KR20230154024A - 다수의 단백질 공급물을 사용한 베타-락토글로불린의 결정화 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 BLG의 결정화에 의해 베타-락토글로불린(BLG) 조성물을 제조하는 개선된 방법에 관한 것이다. 본 발명은 적어도 2개의 상이한 BLG 함유 단백질 공급물을 사용하며, 이를 혼합하여 BLG가 결정화되는 과포화된 단백질 용액을 제조한다. 단백질 공급물 중 하나는 적어도 5.6의 pH를 가져야 하고, 단백질 공급물 중 하나는 최대 5.4의 pH를 가져야 한다.
Description
본 발명은 BLG의 결정화에 의해 베타-락토글로불린(BLG) 조성물을 제조하는 개선된 방법에 관한 것이다. 본 발명은 적어도 2개의 상이한 BLG 함유 단백질 공급물을 사용하며, 이를 혼합하여 BLG가 결정화되는 과포화된 단백질 용액을 제조한다. 단백질 공급물 중 하나는 적어도 5.6의 pH를 가져야 하고, 단백질 공급물 중 하나는 최대 5.4의 pH를 가져야 한다.
우유 단백질 분별의 개념은 당업계에 잘 알려져 있으며, 지난 수십년 동안 각각 특정 특성 및 특징을 갖는 다양한 우유 단백질 종이 농축된 조성물을 제조하기 위한 다양한 기술이 개발되었다.
유청 또는 훼이(whey)로부터의 베타-락토글로불린(BLG)의 단리는 다수의 간행물의 주제이며, 전형적으로는 다수의 분리 단계 및 대개 크로마토그래피 기술을 수반하여 정제된 베타-락토글로불린 생성물에 도달한다.
WO 2018/115520호는 염용 모드 및 pH 범위 5 내지 6의 결정화에 의한 단백질 용액으로부터의 BLG의 산업 규모의 분리를 기술하고 있다. 그러나, WO 2018/115520호는 본 발명에 의해 정의된 BLG-함유 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)을 혼합함으로써 과포화된 훼이 단백질 용액을 제조하는 것을 개시하지는 않는다.
WO 2020/002422호는 염용 모드 및 5 내지 6 범위의 pH에서의 BLG 결정화를 사용한 훼이 단백질로부터의 BLG의 산업 규모의 제거에 의해 알파-락트알부민 농축된 훼이 단백질의 제조를 기술하고 있다. 그러나, WO 2020/002422호는 본 발명에 의해 정의된 BLG-함유 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)을 혼합함으로써 과포화된 훼이 단백질 용액을 제조하는 것을 개시하지는 않는다.
de Jongh 외(Mild Isolation Procedure Discloses New Protein Structural Properties of β-Lactoglobulin, J Dairy Sci., vol. 84(3), 2001, 페이지 562-571)는 카제인의 저온 산 응고 및 수득된 산 훼이를 친화성 크로마토그래피(DEAE Sepharose)와 겔 투과 크로마토그래피의 조합에 적용하는 것에 의한 신선하게 짜낸 우유로부터의 BLG의 정제를 기술하였다. 수득된 BLG 조성물은 1 g의 단백질당 0.985 g의 베타-락토글로불린을 함유하는 것으로 명시되었다.
Slack 외(Journal of Food Processing and Preservation, vol. 10, 1986, 페이지 19-30)는 상이한 접근법을 탐구하였으며, 탈염된 산(demineralised acid) 훼이 및 감미 훼이를 pH 4.65로 pH 조절하고, 형성된 침전물을 원심 분리 및 디켄테이션(decantation)에 의해 분리함으로써 BLG-농축된 침전물을 제조하였다. 수득된 침전물 펠릿은 상대적으로 불용성이며, 추가의 BLG에 유의한 양의 단백질 불순물을 함유하였던 것으로 기술되었다. 결정 형성은 관찰되지 않았다. pH 4.65에서 형성할 수 있는 BLG 침전물은 BLG 결정이 아님을 유의하여야 한다.
Palmer(Crystalline Globulin from Cow's Milk, J. Biol. Chem., Vol. 104, 1934, 페이지 359-372)는 원하지 않는 단백질의 염 침전, pH-조절, 및 원하지 않는 기타 단백질을 제거하기 위한 투석의 몇몇의 순서를 사용하여 산 훼이를 기반으로 단백질 결정을 제조하기 위한 힘들고, 시간 소모적인 공정을 보고하였다. 최종적으로, 고도로 정제된 BLG 용액이 수득되었을 때, BLG이 결정화되었다. 공정은 12일이 넘게 지속되었으며, 톨루엔의 첨가가 필요하였다. 따라서, Palmer에 개시된 절차는 안전한 식품 제조와 비상용성이며, 분명하게 식용이 아닌 생성물을 제공한다.
Aschaffenburg 외(Improved Method for the Preparation of Crystalline beta-Lactoglobulin and alpha-Lactalbumin from Cow's Milk, Bioch., vol. 65, 1957, 페이지 273-277)는 Palmer의 공정에 비해 개선된 공정을 개시하며, 이러한 개선은 수주 대신에 대략 수일에 베타-락토글로불린 결정이 제조되도록 한다. 그러나, 개선된 방법은 여전히 결정화 전에 원하지 않는 단백질의 제거를 필요로 하며, 추가로 결정화를 위한 톨루엔을 이용하여 이를 안전한 식품 제조와 비상용성이도록 만든다.
JP H10 218755 A호는 BLG를 유효 성분으로서 포함하는 멜라닌-생성 억제제를 함유하는 화장품 조성물의 제조를 개시하고 있다. 문서는 BLG가 예를 들어 다음 공정에 의해 단리될 수 있음을 추가로 시사한다: 염산을 우유에 첨가하여 카제인을 침전시킨 다음, 여과하여 훼이를 수득한다. 훼이의 pH를 6.0으로 조절하고, 황산암모늄을 반 포화(half saturation)의 양으로 첨가하고; 침전된 단백질을 염석에 의해 제거하고, 여과물을 회수한다. 여과물은 황산암모늄으로 포화되고, 침전된 단백질이 회수된다. 회수된 단백질을 다시 물 중에 용해시키고, pH 5.2에서 투석하여 결정을 분리하고, β-락토글로불린이 1 L의 훼이로부터 약 1.8 g의 비율로 제조된다. 그러나, JP H10 218755 A호에 기술된 제안된 공정의 일반적 공정 단계는 BLG 결정의 형성에 이르기에는 불충분한다. 따라서, 문서는 BLG의 결정화 또는 BLG 결정을 가능하게 하는 개시내용을 포함하지 않는다.
US 2790790호는 용액으로부터의 단백질의 침전 및 보다 특히 침전제로서 염화나트륨의 사용에 의해 수용액으로부터 상대적으로 비공액 단백질의 분별 침전을 위한 공정을 개시하고 있다. 공정은 pH 3.6 내지 3.8에서 NaCl-유도된 침전에 의해 BLG를 단리하는 데 유용한 것으로 시사된다. 문서의 실시예 II에서, NaCl-침전물은 보통의 방식으로 투석되어 결정질 B-락토글로불린을 형성될 수 있음이 시사된다. 그러나, US 2790790호는 pH 3.6 내지 3.8에서의 BLG 결정의 형성이 실질적으로 가능함을 입증하지 않으며, BLG 침전물을 투석하는 "보통의 방식"의 의미에 대한 언급을 포함하지 않는다. 따라서, 문서는 BLG의 결정화 또는 BLG 결정을 가능하게 하는 개시내용을 포함하지 않는다.
발명의 요약
베타-락토글로불린(BLG)은 결정화에 의해 산업 규모로 효율적으로 단리될 수 있음이 이전에 발견되었다(PCT 출원 WO 2018/115520호). 이러한 결정화 방법은 다량의 과포화된 단백질 용액의 처리 및 취급이 필요하다.
본 발명자들은 WO 2018/115520호의 대규모 구현이 대개 공정에서 결정화가 의도되기 전에 BLG의 원하지 않는 결정을 초래하는 것을 발견하였다. 이는 BLG 결정화가 미립자 물질의 존재에 민감한 막 여과 유닛 또는 기타 장비에서 발생하는 경우, 예를 들어 문제이다.
이제, 본 발명자들은 결정화에 의한 BLG의 단리가 그 자체로는 BLG 과포화를 갖지 않거나, 오직 낮은 수준으로 갖지만, 조합될 때, 더 높은 과포화도를 제공하는 둘 이상의 BLG-함유 단백질 공급물을 혼합하여 과포화된 단백질 용액을 제조함으로써 개선될 수 있음을 발견하였다. 이들 단백질 공급물 중 하나는 적어도 5.6, 그리고 보다 바람직하게는 적어도 6.0의 pH를 가져야 하고, 다른 것은 최대 5.4, 그리고 보다 바람직하게는 최대 5.0의 pH를 가져야 한다. 조합될 때, 2개의 공급물은 본 발명자들이 BLG 결정화의 수율을 위한 최적의 pH인 것으로 발견하였던 5.5에 가까운 pH를 갖는 과포화된 BLG 단백질 용액을 제공한다.
단백질 공급물을 조합하는 단계는 바람직하게는 공급물을 혼합하는 것에 의해 수행되며, 단백질의 결정화에 민감한 장비의 사용이 필요하지 않다. 따라서, 본 발명은 수반되는 공정 장비가 막히거나, 고장에 이를 수 있는 조기 그리고 원하지 않은 BLG 결정화의 위험을 감소시키거나, 심지어는 완전히 피한다.
과포화된 단백질 용액의 형성의 개략적 예시는 도 1에서 보여주며, 여기서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)(최대 5.4, 그리고 바람직하게는 그 미만의 pH를 가짐)은 5 내지 6 범위의 pH를 갖고, BLG에 대해 과포화되는 초기 단백질 용액을 제공하기에 충분한 양으로 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)(적어도 5.6, 그리고 바람직하게는 심지어 그 초과의 pH를 가짐)과 혼합된다.
본 발명자들은 개별적 유형 A 및 B 단백질 공급물이 조기(그리고 따라서 원하지 않는) BLG 결정화의 위험이 없거나, 오직 매우 제한된 위험으로 제조될 수 있기 때문에, 이러한 접근법이 BLG의 대규모 결정화에 매우 이로운 것을 발견하였다. 그러나, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 공급물(들)이 혼합되자마자, 과포화된 초기 단백질 용액이 형성된다.
도 2는 BLG 결정화의 수율이 결정화가 발생되어야 하는 단백질 용액의 pH에 좌우되는 방식을 개략적으로 예시한다. 본 발명자들은 최적의 pH가 대략 5.5인 것을 발견하였다. 따라서, 보다 산성인 유형 B 단백질 공급물(들)을 보다 덜 산성인 유형 A 공급물(들)과 혼합함으로써, BLG에 대해 과포화된 초기 단백질 용액이 수득된다. 유형 A 단백질 공급물(들) 및/또는 유형 B 단백질 공급물(들)이 BLG에 대해 약간 과포화되는 경우, 초기 단백질 용액은 더욱더 과포화되어야 한다.
본 출원 및 모든 목적을 위해 본원에 포함된 WO 2018/115520호의 개시내용에 의해 안내된 바와 같이, 당업자는 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)을 제조하고, 이들을 혼합하여 본원에 기재된 초기 단백질 용액을 제조할 수 있다.
따라서, 본 발명의 양태는 바람직하게는 결정화된 및/또는 단리된 형태의 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) BLG를 포함하는 초기 단백질 용액을 제조하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖는, 단계,
b) 바람직하게는 염용 모드의 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 BLG를 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) 선택적으로, BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계를 포함하며,
단계 a)는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 조합 그리고 바람직하게는 혼합하는 것에 의해 초기 단백질 용액을 제조하는 단계를 수반하고, 여기서,
- "유형 A 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 적어도 5.6의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의되고,
- "유형 B 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 최대 5.4의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의된다.
도 1은 유형 A 단백질 공급물(들)이 유형 B 단백질 공급물(들)과 혼합되어 초기 단백질 용액을 제조하는 방법을 예시한다.
도 2는 유형 A 단백질 공급물(들), 유형 B 단백질 공급물(들), 및 초기 단백질 용액의 pH가 결정화에 의한 BLG의 단리를 위한 최적의 pH에 대해 위치하는 방식의 개략적 예시이다.
도 2는 유형 A 단백질 공급물(들), 유형 B 단백질 공급물(들), 및 초기 단백질 용액의 pH가 결정화에 의한 BLG의 단리를 위한 최적의 pH에 대해 위치하는 방식의 개략적 예시이다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 양태는 바람직하게는 결정화된 및/또는 단리된 형태의 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법에 관한 것이며, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) BLG를 포함하는 초기 단백질 용액을 제조하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖는, 단계,
b) 바람직하게는 염용 모드의 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 BLG를 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) 선택적으로, BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계를 포함하며,
단계 a)는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 조합 그리고 바람직하게는 혼합하는 것에 의해 초기 단백질 용액을 제조하는 단계를 포함한다.
본 발명의 문맥에서, 용어 "식용 조성물"은 인간의 섭취에 안전하고, 식품 성분으로서 사용하며, 톨루엔 또는 원하지 않는 다른 유기 용매와 같은 유독성 구성성분의 문제가 되는 양을 함유하지 않는 조성물에 관한 것이다.
용어 "베타-락토글로불린을 포함하는 식용 조성물" 및 "식용 BLG 조성물"은 본원에서 상호 교환적으로 사용된다.
BLG는 소 훼이 및 유청에서 가장 우세한 단백질이고, 몇몇의 유전적 변이로 존재하며, 암소 우유에서의 주요한 것은 A 및 B로 표지된다. BLG는 리포칼린 단백질이고, 다수의 소수성 분자에 결합할 수 있어서 이들의 수송에서의 역할을 시사한다. BLG는 또한 철결합체를 통해 철에 결합할 수 있는 것으로 드러났으며, 병원체와 싸우는 역할을 가질 수 있다. BLG의 동족체는 인간 모유에서 결여되어 있다.
소 BLG는 대략 18.3 내지 18.4 kDa의 분자량을 갖는 대략 162개의 아미노산 잔기의 상대적으로 작은 단백질이다. 생리학적 조건 하에서, 이는 대체로 이량체이지만, 약 pH 3 미만에서 단량체로 해리되어 NMR에 의해 결정된 바와 같이 이의 고유 상태를 보존한다. 대조적으로, BLG는 또한 다양한 자연 상태 하에서 사량체, 육량체, 및 다른 다량체 응집 형태로 존재한다.
BLG 용액은 고유 구조가 충분히 불안정하게 되어 응집을 허용할 때, 다양한 조건 하에서 겔을 형성할 수 있다. 낮은 pH 및 낮은 이온 강도에서의 장기적 가열 하에서, 투명한 '미세 가닥화' 겔이 형성되며, 여기서, 단백질 분자는 경직된 긴 섬유로 조립된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG" 또는 "베타-락토글로불린"은 예를 들어 고유 및/또는 글리코실화 형태의 포유동물 종으로부터의 BLG에 관한 것이며, 자연 발생 유전적 변이를 포함한다. 용어 BLG는 또한 재조합 미생물에 의해 생산된 포유동물 BLG를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "BLG" 또는 "베타-락토글로불린"은 미접힘(unfolded) 및 응집된 BLG는 제외한다. BLG의 함량은 WO 2018/115520호의 실시예 9.9에 따라 측정된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "결정"은 구성요소(예컨대, 원자, 분자, 또는 이온)가 고도로 정렬된 미세한 구조로 배열되어 모든 방향에서 연장되는 결정 격자를 형성하는 고체 물질에 관한 것이다. BLG 결정은 주로 고도로 정렬된 미세한 구조로 배열된 BLG를 함유하여 모든 방향에서 연장되는 결정 격자를 형성하는 단백질 결정이다. BLG 결정은 예를 들어 모놀리식 또는 다결정질일 수 있으며, 예를 들어 온전한 결정, 결정의 단편, 또는 이의 조합일 수 있다. 결정의 단편은 예를 들어 온전한 결정이 처리 동안 기계적 전단에 적용될 때 형성된다. 결정의 단편은 또한 결정의 고도로 정렬된 미세한 구조를 갖지만, 온전한 결정의 심지어 표면 및/또는 심지어 가장자리 또는 모서리가 결여될 수 있다. 예를 들어, 다수의 온전한 BLG 결정의 예에 대한 도 18 및 BLG 결정의 단편의 예에 대한 도 13을 참조한다. 둘 모두의 경우, BLG 결정 또는 결정 단편은 광 현미경을 사용하여 뚜렷하고, 조밀하고, 일관된 구조로 시각적으로 식별될 수 있다. BLG 결정 또는 결정 단편은 대개 적어도 부분적으로 투명하다. 단백질 결정은 복굴절인 것으로 추가로 알려지며, 이러한 광학적 특성은 미지의 입자가 결정 구조를 갖는 것으로 식별하는 데 사용될 수 있다. 반면에, 비-결정질 BLG 응집체는 뚜렷하지 않고, 불투명하고, 불규칙한 크기의 개방형 또는 다공성 덩어리로 나타난다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "결정화하다"는 단백질 결정의 형성에 관한 것이다. 결정화는 예를 들어 자발적으로 발생하거나, 결정화 시드(crystallisation seed)의 첨가에 의해 개시될 수 있다.
식용 조성물은 결정화된 및/또는 단리된 형태의 BLG를 포함한다. 단리된 형태의 BLG를 포함하는 식용 조성물은 총 고형분에 대해 적어도 80% w/w의 BLG를 포함한다. 결정화된 형태의 BLG를 포함하는 식용 조성물은 적어도 일부 BLG 결정, 및 바람직하게는 유의한 양의 BLG 결정을 포함한다.
BLG 결정은 대개 현미경에 의해 관찰될 수 있으며, 심지어 이들을 육안으로 가시적이도록 만드는 크기에 이를 수 있다.
본 발명의 맥락에서, "과포화된" 또는 "BLG에 대해 과포화된" 액체는 소정의 물리적 및 화학적 조건에서 해당 액체 중에 BLG의 포화점 초과인 용해된 BLG의 농도를 함유한다. 용어 "과포화된"은 결정화의 영역에서 잘 알려져 있으며(예를 들어, Grard Coquerela, "Crystallization of molecular systems from solution: phase diagrams, supersaturation and other basic concepts", Chemical Society Reviews, p. 2286-2300, 7판, 2014 참조), 과포화는 다수의 상이한 측정 기술(예를 들어, 분광학 또는 입자 크기 분석)에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 맥락에서, BLG에 대한 과포화는 다음 절차에 따라 결정된다.
특정 조건 세트에서 액체가 BLG에 대해 과포화되는지 여부를 시험하기 위한 절차:
a) 시험되는 액체의 50 ml의 샘플을 115 mm의 높이, 25 mm의 내경, 및 50 mL의 용량을 갖는 원심 분리 튜브(VWR 카탈로그 번호 525-0402)로 옮긴다. 샘플 및 이의 후속 분획을 단계 a) 내지 h) 동안 액체의 원래의 물리적 및 화학적 조건에서 유지하도록 주의를 기울여야 한다.
b) 샘플을 즉시 최대 30초의 가속 및 최대 30초의 감속으로 3000 g에서 3.0분 동안 원심 분리한다.
c) 원심 분리 직후, 가능한 한 많은 상청액(펠릿이 형성되었던 경우, 펠릿을 휘젓지 않음)을 제2 원심 분리 튜브(단계 a)에서와 동일한 유형)로 옮긴다.
d) 상청액의 0.05 mL의 하위 샘플(하위 샘플 A)을 취한다.
e) 최대 200 마이크론의 입자 크기를 갖는 10 mg의 BLG 결정(총 고형분에 대한 적어도 98%의 순수한 BLG)을 제2 원심 분리 튜브에 첨가하고, 혼합물을 교반한다.
f) 제2 원심 분리 튜브를 원래의 온도에서 60분 동안 그대로 두었다.
g) 단계 f) 직후, 제2 원심 분리 튜브를 500 g에서 10분 동안 원심 분리하고, 이어서 상청액의 또 다른 0.05 mL의 하위 샘플(하위 샘플 B)을 취한다.
h) 존재하는 경우, 단계 g)의 원심 분리 펠릿을 회수하고, 이를 milliQ 수 중에 재현탁시키고, 즉시 현미경에 의해 가시적인 결정의 존재에 대해 현탁액을 검사한다.
i) 하위 샘플 A 및 B 중의 BLG의 농도를 WO 2018/115520호의 실시예 9.9에 약술된 방법을 사용하여 결정한다 - 결과는 하위 샘플의 총 중량에 대한 % BLG w/w로 표시된다. 하위 샘플 A의 BLG의 농도는 CBLG, A로 지칭되고, 하위 샘플 B의 BLG의 농도는 CBLG, B로 지칭된다.
j) cBLG, B가 cBLG, A보다 더 낮은 경우 및 결정이 단계 i에서 관찰되는 경우, 단계 a)의 샘플이 취해진 액체는 (특정 조건에서) 과포화되었다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "액체" 및 "용액"은 액체 및 예를 들어 단백질 결정 또는 다른 단백질 입자와 같은 고체 또는 반-고체 입자의 조합을 함유하는 조성물을 포괄한다. 따라서, "액체" 또는 "용액"은 현탁액 또는 심지어 슬러리일 수 있다. 그러나, "액체" 및 "용액"은 바람직하게는 펌핑 가능하다.
본 발명의 맥락에서, "BLG 결정"을 포함하는 예를 들어 분말과 같은 건조 생성물은 BLG 결정의 현탁액을 건조시켜서 수득된 생성물을 함유하며, 습식 BLG 결정의 결정 구조는 건조 공정 동안 왜곡되었을 수 있고, 적어도 부분적으로 이들의 x-선 회절 특징을 잃을 수 있다. 동일한 방식으로, 용어 "건조 BLG 결정" 및 "건조된 BLG 결정"은 습식 BLG 결정을 건조시켜서 수득된 입자를 지칭하며, 이러한 건조 입자는 결정 구조 자체를 가질 필요가 없다. 그러나, 본 발명자들은 건조된 BLG 결정이 차가운(4℃) 탈염수 중에 1 부의 건조된 BLG 결정에 대해 2 부의 물의 중량비로 재현탁될 때, BLG 결정은 재수화되고, 건조 전과 같은 실질적으로 동일한 결정 구조(공간군-유형 및 단위 셀 치수)를 회복함을 관찰하였다.
PCT 출원 WO 2018/115520호의 맥락에 기술된 분석 방법이 본 발명에 동일하게 적용되며, 본원에 기재된 매개변수를 결정하기 위해 사용되어야 한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "초기 단백질 용액"은 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 및 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 조합 그리고 바람직하게는 혼합하여 제조된 단백질 용액에 관한 것이다. 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 단계 b)의 결정화가 개시되는 BLG-함유 용액이다. 사용되는 단백질 공급물(들) 중 하나 이상이 이미 BLG 결정을 함유하는 경우, 초기 단백질 용액은 5.0 내지 6.0 범위의 pH를 갖고, BLG에 대해 과포화이고, 유형 A 단백질 공급물 및 유형 B 단백질 공급물을 조합 그리고 바람직하게는 혼합하여 수득되는 제1 단백질 용액이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유형 A 단백질 공급물"은 적어도 5.6의 pH를 갖고, BLG를 추가로 포함하는 단백질 공급물에 관한 것이다. 따라서, 적어도 5.6의 pH를 갖고, 초기 단백질 용액을 제조하기 위해 사용되는 임의의 BLG-함유 단백질 공급물은 유형 A 단백질 공급물로 간주된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유형 B 단백질 공급물"은 최대 5.4의 pH를 갖고, BLG를 추가로 포함하는 단백질 공급물에 관한 것이다. 따라서, 최대 5.4의 pH를 갖고, 초기 단백질 용액을 제조하기 위해 사용되는 임의의 BLG-함유 단백질 공급물은 유형 B 단백질 공급물로 간주된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)"은 본 발명이 초기 단백질 용액의 제조 동안 유형 B 단백질 공급물(들)과 조합되는 단일 유형 A 단백질 공급물 또는 몇몇의 유형 A 단백질 공급물로 구현될 수 있음을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)"은 본 발명이 초기 단백질 용액의 제조 동안 유형 A 단백질 공급물(들)과 조합되는 단일 유형 B 단백질 공급물 또는 몇몇의 유형 B 단백질 공급물로 구현될 수 있음을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, ~일 것이다"는 이들이 초기 단백질 용액을 제조하는 데 사용될 때, 이들이 가설상으로 동일한 양의 단일 유형 A 단백질 공급물로 혼합되는 경우, 가질 특징을 기반으로 하는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)을 기술한다. 이 용어는 또한 오직 단일 유형 A 단백질 공급물의 사용을 포함하며, 이러한 경우, 특징은 단일 유형 A 단백질 공급물에 관한 것임을 유의하는 것이 중요하다. 이 용어는 다수의 유형 A 단백질 공급물이 실질적으로 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)과 혼합되기 전에 조합되는 것이 필요하지 않음을 유의하는 것이 추가로 중요하다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, ~일 것이다"는 이들이 초기 단백질 용액을 제조하는 데 사용될 때, 이들이 가설상으로 동일한 양의 단일 유형 B 단백질 공급물로 혼합되는 경우, 가질 특징을 기반으로 하는 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 기술한다. 이 용어는 또한 오직 단일 유형 B 단백질 공급물의 사용을 포함하며, 이러한 경우, 특징은 단일 유형 B 단백질 공급물에 관한 것임을 유의하는 것이 중요하다. 이 용어는 다수의 유형 B 단백질 공급물이 실질적으로 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 혼합되기 전에 조합되는 것이 필요하지 않음을 유의하는 것이 추가로 중요하다.
단계 a)의 초기 단백질 용액은 전형적으로 BLG 이외에 비-BLG 고형분을 포함한다. 본 발명의 맥락에서, 용어 "비-BLG 고형분"은 예를 들어 탄수화물, 미네랄, 지질, 펩타이드뿐만 아니라 BLG 이외의 다른 단백질과 같은 고형분에 관한 것이다. 초기 단백질 용액 중에 존재하는 고형분은 단백질 공급물이 제조되었던 단백질 공급원 또는 공급원들에 대해 특징적이다. 훼이 단백질 공급원을 기반으로 하는 단백질 공급물은 전형적으로 BLG 이외에 예를 들어 알파-락트알부민, 카제이노마크로펩타이드, 및/또는 소혈청 알부민과 같은 다른 훼이 단백질을 함유할 것이다. 발효에 의해 제조된 BLG 공급원을 기반으로 하는 단백질 공급원은 전형적으로 발효 브로스(fermentation broth)로부터의 불순물, 예를 들어 다른 단백질, 펩타이드, 및 대사 작용 영양분과 같은 예를 들어 잔류 영양분 및 대사 부산물을 함유한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 단계 c)의 분리를 포함하지 않으며, BLG 결정 및 추가의 단백질, 예를 들어 추가의 훼이 단백질 둘 모두를 포함하는 식용 조성물을 제공한다. 이러한 방법의 변형이 단계 f)의 건조를 추가로 포함하는 경우, 이는 BLG 결정 및 추가의 훼이 단백질, 즉, WPC 또는 WPI를 함유하는 건조 조성물을 제공하며, 여기서, BLG 중 적어도 일부는 BLG 결정의 형태로 존재한다. 바람직하게는, 방법은 직접적 순서로 단계 a), b), 및 f)를 포함한다.
단백질 공급물이 훼이 단백질 농축물(WPC), 훼이 단백질 단리물(WPI), 혈청 단백질 농축물(SPC), 또는 혈청 단백질 단리물로부터 제조되는 경우, 상기 방법의 변형은 액체 또는 건조 형태의 WPC, WPI, SPC, 또는 SPI를 제조할 수 있도록 만들며, 여기서, BLG 중 적어도 일부는 BLG 결정의 형태이다.
용어 "훼이 단백질 농축물" 및 "혈청 단백질 농축물"은 총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w의 단백질의 총량을 함유하는 건조 또는 수성 조성물에 관한 것이다.
WPC 또는 SPC는 바람직하게는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 70% w/w BLG,
총 단백질에 대해 8 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
대안적으로, 그러나 또한 바람직하게, WPC 또는 SPC는 다음을 함유할 수 있다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
바람직하게는, WPC 또는 SPC는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 20 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 80% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
보다 바람직하게는, WPC 또는 SPC는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 70 내지 89% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
용어 "훼이 단백질 단리물" 및 "혈청 단백질 단리물"은 총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w의 단백질의 총량을 함유하는 건조 또는 수성 조성물에 관한 것이다.
WPI 또는 SPI는 바람직하게는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 15 내지 70% w/w BLG,
총 단백질에 대해 8 내지 50% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 40% w/w CMP.
대안적으로, 그러나 또한 바람직하게, WPI 또는 SPI는 다음을 함유할 수 있다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 95% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
보다 바람직하게는, WPI 또는 SPI는 다음을 함유한다:
총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 단백질,
총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w BLG,
총 단백질에 대해 4 내지 35% w/w ALA, 및
총 단백질에 대해 0 내지 25% w/w CMP.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 BLG 결정, 예를 들어 단계 c)로부터 수득된 분리된 BLG 결정을 세정하는 단계 d)를 추가로 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 BLG 결정, 예를 들어 단계 c) 또는 d)로부터 수득된 BLG 결정을 재결정하는 단계 e)를 추가로 포함한다.
방법은 단계 a), b), c), d), 및 e)를 예를 들어 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다. 대안적으로, 방법은 단계 a), b), c), 및 e)를 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물을 건조하는 단계 f)를 추가로 포함한다.
방법은 단계 a), b), 및 f)를 예를 들어 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
대안적으로, 방법은 단계 a), b), c), 및 f)를 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
대안적으로, 방법은 단계 a), b), c), d), 및 f)를 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
대안적으로, 방법은 단계 a), b), c), d), e), 및 f)를 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
언급된 바와 같이, 본 발명의 단계 a)는 5 내지 6 범위의 pH를 갖고, BLG에 대해 과포화된 초기 단백질 용액을 제공하는 단계를 포함한다.
초기 단백질 용액은 종종 BLG 이외의 추가의 단백질을 함유한다. 본 발명의 문맥에서, 용어 "추가의 단백질"은 BLG가 아닌 단백질을 의미한다. 초기 단백질 용액 중에 존재하는 추가의 단백질은 전형적으로 유청 또는 훼이에서 발견되는 하나 이상의 비-BLG 단백질을 포함한다. 이러한 단백질의 비-제한적 예는 알파-락트알부민, 소혈청 알부민, 면역글로불린, 카제이노-마크로펩타이드(CMP), 오스테오폰틴, 락토페린, 및 우유 지방 구막 단백질이다. 대안적으로, 예를 들어 BLG가 재조합 세포 배양의 발효에 의해 생산되는 경우, 추가의 단백질은 발효 브로스로부터의 단백질 불순물 또는 세포 잔사물일 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "훼이 단백질"은 훼이 또는 유청에서 발견되는 단백질에 관한 것이다. 초기 단백질 용액의 훼이 단백질은 훼이 또는 유청에서 발견되는 단백질 종의 하위 세트일 수 있거나, 훼이 및/또는 유청에서 발견되는 단백질 종의 완전한 세트일 수 있다. 그러나, 초기 단백질 용액은 언제나 BLG를 함유한다.
따라서, 초기 단백질 용액은 알파-락트알부민, 소혈청 알부민, 면역글로불린, 카제이노마크로펩타이드(CMP), 오스테오폰틴, 락토페린, 우유 지방 구막 단백질, 및 이의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 추가의 훼이 단백질을 함유한다.
알파-락트알부민(ALA)은 거의 모든 포유동물 종의 우유에서 존재하는 단백질이다. ALA는 락토스 합성효소(LS) 헤테로이량체의 조절 하위 단위를 형성하고, β-1,4-갈락토실트랜스퍼라제(베타4Gal-T1)는 촉매적 구성성분을 형성한다. 함께, 이들 단백질은 갈락토스 모이어티를 글로코스로 전이시킴으로써 LS가 락토스를 생산할 수 있도록 한다. 다량체로서, 알파-락트알부민은 칼슘 및 아연 이온에 강하게 결합하며, 살세균 또는 항종양 활성을 보유할 수 있다. 베타-락토글로불린과의 주요 구조적 차이 중 하나는 ALA가 공유 응집 반응에 대한 출발 지점으로서의 역할을 할 수 있는 임의의 유리 티올기를 갖지 않는 것이다. 결과적으로, 순수한 ALA는 변성 및 산성화 시 겔을 형성하지 않을 것이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "ALA" 또는 "알파-락트알부민"은 예를 들어 고유 및/또는 글리코실화 형태의 포유동물 종으로부터의 알파-락트알부민에 관한 것이며, 자연 발생 유전적 변이를 포함한다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 10% w/w의 카제인, 바람직하게는 단백질의 총량에 대해 최대 5% w/w, 보다 바람직하게는 최대 1% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0.5 % w/w의 카제인을 포함한다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 임의의 검출 가능한 양의 카제인을 함유하지 않는다.
용어 "유청"은 예를 들어 마이크로여과 또는 대기공 한천여과에 의해 카제인 및 우유 지방구가 우유로부터 제거되었을 때 남은 액체에 관한 것이다. 유청은 또한 "이상적 훼이"로 지칭될 수 있다.
용어 "유청 단백질" 또는 "혈청 단백질"은 유청에 존재하는 단백질에 관한 것이다.
용어 "훼이"는 우유의 카제인이 침전되고, 제거되었던 후에 남은 액체 상청액에 관한 것이다. 카제인 침전은 예를 들어 우유의 산성화에 의해 및/또는 렌넷 효소(rennet enzyme)의 사용에 의해 달성될 수 있다.
훼이의 몇몇의 유형, 예컨대 카제인의 렌넷 기반 침전에 의해 생산된 훼이 생성물인 "감미 훼이" 및 카제인의 산 기반 침전에 의해 생산된 훼이 생성물인 "산 훼이" 또는 "산미 훼이"가 존재한다. 카제인의 산 기반 침전은 예를 들어 식품 산의 첨가에 의해 또는 세균 배양에 의해 달성될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 2% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 10% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 적어도 15% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 20% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 30% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 0 내지 20% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 15% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 10% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 5% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 15 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 20 내지 65% w/w, 더욱더 바람직하게는 25 내지 60% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 50% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 5% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 10% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 15% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 20% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 가장 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 1% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 2% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 3% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 가장 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 4% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 또 다른 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 35% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 40% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 예를 들어 단백질의 총량에 대해 적어도 45% w/w의 추가의 훼이 단백질을 예를 들어 포함할 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 50% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 5 내지 90% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 10 내지 80% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다. 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 20 내지 70% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 예를 들어 포함할 수 있다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 30 내지 70% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함한다.
언급된 바와 같이, 본 발명자들은 유기 용매의 사용 없이 BLG를 결정화할 수 있음을 발견하였다. 이러한 정제 접근법은 또한 훼이 단백질을 함유하는 조합물(preparation)을 정련하는 데 사용될 수 있으며, 여기서, 조합물은 일부 BLG 정제에 이미 적용되었고, BLG의 순도를 더욱더 증가시키기 위한 단순한 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 1 내지 20% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 2 내지 15% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 예를 들어 단백질의 총량에 대해 3 내지 10% w/w 범위의 추가의 훼이 단백질을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 5% w/w의 ALA를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 10% w/w의 ALA를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 15% w/w의 ALA를 포함한다. 대안적으로는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 20% w/w의 ALA를 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 25% w/w의 ALA를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w의 ALA를 포함한다. 단계 a)의 초기 단백질 용액은 바람직하게는 단백질의 총량에 대해 적어도 35% w/w의 ALA를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 40% w/w의 ALA를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 5 내지 95% w/w 범위의 ALA를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 5 내지 70% w/w 범위의 ALA를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 10 내지 60% w/w 범위의 ALA를 포함할 수 있다. 단계 a)의 초기 단백질 용액은 바람직하게는 단백질의 총량에 대해 12 내지 50% w/w 범위의 ALA를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 20 내지 45% w/w 범위의 ALA를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액을 적어도 0.01의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 적어도 0.5의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 예를 들어 적어도 2와 같은 적어도 1의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 예를 들어, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 적어도 3의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 가질 수 있다.
초기 단백질 용액 및 단백질 공급물 중의 BLG 및 다른 단백질의 양과 농도는 모두 용해된 단백질을 지칭하며, 침전되거나, 결정화된 단백질을 포함하지 않는다.
본 발명의 맥락에서, 구성성분 X와 구성성분 Y 사이의 "중량비"라는 용어는 계산 mX/mY에 의해 수득된 값을 의미하며, 여기서, mX는 구성성분 X의 양(중량)이고, mY는 구성성분 Y의 양(중량)이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 0.01 내지 20 범위의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 0.2 내지 10 범위의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 더욱더 바람직하게는 단계 a)의 초기 단백질 용액은 0.5 내지 4 범위의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 갖는다. 예를 들어, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 1 내지 3 범위의 BLG와 ALA 사이의 중량비를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 2% w/w의 BLG를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 15% w/w의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 10% w/w의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 12% w/w의 BLG를 포함한다. 예를 들어, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 15% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 예를 들어 적어도 20% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 대안적으로는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 40% w/w의 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 45% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 예를 들어 단백질의 총량에 대해 적어도 50% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 가장 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 55% w/w의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 95% w/w의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 90% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 85% w/w의 BLG를 예를 들어 포함할 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 예를 들어 최대 80% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 78% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 75% w/w의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 1 내지 95% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 5 내지 90% w/w 범위의 BLG를 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 10 내지 85% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 10 내지 80% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 가장 바람직하게는 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 20 내지 70% w/w 범위의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 10 내지 95% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 12 내지 90% w/w 범위의 BLG를 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 15 내지 85% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 15 내지 80% w/w 범위의 BLG를 포함한다. 가장 바람직하게는 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 30 내지 70% w/w 범위의 BLG를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 적어도 0.4% w/w의 양으로 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 적어도 1.0% w/w의 양으로 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 적어도 2.0% w/w의 양으로 BLG를 포함한다. 초기 단백질 용액은 적어도 4% w/w의 양으로 BLG를 포함하는 것이 더욱더 바람직하다.
BLG의 더 높은 농도가 더욱더 바람직하며, 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 적어도 6% w/w의 양으로 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 적어도 10% w/w의 양으로 BLG를 포함한다. 초기 단백질 용액이 적어도 15% w/w의 양으로 BLG를 포함하는 것이 더욱더 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 0.4 내지 40% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 1 내지 35% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 4 내지 30% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 초기 단백질 용액은 10 내지 25% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함하는 것이 더욱더 바람직하다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 45% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 3 내지 40% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 5 내지 36% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 초기 단백질 용액은 7 내지 34% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함하는 것이 더욱더 바람직하다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 6 내지 32% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 8 내지 30% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 10 내지 28% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함한다. 초기 단백질 용액은 12 내지 26% w/w 범위의 양으로 BLG를 포함하는 것이 더욱더 바람직하다.
초기 단백질 용액은 탈염된 초기 단백질 용액인 것이 바람직하다.
이 맥락에서, 용어 탈염된은 초기 단백질 용액의 전도도가 최대 15 mS/cm, 그리고 바람직하게는 최대 10 mS/cm, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 8 mS/cm인 것을 의미한다. 탈염된 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 바람직하게는 최대 7 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 4 mS/cm, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 1 mS/cm이다.
초기 단백질 용액은 탈염된 유청 단백질 농축물, 탈염된 유청 단백질 단리물, 탈염된 훼이 단백질 농축물, 또는 탈염된 훼이 단백질 단리물인 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 탈염되고 pH 조절된 유청 단백질 농축물, 훼이 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 훼이 단백질 단리물, 또는 이의 조합을 포함하거나, 심지어 이로 구성된다.
초기 단백질 용액은 탈염된 유청 단백질 농축물을 예를 들어 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다. 대안적으로, 초기 단백질 용액은 탈염된 훼이 단백질 농축물을 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다. 대안적으로, 초기 단백질 용액은 탈염된 유청 단백질 단리물을 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다. 대안적으로, 초기 단백질 용액은 탈염된 훼이 단백질 단리물을 포함하거나, 심지어 이로 구성될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "훼이 단백질 농축물" 및 "유청 단백질 농축물"은 훼이 또는 유청의 조합물에 관한 것이며, 여기서, 조합물은 총 고형분에 대해 대략 20 내지 89% w/w 범위의 단백질을 함유한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "훼이 단백질 단리물" 및 "단리된 유청 단백질"은 훼이 또는 유청의 조합물에 관한 것이며, 여기서, 조합물은 총 고형분에 대해 적어도 90% w/w의 단백질을 함유한다.
용어 "~로 본질적으로 구성되다" 및 "~로 본질적으로 구성된"은 당해 청구항 또는 특성이 명시된 물질 또는 단계 및 청구된 발명의 기본적 그리고 신규 특징(들)에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것들을 포괄함을 의미한다.
초기 단백질 용액의 단백질은 바람직하게는 포유동물 우유, 및 바람직하게는 암소, 양, 염소, 물소, 낙타, 라마, 암말, 및/또는 사슴과 같은 반추 동물의 우유로부터 유래된다. 소(암소) 우유로부터 유래된 단백질이 특히 바람직하다. 따라서, BLG 및 임의의 추가의 단백질은 바람직하게는 소 BLG 및 소 훼이 단백질이다. 본 발명의 다른 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 BLG는 재조합 미생물에 의해 생산되었지만, 여전히 포유동물 우유로부터 유래된 BLG의 아미노산 서열을 갖는다.
초기 단백질 용액의 단백질은 바람직하게는 가능한 한 이의 고유 형태에 가까운 것이며, 바람직하게는 적어도 적용된다면, 오직 온화한, 비-변성 열 처리에 적용되었다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 BLG는 최대 1의 락토실화 정도를 갖는다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 BLG는 최대 0.6의 락토실화 정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 BLG는 최대 0.4의 락토실화 정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 BLG는 최대 0.2의 락토실화 정도를 갖는다. 가장 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 BLG는 예를 들어 바람직하게는 최대 0.01과 같은 최대 0.1의 락토실화 정도를 갖는다.
BLG의 락토실화 정도는 Czerwenka 외(J. Agric. Food Chem., Vol. 54, No. 23, 2006, 페이지 8874-8882)에 따라 결정된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 최대 80 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 40 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 20 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 10 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 가장 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 예를 들어 바람직하게는 0 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값과 같은 최대 5 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다.
초기 단백질 용액은 전형적으로는 단백질 이외에 다른 구성성분을 함유한다. 초기 단백질 용액은 예를 들어 미네랄, 탄수화물, 및/또는 지질과 같은 훼이 또는 유청에서 보통 발견되는 다른 구성성분을 함유할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 초기 단백질 용액은 훼이 또는 유청에 고유하지 않은 구성성분을 함유할 수 있다. 그러나, 이러한 비-고유 구성성분은 바람직하게는 식품 생산에 사용하기에 및 바람직하게는 또한 인간 섭취에 안전하여야 한다.
본 발명은 BLG 이외의 다른 고형분을 함유하는 미정제 초기 단백질 용액으로부터 BLG를 분리하는 데 특히 유리하다.
초기 단백질 용액은 예를 들어 락토스, 올리고당, 및/또는 락토스의 가수분해 생성물(즉, 글루코스 및 갈락토스)와 같은 탄수화물을 예를 들어 함유할 수 있다. 초기 단백질 용액은 0 내지 40% w/w 범위, 예컨대 1 내지 30% w/w 범위, 또는 2 내지 20% w/w 범위의 탄화수소를 예를 들어 함유할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 최대 20% w/w의 탄수화물, 바람직하게는 최대 10% w/w의 탄수화물, 보다 바람직하게는 최대 5% w/w의 탄수화물, 및 더욱더 바람직하게는 최대 2% w/w의 탄수화물을 함유한다.
초기 단백질 용액은 또한 예를 들어 트리글리세라이드 및/또는 다른 지질 유형, 예컨대 인지질 형태의 지질을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 최대 15% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 최대 10% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 최대 6% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 최대 1.0% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 가장 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 최대 0.5% w/w의 지질의 총량을 포함한다.
초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 전형적으로는 초기 단백질 용액의 중량에 대해 적어도 1% w/w이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 적어도 5% w/w이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 적어도 10% w/w이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 적어도 15% w/w이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 1 내지 50% w/w 범위이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 5 내지 40% w/w 범위이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 10 내지 30% w/w 범위이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 15 내지 25% w/w 범위이다.
초기 단백질 용액의 총 고형분은 전형적으로는 초기 단백질 용액의 중량에 대해 적어도 1% w/w이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 적어도 5% w/w이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 적어도 10% w/w이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 적어도 15% w/w이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 5 내지 50% w/w 범위이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 8 내지 40% w/w 범위이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 10 내지 30% w/w 범위이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 15 내지 25% w/w 범위이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 8 내지 50% w/w 범위이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 10 내지 45% w/w 범위이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 12 내지 40% w/w 범위이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 총 고형분은 15 내지 35% w/w 범위이다.
초기 단백질 용액의 단백질의 총량은 WO 2018/115520호의 실시예 9.2에 따라 결정된다.
단계 a)의 초기 단백질 용액은 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 조합하고, 그리고 바람직하게는 혼합하여 제조된다. 상기 언급된 바와 같이, 적어도 5.6의 pH를 갖는 임의의 BLG-함유 단백질 공급물은 유형 A 단백질 공급물로 정의되고, 최대 5.4의 pH를 갖는 임의의 BLG-함유 단백질 공급물은 유형 B 단백질 공급물로 정의된다.
가장 바람직한 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 단일 유형 A 단백질 공급물과 단일 유형 B 단백질 공급물을 조합하고, 그리고 바람직하게는 혼합하여 제조된다. 결정화는 바람직하게는 액체의 형태 또는 대안적으로는 분말의 형태의 시드 조성물의 후속 첨가에 의해 바람직하게는 개시된다.
초기 단백질 용액은 유형 A 또는 유형 B가 아닌 단백질 공급물(들), 예를 들어 대략 5.5의 pH를 갖는 단백질 공급물(들) 또는 BLG를 함유하지 않는 단백질 공급물(들)을 추가로 함유할 수 있지만, 이들이 예를 들어 BLG 결정 또는 다른 시드 물질을 제공하여 결정화를 개시함으로써 공정을 최적화하는 데 사용되지 않는 한, 이러한 추가의 단백질 공급물의 존재를 제한하거나, 심지어 피하는 것이 바람직하다.
초기 단백질 용액의 제조는 적합한 pH를 갖는 초기 단백질 용액을 제공하기 위해 단백질 공급물 이외의 다른 성분의 첨가, 예를 들어 산 또는 염기의 첨가를 포함할 수 있다. 그러나, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 및 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합될 때 바람직한 pH를 제공하며, 따라서 다른 성분의 첨가를 제한하거나, 심지어 피하도록 이미 컨디셔닝되었던 것이 바람직하다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)" 및 "하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)"은 BLG에 대해 과포화된 초기 단백질 용액의 제조 동안 조합된 BLG-함유 조성물에 관한 것이다. 언급된 바와 같이, "유형 A 단백질 공급물"은 적어도 5.6의 pH를 갖고, "유형 B 단백질 공급물"은 최대 5.4의 pH를 갖는다. 단백질 공급물은 전형적으로는 BLG 및 불순물을 포함하는 수성 액체 및/또는 분말이다. 전형적 불순물의 예는 미네랄, 탄수화물, 예를 들어 추가의 단백질과 같은 기타 단백질이다.
따라서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들), 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들), 및 임의의 추가의 성분은 임의의 순서로 조합되어 초기 단백질 용액을 제공할 수 있다.
초기 단백질 용액은 단백질 공급물을 조합하는 것에 의해, 바람직하게는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 및 선택적으로 임의의 추가의 단백질 공급물 또는 성분을 혼합하는 것에 의해 제조된다.
모든 단백질 공급물 및 임의의 추가의 성분은 적절한 화학적 조성물로 제공되며, 본원에 기재된 초기 단백질 용액을 제공하기에 충분한 양으로 조합된다.
본 발명자들은 BLG 결정화의 최대 BLG 수율이 대략 pH 5.5에서 수득됨을 발견하였다. 따라서, 초기 단백질 용액은 다음의 pH보다 5.5에 더 가까운 pH를 갖는 것이 바람직하다:
- 이들이 조합되었던 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 pH, 또는
- 이들이 조합되었던 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 pH, 또는
- 이들이 조합되었던 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 pH 및 이들이 조합되었던 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 pH.
단백질 공급물을 조합하여 BLG 과포화에 대해 준안정성 영역, 즉, 과포화된 영역인 초기 단백질 용액을 제공하는 것이 대개 바람직하며, 여기서, BLG 결정은 시딩(seeding)이 사용될 때, 자랄 수 있지만, 결정화가 자발적으로 시작하지는 않는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 적어도 5.6, 보다 바람직하게는 적어도 5.7, 더욱더 바람직하게는 적어도 5.8, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 5.9의 pH를 가질 것이고,
유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 5.4, 보다 바람직하게는 최대 5.3, 더욱더 바람직하게는 5.2, 그리고 가장 바람직하게는 5.1의 pH를 가질 것이다.
오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 문구 "조합되는 경우, ~것이다"는 단일 유형 A 단백질 공급물 자체를 지칭한다. 유사하게, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 문구 "조합되는 경우, ~것이다"는 단일 유형 B 단백질 공급물 자체를 지칭한다.
따라서, 문구 "유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, [특정 특성]을 가질 것이다"는 다음을 의미한다:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 이는 [특정 특성]을 갖는다.
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, [특정 특성]을 가질 것이다.
예를 들어, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 적어도 5.6의 pH를 가질 것이라고 명시된 것은, 다음을 의미한다:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 이는 적어도 5.6의 pH를 갖는다.
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 적어도 5.6의 pH를 가질 것이다.
예를 들어, 2개의 유형 A 단백질 공급물이 사용된 실시형태에서, 문구 "조합되는 경우, ~일 것이다"는 특정 특성이 2개의 유형 A 단백질 공급물이 혼합되었던 경우, 수득될 것임을 의미한다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 5.6, 보다 바람직하게는 적어도 5.7, 더욱더 바람직하게는 적어도 5.8, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 5.9의 pH를 갖고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.4, 보다 바람직하게는 최대 5.3, 더욱더 바람직하게는 5.2, 그리고 가장 바람직하게는 5.1의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 적어도 6.0, 보다 바람직하게는 적어도 6.1, 더욱더 바람직하게는 적어도 6.2, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6.3의 pH를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 5.0, 보다 바람직하게는 최대 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.7의 pH를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 6.0, 보다 바람직하게는 적어도 6.1, 더욱더 바람직하게는 적어도 6.2, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6.3의 pH를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.0, 보다 바람직하게는 최대 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.7의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 6.0 내지 8 범위의 pH, 보다 바람직하게는 6.1 내지 7.5 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.2 내지 7.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.5 범위의 pH를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
6.0 내지 8 범위의 pH, 보다 바람직하게는 6.1 내지 7.5 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.2 내지 7.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.5 범위의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 4.0 내지 5.0 범위의 pH, 보다 바람직하게는 4.1 내지 4.9 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4.3 내지 4.8 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.8 범위의 pH를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
4.0 내지 5.0 범위의 pH, 보다 바람직하게는 4.1 내지 4.9 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4.3 내지 4.8 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.8 범위의 pH를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는다.
공급물이 BLG 결정을 함유하지 않더라도, 이는 여전히 BLG에 대해 포화되거나, 심지어 과포화될 수 있음을 유의하여야 한다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지만, 자발적 결정화가 일어나지 않는 준안정성 구역에 존재한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지만, 자발적 결정화가 일어나지 않는 준안정성 구역에 존재한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기의 단백질 용액의 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 40% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
바람직하게는, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기의 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 90% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기의 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 99% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
예를 들어, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기의 단백질 용액의 100% w/w의 BLG 함량에 기여하는 것이 바람직할 수 있다. 이는 예를 들어 전형적으로 시드 물질이 초기 단백질 용액의 제조 후에 첨가되는 경우의 상황이다.
본 발명자들은 단백질 공급물 중 적어도 일부가 BLG에 대해 과포화되지 않는 것이 대개 바람직한 것을 발견하였으며, 이는 제조 동안 제어되지 않은 결정화의 위험을 유의하게 감소시키기 때문이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물은 초기 단백질 용액의 적어도 1% w/w의 BLG 함량, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 40% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
바람직하게는, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물은 초기의 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 90% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물은 초기의 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 99% w/w의 BLG 함량에 기여한다.
BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기의 단백질 용액의 대략 100% w/w의 BLG 함량에 기여하는 것이 대개 바람직하다.
유형 A 및 유형 B 단백질 공급물을 단백질 변성 및/또는 분해를 피하는 온도에서 제조, 저장, 및 사용하는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 가질 것이다.
본 발명자들은 낮은 전도도를 갖는 단백질 공급물로부터 제조된 초기 단백질 용액이 더 높은 수율의 BLG 결정화를 제공함을 발견하였다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 10 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 4 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 10 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 4 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 3 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 2 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 1 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 3 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 2 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 1 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 10 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 4 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 10 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 4 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 3 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 2 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 1 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 3 mS/cm, 보다 바람직하게는 최대 2 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 1 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 가질 것이다.
본 발명자들은 BLG 결정화 수율이 전도도(mS/cm 단위로 표시됨)와 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)의 단백질의 총량(공급물(들)의 총량에 대한 총 단백질의 % wt.로 표시됨) 사이의 비가 특정 역치 이하로 유지되는 경우, 수득되는 것을 추가로 관찰하였다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 보다 바람직하게는 최대 0.20, 보다 바람직하게는 최대 0.18, 더욱더 바람직하게는 최대 0.12, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.10의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 보다 바람직하게는 최대 0.20, 보다 바람직하게는 최대 0.18, 더욱더 바람직하게는 최대 0.12, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.10의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 보다 바람직하게는 최대 0.20, 보다 바람직하게는 최대 0.18, 더욱더 바람직하게는 최대 0.12, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.10의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비를 가질 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 보다 바람직하게는 최대 0.20, 보다 바람직하게는 최대 0.18, 더욱더 바람직하게는 최대 0.12, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.10의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 6 내지 32% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 6 내지 32% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양으로 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양으로 BLG를 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG를 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 2% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 10% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 2% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 10% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 총 고형분에 대해 적어도 15% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 20% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 30% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 적어도 15% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 20% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 30% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 혼합되는 경우, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 0 내지 20% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 15% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 10% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 5% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 0 내지 20% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 15% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 10% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 5% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 15 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 20 내지 65% w/w, 더욱더 바람직하게는 25 내지 60% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 50% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 15 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 20 내지 65% w/w, 더욱더 바람직하게는 25 내지 60% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 50% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 2% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 10% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 2% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 10% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 적어도 15% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 20% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 30% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
총 고형분에 대해 적어도 15% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 20% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 30% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 1 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 2 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 3 내지 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 0 내지 20% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 15% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 10% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 5% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
총 고형분에 대해 0 내지 20% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 15% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 10% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 5% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 총 고형분에 대해 15 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 20 내지 65% w/w, 더욱더 바람직하게는 25 내지 60% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 50% w/w의 양으로 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
따라서, 본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
총 고형분에 대해 15 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 20 내지 65% w/w, 더욱더 바람직하게는 25 내지 60% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 50% w/w의 양의 비-BLG 고형분을 포함할 것이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 저함량의 변성된 단백질을 갖는다. 바람직하게는, 단백질 공급물은 조합되는 경우, 최대 20%, 보다 바람직하게는 최대 10%, 더욱더 바람직하게는 최대 5%, 그리고 가장 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도를 가질 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물의 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 95% w/w, 보다 바람직하게는 15 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 75% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 35 내지 70% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물의 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 B 단백질 공급물의 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 95% w/w, 보다 바람직하게는 15 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 75% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 35 내지 70% w/w 범위의 유형 B 단백질 공급물의 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함한다:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함한다:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 5.8 내지 9의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 2.5 내지 5.2의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함한다:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 6.0 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 3 내지 5.0의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
본 발명의 바람직한 또한 추가의 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함한다:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 6.1 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 3 내지 4.9의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 모든 단백질 공급물은 액체 형태이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 건조 형태이다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 건조 형태 및 바람직하게는 분말 형태이고, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 액체 형태이다.
단백질 공급물은 바람직하게는 WPC, WPI, SPC, SPI, 또는 이의 조합으로부터 제조된다.
초기 단백질 용액의 화학적 조성에 관한 실시형태는 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)에 동일하게 적용되지만, 전형적으로는 단백질 공급물 중 적어도 하나의 매개변수는 과포화 또는 적어도 자발적 결정화를 피하도록 설정된다.
초기 단백질 용액의 BLG의 과포화도는 다음의 과포화도보다 더 높은 것이 대개 바람직하다:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 A 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 A 단백질 공급물들.
추가적으로, 초기 단백질 용액의 BLG의 과포화도는 다음의 과포화도보다 더 높은 것이 대개 바람직하다:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 B 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 B 단백질 공급물들.
초기 단백질 용액의 BLG의 과포화도는 다음의 둘 모두의 과포화도보다 더 높은 것이 특히 바람직하다:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 A 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 A 단백질 공급물들,
및
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 B 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 B 단백질 공급물들.
액체의 과포화도는 액체 샘플을 BLG 결정으로 시딩하고, 샘플을 동일한 조건(예를 들어, 온도, 압력, 및 습도)으로 24시간 동안 유지할 때 샘플 내에서 발생하는 추가의 BLG 결정 매스(crystal mass)의 양을 정량화함으로써 결정된다. BLG 결정 매스의 정량화는 액체의 온도에서 5분 동안 15000 g에서 원심 분리하고, 이후 WO 2018/115520A1호의 분석 9.9를 사용하여 수득된 펠릿 중의 BLG의 함량을 정량화함으로써 이루어진다. 과포화도는 펠릿에서 단리될 수 있는 액체 샘플 중의 BLG의 백분율이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물에 대해, 오직단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 이는 다음을 갖거나, 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이다:
- 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH,
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이다:
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2.5 내지 4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH,
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도,
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비.
본 발명의 특히 바람직한 실시형태에서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이고:
- 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 5.6 내지 10, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH,
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도,
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비,
및
- 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이다:
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2.5 내지 4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이다:
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2.5 내지 4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 총 고형분에 대해 적어도 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 40% w/w의 비-BLG 고형분의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비.
본 발명의 특히 바람직한 실시형태에서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이고:
- 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 총 고형분에 대해 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 40% w/w의 양의 비-BLG 고형분의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비,
및
- 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에, 다음을 가질 것이다:
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2.5 내지 4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 총 고형분에 대해 적어도 0 내지 70% w/w, 보다 바람직하게는 0 내지 60% w/w, 더욱더 바람직하게는 0 내지 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 0 내지 40% w/w의 비-BLG 고형분의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 다음 공정 단계 중 하나 이상에 의해 제조된다:
- pH를 조절하는 단계,
- 전도도를 감소시키는 단계
- 온도를 감소시키는 단계
- 단백질 농도를 증가시키는 단계
- 물 활성도를 감소시키는 제제를 첨가하는 단계
- 이온 조성을 개질하는 단계.
본 발명자들은 압력-유도 막 여과가 액체 단백질 공급물을 제조하기에 적절한 것을 발견하였다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 단백질 공급원, 바람직하게는 훼이 단백질 공급물의 압력-유도 막 여과를 포함하는 공정에 의해 제조된다. 바람직한 압력-여과 막 여과는 한천여과, 마이크로여과, 나노여과, 역삼투에 의한 여과를 포함한다. 한천여과는 단백질 공급물을 제조하는 데 특히 바람직한 것으로 발견되었으며, 단백질 공급물의 제조 동안 압력-유도 막 여과의 유일한 유형으로 사용될 수 있거나, 다른 여과 방법와 조합하여 사용될 수 있다.
단백질 공급물의 제조는 대개 바람직한 pH를 갖는 단백질 공급물을 제공하기 위한 pH 조절을 포함한다. 바람직하게는, pH는 유형 A 단백질 공급물을 제조할 때, 6.0 내지 7.0 범위의 pH 그리고 유형 B 단백질 공급물을 제조할 때, 4.0 내지 5.0 범위의 pH로 조절된다. pH는 바람직하게는 식품 허용 가능한 산 및/또는 염기를 사용하여 조절된다. 예를 들어 카복실산과 같은 식품 허용 가능한 산이 특히 바람직하다. 이러한 산의 유용한 예는 예를 들어 염산, 황산, 인산, 아세트산, 말레산, 타르타르산, 락트산, 시트르산, 또는 글루콘산, 및/또는 이의 혼합물이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, pH는 예를 들어 D-글루코노-델타-락톤과 같은 락톤을 사용하여 조절되며, 이는 천천히 가수분해되고, 동시에 이를 함유하는 수성 액체의 pH를 감소시킨다. 락톤의 가수분해가 종료된 후에 목표 pH는 정확하게 계산될 수 있다.
식품 허용 가능한 염기의 유용한 예는 예를 들어 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화칼슘과 같은 예를 들어 수산화물 공급원, 예를 들어 트리-나트륨 시트레이트와 같은 식품 산의 염, 및/또는 이의 조합이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, pH는 양이온 교환 물질을 이의 H+ 형태로 첨가하여 조절된다. 비드-유형/큰 입자 유형 양이온 교환 물질은 결정화 전에 또는 심지어 결정화 후에 초기 단백질 용액으로부터 용이하게 제거된다. 양이온 교환 물질을 이의 H+ 형태로 첨가하여 pH를 조절하는 것이 본 발명에서 특히 이로우며, 이는 단백질 공급물의 전도도에 유의하게 영향을 미치는 음성 반대 이온을 첨가하지 않고 pH를 감소시키기 때문이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 제조는 단백질 공급물의 전도도를 감소시키는 단계를 포함한다.
본원에 언급된 전도도 값은 달리 명시되지 않는 한, 25℃로 정규화되었다.
본 발명자들은 초기 단백질 용액의 전도도를 감소시키는 것이 BLG 결정의 더 높은 수율에 이르는 것을 발견하였다. 초기 단백질 용액의 수득 가능한 최소 전도도는 단백질 분획 및 지질 분획(존재하는 경우)의 조성에 좌우된다. 예를 들어 카제이노마크로펩타이드(CMP)와 같은 일부 단백질 종은 다른 단백질 종보다 전도도에 더 기여한다. 따라서, 단백질 공급물의 전도도는 단백질과 단백질의 반대 이온이 전도도에 대한 주요 기여자인 수준에 가깝도록 하는 것이 바람직할 수 있다. 전도도의 감소는 대개 액체상 중에 존재하며, 단백질에 단단히 결합되지 않은 작은, 유리 이온 중 적어도 일부의 제거를 포함한다.
단백질 공급물은 최대 10 mS/cm의 전도도를 갖는 것이 대개 바람직하다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 최대 5 mS/cm의 전도도를 갖는다. 바람직하게는, 단백질 공급물은 최대 4 mS/cm의 전도도를 갖는다.
더 낮은 전도도가 더욱더 바람직하며, BLG 결정의 더 높은 수율에 이르게 한다. 따라서, 단백질 공급물은 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도를 갖는다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 최대 1 mS/cm의 전도도를 갖는다. 바람직하게는, 단백질 공급물은 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 갖는다.
단백질 공급물의 낮은 전도도는 바람직하게는 투석 또는 투석여과에 의해 수득된다. 한천여과에 의한 투석여과는 단백질은 유지되면서, 염 및 하전된 작은 분자는 세척 제거되도록 하기 때문에 특히 바람직하다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 동일한 UF 유닛이 UF/투석여과 및 단백질 공급물의 후속 농축에 사용된다.
본 발명자들은 전도도(mS/cm 단위로 표시됨)와 초기 단백질 용액 중의 단백질의 총량(초기 단백질 용액의 총 중량에 대한 총 단백질 % wt.로 표시됨) 사이의 비가 이롭게는 특정 역치 이하에서 유지되어 BLG의 결정화를 용이하게 하는 징후를 확인하였다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.3이다. 바람직하게는, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.25이다. 바람직하게는, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.20이다. 보다 바람직하게는, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.18이다. 더욱더 바람직하게는, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.12이다. 가장 바람직하게는, 전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.10이다.
전도도와 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 예를 들어 대략 0.07 또는 심지어 그 미만인 것이 바람직하다.
본 발명자들은 단백질 공급물이 이롭게는 최대 10 mS/cm의 UF 투과 전도도를 수득하도록 컨디셔닝될 수 있음을 추가로 발견하였다. UF 투과 전도도는 액체의 작은 분자 분획의 전도도의 척도이며, WO 2018/115520호의 실시예 9.10에 따라 측정된다. 용어 "전도도"가 그 자체로 본원에 사용될 때, 이는 당해 액체의 전도도를 지칭한다. 용어 "UF 투과 전도도"가 사용될 때, 이는 액체의 작은 분자 분획의 전도도를 지칭하며, WO 2018/115520호의 실시예 9.10에 따라 측정된다.
바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 7 mS/cm이다. 보다 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 5 mS/cm일 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 3 mS/cm일 수 있다.
더욱더 낮은 UF 투과 전도도가 사용될 수 있으며, 높은 수율의 BLG가 수득되어야 하는 경우, 특히 바람직하다. 따라서, 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 1.0 mS/cm이다. 보다 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.4 mS/cm이다. 더욱더 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.1 mS/cm이다. 가장 바람직하게는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.04 mS/cm이다.
더욱더 낮은 UF 투과 전도도는 투석여과 동안 예를 들어 MilliQ 수가 희석제로서 사용되어 도달될 수 있다(MilliQ 수는 대략 0.06 μS/cm의 전도도를 가짐). 따라서, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.01 mS/cm일 수 있다. 대안적으로는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.001 mS/cm일 수 있다. 대안적으로는, 단백질 공급물의 UF 투과 전도도는 최대 0.0001 mS/cm일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 온도 감소를 포함한다.
단백질 공급물의 온도는 최대 30℃, 바람직하게는 최대 20℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 10℃일 수 있다. 본 발명자들은 더욱더 낮은 온도가 단백질 공급물이 혼합될 때 수득되는 더 높은 과포화도를 제공하며, 따라서 단백질 공급물의 온도는 최대 5℃, 바람직하게는 최대 2℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0℃로 예를 들어 감소될 수 있음을 발견하였다. 온도는 심지어 0℃ 미만일 수 있지만, 바람직하게는 단백질 공급물은 예를 들어 아이스 슬러리의 형태로 펌핑 가능하도록 유지되어야 한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 조합되어 초기 단백질 용액을 제조하기 전에 아이스 슬러리이다.
단백질 공급물의 제조는 바람직하게는 하나 이상의 단백질 농축 단계, 예컨대 한천여과, 나노여과, 역삼투, 및/또는 증발을 포함한다.
한천여과는 단백질이 선택적으로 농축되도록 하기 때문에 특히 바람직하다. 상기 언급된 바와 같이, 한천여과는 바람직하게는 단백질 공급물의 제조 동안 투석여과 및 농축 둘 모두를 위해 사용된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물의 BLG의 농도는 BLG의 자발적 결정화가 일어나는 수준 미만이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 하나 이상의 물 활성도 감소제(들)의 첨가를 포함한다.
이러한 물 활성도 감소제의 유용하지만 비-제한적인 예는 다당류 및/또는 폴리-에틸렌 글리콜(PEG)이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 투석 또는 투석여과에 의해, 신규 이온성 종의 첨가에 의한 이온 교환을 포함한다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 예를 들어 적어도 BLG는 유지하는 막을 사용한 투석여과에 의해 전도도를 감소시키는 단계를 포함한다. 한천여과에 의한 투석여과가 특히 바람직하다.
임의의 적합한 단백질 공급원이 단백질 공급물을 제조하는 데 사용될 수 있다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급원은 BLG를 생산할 수 있는 하나 이상의 포유동물 세포, 재조합 식물 세포, 재조합 포유동물 세포, 및/또는 재조합 미생물의 발효에 의해 생산된다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단백질 공급원은 포유동물 우유로부터의 훼이 또는 유청으로부터 유래된다. 본 발명의 특히 바람직한 실시형태에서, 단백질 공급물의 단백질 공급원은 유청 단백질 농축물, 훼이 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 훼이 단백질 단리물, 또는 이의 조합을 포함하거나, 심지어 이로 구성된다.
전형적으로, 단백질 공급물은 상기 언급된 공정 중 둘 이상을 조합하고, 바람직하게는 혼합하여 제조된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 바람직하게는 훼이 단백질 공급원인 단백질 공급원을,
- 유형 A 단백질 공급원을 제조할 때, 소기의 pH, 바람직하게는 6.0 내지 8 범위의 pH 및 유형 B 단백질 공급물을 제조할 때, 3 내지 5.0 범위의 pH로의 pH 조절, 및
- 한천여과, 나노여과, 및/또는 역삼투에 의한 농축에 적용하는 단계를 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단백질 공급물의 제조는 바람직하게는 훼이 단백질 공급원인 단백질 공급원을,
- 유형 A 단백질 공급원을 제조할 때, 소기의 pH, 바람직하게는 6.0 내지 8 범위의 pH 및 유형 B 단백질 공급물을 제조할 때, 3 내지 5.0 범위의 pH로의 pH 조절,
- 한천여과, 나노여과, 및/또는 역삼투에 의한 농축,
- 낮은 전도도를 갖는 단백질 공급물을 제공하는 한천여과/투석여과, 및
- 처리 동안 액체 스트림의 온도를 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃로 유지하는 온도 조절에 적용하는 단계를 포함한다.
본 발명자들은 본 방법의 BLG 수율이 나트륨+칼륨의 합 대 칼슘과 마그네슘의 합 사이의 몰비를 제어함으로써 개선될 수 있음을 추가로 발견하였다. 칼슘 및 마그네슘의 더 높은 상대적 양은 놀랍게도 BLG의 수율을 증가시키며, 따라서 본 방법의 BLG 회수의 효율을 증가시키는 것으로 보인다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 4의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 보다 바람직하게는, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 2의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 더욱더 바람직하게는, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 1.5, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 1.0의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 가장 바람직하게는, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 예를 들어 최대 0.2와 같은 최대 0.5의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다.
Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비는 (mNa+mK)/(mCa+mMg)로 계산되며, 여기서, mNa는 몰 단위의 원소 Na의 함량이고, mK는 몰 단위의 원소 K의 함량이고, mCa는 몰 단위의 원소 Ca의 함량이고, mMg는 몰 단위의 원소 Mg의 함량이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 유형 B 단백질 공급물(들) 조합되는 경우, 최대 4의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 보다 바람직하게는, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 2의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 더욱더 바람직하게는, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 1.5, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 1.0의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다. 가장 바람직하게는, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 예를 들어 최대 0.2와 같은 최대 0.5의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 가질 것이다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단백질 공급물은 낮은 함량의 변성된 단백질을 갖는다. 바람직하게는, 단백질 공급물은 최대 20%, 바람직하게는 최대 10%, 보다 바람직하게는 최대 5%, 그리고 가장 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 제조는 5 내지 6 범위의 pH를 갖는다.
모든 pH 값은 pH 유리 전극을 사용하여 측정되고, 25℃로 정규화된다.
초기 단백질 용액은 예를 들어 4.9 내지 6.1 범위의 pH를 가질 수 있다. 초기 단백질 용액의 pH는 예를 들어 5.0 내지 6.1 범위일 수 있다. 대안적으로, 초기 단백질 용액의 pH는 5.1 내지 6.1 범위일 수 있다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 pH는 5.1 내지 6.0 범위이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 pH는 5.0 내지 6.0 범위이다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 pH는 5.1 내지 6.0 범위이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 pH는 5.1 내지 5.9 범위이다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 pH는 5.2 내지 5.8 범위일 수 있다. 가장 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 pH는 5.4 내지 5.6 범위이다.
본 발명자들은 최대 BLG 결정화 수율이 대략 pH 5.5에서 수득되며, 초기 단백질 용액의 pH는 이롭게는 pH 5.5 밖에서 선택되지만, 예를 들어 식품 산 또는 추가의 유형 B 단백질 공급물 또는 유형 A 단백질 공급물의 첨가에 의해 결정화 동안 최적의 pH에 가깝게 이동될 수 있음을 관찰하였다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 pH는 5.0 내지 5.3 또는 5.7 내지 6.0 범위이다.
본 발명자들은 결정화 동안 자발적 결정화를 피하는 것이 이로우며, 준안정성 구역에서의 제어된 결정화에 의해 형성된 BLG 결정이 보다 균일한 크기 분포를 갖고, 자발적 BLG 결정화로부터 생성된 BLG 결정보다 모액으로부터 효율적으로 분리하기에 더 용이함을 발견하였다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액 및 바람직하게는 또한 결정화 단백질 용액은 자발적 BLG 결정화를 피하도록 제어된다. 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되지만, 준안정성 구역에 존재하는 것이 예를 들어 바람직하며, 이는 자발적 BLG 결정화가 일어날 수 없음을 의미한다.
본 발명자들은 초기 단백질 용액의 낮은 전도도가 BLG 결정의 더 높은 수율에 이르는 것을 발견하였다. 초기 단백질 용액의 수득 가능한 최소 전도도는 단백질 분획 및 지질 분획(존재하는 경우)의 조성에 좌우된다. 예를 들어 카제이노마크로펩타이드(CMP)와 같은 일부 단백질 종은 다른 단백질 종보다 전도도에 더 기여한다. 따라서, 단백질 공급물의 전도도는 단백질과 단백질의 반대 이온이 전도도에 대한 주요 기여자인 수준에 가깝도록 하는 것이 바람직할 수 있다. 전도도의 감소는 대개 액체상 중에 존재하며, 단백질에 단단히 결합되지 않은 작은, 유리 이온 중 적어도 일부의 제거를 포함한다.
초기 단백질 용액은 최대 10 mS/cm의 전도도를 갖는 것이 대개 바람직하다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 최대 5 mS/cm의 전도도를 갖는다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 4 mS/cm의 전도도를 갖는다.
더 낮은 전도도가 더욱더 바람직하며, BLG 결정의 더 높은 수율에 이르게 한다. 따라서, 초기 단백질 용액은 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도를 갖는다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 최대 1 mS/cm의 전도도를 갖는다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 0.5 mS/cm의 전도도를 갖는다.
본 발명자들은 전도도(mS/cm 단위로 표시됨)와 초기 단백질 용액 중의 단백질의 총량(초기 단백질 용액의 총 중량에 대한 총 단백질 % wt.로 표시됨) 사이의 비가 이롭게는 특정 역치 이하에서 유지되어 BLG의 결정화를 용이하게 하는 징후를 확인하였다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.3이다. 바람직하게는, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.25이다. 바람직하게는, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.20이다. 보다 바람직하게는, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.18이다. 더욱더 바람직하게는, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.12이다. 가장 바람직하게는, 전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.10이다.
전도도와 초기 단백질 공급물 중의 단백질의 총량 사이의 비는 대략 0.07 또는 심지어 그 미만인 것이 예를 들어 바람직하다.
본 발명자들은 초기 단백질 용액이 이롭게는 최대 10 mS/cm의 UF 투과 전도도를 가질 수 있음을 추가로 발견하였다. UF 투과 전도도는 액체의 작은 분자 분획의 전도도의 척도이며, WO 2018/115520호의 실시예 9.10에 따라 측정된다. 용어 "전도도"가 그 자체로 본원에 사용될 때, 이는 당해 액체의 전도도를 지칭한다. 용어 "UF 투과 전도도"가 사용될 때, 이는 액체의 작은 분자 분획의 전도도를 지칭하며, WO 2018/115520호의 실시예 9.10에 따라 측정된다.
바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 7 mS/cm이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 5 mS/cm일 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 3 mS/cm일 수 있다.
더욱더 낮은 UF 투과 전도도가 사용될 수 있으며, 높은 수율의 BLG가 수득되어야 하는 경우, 특히 바람직하다. 따라서, 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 1.0 mS/cm이다. 보다 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.4 mS/cm일 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.1 mS/cm일 수 있다. 가장 바람직하게는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.04 mS/cm일 수 있다.
더욱더 낮은 UF 투과 전도도가 투석여과 동안 예를 들어 MilliQ 수를 희석제로서 사용되어 도달될 수 있다(MilliQ 수는 대략 0.06 μS/cm의 전도도를 가짐). 따라서, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.01 mS/cm일 수 있다. 대안적으로는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.001 mS/cm일 수 있다. 대안적으로는, 초기 단백질 용액의 UF 투과 전도도는 최대 0.0001 mS/cm일 수 있다.
본 발명자들은 저온이 BLG 결정화 수율을 증가시키는 것을 발견하였다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 온도는 최대 30℃, 바람직하게는 최대 20℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 10℃이다. 더 낮은 온도는 심지어 더 높은 과포화도를 제공하며, 따라서 초기 단백질 용액의 온도는 바람직하게는 최대 5℃, 그리고 보다 바람직하게는 최대 2℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0℃이다. 온도는 심지어 0℃ 미만일 수 있지만, 바람직하게는 초기 단백질 용액은 예를 들어 아이스 슬러리의 형태로 펌핑 가능하도록 유지되어야 한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 BLG 결정화의 개시 시 아이스 슬러리이다. 대안적으로 또는 추가적으로, 결정화 초기 단백질 용액은 단계 b)의 BLG 결정화 동안 아이스 슬러리로 전환되거나, 이로 유지될 수 있다.
본 발명자들은 본 방법의 BLG 수율이 나트륨+칼륨의 합 대 칼슘과 마그네슘의 합 사이의 몰비를 제어함으로써 개선될 수 있음을 추가로 발견하였다. 칼슘 및 마그네슘의 더 높은 상대적 양은 놀랍게도 BLG의 수율을 증가시키며, 따라서 본 방법의 BLG 회수의 효율을 증가시키는 것으로 보인다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 최대 4의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 갖는다. 보다 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 최대 2의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 최대 1.5, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 1.0의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 갖는다. 가장 바람직하게는, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 예를 들어 최대 0.2와 같은 최대 0.5의 Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비를 갖는다.
Na + K 및 Ca + Mg 사이의 몰비는 (mNa+mK)/(mCa+mMg)로 계산되며, 여기서, mNa는 몰 단위의 원소 Na의 함량이고, mK는 몰 단위의 원소 K의 함량이고, mCa는 몰 단위의 원소 Ca의 함량이고, mMg는 몰 단위의 원소 Mg의 함량이다.
초기 단백질 용액이 염용에 의해 BLG에 대해 과포화되며, 따라서 BLG가 염용 모드의 초기 단백질 용액으로부터 결정화될 수 있는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액은 특히 본 발명의 식용 BLG 생성물이 단백질 변성도를 또한 가져야 하는 경우, 낮은 함량의 변성된 단백질을 갖는다. 바람직하게는, 초기 단백질 용액은 최대 20%, 바람직하게는 최대 10%, 보다 바람직하게는 최대 5%, 그리고 가장 바람직하게는 최대 2%의 단백질 변성도를 갖는다.
방법의 단계 b)는 과포화된 초기 단백질 용액의 BLG 중 적어도 일부를 결정화하는 단계를 포함한다.
단계 b)의 결정화는 염용 모드, 즉, 낮은 이온 강도 및 전도도를 갖는 액체 중에 발생하는 것이 특히 바람직하다. 이는 결정화를 유발하기 위해 유의한 양의 염이 용액에 첨가되는 염석 모드와는 대조적이다.
단계 b)의 BLG의 결정화는 예를 들어 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다:
- 결정화가 발생하기를 기다리는 것,
- 결정화 시드의 첨가,
- BLG의 과포화도를 더욱더 증가시키는 것, 및/또는
- 기계적 자극.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b)는 결정화 시드를 초기 단백질 용액에 첨가하는 단계를 포함한다. 본 발명자들은 결정화 시드의 첨가가 생산 동안 공정 장비의 갑작스러운 막힘 및 의도하지 않은 정지를 피하기 위해 BLG 결정화가 발생하는 때 및 경우를 제어하는 것을 가능하게 만드는 것을 발견하였다. 단백질 공급물을 농축하는 동안, 결정화 개시를 피하는 것이 예를 들어 대개 바람직하다.
이론상으로, BLG의 결정화를 개시하는 임의의 시드 물질이 사용될 수 있다. 그러나, 추가의 불순물이 초기 단백질 용액에 첨가되는 것을 피하도록 수화된 BLG 결정 또는 건조된 BLG 결정이 시딩을 위해 사용되는 것이 바람직하다.
결정화 시드는 건조 형태일 수 있거나, 초기 단백질 용액에 첨가될 때 현탁액의 일부를 형성할 수 있다. 결정화 시드, 예를 들어 BLG 결정을 함유하는 현탁액을 첨가하는 것은 결정화의 더 빠른 개시를 제공하는 것으로 나타나기 때문에 본원에서 바람직하다. 결정화 시드를 함유하는 이러한 현탁액은 5 내지 6 범위의 pH 및 최대 10 mS/cm의 전도도를 갖는 것이 바람직하다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 결정화 시드 중 적어도 일부는 초기 단백질 용액과 접촉하게 되는 고체상 상에 위치한다.
결정화 시드는 바람직하게는 BLG 결정의 소기의 크기보다 더 작은 입자 크기를 갖는다. 결정화 시드의 크기는 최대 시드를 체질 또는 다른 크기 분별 공정에 의해 제거하여 개질될 수 있다. 예를 들어 분쇄의 의한 입자 크기 감소가 또한 입자 크기 분별 전에 이용될 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 적어도 90% w/w의 결정화 시드는 0.1 내지 600 마이크론 범위의 입자 크기(체질 분석에 의해 분석됨)를 갖는다. 예를 들어, 적어도 90% w/w의 결정화 시드는 1 내지 400 마이크론 범위의 입자 크기를 가질 수 있다. 바람직하게는, 적어도 90% w/w의 결정화 시드는 5 내지 200 마이크론 범위의 입자 크기를 가질 수 있다. 보다 바람직하게는, 적어도 90% w/w의 결정화 시드는 5 내지 100 마이크론 범위의 입자 크기를 가질 수 있다.
결정화 시드의 입자 크기 및 투여량은 BLG의 최적의 결정화를 제공하도록 조정될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물(들) 중 적어도 하나는 이미 BLG 결정을 함유하며, 이러한 경우, 추가의 시딩이 필요하지 않지만, 충분한 양의 결정화 시드를 확보하는 것이 대개 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b)는 BLG의 과포화도를 바람직하게는 BLG의 결정화가 즉시, 즉, 최대 20분 내에, 그리고 바람직하게는 최대 5분 내에 개시하는 과포화도로 더욱더 증가시키는 단계를 포함한다. 이는 또한 결정자가 자발적으로 형성되고, 결정화 공정을 시작하는 핵생성 구역으로 지칭된다.
과포화도는 다음 중 하나 이상에 의해 예를 들어 증가될 수 있다:
- 초기 단백질 용액의 단백질 농도를 추가로 증가시키는 것
- 초기 단백질 용액을 추가로 냉각시키는 것
- 초기 단백질 용액을 BLG 결정화를 위한 최적의 pH에 가깝도록 하는 것
- 전도도를 더욱더 감소시키는 것.
추가의 유형 A 또는 B 단백질 공급물의 첨가에 의해 초기 단백질 용액의 단백질 농도를 추가로 증가시키고/시키거나 초기 단백질 용액을 BLG 결정화를 위한 최적의 pH (대략 pH 5.5)에 가깝도록 하는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b)는 BLG 결정이 형성되도록 기다리는 단계를 포함한다. 이는 수시간이 소요될 수 있으며, BLG에 대해 오직 약간 과포화되고, 결정화 시드가 첨가되지 않았던 초기 단백질 용액에 대해 전형적이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액(단계 a)의 제공 및 BLG의 결정화(단계 b)는 2개의 별도의 단계로 발생한다. 그러나, 초기 단백질 용액이 이미 적어도 일부 BLG 결정을 함유하는 경우, 단계 b)는 초기 단백질 용액이 제조되었던 순간에 시작한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b)는 바람직하게는 BLG의 과포화도를 상승시키거나, 적어도 과포화를 유지하기 위해 결정화 단백질 용액의 추가의 조절을 포함한다. 추가의 조절은 바람직하게는 BLG 결정의 수율을 증가시키거나, 예를 들어 더 크고, 더 균일한 결정 크기 형태의 더 양호한 품질의 BLG 결정을 제공한다.
이러한 추가의 조절은 다음 중 하나 이상을 포함할 수 있다:
- 결정화 단백질 용액의 단백질 농도를 더욱더 증가시키는 것
- 결정화 단백질 용액을 더욱더 저온으로 냉각시키는 것
- 결정화 단백질 용액을 BLG 결정화를 위한 최적의 pH에 더욱더 가깝도록 하는 것
- 결정화 단백질 용액의 전도도를 더욱더 감소시키는 것.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 결정화 단백질 용액은 단계 b) 동안 준안정성 구역에서 유지되어 신규 결정자의 자발적 형성을 피한다.
추가의 유형 A 또는 B 단백질 공급물의 첨가에 의해 결정화 단백질 용액의 단백질 농도를 추가로 증가시키고/증가시키거나 결정화 단백질 용액을 BLG 결정화를 위한 최적의 pH (대략 pH 5.5)에 더 가깝도록 하는 것이 특히 바람직하다. pH 조절은 바람직하게는 자발적 결정화 또는 큰 국소적 pH 차이를 피하기 위해 천천히 수행된다. 0.05 내지 0.5 pH 단위/시간 범위의 pH 조절 속도가 제어된 BLG 결정화에 이로운 것으로 발견되었다.
결정화 단백질 용액의 온도는 단계 b) 동안 초기 단백질 용액의 온도보다 적어도 2℃, 바람직하게는 초기 단백질 용액의 온도보다 적어도 4℃, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6℃ 더 낮은 온도로 감소시키는 것이 추가로 특히 바람직하다. 그러나, 결정화 단백질 용액은 완전히 동결되지 않는 것이 바람직하다.
본 발명자들은 최대 BLG 결정화 수율이 대략 pH 5.5에서 수득되며, 초기 단백질 용액의 pH는 이롭게는 최적값 밖에서 선택되지만, 예를 들어 식품 산의 첨가에 의해 또는 보다 바람직하게는 추가의 유형 B 단백질 공급물 또는 유형 A 단백질 공급물에 의해 결정화 동안 최적의 pH에 가깝게 이동될 수 있음을 관찰하였다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 초기 단백질 용액의 pH는 5.0 내지 5.3, 또는 5.7 내지 6.0 범위이다. 본 발명의 바람직한 이러한 실시형태에서, 결정화 단백질 용액의 pH를 바람직하게는 추가의 유형 A 단백질 공급물 또는 추가의 유형 B 단백질 공급물의 첨가에 의해 초기 단백질 용액의 pH보다 pH 5.5에 가깝도록 결정화 단백질 용액의 pH를 조절하는 것이 추가로 바람직하다. 결정화 단백질 용액을 결정화 동안 대략 pH 5.5로 조절하는 것이 특히 바람직하다. 결정화 단백질 용액을 조절하기 위해 사용되는 추가의 유형 A 단백질 공급물 또는 추가의 유형 B 단백질 공급물은 바람직하게는 결정화 단백질 용액과 동일하거나, 더 낮은 전도도를 갖는다. 결정화 동안 상기 언급된 pH 조절을 결정화 단백질 용액의 온도의 감소와 조합하여 결정화 단백질 용액이 예를 들어 동시에 또는 순차적으로 초기 단백질 용액의 온도 미만인 온도로 냉각되도록 하는 것이 추가로 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서:
- 단계 a)의 초기 단백질 용액의 pH는 5.0 내지 5.3, 또는 5.7 내지 6.0 범위이고, 초기 단백질 용액의 온도는 5 내지 20℃ 범위이고,
- 단계 b) 동안, 결정화 단백질 용액의 pH는 바람직하게는 초기 단백질 용액의 pH가 5.0 내지 5.3 범위인 경우, 추가의 유형 A 단백질 공급물의 첨가에 의해, 또는 초기 단백질 용액의 pH가 5.7 내지 6.0 범위인 경우, 추가의 유형 B 단백질 공급물의 첨가에 의해, 5.4 내지 5.6 범위의 pH로 조절되고,
- 단계 b) 동안, 결정화 단백질 용액의 온도는 초기 단백질 용액의 온도보다 적어도 2℃ 더 낮은 온도로 감소된다.
용어 "추가의 유형 A 단백질 공급물" 및 "추가의 유형 B 단백질 공급물"은 초기 단백질 용액에 첨가되어 결정화를 유발하거나, 결정화 단백질 용액에 첨가되어 적어도 이의 pH 및 BLG 함량을 개질하는 BLG 함유 조성물에 관한 것이다. "유형 A 단백질 공급물" 및 "유형 B 단백질 공급물"의 맥락에서 기재된 특성 및 선호도는 각각 "추가의 유형 A 단백질 공급물" 및 "추가의 유형 B 단백질 공급물"에 동일하게 적용된다.
본 발명자들은 x-선 결정학에 의해 단리된 BLG 결정의 결정 격자 구조를 결정하였으며, 종래 기술에서 유사한 결정을 발견하지 않았다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b) 동안 수득된 BLG 결정 중 적어도 일부는 사방정계 공간군 P 21 21 21을 갖는다.
바람직하게는, 수득된 BLG 결정 중 적어도 일부는 사방정계 공간군 P 21 21 21 및 단위 셀 치수 a=68.68(±5%) Å, b = 68.68(±5%) Å, 및 c = 156.65 Å; 및 단위 셀 통합 각도 α=90도, β=90도, 및 γ=90도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 수득된 BLG 결정 중 적어도 일부는 사방정계 공간군 P 21 21 21 및 단위 셀 치수 a=68.68(±2%) Å, b = 68.68(±2%) Å, 및 c = 156.65(±2%) Å; 및 단위 셀 통합 각도 α=90도, β=90도, 및 γ=90도를 갖는다.
더욱더 바람직하게는, 수득된 BLG 결정 중 적어도 일부는 사방정계 공간군 P 21 21 21 및 단위 셀 치수 a=68.68(±1%) Å, b = 68.68(±1%) Å, 및 c = 156.65(±1%) Å; 및 단위 셀 통합 각도 α=90도, β=90도, 및 γ=90도를 가질 수 있다.
가장 바람직하게는, 수득된 BLG 결정 중 적어도 일부는 사방정계 공간군 P 21 21 21 및 단위 셀 치수 a=68.68 Å, b = 68.68 Å, 및 c = 156.65 Å; 및 단위 셀 통합 각도 α=90도, β=90도, 및 γ=90도를 갖는다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 BLG 결정 중 적어도 일부를 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계 c)를 포함한다. 이는 특히 BLG의 정제를 원할 때, 바람직하다.
단계 c)는 예를 들어 BLG 결정을 적어도 30% w/w의 고형분 함량으로 분리하는 단계를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 40% w/w의 고형분 함량으로 분리하는 단계를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 50% w/w의 고형분 함량으로 분리하는 단계를 포함한다.
본 발명자들은 분리된 BLG 결정에 부착되는 수성 부분이 전형적으로는 피해야 하는 불순물을 함유하기 때문에 높은 고형분 함량이 BLG의 정제에 이로운 것을 발견하였다. 추가적으로, 높은 고형분 함량은 분리된 BLG 결정을 예를 들어 분말과 같은 건조 생성물로 전환시키기 위한 에너지 소비를 감소시키며, 이는 소정의 용량을 갖는 건조 유닛으로부터 수득되는 BLG 수율을 증가시킨다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 60%의 고형분 함량으로 분리시키는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 70%의 고형분 함량으로 분리시키는 단계를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 80%의 고형분 함량으로 분리시키는 단계를 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 c)의 분리는 다음 작동 중 하나 이상을 포함한다:
- 원심 분리,
- 디켄테이션,
- 여과,
- 침강,
- 상기의 조합.
이들 유닛 작동은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 용이하게 구현된다. 여과에 의한 분리는 예를 들어 진공 여과, 동적 직교류식 여과(DCF), 여과액 프레스, 또는 필터 원심 분리의 사용을 포함할 수 있다.
여과를 위한 상이한 기공 크기가 소기의 결과물을 기반으로 이용될 수 있다. 바람직하게는, 필터는 고유의 훼이 단백질 및 작은 응집체가 통과되도록 하지만, BLG 결정은 유지한다. 필터는 바람직하게는 적어도 0.1 마이크론의 공칭 기공 크기를 갖는다. 필터는 예를 들어 적어도 0.5 마이크론의 공칭 기공 크기를 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 필터는 적어도 2 마이크론의 공칭 기공 크기를 가질 수 있다.
더 큰 기공 크기를 갖는 필터가 또한 사용될 수 있으며, 사실상 주로 큰 결정이 BLG 결정을 함유하는 액체로부터 분리되어야 하는 경우, 바람직하다. 본 발명의 일부 실시형태에서, 필터는 적어도 5 마이크론의 공칭 기공 크기를 갖는다. 바람직하게는, 필터는 적어도 20 마이크론의 공칭 기공 크기를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 필터는 적어도 40 마이크론의 기공 크기를 가질 수 있다.
필터는 예를 들어 0.1 내지 5000 마이크론과 같은 0.03 내지 5000 마이크론 범위의 기공 크기를 예를 들어 가질 수 있다. 바람직하게는, 필터는 0.5 내지 1000 마이크론 범위의 기공 크기를 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 필터는 예를 들어 10 내지 500 마이크론 범위, 또는 50 내지 500 마이크론 범위와 같은 5 내지 800 범위의 기공 크기를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 필터는 0.03 내지 100 마이크론 범위의 기공 크기를 갖는다. 바람직하게는, 필터는 0.1 내지 50 마이크론 범위의 기공 크기를 가질 수 있다. 보다 바람직하게는, 필터는 4 내지 40 마이크론 범위의 기공 크기를 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 필터는 5 내지 30 마이크론 범위, 예컨대 10 내지 20 마이크론 범위의 기공 크기를 가질 수 있다.
1 마이크론 초과의 기공 크기를 갖는 필터를 사용하는 이점은 세균 및 다른 미생물이 또한 분리 동안 및 선택적으로 또한 세정 및/또는 재결정 동안 적어도 일부 제거된다는 것이다. 따라서, 본 방법은 매우 낮은 세균 로딩량을 갖지만, 단백질의 열 손상은 피하는 고순도의 BLG를 생산할 수 있도록 만든다.
1 마이크론 초과의 기공 크기를 갖는 필터를 사용하는 또 다른 이점은 물의 제거 및 후속 건조가 더 용이하며, 더 적은 에너지를 소비하게 된다는 것이다.
BLG 결정으로부터 분리된 잔여 액체는 초기 단백질 용액의 제조 동안 하나 이상의 단백질 공급물로 재활용될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 c)는 필터 원심 분리를 이용한다. 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 c)는 디켄터 원심 분리를 이용한다. 결과(WO 2018/115520호의 실시예 13 참조)는 모액으로부터 BLG 결정을 분리하기 위한 필터 원심 분리 및/또는 디켄터 원심 분리의 사용이 예를 들어 진공 여과보다 더 강한 작동을 제공하는 것으로 드러났다.
형성된 필터 케이크를 건조 가스로 건조시켜서 필터 케이크의 수분 함량을 감소시키고, 바람직하게는 필터 케이크를 필터로부터 박리할 수 있도록 만드는 것이 대개 바람직하다. 건조 가스의 사용은 분리 단계의 일부 또는 대안적으로는 필터 케이크가 직접 건조 식용 BLG 조성물로 전환되는 경우, 최종 건조 단계를 형성할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 c)는 DCF 유닛을 이용한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 c)는 BLG 결정을 유지할 수 있는 막이 장착된 DCF 유닛을 사용하여 수행되고, DCF 투과물은 재활용되어 초기 단백질 용액 또는 단백질 공급물 중 일부를 형성하고, DCF 보유물(retentate)은 회수되거나, 결정화 탱크로 복귀될 수 있다. 바람직하게는, DCF 투과물은 예를 들어 한천여과/투석여과에 의해 처리되어 초기 단백질 용액 또는 단백질 공급물과 혼합되기 전에 BLG에 대해 과포화되도록 만든다.
이롭게는, 이들 실시형태는 액체 스트림의 온도가 15℃ 초과로 상승되는 것이 필요하지 않으며, 따라서 더 높은 온도를 필요로 하는 방법의 변형보다 미생물 오염에 대한 경향성이 더 적다. 이들 실시형태의 또 다른 산업적 이점은 과포화 수준이 용이하게 제어되며, 원하지 않는 자발적 결정화가 일어나지 않는 수준으로 유지될 수 있다는 것이다. 따라서, 본 방법의 이들 실시형태 동안 액체 스트림의 온도는 바람직하게는 최대 15℃, 보다 바람직하게는 최대 12℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃이다.
이들 실시형태는 WO 2018/115520호의 실시예 10에 예시된다. 이들 실시형태는 배치(batch) 방법 또는 연속식 방법으로 구현될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 BLG 결정, 예를 들어 c)의 분리된 BLG 결정을 세정하는 단계 d)를 포함한다. 세정은 단일 세정 또는 다수의 세정 단계로 구성될 수 있다.
단계 d)의 세정은 바람직하게는 BLG 결정을 완전히 용해시키지 않으면서 BLG 결정을 세정 액체와 접촉시키는 단계 및 이후 잔여 BLG 결정을 세정 액체로부터 분리하는 단계를 포함한다.
세정 액체는 바람직하게는 BLG 결정의 완전한 용해를 피하도록 선택되며, 예를 들어 차가운 탈염수, 차가운 수돗물, 또는 차가운 역삼투 투과물을 포함하거나, 심지어 이로 본질적으로 구성될 수 있다.
세정 액체는 5 내지 6 범위, 바람직하게는 5.0 내지 6.0 범위, 그리고 더욱더 바람직하게는 예를 들어 5.1 내지 5.9 범위와 같은 5.1 내지 6.0 범위의 pH를 가질 수 있다.
세정 액체는 최대 0.1 mS/cm, 바람직하게는 최대 0.02 mS/cm, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0.005 mS/cm의 전도도를 가질 수 있다.
더욱더 낮은 전도도를 갖는 세정 액체가 사용될 수 있다. 예를 들어, 세정 액체는 최대 1 마이크로S/cm의 전도도를 가질 수 있다. 대안적으로는, 세정 액체는 예를 들어 대략 0.05 마이크로S/cm와 같은 최대 0.1 마이크로S/cm의 전도도를 가질 수 있다.
세정 단계는 바람직하게는 결정화된 BLG의 용해를 제한하는 저온에서 수행된다. 세정 단계의 온도는 바람직하게는 최대 30℃, 보다 바람직하게는 최대 20℃, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 10℃이다.
세정 단계는 최대 5℃, 보다 바람직하게는 예를 들어 대략 0℃와 같은 최대 2℃에서 예를 들어 수행될 수 있다. 0℃ 미만의 온도는 세정 액체가 예를 들어 하나 이상의 빙점 저하제(들)의 존재로 인해 해당 온도에서 동결되지 않는 한, 사용될 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 세정 액체는 예를 들어 적어도 1% w/w의 양으로, 그리고 바람직하게는 예를 들어 4% w/w의 양과 같은 적어도 3% w/w의 양으로 BLG를 함유한다.
단계 d)의 세정은 전형적으로는 BLG 결정의 초기량의 최대 80% w/w, 바람직하게는 BLG 결정의 초기량의 최대 50% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 20% w/w를 용해시킨다. 바람직하게는, 단계 d)의 세정은 BLG 결정의 초기량의 최대 15% w/w, 보다 바람직하게는 BLG 결정의 초기량의 최대 10% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 5% w/w를 용해시킨다.
세정 액체의 총량과 분리된 BLG 결정의 초기량 사이의 중량비는 대개 적어도 1, 바람직하게는 적어도 2, 그리고 보다 바람직하게는 적어도 5이다. 예를 들어, 세정 액체의 양과 분리된 BLG 결정의 초기량 사이의 중량비는 적어도 10일 수 있다. 대안적으로는, 세정 액체의 총량과 분리된 BLG 결정의 초기량 사이의 중량비는 예를 들어 적어도 50 또는 적어도 100과 같은 적어도 20일 수 있다.
용어 "세정 액체의 총량"은 전체 공정 동안 사용되는 세정 액체의 총량에 관한 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 하나 이상의 세정 순서는 BLG 결정 분리와 동일한 필터 배열 또는 유사한 필터 배열에서 발생한다. 주로 BLG 결정을 함유하는 필터 케이크는 필터를 통해 제거되는 세정 액체의 하나 이상의 순서에 첨가되는 한편, BLG 결정의 잔여 부분은 필터 케이크에 남는다.
본 발명의 특히 바람직한 실시형태에서, 단계 c)의 분리를 BLG 결정을 유지하는 필터를 사용하여 수행된다. 이후, 필터 케이크는 필터 케이크와 필터를 통해 이동하는 하나 이상의 분량의 세정 액체와 접촉되다. 세정 액체의 각각의 분량은 예를 들어 필터 케이크의 부피의 최대 0.2배와 같이 필터 케이크의 부피의 최대 10배, 바람직하게는 필터 케이크의 부피의 최대 5배, 보다 바람직하게는 필터 케이크의 부피의 최대 1배, 더욱더 바람직하게는 필터 케이크의 부피의 최대 0.5배인 것이 대개 바람직하다. 필터 케이크의 부피는 필터 케이크의 고형분 및 유체(액체 및 가스) 둘 모두를 포함한다. 필터 케이크는 이러한 방식으로 바람직하게는 적어도 2 차례, 바람직하게는 적어도 4 차례, 그리고 더욱더 바람직하게는 적어도 6 차례 세정된다.
단계 d)로부터의 사용된 세정 액체는 단백질 공급물 또는 초기 단백질 용액으로 예를 들어 재활용될 수 있으며, 여기서, 세정 제거된 BLG는 다시 단리될 수 있다.
방법은 재결정 단계를 포함하는 단계 e)를 추가로 포함할 수 있다. 재결정 단계는 다음을 예를 들어 포함할 수 있다:
- 분리된 BLG 결정을 재결정 액체 중에 용해시키는 단계,
- 재결정 액체를 조절하여 BLG에 대한 과포화를 수득하는 단계,
- 과포화된, 조절된 재결정 액체 중에서 BLG을 결정화하는 단계, 및
- BLG 결정을 조절된 잔여 재결정 액체로부터 분리하는 단계.
대안적으로 그리고 대개 보다 바람직하게, 분리된 BLG 결정은 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들) 및 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)로 전환되며, 이들은 조합되어 단계 a)에서와 같이 과포화된 신규 단백질 용액, 예를 들어 훼이 단백질 용액을 형성하고, 신규 단백질 용액 BLG는 다시 결정화된다.
단계 e)는 단일 재결정 순서 또는 다수의 재결정 순서를 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 단계 c) 또는 d)의 BLG 결정은 적어도 2 차례 재결정된다. 예를 들어, BLG 결정은 예를 들어 적어도 4 차례와 같은 적어도 3 차례 재결정될 수 있다.
세정 및 재결정 단계는 임의의 순서로 조합될 수 있으며, 필요한 경우 다수의 차례로 수행될 수 있다.
단계 c)의 분리된 BLG 결정은 예를 들어
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d)에 이어서,
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e)의 공정 순서에 적용될 수 있다.
대안적으로, 단계 c)의 분리된 BLG 결정은
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e)에 이어서,
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d)의 공정 순서에 적용될 수 있다.
예를 들어
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d),
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e),
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d), 및
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e)의 순서로,
또는 예를 들어
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e),
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d),
- 하나 이상의 재결정 단계(단계 e).
- 하나 이상의 세정 단계(단계 d)의 순서로 세정 및 재결정의 다수의 단계를 조합하는 것이 또한 가능하다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 방법은 분리된 BLG를 예를 들어 크로마토그래피 또는 선택적 여과를 기반으로 하는 추가의 BLG 농축 단계에 적용하는 단계를 추가로 포함한다. 그러나, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 방법은 단계 b) 후에 추가의 BLG 농축 단계를 포함하지 않는다. 용어 "추가의 BLG 농축 단계"란, 단백질 총량에 대해 BLG를 농축하는 공정 단계를 의미하며, 이러한 단계는 BLG의 결정화 또는 BLG 결정의 취급과 관련되지 않는다. 이러한 추가의 BLG 농축 단계의 일 예는 이온 교환 크로마토그래피이다. BLG 결정의 세정 및/또는 BLG의 재결정은 "추가의 BLG 농축 단계"로 간주되지 않는다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 방법은 건조 단계 f)를 포함하며, 여기서, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 건조 조성물로 전환된다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "건조"는 당해 조성물 또는 생성물이 최대 6% w/w의 물 그리고 바람직하게는 심지어 그 미만을 포함함을 의미한다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "BLG-함유 조성물"은 단계 f)의 건조에 적용되는 조성물을 설명하는 데 사용된다.
본 발명의 맥락에서, "단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물"은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터의 적어도 일부의 BLG를 포함하는 조성물을 의미한다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, "단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물"은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 직접 수득된다. 그러나, 본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, "단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물"은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 직접 수득된 조성물의 추가의 처리의 결과이다.
BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 직접 수득된 조성물 중에 존재하는 유의한 양의 BLG를 함유하는 것이 대개 바람직하다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 수득된 적어도 50% w/w의 BLG, 바람직하게는 적어도 70%, 그리고 더욱더 바람직하게는 적어도 80%를 포함한다.
바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 수득된 적어도 85% w/w의 BLG를 포함한다. 보다 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 수득된 적어도 90% w/w의 BLG를 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 수득된 적어도 95% w/w의 BLG를 포함한다. 가장 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 수득된 100% w/w의 BLG를 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 단계는 분무 건조, 동결 건조, 스핀-플래시 건조(spin-flash drying), 회전식 건조, 및/또는 유동층 건조 중 적어도 하나를 포함한다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 단계는 BLG 결정이 용해되었던 BLG-함유 조성물을 포함하며, 여기서, 생성된 분말은 단계 b)에 의해 또는 건조 단계 전에 재결정에 의해 형성된 BLG 결정을 함유하지 않는다. 이들 실시형태는 식용 BLG 조성물이 예를 들어 종래의 건조된 훼이 단백질 분말의 것과 유사하여야 하는 경우, 바람직하다.
BLG 결정은 다음에 의해 예를 들어 용해될 수 있다:
- 온도를 증가시키는 것,
- 예를 들어 하나 이상의 염의 첨가에 의해 전도도를 증가시키는 것,
- 예를 들어 범위 5 내지 6 밖으로 pH를 변화시키는 것,
- 예를 들어 희석에 의해 BLG의 농도를 감소시키는 것,
- 또는 상기의 조합.
분무 건조는 BLG 결정을 함유하지 않는 BLG-함유 조성물을 건조하는 본원에서 바람직한 방법이다.
본 발멸의 특히 바람직한 다른 실시형태에서, 건조 단계는 여전히 BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물을 포함하며, 여기서 생성된 분말은 BLG 결정을 함유한다. 이들 실시형태는 식용 BLG 조성물이 종래의 건조된 훼이 단백질 분말보다 더 높은 밀도를 가져야 하는 경우, 바람직하다.
본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 단계는 여전히 BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물을 포함하며, 여기서, 생성된 분말은 BLG 분말을 함유한다. 이들 실시형태는 식용 BLG 조성물이 종래의 건조된 훼이 단백질 분말보다 더 높은 밀도를 가져야 하는 경우, 바람직하다.
WO 2018/115520호의 실시예 7에 문서화된 바와 같이, 본 발명자들은 BLG의 슬러리를 분무 건조하고, 건조된 BLG 결정이 차가운 탈염수 중에 재현탁될 때, 적어도 일부의 결정 구조를 유지하는 것이 가능함을 이전에 발견하였다. BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물을 분무 전에 유의한 양의 BLG 결정을 용해시키는 열처리 체제에 노출하는 것은 피하는 것이 특히 이롭다. 따라서, BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물의 사전 가열이 분무 전에 사용되는 경우, 열 로딩을 조심스럽게 제어하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일부 실시형태에서, BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물은 분무 장치(예를 들어, 노즐 또는 원자화 장치)의 배출구에 도달할 때, 최대 70℃, 바람직하게는 최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃의 온도를 갖는다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물은 분무 장치의 배출구에 도달할 때, 최대 40℃, 바람직하게는 최대 30℃, 보다 바람직하게는 최대 20℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 갖는다.
분무 건조기의 분무 장치는 건조되는 용액 또는 현탁액을 분무-건조기의 건조 챔버로 유입되는 액적으로 전환시키는 장치, 예를 들어 노즐 또는 원자화 장치이다.
BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물은 분무 장치의 배출구에 도달할 때, 0 내지 50℃ 범위, 바람직하게는 분무 장치의 배출구에 도달할 때, 2 내지 40℃ 범위, 보다 바람직하게는 4 내지 35℃ 범위, 그리고 가장 바람직하게는 5 내지 10℃ 범위의 온도를 갖는 것이 특히 바람직하다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG-함유 조성물은 분무 장치의 배출구에 도달할 때, 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%, 보다 바람직하게는 적어도 60%, 더욱더 바람직하게는 적어도 80%, 그리고 가장 바람직하게는 예를 들어 바람직하게는 97 내지 100%와 같은 적어도 90%의 BLG의 결정도를 갖는다. BLG-함유 조성물은 BLG 단리물일 수 있으며, 예를 들어, 총 단백질에 대해 90% w/w 초과의 양으로 BLG를 함유할 수 있거나, 이는 유의한 양의 다른 단백질을 함유할 수 있으며, 따라서 총 단백질에 대해 최대 90% w/w의 양으로 BLG를 함유할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG-함유 조성물은 본원에 기재된 전통적 액체 WPC 또는 WPI, 또는 전통적 액체 SPC 또는 SPI의 단백질 조성물을 가질 수 있지만, 분무 장치의 배출구에 도달할 때, 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%, 보다 바람직하게는 적어도 60%, 더욱더 바람직하게는 적어도 80%, 그리고 가장 바람직하게는 예를 들어 바람직하게는 97 내지 100%와 같은 적어도 90%의 BLG의 결정도를 갖는다.
분무 건조기의 가스의 주입구 온도는 바람직하게는 140 내지 220℃ 범위, 보다 바람직하게는 160 내지 200℃ 범위, 그리고 더욱더 바람직하게는 예를 들어 바람직하게는 대략 180℃와 같은 170 내지 190℃ 범위이다. 분무 건조기로부터의 가스의 배출구 온도는 바람직하게는 50 내지 95℃ 범위, 보다 바람직하게는 70 내지 90℃ 범위, 그리고 더욱더 바람직하게는 예를 들어 바람직하게는 대략 85℃와 같은 80 내지 88℃ 범위이다. 경험에 의한 법칙으로서, 분무 건조에 적용되는 고형분은 가스 배출 온도보다 10 내지 15℃ 더 낮은 온도로 가열된다고 한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 분무 건조기는 바람직하게는 50 내지 85℃ 범위, 보다 바람직하게는 60 내지 80℃ 범위, 그리고 더욱더 바람직하게는 예를 들어 바람직하게는 대략 70℃와 같은 65 내지 75℃ 범위이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조되는 BLG-함유 조성물은 건조 BLG 단리물과 혼합되어 고형분 함량을 혼합물이 유동층 건조에 의해 건조될 수 있는 수준으로 상승시킨다. 이는 또한 역혼합으로도 지칭되며, BLG 생성물이 매우 비용 효율적으로 건조되도록 한다. 이들 실시형태는 BLG 결정을 함유하는 BLG-함유 조성물에 대해 특히 바람직하다.
본 방법의 이점은 건조되는 BLG-함유 조성물이 건조 단계 전에 매우 높은 고형분 함량을 가질 수 있으며, 따라서 더 적은 물이 제거되어야 하고, 더 적은 에너지가 건조 작동에서 소비된다는 것이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 적어도 20% w/w의 고형분 함량을 갖는다. 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 적어도 30% w/w의 고형분 함량을 갖는다. 보다 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 적어도 40% w/w의 고형분 함량을 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 예를 들어 적어도 60% w/w와 같은 적어도 50% w/w의 고형분 함량을 갖는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 20 내지 80% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다. 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 30 내지 70% w/w범위의 고형분 함량을 갖는다. 보다 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 40 내지 65% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물은 예를 들어 대략 60% w/w와 같은 50 내지 65% w/w 범위의 고형분 함량을 갖는다.
본 발명자들은 BLG-함유 조성물의 결정도가 높을수록, 더 적은 물이 BLG-함유 조성물에 결합되며, BLG-함유 조성물의 더 높은 총 고형분 함량이 건조 단계 전에 획득될 수 있음을 발견하였다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG-함유 조성물은 적어도 10% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 바람직하게는, BLG-함유 조성물은 적어도 20% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, BLG-함유 조성물은 적어도 30% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, BLG-함유 조성물은 적어도 40% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다.
더욱더 높은 결정도가 대개 바람직하다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG-함유 조성물의 BLG는 적어도 50% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 바람직하게는, BLG-함유 조성물의 BLG는 적어도 60% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, BLG-함유 조성물의 BLG는 적어도 70% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, BLG-함유 조성물의 BLG는 적어도 80% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다. 가장 바람직하게는, BLG-함유 조성물의 BLG는 적어도 90% w/w, 바람직하게는 적어도 95% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 97% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 적어도 99% w/w의 BLG의 결정도를 갖는다.
본 발명자들은 물의 감소된 함량이 조성물 중의 BLG의 결정도를 증가시키는 경향이 있음을 발견하였다. 따라서, 높은 물:BLG 비를 갖는 조성물(예를 들어, 물 중에 4%의 BLG 결정의 현탁액)은 동일한 조건에서 더 낮은 물:BLG 비(예를 들어, 필터 케이크 또는 습윤, 단리된 결정)를 갖는 조성물이 갖는 것보다 BLG의 더 낮은 결정도를 갖는 경향이 있다.
본 발명의 방법은 BLG 또는 초기 단백질 용액 중의 다른 훼이 단백질 둘 모두의 영양가를 손상시키지 않는 온화한 온도를 사용하여 작동될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG는 방법 동안 90℃ 초과의 온도에 적용되지 않는다. 바람직하게는, BLG는 방법 동안 80℃ 초과의 온도에 적용되지 않는다. 더욱더 바람직하게는, BLG는 방법 동안 75℃ 초과의 온도에 적용되지 않는다. 분무 건조가 대개 150℃ 초과의 온도를 이용하더라도, 짧은 노출 시간 및 물의 동시 증발은 분무 건조된 단백질이 50 초과 내지 70℃의 온도를 경험하지 않음을 의미하는 것을 유의하여야 한다.
본 발명자들은 건조 단계 동안 연장된 가열이 결정 형태인 BLG의 양을 감소시키는 징후를 확인하였다. 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 단계 동안 열 노출은 최대 10%, 바람직하게는 최대 4%, 보다 바람직하게는 최대 1%, 더욱더 바람직하게는 최대 0.4%, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0.1%의 BLG의 변성도를 제공할만큼 충분히 낮게 유지된다. 가장 바람직하게는, 건조 단계는 검출 가능한 BLG의 변성이 전혀 생성되지 않는다.
건조 단계에 의해 초래된 변성도는 단계 f)에서 건조되는 BLG-함유 조성물 중의 BLG 함량(총 고형분에 대해)(C단계 f 전) 및 재용해되는, 건조된 조성물 중의 BLG 함량(총 고형분에 대해)을 결정하고, 다음 식을 사용하여 계산된다:
변성도 = ((C단계 f 전 - C단계 f 후)/C단계 f 전) * 100%
본 발명의 바람직한 일부 실시형태는 결정화된 형태의 베타-락토글로불린(BLG)를 포함하는 식용 조성물의 제조 방법에 관한 것이며, 방법은,
a) BLG 및 적어도 하나의 추가의 훼이 단백질을 포함하는 초기 단백질 용액을 제공하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖고, 상기 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 단계:
- 총 고형분에 대해 70 내지 100% w/w의 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w의 BLG, 그리고 바람직하게는 30 내지 70% w/w의 BLG,
- 총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w의 ALA, 그리고 바람직하게는 8 내지 35% w/w의 ALA,
- 단백질에 대해 0 내지 25% w/w의 CMP,
- 초기 단백질 용액의 총 중량에 대해 적어도 10% w/w의 단백질,
b) 바람직하게는 결정화 시드의 첨가에 의해 BLG를 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
f) 단계 b)의 BLG 결정 함유 용액 또는 이의 농축물을 건조하는 단계로서, 상기 BLG 결정 함유 용액은 바람직하게는 적어도 30%의 BLG의 결정도를 갖는, 단계를 포함하며,
방법은 단계 c), d), 또는 e)를 포함하지 않는다.
초기 단백질 용액은 바람직하게는 탈염된 단백질 용액이며, 바람직하게는 최대 0.3의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비 및/또는 최대 7 mS/cm의 UF 투과 전도도를 갖는다.
이들 실시형태에서, BLG 결정은 BLG 결정 함유 용액으로부터 분리되지 않지만, 건조되고, 분말 형태의 고밀도의 식용 단백질 조성물을 생성한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태는 결정화된 형태의 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법에 관한 것이며, 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) BLG 및 적어도 하나의 추가의 훼이 단백질을 포함하는 초기 단백질 용액을 제공하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖고, 상기 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 단계:
- 총 고형분에 대해 70 내지 100% w/w의 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w, 그리고 바람직하게는 30 내지 70% w/w의 BLG,
- 총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w, 그리고 바람직하게는 8 내지 35% w/w의 ALA,
- 단백질에 대해 0 내지 25% w/w의 CMP,
- 초기 단백질 용액의 총 중량에 대해 적어도 10% w/w의 단백질,
b) 바람직하게는 결정화 시드의 첨가에 의해 BLG를 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계,
d) 선택적으로, 단계 c)로부터 수득된, 분리된 BLG 결정을 세정하는 단계,
e) 선택적으로, 단계 c) 또는 d)로부터 수득된 BLG 결정을 재결정하는 단계, 및
f) 단계 c), d), 또는 e)로부터 유래되고, 바람직하게는 이로부터 직접 수득된 BLG-함유 용액을 건조하는 단계로서, BLG-함유 용액은 BLG 결정을 포함하고, 바람직하게는 적어도 30%의 BLG의 결정도를 갖는, 단계,
초기 단백질 용액은 바람직하게는 탈염된 단백질 용액이며, 바람직하게는 최대 0.3의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비 및/또는 최대 7 mS/cm의 UG 투과 전도도를 갖는다.
이들 실시형태는 고밀도 분말 형태의 낮은 미네랄 및 낮은 인의 식용 BLG 조성물을 제조하기에 특히 유용하다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시형태는 단리된 형태의 베타-락토글로불린을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법에 관한 것이며, 방법은 다음 단계를 포함한다:
a) BLG 및 적어도 하나의 추가의 훼이 단백질을 포함하는 초기 단백질 용액을 제공하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖고, 상기 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 단계:
- 총 고형분에 대해 70 내지 100% w/w의 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 90% w/w의 BLG, 그리고 바람직하게는 30 내지 70% w/w의 BLG,
- 총 단백질에 대해 4 내지 50% w/w의 ALA, 그리고 바람직하게는 8 내지 35% w/w의 ALA,
- 단백질에 대해 0 내지 25% w/w의 CMP,
- 초기 단백질 용액의 총 중량에 대해 적어도 10% w/w의 단백질,
b) 바람직하게는 결정화 시드의 첨가에 의해 BLG를 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계,
d) 선택적으로, 단계 c)로부터 수득된, 분리된 BLG 결정을 세정하는 단계,
e) 선택적으로, 단계 c) 또는 d)로부터 수득된 BLG 결정을 재결정하는 단계, 및
f) 단계 c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물을 건조하는 단계로서, BLG-함유 조성물은 BLG 결정을 포함하지 않는, 단계.
초기 단백질 용액은 바람직하게는 탈염된 단백질 용액이며, 바람직하게는 최대 0.3의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비 및/또는 최대 7 mS/cm의 UF 투과 전도도를 갖는다.
이들 실시형태에서, BLG 결정은 건조 전에 용해된다.
바람직한 일부 실시형태에서, 본 방법은 배치 공정으로서 구현된다. 대안적으로 그리고 때때로 바람직하게는, 방법은 반-배치(semi-batch) 공정으로서 구현될 수 있다. 바람직한 다른 실시형태에서, 방법은 연속식 공정으로서 구현된다.
본 방법의 이점은 종래 기술의 BLG 결정화에 필적하는 방법보다 훨씬 더 빠르다는 것이다. 단백질 공급물의 초기 조절에서 단계 c의 분리의 완료까지의 지속 기간은 최대 10시간, 바람직하게는 최대 4시간, 보다 바람직하게는 최대 2시간, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 1시간일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, BLG 결정이 단계 c)에서 분리되었던 후에 남은 BLG-함유 용액은 수집되고, 식품 제조에서의 성분으로서 직접 사용되거나, 모든 목적을 위해 본원에 인용되어 포함된 WO 2020/002,422호의 PCT 출원에 따라 추가의 처리에 적용된다. 그러한 경우, 본 방법은 식용 BLG 조성물 외에 식용, 알파-락트알부민 농축된 훼이 단백질 조성물을 제공한다.
식용 BLG 조성물은 바람직하게는 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w의 양의 BLG 및 총 고형분에 대해 적어도 30% w/w의 총 단백질의 양을 함유한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물의 BLG는 최대 1의 락토실화 정도를 갖는다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 최대 0.6의 락토실화 정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 최대 0.4의 락토실화 정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 최대 0.2의 락토실화 정도를 갖는다. 가장 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 예를 들어 바람직하게는 최대 0.01과 같은 최대 0.1의 락토실화 정도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 90% w/w의 비-락토실화 BLG, 바람직하게는 적어도 95% w/w의 비-락토실화 BLG, 그리고 더욱더 바람직하게는 적어도 98% w/w의 비-락토실화 BLG를 포함한다.
비-락토실화 BLG의 백분율은 WO 2018/115520호의 실시예 9.1에 따라 결정된다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 10% w/w의 결정도를 갖는다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 20% w/w의 결정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 30% w/w의 결정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 40% w/w의 결정도를 갖는다.
더욱더 높은 결정도가 대개 바람직하다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 50% w/w의 결정도를 갖는다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 60% w/w의 결정도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 70% w/w의 결정도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 80% w/w의 결정도를 갖는다. 가장 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 BLG는 적어도 90% w/w, 그리고 바람직하게는 적어도 95% w/w의 결정도를 갖는다.
5 내지 6 범위의 pH를 갖는 액체 중의 BLG의 결정도는 WO 2018/115520호의 실시예 9.7에 따라 측정된다. 분말화 물질 중의 BLG의 결정도는 WO 2018/115520호의 실시예 9.8에 따라 결정된다. 식용 조성물이 건조 생성물이지만, 분말의 형태가 아닌 경우, 이는 WO 2018/115520호의 실시예 9.8의 방법에 적용되기 전에, 예를 들어 분쇄 또는 밀링에 의해 분말로 전환되어야 한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 WPC, WPI, SPC, 또는 SPI이며, 여기서, BLG 중 적어도 일부는 결정 형태이다. 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 최대 90% w/w의 BLG를 예를 들어 포함할 수 있고, 적어도 10%의 BLG의 결정도를 가질 수 있다. 예를 들어, 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 최대 80% w/w의 BLG를 포함할 수 있고, 적어도 10%의 BLG의 결정도를 가질 수 있다. 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 30 내지 70% w/w의 BLG를 예를 들어 포함할 수 있고, 적어도 10%의 BLG의 결정도를 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 최대 90% w/w의 BLG를 포함하고, 적어도 30%의 BLG의 결정도를 갖는다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 최대 80% w/w의 BLG를 포함할 수 있고, 적어도 30%의 BLG의 결정도를 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질 총량에 대해 30 내지 70% w/w의 BLG를 포함할 수 있고, 적어도 30%의 BLG의 결정도를 가질 수 있다.
본 발명자들은 본 발명이 매우 낮은 함량의 인 및 기타 미네랄을 갖는 식용 훼이 단백질 생성물을 제조할 수 있도록 만드는 것을 발견하였으며, 이는 신장 질환을 앓거나, 달리 감소된 신장 기능을 갖는 환자에게 이롭다.
식용 BLG 조성물은 바람직하는 낮은 인 조성물이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "낮은 인"은 100 g의 단백질당 최대 100 mg의 인의 총 인 함량을 갖는 조성물, 예를 들어 액체, 분말, 또는 또 다른 식료품에 관한 것이다. 바람직하게는, 낮은 인 조성물은 100 g의 단백질당 최대 80 mg의 인의 총 함량을 갖는다. 보다 바람직하게는, 낮은 인 조성물은 100 g의 단백질당 최대 50 mg의 인의 총 함량을 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 낮은 인 조성물은 100 g의 단백질당 최대 20 mg의 인의 총 함량을 가질 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 낮은 인 조성물은 100 g의 단백질당 최대 5 mg의 인의 총 함량을 가질 수 있다. 본 발명에 따른 낮은 인 조성물은 감소된 신장 기능을 갖는 환자군에 대한 식료품의 제조를 위한 식품 성분으로서 사용될 수 있다.
따라서, 본 발명의 특히 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 100 g의 단백질당 최대 80 mg의 인을 포함한다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 100 g의 단백질당 최대 30 mg의 인을 포함한다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 100 g의 단백질당 최대 20 mg의 인을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 100 g의 단백질당 최대 10 mg의 인을 포함한다. 가장 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 100 g의 단백질당 최대 5 mg의 인을 포함한다.
인 함량은 당해 조성물의 원소 인의 총량에 관한 것이며, WO 2018/115520호의 실시예 9.5에 따라 결정된다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 낮은 미네랄 조성물이다.
본 발명의 맥락에서, 용어 "낮은 미네랄"은 다음 중 적어도 하나, 바람직하게는 2개, 그리고 더욱더 바람직하게는 전부를 갖는 조성물, 예를 들어 액체, 분말, 또는 또 다른 식료품에 관한 것이다:
- 총 고형분에 대해 최대 1.2% w/w의 애쉬 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.3% w/w의 칼슘과 마그네슘의 총 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.1% w/w의 나트륨과 칼슘의 총 함량,
- 100 g 단백질당 최대 100 mg 인의 총 인 함량.
바람직하게는, 낮은 미네랄 조성물은 다음 중 적어도 하나, 바람직하게는 2개 이상, 그리고 더욱더 바람직하게는 전부를 갖는다:
- 총 고형분에 대해 최대 0.7% w/w의 애쉬 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.2% w/w의 칼슘과 마그네슘의 총 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.08% w/w의 나트륨과 칼슘의 총 함량,
- 100 g 단백질당 최대 80 mg 인의 총 인 함량.
더욱더 바람직하게는, 낮은 미네랄 조성물은 다음 중 적어도 하나, 바람직하게는 2개 이상, 그리고 더욱더 바람직하게는 전부를 갖는다:
- 총 고형분에 대해 최대 0.5% w/w의 애쉬 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.15% w/w의 칼슘과 마그네슘의 총 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.06% w/w의 나트륨과 칼슘의 총 함량,
- 100 g 단백질당 최대 50 mg 인의 총 인 함량.
낮은 미네랄 조성물을 다음을 갖는 것이 특히 바람직하다:
- 총 고형분에 대해 최대 0.5% w/w의 애쉬 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.15% w/w의 칼슘과 마그네슘의 총 함량,
- 총 고형분에 대해 최대 0.06% w/w의 나트륨과 칼슘의 총 함량,
- 100 g 단백질당 최대 50 mg 인의 총 인 함량.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 식용 BLG 조성물의 총 고형분에 대해 적어도 25% w/w의 단백질 총량을 포함한다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 식용 BLG 조성물의 총 고형분에 대해 적어도 50% w/w의 단백질 총량을 포함한다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 식용 BLG 조성물의 총 고형분에 대해 적어도 75% w/w의 단백질 총량을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 식용 BLG 조성물의 총 고형분에 대해 적어도 90% w/w의 단백질 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물의 단백질의 총량은 총 고형분에 대해 25 내지 100% w/w 범위이다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 단백질의 총량은 총 고형분에 대해 50 내지 100% w/w 범위이다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 단백질의 총량은 총 고형분에 대해 75 내지 100% w/w 범위이다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물의 단백질의 총량은 총 고형분에 대해 90 내지 100% w/w 범위이다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 단백질의 총량에 대해 적어도 75% w/w의 BLG를 포함한다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질의 총량에 대해 적어도 90% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질의 총량에 대해 적어도 95% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질의 총량에 대해 적어도 97% w/w의 BLG를 포함할 수 있다. 가장 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 단백질의 총량에 대해 대략 100% w/w의 BLG를 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 최대 10% w/w의 탄수화물, 바람직하게는 최대 5% w/w의 탄수화물, 보다 바람직하게는 최대 1% w/w의 탄수화물, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 0.1% w/w의 탄수화물을 함유한다.
식용 BLG 조성물은 또한 예를 들어 트리글리세라이드 및/또는 다른 지질 유형, 예컨대 인지질의 형태의 지질을 포함할 수 있다.
본 발명의 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 총 고형분에 대해 최대 1% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 총 고형분에 대해 최대 0.5% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 총 고형분에 대해 최대 0.1% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 총 고형분에 대해 최대 0.05% w/w의 지질의 총량을 포함한다. 가장 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 총 고형분에 대해 최대 0.01% w/w의 지질의 총량을 포함한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 건조 조성물 그리고 예를 들어 분말이다. 식용 BLG 조성물은 분무 건조된 분말인 것이 특히 바람직하다.
본 발명자들은 BLG 중 적어도 일부가 건조될 때 결정 형태였던 분말 형태의 식용 BLG 조성물이 BLG 결정이 없는 필적하는 BLG 조성물보다 더 높은 밀도를 가짐을 관찰하였다(실시예 7 참조). 이러한 고밀도 효과는 매우 놀랍게도 분무 건조된 BLG 결정 슬러리로부터 수득된 분말 형태의 식용 BLG 조성물에 대해서도 관찰된다.
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.40 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 바람직하게는, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.45 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.50 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도를 갖는 것이 더욱더 바람직하다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.7 g/mL의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있다.
벌크 밀도의 이점은 BLG가 존재하는 거의 유일한 단백질인 식용 BLG 조성물의 분말 및 BLG의 농도가 초기 단백질 용액 중에 존재하였던 다른 단백질에 대해 농축되지 않았던 식용 BLG 조성물의 분말에 둘 모두 적용된다. 따라서, 본 발명은 단리된 BLG 및 유의한 양의 ALA와 BLG 이외의 다른 훼이 단백질을 포함하는 미정제 훼이 단백질 둘 모두의 고밀도 분말을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.45 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.50 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.7 g/mL의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.45 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.50 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.6 g/mL의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 적어도 0.7 g/mL의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다.
분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.40 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.45 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 분말화, 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화, 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.8 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다.
본 발명자들은 더 적은 포장 물질이 kg 분말당 필요하고, 더 많은 분말(질량)이 소정의 컨테이너 또는 트럭에 의해 수송될 수 있기 때문에, 본 발명의 고밀도 분말은 이롭게는 보다 비용 효율적인 분말의 포장 및 로지스틱이 가능하도록 함을 발견하였다.
분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.40 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.45 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.8 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖는다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.55 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.60 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.65 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 바람직하게는 0.70 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있다.
분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.40 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.45 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.8 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다.
분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.40 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.45 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.9 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.6 내지 0.8 g/mL 범위의 벌크 밀도를 예를 들어 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.55 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.60 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.65 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 바람직하게는 0.70 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 70% w/w의 단백질을 포함한다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 분말 형태의 식용 BLG 조성물은 0.50 내지 1.5 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.55 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 보다 바람직하게는, 분말화 식용 BLG 조성물은 0.60 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다. 분말화 식용 BLG 조성물은 0.65 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 갖고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함하는 것이 더욱더 바람직하다. 분말화 식용 BLG 조성물은 바람직하게는 0.70 내지 1.0 g/mL 범위의 벌크 밀도를 가질 수 있고, 조성물의 총 중량에 대해 적어도 80% w/w의 단백질을 포함한다.
분말의 벌크 밀도는 WO 2018/115520호의 실시예 9.3에 따라 측정된다.
본 발명자들은 본 발명에 따른 BLG 조성물이 유사한 BLG 조성물보다 더 양호한 장기간 안정성을 갖는 징후를 확인하였다. 이는 특히 BLG 중 적어도 일부가 BLG 결정의 형태로 존재할 때의 경우이며, 이는 BLG 분자의 더 양호한 저장 안정성을 제공하는 것으로 보인다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 BLG 조성물은 30℃에서 60일 후에 최대 80 mg/100 g 단백질, 바람직하게는 최대 60 mg/100 g 단백질, 보다 바람직하게는 최대 40 mg/100 g 단백질, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 20 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 가장 바람직하게는, 건조 BLG 조성물은 30℃에서 60일 후에 최대 10 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 BLG 조성물은 최대 80 mg/100 g 단백질, 바람직하게는 최대 60 mg/100 g 단백질, 보다 바람직하게는 최대 40 mg/100 g 단백질, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 20 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 가장 바람직하게는, 건조 BLG 조성물은 최대 10 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다. 바람직하게는, 건조 BLG 조성물은 최대 0 mg/100 g 단백질의 퓨로신 값을 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 건조 BLG 조성물의 BLG는 30℃에서 60일 후에 최대 1, 바람직하게는 최대 0.6, 보다 바람직하게는 0.2, 더욱더 바람직하게는 최대 0.1, 그리고 가장 바람직하게는 최대 0.01의 락토실화 정도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 액체 조성물이다. 액체 식용 BLG 조성물은 바람직하게는 적어도 20% w/w의 물, 보다 바람직하게는 적어도 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 40% w/w의 물을 포함한다.
액체 식용 BLG 조성물은 20 내지 90% w/w 범위의 물, 보다 바람직하게는 30 내지 80% w/w 범위, 더욱더 바람직하게는 적어도 40% w/w의 물을 예를 들어 포함할 수 있다.
본 발명자들은 분무 건조가 식용 BLG 분말 조성물을 제조하는 데 사용되었더라도, 본 발명에 따른 식용 BLG 조성물이 놀랍게도 낮은 단백질 변성도를 갖는 것을 발견하였다(WO 2018/115520호의 실시예 11 참조).
따라서, 본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 최대 10%의 단백질 변성도를 갖는다. 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 최대 5%의 단백질 변성도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 최대 2%의 단백질 변성도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 최대 1%의 단백질 변성도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 식용 BLG 조성물은 최대 0.5%의 단백질 변성도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은 건조 분말, 그리고 바람직하게는 분무 건조된 분말이고, 최대 2%, 그리고 바람직하게는 최대 1.5%의 단백질 변성도를 갖는다. 보다 바람직하게는, 예를 들어 분무 건조된 분말 형태의 건조 식용 BLG 조성물은 최대 1.0%의 단백질 변성도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 예를 들어 분무 건조된 분말 형태의 건조 식용 BLG 조성물은 최대 0.8%의 단백질 변성도를 갖는다. 더욱더 바람직하게는, 예를 들어 분무 건조된 분말 형태의 건조 식용 BLG 조성물은 최대 0.5%의 단백질 변성도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질
- 총 단백질에 대해 적어도 95%의 BLG를 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이고,
- 적어도 0.50 g/mL, 그리고 바람직하게는 적어도 0.60 g/mL의 벌크 밀도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질
- 총 단백질에 대해 적어도 95%의 BLG를 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이고,
- 적어도 0.50 g/mL, 그리고 바람직하게는 적어도 0.60 g/mL의 벌크 밀도를 갖고,
- 적어도 20%, 그리고 바람직하게는 적어도 40%의 결정도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질
- 총 단백질에 대해 적어도 95%의 BLG를 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이고,
- 적어도 0.50 g/mL, 그리고 바람직하게는 적어도 0.60 g/mL의 벌크 밀도를 갖고,
- 최대 2%, 그리고 바람직하게는 최대 1.0%의 단백질 변성도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 추가의 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 95%의 BLG,
- 최대 80 mg 인/100 g 단백질을 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이다.
본 발명의 더 바람직한 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 90%의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 97%의 BLG,
- 최대 50 mg 인/100 g 단백질을 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 최대 6% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질, 그리고 바람직하게는 총 고형분에 대해 적어도 90%의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 90%의 BLG,
- 총 단백질에 대해 8 내지 25% w/w의 ALA를 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 건조 분말이고,
- 적어도 20%, 그리고 바람직하게는 적어도 40%의 BLG의 결정도를 갖는다.
본 발명의 바람직한 일부 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 20 내지 80% w/w의 물, 그리고 바람직하게는 20 내지 60% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질, 그리고 바람직하게는 총 고형분에 대해 적어도 90%의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 적어도 95%의 BLG,
- 최대 80 mg 인/100 g 단백질을 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40%의 BLG의 결정도를 갖고,
- 선택적으로, 최대 2%, 그리고 바람직하게는 최대 1.0%의 단백질 변성도를 갖는다.
이들 실시형태에 따른 식용 조성물은 특히 건조된 형태의 식용 BLG 조성물을 제조하기에 유용하며, 훼이 단백질 종의 훼이 단백질의 정상 농도 프로파일을 갖되, 건조된 BLG 결정 형태의 적어도 일부의 BLG를 함유하는 고밀도의 훼이 단백질 분말의 분무 건조 및 제조에 특히 적합하다.
본 발명의 바람직한 다른 실시형태에서, 식용 BLG 조성물은,
- 20 내지 80% w/w의 물, 그리고 바람직하게는 20 내지 60% w/w의 물
- 총 고형분에 대해 적어도 80%의 총 단백질, 그리고 바람직하게는 총 고형분에 대해 적어도 90%의 총 단백질,
- 총 단백질에 대해 30 내지 79%의 BLG,
- 총 단백질에 대해 8 내지 25% w/w의 ALA를 포함하며,
상기 식용 BLG 조성물은:
- 적어도 20%, 바람직하게는 적어도 40의 BLG의 결정도를 갖는다.
이들 실시형태에 따른 식용 조성물은 특히 건조된 형태의 식용 BLG 조성물을 제조하기에 유용하며, 훼이 단백질 종의 훼이 단백질의 정상 농도 프로파일을 갖되, 건조된 BLG 결정 형태의 적어도 일부의 BLG를 함유하는 고밀도의 훼이 단백질 분말의 분무 건조 및 제조에 특히 적합하다.
본 방법은 바람직하게는 1 내지 65℃의 범위, 바람직하게는 2 내지 50℃, 보다 바람직하게는 3 내지 20℃의 범위, 더욱더 바람직하게는 4 내지 15℃의 범위의 온도에서 수행된다.
본 발명의 특히 바람직한 실시형태는 번호를 매긴 다음의 실시형태에 기술된다.
번호를 매긴 실시형태 1. 바람직하게는 결정화된 및/또는 단리된 형태의 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은
a) BLG를 포함하는 초기 단백질 용액을 제조하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖는, 단계,
b) 바람직하게는 염용 모드의, 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 BLG를 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) 선택적으로, BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계를 포함하며,
단계 a)는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 조합, 그리고 바람직하게는 혼합하는 것에 의해 초기 단백질 용액을 제조하는 단계를 포함하고, 여기서,
- "유형 A 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 적어도 5.6의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의되고,
- "유형 B 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 최대 5.4의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 2. 실시형태 1에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 적어도 5.6, 보다 바람직하게는 적어도 5.7, 더욱더 바람직하게는 적어도 5.8, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 5.9의 pH를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 5.4, 보다 바람직하게는 최대 5.3, 더욱더 바람직하게는 5.2, 그리고 가장 바람직하게는 5.1의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 3. 실시형태 1 또는 실시형태 2에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 적어도 6.0, 보다 바람직하게는 적어도 6.1, 더욱더 바람직하게는 적어도 6.2, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6.3의 pH를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 5.0, 보다 바람직하게는 최대 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.7의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 4. 실시형태 1 내지 실시형태 3 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 5. 실시형태 1 내지 실시형태 4 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 6.0 내지 8 범위의 pH, 보다 바람직하게는 6.1 내지 7.5 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.2 내지 7.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 6. 실시형태 1 내지 실시형태 5 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 7. 실시형태 1 내지 실시형태 6 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 4.0 내지 5.0 범위의 pH, 보다 바람직하게는 4.1 내지 4.9 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4.3 내지 4.8 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.8 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 8. 실시형태 1 내지 실시형태 7 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 9. 실시형태 1 내지 실시형태 8 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 10. 실시형태 1 내지 실시형태 9 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 11. 실시형태 1 내지 실시형태 10 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 12. 실시형태 1 내지 실시형태 11 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 13. 실시형태 1 내지 실시형태 12 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 14. 실시형태 1 내지 실시형태 13 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 15. 실시형태 1 내지 실시형태 14 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 또는 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 16. 실시형태 1 내지 실시형태 15 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 17. 실시형태 1 내지 실시형태 16 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 18. 실시형태 1 내지 실시형태 17 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 19. 실시형태 1 내지 실시형태 18 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 포화되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 20. 실시형태 1 내지 실시형태 19 중 어느 하나에 있어서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 21. 실시형태 1 내지 실시형태 20 중 어느 하나에 있어서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 22. 실시형태 1 내지 실시형태 21 중 어느 하나에 있어서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 23. 실시형태 1 내지 실시형태 22 중 어느 하나에 있어서, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 24. 실시형태 1 내지 실시형태 23 중 어느 하나에 있어서, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 25. 실시형태 1 내지 실시형태 24 중 어느 하나에 있어서, BLG에 대해 과포화되지 않은 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 26. 실시형태 1 내지 실시형태 25 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 27. 실시형태 1 내지 실시형태 26 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 28. 실시형태 1 내지 실시형태 27 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 29. 실시형태 1 내지 실시형태 28 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 30. 실시형태 1 내지 실시형태 29 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 31. 실시형태 1 내지 실시형태 30 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 32. 실시형태 1 내지 실시형태 31 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 33. 실시형태 1 내지 실시형태 32 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물(들)은 조합되는 경우, 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 1 내지 45% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물(들)의 조합의 중량에 대해 3 내지 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 5 내지 36% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 7 내지 34% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 34. 실시형태 1 내지 실시형태 33 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물의 총량을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 35. 실시형태 1 내지 실시형태 34 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 B 단백질 공급물의 총량을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 36. 실시형태 1 내지 실시형태 35 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w의 범위의 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
번호를 매긴 실시형태 37. 실시형태 1 내지 실시형태 36 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 5.8 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w의 범위의 3 내지 5.2의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
번호를 매긴 실시형태 38. 실시형태 1 내지 실시형태 37 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 6.0 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w의 범위의 3 내지 5.0의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
번호를 매긴 실시형태 39. 실시형태 1 내지 실시형태 38 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 6.1 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w의 범위의 3 내지 4.9의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
번호를 매긴 실시형태 40. 실시형태 1 내지 실시형태 39 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액을 제조하기 위해 사용된 단백질 공급물 중 적어도 하나는 액체 형태인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 41. 실시형태 1 내지 실시형태 40 중 어느 하나에 있어서, 모든 단백질 공급물은 액체 형태인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 42. 실시형태 1 내지 실시형태 41 중 어느 하나에 있어서, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 건조 형태, 그리고 바람직하게는 분말 형태이고, 단백질 공급물 중 적어도 하나는 액체 형태인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 43. 실시형태 1 내지 실시형태 42 중 어느 하나에 있어서, 모든 단백질 공급물은 건조 형태인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 44. 실시형태 1 내지 실시형태 43 중 어느 하나에 있어서, BLG 결정, 예를 들어 단계 c)로부터 수득된, 분리된 결정을 세정하는 단계 d)를 추가로 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 45. 실시형태 1 내지 실시형태 44 중 어느 하나에 있어서, BLG 결정, 예를 들어 단계 c) 또는 d)로부터 수득된 BLG 결정을 재결정하는 단계 e)를 추가로 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 46. 실시형태 1 내지 실시형태 45 중 어느 하나에 있어서, 단계 b), c), d), 또는 e)로부터 유래된 BLG-함유 조성물을 건조하는 단계 f)를 추가로 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 47. 실시형태 1 내지 실시형태 46 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 총 고형분에 대해 적어도 1% w/w의 비-BLG 고형분을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 48. 실시형태 1 내지 실시형태 47 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 5% w/w의 ALA를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 49. 실시형태 1 내지 실시형태 48 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 적어도 15% w/w의 추가의 훼이 단백질을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 50. 실시형태 1 내지 실시형태 49 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 단백질의 총량에 대해 최대 40% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 51. 실시형태 1 내지 실시형태 50 중 어느 하나에 있어서, 단계 a)의 초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 적어도 5% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 52. 실시형태 1 내지 실시형태 51 중 어느 하나에 있어서, 단백질 공급물은 유청 단백질 농축물, 훼이 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 및/또는 훼이 단백질 단리물로부터 제조되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 53. 실시형태 1 내지 실시형태 52 중 어느 하나에 있어서, 전도도와 초기 단백질 용액의 단백질의 총량 사이의 비는 최대 0.3인. 방법.
번호를 매긴 실시형태 54. 실시형태 1 내지 실시형태 53 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액의 UF 투과물 전도도는 최대 7 mS/cm인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 55. 실시형태 1 내지 실시형태 54 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물(들)은 하나 이상의 훼이 단백질 물질을 다음 조절 중 하나 이상에 적용하여 제조되는, 방법:
- pH를 조절하는 것,
- 전도도를 감소시키는 것,
- 온도를 감소시키는 것,
- 단백질 농도를 증가시키는 것, 및
- 물 활성도를 감소시키는 제제를 첨가하는 것.
번호를 매긴 실시형태 56. 실시형태 1 내지 실시형태 55 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물의 제조는 훼이 단백질 물질의 pH를 조절하는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 57. 실시형태 1 내지 실시형태 56 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물의 제조는 훼이 단백질 물질의 전도도를 감소시키는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 58. 실시형태 1 내지 실시형태 57 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물의 제조는 훼이 단백질 물질의 온도를 감소시키는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 59. 실시형태 1 내지 실시형태 58 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물의 제조는 훼이 단백질 물질의 총 단백질 농도를 증가시키는 것을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 60. 실시형태 1 내지 실시형태 59 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물은 유청 단백질 농축물, 훼이 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 및/또는 훼이 단백질 단리물로부터 유래되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 61. 실시형태 1 내지 실시형태 60 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 단백질 공급물은 유청 단백질 농축물, 훼이 단백질 농축물, 유청 단백질 단리물, 및/또는 훼이 단백질 단리물을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 62. 실시형태 1 내지 실시형태 61 중 어느 하나에 있어서, 단계 b)의 BLG의 결정화는 다음 중 하나 이상을 포함하는, 방법:
- 결정화가 발생하기를 기다리는 것,
- 결정화 시드의 첨가,
- BLG의 과포화도를 더욱더 증가시키는 것, 및/또는
- 기계적 자극.
번호를 매긴 실시형태 63. 실시형태 1 내지 실시형태 62 중 어느 하나에 있어서, 단계 b)의 BLG의 결정화는 BLG의 결정화가 진행 중인 동안, BLG를 함유하는 하나 이상의 추가의 단백질 공급물의 첨가를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 64. 실시형태 1 내지 실시형태 63 중 어느 하나에 있어서, 단계 c)는 BLG 결정을 잔여 초기 단백질 용액으로부터 분리하는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 65. 실시형태 64에 있어서, 단계 c)는 BLG 결정을 적어도 30% w/w, 바람직하게는 적어도 40% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w의 고형분 함량으로 분리하는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 66. 실시형태 44 내지 실시형태 65 중 어느 하나에 있어서, 단계 d)의 세정은 BLG 결정을 완전히 용해시키지 않으면서 분리된 BLG 결정을 세정 액체와 접촉시키고, 이후 잔여 BLG 결정을 세정 액체로부터 분리하는 단계를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 67. 실시형태 66에 있어서, 단계 d)의 세정은 BLG 결정의 초기량의 최대 80% w/w, 바람직하게는 BLG 결정의 초기량의 최대 50% w/w, 그리고 더욱더 바람직하게는 최대 20% w/w를 용해시키는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 68. 실시형태 45 내지 실시형태 67 중 어느 하나에 있어서, 재결정 단계는 다음을 포함하는, 방법:
- 분리된 BLG 결정을 재결정 액체 중에 용해시키는 것,
- 재결정 액체를 조절하여 BLG에 대해 과포화를 수득하는 것,
- BLG를 과포화된, 조절된 재결정 액체 중에서 결정화하는 것, 및
- BLG 결정을 조절된 잔여 재결정 액체로부터 분리하는 것.
번호를 매긴 실시형태 69. 실시형태 45 내지 실시형태 68 중 어느 하나에 있어서, 단계 d)의 BLG 결정은 적어도 2 차례 재결정되는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 70. 실시형태 46 내지 실시형태 69 중 어느 하나에 있어서, 건조 단계는 분무 건조, 동결 건조, 스핀-플래시 건조기, 회전식 건조, 및/또는 유체층 건조 중 하나 이상을 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 71. 실시형태 1 내지 실시형태 70 중 어느 하나에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 5.6, 보다 바람직하게는 적어도 5.7, 더욱더 바람직하게는 적어도 5.8, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 5.9의 pH를 갖고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.4, 보다 바람직하게는 최대 5.3, 더욱더 바람직하게는 5.2, 그리고 가장 바람직하게는 5.1의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 72. 실시형태 1 내지 실시형태 71 중 어느 하나에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 6.0, 보다 바람직하게는 적어도 6.1, 더욱더 바람직하게는 적어도 6.2, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6.3의 pH를 갖고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.0, 보다 바람직하게는 최대 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.7의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 73. 실시형태 1 내지 실시형태 72 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
5.6 내지 10, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 74. 실시형태 1 내지 실시형태 73 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
6.0 내지 8, 보다 바람직하게는 6.1 내지 7.5, 더욱더 바람직하게는 6.2 내지 7.0, 그리고 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.5 범위의 pH를 갖는,방법.
번호를 매긴 실시형태 75. 실시형태 1 내지 실시형태 74 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
2 내지 5.4, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 76. 실시형태 1 내지 실시형태 75 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
4.0 내지 5.0, 보다 바람직하게는 4.1 내지 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.3 내지 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.8 범위의 pH를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 77. 실시형태 1 내지 실시형태 76 중 어느 하나에 있어서,
하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않고/않거나, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 78. 실시형태 1 내지 실시형태 77 중 어느 하나에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않고/않거나, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 79. 실시형태 1 내지 실시형태 78 중 어느 하나에 있어서, BLC 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 80. 실시형태 1 내지 실시형태 79 중 어느 하나에 있어서, BLC 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 81. 실시형태 1 내지 실시형태 80 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 82. 실시형태 1 내지 실시형태 81 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 83. 실시형태 1 내지 실시형태 82 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 84. 실시형태 1 내지 실시형태 83 중 어느 하나에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 85. 실시형태 1 내지 실시형태 84 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 6.0 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 3 내지 5.0의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량.
번호를 매긴 실시형태 86. 실시형태 1 내지 실시형태 85 중 어느 하나에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
- 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비
를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH.
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도.
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비
를 가질 것인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 87. 실시형태 1 내지 실시형태 86 중 어느 하나에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
- 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 5.6 내지 10, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH,
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도,
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비
를 가질 것이고,
- 유형 B 단백질 공급물에 대해, 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는, 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 이들이 혼합되는 경우에,
- 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 4 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 6 내지 32% w/w, 보다 바람직하게는 8 내지 30% w/w, 더욱더 바람직하게는 10 내지 28% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 12 내지 26% w/w의 BLG의 함량,
- 2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH,
- 바람직하게는, 최대 20℃, 보다 바람직하게는 최대 15℃, 더욱더 바람직하게는 최대 10℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 5℃의 온도,
- 바람직하게는, 단백질의 총량에 대해 적어도 30% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 40% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 50% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 55% w/w의 양의 BLG의 함량,
- 다음 중 하나 이상:
- 최대 7 mS/cm, 더욱더 바람직하게는 최대 5 mS/cm, 그리고 가장 바람직하게는 최대 3 mS/cm의 전도도, 및
- 최대 0.3, 보다 바람직하게는 최대 0.25, 가장 바람직하게는 최대 0.20의 전도도와 단백질의 총량 사이의 비
를 가질 것인, 방법.
번호를 매긴 실시형태 88. 실시형태 1 내지 실시형태 87 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 단백질 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 89. 실시형태 1 내지 실시형태 88 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 단백질 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 90. 실시형태 1 내지 실시형태 89 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 고형분 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 91. 실시형태 1 내지 실시형태 90 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 고형분 함량에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 92. 실시형태 1 내지 실시형태 91 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 중량의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 93. 실시형태 1 내지 실시형태 92 중 어느 하나에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 중량의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w에 기여하는, 방법.
번호를 매긴 실시형태 94. 실시형태 1 내지 실시형태 93 중 어느 하나에 있어서, 초기 단백질 용액의 BLG의 과포화도는 다음의 둘 모두의 불포화도보다 더 높은, 방법:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 A 단백질 공급물, 또는
-둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 A 단백질 공급물들,
및
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 B 단백질 공급물, 또는
-둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로, 조합되는 경우에, 유형 B 단백질 공급물들.
본 발명은 구체적 실시형태를 참조하여 상기 기술되었다. 그러나, 상기 기재된 것과 다른 실시형태가 본 발명의 범주 내에서 동일하게 가능하다. 본 발명의 다양한 실시형태 및 양태의 상이한 특성 및 단계는 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 것들과 다른 방식으로 조합될 수 있다.
실시예
실시예 1: 2개의 WPI 스트림의 혼합을 기반으로 하는 결정화.
도입:
WO 2018/115520호의 방법의 대규모 구현의 초기 시험 동안, 빈번한 자발적 BLG 결정화 사건이 훼이 단백질 용액을 제조하는 데 사용된 한천여과 유닛에서 관찰되었다. 자발적 BLG 결정화 사건은 생산을 중단시키고, 결정화에 의해 영향을 받은 공정 유닛의 시간 소모적 세정을 초래하였다.
이어서, 본 발명자들은 생산 동안 적합하지 않은 조건 하에서(예를 들어, 높고, 국소적 단백질 농도 및/또는 갑작스러운 냉각의 발생 시) BLG에 대해 과포화될 수 있었던 단일 공급물으로부터 WO 2018/115520호의 과포화된 단백질 용액을 생산하는 대신에, 각각이 BLG에 대해 분명하게 비-과포화되도록(또는 오직 제한된 정도로 과포화된) 만드는 pH를 갖는, 2개(또는 그 초과)의 공급물로부터 과포화된 훼이 단백질을 생산하고, 이어서 2개(또는 그 초과)의 공급물을 혼합하여 BLG의 과포화를 위한 알맞은 pH, 즉, pH 5.5에 가까운 pH를 얻는 것이 더 영리하다는 생각이 있다.
이러한 새로운 접근법은 제어되지 않은 BLG 결정화의 위험 없이 매우 고함량의 단백질을 갖는 공급물을 제조할 수 있도록 만든다. 추가적으로, 이러한 접근법은 유의하게 미생물의 최적 성장 미만의 온도에서 공급물 및 이후 초기 단백질 용액을 제조할 수 있도록 만들며, 이는 더 적은 열처리가 최종 생성물의 미생물 함량을 허용 가능한 수준으로 감소시키는 데 필요하기 때문에 이롭다. 본 발명자들은 본 유형 A 및/또는 유형 B 단백질 공급물에 의해 이루어진 pH 조절이 전통적 식품 산 또는 식품 염으로 동일한 pH 변화를 만드는 것과 대조적으로 초기 단백질 용액의 전도도에서의 매우 제한된 변화에만 기여함을 발견하였다. 이는 초기 단백질 용액의 감소된 전도도가 전형적으로는 더 높은 BLG 결정화 수율에 이르도록 하기 때문에 유익하다.
이러한 새로운 접근법의 실현 가능성은 본 실시예에서 입증되며, 여기서, 제1 단백질 공급물(배치 1, 유형 A 단백질 공급물)은 6.2의 pH를 가졌고, 제2 단백질 공급물(배치 2, 유형 B 단백질 공급물)은 4.9의 pH를 가졌다. 높은 단백질 농도에도 불구하고, 공급물 중 어느 것도 과포화되지 않았다. 그러나, 단순히 적절한 양으로 2개의 공급물을 혼합함으로써(pH 5.5에 가까운 pH를 얻기 위함), BLG가 결정화될 수 있는 과포화된 단백질 혼합물을 수득하였다.
공정:
본 실시예를 위한 훼이 원료는 표준 치즈 생산 공정으로부터의 감미 훼이로부터 유래된 락토스 고갈된 UF 보유물이었으며, 훼이는 사용 전에 Synder FR 막을 통해 지방이 감소되었다. 이 원료로부터 2개의 배치를 생산하고, 30 mill 스페이서를 갖는 Alfa Laval GR82PE 막 및 1.5 내지 3.0 bar의 공급물 압력을 사용하여 한천여과 장비에 의해 컨디셔닝하였다. 생성물을 투석여과 매질로서의 연마수(polished water)로 탈염시키고, 공급물은 18% TS(총 고형분) ± 5%의 농도를 가졌다. 투석여과를 적어도 보유물 중의 전도도에서의 저하가 20분의 기간에 걸쳐 0.02 mS/cm 미만일 때까지 지속하였고, 여기서, 보유물 중의 TS는 안정하였다(± 0.5% TS). 이어서, 보유물을 약 22% TS로 농축시키고, 배치 1 및 2의 공급물 조성은 표 1.1 및 1.2에서 확인할 수 있다.
제1 배치(배치 1)는 10 내지 12℃에서 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 6.1로 pH 조절하였다. 다른 배치(배치 2)는 10 내지 12℃에서 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 4.9로 pH 조절하였다.
UF 처리 후에, 배치 중 일부가 5개의 상이한 비로 함께 혼합되어 결정화가 수행되는 단백질 용액을 제조하기 전에 2개의 배치의 온도를 10℃로 조절하였으며, 상세한 내용을 위해서는 표 1.3을 참조한다. 각각의 혼합물을 0.1% w/w의 시드 물질로 10℃에서 시딩하고, 시딩 후에 5℃로 냉각시키고, 교반하면서 밤새 그대로 두었다.
배치 1 및 배치 2가 이미 과포화되었는지 여부를 확인하기 위해, 2개의 배치의 각각의 샘플을 상기 언급된 혼합 전에 취하고, 또한 시딩하고, 10℃에서 밤새 저장하였다. 다음날 아침에 현미경에 의한 육안 검사는 인큐베이션 후에 결정이 존재하지 않았음을 보여주었으며, 따라서 배치 1 및 배치 2는 과포화되지 않았다는 것으로 결론을 내릴 수 있다.
배치 1 및 2 중 적은 부분을 함께 혼합하여 5.5의 최종 pH에 도달하고, 이후 적은 양의 건조된 BLG 결정 물질을 첨가하여 시드 물질을 생산하였다. 이어서, 시드 용액을 교반하면서 얼음 상에 1시간 동안 놓았다.
단백질 용액 샘플을 시딩 전 및 결정화 후에 취하고, 3000 g에서 5분 동안 원심 분리하고, 상청액 샘플을 WO 2018/115520호의 실시예 1에 기재된 바와 같이 RP-HPLC에 의해 분석하고, 결정화 수율은 다음 식으로 계산하였다:
상기 식에서, %BLG결정화 전은 시딩 및 결정화 전의 샘플에서 HPLC에 의해 측정된 BLG 농도이고, %BLG결정화 후는 결정화 후의 샘플의 상청액에서 HPLC에 의해 측정된 BLG 농도이다.
결과:
하기 표로부터 확인할 수 있는 바와 같이, BLG에 대해 낮은 과포화도(또는 심지어 과포화 없음)를 갖는 pH 영역에서 훼이 단백질 공급물을 컨디셔닝하며, 이로 인해 UF 플랜트에서의 자발적 결정화의 위험을 낮추고, 자발적 BLG 결정화 없이 사용될 수 있는 최대 단백질 농도를 증가시키는 것이 가능하다. 2개의 공급물을 이후 혼합하여 높은 BLG 과포화도를 갖는 초기 단백질 용액을 제공하였다.
실시예 2: 상업적으로 입수 가능한 WPI를 사용한 2개의 WPI 스트림의 혼합을 기반으로 하는 결정화.
본 실시예를 위한 훼이 물질은 상업적으로 입수 가능한 Lacprodan DI-9213 및 제2 자체-생산된 pH 6.2 WPI이었다.
pH 6.2 WPI는 표준 치즈 생산 공정으로부터의 감미 훼이로부터 유래된 락토즈 고갈된 UF 보유물로부터 제조하였고, 훼이는 사용 전에 Synder FR 막을 통해 지방 감소되었다. 원료를 10 내지 12℃에서의 UF 처리 전에 식품 등급 염산으로 pH 6.2로 pH 조절하였다. 이 원료로부터 배치를 생산하고, 30 mill 스페이서를 갖는 Alfa Laval GR82PE 막 및 1.5 내지 3.0 bar의 공급물 압력을 사용하여 한천여과 장비에 의해 컨디셔닝하였다. 생성물을 투석여과 매질로서의 연마수로 탈염시키고, 공급물은 18% TS ± 5%의 농도를 가졌다. 투석여과를 적어도 보유물 중의 전도도에서의 저하가 20분의 기간에 걸쳐 0.02 mS/cm 미만일 때까지 지속하였고, 여기서, 보유물 중의 TS는 안정하였다(± 0.5% TS). 이어서, 보유물을 약 22% TS로 농축시키고, 배치 1 및 2의 공급물 조성은 표 2.1 및 2.2에서 확인할 수 있다.
배치 2는 분말 형태의 Lacprodan DI-9213으로부터 제조하였다.
분말을 16.3의 TS로 재수화시키고, 모든 분말이 용해될 때까지, 이를 교반하면서 10℃에서 그대로 두어서 컨디셔닝하였다.
컨디셔닝 후, 2개의 배치를 실시예 1에서와 같이 처리하고(오직 2개의 용액이 제조되었던 것을 제외하고), 분석하였다.
혼합물의 특징은 표 2.3에서 확인할 수 있다.
결과:
하기 표로부터 확인할 수 있는 바와 같이, BLG에 대해 과포화를 갖지 않는 pH 영역에서 훼이 단백질 공급물을 컨디셔닝하여, 이로 인해 자발적 결정화의 위험을 낮추고, UF 플랜트에서의 결정화의 위험 없이 가능한 단백질 농도 수준을 증가시키고, 이후 높은 과포화도를 수득하기 위해 2개를 함께 혼합하는 것이 가능하다. 더 높은 전도도는 예상된 바와 같이 수율에 영향을 미칠 수 있음을 확인할 수 있다.
실시예 3: 2개의 WPI 스트림, pH 4.0 및 6.1의 혼합을 기반으로 하는 결정화.
본 실시예를 위한 훼이 원료는 표준 치즈 생산 공정으로부터의 감미 훼이로부터 유래된 락토즈 고갈된 UF 보유물이었고, 훼이는 사용 전에 Synder FR 막을 통해 지방 감소되었다. 이 원료로부터 2개의 배치를 생산하고, 30 mill 스페이서를 갖는 Alfa Laval GR82PE 막 및 1.5 내지 3.0 bar의 공급물 압력을 사용하여 한천여과 장비에 의해 컨디셔닝하였다. 생성물을 투석여과 매질로서의 연마수로 탈염시키고, 공급물은 18% TS ± 5%의 농도를 가졌다. 투석여과를 적어도 보유물 중의 전도도에서의 저하가 20분의 기간에 걸쳐 0.02 mS/cm 미만일 때까지 지속하였고, 여기서, 보유물 중의 TS는 안정하였다(± 0.5% TS). 이어서, 보유물을 약 22% TS로 농축시키고, 배치 1 및 2의 공급물 조성은 표 3.1 및 3.2에서 확인할 수 있다.
하나의 배치(배치 1)는 10 내지 12℃에서의 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 6.1로 pH 조절하였다. 다른 배치(배치 2)는 10 내지 12℃에서의 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 4.9로 pH 조절하였다.
컨디셔닝 후, 2개의 배치를 WO 2018/115520호의 실시예 1에서와 같이 처리하고(오직 4개의 용액이 제조되었던 것을 제외하고), 분석하였다.
혼합물의 특징은 표 3.3에서 확인할 수 있다.
결과:
하기 표로부터 확인할 수 있는 바와 같이, BLG에 대해 낮은 과포화도를 갖는 영역에서 훼이 단백질 공급물을 컨디셔닝하며, 이로 인해 자발적 결정화의 위험을 낮추고, UF 플랜트에서의 결정화의 위험 없이 가능한 단백질 농도 수준을 증가시키고, 이후 높은 과포화도를 수득하기 위해 2개를 함께 혼합하는 것이 가능하다.
실시예 4: 결정 크기 분포
본 실시예를 위한 훼이 원료는 표준 치즈 생산 공정으로부터의 감미 훼이로부터 유래된 락토즈 고갈된 UF 보유물이었고, 훼이는 사용 전에 Synder FR 막을 통해 지방 감소되었다. 이 원료로부터 각각의 결정화를 위한 2개의 배치를 생산하고, 30 mill 스페이서를 갖는 Alfa Laval GR82PE 막 및 1.5 내지 3.0 bar의 공급물 압력을 사용하여 한천여과 장비에 의해 컨디셔닝하였다. 생성물을 투석여과 매질로서의 연마수로 탈염시키고, 공급물은 18% TS ± 5%의 농도를 가졌다. 투석여과를 적어도 보유물 중의 전도도에서의 저하가 20분의 기간에 걸쳐 0.02 mS/cm 미만일 때까지 지속하였고, 여기서, 보유물 중의 TS는 안정하였다(± 0.5% TS). 이어서, 보유물을 약 22% TS로 농축시키고, 배치 1 및 2의 공급물 조성은 하기 표에서 확인할 수 있다.
하나의 배치(배치 1)는 10 내지 12℃에서의 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 약 6.1로 pH 조절하였다. 다른 배치(배치 2)는 10 내지 12℃에서의 UF 처리 전에 식품 등급 염산(HCl)으로 pH 4.9로 pH 조절하였다.
결정화는 300 L의 결정화 탱크 내에서 수행하고, 0.1% w/w의 시드 물질을 사용하였다. 시드 물질은 실시예 1에서와 같이 생산하였다.
제1 결정화
컨디셔닝 후에 2개의 배치를 함께 혼합하여 5.50의 최종 pH를 얻고, 혼합물을 시딩하고, 5℃로 신속하게 냉각시키고, 결정화되도록 밤새 그대로 두었다. 슬러리 샘플을 실시예 1에서 기재된 바와 같이 분석하여 수율을 계산하였다. 결정 슬러리의 입자 크기 분포를 Malvern 입자 크기 특성화에 의해 분석하였다.
제2 결정화
컨디셔닝 후에 2개의 배치를 함께 혼합하여 5.45의 최종 pH를 얻고, 혼합물을 시딩하고, 5℃로 신속하게 냉각시키고, 결정화되도록 밤새 그대로 두었다. 슬러리의 샘플을 실시예 1에서 기재된 바와 같이 분석하여 수율을 계산하였다. 결정 슬러리의 입자 크기 분포를 Malvern 입자 크기 특성화에 의해 분석하였다.
제3 결정화:
컨디셔닝 후에 2개의 배치를 함께 혼합하여 5.80의 최종 pH를 얻고, 혼합물을 시딩하고, 1시간 동안 인큐베이션한 후, 배치 2를 2시간에 걸쳐 추가로 첨가하여 5.45의 최종 pH로 조절하고, 이어서 5℃로 신속하게 냉각시키고, 결정화되도록 밤새 그대로 두었다. 슬러리의 샘플을 실시예 1에서 기재된 바와 같이 분석하여 수율을 계산하였다. 결정 슬러리의 입자 크기 분포를 Malvern 입자 크기 특성화에 의해 분석하였다.
결과:
표 4.7에서, 결정화 결과를 보여주며, 확인할 수 있는 바와 같이, 결정 크기 분포는 상이한 원료가 사용되고, 결정화 공정이 상이하였더라도, 유사하였다.
Claims (26)
- 바람직하게는 결정화된 및/또는 단리된 형태의, 베타-락토글로불린(BLG)을 포함하는 식용 조성물의 제조 방법으로서, 상기 방법은
b) BLG를 포함하는 초기 단백질 용액을 제조하는 단계로서, 상기 초기 단백질 용액은 BLG에 대해 과포화되고, 5 내지 6 범위의 pH를 갖는, 단계,
b) 바람직하게는 염용 모드의, 과포화된 초기 단백질 용액 중에서 BLG를 결정화하고, 이로 인해 BLG 결정 함유 용액을 수득하는 단계, 및
c) 선택적으로, BLG 결정을 BLG 결정 함유 용액의 잔여 액체로부터 분리하는 단계를 포함하며,
단계 a)는 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물(들)과 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물(들)을 혼합하는 것에 의해 초기 단백질 용액을 제조하는 단계를 포함하고, 여기서,
- "유형 A 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 적어도 5.6의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의되고,
- "유형 B 단백질 공급물"은 BLG를 포함하고, 최대 5.4의 pH를 갖는 단백질 공급물로 정의되는, 방법. - 제1항에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 5.6, 보다 바람직하게는 적어도 5.7, 더욱더 바람직하게는 적어도 5.8, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 5.9의 pH를 갖고, 및
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.4, 보다 바람직하게는 최대 5.3, 더욱더 바람직하게는 5.2, 그리고 가장 바람직하게는 5.1의 pH를 갖는, 방법. - 1항 또는 제2항에 있어서,
- 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
적어도 6.0, 보다 바람직하게는 적어도 6.1, 더욱더 바람직하게는 적어도 6.2, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 6.3의 pH를 갖고, 및
- 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
최대 5.0, 보다 바람직하게는 최대 4.9, 더욱더 바람직하게는 4.8, 그리고 가장 바람직하게는 4.7의 pH를 갖는, 방법. - 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
5.6 내지 10 범위의 pH, 보다 바람직하게는 5.8 내지 8 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.0 내지 7 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.1 내지 6.5 범위의 pH를 갖는. 방법. - 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
6.0 내지 8 범위의 pH, 보다 바람직하게는 6.1 내지 7.5 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 6.2 내지 7.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 6.2 내지 6.5 범위의 pH를 갖는, 방법. - 1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
2 내지 5.4 범위의 pH, 보다 바람직하게는 3 내지 5.2 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4 내지 5.0 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.9 범위의 pH를 갖는, 방법. - 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
4.0 내지 5.0 범위의 pH, 보다 바람직하게는 4.1 내지 4.9 범위의 pH, 더욱더 바람직하게는 4.3 내지 4.8 범위의 pH, 그리고 가장 바람직하게는 4.5 내지 4.8 범위의 pH를 갖는, 방법. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서,
하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않고/않거나,
하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG 결정을 함유하지 않고, 보다 바람직하게는 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG 결정을 함유하지 않는, 방법. - 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 A 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않고/않거나,
하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 적어도 하나는 BLG에 대해 과포화되지 않고, 보다 바람직하게는, 하나 이상의 유형 B 단백질 공급물 중 어느 것도 BLG에 대해 과포화되지 않는, 방법. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 1% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 10% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 20% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 40% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, BLG 결정을 함유하지 않는 유형 A 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 BLG 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는,
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법. - 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
최대 60℃, 보다 바람직하게는 최대 50℃, 더욱더 바람직하게는 최대 40℃, 그리고 가장 바람직하게는 최대 30℃의 온도를 갖는, 방법. - 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1%의 w/w BLG, 보다 바람직하게는 유형 A 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법. - 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 B 단백질 공급물에 대해:
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 이들이 혼합되는 경우에,
유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 1% w/w의 BLG, 보다 바람직하게는 유형 B 단백질 공급물의 총 중량에 대해 적어도 3% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 5% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 7% w/w의 BLG를 포함하는, 방법. - 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서,
초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 A 단백질 공급물의 총량을 포함하는, 방법. - 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서,
초기 단백질 용액은 초기 단백질 용액의 중량에 대해 1 내지 99% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량을 포함하는, 방법. - 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의, 5.8 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의, 3 내지 5.2의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량. - 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 초기 단백질 용액은 다음을 포함하는, 방법:
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의, 6.0 내지 8의 pH를 갖는 유형 A 단백질 공급물(들)의 총량, 및
- 초기 단백질 용액의 중량에 대해 5 내지 90% w/w, 보다 바람직하게는 10 내지 80% w/w, 더욱더 바람직하게는 20 내지 70% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 30 내지 60% w/w 범위의, 3 내지 5.0의 pH를 갖는 유형 B 단백질 공급물(들)의 총량. - 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 단백질 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 단백질 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 고형분 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 고형분 함량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 50% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 70% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 80% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 90% w/w의 중량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 유형 A 단백질 공급물(들) 및 유형 B 단백질 공급물(들)은 초기 단백질 용액의 적어도 92% w/w, 보다 바람직하게는 적어도 94% w/w, 더욱더 바람직하게는 적어도 96% w/w, 그리고 가장 바람직하게는 적어도 99% w/w의 중량에 기여하는, 방법.
- 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 초기 단백질 용액의 BLG의 과포화도는 다음의 둘 모두의 과포화도보다 높은, 방법:
- 오직 단일 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 A 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 A 단백질 공급물이 사용되는 경우로 조합되는 경우에, 유형 A 단백질 공급물들, 그리고
- 오직 단일 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우, 유형 B 단백질 공급물, 또는
- 둘 이상의 유형 B 단백질 공급물이 사용되는 경우로 조합되는 경우에, 유형 B 단백질 공급물들.
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