KR20230091978A - 면역원성 항원 - Google Patents

면역원성 항원 Download PDF

Info

Publication number
KR20230091978A
KR20230091978A KR1020237017151A KR20237017151A KR20230091978A KR 20230091978 A KR20230091978 A KR 20230091978A KR 1020237017151 A KR1020237017151 A KR 1020237017151A KR 20237017151 A KR20237017151 A KR 20237017151A KR 20230091978 A KR20230091978 A KR 20230091978A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
epitope
immunogenic
protein
epitopes
antibody
Prior art date
Application number
KR1020237017151A
Other languages
English (en)
Inventor
제프리 디. 피셔
클라라 제이. 세이
루크 티. 다움
제럴드 더블유. 피셔
Original Assignee
롱혼 백신즈 앤드 다이어그나스틱스, 엘엘씨
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 롱혼 백신즈 앤드 다이어그나스틱스, 엘엘씨 filed Critical 롱혼 백신즈 앤드 다이어그나스틱스, 엘엘씨
Publication of KR20230091978A publication Critical patent/KR20230091978A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/35—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/04—Mycobacterium, e.g. Mycobacterium tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/09—Lactobacillales, e.g. aerococcus, enterococcus, lactobacillus, lactococcus, streptococcus
    • A61K39/092—Streptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/102—Pasteurellales, e.g. Actinobacillus, Pasteurella; Haemophilus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/641—Branched, dendritic or hypercomb peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1018—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
    • C07K16/1289—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Mycobacteriaceae (F)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55572—Lipopolysaccharides; Lipid A; Monophosphoryl lipid A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6043—Heat shock proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Abstract

본 발명은 포유류에서 면역 반응을 유도하는 하나 이상의 병원체의 항원성 에피토프로부터 수득되거나 또는 유래하는 항원, LTA, PNG 또는 LPS와 같은 포유류에서 면역 반응을 유도하는 박테리아 세포벽 물질로부터 수득되거나 또는 유래하는 항원, 및 CRM과 같은 T 세포 자극 항원을 포함하는 복합 항원에 관한 것이다. 바람직하게는, 복합 항원은 병원체에 대해 효과적이거나 또는 병원체에 의한 감염으로부터 보호하는 수집될 수 있는 항체를 생성할 수 있는, 면역원성 조성물 또는 백신을 포함한다. 또한, 본 발명은 복합 항원을 포함하는 백신, 및 감염을 치료 및 예방하는 방법에 관한 것이다.

Description

면역원성 항원
관련 출원에 대한 참조
본 출원은 2020년 10월 20일자 미국 가출원번호 63/094,116, 2020년 10월 21일자 미국 가출원번호 63/094,472 및 2021년 9월 21일자 미국 가출원번호 63/246,360에 대해 우선권을 주장하며, 각 문헌은 그 전체가 원용에 의해 구체적으로 통합된다.
서열목록
본 출원은 ASCII 형식으로 전자 제출된 서열목록을 수록하고 있으며, 그 전체가 원용에 의해 본원에 포함된다. 이러한 ASCII 복사본은 2021년 10월 15일자에 생성되었으며, 파일명 3022_051_PCT_SL.txt 및 크기 11,763 바이트이다.
1 발명의 분야
본 발명은 에피토프 여러개로 구성된 복합 항원 (composite antigen) 및 복합 항원을 이용한 면역 반응을 구축하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 T 세포 자극 에피토프 및/또는 보강제를 함유할 수 있는, 박테리아 세포벽 성분에 특이적인 에피토프, 복합 에피토프 (composite epitopes) 및 미모토프 (mimotopes)를 비롯하여, 하나 이상의 병원체에 특이적인 에피토프, 복합 에피토프 및 미모토프를 함유한 복합 항원을 포함하는 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 복합 항원을 포함하는 면역원성 조성물, 복합 항원을 포함하는 백신, 복합 항원에 대한 항체, 및 복합 항원을 이용해 면역 반응을 구축하는 방법에 관한 것이다.
동물에서 미생물 병원체는 감염성 질환의 주요 요인이다. 병원체 및 그 숙주는 생존 및 증식을 위해 끊임없이 경쟁하면서 서로 계속 적응한다. 어떤 병원체는 포유류 숙주에 감염하여 숙주 면역 반응에 노출되더라도 심지어 수년 또는 수십년 동안 생존하는데 엄청난 성공을 거두고 있다. 이러한 상당한 성공을 거두고 있는 포유류 병원체로는 박테리아, 바이러스 및 단세포성 및 다세포성 진핵생물, 예를 들어 진균 및 기생 유기체가 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.
현재, 병원성 유기체의 전파는 백신과 같은 하나 이상의 면역원성 조성물을 이용한 백신 접종 및/또는 치료를 통해 동물 집단에서 제어한다. 불활화되거나 또는 사멸된 유기체, 단순히 항원을 함유한 백신이 현재 전세계적으로 사용되고 있으며, 특히 유아, 노인, 적절한 건강 관리되지 않는 개체 및 면역저하 개체와 같은 고-위험군에서 사용이 권장된다. 다수의 백신이 화학적 수단에 의해 불활화된 미생물 및 정제된 항원을 함유한다. 세계보건기구 (WHO)는 특정 지역에서 가장 유행하는 것으로 보이는 것에 대해 백신을 개발하고자 하는 목적으로 특이적인 혈청형에 대한 정기적인 보고를 제공함으로써 전 세계적으로 효율을 극대화한다. 역사적으로 대유행은 수개월 이내에 다른 대륙으로 확산하고, 향후 대유행은 국제 여행 증가로 인해 더 빨리 전파될 것으로 보인다. 임의의 향후 광범위한 발병 또는 대유행이 최초로 발생한 시점에는 기존 수단에 의해 제조되는 유효한 백신은 이용가능하지 않거나 또는 공급이 매우 부족할 것임은 불가피할 것이다.
그람 양성 박테리아가 병원 감염의 주 요인이다. 병원에서 가장 흔한 병원성 분리주는 엔테로코커스 spp. (Enterococcus spp.), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 코아굴라제-음성의 스타필로콕시 (coagulase-negative Staphylococci) 및 스트렙토코커스 뉴모니애 (Streptococcus pneumonia)이며 (예를 들어, Principles and Practice of Infectious Diseases, 4th ed. Mandell G L, Bennett J E, Dolin R, ed. Churchill Livingstone, New York 1995 참조), 이 중 다수가 하나 이상의 항생제에 내성이다. 엔테로코커스 spp.는 인간에서 정상적인 장내세균총의 일부이다. 17종 이상의 엔테로코커스 종들 중 유일하게 엔테로코커스 패칼리스 (E. faecalis)와 엔테로코커스 패슘 (E. faecium)만 일반적으로 검출가능한 수로 인간에 상주하고 감염된다 (엔테로코커스 패칼리스는 인간 감염의 약 80%에서 단리되고, 엔테로코커스 패슘은 나머지 대부분에서 단리됨).
스타필로콕시 (Staphylococci)는 표재성 농양 (예, 부스럼, 맥립종, 종기 및 기타 국소 농양)에서 심부 감염증 (예, 골수염, 폐렴, 심내막염, 요로 감염, 화농성 관절염, 수막염, 수술 후 창상 감염, 패혈증 및 식중독)에 이르는 매우 다양한 질환을 유발한다. 스타필로코커스 아우레우스는 수술 상처의 병원 획득 (병원내) 감염의 주 요인이고, 스타필로코커스 에피더미디스는 내재성 의료 기구와 관련한 감염을 유발한다 (예를 들어, Silverstein et al., 1990; Patti et al., 1994; Dann et al., 1994 참조).
다중 항생제 내성이 스타필로코커스 아우레우스 및 스타필로코커스 에피더미디스에서 공통적으로 증가하고 있다. 스타필로코커스에 속하는 병원 균주는 종종 다수의 여러 항생제에 대해 내성이다. 스타필로코커스 에피더미스의 병원 분리주는 또한 메티실린 등의 수종의 항생제에 대해 내성이다. 아울러, 스타필로코커스 아우레우스는 4급 암모늄 화합물과 같은 소독제 및 살균제에 대해 내성을 나타내며, 병원 환경에서의 이의 생존에 일조할 수 있다.
마이코박테리움 투베르쿨로시스 (Mycobacterium tuberculosis, MTB)는 그람 양성으로 약하게 염색되고, 마이코박테리아세아에 (Mycobacteriaceae) 과에 속하는 병원성 박테리아 종으로, 대부분의 결핵 (TB) 사례의 원인 물질이다. 이 속의 다른 종으로는 연구실에서 사용되는 마이코박테리움 스메그마티스 (M. smegmatis)와 한센병의 원인 물질로서 마이코박테리움 레프래 (M. leprae)가 있다. MTB는 1882년에 Robert Koch에 의해 처음으로 발견되었으며, 마이코박테리움 투베르쿨로시스는 세포가 그람 염색되지 않게 만드는 특이하고 복잡한 지질이 풍부한 피막을 가지고 있다. 그래서 이의 진단에는 대신 항산성 검출 기법 (Acid-fast detection technique)을 이용한다. 마이코박테리움 투베르쿨로시스의 생리는 고 호기성이며, 생존 유지에 상당한 수준의 산소를 요한다. 주로 포유류 호흡기의 병원체로서 MTB는 일반적으로 흡입에 의해 유입되고, 개체의 5-10%에서 급성 폐 감염으로 진행된다. 나머지 개체는 감염이 완전히 제거되거나 또는 감염이 잠복 상태로 전환될 수 있다. 면역계가 MTB를 방제하는 방식은 명확하지 않지만, 세포 매개 면역이 핵심적인 역할을 하는 것으로 보인다 (Svenson et al., Human Vaccines, 6-4:309-17, 2010). TB에 대한 일반적인 진단 방법은 투베르쿨린 피부 검사, 항산성 염색 및 흉부 방사선 촬영이다.
마이코박테리움 투베르쿨로시스는 증식에 산소를 필요로 하며, 세포벽의 높은 지질 함량으로 인해 전형적인 세균학적 염색 (bacteriological stain)을 유지하지 않는다. 마이코박테리아는 실증적 관점에서 그람 양성 범주에 맞지 않으며 (즉, 크리스탈 바이올렛 염색되지 않음), 외측 세포막이 없어 항산성 그람 양성 세균으로 분류된다.
그람 음성 박테리아는 박테리아를 분류하는 그람 염색 방법에 사용되는 크리스탈 바이올렛 염료에 의해 염색되지 않는 박테리아이다. 이는 내부 세포질 세포막과 박테리아 바깥쪽 막 사이에 끼인 얇은 펩티도글리칸 세포벽으로 구성된 세포 외피 (cell envelope)를 특징으로 한다. 그람 음성 박테리아는 도처에서, 실제 생명체를 뒷받침하는 지구상의 거의 모든 환경에서 발견된다. 그람 음성 박테리아로는 모델 유기체 에세리키아 콜라이(Escherichia coli) 뿐 아니라 슈도모나스 에어루지노사 (Pseudomonas aeruginosa), 클라미디아 트라코마티스 (Chlamydia trachomatis) 및 예르시니아 페스티스 (Yersinia pestis) 등의 다수의 병원성 박테리아 등이 있다. 이들의 바깥쪽 막이 여러 항생제 (페니실린 등); 보통 (내부) 세포 막의 펩티도글리칸을 손상시키는 디터전트; 및 선천 면역계의 일부를 구성하는 동물에 의해 생산되는 항미생물 효소인 리소자임으로부터 자신을 보호하므로, 의학적으로 중대한 문제가 된다. 아울러, 이 막의 바깥쪽 엽 (outer leaflet)은 박테리아가 면역 세포에 의해 세포용혈되었을 때 독성 반응을 유발할 수 있는 지질 A 성분을 가진 복잡한 리포폴리카사라이드 (LPS)를 함유하고 있다. 이러한 독성 반응으로는 열, 호흡수 증가 및 저혈압 등이 있을 수 있으며, 이는 패혈증 쇼크로 알려진 생명을 위협하는 병태일 수 있다.
상당 부분 고속 서열분석 기법의 출현으로, 다양한 균주를 비롯한 이들 모든 병원체로부터 유래한 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩타이드들은 국립 생물공학정보센터 (National Library of Medicine, National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA)와 같이 공개적으로 이용가능한 데이터베이스에서 확인된다. 박테리아 및 기타 유기체의 원액은 American Type Culture Collection (Manassas, VA, USA) 및 다른 공개적으로 이용가능한 출처로부터 입수할 수 있다.
패혈증 쇼크는 중환자실 환자에서 흔한 사망 원인으로, 그람 양성 박테리아의 펩티도글리칸 (PGN) 및 리포테이코산 (LTA)과 그람 음성 박테리아의 LPS를 함유한 박테리아의 세포벽 성분에 의해 유발된다. 이들 박테리아는 단독으로 또는 조합하여 혈류에 침범하거나 또는 세포벽 성분을 혈류와 조직으로 방출시켜, 쇼크 및 다기관 부전을 일으킬 수 있다. 초-정제된 PGN 및 LTA를 함유한 비-정제 PGN을 이용해, 각 세포벽 성분에 결합하는 PGN 및 LTA에 특이적인 특이 항체들이 개발되었다. 아울러, 세포벽 성분에 대한 항체는 박테리아의 옵소닌탐식 살상 활성 (opsonophagocytic killing activity, OPKA)을 촉진하여 혈액으로부터 소거를 촉진할 수 있다. LTA 또는 PGN에 대한 항체는 OPKA를 촉진하고 동시에 박테리아 사균 및 손상된 박테리아로부터 유래한 세포벽 단편에 결합하여, 그람 양성 박테리아에 대한 면역을 강화할 수 있다. 이러한 항체는 이용가능하지 않거나 또는 너무 늦게 투여할 경우, 세포벽 성분이 염증 반응의 과잉을 유발하고 조직 손상과 쇼크를 촉진하는 사이토카인 및 케모카인을 유도하도록 작용한다. 이러한 면역 반응의 과도한 자극은 흔히 사이토카인 폭풍으로 지칭되는데, 숙주에 매우 유해하고, 종종 사망으로 이어진다.
과거 50년간 미생물에 대해 보호성 면역 반응을 유발할 수 있는 백신이 생산되었다. 백신은 바이러스, 박테리아 또는 진균에 의해 유발되었든 간에 광범위한 질환으로부터 인간을 보호하는데 매우 효과적이었다. 백신이 이러한 광범위한 병원성 유기체에 대해 특이적인 보호를 유발하는 능력은 특이적인 체액성 항체 반응뿐 아니라 세포-매개 반응을 자극하는 능력으로부터 비롯한다. 일부 물질은 최소한의 화학적 변형으로도 면역 반응을 자극할 수 있는데, 예를 들어, 파상풍 톡소이드는 심지어 보강제 없이도 면역원성을 나타낸다. 다른 중요한 물질은 비-면역원성이거나 또는 면역원성이 충분하지 않지만, 왕성한 면역 반응을 유발할 수 있는 형태의 면역원성 분자 또는 구조체로 변환할 수 있다. 예를 들어, 대부분의 다당류는 면역원성이 낮다. 여기에 단백질을 커플링하면, 제조된 구조체는 면역원성이 된다. 다당류에 단백질의 커플링은 다당류를 면역원성이 약한 T 세포 비의존형 항원으로부터 T 세포 보조를 동원하는 T 세포 의존적인 항원으로 변환하게 되어, 증강된 면역 반응을 자극한다 (예, J. M. Cruse, et al. (Editors), Conjugate Vaccines, Karger, Basel, (1989); R. W. Ellis, et al. (Editors), Development and Clinical Uses of Haemophilus B Conjugate Vaccines, Marcel Dekker, N.Y. (1994) 참조). 잘 알려진 T 세포 자극 물질로는 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 디프테리아 톡소이드 (예를 들어, 천연 형태 및 재조합 형태의 CRM), 파상풍 톡소이드, 슈도모나스 (Pseudomonas) 엑소단백질 A, 슈도모나스 에어루지노사 (Pseudomonas aeruginosa) 톡소이드, 보르데텔라 퍼투시스 (Bordetella pertussis) 톡소이드, 클로스트리듐 퍼프린겐스 (Clostridium perfringens) 톡소이드, 에세리키아 콜라이 (Escherichia coli) 이열성 독소 B 서브유닛, 네이세리아 메닝기티디스 (Neisseria meningitidis) 외막 복합체, 헤모필러스 인플루엔자 단백질 D, 플라젤린 Fli C, 투구게 헤모시아닌, 및 이들의 단편, 유도체 또는 변형물 등이 천연 형태 및 재조합 형태를 둘다를 비롯하여 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다.
T 세포 자극 단백질과 다당류의 접합은 유익한 결과를 제공할 수 있다. 예를 들어, 단백질-다당류 접합체는 다당류 성분뿐 아니라 단백질 성분에 대해서도 항체 반응을 강화한다 (예, 미국 특허 No. 5,585,100). 이러한 효과는 또한 A. Lees, et al., "Enhanced Immunogenicity of Protein-Dextran Conjugates: I. Rapid Stimulation of Enhanced Antibody Responses to Poorly Immunogenic Molecules," Vaccine, Vol. 12, No. 13, (1994), pp. 1160 1166에 기술되어 있다.
다양한 박테리아 병원체의 끊임없는 출현 (또는 재출현)으로, 새로운 접합 백신이 계속 요구되고 있다. (혈청형, 하위 균주를 비롯한) 박테리아 균주의 빠른 돌연변이와 가변성으로 인해, 적합한 백신을 개발하기 위한 충분한 시간 안에 출현 유기체의 항원성 모이어티를 식별하기 매우 어렵고, 때로는 불가능하다. 신생 출현 또는 재출현 박테리아 균주의 폴리펩타이드 및 폴리뉴클레오티드 (특히 항원 유전자의 서열)가 특히 필요하다. 일부 항원이 숙주의 내부 환경과 가장 강하게 상호작용하는 경향이 있어, 숙주 면역 반응을 지배하고, 종종 숙주 면역계로부터 미생물을 보호한다. 이러한 면역-우성 (mmune-dominant) 항원이 일반적으로 백신에 가장 바람직하다. 반대로, 비-면역우성 항원은 숙주 면역 반응을 유발할 수 있긴 하지만, 전체 면역 반응에서 단지 일부만 차지한다. 이는, 항원이 미생물 표면의 틈 또는 접힌 부분에 위치하거나 또는 미생물의 돌출된 요소에 의해 둘러싸인 경우와 같이, 비-면역우성 항원이 숙주 면역계로부터 적어도 일부 차폐되기 때문에 발생하는 것으로 보인다. 비-면역우성 항원이 면역우성 항원에 비해 숙주 면역 압력에 반응하여 돌연변이되는 경향이 낮다.
CDC와 세계적인 질병 예방 주 기관에서는 유일한 최선의 감염 예방 방안이 정기적인 백신 접종에 의한 것임을 권고한다. 그러나, 기존 백신은 전형적으로 하나의 항원을 표적으로 한다. 기존 백신의 무용성은 또한 일부 미생물의 항원 소변이가 원인일 수 있다. 그 결과, 많은 사람이 효과적인 치료 방법 없이 미생물 감염 및 사이토카인 폭풍에 취약해질 수 있다. 이러한 시나리오는 특히 고 병원성 미생물과 관련있다.
하나 이상의 미생물에 대항하여 보호를 제공하는 백신을 투여하고 동시에 세포 표면 물질의 존재에 의해 유발되는 염증 반응을 약화하는 것이 유익할 것이다. 또한, 여러가지 병원체의 선별을 통해 효과적인 보호를 제공하게 될 백신을, 그리고 면역계 기능이 제한적인 개체들에서 효과적일 수 있는 백신을 단 한종 또는 제한된 수로 투여하는 것이 유익할 것이다. 이러한 백신은 다수의 개체 및 집단을 치료하는데 유용할 것이며, 기존 백신을 보완하는데 유용할 수 있어, 이들 모두 기존 병원체뿐 아니라 집단에서 신생 출현한 병원체에 대해서도 가능한 많은 개체에 대해 포괄적인 보호를 제공할 수 있다.
본 발명은 면역 반응을 구축하기 위한 새롭고 유용한 조성물뿐 아니라 도구 및 방법을 제공한다. 구체적으로, 본 발명은 하나 이상의 병원체의 항원 영역을 함유하며 이로부터 개발된 면역원성 조성물, 펩타이드, 백신 및 방법을 제공한다.
본 발명의 일 구현예는 펩타이드를 포함하는 항원에 관한 것이다. 펩타이드는, 바람직하게는 연속적인 서열 (contiguous sequence)로 놓이는, 2 이상의 항원성 에피토프 또는 하나 이상의 미모토프 (mimotope)가 커플링된 하나 이상의 에피토프를 포함한다. 본원에 기술된 바와 같은 항원성 펩타이드/조성물은 T 세포 자극 에피토프 및/또는 보강제를 추가로 포함한다. 이들 에피토프 중 임의의 것은 복합 에피토프 (composite epitope)이거나 또는 이를 포함할 수 있다. 본 발명의 면역원성 항원 (immunogenic antigen)은, 동일하거나 또는 다른 병원체일 수 있는, 그 에피토프를 가진 병원체 및/또는 그 미모토프가 유래한 에피토프를 가진 병원체에 기인할 수 있는 감염에 대해 면역을 형성하거나 또는 강화하는, 면역 반응을 포유류에서 유발한다.
바람직하게는, 면역원성 펩타이드/조성물은 하나 이상의 세포벽 항원 (CWA)에 특이적인 하나 이상의 항원성 에피토프; 및 보강제 및/또는 T 세포 자극 항원/에피토프 (TCSA)를 임의의 조합으로 포함한다. 예를 들어: CWA + 보강제; CWA-TCSA; TCSA-CWA-TCSA; CWA-TCSA-CWA 및 이들의 그외 조합 및 다중체 (multiples). 펩타이드 및 복합물 (composite)은 병원체 특이 항원 (PSA)의 에피토프 하나 이상을 임의 순서로 포함할 수 있다. 예를 들어: PSA + 보강제; PSA-TCSA-CSA; CSA-TCSA-PSA; TCSA-PSA-TCSA-CSA; TCSA-CSA-TCSA-PSA; PSA-TCSA-CSA-TCSA; CSA-TCSA-PSA-TCSA; PSA-TCSA-TCSA-CSA; TCSA-PSA-CSA-TCSA; TCSA-CSA-PSA-TCSA; 및 어느 것이 수회 반복될 수 있는, 이들의 조합, 복합 에피토프는 반복 에피토프를 비롯하여 여러가지 에피토프 조합으로 된 복합물을 포함하지만, 이로 제한되는 것은 아니다. 예를 들어, T 세포 자극 부분은 서로 다른 에피토프 또는 동일한 에피토프 2종 사이에, 어느 한쪽 또는 다른 쪽, 또는 양쪽에 있을 수 있다. 또한, 바람직하게는, 펩타이드의 서열들은 연속적이며, 동일한 조성물의 개별 성분이 아니다. 항원은 하나 이상의 병원체에 특이적인 에피토프를 포함할 수 있다. 면역원성 펩타이드/조성물은 바람직하게는 동일하거나 또는 다른 병원체의 하나 이상의 에피토프의 구조를 모방하는 미모토프를 포함한다. 미모토프는 이것이 기원한 에피토프와는, 바람직하게는 아미노산 서열 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상에서 차이가 있을 수 있다. 미모토프는 에피토프와 동일한 유기체의 동일 항원의 동일 영역으로부터 유래할 수 있으며, 균주 (strain), 혈청형, 종 또는 분리주와의 유전자 측면에서 에피토프와 상이할 수 있으며, 예를 들어, 다양한 유전자 영역들이 아미노산 서열 1개, 2개, 3개 또는 4개 차이를 가질 수 있다. 미모토프 에피토프의 서열은 병원체의 각 균주 또는 혈청형의 보존된 영역과 상이하다. 바람직하게는, 에피토프는 단일한 에피토프를 포함하고, 미모토프는 단일한 미모토프를 포함하며, 에피토프와 미모토프는 인접하다.
바람직한 보강제 제형은 프로인트 보강제, 리포솜, 사포닌, 지질 A, 스쿠알렌, 인지질로서 다이미리스토일 포스파티딜콜린 (DMPC), 다이팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC), 다이스테아릴 포스파티딜콜린 (DSPC), 다이미리스토일 포스파티딜글리세롤 (DMPG), 다이팔미토일 포스파티딜글리세롤 (DPPG) 및/또는 다이스테아릴 포스파티딜글리세롤 (DSPG)일 수 있는 하나 이상의 포스파티딜콜린 (PC) 및/또는 포스파티딜글리세롤 (PG), 콜레스테롤, 모노포스포릴 지질 A (MPLA) 및 사포닌을 포함하는 리포솜 이중층을 가진 유니라멜라 (unilamellar)를 포함한다. 또한, 바람직한 보강제로는 예를 들어, QS-21 (퀼리야 사포나리아 몰리나 (Quillaja saponaria Molina)로부터 추출된 사포닌 분획)과 3-O-데스아실-4'-모노포스포릴 지질 A (MPL; 살모넬라 미네소타로부터 유래한 리포폴리사카라이드의 무독성 유도체), 그리고 종종 Toll-유사 수용체 (예를 들어, TLR4)와 같은 리간드를 포함하는 리포솜-기반의 보강제인 AS01 (Adjuvant System 01), 보강제 Shingrix의 성분인 AS01b, 면역자극원으로서 포화 인지질, 콜레스테롤 및/또는 모노포스포릴 지질 A (MPLA)를 함유한 리포좀을 포함하는 ALF (Army Liposome Formulation) 등이 있다. ALF는 안전하고 효능이 강하다. AS01은 말라리아 백신 RTS,S (Mosquirix)에 함유되어 있다. ALF 변형물 및 유도체로는, 예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 ALF (ALFA), QS21 사포닌을 함유한 ALF (ALFQ), 및 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 ALFQ (ALFQA) 등이 있다. 본 발명의 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함할 수 있다.
일반적으로 미생물 병원체에 대항하여 보호성 면역 반응을 형성하는 것으로 간주되는 에피토프 및 미모토프는 그람 양성 박테리아, 그람 음성 박테리아, 신생 항원 (neoantigen) 및 숨겨진 항원 (cryptic antigen)을 함유한 진균으로부터 수득되거나 또는 유래한 에피토프 및 미모토프를 포함한다. 일반적으로 세포벽 물질에 대해 특이적인 면역 반응을 생성하는 것으로 간주되는 에피토프로는, 예를 들어, 당단백질, 세포벽에 결합된 다당류, N-아세틸글루코사민, 세포벽 폴리머, 하이드록시프롤린-풍부 당단백질 (HRGP), 알파 크리스탈린 도메인 (alpha crystallin domain, ACD), 아라비노갈락탄 단백질 (AGP), 글리신-풍부 단백질 (GRP), 프롤린-풍부 단백질 (PRP), 펩티도글리칸 (PGN), 슈도펩티도글리칸, LTA, LPS 및 이들의 유도체 및 조합에 대해 특이적인 에피토프 및 미모토프 등이 있다. 일반적으로 면역 반응을 생성하는 것으로 간주되는 에피토프는 T 세포 자극 에피토프이고, 예를 들어 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 디프테리아 톡소이드 (예를 들어, 천연 형태 및 재조합 형태의 CRM), 파상풍 톡소이드, 슈도모나스 엑소단백질 A, 슈도모나스 에어루지노사 톡소이드, 보르데텔라 퍼투시스 톡소이드, 클로스트리듐 퍼프린겐스 톡소이드, 에세리키아 콜라이 이열성 독소 B 서브유닛, 네이세리아 메닝기티디스 외막 복합체, 헤모필러스 인플루엔자 단백질 D, 플라젤린 Fli C, 투구게 헤모시아닌, 및 이들의 단편, 유도체 또는 변형물의 에피토프를 천연 형태 및 재조합 형태를 비롯하여 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는, 비-제한적으로, 박테리아, 바이러스, 기생충, 진균 또는 이들의 조합을 비롯하여, 하나 이상의 병원체와 관련한 질환 및 감염을 치료하거나 또는 바람직하게는 예방하는데 유용한 항원을 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 이들 면역원성 조성물은 백신일 수 있으며, 이중 어느 것은 약제학적으로 허용가능한 성분을 함유할 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 본원에 개시된 면역원성 펩타이드/항원에 대해 특이적으로 반응하는 항체에 관한 것이다. 항체는 포유류로부터 유래한 다클론 또는 단일클론 항체일 수 있거나, 또는 비-인간으로부터 유래하여 이후 인간화될 수 있다. 바람직한 항체는 옵소닌성 (opsonic) 항체이다. 본 발명은 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는 하나 이상의 병원성 유기체에 대해 특이적으로 반응하는 본원에 기술된 항체를 포함하는 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이다. 항체는 포유류로부터 유래한 다클론 또는 단일클론 항체일 수 있거나, 또는 비-인간으로부터 유래하여 이후 인간화될 수 있다. 바람직한 항체는 옵소닌성 항체이고 및/또는 독성을 중화한다. 본 발명은 단일클론 항체를 생산하는 하이브리도마를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는 본원에 기술된 바와 같은 본 발명의 복합 항원을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 이들 폴리뉴클레오티드를 함유한 벡터, 발현 벡터를 비롯한 벡터, 및 통합된 핵산 서열을 함유한 재조합 조작된 유기체에 관한 것이다.
본 발명의 다른 구현예는 본 발명의 포유류 항원 또는 항체를 투여하는 것을 포함하는 포유류에서 하나 이상의 병원체에 대항하여 면역 반응을 생성하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 생성된 면역 반응 또는 투여된 바와 같은 면역 반응은 유기체의 하나 이상의 여러 균주, 혈청형 또는 종에 대하여 보호성이며, 염증을 예방하거나 또는 감소시킨다.
본 발명의 다른 구현예들과 이점들이 아래에서 본원에 기술되며, 부분적으로는 본 발명의 설명으로부터 명확해지거나 또는 본 발명의 실시를 통해 학습할 수 있다.
도 1. ELISA에 의해 스크리닝한, 항-MTB MAB JG7 및 GG9, 항-LTA MAB (96-110)의 세포벽 혼합물 (비정제 세포벽)에 대한 결합성.
도 2. ELISA에 의해 스크리닝한, 항-MTB MAB JG7 및 GG9, 항-LTA MAB (96-110)의 초순수 PGN에 대한 결합성.
도 3. PGN CRM-접합 백신 투여 마우스가 PGN 단독 투여 마우스와 비교해 42일까지 더 견고한 면역 반응을 보임을 보여주는, ELISA에 의해 스크리닝한 펩티도글리칸에 대한 마우스 항혈청 역가.
도 4. MS190이 다른 군에서 마우스와 비교해 MTB에 대해 가장 강력한 면역 반응을 나타내며 양호한 융합 후보물질임을 보여주는, ELISA에 의해 스크리닝한 MTB 및 SMEG에 대한 81일 마우스 항-혈청 역가.
도 5. 다양한 그람 양성 박테리아에 대한 마우스 195-197 유래 81일 항-PGN 혈청 항체의 결합성.
도 6. 96웰 플레이트에서 초순수 PGN 10 ㎍/mL에 대한 항-PGN 하이브리도마 MD11 양성 클론의 결합성.
도 7. 24웰 플레이트에서 초순수 PGN 및 다양한 그람 양성 박테리아에 대한 항-PGN MD11 클론의 결합성.
도 8. TB Pep 01 및 TB Pep 02를 이용한 단일클론 항체 생산.
도 9. 다양한 항원에 대한 마우스 M1435 유래 하이드리도마 클론 LD7 및 CA6 유래 상층액의 결합성.
도 10. 3% NGS로 차단시 다양한 항원에 대한 마우스 M1435 유래 하이드리도마 클론 LD7 및 CA6 유래 상층액의 결합성.
도 11. 고정된 항원에 대한 항-TB Pep 01 정제한 MAB LD7 I BB2 및 CA6 II GA8의 결합성.
도 12. 지수기-중간 단계 (~107 CFU/mL)의 살아있는 마이코박테리움 스메그마티스에 대한 항-TB Pep 01 정제한 MAB LD7 및 CA6의 결합성.
도 13. 지수기-중간 증식 단계의 살아있는 마이코박테리움 스메그마티스에 대한 항-TB Pep 01 정제한 MAB LD7 및 CA6의 결합성.
도 14. 대식세포주 U-937을 이용한 항-TB Pep01 MAB - LD7 및 CA6에 의한 살아있는 마이코박테리움 스메그마티스의 옵소닌탐식 살상 (opsonophagocytic killing).
백신 접종 및 백신은 흔히 쇠약하게 만들고 위험한 병원체로부터 감염을 회피하고 전파를 방지하기 위한 최상의 기전이다. 다수의 여러 감염과 관련해 치료 옵션이 적고 이용가능한 옵션들이 제한적인 효능만 제공하므로, 종종 백신 접종이 유일한 유효한 옵션이다. 기존의 백신 접종에는 병원체의 기존 항원 영역에 대한 사전 이해 또는 일반적인 식별이 필요하다. 병원체 자체를 증식시키고, 열-사멸 처리하거나 또는 달리 약독화된 미생물로부터 적절한 백신을 개발한다. 대안적으로, 투여시 보호성 면역 반응을 구축하기 위한 항원 또는 항원 콜렉션을 동정한다. 백신의 필요성은 특히 박테리아, 바이러스 및 기생충에 의한 감염의 예방과 관련하여 시급하다. 이러한 많은 병원체, 특히 특정 바이러스는 계속 돌연변이되어, 기존 병원체 또는 기원 병원체에 대해 개발된 백신은 신생 출현 균주에 대해 무용지물이 된다. 그 결과, 감염에 대한 백신은 매년 다시 제형화되고, 종종 상당히 고 용량으로 투여한다. 제조 단가가 높고, 백신 투여는 환자에게 매우 많은 합병증과 관련한 위험을 가지고 있다.
패혈증 쇼크는 중환자실에 입원한 환자들의 일반적인 사망 원인으로서, 예를 들어 비-제한적으로 그람 양성 박테리아의 PGN 및 LTA, 예를 들어 그람 음성 박테리아의 LPS 등의 박테리아 세포벽에 의해 유발된다. 이들 박테리아는 단독으로 또는 조합하여 혈류에 침투하거나 또는 세포벽 성분을 혈류 및 조직으로 분비함으로써, 쇼크 및 다기관 부전을 유발한다. 세포벽 성분이 염증 반응을 과도하게 일으켜 조직 손상과 쇼크를 촉진하는 사이토카인 및 케모카인을 유도하도록 상승적으로 작용할 수 있다.
놀랍게도, 기본적으로 본원에 개시 및 기술된 바와 같이 구축된 항원으로부터 효과적인 면역원성 조성물 및/또는 백신을 제조할 수 있다는 것을 알게 되었다. 본원에 기술된 바와 같은 면역원성 항원은 에피토프 2 이상 또는 하나 이상의 에피토프와 하나 이상의 미모토프를 포함하며, 이 중 임의의 것은 복합 에피토프일 수 있다. 에피토프와 미모토프는 면역학적 반응을 유발하는 병원체 또는 여러 병원체의 항원성 영역으로부터 수득되거나 또는 유래한다. 바람직하게는, 이러한 복수 형태 (plurality)는 세포벽 성분에 대해 면역학적 반응을 유발하는 하나 이상의 에피토프와, 그리고 동일하거나 또는 다른 병원체에 대해 면역학적 반응을 유발하는 미모토프를 함유한다. 본원에서, 미모토프는 에피토프의 구조를 모방하는 거대분자를 포함한다. 이러한 특성으로 인해, 이것이 모방하는 에피토프에 의해 유발되는 항체 반응과 유사한 항체 반응 등의 면역학적 반응을 유발한다. 마찬가지로, 면역학적 반응 (예, 세포성 반응, 항체 반응)의 세기에 의해 측정된 바와 같이, 바람직하게는 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 이상으로 유발한다. 기본적으로, 미모토프는 에피토프 서열을 모방하지만 천연 에피토프 구조체의 면역원성 특성을 가진 다른 구조를 가진다. 바람직하게는, 미모토프는 펩타이드 서열이며, 이것이 모방하는 에피토프와 아미노산 1개, 2개, 3개, 4개 또는 그 이상의 차이를 가진다. 대안적으로, 미모토프는 펩타이드가 아닐 수 있으며, 예를 들어 사카라이드, 다당류, 지질, 지방산, 펩타이드 핵산 (PNA) 또는 거대분자들의 조합 등의 여러가지 거대분자일 수 있다. 바람직하게는, 항원은 예를 들어 T 세포 반응과 같은 면역학적 반응의 생성을 자극하는 에피토프를 하나 이상 함유한다. 면역원성 펩타이드/조성물은, T 세포 자극 에피토프에 대한 대안으로서, 또는 T 세포 자극 에피토프와 더불어, 또한 보강제를 포함할 수 있다. 본 발명의 면역원성 항원은 에피토프 2 이상의 보존된 영역들의 조합을 제시하는 하나 이상의 에피토프를 포함할 수 있다. 복합 에피토프는, 하나 이상의 아미노산을 하나의 서열에서 하나 이상의 다른 펩타이드 서열에 부가함으로써 서로 다른 아미노산 서열을 가진 보존된 서열들 2종 이상으로 된 조합일 수 있으며, 즉 복합 에피토프 서열은 서열들의 조합으로서 개별 펩타이드 서열들 중 어떤 것은 더 길고 서로 상이하다. 이러한 조합된 에피토프들을 본원에서 복합 에피토프로 지칭한다. 보통 함께 발견되지 않는 서로 다른 에피토프 또는 미모토프를 여러개 가진 펩타이드는 본원에서 복합 펩타이드로 지칭한다. 복합 펩타이드는 2 이상의 인접한 에피토프 서열, 2 이상의 인접한 미모토프 서열, 2 이상의 복합 에피토프 서열, 하나 이상의 미모토프 또는 복합 에피토프에 커플링된 하나 이상의 인접한 에피토프 서열, 하나 이상의 에피토프 또는 복합 에피토프에 커플링된 하나 이상의 미모토프, 또는 이들의 조합을 가진다. 복합 항원은 복합 펩타이드와 유사하지만, 모든 에피토프들이 반드시 연속적인 서열에 놓이는 것은 아니다. 본원에 기술된 바와 같이 복합 펩타이드 및 항원은 한가지 또는 여러가지 소스 (예, 바이러스 입자, 기생충, 박테리아, 진균, 세포)로부터 수득되거나 또는 유래한, 보통 서로 연결되지 않거나 또는 함께 발견되지 않는, 면역학적 반응성 영역을 여러개 포함할 수 있다. 이들 면역학적 영역은 바람직하게는 감염 또는 질환과 관련있는, 또는 중요하게는 병원체에 대항하여 보호를 제공하기 위한 면역계의 자극과 관련있는, 병원체 또는 기타 항원의 항원성 영역에서 발견되는 서열을 나타내는, 아미노산 서열 또는 에피토프이다.
본원에 기술된 바와 같이 면역원성 펩타이드/조성물은 감염을 치료 또는 예방하는데 유용하고, 아울러 염증 반응, 조직 손상 및 패혈증 쇼크의 과도한 발생을 낮추거나 또는 예방하는데 유용한다. 병원체에 특이적인 단일클론 항체 + 세포벽 물질에 대한 항체를 포함하는 조성물의 투여는 옵소닌화 (opsonization)를 촉진하고, 염증의 조정 또는 하향 조절을 촉진한다. 염증의 하향 조절을 측정하는 한가지 방식은 예를 들어 강력한 항-염증 특성을 가진 면역조절 사이토카인인 인터루킨-10 (IL-10)의 상향 조절과 염증을 강하게 촉진하는 IL-12의 하향 조절을 확인하는 것이다.
미생물 병원체(들)에 대해 보호성 면역 반응을 야기하는 에피토프 및 미모토프는 임의 병원체의 신생 항원 및 숨겨진 항원을 비롯하여, 그람 양성 박테리아, 그람 음성 박테리아, 기생충, 바이러스 및 진균으로부터 수득되거나 또는 유래하는 에피토프 및 미모토프를 포함한다. 박테리아 병원체로는 예를 들어 바실러스 spp. (Bacillus spp.)(예, 바실러스 안트라시스 (Bacillus anthracis)), 마이코박테리아 spp. (Mycobacteria spp.)(예, 마이코박테리움 투베르쿨로시스 (M. tuberculosis), 마이코박테리움 스메그마티스 (M. smegmatis), 마이코박테리움 레프래 (M. leprae)), 에세리키아 spp. (Escherichia spp.)(예, E. coli), 스타필로코커스 spp. (예, 스타필로코커스 아우레우스), 뉴모코커스 spp. (예, ), 스트렙토코커스 spp. (예, 스트렙토코커스 뉴모니애 (S. pneumoniae), 스트렙토코커스 무탄스 (S. mutans), 스트렙토코커스 피오게네스 (S. pyogenes), 스트렙토코커스 안지노시스 (S. anginosis), 스트렙토코커스 상귀니스 (S. sanguinis), 스트렙토코커스 디스갈락티애 (S. dysgalactiae)), 비브리오 spp. (예, 비브리오 콜레라 (V. cholera)), 헤모필러스 spp. (예, 헤모필러스 인플루엔자 (H. influenzae)), 슈도모나스 spp. (예, 슈도모나스 에어루지노사 (P. aeruginosa)) 및 예르시니아 spp. (예, 예르시니아 페스티스 (Y. pestis)) 등이 있다.
세포벽 물질에 대해 특이적인 면역 반응을 생성하는 에피토프 및 미모토프로는, 예를 들어, 당단백질, 피막 (capsule), N-아세틸글루코사민, 세포벽 폴리머, 하이드록시프롤린-풍부 당단백질 (HRGP), 열 충격의 알파 크리스탈린 도메인 (ACD) 및 기타 단백질, 아라비노갈락탄 단백질 (AGP), 글리신-풍부 단백질 (GRPs), 프롤린-풍부 단백질 (PRP), 펩티도글리칸 (PGN), 열 충격 단백질 (HS), 리포아라비노만난 (LAM), 슈도펩티도글리칸, 리포테이코산 (LTA), 리포폴리사카라이드 (LPS), 및 이들의 유도체 및 조합 등이 있다. 바이러스 물질에 대해 특이적인 면역 반응을 생성하는 에피토프로는, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스 단백질, 예를 들어 HA (헤마글루티닌), NA (뉴라미다제), M2e (매트릭스 단백질 2 엑토도메인), HEF (헤마글루티닌-에스테라제-융합체) 또는 CM2 (제2 막 단백질)에 특이적인 에피토프 및 미모토프 등이 있다.
면역 반응을 생성하는 에피토프 및 미모토프는 T 세포 자극 에피토프이고, 예를 들어, 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 디프테리아 톡소이드 (예를 들어, 천연 형태 및 재조합 형태의 CRM {교차 반응성 물질}, 예를 들어 CRM197), 파상풍 톡소이드, 슈도모나스 엑소단백질 A, 슈도모나스 에어루지노사 톡소이드, 보르데텔라 퍼투시스 톡소이드, 클로스트리듐 퍼프린겐스 톡소이드, 에세리키아 콜라이 이열성 독소 B 서브유닛, 네이세리아 메닝기티디스 외막 복합체, 헤모필러스 인플루엔자 단백질 D, 플라젤린 Fli C, 투구게 헤모시아닌, 및 이들의 단편, 유도체 또는 변형물의 에피토프 및 미모토프를 천연 형태 및 재조합 형태를 비롯하여 포함한다. 면역계 에피토프에 대한 데이터베이스로는 예를 들어, MHCBN (Major Histocompatability Binding predictions): MHC/TAP 결합제 및 T 세포 에피토프에 대한 데이터베이스; BCIPEP: B 세포 에피토프 데이터베이스; SYFPEITHI-T 세포 에피토프에 대한 온라인 데이터베이스; IEDB (Immune Epitope Data Base) - 인지 상황에 대한 주석이 첨부된 T 세포 및 B 세포 에피토프에 대한 데이터베이스; ANTIJEN - 영국 제너 연구소의 T 및 B 세포 에피토프 데이터베이스; IMGT/3D 구조-DB - 프랑스 몽펠리에 소재한 IG 및 TR의 주석이 첨부된 B 및 T 세포 에피토프의 3차원 구조; SEDB: 구조적 에피토프 데이터베이스 - 폰디체리 대학, 및 미국 국립 의학 도서관 의학 주제 표제 (MeSH)에서의 에피토프 등이 있다.
본 발명의 일 구현예는 복합물을 포함할 수 있는, 2 이상의 에피토프; 복합물을 포함할 수 있는, 하나 이상의 에피토프 및 하나 이상의 미모토프; 또는 하나 이상의 미모토프를 함유하는 면역원성 항원 및 조성물에 관한 것이다. 미모토프는 자연계에서 존재하지 않으며 이것이 모방하는 에피토프와는 다른 구조를 가지지만 동일한 또는 비슷한 면역학적 반응을 생성하는 인공적으로 구축된, 아미노산 서열이다. 이들 에피토프 및 미모토프는 인공적으로 정렬되고, 바람직하게는 단일한 아미노산 서열 또는 펩타이드로 정렬된다. 이러한 복수 형태는 동일한 에피토프 및/또는 미모토프를 여러개 함유할 수 있지만, 자연적으로 이루어진 순서가 아니거나 또는 하나 이상의 병원체로부터 유래한 다양한 여러가지 에피토프 및 미모토프들을 여러개 함유할 수 있다. 에피토프는 병원체의 공지된 면역학적 영역과 동일할 수 있다. 에피토프 및 미모토프는, 기존에 존재하지 않으며 화학적 합성 또는 재조합 조작에 의해서와 같이 인공적으로 구축된, 완전히 새로운 구조체일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 면역원성 항원은 예를 들어 살상 T 세포 (TC 또는 CTL) 반응, 헬퍼 T 세포 (TH) 반응, 및/또는 기억 T 세포 반응 (Tm) 또는 바람직하게는 옵소닌탐식 반응 등의 B 세포 및/또는 T 세포 반응을 유발하는 영역을 또한 포함한다. 또한, 펩타이드는 동일한 또는 서로 다른 병원성 유기체의 예를 들어 세포벽 물질의 면역학적 반응성 영역의 에피토프 및 미모토프를 하나 이상 함유한다. 세포벽 물질의 면역학적 반응성 영역으로는 예를 들어 PGN, LTA, LAM, 열 충격 단백질 및 LPS의 에피토프인 아미노산 서열 등이 있다.
단일한 펩타이드 서열로서 배치되는 바람직한 에피토프 조합 (임의의 것은 미모토프 또는 복합 에피토프일 수 있음)으로는, 예를 들어, Acr-LAM-LTA; LAM-T 세포-LAM; NA-LAM; HA-HA-NA-Acr; M2e-Acr; M2e-T 세포; HA-HA-NA; HA-HA-NA-Acr; T 세포-HA-HA-NA; M2e-NA; PDG-Acr; PDG-LAM-LTA; Acr-PDG-HS; ACD-LAM-LTA; LAM-LTA-ACD; Acr-PDG-LAM; LAM-LAM-LTA; LTA-LAM-PDG 등이 있다. 이들 에피토프 조합은 아미노 말단에, 카르복시 말단에 및/또는 다른 에피토프들 사이에 T 세포 에피토프를 추가로 함유할 수 있으며, 조성물은 보강제를 함유할 수 있다.
바람직하게는, 면역원성 항원의 서열은 하나 이상의 병원체에 특이적인 에피토프 및 미모토프 (예, 병원체-특이 항원; PSA; 세포 표면 항원; CSA; 바이러스-특이 항원; VSA)와, 하나 이상의 T 세포 자극 항원 (T 세포 자극 항원; TCSA)의 항원 결정기 (antigenic determinant)를 포함한다. 바람직하게는, 항원은, 일반적으로 미생물 병원체로부터 보호하는 에피토프, 그람 양성 박테리아 유래의 PGN 또는 LTA 또는 그람 음성 박테리아 유래의 LPS에 특이적인 하나 이상의 에피토프, 및 CRM으로 이루어진 조합을 포함한다. 에피토프 및 미모토프로는 비-제한적으로 PSA, TCSA 및 CSA 조합의 복합물 등이 있다. 예를 들어, T 세포 자극 부분은 서로 다른 에피토프 2종 사이에, 어느 한쪽 또는 다른 쪽에, 또는 양쪽에 있을 수 있다. 바람직한 구조는 TCSA1-CSA-2-TCSA2 등, 이의 다양한 조합 및 다중체 (multiple)를 포함한다.
이들 백신 및 항체는 염증 반응을 상향 조절하여 OPKA를 촉진하면서 동시에 박테리아 사균 및 손상된 균 (및 박테리아 생균)으로부터 유래한 세포 PGN 및 LTA에 결합하는 이중 기능을 제공하며, 따라서 패혈증 쇼크를 유발하고 과도한 반응성 염증 반응을 생성하는 사이토카인을 하향 조절한다. 사실상, PGN 단편과 LTA 단편이 항체에 의해 흡수되고, 상승적으로 작용하여 스폰지와 같으며, 그래서 이들 독성 물질이 포유류 시스템으로부터 제거된다. 세포벽 PGN 및 LTA의 영향을 제거하거나 또는 완화하는 것이 박테리아 감염 및 패혈증 쇼크를 예방하고 치료하는데 중요하다.
면역원성 항원은 바람직하게는 2 이상의 서로 다른 에피토프들로부터, 하나 이상의 에피토프 + 하나 이상의 미모토프로부터, 또는 하나 이상의 미모토프로부터 제작된 조작된 인공 구축 항원이며, 그래서 제조된 복합 항원은 개별 구성성분 에피토프와는 다르거나 상가적이거나 또는 상승적인, 물리적 및/또는 화학적 특성을 가진다. 바람직한 항원은, 포유류의 면역계에 노출시, 구성성분 에피토프에 대해, 바람직하게는 개개 구성성분 에피토프에 대해서보다 더 높은 수준으로 (예를 들어, 동정한 병원체에 대한 세포성 또는 체액성 반응으로부터 측정가능한 바와 같이) 면역학적 반응을 동시에 유발할 수 있다. 아울러, 면역원성 항원은 백신으로 사용시 환자에 보호성 면역학적 반응을, 구성성분 에피토프 각각으로부터 병원체(들)에 대항하여 생성되는 부가된 기능을 제공한다. 바람직하게는, 면역원성 항원은 구성성분이 기원한 병원체뿐 아니라 물론 관련 병원체에 대해서도 보호를 제공하는 부가적인 기능을 가진다. 이러한 관련 병원성 유기체는 유기체와 동일 종의 균주 또는 혈청형일 수 있거나, 또는 유기체와 동일 속의 다른 종, 또는 공통 에피토프 측면에서만 관련성이 있는 완전히 다른 유기체일 수 있다.
단리된 에피토프 및 미모토프는 병원체의 단백질 또는 펩타이드로부터 수득되거나 또는 유래한 영역이고, 즉 포유류에 투여시 견고한 면역학적 반응을 유발하는 복합물이다. 바람직하게는, 견고한 반응은 병원체 노출로부터 발생하는 질환으로부터 포유류를 면역학적으로 보호한다. 바람직하게는, 복합물의 에피토프 및 미모토프는 각각 아미노산 약 20개 이하, 바람직하게는 아미노산 약 15개 이하, 바람직하게는 아미노산 약 10개 이하, 바람직하게는 아미노산 약 8개 이하, 바람직하게는 아미노산 약 6개 이상, 바람직하게는 또한 아미노산 약 4개 이하를 포함한다.
복합 항원은 2 이상의 에피토프 및 미모토프로부터 구축될 수 있어, 제조되된 복합물은 구성성분 에피토프들과는 다르거나 또는 부가적인 물리적 및/또는 화학적 특성을 가지며 구성성분 에피토프들 중 어느 하나가 일반적으로 더 길다. 바람직한 복합물은, 포유류의 면역계에 노출시, 복합물의 구성성분 에피토프 및 미모토프 각각에 대해, 바람직하게는 구성성분 에피토프 및/또는 미모토프 어느 하나에 의해 각각 달성되는 것보다 더 높은 수준으로 면역학적 반응을 동시에 유발할 수 있다. 아울러, 복합물은 백신으로 사용시 환자에서 구성성분 에피토프들 각각의 병원체(들)에 대항하여 보호성 면역학적 반응을 생성하는 부가된 기능을 제공한다. 바람직하게는, 복합물은 그 구성성분이 기원한 병원체뿐 아니라 물론 관련 병원체에 대해서도 보호를 제공하는 부가적인 기능을 가진다. 이러한 관련 병원성 유기체는 유기체와 동일 종의 균주 또는 혈청형일 수 있거나, 또는 유기체와 동일 속의 다른 종, 또는 공통 에피토프 측면에서만 관련성이 있는 완전히 다른 유기체일 수 있다.
본 발명의 면역원성 및 복합 항원은 자연계에 존재하지 않으면 면역계에 달리 노출된 바 없는 완전히 인공적인 분자이다. 바람직하게는, 복합물은 단일한 서열로 조합되거나 또는 혼성된, 보존된 면역학적 영역들로부터 형성되거나 또는 유래하여, 복합물은 관련 병원체들에서 고도로 보존된 단백질 및/또는 폴리펩타이드의 면역학적으로 반응성 영역을 제시한다. 백신은 단일한 복합물로부터 개발될 수 있지만, 다수의 경우에는 복수의 여러가지 복합물들로부터 개발될 수 있으며 세포 표면/벽 항원 (예, PGN)과 같은 천연 단백질 또는 T 세포 자극 항원 (예, CRM)과 접합된 항원을 (보강제와 함께 또는 보강제 없이) 복합 펩타이드에 부가하여, 자연계에서 발견되지 않는 혼합물을 구축할 수 있다.
이에, 본원에 기술된 바와 같이, 면역원성 항원 및 조성물은 2 이상의 서로 다른 에피토프, 하나 이상의 에피토프 + 하나 이상의 미모토프, 또는 하나 이상의 미모토프를 포함하여, 유효한 백신을 제공할 수 있다. 이러한 면역원성 항원은 바람직하게는 하나 이상의 복합 에피토프 및/또는 미모토프를 포함함에도 불구하고, 본 발명의 면역원성 항원 또는 항원 일군을 이용한 백신 접종으로부터 달성되는 면역학적 반응은 항원의 서열이 본래 수득되거나 또는 유래한 기원 균주에 의해 유발되는 감염으로부터 보호를 제공하고, 또한 항원에 제시된 일반적으로 보존된 영역 하나 이상을 공유하는 다른 균주, 혈청형 및/또는 종에 대하여 면역학적 보호를 제공한다. 따라서, 항원을 이용한 백신 접종으로 달성되는 형성되는 면역 반응은, 병원체의 진화에서 생길 수 있는 항원 소변이와 무관하게, 복수의 균주, 혈청형 및 종 또는 달리 관련 병원체에 대하여, 기존의 한가지 항원 백신 접종으로 달성되는 것보다 더 광범위하게 보호성이다. 바람직하게는, 본 발명의 면역원성 항원으로부터 개발된 백신은 임의의 반복 또는 매년 백신 접종의 필요성, 관련 합병증 및 제조 비용과 환자에 대한 위험 증가를 회피한다. 이러한 백신은 개체 및 집단을 치료하는데 유용하며, 따라서 감염, 사망 및 대유행을 예방하고, 기존 백신을 보완하는데 유용하다.
본원에 기술된 바와 같이, 면역원성 항원은, 2 이상의 에피토프, 하나 이상의 에피토프 + 하나 이상의 미모토프, 또는 하나 이상의 에피토프의 병원체와 동일하거나 또는 상이할 수 있는 병원성 미생물의 에피토프에 대한 하나 이상의 미모토프로부터 유래한 서열의 아미노산으로 된 단쇄를 포함한다. 에피토프 서열은 복합 서열을 따라 연속적으로 중단없이 반복될 수 있거나, 또는 펩타이드를 코딩하고 면역원성일 수도 있는 스페이서 또는 서열로서 단일한 또는 수개의 아미노산일 수 있는 다른 서열 (총괄적으로 스페이서)이 사이에 개입될 수 있다. 바람직하게는, 항원은 면역원성이고, 세포성 (T 세포) 또는 체액성 (B 세포) 면역 반응을 포유류에서 유발할 수 있다. 비-관련 미생물로부터 유래한 펩타이드 서열이 단일한 복합 항원에 조합될 수도 있다. 선택한 면역-반응성 펩타이드의 바이러스 서열들 사이에 다른 미생물, 예를 들어, 스트렙토코커스 뉴모코커스 (S. pneumococcus), 슈도모나스 에어루지노사 (P. auriginosa) 또는 스타필로코커스 아우레우스 (S. aureus)와 같은 박테리아로부터 선택된 에피토프 또는 보존된 서열이 배치될 수 있다.
바람직하게는 항원은 아미노산 약 65개 이하, 약 60개 이하, 약 55개 이하, 약 50개 이하, 약 45개 이하, 약 40개 이하, 약 35개 이하, 약 30개 이하 또는 약 25개 이하로 된 단일한 연속적인 아미노산 서열을 포함한다. 모든 에피토프들을 단일한 서열로 가지는 이점은 적어도 다음을 포함하지만, 이로 제한되는 것은 아니다: (i) 펩타이드를 여러개 제조하는 것과 비교해 단일한 펩타이드의 제조 용이성; (ii) 동일한 병원체 또는 복수의 병원체에 대항하여 단일한 펩타이드를 가짐으로써 달성되는 표준화 (standardization); (iii) 복수의 펩타이드들을 혼합 및 투여하는 것에 대한 조정이 필요하지 않음; 및 (iv) 펩타이드 백신 1종을 투여할 수 있는 용이성. 이러한 이점은 백신 제조 속도 및 백신 유통 속도를 개선할 뿐 아니라 이러한 백신은 생명을 구할 수 있다.
면역원성 항원의 에피토프, 미모토프, 복합 에피토프 및 이들의 조합은 임의 서열 및 크기일 수 있지만, 바람직하게는 천연 아미노산으로 구성되며, 아미노산 길이는 5개 초과 내지 35개 미만, 바람직하게는 30개 미만, 바람직하게는 아미노산 5-25개 길이, 바람직하게는 아미노산 8-20개 길이, 더 바람직하게는 아미노산 5-15개 길이이다. 복합 항원은 바람직하게는 복합 에피토프 및/또는 기타 에피토프를 임의 개수로 포함한다. 특정 병원체, 병원체 패밀리 또는 병원체 군에 대해 가장 유효한 복합 항원의 에피토프의 개수는 본 발명의 내용으로부터 당해 기술 분야의 당업자가 일상적인 검사 절차를 이용해 결정할 수 있다. 면역원성 항원은 하나의 에피토프, 복합물 또는 달리, 바람직하게는 2개 이상, 3개 이상, 4개 이상, 5개 이상, 6개 이상, 7개 이상, 8개 이상, 9개 이상, 10개 이상 또는 이보다 긴 아미노산 서열을 이용하는 것이 효과적일 수 있다. 선택적으로, 면역원성 항원은 동일한 또는 하나 이상의 다른 병원체로부터 유래한 항원성 영역의 서열, 또는 면역 시스템에 부스트를 제공하거나 면역학적 감작제로서 작용하는 서열일 수 있는, 하나 이상의 스페이서를 에피토프 사이에 포함할 수도 있다. 부스트는 면역 시스템을 직접적으로 또는 하나 이상의 T 세포 자극 에피토프 및/또는 하나 이상의 보강제와 함께 자극하는 것으로 알려진 아미노산 서열로부터 유발할 수 있다.
바람직한 일 구현예에서, 스타필로코칼 spp. (Staphylococcal spp.)(예, 스타필로코커스 아우레우스, 스타필로코커스 에피더미디스 및 메티실린-내성 스타필로코커스 아우레우스 (MRSA)) 또는 스트렙토코커스 spp.와 같은 그람 양성 미생물에 대해 면역학적 반응을 구축하는데 유용한 면역원성 항원은 에피토프 LTA 또는 PNG, 및/또는 유사 구조체들로부터 유래한 새로운 에피토프를 포함한다.
또한, LPS의 에피토프, 복합 에피토프 및/또는 미모토프, 및/또는 유사한 구조체로부터 유래한 새로운 면역학적 부위를 함유하는, 스타필로콕시 또는 마이코박테리움 spp. 예를 들어 마이코박테리움 투베르쿨로시스 및 마이코박테리움 스메그마티스 및 클로스트리듐 spp. 예를 들어 클로스트리듐 테타니와 같은 그람 양성 미생물, 및 E. coli 및 슈도모나스와 같은 그람 음성 박테리아의 표면 또는 세포벽 단백질의 에피토프, 복합 에피토프 및/또는 미모토프를 함유하는 면역원성 항원이 바람직하다.
본 발명의 다른 구현예는 자연적으로는 존재하지 않으며 인공적으로 구축되어야 하는 서열을 포함할 수 있는, 하나 이상의 에피토프, 하나 이상의 복합 에피토프, 및/또는 하나 이상의 미모토프의 연속적인 서열 (contiguous sequence)에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 연속적인 서열은 복수의 병원체들에서 공통적이거나 또는 여러가지 병원체들의 보존된 영역으로부터 유래한 서열들의 조합일 수 있는, 하나 이상의 에피토프, 하나 이상의 복합 에피토프, 및/또는 하나 이상의 미모토프를 포함한다. 예를 들어, 병원체 2종이 아미노산 단 하나 차이만 존재하는 유사한 보존된 영역을 가진 경우, 복합물은 보존된 영역 하나와 동일한 에피토프와 또 다른 보존된 영역의 미모토프를 포함할 수 있다.
또한, 바람직하게는, 본 발명의 면역원성 항원은 반복 에피토프, 복합 에피토프 및/또는 미모토프를 복수개로 포함하며, 선택적으로 각 에피토프, 복합물 또는 기타 사이에 또는 이를 둘러싼 링커 영역을 포함하고, 복수의 에피토프 및 미모토프들은 서로 동일하거나 또는 서로 상이한 영역의 것일 수 있다. 바람직한 링커는 동일하거나 또는 서로 다른 병원체의 항원성 영역의 아미노산 서열, 또는 면역 반응의 구축을 보조하는 아미노산 서열을 포함한다. 바람직한 예는, 비-제한적으로, 마이코박테리아, 예컨대 마이코박테리움 투베르쿨로시스, 스트렙토코커스, 예컨대 스트렙토코커스 뉴모코커스, 스타필로코커스, 예컨대 스타필로코커스 아우레우스와 같은 박테리아의 다양한 항원성 영역들 중 임의의 것을 포함한다. 바람직한 예는, 비-제한적으로, 예를 들어, 인플루엔자 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 코로나 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 아데노바이러스, 리노바이러스, 인간 메타뉴모바이러스 및 엔테로바이러스와 같은 호흡기 바이러스, 또는 아데노바이러스, 지카바이러스, 풍진 바이러스, 간염 바이러스, 헤르페스 심플렉스 바이러스, 레트로바이러스, 수두 대상포진 바이러스, 인간 파필로마 바이러스, 파르보바이러스, 인간 메타뉴모바이러스 및 엔테로바이러스와 같은 병원성 바이러스, 및 HIV 등의 바이러스의 다양한 항원성 영역들 중 임의의 것을 포함한다. 본 발명의 복합 항원의 개발에 기원일 수 있는 기생충 유기체로는 예를 들어 플라스모듐 spp. (Plasmodium spp.), 리슈마니어 spp. (Leishmania spp.), 과디어 spp. (Guardia spp.), 내부 기생충 (endoparasites), 원생동물 및 연충 (helminth) spp. 등이 있다. 진균 유기체로는, 예를 들어, 크립토콕시 (Cryptococci), 아스퍼질러스 (aspergillus) 및 칸디다 (candida) 등이 있다. 또한, 바람직하게는, 복합 항원은 T 세포 반응, B 세포 반응, OPKA 반응 또는 병원체에 대한 특이 반응과 조합한 반응을 생성하는 에피토프를 함유한다. 본 발명의 복합 항원을 이용하여 치료 또는 예방되는 질환으로는 패혈증, 감기, 독감, 위장 감염, 성병, 면역결핍 증후군, 병원 감염, 셀리악 질환, 염증성 장 질환, 염증, 다발성 경화증, 자가면역 장애, 만성 피로 증후군, 류마티스 관절염, 중증 근무력증, 전신성 홍반성 루푸스 및 감염성 건선 등이 있다.
본 발명의 다른 구현예는 본 발명의 면역원성 항원으로 포유류를 면역화하는 방법에 관한 것이다. 면역화된 포유류로부터 수득된 항혈청은 복합 항원이 기원한 병원체에 대항하여 반응한다. 본 발명의 다른 구현예는 따라서 면역화된 포유류로부터 수득한 항혈청이며, 이는 다른 포유류에의 투여를 위해 검사하거나 또는 치료학적으로 활용하기 위해 추가로 정제될 수 있으며, 이로써 하나 이상의 병원체로 인한 감염으로부터 보호를 제공한다. 또한, 바람직하게는, 수득한 항혈청은 면역원성 항원이 유래한 병원체뿐 아니라 균주, 혈청형 또는 심지어 종 측면에서 상이할 수 있는 부가적인 병원체에 대해서도 광의적인 보호를 제공한다.
본 발명의 다른 구현예는 면역원성 항원 또는 본 발명의 면역원성 항원으로부터 발생된 항혈청으로 구성된 백신에 대한 것이다. 바람직하게는, 본 발명의 백신은, 신생 바이러스 분리주로부터 잠재적인 감염 발생에 대항하여 환자 집단에 대한 보호를 유지하기 위한, 매년 또는 반복적인 백신 접종의 필요성을 낮추거나 또는 없애는, 병원체의 항원 대변이로 인한 항원성의 변형에 덜 취약하다. 아울러, 본 발명의 백신은, 일반적으로, 유리하게는 (부분적으로는 반복 투여 필요성의 실질적인 감소로 인한) 제조 및 투여 측면에서 모두 증가된 안전성 고려, 부분적으로 균주-특이적인 소변이 및 대변이로 인한 재제형화 필요성의 최소화로 인한 비교적 긴 품질 수명 (shelf life), 특정 미생물 에피토프에 대한 고 특이성의 면역 반응을 표적화하는 능력, 및 각각 다를 수 있지만 동일 병원체의 공지된 균주 또는 종일 수 있는 복수의 병원체에 유효한 단일 백신을 제조할 수 있는 능력을 제공해준다. 본 발명은 항원성 조성물 및 항체 조성물, 이들 조성물의 제조 방법, 및 감염의 방지, 치료, 관리 및/또는 예방에서의 이의 이용 방법을 포함한다. 본원에 개시된 조성물 및 이를 이용하는 방법은 바이러스, 박테리아, 기생충 및/또는 진균에 의한 발병 및 감염을 당해 기술 분야에서 현재 이용가능한 기존 치료보다 우수한 방법과 면역원성 조성물을 이용해 치료 또는 예방하는데 특정한 용도를 가진다. 본원의 항체는 2종의 서로 다른 에피토프, 즉 항체의 각 팔에 특이적인 에피토프에 대해 특이적으로 반응성인 2가 항체를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는 예를 들어 바이러스, 기생충, 진균 또는 박테리아 감염, 바람직하게는, 비-제한적으로, MTB, 스타필로코커스 감염, 인플루엔자 감염, 코로나 바이러스 감염 및 기타의 발병과 같은 감염을 예방 또는 방제하는 방법에 관한 것이다. 본 방법은 개시된 면역원성 조성물, 항혈청 및/또는 항체 중 하나 이상을 면역학적인 유효량으로 일반 집단에서 이러한 감염의 발병을 방지, 감소, 약화, 완화, 방제 또는 지연시키기에 충분한 시간 동안 집단의 취약성 또는 위험 구성원에 제공하는 단계를 적어도 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는 필요한 포유류에서 감염에 대항하여 보호성 면역 반응을 구축하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 일반적으로 필요한 포유류에 본원에 개시된 하나 이상의 면역원성 조성물을 면역학적 유효량으로 감염성 유기체의 하나 이상의 종, 균주 또는 혈청형에 대하여 보호 면역 반응을 구축하기에 충분한 시간 동안 조건 하에 제공하는 단계를 포함한다. 아울러, 본 발명은 일반적으로 그러한 포유류에 본원에 개시된 적어도 제1 면역원성 조성물을 예방학적 유효량으로 제공하는 것을 수반하는, 항혈청 또는 항체와 같은 예방학적 항바이러스 또는 항미생물 조성물을 적어도 먼저 포유류에서 세포, 조직, 장기 또는 장기 시스템에 투여하는 방법을 제공한다.
본 발명의 다른 구현예는 동일한 또는 여러가지 병원체에서 복수의 단백질들에 보존된 펩타이드 서열의 하나 이상의 반복 펩타이드 서열 또는 이러한 펩타이드 서열의 단편, 변이체 또는 유도체를 가진 본 발명의 복합 항원을 포함하는 면역원성 조성물에 대한 것이다. 복합 서열이 유래한 보존된 영역은 동일한 병원체 또는 여러가지 병원체들의 서브타입에 보존되어 있을 수 있다. 바람직한 병원체로는 비-제한적으로 박테리아, 바이러스, 기생충, 진균 및 바이러스 등이 있다.
본 발명의 면역원성 항원은 또한 비-제한적인 예로, 스트렙토코커스 (Streptococcus), 슈도모나스 (Pseudomonas), 마이코박테리움 (Mycobacterium), 예컨대 마이코박테리아 투베르쿨로시스 (M. tuberculosis), 시겔라 (Shigella), 캄필로박터 (Campylobacter), 살모넬라 (Salmonella), 헤모필러스 인플루엔자 (Haemophilus influenza), 클라미도필라 뉴모니애 (Chlamydophila pneumonia), 코리네박테리움 디프테리아 (Corynebacterium diphtheriae), 클로스트리듐 테타니 (Clostridium tetani), 미코플라스마 뉴모니애 (Mycoplasma pneumonia), 스타필로코커스 아우레우스 (Staphylococcus aureus), 모락셀라 카타르할리스 (Moraxella catarrhalis), 레지오넬라 뉴모필라 (Legionella pneumophila), 보르데텔라 퍼투시스 (Bordetella pertussis), 에세리키아 콜라이 (Escherichia coli), 예컨대 E. coli 0157의 단백질 및/또는 폴리펩타이드의 복수의 또는 조합된 에피토프, 및 전술한 임의의 것의 보존된 영역들의 복수의 또는 조합된 에피토프, 미모토프 및/또는 복합물과 같은 박테리아의 서열들 (예, 에피토프 조합물, 미모토프, 복합물)로부터 수득되거나 또는 유래할 수 있다. 이러한 서열이 수득되거나 또는 유래할 수 있는 기생충의 예로는, 비-제한적으로, 플라스모듐 (Plasmodium), 예컨대 플라스모듐 팔시파룸 (Plasmodium falciparum) 및 트리타노소마 (Trypanosoma) 등이 있다. 예시적인 진균으로는, 비-제한적으로, 아스퍼질러스 푸미가투스 (Aspergillus fumigatus) 또는 아스퍼질러스 플라부스 (Aspergillus flavus) 등이 있다.
바람직하게는, 병원체의 서브타입들 및/또는 서브타입 내 균주들은 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99% 동일하다. 일부 서브타입은 100% 동일성 (불변)에 가까울 수 있다. 바람직하게는, 항원 내 하나 이상의 펩타이드 서열은 또한 2종 이상의 바이러스 입자의 상동적인 단백질 (예, 단백질 서브유닛)에 보존되어 있다.
본 발명은, 바이러스 또는 박테리아 균주 또는 혈청형 집단에 보존된 복수의 상동적인 단백질들에 보존될 수 있는, 하나 이상의 에피토프, 복합 에피토프 및/또는 미모토프 서열을 포함하는, 하나 이상의 항원을 가진 면역원성 펩타이드 또는 폴리펩타이드, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 제공한다. 예시적인 면역원성 항원에서, 하나 이상의 단백질 및/또는 하나 이상의 미생물로부터 유래한 서열이 면역원성 항원에 포함될 수 있다. 다른 구현예에서, 하나 이상의 에피토프, 하나 이상의 복합 에피토프 및/또는 하나 이상의 미모토프 서열이 1회 또는 그 이상 수회 반복될 수 있다. 바람직하게는, 면역원성 펩타이드 서열에 제시된 에피토프 및/또는 미모토프 서열은 이것이 선택되어진 유기체뿐 아니라 기타 박테리아 또는 바이러스 균주 또는 혈청형의 천연 단백질에 대해서도 면역학적 인지를 제공한다. 개시된 모든 구현예들에서, 조성물은 보강제 및 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화된, T 세포 에피토프를 함유할 수 있다.
면역원성 항원은 하나 이상의 T 세포 자극 에피토프, 예를 들어 디프테리아 톡소이드, 파상풍 톡소이드, 다당류, 지단백질 또는 이의 유도체 또는 이들의 임의 조합 (이의 단편 또는 변형물 포함)을 포함할 수 있다. 전형적으로, 복합 항원의 하나 이상의 반복 서열이 T 세포 자극 에피토프와 동일한 분자에 포함된다. 단백질-기반의 T 세포 자극 에피토프의 경우, 복합 항원의 하나 이상의 반복 서열은 T 세포 자극 에피토프와 동일한 폴리펩타이드에 포함될 수 있거나, 또는 다른 방식으로 연합될 수 있다. 바람직하게는, 하나 이상의 반복 서열은 본 발명의 복합 항원내 하나 이상의 T 세포 자극 에피토프를 따라 놓이거나 또는 그 안에 통합된다.
본 발명의 면역원성 항원은 시험관내 화학적 합성, 고상 단백질 합성 및 시험관내 (무세포성) 단백질 번역에 의해 합성할 수 있거나, 또는 박테리아 세포, 진균, 곤충 세포, 포유류 세포, 바이러스 입자, 효모 등에서 재조합에 의해 조작하여 발현시킬 수 있다.
바람직한 면역원성 항원은 다음과 같은 요소들 중 하나 이상을 함유한다: 하나 이상의 보존된 에피토프 및 미모토프 서열; T 세포 에피토프; 다당류; 폴리뉴클레오티드; 구조 성분; 또는 이들의 조합 또는 다중체. 하나 이상의 구조 성분은 하기 중 하나 이상을 함유할 수 있다: 하나 이상의 링커 세그먼트; 하나 이상의 당-결합성 모이어티; 하나 이상의 뉴클레오티드-결합성 모이어티; 하나 이상의 단백질-결합성 모이어티; 하나 이상의 효소적 모이어티; 또는 이들의 조합. 본 발명은, 본 발명의 표적 항원이 약제학적으로 허용가능한 희석제, 부형제 또는 담체와 조합되고 대부분의 임의의 보강제와 함께 사용될 수 있는, 면역원성 조성물, 바람직하게는 약학적 조성물, 더 바람직하게는 백신의 제조 방법을 포함한다. 바람직한 약제학적으로 허용가능한 성분으로는 예를 들어, 물, 지방산, 사카라이드, 다당류, 오일, 에스테르, 지질, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 희석제, 부형제, 벌킹제, 착색제 또는 이들의 조합 등이 있다. 바람직한 보강제로는, 예를 들어, QS-21 (퀼리야 사포나리아 몰리나 (Quillaja saponaria Molina)로부터 추출된 사포닌 분획)과 3-O-데스아실-4'-모노포스포릴 지질 A (MPL; 살모넬라 미네소타로부터 유래한 리포폴리사카라이드의 무독성 유도체), 그리고 종종 Toll-유사 수용체 (예를 들어, TLR4)와 같은 리간드를 포함하는 리포솜-기반의 보강제인 AS01 (Adjuvant System 01), 보강제 Shingrix의 성분인 AS01b, 포화 인지질, 콜레스테롤, 및/또는 모노포스포릴 지질 A (MPLA)를 면역자극원으로 함유한 리포좀을 포함하는 ALF (Army Liposome Formulation) 등이 있다. ALF는 안전하고 효능이 강력하다. AS01은 말라리아 백신 RTS,S (Mosquirix)에 함유되어 있다. ALF 변형체 및 유도체로는, 예를 들어, 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 ALF (ALFA), QS21 사포닌을 함유한 ALF (ALFQ), 및 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 ALFQ (ALFQA) 등이 있다. 바람직한 보강제 제형은 프로인트 보강제, 리포솜, 사포닌, 지질 A, 스쿠알렌, 인지질로서 다이미리스토일 포스파티딜콜린 (DMPC), 다이팔미토일 포스파티딜콜린 (DPPC), 다이스테아릴 포스파티딜콜린 (DSPC), 다이미리스토일 포스파티딜글리세롤 (DMPG), 다이팔미토일 포스파티딜글리세롤 (DPPG), 및/또는 다이스테아릴 포스파티딜글리세롤 (DSPG)일 수 있는 하나 이상의 포스파티딜콜린 (PC) 및/또는 포스파티딜글리세롤 (PG), 콜레스테롤, 모노포스포릴 지질 A (MPLA) 및 사포닌을 포함하는 리포솜 이중층을 가진 유니라멜라 (unilamellar) 리포솜을 포함한다. 바람직하게는, 콜레스테롤:인지질 몰 비율은 약 50:50 초과이며, 또한 유니라멜라 리포솜은 광 산란 분석에 의해 측정시 마이크로미터 범위의 중위 직경 (median diameter)을 가진다. 추가적으로 바람직한 보강제는 2019년 10월 8일에 등록된 미국 특허 번호 10,434,167 (Carl R. Alving et al.)에 기술되어 있으며, 그 전체가 원용에 의해 본원에 포함된다.
본 발명의 맥락에서, 본원에 개시된 면역원성 항원의 에피토프, 복합물 또는 미모토프 서열에서, 펩타이드에 대한 면역학적 반응을 실질적으로 변형시키지 않으면서, 비교적 적은 수의 (예를 들어, 1 또는 2) 보존적인 치환 또는 중성 치환 (neutral substitution)을, 행할 수 있다. 일부 경우에, 특정 펩타이드에서 하나 이상의 아미노산의 치환은 실제 변형된 펩타이드 또는 그 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 조성물이 제공된 동물에서 펩타이드가 면역 또는 T 세포 반응을 유발하는 능력을 강화하거나 또는 개선하도록 작용할 수 있다. 적합한 치환은 일반적으로 컴퓨터 프로그램을 이용해 식별할 수 있으며, 이러한 치환의 효과는 변형된 펩타이드와 항혈청 및/또는 T 세포의 반응성에 기반하여 검증할 수 있다. 이에, 바람직한 특정 구현예에서, 본원에 개시된 진단 및 치료학적 방법에 이용하기 위한 펩타이드는, 변형된 펩타이드가 항원-특이적인 항혈청 및/또는 T 세포 또는 클론과 반응하는 능력이 비-변형된 펩타이드와 비교해 현저하게 낮지 않도록, 하나 이상의 아미노산 잔기가 하나 이상의 대체 아미노산으로 치환된 1차 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
전술한 바와 같이, 바람직한 펩타이드 변이체는 에피토프의 하나 이상의 보존적인 치환을 가진 것이며, 그래서 미모토프를 형성할 수도 있다. "보존적인 치환"은 펩타이드 화학 분야에서 당업자가 펩타이드의 2차 구조 및 하이드로패틱 (hydropathic) 특성이 실질적으로 변형되지 않을 것으로 예상할 수 있는 바와 같이, 아미노산을 비슷한 특성의 다른 아미노산으로 치환하는 것이다. 아미노산 치환은 일반적으로 잔기의 극성, 전하, 용해성, 소수성, 친수성 및/또는 양친매성 특성의 유사성에 기반하여 이루어질 수 있다. 예를 들어, 음으로 하전된 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함하고; 양으로 하전된 아미노산은 라이신 및 아르기닌을 포함하고; 친수성 값이 비슷한 비-하전된 극성 헤드 기를 가진 아미노산은 루신, 이소루신 및 발린을 포함하고; 글리신 및 알라닌; 아스파라긴 및 글루타민; 및 세린, 트레오닌, 페닐알라닌 및 티로신이 있다. 보존적인 변화를 나타내는 아미노산 치환의 예로는 다음을 포함한다: (1) Ala, Pro, Gly, Glu, Asp, Gln, Asn, Ser 또는 Thr 중 하나 이상의, 동일한 군으로부터 유래한 하나 이상의 잔기로의 치환; (2) Cys, Ser, Tyr 또는 Thr 잔기 중 하나 이상의 동일한 군에 속하는 하나 이상의 잔기로의 치환; (3) Val, Ile, Leu, Met, Ala 또는 Phe 잔기 중 하나 이상의 동일한 군에 속하는 하나 이상의 잔기로의 치환; (4) Lys, Arg 또는 His 잔기 중 하나 이상의 동일한 군에 속하는 하나 이상의 잔기로의 치환; 및 (5) Phe, Tyr, Trp 또는 His 잔기 중 하나 이상의 동일한 군에 속하는 하나 이상의 잔기로의 치환. 변이체는 아울러 또는 대안적으로 비-보존적인 변화를, 예를 들어 (1) 군의 아미노산 잔기 하나를 (2) 군, (3) 군, (4) 군 또는 (5) 군의 아미노산으로 치환함으로써, 포함할 수 있다. 변이체는 또한 (또는 대안적으로) 펩타이드의 면역원성, 2차 구조 및 하이드로패틱 특성에 최소한의 영향을 미치는 아미노산을 예를 들어 결손 또는 부가함으로써 변형할 수 있다.
에피토프 및 미모토프는 복합 항원 서열에서 서로에 대해 임의 순서로 정렬될 수 있다. 2 이상의 에피토프 서열 2종 사이에 위치하는 스페이서 아미노산 개수는 임의의 실제적인 범위일 수 있으며, 예를 들어 인접 에피토프와 미모토프 사이에 위치한 아미노산은 1 또는 2개에서 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 심지어 10개 이상일 수 있다.
본 발명의 다른 구현예는 본 발명의 항원 서열을 코딩하는 DNA, RNA 및 PNA 구조체를 비롯한 폴리뉴클레오티드에 대한 것이다. 이들 폴리뉴클레오티드는 단일 가닥 (코딩 또는 안티센스) 또는 이중 가닥일 수 있으며, DNA (게놈, cDNA 또는 합성) 또는 RNA 분자일 수 있다. 부가적인 코딩 또는 비-코딩 서열은 본 발명의 폴리뉴클레오티드 내에 반드시 그런 것은 아니지만 존재할 수 있으며, 폴리뉴클레오티드는 다른 분자 및/또는 지지 물질에 반드시 그런 것은 아니지만 연결될 수 있다. 당해 기술 분야의 당업자가 이해하는 바와 같이, 유전자 코드의 축중 결과로, 주어진 1차 아미노산 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열은 여러개 존재한다. 이들 폴리뉴클레오티드들 중 일부는 임의의 네이티브 유전자의 뉴클레오티드와 최소한의 상동성을 가진다. 그럼에도 불구하고, 코돈 사용 차이로 인해 다양한 폴리뉴클레오티드도 본 발명에서 구체적으로 고려된다. 면역원성 펩타이드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 일반적으로 생체내 또는 시험관내에서 펩타이드를 생산하는데 이용할 수 있다. 임의의 폴리뉴클레오티드는 생체내 안정성을 높이기 위해 추가로 변형될 수 있다. 가능한 변형으로는, 비-제한적으로, 5' 및 3'-말단에 측면 서열 부가; 백본에 포스포다이에스테라제 연결 대신 포스포로티오에이트 또는 2'-o-메틸의 사용; 및/또는 이노신, 퀘오신 (queosine) 및 비투토신 (wybutosine)과 같은 비-전통적인 염기뿐 아니라 아데닌, 시티딘, 구아닌, 티민 및 우리딘의 아세틸- 메틸-, 티오- 및 기타 변형된 형태의 함유를 포함한다.
본 발명의 다른 구현예는 백신 및 면역학적 조성물로서 본 발명의 면역원성 항원을 코딩하는 합성 또는 재조합 핵산에 관한 것이며, 이는 투여된 다음 동일한 병원체 또는 복수의 병원체에 대해 면역원성 반응을 구축하는 면역원성 항원으로 번역될 수 있다. 본 발명의 핵산 백신에 의해 치료 또는 예방가능할 수 있는 바람직한 병원체로는 박테리아, 바이러스, 기생충 및 진균 감염 등이 있지만, 이로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예는 백신 접종이 필요한 환자에게 백신을 치료학적 또는 예방학적 유효량으로 투여하여, 환자에서 병원체에 대해 검출가능한 면역 반응을 제공하는 것을 포함하는 병원체에 대해 개체를 백신 접종하는 방법을 포함하며, 여기서 백신은 복수의 박테리아 입자들에서 복수의 상동적인 단백질들에 일부 보존되어 있을 수 있는, 하나 이상의 에피토프, 복합물, 미모토프 또는 기타 서열을 포함하는 면역원성 항원과, 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 바람직한 약제학적으로 허용가능한 성분으로는 예를 들어, 물, 지방산, 사카라이드, 다당류, 오일, 에스테르, 지질, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 희석제, 부형제, 벌킹제, 착색제 또는 이들의 조합 등이 있으나, 이들로 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 다른 구현예는 본 발명의 면역원성 항원을 코딩하는 뉴클레오티드 또는 DNA 백신에 관한 것이다. 본 발명의 DNA 백신은 면역원성 항원의 유전자 서열 + 세포에서 복합 항원의 발현을 제공하기 위한 기타 필수 서열을 포함한다. 포유류에 유전자 조작된 DNA를 주입함으로써, 면역원성 항원은 바람직하게는 세포 내 또는 세포 상에서 제조되고, 포유류의 면역 시스템이 이를 인지하여 항원, 즉 병원체에 대해 세포성 반응 또는 체액성 반응을 구축한다. DNA 백신은 포유류에서 보다 포괄적이고 완전한 면역 반응을 유도하는 능력 등의 기존 백신을 능가하는 여러가지 이점을 가진다. 이에, DNA 백신을 이용해 바이러스, 박테리아 및 기생충 기원의 여러가지 수종의 병원성 유기체로부터 유발되는 질환뿐 아니라 일부 종양으로부터 포유류를 보호할 수 있다.
DNA 백신은, 전형적으로, 항원 서열을 병원체로부터 유래한 특이적인 단백질 서열로 전사 및 번역하도록, 유전자 변형된 벡터 또는 플라스미드에 함유된 면역원성 항원을 코딩하는, 함유된 박테리아 DNA를 포함한다. 예를 들어, 백신 DNA를 신체 세포에 주입하면, 세포 장치가 DNA를 복합 항원으로 전사 및 번역한다. 비-천연성이며 포유류 면역 시스템에 의해 인지되지 않는 면역원성 항원은, 세포에 의해 가공 처리되고, 가공된 단백질, 바람직하게는 에피토프는 세포 표면 상에 나열된다. 이들 항원이 외래 물질로 인지되면, 포유류의 면역 시스템은 감염으로부터 포유류를 보호하는 적절한 면역 반응을 유발한다. 아울러, 본 발명의 DNA 백신은 바람직하게는, 비-제한적으로, 마우스 또는 인간 세포 등의 대상 포유류 세포에서 발현시키도록 코돈 최적화된다. 바람직한 구현예에서, 코돈 최적화는 원하는 펩타이드 서열이 발현되도록 구체적인 세포 타입에 대해 요망되는 코돈 사용 편향성 (코딩 DNA에서 동일한 의미의 코돈의 발생 빈도)을 선택하는 것을 수반한다.
본 발명의 다른 구현예는 단독 또는 하나 이상의 다른 예방 및/또는 테리피 용법과 조합하여, 세포 또는 동물에 투여하기 위한 약제학적으로 허용가능한 조성물 형태의 치료학적 및 예방학적 물질에 관한 것이다. 본 발명의 치료학적 및 예방학적 물질은 에피토프, 미모토프, 복합 에피토프 및 이들의 조합을 함유할 수 있는 면역원성 항원, 본 발명의 DNA 서열, 본 발명의 항체, 및/또는 본 발명의 면역원성 항원에 노출 또는 감작된 T 세포를 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제 및 담체 용액의 제형은, 본원에 기술된 구체적인 조성물을 다양한 치료 용법에서 이용하기 위한 적합한 투약 및 치료 용법의 개발에서와 같이, 당해 기술 분야의 당업자들에게 잘 알려져 있다.
면역원성 조성물(들)의 양(들) 및 이러한 면역원성 조성물(들)의 투여에 필요한 시간은 본 발명의 기술이 유익한 당해 기술 분야의 통상적인 당업자의 영역 내일 것이다. 본원에 개시된 면역원성 조성물의 치료학적 유효량, 약제학적 유효량 및/또는 예방학적 유효량의 투여는, 예를 들어 이러한 시술을 받는 환자에게 원하는 혜택을 제공하기 충분한 양으로 전달 물질을 1회 주사하는 등의, 1회 투여에 의해 달성될 수 있다. 대안적으로, 일부 경우에, 이러한 조성물을 선택 개체에 투여하는 것을 감독하는 의료 실무자에 의해 결정될 수 있는 바와 같이, 면역원성 조성물의 수회, 또는 연속적인 투여를 비교적 단기간 동안 또는 심지어 비교적 연장된 기간 동안 제공하는 것이 바람직할 수 있다.
본 발명의 면역원성 조성물 및 백신은, 바람직하게는, 예방학적으로 또는 치료학적으로 유효하고 바람직하게는 면역원성일 수 있는 바와 같이, 투약 제형에 적합한 방식으로, 그리고 그러한 양으로 투여된다. 투여는 근육내 (IM), 피하 (SQ), 진피내, 비강내, 복막내 또는 당해 기술 분야의 당업자들에게 공지되고 조성물에 적절한 기타 방법일 수 있다. 투여되는 양은 예를 들어 환자의 면역 시스템이 면역 반응을 유발하는 능력과 원하는 보호 수준 등의 치료할 개체에 따라 달라진다. 적절한 투여량 범위는 백신 접종 당 활성 성분 수백 마이크로그램 (㎍) 정도일 수 있으며, 바람직한 범위는 약 0.1 ㎍ 내지 2000 ㎍ (심지어 이보다 더 높음, 예를 들어, 약 1 내지 약 10 mg 범위도 고려됨), 예컨대 약 0.5 ㎍ 내지 1000 ㎍, 바람직하게는 약 1 ㎍ 내지 약 500 ㎍, 특히 약 10 ㎍ 내지 약 100 ㎍ 범위이다. 초기 투여 및 부스트 샷에 적합한 용법은 또한 가변적일 수 있지만, 전형적으로는 처음 투여한 다음 선택적이나 바람직한 후속 접종 또는 기타 주기적인 투여하는 것으로 이루어진다.
특정 구현예에서, 용량은 단백질 또는 표적 항원 총 약 1 ㎍ 내지 약 1 mg 범위로 구성될 것이다. 예시적인 일 구현예에서, 백신의 투여량 범위는 약 0.1 ㎍ 내지 약 10 mg이다. 그러나, 전달되는 펩타이드의 양을 토대로 투여량을 조정하는 것이 바람직할 수 있다. 다른 예로, 이러한 범위는 주로 당해 기술 분야의 당업자가 기존 투약 기법에 따라 벗어날 수도 있는 지침이다. 정확한 투여량은 면역학적 유효량이 전달되도록 적절한 숙주에서 발생되는 접합체의 면역원성을 평가함으로써 결정할 수 있다. 면역학적 유효량은 환자의 면역 시스템이 면역원성 조성물 또는 백신에 대한 면역 반응을 확립하도록 자극하는 양이다. 바람직하게는, 미생물 감염에 의해 유발되는 질환으로부터 장기간 보호를 제공하기에 충분한 면역학적 기억 수준을 달성한다. 본 발명의 면역원성 조성물 또는 백신은 바람직하게는 보강제와 함께 제형화될 수 있다. "장기간"은 바람직하게는 적어도 약 6개월 이상, 적어도 약 1년 이상, 적어도 약 2년 내지 5년 이상, 또는 심지어 적어도 약 2년 내지 약 10년 이상, 또는 그 이상의 기간을 의미한다.
본 발명의 다른 구현예는 본원에 기술된 면역원성 항원 및 이의 보존적인 변이체에 대해 특이적인 항체에 관한 것이다. 이들 폴리펩타이드에 대해 특이적인 항체는, 예를 들어, 진단 및 치료 목적으로 둘다, 예를 들어 표적 폴리펩타이드의 활성, 분포 및 발현과 관련하여, 이용 가능하다. 본 발명의 항체는 클래스 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE일 수 있으며, 비-제한적으로, 다클론 항체, 단일클론 항체, 다중 또는 단쇄 항체, 예컨대 가변성 중쇄 및 가변성 경쇄가 (직접 또는 펩타이드 링커를 통해) 서로 연결되어 연속적인 폴리펩타이드를 형성하는 단쇄 Fv (sFv 또는 scFv) 항체, 및 인간화된 항체 또는 키메라 항체를 포함한다.
본 발명의 면역원성 펩타이드에 대해 특이적인 항체는 당해 기술 분야에 잘 알려진 방법으로 제조할 수 있다. 이러한 항체는 비-제한적으로 다클론, 단일클론, 키메라, 인간화된, 단쇄, Fab 단편 및 Fab 발현 라이브러리에 의해 제조되는 단편을 포함할 수 있다. 다클론 항체 및 단일클론 항체를 생산하는 다수의 방법이 당해 기술 분야의 당업자에게 알려져 있으며, 본 발명의 폴리펩타이드에 특이적인 항체를 제조하도록 수정하거나 및/또는 본 발명의 폴리뉴클레오티드 서열에 의해 코딩할 수 있다 (예를 들어, Coligan Current Protocols in Immunology Wiley/Greene, NY; Paul (ed.) (1991); (1998) Fundamental Immunology Fourth Edition, Lippincott-Raven, Lippincott Williams & Wilkins; Harlow and Lane (1989) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press, NY, USA; Stites et al. (Eds.) Basic and Clinical Immunology (4th ed.) Lange Medical Publications, Los Altos, CA, USA 및 문헌에 인용된 참조문헌; Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice (2d ed.) Academic Press, New York, NY, USA; 1986; 및 Kohler and Milstein (1975)을 참조함).
하기 실시예들은 본 발명의 구현예들을 예시하지만, 본 발명을 제한하는 것으로 간주되어서는 안된다.
실시예
실시예 1
에탄올-사멸된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 (MTB)로 면역화된 마우스로부터 구축한 단일클론 항체 (MAB) 2종 (항-MTB MAB GG9 및 JG7)과 항-LTA MAB 1종 (96-110)을 효소-연계된 면역흡착 분석 (ELISA)에 의해 스크리닝하여, 세포벽 항원의 인지를 확인하였다. 모두 스타필로코커스 아우레우스로부터 유래한 세포벽 혼합물 및 초순수 PGN에 대한 MAB GG9, JG7 및 96-110의 결합성을 분석하였다. LTA를 겨냥하는 MAB (96-110)는 LTA 및 PGN 둘다 함유한 비-정제 세포벽 혼합물에만 결합하고 (도 1), (LTA 등의 다른 세포벽 성분을 함유하지 않는) 초순수 PGN에는 결합하지 않은 반면 (도 2), 항-MTB MAB JG7 및 GG9는 세포벽 혼합물과 초순수 PGN에 둘다 결합하였다. 즉, PGN 및 LTA에 특이적인 항체는 세포벽 성분들 각각에 강하게 결합할 수 있다 (도 1 및 2).
실시예 2
ICR 암컷 마우스에 비-접합 또는 CRM-접합된 초순수 PGN를 3가지 용량, 즉 5, 20 및 50 ㎍/마우스로, TiterMax Gold 보강제 (비-접합 PGN은 단 50 ㎍만 사용)와 함께 피하 주사하여 면역화하였다. 부스터 면역화는 20일, 42일 및 64일에 수행하였으며, 28일, 42일, 63일 및 81일에 망막-안와 채혈을 수행하였다. PGN, MTB 및 다양한 그람 양성 박테리아에 결합하는 항혈청을 ELISA에 의해 분석하였다. 비-접합 PGN은 마우스에서 면역성이었지만, 일반적으로 접합된 군이 비-접합 반응과 비교해 더 강한 반응을 나타내었다 (도 3). 세포벽 성분 PGN과 여러가지 MTB 균주에 대해 강한 면역 반응이 검출되었으며, 최고 역가는 MS 190, 191, 196 & 197에서 명확하였다 (도 4 및 5). 따라서, PGN 단독 또는 PGN-CRM 접합 백신으로 면역화한 마우스는 강건한 체액성 반응을 발생시키며, 이는 PGN에 대한 강한 결합성과 MTB 및 마이코박테리움 스메그마티스를 비롯한 마이코박테리아뿐 아니라 스타필로코커스 아우레우스, GBS, 스타필로코커스 에피더미디스 및 바실러스 섭틸리스와 같은 기타 그람 양성 박테리아에도 결합함을 입증해준다.
실시예 3
PGN 또는 LTA 백신을 이용한 면역화는 체액성 면역의 유도 및 항-PGN 및 항-LTA 항체를 분비하는 하이브리도마의 생산을 제공해준다. 세포벽 성분에 대해 생성된 이들 항체는 박테리아의 OPKA를 촉진하고, 혈액으로부터 소거를 강화할 수 있다. 특히, CRM-접합 PGN (20 ㎍)으로 면역화한 ICR 마우스 군으로부터, 마우스 190는 PGN, MTB 및 기타 그람 양성 박테리아에 대해 강한 면역 반응을 유발하였으며, 이의 비장 세포를 회수하여 하이브리도마 MD11을 생산하기 위해 골수종 세포주 SP2/0와 융합하였다. 항-PGN 양성 클론 (MD11) 수종이 PGN에 강하게 결합하였다 (도 6). 또한, 이들 클론은 마이코박테리아, 스타필로코커스 아우레우스 및 바실러스 섭틸리스에 대해서도 강한 결합성을 나타내었다 (도 7). 96 & 24웰 배양 플레이트에서 하이브리도마 MD11 클론 5종으로부터 수집한 상층액은 초순수 PGN, MTB, SMEG 및 기타 그람 양성 박테리아에 결합하였다 (도 5).
실시예 4
마이코박테리움에 결합하는 항체를 유발하는 MTB 알파 크리스탈린 단백질 (Acr)의 보존된 에피토프를 합성하였다. 이 단백질은 대식세포에서 MTB 생존과 잠복기 무증상 감염시 장기간 생육에 중요하다. 작은 보존된 Acr 에피토프 - SEFAYGSFVRTVSLPVGADE (서열번호 1; TB Pep 01로 지칭함)를 동정하였다.
TB Pep 01을 보존된 인플루엔자 HA 및 NA 복합 펩타이드 (GNLFIAPWGVIHHPHYEECSCY; 서열번호 25; HA의 인플루엔자 바이러스 에피토프, HA 및 NA; TB Pep 02로 지칭함)와 조합하여 복합 펩타이드를 구축하였다.
이 에피토프로 면역화한 마우스로부터 유래한 단일클론 항체 (MAB)는 TB Pep 01 및 TB Pep 02에 결합하였다 (도 8). 마우스 M1435로부터 유래한 하이브리도마 클론 LD7 및 CA6의 상층액은 3% NGS 첨가시 및 비-첨가시 다양한 항원에 결합하였다 (도 9 및 10). 항-TB Pep 01 정제한 MAB LD7 I BB2 및 CA6 II GA8은 일부 고정된 항원에 결합하였다 (도 11). 항-TB Pep 01 정제한 MAB LD7 및 CA6는 지수기 증식 중간 상태에 있는 마이코박테리움 스메그마티스 생균에 결합하였다 (~107 CFU/mL). 조건은 생균 및 1시간 동안 열-처리이거나 또는 1시간 동안 에탄올 처리였다 (도 12 및 13). 지수기 증식 중간 상태에 있는 마이코박테리움 스메그마티스 생균에 대한 항-TB Pep01 정제한 MAB LD7 및 CA6의 결합성 (도 14). 항-TB Pep01 MAB - LD7 및 CA6에 의한 마이코박테리움 스메그마티스 생균의 옵소닌탐식 살상이 대식세포주 U-937을 이용해 입증되었다.
TB Pep 01 CRM-접합체로 면역화한 마우스는 펩타이드에 결합하고 또한 마이코박테리움 스메그마티스와 같은 마이코박테리아에도 결합하는 항체를 유도하였으며, 마이코박테리움 스메그마티스에 대해 OPKA를 유도하였다.
실시예 5
TB Pep01은 MTB의 열 충격 단백질 알파-크리스탈린 (hsp20)에 대한 펩타이드이다. Hsp20은 마이코박테리움 속에 속하는 액티노박테리아 문의 비-결핵 종을 비롯한 마이코박테리움, 예를 들어 마이코박테리움 포르투이툼 (M. fortuitum)에서 발견되는 단백질 계열이다. Ying Yuan, et al., "The 16-kDa a-crystallin (Acr) protein of Mycobacterium tuberculosis is required for growth in macrophages", Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:9578-9583, August 1998을 참조하며, 이는 원용에 의해 본원에 포함된다. 하기 나타낸 바와 같이 (Hsp20/밑줄 표시된 aa 미스매치가 존재하는 알파 크리스탈린 계열 단백질), 마이코박테리움 투베르쿨로시스와 마이코박테리움 스메그마티스 간의 hsp20의 상동성은 80%이다 (아미노산 20개 중 16개):
서열번호 1 SEFAYGSFVRTVSLPVGADE (Acr) 마이코박테리움 투베르쿨로시스
서열번호 2 SEFAYGSFMRSVTLPPGADE 마이코박테리움 스메그마티스
서열번호 3 SEFSYGSFVRTVSLPGGADE 마이코박테리움 칸사시이
서열번호 4 SEFSYGSFVRTVSLPAGADE 마이코박테리움 만테니이
서열번호 5 SEFSYGSFVRTVTLPTDADE 마이코박테리움 포르투이툼
서열번호 6 SEFSYGSFARTVSLPAGANE 마이코박테리움 제노피
실시예 6
세포벽 PGN 및 LTA의 에피토프를 함유하고 박테리아 생균의 세포벽에 결합하는 항체를 유도하는 복합 펩타이드 백신은, 마이코박테리아, 스타필로콕시 및 기타 박테리아의 OPKA를 촉진할 수 있으며, 혈액으로부터 소거를 강화할 수 있다. LTA 및 PGN은 쇼크를 유도하므로, 세포벽 성분에 결합하는 항체는 마이코박테리아, 스타필로콕시 및 기타 박테리아로 감염된 환자에서 쇼크를 예방 및/또는 치료하기 위한 중요하고 유용한 전략을 제공할 수 있다. 이들 백신 및 항체는 단독으로 또는 다른 물질과 함께 박테리아 감염 및 쇼크를 예방 및/또는 치료할 수 있다. PGN과 LTA 에피토프의 조합으로, 다수의 박테리아 병원체에 존재하는 고도로 보존된 구조체에 대해 항체를 유도할 수 있다. 이렇게 생성된 항체는 많은 수의 박테리아에 대해 효과적이다. 서열의 예는 다음과 같다:
서열번호 7 WRMYFSHRHAHLRSP (옵소닉 MAB에 결합하는 LTA 에피토프/미모토프)
서열번호 8 WHWRHRIPLQLAAGR (옵소닉 MAB에 결합하는 LTA 에피토프/미모토프)
서열번호 9 WRMYFSHRHAHLRSPQYIKANSKFIGITE (LTA 미모토프 + T 세포 에피토프)
서열번호 10 WHWRHRIPLQLAAGRQYIKANSKFIGITE (LTA 미모토프 + T 세포 에피토프)
서열번호 11 QYIKANSKFIGITEWRMYFSHRHAHLRSP (T 세포 에피토프 + LTA 미모토프)
서열번호 12 QYIKANSKFIGITEWHWRHRIPLQLAAGR (T 세포 에피토프 + LTA 미모토프)
서열번호 13 WRMYFSHRHAHLRSPQYIKANSKFIGITEWHWRHRIPLQLAAGR (LTA 미모토프 + T 세포 에피토프 + LTA 미모토프)
서열번호 14 WRMYFSHRHAHLRSPWHWRHRIPLQLAAGR (LTA 미모토프 + LTA 미모토프)
서열번호 15 WHWRHRIPLQLAAGRWRMYFSHRHAHLRSP (LTA 미모토프 + LTA 미모토프)
서열번호 16 WRMYFSHRHAHLRSPWHWRHRIPLQLAAGRQYIKANSKFIGITE (LTA + LTA 미모토프 + T 세포 에피토프)
서열번호 17 QYIKANSKFIGITEWRMYFSHRHAHLRSPWHWRHRIPLQLAAGR (T 세포 에피토프 + LTA 미모토프 + LTA 미모토프)
서열번호 18 HSFKWLDSPRLR (LAM MTB 미모토프)
서열번호 19 ISLTEWSMWYRH (LAM MTB 미모토프)
서열번호 20 ISLTEWSMWYRHQYIKANSKFIGITEHSFKWLDSPRLR (LAM MTB 미모토프 + T 세포 에피토프 + LAM MTB 미모토프)
서열번호 21 QYIKANSKFIGITEHYEECSCYHSFKWLDSPRLR (T 세포 에피토프 + 인플루엔자 NA 에피토프 + LAM MTB 미모토프)
서열번호 22 SEFAYGSFVRTVSLPVGADEHSFKWLDSPRLR (MTB 알파 크리스탈린 단백질 에피토프)
서열번호 23 SEFAYGSFVRTVSLPVGADEHSFKWLDSPRLRQYIKANSKFIGITE (MTB 알파 크리스탈린 단백질 에피토프 + T 세포 에피토프)
서열번호 24 SEFAYGSFVRTVSLPVGADE (Acr 에피토프; TB Pep 01)
서열번호 25 GNLFIAPWGVIHHPHYEECSCY (Pep 11; HA, HA, 및 NA의 인플루엔자 바이러스 에피토프)
서열번호 26 SEFAYGSFVRTVSLPVGADEGNLFIAPWGVIHHPHYEECSCY (Acr 에피토프 + HA, HA, 및 NA의 인플루엔자 바이러스 에피토프; TB Pep 02)
서열번호 27 SLLTEVETPIRNEWGLLTEVETPIRQYIKANSKFIGITE (Pep 5906)
서열번호 28 GNLFIAPWGVIHHPHYEECSCYQYIKANSKFIGITE (Pep 11 + T 세포 에피토프; HA, HA, 및 NA의 인플루엔자 바이러스 에피토프; Pep 64)
서열번호 29 QYIKANSKFIGITEGNLFIAPWGVIHHPHYEECSCY (T 세포 에피토프 + Pep 11; HA, HA, 및 NA의 인플루엔자 바이러스 에피토프; Pep 63)
실시예 7
서열번호 25는 HA 복합 서열 2종과 NA 유래 보존된 에피토프 서열로 구성된 인플루엔자 복합 항원이다. 이 인플루엔자 복합 항원을 이용한 마우스 면역화로 군 1 및 2에 속하는 인플루엔자 A 바이러스에 결합하는 항체를 보존된 에피토프에 대해 유도하였으며, 이는 또한 T 세포 에피토프 (서열번호 27)를 함유한 인플루엔자 매트릭스 복합 펩타이드 항원과 함께 제형화할 수 있다. 아울러, N 말단과 C 말단 양쪽에 (Pep 63; 서열번호 29 및 Pep 64; 서열번호 28) T 세포 에피토프를 가진 Pep 11 (서열번호 25)을 합성하였다. 각각 Addavax 중의 Pep 5906을 이용해 제형화된, 비-접합 Pep 11, 또는 Pep 64를 이용한 ICR 마우스 SQ의 면역화는, HA, NA 및 매트릭스 에피토프에 대해 강력한 항-인플루엔자 및 에피토프 특이적인 혈청 항체를 유도하였다. 마우스에 펩타이드 제형 20 ㎍이 제공된 마우스는 1:100보다 높은 혈청 역가로 에피토프 특이적인 IgG1 항체를 발현하였다. Pep 11 및 Pep 64 복합 항원 둘다 인플루엔자에 대해 혈청 항체를 강하게 자극할 수 있다. 복합 항원 서열 TB Pep 2 (인플루엔자 Pep 11 및 TB Pep 1으로 구성)는 마우스에 투여시 인플루엔자 및 인플루엔자 에피토프에 대해, 또한 MTB 열 충격 단백질에 대해 항체를 유도하였다.
실시예 8
ICR 마우스 및 코튼 랫을, ALFQ를 이용해 제형화한, 비-접합 복합 인플루엔자 펩타이드 백신 (T 세포 에피토프를 가진 인플루엔자 HA, NA 및 M2e 복합 펩타이드; Pep 11; 서열번호 25) 1 ㎍을 근육내 또는 진피내 경로를 통해 투여하여, 번역화하였다 (코튼 랫에는 근육내 또는 진피내 주사 둘다 제공). 이들 2가지 투여 경로 모두 1군 및 2군 인플루엔자 바이러스 (Flu A California H1N1/pdm09 및 Flu A Hong Kong H3N2/4801/2014)에 결합하는 혈청 IgG 항체를 유도하였다. 아울러, ALFQ 중에 제형화된 복합 인플루엔자 백신 1 ㎍은 진피내 및 근육내 경로에 의해 제공된 인플루엔자 바이러스 둘다에 대해 중화 항체를 유도하였다. 이들 데이터는, ALFQ 중에 제형화된 복합 인플루엔자 펩타이드 백신이 매우 낮은 용량에서 담체 접합 없이도 다양한 면역화 경로에 의한 투여시 강한 면역 반응을 유도함을, 입증해준다. 이는 제조 효율성 및 생산 단가 감소 측면에 이점을 제공한다. 저 용량 진피내 투여 역시 백신의 단가를 낮출 수 있으며, 새 및 돼지와 같은 동물의 면역화와 인간에 대한 대규모 글로벌 면역화에 더욱 유용할 수 있다.
당해 기술 분야의 당업자라면 본원에 개시된 본 발명의 설명 및 실시를 고려해 본 발명의 다른 구현예들 및 용도들이 명백할 것이다. 모든 간행물, 미국 및 외국 특허 및 특허 출원 등의 본원에 인용된 모든 참조문헌들은 그 전체가 구체적으로 원용에 의해 본 명세서에 포함된다. 용어 '포함하는'이 사용되는 경우 용어 '로 구성되는' 및 '로 필수적으로 구성되는'을 망라하는 것으로 의도된다. 아울러, 용어 '포함하는', '함유하는' 및 '가지는'은 제한되는 것으로 의도되지 않는다. 설명 및 실시예는 단지 예시로 간주되며 본 발명의 진정한 범위 및 사상은 첨부된 청구항에 의해 정의되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> LONGHORN VACCINES AND DIAGNOSTICS, LLC <120> IMMUNOGENIC COMPOSITE ANTIGENS <130> 3022.051.PCT <150> 63/246,360 <151> 2021-09-21 <150> 63/094,472 <151> 2020-10-21 <150> 63/094,116 <151> 2020-10-20 <160> 29 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 1 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Met Arg Ser Val Thr Leu Pro Pro 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu 20 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Ser Glu Phe Ser Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu 20 <210> 4 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Ser Glu Phe Ser Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Ala 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu 20 <210> 5 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Ser Glu Phe Ser Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Thr Leu Pro Thr 1 5 10 15 Asp Ala Asp Glu 20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Ser Glu Phe Ser Tyr Gly Ser Phe Ala Arg Thr Val Ser Leu Pro Ala 1 5 10 15 Gly Ala Asn Glu 20 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 7 Trp Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro 1 5 10 15 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 8 Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg 1 5 10 15 <210> 9 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 9 Trp Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 20 25 <210> 10 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 20 25 <210> 11 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 11 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Trp Arg 1 5 10 15 Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro 20 25 <210> 12 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 12 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Trp His 1 5 10 15 Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg 20 25 <210> 13 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 13 Trp Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro Gln 1 5 10 15 Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Trp His Trp 20 25 30 Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg 35 40 <210> 14 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 14 Trp Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro Trp 1 5 10 15 His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg 20 25 30 <210> 15 <211> 30 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 15 Trp His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg Trp 1 5 10 15 Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro 20 25 30 <210> 16 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 16 Trp Arg Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro Trp 1 5 10 15 His Trp Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg Gln Tyr 20 25 30 Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 35 40 <210> 17 <211> 44 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 17 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Trp Arg 1 5 10 15 Met Tyr Phe Ser His Arg His Ala His Leu Arg Ser Pro Trp His Trp 20 25 30 Arg His Arg Ile Pro Leu Gln Leu Ala Ala Gly Arg 35 40 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 18 His Ser Phe Lys Trp Leu Asp Ser Pro Arg Leu Arg 1 5 10 <210> 19 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 19 Ile Ser Leu Thr Glu Trp Ser Met Trp Tyr Arg His 1 5 10 <210> 20 <211> 38 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 20 Ile Ser Leu Thr Glu Trp Ser Met Trp Tyr Arg His Gln Tyr Ile Lys 1 5 10 15 Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu His Ser Phe Lys Trp Leu 20 25 30 Asp Ser Pro Arg Leu Arg 35 <210> 21 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu His Tyr 1 5 10 15 Glu Glu Cys Ser Cys Tyr His Ser Phe Lys Trp Leu Asp Ser Pro Arg 20 25 30 Leu Arg <210> 22 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu His Ser Phe Lys Trp Leu Asp Ser Pro Arg Leu Arg 20 25 30 <210> 23 <211> 46 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu His Ser Phe Lys Trp Leu Asp Ser Pro Arg Leu Arg 20 25 30 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 35 40 45 <210> 24 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 24 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu 20 <210> 25 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 25 Gly Asn Leu Phe Ile Ala Pro Trp Gly Val Ile His His Pro His Tyr 1 5 10 15 Glu Glu Cys Ser Cys Tyr 20 <210> 26 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 26 Ser Glu Phe Ala Tyr Gly Ser Phe Val Arg Thr Val Ser Leu Pro Val 1 5 10 15 Gly Ala Asp Glu Gly Asn Leu Phe Ile Ala Pro Trp Gly Val Ile His 20 25 30 His Pro His Tyr Glu Glu Cys Ser Cys Tyr 35 40 <210> 27 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 27 Ser Leu Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Asn Glu Trp Gly Leu 1 5 10 15 Leu Thr Glu Val Glu Thr Pro Ile Arg Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser 20 25 30 Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu 35 <210> 28 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 28 Gly Asn Leu Phe Ile Ala Pro Trp Gly Val Ile His His Pro His Tyr 1 5 10 15 Glu Glu Cys Ser Cys Tyr Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile 20 25 30 Gly Ile Thr Glu 35 <210> 29 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 29 Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu Gly Asn 1 5 10 15 Leu Phe Ile Ala Pro Trp Gly Val Ile His His Pro His Tyr Glu Glu 20 25 30 Cys Ser Cys Tyr 35

Claims (52)

  1. 2종 이상의 박테리아 세포벽 에피토프 또는 하나 이상의 박테리아 세포벽 에피토프와 하나 이상의 미모토프를 포함하는 연속적인 펩타이드; 및
    T 세포 자극 에피토프 및/는 보강제를 포함하는,
    면역원성 항원.
  2. 제1항에 있어서, 상기 면역원성 항원이 마이코박테리아의 에피토프를 포함하는, 면역원성 항원.
  3. 제2항에 있어서, 상기 마이코박테리아가 마이코박테리움 투베르쿨로시스 (M. tuberculosis), 마이코박테리움 보비스 (M. bovis) 또는 마이코박테리움 스메그마티스 (M. smegmatis)를 포함하는, 면역원성 항원.
  4. 제2항에 있어서, 마이코박테리아의 에피토프 하나 이상이 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질 (alpha crystalline protein), 열 충격 단백질, 아라비노갈락탄 단백질, 글리신-풍부 단백질, 프롤린-풍부 단백질, 슈도펩티도글리칸, 리포테이코산 또는 리포폴리사카라이드의 에피토프를 포함하는, 면역원성 항원.
  5. 제1항에 있어서, 상기 미모토프가 병원체의 에피토프를 모방하는, 면역원성 항원.
  6. 제5항에 있어서, 상기 미모토프는 병원체의 에피토프와 아미노산 1개, 2개, 3개 또는 4개 차이를 가진, 면역원성 항원.
  7. 제5항에 있어서, 상기 병원체가 마이코박테리아 또는 인플루엔자 바이러스를 포함하는, 면역원성 항원.
  8. 제7항에 있어서, 상기 미모토프가 마이코박테리아의 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질, 열 충격 단백질, 아라비노갈락탄 단백질, 글리신-풍부 단백질, 프롤린-풍부 단백질, 슈도펩티도글리칸, 리포테이코산 또는 리포폴리사카라이드의 에피토프를 모방하는, 면역원성 항원.
  9. 제7항에 있어서, 상기 인플루엔자 바이러스의 에피토프가 HA, NA, M2e, HEF 또는 CM2 단백질의 에피토프를 포함하는, 면역원성 항원.
  10. 제1항에 있어서, 상기 에피토프 및 미모토프가 모두 단일한 펩타이드를 따라 연속적인, 면역원성 항원.
  11. 제1항에 있어서, 상기 에피토프 및 미모토프가 동일한 병원체의 다른 종, 균주 (strain), 혈청형 또는 분리주로부터 유래한, 면역원성 항원.
  12. 제1항에 있어서, 상기 T 세포 자극 에피토프가 무독화된 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 무독화된 디프테리아 독소, 디프테리아 톡소이드, 천연 CRM, 재조합 CRM, 파상풍 톡소이드, 슈도모나스 엑소단백질 A, 슈도모나스 에어루지노사 톡소이드, 보르데텔라 퍼투시스 톡소이드, 클로스트리듐 퍼프린겐스 톡소이드, 에세리키아 콜라이 이열성 독소 B 서브유닛, 네이세리아 메닝기티디스 외막 복합체, 헤모필러스 인플루엔자 단백질 D, 플라젤린 Fli C, 투구게 헤모시아닌, 또는 이들의 단편, 유도체 또는 변형물을 포함하는, 면역원성 항원.
  13. 제1항에 있어서, 상기 보강제가 프로인트 보강제, 리포솜, 사포닌, 지질 A, 스쿠알렌, 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 리포솜, QS21 사포닌을 함유한 리포솜, QS21 사포닌을 함유하며 알루미늄 하이드록사이드에 흡착된 리포솜, 포화 인지질, 콜레스테롤 및/또는 모노포스포릴을 함유한 리포솜, ALFQ, ALFA, AS01, 및/또는 이들의 변형물 또는 유도체를 포함하는, 면역원성 항원.
  14. 마이코박테리아의 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질 또는 열 충격 단백질의 에피토프와 인플루엔자 바이러스의 HA, NA 또는 M2e 단백질의 미모토프를 포함하고, T 세포 자극 에피토프로서 CRM 및/또는 보강제로서 ALFQ를 추가로 포함하는, 면역원성 항원.
  15. 마이코박테리아의 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질 또는 열 충격 단백질의 에피토프와 마이코박테리아의 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질 또는 열 충격 단백질의 에피토프에 대한 미모토프를 포함하고, T 세포 자극 에피토프로서 CRM 및/또는 보강제로서 ALFQ를 추가로 포함하는, 면역원성 항원.
  16. 제1항의 항원을 포함하는 백신.
  17. 제16항에 있어서, 리포솜-기반의 보강제를 포함하는, 백신.
  18. 제17항에 있어서, 상기 리포솜-기반의 보강제가 ALFQ를 포함하는, 백신.
  19. 제16항에 있어서, 무독화된 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 무독화된 디프테리아 독소, 디프테리아 톡소이드, 천연 CRM, 재조합 CRM 또는 파상풍 톡소이드를 T 세포 자극 에피토프로서 포함하는, 백신.
  20. 제1항의 면역원성 항원 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 제공하여 조성물을 제조하는 단계; 및
    상기 조성물을 포유류에 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 조성물이 박테리아 감염에 대해 면역원성 반응을 유발하는,
    박테리아 감염을 치료 또는 예방하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 상기 박테리아 세포벽 에피토프가 마이코박테리아의 에피토프를 포함하는, 방법.
  22. 제20항에 있어서, 상기 면역원성 반응이 적어도 6개월 동안 지속되는, 방법.
  23. 제20항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 담체가 물, 지방산, 사카라이드, 다당류, 오일, 에스테르, 지질, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 희석제, 부형제, 벌킹제, 착색제 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  24. 제20항에 있어서, 상기 투여가 근육내, 피하, 진피내, 비강내 또는 복막내 투여를 포함하는, 방법.
  25. 제20항에 있어서, 상기 면역원성 항원이 인플루엔자 바이러스의 에피토프에 대한 미모토프를 포함하고, 상기 투여는 인플루엔자 바이러스 감염에 대해 면역원성 반응을 또한 유발하는, 방법.
  26. 제1항의 면역원성 항원에 특이적으로 반응하는 항체.
  27. 제26항에 있어서, 클래스 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM의 항체 또는 이들의 단편 또는 조합을 포함하는, 항체.
  28. 제26항에 있어서, 옵소닌성 (opsonic)인, 항체.
  29. 제26항에 있어서, 다클론, 단일클론 또는 인간화된 항체를 포함하는, 항체.
  30. 제29항의 단일클론 항체를 발현하는 하이브리도마.
  31. 제26항의 항체를 투여하는 것을 포함하는 환자 치료 방법.
  32. 하나 이상의 미모토프 및 T 세포 자극 에피토프 및/또는 보강제를 포함하는 면역원성 조성물.
  33. 제32항에 있어서, 상기 미모토프가 병원체의 에피토프를 모방하는, 면역원성 조성물.
  34. 제33항에 있어서, 상기 미모토프는 병원체의 에피토프에 대해 아미노산 1개, 2개, 3개 또는 4개 차이를 가진, 면역원성 조성물.
  35. 제33항에 있어서, 상기 병원체가 마이코박테리아 또는 인플루엔자 바이러스를 포함하는, 면역원성 조성물.
  36. 제35항에 있어서, 상기 미모토프가 마이코박테리아의 펩티도글리칸, 알파 크리스탈린 단백질, 열 충격 단백질, 아라비노갈락탄 단백질, 글리신-풍부 단백질, 프롤린-풍부 단백질, 슈도펩티도글리칸, 리포테이코산 또는 리포폴리사카라이드의 에피토프를 모방하는, 면역원성 조성물.
  37. 제35항에 있어서, 상기 미모토프가 인플루엔자 바이러스의 HA, NA, M2e, HEF 또는 CM2 단백질의 에피토프를 모방하는, 면역원성 조성물.
  38. 제32항의 조성물을 포함하는 백신.
  39. 제38항에 있어서, 리포솜-기반의 보강제를 포함하는, 백신.
  40. 제39항에 있어서, 상기 리포솜-기반의 보강제가 ALFQ를 포함하는, 백신.
  41. 제38항에 있어서, 무독화된 파상풍 독소, 파상풍 독소 중쇄 단백질, 무독화된 디프테리아 독소, 디프테리아 톡소이드, 천연 CRM, 재조합 CRM 또는 파상풍 톡소이드를 T 세포 자극 에피토프로서 포함하는, 백신.
  42. 제32항의 면역원성 항원 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 제공하여 조성물을 제조하는 단계; 및
    상기 조성물을 포유류에 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 조성물이 박테리아 감염에 대해 면역원성 반응을 유발하는,
    박테리아 감염을 치료 또는 예방하는 방법.
  43. 제42항에 있어서, 상기 박테리아 세포벽 에피토프가 마이코박테리아의 에피토프를 포함하는, 방법.
  44. 제42항에 있어서, 상기 면역원성 반응이 적어도 6개월 동안 지속되는, 방법.
  45. 제42항에 있어서, 상기 약제학적으로 허용가능한 담체가 물, 지방산, 사카라이드, 다당류, 오일, 에스테르, 지질, 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 희석제, 부형제, 벌킹제, 착색제 또는 이들의 조합을 포함하는, 방법.
  46. 제42항에 있어서, 상기 투여가 근육내, 피하, 진피내, 비강내 또는 복막내 투여를 포함하는, 방법.
  47. 제32항의 면역원성 조성물에 특이적으로 반응하는 항체.
  48. 제47항에 있어서, 클래스 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM의 항체 또는 이들의 단편 또는 조합을 포함하는, 항체.
  49. 제47항에 있어서, 옵소닌성 (opsonic)인, 항체.
  50. 제47항에 있어서, 다클론, 단일클론 또는 인간화된 항체를 포함하는, 항체.
  51. 제50항의 단일클론 항체를 발현하는 하이브리도마.
  52. 제47항의 항체를 투여하는 것을 포함하는 환자 치료 방법.
KR1020237017151A 2020-10-20 2021-10-20 면역원성 항원 KR20230091978A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063094116P 2020-10-20 2020-10-20
US63/094,116 2020-10-20
US202063094472P 2020-10-21 2020-10-21
US63/094,472 2020-10-21
US202163246360P 2021-09-21 2021-09-21
US63/246,360 2021-09-21
PCT/US2021/055832 WO2022087122A1 (en) 2020-10-20 2021-10-20 Immunogenic antigens

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230091978A true KR20230091978A (ko) 2023-06-23

Family

ID=81186738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237017151A KR20230091978A (ko) 2020-10-20 2021-10-20 면역원성 항원

Country Status (6)

Country Link
US (2) US20220118079A1 (ko)
KR (1) KR20230091978A (ko)
GB (1) GB2615470A (ko)
IE (1) IE20210235A1 (ko)
WO (1) WO2022087122A1 (ko)
ZA (1) ZA202304356B (ko)

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5785973A (en) * 1988-02-01 1998-07-28 Praxis Biologics, Inc. Synthetic peptides representing a T-cell epitope as a carrier molecule for conjugate vaccines
US7250494B2 (en) * 1998-06-15 2007-07-31 Biosynexus Incorporated Opsonic monoclonal and chimeric antibodies specific for lipoteichoic acid of Gram positive bacteria
US20060246079A1 (en) * 2003-11-14 2006-11-02 Morrow Phillip R Neutralizing human antibodies to anthrax toxin
WO2005080414A1 (en) * 2004-02-19 2005-09-01 Ramot At Tel-Aviv University Ltd Peptide mimotopes of mycobacterial mannosylated lipoglycans and uses thereof
CN102612559B (zh) * 2009-08-28 2015-06-10 一般财团法人化学及血清疗法研究所 源自流感m2的修饰的肽疫苗
SI2547364T1 (sl) * 2010-03-15 2017-05-31 Academisch Ziekenhuis Leiden H.O.D.N. Lumc Peptidi, konjugati in postopek za povečanje imunogenosti cepiva
WO2015031787A2 (en) * 2013-08-30 2015-03-05 Longhorn Vaccines And Diagnostics, Llc Enhancing immunity to tuberculosis
CA3014196A1 (en) * 2016-02-17 2017-08-24 CAMRIS International, Inc. Antigen for use in malaria vaccine
WO2019006022A1 (en) * 2017-06-27 2019-01-03 The Broad Institute, Inc. SYSTEMS AND METHODS FOR PREDICTING MHC CLASS II EPITOPE

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022087122A1 (en) 2022-04-28
IE20210235A1 (en) 2023-08-16
US20220296696A1 (en) 2022-09-22
ZA202304356B (en) 2023-11-29
GB202306776D0 (en) 2023-06-21
US20220118079A1 (en) 2022-04-21
GB2615470A (en) 2023-08-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7109412B2 (ja) Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓに対して免疫化するための組成物
RU2723045C2 (ru) Композиции neisseria meningitidis и способы их получения
KR101905278B1 (ko) 나이세리아 메닌지티디스 조성물 및 그의 방법
JP2009515831A (ja) ペスト菌（Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ）抗原を含む組成物
JP2012501959A (ja) Ｙｅｒｓｉｎｉａｐｅｓｔｉｓ抗原を含む組成物
MX2012000158A (es) Vacunas y composiciones contra streptococcus pneumoniae.
CN106794236B (zh) A群链球菌疫苗
JP2016510056A (ja) 無細胞百日咳ワクチン
Gregory et al. Soluble antigens derived from Coxiella burnetii elicit protective immunity in three animal models without inducing hypersensitivity
CA3063419A1 (en) Live salmonella typhi vectors engineered to express heterologous outer membrane protein antigens and methods of use thereof
US8741302B2 (en) Polypeptide derived from Enterococcus and its use for vaccination
US11866463B2 (en) Immunogenic compositions to treat and prevent microbial infections
KR20230091978A (ko) 면역원성 항원
US20230226166A1 (en) Immunogenic Antigens
US10933126B2 (en) Clostridium difficile immunogenic compositions and methods of use
US20240123055A1 (en) Vaccines and Antibodies for the Treatment and Prevention of Microbial Infections
US20240091331A1 (en) Vaccines and Antibodies for the Treatment and Prevention of Microbial Infections
US20230201326A1 (en) Immunogenic Compositions and Vaccines in the Treatment and Prevention of Infections
WO2024081953A2 (en) Vaccines and antibodies for the treatment and prevention of microbial infections
JP2013510188A (ja) 黄色ブドウ球菌に由来する菌血症関連抗原