KR20230071796A - Method for cultivation of soybean plant with increased isoflavone derivatives by using a new smart-metabolite chamber - Google Patents

Method for cultivation of soybean plant with increased isoflavone derivatives by using a new smart-metabolite chamber Download PDF

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손기호
강상수
조두용
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Abstract

본 발명에서는 콩 식물체의 이소플라본 유도체의 함량이 증진되도록 재배할 수 있는 스마트-대사체 챔버 및 이를 이용한 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배방법이 개시된다.
본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버를 이용한 콩 식물체 재배방법에 의하면 단기간 (20~40일)에 이소플라본 유도체 고함유 콩 식물체를 재배할 수 있다. 또한 본 발명의 재배방법은 이소플라본 유도체 고 함유 콩 식물체를 연중 안정적으로 생산할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 이소플라본 유도체 고 함유 콩 식물체인 콩잎, 콩 줄기, 및 콩 뿌리, 그 추출물 또는 그 분획물은 에스트로겐 대체재로 사용될 수 있어서, 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용, 항산화용, 및 피부미용용 약제학적 조성물, 간강기능성 식품 및 화장품의 소재로 유용하다.
In the present invention, a smart-metabolite chamber that can be cultivated to increase the content of isoflavone derivatives in soybean plants and a method for cultivating soybean plants enriched with isoflavone derivatives using the same are disclosed.
According to the soybean plant cultivation method using the smart-metabolite chamber according to the present invention, soybean plants with a high content of isoflavone derivatives can be grown in a short period of time (20 to 40 days). In addition, the cultivation method of the present invention can stably produce soybean plants containing high isoflavone derivatives throughout the year. In addition, soybean leaves, soybean stalks, and soybean roots, extracts or fractions thereof, which are soybean plants containing high isoflavone derivatives according to the present invention, can be used as estrogen substitutes, for prevention and improvement of diseases caused by estrogen deficiency, for antioxidant, And it is useful as a material for pharmaceutical compositions for skin care, liver function foods and cosmetics.

Description

스마트-대사체 챔버를 이용한 이소플라본 유도체가 증진된 콩 식물체 재배방법 {Method for cultivation of soybean plant with increased isoflavone derivatives by using a new smart-metabolite chamber}Method for cultivation of soybean plant with increased isoflavone derivatives by using a new smart-metabolite chamber}

본 발명은 스마트-대사체 챔버를 이용한 이소플라본 유도체가 증진된 콩 식물체 재배방법에 관한 것으로, 더 상세하게는 콩 식물체의 이소플라본 유도체의 함량이 증진되도록 재배할 수 있는 스마트-대사체 챔버(smart-metabolite chamber) 및 이를 이용한 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배방법에 관한 것이다.The present invention relates to a method for cultivating soybean plants with enhanced isoflavone derivatives using a smart-metabolite chamber, and more particularly, to a smart-metabolite chamber (smart-metabolite chamber that can be cultivated to increase the content of isoflavone derivatives in soybean plants). -metabolite chamber) and a method for cultivating soybean plants enriched with isoflavone derivatives using the same.

여성호르몬인 에스트로겐은 40대 이후 줄어들기 시작하여 궁극적으로 갱년기를 유발한다. 에스트로겐이 줄어들면 이 호르몬의 작용점인 뼈, 심장, 피부, 뇌 등에 노화가 시작된다. 이러한 노화 진행을 억제하기 위해 에스트로겐 대체재가 절실히 요구되며 구조적인 유사성을 갖는 이소플라본 유도체가 효과적인 에스트로겐 대체제로 보고되고 있다.Estrogen, a female hormone, begins to decrease after the age of 40 and ultimately causes menopause. When estrogen is reduced, aging begins in the bones, heart, skin, brain, etc., which are the action points of this hormone. In order to suppress this aging process, estrogen substitutes are desperately needed, and isoflavone derivatives having structural similarities have been reported as effective estrogen substitutes.

이소플라본 유도체는 약리학적 효능이 뛰어난 대표적인 플라보노이드로서 세계적으로 이들이 고-함유된 기능성 식물개발에 많은 자본이 투자되고 있는 실정이다. 이소플라본은 비스테로이드 에스트로겐으로 화학적 및 생리학적 특성이 에스트로겐과 유사하여 식물성 에스트로겐이라 불리며 경쟁적으로 에스트로겐 수용체와 결합함으로써 에스트로겐 또는 항 에스트로겐 작용을 하는 물질이다(Hudson, 2001). 이들은 여성호르몬인 에스트로겐과 구조가 유사하여 에스트로겐에서 나타나는 유용한 생리활성을 보여준다. 이소플라본을 섭취하면, 여성의 내분비 상태를 조절하고 난소의 주기성에 영향을 미친다고 알려져 있다(Kenneth, Setchell, & Cassidy, 1999). 특히 여성호르몬이 부족하여 나타날 수 있는 갱년기 증세 중 하나인 골다공증의 위험을 감소시키고, 혈장 내 콜레스테롤 수치를 낮추는 것으로 보고되고 있다(Obstetrics & Gynecology 2001. 389). 또한 관상동맥심장질환(coronary arterial heart disease, CAHD)의 위험을 낮추는 효과와 항산화 활성이 뛰어난 것으로 알려져 있다. Isoflavone derivatives are typical flavonoids with excellent pharmacological efficacy, and a lot of capital is being invested in the development of functional plants containing them in high quantities worldwide. Isoflavones are non-steroidal estrogens, which are called phytoestrogens because their chemical and physiological properties are similar to those of estrogen, and are substances that act as estrogen or anti-estrogen by competitively binding to estrogen receptors (Hudson, 2001). They are similar in structure to the female hormone estrogen and show useful physiological activities that appear in estrogen. Ingestion of isoflavones is known to regulate female endocrine status and affect ovarian cycles (Kenneth, Setchell, & Cassidy, 1999). In particular, it has been reported to reduce the risk of osteoporosis, which is one of the menopausal symptoms that can occur due to lack of female hormones, and to lower plasma cholesterol levels (Obstetrics & Gynecology 2001. 389). It is also known to have an effect of lowering the risk of coronary arterial heart disease (CAHD) and excellent antioxidant activity.

이소플라본 유도체 중 비배당체로는 제니스테인(genistein), 다이드제인(daidzein) 및 글리시테인(glycitein) 등이 있으며, 배당체로는 제니스틴(genistin), 다이드진(daidzin) 및 글리시틴(glycitin) 등이 있다. 대두 유래 비 발효식품에는 배당체가 많은 반면, 된장과 같은 대두를 이용한 발효식품에는 발효에 관계된 박테리아에 의해 배당체로부터 당이 분해되면서 비배당체가 주로 존재하게 된다. Among isoflavone derivatives, non-glycosides include genistein, daidzein, and glycitein, and glycosides include genistin, daidzin, and glycitin. ), etc. While there are many glycosides in non-fermented soybean-derived foods, non-glycosides are mainly present in fermented foods using soybeans, such as soybean paste, as sugars are decomposed from glycosides by bacteria involved in fermentation.

콩에 있는 이소플라본 유도체는 에스트로겐 수용체인 ER-베타(estrogen receptor beta)에 높은 친화도를 가지고 있어 가장 효과적인 에스트로겐 대체제이다(Endocrinology 1997, 863). Isoflavone derivatives in soybean have high affinity for estrogen receptor beta (ER-beta), making them the most effective estrogen substitutes (Endocrinology 1997, 863).

이소플라본 유도체가 고 함유된 콩 식물체 개발을 위해 많은 연구가 진행되고 있으며, 최근에 콩잎에 에틸렌 또는 에틸렌 공여체인 에테폰을 처리하여 이소플라본 유도체 고함유 콩잎을 생산하는 재배 방법 기술(한국등록특허 제10-1451298, 한국등록특허 제10-2282625)이 보고되어 있다. 이들 기술은 콩 파종 후 50~60일 정도 노지에서 재배된 것을 에틸렌 공여체(에테폰)을 처리하거나 노지에서 재배된 것을 지상부만 수확하여 밀폐된 처리장(컨테이너) 옮긴 후 에틸렌을 처리하기 때문에, 자연환경(온도, 장마 등)의 제어가 되지 않아 표준화된 이소플라본 고함유 콩 식물체 안정적으로 생산이 어렵고 또한, 1년에 1회 내지 2회 정도 콩 식물체를 생산할 수 없으며, 생산 시 노동력이 많이 드는 문제점이 있다.A lot of research has been conducted to develop soybean plants high in isoflavone derivatives, and recently, cultivation method technology for producing soybean leaves high in isoflavone derivatives by treating soybean leaves with ethylene or ethene, an ethylene donor (Korean Registered Patent No. 10-1451298, Korean Registered Patent No. 10-2282625) have been reported. These technologies treat the ethylene donor (ethephon) from soybeans grown in the open field about 50 to 60 days after soybean sowing, or harvest only the above-ground part of what is grown in the open field, move it to a closed treatment plant (container), and treat ethylene. (Temperature, rainy season, etc.) is not controlled, so it is difficult to stably produce standardized soybean plants containing high isoflavones, and it is impossible to produce soybean plants once or twice a year, and there is a problem that a lot of labor is required during production. there is.

따라서 실내에서 연중 생산이 가능하고 노동력이 적게 드는 이소플라본 유도체 고 함유 콩 식물체의 재배방법의 개발이 요구되어 왔다. Therefore, it has been required to develop a method for growing soybean plants containing high isoflavone derivatives that can be produced indoors all year round and requires less labor.

이에, 본 발명자들은 스마트-대사체 챔버를 개발하고, 이를 이용할 경우 실내에서 이소플라본 유도체 고 함유 콩 식물체를 연중 재배할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.Accordingly, the present inventors developed a smart-metabolite chamber, confirmed that soybean plants containing high isoflavone derivatives could be grown indoors all year round, and completed the present invention.

본 발명의 목적은 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 재배할 수 있는 신규한 스마트-대사체 챔버(smart-metabolite chamber)를 제공하는 것이다.An object of the present invention is to provide a novel smart-metabolite chamber capable of growing soybean plants enriched with isoflavone derivatives.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 스마트-대사체 챔버를 이용하여 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for growing soybean plants enriched with isoflavone derivatives using the smart-metabolite chamber.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법에 의해 재배된 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide soybean plants enriched with isoflavone derivatives grown by the above method.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 건강기능성 식품을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a health functional food containing soybean plants enriched with the isoflavone derivatives.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 화장품을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide cosmetics containing soybean plants enriched with the isoflavone derivatives.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising a soybean plant enriched with the isoflavone derivative.

본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 재배할 수 있는 신규한 스마트-대사체 챔버를 제공한다. In order to achieve the object of the present invention, a novel smart-metabolite chamber capable of growing soybean plants enriched with isoflavone derivatives is provided.

상기 스마트-대사체 챔버는, 내부공간을 포함하는 챔버부; 상기 챔버부를 개폐하는 도어부; 상기 도어부 중앙에 설치된 관찰 창; 챔버부 내부 천장에 설치된 LED 광원부; 온도, 습도 및 이산화탄소 측정기; 챔버부 환기를 위한 환기 팬; 챔버부 내부 뒷면에 설치된 온도조절 팬; 에틸렌 가스 분사장치; 에틸렌 가스 측정기; LED 광원을 조절하는 광원조절장치; 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집장치; 온도조절용 물 순환장치; 에틸렌 가스통; 및 데이터 저장장치를 포함한다 (도 1a 참조). The smart-metabolite chamber includes a chamber part including an inner space; a door unit opening and closing the chamber unit; an observation window installed in the center of the door unit; An LED light source unit installed on the ceiling inside the chamber unit; temperature, humidity and carbon dioxide meters; Ventilation fan for ventilation of the chamber; A temperature control fan installed on the back of the inside of the chamber; ethylene gas injector; ethylene gas meter; Light source control device for controlling the LED light source; Automatic temperature and humidity control and data collection device; Water circulator for temperature control; ethylene gas cylinder; and data storage (see FIG. 1A).

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 상기 스마트-대사체 챔버를 이용하여 하기 화학식 1의 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법을 제공한다: According to another object of the present invention, the present invention provides a method for growing soybean plants enriched with isoflavone derivatives of Formula 1 using the smart-metabolite chamber:

Figure pat00001
[화학식 1]
Figure pat00001
[Formula 1]

상기 식에서, R1은 H 또는 OH이고, R2는 글루코오스(glucose) 또는 글루코오스 말로네이트(glucose malonate)이다. In the above formula, R 1 is H or OH, and R 2 is glucose or glucose malonate.

본 발명에서 화학식 1의 이소플라본 유도체는 하기 [화학식 2] 내지 [화학식 7]로 표기되는 화합물 중 어느 하나 이상 일 수 있다.In the present invention, the isoflavone derivative of Chemical Formula 1 may be any one or more of the compounds represented by [Formula 2] to [Formula 7] below.

Figure pat00002
Figure pat00002

본 발명에서 콩 식물체는 콩잎, 콩 줄기, 및/또는 콩 뿌리일 수 있다. In the present invention, the bean plant may be a bean leaf, a bean stalk, and/or a bean root.

상기 재배 방법은 The cultivation method

i) 스마트-대사체 챔버에서 콩 종자 또는 발아된 콩을 파종하여 20 ~ 40일을 생육시키는 단계; i) sowing soybean seeds or germinated soybeans in a smart-metabolite chamber and growing them for 20 to 40 days;

ii) 에틸렌 가스 분사장치에서 에틸렌을 분사하여 생육된 콩 식물체에 에틸렌을 1,000 ~ 10,000 ppm의 농도로 12 ~ 72 시간 처리하는 단계; 및 ii) spraying ethylene from an ethylene gas injector to treat soybean plants grown with ethylene at a concentration of 1,000 to 10,000 ppm for 12 to 72 hours; and

iii) 콩 식물체를 수확하는 단계;를 포함한다. iii) harvesting soybean plants;

단계 i) 생육Stage i) Growth

스마트-대사체 챔버에서 콩 종자 또는 발아된 콩을 파종하여 20 ~ 40일을 생육시킨다.Soybean seeds or germinated soybeans are sown in the smart-metabolite chamber and grown for 20 to 40 days.

단계 i)에서, 파종은 콩 종자 또는 발아된 콩을 이용할 수 있으며, 바람직하게는 발아된 콩을 파종한다. In step i), soybean seeds or germinated soybeans may be used for sowing, and germinated soybeans are preferably sowed.

본 발명에서 발아된 콩은 콩 무게에 1~3배 정도의 물을 넣고 15~25℃에서 콩을 불린 후 20~30℃의 콩 발아기 또는 콩나물 제조기에 넣고 암실에서 16~24시간 내 발아를 시키는 것으로 제조될 수 있다.In the present invention, the germinated beans are put in 1 to 3 times the weight of the beans, soaked at 15 to 25 ° C, put in a bean sprouter or bean sprout maker at 20 to 30 ° C, and germinated within 16 to 24 hours in a dark room can be made into

단계 i)에서 콩 식물체의 생육은 파종 후 20~40 일 수행되며, 바람직하게는 30~35 일이 바람직하다. 20일 미만의 경우 콩 식물체 바이오매스 함량이 적고 40일 초과의 경우 실내의 스마트-대사체 챔버에서 생육에 문제가 발생할 수 있다.In step i), the growth of soybean plants is performed 20 to 40 days after sowing, preferably 30 to 35 days. In the case of less than 20 days, the soybean plant biomass content is low, and in the case of more than 40 days, problems may arise in growth in the indoor smart-metabolite chamber.

콩 식물체 생육을 위하여 챔버부 내부 천장에 설치된 LED 광원부는 백색, 청색, 적색의 단일광원; 백색과 청색, 백색과 적색, 청색과 적색의 이중 혼합광원; 또는 백색과 청색과 적색의 삼중 혼합광원이 사용될 수 있으며, 백색과 청색과 적색의 삼중 혼합광원이 바람직하다.The LED light source installed on the ceiling inside the chamber for the growth of bean plants includes a single light source of white, blue, and red; Dual mixed light sources of white and blue, white and red, and blue and red; Alternatively, a triple mixed light source of white, blue, and red may be used, and a triple mixed light source of white, blue, and red is preferable.

콩 식물체 생육을 위한 스마트-대사체 챔버의 광량은 100 ㎛ol/m2/s 이상을 사용하며, 바람직하게는 200 ㎛ol/m2/s 이상을 사용한다. 100 ㎛ol/m2/s 미만의 경우 광합성이 원활하지 않아 콩 식물체 바이오매스 함량이 적고 이소플라본 유도체의 생성이 원활지 않다.The amount of light in the smart-metabolite chamber for soybean plant growth is 100 μmol/m 2 /s or more, preferably 200 μmol/m 2 /s or more. If less than 100 μmol / m 2 /s, photosynthesis is not smooth, so the soybean plant biomass content is low and the production of isoflavone derivatives is not smooth.

콩 식물체 생육을 위한 스마트-대사체 챔버 내의 온도는 20 ~ 35℃인 것이 바림직하고, 25 ~ 30℃인 것이 더욱 바람직하다. 20℃ 미만의 경우 콩 식물체 냉해로 인해 콩 식물체가 생육하지 못하고 35℃ 초과의 경우 고온 장애가 발생할 수 있다.The temperature in the smart-metabolite chamber for soybean plant growth is preferably 20 to 35 ° C, more preferably 25 to 30 ° C. In the case of less than 20 ° C., the soybean plant does not grow due to cold damage to the soybean plant, and in the case of more than 35 ° C., high temperature failure may occur.

콩 식물체 생육을 위한 스마트-대사체 챔버 내의 습도는 40 ~ 80%인 것이 바람직하고, 60 ~ 70%인 것이 더욱 바람직하다. 40% 미만의 경우 수분 부족으로 콩 식물체의 광합성 등은 신진대사가 원활하지 않아 잎 등이 고사할 수 있고 80% 초과의 경우 과다한 수분으로 뿌리 등이 썩을 수 있다.The humidity in the smart-metabolite chamber for soybean plant growth is preferably 40 to 80%, more preferably 60 to 70%. In the case of less than 40%, photosynthesis of soybean plants is not smooth due to lack of moisture, so that the leaves may wither, and in the case of more than 80%, the roots may rot due to excessive moisture.

단계 ii) 에틸렌 처리step ii) ethylene treatment

에틸렌 가스 분사장치에서 에틸렌을 분사하여 생육된 콩 식물체에 에틸렌을 1,000 ~ 10,000 ppm의 농도로 12 ~ 72 시간 처리한다. Soybean plants grown by spraying ethylene from an ethylene gas sprayer are treated with ethylene at a concentration of 1,000 to 10,000 ppm for 12 to 72 hours.

에틸렌은 가장 간단한 올레핀계 탄화수소(화학식: C2H4)로 무색이며, 감미가 있는 기체이다. 식물호르몬의 일종으로서 청과물의 수확 뒤의 생리 변화, 특히 원예작물의 성숙이나 엽채류의 황색화 등 식물조직의 성숙을 촉진하는 작용을 갖는다.Ethylene is the simplest olefinic hydrocarbon (chemical formula: C 2 H 4 ) and is a colorless, sweet gas. As a kind of plant hormone, it has the effect of promoting the maturation of plant tissues, such as physiological changes after harvest of fruits and vegetables, especially maturation of horticultural crops and yellowing of leafy vegetables.

에틸렌 처리 농도는 1,000~10,000 ppm의 고농도이며, 바람직하게는 5,000~1,0000 ppm의 농도로 처리한다. 에틸렌 처리 농도가 1,000 ppm 미만의 경우 이소플라본 유도체 축적이 거의 이루어지 않고 10,000 ppm 초과 처리해도이소플라본 유도체 축적에 큰 차이가 없다.The ethylene treatment concentration is a high concentration of 1,000 to 10,000 ppm, preferably 5,000 to 1,0000 ppm. When the concentration of ethylene treatment is less than 1,000 ppm, accumulation of isoflavone derivatives is hardly achieved, and even when treatment concentration exceeds 10,000 ppm, there is no significant difference in accumulation of isoflavone derivatives.

에틸렌 처리시간은 12~72시간이 바람직하며, 24~48시간이 더 바람직하다. 에틸렌 처리시간이 12시간 미만의 경우 이소플라본 유도체 축적이 거의 이루어지 않고 72시간 초과의 경우에도 이소플라본 유도체 축적에 큰 차이가 없다.The ethylene treatment time is preferably 12 to 72 hours, more preferably 24 to 48 hours. When the ethylene treatment time is less than 12 hours, the accumulation of isoflavone derivatives is hardly achieved, and even when the ethylene treatment time exceeds 72 hours, there is no significant difference in the accumulation of isoflavone derivatives.

단계 ii)에서 에틸렌 처리는 스마트-대사체 챔버가 완전히 닫힌 밀폐된 공간에서 이루어진다. 즉 스마트-대사체 챔버의 도어를 닫고 환기팬을 막아서 밀폐를 시킨 후 에틸렌을 처리한다. In step ii), the ethylene treatment takes place in an enclosed space where the smart-metabolite chamber is completely closed. That is, the door of the smart-metabolite chamber is closed and the ventilation fan is closed to seal it, and then ethylene is treated.

필요에 따라서 에틸렌 처리 전에 상기와 같은 밀폐된 공간에서 콩식물체를 1~2시간 유지하여 안정화시킨다. 콩 식물체의 호흡에 의해서 발생하는 수분으로 인해 습도조절을 위함이다. If necessary, the soybean plants are maintained for 1 to 2 hours in an enclosed space as described above before ethylene treatment to stabilize them. It is for humidity control due to moisture generated by respiration of soybean plants.

에틸렌 처리시, 스마트-대사체 챔버의 온도는 20~40℃인 것이 바람직하고, 30~35℃인 것이 더욱 바람직하다. 습도는 60~90%인 것이 바람직하고, 70~80% 인 것이 더 바람직하다. 에틸렌 처리 온도 20℃ 및 습도 60% 미만의 경우 콩 식물체의 대사작용이 원활하지 않아 이소플라본 유도체 축적이 거의 이루어지지 않고 온도 40℃ 및 습도 90% 초과 역시 고온과 과다 수분 함량으로 인해서 호흡 등의 대사작용이 원활하지 않아 이소플라본 유도체 이루어지지 않는다. During ethylene treatment, the temperature of the smart-metabolite chamber is preferably 20 to 40°C, more preferably 30 to 35°C. Humidity is preferably 60 to 90%, more preferably 70 to 80%. In the case of ethylene treatment temperature of 20℃ and humidity of less than 60%, the metabolism of soybean plants is not smooth, so isoflavone derivatives are hardly accumulated. Isoflavone derivatives are not made because the action is not smooth.

iii) 수확iii) harvest

단계 ii)에서 에틸렌 처리가 완료된 콩 식물체를 수확한다. In step ii), soybean plants treated with ethylene are harvested.

상기와 같이 본 발명에 따른 재배 방법은 콩 식물체를 수확 전에 단계 ii)와 같이 특정 조건으로 에틸렌을 처리함에 따라서 콩 식물체의 이소플라본 유도체의 함량을 현저히 증진시킬 수 있다. 본 발명에 따라 재배된 콩 식물체의 경우 (약 25,047 ㎍/g ; 실시예 1), 노지에서 재배된 후 스마트-대사체 챔버에서 에틸렌 처리된 콩 식물체 (약 12,031 ㎍/g; 비교예 2)와 스마트-대새체 챔버에서 생육되고 에틸렌이 처리되지 않은 콩 식물체 (약 15,956 ㎍/g; 비교예 1)에 비하여, 이소플라본 유도체의 함량이 각각 2.08배 및 1.57배로 현저히 증진되었다 (표 1).As described above, the cultivation method according to the present invention can significantly increase the content of isoflavone derivatives in soybean plants by treating the soybean plants with ethylene under specific conditions as in step ii) before harvesting. In the case of soybean plants grown according to the present invention (about 25,047 μg / g; Example 1), soybean plants grown in the field and then treated with ethylene in a smart-metabolite chamber (about 12,031 μg / g; Comparative Example 2) and Compared to soybean plants grown in the smart-replacement chamber and not treated with ethylene (about 15,956 μg/g; Comparative Example 1), the contents of isoflavone derivatives were significantly increased by 2.08 and 1.57 times, respectively (Table 1).

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 상기 방법에 의해 재배된 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 제공한다.According to another object of the present invention, to provide soybean plants enriched with isoflavone derivatives grown by the above method.

본 발명에서, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체는 콩 잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 바람직하게는 콩 잎 및/또는 콩 뿌리이다.In the present invention, the isoflavone derivative-enhanced soybean plant may be at least one selected from the group consisting of soybean leaves, soybean stems and soybean roots, and is preferably soybean leaves and/or soybean roots.

본 발명에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체는 이소플라본 유도체를 25,000 ㎍/g 이상 함유하며, 콩 잎은 이소플라본 유도체를 9,590 ㎍/g 이상 함유하며, 콩 줄기는 이소플라본 유도체를 3,300 ㎍/g 이상 함유하며, 콩 뿌리는 이소플라본 유도체를 12,130 ㎍/g 이상 함유한다 (표 5, 도 12). Soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to the present invention contain 25,000 μg/g or more of isoflavone derivatives, soybean leaves contain 9,590 μg/g or more of isoflavone derivatives, and bean stems contain 3,300 μg/g or more of isoflavone derivatives. g or more, and soybean roots contain more than 12,130 μg/g of isoflavone derivatives (Table 5, FIG. 12).

본 발명에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체는 그 자체로, 또는 용매로 추출되어 식품, 화장품 및 약제학적 조성물의 소재로 사용될 수 있다. The soybean plant enriched with isoflavone derivatives according to the present invention can be used as a material for food, cosmetics and pharmaceutical compositions by itself or after being extracted with a solvent.

본 발명에서 추출 용매로는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용할 수 있다. 알코올로는 C1 내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. In the present invention, water, alcohol, or a mixture thereof may be used as the extraction solvent. It is preferable to use C1 to C2 lower alcohol as the alcohol, and it is preferable to use ethanol or methanol as the lower alcohol.

추출 방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 구체적으로는 추출 용매를 건조된 콩 식물체에 1~10배(v/w) 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 추출온도는 20~100℃인 것이 바람직하고, 추출시간은 10~48시간인 것이 바람직하나 이에 한정되지는 않는다. As an extraction method, shaking extraction, Soxhlet extraction, or reflux extraction is preferably used, but is not limited thereto. Specifically, it is preferable to extract by adding 1 to 10 times (v/w) of the extraction solvent to the dried soybean plant, the extraction temperature is preferably 20 to 100 ° C, and the extraction time is preferably 10 to 48 hours. However, it is not limited thereto.

추출물은 감압 농축한 후 건조될 수 있으며, 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. The extract may be dried after being concentrated under reduced pressure, and it is preferable to use a vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator for concentration under reduced pressure, but is not limited thereto. In addition, drying is preferably performed under reduced pressure, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.

추출물은 추가로 유기용매로 분획될 수 있으며, 출물을 물에 현탁시킨 후 유기용매로 n-헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올이 사용하여 분획 할 수 있으며, 클로로포름을 사용하는 것이 바람직하다. 추출물로부터 분획 과정을 1~5회, 바람직하게는 3회 반복하여 분획물을 수득할 수 있고, 분획 후 감압 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.The extract may be further fractionated with an organic solvent, and after suspending the extract in water, fractionation may be performed using n-hexane, chloroform, ethyl acetate or butanol as an organic solvent, preferably using chloroform. A fraction may be obtained by repeating the fractionation process from the extract 1 to 5 times, preferably 3 times, and it is preferable to concentrate under reduced pressure after fractionation, but is not limited thereto.

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 건강기능성 식품을 제공한다.According to another object of the present invention, the present invention provides a health functional food comprising soybean plants enriched with the isoflavone derivatives.

본 발명에 따른 건강기능성 식품은 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용, 항산화용, 및 피부미용용으로 유용하다. The health functional food according to the present invention is useful for preventing and improving diseases caused by estrogen deficiency, for antioxidant, and for skin care.

본 발명에서 상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나이다. In the present invention, the disease caused by estrogen deficiency is any one selected from the group consisting of osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvovaginal disease, hyperlipidemia, skin aging, and facial flushing.

이소플라본 유도체들은 상기와 같은 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용, 항산화용, 및 피부미용용으로 생리활성이 확립되어 있으므로, 고 함량의 이소플라본 유도체를 포함하는 본 발명에 따른 콩 식물체는 상기와 같은 건강기능성 식품으로 유용하게 사용될 수 있다.Since isoflavone derivatives have established physiological activities for preventing and improving diseases caused by estrogen deficiency, for antioxidant purposes, and for skin care, the soybean plant according to the present invention containing a high content of isoflavone derivatives is It can be usefully used as a health functional food as described above.

본 발명에 따른 건강기능성 식품은 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체 (콩 잎, 콩 줄기, 콩 뿌리)를 그대로 포함하거나, 상기와 같은 추출물 또는 분획물의 형태로 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 포함될 수 있다. The health functional food according to the present invention may include isoflavone derivative-enhanced soybean plants (bean leaves, soybean stalks, soybean roots) as it is, or may be included together with other foods or food ingredients in the form of extracts or fractions as described above. .

본 발명에서 '건강기능성 식품'이란 일상 식사에서 결핍되기 쉬운 영양소나 인체에 유용한 기능을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조한 식품으로, 인체의 건강을 유지하는데 도움을 주는 식품을 의미한다. In the present invention, 'health functional food' refers to a food prepared using raw materials or components having useful functions for the human body or nutrients that are easily deficient in daily meals, and means food that helps maintain the health of the human body.

본 발명에서 건강기능성 식품의 형태 및 종류는 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로는 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환의 형태일 수 있다. 건강기능성 식품은 추가성분으로서 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연탄수화물을 포함할 수 있다. 감미제는 천연 또는 합성 감미제일 수 있고, 천연 감미제의 예로는 타우마틴, 스테비아 추출물 등이 있다. 한편, 합성 감미제의 예로는 사카린, 아스파탐 등이 있다. 또한 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고당 및 당알코올 등일 수 있다.In the present invention, the form and type of health functional food is not particularly limited. Specifically, it may be in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills. Health functional foods may contain various flavors, sweeteners, or natural carbohydrates as additional ingredients. The sweetener may be a natural or synthetic sweetener, and examples of natural sweeteners include thaumatin, stevia extract, and the like. On the other hand, examples of synthetic sweeteners include saccharin and aspartame. In addition, natural carbohydrates may include monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, oligosaccharides and sugar alcohols.

본 발명에서 건강기능성 식품은 상기 추가성분 외에, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙스탄 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합으로 사용될 수 있다. In the present invention, health functional food, in addition to the above additional ingredients, nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectanes and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin , alcohol and the like may be further included. These components may be used independently or in combination.

본 발명에서 상기 식품의 종류는 특별히 제한되지 않으며, 환제, 정제, 캡슐제, 차, 선식, 밀가루 식품, 스프, 유제품, 소스, 육류 첨가제, 음료 (파우치제, 드링크제 등) 등일 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다. In the present invention, the type of food is not particularly limited, and may be pills, tablets, capsules, tea, wire, flour foods, soups, dairy products, sauces, meat additives, beverages (pouches, drinks, etc.), but are limited thereto. It doesn't work.

바람직하게는 본 발명에 따른 식품은 차(Tea)일 수 있다. 본 발명에 따른 차는 본 발명에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체 및 향미를 갖는 허브 식물체를 혼합한 혼합차일 수 있다. 상기 허브 식물체는 캐모마일, 레몬그라스, 로즈힙, 라벤다, 페퍼민트, 펜넬, 로즈마리, 자스민, 히비스커스, 로즈플라워, 애플후르츠, 스트로베리후르츠, 레몬후르츠 및 오렌지 플라워로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상인 것이 바람직하다. 본 발명의 차 또는 혼합차는 착향차(着香茶), 티백(tea bag), 인스턴트(instant tea) 및 캔(can)으로 구성된 군으로부터 선택된 형태로 가공될 수 있다.Preferably, the food according to the present invention may be tea. The tea according to the present invention may be a mixed tea in which a soybean plant enriched with an isoflavone derivative according to the present invention and a herbal plant having a flavor are mixed. The herbal plant is preferably at least one selected from the group consisting of chamomile, lemongrass, rosehip, lavender, peppermint, fennel, rosemary, jasmine, hibiscus, roseflower, apple fruit, strawberry fruit, lemon fruit and orange flower. The tea or blended tea of the present invention may be processed into a form selected from the group consisting of flavored tea, tea bag, instant tea and can.

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 화장품을 제공한다.According to another object of the present invention, the present invention provides a cosmetic comprising a soybean plant enriched with the isoflavone derivative.

본 발명에 따른 화장품은 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체 (콩 잎, 콩 줄기, 콩 뿌리)를 그대로 포함하거나, 상기와 같은 추출물 또는 분획물의 형태로 다른 화장품 성분과 함께 포함될 수 있다. Cosmetics according to the present invention may include isoflavone derivative-enhanced soybean plants (bean leaves, soybean stalks, soybean roots) as they are, or may be included together with other cosmetic ingredients in the form of extracts or fractions as described above.

본 발명에서 화장품은 로션, 연고, 겔, 크림, 패치, 마스크팩 또는 분무제 등의 형태일 수 있으나 여기에 국한되는 것은 아니며, 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 등 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 첨가제를 함유할 수 있다.Cosmetics in the present invention may be in the form of lotion, ointment, gel, cream, patch, mask pack or spray, but are not limited thereto, and in addition, fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, softeners, Antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents, fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, sequestering and chelating agents, preservatives, vitamins, blocking agents, wetting agents, essential oils, dyes, It may contain any additives commonly used in cosmetics, such as pigments, hydrophilic or lipophilic actives, and lipid vesicles.

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 상기 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 포함하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물을 제공한다. According to another object of the present invention, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing and treating diseases caused by estrogen deficiency, including soybean plants enriched with the isoflavone derivatives.

본 발명에서 상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나이다. In the present invention, the disease caused by estrogen deficiency is any one selected from the group consisting of osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvovaginal disease, hyperlipidemia, skin aging, and facial flushing.

이소플라본 유도체들은 에스트로겐 대체재로서 상기와 같은 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용으로 확립되어 있으므로, 고함량의 이소플라본 유도체를 포함하는 본 발명에 따른 콩 식물체는 상기와 같은 용도의 약제학적 조성물로 유용하다.Since isoflavone derivatives are established as estrogen substitutes for the prevention and improvement of diseases caused by estrogen deficiency as described above, the soybean plant according to the present invention containing a high content of isoflavone derivatives is a pharmaceutical composition for use as described above useful as

본 발명에 따른 약제학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화될 수 있다. 상기 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토오스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 혼합생약재에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may be formulated in the form of oral formulations such as powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, external preparations, suppositories and sterile injection solutions according to conventional methods, respectively. can Carriers, excipients and diluents that may be included in the composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia gum, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methyl cellulose , microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. When formulated, it is prepared using diluents or excipients such as commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, and surfactants. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, etc. These solid preparations contain at least one or more excipients such as starch, calcium carbonate, sucrose, etc. Alternatively, it is prepared by mixing lactose and gelatin. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions for oral use, emulsions, syrups, etc. In addition to water and liquid paraffin, which are commonly used simple diluents, various excipients such as wetting agents, sweeteners, aromatics, and preservatives may be included. . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, freeze-dried formulations, and suppositories. Propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl oleate may be used as non-aqueous solvents and suspending agents. As a base for the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin paper, glycerogeratin and the like may be used.

본 발명에 따른 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구 투여할 수 있으며, 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사, 직장 내주사, 피하주사, 정맥주사, 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식으로 투여될 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention can be administered orally or parenterally, and when administered parenterally, it can be administered by external skin or intraperitoneal injection, intrarectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method. can

본 발명에 따른 약제학적 조성물의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 바람직한 효과를 위해서, 상기 조성물은 1일 0.0001 내지 1 g/kg으로, 바람직하게는 0.001 내지 200 mg/kg으로 투여하는 것이 바람직하다. 상기 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다.The preferred dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention varies depending on the condition and body weight of the patient, the severity of the disease, the type of drug, the route of administration and the period of administration, but can be appropriately selected by those skilled in the art. For desirable effects, the composition is preferably administered at 0.0001 to 1 g/kg per day, preferably at 0.001 to 200 mg/kg. The administration may be administered once a day or divided into several times.

본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버를 이용한 콩 식물체 재배방법에 의하면 단기간 (20~40일)에 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 재배할 수 있다. 또한 본 발명의 재배방법은 이소플라본 유도체 고 함유 콩 식물체를 연중 안정적으로 생산할 수 있다. According to the soybean plant cultivation method using the smart-metabolite chamber according to the present invention, soybean plants enriched with isoflavone derivatives can be grown in a short period of time (20 to 40 days). In addition, the cultivation method of the present invention can stably produce soybean plants containing high isoflavone derivatives throughout the year.

본 발명에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체인 콩잎, 콩 줄기, 및 콩 뿌리, 그 추출물 또는 그 분획물은 에스트로겐 대체재로 사용될 수 있다. Soybean leaves, soybean stems, and soybean roots, which are soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to the present invention, and extracts or fractions thereof can be used as estrogen substitutes.

본 발명에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체인 콩잎, 콩 줄기, 및 콩 뿌리, 그 추출물 또는 그 분획물은 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 개선용, 항산화용, 및 피부미용용 약제학적 조성물, 간강기능성 식품 및 화장품의 소재로 유용하다. Soybean leaves, soybean stems, and soybean roots, which are soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to the present invention, and extracts or fractions thereof are pharmaceutical compositions for preventing and improving diseases caused by estrogen deficiency, for antioxidants, and for skin care , It is useful as a material for liver functional foods and cosmetics.

도 1a는 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버의 구성도의 일례를 도시한 것이다. 도 1b는 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버의 실제 제작된 제품의 보여주는 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버에서 콩 식물체를 재배하는 과정을 보여주는 사진이다. (A) 파종 후 생육 5일째 콩 식물체 모습이며, (B)는 생육 15일째 콩 식물체 모습이며, (C)는 생육 30일째 콩 식물체 모습이며, (D)는 에틸렌 처리 후 콩 식물체 모습이다.
도 3은 콩 식물체 중 콩잎의 이소플라본 유도체를 분석한 HPLC 크로마토그램이다. 도 3a는 스마트-대사체 챔버에서 생육시킨 후 에틸렌 처리하지 않은 콩잎 (비교예 1)의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 3b는 밭(노지)에 콩 파종 후 60일 정도 생육시키고 스마트-대사체 챔버에서 에틸렌을 처리한 콩잎 (비교예 2)의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 3c는 스마트-대사체 챔버에서 생육시킨 후 에틸렌 처리한 콩잎(실시예 1)의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이다. a는 다이드진, b는 제니스틴, c는 말로닐 다이드진, d는 말로닐 제니스틴, e는 다이드제인, f는 제니스테인.
도 4는 콩 식물체 중 콩 줄기의 이소플라본 유도체를 분석 HPLC 크로마토그램이다. 도 4a는 비교예 1의 콩 줄기의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 4b는 비교예 2의 콩 줄기의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 4c는 실시예 1의 콩 줄기의 이소플라본 분석 HPLC 크로마토그램이다.
도 5는 콩 식물체 중 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이다. 도 5a는 비교예 1의 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 5b는 비교예 2의 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이며, 도 5c는 실시예 1의 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 분석 HPLC 크로마토그램이다.
도 6은 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 a의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 다이드진의 화학식을 나타낸 것이다.
도 7은 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 b의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 제니스틴의 화학식을 나타낸 것이다.
도 8는 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 c의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 말로닐 다이드진의 화학식을 나타낸 것이다.
도 9는 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 d의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 말로닐 제니스틴의 화학식을 나타낸 것이다.
도 10는 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 e의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 다이드제인의 화학식을 나타낸 것이다.
도 11은 도 3c HPLC 크로마토그램에서 피크 f의 LC-ESI-TOF/MS의 BPI 스펙트럼 및 해당 화합물인 제니스테인의 화학식을 나타낸 것이다.
도 12는 비교예 1, 비교예 2 및 실시예 1의 콩 식물체의 총 이소플라본 유도체 함량을 비교한 그래프이다.
1A shows an example of a configuration diagram of a smart-metabolite chamber according to the present invention. Figure 1b is a picture showing the actual manufactured product of the smart-metabolite chamber according to the present invention.
Figure 2 is a picture showing the process of growing soybean plants in a smart-metabolite chamber according to the present invention. (A) The soybean plant on the 5th day after sowing, (B) the soybean plant on the 15th day of growth, (C) the soybean plant on the 30th day of growth, and (D) the soybean plant after ethylene treatment.
3 is an HPLC chromatogram analyzing isoflavone derivatives of soybean leaves among soybean plants. Figure 3a is an HPLC chromatogram for isoflavone derivative analysis of soybean leaves (Comparative Example 1) that were not treated with ethylene after being grown in a smart-metabolite chamber, and Figure 3b is a smart- Isoflavone derivative analysis HPLC chromatogram of soybean leaves treated with ethylene in the metabolite chamber (Comparative Example 2), and FIG. It is an HPLC chromatogram. a is daidzine, b is genistin, c is malonyl daidzine, d is malonyl genistin, e is daidzein, and f is genistein.
4 is an HPLC chromatogram for analyzing isoflavone derivatives of soybean stems among soybean plants. Figure 4a is an HPLC chromatogram for isoflavone derivative analysis of soybean stems of Comparative Example 1, Figure 4b is an HPLC chromatogram for isoflavone derivatives analysis of soybean stems of Comparative Example 2, and Figure 4c is isoflavones of soybean stems of Example 1 Analytical HPLC chromatogram.
5 is an HPLC chromatogram of isoflavone derivative analysis of soybean roots among soybean plants. Figure 5a is an HPLC chromatogram for isoflavone derivative analysis of soybean roots of Comparative Example 1, Figure 5b is an HPLC chromatogram for isoflavone derivative analysis of soybean roots of Comparative Example 2, and Figure 5c is isoflavones of soybean roots of Example 1 Derivative analysis HPLC chromatogram.
FIG. 6 shows the BPI spectrum of LC-ESI-TOF/MS of peak a in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of daidzine, a corresponding compound.
FIG. 7 shows the LC-ESI-TOF/MS BPI spectrum of peak b in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of the corresponding compound, Genistine.
FIG. 8 shows the BPI spectrum of LC-ESI-TOF/MS of peak c in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of the corresponding compound, malonyl dididzine.
FIG. 9 shows the LC-ESI-TOF/MS BPI spectrum of peak d in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of the corresponding compound, malonyl genistine.
FIG. 10 shows the BPI spectrum of LC-ESI-TOF/MS of peak e in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of the corresponding compound, daidzein.
FIG. 11 shows the BPI spectrum of LC-ESI-TOF/MS of peak f in the HPLC chromatogram of FIG. 3c and the chemical formula of the corresponding compound, genistein.
Figure 12 is a graph comparing the total isoflavone derivative content of soybean plants of Comparative Example 1, Comparative Example 2 and Example 1.

이하, 본 발명을 도면, 실시예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다. 단 도면, 실시예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 도면, 실시예 및 제조예에 의해서 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to drawings, examples and manufacturing examples. However, the drawings, examples, and manufacturing examples are merely illustrative of the present invention, and the contents of the present invention are not limited by the drawings, examples, and manufacturing examples.

<스마트-대사체 챔버><Smart-metabolite chamber>

본 발명의 스마트-대사체 챔버를 도면을 참조하여 상세히 설명한다.The smart-metabolite chamber of the present invention will be described in detail with reference to the drawings.

도 1a는 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버의 구성도의 일례를 도시한 것이다.1A shows an example of a configuration diagram of a smart-metabolite chamber according to the present invention.

도 1a를 참조하면, 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버(1)는 내부공간을 포함하는 챔버부(10), 상기 챔버부를 개폐하는 개폐 도어부(20), 상기 도어부 중앙에 설치된 관찰 창(21), 챔버부 내부 천장에 설치된 LED 광원부(103), 온도, 습도 및 이산화탄소 측정기(105); 챔버부 환기를 위한 환기 팬(106), 챔버부 내부 뒷면에 설치된 온도조절 팬(107), 에틸렌 가스 분사장치(110), 에틸렌 가스 측정기(111), LED 광원을 조절하는 광원조절장치(101, 102), 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집장치(104), 온도조절용 물 순환장치(108), 에틸렌 가스통(109) 및 데이터 저장장치 (112)를 포함할 수 있다. Referring to FIG. 1A, the smart-metabolite chamber 1 according to the present invention includes a chamber unit 10 including an inner space, an opening and closing door unit 20 for opening and closing the chamber unit, and an observation window installed in the center of the door unit. (21), an LED light source unit 103 installed on the ceiling inside the chamber unit, a temperature, humidity and carbon dioxide meter 105; A ventilation fan 106 for ventilation of the chamber unit, a temperature control fan 107 installed on the back of the inside of the chamber unit, an ethylene gas spraying device 110, an ethylene gas meter 111, a light source control device 101 for controlling the LED light source, 102), an automatic temperature and humidity control and data collection device 104, a water circulation device for temperature control 108, an ethylene gas cylinder 109, and a data storage device 112.

본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버에서 챔버부(10)는 가로×세로× 높이는 500~1200 mm × 400~1000 mm × 400~8000 mm 크기일 수 있으며, 700 mm × 500 mm × 500 mm 크기가 바람직하다. 상기 챔버부(10)의 재질은 알루미늄 또는 스텐레스스틸, 나무, 폴리아크릴판으로 제작하는 바람직하나, 알루미늄 또는 스텐레스스틸로 제작하는 것이 더욱 바람직하다.In the smart-metabolite chamber according to the present invention, the chamber unit 10 may have a width × length × height of 500 to 1200 mm × 400 to 1000 mm × 400 to 8000 mm, and a size of 700 mm × 500 mm × 500 mm desirable. The material of the chamber part 10 is preferably made of aluminum or stainless steel, wood, or polyacrylic plate, but more preferably made of aluminum or stainless steel.

상기 도어부(20)는 챔버부(10)를 개폐할 수 있게 하고 중앙에 관찰 창(21)이 설치되어 있어 식물체의 생육을 관찰할 수 있다 (도 1b). 관찰 창(21)은 투명 아크릴판, 유리 등의 재질로 구성될 수 있다. The door part 20 allows the chamber part 10 to be opened and closed, and an observation window 21 is installed in the center so that the growth of the plant can be observed (FIG. 1B). The observation window 21 may be made of a material such as a transparent acrylic plate or glass.

상기 LED 광원부(103)는 챔버부 내부 천장에 설치될 수 있으며 적색, 청색, 백색, UV-A 및 UV-B으로 구성된 군에서 선택되는 1종 이상의 광을 식물체에 조사할 있다. 광량은 암실 조건에서 각각의 LED 광원을 1%에서 100%로 조절될 수 있다. The LED light source unit 103 may be installed on the ceiling inside the chamber unit and may irradiate plants with one or more types of light selected from the group consisting of red, blue, white, UV-A and UV-B. The amount of light can be adjusted from 1% to 100% for each LED light source in a dark room condition.

상기 LED 광원을 조절하는 광원조절장치(101, 102)는 챔버부(10) 외부면의 어느 일부에 설치될 수 있으며, 적색(660 nm), 청색(450 nm) 및 백색의 3채널 광원조절장치(101)와 UV-A(375 nm) 및 UV-B(315 nm)의 광원조절장치(102)로 나뉠 수 있다. 광원조절장치는 각각의 LED 광원의 광량을 1%에서 100%로 조절할 수 있다.The light source control devices 101 and 102 for controlling the LED light source may be installed on any part of the outer surface of the chamber unit 10, and a three-channel light source control device of red (660 nm), blue (450 nm), and white. (101) and UV-A (375 nm) and UV-B (315 nm) light source control devices 102. The light source control device can adjust the amount of light of each LED light source from 1% to 100%.

상기 온도, 습도 및 이산화탄소 측정기(105)는 챔버부(10) 내부의 일측면에 설치될 수 있으며 챔버부(10) 외부에 설치된 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집장치(104)에 연결되어 있다. 온도는 -10℃에서 60℃까지 측정이 가능하며, 습도 측정은 0%에서 100%까지 측정이 가능하다. 이산화탄소는 0에서 2,000 ppm까지 측정이 가능하다The temperature, humidity and carbon dioxide meter 105 may be installed on one side of the inside of the chamber unit 10 and is connected to an automatic temperature and humidity control and data collection device 104 installed outside the chamber unit 10. Temperature can be measured from -10℃ to 60℃, and humidity can be measured from 0% to 100%. Carbon dioxide can be measured from 0 to 2,000 ppm.

상기 환기 팬(106)는 챔버부(10)의 환기를 위해 1개 이상 설치될 수 있다. One or more ventilation fans 106 may be installed to ventilate the chamber unit 10 .

상기 온도조절 팬(107)은 챔버부(10) 내부 뒷면에 설치되어 있으며, 챔버부의 내부공간의 온도를 조절하는 기능을 하며 외부에 설치되어 있는 온도조절용 물 순환장치(108)와 연결되어 있다. 스마트-대사체 챔버(1) 내의 온도는 15℃에서 45℃까지 일정하게 유지 가능하며, 스마트-대사체 챔버(1) 내의 실제 습도는 20%에서 100%까지 일정하게 유지 가능하다. The temperature control fan 107 is installed on the inner rear surface of the chamber part 10, functions to control the temperature of the inner space of the chamber part, and is connected to the water circulation device 108 for temperature control installed outside. The temperature in the smart-metabolite chamber 1 can be kept constant from 15° C. to 45° C., and the actual humidity in the smart-metabolite chamber 1 can be kept constant from 20% to 100%.

상기 에틸렌 가스 분사장치(110)는 챔버부(10) 내부의 일측에 설치되어 식물체에 에틸렌을 분사할 수 있으며, 챔버부(10) 외부에 설치된 에틸렌 가스통(109)과 연결되어 있다. 챔버부(10) 내부의 에틸렌 가스 농도는 최대 10,000 ppm까지의 농도로 분사가 가능하며, 에틸렌 가스는 물에 일시적으로 통과한 분사 장치(110)를 통해 스마트-대사체 챔버 내에 고루 분사가 이루어진다. 에틸렌 가스 분사조절은 가스 개폐 장치(미도시)를 설치하여 조절한다 .The ethylene gas injection device 110 is installed on one side of the inside of the chamber part 10 to inject ethylene to plants, and is connected to the ethylene gas cylinder 109 installed outside the chamber part 10. The concentration of ethylene gas inside the chamber unit 10 can be sprayed at a concentration of up to 10,000 ppm, and the ethylene gas is evenly sprayed into the smart-metabolite chamber through the spray device 110 that temporarily passes through water. Ethylene gas injection control is controlled by installing a gas switch (not shown).

상기 에틸렌 가스 측정기(111)는 온도조절 팬(107) 아래에 설치되어 챔버부 내부의 에틸렌 가스 농도를 측정한다. 에틸렌 가스 측정기의 계량기(미도시)는 외부 설치하여 측정기로부터 감지되는 양으로 측정한다. The ethylene gas meter 111 is installed under the temperature control fan 107 to measure the ethylene gas concentration inside the chamber. A meter (not shown) of the ethylene gas meter is installed outside and measures the amount detected by the meter.

상기 데이터 저장장치(112)는 챔버부(10) 외부에 설치되어 있으며, 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집장치(104)와 연결되어 있다. 데이터 수집장치(104)는 컴퓨터일 수 있다. The data storage device 112 is installed outside the chamber unit 10 and is connected to the automatic temperature and humidity control and data collection device 104 . Data collection device 104 may be a computer.

상기 스마트-대사체 챔버(1)에는 전원공급용 전원 공급장치(DC24VDC), 전압강하 모듈인 전압분할 장치(VDIV10.1), 데이터 로거와 원격접속을 위한 모뎀 (이더넷 모뎀), 무선 Wifi모뎀 통신을 위한 유무선 공유기인 라우터 및 온도조절 팬 / 환기 팬 동작용 전기 제어기가 추가로 설치될 수 있다. The smart-metabolite chamber (1) includes a power supply (DC24VDC) for power supply, a voltage divider (VDIV10.1) as a voltage drop module, a modem for remote access to the data logger (Ethernet modem), and wireless Wifi modem communication A router, which is a wired/wireless sharing device, and an electric controller for operating a temperature control fan/ventilation fan can be additionally installed.

도 1b는 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버의 실제 제작된 제품의 보여주는 사진이다.Figure 1b is a picture showing the actual manufactured product of the smart-metabolite chamber according to the present invention.

제조예 1: 스마트-대사체 챔버에서 콩 식물체의 재배Preparation Example 1: Cultivation of soybean plants in a smart-metabolite chamber

콩 종자 무게에 약 2배 정도의 물을 넣고 20℃에서 콩을 불린 후 25℃의 콩 발아기에 넣고 암실에서 20시간 발아를 시킨 발아된 콩(발아콩)을 준비하였다. After adding water about twice the weight of the bean seeds and soaking the beans at 20 ° C, germinated beans (germinated beans) were prepared by putting them in a bean germination machine at 25 ° C and germinating for 20 hours in a dark room.

식물용 포트(pot)에 일반 원예 상토를 채운 후 발아콩을 2알 내지 3알 파종하였다. 스마트-대사체 챔버(1)의 광원의 백색, 청색 및 적색의 광 비율을 1 : 1 : 1로 설정하고 광량은 400 ㎛ol/m2/s로 설정하고, 온도는 25±0.5℃ 및 습도는 65±5%로 설정한 후, 상기에서 파종한 콩의 포토를 스마트-대사체 챔버에 넣고 30일간 생육시켰다 (도 2의 (A)~(C), 비교예 1). After filling the plant pot with general horticultural medium, 2 to 3 germinated beans were sown. The light ratio of white, blue, and red light of the smart-metabolite chamber 1 is set to 1: 1: 1, the amount of light is set to 400 µmol/m 2 /s, the temperature is 25 ± 0.5 ° C and humidity After setting to 65 ± 5%, the soybean photos sowed above were placed in a smart-metabolite chamber and grown for 30 days (Fig. 2 (A) to (C), Comparative Example 1).

스마트-대사체 챔버(1)에서의 에틸렌 처리는 완전히 차단된 밀폐된 공간에서 진행하였다. 스마트-대사체 챔버의 환기 팬 등을 완전히 막은 후 밀폐된 공간으로 만들고 온도 35±1℃ 및 습도 80±5% 조건에서 2시간 안정화시킨후, 에틸렌 가스 분사장치(110)를 통하여 에틸렌 가스를 분사하여 10,000 ppm의 농도로 상기 생육된 콩 식물체에 에틸렌을 24시간 처리한 후 콩 식물체를 수확하였다 (도 2의 (D); 실시예 1). 수확한 콩 식물체는 흐르는 물에 3회 세척하고 잎과 줄기, 뿌리로 구분하여 50±2℃에서 24~48시간 건조하여 냉장실에 보관하였다.Ethylene treatment in the smart-metabolite chamber (1) was performed in an enclosed space completely blocked. After completely blocking the ventilation fan of the smart-metabolite chamber, make it an airtight space, stabilize it for 2 hours under the condition of temperature 35 ± 1 ℃ and humidity 80 ± 5%, and then spray ethylene gas through the ethylene gas injection device 110 After treating the grown soybean plants with ethylene at a concentration of 10,000 ppm for 24 hours, the soybean plants were harvested (FIG. 2 (D); Example 1). Harvested soybean plants were washed three times in running water, separated into leaves, stems, and roots, dried at 50 ± 2 ° C for 24 to 48 hours, and stored in a refrigerator.

비교를 위하며, 밭(노지)에 콩을 파종한 후 60일간 생육시키고 밭에 수확한 후 스마트-대사체 챔버(1)로 이동시킨 다음, 상기와 동일한 방법으로 에틸렌을 처리하여 노지 재배 에틸렌 처리 콩 식물체를 준비하였다 (비교예 2).For comparison, soybeans were sown in the field (open field), grown for 60 days, harvested in the field, moved to the smart-metabolite chamber (1), and treated with ethylene in the same manner as above to treat ethylene in the field Soybean plants were prepared (Comparative Example 2).

참고예: 콩 식물체 추출물의 제조Reference Example: Preparation of soybean plant extract

상기에서 제조된 콩 식물체들의 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리를 건조하고, 건조된 콩잎, 콩 줄기, 콩 뿌리 각각 10 g에 50% 에탄올 400 ml을 넣고 25℃에서 5일간 추출하였다. 상기 추출한 용매를 감압농축하여 16~20%의 수율로 콩잎, 콩 줄기, 콩 뿌리의 추출물을 얻었다.The soybean leaves, soybean stems, and soybean roots of the prepared soybean plants were dried, and 400 ml of 50% ethanol was added to 10 g of each of the dried soybean leaves, soybean stems, and soybean roots, and extracted at 25° C. for 5 days. The extracted solvent was concentrated under reduced pressure to obtain extracts of soybean leaves, soybean stems, and soybean roots in a yield of 16 to 20%.

실험예 1: 콩잎, 콩 줄기, 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 분석Experimental Example 1: Analysis of isoflavone derivatives of soybean leaves, soybean stems, and soybean roots

실시예 1, 비교예 1 및 비교예 2의 콩잎과 콩 줄기, 콩 뿌리의 이소플라본 유도체 축적정도를 확인하기 위해 HPLC(high performance liquid chromatography) 분석을 수행하였다. High performance liquid chromatography (HPLC) analysis was performed to confirm the degree of accumulation of isoflavone derivatives in soybean leaves, soybean stems, and soybean roots of Example 1, Comparative Example 1, and Comparative Example 2.

상기 참고예에서 준비된 각 추출물을 0.2㎛의 공극을 가진 막 여과 필터를 이용하여 여과한 후 이소플라본을 분석하였다. HPLC는 엘이질런트 테크놀로지사(Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany)의 Agilent 1260 system LC를 이용하였으며, 칼럼은 Lichrophore 100 RP C18 column (4.6×250 mm, 5μm, Merck, Germany)을 사용하였다. 용리속도는 1 ml/분, 용리 조건은 0.2% 아세트산 수용액(용매 A)를 0.2% 아세트산를 첨가한 아세토니트릴(용매 B) 혼합용액을 사용하여 표 1과 같은 구배 용출(gradient elution)을 적용하여 이소플라본 유도체 분리하였다. 이때 DAD (diode array detector) 검출기 254 nm의 검출 파장에서 분석하였고, 그 결과를 도 3a ~ 도 5c에 나타냈다.Each extract prepared in the reference example was filtered using a membrane filtration filter having a pore size of 0.2 μm, and then isoflavones were analyzed. For HPLC, an Agilent 1260 system LC from Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany was used, and a Lichrophore 100 RP C18 column (4.6 × 250 mm, 5 μm, Merck, Germany) was used as the column. The elution rate is 1 ml / min, and the elution conditions are 0.2% acetic acid aqueous solution (solvent A) and acetonitrile (solvent B) mixed solution with 0.2% acetic acid added. Gradient elution as shown in Table 1 is applied. A flavone derivative was isolated. At this time, analysis was performed at a detection wavelength of 254 nm by a diode array detector (DAD) detector, and the results are shown in FIGS. 3A to 5C.

시간 (분)time (minutes) 용매 A (%)Solvent A (%) 용매 B (%)Solvent B (%) 00 100100 00 1515 9090 1010 2525 8080 2020 3535 7575 2525 4545 6565 3535 5050 6565 3535

도 3a ~ 도 5c에 도시된 바와 같이, 비교예 1 (스마트-대사체 챔버에서 생육하여 에틸렌을 처리하지 않은 콩 식물체)의 이소플라본 유도체 함량은 거의 낮으나, 실시예 1 (스마트-대사체 챔버에서 생육하여 에틸렌을 처리한 콩 식물체)의 경우 4~6종의 이소플라본 유도체가 현저히 축적됨을 확인할 수 있으며, 실시예 1은 비교예 2 (노지에 60일 정도 생육 후 스마트-대사체 챔버에서 에틸렌을 처리한 콩 식물체) 보다도 4~6종의 이소플라본 유도체가 훨씬 증가하였다. 3a to 5c, the isoflavone derivative content of Comparative Example 1 (soybean plants grown in the smart-metabolite chamber and not treated with ethylene) was almost low, but Example 1 (smart-metabolite chamber In the case of soybean plants grown and treated with ethylene), it can be seen that 4 to 6 isoflavone derivatives are significantly accumulated. treated soybean plants), 4 to 6 isoflavone derivatives were significantly increased.

구체적으로 살펴보면, 비교예 1의 콩잎의 경우 이소플라본 유도체 피크가 낮으나(도 3a), 실시예 1의 콩잎의 경우는 6종의 이소플라본 유도체가 현저히 증가됨을 확인할 수 있었고 (도 3c), 비교예 2의 콩잎 (도 3b)보다도 훨씬 증가되었다. 또한 비교예 1의 콩 줄기는 이소플라본 유도체 피크가 낮으나 (도 4a), 실시예 1의 콩 줄기는 6종의 이소플라본 유도체가 현저히 증가됨을 확인할 수 있었고 (도 4c), 비교예 2의 콩 줄기 (도 4b) 보다 더 증가됨을 확인할 수 있다. 한편, 실시예 1의 콩 뿌리에서는 4종의 이소플라본 유도체(다이드진, 제니스틴, 말로닐 다이드진 및 말로닐 제니스틴)가 비교예 1의 콩 뿌리(도 5a)보다 훨씬 증가되었으며(도 5c), 비교예 2의 콩 뿌리(도 5b)에 비하여 4종의 이소플라본 유도체(다이드진, 말로닐 다이드진, 다이드제인 및 제니스테인)가 현저히 증가하였다(도 5c). Specifically, in the case of the bean leaves of Comparative Example 1, the isoflavone derivative peak was low (FIG. 3a), but in the case of the bean leaf of Example 1, it was confirmed that 6 types of isoflavone derivatives were significantly increased (FIG. 3c). The soybean leaf of 2 (FIG. 3b) was significantly increased. In addition, the soybean stem of Comparative Example 1 had a low isoflavone derivative peak (FIG. 4a), but the soybean stem of Example 1 showed a significant increase in 6 isoflavone derivatives (FIG. 4c), and the soybean stem of Comparative Example 2 (FIG. 4b) it can be confirmed that it is more increased. On the other hand, four isoflavone derivatives (daidzin, genistin, malonyl daidzin, and malonyl genistin) were significantly increased in the bean root of Example 1 compared to the bean root of Comparative Example 1 (FIG. 5a) (FIG. 5c). ), four isoflavone derivatives (daidzin, malonyl dididzin, daidzein and genistein) were significantly increased compared to the soybean root of Comparative Example 2 (FIG. 5b) (FIG. 5c).

실시예 1의 콩잎, 콩 줄기, 콩 뿌리의 경우 다이드진(피이크 a), 제니스틴(피이크 b), 말로닐 다이드진(피이크 c) 및 말로닐 제니스틴(피이크 d)이 아주 높은 농도로 검출되었고(도 3c, 도 4c, 도 5c), 실시예 1의 콩잎과 콩 줄기의 경우에는 다이드제인(피이크 e) 및 제니스테인(피이크 f)이 비교예 1의 콩잎과 콩 줄기보다 높은 농도로 검출되었고(도 3c, 도 4c), 실시예 1의 콩 뿌리의 경우에는 비교예 2의 콩 뿌리보다 다이드제인(피이크 e) 및 제니스테인(피이크 f)이 높은 농도로 검출되었다(도 5c). In the case of soybean leaves, soybean stems, and soybean roots of Example 1, daidzin (peak a), genistin (peak b), malonyl daidzin (peak c) and malonyl genistin (peak d) were detected at very high concentrations (Fig. 3c, Fig. 4c, Fig. 5c), in the case of the bean leaves and bean stems of Example 1, daidzein (peak e) and genistein (peak f) were detected at higher concentrations than those of the bean leaves and bean stalks of Comparative Example 1 (FIGS. 3c and 4c), and in the case of the bean root of Example 1, higher concentrations of daidzein (peak e) and genistein (peak f) were detected than the bean root of Comparative Example 2 (Fig. 5c).

상기와 같은 결과들로부터, 본 발명에 따른 스마트-대사체 챔버에서 생육시켜 에틸렌을 처리하는 콩 식물체의 재배방법에 의하면 이소플라본 유도체가 고농도로 함유한 콩 식물체를 얻을 수 있음을 확인할 수 있다.From the above results, it can be confirmed that according to the method of growing soybean plants treated with ethylene by growing in a smart-metabolite chamber according to the present invention, soybean plants containing high concentrations of isoflavone derivatives can be obtained.

실험예 2: 이소플라본 유도체의 분리, 정제 및 구조분석Experimental Example 2: Isolation, Purification and Structural Analysis of Isoflavone Derivatives

실시예 1의 콩잎 (도 3c)의 각 피크에 해당하는 이소플라본 유도체에 대해 UPLC-ESI-TOF/MS(Acquity UPLC system coupled with SYNAPT G2-Si HDMS, Waters) 분석을 수행하였다.UPLC-ESI-TOF/MS (Acquity UPLC coupled system with SYNAPT G2-Si HDMS, Waters) analysis was performed on the isoflavone derivatives corresponding to each peak of the soybean leaf (FIG. 3c) of Example 1.

구체적으로, 참고예에서 준비된 추출물에 대하여 UPLC BEH C18 칼럼(2.1 mm ×100 mm, 1.7 μm, waters)을 이용하고, 용리 조건은 0.1% 포름산 수용액(용매 A)과 0.1% 포름산 아세토니트릴(용매 B) 혼합용액으로 표 2와 같은 구배 용출(gradient elution)을 적용하여 이소플라본 유도체를 분리하였다. 이때 주입된 추출용액의 양은 1 ㎕이며, UPLC-ESI-TOF 질량분석은 표 3과 같은 조건으로 수행하였고, 그 결과를 도 6 ~ 도 12에 나타냈다.Specifically, a UPLC BEH C18 column (2.1 mm × 100 mm, 1.7 μm, water) was used for the extract prepared in the reference example, and the elution conditions were 0.1% formic acid aqueous solution (solvent A) and 0.1% formic acid acetonitrile (solvent B ) Isoflavone derivatives were isolated by applying gradient elution as shown in Table 2 to the mixed solution. At this time, the amount of the injected extraction solution was 1 μl, and UPLC-ESI-TOF mass spectrometry was performed under the same conditions as in Table 3, and the results are shown in FIGS. 6 to 12.

시간 (분)time (minutes) 용매 A (%)Solvent A (%) 용매 B (%)Solvent B (%) 00 77 33 55 8585 1515 1010 7575 2525 1111 7070 3030 1212 5555 4545

세부 사항Detail 조건condition IonizationIonization ESI-negative modeESI-negative mode Capillary voltageCapillary voltage 3 kV3 kV Sample cone voltageSample cone voltage 40 V40V Desolvation gas flowDesolvation gas flow 800 L/h800 L/h Cone gas flowCone gas flow 30 L/h30L/h Desolvation temperatureDesolvation temperature 400℃400℃ Ion source temperatureIon source temperature 100℃100℃ Data collectionData collection m/z 50-1500 rage with a scan time of 0.2 s m/z 50-1500 rage with a scan time of 0.2 s Lock massLock mass Leucine-enkephalin(556.2771 Da)Leucine-enkephalin (556.2771 Da)

도 6에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 a의 질량분석 스펙트럼에서 [M+H]-는 415.0 (이론치 분자량: 416.3)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 다이드진의 원소 조성과 일치하는 C21H21O9임을 확인하였다. 피크 a는 참고문헌(J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 다이드진과 일치하는바, 화학식 2의 다이드진으로 동정하였다.As shown in FIG. 6, in the mass spectrometry spectrum of peak a in FIG. 3c, [M+H] - was 415.0 (theoretical molecular weight: 416.3). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 21 H 21 O 9 consistent with the elemental composition of daidzin. Peak a was identified as daidzin of Formula 2, as it coincided with daidzin shown in the reference literature (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324).

Figure pat00003
Figure pat00003

도 7에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 b의 질량분석 스펙트럼에서 [M+H]-는 431.1 (이론치 분자량: 432.3)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 제니스틴의 원소 조성과 일치하는 C21H21O10임을 확인하였다. 피크 a는 참고문헌(J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 제니스틴과 일치하는바, 화학식 3의 제니스틴으로 동정하였다.As shown in FIG. 7, in the mass spectrometry spectrum of peak b in FIG. 3c, [M+H] - was 431.1 (theoretical molecular weight: 432.3). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 21 H 21 O 10 consistent with the elemental composition of Genistine. Peak a was identified as Genistin of Chemical Formula 3 because it coincided with Genistin shown in the reference document (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324).

Figure pat00004
Figure pat00004

도 8에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 c의 질량분석 스펙트럼에서 [M+H]-는 501.4 (이론치 분자량: 502.4)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 말로닐 다이드진의 원소 조성과 일치하는 C24H23O12임을 확인하였다. 피크 c는 참고문헌(J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 말로닐 다이드진과 일치하는바, 화학식 4의 말로닐 다이드진으로 동정하였다.As shown in FIG. 8, in the mass spectrometry spectrum of peak c in FIG. 3c, [M+H] - was 501.4 (theoretical molecular weight: 502.4). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 24 H 23 O 12 consistent with the elemental composition of malonyl daidzin. Peak c was identified as malonyl daidzin of Chemical Formula 4, as it coincided with malonyl daidzin shown in the reference literature (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324).

Figure pat00005
Figure pat00005

도 9에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 d의 질량분석 스펙트럼에서 [M+H]-는 517.1 (이론치 분자량: 518.4)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 말로닐 제니스틴의 원소 조성과 일치하는 C24H23O13임을 확인하였다. 피크 a는 참고문헌(J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324)에 나타난 말로닐 제니스틴과 일치하는바, 화학식 5의 말로닐 제니스틴으로 동정하였다.As shown in FIG. 9, in the mass spectrometry spectrum of peak d in FIG. 3c, [M+H] - was 517.1 (theoretical molecular weight: 518.4). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 24 H 23 O 13 consistent with the elemental composition of malonyl genistin. Peak a was identified as malonyl genistin of formula 5, as it coincided with malonyl genistin shown in the reference literature (J. Agric. Food Chem. 2016, 64, 7315-7324).

Figure pat00006
Figure pat00006

도 10에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 e의 질량분석 스펙트럼에서 [M+H]-는 253.1 (이론치 분자량: 254.2)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 말로닐 다이드진의 원소 조성과 일치하는 C15H10O4임을 확인하였다. 피크 c는 참고문헌(Food Chem. 2020, 305, 125462)에 나타난 말로닐 다이드진과 일치하는바, 화학식 6의 말로닐 다이드진으로 동정하였다.As shown in FIG. 10, in the mass spectrometry spectrum of peak e in FIG. 3c, [M+H] - was 253.1 (theoretical molecular weight: 254.2). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 15 H 10 O 4 consistent with the elemental composition of malonyl daidzin. Peak c was identified as malonyl daidzin of Chemical Formula 6, as it coincided with malonyl daidzin shown in references (Food Chem. 2020, 305, 125462).

Figure pat00007
Figure pat00007

도 11에 나타낸 바와 같이, 도 3c의 피크 f의 질량분석 스펙트럼에서 M+H]-는 269.0 (이론치 분자량: 270.4)로 나타났다. 이로부터 원소 조성이 말로닐 제니스틴의 원소 조성과 일치하는 C15H10O5임을 확인하였다. 피크 a는 참고문헌(Food Chem. 2020, 305, 125462)에 나타난 말로닐 제니스틴과 일치하는바, 화학식 7의 말로닐 제니스틴으로 동정하였다.As shown in FIG. 11, in the mass spectrometry spectrum of peak f in FIG. 3c, M+H] - was 269.0 (theoretical molecular weight: 270.4). From this, it was confirmed that the elemental composition was C 15 H 10 O 5 consistent with the elemental composition of malonyl genistin. Peak a coincided with malonyl genistin shown in the reference literature (Food Chem. 2020, 305, 125462), so it was identified as malonyl genistin of formula 7.

Figure pat00008
Figure pat00008

실험예 3: 콩 식물체의 이소플라본 유도체의 함량 분석 및 비교Experimental Example 3: Analysis and comparison of content of isoflavone derivatives in soybean plants

실시예 1, 비교예 1, 비교예 2의 각 추출물을 0.2㎛의 공극을 가진 막 여과 필터를 이용하여 여과한 후 이소플라본 함량을 분석하고 총량을 정량하여 비교하였다.Each extract of Example 1, Comparative Example 1, and Comparative Example 2 was filtered using a membrane filtration filter having a pore of 0.2 μm, and then the isoflavone content was analyzed and the total amount was quantified and compared.

구체적으로 HPLC는 엘이질런트 테크놀로지사(Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany)의 Agilent 1260 system LC를 이용하였으며, 칼럼은 Lichrophore 100 RP C18 column (4.6×250 mm, 5μm, Merck, Germany)을 사용하였다. 용매 유속은 1 ml/분로 조절하였고 주입된 추출 용액의 양은 20 ㎕이었으며, 이동상은 0.2% 아세트산 수용액(용매 A)를 0.2% 아세트산를 첨가한 아세토니트릴(용매 B) 혼합용액을 사용하여 표 4와 같은 구배 용출(gradient elution)을 적용하여 이소플라본 유도체 분리하였다. 이때 DAD (diode array detector) 검출기 254 nm의 검출 파장에서 분석하였다. 정량분석에 이용한 표준용액은 시그마사(Sigma, USA)에서 구입한 순도 98%의 다이드진과 제니스틴, 다이드제인, 제니스테인을 메탄올에 용해시켜 1~100 ㎍/ml 범위로 제조하였다. 제조한 표준용액으로 HPLC 분석을 실시하여 피크 면적(peak area)으로부터 검량선을 작성하였다. Specifically, for HPLC, an Agilent 1260 system LC from Agilent Technologies Inc., Waldbronn, Germany was used, and a Lichrophore 100 RP C18 column (4.6 × 250 mm, 5 μm, Merck, Germany) was used as the column. . The solvent flow rate was adjusted to 1 ml/min, the amount of the injected extraction solution was 20 μl, and the mobile phase was a mixture of 0.2% acetic acid aqueous solution (solvent A) and acetonitrile (solvent B) to which 0.2% acetic acid was added, as shown in Table 4. Isoflavone derivatives were isolated by applying gradient elution. At this time, the DAD (diode array detector) detector was analyzed at a detection wavelength of 254 nm. Standard solutions used for quantitative analysis were prepared by dissolving 98% pure daidzine, genistin, daidzein, and genistein purchased from Sigma (USA) in methanol to have a concentration of 1 to 100 μg/ml. HPLC analysis was performed with the prepared standard solution, and a calibration curve was prepared from the peak area.

시간 (분)time (minutes) 용매 A (%)Solvent A (%) 용매 B (%)Solvent B (%) 00 100100 00 1515 9090 1010 2525 8080 2020 3535 7575 2525 4545 6565 3535 5050 6565 3535

상기와 같이 분석된 콩 식물체의 각각의 이소플라본 유도체 함량 및 총량을 표 5에 나타냈다:The content and total amount of each isoflavone derivative of the soybean plants analyzed as above are shown in Table 5:

함량 (μg/g)content (μg/g) 에틸렌 무처리Ethylene-free 에틸렌 처리ethylene treatment 비교예 1Comparative Example 1 비교예 2Comparative Example 2 실시예 1Example 1 콩잎bean leaves 콩줄기bean stalk 콩뿌리bean root 콩잎bean leaves 콩줄기bean stalk 콩뿌리bean root 콩잎bean leaves 콩줄기bean stalk 콩뿌리bean root GlycosidesGlycosides Daidzin (a) Daidzin (a) 683.16683.16 185.11185.11 220.24220.24 1236.731236.73 590.23590.23 292.88292.88 1550.281550.28 406.68406.68 868.85868.85 Genistin (b) Genistine (b) 402.41402.41 11.0111.01 14.4614.46 883.10883.10 224.99224.99 39.2539.25 1449.341449.34 78.7478.74 43.7943.79 합계Sum 1085.571085.57 196.12196.12 234.7234.7 2119.822119.82 815.22815.22 332.13332.13 2999.622999.62 485.42485.42 912.64912.64 Malonly-glycosidesMalonly-glycosides Daidzin (c) Daidzin (c) 475.07475.07 761.33761.33 529.50529.50 2644.202644.20 875.54875.54 500.51500.51 2692.372692.37 1,827.621,827.62 1908.421908.42 Genistin (d) Genistin (d) 1089.321089.32 239.14239.14 104.77104.77 2571.352571.35 554.72554.72 108.64108.64 3200.123200.12 812.52812.52 106.93106.93 합계Sum 1564.391564.39 1000.471000.47 634.27634.27 5215.555215.55 1430.251430.25 609.15609.15 5892.495892.49 2,640.142,640.14 2015.352015.35 AglyconesAglycones Daidzein (e) Daidzein (e) 431.79431.79 107.83107.83 9,645.319,645.31 220.91220.91 349.24349.24 483.16483.16 452.76452.76 138.30138.30 8467.718467.71 Genistein (f) Genistein (f) 206.11206.11 27.1527.15 822.96822.96 167.18167.18 72.4372.43 86.2986.29 251.12251.12 48.0548.05 743.74743.74 합계Sum 637.90637.90 134.98134.98 10468.2710468.27 518.16518.16 421.67421.67 569.45569.45 703.88703.88 186.35186.35 9211.459211.45 모든 실험은 5반복 진행하여 평균값으로 표시하였다.
nd: 검출되지 않음.
All experiments were repeated 5 times and expressed as the average value.
nd: not detected.

표 5에 기재된 바와 같이, 실시예 1의 콩잎의 경우, 다이드진은 1550.28 ㎍/g, 제니스틴은 1449.34 ㎍/g, 말로닐 다이드진은 2692.37 ㎍/g 및 말로닐 제니스틴은 3200.12 ㎍/g으로 비교예 1의 콩잎에 비하여 각각 2.3배, 3.6배, 5.7배 및 2.9배 증가하였고, 실시예 1의 콩 줄기의 경우 다이드진은 406.68 ㎍/g, 제니스틴은 78.74 ㎍/g, 말로닐 다이드진은 1827.62 ㎍/g 및 말로닐 제니스틴은 812.52 ㎍/g으로 비교예 1의 콩 줄기보다 각각 2.2배, 7.2배, 2.4배 및 3.4배 증가하였다. 실시예 1의 콩 뿌리의 경우 다이드진은 868.85 ㎍/g, 제니스틴은 43.79 ㎍/g 및 말로닐 다이드진은 1908.42 ㎍/g으로 비교예 1의 콩 뿌리보다 각각 2.2배, 7.2배 및 2.4배 증가하였다. As shown in Table 5, in the case of the soybean leaves of Example 1, daidzin was 1550.28 μg/g, genistin was 1449.34 μg/g, malonyl daidzin was 2692.37 μg/g, and malonyl genistin was 3200.12 μg/g. 2.3 times, 3.6 times, 5.7 times and 2.9 times respectively compared to the bean leaves of Comparative Example 1, and in the case of the bean stems of Example 1, daidzin was 406.68 μg/g, genistin was 78.74 μg/g, and malonyl da Idgin was 1827.62 μg/g and malonyl genistin was 812.52 μg/g, respectively, 2.2 times, 7.2 times, 2.4 times, and 3.4 times higher than the soybean stem of Comparative Example 1. In the case of the bean root of Example 1, daidzin was 868.85 μg/g, genistin was 43.79 μg/g, and malonyl daidzin was 1908.42 μg/g, respectively, 2.2 times, 7.2 times, and 2.4 times higher than that of the bean root of Comparative Example 1. doubled.

한편 비교예 2의 콩잎에 비하여 실시예 1의 콩잎은 다이드진, 제니스틴, 말로닐 제니스틴, 다이드제인 및 제니스테인은 각각 1.2배, 16배, 1.2배, 2.1배 및 1.5배 증가하였으며, 비교예 2에 비하여 실시예 1의 콩 줄기의 경우 말로닐 다이드진과 말로닐 제니스틴이 각각 2.1배와 1.5배 증가하였고, 실시예 1의 콩 뿌리의 경우 다이드진, 말로닐 다이드진, 다이드제인 및 제니스테인이 비교예 2에 비하여 각각 3.0배, 3.8배, 17.5배 및 8.6배로 현저히 증가하였다.On the other hand, compared to the bean leaves of Comparative Example 2, the bean leaves of Example 1 increased daidzin, genistin, malonyl genistin, daidzein, and genistein by 1.2 times, 16 times, 1.2 times, 2.1 times, and 1.5 times, respectively. Compared to 2, in the case of the bean stem of Example 1, malonyl daidzin and malonyl genistin increased by 2.1 times and 1.5 times, respectively, and in the case of the bean root of Example 1, daidzin, malonyl daidzin, daidzein and genistein significantly increased by 3.0-fold, 3.8-fold, 17.5-fold, and 8.6-fold, respectively, compared to Comparative Example 2.

각 콩 식물체의 총 이소플라본 함량을 산출하여 도 12에 나타냈다. The total isoflavone content of each soybean plant was calculated and shown in FIG. 12 .

도 12에 도시된 바와 같이, 실시예 1의 콩잎 및 콩 줄기의 총 이소플라본 함량은 각각 9595.99 ㎍/g 및 3311.91 ㎍/g이었으며 비교예 1의 콩잎 및 콩 줄기에 비하여 2.9배 및 2.5배로 현저히 증가하였다. 또한 실시예 1의 경우 비교예 2의 콩잎 및 콩 줄기의 총 이소플라본 함량에 비해 각각 1.2배 높았으나, 콩 뿌리의 경우 8.0배로 현저히 높았다.As shown in FIG. 12, the total isoflavone contents of the bean leaves and bean stems of Example 1 were 9595.99 μg/g and 3311.91 μg/g, respectively, and significantly increased by 2.9 and 2.5 times compared to the bean leaves and bean stems of Comparative Example 1. did In addition, in the case of Example 1, the total isoflavone content of soybean leaves and soybean stems of Comparative Example 2 was 1.2 times higher, respectively, but in the case of soybean roots, it was significantly higher at 8.0 times.

제조예 2: 약제학적 조성물 제조Preparation Example 2: Preparation of pharmaceutical composition

<1-1> 산제의 제조<1-1> Preparation of powder

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g, 유당 1.5 g 및 탈크 0.5 g0.1 g of soybean leaves, soybean stalks and soybean roots enriched with isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof or fractions of extracts, lactose 1.5 g and talc 0.5 g

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.A powder was prepared by mixing the above components and filling in airtight bags.

<1-2> 정제의 제조<1-2> Manufacture of tablets

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g, 락토오스 7.9 g. 결정성 셀룰로오스 1.5 g 및 마그네슘 스테아레이트 0.5 g0.1 g of soybean leaves, soybean stems and soybean roots, extracts or fractions of extracts enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 7.9 g of lactose. 1.5 g of crystalline cellulose and 0.5 g of magnesium stearate

상기의 성분들을 혼합한 후 직타법(direct tableting method)으로 정제를 제조하였다.After mixing the above components, tablets were prepared by direct tableting method.

<1-3> 캡슐제의 제조<1-3> Preparation of capsules

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g, 옥수수전분 5 g 및 카르복시 셀룰로오스 4.9 gSoybean leaves, soybean stalks and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 0.1 g of extracts or fractions of extracts thereof, 5 g of corn starch and 4.9 g of carboxy cellulose

상기의 성분들을 혼합하여 분말을 제조한 후, 상기 분말을 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라 경질 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.After preparing a powder by mixing the above ingredients, the powder was filled into a hard capsule according to a conventional capsule preparation method to prepare a capsule preparation.

<1-4> 주사제의 제조<1-4> Preparation of injections

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g, 주사용 멸균 증류수 적량, pH 조절제 적량Soybean leaves, soybean stems and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 0.1 g of extracts or fractions thereof, appropriate amount of sterilized distilled water for injection, appropriate amount of pH adjusting agent

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2 ㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.It was prepared with the above component content per 1 ampoule (2 ml) according to the conventional method for preparing injections.

<1-5> 액제의 제조<1-5> Preparation of liquid formulation

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 g, 이성화당 10 g, 만니톨 5 g, 정제수 적량Soybean leaves, soybean stems and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 0.1 g of extracts or fractions thereof, 10 g of isomerized sugar, 5 g of mannitol, appropriate amount of purified water

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고, 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합하였다. 그 다음 정제수를 가하여 전체 100 ㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.Each component was added to and dissolved in purified water according to a conventional method for preparing a liquid formulation, an appropriate amount of lemon flavor was added, and the above components were mixed. Then, purified water was added to adjust the total volume to 100 ml, and then filled into a brown bottle and sterilized to prepare a solution.

제조예 3: 건강기능성 식품의 제조Preparation Example 3: Preparation of health functional food

<1-1> 혼합차의 제조<1-1> Manufacturing of blended tea

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물과 향미를 갖는 허브 식물체를 혼합하여, 혼합차를 제조하였다.Blended tea was prepared by mixing soybean leaves, soybean stems and soybean roots, extracts thereof or fractions of extracts enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, and herb plants having flavor.

<1-2> 밀가루 식품의 제조<1-2> Manufacture of flour food

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.5 ~ 5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이를 혼합한 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.0.5 to 5.0 parts by weight of soybean leaves, soybean stems and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, extracts thereof or fractions of the extracts are added to wheat flour, and breads, cakes, cookies, crackers and noodles are prepared using the mixture. manufactured.

<1-3> 스프 및 육즙(gravies)의 제조<1-3> Manufacture of soups and gravies

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 0.1 ~ 5.0 중량부를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.0.1 to 5.0 parts by weight of soybean leaves, soybean stalks and soybean roots, extracts thereof or fractions thereof enriched with the isoflavone derivatives of the present invention were added to soups and broths to prepare health-promoting meat products and noodle soups and broths.

<1-4> 그라운드 비프(ground beef)의 제조<1-4> Manufacture of ground beef

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 10 중량부를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.Ground beef for health promotion was prepared by adding 10 parts by weight of soybean leaves, soybean stems and soybean roots, extracts thereof or fractions thereof enriched with the isoflavone derivatives of the present invention to ground beef.

<1-5> 유제품(dairy products)의 제조<1-5> Manufacture of dairy products

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 5 ~ 10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.5 to 10 parts by weight of soybean leaves, soybean stalks and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, their extracts or fractions of the extracts were added to milk, and various dairy products such as butter and ice cream were prepared using the milk.

<1-6> 선식의 제조<1-6> Manufacture of wire

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화한 후 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Brown rice, barley, glutinous rice, and adlay were alphanized by a known method, dried, roasted, and then prepared into a powder having a particle size of 60 mesh using a grinder.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.Black beans, black sesame seeds, and perilla seeds were also steamed and dried by a known method, roasted, and then prepared into powder with a particle size of 60 mesh by a grinder.

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물을 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.The isoflavone derivative-enhanced soybean leaves, soybean stems and soybean roots, extracts thereof, or fractions of the extracts are concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, dried with a spray or hot air dryer, and the dried product is pulverized with a grinder to a particle size of 60 mesh and dried. powder was obtained.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및, 본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물을 하기의 비율로 배합하여 제조하였다.It was prepared by blending the grains, seeds, and isoflavone derivative-enhanced soybean leaves, soybean stalks and soybean roots, extracts thereof or fractions of extracts of the present invention in the following ratio.

곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부), 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부), 본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물(3 중량부), 영지(0.5 중량부), 지황(0.5 중량부)Cereals (30 parts by weight of brown rice, 15 parts by weight of adlay, 20 parts by weight of barley), seeds (7 parts by weight of perilla seeds, 8 parts by weight of black beans, 7 parts by weight of black sesame seeds), soybean leaves enriched with isoflavone derivatives of the present invention, soybeans Stems and bean roots, extracts thereof or fractions of extracts (3 parts by weight), ganoderma lucidum (0.5 parts by weight), Rehmannia Root (0.5 parts by weight)

<1-7> 음료의 제조<1-7> Manufacture of beverages

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 100 mg, 구연산 100 mg, 올리고당 100 mg, 매실농축액 2 mg, 타우린 100 mg, 정제수를 가하여 전체 500 mlSoybean leaves, soybean stems and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 100 mg of extracts or fractions thereof, 100 mg of citric acid, 100 mg of oligosaccharides, 2 mg of plum concentrate, 100 mg of taurine, and purified water were added to make a total of 500 ml.

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1 시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 1 L 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.After mixing the above components according to the usual health drink manufacturing method, stirring and heating at 85 ° C. for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 1 L container, sealed and sterilized, and stored in a refrigerator according to the present invention. It is used in the manufacture of health beverage compositions.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였으나, 수요계층, 수요국가, 사용 용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합 비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the composition ratio is a mixture of ingredients suitable for a relatively favorite beverage in a preferred embodiment, the mixing ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as class of demand, country of demand, and purpose of use.

제조예 4: 화장품 제조Preparation Example 4: Cosmetics Manufacturing

<1-1> 크림 제조<1-1> Cream manufacturing

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리, 이의 추출물 또는 추출물의 분획물 4.6 중량부, 세토스테아릴알코올 2.8 중량부, 밀납 2.6 중량부, 스테아린산 1.4 중량부, 친유형모노스테아린산글리세린 2 중량부, 피이지-100 스테아레이트 1 중량부, 세스퀴올레인산소르비탈 1.4 중량부, 호호바오일 4 중량부, 스쿠알란 3.8 중량부, 폴리소르베이트 60 1.1 중량부, 마카다미아오일 2 중량부, 초산토코페롤 0.2 중량부, 메칠폴리실록산 0.4 중량부, 에칠파라벤 0.1 중량부, 프로필파라벤 0.1 중량부, Euxyl K-400 0.1 중량부, 1,3-부틸렌글리콜 7 중량부, 메칠파라벤 0.05 중량부, 글리세린 6 중량부, d-판테놀 0.2 중량부, 트리에탄올아민 0.2 중량부, pt 41891 0.2 중량부, p-H2O 46.05 0.295 중량부를 혼합하여 크림 제조방법에 따라 제조하였다.Soybean leaves, soybean stalks and soybean roots enriched with isoflavone derivatives of the present invention, 4.6 parts by weight of extracts or fractions thereof, 2.8 parts by weight of cetostearyl alcohol, 2.6 parts by weight of beeswax, 1.4 parts by weight of stearic acid, lipophilic monostearate glycerin 2 parts by weight, PEG-100 stearate 1 part by weight, sesquioleate 1.4 parts by weight, jojoba oil 4 parts by weight, squalane 3.8 parts by weight, polysorbate 60 1.1 parts by weight, macadamia oil 2 parts by weight, tocopherol acetate 0.2 parts by weight, methylpolysiloxane 0.4 parts by weight, ethylparaben 0.1 parts by weight, propylparaben 0.1 parts by weight, Euxyl K-400 0.1 parts by weight, 1,3-butylene glycol 7 parts by weight, methylparaben 0.05 parts by weight, glycerin 6 parts by weight 0.2 parts by weight of d-panthenol, 0.2 parts by weight of triethanolamine, 0.2 parts by weight of pt 41891, and 0.295 parts by weight of p-H O 46.05 were mixed and prepared according to the cream manufacturing method.

<1-2> 로션의 제조<1-2> Manufacture of Lotion

본 발명의 이소플라본 유도체가 강화된 콩잎과 콩 줄기, 콩 뿌리의 추출물 또는 추출물의 분획물 3.5 중량부, 세토스테아릴알코올 1.6 중량부, 스테아린산 1.4 중량부, 친유형모노스테아린산글리세린 1.8 중량부, 피이지-100 스테아레이트 2.6 중량부, 세스퀴올레인산소르비탈 0.6 중량부, 스쿠알렌 4.8 중량부, 마카다미아오일 2 중량부, 호호바오일 2 중량부, 초산토코페롤 0.4 중량부, 메칠폴리실록산 0.2 중량부, 에칠파라벤 0.1 중량부, 프로필파라벤 0.1 중량부, 1,3-부틸렌글리콜 4 중량부, 메칠파라벤 0.1 중량부, 산탄검 0.1 중량부, 글리세린 4 중량부, d-판테놀 0.15 중량부, 알란토인 0.1 중량부, 카르보내(2% aq. Sol) 4 중량부, 트리에탄올아민 0.15 중량부, 에탄올 3 중량부, pt 41891 0.1 중량부, p-H20 48.3 중량부를 혼합하여 로션 제조방법에 따라 제조하였다.3.5 parts by weight of extracts or fractions of extracts of soybean leaves, soybean stalks, and soybean roots enriched with the isoflavone derivatives of the present invention, 1.6 parts by weight of cetostearyl alcohol, 1.4 parts by weight of stearic acid, 1.8 parts by weight of lipophilic monostearate glycerin, PEG -100 stearate 2.6 parts by weight, sesquioleate 0.6 parts by weight, squalene 4.8 parts by weight, macadamia oil 2 parts by weight, jojoba oil 2 parts by weight, acetic acid tocopherol 0.4 parts by weight, methylpolysiloxane 0.2 parts by weight, ethylparaben 0.1 parts by weight part, 0.1 part by weight of propyl paraben, 4 part by weight of 1,3-butylene glycol, 0.1 part by weight of methylparaben, 0.1 part by weight of xanthan gum, 4 parts by weight of glycerin, 0.15 part by weight of d-panthenol, 0.1 part by weight of allantoin, carbohydrate (2% aq. Sol) 4 parts by weight, triethanolamine 0.15 parts by weight, ethanol 3 parts by weight, pt 41891 0.1 parts by weight, p-H20 48.3 parts by weight were mixed and prepared according to the lotion manufacturing method.

1:스마트-대사체 챔버
10: 챔버부
20: 도어부
21: 관찰 창
101: 광원조절장치 (적색, 청색, 백색 광원)
102: 광원조절장치 (UV-A 혹은 UV-B)
103: LED 광원부 (적색/청색/백색/UV-A 혹은 B)
104: 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집 장치
105: 온도, 습도 및 이산화탄소 측정기
106: 환기 팬
107: 온도조절 팬
108: 온도조절용 물 순환장치
109: 에틸렌 가스통
110: 에틸렌 가스 분사장치
111: 에틸렌 가스 측정기
112: 데이터 저장장치
1: Smart-metabolite chamber
10: chamber part
20: door part
21: observation window
101: light source control device (red, blue, white light source)
102: light source control device (UV-A or UV-B)
103: LED light source (red/blue/white/UV-A or B)
104: temperature and humidity automatic control and data collection device
105: temperature, humidity and carbon dioxide meter
106: ventilation fan
107: temperature control fan
108: water circulation device for temperature control
109: ethylene gas cylinder
110: ethylene gas injector
111: ethylene gas meter
112: data storage

Claims (17)

내부공간을 포함하는 챔버부; 상기 챔버부를 개폐하는 도어부; 상기 도어부 중앙에 설치된 관찰 창; 챔버부 내부 천장에 설치된 LED 광원부; 온도, 습도 및 이산화탄소 측정기; 챔버부 환기를 위한 환기 팬; 챔버부 내부 뒷면에 설치된 온도조절 팬; 에틸렌 가스 분사장치; 에틸렌 가스 측정기; LED 광원을 조절하는 광원조절장치; 온도 및 습도 자동제어 및 데이터 수집장치; 온도조절용 물 순환장치; 에틸렌 가스통; 및 데이터 저장장치를 포함하는 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 재배용 스마트-대사체 챔버.
a chamber portion including an inner space; a door unit opening and closing the chamber unit; an observation window installed in the center of the door unit; An LED light source unit installed on the ceiling inside the chamber unit; temperature, humidity and carbon dioxide meters; Ventilation fan for ventilation of the chamber; A temperature control fan installed on the back of the inside of the chamber; ethylene gas injector; ethylene gas meter; Light source control device for controlling the LED light source; Automatic temperature and humidity control and data collection device; Water circulator for temperature control; ethylene gas cylinder; and a smart-metabolite chamber for growing soybean plants enriched with isoflavone derivatives comprising a data storage device.
제 1항에 따른 스마트-대사체 챔버를 이용하여 하기 화학식 1의 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법으로,
Figure pat00009
[화학식 1]
상기 식에서, R1은 H 또는 OH이고, R2는 글루코오스 또는 글루코오스 말로네이트이며,
상기 방법은
i) 스마트-대사체 챔버에서 콩 종자 또는 발아된 콩을 파종하여 20 ~ 40일을 생육시키는 단계;
ii) 에틸렌 가스 분사장치에서 에틸렌을 분사하여 생육된 콩 식물체에 에틸렌을 1,000 ~ 10,000 ppm의 농도로 12 ~ 72 시간 처리하는 단계; 및
iii) 콩 식물체를 수확하는 단계;를 포함하는 것인 방법.
A method for cultivating soybean plants enriched with isoflavone derivatives of Formula 1 using the smart-metabolite chamber according to claim 1,
Figure pat00009
[Formula 1]
In the above formula, R 1 is H or OH, R 2 is glucose or glucose malonate,
The above method
i) sowing soybean seeds or germinated soybeans in a smart-metabolite chamber and growing them for 20 to 40 days;
ii) spraying ethylene from an ethylene gas injector to treat soybean plants grown with ethylene at a concentration of 1,000 to 10,000 ppm for 12 to 72 hours; and
iii) harvesting soybean plants; a method comprising the.
제 2항에 있어서, 단계 i)에서 파종은 발아된 콩을 이용하는 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method for cultivating soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to claim 2, wherein the sowing in step i) uses germinated soybeans.
제 2항에 있어서, 단계 i)에서 파종 후 30 ~ 35일 생육시키는 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method of claim 2, wherein in step i), the soybean plant is grown 30 to 35 days after sowing.
제 2항에 있어서, 단계 i)에서 스마트-대사체 챔버의 광원은 백색과 청색과 적색의 삼중 혼합광원이며, 광량은 100 ㎛ol/m2/s 이상이며, 온도는 20 ~ 35℃, 습도는 40 ~ 80%인 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method of claim 2, wherein in step i), the light source of the smart-metabolite chamber is a triple mixed light source of white, blue, and red, the amount of light is 100 μmol / m 2 /s or more, the temperature is 20 ~ 35 ℃, humidity Is 40 to 80%, isoflavone derivatives fortified soybean plant cultivation method.
제 2항에 있어서, 단계 ii)에서 에틸렌 농도는 5,000~1,0000 ppm인 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method of claim 2, wherein the ethylene concentration in step ii) is 5,000 to 1,0000 ppm.
제 2항에 있어서, 단계 ii)에서 에틸렌 처리 시간은 24~48 시간인 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method of claim 2, wherein the ethylene treatment time in step ii) is 24 to 48 hours.
제 2항에 있어서, 단계 ii)에서 스마트-대사체 챔버의 온도는 20~40℃, 습도는 60~90%인 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체의 재배 방법.
The method of claim 2, wherein in step ii), the temperature of the smart-metabolite chamber is 20-40 ° C and the humidity is 60-90%.
제 2항에 따른 재배 방법에 의해 제조된 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체.
Soybean plants enriched with isoflavone derivatives prepared by the cultivation method according to claim 2.
제 9항에 있어서, 콩 식물체는 콩잎, 콩 줄기 및 콩 뿌리로 구성되는 군에서 선택되는 어느 하나인 것인 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체.
The isoflavone derivative-enriched soybean plant according to claim 9, wherein the soybean plant is any one selected from the group consisting of soybean leaves, soybean stems, and soybean roots.
제 9항에 있어서, 이소플라본 유도체는 하기 화학식 2 내지 화학식 6으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상인 것인 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체:
Figure pat00010

The soybean plant enriched with isoflavone derivatives according to claim 9, wherein the isoflavone derivative is one or more selected from the group consisting of the following formulas 2 to 6:
Figure pat00010

제 10항에 있어서, 콩 잎은 이소플라본 유도체를 9,590 ㎍/g 이상 함유하고, 콩 줄기는 이소플라본 유도체를 3,300 ㎍/g 이상 함유하고, 콩 뿌리는 이소플라본 유도체를 12,130 ㎍/g 이상 함유하는 것인, 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체.

11. The method according to claim 10, wherein the soybean leaves contain at least 9,590 μg/g of isoflavone derivatives, the soybean stalks contain at least 3,300 μg/g of isoflavone derivatives, and the soybean roots contain at least 12,130 μg/g of isoflavone derivatives. Soybean plants enriched with isoflavone derivatives.

제 9항에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약제학적 조성물로,
상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것인 약제학적 조성물.
A pharmaceutical composition for the prevention and treatment of diseases caused by estrogen deficiency, containing soybean plants enriched with the isoflavone derivative according to claim 9 as an active ingredient,
The disease caused by estrogen deficiency is osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvovaginal disease, hyperlipidemia, skin aging and facial flushing any one selected from the group consisting of a pharmaceutical composition.
제 9항에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 유효성분으로 함유하는 에스트로겐 결핍에 기인한 질환의 개선용 건강기능성 식품으로,
상기 에스트로겐 결핍에 기인한 질환은 골다공증, 심장질환, 유방암, 외음질 질환, 과지질혈증, 피부노화 및 안면홍조로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나인 것인 식품.
A health functional food for improving diseases caused by estrogen deficiency, containing soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to claim 9 as an active ingredient,
The disease caused by estrogen deficiency is any one selected from the group consisting of osteoporosis, heart disease, breast cancer, vulvovaginal disease, hyperlipidemia, skin aging and facial flushing.
제 9항에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 유효성분으로 함유하는 항산화용 건강기능성 식품.
A health functional food for antioxidant containing soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to claim 9 as an active ingredient.
제 15항에 있어서, 상기 식품은 차(tea)인 것인 항산화용 건강기능성 식품.
[Claim 16] The health functional food for antioxidant according to claim 15, wherein the food is tea.
제 9항에 따른 이소플라본 유도체가 강화된 콩 식물체를 유효성분으로 함유하는 화장품.
Cosmetics containing soybean plants enriched with isoflavone derivatives according to claim 9 as an active ingredient.
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