KR20230013237A - Tlr9 효능제를 포함하는 대상포진 백신 - Google Patents

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KR20230013237A
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antigen
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존 디. 캠벨
랜달 엔. 히어
로버트 에스. 얀센
데이비드 노백
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다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션
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Abstract

본 개시내용은 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV) 당단백질 E 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 그를 필요로 하는 개체에서 VZV에 대한 면역 반응을 자극하는데 적합하다.

Description

TLR9 효능제를 포함하는 대상포진 백신
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2020년 3월 9일자로 출원된 미국 가출원 번호 62/987,243의 우선권 및 이익을 주장하며, 그 개시내용은 그 전체가 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일로서의 서열 목록의 제출
ASCII 텍스트 파일에 대한 하기 제출의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF) (파일명: 377882007140SEQLIST.TXT, 기록된 날짜: 2021년 3월 9일, 크기: 10 KB).
분야
본 개시내용은 바리셀라 조스터(varicella zoster) 바이러스 표면 (VZV) 당단백질 E 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 그를 필요로 하는 개체에서 VZV에 대한 면역 반응을 자극하는데 적합하다.
대상포진 (헤르페스 조스터(herpes zoster))은 신체 또는 얼굴의 한 쪽에 타고, 따끔거리고, 가려움을 느끼고, 이어서 고통스러운 발진 및 수포를 특징으로 하는 바이러스성 질환이다. 질병 제어 및 예방 센터 (CDC)에 따르면, 대상포진을 가진 약 10-13%의 노인들은 합병증으로서 장기간 신경 통증 (포진후 신경통)을 경험한다. 또한, 눈 또는 귀 근처에서의 대상포진 발진은 시력 상실을 초래하거나 얼굴의 근육이 마비되게 할 수 있다 (램세이 헌트(Ramsay Hunt) 증후군).
수두와 같은 대상포진은 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 의한 감염에 의해 유발된다. 대상포진은 VZV에 의한 초기 감염의 결과로서 수두를 가진 개체에서 잠재성 VZV의 재활성화에 의해 유발된다. 미국 식품의약국(FDA)이 1995년에 바리셀라 백신을 승인하기 전에, 미국에서 대부분의 아동은 수두에 걸렸고, 따라서 현재 성인으로서 대상포진에 걸릴 위험이 있다.
50세 이상의 개체에서 대상포진의 예방을 위해 2개의 백신이 이용가능하다. 조스타박스(ZOSTAVAX)®는 머크 앤 코., 인크.(Merck & Co., Inc.) (뉴저지주 화이트하우스 스테이션(Whitehouse Station))에 의해 시판되는 생 약독화 바이러스 백신이다. 싱그릭스(SHINGRIX)®는 글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline) (노스캐롤라이나주 리서치 트라이앵글 파크(Research Triangle Park))에 의해 판매되는 재조합, 아주반트 처리된 서브유닛 백신이다. 직접(head-to-head) 임상 시험이 수행되지 않았지만, 면역화 관행에 관한 권고 위원회는 2017년에 헤르페스 조스터 및 포진후 신경통에 대한 개선된 효능의 추정치에 기초하여 조스타박스®보다는 싱그릭스®의 우선 사용을 권장하기로 근소한 표차이로 결정하였다 (Dooling et al., MMWR, 67:103-108, 2018). 싱그릭스®는 항원으로서의 재조합 VZV 당단백질 E (gE)를 아주반트로서의 AS01B와 조합하여 함유한다. AS01B는 리포솜 제제로 조합된, 살모넬라 미네소타(Salmonella minnesota)로부터의 3-O-데사실-4'-모노포스포릴 지질 A (MPL) 및 퀼라자 사포나리아 몰리나(Quillaja saponaria Molina)의 추출물로부터 정제된 사포닌인 QS-21로 구성된다. 싱그릭스®에 대한 근소한 표차이 (8 대 7)는 반응원성에 대한 우려와 연관되었다. 싱그릭스®에 대한 III상 연구는 위약 수용자의 3.1%에 비해 백신 수용자의 16.5%에서 등급 3 유해 사건이 발생하였고, 위약 수용자의 2.4%에 비해 백신 수용자의 10.8%에서 등급 3 전신 사건 (근육통, 피로, 두통, 오한, 열 및 위장관 증상)이 발생하였음을 보고하였다 (Lal et al., N Eng J Med, 372:2087-2096, 2015; 및 Cunningham et al., N Eng J Med, 375:1019-1032, 2016). 싱그릭스® 백신접종 후 비교적 높은 수준의 심각한 부작용은 환자에서의 제2 용량 순응도 수준에 부정적인 영향을 미칠 잠재력을 갖는 것으로 인식되었고 (Bharucha et al., Human Vaccines & Immunotherapeutics, 13:1789-1797, 2017), 이는 환자가 대상포진 보호를 위해 2회 용량을 받을 필요를 고려하면 지속적인 관심사였다.
단백질 서브유닛 백신, 예컨대 싱그릭스(SHINGRIX)®의 반응원성은 다양한 인자에 의해 영향을 받을 수 있고, 그 중 주된 것은 면역원성을 개선하기 위해 포함된 아주반트의 성질이다. 모델 단백질 항원과 조합된 상이한 아주반트 시스템 (AS) 아주반트를 건강한 인간 대상체의 면역화에 의해 비교하였다. AS01B 아주반트는 비교 아주반트 (AS01E, AS03A, AS04 및 명반)보다 더 높은 수준의 국소 및 전신 반응원성을 유도하는 것으로 밝혀졌다 (Leroux-Roels et al., Clin Immunol, 169:16-27, 2016). 이는 AS01B가 SHINGRIX의 관련 반응원성 프로파일에 상당히 기여하고 있음을 시사한다.
따라서, 우수한 안전성 프로파일을 갖지만, VZV gE 면역원성과 관련하여 싱그릭스®보다 열등하지 않은 개선된 대상포진 백신이 필요하다.
요약
본 개시내용은 바리셀라 조스터 바이러스 표면 (VZV) 당단백질 E 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. 면역원성 조성물은 그를 필요로 하는 개체에서 VZV에 대한 면역 반응을 자극하는데 적합하다.
도 1a는 제1 용량 (프라임)의 대상포진 백신의 수용자 및 대조군 수용자 (CTL 및 LAV)의 혈청 내의 항-VZV gE-반응성 IgG의 수준을 보여준다. 도 1b는 대상포진 백신 및 대조군 수용자 (CTL 및 LAV)의 제1 용량 (프라임) 및 제2 용량 (부스트)의 수용자의 혈청 내의 항-VZV gE-반응성 IgG의 수준을 보여준다.
도 2a-2c는 제1 용량 (프라임) 및 제2 용량 (부스트)의 대상포진 백신의 수용자 및 대조군 수용자 (CTL 및 LAV)의 gE-항원 유도된, IL-2 및/또는 IFN-γ 분비 CD4+ T 세포를 보여준다.
도 3a-3b는 제1 용량 (프라임) 및 제2 용량 (부스트)의 대상포진 백신의 수용자 및 대조군 수용자 (CTL 및 LAV)의 gE-항원 유도된, IL-2 또는 IFN-γ 분비 CD154+, CD4+ T 세포를 보여준다.
일반적인 기술 및 정의
본 개시내용의 실시는, 달리 나타내지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내에 있는 분자 생물학 (재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 이용할 것이다.
본원 및 첨부된 청구항들에서 사용되는 단수 형태들 ("a", "an", 및 "the")은 달리 표시되지 않는 한 복수의 언급을 포함한다. 예를 들어, "부형제"는 하나 이상의 부형제를 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 "포함하는"이라는 문구는 개방형이며, 이는 그러한 실시양태가 추가 요소를 포함할 수 있음을 나타낸다. 대조적으로, 어구 "~로 이루어진"은 폐쇄형이며, 이는 이러한 실시양태가 (미량의 불순물을 제외하고는) 추가의 요소를 포함하지 않음을 나타낸다. 어구 "~로 본질적으로 이루어진"은 부분적으로 폐쇄형이며, 이는 이러한 실시양태가 이러한 실시양태의 기본 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 요소를 추가로 포함할 수 있음을 나타낸다.
값과 관련하여 본원에 사용된 용어 "약"은 그 값의 90% 내지 110%를 포괄한다 (예를 들어, 약 3000 μg의 CpG 1018은 2700 μg 내지 3300 μg의 CpG 1018을 지칭한다).
본원에서 상호교환가능하게 사용되는 용어 "폴리뉴클레오티드" 및 "올리고뉴클레오티드"는 단일-가닥 DNA (ssDNA), 이중-가닥 DNA (dsDNA), 단일-가닥 RNA (ssRNA) 및 이중-가닥 RNA (dsRNA), 변형된 올리고뉴클레오티드 및 올리고뉴클레오시드 또는 그의 조합을 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 선형 또는 원형으로 구성될 수 있거나, 또는 올리고뉴클레오티드는 선형 및 원형 세그먼트 둘 다를 함유할 수 있다. 올리고뉴클레오티드는 일반적으로 포스포디에스테르 연결을 통해 연결된 뉴클레오시드의 중합체이지만, 대안적 연결, 예컨대 포스포로티오에이트 에스테르가 또한 올리고뉴클레오티드에 사용될 수 있다. 뉴클레오시드는 당에 결합된 퓨린 (아데닌 (A) 또는 구아닌 (G) 또는 그의 유도체) 또는 피리미딘 (티민 (T), 시토신 (C) 또는 우라실 (U), 또는 그의 유도체) 염기로 이루어진다. DNA 내의 4개의 뉴클레오시드 단위 (또는 염기)는 데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 티미딘, 및 데옥시시티딘으로 불린다. 뉴클레오티드는 뉴클레오시드의 포스페이트 에스테르이다.
본원에 사용된 용어 "CpG", "CpG 모티프" 및 "시토신-포스페이트-구아노신"은 올리고뉴클레오티드에 존재할 때, 시험관내, 생체내 및/또는 생체외에서 측정가능한 면역 반응에 기여하는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 디뉴클레오티드를 지칭한다. 측정가능한 면역 반응의 예는 항원-특이적 항체 생산, 시토카인의 분비, 림프구 집단, 예컨대 NK 세포, CD4+ T 림프구, CD8+ T 림프구, B 림프구의 활성화 또는 확장 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게는, CpG 올리고뉴클레오티드는 우선적으로 Th1-유형 반응을 활성화시킨다.
물질의 "유효량" 또는 "충분한 양"은 임상 결과를 비롯한 유익하거나 목적하는 결과를 달성하기에 충분한 양이며, 따라서 "유효량"은 적용되는 문맥에 따라 달라진다. 면역원성 조성물의 투여와 관련하여, 유효량은 면역 반응을 자극하기에 충분한 항원 및 TLR9 효능제를 함유한다 (바람직하게는, 항원에 대한 항체의 혈청보호 수준).
용어 "개체" 및 "대상체"는 포유동물을 지칭한다. "포유동물"은 인간, 비-인간 영장류 (예를 들어, 원숭이), 농장 동물, 스포츠 동물, 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트), 및 애완동물 (예를 들어, 개 및 고양이)을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다.
면역원성 조성물과 관련하여 본원에 사용된 용어 "용량"은 임의의 한 시점에 대상체에 의해 취해진 (그에 의해 투여되거나 또는 그에 의해 제공된) 면역원성 조성물의 측정된 부분을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "단리된" 및 "정제된"은 자연적으로 연관된 적어도 1종의 성분으로부터 제거된 (예를 들어, 그의 원래 환경으로부터 제거된) 물질을 지칭한다. 재조합 단백질과 관련하여 사용될 때, 용어 "단리된"은 단백질을 생산한 숙주 세포의 배양 배지로부터 제거된 단백질을 지칭한다.
반응 또는 파라미터의 "자극"은 관심 파라미터를 제외하고는 동일한 조건과 비교할 때, 또는 대안적으로 또 다른 조건과 비교할 때 (예를 들어, TLR 효능제의 부재와 비교하여 TLR 효능제의 존재 하에 TLR-신호전달의 증가) 상기 반응 또는 파라미터를 도출하고/하거나 증진시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 면역 반응의 "자극"은 반응의 증가를 의미한다. 측정된 파라미터에 따라, 증가는 5배 내지 500배 이상, 또는 5, 10, 50, 또는 100배 내지 500, 1,000, 5,000, 또는 10,000배일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "면역화"는 항원에 대한 포유동물 대상체의 반응을 증가시키고, 따라서 감염에 저항하거나 그를 극복하고/하거나 질환에 저항하는 그의 능력을 개선시키는 과정을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "백신접종"은 포유동물 대상체의 신체 내로의 백신의 도입을 지칭한다.
"아주반트"는 항원을 포함하는 조성물에 첨가될 때, 노출 시 포유동물 수용자에서 항원에 대한 면역 반응을 향상시키거나 강화시키는 물질을 지칭한다.
상세한 설명
본 개시내용은 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV) 당단백질 E (gE) 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이다. VZV gE 항원은 전장 VZV gE 항원의 신호 펩티드, 막횡단 및 세포질 도메인이 없는 말단절단된 재조합 단백질일 수 있다. 면역원성 조성물은 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역 반응의 자극을 필요로 하는 개체에서 바리셀라 조스터 바이러스에 대한 면역 반응을 자극하는데 적합하다.
I. 면역원성 조성물 및 키트
본 개시내용은 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 대한 면역 반응을 자극하기 위한, VZV 당단백질 E (gE) 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하는 면역원성 조성물에 관한 것이며, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (또한 CpG 또는 시토신-포스페이트-구아노신으로도 지칭됨) 모티프를 포함하는 8 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, gE 항원 및 올리고뉴클레오티드는 포유동물 대상체, 예컨대 인간 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 VZV gE 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함한다.
A. 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제
톨-유사 수용체 (TLR)는 수지상 세포 및 다른 선천성 면역 세포 내에서 및 그 상에서 발현되고, 침입 병원체의 존재에 대한 반응을 자극하기 위한 가장 중요한 수용체 중 하나이다. 인간은 구조가 유사하지만 바이러스 또는 박테리아의 상이한 부분을 인식하는 다수의 유형의 TLR을 갖는다. 특정 TLR을 활성화시킴으로써, 적응 반응을 향상시키기 위해 이용될 수 있는 특정 유형의 선천 면역 반응을 자극하고 제어하는 것이 가능하다.
TLR9 (CD289)는 합성 CpG-함유 올리고데옥시뉴클레오티드 (CpG-ODN)를 사용하여 모방될 수 있는, 미생물 DNA에서 발견되는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 인식한다. CpG-ODN은 항체 생산을 증진시키고 T 헬퍼 1 (Th1) 세포 반응을 자극하는 것으로 공지되어 있다 (Coffman et al., Immunity, 33:492-503, 2010). 구조 및 생물학적 기능에 기초하여, CpG-ODN은 3가지 일반적 클래스: CpG-A, CpG-B, 및 CpG-C로 나누어졌다 (Campbell, Methods Mol Biol, 1494:15-27, 2017). B 세포 활성화의 정도는 클래스들 사이에서 달라지며, CpG-A ODN은 약하고, CpG-C ODN은 양호하고, CpG-B ODN은 강한 B 세포 활성화제이다. 본 개시내용의 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제는 바람직하게는 우수한 B 세포 활성화제 (CpG-C ODN) 또는 보다 바람직하게는 강한 (CpG-B ODN) B 세포 활성화제이다.
최적 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제는 종종 하기 화학식에 따른 회문식 서열을 함유한다: 5'-퓨린-퓨린-CG-피리미딘-피리미딘-3', 또는 5'-퓨린-퓨린-CG-피리미딘-피리미딘-CG-3' (미국 특허 번호 6,589,940). TLR9 효능작용은 또한 특정 비-회문식 CpG-풍부화된 포스포로티오에이트 올리고뉴클레오티드에서 관찰되지만, 뉴클레오티드 서열에서의 변화에 의해 영향을 받을 수 있다. 추가로, TLR9 효능작용은 CpG 디뉴클레오티드 내의 시토신의 메틸화에 의해 폐지된다. 따라서, 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-AACGTTCG-3'을 포함하는 8 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20개 뉴클레오티드 초과의 길이이고, 올리고뉴클레오티드는 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25 또는 24개 뉴클레오티드 미만의 길이이다. 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호(SEQ ID NO): 3)을 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 뉴클레오티드 초과의 길이이고, 올리고뉴클레오티드는 35, 34, 33, 32, 31, 30, 29, 28, 27, 26, 25, 또는 24개 뉴클레오티드 미만의 길이이다.
다이나박스 테크놀로지스 코포레이션(Dynavax Technologies Corporation) (캘리포니아주 에머리빌)의 연구자들은 종에 걸쳐 공동-투여된 항원에 대한 면역 반응을 실질적으로 증진시킬 수 있는 특정 서열을 함유하는 22-mer 포스포로티오에이트 연결된 올리고데옥시뉴클레오티드, CpG 1018을 확인하였다 (Campbell, Methods Mol Biol, 1494:15-27, 2017). CpG 1018 (5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3', 서열식별번호: 1로서 제시됨)은 시험관내 및 생체내 면역자극성 활성에 대해 광범위한 패널의 올리고뉴클레오티드를 스크리닝한 후에 선택되었다. CpG 1018은 마우스, 토끼, 개, 개코원숭이, 시노몰구스 원숭이 및 인간에서 활성인 CpG-B ODN이다. 따라서, 일부 바람직한 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열식별번호: 1의 서열을 포함하는 올리고뉴클레오티드이다.
예시적인 올리고뉴클레오티드 TLR9 효능제, CpG 1018은 CpG-ODN이지만, 본 개시내용은 완전 DNA 분자로 제한되지 않는다. 즉, 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 CpG(들) 및 회문식 서열이 데옥시리보핵산이고 이들 영역 외부의 1개 이상의 핵산이 리보핵산인 DNA/RNA 키메라 분자이다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 선형이다. 다른 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 원형이거나 또는 헤어핀 루프(들)를 포함한다. CpG 올리고뉴클레오티드는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.
일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 변형을 함유할 수 있다. 변형은 3'OH 또는 5'OH 기의 변형, 뉴클레오티드 염기의 변형, 당 성분의 변형, 및 포스페이트 기의 변형을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 변형된 염기(들)가 왓슨-크릭 염기 쌍형성을 통해 그의 천연 상보체에 대해 동일한 특이성을 유지하는 한 (예를 들어, 회문식 부분이 여전히 자기-상보적임), 변형된 염기는 CpG 올리고뉴클레오티드의 회문식 서열에 포함될 수 있다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 비-정규 염기를 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 변형된 뉴클레오시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 뉴클레오시드는 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신, 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, TLR9 효능제는 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-3' (서열식별번호: 2)를 포함하는 올리고뉴클레오티드이고, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-X-G1CTTG1CAAG1CT-5'를 포함하고, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤이다 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5').
CpG 올리고뉴클레오티드는 포스페이트 기의 변형을 함유할 수 있다. 예를 들어, 포스포디에스테르 연결 이외에, 포스페이트 변형은 메틸 포스포네이트, 포스포로티오에이트, 포스포르아미데이트 (가교 또는 비-가교), 포스포트리에스테르 및 포스포로디티오에이트를 포함하나, 이에 제한되지는 않고, 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 다른 비-포스페이트 연결들도 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 백본만을 포함한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 백본만을 포함한다. 일부 실시양태에서, 올리고뉴클레오티드는 포스페이트 백본 내의 포스페이트 연결의 조합, 예컨대 포스포디에스테르 및 포스포로티오에이트 연결의 조합을 포함한다. 포스포로티오에이트 백본을 갖는 올리고뉴클레오티드는 포스포디에스테르 백본을 갖는 것보다 더 면역원성일 수 있고, 숙주 내로의 주사 후에 분해에 대해 더 저항성인 것으로 보인다 (Braun et al., J Immunol, 141:2084-2089, 1988; 및 Latimer et al., Mol Immunol, 32:1057-1064, 1995). 본 개시내용의 CpG 올리고뉴클레오티드는 적어도 1, 2 또는 3개의 뉴클레오티드간 포스포로티오에이트 에스테르 연결을 포함한다. 일부 실시양태에서, 복수의 CpG 올리고뉴클레오티드 분자가 적어도 1종의 부형제를 포함하는 제약 조성물 중에 존재하는 경우, 포스포로티오에이트 에스테르 연결의 두 입체이성질체가 복수의 CpG 올리고뉴클레오티드 분자 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드의 모든 뉴클레오티드간 연결은 포스포로티오에이트 연결이거나, 또는 상기 또 다른 방식으로, CpG 올리고뉴클레오티드는 포스포로티오에이트 백본을 갖는다.
전형적으로 0.5 ml 용량인, 면역원성 조성물의 단위 용량은 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드, 바람직하게는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 250, 500, 750, 1000, 또는 1250 μg 초과의 CpG 올리고뉴클레오티드, 및 약 6000, 5000, 4000, 3000, 또는 2000 μg 미만의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 375, 750, 1500, 3000 또는 6000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 750 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 1500 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물은 약 3000 μg의 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
본원에 기재된 CpG 올리고뉴클레오티드는 달리 나타내지 않는 한 그의 제약상 허용되는 염 형태이다. 예시적인 염기성 염은 암모늄 염, 알칼리 금속 염, 예컨대 나트륨, 리튬 및 칼륨 염, 알칼리 토금속 염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘 염, 아연 염, 유기 염기 (예를 들어, 유기 아민), 예컨대 N-Me-D-글루카민, N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 클로라이드, 콜린, 트로메타민, 디시클로헥실아민, t-부틸 아민과의 염, 및 아미노산, 예컨대 아르기닌, 리신 등과의 염을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 암모늄, 나트륨, 리튬 또는 칼륨 염 형태이다. 한 바람직한 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 나트륨 염 형태이다.
B. 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV) 당단백질 E (gE) 항원
본 개시내용의 면역원성 조성물의 VZV gE 항원은 gE 또는 그의 단편을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, gE 항원은 VZV-반응성 항체에 의해 인식되고/되거나 gE의 펩티드 단편은 VZV-반응성 T 세포에 의해 인식된다. 일부 실시양태에서, gE 항원은 재조합 단백질인 반면, 다른 실시양태에서 gE 항원은 VZV 비리온으로부터 정제된 것이다. 일부 바람직한 실시양태에서, gE 항원은 단리된 항원이다. 일부 실시양태에서, VZV gE 항원은 전장 VZV gE 항원의 신호 펩티드, 막횡단 및 세포질 도메인이 없는 말단절단된 재조합 단백질이다. 대표적인 gE의 아미노산 서열은 진뱅크(GenBank) 번호 AQT34120.1로서 제시된다. 일부 실시양태에서, gE 항원은 진뱅크 번호 AQT34120.1의 잔기 39-585로부터의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, gE의 아미노산 서열은 서열식별번호: 4로서 제시된다:
Figure pct00001
Figure pct00002
일부 실시양태에서, gE 항원은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, gE의 아미노산 서열은 서열식별번호: 5로서 제시된다:
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
일부 실시양태에서, gE 항원은 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 5와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
전형적으로 0.5 ml 용량인, 면역원성 조성물의 단위 용량은 약 10 μg 내지 약 100 μg의 gE 항원, 바람직하게는 약 25 μg 내지 약 75 μg의 gE 항원, 바람직하게는 약 40 내지 약 60 μg의 gE 항원, 또는 약 50 μg의 gE 항원을 포함할 수 있다.
C. 추가의 성분
본 개시내용의 면역원성 조성물은 1종 이상의 추가의 성분, 예컨대 1종 이상의 부형제, 또 다른 아주반트, 및/또는 추가의 항원을 포함할 수 있다.
1. 부형제
본 개시내용의 제약상 허용되는 부형제는, 예를 들어, 용매, 벌킹제, 완충제, 장성 조정제, 및 보존제를 포함한다 (Pramanick et al., Pharma Times, 45:65-77, 2013). 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 용매, 벌킹제, 완충제 및 장성 조정제 중 1종 이상으로서 기능하는 부형제를 포함할 수 있다 (예를 들어, 염수 중 염화나트륨은 수성 비히클 및 장성 조정제 둘 다로서 기능할 수 있다).
일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 용매로서 수성 비히클을 포함한다. 적합한 비히클은 예를 들어 멸균수, 염수 용액, 포스페이트 완충 염수, 및 링거액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 등장성이다.
면역원성 조성물은 완충제를 포함할 수 있다. 완충제는 처리, 저장 및 임의로 재구성 동안 활성제의 분해를 억제하기 위해 pH를 제어한다. 적합한 완충제는 예를 들어 아세테이트, 시트레이트, 포스페이트 또는 술페이트를 포함하는 염을 포함한다. 다른 적합한 완충제는 예를 들어 아미노산, 예컨대 아르기닌, 글리신, 히스티딘 및 리신을 포함한다. 완충제는 염산 또는 수산화나트륨을 추가로 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충제는 조성물의 pH를 6 내지 9의 범위 내로 유지한다. 일부 실시양태에서, pH는 (하한) 6, 7 또는 8 초과이다. 일부 실시양태에서, pH는 (상한) 9, 8, 또는 7 미만이다. 즉, pH는 하한이 상한 미만인 약 6 내지 9의 범위이다.
면역원성 조성물은 장성 조정제를 포함할 수 있다. 적합한 장성 조정제는 예를 들어 덱스트로스, 글리세롤, 염화나트륨, 글리세린 및 만니톨을 포함한다.
면역원성 조성물은 벌킹제를 포함할 수 있다. 벌킹제는 제약 조성물이 투여 전에 동결건조되어야 하는 경우에 특히 유용하다. 일부 실시양태에서, 벌킹제는 동결 또는 분무 건조 동안 및/또는 저장 동안 활성제의 안정화 및 분해 방지를 돕는 보호제이다. 적합한 벌킹제는 슈크로스, 락토스, 트레할로스, 만니톨, 소르비탈, 글루코스 및 라피노스와 같은 당 (단당류, 이당류 및 다당류)이다.
면역원성 조성물은 보존제를 포함할 수 있다. 적합한 보존제는 예를 들어 항산화제 및 항균제를 포함한다. 그러나, 바람직한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 멸균 조건 하에 제조되고, 1회 사용 용기 내에 존재하므로, 보존제의 포함을 필요로 하지 않는다.
2. 추가의 아주반트
아주반트는 관련 기술분야에 공지되어 있고, 명반 (알루미늄 염), 수중유 에멀젼, 유중수 에멀젼, 리포솜, 및 마이크로입자, 예컨대 폴리(락티드-코-글리콜리드) 마이크로입자를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (Shah et al., Methods Mol Biol, 1494:1-14, 2017). 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 gE 항원이 흡착되는 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 알루미늄 히드록시드 및 인산알루미늄 중 하나 또는 둘 다를 포함한다. 일부 실시양태에서, 알루미늄 염 아주반트는 알루미늄 히드록시드로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 단위 용량 (예를 들어, 약 0.5 ml)의 면역원성 조성물은 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al3+, 바람직하게는 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al3+를 포함한다.
다른 실시양태에서, 면역원성 조성물은 추가의 아주반트를 추가로 포함한다. 추가의 적합한 아주반트는 수-중-스쿠알렌 에멀젼 (예를 들어, MF59 또는 AS03), TLR3 효능제 (예를 들어, 폴리-IC 또는 폴리-ICLC), TLR4 효능제 (예를 들어, 사포닌, 예컨대 AS01 또는 AS02에서와 같은 Quil A 또는 QS-21), TLR5 효능제 (박테리아 플라겔린), 및 TLR7 및/또는 TLR8 효능제 (이미다조퀴놀린 유도체, 예컨대 이미퀴모드, 및 레시퀴모드)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다 (Coffman et al., Immunity, 33:492-503, 2010). 비-인간 동물에서의 수의학적 용도 및 항체 생산을 위해, 프로인트 아주반트의 분열촉진 성분 (완전 및 불완전 둘 다)이 사용될 수 있다.
D. 키트
본 개시내용은 또한 i) VZV gE 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물; 및 ii) 그를 필요로 하는 포유동물 대상체, 예컨대 인간 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 면역원성 조성물의 투여에 대한 지침서 세트를 포함하는 키트를 제공한다. 추가로, 본 개시내용은 i) VZV gE 항원을 포함하는 제1 조성물; ii) TLR9 효능제, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하는 제2 조성물; iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 면역원성 조성물을 제조하는 것에 대한 지침서; 및 임의로 iv) gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물을 그를 필요로 하는 포유동물, 예컨대 인간 대상체에서 투여하는 것에 대한 추가의 지침서 세트를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-AACGTTCG-3'을 포함한다. 일부 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함한다. 일부 바람직한 실시양태에서, CpG 올리고뉴클레오티드는 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)의 서열을 포함한다.
키트는 적절하게 패키징된 면역원성 조성물을 포함할 수 있다. 예를 들어, 면역원성 조성물이 동결-건조된 분말인 경우, 탄성 마개를 통해 유체 (예를 들어, 멸균수, 염수 등)를 주사함으로써 분말이 용이하게 재현탁될 수 있도록 탄성 마개를 갖는 바이알이 통상적으로 사용된다. 일부 실시양태에서, 키트는 투여용 장치 (예를 들어, 주사기 및 바늘)를 포함한다. 면역원성 조성물의 사용에 관한 지침서는 일반적으로 의도된 사용 방법에 대한 투여량, 스케줄 및 투여 경로에 관한 정보를 포함한다. 일부 실시양태에서, 면역원성 조성물은 VZV에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 것이다.
II. 사용 방법
본 개시내용은 VZV 당단백질 E (gE) 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제, 예컨대 CpG 올리고뉴클레오티드를 포함하는 면역원성 조성물을 포유동물 대상체에게 투여하여 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 것을 포함하는, VZV에 대한 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 면역원성 조성물은 근육내 주사에 의해, 임의로 약 0.5 mL의 부피 (예를 들어, 단위 용량)로 투여되어야 한다. 일부 실시양태에서, 근육내 주사는 이를 필요로 하는 인간 대상체의 상완의 삼각근 내로 이루어진다.
면역 반응을 자극하는 것은 (예를 들어, 초기 백신접종 요법의 결과로서) 신생 면역 반응을 도출하거나 또는 (예를 들어, 부스터 백신접종 요법의 결과로서) 기존 면역 반응을 증진시키는 것으로부터 발생할 수 있는 면역 반응을 증가시키는 것을 의미한다. 일부 실시양태에서, 면역 반응을 자극하는 것은 시토카인 생산을 자극하는 것; B 림프구 증식을 자극하는 것; 항체 생산을 자극하는 것; 인터페론 경로-연관 유전자 발현을 자극하는 것; 화학유인물질-연관 유전자 발현을 자극하는 것; 및 형질세포양 수지상 세포 성숙을 자극하는 것으로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 바람직한 실시양태에서, 면역 반응을 자극하는 것은 대상체에서 항원-특이적 항체 반응을 증가시키는 것을 포함한다.
열거된 실시양태
1. 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물이며, VZV 당단백질 E (gE) 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하고, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, gE 항원 및 올리고뉴클레오티드는 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인 면역원성 조성물.
2. 실시양태 1에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 조성물.
3. 실시양태 1에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)을 포함하는 것인 조성물.
4. 실시양태 1 내지 3 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드가 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 조성물.
5. 실시양태 4에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-3' (서열식별번호: 2)를 포함하며, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, 임의로 여기서 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-X-G1CTTG1CAAG1CT-5'를 포함하며, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 조성물.
6. 실시양태 1 내지 5 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하고, 임의로 여기서 모든 뉴클레오티드 연결이 포스포로티오에이트 연결인 조성물.
7. 실시양태 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 조성물.
8. 실시양태 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 조성물.
9. 실시양태 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서, VZV gE 항원이 전장 VZV gE 항원의 신호 펩티드, 막횡단 및 세포질 도메인이 없는 말단절단된 재조합 단백질이며, 임의로 여기서 VZV gE 항원이
(i) 진뱅크 번호 AQT34120.1의 잔기 39-585의 아미노산 서열, 또는 그와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열; 또는
(ii) 서열식별번호: 4의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 4와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열; 또는
(iii) 서열식별번호: 5의 아미노산 서열, 또는 서열식별번호: 5와 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열
을 포함하는 것인 조성물.
10. 실시양태 1 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 25 내지 약 75 μg의 gE 항원을 포함하며, 임의로 여기서 면역원성 조성물이 약 40 내지 약 60 μg의 gE 항원, 또는 약 50 μg의 gE 항원을 포함하는 것인 조성물.
11. 실시양태 1 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함하는 조성물.
12. 실시양태 11에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 하나 이상을 포함하는 것인 조성물.
13. 실시양태 11에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 조성물.
14. 실시양태 11 내지 13 중 어느 하나에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al3+를 포함하며, 임의로 여기서 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al3+를 포함하는 것인 조성물.
15. 실시양태 1 내지 14 중 어느 하나에 있어서, 포유동물 대상체가 인간 대상체인 조성물.
16. i) 실시양태 1 내지 15 중 어느 하나의 면역원성 조성물, 및
ii) 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 조성물의 투여에 대한 지침서
를 포함하는 키트.
17. i) 바리셀라 조스터 바이러스의 당단백질 E (gE) 항원을 포함하는 제1 조성물; ii) TLR9 효능제를 포함하는 제2 조성물; 및
iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 면역원성 조성물을 제조하는 것에 대한 지침서
를 포함하는 키트.
18. 실시양태 17에 있어서, iv) 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 면역원성 조성물을 투여하는 것에 대한 추가의 지침서 세트
를 추가로 포함하는 키트.
19. 실시양태 16 내지 18 중 어느 한 실시양태에 있어서, 면역원성 조성물의 근육내 주사를 위한 주사기 및 바늘을 추가로 포함하는 키트.
20. 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하도록 실시양태 1 내지 15 중 어느 하나의 면역원성 조성물을 포유동물 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물 대상체에서 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법.
21. 실시양태 20에 있어서, 면역원성 조성물이 근육내 주사에 의해 투여되는 것인 방법.
실시예
약어: CpG (비메틸화 시티딘-포스포-구아노신); CTRL (대조군); gE (VZV 당단백질 E); LAV (생 약독화 바이러스); mcg (마이크로그램); mcl (마이크로리터); MPL (모노포스포릴 지질 A); TLR9 (톨-유사 수용체 9); 및 VZV (바리셀라 조스터 바이러스).
실시예 1
마우스에서의 CpG-아주반트 처리된 조스터 백신의 면역원성
본 실시예는 생 약독화 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV) 균주 (하기에서 LAV로 지칭됨)로 감염된 마우스에서의 조스터 백신의 면역원성을 평가하기 위한 전임상 연구의 설명을 제공한다.
항원: 재조합 VZV 당단백질 E (gE)는 막횡단 앵커 및 카르복시-말단 도메인이 결여된 gE의 말단절단된 버전을 발현하는 유전자 조작된 차이니즈 햄스터 난소 숙주 세포의 세포 배양에 의해 수득되고, 따라서 상청액 내로 분비된다. 세포 배양은, 아미노산을 함유하지만 알부민, 항생제 또는 동물 유래 단백질을 함유하지 않는 배지에 의해 지지된다. gE를 크로마토그래피에 의해 정제하고, 문헌 [Haumont et al., Virus Res, 40:199-204, 1996]에 기재된 바와 같이 미래의 사용을 위해 동결건조시킨다. 초기 전임상 연구를 위해, VZV gE를 상업적으로 입수하였다.
사용 전에 gE를 아주반트 제제 또는 제약상 허용되는 완충제 또는 생리 식염수와 조합함으로써 백신을 제조하였다. 구체적으로, gE를 주사 전 30분 동안 명반 (알루미늄 히드록시드)에 흡착시키고, AS01B 및 CpG 1018 아주반트를 주사 직전에 각각 gE와 혼합하였다.
실험 설계: 면역화 스케줄의 시작 35일 전 (제 -35일)에 생 약독화 VZV 백신 (500 mcl 중 LAV의 104 플라크 형성 단위를 피하 경로에 의해 투여함)으로 프라이밍된 C57BL/6 마우스 (n=4-8/군)에서 CpG 1018의 아주반트 활성을 평가하였다. 사용된 LAV는 머크 앤드 코., 인크. (뉴저지주 화이트하우스 스테이션)에 의해 시판되는 바리박스® 바리셀라 바이러스 백신 라이브였다. 마우스는 VZV의 충분한 복제를 지지하지 않기 때문에, 이는 인간에서 기존의 VZV 감염을 모방하기 위해 행해졌다. 마우스를 제0일 및 제28일에 근육내 경로에 의해 50 mcl의 백신 제제 또는 염수 대조군으로 면역화하였다. 군, 투여량 및 샘플링을 표 1-1에 열거한다.
표 1-1. gE 면역원성의 평가를 위한 백신접종
Figure pct00006
VZV gE는 B 세포 및 T 세포 에피토프 둘 다를 함유한다. 따라서, 백신의 1회 (제21일) 또는 2회 (제56일) 투여 후에 VZV gE 항원-코팅된 마이크로타이터 플레이트를 사용하여 상업적으로 입수가능한 ELISA로 gE에 대한 혈청 항체 반응을 측정하였다. CD3+CD4+ T 세포 시토카인 반응 (IL-2 및 IFN-γ)은 gE 항원의 길이에 걸쳐 있는 중첩 펩티드로 비장 세포 배양물을 시험관내 재자극한 후에 유동 세포측정법에 의해 측정하였다. 군당 3개의 비장 세포 서브풀을 테스트하였다 (3, 3, 또는 2 마우스 비장/풀). T 세포 반응을 CD4+ T 세포의 백분율로서 또는 CD154+CD4+ T 세포의 백분율로서 평가하였으며, 여기서 CD154는 항원-자극된 세포에서 일시적으로 상향-조절된 분자이고, 따라서 항원-반응성 CD4+ T 세포 (즉, 생체외 gE 펩티드 자극에 반응하는 세포)의 특이적 마커로서의 역할을 한다. 마우스를 주사 부위 반응을 포함한 건강 파라미터 및 일반적인 외관에 대해 모니터링하였다.
시험된 모든 아주반트 군은 프라임 및 부스터 백신접종 후에 높은 수준의 항-VZV IgG 반응을 유도하였다. 제1 gE 면역화 (프라이밍) 후 제21일에, 항-VZV IgG 반응은 비-면역화된 마우스 및 LAV-프라이밍되었지만 추가로 면역화되지 않은 마우스에서 관찰된 배경 수준과 비교하여 상승하였다. 아주반트 알루미늄 히드록시드 (명반) 단독 또는 CpG 1018 단독의 첨가는 gE 항원 단독으로의 면역화에 비해 항-VZV IgG 반응을 증가시켰다. 제1 면역화 후의 최고 항-VZV IgG 반응이 CpG-1018 + 명반으로 면역화된 마우스에서 관찰되었다 (도 1a). gE + CpG 1018 + 명반 면역화된 군에서의 반응은 CpG-1018 단독과 조합된 gE로 면역화된 마우스 또는 gE + AS01b로 면역화된 마우스에서보다 유의하게 더 높았다. 항-VZV IgG 반응은 모든 gE ± 아주반트 군에서 제56일에 제2 면역화 (부스트) 후 약 1 로그 더 높은 것으로 관찰되었고 (도 1b), 이 시점에서 유사한 반응이 gE + AS01b 및 gE + CpG 1018 + 명반 군에서 관찰되었고, gE + AS01b 면역화된 마우스에서의 반응은 gE + CpG 1018로 면역화된 마우스에서보다 유의하게 더 높았다 (터키의 다중 비교 시험과 함께 ANOVA, *** P < 0.001, **** P < 0.0001).
gE 펩티드-자극된 비장 세포에서의 생체외 세포내 시토카인 발현 반응을 gE 항원-특이적 CD4+ T 세포 반응에 대한 면역화 요법의 효과의 척도로서 정량화하였다. gE-자극된 시토카인 발현을 모든 CD4+ T 세포의 백분율로서 및 항원-반응성 집단 (CD154+CD4+ T 세포)의 백분율로서 측정하였다. IL-2 및 IFN-γ 발현은 대조군 (CTL), LAV-프라이밍 단독, gE 단독 및 명반 아주반트 처리된 군으로부터의 CD4+ T 세포에는 부재하거나 또는 매우 낮은 수준이었다. 대조적으로, 아주반트로서 AS01b 또는 CpG 1018의 사용은 생체외 재자극 후에 측정된 바와 같이 유사하게 상승된 IL-2 (도 2a) 및 IFN-γ 발현 (도 2b) T 세포를 유도하였다. IL-2 및 IFN-γ 발현은 gE + CpG 1018 + 명반-면역화 군으로부터의 재자극된 CD4+ T 세포에서 더 낮은 경향이 있었다. IL-2 및 IFN-γ 공동-발현 CD4+ T 세포는 AS01b-아주반트 처리된 마우스로부터의 세포, 이어서 CpG 1018 및 CpG 1018 + 명반-아주반트 처리된 마우스로부터의 세포에서 가장 높았다 (도 2c). 반응 패턴은 AS01b 및 CpG 1018-아주반트 처리된 마우스로부터의 gE 펩티드 재자극된 T 세포에서 유사한 사이토카인 발현으로 항원-반응성 (CD154+) CD4+ T 세포 집단 내에서 유사하였다 (도 3a-3b). IFN-γ 발현은 AS01b 아주반트 처리된 마우스로부터의 T 세포에 비해 CpG 1018 아주반트 처리된 마우스로부터의 항원-특이적 T 세포에서 더 높은 경향을 보였고, 세포내 IL-2 및 IFN-γ 발현 둘 다는 gE 반응을 아주반트 처리하기 위해 CpG 1018 + 명반이 사용된 마우스에서 보다 낮았다.
요약하면, 시험된 모든 아주반트는 제1 면역화 후에 gE + CpG 1018 + 명반 면역화된 마우스 및 부스터 면역화 후에 gE + AS01b-면역화된 마우스에서 가장 높은 항체 반응으로 C57BL/6 마우스에서 높은 수준의 항-VZV IgG 반응을 유도하였지만, CpG 1018 + 명반에서 유도된 수준은 유사하였다. gE 면역화에 대한 CD4+ T 세포 반응을 생체외 gE 펩티드 재자극 후에 평가하였고, CD154의 발현에 의해 확인된 바와 같이, 항원-반응성 집단의 모든 CD4+ 세포의 백분율로서 측정된 경우에 CpG 1018 및 AS01b-아주반트 처리된 군에서 가장 높은 반응이 관찰되었다. 데이터는 명반과 조합된 CpG 1018 또는 독립형 아주반트로서의 CpG 1018이 면역화된 마우스에서 AS01b에 대해 각각 유사한 항체 및 T 세포 반응을 유도하였음을 입증하였다. T 세포 반응이 주로 대상포진 발생의 제어를 담당하는 것으로 여겨지기 때문에, 데이터는 gE-기반 백신에서 아주반트로서 CpG 1018의 사용을 지지한다. 단독의 또는 명반과 조합된 CpG 1018은 AS01b와 비교하여 유리한 반응원성 프로파일을 생성하는 것으로 고려된다.
상기 개시내용이 명료성 및 이해의 목적을 위해 예시 및 실시예로서 일부 상세히 설명되었지만, 특정 변경 및 수정이 실시될 수 있다는 것이 본 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 따라서, 실시예는 첨부된 청구항에 의해 서술되는 본 개시내용의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
SEQUENCE LISTING <110> DYNAVAX TECHNOLOGIES CORPORATION <120> SHINGLES VACCINES COMPRISING A TLR9 AGONIST <130> 37788-20071.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/987,243 <151> 2020-03-09 <160> 5 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 tgactgtgaa cgttcgagat ga 22 <210> 2 <211> 11 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <220> <221> misc_feature <222> 3, 7, 11 <223> 2'-deoxy-7-deazaguanosine <400> 2 tcgaacgttc g 11 <210> 3 <211> 10 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 aacgttcgag 10 <210> 4 <211> 546 <212> PRT <213> Varicella zoster virus <400> 4 Met Gly Thr Val Asn Lys Pro Val Val Gly Val Leu Met Gly Phe Gly 1 5 10 15 Ile Ile Thr Gly Thr Leu Arg Ile Thr Asn Pro Val Arg Ala Ser Val 20 25 30 Leu Arg Tyr Asp Asp Phe His Ile Asp Glu Asp Lys Leu Asp Thr Asn 35 40 45 Ser Val Tyr Glu Pro Tyr Tyr His Ser Asp His 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Arg Gly Ala Glu Phe His Met Trp Asn Tyr His Ser His Val Phe Ser 340 345 350 Val Gly Asp Thr Phe Ser Leu Ala Met His Leu Gln Tyr Lys Ile His 355 360 365 Glu Ala Pro Phe Asp Leu Leu Leu Glu Trp Leu Tyr Val Pro Ile Asp 370 375 380 Pro Thr Cys Gln Pro Met Arg Leu Tyr Ser Thr Cys Leu Tyr His Pro 385 390 395 400 Asn Ala Pro Gln Cys Leu Ser His Met Asn Ser Gly Cys Thr Phe Thr 405 410 415 Ser Pro His Leu Ala Gln Arg Val Ala Ser Thr Val Tyr Gln Asn Cys 420 425 430 Glu His Ala Asp Asn Tyr Thr Ala Tyr Cys Leu Gly Ile Ser His Met 435 440 445 Glu Pro Ser Phe Gly Leu Ile Leu His Asp Gly Gly Thr Thr Leu Lys 450 455 460 Phe Val Asp Thr Pro Glu Ser Leu Ser Gly Leu Tyr Val Phe Val Val 465 470 475 480 Tyr Phe Asn Gly His Val Glu Ala Val Ala Tyr Thr Val Val Ser Thr 485 490 495 Val Asp His Phe Val Asn Ala Ile Glu Glu Arg Gly Phe Pro Pro Thr 500 505 510 Ala Gly Gln Pro Pro Ala Thr Thr Lys Pro Lys Glu Ile Thr Pro Val 515 520 525 Asn Pro Gly Thr Ser Pro Leu Leu Arg 530 535

Claims (21)

  1. 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물이며, VZV 당단백질 E (gE) 항원 및 톨-유사 수용체 9 (TLR9) 효능제를 포함하고, 여기서 TLR9 효능제는 비메틸화 시티딘-포스포-구아노신 (CpG) 모티프를 포함하는 10 내지 35개 뉴클레오티드 길이의 올리고뉴클레오티드이고, gE 항원 및 올리고뉴클레오티드는 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하는데 효과적인 양으로 면역원성 조성물 중에 존재하는 것인 면역원성 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-AACGTTCGAG-3' (서열식별번호: 3)을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 5'-TGACTGTGAA CGTTCGAGAT GA-3' (서열식별번호: 1)의 서열을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 변형된 뉴클레오시드를 포함하며, 임의로 여기서 변형된 뉴클레오시드가 2'-데옥시-7-데아자구아노신, 2'-데옥시-6-티오구아노신, 아라비노구아노신, 2'-데옥시-2'치환된-아라비노구아노신 및 2'-O-치환된-아라비노구아노신으로 이루어진 군으로부터 선택된 것인 면역원성 조성물.
  5. 제4항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-3' (서열식별번호: 2)을 포함하며, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고, 임의로 여기서 올리고뉴클레오티드가 서열 5'-TCG1AACG1TTCG1-X-G1CTTG1CAAG1CT-5'을 포함하며, 여기서 G1은 2'-데옥시-7-데아자구아노신이고 X는 글리세롤인 (5'-서열식별번호: 2-3'-X-3'-서열식별번호: 2-5') 면역원성 조성물.
  6. 제3항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 적어도 1개의 포스포로티오에이트 연결을 포함하거나, 또는 모든 뉴클레오티드 연결이 포스포로티오에이트 연결인 면역원성 조성물.
  7. 제6항에 있어서, 올리고뉴클레오티드가 단일-가닥 올리고데옥시뉴클레오티드인 면역원성 조성물.
  8. 제6항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg 내지 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드 또는 약 750 μg 내지 약 3000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 375 μg, 약 750 μg, 약 1500 μg, 약 3000 μg, 또는 약 6000 μg의 올리고뉴클레오티드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  9. 제8항에 있어서, VZV gE 항원이 전장 VZV gE 항원의 신호 펩티드, 막횡단 및 세포질 도메인이 없는 말단절단된 재조합 단백질인 면역원성 조성물.
  10. 제9항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 25 내지 약 75 μg의 gE 항원을 포함하거나, 또는 면역원성 조성물이 약 40 내지 약 60 μg의 gE 항원, 또는 약 50 μg의 gE 항원을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  11. 제10항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트를 추가로 포함하는 면역원성 조성물.
  12. 제11항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 무정형 알루미늄 히드록시포스페이트 술페이트, 알루미늄 히드록시드, 알루미늄 포스페이트, 및 칼륨 알루미늄 술페이트로 이루어진 군 중 1개 이상을 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  13. 제11항에 있어서, 알루미늄 염 아주반트가 알루미늄 히드록시드를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  14. 제11항에 있어서, 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.25 내지 약 0.50 mg Al3+를 포함하거나, 또는 0.5 ml 용량의 면역원성 조성물이 약 0.30 내지 약 0.40 mg Al3+를 포함하는 것인 면역원성 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 대상체가 인간 대상체인 면역원성 조성물.
  16. i) 제15항의 면역원성 조성물, 및
    ii) 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위한 면역원성 조성물의 투여에 대한 지침서
    를 포함하는 키트.
  17. i) 바리셀라 조스터 바이러스의 당단백질 E (gE) 항원을 포함하는 제1 조성물;
    ii) TLR9 효능제를 포함하는 제2 조성물; 및
    iii) 제1 조성물을 제2 조성물과 혼합하여 면역원성 조성물을 제조하는 것에 대한 지침서
    를 포함하는 키트.
  18. 제17항에 있어서, iv) 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하기 위해 면역원성 조성물을 투여하는 것에 대한 추가의 지침서 세트
    를 추가로 포함하는 키트.
  19. 제18항에 있어서, 면역원성 조성물의 근육내 주사를 위한 주사기 및 바늘을 추가로 포함하는 키트.
  20. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항의 면역원성 조성물을 포유동물 대상체에게 투여하여 포유동물 대상체에서 gE 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 것을 포함하는, 포유동물 대상체에서 바리셀라 조스터 바이러스 (VZV)에 대한 면역 반응을 자극하는 방법.
  21. 제20항에 있어서, 면역원성 조성물이 근육내 주사에 의해 투여되는 것인 방법.
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