KR20230127918A - 신규 항체 약물 접합체 - Google Patents

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이태진
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Abstract

본 발명은 신규 항체 약물 접합체에 관한 것으로, 상세하게는 폴리에틸렌 글리콜을 포함하는 항체 약물 접합체, 이의 용매화물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물로 우수한 물성, 안정성을 가지는 접합체에 관한 것이다.

Description

신규 항체 약물 접합체 {Novel antibody drug conjugate}
본 발명은 신규 항체 약물 접합체에 관한 것으로, 상세하게는 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함하는 항체 약물 접합체, 이의 용매화물, 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
항체 약물 접합체(antibody drug conjugate, ADC)는 항체(antibody), 약물(drug or payload) 및 링커(linker)로 구성된 화합물로, 특정 표적 항원에 결합하는 항체와 세포사멸 효과 등 약리효과를 나타내는 약물을 공유 결합시켜 제조된다. 항체 약물 접합체는 항원 또는 수용체를 선택적으로 인지할 수 있는 표적화 능력, 특성 세포의 사멸 유도능, 링커의 안정화 및 해리능이 요구되며, 이를 만족하는 항체 약물 접합체는 표적화를 통해 특정 세포에만 선택적으로 작용하여 부작용이 감소됨과 동시에 치료효과를 높일 수 있다. 항체 약물 접합체의 연구 개발이 다양하게 진행되어 빠르게 성장하고 있으며, Adcetris, Kadcyla, Besponsa, Mylotarg, Polivy, Padcev 등의 약물 접합체가 FDA 승인된 바 있다.
폴리에틸렌 글리콜(PEG)는 에틸렌옥사이드 모노머를 단위로 하는 수용성, 생체 적합성, 무독성 중합체로, 약물 분야에서 페길레이션(PEGylation)을 통한 혈장 반감기 연장, 효소 분해 방지, 서방출 등을 위하여 사용되고 있다. 항체 약물 접합체 분야에서도 폴리에틸렌 글리콜을 이용하여 유리한 효과를 부여하려는 시도가 있어왔다. 이와 관련하여, 미국등록 제11,103,593호에서는 PEG 단위를 포함하는 접합체가 개시되어 있고, 항종양 활성 증가, 안정성 향상을 위한 페길레이션 등이 개시된 바 있다. 다만, 페길레이션이 이루어진다 하더라도 모든 항체 약물 접합체에서 약물 특성이 향상되는 것은 아니고, 링커, 약물 등에 따라 그 효과가 달라질 수 있다. 이에, 높은 안정성과 물성이 개선된 항체 약물 접합체가 요구되고 있다.
미국등록특허 제11103593호
Construction of paclitaxel-based antibody-drug conjugates with a PEGylated linker to achieve superior therapeutic index, Ting Shao et al., Signal TRNAsduction and Targeted Therapy 5, 2020 Optimization of a PEGylated Glucuronide-Monomethylauristatin E Linker for Antibody-Drug Conjugates, Patrick J Burke et al., Mol Cancer Ther, 2017 An optimal "Click" formulation strategy for antibody-drug conjugate synthesis, Erol C Vtansever et al., Bioorg Med Chem, 2020 Click Chemistry Conjugations, Tak Ian Chio et al., Methods mol Biol, 2020
본 발명은 우수한 물성을 나타내고, 소수성 약물에 의한 침전 방지가 가능한 신규 링커를 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 링커를 포함하는 항체 약물 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공하고자 한다.
또한, 본 발명은 상기 신규 향체 약물 접합체를 포함하는 약학적 조성물을 제공하고자 한다.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 일반식 1로 표현되는 접합체를 제공한다.
[일반식 1]
상기 식에서,
Ab는 리간드이고,
Sp1, Sp2, Sp3 및 Sp4는 각각 독립적으로 스페이서이며,
L1는 제1 링커 유닛이고,
L2는 제2 링커 유닛이며,
L3, L3' 및 L3''는 각각 독립적으로 선택되는 제3 링커 유닛이고,
X1, X2, 및 X3는 각각 독립적으로 선택되는 활성제 또는 폴리에틸렌 글리콜 유닛이며,
여기에서, X1, X2, 및 X3 중 최소 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이고,
z는 1 내지 20의 정수이며,
n은 1 내지 20의 정수이고,
m은 1 내지 20의 정수이며,
여기에서, n, m이 2 이상인 경우, L1, L2, L3, L3', Sp2, Sp3, X2 및 X3는 각각 독립적으로 선택된다.
본 발명은 상기 접합체의 용매화물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Ab는 항체, 항체 절편 또는 이의 항원 결합 단편이다.
본 발명에서, 항체, 항체 절편, 또는 이의 결합 단편은 단클론 항체, 다클론 항체, 항체 단편, Fab, Fab', F(ab)2, Fv, scFv, 다이아바디, 선형 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 완전 인간 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 또한, 본 발명에서, 항체의 경쇄 영역(VL 영역), 중쇄 영역(VH 영역), 이의 불변 도메인, 또는 이의 가변 도메인을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명은 상기 항체의 변이체를 포함하며, 항체의 친화도/결합력/특이성/선택성 중 어느 하나 이상의 비율이 50% 이상, 60%이상, 70%이상, 80%이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상 97% 이상 포함하는 변이체를 포함한다.
본 발명에서 항체의 비제한적인 예로, IgA, IgG, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgE, IgD 등을 포함한다.
본 발명에서, 항체의 비제한적인 예시는 하기와 같다.
항 CD71 항체, 항 EGFR 항체, 항 HER2 항체, 항 CD20 항체, 항 CA125 항체, 항 CD19 항체, 항 CD44 항체, 항 CD22 항체, 항 FAP 항체, 항 CD38 항체, 항 CD56 항체, 항 CEA 항체, 항 CD2 항체, 항 CD3 항체, 항 CD7 항체, 항 CD10 항체, 항 CD167 항체, 항 CD140 항체, 항 CD121 항체, 항 CD145 항체, 항 CD71 항체, CCK2R, CLDN18(Claudin-18), CRIPTO, CSF2, CTLA4, DLL3, DLL4, 인터페론, 인터류킨류(IL-1, IL-2, IL4, IL-9 등), IFN, NGF,
세툭시맙, 파니투무맙, 니모투주맙, 브렌투시맙, 리투시맙, 오파투무맙, 토시투모맙, 이부리투모맙, 트라스트주맙, 페르투주맙, 오조가미신, 오조가미신, 이필리무맙, 라베투주맙, 린투주맙, 마투주맙, 시플리주맙, 손투주맙, 메폴리주맙, 모타비주맙, 모토비주맙, 나탈리주맙, 놀로비주맙, 누마비주맙, 오말리주맙, 팔비주맙, 파스콜리주맙, 펙푸시투주맙, 펙투주맙, 퍼투주맙, 펙셀리주맙, 라니비주맙, 레슬리비주맙, 레슬리주맙, 레시비주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 시브로투주맙, 타카투주맙 테트락세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 테피바주맙, 토실리주맙, 토랄리주맙, 트라스투주맙, 투쿠시투주맙, 우르톡사주맙, 비실리주맙, CNTO 95, huC242, huN901.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, L1, L2, L3, L3', L3'', X1, X2, X3 중 일부의 결합으로 표현되는 링커는 절단성 링커 또는 비절단성 링커이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 링커는 절단성 링커이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 절단성 링커는 프로테아제-민감성, pH-민감성, 글루타치온(glutathione)-민감성일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 링커는 효소 절단성 링커일 수 있다. 상기 효소에 의해 절단가능한 링커는 1개 또는 2개 이상의 부위를 포함할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, L1, L2, L3, L3', L3'', X1, X2, X3 중 일부의 결합으로 표현되는 링커는 글루쿠로니다제(glucuronidase)에 의해 절단가능한 절단성 링커이다. 또한, 상기 링커는 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 의해 절단가능한 링커이다.
또한, 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, L1, L2, L3, L3', L3'', X1, X2, X3 중 일부의 결합으로 표현되는 링커는 카텝신에 의해 절단가능한 절단성 링커이다. 예를 들어, 발린-시트룰린(val-cit), 리신-리신(lys-lys), 페닐알라닌-리신(phe-lys), 발린-알라닌(Val-Ala), 알라닌-알라닌(Ala-Ala) 링커 등을 포함할 수 있다. 또한, 상기 절단성 링커는 카텝신에 의해 절단가능하면서도 생체 내에서 안정적인 상태를 유지할 수 있다. 또한, 구체적인 일 예에서, 상기 절단성 링커는 카텝신 B, 카텝신 C, 또는 카텝신 D에 의해 절단가능하면서도 생체 내 안정적인 상태를 유지할 수 있다. 이중 발린-시트룰린(Val-Cit) 링커는 카텝신 B에 의해 절단가능한 링커이다.
또한, 본 발명에서 상기 Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, L1, L2, L3, L3', L3'', X1, X2, X3 중 일부의 결합으로 표현되는 링커에서, 스페이서, 제1 링커, 제2 링커, 제3 링커 중 일부는 카텝신(예를 들어, 카텝신 B, C, D)에 의해 절단가능한 단위일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 링커 내 하이드라존과 같은 산에 불안정한 그룹의 가수분해를 유도하는 그룹을 포함하는, pH-민감성 링커를 포함시킬 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 글루타치온-민감성 링커, 예를 들어 다이설파이드 브릿지를 포함하는 링커를 포함시킬 수 있다.
본 발명에서, 항체 및 링커는 항체의 티올, 특히 시스테인의 티올을 통해 링커와 결합할 수 있다. 또한, 본 발명에서 항체 및 링커는 항체의 아민, 특히, 리신의 아민을 통해 링커와 결합할 수 있다.
본 발명에서, 항체 및 링커 유닛이 결합되는 경우, 스페이서를 포함한 구조에 의해 결합될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 클릭 화학(click chemistry)에 의해 결합된 형태를 포함할 수 있다. 구체적으로, 카르보닐-아미노옥시 (carbonyl-aminoxy)의 옥심 결합 또는 아지드-알킨(azide-alkyne) 기반 클릭 화학에 의해 결합된 형태 등을 포함할 수 있고, 공지된 방법(Bioorg Med Chem. 2020 Dec 15; 28(24), Methods Mol Biol, 2020; 2078: 83-97 등)에 의해 결합된 형태를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 직접결합, 또는 원자 1 내지 200의 화학 구조를 나타낸다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상의 결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서의 결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 또는 제4 스페이서는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 비치환된 C1-10 헤테로알킬렌이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 비치환된 C1-10 헤테로알킬렌이고, NH 결합부위를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C1-20 헤테로알킬렌이고,
치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며
R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴 및 C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C6-50 헤테로아릴렌이고,
치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬렌로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며,
R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴 및 C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 R1은 H, OH 또는 C1-3 알킬이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 =O로 치환된 C6-50 헤테로아릴렌이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 직접결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 말단 C(O)를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 말단 NH를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 말단 C(O)NH를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 -C(O)(CH2)a-, -NH(CH2)a-, -C(O)(CH2)aC(O)-, -C(O)(CH2)aNH-, -NH(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)-, -NHC(O)(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)NH-, 및 -NHC(O)(CH2)aO(CH2)b-로 구성된 군으로부터 선택되고,
여기에서 a, b는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
구체적인, 본 발명의 일 양태에서, 상기 a, b는 각각 독립적으로 1 내지 7의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 을 포함한다.
또한, 본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 이고,
여기에서 X는 치환되거나 비치환된 C1-10 알킬 또는 치환되거나 비치환된 C1-10 헤테로알킬이며, 치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2 및 SH로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상으로 치환되고, s1은 1 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 이고, s1은 1 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 이고,
여기에서 Xa 및 Xb는 각각 독립적으로 치환되거나 비치환된 C1-10 알킬 또는 치환되거나 비치환된 C1-10 헤테로알킬이며, 치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2 및 SH로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상으로 치환되고, s1은 1 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Xa 및 Xb는 각각 독립적으로 -C(O)(CH2)a-, -NH(CH2)a-, -C(O)(CH2)aC(O)-, -C(O)(CH2)aNH-, -NH(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)-, -NHC(O)(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)NH-, 및 -NHC(O)(CH2)aO(CH2)b-로 구성된 군으로부터 선택되고,
여기에서 a, b는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Xa는 -C(O)-이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Xb는 -CH2C(O)-, -(CH2)2OCH2C(O)-NH-이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 스페이서는 -NH-(CH2)a-NH-이고, s는 1 내지 5의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Sp1은 이고,
Xa의 는 L1와 결합하고, Xb의 는 Ab와 결합하며,
상기 Xa, Xb 및 s1은 상기 정의한 바와 같다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아미노산, 비천연 아미노산 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아르기닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 알라닌, 아르기닌, 시트룰린, 이소류신, 류신, 리신, 페닐알라닌, 세린, 트립토판, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아르기닌, 아스파라긴, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 알라닌, 시트룰린, 리신, 페닐알라닌, 세린, 및 발린로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아르기닌, 아스파라긴, 글루타민, 시트룰린, 리신, 세린 및 발린로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2는 리신이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1은 이고, * 및 **는 다른 L1와 결합하거나 Sp1 또는 Sp4와 결합되는 부분이고, ***는 L2와 결합되는 부분이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 효소(enzyme)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 종양 연관 프로테아제(protease)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 글루쿠로니다제(glucuronidase)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 한다. 구체적으로, 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 의해 절단가능하다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 카텝신(cathepsin)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체에서 L2가 직접결합이 경우, -Sp2-L3-X2 또는 -Sp3-L3'-X3 중 어느 하나는 부존재하며, L1이 -Sp2-L3-X2 또는 -Sp3-L3'-X3 중 어느 하나와 결합한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L2가 모두 직접결합인 경우, 접합체는 하기 일반식 2로 표현될 수 있다.
[일반식 2]
상기 식에서,
Ab는 리간드이고,
Sp1, Sp2, 및 Sp4는 각각 독립적으로 스페이서이며,
L1는 제1 링커 유닛이고,
L3, 및 L3''는 각각 독립적으로 선택되는 제3 링커 유닛이고,
X1, 및 X2는 각각 독립적으로 선택되는 활성제 또는 폴리에틸렌 글리콜 유닛이며,
여기에서, X1 및 X2 중 최소 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이고,
z는 1 내지 20의 정수이며,
n은 1 내지 20의 정수이고,
m은 1 내지 20의 정수이며,
여기에서, n, m이 2 이상인 경우, L1, L3, Sp2 및 X2는 각각 독립적으로 선택된다.
또한, 여기에서, 각 스페이서, 링커 유닛, 활성제, 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 상기 정의한 바에 의한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L3, L3' 및 L3''중 어느 하나 이상은 직접결합이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 L3, L3' 및 L3'' 중 어느 하나 이상은 하기 일반식 A로 표현된다.
[일반식 A]
상기 식에서,
G는 글루쿠론산(glucuronic acid), 또는 이의 유도체이고,
A1은 및 A2는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 G는 베타-글루쿠론산(beta-glucuronic acid)이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A1은 X2 또는 X3에 결합된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A2는 Sp2, Sp3 또는 Sp4에 결합된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1NH-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)NH-(CH2)b1- 및 -(CH2)a1OC(O)NH-(CH2)b1-로 구성된 군으로부터 선택되고,
상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-이고, 상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A1은 -CH2OC(O)-이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A2는 하기 일반식 A-1로 표현된다.
[일반식 A-1]
-A21-A22-A23-
상기 A21 및 A23은 각각 독립적으로 -O-, -OCO-, -OCOO-, -OCONRa-, -NHRa-, -NRaCO-, -NRaCONRb-, -NRaCOO-, -NRaCORb-, -NRaCO-Rb-CO-, -NRaCO-Rb-NH- 및 -S(O)-로 구성된 군으로부터 선택되고,
여기에서, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, 또는 C1-5 알킬렌이며,
상기 A22는 C1-10 알킬렌, 또는 C2-10 알케닐렌이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 A2는 -NHC(O)-(CH2)2-NH-이다.
본 발명에서, 상기 Sp1, Sp2, Sp3, Sp4, L1, L2, L3, L3', L3'', X1, X2, X3 중 일부의 결합으로 표현되는 링커에서, X1, X2 및 X3 중 어느 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이다.
본 발명에서, 상기 접합체의 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 상기 결합 형태로 표현됨에 따라 항체-링커-약물의 결합에서 병렬 형태로 결합된다. 또한, 본 발명에서 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 둘 이상이 포함될 수 있고, 이 때 폴리에틸렌 글리콜 유닛이 모두 병렬 형태로 결합된 것을 의미하지는 않는다. 다만, 본 발명에서 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 병렬 형태로 결합된 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 X1, X2 및 X3 중 최소 둘 이상은 폴리에틸렌 글리콜 반복 단위이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)-를 반복단위로 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)x-를 반복단위로 포함하고, x는 4 내지 40의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -C(O)-의 결합부위를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 C1-5 알킬의 말단부위를 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 하기 식으로 표현될 수 있다.
상기 식에서, x는 4 내지 40의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 m은 n 이하의 정수이고, m 반복단위는 각각 독립적으로 선택된다. 본 발명에서, 상기 m의 구조단위는 n의 구조단위에 결합되어 있고, m의 구조단위는 그에 따라 n의 구조단위 이하의 정수에 해당한다.
본 발명의 일 양태에서, n, m은 1 이다.
본 발명의 일 양태에서, n, m은 2 이상의 정수이고, 이 경우 각 구조단위는 다른 구조단위와 독립적으로 선택될 수 있다. 예를 들어, n이 3인 경우, 3개의 L1을 포함하고, 3개의 L1은 각각 독립적으로 아미노산, 비천연 아미노산 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택되어 각기 다른 L1을 나타낼 수 있다. 또한, m이 3인 경우, L2, Sp2, Sp3, L3', L3'', X2, X3는 각각 독립적으로 선택된 유닛을 나타내어, L2는 각각 독립적으로 아미노산, 비천연 아미노산 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택되어 3개의 각기 다른 L1을 나타낼 수 있고, 3개의 X2 및 X3는 각각 독립적으로 활성제 또는 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 나타낼 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 n은 2 내의 6의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 n은 2 내의 4의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 m은 2 내지 6의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 m은 2 내지 4의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 X1, X2 및 X3 중 최소 하나 이상은 활성제이다.
본 발명에서, L1 또는 L2가 증가됨에 따라 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 증가시킬 수 있다. 보다 구체적으로, L1 또는 L2가 1개 증가하는 경우, 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 1개 또는 2개 증가할 수 있다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 하기 일반식 1-2로 표현되는 접합체일 수 있다.
[일반식 1-2]
상기 식에서, Ab, Sp1, X1 및 z는 상기 일반식 1에서의 정의와 동일하며,
L11, L12는 상기 일반식 1에서의 L1에 대한 정의와 동일하고,
L21, L22는 상기 일반식 1에서의 L2에 대한 정의와 동일하며,
L31, L32는 상기 일반식 1에서의 L3에 대한 정의와 동일하고,
Sp21, Sp22는 상기 일반식 1에서의 Sp2에 대한 정의와 동일하고,
Sp31, Sp32는 상기 일반식 1에서의 Sp3에 대한 정의와 동일하고,
X21, X22는 상기 일반식 1에서의 X2에 대한 정의와 동일하고,
X31, X32는 상기 일반식 1에서의 X3에 대한 정의와 동일하다.
또한, 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 하기 일반식 1-3으로 표현되는 접합체일 수 있다.
[일반식 1-3]
상기 식에서, Ab, Sp1, Sp4, L3'', X1 및 z는 상기 일반식 1에 대한 정의와 동일하며,
L11, L12는 상기 일반식 1에서의 L1에 대한 정의와 동일하고,
L21, L22는 상기 일반식 1에서의 L2에 대한 정의와 동일하며,
X21, X22는 상기 일반식 1에서의 X2에 대한 정의와 동일하고,
X31, X32는 상기 일반식 1에서의 X3에 대한 정의와 동일하다.
또한, 구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 하기 일반식 1-4로 표현되는 접합체일 수 있다.
[일반식 1-4]
상기 식에서, Ab, Sp1, Sp4, L3'', X1 및 z는 상기 일반식 1에 대한 정의와 동일하며,
L11은 상기 일반식 1에서의 L1에 대한 정의와 동일하고,
L21는 상기 일반식 1에서의 L2에 대한 정의와 동일하며,
X21는 상기 일반식 1에서의 X2에 대한 정의와 동일하고,
X31는 상기 일반식 1에서의 X3에 대한 정의와 동일하다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 하기 일반식 1-5로 표현되는 접합체일 수 있다.
[일반식 1-5]
상기 식에서, Ab, Sp1, Sp4, L3'', X1 및 z는 상기 일반식 1에서의 정의와 동일하며,
L11는 상기 일반식 1에서의 L1에 대한 정의와 동일하고,
Sp21 는 상기 일반식 1에서의 Sp2에 대한 정의와 동일하고,
X21 는 상기 일반식 1에서의 X2에 대한 정의와 동일하고,
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 접합체는 하기 일반식 1-6으로 표현되는 접합체일 수 있다.
[일반식 1-6]
상기 식에서, Ab, Sp1, Sp4, L3'', X1 및 z는 상기 일반식 1에서의 정의와 동일하며,
L11, L12는 상기 일반식 1에서의 L1에 대한 정의와 동일하고,
L22는 상기 일반식 1에서의 L2에 대한 정의와 동일하며,
L32는 상기 일반식 1에서의 L3에 대한 정의와 동일하고,
Sp22는 상기 일반식 1에서의 Sp2에 대한 정의와 동일하고,
X21, X22는 상기 일반식 1에서의 X2에 대한 정의와 동일하고,
X32는 상기 일반식 1에서의 X3에 대한 정의와 동일하다.
또한, 본 발명은 하기 일반식 1a로 표현되는 링커 유닛에 관한 것이다.
[일반식 1a]
상기 식에서,
Sp1, Sp2, Sp3 및 Sp4는 각각 독립적으로 스페이서이며,
L1는 제1 링커 유닛이고,
L2는 제2 링커 유닛이며,
X1*, X2*, 및 X3* 중 어느 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이며,
X1*, X2*, 및 X3* 중 어느 하나 이상이 폴리에틸렌 글리콜 유닛이 아닌 경우, 활성제 결합 모이어티이고,
n은 1 내지 20의 정수이며,
m은 1 내지 20의 정수이고,
여기에서, n, m이 2 이상인 경우, L1, L2, L3, L3', Sp2, Sp3, X2* 및 X3*는 각각 독립적으로 선택되고,
Z는 리간드 결합 모이어티(moiety)이다.
본 발명에서, 상기 일반식 1a의 L1, L2, Sp1, Sp2, Sp3, 및 Sp4는 상기 일반식 1의 정의와 동일하다.
또한, 본 발명에서 상기 일반식 1a의 X1*, X2*, 및 X3*가 활성제 결합 모이어티가 아닌 경우, 상기 일반식 1의 X1, X2 및 X3와 동일한 정의에 의한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 X1*, X2*, 및 X3* 중 최소 둘 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Z는 Fc 결합 단백질(binding protein)을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 Z는 이고,
여기에서, X1은 CR, NR, S 또는 O이며,
여기에서, R은 수소, C1-3 알킬, C1-3 헤테로알킬 또는 C1-3 알콕시이고,
X2는 NH이며, Z1은 Fc 결합 단백질이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Z1은 Ac-PEG8-DCAWH-(Dap)-GELVWCT-NH-이다. (Ac: acetylateion / Dap: di-amino-propionic acid)
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 Z1은 Ac-PEG8-DCAWH-(Dap)-GELVWCT-NH-이고, Cys-Cys 디설파이드 결합(disulfide oxidation)을 포함한다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제 결합 모이어티는 부재하거나, -(CH2)z1OC(O)-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1C(O)-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1NH-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1C(O)NH-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1NHC(O)-(CH2)z2-Rz 및 -(CH2)z1OC(O)NH-(CH2)z2-Rz로 구성된 군으로부터 선택되고,
여기에서, Rz는 COOH, NH2, C2-5 알키닐, C5-20 사이클로알케닐, C5-20 사이클로알키닐, C5-20 헤테로사이클로알키닐 또는 N3이고,
z1 및 z2는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제 결합 모이어티는 이고,
여기에서, X3는 -(CH2)z1OC(O)-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1C(O)-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1NH-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1C(O)NH-(CH2)z2-Rz, -(CH2)z1NHC(O)-(CH2)z2-Rz 및 -(CH2)z1OC(O)NH-(CH2)z2-Rz로 구성된 군으로부터 선택되고,
여기에서, Rz는 COOH, NH2, C2-5 알키닐, C5-20 사이클로알키닐, C5-20 헤테로사이클로알키닐 또는 N3이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제 결합 모이어티는 -C(O)-CH2-N3이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 링커 유닛은 하기 일반식 1-2a로 표현되는 링커 유닛일 수 있다.
[일반식 1-2a]
상기 식에서, Z 및 Sp1은 상기 일반식 1a와 동일하며,
L11, L12는 상기 일반식 1a의 L1와 동일하고,
L21, L22는 상기 일반식 1a의 L2와 동일하며,
Sp21, Sp22는 상기 일반식 1a의 Sp2와 동일하며,
X1*, X21*, X22*, X31* 및 X32*는 각각 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛 또는 활성제 결합 모이어티이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 링커 유닛은 하기 일반식 1-3a로 표현되는 링커 유닛일 수 있다.
[일반식 1-3a]
상기 식에서, Z, Sp1, 및 Sp4는 상기 일반식 1a에서의 정의와 동일하며,
L11, L12는 상기 일반식 1a의 L1와 동일하고,
L21, L22는 상기 일반식 1a의 L2와 동일하며,
X1*, X21*, X22*, X31* 및 X32*는 각각 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛 또는 활성제 결합 모이어티이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 링커 유닛은 하기 일반식 1-4a로 표현되는 링커 유닛일 수 있다.
[일반식 1-4a]
상기 식에서, Z, Sp1, 및 Sp4는 상기 일반식 1a에서의 정의와 동일하며,
L11는 상기 일반식 1a의 L1와 동일하고,
L21는 상기 일반식 1a의 L2와 동일하며,
X1*, X21*, 및 X31*는 각각 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛 또는 활성제 결합 모이어티이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 링커 유닛은 하기 일반식 1-5a로 표현되는 링커 유닛일 수 있다.
[일반식 1-5a]
상기 식에서, Z, Sp1, 및 Sp4는 상기 일반식 1a에서의 정의와 동일하며,
L11는 상기 일반식 1a의 L1와 동일하고,
Sp21은 상기 일반식 1a의 Sp2와 동일하며,
X1* 및 X21*는 각각 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛 또는 활성제 결합 모이어티이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 링커 유닛은 하기 일반식 1-6a로 표현되는 링커 유닛일 수 있다.
[일반식 1-6a]
상기 식에서, Z, Sp1, 및 Sp4는 상기 일반식 1a에서의 정의와 동일하며,
L11 및 L12는 상기 일반식 1a의 L1와 동일하고,
L22는 상기 일반식 1a의 L2와 동일하며,
Sp22은 상기 일반식 1a의 Sp2와 동일하고,
X1*, X21*, X22* 및 X32*는 각각 독립적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛 또는 활성제 결합 모이어티이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제는 단백질 표적화 약물, 세포 표적화 약물, DNA 표적화 약물 및 RNA 표적화 약물로 구성된 군으로부터 선택된다.
본 발명에서, "단백질 표적화 약물", "세포 표적화 약물", "DNA 표적화 약물", "RNA 표적화 약물"은 각각 임의의 단백질, 세포, DNA, RNA의 기능을 유해하거나 무해한 방식으로 변경시키거나 사멸시키는 약물을 의미한다. 보다 구체적으로, 단백질 표적화 약물, 세포 표적화 약물, DNA 표적화 약물, RNA 표적화 약물은 각각 독성 약물일 수 있다. "독성 약물"은 임의의 단백질, 세포, DNA, RNA의 기능을 유해한 방식으로 변경시키는 약물을 의미한다. 예를 들면, 세포 성장, 세포 증식, 단백질 합성, DNA 합성 등을 유해한 방식으로 변경시킬 수 있다.
본 발명에서, 약물의 비제한적인 예시는 하기와 같다.
항튜불린제(antitubulin agent), 항생제(antibiotic), 항엽산제(antifolate), 알킬화제(alkylating agent), 안트라사이클린계 활성제(anthracycline), 캄프토테신계 활성제(camptothecin)
구체적으로, 사이클로포스파미드(cyclophosphamide), 메클로레타민(mechlorethamine), 클로람부실(chlorambucil), 멜팔란(melphalan), 카르무스틴(carmustine, BCNU), 로무스틴(lomustine, CCNU), 이포스파미드(ifofamine), 프로카바진(procarbazine), 다카바진(dacarbazine), 테모졸로미드(temezolomide) 알트레타민(altretamine), 시스플라틴(cisplatin), 카보플라틴(carboplatin), 탁솔(taxol), 탁소텔(taxotere), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 돌라스타틴 10(dolastatin 10), 돌라스타틴 15(dolastatin 15), 모노메틸 아우리스타틴 E(monomethyl auristatin E, MMAE), 모노메틸 아우리스타틴 F(monomethyl auristatin F, MMAF), 모노메틸 아우리스타틴 D(monomethyl auristatin D, MMAD), DM-1, DM-4, 안트라사이클린(anthracycline), 튜불리신(tubulysin), 다우노루비신(daunorubicin), 독소루비신(doxorubicin), 에피루비신(epirubicin), 이다루비신(idarubicin), 에피르부신(epirbucin), 글라부신(glarbuicin), 다우노루비신(daunorubicin), 악티노마이신(actinomycin), 블레오마이신(bleomycin), 미토마이신(mitomycin), 에토포시드(etoposide), 발루비신(valrubicin), 미트라마이신(mithramycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 파클리탁셀(paclitaxel), 빈크리스틴(vincristine), 빈블라스틴(vinblastine), 비노렐빈(vinorelbine), 에스트라무스틴(estramustine), 네모루비신(nemorubicin), 네오카지노스타틴(neocarzinostatin), 도세탁셀(docetaxel), 푸로마이신(puromycin), 캄프토테신(camptothecin), 캄포테신(camtothecin), 10-하이드록시캄포테틴(hydroxyl camtothecin), 크립토피신(cryptophycin), 루르토테칸(lurtotecan), 기마테칸(gimatecan), 토포테칸(topotecan), 이리노테칸(irinotecan), 엑사테칸(exatecan), 오라테신(orathecin), 피라르부신(pirarbucin), 실라테칸(silatecan), 코시테칸(cositecan), 지마테칸(gimatecan), 벨로테칸(belotecan), 루비테칸(rubitecan), SN-38, 메이탄시노이드(maytansinoid), 벤조디아제핀(benzodiazepine), 피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine), 피롤로벤조디아제핀 이량체(pyrrolobenzodiazepine dimer), 칼리케아미신(calicheamicine), 듀오카르마이신(duocarmycin), 메토트렉세이트(methotrexate), 아마니틴(amanitine), 디옥시코포마이신(deoxycoformaycin), 6-메르캅토퓨린(mercaptopurine), 6-티오구아닌(thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 2-클로로디옥시아데노신(Chlorodeoxyadenosine), 하이드록시우레아(Hydroxyurea), 메토트렉세이트(Methotrexate), 5-플루오로우라실(Fluorouracil), 카페시타빈(Capecitabine), 시토신 아라비노사이드(Cytosine arabinoside), 아자시티딘(Azacytidine), 젬시타빈(Gemcitabine), 플루다라빈(Fludarabine), 아스파라기나제(Asparaginase), FL118, 아파티닙(afatinib)
본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제는 아우리스타틴(auristatin)이다.
구체적인 본 발명의 일 양태에서, 상기 활성제는 돌라스타틴, 아파티닙, 듀오카르마이신, FL118, MMAD, MMAE, 또는 MMAF이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 항체에 결합되는 링커-활성제는
고,
여기에서,
BG-MMAE는
이며,
m-PEG8은 이다.
또한, 본 발명은 상기 접합체를 포함하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 접합체를 포함하는 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 증식성 질환은 암이다.
본 발명의 접합체의 투여 경로는 예를 들면, 경구 또는 비경구 경로로 투여될 수 있다. 여기서, 비경구는 광의의 투여 경로를 의미하며, 예를 들면, 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 피하, 비내, 설하, 척추강내(초내, intrathecal), 흡입, 눈, 직장, 질, 뇌실 투여 등을 포함한다. 상기 조성물을 제제화할 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조된다.
경구투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환자, 산제, 과립제, 캡슐제, 트로키제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 본 발명에 따른 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제, 동결건조제제, 좌제 등이 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤, 젤라틴 등이 사용될 수 있다.
다만, 이는 예시적인 것으로 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 따른 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명에 따른 접합체는 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 포함함에 따라 우수한 물성을 가지고, 침전 형성 방지가 가능하여, 약물의 전달 효율이 상승된다는 이점이 있다.
도 1 내지 도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 접합체의 제조과정을 나타낸 도이다.
본 발명에서 각 용어는 하기 정의에 따른다.
본 발명에서, "독립적으로"는 하나의 선택이 다른 하나의 선택에 의존적이거나 영향을 주지않는 것으로, 각각 선택될 수 있는 것을 의미한다.
본 발명에서, "유닛"은 분절되거나 분절될 수 있는 단위를 의미한다.
본 발명에서, "유사체", "유도체"는 모 화합물로부터 일부가 탈락, 변형, 부가된 형태를 나타내는 화합물을 의미한다.
본 명세서에서, "링커"는 분자 또는 원자를 다른 부자, 예를 들어 항체와 활성제를 연겨라는 화학적 모이어티 전체를 의미한다. 링커는 내부에 공유 결합 가능한 화학상의 작용기를 통해 다수의 분자 또는 아미노산이 결합된 형태를 의미할 수 있다.
본 명세서에서, "절단가능한", "절단성"은 당업계에서 알려진 바와 동일한 화학적/생물학적 의미를 나타내며, 특정 조건에서 절단되는 것, 예를 들면, 산성, 환원성, 효소 등의 조건에서 절단되는 것을 모두 포함한다.
본 발명에서, "비치환되거나 치환된"은 비치환될 수 있거나 또는 치환될 수 있는 모기(parent group)를, "치환된"은 1 이상의 치환기를 갖는 모기(parent group)를, 치환기는 모기(parent group)에 공유결합되거나 모기(parent group)에 융합된 화학적 부분을 의미한다.
본 발명에서, "알킬"은 지방족 또는 지환족, 포화 또는 불포화(불포화, 완전 불포화) 탄화수소 화합물의 탄소 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분으로서, 포화 알킬의 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸 등을, 포화 직쇄형 알킬의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸(아밀), n-헥실, n-헵틸 등, 포화 분지쇄형 알킬의 예로는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸 등을 들 수 있다.
본 발명에서, "알케닐"은 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬로서, 불포화 알케닐기의 예로는 에테닐(비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CHCH3), 2-프로페닐, 이소프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등을 들 수 있다.
본 발명에서, "알키닐"은 1 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기로서, 불포화 알키닐기의 예는 에티닐 및 2-프로피닐 등을 들 수 있다.
본 발명에서, "알킬렌"은 상기 알킬에서 탄소 원자로부터 수소 원자 하나를 더 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서, "알케닐렌"은 상기 알케닐에서 탄소 원자로부터 수소 원자 하나를 더 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서, "알키닐렌"은 상기 알키닐에서 탄소 원자로부터 수소 원자 하나를 더 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서, "할로"는 플루오린, 클로라인, 브로마인, 요오드 등을 말한다.
본 발명에서, "아릴"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 모이어티에 관한 것이다. 예를 들어 "C5-7아릴"은 모이어티가 5 내지 7 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미하고, "C5-10 아릴"은 모이어티가 5 내지 10 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미한다. 여기에서 접두사(C5-7, C5-10 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 "C5-6아릴"은 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 아릴기에 관한 것이다. 여기에서, 고리 원자는 "카르보아릴기"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있다. 카르보아릴기의 예는 벤젠, 나프탈렌, 아줄렌, 안트라센, 페난트렌, 나프타센 및 피렌으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 적어도 하나가 방향족 고리인 융합 고리를 포함하는 아릴기의 예는 인단, 인덴, 이소인덴, 테트랄린, 아세나프텐, 플루오렌, 페날렌, 아세페난트렌 및 아세안트렌으로부터 유도된 기를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 또는, 고리 원자는 "헤테로아릴기"에서와 같이 하나 이상의 헤테로 원자를 포함할 수 있다.
본 발명에서, "헤테로아릴"은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 아릴로서, 예로는 피리딘, 피리미딘, 벤조티오펜, 푸릴, 디옥살라닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐 등, 보다 구체적으로 벤조푸란, 이소벤조푸란, 인돌, 이소인돌, 인돌리진, 인돌린, 이소인돌린, 푸린(아데닌 또는 구아닌), 벤즈이미다졸, 인다졸, 벤즈옥사졸, 벤즈이속사졸, 벤조디옥솔, 벤조푸란, 벤조트리아졸, 벤조티오푸란, 벤조티아졸, 벤조티아디아졸로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C9, 크로멘, 이소크로멘, 크로만, 이소크로만, 벤조디옥산, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴놀리진, 벤족사진, 벤조디아진, 피리도피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 프테리딘으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C10, 벤조디아제핀으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C11, 카르바졸, 디벤조푸란, 디벤조티오펜, 카르볼린, 페리미딘, 피리도인돌로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C13, 아크리딘, 크산텐, 티오크산텐, 옥산트렌, 페녹사티인, 페나진, 페녹사진, 페노티아진, 티안트렌, 페난트리딘, 페난트롤린, 페나진으로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C14를 들 수 있다.
본 발명에서, "사이클로알킬"은 시클릴기인 알킬기이고, 고리(cyclic) 탄화수소 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분에 관한 것이다. 사이클로알킬기의 예는 하기 화합물 및 이로부터 유도된 것들을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 사이클로알킬은 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로헵탄, 메틸사이클로프로판, 디메틸사이클로프로판, 메틸사이클로부탄, 디메틸사이클로부탄, 메틸사이클로펜탄, 디메틸사이클로펜탄 및 메틸사이클로헥산; 불포화 단일고리 탄화수소 화합물: 사이클로프로펜, 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 메틸사이클로프로펜, 디메틸사이클로프로펜, 메틸사이클로부텐, 디메틸사이클로부텐, 메틸사이클로펜텐, 디메틸사이클로펜텐 및 메틸사이클로헥센; 및 포화 헤테로사이클릭 탄화수소 화합물: 노르카란, 노르피난, 노르보르난을 포함할 수 있다.
본 발명에서, "아릴렌"은 상기 아릴에서 탄소 원자로부터 수소 원자 하나를 더 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서, "헤테로아릴렌"은 상기 헤테로아릴에서 탄소 원자로부터 수소 원자 하나를 더 제거하여 얻어진 2가 부분을 의미한다.
본 발명에서, 접두사(예를 들어 C1-12, C3-8 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리 원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 본 명세서에서 사용된 용어 "C3-6 헤테로사이클릴"은 3 내지 6개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릴기에 관한 것이고, 여기에서 고리 원자의 종류가 제한되지 않는다.
본 발명에서, "용매화물(solvate)"은 본 발명에 따른 화합물과 용매 분자(solvent molecules) 사이의 분자 복합체(molecular complex)를 말하며, 용매화물의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide), 에틸 아세테이트, 아세트산, 에탄올아민 또는 이의 혼합용매와 결합한 본 발명에 따른 화합물을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에서, "약학적으로 허용가능한 염"은 본 발명에 따른 화합물이 목적으로 하는 약물학적 활성을 갖는 화합물의 염 형태를 의미한다. 염의 형태는 무기산(염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산), 유기산(아세트산, 프로피온산, 헥산산, 사이클로펜탄프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 락트산, 말론산, 숙신산, 말산, 말레산, 퓨마르산, 타타르산, 시트르산, 벤조산) 등을 포함한, 이로 제한되는 것은 아니다.
본 발명에 있어서, "약학적으로 유효가능한 양"은 의학적 예방 또는 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 예방 또는 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 환자의 체중, 건강, 성별, 환자의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 출원 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 사용된 본 출원의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.
본 발명은 항체-약물 접합체에서 특정 유닛을 병렬적으로 배치시켜 약물의 속성을 개선시킬 수 있다.
본 발명은 항체 Fc 도메인(domain)의 특정 아미노산 위치에 결합하여 활성 화합물의 효율적인 방출이 가능하도록 설계될 수 있고, 특정 아미노산 위치에 결합할 수 있도록 링커 및 활성제의 일부분을 조절할 수 있다.
본 발명 폴리에틸렌 글리콜 유닛의 배향, 결합 위치를 조절하기 위하여 적절한 링커, 작용기 등을 도입하여 조절할 수 있고, 그에 따라 항체 약물 접합체의 선택성, 약동학 등에 차이를 나타낼 수 있다. 구체적으로 폴리에틸렌 글리콜 유닛의 병렬적 배향 및 결합 위치를 조절하기 위하여 아민 작용기를 포함하는 아미노산 또는 아민 작용기를 포함하는 화합물을 사용할 수 있다. 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 아민 작용기를 포함하는 아미노산의 개수에 따라 증가 또는 감소할 수 있다. 또한, 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 아민 작용기를 포함하는 아미노산의 위치, 구조에 따라 증가 또는 감소할 수 있다.
본 발명에서, 폴리에틸렌 글리콜 유닛을 병렬적으로 배향함에 따라 약물의 소수성(Hydrophobic) 부분을 쉴딩(shielding) 또는 마스킹(masking)할 수 있고, 표적 세포에서 약물의 효율적인 방출이 가능케 한다. 또한, 그에 따라, PK 증진, in vivo 효력 개선 등의 증진 효과를 나타낸다. 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 약물의 소수성 부분을 쉴딩 또는 마스킹 하기 적합한 위치나 개수를 사용할 수 있으며, 이는 약물의 종류 등에 의해 달라질 수 있다.
구체적인 일 실시예에서, IgG 1, 3, 또는 4 항체의 Fc 도메인 248번에 결합가능케 하기 위하여 티오에스터(thioester) 작용기를 도입할 수 있다. 또한, 반응성을 높이기 위하여 말레이미드(maleimide) 작용기를 포함하는 화합물 또는 티올 반응성 에디티브 화합물을 사용할 수 있다.
구체적인 일 실시예에서, 사이클릭 펩타이드(cyclic peptide)가 항체에 결합할 때 발생가능한 수소 결합 등의 방해요인을 제거하기 위하여 C6 스페이서(예를 들면, C6 알킬구조)를 도입하여 아미노산 248번 위치 리신에 결합시킬 수 있다. 또한, 아미노산 248번 위치에 도입함에 따라 작용기를 도입시킨 후 약물을 도입할 수 있고, 그에 따라 3차원적으로 마스킹 또는 쉴딩 효과를 나타낼 수 있다.
구체적인 일 실시예에서, 아민 작용기를 포함하는 아미노산은 리신(lysine)을 사용할 수 있다. 다만, 이는 실시가능한 일 예로, 이에 제한되는 것은 아니다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
<실시예 1-1> 링커 제조(PEG BRNAched payload linker)
화합물 1의 제조
2-클로로트리틸 클로라이드레진(2-chlorotrityl chloride resin)(1.4 mmol/g) 2 g에 디클로로메탄(Dichloromethane) 50 mL를 첨가하여 30분간 교반하였다. 이후, 에틸렌디아민(Ethylene-di-amine) (5.6 mmol, 2 eq)와 디아이소프로필에틸아민(N,N'-Diisopropylethylamine) (11.2 mmol, 4 eq)를 40 mL 의 디클로로메탄과 섞어 레진(resin)에 넣었다. 상온에서 2시간 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 그 후 남아 있는 레진을 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드 (Dimethylformamide)로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 1을 제조하였다.
화합물 2의 제조
상기 화합물 1을 포함하는 레진에 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-디메틸-2,6-디옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신(N-alpha-Fmoc-N-epsilon-[1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxycyclohex-1-ylidine)ethyl]-L-lysine) (5.6 mmol, 2 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸(Hydroxybenzotriazole) (11.2 mmol, 4 eq)과 디아이소프로필카보디이마이드(N,N'-Diisopropylcarbodiimide) (5.6 mmol, 2 eq)을 레진에 넣고 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간동안 상온에서 교반 후, 반응 용액을 제거하였다. 이후, 상기 과정을 아미노산 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-디메틸-2,6-디옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신과 4,7,10,13,16,19,22,25-옥타옥사핵사코사노익 에시드(4,7,10,13,16,19,22,25-Octaoxahexacosanoic acid)를 순서대로 넣어 동일하게 위와 반복하여 진행하였다. 4,7,10,13,16,19,22,25-옥타옥사핵사코사노익 에시드 반응 후, 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 2를 제조하였다.
화합물 3의 제조
5% 하이드라진 함유 디메틸포름아마이드(부피비율)를 레진에 50 mL 넣어준 후, 상온에서 10 분간 교반시킨 후, 반응 용액을 제거하였다. 그 후 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 3을 제조하였다.
화합물 4의 제조
상기 화합물 3을 포함하는 레진에 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-디메틸-2,6-디옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신 (11.2 mmol, 4 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸 (22.4 mmol, 8 eq)과 디아이소프로필카보디이마이드 (11.2 mmol, 4 eq)을 레진에 넣고 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간동안 상온에서 교반시킨 후, 반응 용액을 제거하였다. 반응 후 20 % 피페리딘이 함유된 디메틸포름아마이드(부피 비율) 용액 40 mL 를 레진에 넣고 10분간 상온에서 교반하고, 용액을 제거하였다(2회 반복). 그 후, 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻었다. 다음 반응으로 석신산무수물(succinic anhydride) (16.8 mmol, 6 eq)를 넣어준 후, 디아이소프로필에틸아민(16.8 mmol, 6 eq)을 레진에 넣고 용매로 디메틸포름아마이드 50 mL를 넣어 1시간동안 상온에서 교반시킨 후, 반응 용액을 제거하였다. 반응 후에 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 씻었다. 다음 과정으로 상기 화합물 3 제조 과정을 동일하게 수행하였다. 이후, 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사핵사코산-26-오익-에시드 (28 mmol, 2 eq)와 하이드록시벤조트라이아졸 (56 mmol, 4 eq)과 디아이소프로필카보디이마이드 (28 mmol, 2 eq)를 순서대로 넣고 용매로 디메틸포름아마이드 50 mL를 넣어 10분간 반응 활성화 과정을 거친 후, 레진에 넣었다. 2시간동안 상온에서 교반 후, 반응 용액을 제거하였다. 반응이 완료된 후 디클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 씻어준 후 레진은 건조하여 화합물 4를 제조하였다.
화합물 5의 제조
95 : 2.5 : 2.5(TFA:TIS:DW) 부피 비율로 트라이플루오로아세트 산(TFA, Trifluoroacetic acid), 트라이아이소프로필실란(TIS, Triisopropylsilane)과 물(DW, deionized water)을 50 mL 섞어 화합물 4의 제지까지 진행된 레진에 넣고, 상온에서 2시간 교반하였다. 교반 후 용액과 레진을 분리하고, 분리된 용액에 0 ℃ 디에틸 에터(Diethyl ether)를 500 mL 넣고 섞어 준 후, 0 ℃ 에서 2시간 이상 방치하였다. 석출된 생성물을 필터해 준 후, 0 ℃ 디에틸 에터 50 mL 첨가 후, 다시 필터하였다 (2회 반복). 이후, 생성물을 건조해 화합물 5 (2.24 mmol, 80%)를 제조하였다.
화합물 6의 제조
상기 화합물 5(1 g, 0.511 mmol)와 DBCO-C6-NHS(2,5-Dioxo-1-pyrrolidinyl 11,12-didehydro-ε-oxodibenz[b,f]azocine-5(6H)-hexanoate) (0.613 mmol, 1.2 eq)를 10 mL의 디메틸포름아마이드에 섞어준 후, 디아이소프로필에틸아민 (1.022 mmol, 2 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 5.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하여 화합물 6 (0.434 mmol, 85%)을 수득하였다.
화합물 7의 제조
상기 합성된 화합물 6 (0.434 mmol)과 테트라메틸-O-(N-석시니미딜)우로니움 테트라플루오로보레이트(Tetramethyl-O-(N-succinimidyl)uRNAium tetrafluoroborate) (1.736 mmol, 4 eq)을 디메틸포름아마이드 10 mL에 섞어 준 후 디아이소프로필에틸아민(1.736 mmol, 4 eq)을 넣고 상온에서 0.5 ~ 2시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 5.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 7을 수득하였다.
화합물 8의 제조
상기 합성된 화합물 7 (0.217 mmol)에 준비한 H2N-BG-MMAE (0.26 mmol, 1.2 eq)를 디메틸포름아마이드 5 mL에 섞어 준 후, 디아이소프로필에틸아민 (0.434 mmol, 2 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 5.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 8을 수득하였다. 화합물 8은 건조 후 밀봉하여 -80℃에 보관하였다.
<실시예 1-2> NH 2 -BG-MMAE 제조(NH 2 - Beta glucuronide - monomethyl auristatin E)
화합물 9의 제조
4-하이드록시-3-나이트로벤잘데하이드 (4 g, 29.6 mmol)을 120 mL 아세토니트릴에 녹인 후 분자체(molecular-sieve, 10 g)를 첨가하였다. 이후, 아세토브로모- α -D- 글루쿠로닉 에씨드 메틸 에테르 (10.3 g, 32.6 mmol)와 산화은(Ⅰ) (7 g, 30.2 mmol)을 넣고 아르곤 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과 후 감압 농축하고 에틸 아세테이트와 증류수 넣어 유기층을 추출하였다. 모인 유기층을 무수 황산 마그네슘으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9 (12.6 g, 88%)을 수득하였다.
화합물 10의 제조
화합물 9 (12.6 g, 26.0 mmol)를 아이소프로필 알코올 (50.6 mL)과 클로로포름 (185 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기하에서 소듐 보로하이드라이드 (1.67 g, 44.1 mmol)를 서서히 첨가하고 2.5시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수를 넣고 15분 동안 교반하였다. 에틸 아세테이드와 증류수를 넣어 유기층을 추출하였다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 10 (7.7 g, 61.1 %)을 수득하였다.
화합물 11의 제조
화합물 10 (6.7 g, 14.2 mmol)을 에틸 아세테이트 (90 mL), 에탄올 (190 mL), 메탄올 (44 mL)에 녹인 후 팔라듐 (0.33 g)을 넣고 수소 대기하에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 11 (5.3 g, 76.9%)을 수득하였다.
화합물 12의 제조
플루오레닐메틸옥시카보닐-베타-알라닌(Fmoc-beta-alanine) (2.46 g, 7.9 mmol)을 디클로로메탄 (13 mL), N,N-디메틸폼아마이드 (0.5 mL)에 녹인 후 질소 대기하에서 옥살릴클로라이드 (1.36 mL, 15.8 mmol)을 서서히 첨가하고 2시간동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축 후, 디클로로메탄 (33 mL)에 용해된 화합물 3(3g, 6.59mmol)에 0 ℃에서 천천히 적가하였다. 다아이소프로필에틸아민(2.68mL, 7.9 mmol) 용해된 화합물에 천천히 적가하였다. 에 0 ℃에서 천천히 적가하였다. 반응 용액을 농축 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 12 (3.9 g, 79.1%)를 수득하였다.
화합물 13의 제조
화합물 12 (2.5 g, 3.34 mmol)를 디클로로메탄(30 mL)에 녹인 후, 비스(4-나이트로페닐)카보네이트 (1.73 g, 5.7 mmol), N,N-디아이소프로필에틸아민 (0.99 mL, 5.68 mmol)를 넣고 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피 정제하여 화합물 13 (2.3 g, 75.4%)를 수득하였다.
화합물 14의 제조
화합물 13 (1 g, 1.09 mmol)을 N,N-디아이소프로필에틸아민 (10.8 mL)에 녹인 후 모노메틸아우리스탄틴 E (MMAE, 0.864 g, 1.2 mmol), N-하이드록시벤조트리아졸 하이드레이트 (HOBt·H2O, 0.44 g, 3.27 mmol), N,N-디아이소프로필에틸아민 (0.28 mL, 1.64 mmol)을 넣고 상온에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압농축하고 컬럼 크로마토그래피 정제하여 화합물 14 (1.45 g, 89%)를 수득하였다.
화합물 15의 제조
화합물 14 (1.4 g, 9.37 mmol)를 메탄올 (15.2 mL)에 녹인 후 0.4 N 리튬하이드록사이드 용액 (1.5 mL)를 넣고 6시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 컬럼 크로마토그래피 정제하여 화합물 15 (0.62 g, 59%)를 수득하였다.
<실시예 2-1> 링커 제조(C6PEG3 linker)
화합물 1의 제조
2-클로로트리틸 클로라이드레진(2-chlorotrityl chloride resin) (1.4 mmol/g) 5 g에 다이클로로메탄(Dichloromethane) 50 mL를 첨가하여 30분간 교반하였다. 교반 후 용매를 제거 하고, 다음 반응을 위해 플루오레닐메톡시카보닐-L-6-아미노헥사노익 에시드(Fmoc-L-6-aminohexanoic acid) (14 mmol, 2 eq)와 다이아이소프로필에틸아민(N,N'-Diisopropylethylamine) (28 mmol, 4 eq)를 40 mL 의 다이클로로메탄과 섞어 레진(resin)에 넣었다. 이후, 상온에서 2 시간 교반 후, 반응 액을 제거하였다. 그 후 남아 있는 레진을 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드 (Dimethylformamide)로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 1을 제조하였다.
화합물 2의 제조
20 % 피페리딘이 함유된 디메틸포름아마이드(부피 비율) 용액 40 mL 를 레진에 넣고 10분간 상온에서 교반해주고, 교반 후 반응 용액을 제거하였다(2회 반복). 그 후 남아 있는 레진을 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드 (Dimethylformamide)로 20 mL x 3회 첨가하여 씻었다. 다음 반응에 사용되는 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-다이메틸-2,6-다이옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신(N-alpha-Fmoc-N-epsilon-[1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxycyclohex-1-ylidine)ethyl]-L-lysine) (14 mmol, 2 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸(Hydroxybenzotriazole) (28 mmol, 4 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드(N,N'-Diisopropylcarbodiimide) (14 mmol, 2 eq)을 레진에 넣고 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간 동안 상온에서 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 이후, 상기 과정을 아미노산 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-다이메틸-2,6-다이옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신과 4,7,10,13,16,19,22,25-옥타옥사핵사코사노익 에시드(4,7,10,13,16,19,22,25-Octaoxahexacosanoic acid) 순서대로 넣어 동일하게 반복하여 진행하였다. 4,7,10,13,16,19,22,25-옥타옥사핵사코사노익 에시드 반응 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 2를 제조하였다.
화합물 3의 제조
5% 하이드라진 함유 디메틸포름아마이드(부피비율)를 레진에 50 mL 넣어 준 후 상온에서 10 분간 교반 후 반응 용액은 제거하였다. 그 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 3을 제조하였다.
화합물 4의 제조
N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-다이메틸-2,6-다이옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신 (28 mmol, 4 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸 (56 mmol, 8 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드 (28 mmol, 4 eq)을 레진에 넣고 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간 동안 상온에서 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 반응 후 20 % 피페리딘이 함유된 디메틸포름아마이드(부피 비율) 용액 40 mL 를 레진에 넣고 10분간 상온에서 교반하고, 반응 용액을 제거하였다(2회 반복). 그 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻었다. 다음 반응으로 2-아지도아세트 산(2-Azidoacetic acid)(28 mmol, 2 eq)를 넣어준 후 위 과정과 동일하게 하이드록시벤조트라이아졸(56 mmol, 4 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드(28 mmol, 2 eq)을 레진에 넣어준 후 용매로 디메틸포름아마이드 50 mL를 넣어 2시간동안 상온에서 교반 후 용액은 제거하였다. 반응 후에 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 씻었다. 다음 과정으로 화합물 3 제조 과정을 동일하게 수행하였다. 2,5,8,11,14,17,20,23-옥타옥사핵사코산-26-오익-에시드 (28 mmol, 2 eq)와 하이드록시벤조트라이아졸 (56 mmol, 4 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드 (28 mmol, 2 eq)를 순서대로 넣고 용매로 디메틸포름아마이드 50 mL를 넣어 2시간 동안 상온에서 교반 후 용액은 제거하였다. 반응이 완료된 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 씻어준 후 레진은 건조하여 화합물 4를 제조하였다.
화합물 5의 제조
95 : 2.5 : 2.5 (TFA:TIS:DW) 부피 비율로 트라이플루오로아세트 산(TFA, Trifluoroacetic acid), 트라이아이소프로필실란(TIS, Triisopropylsilane)과 물(DW, deionized water)을 50 mL 섞어 화합물 4 제지까지 진행된 레진에 넣고 상온에서 2시간 교반하였다. 교반 후, 용액과 레진을 분리하였다. 분리된 용액에 0 ℃ 다이에틸 에터(Diethyl ether)를 500 mL 넣고 섞어준 후, 0 ℃에서 2시간 이상 방치하였다. 석출된 생성물을 필터해 준 후 0℃ 다이에틸 에터 50 mL 첨가 후 다시 필터하였다(2회 반복). 이후 생성물을 건조하여 화합물 5 (5.11 mmol, 73%)를 제조하였다.
화합물 6의 제조
상기 화합물 5 (0.996g, 0.5 mmol)와 테트라메틸-O-(N-석시니미딜)우로니움 테트라플루오로보레이트(Tetramethyl-O-(N-succinimidyl)uronium tetrafluoroborate) (1 mmol, 2 eq)을 디메틸포름아마이드 5 mL에 섞어준 후 다이아이소프로필에틸아민 (1.5 mmol, 3 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하여 화합물 6(0.375 mmol, 75%)을 수득하였다.
화합물 7의 제조
상기 화합물 6 (0.375 mmol)과 tert-부틸 2-머캅토아세테이트(tert-Butyl 2-mercaptoacetate) (0.7 mmol, 2 eq)을 디메틸포름아마이드 5 mL에 섞어준 후 다이아이소프로필에틸아민 (1.1 mmol, 3 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 7 (0.3 mmol, 80%)을 수득하였다.
화합물 8의 제조
상기 화합물 7 (0.375 mmol)에 트라이플루오로아세트 산과 다이클로로메탄을 1:1 부피비율로 10 mL 넣어 준 후 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 감압 농축기로 용액을 제거한 후 다시 다이클로로메탄 10mL을 넣고 감압 농축을 수행하여(3회 반복) 화합물 8을 수득하였다. 화합물 8은 건조하여 -80 ℃에 보관하였다. (0.297 mmol, 99%)
화합물 9의 제조
상기 화합물 8 (0.375 mmol)에 디메틸포름아마이드 용액 10 mL을 넣고 다이아이소프로필에틸아민을 첨가하여 pH를 8~9로 조절하였다. 상온에서 10분간 교반 후 테트라메틸-O-(N-석시니미딜)우로니움 테트라플루오로보레이트 (0.7 mmol, 2 eq)를 넣어준 후 다이아이소프로필에틸아민 (0.375 mmol, 1 eq)을 같이 첨가하여 상온에서 2시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0 이 되도록 넣어주었다. Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 9 (0.173 mmol, 46%)를 수득하였다.
화합물 10의 제조
상기 화합물 9 (0.173 mmol)에 디메틸포름아마이드 용액 5 mL을 넣고, SPPS(Solid phase peptide synthesis) 방법으로 합성된 FcBP(Sequence: Ac-PEG8-DCAWH-(Dap)-GELVWCT-NH2, Fc-binding peptide, L-form amino acid, disulfide bridge) (0.225 mmol, 1.2 eq) 펩타이드 합성물을 넣고 다이아이소프로필에틸아민 (0.26 mmol, 1.5 eq)을 첨가하여 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응 종료 후 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 10 (348 mg, 0.087 mmol, 50%)을 수득하였다.
<실시예 2-2> 링커 제조 (C6PEG4 linker)
화합물 11의 제조
고체상 합성법을 이용하여 합성하였다. 2-클로로트리틸 클로라이드레진(2-chlorotrityl chloride resin) (1.4 mmol/g) 2 g에 다이클로로메탄(Dichloromethane) 50 mL를 첨가하여 30분간 교반하였다. 교반 후 용매를 제거 하고, 다음 반응을 위해 플루오레닐메톡시카보닐-L-6-아미노헥사노익 에시드(Fmoc-L-6-aminohexanoic acid) (5.6 mmol, 2 eq)와 다이아이소프로필에틸아민(N,N'-Diisopropylethylamine) (11.2 mmol, 4 eq)를 40 mL 의 다이클로로메탄과 섞어 레진(resin)에 넣었다. 상온에 2 시간 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 그 후 남아 있는 레진을 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드(Dimethylformamide)로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 11을 제조하였다.
화합물 12의 제조
20 % 피페리딘이 함유된 디메틸포름아마이드(부피 비율) 용액 40 mL 를 레진에 넣고 10분간 상온에서 교반해주고, 교반 후 반응 용액을 제거하였다(2회 반복). 그 후 남아 있는 레진을 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드 (Dimethylformamide)로 20 mL 첨가하여 각각 3회씩 씻었다. 다음 반응에 사용되는 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-다이메틸-2,6-다이옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신(N-alpha-Fmoc-N-epsilon-[1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxycyclohex-1-ylidine)ethyl]-L-lysine) (5.6 mmol, 2 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸(Hydroxybenzotriazole) (11.2 mmol, 4 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드(N,N'-Diisopropylcarbodiimide) (5.6 mmol, 2 eq)을 레진에 넣고, 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간 동안 상온에서 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 이후, 상기 과정을 N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-[1(4,4-다이메틸-2,6-다이옥시사이클로헥-1-일리딘)에틸]-L-라이신과 2-아지도아세트 산(2-Azidoacetic acid) 순서대로 넣어 동일하게 반복하여 진행하였다. 2-아지도아세트 산 반응 후, 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 12를 제조하였다.
화합물 13의 제조
5% 하이드라진 함유 디메틸포름아마이드(부피비율)를 레진에 50 mL 넣어 준 후 상온에서 10 분간 교반 후 반응 용액은 제거하였다. 그 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻어 화합물 13을 제조하였다.
화합물 14의 제조
N-알파-플루오레닐메톡시카보닐-N-입실론-플루오레닐메톡시카보닐-L-라이신(N-alpha-Fmoc-N-epsilon-Fmoc-L-lysine) (11.2 mmol, 4 eq)과 하이드록시벤조트라이아졸 (22.4 mmol, 8 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드 (11.2 mmol, 4 eq)을 레진에 넣고 디메틸포름아마이드 50 mL를 용매로 사용하여 2시간 동안 상온에서 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 반응 후 20 % 피페리딘이 함유된 디메틸포름아마이드(부피 비율) 용액 40 mL 를 레진에 넣고 10분간 상온에서 교반하고, 용액을 제거하였다(2회 반복). 그 후 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 레진을 씻었다. 다음 과정으로 4,7,10,13,16,19,22,25-옥타옥사핵사코사노익 에시드(4,7,10,13,16,19,22,25-Octaoxahexacosanoic acid)(22.4 mmol, 8 eq)를 넣어 준 후 위 과정과 동일하게 하이드록시벤조트라이아졸(44.8 mmol, 16 eq)과 다이아이소프로필카보다이이마이드(22.4 mmol, 8 eq)을 레진에 넣어준 후, 용매로 디메틸포름아마이드 50 mL를 넣어 2시간 동안 상온에서 교반 후 반응 용액을 제거하였다. 반응 후에 다이클로로메탄과 디메틸포름아마이드로 각 50 mL x 3회 첨가하여 씻어준 후 레진은 건조하여 화합물 14를 제조하였다.
화합물 15의 제조
95 : 2.5 : 2.5 (TFA:TIS:DW) 부피 비율로 트라이플루오로아세트 산(TFA, Trifluoroacetic acid), 트라이아이소프로필실란(TIS, Triisopropylsilane)과 물(DW, deionized water)을 50 mL 섞어 화합물 14 제지까지 진행된 레진에 넣고 상온에서 2시간 교반하였다. 교반 후 용액과 레진을 분리하였다. 분리된 용액에 0 ℃ 다이에틸 에터(Diethyl ether)를 500 mL 넣고 섞어준 후, 0 ℃에서 2시간 이상 방치하였다. 석출된 생성물을 필터해 준 후 0 ℃ 다이에틸 에터 50 mL 첨가 후 다시 필터하였다(2회 반복). 이후, 생성물을 건조해 화합물 15 (2.13 mmol, 76%)를 제조하였다.
화합물 16의 제조
상기 화합물 15 (1 g, 0.433 mmol)와 테트라메틸-O-(N-석시니미딜)우로니움 테트라플루오로보레이트(Tetramethyl-O-(N-succinimidyl)uronium tetrafluoroborate) (1 mmol, 2 eq)을 디메틸포름아마이드 5 mL에 섞어준 후 다이아이소프로필에틸아민 (1.3 mmol, 3 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하여 화합물 16 (0.303 mmol, 70%)을 수득하였다.
화합물 17의 제조
상기 화합물 16 (0.303 mmol)과 tert-부틸 2-머캅토아세테이트 (tert-Butyl 2-mercaptoacetate) (0.606 mmol, 2 eq)을 디메틸포름아마이드 5 mL에 섞어 준 후 다이아이소프로필에틸아민 (0.909 mmol, 3 eq)을 넣고 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0 이 되도록 넣어주었다. 반응 용액을 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 17 (0.242 mmol, 80%)을 수득하였다.
화합물 18의 제조
상기 화합물 17 (0.242 mmol)에 트라이플루오로아세트 산과 다이클로로메탄을 1:1 부피비율로 10 mL 넣어준 후, 상온에서 1시간 교반하였다. 반응 종료 후 감압 농축기로 용액을 제거 한 후 다시 다이클로로메탄 10mL을 넣고 감압 농축(3회 반복)을 수행하여 화합물 18을 제조하였다. 화합물 18은 건조하여 -80 ℃에 보관하였다.
화합물 19의 제조
상기 화합물 18 (0.242 mmol)에 디메틸포름아마이드 용액 10 mL을 넣고 다이아이소프로필에틸아민을 첨가하여 pH를 8~9로 조절하였다. 상온에서 10분간 교반 후 테트라메틸-O-(N-석시니미딜)우로니움 테트라플루오로보레이트 (0.7 mmol, 2 eq)를 넣어준 후 다이아이소프로필에틸아민 (0.375 mmol, 1 eq)을 같이 첨가하여 상온에서 2시간 교반하였다. 반응 종료 후 트라이플루오로아세트 산으로 용액의 pH가 4.0이 되도록 넣어주었다. Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 19 (0.124 mmol, 51%)를 수득하였다.
화합물 20의 제조
상기 화합물 19 (0.173 mmol)에 디메틸포름아마이드 용액 5 mL을 넣고, SPPS(Solid phase peptide synthesis) 방법으로 합성된 FcBP(Sequence: Ac-PEG8-DCAWH-(Dap)-GELVWCT-NH2, Fc-binding peptide, L-form amino acid, disulfide bridge) (0.225 mmol, 1.2 eq) 펩타이드 합성물을 넣고 다이아이소프로필에틸아민 (0.26 mmol, 1.5 eq)을 첨가하여 상온에서 1시간 반응시켰다. 반응 종료 후 Prep-HPLC (C18)으로 정제하고, 동결건조하여 화합물 20 (283 mg, 0.066 mmol, 53%)을 수득하였다.

Claims (66)

  1. 하기 일반식 1로 표현되는 접합체:
    [일반식 1]

    상기 식에서,
    Ab는 리간드이고,
    Sp1, Sp2, Sp3 및 Sp4는 각각 독립적으로 스페이서이며,
    L1는 제1 링커 유닛이고,
    L2는 제2 링커 유닛이며,
    L3, L3' 및 L3''는 각각 독립적으로 선택되는 제3 링커 유닛이고,
    X1, X2, 및 X3는 각각 독립적으로 선택되는 활성제 또는 폴리에틸렌 글리콜 유닛이며,
    여기에서, X1, X2, 및 X3 중 최소 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 반복 유닛이고,
    z는 1 내지 20의 정수이며,
    n은 1 내지 20의 정수이고,
    m은 1 내지 20의 정수이며,
    여기에서, n, m이 2 이상인 경우, L1, L2, L3, L3', Sp2, Sp3, X2 및 X3는 각각 독립적으로 선택된다.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 Ab는 항체, 항체 절편 또는 이의 항원 결합 단편인, 접합체.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인, 접합체.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상인, 접합체.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  6. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 비치환된 C1-10 헤테로알킬렌인, 접합체.
  7. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C1-20 헤테로알킬렌이고,
    치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며
    여기에서, R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴 및 C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  8. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C6-50 헤테로아릴렌이고,
    치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬렌으로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며,
    여기에서, R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴, C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  9. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 직접결합인, 접합체.
  10. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 말단 C(O)를 포함하는 것인, 접합체.
  11. 제3항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 -C(O)(CH2)a-, -NH(CH2)a-, -C(O)(CH2)aC(O)-, -C(O)(CH2)aNH-, -NH(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)-, -NHC(O)(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)NH-, 및 -NHC(O)(CH2)aO(CH2)b-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    여기에서 a, b는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수인, 접합체.
  12. 제3항에 있어서,
    상기 스페이서 중 어느 하나 이상은 인, 접합체.
  13. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아미노산, 비천연 아미노산 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  14. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  15. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, 아르기닌, 시트룰린, 이소류신, 류신, 리신, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, 시트룰린, 리신, 페닐알라닌 및 발린으로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 접합체.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 종양 연관 프로테아제(protease)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 하는, 접합체.
  18. 제1항에 있어서,
    상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 하는, 접합체.
  19. 제1항에 있어서,
    상기 L3, L3' 및 L3''는 각각 독립적으로 직접결합이거나, 하기 일반식 A로 표현되는 것인, 접합체:
    [일반식 A]

    상기 식에서,
    G는 글루쿠론산(glucuronic acid), 또는 이의 유도체이고,
    A1은 및 A2는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된다.
  20. 제19항에 있어서,
    상기 G는 베타-글루쿠론산(beta-glucuronic acid)인, 접합체.
  21. 제19항에 있어서,
    상기 A1은 X2, 또는 X3에 결합되는 것인, 접합체.
  22. 제19항에 있어서,
    상기 A2는 Sp2, Sp3 또는 Sp4에 결합되는 것인, 접합체.
  23. 제19항에 있어서,
    상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1NH-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)NH-(CH2)b1- 및 -(CH2)a1OC(O)NH-(CH2)b1-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수인, 접합체.
  24. 제19항에 있어서,
    상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-이고,
    상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수인, 접합체.
  25. 제19항에 있어서,
    상기 A2는 하기 일반식 A-1로 표현되는 것인, 접합체:
    [일반식 A-1]
    -A21-A22-A23-
    상기 A21 및 A23은 각각 독립적으로 -O-, -OCO-, -OCOO-, -OCONRa-, -NHRa-, -NRaCO-, -NRaCONRb-, -NRaCOO-, -NRaCORb-, -NRaCO-Rb-CO-, -NRaCO-Rb-NH- 및 -S(O)-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    여기에서, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, 또는 C1-5 알킬이며,
    상기 A22는 C1-10 알킬렌, 또는 C2-10 알케닐렌이다.
  26. 제19항에 있어서,
    상기 A2는 -NHC(O)-(CH2)2-NH-인, 접합체.
  27. 제1항에 있어서,
    상기 X1, X2, 및 X3 중 최소 둘 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛인, 접합체.
  28. 제1항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)-를 반복단위로 포함하는 것인, 접합체.
  29. 제1항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)x-를 반복단위로 포함하고, x는 4 내지 40의 정수인, 접합체.
  30. 제1항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -C(O)-의 결합부위를 더 포함하는, 접합체.
  31. 제1항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 C1-5 알킬의 말단부위를 더 포함하는, 접합체.
  32. 제1항에 있어서,
    상기 m은 n 이하의 정수이고, m 반복단위는 각각 독립적으로 선택되는 것인, 접합체.
  33. 제1항에 있어서,
    상기 X1, X2, 및 X3 중 최소 하나 이상은 활성제인, 접합체.
  34. 제1항에 있어서,
    상기 활성제는
    단백질 표적화 약물, 세포 표적화 약물, DNA 표적화 약물 및 RNA 표적화 약물로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 접합체.
  35. 제1항에 있어서,
    상기 일반식 1의 Ab를 제외한 링커-활성제는 ,
    ,
    ,
    ,
    ,
    ,
    또는
    이고,
    여기에서,
    BG-MMAE는
    이며,
    m-PEG8은 인, 접합체.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 따른 접합체를 포함하는 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  37. 하기 일반식 1a로 표현되는 링커 유닛:
    [일반식 1a]

    상기 식에서,
    Sp1, Sp2, Sp3 및 Sp4는 각각 독립적으로 스페이서이며,
    L1는 제1 링커 유닛이고,
    L2는 제2 링커 유닛이며,
    L3, L3' 및 L3''는 각각 독립적으로 선택되는 제3 링커 유닛이고,
    X1*, X2*, 및 X3* 중 어느 하나 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛이며,
    X1*, X2*, 및 X3* 중 어느 하나 이상이 폴리에틸렌 글리콜 유닛이 아닌 경우, 활성제 결합 모이어티이고,
    n은 1 내지 20의 정수이며,
    m은 1 내지 20의 정수이고,
    여기에서, n, m이 2 이상인 경우, L1, L2, L3, L3', Sp2, Sp3, X2* 및 X3*는 각각 독립적으로 선택되고,
    Z는 리간드 결합 모이어티(moiety)이다.
  38. 제37항에 있어서,
    상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상인, 링커 유닛.
  39. 제37항에 있어서,
    상기 스페이서는 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서로 구성된 군으로부터 선택된 2종 이상인, 링커 유닛.
  40. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 또는 제4 스페이서는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  41. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 비치환된 C1-10 헤테로알킬렌인, 링커 유닛.
  42. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C1-20 헤테로알킬렌이고,
    치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며
    여기에서, R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴 및 C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  43. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 치환된 C6-50 헤테로아릴렌이고,
    치환되는 경우, 할로, =O, OH, NH2, SH, NO2, N3, CN, OR1, SR1, OC(O)R1, OC(O)NHR1, OC(O)OR1, CONHR1, CON(R1)2, NHC(O)R1, C(O)R1, NHR1, N(R1)2, C(O)R1, OS(O)2R1, -OP(O)(OR1)(OR1), OP(O)(NHR1)(NHR1), 및 C1-3 알킬렌로 구성된 군으로부터 선택된 것으로 치환되며,
    여기에서, R1은 H, OH, C1-5 알킬, C1-5 헤테로알킬, C3-8 아릴 및 C3-8 헤테로아릴로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  44. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상이 직접결합인, 링커 유닛.
  45. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 말단 C(O)를 포함하는 것인, 링커 유닛.
  46. 제38항에 있어서,
    상기 제1 스페이서, 제2 스페이서, 제3 스페이서 및 제4 스페이서 중 어느 하나 이상은 -C(O)(CH2)a-, -NH(CH2)a-, -C(O)(CH2)aC(O)-, -C(O)(CH2)aNH-, -NH(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)-, -NHC(O)(CH2)aNH-, -NHC(O)(CH2)aC(O)NH-, 및 -NHC(O)(CH2)aO(CH2)b-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    여기에서 a, b는 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수인, 링커 유닛.
  47. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 아미노산, 비천연 아미노산 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  48. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, β-알라닌, γ-아미노부티르산, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, γ-카르복시글루탐산, 시트룰린, 시스테인, 글루탐산, 글루타민, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 노르류신, 노르발린, 오르니틴, 페닐알라닌, 프롤린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  49. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, 아르기닌, 시트룰린, 이소류신, 류신, 리신, 페닐알라닌, 트립토판, 발린 및 이의 유도체로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  50. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2는 각각 독립적으로 직접결합, 알라닌, 시트룰린, 리신, 페닐알라닌 및 발린로 구성된 군으로부터 선택된 것인, 링커 유닛.
  51. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 종양 연관 프로테아제(protease)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 하는, 링커 유닛.
  52. 제37항에 있어서,
    상기 L1 및 L2 중 어느 하나 이상은 베타-글루쿠로니다제(β-glucuronidase)에 의해 절단가능한 것을 특징으로 하는, 링커 유닛.
  53. 제37항에 있어서,
    상기 L3, L3' 및 L3''는 각각 독립적으로 직접결합이거나, 하기 일반식 A로 표현되는 것인, 링커 유닛:
    [일반식 A]

    상기 식에서,
    G는 글루쿠론산(glucuronic acid), 또는 이의 유도체이고,
    A1은 및 A2는 각각 독립적으로 직접결합, 치환되거나 비치환된 C1-50 알킬렌, 치환되거나 비치환된 C1-50 헤테로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C2-50 알케닐렌, 치환되거나 비치환된 C3-50 사이클로알킬렌, 치환되거나 비치환된 C6-50 아릴렌, 및 치환되거나 비치환된 C6-50 헤테로아릴렌으로 구성된 군으로부터 선택된다.
  54. 제53항에 있어서,
    상기 G는 베타-글루쿠론산(beta-glucuronic acid)인, 링커 유닛.
  55. 제53항에 있어서,
    상기 A1은 X2, 또는 X3에 결합되는 것인, 링커 유닛.
  56. 제53항에 있어서,
    상기 A2는 Sp2, Sp3 또는 Sp4에 결합되는 것인, 링커 유닛.
  57. 제53항에 있어서,
    상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)-(CH2)b1-, -(CH2)a1NH-(CH2)b1-, -(CH2)a1C(O)NH-(CH2)b1- 및 -(CH2)a1OC(O)NH-(CH2)b1-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수인, 링커 유닛.
  58. 제53항에 있어서,
    상기 A1은 -(CH2)a1OC(O)-(CH2)b1-이고,
    상기 a1 및 b1은 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수인, 링커 유닛.
  59. 제53항에 있어서,
    상기 A2는 하기 일반식 A-1로 표현되는 것인, 링커 유닛:
    [일반식 A-1]
    -A21-A22-A23-
    A21 및 A23은 각각 독립적으로 -O-, -OCO-, -OCOO-, -OCONRa-, -NHRa-, -NRaCO-, -NRaCONRb-, -NRaCOO-, -NRaCORb-, -NRaCO-Rb-CO-, -NRaCO-Rb-NH- 및 -S(O)-로 구성된 군으로부터 선택되고,
    여기에서, Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, 또는 C1-5 알킬이며,
    상기 A22는 C1-10 알킬렌, 또는 C2-10 알케닐렌이다.
  60. 제53항에 있어서,
    상기 A2는 -NHC(O)-(CH2)2-NH-인, 링커 유닛.
  61. 제37항에 있어서,
    상기 X1*, X2*, 및 X3* 중 최소 둘 이상은 폴리에틸렌 글리콜 유닛인, 링커 유닛.
  62. 제37항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)-를 반복단위로 포함하는 것인, 링커 유닛.
  63. 제37항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -(CH2CH2O)x-를 반복단위로 포함하고, x는 4 내지 40의 정수인, 링커 유닛.
  64. 제37항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 -C(O)-의 결합부위를 더 포함하는, 링커 유닛.
  65. 제37항에 있어서,
    상기 폴리에틸렌 글리콜 유닛은 C1-5 알킬의 말단부위를 더 포함하는, 링커 유닛.
  66. 제37항에 있어서,
    상기 m은 n 이하의 정수이고, m 반복단위는 각각 독립적으로 선택되는 것인, 링커 유닛.
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