KR20230125654A - Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same - Google Patents
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Abstract
본 발명은 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) SMFM2016-WK1 균주(기탁번호 : KCTC 14847BP); 상기 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 프로바이오틱스, 의약외품 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물 및 미생물 제제에 관한 것이다.
본 발명의 페디오코커스 펜토세우사 SMFM2016-WK1 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성으로 인해 장내 활성능을 가지며, 돼지, 특히 이유자돈의 설사증을 유발하는 원인균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내어 돼지 설사증의 예방, 치료 및 개선을 위한 조성물로서 유용하게 활용될 수 있다. The present invention Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) SMFM2016-WK1 strain (Accession Number: KCTC 14847BP); It relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating swine diarrhea, a probiotics, a quasi-drug composition, a feed composition, a feed additive composition, and a microbial preparation comprising the strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
The Pediococcus pentoceusa SMFM2016-WK1 strain of the present invention has intestinal activity due to acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, and exhibits excellent antibacterial activity against the causative bacteria that cause diarrhea in pigs, especially weaning pigs, resulting in diarrhea in pigs. It can be usefully used as a composition for the prevention, treatment and improvement of
Description
본 발명은 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) SMFM2016-WK1 균주(기탁번호: KCTC 14847BP); 상기 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 프로바이오틱스, 의약외품 조성물, 사료 조성물, 사료 첨가제 조성물 및 미생물 제제에 조성물에 관한 것이다.The present invention Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) SMFM2016-WK1 strain (Accession Number: KCTC 14847BP); It relates to a pharmaceutical composition, probiotics, quasi-drug composition, feed composition, feed additive composition, and microbial preparation composition for preventing or treating swine diarrhea, comprising the strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
가축의 설사는 사료의 급변, 스트레스, 온도 변화 등 외부환경에 의해 발생하여, 대장균, 살모넬라 등 세균성과 TGE, PED 등 바이러스성으로 크게 구분되는데 심한 설사가 계속되어 섭취한 영양소의 흡수 장애가 일어나면서 체조직의 수분과 전해질이 상실되어 탈수증 및 전해질의 불균형이 뒤따르게 된다.Diarrhea in livestock is caused by external environments such as sudden changes in feed, stress, and temperature change, and is largely divided into bacterial types such as Escherichia coli and Salmonella and viral types such as TGE and PED. of water and electrolytes are lost, leading to dehydration and electrolyte imbalance.
특히, 자돈의 경우 불합리한 양돈장 시설 환경과 차단 방역의 미흡으로 자주 발생하는 설사와 함께 부적절한 사양관리로 인해 발생하는 설사도 흔히 나타난다. 그 중에서도 이유자돈은 여러 스트레스로 소화 장애가 일어날 수 있는 요인이 많아 이로인해 자주 설사가 발생한다. 특히, 이유자돈에서 전염성 설사가 발병하면 거의 다수가 폐사하고 치유가 되더라도 성장장애로 막대한 손실을 초래하는 경우가 많아, 자돈의 성장을 위축시키거나 수익성에 큰 손실을 초래하는 요인이 된다.In particular, in the case of piglets, diarrhea that often occurs due to unreasonable pig farm facility environment and lack of biosecurity and inappropriate breeding management often occurs. Among them, there are many factors that can cause digestive disorders due to various stresses in weaning pigs, which often cause diarrhea. In particular, when infectious diarrhea occurs in weaning pigs, most of them die and even if they are cured, they often cause enormous losses due to growth disorders, which is a factor that shrinks the growth of piglets or causes a great loss in profitability.
이러한 설사병의 예방과 치료에는 백신요법과 항생제 투여가 주로 병행되고 있으며, 특히 돼지 설사병은 빠른 전파로 인해 자돈의 대량 폐사를 야기하나 치료 물질에 대한 개발은 부진한 실정이다.Vaccination therapy and antibiotic administration are mainly used for the prevention and treatment of diarrheal disease. In particular, swine diarrheal disease causes mass mortality of piglets due to rapid propagation, but development of therapeutic substances is sluggish.
우리나라의 경우 돼지의 설사병인 티지이, 로타, 피이디등이 만연하여 지속적인 피해를 주고 있으나, 세계적으로 세균성 질병의 대책으로 사용되는 합성 항생제의 사용에 대한 규제가 강화되고 있으며, 대한민국 농림부 역시 2005년 5월부터 축산물의 안전성 제고를 위해 사료에 혼합할 수 있는 항생제 등 동물용 약품의 종류를 현행 53종에서 25종으로 감축하는 등 국제적인 항생제 사용규제에 동참하고 있다. 또한, 육류 소비자들의 건강에 대한 관심이 증가하면서 안전한 축산물을 선호하는 경향이 높아짐에 따라, 무분별한 항생제 사용에 대한 우려가 높아지고 있다. In Korea, diarrheal diseases of pigs such as TGI, Rota, PD, etc. are prevalent and cause continuous damage, but regulations on the use of synthetic antibiotics used as countermeasures against bacterial diseases are being strengthened worldwide. In order to improve the safety of livestock products, the number of veterinary medicines such as antibiotics that can be mixed with feed has been reduced from the current 53 to 25, thereby participating in international antibiotic use regulations. In addition, as interest in health of meat consumers increases and the tendency to prefer safe livestock products increases, concerns about indiscriminate use of antibiotics are increasing.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 이유자돈의 설사증을 예방 또는 치료하기 위한 개선물질을 생산하고자 예의 노력한 결과, 농림축산식품부 고시 「사료 등의 기준 및 규격」에 따라 사용 가능한 미생물인 신규 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 돼지의 설사증을 예방하는 데 도움을 줄 수 있음을 확인하여 본 발명을 완성하였다. Under this background, the present inventors have made diligent efforts to produce improved materials for preventing or treating diarrhea in weaning piglets, and as a result, the new Pediococcus pentosase, a microorganism that can be used in accordance with the "Standards and Specifications for Feed, etc." announced by the Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs The present invention was completed by confirming that the mouse SMFM2016-WK1 strain can help prevent diarrhea in pigs.
본 발명은 전술한 문제 및 이와 연관된 다른 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.The present invention aims to solve the above problems and other problems related thereto.
본 발명의 일 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) SMFM2016-WK1 균주(기탁번호 : KCTC 14847BP)를 제공하는 것이다.One exemplary object of the present invention is to provide Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) SMFM2016-WK1 strain (Accession Number: KCTC 14847BP).
본 발명의 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating porcine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceu strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient. will be.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 프로바이오틱스를 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide probiotics for preventing or improving porcine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide a quasi-drug composition for preventing or improving porcine diarrhea, comprising a Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide a feed composition for preventing or improving swine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide a feed additive composition for preventing or improving pig diarrhea, comprising a Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
본 발명의 또 다른 예시적 목적은 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 미생물 제제를 제공하는 것이다.Another exemplary object of the present invention is to provide a microbial preparation for preventing or improving porcine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
본 명세서에 개시된 발명의 기술적 사상에 따라 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 문제점을 해결하기 위한 과제로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제는 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The technical problem to be achieved according to the technical idea of the invention disclosed in this specification is not limited to the problem to solve the problems mentioned above, and another problem not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the following description. There will be.
이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 출원에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 출원에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 출원의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 출원의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.A detailed description of this is as follows. Meanwhile, each description and embodiment disclosed in this application may also be applied to each other description and embodiment. That is, all combinations of various elements disclosed in this application fall within the scope of this application. In addition, the scope of the present application is not to be construed as being limited by the specific descriptions described below.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) SMFM2016-WK1 균주를 제공한다. 상기 균주는 김치에서 분리되어 돼지의 설사증 개선 효능을 나타내는 균주로서, 2022년 1월 13일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC)에 기탁되어 수탁번호 KCTC 14847BP를 부여받았으며, 서열번호 1의 염기서열로 표시될 수 있다.One aspect of the present invention for achieving the above object provides a Pediococcus pentosaceu SMFM2016-WK1 strain. The strain is isolated from kimchi and exhibits an effect of improving diarrhea in pigs, and was deposited with the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology (KCTC) on January 13, 2022, and was given accession number KCTC 14847BP, and the base of SEQ ID NO: 1 sequence can be displayed.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지고, 유해효소를 생성하지 않는 것일 수 있으며, 상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain may have acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, and may not produce harmful enzymes, the harmful enzymes being beta-glucuronidase (β-glucuronidase) Or it may be gelatinase (gelatinase), but is not limited thereto.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주는 돼지 설사병을 유발시키는 병원균에 대한 항균활성을 가질 수 있다.The Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain may have antibacterial activity against pathogens causing swine diarrhea.
구체적으로, 본 발명의 실시예에서는, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가져 우수한 장내 활성능을 가짐을 확인하였다. 또한, 상기 균주는 용혈성이 없고, 베타글루쿠로이다제 및 젤라티나제와 같은 유해효소를 생성하지 않아 돼지 장내에서 안전성을 가짐을 확인하였다.Specifically, in the examples of the present invention, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance and has excellent intestinal activity. In addition, it was confirmed that the strain was safe in the pig intestine because it was not hemolytic and did not produce harmful enzymes such as beta-glucuroidase and gelatinase.
아울러, 분산 스팟 테스트를 통해 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 대장균 및 살모넬라 티피무리움에 대한 억제능을 in vitro상 확인하였으며, 장내 대장균 또는 살모넬라를 접종한 마우스와 이유자돈에서, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주를 급여한 결과 체내의 대장균 또는 살모넬라 균의 우수한 저감 효과를 확인하였다.In addition, the inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain against Escherichia coli and Salmonella typhimurium was confirmed in vitro through a distributed spot test, and in mice and weaning piglets inoculated with enteric coli or Salmonella, Pediococcus As a result of feeding the Pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, an excellent reduction effect of Escherichia coli or Salmonella in the body was confirmed.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 치료용, 개선 용도를 제공한다. Another aspect of the present invention for achieving the above object is Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) strain, its culture, concentrate, dried or lysate containing as an active ingredient, for preventing or treating porcine diarrhea , providing improvement uses.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 (Pediococcus pentosaceu) 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object is Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) strain, its culture, concentrate, dried or lysate containing as an active ingredient, for preventing or treating porcine diarrhea A pharmaceutical composition is provided.
본 발명에 있어 상기 페디오코커스 펜토타세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the Pediococcus pentotaceus strain may be Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain having accession number KCTC 14847BP, but is not limited thereto.
본 발명에서 용어 "배양물"은 균주를 배지에 배양하여 균주가 영양분을 섭취하고 물질대사를 통해 생겨난 부산물과 균주 등이 포함된 배지를 의미하는 것으로, 상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 배양물을 의미할 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 상기 균주의 배양물 뿐 아니라 이의 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 포함하는 것일 수 있다. In the present invention, the term "culture" refers to a medium containing by-products and strains generated by culturing a strain in a medium, ingesting nutrients and metabolizing the strain, and the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 It may mean a culture of a strain. In addition, the composition of the present invention may include a culture of the strain as well as a concentrate, dried product or lysate thereof.
본 발명의 용어 "돼지 설사증"은 병원성 세균 감염에 의한 설사를 주 증상으로 하는 소화기 질병으로, 초유의 불충분한 섭취, 주변 환경의 불량, 겨울철 불충분한 보온 등 여러 스트레스 요인이 작용하여 그 증상이 심해지는 질병을 말한다. 특히 어린 돼지에서 많이 발생하며, 감염시기에 따라 신생자돈 설사증, 포유자돈 설사증, 이유자돈 설사증으로 나눌 수 있다.The term "porcine diarrhea" of the present invention is a digestive disease whose main symptom is diarrhea caused by pathogenic bacterial infection, and the symptoms become severe due to various stress factors such as insufficient intake of colostrum, poor surrounding environment, and insufficient warmth in winter. refers to a disease In particular, it occurs frequently in young pigs, and it can be divided into neonatal piglet diarrhea, suckling piglet diarrhea, and weanling piglet diarrhea according to the time of infection.
본 발명에 있어서, 상기 "돼지 설사증"은 이유자돈의 설사증을 의미할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the "pig diarrhea" may mean diarrhea of weaning pigs, but is not limited thereto.
본 발명에 있어서, 상기 병원성 세균은 대장균(Escherichia coli) 또는 살모넬라 균(Salmonella Sp.)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.In the present invention, the pathogenic bacteria may be Escherichia coli or Salmonella Sp. , but is not limited thereto.
본 발명의 약학적 조성물은 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 포함하는 것으로, 돼지 설사증에 대한 개선 효과를 동일하게 나타낼 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention includes Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, its culture, concentrate, dried product or lysate, and can exhibit the same improvement effect on swine diarrhea.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase) 등의 유해효소를 생성하지 않는 것일 수 있다. The Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, and does not produce harmful enzymes such as β-glucuronidase or gelatinase. it may be that it does not
본 발명의 용어 "예방"은 본 발명의 약학적 조성물의 투여를 통해 돼지 설사증을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, 본 발명의 용어 "치료"는 본 발명의 약학 조성물을 투여함으로써 발병한 돼지 설사증이 호전 또는 완화되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다. 본 발명의 용어 "개선"은 상기 조성물의 투여로 돼지 설사증이 호전되는 모든 행위를 의미한다.The term "prevention" of the present invention refers to any action that suppresses or delays swine diarrhea through administration of the pharmaceutical composition of the present invention, and the term "treatment" of the present invention refers to pigs caused by administering the pharmaceutical composition of the present invention. Any action that ameliorates, alleviates, or is beneficially altered in diarrhea. The term "improvement" of the present invention refers to all actions in which pig diarrhea is improved by administration of the composition.
본 발명의 용어 "약학적 조성물"은 질병의 예방 또는 치료를 목적으로 제조된 것을 의미하며, 각각 통상의 방법에 따라 다양한 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.The term "pharmaceutical composition" of the present invention means prepared for the purpose of preventing or treating a disease, and may be formulated and used in various forms according to conventional methods, respectively.
본 발명의 약학적 조성물은 통상의 방법에 따른 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다. 약학적으로 허용되는 담체는 투여 경로나 제형에 따라 당업계에 주지되어 있으며, 구체적으로는 '대한민국약전'을 포함한 각국의 약전을 참조할 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로오스, 수크로오스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 본 발명의 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제는 비자연적 담체일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The pharmaceutical composition of the present invention may further include a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent according to conventional methods. Pharmaceutically acceptable carriers are well known in the art depending on the route of administration or dosage form, and specific reference may be made to the pharmacopoeia of each country including the 'Korean Pharmacopoeia'. Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition of the present invention include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, gum acacia, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate, and mineral oil. In addition, carriers, excipients and diluents that may be included in the composition of the present invention may be non-natural carriers, but are not limited thereto.
본 발명의 약학적 조성물은 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상세하게는, 제형화할 경우 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 액체 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다. 약학적 조성물의 구체적인 제제화와 관련하여서는 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences(19th ed., 1995)] 등을 참조할 수 있다. 상기 문헌은 본 명세서의 일부로서 간주된다.The pharmaceutical composition of the present invention may be formulated and used in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories or sterile injection solutions according to conventional methods. . Specifically, when formulated, it may be prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc., and these solid preparations contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, etc. to the compound. It can be prepared by mixing. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid preparations for oral administration include suspensions, internal solutions, emulsions, and syrups. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. can Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried formulations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for the suppository, Witepsol, Macrogol, Tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogelatin, and the like may be used. The specific formulation of the pharmaceutical composition is known in the art, and reference may be made to, for example, Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995). These documents are considered as part of this specification.
본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 상기 약학적으로 유효한 양은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분하며 부작용을 일으키지 않을 정도의 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 환자의 건강상태, 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 방법, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 투여량 및 횟수는 어떠한 면에서든 본 발명의 범위를 제한하는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The pharmacologically effective amount means an amount that is sufficient to treat a disease at a reasonable benefit/risk ratio applicable to medical treatment and does not cause side effects. It may be determined according to the activity of the drug, sensitivity to the drug, method of administration, time of administration, route of administration and excretion rate, duration of treatment, factors including drugs used in combination or concurrently, and other factors well known in the medical field. The dosage and frequency do not limit the scope of the present invention in any way.
본 발명의 약학적 조성물은 쥐, 개, 고양이, 소, 말, 돼지, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로를 통해 투여될 수 있으며, 돼지인 경우가 바람직할 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있으며, 예를 들어 경구, 정맥, 근육 또는 피하 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered to mammals such as mice, dogs, cats, cows, horses, pigs, and humans through various routes, and may be preferably pigs. Any mode of administration may be expected, and may be administered by, for example, oral, intravenous, intramuscular or subcutaneous injection, but is not limited thereto.
본 발명의 약학적 조성물은 돼지 설사증에 대한 예방 또는 치료 효과를 가질 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may have a preventive or therapeutic effect on swine diarrhea.
본 발명의 용어 "유효성분으로 포함하는"의 의미는, 약학적 조성물로써 돼지 설사증에 대한 예방 또는 치료 효과를 나타낼 수 있는 정도의 유효량을 포함하는 것을 말한다. The term "comprising as an active ingredient" of the present invention means that the pharmaceutical composition contains an effective amount capable of exhibiting a preventive or therapeutic effect on swine diarrhea.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 프로바이오틱스를 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object provides probiotics for preventing or improving porcine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient do.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 SMFM2016-WK1 균주일 수 있다.The Pediococcus pentosaceus strain may be the SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
용어 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 배양물 및 돼지설사증은 전술한 바와 같다.The terms Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, culture and swine diarrhea are as described above.
본 발명에서 용어 "프로바이오틱스"는 체내에서 유익한 효과를 제공하는 살아있는 미생물을 의미하는 것으로, 특히 본 발명에서는 미생물의 상호작용을 통해 돼지 설사증을 예방, 개선 및 치료하는 목적을 달성할 수 있는 미생물을 의미한다. 본 발명 목적상 상기 프로바이오틱스로 사용되는 균주는 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주이며, 돼지 설사증의 예방, 개선 및 치료에 효과를 나타내는 한 다른 프로바이오틱스 균주를 추가로 더 포함할 수 있다.In the present invention, the term "probiotics" refers to live microorganisms that provide beneficial effects in the body, and in particular, in the present invention, microorganisms that can achieve the purpose of preventing, improving, and treating swine diarrhea through the interaction of microorganisms do. The strain used as the probiotics for the purpose of the present invention is the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, and may further include other probiotic strains as long as they are effective in preventing, improving, and treating swine diarrhea.
본 발명의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주를 포함하는 프로바이오틱스는 돼지 설사증 예방 및 개선용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 것으로, 상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 특징을 가지고, 돼지 설사증을 유발하는 병원균, 예컨대 대장균(Escherichia coli) 또는 살모넬라 균(Salmonella Sp.)에 대한 항균 활성을 나타낼 수 있다.Probiotics containing the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain of the present invention are characterized in that they are used for preventing and improving swine diarrhea, and the strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, and is harmful It has the characteristic of not producing enzymes and can exhibit antibacterial activity against pathogens that cause pig diarrhea, such as Escherichia coli or Salmonella Sp .
본 발명의 프로바이오틱스는 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 포함하는, 분말, 발효유, 과립, 캡슐, 환, 껌, 필름 등의 형태로 사용될 수 있으나, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다.The probiotics of the present invention can be used in the form of powder, fermented milk, granules, capsules, pills, gum, films, etc. However, it is not particularly limited thereto.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 의약외품 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object is a quasi-drug composition for preventing or improving swine diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient to provide.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 SMFM2016-WK1 균주일 수 있다.The Pediococcus pentosaceus strain may be the SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 배양물 및 돼지 설사증은 전술한 바와 같다.The Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, culture and swine diarrhea were as described above.
본 발명의 의약외품 조성물은 상기 SMFM2016-WK1 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 포함하는 것으로서, 돼지 설사증 예방 및 개선용으로 사용되는 것을 특징으로 하는 것으로, 상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 특징을 가진다.The quasi-drug composition of the present invention includes the SMFM2016-WK1 strain, its culture, concentrate, dried product or lysate, and is characterized in that it is used for preventing and improving swine diarrhea, and the strain is acid-resistant and bile-resistant And it has digestive enzyme resistance and does not produce harmful enzymes.
상기 의약외품 조성물은 돼지 설사증을 유발하는 병원균, 예컨대 대장균(Escherichia coli) 또는 살모넬라 균(Salmonella Sp.)에 대한 항균 활성을 나타낼 수 있다.The quasi-drug composition may exhibit antibacterial activity against pathogens causing diarrhea in pigs, such as Escherichia coli or Salmonella Sp .
구체적으로, 본 발명의 의약외품 조성물은 동물용 의약외품 또는 구강용 의약외품을 포함하는 것일 수 있다. 본 발명의 의약외품 조성물은 상기 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물 이외에 구강용 의약외품 조성물에 통상적으로 사용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예컨대 연마제, 습윤제, 결합제, 기포제, 감미제, 방부제, 약효성분, 향미제, 색소, 용제, 증백제, 가용화제 또는 pH 조정제를 포함할 수 있다.Specifically, the quasi-drug composition of the present invention may include a quasi-drug for animals or a quasi-drug for oral use. In addition to the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, its culture, concentrate, dried product, or lysate, the "quasi-drug" composition of the present invention may include components commonly used in "quasi-drug" compositions for oral use, such as abrasives and wetting agents , a binder, a foaming agent, a sweetener, a preservative, a medicinal ingredient, a flavoring agent, a colorant, a solvent, a brightening agent, a solubilizing agent, or a pH adjusting agent.
또한, 본 발명의 의약외품 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 동물용 의약외품으로서 소독제, 살균제, 구강 위생제제, 세정제, 탈취제, 약용 샴푸제, 소독용 티슈 및 욕용제로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 제형일 수 있고, 구강용 의약외품으로서 구체적으로는 치약, 구강청결제, 껌, 캔디류, 구강스프레이, 구강용 연고제, 구강용 바니쉬(varnish), 구강필름 및 잇몸 마사지 크림으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 제형일 수 있으나, 이에 특별히 제한되는 것은 아니다. 하나의 예로서, 본 발명의 의약외품 조성물이 치약의 제형일 경우, 습윤제, 연마제, 결합제, 기포제, 향미제, 감미제, 착색제, 보존제, 약효성분, 용제, pH 조절제 등을 포함할 수 있다.In addition, the quasi-drug composition of the present invention can be prepared in any formulation conventionally manufactured in the art, and as a quasi-drug for animals, disinfectant, disinfectant, oral hygiene agent, detergent, deodorant, medicinal shampoo, disinfectant tissue and bath agent It may be one or more formulations selected from the group consisting of, and as oral quasi-drugs, specifically, toothpaste, mouthwash, gum, candy, oral spray, oral ointment, oral varnish, oral film, and gum massage cream. It may be one or more formulations selected from the group consisting of, but is not particularly limited thereto. As an example, when the quasi-drug composition of the present invention is a toothpaste formulation, it may include a wetting agent, an abrasive, a binder, a foaming agent, a flavoring agent, a sweetening agent, a coloring agent, a preservative, a medicinal component, a solvent, a pH adjusting agent, and the like.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object is a feed composition for preventing or improving pig diarrhea, comprising Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient to provide.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 SMFM2016-WK1 균주일 수 있다.The Pediococcus pentosaceus strain may be the SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 페디오코커스 펜토세우사 SMFM2016-WK1 균주, 배양물 및 돼지 설사증은 전술한 바와 같다.The Pediococcus pentoceusa SMFM2016-WK1 strain, culture and swine diarrhea were as described above.
본 발명에서 용어, "사료"는 특히 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미할 수 있다.In the present invention, the term "feed" may mean any natural or artificial diet, meal, etc., or components of the meal, especially for or suitable for eating, ingesting and digesting by animals.
상기 사료의 종류는 특별히 제한되지 아니하며, 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 사료를 사용할 수 있다. 상기 사료의 비제한적인 예로는, 곡물류, 근과류, 식품 가공 부산물류, 조류, 섬유질류, 제약 부산물류, 유지류, 전분류, 박류 또는 곡물 부산물류 등과 같은 식물성 사료; 단백질류, 무기물류, 유지류, 광물성류, 유지류, 단세포 단백질류, 동물성 플랑크톤류 또는 음식물 등과 같은 동물성 사료를 들 수 있다. 이들은 단독으로 사용되거나 2 종 이상을 혼합하여 사용될 수 있다.The type of feed is not particularly limited, and feeds commonly used in the art may be used. Non-limiting examples of the feed include vegetable feeds such as grains, root fruits, food processing by-products, algae, fibers, pharmaceutical by-products, oils and fats, starches, meal or grain by-products; Animal feed such as proteins, inorganic materials, oils, mineral oils, oils, single cell proteins, zooplankton, or food may be mentioned. These may be used alone or in combination of two or more.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object is Pediococcus pentosaceus strain, a feed additive composition for preventing or improving pig diarrhea, comprising a culture, concentrate, dried product or lysate thereof as an active ingredient provides
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 SMFM2016-WK1 균주일 수 있다.The Pediococcus pentosaceus strain may be the SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 페디오코커스 펜토세우사 SMFM2016-WK1 균주, 배양물 및 돼지 설사증은 전술한 바와 같다.The Pediococcus pentoceusa SMFM2016-WK1 strain, culture and swine diarrhea were as described above.
본 발명의 사료 첨가제는 사료에 첨가되어 가축이나 동물, 어류 등의 질병 예방, 건강 유지, 성장, 병원균 저감, 독성 물질 제거 등의 효과를 나타내는 것을 의미한다. 사료 첨가제의 종류는 매우 다양하나, 그 예로 항생제, 보존제, 향미제, 유화제, 아미노산, 비타민제, 효소제, 생균제, 규산염제, 착색제, 추출제, 올리고당 등일 수 있다.The feed additive of the present invention is added to feed to show effects such as disease prevention, health maintenance, growth, pathogen reduction, and toxic substance removal of livestock, animals, and fish. There are many types of feed additives, and examples thereof include antibiotics, preservatives, flavoring agents, emulsifiers, amino acids, vitamins, enzymes, probiotics, silicate agents, coloring agents, extractants, oligosaccharides, and the like.
본 발명에 있어서, 상기 사료 첨가제는 돼지의 설사증을 예방, 치료 또는 개선하기 위한 것일 수 있다.In the present invention, the feed additive may be for preventing, treating or improving diarrhea in pigs.
상기 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 하나의 양태는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물을 유효성분으로 포함하는, 돼지 설사증 예방 또는 개선용 미생물 제제를 제공한다.Another aspect of the present invention for achieving the above object is Pediococcus pentosaceus strain, a microbial preparation for preventing or improving swine diarrhea, comprising a culture, concentrate, dried product or lysate thereof as an active ingredient to provide.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 SMFM2016-WK1 균주일 수 있다.The Pediococcus pentosaceus strain may be the SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
용어 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 배양물 및 돼지설사증은 전술한 바와 같다.The terms Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, culture and swine diarrhea are as described above.
상기 미생물 제제는 이에 제한되는 것은 아니나, 돼지 설사증 예방 또는 개선용으로 사용될 수 있다. The microbial agent may be used for preventing or improving swine diarrhea, but is not limited thereto.
또한, 이러한 미생물 제제는 생균제를 의미하기도 하며, 액상 형태 또는 분말 형태 등 통상의 미생물 제제의 여러 제형으로 제조될 수 있다. 일 구현예로, 돼지와 같은 가축의 사료에 포함될 수도 있으며, 기타 다른 미생물 제제와 혼합하여 사용될 수도 있다. In addition, these microbial preparations also refer to probiotics, and may be prepared in various formulations of conventional microbial preparations such as liquid form or powder form. In one embodiment, it may be included in feed for livestock such as pigs, and may be used in combination with other microbial agents.
본 발명의 미생물 제제에는 페디오코커스 펜토사세우스 균주, 이의 배양물, 농축물, 건조물 또는 파쇄물 이외에도 필요에 따라 상기 균주의 활성을 유지하기 위한 물질(예를 들어, 완충제 등), 다른 미생물의 오염을 방지하기 위한 물질(예를 들어, 항생제 등), 보관을 위한 보존제(예를 들어, 동결보관을 위한 글리세롤 등) 등 미생물 제제화에 필요한 물질이 추가로 포함될 수 있으며, 돼지 설사증 예방 또는 개선 용도로 사용하는데 필요한 다른 물질들이 추가로 포함될 수 있다.In addition to the Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate, the microbial preparation of the present invention includes materials (eg, buffers, etc.) for maintaining the activity of the strain, other microorganisms, if necessary. Substances necessary for microbial formulation, such as substances to prevent contamination (eg, antibiotics, etc.), preservatives for storage (eg, glycerol for frozen storage, etc.) may be additionally included, and use for preventing or improving swine diarrhea Other materials necessary for use as may be additionally included.
본 발명의 미생물 제제는 분말 또는 액상 제형일 수 있다. 분말 제형의 경우 본 발명 균주의 균체 자체 혹은 증량제(extender) 등의 첨가제를 첨가하여 분말화한 것일 수 있으며, 액상 제형의 경우 본 발명 균주의 배양액 자체, 배양액을 용매로 희석한 희석액 또는 배양액 중 균체를 분리하여 다른 용매에 현탁한 현탁액일 수 있다.The microbial preparation of the present invention may be a powder or liquid formulation. In the case of a powder formulation, the cell body of the strain of the present invention itself or by adding additives such as an extender may be powdered. may be separated and suspended in another solvent.
본 페디오코커스 펜토세우사 SMFM2016-WK1 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성으로 인해 장내 활성능을 가지며, 돼지, 특히 이유자돈의 설사증을 유발하는 원인균에 대한 우수한 항균 활성을 나타내어 돼지 설사증의 예방, 치료 및 개선을 위한 조성물로서 유용하게 활용될 수 있다. The present Pediococcus pentoceusa SMFM2016-WK1 strain has intestinal activity due to acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, and prevents pig diarrhea by showing excellent antibacterial activity against the causative bacteria that cause diarrhea in pigs, especially weaning pigs. , can be usefully utilized as a composition for treatment and improvement.
다만, 본 명세서에 개시된 기술의 일 실시예에 따른 효과는 이상에서 언급한 것들로 제한되지 않으며, 언급하지 않은 또 다른 효과들은 아래의 기재로부터 통상의 기술자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, effects according to one embodiment of the technology disclosed in this specification are not limited to those mentioned above, and other effects not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.
본 명세서에서 인용되는 도면을 보다 충분히 이해하기 위하여 각 도면의 간단한 설명이 제공된다.
도 1은 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 내산성 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 2는 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 내담즙성 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 3은 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 소화효소 저항성 분석 결과를 나타낸 것이다.
도 4는 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 비용혈성을 확인한 결과이다.
도 5는 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 젤라티나제(gelatinase) 비생성능을 확인한 결과이다.
도 6은 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 대장균 억제능을 확인한 결과이다.
도 7은 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 살모넬라균 억제능을 확인한 결과이다.
도 8은 마우스에서 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 대장균 저해능을 확인한 결과이다.
도 9는 마우스에서 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 살모넬라균 저해능을 확인한 결과이다.
도 10은 이유자돈에서 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 대장균 저해능을 확인한 결과이다.
도 11은 이유자돈에서 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 살모넬라균 저해능을 확인한 결과이다.In order to more fully understand the drawings cited herein, a brief description of each drawing is provided.
Figure 1 shows the results of acid resistance analysis of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 2 shows the results of bile resistance analysis of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 3 shows the results of digestive enzyme resistance analysis of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 4 is the result of confirming the non-hemolytic properties of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 5 is the result of confirming the gelatinase (gelatinase) non-producing ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 6 is a result confirming the E. coli inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
7 is a result confirming the Salmonella inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain.
Figure 8 is a result confirming the E. coli inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain in mice.
Figure 9 is a result confirming the Salmonella inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain in mice.
10 is a result confirming the E. coli inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain in weanling piglets.
11 is a result of confirming the Salmonella inhibitory ability of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain in weanling piglets.
이하, 본 발명을 하기 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예만으로 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail through the following examples. However, these examples are intended to illustrate the present invention by way of example, and the scope of the present invention is not limited only to these examples.
실시예 1:Example 1: 페디오코커스 펜토사세우스Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1SMFM2016-WK1 균주의 분리 및 동정Isolation and identification of strains
식품에서 분리한 균주 373개 및 자돈 분리 균주 6개를 포함해 총 379개의 균주를 확보하였다.A total of 379 strains were secured, including 373 strains isolated from food and 6 strains isolated from piglets.
구체적으로, 수집한 김치 시료에서 젖산균을 분리하기 위해 무균 상태에서 3M 멸균백(3M™, St. Paul, MN, USA)에 김치를 25 g 담은 후 2 배의 buffer peptone water (BPW; Becton Dickinson and Company, Sparks, MD, USA)를 넣어 균질기(BagMixer®, Interscience, St.Nom, Yvelines, France)를 사용하여 60초 균질화하였다. 균질화한 용액을 BPW로 단계별로 희석한 후 희석액을 de Man, Rogosa and Sharpe agar (MRS agar; Becton Dickinson and Company)에 접종 및 도말하였다. 37℃에서 48시간 배양한 후 배지 내 젖산균의 성상을 보이며, 형태학적 차이를 보이는 집락을 무작위로 선택하여 순수 분리하였다.Specifically, in order to isolate lactic acid bacteria from the collected kimchi samples, 25 g of kimchi was put in a 3M sterilization bag (3M™, St. Paul, MN, USA) under aseptic conditions, and 2 times buffer peptone water (BPW; Becton Dickinson and Company, Sparks, MD, USA) and homogenized for 60 seconds using a homogenizer (BagMixer®, Interscience, St.Nom, Yvelines, France). After diluting the homogenized solution step by step with BPW, the diluted solution was inoculated and spread on de Man, Rogosa and Sharpe agar (MRS agar; Becton Dickinson and Company). After culturing at 37 ° C for 48 hours, colonies showing the characteristics of lactic acid bacteria in the medium and showing morphological differences were randomly selected and isolated.
이후 단일 콜로니를 회수하여 내산 및 내담즙성이 우수한 균주에 대해 16s rRNA 분석을 통해 동정하였고, 농림축산식품부 고시 「사료 등의 기준 및 규격」에 따라 보조 사료로 사용 가능한 페디오코커스 펜토사세우스(Pediococcus pentosaceus, P. pentosaceus) SMFM2016-WK1 균주를 선발하였다.Afterwards, a single colony was recovered and a strain with excellent acid resistance and bile resistance was identified through 16s rRNA analysis, and Pediococcus pentosaceus that can be used as a supplementary feed according to the Ministry of Agriculture, Food and Rural Affairs notice "Standards and Specifications for Feed, etc." ( Pediococcus pentosaceus , P. pentosaceus ) SMFM2016-WK1 strain was selected.
상기 SMFM2016-WK1 균주는 한국생명공학연구원 생물자원센터에 2022년 1월 13일자로 수탁되었으며(수탁번호 : KCTC 14847BP), 서열번호 1의 염기서열로 표시된다.The SMFM2016-WK1 strain was deposited at the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology Biological Resource Center on January 13, 2022 (accession number: KCTC 14847BP), and is represented by the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 1.
실시예 2: 장내 활성능 분석Example 2: Intestinal activity assay
페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 장내 활성능을 확인하기 위해, 식품에서 분리한 다른 후보 균주들과 함께 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 비교하였다.To confirm the intestinal activity of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance were compared with other candidate strains isolated from food.
구체적으로, 내산성 시험은 MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였다. 균액을 PBS 용액에 107 CFU/mL로 희석하였고 pH 2.5로 맞춘 MRS broth와 균액을 1 : 1 비율로 섞어 37℃에서 배양한 후 균액 접종 직후와 3시간 후의 생균수를 tryptic soy agar (TSA; Becton Dickinson and Company, New Jersey, USA)에 37℃에서 48시간 배양 후 계수하였다.Specifically, in the acid resistance test, the MRS broth was inoculated with a strain preservation solution, cultured at 37 ° C for 18 hours, centrifuged (1,912 × g, 15 minutes, 4 ° C) to settle the cells, and washed twice with PBS. The bacterial solution was diluted to 10 7 CFU/mL in PBS solution, and the MRS broth adjusted to pH 2.5 and the bacterial solution were mixed in a 1: 1 ratio and cultured at 37 ° C. The number of viable cells immediately after and 3 hours after inoculation with the bacterial solution was measured using tryptic soy agar (TSA; Becton Dickinson and Company, New Jersey, USA) and counted after 48 hours of incubation at 37°C.
내담즙성 시험은 MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였다. 균액을 PBS 용액에 107 CFU/mL로 희석하였고 0.3% porcine bile extract (sigma-aldrich, Missouri, St. Louis, USA)를 첨가한 MRS broth에 1% 접종하여 37℃에서 배양하면서 접종 직후와 24시간 후의 생균수를 TSA에 48시간 배양 후 계수하였다.In the bile resistance test, MRS broth was inoculated with the strain preservation solution, cultured at 37 ° C for 18 hours, centrifuged (1,912 × g, 15 minutes, 4 ° C) to settle the cells, and washed twice with PBS. The bacterial solution was diluted to 10 7 CFU/mL in PBS solution and 1% inoculated into MRS broth to which 0.3% porcine bile extract (sigma-aldrich, Missouri, St. Louis, USA) was added and cultured at 37°C immediately after inoculation and at 24 °C. After 48 hours of culture in TSA, the number of viable cells was counted.
소화효소 저항성 시험은 MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였다. 균액을 PBS 용액에 107 CFU/mL로 희석하였고 0.1% pancreatin from porcine pancreas (sigma-aldrich, Missouri, St. Louis, USA)를 첨가한 pH 8.0의 PBS에 1% 접종하여 37℃에서 배양하면서 접종 직후와 4시간 후의 생균수를 TSA에 48시간 배양 후 계수하였다.For the digestive enzyme resistance test, the MRS broth was inoculated with the strain preservation solution, incubated at 37 ° C for 18 hours, centrifuged (1,912 × g, 15 minutes, 4 ° C) to settle the cells, and washed twice with PBS. The bacterial solution was diluted to 10 7 CFU/mL in PBS solution, and 0.1% pancreatin from porcine pancreas (sigma-aldrich, Missouri, St. Louis, USA) was inoculated in 1% PBS at pH 8.0 and inoculated while incubating at 37 ° C. The number of viable cells immediately after and after 4 hours was counted after 48 hours of incubation in TSA.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 다른 후보 균주들에 비해 우수한 내산성(도 1), 내담즙성(도 2) 및 소화효소 저항성(도 3)을 가짐을 확인하였다.As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain had excellent acid resistance (FIG. 1), bile resistance (FIG. 2) and digestive enzyme resistance (FIG. 3) compared to other candidate strains.
실시예 3: 안정성 분석Example 3: Stability analysis
페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 돼지 장내에서 안전한지 확인하기 위해 용혈성 및 유해효소 생성 여부를 확인하였다.To confirm whether the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain was safe in the pig intestine, hemolytic and harmful enzyme production was checked.
먼저, 용혈성을 확인하기 위하여, Sheep blood 5%가 첨가된 배지를 사용하여 균주의 용혈성을 확인하였다. MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였다. 준비된 균액을 Columbia blood agar (bioMerieux, Marcy l'Etoile, Lyon, France)에 획선 도말하여 37℃에서 48시간 호기 배양하였다. 배양 후 배지에 나타난 투명대의 형성여부를 통해 alpha (α), beta (β), gamma (γ) 용혈성 보유 여부를 판정하였다. 양성 대조군으로 β 용혈성은 Vibrio vulnificus ATCC27562, α 용혈성은 Escherichia coli ATCC 25922를 사용하였다.First, in order to confirm the hemolytic property, the hemolytic property of the strain was confirmed using a medium supplemented with 5% of sheep blood. MRS broth was inoculated with the strain preservation solution, cultured at 37 ° C for 18 hours, centrifuged (1,912 × g, 15 minutes, 4 ° C) to settle the cells, and washed twice with PBS. The prepared bacterial solution was streak-smeared on Columbia blood agar (bioMerieux, Marcy l'Etoile, Lyon, France) and aerobically cultured at 37°C for 48 hours. The presence of alpha ( α ), beta ( β ), and gamma ( γ ) hemolytic properties was determined through the formation of zona pellucida appearing in the culture medium after culture. As positive controls, Vibrio vulnificus ATCC27562 for β hemolysis and Escherichia coli ATCC 25922 for α hemolysis were used.
그 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이, sheep blood가 5% 함유된 Columbia agar에 배양하여도 혈액을 용해시키지 않고 투명환을 생성하지 않는 것을 확인하여 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 용혈성이 없음을 확인하였다. As a result, as shown in Figure 4, it was confirmed that even when cultured in Columbia agar containing 5% of sheep blood, blood was not dissolved and transparent rings were not generated, and Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain was hemolytic. confirmed that there is no
또한, 유해효소 생성능을 확인하기 위해 젤라티나제(gelatinase)의 생성 여부를 확인하였다. 구체적으로, MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 MRS agar에 획선 도말해 37℃에서 24시간동안 배양해 얻은 단일 콜로니를 멸균 백금이로 취해 nutrient gelatin (MB cell, Seoul, Korea)에 천자 접종하였다. 균주의 확산을 위해 가볍게 휘저어 준 후 37℃에서 4일간 배양시키면서 매일 배양기에서 꺼내어 4℃에서 30분간 방치하여 gelatinase 생성능을 관찰하였다. Gelatinase를 생성하는 Staphylococcus aureus ATCC 25922를 양성 대조군으로 하여 동일한 실험을 진행하였으며, 균을 접종하지 않은 실험군을 음성 대조군으로 사용하였다. gelatinase 생성능이 있는 균주는 gelatin agar를 액체 상태로 용해시키며, gelatinase 생성능이 없는 균주는 agar를 용해시키지 않아 배지를 고체상태로 유지하게 된다.In addition, in order to confirm the ability to produce harmful enzymes, it was confirmed whether or not gelatinase was produced. Specifically, MRS broth was inoculated with the strain preservation solution, cultured at 37 ° C for 18 hours, streaked on MRS agar and cultured at 37 ° C for 24 hours, and single colonies obtained were taken with sterile platinum and nutrient gelatin (MB cell, Seoul, Korea) was inoculated by puncture. After stirring lightly for the spread of the strain, it was cultured at 37 ° C for 4 days, taken out of the incubator every day, and left at 4 ° C for 30 minutes to observe the gelatinase production ability. The same experiment was conducted using Staphylococcus aureus ATCC 25922, which produces gelatinase, as a positive control, and an experimental group not inoculated with the bacteria was used as a negative control. Strains capable of producing gelatinase dissolve gelatin agar in a liquid state, and strains without gelatinase producing ability do not dissolve agar and maintain the medium in a solid state.
그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 agar를 용해시키지 않아 배지를 고체상태로 유지하여 젤라티나제 생성능이 없음을 확인하였다.As a result, as shown in FIG. 5, in the case of the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, the agar was not dissolved and the medium was maintained in a solid state, confirming that there was no ability to produce gelatinase.
추가적으로, 유해효소인 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 생성 여부를 확인하였다.Additionally, it was confirmed whether β-glucuronidase, a harmful enzyme, was produced.
구체적으로, 발암물질 생산 유해효소인 β-glucuronidase 생성능을 API ZYM kit (bioMerieux, Marcy l'Etoile, Lyon, France)를 이용하여 확인하였다. MRS broth에 균주 보존액을 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였고, 이를 증류수로 현탁하여 McFarland 5로 탁도를 맞추어 큐플에 50 μL씩 분주 후 37℃에서 4시간 동안 배양하였다. 배양 후 ZYM A와 ZYM B 시약을 활용하여 아래와 같은 표 1을 이용해 효소반응 후 β-glucuronidase 생성능을 확인하였다.Specifically, the ability to produce β-glucuronidase, a carcinogen-producing harmful enzyme, was confirmed using the API ZYM kit (bioMerieux, Marcy l'Etoile, Lyon, France). MRS broth was inoculated with the strain preservation solution, incubated at 37 ° C for 18 hours, centrifuged (1,912 × g, 15 minutes, 4 ° C) to settle the cells, washed twice with PBS, and suspended in distilled water to McFarland 5. After adjusting the turbidity, 50 μL was dispensed into each cuple and incubated at 37 ° C for 4 hours. After culturing, using ZYM A and ZYM B reagents, the ability to generate β -glucuronidase was confirmed after the enzymatic reaction using Table 1 below.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 무색을 나타내어 베타글루쿠로니다제 생성능이 없음을 확인하였다.As a result, in the case of the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, it was confirmed that it had no ability to produce beta-glucuronidase because it was colorless.
결과적으로, SMFM2016-WK1 균주는 유해효소인 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 및 젤라티나제(gelatinase)를 생성하지 않으며, 용혈성이 없는 것으로 확인되어 돼지의 장내에서 안전한 미생물로 확인되었다.As a result, the SMFM2016-WK1 strain did not produce β-glucuronidase and gelatinase, which were harmful enzymes, and was confirmed to be non-hemolytic, confirming that it was a safe microorganism in the intestines of pigs.
실시예 4: 항생제 내성 분석Example 4: Antibiotic Resistance Assay
페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주가 항생제에 내성이 있는지 확인하기 위해 EFSA의 ‘인간 및 수의학적으로 중요한 항균제에 대한 박테리아 감수성 평가에 대한 지침’에 제시된 페디오코커스 속 균주의 항생제 내성 기준을 참고하여 8종의 항생제를 선정하였고, 명시된 기준을 참고하여 항생제 내성을 판독하였다. Antibiotic resistance criteria of strains of the genus Pediococcus presented in EFSA's 'Guidelines for Evaluation of Bacterial Susceptibility to Antimicrobials of Human and Veterinary Importance' to determine whether Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 is resistant to antibiotics , 8 types of antibiotics were selected, and antibiotic resistance was read by referring to the specified criteria.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주는 항생제에 대한 내성이 없는 것을 확인하였다(표 2).As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain had no resistance to antibiotics (Table 2).
실시예 5: 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 돼지 설사증 개선 효과 확인 Example 5: Confirmation of Pig Diarrhea Improvement Effect of Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 Strain
5-1: 설사증 원인균 억제능 분석5-1: Analysis of diarrhea causative bacteria inhibitory ability
축산검역본부로부터 병원성 세균인 대장균(Escherichia coli) 및 살모넬라 티피무리움(Salmonella Typhimurium) 균을 분양받아 diffusion spot test를 통해 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 억제능을 확인하였다. Escherichia coli and Salmonella Typhimurium , which are pathogenic bacteria, were distributed from the Livestock Quarantine Headquarters, and the inhibitory ability of the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain was confirmed through a diffusion spot test.
구체적으로, MRS agar 표면에 후보 생균제 균액 3 μL를 점적하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 후보 생균제는 다음과 같이 준비하였다. MRS broth에 후보균주 보존액을 1% 접종하여 37℃에서 18시간 배양한 후 원심분리(1,912 ×g, 15분, 4℃)하여 균체를 가라앉히고 PBS로 총 2회 세척하였다. 세척이 완료된 균액의 최종농도가 약 109 CFU/mL가 되도록 접종 균액을 준비하였다.Specifically, 3 μL of the candidate probiotic solution was dropwise on the surface of the MRS agar and incubated at 37° C. for 24 hours. Candidate probiotics were prepared as follows. MRS broth was inoculated with 1% candidate strain stock solution, cultured at 37°C for 18 hours, centrifuged (1,912 ×g, 15 minutes, 4°C) to settle the cells, and washed twice with PBS. The inoculated bacterial solution was prepared so that the final concentration of the washed bacterial fluid was about 10 9 CFU/mL.
설사증 원인균을 BHI agar 10 mL에 1% 접종한 후, 후보 생균제를 점적한 배지에 중층하여 37℃에서 24시간 배양하였다. 설사증 원인균의 생장 저해대의 크기(mm)를 측정하여 후보 생균제의 항균 효과를 비교하였다. 자돈 설사 주요 원인균인 E. coli와 Salmonella 는 다음과 같이 접종 균액을 준비하였다. After inoculating 1% of the diarrheal causative bacteria in 10 mL of BHI agar, the candidate probiotics were layered on the dripped medium and cultured at 37 ° C. for 24 hours. The antibacterial effect of the candidate probiotics was compared by measuring the size (mm) of the growth inhibitory zone of the diarrhea causative bacteria. E. coli and Salmonella , the main causative bacteria of piglet diarrhea, were prepared as inoculated strains as follows.
70℃에 보관된 E. coli와 Salmonella 보존액을 TSB 10 mL에 1% 접종한 후, 37℃ 호기적 조건에서 24시간 배양하였고, 활성화를 위해 배양액 0.1 mL를 취하여 TSB 10 mL에 접종한 후, 37℃ 호기적 조건에서 24시간 배양하였다. 실험 원액을 준비하기 위하여 배양액 10 mL를 1,912 ×g, 4℃에서 15분간 원심분리하고, PBS로 총 2회 세척하였고, 세척이 완료된 E. coli와 Salmonella 각 균주의 최종농도가 약 106 CFU/mL가 되도록 접종 균액을 준비하였다.After inoculating 1% of E. coli and Salmonella preservation solution stored at 70 ° C in 10 mL of TSB, cultured for 24 hours at 37 ° C aerobic conditions, and after taking 0.1 mL of the culture medium for activation and inoculating 10 mL of TSB, 37 It was cultured for 24 hours at ℃ aerobic conditions. In order to prepare the experimental stock solution, 10 mL of the culture medium was centrifuged at 1,912 × g, 4 ° C for 15 minutes, washed twice with PBS, and the final concentration of each strain of E. coli and Salmonella after washing was about 10 6 CFU / The inoculation solution was prepared to be mL.
그 결과, 대장균 3종(KVCC-BA0001423, KVCC-BA0001823, KVCC-BA1600302) 및 살모넬라 티피무리움 2종(KVCC-BA2000160, KVCC-BA2000161)에 대해 항균력을 비교했을 때, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주는 시판 생균제 3종 대비 현저히 우수한 항균 활성을 가지는 것을 확인하였다(도 6 및 도 7).As a result, when comparing the antimicrobial activity against 3 types of Escherichia coli (KVCC-BA0001423, KVCC-BA0001823, KVCC-BA1600302) and 2 types of Salmonella typhimurium (KVCC-BA2000160, KVCC-BA2000161), Pediococcus pentosaceus It was confirmed that the SMFM2016-WK1 strain had significantly superior antibacterial activity compared to three commercially available probiotics (Figs. 6 and 7).
5-2: 마우스에서 설사증 원인균 저해 분석5-2: Analysis of inhibition of causative bacteria of diarrhea in mice
마우스에 대장균을 접종하여 장내 대장균 수를 증가시킨 후, 3종의 시판 생균제(BA, EN 및 LA), 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 페디오코커스 아시디락티시(Pediococcus acidilactici) PK 균주, 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) PF30 균주 및 락토바실러스 류테리 PF20 균주를 각각 처리하여 장내 대장균 수를 비교하였다. After inoculating mice with E. coli to increase the number of E. coli in the intestine, three commercially available probiotics (BA, EN and LA), Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, Pediococcus acidilactici ( Pediococcus acidilactici ) The PK strain, Lactobacillus reuteri PF30 strain and Lactobacillus reuteri PF20 strain were respectively treated, and the number of intestinal coliforms was compared.
구체적으로, 마우스에 E. coli JOL576 (1.0 × 109 CFU/mL-1) 200 μL를 3일간 경구 투여하여 장내 대장균 수 증가를 유도하였다. 생균제의 경우, 각 젖산균을 활용하여 파우더 형태의 생균제로 제조한 후 사료 내 109 CFU/kg 수준으로 배합하여 마우스에게 급여하였다. 사료 급여 7일 후와 14일 후에 마우스를 희생시켰으며, 소장 및 대장 소화물을 회수한 후 Macconkey agar에 도말하여 장내 대장균 수를 확인하였다.Specifically, 200 μL of E. coli JOL576 (1.0 × 10 9 CFU/mL −1 ) was orally administered to mice for 3 days to induce an increase in the number of E. coli in the intestine. In the case of probiotics, each lactic acid bacteria was used to prepare probiotics in a powder form, and then mixed at a level of 10 9 CFU/kg in feed and fed to mice. The mice were sacrificed after 7 days and 14 days after feeding, and the small and large intestine digests were collected and smeared on Macconkey agar to confirm the number of E. coli in the intestine.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 시판 생균제와 유사하거나 더 우수한 대장균 저감 효과를 나타내었으며, 3종의 균주에 비해 우수한 대장균 저감 효과를 나타냄을 확인하였다(도 8).As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain exhibited a similar or superior E. coli reduction effect to that of commercially available probiotics, and exhibited an E. coli reduction effect superior to that of the three strains (FIG. 8).
마찬가지로, 마우스에 살모넬라균을 접종하여 장내 살모넬라 수를 증가시킨 후, 3종의 생균제(BA, EN 및 LA) 및 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 페디오코커스 아시디락티시(Pediococcus acidilactici) PK 균주, 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) PF30 균주 및 락토바실러스 류테리 PF20 균주를 각각 처리하여 장내 대장균 수를 비교하였다. Similarly, after inoculating mice with Salmonella to increase the number of Salmonella in the intestine, three probiotics (BA, EN and LA) and Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, Pediococcus acidilactici ( Pediococcus acidilactici ) PK strain, Lactobacillus reuteri PF30 strain, and Lactobacillus reuteri PF20 strain, respectively, were treated and the number of intestinal coliforms was compared.
구체적으로, 마우스에 살모넬라 티피무리움 JOL990 (1.0 × 109 CFU/mL-1) 200 μL를 3일간 경구 투여하여 장내 살모넬라 수 증가를 유도하였다. 생균제의 경우, 각 젖산균을 활용하여 파우더 형태의 생균제로 제조한 후 사료 내 109 CFU/kg 수준으로 배합하여 마우스에게 급여하였다. 사료 급여 7일 후와 14일 후에 마우스를 희생시켰으며, 소장 및 대장 소화물을 회수한 후 Salmonella shigella agar에 도말하여 장내 살모넬라 수를 확인하였다.Specifically, 200 μL of Salmonella typhimurium JOL990 (1.0 × 10 9 CFU/mL -1 ) was orally administered to mice for 3 days to induce an increase in the number of Salmonella in the intestine. In the case of probiotics, each lactic acid bacteria was used to prepare probiotics in powder form, and then mixed at a level of 10 9 CFU/kg in feed and fed to mice. The mice were sacrificed 7 days and 14 days after feeding, and the small and large intestine digests were collected and smeared on Salmonella shigella agar to confirm the number of Salmonella in the intestine.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 시판 생균제와 유사하거나 더 우수한 살모넬라 저감 효과를 나타내었으며, 3종의 균주에 비해 우수한 살모넬라 저감 효과를 나타냄을 확인하였다(도 9).As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain exhibited a similar or better Salmonella reduction effect than commercially available probiotics, and exhibited an excellent Salmonella reduction effect compared to the three strains (FIG. 9).
5-3: 이유자돈에서 설사증 원인균 저해 분석5-3: Analysis of inhibition of the causative agent of diarrhea in weaned piglets
이유자돈에 대장균을 접종하여 장내 대장균 수를 증가시킨 후, 3종의 시판 생균제(BA, EN 및 LA), 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 페디오코커스 아시디락티시(Pediococcus acidilactici) PK 균주, 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) PF30 균주 및 락토바실러스 류테리 PF20 균주를 각각 처리하여 장내 대장균 수를 비교하였다. After inoculating E. coli in weanling piglets to increase the number of E. coli in the intestine, three commercially available probiotics (BA, EN and LA), Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, Pediococcus acidilactici The PK strain, Lactobacillus reuteri PF30 strain and Lactobacillus reuteri PF20 strain were respectively treated, and the number of intestinal coliforms was compared.
구체적으로, 이유자돈에 E. coli JOL576 (1.0 × 109 CFU/mL-1) 10 mL을 3일간 경구 투여하여 장내 대장균 수 증가를 유도하였다. 생균제의 경우, 각 젖산균을 활용하여 파우더 형태의 생균제로 제조한 후 사료 내 109 CFU/kg 수준으로 배합하여 이유자돈에 급여하였다. 사료 급여 7일 후와 14일 후에 이유자돈을 희생시켰으며, 대장 소화물을 회수한 후 Macconkey agar에 도말하여 장내 대장균 수를 확인하였다.Specifically, 10 mL of E. coli JOL576 (1.0 × 10 9 CFU/mL -1 ) was orally administered to weaning piglets for 3 days to induce an increase in the number of E. coli in the intestine. In the case of probiotics, each lactic acid bacteria was used to prepare probiotics in powder form, and then mixed at a level of 10 9 CFU/kg in feed and fed to weaning pigs. Weaned piglets were sacrificed 7 and 14 days after feeding, and colon digests were recovered and smeared on Macconkey agar to confirm the number of intestinal coliforms.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 시판 생균제와 유사하거나 더 우수한 대장균 저감 효과를 나타내었으며, 3종의 균주에 비해 우수한 대장균 저감 효과를 나타냄을 확인하였다(도 10).As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain showed a similar or better E. coli reduction effect than the commercially available probiotic, and exhibited an E. coli reduction effect superior to that of the three strains (FIG. 10).
마찬가지로, 이유자돈에 살모넬라균을 접종하여 장내 살모넬라 수를 증가시킨 후, 3종의 생균제(BA, EN 및 LA) 및 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주, 페디오코커스 아시디락티시(Pediococcus acidilactici) PK 균주, 락토바실러스 류테리(Lactobacillus reuteri) PF30 균주 및 락토바실러스 류테리 PF20 균주를 각각 처리하여 장내 대장균 수를 비교하였다. Similarly, after inoculating weanling piglets with Salmonella to increase the number of Salmonella in the intestine, three probiotics (BA, EN and LA) and Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain, Pediococcus acidilactici ( Pediococcus acidilactici ) PK strain, Lactobacillus reuteri PF30 strain, and Lactobacillus reuteri PF20 strain, respectively, were treated and the number of intestinal coliforms was compared.
구체적으로, 이유자돈에 살모넬라 티피무리움 JOL990 (1.0 Х 109 CFU/mL-1) 10 mL을 3일간 경구 투여하여 장내 살모넬라 수 증가를 유도하였다. 생균제의 경우, 각 젖산균을 활용하여 파우더 형태의 생균제로 제조한 후 사료 내 109 CFU/kg 수준으로 배합하여 이유자돈에 급여하였다. 사료 급여 7일 후와 14일 후에 이유자돈을 희생시켰으며, 대장 소화물을 회수한 후 Salmonella shigella agar에 도말하여 장내 대장균 수를 확인하였다.Specifically, 10 mL of Salmonella typhimurium JOL990 (1.0 Х 10 9 CFU/mL -1 ) was orally administered to weaning piglets for 3 days to induce an increase in the number of Salmonella in the intestine. In the case of probiotics, each lactic acid bacteria was used to prepare probiotics in powder form, and then mixed at a level of 10 9 CFU/kg in feed and fed to weaning pigs. Weaned piglets were sacrificed 7 and 14 days after feed feeding, and colon digests were collected and smeared on Salmonella shigella agar to confirm the number of intestinal coliforms.
그 결과, 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주의 경우 시판 생균제와 유사하거나 더 우수한 살모넬라 저감 효과를 나타내었으며, 3종의 균주에 비해 우수한 살모넬라 저감 효과를 나타냄을 확인하였다(도 11).As a result, it was confirmed that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain exhibited a similar or better Salmonella reduction effect than commercially available probiotics, and exhibited an excellent Salmonella reduction effect compared to the three strains (FIG. 11).
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.From the above description, those skilled in the art to which the present invention pertains will be able to understand that the present invention may be embodied in other specific forms without changing its technical spirit or essential features. In this regard, it should be understood that the embodiments described above are illustrative in all respects and not limiting. The scope of the present invention should be construed as including all changes or modifications derived from the meaning and scope of the claims to be described later and equivalent concepts rather than the detailed description above are included in the scope of the present invention.
<110> Sookmyung Women's university industry-academic cooperation foundation REPUBLIC OF KOREA(Animal and Plant Quarantine Agency) Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation LACTOMASON CO., LTD. <120> Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same <130> KPA2021-405 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 780 <212> DNA <213> Pediococcus pentosaceus <400> 1 acggctagct cctaaaaggt taccccaccg gctttgggtg ttacaaactc tcatggtgtg 60 acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac 120 tagcgattcc gacttcgtgt aggcgagttg cagcctacag tccgaactga gaatggtttt 180 aagagattag cttaacctcg cggtctcgcg actcgttgta ccatccattg tagcacgtgt 240 gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcgtc cccaccttcc tccggtttgt 300 caccggcagt ctcactagag tgcccaactt aatgctggca actagtaata agggttgcgc 360 tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct 420 gtcattctgt ccccgaaggg aacctctaat ctcttagact gtcagaagat gtcaagacct 480 ggtaaggttc ttcgcgtagc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540 cgtcaattct tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc caggcggatt acttaatgcg 600 ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gtaatcatcg tttacggcat 660 ggactaccag ggtatctaat cctgttcgct acccatgctt tcgagcctca gcgtcagttg 720 cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca tttcaccgct 780 780 <110> Sookmyung Women's university industry-academic cooperation foundation REPUBLIC OF KOREA (Animal and Plant Quarantine Agency) Chungbuk National University Industry-Academic Cooperation Foundation LACTOMASON CO., LTD. <120> Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same <130> KPA2021-405 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 780 <212> DNA 213 <Pediococcus pentosaceus> <400> 1 acggctagct cctaaaaggt taccccaccg gctttgggtg ttacaaactc tcatggtgtg 60 acgggcggtg tgtacaaggc ccgggaacgt attcaccgcg gcatgctgat ccgcgattac 120 tagcgattcc gacttcgtgt aggcgagttg cagcctacag tccgaactga gaatggtttt 180 aagagattag cttaacctcg cggtctcgcg actcgttgta ccatccattg tagcacgtgt 240 gtagcccagg tcataagggg catgatgatt tgacgtcgtc cccaccttcc tccggtttgt 300 caccggcagt ctcactagag tgcccaactt aatgctggca actagtaata agggttgcgc 360 tcgttgcggg acttaaccca acatctcacg acacgagctg acgacaacca tgcaccacct 420 gtcattctgt ccccgaaggg aacctctaat ctcttagact gtcagaagat gtcaagacct 480 ggtaaggttc ttcgcgtagc ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc 540 cgtcaattct tttgagtttc aaccttgcgg tcgtactccc caggcggatt acttaatgcg 600 ttagctgcag cactgaaggg cggaaaccct ccaacactta gtaatcatcg tttacggcat 660 ggactaccag ggtatctaat cctgttcgct acccatgctt tcgagcctca gcgtcagttg 720 cagaccagac agccgccttc gccactggtg ttcttccata tatctacgca tttcaccgct 780 780
Claims (25)
Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) SMFM2016-WK1 strain (accession number: KCTC 14847BP).
상기 균주는 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 포함하는 것인, 균주.
According to claim 1,
The strain is a strain comprising the nucleotide sequence represented by SEQ ID NO: 1.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 균주.
According to claim 1,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, the strain.
Pediococcus pentosaceus ( Pediococcus pentosaceu ) strain, a pharmaceutical composition for preventing or treating porcine diarrhea, comprising a culture, concentrate, dried product or lysate thereof as an active ingredient.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 4,
The Pediococcus pentosaceus strain is a pharmaceutical composition, characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
According to claim 5,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, a pharmaceutical composition.
상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)인, 약학적 조성물.
According to claim 6,
The harmful enzyme is beta-glucuronidase (β-glucuronidase) or gelatinase (gelatinase), a pharmaceutical composition.
Pediococcus pentosaceus strain, probiotics for preventing or improving swine diarrhea, containing as an active ingredient a culture, concentrate, dried product or lysate thereof.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 프로바이오틱스.
According to claim 8,
The Pediococcus pentosaceus strain is characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP, probiotics.
A quasi-drug composition for preventing or improving porcine diarrhea, comprising a Pediococcus pentosaceus strain, its culture, concentrate, dried product or lysate as an active ingredient.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 의약외품 조성물.
According to claim 10,
The Pediococcus pentosaceus strain is a quasi-drug composition, characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain with accession number KCTC 14847BP.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 의약외품 조성물.
According to claim 11,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, quasi-drug composition.
상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)인, 의약외품 조성물.
According to claim 12,
The harmful enzyme is beta-glucuronidase (β-glucuronidase) or gelatinase (gelatinase), quasi-drug composition.
Pediococcus pentosaceus strain, a feed composition for preventing or improving swine diarrhea, comprising a culture, concentrate, dried product or lysate thereof as an active ingredient.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 사료 조성물.
According to claim 14,
The Pediococcus pentosaceus strain is a feed composition, characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 사료 조성물.
According to claim 15,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, feed composition.
상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)인, 사료 조성물.
According to claim 16,
The harmful enzyme is beta-glucuronidase (β-glucuronidase) or gelatinase (gelatinase), the feed composition.
Pediococcus pentosaceus strain, a feed additive composition for preventing or improving swine diarrhea, comprising a culture, concentrate, dried product or lysate thereof as an active ingredient.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 사료 첨가제 조성물.
According to claim 18,
The Pediococcus pentosaceus strain is a feed additive composition, characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain of accession number KCTC 14847BP.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 사료 첨가제 조성물.
According to claim 19,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, feed additive composition.
상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)인, 사료 첨가제 조성물.
According to claim 20,
The harmful enzyme is beta-glucuronidase (β-glucuronidase) or gelatinase (gelatinase), feed additive composition.
Pediococcus pentosaceus strain, a culture, concentrate, dried or lysate thereof as an active ingredient, a microbial agent for preventing or improving porcine diarrhea.
상기 페디오코커스 펜토사세우스 균주는 수탁번호 KCTC 14847BP의 페디오코커스 펜토사세우스 SMFM2016-WK1 균주인 것을 특징으로 하는, 미생물 제제.
The method of claim 22,
The Pediococcus pentosaceus strain is a microbial preparation, characterized in that the Pediococcus pentosaceus SMFM2016-WK1 strain with accession number KCTC 14847BP.
상기 균주는 내산성, 내담즙성 및 소화효소 저항성을 가지며, 유해효소를 생성하지 않는 것을 특징으로 하는, 미생물 제제.
According to claim 23,
The strain has acid resistance, bile resistance and digestive enzyme resistance, characterized in that it does not produce harmful enzymes, microbial preparations.
상기 유해효소는 베타글루쿠로니다제(β-glucuronidase) 또는 젤라티나제(gelatinase)인, 미생물 제제.According to claim 24,
The harmful enzyme is beta-glucuronidase (β-glucuronidase) or gelatinase (gelatinase), a microbial agent.
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|---|---|---|---|
| KR1020220022522A KR20230125654A (en) | 2022-02-21 | 2022-02-21 | Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same |
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| KR1020220022522A KR20230125654A (en) | 2022-02-21 | 2022-02-21 | Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same |
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| KR20230125654A true KR20230125654A (en) | 2023-08-29 |
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| KR1020220022522A KR20230125654A (en) | 2022-02-21 | 2022-02-21 | Novel Pediococcus pentosaceus strain and Composition for Preventing or Improving Pig diarrhea Comprising the same |
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| KR (1) | KR20230125654A (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102662319B1 (en) * | 2023-09-06 | 2024-04-30 | 재단법인 농축산용미생물산업육성지원센터 | Novel Strain of Pediococcus pentosaceus CACC616, and Feed Composition Using thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20200107384A (en) | 2019-03-07 | 2020-09-16 | 전남대학교산학협력단 | Novel Pediococcus pentosaceus FB145 with removing cadmium and use thereof |
-
2022
- 2022-02-21 KR KR1020220022522A patent/KR20230125654A/en unknown
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|---|---|---|---|---|
| KR102662319B1 (en) * | 2023-09-06 | 2024-04-30 | 재단법인 농축산용미생물산업육성지원센터 | Novel Strain of Pediococcus pentosaceus CACC616, and Feed Composition Using thereof |
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