KR20230028515A - 알파 방사성표지된 가스트린 유사체 및 cckb 수용체 양성 질환의 치료 방법에서의 그의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 알파 방사성표지된 가스트린 유사체, 및 펩티드 수용체 방사성핵종 요법 (PRRT) 적용에서의 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 건강한 조직에 대한 독성은 방지 및/또는 감소시키면서, 우수한 생체분포 및 치료 효능을 나타내는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법에서의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체의 용도에 관한 것이다.

Description

알파 방사성표지된 가스트린 유사체 및 CCKB 수용체 양성 질환의 치료 방법에서의 그의 용도
본 발명은 알파 방사성표지된 가스트린 유사체, 및 펩티드 수용체 방사성핵종 요법 (PRRT) 적용에서의 그의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 건강한 조직에 대한 독성은 방지 및/또는 감소시킬 수 있으면서, 우수한 생체분포 및 치료 효능을 나타내는, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체, 예컨대, 악티늄-255로 표지된 가스트린 유사체에 관한 것이다. 본 발명은 또한 CCKB 수용체 양성 질환, 예컨대, 종양 또는 암을 치료하는 방법에서의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체의 용도에 관한 것이다.
G-단백질 결합 수용체 (GPCR)는 세포막을 가로질러 화학적 신호를 전달하는 기능을 하는 막 단백질의 수퍼패밀리를 구성한다. 리간드가 GPCR에 결합하면, 입체구조적 변화를 일으켜 GPCR이 연관된 G 단백질을 활성화시키고 방출되도록 하며, 이는 이후에 신호 전달 경로를 작동시킨다.
그의 펩티드 리간드에 선택적으로 결합하는 G-단백질 결합 수용체 (GPCR)의 과다발현은 인간 암에 대한 펩티드 수용체 방사성핵종 요법 (PRRT)의 개발을 가능하게 한다 (Lappano et al. Nat Rev Drug Discov . 2011, 10(1), 47-60). PRRT의 가장 중요한 목표 중 하나는 표적 세포, 예컨대, 암 세포로의 방사성표지된 리간드의 높은 흡수를 달성하여, 방사선 유도성 DNA 손상 및 세포 사멸을 일으키는 것이다. 따라서, 주변의 건강한 조직을 부작용으로부터 보호하면서 표적 세포에서 방사성제약의 흡수를 증가시키는 전략이 고려되었다.
효능작용 리간드 기반 치료제에 의해 표적화되는 GPCR에서는 입체구조적 변화가 일어나게 되고, 이로 인해 G-단백질 알파 서브유닛 (Gα)에서 GDP는 GTP로 교환된다. 이어서, 수용체에서 Gα 및 Gβγ 서브유닛이 해리되면, 그 결과로 단백질 키나제 A 및 C (PKA; PKC) 뿐만 아니라, 포스포이노시티드 3-키나제 (PI3K) 및 미토겐 활성화 단백질 키나제 (MAPK)를 수반하는 다양한 키나제 신호전달 경로가 활성화된다 (O'Hayre et al. Curr Opin Cell Biol . 2014, 27, 126-135). 이어서, 활성화된 GPCR에서는 어레스틴 매개 내재화 프로세스를 통한 탈감작화가 일어나고, 그에 의해 GPCR은 분해를 위해 리소좀으로, 또는 다시 세포 표면으로의 그의 리사이클링을 위해 엔도좀으로 수송될 수 있다 (Rajagopal et al. Cell Signal. 2018, 41, 9-16). 이러한 내재화 프로세스를 통해 리간드가 접합된 방사성 핵종은 표적 세포, 예컨대, 암 세포로 전달될 수 있다.
갑상선 수질암 (MTC)은 칼시토닌 생산 C 세포에서 유래된 신경내분비 종양이다. 모든 갑상선암 중 3-5%를 차지하는 MTC는 비교적 희귀한 암 엔티티이다 (Hadoux et al. Lancet Diabetes Endocrinol . 2016, 4(1), 64-71). 불행하게도, 종래 화학요법 (일반적으로 독소루비신 단독 또는 시스플라틴과의 조합)에 대한 반응은 오직 일시적일 뿐이며, 이익은 소수의 환자에게만 제한된다. 추가로, MTC 세포는 아이오딘을 축적하지 않고, 이에 따라 방사성 아이오딘 처리에 반응하지 않는다 (Verburg et al. Methods. 201, 55(3), 230-237). 현재, MTC는 모든 갑상선암 관련 사망의 14%를 차지하며, 이는 특히 전이성 환자에서 더 우수한 치료가 필요하다는 것을 나타낸다 (Roman et al. Cancer. 2006, 107(9), 2134-2142).
소세포 폐암 (SCLC)은 가장 일반적으로 폐에서 발생하는 고도로 악성인 암이다. 이는 일반적으로 중앙에 위치한 기관지 기도에서 발생하고, 종격동을 침범하는, 크고 빠르게 발생하는 병변을 나타낸다. 질환의 제한된 병기에서 SCLC 진단을 받은 환자 중 ⅓은 화학방사선요법으로 대략 25%의 치유율을 보인다. 다른 한편으로는 확장-병기 SCLC 및 재발성 SCLC, 둘 모두는 종종 치유가 불가능한 것으로 간주되며, 이용가능한 치료, 예컨대, 화학요법은 일반적으로 완화 목적으로 투여된다. 재발성 SCLC 환자의 예후는, 약 6개월의 중앙 전체 생존 기간으로, 여전히 불량하다 (Travis et al. J Thorac Oncol. 2015, 10(9), 1243-1260).
폐외 소세포 암종 (EPSCC)은 폐 외부에서 발생하는 소세포 암종을 지칭한다. 이는 가장 일반적으로 위장관계 및 비뇨생식계에서 발생한다. EPSCC는 단지 모든 소세포 암종 사례 중 2.5% 내지 5.0%, 및 모든 암 중 0.1% 내지 0.4%를 구성하는 희귀한 신생물이다. EPSCC는 빠른 국소 진행, 조기 광범위한 전이, 및 치료 후 재발을 특징으로 하는 공격적인 자연사를 가지고 있다. EPSCC 진단을 받은 환자의 예후는 화학요법에도 불구하고, 3 내지 27개월의 중앙 생존 기간 범위 및 약 13%의 전체 5년 생존율로, 비교적 불량하다 (Nakazawa et al. Oncol Lett . 2012, 4(4), 617-620).
GPCR 패밀리에 속하는 콜레시스토키닌 B 수용체 (CCKBR, 때때로 CCK2R로도 지칭됨)의 높은 발현은 MTC, 신경교종, SCLC, 결장암, 난소암 등을 포함한 다양한 암에서 검증되었다 (Reubi et al. Cancer Res. 1997, 57(7), 1377-1386). 추가로, 소형 펩티드 호르몬인 "미니가스트린"은 높은 친화도로 CCKBR에 결합하는 것으로 알려져 있다. 따라서, 이전 연구에서는 PRRT, 특히 "테라노스틱스(theranostics)" (요법 및 진단) 적용을 위해 방사성표지된 가스트린 유사체를 사용하는 것이 제안되었다.
베어(Behr) 등은 베타- (예컨대, 90Y, 153Sm), 오제 전자- (예컨대, 111In, 67Ga) 및 알파-방사체 (예컨대, 213Bi, 225Ac)를 비롯한 다양한 방사성핵종에 대해 우수한 안정성을 갖는 킬레이팅 모이어티 (DTPA)를 포함하는 미니가스트린 유사체의 사용을 제안하였다. 그러나, 방사성표지된 가스트린 유사체는 사용된 방사성핵종에 관계없이, CCKBR을 내인적으로 발현하는 건강한 조직에, 특히, 위에 축적되는 경향이 있는 것으로 밝혀졌다. 이러한 축적은 같은 건강한 조직에서 유해한 부작용 (독성), 예컨대 출혈성 위염을 유발할 수 있으며, 결과적으로 이는 치료가 필요한 대상체에게 투여될 수 있는 방사선의 선량을 제한할 수 있다 ([J Nucl Med . 2001, 42(5):68P]; [Semin Nucl Med. 2002, 32(2), 97-109]).
WO 2015/067473 A1에는 우수한 종양 흡수 뿐만 아니라 신장에서의 낮은 축적, 즉 우수한 "종양 대 신장 비"를 나타내는, 177Lu로 표지된 화학식 DOTA-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (PP-F11N)의 가스트린 유사체 (하기에서 "177Lu-PP-F11N")가 기술되어 있다. 그러나, 최근 연구에서는 상기 화합물이 건강한 조직 (즉, 위)에 그의 내인적 CCKBR 발현으로 인해 축적될 수 있으며, 이에 따라 방사선 선량을 제한하고/거나, 유해한 부작용을 일으킬 수 있는 것으로 밝혀졌다 ([Sauter et al. J Nucl Med . 2019, 60(3), 393-399]; [Rottenburger et al. J Nucl Med . 2020, 61(4), 520-526]). 추가로, 루테튬-177은 그의 조직 투과 범위가 길기 때문에 주변의 건강한 세포에 손상을 줄 수 있으며 (십자포화 효과), 특히 작은 크기의 신생물 및/또는 진행 (전이) 단계의 질환, 예컨대, (미세)전이의 치료에 있어 불충분한 DNA 손상으로 인한 제한된 효능을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
상기 내용을 고려하여, 본 발명의 목적은 우수한 생체분포 및 치료 효능 뿐만 아니라 건강한 조직에 대해서는 낮은 독성을 갖는, PRRT 적용을 위한 화합물을 제공하는 것이다. 추가 목적은 CCKB 수용체 양성 질환, 특히, 진행 단계의 CCKB 수용체 양성 질환의 치료 방법에서 사용될 수 있는 화합물을 제공하는 것이다.
본 발명은 건강한 조직에 대한 낮은 독성 (또는 무독성) 뿐만 아니라, 우수한 생체분포 및 치료 효능을 갖는 화합물, 즉, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체를 제공한다. 특히, 본 발명자들은 알파 방사성핵종으로 특정 가스트린 유사체를 표지함으로써 내인적으로 CCKBR을 발현하는 건강한 조직에서의 (예컨대, 위에서의) 방사성 화합물의 축적, 및 표적 세포 주변의 건강한 조직의 조사에 기인하는 유해한 부작용은 방지 및/또는 감소시키면서, 우수한 생체분포 및 치료 효능을 달성할 수 있다는 것을 발견하였다. 알파 방사성핵종 표지된 가스트린 화합물은 건강한 조직, 특히, 위에서 그의 높은 내인적 CCKBR 발현으로 인해 독성 증가와 연관이 있기 때문에 이러한 발견은 특히 놀라운 것이다.
따라서, 본 발명은 하기 화학식 (1)을 갖는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체에 관한 것이다:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Axx-Asp-Phe-NH2 (1)
상기 식에서,
Axx는 메티오닌과 동배체인 아미노산을 나타내고,
Y는 알파 방사성핵종을 킬레이팅하는 모이어티를 나타낸다.
본 발명의 화합물은 PRRT 적용에서 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 또한 CCKBR 양성 질환, 특히, GC, PADC, SCLC, EPSCC, MTC, 신경교종, GEP-NET, 결장암, 난소암, 유방암, 및 임의의 CCKB 수용체 양성 질환의 치료 방법에서 사용하기 위한 알파 방사성표지된 가스트린 유사체에 관한 것이다.
본 발명은 특히 하기 실시양태 ("항")를 포함한다:
1. 하기 화학식 (1)을 갖는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Axx-Asp-Phe-NH2 (1)
상기 식에서,
Axx는 메티오닌과 동배체인 아미노산을 나타내고,
Y는 알파 방사성핵종을 킬레이팅하는 모이어티를 나타낸다.
2. 제1항에 있어서, Axx가 이소류신 (Ile), 노르류신 (Nle), 2-아미노-5-헵텐산, 호모-노르류신 (호모-Nle), 호모-시스테인 (호모-Cys), 2-아미노-4-메톡시부탄산, 텔루로메티오닌 (Te-Met), 셀레노메티오닌 (Se-Met) 및 페닐글리신 (Phg)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산, 바람직하게는 Nle를 나타내는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, Y가 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA), 1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA), 2-(4-이소티오시아나토벤질)-1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA-NCS), [6,6'-({9-히드록시-1,5-비스(메톡시카르보닐)-2,4-디(피리딘-2-일)-3,7-디아자비시클로[3.3.1]노난-3,7-디일}비스(메틸렌))디피콜린산] (H2Bispa2), N,N '-비스[(6-카르복시-2-피리딜)메틸]-4,13-디아자-18-크라운-6 (마크로파(Macropa)), 6-[[16-[(6-카르복시피리딘-2-일)메틸]-1,4,10,13-테트라옥사-7,16-디아자시클로옥타덱-7-일]메틸]-4-이소티오시아나토피리딘-2-카르복실산 (마크로파-NCS), 비스(페닐이미노디아세테이트)-디아자크라운 에테르 (마크로피드(Macropid)) 또는 t-Bu-칼릭스[4]아렌 테트라카르복실산으로부터, 바람직하게는 DOTA 또는 HEHA로부터, 더욱 바람직하게는 DOTA로부터 유도된 모이어티인 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 방사성핵종이 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 211At, 223Ra, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터, 바람직하게는 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터, 및 더욱 바람직하게는 213Bi, 225Ac 및 149Tb로부터 선택되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 방사성핵종이 225Ac인 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
알파 방사성핵종이 하기 (i) 및 (ii):
(i) 20 keV/㎛ 내지 190 keV/㎛, 바람직하게는 30 keV/㎛ 내지 160 keV/㎛, 더욱 바람직하게는 50 keV/㎛ 내지 150 keV/㎛, 특히, 약 80 keV/㎛의 선형 에너지 전달 (LET); 및
(ii) 20 ㎛ 내지 150 ㎛, 바람직하게는 30 ㎛ 내지 120 ㎛, 더욱 바람직하게는 40 ㎛ 내지 100 ㎛의 조직 투과 범위 (TPR)
중 적어도 하나를 충족시키는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (2)로 표시되는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (2)
상기 식에서, Y는 225Ac를 킬레이팅하는 DOTA로부터 유도되는 모이어티를 나타낸다.
8. CCKB 수용체 양성 질환(들) 진단을 받은 인간 대상체에게 치료 유효 선량의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체를 투여하는 단계를 포함하고;
여기서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 것인,
하나 이상의 CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
9. 제8항에 있어서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체가 하기 화학식 (2)로 표시되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (2)
상기 식에서, Y는 225Ac를 킬레이팅하는 DOTA로부터 유도되는 모이어티를 나타낸다.
10. 제8항 또는 제9항에 있어서, CCKB 수용체 양성 질환(들)이 위암 (GC), 췌장 선암종 (PADC), 소세포 폐암 (SCLC), 폐외 소세포 암종 (EPSCC), 갑상선 수질암 (MTC), 신경교종, 위장관췌장 신경내분비 종양 (GEP-NET), 결장암, 난소암, 유방암, 및 임의의 CCKB 수용체 양성 암 또는 종양으로부터 선택되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, CCKB 수용체 양성 질환(들)이 SCLC, EPSCC 및 MTC로부터, 바람직하게는 SCLC 및 MTC로부터 선택되고, 더욱 바람직하게는 MTC인 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 대상체에게 투여되는 치료 유효 선량이 10 내지 10,000 kBq/kg, 바람직하게는 30 내지 1000 kBq/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 kBq/kg인 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
13. CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법으로서,
치료 유효 선량의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체를 그를 필요로 하는 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고;
여기서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같고, 바람직하게는 제7항에서 정의된 바와 같은 것인 방법.
도 1 - A431/CCKBR 세포에서 177Lu-PP-F11N 및 225Ac-PP-F11N의 내재화. 177Lu-PP-F11N 또는 225Ac-PP-F11N과의 2 h 인큐베이션 후 내재화 및 세포 결합 방사능을 측정하였다. 모든 실험은 삼중으로 검정하였다. 막대는 평균 ± SD를 나타낸다.
도 2 - 이종이식된 누드 마우스에서의 225Ac-PP-F11N의 생체분포. 조직 1 그램당 주사된 총 방사능의 비율(%) (% i.A./g)로서 제시된, 225Ac-PP-F11N 투여 후 1, 4, 24, 48 h 및 7일째의 종양, 신장, 위, 간, 골 및 혈액에서의 방사능 흡수를 나타낸다. 막대는 각 시점에 대한 평균 ± SD (n=4)를 나타낸다.
도 3 - 이종이식된 누드 마우스에서의 225Ac-PP-F11N 및 177Lu-PP-F11N의 생체분포. 225Ac-PP-F11N (검은색 막대) 및 177Lu-PP-F11N (흰색 막대) 주사 후 4 h째의 명시된 기관내에서의 방사능 흡수의 비교 분석. 막대는 평균 ± SD (n=4)를 나타낸다. *P<0.01, **P<0.01, ***P<0.001.
도 4 - 225Ac-PP-F11N 처리된 마우스에서의 종양 성장 억제 및 수명 연장. 종양 이식 후, PBS 또는 30, 45, 60, 90 및 120 kBq의 정제된 225Ac-PP-F11N을 명시된 바와 같이 A431/CCKBR 종양 보유 누드 마우스 군에 투여하였다 (n=9, 다음을 제외: 대조군 및 60 kBq 군; n=18). 상이한 처리군에서의 종양 성장 곡선. 값은 평균 ± SD로 표시되어 있다.
도 5 - 처리 후 신장 및 위 절편의 조직학적 분석. 대조군, 60 및 120 kBq 225Ac-PP-F11N 처리된 A431/CCKBR 이종이식된 누드 마우스로부터 단리된 기관의 HE 염색의 대표 이미지.
도 6 - 45 kBq 또는 60 kBq의 225Ac-PP-F11N 처리 후 SPECT/CT 이미징. 45 kBq (좌측) 및 60 kBq (우측)의 225Ac-PP-F11N 처리 후 종양이 검출되지 않는 마우스 2마리의 111In-PP-F11N을 사용한 SPECT-CT 이미지.
도 7 - 225Ac-PP-F11N의 품질 관리. HPLC 정제 동안 수집된 분획으로부터의 샘플을 박층 크로마토그래피 (TLC) 플레이트 (물/아세토니트릴, 40/60, v/v 중 0.1 M 숙신산)에서 용리시키고, 용리를 중단시켰다. 용리 후 30 min째에 인광체 스크린 (멀티센시티브(MultiSensitive); 퍼킨엘머(PerkinElmer)로부터 이용가능)을 TLC 플레이트에 노출시킨 후 (노출 시간: 2 min), 이어서, 사이클론 플러스 스토리지 포스포르 시스템(Cyclone Plus Storage Phosphor System) (퍼킨엘머)을 사용하여 300 dpi 해상도로 스캐닝하여 방사능 분포를 측정하였다. (A) 주로 비결합 방사성핵종 (221Fr, 213Bi 및 209Tl)에 기인한 감마 방출이 관찰되었다. (B) 용리 후 24시간째에 인광체 스크린 (멀티센시티브; 퍼킨엘머)을 동일한 TLC 플레이트에 노출시킨 후 (노출 시간: 2 min), 이어서, 스캐닝하여 방사능 분포를 측정하였고, 이는 여기서 오직 α-붕괴된 225Ac로부터 유래된 딸 방사성핵종만을 보여준다.
1. 정의
본원에서 사용된 "가스트린 유사체"라는 표현은 CCKBR에 결합할 수 있는 내인성 펩티드 호르몬 "가스트린"과 구조적으로 관련된 화합물 (펩티드) 부류를 지칭한다. 특히, "가스트린 유사체"라는 표현은 C-말단 펜타펩티드 Gly-Trp-Dxx-Asp-Phe-NH2를 함유하는 화합물을 정의하며, 여기서, Dxx는 CCKBR-결합 내인성 펩티드 호르몬, 예컨대, 가스트린, 콜레시스토키닌 (CCK) 및 미니가스트린 (Leu-(Glu)5-Glu-Glu-Glu-Glu-Ala-Tyr-Gly-Trp-Met-Asp-Phe-NH2)에서 발견되는 C-말단 아미노산 서열과 유사한, 메티오닌과 동배체인 아미노산이다. 가스트린 유사체는 예컨대, 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA)과 같은 방사성 금속에 대한 킬레이팅 모이어티의 공유 부착을 허용하기 위해 화학적으로 변형될 수 있다.
본원에서 사용된, 용어 "아미노산"은 적어도 하나의 아미노 기 및 적어도 하나의 산성 기, 바람직하게는 카르복실 기를 함유하거나, 또는 그로부터 유도되는 화합물을 지칭한다. 아미노 기와 산성 기 사이의 거리는 특별히 제한되지 않는다. α-, β- 및 γ-아미노산이 적합하지만, α-아미노산, 및 특히 α-아미노 카르복실산이 특히 바람직하다. 이 용어는 자연적으로 발생된 아미노산 뿐만 아니라, 자연에서 발견되지 않는 합성 아미노산, 둘 모두 포함한다. 달리 언급되지 않거나, 문맥에 의해 달리 명시되지 않는 한, 인접한 아미노산 기 사이의 모든 연결은 펩티드 (백본 아미드) 결합에 의해 형성된다. 본원에 기술된 펩티드는 통상적인 아미노-에서 카르복시- 방향으로 왼쪽에서 오른쪽으로 열거되어 있다.
본원에서 사용된, "메티오닌과 동배체인 아미노산" (또는 "메티오닌 생동배체")이라는 표현은 메티오닌과 유사한 형태 및/또는 전자 특성을 갖는 천연 또는 비천연 아미노산을 지칭한다. 그 결과, 메티오닌 잔기가 메티오닌과 동배체인 아미노산으로 대체된 화합물은 메티오닌을 함유하는 원래 화합물과 동일한 특성, 예컨대, 결합 친화도, 효능작용 활성 등을 나타낸다. 여기서, 용어 "동배체"는 아미노산의 백본 및/또는 측쇄가 예컨대, 입체적으로, 전자적으로 등 메티오닌을 모방하도록 정의된다는 점에서 본질적으로 메티오닌과 동배체인 모든 아미노산을 포함하는 것을 의미한다. 메티오닌과 동배체인 아미노산의 예로는 이소류신 (Ile), 노르류신 (Nle), 호모-시스테인 (호모-Cys), 2-아미노-5-헵텐산, 호모-노르류신 (호모-Nle), 2-아미노-4-메톡시부탄산, 텔루로-메티오닌 (Te-Met), 셀레노-메티오닌 (Se-Met), 및 페닐글리신 (Phg)을 포함한다. 일부 측면에서, "메티오닌과 동배체인 아미노산"이라는 표현은 미니가스트린의 아미노산 서열에서 메티오닌을 대체하는 경우, CCKBR에 대한 미니가스트린의 약리학적 (효능작용) 활성의 적어도 20%, 바람직하게 적어도 50%, 더욱 바람직하게 적어도 80%를 유지하는 가스트린 유사체를 생성하는 아미노산 잔기를 지칭한다. 약리학적 활성은 문헌 [Blaeker et al. (Regulatory Peptides 2004, 118, 111-117)]에 기술된 바와 같이, 가스트린 유사체 자극 세포에서 칼시토닌 수준의 세포내 증가를 측정함으로써 결정될 수 있다.
본원에서 사용된, "알파 방사성핵종을 포함하는 모이어티" (또는 "알파 방사성핵종을 킬레이팅하거나, 또는 (공유) 결합하는 모이어티)라는 표현은 (i) 알파 방사성핵종에 전자를 제공하여 그와 함께 배위 착체를 형성, 즉, 그와 함께 적어도 하나의 배위 공유 결합 (쌍극자 결합)을 형성함으로써 배위 착체를 형성할 수 있거나, 또는 (ii) 예컨대, 211At 및 223Ra와 같은 알파 방사성핵종에 공유 결합할 수 있는 모이어티 (킬레이팅제 또는 리간드)를 지칭한다. 킬레이팅 메커니즘은 킬레이팅제 및/또는 방사성핵종에 의존한다. 예를 들어, DOTA는 카르복실레이트 및 아미노 기 (공여자 기)를 통해 방사성핵종, 예컨대, 225Ac와 배위결합하여 안정성이 높은 착체를 형성할 수 있는 것으로 간주된다 (Dai et al. Nature Com. 2018, 9, 857). 알파 방사성핵종, 예컨대, 225Ac를 킬레이팅할 수 있는 모이어티의 비제한적 예로는 DOTA, 1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA), 2-(4-이소티오시아나토벤질)-1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA-NCS), [6,6'-({9-히드록시-1,5-비스(메톡시카르보닐)-2,4-디(피리딘-2-일)-3,7-디아자비시클로[3.3.1]노난-3,7-디일}비스(메틸렌))디피콜린산] (H2Bispa2), N,N '-비스[(6-카르복시-2-피리딜)메틸]-4,13-디아자-18-크라운-6 (마크로파), 6-[[16-[(6-카르복시피리딘-2-일)메틸]-1,4,10,13-테트라옥사-7,16-디아자시클로옥타덱-7-일]메틸]-4-이소티오시아나토피리딘-2-카르복실산 (마크로파-NCS), 비스(페닐이미노디아세테이트)-디아자크라운 에테르 (마크로피드), t-Bu-칼릭스[4]아렌 테트라카르복실산을 포함한다.
본원에서 사용된, "화합물로부터 유도된 모이어티"라는 표현은 그의 유도 기점이 된 분자와는 인접한 모이어티에의 결합을 담당하는 구조적 요소(들)만이 상이한, 인접한 모이어티에 결합된 모이어티 (Y)을 지칭한다. 이는 기존 작용기에 의해 형성된 공유 결합 또는 상기 목적을 위해 새로 도입된 인접한 작용기에 의해 형성된 공유 결합을 포함할 수 있다. 예를 들어, "1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA)으로부터 유도된 모이어티"라는 표현은 그의 카르복실 기 중 하나를 통해 펩티드 *-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Axx-Asp-Phe-NH2의 N-말단에 공유적으로 부착되어 펩티드 (아미드) 결합을 형성하는 DOTA 분자를 지칭한다 (*는 DOTA 모이어티에 대한 공유 부착을 나타낸다).
이와 관련하여 "알파 방사성핵종" (또는 "알파 입자 방출 핵종," "알파 방사체," "알파")이라는 표현은 알파 입자를 방출하여 방사성 붕괴를 겪는 불안정한 원소 (방사성핵종)를 지칭한다. 알파 방사성핵종의 비제한적 예로는 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 211At, 223Ra, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th를 포함한다.
본원에서 사용된, "암"이라는 용어는 악성 종양을 형성하는 비정상적 세포 성장을 특징으로 하며, 다른 조직 또는 부분으로 침입하거나, 또는 확산되어 전이로 알려져 있는 "속발성" 종양을 형성할 수 있는 잠재성을 가질 수 있는, 포유동물 조직의 병리학적 상태를 의미한다. 종양은 하나 이상의 암 세포를 포함한다.
본원에서 사용된, "내재화"라는 용어는 예컨대, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체와 같은 분자가 세포막에 의해 포식되고, 세포 내로 이입되는 생물학적 프로세스를 지칭한다. 그 결과, 예컨대, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체와 같은 분자는 세포 내부에 존재하게 된다.
"세포 흡수"라는 표현은 분자가 내재화되고/거나, 세포막 상에 결합되는 생물학적 프로세스를 지칭한다. 그 결과, 분자는 세포 내부에 뿐만 아니라, 세포막에 존재할 수 있다. 유사한 방식으로, "종양 흡수" (또는 "종양 세포 흡수")라는 표현은 분자, 예를 들어 방사성표지된 가스트린 유사체가 종양 (암) 세포에 의해 흡수되는 생물학적 프로세스를 지칭한다. 그 결과, 분자, 예를 들어 방사성표지된 가스트린 유사체는 종양 (암) 세포 내부에 및/또는 세포막에 존재할 수 있다.
본원에서 사용된, "CCKB 수용체 양성 질환"이라는 표현은 세포 표면 상에서 CCKBR의 (과다)발현을 특징으로 하는 질환, 예컨대, 종양 또는 암을 지칭한다 ([Reubi et al. Cancer Res. 1997, 57(7), 1377-1386]; [Dufresne et al. Physiol Rev 2006, 86, 805-847]). 특히, 세포 표면 상의 CCKBR의 (과다)발현은 관련 기술분야에 공지된 기술에 의해, 예컨대, 하기 추가로 기술되는 바와 같은 면역조직화학법 또는 웨스턴 블롯 분석에 의해 결정될 수 있다. CCKBR 양성 질환의 비제한적인 예로는 위암(gastric cancer) (위암(stomach cancer)) (GC), 췌장 선암종 (PADC), 소세포 폐암 (SCLC), 폐외 소세포 암종 (EPSCC), 갑상선 수질암 (MTC), 신경교종, 위장관췌장 신경내분비 종양 (GEP-NET), 결장암, 난소암, 유방암을 포함한다. 본 개시내용과 관련하여, "CCKB 수용체 양성 질환"이라는 표현은 또한 원발성 종양의 신체의 또 다른 부분으로의 전이성 확산으로부터 발생한 질환, 즉, 진행 단계의 질환을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, CCKB 수용체 질환 (암)이 결장에서 발생하여 신체의 또 다른 부분으로 전이되는 경우, 신체의 상기 다른 부분에서 발견되는 암 세포는 (CCKBR 양성) 결장암 세포이다.
본원에서 사용된, "CCKBR 양성 질환 진단을 받은 인간 대상체"이라는 표현은 상기 언급된 CCKBR 양성 질환 중 적어도 하나와 관련하여 양성 진단을 받은, 예를 들어, MTC 또는 SCLC 양성 진단을 받은 인간 대상체를 지칭한다. 이와 관련하여 질환(들)의 진단 및 상태는 예컨대, 미국 암 학회(American Cancer Society: ACS)로부터 이용가능한 것과 같은 확립된 스크리닝 가이드라인에 기초하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 예를 들어, "양성 진단"은 대상체가 질환의 조직학적 및/또는 세포학적 상태 및 임의적으로 하기 중 하나 이상의 것을 갖는다는 것을 의미할 수 있다:
(1) 적어도 1회의 전신 치료 요법 후 방사선학적으로 기록된 질환 진행 또는 재발,
(2) 마지막 항암 요법 후 기록된 고형 종양의 반응 평가 기준 1.1(Response Evaluation Criteria in Solid Tumors 1.1: RECIST 1.1)에 따라 적어도 하나의 방사선 조사되지 않은 두개외 측정가능한 표적 병변,
(3) 고형 종양의 양전자 방출 단층촬영 반응 기준 1.0(Positron Emission Tomography Response Criteria in Solid Tumors 1.0) (RECIST 1.0)에 따라 적어도 하나 종양 병변, 및
(4) 미동부 동부 종양 연구 단체(Eastern Cooperative Oncology Group: ECOG) 점수 0-2.
본원에서 사용된, "유효 선량" (또는 "유효량")이라는 표현은 질환(들)을 치료하기 위해 대상체 (환자)에게 투여되는 방사능의 총량 (단위: 베크렐/킬로그램), 예컨대, 예를 들어, 암 세포 증식을 감소 또는 중단시키고/거나, 암 세포수를 감소시키는 데 필요한 선량을 지칭한다. 치료 과정이 1회 이상의 (투여) 사이클을 포함하는 경우, 유효 선량은 전체 과정, 즉, 모든 사이클에 걸쳐 대상체에게 투여된 방사능의 총량을 지칭한다. 이와 관련하여 "사이클"이라는 용어는 화합물을 대상체에게 투여한 후 (치료 기간), 이어서, 또 다른 사이클로 진입하기 전에 환자에 휴식을 허용하는 (휴식 기간) 기간을 의미한다. 치료는 1회 이상의 사이클, 예컨대, 최대 10회의 사이클을 포함할 수 있다. 연속 사이클을 일반적으로 "과정"이라고 하며, 이는 각 사이클의 기간에 따라 수개월, 예컨대, 3 내지 6개월에 걸쳐 지속될 수 있다.
유효 선량은 선량측정법에 기초하여 의사에 의해 결정될 수 있다. 임의의 특정 대상체/환자에 대한 유효 선량 및 투여 빈도는 달라질 수 있으며, 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 모드 및 시간, 배설 속도, 질환의 중증도, 및 개체가 받고 있는 요법을 포함하는 다양한 인자에 의존한다. 의사는 유효 선량을 결정할 때 상기와 같은 인자를 고려한다.
본 설명에서 "바람직한" 실시양태/특징이 언급되는 경우, 이러한 "바람직한" 실시양태/특징의 조합은 또한 이러한 "바람직한" 실시양태/특징의 조합이 기술적으로 의미가 있는 한 개시된 것으로 간주될 것이다.
이하, 본 발명의 설명 및 청구범위에서, "함유하는" 및 "포함하는"이라는 용어의 사용은 언급된 구성요소 이외에도, 언급되지 않은 추가적인 구성요소가 존재할 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 그러나, 이러한 용어들은 더욱 제한된 실시양태로서 "~로 이루어진"이라는 용어도 개시하며, 이로 인해 기술적으로 의미가 있는 한, 언급되지 않은 추가적인 구성요소는 존재하지 않을 수 있다는 것으로 이해되어야 한다.
문맥상 달리 명시되지 않는 한, 및/또는 대안적 의미가 본원에서 명시적으로 제공되지 않는 한, 모든 용어는 [IUPAC Gold Book (status of 1st Nov. 2017)] 또는 [Dictionary of Chemistry, Oxford, 6th Ed]에 반영된 바와 같은 관련 기술분야에서 일반적으로 허용되는 의미를 갖는 것으로 의도된다.
2. 개요
본 발명은 알파 방사성핵종, 특히, 225Ac를 이용하여 특정 가스트린 유사체 (즉, 화학식 (1)의 가스트린 유사체)를 표지하면, 건강한 조직, 즉, CCKBR을 내인적으로 발현하는 조직 및/또는 표적 세포 주변의 조직에 대한 독성 (유해한 부작용)은 방지 및/또는 감소되면서, 표적 세포, 예컨대, 암 세포 내로 잘 흡수되고, 그 결과로 우수한 생체분포 및 치료 효능을 얻을 수 있다는 발견에 기초한다. 가능하게는 방출된 알파 입자의 높은 에너지에 기인하여 알파 방사성표지된 화합물의 사용이 세포독성 부작용, 예컨대, 방사선 신병증, 출혈성 위염 등과 연관이 있을 수 있기 때문에 상기 결과는 특히 놀라운 것이다.
본 발명의 화합물은 CCKBR 양성 질환, 특히 GC, PADC, SCLC, EPSCC, MTC, 신경교종, GEP-NET, 결장암, 난소암, 유방암, 및 임의의 CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법에서 사용될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물은 진행 (전이성) 단계의 질환에 도달한 CCKBR 양성 질환, 예를 들어, 전이성 MTC 또는 전이성 SCLC를 치료하는 데 특히 적합할 것으로 예상된다.
3. 알파 방사성표지된 가스트린 유사체
본 발명은 알파 방사성핵종, 즉, 225Ac로 표지된 가스트린 유사체 (화합물)에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 CCKBR-발현 표적 세포, 예컨대, 암 세포에 대하여 우수한 생체내 생체분포 및 치료 효능을 나타낸다. 추가로, 본 발명의 화합물은 CCKBR을 내인적으로 발현하는 조직 및/또는 표적 세포 주변의 조직에 대해 낮은 독성 (또는 독성 없음)을 나타낸다.
어느 이론에도 얽매이지 않으면서, 화학식 (1)의 가스트린 유사체를 사용하면, CCKBR-발현 세포에서 우수한 표적화 및 흡수 효과를 달성하여 우수한 생체분포를 얻을 수 있고, 동시에, 알파 방사성핵종으로 표지하면 방출된 알파 입자의 높은 에너지에 기인하여 우수한 치료 효능 (즉, 표적 세포에서 높은 수준의 DNA 손상)을 달성할 수 있다고 여겨진다. 추가로, 본 발명자들은 놀랍게도 알파 방사성표지된 가스트린 유사체의 사용이 CCKBR을 내인적으로 발현하는 건강한 조직에서 (예컨대, 위에서) 및/또는 표적 세포 주변의 건강한 조직에서 유해한 부작용 (독성)을 유발하지 않는다는 것을 관찰하였다. 이러한 결과는 가정컨대, 본 발명의 화합물이 건강한 조직에서 낮은 수준의 축적을 나타내고, 또한 알파 방사성핵종의 짧은 투과 범위에 기인하여 주변 조직에 대한 알파 방사성핵종의 불리한 방사선이 크게 감소 (즉, 십자포화 효과 감소)된다는 사실에 기인하는 것이다. 이는 투과 범위가 길어 주변의 건강한 조직에 손상을 줄 수 있는 (십자포화 효과) 다른 방사성핵종, 예컨대, 177Lu과는 대조를 이룬다.
본 발명의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 하기 화학식 (1)로 표시되는 화합물이다:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Axx-Asp-Phe-NH2 (1)
상기 식에서, Axx는 메티오닌과 동배체인 아미노산을 나타내고, Y는 알파 방사성핵종을 킬레이팅하는 모이어티를 나타낸다.
한 실시양태에서, Axx는 이소류신 (Ile), 노르류신 (Nle), 2-아미노-5-헵텐산, 호모-노르류신 (호모-Nle), 호모-시스테인 (호모-Cys), 2-아미노-4-메톡시부탄산, 텔루로메티오닌 (Te-Met), 셀레노메티오닌 (Se-Met) 및 페닐글리신 (Phg)으로부터 선택되는 메티오닌과 동배체인 아미노산을 나타낸다. 바람직하게는 Axx는 Nle이다.
한 실시양태에서, Y는 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA), 1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA), 2-(4-이소티오시아나토벤질)-1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA-NCS), [6,6'-({9-히드록시-1,5-비스(메톡시카르보닐)-2,4-디(피리딘-2-일)-3,7-디아자비시클로[3.3.1]노난-3,7-디일}비스(메틸렌))디피콜린산] (H2Bispa2), N,N '-비스[(6-카르복시-2-피리딜)메틸]-4,13-디아자-18-크라운-6 (마크로파), 6-[[16-[(6-카르복시피리딘-2-일)메틸]-1,4,10,13-테트라옥사-7,16-디아자시클로옥타덱-7-일]메틸]-4-이소티오시아나토피리딘-2-카르복실산 (마크로파-NCS), 비스(페닐이미노디아세테이트)-디아자크라운 에테르 (마크로피드) 또는 t-Bu-칼릭스[4]아렌 테트라카르복실산으로부터 선택되는, 킬레이팅제로부터 유도된 모이어티를 나타낸다. 바람직하게는 Y는 DOTA 또는 HEHA로부터 유도된 모이어티를 나타낸다. 더욱 바람직하게는 Y는 DOTA이다.
바람직한 실시양태에서, Axx는 Nle이고, Y는 DOTA이다. 하기에서, 이 화합물은 "PP-F11N"으로 명명된다.
한 실시양태에서, 알파 방사성핵종은 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 211At, 223Ra, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터 선택된다. 바람직하게는 알파 방사성핵종은 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터 선택된다. 더욱 바람직하게는 알파 방사성핵종은 213Bi, 225Ac 및 149Tb로부터 선택되고, 가장 바람직하게는 알파 방사성핵종은 225Ac이다.
한 실시양태에서, 알파 방사성핵종은 하기 (i) 및 (ii):
(i) 20 keV/㎛ 내지 190 keV/㎛, 바람직하게는 30 keV/㎛ 내지 160 keV/㎛, 더욱 바람직하게는 50 keV/㎛ 내지 150 keV/㎛, 특히, 약 80 keV/㎛의 선형 에너지 전달 (LET); 및
(ii) 20 ㎛ 내지 150 ㎛, 바람직하게는 30 ㎛ 내지 120 ㎛, 더욱 바람직하게는 40 ㎛ 내지 100 ㎛의 조직 투과 범위 (TPR)
중 적어도 하나, 및 바람직하게는 그 둘 모두를 충족시킨다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 하기 화학식 (2)로 표시된다:
Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (2)
상기 식에서, Y는 225Ac를 킬레이팅하는 DOTA로부터 유도된 모이어티를 나타낸다. 하기에서, 이 화합물은 "225Ac-PP-F11N"으로 명명된다.
알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 인간 의약에서 사용하기 위한 제약 조성물 형태로 제공될 수 있다. 상기 조성물은 치료 유효 선량의 본 발명의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체 및 하나 이상의 다른 성분, 예컨대, 담체, 희석제 등을 포함한다. 한 측면에서, 제약 조성물은 mTOR 억제제, 특히 라파마이신 및/또는 라파로그를 포함할 수 있다. 또 다른 측면에서, 제약 조성물은 mTOR 억제제를 함유하지 않고, 특히, 라파마이신 및/또는 라파로그를 함유하지 않는다. 이와 관련하여, 용어 "mTOR 억제제"는 포유동물 라파마이신 표적 (mTOR)을 억제하는 화합물을 지칭한다. 용어 "라파마이신" (시롤리무스(Sirolimus))은 포유동물 라파마이신 표적 (mTOR)을 억제함으로써 면역억제 특성을 나타내는 것으로 관련 기술분야에 공지된 마크롤라이드 화합물을 지칭하는 반면, 용어 "라파로그" ("라파마이신-유사체"를 의미)는 FK 결합 단백질 12에 결합하여 복합체 1 중 포유동물 라파마이신 표적 (mTORC1)을 억제하는 것으로 공지된, 라파마이신과 구조적으로 관련된 화합물 부류를 지칭한다. 라파로그의 예로는 에버롤리무스(Everolimus) (RAD001), 템시롤리무스(Temsirolimus) (CCI-779) 및 리다포롤리무스(Ridaforolimus) (AP-23573, MK-8669)를 포함한다.
4. 질환의 치료 방법에서의 화합물의 용도
본 발명의 화합물은 하나 이상의 CCKBR 양성 질환을 치료하는 방법에 사용될 수 있다. 치료는 종양 세포의 표적화된 파괴를 통해 CCKBR 양성 질환(들)의 진행을 예방, 감소 또는 정지시키는 것을 목적으로 하는 치료적 및/또는 예방적 치료일 수 있다. 일부 측면에서, 치료는 치료를 받지 않은 경우에 예상되는 생존기간과 비교하여 환자의 생존기간을 연장시킬 수 있다.
CCKBR 양성 질환(들)을 치료하는 방법은 하나 이상의 CCKBR 양성 질환 진단을 받은 인간 대상체에게 치료 유효 선량의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체 (또는 상기를 포함하는 제약 조성물)를 투여하는 단계를 포함한다. 대상체에게 투여되는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 상기 기술된 화학식 (1)로 표시되는 화합물이다. 바람직하게는 대상체에게 투여되는 화합물은 알파 방사성핵종으로 표지된 PP-F11N이다.
한 바람직한 실시양태에서, 대상체에게 투여되는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 225Ac-PP-F11N이다.
표적 세포가 CCKBR 발현을 특징으로 하는 한 (CCKBR 양성), 치료하고자 하는 CCKB 수용체 질환(들)은 특별히 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 치료하고자 하는 CCKB 수용체 양성 질환(들)은 위암 (위암) (GC), 췌장 선암종 (PADC), 소세포 폐암 (SCLC), 폐외 소세포 암종 (EPSCC), 갑상선 수질암 (MTC), 신경교종 (예컨대, 성상세포종), 위장관췌장 신경내분비 종양 (GEP-NET), 결장암, 난소암, 유방암, 및 임의의 CCKB 수용체 양성 암 또는 종양으로부터 선택된다.
한 실시양태에서, 치료하고자 하는 CCKB 수용체 양성 질환(들)은 SCLC, EPSCC 및 MTC로부터 선택된다. 바람직하게는 치료하고자 하는 CCKB 수용체 양성 질환(들)은 SCLC 및/또는 MTC이다. 더욱 바람직하게는 CCKB 수용체 양성 질환은 MTC이다.
추가로, 방출된 알파 입자가 파종성 암 세포에서 높은 수준의 DNA 이중 가닥 파단을 유도할 수 있기 때문에, 본 발명의 화합물, 예컨대, 225Ac-PP-F11N은 진행 (전이성) 단계에 도달한 상기 질환들 중 적어도 하나인 질환(들) 진단을 받은 대상체에게 투여될 수 있대 우수한 치료 효능을 보일 것으로 예상된다. 가정컨대, DNA 수복 메커니즘의 활성화 및 방사선저항성에 기인하는, 파종성 질환 치료에 대하여 불충분한 효능을 보일 수 있는 다른 방사성핵종, 예컨대, 루테튬-177과 대조를 이룬다. 따라서, 치료하고자 하는 질환(들)은 진행 단계의 임의의 CCKB 수용체 양성 질환, 바람직하게는 진행 단계의 상기 언급된 CCKB 수용체 양성 질환으로부터 선택되는 하나 이상의 것, 특히, 전이성 MTC 또는 전이성 SCLC일 수 있다.
관찰되는 치료 효과는 암 세포수 감소, 종양 크기 축소, 말초 기관으로의 암 세포 침윤 또는 지연, 종양 성장 억제, 및/또는 CCKBR 양성 질환(들)과 연관된 증상들 중 하나 이상의 것의 완화일 수 있다.
치료 유효 선량은 통상적으로 의사에 의해 결정될 수 있다. 임의의 특정 대상체/환자에 대한 선량 수준 및 투여 빈도는 달라질 수 있고, 사용되는 화합물의 활성, 상기 화합물의 대사 안정성 및 작용 기간, 환자의 연령, 체중, 일반적인 건강 상태, 성별, 식이, 투여 모드 및 시간, 배설 속도, 약물 조합, 특정 병태의 중증도, 및 개체가 받고 있는 요법을 포함하는 다양한 인자에 의존한다. 이들 인자는 치료 유효 선량 결정시 의사에 의해 고려된다.
한 실시양태에서, 환자에게 투여되는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체의 치료 유효 선량은 10 내지 40,000 kBq/kg이다. 바람직하게는 치료 유효 선량은 30 내지 1,000 kBq/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 kBq/kg이다. 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 1일 1회, 또는 수회에 걸쳐 투여될 수 있다.
분자는 한 번에 또는 연속된 치료에 걸쳐, 즉, 1회 이상의 투여 사이클에 걸쳐 환자에게 투여될 수 있다. 특히, 화합물은 2 내지 10주로 이루어진 사이클당 1회 또는 2회, 바람직하게는 4 내지 8주로 이루어진 사이클당 1회, 더욱 바람직하게는 6주로 이루어진 사이클당 1회 또는 8주로 이루어진 사이클당 1회 대상체에게 투여될 수 있다. 화합물이 사이클당 2회 투여될 때, 치료 유효 선량은 사이클 동안 별개로 투여되는 2개의 절반 용량으로 분할된다. 사이클 수는 1 내지 최대 10회 사이클, 바람직하게는 2 내지 8회 사이클, 더욱 바람직하게는 4 내지 6회 사이클 범위일 수 있다.
한 측면에서, 화합물은 하기 투여 패턴 중 하나에 따라 대상체에게 투여된다:
(A) 적어도 2회의 6주 사이클 동안 6주로 이루어진 사이클당 1회, 바람직하게는 3회의 6주 사이클 동안 6주로 이루어진 사이클당 1회; 또는
(B) 적어도 2회의 8주 사이클 동안 8주로 이루어진 사이클당 1회, 바람직하게는 3회의 8주 사이클 동안 8주로 이루어진 사이클당 1회.
한 실시양태에서, 하나 이상의 CCKBR 양성 질환 진단을 받은 환자는 화합물 투여 전 하기 (a) 내지 (h) 중 하나 이상의 것을 충족시킨다:
(a) 혈청 크레아티닌 1.5xULN 이하, 또는 만성 신장 질환-역학 공동 연구 (CKD-EPI: Chronic Kidney Disease-Epidemiology Collaboration) 공식에 기초한 추정 사구체 여과율 (eGFR) 50 mL/min 초과;
(b) 혈중 절대 호중구 수 (ANC) 1,500개의 세포/㎕ 이상;
(c) 혈중 혈소판 수 100,000개의 세포/㎕ 이상;
(d) 혈중 헤모글로빈 9 g/dL 이상;
(e) AST 또는 ALT 3xULN 이하;
(f) 혈청 알부민 20 g/L 초과;
(g) 총 빌리루빈 2.5 mg/dL 이하; 및
(h) 알칼리성 포스파타제 5xULN 미만.
한 실시양태에서, 본 방법은 대상체가 상기 (a) 내지 (h) 중 하나 이상의 것을 충족시키는지 여부를 결정하는 단계를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 화합물은 주사, 특히, 정맥내 주사에 의해 대상체에게 투여된다. 이와 관련하여, 화합물은 예컨대, 수성 담체 (예컨대, 물 또는 0.9% 염화나트륨)와 같은 제약상 허용되는 주사가능한 담체 중의 액제로 제공될 수 있다. 유효 용량은 1 내지 200 mL, 바람직하게는 5 내지 50 mL, 예컨대, 약 10 mL의 부피로 투여될 수 있다. 주입 속도는 35 내지 60 mL/h, 예를 들어, 약 50 mL/h일 수 있다.
한 실시양태에 따라, 본 방법은
(α) 제약상 허용되는 주사가능한 담체 중에 화합물을 용해시켜 화합물의 주사용 액제를 수득함으로써 화합물의 주사용 액제를 제조하는 단계; 및
(β) 단계 (α)로부터 수득된 화합물의 주사용 수성 액제를 20 내지 60 min, 예컨대, 30 내지 45 min의 주입 기간에 걸쳐 35 내지 60 mL/h 예컨대, 50 mL/h의 주입 속도로 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
한 추가 실시양태에 따라, 화합물은 하나 이상의 다른 치료제 또는 요법, 예컨대, 화학요법제, 면역조정제, 양성자 펌프 억제제 (PPI) 또는 히스타민 H2-수용체 길항제와 함께 공동으로, 그 이전에 및/또는 그 이후에 투여된다.
한 측면에서, 화합물 (또는 상기를 포함하는 제약 조성물)은 라파마이신 및/또는 라파로그와 함께 조합하여 (즉, 그와 함께 공동으로, 그 이전에 및/또는 그 이후에) 투여된다. 한 추가 측면에서, 화합물은 에버롤리무스와 함께 조합하여 (즉, 그와 함께 공동으로, 그 이전에 및/또는 그 이후에) 투여된다. 추가의 또 다른 측면에서, 화합물은 라파마이신 및/또는 라파로그와 함께 조합하여 (즉, 그와 함께 공동으로, 그 이전에 및/또는 그 이후에) 투여되지 않는다.
한 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 하나 이상의 다른 치료제 또는 요법, 예컨대, 화학요법제 및/또는 면역조정제와 함께 공동으로, 그 이전에 또는 그 이후에 투여될 수 있다. 사용될 수 있는 치료제 또는 요법의 예로는 항신생물제, 예컨대, 알킬화제, 알칼로이드 또는 키나제 억제제, 면역조정제 및 그의 제약상 허용되는 염 및 유도체를 포함한다.
5. 알파 방사성표지된 가스트린 유사체 제조
하기에서, 하기에서, 방사성표지된 가스트린 유사체 제조 방법을 제공한다. 가스트린 유사체는 온-레진 펩티드 커플링 및 수렴 전략을 포함하는 표준 Fmoc 기반 고체상 펩티드 합성 (SPPS)에 의존하여 합성될 수 있다. 본 발명의 가스트린 유사체를 제조하고, 방사성표지하기 위해 사용될 수 있는 일반 전략법 및 방법론은 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 이는 또한 하기에서 추가로 설명된다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 알파 방사성핵종, 예컨대, 225Ac로 표지된 화합물을 정제하고, 그의 순도를 측정하는 방법을 제공한다. 알파 방사성핵종은 일반적으로 α 붕괴를 보이지만, 일부 경우에서는 γ-방출을 보이지 않는 단거리 방사체이기 때문에, 알파 방사성표지된 화합물, 예컨대, 225Ac-표지된 화합물의 정제 및 품질 관리는 특히 어려울 수 있다. 따라서, 알파 방사성핵종으로 표지된 화합물은 종래 방사선촬영 시스템으로 (직접) 검출할 수 없다. 추가로, 정제 용액 중 그의 농도가 낮기 때문에 (전형적으로 피코몰 범위), 예를 들어, UV 흡광도와 같은 표준 검출 방법으로 알파 방사성표지된 화합물을 검출하는 것은 불가능할 수 있다.
따라서, 본 발명자들은 알파 방사성표지된 화합물을 정제하고, 그의 순도를 측정하는 방법을 개발하였다. 본 방법은 하기에서 예시 화합물로서 225Ac로 표지된 DOTA-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (225Ac-PP-F11N)를 사용하여 설명된다.
(1) 킬레이팅 모이어티를 포함하는 화합물 (예컨대, PP-F11N)을 (예컨대, 하기 추가로 기술되는 바와 같이 용액 중에서 225Ac와 화합물을 반응시킴으로써) 225Ac로 표지한 후, 이어서, 표지 용액을 크로마토그래피 방법 (HPLC)에 의해 정제하고, 여기서, 용리된 용액의 분획을 수집한다;
(2) 분획을 샘플링하고, 적절한 용매 시스템 (예컨대, 물 중 0.1 M 숙신산/아세토니트릴, 40/60, v/v)을 이용하여 정지상을 포함하는 고체 지지체 상에서 (예컨대, TLC 플레이트 상에서) 개별적으로 전개시킨 후, 표지 용액 중에 존재하는 (예컨대, 비결합) γ선 방출 방사성핵종이 붕괴되고, (225Ac의 α-붕괴에 의해 생성된) 225Ac 기원의 딸 방사성핵종만이 존재할 때까지, 미리 결정된 기간 동안 (예컨대, 6 내지 24시간 동안) 방치해 둘 수 있다;
(3) 플레이트의 방사능 분포를 측정하고, 분획 중 225Ac 표지된 화합물의 순도를 결정할 수 있다.
TLC 상의 방사능 분포는 적절하게 보정될 수 있는, 사이클론® 플러스 스토리지 포스포르 시스템(Cyclone® Plus Storage Phosphor System) 및 멀티센시티브 또는 슈퍼 레절루션(Super Resolution) 저장 인광체 스크린 (퍼킨엘머 (스위스)로부터 이용가능)을 사용하여 측정할 수 있다. 측정을 수행하기 위해, (백색광 박스를 사용하여 예비 소거된) 인광체 스크린을 TLC 플레이트에 노출시키고, 사이클론® 플러스 방사선이미징 시스템에 배치하고, 스캐닝한다. 노출 시간 (인광체 스크린 → TLC 플레이트)은 1 내지 60 min, 바람직하게는 2 내지 10 min, 더욱 바람직하게는 2 min이다. 수집된 분획 중 화합물의 순도/정량 측정은 옵티콴트(OptiQuant)® 소프트웨어를 사용하여 수행할 수 있다.
본원에 기술된 방법을 통해 알파 방사성표지된 화합물을 고감도로 검출 및 정량화할 수 있다.
6. 실시예
6.1 약어 목록
DIEA: 디이소프로필에틸아민
DMEM: 둘베코스 변형 이글 배지
DMF: 디메틸 포름아미드
DTT: 디티오트레이톨
ESI: 전자 분무 이온화
FBS: 우태아 혈청
HATU: 1-[비스(디메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸로[4,5-b]피리듐 3-옥시드 헥사플루오로포스페이트
HBTU: 3-[비스(디메틸아미노)메틸륨일]-3H-벤조트리아졸-1-옥시드 헥사플루오로포스페이트
HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피
IU: 국제 단위
MS: 질량 분석법
PBS: 포스페이트 완충처리된 염수
SQD: 단일 사중극자 검출
SPECT: 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영법
SPPS: 고체상 펩티드 합성
TBST: 트윈 20(Tween 20)을 포함하는 트리스-완충처리된 염수
TFA: 트리플루오로아세트산
TIS: 트리이소프로필실란
TLC: 박층 크로마토그래피
UPLC: 초고성능 액체 크로마토그래피
6.2 물질 및 방법
본 발명의 화합물을 제조하고, 평가하기 위해 하기 물질 및 방법을 사용할 수 있다.
6.2.1 세포 배양, 형질감염 및 처리
이전에 기술된 바와 같이 (Aloj et al., J Nucl Med 2004, 45(3), 485-94) 생성된, CCKBR을 과다발현하는 인간 표피양 암종 A431 안정 세포주를 5% CO2를 함유하는 가습 인큐베이터에서 37℃하에 10% FBS (바이오 컵셉트(Bio Concept: 스위스)), 2 mM 글루타민 및 항생제 (0.1 mg/mL 스트렙토마이신, 100 IU 페니실린)로 보충된 DMEM 중에서 배양하였다.
6.2.2 가스트린 유사체 제조
액티보-P-11 자동 펩티드 합성기(Activo-P-11 Automated Peptide Synthesizer) (액티보테크(Activotec)) 및 링크 아미드(Rink Amide) 레진 (로딩: 0.60 mmol/g; 노바바이오켐(Novabiochem))을 이용하여 온-레진 펩티드 커플링 및 수렴 전략법을 비롯한 표준 Fmoc 기반 SPPS에 의해 본원 기술된 가스트린 유사체를 제조할 수 있다.
아미드 결합 형성을 위한 커플링 반응은 DIEA (6 eq.)의 존재하에 HBTU (2.9 eq)로 활성화된 3 eq의 Fmoc-아미노산을 사용하여 실온에서 30 min에 걸쳐 수행한다. Fmoc 탈보호는 DMF 중 20% 피페리딘 용액을 이용하여 수행한다. DIEA (6 eq)의 존재하에 HATU (2.9 eq)로 활성화된 3 eq의 DOTA 트리스-t-Bu 에스테르 (노바바이오켐)를 사용하여 N-말단 표지 모이어티의 커플링을 실온에서 30 min에 걸쳐 수행한다.
펩티드를 60 min 동안 TFA/TIS/물 (95/2.5/2.5, v/v/v)로 처리하여 동시 측쇄 탈보호하에 레진으로부터 절단한다. 절단 혼합물 농축 후, 미정제 펩티드를 냉 디에틸 에테르로 침전시키고, 원심분리한다.
SQD 질량 분석기에 연결된 워터스 자동정제 HPLC 시스템(Waters Autopurification HPLC system)에서 X셀렉트 펩티드 CSH C18 OBD 프렙(XSelect Peptide CSH C18 OBD Prep) 컬럼 (130 Å, 5 ㎛, 19 mm x 150 mm)으로 용매 시스템 (물 중 0.1% TFA) 및 B (아세토니트릴 중 0.1% TFA)를 이용하여 30 min 동안 25 mL/min 유속 및 20-60% 구배의 B로 펩티드를 정제할 수 있다. 적절한 분획을 회합, 농축 및 동결건조시킨다. SQD 질량 분석기에 연결된 워터스 액쿼티 UPLC 시스템(Waters Acquity UPLC System)에서 CSH C18 컬럼 (130 Å, 1.7 ㎛, 2.1 mm x 50 mm)으로 용매 시스템 A (물 중 0.1% TFA) 및 (아세토니트릴 중 0.1% TFA)를 이용하여 5 min 동안 0.6 mL/min 유속 및 5-85% 구배의 B로 펩티드를 순도를 결정한다.
MS 분석은 포지티브 및 네거티브 모드에서 전자분무 이온화 (ESI) 인터페이스를 사용하여 수행할 수 있다.
6.2.3 가스트린 유사체 방사성표지
(a) 알파 방사성핵종, 즉, 악티늄-225로 방사성표지된 가스트린 유사체를 제조하기 위해, N-말단 DOTA-접합된 가스트린 유사체 DOTA-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (PP-F11N; 상기 섹션 6.2.1에 기술된 바와 같이 제조)의 스톡 용액을 금속 무함유 물 중에서 제조하고, -20℃에서 보관한다 (농도: 0.58 mM).
6 ㎕의 225Ac 용액 (0.1 M HCl 중 6 MBq; ITG 게엠베하(ITG GmbH: 독일)로부터 이용가능), 100 ㎕의 PP-F11N 스톡 용액 (0.58 mmol), 120 ㎕ 아세트산암모늄 (0.4 M, pH 5.5) 및 21 ㎕ 아스코르브산 (100 mg/mL, 아세트산나트륨 완충제 중에서 새로 제조; 전체 pH = 5 - 5.5)을 포함하는 반응 혼합물을 깨끗한 멸균 에펜도르프(Eppendorf)® 튜브 (1.5 mL)에서 90℃에서 15 min 동안 가열한다. 이어서, 반응 혼합물 중 임의의 유리 금속을 착화시키기 위해 금속 무함유 물 중 2 ㎕의 0.5 mM EDTA를 첨가한다.
자동 샘플러, 방사선 모니터 (RM-19, EBERLINE 인스트루먼트 코포레이션(EBERLINE Instrument Corporation: 미국 뉴멕시코주 산타페)), UV 검출기 (파마시아 LKB-UV-M II(Pharmacia LKB-UV-M II)), 닥터 마이쉬(Dr. Maisch)로부터의 역상 C-18 안정성 BS-C23 컬럼(reversed-phase C-18 Stability BS-C23 column) (150 x 4,6 mm) (5 ㎛, 150 x 4.6 mm, X테라TM(XterraTM), MS, 워터스 (미국))에 연결된 515 HPLC 펌프 및 L-7100 펌프가 장착된 머크 히타치 라크롬 2D HPLC 시스템(Merck Hitachi LaChrom 2D HPLC system)을 이용하여 반응 배치를 정제할 수 있다. 이동상은 금속 무함유 물 중 0.1% TFA (시그마-알드리치(Sigma-Aldrich: 미국)) (A) 및 아세토니트릴 (VWR 케미칼즈(Chemicals: 미국), HPLC 등급) (B)로 구성된다. 샘플 주사 후, 용매 B 중 용매 A (68%)를 3 mL/분의 유속으로 5 min 동안 적용하여 모든 샘플을 컬럼에 로딩한다. 이어서, 용매 B 중 용매 A (50 - 10%) 구배를 1 mL/min의 유속으로 25 min 동안 적용하여 비표지 PP-F11N으로부터 225Ac-PP-F11N을 분리한다. 비표지 PP-F11N의 UV 피크 후, 225Ac-표지된 PP-F11N의 용리 시간은 비표지 PP-F11N보다 더 길다. 250 ㎕ 100 mg/mL 신선한 아세트산나트륨 완충제가 포함된 깨끗한 멸균 에펜도르프® 튜브를 사용하여 225Ac-PP-F11N 분획을 수집할 수 있다.
용리제로서 물 중 0.1 M 숙신산/아세토니트릴 40/60 (v/v)을 사용하여 TLC 플레이트 (RP-18 개질된 실리카 겔 60으로 코팅된 TLC 플레이트, 5x10 cm; 머크(Merck)) 상에서 그의 샘플을 전개시킴으로써 수득된 225Ac-PP-F11N 분획의 순도를 결정할 수 있다. TLC 플레이트를 24시간 동안 방치시킬 수 있고, 이후, 멀티센시티브 저장 인광체 스크린 (퍼킨엘머로부터 이용가능)이 함유된 카세트에 배치하였다. 2분 후, 인광체 스크린을 사이클론® 플러스 스토리지 포스포르 시스템에 배치하고, 방사능 분포를 측정한다.
하기 실험에서 사용되는 수집된 분획 중 225Ac-PP-F11N 화합물의 순도는 97%인 것으로 결정되었다 (도 7).
(b) (225Ac-PP-F11N 처리 후 SPECT 이미징을 위해 사용되는) 인듐-111로 방사성표지된 가스트린 유사체를 제조하기 위해, 23.4 nmol의 PP-F11N 및 120 MBq의 111In (69.5 pmol, ITG 게엠베하 (독일)로부터 이용가능)을 92 ㎕ 0.4 M 아세트산암모늄 완충제 (pH 5.5) 중에서 제조하고, 66 ㎕ 0.5 M 아스코르브산을 첨가하고, 95℃에서 20 min 동안 표지를 수행한다. 이어서, 반응 혼합물 중 임의의 유리 금속을 착화시키기 위해 금속 무함유 물 중 2 ㎕의 0.5 mM EDTA를 첨가한다.
인듐 혼입은 C18 컬럼을 사용하여 표준 HPLC에 의해 분석할 수 있고, 효율은 95% 초과에 도달하였다. 표지 직후, 감마 계수기를 사용하여 표적화된 방사선 실험을 위한 방사성표지된 가스트린 유사체의 적절한 희석액을 제조한다.
(c) (비교 실험을 위해 사용되는) 루테튬-177로 방사성표지된 가스트린 유사체를 제조하기 위해, 1:30의 핵종/펩티드 비로 PP-F11N 및 177Lu (ITG 게엠베하 (독일)로부터 이용가능) 용액을 0.4 M 아세트산암모늄 완충제 (pH 5.5) 중에서 제조하고, 90℃에서 15 min 동안 표지를 수행한다.
루테튬 혼입은 C18 컬럼을 사용하여 표준 HPLC에 의해 분석할 수 있고, 효율은 95% 초과에 도달하였다. 표지 직후, 감마 계수기를 사용하여 표적화된 방사선 실험을 위해 적절한 방사성표지된 가스트린 유사체의 희석액을 제조한다.
6.2.4 시험관내 방사성표지된 펩티드 내재화 검정
내재화 검정을 위해, 웰당 1 x 106개의 세포를 6-웰 플레이트 상에서 밤새도록 배양하였다. 다음날, PBS-세척된 세포를 표준 조직 배양 조건하에서 0.1% BSA를 포함하는 DMEM 중에서 160 Bq의 정제된 225Ac-PP-F11N (또는 100.000 cpm의 177Lu-PP-F11N)과 함께 2시간 동안 인큐베이션시킨다. 차단 실험을 위해 4 μM LEEEEEAYGWMDF 펩티드를 사용하였다.
인큐베이션 후, 상청액 (2x PBS 세척액과 함께)을 수집한다. 이어서, 세포를 0.05 M 빙냉 글리신 완충제 (pH = 2) 중에서 5 min 동안 2회 인큐베이션시킨 후, 이어서, 37℃에서 15 min 동안 1 M NaOH 중에서 용해 단계를 수행한다. 수집된 분획 3개를 모두 (상청액/PBS; 글리신 용액; 용해된 세포) 패커드 코브라 II 오토-감마 계수기(Packard Cobra II Auto-Gamma counter) (퍼킨엘머: 스위스)에서 측정할 수 있다. 225Ac-PP-F11N의 내재화 분획 및 막 결합 분획을 전체 방사능 대비 비율(%)로 제시한다. 차단 펩티드를 이용한 실험으로부터 비특이적인 막 결합 (글리신 분획) 또는 내재화 (NaOH 용해된 세포)를 수득된 결과로부터 감산한다.
6.2.5 증식 검정
세포 증식 검정을 위해, 웰당 4 x 103개의 세포를 96-웰 플레이트 상에 시딩한다. 다음날, 상이한 방사능 수준의 225Ac-PP-F11N (0.01 내지 316.23 kBq/mL)을 A431/CCKBR 세포에 첨가한다. 2 h 인큐베이션 후, 비결합 225Ac-PP-F11N을 함유하는 배지를 제거하고, 세포를 신선한 배지 중에서 추가로 24 h 동안 인큐베이션시킨다.
셀타이터 96 아쿠어스 비-방사성 세포 증식 키트(CellTiter 96 AQueous Non-Radioactive Cell Proliferation Kit) (프로메가 아게(Promega AG: 스위스))를 사용하여 제조사의 설명서에 따라 세포 증식을 분석할 수 있다. 마이크로플레이트 판독기(MicroPlate Reader) (퍼킨엘머: 스위스)를 이용하여 참조로 650 nm하에 570 nm에서 포르마잔 생성물의 흡광도를 측정한다. 대조군 (비처리) 세포의 흡광도를 세포 생존율 100%로 세팅한다. 50% 세포 생존율을 초래하는 225Ac-PP-F11N의 방사능 수준을 계산하고, 세포 사멸에서 반수 최대 유효 방사능 수준 (EA50)으로 제시한다. 본 검정법을 삼중으로 수행한다.
6.2.6 WB 분석
하기와 같이 웨스턴 블롯 분석에 의해 CCKBR의 발현 수준을 결정할 수 있다:
CCKBR에 대한 항체 (ab77077)는 압캠(Abcam: 영국)으로부터 이용가능하다. 세포를 용해 완충제 (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% 트리톤 X, 1 mM 나트륨 오르토바나데이트로 보충된 0.1% SDS, 1 mM NaF 및 프로테아제 억제제 칵테일 (로슈(Roche)))에서 균질화시킨다. 50 ㎍ 단백질 추출물의 분취물을 SDS-PAGE에 의해 분리하고, 전기블롯팅에 의해 PVDF 막 (밀리포어(Millipore))으로 옮긴다. 막을 TBST (0.1% 트윈 20) 중에서 5% 탈지유로 1 h 동안 차단되고, TBST 중에서 2% BSA와 함께 밤새도록 1차 항체와 함께 인큐베이션시킨 후, HRP-접합된 2차 항체와 함께 2 h 동안 인큐베이션시킨다. 단백질 특이적 신호를 화학발광 시약 (ECL)으로 검출할 수 있고, 신호는 이미지콴트 RT ECL 이미저(ImageQuant RT ECL Imager) (GE 헬쓰케어(GE Healthcare))를 사용하여 획득할 수 있다.
CCKBR 검출 전, 단백질 용해물에 대해 탈글리코실화를 수행한다. 간략하면, 18 ㎕의 전체 세포 용해물 (대략 50 ㎍)을 2 ㎕의 10x 변성 완충제 (5% SDS, 0.4 M DTT)와 혼합하고, RT에서 10 min 동안 인큐베이션시킨다. 이어서, 4 ㎕의 10x 글리코버퍼(Glycobuffer) (0.5 M 인산나트륨, pH 7.5), 4 ㎕의 10% 트윈-20 및 10 ㎕의 물을 첨가하였다. 마지막으로, 2 ㎕의 PNGase F (시그마(Sigma))를 첨가하고, 혼합하고, 원심분리에 의해 수집한다. WB 분석 전에 37℃에서 밤새도록 반응을 수행한다.
6.2.7 동물 연구
본 연구에서, 인간 A431/CCKBR 이종이식 마우스 모델이 사용된다. 중요하게는 갑상선 수질암 (MTC) 환자에서의 I상 임상 시험의 규제 승인을 위해 필요한 방사성표지된 미니가스트린 유사체 약동학적 성질, 생체분포, 선량측정 또는 독성의 임상전 평가를 위해 A431-CCK2R 이종이식편을 보유한 면역결핍 마우스가 이전에 사용된다 (Maina et al., Eur J Pharm Sci. 2016;91:236-42).
생체분포 연구를 위해, 0.1 mL의 포스페이트-완충처리된 염수 (PBS) 중 2 x 106개의 A431/CCKBR 세포를 마취된 누드 마우스 (면역손상된 CD-1 암컷 누드 마우스; 찰스 리버스(Charles Rivers: 독일))의 좌측 및 우측 옆구리에 피하로 (s.c.) 주사한다 (동물당 2개 종양). 이식 후 12 내지 14일 후, 대략 0.1-0.2 ㎤의 A431/CCKBR 종양을 보유하는 누드 마우스에 38 kBq HPLC 정제된 225Ac-PP-F11N (0.08 pmol) 또는 150 kBq HPLC 정제된 177Lu-PP-F11N (0.21 pmol)을 정맥내로 주사한다. 방사성표지된 펩티드 투여 후 1, 4, 24, 48 h 및 7일째, 마우스를 희생시키고, 사후 해부된 종양 및 기관의 중량을 측정하고, 그의 방사능을 감마 계수기 (패커드 코브라 II 오토 감마, 퍼킨엘머: 스위스)에서 측정한다.
요법 연구를 위해, 누드 마우스 좌측 어깨에 5 x 106개의 A431/CCKBR 세포를 피하로 주사한다. 종양 이식 후 5 내지 7일째, 대략 0.1-0.2 ㎤의 A431/CCKBR 종양을 보유하는 누드 마우스를 무작위로 그룹화하고, 100 ㎕ PBS 중 30, 45, 60, 90 및 120 kBq의 HPLC 정제된 225Ac-PP-F11N을 정맥내로 주사한다. 대조군에는 100 ㎕ PBS를 주사한다. 실험일 동안 매일 종양 직경 및 마우스 체중을 기록한다. 공식, 공식 V = (W2 x L)/2를 사용하여 종양 부피를 계산한다 (Faustino-Rocha et al. Lab Anim. 2013, 42(6), 217-224). 종양 부피가 1.5 ㎤를 초과하였을 때, 누드 마우스를 희생시킨다. 대조군, 30, 45, 60 kBq 및 대조군, 60, 90, 120 kBq 처리군을 포함하는 2 세트의 실험으로부터 데이터를 수득한다.
모든 실험은 스위스 동물 보호법(Swiss Animal Protection Laws)에 따라 수행한다.
6.2.8 SPECT /CT
SPECT/CT 실험을 위해, 방사성표지된 111In-PP-F11N을 HPLC에 의해 정제하고, 스피드백(SpeedVac)에서 농축시키고, PBS 100 ㎕당 13 MBq로 희석하고, 누드 마우스에 정맥내로 주사한다 (마우스당 13 MBq/100 ㎕). 30, 45 및 60 kBq의 225Ac-DOTA-PP-F11N으로 처리한 후, X선 컴퓨터 단층촬영법과 조합된 단일 광자 방출 컴퓨터 단층촬영법 (SPECT) (멀티핀홀 소형 동물용 나노 SPECT/CT 카메라(Nano SPECT/CT camera), 메디소 메디컬 이미징 시스템즈(Mediso Medical Imaging Systems))에 의해 A431/CCKBR 종양 보유 누드 마우스에서의 111In-PP-F11N의 이미징을 수행한다. 모든 마우스를 주사 후 2 h째에 희생시키고, 7.5 min CT를 위해 바로 사용한 후, 45 min SPECT 스캔을 수행한다. 이미지 재구성 및 프로세싱은 비보콴트 3.0 패치1(VivoQuant 3.0 Patch1) 소프트웨어를 사용하여 수행한다.
6.2.9 면역화학법
포르말린 고정 A431/CCKBR 종양의 파라핀 절편에 대해 탈파라핀화를 수행하였다. 재수화된 슬라이드를 10 mM 시트레이트 완충제 (pH 6.0) 중 98℃에서 60분 동안 전처리한 후, PBS 중에서 4% 무지방 우유와 함께 90분 동안 인큐베이션시켰다. 아비딘/비오틴 차단제 처리 (인비크로겐(Invitrogen)) 및 검출을 위해, 제조사의 설명서에 따라 ABC 방법을 사용하였다. 사용자 매뉴얼에 따라 자동 장치 시약 시스템 (디스커버리 XT(Discovery XT), 벤타나 메디컬 시스템 인크.(Ventana Medical System Inc.))을 이용하여 Ki67에 대한 모노클로날 항체 (써모 사이언티픽(Thermo Scientific), SP6)에 대한 신호를 기록하였다. 헤마톡실린-대조 염색된 절편의 이미지를 포착하고 (니콘(Nikon), YTHM), 이미지액세스 엔터프라이즈7(ImageAccess Enterprise7) 및 이미지J(ImageJ) 소프트웨어를 이용하여 분석하였다 (Schneider et al. Nat Methods 2012, 9(7), 671-675).
6.2.10 생물정보학 분석 및 통계
모든 통계 분석을 위해 윈도우즈(Windows)용 그래프패드 프리즘 7.00(GraphPad Prism 7.00)을 이용하였다. 생체분포 연구를 위해서는 2개 군에 대하여 양측 이분산성 스튜던츠 t 검정을 수행하는 반면, 요법 연구에서는 대조군과 모든 225Ac-PP-F11N 처리군을 비교하기 위해 던네트(Dunnett's) 다중 비교 검정과 조합된 일원 ANOVA를 사용하였다. 대조군과 처리군의 상이한 생존 곡선을 비교하기 위해 로그 순위 (맨텔-콕스(Mantel-Cox)) 검정 및 게한-브레슬로우-윌콕슨(Gehan-Breslow-Wilcoxon) 검정을 수행한다. 종점은 생존 곡선에서 사망으로 정의된다. P<0.05인 값은 통계학상 유의적인 것으로 간주된다. 결과는 적어도 3회의 독립된 반복 실험의 평균 ± 표준 편차로 기록된다.
실시예 1: 225 Ac -PP- F11N의 시험관내 내재화 및 세포독성 효과
CCKBR에 대한 본 발명의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체의 친화성 및 특이성을 평가하기 위해, (상기 기술된 바와 같이 제조된) 정제된 225Ac-PP-F11N을 이용하여 상기 기술된 시험관내 내재화 검정을 수행하였다. 225Ac-PP-F11N의 내재화율은 45%에 도달하였고, 막 결합 방사능은 전체 방사능 대비 1%였다. 결과는 도 1에 도시되어 있다. 차단 펩티드 (LEEEEEAYGWMDF)의 존재가 내재화율을 1.4%로 억제시켰고, 이는 225Ac-PP-F11N의 CCKBR 특이적 세포 흡수를 시사하는 것이다. (상기 명시된 바와 같이 제조된) 177Lu-PP-F11N을 이용하여 실험을 반복하였다. 두 화합물, 225Ac-PP-F11N 및 177Lu-PP-F11N 모두 유사한 시험관내 내재화율을 나타내는 것으로 밝혀졌다.
세포독성 효과를 분석하기 위해, 상기 기술된 세포 증식 검정법을 수행하였다. EA50 값을 계산하였고, 225Ac-PP-F11N 처리 후 24 h째 6.2 ± 1.1 kBq/mL에 도달하였다 (데이터는 제시되지 않음). 100 kBq/mL에서 최대 세포독성 효과 (세포 생존율 0%)에 도달하였다.
본 결과는 본 발명의 화합물이 CCKBR 특이적 세포 흡수 (내재화율 45%) 및 강력한 세포독성 효과를 나타낸다는 것을 입증한다.
실시예 2: 225 Ac -PP- F11N의 생체내 생체분포
225Ac-PP-F11N을 이용하여 상기 기술된 생체분포 연구를 수행함으로써 본 발명의 화합물의 생체내 생체분포를 평가하였다.
A431/CCKBR 종양 보유 누드 마우스에서 방사성제약 적용 후 1, 4, 24, 48 h 및 7일째 생체분포 연구를 수행하였다. 주사 후 1 및 4 h째 225Ac-PP-F11N의 높은 종양 흡수가 관찰되었고, 각각 1 그램당 주사된 방사능 대비 13 및 11.2% (% i.A./g)에 도달하였다 (도 2). 24, 48 h 및 7일 후, 종양 흡수는 예상대로 각각 7.2, 5.7 및 4.5% i.A./g로 감소하였다. 건강한 기관 분석에서는 CCKBR의 내인적 발현에 기인하여 주사 후 (p.i.) 1 h째 위에서 1.5% i.A./g인 것으로 나타났다. 위에서의 방사능은 24시간 이내에는 유사하였고 (4 및 24 h째 1.3 및 1.2% i.A./g), p.i. 48 h 및 7일째 0.8 및 0.3% i.A./g로 감소하였다. 처음 4시간 이내에 신장에서 방사성표지된 가스트린 축적의 8.1에서 4.2% i.A./g로의 50% 감소가 관찰되었다. 주사 후 48 h 및 1주째 방사능 수준은 3.8에서 1.2%로 추가로 감소되었다. 분석된 다른 기관에서, 방사능은 주사 후 1 h째 최대 0.38 내지 0.02% i.A./g에 도달하였고, 1주 이내에 0.15-0.01%로 감소되었다.
추가로, 비교 생체분포 연구에서는 225Ac-PP-F11N이 주사 후 4 h째 루테튬-177 표지된 미니가스트린 유사체 (177Lu-PP-F11N)와 유사한 생체분포 프로파일을 갖는 것으로 나타났다 (도 3). 종양 흡수는 거의 동일하였지만, 177Lu-PP-F11N과 비교하여 간 및 뼈에서는 225Ac-PP-F11N의 중간 정도의 더 높은 비특이적 흡수가 관찰되었고, 분석된 모든 시점에서 2% i.A./g 미만에 도달하였다.
본 발명의 화합물은 분석된 시점에서 우수한 생체분포 특성, 즉, 우수한 종양-대-신장 및 종양-대-위 비를 보이는 것으로 나타났고, 이는 종양 조직에서의 225Ac-PP-F11N의 특이적인 축적, 및 CCKBR을 내인적으로 발현하는 기관에서의 225Ac-PP-F11N의 낮은 축적을 시사하는 것이다. 추가로, 체중 또는 기관 중량, 일반적인 건강 상태 또는 해부학적 측면에서 유의적인 차이는 관찰되지 않았다.
실시예 3: 225 Ac -PP- F11N의 생체내 치료 효과
본 발명의 화합물의 치료 효능을 평가하기 위해, 225Ac-PP-F11N을 이용하여 상기 기술된 요법 연구를 수행하였다. 5개의 상이한 용량의 정제된 225Ac-PP-F11N 투여 후 면역손상된 A431/CCKBR-종양 보유 누드 마우스의 종양 성장 및 평균 생존 기간을 평가하였다.
도 4에 제시된 바와 같이, 225Ac-PP-F11N으로 처리하였을 때, 종양 성장은 용량에 의존하는 방식으로 억제되었다. 모든 군에 모든 마우스가 그대로 존재한 11일째, 대조군에서의 평균 종양 부피는 0.78 ㎤에 도달한 반면, 30, 45, 60, 90 및 120 kBq 225Ac-PP-F11N 처리된 마우스에서의 평균 종양 크기는 0.54 (P=0.0142), 0.31 (P<0.001), 0.12 (P<0.001), 0.11 (P<0.001) 및 0.07 ㎤ (P<0.001)로 축소되었다. 대조군에서, PBS 주사 후 11일째, 종양 부피가 1.5 ㎤를 초과한 것 (종점)에 기인하여 첫 번째 마우스를 안락사시킨 반면, 30, 45, 60, 90 및 120 kBq 225Ac-PP-F11N 처리군에서는 첫 번째 종양이 각각 12, 13, 21, 33 및 44일째에 1.5 ㎤를 초과하였다. 처리 동안, 체중 손실 또는 다른 세포독성 증상은 없었고, 모든 군에서 체중 증가가 관찰되었다. 대조군의 체중은 가정컨대, 더 빠른 종양 성장으로 인해 중간 정도 증가한 것으로 관찰되었다.
추가로, 225Ac-PP-F11N으로 처리하였을 때, 용량에 의존하는 방식으로 수명이 증가한 것으로 관찰되었다. 대조군에서의 평균 생존 기간은 17일인 반면, 30, 45, 60, 90 및 120 kBq 225Ac-PP-F11N 처리된 마우스에서의 평균 생존 기간은 각각 22, 27, 34, 44 및 58일로 연장되었다. 본 결과는 하기 표 1에 제시되어 있다.
Figure pct00001
표 1: A431/ CCKBR 종양 보유 누드 마우스의 평균 생존 기간
(*) 로그 순위 (맨텔-콕스) 검정을 수행하여 대조군과의 처리군의 상이한 생존 곡선 비교를 통해 P-값을 획득하였다.
본 결과는 본 발명의 화합물이 건강한 조직에서의 화합물의 축적에 기인하는 유해한 부작용은 방지할 수 있으면서, 우수한 치료 효능을 나타낸다는 것을 입증한다.
실시예 4: 조직병리학적 분석 및 PET/ SPECT 이미징
건강한 기관에 대한 225Ac-PP-F11N의 부작용 (독성)을 추가로 분석하기 위해, 실시예 3의 대조군 및 225Ac-PP-F11N 처리된 마우스로부터 단리된 신장 및 위를 요법 마지막 단계에서 헤마톡실린 및 에오신 (HE)으로 염색하였다. 대조군으로부터 유래된 기관은 PBS 주사 후 11-26일째에 단리시킨 반면, 60 및 120 kBq 225Ac-PP-F11N 처리군으로부터 기관을 34 내지 49일째에 해부하였다. HE 염색에서는 대조군과 225Ac-PP-F11N 처리군 사이에 어떤 차이도 없는 것으로 나타났고 (도 5), 이는 위 및 신장에서 알파 요법 동안 급성 방사선 독성의 징후는 없다는 것을 시사하는 것이다.
도 6에 제시된 바와 같이, 45 kBq (좌측 사진) 및 60 kBq (우측 사진) 225Ac-PP-F11N 처리군으로부터의 종양 무함유 마우스에서의 111In-PP-F11N의 SPECT/CT 이미지는 어떤 검출가능한 종양도 없다는 것을 나타낸다. 방사성 신호는 오직 신장 및 방광을 포함한 배설 기관에서만 검출되었다.
상기 결과는 본 발명의 화합물에 의해 달성된 뛰어난 치료 효능 뿐만 아니라, 건강한 조직, 특히, 위에 대한 그의 낮은 독성을 입증한다. 알파 방사성표지된 가스트린 화합물 사용이 이전에는 예컨대, 출혈성 위염과 같은 세포독성 부작용과 연관이 있었기 때문에 위에 대하여 독성이 없다는 것은 놀라운 것이다 (Semin Nucl Med . 2002, 32(2), 97-109). 따라서, 본 발명의 화합물은 CCKBR 양성 질환, 특히 CCKBR 양성 암, 예컨대, MTC를 치료하는 방법에서 효과적으로 사용될 수 있다.
SEQUENCE LISTING <110> PAUL SCHERRER INSTITUT <120> Alpha radiolabeled gastrin analogue and use thereof in methods of treating CCKB receptor positive disease <130> 238834 <160> 3 <170> BiSSAP 1.3.6 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> minigastrin (blocking peptide) <220> <221> MOD_RES <222> (13)..(13) <223> AMIDATION <400> 2 Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe 1 5 10 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C-terminal pentapeptide analoguous to the C-terminal amino acid sequence found in CCKBR-binding endogenous peptide hormones <220> <221> VARIANT <222> (3)..(3) <223> Represents an amino acid isosteric with methionine <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> AMIDATION <400> 3 Gly Trp Xaa Asp Phe 1 5 <210> 3 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> minigastrin as described on page 8 of the application as filed <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> AMIDATION <400> 2 Leu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe 1 5 10 15

Claims (13)

  1. 하기 화학식 (1)을 갖는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
    Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Axx-Asp-Phe-NH2 (1)
    상기 식에서,
    Axx는 메티오닌과 동배체인 아미노산을 나타내고,
    Y는 알파 방사성핵종을 킬레이팅하는 모이어티를 나타낸다.
  2. 제1항에 있어서, Axx가 이소류신 (Ile), 노르류신 (Nle), 2-아미노-5-헵텐산, 호모-노르류신 (호모-Nle), 호모-시스테인 (호모-Cys), 2-아미노-4-메톡시부탄산, 텔루로메티오닌 (Te-Met), 셀레노메티오닌 (Se-Met) 및 페닐글리신 (Phg)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산, 바람직하게는 Nle를 나타내는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, Y가 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산 (DOTA), 1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA), 2-(4-이소티오시아나토벤질)-1,4,7,10,13,16-헥사아자시클로헥사데칸-1,4,7,10,13,16-헥사아세트산 (HEHA-NCS), [6,6'-({9-히드록시-1,5-비스(메톡시카르보닐)-2,4-디(피리딘-2-일)-3,7-디아자비시클로[3.3.1]노난-3,7-디일}비스(메틸렌))디피콜린산] (H2Bispa2), N,N '-비스[(6-카르복시-2-피리딜)메틸]-4,13-디아자-18-크라운-6 (마크로파(Macropa)), 6-[[16-[(6-카르복시피리딘-2-일)메틸]-1,4,10,13-테트라옥사-7,16-디아자시클로옥타덱-7-일]메틸]-4-이소티오시아나토피리딘-2-카르복실산 (마크로파-NCS), 비스(페닐이미노디아세테이트)-디아자크라운 에테르 (마크로피드(Macropid)) 또는 t-Bu-칼릭스[4]아렌 테트라카르복실산으로부터, 바람직하게는 DOTA 또는 HEHA로부터, 더욱 바람직하게는 DOTA로부터 유도된 모이어티인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 방사성핵종이 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 211At, 223Ra, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터, 바람직하게는 212Bi, 213Bi, 225Ac, 225Fm, 149Tb, 212Pb, 226Th 및 227Th로부터, 및 더욱 바람직하게는 213Bi, 225Ac 및 149Tb로부터 선택되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 알파 방사성핵종이 225Ac인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    알파 방사성핵종이 하기 (i) 및 (ii):
    (i) 20 keV/㎛ 내지 190 keV/㎛, 바람직하게는 30 keV/㎛ 내지 160 keV/㎛, 더욱 바람직하게는 50 keV/㎛ 내지 150 keV/㎛, 특히, 약 80 keV/㎛의 선형 에너지 전달 (LET); 및
    (ii) 20 ㎛ 내지 150 ㎛, 바람직하게는 30 ㎛ 내지 120 ㎛, 더욱 바람직하게는 40 ㎛ 내지 100 ㎛의 조직 투과 범위 (TPR)
    중 적어도 하나를 충족시키는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (2)로 표시되는 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
    Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (2)
    상기 식에서, Y는 225Ac를 킬레이팅하는 DOTA로부터 유도되는 모이어티를 나타낸다.
  8. CCKB 수용체 양성 질환(들) 진단을 받은 인간 대상체에게 치료 유효 선량의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체를 투여하는 단계를 포함하고;
    여기서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 것인,
    하나 이상의 CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법에서 사용하기 위한 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  9. 제8항에 있어서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체가 하기 화학식 (2)로 표시되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체:
    Y-(DGlu)6-Ala-Tyr-Gly-Trp-Nle-Asp-Phe-NH2 (2)
    상기 식에서, Y는 225Ac를 킬레이팅하는 DOTA로부터 유도되는 모이어티를 나타낸다.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, CCKB 수용체 양성 질환(들)이 위암 (GC), 췌장 선암종 (PADC), 소세포 폐암 (SCLC), 폐외 소세포 암종 (EPSCC), 갑상선 수질암 (MTC), 신경교종, 위장관췌장 신경내분비 종양 (GEP-NET), 결장암, 난소암, 유방암, 및 임의의 CCKB 수용체 양성 암 또는 종양으로부터 선택되는 것인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, CCKB 수용체 양성 질환(들)이 SCLC, EPSCC 및 MTC로부터, 바람직하게는 SCLC 및 MTC로부터 선택되고, 더욱 바람직하게는 MTC인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  12. 제8항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 대상체에게 투여되는 치료 유효 선량이 10 내지 40,000 kBq/kg, 바람직하게는 30 내지 1,000 kBq/kg, 더욱 바람직하게는 50 내지 200 kBq/kg인 알파 방사성표지된 가스트린 유사체.
  13. CCKB 수용체 양성 질환을 치료하는 방법으로서,
    치료 유효 선량의 알파 방사성표지된 가스트린 유사체를 그를 필요로 하는 인간 대상체에게 투여하는 단계를 포함하고;
    여기서, 알파 방사성표지된 가스트린 유사체는 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같고, 바람직하게는 제7항에서 정의된 바와 같은 것인 방법.
KR1020237002961A 2020-07-31 2021-07-30 알파 방사성표지된 가스트린 유사체 및 cckb 수용체 양성 질환의 치료 방법에서의 그의 용도 KR20230028515A (ko)

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