KR20230157385A - 항 her2 항체 면역 작용제 접합체 및 이의 적용 - Google Patents

항 her2 항체 면역 작용제 접합체 및 이의 적용 Download PDF

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KR20230157385A
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폴 에이치. 송
강 친
지안동 유안
총 리우
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진콴텀 헬스케어 (쑤저우) 씨오., 엘티디.
브라이트제네 바이오-메디컬 테크놀로지 코., 엘티디.
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Abstract

본 개시는 분자 약물 접합체를 표적으로 하는 연결 유닛 분자 및 이에 대응하는 접합체, 이의 제조 및 사용에 관한 것으로, 특히 새로운 유형의 암 치료제로서 항-HER2 항체 면역 작용제 접합체(AIAC)에 관한 것이다.

Description

항 HER2 항체 면역 작용제 접합체 및 이의 적용
[0001] 본 개시는 생물 제약 분야, 특히 분자 면역 작용제 접합체를 표적으로 하는 연결 유닛 및 대응하는 접합체, 이의 제조 방법 및 적용에 관한 것이다.
[0002] 인간 상피세포 성장인자 수용체 2(HER2)는 티로신 키나아제 활성을 가진 상피세포 성장인자 수용체 계열의 구성원이다. HER2의 증폭 또는 과발현은 유방암의 약 15 내지 30%, 위암/위식도암의 10 내지 30%에서 발생한다. HER2 과발현은 난소, 자궁내막, 방광, 폐, 결장 및 두경부암과 같은 다른 암에서도 발견되었다(Iqbal N. et al, Mol Biol Int. 2014:852748). HER2 방향성 항체 또는 항체 약물 접합체(ADC)와 같은 HER2 표적 치료제의 효능으로 HER2 양성 질환 환자의 기대 수명이 크게 향상되었지만, 본질적으로 HER2 양성 유방암은 여전히 HER2 음성(및 HR 양성) 질환 환자보다 예후와 결과가 안 좋은 더 공격적인 형태의 질환이다. 또한 다른 HER2 과발현 암에서도 치료 결과가 실망스러운 것으로 입증되었다. 치료 결과가 좋지 않은 여러 가지 이유 중 하나는 HER2 표적 치료제를 투여받은 환자에게 내성이 생기기 때문이다. 종양 세포의 면역 탈출이 이 과정에 기여한다.
[0003] 면역치료는 새로운 암 치료법으로 큰 힘을 발휘하고 있다. CLTA-4와 PD-1/L1 단일클론 항체로 대표되는 면역 체크포인트 차단법은 기본적으로 T세포 기반 치료제로 다양한 암 적응증에 사용이 승인됐지만, 암에 대항하기 위해 면역계의 다른 메커니즘을 탐구하는 노력도 활발히 진행되고 있다. 골수 세포, 주로 대식세포, DC를 표적으로 하는 것이 유망한 방향으로 떠오르고 있다. 작용제 또는 대식세포 체크포인트 억제제에 의해 대식세포와 DC를 활성화하면 종양 세포를 제거하는 식균 능력뿐만 아니라 항원 제시 기능도 향상되어 적응성 항종양 면역을 더욱 강력하게 촉발할 수 있다.
[0004] 본 발명은 종양 표적 면역 치료의 새로운 약물인 HER2 방향성 항체 면역 작용제 접합체(AIAC)를 제공한다.
[0005] 일 양태에서, 식 (I-1) 또는 (I-2)로 표시되는 화합물을 제공하며,
(I-1)
(I-2)
여기서, B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-이고, k는 1~5의 정수이며, j는 1~3의 정수이고,
PL은 상기 B2 부분에 연결되는 페이로드이며,
바람직하게는, PL은 레시퀴모드이다.
[0006] 다른 양태에서, 식 (II-1) 또는 (II-2)로 표시되는 항체 약물 접합체가 제공되며,
(II-1)
(II-2)
여기서, B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-이고, k는 1~5의 정수이며, j는 1~3의 정수이고,
PL은 상기 B2 부분에 연결되는 페이로드이며,
바람직하게는, PL은 레시퀴모드이고,
z는 1~4의 정수이며, 바람직하게는 1~2이고,
A는 SEQ ID NO: 1로 표시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 2로 표시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체이다.
[0007] 본 발명의 항체 면역 작용제 접합체(AIAC)는 새로운 유형의 종양 표적 치료법을 제공한다. 시험관 내 실험에 따르면, AIAC는 변형되지 않은 네이키드 항체에 비해 더 높은 TNFα 생성을 유도할 수 있는 것으로 밝혀졌다. 생체 내 실험에서 AIAC는 항종양 효과를 나타냈다.
[0008] 도 7 및 도 8에서 X축 아래의 화살표는 투여 시점을 나타낸다.
[0009] 도 1은 식 (I')로 표시되는 화합물의 예시를 나타내는 도이다.
[0010] 도 2는 식 (II')로 표시되는 화합물의 예시를 나타내는 도이다.
[0011] 도 3은 식 (III')로 표시되는 화합물의 예시를 나타내는 도이다.
[0012] 도 4는 접합체 AC102-5-1-1, AC102-6-1-1 및 이에 상응하는 네이키드 변형되지 않은 항체 Ab0001(트라스투주맙) 및 작용제 레시퀴모드에 대한 인간 PBMC-NCI N87 공동 배양에서의 TNFα 유도 활성을 나타내는 도이다.
[0013] 도 5는 PBMC와 NCI N87 또는 MDA-MB-468 세포의 공동 배양에서 AC102-6-1-1 및 항체의 TNFα 유도 활성을 나타내는 도이다.
[0010] 도 6은 PBMC와 NCI N87 세포의 공동 배양에서 AC102-9-1-1, AC102-12-1-1, AC102-10-1-1, AC102-13-1-1 및 항체의 TNFα 유도 활성을 나타내는 도이다.
[0014] 도 7: 매체(PBS pH 6.5), 항체 및 테스트용 접합체(AC102-5-1-1 또는 AC102-6-1-1)가 5mg/kg인 NCI N87 CDX 모델이 투여된 SCID 베이지 마우스에서 시간에 따른 종양 부피 변화를 나타내는 도이다.
[0015] 도 8은 3mg/kg 및 10mg/kg의 AC102-6-1-1, 및 10mg/kg의 항체를 투여하여 hHER2가 과발현된 MC38 모델에서 시간에 따른 종양 부피 변화를 나타내는 도이다.
[0016] 본 개시의 기술적 내용을 설명하기 위해 구체적인 실시형태가 아래에 제공된다. 당업자는 본 명세서에 개시된 내용을 통해 본 개시의 다른 장점과 효과를 쉽게 이해할 수 있을 것이다. 본 개시는 또한 다른 구체적 실시형태를 통해 구현되거나 적용될 수 있다. 당업자는 본 개시의 정신을 벗어나지 않으면서 다양한 수정 및 변형을 수행할 수 있다.
정의
[0017] 이하에서 달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용되는 모든 기술 용어 및 과학 용어는 당업자에게 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 본 명세서에 사용된 기술은 당업자에게 명백한 변형 및 이에 상응하는 대체를 포함하며 본 분야에서 일반적으로 이해되는 기술을 지칭한다. 다음 용어는 당업자가 쉽게 이해할 수 있을 것으로 믿어지지만, 본 개시를 보다 잘 설명하기 위해 다음과 같은 정의가 제시된다. 본 명세서에 상품명이 기재되어 있는 경우, 이는 해당 상품 또는 이의 활성 성분을 가리킨다. 본 명세서에 인용된 모든 특허, 공개된 특허 출원 및 간행물은 본 명세서에 참조로 통합되어 있다.
[0018] 특정 양, 농도 또는 기타 값 또는 파라미터가 범위, 선호 범위 또는 선호 상한 또는 선호 하한의 형태로 명시된 경우, 이는 해당 범위가 명시적으로 열거되었는지 여부에 관계없이 상한 또는 선호 값과 하한 또는 선호 값을 결합하여 형성된 범위를 구체적으로 밝히는 것과 동일하다고 이해해야 한다. 달리 명시되지 않는 한, 본 명세서에 나열된 숫자 범위는 범위의 끝점과 범위 내의 모든 정수 및 분수(소수)를 포함하도록 의도된다. 예를 들어, "i는 2에서 20 사이의 정수이다"라는 표현은 i가 2에서 20 사이의 정수, 예를 들어, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20이 될 수 있다는 것을 의미한다. 다른 유사한 표현도 비슷한 방식으로 이해해야 한다.
[0019] 본 명세서에 달리 명시되지 않는 한, "하나" 및 "상기"와 같은 단수 형식에는 복수형이 포함된다. "하나 이상" 또는 "적어도 하나"라는 표현은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 그 이상을 의미할 수 있다.
[0020] 숫자 변수와 함께 사용할 때 "약" 및 "대략"이라는 용어는 일반적으로 해당 변수의 값과 변수의 모든 값이 실험 오차 범위(예를 들어, 평균의 95% 신뢰 구간 내) 내에 있거나 지정된 값의 ±10% 범위 또는 더 넓은 범위 내에 있음을 의미한다.
[0021] "화학량 론적 비율"이라는 용어는 다양한 물질을 특정 량에 따라 중량으로 일치시키는 것을 의미한다. 예를 들어, 본 개시에서, 활성 성분은 필러, 바인더 및 윤활제와 지정된 중량 비율로 혼합된다.
[0022] "선택 사항" 또는 "선택적으로"라는 용어는 이후에 설명된 이벤트가 반드시 발생할 필요는 없지만 발생할 수 있음을 의미하며, 이 설명에는 해당 이벤트 또는 상황이 발생하거나 발생하지 않는 경우가 포함된다.
[0023] "포함" 또는 이와 유사한 표현인 "포괄," "함유," 및 "가지는" 표현은 개방형이며, 명시되지 않은 추가 요소, 단계 또는 성분을 배제하지 않는다. "구성하는"이라는 표현은 지정되지 않은 요소, 단계 또는 성분을 배제한다. "본질적으로 구성하는"이라는 표현은 그 범위가 지정된 요소, 단계 또는 성분과 추가로 주장된 주제의 본질적이고 새로운 특성에 실질적으로 영향을 미치지 않는 선택적으로 존재하는 요소, 단계 또는 성분으로 제한된다는 것을 의미한다. "포함"이라는 표현은 "본질적으로 구성하는" 및 "구성하는"이라는 표현을 포함한다는 것을 이해해야 한다.
[0024] "표적 분자"라는 용어는 특정 표적(예를 들어, 수용체, 세포 표면 단백질, 사이토카인 등)에 친화력이 있는 분자를 의미한다. 표적 분자는 표적 전달을 통해 생체 내 특정 부위에 페이로드를 전달할 수 있다. 표적 분자는 하나 이상의 표적을 인식할 수 있다. 특정 표적 부위는 인식하는 표적에 의해 정의된다. 예를 들어, 수용체를 표적으로 하는 표적 분자는 많은 수의 수용체를 포함하는 부위에 페이로드를 전달할 수 있다. 표적 분자의 예로는 항체, 항체 단편, 주어진 항원에 대한 결합 단백질, 항체 모방체, 주어진 표적에 대해 친화력을 가진 스캐폴드 단백질, 리간드 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
[0025] 본 명세서에서 사용되는 "항체"라는 용어는 광범위한 의미로 사용되며, 특히 원하는 생물학적 활성을 갖는 한 온전한 단일 클론 항체, 다클론 항체, 단일 특이 항체, 다중 특이 항체(예를 들어, 이중 특이 항체) 및 항체 단편을 포함한다. 항체는 임의의 아형(예를 들어, IgG, IgE, IgM, IgD 및 IgA) 또는 서브 클래스일 수 있으며, 임의의 적합한 종으로부터 유래될 수 있다. 일부 실시형태에서, 항체는 인간 또는 생쥐에서 유래한다. 항체는 또한 재조합 방법으로 제조된 완전 인간 항체, 인간화 항체 또는 키메라 항체일 수도 있다.
[0026] 본 문서에서 단일 클론 항체는 실질적으로 동질적인 항체 집단에서 얻은 항체, 즉 집단을 구성하는 개별 항체가 소수의 가능한 자연적 돌연변이를 제외하고는 동일한 항체를 지칭하는 의미로 사용된다. 단일 클론 항체는 단일 항원 부위에 대한 특이성이 매우 높다. "단일 클론"이라는 단어는 항체의 특성이 실질적으로 동질적인 항체 집단에서 파생된 것이며 항체를 생산하기 위해 일부 특정한 방법이 필요한 것으로 해석되어서는 안 된다는 것을 의미한다.
[0027] 온전한 항체 또는 전장 항체는 기본적으로 항원 결합 가변 영역과 경쇄 상수 영역(CL) 및 중쇄 상수 영역(CH)으로 구성되며, 항체의 아형에 따라 CH1, CH2, CH3 및 CH4를 포함할 수 있다. 항원 결합 가변 영역(단편 가변 영역, Fv 단편이라고도 함)은 일반적으로 경쇄 가변 영역(VL)과 중쇄 가변 영역(VH)으로 구성된다. 상수 영역은 네이티브 서열을 갖는 상수 영역(예를 들어, 인간 네이티브 서열을 갖는 상수 영역) 또는 이의 아미노산 서열 변이체일 수 있다. 가변 영역은 표적 항원을 인식하고 상호 작용한다. 상수 영역은 면역계에 의해 인식되고 면역계와 상호 작용할 수 있다.
[0028] 항체 단편은 온전한 항체의 일부, 바람직하게는 항원 결합 영역 또는 가변 영역을 구성할 수 있다. 항체 단편의 예로는 Fab, Fab', F(ab')2, VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편, Fv 단편, 단일 도메인 항체(dAb) 단편 및 분리된 상보성 결정 영역(CDR)이 있다. Fab 단편은 전장 면역글로불린의 파파인 분해에 의해 얻어진 항체 단편이거나, 예를 들어 재조합 발현에 의해 생성된 동일한 구조를 가진 단편이다. Fab 단편은 경쇄(VL 및 CL을 포함)와 다른 사슬을 포함하며, 상기 다른 사슬은 중쇄(VH)의 가변 도메인 및 중쇄(CH1)의 상수 영역 도메인을 포함한다. F(ab')2 단편은 pH 4.0-4.5에서 면역 글로불린의 펩신 분해에 의해 얻어진 항체 단편이거나, 예를 들어 재조합 발현에 의해 생성된 동일한 구조를 가진 단편이다. F(ab')2 단편은 본질적으로 두 개의 Fab 단편으로 구성되며, 각 중쇄 부분은 두 단편을 연결하는 이황화 결합을 형성하는 시스테인을 포함하여 몇 가지 추가 아미노산을 포함한다. Fab' 단편은 F(ab')2 단편(중쇄 1개 및 경쇄 1개)의 절반을 구성하는 단편이다. 항체 단편은 예를 들어 이황화 결합 및/또는 펩타이드 연결 유닛을 통해 서로 결합된 복수의 사슬을 포함할 수 있다. 항체 단편의 예로는 단일 사슬 Fv(scFv), Fv, dsFv, 디아바디, Fd 및 Fd' 단편 및 변형된 단편을 포함한 기타 단편도 포함된다. 항체 단편은 일반적으로 적어도 또는 약 50개의 아미노산으로 구성되며, 일반적으로 적어도 또는 약 200개의 아미노산으로 구성된다. 항원 결합 단편은 항체 프레임워크에 삽입될 때(예를 들어, 해당 영역의 치환에 의해), 항원에 면역 특이적으로 결합하는 항체를 생성할 수 있는 임의의 항체 단편을 포함할 수 있다.
[0029] 본 개시에 따른 항체는 본 분야에 잘 알려진 기술, 예를 들어 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술, 또는 당업자에게 알려진 다른 기술과 같은 기술 또는 이들의 조합을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 유전자 조작 재조합 항체(또는 항체 모방체)는 적절한 배양 시스템(예를 들어, 대장균 또는 포유류 세포)에 의해 발현될 수 있다. 예를 들어, 조작은 해당 말단에 리가제 특이적 인식 서열을 도입하는 것을 지칭할 수 있다.
[0030] HER2는 상피세포 성장인자(EGFR) 수용체 티로신 키나아제 계열에 속하는 인간 상피세포 성장인자 수용체-2를 지칭한다. 본 출원에서, ErbB2 및 HER2라는 용어는 동일한 의미를 가지며 상호 교환하여 사용될 수 있다.
[0031] 본 명세서에서 사용되는 "표적 분자 약물 접합체"라는 용어는 "접합체"로 지칭된다. 접합체의 예로는 항체 약물 접합체가 포함되나 이에 국한되지 않는다.
[0032] 저분자 화합물은 의학에서 일반적으로 사용되는 유기 분자와 비슷한 크기의 분자를 의미한다. 이 용어는 생물학적 거대 분자(예를 들어, 단백질, 핵산 등)를 포함하지 않고 디펩타이드, 트리펩타이드, 테트라펩타이드, 펜타펩타이드 등과 같은 저분자량 펩타이드 또는 그 유도체도 포함한다. 일반적으로, 저분자 화합물의 분자량은 예를 들어, 약 100 내지 약 2000 Da, 약 200 내지 약 1000 Da, 약 200 내지 약 900 Da, 약 200 내지 약 800 Da, 약 200 내지 약 700 Da, 약 200 내지 약 600 Da, 약 200 내지 약 500 Da일 수 있다.
[0033] 면역 작용제는 면역 세포의 활성화를 통해 종양에 대한 면역 반응을 유도하거나 향상시킬 수 있는 작용제를 의미하며, 여기에는 DC, B 세포, 대식세포, NK 세포 및 T 세포가 포함되나 이에 국한되지 않는다. TLR 작용제와 같은 면역 작용제의 비제한적인 예로는, 본 분야에 알려진 TLR7 및/또는 TLR8 및/또는 TLR9의 작용제(예를 들어, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 852A 및 VTX-2337) 및 스팅(STING) 작용제(예를 들어, ADU-S100 및 MK-1454)를 포함하되 이에 국한되지 않는다.
[0034] 연결 유닛는 화합물 또는 물질에서 두 개 이상의 부분에 공유 결합하는 작용기를 의미한다. 예를 들어, 연결 유닛은 표적 분자 및/또는 페이로드의 보조 부분을 공유 결합하는 역할을 할 수 있다.
[0035] 스페이서는 서로 다른 구조 모듈 사이에 위치하여 구조 모듈을 공간적으로 분리할 수 있는 구조물이다. 스페이서의 정의는 특정 기능을 가지고 있는지 또는 생체 내에서 절단되거나 분해될 수 있는지 여부에 의해 제한되지 않는다. 스페이서의 예로는 아미노산 및 비아미노산 구조가 포함되나 이에 국한되지 않으며, 여기서, 비아미노산 구조는 아미노산 유도체 또는 유사체일 수 있으나 이에 국한되지 않는다. "스페이서 서열"은 스페이서 역할을 하는 아미노산 서열을 의미하며, 이의 예로는 Leu, Gln 등과 같은 단일 아미노산, 복수의 아미노산을 포함하는 서열, 예를 들어 GA 등과 같은 두 개의 아미노산을 포함하는 서열 또는 GGGGS, GGGGSGGGGS, GGGGSGGGGSGGGGS 등을 포함하되 이에 한정되지 않는다. 스페이서의 다른 예로는 PABC(p-벤질옥시카보닐)등과 같은 자가 분해성 스페이서가 있다.
[0036] 용어 "알킬"은 탄소 원자와 수소 원자로 구성된 직선형 또는 분지형 포화 지방족 탄화수소기를 의미하며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 연결된다. 알킬기는 1 내지 20개의 탄소 원자를 포함할 수 있으며, 예를 들어 C1-C4 알킬기, C1-C3 알킬기, C1-C2 알킬기, C3 알킬기, C4 알킬기, C3-C6 알킬기와 같은 C1-C20 알킬기를 지칭할 수 있다. 알킬기의 비제한적인 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 2-메틸부틸, 1-메틸부틸, 1-에틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 네오펜틸, 1,1-디메틸프로필, 4-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸, 1-메틸펜틸, 2-에틸부틸, 1-에틸부틸, 3,3-디메틸부틸, 2,2-디메틸부틸, 1,1-디메틸부틸, 2,3-디메틸부틸, 1,3-디메틸부틸 또는 1,2-디메틸부틸 또는 이들의 이성질체가 포함되나 이에 국한되지 않는다. 2가 라디칼은 자유 원자가 전자를 가진 탄소 원자에서 수소 원자 하나를 제거하여 해당 1가 라디칼로부터 얻은기를 의미한다. 2가 라디칼은 분자의 나머지 부분과 연결된 두 개의 연결 부위를 가지고 있다. 예를 들어, "알킬렌" 또는 "알킬리덴"은 직선형 또는 분지형 포화 2가 탄화수소기를 의미한다. 알킬렌기의 예로는 메틸렌(-CH2-), 에틸렌(-C2H4-), 프로필렌(-C3H6-), 부틸렌(-C4H8-), 펜틸렌(-C5H10-), 헥실렌(-C6H12-), 1-메틸에틸렌(-CH(CH3)CH2-), 2-메틸에틸렌(-CH2CH(CH3)-), 메틸프로필렌, 에틸프로필렌 등이 있으나 이에 한정되지는 않는다.
[0037] 본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 한 그룹이 다른 그룹에 결합될 때, 화학적으로 안정적인 구조가 형성되는 경우, 그룹의 연결은 직선형 또는 분지형일 수 있다. 이러한 조합에 의해 형성된 구조는 구조 내의 임의의 적절한 원자를 통해, 바람직하게는 지정된 화학 결합을 통해 분자의 다른 부분에 연결될 수 있다. 예를 들어, -CH2-, -NH-, -(CO)-, -NH(CO)-, -(CO)NH-를 포함하는 그룹 중 하나와 C1-4 알킬렌의 조합을 설명할 때, C1-4 알킬렌은 C1-4 알킬렌-CH2-, C1-4 알킬렌-NH-, C1-4 알킬렌-(CO)-, C1-4 알킬렌-NH(CO)-, C1-4 알킬렌-(CO)NH-, -CH2-C1-4 알킬렌, -NH-C1-4 알킬렌, -(CO)-C1-4 알킬렌, -NH(CO)-C1-4 알킬렌, -(CO)NH-C1-4 알킬렌과 같은 상기 그룹과 선형 연결을 형성할 수 있다. 생성된 2가 구조는 분자의 다른 부분에 추가로 연결될 수 있다.
식 (I')로 표시되는 화합물
[0038] 일 양태에서, 식 (I')(식 (I'-1) 또는 식 (I'-2) 또는 이들의 혼합물)로 표시되는 화합물을 제공한다.
(I'-1)
(I'-2)
여기서,
B2는 -(CH2)k1(CO)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2(CO)-Lys-R3, -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-H, 또는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-R3이다.
R1은 -C1-6 알킬이다.
R2는 수소 및 -C1-6 알킬 중에서 선택된다.
R3는 페이로드의 그룹과 반응할 때 떠날 수 있는 그룹이다.
k, k1, k2는 각각 독립적으로 1~5의 정수이고, j는 1~3의 정수이며, d는 1 또는 2이다.
[0039] 일 실시형태에서, 식 (I'-1) 및 (I'-2)의 B2는 동일하다.
[0040] 일 실시형태에서, d는 1이다.
일 실시형태에서, 말단기는 수소이다. 일 실시형태에서, R3는 히드록시
또는 이다.
[0041] 일 실시형태에서, 말단기 R3은 B2와 페이로드의 반응으로 인한 생성물 분자에 나타나지 않는 구조의 일부를 나타내며, 따라서 연결 유닛 페이로드 중간체(아래 참조)에서 B2에 대응하는 구조 부분은 상기 2가 그룹 중 하나 또는 둘 이상의 조합이다.
티오석시니미드는 생리학적 조건에서 불안정하며 마이클 첨가를 역전시켜 접합 부위에서 분열을 일으킬 수 있다. 또한, 시스템에 다른 티올 화합물이 존재할 경우 티오석시니미드는 다른 티올 화합물과 티올 교환할 수도 있다. 이 두 가지 반응은 모두 페이로드의 탈락을 초래하고 독성 부작용을 초래할 수 있다. 본 개시에 따르면, 고리 개방형 숙시니미드 구조
는 더 이상 역 마이클 첨가 또는 티올 교환을 거치지 않으므로 생성물이 더 안정적이다. 고리 개방 반응의 방법은 WO2015165413A1에서 확인할 수 있다.
식 (I')로 표시되는 화합물의 특정 실시형태
[0042] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k1(CO)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2(CO)-(Lys-OH)이고, k1은 5이며, j는 3이고, k2는 1이며, Lys는 α 아미노기를 통해 B2의 나머지 부분에 연결되고, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-5)이다.
(LN102-5)
[0043] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-H이고, k는 2이며, j는 1이고, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-6)이다.
(LN102-6)
[0044] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-R3이고, k는 2이며, d는 1이고, R1(S)-메틸, R2는 수소이고, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-9)이다.
(LN102-9)
[0045] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-R3이고, k는 2이며, d는 1이고, R1(R)-메틸이며, R2는 수소이고, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-10)이다.
(LN102-10)
[0046] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-R3이고, k는 2이며, d는 2이고, R1 및 R2는 메틸이며, R1'는 (S)-메틸이고, R2' 는 수소이며, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-12)이다.
(LN102-12)
[0047] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-R3이고, k는 2이며, d는 2이고, R1 및 R2는 메틸이며, R1'(R)-메틸이고, R2'는 수소이며, 연결 유닛의 구조는 다음 두 구조의 혼합물(연결 유닛 LN102-13)이다.
(LN102-13)
[0048] 일 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물은 도 1에 도시된 바와 같은 화합물 중 하나이다.
[0049] 분자 내에 둘 이상의 -(CH2)kC(O)- 기가 있을 때, 각 k의 값은 독립적으로 선택된다는 것을 이해해야 한다. 일부 실시형태에서, 분자 중의 "k"는 k1, k2, k3와 같은 추가 숫자와 함께 또는 없이 표시되며, 여기서 숫자는 어떠한 순서를 나타내지 않고 단지 "k"를 구별하기 위해 사용된다. g, j 및 d와 같은 다른 각주도 비슷한 방식으로 이해해야 한다.
[0050] 둘 이상의 Rx(x가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 등)가 있을 때, 각 Rx는 독립적으로 선택되는 것으로 이해되어야 한다. 일부 실시형태에서, 분자 내의 "x"는 추가 아포스트로피(') 또는 아포스트로피(예를 들어, '', ''', '''' 등)의 유무에 따라 표시되며, 예를 들어, R, R1', R1'', R1''', R2', R2'', R2''' 등이 있다. R3과 같은 다른 Rx도 비슷한 방식으로 이해해야 한다.
연결 유닛으로서의 식 (I')로 표시되는 화합물
[0051] 일 실시형태에서, B2에 의해 구성된 반응기는 다른 반응기를 포함하는 페이로드와 공유 결합하는 데 사용될 수 있으며, 식 (I')로 표시되는 화합물이 페이로드를 지니도록하는 데 사용될 수 있다.
[0052] 다른 실시형태에서, 식 (I')에 의해 구성된 리가제 인식 서열 GGG(G는 글리신)는 상응하는 리가제 인식 서열 LPETGG를 갖는 리가제에 의한 접합에 사용될 수 있다.
[0053] 따라서, 식(I')로 표시되는 화합물은 표적 분자(예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편) 및/또는 페이로드에 연결될 수 있는 연결 유닛으로서 사용될 수 있다.
[0054] 당업자는 통상적인 고상 또는 액상 방법으로 연결 유닛을 합성할 수 있다.
페이로드 베어링 식(I')로 표시되는 화합물
[0055] B2에 의해 구성된 반응기는 다른 반응기를 포함하는 페이로드와 공유 결합하여 페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물을 제공한다.
[0056] 다른 양태에서, 식 (II'-1) 또는 (II'-2)의 구조를 가진 화합물이 제공된다.
(II'-1)
(II'-2)
여기서,
PL은 식 (I')로 표시되는 화합물의 B2 부분에 연결되는 페이로드이다.
페이로드
[0057] 본 개시에서, 페이로드는 저분자 화합물, 핵산 및 유사체, 추적 분자(형광 분자 등 포함), 단펩타이드, 폴리펩타이드, 펩티도메틱 및 단백질 중에서 선택될 수 있다. 일 실시형태에서, 페이로드는 저분자 화합물, 핵산 분자 및 추적 분자 중에서 선택된다. 바람직한 실시형태에서, 페이로드는 저분자 화합물 중에서 선택된다. 보다 바람직한 실시형태에서, 페이로드는 세포 독소 및 그 단편으로부터 선택된다. 보다 바람직한 실시형태에서, 페이로드는 면역 작용제 및 그 단편으로부터 선택된다.
[0058] 일 실시형태에서, 면역 작용제는 TLR 작용제(예를 들어, TLR 7 작용제, TLR 8 작용제, TLR 7/8 작용제) 및 STING 작용제와 같은 TLR 작용제 중에서 선택된다. 일 실시형태에서, 면역 작용제는 TLR 작용제 중에서 선택된다.
[0059] 일 실시형태에서, 면역 작용제는 레시퀴모드
이다.
[0060] 일 실시형태에서, 연결 유닛과 페이로드는 축합 반응, 친핵성 첨가, 친전자성 첨가 등을 포함하되 이에 국한되지 않는, 본 분야에 공지된 임의의 반응을 사용하여 위에서 정의된 바와 같이 반응기를 통해 연결된다.
[0061] 일 실시형태에서, 페이로드는 면역 작용제이고, 항체 면역 작용제 접합체(LPx로 번호 매김)는 다음 표와 도 2에 도시된 화합물 중 하나이다.
페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물의 제조
[0062] 일 실시형태에서, 연결 유닛과 페이로드는 축합 반응, 친핵성 첨가, 친전자성 첨가 등을 포함하되 이에 국한되지 않는 본 분야에 공지된 임의의 반응을 통해 위에서 정의된 바와 같이 반응기를 통해 연결된다.
식 (III')로 표시되는 화합물
[0063] 일 양태에서, 식 (III')로 표시되는 화합물이 제공된다.
(III');
여기서, B2는 식 (I')에 정의된 바와 같다.
[0064] 일 실시형태에서, 식 (III')로 표시되는 화합물은 다음과 같은 경로를 통해 페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물을 제조하는 데 사용될 수 있다.
페이로드 베어링 식(III')로 표시되는 화합물을 페이로드 베어링 식(I')로 표시되는 화합물로 전환하는 것은 본 분야에 공지된 임의의 방법을 사용하거나 본 명세서에 설명된 바와 같이 수행될 수 있다. 예를 들어, 단일 단계 또는 다단계 합성을 수행하여 구조 단편(LU102)을 페이로드 베어링 식(III')로 표시되는 화합물 내의 말레이미드 고리에 도입한 다음, 숙시니미드 부분을 포함하는 결과 분자가 고리 개방 반응을 수행하여 숙시니미드 고리를 개방하고 페이로드 베어링 식(I')로 표시되는 화합물(즉, 식(II')로 표시되는 화합물)을 얻을 수 있다. 일 실시형태에서, LU102는 식 (III')로 표시되는 화합물에 함유된 말레미드기와 LU102의 티올기의 반응을 통해 페이로드 베어링 식 (III')로 표시되는 화합물에 도입된다.
접합체 및 이의 제조
[0065] 다른 양태에서, 식 (IV'-1) 또는 (IV'-2)의 구조를 가진 접합체가 제공된다.
(IV'-1)
(IV'-2)
여기서,
PL은 식 (I')로 표시되는 화합물의 B2 부분에 연결된 페이로드이다.
A는 식 (I')로 표시되는 화합물의 D1 또는 D2 부분에 연결된 표적 분자이다.
z는 1 또는 2이다.
[0066] 일 실시형태에서, 페이로드는 상기 정의된 바와 같은 면역 작용제이다. 일 실시형태에서, 접합체는 항체 면역 작용제 접합체이다.
표적 분자
[0067] 일 실시형태에서, 표적 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다.
[0068] 본 개시의 일부 실시형태에서, 표적 분자(예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 단편)에 의해 인식되는 표적은 CD19, CD22, CD25, CD30/TNFRSF8, CD33, CD37, CD44v6, CD56, CD70, CD71, CD74, CD79b, CD117/KIT, CD123, CD138, CD142, CD174, CD227/MUC1, CD352, CLDN18.2, DLL3, ErbB2/HER2, CN33, GPNMB, ENPP3, Nectin-4, EGFRvIII, SLC44A4/AGS-5, 메소텔린(mesothelin), CEACAM5, PSMA, TIM1, LY6E, LIV1, Nectin4, SLITRK6, HGFR/cMet, SLAMF7/CS1, EGFR, BCMA, AXL, NaPi2B, GCC, STEAP1, MUC16, 메소텔린, ETBR, EphA2, 5T4, FOLR1, LAMP1, 카데린 6(Cadherin), FGFR2, FGFR3, CA6, CanAg, Integrin αV, TDGF1, Ephrin A4, Trop2, PTK7, NOTCH3, C4. 4A, FLT3을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
[0069] 일 실시형태에서, 표적 분자는 항-인간 HER2 항체 또는 이의 항원 결합 단편이다. 항-인간 HER2 항체의 예로는 트라스투주맙이 포함되나 이에 국한되지 않는다. 트라스투주맙은 HER2의 네 번째 세포외 도메인(ECD4)에 결합하며 HER2 양성 유방암 및 위암 치료에 사용될 수 있도록 승인됐다.
[0070] 바람직한 실시형태에서, 항-인간 HER2 항체는 트라스투주맙에 기반한 조작된 항-HER2 항체 중에서 선택된 하나 이상의 항체이다.
[0071] 바람직한 실시형태에서, 항-인간 HER2 항체는 단일 클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 항체 단편 및 항체 모방체 중에서 선택된 재조합 항체이다. 일 실시형태에서, 항체 모방체는 scFv, 미니바디, 디아바디, 나노바디 중에서 선택된다. 식 (I')로 표시되는 화합물과 접합하기 위해, 본 개시의 표적 분자는 식 (I')로 표시되는 화합물과 연결되도록 변형된 부분을 포함할 수 있다. 이 변형된 부분의 도입 위치는, 예를 들어, 표적 분자가 항체인 경우, 그 도입 위치는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 C-말단 또는 N-말단에 위치할 수 있으나 이에 국한되지 않는다.
[0072] 일 실시형태에서, 본 개시의 표적 분자는 항체 또는 이의 항원 결합 단편이으로서 말단 변형을 포함할 수 있다. 말단 변형은 리가제 인식 서열을 포함하는 항체의 중쇄 또는 경쇄의 C-말단 또는 N-말단에서의 변형을 의미한다. 다른 실시형태에서, 말단 변형은 2 내지 10개의 아미노산을 포함하는 스페이서 Sp1을 더 포함할 수 있으며, 여기서 항체, Sp2 및 리가제 인식 서열은 순차적으로 연결된다. 특정 실시형태에서, Sp2는 스페이서 서열이 GA, GGGGS, GGGGSGGGGS, GGGGSGGGGSGGGGS, 특히 GA 중에서 선택된 스페이서 서열이다.
[0073] 바람직한 실시형태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄는 야생형(LC), 리가제 인식 서열 LPETGG의 직접 도입에 의해 변형된 C-말단 변형 경쇄(LCCT) 및 짧은 펩타이드 스페이서와 리가제 공여체 기질을 인식하는 서열 LPETGG를 도입하여 변형된 C-말단 변형 경쇄(LCCTL)의 3가지 유형을 포함한다. 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄는 야생형(HC), 리가제 인식 서열 LPETGG를 직접 도입하여 변형된 C-말단 변형 중쇄(HCCT) 및 짧은 펩타이드 스페이서와 리가제 공여체 기질을 인식하는 서열 LPETGG를 도입하여 변형된 C-말단 변형 중쇄(HCCTL)의 3가지 유형을 포함한다. 식 (IV')로 표시되는 화합물에서 z가 1 또는 2 인 경우, 상기 중쇄 및 경쇄의 조합은 8 개의 선호되는 항체 분자를 형성할 수있으며, 아미노산 서열표를 참조한다.
[0074] 본 개시의 접합체는 페이로드를 더 포함할 수 있다. 페이로드는 전술한 바와 같다.
접합체의 특정 실시형태
[0075] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서 B2는 -(CH2)k1(CO)-NH-(C2H4-O)j-(CH2)k2(CO)-(Lys-OH)-이고, k1은 5이며, j는 3이고, k2는 1이며, Lys는 α 아미노기를 통해 B2의 나머지 부분에 연결되고, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-5).
(AC102-5)
[0076] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서, B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-이고, k는 2이며, j는 1이고, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-6).
(AC102-6)
[0077] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서, B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-이고, k는 2이며, d는 1이고, R1(S)-메틸이며, R2는 수소이고, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-9).
(AC102-9)
[0078] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서, B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-이고, k는 2이며, d는 1이고, R1(R)-메틸이며, R2는 수소이고, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-10).
(AC102-10)
[0079] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서, B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-이고, k는 2이며, d는 2이고, R1 및 R2는 메틸이며, R1'(S)-메틸이고, R2' 는 수소이며, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-12).
(AC102-12)
[0080] 일 실시형태에서, 식 (IV')에서, B2는 -(CH2)k(CO)-(NH-CR1R2-(CO))d-이고, k는 2이며, d는 2이고, R1 및 R2는 메틸이며, R1'(R)-메틸이고, R2'는 수소이며, 접합체의 구조는 다음과 같다(식 AC102-13).
(AC102-13)
접합체의 제조
[0081] 본 개시의 접합체는 본 분야에 공지된 임의의 방법으로 제조할 수 있다. 일부 실시형태에서, 접합체는 표적 분자와 페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물의 리가제가 촉매하는 부위 특이적 접합에 의해 제조되며, 여기서 표적 분자는 리가제 인식 서열에 의해 변형된다. 이 방법은 단계 A와 단계 B로 구성된다.
[0082] 단계 A. 연결 유닛 페이로드 중간체의 제조
[0083] 바람직한 실시형태에서, 식 (I')로 표시되는 화합물 중 B2는 반응기를 통해 상응하는 반응기를 포함하는 페이로드에 공유 결합되며, 여기서 반응기는 각각 위에서 정의된 바와 같다.
[0084] 본 개시의 식 (I')로 표시되는 화합물을 사용하여 제조된 연결 유닛 페이로드 중간체는 구조가 정의되고, 조성이 정의되며, 순도가 높아서 항체와 접합 반응할 때 불순물이 적게 유입되거나 다른 불순물이 유입되지 않는다. 이러한 중간체를 리가제 인식 서열을 포함하는 변형된 항체와 리가제 촉매 부위에 특이적으로 접합시키는 데 사용하면 고도로 제어 가능한 품질을 가진 동질적인 ADC를 얻을 수 있다.
[0085] 단계 B. 표적 분자를 페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물에 연결
[0086] 본 개시의 표적 분자는 본 분야에 공지된 임의의 방법에 의해 페이로드베어링 식 (I')로 표시되는 화합물(즉, 식 (II')로 표시되는 화합물)에 접합될 수 있다. 예를 들어, 리가제 촉매 부위에 특이적으로 접합하는 기법이 적용되고, 표적 분자 및 페이로드 베어링 식 (I')로 표시되는 화합물은 기질의 리가제 특이적 인식 서열을 통해 서로 연결된다. 일 실시형태에서, 표적 분자는 경쇄 및/또는 중쇄의 C-말단에 도입된 인식 서열을 기반으로하는 말단 변형을 가진 항체이고, 표적 분자는 야생형 또는 최적화된 조작된 리가제 또는 이들의 임의의 조합에 의한 촉매 작용 및 적절한 촉매 반응 조건 하에서 식 (II')로 표시되는 화합물과 접합된다.
[0087] 특정 실시형태에서, 리가제는 소트타제 A이고 접합 반응은 다음 도식으로 나타낼 수 있다.
[0088] 삼각형과 오각형은 각각 항체의 일부 또는 식 (II')로 표시되는 화합물의 일부를 나타낸다. n은 각각 위에 정의된 바와 같다. 수용체 기질의 상응하는 인식 서열인 Gn과 접합될 때, LPETGG 서열에서 글리신의 상류 펩타이드 결합은 소트타제 A에 의해 절단되고, 생성된 중간체는 Gn의 유리 N-말단에 연결되어 새로운 펩타이드 결합을 생성한다. 얻어진 아미노산 서열은 LPETGn이다. 서열 Gn과 LPETGG는 위에 정의된 바와 같다.
특정 접합체의 표
[0089] 일 실시형태에서, 페이로드는 면역 작용제이다. 일 실시형태에서, 항체 면역 작용제 접합체는 다음 표와 도 3에 도시된 바와 같다.
약물 조성물 및 약물 제제
[0090] 본 개시의 또 다른 목적은 본 개시의 접합체의 예방적 또는 치료적으로 효과적인 양 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약물 조성물을 제공하는 것이다.
[0091] 본 개시의 약물 조성물은 사람이나 동물의 증상을 예방, 완화, 방지 또는 치료하는 효과를 달성하는 한, 임의의 방식으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 투여 경로에 따라 다양한 적합한 투여 형태가 제조될 수 있으며, 특히 주사용 동결 건조 분말, 주사제 또는 주사용 멸균 분말과 같은 주사제가 이에 해당한다.
[0092] "약학적으로 허용 가능한"이라는 용어는 정상적인 의학적 판단 범위 내에서 환자의 조직과 접촉했을 때 과도한 독성, 자극 또는 알레르기 반응 등이 발생하지 않고 합리적인 장단점 비율을 가지며 의도된 적용에 효과적이어야 함을 의미한다.
[0093] 약학적으로 허용 가능한 담체라는 용어는 약학적으로 허용 가능하며 접합체의 생물학적 활성 및 특성을 방해하지 않는 담체 물질을 의미한다. 수성 담체의 예로는 완충 식염수 등이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다. 약학적으로 허용 가능한 담체에는 또한 pH 조절제, 완충제, 독성 조절제 등과 같은 조성물을 생리적 조건에 가깝게 하는 담체 물질 및 아세트산 나트륨, 염화나트륨, 염화칼륨, 염화칼슘, 젖산나트륨 등을 포함한다.
[0094] 일 실시형태에서, 본 개시의 약물 조성물은 약물 대 항체 비율(DAR)이1-10, 1-8, 1-6, 1-4, 1-3.5, 1-3, 1-2.5, 바람직하게는 1-2와 같은 1 내지 20의 정수 또는 비정수이다. 일 실시형태에서, 본 개시의 약물 조성물은 DAR이 약 1.4 내지 약 2, 바람직하게는 약 1.5 내지 약 2, 더 바람직하게는 약 1.55 내지 약 1.95이다. 일 실시형태에서, 본 개시의 약물 조성물은 DAR이 약 1.6 내지 약 1.8이다.
치료 방법 및 용도
[0095] 본 개시의 접합체는 종양 및/또는 자가면역 질환을 치료하는 데 사용될수 있다. 접합체 치료에 민감한 종양에는 특정 종양 관련 항원 또는 세포 표면 수용체를 특징으로 하는 종양이 포함되며, 이러한 종양은 접합체 내의 표적 분자에 의해 인식되고 접합체 내의 작용제의 면역 세포 활성화 활성에 의해 영향을 받을 수 있다.
[0096] 따라서, 다른 양태에서, 본 개시의 접합체 또는 본 개시의 약물 조성물이 종양 또는 자가면역 질환으로부터 선택된 질병, 장애 또는 상태를 치료하기 위한 의약품의 제조에 사용되는 적용도 제공한다.
[0097] 다른 양태에서, 종양 또는 자가면역 질환의 치료에 사용되는 본 개시의 접합체 또는 본 개시의 약물 조성물이 제공된다.
[0098] 또 다른 양태에서, 종양 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법이 제공되며, 상기 방법에는 본 개시의 접합체 또는 본 개시의 약물 조성물의 유효량을 필요로 하는 개체에 투여하는 단계가 포함된다.
[0099] 바람직한 실시형태에서, 항-인간 HER2 항체와 페이로드의 접합에 의해 형성된 본 개시의 접합체는 종양 세포 표면의 HER2에 특이적으로 결합하여 HER2를 발현하는 종양 세포를 선택적으로 사멸시킬 수 있다. 또 다른 바람직한 실시형태에서, 본 개시의 접합체 또는 본 개시의 약물 조성물을 HER2 양성 종양으로부터 선택된 질병, 장애 또는 상태를 치료하기 위한 의약품의 제조에 사용하는 적용이 제공된다. 보다 바람직한 실시형태에서, 질병, 장애 또는 상태는 유방암, 위암, 폐암, 난소암, 요로상피암 등으로부터 선택된다.
[0100] 피험자에게 투여되는 접합체의 용량은 상당한 정도로 조정될 수 있다. 투여량은 특정 투여 경로와 피험자의 필요에 따라 달라질 수 있으며 의료 전문가의 판단에 따라 달라질 수 있다.
유익한 효과
[0101] 본 개시는 독특한 구조를 가진 연결 유닛을 활용하고 리가제를 사용하여 항 HER2 항체와 작용제의 접합을 촉매한다. 본 개시의 접합체는 균질성이 우수하고, 활성이 높으며 선택성이 높다. 특히, 세포 내 대사산물은 표적 항원의 발현이 낮거나 발현이 없는 세포에 대해 세포 증식 독성이 현저히 감소되는 것으로 나타났다. 또한, 연결 유닛 작용제 중간체의 독성은 유리 작용제보다 독성이 훨씬 낮기 때문에 약물의 제조 과정이 덜 해로워 이는 산업화 생산에 유리하다.
[0102] 본 개시의 접합체는 다음 중 적어도 하나의 기술적 효과를 구현한다.
(1) 표적 세포에 대해 비교적 높은 억제 활성을 가지거나 표적 세포에 대해 강력한 살상 작용이 있다.
(2) 물리화학적 특성이 우수하다(예를 들어, 용해도, 물리적 및/또는 화학적 안정성).
(3) 약동학적 특성이 우수하다(예를 들어, 혈장 내 우수한 안정성, 적절한 반감기 및 작용 지속 시간).
(4) 안전성이 우수하다(비표적 정상 세포 또는 조직에 대한 독성이 낮고/또는 부작용이 적고, 치료 윈더우가 넓다).
이 약물은 환자가 HER2 표적 치료에 저항하는 것을 방지하고 골수성 세포를 활성화하여 선천성 및 적응성 면역 반응을 향상시킬 수 있다. 현재 HER2 표적 치료제의 낮은 반응율을 극복할 수 있다.
예시
[0103] 예시의 제조
[0104] 본 발명의 목적과 기술적 해결책을 보다 명확하게 설명하기 위해, 구체적인 실시형태를 참조하여 아래에 추가로 설명한다. 이러한 실시형태는 본 개시의 범위를 제한하기 위한 것이 아님을 이해해야 한다. 다음의 실시형태에서 언급되지 않은 구체적인 실험 방법은 종래의 실험 방법에 따라 수행된다.
[0105] 기기, 재료 및 시약
[0106] 달리 명시되지 않는 한, 실시형태에 사용된 기기 및 시약은 시중에서 판매되는 제품이다. 상기 시약은 추가 정제할 필요없이 바로 사용할 수 있다.
MS: Thermo Fisher Q Exactive Plus, Water2795-Quattro 마이크로 삼중 사중극자 질량 분석기
HPLC: Waters 2695, 애질런트(Agilent) 1100, 애질런트 1200
반 제조 HPLC: Lisure HP plus 50D
유동세포 계수법: CytoFLEX S
HIC-HPLC: 부틸-HIC; 이동상 A는 25mM의 PB 및 2M의 (NH4)2SO4이고 pH 7.0이다. 이동상 B는 25mM의 PB이고 pH 7.0이다, 유속은 0.8 ml/min이고, 획득 시간은 25분이다. 주사량은 20 μg이고 컬럼 온도는 25℃이다. 검출 파장은 280nm이고, 샘플 챔버 온도는 8℃이다.
SEC-HPLC: 컬럼: TSK-gel G3000 SWXL, TOSOH 7.8mm ID × 300mm, 5μm이다. 이동상은 0.2 M의 KH2PO4 및 0.25 M의 KCl이고, pH 6.2이다. 유속은 0.5 ml/min이고, 획득 시간은 30분이다. 주사량은 50 μl이고 컬럼 온도는 25℃이다. 검출 파장은 280nm이고 샘플 트레이 온도는 8℃이다.
CHO는 써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific)에서, pcDNA 3.3은 라이프 테크놀로지(Life Technology)에서 얻었다. HEK293F는 Prejin에서, PEIMAX 형질전환 시약은 폴리사이언스(Polyscience)에서 얻었다. MabSelect Sure ProA는 GE에서, Capto S ImpAct는 GE에서 얻었다. 링크-아미드-MBHA-수지와 디클로로 수지는 난카이 합성(Nankai synthesis)에서, HCC1954는 ATCC CAT# CRL-2338에서 얻었다. SK-BR-3은 ATCC CAT# HTB-30에서, BT474 세포는 ATCC CAT# HTB-20에서 얻었다. JIMT1 세포는 DSMZ CAT#ACC589에서, Colo205 세포는 ATCC CAT# CRL-222에서 얻었다. MC38hHER2 마우스 결직장암 세포는 바이오사이토젠(Biocytogen)에서, NUGC4 인간 위암 세포는 JCRB CAT#JCRB0834에서 얻었다. NCI-N87 세포(ATCC CAT# CRL-5822), MDA-MB-468은 ATCC CAT# HTB-132에서 얻었다.
실시형태 1 항체 발현 벡터의 구성, 항체 발현, 정제 및 식별
[0107] 1.1 변형된 항-인간 HER2 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 생산
[0108] 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 발현 플라스미드(경쇄: SEQ ID NO:1, 중쇄: SEQ ID NO:2)는 다음과 같이 구성되었다. 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 서열: 트라스투주맙의 아미노산 서열을 기반으로 하며, 경쇄의 C-말단에 GALPETGG가 도입되는데, 여기서 LPETGG는 리가제 공여체 기질을 인식하는 서열이고, GA는 스페이서 서열이다. 플라스미드를 CHO 세포에 감염시키고 세포 집단을 확립하고 5-10L 반응기에서 트라스투주맙의 배양 과정을 참조하여 배양하여, 발현 세포 집단에 대해 선별하고 상층액을 수집한다.
[0109] 1.2 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 정제
[0110] Ab0001-LCCTL-HC의 정제는 MabSelect 친화성 크로마토 그래피와 세파 로스(Sepharose) S 양이온 교환 크로마토그래피의 조합을 사용하여 표준 과정으로 수행되었으며, 정제된 산물은 원시 트라스투주맙 약물 버퍼(5mM 히스티딘-HCl, 2 %의 트레할로스, 0.009 %의 폴리소르베이트 20, PH 6.0)에 용해되고 소량으로 동결시킨다.
[0111] 1.3 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 품질 관리
[0112] 상기 정제된 항체 Ab0001-LCCTL-HC의 순도는 SDS-PAGE에 의해 98.5 %이고, 샘플의 고분자 중합체의 함량은 SEC-HPLC에 의해 0.4 % 미만이며, 내독소 함량은 0.098EU/mg 미만이다.
[0113] 1.4 기타 변형된 항 인간 항체의 제조
[0114] 유사한 방법으로, 트라스투주맙의 경쇄 및/또는 중쇄의 C-말단에 각각 리가제 인식 서열을 기반으로 한 말단 변형을 도입하여 변형된 항체를 제공한다.
[0115] Ab0001(트라스투주맙)을 기반으로 한 변형된 항-인간 HER2 항체는 표 1에 나열되어 있다. 말단 변형 서열에서 LPETGG는 리가제 공여체 기질을 인식하는 서열이고 GA는 스페이서 서열이다.
변형된 항-인간 HER2 항체
서열 말단에 도입된 서열
Ab0001-LCCTL-HC 경쇄 SEQ ID NO:1 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HC 중쇄 SEQ ID NO:2 -*
Ab0001-LC-HCCT 경쇄 SEQ ID NO:3 -
Ab0001-LC-HCCT 중쇄 SEQ ID NO:4 LPETGG
Ab0001-LC-HCCTL 경쇄 SEQ ID NO:5 -
Ab0001-LC-HCCTL 중쇄 SEQ ID NO:6 GALPETGG
Ab0001-LCCT-HC 경쇄 SEQ ID NO:7 LPETGG
Ab0001-LCCT-HC 중쇄 SEQ ID NO:8 -
Ab0001-LCCT-HCCT 경쇄 SEQ ID NO:9 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCT 중쇄 SEQ ID NO:10 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCTL 경쇄 SEQ ID NO:11 LPETGG
Ab0001-LCCT-HCCTL 중쇄 SEQ ID NO:12 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCT 경쇄 SEQ ID NO:13 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCT 중쇄 SEQ ID NO:14 LPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCTL 경쇄 SEQ ID NO:15 GALPETGG
Ab0001-LCCTL-HCCTL 중쇄 SEQ ID NO:16 GALPETGG
*: "-" 말단 변형이 없음을 나타낸다.
예시 2 중간체의 제조
[0116] 2.1 연결 유닛의 제조
[0117] A와 Lm이 존재하는 연결 유닛
[0118] 식 (I')의 부분 A를 포함하는 연결 유닛 단편 LU102는 링크 아미드 -MBHA-수지 또는 디클로로 수지를 사용하여 일반적인 고상 폴리펩티드 합성에 의해 합성된다. Fmoc는 연결 유닛에서 아미노산과 Lk 구조의 아미노기를 보호하는 데 사용된다. 접합 시약은 HOBT, HOAt/DIC, DCC, EDCI 또는 HATU 중에서 선택된다. 합성된 후, 수지는 트리플루오로 아세트산을 사용하여 절단하였다. 생성물은 HPLC로 정제하고 동결 건조하여 사용하기 위해 보관하였다. 연결 유닛 단편은 다음 표에 나열되어 있다.
[표]
[0119] 상기 표의 연결 유닛 단편은 말레이미드 구조 또는 그 유도체를 포함하는 연결 유닛 단편과 반응시킨 후, WO2015165413A1에 설명된 방법에 따라 고리 개방 반응을 수행하여 연결 유닛 LN102-5, LN102-6, LN102-9, LN102-10, LN102-12 및 LN102-13을 얻었다. 이들의 구조는 다음 표에 표시된 바와 같다.
[0120] 2.2 연결 유닛 작용제 중간체의 제조[0121] 2.2.1 연결 유닛 작용제 중간체 LP102-6-1의 제조
[0122] 단계 1: 레시퀴모드(25.0 g, 79.5mmol)를 MeCN(500 mL)에 용해시키고 Trt-Cl(33.25 g, 119.3mmol)로 처리한 다음 TEA(20.12 mL, 20.12mmol)로 처리한다. 반응물을 2~3시간 동안 환류시킨다(TLC). 반응 혼합물을 진공 상태에서 농축시킨다. 그런 다음 혼합물을 AcOEt(700 mL) 및 H2O(400 mL)로 처리하고 30분 동안 교반하여 분리하였다. 유기상을 진공에서 300mL로 농축하고 n-헵탄(400mL)으로 처리한다. 그런 다음 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 여과한 후 케이크를 EtOH/H2O(1:1, 200mL)로 치고 여과하였다. 케이크를 진공 상태에서 건조시켜 백색 고체(43.9 g, 99.1 %)와 같은 표적 화합물 HX20031-a를 얻었다.
[0123] 단계 2: 화합물(HX20031-a)(40.02g, 72.9 mmol)을 DMF(200 mL)에 용해시키고 0~10℃로 냉각시켰다. NaH(60%, 3.74 g, 93.4 mmol)를 일괄적으로 첨가한다. 현탁액을 0~10℃에서 l시간 동안 격렬하게 교반한 후 20~30℃로 1시간 동안 가열하면서 교반한다. 그 다음 혼합물을 0~10℃까지 냉각시키고 화합물 1186g(20.88g, 93.4 mmol)을 일 부분으로 처리한다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반한 후 10%의 NaH2PO4(1L)와 AcOEt(1L)의 혼합물로 천천히 처리한다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고 여과시킨다. 유기층을 농축시키고 실리카겔 컬럼 크로마토그래피(n-헵탄 대 n-헵탄/AcOEt = 10 : 1~n-헵탄/AcOEt = 4 : 1)로 정제하여 표적 화합물 HX20031-b (24.89 g, 46.9 %)를 얻는다.
[0124] 단계 3: 화합물(HX20031-b)(10 g, 14.3mmol)을 TFA(40 mL)와 H2O(80 mL)의 혼합물로 처리한다. 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반한다. 그런 다음 혼합물을 MTBE(400 mL)에 붓고 2시간 동안 교반한다. 여과한 후 케이크를 MTBE(200 mL)로 치고 여과한다. 케이크를 진공 상태에서 건조시켜 백색 고체(8.51 g, 100%)의 표적 화합물 HX20031-c를 얻는다.
[0125] 단계 4: 화합물 HX20031-c(6.0 g, 10.2 mmol)를 DMF(50mL)에 용해시키고 DIPEA(3.5mL, 20.4 mmol) 및 N-숙시니미딜 3-말레이미도프로피오네이트(3.27 g, 12.3 mmol)로 처리한다. 반응을 실온에서 3시간 동안 유지 한 다음(HPLC) 혼합물을 다음 단계에 직접 사용한다.
[0126] 단계 5-6: 단계 4의 혼합물을 연결 유닛 LU102(5.5g, 15.3mmol) 및 H2O(50mL)의 용액으로 처리한다. 혼합물을 0 내지 40℃에서 0.5 내지 20시간 동안 반응시킨다. 그런 다음 반응 혼합물을 적당량의 트리스 베이스 용액 또는 고리 개방 반응을 촉진하는 다른 용액과 혼합하여 0 내지 40℃에서 0.2 내지 20시간 동안 반응시킨다. 반응이 완료된 후, 생성물을 반 제조/제조 HPLC로 정제하고 동결 건조시켜 연결 유닛 작용제 LP102-6-1(3.3g, 세 단계에 대해 30%)을 얻는다. MS m/z 1065.6 [M+H]+이다.
실시형태 3 표적 분자 약물 접합체의 제조
[0127] 연결 유닛 작용제 중간체는 각각 리가제에 의해 부위 특이적인 방식으로 항체에 접합되어 AIAC를 형성한다. 접합 반응 방법은 WO2015165413A1에서 확인할 수 있다. 결과 AIAC는 다음 표에 표시된 바와 같다.
예시 1의 효과 시험관 내 항체 면역 작용제 접합체의 평가
[0128] 인간 말초 단핵 세포의 분리
[0129] 인간 말초 단핵 세포는 건강한 헌혈자로부터 SepMate 50과 림포프렙(Lymphoprep)(스템셀 테크놀로지스)을 사용하여 분리하였다. 살아있는 세포를 계수하고 10%의 FBS가 포함된 RPMI1640 배지에서 세포 농도를 1.25x106/ml로 조정한다. 트립신으로 종양 세포를 분리하고 수집한다. 살아있는 세포를 계수하고 10%의 FBS가 함유된 RPMI1640 배지에서 세포 농도를 2.5x105/ml로 조정한다. 12.5x104 인간 PBMC와 2.5x104 종양 세포(PBMC : 종양 세포=5:1)를 96웰 플레이트의 웰에 첨가한 후 항체 또는 접합체를 표시된 농도로 첨가한다. 세포 혼합물을 약물과 함께 18시간 동안 배양한 후, 무세포 상청액을 수집하여 인간 TNFα ELISA를 실시한다.
[0130] HER2 표적 면역 결합체의 활성을 평가하기 위해 인간 PBMC와 NCI N87 인간 위암 세포를 5:1의 비율로 공동 배양하고 항체 또는 테스트 면역 결합체(AC102-6-1-1 또는 AC102-5-1-1)를 표시된 농도로 첨가한다. AC102-6-1-1은 항체 Ab0001보다 TNFα의 생성을 더 많이 유도하며, AC102-6-1-1의 유효 농도는 페이로드인 레시퀴모드보다 훨씬 낮았다. 다른 면역 접합체 AC102-5-1-1은 Ab0001에 비해 다른 활성을 뚜렷하게 보이지 않았다(도 4). AC102-6-1-1의 활성은 인간 PBMC와 MDA-MB-468 HER2 음성 세포의 공동 배양에서 관찰되지 않았으며, 이는 AC102-6-1-1의 활성이 표적 종양 세포에서 HER2의 발현에 크게 의존한다는 것을 나타낸다(도 5).
[0131] 유사한 실험 환경에서 다른 여러 접합체의 체외 활성을 평가하였다(도 6).
예시 2의 효과 생체 내 항체 면역 작용제 접합체의 평가
[0132] 생체 내 항종양 효과 연구를 위해 1x107의 NCI N87 인간 위암 세포를 SCID 베이지 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 접종하였다. 6일 후 종양 부피가 평균 173mm3에 도달하면 종양 베어링 마우스를 배정하여 Ab0001 또는 테스트용 면역 접합체(AC102-5-1-1 또는 AC102-6-1-1)를 5mg/kg으로 정맥 투여하였다. 종양 부피는 캘리퍼를 사용하여 매주 2회 측정한다. 항체 자체인 Ab0001은 항종양 활성이 매우 제한적이었다. AC102-5-1-1과 AC102-6-1-1은 종양 거의 치료되었다(도 7).
[0133] 인간 HER2를 과발현하는 5x105 MC38hHER2 생쥐 결직장암 세포를 C57BL/6 마우스의 오른쪽 옆구리에 피하 접종하였다. 8일 후 종양 부피가 평균 90mm3에 도달하면 종양 베어링 마우스를 배정하여 Ab0001 또는 AC102-6-1-1을 정맥 내에 투여하였다. 10mg/kg의 Ab0001은 뚜렷한 항종양 활성을 보이지 않았다. 3mg/kg 및 10mg/kg의 AC102-6-1-1은 용량 의존적으로 종양 성장을 억제하였다(도 8).
SEQUENCE LISTING <110> GeneQuantum Healthcare (Suzhou) Co., Ltd. BRIGHTGENE BIO-MEDICAL TECHNOLOGY CO., LTD. <120> Anti-HER2 Antibody-Immune Agonist Conjugate and Applications Thereof <130> NP2023TC1381 <160> 16 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCTL-HC Light chain <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly 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160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys Leu Pro Glu Thr Gly Gly 210 215 220 <210> 12 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCT-HCCTL Heavy chain <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys Gly Ala Leu Pro Glu Thr Gly Gly 450 455 <210> 13 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCTL-HCCT Light chain <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ala Leu Pro Glu Thr Gly Gly 210 215 220 <210> 14 <211> 456 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCTL-HCCT Heavy chain <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys Leu Pro Glu Thr Gly Gly 450 455 <210> 15 <211> 222 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCTL-HCCTL Light chain <400> 15 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Ala Leu Pro Glu Thr Gly Gly 210 215 220 <210> 16 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab0001-LCCTL-HCCTL Heavy chain <400> 16 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 115 120 125 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 130 135 140 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 145 150 155 160 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 165 170 175 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 180 185 190 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 195 200 205 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 210 215 220 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 225 230 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 245 250 255 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 260 265 270 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 275 280 285 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 290 295 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 305 310 315 320 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 325 330 335 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 340 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 355 360 365 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 370 375 380 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 385 390 395 400 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 405 410 415 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 420 425 430 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 435 440 445 Gly Lys Gly Ala Leu Pro Glu Thr Gly Gly 450 455

Claims (8)

  1. 식 (I-1) 또는 (I-2)로 표시되는 화합물에 있어서,

    (I-1)

    (I-2)
    B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-이고, k는 1~5의 정수이며, j는 1~3의 정수이고,
    PL은 상기 B2 부분에 연결되는 페이로드이며,
    바람직하게는, PL은 레시퀴모드인 것을 특징으로 하는 화합물.
  2. 제1항에 있어서,
    k는 2인 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    j는 1인 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 화합물은 다음 구조:

    중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물.
  5. 식 (II-1) 또는 (II-2)로 표시되는 항체 약물 접합체에 있어서,

    (II-1)

    (II-2)
    B2는 -(CH2)k(CO)-NH-(C2H4-O)j-이고, k는 1~5의 정수이며, j는 1~3의 정수이고,
    PL은 상기 B2 부분에 연결되는 페이로드이며,
    바람직하게는, PL은 레시퀴모드이고,
    z는 1~4의 정수이며, 바람직하게는 1~2이고,
    A는 SEQ ID NO: 1로 표시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 2로 표시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
  6. 제5항에 있어서,
    k는 2인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
  7. 제6항에 있어서,
    j는 1인 것을 특징으로 하는 항체 약물 접합체.
  8. 제5항 내지 제7항에 따른 항체 약물 접합체는 다음 구조:


    중에서 선택되며,
    z는 1~4의 정수이고, 바람직하게는 1~2이며,
    A는 SEQ ID NO: 1에 표시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄 및 SEQ ID NO: 2에 표시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체인 것을 특징으로 하는 약물 접합체.






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