KR20230115516A - Composition for Anti-inflammation Using an Extract of Sargassum - Google Patents

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장혜민
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류주원
황지영
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Abstract

본 발명은 알쏭이모자반(Sargassum confusum) 추출물, 짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum) 추출물, 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum) 추출물, 미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo) 추출물 및 쌍발이모자반(Sargassum patens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.The present invention provides extracts from the group consisting of Sargassum confusum extract, Sargassum hemiphyllum extract, Sargassum siliquastrum extract, Sargassum miyabei Yendo extract, and Sargassum patens extract. Provided is an anti-inflammatory composition comprising at least one selected capsular extract.

Description

모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물{Composition for Anti-inflammation Using an Extract of Sargassum}Composition for Anti-inflammation Using an Extract of Sargassum

본 발명은 모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 알쏭이모자반(Sargassum confusum) 추출물, 짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum) 추출물, 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum) 추출물, 미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo) 추출물 및 쌍발이모자반(Sargassum patens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 포함하는 항염증 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to an anti-inflammatory composition comprising a capsular capsular extract, and more particularly, to Sargassum confusum extracts, Sargassum hemiphyllum extracts, Sargassum siliquastrum extracts, and Miaves capsular capsicum (Sargassum) miyabei Yendo) extract and Sargassum patens extract.

염증은 물리적인 외상, 유해한 화학물질, 박테리아, 곰팡이, 바이러스에 의한 감염이나 생체 내 대사산물 중의 자극성 물질에 의하여 야기되는 병리적 상태에 대응하여 나타나는 국소적인 생체의 방어 반응이다. 염증은 손상된 조직과 이동하는 세포로부터 생산되는 다양한 염증 매개 인자에 의하여 촉발된다. 염증 반응 시에는 염증 부위에 혈장이 축적되어 세균이 분비한 독성을 희석시키며, 혈류가 증가하고, 홍반, 통증, 부종, 발열 등의 증상이 수반되게 된다. 정상적인 경우에 생체는 염증 반응을 통하여 발병 요인을 중화시키거나 제거하고 상한 조직을 재생시켜서 정상적인 구조와 기능을 회복시키지만, 그렇지 못한 경우에는 만성 염증과 같은 질병 상태로 진행되기도 한다.Inflammation is a local body's defense response that appears in response to pathological conditions caused by physical trauma, infection by harmful chemicals, bacteria, fungi, and viruses, or irritants among metabolites in the body. Inflammation is triggered by various inflammatory mediators produced from damaged tissues and migrating cells. During the inflammatory reaction, blood plasma accumulates at the inflammatory site, dilutes the toxicity secreted by bacteria, increases blood flow, and is accompanied by symptoms such as erythema, pain, edema, and fever. In normal cases, the living body neutralizes or removes disease factors through an inflammatory response and regenerates damaged tissues to restore normal structures and functions, but in other cases, it may progress to a disease state such as chronic inflammation.

최근 분자생물학의 발달로 분자적 수준에서 염증 반응에 대한 많은 연구가 이루어지고 있으며, 염증 반응에는 다양한 생화학적 현상이 관여하지만, 특히 대식세포(Macrophage)는 화학적 자극 등에 의하여 산화질소(NO)와 여러 염증성 사이토카인을 생성하여 염증반응에서 중요한 역할을 한다고 알려져 있다(Ito T., etal, Curr Drug Traget Inflamm Allergy, 2(3);257-265, 2003). 산화질소는 산화질소의 합성요소의 작용에 의하여 L-아르기닌(L-arginine)으로부터 합성되는데, NOS는 몇 가지 이소 형태가 존재한다. 뇌에 존재하는 b/NOS(brain NOS), 신경계 존재하는 nNOS(neuronal NOS), 혈관 내피계에 존재하는 eNOS(endothelial NOS) 등은 체내에서 항상 일정수준으로 발현되고 있으며, 이들에 의해 소량 생성되는 일산화질소(NO)는 혈압 조절 작용, 신경 전달 작용, 학습, 기억 등과 관련된 다양한 생리 반응을 수행함으로써 인체의 항상성 유지에 중요한 역할을 수행한다. 이에 반하여 어떤 자극에 의해 그 발현이 유도되는 iNOS(induced NOS)는 NO를 과다 생성하며, iNOS에 의해 과다 생성된 산화질소(NO)는 수퍼옥사이드(superoxide)와 반응하여 퍼옥시니트라이드(peroxynitrite)를 형성하게 된다. 이는 강력한 산화제로 작용하여 세포에 손상을 입힘으로써 염증과 암을 포함한 다양한 병리적 과정에 관여한다(Gupta SC et al., Exp Biol Med., 236;658-671, 2011; Riehemann etal, FEBS Lett, 442;89-94, 1999; Stamleret al., Science, 358;1898-1902, 1992).With the recent development of molecular biology, many studies have been conducted on the inflammatory response at the molecular level, and various biochemical phenomena are involved in the inflammatory response. It is known to play an important role in the inflammatory response by producing inflammatory cytokines (Ito T., etal, Curr Drug Traget Inflamm Allergy, 2(3);257-265, 2003). Nitric oxide is synthesized from L-arginine by the action of a synthetic factor of nitric oxide, and NOS has several isoforms. b/NOS (brain NOS) present in the brain, neuronal NOS (nNOS) present in the nervous system, and endothelial NOS (eNOS) present in the vascular endothelial system are always expressed at a constant level in the body, and small amounts are produced by them. Nitric oxide (NO) plays an important role in maintaining homeostasis of the human body by performing various physiological reactions related to blood pressure regulation, neurotransmission, learning, and memory. In contrast, iNOS (induced NOS), the expression of which is induced by certain stimuli, produces excessive NO, and nitric oxide (NO) excessively produced by iNOS reacts with superoxide to form peroxynitrite. will form It acts as a strong oxidant and damages cells, which is involved in various pathological processes including inflammation and cancer (Gupta SC et al., Exp Biol Med., 236;658-671, 2011; Riehemann et al, FEBS Lett, 442;89-94, 1999; Stamler et al., Science, 358;1898-1902, 1992).

한편 시클로옥시게나제(cyclooxygenase, COX)는 COX의 기능과 함께 하이드로퍼옥시다제 활성을 가지고 아라키돈산으로부터 중간체인 PGG₂와 PGG₂를 합성하며, 이들 화합물로 PGE₂, PGF₂, PGD₂, 프로스타시클린 및 트롬복산A2(thromboxane A2, TxA2)를 생성하는데, COX에도 2종류의 이소 형태가 존재한다. COX-1은 대부분의 조직에 항시 발현되어 세포 보호 작용에 필요한 프로스타글란딘(PGs)을 합성하는 데 반하여, COX-2는 염증 반응 시 신속히 그 발현이 유도되어 PGE₂등을 생성함으로써 염증 반응을 일으키는 데 중요한 역할을 수행한다(Weisz A., Biochem. J., 316:209-215, 1996;(Miller M. J. et al., Mediators of inflammation, 4:387-396, 1995: Appleton L. et al., Adv. Pharmacol., 35:27-28, 1996).On the other hand, cyclooxygenase (COX) has hydroperoxidase activity along with the functions of COX and synthesizes intermediates PGG₂ and PGG₂ from arachidonic acid. It produces double acid A2 (thromboxane A2, TxA2), and COX also has two isoforms. COX-1 is constitutively expressed in most tissues to synthesize prostaglandins (PGs) necessary for cell protection, whereas COX-2 is rapidly induced during inflammatory reactions and produces PGE₂, which is important in causing inflammatory reactions. (Weisz A., Biochem. J., 316:209-215, 1996; (Miller M. J. et al., Mediators of inflammation, 4:387-396, 1995: Appleton L. et al., Adv. Pharmacol., 35:27-28, 1996).

PGE₂는 염증을 매개하는 물질로 가장 잘 알려져 있으며, 치주염(periodontitis)과 같은 염증질환에서 matrix metalloproteinases (MMPs)의 생성을 유도하여 조직 손상에 기여한다. 류마티스 관절염환자에서 얻은 대식 세포에서 다량의 PGE₂가 생성되고 생성된 PGE₂는 류마티스 관절염에서의 염증반응과 조직 파괴 기전에 중요한 역할을 한다.PGE2 is best known as a substance that mediates inflammation and contributes to tissue damage by inducing the production of matrix metalloproteinases (MMPs) in inflammatory diseases such as periodontitis. A large amount of PGE2 is produced in macrophages obtained from patients with rheumatoid arthritis, and the PGE2 produced plays an important role in the inflammatory response and tissue destruction mechanism in rheumatoid arthritis.

PGE₂는 이미 잘 알려진 염증 반응의 매개체로서의 역할뿐만 아니라, Th2 type의 면역반응을 촉진하고 Th1 type의 면역반응은 억제하며, 대식포에서 TNF-α, IL-1β, IL-8, IL-12 등의 염증성 사이토카인의 생성을 억제하고 IL-10과 같은 항염증성 사이토카인의 생성을 촉진하는 면역반응의 조절자로서의 역할이 최근 수년간의 많은 연구에서 밝혀졌다.PGE₂ not only plays a role as a mediator of the well-known inflammatory response, but also promotes the Th2 type immune response and suppresses the Th1 type immune response, and in macrophages TNF-α, IL-1β, IL-8, IL-12, etc. Its role as a modulator of the immune response, which suppresses the production of inflammatory cytokines and promotes the production of anti-inflammatory cytokines such as IL-10, has been revealed in many studies in recent years.

이러한 염증 반응의 매개체로서의 역할을 하는 NO와 PGs의 과다 생성을 유도하는 iNOS 및 COX-2의 발현은 핵전사인자인 NF-κB에 의해 조절되는데, NF-κB는 Rel 유전자계(Rel gene family)의 핵단백질로서, 세포질에서는 I-κB와 결합되어 불활성인 형태로 존재하나, 어떤 요인에 의하여 I-κB 키나제(kinase)가 활성화되면 인산화 과정을 통해 I-κB가 떨어져 나가게 됨으로써 활성화된다. 이렇게 활성화된 NF-κB는 핵으로 이동하여 염증 반응을 유도하는 iNOS 및 COX-2의 유전자 발현을 유도하는 것이다(Oh, G. T. et al., Atherosclerosis, 159(1):17-26, 2001).The expression of iNOS and COX-2, which induce excessive production of NO and PGs, which serve as mediators of these inflammatory responses, are regulated by the nuclear transcription factor NF-κB, which is part of the Rel gene family. As a nucleoprotein, in the cytoplasm, it is present in an inactive form in association with I-κB, but when I-κB kinase is activated by a certain factor, I-κB is detached through a phosphorylation process and activated. The activated NF-κB moves to the nucleus and induces the expression of iNOS and COX-2 genes, which induce an inflammatory response (Oh, G. T. et al., Atherosclerosis, 159(1):17-26, 2001).

현재 항염증제로서 널리 사용되고 있는 비스테로이드성 소염제(non-steroidal anti-inflammatory drugs, NSAIDS)는 위장관 장애, 간장애, 신장애 등의 심각한 부작용을 야기한다고 알려져 있다. 따라서 항염 활성을 가지면서 부작용이 적고 효과가 지속적인 새로운 약물의 개발이 여전히 필요한 실정이다.Non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDS), which are currently widely used as anti-inflammatory drugs, are known to cause serious side effects such as gastrointestinal disorders, liver disorders, and renal disorders. Therefore, it is still necessary to develop new drugs having anti-inflammatory activity, side effects, and continuous effects.

한편, 해조류는 역사적으로 오래전부터 인류가 식용이나 산업용으로 다양하게 이용하여 왔으며, 폴리페놀 성분과 다당류 성분, 기능성 펩타이드, 미네랄, 알긴산 등 다양한 유효성분을 함유하고 있는 것으로 알려져 있다. 하지만 현재까지의 해조류의 항염증 효과에 대한 연구는 미역, 피래, 다시마 등에만 국한되어 있는 바, 다양한 해조류에 대한 항염증 연구가 필요하다.On the other hand, seaweed has historically been widely used by mankind for food or industrial purposes since long ago, and is known to contain various active ingredients such as polyphenol components, polysaccharide components, functional peptides, minerals, and alginic acid. However, research on the anti-inflammatory effect of seaweeds to date has been limited to seaweed, blood, and kelp, and thus anti-inflammatory studies on various seaweeds are needed.

대한민국 등록특허 제10-1516317호Republic of Korea Patent No. 10-1516317

본 발명의 목적은 염증을 매개하는 물질의 발현을 저해하여 우수한 항염증 효과를 나타내면서도 부작용이 적은 항염증 조성물을 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide an anti-inflammatory composition with fewer side effects while exhibiting an excellent anti-inflammatory effect by inhibiting the expression of substances mediating inflammation.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 알쏭이모자반(Sargassum confusum) 추출물, 짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum) 추출물, 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum) 추출물, 미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo) 추출물 및 쌍발이모자반(Sargassum patens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides an extract of Sargassum confusum, an extract of Sargassum hemiphyllum, an extract of Sargassum siliquastrum, an extract of Sargassum miyabei Yendo, and a double-headed cap (Sargassum). patens) extract, and an anti-inflammatory composition comprising at least one extract selected from the group consisting of extracts.

또한 일 실시예에서, 본 발명은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.Also in one embodiment, the present invention provides a food composition comprising the anti-inflammatory composition.

다른 실시예에서, 본 발명은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.In another embodiment, the present invention provides a cosmetic composition comprising the anti-inflammatory composition.

또 다른 실시예에서, 본 발명은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다.In another embodiment, the present invention provides a pharmaceutical composition comprising the anti-inflammatory composition.

본 발명에 따른 항염증용 조성물은 해조류인 모자반(Sargassum) 추출물을 이용하여 우수한 항염증 효과를 나타낸다.The anti-inflammatory composition according to the present invention shows an excellent anti-inflammatory effect by using an extract of Sargassum, which is a seaweed.

또한, 본 발명의 모자반(Sargassum) 추출물을 이용하여 염증성 질환의 개선 등의 용도, 염증성 피부 자극의 완화 용도 등으로 식품 조성물, 화장료 조성물 및 약제학적 조성물로 제공될 수 있다.In addition, using the Sargassum extract of the present invention, it can be provided as a food composition, cosmetic composition, or pharmaceutical composition for use in improving inflammatory diseases or alleviating inflammatory skin irritation.

도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 항염증용 조성물의 세포독성 실험 결과이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 항염증용 조성물의 산화질소 생성 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 3a은 본 발명의 일 실시예에 따른 항염증용 조성물의 염증성 사이토카인 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 항염증용 조성물의 염증성 사이토카인 억제 효과를 나타낸 결과이다.
도 3c는 본 발명의 일 실시예에 따른 항염증용 조성물의 염증성 사이토카인 억제 효과를 나타낸 결과이다.
1 is a cytotoxicity test result of an anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a result showing the nitric oxide generation inhibitory effect of the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention.
Figure 3a is a result showing the inflammatory cytokine inhibitory effect of the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention.
Figure 3b is a result showing the inflammatory cytokine inhibitory effect of the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention.
Figure 3c is a result showing the inflammatory cytokine inhibitory effect of the anti-inflammatory composition according to an embodiment of the present invention.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement the present invention. However, the present invention may be embodied in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.

본 발명의 일 실시예에서, 알쏭이모자반(Sargassum confusum) 추출물, 짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum) 추출물, 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum) 추출물, 미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo) 추출물 및 쌍발이모자반(Sargassum patens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물을 제공한다.In one embodiment of the present invention, Sargassum confusum extract, Sargassum hemiphyllum extract, Sargassum siliquastrum extract, Sargassum miyabei Yendo extract, and Sargassum patens Provided is an anti-inflammatory composition comprising at least one type of capsular extract selected from the group consisting of extracts.

본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 본 발명에서 모자반 추출물은 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 것 뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예를 들어, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한 외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 모자반 추출물에 포함되는 것이다. 본 발명에서 이용되는 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.As used herein, the term 'extract' has a meaning commonly used in the art as a crude extract in the art as described above, but also includes fractions obtained by additional fractionation of the extract in a broad sense. That is, in the present invention, the capsular extract includes not only those obtained using the above-described extraction solvent, but also those obtained by additionally applying a purification process thereto. For example, a fraction obtained by passing the extract through an ultrafiltration membrane having a certain molecular weight cut-off value, separation by various chromatography (made for separation according to size, charge, hydrophobicity or affinity), etc. Fractions obtained through various purification methods performed are also included in the capsular extract of the present invention. The extract used in the present invention may be prepared in a powder state by additional processes such as distillation under reduced pressure and freeze drying or spray drying.

본 명세서에서 '항염증'은 아래에서 정의되는 염증성 질환의 개선(증상의 경감), 그러한 질환의 발병 억제 또는 지연을 포함하는 의미이다.As used herein, 'anti-inflammatory' is meant to include improvement (relief of symptoms) of an inflammatory disease defined below, inhibition or delay of onset of such a disease.

또한 본 명세서에서, 상기 '염증성 질환' 이란 외부의 물리·화학적 자극 또는 박테리아, 곰팡이, 바이러스, 각종 알레르기 유발 물질 등 외부 감염원의 감염 또는 자가면역에 대한 국부적 또는 전신적 생체 방어 반응으로 특정되는 염증 반응이 일으키는 병리적 증상으로서 정의될 수 있다. 이러한 염증반응은 각종 염증 매개 인자와 면역 세포와 관련된 효소(iNOS, COX-2) 활성화, 염증 매개 물질의 분비(NO, TNF-α, IL-6 등의 분비), 채액 침윤, 세포 이동, 조직 파괴 등의 일련의 복합적인 생리적 반응을 수반하며, 홍반, 통증, 부종, 발열, 신체의 특정 기능의 저하 또는 상실 등의 증상에 의해 외적으로 나타난다. 상기 염증성 질환은 급성, 만성, 궤양성, 알레르기성 또는 괴사성을 띌 수 있으므로, 어떠한 질환이 상기와 같은 염증성 질환의 정의에 포함되는 한 그것이 급성이든지, 만성이든지, 궤양성이든지, 알레르기성이든지 또는 괴사성이든지를 불문한다.In addition, in the present specification, the term 'inflammatory disease' is an inflammatory response characterized by a local or systemic biological defense response against external physical and chemical stimuli or infection of external infectious agents such as bacteria, fungi, viruses, and various allergens, or autoimmunity. It can be defined as a pathological symptom that causes These inflammatory responses include activation of various inflammatory mediators and enzymes related to immune cells (iNOS, COX-2), secretion of inflammatory mediators (secretion of NO, TNF-α, IL-6, etc.), body fluid infiltration, cell migration, tissue It is accompanied by a series of complex physiological reactions such as destruction, and is externally manifested by symptoms such as erythema, pain, edema, fever, and deterioration or loss of specific body functions. Since the inflammatory disease may be acute, chronic, ulcerative, allergic or necrotic, so long as any disease is included in the definition of inflammatory disease as described above, whether it is acute, chronic, ulcerative, allergic or Regardless of whether it is necrotic or not.

상기 모자반(Sargassum)은 모자반속 조류의 총칭이다. 몸은 외견상 뿌리·줄기·잎의 구분이 뚜렷하고, 뿌리는 가반상(假盤狀)이며 1개의 중심 가지를 내어 1~3m 이상 크게 자란다. 줄기는 삼릉주 또는 삼각형이고 비틀린다. 잎은 줄기에서 기부 쪽으로 향하여 나며 휘어지고, 주걱 모양 또는 타원형을 하고 잎 중앙부까지 중륵이 생긴다. 상부의 잎은 피침형이고 가장자리에 톱니 모양의 돌기가 나며, 온몸에는 줄기부터 기포가 생긴다. 식용으로 이용되는 모자반류의 대표적인 종류로서, 짙은 황갈색을 띠고 한국의 전 해안에서 볼 수 있다. 모자반속은 난해성 식물로서 여러해살이며 한국의 연안에서 해중림(海中林)을 이루는 대표적인 종류이다. 지충이·괭생이모자반·알쏭이모자반·꽈배기모자반·큰잎모자반·짝잎모자반·쌍발이모자반 등 약 20종이 채집된다. 일본이나 동남아시아 일대에는 50여 종이 생육하고 있다. 모자반속이 무성한 곳은 각종 연안동물들이 먹이를 얻거나 산란하기에 적합하여, 환경보존과 어업자원 확보를 위해서도 매우 중요한 구실을 한다. 한국에서도 모자반속의 많은 종류가 식용되기도 하며, 알긴산 등 해조 공업의 원료로 이용되거나 비료로도 쓰이고 있다.Sargassum is a generic term for algae of the genus Sargassum. Outwardly, the body is clearly divided into roots, stems, and leaves. The stem is triangular or triangular and twisted. Leaves are bent toward the base from the stem, spatula-shaped or elliptical, and midribs are formed up to the center of the leaf. The upper leaf is lanceolate and has sawtooth projections on the edge, and air bubbles are formed all over the body from the stem. It is a representative type of capsicum used for food. It is dark yellowish brown and can be seen all over the coast of Korea. Mojabansok is a difficult-to-sea plant that is perennial and is a representative type of marine forest in the coastal areas of Korea. About 20 species are collected, including locusts, hoesaeng hats, egg-shaped hats, twisted hats, large leaf hats, single leaf hats, and double-headed hats. About 50 species grow in Japan and Southeast Asia. Places with thick caps are suitable for various coastal animals to obtain food or spawn, and play a very important role in preserving the environment and securing fishery resources. In Korea, many types of capsicum are also edible, and are used as raw materials for the seaweed industry, such as alginic acid, or as fertilizers.

알쏭이모자반(Sargassum confusum)은 조간대 하부에서 점심대에 걸쳐 생육한다. 식물체는 반상(盤狀)의 뿌리에서 짧은 중심가지를 1개 또는 2~3개 내고 0.6~2m로 커진다. 중심가지는 원주상이고 작은 가시가 있다. 하부의 잎은 타원형 또는 주걱 모양이고 길이 7cm이며 중륵(中肋)이 파묻힌다. 또한 잎가장자리에 톱니가 있으나 때로는 없어진다. 상부의 잎은 변화가 많으나, 보통 긴 피침상(披針狀)이고 길이 3~5cm이며 양 끝이 가늘다. 기포(氣胞)는 대개 작은 가지의 기부에 생기고 구상(球狀)이며, 어린 것은 도란형이고 미철두(微凸頭)가 있다. 한국·사할린·쿠릴열도·중국 등지에 분포한다.Sargassum confusum grows from the lower intertidal zone to the noon zone. The plant body grows to 0.6-2m by giving out 1 or 2-3 short central branches from the semi-shaped root. The central branch is columnar and has small spines. The lower leaves are oval or spatula-shaped, 7cm long, and the midrib is buried. In addition, there are teeth on the edge of the leaf, but sometimes they disappear. The leaves on the upper part have many changes, but are usually long lanceolate, 3-5 cm long, and both ends are thin. Bubbles are usually formed at the base of small branches and are spherical, and young ones are obovate and have cheoldu (微凸頭). Distributed in Korea, Sakhalin, Kuril Islands, and China.

짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum)은 갈색이며 섬유상의 뿌리에서 외가닥 또는 두 갈래로 줄기를 내어 퍼지고, 중심가지가 30~50cm 자라며 곁가지를 낸다. 가지는 실 모양이고 굵기는 1.5~2mm이다. 잎은 몸의 하부에서 쐐기꼴 또는 도란형이고, 위쪽에서는 가장자리에 톱니가 나거나 밋밋하다. 상부의 잎이 좌우대칭이 아니기 때문에 짝잎모자반이라고 부른다. 한국(동해안·제주)·일본에 주로 분포한다.Sargassum hemiphyllum is brown and spreads with a single or two-stranded stem from the fibrous root, and the central branch grows 30-50cm and gives out side branches. The branch is thread-like and the thickness is 1.5~2mm. Leaves are wedge-shaped or obovate at the lower part of the body, and sawtooth or flat at the upper part. Since the leaves on the upper part are not symmetrical, it is called an even leaf cap. It is mainly distributed in Korea (East Coast, Jeju) and Japan.

꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum)은 간조선(干潮線) 부근에서 점심대(漸深帶)에 걸쳐 바위 위에 붙어 산다. 길이는 보통 2~3m이나 수십 미터에 이르는 것도 있다. 계절과 산지(産地)에 따라 독특한 모양으로 변하지만, 대체로 밑동의 잎은 폭이 넓고 2중의 톱니가 없으며 가지가 3릉형(三稜形)이고 꽈배기 모양으로 꼬인다. 윗부분에 공기방울이 가득 붙어 있어 바닷속에서 곧게 선다. 한국(비진도·욕지도·어청도·제주도 등지)·일본에 주로 분포한다.Sargassum siliquastrum lives on rocks from the low tide to the low tide. It is usually 2-3m in length, but there are some that reach several tens of meters. It changes in a unique shape depending on the season and the place of origin, but generally, the leaves at the base are wide, do not have double sawtooth, and the branches are three-ringed and twisted in a twisted shape. The upper part is full of air bubbles, so it stands upright in the sea. It is mainly distributed in Korea (Bijindo, Yokjido, Eocheongdo, Jeju Island, etc.) and Japan.

미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo)은 흑갈색이며 방석 모양의 뿌리에서 원기둥 모양의 줄기가 여러 개 나오고 줄기는 길어지면서 짧은 가지를 낸다. 잎은 가죽질이고 좁은 주걱 모양이며 가장자리에는 무딘 거치가 있거나 매끈하다. 기포는 북 모양이며 끝에 가시 모양의 잎을 가지며 조간대 하부에 자란다.Sargassum miyabei Yendo is dark brown, and several cylindrical stems come out from cushion-shaped roots, and the stems grow long and give out short branches. The leaves are leathery, narrow spatula-shaped, and the edges are dull or smooth. Bubbles are drum-shaped, have spine-shaped leaves at the ends, and grow in the lower intertidal zone.

쌍발이모자반(Sargassum patens)은 조간대 하부에 착생하며, 큰 반상근(盤狀根)에서 곧게 서는 줄기가 높이 1m 또는 그 이상 크게 자란다. 줄기는 보통 편압(扁壓)되고, 양 가장자리가 얇으며 많은 중심가지로 갈라지고 이들 가지는 다시 깃 모양으로 가지친다. 기부의 잎은 댓잎 모양으로 길쭉하고 나비 5~10mm, 길이 2~5cm이며 납작한 자루가 있고 때로는 분열하여 여러 개가 어긋나거나 깃 모양으로 붙는다. 상부 잎은 가는 선상(線狀)이고 기부가 잘록하며 대개 어긋붙는다. 기포(氣胞)는 타원형·도란형을 하고 납작한 자루가 있으며 관엽(冠葉)이 있다. 한국에는 울릉도·여수·완도·제주 등지에서 생육한다.Sargassum patens are epiphytic in the lower intertidal zone, and the stems standing straight from the large seminiferous roots grow taller than 1m in height. The stem is usually flattened, both edges are thin, and it is divided into many central branches, and these branches are branched again into feathers. The leaves of the basal part are bamboo leaf-shaped, elongated, 5-10mm wide, 2-5cm long, with flat stalks, and sometimes divided, several of which are alternate or attached like feathers. The upper leaves are thin linear and the basal part is constricted, and they are usually alternately attached. The bubbles are oval, obovate, have a flat stalk, and have crown leaves. In Korea, it grows in Ulleungdo, Yeosu, Wando, and Jeju.

본 발명의 조성물은 상기와 같이 알쏭이모자반 추출물, 짝잎모자반 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 미아베모자반 추출물, 쌍발이모자반 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 유효성분으로 포함하여, 염증성 사이토카인(TNF-α, IL-6, IL-1β)의 분비를 억제하고 NO(Nitric Oxide)의 생성을 억제하여 항염증 용도로서 사용될 수 있다.As described above, the composition of the present invention contains, as an active ingredient, at least one extract selected from the group consisting of capsular capsular capsular extract, capsicum capsicum extract, capsicum capsicum extract, capsicum capsicum extract, extracts of capsicum capsicum, miabe capsicum extracts, and extracts of capsicum capsicum, as an active ingredient, It can be used for anti-inflammatory purposes by suppressing the secretion of caine (TNF-α, IL-6, IL-1β) and the production of nitric oxide (NO).

일반적으로 염증 반응에 있어서, LPS(lipopolysaccharide)는 그람 음성 박테리아의 세포벽으로부터 유래된 세포내 독소로 TLR4(toll-like receptor 4)와의 결합함으로써 전사인자인 NF-κB를 활성화시키며, NO, 염증성 사이토카인 및 PGE₂등 여러 염증 조절 물질을 분비하게 한다.In general, in the inflammatory response, LPS (lipopolysaccharide) is an intracellular toxin derived from the cell wall of Gram-negative bacteria and binds to toll-like receptor 4 (TLR4) to activate NF-κB, a transcription factor, and NO, an inflammatory cytokine. and PGE2 to secrete various inflammatory regulating substances.

이러한 과정에서 상기 모자반 추출물들은 농도 의존적으로 NO, 염증성(IL-1β, IL-6, TNF-α) 및 PGE₂의 생성을 억제하는 것으로 항염증제의 용도로 사용될 수 있다.In this process, the capsular extracts suppress the production of NO, inflammatory substances (IL-1β, IL-6, TNF-α) and PGE2 in a concentration-dependent manner, and thus can be used as anti-inflammatory agents.

상기 PGE₂는 염증 매개 물질 중 하나로 phospholipase A2의 효소작용에 의해 합성이 이루어지는데 막 인지질(membrane phospholipid)로부터 아라키돈 산(arachidonic acid)가 만들어지는 것으로 시작된다.The PGE2 is one of the inflammatory mediators and is synthesized by the enzymatic action of phospholipase A2. It starts with the production of arachidonic acid from membrane phospholipid.

상기 아라키돈 산(Arachidonic acid)은 효소작용에 의해 프로스타글란딘(prostaglandin) G2가 되고 다시 불안정한 대사산물인 프로스타글란딘(prostaglandin) H2가 된다.The arachidonic acid is converted into prostaglandin G2 by enzymatic action and then becomes an unstable metabolite, prostaglandin H2.

이 두 과정은 시클로옥시제나아제(cyclooxygenase, COX)에 의해 촉진되며, COX는 두 종류 이상의 아이소엔자임(isoenzyme)이 존재하는데 이들 중 COX-1은 지속적으로 발현하여 혈소판 응집, 위 점막 보호, 신기능 조절 등의 생리적 기능을 담당하고 COX-2는 염증 등의 자극에 의해 발현된다.These two processes are promoted by cyclooxygenase (COX), and COX has two or more isoenzymes. Among them, COX-1 is constantly expressed to regulate platelet aggregation, gastric mucosa protection, and renal function. Responsible for physiological functions such as COX-2, which is expressed by stimuli such as inflammation.

OX에 의해 생성된 PGH₂는 불안정한 중간 대사산물로 세포의 종류나 자극에 따라 다양한 프로스타노이드 신타아제(prostanoid synthase 들에 의해 PGE₂, PGD₂, PGI₂, PGF₂, thromboxane A2 (TXA₂) 등으로 대사된다.PGH₂ produced by OX is an unstable intermediate metabolite, and is metabolized into PGE₂, PGD₂, PGI₂, PGF₂, thromboxane A2 (TXA₂), etc. by various prostanoid synthase depending on the cell type or stimulation.

또한, PGH₂에서 PGE₂로의 대사에 관여하는 PGE synthase (PGES)는 현재까지 cytosolic PGES (cPGES), microsomal PGES-1 (mPGES-1), mPGES-2 등 세 종류의 아이소폼(isoform)이 알려져 있는데 이 중 mPGES-1은 리포폴리사카라이드(lipopolysaccharid, LPS)와 같은 염증성 자극이나 IL-1β, TNF-α와 같은 염증성 사이토카인, 산화질소(NO)에 의해 발현이 증가되며 COX-2와 기능적으로 밀접하게 연계되어 PGE₂의 생성에 관여한다.In addition, PGE synthase (PGES), which is involved in the metabolism of PGH₂ into PGE₂, has been known to have three isoforms: cytosolic PGES (cPGES), microsomal PGES-1 (mPGES-1), and mPGES-2. Among them, the expression of mPGES-1 is increased by inflammatory stimuli such as lipopolysaccharid (LPS), inflammatory cytokines such as IL-1β and TNF-α, and nitric oxide (NO), and is functionally close to COX-2. It is closely linked and is involved in the production of PGE2.

이에, 본 발명은 상기한 모자반 추출물들을 유효성분으로 이용함에 따라, 염증성 사이토카인(Cytokine) 및 산화질소(NO) 의 발현을 저해함에 따라, 우수한 항염증 효과를 나타낼 수 있다.Accordingly, the present invention can exhibit excellent anti-inflammatory effects by inhibiting the expression of inflammatory cytokines and nitric oxide (NO) by using the capsular extract as an active ingredient.

또한 천연 해조류를 사용하므로, 항염증 용도로 사용하였을 때 인체에 부담이 적고 부작용이 없다.In addition, since natural seaweed is used, there is little burden on the human body and no side effects when used for anti-inflammatory purposes.

상기 모자반 추출물들은 목적하는 바에 따라 단독 또는 혼합하여 항염증용 조성물로 사용될 수 있으며 다양한 중량비로 혼합하여 사용될 수도 있다.The capsular extracts may be used as an anti-inflammatory composition alone or in combination as desired, and may be mixed in various weight ratios.

일 예에서, 상기 항염증용 조성물은 알쏭이모자반 추출물, 짝잎모자반 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 미아베모자반 추출물 및 쌍발이모자반 추출물을 모두 포함할 수 있으며, 보다 구체적으로, 상기 항염증용 조성물 전체 100 중량부에 대하여 각 모자반 추출물을 10 내지 50 중량부로 포함할 수 있다.In one example, the anti-inflammatory composition may include all of the two-headed capricorn extract, the pair-leaf capricorn extract, the pretzel capillaries extract, the Miabe capbanchi extract, and the double-headed capinal capillaries extract, and more specifically, the anti-inflammatory composition in total 100 Each capsular extract may be included in an amount of 10 to 50 parts by weight based on parts by weight.

본 발명의 다른 예에서, 상기 항염증용 조성물은 잔잎바디(Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.) 추출물, 불레기말(Colpomenia sinuosa) 추출물 및 고리매(Scytosiphon lomentaria) 추출물을 추가로 포함할 수 있다.In another example of the present invention, the anti-inflammatory composition may further include an extract of Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa., an extract of Colpomenia sinuosa, and an extract of Scytosiphon lomentaria. there is.

잔잎바디(Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.)는 쌍떡잎식물 산형화목 산형과의 여러해살이풀로 주로 높은 지대의 습지 근처에서 자란다. 높이가 1m에 달하며 곧게 자라며, 잎은 기수2~3회 우상복엽으로서 엽병이 길며 엽병 밑부분이 편평한 엽초로 되어 원줄기를 둘러싼다. 소엽은 긴 달걀모양 또는 피침형이고 가장자리에 딱딱한 톱니가 있으며 위로 갈수록 잎이 작아져서 3개로 갈라지고 엽병 전체가 엽초로 된다. 꽃은 백색으로 7 내지 8월에 피며 겹우산모양꽃 차례에 달리고 산경에 능선이 있으며 윗부분에 밀모가 있고 소산경은 10 내지 30개로서 길이 2 내지 4cm이며 능선과 더불어 안쪽에 잔돌기가 밀생하고 꽃자루는 길이 1cm 정도이다. 총포(總苞)는 수개이고 소총포는 가늘고 작으며 다수이다. 꽃부리는 소형이고 꽃잎은 5개이며 안으로 굽는다. 열매는 구형(球珩)으로 9 내지 10월에 성숙하며 늑(肋)사이에 3개, 합생면에 8개의 유관이 있다. 뿌리는 진정 또는 두통에 쓰이며 어린잎은 식용한다. 본원발명에서는 잔잎바디의 잎을 추출한 잔잎바디 추출물을 유효 성분으로 포함하는 것이 바람직하다.Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.) is a dicotyledonous perennial plant of the umbel family Ubelaceae and grows mainly near wetlands in highlands. It grows up to 1m in height and grows straight. Leaves are pinnately compound 2-3 times in radix, with long petioles, and the lower part of the petiole becomes a flat sheath and surrounds the main stem. Leaflets are long egg-shaped or lanceolate, with hard sawtooth on the edge, and the leaves become smaller as they go up, split into 3, and the entire petiole becomes a sheath. Flowers are white, blooming in July or August, hanging in the order of double umbrella-shaped flowers, with ridges on the scapes, with dense hairs on the upper part, 10 to 30 peduncles, 2 to 4 cm long, with dense projections on the inside along with the ridges, and the peduncle is It is about 1 cm long. Guns are several, and rifles are thin, small, and numerous. The corolla is small and has 5 petals, which are bent inside. The fruit is spherical and matures in September to October. The root is used for soothing or headache, and the young leaves are edible. In the present invention, it is preferable to include the fine leaf body extract obtained by extracting the leaves of the small leaf body as an active ingredient.

불레기말(Colpomenia sinuosa)은 조간대(潮間帶) 하부의 바위 위나 해조(海藻)에 붙어 사는 해조류로서, 엷은 막질의 불레기 모양이며 지름 4~10cm, 때로는 30cm 정도 되는 것도 있다. 어릴 때는 속이 물에 차 있다. 공 모양 또는 불규칙한 모양이며 두께는 250~350μm이다. 피층은 1~2층의 정사각형 또는 다각형 세포로 되어 있고, 내층은 2~5층의 다소 둥근 세포로 되어 있다. 극한지를 제외하고 세계적으로 널리 분포한다.Colpomenia sinuosa is a seaweed that lives on rocks in the lower intertidal zone or attached to seaweed. When young, the stomach is full of water. It is spherical or irregular in shape and has a thickness of 250 to 350 μm. Cortex with 1-2 layers of square or polygonal cells, inner layer with 2-5 layers of more or less round cells. It is widely distributed throughout the world except in extreme regions.

고리매(Scytosiphon lomentaria)는 고리맷과의 해조(海藻)류로서, 몸의 길이는 15~60cm이며 몸 군데군데에 잘록한 주름이 있고 혁질(革質)이다. 조간대(潮間帶) 부근의 바위에 붙어 살며 전 세계에 분포한다.Scytosiphon lomentaria is a seaweed of the family Gorimatidae. It has a body length of 15 to 60 cm, has narrow wrinkles in some places, and is leathery. Lives on rocks near the intertidal zone and is distributed all over the world.

본 발명에 의한 항염증용 조성물은 상기한 모자반 추출물들만을 포함하는 경우에도 우수한 항염증 효과를 나타내나, 위와 같이 부챗말 추출물, 불레기말 추출물 및 고리매 추출물을 혼합하여 복합 추출물로 사용할 경우 보다 우수한 항염증 효과를 나타낼 수 있다.The anti-inflammatory composition according to the present invention exhibits an excellent anti-inflammatory effect even when only the above-mentioned capsular extract is contained, but it is more excellent than when the composite extract is mixed and used as a composite extract of Buchat end extract, Bulregi end extract, and Goryume extract. May have anti-inflammatory effects.

구체적으로, 상기 잔잎바디 추출물, 불레기말 추출물 및 고리매 추출물은 상기 항염증용 조성물 전체 100 중량부에 대하여 각 5 내지 15 중량부로 포함될 수 있다.Specifically, the small leaf body extract, bullegi end extract, and goma extract may be included in 5 to 15 parts by weight, respectively, based on 100 parts by weight of the total anti-inflammatory composition.

상기 추출물들은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출될 수 있다.The extracts may be extracted using an extraction solvent selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms, and mixtures thereof.

상기 추출물을 분쇄한 분쇄물을 물, 에탄올, 메탄올 등과 같은 탄소수 1 내지 6의 알코올과 같은 극성 용매 또는 알코올과 물의 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합 용매로 용출할 수 있다. 이 때, 추출 온도는 10℃ 내지 100℃, 바람직하게는 실온에서 추출한 추출물일 수 있다.The pulverized product obtained by pulverizing the extract may be eluted with a polar solvent such as an alcohol having 1 to 6 carbon atoms such as water, ethanol, or methanol, or a mixed solvent having a mixing ratio of 1:0.1 to 1:10 of alcohol and water. At this time, the extraction temperature may be 10 ℃ to 100 ℃, preferably the extract extracted at room temperature.

상기 추출 용매는 시료의 중량 기준으로 2 내지 50배를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 2 내지 20배이다. 추출을 위해 시료는 추출 용매에서 침출을 위해 1 내지 72시간 동안 방치될 수 있으며, 상세하게는 1 내지 24시간 동안 방치될 수 있다.The extraction solvent may be used in an amount of 2 to 50 times, preferably 2 to 20 times, based on the weight of the sample. For extraction, the sample may be left for leaching in the extraction solvent for 1 to 72 hours, specifically 1 to 24 hours.

여과된 추출물을 진공 회전 농축기로 감압 농축하여 수득한 결과물일 수 있으나, 이에 제한되지 않고 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이의 조정제물 또는 정제물을 모두 포함한다.It may be a product obtained by concentrating the filtered extract under reduced pressure with a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto, and includes all extracts, dilutions or concentrates of extracts, dried products obtained by drying extracts, and crude or purified products thereof.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 식품 조성물은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다.A food composition according to another embodiment of the present invention relates to a food composition comprising the anti-inflammatory composition.

상기 식품 조성물은 어떠한 형태로도 제조될 수 있으며, 예컨대 차, 주스, 탄산음료, 이온음료 등의 음료류, 우유, 요구르트 등의 가공 유류, 껌류, 떡, 한과, 빵, 과자, 면 등의 식품류, 정제, 캡슐, 환, 과립, 액상, 분말, 편상, 페이스트상, 시럽, 겔, 젤리, 바 등의 건강기능식품 제제류 등으로 제조될 수 있다.The food composition may be prepared in any form, for example, beverages such as tea, juice, carbonated beverages, and ionic beverages, processed oils such as milk and yogurt, foods such as chewing gum, rice cakes, traditional Korean snacks, bread, snacks, and noodles, It can be manufactured into health functional food preparations such as tablets, capsules, pills, granules, liquid, powder, flakes, pastes, syrups, gels, jellies, and bars.

또한, 법률상·기능상의 구분에 있어서 제조·유통 시점의 시행 법규에 부합하는 한 임의의 제품 구분을 따를 수 있다. 예컨대 한국 "건강기능식품에관한법률"에 따른 건강기능식품이거나, 한국 "식품위생법"의 식품공전(식약처 고시, 식품의 기준 및 규격)상 각 식품유형에 따른 과자류, 두류, 다류, 음료류, 특수용도식품 등일 수 있다.In addition, in terms of legal and functional classification, any product classification can be followed as long as it conforms to the enforcement regulations at the time of manufacturing and distribution. For example, it is a health functional food according to the "Health Functional Food Act" of Korea, or confectionery, legumes, teas, beverages, It may be special purpose food, etc.

상기 식품 조성물은 상기 추출물들 이외에 식품첨가물이 포함될 수 있다.The food composition may include food additives in addition to the extracts.

식품첨가물은 일반적으로 식품을 제조, 가공 또는 보존함에 있어 식품에 첨가되어 혼합되거나 침윤되는 물질로서 이해될 수 있는데, 식품과 함께 매일 그리고 장기간 섭취되므로 그 안전성이 보장되어야 한다. 식품의 제조·유통을 규율하는 각국 법률(한국에서는 "식품위생법"임)에 따른 식품첨가물공전에는 안전성이 보장된 식품첨가물이 성분 면에서 또는 기능 면에서 한정적으로 규정되어 있다. 한국 식품첨가물공전(식약처 고시 "식품첨가물 기준 및 규격")에서는 식품첨가물이 성분 면에서 화학적 합성품, 천연 첨가물 및 혼합 제제류로 구분되어 규정되어 있는데, 이러한 식품첨가물은 기능 면에 있어서는 감미제, 풍미제, 보존제, 유화제, 산미료, 점증제 등으로 구분된다.Food additives may generally be understood as substances that are added to, mixed with, or infiltrated into food in manufacturing, processing, or preserving food. Since food is consumed daily and for a long period of time, its safety must be guaranteed. According to the Food Additive Code under the laws of each country governing the manufacture and distribution of food (referred to as the “Food Sanitation Act” in Korea), safety-guaranteed food additives are limitedly regulated in terms of ingredients or functions. In the Korean Food Additives Codex (Ministry of Food and Drug Safety Notice "Standards and Specifications for Food Additives"), food additives are classified into chemical synthetic products, natural additives, and mixed formulations in terms of ingredients, and these food additives are classified as sweeteners and flavors in terms of functions It is divided into additives, preservatives, emulsifiers, acidulants, and thickeners.

감미제는 식품에 적당한 단맛을 부여하기 위하여 사용되는 것으로, 천연의 것이거나 합성된 것 모두 본 발명의 조성물에 사용할 수 있다. 바람직하게는 천연 감미제를 사용하는 경우인데, 천연 감미제로서는 옥수수 시럽 고형물, 꿀, 수크로오스, 프룩토오스, 락토오스, 말토오스 등의 당 감미제를 들 수 있다.Sweeteners are used to impart appropriate sweetness to foods, and both natural and synthetic sweeteners can be used in the composition of the present invention. Preferably, a natural sweetener is used, and examples of the natural sweetener include sugar sweeteners such as corn syrup solids, honey, sucrose, fructose, lactose, and maltose.

풍미제는 맛이나 향을 좋게 하기 위하여 사용될 수 있는데, 천연의 것과 합성된 것 모두 사용될 수 있다. 바람직하게는 천연의 것을 사용하는 경우이다. 천연의 것을 사용할 경우에 풍미 이외에 영양 강화의 목적도 병행할 수 있다. 천연 풍미제로서는 사과, 레몬, 감귤, 포도, 딸기, 복숭아 등에서 얻어진 것이거나 녹차잎, 둥굴레, 대잎, 계피, 국화 잎, 자스민 등에서 얻어진 것일 수 있다. 또 인삼(홍삼), 죽순, 알로에 베라, 은행 등에서 얻어진 것을 사용할 수 있다. 천연 풍미제는 액상의 농축액이나 고형상의 추출물일 수 있다. 경우에 따라서 합성 풍미제가 사용될 수 있는데, 합성 풍미제는 에스테르, 알콜, 알데하이드, 테르펜 등이 이용될 수 있다.Flavors may be used to improve taste or aroma, and both natural and synthetic flavors may be used. Preferably, it is the case of using a natural one. In case of using natural ones, in addition to flavor, the purpose of enhancing nutrition can also be combined. As a natural flavoring agent, it may be obtained from apples, lemons, tangerines, grapes, strawberries, peaches, etc., or obtained from green tea leaves, roundworms, bamboo leaves, cinnamon, chrysanthemum leaves, jasmine, and the like. In addition, those obtained from ginseng (red ginseng), bamboo shoots, aloe vera, ginkgo, etc. can be used. Natural flavors can be liquid concentrates or solid extracts. In some cases, synthetic flavors may be used, and synthetic flavors may include esters, alcohols, aldehydes, terpenes, and the like.

보존제로서는 소듐 소르브산칼슘, 소르브산나트륨, 소르브산칼륨, 벤조산칼슘, 벤조산나트륨, 벤조산칼륨, EDTA(에틸렌디아민테트라아세트산) 등이 사용될 수 있고, 또 유화제로서는 아카시아검, 카르복시메틸셀룰로스, 잔탄검, 펙틴 등을 들 수 있으며, 산미료로서는 연산, 말산, 푸마르산, 아디프산, 인산, 글루콘산, 타르타르산, 아스코르브산, 아세트산, 인산 등이 사용될 수 있다. 산미료는 맛을 증진시키는 목적 이외에 미생물의 증식을 억제할 목적으로 식품 조성물이 적정 산도로 되도록 첨가될 수 있다.As preservatives, sodium sorbate, sodium sorbate, potassium sorbate, calcium benzoate, sodium benzoate, potassium benzoate, EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid), etc. may be used, and as emulsifiers, acacia gum, carboxymethylcellulose, xanthan gum, pectin and the like, and examples of the acidulant include acid salt, malic acid, fumaric acid, adipic acid, phosphoric acid, gluconic acid, tartaric acid, ascorbic acid, acetic acid, phosphoric acid, and the like. Acidulants may be added to the food composition to have an appropriate acidity for the purpose of inhibiting the growth of microorganisms in addition to improving taste.

점증제로서는 현탁화 구현제, 침강제, 겔형성제, 팽화제 등이 사용될 수 있다.As the thickening agent, a suspending agent, a sedimentation agent, a gel forming agent, a swelling agent, and the like may be used.

본 발명의 다른 일 실시예에 따른 식품 조성물은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 화장료 조성물에 관한 것이다.A food composition according to another embodiment of the present invention relates to a cosmetic composition comprising the anti-inflammatory composition.

상기 항염증용 조성물이 화장료 조성물로 파악될 경우, 그 용도는 염증성 피부 자극의 완화로 이해될 수 있으며, 상기 추출물들의 유효성분 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들인 안정화제, 용해화제, 계면활성제, 비타민, 색소 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.When the anti-inflammatory composition is understood as a cosmetic composition, its use can be understood as the relief of inflammatory skin irritation, and in addition to the active ingredients of the extracts, stabilizers, solubilizers, and surfactants commonly used in cosmetic compositions are used. , conventional adjuvants and carriers such as vitamins, colors and flavors.

상기 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다.The cosmetic composition may be prepared in any formulation conventionally prepared in the art, and may be used in solutions, suspensions, emulsions, pastes, gels, creams, lotions, powders, soaps, surfactant-containing cleansing, oils, powder foundations, It can be formulated as emulsion foundation, wax foundation and spray.

본 발명의 또 다른 일 실시예에 따른 식품 조성물은 상기 항염증용 조성물을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.A food composition according to another embodiment of the present invention relates to a pharmaceutical composition comprising the anti-inflammatory composition.

상기 약학 조성물은 상기 추출물들의 유효성분 이외에 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하여 당업계에 공지된 통상의 방법으로 투여 경로에 따라 경구용 제형 또는 비경구용 제형으로 제조될 수 있다. 여기서 "약제학적으로 허용되는" 의미는 유효성분의 활성을 억제하지 않으면서 적용(처방) 대상이 적응 가능한 이상의 독성을 지니지 않는다는 의미이다.The pharmaceutical composition may be prepared as an oral formulation or parenteral formulation according to the route of administration by a conventional method known in the art, including a pharmaceutically acceptable carrier in addition to the active ingredients of the extracts. Here, "pharmaceutically acceptable" means that it does not inhibit the activity of the active ingredient and does not have toxicity more than is adaptable to the subject of application (prescription).

또한 상기 약학 조성물이 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼 등의 제형으로 제조될 수 있다. 이때 약제학적으로 허용되는 적합한 담체의 예로서는 락토스, 글루코스, 슈크로스, 덱스트로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨 등의 당류, 옥수수 전분, 감자 전분, 밀 전분 등의 전분류, 셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스 등의 셀룰로오스류, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 마그네슘 스테아레이트, 광물유, 맥아, 젤라틴, 탈크, 폴리올, 식물성유 등을 들 수 있다. 제제화활 경우 필요에 따라 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 및/또는 부형제를 포함하여 제제화할 수 있다.In addition, when the pharmaceutical composition is prepared as an oral dosage form, powders, granules, tablets, pills, dragees, capsules, solutions, gels, syrups, suspensions, wafers, etc. It can be made into a formulation. Examples of suitable pharmaceutically acceptable carriers include sugars such as lactose, glucose, sucrose, dextrose, sorbitol, mannitol, and xylitol, starches such as corn starch, potato starch, and wheat starch, cellulose, methylcellulose, ethylcellulose, Celluloses such as sodium carboxymethylcellulose and hydroxypropylmethylcellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, magnesium stearate, mineral oil, malt, gelatin, talc, polyol, vegetable oil etc. are mentioned. In the case of formulation, if necessary, diluents and/or excipients such as fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants may be included.

비경구용 제형으로 제조될 경우에는 적합한 담체와 함께 당업계에 공지된 방법에 따라 주사제, 경피 투여제, 비강 흡입제 및 좌제의 형태로 제제화될 수 있다. 주사제로 제제화활 경우 적합한 담체로서는 멸균수, 에탄올, 글리세롤이나 프로필렌 글리콜 등의 폴리올 또는 이들의 혼합물을 들 수 있으며, 바람직하게는 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline)나 주사용 멸균수, 5% 덱스트로스 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 경피 투여제로 제제화할 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태로 제제화될 수 있다. 비강 흡입제의 경우 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 등의 적합한 추진제를 사용하여 에어로졸 스프레이 형태로 제제화될 수 있으며, 좌제로 제제화할 경우 그 기제로는 위텝솔(witepsol), 트윈(tween) 61, 폴리에틸렌글리콜류, 카카오지, 라우린지, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르류, 폴리옥시에틸렌 스테아레이트류, 소르비탄 지방산 에스테르류 등이 사용될 수 있다.When prepared as a parenteral formulation, it may be formulated in the form of an injection, transdermal administration, nasal inhalation, and suppository along with a suitable carrier according to a method known in the art. In the case of formulation as an injection, suitable carriers include sterile water, ethanol, polyols such as glycerol or propylene glycol, or mixtures thereof, preferably Ringer's solution, PBS (phosphate buffered saline) containing triethanolamine or sterilization for injection water, isotonic solutions such as 5% dextrose, and the like can be used. When formulated as a transdermal formulation, it may be formulated in the form of ointments, creams, lotions, gels, external solutions, pastas, liniments, air rolls, and the like. In the case of nasal inhalation, it can be formulated in the form of an aerosol spray using a suitable propellant such as dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide, etc., and when formulated into suppositories, the base is Witepsol ( witepsol), tween 61, polyethylene glycols, cacao fat, laurin fat, polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters, polyoxyethylene stearates, sorbitan fatty acid esters, and the like may be used.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement the present invention. However, the present invention may be embodied in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.

[실시예 1: 모자반 추출물들의 항염증 효과 확인][Example 1: Confirmation of Anti-Inflammatory Effects of Mojaban Extracts]

모자반 추출물들의 제조Preparation of Mojaban Extracts

알쏭이모자반(SC), 짝잎모자반(SH), 꽈배기모자반(SS), 미아베모자반(SMY) 및 쌍발이모자반(SP)은 2021년 8월경 한국 제주도 연안에서 채집하였고, 염분과 기타 불순물을 제거하고 동결건조한 후 분쇄하였다. 이를 메탄올과 1:9의 비율로 3시간씩 3번 추출한 뒤 추출액을 회전식 진공 농축기를 이용하여 농축한 후 실험에 사용하였다.Strawberry cap (SC), double-leaved cap (SH), twisted cap (SS), Miabe cap (SMY), and double-headed cap (SP) were collected from the coast of Jeju Island, Korea around August 2021, and salt and other impurities were removed. It was lyophilized and pulverized. After extracting this with methanol three times for 3 hours at a ratio of 1:9, the extract was concentrated using a rotary vacuum concentrator and used in the experiment.

1. 실험예 1: 세포 독성 평가1. Experimental Example 1: Evaluation of cytotoxicity

세포 배양cell culture

ATCC에서 분양받은 Raw 264.7 대식세포는 10% FBS, 1% antibiotics를 첨가한 DMEM 배지를 사용하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다.Raw 264.7 macrophages distributed from ATCC were cultured in a 37°C, 5% CO 2 incubator using DMEM medium supplemented with 10% FBS and 1% antibiotics.

대식세포에 대한 세포 독성 평가Evaluation of cytotoxicity to macrophages

배양한 Raw 264.7 대식세포를 96 well plate에 각 well 당 1x105 cell 로 분주하여 24시간 동안 전배양하였다. 세포가 well plate에 충분히 부착된 것을 확인한 후, 무혈청배지를 이용하여 각 모자반 추출물을 0.1, 1, 10, 50, 100㎍/ml로 농도별로 첨가하고 24시간 동안 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 그 후 MTT 시약을 100㎕ 첨가하고 4시간 37℃ 배양기에서 배양한 후 용액을 제거하고 DMSO 100㎕를 분주하여 30분 37℃에서 배양한 뒤 ELISA를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 계산식에 따라 계산하였다.The cultured Raw 264.7 macrophages were divided into 1x10 5 cells per well in a 96 well plate and pre-cultured for 24 hours. After confirming that the cells were sufficiently adhered to the well plate, each concentration of 0.1, 1, 10, 50, and 100 μg/ml of each capsular extract was added using a serum-free medium, followed by incubation at 37°C and 5% CO 2 for 24 hours. cultured in. Then, 100 μl of MTT reagent was added, incubated in an incubator at 37°C for 4 hours, the solution was removed, 100 μl of DMSO was dispensed, and incubation was performed at 37°C for 30 minutes. Then, the absorbance was measured at 540 nm using ELISA and calculated according to the formula did

실험 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1은 본 발명의 모자반 추출물들이 실험한 모든 농도에서 특별히 세포독성을 나타내지 않음을 보여준다.The experimental results are shown in FIG. 1 . Figure 1 shows that the capsular extracts of the present invention did not exhibit any particular cytotoxicity at all tested concentrations.

2. 실험예 2: NO(Nitric Oxide) 분비량 측정2. Experimental Example 2: NO (Nitric Oxide) secretion measurement

상기 실험예 1에서와 동일하게 배양한 Raw 264.7 대식세포를 96 well plate에 각 well 당 1x105 cell 로 분주하여 24시간 동안 전배양하였다. 세포가 well plate에 충분히 부착된 것을 확인한 후, 무혈청배지를 이용하여 62.5 ㎍/ml의 농도의 각 모자반 추출물을 처리하였다. 1시간 뒤에 LPS(lipopolysaccharide, 1 ㎍/mL)를 처리하여 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 상층액을 수집하여 마이크로플레이트에 넣고 동량의 griess 시약(1% sulfanilamide + 0.1% naphthylendiamine dihydrochloride, 1:1)을 첨가하여 실온에서 10분간 반응시킨 후, microplate reader를 이용하여 540nm에서 흡광도를 측정하여 NO 생성량을 측정하였다.Raw 264.7 macrophages cultured in the same manner as in Experimental Example 1 were divided into 1x10 5 cells per well in a 96 well plate and pre-cultured for 24 hours. After confirming that the cells were sufficiently attached to the well plate, each capsular extract at a concentration of 62.5 μg/ml was treated using a serum-free medium. After 1 hour, LPS (lipopolysaccharide, 1 μg/mL) was treated and incubated for 24 hours at 37° C., 5% CO 2 incubator. Collect the supernatant, put it in a microplate, add the same amount of griss reagent (1% sulfanilamide + 0.1% naphthylendiamine dihydrochloride, 1:1), react at room temperature for 10 minutes, measure the absorbance at 540 nm using a microplate reader, and The production amount was measured.

상기 실험 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 따르면, 본 발명의 5종 모자반 추출물 모두 시료 무처리군에 비해 유의적으로 NO 생성을 억제하였다.The experimental results are shown in FIG. 2 . According to FIG. 2, all 5 types of capsular extracts of the present invention significantly inhibited NO production compared to the untreated sample.

3. 실험예 3: 염증성 사이토카인(Cytokine) 분비량 측정 3. Experimental Example 3: Measurement of inflammatory cytokine secretion

상기 실험예 1에서와 동일하게 배양한 Raw 264.7 대식세포를 96 well plate에 각 well 당 1x105 cell 로 분주하여 24시간 동안 전배양하였다. 세포가 well plate에 충분히 부착된 것을 확인한 후, 무혈청배지를 이용하여 62.5 ㎍/ml의 농도의 각 모자반 추출물을 처리하였다. 1시간 뒤에 LPS(lipopolysaccharide, 1 ㎍/mL)를 처리하여 24시간 동안 37℃, 5% CO2 incubator에서 배양하였다. 상층액을 수집하여 마이크로플레이트에 넣고 ELISA kit를 이용하여 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 함량을 측정하였다.Raw 264.7 macrophages cultured in the same manner as in Experimental Example 1 were divided into 1x10 5 cells per well in a 96 well plate and pre-cultured for 24 hours. After confirming that the cells were sufficiently attached to the well plate, each capsular extract at a concentration of 62.5 μg/ml was treated using a serum-free medium. After 1 hour, LPS (lipopolysaccharide, 1 μg/mL) was treated and incubated for 24 hours at 37° C., 5% CO 2 incubator. The supernatant was collected and placed in a microplate, and the contents of IL-6, TNF-α and IL-1β were measured using an ELISA kit.

상기 실험 결과를 도 3에 나타내었으며, 이에 따르면 본 발명의 5종 모자반 추출물 모두 LPS에 의해 증가된 IL-6, TNF-α 및 IL-1β의 분비량을 농도의존적으로 효과적으로 감소시킴을 확인하였다.The above experimental results are shown in FIG. 3, and according to this, it was confirmed that all 5 capsular extracts of the present invention effectively reduced the LPS-induced secretion of IL-6, TNF-α, and IL-1β in a concentration-dependent manner.

[실시예 2: 복합 추출물의 항염증 효과 확인][Example 2: Confirmation of anti-inflammatory effect of complex extract]

상기 실시예 1에서 본 발명에서의 알쏭이모자반 추출물, 짝잎모자반 추출물, 꽈배기모자반 추출물, 미아베모자반 추출물 및 쌍발이모자반 추출물의 항염증 활성 실험 결과를 확인하였다. 이에 상기 5종의 모자반 추출물을 모두 포함하는 복합 추출물에 대한 항염증 활성 실험 결과와, 잔잎바디(PH) 추출물, 불레기말(CS) 추출물 및 고리매(SL) 추출물까지 추가로 포함하는 복합 추출물에 대한 항염증 활성 실험 또한 진행하였다. 구체적인 조성은 하기 표 1에 중량부로 나타내었다.In Example 1, the anti-inflammatory activity test results of the present invention were confirmed by the anti-inflammatory activity of the present invention. Accordingly, the anti-inflammatory activity test results for the composite extract containing all of the five types of capsular extracts, and the composite extract further including the fine leaf body (PH) extract, the bullegi end (CS) extract, and the ringworm (SL) extract An anti-inflammatory activity test was also conducted. Specific composition is shown in parts by weight in Table 1 below.

단일 추출물single extract 복합 추출물 1Complex Extract 1 복합 추출물 2Complex Extract 2 복합 추출물 3Complex Extract 3 복합 추출물 4Complex Extract 4 복합 추출물 5Complex Extract 5 SCSC 100100 2020 2020 2020 1515 1010 SHSH -- 2020 2020 2020 1010 1010 SSSS -- 2020 2020 1010 1010 1010 SMYSMY -- 2020 1515 1010 1010 55 SPSP -- 2020 1010 1010 1010 55 PHPH -- -- 55 1010 1515 2020 CSCS -- -- 55 1010 1515 2020 SLSL -- -- 55 1010 1515 2020

(단위: 중량부)상대적인 평가를 위해 SC 단일 추출물을 처리한 경우의 항염증 실험 결과를 지수 5로 놓고, 다른 복합 추출물에 대한 항염증 효과 정도를 지수로 기재하였다. 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.(Unit: parts by weight) For relative evaluation, the anti-inflammatory test result in the case of treatment with a single SC extract was set as index 5, and the degree of anti-inflammatory effect for other composite extracts was described as an index. The results are shown in Table 2 below.

단일 추출물single extract 복합 추출물 1Complex Extract 1 복합 추출물 2Complex Extract 2 복합 추출물 3Complex Extract 3 복합 추출물 4Complex Extract 4 복합 추출물 5Complex Extract 5 NO 생성 억제Inhibition of NO production 55 55 77 88 88 4
4
염증성 사이토카인 생성 억제Inhibition of inflammatory cytokine production 55 66 88 77 77 55

상기 표 2에 나타낸 바와 같이, 항염증 효과를 확인하기 위한 NO 생성 억제 및 염증성 사이토카인의 생성 억제에 대해 단일 추출물과 상대적인 비교 결과, 복합 추출물 1 내지 4에 의하는 경우 항염증 효과가 상승하는 것으로 나타났으며, 특히 복합 추출물 2 내지 4에 의하는 경우 뛰어난 항염증 효과를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.As shown in Table 2 above, as a result of relative comparison with a single extract for inhibition of NO production and inhibition of inflammatory cytokine production to confirm the anti-inflammatory effect, the anti-inflammatory effect is increased in the case of complex extracts 1 to 4 In particular, it was confirmed that the composite extracts 2 to 4 exhibited an excellent anti-inflammatory effect.

Claims (7)

알쏭이모자반(Sargassum confusum) 추출물, 짝잎모자반(Sargassum hemiphyllum) 추출물, 꽈배기모자반(Sargassum siliquastrum) 추출물, 미아베모자반(Sargassum miyabei Yendo) 추출물 및 쌍발이모자반(Sargassum patens) 추출물로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 모자반 추출물을 포함하는 항염증용 조성물.1 selected from the group consisting of Sargassum confusum extract, Sargassum hemiphyllum extract, Sargassum siliquastrum extract, Sargassum miyabei Yendo extract, and Sargassum patens extract An anti-inflammatory composition comprising an extract of at least one species of moss. 제1항에 있어서,
잔잎바디(Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.) 추출물, 불레기말(Colpomenia sinuosa) 추출물 및 고리매(Scytosiphon lomentaria) 추출물을 추가로 포함하는,
항염증용 조성물.
According to claim 1,
Small leaf body (Angelica czernaevia (Fisch. et Meyer) Kitagawa.) extract, Colpomenia sinuosa extract and ring plum (Scytosiphon lomentaria) extract further comprising,
Anti-inflammatory composition.
제1항에 있어서,
상기 조성물은 염증을 매개하는 물질인 염증성 사이토카인(Cytokine), 산화질소(NO), iNOS 및 COX-2의 발현을 억제하는 것인,
항염증용 조성물.
According to claim 1,
The composition inhibits the expression of inflammatory cytokines (Cytokine), nitric oxide (NO), iNOS and COX-2, which are substances mediating inflammation,
Anti-inflammatory composition.
제1항에 있어서,
상기 추출물은 물, 탄소수 1 내지 6의 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 추출 용매를 이용하여 추출한 것인,
항염증용 조성물.
According to claim 1,
The extract is extracted using an extraction solvent selected from the group consisting of water, alcohol having 1 to 6 carbon atoms, and mixtures thereof,
Anti-inflammatory composition.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
식품 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 4
food composition.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
화장료 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 4
cosmetic composition.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 따른 조성물을 포함하는
약학 조성물.
Comprising the composition according to any one of claims 1 to 4
pharmaceutical composition.
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