KR20240048145A - 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물 - Google Patents

송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20240048145A
KR20240048145A KR1020220127574A KR20220127574A KR20240048145A KR 20240048145 A KR20240048145 A KR 20240048145A KR 1020220127574 A KR1020220127574 A KR 1020220127574A KR 20220127574 A KR20220127574 A KR 20220127574A KR 20240048145 A KR20240048145 A KR 20240048145A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
extract
mushroom
fruiting body
antibacterial
present
Prior art date
Application number
KR1020220127574A
Other languages
English (en)
Inventor
손호용
정인창
이동희
Original Assignee
국립안동대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 국립안동대학교 산학협력단 filed Critical 국립안동대학교 산학협력단
Priority to KR1020220127574A priority Critical patent/KR20240048145A/ko
Publication of KR20240048145A publication Critical patent/KR20240048145A/ko

Links

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01NPRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P1/00Disinfectants; Antimicrobial compounds or mixtures thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A01AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01PBIOCIDAL, PEST REPELLANT, PEST ATTRACTANT OR PLANT GROWTH REGULATORY ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR PREPARATIONS
    • A01P3/00Fungicides
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K10/00Animal feeding-stuffs
    • A23K10/30Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9728Fungi, e.g. yeasts
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C11ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11DDETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16Organic compounds
    • C11D3/38Products with no well-defined composition, e.g. natural products

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 송화버섯 자실체(Fruiting body of Songhwa mushroom) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯(송화버섯: 대한민국 공개특허 제10-2022-0073141호) 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 광범위 항균 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 광범위 항균 조성물의 유효성분으로서의 송화버섯 자실체 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 항균용 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가물, 각종 세정제 및 각종 청결제 등의 용도로 사용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 송화버섯 자실체 추출물은 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 활성의 손실이 나타나지 않아, 액상, 크림, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 손쉽게 가공될 수 있어 제약 산업, 식품 산업, 축산업, 보건 산업 및 화장품 산업상 매우 유용하게 이용될 수 있다.

Description

송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물{ANTIMICROBIAL COMPOSITION COMPRISING THE EXTRACT OF SONGHWA MUSHROOM FRUITING BODY}
본 발명은 송화버섯 자실체(Fruiting body of Songhwa mushroom) 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물에 관한 것으로서, 보다 구체적으로는, 발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯(송화버섯: 대한민국 공개특허 제10-2022-0073141호) 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 광범위 항균 조성물에 관한 것이다.
인류는 병원성 미생물의 침입을 방어하고, 식품 부패 미생물을 제어하기 위하여 다양한 항균제와 방부제를 사용하여 왔다. 그러나, 화학 항균제 및 방부제의 경우, 다양한 세균과 진균에 우수한 항균력을 보이는 반면, 장기간 사용시에는 알러지(allergy)에 의한 발적, 혈관성 부종, 골수 억제, 빈혈, 위염, 퇴행성 뇌질환 등의 많은 부작용이 나타나게 된다. 실제 미국에서는 클로람페니콜(chloramphenicol) 등의 부작용이 심한 항생제 사용을 금지한 바 있다. 따라서, 안전성이 확보되어 있으면서 장기간 사용 경험이 있는 천연물을 이용한 천연 항균제 개발에 관한 다양한 연구가 진행 중에 있다.
미국 질병관리예방센터(U.S. Center for Disease Control and Prevention)에 따르면, 병원 내 혈류 감염이 미국에서 주된 사망 원인 중 하나이다. 또한, 피부 및 연조직을 통한 병원성 세균 및 진균의 감염은 보편적인 의학적 질병으로 인식되어 있으며, 주로 외상 또는 수술에 의하여 유발되는 것으로 이해되고 있다. 많은 병원성 세균 및 진균의 감염은 감염의 중증도에 따라 그 처치 방법이 다르지만, 경구용 항미생물제 및 국소 청결로 성공적인 치료가 가능하다. 그러나, 근원적인 위험 인자(예를 들면, 혈관 혈류 이상, 당뇨) 및/또는 치료하기 어렵거나 다중-내성인 세균 및 진균에 의해 유발된 감염을 갖는 환자에서 흔히 발생하는 보다 심하거나 복잡한 감염은 정맥 내 항미생물제 치료 및 침입성 외과적 조직 제거 등의 조치가 필요할 수도 있다. 실례로, 글라이코펩타이드계 항생물질인 반코마이신은 다중-약물-내성 그람-양성균, 특히 MRSA, 응고효소-음성 스태필로코커스 및 엔테로코커스에 의해 야기된 심한 병원 내 감염에 대해 성공적으로 사용되어왔다. 그러나, 최근 반코마이신에 대해 내성을 갖는 균주의 분리가 증가하고 있음이 보고되고 있으며, 현재의 항생제로는 병원균 중 일부균에 의해 유발된 심한 감염에 대한 치료가 매우 제한되어 있는 것이 사실이다. 따라서, 점차 증가되고 있는 내성균에 대한 보다 효과적인 새로운 항생물질 개발의 필요성이 증가되고 있다.
한편, 버섯은 분류학적으로 균류에 속하나 일반적인 균류와 다르게 포자를 형성하기 위한 대형의 자실체를 만드는 것이 특징으로 대부분 담자균류와 자낭균류에 속하는 고등균류이다. 버섯은 풍미가 뛰어나고 탄수화물, 단백질, 지질, 무기질, 비타민 및 미네랄 등의 각종 영양소를 다양하게 함유하고 있을 뿐만 아니라, 생리 활성 물질들을 생산함으로써 예로부터 식용 및 약용으로 널리 이용되어 온 식품이다. 또한, 버섯의 β-glucan은 면역활성체의 기능, 항산화능, 생체조직 재생과 치유기능, 항생제, 항균, 항바이러스 및 대식세포를 자극하여 돌연변이 세포를 인식하고 공격하는 항종양 효과가 있다고 보고되고 있다.
특히, 표고버섯(Lentinula edodes)은 담자균강 주름버섯목 느타리과 잣버섯속에 속하는 식용버섯으로 버섯 중 비타민 C의 함량이 가장 많으며, 각종 아미노산과 ergosterol이 다량 함유하고 있다. 표고버섯은 건강 기능성 측면에서 항암, 폐질환 및 위장 질환 예방, 바이러스에 대한 면역 증강, 항체 생성 촉진, 혈압 강하, 동맥경화 예방, 혈중 지질 농도 조절 기능, 당뇨 억제 효과 등이 잘 알려져 있다(이다형, 2010. 성균관 대학교 석사논문; 이정임 외, 2020. 생명과학회지 30: 877-885).
최근에는 발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯이 개발되어 “송화버섯”이라는 이름으로 시중에 광범위하게 판매되고 있으며, 송화버섯은 기존의 표고버섯보다 향이 진하고, 버섯의 조직이 단단하여 식감이 우수하며, 저장성이 좋으며, 또한 항산화 작용이 우수하여 피부미백, 노화방지 및 주름개선 효과가 우수하다는 장점이 알려져 있다(대한민국 공개특허 제10-2022-0073141호). 2022년 8월 현재 송화버섯은 국내 유명 온라인 쇼핑몰내의 판매처가 3,100개소를 상회하고 있어 소비시장도 빠르게 확대되고 있는 실정이다.
표고버섯과 관련된 특허로는 대한민국 등록특허 제10-1839507호 [표고버섯과 표고버섯 발효물이 함유된 양념 창난 젓갈 제조방법], 제10-1830763호 [표고버섯 추출물을 포함하는 쌀된장의 제조방법 및 이로부터 제조된 쌀된장], 제10-1823460호 [표고버섯분말을 이용한 반건조 우럭의 제조방법], 제10-1759312호 [표고버섯 가루의 제조방법, 표고버섯 가루를 이용한 영양바의 제조방법 및 이에 의해 제조된 영양바], 제10-1673573호 [표고버섯차의 제조방법 및 이로 제조된 표고버섯차]가 개시되어 있으며, 대한민국 공개특허 제10-2004-0038957호 [표고버섯분말을 함유한 김(laver) 제조를 주제로 한 식품]이 공개되어 있다.
또한, 표고버섯의 유용 생리 활성 관련 특허로는 대한민국 등록특허 제10-1487742호 [표고버섯과 천마 추출물을 포함하는 항산화 효능을 갖는 식품 조성물], 제10-1806808호 [표고버섯 균사체를 이용하여 발효시킨 적하수오 발효물을 유효성분으로 함유하는 여성 갱년기 증상의 예방, 개선 또는 치료용 조성물], 제10-1611947호 [혈관 질환 예방 및 개선용 건강 식품 조성물 및 그 제조방법], 제10-1266528호 [표고버섯 균사체 배양물에서 추출된 다당체를 유효성분으로 함유하는 보습 및/또는 미백용 화장료 조성물]이 개시되어 있으며, 공개특허 제10-2017-0036912호 [표고버섯 추출물을 유효성분으로 함유하는 아토피 및 접촉성 피부염 예방 및 개선용 조성물], 공개특허 제10-2003-0056753호 [표고버섯 균사체, 아가리쿠스 균사체, 수용성 키토산을 함유하는 비만 조절용 건강 식품 조성물], 제10-2008-0110212호 [표고버섯 열수 추출물을 이용한 골길이 성장에 도움을 주는 조성물]이 공개되어 있다.
송화버섯과 관련된 연구로는 송화버섯 섭취 후 발생한 피부염에 대한 보고가 1건(박명진 외, 2019. 대한피부과학회지 57: 342-343) 있으나 구체적인 연구는 이루어진 바 없는 실정이다.
송화버섯과 관련된 특허로는 대한민국 등록특허 제10-1944397호에 [유황표고버섯을 함유하는 고추장 및 이의 제조방법], 제10-2060312호에 [울금 추출물을 함유하는 액체배지를 이용한 송화버섯 종균 제조방법], 제10-2322070호에 [갈치와 송화버섯을 이용한 김치 및 이의 제조 방법]이 개시되어 있으며, 공개특허 제10-2022-0073141호에 [발효 유황이 첨가된 표고버섯 및 그 재배방법] 및 10-2020-0142655호에 [유황을 함유한 표고버섯과 느타리버섯 재배방법]이 공개되어 있다. 또한 제10-2022-0073141호 [발효 유황이 첨가된 표고버섯 및 그 재배방법]에는 송화버섯의 항산화 활성, 피부미백, 노화방지 및 주름개선 효과가 우수함이 보고되어 있다.
그러나, 현재까지 송화버섯 자실체 추출물의 병원성 세균, 진균 및 항생제 내성균에 대한 광범위 항균 활성 관련 연구나 특허는 알려진 바 없다.
KR 10-2022-0073141 A
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명에서 해결하고자 하는 과제는 송화버섯(Songhwa mushroom) 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 광범위 항균 조성물을 제공하고자 하는 것이다.
상기와 같은 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 송화버섯(Songhwa mushroom) 자실체 추출물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 송화버섯 자실체의 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.
상기 항균은 그람 양성 세균, 그람 음성 세균 또는 진균에 대한 것이 바람직하다.
상기 항균은 항생제 내성 진균에 대한 것이 바람직하다.
상기 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제 및 청결제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
본 발명의 광범위 항균 조성물의 유효성분으로서의 송화버섯 자실체 추출물은, 본 명세서의 실시예를 통해 증명된 바와 같이, 항균용 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가물, 각종 세정제 및 각종 청결제 등의 용도로 사용할 수 있는 뛰어난 효과가 있다. 뿐만 아니라, 본 발명의 송화버섯 자실체 추출물은 열 안정성이 우수하고, pH 2의 산성조건 및 혈장 내에서도 활성의 손실이 나타나지 않아, 액상, 크림, 분말, 환, 정 등의 다양한 형태로 손쉽게 가공될 수 있어 제약 산업, 식품 산업, 축산업, 보건 산업 및 화장품 산업상 매우 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 표고버섯과 송화버섯 자실체를 나타낸 것이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 발명자들은 송화버섯의 항세균 및 항진균 효능을 검정하기 위하여, 일정방법으로 송화버섯 자실체의 에탄올 추출물을 조제하고, 이를 항균 활성 성분으로 회수하였으며, 상기 추출물은 열 안정성과 산 안정성이 우수한 특징을 가짐을 확인함으로써 상기 송화버섯 자실체 추출물을 항균 조성물로 활용하고자 하였다.
특히, 상기 추출물은 그람 양성 세균, 그람 음성 세균 및 진균, 특히 항생제 내성 진균에 대해 강력한 항균력을 나타내어, 다양한 세균 및 진균 감염병에 대한 광범위 항균제 등으로 개발될 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
구체적으로, 본 발명자들은 민간에서 항산화, 미백, 주름개선, 혈관계 및 순환계, 소화계, 신진대사계 등의 다양한 질환에 효과가 있다고 알려진 송화버섯을 이용하여 항균 조성물을 개발하기 위하여, 송화버섯의 자실체를 대상으로 다양한 용매 추출물을 조제하고, 이의 다양한 세균에 대한 항균력을 평가한 결과, 송화버섯 자실체의 에탄올 추출물에서 그람양성 세균, 그람음성 세균 및 항생제 내성 Candida sp. 균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내어, 상기 추출물이 광범위 항세균제로 이용 가능함을 확인하였다.
따라서, 본 발명은 본 발명은 송화버섯(Songhwa mushroom) 자실체 추출물을 포함하는 항균 조성물을 제공한다.
상기 추출물은 송화버섯 자실체의 에탄올 추출물인 것이 바람직하다.
상기 항균은 그람 양성 세균, 그람 음성 세균 또는 진균에 대한 것이 바람직하다.
상기 항균은 항생제 내성 진균에 대한 것이 바람직하다.
상기 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제 및 청결제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것이 바람직하다.
이하에서는, 본 발명의 송화버섯 자실체 추출물의 제조 방법 및 효능 실험 등을 보다 구체적으로 설명한다.
본 발명은 송화버섯 자실체로부터 용매 추출을 통해 추출물을 조제하는 단계; 상기 추출물의 항균 활성 평가 단계; 송화버섯 자실체 에탄올 추출물의 안전성 및 안정성 조사 단계를 포함한다.
본 발명의 조성물에 포함되는 "송화버섯 자실체 추출물"은 송화버섯 자실체를 수확한 후 건조하고, 이를 2~3cm 크기로 절단한 후 유기용매로 추출하는 단계 및 상기 추출액을 0.06mm 이하의 여과망을 사용하여 여과하고, 이를 감압농축하는 단계에 의해 수득될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 유기용매는 물(냉수, 열수), 헥센, 메틸렌클로라이드, 아세톤, 주정, 탄소수 1~4의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 주정, 프로판올, 부탄올 등), 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매 등을 이용할 수 있으며, 95% 에탄올 추출이 바람직하다.
상기 추출물은 헥센, 에틸아세테이트 및 부탄올의 유기용매로 순차 또는 각각 분획하여 헥센 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부탄올 분획물 및 물 잔류물을 추가적으로 수득할 수 있다.
본 발명의 송화버섯 자실체 추출물은 감압건조 및 동결건조, 또는 분무건조 등과 같은 통상적인 분말화 과정을 거쳐 분말로 제조될 수 있다. 이들은 혈장 내의 다양한 분해효소에 분해되지 않으며, 100℃의 열처리와 pH 2의 인체 위 내의 pH에서도 항균 활성을 유지한다.
본 발명의 송화버섯 자실체 추출물은 강력한 항균 활성을 나타내어, 병원성 세균 및 진균의 감염의 예방 또는 치료와 관련되는 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품, 화장품, 동물 사료용 첨가물 및 각종 청결제의 소재로 사용될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 약학적 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 각각의 사용 목적에 맞게 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구 제형, 멸균 주사용액의 주사제 등 다양한 형태로 제형화하여 사용할 수 있으며, 경구 투여하거나 정맥 내, 복강 내, 피하, 직장, 국소 투여 등을 포함한 다양한 경로를 통해 투여될 수 있다. 이러한 약학적 조성물에는 추가적으로 담체, 부형제 또는 희석제 등이 더 포함될 수 있으며, 포함될 수 있는 적합한 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리쓰리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 비정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유 등을 들 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 충전제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제, 방부제 등을 추가로 더 포함할 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고, 종래의 치료제와 순차적으로 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물에서 항균 활성을 갖는 성분의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 당 1 내지 5,000mg, 바람직하게는 100 내지 3,000mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 투여 경로, 질병의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 다양한 경로를 통하여 대상에 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내(intra-cerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명에서 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 환자에게 소정의 물질을 제공하는 것을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 일반적인 모든 경로를 통하여 경구 또는 비경구 투여될 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물은 유효성분을 표적 세포로 전달할 수 있는 임의의 장치를 이용해 투여될 수도 있다. 본 발명에서 "대상"은, 특별히 한정되는 것은 아니지만, 예를 들어, 인간, 원숭이, 소, 말, 양, 돼지, 닭, 칠면조, 메추라기, 고양이, 개, 마우스, 쥐, 토끼 또는 기니아 피그를 포함하고, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 인간을 의미한다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 건강 기능 식품의 용도로서 적용될 수 있다.
본 발명의 건강 기능 식품은 병원성 미생물의 감염 우려가 높은 대상으로부터 감염의 가능성을 낮추어 줄 수 있는 효과적인 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 항균 활성이 우수한 유효성분을 포함하는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다. 본 발명의 활성 성분은 일반적으로 전체 식품 중량의 0.01 내지 15중량%로 가할 수 있으며, 건강음료 조성물은 100 ml를 기준으로 0.02 내지 10g, 바람직하게는 0.3 내지 1g의 비율로 가할 수 있다. 본 발명의 건강 기능 식품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 화합물을 함유하는 것 외에 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제, 예컨대, 천연 탄수화물 및 다양한 향미제 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 예로는 포도당, 과당 등의 단당류, 말토오스, 수크로오스 등의 이당류 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리쓰리톨 등의 당알코올이 있다. 상기 향미제로는 타우마틴, 레바우디오시드 A, 글리시르히진, 사카린, 아스파르탐 등을 사용할 수 있다. 상기 향미제의 비율은 본 발명의 건강 기능 식품 100ml당 일반적으로 약 1 내지 20g, 바람직하게는 약 5 내지 12g을 사용한다. 상기 외에 본 발명의 건강 기능 식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물, 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 건강 기능 식품은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료 등의 제조를 위한 과육을 함유할 수도 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 본 발명의 상기 활성 분획물 100 중량부 당 0.01 내지 약 20중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 화장료 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 본 발명의 항균 활성이 우수한 성분을, 예를 들어, 에센스, 영양크림, 바디로션, 린스, 샴푸, 바디클렌저, 로션, 스킨, 마스크팩 등의 형태로 제조될 수 있으며, 여기에 한정되는 것은 아니다. 상기 형태로의 제조는 당업자에게 알려진 다양한 제조 공정에 따라 용이하게 수행될 수 있을 것이다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 동물 사료 조성물의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 동물은 식물에 대응하는 생물군으로 주로 유기물을 영양분으로 섭취하며, 소화나 배성 및 호흡기관이 분화되어 있는 것을 말하고, 구체적으로는 극피동물, 갑각류, 연체동물, 어류, 양서류, 파충류, 조류, 포유류일 수 있으며, 바람직하게는 성게류 또는 해삼류와 같은 극피동물, 게, 새우, 대하 등의 갑각류를 포함하는 절지동물, 두족류, 복족류 또는 이매패류 등의 연체동물, 참돔, 도미, 대구, 가자미, 넙치 등의 어류, 꿩 또는 닭 등의 가금류를 포함하는 조류 또는 돼지, 소, 염소 등의 포유류일 수 있다.
상기 동물 사료용 조성물은 본 발명의 항균 성분을 포함하는 항균 조성물에 곡물, 식물성 단백질 사료, 동물성 단백질 사료, 당분 또는 유제품을 추가로 포함할 수 있다. 상기 곡물은 구체적으로는 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀일 수 있고, 상기 식물성 단백질 사료는 구체적으로는 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것일 수 있으며, 상기 동물성 단백질 사료는 구체적으로는 혈분, 육분, 골분 및 생선분일 수 있고, 상기 당분 또는 유제품은 구체적으로는 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조성분일 수 있다.
상기 동물 사료용 조성물은 추가로 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성창 촉진제 또는 질병 예방제와 같은 성분을 함께 사용할 수 있다.
본 발명의 동물 사료용 조성물에 포함되는 항균 조성물은 사료의 사용목적 및 사용조건에 따라 달라질 수 있으며, 일 예로 최종 생산된 사료 1kg을 기준으로 상기 항균성 조성물이 0.1g 내지 100g 포함될 수 있다.
또한, 상기 사료 조성물은 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질로 제조될 수 있으며, 상기 조성물은 메쉬로 공급되거나 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성시킬 수 있으며, 저장을 위해 펠렛화, 팽창화 또는 압출 공정을 거칠 수 있으며, 저장의 용이성을 위해 바람직하게는 과잉의 물을 건조 제거될 수 있다.
바람직한 구체예로서, 본 발명의 항균 조성물은 식품, 화장품 또는 동물 사료용 첨가제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 첨가제는 사용되는 식품, 화장품 또는 동물 사료에 보존성을 부여하기 위하여 첨가되는 것으로서, 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로 식품, 화장품 또는 동물용 사료에 안전하게 적용할 수 있다.
상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 첨가제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 첨가제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 세정제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 세정제는 바람직하게는 의류용 세제, 식기 세척제, 식품 세정제, 가전제품 세척제일 수 있다. 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 더욱 바람직하게는 주방용품 또는 식품세척 등을 포함하는 각종 생활용품의 세척이나 항균성 부여를 목적으로 사용할 수 있다.
상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 첨가물을 추가로 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 세정제 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가제와 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 세정제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으며, 제품화를 위하여 포장을 위해 통상의 방법을 사용할 수 있다.
또한, 상기 세정제 중 항균성 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위, 적용대상물품 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균성 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균성 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
바람직한 구체예로서, 본 발명은 항균 조성물은 청결제의 용도로서 적용될 수 있다.
상기 청결제는 일상 생활에서 흔히 감염되기 쉬운 병원성 미생물의 체내 감염을 예방 차원에서 수행하기 위하여 간단한 방법으로 손, 구강 또는 여성용 청결제 등의 용도로 사용될 수 있다. 상기 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로 손, 구강, 여성용 청결제로 사용하는 경우에도 안전하게 적용할 수 있다.
상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 적의 선택된 추가적인 여타의 첨가물을 추가로 더 포함할 수 있으며, 통상적으로 사용되는 첨가물 등 다른 유효성분이나 색소, 계면활성제, 방부제 등의 첨가물과 혼합하여 사용할 수 있다. 상기 청결제는 그 사용 목적 및 용도에 따라 분말화, 과립화, 정제화 또는 액상화하여 제조될 수 있으나, 액상형의 경우 편리한 사용이 가능할 것이다.
또한, 상기 청결제 중 항균 조성물의 사용량은 사용목적과 적용형태, 적용부위 등에 따라 적절히 사용될 수 있으며, 예를 들면 전체 조성물 기준으로 0.01 중량부 내지 50 중량부를 포함할 수 있으나, 상기 항균 조성물의 함량은 이에 한정되는 것은 아니다. 본원 발명의 항균 조성물은 천연성분으로 인체에 유해하지 아니하므로, 그 제품의 특성상 적용목적을 달성할 수 있는 경우라면 다양한 양으로 사용가능하다.
이하에서는 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 하기 실시예는 본 발명의 바람직한 일 구체예일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예의 범위로 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
실시예 1: 송화버섯 및 표고버섯 자실체 확보
송화버섯 자실체(Fruiting body of Songhwa mushroom) 및 표고버섯 자실체(Fruiting body of Ganoderma lucidum)는 경북 문경의 (주)골드팜바이오로부터 제공받았으며, 각각의 자실체는 도 1에 나타내었다. 송화버섯은 발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯을 말하며, 재배방법은 대한민국 공개특허 제10-2022-0073141호 [발효 유황이 첨가된 표고버섯 및 그 재배방법]에 상세히 기재되어 있다. 간단히 송화버섯 재배법을 설명하면, 표고버섯 톱밥배지를 만들어 살균을 하는 배지살균단계; 상기 배지살균단계에서 살균된 배지에 표고버섯 종균을 접종하는 접종단계; 상기 접종단계에서 표고버섯 종균이 접종된 배지에 발효유황액을 공급하여 버섯을 배양하는 배양단계; 및 상기 배양단계에서 배양된 표고버섯이 색이 나도록 갈변시키는 갈변단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 발효유황이 첨가된 표고버섯의 재배방법이며, 상기 발효유황액은, 물 100중량부에 대해 유황 10 내지 30중량부, 수산화나트륨 10 내지 30중량부, 천매암 1 내지 2중량부, 황토 1 내지 2중량부, 천일염 1 내지 2중량부, 제올라이트 1 내지 2중량부를 혼합한 후 1 내지 3시간 교반하여 유황혼합물을 제조하는 혼합단계; 상기 혼합단계에서 제조된 유황혼합물을 1 내지 3일간 정치한 후 침전물을 여과하여 유황액을 제조하는 여과단계; 및 상기 여과단계에서 제조된 유황액을 채에 1 내지 2회 내린 후, 채에 내린 유황액에 버섯균사를 넣고 20 내지 25℃에서 5 내지 10일간 발효시켜 발효유황액을 제조하는 발효유황액제조단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 발효 유황이 첨가된 표고버섯의 재배방법이다. 송화버섯은 표고버섯보다 향이 진하고, 버섯의 조직이 단단하여 식감이 우수하며, 저장성이 좋은 특성을 보였다. 실제 송화버섯과 표고버섯의 수분함량은 각각 70.5±1.5%와 80.3±2.4%를 나타내어 유의적으로 차이가 나타났다.
실시예 2: 송화버섯 및 표고버섯 자실체의 에탄올 추출물 조제 및 추출물의 성분 분석
실시예 1에서 확보한 송화버섯 및 표고버섯 자실체를 음건하고, 이를 세절하여 이를 대상으로 에탄올 추출물을 제조하였으며, 각각의 시료에 대해 10배의 에탄올(95%, 덕산, 한국)를 가하고, 상온에서 2회 반복 추출한 후 추출액을 모아 필터링한 후, 감압 농축하여 분말로 제조하였다. 송화버섯 및 표고버섯 자실체의 추출 수율과 이들의 유용성분 분석 결과는 표 1에 나타내었다.
[표 1] 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 수율 및 유용성분 분석
표 1에 나타낸 바와 같이, 송화버섯 자실체의 추출 효율은 9.1%로 표고버섯보다 3.5배 높게 나타나, 송화버섯은 표고버섯보다 다양한 생리활성 성분을 포함하고 있음을 알 수 있었다. 송화버섯 자실체 추출물의 유용성분 분석을 위해 총 폴리페놀, 총 플라보노이드 및 총당 함량을 측정하였다. 이때, 총 폴리페놀 함량은 추출 검액 400μl에 50μl의 Folin-ciocalteau, 100μl의 Na2CO3 포화용액을 넣고 실온에서 1시간 방치한 후 725nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 tannic acid를 사용하였다. 총 플라보노이드 함량은 각각의 시료를 18시간 에탄올 교반 추출하고, 여과한 추출 검액 400μl에 90% diethylene glycol 4ml를 첨가하고 다시 1 N NaOH 40μl를 넣고 37℃에서 1시간 반응 후 420nm에서 흡광도를 측정하였다. 표준시약으로는 rutin을 사용하였다. 총당은 phenol-sulfuric acid법을 이용하여 정량하였으며 표준시약으로는 sucrose를 사용하였다. 환원당 정량은 DNS법을 사용하였으며 표준시약으로는 glucose를 사용하였다.
총 폴리페놀 함량 분석 결과, 송화버섯 추출물은 62.7mg/g의 매우 높은 폴리페놀 함량을 보여 표고버섯 추출물(4.4mg/g)보다 약 14.3배 높은 함량을 보였다. 총 플라보노이드 함량분석에서도 송화버섯 추출물은 3.6mg/g의 매우 높은 함량을 보여 표고버섯 추출물(0.3mg/g)보다 약 12.0배 높은 함량을 보였다. 총당 함량 분석 결과 송화버섯 추출물은 21.3mg/g을 나타내어 표고버섯 추출물(6.4mg/g)보다 약 3.3배 높은 함량을 나타내었다. 따라서, 송화버섯 자실체 추출물은 표고버섯에 비해 다양한 유용 생리활성을 나타내리라 예상된다.
실시예 3: 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 항균활성
실시예 2에서 제조된 버섯 추출물들의 항균 활성을 평가하였으며, 그 결과를 표 2에 나타내었다. 항균 활성 평가에 사용된 균주로는, 그람 음성균으로서 Escherichia coli KCTC 1682, Proteus vulgaris KCTC 2433, Pseudomonas aeruginosa KACC 10186, Salmonella typhimurium KCTC 1926을 사용하였고, 그람 양성균으로는 Staphylococcus aureus KCTC 1916, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Listeria monocytogenes KACC 10550, Bacillus subtilis KCTC 1924를 사용하였다. 한편, 항진균 활성 평가를 위해서는 Saccharomyces cerevisiae IF0 0233 및 캔디다증 진균감염증 원인균 Candida albicans KCTC 1940을 사용하였다.
먼저, 항세균 활성 평가의 경우, Nutrient broth(Difco Co., USA)에 각각의 세균을 접종하여 37℃에서 24시간 동안 배양한 후, 각 균주를 O.D.600 0.1로 조정하여 Nutrient agar(Difco Co., USA) 배지를 포함하는 멸균 petri dish(90mm, 녹십자, 한국)에 100μl씩 도말하고, 각각의 시료 5μl를 멸균 disc-paper(지름 6.5mm, Whatsman No. 2)에 가하여, 37℃에서 24시간 동안 배양하였으며, 진균의 경우에는, Sabouraud dextrose(Difco Co. USA)를 이용하여 동일한 방법으로 30℃에서 24시간 동안 배양 후, 생육저지환의 크기를 측정하여 항균활성을 평가하였다. 대조구로는 항세균제인 엠피실린(ampicillin)과 항진균제인 마이코나졸(miconazole, Sigma Co., USA)을 각각 1μg/disc 농도로 사용하였으며, 생육저지환의 크기는 육안으로 생육이 나타나지 않는 부분의 지름을 mm 단위로 측정하였고, 3회 이상 평가 후 대표 결과로 나타내었다.
[표 2] 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 항균 활성
그 결과, 표 2에 나타낸 바와 같이, 임상에서 항세균제로 사용되고 있는 ampicillin은 1μg/disc에서도 광범위한 항균 활성을 나타내었으며, Pseudomonas aeruginosaEscherichia coli에 대해서는 상대적으로 약한 생육억제환(7~9mm)을 나타내었다. 임상에서 항진균제로 사용되고 있는 miconazole은 1μg/disc에서도 Saccharomyces cerevisiaeCandida albicans의 생육을 강하게 저해하였다. 한편 표고버섯 추출물은 500μg/disc 농도에서 평가한 사용한 그람양성균, 그람음성균 및 진균에 대해 생육억제환을 전혀 나타내지 않아 유의적인 항균활성이 없음을 확인하였다. 그러나 송화버섯 추출물은 Listeria monocytogenes, Bacillus subtilis, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris, Salmonella typhimurium, Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae 모두에 대해 양호한 항균 활성을 나타내었다.
실시예 4: 송화버섯 자실체 추출물의 항생제 내성 진균에 대한 항균활성
실시예 2에서 제조된 송화버섯 및 표고버섯 자실체의 에탄올 추출물들을 대상으로 항생제 내성 진균에 대한 항균 활성을 실시예 3의 방법과 동일하게 평가하였으며, 그 결과는 표 3에 나타내었다. 항균 활성 평가에 사용된 균주로는 국내의 항생제내성균주은행(http://knrrb.ccarm-bio.or.kr/)에서 구입한 amphotericin B, flucytisine, fluconazole 및 itraconzole에 대한 다제내성 Candida sp. 균주 7종과 ciprofloxacin, levofloxacin, ofloxacin에 대한 다제내성 Candida sp. 균주 2종을 사용하였다. 균주의 상세 정보는 표 4에 나타내었다.
[표 3] 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 항생제 내성균주에 대한 항균 활성
[표 4] 송화버섯 자실체 추출물의 항균 활성에 사용된 항생제 내성균주의 내성
그 결과, 송화버섯 자실체 추출물은, 표고버섯 추출물과는 다르게, 항생제 내성균주 Candida albicans CCARM 14002, 14009, 14020 및 14022 균주와 Candida glabrata 14015, Candida tropicalis CCARM 14019 에 대해 항균력을 나타내었다. 이러한 결과는 발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯의 황함량이 314.7mg/100g인점(발효유황을 첨가하여 재배된 표고버섯: 대한민국 공개특허 제10-2022-0073141호)을 감안한다면, 발효유황에 의한 항균 활성으로 이해하기는 어려우며, 특히 에탄올 추출물에서 항균력이 나타남을 고려할 때, 송화버섯 대사산물에 의한 항균활성으로 이해된다.
실시예 5: 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 항산화 활성 및 nitrite 소거능 평가
실시예 2에서 제조된 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물을 대상으로 항산화 및 nitrite 소거능을 평가하여 그 결과를 표 5에 나타내었다. 이때 추출물은 DMSO(dimethylsulfoxide)에 녹인 후 적당한 농도로 희석하여 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl) 음이온 라디칼 소거능, ABTS[2,2-azobis (3-ethylbenzo thiazoline-6-sulfonate)] 양이온 라디칼 소거능, nitrite 소거능 및 환원력 측정에 사용하였다.
먼저, DPPH 소거능의 경우 다양한 농도로 희석한 시료 20μl에, 99.5% 에탄올에 용해시킨 2 x 10-4M DPPH 용액 380μl를 넣고 혼합하여 37℃에서 30분 동안 반응시킨 후, 516nm에서 microplate reader(Asys Hitech, Expert96, Asys Co., Austria)를 사용하여 흡광도를 측정하였다. DPPH radical 소거능은 시료첨가구와 비첨가구의 백분율로 표시하였다. ABTS 소거능의 경우 7mM ABTS(Sigma Co., USA) 5ml와 140mM potassium persulfate 88ml를 섞은 후 상온에서 16시간 빛을 차단하여 ABTS 양이온을 형성시켰으며, 이후 이 용액을 414nm에서 흡광도 값이 1.5가 되도록 에탄올로 희석하였다. 조제된 희석용액 190ml와 다양한 농도로 조제된 시료 10ml를 혼합한 후 상온에서 6분간 반응시킨 후 734nm에서 흡광도를 측정하고, 다음의 식에 의해 ABTS radical 소거능을 계산하였다.
ABTS radical 소거능 (%) = [(C-S)/C] x 100,
C: 용매 대조구 DMSO 첨가시의 흡광도
S: 시료 첨가시의 흡광도.
한편, nitrite 소거능 측정의 경우, 아질산염 용액(1mM)에 시료용액을 가하고, 여기에 0.1N HCl을 가해 pH 1.2로 조정한 후, 37℃에서 1시간 반응시킨 후 Griess reagent(Sigma Co., USA)를 가하고 혼합하였다. 이후 15분간 실온에서 방치 후 520nm에서 흡광도를 측정하여 잔존 nitrite 양을 측정하였다. nitrite 소거능(%)는 다음의 식에 의해 계산하였다.
NSA (%) = [1-(A-C)/B] x100,
A: 1mM nitrite 용액에 시료를 첨가하여 1시간 반응시킨 후의 흡광도
B: 1mM nitrite 용액의 흡광도
C: 버섯 추출물 시료의 흡광도
상기의 항산화 실험에서 대조구로는 vitamin C(Sigma Co., USA)를 사용하였으며, 용매 대조구로는 DMSO를 사용하였다. 각각의 활성 평가는 각각 3회 반복한 실험의 평균과 편차로 표시하였다.
한편, 환원력 평가의 경우 Oyaizu 등의 방법을 변형(안선미 등, 2011. J. Life Sci. 21: 576-583)하여 측정하였다. 에탄올에 용해한 시료 2.5ml에 0.2M sodium phosphate buffer(pH 6.6) 2.5ml와 10% potassium ferricyanide 2.5ml를 첨가하고, 50℃에서 20분간 반응시킨 후, 10% trichloroacetic acid 2.5ml를 첨가하여 반응을 종료하고 4000rpm에서 10분간 원심분리하여 상등액을 회수하였다. 회수한 상등액은 증류수로 2배 희석한 후, 신선하게 조제된 0.1% ferric chloride 용액과 5:1(v/v) 비율로 혼합하고 700nm에서 흡광도를 측정하여 평가하였다.
[표 5] 송화버섯 및 표고버섯 추출물의 항산화 활성
표 3에 나타낸 바와 같이, 버섯 추출물을 0.5mg/ml 농도로 조정하여 항산화력을 평가한 결과 송화버섯 자실체 추출물은 표고버섯 추출물에 비해 DPPH 음이온 소거능은 거의 유사하였으며, ABTS 양이온 소거능 및 환원력은 1.2배 및 1.17배 증가된 활성을 보였다. 가장 큰 차이는 nitrite 소거능에서 나타났으며, 버섯 추출물을 0.5mg/ml 농도로 조정하여 항산화력을 평가한 결과 송화버섯 자실체 추출물은 41.4%의 소거능을 보여, 표고버섯 추출물에 비해 4.4배 강력한 활성을 보였다. 실제 활성 라디컬의 50%를 소거할수 있는 농도(IC50)를 계산한 결과, nitrite에 대한 송화버섯과 표고버섯 자실체 추출물의 IC50은 각각 365 및 1,851mg/ml를 보여 송화버섯이 5.07배 낮은 값을 보였다. 통상 산화적 스트레스, 염증, 세균 및 진균 감염은 밀접히 연관되어 있으므로(곽정심 외, 2018, 한국유화학회지 35: 975-984; 김다애 201. 건국대학교 석사논문; 이동진 외, 2007, 한국국제농업개발학회지 19: 38-42; Shcherbakova A et al., 2021. World J Microbiol Biotechnol. 37:129, doi: 10.1007/s11274-021-03099-y), 송화버섯 추출물의 우수한 항산화 및 nitrite 소거능은 항염증 및 항균 활성에 기여하리라 판단된다.
실시예 6: 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성
실시예 2에서 제조된 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 급성독성 가능성을 평가하기 위해 인간 적혈구 용혈 활성을 평가하였다. 이때, 용혈 활성은 기존의 보고(손호용, 2014년. Korean J. Microbiol. Biotechnol. 42: 285-292)에 준해 평가하였으며, 간단하게는 PBS로 3회 수세한 인간 적혈구 100μl를 96-well microplate에 가하고 다양한 농도의 시료용액 100μl를 가한 다음 37℃에서 30분간 반응시켰으며, 이후, 반응액을 10분간 원심분리(1,500rpm)하여 상등액 100μl를 새로운 microtiter plate로 옮긴 후 용혈에 따른 헤모글로빈 유출 정도를 414nm에서 측정하였다. 시료의 용매 대조구로는 DMSO(2%)를 사용하였으며, 적혈구 용혈을 위한 실험 대조구로는 Triton X-100(1mg/ml)를 사용하였다. 용혈 활성은 다음의 수식을 이용하여 계산하였다.
[표 6] 송화버섯 및 표고버섯 자실체 추출물의 인간 적혈구 용혈 활성
표 6에 나타낸 바와 같이, 대조구로 사용된 DMSO와 물은 용혈 활성이 없었으며, triton X-100은 1mg/ml 농도에서 적혈구를 100% 용혈시킴을 확인하였다. 또한, 항암제, 항진균제로 사용되고 있는 amphotericin B의 경우 0.0032 mg/ml 농도에서 50% 이상 적혈구를 용혈시킴을 확인하였다. 한편, 송화버섯 자실체 추출물은 1mg/ml 농도에서 68.6%의 적혈구 용혈을, 0.5mg/ml 농도에서는 49.9%의 용혈을 보였다. 반면 표고버섯의 경우에는 1mg/ml 농도에서도 적혈구 용혈이 나타나지 않았다. 송화버섯 추출물의 용혈활성은 사포닌 등에 의해 나타나는 것으로 이해되며, 현재까지 식용(추출 차, 복합추출음료)으로 이용된 점을 감안하면 심각한 급성독성은 없을 것으로 판단하였다. 특히 부작용이 인정되는 amphotericin B와 비교한다면 동일 활성의 적혈구 용혈활성을 나타내기 위해 송화버섯 자실체 추출물은 약 300배이상의 고농도가 필요하므로 급성독성은 나타나지 않을 것으로 판단되었다.
실시예 6: 송화버섯 자실체 추출물의 혈장, 산 및 열 안정성 평가
실시예 2에서 제조된 송화버섯 자실체 추출물은 통상의 차류, 복합음료, 주류로 제조되어 음용되고 있어 안전성에는 별도의 문제가 없으리라 판단되었다. 따라서 송화버섯 자실체 추출물의 항균 활성에 대한 혈장 안정성, 열 안정성 및 산 안정성을 확인하였다. 상기 추출물은 100℃에서 1시간 열 처리, pH 2(0.01M HCl)에서의 1시간 처리, 혈장에서 1시간 처리시에도 항균 활성의 심각한 손실이 나타나지 않았다. 따라서, 상기 송화버섯 자실체 추출물은 다양한 식품 가공 공정하에서도 우수한 항균 활성을 유지할 것으로 예상된다.

Claims (5)

  1. 송화버섯(Songhwa mushroom) 자실체 추출물을 포함하는 항균 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 추출물은 송화버섯 자실체의 에탄올 추출물인 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 항균은 그람 양성 세균, 그람 음성 세균 또는 진균에 대한 것임을 특징으로 하는 항균 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 항균은 항생제 내성 진균에 대한 것임을 특징으로 하는 항균 조성물.
  5. 제 1항 내지 제 4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 약학 조성물, 건강 기능 식품, 화장료 조성물, 동물 사료 조성물, 식품 첨가물, 화장품 첨가물, 동물 사료용 첨가물, 세정제 및 청결제로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 항균 조성물.
KR1020220127574A 2022-10-06 2022-10-06 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물 KR20240048145A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220127574A KR20240048145A (ko) 2022-10-06 2022-10-06 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020220127574A KR20240048145A (ko) 2022-10-06 2022-10-06 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20240048145A true KR20240048145A (ko) 2024-04-15

Family

ID=90715733

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020220127574A KR20240048145A (ko) 2022-10-06 2022-10-06 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20240048145A (ko)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220073141A (ko) 2020-11-26 2022-06-03 김진선 발효 유황이 첨가된 표고버섯 및 그 재배방법

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20220073141A (ko) 2020-11-26 2022-06-03 김진선 발효 유황이 첨가된 표고버섯 및 그 재배방법

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20200003993A (ko) 쪽잎 추출물을 포함하는 항균 조성물 및 이의 용도
KR101791549B1 (ko) 얌빈 지하부 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 항세균성 조성물
KR102243591B1 (ko) 도깨비부채 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR101715622B1 (ko) 나문재 속 식물의 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균성 조성물
KR101806720B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸으로 발효시킨 황기 뿌리 배양액의 리스테리아 항균조성물
KR101602552B1 (ko) 산수유 추출물을 포함하는 항균 조성물
KR102086166B1 (ko) 람부탄 껍질 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR101976201B1 (ko) 생강싹 추출물을 포함하는 항균 조성물
KR101911847B1 (ko) 우엉 추출물의 유기용매 분획물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR20210027722A (ko) 약용 및 식용 천연물 복합 발효액을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR102254424B1 (ko) 상동나무 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR101776511B1 (ko) 락토바실러스 플란타룸으로 발효시킨 향나무 열매 배양액의 리스테리아 항균조성물
KR20150133351A (ko) 플라보놀계 화합물 및 항생물질을 유효성분으로 포함하는 항균 조성물
KR20240048145A (ko) 송화버섯 자실체 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR20200058353A (ko) 왕귀뚜라미 추출물의 헥센 분획물 또는 부탄올 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균 조성물
KR20220094308A (ko) 치커리 추출물을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 감염증 예방 또는 치료용 약학 조성물
KR102287391B1 (ko) 모링가 지하부 추출물을 포함하는 항균 조성물
KR102254425B1 (ko) 백목련 미성숙 열매 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR102287389B1 (ko) 인삼 꽃봉오리 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR102677601B1 (ko) 장대 품종의 케나프 종자 추출물을 포함하는 항균 조성물
US20230051204A1 (en) Antimicrobial composition containing wasp extract as active ingredient
KR102131454B1 (ko) 윤농참쌀 추출물을 포함하는 항균 조성물
KR102534868B1 (ko) 흰점박이꽃무지 코쿤 추출물을 유효성분으로 함유하는 항균 조성물
KR20040043396A (ko) 항균활성을 갖는 키토산, 키토산올리고당 및자몽종자추출물을 함유한 기능성 식품 조성물
KR20230077110A (ko) 표고버섯 수확 후의 버섯폐배지 추출물을 포함하는 항균 조성물