KR20230110270A - 콩과 식물 성분을 포함하는 조성물, 이의 제조 공정 및 용도 - Google Patents

콩과 식물 성분을 포함하는 조성물, 이의 제조 공정 및 용도 Download PDF

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피에르 라발레
레장 데가녜
로렌스 캄브롱-포르탕
루이-필립 베지나
피에르 탈보
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비렌시아 이노베이션 인코포레이티드
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Abstract

본 개시내용은 콩과 계통 식물 분획, 특히 메디카고 사티바 종으로부터 가치있는 생성물을 회수하기 위한 공정에 관한 것이다. 본 명세서에 개시된 공정은 거대섬유, 미세섬유, 사포닌 전구체, 엽록체 액체 및 건조 조성물 및 루비스코 전구체를 수득하기 위한 공정을 포함한다. 또한 콩과 계통 식물로부터 단백질, 효소, 펩티드, 아미노산, 지방산, 지방 알코올, 테르펜, 페놀 및 색소와 같은 가치있는 화합물을 추출하는 공정이 개시되어 있다. 공정은 전단력을 약화시키면서 식물 섬유를 분리하는 것, 온도를 45℃ 이하로 유지하는 것, pH를 4 초과로 유지하는 것 및 항산화제 및/또는 항균제를 첨가하는 것 중 적어도 하나를 포함할 수 있다. 이들 회수된 콩과 계통 식물 생성물을 포함하는 조성물 및 이의 용도가 또한 개시되어 있다.

Description

콩과 식물 성분을 포함하는 조성물, 이의 제조 공정 및 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 개시 내용은 2020년 10월 21일에 출원된 미국 가출원 제63/094,812호에 대한 우선권을 주장하고, 그 전체 내용이 본 출원에 참조로 포함된다.
개시내용의 분야
본 개시 내용은 잎이 무성한 식물 성분, 예컨대 콩과(Fabaceae family) 식물 성분을 포함하는 조성물 및 전구체, 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이고, 보다 구체적으로는 메디카고 사티바(Medicago sativa) 성분을 포함하는 조성물 및 전구체, 이의 제조 방법 및 용도에 관한 것이다.
수 세기 동안, 농업은 식물 바이오매스를 벌크 단백질 및 탄수화물 영양분의 공급원으로서 사용해 왔다. 이들 성분의 대부분은 전통적으로 식물 저장 기관(열매, 종자, 저장 줄기, 뿌리)에서 나왔기 때문에, 그 조성물은 발육 중인 배아(종자) 또는 발육 중인 싹(저장 뿌리)이 용이하게 이용 가능하도록 의도된 요소에 대해 강한 바이어스를 가지고 있었다. 그 결과, 이들 탄수화물과 단백질-풍부 종자 또는 뿌리의 남용은 인간과 동물 식이의 진화에 부정적인 영향을 미쳤다. 예를 들어, 서구 사회에서, 식물 저장 기관(가공되지 않거나 가공됨)의 단백질에는 일반적으로 인간에게 필수적인 아미노산이 부족하고, 다른 필수 영양 성분이 없기 때문에, 이들은 단백질의 공급원으로서 소홀히 여겨졌고, 다양한 상보적 성분의 첨가를 통해 영양 균형을 이루는 동물 사료로만 거의 사용되었다.
다음 두 가지 결론이 도출되면서 인간의 영양은 이제 전환점에 서 있다: 첫째, 육류(동물성 단백질)의 생산을 위해 종래의 식물 바이오매스를 사용하는 것이 환경에 부정적인 영향을 극적으로 미치고, 둘째, 종래의 식물성 생성물(저장 기관)을 인간의 영양을 위한 단백질 공급원으로서 사용하는 것이 부적절하다.
식물은 동물성 단백질과 같거나 더 우수한 품질의 단백질을 함유하고 있다. 이들은 광합성 기관, 예컨대 잎 및 다른 기생 식물 조직이나 기관에서 발견되기 때문에 종래의 식물성 생성물에서는 거의 발견되지 않는다. 그리고 특정 식물 종 및 속의 잎에는 다른 것보다 이 고품질 단백질이 더 많이 함유되어 있다. 일반적으로, 그의 광합성 활성(잎 1g당)이 높을수록 그의 엽록체 함량이 높아지고, 건조 물질 기준으로 그의 고품질 단백질 함량이 높아진다. 또한 광합성 기관의 경우, 엽록체 함량이 높을수록 틸라코이드 멤브레인의 빌딩 블록인 오메가-3 인지질 함량이 높아진다. 따라서 가장 흔하고 풍부한 잎인 광합성 기관은 고품질 단백질과 지질의 지속 가능하고 가치 있는 공급원이 될 수 있는 것으로 보인다.
다른 한편으로는, 식물 기원으로부터의 이러한 유형의 바이오매스는 상이한 유형의 산업, 예컨대 인간 및 동물 건강, 인간의 영양, 동물의 영양, 특정 병원체의 생물 방제 및 식물의 생물 자극과 관련된 산업에 부가가치 화합물 또는 분자(단백질 및 지질 제외)를 제공할 수 있다. 광합성 바이오매스는 미세 여부에 관계없이 조류나 자연적으로 또는 인간에 의해 자란 육상 식물로부터 나올 수 있다.
재배하든 채취하든 산업적 양의 조류를 수득하는 것은 복잡하고 고비용이 들기 때문에 그의 사용을 크게 제한하는 것으로 나타났다. 많은 육상 식물이 더 효율적인 것으로 밝혀졌다. 이들 중에서, 콩과의 식물은 그의 높은 생산성, 높은 단백질 함량 및 그의 질소 수정 요구량의 100%를 충족시킬 수 있는 기체 질소-고정 박테리아와의 그의 상호작용 때문에 특히 흥미롭다. 특히, 콩과 식물, 예를 들어 토끼풀족(Trifolieae tribe) 식물은 그의 잎에 단백질 함량이 높다.
콩과 계통의 식물 중에서, 알팔파(메디카고 사티바)가 특히 유리하다. 일부 연구에 따르면, 알팔파 1헥타르는 대두 1헥타르보다 5배 더 많은 단백질을 생산할 수 있다. 부가하여, 알팔파는 그 물 요구량을 크게 줄이는 매우 깊은 뿌리 시스템을 가지고 있다. 흥미롭게도, 뿌리 네트워크의 깊이는 대기의 CO2로부터 토양에 유기 탄소의 영구적인 축적을 허용하고 결과적으로 개발중인 탄소 경제의 맥락에서 거래될 수 있는 신용을 잠재적으로 얻을 수 있다. 부가하여, 알팔파 잎은 특히 그 단백질 함량, 아미노산 및 비타민 A, B, D, E, C 및 K의 관점에서 탁월한 영양 프로필을 가지고 있다. 그것은 또한 칼슘, 나트륨, 마그네슘, 칼륨과 아연과 같은 미네랄의 관심있는 공급원이다. 사실, 알팔파는 인체의 적절한 기능에 필요한 거의 모든 요소를 제공한다. 예를 들어, 그 아미노산 구성은 우유의 것과 비슷하고 14종 아미노산을 포함하며 그 중 8종은 인간 건강에 필수적이다. 마지막으로, 알팔파의 특정 부분이나 조직에는 인간이 만들고 합성적으로 생산한 화학물질에 대한 대안을 찾는 사회에서 경제적 관심이 증가하는 다른 화합물 또는 분자가 함유될 수 있다는 점이 언급되어야 한다. 이들 관심있는 분자 또는 화합물 중에는 예를 들어 트리아콘타놀(식물에 대한 생체자극 효과가 있는 지방 알코올), 쿠메스트롤(에스트로겐 유형 분자), 열 충격 단백질 HSP70(치료 가능성이 있는 스트레스 단백질), 알부민 펩티드 Pa1b(곤충독성 펩티드), 루비스코(높은 영양가를 갖는 효소) 및 사포닌(계면활성제, 항-콜레스테롤 및 생물살충 효과를 갖는 테르펜)이 포함된다. 그러나, 사포닌은 너무 높은 용량에서 그 독성을 고려할 때 동물에 대한 알팔파의 식이 가치에 영향을 미친다는 점에 유의하는 것이 중요하다.
현재까지, 알팔파 및 같은 유형의 다른 관심있는 식물의 전체 가치는 물가를 안정시키거나 또는 업그레이드될 수 있는 식물의 상이한 구성요소의 각각에 대해 특정한 특성 및 구조를 보존할 수 있는 산업 공정의 부재때문에 보다 적게 개발되고 있다. 많은 상황에서, 사용되는 장비 및 작동 매개변수는 많은 물가를 안정시킬 수 있거나 복구가능한 구성요소의 가치에 돌이킬 수 없는 영향을 미치는 물리적, 화학적 및/또는 생물학적 스트레스를 생성한다. 사실, 대부분의 다른 식물 분획화 공정은 분쇄를 위한 과도한 기계적 강도, 응고 및 분획화 동안 고온 및/또는 극한 pH 조건을 사용하여 엽록체 무결성의 파손 및 액체 분획의 주요 루비스코 단백질 성분의 방출을 초래한다. 이는 이러한 분획화로 인한 엽록체 농축물의 단백질 품질을 크게 저하시키고 액체 분획으로부터 루비스코 회수를 극도로 어렵게 만든다. 부가하여, 응고 및 분획화 동안 고온 및/또는 극한 pH 조건의 사용은, 제한 없이 예를 들어, 모두 열에 불안정하고 pH 민감성인, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질과 같은 주요 영양 용질의 증가된 산화적 붕괴를 초래한다. 다른 상황에서, 소-규모 기술은 상업적 활동을 지원하는 데 필요한 산업적 규모에 대해 구현하는 것이 불가능하다. 따라서 알팔파 및 기타 관심있는 종의 분획화 공정에 대한 필요성이 있으며, 이는 식물의 주요 물가를 안정시킬 수 있거나 복구가능한 구성요소의 가치를 보존하고 따라서 처리되는 고형 폐기물의 생성 및 기존 액체 폐기물의 처리 필요성을 제거하는 높은 가치를 가진 최대의 혁신적인 생성물을 개발한다.
몇몇 식물, 특히 콩과 계통의 식물, 그리고 더욱 특히 메디카고 종 식물은, 그 고유한 특성을 감안할 때 주변의 화학적, 물리적 및 미생물학적 조건에 의해 쉽게 개질될 수 있는, 단백질을 포함하여 매우 가치 있는 구조, 화합물 및 분자의 풍부한 함량을 갖는다. 본 개시내용은 경제적 관심있는 식물 분획, 보다 구체적으로 메디카고 종 식물의 분획화 공정에 관한 것이다. 공정은 부가가치있는 최종 생성물로 직접적으로 사용될 수 있고/있거나 추가 추출 또는 정제를 거쳐 다양한 산업 분야에서 사용되도록 의도된 생성물의 추가 개발을 위한 활성 성분으로 고부가가치 화합물 또는 분자를 얻을 수 있는 다양한 생성물을 제공하는 4가지 별개의 분획화를 포함한다. 첫 번째 분획화는 주로 거대섬유를 생성한다. 두 번째 분획화는 주로 미세섬유를 생성한다. 세 번째 분획화는 주로 예를 들어 사포닌 추출물과 같은 엽록체가 거의 없는 생성물을 생성한다. 네 번째 분획화는 주로 엽록체를 생성하며, 이는 변하지 않거나 약간 변형된, 액체 분획에 현탁되어 있거나 그렇지 않다. 후자 분획을 구성하는 요소의 원래 고유한 품질의 보존은 큰 상업적 이익을 제공한다; 이는 공정의 각 단계에서 화학적, 물리적 및 미생물학적 스트레스의 완화에 의해 가능하게 된다. 이 완화는 주로 다음 요인 중 하나 이상을 기반으로 한다: 공정의 시작 시 섬유의 분리 및 저에너지 소산 장비의 지속적인 사용으로 인한 전단력의 감쇠, 45℃ 이하의 온도 유지, 4 이상의 pH 유지 및 특정 공정 활성에서 항산화제 및/또는 항균제의 첨가. 상기한 것을 기반으로 일 분획화의 부산물은 다음 분획화에 대한 원료가 된다. 이와 같이, 전체적으로 볼 때 공정은 최소한의 유기물을 함유하고 쉽게 분해되는 소량의 액체 폐기물을 생성한다.
따라서, 본 명세서에 개시된 양태는 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는 엽록체 현탁액이다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
따라서, 본 명세서에 개시된 양태는 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액이며, 조성물은 적어도 25% w/v의 고체 함량을 가지며, 여기서 엽록체는 콩과 식물로부터 단리되고,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액에 관한 것으로, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고 엽록체는 콩과 식물로부터 단리되고,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액에 관한 것으로, 현탁액은 참조 메디카고(Medicago) 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액에 관한 것으로, 현탁액은 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액에 관한 것으로, 현탁액은 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 엽록체 현탁액의 제조 공정에 관한 것으로, 상기 공정은
콩과 식물 단편을 압착하여 압착된 식물 단편을 수득하는 단계;
압착된 식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획을 분리하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
엽록체 현탁액을 수득하는 단계; 그리고
선택적으로 엽록체 현탁액을 세척하는 단계를 포함하고,
비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%가 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 엽록체 현탁액에 관련된 것이고,
비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%가 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는 세척된 엽록체 현탁액:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 세척된 엽록체 현탁액,
비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%가 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
상기 엽록체 현탁액은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는 액체 엽록체 조성물:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 적어도 25% w/v의 고체 함량을 갖는 액체 엽록체 조성물,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하고, 선택적으로 N2 또는 질소로 채워진 밀봉된 통 또는 용기 내에 배치되는 즉시 사용 가능한 액체 엽록체 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 해양 유기체를 먹이기 위한 본 명세서에 기재된 액체 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 동물 및/또는 인간을 위한 식품의 제조에서의 본 명세서에 기재된 액체 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 화장품의 제조에서의, 본 본 명세서에 기재된 액체 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물의 제조 공정에 관한 것으로, 상기 방법은
콩과 식물 단편을 압착하는 단계;
압착된 식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 분리하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
엽록체 현탁액을 수득하는 단계;
엽록체 현탁액을 세척하는 단계; 및
세척된 엽록체 현탁액을 컨디셔닝하여 액체 엽록체 조성물을 수득하는 단계로서, 엽록체 현탁액을 혼합하는 것, 엽록체 현탁액의 염도 및/또는 몰농도를 조정하는 것, 엽록체 현탁액을 제형화제, 보존제, 식품 보충물, 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것, 엽록체 현탁액을 포장하는 것, 엽록체 현탁액을 캡슐화하는 것, 및 이들의 혼합으로부터 선택된 적어도 하나의 단계를 포함하는, 단계,
조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고, 그리고
선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 및/또는 액체 엽록체 조성물은 엽록체 현탁액 중 루비스코 함량의 약 90%를 포함하고,
비-엽록체 세포 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95% 또는 엽록체 외부의 가용성 함량이 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나 상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 본 명세서에 기재된 공정에 따라 수득된, 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물에 관한 것으로,
비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%가 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물에 관한 것으로, 상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물에 관한 것으로, 상기 조성물은 약 8% 미만의 수분 함량을 가지며,
상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 콩과 식물로부터 단리되는 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물에 관한 것으로, 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물에 관한 것으로, 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물에 관한 것으로, 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
상기 건조 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 본 명세서에 기재된 조성물을 포함하고, 선택적으로 N2 또는 질소로 채워진 밀봉된 통 또는 용기 내에 배치되는 즉시 사용 가능한 액체 엽록체 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 동물 및/또는 인간에게 먹이를 주기 위한 본 명세서에 기재된 건조 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 동물 및/또는 인간을 위한 식품의 제조에서의 본 명세서에 기재된 건조 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 동물 및/또는 인간을 위한 영양적 보충물의 제조에서의, 본 명세서에 기재된 건조 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 화장품의 제조에서의, 본 본 명세서에 기재된 건조 엽록체 조성물의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 해양 유기체를 먹이는 방법으로, 상기 방법은 해양 유기체를 위한 식이에 제공된 미세조류 및/또는 시아노박테리아의 적어도 일부를 본 명세서에 기재된 건조 엽록체 조성물로 대체하는 것을 포함한다.
또 다른 양태는 건조 엽록체 조성물을 제조하는 공정에 관한 것으로, 상기 공정은
콩과 식물 단편을 제공하는 단계;
식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 분리하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
엽록체 현탁액을 수득하는 단계;
엽록체 현탁액을 세척하는 단계; 및
세척된 엽록체 현탁액을 컨디셔닝하여 건조 엽록체 조성물을 수득하는 단계를 포함하고,
조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고, 그리고
선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 및/또는 건조 엽록체 조성물은 엽록체 현탁액 중 루비스코 함량의 약 90%를 포함하고,
상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는다:
약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
또 다른 양태는 본 명세서에 기재된 공정에 따라 수득된 건조 엽록체 조성물에 관한 것이다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길이를 갖는 단리된 콩과 식물 미세섬유에 관한 것이다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길치를 갖고 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 갖는 단리된 메디카고 종 식물 미세섬유에 관한 것이다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길이를 갖고 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g(건조 기준)의 감소된 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는 단리된 메디카고 종 식물 미세섬유에 관한 것이다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길이를 갖고 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는 단리된 메디카고 종 식물 미세섬유에 관한 것이고, 미세섬유에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 측정된 바와 같이 온전하다.
또 다른 양태는 콩과 식물 미세섬유 및 물을 포함하는 식물 미세섬유 조성물에 관한 것으로, 식물 미세섬유는 평균 길이가 약 40 미크론 내지 약 200 미크론이다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길치를 갖는 메디카고 종 식물을 포함하는 식물 미세섬유 조성물에 관한 것이고, 조성물은 참조 메디카고(Medicago) 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 갖는다.
또 다른 측면은 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길이를 갖는 메디카고 종 식물 미세섬유를 포함하는 식물 미세섬유 조성물에 관한 것이고, 조성물은 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g(건조 기준)의 감소된 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는다.
또 다른 양태는 약 40 미크론 내지 약 200 미크론의 평균 길이를 갖는 메디카고 종 식물을 포함하는 식물 미세섬유 조성물에 관한 것이고, 조성물은 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 가지며, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 측정된 바와 같이 온전하다.
또 다른 양태는 식품 및 사료 제품의 제조에서 본 명세서에 개시된 식물 미세섬유의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 화장품 제조에 있어서 본 명세서에 개시된 식물 미세섬유의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 인간 및/또는 동물 영양적 보충물로서 본 명세서에 개시된 식물 미세섬유의 용도에 관한 것이다.
여전히 또 다른 양태에서, 콩과 계통 식물 미세섬유 조성물을 제조하는 공정이 제공되며, 상기 공정은:
콩과 계통 식물 단편을 제공하는 단계;
식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획을 분리하는 단계; 및
미세섬유 분획을 컨디셔닝하여 미세섬유 조성물을 수득하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태에서, 콩과 계통 식물 미세섬유로부터 적어도 하나의 화합물을 추출하는 공정이 제공되며, 상기 공정은:
콩과 계통 식물 단편을 제공하는 단계;
식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획을 분리하는 단계;
식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획을 수득하는 단계; 및
식물 거대섬유로부터 단백질, 효소, 펩티드, 아미노산, 지방산, 지방 알코올, 테르펜, 페놀, 색소 및 이의 혼합물로부터 선택적으로 선택되는 적어도 하나의 화합물을 추출하는 단계를 포함한다.
또 다른 양태는 단백질, 효소, 펩티드, 아미노산, 지방산, 지방 알코올, 테르펜, 페놀, 색소 및 이의 혼합물로부터 선택된 적어도 하나의 화합물을 추출하기 위한 식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획의 용도에 관한 것이다.
또 다른 양태는 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 단리된 콩과 계통 식물 미세섬유에 관한 것이다.
또 다른 양태는 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 콩과 계통 식물 미세섬유 조성물에 관한 것이다.
비-제한적인 예로서 개시내용의 다양한 실시형태를 나타내는 다음 도면에서, 여기서:
도 1은 일 실시형태에 따라 본 명세서에 개시된 공정의 흐름도이고;
도 2a는 다른 실시예에 따라 본 명세서에 개시된 공정의 흐름도이고;
도 2b는 굵은 선은 황색 주스를 나타내고; 이중선은 녹색 주스 나타내고; 이중 점선은 녹색 젤리를 나타내고; 점선은 갈색 주스를 나타내는, 작동상으로 사용되는 용어를 참조하여 도 2a에 따른 공정의 흐름도이다.
도 3은 또 다른 실시형태에 따른, 첫 번째 분획화 F1 및 특히 수확된 식물로부터 거대섬유 조성물을 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 4는 또 다른 실시형태에 따른, 두 번째 분획화 F2 및 특히 수확된 식물로부터 미세섬유 조성물을 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 5는 또 다른 실시형태에 따른, 세 번째 분획화 F3 및 특히 수확된 식물로부터 사포닌 전구체를 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 6은 또 다른 실시형태에 따른, 네 번째 분획화 F4 및 특히 수확된 식물로부터 세척된 엽록체 현탁액을 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 7은 또 다른 실시형태에 따른, 네 번째 분획화 F4 및 특히 수확된 식물로부터 액체 엽록체 조성물을 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 8은 또 다른 실시형태에 따른, 네 번째 분획화 F4 및 특히 수확된 식물로부터 건조 엽록체 조성물을 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고;
도 9는 또 다른 실시형태에 따른, 네 번째 분획화 F4 및 특히 수확된 식물로부터 루비스코 전구체를 수득하는 공정을 상세히 설명하는 흐름도이고; 그리고
도 10a는 다른 실시형태에 따른 식물 성분을 회수하는 공정의 주류 흐름도이고;
도 10b는 다른 실시형태에 따른 식물 성분을 회수하는 종합적인 흐름도이고;
도 11은 일 실시형태에 따른 식물 준비 및 4가지 분획화를 포함하는 전반적인 산업 공정의 흐름도이고;
도 12는 일 실시형태에 따른, 식물 투입물의 제제 P의 흐름도이고;
도 13은 일 실시형태에 따른, 첫 번째 분획화 F1의 흐름도이고;
도 14는 일 실시형태에 따른, 두 번째 분획화 F2의 흐름도이고;
도 15는 일 실시형태에 따른, 세 번째 분획화 F3의 흐름도이고;
도 16은 일 실시형태에 따른, 네 번째 분획화 F4의 흐름도이고;
도 17은 살충제로서 메디카겐산의 적용 일자를 나타내는 타임라인이고;
도 18a, 18b 및 18c는 다양한 농도의 메디카겐산 사포닌을 기준으로 시간 경과에 따른 감자 잎의 삼켜진 면적을 나타내는 일련의 그래프이고;
도 19는 식이에 따른 어린 홍합(밀릴루스 에둘리스)의 크기를 예시하는 막대 그래프이고;
도 20a는 본 명세서에 개시된 바와 같은 분별화 후 녹색 고체 현탁액(예를 들어, 4B)의 현미경 검사를 묘사하는 이미지이고, 도 20b는 24-시간에 걸쳐 해수에 건조된 엽록체 농축물(예를 들어, 4E)의 1L 현탁액에서 측정된 평균 입자 직경(μm)을 나타내는 그래프이다.
도 21은 본 명세서에 기재된 공정에 따라 수득된 알팔파의 정화된 갈색 주스 3D 및 건조된 엽록체 조성물 4E에서 루비스코(중질 소단위체)의 분포의 웨스턴 블롯 이미지이고;
도 22는 본 명세서에 기재된 공정에 따라 제조된 건조된 엽록체 조성물 4E(4E, 적색), 및 미세조류 이소크리시스 갈바나(CISO; 청색) 및 샤애토세로스 그라실리스(CG; 흑색)에서 측정된 총 아미노산 및 암모니아 농도(% DW(건조 중량))를 매핑하는 레이더 차트이고;
도 23은 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)에서 식별된 상이한 단백질의 총 수를 나타내는 막대 그래프이고;
도 24는 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)에서 식별된 단백질의 위치의 개요를 제공하는 벤 다이어그램이고;
도 25는 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)에서 상이한 중첩 위치를 구체적으로 식별하는 벤 다이어그램이고;
도 26은 단백질 외부에서 발견되고 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)에서 식별된 상이한 펩티드의 총 수를 나타내는 막대 그래프이고; 그리고
도 27은 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)에서 식별된 펩티드의 위치의 개요를 제공하는 벤 다이어그램이다.
도 28은 재수화된 건조 엽록체 농축물(4E)에서 치수 > 2um의 엽록체의 상대적 존재비를 나타낸다. 오른쪽에는 2017년에 제조된 세척된 엽록체 현탁액(4B)으로부터의 엽록체이고; 왼쪽에는 2018년에 제조된 세척된 엽록체 현탁액(4B)으로부터의 엽록체이다.
도 29는 재수화된 동결건조 엽록체 농축물에서 엽록체 치수의 대용물(FSC-A 신호)과 관련된 엽록체 내 농도의 대용물(엽록소 a로부터의 형광 신호)을 나타낸다. 형광 신호의 강도는 흑색에서부터 백색으로 증가한다.
도 30은 손상되지 않은 외부 및 내부 멤브레인 시스템을 나타내는 뚜렷한 명확한 신호를 나타내는 650nm에서 여기에 이어서 희석된 재수화된 엽록체(엽록소 a)의 방출을 도시한다.
도 31은 현탁액 중의 희석된 재수화된 엽록체의 현미경 관찰을 나타낸다.
도 32는 재수화된 건조된 엽록체 조성물(4E)의 크기 분포 및 현미경 관찰을 나타낸다.
도 33은 루비스코(Rubisco)의 면역블롯을 나타내고, 여기서 레인 1은 알파파(alfafa) 전체 식물 추출물이고, 레인 2는 녹색 주스(2G)이고, 레인 3은 C1(3K)이고, 레인 4는 C2(4B)이고, 레인 5는 갈색 주스(3D)이고, 레인 6은 C1의 세척액이고, 레인 7, 8 및 9는 각각 8,25, 16,5 및 33 ng의 정제된 루비스코(Agrisera #AS03 037A)이고, 레인 10은 분자량 마커이다.
도 34는 FBPP의 면역블롯을 나타내고, 여기서 레인 1은 분자량 마커이고, 레인 2는 전체 알파파 식물 추출물이고, 레인 3은 녹색 주스(2G)이고, 레인 4는 갈색 주스(3D)이고, 레인 5는 C1의 세척액이고, 레인 6은 C1(3K)이고, 레인 7은 C2(4B)이다.
개시내용의 추가의 특징 및 이점은 단지 예로서 그리고 비-제한적인 방식으로 예시된 바와 같은 다양한 구현예의 다음 설명으로부터 보다 쉽게 명백해질 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "섬유"는 주로 셀룰로오스, 헤미셀룰로오스 및 리그닌으로 구성된 기다란 구조를 의미한다. 목질화의 수준은 특히 식물, 식물의 구조 및 그 성장 단계에 따라 다르다. 섬유는 식물에 대한 지지를 제공하는 역할을 한다. 그것들은 단리되거나 다발로 될 수 있고 다양한 길이와 직경을 가질 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "섬유"(거대섬유 및 미세섬유)는 전체에 의해 다소 유지될 수 있거나 또는 단편화된 실모양의 구조일 수 있는 이러한 기다란 구조뿐만 아니라 다른 구조 또는 집합체를 지칭한다. 문맥에 따라 다소 용해된 화합물 또는 분자를 함유하는 다소간 결합된 액체도 발견될 수 있다. 이 문서에서 용어 거대섬유는 예를 들어 압착 분리 활성으로 인한 임의 크기의 섬유를 포함할 수 있는 반면, 용어 미세섬유는 주로 예를 들어 스크리닝 분리로 인한 작은 크기, 예를 들어 200 미크론미크론 미만의 섬유를 지칭한다는 것에 유의해야 한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이 용어 "식물 단편" 또는 "식물 단편들"은 기생 부분, 예를 들어, 줄기와 잎 부분, 바람직하게는 식물의 더 잎이 무성한 부분을 포함하는, 콩과 계통 식물, 예를 들어 알팔파 식물의 다양한 길이의 부분 또는 영역을 의미한다. 예를 들어, 식물 단편은 약 1:1, 약 1:1.1, 약 1:1.2, 약 1:1.3, 약 1:1.4 또는 약 1:1.5(습윤 중량 기준)의 잎 대 줄기 비율을 갖는다. 예를 들어, 식물 단편은 식물에서의 엽록체 함량 중 적어도 70%를 함유한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "참조 콩과 계통 식물"은 가공, 압착, 추출 또는 달리 처리 또는 형질전환되지 않은 콩과 계통 식물, 바람직하게는 이의 기생 부분을 의미한다. 참조 콩과 계통 식물은, 예를 들어 수확되지 않은 콩과 계통 식물 또는 더 작은 단편으로 절단된 콩과 계통 식물일 수 있다. 예를 들어, 참조 콩과 계통 식물은 본 명세서에 기재된 바와 같은 처리 이전에 (예를 들어, 분리, 컨디셔닝, 추출, 세척 이전에) 수확된 식물 단편 0B일 수 있다. 참조 콩과 계통 식물은 비교되어 지는 식물과 동일한 과, 족(예를 들어, 트리폴리애), 속, 종(예를 들어, 메디카고 사티바), 아종(예를 들어, 메디카고 사티바 아종 사티바) 및 변종(또는 품종)에 속하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 식물 단편이 특정 알팔파 품종으로부터 수득된 경우, 참조 콩과 계통 식물은 동일한 알팔파 품종의 단편을 포함한다. 유사하게, 용어 "참조 메디카고 종 식물"은 가공, 압착, 추출 또는 달리 처리 또는 형질전환되지 않은 메디카고 종 식물, 바람직하게는 이의 기생 부분을 의미한다. 참조 메디카고 종 식물은 예를 들어 수확되지 않은 메디카고 종 식물 또는 더 작은 단편으로 절단된 메디카고 종 식물일 수 있다. 예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 본 명세서에 기재된 바와 같이 처리 이전에 수확된 식물 단편 0B일 수 있다. 예를 들어, 단편이 특정 알팔파 품종으로부터 수득된 경우, 참조 메디카고 종 식물은 동일한 알팔파 품종에 속한다. 시험되는 식물에 존재하는 화합물, 예를 들어 사포닌 또는 루비스코의 함량을 측정하고 비교하는 맥락에서, 참조 값도 알려진 값일 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "사포닌" 또는 "사포닌들"은 하나 이상의 탄수화물 사슬에 연결된 아글리콘 또는 사포게닌 단위를 지칭한다. 아글리콘 또는 사포게닌 단위는 스테롤 또는 보다 일반적인 트리테르펜 단위로 구성된다. 스테로이드와 트리테르페노이드 사포닌 둘 모두에서, 탄수화물 측쇄는 통상적으로 사포게닌의 3 탄소에 부착된다. 사포닌은 분자의 탄수화물 부분이 수용성인 반면 사포게닌은 지용성이기 때문에 표면-활성 또는 세제 특성을 가지고 있다. 일부 식물성 사포닌은 실험 동물의 장 내강에서 콜레스테롤 흡수를 억제하고 결과적으로 혈장 콜레스테롤의 농도를 감소시키는 것으로 나타났다. 다른 사포닌도 살충 특성이 있는 것으로 나타났다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "메디카겐산" 또는 "메디카겐산 사포닌"은 메디카고 종, 예를 들어 보다 특히 메디카고 사티바(알팔파)로부터 수득된 사포닌의 특정 형태를 의미한다. 메디카겐산은 알팔파 잎에서 발견되는 가장 풍부한 사포닌 중 하나로 품종에 따라 총 사포닌 함량의 약 50%를 차지한다. 메디카겐산 사포닌 함량을 포함하는 사포닌 함량은, 예를 들어 품종 유형에 따라 절대값이 다를 수 있음이 이해될 것이다. 대조적으로, 분획화 공정의 결과로, 한 생성물에서 다른 생성물로의 사포닌 또는 메디카겐산 사포닌의 상대적 농도(예를 들어, 참조 메디카고 종 식물에 비해 농도에서 감소의 관점에서)는 품종 유형에 관계없이 유사하게 유지된다. 예를 들어, 사포닌 함량은, 예를 들어 전자분무 모드에서 UPLC-MS/MS 시스템 상에서 질량 분석법 분석을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 사포닌 함량의 정량화는 상업적 표준, 예를 들어 메디카겐산(LGC standard), 바요게닌(Cederlane), 헤데라게닌(Sigma Aldrich Canada Ltd) 소야사포게놀 A(LGC standard) 및 소야사포게놀 B(Sigma Aldrich Canada Ltd)를 기반으로 할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "엽록체 함량"은 본 명세서에 기재된 조성물, 현탁액 또는 혼합물 중 총 엽록체 함량을 의미한다. 엽록체 함량은, 예를 들어 광산란 기술 사용, 현미경하의 육안 검사 사용, 특정 엽록체 색소(예를 들어, 카로틴, 크산토필, 엽록소)를 분석하기 위한 분광광도법, 엽록체의 광합성 수준(예를 들어, 탄소 동화 및/또는 산소 발생/방출) 측정 및 엽록체에서만 발견되는 단백질, 효소 및/또는 기타 분자의 수준 측정, 예를 들어, 루비스코 홀로엔자임, 특정 내부 또는 외부 엽록체 막 단백질 또는 티칼로이드 루멘 또는 티칼로이드 막 단백질의 면역형광 정량을 사용하는, 임의의 적절한 공지된 방법을 사용하여 정성적으로 또는 정량적으로 결정될 수 있다. 엽록체 함량은, 예를 들어 Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL (2005) 제18판, AOAC Official Method 942.04 (수정됨)에 따라 엽록소 함량의 관점에서 측정될 수 있다. 베타 카로틴 함량은 예를 들어 Official Methods of Analysis, Method 2005.07, AOAC INTERNATIONAL, (수정됨)에 따라 측정될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "고체 분획"은 식물 바이오매스로부터 추출된 구조, 화합물 및/또는 분자의 혼합물을 의미하며, 이는 용해되지 않고 특정 부피의 액체를 보유할 수 있고/있거나 상기 액체에 완전히 또는 부분적으로 결합된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "액체 분획"은, (예를 들어, 산의 첨가에 의해) 변형되거나 되지 않은 식물 바이오매스로부터 추출된 액체를 의미하며, 이는 현탁액에 구조 및/또는 화합물 및/또는 상기 액체에 용해되거나 되지 않은 분자를 함유할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "단백질 함량"은 본 명세서에 기재된 생성물(예를 들어, 조성물, 전구체 또는 현탁액)의 총 단백질 함량을 의미한다. 단백질 함량에는 루비스코 단백질 함량이 포함된다. 단백질 함량에는 식물 구조(예를 들어, 막)에 연관 또는 연결되거나 그 안에 포매된 단백질, 완전히 용해되는 단백질, 액체 분획에서 현탁액에 응집체로 자연적으로 존재하는 단백질, 및 부분적으로 회합되거나 부분적으로 분해되는 이들 단백질의 부분이 포함된다. 단백질 함량은, 예를 들어 제한 없이 단백질 검정, 예를 들어 비신코닌산(BCA) 단백질 검정 같은 당업계에 인지된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 단백질 함량은 또한 Dumas 방법에 따라 또는 Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 제18판, Methods 968.06 and 992.15, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, (2005) (수정됨)에 따라 측정될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "지질 함량"은 본 명세서에 기재된 생성물(예를 들어, 조성물, 전구체 또는 현탁액)의 총 지질 함량을 의미한다. 지질 함량에는 트리글리세리드, 인지질(유용한 오메가-3 및 오메가-6 지방산 포함) 스핑고리피드 및 기타 막 지질 및 지질 방울(주로 트리아실글리세롤)이 포함된다. 지질 함량은 당업계에 인정된 방법을 사용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 지방산 프로필은 문헌[공식 방법 번호 996.06, AOAC INTERNATIONAL의 공식 분석 방법(수정), 제19판, AOAC INTERNATIONAL: Gaithersburg, Maryland (2012)]에 따라 측정될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "고갈된"은 이러한 원소가 없거나 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만 또는 1% 미만의 이러한 원소를 함유하는 현탁액을 의미한다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H와 관련하여, "고갈된"은 식물 단편 0B와 비교하여 이러한 거대섬유에서 적어도 80% 감소를 의미한다. 유사하게, 미세섬유 고갈된 현탁액 2G와 관련하여, "고갈된"은 거대섬유 고갈된 현탁액 1H와 비교하여 그러한 미세섬유에서 적어도 80% 감소를 의미한다. 동일한 추론이 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2 및 미세섬유-고갈된 현탁액 2G.2에 적용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "엽록체 감소된"은 본 명세서에 기재된 공정 동안 초기 엽록체 중 적어도 50%가 제거된 현탁액을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "사포닌-풍부화된 분말"은 분말 형태에서의 참조 콩과 계통 식물의 사포닌 함량과 비교한 사포닌 함량에서 적어도 5배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 40배 또는 50배 증가를 갖는 사포닌-함유 분말을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "컨디셔닝" 또는 "컨디셔닝된"은 최종 생성물을 추가(예를 들어, 상업적, 산업적) 용도에 적합하게 만드는 관점에서 중간 생성물에 대해 수행될 수 있는 임의의 공정 또는 처리를 의미한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 생성물을 최소한으로 포장하는 것과 선택적으로 추가로 건조, 희석, 첨가제 및/또는 보충제를 첨가하는 것을 포함한다. 예를 들어, 미세섬유 분획의 맥락에서, 컨디셔닝은 포장하는 것에 부가하여 미세섬유를 건조하여 그 수분 함량을 줄이는 것과 적절한 양의 영양 보충제 및 기타 첨가제를 첨가하는 것을 포함할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 내용이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 복수 참조를 포함한다. 또한 "또는"이라는 용어는 내용이 달리 명백하게 지시하지 않는 한 "및/또는"을 포함하는 의미로 일반적으로 사용된다는 점에 유의해야 한다.
본 개시내용의 범위를 이해함에 있어서, 본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "포함하는" 및 그 파생어는 언급된 특징, 요소, 성분, 그룹, 정수 및 /또는 단계를 특정하지만, 그러나 언급되지 않은 다른 기능, 요소, 성분, 그룹, 정수 및/또는 단계의 존재를 배제하지 않는 개방형 용어인 것으로 의도된다. 전술한 내용은 용어 "함유하는", "가지는" 및 그 파생어와 같이 유사한 의미를 갖는 단어에도 적용된다.
본 명세서에 사용된 "실질적으로", "약" 및 "대략적으로"와 같은 정도의 용어는 최종 결과가 유의하게 변경되지 않도록 수정된 용어의 합리적인 편차량을 의미한다. 이 편차가 그것이 수정하는 단어의 의미를 부정하지 않는다면, 이들 정도의 용어는 수정된 용어의 ±5% 또는 ±10%의 편차를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.
특정 섹션에 기재된 정의 및 구현예는 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 적합한 것으로 본 명세서에 기재된 다른 구현예에 적용가능하도록 의도된다.
현재 개시된 분획화 공정은 다양한 최종 및 중간 생성물뿐만 아니라 전구체, 예를 들어, 필요한 경우 그 추출 및 정제에 이어서 다른 생성물의 개발에 대해 높은 가치를 제시하는 분자 및 화합물을 생성할 수 있는 각 식물 단편의 주요 성분의 무결성 및 품질의 보존 원칙에 기초하여 개발되었다. 엽록체(즉, 잎 세포의 주요 성분)의 무결성을 보존하면 나머지의 식물 내용물로부터 엽록체를 분리할 수 있고 그 자체의 성분(예를 들어, 루비스코, 막 지질, 막 단백질, 카로틴, 크산토필, 엽록소)의 품질을 보존할 수 있다는 가설이 세워졌다. 엽록체 무결성의 보존은 엽록체 성분을 하나의 단일 분획으로 분리하고 추가로 다양한 방법을 사용하여 상이한 최종 생성물에서 이 분획을 세척하고 컨디셔닝하는 것을 허용했다. 따라서, 이 엽록체-기반 분획으로부터, 높은 엽록체 농도로 액체 및 건조 생성물을 컨디셔닝하는 것이 가능하다. 또한 불용성 엽록체 성분(예를 들어, 막 지질, 막 단백질, 막 결합 색소)으로부터 루비스코를 추출하거나 방출하고 루비스코 단백질 본체의 크기에 기반하여 필요한 수준으로 정제하여, 루비스코 화합물 또는 루비스코 기반 활성 성분을 생산하는 것이 가능하다. 더욱이, 하나의 단일 분획에 그 원래의 입자 형태에 엽록체 성분을 가두어 다른 분획에 귀중한 필수 성분뿐만 아니라 엽록체의 보존도 허용할 수 있었음이 관찰되었다. 거대섬유 분획은 주로 이 고형 분획으로부터 사포닌의 상당량이 추출되기 때문에 동물 영양에 적합한 식물 단편의 소화가능한 거대섬유를 함유한다. 미세섬유 분획은 인간과 동물에게도 유익한 미세섬유를 함유한다. 부가하여, 이들 두 분획은 또한 지방 알코올, 효소, 펩티드 등과 같은 다양한 부가가치 분자 또는 화합물을 함유한다. 나머지 분획은 액체이고 다른 사포닌-기반 최종 생성물을 개발하기 위해 추출 및 정제될 수 있는 높은 사포닌 농도를 나타낸다. 엽록체 무결성을 보존함으로써, 달리는 액체 분획에서 가용성으로 방출되었을 수 있고 가치 있는 가용성 화합물을 단리하기 위한 액체 분획의 추가 처리를 손상시킬 수 있는 엽록체의 주요 오염 성분이 없는 액체 분획을 생성할 수 있었다.
전반적인 공정은 도 1의 흐름도에 도시되어 있고, 도 2a의 흐름도에 더 구체적으로 설명되어 있다. 간단히 말해서, 적합한 식물, 예를 들어 알팔파는 바이오매스 준비 0A 동안 생산 및 단편화되고 액체 분획이 식물 단편 0B로부터 분리되는 거대섬유 분리 1A를 거친다. 생성된 거대섬유 분획 1B는 거대섬유 컨디셔닝 1C를 거쳐 최종 생성물로 사용할 준비가 된 거대섬유 조성물 1D를 얻고/얻거나 고가 분자 및/또는 화합물의 화합물 추출 1F를 받을 수 있다. 미세섬유 고갈 2A 동안, 나머지 미세섬유는 액체 분획, 즉 거대섬유 고갈된 현탁액 1H로부터 추출되고, 미세섬유 컨디셔닝 2B를 거쳐 미세섬유 조성물 2C를 생성한다. 미세섬유 조성물 2C는 인간 및 동물 영양을 위한 최종 생성물 2D로 사용할 준비가 된다. 거대섬유 분획 1B와 유사하게, 미세섬유 분획 2AA는 또한 고가 분자 및/또는 화합물의 화합물 추출 2E를 거칠 수 있다. 생성된 미세섬유 고갈된 현탁액 2G는 엽록체 분리 3A를 거쳐 현탁액으로부터 엽록체를 제거하여 2개의 상이한 현탁액인, 엽록체 현탁액 3K 및 엽록체 감소된 현탁액 3B를 생성한다. 후자는 잔류 단백질, 바람직하지 않은 용해물(예를 들어, 이취 및 역취를 유발하는 것)뿐만 아니라 기타 현탁된 물질(예를 들어, 3CC)을 제거하기 위해 현탁액 정화 3C를 거치고 분자 및 화합물, 예컨대 사포닌을 추출하기 위해 화합물 추출 3E를 거칠 수 있다. 그 후, 생성된 사포닌- 풍부화된 분말 3F가 얻어지고 예를 들어 사포닌 분말 컨디셔닝 3G를 거칠 수 있다. 엽록체 현탁액 3K는 엽록체 세척 4A에 이어 액체 엽록체 컨디셔닝 4G 및/또는 건조 엽록체 컨디셔닝 4D를 거쳐 각각 최종 생성물 4I 및 4F로 사용할 준비가 된 액체 엽록체 조성물 4H 및/또는 건조 엽록체 조성물 4E를 수득한다. 루비스코 및/또는 기타 분자 및 화합물을 추출하기 위해 전체 또는 부분적으로 컨디셔닝 4G 및 4D 대신에 화합물 추출 4J가 또한 수행될 수 있다는 점에 유의해야 한다. 생성된 루비스코 현탁액 4K는 루비스코 컨디셔닝 4L을 거쳐 추가 최종 생성물 개발 4N에 사용될 수 있는 루비스코 전구체 4M을 얻을 수 있다.
다른 구체적이지만 비-제한적인 실시예가 뒤따를 것이다. 도 1 내지 도 10b의 흐름도에서, 공정 활성도는 직사각형으로 식별되고, 생성물(중간체, 전구체, 최종 생성물)은 타원형으로 식별되고, 전구체 생성물 생성물 및 최종 생성물의 용도는 다이아몬드로 식별된다.
식물 생산 P
예를 들어 도 2a에 도시된 바와 같이, 식물 생산 P는 식물을 재배, 수확 및 단편화하는 것을 포함하고 신선한 식물 단편 0B를 생성하는 바이오매스 준비 0A로 시작된다. 이 예비 식물 생산 P는 도 1, 2b, 3, 4, 5, 6, 7, 8 및 9에도 도시되어 있다.
식물의 기생 부분이 너무 목질화되지 않도록 바이오매스 준비 0A 동안 주의를 기울인다. 사실, 바람직한 잎 대 줄기 비율을 함유하는 바이오매스(예를 들어, 식물)를 선택하는 것이 바람직하다. 식물은 바람직하게는 줄기의 아래쪽 부분이 잎을 흘리기 시작하지 않고 줄기가 여전히 광합성의 징후(녹색)를 보이는 단계에서 수확된다. 예를 들어, 알팔파의 경우 이 단계는 높이가 약 50cm이지만 품종, 기상 조건, 토양 유형, 토양 밀도, 서있는 작물 밀도 등 사이에서 유의하게 다를 수 있다. 품종에 관계없이 개화 전에 수확하는 것이 바람직하다. 유사하게, 다른 식물 종, 예를 들어 사료 풀의 경우, 수확은 개화 이전에 수행하는 것이 바람직하다. 일반적인 목적은 목질화된 섬유에서의 낮은 함량을 갖는 잎이 많은 바이오매스를 공정에 공급하는 것인데, 이러한 섬유는 거대섬유 분리 1A 및 미세섬유 고갈 2A 동안 과도한 전단을 생성할 수 있기 때문이다.
바이오매스 수확은, 예를 들어 커터 바가 장착된 수확기로 가장 잘 수행된다. 일반적으로 컨디셔닝 장치 및/또는 해머 밀이 장착된 수확기는 피해야 한다. 목적은 이 공정의 초기 단계에서 세포 내용물의 방출을 최소화하기 위해 가능한 한 적은 전단, 밀링 및 스트리핑으로 날카롭게 절단된 식물 단편 0B를 공정에 공급하는 것이다. 이 단계에서 세포 내용물을 방출하는 것은 무결성을 보전하는 공정 원칙에 2가지 해로운 영향이 있다. 이 단계에서 엽록체를 방출하는 것은 식물 단편 0B 조작 및 운송 동안에 이들을 파손할 수 있다. 같은 방식으로 이 단계에서 세포 내용물을 방출하는 것은 가치있는 성분의 조기 변성을 촉발할 수 있다. 변성의 예는, 예를 들어 화학적(예를 들어, 산화), 효소적(예를 들어, 단백질분해) 또는 생물학적(예를 들어, 고에너지 성분의 방출에 의해 자극되는 미생물 성장)일 수 있다. 예방조치로, 산화를 제어/감소시키기 위해 항산화제, 예를 들어 메타중아황산나트륨을 신선하게 수확된 바이오매스에 (예를 들어, 분무에 의해) 첨가할 수 있다.
신선하게 수확되고 절단된 식물 단편 0A를 수득하는 것이 바람직하지만, 바이오매스 준비 0A 및 생성된 중간 생성물 또는 식물 단편 0B로 시작하여 공정을 수행할 필요는 없다는 것이 이해될 것이다. 다른 적절한 식물 단편 또는 그린 바이오매스는 최근에(예를 들어, 하루 미만) 수확되어 가능한 한 엽록체 무결성에 손상을 최소화하면서 절단된 한 사용될 수 있다.
예를 들어, 식물 단편 0B는 적어도 하나의 식물을 단편으로 절단함에 의해 수득된다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 커터 바를 사용함에 의해 수득된다.
예를 들어, 식물 단편 0B는 약 10mm 내지 약 100mm의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 약 15mm 내지 약 85mm의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 약 20mm 내지 약 50mm의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 적어도 하나의 식물은 개화 이전에 절단된다.
예를 들어, 적어도 하나의 식물은 콩과 계통 식물이다. 예를 들어, 적어도 하나의 식물은 트리폴리애 족으로부터의 식물이다. 예를 들어, 적어도 하나의 식물은 메디카고 속, 예컨대 메디카고 사티바, 메디카고 팔카타, 메디카고 폴리모르파, 메디카고 루풀리나, 메디카고 루고사, 메디카고 크레타시아, 메디카고 플라티카르파, 메디카고 마리나, 메디카고 루페스트리스, 메디카고 세쿤디플로라 또는 메디카고 트룬카튤라로부터 유래한다. 예를 들어, 적어도 하나의 식물은 메디카고 사티바 종 또는 알팔파이다. 본 명세서에서 메디카고 사티바에 대한 언급은 메디카고 사티바의 모든 아종(종 또는 아종)(즉, 메디카고 사티바 종)을 포함하는 것으로 이해될 것이다. 예를 들어, 적어도 하나의 식물이 메디카고 사티바인 경우, 예를 들어 심포니 품종을 포함하는 임의의 적절한 품종 또는 변종이 사용될 수 있음을 이해될 것이다.
본 명세서에 언급된 바와 같이 식물에서 총 사포닌 농도는 조직 유형 및 식물 성장의 단계와 같은 여러 인자를 기반으로 하여 달라질 수 있다. 총 사포닌 농도 또한 품종마다 다르다. 예를 들어, 일부 메디카고 사티바 품종은 메디카겐산 사포닌의 더 낮은 함량, 예를 들어 1.5mg/g(건조 기준)을 갖는 반면 다른 메디카고 사티바 품종은 더 높은 함량의 메디카겐산 사포닌, 예를 들어 8mg/g(건조 기준)을 함유한다. 예를 들어, 본 명세서에서 실시예 13에 기술된 바와 같이, 심포니 품종의 기생 부분은 3.3mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 함량을 갖는다.
예를 들어, 알팔파 식물은 약 40cm 내지 약 60cm의 높이에서 절단된다. 예를 들어, 알팔파는 약 45cm에서 약 55cm의 높이에서 절단된다. 예를 들어, 알팔파는 약 50cm의 높이에서 절단된다.
예를 들어, 식물 단편 0B는 약 1:1, 약 1:1.2, 약 1:1.3, 약 1:1.4, 약 1:1.5(습윤 무게 기준)의 평균 잎 대 줄기 비율을 갖는다.
예를 들어, 식물 단편 0B는 항산화제 및/또는 항균제로 처리된다. 예를 들어, 항산화제는 시트르산, 메타중아황산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨 또는 메타중아황산칼륨이다. 예를 들어, 항균제는 시트르산, 벤조산염, 선택적으로 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 식물 단편 0B는 수확 후 2시간 이내에 항산화제 및/또는 항균제와 접촉된다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 수확 후 1시간 이내에 항산화제 및/또는 항균제와 접촉된다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 수확 후 15분 이내에 항산화제 및/또는 항균제와 접촉된다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 수확 후 5분 이내에 항산화제 및/또는 항균제와 접촉된다. 예를 들어, 식물 단편 0B는 수확 시 항산화제 및/또는 항균제와 접촉된다.
첫 번째 분획화 F1
도 2a, 2b 및 3을 참조하면, 첫 번째 분획화 F1은 1A부터 1H까지의 공정 활성도(직사각형), 중간 또는 최종 생성물(타원형) 및 용도(다이아몬드)로 표시된다. 첫 번째 분획의 목적은 식물 단편 0B에서 액체 분획을 가능한 한 많이 분리하는 것이다. 식물 단편 0B(예를 들어, 상기에서 기재된 바와 같은 신선한 식물 단편)를 제공할 때, 이러한 단편은 거대섬유 분리 1A에 제시되어 거대섬유 분획 1B 뿐만 아니라 특히 엽록체 및 잔여 미세섬유를 함유하는 추출된 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 수득한다. 거대섬유 분리 1A는 생성된 추가 현탁액에서 거대섬유 분획 1B로부터 더 가치 있는 분자, 화합물 또는 구조를 추출하기 위해 한번보다 더 많이 수행될 수 있다. 생성된 거대섬유 분획 1B는 거대섬유 컨디셔닝 1C를 거쳐 동물 영양 1E에 사용될 수 있는 거대섬유 조성물 1D를 수득한다.
거대섬유 분리 1A
거대섬유 분리 1A는 과도한 전단, 온도 상승 및/또는 압력 차이, 엽록체 파손을 초래할 수 있는 모든 조건을 피하면서 수행되는 것이 바람직하다. 식물 단편 0B를 제공한 후 가능한 한 빨리 분리를 수행하고 사용된 분리 장치의 유출에서 온도가 예를 들어 30℃를 초과하지 않는 것이 바람직하다. 이 장치는 사용된 기계적 힘 또는 소산된 에너지가 엽록체 무결성을 보존하는 한 분리에 대해 적합하다. 해머 밀 및 초음파 장치는 과도한 전단을 생성하고/하거나 엽록체 막 무결성을 파괴할 수 있으므로 피하는 것이 바람직하다. 현재 개시된 공정은 과도한 기계적 강도의 사용이, 예를 들어 액체 분획에서 엽록체 무결성의 파손 및 루비스코 단백질 성분의 방출을 초래하여 이에 따라 엽록체 농축의 품질을 감소시키는 광합성적으로 활성인 식물 바이오매스에 대한 다른 공지된 분획화 공정과 대조된다. 그런 다음 루비스코는 식물 세포의 모든 잔존하는 가용성 성분과 혼합되고, 그 회수 또는 정제도 어려워진다. 부가하여, 이 초기 단계에서 높은 전단을 초래하는 기계적 조건의 사용은 바이오매스 온도를 증가시킬 수 있으며, 이는 차례로 엽록체 내 그리고 예를 들어 카로틴, 엽록소, 천연 항산화제(즉, 분획에 첨가된 항산화제가 아님), 안토시아닌, 단백질 및 오메가-3 인지질과 같은 액상 내 섬유질 분획(거대섬유 및 미세섬유)에 존재하는 주요 영양 용질의 산화적 붕괴를 증가시킬 것이며, 이들은 모두 열에 불안정하고 pH에 민감하다.
예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 약 42℃ 이하의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 약 4℃ 내지 약 42℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 약 15℃ 내지 약 38℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 약 20℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다.
예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 프레스, 선택적으로 스크류 프레스 또는 유압 프레스를 사용하여 수행된다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 800kPa 미만이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 400kPa 내지 약 800kPa이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 400kPa 내지 약 750kPa이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 400kPa 내지 약 700kPa이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 400kPa 내지 약 650kPa이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 400kPa 내지 약 600kPa 정도이다. 예를 들어, 가해지는 압력은 약 400kPa 내지 약 500kPa이다.
예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 6시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 5시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 4시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편 제공으로부터 3시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 2시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 1시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리는 식물 단편 제공으로부터 약 1시간 내지 약 6시간에 수행된다.
예를 들어, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H 및 1H.2의 분리는 식물 단편 0B를 2회 압착하는 것(예를 들어, 1A.1 및 1A.2)을 포함한다. 이 맥락에서, 두 번째 압착(1A.2)은 첫 번째 압착(1A.2)으로 인한 식물 거대섬유를 함유하는 거대섬유 분획 1B를 재수화하고, 재수화된 물질로부터 두 번째 부피의 액체 또는 두 번째 부피의 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2를 추출하는 것을 포함한다. 예를 들어, 재수화는 물 및/또는 전반적인 공정의 다운스트림 활성도에서 나오는 재순환 액체를 부가하는 것을 포함한다. 예를 들어, 첫 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 두 번째 분획화 F2에 사용될 수 있는 반면, 두 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2는 현탁액 정화 3C의 대상이 될 수 있고 그런 다음 세 번째 분획화 F3에서 화합물 추출 3E에서 수행된 바와 같이 분자 또는 화합물의 추출 대상이 될 수 있다. 예를 들어, 첫 번째 및 두 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H 및 1H.2는 혼합 여부에 관계없이 두 번째 분획화 F2를 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 식물 단편이 두 번 압착되는 경우, 생성된 거대섬유 분획 1B는 첫 번째 압착 및/또는 두 번째 압착(예를 들어, 1A.1 및 1A.2)을 거친 거대섬유를 포함한다.
예를 들어, 거대섬유 분리 1A의 공정은 식물 단편에 소포제를 제공하는 것을 포함한다.
거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 작은 크기의 현탁된 구조 및/또는 화합물뿐만 아니라 그 안에 용해되거나 용해되지 않은 분자, 예컨대 예를 들어 사포닌을 함유한다. 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 또한 화합물, 분자 및/또는 추가 다운스트림 조성물 또는 현탁액과 같은 관심있는 상이한 고체 및 가용성 물질을, 이러한 화합물 또는 분자의 최소 분해로 포함한다. 이후에 추가로 기술되고 도 10b에 도시된 바와 같이, 두 번째 압착 단계의 바로 업스트림에 있는 첫 번째 압착 케이크(1B)에 물을 주는 것을 포함하는 두 단계 압착(1A.1 및 1A.2)은 품질과 무결성을 유지하면서 이러한 바람직한 고체 및 가용성 물질의 더 높은 비율로 포획하는 것을 허용한다. 그 안에 포함된 미세섬유와 길이가 약 20 - 200 미크론미크론인 것을 제외하고, 고체 입자의 75% 초과가 엽록체의 평균 크기인 5 내지 10 미크론미크론인 것을 나타내는 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 크기 분포 분석은 거대섬유 분리 1A의 품질의 지표이다. 더욱이, 거대섬유 분획 1B를 구성하는 거대섬유 응집체에 포획되지 않은 상당한 비율의 미세섬유가 거대섬유 고갈된 현탁액 1H에 잔류할 수 있다. 상기에서 언급된 바와 같이, 이들 미세섬유는 평균 크기 또는 길이가 20 내지 200 미크론미크론 사이이다. 마지막으로, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 또한 바이오매스 준비 0A 동안 식물 단편 0B에 업스트림 공정에서 첨가된 예를 들어 메타중아황산염과 같은 잔류 항산화제 및/또는 항균제를 함유할 수 있다는 점에 유의해야 한다.
거대섬유 분획 1B는 거대섬유, 미생물(예를 들어, 박테리아, 효모, 균류), 전체 식물 세포뿐만 아니라 단백질, 펩티드, 아미노산, 색소와 같은 분자 및/또는 화합물을 포함한 다양한 구조를 포함하며, 그 모두는 특정한 액체 부피를 유지할 수 있고/있거나 상기 액체에 전체적으로 또는 부분적으로 결합된다. 거대섬유 분획 1B는 또한 바이오매스 준비 0A 동안 식물 단편 0B에 업스트림 공정에서 첨가된 메타중아황산염과 같은 잔류 항산화제 및/또는 항균제를 함유할 수 있다. 더욱이, 대부분의 식물의 사포닌이 액체 분획 또는 거대섬유 고갈된 현탁액 1H에 의해 운반(또는 용해)되어, 거대섬유 분획 1B의 영양가 및 소화성을 차례로 향상시키는 것으로 관찰되었다.
달리 지시되지 않는 한, 본 섹션에서 "거대섬유"는 거대섬유 분획 1B에 포함된 거대섬유, 단리된 거대섬유 및 거대섬유 조성물 1D에 포함된 거대섬유를 지칭한다(후자는 하기에 추가로 기재됨).
예를 들어, 본 명세서에 개시된 거대섬유 분획 1B 및 거대섬유 조성물 1D는 콩과 계통 식물 거대섬유를 포함한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 종에서 유래한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 사티바 종(즉, 알팔파) 또는 아종에서 유래한다.
예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 50 중량% 내지 약 75 중량%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 55 중량% 내지 약 65 중량%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 60 중량% 내지 약 63 중량%의 수분 함량을 갖는다.
예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 30% 내지 약 70%의 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 50% 내지 약 70%의 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 식물 단편(0B)이다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 참조 식물 단편(0B)에 비해 약 60% 내지 약 65%의 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 50% 내지 약 70%의 메디카겐산 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 60% 내지 약 65%의 메디카겐산 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다.
예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 식물 단편 0B로 구성된다. 예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 알팔파이다.
예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 1.0 내지 5.0mg/g(건조 기준)의 사포닌 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 1.5 내지 4.0mg/g(건조 기준)의 사포닌 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 1.5mg/g(건조 기준) 미만의 사포닌 함량을 갖는다.
예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 0.5mg/g(건조 기준), 약 0.6mg/g(건조 기준), 약 0.7mg/g(건조 기준), 약 0.8mg/g(건조 기준), 약 0.1mg/g(건조 기준), 약 1.0mg/g(건조 기준), 약 1.2mg/g(건조 기준), 약 1.4mg/g(건조 기준), 약 1.6mg/g(건조 기준), 약 1.8mg/g(건조 기준), 약 2.0mg/g(건조 기준), 약 2.5mg/g(건조 기준), 약 3.0mg/g(건조 기준), 약 3.5mg/g(건조 기준), 약 4.0mg/g(건조 기준), 약 4.0mg/g(건조 기준), 약 4.5mg/g(건조 기준) 또는 약 5.0mg/g(건조 기준)의 사포닌 함량을 갖는다. 예를 들어, 사포닌은 메디카겐산 사포닌이다.
예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 10% w/w 내지 약 30% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 12% w/w 내지 약 24% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 15% w/w 내지 약 20% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 식물 거대섬유, 거대섬유 분획 1B 및/또는 거대섬유 조성물 1D는 약 16% w/w 내지 약 18% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다.
예를 들어, 식물 거대섬유는 약 10mm 내지 약 100mm의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유는 약 10mm 내지 약 50mm의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유의 적어도 75%는 약 20mm 미만의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유의 적어도 80%는 약 20mm 미만의 평균 길이를 갖는다.
예를 들어, 항산화제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
거대섬유 컨디셔닝 1C
품질 및 기호성을 보존하기 위해, 식물 거대섬유를 포함하는 거대섬유 분획 1B는, 예를 들어 도 1, 2a, 2b 및 3에 도시된 바와 같이 거대섬유 조성물 1D를 수득하기 위해 컨디셔닝될 수 있다. 예를 들어, 컨디셔닝은 필요에 따라 용기 또는 컨테이너에 거대섬유 분획 1B를 신속하게 포장하고 압착하는 것을 포함한다. 초기 식물 성장 단계(예를 들어, 식물이 여전히 높은 잎/줄기 비율을 표시할 때)에서 수확하는 데 주의를 기울인 경우, 급격하게 절단(예를 들어, 10-50mm 사이)하고, 제한된 온도 증가와 차별적인 낮은 전단 및 압력 하에서 식물 단편 0B를 압착하고, 그리고 급속하게, 예를 들어 거대섬유 분리 1A, 거대섬유 컨디셔닝 1C의 약 30분 또는 약 1시간 이내에 포장하는 것은 예를 들어 약 60%-65% 수분을 갖고 약 15 내지 20% w/w 단백질 함량(건조 기준)을 갖는 거대섬유 조성물 1D를 초래할 것이다. 밀폐 용기 또는 컨테이너, 발효 또는 사일로에 저장하는 것을 사용하여 거대섬유 조성물 1D의 pH를 약 3-4주 이내에 원하는 pH, 예를 들어 4.3 미만으로 낮출 수 있다. 대안적으로, 박테리아 접종물은 거대섬유 컨디셔닝 1C 동안 포장하기 이전에 거대섬유 분획 1B에 첨가될 수 있다. 보충제, 항산화제 및/또는 항균제가 또한 포장하기 이전에 거대섬유 분획 1B에 첨가될 수 있다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 거대섬유 조성물 1D를 수득하기 위해 컨디셔닝된다. 예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분리 1A로부터 4시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분리 1A로부터 3시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분리 1A로부터 2시간 이내에 수행된다. 예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분리 1A로부터 약 1시간 내지 약 4시간 안에 수행된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B를 항산화제 및/또는 항균제와 혼합하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨 또는 메타중아황산칼륨이다. 예를 들어, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 벤조산나트륨 또는 메타중아황산칼륨이다.
예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B에 영양 보충제를 첨가하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B를 포장하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 포장 후에 거대섬유 분획 1B를 사일로에 저장하는 것을 포함한다. 예를 들어, 포장은 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리로부터 6시간 미만, 4시간 미만, 3시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만에 수행된다. 예를 들어, 포장은 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 분리로부터 약 1시간 내지 약 6시간 내에 수행된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 기밀 용기에서 거대섬유 분획 1B를 압착하고 기밀하게 밀봉하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 변형된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에서 기밀 용기에서 거대섬유 분획 1B를 압착하고 밀봉하는 것을 포함한다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 3:1의 비율로 압착되고, 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2.8:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2.6:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2.4:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2.3:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2.2:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 1.8:1의 비율로 압착된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 1.5:1의 비율로 압착된다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 선택적으로 리셉터블에 기밀하게 밀봉된다. 예를 들어, 용기는 약 20 리터 내지 약 2,000 리터의 용량을 갖는다. 예를 들어, 용기는 폴리머 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명한 폴리머 파우치 또는 백이다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 변형된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에서 기밀하게 밀봉된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B를 산, 선택적으로 유기산과 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B에 락토바실러스 박테리아를 접종하여 발효를 가속화하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 거대섬유 분획 1B에 바실러스 박테리아, 예를 들어 바실러스 서브틸리스를 접종하여 유익한 미생물 활동을 자극하는 것을 포함한다. 예를 들어, 발효는 혐기성이다. 예를 들어, 발효는 호기성이다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 2주 내지 약 6주의 기간 동안 발효된다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 약 3주 내지 약 4주의 기간 동안 발효된다.
발효 기간에 이어서, 생성된 발효된 거대섬유 조성물 1D는 pH를 낮추었다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 4.0 내지 5.0의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 4.0 내지 4.5의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 4.0 내지 4.4의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 4.0 내지 4.3의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 5.0 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.8 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.7 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.6 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.5 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.4 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 4.3 미만의 pH를 갖는다.
예를 들어, 컨디셔닝은 최종 생성물으로서 거대섬유 조성물 1D의 영양가를 증가시키기 위해 비타민 및 지방산을 첨가하는 것을 포함한다.
예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 50 중량% 내지 약 75 중량%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 55 중량% 내지 약 65 중량%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 60 중량% 내지 약 63 중량%의 수분 함량을 갖는다.
예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 물을 추가로 포함한다.
표 9에 나타낸 바와 같이, 생성된 거대섬유 조성물 1D는 식물 단편 0B에 비해 감소된 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는다.
예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 30% 내지 약 70%의 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 식물 단편 0B에 비해 약 50% 내지 약 65%의 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다.
예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 식물 단편 0B에 비해 약 30% 내지 약 70%의 메디카겐산 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 식물 단편 0B에 비해 약 40% 내지 약 65%의 메디카겐산 사포닌 함량에서의 감소를 갖는다. 예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 식물 단편 0B로 구성된다. 예를 들어, 참조 메디카고 종 식물은 알팔파이다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 약 0.4 내지 5.5mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는다. 예를 들어, 거대섬유 조성물 1D는 1.5mg/g(건조 기준) 미만의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖는다.
화합물 추출 1F
도 2a, 2b 및 3을 참조하면, 화합물 추출 1F는 또한 거대섬유 분획 1B로부터 수행되어 고가의 분자 및/또는 화합물을 수득할 수 있다. 일단 추출된 이들 분자 및/또는 화합물은 다양한 수준에서 정제될 수 있고 다양한 산업에서 유용한 최종 생성물의 개발을 위한 활성 성분으로 사용될 수 있다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 본 명세서의 실시예에 나타낸 바와 같이 단백질, 효소, 펩티드, 아미노산, 지방산, 지방 알코올, 테르펜, 페놀 및 색소의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 단백질, 선택적으로 표 10 내지 16 중 어느 하나에서 확인된 단백질의 공급원일 수 있다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 펩티드의 공급원일 수 있다. 예를 들어, 거대섬유 분획 1B는 지방 알코올, 선택적으로 트리아콘탄올의 공급원일 수 있다(실시예 14에 나타낸 바와 같음).
거대섬유 조성물 1D는 즉 도 2 및 3에 도시된 바와 같이 동물 사료 1E로서 상품화되어 사용될 수 있다.
두 번째 분획화 F2
첫 번째 분획화 F1 동안 실질적으로 손상되지 않은 상태로 유지되었기 때문에, 엽록체는 가용성 식물 성분에서 분리될 수 있다. 그러나, 엽록체 분리 3A 이전에, 거대섬유 분리 1A로부터 수득된 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 특히 도 1, 2a, 2b, 4, 5, 6, 7, 8 및 9에 도시된 바와 같이 미세섬유 고갈 2A를 포함하는 두 번째 분획화 F2를 거친다. 미세섬유 고갈 2A(또는 미세섬유 분리)는 거대섬유 분리 1A에서 유래하는 식물 미세섬유를 제거한다. 미세섬유가 엽록체의 추가 조작 동안 연마제로 작용하여 그 무결성에 차례로 영향을 미칠 수 있으므로 이 단계에서 미세섬유를 제거하는 것이 중요하다는 것이 발견되었다. 미세섬유 고갈 2A는 구조물, 주로 무손상 엽록체, 뿐만 아니라 그 안에 용해되거나 용해되지 않은 일부 화합물 및 분자를 함유하는 미세섬유 분획 2AA 및 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 제공한다. 거대섬유 분획 1B와 유사하게, 미세섬유 분획 2AA는 미세섬유 컨디셔닝 2B를 거쳐 인간 및 동물 영양 2D에 적합한 최종 생성물으로서 미세섬유 조성물 2C 및/또는 추가 최종 생성물 개발 3I를 위한 고가 분자 및/또는 화합물을 추출하기 위해 화합물 추출 2E를 수득할 수 있다.
미세섬유 고갈 2A
예를 들어 체질, 압력 체질, 원심분리 및 경사분리를 포함하는 액체 분획 또는 거대섬유 고갈된 현탁액 1H로부터 미세섬유를 고갈시키기 위한 다양한 적절한 방법이 사용될 수 있음을 이해할 것이다. 식물 단편을 두 번 압착하면, 미세섬유가 2개의 거대섬유 고갈된 현탁액 1H 및 1H.2에서 나올 수 있다. 도 14는 2개의 거대섬유 분리 1A.1 및 1A.2가 발생하는 이 특정 공정의 예를 도시한다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 체질, 압력 체질, 원심분리 및/또는 경사분리에 의한 분리를 포함한다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 약 20 미크론미크론 내지 약 155 미크론미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 여과하는 것을 포함한다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 약 30 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 여과하는 것을 포함한다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 약 40 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 여과하는 것을 포함한다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 약 80 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 여과하는 것을 포함한다.
예를 들어, 분리는 두 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H로부터 두 번째 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것을 추가로 포함한다. 예를 들어, 두 번째 미세섬유 분획 2AA를 분리하는 것은 약 20 미크론미크론 내지 약 155 미크론미크론, 약 30 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론, 약 40 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론 또는 약 80 미크론미크론 내지 약 90 미크론미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 두 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H를 여과하는 것을 포함한다. 예를 들어, 두 번째 미세섬유 분획 2AA는 미세섬유 분획 2AA와 조합된다.
거대섬유 고갈된 현탁액 1H와 유사하게, 미세섬유 고갈 2A로 인한 미세섬유 고갈된 현탁액 2G는 현탁된 구조물, 주로 엽록체 및/또는 작은 크기의 화합물 뿐만 아니라 그 안에 용해되거나 용해되지 않은 분자, 예컨대 예를 들어 사포닌을 함유한다. 생성된 미세섬유 고갈된 현탁액 2G의 크기 분포 분석은 5-6 미크론미크론 사이의 피크와 엽록체의 평균 크기인 4 내지 10 미크론미크론 사이인 입자의 75% 초과를 갖는 날카로운 분포 프로필을 나타낸다. 입자 크기는 그 상대적 부피를 추정하기 위해 적절한 방법을 사용하여 예를 들어 동적 광산란을 사용하여 결정될 수 있다(실시예 11에 추가로 기술됨). 이것은 엽록체 무결성의 관점에서 거대섬유 분리 1A뿐만 아니라 미세섬유 고갈 2A의 품질의 지표이다. 파괴된 엽록체 단편은 0.5 내지 2 미크론미크론 사이의 피크를 가진 넓은 입자 분포를 나타낸다. 또한 미세섬유 고갈 2A에 사용된 장치 분리 용량보다 열등한 크기를 갖는 더 작은 미세섬유가 남아 있는 것이 관찰될 수 있다. 미세섬유 고갈된 현탁액 2G는 또한 업스트림 공정에서 첨가되는 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 시트르산 또는 메타중아황산염을 함유할 수 있음을 주목해야 한다.
달리 표시되지 않는 한, 본 섹션에서 "미세섬유"는 미세섬유 분획 2AA에 포함된 미세섬유, 단리된 미세섬유 및 미세섬유 조성물 2C에 포함된 미세섬유를 지칭한다(후자는 하기에 추가로 기술됨).
예를 들어, 미세섬유 고갈된 현탁액 2G에서 고체 입자 중 적어도 75%는 약 5 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다.
미세섬유 분획 2AA 및 미세섬유 조성물 2C는 미세섬유(예를 들어, 장치 분리 용량보다 월등한 크기를 가짐), 미생물(예를 들어, 박테리아, 효모, 진균), 전체 식물 세포, 뿐만 아니라 화합물 및/또는 분자를 포함하는 다양한 구조를 포함하며 그 모두는 특정한 액체 부피를 유지할 수 있고/있거나 상기 액체에 전체적으로 또는 부분적으로 결합된다. 미세섬유 분획 2AA 및 미세섬유 조성물 2C는 또한 업스트림 공정에서 첨가되는 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 시트르산 또는 메타중아황산염을 함유할 수 있다. 더욱이, 대부분의 식물의 사포닌은 액체 분획 또는 미세섬유 고갈된 현탁액 2G에 의해 운반(또는 용해)되는 것으로 관찰되었다.
예를 들어, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및 미세섬유 조성물 2C는 콩과 계통 식물 미세섬유를 포함한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 속의 식물로부터 유래한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 사티바 종(알팔파)으로부터 유래한다.
예를 들어, 미세섬유는 약 40 미크론미크론 내지 약 300 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 미세섬유는 약 40 미크론미크론 내지 약 200 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 미세섬유는 약 40 미크론미크론 내지 약 160 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 미세섬유는 약 80 미크론미크론 내지 약 200 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 미세섬유는 약 90 미크론미크론 내지 약 180 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다. 예를 들어, 미세섬유들은 약 100 미크론미크론 내지 약 160 미크론미크론의 평균 길이를 갖는다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 약 70 중량%내지 약 90 중량%의 수분을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 약 75 중량%내지 약 90 중량%의 수분을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 약 80 중량%내지 약 90 중량%의 수분을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 약 85 중량%내지 약 90 중량%의 수분을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 약 85 중량%내지 약 88 중량%의 수분을 갖는다.
표 6에 기술된 바와 같이, 현재 개시된 미세섬유의 영양소 및 기타 성분을 분석하고 섬유의 공급원인 다른 공지된 식품(즉, 조밀기울 및 탈수된 바나나)과 비교하였다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 20% w/w 내지 약 40% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 25% w/w 내지 약 40 w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 25% w/w 내지 약 35% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 30% w/w 내지 약 35% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 92%의 습도 함량을 나타내는 미세섬유에 대해 약 2,000μg/g(건조 기준)의 트리아콘탄올 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 92%의 습도 함량을 나타내는 섬유 미세섬유에 대해 약 1,500μg/g 내지 3,000μg/g(건조 기준)의 트리아콘탄올 함량을 갖는다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 80μg/g 내지 약 120μg/g(건조 기준)의 베타 카로틴 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 90μg/g 내지 약 110μg/g(건조 기준)의 베타 카로틴 함량을 갖는다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 300μmol TE/g 내지 약 450μmol 트롤록스 등가물(TE)/g(건조 기준)의 천연 항산화제 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA 및/또는 미세섬유 조성물 2C는 약 300μmol TE/g 내지 약 400μmol TE/g(건조 기준)의 천연 항산화제 함량을 갖는다.
미세섬유 컨디셔닝 2B
미세섬유 고갈 2A로 인한 미세섬유 분획 2AA는 그 구성성분의 품질을 보존하고 심지어 이를 증가시키기 위해 컨디셔닝을 거칠 수 있다. 컨디셔닝은 예를 들어 총 수분 함량을 감소시키고 따라서 산화를 감소시키기 위해 미세섬유 분획 2AA를 빠르게 건조시키는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 미세섬유 분획 2AA를 건조하는 것을 포함한다. 예를 들어, 생성된 미세섬유 조성물 2C는 약 5% w/w 내지 약 20% w/w의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 조성물 2C는 약 6% w/w 내지 약 16% w/w의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 조성물 2C는 약 8% w/w 내지 약 14% w/w의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 미세섬유 조성물 2C는 약 1% w/w 내지 약 12% w/w의 수분 함량을 갖는다.
필요에 따라, 유익한 기능을 갖는 영양 보충제, 항산화제, 항균제, 보존제 및/또는 미생물 접종물이 미세섬유 컨디셔닝 2B 동안 포장되기 이전에 미세섬유 분획 2AA에 첨가될 수 있다. 생성된 미세섬유 조성물 2C를 보호하기 위한 포장은 보존, 운송 또는 최종 사용자 요구사항에 따라 선택된다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 산화방지제 및/또는 항균제를 미세섬유 분획 2AA에 혼합하는 것을 포함한다. 예를 들어, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 미세섬유 분획 2AA에 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산 및/또는 비타민을 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 미세섬유 분획 2AA에 박테리아를 접종하는 것을 포함한다. 예를 들어, 박테리아는 락토바실러스 종 및/또는 바실러스 종(예를 들어, 바실러스 서브틸리스)이다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 단리된 콩과 계통 식물 미세섬유가 제공된다. 또 다른 구현예에서, 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 콩과 계통 식물 미세섬유를 포함하는 조성물이 제공된다. 예를 들어, 식물은 메디카고 속으로부터 유래된다. 예를 들어, 식물은 메디카고 사티바 종 또는 아종이다.
생성된 미세섬유 조성물 2C는 단백질, 색소 및 섬유와 같은 다양한 유익한 식이 영양소의 공급원이고, 예를 들어 건강 및 신체 수행성에 대한 그 영향을 고려하여 인간 및 동물 영양 2D를 위한 보충제로 사용될 수 있다.
예를 들어, 보존제, 항산화제 및/또는 항균제, 예를 들어 시트르산, 벤조산염, 메타중아황산염 및/또는 기타 식품 첨가물 예를 들어 비타민, 오메가-3 지방산 또는 오메가-6 지방산은 미세섬유 컨디셔닝 2B 동안 미세섬유 분획 2AA에 첨가될 수 있다.
예를 들어, 보존제, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 기밀성 용기에 미세섬유 분획 2AA를 포장하는 것을 포함한다. 예를 들어, 용기는 폴리머 파우치, 백 또는 컨테이너이다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 진공 하에서 또는 선택적으로는 변형된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로는 N2 또는 질소 하에서 기밀 용기에서 미세섬유 분획 2AA를 기밀하게 밀봉하는 것을 포함한다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 빛을 차단하고 따라서 산화를 감소시키기 위해 불투명한 용기에 미세섬유 분획 2AA를 포장하는 것을 포함한다.
예를 들어, 미세섬유 컨디셔닝 2B는 미세섬유를 약 5 중량% 내지 약 20 중량%, 약 6 중량% 내지 약 16 중량%, 약 8 중량% 내지 약 14 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 수분 함량으로 건조시키는 것을 포함한다.
화합물 추출 2E
도 1, 2a, 2b 및 4를 참조하면, 화합물 추출 2E는 또한 고가의 분자 및/또는 화합물을 수득하기 위해 미세섬유 분획 2AA로부터 수행될 수 있다. 이들 분자 및/또는 화합물은, 일단 추출되면, 다양한 수준에서 정제될 수 있고 다양한 산업에서 유용한 최종 생성물의 개발을 위한 활성 성분으로 사용될 수 있다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 본 명세서에서의 실시예에 나타낸 바와 같이 단백질, 효소, 펩티드, 아미노산, 지방산, 지방 알코올, 테르펜, 페놀, 색소 및 이의 혼합물의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 실시예 14에 나타낸 바와 같이, 미세섬유 분획 2AA는 식물에 대해 인식된 생체자극 효과를 나타내는 트리아콘탄올의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 단백질의 공급원, 선택적으로 표 10 내지 16 중 어느 하나로 확인된 단백질일 수 있다. 예를 들어, 미세섬유 분획 2AA는 펩티드의 공급원일 수 있다.
세 번째 분획화 F3
두 번째 분획화 F2에서 미세섬유를 제거한 후, 예를 들어 도 1, 2a, 2b 및 5에 도시된 바와 같이 세 번째 분획화 F3이 달성될 수 있다. 이전 분획화와 유사하게 세 번째 분획화 F3은 3A에서 3K까지의 공정 활성도(사각형), 중간 및 전구체 생성물(타원형) 및 용도(다이아몬드)로 표시된다. 세 번째 분획화 F3의 목적은 미세섬유 고갈된 현탁액 2G로부터 무손상 엽록체를 가능한 한 많이 분리할 뿐만 아니라 다양한 용해된 성분 및/또는 분자, 특히 사포닌을 함유하는 엽록체 감소된 현탁액 3B를 생성하는 것이다. 그렇게 하기 위해, 미세섬유 고갈된 현탁액 2G는 엽록체 현탁액 3K 및 엽록체 감소된 현탁액 3B를 수득하기 위해 선택적으로 상이한 접근법 또는 기술을 사용하여 엽록체 분리 3A를 거친다. 후자의 현탁액은 선택적으로 다른 방법을 사용하여 현탁액 정화 3C를 거쳐 오염물질을 제거하여 정화된 현탁액 3D 및 두 번째 엽록체 현탁액 3CC를 수득할 수 있다. 마지막으로, 이 정화된 현탁액 3D로부터 화합물 추출 3E를 수행하여 특히 사포닌 분말 컨디셔닝 3G를 거쳐 사포닌 전구체 3H를 생성하는 사포닌- 풍부화된 분말 3F를 얻을 수 있다. 이 전구체는 추가 최종 생성물 개발 3I에 대해 사용될 수 있다.
엽록체 분리 3A
예를 들어 원심분리, 접선 유동 여과(TFF), 응집/경사분리, 침전, 여과 및 동등한 방법을 포함하는, 엽록체를 포함하는 액체 분획, 예를 들어 출발 물질로서 미세섬유 고갈된 현탁액 2G로부터 엽록체를 분리하기 위한 다양한 적합한 방법이 사용될 수 있다는 것이 이해될 것이다. 모든 경우에, 엽록체 분리 3A는 과도한 전단, 온도 상승, 압력 변화, 몰농도 변화 및 엽록체 파손을 야기하는 기타 조건을 피해야 하며 결과적으로 액체 현탁액(예를 들어, 엽록체 감소된 현탁액 3B)에서 엽록체의 가용성 성분의 분산을 피해야 한다. 또한 엽록체 내부 또는 외부에서 발견되는 가용성 성분(대부분 단백질)의 응고를 방지하기 위해 생리학적 범위 내에서 pH(예를 들어, 4.5 이상)를 유지하는 데 주의를 기울인다. pH 조정을 위해 필요한 경우, 순한 또는 약한 "천연" 유기산을 사용하는 것이 바람직하다. 세포 성분과 엽록체의 동시-침전 또한 회피되어야 한다.
예를 들어, 엽록체 분리 3A는 미세섬유-고갈된 현탁액 2G를 약 4.8 내지 약 5.0의 pH로 산성화하고 (예를 들어, 10,000g에서) 원심분리에 의해 그 성분을 분리함에 의해 수행될 수 있다.
예를 들어, 엽록체는 또한 선택적으로 300kDa 및/또는 0.2 미크론미크론의 필터를 사용하여 접선 유동 여과에 의해 분리될 수 있다.
예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 4℃ 내지 약 45℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 4℃ 내지 약 40℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 15℃ 내지 약 42℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 20℃ 내지 약 38℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 20℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체 분리 3A는 약 20℃ 내지 약 37℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 엽록체를 분리하는 것은 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다.
예를 들어, 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 것은 엽록체를 침강시키고 선택적으로 침강된 엽록체를 단리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 엽록체는 약 4.0 내지 약 5.5의 pH로 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산성화함에 의해 침강된다. 예를 들어, 엽록체는 약 4.2 내지 약 5.2의 pH로 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산성화함에 의해 침강된다. 예를 들어, 엽록체는 약 4.4 내지 약 5.2의 pH로 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산성화함에 의해 침강된다. 예를 들어, 엽록체는 약 4.6 내지 약 5.2의 pH로 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산성화함에 의해 침강된다. 예를 들어, 엽록체는 4.8 내지 약 5.2의 pH로 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산성화함에 의해 침강된다. 예를 들어, 산성화는 미세섬유 고갈된 현탁액 2G를 산과 혼합하는 것을 포함한다. 예를 들어, 시트르산 또는 다른 4-C 또는 5-C 유기산이 이 목적으로 사용될 수 있다.
예를 들어, 침강된 엽록체는 약 2,000g 내지 약 15,000g의 힘에서 원심분리에 의해 분리된다. 예를 들어, 침전된 엽록체는 약 2,000g 내지 약 10,000g의 힘에서 원심분리에 의해 분리된다. 예를 들어, 침전된 엽록체는 약 4000g 내지 약 12,000g의 힘에서 원심분리에 의해 분리된다. 예를 들어, 침전된 엽록체는 약 10,000g의 힘에서 원심분리에 의해 분리된다.
상기에 언급된 바와 같이, 엽록체 분리 3A는 2개의 분획, 즉 엽록체 현탁액 3K 및 엽록체 감소된 현탁액 3B를 생성할 것이다(예를 들어, 도 2a, 2b, 5, 6, 7, 8 및 9에 도시된 바와 같음).
엽록체 현탁액 3K는 예를 들어 식물 단편 0B에서의 동적 광산란 하에서 관찰된 바와 같이 초기 엽록체 수준과 비교할 때 무손상 엽록체의 75% 초과를 함유할 수 있다. 엽록체 현탁액 3K는 또한 엽록체 분리 3A 동안 도입된 초기 부피의 30%를 나타내는 약 30%의 고체 함량(w/v)과 높은 수준의 단백질(예를 들어, 25 내지 50%)을 함유한다. 엽록체 현탁액 3K는 또한 업스트림 공정에서 첨가된 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 메타중아황산염 및/또는 유기산(예컨대 시트르산)을 함유할 수 있다는 점에 유의해야 한다.
엽록체 감소된 현탁액 3B는 여전히 미세섬유 고갈된 현탁액 2G에서 관찰된 초기 부피로부터 녹색 물질(예를 들어, 엽록체)의 약 30%, 및 약 6.5% w/v 고체 함량 및 약 3% w/w(건조 기준)를 특징으로 하는 기타 잔류 단백질, 당, 식물 구조물을 함유한다. 이 분획은 또한 미세섬유 고갈된 현탁액 2G에 함유된 메디카겐산 사포닌 70% 초과를 포함하는 가용성 물질을 함유한다. 엽록체 현탁액 3K와 유사하게, 엽록체 감소된 현탁액 3B는 또한 업스트림 공정에서 첨가된 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 시트르산, 메타중아황산염 및/또는 유기산(예컨대 시트르산)을 함유할 수 있다.
두 분획(3B 및 3K)의 크기 분포 분석은 그 안에 함유된 엽록체가 산성화로 인해 제한된 응집을 갖는 평균 5-7μm에서 대부분 무손상 엽록체임을 입증한다. 엽록체 물리적 구조의 온전함은 공정 동안 기계적, 생물학적 및 화학적 스트레스의 엄격한 제어에 의해 공정 흐름의 이 단계까지 유지된다. 수확 시 바이오매스 성숙, 온화하지만 효율적인 바이오매스 컨디셔닝, 기계적 파괴 동안 낮은-전단 및 낮은-차압, 프레스에서 온도의 제어(예를 들어, > 4℃ 및 < 34℃), 산성화를 위한 약한 유기산, 산성화 동안 pH의 제어(예를 들어, 4.8 < pH < 5.1) 및/또는 원심분리 동안 온도의 제어의 조합은 엽록체 무결성을 유지하는 데 바람직하다. 엽록체 무결성을 유지하는 것은 엽록체 내에 엽록체 성분을 격리한다. 엽록체 무결성을 보호하면 하나의 침강 활동에서 액체 분획으로부터 전체 엽록체의 기계적 분리를 허용한다. 이것은 또한 식물 잎 물질 중 하나의 중요한 단백질 성분으로, 주요 엽록체 단백질이고 영양과 관련하여 가장 중요한 식물성 단백질인, 루비스코(리불로스 비스-포스페이트 카르복실라제)의 기계적 분리를 허용하기 때문에 공정 흐름의 연속성에 중요하다. 이러한 고도로 제어된 공정 제한 및 성능에서 카로틴, 엽록소, 항산화제, 오메가-3 인지질과 같은 일부 다른 특정 생성물이 고순도의 양으로 선택적으로 수득될 수 있다.
엽록체 정화 3C
엽록체 감소된 현탁액 3B는 엽록체 및/또는 작은 치수의 기타 녹색 물질과 같은 일부 고체를 함유하고, 현탁액 정화 3C를 통해 메디카겐산 사포닌과 같은 선택적으로 분리 가용성 물질로 정화된다. 수득된 정화된 현탁액 3D는 화합물 추출 3E에 사용할 준비가 되었다. 정화는 원심분리, 접선 유동 여과(TFF), 한외여과, 응집/경사분리 또는 이에 상응하는 방법에 의해 수행될 수 있다. 응집/경사분리를 위해 적합한 방법은 유기성 제제의 사용을 기반으로 함을 이해할 것이다. 임의의 전술한 방법의 조합을 사용하여 엽록체 감소된 현탁액 3B를 분리할 수 있다. 크기 분포는 생성된 잔류물에서 75% 초과의 입자가 산성화된 물질에 대해 약 4-7 미크론미크론 사이에 남아 있음을 확인하기 위해 이 단계에서 사용될 수 있다는 점에 유의해야 한다. 현탁액 정화 3C는 또한 도 14 및 15에 기술된 바와 같이 발생하는 경우 하위-활성도 2A.2를 초래하는 미세섬유 고갈된 현탁 2G.2에 대해 수행될 수 있다는 점에 유의해야 한다.
또 다른 구현예에서, 도 2a 및 도 2b를 참조하면, 엽록체 감소된 현탁액 3B에 잔존하는 엽록체는 TFF(예를 들어, 세라믹, 중공사, 멤브레인, 횡류)를 사용하여 다른 저-분자량 성분으로부터 직접적으로 분리될 수 있다. 예를 들어, 300kDa 미만, 34℃ 초과 또는 4℃ 미만의 온도에서 그리고 임의의 유기산의 첨가 없이 잔류물에 가용성 성분을 유지하기 위해 저분자 컷-오프에서 TFF를 사용하지 않도록 주의해야 한다. 이것은 두 번째 엽록체 현탁액 3CC에서 엽록체 무결성을 변경하는 것을 방지하고 멸균 여과액(예를 들어, 정화된 현탁액 3D)을 제공한다. 34℃ 미만으로 온도를 유지하는 것은 또한 가치있는 성분(예를 들어, 비제한적으로 두 번째 엽록체 현탁액 3CC, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질)의 생화학적 무결성을 보존한다. 마지막으로, 이 정화 방법은 전단을 제한하기 위해 재순환의 흐름이 조정되고, 이 때문에 장입된 부피의 약 70%가 1% w/v 미만의 고체 함량을 특징으로 하는 여과액(예를 들어, 정화된 현탁액 3D)에 함유되는 것을 요한다.
예를 들어, 현탁액 정화 3C는 200 - 600kDalton 사이의 저분자 컷-오프 중량에서 여과에 의해 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 200 - 500kDalton 사이의 저분자량 컷-오프에서 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 200 - 400kDalton 사이의 저분자량 컷-오프에서 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 300kDalton 저분자량 컷-오프에서 수행된다.
상기 본 명세서의 구현예에 따라, 현탁액 정화 3C(또는 도 10b에서 언급된 3C.1)로부터 생성된 첫 번째 분획, 즉, 두 번째 엽록체 현탁액 3CC(도 2a, 2b 및 10b에 도시된 바와 같음)는 예를 들어 동적 광산란에 의해 관찰된 4 - 10 미크론미크론의 범위인 입자에 의해 표시되는 무손상 엽록체, 현탁액 정화 3C에 도입된 초기 부피의 20%를 나타내는 약 40% w/v의 고체 함량 및 높은 수준의 단백질(예를 들어, 45 내지 55% 건조 중량 기준)을 함유할 수 있다. 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 또한 업스트림 공정에서 첨가된 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 메타중아황산염 및/또는 유기산 (예컨대 시트르산)을 함유할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 그 물리적, 생리학적 및 유기적 특성에 따라 엽록체 분리 3A 후에 수득된 엽록체 현탁액 3K와 유사하고 그에 따라서 추가로 처리될 수 있다.
보다 구체적으로 도 10b를 참조하면, 유사한 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 또한 미세섬유 고갈된 현탁액 2G와 유사하지만 미세섬유 고갈된 현탁액 2G가 첫 번째 압착 1A.1로부터 수득될 때 두 번째 압착 1A.2로부터 수득된 미세섬유 고갈된 현탁액 2G.2의 현탁액 정화 3C.2로부터 생성되어 수득될 수 있다. 이 추가의 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 그 물리적, 생리학적 및 유기적 특성에 따라 엽록체 현탁액 3K와 유사하고, 따라서 현탁액 정화 3C.1 후에 수득된 첫 번째 두 번째 엽록체 현탁액 3CC와 유사하며 그에 따라서 추가로 처리될 것이다.
상기 언급된 바와 같이, 현탁액 정화 3C로부터 생성된 두 번째 분획, 즉 정화된 현탁액 3D(도 2a, 2b 및 5 및 10b에 도시된 바와 같음)는 여전히 미세섬유 고갈된 현탁액 2G에 함유된 50% 초과의 메디카겐산 사포닌뿐만 아니라 3 미만, 선택적으로 1% w/v 미만의 고체 함량을 특징으로 하는 가용성 단백질, 당류를 포함하는 가용성 물질을 함유한다. 이 정화된 현탁액 3D는 현탁액 정화 3C에 의해 미생물을 제거한 후 멸균된다. 두 번째 엽록체 현탁액 3CC와 유사하게, 정화된 현탁액 3D는 또한 업스트림 공정에서 첨가된 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 메타중아황산염 및/또는 유기산(예컨대 시트르산)을 함유할 수 있다.
예를 들어, 공정은 두 번째 미세섬유 고갈된 현탁액 2G.2를 수득하기 위해 두 번째 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2로부터 미세섬유를 분리하는 단계 2A.2, 두 번째 현탁액 정화 3C.2를 수득하기 위해 선택적으로 원심분리, 한외여과 및/또는 접선 유동 여과에 의해 두 번째 미세섬유 고갈된 현탁액 2G.2를 정화하는 단계 3C.2 및 두 번째 현탁액 정화 3CC를 정화된 현탁액 3D와 조합하는 단계를 추가로 포함한다.
예를 들어, 엽록체 감소된 현탁액 3B(또는 2G.2)를 정화하는 단계는 약 15℃ 내지 약 42℃, 약 20℃ 내지 약 40℃, 약 20℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃, 약 25℃ 내지 약 35℃, 약 30℃ 내지 약 35℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 약 20℃ 내지 약 40℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 약 25℃ 내지 약 35℃의 온도에서 수행된다. 예를 들어, 현탁액 정화 3C는 약 30℃ 내지 약 35℃의 온도에서 수행된다.
화합물 추출 3E 및 후속 활성도
도 1, 2a, 2b 및 15를 참조하면, 화합물 추출 3E는 또한 고가의 분자 및/또는 화합물을 수득하기 위해 정화된 현탁액 3D로부터 수행될 수 있다. 이들 분자 및/또는 화합물은 일단 추출되면 다양한 산업에서 유용한 최종 생성물의 개발을 위한 활성 성분으로 사용될 수 있는 전구체를 수득하기 위해 정제 및/또는 컨디셔닝될 수 있다.
예를 들어, 정화된 현탁액 3D는 사포닌과 같은 테르펜의 공급원일 수 있다. 예를 들어, 정화된 현탁액 3D는 다양한 유형의 최종 생성물의 개발을 위한 활성 성분이 될 수 있는 사포닌 예를 들어 메디카겐산 스포닌의 공급원일 수 있다. 도 15는 다양한 최종 생성물의 개발을 위한 기초로 사용되는 사포닌 전구체 3H를 얻는 것을 허용하는 추출 및 컨디셔닝을 예시한다. 실시예 13은 다양한 분획에서 메디카겐산 사포닌의 분포를 상세히 설명한다. 고상 추출을 사용하여 사포닌을 추출하는 방법은 MEDICAGENIC ACID SAPONIN AND USES THEREOF의 명칭으로 2007년 7월 13일자로 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/CA2007/001255호에 기재되어 있으며, 이는 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
예를 들어, 정화된 현탁액 3D 또는 엽록체 감소된 현탁액 3B는 실시예 14에 나타낸 바와 같이 트리아콘탄올과 같은 지방 알코올의 공급원이다.
예를 들어, 정화된 현탁액 3D는 단백질, 선택적으로 표 10 내지 16 중 어느 하나에서 확인된 단백질의 공급원일 수 있다. 예를 들어, 정화된 현탁액 3D는 펩티드의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 사포닌 전구체 3H를 제조하는 방법은 엽록체 감소된 조성물을 항균제 및/또는 항산화제, 선택적으로는 메타중아황산나트륨 또는 시트르산과 혼합하는 것을 추가로 포함한다.
예를 들어, 사포닌- 풍부화된 분말 3F를 추출하는 것은 선택적으로 고성능 액체 크로마토그래피, 증류 및/또는 분무 건조를 사용하여 엽록체 감소된 조성물에서 사포닌 내용물을 분리 및/또는 농축하는 것을 포함한다.
예를 들어, 사포닌- 풍부화된 분말 3F를 추출하는 것은 약 15℃ 내지 약 42℃, 약 20℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행된다.
예를 들어, 생성된 사포닌- 풍부화된 분말 3F는 컨디셔닝될 수 있다. 예를 들어, 컨디셔닝은 사포닌- 풍부화된 분말 3F를 포장하는 것을 포함한다. 예를 들어, 사포닌-풍부화된 분말 3F는 선택적으로 용기에서 기밀하게 밀봉된다. 예를 들어, 용기는 폴리머 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명한 폴리머 파우치 또는 백이다. 예를 들어, 사포닌- 풍부화된 분말 3F는 변형된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에서 기밀하게 밀봉된다.
예를 들어, 사포닌 전구체 3H는 약 50mg/g 내지 약 180mg/g(건조 기준)의 사포닌 함량을 포함한다. 예를 들어, 사포닌 전구체 3H는 약 3% 내지 약 6%(건조 기준)의 사포닌 함량을 포함한다.
예를 들어, 사포닌은 메디카겐산 사포닌이다.
예를 들어, 본 명세서에 개시된 사포닌 전구체 3H는 실시예 9에 나타낸 바와 같이 살충제의 제조에 사용될 수 있다. 사포닌 전구체 3H는 또한 기능식품, 화장품 및/또는 약제의 제조에 사용될 수 있다. 예를 들어, 사포닌 전구체 3H는 살충제, 기능식품 및/또는 약제로 사용된다.
네 번째 분획화 F4
네 번째 분획화 F4는 최종 생성물으로 컨디셔닝하고(예를 들어, 도 1, 2a, 2b, 6, 7, 8 및 9에 도시된 바와 같음) 및/또는 추출에 이어서 가치있는 화합물의 공급원으로 사용하기 위해 엽록체를 세척하는 것에 대한 것이다. 네 번째 분획화 F4는 4A에서 4N까지의 공정 활성도(사각형), 중간, 최종 및 전구체 생성물(타원형) 및 용도(다이아몬드)로 표시된다. 네 번째 분획화 F4는 엽록체 세척 4A를 포함하며, 이의 목적은 주로 엽록체 현탁액 3K뿐만 아니라 두 번째 엽록체 현탁액 3CC에서도 가능한 한 많은 세척된 무손상 엽록체를 수득하는 것이다. 그렇게 하기 위해 다른 방법을 사용하여 작은 크기의 구조 및/또는 화합물뿐만 아니라 그 안에 용해되거나 용해되지 않은 분자와 같은 잔류 오염물질을 제거하여 세척된 엽록체 현탁액 4B를 얻을 수 있다. 그 후, 이 현탁액은 액체 엽록체 컨디셔닝 4G 및/또는 건조 엽록체 컨디셔닝 4D를 거쳐 각각 액체 엽록체 조성물 4H 및/또는 건조 엽록체 조성물 4E를 얻을 수 있으며, 그 둘 모두는 인간 및 동물 영양 4I 및 4F에 적합할 수 있다. 세척된 엽록체 현탁액 4B는 또한 화합물 추출 4J를 거쳐 예를 들어 루비스코 현탁액 4K를 생성할 수 있다. 이 현탁액은 루비스코 컨디셔닝 4L을 거쳐 추가 최종 생성물 개발 4N에 사용될 수 있는 루비스코 전구체 4M을 얻을 수 있다.
엽록체 세척 4A
이전 분획화 F3에 의해 생성된 상이한 엽록체 현탁액 3K는 여전히 일부 잔류 물질을 함유할 수 있고, 주로 그 잠재적인 독성, 이취 및 역취로 인한 식이 관점으로부터 바람직하지 않은 것으로 간주된 휘발성 물질, 페놀 및 사포닌과 같은 다른 성분으로부터 엽록체가 선택적으로 분리되도록 세척될 수 있다. 따라서, 엽록체 세척 4A는 엽록체 컨디셔닝 4G 및 4D뿐만 아니라 화합물 추출 4J를 겪을 준비가 된 세척된 엽록체 현탁액 4B를 얻을 수 있도록 한다.
엽록체 분리 3A는 깨끗한 엽록체를 농축하는 그 능력이 제한되어 있다. 부가하여, 엽록체가 너무 농축되면 그 조작으로 인해 과도한 전단이 발생할 수 있음이 발견되었다. 약 30-35%의 고체 엽록체 함량은 원심분리, 접선 유동 여과(TFF) 또는 응집/분리에 의해 얻어질 수 있다. 그러나, 이러한 농도에서는 엽록체 현탁액 3K에 상당한 양의 가용성 오염물질이 남아 있다. 유사하게, 원심분리에 의한 엽록체의 침강은 원심분리기에 도입된 엽록체 현탁액 3K의 초기 부피의 30% 및 35% 고체 함량을 갖는 농축물을 제공할 것이다.
모든 다른 엽록체 현탁액 3K의 엽록체는 초기 분획화 전반에 걸쳐 실질적으로 손상되지 않은 상태로 유지되므로, 추가 세척 및 농축을 위해 엽록체 세척 4A를 받을 수 있다. 그렇게 하기 위해, (도 10b에 도시된 바와 같이) 거대섬유 분리 1A 동안 수행된 두 번째 압착과 관련된 엽록체 정화 하위-활성도에서 오는 주요 엽록체 현탁액 3K, 두 번째 엽록체 현탁액 3CC 및/또는 엽록체 현탁액 3CC는 물이나 삼투조절제(최소 전단을 가짐)에 희석되고 다시 침강될 수 있다. 물이나 삼투조절제의 사용은 세척 활성도의 정도의 목적에 의해 가이드된다. 식물 단편 0B를 압착하여 얻은 거대섬유 고갈된 현탁액 1H의 평균 삼투압 잠재력은 약 0.6M(1가 염)과 동등하다. 이 삼투압 잠재력은 엽록체에 대해 등장성이다; 그러나, 엽록체는 제한된 시간 동안 0.25M - 0.7M(1가 염에 상당함) 사이의 변화를 견딜 수 있다. 따라서, 엽록체 현탁액 3K를 물에서 그 부피의 약 2.5배로 희석하면 삼투압 잠재력이 엽록체가 견딜 수 있는 약 0.25M으로 된다. 이러한 희석 비율로, 엽록체 무결성이 유지될 수 있어 화합물 추출 4J 동안 추가로 추출될 수 있는 루비스코 단백질 및 기타 가치있는 엽록체 가용성 화합물을 엽록체 내에 보유할 수 있다.
물에 반복적으로 희석하거나 더 많은 부피의 물로 희석하면 엽록체 삼투압 잠재력이 0.25M 미만의 값으로 되어 엽록체 파손(예를 들어, 저삼투 조건에 기인함)을 야기할 수 있다. 희석에 사용되는 물의 양이 많을수록(단일 단계 또는 반복 단계에서) 최종 세척된 엽록체 현탁액 4B에 가용성 성분의 양이 더 적게 존재할 것이다(예를 들어, 페놀수지, 사포닌). 더 광범위한 세척이 필요한 경우, 삼투조절제 용액을 사용하여 삼투압 잠재력을 0.25M보다 높게 유지한다.
엽록체 세척 4A는 또한 세척된 엽록체 현탁액 4B의 함량이 특정 변수에 따라 상이한 농도로 존재하는 바람직하지 않은 화합물을 제거하여 한 배치에서 다른 배치로 고도로 재현가능하게 한다. 사실, 엽록체는 함량이 약간만 다를 뿐이다(그 내부 성분의 상대적 풍부함은 하나의 주요 물리-생화학적 기능과 연결되어 있기 때문임). 대조적으로, 잎 세포의 가용성 저분자량 성분(LMWC)에서의 함량은 예를 들어 스트레스(추위, 더위, 염분) 또는 발달 상태로 인해 그 생리학적 상태에 따라 유의하게 다를 것이다. 가용성 LMWC가 다양하기 때문에, 그리고 엽록체 주변에 상당한 양의 가용성 성분이 최종 엽록체 제제에 존재하는 경우, LMWC를 제거하기 위해 적절한 세척이 발생하는 경우를 제외하고, 최종 생성물로서 이 제제의 조성은 그에 따라서 달라질 것이다.
주어진 엽록체 현탁액 3K의 희석 후, 엽록체 재-분리 또는 농축은 원심분리, 접선 유동 여과(TFF), 응집/응고 및 이에 상응하는 방법과 같은 다양한 적합한 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 엽록체 분리 3A와 유사하게, 엽록체 세척 4A는 과도한 전단, 온도 상승, 압력 변동, 몰농도 변동 및 엽록체 파손을 초래하고 전체 현탁액(예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B)에서 엽록체의 가용성 성분의 분산을 야기할 수 있는 기타 모든 조건을 피하는 조건에서 수행되어야 한다.
일 구현예에서, 엽록체 세척 4A는 다음과 같이 수행될 수 있다. 엽록체 현탁액 3K, 또는 상이한 엽록체 현탁액 3K 및 3CC의 혼합물을 약 1:3의 비율(엽록체 현탁액 1 부피 대 최종 부피 3)으로 희석되고 후속적으로 원심분리(예를 들어, 10,000G에서)에 의해 분리된다. 예를 들어, 300L의 엽록체 현탁액 3K는 물로 총 최종 부피 900L로 희석될 것이다.
예를 들어, 세척은 엽록체 현탁액 3K를 희석하고 엽록체를 재-단리하는 것을 포함한다.
예를 들어, 주 엽록체 현탁액 3K는 약 1 내지 약 5의 액체:엽록체 현탁액 3K 비율로 희석된다. 예를 들어, 엽록체 현탁액 3K는 약 1.5 내지 약 4의 액체:엽록체 현탁액 3K 비율로 희석된다. 예를 들어, 엽록체 현탁액 3K는 3의 액체:엽록체 현탁액 3K 비율로 희석된다. 예를 들어, 엽록체 현탁액 3K는 약 2 내지 약 3의 액체:현탁액 비율로 재-현탁된다.
예를 들어, 재-현탁된 엽록체 현탁액 3K는 약 0.2M 내지 약 0.7M 또는 약 0.25M 내지 약 0.6M의 몰농도를 갖는다. 예를 들어, 재-단리하는 것은 재-현탁된 엽록체 조성물의 원심분리, 응고, 응집 및/또는 침강을 포함한다.
예를 들어, 희석된 엽록체 현탁액 3K로부터 엽록체의 재-단리는 원심분리, 접선 유동 여과(TFF), 응집/경사분리를 포함한다.
예를 들어, 희석된 엽록체 현탁액 3K(또는 이들의 혼합물)로부터 재-단리하는 것은 희석된 현탁액을 약 4,000g 내지 약 15,000g의 힘에서 원심분리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 재-단리하는 것은 약 2,000g 내지 약 10,000g의 힘에서 관련된 희석된 엽록체 현탁액 3K를 원심분리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 재-단리하는 것은 약 4,000g 내지 약 10,000g의 힘에서 관련된 희석된 엽록체 현탁액 3K를 원심분리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 재-단리하는 것은 희석된 엽록체 현탁액 3K를 약 10,000g의 힘에서 원심분리하는 것을 포함한다.
예를 들어, 세척하는 것은 초기 엽록체 현탁액 3K로부터 엽록체를 2회 재-현탁(또는 희석)하고 재-단리하는 것을 포함한다.
엽록체 세척 4A로부터 생성된 세척된 엽록체 현탁액 4B는 주로 액상에서 변경되지 않거나 약간 변경되거나, 현탁되거나 용해된, 단백질 및 지질 성질의 구조, 화합물 및 분자를 포함한다. 세척된 엽록체 현탁액 4B는 또한 업스트림 공정에서 첨가된 잔류 항산화제 및/또는 항균제, 예컨대 메타중아황산염 및/또는 유기산(예컨대 시트르산)을 함유할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 이 생성물을 구성하는 요소의 원래 및 고유한 품질의 바람직한 보존은 업스트림 공정의 각 단계에서 화학적, 물리적, 미생물학적 및 생화학적 스트레스의 완화에 의해 가능하게 된다.
따라서, 이제 도 1, 2a, 2b, 7, 8 및 9를 참조하면, 생성된 세척된 엽록체 현탁액 4B는 최종 생성물을 컨디셔닝하고/하거나 추가 최종 생성물 개발 4N을 위한 고가 분자 및/또는 화합물을 추출하기 위해 추가로 처리될 수 있다.
예를 들어, 컨디셔닝(4D 또는 4G)은 엽록체 현탁액 3K, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 4B를 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함한다.
세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 40%(w/w)의 고체 함량, 무손상 엽록체 함량 > 90%, 약 4 미크론미크론 내지 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는 그 안에 포함된 적어도 약 50%의 고체 입자, 약 50% w/w(건조 기준)의 단백질 함량, 약 11.5% w/w(건조 기준)의 지질 함량, 엽록체 현탁액 3K 중 약 90%의 리불로스-1,5-비스포스페이트 카르복실라제/옥시게나제(루비스코) 함량, 약 22,000μmole TE/100g 초과의 항산화제 함량 및 약 5mg/g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는다.
엽록체 함량은 세척된 엽록체 현탁액 4B에서 엽록체의 무결성 및 순도를 측정하는 데 사용될 수 있다. 엽록체 무결성의 보다 정확한 평가를 수득하기 위해 특정 엽록체 성분 간의 비율, 예를 들어 틸라코이드-관련 색소(예를 들어, 카로틴 또는 엽록소)와 루비스코(주요 기질 단백질 성분) 간의 비율이 지표로 사용될 수 있다. 유사하게, 특정 엽록체 성분(예를 들어, 루비스코, 카로틴, 엽록소)과 특정 세포(세포질) 성분(예를 들어, 액틴 또는 포도당신생합성 경로의 효소) 간의 비율이 세척된 엽록체 현탁액 4B의 순도를 측정하고 불순물을 식별하는 데 사용될 수 있다. 마지막으로, 상업용 키트에서 이용가능한 면역학적 마커(예를 들어, Agrisera 제품)를 또한 사용하여 세척된 엽록체 현탁액 4B의 순도를 평가할 수 있다. 이러한 면역학적 마커는 예를 들어 엽록체(예를 들어, 루비스코)에 함유된 효소에 대해 특이적일 수 있다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B, 액체 엽록체 조성물 4H 및/또는 건조 엽록체 조성물 4E는 항산화제, 항균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 시트르산, 말산, 숙신산 및 젖산으로부터 선택적으로 선택된 하나 이상의 유기산을 추가로 포함한다. 예를 들어, 유기산은 선택적으로 5 내지 7 사이의 pH를 갖는 온화한 유기산이다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 80% 내지 약 90%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 82% 내지 약 88%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 84% 내지 약 86%의 수분 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 85%의 수분 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 15%의 건조 물질 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 5.0 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.8 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.7 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.6 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 현탁액은 약 4.5 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.4 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.3 미만의 pH를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 4.2 미만의 pH를 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 25% w/v 내지 약 50% w/v의 고체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 25% w/v 내지 약 45% w/v의 고체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 30% w/v 내지 약 45% w/v의 고체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 35% w/v 내지 약 40% w/v의 고체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 30 중량% 내지 약 50 중량%, 약 35 중량% 내지 약 45 중량%, 약 37 중량% 내지 약 43 중량% 또는 약 39 중량% 내지 약 51 중량%의 고체 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 존재하는 총 고형물에 대해 무손상 엽록체의 높은 비율을 가지며, 예를 들어 존재하는 총 고형물에 대해 적어도 약 50% w/w 내지 약 99% w/w(건조 기준)의 엽록체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 적어도 약 60% w/w 내지 약 99% w/w(건조 기준)의 엽록체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 적어도 약 70% w/w 내지 약 99% w/w(건조 기준)의 엽록체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 적어도 약 75% w/w 내지 약 99% w/w(건조 기준)의 엽록체 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 적어도 약 75% w/w 내지 약 97.5% w/w(건조 기준)의 함량을 갖는다. 예를 들어, 여기서 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%의 고체 함량이 엽록체로 구성된다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B에 포함된 고체 입자의 적어도 약 95%는 약 3 미크론미크론 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B에 포함된 고체 입자의 적어도 약 90%는 약 4 미크론미크론 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B에 포함된 고체 입자의 적어도 약 80%는 약 4 미크론미크론 내지 약 6 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B에 포함된 고체 입자의 적어도 약 75%는 약 4 미크론미크론 내지 약 5 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B에 포함된 고체 입자의 적어도 약 90%는 약 3 미크론미크론 내지 약 5 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다. 예를 들어, 조성물에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론미크론 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 70%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 결정된 바와 같이 무손상 엽록체이다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 75%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 결정된 바와 같이 무손상 엽록체이다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 80%는 무손상 엽록체이다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 85%는 무손상 엽록체이다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 90%는 무손상 엽록체이다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 95%는 무손상 엽록체이다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외부 막 무결성을 갖는다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내부 막 무결성을 갖는다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 계통 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지하였다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 45% w/w(건조 기준) 초과의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 45% w/w 내지 약 55% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 48% w/w 내지 약 55% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 48% w/w 내지 약 53% w/w(건조 기준)의 단백질 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 엽록체 현탁액 3K에서의 루비스코 함량의 약 90%의 루비스코 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 5% w/w 내지 약 25% w/w(건조 기준)의 지질 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 10% w/w 내지 약 25% w/w(건조 기준)의 지질 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 10% w/w 내지 약 20% w/w(건조 기준)의 지질 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 0.2 내지 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1% w/w(건조 기준) 초과 또는 약 2% w/w (건조 기준) 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 2% w/w 내지 약 10% w/w(건조 기준)의 오메가-3 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 2% w/w 내지 약 6% w/w(건조 기준)의 오메가-3 지방산 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1% w/w(건조 기준) 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1% w/w 내지 약 10% w/w(건조 기준)의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1% w/w 내지 약 4% w/w(건조 기준)의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 20,000μmole TE/100g 초과의 천연 항산화제 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 20,000μmole TE/100g 내지 약 24,000,000μmole TE/100g의 천연 항산화제 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 20mg/g 초과(건조 기준), 약 25mg/g 초과 또는 약 30mg/g 초과(건조 기준)의 엽록소 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 5.0mg/g(건조 기준) 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 300,000IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 1.6mg/g(건조 기준) 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 식물 단편 0B에서의 원래 사포닌 함량 또는 참조 메디카고 종 식물에 대해 10 내지 약 15%(건조 기준)의 사포닌 함량을 갖는다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 약 3.0mg/g(건조 기준) 미만의 메디카겐산 함량을 갖는다.
건조 엽록체 컨디셔닝 4D
엽록체 세척 4A로부터 생성된 세척된 엽록체 현탁액 4B는 그 성분의 품질을 보존하고 심지어 이를 증가시키기 위해 건조될 수 있다. 세척된 엽록체 현탁액 4B는 부드럽게 건조되어 총 수분 함량을 감소시키고 따라서 산화 및 물 활성도(aw)를 감소시킨다. 건조는 분무 건조, 드럼 건조, 동결-건조, 원자화, 유동층 또는 이에 상응하는 기타 방법에 의해 수행된다. 바람직한 건조 온도는 45℃ 이하이다. 생성된 건조 엽록체 조성물 4E는 적어도 75%의 엽록체 함량, 약 12% 미만의 수분 함량 및 1 미만의 물 활성도(aw)를 갖는다. 필요에 따라 포장 이전에 건조 엽록체 조성물 4E는 제형화제(예를 들어, 증점제, 분산제, 겔화제, 희석제 등), 보존제, 영양 보충제 및/또는 유익한 미생물과 혼합될 수 있다. 최종 건조 엽록체 조성물 4E를 보호하기 위한 포장은 보존, 운송 또는 고객 요구사항에 따라 선택된다.
본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E와 달리, 예를 들어 펠렛으로 판매되는 다른 공지된 기존 녹색 단백질/색소 생성물은 고압 기계적 추출 후에 수득된 액체의 고온에서 응고 및 알칼리화 또는 산성화에 의해 생성된다. 이 과정은 엽록체 무결성을 파괴하고 가용성 분획에 루비스코를 방출한다. 이러한 생성물에는 단편화된 엽록체 성분으로 응고되는 가용성 분획으로부터의 오염물질도 함유되어 있다. 그것은 또한 펠릿 단계 동안 가열된다. 건조된 알팔파 주스는 담체를 사용하여 압착 및 분무-건조를 통해 생산된다. 따라서, 일부 성분의 양의 값을 희석시키는 가용성 분획의 바람직하지 않은 성분을 함유할 수 있다.
예를 들어, 컨디셔닝은 건조 엽록체 조성물을 과립화 및/또는 캡슐화하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 캡슐화하는 것은 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 적절한 식품 등급 결합제, 윤활제, 항산화제 등과 혼합되어 혼합물을 형성할 수 있다. 혼합물은 과립의 형태로 과립화될 수 있고 과립은 캡슐, 선택적으로 불투명/광-불투과성 캡슐에 캡슐화될 수 있다. 선택적으로 캡슐은 식품 등급 물질로 만들어진다. 다른 구현예에서, 혼합물은 현탁액을 형성하고 현탁액은 선택적으로 불투명/광-불투과성 캡슐에 직접적으로 캡슐화될 수 있다.
일 구현예에서, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 24시간 작동할 수 있는 2개 분무 건조기를 사용하여 공기에 의해 건조된다. 건조하는 온도는 45℃ 이하로 설정되며 수분 수준을 약 85%에서 약 6-10%로 감소시킬 수 있다. 밝은 녹색을 갖는 생성된 건조 엽록체 조성물 4E는 엽록체 농축물로서 사용할 준비가 되었다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액 3K, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 4B를 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 여기서 컨디셔닝은 45℃ 이하의 온도에서 세척된 엽록체 현탁액 4B를 건조하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 20℃ 내지 44℃ 사이의 온도에서 세척된 엽록체 현탁액 4B를 건조하는 것을 포함한다.
예를 들어, 건조는 분무 건조, 드럼 건조, 동결-건조, 원자화 또는 유동층을 사용하여 수행된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 조성물을 제형화제(예를 들어, 증점제, 분산제, 겔화제, 희석제), 보존제, 식품 보충제, 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 조성물은 질소 블랭킷 하에 5kg 백 내지 20kg 밀봉된 통에 포장될 수 있고 수년의 저장 수명을 제공할 수 있다.
예를 들어, 컨디셔닝은 개질된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에서 엽록체 조성물을 포장하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 조성물을 중합체 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명한 중합체 파우치 또는 백에 포장하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 조성물을 과립화하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 조성물을 캡슐, 선택적으로 불투명한 캡슐에 캡슐화하는 것을 포함한다. 예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 조성물을 과립화하고 캡슐화하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 콩과 계통 식물로부터 생산된 건조 엽록체 조성물 4E가 제공된다. 예를 들어, 식물은 메디카고 속에서 유래한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 사티바 종 또는 아종에서 유래한다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1% 미만의 수분 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 분말 형태이다. 예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 과립 형태이다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 캡슐화된 형태이다. 예를 들어, 조성물은 캡슐, 선택적으로 불투명한 캡슐에 캡슐화된다.
예를 들어, 영양 보충제, 예를 들어 비타민, 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물이 건조 엽록체 조성물 4E에 첨가될 수 있다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 항산화제, 항균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다. 예를 들어, 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다.
예를 들어, 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%의 고체 함량이 엽록체로 구성된다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론미크론 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내부 막 무결성을 갖는다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외부 막 무결성을 갖는다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 계통 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지하였다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 45 중량% 내지 약 55 중량%, 약 48 중량% 내지 약 55 중량% 또는 약 48 중량% 내지 약 52 중량%의 단백질 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 엽록체 현탁액 3K에서의 루비스코 함량 중 약 90%의 루비스코 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 300,000IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 20mg/g 초과, 약 25mg/g 초과 또는 약 30mg/g 초과의 엽록소 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 1.6mg/g 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 20,000μmole TE/100g 초과의 천연 항산화제 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 20,000 000μmole TE/100g 내지 약 24,000 000μmole TE/100g의 천연 항산화제 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 10 중량% 내지 약 15 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 지질 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 2 중량% 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 2 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 2 중량% 내지 약 6 중량%의 오메가-3 지방산 함량을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 1% 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 4%의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 조성물은 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 0.2 내지 약 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는다.
예를 들어, 건조 엽록체 조성물 4E는 약 5.0 미만, 약 4.8 미만, 약 4.7 미만, 약 4.6 미만, 약 4.5 미만, 약 4.4 미만, 약 4.3 미만 또는 약 4.2 미만의 pH를 갖는다.
건조 엽록체 조성물 4E의 함량을 고려하면, 그것은 인간 및 동물 영양 4F에 유리하게 사용될 수 있다. 아래 표 7은 시장에 존재하는 다른 생성물의 것과 비교하여 얻을 수 있는 주요 특성의 예를 제공한다.
일 양태에서, 해양 유기체에 사료를 주기 위한, 본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E의 용도가 제공된다.
일 양태에서, 동물 사료 또는 식품의 제조에서 본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E의 용도가 제공된다. 일 양태에서, 동물 사료 또는 식품으로서, 본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E의 용도가 제공된다.
일 양태에서, 영양 보충제의 제조에서 본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E의 용도가 제공된다.
화장품 제조에서 본 명세서에 개시된 건조 엽록체 조성물 4E의 용도가 제공된다.
일 양태에서, 해양 유기체에 사료를 주기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 해양 유기체를 위한 식이에 제공된 미세조류의 적어도 일부를 본 명세서에 개시된 재수화된 건조 엽록체 조성물 4E로 대체하는 것을 포함한다.
액체 엽록체 컨디셔닝 4G
엽록체 세척 4A로부터 생성된 세척된 엽록체 현탁액 4B는 또한 액체 컨디셔닝 4G를 거쳐 특정 시장에서 최종 생성물로서 액체 엽록체 조성물 4H를 제공할 수 있다. 액체 엽록체 조성물 4H는 추가 변형 없이 그대로 사용하거나 또는 목표로 하는 최종 용도와 양립할 수 있고 엽록체의 무결성을 보장하는 물 또는 다른 액체에 희석된 세척된 엽록체 현탁액 4B일 수 있다. 추가 변형 없이 그대로 사용될 때, 생성된 액체 엽록체 조성물 4H는 세척된 엽록체 현탁액 4B의 수분 함량에 상응하는 약 85%의 수분 함량을 나타낸다. 필요에 따라 포장 이전에, 액체 엽록체 조성물 4H는 제형화제(예를 들어, 증점제, 분산제, 겔화제, 희석제 등), 보존제, 영양 보충제 및/또는 유익한 미생물과 혼합될 수 있다. 생성된 조성물은 0.25 - 0.7M에 가까운 엽록체의 무결성을 보장하는 몰농도를 나타내야 한다. 마지막으로, 최종 액체 엽록체 조성물 4H를 보호하기 위한 포장은 보존, 운송 또는 고객 요구사항에 따라 선택된다.
건식 엽록체 컨디셔닝 4D와 유사하게, 액체 엽록체 컨디셔닝 4G는 또한 캡슐, 선택적으로 불투명한 캡슐에 엽록체를 캡슐화하는 것을 포함할 수 있다. 본 명세서에 개시된 조성물을 캡슐화하는 것은 공지된 방법을 사용하여 달성될 수 있다. 액체 최종 생성물을 갖기 위해 생성된 캡슐은 그 다음 최종 용도와 양립할 수 있는 액체에 재현탁된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 4B를 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액의 염도 및/또는 몰농도를 조정하는 것을 포함한다. 예를 들어, 엽록체 현탁액의 염도는 약 2% 내지 약 4%, 선택적으로 약 3.5%로 조정된다.
예를 들어, 엽록체 현탁액의 몰농도는 약 0.25M 내지 약 0.7M, 선택적으로 약 0.6M으로 조정된다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 제형화제(예를 들어, 증점제, 분산제, 겔화제, 희석제), 보존제, 식품 보충제, 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 개질된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에서 포장하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 중합체 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명한 중합체 파우치 또는 백에 포장하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 캡슐, 선택적으로 불투명한 캡슐에 캡슐화하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된
공정에 따라 수득된 콩과 계통 식물로부터 생산된 건조 엽록체 조성물 4H가 제공된다. 예를 들어, 식물은 메디카고 속에서 유래한다. 예를 들어, 식물은 메디카고 사티바 종 또는 아종에서 유래한다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 공정에 따라 수득된 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물 4H가 제공된다.
예를 들어, 공정은 캡슐, 선택적으로 불투명 캡슐에 물에서의 액체 엽록체 조성물 4H를 캡슐화하는 것을 추가로 포함한다.
예를 들어, 물은 식염수이다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 적어도 15 w/w%의 건조 물질 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 항산화제, 항균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다. 예를 들어, 조성물은 항산화제 및/또는 항균제를 추가로 포함한다. 예를 들어 항산화제 및/또는 항균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨이다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 오메가-3 지방산(예를 들어, 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함한다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 30 중량% 내지 약 50 중량%, 약 35 중량% 내지 약 45 중량%, 약 37 중량% 내지 약 43 중량% 또는 약 39 중량% 내지 약 51 중량%의 고체 함량을 갖는다.
예를 들어, 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%의 고체 함량이 엽록체로 구성된다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론미크론 내지 약 10 미크론미크론의 평균 크기를 갖는다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외부 막 무결성을 갖는다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내부 부 막 무결성을 갖는다.
예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 계통 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지하였다. 예를 들어, 엽록체의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 적어도 약 80%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 결정된 바와 같이 무손상 엽록체이다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 45 중량% 초과의 단백질 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 45 중량% 내지 약 55 중량%, 약 48 중량% 내지 약 55 중량% 또는 약 48 중량% 내지 약 52 중량%의 단백질 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 엽록체 현탁액 3K 내의 루비스코 함량의 약 90%의 루비스코 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 300,000IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 20mg/g 초과, 약 25mg/g 초과 또는 약 30mg/g 초과의 엽록소 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 1.6mg/g 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 20,000μmole TE/100g 초과의 천연 항산화제 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 20,000 000μmole TE/100g 내지 약 24,000 000μmole TE/100g의 천연 항산화제 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 10 중량% 내지 약 15 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 지질 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 2 중량% 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 2 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 2 중량% 내지 약 6 중량%의 오메가-3 지방산 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 1% 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 4%의 오메가-6 지방산 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 0.2 내지 약 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 80% 내지 약 90%, 약 82% 내지 약 88%, 약 84% 내지 약 86% 또는 약 85%의 수분 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 15%의 건조 물질 함량을 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 5.0 미만, 약 4.8 미만, 약 4.7 미만, 약 4.6 미만, 약 4.5 미만, 약 4.4 미만, 약 4.3 미만 또는 약 4.2 미만의 pH를 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 50 중량% 초과의 단백질 함량 및 약 25mg/g 초과의 엽록소 함량을 가지며, 여기서 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광산란 측정 및 분석에 의해 결정된 바와 같이 무손상 엽록체이다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 약 0.2M 내지 약 0.7M 또는 약 0.25M 내지 약 0.7M의 몰농도를 갖는다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H는 캡슐, 선택적으로 불투명한 캡슐에 캡슐화된다.
예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H의 염도는 약 3% 내지 약 4%로 조정된다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H의 염도는 약 3.5%로 조정된다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H의 몰농도는 약 0.5M 내지 약 0.7M으로 조정된다. 예를 들어, 액체 엽록체 조성물 4H의 몰농도는 약 0.6M으로 조정된다.
액체 엽록체 조성물 4H의 함량이 건조 엽록체 조성물 4E의 함량과 유사함을 고려하면, 공정에서 생성된 액체 최종 생성물은 또한 인간 및 동물 영양 4I를 위해 유익하게 사용될 수 있다.
일 구현예에서, 본 명세서에 개시된 콩과 계통 식물로부터 단리된 액체 엽록체 조성물 4H의 용도는 동물 사료 또는 인간을 위한 식품의 제조를 위한 것이다.
또 다른 구현예에서, 콩과 계통 식물로부터 분리된 액체 엽록체 조성물 4H의 용도는 해양 유기체에 사료를 주기 위한 것이다.
또 다른 구현예에서, 화장품 제조에서 콩과 식물로부터 단리된 액체 엽록체 조성물 4H의 용도.
수 중 수성 현탁액의 제조에서 콩과 계통 식물로부터 단리된 엽록체의 용도.
인간 또는 동물 식이에서 미세조류 및/또는 시아노박테리아에 대한 대체물 또는 대안으로서 콩과 계통 식물에서 단리된 엽록체의 용도.
예를 들어, 미세조류는 클로렐라이다. 예를 들어, 시아노박테리아는 스피룰리나이다.
해양 유기체를 사육하기 위한 방법으로서, 상기 방법은 상기 해양 유기체를 위한 식이에 제공된 미세조류 및/또는 시아노박테리아의 적어도 일부를 본 명세서에 기재된 액체 엽록체 조성물 4H로 대체하는 것을 포함하는, 방법.
추가 구현예에서, 콩과 계통 식물로부터 단리된 엽록체의 용도는 바로 사용할 수 있는 액체 엽록체 조성물 4H로서 수 중 수성 현탁액의 제조를 위한 것이다.
다른 구현예에서, 콩과 계통 식물로부터 단리된 액체 엽록체 조성물 4H의 용도는 인간 또는 동물 식이에서 스피룰리나, 클로렐라 및/또는 기타 미세 조류 또는 시아노박테리아에 대한 대체물 또는 대안을 위한 것이다.
일 구현예에서, 해양 유기체에 사료를 주기 위한 방법이 제공되며, 상기 방법은 상기 해양 유기체를 위한 식이에 제공된 미세조류의 적어도 일부를 콩과 계통 식물의 식물로부터 단리된 액체 엽록체 조성물 4H로 대체하는 것을 포함한다.
화합물 추출 4J 및 후속 활성도
도 1, 2a, 2b, 9 및 16을 참조하면, 화합물 추출 4J는 또한 세척된 엽록체 현탁액 4B로부터 수행되어 고가의 분자 및/또는 화합물을 수득할 수 있다. 이들 분자 및/또는 화합물은 일단 추출되면 상이한 수준에서 정제 및/또는 컨디셔닝되어 다양한 산업에 전용되는 최종 생성물 개발을 위한 활성 성분으로 사용될 수 있거나 상업적 맥락에 따라 그 자체로 최종 생성물으로 간주될 수 있는 전구체를 수득할 수 있다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 단백질, 선택적으로 표 10 내지 16 중 어느 하나에서 확인된 단백질의 공급원일 수 있다. 예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 펩티드의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 루비스코와 같은 효소의 공급원일 수 있다.
예를 들어, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 다양한 유형의 최종 생성물의 개발을 위한 활성 성분일 수 있는 루비스코의 공급원일 수 있다. 도 16은 다양한 최종 생성물의 개발을 위한 기반으로 사용되어 지는 루비스코 전구체 4M을 얻을 수 있도록 하는 추출 및 컨디셔닝을 예시한다.
예를 들어, 루비스코를 엽록체로부터 분리하는 것은 약 34℃ 미만의 온도에서 수행된다.
예를 들어, 루비스코를 엽록체로부터 분리하는 것은 엽록체를 분획화하여 루비스코를 가용화하고 가용성 루비스코를 단리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 루비스코를 가용화하는 것은 외부 및/또는 내부 엽록체 막을 파열시켜 선택적으로 삼투 충격 및/또는 초음파처리를 통해 루비스코를 방출하는 것을 포함한다.
예를 들어, 가용성 루비스코를 단리하는 것은 선택적으로 0.2 미크론미크론 다공성에서 접선 유동 여과를 사용하여 불용성 엽록체 성분(예를 들어, 티칼로이드 막)을 여과 제거하는 것을 포함한다. 예를 들어, 루비스코 현탁액 4K를 여과하는 것은 접선 유동 여과, 여과, 응집 및/또는 경사분리를 사용하여 수행된다. 예를 들어, 루비스코 현탁액 4K를 여과하는 것은 루비스코 현탁액 4K를 2번 여과하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 루비스코 현탁액 4K에 식품 등급 보호제, 선택적으로 메타중아황산염 또는 벤조산염 및/또는 하나 이상의 보충적 성분을 첨가하는 것을 포함한다.
예를 들어, 컨디셔닝은 선택적으로 분무 건조, 드럼 건조, 동결-건조, 원자화 또는 유동층을 사용하여 루비스코 현탁액 4K를 건조하는 것을 포함한다. 예를 들어, 건조하는 온도는 45℃ 이하, 선택적으로 15℃ 내지 40℃ 또는 20℃ 내지 35℃에서 유지된다.
바이오매스의 물가안정책
수많은 식물은 영양학적, 의료적 또는 산업적 적용에 유용할 수 있는지 여부에 관계없이 원하는 화합물이 풍부한 내용물을 나타낼 수 있다. 아미노산 또는 펩티드의 존재에 의해, 이들 화합물의 다수는 단백질 화합물이 될 수 있고 따라서 그 화학적, 물리적 및/또는 미생물적 환경을 변경함에 의해 그 본질적인 특성이 쉽게 변형될 수 있다. 현재 개시된 공정은 식물 바이오매스의 순차적인 분획화에 관한 것이다. 4개의 별개의 분획이 수득될 수 있고 바람직한 다양한 구조, 화합물 또는 분자가 추가로 단리되고 컨디셔닝될 수 있다.
ㆍ 첫 번째 분획, 즉 첫 번째 고체 분획은 대부분 큰 섬유와 구조(예를 들어, 거대 섬유)를 포함할 수 있다.
ㆍ 두 번째 분획, 즉 두 번째 고체 분획은 대부분 작은 크기의 섬유(예를 들어, 미세섬유)를 포함할 수 있다.
ㆍ 세 번째 분획은 현탁 상태이거나 액상에 용해되어 있는지 여부에 관계없이 단백질 함량이 낮은 대부분 화합물 및 분자(예를 들어, 사포닌 전구체 3H)를 포함할 수 있다.
ㆍ 네 번째 분획은, 현탁액 또는 액상에 용해되어 있는, 변형되지 않거나 약간 변형된(예를 들어, 건조 엽록체, 액체 엽록체, 루비스코 전구체), 대부분 단백질 또는 펩티드 구조, 화합물 및 분자를 포함할 수 있다.
상기-언급된 제시된 분획에 함유된 화합물의 본래 및 고유 품질을 보존하는 것이 경제적으로 바람직하다. 이 공정은 각각의 활성도에서, 다음을 포함한 화학적, 물리적, 미생물적 스트레스를 완화함에 의해 달성될 수 있다:
ㆍ 4 미크론미크론보다 큰 크기를 갖는 섬유 및 구조의 바이오매스 분리 동안 전단력 완화 및 공정 활성도 전반에 걸쳐 적은 양의 에너지를 소산시키는 장비 사용;
ㆍ 낮은 온도 조건 예를 들어 45℃ 이하 유지;
ㆍ 4 이상의 pH 조건 유지; 및
ㆍ 공정의 특정 지점에 항산화제 및/또는 항균제 첨가
따라서, 식물 성분을 회수하는 공정(메인스트림)이 도 10a에 기술되어 있다(여기서 공정 활성도는 직사각형으로 표시되고 생성물은 타원형으로 표시됨). 구체적으로, 식물 단편 100B는 추출 101A를 거치며 이에 의해 섬유를 함유하는 첫 번째 고체 분획 101B 및 첫 번째 액체 분획 101H를 수득한다. 첫 번째 액체 분획 101H는 두 번째 추출 102A를 거쳐 미세섬유를 함유하는 두 번째 고체 분획 102AA 및 두 번째 액체 분획 102G를 수득한다. 두 번째 액체 분획 102G는 제3 추출 103A를 거쳐 엽록체 고갈된 분획 103B 및 단백질-풍부화된 분획 103K를 수득한다. 일부 구현예에서, 항산화제 및/또는 항균제가 첫 번째 고체 분획 101B, 두 번째 고체 분획 102AA, 단백질-고갈된 분획 103B 또는 단백질-풍부화된 분획 103K에 첨가된다.
공정은 다음 중 적어도 하나를 포함한다: 1) 약 800 kPa(선택적으로 600 kPa) 미만의 압력을 사용하여 식물 또는 이의 단편으로부터 추출하는 단계; 2) 공정 동안 45℃ 이하(선택적으로 37℃)로 온도를 유지하는 단계; 또는 3) pH를 약 4.5 이상(선택적으로 4.8 이상)으로 유지하면서 두 번째 액체 분획으로부터 추출하는 단계.
예를 들어, 공정은 약 800kPa 미만(선택적으로 600kPa)의 압력을 사용하여 식물 또는 이의 단편으로부터 추출하는 단계; 공정 동안 약 43℃ 미만(선택적으로 37℃)의 온도를 유지하는 단계; 및 pH를 약 4.5 이상(선택적으로 4.8 이상)으로 유지하면서 두 번째 액체 분획으로부터 추출하는 단계를 포함한다.
주요 공정 활성도를 나타내는 도 10a와 대조적으로, 도 10b는 중간체, 전구체 및 최종 생성물을 포함하는 상세한 분획화 공정뿐만 아니라 분획화 공정 활성도 및 하위-활성도의 포괄적인 관점을 제시한다. 각각의 모든 공정 활성도는 고품질의 최종 생성물을 수득하기 위해 물리적, 화학적 및 생물학적 조건에 관한 것이다.
예를 들어, 공정은 연속 공정 또는 반-연속 공정이다. 예를 들어, 공정은 연속적이고 사용된 식물 단편의 양은 약 50 메트릭톤(MT)/시간보다 크다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다. 예를 들어, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 실질적으로 모든 비-엽록체 세포 함량은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다. 예를 들어, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 실질적으로 모든 엽록체 외부의 가용성 함량은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다. 예를 들어, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 실질적으로 모든 비-엽록체 세포 함량은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거될 수 있다. 예를 들어, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 실질적으로 모든 엽록체 외부의 가용성 함량은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%를 갖는다. 예를 들어, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 실질적으로 모든 비-엽록체 세포 함량을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%를 갖는다. 예를 들어, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 엽록체 외부의 실질적으로 모든 가용성 함량을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%를 갖는다. 예를 들어, 비-엽록체 세포 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 실질적으로 모든 비-엽록체 세포 함량을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%를 갖는다. 예를 들어, 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 또는 적어도 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된다. 일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정에 따라 수득된 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거된 엽록체 외부의 실질적으로 모든 가용성 함량을 갖는다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물의 본 개시내용의 용도에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 엽록체 현탁액은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 엽록체 현탁액은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 엽록체 현탁액은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 엽록체 현탁액을 제조하는 공정에서, 엽록체 현탁액은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 액체 엽록체 조성물은 약 70 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율을 가지며, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 액체 엽록체 조성물은 약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이고, 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정된다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 액체 엽록체 조성물은 약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율을 가지며, 루비스코/엽록소의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 액체 엽록체 조성물을 제조하는 공정에서, 액체 엽록체 조성물은 약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율을 가지며, 루비스코/FBPP의 비율은 이다.
일부 구현예에서, 본 개시내용의 공정은 콩과 식물 단편으로부터의 사포닌의 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과를 제거한다.
불순물 및 세포 함량의 초기 비율 및 양은 상이한 품종에 따라 달라질 수 있음을 당업자는 인식할 수 있다.
특정 구현예를 특히 참조하여 설명이 이루어졌지만, 이에 대한 수많은 변형이 당업자에게 나타날 것이라는 것을 이해할 것이다. 청구범위의 범주는 본 개시내용 및 첨부 도면에 제공된 특정 구현예 및 실시예에 의해 제한되어서는 안되며, 전체로서 본 개시내용과 일치하는 가장 넓은 해석이 주어져야 한다.
실시예
실시예 1 - 산업 공정의 전반적인 설명
도 11에서, 산업 공정의 5가지 주요 공정 활성도가 간략하게 기술되어 있다.
생산 단계 P에서, 4,000 헥타르 이상의 농경지에서 재배된 알팔파를 수확하고 절단하여 160,000 MT의 신선한 식물 단편 0B(예를 들어, 메디카고 사티바)를 생산한다.
첫 번째 분획화 F1에서, 식물 단편 0B는 물리적 분리 1A 및 후속적인 물리적, 화학적 또는 생물학적 컨디셔닝 1C를 거쳐 약 72,000(60,000 - 80,000) 메트릭톤(MT)의 거대섬유 조성물 1D(사용 준비가 완료된 최종 생성물 #1)를 수득할 수 있다.
두 번째 분획화 F2에서, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 미세섬유 고갈 2A를 거쳐 미세섬유 분획 2AA를 수득하고 후속 물리적, 화학적 또는 생물학적 컨디셔닝 2B를 거쳐 약 1,000(800 - 1,200) 메트릭톤(MT)의 미세섬유 조성물 2C(사용 준비가 완료된 최종 생성물 #2)를 수득할 수 있다.
세 번째 분획화 F3에서, 미세섬유 고갈된 현탁액은 엽록체 분리 3A를 거쳐 엽록체 감소된 현탁액 3B를 수득하고 후속 물리적, 화학적 및 기계적 컨디셔닝 3G를 거쳐 약 375(150 - 500) 메트릭톤(MT)의 사포닌 전구체 3H를 수득하여 최종 생성물 개발(전구체 생성물 #1)을 수행할 수 있다
네 번째 분획화 F4에서, 엽록체 현탁액 3K는 엽록체 세척 4A를 거쳐 고단백질 함량을 포함하는 세척된 엽록체 현탁액 4B를 수득할 수 있을 뿐만 아니라 다른 성분 및 분자가 바이오소스의 전구체로서 사용될 수 있다. 특히 식품 등급 요건에 관한 추가 물리적, 화학적 또는 생물학적 컨디셔닝 4D, 4G는 약 2,400(2,000 - 4,000) 메트릭톤(MT)의 건조 엽록체 조성물 4E 및/또는 액체 엽록체 조성물 4H(사용 준비가 완료된 최종 생성물 #3 및 사용 준비가 완료된 최종 생성물 #4)를 수득하기 위해 수행될 수 있는 반면, 상기와 같이 동일한 세척된 엽록체 현탁액은 루비스코 컨디셔닝 4L의 다른 경로를 거쳐 최종 생성물 개발(전구체 생성물 #2)을 수행하는 데 유용한 루비스코 전구체 4M을 수득할 수 있다.
요약하면, 이 공정을 사용하여 상업적(사용 준비가 완료됨) 최종 생성물 1D, 2C, 4E, 4H 및 전구체 생성물(바이오소스의 산업 전구체) 3H 및 4M을 일 구현예에서 수득할 수 있다.
실시예 2 - 바이오매스 준비(0A)
바이오매스 준비 0A는 특히 도 12의 흐름도뿐만 아니라 도 1 내지 9의 흐름도에 예시되어 있다.
바이오매스 준비 0A는 식물 생산 P와 관련된다. 알팔파(메디카고 사티바), 특히 심포니 품종은 약 4,000 헥타르 이상의 농경지에서 재배된다. 수확에 대한 결정은 위성 조사(현장 조사에 의해 추가로 확인됨), 적절한 잎 대 줄기 비율(예를 들어, 습윤 무게를 기준으로 1:1), 적절한 식물 높이(예를 들어, 50 내지 60cm)를 포함한 다수의 인자에 기초하고, 상기 본 명세서에 기술된 올바른 사양은 일반적으로 이전 수확에 이어 28 내지 35일의 기간 후에 수득된다.
바이오매스 준비 0A는 수확에 의해 시작한다; 수확은 18 × 20 메트릭톤(MT) 트레일러로 구성된 2대의 수확기를 사용하여 수행된다. 트럭 적재 시간은 약 20분이며 공장까지 편도 이동은 약 30분에서 2시간이 소요될 수 있다. 수확물을 식물 호퍼에 업로드하는 데는 예를 들어 약 20분이 소요될 수 있다. 따라서, 이들 조건에서 수확으로부터 첫 번째 분획화 F1(활성도 1A)까지의 시간은 약 4시간이 될 수 있다. 이어지는 공정를 사용하여, 시간당 최대 100 메트릭톤(MT)의 알팔파를 수확하고 잘게 절단하고 컨디셔닝하고, 그리고 수확은 하루에 16시간, 예를 들어 연간 100일 수행할 수 있다.
길이가 약 10 - 100mm, 대부분 약 20mm로 측정되는 식물 단편 0B를 수확할 때, 약 10%(100g/L)의 농도인 메타중아황산나트륨(Na2S2O5)을 알팔파 단편의 메트릭톤(MT)당 약 5 리터의 비율로 알팔파 단편에 첨가한다.
트럭은 바이오매스 투입량을 계산하기 계량된다. 이 시설은 병렬로 작동할 수 있는 2개의 식물 호퍼를 포함한다. 컨베이어를 사용하여 식물 단편 0B는 다음 분획화 단계의 흡입구 안으로 직접적으로 공급하기 위해 그곳으로 이동한다.
식물 단편 0B는 길이가 약 2cm이고 잎과 줄기를 포함하며, 연간 약 160,000 입방톤(시간당 100 입방미터, 하루 16시간, 연간 100일)의 속도로 생산될 수 있다. 식물 단편은 저장 수명이 약 4시간 미만이고 수분 함량이 약 82%이며 메타중아황산나트륨과 혼합될 수 있다.
실시예 3 - 첫 번째 분획화 (활성도 1A에서 생성물 1H로)
이 첫 번째 분획화 F1에서, 새롭게 수득한 식물 단편 0B는 액체 분획으로부터 섬유 성분을 분리하기 위해 2 단계 압착(1차 단계 압착 및 2차 단계 압착)을 거친다. 첫 번째 분획화는 도 13에 자세히 설명되어 있고 도 1 및 도 10b에서도 참조된다.
이제 도 13을 참조하면, 거대섬유 분리 1A에서, 식물 단편 0B는 4개의 스크류 프레스(예를 들어, 트윈 스크류 프레스) 안으로 공급되며, 각 프레스는 시간당 30 메트릭톤 용량을 가져, 시간당 100 메트릭톤 초과의 총 투입 용량을 제공한다. 식물 단편 0B는 컨베이어 및/또는 분배기를 사용하여 프레스의 상단 안으로 공급된다. 약 200 - 300ppm의 소포제(식물성 기름 내)가 스크류 챔버의 하단에 첨가된다. 백 콘 장치는 약 80psi 이하의 압력을 가하여 액체 분획이 식물 단편 0B에서 더 잘 추출되도록 압착된 케이크가 밖으로 이동하는 것에 대한 제한을 구축한다. 단편을 압착하면, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H(작동적으로 녹색 주스로 지칭됨)(또한 작동적으로 사용되는 용어를 참조하여 분획화 공정을 기술하는 도 2b 참조)가 시간당 약 55 입방미터의 속도로 얻어지고, 압착된 케이크, 예를 들어 식물 거대섬유 분획 1B는 시간당 약 45 메트릭톤의 속도로 수득된다.
압착된 케이크는 도 13에 도시된 바와 같이 거대섬유 분리 1A에서 1차 압착(1A.1)의 결과이다. 압착된 케이크의 45 메트릭톤은 약 50㎥의 액체와 추가로 조합될 것이다(이 액체의 절반은 신선한 물이고 나머지 절반은 화합물 추출 3E 또는 다른 곳에서 나오는 재순환된 공정수임. 약 80%의 수분 함량을 갖는 재수화된 압착된 케이크는 더 많은 화합물을 초기 식물 단편 OB로부터 추출하기 위해 2차 단계 압착( 1A.2 )을 거칠 수 있다. 그렇게 하기 위해, 1차 단계 압착( 1A.1 )에서 얻은 압착된 케이크를 재수화하고 컨베이어 및/또는 분배기를 사용하여 프레스의 두 번째 트레인(예를 들어, 트윈 또는 싱글 스크류 프레스)의 상단 안으로 공급한다. 과도한 거품의 존재를 관찰한 후 필요한 경우, 약 200ppm 미만의 소포제(식물성 기름 내)를 스크류 챔버의 하단에 첨가한다. 백 콘 장치는 약 80psi 이하의 압력을 적용하여 액체 분획이 재수화된 압착된 케이크에서 더 잘 추출되도록 압착된 케이크가 밖으로 이동하는 것에 대한 제한을 구축한다. 케이크를 압착하면, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2(작동적으로 황색 주스로 지칭됨)가 시간당 약 57 입방미터의 속도로 수득되고, 식물 거대섬유를 포함하는 거대섬유 분획 1B는 시간당 약 38 메트릭톤의 속도로 수득된다.
프레스 바닥 탱크에서 자유 유동하는 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 약 11-15%의 부유된 고형물을 포함하고, 약 30℃ 미만의 온도에 있고, 밝은 녹색을 가지고, 그리고 약간의 잔류 발포를 포함할 수 있다. 냉장(예를 들어, 4℃)된 경우 약 16시간의 저장 수명을 가질 수 있다. 이 단계에서, 액체 분획에는 보존제가 첨가되지 않는다. 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 후속적으로 두 번째 분획화에서 미세섬유 고갈 2A로 펌핑된다.
2차 단계 압착으로부터의 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2(도 10b에 도시됨)는 프레스 탱크에서 자유 유동하고 약 6-8%의 현탁된 고체를 포함한다. 그것은 약 34℃ 미만의 온도이고, 옅은 녹색을 띠며 약간의 잔류 거품을 포함할 수 있다. 이 단계에서 보존제는 액체 분획에 첨가되지 않는다. 거대 섬유 고갈된 현탁액 1H.2는 후속적으로 두 번째 분획화에서 미세섬유 고갈 2A.2로 펌핑된다. 2개의 거대섬유 고갈된 현탁액, 1H 및 1H.2가 일부 유사한 사양을 갖고 있더라도 차이가 존재하여 (예를 들어, 고체 함량, 수분, 단백질 함량) 2개의 다운스트림 공정인 미세섬유 고갈, 2A.1 및 2A.2는 각각 다를 것이다는 점에 주의해야 한다. 대안으로, 사용 준비가 완료된 최종 생성물 4H 및 4E 또는 사포닌 전구체 3H 생산에 대한 시장 요구에 따라 가동되는 경우 2개의 거대섬유 고갈된 현탁액 1H 및 1H.2는 단일 배치에서 가공될 수 있다.
거대섬유 분획 1B(예를 들어, 2차 단계 고체 압착된 케이크)는 약 63%의 수분 함량을 가지고 34℃ 미만의 온도이고 흐려진 녹색을 갖는다. 그것은 약 4시간의 저장 수명을 가질 수 있다. 거대섬유 분획 1B는 컨베이어 상에 증착되고 거대섬유 컨디셔닝 1C(예를 들어, 생물학적, 화학적 및 물리적 컨디셔닝)로 이동된다.
여전히 도 13을 참조하면, 거대섬유 컨디셔닝 1C는 거대섬유 분획 1B의 생물학적 컨디셔닝(1C.1)에 의해 시작하여, 거대섬유 분획 1B의 사일로에 저장하는 것을 가속화하기 위해 거대섬유 분획 1B의 접종물(예를 들어, 상업용 박테리아 접종물) 2g/메트릭톤을 추가한다. pH는 3-4주 이내에 약 4.3으로 감소할 것이다. 그때까지 젖산 발효에 의해 물질이 안정화되고 산화 및 발효가 장기간(예를 들어, 12개월) 중단/감소될 것이다.
원하는 pH에 도달하면 발효를 중지시키고 거대섬유 분획 1B의 포장을 밀봉하여 산화를 중지시키는 것이 중요하다. 이를 위해 접종물로 처리된 거대섬유 분획 1B를 압착(예를 들어, 비율 2.2:1)하고 밀봉된 플라스틱 백(예를 들어, 40kg 이상의 백)에 포장(1C.2)하여 장기간(예를 들어, 8 - 12개월) 보관할 것이다. 그 결과는 사용-준비-완료된 최종 생성물 #1인 거대섬유 조성물 1D이다.
실시예 4 - 두 번째 분획화 (활성도 2A에서 생성물 2G로)
미세섬유 고갈 2A는 둘 모두 첫 번째 분획화 F1로부터 수득된 거대섬유 고갈된 현탁액 1H(작동적으로 녹색 주스로 칭함) 및 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2(작동적으로 황색 주스로 칭함)로부터 미세섬유를 제거하는 것을 포함한다. 이들 활성도는 특히 도 14뿐만 아니라 도 1, 2a, 2b, 4-10b에 예시되어 있다.
도 14를 참조하면, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H(예를 들어, 녹색 주스)는 프레스 바닥 탱크로부터 미세섬유 고갈 2A(트레인 #1)로 펌핑된다. 거대섬유 고갈된 현탁액 1H는 각각 시간당 약 15 입방미터의 용량을 갖는 4개의 미세 회전 스크린 필터 안으로 공급된다. 필터는 86 미크론미크론 스크린을 포함하고 자유 흐름 장비가 사용된다. 생성된 출력물은 시간당 약 52 입방미터의 속도로 미세섬유-고갈된 현탁액 2G(예를 들어, 여과된 녹색 주스) 및 시간당 약 3.3 메트릭톤의 속도로 미세섬유 분획 2AA로 구성된다. 미세섬유-고갈된 현탁액 2G(약 30℃ 미만의 온도에서)는 냉장된 탱크로 펌핑되어 예를 들어, 4℃에서 16시간 동안 저장될 수 있다. 그것은 약 10 내지 16%의 현탁된 고체를 포함하고 높은 단백질 함량을 가지고 있다. 미세섬유-고갈된 현탁액 2G는 후속적으로 아래에 설명된 세 번째 분획화 F3으로 펌핑된다. 고체 미세섬유 2AA(아래에서 더 기술됨)는 컨베이어 상으로 증착된다.
별도로, 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2는 액체 분획 1H와 유사한 미세-섬유 고갈 2A.2(트레인 #2)를 겪는다. 각각 시간당 약 15 입방미터의 용량을 갖는 4개의 미세 회전식 스크린 필터를 통해 여과된다. 필터는 86 미크론미크론 스크린을 포함하고 자유 흐름 장비가 사용된다. 수득된 산출물은 시간당 약 57 입방미터의 속도로 미세섬유-고갈된 현탁액 2G.2(작동적으로 여과된 황색 주스로 칭함)와 시간당 약 1.7 메트릭톤의 속도로 미세섬유 분획 2AA로 구성된다. 두 번째 미세섬유-고갈된 현탁액 2G.2(약 30℃ 미만의 온도로 유지됨)는 냉장 탱크 안으로 펌핑되고 4℃에서 16시간 동안 저장될 수 있다. 이 여과된 황색 주스(예를 들어, 2G.2)는 약 6%의 현탁된 고체를 포함한다. 그것은 아래에 설명된 세 번째 분획화 F3으로 펌핑된다. 고체 미세섬유 2AA는 컨베이어 상으로 증착된다.
거대섬유 고갈된 현탁액 1H(예를 들어, 거대섬유가 고갈된 녹색 주스) 및 거대섬유 고갈된 현탁액 1H.2(예를 들어, 황색 주스)를 여과함에 의해 수득된 두 미세섬유 분획은 함께 조합되어 미세섬유 분획 2AA를 형성한다. 이들 미세섬유는 약 88%의 수분 함량, 높은 단백질 함량, 밝은 녹색 및 약 4시간의 저장 등을 갖는다.
여전히 도 14를 참조하면, 미세섬유는 시간당 약 5 메트릭톤의 속도로 생성되고 원하는 적용에 따라 추가로 컨디셔닝될 수 있다. 그것은 추가로 제형화될 수 있거나 2B.1, 예를 들어 액체와 혼합될 수 있거나, 예를 들어 하나 이상의 회전식 건조기를 사용하여 낮은 온도 2B.2(예를 들어, 임의의 고체는 건조기에서 약 43℃ 미만으로 유지됨)에서 건조될 수 있고, 따라서 수분 함량을 약 88%에서 약 12% 미만으로 감소시킨다. 그 다음 건조된 미세섬유는 공기 진공 2B.3 하에서 포장되고 미세섬유 조성물 2C(또는 영양 보충제)로 사용되어 질 준비가 완료된다. 사용 준비가 완료된 이들 미세섬유는 시간당 약 650(600 내지 800)kg의 속도로 생산될 수 있고 약 11.5%의 수분 함량을 갖는다. 그것들은 몇 년의 저장 수명을 가지고 예를 들어 5kg 또는 10kg 밀봉 백에 포장될 수 있다.
실시예 5 - 세 번째 분획화 (활성도 3A에서 생성물 3K로)
세 번째 엽록체 분리 3A는 주 엽록체 현탁액 3K 및 엽록체 감소된 현탁액 3B를 단리하는 것을 포함하고, 도 15뿐만 아니라 도 1, 2a, 2b 및 5-10b의 흐름도에 상세하게 설명되어 있다.
첫째, 냉장 탱크에 함유된 미세섬유-고갈된 현탁액 2G(예를 들어, 작동적으로 여과된 녹색 주스로 칭함)는 그것을 52 입방미터의 미세섬유-고갈된 현탁액 2G에서 시간당 18L의 유량(즉 400ppm)으로 구연산(50%의 산 농도)과 혼합함에 의해 탱크 출력에서 산성화된다 . 최종 pH는 약 4.8 내지 약 5.1의 범위이다.
그런 다음 산성화된 현탁액은 3개의 원심분리기로 펌핑되어 시간당 최소 5000L의 농축액 출력 용량을 갖고 10 000G에서 회전하는 3개의 원심분리기를 사용하여 엽록체 분리 3A를 겪는다. 1차 단계 원심분리의 이월을 시간당 33 입방미터의 속도로 생성되는 액체 상등액인 엽록체 감소된 현탁액 3B이다. 농축된 젤리는 주요 엽록체 현탁액 3K(작동상으로 엽록체를 함유하는 녹색 생 젤리로 칭함)이고 시간당 19 입방미터의 속도로 생산된다. 엽록체 분리 3A로부터 이월 액체는 트럭으로 펌핑되어 유기 액체 비료와 물 균형있는 기여로서 농경지로 다시 재활용된다.
주 엽록체 현탁액 3K는 녹색을 가지고 무손상 엽록체를 포함하고, 예를 들어 존재하는 엽록체의 75% - 97%는 무손상이고 약 30%는 현탁된 고체이다. 현탁액의 온도는 34℃ 미만이고 저장 수명은 현탁액을 냉장(예를 들어, 4℃)하여 약 16시간까지 증가될 수 있다. 이 단계에서는 보존제가 첨가되지 않다. 세척되지 않은 엽록체 현탁액은 후속적으로 네 번째 분획화 F4로 펌핑된다.
이제 도 10b 및 도 15를 참조하면, 엽록체 감소된 현탁액 3B(작동상으로 갈색 주스로 칭함)는 여전히 잔류 엽록체로부터의 약간의 녹색 색소를 포함하고 약 3%의 현탁된 고체를 포함한다. 현탁액의 온도는 34℃ 미만이고 저장 수명은 약 4시간이다. 엽록체 감소된 현탁액 3B는 약 80% 잔류물 재순환 및 300kDa 다공성(세라믹)으로 다중-셀 장비를 사용하여 접선 흐름 여과(TFF)를 통해 트레인 #1(3C.1)에서 엽록체 정화 3C를 거친다. 정화된 현탁액 3D로 명명된 여액은 시간당 약 25 입방미터의 속도로 생산되고 화합물 추출 3E를 거친다. 잔류물은 시간당 약 8 입방미터의 속도로 생성된다. 잔류물은 액체 두 번째 엽록체 현탁액 3CC(예를 들어, 두 번째 엽록체 현탁액)로 구성되고 높은 단백질 함량과 약 40%의 현탁된 고체를 포함한다. 그 온도는 약 34℃ 미만이며 냉장(예를 들어, 4℃) 시 약 16시간 동안 저장될 수 있다. 이 액체 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 그 다음 주 엽록체 현탁액 3K와 조합되고 하기 기재된 분획화 F4로 펌핑된다.
미세섬유-고갈된 현탁액 2G.2(예를 들어, 두 번째 분획화 동안 하위 활성도 2A.2에서 얻은 미세섬유-고갈된 현탁액)는 그것이 낮은 단백질 함량을 가지고 사포닌의 공급원이라는 점을 감안하여 재사용된다. TFF를 사용한 여과는 약 90% 잔류물 재순환 및 300kDa 다공성(세라믹)에서 다중-셀 장비를 사용하여, 시간당 약 55 입방미터의 속도로 트레인 #2(3C.2)에서 엽록체 정화 3C에서 수행된다. 시간당 3 입방미터의 속도로 생성된 잔류물은 두 번째 엽록체 현탁액 3CC에 상응하고 약 40%의 현탁된 고체를 포함한다. 이 두 번째 엽록체 현탁액 3CC는 또한 주 엽록체 현탁액 3K와 유사하다. 3C.1 및 3C.2 이후 3CC의 두 공급원과 주 엽록체 현탁액 3K는 네 번째 분획화 F4에 도입되기 이전에 함께 혼합된다(도 10b에 도시됨).
현탁액 정화 3C.2로부터, 여과액 정화 현탁액 3D가 시간당 약 52 입방미터의 속도로 생성된다. 3C.2 및 3C.1로부터 두 여과액은 함께 조합되어 시간당 약 77 입방미터의 총 속도로 생성되고, 무균상태이고, 약 1% 미만의 고체 함량을 포함하고 높은 사포닌 함량을 갖는 정화된 현탁액 3D(예를 들어, 무균 갈색 주스)를 형성한다.
사포닌을 분리하기 위해, 도 15에 도시된 바와 같이, 정제된 현탁액 3D는 C18 XAD 컬럼을 사용하는 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)로 시작하여, 화합물 추출 3E를 거친다(3E.1). 정화된 현탁액 3D는 시간당 약 77 입방미터의 속도로 컬럼에 공급된다. 장입, 세척 메탄올(MeOH)/물, 메탄올(MeOH) 용리의 순차적인 공정이 수행되고 다음 장입 이전에 컬럼 세척이 수행된다. MeOH에서 사포닌 농축물(3E.1)은 시간당 약 15 입방미터의 속도로 수득된다. 그런 다음 MeOH은 농축물로부터 증류되어(3E.2) 사포닌 농축 페이스트(약 20% 잔류 MeOH를 가짐)를 수득한다. 이 사포닌 농축 페이스트는 분무 건조(MeOH)되고(3E.3) 생성된 생성물은 시간당 100kg(50 - 200)의 속도로 생성되는 사포닌- 풍부화된 분말 3F이며 약 6 내지 8%의 수분을 갖는다. 사포닌- 풍부화된 분말 3F에서 메디카겐산 사포닌의 함량은 1% 초과, 일반적으로 3% 초과 6% 미만이다. 사포닌- 풍부화된 분말 3F는 더 흥미로운 추가 응용 분야가 있는 것으로 간주되는 메디카겐산 사포닌 대신 대두 사포닌을 씻어내어 메디카겐산 사포닌이 풍부화된다. 사포닌- 풍부화된 분말 3F는 사포닌 분말 컨디셔닝 3G로 이송된다.
컨디셔닝 동안, 사포닌- 풍부화된 분말 3F는 수년의 저장 수명을 갖는 가변 기간 동안 저장되도록 1 - 5kg 백에 진공 상태 하에서 포장 및 밀봉된다. 사포닌 전구체 3H는 추가로: a) 살균제/살충제로 사용되도록 제형화될 수 있고 및/또는 b) 더 높은 수준(동등 또는 > 65%)에서 메디카겐산 사포닌을 정제하기 위해 가공된 다음, 특정 질병 제어에 유용할 수 있는 기능식품 분자로서 다른 기능식품 화합물 또는 미량 성분과 함께 조합되거나 되지 않은 채로 사용될 있다.
화합물 추출 3E로부터 잔존하는 액체(3E.1)는 1% 미만의 현탁된 고체를 포함하는 멸균 액체이다. 이 액체의 시간당 약 25 입방미터는 상기 실시예 3에서 기술된 바와 같이 2차 단계 압착 1A.2로 다시 재순환되는 반면, 3E.1을 통해 흐르는 액체의 시간당 약 50 입방미터는 유기 액체 비료로 농경지로 다시 재활용된다.
실시예 6 - 4차 분획화 (활성도 4A에서 생성물 4M으로)
네 번째 분획화 F4는 엽록체의 추가 분리에 대한 것으로, 도 16뿐만 아니라 도 1, 2a, 2b 및 6-10b의 흐름도에 상세히 설명되어 있다.
세 번째 분획화 F3에서, 즉 주 엽록체 현탁액 3K 및 역시 두 번째 엽록체 현탁액 3CC로부터, 3C.1 및 3C.2로부터 획득된 엽록체 현탁액은 신선한 물(시간당 약 60 입방미터의 비율)이 첨가되는 혼합 탱크에서 조합된다. 수득된 혼합물은 시간당 약 90 입방미터의 속도로 생산되고 엽록체 분리 3A와 유사하게, 시간당 최소 5000L의 출력 용량을 갖고 10 000G에서 회전하는 3개의 원심분리기를 사용하는 엽록체 세척 4A로 펌핑된다. 2차 단계 원심분리의 출력물은 시간당 74 입방미터의 속도로 생성된 이월과 시간당 16 입방미터의 속도로 생성된 세척된 엽록체 현탁액 4B를 포함한다).
세척된 엽록체 현탁액 4B는 높은 단백질, 지질, 색소 및 항산화제 함량 및 30-40% w/v 고체 함량, 10-15% w/w(건조 기준), 85-90% 수분, 녹색, 1A.1 후 잔류 항-산화, 3A.1 후 잔류 구연산, 무손상 엽록체 90% 초과를 갖는다. 세척된 엽록체 현탁액 4B는 고체 엽록체 컨디셔닝 4D 및/또는 액체 엽록체 컨디셔닝 4G 및/또는 화합물 추출 4J를 거칠 수 있다.
세척된 엽록체 현탁액 4B는 고체 엽록체 컨디셔닝 4D를 거칠 수 있다. 이 시나리오에서, 이제 도 16을 참조하면, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 먼저 일부 미량-성분 또는 식품 등급 보존제가 원하는 필요에 기반하여 세척된 엽록체 현탁액 4B에 첨가될 수 있는(고체 또는 액체 제형) 컨디셔닝 4D.1을 거친다.
제형화된 엽록체 현탁액은 4D.1에서 4D.2로 이송되어 24시간 작동할 수 있는 2개의 분무 건조기를 사용하여 건조(공기)된다. 4D.1로부터 이송된 엽록체 현탁액은 85% 수분이고 150℃를 초과하지 않는 온도로 가열된 공기와 함께 분무 건조기에 펌핑을 거친다. 사이클론 공정은 물의 증발 후 최종 분말 온도가 43℃ 미만으로 유지되도록 지속적으로 모니터링될 것이다. 그 결과는 약 6%(6-8%) 수분을 갖는 엽록체 분말이다.
4D.2의 결과로, 엽록체 분말은 시간당 2.4(1.6 - 2.5) 메트릭톤의 속도로 생산되며, 밝은 녹색을 가지고 빛, 습기에 민감하고 빛을 차단하는 백 또는 통에 밀봉되거나 포장될 필요가 있다. 엽록체 분말은 식품 및 미량-성분으로 인간 섭취에 적합하다. 엽록체 분말은 1kg, 2kg 및 5kg 백 또는 20L 식품 등급 통에 진공 포장되어 포장될 수 있다(4D.3). 가능하면 질소 블랭킷 하에서 진공을 보장하기 위해 특별한 주의가 기울여질 것이고 수년의 저장 수명을 갖는다. 최종 결과는 사용 준비가 완료된 건조 엽록체 조성물 4E이다(최종 생성물 # 3).
세척된 엽록체 현탁액 4B는 액체 엽록체 컨디셔닝 4G를 거칠 수 있다. 이 시나리오에서, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 먼저 최종 수령 요청을 존중하기 위해 세척된 엽록체 현탁액 4B에 일부 미량-성분 또는 식품 등급 보존제(고체 또는 액체 제형)이 첨가될 수 있는 컨디셔닝 4G.1을 거친다. 세척된 엽록체 현탁액 4B는 DHA 지방산(장쇄) 및/또는 기타 영양소와 조합될 수 있다.
4G.1의 결과로, 엽록체를 함유하는 액체는 시간당 약 15 입방미터의 속도로 생성되며 약 85%의 수분 함량을 가지고 빛, 온도에 민감하고 4G.2에서 빛을 멈추는 통에 밀봉되거나 포장될 필요가 있다. 엽록체를 함유하는 이 액체는 진공을 보장하고 통 상단에서 공기를 빛과 산소로부터 보호되는 질소로 대체하기 위해 특별한 주의를 기울여 20L 식품 등급 통에 진공 포장된다; 통은 냉장 보관(2℃ < to < 4℃)으로 이송되고 4개월의 지연 이내에 최종 사용자에게 배송될 것이다. 최종 결과는 사용 준비가 완료된 액체 엽록체 조성물 4H이다(최종 생성물 # 4).
세척된 엽록체 현탁액 4B는 화합물 추출 4J를 거칠 수 있다. 이 시나리오에서, 세척된 엽록체 현탁액 4B는 엽록체 막을 파괴하고, 부분적으로 파괴된 틸라코이드 막을 현탁액에 남기는, 엽록체의 모든 가용성 성분을 용액에서 방출하기 위해 제한된 양의 전단(선호되는 가공 방식), 고압차, 외부 유체의 저-장성 또는 고장성, 초음파 및/또는 기타 기계적 또는 화학적 응력을 사용하여 엽록체 분획 4J.1을 먼저 거친다. 언제든지 온도는 34℃ 아래로 유지된다. 현탁액은 TFF를 통해 고체 물질을 단리하기 위해 4J.2로 이송된다.
4J.2에서, 1,760,000KDalton을 넘는 잔류물, 식물 파편, 막 및 초고분자량 구조를 포획하기 위해 TFF 0.2 미크론미크론, 또는 여과 또는 응집/경사분리를 사용하는 것은 여액 당에서, 상이한 효소의 낮은 상대적인 양과 100%의 루비스코를 유지하는 것을 허용한다; 루비스코는 약 540kDalton의 분자량을 가짐. 여액은 4J.3으로 이송되어 루비스코를 단리한다. 다른 한편으로, 식물 기원의 녹색 구조 및 분자를 함유하는 잔류물은 추가 변형을 위해 유지되거나 농경지로 다시 비료 제제로 재활용될 수 있다.
4J.2에서 나오는 여액은 4J.3에서 처리되어 TFF 500kDalton 또는 여과 또는 응집/경사분리를 사용하여 루비스코를 단리하고, 잔류물에 약 540kDalton의 분자량을 갖는 루비스코를 포획한다. 잔류물인, 루비스코 현탁액 4K는 주로 루비스코가 높은 정도의 순도에 있고 고유하고 to > 37℃가 결코 아닌 화학물질에 노출되지 않은 상태로 유지될 것이고; 40% 고체(w/v), 80% 수분이다. 루비스코 현탁액 4K는 루비스코 컨디셔닝 4L을 거칠 것이다. 반면에, 식물 유래 당, 효소, 분자를 함유하는 여액은 추가 변형을 위해 유지되거나 농경지로 다시 비료 제제로 재활용될 수 있다.
루비스코 컨디셔닝 4L은 목표된 적용 또는 용도와 관련된 다양한 대안에 따른 컨디셔닝으로 구성된다. 첫째, 옵션으로 루비스코 현탁액 4K에 보완 성분을 첨가하거나 식품 등급 보호제를 첨가하는 것이 가능하다. 둘째, 4J.3(수분 80%)으로 인한 루비스코 현탁액 4K는 보완 성분의 첨가와 상관없이 150℃를 초과하지 않는 온도에서 가열된 공기와 함께 분무 건조기 안으로 펌핑된다; 사이클론 공정은 물의 증발 후 최종 분말 온도가 45℃ 이하로 유지되도록 보장하기 위해 지속적으로 모니터링될 것이다. 대안으로, 최종 사용 요구사항에 따라 분무 건조 대신 동결 건조를 사용하는 것이 가능하다. 생성된 루비스코 분말은 추가 최종 생성물 개발에 사용되는 두 번째 전구체 생성물 #2인 루비스코 전구체(4M)로 식별되는 10%(8-12%) 수분 현탁액이다.
실시예 7 - 분획화 및 메디카겐산 사포닌 회수
다른 실시예에서, 도 10b를 참조하면, 1000kg의 신선한 잎이 많은 알팔파 바이오매스가 수확되어 2-5cm 단편으로 절단된다. 전형적으로 바이오매스는 잎 대 줄기 비율이 약 1:1(습윤 중량/습윤 중량)이고 싹의 기부에서 잎이 시들거나 건조된 것으로 보이지 않는 발달 단계에서 수확된다. 표면 기준당 수확량보다 바이오매스의 어림이 선호된다. 어린 싹은 상대적으로 낮은 수준의 목질화를 함유하고 있으며, 이는 차례로 후속 기계적 파괴에 필요한 강도를 감소시킨다. 어린 싹은 또한 무엇보다도 녹색 고체(주로 엽록체로 구성됨)의 회수에 바람직한 활성 잎이 많은 물질의 더 높은 상대적 비율을 함유한다. 본 실시예에 개시된 다양한 성분의 농도는 적용가능한 표준 방법을 사용하여 독립적인 실험실에서 측정되었다.
수확된 바이오매스의 준비
수확기에 날카로운 절단 장치, 예를 들어 해머밀과 같은 분쇄 장치보다 날카로운 날이 있는 조정가능한 절단 테이블의 사용이 바람직하다. 싹의 날카로운 절단은 싹 조직이 분쇄되는 것을 감소시켜 식물 액체와 용질의 손실을 제한한다. 일반적으로 식물 단편을 2-5cm의 길이로 줄이는 날카로운 절단은 그렇지 않으면 바이오매스가 분쇄되는 경우 빠르게 발생할 수 있는 수집 및 프레스까지의 이송 동안 바이오매스 생화학적 부패를 제한한다. 부가하여, 산화적 부패를 제한하기 위해 수집하는 동안 바이오매스에 항산화제(예를 들어, 메타중아황산 칼륨 또는 나트륨)를 분무하는 것이 바람직하다. 바이오매스를 2-5cm 단편으로 절단하는 것은 또한 후속 기계적 파괴에 필요한 강도를 감소시킨다.
바이오매스의 첫 번째 압착
식물 단편(0B)은 유입에서 바이오매스 온도와 유출에서 압착된 녹색 주스(1H) 온도 또는 섬유질 케이크(1B) 사이의 온도 차이를 6℃ 미만으로 유지하도록 허용하는 샤프트 속도 및 콘 압력에서 스크류 프레스를 통과한다. 부가하여, 스크류 프레스 설정은 압착하는 동안 언제든지 임의의 가공된 성분에 도달하는 최대 온도가 34℃ 아래로 유지되도록 조정된다. 전형적으로, 이들 값에 제한되지 않고 유입의 바이오매스 물 함량의 상태에 의존하지만, 프레스를 통한 이 첫 번째 통과는 28% 건조 물질에서의 섬유질 케이크 약 450kg과 약 12% 건조 물질에서의 녹색 주스(1H) 약 550L 및 약 14%(중량/부피)의 고체 함량을 산출할 것이다(예를 들어 도 13 참조). 녹색 주스(1H)의 현미경 관찰 및 다양한 기타 특성은 녹색 주스(1H)에 존재하는 고체의 대부분이 4-7 미크론미크론에서의 평균 크기의 무손상 엽록체로 구성되어 있음을 나타냈다(하기에 더 자세히 설명됨).
유입에서 바이오매스(0B)의 메디카겐산 사포닌 함량은 건조 중량 기준으로 약 3300ng/g(총 592g)이다. 그러나 메디카겐산 사포닌 함량은 바이오매스 공급원, 예를 들어 그 속(메디카고 , 로터스 , 트리폴리움) 및 관련 종, 품종, 변종, 생식질, 발달 단계 및, 특히 한 계절 내에 여러 수확 주기가 있는 식물 및 다년생 식물의 경우 이러한 식물의 계절적 변화에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 첫 번째 압착(1A.1) 후, 섬유질 케이크(1B)의 메디카겐산 사포닌 함량은 초기 총 메디카겐산 사포닌 함량의 약 2/3에 해당하는 총 약 316g으로 감소된다.
바이오매스의 두 번째 압착
이 섬유질 케이크(1B)는 그런 다음 500L의 헹굼액(예를 들어, 물)과 혼합되어 그 안에 포획된 고체 및 용질이 헹구어 지고 두 번째 액체 현탁액 또는 황색 주스(1H.2)로 회수될 수 있다. 다른 적절한 헹굼액은, 예를 들어, 공정 흐름의 다른 활성도(예를 들어, 3A 및 3C)에서 폐기물로 생성되는 낮은 용질 함량을 갖는 액체를 포함한다. 첨가된 헹굼액의 부피는 다양할 수 있지만 전형적으로 유입 시 초기 바이오매스 중량의 약 50% 또는 첫 번째 녹색 주스(1H)의 부피로 조정된다. 섬유질 케이크(1B)와 헹굼액의 혼합은 배치 또는 연속 흐름으로 다양한 방법에 의해 수행될 수 있다. 바람직한 방법은 섬유 케이크(1B)가 컨베이어에 의해 첫 번째 스크류 프레스로부터 수행되고, 조정된 양의 헹굼액이 분무되고, 회전식 믹서에 장입되고, 두 번째 스크류 프레스에 공급되는 연속 흐름이다.
물을 뿌린 섬유질 케이크는 그런 다음 유입에서 섬유질 케이크(1B) 온도와 배출에서 황색 주스(1H.2) 온도 사이의 온도 차이를 6℃ 미만으로 제어할 수 있는 조건 하에서 다시 압착된다(1A.2). 부가하여, 스크류 프레스 설정은 압착하는 동안 언제든지 임의의 가공된 성분에 도달하는 최대 온도가 34℃ 아래로 유지되도록 조정된다. 프레스를 통한 이 두 번째 통과(1A.2)는 약 37% 건조 물질에서의 섬유질 케이크 약 380kg과 2.75% 건조 물질에서의 황색 주스(1H.2) 약 620L 및 약 6%(중량/부피)의 고체 함량을 산출할 것이다. 상기-언급된 수율은 유입 시 섬유질 케이크의 액체 함량에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 이 두 번째 압착(1A.2) 후, 섬유질 케이크(1A.2의 다운스트림)의 메디카겐산 사포닌에서 함량은 초기 총 함량의 약 1/3에 해당하는 총 약 206g으로 감소된다. 전형적으로, 두 번째 압착(1A.2)의 세척된 섬유질 케이크 다운스트림은 약 37%의 건조 물질을 함유하고 알팔파의 경우 약 18% 단백질(건조 중량 기준)을 함유할 것이다.
섬유질 케이크의 포장 및 발효
이 실시예에서, 2번의 압착을 거친 세척 및 압착된 섬유질 케이크(1A.2의 다운스트림)는 공압 장치로 그 초기 부피의 약 절반으로 압착되고 플라스틱 필름으로 가압-포장된다. 이것은 바람직하게는 두 번째 압착(1A.2) 직후에 수행된다. 이후 3-4주 동안 젖산 발효가 일어날 것이고 사일로에 저장한 목초는 약 4.2의 pH에서 안정화될 것이다. 대안적으로, 압착된 섬유질 케이크는 발효를 가속화할 상업용 박테리아 접종물과 혼합될 수 있다. 높은 수분 함량을 갖는 사포닌 감소된 사일로에 저장한 압착된 섬유질 케이크(1D)가 수득된다.
녹색 및 황색 주스의 섬유질 제거
녹색 (1H) 및 황색 주스(1H.2) 둘 모두는 그 다음 압착 단계 동안 전단에 의해 생성된 미세섬유의 제거를 위해 여과 장치를 통해 통과된다(2A 및 2A.2). 예를 들어, 여과 장치는 구멍 크기에서 86μm의 스크린 필터를 갖는 회전식 장치이다. 녹색 주스(1H)의 여과는 약 11.5% 건조 물질 함량에서 약 32.5kg의 미세섬유(2AA)를 생성한다. 황색 주스(1H.2)의 여과는 약 11.5% 건조 물질 함량에서 약 16.6kg의 미세섬유(2AA)를 생성한다. 전반적으로, 두 여과(2A.1 및 2A.2)는 총 초기 습윤 바이오매스 중량의 약 5%로 계량되고 메디카겐산 사포닌에서 총 초기 함량의 약 2.5%를 격리하는 미세섬유(2AA)의 생성을 초래한다.
녹색 주스로부터 녹색 고체의 선택적 포획
이전의 섬유질 제거(2A)로부터 생성된 녹색 주스(2G)는 그 다음 예를 들어 원심분리 또는 접선 유동 여과에 의한 고체의 침강에 의해 분획화된다. 전형적으로 침강을 돕기 위해, 녹색 주스(2G)는 순한 유기산, 예를 들어 구연산의 첨가를 통하여 pH가 5.1 아래로 된다. 다른 적합한 유기산은 예를 들어 말산, 숙신산 및 젖산을 포함한다. 엽록체 막의 등전점 아래의 산성화는 응집에 유리하고 침강을 촉진할 것이다. 혼합은 녹색 주스의 어느 위치에서도 pH가 4.8 아래로 감소하지 않도록 주의 깊고 철저하게 수행된다. pH 4.8 아래로의 산성화는 용질(예를 들어, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질 포함)의 생화학적 무결성뿐만 아니라 엽록체의 물리적 무결성을 손상시킨다.
이 산성화된 녹색 주스(2G)의 원심분리는 10 000g에서 CSC-15(GEA)와 같은 순차적 배출과 함께 연속 흐름 원심분리기(3A)에서 수행된다. 원심분리된 현탁액의 온도가 34℃에 도달하지 않도록 주의한다; 이것은 이 실시예에 따라 원심분리기를 통과하는 흐름이 조정되어 체류 시간을 약 500L/hr의 값으로 제한한다는 것을 의미한다. 온도를 34℃ 미만으로 유지하는 것은 용질(예를 들어, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질 포함)의 생화학적 무결성을 보존하는 것을 허용한다. 이들 조건 하에서 이월 또는 갈색 주스(3B)는 약 6.5%의 고체(중량/부피)을 함유하고 초기 장입된 부피의 약 70%를 나타내는 반면 녹색 젤리(3K)는 약 31.5%의 고체(중량/부피)를 함유하고 총 초기 장입 부피의 약 30%를 나타낸다. 이들 값은 녹색 주스(2G)의 초기 고체 함량, 유속, 배출 빈도 또는 원심분리 조건의 기타 조정에 따라 달라질 수 있음이 이해될 것이다. 예를 들어, 더 낮은 고체 함량은 액체 온도를 34℃ 아래로 유지하면서 더 높은 유속, 더 낮은 배출 빈도를 허용할 것이다.
원심분리(3A)에서 유출하는 2개의 중간 생성물(3B 및 3K)에서 고체 크기 분포의 특성화는 그 안에 함유된 엽록체가 산성화로 인한 약간의 응집과 함께 평균 크기가 5-7 미크론미크론인 대부분 무손상 엽록체임을 입증한다(보다 자세하게는 실시예 11 참조). 엽록체 물리적 구조의 무손상은 기계적 및 화학적 개입의 엄격한 제어에 의해 공정 흐름의 이 단계까지 유지된다. 이 실시예에서, 수확 시 바이오매스 성숙도, 온화하지만 효율적인 바이오매스 준비, 기계적 파손(스크류 프레스) 동안 낮은-전단 및 낮은-차압, 스크류 프레스에서 온도의 제어(< 34℃), 산성화를 위한 약한 유기산, 산성화 동안 pH의 제어(4.8 < pH < 5.1) 및/또는 원심분리 동안 온도의 제어에서 선택의 조합은 엽록체 무결성을 유지하는 데 바람직하다. 엽록체 무결성을 유지하는 것은 엽록체 성분이 엽록체 내에서 격리된 상태로 유지되게 허용하고 따라서 하나의 침강 활성에서 액체 분획으로부터 전체 엽록체의 기계적 분리를 허용한다. 이것은 또한 주요 엽록체 단백질이고 영양에 관하여 가장 중요한 식물 단백질인, 식물 잎 재료의 중요한 단백질 성분, 즉 루비스코(리불로스 비스-포스페이트 카르복실라제)의 기계적 분리를 허용하므로 공정 흐름의 연속성에 중요하다. 엽록체 무결성을 보존하는 이 접근방식은 파손 및 조작을 위해 과도한 기계적 강도의 사용, 분획화 동안 가용성 또는 고체 성분의 응고를 위한 고온 및/또는 극한 pH 조건의 사용이 엽록체 무결성의 파손을 초래하고 액체 분획에서 핵심 루비스코 단백질 성분을 방출하는 광합성적으로-활성인 바이오매스를 분획화하는 데 사용되는 다른 공정과 대비된다. 엽록체 무결성의 파손은 이러한 분획화로 인한 녹색 고체 현탁액의 단백질 품질을 강하게 저하시키고 액체 분획으로부터 루비스코 회수를 극도로 어렵게 만든다. 부가하여, 응고 및 분획화 동안에 높은 온도 및/또는 극한 pH 조건의 사용은 열에 불안정하고 pH 민감성인 주요 영양 용질(예를 들어, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질)의 증가된 산화적 부패를 초래한다.
갈색 주스의 정화
온화한 원심분리 조건이 엽록체 분리(3A)에 사용되므로 생성된 갈색 주스(3B)는 여전히 초기 엽록체의 20%와 40% 사이(약 6.5% 중량/부피)를 함유할 수 있다. 이들 엽록체는 예를 들어 접선 유동 여과(TFF)에 의해 회수될 수 있다(3C.1). TFF 동안 현탁액의 온도가 34℃에 도달하지 않도록 주의한다; 이것은 재순환의 흐름이 전단을 제한하도록 조정됨을 의미한다. 온도를 34℃ 아래로 유지하는 것은 용질(예를 들어, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질)의 생화학적 무결성을 보존하는 것을 허용한다. 이들 조건에서, 정화된 현탁액(또는 갈색 주스)(3D)은 0.2% 미만의 고체를 함유하고 초기 장입된 부피의 약 70%를 나타낸다. TFF(3C.1)에서 생성된 두 번째 엽록체 현탁액(또는 농축된 잔류물)(3CC)은 약 40%의 고체를 함유하고 총 초기 장입 부피의 약 30% 미만을 나타낸다.
황색 주스의 정화
두 번째 섬유질 제거(2A.2)로부터 생성된 황색 주스(2G.2)는 그 다음 첫 번째 정화(3C.1)와 유사하게 정화(3C.2)된다(상기 참조). 황색 주스의 낮은 고체 농도인 6-7% 미만에서 유래하여, 정화(3C.2)는 바람직하게는 먼저 원심분리를 거칠 필요 없이 TFF에 의해 수행된다. 황색 주스(2G.2)의 온도가 TFF 동안 34℃에 도달하지 않도록 주의한다; 이것은 재순환의 흐름이 열을 발생시키는 전단을 제한하도록 조정됨을 의미한다. 온도를 34℃ 미만으로 유지하는 것은 용질(예를 들어, 카로틴, 엽록소, 항산화제, 안토시아닌, 단백질, 오메가-3 인지질)의 생화학적 무결성도 보존할 수 있다. 이들 조건에서 정화된 현탁액(3D)은 약 0.2% 미만의 고체를 함유하고 초기 장입된 부피의 약 70%를 나타내고, 농축된 잔류물 또는 두 번째 엽록체 현탁액(3CC)은 약 40% 고체를 함유하고 총 초기 장입 부피의 약 30% 미만을 나타낸다.
녹색 젤리의 세척
녹색 젤리(3K)는 전형적으로 약 31.5% 고체를 함유하고 초기 장입 부피의 약 30%로 구성된다. 이것은 녹색 젤리(3K)의 약 70%가 생화학적 불안정에 기여하고 잎이 많은 바이오매스의 추출물의 "풀 같은" 이취 및 역취와 인과적으로 관련되어 있는 사포닌, 폴리페놀 및 휘발성 물질과 같은 용질을 여전히 함유하는 액상으로 구성되어 있음을 의미한다. 따라서, 이들 용질을 세척하는 것(4A)은 기호성이 증가하고 상용 미세-조류(예를 들어, 클로렐라)의 것에 유사한 조성을 갖는 녹색 젤리(4B)를 초래한다. 부가하여, 이들 용질 중 일부는 농후화되고 정제되면 영양적 가치가 있다. 이 실시예에서, 350L의 물이 녹색 젤리(3K)에 첨가된 다음 상기에서 기술된 것(3A)과 동일한 조건에서 "세척하는" 원심분리 사이클(4A)에 적용된다. 대안으로, 현탁액 정화(3C.1 및 3C.2)로부터 생성된 고체(3CC)는 물과 혼합되고 녹색 젤리(3K)에 첨가될 수 있다. 첨가되는 액체의 총량은 활성도(4A)의 세척 효과를 증가시키기 위해 조정될 수 있다.
전형적으로, 엽록체 세척(4A)은 용질 함량이 더 낮고 고체 함량이 더 높은(40% 이상) 세척된 녹색 고체 현탁액(4B)을 생성한다. 세척된 녹색 고체 현탁액(4B)은 초기 장입된 부피의 약 25% 및 약 14% 건조 물질 함량으로 구성된다.
엽록체 세척(4A)은 또한 약 4.5% 건조 물질 함량에서 초기 장입된 부피의 약 75%로 구성하는 이월을 생성할 것이다. 이 이월은 비료 제제로 농경지로 다시 재활용될 것이다. 대안적으로, 이 이월은 특히 메디카겐산 사포닌과 같은 가치있는 용질을 포함하여 세척된 용질을 함유하기 때문에, 예를 들어 TFF에 의해 차례로 정화될 수 있고 추가 정제를 위해 회수될 수 있다. 이들 값은 세척(4A)에 사용된 세척하는 액체의 양 및 용질 함량에 따라 유의하게 달라질 수 있음이 이해될 것이다.
분획화 생성물 중에서 메디카겐산 사포닌 분포
메디카겐 사포닌의 전형적인 분포는 표 1에 나타나 있다.
[표 1]:
미세섬유 및 세척된 녹색 고체 현탁액의 컨디셔닝
이 실시예에서, (원심분리 및/또는 TFF로부터) 세척된 녹색 고체 현탁액(4B) 및 미세섬유 분획(2AA)은 컨디셔닝 활성도(각각 4D 및 2B)로서 약 6-10% 미만의 수분 함량으로 건조된다. 녹색 고체 현탁액(4B)은 입자의 온도가 항상 45℃ 이하로 유지되는 분무 건조기에서 분말 형태로 건조된다. 미세섬유 분획(2AA)은 미세섬유 물질의 온도가 항상 45℃ 이하로 유지되는 회전식 건조기(2B)에서 건조된다. 플래시 건조기, 링 건조기 또는 유동층 건조기와 같은 다른 유형의 건조기를 대안적으로 사용할 수 있다. 45℃ 이하의 온도를 유지하는 것은 이들 두 생성물의 중요한 성분, 예를 들어 엽록소, 카로틴, 크산토필, 오메가-3 인지질 및 단백질의 생화학적 무결성을 보존한다.
정화된 현탁액의 운명
TFF(3D)에 의해 정화된 모든 현탁액은 미생물이 없고 콜로이드가 없다. 그것은 현재 기능식품 및 제약 산업에서 사용되는 방법에 의한 추가 가공(3E 및 3G)할 준비가 되어 있다. 이 실시예에서 메디카겐 사포닌은 혼합된 고체상 매트릭스, 예를 들어(이에 제한되지 않음) XAD 매트릭스(Dow Chemicals) 및 증가하는 농도의 메탄올에서 용리로 정제된 현탁액의 간단한 통과에 의해 농축된다.
실시예 8 - 살충제로서의 사포닌 전구체(3H)의 용도
또 다른 실시예는 분획화로부터 수득된 정화된 현탁액(3D)(도 2a 및 2b뿐만 아니라 도 15 참조)은 이온 교환 매트릭스 상의 고체상 추출(3E)에 의해 메디카겐산 사포닌이 풍부화되고 그런 다음 감자 잎에 대한 손상을 제어하기 위해 살충제로 사용된다는 것이다.
풍부화
이 실시예에서, 정화된 현탁액(3D)은 4/1의 비율(정화된 현탁액의 부피/습윤 매트릭스의 부피)에서, 반응 용기에서의 XAD 매트릭스에 대한 변경 또는 조정없이 장입(3E.1)된다. 장입하기 이전에 매트릭스는 100% 메탄올로 컨디셔닝되고 순수한 물로 세척되고 평형상태로 된다. 그런 다음 매트릭스는 최대 65%(메탄올/물)의 증가하는 메탄올 농도로 세척되고 세척물은 폐기된다. 메디카겐산은 그런 다음 100% 메탄올을 사용하여 매트릭스에서 용리된다. 그런 다음 용리액은 그 부피의 20%로 증발되고 물(3 부피)에 희석되고 동결건조된다.
이 농축 방법의 많은 변형이 존재한다. 예를 들어 매트릭스(예를 들어, 친화성, 역상, 소수성), 장입, 세척 및 용리 조건, 작동 모드(용기 대 컬럼) 또는 연속 대 단계 기울기의 선택에서 변경이 이루어질 수 있다(그러나 이에 제한되지 않음). 이 실시예에서, 메디카겐산의 최종 농도는 약 3%(31mg/g의 건조 중량)였지만 일부 배치는 6-8%(60 - 80mg/g)에 도달할 수 있었다.
살충제 시험
콜로라도 감자 딱정벌레( CPB ) 사육
CPB 에그는 Fredericton Research and Development Center(Agriculture and Agri-Food Canada)에서 공급되었다. 수령 즉시 에그는 격리된 케이지의 감자 식물에 증착되고 CPB는 제2령기까지 사육되었다. 사육은 16시간:8시간(광:암)의 광주기와 23℃:20℃(낮:밤)의 온도로 슈행된다.
사포닌 전구체 제형
생성물은 동결-건조된 분말 형태였다. 그것은 본 명세서에 기술된 바와 같이 수득된 정화된 현탁액으로부터 고체상 추출에 의해 메디카겐산이 풍부한 제제(예를 들어, 건조 기준으로 3-6%)였다. 건조된 생성물 100mg을 먼저 2mL의 에탄올에 용해시키고 물을 80/20(물/에탄올) 비율을 충족하도록 첨가하였다. 용액을 후속적으로 여과하였다(SCFA 필터 0.45μm). 최종 용액은 육안으로 관찰가능한 침전물 없이 깨끗하고 균질하게 보였다.
시험 프로토콜
동일한 크기의 감자 잎을 식물로부터 적출하였다. 작은 스프레이 병을 사용하여, 각 용액을 양 잎 표면에 적용했다. 3가지 스프레이(100μL/스프레이)를 잎의 각 면에 적용하여 전체 표면을 덮었다. 잎을 30분 동안 오픈된 공기에서 건조시켰다. 이어서, 잎을 페트리 접시에 놓인 젖은 필터 상에 놓았다. 그런 다음 각 잎 상에 유충(단계 2)을 두었다. 3일 후, 잎은 생성물로 처리된 신선한 잎으로 대체되었다(이하 도 17). 6일차에 새로운 잎 변경이 이루어졌다. 시험은 9일차까지 계속되었다. 그 다음 처리되지 않은 잎만 6일차 및 9일차에 사용되었다.
초기 풍부화된 제제의 4가지 희석액이 사용되었다: 2.5g/L, 1.25g/L, 0.625g/L, 0.31g/L. 대조군은 80/20(물/에탄올) 용매로 구성되었다.
잎의 디지털화된 이미지는 유충과의 접촉 전후에 촬영되었다. Image J 소프트웨어를 사용하여, 따라서 각 조건에 대한 삼켜진 영역의 표면을 계산할 수 있었다.
결과
생성물에 노출된 유충의 생존율은 사용된 모든 농도(희석액)에 대해 급격히 감소하였다. 최고 농도(2.5g/L)에 노출된 모든 유충은 죽었다. 또한 생존율은 낮은 농도(0.625 및 1.25g/L)로 감소되는 것으로 나타난다. 가장 낮은 농도(0.31g/L)에서는 사망이 관찰되지 않았다.
잎 물질의 소비는 모든 농도에서 생성물에 대한 노출에 의해 극적으로 감소하였다(도 18). 0.31g/L의 최고 희석에서 유충은 9일차에 대조군 유충보다 86% 더 적은 잎을 소비했다.
결론
결과는 알팔파에서 추출된 사포닌 전구체(3H)가 감자 콜로라도 딱정벌레의 유충에 강력한 살충 효과가 있음을 보여준다. 이 생성물은 (물/에탄올 혼합물에 용해와 별도로) 제형화되지 않았다. 현재 프로토콜 하에서는 살충 효과가 단지 반발력인지 입증할 수 없었다. 화합물의 반발 효과가 너무 강해 기아의 결과로서 유충의 사망이 발생했다. 사포닌(메디카겐산 포함)은 다른 살충 작용 방식을 갖는 것으로 나타났다.
실시예 9 - 어린 연체동물의 식이에서 해양 미세-조류의 대체물로서 건조된 엽록체 현탁액의 용도
이 실시예에서, 건조된 엽록체 분말(4E)이 어린 연체동물의 식이에서 해양 미세-조류에 대한 대체물로 사용되었다. 식이 치료 및 섭식 요법은 아래 표 2에 자세히 설명되어 있다.
생물학적 물질
미세조류 칵테일은 1:1:1의 비율로 이소크리시스 갈바나 , 파블로바 루터리 및 캐토세로스 그라실리의 혼합물이었다. 건조된 엽록체 4E는 본 명세서에 기재된 바와 같이 생성되었다. 연체동물은 프린스 에드워드 아일랜드의 세인트-피터스 베이(캐나다)에서 수확된 성체로부터 퀘벡 대학교 양식장에서 생산된 미틸러스 에둘리스 종으로부터 8주령 수컷 및 암컷 새끼였다.
[표 2]: 치료 및 섭식 연대
음식 섭취량을 계산하는 데 사용되는 엽록체의 수는 2 내지 8μm 사이의 입자를 계수함에 의해 결정되었다(Cellometer Auto T4 Nexcelom Bioscience). 미세조류의 수는 Beckmann Coulter Inc. Z2 계수기를 사용하여 결정되었다. 미세조류 칵테일의 혼합물에 대한 50,000 세포/ml의 농도는 ml당 2μg의 건조 물질의 질량을 나타낸다. 실험은 250ml-플라스크에서 수행되었으므로 대조군 처리는 따라서 1mg의 건조된 미세조류와 건조 미세조류의 0.5mg 엽록체로 처리를 수용했다.
절차:
D0: 배양기에서 8주령의 275마리 새끼를 해부용 집게로 선별하여 유사한 크기의 개체를 조심스럽게 채취하여 수집하였다. 50마리 새끼를 쌍안경을 사용하여 측정하여 각 250ml 샘플에서 새끼의 평균 크기를 결정했다. 이백오십 마리 새끼를 실온에서 버블링 해수 250ml와 함께 실험용 삼각 플라스크에 분배했다(삼각 플라스크당 25마리 새끼).
매 2일: 삼각 수를 교체하고 모든 처리에 대해 식량 배급을 제공하였다. 일주일에 한 번 새끼를 부드럽게 제거하고 삼각 플라스크를 청소하여 임의의 가능한 오염을 방지했다.
D30-D60: D30에 삼각 플라스크로부터의 물을 버리고 해부용 집게로 새끼를 회수하였다. 새끼는 크기와 생존을 결정하기 위해 쌍안경을 사용하여 측정되었다. D60에서 새끼 크기는 다시 측정되었다. 보다 구체적으로, Image Pro Plus 소프트웨어를 사용하여 새끼 크기가 측정되었다.
결과
도 19는 실험의 1일차(D0) 및 상이한 식이 하에서 1개월 및 2개월의 유지 후 새끼 홍합(미틸러스 에둘리스)의 평균 크기를 나타낸다. 정규 방식으로 분포되는 데이터(Levene 테스트 = 2.116, p = 0.063) 및 균질하게 된 분산(KS 테스트 = 1.046, p = 0.060)인, 분산 분석이 적용되었다. 분석은 시간과 식이 사이의 상호작용(DF = 2 및 433, F = 0.32, p = 0.726) 없이 시간(DF = 1 및 433, F = 52.9, p <0.0001)과 식이(DF = 2 및 433, F = 10.4, p <0.0001)의 효과를 밝힌다.
치료에 관계없이 첫 달 동안 새끼의 꾸준한 성장이 있다. 이것은 식량 배급이 제공하는 에너지가 새끼를 생존시키고 껍데기 발달로 이어지기에 충분했음을 시사한다. 100% 미세조류 식이와 미세조류의 50%를 알팔파 엽록체의 세포 농도의 2배(미세조류:엽록체 1:2)로 대체한 식이 간에는 유의한 차이가 없다. 그러나, 50% 미세조류와 50% 엽록체의 혼합물(미세조류:엽록체 1:1)은 2개월에 걸쳐 거의 10%의 감소된 성장을 초래했다.
[표 3]: 식품 가공의 함수로서 시간에 걸친 새끼 홍합의 생존율( % 단위)
결과는 2개월의 사육 후 식이에 관계없이 유의한 차이 없이 매우 높은 생존율을 보였다(표 3)(DF = 2, Kurskal-Wallis = 0.1, p = 0.951). 관찰된 평균 사망률은 4% 미만, 즉 샘플당 2 새끼 미만이었다.
실시예 10 - 메디카겐산 사포닌의 추출 및 항콜레스테롤 화합물로서의 잠재적 용도
특정 유형의 사포닌, 및 특히 메디카겐산 사포닌은 콜레스테롤 및 기타 혈액 지질을 조절하는 잘 입증된 능력을 가지고 따라서 스타틴에 비교할만한 효과를 갖는 천연 항콜레스테롤 화합물로 사용될 수 있다(메디카겐산 사포닌 및 그의 용도라는 명칭으로 2007년 7월 13일에 출원된, 국제 특허 출원 번호 PCT/CA2007/001255에 기술된 바와 같으며, 이는 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함됨). 이 실시예에서, 실시예 7에 기술된 바와 같이 생성된 메디카겐산이 풍부한 용리액은 제니스테인, 쿠메스트롤 또는 기타 생물학적으로 활성인 2차 대사산물과 같은 오염 물질이 제거되고 기능식품의 요구사항을 충족하는 농도와 순도에 도달하도록 추가 처리된다. 이 실시예에서, 사포닌 전구체(3H)에서 유래하는 부분 정제된 메디카겐산은 순도가 약 45%에 이르고 다른 부분적으로 정제된 메디카겐산 제제에 대해 기술된 바와 같이 혈액 지질의 조절에 사용될 수 있다(예를 들어 국제 특허 출원 번호 PCT/CA2007/001255에 기술됨).
실험 프로토콜
페놀성 화합물의 제거
페놀성 산 및 폴리페놀은 산화되기 쉽고 복잡한 혼합물에서 불안정성을 유발할 수 있는 식물 2차 대사산물이다. 부가하여, 산화된 페놀류는 침전되는 경향이 있다. 제니스테인 및 다드제인과 같은 일부 페놀류는 그 안에 상당한 수준으로 존재하는 제제의 사용을 제한할 수 있는 생물학적 활성과 관련되어 있다. 페놀류 및 메디카겐산은 친화도와 용해도가 다르고 이 특성을 이용하여 메디카겐산이 풍부한 추가 제제를 분획화할 수 있다. 이 실시예에서 XAD 매트릭스(3E)로부터의 동결건조된 용리액은 물에 재현탁되고 에틸 아세테이트와 같은 용매와 혼합된다. 에틸 아세테이트는 물과 분리되고 많은 페놀류 대해 상대적으로 높은 친화력을 가지고 있는 상대적으로 낮은 극성의 용매이다. 대안적으로, NaCl과 같은 염은 물에 첨가되어 상 형성을 촉진할 수 있다. 이 혼합물의 비율은 많은 요인에 따라 달라지며 가장 중요한 것은 물 혼합물의 상대적 전하이다. XAD 용리액이 소량의 물에 용해되면 에틸 아세테이트의 양은 수상의 부피를 초과할 수 있다. 달리는 분할로 지칭되는, 액체-액체 상 추출(이 경우 수용액에서 페놀류의 추출)은 화학 공학에서 일반적인 관행이고 프로토콜의 충분한 예가 문헌에 제공되어 있다.
이 실시예에서, 두 분획은 기계적 교반에 의해 완전히 혼합되고 상은 그 다음 디캔터에서 분리되도록 허용된다. 그런 다음 메디카겐산을 함유하는 물 분획이 회수된다(3F). 이것은 추가 가공을 위해 그대로 사용되거나 보관을 위해 건조 또는 동결건조될 수 있다. 이 실시예에서, 액체-액체 분할에서 수득된 농후화는 15-20% 사이의 메디카겐산의 최종 농도로 3-5의 인자의 것이다. 농후화 인자와 최종 농도 둘 모두는 메디카겐산의 초기 농도, 페놀류에서의 농도, 사용된 용매의 유형 및 비율과 기타 간섭 화합물 및 많은 기타 요인의 존재에 따라 크게 달라질 수 있다.
메디카겐산 정제
사포닌의 양친매성 특성 및 메디카겐산의 산성 특성은 다른 대사산물 및 소야사포닌 및 베이오게닌과 같은 다른 덜 하전된 사포닌으로부터 메디카겐산을 추가로 정제하는 데 사용될 수 있다. 이 실시예에서 이전 액체-액체 분할 단계의 수상은 물에 미리 조절된 C18 매트릭스(50미크론미크론) 상으로 장입된다. 매트릭스는 증가하는 양의 메탄올 및 또는 에탄올로 세척된다. 분리를 돕기 위해 아세토니트릴 또는 기타 용매가 첨가될 수 있다. 메디카겐산은 전형적으로 50-65% 사이의 메탄올 또는 에탄올 농도에서 용리된다. 이 용리는 한 단계에서, 예를 들어 매트릭스를 35% 메탄올로 세척한 다음, 50% 메탄올로 세척한 다음, 65% 메탄올(또는 에탄올)에서 단일 단계 용리로 메디카겐산을 회수함에 의해 수행될 수 있다. 대안적으로, 메탄올 및/또는 에탄올 농도를 점진적으로(구배) 증가시킬 수 있으며 에탄올 또는 메탄올 농도가 50%에 도달하면 메디카겐산을 수집할 수 있다.
에탄올 또는 메탄올은 먼저 혼합물로부터 증발되고(에탄올:물 또는 메탄올:물 혼합물) 그 다음 최종 물 제제는 분무 건조되거나, 동결건조되거나, 액체에서 장기간 보관을 위해 액체로 제형화되거나 동결될 수 있다.
전형적으로, 이러한 제제에서 메디카겐산의 최종 농도는 약 45%일 것이다. 이 최종 농도는 예를 들어 (그러나 여기에 제한되지 않음) 메디카겐산의 초기 농도, 오염 물질의 존재, 사용된 소수성 매트릭스, 매트릭스의 장입 및 세척을 위해, 그리고 메디카겐산 및 기타 여러 인자의 특정한 용리를 위해 사용된 프로토콜에 따라 매우 다양할 것이다.
알팔파 또는 메디카겐산 제제의 항콜레스테롤 활성에 대해 공개된 다수의 이전 연구에 비추어 볼 때, 메디카겐산이 풍부한 제제는 다양한 복용량, 예를 들어, 50-100mg 사이의 매일 복용량에서 고콜레스테롤 병태의 치료에 효율적일 것으로 여겨진다.
실시예 11 - 엽록체 무결성 보존 및 이의 용도
엽록체는 광합성의 명 단계를 담당하는 효소(단백질) 및 색소(카로틴 및 엽록소)가 포매된 상당한 비율의 틸라코이드 막으로 구성된 깨지기 쉬운 식물 세포 소기관이다. 그들은 또한 수확된 광 에너지를 유기 분자인 루비스코로 변환시키는 것을 담당하는 효소인 루비스코를 포함하는 가용성 분획을 함유하고 있다. 루비스코는 전체 식물에서 가장 풍부한 효소이고 종자에서 유래된 대부분의 식물 단백질과 달리 평형화된 아미노산 균형을 가지고 있다. 그것은 인간 섭취에 대해 가장 가치 있는 단백질 공급원 중 하나이다.
엽록체는 깨지기 쉬운 이중-층 지질막으로 둘러싸여 있다. 이 막을 파괴하는 것은 루비스코를 포함한 엽록체 내용물의 누출을 초래할 것이다. 적은 양의 전단, 높은 압력차, 외부 유체의 저장성 또는 고장성, 초음파 및 기타 기계적 또는 화학적 스트레스가 엽록체 막을 파괴하고 용액에서 엽록체의 모든 가용성 성분을 방출하여, 현탁액에 부분적으로 파괴된 틸라코이드 막을 남길 것이다는 것은 잘 입증되어 있다.
알팔파로부터 녹색 단백질 농축물의 제조에 알려진 공정은 엽록체 무결성을 크게 파괴하고 엽록체 가용성 분획의 누출을 초래하는 수확, 컨디셔닝, 추출 및 침강 방법을 포함한다. 이러한 공정에서 바이오매스는 종종 섬유 크기를 줄이기 위해 해머 밀을 통과한다. 이것은 방출된 엽록체에 상당한 전단 응력을 부과한다. 그런 다음 분쇄된 바이오매스는 더 많은 전단 응력을 부과하고 엽록체가 민감한 높은 압력차를 생성하는 높은 스크류 속도 및 콘 압력 하에서 스크류 프레스를 종종 통과한다. 스크류 상의 높은 토크는 때때로 60-65℃에 도달하는 온도 상승을 또한 초래한다. 높은 온도는 또한 일반적으로 녹색 고체의 응고를 유도하는 데 사용된다. 전형적으로 증기가 순환하는 녹색 주스에 주입되고 85℃ 초과의 온도가 연장된 기간(예를 들어, 5분 초과) 동안 도달된다. 프레스에서 그리고 응고 동안 높은 온도의 조합은 모두 엽록체(더욱이 틸라코이드) 구조의 파괴와 카로틴, 크산토필 및 인지질과 같은 중요한 엽록체 성분의 변성에 기여한다. 이러한 가공의 최종 생성물은 가장 중요한 엽록체 성분, 즉 루비스코가 결여된 틸라코이드의 녹색 응고물로, 강한 자극적인 역취를 갖고 상당히 산화된 색소 및 지질 함량을 가지고 있다. 이 응고물은 또한 액체 분획으로부터 거대분자(예를 들어, DNA)뿐만 아니라 이들 높은 온도에서도 침전되는 불안정한 저분자량 화합물에 의해 오염된다. 마무리 단계로 가열된 탈수된 녹색 페이스트는 일반적으로 훨씬 더 높은 온도(종종 100℃ 초과)에서도 펠릿화된다. 그 결과, 알팔파 녹색 단백질 농축물은 종종 저평가되어 왔으며 상업적 성공과 적용이 제한적이었다. 고품질 식물 단백질의 더 높은 소비를 향한 인간 영양의 현재 추세와 폭발하는 양식사료 시장에서 미세조류 대체물 개발에 대한 긴급한 필요성으로 인해, 본질적으로 영양가가 높은 토지 작물을 가공하는 동안 영양가를 유지할 수 있는 접근방식이 필요하다.
바이오매스의 분획화
거대섬유(1D), 녹색 주스(2G), 녹색 젤리(3K), 세척된 녹색 고체 현탁액(4B), 갈색 주스(3B) 및 정화된 갈색 주스(3D)는 본 명세서에 기재된 바와 같이 제조되었다(보다 자세하게는, 상기 실시예 7을 참고한다). 공정 단계는 엽록체의 무결성을 유지하기 위해 잎이 많은 바이오매스에 부가되는 기계적 응력을 최소화하는 방향으로 진행된다. 엽록체 무결성을 유지하면 많은 이점이 있다: 그것은 정의된 크기 및 물리적 특성의 입자 내에서 귀중한 엽록체 성분을 격리하여 악취 및 "풀" 맛과 같은 바람직하지 않은 특성에 기여하는 페놀류 또는 사포닌과 같은 오염 가용성 성분으로부터 정제되고 "세척"될 수 있다. 엽록체 무결성을 유지하는 것은 또한 최종 생성물이 액체에 쉽게 현탁될 것이고 재현탁 시 결정된 입자 크기를 가질 것이다는 것을 보장한다. 이는 목적이 미세조류를 대체하는 양식 사료로 녹색 고체 현탁액을 사용하는 것인 경우 및/또는 최종 용도가 고품질 최종 인간 영양 미세-성분인 경우에 중요하다. 이론적으로 그리고 대부분의 미세조류는 그 엽록체의 80% 초과(건조 기준)로 구성된 단세포 유기체이므로, 알팔파로부터 엽록체와 같은 정제된 육상 식물 엽록체는 미세조류에 근접한 단백질 및 인지질 함량을 가져야 한다. 오염된 가용성 성분을 제거함에 의해 대부분의 상업용 미세조류 제제 및 알팔파 상업용 녹색 단백질 농축물의 것을 능가하는 높고 재현가능하고 독특한 인지질(오메가-3)/단백질 비율을 갖는 엽록체 현탁액을 제조할 수 있게 되었다.
녹색 고체 현탁액(4B)은 무손상 엽록체의 치수에 상응하는 4-6 미크론미크론의 평균 입자 크기를 갖는 구조를 포함한다. 엽록체의 온전함은 다양한 접근방식 즉 동적 광산란 및 현미경 관찰(도 20a 및 b에 도시된 바와 같음), 루비스코의 할당(도 21에 도시된 바와 같음), 지질 조성(표 4) 및 아미노산 조성(도 22)을 사용하여 측정되었다.
녹색 고체 특성화
도 20a는 분획화(4B) 후 녹색 고체 현탁액에 포함된 엽록체의 현미경 이미지이다. 볼 수 있는 바와 같이, 엽록체는 대부분 무손상으로 보이고 약 4-6 미크론미크론의 평균 직경을 가지고 있다.
평균 엽록체 직경(μm)은 24-시간 기간에 걸쳐 해수에 재현탁된 건조된 엽록체 농축물(4E)의 1L 현탁액에서 측정되었다. 샘플은 각각 0, 0.25, 0.5, 1, 2, 8 및 24시간에 취해졌다. 각 샘플의 입자는 복합 현미경으로 디지털 사진 촬영되고 이미지 분석 소프트웨어로 측정되었다. 도 20b에 도시된 바와 같이, 상기 각 포인트는 단일 복제에 대해 결정된 값을 나타내며; 각 샘플링 기간에 대해 많은 복제가 측정되었다. 2개의 추정된 평균 라인이 도 20b에 도시되어 있다; 하단 라인은 교반 없이 재현탁된 입자의 보통의 평균이고 상단 라인은 교반과 함께 재현탁된 입자의 보통의 평균이다. 이들 결과는 교반 유무에 관계없이 보통의 평균에서 매우 제한된 차이를 보여준다. 볼 수 있는 바와 같이, 건조 및 재현탁 후에도 평균 입자 직경은 약 4미크론미크론으로 유지되어 엽록체 무결성이 유지되었음을 입증한다.
루비스코의 할당
녹색 주스의 액상 및 고체 입자(14% 고형분, vol/vol)에서 루비스코(중질 소단위체)의 분포는 웨스턴 블롯팅으로 분석되었다(도 21에 도시된 바와 같음). 상기 실시예 7에서 광범위하게 기술된 바와 같이, 웨스턴 블롯팅에 의해 분석된 상이한 생성물이 이후에 요약되어 제시된다. 이 녹색 주스(2G)는 희석된 구연산으로 pH 5로 산성화되고 10 000g에서 CSC-15 원심분리기(GEA)를 통해 통과된다. 원심분리기의 체류 시간은 17초로 추정되었다. 이들 조건에서 갈색 주스(3B)는 12% 미만의 고체를 함유했다. 그 안에 남아 있는 고체는 접선 흐름 하에 300kD 세라믹 필터 멤브레인을 통한 통과에 의해 제거되었다. 엽록체 농축물(3CC)은 약 40% 고체에서 회수되었다. 건조 엽록체 조성물(4E)을 수득하기 위해 입자의 최고 온도를 항상 45℃ 이하로 유지하면서 분무 건조기에서 건조시켰다. 정화된 갈색 주스(3D)를 동결건조에 의해 건조시켰다. 대조군으로서, 전체 알팔파 잎(원래 샘플과 동일)을 동결건조 및 분쇄하였다. 건조된 정화된 갈색 주스(3D), 건조된 엽록체 조성물(4E) 및 전체 잎 대조군을 SDS-PAGE 장입 완충액에서 제조하고 겔 상에 장입하였다. 4 및 1.6ug의 건조된 엽록체 농축물(4E)의 당량을 각각 웰 2 및 9에 장입했다. 4 및 1.6ug의 동결건조된 전체 알팔파 잎의 당량을 각각 웰 1 및 8에 장입했다. 루비스코 표준(루비스코, 정제된 중쇄, Agrisera)을 웰 4(60ng), 5(30ng) 및 6(15ng)에 장입했다. 1.6ug의 동결건조 정화된 갈색 주스(3D)의 당량을 웰 7에 장입했다. 이동 후 T(10% 아크릴아미드)인, 단백질은 PVDF 멤브레인으로 트랜스블로팅되고, 3% 카제인에서 세척되고, 루비스코는 토끼 항-루비스코 중쇄 면역시약(Rbcl, Agrisera)에서 인큐베이션되고 염소 항-토끼 IgG로 검출되었다.
웨스턴 블롯팅 결과는 루비스코 단백질이 분획화 과정 전반에 걸쳐 엽록체에 격리된 상태로 남아 있음을 보여준다. 웰 7에는 웰 6에서 볼 수 있는 신호의 5배 미만이 함유된 것으로 추정되어, 15ng의 순수한 루비스코를 함유했다. 따라서, 웰 9는 웰 4보다 2배 초과로 더 많은 신호를 함유하고 있어 루비스코 120ng을 초과하는 것으로 추정된다. 따라서, 이들 두 분획의 루비스코의 상대 함량의 최소 비율은 3ng(웰 7의 함량)/120ng(웰 9 x 10의 함량), 즉 2,5 × 10-2인 것으로 추정되었다. 이들 결과는 총 루비스코 함량의 2.5% 미만이 분획화 동안 엽록체에서 방출되었음을 시사하여 이에 따른 추론으로 엽록체의 2.5% 미만이 분획화 동안 파손되었다(즉, 엽록체의 97.5% 초과가 손상되지 않은 상태로 남아 있음)는 것을 추정한다.
이들 발견은 대부분의 루비스코가 소위 백색 단백질이라고 불리는 액체 부분(Levesque 및 Rambourg 2002)에서 대량으로 회수되는 가혹한 기계적 및 화학적 조건 하에서 통상적인 분획화로부터 얻은 결과와 대조적이다. 따라서, 기술된 과정에 특정한 다음 인자들은, 다른 것들 중에서도, 엽록체 온전함의 유지에 유의하게 기여한 것으로 나타났다:
1. 바이오매스를 분쇄함이 없이 섬유 크기를 < 3-5cm로 줄이기 위해 날카로운 칼날과 절단 테이블이 있는 수확기의 사용
2. 전단, 압력차 및 열 축적을 감소시키기 위해 낮은 스크류 속도 및 콘 압력의 사용
3. 가역적 응고를 유도하고 침강을 돕기 위해 약한 산성화(pH 4.5 이상)의 사용
4. 탈수를 위한 분무 건조의 사용,
5. 입자의 온도를 항상 45℃ 이하로 유지하는 것.
녹색 엽록체 농축물의 아미노산 조성
미세조류의 외피는 엽록체의 외부 막보다 기계적 파괴에 훨씬 더 저항성이다. 그러나, 대부분의 미세조류는 단일(또는 제한된 수의) 엽록체가 발견되는 단일-세포로 된다. 따라서, 인간 섭취(예를 들어, 클로렐라) 또는 양식사료로서 미세조류의 제제는 전체 건조된 미세조류(인간 섭취) 또는 전체 살아있는 미세조류(양식사료)로 구성되며 주요 단백질 기여는 루비스코 및 틸라코이드의 막 단백질에서 비롯된다.
알팔파 잎이 많은 바이오매스의 분획화 동안 엽록체가 전체로 유지되고 오염된 식물 세포질 단백질이 세척되기 때문에, 세척된 엽록체 현탁액(4B)의 아미노산 조성은 미세조류의 아미노산 조성과 밀접하게 유사하다. 도 22에서 엽록체 농축물(CC)로, 이소크리시스 갈바나 케이맨 균주(CISO) 및 캐토세로스 그라실리스(CG)로 지칭되는, 현재 개시된 세척된 엽록체 현탁액(4B)의 아미노산 조성의 완전한 비교가 본 명세서에서 예로서 제공된다(도 22).
표 4에 나타낸 바와 같이, 엽록체 및 미세조류에서 막 지질의 대부분을 나타내는 인지질에 대해서도 마찬가지이다. 이 분석을 통해 밝혀진 한 가지 놀라운 증거는, 이전에 4B로도 또한 확인된, 엽록체 농축물(CC), 세척된 엽록체 현탁액 및 알팔파로부터 얻은, 건조된 형태에 대한, 건조 엽록체 조성물인, 4E는 전체로 총 지질의 20%를 초과하여 함유하고, 총 지질의 평균 9%를 함유하는 2가지 대조 해양 미세조류, 즉 이소크리시스 갈바나 케이맨 균주(CISO) 및 캐토세로스 그라실리스(CG)와 비교하여 거의 모두을 인지질로 함유한다는 것이다. 이것은 또한 지질 함량이 8%를 초과하지 않는 상용 알팔파 녹색 단백질 농축물과 대조된다.
[표 4]. 엽록체 농축물 (CC), 이소크리시스 갈바나 케이맨 균주( CISO ) 및 캐토세로스 그라실리스 (CG)에서 측정된 지질 클래스 조성(총 지질의%) 및 총 지질(mg g -1 ).
실시예 12 - 최종 생성물과 상용 생성물의 비교
목적
본 실시예의 주요 목적은 본 명세서에 기재된 바와 같은 분획화 공정으로부터 수득된 최종 생성물(1D, 2C, 4E)을 기존의 상용 생성물과 비교하는 것이었다.
방법
이후에 제시되는 각각 및 모든 결과는 다음의 분석 방법 참고문헌을 사용하여 독립적인 실험실에서 분석되었다:
수분(M100T100_S:8)
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 제18판, Methods 925.09 and 926.08, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA,(2005). (수정판).
ORAC(ORAC_S:8)
J AOAC Int., 94권, 제5호, 2011년, pg 1562-1566
단백질(N x 6.25) Dumas 방법(DGEN_S:11)
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL, 제18판, Methods 968.06 and 992.15, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, (2005). (수정판)
조 섬유(CFIB_S:5)
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL (2005) 제18판, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, Official Method 962.09.
카로틴 (CAR1_S:25) Covance Laboratories - Madison
Official Methods of Analysis, Method 2005.07, AOAC INTERNATIONAL, (수정판).
Quackenbush, F. W., "Reverse Phase HPLC Separation of cis- and trans-Carotenoids and Its Application to Beta Carotenes in Food Materials," Journal of Liquid Chromatography, 10: 643-653 (1987) (수정판).
카로틴 (CAR2_S:13)
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL (2005) 제18판, AOAC INTERNATIONAL, Gaithersburg, MD, USA, Official Method 941.15.
Quackenbush, F. W., Journal of Liquid Chromatography, 10:643-653, (1987). (수정판)
엽록소(CPHL_S:3)
Official Methods of Analysis of AOAC INTERNATIONAL (2005) 제18판, AOAC Official Method 942.04. (수정판).
지방산 프로필(FALT_S:36)
Official Method No. 996.06, Official Methods of Analysis of the AOAC INTERNATIONAL (수정판), 제19판, AOAC INTERNATIONAL: Gaithersburg, Maryland (2012).
Official Methods and Recommended Practices of the AOCS, Official methods Ce 2b-11 (2011), Ce 1h-05 (2009), Ce 1j-07 (2013), Ce 2-66 (2009),The American Oil Chemists' Society, Champaign, IL (수정판).
당 프로필 (SUGN_S:12)
Mason, B. S., 및 Slover, H. T., "A Gas Chromatographic Method for the Determination of Sugars in Foods," Journal of Agricultural and Food Chemistry 19(3):551-554 (1971). (수정판)
Brobst, K. M., "Gas-Liquid Chromatography of Trimethylsilyl Derivatives, Methods in Carbohydrate Chemistry," 6:3-8, Academic Press, New York, NY, (1972). (수정판)
결과
거대섬유 조성물(1D)
거대섬유 조성물(1D)과 소의 통상적인 공급원료인, 상용 알팔파 건초의 비교. 분석은 독립적인 외부 정부 연구소, 즉 Centre de recherche en sciences animals de Deschambault에서 수행했다.
거대섬유 조성물(1D)은 건초보다 단백질 및 수분 함량이 더 높지만 사포닌 함량이 감소하기 때문에 시장에서 이용가능한 알팔파 건초에 대한 흥미로운 대안일 수 있음이 밝혀졌다(하기 표 5 참조). 높은 사포닌 함량은 소화 장애 및 기호성의 상실과 관련되어 있다. 사포닌 농도는 사용된 품종에 따라 크게 달라질 수 있음을 이해할 것이다.
[표 5] 알팔파 건초와 비교한 거대섬유의 뚜렷한 사양
미세섬유 조성물(2C)
미세섬유 조성물 2C의 조성은 밀기울 및 건조 바나나의 조성에 비교할만하다. 그러나, 미세섬유 조성물 2C는 중요한 녹색 식이 섬유 생성물이다. 밀기울(조) 및 바나나(탈수됨)와 비교하여(표 6에 나타난 바와 같음), 미세섬유 조성물 2C는 탄수화물 및 지질에서의 낮은 함량으로 균형이 잘 잡혀 있고, 바나나와 동등하지만 조 밀기울보다는 적은, 섬유질에서 높은 상대적 함량과 함께 단백질, 베타-카로틴 및 항산화 화합물에서 더 높은 함량을 갖는다.
[표 6] 상용 제품과 미세섬유 조성물(2C) 비교
(1) 독립적인 연구소 Covance WI(www.covance.com)에서 분석됨
(2) 이후 www.nutritionvalue.org
ND = 이용가능한 데이터 없음
건조 엽록체 조성물 4E
기존 상용 제품과 건조 엽록체 조성물(4E)의 비교. 건조 엽록체 조성물(4E)을 단백질, 항산화제, 색소 및 인지질 함량이 높다고 주장하는 미량-성분과 비교하였다(하기 표 7). 단백질 함량을 제외하고 건조 엽록체 조성물(4E)은 클로렐라, 해양 미세조류 및 알팔파 단백질 농축액과 비교하여 1위 또는 동순위이다.
[표 7] 인정된 기존 동등물과 비교한 엽록체 조성물 4E의 뚜렷한 사양
(1) Covance Laboratories WI www.covance.com에 의해 수행된 분석
(2) 높은% 단백질 보충제로 게시된 상용 제품(Organika®)
(3) 높은% 단백질 보충제로 게시된 일반적으로 제자리에서 생산되는 천연 화합물
(4) 높은% 단백질 보충제로 게시된 상용 화합물(VITALFA®)
N.D. 이용가능한 데이터 없음
실시예 13 - 사포닌에 의한 소수성 및/또는 양친매성 불순물의 추적
목적
업스트림에서 다운스트림으로 샘플링, 다양한 중간 및 최종 생성물, 예컨대: (0B) 식물 단편; (2G) 탈섬유 녹색 주스; (3D) 정화된 현탁액; (3K) 엽록체 현탁액; (4B) 세척된 엽록체 현탁액은 공정의 상이한 단계에서 가치가 떨어지는 성분 감소를 결정할 수 있게 한다. 전체 공정에서 다양한 정제 활성을 거친 후, 친수성, 소수성 및 양친매성 물질은 하나 또는 다른 프로세싱 활성에서 플러싱될 수 있고; 동시에 어딘가에 모두 포획되거나 연결되거나 특정 물질과 연관되고, 특이적 친수성 또는 소수성 구동 경로에 의해 어딘가에 있다.
본 실시예에서, 소화 장애의 원인이 되는 영양 결핍 화합물인 메디카겐산(Mediagenic acid) 사포닌(MA 사포닌)은 본 개시 내용의 공정에 의해 제거되는 것으로 나타났다. 뚜렷한 최종 생성물(4B)의 생산, 상이한 형태의 천연 업스트림 생성물, 특이적 세척 활성을 통해 가치 성분을 분리하고 세척하는 것이 달성된 것으로 나타났다.
결과 및 논의
메디카겐산 사포닌(MA 사포닌)의 측정은 중간 생성물과 최종 생성물 모두 및 각각에서 완료되었다. 공정을 통해 흐르는 MA 사포닌의 질량 균형에 따라, 얼마나 많은 MA 사포닌이 엽록체 현탁액으로부터 씻겨나갔는지를 계산하였다.
표 8: 상이한 분획에서 MA 사포닌의 분포
표 8에 제시된 결과는 MA 사포닌(mg)/총 물질(건조)(g)의 수준 및 탈섬유 녹색 주스로부터의 각각의 분획에서 계산된 MA 사포닌의 총 질량을 나타낸다. 표의 오른쪽 끝 컬럼은 식물 단편에서 측정된 것과 비교하여 다운스트림 분획에서 여전히 측정된 사포닌의 결과(%)를 나타낸다. 물을 포함한 화합물의 총 질량이 모든 분획 및 각각의 분획에서 상이하기 때문에 각각의 분획에서 질량 균형을 느낄 필요가 있다.
최종 생성물 4B는 식물 단편으로부터 추출된 천연 탈섬유 녹색 주스와는 완전히 상이한 세트이다. 원심분리(3A)에 의한 분리는 폴리페놀 및 휘발성 물질과 같은 이미(off-taste) 및 이취(off-odour) 화합물의 일부 추출을 허용하였지만, 표 8에 나타낸 바와 같이 메디카겐산 사포닌과 같은 영양불량 물질도 허용하였다. 더욱이, 세척 단계의 추가의 공정 단계(제1 분리 단계 젤리 3K를 물에 희석하고 다시 분리하여 영양 결핍 잔류물을 씻어내는 단계)는 중간 형태 3K와 비교하여 최종 생성물에서 MA 사포닌의 총량을 32%까지 감소하도록 허용되었다. 농도 관점에서, 세척된 엽록체 현탁액인 4B 분획은 세척 활성 4A 이전의 중간 엽록체 현탁액 3K에서 관찰된 농도보다 9.9% 더 낮은 MA 사포닌 농도를 특징으로 한다.
실시예 14 - 트리아콘탄올
목적
목적은 이 분자가 주로 식물 생체자극제로 작용할 수 있다는 점을 고려하여 공정의 4개 분획화로부터의 생성물로부터 트리아콘탄올을 추출할 가능성을 탐구하는 것이었다.
방법
4개의 생성물(2개의 분획 및 2개의 현탁액)을 공정 동안 수집하고 -80℃에서 즉시 동결시켰다. 트리아콘탄올은 액체-액체 추출에 의해 샘플에서 추출되었다. 그 다음, 친유성 부분을 건조시키고 유도체화하였다. 유사한 화합물인, 노나데칸산 메틸 에스테르를 대조군으로서 추출액에 첨가하였다. 가스 크로마토그래피 시스템과 질량 분석 검출기(GC-MS, Agilent)를 사용하여 분석을 수행했다. 트리아콘탄올은 정량화의 표준으로 사용되었다. 식별은 보존 시간과 NIST 라이브러리를 기반으로 했다. 수분은 105℃에서 건조 후 계산되었다.
결과
[표 9]: 트리아콘탄올의 양
논의
트리아콘타놀은 에피큐티큘러 왁스에서 발견되는 천연 식물 성장 조절제이다. 이 천연 분자는 작물 생산을 향상시키고 다양한 작물에서 광합성, 단백질 합성, 수분 및 영양소의 흡수, 효소 활성, 유리 아미노산의 함량 및 에센셜 오일의 활성 성분을 향상시키는 것으로 보고되었다. 트리아콘탄올은 식물의 유전적 잠재력을 크게 활용한다. 현재 조사에서, 트리아콘탄올은 4가지 생성물 중 3가지, 즉 엽록체 감소된 현탁액 3B, 거대섬유 분획 1B 및 미세섬유 분획 2AA에서 검출되었다. 후자는 관찰된 더 높은 농도를 고려할 때 트리아콘탄올 추출에 사용하기에 가장 흥미로운 생성물일 수 있다.
실시예 15 - 4개 분획화로부터 획득된 생성물로부터 추출가능한 부가-가치 단백질 및 펩티드 분자
목표
고급 바이오-소스 전구체는 본 명세서에 기재된 4개 분획화 공정의 하나 이상의 생성물, 즉 거대섬유 분획(1B), 미세섬유 분획(2AA), 엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B)으로부터 선택적으로 추출될 수 있다. 이들 전구체는 특정 산업 분야(예를 들어, 제약, 기능식품, 식품, 농업)에서 사용될 잠재성이 있다. 더욱이, 위치를 특정하고 이용가능한 펩티드의 양을 평가하고 단백질 외부에 위치하는 것이 바람직하여, 빌딩 블록 또는 바이오-소스 전구체로 사용될 수 있다.
방법
4개의 생성물인, 2개의 고체(거대섬유 분획(1B) 및 미세섬유 분획(2AA)) 및 2개의 액체(엽록체 감소된 현탁액(3B) 및 세척된 엽록체 현탁액(4B))는 분획화 공정 동안 수집되고 -80℃에서 즉시 동결되었다. 두 고체 분획 각각의 200mg의 샘플을 사용하고 두 액체 분획 각각의 0.5mL의 샘플을 사용했다. 중탄산암모늄(50mM), 소듐 데옥시콜레이트(0.5%), 디티오트레이톨(50mM) 및 펩스타틴(1uM)을 함유하는 완충액을 고체 분획(1mL의 완충액) 및 액체 분획(0.5mL의 완충액)을 함유하는 튜브에 첨가하였다. 스틸 비드로 기계적 추출을 2분 동안 수행한 다음 각 튜브를 원심분리하고 상등액을 수집했다. 아세톤(5 부피)을 단백질 침전을 위해 각 튜브에 첨가하고, 원심분리 후, 생성된 상등액을 수집하고 펩티드 분석을 위해 탈염하였다. 생성된 펩티드 혼합물 1μg을 5600 Triple TOF 질량 분석기(Sciex)를 사용하여 분석했다. 방법은 대략 800Da에서 3kDa 사이의 분자량에 해당하는 8개 내지 30개 아미노산 길이의 펩티드의 검출을 가능하게 했다.
루비스코는 이 실시예에서 확인된 분자 중 하나였고, 상기 실시예 11에서 추가로 분석되었다.
결과
단백질: 분획화의 생성물당 확인된 상이한 단백질의 총 수는 도 23의 막대 그래프에 도시되어 있다. 도 24는 다양한 분획화 생성물에서의 그 위치에 기초하여 다수의 확인된 단백질의 분석을 제공한다. 특이적 단백질은 표 10 내지 16에서 확인되고 그 위치는 도 25에서 참조된다.
펩티드: 유사하게, 분획화의 생성물당 확인된 상이한 펩티드(단백질 외부에서 발견됨)의 총 수가 도 26의 막대 그래프에 도시되어 있다. 도 27은 다양한 분획화 생성물에서의 위치에 기초한 확인된 펩티드의 분석을 제공한다.
[표 10]: 산업적 적용을 가질 수 있는 일부 단백질 분자
[표 11]: 초산화물 디스뮤타아제 및 열 충격 단백질 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L); MW = 분자량
[표 12]: 리폭시게나제 및 키티나제 유형 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L); MW = 분자량
[표 13]: 서브틸리신 -유사 세린 프로테아제 유형 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L); MW = 분자량
[표 14]: 퍼옥시다제 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L); MW = 분자량
[표 15]: 옥신 결합 단백질, 미오-이노시톨 포스파타제 및 베타갈락토시다 제 유형 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L); MW = 분자량
[표 16]: 디펜신 및 Nod-인자-결합 유형 분자의 위치
* 상대적 풍부도: 단백질당 다수의 서열화된 펩티드를 기반으로 한 단백질 풍부도 지수 방법에 따라 > 30 : 높음(H); 15-30: 보통(M); 0-14: 낮음(L)); MW = 분자량
토론 및 결론
더 많은(5배) 수의 단백질이 도 23에 나타낸 바와 같이, 네 번째 생성물(세척된 엽록체 현탁액 4B)에 비해 첫 번째 생성물(거대섬유 분획 1B)에서 확인되었다. 이들 단백질 중 일부는 산업적 수준에서 가치가 있을 수 있다. 산업적 생산으로 이동하기 이전에 a) 최종 생성물의 가치; b) 최종 생성물의 빌딩 블록 및/또는 전구체로서 특정한 단백질 물질에 대해 얻을 수 있는 가격; c) 추출 및 정제 비용을 포함하여 많은 요소가 평가되어야 한다.
많은 수의 펩티드(2,827)가 도 27에 도시된 바와 같이 4개 상이한 분획화의 생성물에 또한 제시된다. 가장 많은 수의 펩티드는 첫 번째 분획화(거대섬유 분획 1B) 및 세 번째 분획화(엽록체 감소된 현탁액 3B)에서 발견된다. 상기에서와 같이 단백질 평가에 대해 논의하면서 이들 펩티드 중 일부의 경제적 잠재력을 설정하기 위해서는 더 많은 연구와 실험이 이루어져야 할 것이다.
실시예 16 - 직교 분석 방법의 사용에 의해 세척된 엽록체 현탁액(4B)으로부터 제조된 건조된 엽록체 조성물(4E)의 온전함의 입증
이 실시예에서, 엽록체 페이스트(4B)를 실시예 #6에서와 같이 제조하고 동결건조에 의해 건조시켰다. 그것은 추가 처리 전에 1주일 이상 보관되었다. 그런 다음 그것을 염수에 재현탁하고 일련의 직교 분석 접근방식에 의해 온전함을 특성화했다.
유세포분석
재수화시 엽록체가 그 원래의 모양과 치수를 회복할 수 없는 것은 외부 및 내부 막 시스템에 비가역적인 손상을 나타낼 것이라는 가정하에, 유세포 분석을 사용하여 치수가 2um보다 더 큰 엽록체의 상대적 풍부도를 결정했다. 도 28은 2017년과 2018년에 제조된 페이스트(4E)로부터 재수화된 엽록체의 많은 부분이 2um보다 큰 치수임을 분명히 보여주며, 이는 그것이 페이스트(4E)의 가공을 통해 무손상 상태로 남아 있음을 시사한다.
농도 대용물과 형광(엽록소-a) 대용물을 플로팅하여 추가 입증을 했다. 도 29는 형광 강도가 더 큰 크기의 엽록체와 연관되어 있음을 입증하며, 이는 무손상 엽록소-a가 치수 > 2um의 엽록체에 존재함을 시사한다.
공초점 현미경
건조된 엽록체 조성물(4E)의 수화의 결과로, 희석된 재수화된 엽록체를 650nm(엽록소-a)에서 여기한 후 공초점 현미경으로 조사하였다. 관찰은 엽록체 외부 경계의 날카로운 형광 묘사와 함께 평균 약 5um의 엽록체를 나타내어, 내부 및 외부 막 시스템이 손상되지 않았음을 시사한다(도 30 참조).
가시 현미경
가시 현미경 하에서 희석된 재수화된 엽록체의 반복된 관찰(도 31)은 그것이 길이가 평균 5.5um이었고 온전함을 시사하는 형태임을 확인하였다.
전반적으로, 이들 분석은 세척된 엽록체 현탁액(4B) 및 건조된 엽록체 현탁액(4E)이 동결건조 및 재수화를 통해 온전함을 유지하는 무손상 엽록체를 비교적 풍부하게 함유함을 입증한다.
실시예 17 - 건조된 엽록체 조성물(4E)의 수 혼화성의 입증
이 실시예에서, 건조된 엽록체 조성물(4E)은 실시예 6에서와 같이 제조되었고, 원자화 또는 동결건조에 의해 건조되었다. 이들 건조된 생성물(< 8% 수분 함량)은 적어도 한 달 동안 진공 밀봉된 패키지에 보관되었다. 그것은 그런 다음 약한 교반(에어 버블링) 하에서 수조에 침지되었다. 크기 분포 분석을 위해 침지 후 60초 이내에 샘플을 채취했다.
실시예 6에서와 같이 제조된 건조된 엽록체 조성물(4E)은 상당한 교반 없이 물에 침지시 쉽고 용이하게 재현탁되었다. 육안 관찰에 따르면 물에 침지시 엽록체 입자가 중간 덩어리를 형성함이 없이 즉시 퍼져 분산되었다는 것을 나타냈다. 침지 60초 이내에 채취한 샘플의 크기 분포 분석(도 32)은 평균 입자 크기가 4um보다 약간 작은 것으로 나타났으며, 이는 무손상 엽록체의 평균 치수에 해당한다. 이들 샘플의 현미경 관찰은 이들 샘플의 평균 입자가 무손상 엽록체의 구조적 특징을 가짐을 확인시켜 주었다.
실시예 #16에서와 같이 제조된 건조된 엽록체 조성물(4E) 또한 물에 쉽게 분산되었다. 도 29는 유세포분석(FSC)에 의해 측정된 건조된 엽록체 조성물(4E)로부터 재수화된 엽록체의 크기 분포를 나타낸다. 분무 건조 세척된 엽록체 현탁액(4B) 또는 동결건조 세척된 엽록체 현탁액(4B)은 입자 물질의 부피가 5 내지 10um 사이에서 발견되는 도 2에서 도시된 바와 같이 쉽고 용이하게 분산된다.
이것은 본 실시예에 사용된 조건에서, 비제한적으로, 실시예 6에서와 같이 제조되고 원자화 또는 동결건조에 의해 건조된, 건조된 엽록체 조성물(4E)이 순수한 물에 용이하게 재현탁될 것임을 입증한다. 진공 건조 및 고리 건조와 같은 다른 유형의 건조 또는 염수 및 완충액과 같은 재현탁을 위한 기타 수성 매체도 동일한 결과를 제공할 수 있다.
실시예 18 - 알팔파 하위-분획 사이의 사포닌 클래스의 분리를 위한 차등 친화도의 사용
사포닌은 상이한 조성의 유기 다환 코어의 글루코사이드(사포게닌)이다. 대부분의 식물에서 사포닌은 아글리콘으로 거의 발생하지 않지만 그 사포게닌 코어의 글리코실화 수준과 성질은 광범위하게 다양하다. 알팔파(메디카고 사티바 종)에는 사포닌의 2가지 주요 클래스가 발견된다. 메디카겐산, 잔산, 헤데라게닌, 베이오게닌과 같은 산성 사포게닌 코어를 가진 사포닌과 소야사포게놀과 같은 중성 사포게닌 코어를 가진 사포닌(A, B). 메디카겐산과 소야사포게놀은 일반적으로 총 사포닌 함량의 80% 초과로 구성된다.
알팔파에서 대부분의 사포닌은 위치 C3-OH에서 복합체 글리칸에 연결되어 있다. 알팔파 사포닌에 대한 이 위치에서 알려진 글리칸 대체물 목록은 Tava 및 Avato 2006 Chemical and biological activity of triterpene Saponins from Medicago species에 의해 제시되었다.
Natural product communication 1(12):1159-1180·2006년 1월. 부가하여, 헤데라게닌, 베이오게닌, 메디카겐산 및 잔산은 일반적으로 또 다른 복합체 글리칸 사슬로 에스테르화되는 위치 C28에 카르복실기를 갖는다. 헤데라게닌과 베이오게닌 사포게닌 코어는 단지 C28에서 1개의 카르복실기를 가지기 때문에 그의 글루코시드는 일반적으로 생리학적 pH에서 수성 용액에서 전하를 띠지 않다. 대조적으로, 메디카겐산과 잔산은 비치환된 채로 남아있는 C23 위치에 추가 카르복실기를 가지고 생리학적 pH에서 수성 용액에서 카르복시산처럼 거동한다.
따라서, 모든 사포닌은 친수성 및 친유성 특성을 모두 가지고 있지만, 그 글루코사이드의 전하에서 차이는 조 식물 추출물과 같은 복합체 혼합물에서 거동의 차이를 생성한다.
이 실시예에서, 엽록체 현탁액(3K)은 실시예 5에 기재된 바와 같이 미세섬유 고갈된 현탁액(2G)으로부터 분리되었다. 수성 또는 지질-풍부한 분획에 대한 차등 친화도를 사용하여 메디카겐산과 같은 산성 사포닌에서 수성 분획을 풍부하게 하였다.
[표 17]. 신선한 식물 단편(0B) 및 그 분획화의 생성물(3B, 3K)에서 사포닌 유형의 백분율(총 사포닌 함량 기준).
표 17은 신선한 식물 단편(0B 및 그 분획화 생성물(3B, 3K))에서 사포닌 유형의 상대적 풍부도를 나타낸다. 이들 결과는 지질-풍부한 녹색 고체(엽록체)가 원심분리에 의해 제거됨에 따라 단백질 감소된 현탁액(3B)의 메디카겐산에서 상당한 농후화를 보여준다(실시예 5, 7, 13 참조). 분리를 위해 사용된 조건에서, 생성된 정화된 주스의 사포닌 함량의 82%가 메디카겐산으로 구성되어, 메디카겐산이 하전된 상태로 남아있는 조건의 사용에 의해, 그것은 수성 분획에 대한 그 차등 친화도의 사용에 의해 소야사포게놀 B와 A로부터 쉽게 분리될 수 있음을 입증한다. 이들 조건은 pH 조정, 예를 들어 녹색 고체가 침강되는 경향이 높고 메디카겐산의 카르복실기가 5 이상의 pH에서 대부분의 유기산에 대한 것과 같이 여전히 음으로 하전된 구연산염으로 pH 5로 조정일 수 있지만 이에 제한되지는 않는다.
실시예 19 루비스코, 엽록소(Chlorophyll) 및 cFBPP 수준을 측정하기 위한 일반적인 방법
실시예 20 및 21의 분석을 위해 다음의 방법을 사용하였다.
물질 및 방법
다음은 루비스코 중질 서브단위(Rbcl) 및 사이토졸 푸룩토스 1,6-비스포스파타제(cFBPase)의 함량을 정량화하기 위한 표준화된 면역검출 방법이다.
건조된 분말 샘플을 추출 완충액 1X(Cedarlane # AS08-300)의 mL(w/v)당 약 10 mg의 샘플의 비율로 균질화한다. 이어서 균질물을 1부피의 2X Laemmli 완충액(Bio-Rad # 161-0737)과 혼합하고, 변성을 위해 100℃/10분에서 가열한다. 변성된 샘플을 트리스-글리신-SDS 완충액(25 mM의 트리스, 192 mM의 글리신, 0,1%의 SDS(w/v), pH 8,3)의 Mini-protean 시스템(Bio-Rad # 456-1033)을 사용하여 200 볼트에서 30분 동안 Stain-free TGX 4 내지 20%의 아크릴아미드 겔(Bio-Rad # 456-1033) 상에서 분리한다. 제조자 지침에 따라 트리스-글리신-메탄올 완충액(25 mM의 트리스, 192 mM의 글리신, 0.1%의 SDS(w/v), pH 8.3, 20%의 메탄올)을 사용하여 100볼트에서 30분 동안 PVDF 멤브레인(Bio-Rad # 162-0260) 상에서 면역블로팅을 수행한다. 블로팅된 멤브레인을 5%의 탈지유 용액으로 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 포화시킨다. Rbcl 검출을 위해 1차 항체(Cedarlane # AS03-037)를 5%의 탈지유에 1/10000 희석하고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하고, TTBS(20 mM의 트리스, pH 7.5, 500 mM의 NaCl, 0,1%의 트윈 20)로 5분 동안 5회 세척한다. 2차 항체(Cedarlane # AS09-602)를 5%의 탈지유에 1/10000 희석하여 사용하고, 동일한 조건에서 인큐베이션한다. 30분 인큐베이션 후, 화학발광 계시 동안 분자량 마커(Bio-Rad # 161-0376)를 검출할 수 있도록 1 μL의 Streptactin(Bio-Rad # 161-0380)을 첨가한다. 멤브레인을 TTBS로 5분 동안 5회 세척하고, 루미놀(Bio-Rad # 170-5060)로 3분 동안 진탕시키면서 화학발광 검출을 수행하고, 이미지를 ImageLab v6.1로 분석한다.
cFBPase의 경우, 1차 항체(Cedarlane # AS04-043)를 1/5000로 희석하고, 나머지 면역검출은 Rbcl과 같다. ChemiDoc MP 이미징 시스템(Bio-Rad # 17001402) 상에서 화학발광을 수행한다.
효소의 상대 존재비, 그리고 이 경우 사이토졸 FBPP는 면역검출에 의해 확실하게 정량적으로 측정될 수 있다. 이는 디지털 스캐너에 의한 면역블롯의 광학 밀도 측정을 통해 달성된다. 따라서 주어진 SDS-PAGE 세트, 면역블로팅 및 면역검출 조건 하에서 표적 항원(여기서는 사이토졸 FBPP)의 함량 값을 광학 밀도에 할당할 수 있다. 상이한 제조에서 사이토졸 FBPP의 함량을 측정하기 위해 사이토졸 FBPP의 한 단위(cFBPP 단위)는 상기 물질 및 방법 섹션에 기재된 고정된 조건 하에서 측정된 광학 밀도의 한 단위로서 결정된다.
도 33은 루비스코의 면역블롯 사진을 나타낸다. 도 34는 cFBPP의 면역블롯 사진을 나타낸다.
표 18은 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase의 강도 측정 및 양을 나타낸다. 표 19는 표 18의 값을 사용하여 계산된 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase의 비율을 나타낸다.
표 18 및 표 19에서 C1의 세척은 단계 4A로부터 제거된 상청액을 지칭한다.
[표 18]: 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase의 양 및 강도
[표 19]: 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase 수준의 비율
실시예 20: 사이토졸 푸룩토스-1,6-비스포스파타제(FBPP) 비율
사이토졸 푸룩토스-1,6-비스포스파타제(FBPP)는 엽록체에 의해 생산된 트리오스 포스페이트 전구체로부터 수크로스 합성을 초래하는 대사 경로의 핵심 효소이다. 이 효소는 또한 수크로스로부터의 포도당신생성에 관여한다. 그의 활성은 그의 두 기질의 복잡한 균형에 의해 조절되지만, 사이토졸에서의 그의 수준은 일반적으로 안정하고, 광합성 활성에 의해 조절된다. 따라서 잎 세포에서, 보다 일반적으로는 광합성 조직의 세포에서 광합성 수용력 및 엽록체 함량은 둘 모두 사이토졸 FBPP 수준과 연결된다. 이에 비추어, 광합성 조직으로부터의 식물 추출물 또는 임의의 추출물에서 사이토졸 FBPP 수준(상대 존재비)은 종, 조직 유형, 생리학적 상태, 스트레스, 빛 노출, 일주 주기 및 다른 환경 조건 또는 고유 조건에 따라 수준(상대 존재비)이 크게 달라지는 사이토졸로부터의 다른 가용성 물질과 달리 사이토졸 오염의 매우 신뢰할 수 있는 마커로 간주된다.
사이토졸 FBPP의 수준은 SDS-PAGE에 의한 분리 후 효소의 면역검출에 의해 정량적으로 결정될 수 있다. 이는 수준이 다양한 추출물에 있는 가용성 성분의 존재에 의해 영향을 받을 수 있는 효소적 검정을 사용하는 것보다 바람직하다. 그러한 면역검출을 위한 항체는 상업적으로 입수 가능하고, 그의 특이성 및 친화성은 표준화되어 있다.
본 실시예에서, 토끼 항-FBPP는 실시예 19에 기재된 방법에 따라 FBPP의 면역검출(도 34)을 위해 본 개시 내용의 공정으로부터 수득된 다양한 분획에서 사용되었다. 도 34에서, 이들 특이적 면역검출의 조건 하에 사이토졸 FBPP가 전체 추출물에서 상당한 양으로 검출되고 정량화될 수 있지만(레인 2 내지 3), 엽록체 현탁액에서는 거의 검출되지 않는다(레인 6 내지 7)는 것을 알 수 있고, 본 개시 내용의 공정(예를 들어, 도 1의 공정)이 미량의 가용성 사이토졸 함량을 모두 씻어낸다는 것을 입증한다. 도 34는 또한 cFBPase 함량이 엽록체로부터의 침강 및 여과에 의해 수득된 갈색 주스 분획에 농축되었다는 것을 나타낸다. 약 66배의 농축인 cFBPase 상대 존재비(건조 중량 mg당 단위)의 계산이 엽록체로부터의 침강 및 여과에 의해 달성되었다.
대조적으로, 도 33에서, 엽록체에 특이적인 마커인 루비스코 중질 서브유닛이 농축된 엽록체 현탁액(레인 4)에서 완전히 격리되고, 갈색 주스(레인 5)에서는 검출되지 않는다는 것을 알 수 있다.
종합하면, 이들 결과는 본 개시 내용의 일반적인 공정이 엽록체 멤브레인 무결성을 보호하고, 사이토졸 기원으로부터 온전한 엽록체를 오염 가용성 물질로부터 분리할 수 있게 하여 순도와 온전성을 둘 모두 보장한다는 것을 나타낸다.
이들 결과는 또한 엽록체의 가용성 성분 및 멤브레인 성분 둘 다와 사이토졸의 가용성 성분 사이의 비율을 설정함으로써 순도와 온전성 또는 무결성을 정량화할 수 있다는 것을 나타낸다.
예를 들어, 중질 서브유닛이 엽록체에서 가용성이기 때문에, 정제된 엽록체 현탁액 분획에서 그의 격리는 본 개시 내용의 공정 동안 누출이 없었고, 루비스코가 내부 엽록체 멤브레인 시스템의 성분인 베타 카로텐 및 엽록소와 단독으로 회합되어 남아 있다는 표시이다.
따라서, 온전성 및 순도는 엽록체 현탁액의 특징화를 위해 조합될 수 있고, 도 34에 기재된 공정의 효능을 입증하기 위해 사용될 수 있다. 표 18은 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase의 강도 측정 및 양을 나타낸다. 표 19는 표 18의 값을 사용하여 계산된 엽록소, 루비스코 및 cFBPPase의 비율을 나타낸다.(실시예 19 참고) 표 18에 나타낸 바와 같이, 순도 및 온전성은 cBFPase와 같은 사이토졸 마커에 대한 엽록소(엽록체 내부 멤브레인 성분) 또는 루비스코(가용성 엽록체 성분)의 비율을 설정함으로써 정량화될 수 있다.
본 실시예에서, 엽록소/cFBPase 비율은 초기 바이오매스에서 약 5였고, 최종 엽록체 제조(C2)에서 약 100에 가까운 값으로 증가하였다. 이 비율의 증가는 본 개시 내용의 공정에 의해 달성된 순도 및 온전성의 척도로서 사용될 수 있고, 따라서 온전성을 보존하고 사이토졸 물질을 씻어내는 것 둘 다에서 공정의 효능의 직접적인 결과인 조성물의 척도로서 사용될 수 있다. 본 개시 내용의 공정은 엽록소/cFBPPase의 비율이 적어도 50 이상인 엽록체 현탁액을 생산할 수 있는 것으로 나타났다.
따라서, Rbcl/cFBPase 비율의 증가는 또한 본 개시 내용의 공정에 의해 달성된 순도 및 온전성의 척도로서 사용될 수 있고, 따라서 온전성을 보존하고 사이토졸 물질을 씻어내는 것 둘 다에서 공정의 효능의 직접적인 결과인 조성물의 척도로서 사용될 수 있다. 본 개시 내용의 공정은 루비스코/cFBPPase의 비율이 적어도 18 이상인 엽록체 현탁액을 생산할 수 있는 것으로 나타났다.
실시예 21: 엽록체 내부에 주로 또는 독점적으로 존재하는 순수 화합물의 선택적 추출을 허용하기 위한 엽록체의 무결성 보호
이들 엽록체의 무결성을 대량으로 파괴하지 않고 온전한 엽록체의 선택적 추출은 가공 장비에 대한 선택적 실행 사양을 통해 수행될 수 있다. 엽록체의 내부 및 외부 멤브레인의 화학적 변형을 최소화하기 위해 제제에 대한 첨가제도 선택되었고; 순한 화학 첨가제를 사용하면 엽록체 내부에 주로 또는 독점적으로 존재하는 중요한 유기 물질의 임의의 파괴나 누출을 또한 방지할 수 있다.
본 전략은 영양적 화합물로서 직접 사용하거나 내부에 존재하는 선택적 화합물을 추출하기 위해 엽록체의 무결성을 보호하는 것이다. 엽록체의 무결성은 동적 광 산란(도 20a 및 도 20b에 나타낸 바와 같음)에 의해 직접적으로 확인되었고, 대사 활성의 측정에 의해 간접적으로 확인되었다. 대사 활성과 물리적 무결성을 둘 다 확인하면 엽록체가 예외 없이 온전하다는 것을 확인할 수 있는 반면, 동적 광 산란과 달리 온전성을 보장하지 않는 사소한 시험만을 나타내는 단순한 현미경 관찰이다. 도 20a 및 도 20b에 나타낸 바와 같이, 본 개시 내용의 엽록체는 실질적으로 온전하다.
제제의 밝은 녹색에서 밝은 갈색으로의 상당한 편차는 지질 이중층이 낮은 열 조건에 의해 손상되어 내부 물질이 외부 사이토졸로 누출되고, 순수 물질이 루비스코와 같이 사이토졸 혼합물에 분산된다는 신호일 수 있다.
엽록체 무결성 검사는 또한 루비스코/엽록소 비율의 측정에 의해 달성될 수 있고, 여기서 루비스코를 포함한 엽록체의 내부 액체 물질 부분이 사이토졸 외부 액체로 임의의 누출되면 엽록소가 엽록체 내부의 틸라코이드 구조에 적층된 원래의 엽록소와 비교하여 비율이 감소할 것이다. 실시예 19 및 20은 루비스코/엽록소 비율 진화를 확인시켜 준다.
실제로, 분획 4B에서 온전한 엽록체의 높은 백분율의 관찰은 분획 4E, 건조 엽록체 조성물 및 분획 4H, 액체 엽록체 조성물에서 동일한 수준으로 관찰되고; 이는 분획 4E 또는 4H로 진화하기 위해 분획 4B의 낮은 스트레스 상태에 의해 지지된다.
루비스코 및 엽록소 수준을 측정하는 실험을 실시예 19(예를 들어, 물질 및 방법)에 나타낸 바와 같이 수행하였다. 결과 및 비율은 실시예 19의 표 18 및 표 19에 기재되어 있다.
엽록체의 무결성을 입증하기 위해 루비스코/엽록소 비율(표 19)과 같이 엽록체의 가용성 성분과 멤브레인 성분 사이의 계산된 비율은 루비스코가 내부 엽록체 멤브레인 시스템의 성분인 엽록소와 단독으로 회합되어 있다는 것을 나타낸다. 표 19의 결과는 식물 단편(0B)에서 3.5의 비율과 4B에서 4.5의 비율을 입증하고, 엽록체의 무결성을 확인한다. 엽록체가 온전하지 않은 경우, 이 비율은 가용성 루비스코가 엽록체 외부로 누출되어 낮아질 것이다.
실시예 22: 엽록체의 정제
도입
식물 바이오매스 조직으로부터 엽록체를 정제하는 것은 단백질 물질의 상업적 영양가를 손상시키는 이미 및 이취 화합물을 씻어내기에 충분하지 않다. 이들 영양가가 없는 화합물은 엽록체 외부의 사이토졸에 있고, 친수성(예를 들어, 폴리페놀); 소수성(예를 들어, 지방산으로부터의 휘발성 착물); 및/또는 양친매성(예를 들어, 사포닌)일 수 있다.
상업적으로 적응된 뚜렷한 물질을 수득하기 위해 선택적 추출은 다중 공정 활성에서 가치가 없는 물질을 씻어내야 할 것이다. 먼저, 엽록체 환원 현탁액(3B)에서 배수될 수 있는 사포닌과 같은 식물 잔해 및 양친매성 물질의 선택적 분리(3A)는 풍부한 엽록체 현탁액(3K)을 수득할 수 있게 한다. 3B의 제2 선택적 분리(3C)에서 계속하면, 3D에서 더 많은 양친매성 물질 및 친수성 물질이 잔류 엽록체의 배치(3CC)에서 플러싱될 수 있다. 폴리페놀, 휘발성 물질 및 더 많은 사포닌에 의해 오염된 증류기인 3K와 3CC를 조합하면 분리(4A)를 통해 실현 가능한 한 많이 추가로 정제할 수 있고, 천연 알팔파 바이오매스 물질에 자연적으로 존재하는 이미, 이취 및 일반적으로 가치가 없는 화합물이 감소된 세척된 엽록체 현탁액(4B)을 달성한다.
cFBPP 비율에 의한 친수성 불순물의 추적
엽록체 주위의 사이토졸에 존재하는 영양 결핍 화합물을 씻어내는 것은 뚜렷한 물질을 수득하기 위한 핵심이다. 온전한 엽록체에 주로 존재하는 엽록소에 대한 사이토졸에 주로 존재하는 단백질인 사이토졸 푸룩토스-1,6-비포스파타제(cFPBB)의 비율을 분획 3K와 4B 둘 모두에서 측정하면 엽록체 주의의 친수성 물질의 제거를 입증할 수 있다. 엽록소/cFBPP 비율의 증가는 사이토졸에서 친수성 물질이 제거된다는 것을 나타낸다. cFPBB 감소의 측정은 4A 세척 활성에서 많은 이미 및 이취의 제거를 나타낸다. cFPBB 측정은 또한 알팔파 품종 선택과 독립적이고, 사용 중인 선택된 품종에 관계없이 주로 바이오매스 단편 0B에서 동일한 수준에 있다.
엽록체 현탁액(4B)의 정제는 분획 4E, 건조 엽록체 조성물 및 분획 4H, 액체 엽록체 조성물에서 동일한 수준으로 관찰될 수 있고; 이는 분획 4E 또는 4H로 진화하기 위해 분획 4B의 낮은 스트레스 상태에 의해 지지된다.
cFBPP 비율의 결과는 표 18 및 표 19에 나타나 있고, 실시예 20에서 논의된다.
본 개시 내용은 실시예를 참조하여 기재되었지만, 청구범위의 범주는 실시예에 제시된 구현예에 의해 제한되어서는 안 되고, 전체적으로 명세서와 일치하는 가장 넓은 해석을 고려해야 한다는 것을 이해해야 한다.
모든 공보, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 공보, 특허 또는 특허 출원이 전체적으로 참조로 포함되도록 구체적이고 개별적으로 표시된 것과 동일한 정도로 그 전체가 본 출원에 참조로 포함된다. 본 개시 내용의 용어가 본 출원에 참조로 포함된 문서에서 상이하게 정의된 것으로 밝혀진 경우, 본 출원에 제공된 정의는 용어에 대한 정의로서 역할을 한다.

Claims (253)

  1. 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 조성물은 적어도 25% w/v의 고체 함량을 가지며, 엽록체 콩과 식물로부터 단리되고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  2. 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고 엽록체는 콩과 식물로부터 단리되고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  3. 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 현탁액은 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  4. 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 현탁액은 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  5. 엽록체 및 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 현탁액은 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 식물은 알팔파인, 현탁액.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 건조 물질 함량은 적어도 15 w/w%인, 현탁액.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제, 향균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 현탁액.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 오메가-3 지방산 (예를 들어 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 현탁액.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 약 30 중량% 내지 약 50 중량%, 약 35 중량% 내지 약 45 중량%, 약 37 중량% 내지 약 43 중량% 또는 약 39 중량% 내지 약 51 중량%의 고체 함량을 갖는, 현탁액.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 고체 함량의 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%는 엽록체로 구성되는, 현탁액.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는, 현탁액.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외막 무결성을 갖는, 현탁액.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내막 무결성을 갖는, 현탁액.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지한 것인, 현탁액.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 적어도 약 80%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 현탁액.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 45 중량% 초과의 단백질 함량을 갖는, 현탁액.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 약 45 중량% 내지 약 55 중량% 또는 약 48 중량% 내지 약 55 중량%의 단백질 함량을 갖는, 현탁액.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 약 48 중량% 내지 약 52 중량%의 단백질 함량을 갖는, 현탁액.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 약 300,000 IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는, 현탁액.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mg/g 초과, 약 25 mg/g 초과 또는 약 30 mg/g 초과의 엽록소 함량을 갖는, 현탁액.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.6 mg/g 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는, 현탁액.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 μmole의 트롤록스 등가물 (TE)/100g 초과의 항산화제 함량을 갖는, 현탁액.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 000 μmole TE/100g 내지 약 24,000 000 μmole TE/100g의 항산화제 함량을 갖는, 현탁액.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 10 중량% 내지 약 15 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 지질 함량을 갖는, 현탁액.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1 중량% 초과, 선택적으로 약 2 중량% 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는, 현탁액.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 2 중량% 내지 약 6 중량%의 오메가-3 지방산 함량을 갖는, 현탁액.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 현탁액.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 4%의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 현탁액.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는, 현탁액.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.2 내지 약 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는, 현탁액.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 약 80% 내지 약 90%, 약 82% 내지 약 88%, 약 84% 내지 약 86% 또는 약 85%의 수분 함량을 갖는, 현탁액.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 약 15%의 건조 물질 함량을 갖는, 현탁액.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, pH는 약 5.0 미만, 약 4.8 미만, 약 4.7 미만, 약 4.6 미만, 약 4.5 미만, 약 4.4 미만, 약 4.3 미만 또는 약 4.2 미만인, 현탁액.
  35. 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 선택적으로 시트르산, 말산, 석신산 및 락트산으로부터 선택된 하나 이상의 유기산을 추가로 포함하는, 현탁액.
  36. 제35항에 있어서, 유기산은 선택적으로 pH 5 내지 7을 갖는 약한 유기산인, 현탁액.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 50 중량% 초과의 단백질 함량 및 약 25 mg/g 초과의 엽록소 함량을 가지며, 엽록체의 적어도 70%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 현탁액.
  38. 제1항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 세척된 현탁액인, 현탁액.
  39. 엽록체 현탁액의 제조 공정으로서,
    콩과 식물 단편을 압착하여 압착된 식물 단편을 수득하는 단계;
    압착된 식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
    거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 포함하는 미세섬유 분획을 분리하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
    엽록체 현탁액을 수득하는 단계; 및
    선택적으로 엽록체 현탁액을 세척하는 단계를 포함하고,
    비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 공정:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  40. 제39항에 있어서, 콩과 식물은 메디카고 종 식물인, 공정.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 식물은 알팔파인, 공정.
  42. 제39항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 발포방지제를 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  43. 제39항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 식물 단편의 압착으로부터 6시간 미만, 4시간 미만, 3시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만에 수행되는, 공정.
  44. 제39항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 식물 단편의 압착으로부터 약 1시간 내지 약 6시간 동안 수행되는, 공정.
  45. 제39항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 약 42℃이하의 온도에서 수행되는, 공정.
  46. 제39항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 약 4℃ 내지 약 42℃, 약 15℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  47. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 약 800 kPa 미만의 압력에서 수행되는, 공정.
  48. 제39항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 적용된 압력은 약 400kPa 내지 약 800 kPa, 약 400kPa 내지 약 750 kPa, 약 400kPa 내지 약 700 kPa, 약 400kPa 내지 약 650 kPa, 약 400kPa 내지 약 600 kPa 또는 약 400kPa 내지 약 500kPa인, 공정.
  49. 제39항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 식물 단편의 압착은 프레스, 선택적으로 스크류 프레스 또는 유압 프레스를 사용하여 수행되는, 공정.
  50. 제39항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 압착은 식물 단편을 2회 압착하는 것을 포함하는, 공정.
  51. 제50항에 있어서, 2회 압착은 수득된 식물 거대섬유 분획을 (예를 들어, 물 또는 재순환 액체로) 재수화하여 재수화된 식물 거대섬유 현탁액을 얻고 재수화된 식물 거대섬유 현탁액으로부터 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 것을 포함하는, 공정.
  52. 제39항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 체질, 압력 체질, 원심분리 및/또는 경사분리에 의한 분리를 포함하는, 공정.
  53. 제39항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  54. 제53항에 있어서, 제2 거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  55. 제54항에 있어서, 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  56. 제54항 또는 제55항에 있어서, 제2 미세섬유 분획은 미세섬유 분획과 조합되는, 공정.
  57. 제39항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액 중 고체 입자의 적어도 75%는 약 5 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는 것인, 공정.
  58. 제39항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 분리는 약 15℃ 내지 약 42℃, 약 20℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  59. 제39항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계는 엽록체를 침강시키는 단계 및 선택적으로 침강된 엽록체를 단리하는 단계를 포함하는, 공정.
  60. 제59항에 있어서, 엽록체는 미세섬유 고갈된 현탁액을 약 4.0 내지 약 5.5, 약 4.2 내지 약 5.2, 약 4.4 내지 약 5.2, 약 4.6 내지 약 5.2 또는 4.8 내지 약 5.2의 pH로 산성화함으로써 침강되는, 공정.
  61. 제60항에 있어서, 산성화는 미세섬유 고갈된 현탁액을 산과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  62. 제61항에 있어서, 산은 4-C 유기산, 5-C 유기산 또는 시트르산인, 공정.
  63. 제59항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 침강된 엽록체는 약 2000 g 내지 약 15,000 g, 약 2000 g 내지 약 10,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘에서 원심분리에 의해 단리되는, 공정.
  64. 제39항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 접선 흐름 여과, 한외여과, 응고, 응집 및/또는 전기응고에 의해 분리되는, 공정.
  65. 제39항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 선택적으로 300 kDa 및/또는 0.2 미크론의 필터를 사용하여 접선 흐름 여과에 의해 분리되는, 공정.
  66. 제39항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 현탁액는 세척되고 세척된 엽록체 현탁액은 엽록체 현탁액 중 루비스코 함량의 약 90%를 포함하는, 공정.
  67. 제66항에 있어서, 세척은 엽록체 현탁액을 재현탁시키고 엽록체를 재단리하는 것을 포함하는, 공정.
  68. 제39항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 현탁액은 약 2 내지 약 3의 액체:현탁액 비율로 재현탁되는, 공정.
  69. 제68항에 있어서, 재현탁된 엽록체 현탁액은 약 0.2 M 내지 약 0.7 M 또는 약 0.25 M 내지 약 0.6 M의 몰농도를 갖는 것인, 공정.
  70. 제39항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리 단계는 재현탁된 엽록체 조성물의 원심분리, 응고, 응집 및/또는 침강을 포함하는, 공정.
  71. 제39항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리는 약 2,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘으로 재현탁된 엽록체 조성물을 원심분리하는 것을 포함하는, 공정.
  72. 제71항에 있어서, 세척은 엽록체를 재현탁 및 재단리하는 2회를 포함하는, 공정.
  73. 제39항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 현탁액을 컨디셔닝하는 단계를 추가로 포함하고, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액을 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가 3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  74. 제73항에 있어서, 보존제/항산화제는 메타중아황산나트륨인, 공정.
  75. 제39항 내지 제74항 중 어느 한 항의 공정에 따라 얻은 엽록체 현탁액으로서,
    비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  76. 제39항 내지 제74항 중 어느 한 항의 공정에 따라 얻은 세척된 엽록체 현탁액으로서,
    비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 세척된 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  77. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  78. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 적어도 25% w/v의 고체 함량을 갖는 액체 엽록체 조성물로서,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  79. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  80. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  81. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  82. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서, 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  83. 제77항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 식물은 알팔파인, 조성물.
  84. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 건조 물질 함량은 적어도 15 w/w%인, 조성물.
  85. 제77항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제, 향균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 조성물.
  86. 제77항 내지 제84항에 있어서, 항산화제 및/또는 향균제를 추가로 포함하는, 조성물.
  87. 제86항에 있어서, 항산화제 및/또는 향균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨인, 조성물.
  88. 제77항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 오메가-3 지방산 (예를 들어 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 조성물.
  89. 제77항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 약 30 중량% 내지 약 50 중량%, 약 35 중량% 내지 약 45 중량%, 약 37 중량% 내지 약 43 중량% 또는 약 39 중량% 내지 약 51 중량%의 고체 함량을 갖는, 조성물.
  90. 제77항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, 고체 함량의 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%는 엽록체로 구성되는, 조성물.
  91. 제77항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는, 조성물.
  92. 제77항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외막 무결성을 갖는, 조성물.
  93. 제77항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내막 무결성을 갖는, 조성물.
  94. 제77항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지한 것인, 조성물.
  95. 제77항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 적어도 약 80%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 조성물.
  96. 제77항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 45 중량% 초과의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  97. 제77항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 약 45 중량% 내지 약 55 중량% 또는 약 48 중량% 내지 약 55 중량%의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  98. 제77항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 약 48 중량% 내지 약 52 중량%의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  99. 제77항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 약 300,000 IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는, 조성물.
  100. 제77항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mg/g 초과, 약 25 mg/g 초과 또는 약 30 mg/g 초과의 엽록소 함량을 갖는, 조성물.
  101. 제77항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.6 mg/g 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는, 조성물.
  102. 제77항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 μmole의 트롤록스 등가물 (TE)/100g 초과의 항산화제 함량을 갖는, 조성물.
  103. 제77항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 000 μmole TE/100g 내지 약 24,000 000 μmole TE/100g의 항산화제 함량을 갖는, 조성물.
  104. 제77항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 10 중량% 내지 약 15 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 지질 함량을 갖는, 조성물.
  105. 제77항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 중량% 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는, 조성물.
  106. 제77항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 2 중량% 내지 약 6 중량%의 오메가-3 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  107. 제77항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  108. 제77항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 4%의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  109. 제77항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는, 조성물.
  110. 제77항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.2 내지 약 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는, 조성물.
  111. 제77항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 약 80% 내지 약 90%, 약 82% 내지 약 88%, 약 84% 내지 약 86% 또는 약 85%의 수분 함량을 갖는, 조성물.
  112. 제77항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 약 15%의 건조 물질 함량을 갖는, 조성물.
  113. 제77항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, pH는 약 5.0 미만, 약 4.8 미만, 약 4.7 미만, 약 4.6 미만, 약 4.5 미만, 약 4.4 미만, 약 4.3 미만 또는 약 4.2 미만인, 조성물.
  114. 제77항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 50 중량% 초과의 단백질 함량 및 약 25 mg/g 초과의 엽록소 함량을 가지며, 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 현탁액.
  115. 제77항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 물은 식염수인, 조성물.
  116. 제77항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.2 M 내지 약 0.7 M 또는 약 0.25 M 내지 약 0.7 M의 몰농도를 갖는, 조성물.
  117. 제77항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 캡슐, 선택적으로 불투명 캡슐에 캡슐화되는, 조성물.
  118. 제77항 내지 제117항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하고, 선택적으로 N2 또는 질소로 채워진 밀봉된 통 또는 용기 내에 배치되는 즉시 사용 가능한 액체 엽록체 조성물.
  119. 해양 유기체을 먹이기 위한, 제77항 내지 제117항 중 어느 한 항의 액체 엽록체 조성물의 용도.
  120. 동물 및/또는 인간을 위한 식품의 제조에서의 제77항 내지 제117항 중 어느 한 항의 액체 엽록체 조성물의 용도.
  121. 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물의 제조 공정으로서,
    콩과 식물 단편을 압착하는 단계;
    압착된 식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
    거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 분리하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
    엽록체 현탁액을 수득하는 단계;
    엽록체 현탁액을 세척하는 단계; 및
    세척된 엽록체 현탁액을 컨디셔닝하여 액체 엽록체 조성물을 수득하는 단계로서, 엽록체 현탁액을 혼합하는 것, 엽록체 현탁액의 염도 및/또는 몰농도를 조정하는 것, 엽록체 현탁액을 제형화제, 보존제, 식품 보충물, 오메가-3 지방산, 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것, 엽록체 현탁액을 포장하는 것, 엽록체 현탁액을 캡슐화하는 것, 및 이들의 혼합으로부터 선택된 적어도 하나의 단계를 포함하는, 단계,
    조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고, 그리고
    선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 및/또는 액체 엽록체 조성물은 엽록체 현탁액 중 루비스코 함량의 약 90%를 포함하고,
    비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나, 상기 액체 엽록체 조성물은 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는 공정:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  122. 제121항에 있어서, 콩과 식물은 메디카고 종 식물인, 공정.
  123. 제121항 또는 제122항에 있어서, 식물은 알팔파인, 공정.
  124. 제121항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 발포방지제를 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  125. 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 6시간 미만, 4시간 미만, 3시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만에 수행되는, 공정.
  126. 제121항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 약 1시간 내지 약 6시간에 수행되는, 공정.
  127. 제121항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 42℃ 이하의 온도에서 수행되는, 공정.
  128. 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 4℃ 내지 약 42℃, 약 15℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  129. 제121항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 800 kPa 미만의 압력에서 수행되는, 공정.
  130. 제121항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 적용된 압력은 약 400kPa 내지 약 800 kPa, 약 400kPa 내지 약 750 kPa, 약 400kPa 내지 약 700 kPa, 약 400kPa 내지 약 650 kPa, 약 400kPa 내지 약 600 kPa 또는 약 400kPa 내지 약 500kPa인, 공정.
  131. 제121항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 프레스, 선택적으로 스크류 프레스 또는 유압 프레스를 사용하여 수행되는, 공정.
  132. 제121항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 분리는 식물 단편을 2회 압착하는 것을 포함하는, 공정.
  133. 제132항에 있어서, 2회 압착은 수득된 식물 거대섬유 분획을 (예를 들어, 물 또는 재순환 액체로) 재수화하여 재수화된 식물 거대섬유 현탁액을 얻고 재수화된 식물 거대섬유 현탁액으로부터 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 것을 포함하는, 공정.
  134. 제121항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 체질, 압력 체질, 원심분리 및/또는 경사분리에 의한 분리를 포함하는, 공정.
  135. 제121항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  136. 제135항에 있어서, 제2 거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  137. 제136항에 있어서, 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  138. 제135항 또는 제137항에 있어서, 제2 미세섬유 분획은 미세섬유 분획과 조합되는, 공정.
  139. 제121항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액 중 고체 입자의 적어도 75%는 약 5 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는 것인, 공정.
  140. 제121항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 분리는 약 15℃ 내지 약 42℃, 약 20℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  141. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계는 엽록체를 침강시키는 단계 및 선택적으로 침강된 엽록체를 단리하는 단계를 포함하는, 공정.
  142. 제141항에 있어서, 엽록체는 미세섬유 고갈된 현탁액을 약 4.0 내지 약 5.5, 약 4.2 내지 약 5.2, 약 4.4 내지 약 5.2, 약 4.6 내지 약 5.2 또는 4.8 내지 약 5.2의 pH로 산성화함으로써 침강되는, 공정.
  143. 제142항에 있어서, 산성화는 미세섬유 고갈된 현탁액을 산과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  144. 제143항에 있어서, 산은 4-C 유기산, 5-C 유기산 또는 시트르산인, 공정.
  145. 제141항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 침강된 엽록체는 약 2000 g 내지 약 15,000 g, 약 2000 g 내지 약 10,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘에서 원심분리에 의해 단리되는, 공정.
  146. 제121항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 접선 흐름 여과, 한외여과, 응고, 응집 및/또는 전기응고에 의해 분리되는, 공정.
  147. 제121항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 선택적으로 300 kDa 및/또는 0.2 미크론의 필터를 사용하여 접선 흐름 여과에 의해 분리되는, 공정.
  148. 제121항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 세척은 엽록체 현탁액을 재현탁시키고 엽록체를 재단리하는 것을 포함하는, 공정.
  149. 제121항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 현탁액은 약 2 내지 약 3의 액체:현탁액 비율로 재현탁되는, 공정.
  150. 제149항에 있어서, 재현탁된 엽록체 현탁액은 약 0.2 M 내지 약 0.7 M 또는 약 0.25 M 내지 약 0.6 M의 몰농도를 갖는 것인, 공정.
  151. 제148항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리 단계는 재현탁된 엽록체 현탁액의 원심분리, 응고, 응집 및/또는 침강을 포함하는, 공정.
  152. 제148항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리는 약 2,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘으로 재현탁된 엽록체 현탁액을 원심분리하는 것을 포함하는, 공정.
  153. 제121항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 세척은 엽록체를 재현탁 및 재단리하는 2회를 포함하는, 공정.
  154. 제121항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액을 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가 3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  155. 제121항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액의 염도 및/또는 몰농도를 조정하는 것을 포함하는, 공정.
  156. 제155항에 있어서, 엽록체 현탁액의 염도는 약 2% 내지 약 4%, 선택적으로 약 3.5%로 조정되는, 공정.
  157. 제155항에 있어서, 엽록체 현탁액의 몰농도는 약 0.25M 내지 약 0.7M, 선택적으로 내지 약 0.6M로 조정되는, 공정.
  158. 제121항 내지 제157항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 제형화제 (예를 들어 증점제, 분산제, 겔화제, 담화 제제), 보존제, 식품 보충물, 오메가-3 지방산 (예를 들어 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  159. 제121항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 개질된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에 엽록체 현탁액을 포장하는 것을 포함하는, 공정.
  160. 제121항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 폴리머 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명 폴리머 파우치 또는 백에 엽록체 현탁액을 포장하는 것을 포함하는, 공정.
  161. 제121항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 캡슐, 선택적으로 불투명 캡슐에 캡슐화하는 것을 포함하는, 공정.
  162. 제121항 내지 제161항 중 어느 한 항의 공정에 따라 수득된, 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 액체 엽록체 조성물로서,
    비-엽록체 세포 함량 또는 엽록체 외부의 가용성 함량의 적어도 75% 또는 약 75% 내지 약 95%는 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 제거되고/되거나,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 액체 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  163. 콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 약 8% 미만의 수분 함량을 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  164. 콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  165. 콩과 식물로부터 단리되는 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과의 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  166. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 참조 메디카고 종 식물에 비해 0.3 mg/g 내지 약 2.4 mg/g (건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량의 감소를 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  167. 콩과 식물로부터 단리되고 물에 현탁된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 약 1.0 내지 약 6.4 mg/g(건조 기준)의 메디카겐산 사포닌 함량을 갖고, 조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  168. 제163항 내지 제167항 중 어느 한 항에 있어서, 식물은 알팔파인, 조성물.
  169. 제163항 내지 제168항 중 어느 한 항에 있어서, 수분 함량은 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1% 미만인, 조성물.
  170. 제163항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 건조 형태인, 조성물.
  171. 제163항 내지 제170항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물은 분말 형태인, 조성물.
  172. 제163항 내지 제171항 중 어느 한 항에 있어서, 항산화제, 향균제, 선택적으로 정균제 또는 살균제, 살진균제 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 조성물.
  173. 제163항 내지 제171항에 있어서, 항산화제 및/또는 향균제를 추가로 포함하는, 조성물.
  174. 제173항에 있어서, 항산화제 및/또는 향균제는 시트르산, 메타중아황산염, 벤조산염, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 메타중아황산칼륨, 벤조산나트륨 또는 벤조산칼륨인, 조성물.
  175. 제163항 내지 제174항 중 어느 한 항에 있어서, 오메가-3 지방산 (예를 들어 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 비타민, 또는 이들의 혼합물을 추가로 포함하는, 조성물.
  176. 제163항 내지 제175항 중 어느 한 항에 있어서, 고체 함량의 적어도 약 40 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 50 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 60 중량% 내지 약 90 중량%, 적어도 약 70 중량% 내지 약 90 중량% 또는 적어도 약 75 중량% 내지 약 90 중량%는 엽록체로 구성되는, 조성물.
  177. 제163항 내지 제176항 중 어느 한 항에 있어서, 조성물에 포함된 고체 입자의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 약 5 미크론 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는, 조성물.
  178. 제163항 내지 제177항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 외막 무결성을 갖는, 조성물.
  179. 제163항 내지 제178항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 보존된 내막 무결성을 갖는, 조성물.
  180. 제163항 내지 제179항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90%는 참조 콩과 식물에 포함된 엽록체와 비교하여 대사 활성을 유지한 것인, 조성물.
  181. 제163항 내지 제180항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체의 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70% 또는 적어도 약 80%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 조성물.
  182. 제163항 내지 제181항 중 어느 한 항에 있어서, 45 중량% 초과의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  183. 제163항 내지 제182항 중 어느 한 항에 있어서, 약 45 중량% 내지 약 55 중량% 또는 약 48 중량% 내지 약 55 중량%의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  184. 제163항 내지 제182항 중 어느 한 항에 있어서, 약 48 중량% 내지 약 52 중량%의 단백질 함량을 갖는, 조성물.
  185. 제163항 내지 제184항 중 어느 한 항에 있어서, 약 300,000 IU/100g 초과의 베타-카로틴 함량을 갖는, 조성물.
  186. 제163항 내지 제185항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20 mg/g 초과, 약 25 mg/g 초과 또는 약 30 mg/g 초과의 엽록소 함량을 갖는, 조성물.
  187. 제163항 내지 제186항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.6 mg/g 초과의 크산토필 루테인 함량을 갖는, 조성물.
  188. 제163항 내지 제187항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 μmole의 TE/100g 초과의 항산화제 함량을 갖는, 조성물.
  189. 제163항 내지 제188항 중 어느 한 항에 있어서, 약 20,000 000 μmole TE/100g 내지 약 24,000 000 μmole TE/100g의 항산화제 함량을 갖는, 조성물.
  190. 제163항 내지 제189항 중 어느 한 항에 있어서, 약 5 중량% 내지 약 15 중량%, 약 10 중량% 내지 약 15 중량% 또는 약 10 중량% 내지 약 12 중량%의 지질 함량을 갖는, 조성물.
  191. 제163항 내지 제190항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 중량% 초과의 오메가-3 지방산 함량, 선택적으로 에이코사펜타엔산 및/또는 도코사헥사엔산 함량을 갖는, 조성물.
  192. 제163항 내지 제191항 중 어느 한 항에 있어서, 약 2 중량% 내지 약 10 중량% 또는 약 2 중량% 내지 약 6 중량%의 오메가-3 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  193. 제163항 내지 제192항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 초과의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  194. 제163항 내지 제193항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1% 내지 약 10% 또는 약 1% 내지 약 4%의 오메가-6 지방산 함량을 갖는, 조성물.
  195. 제163항 내지 제194항 중 어느 한 항에 있어서, 약 1.5 내지 약 3의 오메가-3 지방산/오메가-6 지방산 비율을 갖는, 조성물.
  196. 제163항 내지 제195항 중 어느 한 항에 있어서, 약 0.2 내지 약 0.4의 지질/단백질 비율을 갖는, 조성물.
  197. 제163항 내지 제196항 중 어느 한 항에 있어서, pH는 약 5.0 미만, 약 4.8 미만, 약 4.7 미만, 약 4.6 미만, 약 4.5 미만, 약 4.4 미만, 약 4.3 미만 또는 약 4.2 미만인, 조성물.
  198. 제163항 내지 제197항 중 어느 한 항에 있어서, 50 중량% 초과의 단백질 함량 및 약 25 mg/g 초과의 엽록소 함량을 가지며, 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전한 엽록체인, 현탁액.
  199. 제163항 내지 제198항 중 어느 한 항에 있어서, 캡슐, 선택적으로 불투명 캡슐에 캡슐화되는, 조성물.
  200. 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하고, 선택적으로 N2 또는 질소로 채워진 밀봉된 통 또는 용기 내에 배치되는 즉시 사용 가능한 액체 엽록체 조성물.
  201. 동물 및/또는 인간을 먹이기 위한, 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 건조 엽록체 조성물의 용도.
  202. 동물 및/또는 인간을 위한 식품의 제조에서의 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 건조 엽록체 조성물의 용도.
  203. 동물 및/또는 인간을 위한 영양적 보충물의 제조에서의 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 건조 엽록체 조성물의 용도.
  204. 해양 유기체를 먹이는 방법으로서, 상기 해양 유기체를 위한 식이에 제공된 미세조류 및/또는 시아노박테리아의 적어도 일부를 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 건조 엽록체 조성물로 대체하는 것을 포함하는, 방법.
  205. 제204항에 있어서, 해양 유기체를 먹이기 전에 건조 엽록체 조성물을 재수화시키는 단계를 포함하는, 방법.
  206. 건조 엽록체 조성물의 제조 공정으로서,
    콩과 식물 단편을 제공하는 단계;
    식물 단편으로부터 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 단계;
    거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 식물 미세섬유를 분리하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액을 수득하는 단계;
    미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계;
    엽록체 현탁액을 수득하는 단계;
    엽록체 현탁액을 세척하는 단계; 및
    세척된 엽록체 현탁액을 컨디셔닝하여 건조 엽록체 조성물을 수득하는 단계를 포함하고,
    조성물에 포함된 엽록체의 적어도 75%는 예를 들어 동적 광 산란 측정 및 분석에 의해 결정 시 온전하고, 그리고
    선택적으로 세척된 엽록체 현탁액 및/또는 건조 엽록체 조성물은 엽록체 현탁액 중 루비스코 함량의 약 90%를 포함하고,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 공정:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  207. 제206항에 있어서, 건조 엽록체 조성물은 약 8% 미만, 선택적으로 5% 미만의 수분 함량을 갖는, 공정.
  208. 제207항 또는 제207항에 있어서, 콩과 식물은 메디카고 종 식물인, 공정.
  209. 제206항 내지 제208항 중 어느 한 항에 있어서, 식물은 알팔파인, 공정.
  210. 제206항 내지 제209항 중 어느 한 항에 있어서, 발포방지제를 제공하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  211. 제206항 내지 제210항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 6시간 미만, 4시간 미만, 3시간 미만, 2시간 미만 또는 1시간 미만에 수행되는, 공정.
  212. 제206항 내지 제211항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 식물 단편의 제공으로부터 약 1시간 내지 약 6시간에 수행되는, 공정.
  213. 제206항 내지 제212항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 42℃ 이하의 온도에서 수행되는, 공정.
  214. 제206항 내지 제213항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 4℃ 내지 약 42℃, 약 15℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  215. 제206항 내지 제214항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 약 800 kPa 미만의 압력에서 수행되는, 공정.
  216. 제206항 내지 제215항 중 어느 한 항에 있어서, 적용된 압력은 약 400kPa 내지 약 800 kPa, 약 400kPa 내지 약 750 kPa, 약 400kPa 내지 약 700 kPa, 약 400kPa 내지 약 650 kPa, 약 400kPa 내지 약 600 kPa 또는 약 400kPa 내지 약 500kPa인, 공정.
  217. 제206항 내지 제216항 중 어느 한 항에 있어서, 거대섬유 고갈된 현탁액의 분리는 프레스, 선택적으로 스크류 프레스 또는 유압 프레스를 사용하여 수행되는, 공정.
  218. 제206항 내지 제217항 중 어느 한 항에 있어서, 분리는 식물 단편을 2회 압착하는 것을 포함하는, 공정.
  219. 제218항에 있어서, 2회 압착은 수득된 식물 거대섬유 분획을 (예를 들어, 물 또는 재순환 액체로) 재수화하여 재수화된 식물 거대섬유 현탁액을 얻고 재수화된 식물 거대섬유 현탁액으로부터 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 분리하는 것을 포함하는, 공정.
  220. 제206항 내지 제219항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 체질, 압력 체질, 원심분리 및/또는 경사분리에 의한 분리를 포함하는, 공정.
  221. 제206항 내지 제220항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  222. 제219항에 있어서, 제2 거대섬유 고갈된 현탁액으로부터 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계를 추가로 포함하는, 공정.
  223. 제222항에 있어서, 제2 미세섬유 분획을 분리하는 단계는 약 20 미크론 내지 약 155 미크론, 약 30 미크론 내지 약 90 미크론, 약 40 미크론 내지 약 90 미크론 또는 약 80 미크론 내지 약 90 미크론의 크기를 갖는 체를 사용하여 제2 거대섬유 고갈된 현탁액을 여과하는 것을 포함하는, 공정.
  224. 제222항 또는 제223항에 있어서, 제2 미세섬유 분획은 미세섬유 분획과 조합되는, 공정.
  225. 제206항 내지 제224항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액 중 고체 입자의 적어도 75%는 약 5 내지 약 10 미크론의 평균 크기를 갖는 것인, 공정.
  226. 제206항 내지 제225항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 분리는 약 15℃ 내지 약 42℃, 약 20℃ 내지 약 38℃, 약 20℃ 내지 약 34℃ 또는 약 25℃ 내지 약 34℃의 온도에서 수행되는, 공정.
  227. 제206항 내지 제226항 중 어느 한 항에 있어서, 미세섬유 고갈된 현탁액으로부터 엽록체를 분리하는 단계는 엽록체를 침강시키는 단계 및 선택적으로 침강된 엽록체를 단리하는 단계를 포함하는, 공정.
  228. 제227항에 있어서, 엽록체는 미세섬유 고갈된 현탁액을 약 4.0 내지 약 5.5, 약 4.2 내지 약 5.2, 약 4.4 내지 약 5.2, 약 4.6 내지 약 5.2 또는 4.8 내지 약 5.2의 pH로 산성화함으로써 침강되는, 공정.
  229. 제228항에 있어서, 산성화는 미세섬유 고갈된 현탁액을 산과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  230. 제229항에 있어서, 산은 4-C 유기산, 5-C 유기산 또는 시트르산인, 공정.
  231. 제227항 내지 제230항 중 어느 한 항에 있어서, 침강된 엽록체는 약 2000 g 내지 약 15,000 g, 약 2000 g 내지 약 10,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘에서 원심분리에 의해 단리되는, 공정.
  232. 제206항 내지 제231항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 접선 흐름 여과, 한외여과, 응고, 응집 및/또는 전기응고에 의해 분리되는, 공정.
  233. 제206항 내지 제231항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체는 선택적으로 300 kDa 및/또는 0.2 미크론의 필터를 사용하여 접선 흐름 여과에 의해 분리되는, 공정.
  234. 제206항 내지 제233항 중 어느 한 항에 있어서, 세척은 엽록체 현탁액을 재현탁시키고 엽록체를 재단리하는 것을 포함하는, 공정.
  235. 제206항 내지 제234항 중 어느 한 항에 있어서, 엽록체 현탁액은 약 2 내지 약 3의 액체:현탁액 비율로 재현탁되는, 공정.
  236. 제235항에 있어서, 재현탁된 엽록체 현탁액은 약 0.2 M 내지 약 0.7 M 또는 약 0.25 M 내지 약 0.6 M의 몰농도를 갖는 것인, 공정.
  237. 제206항 내지 제236항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리 단계는 재현탁된 엽록체 현탁액의 원심분리, 응고, 응집 및/또는 침강을 포함하는, 공정.
  238. 제206항 내지 제236항 중 어느 한 항에 있어서, 재단리는 약 2,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 15,000 g, 약 4,000 g 내지 약 10,000 g 또는 약 10,000 g의 힘으로 재현탁된 엽록체 현탁액을 원심분리하는 것을 포함하는, 공정.
  239. 제206항 내지 제238항 중 어느 한 항에 있어서, 세척은 엽록체를 재현탁 및 재단리하는 2회를 포함하는, 공정.
  240. 제206항 내지 제239항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액, 선택적으로 세척된 엽록체 현탁액을 보존제/항산화제, 선택적으로 메타중아황산나트륨, 오메가 3 지방산, 오메가-6 지방산, 비타민 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  241. 제206항 내지 제240항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 세척된 엽록체 현탁액을 45℃ 이하의 온도에서 건조시키는 것을 포함하는, 공정.
  242. 제206항 내지 제241항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 세척된 엽록체 현탁액을 20℃ 내지 44℃의 온도에서 건조시키는 것을 포함하는, 공정.
  243. 제241항 또는 제242항에 있어서, 건조는 분무 건조, 드럼 건조, 냉동 건조, 미립화 또는 유동층을 사용하여 수행되는, 공정.
  244. 제206항 내지 제243항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 제형화제 (예를 들어 증점제, 분산제, 겔화제, 담화 제제), 보존제, 식품 보충물, 오메가-3 지방산 (예를 들어 에이코사펜타엔산 또는 도코사헥사엔산), 오메가-6 지방산, 또는 이들의 혼합물과 혼합하는 것을 포함하는, 공정.
  245. 제206항 내지 제244항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 개질된 분위기 또는 불활성 분위기, 선택적으로 N2 또는 질소 하에 엽록체 현탁액을 포장하는 것을 포함하는, 공정.
  246. 제206항 내지 제245항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 폴리머 파우치 또는 백, 선택적으로 불투명 폴리머 파우치 또는 백에 엽록체 현탁액을 포장하는 것을 포함하는, 공정.
  247. 제206항 내지 제246항 중 어느 한 항에 있어서, 컨디셔닝은 엽록체 현탁액을 캡슐, 선택적으로 불투명 캡슐에 캡슐화하는 것을 포함하는, 공정.
  248. 제206항 내지 제247항 중 어느 한 항의 공정에 따라 수득된 건조 엽록체 조성물.
  249. 제39항 내지 제74항 및 제121항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서, 콩과 식물 단편으로부터의 사포닌의 약 20% 내지 약 95%, 약 20% 내지 약 30%, 약 70% 내지 약 95%, 약 70% 내지 약 90%, 약 70% 내지 80%, 약 80% 내지 약 90%, 약 90% 내지 약 95%, 또는 90% 초과를 제거하는, 공정.
  250. 엽록체와 물을 포함하는 엽록체 현탁액으로서, 하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 엽록체 현탁액:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  251. 콩과 식물로부터 단리된 엽록체를 포함하는 건조 엽록체 조성물로서, 약 8% 미만의 수분 함량을 가지며,
    하기로부터 선택된 적어도 하나의 비율을 갖는, 건조 엽록체 조성물:
    약 50 내지 약 130, 약 80 내지 약 120, 약 90 내지 약 110, 약 95 내지 약 105, 약 97 내지 약 100 또는 약 98 내지 100의 엽록소/FBPP의 비율로서, 엽록소/FBPP의 비율은 이고, FBPP 강도는 면역블롯에 의해 측정되는 엽록소/FBPP의 비율,
    약 25 내지 약 65, 약 30 내지 약 60, 약 35 내지 약 55, 약 40 내지 약 50, 또는 약 43 내지 약 49의 루비스코/엽록소의 비율로서, 루비스코/엽록소의 비율은 이고 루비스코 강도는 면역블롯에 의해 측정되는, 루비스코/엽록소의 비율,
    약 2.5 ng/mg 내지 약 6.5 ng/mg, 약 3.0 ng/mg 내지 약 6.0 ng/mg, 약 3.5 ng/mg 내지 약 5.5 ng/mg, 약 4.0 ng/mg 내지 약 5.0 ng/mg, 또는 약 4.3 ng/mg 내지 약 4.7 ng/mg의 루비스코/엽록소의 비율로서, 인 루비스코/엽록소의 비율, 및
    약 18 내지 약 100, 약 40 내지 약 90, 약 50 내지 약 80, 약 55 내지 약 75, 약 60 내지 약 70의 루비스코/FBPP의 비율로서, 인 루비스코/FBPP의 비율.
  252. 화장품의 제조에서의, 제77항 내지 제117항 중 어느 한 항의 액체 엽록체 조성물의 용도.
  253. 화장품의 제조에서의, 제163항 내지 제199항 중 어느 한 항의 건조 엽록체 조성물의 용도.
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