KR20230086752A - 경부 근긴장이상증의 치료 방법 - Google Patents

경부 근긴장이상증의 치료 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20230086752A
KR20230086752A KR1020237016072A KR20237016072A KR20230086752A KR 20230086752 A KR20230086752 A KR 20230086752A KR 1020237016072 A KR1020237016072 A KR 1020237016072A KR 20237016072 A KR20237016072 A KR 20237016072A KR 20230086752 A KR20230086752 A KR 20230086752A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
botulinum toxin
muscle
positively charged
complex
risk
Prior art date
Application number
KR1020237016072A
Other languages
English (en)
Inventor
로만 루비오
타이 응웬-클리어리
차드 오
Original Assignee
레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨. filed Critical 레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨.
Publication of KR20230086752A publication Critical patent/KR20230086752A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/4886—Metalloendopeptidases (3.4.24), e.g. collagenase
    • A61K38/4893—Botulinum neurotoxin (3.4.24.69)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
    • C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
    • C12Y304/24069—Bontoxilysin (3.4.24.69), i.e. botulinum neurotoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions

Abstract

본 발명은 경부 근긴장이상증, 이와 관련된 장애 또는 이의 증상을, 이러한 질환을 앓고 있는 대상체에게 투여할 수 있는 보툴리눔 독소를 포함하는 신규한 주사용 조성물을 사용하여 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 상기 주사용 조성물 및 이러한 조성물이 사용되는 방법은 높은 응답률 및 긴 효과 지속 기간(예: 24주 이상의 효과 지속 기간)을 나타내는 신규하고 유익한 치료를 제공한다.

Description

경부 근긴장이상증의 치료 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 10월 13일에 출원된 US 특허 출원 제63/091,293호의 출원일에 대한 우선권을 주장하며, 이는 그 전체가 본원에 참조로 통합된다.
서열 목록
본 출원은 ASCII 포맷으로 전자적으로 제출된 바 있는 서열 목록을 함유하고, 그 전체가 본원에 참조로 통합된다. 상기 ASCII 카피는 2021년 10월 13일에 작성된 것으로, 파일명은 13720_0034P_SL이고, 크기는 7 킬로 바이트이다.
기술 분야
본 발명은 경부 근긴장이상증, 이와 관련된 질병, 또는 이의 증상을 치료하는 방법으로서, 이러한 장애를 앓고 있는 대상체에게 투여될 수 있는 보툴리눔 독소를 포함하는 신규한 주사용 조성물로 치료하는 방법에 관한 것이다. 상기 주사용 조성물들 및 이들 조성물이 사용되는 방법은 높은 응답 속도 및 효과의 긴 지속 기간, 예를 들어 20주 이상의 효과의 지속 기간을 나타내는 신규하고 유리한 치료법을 제공한다.
경부 근긴장이상증(Cervical Dystonia)은 목과 어깨 근육이 무의식적으로 수축하고 비틀어져, 머리를 왼쪽 또는 오른쪽으로(torticollis, 머리만 옆으로 돌아가는 것), 위쪽으로(retrocollis, 뒤로 젖혀지는 것), 아래쪽으로(antecollis, 앞으로 숙여지는 것) 또는 옆으로(laterocollis, 머리가 어깨방향으로 기울어지는 것) 비틀거나 돌리는 것과 같은, 머리 및 목의 비정상적인 움직임 및 어색한 자세를 유발하는, 매우 고통스런 만성적인 신경 운동 장애이다. 상기 움직임은 지속되거나(tonic, 강직성), 경련이거나(clonic, 간대성) 또는 조합일 수있다. 경부 근긴장이상증(목 긴장이상증(Neck Dystonia) 또는 연축성 사경(Spasmodic Torticollis)으로도 불림)은 사람의 근육 활동을 조절하는 능력에 영향을 미친다. 경부 근긴장이상증은 원발성이거나(가족력 있거나 없이, 유일한 명백한 신경계 장애임을 의미함) 2차적인 원인(예를 들어, 신체적 외상)에 의해 유발된 것일 수 있고, 종종 뇌졸중(stroke), 질병 또는 외상에 의해 유발되는 신경계 손상에 의한 것이다. 모든 연령에서, 심지어는 유아기에도 발병할 수 있는 드문 장애인 경부 근긴장이상증은 중년의 개체에서 가장 흔하게 발생하고, 남성보다 여성에서 더 흔하다. 경부 근긴장이상증 또는 다른 유형의 근긴장이상증의 가족력이 있는 사람은 상기 장애가 발병할 위험이 더 높다.
경부 근긴장이상증은 본태성 진전(tremor) 및 파킨슨병 다음으로 3번째로 가장 흔한 운동 장애이다. 10,000명당 약 3명이 경부 근긴장이상증으로 고통받는 것으로 알려져 있다. 북미에서 보고된 사례의 수는 대략적으로 300,000이다.
증상들은 일반적으로 점진적으로 시작되고, 이후에 증상이 실질적으로 악화되지 않는 정체기에 도달한다. 불행히도, 경부 근긴장이상증에 대한 치료법은 없고, 그 상태는 개체의 삶의 질에 큰 영향을 미친다. 일부의 경우에는, 상기 장애는 치료 없이 해결되기도 하지만, 지속적인 경감은 매우 드물다.
보툴리눔 독소 A형은 인간에게 알려진 가장 치명적인 자연적 생물학적 제제로 보고되고 있다. 클로스트리디움 보툴리눔(C. botulinum)의 포자는 토양에서 발견되고, 부적절하게 멸균되고 밀봉된 식품 용기에서 자랄 수 있다. 치명적일 수 있는 보툴리눔독소증(botulism)은 박테리아의 섭취에 의해 유발될 수 있다. 보툴리눔 독소는 신경근 접합부(neuromuscular junction)를 가로질러서 아세틸콜린의 방출을 억제하여 시냅스 전달을 막음으로써 근육의 마비를 일으키는 작용을 하고, 다른 방식으로도 작용하는 것으로 여겨진다. 그 작용은 일반적으로 근육 경력 또는 수축을 유발하여 마비를 일으키는 신호를 본질적으로 차단한다. 지난 10년간, 보툴리눔 독소의 근육 마비 활성은 다양한 치료 효과들을 달성하기 위해 이용되었다. 보툴리눔 독소의 제어된 투여는 다양한 의학적 상태, 예를 들어, 과활동성(hyperactive) 골격근을 특징으로하는 신경 근육 장애를 치료하기 위해 근육마비를 제공하는데 사용되어 왔다. 보툴리눔 독소로 치료된 상태들은 편측얼굴 연축(hemifacial spasm), 성인 발병 연축 사경(adult onset spasmodic torticollis), 및 열상(fissure), 안검연축(blepharospasm), 뇌성마비(cerebral palsy), 경부 근긴장이상증(cervical dystonia), 편두통(migraine headaches), 사시(strabismus), 측두하악관절 장애(temporomandibular joint disorder), 및 다양한 유형의 근육 경련(cramping) 및 연축(spasm)을 포함한다. 더 최근에는, 보툴리눔 독소의 근육-마비효과는 치료용 및 화장용 얼굴 적용, 예를 들어 주름, 안면 주름(frown lines), 및 얼굴 근육의 연축 및 수축의 다른 결과들의 치료에 적용되어 왔다.
보툴리눔 독소 A형 이외에도, 보툴리눔 독소의 혈청학적으로 구분되는 7개의 다른 형태가 있으며, 이들은 또한 그람-양성 박테리아 클로스트리디움 보툴리눔(Clostridium botulinum)에 의해 생성된다. 혈청학적으로 구별되는 8가지 유형의 보툴리눔 독소 중에서 마비를 일으킬 수 있는 7가지 유형은 보툴리눔 독소 혈청형 A, B, C, D, E, F 및 G로 지정되었다. 이들 각각은 유형-특이적 항체에 의한 중화에 의해 구별된다. 보툴리눔 독소 단백질의 각각의 분자량은 약 150kD이다. 보툴리눔 독소의 분자 크기 및 분자 구조에 의해, 이는 각질층 및 그 밑에 있는 피부 구조의 다중 층들을 통과할 수 없다. 보툴리눔 독소의 상이한 혈청형(serotype)은 상이한 동물 종에서 이들이 유발하는 마비의 효과의 강도 및 지속 기간이 다르다. 예를 들어, 랫트에서의 마비율 측정에 따르면 보툴리눔 독소 A형은 보툴리눔 독소 B형에 비해 500배 더 강력한 것으로 밝혀졌다. 또한, 보툴리눔 독소 B형은 A형에 대한 영장류 LD50의 약 12배인 480 U/kg의 용량에서 영장류에서 무-독성인 것으로 밝혀졌다.
클로스트리디움 보툴리눔 박테리아에 의해 방출된 보툴리눔 독소는, 약 150kD의 보툴리눔 독소 단백질 분자를 관련 무-독성 단백질과 함께 함유하는 독소 복합체의 성분이다. 이들 내인성 무-독성 단백질들은 비-헤마글루티닌 단백질뿐만 아니라 헤마글루티닌(hemagglutinin) 단백질들의 패밀리를 포함하는 것으로 여겨진다. 무-독성 단백질들은 독소 복합체에서 보툴리눔 독소를 안정화시키고, 독소 복합체가 섭취되는 경우 소화력이 있는 산(digestive acid)에 의해 변성되는 것으로부터 보호하는 것으로 보고되어 왔다. 따라서, 독소 복합체의 무-독성 단백질들은 보툴리눔 독소의 활성을 보호함으로써, 독소 복합체가 위장관을 통해 투여된 경우 전신 침투를 향상시킨다. 또한, 무-독성 단백질들 중 일부는 특히 혈액에서 보툴리눔 독소 분자를 안정화시키는 것으로 여겨진다.
독소 복합체에서 무-독성 단백질들의 존재는 일반적으로 독소 복합체가 앞서 언급한 바와 같은 약 150 kD인 베어(bare) 보툴리눔 독소 분자의 분자량보다 큰 분자량을 갖도록 한다. 예를 들어, 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아는 약 900 kD, 500 kD 또는 300 kD의 분자량을 갖는 보툴리눔 A형 독소 복합체를 생산할 수 있다. 보툴리눔 독소 B형 및 C형은 약 700 kD 또는 약 500 kD의 분자량을 갖는 복합체로서 생산된다. 보툴리눔 독소 D형은 약 300kD 또는 500kD의 분자량을 갖는 복합체로 생산된다. 보툴리눔 독소 E형 및 F형은 약 300 kD의 분자량을 갖는 복합체로서만 생산된다.
보툴리눔 독소에 추가적인 안정성을 제공하기 위해, 통상적으로 독소 복합체는 제조시에 복합체를 알부민과 조합함으로써 안정화된다. 예를 들어, BOTOX® (Allergan, Inc., Irvine, CA)는 보툴리눔 독소 함유 제제로서, 보조 단백질과 함께 보툴리눔 독소 A형 100 U, 인간 알부민 0.5 밀리그램, 및 염화 나트륨 0.9 밀리그램을 함유한다. 알부민은 제조, 운송, 저장, 및 투여와 관련된 환경을 포함하는 이질적인 환경에서 독소 복합체에 결합하고 이를 안정화시키는 역할을 한다.
일반적으로, 보툴리눔 독소는 보툴리눔 독소 복합체 및 알부민을 함유하는 조성물의 신중하게 제어된 주사에 의해 환자들에게 투여된다. 그러나, 이 방법과 관련하여 몇가지 문제들이 있다. 주사는 고통스러울 뿐만 아니라, 원하는 치료 또는 미용 효과를 달성하기 위해서는 주사 부위 주위에 일반적으로 독소의 큰 피하 우물(subdermal wells)이 국소적으로 생성된다. 보툴리눔 독소는 이러한 피하 우물에서부터 이동하여, 신체의 주변 영역에 원하지 않은 마비를 유발할 수 있다. 이러한 문제는 치료되는 영역이 크고, 그 영역을 치료하기 위해 많은 독소 주사가 필요한 경우 악화된다. 또한, 주사된 독소 복합체는 보툴리눔 독소를 안정화시키고 독소 복합체의 분자량을 증가시키는 무-독성 단백질들 및 알부민을 함유하는 바, 상기 독소 복합체들은 신체에서 긴 반감기를 갖고, 환자에서 바람직하지 않은 항원성 반응을 유발할 수 있다. 예를 들어, 일부 환자는 시간이 지남에 따라 현재 상업적인 제제에서 안정화제로 사용되는 알부민에 대하여 알러지를 일으킬 것이다. 또한, 독소 복합체는 환자의 면역계가 중화 항체를 형성하도록 유도할 수 있으므로, 동일한 효과를 달성하기 위해 후속 투여에서 더 많은 양의 독소가 필요하다. 이 경우, 특히 무-독성 단백질들 및 알부민이 혈액에서 보툴리눔 독소를 안정화시키기 때문에, 후속 주사는 환자의 혈류 내로 다량의 독소를 방출하지 않도록 신중하게 놓아야 하고, 다량의 독소 방출은 치명적인 전신 중독(systemic poisoning)을 유발할 수 있다.
현재 보툴리눔 독소 제제와 관련된 단점을 고려하면, 효과적이고 안정적이지만 주사 후 국소적으로 확산되는 경향이 낮고 감소된 항원성을 나타내는 주사용 보툴리눔 독소 제제를 갖는 것이 매우 바람직할 것이다. 또한, 경부 근긴장이상증을 치료하기 위한 치료 목적으로 이러한 보툴리눔 독소 제제를 사용하는 것이 바람직할 것이다.
경부 근긴장이상증의 치료법은 경구 약물투여, 보툴리눔 독소 주사, 수술, 및 보완 요법(complementary therapies)을 포함한다. 경부 근긴장이상증의 가장 흔하게 처방되는 치료법은 보툴리눔 독소, 일반적으로 A형의 사용이고 (B형또한 사용되기도 하였지만), 이는 징후 및 증상을 감소시킬 수 있다. 보툴리눔 독소는 신경 및 근육 사이의 커뮤니케이션을 차단하는데 도움을 줄 수 있고, 비정상적인 움직임 및 자세들을 완화시킬 수 있다. 주사 횟수는 일반적으로 근긴장이상증의 중증도에 따른다. 독소를 주사하는 의사는 비정상적인 자세 또는 움직임, 및 근육 연축에 대한 느낌을 관찰하거나, 근육 활동을 측정하는 근전도검사 기계를 사용함으로써 주사할 근육을 선택할 수 있다. 근긴장이상증에 영향을 받는 각 근육은 일반적으로 각각 주사되어야 한다. 이와 같이, 현재 이용 가능한 독소 제제의 확산 특성에 기초하여, 한번에 체내로 주사될 수 있는 독소의 총량은 제한이 있다. 경부 근긴장이상증에 대한 치료법은 주사 후 4-7일 이상의 기간 동안 효력을 발휘하는 규칙적인 신경학적 개입을 수반하고, 보툴리눔 독소에 의한 치료법에 대한 반응은 일반적으로 12주 후, 종종 10주 정도에 점점 약해지고, 이는 경부 근긴장이상증으로 고통받는 사람에게 다시 주사할 필요가 있다. 따라서, 더 적은 신경학적인 개입을 필요로 하는 내구성 있고 더 오래 지속되는 치료법이 바람직할 것이다.
발명의 요약
일 양상에 있어서, 본 발명은 본 발명의 조성물의 유효량, 바람직하게는 치료학적으로 유효한 양을 연하곤란, 근력 약화 및/또는 근골격계 통증과 같은 이상 사례(adverse events)를 감소시키기 위해 이러한 치료를 필요로하는 대상체 또는 환자에 주사함으로써, 경부 근긴장이상증의 치료에서 생물학적 효과를 생성하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 이를 필요로하는 개체에서 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음을 포함하는 조성물의 주사를 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은: 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 및 양으로 하전된 담체 성분, 이는 예를 들어 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열 (여기에서, 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수임)을 갖는 양으로 하전된 하나 이상의 효능기 (efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 폴리리신 백본을 포함하는 것이고; 및 약학적으로 허용가능한 주사를 위한 부형제를 포함하며; 상기 보툴리눔 독소는 개체에 약 100U 내지 약 500U의 양으로 투여되고; 상기 하나 이상의 근육은 흉쇄유돌근(sternocleidomastoid), 견갑거근(levator scapulae) 및 목갈비근 복합체(scalenus complex) 중 적어도 하나를 포함하고 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체는 오직 편측 주사(unilaterally injected)되고, 상기 치료 효과는 15% 이하인 이상 사례, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련된다. 상기 치료는 적어도 약 16주, 20주, 24주 또는 28주의 경부 근긴장이상증의 증상 감소 효과 지속기간을 가져 개체에 대한 치료 간격 기간을 연장할 수 있다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 이를 필요로하는 개체에서 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음을 포함하는 조성물의 주사를 개체에 투여하는 단계를 포함하고, 상기 조성물은: 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 및 양으로 하전된 담체 성분, 이는 예를 들어 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열 (여기에서, 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수임)을 갖는 양으로 하전된 하나 이상의 효능기 (efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 폴리리신 백본을 포함하는 것이고; 및 약학적으로 허용가능한 주사를 위한 부형제를 포함하며; 상기 보툴리눔 독소는 개체에 약 100U 내지 약 500U의 양으로 투여되고; 상기 하나 이상의 근육은 두판상근(splenius capitis), 경부판상근(splenius cervices), 승모근(trapezius), 최장근(longissimus), 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및 목갈비근 복합체를 포함하거나 이로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 상기 하나 이상의 근육 각각에 대한 용량 범위는 표 1 또는 표 6에 제시되어 있으며; 상기 치료 효과는 15% 미만인 이상 사례의 위험, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련된다. 상기 치료는 적어도 약 16주, 20주, 24주 또는 28주의 경부 근긴장이상증의 증상 감소 효과 지속 기간을 가져 개체에 대한 치료 간격 기간을 연장할 수 있다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 경부 근긴장이상증을 치료하기 위해 사용되는 양으로 하전된 담체 분자에 비-공유적으로 결합된 보툴리눔 독소를 포함하는 주사용 조성물을 제공한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 상업적 보툴리눔 독소 제제, 예를 들어 BOTOX®, XEOMIN®, DYSPORT®, 또는 MYOBLOC®에 비해 하나 이상의 이점을 갖는다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 상기 조성물은 상업적인 보툴리눔 독소 제제와 비교하여 더 긴 작용 지속 기간 및/또는 더 낮은 이상 사례 발생률을 나타낸다. 또한, 종래의 주사용 보툴리눔 제제에 비해 하나 이상의 이점에는, 감소된 항원성, 주사 후 주변 조직 내로 확산하려는 경향 감소, 종래의 보툴리눔 독소 제제와 비교하여 임상 효능의 지속 기간 증가 또는 향상된 효능, 임상적 효능의 빠른 개시, 및/또는 향상된 안정성을 포함할 수 있다.
또 다른 일 양상은 경부 근긴장이상증의 치료에서 조직을 통한 독소 확산을 개선하기 위해, 특정 비-천연 분자(즉, 클로스트리디움 보툴리눔박테리아로부터 수득된 보툴리눔 독소 복합체에서 발견되지 않는 분자)가 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 및 특히 감소된 보툴리눔 독소 복합체(본원에 정의된 바와 같음)에 부가될 수 있다는 인식이다. 상기 비-천연 분자들은 독소와 비-공유적으로 결합되고, 독소의 주사 후 표적 구조에 도달할 수 있는 능력을 향상시키는 경피 흡수 촉진제(penetration enhancers)로서 역할을 한다. 또한, 상기 비-천연 분자들은 주사 전과 주사 후의 독소의 안정성을 증가시킬 수 있다. 예로서, 상기 경피 흡수 촉진제는 보툴리눔 독소의 고유한 활성을 갖지 않고, 본원에 기재된 바와 같이 하나 이상의 단백질 전달 도메인(transduction domains)을 또한 함유하는 양으로 하전된 담체, 예를 들어, 양이온성 펩티드일 수 있다.
또 다른 일 양상은 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체(또는 150 kD 신경독소 자체만을 포함하거나, 천연 복합체 단백질들 전부는 아니지만 일부를 함께 포함는 감소된 단백질 보툴리눔 독소 복합체) 및 양으로 하전된 담체를포함하는, 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법에 사용하기 위한 조성물을 제공하는 것이다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 치료를 필요로하는 대상체 또는 환자에 주사에 의한 투여 후 장기-지속되고, 유지되는 효능, 예를 들어 장기간의 응답률을 제공하는 경부 근이상증의 치료에 있어서 본 발명의 조성물의 유효 용량 및 양을 제공한다. 이러한 용량 및 양은 바람직하게는 용량 및 양이 투여되는 대상체에서 바람직한 치료 효과를 생성하거나 초래하는 치료학적으로 유효한 용량 및 양이다. 소정의 구체예에서, 보툴리눔 독소, 예를 들어 보툴리눔 독소 A 및 양으로 하전된 담체를, 본원에 기재된 바와 같이, 대상체 당 약 100U 내지 약 500U의 치료학적으로 유효한 양으로 포함하는 본 발명의 조성물에 의한 대상체 또는 환자의 단일 치료법은 경부 근긴장이상증 증상의 감소의 응답률을 적어도 16주 동안, 적어도 20주 동안, 적어도 24 주 동안, 또는 약 6 내지 10개월, 또는 더 길게 제공했다. 또한, 본 발명의 조성물은 주사 후 감소된 주사 부위로부터의 확산 또는 퍼짐 특성을 제공함으로써, 독소 및 이의 효과를 원하는 곳에 국소화하고 치료를 위해 주사된 부위로부터 먼부위 또는 위치에서 독소의 비특이적이거나 원하지 않은 효과를 감소시킨다.
본 발명의 조성물, 예를 들어, RT002에 의해 제공되는 효과의 지속 기간은, 기재된 치료 방법 및 용도에 의한 것뿐만 아니라, 당업계와 비교하여 상당한 이점을 제공한다. 예로서, 보툴리눔 독소를 함유하는 조성물에 의해 치료를 받는 대상체의 경우 그들에게 치료 후의 효과의 지속 기간은 매우 중요하게 여겨진다. 본 발명의 제품(예: RT002)의 유효 용량 및 치료 용법으로 단일 치료(single treatment)로도 달성되는 이러한 길고 지속적인 효과 지속 기간은 대상체에 대한 치료 코스(course) 당 주사 횟수를 줄일 수 있으며, 이는 대상체에게 매우 중요하다. 본원에 기재된 본 발명의 조성물 및 방법이 제공하는, 명확한 효능 및 안전성을 갖는 제품을 이용한 단일 치료에 의한 연장된 효과 지속 기간은 치료의 코스를 경험한 대상체에 더 적은 불편함, 덜 비싼 비용, 및 더 편리함을 제공한다. 또한, 대상체에 대한 상기 제품의 단일 주사 치료(single injectable treatment) 후에, 적어도 16 또는 24주 기간, 또는 적어도 6개월 기간, 또는 6개월 이상 동안 유지되는 유의미하고 지속적인 효과를 제공하는 제품은 개업 의사(practitioners) 및 환자 모두에게 당업계의 미충족 요구에 대한 해결책을 제공한다. 따라서, 본 발명의 조성물 및 방법은 너무 빈번한(too frequent) 치료의 문제점에 대한 해결책을 제공하고, 환자의 전반적 웰빙(wellbeing)을 개선시킨다. 이러한 연장된 작용 지속 기간은 전체 치료 코스에 걸쳐 더 적은 치료(fewer treatment)를 제공한다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 경부 근긴장이상증으로 고통 받는 개체에서 연장된 치료 효과 지속 기간을 달성하기 위해 보툴리눔 독소를 투여하는 방법을 제공하고, 상기 방법은 멸균 조성물로 1차 치료 후에, 치료 효과를 달성하기 위해 치료를 필요로하는 개체의 부위(area) 내로 상기 멸균 주사용 조성물의 용량을 주사 투여하는 단계를 포함하는 것이고; 상기 조성물은 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분 및 양으로 하전된 담체 성분, 상기 양으로 하전된 담체 성분은 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열 (여기에서, 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수임)을 갖는 하나 이상의 양으로 하전된 효능기 (efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 폴리리신 백본을 포함하며; 상기 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분은 약 100U 내지 450U, 또는 보다 구체적으로 약 100U 내지 200U(예: 125U), 또는 약 200U 내지 300U(예: 250U), 또는 300U 내지 450U의 치료 용량으로 개체에 투여되는 것이고; 상기 양으로 하전된 담체는 상기 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분과 비-공유적으로 결합된 것이고; 및 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 부형제를 포함하며; 상기 개체에 주사 투여되는 조성물의 제1 치료 용량은, 선택적으로 제2 또는 후속 치료 용량이 투여되기 전에, 적어도 16주, 18주, 20주, 22주, 24주, 26주, 또는 28주의 효과의 지속 기간을 갖는 연장된 치료 효과 지속 기간을 달성하는 것이다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 경부 근긴장이상증의 치료를 위한, 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체를 100U 이상, 100U 내지 200U(예: 125U), 200 내지 300U((예: 250U), 또는 300 내지 450U로부터 선택된 투여 용량으로 포함하고; 및 양으로 하전된 담체 성분, 이는 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열 (여기에서, 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수임)을 갖는 양으로 하전된 하나 이상의 효능기 (efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 폴리리신 백본을 포함하는 것이고; 및 약학적으로 허용가능한 주사를 위한 부형제를 포함하는 멸균 주사용 조성물을 제공하며; 상기 양으로 하전된 담체는 상기 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분과 비-공유적으로 결합된 것이고; 상기 조성물은, 주사용 조성물의 유효 용량으로 개체를 치료한 후, 적어도 16주 내지 20주, 20주 내지 24주 또는 적어도 6개월, 또는 6개월 이상, 예를 들어 약 6개월 내지 약 10개월 동안 지속되는 치료 효과를 제공하는 것이다. 구체예에서, 상기 폴리리신 백본은 5 내지 30개의 리신 또는 10 내지 20개의 리신을 갖는다.
상기 방법 및 조성물의 일부 구체예에서, 상기 조성물은 혈청형 A의 보툴리눔 독소, 바람직하게는 150 kDa의 분자량을 갖는 혈청형 A 보툴리눔 독소를 포함한다. 일 구체예에서, 상기 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는다. 일 구체예에서, 상기 보툴리눔 독소는 100 U 이상, 100U 내지 200U(예: 125U), 200U 내지 300U(예: 250U), 300U 내지 450U로부터의 투여 용량으로 조성물에 존재한다. 일 구체예에서, 상기 보툴리눔 독소는 100 U, 200U, 300U 및 450U으로 이루어진 군으로부터 선택된 투여 용량으로 조성물에 존재한다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 조성물의 주사에 의한 단일 치료를 경험한 개체에서 경부 근긴장이상증의 증상을 감소시킨다. 특정 구체예에서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 6개월 이상; 7개월 이상; 8개월 이상; 9개월 이상; 또는 적어도 6개월 내지 10개월을 포함한다.
또 다른 일 양상에 있어서, 본 발명은 주사용 보툴리눔 독소에 의한 치료를 필요로 하는 경부 근긴장이상증을 겪고 있는 개체를 치료하는 방법을 제공하는 것이고, 상기 치료 방법은 연장된 효과 지속 기간 및 각각의 치료 간격 사이의 지속 시간을 갖는 다수의 치료 간격을 갖는 치료 코스를 포함하는 것이고, 상기 치료 코스는 다음을 포함한다: 조성물에 의한 초기 치료 후에 치료 효과를 달성하기 위해 치료를 필요로 하는 개체의 부위 내로 멸균 주사용 조성물의 초기 치료 용량을 주사 투여하는 단계; 상기 조성물은 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분 및 양으로 하전된 담체 성분, 상기 양으로 하전된 담체 성분은 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열 (여기에서, 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수임)을 갖는 하나 이상의 양으로 하전된 효능기 (efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 폴리리신 백본을 포함하며; 및 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 부형제를 포함하며; 상기 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분은 100U, 125U, 150U, 175U, 200U, 225U, 250U, 175U, 300U, 325U, 350U, 375U, 400U, 425U, 450U, 500U 이상, 또는 그 사이의 임의의 값의 투용량으로 개체에게 투여되며; 상기 양으로 하전된 담체는 상기 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체 성분과 비-공유적으로 결합된 것이고; 상기 개체에게 주사로 투여되는 조성물의 초기 치료 용량은 적어도 약 6개월 동안 지속되는 치료 효과 지속기간을 제공하며; 및 최초 치료 용량 이후 또는 각 후속 치료 용량 사이에 16 내지 20주, 20 내지 24주, 24 내지 28주, 28 내지 32주 또는 이 이상, 또는 최대 적어도 10개월 이상의 기간을 포함하는 치료 간격으로 조성물의 후속 치료 용량을 개체에게 주사 투여하는 단계를 포함한다.
상기-기재된 치료 방법의 구체예에서, 상기 치료 효과는 경부 근긴장이상증의 증상의 치료이다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 혈청형 A의 보툴리눔 독소, 바람직하게는 150 kDa의 분자량을 갖는 혈청형 A 보툴리눔 독소를 포함한다. 일 구체예에서, 상기 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는 양으로 하전된 펩티드이다. 일 구체예에서, 상기 조성물은 주사 후 주사 부위로부터 국소적으로 확산되지 않는다. 일 구체예에서, 상기 보툴리눔 독소는 100U, 125U, 150U, 175U, 200U, 225U, 250U, 175U, 300U, 325U, 350U, 375U, 400U, 425U 및 450U로 구성된 군으로부터 선택되거나 그보다 많은 투여량으로 조성물에 존재한다. 특정 실시예에서, 치료 간격의 기간 또는 이전 투여 후 후속 투여까지의 기간은 16 내지 20주, 20 내지 24주, 24 내지 28주, 또는 28 내지 32주 사이의 기간이다.
도 1은 본원 실시예 2에 기재된 경부 근긴장이상증 3상 ASPEN-1 연구 디자인을 나타낸다.
도 2a 및 2b는 실시예 2에 기재된 바와 같은 코호트(10A) 및 기저선 특성(10B)에 의한 ASPEN-1 인구 통계(demographics)를 나타낸다. 백분율은 치료-의향 모집단(intent-to-treat population) 내의 대상체의 수를 기반으로 한다. BoNT= 보툴리눔 신경독소(botulinum neurotoxin).
도 3은 ASPEN-1 연구 디자인에 의해 정의된 주사 가능한 근육을 나타낸다.
도 4a 및 4b는 코호트별 1차 평가 지표(Primary Endpoint) - 본원 실시예 3에 기재된 바와 같은 연구 기저선(baseline)으로부터 4주차 및 6주차에서의 평균 변화의 공분산에 대한 TWSTRS 총점 분석(TWSTRS Total Score analysis) (a, 막대 그래프, b, 표 형식)을 나타낸다. 제시된 통계는 치료 조건, 풀링된 연구 센터(지역), 이전 BoNT 치료 경험, 기저선 TWSTRS 총점을 공변량(covariate)으로 하는 ANCOVA 모델을 기반으로 한다. 4주차와 6주차가 모두 누락된 대상체 (n=3)에는 다중 대체(multiple imputation)가 사용되었다. *최소 제곱 평균(Least Square Means). Δ 기저선으로부터의 변화.
도 5는 효과의 지속 기간의 Kaplan-Meier 플롯을 나타낸다. CI; 신뢰 구간(confidence interval). 효과 지속 기간은 치료 후 최대 치료 효과의 적어도 80%가 손실될 때까지의 시간(주)이다. 최대 치료 효과는 TWSTRS 총점에서 기저선 대비 4주 및 6주 차의 평균 변화로 정의된다. 백분율은 치료의향 모집단(intent-to-treat population) 내의 대상체의 수를 기반으로 한다.
도 6은 정의에 따른 치료 효과의 지속 기간의 비교를 나타낸다: 사전 지정됨(Prespecified): 최대 치료 효과의 80% 이상 손실까지의 시간 중간값; 사전 지정됨 + 재치료 (Prespecified + Retreatment): 사전 지정된 정의 또는 재치료 요청까지의 시간 중간값; 사전 지정 + 응답자들의 재치료(Prespecified + Retreatment w/ Responders): 사전 지정된 정의 또는 1차 평가 지표에서 개선이 입증된 대상체에 대한 재치료 요청까지의 시간 중간값.
도 7은 2차 평가 지표 - 4주차 및 6주차의 응답자의 환자 전반적 변화 평가(PGIC: Patient Global Impression of Change)를 나타낸다. 응답자는 4주차 또는 6주차에 보통으로 좋아졌다(+2) 또는 매우 좋아졌다(+3)의 응답으로 정의되었다. 4주차에 아직 연구 중인 대상체의 누락된 응답은 거의 동일함 (0)으로 인정되었다. Δ 위약에 대한 차이. Cochran-Mantel-Haenszel 테스트의 P-값.
도 8은 2차 평가 지표 - 4주차 및 6주차의 응답자의 임상 전반적 변화 평가(CGIC:Clincial Global Impression of Change)를 나타낸다. 응답자는 4주차 또는 6주차에 보통으로 좋아졌다(+2) 또는 매우 좋아졌다(+3)의 응답으로 정의되었다. 4주차에 아직 연구 중인 대상체의 누락된 응답은 거의 동일함 (0)으로 인정되었다. Δ 위약에 대한 차이. Cochran-Mantel-Haenszel 테스트의 P-값.
도 9는 탐색적 평가 지표(Exploratory Endpoint) - 4주차 및 6주차에서의 TWSTRS 서브스케일 점수의 기저선 대비 변화의 평균을 나타낸다. *최소 제곱 평균. Δ 기저선으로부터의 변화.
도 10은 2차 평가 지표 - 시간 경과에 따른 TWSTRS 총점의 기저선 대비 변화를 나타낸다. 표시된 통계는 관찰된 TWSTRS 총점의 기저선 대비 평균 변화이다. 표에 제시된 데이터는 각 방문 시 TWSTRS 평가를 받은 대상체의 수이다.
도 11은 탐색적 분석(Exploratory Analysis) - 연구를 종료한 대상체의 시간 경과에 따른 TWSTRS 총점의 기저선 대비 변화 데이터가 36주차까지 기저선 점수로 귀속된다는 것을 나타낸다. 표시된 통계는 연구를 종료한 대상체가 36주차까지 기저선 점수에 귀속되는 TWSTRS 총점의 기저선 대비 관찰된 평균 변화이다.
도 12는 나노그램 단위의 독소 양에 따라 처방 라벨(2020년)에 따른 현재 시판 중인 제품에서 관찰된 치료 효과의 지속 기간을 두 가지 RT002 용량의 경우와 비교한 도표이다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법에 사용되는 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체를 포함하는 신규한 주사용 조성물에 관한 것이다. 바람직한 구체예에서, 상기 조성물은 상기 독소를 안정화시키거나 또는 주사 후에 조직을 통한 독소의 수송 또는 전달을 가능하게 하여, 종래의 상업적 외인성 알부민이 결합된 보툴리눔 독소 복합체(예: BOTOX® 또는 MYOBLOC®)에 비해 상기 독소가 감소된 항원성, 개선된 안정성 프로파일, 향상된 효능, 임상적 효능의 더 빠른 개시 및/또는 더 긴 지속 기간을 갖는다. 본 발명의 조성물은 본원에 기술된 바와 같이 다양한 치료적 목적을 위해 대상체에게 보툴리눔 독소를 제공하기 위한 주사제 용도로 사용될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 보툴리눔 독소를 전달하는 다른 조성물 및 방법에 비해 부작용 감소를 포함한 개선된 안정성 프로파일을 갖는다. 또한, 이러한 조성물들은 보툴리눔 독소에 대한 면역 반응의 유익한 감소를 제공할 수 있다. 구체예에서, 본 발명의 주사용 조성물은 이러한 조성물, 특히 100U 내지 500U의 양의 보툴리눔 독소를 포함하는 조성물을 경부 근긴장이상증의 치료를 위해 주사로 투여하는 대상체에서 적어도 16주, 18주, 20주 또는 24주 동안 지속되는 효과와 같은 장기간 지속되는 효능을 제공한다.
상기 용어 "보툴리눔 독소"는, 본원에서 사용된 바와 같이, 박테리아 또는 재조합 기술들에 의해 생산된 보툴리눔 독소의 공지된 임의의 타입(예를 들어, C. botulinum의 상이한 혈청형과 관련된 150 kD 보툴리눔 독소 단백질 분자)뿐만 아니라, 새롭게 발견된 혈청형을 포함하여 후속적으로 발견될 수 있는 임의의 타입, 및 조작된 변이체 또는 융합 단백질을 지칭할 수 있다. 상기 언급된 바와 같이, 현재 7개의 면역학적으로 구별되는 보툴리눔 신경독소, 즉, 보툴리눔 신경독소 혈청형 A, B, C, D, E, F 및 G가 특성화되었으며, 이들 각각은 타입-특이적인 항체에 의한 중화에 의해 구별된다. 상기 보툴리눔 독소 혈청형들은 상업적으로 이용가능하고, 예를 들어 Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) 및 Metabiologics, Inc. (Madison, WI), 다른 공급원을 통해 이용 가능하다. 보툴리눔 독소의 상이한 혈청형은 이들이 영향을 미치는 동물 종들 및 이들이 유발하는 마비의 강도 및 지속 기간에 있어 다르다. 보툴리눔 독소의 적어도 2가지 타입, 타입 A 및 B는 특정 조건의 치료를 위한 제제로서 상업적으로 이용 가능하다. 예를 들어, 타입 A는 BOTOX® 상표를 갖는 Allegen, 및 DYSPORT® 상표를 갖는 Ipsen의 제제에 함유되고, 타입 B는 MYOBLOC® 상표를 갖는 Elan의 제제에 함유된다.
본 발명의 조성물에서 사용된 용어 "보툴리눔 독소"는 대체적으로 보툴리눔 독소 유도체, 즉, 보툴리눔 독소 활성을 갖지만, 자연적으로 발생하거나 재조합 천연 보툴리눔 독소와 비교하여 임의의 부분 또는 임의의 아미노산 체인에서 하나 이상의 화학적 또는 기능적 변형을 함유하는 화합물을 지칭할 수 있다. 예를 들어, 상기 보툴리눔 독소는 변형된 신경독소일 수 있고, 이는 자연적 형태와 비교하여 이들 아미노산들 중 적어도 하나는 결실, 변형 또는 치환된 신경독소이거나, 상기 변형된 신경독소는 재조합적으로 생산된 신경독소 또는 이들의 유도체 또는 단편일 수 있다. 예를 들어, 상기 보툴리눔 독소는 예를 들어, 이의 특성을 향상시키거나 바람직하지 않은 부작용을 감소시키지만, 여전히 바람직한 보툴리눔 독소활성을 유지하는 방식으로 변형된 것일 수 있다. 대안적으로, 본 발명에서 사용된 보툴리눔 독소는 재조합 또는 합성 화학 기술에 의해 제조된 독소, 예를 들어, 재조합 펩티드, 융합 단백질, 또는 하이브리드 신경독소, 예를 들어, 상이한 보툴리눔 독소 혈청형의 서브유닛 또는 도메인으로부터 제조된 독소(예를 들어, US 특허 제 6,444,209호 참조)일 수 있다. 상기 보툴리눔 독소는 또한 필수적인 보툴리눔 독소 활성을 갖는 것으로 나타난 전체 분자의 일부일 수 있으며, 이러한 경우 그 자체로 또는 조합 또는 컨쥬게이트 분자, 예를 들어 융합 단백질의 일부로서 사용될 수 있다. 대안적으로, 보툴리눔 독소는 그 자체가 무-독성일 수 있는 보툴리눔 독소 전구체의 형태일 수 있고, , 예를 들어 단백질 분해 절단(proteolytic cleavage)에 의해 독성이 되는 무-독성 징크 프로테아제(zinc protease)일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "보툴리눔 독소 복합체" 또는 "독소 복합체"는 대략적으로 150 kD 보툴리눔 독소 단백질 분자(즉, 보툴리눔 독소 혈청형 A-G 중 임의의 하나에 속함)와 함께, 관련된 내인성 무-독성 단백질(즉, 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아에 의해 생산되는 헤마글루티닌 단백질 및 무-독성 비-헤마글루티닌 단밸질)을 지칭한다. 그러나, 상기 보툴리눔 독소 복합체는 하나의 단일 독소 복합체로서 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아로부터 유래될 필요는 없음을 주목해야 한다. 예를 들어, 보툴리눔 독소 또는 변형된 보툴리눔 독소는 먼저 재조합적으로 제조된 후 무-독성 단백질과 조합될 수 있다. 재조합 보툴리눔 독소는 또한 구매한 후 (예: List Biological Laboratories, Campbell, CA로부터 구매) 무-독성 단백질과 조합될 수 있다.
본 발명은 또한 하나 이상의 외인성 안정화제의 첨가, 내인성 안정화제의 제거, 또는 이들의 조합를 통한 보툴리눔 독소 분자의 안정성의 조절을 고려한다. 예를 들어, 본 발명은 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아에 의해 생산된 보툴리눔 독소 복합체에서 자연적으로 발견되는 양과 비교하여 무-독성 단배질의 양이 감소된 보툴리눔 독소 복합체인, "감소된 보툴리눔 독소 복합체"의 사용을 고려한다. 일 구체예에서, 감소된 보툴리눔 독소 복합체는 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아로부터 유래된 보툴리눔 독소 복합체로부터 무-독성 비-헤마글루티닌 단백질의 분획을 추출하기 위한 임의의 통상적인 단백질 분리 방법을 사용함으로써 제조된다. 예를 들어, 감소된 보툴리눔 독소 복합체는 pH 7.3에서 적혈구에 대한 노출을 통해 보툴리눔 독소 복합체를 분리함으로써 생산될 수 있다(예: 본원에 참조로 통합된 EP 1514556 A1 참조). HPLC, 투석, 컬럼, 원심분리, 및 단백질로부터 단백질을 추출하는 다른 방법들이 사용될 수 있다. 대안적으로, 합성적으로 생산된 보툴리눔 독소를 무-독성 단백질과 조합함으로써 감소된 독소 복합체를 생산하는 경우, 자연적으로 발생하는 보툴리눔 독소 복합체에 존재하는 것보다 적은 헤마글루티닌 또는 무-독성, 비-헤마글루티닌 단백질을 혼합물에 단순히 부가할 수 있다. 본 발명에 따른 상기 감소된 보툴리눔 독소 복합체에서 임의의 무-독성 단백질(예를 들어, 헤마글루티닌 단백질 또는 무-독성 비-헤마글루티닌 단백질, 또는 둘다)은 임의의 양으로 독립적으로 감소될 수 있다. 특정 예시적 구체예에서, 하나 이상의 무-독성 단백질은 보툴리눔 독소 복합체에서 일반적으로 발견되는 양과 비교하여 적어도 약 0.5%, 1%, 3%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소된다. 상기 기재한 바와 같이, 클로스트리디움 박테리아는 독소의 7개의 다른 혈청형을 생성하고, 상업적인 제제는 무-독성 단백질의 상이한 상대량(즉, 독소 복합체의 상이한 양)을 포함하여 제조된다. 예를 들어, MYOBLOCTM은 ml 당 5000U의 보툴리눔 독소 타입 B를 0.05% 인간 혈청 알부민, 0.01 M 숙신산나트륨, 및 0.1 M 염화나트륨과 함께 갖는다. DYSPORTTM 은 500U의 보툴리눔 독소 타입 A-헤마글루티닌 복합체를 125 mcg 알부민 및 2.4 mg 락토스와 함께 갖는다. 특정 구체예에서, 실질적으로 클로스트리디움 보툴리눔 박테리아로부터 유래된 보툴리눔 독소 복합체에서 일반적으로 발견될 수 있는 모든 무-독성 단백질 (예를 들어, 헤마글루티닌 단백질 및 무-독성 비-헤마글루티닌 단백질의 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상)은 보툴리눔 독소 복합체로부터 제거된다. 또한, 일부 경우에 내인성 무-독성 단백질은 동일한 양으로 감소될 수 있으나, 본 발명은 또한 내인성 무-독성 단백질들 중 적어도 하나를 감소시키지만 나머지는 감소시키지 않는 것뿐만 아니라, 내인성 무-독성 단밸질 각각을 상이한 양으로 감소시키는 것을 고려한다.
상기 언급한 바와 같이, 외인성 안정화제 (예를 들어, 알부민)는 보툴리눔 독소 제제를 안정화시키기 위해 일반적으로 부가된다. 예를 들어, BOTOX®의 경우, 100U의 타입 A 보툴리눔 독소 복합체 당 0.5 mg의 인간 알부민은 상기 복합체를 안정화시킨다. 일반적으로 본 발명에 따른 조성물을 안정화시키기 위해 부가될 수 있는 외인성 안정화제의 양은 특별히 제한되지 않는다. 일부 구체예들에서, 본 발명의 양으로 하전된 담체가 그 자체로서 안정화제로서 작용하는 능력으로 인해, 첨가된 안정화제의 양은 통상적으로 첨가되는 양에 비해 적을 수 있다. 예를 들어, 부가된 외인성 알부민의 양은 외인성 알부민의 통상적인 양 보다 천배 적은 양일 수 있고, 본 발명의 소정의 예시적 구체예에서는, 100 U의 보툴리눔 독소 당 0.25, 0.20, 0.15, 0.10, 0.01, 0.005, 0.001, 0.0005, 0.00001, 0.000005, 0.000001, 또는 0.0000001mg 이다. 일 구체예에서, 외인성 알부민이 안정화제로서 본 발명의 조성물에 첨가되지 않으므로, 알부민이 없는 보툴리눔 독소 조성물이 생산된다.
본 발명의 바람직한 조성물은 단백질성 부형제 없이, 특히 임의의 동물성 단백질-유래의 부형제 없이 안정화되는 것인 액체, 보툴리눔 독소-함유 조성물이다. 이러한 액체 조성물은 보툴리눔 독소, 바람직하게는 혈청형 A의 보툴리눔 독소, 양으로 하전된 담체(예를 들어, 펩티드), 비-환원 이당류 또는 비-환원 삼당류, 비-이온성 계면활성제, 및 4.5 내지 7.5 pH를 유지하기 위한 생리학적으로 적합한 버퍼를 포함한다. 상기 바람직한 조성물은 단일 주사에 의한 치료 후에 긴 지속 기간 효과를 제공한다. 일 바람직한 구체예에서, 보툴리눔 독소 A는 150 kDa의 분자량(MW)을 갖는다. 상기 바람직한 조성물은 보툴리눔 독소, 바람직하게는 보툴리눔 독소 A, 보다 바람직하게는 150 kDa MW의 보툴리눔 독소 A, 본원에 기재된 바와 같은 양으로 하전된 담체(예를 들어, 펩티드), 비-환원 이당류, 예를 들어, 수크로스, 비-이온성 계면활성제, 예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80, 또는 소르비탄 에스테르, 및 생리학적으로 적합한 버퍼, 예를 들어, 시트르산, 아세트산, 숙신산, 타르타르산, 말레산, 및 히스티딘을 포함하고; pH 4.5 내지pH 7.5의 pH 를 갖는다.
본 발명에 따르면, 본원에 기재된 바와 같이, 단백질 형질도입 도메인(transduction domain) 또는 효능기를 갖는 양으로 하전된 담체 분자는 보툴리눔 독소의 운반 시스템으로서 적합하여, 독소를 근육과 같은 표적 구조로의 개선된 침투로 주사될 수 있도록 하는 것으로 밝혀졌다. 상기 수송은 보툴리눔 독소의 공유적 변형(covalent modification) 없이 일어난다. 본 발명의 양으로 하전된 담체는 보툴리눔 독소의 침투를 증가시킬 뿐만 아니라, 특정 바람직한 구체예에서 분해에 대해 보툴리눔 독소를 안정화시킬 수 있다. 이러한 구체예에서, 보툴리눔 독소를 안정화시키기 위해 일반적으로 존재하는 헤마글루티닌 단백질 및 무-독성, 비-헤마글루티닌 단백질은 감소되거나 완전히 생략될 수 있다. 유사하게, 제조 시 일반적으로 부가되는 외인성 알부민은 생략될 수 있다.
용어 "담체"와 관련하여, 용어 "양으로 하전된" 또는 "양이온성"의 사용은, 담체는 적어도 용액-상의 일부 조건들 하에, 보다 바람직하게는 적어도 생리학적으로 적합한 일부 조건들 하에 양전하를 가짐을 의미한다. 보다 구체적으로, 본원에서 사용된 바와 같은 "양으로 하전된" 및 "양이온성"은 관심 있는 기(group)가 모든 pH 조건들 하에서 하전되는 작용기(functionality), 예를 들어, 4차 아민(quaternary amine)을 함유하거나, 또는 특정한 용액-상 조건들, 예를 들어 1차 아민의 경우에 pH가 변화하는 조건 하에, 양전하를 얻을 수 있는 작용기를 함유하는 것을 의미한다. 보다 바람직하게, 본원에 사용된 바와 같은 "양으로 하전된" 또는 "양이온성"은 생리학적으로 적합한 조건에서 음이온과 결합되는 거동을 갖는 양이온성 기(group)를 지칭한다. 다수의 양으로 하전된 모이어티(moiety)를 가진 폴리머는 당업자에게 명백한 바와 같이, 호모폴리머일 필요가 없다. 양으로 하전된 모이어티의 다른 예시는 종래 기술에 잘 알려져 있고, 당업자에게 명백한 바와 같이 쉽게 사용될 수 있다.
일반적으로, 양으로-하전된 담체 ("양으로 하전된 백본"으로도 지칭됨)는 전형적으로 원자들의 사슬이며, 이는 생리학적 pH에서 사슬 내에서 양 전하를 띠는 기, 또는 백본으로부터 연장되는 곁사슬에 결합되어 양 전하를 띠는 기를 포함한다. 특정 바람직한 구체예들에서, 상기 양으로 하전된 백본은 양이온성 펩티드이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "펩티드"는 아미노산 서열을 지칭하나, 상기 아미노산 서열 내의 아미노산 잔기의 수와 관련한 내포는 없다. 따라서, 용어 "펩티드"는 또한 폴리펩티드 및 단백질을 포함할 수 있다.
특정 바람직한 구체예들에서, 상기 양으로 하전된 백본 자체는 한정된 효소적 또는 치료적 생물학적 활성을 갖지 않을 것이다. 특정 구체예에서, 상기 백본은 선형 탄화수소 백본이고, 이는 일부 구체예에서 질소, 산소, 황, 규소 및 인으로부터 선택된 헤테로원자가 삽입된다. 백본 사슬 원자들의 대부분은 대개 탄소이다. 또한, 상기 백본은 종종 반복 단위들의 폴리머(예를 들어, 아미노산, 폴리(에틸렌옥시), 폴리(프로필렌아민), 폴리알킬렌이민 등)일 수 있으나, 헤테로폴리머일 수 있다. 일 군의 구체예에서, 양으로 하전된 백본은 폴리프로필렌아민이고, 여기에서 다수의 아민 질소 원자들은 양 전하를 띠는 암모늄 기(4개-치환된)로 존재한다. 또 다른 구체예에서, 양으로 하전된 백본은 논펩티딜(nonpeptidyl) 폴리머이고, 이는 헤테로- 또는 호모-폴리머, 예를 들어, 폴리알킬렌이민, 예를 들어, 약 10,000 내지 약 2,500,000, 바람직하게 약 100,000 내지 약 1,800,000, 가장 바람직하게 약 500,000 내지 약 1,400,000의 분자량을 가진 폴리에틸렌이민 또는 폴리프로필렌이민일 수 있다.
또 다른 군의 구체예에서, 상기 백본은 양으로 하전된 기(예를 들어, 암모늄 기, 피리디늄 기, 포스포늄 기, 설포늄 기, 구아니디늄 기, 또는 아미디늄 기)를 포함하는 복수의 곁-사슬 모이어티와 결합하였다. 이러한 군의 구체예에서의 곁사슬 모이어티는 백본을 따라 일관된 간격을 두고 또는 가변적으로 배치될 수 있다. 또한, 곁사슬의 길이는 유사하거나 유사하지 않을 수 있다. 예를 들어, 일 군의 구체예에서, 상기 곁사슬은 1 내지 20개의 탄소 원자를 가지고, 상기 언급된 양으로 하전된 기들 중 하나에서 원위 말단(distal end, 백본으로부터 떨어진)에서 종결되는 선형 또는 분지형 탄화수소 사슬일 수 있다. 양으로 하전된 담체 및 보툴리눔 독소의 결합은 비-공유적 상호작용에 의한 것이고, 이들의 비-제한적인 예시는 이온성 상호작용, 수소 결합, 반데르발스 힘, 또는 이들의 조합을 포함한다. 본 발명의 사용을 위한 양으로 하전된 백본 및 효능기의 예시는 U.S. 특허 제8,623,811호 및 제9,211,248호에 기재되어 있으며, 이는 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
일 군의 구체예에서, 상기 양으로 하전된 백본은 다수의 양으로 하전된 곁사슬 기(예를 들어, 라이신, 아르기닌, 오르니틴, 호모아르기닌 등)를 가진 폴리펩티드이다. 바람직하게는, 상기 폴리펩티드는 약 100 내지 약 1,500,000, 보다 바람직하게는 약 500 내지 약 1,200,000, 가장 바람직하게는 약 1000 내지 약 1,000,000의 분자량을 가진다. 당업자는 아미노산이 본 발명의 이 부분에서 사용되는 경우, 곁사슬은 결합의 중심에서 D- 또는 L-형(R 또는 S 배열)를 가질 수 있음을 이해할 것이다. 특정 바람직한 구체예에서, 상기 폴리펩티드는 약 500 내지 약 5000, 보다 바람직하게 1000 내지 약 4000, 보다 바람직하게 2000 내지 약 3000의 분자량을 가진다. 다른 바람직한 구체예에서, 상기 폴리펩티드는 10 내지 20개의 아미노산, 또는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개의 아미노산, 바람직하게 폴리리신을 포함한다.
대안적으로, 상기 백본은 아미노산 유사체 및/또는 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 상기 백본은 또한 펩토이드(peptoid)와 같은 폴리펩티드의 유사체일 수 있다. 예를 들어, Kessler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 32:543 (1993); Zuckermann et al. Chemtracts-Macromol. Chem. 4:80 (1992); 및 Simon et al. Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 89:9367 (1992))를 참조한다. 간략하게, 펩토이드는 곁사슬이 α-탄소 원자가 아닌 백본 질소 원자에 결합한 폴리글리신이다. 상기와 같이, 곁사슬의 일부는 전형적으로 양으로 하전된 기에서 종결되어 양으로 하전된 백본 성분을 제공할 것이다. 펩토이드의 합성은 예를 들어, U.S. 특허 제5,877,278호에 기재되어 있으며, 이는 본원에 전체로서 참조로 통합된다. 본원에 용어가 사용된 바와 같이, 펩토이드 백본 구조를 가진 양으로 하전된 백본은, 알파-탄소 위치에서 자연적으로 발생하는 곁사슬을 갖는 아미노산으로 구성되지 않으므로, "비-펩티드"로 여겨진다.
다양한 다른 백본, 예를 들어, 폴리펩티드의 입체(steric) 또는 전자적 모방체(mimics)를 이용하는 백본이 사용될 수 있고, 상기 펩티드의 아미드 결합은 대용물(surrogate), 예를 들어, 에스터 결합, 티오아미드 (--CSNH--), 역 티오아미드 (--NHCS--), 아미노메틸렌 (--NHCH2--) 또는 역 메틸렌아미노(--CH2NH--) 기, 케토-메틸렌 (--COCH2--) 기, 포스피네이트 (phosphinate) (--PO2RCH2--), 포스포아미데이트(phosphonamidate) 및 포스포아미데이트 에스테르 (--PO2RNH--), 역 펩티드 (--NHCO--), 트랜스-알켄 (--CR=CH--), 플루오로알켄 (--CF=CH--), 디메틸렌 (--CH2CH2--), 티오에테르 (--CH2S--), 히드록시에틸렌 (--CH(OH)CH2--), 메틸렌옥시 (--CH2O--), 테트라졸 (CN4), 설포아미도 (--SO2NH--), 메틸렌설포아미도 (--CHRSO2NH--), 역 설포아미도 (--NHSO2--)로 치환된 것이고, 예를 들어 Fletcher et al. ((1998) Chem. Rev. 98:763)에서 리뷰되고 거기에 인용된 참고문헌에 상세하게 설명된 말로네이트 및/또는 겜-디아미노-알킬(gem-diamino-alkyl) 서브유닛을 갖는 백본이 사용될 수 있다. 전술한 많은 치환들은 α-아미노산들로부터 형성된 백본에 대해 대략적으로 등배 전자의(isosteric) 폴리머를 생산한다.
상기 제공된 백본들의 각각에서, 양으로 하전된 기를 띠는 곁사슬 기가 부가될 수 있다. 예를 들어, 설폰아미드-연결된 백본 (--SO2NH-- 및 --NHSO2--)은 질소 원자에 결합된 곁사슬 기를 가질 수 있다. 유사하게, 히드록시에틸렌 (--CH(OH)CH2--) 결합은 히드록시 치환기에 부착된 곁사슬 기를 포함할 수 있다. 당업자는 다른 결합 화학을 용이하게 적용하여, 표준적인 합성 방법을 사용하여 양으로 하전된 곁사슬 기를 제공할 수 있다.
일 구체예에서, 상기 양으로 하전된 백본은 단백질 형질도입 도메인(효능기라고도 기재됨)을 갖는 폴리펩티드이다. 본원에서 사용된 바와 같이, 효능기 또는 단백질 형질도입 도메인은 조직 또는 세포막을 통해 양으로 하전된 백본의 이동을 촉진시키는 효과를 가진 임의의 물질이다. 단백질 형질도입 도메인 또는 효능기의 비-제한적인 예시는 -(gly)n1-(arg)n2 (서열번호 5), HIV-TAT 또는 이들의 단편, 또는 안테나페디아(Antennapedia)의 단백질 형질도입 도메인 (PTD) 또는 이들의 단편을 포함하고, 상기 아래 첨자 n1은 0 내지 20, 보다 바람직하게 0 내지 8, 보다 더 바람직하게 2 내지 5의 정수이고, 아래 첨자 n2는 독립적으로 약 5 내지 약 25, 보다 바람직하게 약 7 내지 약 17, 가장 바람직하게 약 7 내지 약 13의 홀수 정수이다. 일부 구체예에서, 상기 HIV-TAT 단편은 디설피드 응집(disulfide aggregation)과 관련된 문제를 최소화하기 위해 HIV-TAT 분자의 시스테인-풍부 영역(cysteine-rich region)을 함유하지 않는다. 바람직하게, 상기 HIV-TAT의 단편 및 안테나페디아 단백질 형질도입 도메인은 전체 단백질(full protein)의 단백질 형질도입 활성을 보유한다. 더욱 바람직한 구체예에서, HIV-TAT 단편은 sequence (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)의 아미노산 서열을 갖는 것이고, 상기 아래 첨자 p 및 q 각각은 독립적으로 0 내지 20의 정수이거나, p 및 q는 각각 독립적으로 정수 1이다. 또 다른 구체예에서, 상기 단편 또는 효능기는 단편 또는 효능기의 아미노산 서열의 C-말단 또는 N-말단을 통해 백본에 결합된다. 특정 바람직한 구체예에서, p는 1이고 q는 0이거나, p는 0이고 q는 1이다. 바람직한 HIV-TAT 단편은 아래 첨자 p 및 q가 각각 독립적으로 0 내지 8, 보다 바람직하게 0 내지 5의 정수인 단편이다. 또 다른 바람직한 구체예에서, 양으로 하전된 곁사슬 또는 분지형 기는 안테나페티아(Antp) 단백질 형질도입 도메인(PTD), 또는 활성을 보유하는 이들의 단편이다. 이들은 예를 들어, Console et al., J. Biol. Chem. 278:35109 (2003)으로부터 당업계에 알려져 있고, 본 발명에 의해 고려되는 안테나페디아 PTD의 비-제한적인 예시는 아미노산 서열 SGRQIKIWFQNRRMKWKKC (서열번호 6)을 가진 PTD이다. 다른 구체예에서, 본 발명의 조성물 및 방법에 사용하기 위한 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRR-G-(K)15-G-RKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는 양으로 하전된 펩티드; 또는 아미노산 서열 YGRKKRRQRRR-G-(K)15-G-YGRKKRRQRRR (서열번호 7)을 갖는 양으로 하전된 펩티드; 또는 아미노산 서열 RGRDDRRQRRR-G-(K)15-G-RGRDDRRQRRR (서열번호 8)을 갖는 양으로 하전된 펩티드이다.
바람직하게는, 상기 양으로 하전된 담체는 곁-사슬 양으로 하전된 단백질 형질도입 도메인 또는 양으로 하전된 효능기를 담체의 총 중량의 백분율로서 적어도 약 0.01%, 바람직하게 약 0.01 내지 약 50 중량 백분율, 보다 바람직하게 약 0.05 내지 약 45 중량 백분율, 및 가장 바람직하게 약 0.1 내지 약 30 중량 %의 양으로 포함한다. 화학식 -(gly)n1-(arg)n2 (서열번호 5)을 가진 양으로 하전된 단백질 형질도입 도메인의 경우, 바람직한 범위는 약 0.1 내지 약 25%이다.
또 다른 구체예에서, 상기 백본 부분은 폴리리신이고, 상기 양으로 하전된 단백질 형질도입 도메인은 리신 곁사슬 아미노기 또는 C- 또는 N말단에 부착된다. 일부 바람직한 구체예에서, 폴리리신은 적어도 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 또는6000 D, 및 약 2,000,000, 1,000,000, 500,000, 250,000, 100,000, 75,000, 50,000, 및 25,000 D 미만의 분자량을 가질 수 있다. 100 내지 2,000,000 D의 범위 내에서, 하한 및/또는 상한 범위는 각각 100씩 증가되거나 감소될 수 있고, 각각의 결과적인 하위-범위는 구체적으로 고려되는 본 발명의 구체예가 된다. 일부 예시적 구체예에서, 상기 폴리리신은 약 1,000 내지 약 1,500,000 D, 약 2,000 내지 약 800,000 D, 또는 약 3,000 내지 약 200,000 D의 분자량을 갖는다. 다른 예시적 구체예에서, 상기 폴리리신은 약 100 내지 약 10,000 D, 약 500 내지 약 5,000 D, 약 1,000 내지 약 4,000 D, 약 1,500 내지 약 3,500 D 또는 약 2,000 내지 약 3,000 D의 분자량을 갖는다. 바람직한 폴리리신은 10 내지 20개의 리신(서열번호 9), 보다 바람직하게는 15개의 리신을 갖는 폴리펩티드이다. 일부 구체예에서, 본 발명에 의해 고려되는 폴리리신은 상업적으로 이용 가능한 (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo., USA) 임의의 폴리리신일 수 있고, 예를 들어, MW>70,000을 갖는 폴리리신, 70,000 내지 150,000의 MW을 갖는 폴리리신, 150,000 내지 300,000의 MW을 갖는 폴리리신, 및 MW>300,000을 갖는 폴리리신일 수 있다. 적절한 폴리리신의 선택은 조성물의 나머지 성분에 따라 다를 것이고, 조성물의 전체 순 양 전하를 제공하고, 바람직하게는 음으로 하전된 성분의 결합된 길이의 1 내지 4배인 길이를 제공하기에 충분할 것이다. 바람직한 양으로 하전된 단백질 형질도입 도메인 또는 효능 기는 예를 들어 -gly-gly-gly-arg-arg-arg-arg-arg-arg-arg (-Gly3Arg7 (서열번호 10)) 또는 HIV-TAT를 포함한다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 상기 양으로 하전된 백본은 폴리알킬렌이민이고, 이의 비-제한적인 예시는 폴리에틸렌이민, 폴리프로필렌이민, 및 폴리부틸렌이민을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 폴리알킬렌이민은 적어도 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, 5000, 5500, 또는 6000 D, 및 약 2,000,000, 1,000,000, 500,000, 250,000,100,000, 75,000, 50,000, 및 25,000 D 미만의 분자량을 갖는다. 100 내지 2,000,000 D의 범위 내에서, 하한 및/또는 상한 범위는 각각 100씩 증가되거나 감소될 수 있고, 각각의 결과적인 하위-범위는 구체적으로 고려되는 본 발명의 구체예가 된다.
본 발명의 다른 구체예에서, 상기 담체는 상대적으로 짧은 폴리리신 또는 폴리에틸렌이민(PEI) 백본(선형 또는 분지형일 수 있음)이고, 이는 양으로 하전된 분지형 기를 갖는다. 이론에 의해 제한되는 것 없이, 이러한 담체들은 치료용 조성물에서 수송 효율이 급격히 감소되도록 유발하는 백본 및 보툴리눔 독소의 제어되지 않는 응집을 최소화하는데 유용하다. 상기 담체가 상대적으로 짧은 선형 폴리리신 또는 PEI 백본인 경우, 상기 백본은 75,000 D 미만, 보다 바람직하게 30,000 D 미만, 및 가장 바람직하게 25,000 D 미만의 분자량을 가질것이다. 그러나, 상기 담체가 상대적으로 짧은 분지형 폴리리신 또는 PEI 백본인 경우, 상기 백본은 60,000 D 미만, 보다 바람직하게 55,000 D 미만, 및 가장 바람직하게 50,000 D 미만의 분자량을 가질 것이다.
특히 흥미로운 일 구체예에서, 상기 비-천연 분자는 고유의 보툴리눔-독소-유사 활성을 갖지 않으며 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 단백질 형질도입 도메인을 또한 함유하는 양이온성 펩티드이다. 임의의 특정한 과학적 이론에 구속되는 것 없이, 상기 펩티드는 주사 후 복합체 내 관련된 분자의 조직 침투를 증가시키고, 피부 및 시험관 내에서 보툴리눔 독소의 안정화를 향상시키는 것으로 여겨진다. 이들 펩티드에 의해 제공되는 증가된 조직 침투는 특히 외인성 알부민에 결합된 종래의 상업적 보툴리눔 독소 복합체(예: BOTOX® 또는 MYOBLOC®)에 비해 감소된 항원성, 더 나은 안정성 프로파일, 증가된 효능, 임상적 효능의 더 빠른 개시 또는 임상적 효능의 더 긴 지속 기간을 제공한다.
바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 조성물에서 양으로 하전된 담체의 농도는 보툴리눔 독소의 분자 표적, 예를 들어, 운동 신경 판(motor nerve plates)으로의 전달을 향상시키기에 충분하다. 또한, 이론에 구속되는 것 없이, 침투 속도는 수용체-매개 동역학을 따르므로, 침투-향상-분자의 양이 증가함에 따라 조직 침투는 수송 속도가 일정해지는 포화 지점까지 증가한다. 따라서, 바람직한 일 구체예에서, 상기 부가된 침투-향상 분자의 양은 포화 직전에 침투를 최대화시키는 양과 동일하다. 본 발명의 주사용 조성물에서 양으로 하전된 담체 (또는 담체 펩티드)의 유용한 농도 범위는 본원에 기재된 바와 같은 보툴리눔 독소의 단위(U) 당 약 0.1 pg (0.1 pg/U) 내지 보툴리눔 독소의 단위 당 약 1.0 mg (mg/U)이다. 국소(topical) 조성물에서 양으로 하전된 담체 (또는 담체 펩티드)의 유용한 농도 범위는 보툴리눔 독소의 약 1.0 pg/U 내지 0.5 mg/U(담체의 양/보툴리눔 독소의 U)이다. 다른 구체예에서, 본 발명의 주사용 조성물에서 양으로 하전된 담체 (또는 담페 펩티드)는 예를 들어, 1 ng/U 내지 300 ng/U의 보툴리눔 독소, 10 ng/U 내지 200 ng/U의 보툴리눔 독소, 또는 1 ng/U 내지 1000 ng/U의 보툴리눔 독소; 또는 0.1 ng/U 내지 10,000 ng/U의 보툴리눔 독소의 범위로 존재한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 조성물에서 존재하는 보툴리눔 독소 단위에 대한 양으로 하전된 담체 (또는 담체 펩티드)의 양은 비제한적 예시로서 보툴리눔 독소의 단위 당 담체의 ng (ng/U)은 10, 20, 30, 40, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 또는 그 사이 임의의 양이다. 바람직하게는, 상기 보툴리눔 독소는 혈청형 A, 특히, 150 kD 형태의 혈청형 A 보툴리눔 독소이고, 상기 담체 펩티드는 서열번호 4에 나타난 것과 같은 것이다.
일반적으로, 보툴리눔 독소의 활성, 즉, 보툴리눔 독소 활성의 단위(U)를 측정하기 위한 방법 및 절차는 당업자에게 알려져 있으며 당업자에 의해 수행된다. 간략하게, 마우스에서 반수 치사량 분석(median lethality assay, LD50 assay)은 보툴리눔 독소의 단위 수를 높은 정확도로 평가하기 위해 통상적으로 사용된다. 모든 상업적으로 이용가능한 보툴리눔 독소의 용량은 생물학적 활성의 단위의 관점에서 표현된다. 예로써, 보툴리눔 독소의 1 단위는 암컷 Swiss-Webster 마우스에서 계산된 복강내 반수 치사량(LD50)에 해당한다. 또한, 당업계의 치사량 분석을 기재한 Hoffman, R.O. et al., 1986, Int. Ophthalmol. Clin., 26:241-50, DePass, L.R., 1989, Toxicol. Letters, 49:159-170; 및 Pearce, L.B. et al., 1994, Toxicol. Appl. Pharmacol., 128:69-77을 참조바란다. 보다 구체적으로, 본 발명의 조성물의 보툴리눔 독소 성분에 대한 보툴리눔 독소 단위를 측정하기 위한 적절한 방법은 다음과 같다: 17-23 그램 무게의 48 마리의 암컷 CD-1 마우스가 무작위적으로 시험 물품(test article)의 6개의 용량(1.54, 1.31, 1.11, 0.95, 0.80, 및 0.68 U/0.5 mL) 에 할당되고, 용량 그룹당 8마리의 동물이 할당된다. 상기 시험 물품은 분석 또는 시험되는 보툴리눔 독소 제제 또는 샘플을 지칭한다. 상기 동물들은 케이지당 8마리씩 수용되고, 시험 물품을 투여한 후 24시간 이내에 무게가 측정된다. 투여 당일, 상기 시험 물품은 등장 식염수 (0.9% NaCl)에서 적절한 농도로 희석된다. 각 동물들은 복강 내 주사를 통해 희석된 시험 물품의 0.5 mL가 투여된다. 주사 후, 마우스를 케이지에 되돌려 놓고, 사망수를 3일 동안 매일 기록한다. 주사 후 72 시간에 치사율을 기록하고, 동일한 투여 용법 사용하여 평가된 참조 표준 (reference standard)과 비교하여 LD50 값을 추론하기 위해 프로비트(probit) 또는 로지스틱(logistic) 분석에 의해 결과를 분석한다. 예를 들어, 상기 참조 표준은 시험 물품의 상대적 효능을 도출하기 위해 비교에 사용되는 본 발명과 동일한 구성의 특별히 검증되고 보정된 로트(lot)이다. 이후 측정된 LD50값은 물을 타지 않은(neat) (희석되지 않은) 시험 물질에 대해 상대적인 효능 값을 결정하기 위해, 수행된 누적된 희석에 대하여 보정된다.
본 발명의 조성물은 바람직하게는 대상체 또는 환자의 피부 또는 상피 (epithelium)로의 주사를 허용하는 형태이다. 상기 용어 "필요로 하는(in need)"은 약학적 또는 건강-관련된 필요(예를 들어, 바람직하지 않은 근긴장이상 수축 또는 근육 연축을 함유하는 상태의 치료)을 모두 포함하는 의미이다. 바람직한 구체예에서, 상기 조성물은 보툴리눔 독소 (관련 무-독성 단백질 또는 감소된 관련 무-독성 단백질을 함유함)를 양으로 하전된 담체 및 일반적으로 하나 이상의 추가적인 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 혼합함으로써 제조된다. 이들의 가장 단순한 형태에서, 이들은 수성의 약학적으로 허용 가능한 희석제, 예를 들어 완충 식염수(예를 들어, 인산완충 식염수)를 함유할 수 있다. 그러나, 상기 조성물은 적용될 조직에 적합한 피부과학적으로 또는 약학적으로 허용 가능한 담체, 비히클 또는 배지(medium)를 포함한, 주사용 약학적 또는 코스메슈티컬(cosmeceutical) 조성물에서 일반적으로 발견되는 다른 구성성분들을 함유할 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 상기 용어 "약학적으로 허용 가능한"은 기재된 조성물 또는 이의 성분이 일반적으로 과도한 독성, 비호환성, 불안정성, 알러지 반응 등이 없이 이들 조직과 접촉하여 사용하기에 또는 환자에 사용하기에 적합함을 의미한다. 적절한 경우, 본 발명의 조성물은 고려 중인 분야에서 통상적으로 사용되는 임의의 구성성분을 포함할 수 있다.
이들의 형태와 관련하여, 본 발명의 조성물은 용액, 에멀젼(마이크로 에멀젼 포함), 현탁액, 겔, 파우더, 상기 조성물이 사용될 수 있는 근육 및 다른 조직으로의 주사에 사용되는 다른 전형적인 고체 또는 액체 조성물을 포함한다. 바람직한 구체예에서, 본 발명의 조성물은 주사기(syringe)로 주사하기에 적합한 저-점도, 멸균 제제로 존재한다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 조성물 및 제제는 본 발명에 따른 조성물 및 제제를 언급하는 경우 본질적으로 상호 교환적이다. 본 발명의 조성물은 주사 전에 약학적으로 허용 가능한 액체 희석제를 사용하여 재구성되는 동결건조된 파우더의 형태일 수 있다. 특정 구체예에서, 상기 동결건조된 파우더는 액체 희석제로 재구성되어, 약 0.1 내지 약 2000 cP, 보다 바람직하게 약 0.2 내지 약 500 cP, 더욱 보다 바람직하게 약 0.3 내지 약 50 cP, 및 더욱 보다 바람직하게 약 0.4 내지 약 2.0 cP의 점도를 가진 주사용 제제를 형성한다. 발명의 조성물은 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체뿐만 아니라, 이러한 제품에 전형적으로 사용되는 기타 구성성분, 예를 들어, 항균제, 수화제, 조직 확장제 (tissue bulking agent) 또는 조직 충전제(tissue filler), 보존제, 유화제, 천연 또는 합성 오일, 용매, 계면활성제, 세정제(detergents), 겔화제, 항산화제, 충전제, 증점제, 파우더, 점도-조절제 및 물, 및 선택적으로는 마취제, 가려움증-방지제(anti-itch actives), 식물 추출물, 컨디셔닝제(conditioning agents), 무기염류, 폴리페놀, 실리콘 또는 이의 유도체, 비타민 및 약용식물제(phytomedicinals)를 함유할 수 있다.
본 발명에 따른 주사용 조성물은 물질 내에 캡슐화되거나 그렇지 않으면 물질 내에 함유되는 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체을 포함하여, 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체가 시간의 경과에 따라 조절되는 방식으로 조직 내에 방출되는, 제어된-방출(controlled-release) 또는 서방출(sustained-release) 조성물의 형태일 수 있다. 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체를 함유하는 조성물은 매트릭스, 리포좀, 소포(vesicles), 마이크로캡슐, 마이크로스피어 등의 내로, 또는 고체 입자상 물질 내로 함유될 수 있고, 이들 모두는 시간이 지남에 따라 보툴리눔 독소의 방출을 제공하기 위해 선택 및/또는 구성된다. 상기 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체는 함께(즉, 동일한 캡슐로) 또는 별개로(즉, 별개의 캡슐로) 캡슐화될 수 있다.
구체예에서, 본 발명의 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 보툴리눔 독소, 본원에 기재된 바와 같은 양으로 하전된 담체 (또는 펩티드), 비-환원 이당류 또는 비-환원 삼당류, 비-이온성 계면활성제, 및 적절한 pH, 예를 들어, pH 4.5 내지 pH 7.5, 또는 pH 4.5 내지 pH 6.8, 또는 pH 4.5 내지 pH 6.5 범위의 pH로 유지할 수 있는 생리학적으로 적합한 버퍼를 포함하는 액체 (수상) 조성물 (또는 제제)을 포함한다. 적절한 pH는 예를 들어, pH 6.5 또는 pH 7.5 범위에서 pH 값의 상한 및 하한을 또한 포함하는 것으로 이해된다. 상기 액체 조성물에서 비-환원 당의 농도는 10% 내지 40% (w/v)의 범위이고 비-이온성 계면활성제의 농도는 0.005% 내지 0.5% (w/v)의 범위이다. 상기 액체 조성물은 건조, 바람직하게는 동결 건조되어, 안정화된 고체 조성물을 생산할 수 있고, 이는 이후 예를 들어 멸균 식염수 또는 다른 공지된 생리학적 및 약학적으로 허용 가능한 희석제, 부형제, 또는 비히클, 특히 주사용 제제에 사용되는 용도로 알려진 것들을 사용하여 사용을 위해 재구성될 수 있다. 바람직하게는, 상기 건조된, 예를 들어 동결 건조된, 고체 조성물은 비결정형(noncrystalline) 및 무정형 고체 조성물이고, 예를 들어 산제 형태일 수 있다. 또한, 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 동물성 단백질-유래의 제품, 예를 들어 알부민을 포함하지 않는다. 본 발명에 적절한 조성물은 또한 U.S. 특허 제 9,340,587 B2호에 기재되어 있으며, 그 전체 내용이 참조로서 본원에 포함된다. 특정 구체예에서, 상기 조성물은 혈청형 A의 보툴리눔 독소를 포함한다. 다른 특정 구체예에서, 상기 조성물은 150 kDa의 분자량을 갖는 혈청형 A의 보툴리눔 독소를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 조성물은 비-환원 당, 바람직하게는 이당류를 함유하고, 이의 비-제한적 예시는 무수 및 수화된 형태를 포함하는 트레할로스, 또는 수크로스, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 구체예에서, 상기 트레할로스의 수화된 형태, 트레할로스-2수화물이 바람직하다. 다른 구체예에서, 상기 조성물은 삼당류를 함유하고, 이의 비-제한적인 예시는 라피노스이다. 일반적으로, 본 발명의 조성물에서, 상기 비-환원 당, 바람직하게는 이당류, 예를 들어, 수크로스의 농도는 10% 내지 40% (w/v), 바람직하게 10% 내지 25% (w/v), 보다 바람직하게 15% 내지 20% (w/v)의 범위이다. 일부 바람직한 구체예에서, 상기 비-환원 당, 바람직하게는 이당류, 예를 들어, 수크로스의 농도는 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19% 또는 20% (w/v)이다.
일반적으로, 본 발명의 조성물은 보툴리눔 독소를 안정화시키는 능력을 가지며 약학적 용도에 적합한 임의의 비-이온성 계면활성제를 포함할 수 있다. 일부 구체예에서, 상기 비-이온성 계면활성제는 폴리소르베이트이고, 예를 들어, 비제한적 예로써, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 및 폴리소르베이트 80이다. 다른 구체예에서, 상기 비-이온성 계면활성제는 소르비탄 에스테르이고, 이의 비-제한적 예시는 SPAN® 20, SPAN® 60, SPAN® 65, 및 SPAN® 80을 포함한다. 상기 비-이온성 계면활성제 Triton® X-100 또는 NP-40 이 사용될 수 있다. 또한, 상이한 비-이온성 계면활성제의 조합이 사용될 수 있다. 특정 바람직한 구체예에서, 상기 비-이온성 계면활성제는 폴리소르베이트, 폴록사머 및/또는 소르비탄이고; 폴리소르베이트 및 소르베이트가 특히 바람직하다. 구체예에서, 상기 비-이온성 계면활성제는 상한 및 하한 값을 포함하여, 0.005% 내지 0.5%, 또는 0.01% 내지 0.2%, 또는 0.02% 내지 0.1% 또는 0.05 내지 0.08%의 범위로 본 발명의 조성물에 존재한다. 또한, 본 발명의 조성물은 0.01%, 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 0.08%, 0.09%, 0.10%, 0.11%, 0.12%, 0.13%, 0.14%, 또는 0.15%의 양으로 비-이온성 계면활성제를 함유할 수 있다.
일반적으로 본 발명의 조성물에서, 상기 범위로 pH 를 유지할 수 있는 임의의 생리학적으로 적합한 버퍼가 사용에 적합하다. 이러한 버퍼의 비-제한적인 예시는 시트르산, 아세트산, 숙신산, 타르타르산, 말레산 및 히스티딘을 포함한다. 적절한 버퍼 농도의 비-제한적인 예시는 0.400% 내지 0.600%; 0.575%, 또는 0.500% 내지 0.565% 범위의 버퍼 농도를 포함한다. 본 발명의 조성물은 또한 버퍼 염의 혼합물을 포함할 수 있고, 이의 비-제한적인 예시는 시트레이트/아세테이트, 시트레이트/히스티딘, 시트레이트/타르트레이트, 히스티딘 모노히드로클로라이드, 말레이트/히스티딘, 또는 숙시네이트/히스티딘을 포함한다. 따라서, 단일 주사에 의한 치료 후에 긴 지속 기간 효과를 제공하는 본 발명의 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 보툴리눔 독소, 예를 들어 보툴리눔 독소 A 또는 150 kDa MW의 보툴리눔 독소 A, 본원에 기재된 바와 같은 양으로 하전된 담체 (또는 펩티드), 비-환원 이당류, 예를 들어 수크로스, 비-이온성 계면활성제, 예를 들어 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 80, 또는 소르비탄 에스터, 및 적합한 pH, 예를 들어 pH 4.5 내지 pH 6.5 또는 pH 4.5 내지 pH 7.5 범위를 유지할 수 있는 생리학적으로 적합한 버퍼, 예를 들어 시트르산, 아세트산, 숙신산, 타르타르산, 말레산, 및 히스티딘을 본원에 기재된 바와 같은 w/v 양으로 포함한다.
본 발명의 특정 조성물은 보툴리눔 독소, 바람직하게 혈청형 A의 보툴리눔 독소, 또는 150 kDa의 분자량을 갖는 보툴리눔 독소 A; 양으로 하전된 담체 (예를 들어, 펩티드); 비-환원 이당류 또는 비-환원 삼당류, 바람직하게는 10% 내지 40% (w/v)로 존재하는, 이당류; 비-이온성 계면활성제, 바람직하게, 0.005% 내 지 0.5% (w/v)로 존재하는, 폴리소르베이트 또는 소르비탄 에스테르; 및 4.5 내지 7.5의 pH를 유지하기 위한 생리학적으로 적합한 버퍼, 예를 들어, 0.400% 내지 0.600%; 0.450% 내지 0.575%, 또는 0.500% 내지 0.565%로 존재하는 시트르산, 아세트산, 숙신산, 타르타르산, 말레산, 또는 히스티딘을 포함하는, 알부민이-없는, 액체 (수상) 조성물이다.
본 발명에 따른 보툴리눔 독소 제제는, 마비를 생성하고, 이완을 생성하고, 수축을 완화하고, 연축을 예방 또는 완화하고, 샘 생산(glandular output)을 감소시키고, 또는 다른 바람직한 효과들을 위해, 피부 아래의 근육, 또는 피부 내의 샘 구조(glandular structure)에, 주사(일반적으로 주사기를 사용함)에 의해, 유효량으로 전달될 수 있다. 이러한 방식으로 보툴리눔 독소의 국소 전달은, 주사용 또는 이식용 물질들에 비해 용량 감소를 제공하고, 독성을 감소시키고, 바람직한 효과를 위한 보다 정확한 용량 최적화를 가능하게 할 수 있다.
본 발명의 조성물은 보툴리눔 독소의 유효량, 바람직하게 치료학적 유효량으로 전달되도록 투여된다. 본원에 사용된 바와 같이, 상기 용어 "유효량" 또는 "치료학적 유효량"은 바람직한 근육 마비 또는 다른 생물학적 효과를 생산하기에 충분하지만, 암시적으로 안전한 양, 즉, 심각한 부작용을 피하기에 충분히 낮은, 상기 기재된 바와 같은 보툴리눔 독소의 양을 의미한다.
본 발명의 조성물은 단일-용량 치료로서 적용되기 위한 적절한 유효량의 보툴리눔 독소를 함유하거나, 또는 투여 위치에서의 희석을 위해 또는 기간에 걸쳐 다중 적용 및/또는 연속 적용에 사용되기 위해 보다 농축될 수 있다. 본 발명의 양으로 하전된 담체의 사용을 통해, 보툴리눔 독소는 경부 근긴장이상증과 같은 상태를 치료하기 위해 대상체에 주사 투여될 수 있다. 상기 보툴리눔 독소는 근육 또는 다른 관련 피부 또는 다른 표적 조직 구조에 주사 투여된다.
가장 바람직하게는, 상기 조성물은 의사 또는 다른 건강 관리 전문가의 지시에 의해 또는 이에 따라 투여된다. 이들은 단일 치료에서 또는 시간 경과 따른 일련의 치료에서 투여될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명에 따른 조성물은 보툴리눔 독소와 관련된 효과가 요구되는 하나의 위치 또는 위치들에 주사된다. 경부 근긴장이상증 치료에서, 하기 표 1은 주사용 RT002의 적절한 용량에 대한 지침으로, 각각 125U 또는 250U의 용량을 제공한다:
표 1: -주사 가능한 근육 및 근육별 사전-정의된 주사 부피 125U 주사 그룹을 위한 RT002 250U 주사 그룹을 위한 RT002
재구성된 연구 약물의 총 부피는 2.5mL이다.
희석 5 U/ 0.1 mL 10 U/ 0.1 mL
주사가능한 근육 근육별 필수 주사 부피(mL) 용량 범위
(Units)		 용량 범위
(Units)
흉쇄유돌근(sternocleidomastoid) 0.2-0.5 10-25 20-50
견갑거근(levator scapulae) 0.2-0.6 10-30 20-60
목갈비근 복합체(scalenus complex) 0.2-0.3 10-15 20-30
두판상근(splenius capitis) 0.2-1.0 10-50 20-100
경부판상근(splenius cervices) 0.2-1.0 10-50 20-100
승모근(trapezius) 0.3-0.8 15-40 30-80
최장근(longissimus) 0.2-0.6 10-30 20-60
머리, 목, 어깨 부위의 하나 이상의 근육에 보툴리눔 독소 조성물을 주사하였다. 일부 구체예에서, 상기 하나 이상의 근육 표적은 흉쇄유돌근, 견갑거근, 목갈비근 복합체, 경부판상근, 경부판상근, 승모근 및 최장근으로 구성된 군으로부터 선택되며, 좌측 및 우측 근육 또는 근육 복합체는 각각 선택적 표적이다. (도 11 참조). 일부 실시예에서, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 또는 모든 근육 표적은 흉쇄유돌근, 견갑거근, 목갈비근 복합체, 경부판상근, 경부판상근, 승모근 및 최장근으로 구성된 군으로부터 선택되며, 좌측 및 우측 근육 또는 근육 복합체는 각각 선택적 표적이다. 일부 구체예에서, 상기 두판상근, 경부판상근, 승모근 및 최장근은 편측 또는 양측 주사(즉, 신체의 편측 또는 양쪽에 주사)를 받을 수 있다. 일부 구체예에서, 편측(unilaterial) 주사만이 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및/또는 목갈비근 복합체에 투여된다. 일부 구체예에서, 상기 흉쇄유돌근, 견갑거근, 목갈비근 복합체, 두판상근, 경부판상근, 승모근, 및 최장근은 각각 적어도 하나의 주사를 받는다. 일부 구체예에서, 근육 표적은 1회, 2회, 3회, 4회, 5회 등과 같은 하나 이상의 주사를 받을 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 주사에 의해 각각의 근육 표적에 투여되는 용량 범위는 표 1에 제공된다.
보툴리눔 독소는 그 특성 때문에, 바람직하게는 임의의 이상 또는 바람직하지 않은 결과를 생산하지 않고 원하는 결과를 생산하게될 양, 적용 속도, 및 빈도로 투여된다. 구체예들에서, 본 발명의 조성물의 유효 용량을 사용한 단일 치료는 보툴리눔 독소에 의해 치료가능한 징후(indication)에 대한 치료 코스 동안, 또는 단일 다중 치료 세션(session) 동안의 일련의 주사에서, 예를 들어, 적어도 12, 14, 16, 18, 20, 24, 26, 28, 32, 36, 및 38 주; 또는 3개월, 4개월, 5개월, 6개월 또는 6달 이상, 즉 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 또는 그 이상, 10개월을 포함하는 기간동안 지속되는 수반되는 효과와 같은 긴 지속 기간의 효과를 가능하게 한다. 작용의 더 긴 지속 기간은 치료 목적 또는 효과를 유지하기 위해 다중 치료(multiple treatments)가 사용되는 경우 치료들 사이의 보다 긴 간격 또는 시간 기간을 제공한다. 일 구체예에서, 본 발명의 조성물을 약 100 U 내지 500 U; 또는 보다 구체적으로, 약 100U, 125U, 150U, 175U, 200U, 225U, 250U, 175U, 300U, 325U, 350U, 375U, 400U, 425U, 450U 또는 그 사이의 임의의 양의 보툴리눔 독소를 제공하는 조성물을 개체에게 투여하거나 복용한 후의 상기 조성물의 더 긴 지속기간, 예를 들어 적어도 12, 14, 16, 18, 20, 24, 26, 28, 32, 36 및 38주 또는 3 개월, 4 개월, 5개월, 6개월 또는 6개월 이상, 예를 들어 7개월, 8개월, 9개월 또는 10개월, 그 사이를 포함하는 것은, 본 발명에 따른 양전하 담체(또는 펩타이드)를 함유하지 않는 보툴리눔 독소 함유 조성물 또는 제품의 효과 지속 기간에 비해 더 긴 것이다. 일부 경우에서, 본 발명의 양으로 하전된 담체 (또는 펩티드) 없이 보툴리눔 독소를 함유하는 조성물 또는 제품은 3 또는 4개월 미만 동안 효과적이다. 본원의 결과는 바람직하게는 하기 기재된 바와 같은 RT002 제제의 사용을 통해 달성된다.
특정 구체예에서, 보툴리눔 독소 및 본원에 기재된 바와 같은 하나 이상의 양으로 하전된 효능기가 공유적으로 결합된 양으로 하전된 중합에 의한 백본(polymeric backbone)을 포함하는 양으로 하전된 담체를 포함하는 본 발명의 조성물은 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에 단일 주사로 경부 근긴장이상증의 치료를 위해 대상체 당 치료 용량 당 약 100 U 내지 500 U; 또는 보다 구체적으로, 100U, 125U, 150U, 175U, 200U, 225U, 250U, 175U, 300U, 325U, 350U, 375U, 400U, 425U, 450U, 또는 이들 사이의 임의의 양의 보툴리눔 독소를 제공하는 양 또는 용량으로 투여된다. 본 발명에 따르면, 치료 효과는 몇주 또는 몇 개월, 예를 들어, 적어도 10주 동안, 적어도 12주 동안, 적어도 16주동안, 적어도 20주 동안, 적어도 24주 동안, 적어도 28주 동안, 적어도 30주 동안, 또는 적어도 6개월 또는 6개월 이상, 예를 들어 6, 7, 8, 9, 또는 10개월, 또는 그 이상 동안 지속된다. 구체예에서, 상기 보툴리눔 독소는 혈청형 A, B, C, D, E, F, 또는 G이다. 구체예에서 상기 보툴리눔 독소는 혈청형 A이다. 일 구체예에서, 상기 혈청형 A 보툴리눔 독소는 150 kDa의 분자량을 갖는다. 일 구체예에서, 상기 혈청형 A 보툴리눔 독소는 상기 기재된 바와 같이 더 높은 분자량의 복합체의 형태이다. 바람직한 구체예에서, 상기 150 kDa 보툴리눔 독소 또는 상기 독소의 더 높은 분자량 형태는 알부민이-없는 제제에 존재한다. 일 구체예에서, 상기 양으로 하전된 중합에 의한 백본은 폴리리신 또는 폴리에틸렌이민이다. 일 구체예에서, 상기 하나 이상의 양으로 하전된 효능기는 -(gly)n1-(arg)n2 (서열번호 5)를 포함하고, 상기 아래 첨자 n1은 0 내지 20, 보다 바람직하게 0 내지 8, 더욱 보다 바람직하게 2 내지 5의 정수이고, 상기 아래첨자 n2는 독립적으로 약 5 내지 약 25, 보다 바람직하게 약 7 내지 약 17, 가장 바람직하게 약7 내지 약13의 홀수 정수이다. 일부 구체예에서, 상기 하나 이상의 양으로 하전된 효능기는 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3) 아미노산 서열을 갖고, 상기 아래 첨자 p 및 q는 각각 독립적으로 0 내지 20의 정수이다. 특정 바람직한 구체예에서, p는 1이고 q는 0이거나, p는 0이고 q는 1이다. 다른 바람직한 구체예에서, 상기 아래 첨자 p 및 q는 각각 독립적으로 0 내지 8, 보다 바람직하게 0 내지 5의 정수이다. 특정 구체예에서, 상기 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는다. 다른 구체예에서, 상기 하나 이상의 양으로 하전된 효능기는 양으로 하전된 백본에 효능기, 예를 들어 아미노산 서열의 C-말단 또는 N-말단을 통해 부착된다. 일부 구체예에서, 상기 하나 이상의 양으로 하전된 효능기는 양으로 하전된 담체의 양으로 하전된 폴리리신 백본의 말단 또는 양 말단에 결합된다. 특정 구체예에서, 상기 양으로 하전된 백본은 폴리리신이고 상기 보툴리눔 독소는 혈청형 A이다. 또 다른 특정 구체예에서, 상기 혈청형 A 보툴리눔 독소는 150 kDa의 분자량을 갖고, 상기 양으로 하전된 백본은 폴리리신이고 하나 이상의 공유적으로 결합된 양으로 하전된 효능기는 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3) 아미노산 서열을 갖고, 여기에서 아래 첨자 p 및 q는 각각 독립적으로 0 내지 20의 정수이거나, 각각 독립적으로 상기 개시된 바와 같은 값이고; 또는 상기 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는다. 구체예에서, 상기 조성물은 주사 당 50 U 또는 적어도 50 U; 60 U 또는 적어도 60 U; 70 U 또는 적어도 70 U; 80 U 또는 적어도 80 U; 90 U 또는 적어도 90 U; 또는 100 U 또는 적어도 100 U, 125 U 또는 적어도 125 U 또는 적어도 150U; 175 U 또는 적어도 175 U; 200 U 또는 적어도 200 U, 225 U 또는 적어도 225 U 또는 적어도 250U; 275 U 또는 적어도 275 U; 300 U 또는 적어도 300 U, 325 U 또는 적어도 325 U 또는 적어도 350U; 375 U 또는 적어도 375 U; 400 U 또는 적어도 400 U의 보툴리눔 독소를 제공하는 양 또는 용량으로 주사에 의해 투여된다. 전술한 양 또는 용량 사이의 양 또는 용량, 예를 들어, 130 U 또는 적어도 130 U; 170 U 또는 적어도 170 U; 210 U 또는 적어도 210 U 등은 또한 고려된다. 상기 조성물은 단일 치료 용량으로서 약 100 U 내지 500 U; 또는 보다 구체적으로, 약 100 U 내지 200 U 또는 약 200 U 내지 300 U 또는 약 300 U 내지 450 U의 보툴리눔 독소를 제공하는 양으로 주사에 의해 투여되고, 반응 또는 효과는 긴 지속 기간, 예를 들어, 적어도 10주 동안, 적어도 12주 동안, 적어도 14주 동안, 적어도 16주 동안, 적어도 18주 동안, 적어도 20주 동안, 적어도 22주 동안, 적어도 24주 동안, 적어도 6개월, 또는 6개월 이상, 예를 들어 6, 7, 8, 9, 또는 10개월, 또는 그 이상 동안 달성되고 유지된다.
제한하고자 하는 것 없이, 치료 코스에서, 본 발명의 조성물은 본원에 기재된 바와 같이 조성물 및 방법의 치료학적 유효 용량에 의해 제공되는 효과의 연장된 지속 기간에 기초하여 초기 치료 용량 후 덜 빈번한 간격으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 조성물은 본 발명의 방법의 실행에 의해 1 년에 약 2회(약 6개월 마다), 또는 3개월 마다, 4개월 마다, 5개월 마다, 7개월 마다 필요로 하는 개체에게 투여(또는 복용)될 수 있다. 특정 일 구체예에서, 개체는 본 발명의 조성물의 용량이 1년 당 2회 또는 3회 또는 4회 투여된다. 복용 간의 중간 지속 기간은 치료되는 개체에 의해 결정되는 바와 같이 치료 상 치료법 및/또는 치료에 대한 요구에 따라, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 적어도 6개월, 또는 6개월 이상일 수 있다. 본 발명의 조성물은 조성물 내에서 약 100 U 내지 500 U; 또는 보다 구체적으로, 100U, 125U, 150U, 175U, 200U, 225U, 250U, 175U, 300U, 325U, 350U, 375U, 400U, 425U, 450U 또는 이 사이의 임의의 양의 보툴리눔 독소로 적절한 간격으로 복용될 수 있다.
본 발명은 또한 피부를 가로질러 본원에 기재된 보툴리눔 독소-함유 조성물을 주사하기 위한 다양한 전달 장치의 사용을 고려한다. 이러한 장치는, 제한 없이, 주사바늘 및 주사기(syringe)를 포함할 수 있고, 또는 분배 및 조성물 분배의 모니터링이 가능하고, 선택적으로 하나 이상의 양상에서 대상체의 상태를 모니터링할 수 있는(예를 들어, 분배된 물질에 대한 대상체의 반응을 모니터링할 수 있는) 보다 정교한 장치를 포함할 수 있다.
일부 구체예에서, 상기 조성물은 그 자체로 미리-제제화 및/또는 전달 장치에 미리-배치될 수 있다. 본 발명은 또한 상기 조성물이 하나의 성분을 나머지 성분과 별도로 저장하는 키트로 제공되는 구체예를 고려한다. 예를 들어, 특정 구체예에서, 본 발명은 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체를 적용 시점 또는 그 이전에 조합하기 위해 별도로 저장하는 키트를 제공한다. 양으로 하전된 담체의 양 또는 보툴리눔 독소에 대한 이들 분자의 농도 비율은 해당 조성물에 사용하기 위해 선택되는 담체에 따라 달라질 것이다. 예를 들어, 주어진 경우에 담체 분자의 적절한 양 또는 비율은, 예를 들어, 하기 기재된 바와 같이 하나 이상의 실험을 수행함으로써 쉽게 결정될 수 있다.
일반적으로, 본 발명은 보툴리눔 독소 (대안적으로 보툴린무 독소 복합체 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체)를 이를 필요로 하는 대상체 또는 환자에 투여하는 방법을 또한 고려하고, 여기에서 보툴리눔 독소의 유효량은 본원에 기재된 바와 같이 양으로 하전된 담체와 함께 투여된다. "와 함께(in conjunction with)"란 두가지 성분(보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체)을 대상체에게 투여하기 전에 조합하거나 개별적으로 투여하되 함께 작용하여 필요한 양의 치료용 단백질을 효과적으로 전달할 수 있는 방식으로 조합 절차(combination procedure)를 통해 투여하는 것을 의미한다. 예를 들어, 양으로 하전된 담체를 함유하는 조성물을 대상체의 피부에 먼저 투여한 다음 보툴리눔 독소를 함유하는 피부 패치, 주사기 또는 기타 장치를 적용할 수 있다. 상기 보툴리눔 독소는 주사기 또는 다른 분배 장치에 건조 형태로 저장될 수 있고, 상기 양으로 하전된 담체는 상기 독소의 적용 전에 주사되어 둘이 함께 작용하여 바람직한 조직 침투 향상을 일으킬 수 있다. 따라서, 이러한 의미에서, 상기 두 물질들(양으로 하전된 담체 및 보툴리눔 독소)은 조합하여 작용하거나 아마도 in situ로 조성물 또는 조합을 형성하도록 상호작용한다. 따라서, 본 발명은 또한 보툴리눔 독소 및 양으로 하전된 담체를 함유하는 액체, 겔 등을 분배하기 위한 장치를 포함하는 키트를 포함하고, 이는 대상체의 피부 또는 표적 조직에 주사하기에 적합하다. 건강 관리 전문가의 지시 하에 또는 환자 또는 대상체에 의해 본 발명의 조성물을 투여하기 위한 키트는 그 목적에 적합한 맞춤형 어플리케이터를 포함할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약 4.5 내지 약 6.3의 pH를 갖는 생리학적인 환경에서 사용하기에 적합하고, 따라서 이러한 pH를 가질 수 있다. 그러나, 약 4.5 내지 약 7.5의 pH를 갖는 조성물 또한 본원에 기재된 바와 같이 본 발명에 포함된다. 본 발명에 따른 조성물은 실온 또는 냉장 조건 하에서 저장될 수 있다.
일부 구체예에서, 치료되는 환자는 65세, 적어도 65세, 또는 65세 이상이다. 예를 들어, 환자는 65, 66, 68, 70, 75, 80세 또는 그 이상일 수 있다.
실시예
실시예 1 - 제제
주사용 보툴리눔 독소 제제(RT002)를 하기 표 2에 따른 구성성분으로 제조하였다. 새로운 부형제 RTP004를 제외한 모든 비활성 구성성분은 미국 FDA 비활성 구성성분 데이터베이스(US FDA inactive ingredients database)에 나열되어 있다. RTP004는 다음 서열을 갖는 펩티드이다: RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4). 상기 보툴리눔 독소 분자는 R004와 공유 결합하지 않는다. RT002는 알부민과 같은 부속 단백질 또는 동물-유래 단백질을 함유하지 않는다.
표 2. 주사용 RT002의 조성물
구성성분 품질 기준 기능 바이알 당 양 (50U/바이알 제제) 바이알 당 양 (100U/바이알 제제)
보툴리눔 독소 타입 A, 150 kD 내부 활성 구성성분 50 U (0.23 nga) 100 U (0.50 ngd)
L-히스티딘 USP/Ph. Eur. 버퍼 0.14 mg 0.14 mg
L-히스티딘 모노히드로클로라이드 Ph. Eur. 버퍼 0.65 mg 0.65 mg
트레할로스 2수화물 NF/Ph. Eur. 안정화제 36 mg 36 mg
폴리소르베이트-20 NF/Ph. Eur. 안정화제 0.1 mg 0.1 mg
RPT004 내부 안정화제 11.7 mgb 11.7 mgb
주사용 물(Water for Injection) USP 가공 보조제
(Processing Aid)		 N/Ac N/Ac
a, 50U/바이알 의약 제품에 필요한 독소의 이론적 양; b, 15mg RTP004-아세테이트와 동등; c, 제조 시 부가되는 물은 동결건조 단계에서 제거됨. d, 100U/바이알 의약 제품에 필요한 독소의 이론적 양.
RT002 제형을 사용한 용량 증량 연구는 PCT 공개 번호 WO2018/213710(Revance Therapeutics, Inc.)의 실시예 섹션에 기재되어 있다. 이 실시예 및 상기 '710 공보의 전체 명세서는 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
실시예 2
본 실시예는 목의 운동 장애인 고립성(원발성) (isolated (primary)) 경부 근긴장이상증(CD) 성인을 대상으로 실시예 1에 기재된 바와 같이 두 가지 투여량 옵션(125 U 또는 250 U) 중 하나로 RT002 단일 치료의 효능 및 안전성을 평가하는 3상, 무작위 배정, 이중 맹검, 위약 대조, 병행 그룹, 다기관 임상시험(ASPEN-1)에 대해 기재한다. 미국, 캐나다, 및 유럽의 여러 장소에서 고립성(원발성) 중등도-내지-중증 경부 근긴장이상증 환자 301명이 등록되었다. 대상체들은 무작위 배정(3:3:1)을 통해 RT002 250 U(고용량, N=127), RT002 125 U(저용량, N=128) 또는 위약 그룹(N=46)으로 나뉘어 주사되었다.
주요 자격 기준에는 전체 자격 기준을 충족하는 고립성 CD 진단을 받은 대상체가 포함되었다. 주요 포함 기준은: 18 내지 80세의 성인이고; Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale(TWSTRS) 총점 20점 이상, TWSTRS 중증도 서브스케일에서 15점 이상, TWSTRS 장애 서브스케일에서 3점 이상, 및 TWSTRS 통증 서브스케일에서 1점 이상으로 정의되는 기저선(D1)에서 중등도 이상의 고립성 CD(특발성, 머리, 목, 어깨 부위에 국한된 근긴장성 증상)에 대한 진단 기준을 충족한다. 상기 연구 모집단은 BoNT 주사에 미경험(naive)이거나 이전에 CD 증상을 조절하는데 효과적이었던 BoNT 주사로 치료한 이력이 있었다.
상기 RT0002 동결건조 제제는 멸균, 비방부처리된(non-preserved) 0.9% 염화나트륨 용액 식염수로 재구성하였다. RT002 제제는 마개를 덮고 밀봉하여 2-8°C에서 보관된 바이알로 제공되었다. 위약은 일회용 바이알에 신경독이 들어 있지 않은 비활성 구성성분으로 구성된 멸균된 동결 건조 제품이다. 상기 RT0002와 위약은 멸균, 비방부처리된 0.9% 염화나트륨 용액으로 재구성하였다.
연구자들은 임상적 표현을 바탕으로 주사를 맞을 관련 근육, 예를 들어 대상체의 머리, 목, 어깨 위치, 통증의 국소화, 근육 비대 등을 확인하였다. 각각의 관련 근육 그룹에 주사된 부피는 사전-정의된 범위로 제한되었으며, 이는 주사를 위한 근육당 특정 투여량, RT002 250U, RT002 125U 및 위약 주사 각각에 해당한다.
표 1은 주사 가능한 근육 및 근육별 주사를 위한 사전-정의된 부피 범위를 나열한다. 재구성된 연구 약물의 모든 용액을 나누어 선택한 근육에 주사해야 했다. 개별 주사 부피의 합은 최대 2.5mL가 되어야 했다. 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및 목갈비근 복합체의 경우 편측 주사만이 허용되었다. 두판상근, 경부판상근, 승모근 및 최장근의 경우 편측 또는 양측 주사가 허용되었다. 주사의 부피 증가 범위는 0.1mL내지 0.1mL의 배수(예: 0.2mL, 0.3mL, 0.4mL)이다. 각 근육 내 주사 부위 수는 주사 부피에 따라 결정되었다(예: 0.3mL: 1-3개 부위).
3상 연구의 1차 효능 평가 지표는 4주 및 6주차에 Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale(TWSTRS) 총점에서 기저선 대비 변화(감소)로 측정한 근긴장이상증의 개선이었다. TWSTRS는 경부 근긴장이상증 상태의 다양한 특징을 포괄하는 검증된 복합 척도이다. 척도의 첫 번째 부분은 근긴장이상증의 신체적 소견 및 중증도를, 두 번째 부분은 환자가 인지하는 장애 수준을, 및 세 번째 부분은 상태와 관련된 통증을 평가한다. 이 연구 프로토콜에는 여러 가지 2차 효능 평가 지표도 포함되어 있다.
요약하면, 연구 목표는 다음과 같다:
- 중등도 내지 중증의 고립성 CD 성인 환자를 대상으로 고용량 및 저용량 주사용 RT002의 효능을 위약과 비교하고 서로 비교한다.
- 주사용 RT002의 효과 지속 기간을 수립한다.
- 주사용 RT002의 안전성 및 면역원성을 평가한다.
탐색적 목표(Exploratory Objective)는 다음과 같다:
- 고립성 CD에 일반적으로 관련된 근육의 주사 유효 용량을 수립한다.
- 환자가 보고한 결과를 통해 증상 부담, 일상 활동, 심리사회적 기능 및 삶의 질(quality of life, QOL)의 변화를 평가한다.
1차 평가 지표는 다음과 같다:
- 4주 및 6주차에 TWSTRS 총점(TWSTRS = Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale)의 기저선 대비 변화를 통해 측정한 근긴장이상증 개선.
2차 평가 지표는 다음과 같다:
- TWSTRS 총점의 기저선 대비 변화;
- 대상체가 목표 TWSTRS 총점에 도달하거나 초과한 시점으로 여겨지는 치료 후 4주 및 6주째에 달성한 최고 치료 효과의 80% 이상이 손실될 때까지의 시간(주 수)으로 평가한 효과 지속 기간;
- 4주 또는 6주차에 CGIC(Clinician Global Impression of Change)에서 적어도 '중간의(moderate)'(2점) 개선을 보인 대상체의 백분율; 및
- 4주 또는 6주차에 PGIC(Patients Global Impression of Change)에서 적어도 '중간의(moderate)'(2점) 개선을 보인 대상체의 비율; 및
- AE, BoNTA 및 신규 부형제 RT004에 대한 혈청 중화 항체의 존재, 혈액학, 혈청 화학, 소변 검사, ECG, 활력 징후, 신체 및 신경학적 검사, 폐활량 검사(spirometry) (FEV1/FVC)에 의한 폐 기능의 임상적으로 유의미한 변화를 포함하는 안전성.
탐색적 평가 지표는 다음과 같다:
- TWSTRS 서브스케일 점수(TWSTRS 중증도, TWSTRS 장애 및 TWSTRS 통증)의 기저선 대비 변화(모든 치료 후 시점)
- 모든 치료 후 시점에서의 CGIC
- 모든 치료 후 시점에서의 PGIC
- TWSTRS 총점이 20% 이상 감소한 대상체의 백분율(모든 치료 후 시점)
- TWSTRS 총점이 30% 이상 감소한 대상체의 백분율(모든 치료 후 시점)
- 4주차 및 6주차에 각 TSQ 응답 카테고리의 대상체의 백분율
- CDIP-58, WPAI 및 SF-36 점수의 변화를 기반으로 한 증상부담, 일상 활동, 심리사회적 기능 및 QOL의 변화
약물 투여 후 대상체는 주사 후 최대 36주까지 치료 응답, 내약성 및 안전성을 평가하였다. 치료 혜택을 경험한 대상체는 36주까지 연구를 계속했다.
최대 치료 효과의 80% 손실과 일치하는 TWSTRS 총점을 목표 TWSTRS 총점이라고 한다. 대상체의 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS 총점과 같거나 그보다 더 높을 때 연구를 종료하였다. 각 대상체의 목표 점수는 기저선, 4주 및 6주에서의 TWSTRS-총점을 사용하여 계산하였다.
대상체는 임상시험 제품을 투여받고 기준 #1 또는 #2 또는 #3 또는 #4 또는 #5를 충족하는 경우 연구를 완료한 것으로 여겨졌다.
1. 6주까지 연구 방문을 완료한, 4주 및 6주차에서의 평균 TWSTRS 총점이 기저선 대비 감소하지 않았거나 증가한 대상체 (즉, 효능 없음: 개선 없음 또는 질병 상태 악화). 그들의 EOS 방문은 6주이다.
2. 연구 치료로부터 혜택을 받아 TWSTRS 총점이 그들의 계산된 목표 TWSTRS 점수와 동일하거나 더 높을 때까지 모든 후속 연구 방문을 완료한 대상체. 그들의 EOS 방문은 TWSTRS-총점 ≥ 목표 TWSTRS 점수가 되는 시점이다.
3. 연구 치료로부터 혜택을 받았지만 TWSTRS 총점이 그들의 계산된 목표 TWSTRS 점수에 도달하기 전에 연구 동안 CD 증상(예: 통증)의 유의한 재발을 경험하고, 연구자의 결정에 따라 증상 및 신경학적 검사 소견을 바탕으로 필요하게 된 재치료를 요청한 대상체. 그들의 EOS 방문은 연구자가 재치료가 임상적으로 필요하다고 결정한 때의 방문이다.
4. 36주에 도달하고 그들의 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS 점수에 도달하지 않았으며 재치료를 요청하지 않은 대상체. 그들의 EOS 방문은 36주이다.
5. 표 1에 나타낸 바와 같이 EOS 평가를 포함하여 프로토콜-지정 평가를 완료.
결과
상기 연구는 두 용량 모두에서 1차 효능 평가 지표를 충족했으며, 4주와 6주차의 평균에서 경부 근긴장이상증의 징후와 증상에 대해 임상적으로 의미 있는 개선을 입증하였다. 위약 대비 125 유닛 또는 250 유닛으로 치료받은 대상체들은 Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale (TWSTRS) 총점을 측정한 결과 기저선 대비 통계적으로 유의하게 더 큰 변화를 나타냈다 (각각 12.7 및 10.9 대 4.3, p<0.0001 및 p=0.0006). 이 연구에 참여한 거의 모든 대상체가 치료에 반응을 보였으며 24주에도 대다수가 RT002 125 U에 여전히 반응하고 있었다. 이 약물은 두 용량 모두에서 일반적으로 안전하고 내약성이 좋았으며 안전성 프로파일도 고무적이었다. 도 10-19는 연구 설계 및 결과에 대한 데이터의 요약을 제공한다.
효과 지속 기간 20 내지 24주: 4주차와 6주 차에 달성한 치료 효과의 적어도 20%를 유지한 대상체로 정의한 효과 지속 기간의 중간값은 125U 및 250U 용량의 경우 각각 24.0주 및 20.3주였다. 최대 치료 효과의 80% 이상 손실 또는 재치료 요청까지의 시간의 중간값은 125U 및 250U 용량의 경우 각각 20.0주 및 16.4주였다. 최대 치료 효과의 80% 이상 손실 또는 응답자들의 재치료 요청까지의 시간의 중간값은 125U 및 250U 용량의 경우 각각 24.0주 및 20.0주였다.
상기 ASPEN-1 중추적 시험(pivotal trial)은 현재 시판 중인 제품인 XEOMIN, BOTOX, MYOBLOC, 및 DYSPORT에서 관찰된 10-14주에 비해 24주 지속 기간의 장기간-작용 신경조절제의 과학적 및 임상적 유효성을 입증한다. 도 20은 현재 시판중인 제품에서 관찰된 치료 효과의 지속 기간을 나노그램 단위의 독소 양에 따라 두 가지 RT002 용량과 비교한 것이다. 각 제품의 독소 양(나노그램)은 Field, et al. AbobotulinumtoxinA (Dysport®), OnabotulinumtoxinA (Botox®), 및 IncobotulinumtoxinA (Xeomin®) Neurotoxin Content and Potential Implications for Duration of Response in Patients, Toxins 2018, 10(12), 535으로부터 수득하였다.
긍정적인 효능 결과: 상기 임상시험의 4주 1차 효능 측정은 기저선 대비 TWSTRS 총점 감소를 통해 결정되는 바와 같은 경부 근긴장이상증의 징후 및 증상의 개선이다. 4주차와 6주 차에 TWSTRS 총점의 기저선 대비 개선 평균은 RT002 125 U와 RT002 250 U에서 각각 31%와 27%(12.7점과 10.9점)로 나타났다(모두 위약 대비 p<0.001).
TWSTRS 중증도, 장애 및 통증 서브스케일에서는 125U의 경우 30-32%, 250U의 경우 24-26%, 위약의 경우 11-12%로 기저선 대비 비슷한 수준의 개선을 나타냈다 (모든 비교군 대 위약에서 p <0.02).
CGIC(Clinician Global Impression of Change ) 및 PGIC(Patient Global Impression of Change) 모두 TWSTRS 총점의 1차 평가 지표와 일관되게 개선을 나타냈다. 대상체의 77-78%가 4주 또는 6주째에 CGIC로 평가한 CD 증상에서 개선을 경험했으며, 대상체의 71-73%가 4주 또는 6주째에 PGIC로 평가한 CD 증상에서 개선을 경험했다.
일반적으로 안전함 및 우수한-내약성: 125U 및 250U 용량 모두에서 RT002는 일반적으로 내약성이 우수했으며 용량의 증가에 따른 이상 사례의 증가 경향은 없었다. 치료-관련 이상 반응은 위약, 125U 및 250U 용량 그룹에서 각각 17.4%, 29.1% 및 24.2%의 대상체에게 발생하였다. RT002 125U 및 250U 용량 그룹에서 가장 자주 보고된 증상은 각각 주사 부위 통증(7.9% 및 4.7%), 두통(2.2% 및 4.7%), 및 주사 부위 통증(4.7% 및 2.3%)이었다. 125U 및 250U 용량 그룹 대상체의 각각 1.6% 및 3.9%에서 연하곤란이 발생하였다. 연하곤란의 모든 사례는 중증도가 경미(mild)했다. 대부분의 치료 관련 AE는 경증(mild) 또는 중증도(moderate)였다. 부작용에 대한 표 요약은 하기 표 3 및 4에 제공된다.
AE 요약
사례의 n (%) # 		위약
(N=46) 		RT002
125 U
(N=127) 		RT002
250 U
(N=128) 		총
N=301)
임의의 TEAE를
갖는 대상체		 18 ( 39.1) 34 74 ( 58.3) 148 64 ( 50.0) 134 156 ( 51.8) 316
임의의 치료-관련 TEAE를
갖는 대상체		 8 ( 17.4) 11 37 ( 29.1) 54 31 ( 24.2) 49 76 ( 25.2) 114
경증 8 ( 17.4) 34 ( 26.8) 29 ( 22.7) 71 ( 23.6)
중등도 0 2 ( 1.6) 2 ( 1.6) 4 ( 1.3)
중증* 0 1 ( 0.8) 0 1 ( 0.3)
임의의 심각한(serious)
TEAE를 갖는 대상체		 0 5 ( 3.9) 5 3 ( 2.3) 4 8 ( 2.7) 9
사망으로 이어지는 TEAE를
갖는 대상체		 0 1 ( 0.8) 1 0 1 ( 0.3) 1
연구 중단으로 이어지는
임의의 TEAE를 갖는 대상체		 0 0 1 ( 0.8) 1 1 ( 0.3) 1
AE 요약
n (%) 		위약
(N=46) 		RT002
125 U
(N=127) 		RT002
250 U
(N=128) 		총
(N=301)
임의의 치료-관련 TEAE를 갖는 대상체 8 ( 17.4) 37 ( 29.1) 31 ( 24.2) 76 ( 25.2)
주사 부위 통증 2 ( 4.3) 10 ( 7.9) 6 ( 4.7) 18 ( 6.0)
두통 1 ( 2.2) 6 ( 4.7) 6 ( 4.7) 13 ( 4.3)
주사 부위 홍반 1 ( 2.2) 6 ( 4.7) 3 ( 2.3) 10 ( 3.3)
근력 약화 0 6 ( 4.7) 3 ( 2.3) 9 ( 3.0)
근골격계 통증 0 3 ( 2.4) 4 ( 3.1) 7 ( 2.3)
연하 곤란 0 2 ( 1.6) 5 ( 3.9) 7 ( 2.3)
본 연구 결과, 경쟁사 제제과 비교했을 때 RT002 125 U 및 250 U 용량 모두에서 연하곤란, 근골격계 통증, 근력 약화 발생률이 더 낮게 나타났다. 예를 들어, 하기 표 5는 각 제품의 처방 정보에 보고된 연하곤란 비율을 비교한 것이다(2020년도).
제품, 용량 연하 곤란 비율
RT002, 125U 1.6%
RT002, 250U 3.9%
Xeomin, 120U 13%
Dysport, 500U 15%
Xeomin, 240U 18%
Botox, 236U 19%
새롭거나 예상하지 못한 치료 응급 이상 사례는 관찰되지 않았다. 관찰된 치료-관련 AE의 발생은 CD 환자를 대상으로 한 이전 BoNT 연구와 비교하여 유사하거나 더 낮았다. 연구 치료와 관련된 심각한 이상 사례는 보고되지 않았다.
임상시험의 안전성 요약: RT002 125 U 및 RT002 250 모두 24주차까지 일반적으로 안전하고 내약성이 우수한 것으로 나타났으며, 용량 증가에 따른 이상 사례의 증가 경향은 나타나지 않았다.
치료-관련 이상 반응은 위약, 125U 및 250U 용량 그룹에서 각각 17.4%, 29.1% 및 24.2%의 대상체에게 발생하였다.
- 가장 빈번히 보고된 것: 주사 부위 통증(총 6%), 두통(총 4.3%), 주사 부위 홍반(총 3.3%), 근력 약화(총 3%), 근골격계 통증(총 2.3%), 및 연하곤란(총 2.3%). RT002 125U 및 RT002 250U 용량 그룹에서 가장 빈번하게 보고된 사례는 주사 부위 통증(각각 7.9% 및 4.7%)및 두통(각각 4.7% 및 4.7%)이었다.
- 모든 치료-관련 TEAE는 경증 또는 중등도의 중증도였다. 심각한 AE는 보고되지 않았다.
한 대상체는 치료와 관련이 없는 것으로 여겨지는 결과 사망을 동반한 TEAE가 있었다. 대상체가 연구를 받는 동안 AE는 보고되지 않았으며 모든 화학 및 혈액학 결과는 정상이었다. 기저선에서, C-SSRS는 자살 생각 또는 행동에 대해 음성이었다.
125U 및 250U 용량 그룹 대상체의 각각 1.6% 및 3.9%에서 연하곤란이 발생하였다. 연하곤란의 모든 사례는 중증도가 경미(mild)했다.
새롭거나 예상치 못한 TEAE는 관찰되지 않았다. 관찰된 치료-관련 AE의 발생은 CD 환자를 대상으로 한 이전 BoNT 연구와 비교하여 유사하거나 더 낮았다. CD를 치료하기 위해 승인된 다른 BoNTA 제품의 임상시험은 13-39% 범위의 연하곤란 비율을 갖는다. BOTOX, Dysport 및 Xeomin이 포함된다. 데이터는 제품 라벨에 보고된 바와 같다.
본 연구의 효능 요약:
효과의 지속 기간: 치료 후 최고 치료 효과의 80% 이상이 손실될 때까지의 시간(주)으로 정의된 효과 지속 기간의 중간값(95%, CI)은 125 U 용량의 경우 24주(20.3, 29.1), 250 U 용량의 경우 20.3주(16.7, 24.0)였다. 최대 치료 효과는 TWSTRS 총점에서 기저선 대비 4주 및 6주 차의 평균 변화로 정의된다.
CD 징후 및 증상 개선: 4주차와 6주 차에 TWSTRS 총점의 기저선 대비 임상적으로 유의미한 감소는 RT002 125 U와 250 U의 경우 12.7점과 10.9점(31%와 27%)이었다(모두 위약 대비 p<0.001). TWSTRS 중증도, 장애 및 통증 서브스케일에서는 125U의 경우 30-32%, 250U의 경우 24-26%, 위약의 경우 11-12%로 기저선 대비 비슷한 수준의 개선을 나타냈다 (모든 비교군 대 위약에서 p <0.02).
- 기저선 대비 개선은 4주차에 31%(125 U) 및 27%(250 U)로 최대였으며, 이러한 치료 혜택의 대부분은 24주차까지 유지되었다.
변화 반응률에 대한 전반적 인상: CGIC(Clinician Global Impression of Change) 및 PGIC(Patient Global Impression of Change) 모두 TWSTRS 총점의 1차 평가 지표와 일관되게 개선을 나타냈다. 대상체의 77-78%는 CGIC에 의해 평가된 CD 증상에서 4주 또는 6주차에 개선을 경험하였다. 대상체의 71-73%는 PGIC에 의해 평가된 CD 증상에서 4주 또는 6주차에 개선을 경험하였다.
결론: ASPEN-1은 125U 또는 250U의 주사용 RT002가 최대 24주 동안 CD의 징후 및 증상을 감소시키데 효과적이고 일반적으로 내약성이 우수한 치료임을 입증하였다.
RT002는 CD와 관련된 징후 및 증상 감소에 대한 1차 및 모든 2차 평가 지표를 충족하였다. 통계적으로 유의미한 결과가 4주차 및 6주차 TWSTRS 총점 1차 평가 지표에서 달성되었다. 목표 TWSTRS 점수에 도달하기 위한 기간의 중간값은 125U 용량의 경우 24주, 250U 용량량의 경우 20.3주였다/ 4주차와 6주차에 위약 대비 CGIC 및 PGIC에서 우수한 개선이 관찰되었다. 150 kD, 타입 A BoNT는 일반적으로 안전하고 내약성이 우수하며 다른 CD 치료용 BoNT 제품과 유사한 안전성 프로파일을 갖는 것으로 나타났다.
이러한 긍정적인 ASPEN 결과는 고도로 차별화된 신경조절제로서 150kD, 타입 A BoNT에 대한 이전 연구의 결과를 보강한다. 상기 ASPEN-1 중추적 시험(pivotal trial)은 현재 시판 중인 제품에서 관찰된 10-14주에 비해 24주 지속 기간의 장기간-작용 신경조절제의 과학적 및 임상적 유효성을 입증한다.
실시예 3
본 실시예는 고립성 경부 근긴장이상증(CD)을 갖는 성인에서 125U, 200U, 250U, 및 300U 용량으로 RT002를 반복(최대 4회) 치료할 경우의 장기 안전성, 효능 및 면역원성을 평가하기 위한 3상, 오픈-라벨, 다기관(multi-center) 임상시험이다(ASPEN-OLS). 미국, 캐나다, 및 유럽에 있는 연구 센터에서 약 350명의 고립성(원발성) 중등도-내지-중증 경부 근긴장이상증을 갖는 대상체가 모집될 것이며, 이들은 ASPEN-1에 등록되었다 (실시예 2). 연구 ASPEN-1의 대상체는 다음을 포함한다:
● 4주 및 6주차에서의 평균 TWSTRS 총점이 기저선 대비 감소하거나 증가하지 않았으며(즉, 질환이 개선되거나 악화되지 않았음), 연구자가 대상체의 증상 및 신경학적 검사 소견을 바탕으로 재치료가 필요하다고 동의한 대상체.
● 연구 치료의 혜택을 받아 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS에 도달하거나 초과한 시점까지 후속 연구 방문을 완료한 대상체.
● 연구 치료의 혜택을 받았지만 이후 연구 기간 동안 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS 점수에 도달하기 전에 CD 증상(예: 통증)의 심각한 재발을 경험하고 연구자의 결정에 따라 증상 및 신경학적 검사 소견을 바탕으로 필요하게 된 재치료를 요청한 대상체.
● 36주차까지 연구 방문을 완료했지만 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS 점수에 도달하지 못한 대상체. 연구자는 이러한 대상체의 TWSTRS 총점이 목표 TWSTRS 점수와 같거나 높을 때까지 또는 연구자가 임상적으로 필요하다고 판단하여 개체 재치료를 요청할 때까지 OLS에서 추적 관찰할 수 있다고 결정하였다.
주요 자격 기준에는 전체 자격 기준을 충족하는 고립성 CD 진단을 받은 대상체가 포함되었다. 주요 포함 기준은: 18 내지 80세의 성인이고; Toronto Western Spasmodic Torticollis Rating Scale(TWSTRS) 총점 20점 이상, TWSTRS 중증도 서브스케일에서 15점 이상, TWSTRS-장애 서브스케일에서 3점 이상, 및 TWSTRS 통증 서브스케일에서 1점 이상으로 정의되는 기저선(D1)에서 중등도 이상의 고립성 CD(특발성, 머리, 목, 어깨 부위에 국한된 근긴장성 증상)에 대한 진단 기준을 충족한다. TWSTRS-서브스케일 기준은 이전에 연구 프로토콜 ASPEN-1에 등록되지 않은 대상체에게만 적용가능하다.
RT002 125 U 및 250 U는 2 - 8°C에서 보관된 바이알로 제공된다. 위약은 멸균, 비방부처리된 0.9% 염화나트륨 용액으로 재구성되는, 일회용 바이알에 신경독 없이 비활성 구성성분으로 구성된 멸균된 동결 건조 제품이다.
RT002는 영향을 받은(affected) 근육에 다회 IM 주사로 투여될 것이며, 관련된 패턴(pattern of involvement)에 따라 근육에 주사될 것이다. 치료 제1 사이클의 초기 용량(125 U 또는 250 U)은 상기 설명된 기준에 따라 연구자에 의해 결정될 것이다. 후속 치료 사이클에서, 상기 용량은 동일하게 유지되거나 또는 연구자에 의해 결정되는 바와 같이 이전 사이클의 치료 반응에 따라 후속 치료 사이클마다 하나의 사전-정의된 용량-단계만큼 증감할 수 있다. 치료 사이클 2 내지 4의 경우, 상기 용량은 125U(최소 용량), 200U, 250U 또는 300U(최대 용량)일 수 있다.
연구자들은 대상체의 머리, 목, 어깨 위치, 통증의 국소화, 근육 비대 등 임상적 표현을 바탕으로 주사를 맞을 관련 근육을 확인하였다. 각각의 관련 근육 그룹에 주사된 부피는 사전-정의된 범위로 제한되었으며, 이는 RT002 250U, RT002 125U 및 위약 각각에 대한 근육당 특정 투여량에 해당한다.
표 6은 주사 가능한 근육 및 근육별 주사를 위한 사전-정의된 부피 범위를 나열한다. 연구자는 대상체의 머리, 목, 및 어깨 위치, 통증의 국소화, 및 근육 비대를 기반으로 하여 나열된 근육 중에서 주사할 근육을 확인해야 한다. 네 가지 주사 용량에 대한 근육별 사전-정의된 주사 용량 범위는 표 6에 나열되어 있다. 모든 주사용 용량(125 U, 200 U, 250 U, 및 300 U)은 비방부처리된, 0.9% 염화나트륨 주사용 용액으로 재구성된다.
필수 주사 파라미터:
- 재구성된 연구 약물의 모든 용액을 나누어 선택한 근육에 주사해야 한다.
- 선택된 각 근육에 대해, 주사 용량은 상기 근육에 대해 사전-정의된 용량 범위 내여야 한다.
- 표 3에 확인된 근육 이외의 다른 근육에는 주사하지 말아야 한다.
- EMG, 초음파 촬영 또는 기타 영상 장비의 사용은 선택 사항이다다.
- 흉쇄유돌근, 견갑거근, 흉쇄유돌근 복합체(이들 근육 중 하나라도 주사하기로 선택한 경우)의 경우 편측 주사만이 수행될 수 있다.
- 두판상근, 경부판상근, 승모근, 및 최장근(이들 근육 중 하나라도 주사하기로 선택한 경우)의 경우, 편측 또는 양측 주사가 수행될 수 있다.
표 6. 주사 가능한 근육 및 근육당 사전-정의된 주사 용량
주사가능한 근육 RT002 125U RT002 200 U RT002 250U RT002 300U
희석 5 U/ 0.1 mL 8 U/ 0.1 mL 10 U/ 0.1 mL 12 U/ 0.1 mL
주사 부피 범위 (mL) 주사 용량 범위
(유닛)		 주사 용량 범위
(유닛)		 주사 용량 범위
(유닛)		 주사 용량 범위
(유닛)
흉쇄유돌근(sternocleidomastoid) 0.2-0.5 10-25 16-40 20-50 24-60
견갑거근(levator scapulae) 0.2-0.6 10-30 16-48 20-60 24-72
목갈비근 복합체(scalenus complex) 0.2-0.3 10-15 16-24 20-30 24-36
두판상근(splenius capitis) 0.2-1.0 10-50 16-80 20-100 24-120
경부판상근(splenius cervices) 0.2-1.0 10-50 16-80 20-100 24-120
승모근(trapezius) 0.3-0.8 15-40 24-64 30-80 36-96
최장근(longissimus) 0.2-0.6 10-30 16-48 20-60 24-72
*
3상 연구의 1차 효능 평가 지표는 주사에 의한 RT002의 다중 연속 치료의 장기 안전성을 평가하는 것이다. 이 연구 프로토콜에는 여러 가지 2차 효능 평가 지표도 포함되어 있다.
요약하면, 연구 목표는 다음과 같다:
- 주사용 RT002의 다회 연속 치료의 장기 안전성 평가(1차 목표)
- RT002 주사로 다회 치료 후 BoNT 타입 A 및 RTP004에 대한 면역원성 평가(1차 목표)
- 주사를 통한 RT002의 다회 연속 치료의 장기 효능 평가(2차 목표)
- 치료 간 시간 간격 또는 효과 지속 기간 설정(2차 목표)
- RT002 주사로 다회 연속 치료 후 증상 부담, 일상 활동 및 심리사회적 기능의 변화 평가(2차 목표)
탐색적 목표는 다음과 같다:
- RT002 주사로 다회 연속 치료 후 치료 만족도의 변화 평가
- RT002 주사로 다회 연속 치료한 후 건강 관련 삶의 질(QOL)의 변화 평가
1차 평가 지표는 다음과 같다:
- 용량- 및 사이클별 약물-관련 AE의 발생
- 용량 및 사이클별 약물 관련 AE로 인한 연구 약물 중단의 발생
- 용량 및 사이클별 치료-긴급 면역원성
2차 평가 지표는 다음과 같다:
- 치료 간 시간 간격 또는 효과 지속 기간
- 용량 및 사이클별 각 치료 사이클의 4주 및 6주차에서 TWSTRS 총점 평균 변화
- 치료 사이클 4주차 또는 6주차에 CGIC가 최소 "중등도"(2점) 개선된 대상체의 비율
- 치료 사이클 4주차 또는 6주차에 PGIC가 최소 "중등도"(2점) 개선된 대상체의 비율
- CDIP-58 기반 삶의 질 측정의 변화
탐색적 평가 지표는 다음과 같다:
- 용량 및 사이클별 독소의 원거리 확산과 관련된 AE의 발생
- 용량 및 사이클별 각 치료의 4주차 및 6주차에서 TWSTRS-중증도, -장애 및 -통증 서브스케일 점수의 기저선 대비 평균 변화
- 용량 및 사이클별 기저선 대비 각 방문의 TWSTRS 총점 평균 변화
- 모든 치료 후 시점에서의 CGIC
- 모든 치료 후 시점에서의 PGIC
- TWSTRS 총점이 20% 이상 감소한 대상체의 백분율(모든 치료 후 시점)
- TWSTRS 총점이 30% 이상 감소한 대상체의 백분율(모든 치료 후 시점)
- 사이클별 TSQ(Treatment Satisfaction Questionnaire) 점수
- 사이클별 WPAI(Work Productivity and Activity Impairment) 점수 변화
- 사이클별 SF-36(Short Form-36) 점수 변화
최대 치료 효과의 80% 손실과 일치하는 TWSTRS 총점을 목표 TWSTRS 총점이라고 한다. 각 대상체의 목표 점수는 치료 제1 사이클의 기저선, 4주 및 6주에서 TWSTRS-총 점을 사용하여 계산하였다. 다음 치료 사이클은 마지막 치료 후 12주 이전에 발생할 수 없다. 치료 혜택을 받은 대상체는 52주의 연구 기간 동안 최대 4회의 치료를 받을 수 있다. 치료 사이클 사이에 12주 이상 동안 치료 혜택이 유지된 대상체는 52주 연구 기간 동안 1 내지 3회 치료를 받을 수 있다. 치료 사이클 2 내지 4에서, 연구자는 대상체가 제1 사이클에서 투여받은 것과 동일한 용량의 RT002를 주사(125U 또는 250U)로 투여하거나, 또는 이전 사이클의 대상체의 치료 반응에 따라 후속 치료 사이클마다 하나의 사전-정의된 용량-단계만큼 주사 용량을 증가 또는 감소시켜 투여할 수 있다. 치료 제2 사이클부터 두 가지 추가 v 주사 용량: 200U 및 300U의 v 주사를 도입한다. 상기 관련된 각 근육에 주사할 용량은 근육별로 사전-정의된 용량 범위로 제한된다. 표 3은 근육별 주사에 대한 사전-정의된 용량 범위와 및 RT002 주사 총 용량을 나열한다. 치료 사이클 2-4에서 대상체는 1회당 최소 125U 또는 최대 300U를 받을 수 있다.
본원에 기재된 다음의 실시예 및 구체예는 예시적인 목적을 위한 것이며, 이에 비추어 다양한 변경 또는 변화가 당업자에게 제안될 것이며, 본 출원의 정신 및 범위와 첨부된 청구항의 범위 내에 포함되는 것으로 이해된다.
본 문서에 인용된 모든 간행물, 특허 및 공개 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전체가 참조로서 본원에 통합된다.
SEQUENCE LISTING <110> REVANCE THERAPEUTICS, INC. <120> METHODS OF TREATMENT FOR CERVICAL DYSTONIA <130> 13720.0034P1 <150> US 63/091,293 <151> 2020-10-13 <160> 10 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(51) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 1 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Arg Gly Arg Asp Asp Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Gly Gly 50 <210> 2 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (32)..(51) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 2 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 35 40 45 Gly Gly Gly 50 <210> 3 <211> 49 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(49) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 3 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Gly Gly 20 25 30 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 35 40 45 Gly <210> 4 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln 20 25 30 Arg Arg Arg 35 <210> 5 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This region may encompass 0-20 'Gly' residues wherein some positions may be absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..(45) <223> This region may encompass 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 21, 23 or 25 'Arg' residues wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 5 Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly 1 5 10 15 Gly Gly Gly Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 20 25 30 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 35 40 45 <210> 6 <211> 19 <212> PRT <213> Drosophila sp. <400> 6 Ser Gly Arg Gln Ile Lys Ile Trp Phe Gln Asn Arg Arg Met Lys Trp 1 5 10 15 Lys Lys Cys <210> 7 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Tyr Gly Arg Lys 20 25 30 Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 35 <210> 8 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 8 Arg Gly Arg Asp Asp Arg Arg Gln Arg Arg Arg Gly Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Gly Arg Gly Arg Asp 20 25 30 Asp Arg Arg Gln Arg Arg Arg 35 <210> 9 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(20) <223> This sequence may encompass 10-20 'Lys' residues wherein some positions may be absent <220> <223> See specification as filed for detailed description of substitutions and preferred embodiments <400> 9 Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys Lys 1 5 10 15 Lys Lys Lys Lys 20 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 10 Gly Gly Gly Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10

Claims (30)

  1. 개체에서 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    상기 치료 효과를 달성하기 위해 치료가 필요한 개체의 경부 근긴장이상증을 유발하는 하나 이상의 근육에 멸균 주사용 조성물의 치료 용량을 주사 투여하는 것을 포함하고;
    상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 희석제, 및 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체로 구성된 군으로부터 선택된 보툴리눔 독소 성분을 포함하고;
    상기 개체에게 투여되는 보툴리눔 독소 성분의 총 치료 용량은 100 U 내지 500 U이고;
    상기 조성물은 하나 이상의 양으로 하전된 효능기(efficiency group)가 공유결합된 양으로 하전된 백본을 포함하는 양으로 하전된 담체 성분을 포함하고;
    상기 하나 이상의 근육은 흉쇄유돌근(sternocleidomastoid), 견갑거근(levator scapulae) 및 목갈비근 복합체(scalenus complex) 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체는 오직 편측 주사되고(unilaterally injected), 및
    상기 치료 효과는 15% 미만의 이상 사례(adverse event)의 위험, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련이 있는 것인, 방법.
  2. 경부 근긴장이상증의 보툴리눔 독소 치료와 관련된 이상 사례를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은 치료 효과를 달성하기 위해 치료가 필요한 개체의 경부 근긴장이상증을 유발하는 하나 이상의 근육에 멸균 주사용 조성물의 치료 용량을 주사 투여하는 것을 포함하고;
    상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 희석제, 및 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체로 구성된 군으로부터 선택된 보툴리눔 독소 성분을 포함하고;
    상기 개체에게 투여되는 보툴리눔 독소 성분의 총 치료 용량은 100 U 내지 500 U이고;
    상기 조성물은 하나 이상의 양으로 하전된 효능기가 공유결합된 양으로 하전된 백본을 포함하는 양으로 하전된 담체 성분을 포함하고;
    상기 하나 이상의 근육은 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체 중 적어도 하나를 포함하고, 상기 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체는 오직 편측 주사되고, 및
    상기 치료 효과는 15% 미만의 이상 사례의 위험, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련이 있는 것인, 방법.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 상기 하나 이상의 근육은 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체를 포함하는 것인, 방법.
  4. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 흉쇄유돌근, 견갑거근 및 목갈비근 복합체를 위한 용량 범위는 표 1 또는 표 6에 제시되어 있는 것인, 방법.
  5. 개체에서 경부 근긴장이상증을 치료하는 방법으로서, 상기 방법은
    상기 치료 효과를 달성하기 위해 치료가 필요한 개체의 경부 근긴장이상증을 유발하는 하나 이상의 근육에 멸균 주사용 조성물의 치료 용량을 주사 투여하는 것을 포함하고;
    상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 희석제; 및 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체로 구성된 군으로부터 선택되는 보툴리눔 독소 성분을 포함하고;
    상기 개체에게 투여되는 보툴리눔 독소 성분의 총 치료 용량은 100 U 내지 500 U이고;
    상기 조성물은 하나 이상의 양으로 하전된 효능기가 공유결합된 양으로 하전된 백본을 포함하는 양으로 하전된 담체 성분을 포함하며; 및
    상기 하나 이상의 근육은 두판상근(splenius capitis), 경부판상근(splenius cervices), 승모근(trapezius), 최장근(longissimus), 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및 목갈비근 복합체를 포함하거나 이로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 상기 하나 이상의 근육 각각에 대한 용량 범위는 표 1 또는 표 6에 제시되어 있으며; 및
    상기 치료 효과는 15% 미만의 이상 사례의 위험, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련이 있는 것인, 방법.
  6. 경부 근긴장이상증의 보툴리눔 독소 치료와 관련된 이상 사례를 감소시키는 방법으로서, 상기 방법은
    멸균 주사용 조성물로 1차 치료 후에, 치료 효과를 달성하기 위해 치료가 필요한 개체의 경부 근긴장이상증을 유발하는 하나 이상의 근육에 상기 멸균 주사용 조성물의 치료 용량을 주사 투여하는 것을 포함하고;
    상기 조성물은 약학적으로 허용가능한 주사에 적합한 희석제; 및 보툴리눔 독소, 보툴리눔 독소 복합체, 또는 감소된 보툴리눔 독소 복합체로 구성된 군으로부터 선택되는 보툴리눔 독소 성분을 포함하고;
    상기 개체에게 투여되는 보툴리눔 독소 성분의 총 치료 용량은 100 U 내지 500 U이고;
    상기 조성물은 하나 이상의 양으로 하전된 효능기가 공유결합된 양으로 하전된 백본을 포함하는 양으로 하전된 담체 성분을 포함하고; 및
    상기 하나 이상의 근육은 두판상근, 경부판상근, 승모근, 최장근, 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및 목갈비근 복합체를 포함하거나 이로 구성된 그룹으로부터 선택되고, 상기 하나 이상의 근육 각각에 대한 용량 범위는 표 1 또는 표 6에 제시되어 있으며; 및
    상기 치료 효과는 15% 미만의 이상 사례의 위험, 연하곤란의 위험, 근골격계 통증의 위험 및/또는 근력 약화의 위험과 관련이 있는 것인, 방법.
  7. 청구항 5 또는 6에 있어서, 상기 흉쇄유돌근, 견갑거근, 및 목갈비근 복합체는 오직 편측 주사되는 것인, 방법.
  8. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 이상 사례의 위험은 12%, 10%, 8%, 7%, 5%, 또는 3% 미만인 것인, 방법.
  9. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 양으로 하전된 백본은 (gly)p-RGRDDRRQRRR-(gly)q (서열번호 1), (gly)p-YGRKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 2) 또는 (gly)p-RKKRRQRRR-(gly)q (서열번호 3)으로부터 선택되는 아미노산 서열을 갖는 하나 이상의 양으로 하전된 효능기가 공유결합된 폴리리신을 포함하며, 상기 아래 첨자 p 및 q는 각각 독립적으로 0 내지 20의 정수인 것인, 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 아래 첨자 p 및 q는 (i) 각각 독립적으로 0 내지 8의 정수이거나; 또는 (ii) 각각 독립적으로 2 내지 5의 정수인 것인, 방법.
  11. 청구항 9 또는 10에 있어서, 상기 하나 이상의 양으로 하전된 효능기는 양으로 하전된 담체의 양으로 하전된 폴리리신 백본의 말단 또는 양 말단에 결합되는 것인, 방법.
  12. 청구항 9에 있어서, 상기 양으로 하전된 담체는 아미노산 서열 RKKRRQRRRG-(K)15-GRKKRRQRRR (서열번호 4)을 갖는 것인, 방법.
  13. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 혈청형 A의 보툴리눔 독소를 포함하는 것인, 방법.
  14. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 150 kDa의 분자량을 갖는 혈청형 A의 보툴리눔 독소를 포함하는 것인, 방법.
  15. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보툴리눔 독소의 치료 용량은 약 100U 내지 200U 또는 125U의 양으로 개체에게 투여되는 것인, 방법.
  16. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보툴리눔 독소의 치료 용량은 약 200U 내지 300U 또는 250U의 양으로 개체에게 투여되는 것인, 방법.
  17. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서, 상기 보툴리눔 독소의 치료 용량은 300U 내지 450U 또는 300U의 양으로 개체에게 투여되는 것인, 방법.
  18. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 4 개월 초과를 포함하는 것인, 방법.
  19. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 5 개월 초과를 포함하는 것인, 방법.
  20. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 6 개월 초과를 포함하는 것인, 방법.
  21. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 16 주를 포함하는 것인, 방법.
  22. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 20 주를 포함하는 것인, 방법.
  23. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 22 주를 포함하는 것인, 방법.
  24. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 24 주를 포함하는 것인, 방법.
  25. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 26 주를 포함하는 것인, 방법.
  26. 청구항 1 내지 17 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 효과의 지속 기간은 적어도 28 주를 포함하는 것인, 방법.
  27. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 동물성 단백질이 없거나 또는 알부민이 없는 것인, 방법.
  28. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유래의 연하곤란의 위험은 12%, 10%, 8%, 7%, 5%, 또는 3% 미만인 것인, 방법.
  29. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유래의 근골격계 통증의 위험은 12%, 10%, 8%, 7%, 5%, 또는 3% 미만인 것인, 방법.
  30. 전술한 청구항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료 유래의 근력 약화의 위험은 12%, 10%, 8%, 7%, 5%, 또는 3% 미만인 것인, 방법.
KR1020237016072A 2020-10-13 2021-10-13 경부 근긴장이상증의 치료 방법 KR20230086752A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063091293P 2020-10-13 2020-10-13
US63/091,293 2020-10-13
PCT/US2021/054818 WO2022081736A1 (en) 2020-10-13 2021-10-13 Methods for treating cervical dystonia

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230086752A true KR20230086752A (ko) 2023-06-15

Family

ID=81208607

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237016072A KR20230086752A (ko) 2020-10-13 2021-10-13 경부 근긴장이상증의 치료 방법

Country Status (6)

Country Link
EP (1) EP4228599A1 (ko)
KR (1) KR20230086752A (ko)
CN (1) CN117279654A (ko)
AU (1) AU2021360788A1 (ko)
CA (1) CA3195483A1 (ko)
WO (1) WO2022081736A1 (ko)

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3624819A4 (en) * 2017-05-18 2021-03-24 Revance Therapeutics, Inc. METHOD OF TREATMENT OF CERVICAL DYSTONIA
KR20200105829A (ko) * 2017-12-04 2020-09-09 레반스 테라퓨틱스, 아이엔씨. 주사 가능한 보툴리눔 독소 제제 및 높은 반응 속도 및 긴 효과 지속을 갖는 이의 사용 방법

Also Published As

Publication number Publication date
AU2021360788A1 (en) 2023-06-01
EP4228599A1 (en) 2023-08-23
CN117279654A (zh) 2023-12-22
WO2022081736A1 (en) 2022-04-21
CA3195483A1 (en) 2022-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6559849B2 (ja) 注射用ボツリヌス毒素製剤
JP5690785B2 (ja) 改良されたボツリヌス毒素組成物
US10111939B2 (en) Albumin-free botulinum toxin formulations
JP6955491B2 (ja) 治療効果又は美容効果の長い持続時間を有する、注射用ボツリヌス毒素製剤及びこれらの使用方法
US20220347275A1 (en) Methods and Compositions for Treating Skin Conditions Associated With Vascular Hyper-reactivity
US20220096610A1 (en) Methods of treatment for cervical dystonia
US20210162026A1 (en) Transmucosal botulinum toxin compositions, kits, and methods for treating bladder disorders
KR20230086752A (ko) 경부 근긴장이상증의 치료 방법
CA3081596A1 (en) Botulinum toxin formulations and methods of use thereof in plantar fasciitis with extended duration of effect
CN117693366A (zh) 用于治疗上肢痉挛的方法和组合物