KR20230110544A - 혈장 칼리크레인 억제제 - Google Patents

혈장 칼리크레인 억제제 Download PDF

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조반 알렉산더 로페즈
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마오쿤 티안
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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 화합물
Figure pct00085

및 하나 이상의 상기 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 유전성 혈관부종, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄를 비롯한 혈장 칼리크레인의 억제로부터 이익을 얻을 수 있는 하나 이상의 질환 상태를 치료 또는 예방하기 위한 상기 화합물의 사용 방법을 제공한다. 화합물은 혈장 칼리크레인의 선택적 억제제이다.

Description

혈장 칼리크레인 억제제
혈장 칼리크레인은 트립신-유사 세린 프로테아제의 지모겐이고, 혈장에 존재한다. 유전자 구조는 인자 XI의 것과 유사하다. 전체적으로, 혈장 칼리크레인의 아미노산 서열은 인자 XI과 58% 상동성을 갖는다. 내부 I 389-R390 결합에서의 인자 XIIa에 의한 단백질분해 활성화는 중쇄 (371개 아미노산) 및 경쇄 (248개 아미노산)를 산출한다. 혈장 칼리크레인의 활성 부위는 경쇄에 함유되어 있다. 혈장 칼리크레인의 경쇄는 알파 2 마크로글로불린 및 C1-억제제를 포함한 프로테아제 억제제와 반응한다. 흥미롭게도, 헤파린은 고분자량 키니노겐 (HMWK)의 존재 하에 항트롬빈 III에 의한 혈장 칼리크레인의 억제를 유의하게 가속화한다. 혈액에서, 혈장 칼리크레인의 대부분은 HMWK와 복합체를 형성하여 순환한다. 혈장 칼리크레인은 HMWK를 절단하여 브라디키닌을 유리시킨다. 브라디키닌 방출은 혈관 투과성 및 혈관확장의 증가를 유발한다 (검토를 위해, 문헌 [Coleman, R., "Contact Activation Pathway", Hemostasis and Thrombosis, pp. 103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier A.H., "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, pp. 105-128 (1998)]참조).
C1-에스테라제 억제제에 대한 유전적 결핍을 나타내는 환자는 손, 발, 얼굴, 인후, 생식기 및 위장관을 포함한 신체 전반에 걸친 간헐적 종창을 일으키는 평생 질환인 유전성 혈관부종 (HAE)을 앓는다. 급성 삽화로부터 발생한 수포의 분석은 높은 수준의 혈장 칼리크레인을 함유하는 것으로 제시된 바 있고, 단백질-기반 가역적 혈장 칼리크레인 억제제인 에칼란티드 (칼비터(Kalbitor))로의 치료는 HAE의 급성 발작의 치료를 위해 FDA에 의해 승인되었다 (Schneider, L, et al., J.Allergy Clin.Immunol., 120: p.416 (2007)).
추가적으로, 혈장 칼리크레인-키닌 시스템은 진행성 당뇨병성 황반 부종 (DME)으로 진단된 환자에서 비정상적으로 풍부하다. 최근 간행물은 혈장 칼리크레인이 당뇨병성 설치류 모델에서 관찰된 망막 혈관 누출 및 기능장애에 원인이 되며 (A. Clermont, et al., Diabetes, 60:1590 (2011)), 소분자 혈장 칼리크레인 억제제를 사용한 치료가 관찰된 망막 혈관 투과성 및 망막 혈류와 관련된 다른 이상을 개선시킨다는 것을 보여준 바 있다.
유전성 혈관부종, 당뇨병성 황반 부종 및 당뇨병성 망막병증을 비롯한 광범위한 장애를 치료하는데 유용성을 갖는 혈장 칼리크레인 억제제를 개발하는 것이 관련 기술분야에서 바람직할 것이다.
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물:
Figure pct00001
및 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다. 화학식 I의 화합물은 혈장 칼리크레인의 억제제이고, 따라서 유전성 혈관부종, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄를 비롯한 혈장 칼리크레인의 억제로부터 이익을 얻을 수 있는 하나 이상의 질환 상태의 치료, 억제 또는 개선에 유용할 수 있다. 본 발명의 화합물은 추가로 유전성 혈관부종, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄의 치료에 유용한 다른 약물을 포함하나 이에 제한되지는 않는 다른 치료상 유효한 작용제와 조합되어 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 화학식 I의 화합물의 제조 방법, 및 화학식 I의 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 관한 것이다:
Figure pct00002
여기서 X는 N 또는 CH이고;
R1은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R2는 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R3은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 할로, 시아노 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
R4는 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서 상기 알킬 기는 할로, 시아노 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
R5는 NR9R10 또는 ORx이고;
각각의 R6은 독립적으로 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되고;
각각의 R7은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되거나;
또는 R6 및 R7은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-6원 시클로알킬 기를 형성할 수 있고, 이는 1 또는 2개의 할로로 임의로 치환되고;
R8은 수소; 할로; 히드록시; Rx; ORx; 페닐; 인단; ORy; 모노시클릭 또는 비시클릭일 수 있는 헤테로아릴; 헤테로시클릴; 및 모노시클릭 또는 비시클릭일 수 있는 C3-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서 상기 페닐 및 헤테로아릴 기는 옥소, 할로, Rx, ORx, NR9R10, NR9(C=O)Rx, NR9(C=O)ORx, (C=O)ORx, (C=O)NR9, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 상기 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 옥소, 할로, Rx 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고;
R9는 수소 또는 C1-3 알킬이고;
R10은 수소 또는 C1-3 알킬이고;
Rx는 수소 또는 C1-6 알킬이고, 이는 할로 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고,
Ry는 페닐, 헤테로시클릴 또는 C3-6시클로알킬이고, 여기서 상기 페닐기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되고, 상기 헤테로시클릴기는 1 또는 2개의 옥소로 임의로 치환되고, 상기 시클로알킬기는 C1-6알킬로 임의로 치환되고;
n은 0 내지 2의 정수이다.
본 발명의 한 실시양태에서, X는 CH이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, X는 N이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R1은 할로이다. 실시양태의 부류에서, R1은 클로로이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R2는 할로이다. 본 발명의 부류에서, R2는 플루오로이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R3은 수소이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, R3은 메틸이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R4는 수소이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, R3은 메틸이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R5는 NH2이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, R5는 OH이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R6은 수소이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R7은 수소이다.
본 발명의 한 실시양태에서, R8은 페닐이고; 여기서 상기 페닐은 할로, Rx, ORx, NR9R10, NR9(C=O)Rx, NR9(C=O)ORx, (C=O)NR9, (C=O)ORx, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환된다. 실시양태의 부류에서, R8은 페닐이고; 여기서 상기 페닐은 할로, Rx, ORx, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환된다.
본 발명의 한 실시양태에서, n은 0이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, n은 1이다. 본 발명의 또 다른 실시양태에서, n은 2이다.
상기 제시된 바람직한 부류 및 하위부류에 대한 언급은 달리 언급되지 않는 한 특정하고 바람직한 기의 모든 조합을 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 구체적 실시양태는 본원에서 실시예 1 내지 133로서 확인된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
상기 기재된 바와 같은 화학식 I의 화합물 및 제약상 허용되는 담체로 구성된 제약 조성물이 또한 본 발명의 범주 내에 포함된다. 본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체 및 본원에서 구체적으로 개시된 임의의 화합물으로 구성된 제약 조성물을 포괄하는 것으로 고려된다. 본 발명의 이들 및 다른 측면은 본원에 함유된 교시로부터 명백할 것이다.
본 발명은 혈장 칼리크레인 활성이 연루된 질환 또는 상태를 치료하기 위한 조성물을 포함한다. 따라서, 본 발명은 제약상 허용되는 담체 중에 본 발명의 화합물을 포함하는, 포유동물에서 손상된 시각 활성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 망막 정맥 폐쇄, 유전성 혈관부종, 당뇨병, 췌장염, 뇌출혈, 신병증, 심근병증, 신경병증, 염증성 장 질환, 관절염, 염증, 패혈성 쇼크, 저혈압, 암, 성인 호흡 곤란 증후군, 파종성 혈관내 응고, 심폐 우회로 수술 동안의 혈액 응고, 및 수술후 수술로부터의 출혈을 치료하기 위한 조성물을 포함한다. 본 발명의 한 부류는 유전성 혈관부종, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄를 치료하기 위한 조성물을 포함한다. 이들 조성물은 임의로 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제를 포함할 수 있다. 조성물은 바람직한 억제를 실시하기 위해 혈액, 혈액 제품, 또는 포유동물 기관에 첨가될 수 있다.
본 발명은 또한 제약상 허용되는 담체 중에 본 발명의 화합물을 포함하는, 포유동물에서 당뇨병성 망막병증 및 당뇨병성 황반 부종과 연관된 망막 혈관 투과성을 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 포함한다. 이들 조성물은 임의로 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 포도막염, 후방 포도막염, 황반 부종, 급성 황반 변성, 습성 연령 관련 황반 부종, 망막 박리, 망막 정맥 폐쇄, 안구 종양, 진균 감염, 바이러스 감염, 다초점성 맥락막염, 당뇨병성 포도막염, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증, 증식성 유리체망막병증, 교감성 안염, 보그트 코야나기-하라다(Vogt Koyanagi-Harada) 증후군, 히스토플라스마증 및 포도막 확산을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 눈의 염증성 상태를 치료하기 위한 조성물을 포함한다. 이들 조성물은 임의로 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제를 포함할 수 있다.
본 발명은 또한 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 후방 안질환을 치료하는 조성물을 포함한다. 이들 조성물은 임의로 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제를 포함할 수 있다.
본 발명은 본원에 기재된 구조 화학식 I의 화합물, 뿐만 아니라 구조 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염, 및 또한 제약상 허용되지 않는 염 (유리 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염에 대한 전구체로서 또는 다른 합성 조작에서 사용되는 경우)에 관한 것으로 이해될 것이다.
본 발명의 화합물은 제약상 허용되는 염의 형태로 투여될 수 있다. 용어 "제약상 허용되는 염"은 무기 또는 유기 염기 및 무기 또는 유기 산을 비롯한 제약상 허용되는 비독성 염기 또는 산으로부터 제조된 염을 지칭한다. 용어 "제약상 허용되는 염" 내에 포괄되는 염기성 화합물의 염은, 일반적으로 유리 염기를 적합한 유기 또는 무기 산과 반응시킴으로써 제조되는 본 발명의 화합물의 비독성 염을 지칭한다. 본 발명의 염기성 화합물의 대표적인 염은 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 아세테이트, 아스코르베이트, 아디페이트, 알기네이트, 아스피레이트, 벤젠술포네이트, 벤조에이트, 비카르보네이트, 비술페이트, 비타르트레이트, 보레이트, 브로마이드, 부티레이트, 캄포레이트, 캄포르술포네이트, 캄실레이트, 카르보네이트, 클로라이드, 클라불라네이트, 시트레이트, 시클로펜탄 프로피오네이트, 디에틸아세트산, 디글루코네이트, 디히드로클로라이드, 도데실술파네이트, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 에탄술포네이트, 포름산, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코헵타노에이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리세로포스페이트, 글리콜릴아르사닐레이트, 헤미술페이트, 헵타노에이트, 헥사노에이트, 헥실레조르시네이트, 히드라바민, 히드로브로마이드, 히드로클로라이드, 2-히드록시에탄술포네이트, 히드록시나프토에이트, 아이오다이드, 이소니코틴산, 이소티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우레이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 메틸술페이트, 메탄술포네이트, 뮤케이트, 2-나프탈렌술포네이트, 나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, N-메틸글루카민 암모늄 염, 올레에이트, 옥살레이트, 파모에이트 (엠보네이트), 팔미테이트, 판토테네이트, 펙티네이트, 퍼술페이트, 포스페이트/디포스페이트, 피멜산, 페닐프로피온산, 폴리갈락투로네이트, 프로피오네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 술페이트, 서브아세테이트, 숙시네이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 티오시아네이트, 토실레이트, 트리에티오다이드, 트리플루오로아세테이트, 운데코네이트, 발레레이트 등. 또한, 본 발명의 화합물이 산성 모이어티를 보유하는 경우에, 그의 적합한 제약상 허용되는 염은 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 제2철, 제1철, 리튬, 마그네슘, 제2망가니즈, 제1망가니즈, 칼륨, 나트륨, 아연 등을 비롯한 무기 염기로부터 유도된 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 제약상 허용되는 유기 비-독성 염기로부터 유도된 염은 1급, 2급, 및 3급 아민, 시클릭 아민, 디시클로헥실 아민 및 염기성 이온-교환 수지, 예컨대 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드라바민, 이소프로필아민, 리신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등의 염을 포함한다. 또한, 염기성 질소-함유 기는 저급 알킬 할라이드, 예컨대 메틸, 에틸, 프로필 및 부틸 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드; 디알킬 술페이트 예컨대 디메틸, 디에틸, 디부틸; 및 디아밀 술페이트, 장쇄 할라이드 예컨대 데실, 라우릴, 미리스틸 및 스테아릴 클로라이드, 브로마이드 및 아이오다이드, 벤질 및 페네틸 브로마이드와 같은 아르알킬 할라이드 등과 같은 작용제로 4급화될 수 있다.
이들 염은 공지된 방법에 의해, 예를 들어, 등가량의 본 발명의 화합물 및 목적 산, 염기 등을 함유하는 용액을 혼합한 다음, 염을 여과하거나 용매를 증류하여 목적 염을 수집함으로써 수득될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 그의 염은 용매 예컨대 물, 에탄올, 또는 글리세롤과 용매화물을 형성할 수 있다. 본 발명의 화합물은 측쇄의 치환기의 유형에 따라 동시에 산 부가염 및 염기와의 염을 형성할 수 있다.
화학식 I의 화합물이 분자 내에 산성 및 염기성 기를 동시에 함유하는 경우에, 본 발명은 또한 언급된 염 형태 이외에도 내부 염 또는 베타인 (쯔비터이온)을 포함한다.
본 발명은 화학식 I의 화합물의 모든 입체이성질체 형태를 포괄한다. 구체적 입체화학이 지시되지 않는 한, 본 발명은 이들 화합물의 모든 이러한 이성질체 형태를 포함하는 것으로 의도된다. 화학식 I의 화합물에 존재하는 비대칭의 중심은 모두 서로 독립적으로 (R) 배위 또는 (S) 배위를 가질 수 있다. 키랄 탄소에 대한 결합이 본 발명의 구조 화학식에서 직선으로 도시된 경우에, 키랄 탄소의 (R) 및 (S) 배위 둘 다, 및 따라서 각각의 개별 거울상이성질체 및 그의 혼합물 둘 다가 화학식 내에 포괄되는 것으로 이해된다. 특정한 배위가 도시된 경우에, 거울상이성질체 (그 중심에 있는 (R) 또는 (S))가 의도된다. 유사하게, 화합물 명칭이 키랄 탄소에 대한 키랄 지정 없이 언급되는 경우에, 키랄 탄소의 (R) 및 (S) 배위 둘 다, 및 이에 따른 개별 거울상이성질체 및 그의 혼합물이 명칭에 포괄되는 것으로 이해된다. 특정 입체이성질체 또는 그의 혼합물의 생성은 이러한 입체이성질체 또는 혼합물이 수득되는 실시예에서 확인될 수 있지만, 이는 결코 본 발명의 범위 내에 모든 입체이성질체 및 그의 혼합물이 포함되는 것을 제한하지는 않는다.
구체적 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가 지시되지 않는 한, 본 발명은 모든 가능한 거울상이성질체 및 부분입체이성질체 및 2종 이상의 입체이성질체의 혼합물, 예를 들어 모든 비의 거울상이성질체 및/또는 부분입체이성질체의 혼합물을 포함한다. 따라서, 거울상이성질체는, 좌선성 및 우선성 대장체 둘 다로서의 거울상이성질체적으로 순수한 형태, 라세미체 형태, 및 2종의 거울상이성질체의 모든 비율의 혼합물 형태인 본 발명의 대상이다. 시스/트랜스 이성질현상의 경우에, 본 발명은 시스 형태 및 트랜스 형태 둘 다 뿐만 아니라 이들 형태의 모든 비의 혼합물을 포함한다. 개별 입체이성질체의 제조는, 목적하는 경우에 통상의 방법, 예를 들어 크로마토그래피 또는 결정화에 의한 혼합물의 분리, 합성을 위한 입체화학적으로 균일한 출발 물질의 사용, 또는 입체선택적 합성에 의해 수행될 수 있다. 임의로, 유도체화는 입체이성질체의 분리 전에 수행될 수 있다. 입체이성질체의 혼합물의 분리는 화학식 I의 화합물의 합성 중 중간 단계에서 수행될 수 있거나, 또는 최종 라세미 생성물에 대해 수행될 수 있다. 절대 입체화학은, 필요한 경우에 공지된 배위의 입체생성 중심을 함유하는 시약을 사용하여 유도체화된 결정질 생성물 또는 결정질 중간체의 X선 결정학에 의해 결정될 수 있다. 본 발명의 화합물이 호변이성질체화 가능한 경우에, 모든 개별 호변이성질체 뿐만 아니라 그의 혼합물은 본 발명의 범주 내에 포함된다. 본 발명은 모든 이러한 이성질체, 뿐만 아니라 염, 용매화물 (수화물 포함) 및 이러한 라세미체, 거울상이성질체, 부분입체이성질체 및 호변이성질체의 용매화된 염 및 그의 혼합물을 포함한다.
본 발명의 화합물에서, 원자는 그의 천연 동위원소 존재비를 나타낼 수 있거나, 또는 원자 중 1종 이상은 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 우세하게 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 특정한 동위원소로 인위적으로 농축될 수 있다. 본 발명은 구체적으로 및 일반적으로 기재된 화합물의 모든 적합한 동위원소 변형을 포함하는 것으로 의도된다. 예를 들어, 수소 (H)의 상이한 동위원소 형태는 경수소 (1H) 및 중수소 (2H)를 포함한다. 경수소는 자연에서 발견되는 주요한 수소 동위원소이다. 중수소에 대한 농축은 특정 치료 이점, 예컨대 생체내 반감기 증가 또는 투여량 요건 감소를 제공할 수 있거나, 또는 생물학적 샘플의 특징화를 위한 표준으로서 유용한 화합물을 제공할 수 있다. 동위원소-농축된 화합물은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 적절한 동위원소-농축된 시약 및/또는 중간체를 사용하여 본원에서 일반적인 방법 반응식 및 실시예에 기재된 것과 유사한 방법에 의해 과도한 실험 없이 제조할 수 있다.
임의의 가변기 (예를 들어 Rx 등)가 임의의 구성성분에서 1회 초과로 발생하는 경우에, 각 경우에 대한 그의 정의는 모든 다른 경우에 독립적이다. 또한, 치환기 및 가변기의 조합은 단지 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성하는 경우에만 허용가능하다. 치환기로부터 고리계 내부로 그어진 선은 나타낸 결합이 치환가능한 고리 원자 중 임의의 것에 부착될 수 있다는 것을 나타낸다. 고리계가 비시클릭인 경우, 결합은 비시클릭 모이어티의 어느 하나의 고리 상의 적합한 원자 중 임의의 것에 부착될 수 있는 것으로 의도된다.
하나 이상의 규소 (Si) 원자는 통상의 기술자에 의해 하나 이상의 탄소 원자를 대체하여 본 발명의 화합물 내로 혼입되어, 화학적으로 안정하고, 용이하게 이용가능한 출발 물질로부터 관련 기술분야에 공지된 기술에 의해 용이하게 합성될 수 있는 화합물을 제공할 수 있는 것으로 이해된다. 탄소 및 규소는 유사한 C-원소 및 Si-원소 결합을 비교할 경우에 그들의 공유결합 반경이 상이하여 결합 거리 및 입체 배열의 차이를 유도한다. 이들 차이는 탄소와 비교할 경우 규소-함유 화합물의 크기 및 모양의 미묘한 변화를 유도한다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 크기 및 형상의 차이가 효력, 용해도, 오프-타겟 활성의 결여, 패키징 특성 등에서의 미묘한 또는 극적인 변화를 유도할 수 있음을 이해할 것이다. (Diass, J. O. et al. Organometallics (2006) 5:1188-1198; Showell, G.A. et al. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2006) 16:2555-2558).
본 발명의 화합물에 대한 치환기 및 치환 패턴은, 화학적으로 안정하고, 용이하게 이용가능한 출발 물질로부터 관련 기술분야에 공지된 기술 뿐만 아니라 하기 제시된 방법에 의해 용이하게 합성될 수 있는 화합물을 제공하도록 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있는 것으로 이해된다. 치환기가 그 자체로 하나 초과의 기로 치환되는 경우, 안정한 구조가 생성되는 한, 다수의 기가 동일한 탄소 상에 또는 상이한 탄소 상에 존재할 수 있는 것으로 이해된다. 어구 (1개 이상의 치환기로) "임의로 치환된"은 해당 기가 비치환되거나 또는 1개 이상의 치환기로 치환될 수 있음을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
추가로, 본 발명의 화합물은 무정형 형태 및/또는 하나 이상의 결정질 형태로 존재할 수 있으며, 화학식 I의 화합물의 이러한 모든 무정형 및 결정질 형태, 및 그의 혼합물은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 또한, 본 발명의 화합물 중 일부는 물 (즉, 수화물) 또는 통상의 유기 용매와 용매화물을 형성할 수 있다. 본 발명의 화합물의 이러한 용매화물 및 수화물, 특히 제약상 허용되는 용매화물 및 수화물은 마찬가지로 비용매화된 형태 및 무수 형태와 함께 본 발명의 범위 내에 포괄된다.
또한, 본 발명의 화합물에 존재하는 카르복실산 (-COOH) 또는 알콜 기의 경우에, 카르복실산 유도체의 제약상 허용되는 에스테르, 예컨대 알콜의 메틸, 에틸 또는 피발로일옥시메틸, 또는 아실 유도체, 예컨대 O-아세틸, O-피발로일, O-벤조일 및 O-아미노아실이 사용될 수 있다. 서방형 또는 전구약물 제제로서 사용하기 위해 용해도 또는 가수분해 특징을 개질시키는 관련 기술분야에 공지된 에스테르 및 아실 기가 포함된다.
본 발명의 범위 내의 화합물로 생체내 전환되는 본 발명의 화합물의 임의의 제약상 허용되는 전구약물 변형은 또한 본 발명의 범위 내에 있다. 예를 들어 에스테르는 화합물 내의 이용가능한 카르복실산 기의 에스테르화 또는 이용가능한 히드록시 기 상의 에스테르의 형성에 의해 임의로 만들어질 수 있다. 유사하게, 불안정 아미드가 만들어질 수 있다. 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 에스테르 또는 아미드는 특히 생체내에서 산 (또는 전환이 일어나는 유체 또는 조직의 pH에 따라 -COO-) 또는 히드록시 형태로 다시 가수분해될 수 있는 전구약물로서 작용하도록 제조될 수 있으며, 그 자체가 본 발명의 범위 내에 포괄된다. 제약상 허용되는 전구약물 변형의 예는 -C1-6알킬 에스테르, 및 -C1-6알킬 치환된 페닐 에스테르를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
따라서, 본원에 기재되고 청구된 일반적 구조 화학식, 실시양태 및 구체적 화합물 내의 화합물은, 달리 명시되지 않는 한, 그의 염, 모든 가능한 입체이성질체 및 호변이성질체, 물리적 형태 (예를 들어, 무정형 및 결정질 형태), 용매화물 및 수화물 형태, 및 이들 형태의 임의의 조합, 뿐만 아니라 그의 염, 그의 전구약물 형태, 및 그의 전구약물 형태의 염을 포괄한다.
본원에 나타낸 경우를 제외하고, 용어 "알킬" 및 "알킬렌"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소 기를 둘 다 포함하는 것으로 의도된다. 알킬 기에 대해 통상적으로 사용되는 약어가 명세서 전반에 걸쳐 사용되며, 예를 들어 메틸은 "Me" 또는 CH3 또는 말단 기로서 연장된 결합인 기호, 예를 들어 를 포함한 통상적인 약어에 의해 나타내어질 수 있고, 에틸은 "Et" 또는 CH2CH3에 의해 나타내어질 수 있고, 프로필은 "Pr" 또는 CH2CH2CH3에 의해 나타내어질 수 있고, 부틸은 "Bu" 또는 CH2CH2CH2CH3에 의해 나타내어질 수 있는 등이다. 예를 들어, "C1-4 알킬" (또는 "C1-C4 알킬")은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는, 모든 이성질체를 포함한 선형 또는 분지쇄 알킬 기를 의미한다. 예를 들어, 하기 구조:
는 등가의 의미를 갖는다. C1-4 알킬은 n-, 이소-, sec- 및 t-부틸, n- 및 이소프로필, 에틸 및 메틸을 포함한다. 어떠한 숫자도 명시되지 않은 경우에, 1-4개의 탄소 원자가 선형 또는 분지형 알킬 기에 대해 의도된다.
나타낸 경우를 제외하고, 용어 "시클로알킬"은 명시된 수의 탄소 원자를 갖는 모노시클릭 또는 비시클릭 포화 지방족 탄화수소 기를 의미한다. 예를 들어, "시클로알킬"은 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 등을 포함한다.
나타낸 경우를 제외하고, 본원에 사용된 용어 "아릴"은 각각의 고리에서 10개 이하의 탄소 원자의 안정한 모노시클릭 또는 비시클릭 고리계를 나타내며, 여기서 적어도 1개의 고리는 방향족이다. 비시클릭 아릴 고리계는 2개의 고리가 2개의 원자를 공유하는 융합된 고리계, 및 2개의 고리가 1개의 원자를 공유하는 스피로 고리계를 포함한다. 이 정의의 범위 내의 아릴 기는 페닐, 인덴, 이소인덴, 나프탈렌 및 테트랄린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
나타낸 경우를 제외하고, 본원에 사용된 용어 "헤테로아릴"은 각각의 고리에 10개 이하의 원자를 갖는 안정한 모노시클릭 또는 비시클릭 고리계를 나타내며, 여기서 적어도 1개의 고리는 방향족이고, 적어도 1개의 고리는 O, N 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유한다. 비시클릭 헤테로아릴 고리계는 2개의 고리가 2개의 원자를 공유하는 융합된 고리계, 및 2개의 고리가 1개의 원자를 공유하는 스피로 고리계를 포함한다. 이러한 정의의 범주 내의 헤테로아릴 기는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다: 아자인돌릴, 벤조이미다졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤조푸라닐, 벤조푸라자닐, 벤조피라졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤조티오페닐, 벤족사졸릴, 카르바졸릴, 카르볼리닐, 신놀리닐, 디히드로인데닐, 푸라닐, 인돌리닐, 인돌릴, 인돌라지닐, 인다졸릴, 이소벤조푸라닐, 이소인돌릴, 이소퀴놀릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 나프탈레닐, 나프트피리디닐, 옥사디아졸릴, 옥사졸릴, 옥사졸린, 이속사졸린, 피라닐, 피라지닐, 피라졸릴, 피라졸로피리미디닐, 피리다지닐, 피리도피리디닐, 피리딜, 피리미디닐, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀릴, 퀴녹살리닐, 테트라졸릴, 테트라졸로피리딜, 티아디아졸릴, 티아졸릴, 티에닐, 트리아졸릴, 디히드로벤조이미다졸릴, 디히드로벤조푸라닐, 디히드로벤조티오페닐, 디히드로벤족사졸릴, 디히드로인돌릴, 디히드로퀴놀리닐, 디히드로벤조디옥시닐, 디히드로피라졸록사지닐, 디히드로피라졸로티아진디옥시딜, 메틸렌디옥시벤젠, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 옥사졸릴, 테트라-히드로퀴놀린, 술포라닐, 1,3-벤조디옥솔릴, 및 3-옥소-3,4디히드로-2N-벤조[b][1,4]티아진. 헤테로아릴이 질소 원자를 함유하는 경우에, 그의 상응하는 N-옥시드가 또한 상기 정의에 의해 포괄되는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릴"은, 달리 명시되지 않는 한, O, N, S, SO 또는 SO2로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 헤테로원자를 함유하는, 각각의 고리 내 10개 이하의 원자의 안정한 비방향족 모노시클릭 또는 비시클릭 고리계를 의미하는 것으로 의도된다. 비시클릭 헤테로시클릭 고리계는 2개의 고리가 2개의 원자를 공유하는 융합된 고리계, 및 2개의 고리가 1개의 원자를 공유하는 스피로 고리계를 포함한다. 따라서, "헤테로시클릴"은 아자스피로노나닐, 아자스피로옥타닐, 아제티디닐, 디옥사닐, 옥사디아자스피로데세닐, 옥사스피로옥타닐, 옥사졸리디노닐, 피페라지닐, 피페리디닐, 피롤리디닐, 모르폴리닐, 티오모르폴리닐, 테트라히드로푸라닐, 테트라히드로피라닐, 디히드로피페리디닐, 테트라히드로티오페닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 헤테로사이클이 질소를 함유하는 경우에, 그의 상응하는 N-옥시드가 또한 이 정의에 포괄되는 것으로 이해된다.
나타낸 경우를 제외하고, 용어 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오린, 염소, 브로민 또는 아이오딘을 의미한다.
"셀라이트®" (플루카(Fluka)) 디아토마이트는 규조토이고, "셀라이트"로 지칭될 수 있다.
본원에 나타낸 경우를 제외하고, 임의의 하나의 특정한 비시클릭 고리 탄소 원자에 부착되지 않은 것으로 도시된 치환기 가변기, 예컨대 하기 가변기 "R"을 함유하는 구조:
는 가변기가 임의의 비시클릭 고리 탄소 원자에 임의로 부착될 수 있는 구조를 나타낸다. 예를 들어, 상기 구조에 제시된 가변기 R은 6개의 비시클릭 고리 탄소 원자 i, ii, iii, iv, v 또는 vi 중 어느 하나에 부착될 수 있다.
본원에 나타낸 경우를 제외하고, 비시클릭 고리계는 2개의 고리가 2개의 원자를 공유하는 융합된 고리계, 및 2개의 고리가 1개의 원자를 공유하는 스피로 고리계를 포함한다.
본 발명은 또한 적어도 1종의 화학식 I의 화합물 및/또는 화학식 I의 화합물의 제약상 허용되는 염 및/또는 임의로 화학식 I의 화합물의 입체이성질체 형태 또는 화학식 I의 화합물의 입체이성질체 형태의 제약상 허용되는 염을 제약상 적합하고 제약상 허용되는 비히클, 첨가제 및/또는 다른 활성 물질 및 보조제와 함께 함유하는 의약에 관한 것이다.
본원에 사용된 용어 "환자"는 포유동물 예컨대 영장류, 인간, 양, 말, 소, 돼지, 개, 고양이, 래트 및 마우스를 의미하는 것으로 받아들여진다.
본 발명에 따른 의약은 경구, 흡입성, 직장 또는 경피 투여에 의해 또는 피하, 관절내, 복강내 또는 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다. 경구 투여가 바람직하다. 화학식 I의 화합물 및 신체에서 혈액과 접촉하게 되는 다른 표면으로의 스텐트의 코팅이 가능하다.
본 발명은 또한 제약상 적합하고 제약상 허용되는 담체 및 임의로 추가의 적합한 활성 물질, 첨가제 또는 보조제를 사용하여 화학식 I의 하나 이상의 화합물을 적합한 투여 형태로 만드는 것을 포함하는, 의약의 제조 방법에 관한 것이다.
적합한 고체 또는 생약 제제 형태는, 예를 들어, 과립, 분말, 코팅된 정제, 정제, (마이크로)캡슐, 좌제, 시럽, 액, 현탁액, 에멀젼, 점적제 또는 활성 물질의 지속 방출을 갖는 주사액 및 제제이며, 상기 제제에서 통상의 부형제 예컨대 비히클, 붕해제, 결합제, 코팅제, 팽윤제, 활택제 또는 윤활제, 향미제, 감미제 및 가용화제가 사용된다. 언급될 수 있는 빈번하게 사용되는 보조제는 탄산마그네슘, 이산화티타늄, 락토스, 만니톨 및 다른 당, 활석, 락토스, 젤라틴, 전분, 셀룰로스 및 그의 유도체, 동물 및 식물 오일 예컨대 대구 간 오일, 해바라기, 땅콩 또는 참깨 오일, 폴리에틸렌 글리콜 및 용매 예컨대 예를 들어, 멸균수 및 1가 또는 다가 알콜 예컨대 글리세롤이다.
혈장 칼리크레인 억제제를 이용하는 투여 요법은 환자의 유형, 종, 연령, 체중, 성별 및 의학적 상태; 치료될 상태의 중증도; 투여 경로; 환자의 신장 및 간 기능; 및 사용되는 특정한 화합물 또는 그의 염을 포함한 다양한 인자에 따라 선택된다. 통상의 숙련된 의사 또는 수의사는 상태의 진행을 예방, 방지, 또는 저지하는데 요구되는 약물의 유효량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다.
혈장 칼리크레인 억제제의 경구 투여량은, 지시된 효과를 위해 사용되는 경우에, 1일에 체중 kg당 약 0.01 mg (mg/kg/일) 내지 약 30 mg/kg/일, 바람직하게는 0.025-7.5 mg/kg/일, 보다 바람직하게는 0.1-2.5 mg/kg/일, 가장 바람직하게는 0.1-0.5 mg/kg/일의 범위일 것이다 (달리 명시되지 않는 한, 활성 성분의 양은 유리 염기 기준임). 예를 들어, 80 kg 환자는 약 0.8 mg/일 내지 2.4 g/일, 바람직하게는 2-600 mg/일, 보다 바람직하게는 8-200 mg/일, 가장 바람직하게는 8-40 mg/kg/일을 제공받을 것이다. 따라서, 1일 1회 투여를 위한 적합하게 제조된 의약은 0.8 mg 내지 2.4 g, 바람직하게는 2 mg 내지 600 mg, 보다 바람직하게는 8 mg 내지 200 mg, 가장 바람직하게는 8 mg 내지 40 mg, 예를 들어 8 mg, 10 mg, 20 mg 및 40 mg을 함유할 것이다. 유리하게는, 혈장 칼리크레인 억제제는 1일 2, 3 또는 4회의 분할 용량으로 투여될 수 있다. 1일 2회 투여를 위해, 적합하게 제조된 의약은 0.4 mg 내지 4 g, 바람직하게는 1 mg 내지 300 mg, 보다 바람직하게는 4 mg 내지 100 mg, 가장 바람직하게는 4 mg 내지 20 mg, 예를 들어 4 mg, 5 mg, 10 mg 및 20 mg을 함유할 것이다.
정맥내로, 환자는 0.025-7.5 mg/kg/일, 바람직하게는 0.1-2.5 mg/kg/일, 보다 바람직하게는 0.1-0.5 mg/kg/일 사이로 전달하기에 충분한 양으로 활성 성분을 제공받을 것이다. 이러한 양은 다수의 적합한 방식으로, 예를 들어 1일 1회 또는 수회 연장된 기간 동안 다량의 저농도의 활성 성분으로, 단기간 동안 예를 들어 1일 1회 소량의 고농도의 활성 성분으로 투여될 수 있다. 전형적으로, 약 0.01-1.0 mg/mL, 예를 들어 0.1 mg/mL, 0.3 mg/mL, 및 0.6 mg/mL의 활성 성분의 농도를 함유하고, 0.01 mL/kg 환자 체중 내지 10.0 mL/kg 환자 체중, 예를 들어 0.1 mL/kg, 0.2 mL/kg, 0.5 mL/kg의 1일 양으로 투여되는 통상적인 정맥내 제제가 제조될 수 있다. 한 예에서, 0.5 mg/mL의 활성 성분의 농도를 갖는 정맥내 제제를 1일 2회 8 mL 제공받는 80 kg 환자는 1일에 활성 성분 8 mg을 제공받는다. 글루쿠론산, L-락트산, 아세트산, 시트르산 또는 정맥내 투여에 허용가능한 pH 범위에서 합리적 완충 용량을 갖는 임의의 제약상 허용되는 산/짝염기는 완충제로서 사용될 수 있다. 투여될 약물의 용해도에 따라 제제의 적절한 완충제 및 pH의 선택은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 행해진다.
화학식 I의 화합물은 단독요법으로서 및 또한 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다.
"항염증제"는 치료 유효 수준으로 투여되는 경우에 염증의 감소에 직접적으로 또는 간접적으로 효과적인 임의의 작용제이다. "항염증제"는 스테로이드성 항염증제 및 글루코코르티코이드를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 적합한 항염증제는 코르티손, 덱사메타손, 히드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손 및 트리암시놀론을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"항-VEGF 작용제"는 VEGF (혈관 내피 성장 인자)의 활성을 억제하는데 직접적으로 또는 간접적으로 효과적인 임의의 작용제이다. 적합한 항-VEGF 작용제는 베바시주맙, 라니비주맙 및 아플리베르셉트를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"면역억제제"는 신체의 면역계의 강도를 억제 또는 감소시키는데 직접적으로 또는 간접적으로 효과적인 임의의 작용제이다. 적합한 면역억제제는 코르티코스테로이드 (예를 들어, 프레드니손, 부데소니드, 프레드니솔론), 야누스 키나제 억제제 (예를 들어, 토파시티닙), 칼시뉴린 억제제 (예를 들어, 시클로스포린, 타크롤리무스), mTOR 억제제 (예를 들어, 시롤리무스, 에베롤리무스), IMDH 억제제 (예를 들어, 아자티오프린, 레플루노미드, 미코페놀레이트), 생물제제 (예를 들어, 아바타셉트, 아달리무맙, 아나킨라, 세르톨리주맙, 에타네르셉트, 골리무맙, 인플릭시맙, 익세키주맙, 나탈리주맙, 리툭시맙, 세쿠키누맙, 토실리주맙, 우스테키누맙, 베돌리주맙), 및 모노클로날 항체 (예를 들어, 바실릭시맙, 다클리주맙)를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
적합한 항응고제는 인자 XIa 억제제, 트롬빈 억제제, 트롬빈 수용체 길항제, 인자 VIIa 억제제, 인자 Xa 억제제, 인자 IXa 억제제, 인자 XIIa 억제제, 아데노신 디포스페이트 항혈소판제 (예를 들어, P2Y12 길항제), 피브리노겐 수용체 길항제 (예를 들어 불안정형 협심증을 치료 또는 예방하거나 또는 혈관성형술 및 재협착 후 재폐색을 예방하기 위함), 다른 항응고제, 예컨대 아스피린, 및 다양한 혈관 병리상태의 치료에서 상승작용적 효과를 달성하기 위한 혈전용해제, 예컨대 플라스미노겐 활성화제 또는 스트렙토키나제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 이러한 항응고제는, 예를 들어, 아픽사반, 다비가트란, 칸그렐로르, 티카그렐로르, 보라팍사르, 클로피도그렐, 에독사반, 미포메르센, 프라수그렐, 리바록사반 및 세물로파린을 포함한다. 예를 들어, 관상 동맥 질환을 앓고 있는 환자, 및 혈관성형술 시술을 받는 환자는 피브리노겐 수용체 길항제 및 트롬빈 억제제의 공투여로부터 이익을 얻을 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제는, 예를 들어 문헌 [Physicians' Desk Reference]의 판들, 예컨대 70판 (2016) 및 이전 판에 기재된 투여량을 포함하는, 관련 기술분야에 보고된 바와 같은 그의 통상적인 투여량 범위 및 요법으로 사용된다. 다른 실시양태에서, 본원에 기재된 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제는 그의 통상적인 투여량 범위보다 더 낮게 사용된다.
대안적으로 또는 추가적으로, 1종 이상의 추가의 약리학적 활성제는 본 발명의 화합물과 조합되어 투여될 수 있다. 추가의 활성제 (또는 작용제)는 본 발명의 화합물과 상이한, 투여 후 제약 활성 형태로 전환되는 전구약물을 포함한, 신체에서 활성인 제약 활성제 (또는 활성제들)를 의미하는 것으로 의도되고, 또한 이러한 형태가 시판되거나 달리 화학적으로 가능한 경우에 상기 추가의 활성제의 유리-산, 유리-염기 및 제약상 허용되는 염을 포함한다. 일반적으로, 항고혈압제, 추가의 이뇨제, 항아테롬성동맥경화제 예컨대 지질 변형 화합물, 항당뇨병제 및/또는 항비만제를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 임의의 적합한 추가의 활성제 또는 활성제들은 단일 투여 제제 (고정 용량 약물 조합물)에서 본 발명의 화합물과 임의로 조합되어 사용될 수 있거나, 활성제의 동시 또는 순차적 투여 (개별 활성제의 공-투여)를 가능하게 하는 1종 이상의 개별 투여 제제로 환자에게 투여될 수 있다. 사용될 수 있는 추가의 활성제의 예는 안지오텐신 전환 효소 억제제 (예를 들어, 알라세프릴, 베나제프릴, 캅토프릴, 세로나프릴, 실라자프릴, 델라프릴, 에날라프릴, 에날라프릴라트, 포시노프릴, 이미다프릴, 리시노프릴, 모벨티프릴, 페린도프릴, 퀴나프릴, 라미프릴, 스피라프릴, 테모카프릴, 또는 트란돌라프릴); 안지오텐신 II 수용체 길항제 (또한 안지오텐신 수용체 차단제 또는 ARB로 알려짐), (이는 유리-염기, 유리-산, 염 또는 전구-약물 형태로 존재할 수 있음), 예컨대 아질사르탄, 예를 들어, 아질사르탄 메독소밀 칼륨 (에다비(EDARBI)®), 칸데사르탄, 예를 들어, 칸데사르탄 실렉세틸 (아타칸드(ATACAND)®), 에프로사르탄, 예를 들어, 에프로사르탄 메실레이트 (테베탄(TEVETAN)®), 이르베사르탄 (아바프로(AVAPRO)®), 로사르탄, 예를 들어, 로사르탄 칼륨 (코자(COZAAR)®), 올메사르탄, 예를 들어 올메사르탄 메독소밀 (베니카(BENICAR)®), 텔미사르탄 (미카르디스(MICARDIS)®), 발사르탄 (디오반(DIOVAN)®), 및 티아지드-유사 이뇨제 예컨대 히드로클로로티아지드와 조합하여 사용되는 임의의 이들 약물 (예를 들어, 하이자(HYZAAR)®, 디오반 HCT®, 아타칸드(ATACAND HCT® 등); 칼륨 보존성 이뇨제 예컨대 아밀로리드 HCl, 스피로노락톤, 에플레라논, 트리암테렌, (각각 HCTZ와 함께 또는 없이); 중성 엔도펩티다제 억제제 (예를 들어, 티오르판 및 포스포르아미돈); 알도스테론 길항제; 알도스테론 신타제 억제제; 레닌 억제제; 에날크레인; RO 42-5892; A 65317; CP 80794; ES 1005; ES 8891; SQ 34017; 알리스키렌 (2(S),4(S),5(S),7(S)-N-(2-카르바모일-2-메틸프로필)-5-아미노-4-히드록시-2,7-디이소프로필-8-[4-메톡시-3-(3-메톡시프로폭시)-페닐]-옥탄아미드 헤미푸마레이트) SPP600, SPP630 및 SPP635); 엔도텔린 수용체 길항제; 혈관확장제 (예를 들어 니트로프루시드); 칼슘 채널 차단제 (예를 들어, 암로디핀, 니페디핀, 베라파밀, 딜티아젬, 펠로디핀, 갈로파밀, 닐루디핀, 니모디핀, 니카르디핀); 칼륨 채널 활성화제 (예를 들어, 니코란딜, 피나시딜, 크로마칼림, 미녹시딜, 아프릴칼림, 로프라졸람); 교감신경차단제; 베타-아드레날린성 차단 약물 (예를 들어, 아세부톨롤, 아테놀롤, 베탁솔롤, 비소프롤롤, 카르베딜롤, 메토프롤롤, 메토프롤롤 타르테이트, 나돌롤, 프로프라놀롤, 소탈롤, 티몰롤); 알파 아드레날린성 차단 약물 (예를 들어, 독사조신, 프라조신 또는 알파 메틸도파); 중추성 알파 아드레날린성 효능제; 말초 혈관확장제 (예를 들어 히드랄라진); 지질 강하제, 예를 들어, HMG-CoA 리덕타제 억제제 예컨대 심바스타틴 및 로바스타틴 (조코르(ZOCOR)® 및 메바코르(MEVACOR)®, 락톤 전구-약물 형태로 시판됨, 투여후 억제제로서 기능함), 및 디히드록시 개방 고리 산 HMG-CoA 리덕타제 억제제의 제약상 허용되는 염 예컨대 아토르바스타틴 (특히 리피토르(LIPITOR)®로 판매되는 칼슘 염), 로수바스타틴 (특히 크레스토르(CRESTOR)®로 판매되는 칼슘 염), 프라바스타틴 (특히 프라바콜(PRAVACHOL)®로 판매되는 나트륨 염), 및 플루바스타틴 (특히 레스콜(LESCOL)®로 판매되는 나트륨 염); 콜레스테롤 흡수 억제제 예컨대 에제티미브 (제티아(ZETIA)®), 및 에제티미브 (임의의 다른 지질 강하제 예컨대 상기 기재된 HMG-CoA 리덕타제 억제제와의 조합으로, 특히 심바스타틴 (비토린(VYTORIN)®) 또는 아토르바스타틴 칼슘과의 조합으로); 니아신 (즉시-방출 또는 제어 방출 형태로, 특히 DP 길항제 예컨대 라로피프란트 및/또는 HMG-CoA 리덕타제 억제제와 조합된 니아신); 니아신 수용체 효능제 예컨대 아시피목스 및 아시프란, 뿐만 아니라 니아신 수용체 부분 효능제; 대사 변경제 예컨대 인슐린 감작제 및 당뇨병 치료를 위한 관련 화합물, 예컨대 비구아니드 (예를 들어, 메트포르민), 메글리티니드 (예를 들어, 레파글리니드, 나테글리니드), 술포닐우레아 (예를 들어, 클로르프로파미드, 글리메피리드, 글리피지드, 글리부리드, 톨라자미드, 톨부타미드), 티아졸리딘디온, 또한 글리타존으로 지칭됨 (예를 들어, 피오글리타존, 로시글리타존), 알파 글루코시다제 억제제 (예를 들어, 아카르보스, 미글리톨), 디펩티딜 펩티다제 억제제, (예를 들어, 시타글립틴 (자누비아(JANUVIA)®), 알로글립틴, 빌다글립틴, 삭사글립틴, 리나글립틴, 두토글립틴, 게미글립틴), 에르고트 알칼로이드 (예를 들어, 브로모크립틴), 조합 의약 예컨대 자누메트(JANUMET)® (시타글립틴과 메트포르민), 및 주사가능한 당뇨병 의약 예컨대 엑세나티드 및 프람린티드 아세테이트; 글루코스 흡수 억제제, 예컨대 소듐-글루코스 수송체 (SGLT) 억제제 및 그의 다양한 이소형, 예컨대 SGLT-1, SGLT-2 (예를 들어, ASP-1941, TS-071, BI-10773, 토포글리플로진, LX-4211, 카나글리플로진, 다파글리플로진, 에르투글리플로진, 이프라글리플로진, 레모글리플로진 및 소타글리플로진), 및 SGLT-3; 또는 (상기 언급된 질환의 예방 또는 치료에 유익한 다른 약물 예컨대 비제한적으로 디아족시드와 함께); 및 예컨대 화학적으로 가능한 경우 상기 의약제의 유리-산, 유리-염기, 및 제약상 허용되는 염 형태, 전구-약물 형태, 예를 들어, 에스테르, 및 전구-약물의 염을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 언급된 제약 약물의 상표명은 활성제(들)의 시판 형태의 예시를 위해 제공되며; 이러한 제약 약물은 본 발명의 화합물과 함께 공동 또는 순차적 투여를 위한 개별 투여 형태로 사용될 수 있거나, 또는 그 안의 활성제(들)는 본 발명의 화합물을 포함한 고정 용량 약물 조합물로 사용될 수 있다.
다른 적합한 작용제와 조합된 본 발명의 혈장 칼리크레인 억제제의 전형적인 용량은 추가의 작용제의 공투여 없이 투여되는 혈장 칼리크레인 억제제의 용량과 동일할 수 있거나, 또는 환자의 치료 필요에 따라 추가의 작용제의 공투여 없이 투여되는 혈장 칼리크레인 억제제의 용량보다 실질적으로 적을 수 있다.
화합물은 치료 유효량으로 포유동물에게 투여된다. "치료 유효량"은 포유동물에게 단독으로 또는 추가의 치료제와 조합되어 투여되는 경우에 숙주에서 질환 상태를 치료 (즉, 예방, 억제 또는 개선)하거나 질환의 진행을 치료하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 의미한다.
본 발명의 화합물은 바람직하게는 단독으로 치료 유효량으로 포유동물에게 투여된다. 그러나, 본 발명의 화합물은 또한, 하기 정의된 바와 같은, 추가의 치료제와 조합되어 치료 유효량으로 포유동물에게 투여될 수 있다. 조합되어 투여되는 경우에, 화합물의 조합물은, 반드시는 아니지만, 바람직하게는 상승작용적 조합물이다. 예를 들어 문헌 [Chou and Talalay, Adv. Enzyme Regul. 1984, 22, 27-55]에 기재된 바에 의하면, 상승작용은 조합 투여되는 경우의 화합물의 효과 (이 경우에, 목적하는 표적의 억제)가 단일 작용제로서 개별적으로 투여되는 경우의 각각의 화합물의 상가적 효과보다 더 큰 경우에 발생한다. 일반적으로, 상승작용 효과는 화합물의 준최적 농도에서 가장 명백하게 입증된다. 상승작용은 개별 성분과 비교하여 보다 낮은 세포독성, 증가된 항응고제 효과, 또는 조합물의 일부 다른 유익한 효과로 설명할 수 있다.
"조합되어 투여되는" 또는 "조합 요법"이란 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 추가의 치료제가 치료되는 포유동물에게 공동으로 투여됨을 의미한다. 조합되어 투여되는 경우, 각각의 성분은 동시에 투여될 수 있거나, 또는 상이한 시점에 임의의 순서로 순차적으로 투여될 수 있다. 따라서, 각각의 성분은 개별적으로, 그러나 목적하는 치료 효과를 제공하도록 충분히 가까운 시간 내에 투여될 수 있다. 각각의 성분의 투여는 동일한 투여 경로를 통해 이루어질 필요는 없으며; 예를 들어, 한 성분은 경구로 투여될 수 있고, 또 다른 성분은 눈의 유리체 내로 전달될 수 있다.
본 발명은 본 발명의 몇몇 측면의 예시로서 의도되는 실시예에 개시된 구체적 실시양태에 의한 범주 내에 제한되지는 않으며, 기능적으로 동등한 임의의 실시양태는 본 발명의 범주 내에 있다. 사실상, 본원에 나타내고 기재한 것에 더하여 본 발명의 다양한 변형이 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이며, 첨부된 청구범위의 범주 내에 있는 것으로 의도된다.
일반적 방법
본 발명의 화합물은 통상적인 기술을 사용하거나, 또는 하기 일반적 합성 반응식에 약술된 방법론에 따라 제조할 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 유사한 중간체 및/또는 최종 화합물에 도달하는 것으로 나타난 절차 및 시약을 다양하게 할 수 있다.
NMR 스펙트럼은 배리안(VARIAN) 또는 브루커(Bruker) NMR 시스템 (400, 500 또는 600 MHz) 상에서 측정하였다. 화학적 이동은 테트라메틸실란 (TMS)으로부터 ppm 다운필드 및 업필드로 보고하고, 내부 TMS 또는 용매 공명 (1H NMR: CDCl3에 대해 δ 7.27, (CD3)(CHD2)SO에 대해 δ 2.50, 및 13C NMR: CDCl3에 대해 δ 77.02, (CD3)2SO에 대해 δ 39.51)을 참조한다. 커플링 상수 (J)는 헤르츠 (Hz)로 표현되고, 스핀 다중도는 s (단일선), d (이중선), dd (이중 이중선), t (삼중선), m (다중선) 및 br (넓음)로 주어진다. 키랄 분해를 워터스 타르(Waters Thar) 80 SFC 또는 베르게르(Berger) MG II 정제용 SFC 시스템 상에서 수행하였다. LC-MS 데이터는 시마다즈(SHIMADAZU) LC-MS-2020, 시마다즈 LC-MS-2010, 또는 애질런트(Agilent) 1100 시리즈 LC-MS, 애질런트 프라임(Agilent Prime)-1260, 또는 워터스 액퀴티(Waters Acquity) LC-MS 기기 상에서 0.02 내지 0.1% TFA를 함유하는 물 중 MeCN 구배를 사용하는 C18 칼럼을 사용하여 기록하였다. UV 검출은 220 및/또는 254 nm에서였고, ESI 이온화를 MS 검출에 사용하였다.
키랄 칼럼을 사용하는 크로마토그래피에 의해 키랄 분해가 수행되는 경우에, SFC 키랄 분해에 사용된 키랄 칼럼을 표에 열거한다. 사용된 키랄 칼럼의 일부는 키랄팩(CHIRALPAK) AD, 키랄셀(CHIRALCEL) OJ, 키랄팩 AS, 키랄팩 AY, 키랄팩 IA, 키랄팩 AD-H, 및 키랄팩 AS-H였다. 이후, 이들은 그의 2 또는 3문자 약어로 지칭될 것이다. 관례로서, 키랄 분해로부터의 빠른-용리 이성질체가 항상 이 표에 먼저 열거되고, 바로 이어서 동일한 분해로부터의 보다 느린-용리 이성질체가 열거된다. 2종 초과의 이성질체가 분리된 경우에, 이들은 항상 이들이 용리되는 순서로 표에 열거될 것이며, 예컨대 피크 1에 이어서 피크 2, 피크 3 등이 열거될 것이다. 구조에서 키랄 중심 근처의 * 기호는 이 키랄 중심이 그의 입체화학적 배위가 명백하게 결정되지 않고 키랄 분해에 의해 분해되었음을 나타낸다.
또한, TLC는 박층 크로마토그래피이고; UV는 자외선이고; W는 와트이고; wt. %는 중량 백분율이고; x g은 ~배 중력이고; αD는 589 nm에서의 편광의 비회전이고; ℃는 섭씨 온도이고; % w/v는 후자의 작용제의 부피에 대한 전자의 작용제의 중량 백분율이고; Hz는 헤르츠이고; cpm은 분당 카운트이고; δH는 화학적 이동이고; d는 이중선이고; dd는 이중선의 이중선이고; MHz는 메가헤르츠이고; MS는 질량 스펙트럼이고, ES-MS에 의해 수득된 질량 스펙트럼은 본원에서 "LC-MS"로 표시될 수 있고; m/z는 질량 대 전하 비이고; n은 노르말이고; N은 노르말이고; nm는 나노미터이고; nM은 나노몰이다.
본 명세서의 목적상, 하기 약어는 나타낸 의미를 갖는다: [Mes-Acr-Me]+는 9-메시틸-10-메틸아크리디늄 테트라플루오로보레이트이고; X-PHOS Pd G2는 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II)이다.
Figure pct00006
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
일반적 방법
달리 나타내지 않는 한, 사용된 출발 물질은 상업적 공급원으로부터 입수하거나 또는 다른 실시예에서 제조하였다. 본 발명의 화합물의 제조에 사용된 방법은 하기 반응식에 의해 예시된다. 달리 명시되지 않는 한, 사용된 모든 출발 물질은 상업적으로 입수가능하다.
키랄 분리 방법
키랄 SFC를 사용하여 화합물의 부분입체이성질체 또는 거울상이성질체 혼합물을 분리하기 위한 일반적 제조 조건은 하기와 같다:
Figure pct00010
일반 반응식
반응식 A.
Figure pct00011
반응식 A는 Boc-보호된 아닐린 A1 및 케톤 예컨대 A2로부터의 치환된 스피로카르바메이트 예컨대 A6의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 아닐린 A1의 지정 리튬화 및 헤테로시클릭 케톤 A2로의 첨가를 루이스 산 (예를 들어 LaCl3)의 존재 하에 수행한다. 3급 알콜을 카르바메이트 상에서 계내 고리화시켜 스피로카르바메이트 유도체, 예컨대 A3을 수득하고, 이를 바람직하게는 초임계 유동 크로마토그래피 (SFC)를 사용하여 키랄 분리에 적용하여 거울상이성질체 A4 및 A5를 수득할 수 있다. 어느 하나의 거울상이성질체 (예를 들어, A4)의 탈보호는 2급 아민 A6을 제공한다.
반응식 B.
Figure pct00012
반응식 B는 카르보닐 유도체 예컨대 B1로부터 알킬 히드라진 예컨대 B4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 카르보닐 B1을 벤조히드라지드와 축합시켜 중간체 B2를 수득하고, 이를 보호된 히드라진 B3으로 환원시킨다. 산성 조건 하에 탈보호하여 알킬 히드라진 B4를 수득한다.
반응식 C.
Figure pct00013
반응식 C는 카르보닐 유도체, 예컨대 C1로부터 CF3-에틸 히드라진 유도체, 예컨대 C4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 카르보닐 C1을 벤조히드라지드와 축합시켜 중간체 C2를 수득한다. CF3를 TMSCF3와 함께 C2에 첨가하여 CF3-에틸 중간체 C3을 수득하고, 이를 산성 조건 하에 탈보호시켜 히드라진 유도체 C4를 수득한다.
반응식 D.
Figure pct00014
반응식 D는 알킬 할라이드 예컨대 D1로부터의 알킬 히드라진 유도체 예컨대 D2의 합성을 예시한다. 알킬 할라이드 D1을 사용한 히드라진의 알킬화는 알킬 히드라진 D2를 제공한다.
반응식 E.
Figure pct00015
반응식 E는 카르복실산 유도체 예컨대 E1로부터의 알킬 히드라진 유도체 예컨대 E3의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 카르복실산 E1의 광산화환원 탈카르복실화 히드라지드화는 보호된 히드라진 중간체 E2를 제공한다. 탈보호는 알킬 히드라진 유도체 E3을 제공한다.
반응식 F.
Figure pct00016
반응식 F는 알킬 카르복실산 유도체 예컨대 F1로부터의 알킬 히드라진 유도체 예컨대 F4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 알킬 카르복실산 F1의 쿠르티우스 재배열은 보호된 아민 F2를 제공한다. F2의 산화는 N-니트로소 중간체 F3을 제공하고, 이는 환원 및 탈보호되어 알킬 히드라진 유도체 F4를 제공한다.
반응식 G.
Figure pct00017
반응식 G는 아릴 브로마이드 예컨대 G1로부터의 아릴 히드라진 예컨대 G2의 합성을 예시한다. 아릴 히드라진 G2는 적합한 염기의 존재 하에 아릴 브로마이드, 예컨대 G1과 히드라진의 팔라듐-촉매된 교차-커플링 반응을 통해 제조된다.
반응식 H.
Figure pct00018
반응식 H는 히드라진 유도체 예컨대 H2 및 시아노 알콕시아크릴레이트 H1로부터의 아미노피라졸 유도체 예컨대 H4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 치환된 히드라진 H2를 시아노 에톡시 아크릴레이트 H1과 축합시켜 에스테르 아미노피라졸 유도체, 예컨대 H3을 수득한다. H3의 비누화는 카르복실산 H4를 제공한다.
반응식 I.
Figure pct00019
반응식 I는 히드라진 유도체 예컨대 I2 및 알콕시메틸렌 말로네이트 I1로부터의 히드록시피라졸 유도체 예컨대 I4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 치환된 히드라진 I2를 말로네이트 I1과 축합시켜 에스테르 히드록시피라졸 유도체, 예컨대 I3을 수득한다. I3의 비누화는 카르복실산 I4를 제공한다.
반응식 J.
Figure pct00020
반응식 J는 비치환된 아미노피라졸 유도체 예컨대 J1로부터의 N-치환된 아미노피라졸 유도체 예컨대 J4의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 아미노피라졸 J1의 알킬화는 N-치환된 아미노피라졸 J3을 제공한다. J3의 비누화는 N-치환된 아미노피라졸 J4의 카르복실산을 제공한다.
반응식 K.
Figure pct00021
반응식 K는 스피로카르바메이트 피페리딘 유도체 예컨대 K1 및 카르복실산 유도체 예컨대 K2로부터의 스피로카르바메이트 피라졸 또는 트리아졸 유도체 예컨대 K1의 제조를 예시한다. 펩티드 커플링제, 예컨대 TCFH, EDC, HATU 또는 T3P를 사용하여 카르복실산 K2를 스피로카르바메이트 K1과 커플링시켜 아미드 K3을 제공한다.
반응식 L.
Figure pct00022
반응식 L은 스피로카르바메이트 피페리딘 유도체 예컨대 L1로부터의 스피로카르바메이트 아미노피라졸 유도체 예컨대 L5의 제조를 위한 합성 순서를 예시한다. 스피로카르바메이트 L1을 시아노아세트산과 커플링시켜 중간체 L2를 제공하고, 이를 축합시켜 시아노 아크릴레이트 유도체, 예컨대 L3을 제공한다. 염기성 또는 산성 조건 하에 L3과 다양한 히드라진 L4의 축합은 아미노피라졸, 예컨대 L5를 제공한다.
중간체 A2-1
tert-부틸 3-시클로프로필-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트
시클로프로필마그네슘 브로마이드 (30.0 mL, 15.2 mmol, THF 중 0.5 M)를 THF (20 mL) 중 CuI (1.45 g, 7.61 mmol)의 현탁액에 N2 분위기 하에 -78℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃로 가온되도록 하고, 추가로 1시간 동안 교반하여 유기쿠프레이트 시약을 생성하였다. 이어서 용액을 -78℃로 냉각시키고, 이어서 tert-부틸 3-옥소-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (1.0 g, 5.1 mmol) 및 TMSCl (1.30 mL, 10.1 mmol)의 THF 용액 (5 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후, MeOH로 켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc 및 포화 수성 NH4Cl로 희석하고, 층을 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.12 - 3.74 (m, 3H), 3.18 (br s, 1H), 2.66 (dd, J = 16.3, 4.6 Hz, 1H), 2.33 (dd, J = 16.1, 10.5 Hz, 1H), 1.49 (s, 9H), 1.32 - 1.24 (m, 1H), 0.63 (tt, J = 8.7, 4.7 Hz, 1H), 0.55 (dd, J = 12.9, 5.3 Hz, 2H), 0.25 (s, 1H), 0.18 - 0.11 (m, 1H).
중간체 A2-2
tert-부틸 3-(디플루오로메틸)-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트
트리플루오로톨루엔 (22 mL) 및 H2O (9 mL) 중 tert-부틸 3-옥소-3,6-디히드로피리딘-1(2H)-카르복실레이트 (1.1 g, 5.6 mmol) 및 아연 디플루오로메탄술피네이트 (2.5 g, 8.4 mmol)의 용액에, tert-부틸 히드로퍼옥시드 (1.70 mL, 12.6 mmol, H2O 중 70% wt/v)를 실온에서 적가하였다. 반응 혼합물을 35℃로 가열하고, 12시간 동안 교반하였다. 이어서 플라스크를 실온으로 냉각시키고, H2O 및 DCM으로 희석하고, 층을 분리하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 5.80 (t, J = 55.5 Hz, 1H), 4.12 - 3.72 (m, 3H), 3.50 (br s, 1H), 2.63 (dd, J = 15.7, 5.3 Hz, 1H), 2.59 - 2.53 (m, 1H), 2.50 (dd, J = 15.6, 8.7 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 A2-3
tert-부틸 3-옥소-5-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-카르복실레이트
DCM (50 mL) 중 tert-부틸 3-히드록시-5-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-카르복실레이트 (8.0 g, 29.7 mmol)의 용액에, NaHCO3 (7.5 g, 89 mmol) 및 데스-마르틴 퍼아이오디난 (15.1 g, 35.7 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서 반응물을 H2O로 켄칭하고, DCM으로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (600 MHz, CDCl3) δ 4.32 - 3.77 (m, 3H), 3.72 - 3.20 (m, 1H), 2.83 (d, J = 6.9 Hz, 1H), 2.73 (dd, J = 16.7, 6.1 Hz, 1H), 2.57 (dd, J = 16.6, 9.4 Hz, 1H), 1.47 (s, 9H).
중간체 A6-1
6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
단계 1: tert-부틸 6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트: THF (55 mL)를 tert-부틸 (4-클로로-3-플루오로페닐)카르바메이트 (2.21 g, 9.0 mmol)가 들은 둥근 바닥 플라스크에 N2 분위기 하에 첨가하고, 용액을 -78℃로 냉각시켰다. 교반 용액에, nBuLi (11.2 mL, 27.9 mmol, 헥산 중 2.5 M)를 40분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 추가로 45분 동안 교반되도록 하고, 이 때 LaCl32LiCl (22.5 mL, 13.5 mmol, THF 중 0.6 M) 및 tert-부틸 3,3-디메틸-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (3.10 g, 13.5 mmol)의 용액을 -78℃에서 40분의 기간에 걸쳐 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. KOtBu (5.3 mL, 9.0 mmol, THF 중 1.7 M)를 반응 혼합물에 첨가하고, 용액을 60℃로 추가로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 1M HCl로 켄칭하고, EtOAc로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+Na]+ = 421.1 (계산치 421.1).
단계 2: 6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온: HCl (25.0 mL, 100 mmol, 디옥산 중 4 M)을 1,4-디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸 6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 (7.98 g, 20.0 mmol)의 현탁액을 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃로 가열하고, 12시간 동안 격렬히 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 299.1 (계산치 299.1).
표 A. 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 중간체 A6-1에 대해 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다.
중간체 A6-15
(rac)-tert-부틸 (4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5-플루오로-5'-히드록시-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트
단계 1: tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트: DMF (224 mL) 중 tert-부틸 3-히드록시-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (22.4 g, 104 mmol)의 용액이 들은 플라스크를 0℃로 냉각시켰다. 이미다졸 (21.2 g, 312 mmol) 및 TBSCl (18.8 g, 125 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, MTBE로 추출하였다. 층을 분리하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M-55]+ = 274.3 (계산치 274.2).
단계 2: (rac)-tert-부틸 (4R 또는 S,5'R 또는 S)-5'-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 및 (rac)-tert-부틸 (4S 또는 R,5'S 또는 R)-5'-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트: THF (188 mL)를 tert-부틸 (4-클로로-3-플루오로페닐)카르바메이트 (12.5 g, 50.9 mmol)를 함유하는 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 혼합물을 -78℃로 냉각시켰다. nBuLi (63.1 mL, 158 mmol, 헥산 중 2.5 M)를 1시간에 걸쳐 첨가한 다음, LaCl32LiCl (x 102 mL, 61.1 mmol, THF 중 0.6 M) 및 tert-부틸 3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (20.1 g, 61.1 mmol)의 용액을 -78℃에서 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하고, 추가로 12시간 동안 실온으로 가온하였다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 얼음이 들은 플라스크에 붓고, 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 층을 분리하고, 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 부분입체이성질체를 정제용 역상 HPLC (ACN/물 + 10 mM NH4HCO3)에 의해 분리하였다. 표제 화합물의 보다 빠르게 용리하는 부분입체이성질체를 수득하였다: LCMS [M+Na]+ = 523.3 (계산치 523.2). 표제 화합물의 보다 느리게 용리하는 부분입체이성질체를 수득하였다: LCMS [M+Na]+ = 523.3 (계산치 523.2).
단계 3: (rac)-(4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5-플루오로-5'-히드록시스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온: THF (20 mL) 중 (rac)-tert-부틸 (4S 또는 R,5'S 또는 R)-5'-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 (이전 단계로부터의 보다 느린 용리 피크, 1.0 g, 2.0 mmol)가 들은 플라스크를 0℃로 냉각시켰다. TBAF (6.0 mL, 6.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃로 12시간 동안 가온하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 층을 분리하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. HCl (0.9 mL, 3.5 mmol, 디옥산 중 4 M)을 1,4-디옥산 (0.8 mL) 중 조 생성물 (34 mg, 0.090 mmol)의 현탁액을 함유하는 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 12시간 동안 격렬히 교반하고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 287.0 (계산치 287.1).
중간체 A6-16
(rac)-(4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5,5'-디플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
단계 1: (rac)-tert-부틸 (4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5,5'-디플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트: THF (20 mL) 중 (rac)-tert-부틸 (4S 또는 R,5'S 또는 R)-5'-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 (중간체 A6-15의 단계 1로부터의 보다 느린 용리 피크, 1.0 g, 2.0 mmol)가 들은 플라스크를 0℃로 냉각시켰다. TBAF (6.0 mL, 6.0 mmol, 1 M THF 용액)를 플라스크에 첨가하고, 반응 혼합물을 40℃로 12시간 동안 가온하였다. 반응물을 빙수로 켄칭하고, 15분 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 층을 분리하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. DCM (5 mL) 중 조 알콜 (100 mg, 0.260 mmol)을 N2 분위기 하에 -78℃로 냉각시켰다. DCM (2 mL) 중 DAST (625 mg, 0.390 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:DCM)에 의해 직접 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 411.3 (계산치 411.1).
단계 2: (rac)-(4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5,5'-디플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온: HCl (0.6 mL, 2.3 mmol, 디옥산 중 4 M)을 1,4-디옥산 (0.6 mL) 중 (rac)-tert-부틸 (4R 또는 S,5'R 또는 S)-6-클로로-5,5'-디플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 (45 mg, 0.12 mmol)를 함유하는 바이알에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 289.1 (계산치 289.1).
중간체 A6-17
(4R 및 S,6'S)-6-클로로-5-플루오로-6'-메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
단계 1: 벤질 (4R 및 S,6'S)-6-클로로-5-플루오로-6'-메틸-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트: THF (15 mL)를 tert-부틸 (4-클로로-3-플루오로페닐)카르바메이트 (600 mg, 2.44 mmol)에 첨가하고, -78℃로 냉각시켰다. nBuLi (3.0 mL, 7.57 mmol, 헥산 중 2.5 M)를 40분에 걸쳐 첨가하고, 생성된 혼합물을 -78℃에서 추가로 45분 동안 교반하였다. LaCl32LiCl (6.1 mL, 3.66 mmol, THF 중 0.6 M) 및 벤질 (S)-2-메틸-5-옥소피페리딘-1-카르복실레이트 (900 mg, 3.66 mmol)의 용액을 -78℃에서 40분에 걸쳐 첨가하고, 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 16시간 동안 교반하였다. KOtBu (1.40 mL, 2.44 mmol, THF 중 1.7 M)를 첨가하고, 반응물을 60℃로 추가로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 1M HCl로 켄칭하고, EtOAc로 희석하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 부분입체이성질체의 혼합물로서 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 419.0 (계산치 419.1).
단계 2: (4R 및 S,6'S)-6-클로로-5-플루오로-6'-메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온: HBr (3.9 mL, 71.6 mmol, AcOH 중 33 wt%)을 벤질 (4R 및 S,6'S)-6-클로로-5-플루오로-6'-메틸-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르복실레이트 (600 mg, 1.43 mmol)를 함유하는 바이알에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 285.1 (계산치 285.1).
중간체 B4-1
rac-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)히드라진
단계 1: N'-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일리덴)벤조히드라지드: 톨루엔 (10 mL) 중 1,1,1-트리플루오로부탄-2-온 (1.39 g, 11.0 mmol)의 용액에 벤조히드라지드 (1.50 g, 11.0 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 110℃로 18시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물에 부은 다음, 여과하였다. 고체를 물로 세척하고, 추가로 건조시켜 목적 조 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 245.4 (계산치 245.1)
단계 2: N'-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)벤조히드라지드: THF (6 mL) 중 N'-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일리덴)벤조히드라지드 (500 mg, 2.05 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, BH3ㆍTHF (4.09 mL, 4.09 mmol, 1.0 M THF 용액)를 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온되도록 하고, 14시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃로 재냉각시키고, MeOH로 켄칭하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 디클로로메탄을 첨가하였다. 슬러리를 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 유기 층을 포화 수성 NH4Cl로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 246.7 (계산치 247.1).
단계 3: (1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)히드라진: MeOH (3 mL) 중 N'-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)벤조히드라지드 (274 mg, 1.11 mmol)의 용액에 염화수소 (1.48 mL, 17.8 mmol, 37% 수용액)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. EtOAc를 첨가하고, 침전물을 여과하고, EtOAc로 세척하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 3.34-3.49 (m, 1H), 1.80 (dqd, J=14.7, 7.5, 4.4 Hz, 1H), 1.46-1.65 (m, 1H), 0.97-1.27 (m, 3H).
표 B. 하기 화합물을 중간체 B4-1에 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
중간체 C4-1
(2,2,2-트리플루오로-1-(1-플루오로시클로프로필)에틸)히드라진
단계 1: N'-((1-플루오로시클로프로필)메틸렌)벤조히드라지드: 1-플루오로시클로프로판-1-카르브알데히드 (176 mg, 2.0 mmol)를 톨루엔 (4 mL) 중 벤즈히드라지드 (272 mg, 2.0 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃로 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 어떠한 정제도 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 207.1 (계산치 207.1).
단계 2: N'-(2,2,2-트리플루오로-1-(1-플루오로시클로프로필)에틸)벤조히드라지드: 알릴트리메틸실란 (0.48 mL, 3.0 mmol) 및 BF3ㆍEt2O (0.37 mL, 3.0 mmol)를 1,2-디클로로에탄 (4.0 mL) 중 N'-((1-플루오로시클로프로필)메틸렌)벤조히드라지드 (412 mg, 2.0 mmol)의 현탁액에 연속적으로 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 5분 동안 가열하였다. 용매를 진공 하에 증발시키고, 생성된 잔류물을 DMF (4 mL) 중에 용해시켰다. TMSCF3 (0.60 mL, 4.0 mmol) 및 NaOAc (660 mg, 8.0 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 55℃로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 Na2CO3로 켄칭하고, 추가로 5분 동안 교반하였다. 혼합물을 H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 277.1 (계산치 277.1).
단계 3: (2,2,2-트리플루오로-1-(1-플루오로시클로프로필)에틸)히드라진: MeOH (0.75 mL) 중 N'-(2,2,2-트리플루오로-1-(1-플루오로시클로프로필)에틸)벤조히드라지드 (140 mg, 0.51 mmol)의 용액에 HCl (0.7 mL, 8.1 mmol, 37% 수용액)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 톨루엔과 공비혼합하여 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 173.1 (계산치 173.1).
표 C. 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 중간체 C4-1에 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다.
중간체 D2-1
((1-플루오로시클로프로필)메틸)히드라진
히드라진 (0.33 mL, 0.33 mmol, 1.0 M THF 용액)을 EtOH (0.3 mL) 중 1-(브로모메틸)-1-플루오로시클로프로판 (50 mg, 0.33 mmol)이 들은 바이알에 첨가하고, 생성된 혼합물을 70℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 톨루엔과 공비혼합하여 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 105.1 (계산치 105.1).
표 D. 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 중간체 D2-1에 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 제조하였다.
중간체 E3-1
(1-(4-플루오로페닐)시클로프로필)히드라진
단계 1: 디-tert-부틸 1-(1-(4-플루오로페닐)시클로프로필)히드라진-1,2-디카르복실레이트: 아세토니트릴 (20 mL)을 1-(4-플루오로페닐)시클로프로판-1-카르복실산 (360 mg, 2.0 mmol) 및 [Mes-Acr-Me]+ 광촉매 (16 mg, 0.04 mmol)를 함유하는 바이알에 첨가하였다. 용액을 N2로 5분 동안 탈기하였다. 탈기 후, DBU (0.06 mL, 0.4 mmol) 및 디-tert-부틸 아조디카르복실레이트 (576 mg, 2.5 mmol)를 신속하게 연속적으로 첨가하였다. 바이알을 450 nm 청색 LED (머크 광반응기) 앞에 두고, 12시간 동안 교반되도록 두었다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 혼합물을 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M-155]+ = 211.1 (계산치 211.2).
단계 2: (1-(4-플루오로페닐)시클로프로필)히드라진: HCl (6.6 mL, 26.2 mmol, 4.0 M 디옥산 용액)을 디-tert-부틸 1-(1-(4-플루오로페닐)시클로프로필)히드라진-1,2-디카르복실레이트 (640 mg, 1.75 mmol)를 함유하는 바이알에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 혼합물을 톨루엔과 공비혼합하여 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 167.0 (계산치 167.1).
표 E. 하기 화합물을 중간체 E3-1에 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
중간체 F4-1
(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)히드라진
단계 1: tert-부틸 (1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)카르바메이트: tBuOH (5 mL) 중 1-(트리플루오로메틸)시클로프로판카르복실산 (5.00 g, 32.4 mmol)의 용액에 TEA (5.00 mL, 35.7 mmol) 및 디페닐포스피닐 아지드 (11.8 g, 48.7 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 100℃로 15시간 동안 가열하였다. 반응물을 EtOAc로 희석하고, 5% 시트르산, 포화 수성 NaHCO3, 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc: 석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.99-5.12 (m, 1H), 1.45 (s, 9H), 1.26 (br s, 2H), 1.11 (br s, 2H).
단계 2: tert-부틸 니트로소(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)카르바메이트: 니트로실 테트라플루오로보레이트 (78 mg, 0.67 mmol)를 피리딘 (0.2 mL) 및 아세토니트릴 (2 mL) 중 tert-부틸 (1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)카르바메이트 (100 mg, 0.440 mmol)의 용액에 -30℃에서 조금씩 첨가하였다. 용액을 -30℃에서 30분 동안 교반한 다음, 0℃로 2시간 동안 가온하였다. 반응물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 정제용 TLC (EtOAc:석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.69 (s, 9H), 1.57-1.62 (m, 4H).
단계 3: (1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)히드라진: MeOH (2 mL) 중 tert-부틸 니트로소(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)카르바메이트 (100 mg, 0.390 mmol)를 -78℃에서 30분 동안 교반하였다. HCl (0.32 mL, 3.9 mmol, 37% 수용액) 및 아연 (257 mg, 3.93 mmol)을 -78℃에서 첨가하고, 생성된 혼합물을 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 141.0 (계산치 141.1).
중간체 G2-1
(2-(디플루오로메톡시)페닐)히드라진
THF (1 ml)를 NaOtBu (129 mg, 1.35 mmol) 및 X-PHOS Pd G2 (10.6 mg, 0.0130 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 1-브로모-2-(디플루오로메톡시)벤젠 (300 mg, 1.35 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 10분 동안 교반하였다. 히드라진 (42 μL, 1.3 mmol)을 1 부분으로 첨가하고, 바이알을 90℃ (예열된 조)로 가열하고, 12시간 동안 교반되도록 하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, MeOH로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 농축 건조시키고, 조 혼합물을 역상 정제용 HPLC (C18 고정상, ACN/물 + 0.1% TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 175.0 (계산치 175.1).
표 G. 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 중간체 G2-1에 기재된 것과 유사한 절차를 사용하여 제조하였다.
중간체 H4-1
5-아미노-1-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)-1H-피라졸-4-카르복실산
단계 1: 에틸 5-아미노-1-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)-1H-피라졸-4-카르복실레이트: 수소화나트륨 (30.9 mg, 1.29 mmol)을 ACN (1 mL) 중 에틸 5-아미노-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (100 mg, 0.650 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가하였다. 1시간 후, 4-(브로모메틸)테트라히드로-2H-피란 (173 mg, 0.970 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 역상 HPLC(C18 고정상, ACN/물 + 0.04% NH4OH)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 254.2 무수 (계산치 254.1).
단계 2: 5-아미노-1-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)-1H-피라졸-4-카르복실산: EtOH (1 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 에틸 5-아미노-1-((테트라히드로-2H-피란-4-일)메틸)-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (100 mg, 0.400 mmol)의 용액에 LiOHㆍH2O (20 mg, 0.47 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 60℃로 12시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 어떠한 정제도 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 226.0 (계산치 226.1).
표 H. 하기 화합물을 중간체 H4-1에 기재된 것과 유사한 절차를 이용하여 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
중간체 I4-1
5-아미노-1-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)-1H-피라졸-4-카르복실산
단계 1: 에틸 5-아미노-1-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)-1H-피라졸-4-카르복실레이트: EtOH (1 mL) 중 (1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)히드라진 (50 mg, 0.36 mmol), 메틸 2-시아노-3-에톡시아크릴레이트 (56 mg, 0.36 mmol) 및 DIEA (0.31 mL, 1.8 mmol)의 용액을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 정제용 TLC (EtOAc:석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 264.1 (계산치 264.1).
단계 2: 5-아미노-1-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)-1H-피라졸-4-카르복실산: MeOH (2 mL) 및 H2O (0.5 mL) 중 에틸 5-아미노-1-(1-(트리플루오로메틸)시클로프로필)-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (50 mg, 0.20 mmol)의 용액에 LiOHㆍH2O (42.1 mg, 1.0 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 70℃로 5시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시키고, 1 M HCl에 의해 pH 2로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 235.9 (계산치 236.1).
중간체 I4-2
중간체 I4-2를 중간체 I4-1에 대해 상기 기재된 것과 유사한 절차에 따라 제조하였다. LCMS [M+H]+ = 210.1 (계산치 210.0).
중간체 L3-1
(R,E/Z)-2-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르보닐)-3-에톡시아크릴로니트릴
단계 1: 3-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-일)-3-옥소프로판니트릴: DIEA (7.06 mL, 40.4 mmol)를 EtOAc (41 mL) 및 DMF (6.2 mL) 중 6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-윰 클로라이드 (4.14 g, 13.5 mmol) 및 2-시아노아세트산 (1.26 g, 14.8 mmol)의 용액에 첨가하였다. 1-프로판술폰산 무수물 (9.60 ml, 16.2 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (((3:1)EtOH:EtOAc):헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 337.9 (계산치 338.1).
단계 2: (R,E/Z)-2-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르보닐)-3-에톡시아크릴로니트릴: ZnCl2 (무수, 303 mg, 2.21 mmol)를 트리에틸 오르토포르메이트 (18.5 mL, 111 mmol) 및 NMP (0.8 mL) 중 3-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-일)-3-옥소프로판니트릴 (2.50 g, 7.40 mmol)에 첨가하고, 반응 혼합물을 130℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 포화 수성 NaHCO3로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (EtOAc:헥산)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. LCMS [M+H]+ = 394.0 (계산치 394.1).
중간체 L3-2
(R)-2-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르보닐)-3-히드록시아크릴로니트릴
THF (15 mL)를 (R)-3-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-일)-3-옥소프로판니트릴 (1.82 g, 4.43 mmol) 및 메틸 포르메이트 (3.99 g, 66.5 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 초음파처리하여 고체를 용해시킨 다음, KOtBu (14.2 mL, 14.2 mmol, THF 중 1 M)의 용액을 적가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O로 희석하고, 1 M HCl을 사용하여 pH 6으로 중화시키고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 어떠한 정제도 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 366.4 (계산치 366.1).
실시예 1
(R)-1'-(5-아미노-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-카르보닐)-6-클로로-5-플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
(R,E/Z)-2-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르보닐)-3-에톡시아크릴로니트릴 (0.25 mL, 0.10 mmol, EtOH 중 0.4 M 원액)을 (2,2,2-트리플루오로에틸)히드라진 (17 mg, 0.15 mmol)을 함유하는 바이알에 첨가하였다. TEA (42 μL, 0.30 mmol)를 바이알에 첨가하고, 혼합물을 70℃로 12시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 정제용 역상 HPLC(C18 고정상, ACN/물 + 0.05% TFA)에 의해 직접 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. : 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.55 (s, 1H), 7.43 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.74 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.76 - 4.66 (m, 3H), 4.46 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 3.53 (s, 1H), 3.24 - 3.16 (m, 1H), 2.52 (t, J = 11.5 Hz, 1H), 2.30 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.17 (q, J = 10.4 Hz, 1H), 1.73 (d, J = 12.7 Hz, 1H). LCMS [M+H]+ = 462.3 (계산치 462.1).
실시예 2
(R)-1'-(5-아미노-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-카르보닐)-6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
3 mL 바이알에 DMF (0.2 mL) 중 (R)-6-클로로-5-플루오로-5',5'-디메틸스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온 (67 mg, 0.20 mmol) 및 5-아미노-1-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1H-피라졸-4-카르복실산 (84 mg, 0.40 mmol)을 채웠다. 이 혼합물에, TEA (0.14 mL, 1.0 mmol)를 첨가한 후, T3P (0.18 μL, 0.6 mmol, DMF 중 50%w/v)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 정제용 역상 HPLC (C18 고정상, ACN/물 + 0.05% HCO2H)를 통해 직접 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.62 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 6.74 (dd, J = 8.7, 1.1 Hz, 1H), 4.79 - 4.70 (m, 3H), 4.27 (d, J = 12.9 Hz, 1H), 3.73 (s, 1H), 2.97 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 2.17 - 2.03 (m, 2H), 1.24 (s, 3H), 1.03 (s, 3H). LCMS [M+H]+ = 490.4 (계산치 490.1).
실시예 3 및 4
(R)-1'-(5-아미노-1-((R)-1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)-1H-피라졸-4-카르보닐)-6-클로로-5-플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온 및 (R)-1'-(5-아미노-1-((S)-1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)-1H-피라졸-4-카르보닐)-6-클로로-5-플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
(R)-2-(6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-카르보닐)-3-히드록시아크릴로니트릴 (0.25 mL, 0.01 mmol, AcOH 중 0.4 M 원액)을 R- 및 S-(1,1,1-트리플루오로부탄-2-일)히드라진 (31 mg, 0.15 mmol)을 함유하는 바이알에 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃로 12시간 동안 가열하였다. 조 혼합물을 정제용 역상 HPLC(C18 고정상, ACN/물 + 0.05% TFA)를 통해 직접 정제하여 표제 화합물의 부분입체이성질체의 혼합물을 수득하였다. 표제 화합물을 방법 A를 사용하여 정제용 키랄 SFC에 의해 분해하였다. 표제 화합물의 보다 빠르게 용리하는 이성질체를 수득하였다 (실시예 3): 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.57 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 8.6, 7.8 Hz, 1H), 6.72 (dd, J = 8.7, 1.3 Hz, 1H), 4.74-4.81 (m, 1H), 4.68 (br d, J = 13.4 Hz, 1H), 4.45 (br d, J = 12.2 Hz, 1H), 3.43-3.58 (m, 1H), 3.05-3.25 (m, 1H), 2.42-2.58 (m, 1H), 2.24-2.34 (m, 2H), 2.11-2.22 (m, 1H), 1.95-2.07 (m, 1H), 1.72 (dt, J = 11.3, 2.2 Hz, 1H), 0.82 (t, J = 7.3 Hz, 3H). LCMS [M+H]+ = 490.1 (계산치 490.1). 표제 화합물의 보다 느리게 용리하는 이성질체를 수득하였다 (실시예 4). 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.57 (s, 1H), 7.41 (dd, J = 8.7, 7.7 Hz, 1H), 6.73 (dd, J = 8.7, 1.3 Hz, 1H), 4.76-4.80 (m, 1H), 4.68 (br d, J = 14.9 Hz, 1H), 4.46 (br d, J = 11.5 Hz, 1H), 3.41-3.62 (m, 1H), 3.02-3.25 (m, 1H), 2.45-2.60 (m, 1H), 2.22-2.36 (m, 2H), 2.10-2.22 (m, 1H), 2.00 (dqd, J = 14.1, 7.3, 3.9 Hz, 1H), 1.65-1.77 (m, 1H), 0.80-0.88 (m, 3H). LCMS [M+H]+ = 490.2 (계산치 490.1).
표 1. 실시예 1-4에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 따라, 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다.
표 2. 실시예 3 및 4에 대해 기재된 것과 유사한 절차에 따라, 하기 화합물을 적절한 출발 물질을 사용하여 제조하였다. 부분입체이성질체 생성물을 표에 명시된 키랄 SFC 방법을 사용하여 분리하였다. 이들 부분입체이성질체의 쌍에 대해, 빠른-용리 이성질체가 먼저 열거된다.
실시예 132
(R)-6-클로로-5-플루오로-1'-(1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르보닐)스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
단계 1: 에틸 1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르복실레이트: H2O (3 mL) 중 (4-플루오로벤질)히드라진 히드로클로라이드 (650 mg, 3.68 mmol) 및 디에틸 2-(에톡시메틸렌)말로네이트 (875 mg, 4.05 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.27 g, 9.20 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 100℃로 3시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 혼합물을 EtOAc로 세척하였다. 수성 상을 1M HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 265.0 (계산치 265.1).
단계 2: 1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르복실산: EtOH (1 mL) 및 H2O (0.2 mL) 중 에틸 1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (25 mg, 0.095 mmol)의 용액에 NaOH (38 mg, 0.95 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 90℃로 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 1M HCl을 사용하여 pH 2로 산성화시키고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 표제 화합물을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. LCMS [M+H]+ = 237.0 (계산치 237.1).
단계 3: (R)-6-클로로-5-플루오로-1'-(1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르보닐)스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온: ACN (2 mL) 중 1-(4-플루오로벤질)-5-히드록시-1H-피라졸-4-카르복실산 (20 mg, 0.085 mmol) 및 (R)-6-클로로-5-플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온 (31 mg, 0.085 mmol)의 용액에 TCFH (26 mg, 0.093 mmol) 및 1-메틸이미다졸 (21 mg, 0.25 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 정제용 역상 HPLC (C18 고정상, ACN/물 + 0.1% TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물의 부분입체이성질체의 혼합물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.91 (br s, 1H), 7.46 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.32 (br s, 2H), 7.09 (br t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.13 (br s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.19 (br s, 2H), 2.52 (br s, 1H), 2.31 (br d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.17 (br d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.75 (br d, J = 14.5 Hz, 1H). LCMS [M+H]+ = 489.1 (계산치 489.1).
실시예 133
(R)-1'-(5-아미노-1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-카르보닐)-6-클로로-5-플루오로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-2(1H)-온
4 mL 바이알에 DMF (5 mL) 중 (R)-6-클로로-5-플루오로-2-옥소-1,2-디히드로스피로[벤조[d][1,3]옥사진-4,3'-피페리딘]-1'-윰 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (50 mg, 0.13 mmol) 및 5-아미노-1-벤질-1H-1,2,3-트리아졸-4-카르복실산 (28 mg, 0.13 mmol)을 채웠다. 이 혼합물에, DIEA (23 μL, 0.13 mmol)를 첨가하고, 이어서 HATU (49 mg, 0.13 mmol)를 1 부분으로 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반되도록 하였다. 반응 혼합물을 직접 정제용 역상 HPLC(C18 고정상, ACN/물 + 0.05% TFA)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 7.91 (br s, 1H), 7.46 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.32 (br s, 2H), 7.09 (br t, J = 8.5 Hz, 2H), 6.76 (br d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.13 (br s, 2H), 4.36 (s, 2H), 3.19 (br s, 2H), 2.52 (br s, 1H), 2.31 (br d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.17 (br d, J = 13.1 Hz, 1H), 1.75 (br d, J = 14.5 Hz, 1H). LCMS [M+H]+ = 489.1 (계산치 489.1).
인자 XIa 검정
응고 인자 XIa의 억제제로서의 본 발명의 화합물의 유효성은 관련 정제된 세린 프로테아제 및 적절한 합성 기질을 사용하여 결정될 수 있다. 관련 세린 프로테아제에 의한 발색 또는 형광 기질의 가수분해율을 본 발명의 화합물의 부재 및 존재 둘 다에서 측정하였다. 검정을 실온 또는 37℃에서 수행하였다. 기질의 가수분해는 아미노 트리플루오로메틸쿠마린 (AFC)의 방출을 유발하였으며, 이를 405 nm에서의 여기와 함께 510 nm에서의 방출의 증가를 측정함으로써 분광형광측정법으로 모니터링하였다. 억제제의 존재 하에 형광 변화율의 감소는 효소 억제를 나타낸다. 이러한 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 본 검정의 결과는 반수-최대 억제 농도 (IC50), 또는 억제 상수, Ki로서 표현된다.
화합물을 150 mM 염화나트륨, 5 mM 염화칼슘, 0.1% PEG 8000, pH 7.4를 함유하는 50 mM HEPES 완충제 중에서 인간 (0.04 nM) 인자 XIa와 함께 25℃에서 30분 동안 사전-인큐베이션하였다. 인자 XIa 효소적 활성을 기질 글리신-프롤린-아르기닌-7-아미도-4-트리플루오로메틸쿠마린 (GPR-AFC)의 첨가 및 25℃에서 60분 인큐베이션 후 400/505 nm에서의 형광의 측정에 의해 결정하였다. 각각의 데이터 포인트에 대한 % 억제를 데이터로부터 계산하고, 로그 (억제제) 대 반응 4 파라미터 방정식을 사용하여 분석하여 반수-최대 억제 농도 (IC50)를 결정하였다. IC50를 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식을 사용하여 평형 억제 상수 (Ki)로 전환시켰다.
본 검정에 의해 제시된 활성은 본 발명의 화합물이 불안정형 협심증, 급성 관상동맥 증후군, 불응성 협심증, 심근경색, 일과성 허혈 발작, 심방 세동, 졸중 예컨대 혈전성 졸중 또는 색전성 졸중, 정맥 혈전증, 관상 및 뇌 동맥 혈전증, 뇌 및 폐 색전증, 아테롬성동맥경화증, 심부 정맥 혈전증, 파종성 혈관내 응고, 및 재관상 혈관의 재폐쇄 또는 재협착을 앓고 있는 환자에서 다양한 심혈관 및/또는 뇌혈관 혈전색전성 상태를 치료 또는 예방하는데 치료상 유용할 수 있다는 것을 나타낸다.
혈장 칼리크레인 검정
혈장 칼리크레인의 억제제로서의 본 발명의 화합물의 유효성은 관련 정제된 세린 프로테아제 및 적절한 합성 기질을 사용하여 결정될 수 있다. 본 발명의 화합물의 부재 하에 및 존재 하에 둘 다에 대해 관련 세린 프로테아제에 의한 발색 또는 형광 기질의 가수분해율을 측정하였다. 검정을 실온 또는 37℃에서 수행하였다. 기질의 가수분해는 아미노 트리플루오로메틸쿠마린 (AFC)의 방출을 유발하였으며, 이를 405 nm에서의 여기와 함께 510 nm에서의 방출의 증가를 측정함으로써 분광형광측정법으로 모니터링하였다. 억제제의 존재 하에 형광 변화율의 감소는 효소 억제를 나타낸다. 이러한 방법은 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 본 검정의 결과는 반수-최대 억제 농도 (IC50), 또는 억제 상수, Ki로서 표현된다.
혈장 칼리크레인 결정은 150 mM NaCl, 5 mM CaCl2, 및 0.1% PEG 8000 (폴리에틸렌 글리콜; 피셔 사이언티픽(Fisher Scientific))을 함유하는 pH 7.4의 50 mM HEPES 완충제 중에서 수행하였다. 결정은 0.5 nM 최종 농도에서의 정제된 인간 혈장 칼리크레인 (엔자임 리서치 래보러토리즈(Enzyme Research Laboratories)) 및 100 mM 농도에서의 합성 기질, 아세틸-K-P-R-AFC (시그마(Sigma) # C6608)를 사용하여 행하였다.
활성 검정은 기질의 원액을 효소 또는 억제제와 평형을 이룬 효소를 함유하는 용액 내에 최종 농도 ≤ 0.2 Km으로 적어도 10배 희석함으로써 수행하였다. 효소와 억제제 사이의 평형을 달성하는데 요구되는 시간을 대조군 실험에서 결정하였다. 반응을 선형 진행 곡선 조건 하에 수행하고, 405 Ex/510 Em nm에서 형광 증가를 측정하였다. 값은 (100% 억제 값을 감산한 후) 대조군 반응의 퍼센트 억제로 전환하였다. IC50을 4 파라미터 로지스틱 곡선 피트로부터의 변곡점에 의해 결정하였다. Ki는 쳉 프루소프(Cheng Prusoff) 방정식, Ki = IC50/(1+([S]/Km))을 사용하여 계산하였다.
본 검정에 의해 제시된 활성은 본 발명의 화합물이 불안정형 협심증, 급성 관상동맥 증후군, 불응성 협심증, 심근경색, 일과성 허혈 발작, 심방 세동, 졸중 예컨대 혈전성 졸중 또는 색전성 졸중, 정맥 혈전증, 관상 및 뇌 동맥 혈전증, 뇌 및 폐 색전증, 아테롬성동맥경화증, 심부 정맥 혈전증, 파종성 혈관내 응고, 재소통 혈관의 재폐쇄 또는 재협착, 유전성 혈관부종, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 및 망막 정맥 폐쇄를 앓고 있는 환자에서 다양한 안과, 심혈관 및/또는 뇌혈관 혈전색전성 상태를 치료 또는 예방하는데 치료상 유용할 수 있다는 것을 나타낸다.
선택된 화합물에 대한 혈장 칼리크레인 IC50 (nM) 및 FXIa IC50 (nM)는 하기와 같다:
Figure pct00079
Figure pct00080
Figure pct00081
Figure pct00082
Figure pct00083

Claims (18)

  1. 하기 화학식의 화합물 또는 그의 제약상 염:

    여기서 X는 N 또는 CH이고;
    R1은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R2는 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R3은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 할로, 시아노 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
    R4는 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서 상기 알킬 기는 할로, 시아노 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 치환기로 임의로 치환되고;
    R5는 NR9R10 또는 ORx이고;
    각각의 R6은 독립적으로 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되고;
    각각의 R7은 수소, 할로, 히드록시 및 C1-6 알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 상기 알킬 기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되거나;
    또는 R6 및 R7은 이들이 부착되어 있는 탄소 원자와 함께 3-6원 시클로알킬 기를 형성할 수 있고, 이는 1 또는 2개의 할로로 임의로 치환되고;
    R8은 수소; 할로; 히드록시; Rx; ORx; 페닐; 인단; ORy; 모노시클릭 또는 비시클릭일 수 있는 헤테로아릴; 헤테로시클릴; 및 모노시클릭 또는 비시클릭일 수 있는 C3-6 시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고; 여기서 상기 페닐 및 헤테로아릴 기는 옥소, 할로, Rx, ORx, NR9R10, NR9(C=O)Rx, NR9(C=O)ORx, (C=O)ORx, (C=O)NR9, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고; 여기서 상기 시클로알킬 및 헤테로시클릴 기는 옥소, 할로, Rx 및 ORx로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고;
    R9는 수소 또는 C1-3 알킬이고;
    R10은 수소 또는 C1-3 알킬이고;
    Rx는 수소 또는 C1-6 알킬이고, 이는 할로 및 히드록시로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환되고,
    Ry는 페닐, 헤테로시클릴 또는 C3-6시클로알킬이고, 여기서 상기 페닐기는 1 내지 3개의 할로로 임의로 치환되고, 상기 헤테로시클릴기는 1 또는 2개의 옥소로 임의로 치환되고, 상기 시클로알킬기는 C1-6알킬로 임의로 치환되고;
    n은 0 내지 2의 정수이다.
  2. 제1항에 있어서, R1이 할로이고; R2가 할로인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R3이 수소 또는 메틸이고; R4가 수소 또는 메틸인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R5가 NH2인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, n이 0 또는 1인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 페닐이고; 여기서 상기 페닐은 할로, Rx, ORx, NR9R10, NR9(C=O)Rx, NR9(C=O)ORx, (C=O)NR9, (C=O)ORx, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 페닐이고; 여기서 상기 페닐이 할로, Rx, ORx, Ry 및 ORy로 이루어진 군으로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3개의 치환기로 임의로 치환된 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1이고; R6이 수소이고; R7이 수소인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제1항에 있어서, 화합물 1-133 중 어느 하나로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  11. 손상된 시각 활성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 망막 정맥 폐쇄, 유전성 혈관부종, 당뇨병, 췌장염, 뇌출혈, 신병증, 심근병증, 신경병증, 염증성 장 질환, 관절염, 염증, 패혈성 쇼크, 저혈압, 암, 성인 호흡 곤란 증후군, 파종성 혈관내 응고, 심폐 우회 수술 동안의 혈액 응고, 또는 수술후 수술로부터의 출혈의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 제10항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 손상된 시각 활성, 당뇨병성 망막병증, 당뇨병성 황반 부종, 망막 정맥 폐쇄, 유전성 혈관부종, 당뇨병, 췌장염, 뇌출혈, 신병증, 심근병증, 신경병증, 염증성 장 질환, 관절염, 염증, 패혈성 쇼크, 저혈압, 암, 성인 호흡 곤란 증후군, 파종성 혈관내 응고, 심폐 우회 수술 동안의 혈액 응고, 또는 수술후 수술로부터의 출혈을 치료하는 방법.
  12. 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 또는 망막 정맥 폐쇄의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 제10항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 또는 망막 정맥 폐쇄를 치료하는 방법.
  13. 당뇨병성 망막병증 또는 당뇨병성 황반 부종의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 제10항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 당뇨병성 망막병증 또는 당뇨병성 황반 부종을 치료하는 방법.
  14. 망막 정맥 폐쇄의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 제10항의 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 망막 정맥 폐쇄를 치료하는 방법.
  15. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 또는 망막 정맥 폐쇄의 치료를 필요로 하는 포유동물에서 포도막염, 후방 포도막염, 습성 연령 관련 황반 부종, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막병증 또는 망막 정맥 폐쇄를 치료하기 위한 의약의 제조에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  16. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 요법에 사용하기 위한 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 제10항에 있어서, 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제로 이루어진 군으로부터 선택된 또 다른 작용제를 추가로 포함하는 조성물.
  18. 제11항에 있어서, 항염증제, 항-VEGF 작용제, 면역억제제, 항응고제, 항혈소판제 및 혈전용해제로 이루어진 군으로부터 선택된 또 다른 작용제를 추가로 포함하는 방법.
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