KR20230128283A

KR20230128283A - 가축에서 치료제의 반감기를 증가시키기 위한 조성물및 사용 방법

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Publication number: KR20230128283A
Application number: KR1020237021674A
Authority: KR
Inventors: 윌리엄 브론딕; 위르겐 호른
Original assignee: 인베티엑스 인코포레이티드
Priority date: 2020-12-07
Filing date: 2021-12-01
Publication date: 2023-09-04
Also published as: MX2023006639A; EP4255933A1; CA3201120A1; CN117043190A; JP2023552456A; TW202237641A; US20220177549A1; AU2021397693A1; WO2022125355A1

Abstract

가축에서 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 증가시키기 위한 조성물 및 이의 사용 방법이 제공된다. 조성물은 변이체 IgG Fc 영역을 포함한다.

Description

가축에서 치료제의 반감기를 증가시키기 위한 조성물 및 사용 방법

본 개시내용은 일반적으로 야생형 대응물(counterpart)에 비해 가축에서 증가된 반감기를 갖는 폴리펩타이드(예를 들어, 폴리펩타이드-Fc 영역 융합과 같은 융합 폴리펩타이드; 또는 수용체-Fc 융합의 항체 또는 리간드-결합 부분과 같은 결합 분자)에 관한 것이다.

관련 출원에 대한 상호참조

본 출원은 2020년 12월 7일 자로 출원된 미국 특허 가출원 제63/122,365호에 대한 우선권을 주장하며, 이들 각각의 내용은 그 전문이 참조에 의해 원용된다.

EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록

USPTO EFS-웹 서버를 통해 다음의 전자 제출 서열 목록의 전체 내용(MPEP 제1730 II.B.2(a)호에 따라 승인되고 명시되어 있음)은 모든 목적을 위해 참조에 의해 이 문서 전체에 통합되어 있다. 서열 목록은 다음과 같이 식별되는 전자 파일 텍스트 파일 내에 있다.

파일 이름: 47406-0017WO1_Sequence_Listing.txt

생성 날짜: 2021년 12월 01일

크기(바이트): 64,960 바이트

항체의 Fc 영역은 리소좀 경로를 통한 분해로부터 항체를 보호하고 항체 효과기 기능을 매개하는 것을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 많은 기능적 역할을 한다. 가축의 치료제로서 항체의 사용이 증가함에 따라, 최적의 Fab을 선택하는 것뿐만 아니라 목적하는 반감기 및 효과기 기능을 위해 적절한 Fc와 결합하는 데 중점을 두고 있다.

가축에서 사용하기 위한 폴리펩타이드 치료제(예를 들어, 항체)의 반감기를 증가시키는 것과 관련된 당업계의 지침은 거의 없다. 본 개시내용은 가축에서 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)의 혈청 지속성을 향상하는 Fc 영역 변이체를 제공함으로써 해당 결점을 해결한다.

치료적 폴리펩타이드에 유용한 가축 Fc(예를 들어, 가축의 IgG Fc 영역 변이체) 또는 이의 FcRn 결합 단편이 본 명세서에 제공된다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드(예를 들어, 야생형 대응물 IgG Fc 영역)보다 가축 FcRn에 대해 증가된 결합을 갖는 폴리펩타이드를 특징으로 한다. 일부 경우에, 이러한 폴리펩타이드는 pH 5.5, pH 6.0 및/또는 pH 6.5에서 대조군 폴리펩타이드에 비해 가축 FcRn에 대해 증가된 결합을 갖는다. 일부 경우에, 이러한 폴리펩타이드는, 예를 들어, 중성 pH(예를 들어, pH 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4 또는 7.5)보다 산성 pH(예를 들어, pH 5.5, pH 6.0 또는 pH 6.5)에서 더 높은 수준으로 가축 FcRn에 결합할 수 있다. 일부 경우에, 이러한 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5 및/또는 6.0에서 더 높은 수준으로 가축 FcRn에 결합한다. 본 개시내용은 부분적으로 야생형 대응물보다 가축에서 증가된 반감기를 갖는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 Fc 영역 또는 이의 FcRn 결합 영역에 부착되지 않은 이러한 결합 분자의 버전에 비해 증가된 반감기를 갖는 결합 분자(예를 들어, 수용체의 항체 또는 리간드-결합 부분)가 제공된다. 또한, 효소-Fc 영역 융합, 리간드-Fc 영역 융합, 나노바디-Fc 융합 및 펩타이드-Fc 영역 융합이 제공되되, 융합은 야생형 대응물에 비해 증가된 반감기를 갖는다. Fc 영역은 (같은 종 가축의 야생형 Fc 영역에 비해) 반감기를 증가시키는 치환 또는 치환들을 갖는 것 외에, 예를 들어, 효과기 기능을 증가시키고, 효과기 기능을 감소시키고, 단백질 A에 대한 결합을 증가시키고/시키거나 폴리펩타이드의 이질성을 감소시키는(예를 들어, Fc 영역에서 하나 이상의 번역 후 변형을 제거함으로써) 다른 치환을 포함할 수 있다. 가축의 Fc 영역 서열은 임의의 가축의 항체로부터 유래할 수 있다. 일부 경우에, 가축의 Fc 영역 서열은 가축 IgG로부터 유래하며, 그 서브클래스는 본 명세서에 설명되어 있다.

본 개시내용은 (1) 단백질의 리간드 또는 에피토프(epitope)에 특이적으로 결합하는 결합 도메인 또는 이의 단편을 포함하되, 결합 도메인은 (2) 본 명세서에 개시된 바와 같은 Fc 영역(CH2+CH3 영역) 또는 이의 가축 FcRn 결합 영역을 포함하는 도메인에 부착되는 재조합 단백질을 특징으로 한다. 일부 경우에, 결합 도메인은 (i) 예를 들어, 가축 또는 인간/인간화된 항체의 6개의 상보성 결정 영역(CDR); (ii) 나노바디; (iii) 리간드 또는 이의 리간드-결합 단편에 결합하는 가용성 수용체-결합 도메인 및 (iv) 가축 수용체 단백질의 세포외 도메인을 포함한다.

본 개시내용은 또한 (1) 본 명세서에 기재된 가축의 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 제1 Fc 영역(예를 들어, CH2 도메인, CH3 도메인, CH2+CH3 도메인)을 포함하는 제1 폴리펩타이드; 및 (2) 본 명세서에 기재된 가축의 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 제2 Fc 영역을 포함하는 제2 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 제1 및 제2 폴리펩타이드는 제1 및 제2 Fc 영역을 통해 회합될 수 있다. 일부 경우에, 제1 및 제2 Fc 영역의 아미노산 서열은 동일하다. 다른 경우에, 제1 및 제2 Fc 영역의 아미노산 서열은 (예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개 또는 25개의 아미노산만큼) 상이하다.

일부 실시형태에서, Fc 영역 변이체는 IgG1a, IgG1b, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4a, IgG4b, IgG5a, IgG5b, IgG6a 및 IgG6b로 이루어진 군으로부터 선택된 돼지 IgG의 Fc 변이체이다.

일부 실시형태에서, Fc 영역 변이체는 IgG1, IgG2 및 IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된 소 IgG의 Fc 변이체이다.

일부 실시형태에서, Fc 영역 변이체는 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6 및 IgG7로 이루어진 군으로부터 선택된 말 IgG의 Fc 변이체이다.

일부 실시형태에서, Fc 영역 변이체는 IgG1, IgG2 및 IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된 양 IgG의 Fc 변이체이다.

일부 실시형태에서, Fc 영역 변이체는 IgG1, IgG2 및 IgG3으로 이루어진 군으로부터 선택된 염소 IgG의 Fc 변이체이다.

또한, 본 명세서에 개시된 가축의 IgG Fc 영역 변이체 및 폴리펩타이드를 포함하는 융합 분자가 개시된다. 일부 경우에, 가축의 IgG Fc 영역 변이체는 폴리펩타이드(예를 들어, 힌지 영역 또는 링커를 통해)에 공유적으로 부착된다. 일부 경우에, 폴리펩타이드는 가축 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인, 가축 수용체 단백질의 세포외 도메인 또는 항원-결합 도메인이다. 일부 경우에, 폴리펩타이드는 IL-13Rα1 또는 IL-13Rα2, 가축 에리스로포이에틴(EPO), 가축 CTLA4, 가축 LFA3, 가축 VEGFR1/VEGFR3, 가축 IL-1R, 가축 GLP-1 수용체 효능제 및 가축 트롬보포이에틴 결합 펩타이드의 리간드 결합 도메인 또는 세포외 도메인으로부터 선택된다. 일부 경우에, 폴리펩타이드는 scFv, 나노바디 또는 단일 도메인 항체이다. 일부 경우에, IgG Fc 영역 변이체는 가축 IgG1a 항체 Fc 영역의 변이체이다. 일부 경우에, IgG Fc 영역 변이체는 가축 IgG1b 항체 Fc 영역의 변이체이다. 일부 경우에, IgG Fc 영역 변이체는 가축 IgG2 항체 Fc 영역의 변이체이다.

일부 양태에서, 본 개시내용은 가축의 IgG Fc 영역 변이체 또는 이의 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는,

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q, T250E, I250Q, I250E, A250Q, A250E, V250Q 및 V250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W, T252F, K252Y, K252W 및 K252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, M256A, M256D, M256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S286Y, S286F, S286W, S286L, S286D, S286E, T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, E311V, E311K, E311R, E311L, E311H, K311V, K311R, K311L, K311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F, V426H, G426Y, G426F 및 G426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y, M428F, H428L, H428Y 및 H428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H, T436H, F436H 및 V436H로 이루어진 군으로부터 선택됨)로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

아미노산 위치는 EU 넘버링을 기반으로 하며, 폴리펩타이드는 야생형 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 가축의 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 가축은 돼지이다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에 아미노산 치환을 포함한다:

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T250Q, T250E, I250Q 및 I250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W 및 M252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K 및 S254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, E311V, E311K, E311R, E311L 및 E311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(xi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H 및 T436H로 이루어진 군으로부터 선택됨).

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y임);

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T286E임);

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309D 또는 Q309V임);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V임);

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y임);

(vi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428Y임);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434Y임);

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:1 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG Fc이다.

일부 실시형태에서, 가축은 소이다.

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L 및 Q311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(x) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임).

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V임);

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V임);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434Y임); 및

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임).

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:12 내지 14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG Fc이다.

일부 실시형태에서, 가축은 말이다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에 아미노산 치환을 포함한다.

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T250Q, T250E, A250Q, A250E, V250Q 및 V250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, K252Y, K252W 및 K252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L 및 K311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(xi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H, F436H 및 V436H로 이루어진 군으로부터 선택됨).

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V임);

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 G426Y임); 및

(vi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434Y임).

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:15 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG Fc이다.

일부 실시형태에서, 가축은 양이다.

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임).

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:22 내지 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG Fc이다.

(i) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T252Y임);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428Y임); 및

(v) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434Y임).

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:22 내지 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 양의 IgG Fc이다.

일부 실시형태에서, 가축은 염소이다.

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L, K311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

일부 실시형태에서, 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO:25 내지 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 염소의 IgG Fc이다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 적어도 하나의 아미노산 치환 중 2개 이상을 포함하고, 2개 이상의 아미노산 치환은 상이한 위치에 있고, 폴리펩타이드는 (a) 가축의 야생형 IgG의 Fc 도메인 및 (b) 2개 이상의 아미노산 치환 중 하나만을 포함하는 폴리펩타이드와 비교할 때 가축의 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 결합 도메인을 추가로 포함한다. 일부 실시형태에서, 결합 도메인은 (i) 면역글로불린 분자의 6개의 상보성 결정 영역(CDR), (ii) 가축 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인, (iii) 나노바디, 또는 (iv) 가축 수용체 단백질의 세포외 도메인을 포함한다.

일부 실시형태에서, 결합 도메인은 NGF, TrKA, ADAMTS, IL-1, IL-2, IL-4, IL-4R, 안지오텐신 유형 1(AT1) 수용체, 안지오텐신 유형 2(AT2) 수용체, IL-5, IL-12, IL-13, IL-31, IL-33, CD3, CD20, CD47, CD52 및 보체계 복합체(complement system complex)로 이루어진 군으로부터 선택되는 항원에 특이적으로 결합한다.

일부 실시형태에서, 결합 도메인(예를 들어, 항체의 결합 도메인)과 항원 사이의 특이적 결합은 K_D 값으로 표시된다. K_D는 항체의 항체 결합률(k_on)에 대한 항체 해리율(k_off)의 비율이다. K_D 값은 특정 항체/항원 상호작용의 k_on 및 k_off 비율을 측정한 다음 이러한 값의 비율을 사용하여 K_D 값을 계산함으로써 결정할 수 있다. K_D 값이 작을수록 표적에 대한 항체(또는 이의 결합 도메인)의 친화도가 커진다. 일부 실시양태에서, 특이적 결합에 대한 K_D 값의 범위는 약 10^-6 내지 약 10^-12(예를 들어, 10^-6, 10^-7, 10^-8, 10^-9, 10^-10, 10^-11 또는 10^-12)이다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1/VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 효능제 및 트롬보포이에틴 결합 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택되는 단백질을 추가로 포함한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 중성 pH보다 산성 pH에서 더 높은 수준으로 가축 FcRn에 결합한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5에서 더 높은 수준으로 가축 FcRn에 결합한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 6.0에서 더 높은 수준으로 가축 FcRn에 결합한다.

또한, (i) 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 및 (ii) 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 본 명세서에 개시되어 있다.

본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들로 확장된다.

본 명세서에 개시된 다른 양태에서, 본 명세서에 기재된 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들이 제공된다.

본 개시내용은 본 명세서에 기재된 핵산 또는 핵산들 또는 본 명세서에 개시된 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 포함하는 숙주 세포로 확장된다.

또한, 본 명세서에서는 폴리펩타이드를 제조하는 방법이 개시되며, 해당 방법은 하기를 포함한다:

(a) 본 명세서에 개시된 핵산 또는 핵산들을 제공하는 단계;

(b) 숙주 세포 배양물에서 핵산 또는 핵산들을 발현시켜 폴리펩타이드를 생산하는 단계; 및

(c) 숙주 세포 배양물로부터 (b)에서 생산된 폴리펩타이드를 수집하는 단계.

일부 실시형태에서, 방법은 약학적 제형으로 폴리펩타이드를 제형화하는 단계를 더 포함한다.

본 개시내용은 또한 이를 필요로 하는 가축의 질환 또는 장애를 치료하는 방법으로 확장되며, 이 방법은 본 명세서에 개시된 약학적 조성물을 포함하는 유효량의 조성물을 가축에게 투여하는 단계를 포함한다.

본 개시내용은 또한 이를 필요로 하는 가축의 질환 또는 장애를 예방하는 방법으로 확장되며, 이 방법은 본 명세서에 개시된 약학적 조성물을 포함하는 유효량의 조성물을 가축에게 투여하는 단계를 포함한다.

일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 알레르기, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 생식 관련 장애, 감염성 질환 또는 암이다.

일부 실시형태에서, 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절성 통증, 관절염, 빈혈 또는 비만이다.

달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기재된 것과 유사하거나 등가인 방법 및 물질이 본 발명의 실시 또는 시험에 사용될 수 있지만, 예시적인 방법 및 물질이 하기에 기재된다. 본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 특허 및 기타 참고 문헌은 그 전체가 참조에 의해 원용된다. 상충하는 경우, 정의를 포함하여 본 출원이 우선한다. 물질, 방법 및 예는 예시일 뿐이며, 제한하려는 의도가 아니다.

본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 상세한 설명 및 청구범위로부터 명백해질 것이다.

도 1은 돼지 IgG1a, 양 IgG1, 소 IgG1, 말 IgG1, 고양이 IgG1a, 개 IgGB 및 인간 IgG1의 야생형 Fc 영역의 아미노산 서열의 정렬을 나타낸다. 이들 서열은 각각 SEQ ID NO:30 내지 36으로 지정된다.
도 2a~2j는 쿠마시 블루-염색된 SDS/PAGE 겔의 스캐닝 밀도계에 의해 결정된 Fc 변이체를 갖는 돼지 항체의 순도를 보여준다. 각 항체의 순도는 90%를 넘었다.
도 3a~3j는 쿠마시 블루-염색된 SDS/PAGE 겔의 스캐닝 밀도계에 의해 결정된 Fc 변이체를 갖는 양 항체의 순도를 보여준다. 각 항체의 순도는 90%를 넘었다.
도 4a~4j는 쿠마시 블루-염색된 SDS/PAGE 겔의 스캐닝 밀도계에 의해 결정된 Fc 변이체를 갖는 소 항체의 순도를 보여준다. 각 항체의 순도는 90%를 넘었다.
도 5a~5j는 쿠마시 블루-염색된 SDS/PAGE 겔의 스캐닝 밀도계에 의해 결정된 Fc 변이체를 갖는 말 항체의 순도를 보여준다. 각 항체의 순도는 90%를 넘었다.
도 6a~6j는 돼지 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터의 센소그램(sensograms)을 보여준다.
도 7a~7j는 양 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터의 센소그램을 보여준다.
도 8a~8j는 소 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터의 센소그램을 보여준다.
도 9a~9j는 말 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터의 센소그램을 보여준다.

가축에 영향을 주는 매우 다양한 질환의 예방 및 치료를 위한 치료제로서 폴리펩타이드(예를 들어, 항체, 수용체의 리간드-결합 도메인, 효소, 리간드, 펩타이드)의 사용이 증가함에 따라, 특히 폴리펩타이드가 반복적으로 투여되어야 하는 만성 질환의 예방 또는 치료를 위해 연장된 반감기를 갖는 폴리펩타이드를 개발하는 것이 중요하다.

따라서, 본 개시내용은 가축의 이들 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 돌연변이를 포함하는 가축의 면역글로불린 Fc 영역 또는 이의 FcRn-결합 영역을 특징으로 한다. 또한, 이들 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 및 이의 사용 방법이 개시된다. 이러한 펩타이드는 다양한 치료 및 진단 목적을 위해 사용될 수 있다.

값이 범위의 측면에서 기재되는 경우, 설명은 이러한 범위 내의 가능한 모든 하위 범위뿐만 아니라 특정 수치 또는 특정 하위 범위가 명시적으로 언급되는지 여부에 관계없이 이러한 범위 내에 속하는 특정 수치의 개시를 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 범위를 포함하여, 예를 들어, pH, 온도, 시간, 농도 및 분자량의 모든 숫자의 표기는 적절하게는 1.0 또는 0.1의 증분으로 또는 대안으로 +/- 15%, 또는 대안으로 10%, 또는 대안으로 5% 또는 대안으로 2%의 변화로 (+) 또는 (-)로 변하는 근사치이다. 항상 명시적으로 언급되는 것은 아니지만, 모든 숫자 표기 앞에 "약"이라는 용어가 붙음을 이해하여야 한다. 또한, 항상 명시적으로 언급되는 것은 아니지만, 본 명세서에 기재된 시약은 단지 예시일 뿐이며, 이의 동등물이 당업계에 공지되어 있음을 이해하여야 한다.

양 또는 농도 등과 같은 측정 가능한 값을 언급할 때, 본 명세서에서 사용되는 용어 "약"은 명시된 양의 20%, 10%, 5%, 1%, 0.5% 또는 심지어 0.1%의 변화를 포함하는 것을 의미한다.

돼지 항체

돼지는 전형적으로 IgG1a, IgG1b, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4a, IgG4b, IgG5a, IgG5b, IgG6a 및 IgG6b로 지칭되는 11개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 돼지 IgG의 11개의 상이한 서브클래스를 나타낸다. 이들 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 11개의 돼지 IgG 중쇄 Fc 영역 각각의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열의 예시적 실시예는 아래에 제시되어 있으며(CH2 도메인은 밑줄로 표시됨), 각 중쇄 Fc 영역의 GenBank 접근 번호(아미노산 서열이 유도된 아미노산 서열 또는 mRNA 서열에 대한)는 다음과 같이 표시된다.

돼지(Sus scrofa) IgG Fc 서열

IgG1a (GenBank AAA52219.1)

GCEVAGPSVFIFPPKPKDTLMISQTPEVTCVVVDVSKEHAEVQFSWYVDGVEVHTAETRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFKCKVNNVDLPAPITRTISKAIGQSREPQVYTLPPPAEELSRSKVTVTCLVIGFYPPDIHVEWKSNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTFFLYSKLAVDKARWDHGETFECAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK (SEQ ID NO:1)

IgG1b (GenBank AAA52216.1)

GCEVAGPSVFIFPPKPKDTLMISQTPEVTCVVVDVSKEHAEVQFSWYVDGVEVHTAETRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFKCKVNNVDLPAPITRTISKAIGQSREPQVYTLPPPAEELSRSKVTLTCLVIGFYPPDIHVEWKSNGQPEPENTYRTTPPQQDVDGTFFLYSKLAVDKARWDHGDKFECAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK (SEQ ID NO:2)

IgG2a (GenBank U03779)

ACESPGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPQVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGVEVHTAQTRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLNGKEFKCKVNNKDLPAPITRIISKAKGQTREPQVYTLPPHAEELSRSKVSITCLVIGFYPPDIDVEWQRNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKFSVDKASWQGGGIFQCAVMHEALHNHYTQKSISKTPGK (SEQ ID NO:3)

IgG2b (GenBank U03780)

ACESPGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPQVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGVEVHTAQTRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLNGKEFKCKVNNKDLPAPITRIISKAKGQTREPQVYTLPPHAEELSRSKVSITCLVIGFYPPDIDVEWQRNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKFSVDKASWQGGGIFQCAVMHEALHNHYTQKSISKTPGK (SEQ ID NO:4)

IgG3 (GenBank ABY85810.1)

AAEVLGAPSVFLFPPKPKDILMISRTPKVTCVVVDVSQEEAEVQFSWYVDGVQLYTAQTRPMEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFKCKVNNKDLLSPITRTISKATGPSRVPQVYTLPPAWEELSKSKVSITCLVTGFYPPDIDVEWQSNGQQEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKVRWQRGDLFQCAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK (SEQ ID NO:5)

IgG4a (GenBank AAA52220.1)

ACEGPGPSAFIFPPKPKDTLMISRTPKVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGVEVHTAQTRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLNGKEFKCKVNNKDLPAPITRIISKAKGQTREPQVYTLPPPTEELSRSKVTLTCLVTGFYPPDIDVEWQRNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKASWQRGDTFQCAVMHEALHNHYTQKSIFKTPGK (SEQ ID NO:6)

IgG4b (GenBank ABY85806.1)

ACEGPGPSAFIFPPKPKDTLMISRTPKVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGVEVHTAQTRPKEEQFNSTYRVVSVLLIQHQDWLNGKEFKCKVNNKDLPAPITRIISKAKGQTREPQVYTLPPPTEELSRSKVTLTCLVTGFYPPDIDVEWQRNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKASWQRGDTFQCAVMHEALHNHYT (SEQ ID NO:7)

IgG5a (GenBank ABY85809.1)

GCEVAGPSVFIFPPKPKDILMISRTPEVTCVVVDVSKEHAEVQFSWYVDGEEVHTAETRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHEDWLKGKEFECKVNNEDLPGPITRTISKAKGVVRSPEVYTLPPPAEELSKSIVTLTCLVKSIFPPFIHVEWKINGKPEPENAYRT TPPQEDEDRTYFLYSKLAVDKARWDHGETFECAVMHEALHNHYTQKSISKTQGK (SEQ ID NO:8)

IgG5b (GenBank AB699687)

ICPVAGPSVFIFPPKPKDILMISRTPEVTCVVVDVSKEHAEVQFSWYVDGEEVHTAETRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHEDWLKGKEFECKVNNEDLPGPITRTISKAKGVVRSPEVYTLPPPAEELSKSIVTLTCLVKSFFPPFIHVEWKINGKPEPENAYRTTPPQEDEDGTYFLYSKFSVEKFRWHSGGIHCAVMHEALHNHYTEKSVSQTPGK (SEQ ID NO:9)

IgG6a (GenBank AB699687)

ACEGPGPSAFIFPPKPKDTLMISRTPKVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGVEVHTAQTRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLNGKEFKCKVNNKDLPAPITRIISKAKGQTREPQVYTLPPPTEELSRSKLSVTCLITGFYPPDIDVEWQRNGQPEPEGNYRTTPPQQDVDGTYFLYSKLAVDKASWQRGDPFQCAVMHEALHNHYTQKSIFKTPGN (SEQ ID NO:10)

IgG6b (GenBank ABY85805.1)

ACEGNGPSVFIFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQENPEVQFSWYVDGEEVHTAETRPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLKGKEFECKVNNKDLPAPITRIISKAKGPSREPQVYTLSPSAEELSRSKVSITCLVTGFYPPDIDVEWKSNGQPEPEGNYRSTPPQEDEDGTYFLYSKLAVDKARLQSGGIHCAVMHEALHNHYTQKSISKT (SEQ ID NO:11)

돼지 항체의 CH2 영역은 돼지 IgG 항체의 231번 내지 340번 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH2 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

돼지 항체의 CH3 영역은 돼지 IgG 항체의 341 내지 447 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH3 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

돼지 IgG 항체의 Fc 영역은 돼지 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 구성된다.

하기 표 1은 EU 넘버링에 기초하여 인간 IgG1, 개 IgGB 및 고양이 IgG1a의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 11종의 돼지 IgG 동종형(isotype) 각각과 비교한 것이다.

반감기를 향상시키는 돼지 IgG Fc의 치환

증가된 혈청 지속성은 치료적 폴리펩타이드에 대한 유익한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 돼지에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 돼지 IgG1a, IgG1b, IgG2a, IgG2b, IgG3, IgG4a, IgG4b, IgG5a, IgG5b, IgG6a 및 IgG6b Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하되, 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신 상응하는 야생형 돼지 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 돼지 CH2 영역, 돼지 CH3 영역 중 하나 이상에서 또는 돼지 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역과 관련하여 이루어질 수 있다.

본 개시내용은 돼지 IgG의 Fc 영역 변이체 또는 이의 돼지 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 (예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11) 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

(i) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T250Q, T250E, I250Q 및 I250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W 및 M252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K 및 S254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vi) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, E311V, E311K, E311R, E311L 및 E311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y, M428F, H428L, H428Y 및 H428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 야생형 돼지 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H 및 T436H로 이루어진 군으로부터 선택됨).

아미노산 위치는 EU 넘버링에 기초하며, 폴리펩타이드는 야생형 돼지 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 돼지 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의(예: 1, 2, 3, 4, 5, 6 또는 7) 위치에 아미노산 치환을 포함한다:

(vii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434Y임).

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 동일한 pH에서 야생형 돼지 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 pH 약 5.0 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)에서 돼지 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:1 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG CH2 도메인 변이체를 제공한다. 또한 SEQ ID NO:1 내지 11에 나타낸 CH2 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG CH2 도메인 변이체가 제공된다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:1 내지 11에 나타낸 CH3 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:1 내지 11에 나타낸 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다.

일부 실시형태에서, 돼지 IgG Fc CH2 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되되, CH2 도메인 변이체는 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 돼지 IgG Fc CH3 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, CH3 도메인 변이체는 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 돼지 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, Fc 영역 변이체는 SEQ ID NO:1 내지 11 중 어느 하나에 나타낸 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

소 항체

소는 전형적으로 IgG1, IgG2 및 IgG3로 지칭되는 3개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 소 IgG의 3개의 상이한 서브클래스를 나타낸다. 이들 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 3개의 소 IgG 중쇄 Fc 영역 각각의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열의 예시적 실시예는 아래에 제시되어 있으며(CH2 도메인은 밑줄로 표시됨), 각 중쇄 Fc 영역의 GenBank 접근 번호(아미노산 서열이 유도된 아미노산 서열 또는 mRNA 서열에 대한)는 다음과 같이 표시된다.

소(Bos Taurus)

IgG1(GenBank ABE68619.1)

PPELPGGPSVFIFPPKPKDTLTISGTPEVTCVVVDVGHDDPEVKFSWFVDNVEVNTATTKPREEQFNSTYRVVSALRIQHQDWTGGKEFKCKVHNEGLPAPIVRTISRTKGPAREPQVYVLAPPQEELSKSTVSLTCMVTSFYPDYIAVEWQRNGQPESEDKYGTTPPQLDADSSYFLYSKLRVDRNSWQEGDTYTCVVMHEALHNHYTQKSTSKSA (SEQ ID NO:12)

IgG2 (GenBank AQT27057.1)

CVREPSVFIFPPKPKDTLMITGTPEVTCVVVNVGHDNPEVQFSWFVDDVEVHTARTKPREEQFNSTYRVVSALPIQHQDWTGGKEFKCKVNIKGLSASIVRIISRSKGPAREPQVYVLDPPKEELSKSTVSVTCMVIGFYPEDVDVEWQRDRQTESEDKYRTTPPQLDADRSYFLYSKLRVDRNSWQRGGTYTCVVMHEALHNHYMQKSTSKSAGK (SEQ ID NO:13)

IgG3 (GenBank AAC48761.1)

EPLGGLSVFIFPPKPKDTLTISGTPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFVDDVEVHTARTKPREEQFNSTYRVVSALRIQHQDWLQGKEFKCKVNNKGLPAPIVRTISRTKGQAREPQVYVLAPPREELSKSTLSLTCLITGFYPEEIDVEWQRNGQPESEDKYHTTAPQLDADGSYFLYSKLRVNKSSWQEGDHYTCAVMHEALRNHYKEKSISRSPGK (SEQ ID NO:14)

소 항체의 CH2 영역은 소 IgG 항체의 231번 내지 340번 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH2 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

소 항체의 CH3 영역은 소 IgG 항체의 341 내지 447 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH3 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

소 IgG 항체의 Fc 영역은 소 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 구성된다.

하기 표 2는 EU 넘버링에 기초하여 인간 IgG1, 개 IgGB 및 고양이 IgG1a의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 3종의 소 IgG 동종형(isotype)

	CH2 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	소 IgG1	소 IgG2	소 IgG3
231	A	A	P	P
232	P	P	P	P
233	E	E	E	E		E
234	L	M	M	L		P
235	L	L	L	P		L
236	G	G	G	G		G
237	G	G	G	G		G
238	P	P	P	P	P	L
239	S	S	S	S	S	S
240	V	V	I	V	V	V
241	F	F	F	F	F	F
242	L	I	I	I	I	I
243	F	F	F	F	F	F
244	P	P	P	P	P	P
245	P	P	P	P	P	P
246	K	K	K	K	K	K
247	P	P	P	P	P	P
248	K	K	K	K	K	K
249	D	D	D	D	D	D
250	T	T	T	T	T	T
251	L	L	L	L	L	L
252	M	L	S	T	M	T
253	I	I	I	I	I	I
254	S	A	S	S	T	S
255	R	R	R	G	G	G
256	T	T	T	T	T	T
257	P	P	P	P	P	P
258	E	E	E	E	E	E
259	V	V	V	V	V	V
260	T	T	T	T	T	T
261	C	C	C	C	C	C
262	V	V	L	V	V	V
263	V	V	V	V	V	V
264	V	V	V	V	V	V
265	D	D	D	D	N	D
266	V	L	L	V	V	V
267	S	D	G	G	G	G
268	H	P	P	H	H	Q
269	E	E	D	D	D	D
270	D	D	D	D	N	D
271	P	P	S	P	P	P
272	E	E	D	E	E	E
273	V	V	V	V	V	V
274	K	Q	Q	K	Q	Q
275	F	I	I	F	F	F
276	N	S	T	S	S	S
277	W	W	W	W	W	W
278	Y	F	F	F	F	F
279	V	V	V	V	V	V
280	D	D	D	D	D	D
282	G	G	N	N	D	D
282	V	K	T	V	V	V
283	E	Q	Q	E	E	E
284	V	M	V	V	V	V
285	H	Q	Y	N	H	H
286	N	T	T	T	T	T
287	A	A	A	A	A	A
288	K	K	K	T	R	R
289	T	T	T	T	T	T
290	K	Q	S	K	K	K
291	P	P	P	P	P	P
292	R	R	R	R	R	R
293	E	E	E	E	E	E
294	E	E	E	E	E	E
295	Q	Q	Q	Q	Q	Q
296	Y	F	F	F	F	F
297	N	N	N	N	N	N
298	S	G	S	S	S	S
299	T	T	T	T	T	T
300	Y	Y	Y	Y	Y	Y
301	R	R	R	R	R	R
302	V	V	V	V	V	V
303	V	V	V	V	V	V
304	S	S	S	S	S	S
305	V	V	V	A	A	A
306	L	L	L	L	L	L
307	T	P	P	R	P	R
308	V	I	I	I	I	I
309	L	G	L	Q	Q	Q
310	H	H	H	H	H	H
311	Q	Q	Q	Q	Q	Q
312	D	D	D	D	D	D
313	W	W	W	W	W	W
314	L	L	L	T	T	L
315	N	K	K	G	G	Q
316	G	G	G	G	G	G
317	K	K	K	K	K	K
318	E	Q	E	E	E	E
319	Y	F	F	F	F	F
320	K	T	K	K	K	K
321	C	C	C	C	C	C
322	K	K	K	K	K	K
323	V	V	V	V	V	V
324	S	N	N	H	N	N
325	N	N	S	N	I	N
326	K	K	K	E	K	K
327	A	A	S	G	G	G
328	L	L	L	L	L	L
329	P	P	P	P	S	P
330	A	S	S	A	A	A
331	P	P	P	P	S	P
332	I	I	I	I	I	I
333	E	E	E	V	V	V
334	K	R	R	R	R	R
335	T	T	T	T	I	T
336	I	I	I	I	I	I
337	S	S	S	S	S	S
338	K	K	K	R	R	R
339	A	A	A	T	S	T
340	K	R	K	K	K	K

	CH3 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	소 IgG1	소 IgG2	소 IgG3
341	G	G	G	G	G	G
342	Q	Q	Q	P	P	Q
343	P	A	P	A	A	A
344	R	H	H	R	R	R
345	E	Q	E	E	E	E
346	P	P	P	P	P	P
347	Q	S	Q	Q	Q	Q
348	V	V	V	V	V	V
349	Y	Y	Y	Y	Y	Y
350	T	V	V	V	V	V
351	L	L	L	L	L	L
352	P	P	P	A	D	A
353	P	P	P	P	P	P
354	S	S	A	P	P	P
355	R	R	Q	Q	K	R
356	D	E	E	E	E	E
357	E	E	E	E	E	E
358	L	L	L	L	L	L
359	T	S	S	S	S	S
360	K	K	R	K	K	K
361	N	N	N	S	S	S
362	Q	T	K	T	T	T
363	V	V	V	V	V	L
364	S	S	S	S	S	S
365	L	L	V	L	V	L
366	T	T	T	T	T	T
367	C	C	C	C	C	C
368	L	L	L	M	M	L
369	V	I	I	V	V	I
370	K	K	K	T	I	T
371	G	D	S	S	G	G
372	F	F	F	F	F	F
373	Y	F	H	Y	Y	Y
374	P	P	P	P	P	P
375	S	P	P	D	E	E
376	D	D	D	Y	D	E
377	I	I	I	I	V	I
378	A	D	A	A	D	D
379	V	V	V	V	V	V
380	E	E	E	E	E	E
381	W	W	W	W	W	W
382	E	Q	E	Q	Q	Q
383	S	S	I	R	R	R
384	N	N	T	N	D	N
385	G	G	G	G	R	G
386	Q	Q	Q	Q	Q	Q
387	P	Q	P	P	T	P
388	E	E	E	E	E	E
389(a)	N	P	P	S	S	S
389b		E	E	E	E	E
389c		S	N	D	D	D
390	N	K	N	K	K	K
391	Y	Y	Y	Y	Y	Y
392	K	R	R	G	R	H
393	T	T	T	T	T	T
394	T	T	T	T	T	T
395	P	P	P	P	P	A
396	P	P	P	P	P	P
397	V	Q	Q	Q	Q	Q
398	L	L	L	L	L	L
399	D	D	D	D	D	D
400	S	E	S	A	A	A
401	D	D	D	D	D	D
402	G	G	G	S	R	G
403	S	S	T	S	S	S
404	F	Y	Y	Y	Y	Y
405	F	F	F	F	F	F
406	L	L	V	L	L	L
407	Y	Y	Y	Y	Y	Y
408	S	S	S	S	S	S
409	K	K	K	K	K	K
410	L	L	L	L	L	L
411	T	S	S	R	R	R
412	V	V	V	V	V	V
413	D	D	D	D	D	N
414	K	K	R	R	R	K
415	S	S	S	N	N	S
416	R	R	H	S	S	S
417	W	W	W	W	W	W
418	Q	Q	Q	Q	Q	Q
419	Q	R	R	E	R	E
420	G	G	G	G	G	G
421	N	D	N	D	G	D
422	V	T	T	T	T	H
423	F	F	Y	Y	Y	Y
424	S	I	T	T	T	T
425	C	C	C	C	C	C
426	S	A	S	V	V	A
427	V	V	V	V	V	V
428	M	M	S	M	M	M
429	H	H	H	H	H	H
430	E	E	E	E	E	E
431	A	A	A	A	A	A
432	L	L	L	L	L	L
433	H	H	H	H	H	R
434	N	N	S	N	N	N
435	H	H	H	H	H	H
436	Y	Y	H	Y	Y	Y
437	T	T	T	T	M	K
438	Q	Q	Q	Q	Q	E
439	K	E	K	K	K	K
440	S	S	S	S	S	S
441	L	L	L	T	T	I
442	S	S	T	S	S	S
443	L	H	Q	K	K	R
444	S	S	S	S	S	S
445	P	P	P	A	A	P
446	G	G	G	G	G	G
447	K	K	K	K	K	K

반감기를 향상시키는 소 IgG Fc의 치환

증가된 혈청 지속성은 치료적 폴리펩타이드에 대한 유익한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 소에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 소 IgG1, IgG2 및 IgG3 Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하되, 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신 상응하는 야생형 소 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 소 CH2 도메인, 소 CH3 도메인 중 하나 이상에서 또는 소 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역과 관련하여 이루어질 수 있다.

본 개시내용은 소 IgG의 Fc 영역 변이체 또는 이의 소 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 (예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11) 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

(x) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임),

아미노산 위치는 EU 넘버링을 기반으로 하며, 폴리펩타이드는 야생형 소 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 소 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5)의 위치에 아미노산 치환을 포함한다:

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 동일한 pH에서 야생형 소 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 pH 약 5.0 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)에서 소 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:12 내지 14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG CH2 도메인 변이체를 제공한다. 또한 SEQ ID NO:12 내지 14에 나타낸 CH2 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG CH2 도메인 변이체가 제공된다.

다른 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:12 내지 14에 나타낸 CH3 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다.

특정 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:12 내지 14에 나타낸 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다.

일부 실시형태에서, 소 IgG Fc CH2 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되되, CH2 도메인 변이체는 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 소 IgG Fc CH3 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, CH3 도메인 변이체는 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 소 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, Fc 영역 변이체는 SEQ ID NO:12 내지 14 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

말 항체

말은 전형적으로 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6 및 IgG7로 지칭되는 7개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 말 IgG의 7개의 상이한 서브클래스를 나타낸다. 이들 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 7개의 말 IgG 중쇄 Fc 영역 각각의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열의 예시적 실시예는 아래에 제시되어 있으며(CH2 도메인은 밑줄로 표시됨), 각 중쇄 Fc 영역의 GenBank 접근 번호(아미노산 서열이 유도된 아미노산 서열 또는 mRNA 서열에 대한)는 다음과 같이 표시된다.

말(Equus caballus)

IgG1 (GenBank CAC44760.1)

APELLGGPSVFIFPPNPKDTLMITRTPEVTCVVVDVSQENPDVKFNWYMDGVEVRTATTRPKEEQFNSTYRVVSVLRIQHQDWLSGKEFKCKVNNQALPQPIERTITKTKGRSQEPQVYVLAPHPDELSKSKVSVTCLVKDFYPPEINIEWQSNGQPELETKYSTTQAQQDSDGSYFLYSKLSVDRNRWQQGTTFTCGVMHEALHNHYTQKNVSKNPGK (SEQ ID NO:15)

IgG2 (GenBank CAC44761.1)

GPSVFIFPPNPKDALMISRTPVVTCVVVNLSDQYPDVQFSWYVDNTEVHSAITKQREAQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLSGKEFKCSVTNVGVPQPISRAISRGKGPSRVPQVYVLPPHPDELAKSKVSVTCLVKDFYPPDISVEWQSNRWPELEGKYSTTPAQLDGDGSYFLYSKLSLETSRWQQVESFTCAVMHEALHNHFTKTDISESLGK (SEQ ID NO:16)

IgG3 (GenBank AAP82181.1)

APELLGGPSVFIFPPKPKDVLMITRMPEVTCLVVDVSHDSSDVLFTWYVDGTEVKTAKTMPNEEQNNSTYRVVSVLRIQHQDWLNGKKFKCKVNNQALPAPVERTISKATGQTRVPQVYVLAPHPDELSKNKVSVTCLVKDFYPTDITVEWQSNEHPEPEGKYRTTEAQKDSDGSYFLYSKLTVEKDRWQQGTTFTCVVMHEALHNHVMQKNISKNPGK (SEQ ID NO:17)

IgG4 (GenBank AAS18415.1)

ECLQVGPSVFIFPPKPKDVLMISRTPTVTCVVVDVGHDFPDVQFNWYVDGVETHTATTEPKQEQFNSTYRVVSVLPIQHKDWLSGKEFKCKVNNKALPAPVERTISKPTGQPREPQVYVLAPHRDELSKNKVSVTCLVKDFYPTDIDIEWKSNGQPEPETKYSTTPAQLDSDGSYFLYSKLTVETNRWQQGTTFTCAVMHEALHNHYTEKSVSKSPGK (SEQ ID NO:18)

IgG5 (GenBank CAC86340.1)

APELPGGPSVFIFPPKPKDVLKISRKPEVTCVVVDLGHDDPDVQFTWFVDGVETHTATTEPKEEQFNSTYRVVSVLPIQHQDWLSGKEFKCSVTNKALPAPVERTTSKAKGQLRVPQVYVLAPHPDELAKNTVSVTCLVKDFYPPEIDVEWQSNEHPEPEGKYSTTPAQLNSDGSYFLYSKLSVETSRWKQGESFTCGVMHEAVENHYTQKNVSHSPGK (SEQ ID NO:19)

IgG6 (GenBank CAC86341.1)

DSKFLGRPSVFIFPPNPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQENPDVKFNWYVDGVEAHTATTKAKEKQDNSTYRVVSVLPIQHQDWRRGKEFKCKVNNRALPAPVERTITKAKGELQDPKVYILAPHREEVTKNTVSVTCLVKDFYPPDINVEWQSNEEPEPEVKYSTTPAQLDGDGSYFLYSKLTVETDRWEQGESFTCVVMHEAIRHTYRQKSITNFPGK (SEQ ID NO:20)

IgG7 (GenBank AAS18414.1)

ECLSVGPSVFIFPPKPKDVLMISRTPTVTCVVVDVGHDFPDVQFNWYVDGVETHTATTEPKQEQNNSTYRVVSILAIQHKDWLSGKEFKCKVNNQALPAPVQKTISKPTGQPREPQVYVLAPHRDELSKNKVSVTCLVKDFYPTDIDIEWKSNGQPEPETKYSTTPAQLDSDGSYFLYSKLTVETNRWQQGTTFTCAVMHEALHNHYTEKSVSKSPGK (SEQ ID NO:21)

말 항체의 CH2 영역은 말 IgG 항체의 231 내지 340 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH2 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

말 항체의 CH3 영역은 말 IgG 항체의 341 내지 447 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH3 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

말 IgG 항체의 Fc 영역은 말 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 구성된다.

하기 표 3은 EU 넘버링에 기초하여 인간 IgG1, 개 IgGB 및 고양이 IgG1a의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 3종의 말 IgG 동종형(isotype) 각각과 비교한 것이다.

반감기를 향상시키는 말 IgG Fc의 치환

증가된 혈청 지속성은 치료적 폴리펩타이드에 대한 유익한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 말에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 말 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgG5, IgG6 및 IgG7 Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하되, 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신 상응하는 야생형 말 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 말 CH2 도메인, 말 CH3 도메인 중 하나 이상에서 또는 말 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역과 관련하여 이루어질 수 있다.

본 개시내용은 말 IgG의 Fc 영역 변이체 또는 이의 말 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 (예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11) 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

(i) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T250Q, T250E, A250Q, A250E, V250Q 및 V250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, K252Y, K252W 및 K252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, M256A, M256D, M256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S286Y, S286F, S286W, S286L, S286D, S286E, T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vi) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L 및 K311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F, V426H, G426Y, G426F 및 G426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 야생형 말 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H, F436H 및 V436H 로 이루어진 군으로부터 선택됨),

아미노산 위치는 EU 넘버링을 기반으로 하며, 폴리펩타이드는 야생형 말 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 말 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)의 위치에 아미노산 치환을 포함한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 동일한 pH에서 야생형 말 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 pH 약 5.0 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)에서 말 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:15 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG CH2 도메인 변이체를 제공한다. 또한 SEQ ID NO:15 내지 21에 나타낸 CH2 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG CH2 도메인 변이체가 제공된다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:15 내지 21에 나타낸 CH3 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:15 내지 21에 나타낸 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다.

일부 실시형태에서, 말 IgG Fc CH2 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되되, CH2 도메인 변이체는 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 CH2의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 말 IgG Fc CH3 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, CH3 도메인 변이체는 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 말 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, Fc 영역 변이체는 SEQ ID NO:15 내지 21 중 어느 하나에 나타낸 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

양 항체

양은 전형적으로 IgG1, IgG2 및 IgG3로 지칭되는 3개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 양 IgG의 3개의 상이한 서브클래스를 나타낸다. 이들 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 3개의 양 IgG 중쇄 Fc 영역 각각의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열의 예시적 실시예는 아래에 제시되어 있으며(CH2 도메인은 밑줄로 표시됨), 각 중쇄 Fc 영역의 GenBank 접근 번호(아미노산 서열이 유도된 아미노산 서열 또는 mRNA 서열에 대한)는 다음과 같이 표시된다.

양(Oviari)

IgG1 (GenBank X69797)

PELPGGPSVFIFPPKPKDTLTISGTPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFVDNVEVRTARTKPREEQFNSTFRVVSALPIQHQDWTGGKEFKCKVHNEALPAPIVRTISRTKGQAREPQVYVLAPPQEELSKSTLSVTCLVTGFYPDYIAVEWQKNGQPESEDKYGTTTSQLDADGSYFLYSRLRVDKNSWQEGDTYACVVMHEALHNHYTQKSISKPPGK (SEQ ID NO:22)

IgG2 (GenBank X70983)

VSRPSVFIFPPKPKDSLMITGTPEVTCVVVDVGQGDPEVQFSWFVDNVEVRTARTKPREEQFNSTFRVVSALPIQHDHWTGGKEFKCKVHSKGLPAPIVRTISRAKGQAREPQVYVLAPPQEELSKSTLSVTCLVTGFYPDYIAVEWQRARQPESEDKYGTTTSQLDADGSYFLYSRLRVDKSSWQRGDTYACVVMHEALHNHYTQKSISKPPGK (SEQ ID NO:23)

IgG3 (Schwartz et al, 2018, Immunogenetics, 70:317)

PEPLGGLSVFIFPPKPKDTLTISGTPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFVDNVEVRTARTKPREEQFNSTFRVVSALPIQHQDWLRGKEIKCKVHNKGLPAPIVRTISRTKGQAREPQVYVLAPPQEELSKSTLSVTCLVTGFYPDYIAVEWQKNGQPESEDKYGTTTSQLDADGSYFLYSRLRVDKNSWQEGDTYACVVMHEALHNHYTQKSISKPPGK (SEQ ID NO:24)

양 항체의 CH2 영역은 양 IgG 항체의 231 내지 340 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH2 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

양 항체의 CH3 영역은 양 IgG 항체의 341 내지 447 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH3 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

양 IgG 항체의 Fc 영역은 양 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 구성된다.

하기 표 4는 EU 넘버링에 기초하여 인간 IgG1, 개 IgGB 및 고양이 IgG1a의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 3종의 양 IgG 동종형(isotype) 각각과 비교한 것이다.

	CH2 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	양 IgG1	양 IgG2	양 IgG3
231	A	A	P
232	P	P	P	P		P
233	E	E	E	E		E
234	L	M	M	L		P
235	L	L	L	P	V	L
236	G	G	G	G	S	G
237	G	G	G	G	R	G
238	P	P	P	P	P	L
239	S	S	S	S	S	S
240	V	V	I	V	V	V
241	F	F	F	F	F	F
242	L	I	I	I	I	I
243	F	F	F	F	F	F
244	P	P	P	P	P	P
245	P	P	P	P	P	P
246	K	K	K	K	K	K
247	P	P	P	P	P	P
248	K	K	K	K	K	K
249	D	D	D	D	D	D
250	T	T	T	T	S	T
251	L	L	L	L	L	L
252	M	L	S	T	M	T
253	I	I	I	I	I	I
254	S	A	S	S	T	S
255	R	R	R	G	G	G
256	T	T	T	T	T	T
257	P	P	P	P	P	P
258	E	E	E	E	E	E
259	V	V	V	V	V	V
260	T	T	T	T	T	T
261	C	C	C	C	C	C
262	V	V	L	V	V	V
263	V	V	V	V	V	V
264	V	V	V	V	V	V
265	D	D	D	D	D	D
266	V	L	L	V	V	V
267	S	D	G	G	G	G
268	H	P	P	Q	Q	Q
269	E	E	D	D	G	D
270	D	D	D	D	D	D
271	P	P	S	P	P	P
272	E	E	D	E	E	E
273	V	V	V	V	V	V
274	K	Q	Q	Q	Q	Q
275	F	I	I	F	F	F
276	N	S	T	S	S	S
277	W	W	W	W	W	W
278	Y	F	F	F	F	F
279	V	V	V	V	V	V
280	D	D	D	D	D	D
282	G	G	N	N	N	N
282	V	K	T	V	V	V
283	E	Q	Q	E	E	E
284	V	M	V	V	V	V
285	H	Q	Y	R	R	R
286	N	T	T	T	T	T
287	A	A	A	A	A	A
288	K	K	K	R	R	R
289	T	T	T	T	T	T
290	K	Q	S	K	K	K
291	P	P	P	P	P	P
292	R	R	R	R	R	R
293	E	E	E	E	E	E
294	E	E	E	E	E	E
295	Q	Q	Q	Q	Q	Q
296	Y	F	F	F	F	F
297	N	N	N	N	N	N
298	S	G	S	S	S	S
299	T	T	T	T	T	T
300	Y	Y	Y	F	F	F
301	R	R	R	R	R	R
302	V	V	V	V	V	V
303	V	V	V	V	V	V
304	S	S	S	S	S	S
305	V	V	V	A	A	A
306	L	L	L	L	L	L
307	T	P	P	P	P	P
308	V	I	I	I	I	I
309	L	G	L	Q	Q	Q
310	H	H	H	H	H	H
311	Q	Q	Q	Q	D	Q
312	D	D	D	D	H	D
313	W	W	W	W	W	W
314	L	L	L	T	T	L
315	N	K	K	G	G	R
316	G	G	G	G	G	G
317	K	K	K	K	K	K
318	E	Q	E	E	E	E
319	Y	F	F	F	F	I
320	K	T	K	K	K	K
321	C	C	C	C	C	C
322	K	K	K	K	K	K
323	V	V	V	V	V	V
324	S	N	N	H	H	H
325	N	N	S	N	S	N
326	K	K	K	E	K	K
327	A	A	S	A	G	G
328	L	L	L	L	L	L
329	P	P	P	P	P	P
330	A	S	S	A	A	A
331	P	P	P	P	P	P
332	I	I	I	I	I	I
333	E	E	E	V	V	V
334	K	R	R	R	R	R
335	T	T	T	T	T	T
336	I	I	I	I	I	I
337	S	S	S	S	S	S
338	K	K	K	R	R	R
339	A	A	A	T	A	T
340	K	R	K	K	K	K

	CH3 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	양 IgG1	양 IgG2	양 IgG3
341	G	G	G	G	G	G
342	Q	Q	Q	Q	Q	Q
343	P	A	P	A	A	A
344	R	H	H	R	R	R
345	E	Q	E	E	E	E
346	P	P	P	P	P	P
347	Q	S	Q	Q	Q	Q
348	V	V	V	V	V	V
349	Y	Y	Y	Y	Y	Y
350	T	V	V	V	V	V
351	L	L	L	L	L	L
352	P	P	P	A	A	A
353	P	P	P	P	P	P
354	S	S	A	P	P	P
355	R	R	Q	Q	Q	Q
356	D	E	E	E	E	E
357	E	E	E	E	E	E
358	L	L	L	L	L	L
359	T	S	S	S	S	S
360	K	K	R	K	K	K
361	N	N	N	S	S	S
362	Q	T	K	T	T	T
363	V	V	V	L	L	L
364	S	S	S	S	S	S
365	L	L	V	V	V	V
366	T	T	T	T	T	T
367	C	C	C	C	C	C
368	L	L	L	L	L	L
369	V	I	I	V	V	V
370	K	K	K	T	T	T
371	G	D	S	G	G	G
372	F	F	F	F	F	F
373	Y	F	H	Y	Y	Y
374	P	P	P	P	P	P
375	S	P	P	D	D	D
376	D	D	D	Y	Y	Y
377	I	I	I	I	I	I
378	A	D	A	A	A	A
379	V	V	V	V	V	V
380	E	E	E	E	E	E
381	W	W	W	W	W	W
382	E	Q	E	Q	Q	Q
383	S	S	I	K	R	K
384	N	N	T	N	A	N
385	G	G	G	G	R	G
386	Q	Q	Q	Q	Q	Q
387	P	Q	P	P	P	P
388	E	E	E	E	E	E
389(a)	N	P	P	S	S	S
389b		E	E	E	E	E
389c		S	N	D	D	D
390	N	K	N	K	K	K
391	Y	Y	Y	Y	Y	Y
392	K	R	R	G	G	G
393	T	T	T	T	T	T
394	T	T	T	T	T	T
395	P	P	P	T	T	T
396	P	P	P	S	S	S
397	V	Q	Q	Q	Q	Q
398	L	L	L	L	L	L
399	D	D	D	D	D	D
400	S	E	S	A	A	A
401	D	D	D	D	D	D
402	G	G	G	G	G	G
403	S	S	T	S	S	S
404	F	Y	Y	Y	Y	Y
405	F	F	F	F	F	F
406	L	L	V	L	L	L
407	Y	Y	Y	Y	Y	Y
408	S	S	S	S	S	S
409	K	K	K	R	R	R
410	L	L	L	L	L	L
411	T	S	S	R	R	R
412	V	V	V	V	V	V
413	D	D	D	D	D	D
414	K	K	R	K	K	K
415	S	S	S	N	S	N
416	R	R	H	S	S	S
417	W	W	W	W	W	W
418	Q	Q	Q	Q	Q	Q
419	Q	R	R	E	R	E
420	G	G	G	G	G	G
421	N	D	N	D	D	D
422	V	T	T	T	T	T
423	F	F	Y	Y	Y	Y
424	S	I	T	A	A	A
425	C	C	C	C	C	C
426	S	A	S	V	V	V
427	V	V	V	V	V	V
428	M	M	S	M	M	M
429	H	H	H	H	H	H
430	E	E	E	E	E	E
431	A	A	A	A	A	A
432	L	L	L	L	L	L
433	H	H	H	H	H	H
434	N	N	S	N	N	N
435	H	H	H	H	H	H
436	Y	Y	H	Y	Y	Y
437	T	T	T	T	T	T
438	Q	Q	Q	Q	Q	Q
439	K	E	K	K	K	K
440	S	S	S	S	S	S
441	L	L	L	I	I	I
442	S	S	T	S	S	S
443	L	H	Q	K	K	K
444	S	S	S	P	P	P
445	P	P	P	P	P	P
446	G	G	G	G	G	G
447	K	K	K	K	K	K

반감기를 향상시키는 양 IgG Fc의 치환

증가된 혈청 지속성은 치료적 폴리펩타이드에 대한 유익한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 말에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 양 IgG1, IgG2 및 IgG3 Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하되, 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신 상응하는 야생형 양 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 양 CH2 도메인, 양 CH3 도메인 중 하나 이상에서 또는 양 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역과 관련하여 이루어질 수 있다.

본 개시내용은 양 IgG의 Fc 영역 변이체 또는 이의 양 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 (예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11) 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

(i) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vi) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 야생형 양 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임),

아미노산 위치는 EU 넘버링을 기반으로 하며, 폴리펩타이드는 야생형 양 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 양 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5)의 위치에 아미노산 치환을 포함한다.

(ii) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V 임);

(iv) 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428Y 임); 및

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 동일한 pH에서 야생형 양 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 pH 약 5.0 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)에서 양 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:22 내지 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG CH2 도메인 변이체를 제공한다. 또한 SEQ ID NO:22 내지 24에 나타낸 CH2 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG CH2 도메인 변이체가 제공된다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:22 내지 24에 나타낸 CH3 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:22 내지 24에 나타낸 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다.

일부 실시형태에서, 양 IgG Fc CH2 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되되, CH2 도메인 변이체는 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 양 IgG Fc CH3 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, CH3 도메인 변이체는 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 양 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, Fc 영역 변이체는 SEQ ID NO:22 내지 24 중 어느 하나에 나타낸 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

염소 항체

염소는 전형적으로 IgG1, IgG2 및 IgG3로 지칭되는 3개의 IgG 중쇄를 갖는다. 이러한 중쇄는 염소 IgG의 3개의 상이한 서브클래스를 나타낸다. 이들 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GENBANK 데이터베이스로부터 이용 가능하다. 3개의 염소 IgG 중쇄 Fc 영역 각각의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열의 예시적 실시예는 아래에 제시되어 있다(CH2 도메인은 밑줄로 표시됨).

염소(Capra hircus)

IgG1 (Schwartz et al, 2018, Immunogenetics, 70:317)

PELPGGPSVFIFPPKPKDTLTISGKPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFVDNVEVHTARTKPREEQFNSTFRVVSALPIQHQDWTGGKEFKCKVHNEGLPAPIVRTISRTKGQAREPQVYVLAPPQEELSKSTLSVTCLVTGFYPDYIAVEWQRNGQPESEDKYGTTTSQLDADGSYFLYSRLRVNKSSWQEGDTYACVVMHEALHNHYTQKSISKPPGK (SEQ ID NO:25)

IgG2 (Schwartz et al, 2018, Immunogenetics, 70:317)

VRGPSVFIFPPKPKDSLMITGTPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFVDNVEVHTARTKPREEQFNSTFRVVSALPIQHDHWTGGKEFKCKVNNKALPAPIVRTISRDKGQAREPQVYVLAPPQEELSKSTLSVTCLVTGFYPDYIAVEWQRARQPESEDKYGTTTSQLDADGSYFLYSRLRVDKSSWQEGDTYACVVMHEALHNHYTQKSISKPPGK (SEQ ID NO:26)

IgG3 (Schwartz et al, 2018, Immunogenetics, 70:317)

PEPLGGLSVFIFPPKPKDTLTISGTPEVTCVVVDVGQDDPEVQFSWFMDNVEVHTARTTPREEQFNSTFRVVSALPIQHKDWLQGKEFKCKVHNEGLPAPIIRTISRAKGQAREPQVYVLAPPREELSKSTLSVTCLITGFYPEEVDVEWQRDGQPESEDKYHTAPPQLDADGSYFLYSRLRVNKSSWQEGDTYTCAVMHEALRNHYKEKSISKSPGK (SEQ ID NO:27)

염소 항체의 CH2 영역은 염소 IgG 항체의 231 내지 340 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH2 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

염소 항체의 CH3 영역은 염소 IgG 항체의 341 내지 447 아미노산(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 또는 이로 이루어진다. CH3 영역은 N-말단 및/또는 C-말단에 1개 내지 6개(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개)의 추가적인 아미노산 또는 결실을 포함할 수 있음을 이해하여야 한다.

염소 IgG 항체의 Fc 영역은 염소 IgG 항체의 아미노산 231 내지 447(EU 넘버링에 따름)을 포함하거나 이로 구성된다.

하기 표 5는 EU 넘버링에 기초하여 인간 IgG1, 개 IgGB 및 고양이 IgG1a의 CH2 및 CH3 도메인의 아미노산 서열을 3종의 염소 IgG 동종형(isotype) 각각과 비교한 것이다.

	CH2 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	염소 IgG1	염소 IgG2	염소 IgG3
231	A	A	P
232	P	P	P	P		P
233	E	E	E	E		E
234	L	M	M	L		P
235	L	L	L	P	V	L
236	G	G	G	G	R	G
237	G	G	G	G	G	G
238	P	P	P	P	P	L
239	S	S	S	S	S	S
240	V	V	I	V	V	V
241	F	F	F	F	F	F
242	L	I	I	I	I	I
243	F	F	F	F	F	F
244	P	P	P	P	P	P
245	P	P	P	P	P	P
246	K	K	K	K	K	K
247	P	P	P	P	P	P
248	K	K	K	K	K	K
249	D	D	D	D	D	D
250	T	T	T	T	S	T
251	L	L	L	L	L	L
252	M	L	S	T	M	T
253	I	I	I	I	I	I
254	S	A	S	S	T	S
255	R	R	R	G	G	G
256	T	T	T	K	T	T
257	P	P	P	P	P	P
258	E	E	E	E	E	E
259	V	V	V	V	V	V
260	T	T	T	T	T	T
261	C	C	C	C	C	C
262	V	V	L	V	V	V
263	V	V	V	V	V	V
264	V	V	V	V	V	V
265	D	D	D	D	D	D
266	V	L	L	V	V	V
267	S	D	G	G	G	G
268	H	P	P	Q	Q	Q
269	E	E	D	D	D	D
270	D	D	D	D	D	D
271	P	P	S	P	P	P
272	E	E	D	E	E	E
273	V	V	V	V	V	V
274	K	Q	Q	Q	Q	Q
275	F	I	I	F	F	F
276	N	S	T	S	S	S
277	W	W	W	W	W	W
278	Y	F	F	F	F	F
279	V	V	V	V	V	M
280	D	D	D	D	D	D
282	G	G	N	N	N	N
282	V	K	T	V	V	V
283	E	Q	Q	E	E	E
284	V	M	V	V	V	V
285	H	Q	Y	H	H	H
286	N	T	T	T	T	T
287	A	A	A	A	A	A
288	K	K	K	R	R	R
289	T	T	T	T	T	T
290	K	Q	S	K	K	T
291	P	P	P	P	P	P
292	R	R	R	R	R	R
293	E	E	E	E	E	E
294	E	E	E	E	E	E
295	Q	Q	Q	Q	Q	Q
296	Y	F	F	F	F	F
297	N	N	N	N	N	N
298	S	G	S	S	S	S
299	T	T	T	T	T	T
300	Y	Y	Y	F	F	F
301	R	R	R	R	R	R
302	V	V	V	V	V	V
303	V	V	V	V	V	V
304	S	S	S	S	S	S
305	V	V	V	A	A	A
306	L	L	L	L	L	L
307	T	P	P	P	P	P
308	V	I	I	I	I	I
309	L	G	L	Q	Q	Q
310	H	H	H	H	H	H
311	Q	Q	Q	Q	D	K
312	D	D	D	D	H	D
313	W	W	W	W	W	W
314	L	L	L	T	T	L
315	N	K	K	G	G	Q
316	G	G	G	G	G	G
317	K	K	K	K	K	K
318	E	Q	E	E	E	E
319	Y	F	F	F	F	F
320	K	T	K	K	K	K
321	C	C	C	C	C	C
322	K	K	K	K	K	K
323	V	V	V	V	V	V
324	S	N	N	H	N	H
325	N	N	S	N	N	N
326	K	K	K	E	K	E
327	A	A	S	G	A	G
328	L	L	L	L	L	L
329	P	P	P	P	P	P
330	A	S	S	A	A	A
331	P	P	P	P	P	P
332	I	I	I	I	I	I
333	E	E	E	V	V	I
334	K	R	R	R	R	R
335	T	T	T	T	T	T
336	I	I	I	I	I	I
337	S	S	S	S	S	S
338	K	K	K	R	R	R
339	A	A	A	T	D	A
340	K	R	K	K	K	K

	CH3 도메인
EU 번호	인간 IgG1	개 IgGB	고양이 IgG1a	염소 IgG1	염소 IgG2	염소 IgG3
341	G	G	G	G	G	G
342	Q	Q	Q	Q	Q	Q
343	P	A	P	A	A	A
344	R	H	H	R	R	R
345	E	Q	E	E	E	E
346	P	P	P	P	P	P
347	Q	S	Q	Q	Q	Q
348	V	V	V	V	V	V
349	Y	Y	Y	Y	Y	Y
350	T	V	V	V	V	V
351	L	L	L	L	L	L
352	P	P	P	A	A	A
353	P	P	P	P	P	P
354	S	S	A	P	P	P
355	R	R	Q	Q	Q	R
356	D	E	E	E	E	E
357	E	E	E	E	E	E
358	L	L	L	L	L	L
359	T	S	S	S	S	S
360	K	K	R	K	K	K
361	N	N	N	S	S	S
362	Q	T	K	T	T	T
363	V	V	V	L	L	L
364	S	S	S	S	S	S
365	L	L	V	V	V	V
366	T	T	T	T	T	T
367	C	C	C	C	C	C
368	L	L	L	L	L	L
369	V	I	I	V	V	I
370	K	K	K	T	T	T
371	G	D	S	G	G	G
372	F	F	F	F	F	F
373	Y	F	H	Y	Y	Y
374	P	P	P	P	P	P
375	S	P	P	D	D	E
376	D	D	D	Y	Y	E
377	I	I	I	I	I	V
378	A	D	A	A	A	D
379	V	V	V	V	V	V
380	E	E	E	E	E	E
381	W	W	W	W	W	W
382	E	Q	E	Q	Q	Q
383	S	S	I	R	R	R
384	N	N	T	N	A	D
385	G	G	G	G	R	G
386	Q	Q	Q	Q	Q	Q
387	P	Q	P	P	P	P
388	E	E	E	E	E	E
389(a)	N	P	P	S	S	S
389b		E	E	E	E	E
389c		S	N	D	D	D
390	N	K	N	K	K	K
391	Y	Y	Y	Y	Y	Y
392	K	R	R	G	G	H
393	T	T	T	T	T	T
394	T	T	T	T	T	A
395	P	P	P	T	T	P
396	P	P	P	S	S	P
397	V	Q	Q	Q	Q	Q
398	L	L	L	L	L	L
399	D	D	D	D	D	D
400	S	E	S	A	A	A
401	D	D	D	D	D	D
402	G	G	G	G	G	G
403	S	S	T	S	S	S
404	F	Y	Y	Y	Y	Y
405	F	F	F	F	F	F
406	L	L	V	L	L	L
407	Y	Y	Y	Y	Y	Y
408	S	S	S	S	S	S
409	K	K	K	R	R	R
410	L	L	L	L	L	L
411	T	S	S	R	R	R
412	V	V	V	V	V	V
413	D	D	D	N	D	N
414	K	K	R	K	K	K
415	S	S	S	S	S	S
416	R	R	H	S	S	S
417	W	W	W	W	W	W
418	Q	Q	Q	Q	Q	Q
419	Q	R	R	E	E	E
420	G	G	G	G	G	G
421	N	D	N	D	D	D
422	V	T	T	T	T	T
423	F	F	Y	Y	Y	Y
424	S	I	T	A	A	T
425	C	C	C	C	C	C
426	S	A	S	V	V	A
427	V	V	V	V	V	V
428	M	M	S	M	M	M
429	H	H	H	H	H	H
430	E	E	E	E	E	E
431	A	A	A	A	A	A
432	L	L	L	L	L	L
433	H	H	H	H	H	R
434	N	N	S	N	N	N
435	H	H	H	H	H	H
436	Y	Y	H	Y	Y	Y
437	T	T	T	T	T	K
438	Q	Q	Q	Q	Q	E
439	K	E	K	K	K	K
440	S	S	S	S	S	S
441	L	L	L	I	I	I
442	S	S	T	S	S	S
443	L	H	Q	K	K	K
444	S	S	S	P	P	S
445	P	P	P	P	P	P
446	G	G	G	G	G	G
447	K	K	K	K	K	K

반감기를 향상시키는 염소 IgG Fc의 치환

증가된 혈청 지속성은 치료적 폴리펩타이드에 대한 유익한 특성이다. 본 개시내용은 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들에 비해 염소에서 이러한 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 반감기를 향상시키는 야생형 염소 IgG1, IgG2 및 IgG3 Fc 영역에서의 치환을 특징으로 하되, 대조군 폴리펩타이드 또는 대조군 폴리펩타이드들은 IgG Fc 영역 변이체 대신 상응하는 야생형 염소 IgG Fc 영역을 갖는 것을 제외하고는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들과 동일하다. 반감기를 증가시키기 위한 치환은 염소 CH2 도메인, 염소 CH3 도메인 중 하나 이상에서 또는 염소 Fc(예를 들어, CH2+CH3) 영역과 관련하여 이루어질 수 있다.

본 개시내용은 염소 IgG의 Fc 영역 변이체 또는 이의 염소 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하되, 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 (예: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 11) 위치에 아미노산 치환을 포함하며,

(i) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ii) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iii) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치(아미노산 치환은 S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(iv) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(v) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치(아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vi) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(vii) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L, K311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(viii) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치(아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(ix) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치(아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택됨);

(x) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치(아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택됨); 및

(xi) 야생형 염소 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치(아미노산 치환은 Y436H임),

아미노산 위치는 EU 넘버링을 기반으로 하며, 폴리펩타이드는 야생형 염소 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 염소 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 동일한 pH에서 야생형 염소 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 pH 약 5.0 내지 약 6.5(예를 들어, 약 5.5 또는 약 6.0)에서 염소 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:25 내지 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 80%(예를 들어, 적어도 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%) 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG CH2 도메인 변이체를 제공한다. 또한 SEQ ID NO:25 내지 27에 나타낸 CH2 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG CH2 도메인 변이체가 제공된다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:25 내지 27에 나타낸 CH3 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 15(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG CH3 도메인 변이체를 특징으로 한다.

일부 경우에, 본 개시내용은 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다. 또한 SEQ ID NO:25 내지 27에 나타낸 도메인 중 어느 하나로부터 1 내지 20(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20) 아미노산에 의해 변하는 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG Fc 영역 변이체를 특징으로 한다.

일부 실시형태에서, 염소 IgG Fc CH2 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 제공되되, CH2 도메인 변이체는 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 CH2 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 염소 IgG Fc CH3 도메인 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, CH3 도메인 변이체는 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 CH3 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

일부 실시형태에서, 염소 IgG Fc 영역 변이체를 포함하는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이들이 특징이며, Fc 영역 변이체는 SEQ ID NO:25 내지 27 중 어느 하나에 나타낸 도메인의 아미노산 서열과 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.

본 개시내용은 아미노산 치환이 CH2 도메인과 CH3 도메인 중 하나 또는 둘 모두에서 이루어진 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드로 확장된다. 일부 경우에, CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에서 치환은 동일하다. 일부 경우에, CH2 도메인 및/또는 CH3 도메인에서 치환은 동일하지 않다. 일부 경우에, Fc 영역은 효과기 기능을 증가 또는 감소시키고/시키거나 제품 이질성을 향상시키는 하나 이상의 추가적인 치환을 포함한다.

반감기를 향상시키는 치환과 조합될 수 있는 다른 치환

치료적 폴리펩타이드/단백질(예를 들어, 단클론 항체)의 개발은 목적하는 폴리펩타이드/단백질을 생성하기 위한 복잡한 활성 환경의 조정을 수반하는 복잡한 과정이다. 이는 특이도, 친화도, 기능적 활성, 조작된 세포주에서의 발현 수준, 장기 안정성, 효과기 기능의 제거 또는 향상 및 상업적으로 실행 가능한 제조 및 정제 방법의 개발의 최적화를 포함한다. 본 개시내용은 위의 목적 중 임의의 하나 이상을 용이하게 하는 임의의 추가적인 치환을 포함한다.

일부 실시형태에서, 치환은 단백질 A 크로마토그래피에 의한 정제를 용이하게 하기 위해 단백질 A에 대한 결합을 향상시키기 위해 가축의 야생형 IgG Fc 영역에 도입된다. 이러한 치환은 당업자에게 친숙할 것이며, IgG의 1개 이상(예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개 또는 7개)의 위치에 있을 수 있다.

일부 실시형태에서, 추가적인 아미노산 치환은 모 폴리펩타이드 또는 야생형 폴리펩타이드와 비교하여 FcRn에 대한 결합 친화도를 변경시키기 위해(예를 들어, FcRn과의 결합 친화도를 증가 또는 감소시키기 위해) 이루어진다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드는 가축 항체의 힌지 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 변형은 반감기를 증가시키기 위해 가축 항체의 힌지 영역에 대해 이루어질 수 있다. 이러한 변형은 당업자에게 공지될 것이다.

IgG Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드

본 개시내용은 가축에서 증가된 반감기를 갖는 것으로부터 이익을 얻을 수 있는 임의의 폴리펩타이드를 포함한다. 반감기를 증가시키기 위해, 이러한 폴리펩타이드는 위에 개시된 Fc 영역 변이체(예를 들어, CH2 영역, CH3 영역, CH2+CH3 영역)를 포함하도록 설계된다.

예시적인 폴리펩타이드는 전체 항체, scFv, 나노바디, 수용체의 리간드-결합 부분, 사이토카인, 성장 인자, 효소 및 펩타이드를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 예를 들어, 위에 개시된 CH3 도메인 변이체는 scFv 나노바디, 수용체의 리간드-결합 부분(예를 들어, 가축 IL-13Rα1 또는 IL-13Rα2의 리간드-결합 부분), 사이토카인, 성장 인자, 효소 또는 펩타이드에 부착될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "나노바디", "VHH", "VHH 항체 단편" 및 "단일 도메인 항체"는 전형적으로 자연에서 발견되는 경쇄가 결여되어 있는 낙타과에서 발견되는 유형의 항체의 단일 중쇄의 가변 도메인을 나타내기 위해 본 명세서에서 상호교환적으로 사용된다. 적합한 나노바디는 당업자에게 친숙할 것이며, 이의 예시적인 예는 낙타, 단봉 낙타, 라마 및 알파카의 나노바디를 포함한다. 대안으로, 위에 개시된 Fc 영역 변이체는 이러한 폴리펩타이드에 부착될 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 가축의 항체는 본 명세서에 개시된 Fc 영역 변이체를 포함하도록 변형된다.

일부 실시형태에서, 본 개시내용의 폴리펩타이드는 항체 힌지 영역을 포함한다. 힌지 영역은 폴리펩타이드의 항원 또는 리간드-결합 도메인과 Fc 영역 변이체 사이에 위치할 수 있다. 일부 경우에, 힌지 영역은 사이토카인, 성장 인자, 효소 또는 펩타이드의 C-말단에 부착되고, 힌지 영역은 Fc 영역 변이체의 N-말단에 부착된다. 적합한 힌지 영역 서열은 당업자에게 친숙할 것이다.

본 개시내용의 폴리펩타이드에서 힌지 영역이 사용된다면 아미노산 서열에 대해 0개 내지 6개(즉, 0개, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개)의 아미노산 치환을 포함할 수 있다. 일부 경우에, 본 개시내용의 재조합 단백질에 사용되는 힌지 영역은 천연형 힌지 영역의 아미노산 서열과 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일하다.

본 개시내용의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 결합 도메인을 포함할 수 있다. 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 선택된 표적의 단백질, 서브유닛, 도메인, 모티프 및/또는 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들(예를 들어, 융합 폴리펩타이드)은 단백질을 포함할 수 있되, 단백질은 본 명세서에 기재된 치료적 단백질이다. 일부 실시형태에서, 표적(예를 들어, 결합 도메인의 표적에 대한) 또는 치료적 단백질(예를 들어, 융합 폴리펩타이드에 대한)은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다: 17-IA, 4-1BB, 4Dc, 6-케토-PGF1a, 8-아이소-PGF2a, 8-옥소-dG, A1 아데노신 수용체, A33, ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, 어드레신, aFGF, ALCAM, ALK, ALK-1, ALK-7, 알파-1-항트립신처리, 알파-V/베타-1 길항제, ANG, Ang, APAF-1, APE, APJ, APP, APRIL, AR, IgE, 안지오텐신 유형 1(AT1) 수용체, 안지오텐신 유형 2(AT2) 수용체, ARC, ART, 아르테민, 항-Id, ASPARTIC, 심방 나트륨이뇨인자, av/b3 인테그린, Axl, b2M, B7-1, B7-2, B7-H, B-림프구 자극제(BlyS), BACE, BACE-1, Bad, BAFF, BAFF-R, Bag-1, BAK, Bax, BCA-1, BCAM, Bcl, BCMA, BDNF, b-ECGF, bFGF, BID, Bik, BIM, BLC, BL-CAM, BLK, BMP, BMP-2 BMP-2a, BMP-3 오스테오게닌, BMP-4 BMP-2b, BMP-5, BMP-6 Vgr-1, BMP-7(OP-1), BMP-8(BMP-8a, OP-2), BMPR, BMPR-IA(ALK-3), BMPR-IB(ALK-6), BRK-2, RPK-1, BMPR-II(BRK-3), BMP, b-NGF, BOK, 봄베신, 뼈 유래 신경영양 인자, BPDE, BPDE-DNA, BTC, 보체 인자 3(C3), C3a, C4, C5, C5a, C10, CA125, CAD-8, 칼시토닌, cAMP, 암배아 항원(CEA), 암종-관련 항원, 카텝신 A, 카텝신 B, 카텝신 C/DPPI, 카텝신 D, 카텝신 E, 카텝신 H, 카텝신 L, 카텝신 O, 카텝신 S, 카텝신 V, 카텝신 X/Z/P, CBL, CC1, CCK2, CCL, CCL1, CCL11, CCL12, CCL13, CCL14, CCL15, CCL16, CCL17, CCL18, CCL19, CCL2, CCL20, CCL21, CCL22, CCL23, CCL24, CCL25, CCL26, CCL27, CCL28, CCL3, CCL4, CCL5, CCL6, CCL7, CCL8, CCL9/10, CCR, CCR1, CCR10, CCR10, CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CD1, CD2, CD3, CD3E, CD4, CD5, CD6, CD7, CD8, CD10, CD11a, CD11b, CD11c, CD13, CD14, CD15, CD16, CD18, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD25, CD27L, CD28, CD29, CD30, CD30L, CD32, CD33(p67 단백질), CD34, CD38, CD40, CD40L, CD44, CD45, CD46, CD47, CD49a, CD52, CD54, CD55, CD56, CD61, CD64, CD66e, CD74, CD80(B7-1), CD89, CD95, CD123, CD137, CD138, CD140a, CD146, CD147, CD148, CD152, CD164, CEACAM5, CFTR, cGMP, CINC, 클로스트리디움 보툴리눔 독소, 클로스트리디움 퍼프린겐스 독소, CKb8-1, CLC, CMV, CMV UL, CNTF, CNTN-1, COX, C-Ret, CRG-2, CT-1, CTACK, CTGF, CTLA-4, CX3CL1, CX3CR1, CXCL, CXCL1, CXCL2, CXCL3, CXCL4, CXCL5, CXCL6, CXCL7, CXCL8, CXCL9, CXCL10, CXCL11, CXCL12, CXCL13, CXCL14, CXCL15, CXCL16, CXCR, CXCR1, CXCR2, CXCR3, CXCR4, CXCR5, CXCR6, 사이토케라틴 종양-관련 항원, DAN, DCC, DcR3, DC-SIGN, 붕괴 촉진 인자, des(1-3)-IGF-I(뇌 IGF-1), Dhh, 디곡신, DNAM-1, Dnase, Dpp, DPPIV/CD26, Dtk, ECAD, EDA, EDA-A1, EDA-A2, EDAR, EGF, EGFR(ErbB-1), EMA, EMMPRIN, ENA, 엔도텔린 수용체, 엔케팔리네이스, eNOS, Eot, 에오탁신1, EpCAM, 에프린 B2/EphB4, EPO, ERCC, E-셀렉틴, ET-1, 인자 IIa, 인자 VII, 인자 VIIIc, 인자 IX, 섬유아세포 활성화 단백질(FAP), Fas, FcR1, FEN-1, 페리틴, FGF, FGF-19, FGF-2, FGF3, FGF-8, FGFR, FGFR-3, 피브린, FL, FLIP, Flt-3, Flt-4, 여포 자극 호르몬, 프랙탈카인, FZD1, FZD2, FZD3, FZD4, FZD5, FZD6, FZD7, FZD8, FZD9, FZD10, G250, Gas 6, GCP-2, GCSF, GD2, GD3, GDF, GDF-1, GDF-3(Vgr-2), GDF-5(BMP-14, CDMP-1), GDF-6(BMP-13, CDMP-2), GDF-7(BMP-12, CDMP-3), GDF-8(미오스타틴), GDF-9, GDF-15(MIC-1), GDNF, GDNF, GFAP, GFRa-1, GFR-알파1, GFR-알파2, GFR-알파3, GITR, GLP1, GLP2, 글루카곤, Glut 4, 당단백질 IIb/IIIa(GP IIb/IIIa), GM-CSF, gp130, gp72, GRO, GnRH, 성장 호르몬 방출 인자, 합텐(NP-캡 또는 NIP-캡), HB-EGF, HCC, HCMV gB 외피 당단백질, HCMV) gH 외피 당단백질, HCMV UL, 조혈 성장 인자(HGF), Hep B gp120, 헤파라네이스, Her2, Her2/neu(ErbB-2), Her3(ErbB-3), Her4(ErbB-4), 단순 헤르페스 바이러스(HSV) gB 당단백질, HSV gD 당단백질, HGFA, 고분자량 흑색종-관련 항원(HMW-MAA), HIV gp120, HIV IIIB gp120 V3 루프, HLA, HLA-DR, HM1.24, HMFG PEM, HRG, Hrk, 심장의 마이오신, 사이토메갈로바이러스(CMV), 성장 호르몬(GH), HVEM, 1-309, IAP, ICAM, ICAM-1, ICAM-3, ICE, ICOS, IFNg, Ig, IgA 수용체, IgE, IGF, IGF 결합 단백질, IGF-1R, IGFBP, IGF-I, IGF-II, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, 인터류킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), 인터페론(INF)-알파, INF-베타, INF-감마, 인히빈, iNOS, 인슐린 A-사슬, 인슐린 B-사슬, 인슐린-유사 성장 인자 1, 인테그린 알파2, 인테그린 알파3, 인테그린 알파4, 인테그린 알파4/베타1, 인테그린 알파4/베타7, 인테그린 알파5(알파V), 인테그린 알파5/베타1, 인테그린 알파5/베타3, 인테그린 알파6, 인테그린 베타1, 인테그린 베타2, 인터페론 감마, IP-10, I-TAC, JE, 칼리크레인 2, 칼리크레인 5, 칼리크레인 6, 칼리크레인 11, 칼리크레인 12, 칼리크레인 14, 칼리크레인 15, 칼리크레인 L1, 칼리크레인 L2, 칼리크레인 L3, 칼리크레인 L4, KC, KDR, 케라틴세포 성장 인자(KGF), 라미닌 5, LAMP, LAP, LAP(TGF-1), 잠복성 TGF-1, 잠복성 TGF-1 bp1, LBP, LDGF, LECT2, 좌선성 루이스-Y 항원, 루이스-Y 관련 항원, LFA-1, LFA-3, Lfo, LIF, LIGHT, 지방단백질, LIX, LKN, Lptn, L-셀렉틴, LT-a, LT-b, LTB4, LTBP-1, 폐 계면활성제, 황체형성 호르몬, 림프독소 베타 수용체, Mac-1, MAdCAM, MAG, MAP2, MARC, MCAM, MCAM, MCK-2, MCP, M-CSF, MDC, Mer, 금속LOPROTEASES, MGDF 수용체, MGMT, MHC(HLA-DR), MIF, MIG, MIP, MIP-1-알파, MK, MMAC1, MMP, MMP-1, MMP-10, MMP-11, MMP-12, MMP-13, MMP-14, MMP-15, MMP-2, MMP-24, MMP-3, MMP-7, MMP-8, MMP-9, MPIF, Mpo, MSK, MSP, 뮤신(Muc1), MUC18, 뮐러관-인히비틴 물질, Mug, MuSK, NAIP, NAP, NAV 1.7, NCAD, N-카드헤린, NCA 90, NCAM, NCAM, 네프릴리신, 뉴로트로핀-3, -4 또는 -6, 뉴투린, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, nNOS, NO, NOS, Npn, NRG-3, NT, NTN, OB, OGG1, OPG, OPN, OSM, OX40L, OX40R, p150, p95, PADPr, 부갑상선 호르몬, PARC, PARP, PBR, PBSF, PCAD, P-카드헤린, PCNA, PD1, PDL1,PDGF, PDGF, PDK-1, PECAM, PEM, PF4, PGE, PGF, PGI2, PGJ2, PIN, PLA2, 태반 알칼리 포스파테이스(PLAP), P1GF, PLP, PP14, 프로인슐린, 프로렐락신, 단백질 C, PS, PSA, PSCA, 전립선 특이적 막 항원(PSMA), PTEN, PTHrp, Ptk, PTN, R51, RANK, RANKL, RANTES, RANTES, 렐락신 A-사슬, 렐락신 B-사슬, 레닌, 호흡기 세포융합 바이러스(RSV) F, RSV Fgp, Ret, 류마티스성 인자, RLIP76, RPA2, RSK, S100, SCF/KL, SDF-1, 세린, 혈청 알부민, sFRP-3, Shh, SIGIRR, SK-1, SLAM, SLPI, SMAC, SMDF, SMOH, SOD, SPARC, Stat, STEAP, STEAP-II, TACE, TACI, TAG-72(종양-관련 당단백질-72), TARC, TCA-3, T-세포 수용체(예를 들어, T-세포 수용체 알파/베타), TdT, TECK, TEM1, TEM5, TEM7, TEM8, TERT, 고환 PLAP-유사 알칼리 포스파테이스, TfR, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범 특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, 트롬빈, 흉선 Ck-1, 갑상선 자극 호르몬, Tie, TIMP, TIQ, 조직 인자, TMEFF2, Tmpo, TMPRSS2, TNF, TNF-알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF10A(TRAIL R1Apo-2, DR4), TNFRSF10B(TRAIL R2DR5, KILLER, TRICK-2A, TRICK-B), TNFRSF10C(TRAIL R3DcR1, LIT, TRID), TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2, TRUNDD), TNFRSF11A(RANK ODF R, TRANCE R), TNFRSF11B(OPG OCIF, TR1), TNFRSF12(TWEAK R FN14), TNFRSF13B(TACI), TNFRSF13C(BAFF R), TNFRSF14(HVEM ATAR, HveA, LIGHT R, TR2), TNFRSF16(NGFR p75NTR), TNFRSF17(BCMA), TNFRSF18(GITR AITR), TNFRSF19(TROY TAJ, TRADE), TNFRSF19L(RELT), TNFRSF1A(TNF R1CD120a, p55-60), TNFRSF1B(TNF RII CD120b, p75-80), TNFRSF26(TNFRH3), TNFRSF3(LTbR TNF RIII, TNFC R), TNFRSF4(OX40 ACT35, TXGP1 R), TNFRSF5(CD40 p50), TNFRSF6(Fas Apo-1, APT1, CD95), TNFRSF6B(DcR3M68, TR6), TNFRSF7(CD27), TNFRSF8(CD30), TNFRSF9(4-1BB CD137, ILA), TNFRSF21(DR6), TNFRSF22(DCTRAIL R2 TNFRH2), TNFRST23(DCTRAIL R1TNFRH1), TNFRSF25(DR3Apo-3, LARD, TR-3, TRAMP, WSL-1), TNFSF10(TRAIL Apo-2 리간드, TL2), TNFSF11(TRANCE/RANK 리간드 ODF, OPG 리간드), TNFSF12(TWEAK Apo-3 리간드, DR3리간드), TNFSF13(APRIL TALL2), TNFSF13B(BAFF BLYS, TALL1, THANK, TNFSF20), TNFSF14(LIGHT HVEM 리간드, LTg), TNFSF15(TL1A/VEGI), TNFSF18(GITR 리간드 AITR 리간드, TL6), TNFSF1A(TNF-a 커넥틴, DIF, TNFSF2), TNFSF1B(TNF-b LTa, TNFSF1), TNFSF3(LTb TNFC, p33), TNFSF4(OX40 리간드 gp34, TXGP1), TNFSF5(CD40 리간드 CD154, gp39, HIGM1, IMD3, TRAP), TNFSF6(Fas 리간드 Apo-1 리간드, APT1 리간드), TNFSF7(CD27 리간드 CD70), TNFSF8(CD30 리간드 CD153), TNFSF9(4-1BB 리간드 CD137 리간드), TP-1, t-PA, Tpo, TRAIL, TRAIL R, TRAIL-R1, TRAIL-R2, TRANCE, 트렌스페린 수용체, TRF, Trk(예를 들어, TrkA), TROP-2, TSG, TSLP, 종양-관련 항원 CA 125, 종양-관련 항원 발현 루이스 Y 관련 탄수화물, TWEAK, TXB2, Ung, UPAR, uPAR-1, 유로카이네이스, VCAM, VCAM-1, VECAD, VE-카드헤린, VE-카드헤린-2, VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR, VEGFR-3(flt-4), VEGI, VIM, 바이러스 항원, VLA, VLA-1, VLA-4, VNR 인테그린, 폰 빌레브란트 인자, WIF-1, WNT1, WNT2, WNT2B/13, WNT3, WNT3A, WNT4, WNT5A, WNT5B, WNT6, WNT7A, WNT7B, WNT8A, WNT8B, WNT9A, WNT9A, WNT9B, WNT10A, WNT10B, WNT11, WNT16, XCL1, XCL2, XCR1, XCR1, XEDAR, XIAP, XPD 및 호르몬과 성장 인자에 대한 수용체.

일부 실시형태에서, 결합 도메인은 가축에서 ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, ANG, Ang, 안지오텐신 유형 1(AT1) 수용체, 안지오텐신 유형 2(AT2) 수용체, 심방 나트륨이뇨 인자, av/b3 인테그린, b-ECGF, CD19, CD20, CD30, CD34, CD40, CD40L, CD47, COX, CTLA-4, EGFR(ErbB-1), EPO, 여포 자극 호르몬, GDF-8(미오스타틴), GLP1, GLP2, GnRH, 성장 호르몬 방출 인자, IgE, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, 인터류킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), LAP(TGF-1), 잠복성 TGF-1, 잠복성 TGF-1 bp1, LFA-1, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, OX40L, OX40R, PD1, PDL1, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범 특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, TNF, TNF-알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF16(NGFR p75NTR), TNFRSF9(4-1BB CD137, ILA), VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR 및 VEGFR-3(flt-4)와 같지만 이들로 제한되지 않는 하나 이상의 치료적 표적 또는 항원에 특이적으로 결합한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 단백질을 포함할 수 있되, 단백질은 치료적 단백질, 예를 들어, EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1/VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 효능제 또는 트롬보포이에틴 결합 펩타이드이다. 일부 실시형태에서, 치료적 단백질은 ACE, ACE-2, 액티빈, 액티빈 A, 액티빈 AB, 액티빈 B, 액티빈 C, 액티빈 RIA, 액티빈 RIA ALK-2, 액티빈 RIB ALK-4, 액티빈 RIIA, 액티빈 RIIB, ADAM, ADAM10, ADAM12, ADAM15, ADAM17/TACE, ADAMS, ADAM9, ADAMTS, ADAMTS4, ADAMTS5, ANG, Ang, 안지오텐신 유형 1(AT1) 수용체, 안지오텐신 유형 2(AT2) 수용체, 심방 나트륨이뇨 인자, av/b3 인테그린, b-ECGF, CD19, CD20, CD30, CD34, CD40, CD40L, CD47, COX, CTLA-4, EGFR(ErbB-1), EPO, 여포 자극 호르몬, GDF-8(미오스타틴), GLP1, GLP2, GnRH, 성장 호르몬 방출 인자, IgE, IL, IL-1, IL-1R, IL-2, IL-2R, IL-4, IL-4R, IL-5, IL-5R, IL-6, IL-6R, IL-8, IL-9, IL-10, IL-12, IL-13, IL-15, IL-17, IL-18, IL-18R, IL-21, IL-22, IL-23, IL-25, IL-31, IL-33, 인터류킨 수용체(예를 들어, IL-1R, IL-2R, IL-4R, IL-5R, IL-6R, IL-8R, IL-9R, IL-10R, IL-12R, IL-13R, IL-15R, IL-17R, IL-18R, IL-21R, IL-22R, IL-23R, IL-25R, IL-31R, IL-33R), LAP(TGF-1), 잠복성 TGF-1, 잠복성 TGF-1 bp1, LFA-1, 신경 성장 인자(NGF), NGFR, NGF-베타, OX40L, OX40R, PD1, PDL1, TGF, TGF-알파, TGF-베타, TGF-베타 범 특이적, TGF-베타 R1(ALK-5), TGF-베타 R11, TGF-베타 RIIb, TGF-베타 RIII, TGF-베타1, TGF-베타2, TGF-베타3, TGF-베타4, TGF-베타5, TNF, TNF-알파, TNF-알파 베타, TNF-베타2, TNFc, TNF-RI, TNF-RII, TNFRSF16(NGFR p75NTR), TNFRSF9(4-1BB CD137, ILA), VEFGR-1(fit-1), VEGF, VEGFR 또는 VEGFR-3(flt-4)이다.

약학적 조성물

본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 약학적 또는 멸균 조성물을 제조하기 위해, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합될 수 있다(예를 들어, 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, Pa. (1984)] 참조).

치료제 및 진단제의 제형은, 예를 들어, 동결건조된 분말, 슬러리, 수용액 또는 현탁액의 형태로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, 문헌[Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, N.Y.; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, N.Y.; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y.] 참조). 일부 실시형태에서, 본 발명의 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 소듐 아세테이트 용액(pH 5 내지 6)에 적절한 농도로 희석되고, NaCl 또는 수크로스가 등장성을 위해 첨가된다. 폴리소르베이트 20 또는 폴리소르베이트 80과 같은 추가적인 작용제가 안정성을 향상시키기 위해 첨가될 수 있다.

단독으로 또는 또 다른 작용제와 조합하여 투여되는 폴리펩타이드 조성물의 독성 및 치료적 효능은, 예를 들어, 결정 LD₅₀(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED₅₀(집단의 50%에서 치료적으로 유효한 용량)을 결정하기 위해 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 독성 효과와 치료적 효과 사이의 용량 비는 치료 지수(LD₅₀/ED₅₀)이다. 특정 양상에서, 높은 치료 지수를 나타내는 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 바람직하다. 이러한 세포 배양물 검정 및 동물 연구에서 얻어진 데이터는 가축에서 사용하기 위한 투여량의 범위를 제형화하는 데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 바람직하게는 독성이 거의 없거나 또는 전혀 없는 ED₅₀을 포함하는 다양한 순환 농도 내에 있다. 투여량은 사용되는 투약 형태 및 투여 경로에 따라 이 범위 내에서 변할 수 있다.

투여 방식은 다를 수 있다. 적합한 투여 경로는 경구, 직장, 경점막, 장, 비경구; 근육내, 피하, 피내, 골수내, 척추강내, 직접 심실내, 정맥내, 복강내, 비강내, 안구내, 흡입, 취입, 국소, 피부, 경피 또는 동맥내를 포함한다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 주사와 같은 침습적 경로에 의해 투여될 수 있다. 추가의 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 정맥내로, 피하로, 근육내로, 동맥내로, 종양내로 또는 흡입, 에어로졸 전달에 의해 투여된다.

본 명세서에 개시된 약학적 조성물은 또한 주입에 의해 투여될 수 있다. 약학적 조성물을 투여하는 잘 알려진 이식물 및 모듈 형태의 예는 제어된 속도로 약물을 분배하기 위한 이식형 미세 주입 펌프를 개시하고 있는 미국 특허 제4,487,603호; 정확한 주입 속도로 약물을 전달하기 위한 약물 주입 펌프를 개시하고 있는 미국 특허 제4,447,233호; 연속 약물 전달을 위한 가변 흐름 이식형 주입 기구를 개시하고 있는 미국 특허 제4,447,224호; 다중-챔버 구획을 갖는 삼투성 약물 전달 시스템을 개시하고 있는 미국 특허 제4,439,196호를 포함한다. 이러한 많은 이식물, 전달 시스템 및 모듈은 당업자에게 잘 알려져 있다.

대안으로 또는 추가로, 예를 들어, 종종 데포 또는 서방성 제형으로 면역병리를 특징으로 하는 관절염성 관절 또는 병원체-유도성 병변 내로의 항체의 직접 주사를 통해 국부적으로 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 투여할 수도 있다. 또한, 표적화된 약물 전달 시스템, 예를 들어, 면역병리를 특징으로 하는 관절염성 관절 또는 병원체-유도성 병변을 표적화하는, 예를 들어, 조직-특이적 항체로 코팅된 리포솜으로 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 투여할 수 있다. 리포솜은 병든 조직에 대해 표적화되고, 이에 의해 선택적으로 흡수될 것이다.

투여 양생법은 제한 없이 치료되는 가축의 연령, 체중 및 신체적 병태, 치료 항체의 혈청 또는 조직 전환율, 증상의 수준, 치료적 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 면역원성 및 생물학적 매트릭스에서 표적 세포의 접근성을 포함하는 여러 인자에 의존한다. 일부 구현예에서, 투여 양생법은 표적 질환 상태의 향상을 달성하는 동시에 바람직하지 않은 부작용을 최소화하기에 충분한 치료적 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 전달한다. 따라서, 전달되는 생물학적 제제의 양은 특정 치료적 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들 및 치료되는 병태의 중증도에 부분적으로 의존한다. 치료 항체의 적절한 용량을 선택하기 위한 지침이 이용 가능하다(예를 들어, 문헌[Wawrzynczak Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK (1996); Milgrom et al. New Engl. J. Med. 341:1966-1973 (1999); Slamon et al. New Engl. J. Med. 344:783-792 (2001); Beniaminovitz et al. New Engl. J. Med. 342:613-619 (2000); Ghosh et al. New Engl. J. Med. 348:24-32 (2003); Lipsky et al. New Engl. J. Med. 343:1594-1602 (2000)] 참조).

폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 적절한 용량의 결정은, 예를 들어, 치료에 영향을 미치는 것으로 당업계에 알려져 있거나 또는 의심되는 매개변수 또는 인자를 사용하여 당업자에 의해 이루어진다. 일반적으로, 용량은 최적의 용량보다 다소 적은 양으로 시작하고, 이후에 임의의 부정적인 부작용에 대해 목적하는 또는 최적의 효과가 달성될 때까지 적은 증분으로 증가된다. 중요한 진단적 측정은, 예를 들어, 염증의 증상 또는 생성된 염증성 사이토카인의 수준의 측정을 포함한다.

핵산, 벡터, 숙주 세포 및 제조 방법

본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 암호화하는 핵산 또는 핵산들, 핵산 또는 핵산들을 포함하는 벡터 또는 벡터들 및 핵산 또는 핵산들 또는 벡터 또는 벡터들을 포함하는 숙주 세포를 포함한다.

본 명세서에 기재된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 세균 또는 진핵생물 세포에서 생산될 수 있다. 예를 들어, Fab의 일부 폴리펩타이드는 세균 세포, 예를 들어, 대장균 세포에서 생산될 수 있다. 폴리펩타이드는 또한 진핵생물 세포, 예컨대, 형질전환된 세포주(예를 들어, CHO, 293E, COS, 293T, Hela)에서 생산될 수 있다. 또한, 폴리펩타이드(예를 들어, scFv의)는 피키아(Pichia)(예를 들어, 문헌[Powers et al., J Immunol Methods. 251:123-35 (2001)] 참조), 한세눌라(Hanseula) 또는 사카로마이세스(Saccharomyces)와 같은 효모 세포에서 발현될 수 있다. 관심 항체를 생산하기 위해, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리뉴클레오타이드들이 작제되고, 발현 벡터 또는 발현 벡터들에 도입된 다음, 적합한 숙주 세포에서 발현된다. 발현을 향상시키기 위해, 유전자의 뉴클레오타이드 서열은 아미노산 서열을 변경하지 않고(또는 최소한으로 변경 - 예를 들어, 중쇄 또는 경쇄의 C-말단 잔기의 제거) 재코딩될 수 있다. 잠재적인 재코딩을 위한 영역은 번역 개시, 코돈 사용 및 의도하지 않은 mRNA 스플라이싱 가능성과 관련된 영역을 포함한다. 본 명세서에 기재된 Fc 영역 변이체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드들은 당업자에 의해 쉽게 구상될 것이다.

표준 분자 생물학 기법을 사용하여 재조합 발현 벡터(들)를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질감염체를 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 폴리펩타이드(예를 들어, 항체)를 회수할 수 있다.

폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 세균 세포(예를 들어, 대장균)에서 발현되는 경우, 발현 벡터는 세균 세포에서 벡터의 증폭을 가능하게 하는 특성을 가져야 한다. 추가적으로, JM109, DH5α, HB101 또는 XL1-Blue와 같은 대장균이 숙주로서 사용되는 경우, 벡터는 대장균에서 효율적인 발현을 허용할 수 있는 프로모터, 예를 들어, lacZ 프로모터(Ward et al., 341:544-546 (1989)), araB 프로모터(Better et al., Science, 240:1041-1043(1988)) 또는 T7 프로모터를 가져야 한다. 이러한 벡터의 예는, 예를 들어, M13-시리즈 벡터, pUC-시리즈 벡터, pBR322, pBluescript, pCR-Script, pGEX-5X-1(파마시아(Pharmacia)), "QIAexpress 시스템"(퀴아젠(QIAGEN)), pEGFP 및 pET(이 발현 벡터가 사용되는 경우, 숙주는 바람직하게는 T7 RNA 폴리머레이스를 발현하는 BL21임)를 포함한다. 발현 벡터는 항체 분비를 위한 신호 서열을 포함할 수 있다. 대장균의 주변질 세포로의 생산을 위해, pelB 신호 서열(Lei et al., J. Bacteriol., 169:4379 (1987))이 항체 분비를 위한 신호 서열로 사용될 수 있다. 세균 발현을 위해, 염화칼슘 방법 또는 전기천공 방법을 사용하여 발현 벡터를 세균 세포에 도입할 수 있다.

폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들이 CHO, COS 및 NIH3T3 세포와 같은 동물 세포에서 발현되는 경우, 발현 벡터는 이러한 세포에서의 발현에 필요한 프로모터, 예를 들어, SV40 프로모터(Mulligan et al., Nature, 277:108 (1979))(예를 들어, 초기 유인원 바이러스 40 프로모터), MMLV-LTR 프로모터, EF1α 프로모터(Mizushima et al., Nucleic Acids Res., 18:5322 (1990)) 또는 CMV 프로모터(예를 들어, 인간 사이토메갈로바이러스 급초기 프로모터)를 포함한다. Fc 영역 변이체를 암호화하는 핵산 서열 이외에, 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서 벡터의 복제를 조절하는 서열(예를 들어, 복제 기점) 및 선별 마커 유전자와 같은 추가적인 서열을 보유할 수 있다. 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포의 선택을 용이하게 한다(예를 들어, 미국 특허 제4,399,216호, 제4,634,665호 및 제5,179,017호 참조). 예를 들어, 전형적으로 선별 마커 유전자는 벡터가 도입된 숙주 세포에 G418, 하이그로마이신 또는 메토트렉세이트와 같은 약물에 대한 저항성을 부여한다. 선별 마커가 있는 벡터의 예는 pMAM, pDR2, pBK-RSV, pBK-CMV, pOPRSV 및 pOP13을 포함한다.

일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 포유동물 세포에서 생산된다. 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들을 발현하기 위한 예시적인 포유동물 숙주 세포는 차이니즈 햄스터 난소(CHO 세포)(예를 들어, 문헌[Kaufman and Sharp (1982) Mol. Biol. 159:601 621]에 기술되어 있는 바와 같은 DHFR 선별 마커와 함께 사용되는 문헌[Urlaub and Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4216-4220]에 기술되어 있는 dhfr- CHO 세포를 포함), 인간 배아 신장 293 세포(예를 들어, 293, 293E, 293T), COS 세포, NIH3T3 세포, 림프구성 세포주, 예를 들어, NS0 골수종 세포 및 SP2 세포 및 형질전환 동물, 예를 들어, 형질전환 포유동물로부터의 세포를 포함한다. 예를 들어, 세포는 포유동물 상피 세포이다.

항체 발현을 위한 예시적인 시스템에서, 항체의 항체 중쇄 및 항체 경쇄 둘 다를 모두 암호화하는 재조합 발현 벡터는 칼슘 포스페이트-매개성 형질감염에 의해 dhfr-CHO 세포에 도입된다. 재조합 발현 벡터 내에서, 항체 중쇄 및 경쇄 유전자는 각각 높은 수준의 유전자 전사를 유도하기 위해 인핸서/프로모터 조절 요소(예를 들어, CMV 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소 또는 SV40 인핸서/AdMLP 프로모터 조절 요소와 같은 SV40, CMV, 아데노바이러스 등으로부터 유래된 것)에 작동 가능하게 연결된다. 재조합 발현 벡터는 또한 DHFR 유전자를 운반할 수 있으며, 이는 메토트렉세이트 선택/증폭을 사용하여 벡터로 형질감염된 CHO 세포의 선택을 가능하게 한다. 선택된 형질감염체 숙주 세포는 항체 중쇄 및 경쇄의 발현을 가능하게 하기 위해 배양되고, 항체는 배양 배지로부터 회수된다.

치료 방법

본 명세서에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 임의의 질환 또는 장애의 치료 또는 예방을 필요로 하는 가축에서 임의의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 데 사용될 수 있다. 본 발명은 반복된 투여가 필요한 만성 병태의 치료에 특히 유용하다. 단백질 치료제의 증가된 반감기 때문에, 투여의 빈도가 낮고/낮거나 감소된 용량 수준이 가능할 수 있다.

일부 실시형태에서, 치료 또는 예방되는 질환, 장애, 병태 또는 증상은 알레르기 질환, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 골격/근골격 질환, 심혈관 질환, 신경 질환, 신장 질환, 대사 질환, 면역학적 질환, 유전(genetic/inherited) 질환, 생식 관련 장애, 감염성 질환 또는 암이다. 소정의 실시형태에서, 치료 또는 예방될 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 음식 알레르기, 골관절성 통증, 수술 전후 통증, 치통, 암 통증, 관절염, 빈혈, 비만 또는 당뇨병이다.

항체는 질환을 치료 또는 예방할 뿐만 아니라 정상적인 생물학적 기능을 조절, 예를 들어, 생식력 또는 행동을 관리하는 데 사용될 수 있다.

진단

본 명세서에 개시된 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 또한 다양한 진단적 목적, 예를 들어, 가축이 임의의 특정 질환 또는 장애를 갖는지 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 결합 도메인을 포함할 수 있다. 결합 도메인은 본 명세서에 기재된 바와 같은 단백질, 서브유닛, 도메인, 모티프 및/또는 에피토프(예를 들어, 암 세포에 대한 마커)에 특이적으로 결합할 수 있다. 일부 실시형태에서, 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들은 표지 그룹을 추가로 포함한다. 일반적으로, 표지 그룹은 이들이 검출되는 검정에 따라서 다양한 클래스에 속한다: a) 방사성 또는 무거운 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; b) 자성 표지(예를 들어, 자성 입자); c) 산화환원 활성 모이어티; d) 광학 염료; 효소 그룹(예를 들어, 고추냉이 과산화효소, β-갈락토시데이스, 루시퍼레이스, 알칼리 포스파테이스); e) 바이오티닐화된 그룹; 및 f) 2차 리포터에 의해 인식되는 미리 결정된 폴리펩타이드 에피토프(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등). 일부 실시형태에서, 표지 그룹은 잠재적인 입체 장애를 줄이기 위해 다양한 길이의 스페이서 암을 통해 항체에 커플링된다. 단백질을 표지하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 본 발명을 수행하는 데 사용될 수 있다.

일부 실시형태에서, 표지 그룹은 프로브, 염료(예를 들어, 형광 염료) 또는 방사성 동위원소(예를 들어, ³H, ¹⁴C, ²²Na, ³⁶Cl, ³⁵S, ³³P 또는 ¹²⁵I)이다.

특정 표지는 또한 발색단, 인광체 및 형광단을 포함하지만 이들로 제한되지 않는 광학 염료를 포함할 수 있으며, 후자는 다수의 예에서 특이적이다. 형광단은 "소분자" 형광체 또는 단백질성 형광체일 수 있다.

형광 표지는 고유의 형광 특성을 통해 검출될 수 있는 임의의 분자일 수 있다. 적합한 형광 표지는 플루오레세인, 로다민, 테트라메틸로다민, 에오신, 에리트로신, 쿠마린, 메틸-쿠마린, 피렌, 말라사이트 그린, 스틸벤, 루시퍼 옐로우, 캐스케이드 블루J, 텍사스 레드, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC 레드 640, Cy5, Cy5.5, LC 레드 705, 오레곤 그린, 알렉사-플루오르 염료(알렉사 플루오르 350, 알렉사 플루오르 430, 알렉사 플루오르 488, 알렉사 플루오르 546, 알렉사 플루오르 568, 알렉사 플루오르 594, 알렉사 플루오르 633, 알렉사 플루오르 660, 알렉사 플루오르 680), 캐스케이드 블루, 캐스케이드 옐로우 및 R-피코에리트린 (PE)(몰리큘러 프로브스(Molecular Probes), 오리건주 유진 소재), FITC, 로다민 및 텍사스 레드(피어스(Pierce), 일리노이주 록퍼드 소재), Cy5, Cy5.5, Cy7(아머샴 라이프 사이언스(Amersham Life Science), 펜실베니아주 피츠버그 소재)을 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 형광단을 비롯한 적합한 광학 염료는 그 전문이 참조에 의해 원용되어 있는 문헌[Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland]에 기술되어 있다.

적합한 단백질성 형광 표지는 또한 GFP의 레닐라(Renilla), 프틸로사르쿠스(Ptilosarcus) 또는 에쿼리아(Aequorea) 종을 포함하는 녹색 형광 단백질(Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP(클론테크 래보래토리즈, 인크.(Clontech Laboratories, Inc.), GenBank 등록 번호 U55762), 청색 형광 단백질(BFP, 퀀텀 바이오테크놀로지스, 인크.(Quantum Biotechnologies, Inc.), 캐나다 퀘벡주 몬트리올, 메종뉴브 대로 서부 1801번지, 8층 H3H1J9; Stauber, 1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr. Biol. 6:178-182), 증강된 황색 형광 단백질(EYFP, 클론테크 래보래토리즈, 인크.), 루시퍼레이스(Ichiki et al., 1993, J. Immunol. 150:5408-5417), β-갈락토시데이스(Nolan et al., 1988, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85:2603-2607) 및 레닐라(WO92/15673, WO95/07463, WO98/14605, WO98/26277, WO99/49019, 미국 특허 제5,292,658호, 제5,418,155호, 제5,683,888호, 제5,741,668호, 제5,777,079호, 제5,804,387호, 제5,874,304호, 제5,876,995호, 제5,925,558호)를 포함하지만 이들로 제한되지 않는다. 이 단락에서 위에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 참조에 의해 본 명세서에 명시적으로 원용된다.

검정

Fc _γ RI 및 FcγRIII 결합:

FcγRI 및 FcγRIII에 대한 결합은 항체가 ADCC를 매개하는 능력의 척도이다. 항체에 대한 이러한 특성을 평가하기 위해, FcγRI 및 FcγRIII에 대한 항체의 결합을 측정하는 검정이 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.

C1q 결합:

보체의 제1 성분인 C1q에 대한 결합은 보체-의존적 세포독성(CDC)을 매개하는 항체의 능력의 척도이다. 항체에 대한 이러한 특성을 평가하기 위해, C1q에 대한 항체의 결합을 측정하는 검정이 당업계에 공지된 방법을 사용하여 수행될 수 있다.

반감기:

항체의 반감기를 측정하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 문헌[Booth et al., MAbs, 10(7):1098-1110 (2018)] 참조. 예로서, 항체의 반감기는 항체를 Fc가 유래된 종(표적 종)에 주사하고, 소정의 기간 동안 혈청 내 항체의 수준을 측정함으로써 측정될 수 있다. 대안으로 뮤린 FcRn 알파 사슬에 대해 무효이고 표적 종 FcRn 알파 트랜스진을 발현하는 형질전환 마우스 모델이 사용될 수 있다. 표적 종의 FcRn 알파 사슬은 마우스

2-마이크로글로불린 단백질과 쌍을 이루거나 마우스 β2-마이크로글로불린 유전자가 표적 종 β2-마이크로글로불린 유전자로 대체되어 천연 FcRn 알파 사슬-β2-마이크로글로불린 이종이량체 단백질을 형성할 수 있다.

실시예

실시예 1: 선택된 위치에서 NNK 포화 돌연변이유발 라이브러리의 생성 및 개별 변이체 분석

돼지, 소, 말, 양, 염소 IgG1a(의 CH2 및 CH3 도메인의 야생형(wt) 서열(SEQ ID NO:1 내지 27에서 나타낸 바와 같이)을 합성하고, NNK 돌연변이유발을 위한 주형으로서 사용하였다. NNK 포화 돌연변이유발 방법은 목적하는 위치에서 가능한 모든 20개의 아미노산을 생성하는 효과적인 방법이다(Hogrefe et al., Biotechniques. 33: 1158-1165 [2002]; 그 내용은 전체적으로 참조로 여기에 포함된다). 250, 252, 254, 256, 286, 309, 311, 426, 428, 434 및 436 위치(EU 넘버링)에서 개별 NNK 라이브러리를 생성하였다. 지정된 위치의 NNK(N = A/C/G/T, K = G/T) 프라이머를 QuikChange 부위-지정 돌연변이유발 키트(Agilent)와 함께 사용하였다. PCR 산물을 진스크립트 FASEBA 플라스미드에 서브클로닝하고, 대장균에 형질전환시키고, 변이체의 존재에 대해 서열을 확인하였다. CH2 도메인의 하류는 알부민에 대한 pM 친화도를 갖는 SASA(혈청 알부민에 대한 단일-도메인 항체) 태그(Zhang, J.; Wu, S.; Liu, J. Methods and systems for increasing protein stability. US 특허 제US 2013/0129727 A1호; 그 내용은 전체적으로 참조로 여기에 포함된다)이다. SASA 항체는 아래 설명된 센서 칩 표면에 대한 Fc의 포획을 가능하게 한다. PelB(pectate lyase B) 신호 펩타이드는 배지로의 Fc 분비를 촉진하기 위해 N-말단에 있다. CH2-CH3 단백질의 발현은 Lac 프로모터에 의해 조절된다. 표면 플라즈몬 공명(surface plasmon resonance: SPR)을 사용하여 변이체에 대해 pH 6.0에서 표적 가축/종 FcRn에 대한 결합에 대해 조건화 배지(conditioned medium)의 상청액을 분석하였다.

각 라이브러리로부터의 다수의 개별 형질감염체로부터의 상청액을 아래 설명된 바와 같은 Biacore 방법을 사용하여 pH 6.0에서 가축/종의 FcRn에 대한 결합에 대해 검정하였다.

Biacore 8K를 사용한 SPR 분석을 위해, 소 혈청 알부민(BSA)을 CM5 센서 칩에 고정화하였다. 플로우 셀 1 및 2의 센서 칩 표면을 새로 혼합된 50 m㏖/L N-하이드록시석신이미드 및 200 m㏖/L 1-에틸-3-(3-다이메틸아미노프로필) 카보다이이미드 하이드로클로라이드로 420초(10 ㎕/분) 동안 활성화하였다. 그 후, 10 mM 소듐 아세테이트(pH 4.5)에 희석된 BSA를 플로우 셀 2에 주입하여 접합을 달성하고, 플로우 셀 1은 블랭크로 설정하였다. 아민 커플링 반응 후, 칩 표면의 나머지 활성 커플링 부위를 1mM 에탄올아민 하이드로클로라이드를 420초 동안 주입하여 차단시켰다. 결합 실험을 위한 전개 완충액은 HBS-EP(10mM HEPES, 500 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% Tween 20, pH 5.5)였으며, 이를 25℃에서 전개하였다. 변이체로부터의 상청액을 칩 표면에 주입하고, SASA 태그를 통해 고정화된 BSA에 60초 동안 포획하였다. 200 nM의 가축/종의 FcRn을 120초 동안 주입하고, 전개 완충액으로 120초 동안 해리를 완료하였다. BSA의 고정화 단계에 대한 유속은 10 ㎕/분이었고, 결합 및 해리 단계에 대한 유속은 30 ㎕/분이었다. 모든 데이터는 Biacore 8K 평가 소프트웨어 버전 1.1을 사용하여 처리하였다. 결과는 시험된 IgG Fc 변이체가 동일한 가축/종의 야생형 IgG Fc와 비교할 때 pH 6.0에서 상응하는 가축/종의 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 가짐을 보여줄 것이다.

실시예 2: IgG Fc의 스캐닝 돌연변이유발

파지 디스플레이 라이브러리 접근법을 사용하여 pH 6.0에서 동일한 가축 또는 종의 FcRn에 대한 친화도를 증가시키는 IgG1a Fc 변이체를 확인하였다. IgG1a Fc(SEQ ID NO:1~27의 CH2+CH3 도메인 포함)를 트위스트 바이오사이언스(Twist Bioscience)에서 하나 이상의 위치에서 아미노산 돌연변이(치환)를 갖는 다수의 변이체를 생성하였다. 돌연변이된 각 위치에서, 8개의 가능한 아미노산이 치환되었다. 이들 아미노산은 아르기닌 및 라이신(양으로 하전된 측쇄), 아스파르트산 및 글루탐산(음으로 하전된 측쇄), 트레오닌 및 글루타민(극성의 하전되지 않은 측쇄) 및 류신 및 발린(소수성 측쇄)이었다. Fc DNA 라이브러리를 Fc 분자당 평균 2개의 변이체를 갖도록 설계하였다. 변형 조합의 수는 공식: nCr=n!/r!*(n-r)!를 사용하여 계산할 수 있으며, 여기서 n은 부위의 수를 나타내고, r은 분자당 변이체의 수를 나타낸다. 목적하는 부위-특이적 돌연변이를 갖는 Fc 변이체를 트위스트사의 실리콘계 플랫폼에 돌연변이 유발성 올리고뉴클레오타이드로 프린팅하였다.

그런 다음, 올리고뉴클레오타이드를 조립하고 조립 PCR을 사용하여 전장 Fc 유전자 단편 풀을 생성하였다. 그런 다음, 조립된　Fc 유전자 단편 풀을 안티바디 디자인 랩스(Antibody Design Labs)의 pADL-22c 파지미드 벡터의 Sfi 절단-부위로 클로닝하였다. 일반적으로 8Х10¹⁰개가 넘는 변이체의 실험적 다양성을 생성하기 위해 클로닝된 DNA 라이브러리를 전기천공적격 (electrocompetent) TG1 대장균 세포에 형질전환시켰다. 그런 다음, 파지미드 형질전환된 대장균　세포를 M13K07 헬퍼 파지로 공동 형질감염시켜 단백질-기반 패닝에 사용되는 파지 풀을 생성하였다. 라이브러리를 20 mM MES 완충액(pH 6.0), 0.05% Tween 20 및 3% 우유에 재현탁시켰다.

96개의 무작위 파지 클론을 선택함으로써 라이브러리의 품질을 결정하고, Sanger 방법으로 시퀀싱하였다.

첫 번째 파지 선택을 위해, 단백질 A 포획 단계를 사용하여 단백질 A 결합을 상실한 임의의 Fc 변이체를 제거하였다. 이 선택을 위해, 파지 라이브러리를 단백질 A 비드 상에 포획하고, PBS(pH 7.4)로 세척하였다. 파지를 0.1 M 글리신(pH 2.7)으로 용리하고, pH를 1 M Tris-HCl(pH 7.5)로 즉시 중화하였다. 중화된 파지를 폴리에틸렌 글리콜/NaCl로 침전시키고 원심분리하였다. 펠릿화된 파지를 20mM MES(pH 6.0), 0.05% Tween 20, 3% 우유에 재현탁시켰다.

다음 파지 선택은 문헌[Borrok et al., 2015, J Biol. Chem., 290:4282; 그 내용은 전체적으로 참조로 여기에 포함된다]에 의해 기술된 프로토콜을 기반으로 하였다. 간략하게는, Nunc 96 멀티-웰 플레이트를 뉴트라비딘으로 코팅한 다음, 5% 소 혈청 알부민, PBS(pH 7.4)로 차단하였다. 표적 가축 또는 종의 비오티닐화된 FcRn은 pH 6.0의 PBS에서 약 0.30 μg/ml의 농도로 웰에 고정하였다. PBS(pH 6.0) 중 파지 라이브러리를 고정화된 FcRn과 함께 인큐베이션한 다음, PBS(pH 6.0), 0.05% Tween 20, 0.3 M NaCl로 세척하였다. 파지를 37℃에서 30분 동안 인큐베이션함으로써 PBS(pH 7.4)로 용리시켰다. 용리된 파지를 pH 7.4에서 약 0.30 ㎍/㎖의 동일한 가축 또는 종의 FcRn으로 고갈시켰다. 결합되지 않은 파지를 TG1 세포에서 증폭시켰다.

그런 다음 Illumina MiSeq를 사용하여 차세대 시퀀싱에 의해 클론을 시퀀싱하였다.

고유한 변이체를 ExpiFectamine 293 형질감염 시약을 사용하여 Expi293 세포에 형질감염된 IgG 및 미니프렙(mini-prep) 플라스미드 DNA로 재형식화될 수 있다. 이어서 Ig 변이체를 단백질 A 크로마토그래피로 조건화 배지로부터 정제하고, 43 mM 소듐 시트레이트, 130 mM 소듐 바이카보네이트(pH 6.0)로 제형화할 수 있다.

상응하는 가축/종의 FcRn에 대한 IgG 변이체의 친화도를 결정하기 위해, Carterra 기기를 사용하여 결합 동역학을 결정할 수 있다. 이 접근 방법으로 항체(대략 5 ㎎/㎖)를 EDC/NHS 활성화에 의해 HC30M 센서 칩에 아민-커플링시킨 후, 에탄올아민 HCl로 반응을 중지시켰다.

HBSTE(10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.05% Tween-20), 0.5% 소 혈청 알부민(pH 6.0)에서 상이한 농도(333 nM, 111 nM, 37 nM, 12.3 nM, 4.1 nM, 1.37 nM, 0.45 nM)의 FcRn을 센서 칩 위로 흘려 pH 6.0에서의 동역학을 결정하였다. HBSTE 완충액의 pH를 7.4로 조정한 것을 제외하고는 이러한 동일한 전략을 사용하여 pH 7.4에서 FcRn에 대한 결합 동역학을 결정하였다.

동일한 가축/종의 상응하는 FcRN에 대한 IgG Fc 변이체의 결합을 증가시키는 아미노산 치환 목록이 하기 표 6에 제공된다:

해당 가축의 FcRn에 대한 결합 친화도를 증가시키는 가축 IgG Fc 변이체에 대한 아미노산 치환 요약

EU 번호	돼지[11]	소[3]	말[7]	양[3]	염소[3]	아미노산 치환(들)
250	T, I	T	T,A,V	T,S	T,S	Q,E
252	M	T,M	M,K	M,T	T,M	Y,W,F
254	S	S,T	T,S	S,T	S,T	T,R,K,H *
256	T	T	T,M,K	T	T,K	A,D,E
286	T	T	T,S	T	T	Y,F,W,L,D,E
309	Q	Q	Q	Q	Q	D,E,V
311	Q,E	Q	Q,K	Q,D	Q,D,K	V,K,R,L,H **
426	A,V	V,A	G,A,V	V	V,A	Y,F,H
428	M,H	M	M	M	M	L,Y,F ***
434	N,H	N	N,H	N	N	A,H,F,S,W,Y
436	Y,T	Y	Y,F,V	Y	Y	H

[n]은 해당 종에서 확인된 서로 다른 IgG 서브클래스의 수를 나타낸다.

* 양 또는 염소 IgG Fc의 경우 해당 위치에 T가 아님

** 말 IgG4 Fc 및 IgG7 Fc의 경우 이 위치에서 K가 아님

*** 소 IgG Fc에 대한 이 위치에서의 치환 없음

실시예 3: FcRn에 대한 IgG Fc 변이체의 결합 동역학

돼지, 양, 소 및 말 IgG에 대해 Fc 변이체 세트를 발현시키고 정제하였다. 각각의 IgG에 대한 중쇄 및 경쇄에 대한 가변 도메인은 이전에 Gearing et al. (2016, J Vet Intern Med, 30:1129)에 의해 설명되었다. 상이한 종의 IgG에 사용된 중쇄 및 경쇄 불변 도메인은 다음과 같다. 돼지의 경우 IgG1a(GenBank AAA52219.1 SEQ ID NO: 1) 및 돼지 카파 사슬(GenBank AHB17990.1)이고, 양의 경우 IgG1(GenBank X69797, SEQ ID NO: 22) 및 양 카파 사슬(GenBank AU45094.1)이고, 소의 경우 IgG1(GenBank ABE68619.1, SEQ ID NO: 12) 및 소 카파 사슬(GenBank AEM45004.1)이고, 말의 경우 IgG1(GenBank CAC44760.1, SEQ ID NO: 15) 및 말 카파 사슬(GenBank CAA53284.1)이었다. 변이체는 위치 252, 286, 309, 311, 426, 428, 434 및 436(도 1)(EU 넘버링)에서 각 종의 Fc에서 만들어졌다. 각각의 변이체 및 야생형에 대해 합성된 DNA를 pcDNA3.4 발현 벡터(Life Technologies)에 서브클로닝하고 HEK293 셀에서 발현시켰다. 각각의 변이체 및 야생형에 대한 조건화 배지를 표 7에 나타낸 수지로 정제하고 정제된 항체를 PBS, pH 7.2에서 제형화하였다. EMD Millipore에서 구매한 RoboColumn Eshmuno A를 제외하고 모든 수지는 Cytiva에서 구매했다.

항체의 순도는 쿠마시 블루로 염색된 SDS/PAGE 겔의 스캐닝 농도계에 의해 결정되었고 각각 90%를 넘었다(도 2a~2j, 3a~3j, 4a~4j, 5a~5j).

IgG Fc 변이체 및 야생형 IgG 정제용 수지

명칭	정제
돼지 야생형	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 M252￥Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 T286E	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
돼지 Q309D	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 Q309/	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 Q311V	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 A426Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 M428Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 N434Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
돼지 Y436H	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 야생형	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 T252Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 T286E	HiTrap Protein G HP
양 Q309D	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 Q309V	HiTrap Protein G HP
양 Q311V	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 V426Y	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
양 M428Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
양 N434Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
양 N436H	HiTrap Protein G HP
소 야생형	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
소 T252Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 T286E	PreDictor RoboColumn MabSelect Sure
소 Q309D	HiTrap Protein G HP
소 Q309V	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 Q311V	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 V426Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 M428Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 N434Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
소 Y436H	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 야생형	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 M252Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 T286E	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 Q309D	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 Q309V	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 Q311V	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 G426Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 M428Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 N434Y	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml
말 Y436H	RoboColumn Eshmuno A 0.6ml

FcRn 복합체는 대형 서브유닛 p51과 베타-2-마이크로글로불린으로 구성된다. Avi-태그 서열(SEQ ID NO: 28, GLNDIFEAQKIEWHE) 및 8X His 태그를 대형 서브유닛 p51의 세포외 도메인의 C-말단에 융합시키고(돼지: GenBank E9LK24; 양: GenBank Q8HZV2; 소: GenBank AAF60956.1; 말: GenBank XP_023505908.1), pcDNA3.4 발현 벡터(Life Technologies)에 서브클로닝하였다. 플래그 태그(SEQ ID NO: 29, DYKDDDDK)를 베타-2-마이크로글로불린의 C-말단에 융합시키고 (돼지: GenBank L13854.1; 양: GenBank AY549962.1; 소: GenBank X69084.1; 말: GenBank X69083.1), pcDNA3.4 발현 벡터에 서브클로닝하였다. 각 종에 대해 대형 서브유닛 p51 발현 벡터를 베타-2-마이크로글로불린과 함께 HEK293 세포에 공동 형질감염시켰다. FcRn 복합체는 HisTrap 고속 흐름 크로마토그래피(Cytiva)를 사용하여 조건화 배지로부터 정제되었고, 단백질은 pH 7.2의 PBS로 제형화되었다. TSKgel G3000SWxl 컬럼을 사용하여 SDS/PAGE 및 분석 SEC(크기 배제 크로마토그래피)로 단백질을 분석했다. 단백질의 순도는 SDS/PAGE에 의해 95%가 넘었고 95%가 넘는 FcRn 복합체는 분석적 SEC에 의해 대형 서브유닛 p51 및 베타-2-마이크로글로불린의 이종이량체였다.

FcRn 결합 실험은 25℃에서 Biacore 8K+ 시스템에서 완료되었다. 제조사의 지침에 따라 His Capture Kit(Cytiva, Cat 28995056)를 사용하여 His 태그에 대한 다클론 항체를 CM5 바이오센서 칩에 결합했다. 상이한 종으로부터 His-태그된 FcRn은 대략 100 RU가 포획될 때까지 10 μl/분에서 항-His 다클론 바이오센서 칩 상에 흘려졌다. 상이한 돼지, 양, 소 및 말 IgG 변이체 및 야생형은 각각 돼지, 소, 말 및 양 FcRn 단백질 바이오센서 칩에 대한 분석물이었다. 다섯 가지 농도의 IgG를 30초 해리 시간과 함께 30 μl/분에서 90초 동안 주입했다. 각 종의 야생형 IgG의 경우, IgG의 농도는 6.2 nM, 18 nM, 55 nM, 167 nM 및 500 nM이었다. 각 종의 변이체 IgG에 대한 IgG의 농도는 1.2 nM, 3.7 nM, 11 nM, 33 nM 및 100 nM이었다. 러닝 버퍼는 pH 5.9로 조정된 1X PBS-P+(Cytiva, Cat # 28995084)였다. 표면은 10mM 글리신(pH 1.5)으로 30μl/분에서 30초 동안 재생되었다. 데이터는 Insight Evaluation Software를 사용하여 1:1 동역학 상호작용 모델에 맞추거나 정상 상태(steady state) 친화도에 맞춰 평가했다.

돼지 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터를 표 8에 나타냈고 결합 데이터에 대한 센서그램을 도 6a~6j에 나타냈다.

돼지 IgG Fc 변이체 및 FcRn 결합 동역학

돼지 변이체	ka	kd	KD	데이터 피팅 방법	배 증가 야생형 KD
돼지 야생형			3.17E-07	정상 상태 친화도	1-배
돼지 M252Y	3.07E+05	2.99E-02	9.72E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.3-배
돼지 T286E	4.77E+05	4.58E-02	9.61E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.3-배
돼지 Q309D	2.64E+05	2.47E-02	9.36E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.4-배
돼지 Q309V	2.57E+05	8.78E-03	3.41E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	9.3-배
돼지 Q311V	2.81E+05	2.l5E-02	7.64E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	4.1-배
돼지 A426Y	3.74E+05	3.93E-02	1.05E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.0-배
돼지 M428Y	3.00E+05	2.61E-02	8.69E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.6-배
돼지 N434Y	7.35E+05	5.83E-03	7.93E-09	1:1 키네틱 상호작용 모델	40-배
돼지 Y436H			결합 없음

양 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터를 표 9에 나타내었고 결합 데이터에 대한 센서그램을 도 7a~7j에 나타내었다.

양 IgG Fc 변이체 및 FcRn 결합 동역학

양 변이체	ka	kd	KD	데이터 피팅 방법	배 증가 야생형 KD
양 야생형			4.97E-07	정상 상태 친화도	1-배
양 T252Y	6.12E+05	2.64E-02	4.31E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	11-배
양 T286E			결합 없음
양 Q309D			결합 없음
양 Q309V	6.28E+05	4.98E-02	7.93E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	6.3-배
양 Q311V	7.08E+05	6.57E-02	9.27E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	5.4-배
양 V426Y			결합 없음
양 M428Y	1.58E+06	2.63E-01	1.66E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.0-배
양 N434Y	1.58E+06	9.60E-03	6.09E-09	1:1 키네틱 상호작용 모델	81-배
양 Y436H			결합 없음

소 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터를 표 10에 나타내었고 결합 데이터에 대한 센서그램을 도 8a~8j에 나타내었다.

소 IgG Fc 변이체 및 FcRn 결합 동역학

소 변이체	ka	kd	KD	데이터 피팅 방법	배 증가 야생형 KD
소 야생형	2.25E+05	1.14E-01	5.05E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	1-배
소 T252Y	2.33E+05	1.66E-02	7.14E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	7.1-배
소 T286E			결합 없음
소 Q309D			결합 없음
소 Q309V	5.94E+05	7.68E-02	1.29E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.9-배
소 Q311V	5.97E+05	1.09E-07	1.82E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	2.8-배
소 V426Y			결합 없음
소 M428Y			결합 없음
소 N434Y	1.19E+06	1.41E-02	1.19E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	42-배
소 Y436H	6.77E+05	1.52E-01	2.24E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	2.3-배

말 IgG 변이체 및 야생형에 대한 키네틱 결합 데이터를 표 11에 나타내었고 결합 데이터에 대한 센서그램을 도 9a~9j에 나타내었다.

말 IgG Fc 변이체 및 FcRn 결합 동역학

말 변이체	ka	kd	KD	데이터 피팅 방법	배 증가 야생형 KD
말 야생형	1.47E-05	2.l0E-02	1.43E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델
말 M252Y	2.33E+05	1.66E-02	7.14E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	2.0-배
말 T286E	2.55E+05	1.22E-02	4.80E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	3.0-배
말 Q309D	1.51E+05	2.17E-02	1.44E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	1.0-배
말 Q309V	1.98E+05	4.00E-03	2.02E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	7.2-배
말 Q311V	2.16E+05	7.71E-03	3.57E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	4.0-배
말 G426Y	2.69E+05	1.41E-02	5.23E-08	1:1 키네틱 상호작용 모델	2.8-배
말 M428Y	2.01E+05	3.03E-02	1.5lE-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	0.9-배
말 N434Y	4.16E+05	9.78E-04	2.35E-09	1:1 키네틱 상호작용 모델	61-배
말 Y436H	1.91E+05	2.98E-02	1.56E-07	1:1 키네틱 상호작용 모델	0.9-배

표 12는 야생형 Fc와 비교하여 각 Fc 변이체의 배수 증가의 종 비교를 보여준다.

상이한 종들 간의 IgG Fc 변이체 및 FcRn 결합 비교

종	252Y	286E	309D	309V	311V	426Y	428Y	434Y	436H
돼지	3.3-배	3.3-배	3.4-배	9.3-배	4.1-배	3.0-배	3.6-배	40-배	결합없음
양	11-배	결합없음	결합없음	6.3-배	5.4-배	결합없음	3.0-배	81-배	결합없음
소	7.1-배	결합없음	결합없음	3.9-배	2.8-배	결합없음	결합없음	42-배	2.3-배
말	2.0-배	3.0-배	1.0-배	7.2-배	4.0-배	2.8-배	0.9-배	61-배	0.9-배

다른 실시형태

본 발명은 상세한 설명과 함께 설명되었지만, 전술한 설명은 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 범위를 예시하기 위한 것으로 제한하기 위한 것이 아니다. 다른 양태, 이점 및 수정은 다음 청구범위 내에 있다.

SEQUENCE LISTING <110> INVETX, INC. <120> COMPOSITIONS FOR INCREASING HALF-LIFE OF A THERAPEUTIC AGENT IN LIVESTOCK ANIMALS AND METHODS OF USE <130> 47406-0017WO1 <140> PCT/US2021/061409 <141> 2021-12-01 <150> US 63/122,365 <151> 2020-12-07 <160> 36 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 1 Gly Cys Glu Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Gln Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Lys Glu His Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Val Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Ile Gly Gln Ser 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Thr Val Thr Cys Leu Val Ile Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile His Val Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Phe Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Trp Asp His Gly Glu 180 185 190 Thr Phe Glu Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly Lys 210 215 <210> 2 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 2 Gly Cys Glu Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Gln Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Lys Glu His Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Val Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Ile Gly Gln Ser 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Ile Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile His Val Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn 145 150 155 160 Thr Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Phe Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Trp Asp His Gly Asp 180 185 190 Lys Phe Glu Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly Lys 210 215 <210> 3 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 3 Ala Cys Glu Ser Pro Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Gln Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Thr 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro His Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Ile Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Phe Ser Val Asp Lys Ala Ser Trp Gln Gly Gly Gly 180 185 190 Ile Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Pro Gly Lys 210 215 <210> 4 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 4 Ala Cys Glu Ser Pro Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Gln Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Thr 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro His Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Ile Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Phe Ser Val Asp Lys Ala Ser Trp Gln Gly Gly Gly 180 185 190 Ile Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Pro Gly Lys 210 215 <210> 5 <211> 219 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 5 Ala Ala Glu Val Leu Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Ser Gln Glu Glu Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr 35 40 45 Val Asp Gly Val Gln Leu Tyr Thr Ala Gln Thr Arg Pro Met Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys 85 90 95 Asp Leu Leu Ser Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Thr Gly Pro 100 105 110 Ser Arg Val Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ala Trp Glu Glu Leu 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro 130 135 140 Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu 145 150 155 160 Gly Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr 165 170 175 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Val Arg Trp Gln Arg Gly 180 185 190 Asp Leu Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 195 200 205 Thr Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly Lys 210 215 <210> 6 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 6 Ala Cys Glu Gly Pro Gly Pro Ser Ala Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Thr 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Thr Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Ser Trp Gln Arg Gly Asp 180 185 190 Thr Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Phe Lys Thr Pro Gly Lys 210 215 <210> 7 <211> 208 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 7 Ala Cys Glu Gly Pro Gly Pro Ser Ala Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Leu Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Thr 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Thr Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Ser Trp Gln Arg Gly Asp 180 185 190 Thr Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 <210> 8 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 8 Gly Cys Glu Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Lys Glu His Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Glu Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Glu 65 70 75 80 Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Glu Cys Lys Val Asn Asn Glu Asp 85 90 95 Leu Pro Gly Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Val Val 100 105 110 Arg Ser Pro Glu Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Lys Ser Ile Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Ser Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Phe Ile His Val Glu Trp Lys Ile Asn Gly Lys Pro Glu Pro Glu Asn 145 150 155 160 Ala Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Glu Asp Glu Asp Arg Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Trp Asp His Gly Glu 180 185 190 Thr Phe Glu Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Ser Lys Thr Gln Gly Lys 210 215 <210> 9 <211> 217 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 9 Ile Cys Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Ile Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Lys Glu His Ala Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Glu Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Glu 65 70 75 80 Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Glu Cys Lys Val Asn Asn Glu Asp 85 90 95 Leu Pro Gly Pro Ile Thr Arg Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Val Val 100 105 110 Arg Ser Pro Glu Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Lys Ser Ile Val Thr Leu Thr Cys Leu Val Lys Ser Phe Phe Pro Pro 130 135 140 Phe Ile His Val Glu Trp Lys Ile Asn Gly Lys Pro Glu Pro Glu Asn 145 150 155 160 Ala Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Glu Asp Glu Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Phe Ser Val Glu Lys Phe Arg Trp His Ser Gly Gly 180 185 190 Ile His Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Glu 195 200 205 Lys Ser Val Ser Gln Thr Pro Gly Lys 210 215 <210> 10 <211> 218 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 10 Ala Cys Glu Gly Pro Gly Pro Ser Ala Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Thr 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Pro Thr Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Leu Ser Val Thr Cys Leu Ile Thr Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln Gln Asp Val Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Ser Trp Gln Arg Gly Asp 180 185 190 Pro Phe Gln Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 195 200 205 Gln Lys Ser Ile Phe Lys Thr Pro Gly Asn 210 215 <210> 11 <211> 214 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 11 Ala Cys Glu Gly Asn Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro 1 5 10 15 Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 20 25 30 Val Asp Val Ser Gln Glu Asn Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Tyr Val 35 40 45 Asp Gly Glu Glu Val His Thr Ala Glu Thr Arg Pro Lys Glu Glu Gln 50 55 60 Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Pro Ile Gln His Gln 65 70 75 80 Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe Glu Cys Lys Val Asn Asn Lys Asp 85 90 95 Leu Pro Ala Pro Ile Thr Arg Ile Ile Ser Lys Ala Lys Gly Pro Ser 100 105 110 Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Ser Pro Ser Ala Glu Glu Leu Ser 115 120 125 Arg Ser Lys Val Ser Ile Thr Cys Leu Val Thr Gly Phe Tyr Pro Pro 130 135 140 Asp Ile Asp Val Glu Trp Lys Ser Asn Gly Gln Pro Glu Pro Glu Gly 145 150 155 160 Asn Tyr Arg Ser Thr Pro Pro Gln Glu Asp Glu Asp Gly Thr Tyr Phe 165 170 175 Leu Tyr Ser Lys Leu Ala Val Asp Lys Ala Arg Leu Gln Ser Gly Gly 180 185 190 Ile His Cys Ala Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln 195 200 205 Lys Ser Ile Ser Lys Thr 210 <210> 12 <211> 217 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 12 Pro Pro Glu Leu Pro Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys 1 5 10 15 Pro Lys Asp Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Pro Glu Val Thr Cys Val 20 25 30 Val Val Asp Val Gly His Asp Asp Pro Glu Val Lys Phe Ser Trp Phe 35 40 45 Val Asp Asn Val Glu Val Asn Thr Ala Thr Thr Lys Pro Arg Glu Glu 50 55 60 Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Ala Leu Arg Ile Gln His 65 70 75 80 Gln Asp Trp Thr Gly Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val His Asn Glu 85 90 95 Gly Leu Pro Ala Pro Ile Val Arg Thr Ile Ser Arg Thr Lys Gly Pro 100 105 110 Ala Arg Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu Ala Pro Pro Gln Glu Glu Leu 115 120 125 Ser Lys Ser Thr Val Ser Leu Thr Cys Met Val Thr Ser Phe Tyr Pro 130 135 140 Asp Tyr Ile Ala Val Glu Trp Gln Arg Asn Gly Gln Pro Glu Ser Glu 145 150 155 160 Asp Lys Tyr Gly Thr Thr Pro Pro Gln Leu Asp Ala Asp Ser Ser Tyr 165 170 175 Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Arg Val 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Val Val 50 55 60 Ser Val Leu Pro Ile Leu His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Glu Phe 65 70 75 80 Lys Cys Lys Val Asn Ser Lys Ser Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr 85 90 95 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro His Glu Pro Gln Val Tyr Val Leu 100 105 110 Pro Pro Ala Gln Glu Glu Leu Ser Arg Asn Lys Val Ser Val Thr Cys 115 120 125 Leu Ile Lys Ser Phe His Pro Pro Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ile 130 135 140 Thr Gly Gln Pro Glu Pro Glu Asn Asn Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln 145 150 155 160 Leu Asp Ser Asp Gly Thr Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp 165 170 175 Arg Ser His Trp Gln Arg Gly Asn Thr Tyr Thr Cys Ser Val Ser His 180 185 190 Glu Ala Leu His Ser His His Thr Gln Lys 195 200 <210> 35 <211> 202 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 35 Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Leu Ile Ala Arg 1 5 10 15 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Leu Asp Pro Glu Asp Pro 20 25 30 Glu Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asp Gly Lys Gln Met Gln Thr Ala 35 40 45 Lys Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Gly Thr Tyr Arg Val Val 50 55 60 Ser Val Leu Pro Ile Gly His Gln Asp Trp Leu Lys Gly Lys Gln Phe 65 70 75 80 Thr Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu Arg Thr 85 90 95 Ile Ser Lys Ala Arg Gly Gln Ala His Gln Pro Ser Val Tyr Val Leu 100 105 110 Pro Pro Ser Arg Glu Glu Leu Ser Lys Asn Thr Val Ser Leu Thr Cys 115 120 125 Leu Ile Lys Asp Phe Phe Pro Pro Asp Ile Asp Val Glu Trp Gln Ser 130 135 140 Asn Gly Gln Gln Glu Pro Glu Ser Lys Tyr Arg Thr Thr Pro Pro Gln 145 150 155 160 Leu Asp Glu Asp Gly Ser Tyr Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Ser Val Asp 165 170 175 Lys Ser Arg Trp Gln Arg Gly Asp Thr Phe Ile Cys Ala Val Met His 180 185 190 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Glu 195 200 <210> 36 <211> 199 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 1 5 10 15 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 20 25 30 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 35 40 45 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 50 55 60 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 65 70 75 80 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 85 90 95 Ile Ser Lys Ala Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro 100 105 110 Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu 115 120 125 Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 130 135 140 Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 145 150 155 160 Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 165 170 175 Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 180 185 190 His Asn His Tyr Thr Gln Lys 195

Claims

가축의 IgG Fc 영역 변이체 또는 이의 가축 FcRn-결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q, T250E, I250Q, I250E, A250Q, A250E, V250Q 및 V250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W, T252F, K252Y, K252W 및 K252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, M256A, M256D, M256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S286Y, S286F, S286W, S286L, S286D, S286E, T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, E311V, E311K, E311R, E311L, E311H, K311V, K311R, K311L, K311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F, V426H, G426Y, G426F 및 G426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 M428L, M428Y, M428F, H428L, H428Y 및 H428F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(xi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H, T436H, F436H 및 V436H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
로 이루어진 군으로부터 선택되는 적어도 하나의 위치에 아미노산 치환을 포함하며,
상기 아미노산 위치는 EU 넘버링에 기초하고,
상기 폴리펩타이드는 상기 야생형 가축 IgG의 Fc 도메인과 비교할 때 가축 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는, 폴리펩타이드.
제1항에서,
상기 가축은 돼지인 것인, 폴리펩타이드.
제2항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T250Q, T250E, I250Q 및 I250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W 및 M252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K 및 S254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, E311V, E311K, E311R, E311L 및 E311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 M428L, M428Y, M428F, H428L, H428Y 및 H428F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(xi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H 및 T436H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제3항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y인 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286E인 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309D 또는 Q309V 로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V인 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y인 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M428Y인 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434Y인 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제2항 내지 제4항 중 어느 한 항에서,
상기 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO: 1 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 돼지 IgG Fc인 것인, 폴리펩타이드.
제1항에서,
상기 가축은 소인 것인, 폴리펩타이드.
제6항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L 및 Q311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H인 위치;
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제7항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T252Y인 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V인 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V인 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434Y인 위치; 및
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H인 위치;
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에서,
상기 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO: 12 내지 14로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 소 IgG Fc인 것인, 폴리펩타이드.
제1항에서,
상기 가축은 말인 것인, 폴리펩타이드.
제10항에서,
상기 폴리펩타이드는 하기로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드:
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T250Q, T250E, A250Q, A250E, V250Q 및 V250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, K252Y, K252W 및 K252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254T, S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, M256A, M256D, M256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S286Y, S286F, S286W, S286L, S286D, S286E, T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L 및 K311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F, V426H, G426Y, G426F 및 G426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W, N434Y, H434A, H434F, H434S, H434W 및 H434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(xi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H, F436H 및 V436H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치.
제11항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y인 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286E인 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V인 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V인 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 G426Y인 위치; 및
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434Y인 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에서,
상기 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO: 15 내지 21로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 말 IgG Fc인 것인, 폴리펩타이드.
제1항에서,
상기 가축은 양인 것인, 폴리펩타이드.
제14항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D 및 T256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(xi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H인 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제15항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T252Y인 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V인 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V인 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M428Y인 위치; 및
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434Y인 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에서,
상기 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO: 22 내지 24로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 양 IgG Fc인 것인, 폴리펩타이드.
제1항에서,
상기 가축은 염소인 것인, 폴리펩타이드.
제18항에서,
상기 폴리펩타이드는,
(i) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 250에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S250Q, S250E, T250Q 및 T250E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 252에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 M252Y, M252W, M252F, T252Y, T252W 및 T252F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 254에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 S254R, S254K, S254H, T254R, T254K 및 T254H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(iv) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 256에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T256A, T256D, T256E, K256A, K256D 및 K256E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(v) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 286에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 T286Y, T286F, T286W, T286L, T286D 및 T286E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 309에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q309V, Q309D 및 Q309E로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(vii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 311에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Q311V, Q311K, Q311R, Q311L, Q311H, K311V, K311R, K311L, K311H, D311V, D311K, D311R, D311L 및 D311H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(viii) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 426에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 A426Y, A426F, A426H, V426Y, V426F 및 V426H로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(ix) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 428에 상응하는 위치 상기 아미노산 치환은 M428L, M428Y 및 M428F로 이루어진 군으로부터 선택된 위치;
(x) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 434에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 N434A, N434H, N434F, N434S, N434W 및 N434Y로 이루어진 군으로부터 선택된 위치; 및
(xi) 상기 가축의 야생형 IgG의 아미노산 위치 436에 상응하는 위치로서 상기 아미노산 치환은 Y436H인 위치,
로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 위치에서 아미노산 치환을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제18항 또는 제19항에서,
상기 야생형 IgG Fc는 SEQ ID NO: 25 내지 27로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 염소 IgG Fc인 것인, 폴리펩타이드.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에서,
상기 폴리펩타이드는 상기 적어도 하나의 아미노산 치환 중 2개 이상을 포함하고,
상기 2개 이상의 아미노산 치환은 상이한 위치에 있고,
상기 폴리펩타이드는 (a) 상기 가축의 야생형 IgG의 Fc 도메인 및 (b) 상기 2개 이상의 아미노산 치환 중 하나만을 포함하는 폴리펩타이드와 비교할 때 상기 가축의 FcRn에 대해 증가된 결합 친화도를 갖는 것인, 폴리펩타이드.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에서,
결합 도메인을 추가로 포함하는, 폴리펩타이드.
제22항에서,
상기 결합 도메인은,
(i) 면역글로불린 분자의 6개 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining regions);
(ii) 상기 가축의 수용체 단백질의 리간드 결합 도메인;
(iii) 나노바디; 또는
(iv) 상기 가축의 수용체 단백질의 세포외 도메인;
을 포함하는 것인, 폴리펩타이드.
제22항 또는 제23항에서,
상기 결합 도메인은 NGF, TrKA, ADAMTS, IL-1, IL-2, IL-4, IL-4R, 안지오텐신 1형(AT1) 수용체, 안지오텐신 2형(AT2) 수용체, IL-5, IL-12, IL-13, IL-31, IL-33, CD3, CD20, CD47, CD52 및 보체계 복합체(complement system complex)로 이루어진 군으로부터 선택된 항원에 특이적으로 결합하는 것인, 폴리펩타이드.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에서,
EPO, CTLA4, LFA3, VEGFR1/VEGFR3, IL-1R, IL-4R, GLP-1 수용체 작용제(receptor agonist) 및 트롬보포이에틴(Thrombopoietin) 결합 펩타이드로 이루어진 군으로부터 선택된 단백질을 더 포함하는, 폴리펩타이드.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에서,
상기 폴리펩타이드는 중성 pH에서보다 산성 pH에서 더 높은 수준으로 상기 가축의 FcRn에 결합하는 것인, 폴리펩타이드.
제26항에서,
상기 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 5.5에서 더 높은 수준으로 상기 가축의 FcRn에 결합하는 것인, 폴리펩타이드.
제26항에서,
상기 폴리펩타이드는 pH 7.4보다 pH 6.0에서 더 높은 수준으로 상기 가축의 FcRn에 결합하는 것인, 폴리펩타이드.
(i) 상기 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 폴리펩타이드 및 (ii) 약학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
상기 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항의 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 또는 핵산들.
상기 제30항의 핵산 또는 핵산들을 포함하는 발현 벡터 또는 발현 벡터들.
상기 제30항의 핵산 또는 핵산들 또는 상기 제31항의 발현 벡터 또는 발현 벡터들을 포함하는 숙주 세포.
(a) 제30항의 핵산 또는 핵산들을 제공하는 단계;
(b) 숙주 세포 배양에서 상기 핵산 또는 핵산들을 발현시켜 상기 폴리펩타이드를 생산하는 단계; 및
(c) 상기 숙주 세포 배양으로부터 (b)에서 생산된 상기 폴리펩타이드를 수집하는 단계를 포함하는, 폴리펩타이드 제조 방법.
제33항에서,
상기 폴리펩타이드를 약학적 제형으로 제형화하는 단계를 더 포함하는, 폴리펩타이드 제조 방법.
상기 제29항의 약학적 조성물을 포함하는 조성물의 유효량을 가축에게 투여하는 단계를 포함하는, 가축의 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 가축에 대한 치료 방법.
상기 제29항의 약학적 조성물을 포함하는 조성물의 유효량을 가축에게 투여하는 단계를 포함하는, 가축의 질환 또는 장애의 예방을 필요로 하는 가축에 대한 예방 방법.
제35항 또는 제36항에서,
상기 질환 또는 장애는 알레르기, 만성 통증, 급성 통증, 염증성 질환, 자가면역 질환, 내분비 질환, 위장관 질환, 심혈관 질환, 신장 질환, 생식 관련 장애, 전염병 또는 암인 것인, 방법.
제35항 또는 제36항에서,
상기 질환 또는 장애는 아토피성 피부염, 알레르기성 피부염, 골관절염 통증, 관절염, 빈혈 또는 비만인 것인, 방법.