KR20240001135A - 전립선 암의 치료에 사용되는 아레나바이러스 - Google Patents

전립선 암의 치료에 사용되는 아레나바이러스 Download PDF

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Abstract

본 출원은 전립선 암-관련된 항원을 발현하는 아레나바이러스에 관한 것이다. 특히, 본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작되는 변형된 아레나바이러스 입자를 기재하며, 여기서 전립선 암-관련된 항원은 전립선 산성 포스파타제 (PAP), 전립선 특이적 항원 (PSA) 및 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또한 본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 아레나바이러스 게놈 세그먼트 또는 S 세그먼트, cDNA, DNA 발현 벡터, 이러한 아레나바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물, 이러한 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법 및 이러한 아레나바이러스 입자를 사용하여 전립선 암을 치료하는 방법, 및 이러한 용도를 위한 키트를 기재한다.

Description

전립선 암의 치료에 사용되는 아레나바이러스
관련 출원에 대한 교차-참조
본 출원은 2021 년 3 월 23 일자로 출원된 미국 일련 번호 63/165,028의 이익을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 원용된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명 "13194-062-228_SEQ_LISTING" 및 2022 년 3 월 21 일의 생성일을 갖고, 56,767 바이트의 크기를 갖는 ASCII 형식의 서열 목록으로서 전자적으로 제출된 서열 목록을 함유한다. 제출된 서열 목록은 명세서의 일부이며 그 전체가 본원에 참조로 원용된다.
1. 서론
본 출원은 전립선 암-관련된 항원을 발현하는 아레나바이러스에 관한 것이다. 특히, 본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작되는 변형된 아레나바이러스 입자를 기재하며, 여기서 전립선 암-관련된 항원은 전립선 산성 포스파타제 (PAP), 전립선 특이적 항원 (PSA) 및 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또한 본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 아레나바이러스 게놈 세그먼트, 예컨대, S 세그먼트, cDNA, DNA 발현 벡터, 이러한 아레나바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물, 이러한 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법 및 이러한 아레나바이러스 입자를 사용하여 전립선 암을 치료하는 방법, 및 이러한 용도를 위한 키트를 기재한다.
2. 배경기술
2.1 전립선 암
전립선 암은 안드로겐-의존적 유형의 암이며, 전 세계적으로 남성에게 가장 흔한 암 중 하나이다. 이는 또한 미국 (U.S.)에서 남성에게 영향을 미치는 피부암 외에 가장 흔한 암이다. 2020 년 미국에서는 약 191,930 건의 새로운 경우의 전립선 암 및 전립선 암으로 인한 약 33,330 명의 사망자가 있는 것으로 추정된다. 유럽연합 (EU)에서, 전립선 암은 남성 사이에서 가장 빈번히 진단되는 암 중 1위를 차지하고 있으며, 2012 년에 약 345,000 건의 새로운 경우가 추정된다. 전립선 암은 EU에서 동일한 연도의 모든 새로운 암의 24%를 차지하였다. 2015 년에 새로운 전립선 암 경우의 추정된 수는 EU에서 약 365,000 건이었다. 남성 9 명 중 약 1 명은 일생 동안 전립선 암으로 진단될 것이다. 나이는 전립선 암의 주요 위험 인자이며, 질환의 60%가 65 세 초과의 남성에게서 진단되고, 40 세 미만의 남성에서는 거의 발견되지 않는다. 폐암에 이어, 전립선 암은 미국 남성의 암 사망의 두 번째 주요 원인이며, 2020 년에서의 모든 암 사망자의 10%를 차지한다 (Siegel, Miller, and Jemal, 2020, CA Cancer J Clin, 70: 7-30). EU에서, 2020 년에 총 78,800 명의 남성이 전립선 암으로 사망할 것으로 예측되고 있다 (Carioli 등, 2020, Ann Oncol, 31: 650-58.).
국소화된 전립선 암의 경우, 수술, 방사선 및 외과적 거세 또는 의학적 고환절제술을 이용하여 달성되는 안드로겐 박탈 요법 (ADT)이 종종 치유적이다. 냉동요법, 고-세기 초음파, 및 광역학 요법과 같은 비-표준 절제 기법이 또한 사용되지만, 장기적인 데이터는 여전히 결여되어 있다. 림프절 전이를 갖는 환자는 근치 전립선절제술을 포함하거나 포함하지 않은 확정적 방사선요법 (RT) 및 ADT로 종종 치료된다 (Bekelman 등, 2018, J Clin Oncol, 36: 3251-58; NCCN_Guidelines® 2019, NCCN Clinical Practice Guidelines in Oncology). 국소화된 또는 국한성 전립선 암을 갖는 환자에 대한 5-년 생존률은 거의 100%이다.
전립선 암 환자의 약 15%는 진단 시 전이성 질환을 가지고 있다. 또한, 임상적으로 국소화된 질환을 갖는 환자의 약 20%는 국소 요법에 실패하고 불치의 전이성 질환으로 발달할 것이다 (Cooperberg 등, 2004, J Urol, 171: 1393-401). ADT는 전이성 전립선 암을 갖는 환자에 대한 표준 치료법으로 남아 있는 반면, 일반적으로 초기 반응 후 1-2 년 이내에 진행이 발생하며 5-년 생존율은 31%이다. 안드로겐의 거세 수준 (<50 ng/mL)에도 불구하고 진행된 전립선 암은 거세-저항성 전립선 암 (CRPC)으로서 알려져 있다. 전이성 CRPC (mCRPC)가 발달한 환자의 추정 생존은 2-3 년이다 (Scher 등, 2016, J Clin Oncol, 34: 1402-18).
전이성 전립선 암에 대한 치료 옵션은 여전히 제한적이다. 항안드로겐 약제 및 세포독성 화학요법은 최고의 치료의 옵션 중 하나이다. 생존 및 삶의 질의 이익을 입증한 표준 요법은 아비라테론 아세테이트/프레드니손, 엔잘루타미드, 라듐-223 및 도세탁셀/프레드니손을 포함한다. 불분명한 삶의 질의 이익과 함께 생존 이익을 입증한 요법은 시푸류셀-T 및 카바지탁셀/프레드니손을 포함한다 (Basch 등, 2014, J Clin Oncol, 32: 3436-48). 전립선 암에 대해 이용가능한 치료 옵션에도 불구하고, 특히 불량한 예후를 갖거나 진행된 단계인 환자의 경우 새로운 치료법에 대한 수요가 여전히 높다. 예를 들어, 거의 모든 환자에서는 결국 다양한 메커니즘으로 인해 엔잘루타미드를 포함한 차세대 항안드로겐 약제에 대한 저항성이 발달할 것이다 (Watson, Arora, and Sawyers, 2015, Nat Rev Cancer, 15: 701-11). 약물 저항성을 극복하기 위한 전립선 암의 새로운 요법 개발에 대한 관심이 높아지고 있다. 본원에 기재된 조성물 및 방법은 이러한 필요성을 해결하고 관련된 이점을 제공한다.
2.2 전립선 암-관련된 항원
전립선 암-관련된 항원은 PAP, PSA, 및 PSMA를 포함하며, 이들은 전립선 암에 대한 면역요법에서 표적 항원으로서 가장 일반적으로 사용되어 왔다 (Karan, 2013, Immunotherapy, 5: 907-10).
PAP는 전립선 상피 세포에 의해 분비되는 100 kDa의 분자량을 갖는 당단백질이다 (Vihko, Kontturi, and Korhonen, 1978, Clin Chem, 24: 466-70.). PAP에는 두 가지 형태가 있다. 세포성 형태 (cPAP)는 전립선 세포에서 고도로 발현되고, 분비 형태 (sPAP)는 대부분 정액으로 방출된다 (Lin 등, 2001, J Urol, 166: 1943-50.). PAP는 주로 다른 조직에서 적은 발현을 포함하는 양성 및 악성 전립선 조직에 제한된다. 이의 발현은 높은 글리슨 점수 (6 및 7)를 갖는 종양에서 가장 높지만, 위, 유방 및 결장과 같은 다른 선암종에서 또한 발견된다 (Kiessling A, 등 Cancers. 2012;4:193-217.). PAP-특이적 면역 활성화는 시푸류셀-T로 치료된 CRPC를 갖는 환자의 생존과 상관관계가 있다 (Sheikh 등, 2013, Cancer Immunol Immunother, 62: 137-47).
PSA는 전립선 상피 세포에 의해 거의 독점적으로 분비되는 칼리크레인-관련된 펩티다제이며, 전립선 암의 진단 및 모니터링을 위한 진단적 바이오마커이다 (Kiessling A, 등 Cancers. 2012;4:193-217). PSA는 대부분의 전립선 암 조직에서 검출될 수 있다. PSA는 임상 개발의 다양한 단계에서 아데노바이러스, 폭스바이러스, 리스테리아, 플라스미드 DNA, 펩티드 및 수지상 세포 (DC)를 포함한 다중 면역요법 플랫폼에 의한 표적 항원으로서 광범위하게 탐구되어 왔으며, 이의 대부분은 초기 단계에 있다 (Venturini and Drake, 2019, Cold Spring Harb Perspect Med, 9). 전임상 및 임상 연구 둘 모두는 면역요법 표적으로서의 PSA가 PSA-특이적 CD8+ T 세포의 생성을 유도한다는 사실을 입증하였다 (Karan 등, 2011, Immunotherapy, 3: 735-46; Lubaroff 등, 2009, Clin Cancer Res, 15: 7375-80).
PSMA는 전립선 조직 내에서 발현되는 막관통 당단백질이며, 이의 발현 수준은 안드로겐 절제 후에 증가한다 (Wright 등, 1996, Urology, 48: 326-34). PSMA는 정상 전립선 세포의 마커이며, 대부분의 전립선 암 종양, 특히, 미분화된 전이성 CRPC에서 검출될 수 있다. PSMA는 다른 정상 조직에서도 발견될 수 있지만, 전립선 조직과 비교하여 100 내지 1000 배 더 낮은 발현을 갖는다 (Kiessling A, 등 Cancers. 2012;4:193-217). 항원-특이적 CD4+ 및 CD8+ T 세포 반응은 PSMA를 표적화하는 암 백신과 함께 보고되었다 (Chudley 등, 2012, Cancer Immunol Immunother, 61: 2161-70).
3. 요약
3.1 아레나바이러스 게놈 세그먼트
일 양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작된다. 일부 구체적인 실시양태에서, 전립선 암-관련된 항원은 전립선 산성 포스파타제 (PAP), 전립선 특이적 항원 (PSA) 및 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일부 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 1을 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 1로 이루어진다. 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 18을 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 18로 이루어진다. 일부 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5를 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 2를 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 2로 이루어진다. 일부 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6을 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6으로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 서열번호 4와 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 서열번호 4를 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 서열번호 4로 이루어진다. 일부 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 서열번호 8과 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함한다. 다른 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 서열번호 8을 포함한다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 서열번호 8로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 위에-식별된 아레나바이러스 S 세그먼트를 인코딩하는 cDNA를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 cDNA를 포함하는 DNA 발현 벡터를 추가로 포함한다. 다른 실시양태에서, 본 발명은 위에-식별된 아레나바이러스 S 세그먼트, cDNA 또는 DNA 발현 벡터를 포함하는 숙주 세포를 추가로 포함한다.
3.2 아레나바이러스 입자 및 이러한 아레나바이러스 입자의 생성 방법
다른 양태에서, 본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트는 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트 중 하나는 아레나바이러스 GP를 인코딩하는 ORF를 포함하고, 다른 하나는 아레나바이러스 NP를 인코딩하는 ORF를 포함한다.
일부 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 세대 계대된 후 전립선 암-관련된 항원(들) 또는 이의 항원성 단편(들)의 안정한 발현을 갖는다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 5로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 6으로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV) 또는 피친데 바이러스 (PICV)로부터 유래된다. 일부 구체적인 실시양태에서, LCMV는 MP 균주, WE 균주, 암스트롱 균주, 암스트롱 클론 13 균주, 또는 내인성 LCMV 클론 13 당단백질 대신에 LCMV 균주 WE의 당단백질을 발현하는 LCMV 클론 13이다. 다른 구체적인 실시양태에서, PICV는 균주 Munchique CoAn4763 단리주 P18, 또는 P2 균주이다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 2 개의 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 10을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 11을 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 2 개의 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 12를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 13을 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 2 개의 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 14를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 15를 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 2 개의 S 세그먼트를 포함하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 16을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 17을 포함한다.
일부 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 감염성 및 복제 적격이다. 다른 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 약독화된다.
다른 양태에서, 본원은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법을 제공하며, 여기서 이 방법은 다음을 포함한다: (i) 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트 및 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트의 핵산을 숙주 세포에 형질주입시키는 단계이되, 여기서 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트는 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작되는, 단계; (ii) 바이러스 형성에 적합한 조건 하에서 숙주 세포를 유지하는 단계; 및
(iii) 아레나바이러스 입자를 함유하는 세포 배양 상청액을 수확하는 단계. 일부 구체적인 실시양태에서, 핵산은 cDNA이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 핵산은 RNA이다.
일부 실시양태에서, 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트의 전사는 양방향 발현 카세트를 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 방법은 숙주 세포에 아레나바이러스 중합효소를 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 형질주입시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 아레나바이러스 중합효소는 아레나바이러스 L 단백질이다. 다른 실시양태에서, 방법은 숙주 세포에 아레나바이러스 NP 단백질을 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 형질주입시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트의 전사는 각각 프로모터의 제어 하에 있다. 일부 구체적인 실시양태에서, 프로모터는 (i) RNA 중합효소 I 프로모터; (ii) RNA 중합효소 II 프로모터; 및 (iii) T7 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
3.3 치료의 방법 및 이의 키트
다른 양태에서, 본원은 위에 식별된 바와 같은 아레나바이러스 입자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약학 조성물을 제공한다.
다른 양태에서, 본원은 치료적 유효량의 약학 조성물을 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 전립선 암을 치료하는 방법을 제공한다.
다른 양태에서, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 위에 식별된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 위에 식별된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 (i) 및 (ii)를 반복하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자와 비교할 때, 상이한 아레나바이러스 종으로부터 유래되지만, 동일한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래된다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래된다.
일부 실시양태에서, 제1 및 제2 약학 조성물은 정맥내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 제1 및 제2 약학 조성물은 종양내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 종양내로 투여되고, 제2 약학 조성물은 정맥내로 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 정맥내로 투여되고, 제2 약학 조성물은 종양내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 제2 약제는 제1 및/또는 제2 약학 조성물과 조합하여 투여된다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 전립선 암을 치료하는 약제이다. 특정 실시양태에서, 제2 약제는 도세탁셀, 미톡산트론, 카바지탁셀 및 펨브롤리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 다른 특정 실시양태에서, 제2 약제는 엔잘루타미드 및 아비라테론으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 또 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 스테로이드와 함께 투여된다. 일 실시양태에서, 스테로이드는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론을 포함한다.
일부 실시양태에서, 약학 조성물 및 제2 약제는 동시에 공동-투여된다. 다른 실시양태에서, 약학 조성물(들)은 제2 약제의 투여 전에 투여된다. 다른 실시양태에서, 약학 조성물(들)은 제2 약제의 투여 후에 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 제2 약제는 제1 약학 조성물 이후, 제2 약학 조성물 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 약학 조성물(들) 및 제2 약제의 투여 사이의 간격은 약 1 시간, 약 2 시간, 약 3 시간, 약 4 시간, 약 5 시간, 약 6 시간, 약 7 시간, 약 8 시간, 약 9 시간, 약 10 시간, 약 11 시간, 약 12 시간, 약 1 일, 약 2 일, 약 3 일, 약 4 일, 약 5 일, 약 6 일, 약 1 주, 약 8 일, 약 9 일, 약 10 일, 약 11 일, 약 12 일, 약 13 일, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 약 6 주, 약 7 주, 약 8 주, 약 9 주, 약 10 주, 약 11 주, 약 12 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월 또는 약 6 개월 이상이다.
일부 실시양태에서, 대상체는 전립선 암을 앓고 있거나, 전립선 암에 감수성이 있거나, 전립선 암에 걸릴 위험이 있다.
다른 양태에서, 본원은 용기 및 사용 지침서를 포함하는 키트를 제공하며, 여기서 용기는 위에 식별된 바와 같은 아레나바이러스 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물 내에 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 정맥내 투여를 수행하는 데 적합한 장치를 추가로 포함한다.
다른 양태에서, 본원은 2 개 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하는 키트를 제공하며, 여기서 용기 중 하나는 위에 식별된 바와 같은 아레나바이러스 입자를 포함하고, 용기 중 다른 하나는 제2 약제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물 내에 있다. 일부 실시양태에서, 키트는 정맥내 투여를 수행하는 데 적합한 장치를 추가로 포함한다.
3.4 규약 및 약어
4. 도면의 간단한 설명
도 1a-1c: 4 개의 예시적인 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 유전적 조성의 개략도. (도 1a) artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 또는 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 유전적 조성의 개략도; (도 1b) artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 유전적 조성의 개략도; (도 1c) artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 유전적 조성의 개략도.
도 2a-2b: artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 PMVS (12)의 트랜스진 안정성. (도 2a) PAP 및 PSA 트랜스진 안정성을 표시된 계대 수준 (P1, P5 또는 P10)에서 PCR에 의해 분석하였으며; (도 2b) 표시된 계대에서 PMVS (12)의 PAP 및 PSA 트랜스진 발현을 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인하였다. 모 PMVS 스톡 생산 및 계대의 생성에 사용된 HEK/293VRC 세포의 전체 세포 용해물을 PAP, PSA, LCMV NP 및 MAPK 특이적 항체를 사용하여 웨스턴 블롯에서 분석하였다. 미감염된 HEK/293VRC 세포 (대조군; C)의 세포 용해물, 또는 artLCMV-PAP-NP/PAP-GP의 R&D 벡터 제제 (양성 대조군 1; PC1) 또는 artLCMV-PSA-NP/PSA-GP의 R&D 스톡 (양성 대조군 2; PC2)으로 감염된 세포로부터의 세포 용해물을 대조군으로서 사용하였다. 단백질 크기 (kDa)는 peqGold 단백질 표준 V, PeqLab (M)을 지칭한다. PAP: 1162 bp = 387 개의 아미노산, PSA: 786 bp = 262 개의 아미노산.
도 3a-3b: artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 PMVS (05) cl32/05/05의 트랜스진 안정성. (도 3a) PMVS (05) cl32/05/05의 PAP 및 PSA 트랜스진 안정성을 표시된 계대 수준에서 PCR에 의해 분석하였으며; (도 3b) 표시된 계대 수준에서 PMVS (05) cl32/05/05의 트랜스진 발현을 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인하였다. PAP: 1162 bp = 387 개의 아미노산, PSA: 786 bp = 262 개의 아미노산. 미감염된 HEK/293VRC 세포의 세포 용해물 (음성 대조군, -c) 또는 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 R&D 벡터 제제로 감염된 세포로부터의 세포 용해물을 대조군 (양성 대조군, +c)으로서 사용하였다.
도 4: PCR에 의해 테스트된, 표시된 계대에서 두 S 세그먼트 모두에서 전장 PSMA를 인코딩하는 artLCMV의 트랜스진 안정성. NP 세그먼트에 인코딩된 트랜스진의 예상 크기는 2532 bp이고, GP 세그먼트에 인코딩된 트랜스진의 예상 크기는 2518 bp이다.
도 5a-5b: artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 PMVS (09) Cl. 9/7/2의 트랜스진 안정성. (도 5a) PMVS (09) Cl. 9/7/2의 PSMA1 및 PSMA2 트랜스진 안정성을 표시된 계대 수준에서 PCR에 의해 분석하였으며; (도 5b) 표시된 계대에서의 PSMA1 및 PSMA2 트랜스진 발현을 웨스턴 블롯 분석에 의해 분석하였다. 강력하고 특이적인 항체의 이용불능상태(unavailability)는 PSMA2 단백질 발현에 대한 신호 검출을 방해하였다. 별표 (*)는 artPICV-PSMA1/2 양성 대조군에서 발견된 약한 신호를 갖는 밴드를 강조표시한다. 미감염된 HEK/293VRC 세포의 세포 용해물 (음성 대조군, -c) 또는 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (artPICV-PSMA1/2) 또는 artPICV-PSMA-NP/PSMA-GP (artPICV-PSMA, 전장 PSMA를 인코딩함)의 R&D 벡터 제제로 감염된 세포로부터의 세포 용해물을 대조군으로서 사용하였다.
도 6a-6b: artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 PMVS 26의 트랜스진 안정성. (도 6a) NP 및 GP 세그먼트에 인코딩된 트랜스진의 안정성을 표시된 계대 수준에서 PCR에 의해 분석하였으며; (도 6b) 표시된 계대에서의 트랜스진 발현을 웨스턴 블롯 분석에 의해 확인하였다.
도 7a-7e: 마우스에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 상이한 아레나바이러스 입자의 투여 후 CD8 T 세포 반응의 유도. (도 7a) 표시된 벡터의 단일 투여 7 일 후에 마우스에서 PSA 및 PAP에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PAP 및 PSA에 대해 각각 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 7b) 표시된 벡터의 단일 투여 7 일 후에 마우스에서 PSMA 및 PSMA의 하위도메인에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSMA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리 또는 단일 펩티드 PSMA76-90 (PSMA1) 또는 PSMA634-642 (PSMA2)를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 7c) 표시된 벡터 조합의 단일 투여 7 일 후에 마우스에서 PAP 및 PSA에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PAP 또는 PSA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 7d) 표시된 벡터 조합의 단일 투여 7 일 후에 마우스에서 PSMA 및 PSMA의 하위도메인에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSMA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리 또는 단일 펩티드 PSMA76-90 (PSMA1) 또는 PSMA634-642 (PSMA2)를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 7e) 표시된 벡터 또는 벡터 조합의 단일 투여 7 일 후에 마우스에서 LCMV NP (왼쪽 패널) 및 PICV NP (오른쪽 패널)에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. LCMV NP 및 PICV NP에 대해 각각 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시된다.
도 8a-8c: 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 면역원성: (도 8a) 표시된 벡터를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후, 마우스에서 PAP에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PAP에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 8b) 표시된 벡터의 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후, 마우스에서 PSA에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 8c) 표시된 벡터를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 LCMV NP (왼쪽 패널) 및 PICV NP (오른쪽 패널)에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. LCMV NP 및 PICV NP에 대해 각각 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시된다.
도 9a-9b: 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 면역원성. (도 9a) 표시된 벡터를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 PSMA 및 PSMA의 하위도메인에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSMA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리 또는 단일 펩티드 PSMA76-90 (PSMA1) 또는 PSMA634-642 (PSMA2)를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 9b) 표시된 벡터를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 LCMV NP (왼쪽 패널) 및 PICV NP (오른쪽 패널)에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. LCMV NP 및 PICV NP에 대해 각각 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시된다.
도 10: 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV 및 artPICV 벡터 조합의 면역원성. (도 10a) 표시된 벡터 믹스를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 PAP에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PAP에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 10b) 표시된 벡터 믹스를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 PSA에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 10c) 표시된 벡터 믹스를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 PSMA 및 PSMA의 하위도메인에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. PSMA에 대해 중첩된 펩티드 라이브러리 또는 단일 펩티드 PSMA76-90 (PSMA1) 또는 PSMA634-642 (PSMA2)를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시되며; (도 10d) 표시된 벡터 믹스를 이용한 초기 투여 26 일 후 및 순차적 투여 5 일 후에 마우스에서 LCMV NP (왼쪽 패널) 및 PICV NP (오른쪽 패널)에 대한 CD8 T 세포 (즉, IFN-γ+) 반응. LCMV NP 및 PICV NP에 대해 각각 중첩된 펩티드 라이브러리를 이용하여 펩티드 자극을 수행하였다. IFN-γ 양성 CD3+B220-CD8+ T 세포의 백분율은 개별 마우스에 대해 산술 평균 ± 표준 편차로서 표시된다.
도 11: 용량 단계적 확대 및 용량 확장을 위한 연구 설계. 약어: Alt. = 교대, Approx = 대략, art = 인공적, CRPC = 거세 저항성 전립선 암, GP = 당단백질, IV = 정맥내 (ly), LCMV = 림프구성 맥락수막염 바이러스, NP = 핵단백질, PAP = 전립선 산성 포스파타제, PICV = 피친데 바이러스, PSA = 전립선 특이적 항원, PSMA = 전립선 특이적 막 항원, RP2D = 권장되는 II상 용량, Seq. = 순차적.
도 12: 연구 설계 도식. 약어: DL1/2/3 = 용량 수준 1/2/3; mCRPC = 전이성 거세 저항성 전립선 암; Ph2 = 2상; RP2D = 권장되는 2상 용량.
5. 상세한 설명
본원은 섹션 5.1에 기재된 바와 같이, 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 변형된 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 제공한다. 또한 본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 각각 보유하는 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 함유하는 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 변형된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자, 및 섹션 5.4에 기재된 바와 같은 이러한 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법을 제공한다. 또한 본원은 섹션 5.2에 기재된 바와 같이 cDNA, DNA 발현 벡터 및 숙주 세포를 기재한다. 본원은 섹션 5.5에 기재된 바와 같은 이러한 아레나바이러스 입자를 포함하는 약학 조성물을 추가로 제공한다. 이러한 아레나바이러스 입자를 사용하여 전립선 암을 치료하는 방법은 섹션 5.6에 기재되어 있다. 마지막으로, 본원에 기재된 아레나바이러스 입자의 변형된 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 검출하기 위한 검정 및 치료된 동물에서 면역 반응을 측정하기 위한 검정과 같은 다양한 검정이 섹션 5.7에 기재되어 있다.
5.1 아레나바이러스 게놈 세그먼트
본원은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 갖는 신규 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 제공한다. 이러한 신규 조작된 아레나바이러스 세그먼트는 GP, NP, Z 또는 L 단백질과 같은 아레나바이러스 단백질을 인코딩하는 아레나바이러스 ORF 외에 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 갖는다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PAP를 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PSA를 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 전립선 줄기 세포 항원 (PSCA)을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 뮤신-1을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 NY-ESO-1을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 MAGE-A를 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다.
본원에 사용된 바와 같이, 용어 "항원성 단편"은 항원성 단편이 유래되는 항원에 대한 면역 반응을 이끌어내기에 충분한 순차적인 아미노산 서열 또는 입체형태적 면역학적 활성 영역을 포함하거나 이에 상응하는 항원의 일부를 지칭하도록 의도된다. 치료된 동물에서의 이러한 면역 반응은 단편이 유래되는 원래 항원에 의해 이끌어내진 면역 반응과 동일하거나 유사할 수 있다. 항원성 단편에 의해 이끌어내진 면역 반응은 원래 항원에 특이적인 검출가능한 T-세포 반응을 포함한다. 이러한 항원성 단편은 적어도 500 개의 아미노산, 적어도 490 개의 아미노산, 적어도 480 개의 아미노산, 적어도 470 개의 아미노산, 적어도 460 개의 아미노산, 적어도 450 개의 아미노산, 적어도 440 개의 아미노산, 적어도 430 개의 아미노산, 적어도 420 개의 아미노산, 적어도 410 개의 아미노산, 적어도 400 개의 아미노산, 적어도 390 개의 아미노산, 적어도 380 개의 아미노산, 적어도 370 개의 아미노산, 적어도 360 개의 아미노산, 적어도 350 개의 아미노산, 적어도 340 개의 아미노산, 적어도 330 개의 아미노산, 적어도 320 개의 아미노산, 적어도 310 개의 아미노산, 적어도 300 개의 아미노산, 적어도 290 개의 아미노산, 적어도 280 개의 아미노산, 적어도 270 개의 아미노산, 적어도 260 개의 아미노산, 적어도 250 개의 아미노산, 적어도 240 개의 아미노산, 적어도 230 개의 아미노산, 적어도 220 개의 아미노산, 적어도 210 개의 아미노산, 적어도 200 개의 아미노산, 적어도 190 개의 아미노산, 적어도 180 개의 아미노산, 적어도 170 개의 아미노산, 적어도 160 개의 아미노산, 적어도 150 개의 아미노산, 적어도 100 개의 아미노산, 적어도 50 개의 아미노산 길이이지만 단편이 유래되는 원래 항원의 전장보다 적은 아미노산 서열을 포함한다.
본원은 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 갖는 신규 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 제공한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 PSCA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 뮤신-1의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 NY-ESO-1의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 MAGE-A의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 S 세그먼트는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 각각 조작된 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 제공하며, 여기서 PSMA의 2 개의 항원성 단편은 PSMA 아미노산 서열의 약 절반을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 단편은 ORF의 뉴클레오티드 서열에 자연적으로 존재하는 ATG 코돈을 이용함으로써 생성될 수 있다. 다른 실시양태에서, 이러한 단편은 PSMA의 뉴클레오티드 서열에 ATG를 인공적으로 도입함으로써 생성될 수 있다.
구체적으로, 일부 구체적인 실시양태에서, PSMA의 분할은 자연적으로 존재하는 ATG 직전에 발생하며, 그에 따라 PSMA의 후반부는 자연적으로 존재하는 ATG로 시작하고 야생형 PSMA의 번역과 프레임 내에 있다. 따라서, 일 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 171번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 172번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 504번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 505번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 573번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 574번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 924번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 925번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1029번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1030번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1407번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1408번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1524번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1525번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1704번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1705번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1746번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1747번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1845번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1846번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1863번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1864번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1986번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1987번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 1989번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 1990번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 다른 실시양태에서, PSMA의 분할은 서열번호 9의 1번째 내지 2004번째 뉴클레오티드에 상응하는 PSMA의 전반부에 더하여 단부에 첨가된 정지 코돈, 및 서열번호 9의 2005번째 내지 2253번째 뉴클레오티드에 상응하는 후반부를 생성한다. 위에-기재된 실시양태에서, PSMA의 전반부의 마지막 코돈이 돌연변이되어 정지 코돈이 되도록 하였다. 위에-기재된 실시양태에서, PSMA의 전반부의 마지막 코돈은 TAG일 수 있다. 위에-기재된 실시양태에서, PSMA의 전반부의 마지막 코돈은 TAA일 수 있다. 위에-기재된 실시양태에서, PSMA의 전반부의 마지막 코돈은 TGA일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 위치에 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 전립선 암-관련된 항원의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PAP의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4를 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 Z를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 본원에 기재된 바와 같은 PSCA, 뮤신-1, NY-ESO-1, MAGE-A 또는 AKAP-4의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 L을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열을 제공한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1의 하나 이상의 아미노산 치환을 보유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 치환을 보유한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 서열번호 1의 아미노산 위치 2에서 이소류신의 아르기닌으로의 치환이다 (즉, I2R 돌연변이). 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 18을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 PAP의 아미노산 서열은 서열번호 18로 이루어진다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2와 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 아미노산 서열은 서열번호 2를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4와 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열은 서열번호 3 또는 4를 포함한다.
본원은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5와 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PAP의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 5를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSA의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 6을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 50% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 55% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 60% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 65% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 70% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 75% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 80% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 85% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 90% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 91% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 92% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 93% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 94% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 95% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 96% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 97% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 98% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8과 적어도 99% 서열 동일성을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 이종 ORF에 의해 인코딩된 PSMA의 항원성 단편의 뉴클레오티드 서열은 서열번호 7 또는 8을 포함한다.
다른 실시양태에서, 본원은 아레나바이러스 단백질, 예컨대, GP, NP, Z 또는 L 단백질을 인코딩하는 아레나바이러스 ORF에 더하여, 이전의 문단에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 L 세그먼트를 제공한다.
본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 임의의 종의 아레나바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV)로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 라사 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 피친데 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 후닌 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 올리베로스 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 타미아미 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 모발라 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 모페이아 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 입피(Ippy) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 아마파리 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 플렉살(Flexal) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 구아나리토 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 라티노 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 마추포 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 파라나 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 피리탈 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 사비아 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 타카리베 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 베어 캐니언(Bear Canyon) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 화이트워터 아로요(Whitewater Arroyo) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 알파우아요 바이러스 (ALLV)로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 Alxa 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 샤파레(Chapare) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 리지앙 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 쿠픽시 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 가이로 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 로에이 리버(Loei River) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 루조(Lujo) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 루나 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 루리(Luli) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 룬크(Lunk) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 마리엔탈 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 메리노 워크(Merino Walk) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 모로고로 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 오카한자(Okahandja) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 아포레 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 류큐 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 솔웨지 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 소우리스 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 원저우(Wenzhou) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 빅 브러시 탱크(Big Brushy Tank) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 카타리나 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 스키너 탱크(Skinner Tank) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 톤토 크릭(Tonto Creek) 바이러스로부터 유래될 수 있다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트는 사푸리(Xapuri) 바이러스로부터 유래될 수 있다.
본원에 제공된 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 생성하는 방법은 당업계에 잘 알려진 표준 프로토콜을 따른다 (예컨대, Kallert 등, 2017, Nat Commun, 8: 15327 참고).
5.2 핵산, 벡터 시스템 및 숙주 세포
본원은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 형성하기 위해 섹션 5.1에 기재된 바와 같은 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하거나 이로 이루어진 cDNA를 제공한다. 또한 본원은 이 섹션에 기재된 cDNA를 포함하는 DNA 발현 벡터를 제공한다. 추가로 본원은 이 섹션에 기재된 이러한 cDNA 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
5.2.1 아레나바이러스 S 세그먼트에 대한 핵산, 벡터 시스템 및 숙주 세포
구체적인 실시양태에서, 본원은 섹션 5.1에 기재된 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 S 세그먼트의 cDNA를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 섹션 5.1에 기재된 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 L 세그먼트인 cDNA를 제공한다. 특정 실시양태에서, 본원은 (i) 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF; 및 (ii) 아레나바이러스 GP, NP, Z 단백질 또는 L 단백질을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 세그먼트의 cDNA를 제공하며, 여기서 아레나바이러스 GP, NP, Z 단백질 또는 L 단백질을 인코딩하는 ORF 중 하나는 제거되고 섹션 5.1에 기재된 바와 같은 이종 ORF로 대체된다.
일 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 S 세그먼트를 인코딩하는 DNA 발현 벡터를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 S 세그먼트인 cDNA는 DNA 발현 벡터의 일부이거나 이에 통합된다. 다른 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 L 세그먼트를 인코딩하는 DNA 발현 벡터를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 L 세그먼트인 cDNA는 DNA 발현 벡터의 일부이거나 이에 통합된다.
다른 실시양태에서, 본원은 세포를 제공하며, 여기서 세포는 이 섹션에서 위에 기재된 cDNA 또는 벡터 시스템을 포함한다. 이러한 세포로부터 유래된 세포주, 이러한 세포를 포함하는 배양물, 이러한 세포를 배양하는 방법이 또한 본원에 제공된다. 특정 실시양태에서, 본원은 세포를 제공하며, 여기서 세포는 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 S 세그먼트의 cDNA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 세포는 S 세그먼트 및/또는 L 세그먼트를 포함한다.
5.2.2 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자에 대한 핵산, 벡터 시스템 및 숙주 세포
본원은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 3 개의 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 인코딩하는 핵산을 제공한다. 보다 구체적인 실시양태에서, 본원은 예를 들어, 표 1에 제시된 바와 같은 DNA 뉴클레오티드 서열 또는 DNA 뉴클레오티드 서열의 세트를 제공한다. 이러한 핵산을 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다.
구체적인 실시양태에서, 본원은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함께 인코딩하는 일련의 DNA 발현 벡터를 제공한다. 구체적으로, 본원은 3 개의 아레나바이러스 게놈 세그먼트, 즉, 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자 중 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 인코딩하는 일련의 DNA 발현 벡터를 제공한다.
다른 실시양태에서는, 본원은 세포를 제공하며, 여기서 세포는 이 섹션에서 위에 기재된 일련의 벡터를 포함한다. 이러한 세포로부터 유래된 세포주, 이러한 세포를 포함하는 배양물, 이러한 세포를 배양하는 방법이 또한 본원에 제공된다.
5.3 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자
본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트는 섹션 5.1에 기재된 바와 같고, 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트 중 하나는 GP를 포함하고 다른 하나는 NP를 포함한다. 또한 본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 섹션 5.1에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 2 개의 ORF는 3 개의 세그먼트 중 2 개에 삽입된다.
하기 표 1은 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 게놈 기구의 예시적인 예시이며, 여기서 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 게놈에서 2 개의 S 세그먼트의 세그먼트간 재조합은 복제-적격, 2 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자를 생성하지 않으며, 아레나바이러스 프로모터 활성을 폐지한다 (즉, 생성된 재조합된 S 세그먼트는 3' UTR 및 5' UTR 대신 2 개의 3' UTR 또는 2 개의 5' UTR로 구성된다).
표 1
하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자
위치 1은 제1 아레나바이러스 S 세그먼트 5' UTR의 제어 하에 있고; 위치 2는 제1 아레나바이러스 S 세그먼트 3' UTR의 제어 하에 있고; 위치 3은 제2 아레나바이러스 S 세그먼트 5' UTR의 제어 하에 있고; 위치 4는 제2 아레나바이러스 S 세그먼트 3' UTR의 제어 하에 있고; 위치 5는 아레나바이러스 L 세그먼트 5' UTR의 제어 하에 있으며; 위치 6은 아레나바이러스 L 세그먼트 3' UTR의 제어 하에 있다.
* ORF는 섹션 5.1에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 나타낸다.
특정 실시양태에서, 위치 1 및 위치 2 사이의 유전자간 영역 (IGR)은 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 L 세그먼트 IGR일 수 있고; 위치 3 및 4 사이의 IGR은 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 L 세그먼트 IGR일 수 있으며; 위치 5 및 6 사이의 IGR은 아레나바이러스 L 세그먼트 IGR일 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 위치 1 및 위치 2 사이의 IGR은 아레나바이러스 S 세그먼트 IGR일 수 있고; 위치 3 및 4 사이의 IGR은 아레나바이러스 S 세그먼트 IGR일 수 있으며; 위치 5 및 6 사이의 IGR은 아레나바이러스 L 세그먼트 IGR일 수 있다. 특정 실시양태에서, 다른 조합이 또한 가능하다. 특정 실시양태에서, 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 게놈에서 2 개의 S 세그먼트의 세그먼트간 재조합은 복제-적격, 2 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자를 생성하지 않으며, 아레나바이러스 프로모터 활성을 폐지한다 (즉, 생성된 재조합된 S 세그먼트는 3' UTR 및 5' UTR 대신 2 개의 3' UTR 또는 2 개의 5' UTR로 구성된다).
특정 실시양태에서, 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자에서 S 세그먼트 및 L 세그먼트의 세그먼트간 재조합은 2 개의 별개의 세그먼트 대신 단 하나만의 세그먼트에 2 개의 바이러스 유전자를 갖는 기능적 세그먼트를 복원한다. 다른 실시양태에서, 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자에서 S 세그먼트 및 L 세그먼트의 세그먼트간 재조합은 복제-적격, 2 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자를 생성하지 않는다.
특정 실시양태에서, 당업자는 표 1에 예시되고 본원에 기재된 바와 같은 기구로 아레나바이러스 게놈을 작제한 다음, 섹션 5.7에 기재된 바와 같은 검정을 사용하여, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 유전적으로 안정한지 여부, 즉, 본원에 논의된 바와 같은 복제-적격, 2 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자를 생성하지 않는지 여부를 결정할 수 있다.
위에 기재된 바와 같은 복제-적격, 2 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자를 생성하지 않는 것에 더하여, 일부 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 대규모 상업적 생산에 필요한, 다중 세대로 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는다. 따라서, 본원은 적어도 4 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 5 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 6 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 7 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 8 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 9 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 적어도 10 세대 계대된 후에 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공한다.
실시예 섹션 6.1.1 및 6.1.2에 입증된 바와 같이, 본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 5로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 6으로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
구체적인 실시양태에서, 본원은 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 10을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 11을 포함한다.
구체적인 실시양태에서, 본원은 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 12를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 13을 포함한다.
실시예 섹션 6.1.3에 입증된 바와 같이, 본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
구체적인 실시양태에서, 본원은 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 14를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 15를 포함한다.
실시예 섹션 6.1.4에 입증된 바와 같이, 본원은 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작된다.
구체적인 실시양태에서, 본원은 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 제공하며, 여기서 2 개의 S 세그먼트 중 하나는 서열번호 16을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나는 서열번호 17을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 감염성이 있으며, 즉, 유전 물질을 숙주 세포에 진입시키거나 주사할 수 있다. 더 구체적인 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 감염성이 있으며, 즉, 유전 물질을 숙주 세포에 진입시키거나 주사한 다음, 숙주 세포 내부에서 이의 유전 정보를 증폭 및 발현시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 감염된 세포에서 유전 정보를 증폭하고 발현하는 능력을 가지지만 유전적으로 조작된 세포가 아닌, 정상 세포에서 감염성 자손 입자를 추가로 생산하는 데 불능인 게놈을 함유하도록 조작된 감염성, 복제-결핍 아레나바이러스 입자이다. 특정 실시양태에서, 감염성 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 복제-적격이고, 유전적으로 조작된 세포가 아닌, 정상 세포에서 감염성 자손 입자를 추가로 생산할 수 있다. 더 구체적인 특정 실시양태에서, 이러한 복제-적격 바이러스 벡터는 복제-적격 바이러스 벡터가 유래된 야생형 바이러스에 비해 약독화된다.
특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 라사 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV)로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, LCMV는 클론 13, MP 균주, Arm CA 1371, Arm E-250, WE, LCMV cl13/WE (즉, 내인성 LCMV 클론 13 당단백질 대신 LCMV 균주 WE의 당단백질을 발현하는 LCMV 클론 13), UBC, Traub, Pasteur, 810885, CH-5692, Marseille #12, HP65-2009, 200501927, 810362, 811316, 810316, 810366, 20112714, Douglas, GR01, SN05, CABN 및 이들의 유도체이다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 피친데 바이러스 (PICV)로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, PICV는 균주 Munchique CoAn4763 단리주 P18, P2 균주이거나, Trapido 및 동료에 의해 기재된 여러 단리주 중 임의의 것으로부터 유래된다 (Trapido 등, 1971, Am J Trop Med Hyg, 20: 631-641). 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 후닌 바이러스 백신 Candid #1, 또는 후닌 바이러스 백신 XJ 클론 3 균주로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 올리베로스 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 타미아미 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 모발라 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 모페이아 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 입피 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 아마파리 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 플렉살 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 구아나리토 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 라티노 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 마추포 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 파라나 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 피리탈 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 사비아 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 타카리베 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 베어 캐니언 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 화이트워터 아로요 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 알파우아요 바이러스 (ALLV)로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 Alxa 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 샤파레 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 리지앙 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 쿠픽시 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 가이로 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 로에이 리버 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 루조 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 루나 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 루리 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 룬크 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 마리엔탈 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 메리노 워크 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 모로고로 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 오카한자 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 아포레 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 류큐 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 솔웨지 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 소우리스 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 원저우 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 빅 브러시 탱크 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 카타리나 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 스키너 탱크 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 톤토 크릭 바이러스로부터 유래된다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 입자는 사푸리 바이러스로부터 유래된다.
특정 실시양태에서, 본원은 (i) 이의 게놈 세그먼트(들) 중 하나 이상이 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작되고; (ii) GP, NP, Z 단백질 또는 L 단백질을 인코딩하는 ORF가 제거되거나 기능적으로 비활성화되어 생성된 바이러스가 감염성 자손 바이러스 입자를 추가로 생산할 수 없는 복제 결핍 아레나바이러스 입자를 제공한다. 하나 이상의 ORF가 결실되거나 기능적으로 비활성화된 유전적으로 변형된 게놈을 포함하는 아레나바이러스 입자는 보완 세포 (즉, 결실되거나 기능적으로 비활성화된 아레나바이러스 ORF를 발현하는 세포)에서 생산될 수 있다 (예컨대, WO 2009083210을 참고하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 원용됨).
특정 실시양태에서, 본원은 (i) 이의 게놈 세그먼트(들) 중 하나 이상이 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF를 보유하도록 조작되고; (ii) GP, NP, Z 단백질 및 L 단백질을 인코딩하는 ORF가 발현되지만, GP, NP, Z 단백질 및 L 단백질을 인코딩하는 이들 ORF 중 하나 이상이 상응하는 ORF에 대한 야생형 UTR 이외의 UTR의 제어 하에서의 위치에 있는 복제-적격 아레나바이러스 입자를 제공한다 (예컨대, WO 2016075250을 참고하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 원용됨).
특정 실시양태에서, 본 출원은 백신으로서 사용하기에 적합한 이전 단락에 기재된 바와 같은 아레나바이러스 입자 및 전립선 암의 예방접종 및 치료에서 이러한 아레나바이러스 입자를 사용하는 방법에 관한 것이다. 특정 실시양태에서, 본원은 섹션 5.2에 기재된 바와 같은 하나 이상의 cDNA를 하나 이상의 용기에 포함하는 키트를 제공한다. 구체적인 실시양태에서, 키트는 하나 또는 2 개 이상의 용기에 이전 단락에 기재된 바와 같은 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 아레나바이러스 입자를 포함한다. 키트는 다음 중 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다: 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 아레나바이러스 입자의 구제에 적합한 숙주 세포, 플라스미드 cDNA를 숙주 세포에 형질주입시키는 데 적합한 시약, 헬퍼 바이러스, 바이러스 단백질을 인코딩하는 플라스미드 및/또는 변형된 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 아레나바이러스 입자 또는 이의 cDNA에 특이적인 하나 이상의 프라이머.
5.4 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법
3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 예를 들어, 본원에 참조로 원용되는, Emonet 등, 2008, PNAS, 106(9):3473-3478; Popkin 등, 2011, J. Virol., 85 (15):7928-7932, WO2016075250, WO2016198531, WO2017076988, WO2017080920, WO2017198726, WO2018083220 및 WO2018185307에 의해 기재된 바와 같은 당업계에 알려진 역유전 기법에 의해 재조합적으로 생산될 수 있다
5.4.1 감염성 및 복제 적격 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자
특정 실시양태에서, 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법은 (i) 하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트의 핵산을 숙주 세포에 형질주입시키는 단계; (ii) 바이러스 형성에 적합한 조건 하에서 숙주 세포를 유지하는 단계; 및 (iii) 아레나바이러스 입자를 함유하는 세포 배양 상청액을 수확하는 단계를 포함한다.
일단 cDNA로부터 생성되면, 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자 (즉, 감염성 및 복제 적격)가 증식될 수 있다. 특정 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 바이러스가 본원에 기재된 바와 같은 바이러스의 사용을 허용하는 역가로 성장하도록 허용하는 임의의 숙주 세포에서 증식될 수 있다. 일 실시양태에서, 숙주 세포는 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 상응하는 야생형 바이러스에 대해 결정된 역가와 비슷한 역가로 성장하도록 허용한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 숙주 세포에서 증식될 수 있다. 사용될 수 있는 숙주 세포의 구체적인 예는 BHK, HEK 293, VERO 세포 또는 기타 세포를 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 세포주에서 증식될 수 있다.
특정 실시양태에서, 숙주 세포는 배양물에서 유지되고, 하나 이상의 플라스미드(들)로 형질주입된다. 플라스미드(들)는 예컨대, 중합효소 I 프로모터 및 종결자를 포함하는 포유동물 세포에서의 발현에 적합한 하나 이상의 발현 카세트(들)로부터 발현될 아레나바이러스 게놈 세그먼트(들)를 인코딩한다.
구체적인 실시양태에서, 숙주 세포는 배양물에서 유지되고, 하나 이상의 플라스미드(들)로 형질주입된다. 플라스미드(들)는 예컨대, 중합효소 I 프로모터 및 종결자를 포함하는 포유동물 세포에서의 발현에 적합한 하나 이상의 발현 카세트(들)로부터 발현되도록 생성될 바이러스 유전자(들)를 인코딩한다.
하나의 L 세그먼트 및 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 생성하는 데 사용될 수 있는 플라스미드는 다음을 포함할 수 있다: i) S 게놈 세그먼트, 예컨대, pol-I S를 각각 인코딩하는 2 개의 플라스미드, ii) L 게놈 세그먼트, 예컨대, pol-I L을 인코딩하는 플라스미드.
특정 실시양태에서, 바이러스 L 및 S 세그먼트의 세포내 합성을 지시하는 아레나바이러스 중합효소를 인코딩하는 플라스미드는 형질주입 혼합물에 혼입될 수 있다. 예를 들어, L 단백질을 인코딩하는 플라스미드 및 NP를 인코딩하는 플라스미드. L 단백질 및 NP는 바이러스 RNA 전사 및 복제를 위한 최소 트랜스-작용 인자이다. 대안적으로, NP 및 L 단백질과 함께 바이러스 L 및 S 세그먼트의 세포내 합성은 각각 반대 측면으로부터 2 개의 별개의 플라스미드의 L 및 S 세그먼트 cDNA로 판독되는 pol-I 및 pol-II 프로모터를 갖는 양방향 발현 카세트를 사용하여 수행될 수 있다.
또한, 플라스미드(들)는 포유동물 세포에서의 유전자 발현에 적합한 발현 카세트, 예컨대, 위와 같은 중합효소 II 발현 카세트의 제어 하에서 포유동물 선택 마커, 예컨대, 퓨로마이신 저항성을 특징으로 하거나, 바이러스 유전자 전사물(들)은 내부 리보솜 진입 부위, 예컨대, 뇌심근염 바이러스가 뒤따르고, 이어서 표유동물 저항성 마커가 뒤따른다. 대장균에서의 생산을 위해, 플라스미드는 추가적으로 박테리아 선택 마커, 예컨대, 암피실린 저항성 카세트를 특징으로 한다.
플라스미드(들)를 이용한 BHK-21 또는 HEK 293 세포의 형질주입은 칼슘-포스페이트, 리포솜-기반 프로토콜 또는 전기천공과 같은 일반적으로 사용되는 전략 중 임의의 것을 사용하여 수행될 수 있다. 형질주입 며칠 후에, 적합한 선택 약제, 예컨대, 퓨로마이신을 적정된 농도로 첨가한다. 살아남은 클론은 다음의 표준 절차에 따라 단리되고 서브클로닝되며, 고-발현 클론은 관심 있는 바이러스 단백질(들)에 대해 지시된 항체를 이용한 웨스턴 블롯 또는 유세포 분석법 절차를 사용하여 식별된다.
전형적으로, RNA 중합효소 I-구동된 발현 카세트, RNA 중합효소 II-구동된 카세트 또는 T7 박테리오파지 RNA 중합효소 구동된 카세트가 사용될 수 있으며, 후자는 우선적으로 일차 전사물을 가공하여 올바른 단부를 산출하기 위해 3'-말단 리보자임을 이용한다. 특정 실시양태에서, 아레나바이러스 게놈 세그먼트를 인코딩하는 플라스미드는 동일할 수 있으며, 즉, 게놈 서열 및 트랜스작용 인자는 하나의 플라스미드로부터 T7, polI 및 polII 프로모터에 의해 전사될 수 있다.
3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 회수하기 위해, 다음의 절차가 구상된다. 첫째 날: 전형적으로 M6-웰 플레이트에 80% 컨플루언트인 세포를 위에 기재된 바와 같이 플라스미드의 혼합물로 형질주입시킨다. 이를 위해, 칼슘-포스페이트, 리포솜-기반 프로토콜 또는 전기천공과 같은 임의의 일반적으로 사용되는 전략을 활용할 수 있다. 3-5 일 후: 배양된 상청액 (아레나바이러스 입자 제제)을 수확하고, 분취하고, 사용 전 아레나바이러스 입자를 보관해야 하는 기간에 따라 4℃, -20℃ 또는 -80℃에서 보관한다. 아레나바이러스 입자 제제의 감염성 역가는 면역초점 검정에 의해 평가된다. 대안적으로, 형질주입된 세포 및 상청액은 형질주입 후 3-5 일차에 더 큰 용기 (예컨대, T75 조직 배양 플라스크)로 계대될 수 있고, 배양 상청액은 계대 후 최대 5 일까지 수확된다.
게다가 본 출원은 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 발현에 관한 것이다. 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 ORF는 제한 효소를 사용하여 플라스미드에 통합될 수 있다.
5.4.2 감염성, 복제-결함인 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자
감염성, 복제-결함인 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 위에 기재된 바와 같이 구제될 수 있다. 그러나, 일단 cDNA로부터 생성되면, 본원에 제공된 감염성, 복제-결핍 아레나바이러스는 보완 세포에서 증식될 수 있다. 보완 세포는 이의 게놈의 변형에 의해 복제-결핍 아레나바이러스로부터 제거된 기능성을 제공하는 세포이다 (예컨대, GP 단백질을 인코딩하는 ORF가 결실되거나 기능적으로 비활성화된 경우, 보완 세포는 GP 단백질을 제공한다).
사용될 수 있는 세포, 예컨대, BHK-21, HEK 293, MC57G 또는 기타 세포는 배양물에 유지되고, 칼슘-포스페이트, 리포솜-기반 프로토콜 또는 전기천공과 같은 일반적으로 사용되는 전략 중 임의의 것을 사용하여 보완 플라스미드(들)로 형질주입된다. 며칠 후, 적합한 선택 약제, 예컨대, 퓨로마이신을 적정된 농도로 첨가한다. 살아남은 클론은 다음의 표준 절차에 따라 단리되고 서브클로닝되며, 고-발현 C-세포 클론은 관심 있는 바이러스 단백질(들)에 대해 지시된 항체를 이용한 웨스턴 블롯 또는 유세포 분석법 절차를 사용하여 식별된다. 안정적으로 형질주입된 C-세포의 사용에 대한 대안으로서, 정상 세포의 일시적인 형질주입은 C-세포가 사용될 각각의 단계에서 누락된 바이러스 유전자(들)를 보완할 수 있다. 또한, 헬퍼 바이러스를 사용하여, 트랜스에서 누락된 기능성을 제공할 수 있다.
5.5 약학 조성물
본 출원은 또한 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 포함하는 백신, 면역원성 조성물(예컨대, 백신 제형) 및 약학 조성물에 관한 것이다. 이러한 백신, 면역원성 조성물 및 약학 조성물은 당업계의 표준 절차에 따라 제형화될 수 있다. 본원에 기재된 방법 및 적용에 대한 적합한 변형 및 각색이 자명할 수 있고 이의 범주 또는 임의의 실시양태를 벗어나지 않고 이루어질 수 있다는 것은 관련 분야의 당업자에게 용이하게 명백할 것이다.
특정 실시양태에서, 본원은 본원에 기재된 바와 같은 아레나바이러스 입자를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 특정 실시양태에서, 이러한 면역원성 조성물은 약학적으로 허용가능한 부형제를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 이러한 면역원성 조성물은 아쥬반트를 추가로 포함한다. 본원에 기재된 조성물과 조합하여 투여하기 위한 아쥬반트는 상기 조성물의 투여 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 용어 "아쥬반트"는 본원에 기재된 조성물과 함께 또는 이의 일부로서 투여될 때 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자에 대한 면역 반응을 증대, 향상 및/또는 부스팅시키는 화합물을 지칭하며, 가장 중요하게는 유전자 산물은 벡터화되지만, 화합물이 단독으로 투여될 때 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자 및 후자에 의해 벡터화되는 유전자 산물에 대한 면역 반응을 생성하지 않는다. 일부 실시양태에서, 아쥬반트는 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자 및 후자에 의해 벡터화된 유전자 산물에 대한 면역 반응을 생성하고, 알레르기 또는 기타 이상 반응을 생산하지 않는다. 아쥬반트는 예컨대, 림프구 동원, B 및/또는 T 세포의 자극, 및 대식세포 또는 수지상 세포의 자극을 비롯한 여러 메커니즘에 의해 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 백신 또는 면역원성 조성물이 아쥬반트를 포함하거나 하나 이상의 아쥬반트와 함께 투여되는 경우, 사용될 수 있는 아쥬반트는 무기염 아쥬반트 또는 무기염 겔 아쥬반트, 미립자 아쥬반트, 마이크로미립자 아쥬반트, 점막 아쥬반트, 및 면역자극 아쥬반트를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 아쥬반트의 예는 알루미늄 염 (명반)(예컨대, 알루미늄 하이드록시드, 알루미늄 포스페이트 및 알루미늄 설페이트), 3 데-O-아실화된 모노포스포릴 지질 A (MPL)(GB 2220211 참고), MF59 (Novartis), AS03 (GlaxoSmithKline), AS04 (GlaxoSmithKline), 폴리소르베이트 80 (Tween 80; ICL Americas, Inc.), 이미다조피리딘 화합물 (국제 공개공보 번호 WO2007/109812로서 공개된 국제 출원 번호 PCT/US2007/064857 참고), 이미다조퀴녹살린 화합물 (국제 공개공보 번호 WO2007/109813으로서 공개된 국제 출원 번호 PCT/US2007/064858 참고) 및 사포닌, 예컨대, QS21 (Kensil 등, 1995, in Vaccine Design: The Subunit and Adjuvant Approach (eds. Powell & Newman, Plenum Press, NY); 미국 특허 번호 5,057,540 참고)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 아쥬반트는 프로인트 아쥬반트 (완전 또는 불완전)이다. 다른 아쥬반트는 임의로 면역 자극제, 예컨대, 모노포스포릴 지질 A와 조합된 수중유 에멀젼 (예컨대, 스쿠알렌 또는 땅콩유)이다 (Stoute 등, 1997, N. Engl. J. Med. 336, 86-91 참고)
조성물은 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 단독으로 또는 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 포함한다. 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 현탁액 또는 분산액, 특히 등장성 수성 현탁액 또는 분산액이 사용될 수 있다. 약학 조성물은 멸균될 수 있고/거나, 부형제, 예컨대, 보존제, 안정화제, 습윤제 및/또는 유화제, 가용화제, 삼투압 조절용 염 및/또는 완충액을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 종래의 분산 및 현탁 공정에 의해 그 자체로 알려진 방식으로 제조된다. 특정 실시양태에서, 이러한 분산액 또는 현탁액은 점도-조절제를 포함할 수 있다. 현탁액 또는 분산액은 약 2℃ 내지 8℃의 온도에서 유지되거나, 장기간 보관을 위해 우선적으로 냉동된 다음, 사용 직전에 해동될 수 있거나, 대안적으로 보관을 위해 동결건조될 수 있다. 주사의 경우, 백신 또는 면역원성 제제는 수용액, 바람직하게는 행크스 용액, 링거 용액 또는 생리식염수 완충액과 같은 생리학적으로 적합한 완충액으로 제형화될 수 있다. 용액은 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형화제를 함유할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 보존제, 예컨대, 수은 유도체 티메로살을 추가적으로 포함한다. 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 0.001% 내지 0.01% 티메로살을 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 약학 조성물은 보존제를 포함하지 않는다.
다른 실시양태에서는, 본원은 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 포함하는 조성물을 제공한다. 이러한 조성물은 전립선 암의 치료 및 예방의 방법에 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물은 전립선 암에 감수성이거나 전립선 암의 특징적인 증상을 나타내는 대상체 또는 전립선 암으로 진단된 대상체의 치료에 사용된다. 다른 구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 면역원성 조성물은 조성물이 투여되는 숙주에서 면역 반응을 유도하는 데 사용될 수 있다. 본원에 기재된 면역원성 조성물은 백신으로서 사용될 수 있고, 이에 따라 약학 조성물로서 제형화될 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 본원에 기재된 면역원성 조성물은 대상체 (예컨대, 인간 대상체)의 전립선 암의 예방에 사용된다. 다른 실시양태에서, 백신, 면역원성 조성물 또는 약학 조성물은 수의학 및/또는 인간 투여에 적합하다.
5.6 전립선 암을 치료하는 방법
5.6.1 전립선 암의 치료
섹션 5.3에 기재된 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자 및 섹션 5.5에 기재된 약학 조성물은 동일한 항원을 발현하는 전립선 종양 세포에 대해 지시된 강력한 T 세포 반응을 유도하도록 설계된다. 일부 실시양태에서, 섹션 5.3에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자는 DC 및 대식세포를 표적화하여, 효율적인 세포독성 T 림프구 (CTL) 유도를 위한 항원을 전달한다. 그 결과, 유도된 전립선 암-관련된 항원-특이적 이펙터 CD8+ T 세포의 종양으로의 유입은 전립선 암 세포의 CTL-매개된 제거를 초래한다.
따라서, 일부 실시양태에서, 본원은 치료적 유효량으로 섹션 5.5에 기재된 바와 같은 약학 조성물을 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 전립선 암을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원은 치료적 유효량으로 섹션 5.5에 기재된 바와 같은 약학 조성물을 전립선 암의 예방을 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 전립선 암을 예방하는 방법을 제공한다.
일 실시양태에서, 약학 조성물의 투여는 비경구 투여이다. 비경구 투여는 정맥내 또는 피하 투여일 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 아레나바이러스 입자 또는 약학 조성물은 경구, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내, 국부, 피하, 경피, 비강내 및 흡입 경로를 포함하는 것에 의해, 난절법(scarification)(예컨대, 이분화된 바늘을 사용하여 피부의 상부층을 긁는 것)을 통해, 및 종양내 투여를 통해 대상체에 투여된다.
비강내 투여 또는 흡입에 의한 투여를 위해, 본 개시내용에 따라 사용하기 위한 제제는 적합한 추진제, 예컨대, 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 기타 적합한 가스를 사용하여 가압 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 스프레이 제시의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투여량 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 화합물의 분말 믹스를 함유하고 락토스 또는 전분과 같은 적합한 분말 베이스로서의 예컨대, 흡입기 또는 취입기에서의 사용을 위한 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 제형화될 수 있다.
5.6.2 교대 벡터 요법
일부 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 예방을 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (iii) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; 및 (iv) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 예방을 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (iii) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; 및 (iv) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (iii) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; (iv) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; (v) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; 및 (vi) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 예방을 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (iii) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; (iv) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; (v) 일정 기간 후, 제1 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계; 및 (vi) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 다시 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (i) 및 (ii)를 추가로 3 회, 4 회, 5 회, 6 회, 7 회, 8 회, 9 회 또는 10 회 반복하는 단계를 포함한다. 다른 실시양태에서, 본원은 전립선 암의 예방을 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 예방하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (i) 및 (ii)를 추가로 3 회, 4 회, 5 회, 6 회, 7 회, 8 회, 9 회 또는 10 회 반복하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 이전 단락의 제1 및 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 상이한 아레나바이러스 종으로부터 유래되지만, 본원에 기재된 바와 같은 동일한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 실시양태에서, 이전 단락의 제1 및 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 상이한 아레나바이러스 종으로부터 유래되고, 본원에 기재된 바와 같은 상이한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 또 다른 실시양태에서, 이전 단락의 제1 및 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 동일한 아레나바이러스 종으로부터 유래되지만, 본원에 기재된 바와 같은 상이한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다.
구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 아레나바이러스 입자는 본원에 기재된 바와 같은 동일한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 아레나바이러스 입자는 본원에 기재된 바와 같은 상이한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 또 다른 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 아레나바이러스 입자는 본원에 기재된 바와 같은 동일한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 여전히 또 다른 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 아레나바이러스 입자는 본원에 기재된 바와 같은 상이한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다.
구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되며, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PSMA의 동일한 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PAP, PSA, 및 PSMA의 동일한 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유하고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유하고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다.
구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PSMA의 동일한 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고, 두 약학 조성물 모두로부터의 아레나바이러스 입자는 PAP, PSA, 및 PSMA의 동일한 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유하고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 LCMV로부터 유래되고 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유하고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자는 PICV로부터 유래되고 PAP 및 PSA를 인코딩하는 ORF(들)를 보유한다.
5.6.3 투약 및 양생법
또한, 본원은 본원에 기재된 약학 조성물로 전립선 암을 치료하는 방법의 용량을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함유하는 약학 조성물은 약 1 × 106 복제-적격 바이러스 초점 형성 단위 (RCV FFU)로 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함유하는 약학 조성물은 약 1 × 107 RCV FFU로 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함유하는 약학 조성물은 약 1 × 108 RCV FFU로 투여된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함유하는 약학 조성물은 약 1 × 109 RCV FFU로 투여된다.
또한, 본원은 본원에 기재된 약학 조성물로 전립선 암을 치료하는 방법의 용량을 제공한다. 섹션 5.6.2에 기재된 바와 같이, 동일한 또는 상이한 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 함유하는 약학 조성물이 교대로 사용될 수 있다. 이와 같이, 일부 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제1 약학 조성물의 약 22 일 후에 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제1 약학 조성물의 약 43 일 후에 투여될 수 있다.
5.6.4 병용 요법
또한, 본원은 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 방법은 (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및 (iii) 제1 및/또는 제2 약학 조성물과 조합하여 제2 약제를 투여하는 단계를 포함한다.
본원에 제공된 제2 약제는 전립선 암을 치료하기 위해 당업계에 잘 알려진 약제이다. 일부 실시양태에서, 제2 약제는 일반적으로 종양 세포의 성장을 억제하는 화학요법 약물이다. 다른 실시양태에서, 제2 약제는 전립선 암과 연관된 돌연변이된 유전자(들)에 대한 표적화된 요법 약물이다. 다른 실시양태에서, 제2 약제는 안드로겐 축 억제제 (즉, 안드로겐 시그널링 경로의 구성요소 중 임의의 것의 억제제)이다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 안드로겐 합성의 억제제이다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 안드로겐 수용체에 결합한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 작용제이다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 성선자극호르몬-방출 호르몬 (GnRH) 길항제이다. 다른 실시양태에서, 제2 약제는 전립선 암에 대한 면역요법에 사용되는 약제이다. 일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 면역체크포인트 억제제이다. 다른 실시양태에서, 제2 약제는 방사성의약품이다.
일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 도세탁셀이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 미톡산트론이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 카바지탁셀 (제브타나®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 니라파립이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 올라파립 (린파자®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 루카파립 (루브라카®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 아비라테론 아세테이트 (자이티가®/욘사®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 케토코나졸 (니조랄®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 CYP17 효소 패밀리의 억제제이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 비칼루타미드 (카소덱스®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 플루타미드이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 닐루타미드 (닐란드론®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 아팔루타미드 (에를레아다®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 다롤루타미드 (누베카®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 엔잘루타미드 (엑스탄디®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 류프롤리드 아세테이트 (엘리가드®/루프론 데포®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 고세렐린 (졸라덱스®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 데가렐릭스 (퍼마곤®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 시푸류셀-T (프로벤지®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 펨브롤리주맙이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 ADXS-PSA이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 라듐-223 (조피고®)이다.
일부 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 도세탁셀이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 미톡산트론이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 카바지탁셀 (제브타나®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 니라파립이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 올라파립 (린파자®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 루카파립 (루브라카®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 아비라테론 아세테이트 (자이티가®/욘사®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 케토코나졸 (니조랄®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 CYP17 효소 패밀리의 억제제이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 비칼루타미드 (카소덱스®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 플루타미드이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 닐루타미드 (닐란드론®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 아팔루타미드 (에를레아다®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 다롤루타미드 (누베카®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 엔잘루타미드 (엑스탄디®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 류프롤리드 아세테이트 (엘리가드®/루프론 데포®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 고세렐린 (졸라덱스®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 데가렐릭스 (퍼마곤®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 시푸류셀-T (프로벤지®)이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 펨브롤리주맙이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 ADXS-PSA이다. 다른 구체적인 실시양태에서, 제2 약제는 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론과 같은 스테로이드와 함께 라듐-223 (조피고®)이다.
일부 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 정맥내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 피하 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 경구 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 피내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 근육내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 복강내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 국부적으로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 경피로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 비강내로 투여된다. 다른 실시양태에서, 이 섹션에 기재된 제2 약제는 종양내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 약학 조성물 및 제2 약제는 동시에 공동-투여된다. 다른 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 6 개월 초과 전에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제1 약학 조성물은 제2 약제의 투여 6 개월 초과 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제2 약학 조성물 및 제2 약제는 동시에 공동-투여된다. 다른 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 시간 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 일 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 주 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 개월 전에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 6 개월 초과 전에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 시간 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 일에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 일 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 7 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 8 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 9 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 10 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 11 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 12 주 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 1 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 2 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 3 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 4 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 5 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 약 6 개월 후에 투여된다. 구체적인 실시양태에서, 제2 약학 조성물은 제2 약제의 투여 6 개월 초과 후에 투여된다.
5.6.5 환자 집단
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 전립선 암을 앓고 있는 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 전립선 암에 감수성인 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 전립선 암에 걸릴 위험이 있는 대상체에 투여하기 위한 것이다.
당업계에 잘 알려진 바와 같이, 전립선 암의 진전을 평가하기 위해 널리 사용되는 병기결정 시스템은 미국 암 합동 위원회 (AJCC) TNM 시스템이다. 전립선 암에 대한 TNM 시스템은 다음의 정보의 5 개의 양태를 기반으로 한다: (i) 2 개의 하위-범주로 추가로 나뉠 수 있는, 원발성 종양의 규모 (T 범주): 신체 검사 (디지털 직장 검사 포함), 전립선 생검 및 임의의 이미징 테스트에 기반한 임상 T 범주 (cT); 및 수술로 제거된 전립선에 기반한 병리학적 T 범주 (pT); (ii) 암이 인근의 림프절로 확산되었는지 여부 (N 범주); (iii) 암이 신체의 다른 부분으로 확산 (전이)되었는지 여부 (M 범주); (iv) PSA 수준; 및 (v) 전립선 생검의 글리슨 점수. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 cT1, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 10 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 cT2a, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 10 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 pT2, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 10 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 cT1, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 10 이상 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 cT2a 또는 pT2, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 10 이상 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 cT2b 또는 cT2c, N0, M0, 등급 그룹 1 (글리슨 점수 6 이하) 및 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 T1 또는 T2, N0, M0, 등급 그룹 2 (글리슨 점수 7) 및 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 T1 또는 T2, N0, M0, 등급 그룹 2 (글리슨 점수 7 또는 8) 및 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 T1 또는 T2, N0, M0, 등급 그룹 1 내지 4 (글리슨 점수 8 이하) 및 20 미만의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 T3 또는 T4, N0, M0, 등급 그룹 1 내지 4 (글리슨 점수 8 이하) 및 임의의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 임의의 T, N0, M0, 등급 그룹 5 (글리슨 점수 9 또는 10) 및 임의의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 임의의 T, N1, M0, 글리슨 점수에 대한 임의의 등급 그룹, 및 임의의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 임의의 T, 임의의 N, M1, 임의의 글리슨 점수에 대한 임의의 등급 그룹, 및 임의의 PSA로서 진단된 대상체에 투여하기 위한 것이다.
5.6.6 키트
또한 본원은 이 섹션 (즉, 섹션 5.6)에 기재된 방법을 수행하는 데 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 키트는 하나 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하며, 여기서 하나 이상의 용기는 본원에 제공된 조성물 (예컨대, 약학, 면역원성 또는 백신 조성물)을 포함한다. 일부 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 키트는 본원에 기재된 방법을 수행하기 위한 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물의 활성 성분을 각각 함유하는 용기를 포함한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 키트는 2 개 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하며, 여기서 용기 중 하나는 섹션 5.3에 기재된 아레나바이러스 입자를 포함하고, 다른 용기는 섹션 5.6.4에 기재된 제2 약제를 포함한다.
또한, 본원은 하나 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하는 키트를 제공하며, 여기서 하나 이상의 용기는 본원에 제공된 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물 중의 조성물 (예컨대, 약학, 면역원성 또는 백신 조성물), 및 강성 또는 반-강성 개방형 용기, 플라스틱 또는 폐쇄형 용기, 튜브, 드립 챔버, 및 용기로부터 환자의 정맥으로 유체를 이동시키는 데 필요한 튜브에 대한 기타 부속품과 같은 정맥내 투여를 수행하는 데 적합한 장치, 및 바늘을 포함한다. 일부 구체적인 실시양태에서, 본원에 제공된 키트는 2 개 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하며, 여기서 용기 중 하나는 섹션 5.3에 기재된 아레나바이러스 입자를 포함하고, 다른 용기는 섹션 5.6.4에 기재된 제2 약제, 및 강성 또는 반-강성 개방형 용기, 플라스틱 또는 폐쇄형 용기, 튜브, 드립 챔버, 및 용기로부터 환자의 정맥으로 유체를 이동시키는 데 필요한 튜브에 대한 기타 부속품과 같은 정맥내 투여를 수행하는 데 적합한 장치, 및 바늘을 포함한다.
5.7 검정
5.7.1 아레나바이러스 검출 검정
본원은 표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약에 예시된 바와 같이, 다양한 샘플, 예컨대, 치료된 동물 또는 치료된 환자의 타액, 대변, 혈액, 및 소변에서 섹션 5.1에 기재된 바와 같은 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 섹션 5.3에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 존재를 검출할 수 있는 당업계에 알려진 기법을 제공한다. 예를 들어, RT-PCR은 본원에 기재된 바와 같은 전립선 암-관련된 항원을 인코딩하는 이종 ORF 또는 본원에 기재된 바와 같은 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 보유하도록 조작된 아레나바이러스 S 세그먼트를 검출하고 정량화하기 위해 아레나바이러스에 특이적인 프라이머와 함께 사용될 수 있다. 웨스턴 블롯, ELISA, 방사면역검정, 면역침전, 면역세포화학, 또는 FACS와 함께 면역세포화학은 아레나바이러스 S 세그먼트 또는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 유전자 산물을 정량화하기 위해 사용될 수 있다.
5.7.2 감염성을 측정하기 위한 검정
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 아레나바이러스 입자 제제의 감염성을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 바이러스/벡터 역가의 결정은 "초점 형성 단위 검정" (FFU 검정)에 의해 수행될 수 있다. 간략하게, 보완 세포, 예컨대, HEK293-TVL 세포를 플레이팅하고, 바이러스/벡터 샘플의 상이한 희석물로 접종한다. 항온처리 기간 후, 세포가 단층을 형성하고 바이러스가 세포에 부착될 수 있도록 하기 위해, 단층을 메틸셀룰로스로 덮는다. 플레이트를 추가로 항온처리하면, 원래 감염된 세포가 바이러스 자손을 방출한다. 메틸셀룰로스 오버레이로 인해, 새로운 바이러스의 확산은 이웃 세포로 제한된다. 결과적으로, 각각의 감염성 입자는 초점이라고 불리는 감염된 세포의 원형 존을 생산한다. 이러한 초점은 LCMV-NP 또는 아레나바이러스 입자 또는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자에 의해 발현되는 다른 단백질에 대한 항체, 및 HRP-기반 색상 반응을 사용하여 가시화되고 계수가능하게 만들 수 있다. 바이러스/벡터의 역가는 밀리리터당 초점-형성 단위 (FFU/mL)로 계산될 수 있다. 유사한 방식으로, 3 개의 세그먼트를 갖는, 복제 적격 바이러스 입자의 비율이 결정될 수 있다. 보완 세포 대신에, 비-보완 세포주, 예컨대, HEK293이 사용된다. 이는 3 개의 세그먼트를 갖는 바이러스 입자만이 이웃 세포를 감염시키는 것을 가능하게 한다. 복제 적격 바이러스/벡터 (RCV)의 역가는 밀리리터당 초점-형성 단위 (RCV FFU/mL)로 계산될 수 있다. 유사하게, 감염성은 표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약에 예시된 바와 같이 치료된 환자의 샘플에서의 임상 환경에서 측정될 수 있다.
5.7.3 아레나바이러스 입자의 성장
본원에 기재된 아레나바이러스 입자의 성장은 당업계에 알려진 또는 본원에 기재된 임의의 방법에 의해 평가될 수 있다. 바이러스 성장은 본원에 기재된 아레나바이러스 입자의 정의된 양/농도를 세포 배양물 (예컨대, Vero 세포 또는 BHK-21 세포)에 접종함으로써 결정될 수 있다. 명시된 시간 동안 바이러스의 항온처리 후, 표준 방법을 사용하여 바이러스 함유 상청액을 수집하고, 본원에 기재된 검정을 사용하여 감염성을 측정할 수 있다.
5.7.4 혈청 ELISA
동물 (예컨대, 마우스, 기니피그)의 예방접종 시 체액성 면역 반응의 결정은 항원-특이적 혈청 ELISA (효소-연결된 면역흡착 검정)에 의해 수행될 수 있다. 간략하게, 플레이트는 항원 (예컨대, 재조합 단백질)으로 코팅되고, 항체의 비특이적 결합을 방지하기 위해 차단되고, 혈청의 연속 희석물과 함께 항온처리된다. 항온처리 후, 결합된 혈청-항체는 예컨대, 효소-커플링된 항-종 (예컨대, 마우스, 기니피그)-특이적 항체 (총 IgG 또는 IgG 하위클래스 검출) 및 후속 색상 반응을 사용하여 검출될 수 있다. 항체 역가는 예컨대, 엔드포인트 기하 평균 역가로서 결정될 수 있다.
5.7.5 유도된 항체의 중화 활성을 측정하기 위한 검정
혈청 중 중화 항체의 결정은 ATCC로부터의 ARPE-19 세포 및 GFP-태깅된 바이러스를 사용하여 다음의 세포 검정으로 수행된다. 또한 외인성 보체의 공급원으로서 보충 기니피그 혈청이 사용된다. 검정은 중화에 사용하기 1 또는 2 일 전에 384 웰 플레이트에 6.5x103 개의 세포/웰 (50 μl/웰)의 씨딩으로 시작된다. 중화는 세포가 없는 96-웰 멸균 조직 배양 플레이트에서 37℃에서 1 시간 동안 수행된다. 중화 항온처리 단계 후, 혼합물을 세포에 첨가하고, 플레이트 판독기를 이용한 GFP-검출을 위해 추가적인 4 일 동안 항온처리한다. 양성 중화 인간 혈청을 각각의 플레이트에 대한 검정 양성 대조군으로서 사용하여, 모든 결과의 신뢰성을 확인한다. 역가 (EC50)는 4 개의 매개변수 로지스틱 곡선 피팅을 사용하여 결정된다. 추가적인 테스트로서, 웰을 형광 현미경으로 확인한다. 유사하게, 유도된 항체의 중화 활성은 표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약에 예시된 바와 같이 임상 환경에서 측정될 수 있다.
5.7.6 플라크 감소 검정
간략하게, LCMV에 대한 플라크 감소 (중화) 검정은 리포터 유전자 (예컨대, 녹색 형광 단백질 (GFP)을 인코딩하는 복제-적격 또는 -결핍 LCMV를 사용하여 수행될 수 있으며, 5% 토끼 혈청은 외인성 보체의 공급원으로서 사용될 수 있고, 플라크는 형광 현미경에 의해 열거될 수 있다. 중화 역가는 대조군 (면역-전) 혈청 샘플에서와 비교하여 플라크의 50%, 75%, 90% 또는 95% 감소를 초래하는 혈청의 가장 높은 희석으로서 정의될 수 있다.
qPCR LCMV RNA 게놈은 제조사가 제공한 프로토콜에 따라 QIAamp 바이러스 RNA 미니 키트 (QIAGEN)를 사용하여 단리된다. LCMV RNA 게놈 등가물은 SuperScript® III Platinum® One-Step qRT-PCR 키트 (Invitrogen), 및 LCMV NP 코딩 영역의 일부 또는 아레나바이러스 입자 또는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 다른 게놈 스트레치에 특이적인 프라이머 및 프로브 (FAM 리포터 및 NFQ-MGB Quencher)를 이용하여 StepOnePlus 실시간 PCR 시스템 (Applied Biosystems)에서 수행된 정량적 PCR로 검출된다. 반응의 온도 프로파일은 다음과 같을 수 있다: 60℃에서 30 분, 95℃에서 2 분, 이어서 95℃에서 15 초, 56℃에서 30 초의 45 주기. 프라이머 및 프로브 결합 부위를 함유하는 LCMV NP 코딩 서열의 단편 또는 아레나바이러스 입자 또는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 다른 게놈 스트레치에 상응하는 분광광도계로 정량화된 생체외-전사된 RNA 단편의 log10 희석 시리즈로부터 준비된 표준 곡선에 대한 샘플 결과의 비교에 의해 RNA를 정량화할 수 있다.
5.7.7 웨스턴 블롯팅
조직 배양 플라스크 또는 현탁액에서 성장한 감염된 세포는 RIPA 완충액 (Thermo Scientific)을 사용하여 감염 후 표시된 시점에서 용해되거나, 세포-용해 없이 직접 사용된다. 샘플을 환원제 및 NuPage LDS 샘플 완충액 (NOVEX)을 이용하여 10 분 동안 99℃로 가열하고, 전기영동을 위해 4-12% SDS-겔에 로딩되기 전에 실온으로 냉각시킨다. Invitrogens iBlot 겔 전달 디바이스를 사용하여 단백질을 막에 블롯팅하고, Ponceau 염색으로 시각화한다. 마지막으로, 관심 있는 단백질에 대한 일차 항체 및 알칼리성 포스파타제 컨쥬게이션된 이차 항체를 이용하여 제제를 탐침한 다음, 1-단계 NBT/BCIP 용액 (INVITROGEN)으로 염색한다.
5.7.8 항원-특이적 CD8+ T-세포의 검출을 위한 MHC-펩티드 다합체 염색 검정
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 항원-특이적 CD8+ T-세포 반응을 테스트하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, MHC-펩티드 사합체 염색 검정이 사용될 수 있다 (예컨대, Altman J.D. 등, Science. 1996; 274:94-96; 및 Murali-Krishna K. 등, Immunity. 1998; 8:177-187 참고). 간략하게, 검정은 다음의 단계를 포함하며, 사합체 검정은 항원 특이적 T-세포의 존재를 검출하는 데 사용된다. 항원-특이적 T-세포를 검출하기 위해, 이는 정의된 항원 특이성 및 T-세포의 MHC 일배체형 (전형적으로 형광 표지됨)에 대해 맞춤 제작된 MHC 분자의 사합체 및 펩티드 둘 모두에 결합해야 한다. 그런 다음, 사합체는 형광 라벨을 통해 유세포 분석법에 의해 검출된다.
5.7.9 항원-특이적 T-세포의 검출을 위한 ELISPOT 검정
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 항원-특이적 T-세포 반응을 테스트하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, ELISPOT 검정이 사용될 수 있다 (예컨대, Czerkinsky C.C. 등, J Immunol Methods. 1983; 65:109-121; 및 Hutchings P.R. 등, J Immunol Methods. 1989; 120:1-8 참고). 표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약에 예시된 바와 같이, 사이토카인, 예컨대, 비제한적으로 IFN-γ는 ELISPOT 검정에 의해 측정될 수 있다. 간략하게, 검정은 다음의 단계를 포함한다: 면역스팟 플레이트를 항-사이토카인 항체로 코팅한다. 세포를 관심 있는 항원으로부터 유래된 펩티드와 함께 면역스팟 플레이트에서 항온처리한다. 항원-특이적 세포는 코팅된 항체에 결합하는 사이토카인을 분비한다. 그런 다음, 세포를 씻어내고, 제2 바이오틴화된-항사이토카인 항체를 플레이트에 첨가하고, 아비딘-HRP 시스템 또는 기타 적절한 방법으로 시각화한다.
5.7.10 CD8+ 및 CD4+ T-세포의 기능성의 검출을 위한 세포내 사이토카인 검정.
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 CD8+ 및 CD4+ T 세포 반응의 기능성을 테스트하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 유세포 분석법과 조합된 세포내 사이토카인 검정은 비제한적으로 표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약에 예시된 바와 같이 사용될 수 있다 (예컨대, Suni M.A. 등, J Immunol Methods. 1998; 212:89-98; Nomura L.E. 등, Cytometry. 2000; 40:60-68; 및 Ghanekar S.A. 등, Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology. 2001; 8:628-63 참고). 간략하게, 검정은 다음의 단계를 포함한다: 특이적 펩티드 또는 단백질을 통한 세포의 활성화 시, 단백질 수송 (예컨대, 브레펠딘 A)의 억제가 세포 내의 사이토카인을 유지하기 위해 첨가된다. 정의된 항온처리의 기간, 전형적으로 5 시간 후, 세척 단계가 뒤따르고, 다른 세포성 마커에 대한 항체가 세포에 첨가될 수 있다. 그런 다음, 세포를 고정하고, 투과화시킨다. 형광색소-컨쥬게이션된 항-사이토카인 항체를 첨가하고, 유세포 분석법에 의해 세포를 분석할 수 있다.
5.7.11 바이러스 벡터의 복제-결핍을 확인하기 위한 검정
감염성 및 복제-적격 바이러스 입자의 농도를 결정하는 당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 샘플 중 복제-결핍 바이러스 입자를 측정하기 위한 것으로서 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 비-보완 세포를 이용한 FFU 검정은 이 목적을 위해 사용될 수 있다.
게다가, 플라크-기반 검정은 바이러스 샘플의 플라크 형성 단위 (PFU)의 측면에서 바이러스 농도를 결정하기 위해 사용되는 표준 방법이다. 구체적으로, 비-보완 숙주 세포의 컨플루언트 단층은 다양한 희석의 바이러스로 감염되고, 바이러스 감염이 무차별적으로 확산되는 것을 방지하기 위해 한천과 같은 반-고체 배지로 덮여 있다. 바이러스 플라크는 바이러스가 고정된 세포 단층 내의 세포를 성공적으로 감염시키고 그 자체를 복제하고, 주변 세포로 확산될 때 형성된다 (예컨대, Kaufmann, S.H.; Kabelitz, D. (2002). Methods in Microbiology, Vol.32: Immunology of Infection. Academic Press. ISBN 0-12-521532-0 참고). 플라크 형성은 분석될 바이러스에 따라 2-14 일이 걸릴 수 있다. 플라크는 일반적으로 수동으로 계수되며, 결과는 플레이트 제조에 사용된 희석 인자와 조합하여, 샘플 단위 부피당 플라크 형성 단위의 갯수 (PFU/mL)를 계산하기 위해 사용된다. PFU/mL 결과는 샘플 내의 감염성 복제-적격 입자의 갯수를 나타낸다. C-세포가 사용되는 경우, 동일한 검정이 복제-결핍 아레나바이러스 입자 또는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 적정하기 위해 사용될 수 있다.
5.7.12 바이러스 항원의 발현에 대한 검정
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 바이러스 항원의 발현을 측정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, FFU 검정이 수행될 수 있다. 검출을 위해, 각각의 바이러스 항원에 대한 단- 또는 다중클론 항체 제제(들)가 사용된다 (트랜스진-특이적 FFU).
5.7.13 동물 모델
본원에 기재된 아레나바이러스 입자의 재조합 및 감염성을 조사하기 위해, 생체내 동물 모델이 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자의 재조합 및 감염성을 조사하기 위해 사용될 수 있는 동물 모델은 마우스, 기니피그, 토끼 및 원숭이를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 아레나바이러스의 재조합 및 감염성을 조사하기 위해 사용될 수 있는 동물 모델은 마우스를 포함한다. 더 구체적인 실시양태에서, 마우스는 유형 I 인터페론 수용체, 유형 II 인터페론 수용체 및 재조합 활성화 유전자 1 (RAG1)에 대해 삼중-결핍된 아레나바이러스 입자의 재조합 및 감염성을 조사하기 위해 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 동물 모델은 아레나바이러스 감염성 및 트랜스진 안정성을 결정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스 RNA는 동물 모델의 혈청으로부터 단리될 수 있다. 기법은 당업자에게 용이하게 알려져 있다. 바이러스 RNA는 역전사될 수 있으며, 아레나바이러스 ORF를 보유하는 cDNA는 유전자-특이적 프라이머를 이용하여 PCR-증폭될 수 있다. 유세포 분석법은 아레나바이러스 감염성 및 트랜스진 안정성을 조사하기 위해 또한 사용될 수 있다.
5.7.14 전립선 암 진행에 대한 검정
당업계에 잘 알려진 임의의 검정은 전립선 암의 진행을 평가하기 위해 사용될 수 있다. 섹션 6.3.6 및 6.3.6에 예시된 바와 같이, 전립선 암 진행 및 기타 관련 임상 매개변수가 모니터링될 수 있다. 간략하게, 표 9. 질환 현현에 의한 진행의 PCWG3 기준에 예시된 바와 같이, PSA의 수준의 변화의 측정, 표적 병변 및 전립선의 진행의 모니터링, 뼈 전이의 검출은 표준 방법으로 수행될 수 있다 (예컨대, Scher 등, 2016, J Clin Oncol, 34: 1402-18 참고). 게다가, 혈액학, 임상 화학, 소변검사, 응고, 갑상선, 혈청학 및 전립선 암-관련된 테스트에서의 매개변수는 표준 임상 실험실 방법으로 모니터링될 수 있다.
6. 실시예
6.1 연속 계대 동안 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
6.1.1 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 내인성 당단백질 (LCMV cl13/WE) 대신 LCMV 균주 WE의 GP를 발현하는 LCMV 클론 13 (LCMV cl13)에 기반한 약독화된, 복제 적격, 3 개의 세그먼트를 갖는 벡터이다. 도 1a에 도시된 바와 같이, NP-S 세그먼트는 인간 전립선 암-관련된 항원 PAP (서열번호 5)를 인코딩하고, GP-S 세그먼트는 PSA (서열번호 6)를 인코딩한다. 두 항원 모두의 뉴클레오티드 서열은 CpG 디뉴클레오티드 모티프가 없도록 변형되었다. Kallert 등 Nat Commun 2017; 8:15327에 의해 사전에 기재된 바와 같이, 5-플라스미드 공동-형질주입 시스템을 사용하여 생산 세포의 전기천공에 의해 벡터를 데 노보로 생성하였다.
artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 벡터의 PMVS인 PMVS (12)를 생성하고, 인코딩된 트랜스진의 유전적 안정성 및 발현을 증가하는 계대 수준에서 PCR 및 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. 도 2a에 도시된 바와 같이, PAP 및 PSA 트랜스진은 테스트된 모든 계대 수준에서 안정적이었다. 도 2b에 나타낸 바와 같이, PAP 및 PSA의 발현을 웨스턴 블롯에 의해 확인할 수 있었다.
6.1.2 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 피친데 바이러스의 유독의 균주 계대 18 (PIC; 대안적으로 PICV p18로 명명됨)에 기반한 약독화된, 복제 적격, 3 개의 세그먼트를 갖는 벡터이다. 도 1a에 도시된 바와 같이, NP-S 세그먼트는 인간 전립선 암-관련된 항원 PAP (서열번호 5)를 인코딩하고, GP-S 세그먼트는 PSA (서열번호 6)를 인코딩한다. 두 항원 모두의 뉴클레오티드 서열은 CpG 디뉴클레오티드 모티프가 없도록 변형되었다.
artPICV-PAP-NP/PSA-GP PMVS 후보인 PMVS (05) cl.32/05/05를 생성하였고, 인코딩된 트랜스진의 유전적 안정성 및 발현을 증가하는 계대 수준에서 PCR 및 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. 도 3a에 도시된 바와 같이, PAP 및 PSA 트랜스진은 테스트된 모든 계대 수준에서 안정하였다. 도 3b에 나타난 바와 같이, PAP 및 PSA의 발현을 웨스턴 블롯에 의해 확인할 수 있었다.
6.1.3 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
도 4에 도시된 바와 같이, 전장 PSMA를 인코딩하는 artLCMV 벡터 (artLCMV-PSMA)(751 개의 아미노산으로 번역되는 2253 bp로 이루어진 서열번호 9)는 연속 계대 동안 주요 트랜스진 불안정성을 나타냈다. 따라서, PSMA 항원은 PSMA1 (서열번호 3 및 343 개의 아미노산 또는 서열번호 7 및 1032 bp) 및 PSMA2 (서열번호 4 및 407 개의 아미노산 또는 서열번호 8 및 1224 bp)의 두 부분으로 분할되었다. 각각의 부분은 하나의 각각의 게놈 S-세그먼트에 인코딩되었다. 구체적으로, PSMA1 트랜스진의 정확한 번역을 위해 정지 코돈 TGA를 도입하였고, 시작 코돈을 유지하기 위해 PSMA 서열을 ATG 앞에 분할하였다.
artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP는 내인성 당단백질 (LCMV cl13/WE) 대신 LCMV 균주 WE의 GP를 발현하는 LCMV 클론 13 (LCMV cl13)에 기반한 약독화된 복제 적격, 3 개의 세그먼트를 갖는 벡터이다. 벡터는 대안적으로 PSMA로 지정되는 인간 FOLH1 유전자 산물의 생성물을 인코딩한다. PSMA의 N-말단 아미노산 1-343 및 인공적으로 첨가된 정지 코돈은 GP-S 세그먼트에서 "PSMA1" (서열번호 7)로 지정된 ORF에 의해 인코딩되었다. 위치 344의 기존 메티오닌에 의해 야기되는 PSMA의 C-말단 아미노산 344-750은 NP-S 세그먼트에서 "PSMA2" (서열번호 8)로 지정된 ORF에 의해 인코딩되었다. 뉴클레오티드 서열은 CpG 디뉴클레오티드 모티프가 없도록 변형되었다.
artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP PMVS 후보인 PMVS (09) cl.9/7/2를 생성하였고, 유전적 안정성 및 인코딩된 트랜스진의 발현을 증가하는 계대 수준에서 PCR 및 웨스턴 블롯팅에 의해 분석하였다. 도 5a에 도시된 바와 같이, PSMA1 및 PSMA2 트랜스진은 테스트된 모든 계대 수준 중에서 안정하였다. 도 5b에 나타난 바와 같이, PSMA1의 발현을, 웨스턴 블롯팅에 의해 확인할 수 있었다. PSMA2의 단백질 발현 결과는 사용된 항체의 불량한 품질에 의해 손상되었지만, 벡터 게놈의 시퀀싱에서는 코딩 서열의 정확한 전장 삽입을 나타냈다.
6.1.4 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 피친데 바이러스의 유독의 균주 계대 18 (PICV; 대안적으로 PICV p18로 명명됨)에 기반한 약독화된, 복제 적격, 3 개의 세그먼트를 갖는 벡터이다. 도 1c에 도시된 바와 같이, 벡터는 대안적으로 PSMA로 지정되는 인간 FOLH1 유전자 산물의 생성물을 인코딩하였다. PSMA의 N-말단 아미노산 1-343 및 인공적으로 첨가된 정지 코돈은 NP-S 세그먼트에서 "PSMA1" (서열번호 7)로 지정된 ORF에 의해 인코딩되었다. 위치 344의 기존 메티오닌에 의해 야기되는 PSMA의 C-말단 아미노산 344-750은 GP-S 세그먼트에서 "PSMA2" (서열번호 8)로 지정된 ORF에 의해 인코딩되었다. 뉴클레오티드 서열은 CpG 디뉴클레오티드 모티프가 없도록 변형되었다. 아래에 상세히 기재된 바와 같이, artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 생성하였으며, 트랜스진을 안정적으로 인코딩하고 발현하는 것으로 밝혀졌다.
도 6a에 의해 도시된 바와 같이, PMVS, PMVS 26은 어느 세그먼트에서든 임의의 트랜스진 결실 없이 최대 계대 수준 10까지 인코딩된 PSMA1 및 PSMA2 트랜스진을 안정적으로 발현하였다. 도 6b에 도시된 바와 같이, 웨스턴 블롯 분석은 PMVS 26에서의 PSMA1 단백질 발현이 최대 계대 수준 10까지 검출가능하였음을 밝혀냈다. PSMA2의 단백질 발현 결과는 사용된 항체의 불량한 품질에 의해 손상되었지만, 벡터 게놈의 시퀀싱에서는 코딩 서열의 올바른 전장 삽입을 나타냈다.
6.1.5 융합 트랜스진의 벡터 설계 및 트랜스진 안정성
다음의 융합 트랜스진을 갖는 벡터를 테스트하였다: artLCMV-PAP_PSA-NP/ PAP_PSA-GP, artLCMV-PSA_PAP-NP/ PSA_PAP-GP 및 artLCMV-PAP_PSA-NP/ PSMA-GP. PSMA (전장) 벡터 세그먼트는 751 개의 아미노산을 인코딩하는 2253 bp를 가지며, PAP_PSA 융합 벡터 세그먼트는 647 개의 아미노산을 인코딩하는 1941 bp를 갖는다. 3 개의 벡터 모두는 P1에서 불안정한 것으로 나타났다.
6.2 마우스에서 PAP, PSA 및 PSMA를 인코딩하는 artLCMV 및 artPICV 벡터의 면역원성
6.2.1 단일 벡터 작제물 및 벡터 조합의 면역원성
인코딩된 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 단일 벡터 작제물 또는 이들의 조합의 능력을 분석하기 위해, 1x105 RCV FFU/용량으로 표시된 벡터 작제물을 이용하여 마우스에서 정맥내 면역화를 수행하였다 (표 2 연구 레이아웃 참고). 새로 단리된 비장세포를 사용한 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 면역화 후 7 일차에 수행하였다. C57BL/6 × Balb/c 하이브리드 마우스 (즉, CB6F1 마우스)를 사용하여, H-2b 및 H-2d 제한된 T 세포 에피토프를 커버하였다. GraphPad Prism (단방향 ANOVA)을 사용한 Tukey의 다중 비교 테스트를 모든 그룹의 평균을 서로 비교함으로써 ICS 데이터에 대해 실시하였다. p < 0.05( * ), p < 0.01( ** ), p < 0.005( *** ) 및 p < 0.001( **** )의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
표 2 연구 레이아웃
테스트된 모든 벡터는 초기 투여 후 인코딩된 항원에 대한 CD8 T 세포 반응을 유도하였다 (도 7a 및 7b). 두 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 2) 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3) 모두는 비슷한 PAP-특이적 T 세포 반응을 유도하였다 (도 7a). 그러나, PSA에 대한 유도된 T 세포 반응은 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 2)와 비교하여 artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3)로 면역화된 동물에서 유의하게 더 높았다 (도 7a).
유사하게, artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 이용한 면역화 후에 비슷한 PSMA-특이적 T 세포 반응이 관찰되었다. 그러나, PSMA 항원의 개별 부분에 대해 지시된 반응의 분석은 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP (그룹 4)와 비교하여 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 5)의 투여 후에 PSMA1에 대해 유의하게 더 높은 CD8 T 세포 반응을 밝혀냈다 (도 7b).
혼합된 벡터가 모든 인코딩된 항원에 대해 T 세포 반응을 여전히 유도하는지 여부를 조사하기 위해, 그룹 6 및 7의 마우스를 각각 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP (그룹 6) 또는 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 7)의 조합으로 면역화하였다. 도 7c 및 7d에 도시된 바와 같이, 제2 벡터의 공동-투여는 테스트된 벡터의 면역원성을 폐지하지 않았으며, 모든 벡터 작제물은 초기 투여 후에 인코딩된 항원에 대해 여전히 상당한 CD8 T 세포 반응을 유도하였다.
도 7e에 도시된 바와 같이, 벡터-백본 특이적 CD8 T 세포 반응은 모든 치료 그룹에서 유도되었다. LCMV NP-특이적 T 세포 반응은 단일 벡터만으로 면역화된, 그룹 2 또는 4의 마우스와 비교하여 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 조합으로 면역화된 그룹 6의 동물에서 유의하게 더 낮았다. 이는 테스트 동물에 주사된 바이러스의 총 역가가 단일-벡터 그룹 (artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 또는 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP)보다 조합-벡터 그룹 (artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP)에서 2 배 더 높았기 때문에 예상치 못한 일이었다. artPICV-기반 벡터의 경우, artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 5) 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 7)를 이용한 면역화와 비교하여 artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3)의 투여 후에 유의하게 더 높은 벡터 백본 (PICV NP)-특이적 T 세포 반응이 관찰되었다.
6.2.2 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 면역원성
동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 벡터의 면역원성을 분석하기 위해, 마우스를 1×105 RCV FFU/용량의 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 2 및 4) 또는 artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3 및 5)로 0 일차에 정맥내 면역화시켰다. 3 주 후 21 일차에, 그룹 2 및 5의 동물에 1×105 RCV FFU/용량의 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 순차적으로 투약한 반면에, 그룹 3 및 4의 마우스에 1×105 RCV FFU/용량의 artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 순차적으로 투약하였다 (표 3 연구 레이아웃 참고). 새로 단리된 비장세포를 사용한 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 26 일차에 수행하여, 인코딩된 전립선 암-관련된 항원인 PAP 및 PSA뿐만 아니라 아레나바이러스 벡터 백본 단백질 NP에 특이적인 T 세포 반응을 검출하였다. GraphPad Prism (단방향 ANOVA)을 사용한 Tukey의 다중 비교 테스트를 모든 그룹의 평균을 서로 비교함으로써 ICS 데이터에 대해 실시하였다. p < 0.05( * ), p < 0.01( ** ), p < 0.005( *** ) 및 p < 0.001( **** )의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
표 3 연구 레이아웃
도 8a 및 도 8b에 도시된 바와 같이, PAP- 및 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응은 모든 테스트 그룹에서 검출되었다. 그러나, artPICV-PAP-NP/PSA-GP 벡터로 초기에 면역화시키고 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 벡터를 순차적으로 투약한 그룹 5의 동물은 다른 모든 테스트 그룹의 마우스와 비교하여 유의하게 더 높은 PAP- (도 8a) 및 PSA-특이적 (도 8b) CD8 T 세포 반응을 보여주었다.
PSA-특이적 T 세포 반응의 경우 (도 8b), 그룹 2 및 3 사이에는 차이가 있었으며, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 2)와 비교하여 artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3)를 이용한 동종 교대 벡터 투여 후 유도된 상당히 더 높은 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응을 가졌다. 게다가, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 만 (그룹 2)을 이용한 동종 교대 벡터 투여와 비교하여, 초기에 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투약한 동물에 순차적으로 이종 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 벡터 (그룹 4)를 투약하였을 때 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응이 증가하는 경향이 있었다.
아레나바이러스 NP-특이적 T 세포 반응의 분석 (도 8c)은 초기 투여에 사용된 벡터 백본에 대한 CD8 T 세포 반응의 유도를 입증하였다. artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 초기 투여의 경우, 그룹 2 (즉, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 이용한 동종 순차 투여 후) 및 그룹 4 (즉, artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 이용한 이종 순차적 투여 후) 사이의 LCMV NP-특이적 T 세포 반응에는 유의한 차이가 없었다. 대조적으로, 마우스에 초기에 artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 투약하였을 때, artPICV-PAP-NP/PSA-GP (그룹 3)를 이용한 순차적 동종 투약과 비교하여, 동물에 이종 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 벡터 (그룹 5)를 순차적으로 투약하였을 때 PICV NP-특이적 T 세포 반응이 유의하게 더 낮았다. 따라서, 트랜스진- 대 벡터-특이적 T 세포의 비는 그룹 5, 즉, 초기에 artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 투약하고 순차적으로 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투약한 후 가장 높았다.
6.2.3 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 면역원성
동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 PSMA-발현 벡터인 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 면역원성을 분석하기 위해, 마우스를 1×105 RCV FFU/용량의 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP (그룹 2 및 4) 또는 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 3 및 5)로 0 일차에 정맥내 면역화시켰다. 3 주 후 21 일차에, 그룹 3 및 4의 동물에 1×105 RCV FFU/용량의 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 순차적으로 투여한 반면, 그룹 2 및 5의 마우스에 1×105 RCV FFU/용량의 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 순차적으로 투약하였다 (표 4 연구 레이아웃 참고). 새로 단리된 비장세포를 사용한 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 26 일차에 수행하여, 인코딩된 전립선 암-관련된 항원 PSMA뿐만 아니라 아레나바이러스 벡터 백본 단백질 NP에 특이적인 T 세포 반응을 검출하였다. GraphPad Prism (단방향 ANOVA)을 사용한 Tukey의 다중 비교 테스트를 모든 그룹의 평균을 서로 비교함으로써 ICS 데이터에 대해 실시하였다. p < 0.05( * ), p < 0.01( ** ), p < 0.005( *** ) 및 p < 0.001( **** )의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
표 4 연구 레이아웃
PSMA-특이적 CD8 T 세포 반응은 모든 테스트 그룹에서 검출되었다 (도 9a). 그러나, PSMA 항원의 두 부분 모두 (즉, PSMA1 및 PSMA2)에 대해 지시된 가장 높은 항원-특이적 반응이 초기에 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 투약하고 순차적으로 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 투약한 그룹 5의 동물에서 관찰되었다.
대조적으로, 도 9b에 도시된 바와 같이, 아레나바이러스 NP-특이적 T 세포 반응 (도 9b)은 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP에 이어 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 4) 또는 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP에 이어 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP (그룹 5)의 순차적 투여를 사용한 이종 교대 벡터 투여와 비교하여, artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP (그룹 2) 또는 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (그룹 3) 중 어느 하나를 이용한 동종 교대 벡터 투여 후에 유의하게 더 높았다. 따라서, 트랜스진- 대 벡터-특이적 T 세포의 비는 그룹 5, 즉, 초기에 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 투약하고 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 순차적으로 투약한 후에 가장 높았다.
6.2.4 동종 또는 이종 교대 벡터 투여 후 artLCMV 및 artPICV 벡터 조합의 면역원성
인코딩된 항원에 대한 면역 반응을 유도하는 개별 벡터 작제물의 능력을 동종 및 이종 교대 벡터 투여 둘 모두를 사용한 벡터 믹스 (즉, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP; artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP)의 투여 후에 분석하였다.
모든 그룹의 마우스에 0 일차에 초기에 투약하고, 21 일 후에 1×105 RCV FFU/벡터의 사전혼합된 벡터의 정맥내 투여에 의해 순차적으로 투약하였다. 그룹 1 및 3의 마우스를 먼저 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 조합 (즉, artLCMV 벡터 믹스)으로 면역화시켰다. 그룹 1의 동물에 동일한 벡터 조합을 순차적으로 투약한 반면, 그룹 3의 마우스에 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP (즉, artPICV 벡터 믹스)의 조합을 순차적으로 투약하였다. 그룹 2 및 4의 동물은 artPICV 벡터 믹스의 제1 용량을 받았다. 그룹 2의 마우스에 후속적으로 제2 투여를 위해 동일한 artPICV 벡터 믹스를 사용하여 동종적으로 순차적으로 투약하였다. 대조적으로, 그룹 4의 동물에 artLCMV 벡터 믹스를 순차적으로 투약하였다 (표 5 연구 레이아웃 참고). 새로 단리된 비장세포를 사용한 세포내 사이토카인 염색 (ICS)을 26 일차에 수행하여, 인코딩된 전립선 암-관련된 항원인 PAP, PSA 및 PSMA뿐만 아니라 아레나바이러스 벡터 백본 단백질 NP에 특이적인 T 세포 반응을 검출하였다. GraphPad Prism (단방향 ANOVA)을 사용한 Tukey의 다중 비교 테스트를 모든 그룹의 평균을 서로 비교함으로써 ICS 데이터에 대해 실시하였다. p < 0.05( * ), p < 0.01( ** ), p < 0.005( *** ) 및 p < 0.001( **** )의 P 값은 유의한 것으로 간주되었다.
표 5 연구 레이아웃
도 10a에 도시된 바와 같이, PAP-특이적 CD8 T 세포 반응이 모든 테스트 그룹에서 검출되었다. 가장 높은 PAP-특이적 CD8 T 세포 반응은 그룹 3의 동물에서 관찰되었으며, 이들에게는 초기에 artLCMV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artPICV 벡터 믹스를 투약하였다. 이는 또한 초기에 artLCMV 벡터 믹스를 투약하였지만 동일한 artLCMV 벡터 믹스를 동종 방식으로 순차적으로 투약한 그룹 1의 동물과는 유의하게 대조적이었다. 각각의 동물은 모든 테스트 그룹 중 가장 낮은 PAP-특이적 CD8 T 세포 반응을 나타냈다.
이종 교대 벡터 투여는 또한 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응의 유도에 있어서 동종 절차에 대해 유의하게 우수하였다. 도 10b에 도시된 바와 같이, 가장 높은 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응은 그룹 3 및 4의 동물에서 관찰되었으며, 이들에게는 초기에 artLCMV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artPICV 벡터 믹스를 투여하였거나 (그룹 3), 초기에 artPICV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artLCMV 벡터 믹스를 투약하였다 (그룹 4). PSA에 대한 유의하게 더 낮은 T 세포 반응은 각각 동일한 artLCMV (그룹 1) 또는 artPICV (그룹 2) 벡터 믹스로 2 회 면역화된 동물에서 유도되었다. 동종 교대 벡터 투여를 이용한 이들 그룹 간의 비교는 artLCMV 벡터 믹스로 면역화된 그룹 1의 동물과 비교하여 artPICV 벡터 믹스로 처리된 그룹 2의 동물에서 더 높은 PSA-특이적 CD8 T 세포 반응을 밝혀냈다.
상이한 테스트 그룹에서 유도된 PSMA-특이적 CD8 T 세포 반응의 분석은 이종 교대 벡터 투여 후 우수한 면역원성의 관찰을 추가로 입증하였다. 도 10c에 도시된 바와 같이, 가장 높은 PSMA-특이적 CD8 T 세포 반응은 그룹 3 및 4의 동물에서 관찰되었으며, 이들에게는 초기에 artLCMV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artPICV 벡터 믹스를 투약하였거나 (그룹 3), 초기에 artPICV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artLCMV 벡터 믹스를 투약하였다 (그룹 4). PSMA에 대한 유의하게 더 낮은 T 세포 반응은 동종 교대 벡터 투여로 처리된 동물, 즉, 각각 동일한 artLCMV (그룹 1) 또는 artPICV (그룹 2) 벡터 믹스로 2 회 면역화된 동물에서 유도되었다. 이러한 관찰은 전체 PSMA 항원 또는 이의 개별 하위도메인 만에 대한 면역 반응이 분석되었는지 여부와 관계없이 일관되었다.
대조적으로, 벡터 백본-특이적 면역 반응은 벡터 NP-특이적 T 세포 반응 (도 10d)에 의해 입증된 바와 같이, artLCMV 벡터 믹스에 이어 artPICV 벡터 믹스 (그룹 3) 또는 artPICV 벡터에 이어 artLCMV 벡터 믹스 (그룹 4)의 순차적 투여를 사용하는 동종 교대 벡터 투여와 비교하여 artLCMV 벡터 믹스 (그룹 1) 또는 artPICV 벡터 믹스 (그룹 2) 중 어느 하나의 동종 교대 벡터 투여 후에 유의하게 더 높았다. 따라서, 트랜스진- 대 벡터-특이적 T 세포의 비는 그룹 4, 즉, 초기에 artPICV 벡터 믹스를 투약하고 순차적으로 artLCMV 벡터 믹스를 투약한 후 가장 높았다.
6.3 전립선 암 환자의 치료
6.3.1 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법
아래 표 6. 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법의 설명에 기재된 바와 같이, 4 가지 개별 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법을 연구하면서, 다음의 2 개의 치료 양생법을 탐구한다:
● 그룹 1: 환자는 교대 2-벡터 치료를 받는다:
artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
● 그룹 2: 환자는 교대 4-벡터 치료를 받는다:
artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV- PSMA2-NP/PSMA1-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
표 6. 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법의 설명
약어: LCMV = 림프구성 맥락수막염 바이러스, PAP = 전립선 산성 포스파타제, PSA = 전립선-특이적 항원, PICV = 피친데 바이러스, PSMA = 전립선-특이적 막 항원
6.3.2 치료 개요
mCRPC를 갖는 성인 환자는 다음의 두 부분으로 치료된다: 1상 용량 단계적 확대 및 2상 용량 확장. 연구 설계의 도식은 도 11에 제시되어 있다.
(i) I상 용량 단계적 확대
I상 용량 단계적 확대는 다음의 2 개의 치료 그룹을 갖는다:
● 그룹 1: 교대 2-벡터 치료. artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
● 그룹 2: 교대 4-벡터 치료. artPICV-PAP-NP/PSA-GP & artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP & artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
연구 치료는 섹션 6.3.5(i)에 표시된 바와 같이 투여된다.
(ii) II상 용량 확장
II상 용량 확장은 I상 용량 단계적 확대의 완료 시 시작된다.
연구 치료 양생법은 섹션 6.3.5(ii)에 표시된 바와 같이 연구의 I상 용량 단계적 확대 부분으로부터 발생한 안전성, 효험, 바이오마커 및 면역원성 결과에 기반할 것이다.
6.3.3 환자 집단: 포함 기준
모든 환자의 경우:
다음의 기준 모두를 충족하는 환자는 연구에 참여할 자격이 있다:
1. 사전 동의서 (ICF)에 서명할 당시 ≥18 세의 남성 환자.
2. 연구 참여에 대해 자발적인 사전 동의를 제공할 의지와 능력이 있음.
3. 신경내분비 분화 또는 소세포 특징이 없는 전립선 선암종의 조직학적으로 확인된 진단.
4. <50 ng/dL (1.7 nmol/L)의 혈청 테스토스테론 수준을 갖는 문서화된 거세 조건. 거세 조건은 양측 고환절제술 또는 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 유사체 (작용제 또는 길항제)의 사용에 의해 수득될 수 있다. 외과적 양측 고환절제술을 겪지 않은 환자는 연구의 과정 동안 LHRH 유사체를 계속할 의지가 있어야 한다.
5. 환자는 연구 실시 동안 고형 종양의 반응 평가 기준 (RECIST) v1.1 및 면역 RECIST (iRECIST) 후 종양 반응에 대해 평가되는 컴퓨터 단층촬영 (CT) 및/또는 자기 공명 이미징 (MRI)에 의해 ≥1 개의 측정가능한 병변을 가져야 한다.
6. 환자는 평가된 표준 케어 요법에 따라 질환 진행을 가져야 한다. 질환 진행은 전립선 암 임상 시험 작업 그룹 3 (PCWG3) 가이던스에 따라 다음의 기준 중 하나 이상에 의해 정의된다:
● PSA 수준의 상승만으로 질환 진행이 현현하는 환자의 경우, PCWG3은 ≥1 주 간격으로 2 개 이상의 연속 상승 PSA 값 (28-일 스크리닝 기간에 제한되지 않음) 및 1.0 ng/mL의 최소 시작 값을 필요로 한다. 가장 최근의 PSA 수준은 제1 연구 약물 치료 전 21 일 이내에 수득되어야 한다.
(참고: 플루타미드를 받은 환자의 경우, PSA 값 중 적어도 하나는 플루타미드 중단 ≥4 주 후에 수득되어야 한다. 비칼루타미드 또는 닐루타미드를 받은 환자의 경우, PSA 값 중 적어도 하나는 항안드로겐 중단 ≥6 주 후에 수득되어야 한다.)
● 측정가능한 결절 또는 내장 병변을 갖는 환자의 경우, RECIST 1.1에 의해 정의된 이러한 병변 중 하나의 질환 진행은 PSA와 무관하게 적격성에 충분하다. ≥15 mm의 직경의 림프절의 경우, 이는 측정가능한 것으로 간주되고, 크기의 변화를 평가하는 데 사용된다.
● 뼈 전이를 갖는 환자의 경우, 진행은 뼈 스캔 또는 기타 스캔 (예컨대, MRI)에 의해 ≥2 개의 새로운 병변의 출현에 의해 정의된다.
7. 항안드로겐 금단 후 진행은 경우-별 예외가 적용되지 않는 한 등록 적어도 ≥4 주 전에 이루어져야 한다. LHRH 작용제 또는 길항제는 계속되어야 한다.
8. 경우-별 예외가 적용되지 않는 한, 환자는 다음을 갖추어야 한다:
● 마지막 치료로부터 환자의 진행 또는 투약 전 신선한 연조직 생검 표본을 제공하는 능력에 따라 수집된 기록(archival) 연조직 종양 표본. 기록 샘플이 제공되는 경우, 샘플은 2 년을 초과하지 않아야 한다.
● 연구-중 생검에 잠재적으로 이용가능한 연조직 병변.
9. 0 내지 1의 동부 협력 종양학 그룹 (ECOG) 수행 상태
10. 이전의 근치적 방사선 요법은 연구 약물 투여 4 주 이상 전에 완료되어야 한다. 이전의 병소 완화 방사선요법은 연구 약물 투여 2 주 이상 전에 완료되어야 한다.
11. 스크리닝 실험실 값은 다음의 기준을 충족해야 하며, 연구 치료 투여 전 28 일 이내에 수득되어야 한다:
● 절대 호중구 계수 ≥ 1,500/mm3 (1.5 × 109/L)
● 혈소판 ≥ 100 × 103/mm3 (100 × 109/L)
● 헤모글로빈 ≥ 8.5 g/dL
● 혈청 크레아티닌 ≤ 2.0 × 정상의 상한 (ULN) 또는 크레아티닌 청소율 > 30 mL/분 (Cockcroft-Gault 공식 사용)
● 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제/알라닌 아미노트랜스퍼라제 ≤ 3 × ULN
● 총 빌리루빈 ≤ 1.5 × ULN (총 빌리루빈 < 3.0 mg/dL을 가질 수 있는 길버트 증후군을 갖는 환자 제외)
6.3.4 용량 단계적 확대 가이드라인 - 임시 용량 수준 탐구
artLCMV-PAP-NP/PSA-GP, artPICV-PAP-NP/PSA-GP, artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 IV (IV 푸시 또는 주입으로서) 투여된다. 각각의 벡터에 대해 환자당 용량당 1x107 RCV FFU의 시작 용량이 투여된다. 게다가, 임상 연구의 1상 부분에 대한 용량 단계적 확대 계획은 코호트 간에 최대 1로그 차수의 용량 증분을 허용한다 (즉, 107, 108, 109 RCV FFU).
1상 용량 단계적 확대 그룹 1 및 2의 경우, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP, artPICV-PAP-NP/PSA-GP, artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP의 제안된 인간 시작 용량은 1 × 107 RCV FFU이다. 잠재적인 용량 단계적 확대의 비-제한적인 예는 표 7. 그룹 1 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 교대 2-벡터 치료)에 대한 임시 용량 수준 및 표 8. 그룹 2 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 교대 4-벡터 치료)에 대한 임시 용량 수준에 나와 있다.
표 7. 그룹 1 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 교대 2-벡터 치료)의 임시 용량 수준
약어: FFU = 초점-형성 단위, RCV = 복제-적격 바이러스
표 8. 그룹 2 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 교대 4-벡터 치료)에 대한 임시 용량 수준
약어: FFU = 초점-형성 단위, RCV = 복제-적격 바이러스
6.3.5 치료 양생법 및 주기 기간
환자는 허용가능하지 않은 치료-관련된 독성, 질환 진행 (iRECIST에 따른 면역 확인된 진행성 질환 (iCPD) 또는 PCWG3에 따른 뼈 진행) 또는 동의 철회를 경험할 때까지 치료된다.
(i) I상 용량 단계적 확대
그룹 1의 경우 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 교대 2-벡터 치료):
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 교대 IV 투여로 주어진다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투여한다.
● 주기 1 및 2의 경우, 치료 주기는 42 일의 기간으로서 정의된다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투여하며, 처음 4 회 투여 동안 3 주 (21 일)마다 치료를 교대한다.
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 1 및 2의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 1 및 2의 22 일차에 IV 투여된다.
● 주기 3 및 후속 주기의 경우, 치료 주기는 84 일의 기간으로서 정의된다. 주기 3, 1 일차는 주기 2, 42 일차의 완료 후 시작된다. 주기 3 및 후속 주기의 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 용량 투여는 ± 7 일의 시간 윈도우를 갖는다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 용량은 다음과 같이 6 주 (42 일)마다 교대로 투약된다:
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 3 및 후속 주기의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 3 및 후속 주기의 43 일차에 IV 투여된다.
그룹 2의 경우 (artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP의 교대 4-벡터 치료):
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP는 교대 IV 투여로 주어진다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 투여한다.
● 주기 1 및 2의 경우, 치료 주기는 42 일의 기간으로서 정의된다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP를 투여하며, 처음 4 회 투여 동안 3 주 (21 일)마다 치료를 교대한다.
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 주기 1 및 2의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP는 주기 1 및 2의 22 일차에 IV 투여된다.
● 주기 3 및 후속 주기의 경우, 치료 주기는 84 일의 기간으로서 정의된다. 주기 3, 1 일차는 주기 2, 42 일차의 완료 후 시작된다. 주기 3 및 후속 주기의 artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 용량 투여는 ± 7 일의 시간 윈도우를 갖는다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 용량은 다음과 같이 6 주 (42 일)마다 교대로 투약된다:
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP는 주기 3 및 후속 주기의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP는 주기 3 및 후속 주기의 43 일차에 IV 투여된다.
I상 용량 단계적 확대의 경우, artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 양생법 및/또는 artPICV-PAP-NP/PSA-GP + artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP + artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 양생법에 대한 투여 일정은 안전성, 효험 또는 바이오마커 데이터에 기반하여 다음 코호트에 대해 변형될 수 있다.
I상 용량 단계적 확대를 위해, 다음의 정보가 수집된다: (1) DLT 관찰 기간 동안 투여된 제1 연구 약물로부터의 DLT의 발생률; (2) 안전성: AE 및 SAE의 유형, 빈도 및 중증도; (3) 내약성: 용량 중단, 감소 및 용량 세기, 및 실험실 값의 평가; (4) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 ORR, DCR, PFS, OS 및 반응의 지속기간; (5) PSA 반응을 갖는 환자의 비율 (기준선으로부터 기준선 후 최저 PSA 결과까지 PSA의 ≥50% 감소, 적어도 3 주 후 제2 연속 PSA 평가에 의해 확인됨); (6) 임의의 시간에서의 최상의 PSA 반응; (7) 항원 (PAP, PSA 및/또는 PSMA)의 측정 - 특이적 T 세포 반응, 항원-특이적 T 세포 기능성 검정; (8) 면역 세포 CD4 및 CD8 T 세포 측정의 특성규명 (면역표현형검사); 및 (9) 종양 표본, 혈액 및 혈청/혈장 내 바이오마커의 평가.
(ii) II상 용량 확장
아레나바이러스 벡터의 치료 양생법 및 주기 지속기간은 I상에 기재된 바와 동일하다.
일부 치료 그룹에서, 환자는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP, artPICV-PAP-NP/PSA-GP, artLCMV-PSMA2-NP/PSMA1-GP 및 artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP와 함께 진전된 전립선 암의 치료용으로 승인된 의약의 병용 요법을 받을 것이다.
II상 용량 확장을 위해, 다음의 정보가 수집된다: (1) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 ORR 및 DCR; (2) PSA 반응을 갖는 환자의 비율 (기준선으로부터 기준선-후 최저 PSA 결과까지 PSA의 ≥50% 감소, 적어도 3 주 후 제2 연속 PSA 평가에 의해 확인됨); (3) 임의의 시간에서의 최상의 PSA 반응; (4) 종양 반응은 RECIST v1.1/iRECIST (연조직), PCWG3 (뼈) 기준, 예컨대, 반응의 지속기간, PFS 및 OS를 사용하여 평가됨; (5) 안전성: AE 및 SAE의 유형, 빈도 및 중증도; (6) 내약성: 용량 중단, 감소 및 용량 세기, 및 실험실 값의 평가; (7) 항원 (PAP, PSA 및/또는 PSMA)의 측정 - 특이적 T 세포 반응, 항원-특이적 T 세포 기능성 검정; (8) 면역 세포 CD4 및 CD8 T 세포 측정의 특성규명 (면역표현형검사); (9) 종양 표본, 혈액 및 혈청/혈장 내 바이오마커의 평가.
6.3.6 효험 변수
1상 용량 단계적 확대 및 2상 용량 확장의 모든 그룹에 대해, 효험 평가는 다음을 포함한다:
● PSA 수준은 주기 1, 1 일차에 시작하여 3 주마다 테스트됨
● 연조직 및 뼈에 대한 이미징 스캔은 처음 24 주 동안 8 주마다 (즉, 주기 2, 15 일차부터 시작하여, 주기 3, 29 일차 및 84 일차), 그런 다음 그 이후로는 주기 4, 84 일차부터 시작하여 12 주마다 수행됨.
효험은 PCWG3에 따른 PSA 반응 (Scher 등 2016), PCWG3에 따른 뼈 반응, 및 RECIST v1.1 (일차 효험 엔드포인트) 및 iRECIST (이차 효험 엔드포인트)에 따른 연조직 반응을 사용하여 평가된다. 뼈의 진행은 6 주 이상 후에 제2 뼈 스캔에 의한 확인을 필요로 한다.
표 9. 질환 현현에 의한 진행의 PCWG3 기준은 PSA, 뼈 전이 및 측정가능한 질환의 변화에 근거하여 평가 및 진행 기준을 보여준다 (Scher 등, 2016, J Clin Oncol, 34: 1402-18).
표 9. 질환 현현에 의한 진행의 PCWG3 기준
약어: CNS = 중추신경계; PSA = 전립선-특이적 항원; CT = 컴퓨터 단층촬영; MRI = 자기 공명 이미징; PCWG3 = 전립선 암 임상 시험 작업 그룹 3; PET= 양전자 방출 단층촬영; PSA-DT = PSA 배가 시간; RECIST = 고형 종양의 반응 평가 기준
6.3.7 바이오마커 및 중앙 임상 실험실 분석
다음의 실험실 분석 (표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약)을 수행하였다.
표 10. 중앙 실험실 분석을 위한 샘플 수집의 요약
약어: bAb = 결합 항체 검정, CD4 = 분화 클러스터 4, CD8 = 분화 클러스터 8, ctDNA = 순환 종양 데옥시리보핵산, ELISpot = 효소-연결된 면역 흡수 스팟, ICS = 세포내 사이토카인 염색, IFN-γ = 인터페론-감마, IHC = 면역조직화학, LCMV = 림프구성 맥락수막염 바이러스, NP = 핵단백질, PAP = 전립선 산성 포스파타제, PBMC = 말초 혈액 단핵 세포, PSA = 전립선-특이적 항원, PSMA = 전립선-특이적 막 항원, RCV = 복제-적격 바이러스 , RNA = 리보핵산, TIL = 종양-침윤성 림프구, TNF α = 종양 괴사 인자 알파, WES = 전체 엑솜 시퀀싱.
6.4 전이성 거세-저항성 전립선 암 환자의 치료
6.4.1 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법
아래 표 11. 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법의 설명에 기재된 바와 같은 2 개의 개별 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법을 연구하면서, 다음의 치료 양생법을 탐구하였다:
artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
표 11. 바이러스 벡터-기반 치료적 면역요법의 설명
약어: LCMV = 림프구성 맥락수막염 바이러스, PAP = 전립선 산성 포스파타제, PSA = 전립선-특이적 항원, PICV = 피친데 바이러스,
6.4.2 치료 개요
전이성 거세-저항성 전립선 암 (mCRPC)을 갖는 성인 환자는 다음의 2 개의 단계로 치료된다: 1상 용량 단계적 확대 및 권장되는 2상 용량 (RP2D) 확인, 및 2상 용량 확장. 연구 설계의 도식은 도 12에 제시되어 있다.
(i) I상 용량 단계적 확대
I상 용량 단계적 확대는 안전성 및 내약성, 예비 효험, 면역원성 및 안전한 권장되는 2상 용량 (RP2D)의 결정을 위해 artPICV-PAP-NP/PSA-GP/artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 교대 2-벡터 요법을 평가한다. 교대 2-벡터 치료에서, artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP와 교대 순서로 먼저 투여된다.
연구 치료는 섹션 6.4.5(i)에 표시된 바와 같이 투여된다.
(ii) II상 용량 확장
II상 용량 확장은 I상 용량 단계적 확대의 완료 시 시작되고, 연구의 1상 부분에 정의된 RP2D에서 artPICV-PAP-NP/PSA-GP/artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 교대 2-벡터 요법을 평가한다.
연구 치료 양생법은 섹션 6.4.5(ii)에 표시된 바와 같이 연구의 I상 용량 단계적 확대 부분으로부터 발생한 안전성, 효험, 바이오마커 및 면역원성 결과에 기반할 것이다.
6.4.3 환자 집단: 포함 기준
< 50 ng/dL (1.7 nmol/L)의 혈청 테스토스테론 수준 및 적어도 1 개의 측정가능한 연조직 병변 및/또는 ≥1 개의 검출가능한 뼈 전이를 갖는 거세 병태를 입증한 조직학적으로 또는 세포학적으로 확인된 전립선의 선암종을 갖는 참가자는 연구에 등록될 것이다.
모든 환자의 경우:
다음의 기준 모두를 충족하는 환자는 연구에 참여할 자격이 있다:
1. 사전 동의서 (ICF)에 서명할 당시 ≥18 세의 남성 환자.
2. 연구 참여에 대해 자발적인 사전 동의를 제공할 의지와 능력이 있음.
3. 조직학적 또는 세포학적으로 확인된, 신경내분비 분화 또는 소세포 특징이 없는 전립선의 선암종.
4. <50 ng/dL (1.7 nmol/L)의 혈청 테스토스테론 수준을 갖는 문서화된 거세 조건. 거세 조건은 양측 고환절제술 또는 황체형성 호르몬-방출 호르몬 (LHRH) 유사체 (작용제 또는 길항제)의 사용에 의해 수득될 수 있다. 외과적 양측 고환절제술을 겪지 않은 환자는 연구의 과정 동안 LHRH 유사체를 계속할 의지가 있어야 한다.
5. 환자는 ≥1 개의 측정가능한 연조직 병변 및/또는 ≥1 개의 검출가능한 뼈 전이를 가져야 한다. 연조직 병변은 연구 실시 동안 고형 종양의 반응 평가 기준 (RECIST) v1.1 및 면역 RECIST (iRECIST) 후 종양 반응에 대해 컴퓨터 단층촬영 (CT) 및/또는 자기 공명 이미징 (MRI)에 의해 평가될 수 있다.
6. 환자는 표준 케어 요법에 따라 질환 진행을 평가받아야 한다. 질환 진행은 전립선 암 임상 시험 작업 그룹 3 (PCWG3) 가이던스에 따라 다음의 기준 중 하나 이상에 의해 정의된다:
● PSA 수준의 상승만으로 질환 진행이 현현하는 환자의 경우, PCWG3은 ≥3 주 간격으로 적어도 2 개의 연속 상승 PSA 값 (28-일 스크리닝 기간에 제한되지 않음) 및 1.0 ng/mL의 최소 시작 값을 필요로 한다. 가장 최근의 PSA 수준은 제1 연구 약물 치료 전 21 일 이내에 수득되어야 한다.
● 측정가능한 결절 또는 내장 병변을 갖는 환자의 경우, RECIST 1.1에 의해 정의된 이러한 병변 중 하나의 질환 진행은 PSA와 무관하게 적격성에 충분하다. ≥15 mm의 직경의 림프절의 경우, 이는 측정가능한 것으로 간주되고, 크기의 변화를 평가하는 데 사용된다.
● 뼈 전이를 갖는 환자의 경우, 진행은 뼈 스캔 또는 기타 스캔 (예컨대, MRI)에 의해 ≥2 개의 새로운 병변의 출현에 의해 정의된다.
7. 항안드로겐 금단 후 진행은 경우-별 예외가 적용되지 않는 한 등록 적어도 ≥4 주 전에 이루어져야 한다. LHRH 작용제 또는 길항제는 계속되어야 한다.
8. 경우-별 예외가 적용되지 않는 한, 환자는 다음을 갖추어야 한다:
● 마지막 치료로부터 환자의 진행 또는 투약 전 신선한 연조직 생검 표본을 제공하는 능력에 따라 수집된 기록 연조직 종양 표본. 기록 샘플이 제공되는 경우, 샘플은 2 년을 초과하지 않아야 한다.
● 연구-중 생검에 잠재적으로 이용가능한 연조직 병변.
9. 0 내지 1의 동부 협력 종양학 그룹 (ECOG) 수행 상태 (PS)
10. 이전의 근치적 방사선 요법은 연구 약물 투여 적어도 4 주 전에 완료되어야 한다. 이전의 병소 완화 방사선요법은 연구 약물 투여 적어도 2 주 전에 완료되어야 한다.
11. 스크리닝 실험실 값은 다음의 기준을 충족해야 하며, 연구 치료 투여 전 28 일 이내에 수득되어야 한다:
● 절대 호중구 계수 ≥ 1,500/mm3 (1.5 × 109/L)
● 혈소판 ≥ 100 × 103/mm3 (100 × 109/L)
● 헤모글로빈 ≥ 9 g/dL (90 g/L) 또는 ≥5.6 mmol/L
● > 1.5 x 제도적 ULN의 크레아티닌 수준을 갖는 환자의 경우, 혈청 크레아티닌 ≤ 1.5 × 정상의 상한 (ULN) 또는 크레아티닌 청소율 > 30 mL/분 (Cockcroft-Gault 공식 사용)
● 간 전이를 갖는 환자의 경우 아스파테이트 아미노트랜스퍼라제 (AST)/알라닌 아미노트랜스퍼라제 (ALT) ≤ 2.5 × ULN 또는 ≤5 x ULN
● 총 빌리루빈 ≤ 1.5 × ULN, 또는 총 빌리루빈 수준이 >1.5 x ULN인 환자의 경우 직접 빌리루빈 ≤ ULN
● 알부민 ≥3 g/dL
● 국제 표준화 비 (INR) 또는 프로트롬빈 시간 (PT) ≤1.5 x ULN (PT 또는 부분 트롬보플라스틴 시간 (PTT)이 항응고제의 의도된 사용의 치료적 범위 내에 있는 한 환자가 항응고 요법을 받고 있지 않는 한)
● 활성화된 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) 또는 부분 트롬보플라스틴 시간 (PTT) ≤ 1.5 x ULN (PT 또는 PTT가 항응고제의 의도된 사용의 치료적 범위 내에 있는 한 대상체가 항응고 요법을 받고 있지 않는 한)
일부 실시양태에서, 포함 기준은 환자가 적어도 1 회의 표적화된 내분비 요법 (아비라테론 아세테이트와 프레드니손, 엔잘루타미드 및 ARN-509와 같은 차세대 표적화된 약제를 비제한적으로 포함하는 2 세대 항안드로겐 요법으로서 정의됨) 및/또는 도세탁셀을 함유한 적어도 1 회의 양생법/화학요법의 라인으로 치료받았고/거나, 이전 화학요법 양생법이 없고/없거나, 3 회 이하의 양생법/전술한 치료의 라인으로 치료되었다는 것 (이전 요법에 실패/진행됨)을 포함할 것이다.
일부 실시양태에서, 포함 기준은 환자가 표준 케어 요법에 따라 질환 진행을 평가하였다는 것을 포함할 수 있으며, PSA 수준의 상승만으로 질환 진행이 현현하는 환자의 경우, PCWG3은 ≥3 주 간격으로 적어도 2 개의 연속 상승 PSA 값 (28-일 스크리닝 기간에 제한되지 않음) 및 1.0 ng/mL의 최소 시작 값을 필요로 하며, 플루타미드를 받은 환자의 경우, PSA 값 중 적어도 하나는 플루타미드 중단 ≥4 주 후에 수득되어야 하며, 비칼루타미드 또는 닐루타미드를 받은 환자의 경우, PSA 값 중 적어도 하나는 항안드로겐 중단 ≥6 주 후에 수득되어야 한다.
6.4.4 용량 단계적 확대 가이드라인 - 임시 용량 수준 탐구
artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 IV로 투여된다. 각각의 벡터에 대해 환자당 용량당 1×106 RCV FFU의 시작 용량이 투여된다. 게다가, 임상 연구의 1상 부분에 대한 용량 단계적 확대 계획은 코호트 간에 최대 1로그 차수의 용량 증분을 허용한다 (즉, 106, 107, 108 RCV FFU).
1상 용량 단계적 확대를 위해, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP의 제안된 인간 시작 용량은 1×106 RCV FFU이다. 잠재적인 용량 단계적 확대의 비-제한적인 예는 표 12. artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 교대 2-벡터 치료를 위한 임시 용량 수준에 나와 있다.
표 12. artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP의 교대 2-벡터 치료를 위한 임시 용량 수준
약어: FFU = 초점-형성 단위, RCV = 복제-적격 바이러스
6.4.5 치료 양생법 및 주기 지속기간
환자는 허용가능하지 않은 치료-관련된 이상 사례, 질환 진행 (내장/연조직 전이에 대한 고형 종양의 면역 반응 평가 기준 (iRECIST) 또는 뼈 전이에 대한 전립선 암 작업 3 (PCW3)에 의해 확인됨) 또는 동의 철회를 경험할 때까지 치료된다.
(i) I상 용량 단계적 확대
artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 교대 IV 투여로 주어진다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투여한다.
주기 1 및 2의 경우, 치료 주기는 42 일의 기간으로서 정의된다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP를 먼저 투여한 다음, artLCMV-PAP-NP/PSA-GP를 투여하며, 처음 4 회 투여 동안 3 주 (21 일)마다 치료를 교대한다.
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 1 및 2의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 1 및 2의 22 일차에 IV 투여된다.
주기 3 및 후속 주기의 경우, 치료 주기는 84 일의 기간으로서 정의된다. 주기 3, 1 일차는 주기 2, 42 일차의 완료 후 시작된다. 주기 3 및 후속 주기의 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 용량 투여는 ± 7 일의 시간 윈도우를 갖는다. artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 용량은 다음과 같이 6 주 (42 일)마다 교대로 투약된다:
● artPICV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 3 및 후속 주기의 1 일차에 IV 투여된다.
● artLCMV-PAP-NP/PSA-GP는 주기 3 및 후속 주기의 43 일차에 IV 투여된다.
일 실시양태에서, 처음 5 회 용량은 3 주 간격으로 투여될 수 있고, 6 회 용량 이후부터, 6 주 간격으로 용량이 투여될 수 있다.
I상 용량 단계적 확대의 경우, artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 양생법에 대한 투여 일정은 안전성, 효험 또는 바이오마커 데이터에 기반하여 다음 코호트에 대해 변형될 수 있다.
I상 용량 단계적 확대를 위해, 다음의 정보가 수집된다: (1) DLT 관찰 기간 동안 투여된 제1 연구 약물로부터의 DLT의 발생률; (2) 안전성: AE 및 SAE의 유형, 빈도 및 중증도; (3) 내약성: 용량 중단, 감소 및 용량 세기, 및 실험실 값 평가; (4) 전체 생존 (OS); (5) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 무진행 생존 (PFS); (6) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 전체 반응률 (ORR), 질환 통제율 (DCR) 및 반응의 지속기간 (DOR); (7) PSA 반응을 갖는 환자의 비율 (기준선으로부터 기준선 후 최저 PSA 결과까지 PSA의 ≥50% 감소, 적어도 3 주 후 제2 연속 PSA 평가에 의해 확인됨); (8) 임의의 시간에서의 최상의 PSA 반응; (9) PSA 진행까지의 시간 (PSA PFS); (10) 전립선 암-연관된 항원 (PAP 및 PSA)의 측정 - 특이적 T 세포 반응; (11) 전립선 암-연관된 항원 (PAP 및 PSA)의 특징규명 - 특이적 T 세포; 및 (12) 종양 표본 및 혈액 및 혈장 내 순환 종양 세포의 바이오마커의 평가.
(ii) II상 용량 확장
아레나바이러스 벡터의 치료 양생법 및 주기 지속기간은 I상에 기재된 바와 동일하다.
일부 치료 그룹에서, 환자는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 및 artPICV-PAP-NP/PSA-GP와 함께 진전된 전립선 암의 치료용으로 승인된 의약의 병용 요법을 받을 것이다.
II상 용량 확장의 경우, 다음의 정보가 수집된다: (1) PSA 반응을 갖는 환자의 비율 (기준선으로부터 기준선-후 최저 PSA 결과까지 PSA의 ≥50% 감소, 적어도 3 주 후 제2 연속 PSA 평가에 의해 확인됨); (2) RECIST v1.1/iRECIST (연조직), PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 종양 반응; (3) 전체 생존 (OS); (4) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 무진행 생존 (PFS); (5) RECIST v1.1/iRECIST (연조직) 및 PCWG3 (뼈) 기준을 사용한 전체 반응률 (ORR), 질병 통제율 (DCR) 및 반응의 지속기간 (DOR); (6) 임의의 시간에서의 최상의 PSA 반응; (7) PSA 진행까지의 시간 (PSA PFS); (8) 안전성: AE 및 SAE의 유형, 빈도 및 중증도; (8) 내약성: 용량 중단, 감소 및 용량 세기, 및 실험실 값 평가; (9) 전립선 암-연관된 항원 (PAP 및 PSA)의 측정 - 특이적 T 세포 반응; (10) 전립선 암-연관된 항원 (PAP 및 PSA)의 특징규명 - 특이적 T 세포; (11) 종양 표본 및 혈액 및 혈장 내 순환 종양 세포의 바이오마커의 평가.
6.4.6 효험 변수
효험은 PCWG3에 따른 PSA 반응 (Scher 등 2016), PCWG3에 따른 뼈 반응, 및 RECIST v1.1 및 iRECIST (이차 효험 엔드포인트)에 따른 연조직 반응을 사용하여 평가된다.
PSA 수준은 기준선에서 그리고 주기 1, 1 일차에 시작하여 3 주마다 평가된다. 객관적인 방사선 질환이 진행될 때까지 주기 1의 1 일차 후 첫 해에 9 주 (±7 일)마다 종양 및 뼈 스캔을 수행한다.
RECIST 평가에 사용되는 이미징 양식은 흉부, 복부 및 골반의 CT 또는 MRI 스캔이다. 질환 관여의 임의의 다른 구역은 개별 환자의 징후 및 증상을 기반으로 추가적으로 조사된다.
뼈 병변은 테크네튬-99 (뼈 스캔)로 일반적으로 수행되는 뼈 신티그래피에 의해 평가된다. 뼈 병변은 뼈 스캔에 의해 평가되며, RECIST v.1.1 악성 연조직 평가의 일부가 아니다. 뼈 스캔에서 양성 핫스팟은 유의한 것으로 간주되며, 악성 질환의 명백한 부위는 전이성 뼈 병변으로서 기록된다.
표 13. 질환 현현에 의한 진행의 PCWG3 기준은 PSA, 뼈 전이 및 측정가능한 질환의 변화에 근거하여 효험 및 진행을 평가하기 위해 I상 및 II상에서 사용된 기준을 보여준다.
표 13. 질환 현현에 의한 진행의 PCWG3 기준
약어: CNS = 중추신경계; PSA = 전립선-특이적 항원; CT = 컴퓨터 단층촬영; MRI = 자기 공명 이미징; PCWG3 = 전립선 암 임상 시험 작업 그룹 3; PET= 양전자 방출 단층촬영; PSA-DT = PSA 배가 시간; RECIST = 고형 종양의 반응 평가 기준
6.4.7 탐색적 바이오마커, T 세포 반응, PD 바이오마커 및 기타 중앙 임상 실험실 분석
다음의 실험실 분석이 수행된다.
바이러스 배출
바이러스 배출 분석을 위해 환자로부터 타액, 혈액 및 소변으로부터의 샘플을 수집한다. 바이러스 배출을, 정량적 역전사 PCR에 의해 분석하여, 핵단백질 RNA의 카피를 정량화할 것이고, 감염성 검정과 커플링하여, 배출된 물질을 특징규명하여, 감염성 바이러스의 부재를 확인할 수 있다.
T 세포 면역 반응
세포성 면역 반응을 효소-연결된 면역흡착 스팟 (ELISpot) 검정에 의해 측정하여, artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및/또는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP에 대한 세포내 염색을 통해 IFN-γ, TNF-α, IL-2, CD107a를 측정함으로써 항원 특이적 면역 반응 및 CD8+ T 세포 기능성 및 항원 인식으로서 말초 혈액 단핵 세포에서 분비된 IFN-γ 특이적 세포를 평가하였다 (표 14).
표 14 면역원성 분석의 요약
CCD4 = 분화 클러스터 4; CD8 = 분화 클러스터 8; PSA = 전립선 특이적 항원 및 E6 PAP = 전립선 산성 포스파타제; ELISpot = 효소-연결된 면역 흡수 스팟; ICS = 세포내 사이토카인 염색; IFN-γ = 인터페론-감마; IL-2 = 인터류킨-2; LMCV = 림프구성 맥락수막염 바이러스; NP = 핵단백질; PBMC = 말초 혈액 단핵 세포; PICV = 피친데 바이러스; TNF-α = 종양 괴사 인자 알파
약력학적 바이오마커
artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및/또는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 요법에 중요한 인자를 식별하기 위한 추가적인 바이오마커 연구는 요법에 대한 반응 및/또는 저항성의 결정자뿐만 아니라 임상 시험 동안 이상 사례의 결정자를 추가로 조사하고 이해하기 위해 계속될 수 있다. 생체표본 (종양 물질 및 혈액 구성요소; 혈청, 혈장 및 PBMC)는 조직 마커의 면역염색, 게놈 및 전사 분석에 사용될 수 있다.
검정은 다음을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다:
● 생식계열 (혈액) 유전자 분석 (예컨대, 전체 엑솜 시퀀싱 (WES), 유전자 발현 프로파일, RNA-시퀀싱):
● 종양의 유전자 및 전사 분석: ImmunoID NeXT 플랫폼은 특이적 T 세포 클론의 존재, 돌연변이 변화 (TMB), 현미부수체 불안정성 (MSI) 유전자 시그니처를 평가하고, BRCA1/2 및 기타 상동 재조합 복구 (HRR)-관련된 유전자에서의 체세포 돌연변이를 식별하고, 상동 재조합 결핍 (HRD)을 나타내는 게놈 흉터의 존재를 검출할 것이며, 이는 단일 약제로서 또는 다른 치료와의 조합으로의 artPICV-PAP-NP/PSA-GP 및/또는 artLCMV-PAP-NP/PSA-GP 요법에 대한 임상 반응에 중요할 수 있다.
● 다중 면역형광 면역조직화학 (mIF): 종양 샘플은 PD-L1/PD-1 발현, 종양 침윤성 림프구 (TIL), 소진 마커, 및 많은 상이한 암에서 우수한 전체 생존과 상관관계가 있는 것으로 많은 연구에서 나타난 CD103+ 종양-침윤성 림프구 발현에 대해 평가될 것이다.
● 순환 종양 세포 (CTC) 및 순환 종양 DNA (ctDNA): CTC의 열거는 전이성 거세-저항성 전립선 암 (mCRPC)의 예후 및 반응의 바이오마커인 것으로 나타났다. CTC 계수의 감소된 수준은 개선된 무진행 생존 (PFS) 및 전체 생존 (OS)과 연관되어 있다. (Cristofanilli , 2004, Hayes, 2006) 전이성 거세-저항성 전립선 암 (mCRPC)의 예후 및 반응과 상관관계가 있는 것으로 보여지는 CTC를 측정하기 위해 기준선에서 및 치료 동안 혈액 샘플을 수집할 것이다. 추가적으로, 게놈 분야(landscape)를 조사하고 종양-연관된 카피 수 변경 (CNA), 단일-뉴클레오티드 변이 (SNV) 및 환자에서 일반적으로 관찰되는 재배열을 특징규명하기 위해 종양 조직 외에도 사전-정의된 시점에서 혈장/혈청을 수집할 것이다.
● 혈청 바이오마커 분석: 체액성 면역 (항-PSA/PAP 항체 및 항-벡터 중화 항체)은 또한 효소-연결된 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 탐구될 것이고, LCMV 및 PICV 중화 항체는 중화 검정으로 분석될 것이다. 사이토카인 및 케모카인은 사이토카인 분비 프로파일을 연구하기 위해 사전정의된 시점에서 Meso Scale Discovery (MSD)를 사용함으로써 연구될 것이다.
7. 등가물
본원에 개시된 S 세그먼트, 게놈 세그먼트, 바이러스 입자, 핵산, 방법, 숙주 세포, 조성물 및 키트는 본원에 기재된 구체적인 실시양태에 의해 범주가 제한되지 않는다. 실제로, 기재된 것들 이외에 S 세그먼트, 게놈 세그먼트, 바이러스 입자, 핵산, 방법, 숙주 세포, 조성물 및 키트의 다양한 변형은 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백해진다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범주 내에 속하도록 의도된다.
다양한 공개물, 특허 및 특허 출원이 본원에 인용되어 있으며, 이들의 개시내용은 그 전체가 참조로 원용된다.
8. 서열 목록
SEQUENCE LISTING <110> Hookipa Biotech GmbH <120> ARENAVIRUSES USED IN TREATMENTS OF PROSTATE CANCER <130> 13194-062-228 <140> To be assgined <141> On even date herewith <150> 63/165,028 <151> 2021-03-23 <160> 18 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 386 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of PAP <400> 1 Met Arg Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala Arg Ala Ala Ser Leu Ser Leu 1 5 10 15 Gly Phe Leu Phe Leu Leu Phe Phe Trp Leu Asp Arg Ser Val Leu Ala 20 25 30 Lys Glu Leu Lys Phe Val Thr Leu Val Phe Arg His Gly Asp Arg Ser 35 40 45 Pro Ile Asp Thr Phe Pro Thr Asp Pro Ile Lys Glu Ser Ser Trp Pro 50 55 60 Gln Gly Phe Gly Gln Leu Thr Gln Leu Gly Met Glu Gln His Tyr Glu 65 70 75 80 Leu Gly Glu Tyr Ile Arg Lys Arg Tyr Arg Lys Phe Leu Asn Glu Ser 85 90 95 Tyr Lys His Glu Gln Val Tyr Ile Arg Ser Thr Asp Val Asp Arg Thr 100 105 110 Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro Glu Gly 115 120 125 Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His 130 135 140 Thr Val Pro Leu Ser Glu Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn 145 150 155 160 Cys Pro Arg Phe Gln Glu Leu Glu Ser Glu Thr Leu Lys Ser Glu Glu 165 170 175 Phe Gln Lys Arg Leu His Pro Tyr Lys Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly 180 185 190 Lys Leu Ser Gly Leu His Gly Gln Asp Leu Phe Gly Ile Trp Ser Lys 195 200 205 Val Tyr Asp Pro Leu Tyr Cys Glu Ser Val His Asn Phe Thr Leu Pro 210 215 220 Ser Trp Ala Thr Glu Asp Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu 225 230 235 240 Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser 245 250 255 Arg Leu Gln Gly Gly Val Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys 260 265 270 Arg Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala 275 280 285 His Asp Thr Thr Val Ser Gly Leu Gln Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn 290 295 300 Gly Leu Leu Pro Pro Tyr Ala Ser Cys His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe 305 310 315 320 Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu Thr Gln 325 330 335 His Glu Pro Tyr Pro Leu Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser Cys Pro 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ctgactgtgg cacaggtcag aggagggatg 720 gtgtttgagc tggccaattc catagttctc ccttttgatt gcagagatta tgctgtggtt 780 ttgagaaagt atgctgacaa aatttacagc atttcaatga aacatccaca ggaaatgaag 840 acatacagtg tctcatttga ttcacttttt tctgcagtga agaatttcac agaaattgct 900 tccaagttca gtgaaaggct tcaggacttt gacaaaagca acccaattgt tttgagaatg 960 atgaatgatc aactcatgtt tctggaaaga gcattcattg atcccttggg gttgccagac 1020 aggccttttt acaggcatgt catctatgcc ccaagcagtc acaacaagta tgcaggggag 1080 tcatttccag gaatttatga tgctctgttt gacattgaaa gcaaagtgga cccttccaag 1140 gcctggggag aagtgaagag acagatttat gttgcagcct tcacagttca ggcagctgca 1200 gagactttga gtgaagttgc ttaa 1224 <210> 9 <211> 2253 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Nucleotide sequence of full PSMA <400> 9 atgtggaatc ttcttcatga aactgactca gctgtggcca cagccagaag acccaggtgg 60 ctgtgtgcag gggcccttgt tcttgcaggt ggtttttttc tccttggctt cctctttggt 120 tggttcatca agtcttcaaa tgaagcaacc aacatcactc caaagcacaa catgaaagca 180 tttttggatg aattgaaagc tgagaacatc aagaagtttt 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ccaagaaact tcagtgtgtg 600 gacctccatg tcatctccaa tgatgtgtgt gcccaagttc acccccagaa ggtcaccaag 660 ttcatgctgt gtgctggaag atggacaggg ggcaaaagca cctgctctgg tgactctggg 720 ggcccccttg tgtgcaatgg tgtgctccaa ggcatcacct cctggggcag tgagccatgt 780 gccctgcctg aaaggccttc cctgtacacc aaggtggttc attacaggaa gtggatcaag 840 gacacaattg tggccaaccc ctgaagaaca gcgcctccct gactctccac ctcgaaagag 900 gtggagagtc agggaggccc agagggtctc agcgtctttt ccagatagtt tttacaccag 960 gcaccttgaa tgcaccacaa ctacagatcc ccttgttggt caagcggtgt ggctttggac 1020 atgaaccgcc ctttatgtgt ctatgtgttg gtatcttcac aagatgcaga aagatgctga 1080 ttagatatgc tgatgttgaa aacatcaaaa gatccattaa ggctaaagga gtactccctt 1140 gtctttttat gtagtccttc ctcaacatct ctgtgatcat gttatctgct tcttgttcga 1200 tttgatcact aaagtgggtc tcattcaagt aggagccatt agtgacaagc cagcacttgg 1260 gtacactagt ctcaccagtc ttagcatgtt ccagatacca gaactttgag taattacagt 1320 atggtacccc cattagatct cttagatgat tcctcatcaa cagctgatcg gaaatcagag 1380 aatttactgt tgttttgaat acatgcaagg cagactctac atcttgcttg aacttactca 1440 gggcggcctt gttgtaatca attagtcgta gcatgtcaca gaactcttca tcatgattga 1500 cattacattt tgcaacagct gtattcccaa aacatttgag ctctgcagca aggatcatcc 1560 atttggtcag gcaataacca cctggatttt ctactcctga ggagtctgac agggtccagg 1620 tgaatgtgcc tgcaagtctc ctagtgagaa actttgtctt ttcctgagca aagaggattc 1680 tagacatccc aaaagggcct gcatatctac agtggttttc ccaagtcctg ttttgtatga 1740 ttaggtactg atagcttgtt tggctgcacc aagtggtctt gccatctgaa cctgcccagc 1800 cccagccact tctcatgtat tttcctccaa aggcagttct aaacatgtcc aagactctac 1860 ctctgaaagt cctacactgg cttatagcgc tctgtgggtc cgaaaatgac aagttgtatt 1920 gaatggtgat gccattgtta aaatcacaag acactgcttt gtggttggaa ttccctctaa 1980 tactgaggtg cagactcgag actatactca tgagtgtatg gtcaaaagtc tttttgttga 2040 aagcggaggt taagttgcaa aaattgtgat taaggatgga gtcgttagtg aaagttagct 2100 ccagtccaga gcttcccata ctgatgtagt gatgagagtt gttggctgag cacgcattgg 2160 gcatcgtcag atttaagtga gacatatcaa actccactga tttgaactgg taaacccctt 2220 tatagatgtc gggaccatta aggccgtaca tgccacagga cctaccagcc 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atctcatcgg cttctggtcc ctaacccagc ctgtcactgt 1380 tgcatcaaac atgatggtat caagcaatgc acagtgagga ttcgcagtgg tttgtgcagc 1440 ccccttcttc ttcttcttta tgaccaaacc tttatgtttg gtgcagagta gattgtatct 1500 ctcccagatc tcatcctcaa aggtgcgtgc ttgctcggca ctgagtttca cgtcaagcac 1560 ttttaagtct cttctcccat gcatttcgaa caaactgatt atatcatctg aaccttgagc 1620 agtgaaaacc atgttttgag gtaaatgtct gatgattgag gaaatcaggc ctggttgggc 1680 atcagccaag tcctttaaaa ggagaccatg tgagtacttg ctttgctctt tgaaggactt 1740 ctcatcgtgg ggaaatctgt aacaatgtat gtagttgccc gtgtcaggct ggtagatggc 1800 catttccacc ggatcatttg gtgttccttc aatgtcaatc catgtggtag cttttgaatc 1860 aagcatctga attgaggaca caacagtatc ttctttctcc ttagggattt gtttaaggtc 1920 cggtgatcct ccgtttctta ctggtggctg gatagcactc ggcttcgaat ctaaatctac 1980 agtggtgtta tcccaagccc tcccttgaac ttgagacctt gagccaatgt aaggccaacc 2040 atcccctgaa agacaaatct tgtatagtaa attttcataa ggatttctct gtccgggtgt 2100 agtgctcaca aacatacctt cacgattctt tatttgcaat agactcttta tgagagtact 2160 aaacatagaa ggcttcacct 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catctcatcg gcttctggtc cctaacccag cctgtcactg ttgcatcaaa 1260 catgatggta tcaagcaatg cacagtgagg attcgcagtg gtttgtgcag cccccttctt 1320 cttcttcttt atgaccaaac ctttatgttt ggtgcagagt agattgtatc tctcccagat 1380 ctcatcctca aaggtgcgtg cttgctcggc actgagtttc acgtcaagca cttttaagtc 1440 tcttctccca tgcatttcga acaaactgat tatatcatct gaaccttgag cagtgaaaac 1500 catgttttga ggtaaatgtc tgatgattga ggaaatcagg cctggttggg catcagccaa 1560 gtcctttaaa aggagaccat gtgagtactt gctttgctct ttgaaggact tctcatcgtg 1620 gggaaatctg taacaatgta tgtagttgcc cgtgtcaggc tggtagatgg ccatttccac 1680 cggatcattt ggtgttcctt caatgtcaat ccatgtggta gcttttgaat caagcatctg 1740 aattgaggac acaacagtat cttctttctc cttagggatt tgtttaaggt ccggtgatcc 1800 tccgtttctt actggtggct ggatagcact cggcttcgaa tctaaatcta cagtggtgtt 1860 atcccaagcc ctcccttgaa cttgagacct tgagccaatg taaggccaac catcccctga 1920 aagacaaatc ttgtatagta aattttcata aggatttctc tgtccgggtg tagtgctcac 1980 aaacatacct tcacgattct ttatttgcaa tagactcttt atgagagtac taaacataga 2040 aggcttcacc 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acagcgtgat ctagaatcgc ctaggatcca ctgtgcg 2927 <210> 17 <211> 2960 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> PSMA2-GP-S-segment of PMVS(26), which is a PMVS of artPICV-PSMA1-NP/PSMA2-GP <400> 17 gcgcaccggg gatcctaggc ataccttgga cgcgcatatt acttgatcaa agatgcacat 60 ccattcaacc aatgaagtga caagaattta caatgtgatt ggaactctca gaggagcagt 120 ggaaccagac agatatgtca ttctgggagg tcacagggac tcctgggtgt ttggtggaat 180 tgaccctcag agtggagcag ctgtggttca tgaaattgtc aggagttttg gaacactgaa 240 aaaggaaggg tggagaccca gaagaacaat tttgtttgca agctgggatg cagaagaatt 300 tggtcttctt ggttcaactg agtgggcaga ggagaactca agactccttc aggagagagg 360 agtagcttac atcaatgctg actcatctat tgaaggaaat tacactctga gagttgattg 420 cactccacta atgtacagct tggttcacaa tctgacaaaa gagctgaaaa gccctgatga 480 agggtttgaa ggaaaatctc tttatgaaag ttggacaaaa aaaagtccct ccccagagtt 540 cagtggaatg cccaggatca gcaaattggg atctggaaat gattttgagg tgttcttcca 600 aagacttgga attgcttcag gcagagcaag gtacaccaag aattgggaaa ccaacaaatt 660 cagtggttat ccactatatc acagtgttta tgaaacatat gagttggtgg aaaagtttta 720 tgatccaatg ttcaaatatc atctgactgt ggcacaggtc agaggaggga tggtgtttga 780 gctggccaat tccatagttc tcccttttga ttgcagagat tatgctgtgg ttttgagaaa 840 gtatgctgac aaaatttaca gcatttcaat gaaacatcca caggaaatga agacatacag 900 tgtctcattt gattcacttt tttctgcagt gaagaatttc acagaaattg cttccaagtt 960 cagtgaaagg cttcaggact ttgacaaaag caacccaatt gttttgagaa tgatgaatga 1020 tcaactcatg tttctggaaa gagcattcat tgatcccttg gggttgccag acaggccttt 1080 ttacaggcat gtcatctatg ccccaagcag tcacaacaag tatgcagggg agtcatttcc 1140 aggaatttat gatgctctgt ttgacattga aagcaaagtg gacccttcca aggcctgggg 1200 agaagtgaag agacagattt atgttgcagc cttcacagtt caggcagctg cagagacttt 1260 gagtgaagtt gcttaagccc tagcctcgac atgggcctcg acgtcactcc ccaatagggg 1320 agtgacgtcg aggcctctga ggacttgagc ttatttaccc agtctcaccc atttgtaggg 1380 tttctttggg attttataat acccacagct gcaaagagag ttcctagtaa tcctatgtgg 1440 cttcggacag ccatcaccaa tgatgtgcct atgagtgggt attccaacta agtggagaaa 1500 cactgtgatg gtgtaaaaca ccaaagacca gaagcaaatg tctgtcaatg ctagtggagt 1560 cttaccttgt ctttcttcat attcttttat cagcatttca ttgtacagat tctggctctc 1620 ccacaaccaa tcattcttaa aatgcgtttc attgaggtac gagccattgt gaactaacca 1680 acactgcggt aaagaatgtc tccctgtgat ggtatcattg atgtaccaaa attttgtata 1740 gttgcaataa gggattttgg caagctgttt gagactgttt ctaatcacaa gtgagtcaga 1800 aataagtccg ttgatagtct ttttaaagag attcaacgaa ttctcaacat taagttgtaa 1860 ggttttgata gcattctgat tgaaatcaaa taacctcatc gtatcgcaaa attcttcatt 1920 gtgatctttg ttgcattttg ccatcacagt gttatcaaaa cattttattc cagcccaaac 1980 aatagcccat tgctccaaac agtaaccacc tgggacatgt tgcccagtag agtcactcaa 2040 gtcccaagtg aaaaagccaa ggagtttcct gctcacagaa ctataagcag ttttttggag 2100 agccatcctt attgttgcca ttggagtata tgtacagtga ttttcccatg tggtgttctg 2160 tatgatcagg aaattgtaat gtgtcccacc ttcacagttt gttagtctgc aagaccctcc 2220 actacagtta ttgaaacatt ttccaaccca cgcaattttt gggtccccaa tgatttgagc 2280 aagcgacgca ataagatgtc tgccaacctc acctcctcta tccccaactg tcaagttgta 2340 ctggatcaac accccagcac cctcaactgt tttgcatctg gcacctacat gacgagtgac 2400 atggagcaca ttgaagtgta actcattaag caaccatttt aatgtgtgac ctgcttcttc 2460 tgtcttatca caattactaa tgttaccata tgcaaggctt ctgatgttgg aaaagtttcc 2520 agtagtttca tttgcaatgg atgtgtttgt caaagtgagt tcaattcccc atgttgtgtt 2580 agatggtcct ttgtagtaat gatgtgtgtt gttcttgcta catgattgtg gcaagttgtc 2640 aaacattctt gtgaggttga actcaacgtg ggtgagattg tgcctcctat caatcatcat 2700 gccatcacaa cttctgccag ccaaaatgag gaaggtgatg agttggaata ggccacatct 2760 catcagattg acaaatcctt tgatgatgca tagggttgag acaatgatta aggcgacatt 2820 gaacacctcc tgcaggactt cgggtataga ctggatcaaa gtcacaactt gtcccatttt 2880 ggggttgttt gcacttcctc cgagtcagtg aagaagtgaa cgtacagcgt gatctagaat 2940 cgcctaggat ccactgtgcg 2960 <210> 18 <211> 386 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Amino acid sequence of PAP with I2R mutation <400> 18 Met Ile Ala Ala Pro Leu Leu Leu Ala Arg Ala Ala Ser Leu Ser Leu 1 5 10 15 Gly Phe Leu Phe Leu Leu Phe Phe Trp Leu Asp Arg Ser Val Leu Ala 20 25 30 Lys Glu Leu Lys Phe Val Thr Leu Val Phe Arg His Gly Asp Arg Ser 35 40 45 Pro Ile Asp Thr Phe Pro Thr Asp Pro Ile Lys Glu Ser Ser Trp Pro 50 55 60 Gln Gly Phe Gly Gln Leu Thr Gln Leu Gly Met Glu Gln His Tyr Glu 65 70 75 80 Leu Gly Glu Tyr Ile Arg Lys Arg Tyr Arg Lys Phe Leu Asn Glu Ser 85 90 95 Tyr Lys His Glu Gln Val Tyr Ile Arg Ser Thr Asp Val Asp Arg Thr 100 105 110 Leu Met Ser Ala Met Thr Asn Leu Ala Ala Leu Phe Pro Pro Glu Gly 115 120 125 Val Ser Ile Trp Asn Pro Ile Leu Leu Trp Gln Pro Ile Pro Val His 130 135 140 Thr Val Pro Leu Ser Glu Asp Gln Leu Leu Tyr Leu Pro Phe Arg Asn 145 150 155 160 Cys Pro Arg Phe Gln Glu Leu Glu Ser Glu Thr Leu Lys Ser Glu Glu 165 170 175 Phe Gln Lys Arg Leu His Pro Tyr Lys Asp Phe Ile Ala Thr Leu Gly 180 185 190 Lys Leu Ser Gly Leu His Gly Gln Asp Leu Phe Gly Ile Trp Ser Lys 195 200 205 Val Tyr Asp Pro Leu Tyr Cys Glu Ser Val His Asn Phe Thr Leu Pro 210 215 220 Ser Trp Ala Thr Glu Asp Thr Met Thr Lys Leu Arg Glu Leu Ser Glu 225 230 235 240 Leu Ser Leu Leu Ser Leu Tyr Gly Ile His Lys Gln Lys Glu Lys Ser 245 250 255 Arg Leu Gln Gly Gly Val Leu Val Asn Glu Ile Leu Asn His Met Lys 260 265 270 Arg Ala Thr Gln Ile Pro Ser Tyr Lys Lys Leu Ile Met Tyr Ser Ala 275 280 285 His Asp Thr Thr Val Ser Gly Leu Gln Met Ala Leu Asp Val Tyr Asn 290 295 300 Gly Leu Leu Pro Pro Tyr Ala Ser Cys His Leu Thr Glu Leu Tyr Phe 305 310 315 320 Glu Lys Gly Glu Tyr Phe Val Glu Met Tyr Tyr Arg Asn Glu Thr Gln 325 330 335 His Glu Pro Tyr Pro Leu Met Leu Pro Gly Cys Ser Pro Ser Cys Pro 340 345 350 Leu Glu Arg Phe Ala Glu Leu Val Gly Pro Val Ile Pro Gln Asp Trp 355 360 365 Ser Thr Glu Cys Met Thr Thr Asn Ser His Gln Gly Thr Glu Asp Ser 370 375 380 Thr Asp 385

Claims (84)

  1. 아레나바이러스 S 세그먼트로서, 아레나바이러스 S 세그먼트는 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 오픈 리딩 프레임 (ORF)을 보유하도록 조작되고, 전립선 암-관련된 항원은 전립선 산성 포스파타제 (PAP), 전립선 특이적 항원 (PSA) 및 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  2. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  3. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  4. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  5. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  6. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  7. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  8. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  9. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSA 또는 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  10. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  11. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 GP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  12. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  13. 제1항에 있어서, 상기 아레나바이러스 S 세그먼트가 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 이종 ORF, 및 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 NP를 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  14. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 1과 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  15. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 2와 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  16. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 3 또는 서열번호 4와 적어도 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  17. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 1을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  18. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 18을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  19. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 2를 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  20. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 3 또는 서열번호 4를 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  21. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 1로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  22. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 18로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  23. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 2로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  24. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편의 아미노산 서열이 서열번호 3 또는 서열번호 4로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  25. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 5와 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  26. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 6과 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  27. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 7 또는 서열번호 8과 적어도 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90% 동일성을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  28. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 5를 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  29. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 6을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  30. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 7 또는 서열번호 8을 포함하는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  31. 제2항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PAP 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 5로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  32. 제6항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSA 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 6으로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  33. 제10항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PSMA의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF의 뉴클레오티드 서열이 서열번호 7 또는 서열번호 8로 이루어지는, 아레나바이러스 S 세그먼트.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 아레나바이러스 S 세그먼트의 cDNA.
  35. 제34항의 cDNA를 포함하는 DNA 발현 벡터.
  36. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항의 아레나바이러스 S 세그먼트, 제34항의 cDNA, 또는 제35항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  37. 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트는 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항이고, 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트 중 하나는 GP를 포함하고, 다른 하나는 NP를 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  38. 제37항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 적어도 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10 세대에서 계대된 후 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편의 안정한 발현을 갖는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  39. 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 5로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 6으로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  40. 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  41. 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 제1 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 7로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 핵단백질 (NP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되고, 제2 아레나바이러스 S 세그먼트는 아레나바이러스 5' UTR의 제어 하에서의 위치에서 서열번호 8로 이루어진 이종 ORF, 및 아레나바이러스 3' UTR의 제어 하에서의 위치에서 아레나바이러스 당단백질 (GP)을 인코딩하는 ORF를 보유하도록 조작되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  42. 제37항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 림프구성 맥락수막염 바이러스 (LCMV) 또는 피친데 바이러스 (PICV)로부터 유래되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  43. 제42항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 LCMV로부터 유래되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  44. 제43항에 있어서, 상기 LCMV가 MP 균주, WE 균주, 내인성 LCMV 클론 13 당단백질 대신에 LCMV 균주 WE의 당단백질을 발현하는 LCMV 클론 13, 암스트롱 균주, 또는 암스트롱 클론 13 균주인, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  45. 제42항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 PICV로부터 유래되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  46. 제45항에 있어서, 상기 PICV가 균주 Munchique CoAn4763 단리주 P18, 또는 P2 균주인, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  47. 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 2 개의 S 세그먼트 중 하나가 서열번호 10을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나가 서열번호 11을 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  48. 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 2 개의 S 세그먼트 중 하나가 서열번호 12를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나가 서열번호 13을 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  49. 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 2 개의 S 세그먼트 중 하나가 서열번호 14를 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나가 서열번호 15를 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  50. 2 개의 S 세그먼트를 포함하는 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자로서, 2 개의 S 세그먼트 중 하나가 서열번호 16을 포함하고, 2 개의 S 세그먼트 중 다른 하나가 서열번호 17을 포함하는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  51. 제37항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 감염성 및 복제 적격인, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  52. 제37항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자가 약독화되는, 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자.
  53. 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자를 생성하는 방법으로서, 상기 방법은
    (i) 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트 및 1 개의 아레나바이러스 L 세그먼트의 핵산을 숙주 세포에 형질주입시키는 단계로서, 여기서 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트는 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항인, 단계;
    (ii) 바이러스 형성에 적합한 조건 하에서 상기 숙주 세포를 유지하는 단계; 및
    (iii) 상기 아레나바이러스 입자를 함유하는 세포 배양 상청액을 수확하는 단계를 포함하는, 방법.
  54. 제53항에 있어서, 상기 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트의 전사가 양방향 발현 카세트를 사용하여 수행되는, 방법.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 상기 숙주 세포에 아레나바이러스 중합효소를 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 형질주입시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  56. 제55항에 있어서, 상기 아레나바이러스 중합효소가 아레나바이러스 L 단백질인, 방법.
  57. 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 숙주 세포에 아레나바이러스 NP 단백질을 인코딩하는 하나 이상의 핵산을 형질주입시키는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  58. 제53항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 cDNA에 인코딩되는, 방법.
  59. 제53항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산이 RNA에 인코딩되는, 방법.
  60. 제53항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아레나바이러스 L 세그먼트 및 2 개의 아레나바이러스 S 세그먼트의 전사가 각각 프로모터의 제어 하에 있는, 방법.
  61. 제58항에 있어서, 상기 프로모터가 다음으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법:
    (i) RNA 중합효소 I 프로모터;
    (ii) RNA 중합효소 II 프로모터; 및
    (iii) T7 프로모터.
  62. 제37항 내지 제52항 중 어느 한 항의 아레나바이러스 입자 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약학 조성물.
  63. 치료적 유효량의 제62항의 약학 조성물을 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 전립선 암을 치료하는 방법.
  64. 전립선 암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 전립선 암을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    (i) 제1 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제1 약학 조성물은 제37항 내지 제52항 중 어느 한 항의 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계; 및
    (ii) 일정 기간 후, 제2 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계이되, 여기서 제2 약학 조성물은 제37항 내지 제52항 중 어느 한 항의 하나 이상의 아레나바이러스 입자를 포함하는, 단계
    를 포함하는, 방법.
  65. 제64항에 있어서, 상기 방법이 (i) 및 (ii)를 반복하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서, 상기 제1 및 제2 약학 조성물이 정맥내 또는 종양내로 투여되는, 방법.
  67. 제64항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자와 비교할 때, 상이한 아레나바이러스 종으로부터 유래되지만, 동일한 전립선 암-관련된 항원 또는 이의 항원성 단편을 인코딩하는 ORF(들)를 보유하는, 방법.
  68. 제67항에 있어서, 상기 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 PICV로부터 유래되고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 LCMV로부터 유래되는, 방법.
  69. 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 제48항의 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자이고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 제47항의 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자인, 방법.
  70. 제64항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 제48항 및 제50항의 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자이고, 제2 약학 조성물로부터의 하나 이상의 아레나바이러스 입자가 제47항 및 제49항의 3 개의 세그먼트를 갖는 아레나바이러스 입자인, 방법.
  71. 제64항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 약제가 제1 및/또는 제2 약학 조성물과 조합하여 투여되는, 방법.
  72. 제71항에 있어서, 상기 제2 약제가 전립선 암을 치료하기 위한 약제인, 방법.
  73. 제72항에 있어서, 상기 제2 약제가 도세탁셀, 미톡산트론, 카바지탁셀 및 펨브롤리주맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  74. 제72항에 있어서, 상기 제2 약제가 엔잘루타미드 및 아비라테론으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  75. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제2 약제가 스테로이드와 함께 투여되는, 방법.
  76. 제75항에 있어서, 상기 스테로이드가 프레드니손 또는 메틸프레드니솔론을 포함하는, 방법.
  77. 제71항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 약학 조성물 및 제2 약제가 동시에 공동-투여되는, 방법.
  78. 제71항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 약학 조성물이 제2 약제의 투여 전에 투여되는, 방법.
  79. 제71항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 약학 조성물이 제2 약제의 투여 후에 투여되는, 방법.
  80. 제78항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학 조성물(들) 및 제2 약제의 투여 사이의 간격이 약 1 시간, 약 2 시간, 약 3 시간, 약 4 시간, 약 5 시간, 약 6 시간, 약 7 시간, 약 8 시간, 약 9 시간, 약 10 시간, 약 11 시간, 약 12 시간, 약 1 일, 약 2 일, 약 3 일, 약 4 일, 약 5 일, 약 6 일, 약 1 주, 약 8 일, 약 9 일, 약 10 일, 약 11 일, 약 12 일, 약 13 일, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 5 주, 약 6 주, 약 7 주, 약 8 주, 약 9 주, 약 10 주, 약 11 주, 약 12 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월 또는 약 6 개월 이상인, 방법.
  81. 제63항 내지 제80항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 전립선 암을 앓고 있거나, 전립선 암에 감수성이 있거나, 전립선 암에 걸릴 위험이 있는, 방법.
  82. 용기 및 사용 지침서를 포함하는 키트로서, 상기 용기는 제37항 내지 제52항 중 어느 한 항의 아레나바이러스 입자를 포함하고, 임의로 아레나바이러스 입자는 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물 내에 있는, 키트.
  83. 2 개 이상의 용기 및 사용 지침서를 포함하는 키트로서, 상기 용기 중 하나는 제37항 내지 제52항 중 어느 한 항의 아레나바이러스 입자를 포함하고, 용기 중 다른 하나는 제2 약제를 포함하고, 임의로 아레나바이러스 입자는 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물 내에 있는, 키트.
  84. 제82항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 키트가 정맥내 투여를 수행하는 데 적합한 장치를 추가로 포함하는, 키트.
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