KR20230007923A - 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도 - Google Patents
중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20230007923A KR20230007923A KR1020220011024A KR20220011024A KR20230007923A KR 20230007923 A KR20230007923 A KR 20230007923A KR 1020220011024 A KR1020220011024 A KR 1020220011024A KR 20220011024 A KR20220011024 A KR 20220011024A KR 20230007923 A KR20230007923 A KR 20230007923A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- stem cells
- mesenchymal stem
- present
- cells
- disease
- Prior art date
Links
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 114
- 208000005615 Interstitial Cystitis Diseases 0.000 claims abstract description 66
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 57
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 20
- 101000638886 Homo sapiens Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102100038280 Prostaglandin G/H synthase 2 Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 102100031358 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 102100023343 Centromere protein I Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 101000994365 Homo sapiens Integrin alpha-6 Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 102100032816 Integrin alpha-6 Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 101000896657 Homo sapiens Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 Proteins 0.000 claims abstract description 16
- 102100021691 Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase BUB1 Human genes 0.000 claims abstract description 16
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 claims abstract description 14
- 101000907944 Homo sapiens Centromere protein I Proteins 0.000 claims abstract 3
- 101710168942 Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1 Proteins 0.000 claims abstract 3
- 108010037462 Cyclooxygenase 2 Proteins 0.000 claims abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 110
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 26
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 24
- 230000005486 microgravity Effects 0.000 claims description 24
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 22
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 20
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 claims description 20
- 210000001778 pluripotent stem cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 14
- 201000003146 cystitis Diseases 0.000 claims description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 12
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 10
- 239000002998 adhesive polymer Substances 0.000 claims description 10
- 230000005484 gravity Effects 0.000 claims description 10
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 claims description 9
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 claims description 9
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 claims description 9
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 claims description 9
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 claims description 9
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 claims description 9
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 claims description 8
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 8
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 7
- 206010008609 Cholangitis sclerosing Diseases 0.000 claims description 6
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 claims description 6
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 6
- 201000000742 primary sclerosing cholangitis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000010157 sclerosing cholangitis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 claims description 4
- 206010003267 Arthritis reactive Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 4
- 206010063057 Cystitis noninfective Diseases 0.000 claims description 4
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 claims description 4
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 claims description 4
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000003838 Idiopathic interstitial pneumonia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000011200 Kawasaki disease Diseases 0.000 claims description 4
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000000185 Localized scleroderma Diseases 0.000 claims description 4
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 claims description 4
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 4
- 201000003139 chronic cystitis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000001981 dermatomyositis Diseases 0.000 claims description 4
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 4
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 claims description 4
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 claims description 4
- 208000001725 mucocutaneous lymph node syndrome Diseases 0.000 claims description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005987 polymyositis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000002574 reactive arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 4
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 4
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical group CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 claims description 3
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000855 Fucoidan Polymers 0.000 claims description 3
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 claims description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims description 3
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims description 3
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 claims description 3
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 claims description 3
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 2
- 102100030684 Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1 Human genes 0.000 claims 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 claims 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 claims 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 20
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 17
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 17
- 102100040557 Osteopontin Human genes 0.000 abstract description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 abstract description 11
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 abstract description 10
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 7
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 abstract description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 3
- -1 NF-α Proteins 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 23
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 20
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 20
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 16
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 15
- 101710084051 Centromere protein I Proteins 0.000 description 14
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 10
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 10
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 9
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 9
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 9
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 9
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 208000035896 Twin-reversed arterial perfusion sequence Diseases 0.000 description 8
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 8
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 8
- 206010011796 Cystitis interstitial Diseases 0.000 description 7
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 7
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 7
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 7
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 210000005088 multinucleated cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 6
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 5
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 210000005068 bladder tissue Anatomy 0.000 description 5
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 5
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 5
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000004088 simulation Methods 0.000 description 5
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 4
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 102100027211 Albumin Human genes 0.000 description 3
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 3
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Chemical class 0.000 description 3
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 3
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 3
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100030013 Endoribonuclease Human genes 0.000 description 2
- 101710199605 Endoribonuclease Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000725401 Homo sapiens Cytochrome c oxidase subunit 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001046683 Homo sapiens Integrin alpha-L Proteins 0.000 description 2
- 101001049181 Homo sapiens Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000605127 Homo sapiens Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- 101001136981 Homo sapiens Proteasome subunit beta type-9 Proteins 0.000 description 2
- 101000808143 Homo sapiens Uroplakin-1a Proteins 0.000 description 2
- 101000808114 Homo sapiens Uroplakin-1b Proteins 0.000 description 2
- 101000808105 Homo sapiens Uroplakin-2 Proteins 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 102100022339 Integrin alpha-L Human genes 0.000 description 2
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 2
- 102100023678 Killer cell lectin-like receptor subfamily B member 1 Human genes 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 2
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 2
- 108050003267 Prostaglandin G/H synthase 2 Proteins 0.000 description 2
- 102100035764 Proteasome subunit beta type-9 Human genes 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 2
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 2
- 101710113029 Serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 2
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 2
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 2
- 102100038849 Uroplakin-1a Human genes 0.000 description 2
- 102100038853 Uroplakin-1b Human genes 0.000 description 2
- 102100038851 Uroplakin-2 Human genes 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 150000001556 benzimidazoles Chemical class 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000034303 cell budding Effects 0.000 description 2
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 2
- 230000002884 effect on inflammation Effects 0.000 description 2
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 2
- 238000007667 floating Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 2
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 2
- 230000017205 mitotic cell cycle checkpoint Effects 0.000 description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 2
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036407 pain Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000004850 protein–protein interaction Effects 0.000 description 2
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical compound NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L sodium sulfite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])=O GEHJYWRUCIMESM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- CCEKAJIANROZEO-UHFFFAOYSA-N sulfluramid Chemical group CCNS(=O)(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F CCEKAJIANROZEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 2
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003014 totipotent stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- HHGZUQPEIHGQST-RGVONZFCSA-N (2r)-2-amino-3-[[(2r)-2-amino-2-carboxyethyl]disulfanyl]propanoic acid;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CSSC[C@H](N)C(O)=O HHGZUQPEIHGQST-RGVONZFCSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- RBMGJIZCEWRQES-DKWTVANSSA-N (2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O RBMGJIZCEWRQES-DKWTVANSSA-N 0.000 description 1
- CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 CMXXUDSWGMGYLZ-XRIGFGBMSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 2-amino-3-[3-[bis(2-chloroethyl)amino]phenyl]propanoic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CC1=CC=CC(N(CCCl)CCCl)=C1 QDGAVODICPCDMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 2-amino-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)C(N)CCCN=C(N)N KWTQSFXGGICVPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102100034613 Annexin A2 Human genes 0.000 description 1
- 108090000668 Annexin A2 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010005063 Bladder pain Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 208000020401 Depressive disease Diseases 0.000 description 1
- 208000004145 Endometritis Diseases 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 239000004386 Erythritol Substances 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N Erythritol Natural products OCC(O)C(O)CO UNXHWFMMPAWVPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910005390 FeSO4-7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910005444 FeSO4—7H2O Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000012673 Follicle Stimulating Hormone Human genes 0.000 description 1
- 108010079345 Follicle Stimulating Hormone Proteins 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101100256651 Homo sapiens SENP6 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000004454 Hyperalgesia Diseases 0.000 description 1
- 208000035154 Hyperesthesia Diseases 0.000 description 1
- 206010020853 Hypertonic bladder Diseases 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100037792 Interleukin-6 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 101150112982 Itga6 gene Proteins 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N L-Aspartic acid Natural products OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N L-Methionine Natural products CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N L-lysine hydrochloride Chemical compound Cl.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BVHLGVCQOALMSV-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229930195722 L-methionine Natural products 0.000 description 1
- 229930182821 L-proline Natural products 0.000 description 1
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 206010027566 Micturition urgency Diseases 0.000 description 1
- 101100003131 Mus musculus Atp8b1 gene Proteins 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 208000009722 Overactive Urinary Bladder Diseases 0.000 description 1
- 108700005081 Overlapping Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150000187 PTGS2 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 208000000450 Pelvic Pain Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 206010036018 Pollakiuria Diseases 0.000 description 1
- 102000007327 Protamines Human genes 0.000 description 1
- 108010007568 Protamines Proteins 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 description 1
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150038317 SSP1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100125020 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) pss1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100018019 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ssc1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100023713 Sentrin-specific protease 6 Human genes 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000028938 Urination disease Diseases 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N Xylitol Natural products OCCC(O)C(O)C(O)CCO TVXBFESIOXBWNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000038016 acute inflammation Diseases 0.000 description 1
- 230000006022 acute inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000033289 adaptive immune response Effects 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 229940023476 agar Drugs 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N alpha-linolenic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O DTOSIQBPPRVQHS-PDBXOOCHSA-N 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 208000037979 autoimmune inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 208000029162 bladder disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 210000002230 centromere Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L cobalt(3+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+3].N#[C-].N([C@@H]([C@]1(C)[N-]\C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C(\C)/C1=N/C([C@H]([C@@]1(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=C\C1=N\C([C@H](C1(C)C)CCC(N)=O)=C/1C)[C@@H]2CC(N)=O)=C\1[C@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP([O-])(=O)O[C@H]1[C@@H](O)[C@@H](N2C3=CC(C)=C(C)C=C3N=C2)O[C@@H]1CO FDJOLVPMNUYSCM-WZHZPDAFSA-L 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L copper(II) sulfate pentahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.[Cu+2].[O-]S([O-])(=O)=O JZCCFEFSEZPSOG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WFTCFVUQORELJZ-USHJOAKVSA-L disodium;(2s)-2-amino-3-(4-oxidophenyl)propanoate;dihydrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([O-])C=C1 WFTCFVUQORELJZ-USHJOAKVSA-L 0.000 description 1
- LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L disodium;hydrogen phosphate;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O LVXHNCUCBXIIPE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 1
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 1
- 210000002472 endoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N erythritol Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)CO UNXHWFMMPAWVPI-ZXZARUISSA-N 0.000 description 1
- 235000019414 erythritol Nutrition 0.000 description 1
- 229940009714 erythritol Drugs 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 229940028334 follicle stimulating hormone Drugs 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000003599 food sweetener Nutrition 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002149 gonad Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000000301 hemidesmosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 108040006858 interleukin-6 receptor activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- XNCMOUSLNOHBKY-UHFFFAOYSA-H iron(3+);trisulfate;heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Fe+3].[Fe+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O XNCMOUSLNOHBKY-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 229960004488 linolenic acid Drugs 0.000 description 1
- KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N linolenic acid Natural products CC=CCCC=CCC=CCCCCCCCC(O)=O KQQKGWQCNNTQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000845 maltitol Substances 0.000 description 1
- 235000010449 maltitol Nutrition 0.000 description 1
- VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N maltitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O VQHSOMBJVWLPSR-WUJBLJFYSA-N 0.000 description 1
- 229940035436 maltitol Drugs 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000010208 microarray analysis Methods 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000024350 mitotic cell cycle spindle checkpoint Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 239000012120 mounting media Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000003012 network analysis Methods 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000020629 overactive bladder Diseases 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940116317 potato starch Drugs 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- LJPYJRMMPVFEKR-UHFFFAOYSA-N prop-2-ynylurea Chemical compound NC(=O)NCC#C LJPYJRMMPVFEKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 229950008679 protamine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N pyridoxine hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O ZUFQODAHGAHPFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004172 pyridoxine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019171 pyridoxine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011764 pyridoxine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 239000002151 riboflavin Substances 0.000 description 1
- 235000019192 riboflavin Nutrition 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 208000017520 skin disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N sodium 2-[[2-[[hydroxy-(3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl)oxyphosphoryl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoic acid Chemical compound [Na+].C=1NC2=CC=CC=C2C=1CC(C(O)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NP(O)(=O)OC1OC(C)C(O)C(O)C1O IFGCUJZIWBUILZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 235000010265 sodium sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Chemical class 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000003765 sweetening agent Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 description 1
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 1
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 description 1
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 210000003708 urethra Anatomy 0.000 description 1
- 208000026533 urinary bladder disease Diseases 0.000 description 1
- 210000001635 urinary tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 239000000811 xylitol Substances 0.000 description 1
- 235000010447 xylitol Nutrition 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N xylitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-SCDXWVJYSA-N 0.000 description 1
- 229960002675 xylitol Drugs 0.000 description 1
- RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O RZLVQBNCHSJZPX-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/10—Drugs for disorders of the urinary system of the bladder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M35/00—Means for application of stress for stimulating the growth of microorganisms or the generation of fermentation or metabolic products; Means for electroporation or cell fusion
- C12M35/04—Mechanical means, e.g. sonic waves, stretching forces, pressure or shear stimuli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/45—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from artificially induced pluripotent stem cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2513/00—3D culture
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
본 발명은 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 중간엽 줄기세포는 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가 및/또는 PTGS2 마커의 발현량의 감소 특성을 나타냄으로써, TNF-α, IL-6 등의 염증성 사이토카인의 양을 현저히 감소시키므로, 다양한 염증 질환의 예방, 완화, 개선 또는 치료에 효과적이다.
특히, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 동물모델에 투여하는 경우, IC/BPS 유도 과정에서 무너진 방광 내벽을 회복시키고, 염증 정도를 완화시키므로, 간질성 방광염/방광통증 증후군에 대하여 우수한 치료 효능이 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 상처 치유 효과가 우수하므로, 상처치유용으로 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명의 중간엽 줄기세포는 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가 및/또는 PTGS2 마커의 발현량의 감소 특성을 나타냄으로써, TNF-α, IL-6 등의 염증성 사이토카인의 양을 현저히 감소시키므로, 다양한 염증 질환의 예방, 완화, 개선 또는 치료에 효과적이다.
특히, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 동물모델에 투여하는 경우, IC/BPS 유도 과정에서 무너진 방광 내벽을 회복시키고, 염증 정도를 완화시키므로, 간질성 방광염/방광통증 증후군에 대하여 우수한 치료 효능이 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 상처 치유 효과가 우수하므로, 상처치유용으로 유용하게 이용될 수 있다.
Description
본 발명은 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도에 관한 것이다.
일반적으로 염증반응은 생체의 세포나 조직에 기질적 변화를 가져오는 침습으로 인한 손상을 수복 및 재생하기 위한 생체방어 반응과정이고, 이 반응과정에는 국소의 혈관, 체액의 각종 조직세포 및 면역세포 등이 작용한다. 정상적으로 외부 침입균에 의하여 유도되는 염증반응은 생체를 보호하기 위한 방어 시스템인 반면, 비정상적으로 과도한 염증반응이 유도되면 다양한 질환들이 나타나게 되는데, 이러한 질환들을 염증질환이라 총한다. 상기 염증질환은 외부자극에 의하여 활성화된 표적세포로부터 분비되는 다양한 염증 매개물질이 염증을 증폭 및 지속시켜 인체의 생명을 위협하는 질환으로서 급성염증, 방광염과 같은 방광 내에서의 질환, 류마티스관절염과 같은 관절 내에서의 질환, 건선 등의 형태로 나타나는 피부질환 및 기관지 천식 등의 알러지성 염증질환 등을 포함한다.
특히, 간질성 방광염(IC)은 통증, 예를 들면 골반통의 증후, 및 하부 요로 증후군(LUTS), 예를 들면 증가된 빈뇨/절박뇨를 특징으로 하는, 원인이 밝혀지지 않은 만성 방광 질환이다. 보다 최근의 용어는 이 복합 증후를 집합적으로 개시하기 위해 IC와 함께 통증성 방광 증후군(PBS)([MacDiarmid SA et al. Rev Urol 2007; 9(1): 9-16]) 또는 방광 통증 증후군(BPS)([(van der Merve et al. European Urology 53(2008) 60-67])를 포함하는 것으로, 즉 IC/BPS 또는 IC/PBS/BPS로 변화되고 있다.
IC/PBS/BPS의 유병률은 임상적으로 확인된 질병을 갖는 100,000명의 여성당 67 내지 230명으로 다양하며, 흔히 자궁내막염, 재발성 요로 감염, 과민성 방광 또는 외음부 통증으로 잘못 진단되거나 저진단되기 때문에 이 수치는 아마도 더 높을 것이다(Forrest J B et al. Clinical Courier 2006; 24(3):1-8). IC는 삶의 질에 상당한 영향을 미치고, 여행, 가족관계 및 활동에 영향을 미치고(Slade D et al. Urol 1997; 49 (5A Suppl):10-3), 또한 우울성 증후군과 관련되어 있다(Rothrock N E et al. J Urol 2002; 167: 1763-1767).
상기 IC/PBS/BPS는 단일한 병인이 확인되지 않았고, 주로 통각과민, 만성 방광 통증 및 배뇨 장애를 일으킨다(Forrest J B et al. Clinical Courier 2006; 24(3):1-8).
한편, 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell, MSC)는 중간엽 조직 계통으로 분화하는 능력을 가진 다분화능 전구세포이다. 이 세포는 다양한 세포에서 적응 및 선천성 면역 반응을 조절하여 잠재적인 면역 조절 효과를 매개할 수 있어, 자가면역 질환을 치료하기 위한 새로운 대안으로 떠오르고 있다. 또한 면역억제 및 항염증 효과(유럽등록특허 제02298861호, 미국공개특허 제2012-0269774호)를 가질 뿐만 아니라 T 세포의 활성화 및 증식을 억제하는 것으로 알려져 있다(Li ZJ et al., PloS ONE 8(10): 77159, 2013).
그러나, 종래에는 MSC의 일반적인 항염증 효과에 대해서만 공지되어 있을 뿐, 염증 관련 질환에 대하여 더욱 강력한 효과를 갖도록 최적화된 MSC 줄기세포 치료제는 아직까지 개발이 미진한 실정이다. 따라서 염증성 질환의 예방 또는 치료에 적합한 MSC 치료제 개발이 절실히 요구된다.
이에 본 발명자들은 염증 관련 질환에 대하여 더욱 강력한 효과를 갖도록 최적화된 MSC 줄기세포에 대해 예의 연구를 거듭하던 중, 중간엽 줄기세포(MSC)에서 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가하고, PTGS2 마커의 발현량의 감소하면 간질성 방광염을 포함한 다양한 염증 질환의 예방, 완화, 개선 또는 치료에 효과적임을 확인하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 간질성 방광염을 포함한 다양한 염증 질환의 예방, 완화, 개선 또는 치료에 효과적인 중간엽 줄기세포를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 상처치유용 조성물을 제공하는 데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 (A) SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가; 및 (B) PTGS2 마커의 발현량의 감소; 중에서 선택되는 1종 이상의 특성을 나타내는 중간엽 줄기세포를 제공한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 중간엽 줄기세포는 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 마커의 발현량이 증가하는 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 중간엽 줄기세포는 (1) 대상체로부터 분리된 전분화능 줄기세포를 배양하여 배아체(Embryoid Body, EB)를 형성하는 단계; (2) 상기 배아체를 미세중력(microgravity) 하의 생물반응기(bioreactor)에서 3차원 배양하여 스페로이드(spheroid)를 형성하는 단계; 및 (3) 상기 스페로이드를 배양 표면에 점착성 고분자가 코팅된 배양 용기에서 부착 배양하여 중간엽 줄기세포로 분화시키는 단계;를 포함하는 방법으로 제작된 것일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 전분화능 줄기세포는 배아줄기세포(Embryonic Stem Cell, ESC) 또는 유도만능 줄기세포(induced Pluripotent Stem Cell, iPSC)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 전분화능 줄기세포는 유도만능 줄기세포일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 단계 (1)은 상기 전분화능 줄기세포를 다중 웰(multi-well) 배양 용기에서 3차원 배양함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 단계 (1)은 상기 3차원 배양 시 원심 분리를 통해 세포 응집을 유도하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 단계 (2)의 미세중력은 상기 생물반응기를 회전시킴으로써 상기 생물반응기에 가해지는 중력을 상쇄시키는 미세중력 모사장치에 의해 유도될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 15 내지 80rpm으로 회전시키면서 3 - 8일 간 배양함으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 40 내지 60rpm에서 시작하여 매일 5rpm씩 증가시키면서 회전시킴으로써 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 점착성 고분자는 히알루론산(hyaluronic acid), 알긴산(alginate), 헤파린(heparin), 후코이단(fucoidan), 셀룰로스(cellulose), 덱스트란(dextran), 키토산(chitosan), 알부민(albumin), 피브린(fibrin), 콜라겐(collagen) 및 젤라틴(gelatin) 중에서 선택되는 어느 하나일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 점착성 고분자는 젤라틴일 수 있다.
또한, 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 방광염, 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 전신성 홍반성 낭창, 다발성경화증, 특발성섬유성폐포염, 다발성근염, 피부근염, 국한피부경화증, 전신피부경화증, 대장염, 염증성 장질환, 조르젠신드롬(Sjorgen's syndrome), 레이노현상(Raynaud's phenomenon), 베쳇병(Bechet's disease), 가와사키병(Kawasaki's disease), 원발성담즙성경화증(primary biliary sclerosis), 원발성경화성담관염(primary sclerosing cholangitis), 궤양성대장염(ulcerative olitis), 이식편대숙주병(Graft-versus-host disease, GVHD) 또는 크론병(Crohn's disease)일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 방광염은 간질성 방광염(Interstitial Cystitis), 만성 방광염 및 케타민 유발 방광염 중에서 선택되는 1종 이상일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 상처치유용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 중간엽 줄기세포는 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가 및/또는 PTGS2 마커의 발현량의 감소 특성을 나타냄으로써, TNF-α, IL-6 등의 염증성 사이토카인의 양을 현저히 감소시키므로, 다양한 염증 질환의 예방, 완화, 개선 또는 치료에 효과적이다.
특히, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 동물모델에 투여하는 경우, IC/BPS 유도 과정에서 무너진 방광 내벽을 회복시키고, 염증 정도를 완화시키므로, 간질성 방광염/방광통증 증후군에 대하여 우수한 치료 효능이 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 줄기세포 유래 세포외 소포체는 상처 치유 효과가 우수하므로, 상처치유용으로 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 iPSC로부터 MSC를 분화시키는 본 발명의 프로토콜을 요약한 모식도를 나타낸다.
도 2는 Aggrewell 상에서 형성된 배아체(EB)의 형태를 보여주는 그림이다.
도 3은 미세중력 생물배양기인 BAM(Bio Array Matrix) 장치를 통해서 형성된 스페로이드의 형태(상단)와 OCT4 및 DAPI 항체를 이용한 염색 결과(하단)를 보여주는 그림이다.
도 4는 스페로이드에서 유래한 중간엽 줄기세포의 외형을 보여주는 그림으로, 계대 후 방추(spindle) 형태를 띔을 확인하였다(우측).
도 5는 본 발명의 방법으로 분화된 iMSC의 각 계대에서의 외형을 보여주는 그림이다.
도 6은 본 발명의 방법으로 분화된 중간엽 줄기세포의 누적 세포 증식 곡선을 보여주는 그림으로, 각 계대별 CPD(Cummulative Population Doubling)(도 6a), 2배수 시간(Doubling time)(도 6b), 및 Log 세포 수(도 6c)를 각각 나타낸다.
도 7은 본 발명의 방법으로 분화된 중간엽 줄기세포의 세포 표면 마커 발현을 FACS 분석으로 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 8은 면역세포화학 염색을 이용하여 본 발명의 방법을 통해 유도만능 줄기세포가 전능성을 상실하고 중간엽 줄기세포의 마커를 발현하는 세포로 분화되었음을 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 9는 LPS를 이용한 염증 유도 세포에서 본 발명의 방법으로 분화된 줄기세포의 염증제어 효과를 확인한 실험 절차의 모식도를 보여주는 그림이다.
도 10은 RT-PCR을 통해 염증 마커의 발현을 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 11은 면역세포화학 염색을 이용하여 LPS 처리에 의해 염증이 유도된 세포를 TRAP 염색한 결과(좌측), 및 상기 TRAP으로 염색된 세포를 계수한 결과(우측)를 보여주는 그림이다.
도 12는 본 발명의 중간엽 줄기세포에서 분리한 엑소좀의 크기(좌측) 및 농도(우측)를 측정한 결과를 보여주는 그림이다.
도 13a는 본 발명의 중간엽 줄기세포에서 분리한 엑소좀을 Scrach한 NHDF 세포에 처리한 후 시간 경과에 따른 세포 이동 정도를 보여주는 사진이고, 도 13b는 상기 세포 이동 정도를 수치화하여 나타낸 그래프이다.
도 14a는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 함유된 각각의 상향 조절 유전자들의 Protein-Protein Interaction을 알기 위해 데이터베이스 기반인 String-db tool을 이용하여 네트워트 분석한 결과이고, 도 14b는 하향 조절 유전자들을 네트워크 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
도 15a 내지 도 15d는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 포함된 각각의 상향 조절 유전자들에 대하여 각각 DAVID 분석을 수행하여 예측되는 기능들을 이용하여 생성한 벤다이어그램이다.
도 16a 내지 도 16d는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 포함된 각각의 하향 조절 유전자들에 대하여 각각 DAVID 분석을 수행하여 예측되는 기능들을 이용하여 생성한 벤다이어그램이다.
도 17a는 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델에서 본 발명의 중간엽 줄기세포(iMSC) 투여 후 방광 조직의 형태 및 염증 정도를 확인한 그림이다. 도 17a는 IC/BPS 마우스 모델의 방광 조직을 각각 H&E 염색, masson’s trichome 염색 및 toluidine blue 염색한 결과이고, 도 17b는 상기 염색을 통해 Fibrosis 정도(%)와 Mast cell의 침투를 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 18은 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델에서 본 발명의 중간엽 줄기세포(iMSC) 투여 후 추출된 방광 조직에서 mRNA를 추출하여, 염증 관련 사이토카인(TNFα, IL6)의 발현량(도 18a), 요로상피 마커(UPK1A, UPK1B, UPK2)의 발현량(도 186b) 및 IC/BPS에서 발현되는 유전자(KLRB1, PSMB9, ITGAL)의 발현량(도 18c)을 확인한 결과이다.
도 2는 Aggrewell 상에서 형성된 배아체(EB)의 형태를 보여주는 그림이다.
도 3은 미세중력 생물배양기인 BAM(Bio Array Matrix) 장치를 통해서 형성된 스페로이드의 형태(상단)와 OCT4 및 DAPI 항체를 이용한 염색 결과(하단)를 보여주는 그림이다.
도 4는 스페로이드에서 유래한 중간엽 줄기세포의 외형을 보여주는 그림으로, 계대 후 방추(spindle) 형태를 띔을 확인하였다(우측).
도 5는 본 발명의 방법으로 분화된 iMSC의 각 계대에서의 외형을 보여주는 그림이다.
도 6은 본 발명의 방법으로 분화된 중간엽 줄기세포의 누적 세포 증식 곡선을 보여주는 그림으로, 각 계대별 CPD(Cummulative Population Doubling)(도 6a), 2배수 시간(Doubling time)(도 6b), 및 Log 세포 수(도 6c)를 각각 나타낸다.
도 7은 본 발명의 방법으로 분화된 중간엽 줄기세포의 세포 표면 마커 발현을 FACS 분석으로 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 8은 면역세포화학 염색을 이용하여 본 발명의 방법을 통해 유도만능 줄기세포가 전능성을 상실하고 중간엽 줄기세포의 마커를 발현하는 세포로 분화되었음을 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 9는 LPS를 이용한 염증 유도 세포에서 본 발명의 방법으로 분화된 줄기세포의 염증제어 효과를 확인한 실험 절차의 모식도를 보여주는 그림이다.
도 10은 RT-PCR을 통해 염증 마커의 발현을 확인한 결과를 보여주는 그림이다.
도 11은 면역세포화학 염색을 이용하여 LPS 처리에 의해 염증이 유도된 세포를 TRAP 염색한 결과(좌측), 및 상기 TRAP으로 염색된 세포를 계수한 결과(우측)를 보여주는 그림이다.
도 12는 본 발명의 중간엽 줄기세포에서 분리한 엑소좀의 크기(좌측) 및 농도(우측)를 측정한 결과를 보여주는 그림이다.
도 13a는 본 발명의 중간엽 줄기세포에서 분리한 엑소좀을 Scrach한 NHDF 세포에 처리한 후 시간 경과에 따른 세포 이동 정도를 보여주는 사진이고, 도 13b는 상기 세포 이동 정도를 수치화하여 나타낸 그래프이다.
도 14a는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 함유된 각각의 상향 조절 유전자들의 Protein-Protein Interaction을 알기 위해 데이터베이스 기반인 String-db tool을 이용하여 네트워트 분석한 결과이고, 도 14b는 하향 조절 유전자들을 네트워크 분석한 결과를 보여주는 그림이다.
도 15a 내지 도 15d는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 포함된 각각의 상향 조절 유전자들에 대하여 각각 DAVID 분석을 수행하여 예측되는 기능들을 이용하여 생성한 벤다이어그램이다.
도 16a 내지 도 16d는 본 발명의 중간엽 줄기세포에 포함된 각각의 하향 조절 유전자들에 대하여 각각 DAVID 분석을 수행하여 예측되는 기능들을 이용하여 생성한 벤다이어그램이다.
도 17a는 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델에서 본 발명의 중간엽 줄기세포(iMSC) 투여 후 방광 조직의 형태 및 염증 정도를 확인한 그림이다. 도 17a는 IC/BPS 마우스 모델의 방광 조직을 각각 H&E 염색, masson’s trichome 염색 및 toluidine blue 염색한 결과이고, 도 17b는 상기 염색을 통해 Fibrosis 정도(%)와 Mast cell의 침투를 확인한 결과를 그래프로 나타낸 것이다.
도 18은 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델에서 본 발명의 중간엽 줄기세포(iMSC) 투여 후 추출된 방광 조직에서 mRNA를 추출하여, 염증 관련 사이토카인(TNFα, IL6)의 발현량(도 18a), 요로상피 마커(UPK1A, UPK1B, UPK2)의 발현량(도 186b) 및 IC/BPS에서 발현되는 유전자(KLRB1, PSMB9, ITGAL)의 발현량(도 18c)을 확인한 결과이다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면은 (A) SPP1(secreted phosphoprotein 1; Osteopontin), PLAU(Plasminogen Activator, Urokinase), ITGA6(integrin subunit alpha 6), CENPI(Centromere Protein I) 및 BUB1(Budding Uninhibited By Benzimidazoles 1 Homolog; Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase) 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가; 및 (B) PTGS2(Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2, or COX2;) 마커의 발현량의 감소; 중에서 선택되는 1종 이상의 특성을 갖는 중간엽 줄기세포에 관한 것이다.
본 발명에서의 용어, “발현량의 증가” 또는 “발현량의 감소”는 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 왓튼 젤리(Wharton’s Jelly) 유래 중간엽 줄기세포(hWJ-MSC)와 비교하여 중간엽 줄기세포가 발현하는 특정 마커의 발현량이 측정 가능할 정도로 유의하게 증가 또는 감소한 것을 의미하며, 구체적으로는 발현량이 40% 이상 증가 또는 감소한 것을 의미하고, 보다 구체적으로는 50% 이상 증가 또는 감소한 것을 의미하며, 보다 구체적으로는 60% 이상 증가 또는 감소한 것을 의미하며, 보다 더 구체적으로는 80% 이상 증가 또는 감소한 것을 의미하고, 가장 구체적으로는 100% 이상 증가 또는 감소한 것을 의미한다.
본 발명에서의 용어, “줄기세포(stem cell)”는 조직을 구성하는 각 세포로 분화(differentiation)되기 전 단계의 미분화 세포로서, 특정 분화 자극(환경) 하에서 특정 세포로 분화할 수 있는 능력을 가지는 세포들을 총칭한다. 줄기세포는 세포분열이 정지된 분화된 세포와는 달리 세포분열에 의해 자신과 동일한 세포를 생산(self-renewal)할 수 있고, 분화 자극이 가해지면 자극의 성격에 따라 다양한 세포로 분화될 수 있는, 분화의 유연성(plasticity)을 가지고 있는 것이 특징이다.
본 발명에서의 용어, “중간엽 줄기세포”는 지방세포, 골세포, 연골세포, 근육세포, 신경세포, 심근세포로의 분화가 가능한 다분화능(multipotency)을 가진 줄기세포를 의미한다. 중간엽 줄기세포는 소용돌이 모양의 형태와 기본적인 세포표면 표식자 CD73(+), CD105(+), CD34(-), CD45(-)의 발현 정도를 통하여 식별될 수 있으며, 다분화능과 함께 면역 반응을 조절하는 기능도 가진다.
본 발명의 중간엽 줄기세포는 SPP1에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 3배 이상, 구체적으로는 3.0 내지 4.0배, 더욱 구체적으로는 3.50배 내지 4.00배, 더욱 구체적으로는 3.80 배 내지 3.90배 중량으로 발현량을 상향 조절, 또는 증가시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 PLAU에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 1.5배 이상, 구체적으로는 1.5배 내지 2.2배, 구체적으로는 1.80배 내지 2.10배, 더욱 구체적으로는 1.90배 내지 2.00배 중량으로 발현량을 상향 조절, 또는 증가시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 ITGA6에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 2.1배 이상, 구체적으로는 2.1배 내지 3.0배, 구체적으로는 2.30배 내지 2.60배, 더욱 구체적으로는 2.40배 내지 2.50배 중량으로 발현량을 상향 조절, 또는 증가시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 CENPI에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 1.5배 이상, 구체적으로는 1.5배 내지 2.0배, 구체적으로는 1.60배 내지 1.90배, 더욱 구체적으로는 1.70배 내지 1.80배 중량으로 발현량을 상향 조절, 또는 증가시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 BUB1에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 1.4배 이상, 구체적으로는 1.4배 내지 2.1배, 구체적으로는 1.50배 내지 1.90배, 더욱 구체적으로는 1.65 배 내지 1.75배 중량으로 발현량을 상향 조절, 또는 증가시킬 수 있다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 PTGS2에 대하여 종래의 중간엽 줄기세포, 바람직하게는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 적어도 2.0배 이상, 구체적으로는 2.0배 내지 3.0배, 구체적으로는 2.30배 내지 2.90배, 더욱 구체적으로는 2.50배 내지 2.70배 중량으로 발현량을 하향 조절, 또는 감소시킬 수 있다.
본 발명의 중간엽 줄기세포는 상기 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가; 및/또는 상기 PTGS2 마커의 발현량의 감소 특성을 가짐으로써, TNF-α, IL-6 등의 염증성 사이토카인의 양을 현저히 감소시키고, 다양한 염증 질환, 바람직하게는 방광염, 특히 간질성 방광염을 예방, 완화, 개선 또는 치료할 수 있다. 또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 세포의 이동(migration)을 현저히 증가시키며, 상처 치유 효과가 매우 우수하다.
일 구현예에 있어서, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 마커의 발현량이 증가하는 것일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 (1) 대상체로부터 분리된 전분화능 줄기세포를 배양하여 배아체(Embryoid Body, EB)를 형성하는 단계; (2) 상기 배아체를 미세중력(microgravity) 하의 생물반응기(bioreactor)에서 3차원 배양하여 스페로이드(spheroid)를 형성하는 단계; 및 (3) 상기 스페로이드를 배양 표면에 점착성 고분자가 코팅된 배양 용기에서 부착 배양하여 중간엽 줄기세포로 분화시키는 단계;를 포함하는 방법으로 제작된 것일 수 있다.
본 발명에서의 용어, “전능성 줄기세포(pluripotent stem cell)”는 수정란보다 발생이 진행된 상태의 세포로서 내배엽, 중간엽 및 외배엽을 구성하는 세포로 모두 분화할 수 있는 줄기세포를 의미한다. 본 발명의 구체적인 구현예에 따르면, 본 발명에서 이용되는 전능성 줄기세포는 배아줄기세포(Embryonic Stem Cell, ESC), 배아생식세포(Embryonic Germ Cell), 배아종양세포(Embryonic Carcinoma Cell) 또는 유도만능 줄기세포(induced Pluripotent Stem Cell, iPSC)이며, 보다 구체적으로는 배아줄기세포 또는 유도만능 줄기세포이며, 가장 구체적으로는 유도만능 줄기세포이다.
본 발명에서의 용어, “유도만능 줄기세포”는 비-전분화능 세포(예를 들면, 체세포)에 미분화 또는 전분화능 표현형과 관련된 특정 유전자를 삽입하여 인공적으로 유래된 전분화능 줄기세포의 하나이다. 유도만능 줄기세포는 줄기세포 유전자 및 단백질 발현, 염색체 메틸화, 배가시간(doubling time), 배아체 형성, 테라토마 형성, 생존성 키메라 형성, 교잡성 및 분화성을 가진다는 점에서 배아줄기세포와 같은 천연의 전분화능 줄기세포와 동일한 표현형, 생리학적 특성 및 발생학적 특성을 가지는 것으로 당업계에서 간주되고 있다.
본 발명에서의 용어, “줄기세포의 분화”는 미분화 상태의 줄기세포에서 특정세포로 완전히 분화가 유도된 경우뿐만 아니라 줄기세포에서 특정세포로 완전 분화되기 전 중간 단계에서 형성되는 전구체(precursor) 세포의 형성도 포함하는 것이다.
일 구현예에서, 상기의 각 단계에서 사용되는 세포 배양액은 당, 아미노산, 각종 영양물질, 무기질 등과 같이 세포의 성장 및 증식에 필수적인 요소를 포함하는, 인 비트로에서 세포 성장 및 증식을 위한 혼합물이다. 세포 배양용 배지에 추가적으로 포함될 수 있는 성분은 예를 들어 글리세린, L-알라닌, L-아르기닌 하이드로클로라이드, L-시스테인 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, L-글루타민, L-히스티딘 하이드로클로라이드-모노하이드레이트, L-리신 하이드로클로라이드, L-메티오닌, L-프롤린, L-세린, L-트레오닌, L-발린, L-아스파라긴-모노하이드레이트, L-아스파르트산, L-시스틴 2HCl, L-글루탐산, L-이소류신, L-류신, L-페닐알라닌, L-트립토판, L-티로신 디소듐염 디하이드레이트, i-이노시톨, 티아민 하이드로클로라이드, 나이아신아미드, 피리독신 하이드로클로라이드, 바이오틴, D-판토텐산칼슘, 엽산, 리보플라빈, 비타민 B12, 염화나트륨(NaCl), 탄산수소나트륨(NaHCO3), 염화칼륨(KCl), 염화칼슘(CaCl2), 인산수소나트륨 모노하이드레이트(NaH2PO4-H2O), 황산동 펜타하이드레이트(CuSO4-5H2O), 황산제이철 헵타하이드레이트(FeSO4-7H2O), 염화마그네슘(무수), 황산마그네슘(MgSO4), 인산수소이나트륨(Na2HPO4), 황산아연 헵타하이드레이트(ZnSO4-7H2O), D-글루코즈(덱스트로즈), 소듐 피루베이트, 히포크산틴 Na, 리놀렌산, 리포산, 푸트레신 2HCl 및 티미딘을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구현예에서, 상기의 세포 배양용 배지는 인위적으로 제조하여 사용하거나, 혹은 상업적으로 시판되는 것을 구입하여 사용할 수 있다. 상업적으로 시판되고 있는 배양용 배지의 예는 IMDM(Iscove's Modified Dulbecco's Medium), α-MEM(Alpha Modification of Eagle's Medium), F12(Nutrient Mixture F-12) 및 DMEM/F12(Dulbecco's Modified Eagle Medium: Nutrient Mixture F-12)를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 구현예에 있어서, 상기 단계 (1)은 상기 전분화능 줄기세포를 다중 웰(multi-well) 배양 용기에서 3차원 배양함으로써 수행될 수 있다.
본 발명에서의 용어, “3차원 배양(3-dimensional culture)”은 2차원 배양에 상대되는 개념으로, 배양대상 세포를 기질(substrate) 등에 고정시키지 않은 채로 배양액 내에서 부유(floating)하는 상태로 배양하는 것을 말한다. 이에, 용어“3차원 배양”은“부유배양(suspension culture)”과 동일한 의미로 사용된다. 부착(adhesion) 의존성인 줄기세포는 부유배양 시에 세포 응집을 일으키며, 이러한 응집에 포함되지 못하고 홀로 부유하는 세포는 세포사(apoptosis)를 유발하여 사멸하게 되므로 세포는 그 부착 특성에 맞는 환경이 조성되어야 한다. 본 발명에 따르면, 복수의 웰을 가지는 다중 웰에서 전능성 줄기세포를 부유배양 함으로써 웰 크기에 따른 직경의 전능성 줄기세포 응집체, 즉 배아체(Embryoid Body, EB)가 웰 수에 비례하여 형성된다. 이에, 본 발명의 단계 (1)에서는 동일한 크기와 모양을 가지는 규격화된 배아체를 대량으로 수득할 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 다중 웰(multi-well) 배양 용기는 웰 당 350μm×350 μm 내지 450μm×450 μm의 크기를 가지는 마이크로웰 플레이트일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 부유배양은 상기 다중 웰(multi-well) 배양 용기 내 웰 당 0.5×105 내지 1.5×105개, 바람직하게는 0.7×105 내지 1.3×105개, 더욱 바람직하게는 약 0.9×105 내지 1.1×105개의 세포를 분주함으로써 이루어질 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 단계 (1)은 상기 부유배양 시 원심분리를 통해 세포 응집을 유도하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명에서의 용어, “세포 응집(aggregation)”은 단일층(monolayer)이 아닌 3차원적 성장이 허용된 부유 배양 등의 환경에서 배양된 세포가 자가 조립(self aggregation)을 하면서 3차원 구조의 세포 응집 덩어리를 형성하는 것을 의미한다. 3차원 배양의 결과로 만들어진 세포 응집체는 줄기세포가 유래한 생체 내 조직과 유사한 환경을 제공하며, 크기 및 자가 조립된 세포의 수에 따라 구형(sphere)일 수도 있고 구형 이외의 형태일 수도 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 단계 (2)의 미세중력은 상기 생물반응기를 회전시킴으로써 상기 생물반응기에 가해지는 중력을 상쇄시키는 미세중력 모사장치에 의해 유도될 수 있다.
본 발명에서의 용어, “미세중력(microgravity)”은 중력이 존재하지 않거나, 측정 가능 수준 미만으로만 존재하거나, 또는 중력으로 인한 생물학적, 생리학적 영향이 관측되지 않는 정도로만 존재하는 것을 의미하며, 구체적으로는 1 x 106 g 이하의 환경을 의미한다. 따라서 용어“미세중력”은“무중력”으로도 표현될 수 있다.
본 발명에서의 용어, “미세중력 모사장치(microgravity simulator)는 정상 중력 환경 또는 유의한 중력이 존재하는 환경 내에서 인위적으로 중력을 상쇄시킴으로서 미세중력 환경을 유도하는 장치를 의미한다. 이러한 미세중력 모사장치에는 예를 들어 클리노스탯(Clinostat), RPM(Random positioning machine), RWV(Rotating wall vessel) 등이 있으나, 이에 제한되지 않고 적절한 외력의 부가를 통해 본 발명의 생물반응기 내의 배양환경에서 지정된 시간만큼 중력을 상쇄시킬 수 있는 장치라면 제한 없이 사용될 수 있다.
일 구현예에 있어서, 상기 미세중력 모사장치는 클리노스탯(Clinostat)이다. 클리노스탯은 생물반응기와 같은 배양 용기에 결합되어 무작위적으로 혹은 지시(입력)된 패턴에 따라 계속적으로 방향을 바꾸면서 회전하여 끊임없이 3차원 자세를 바꿈으로써 중력 방향의 계속적인 변동을 야기, 이를 통해 중력을 상쇄시키는 장치이다.
일 구현예에 있어서, 상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 15 내지 80 rpm, 바람직하게는 40 내지 80 rpm으로 회전시키면서 3 내지 8일간 배양함으로써 수행될 수 있고, 보다 바람직하게는 4 내지 7일간, 더욱 바람직하게는 5일간 배양할 수 있다.
바람직하게는, 상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 40 내지 60 rpm에서 시작하여 매일 5rpm씩 증가시키면서 회전시킴으로써 수행될 수 있다. 더욱 바람직하게는 50 rpm에서 시작하여 매일 5 rpm씩 증가시키면서 5일간 배양할 수 있다.
본 발명에서의 용어, “생물반응기(bioreactor)”는 생물학적인 활성을 가지는 배양 환경을 조성하기 위한 배양 공간과, 이와 연동되어 작동하는 일련의 기계 장치를 포함하는 생물학적 시료의 배양 장치 또는 시스템을 의미한다.
상기 단계 (2)에서는 단계 (1)에서 생성된 배아체를 미세중력(micro-gravity) 하의 생물반응기에서 3차원 배양을 함으로써 스페로이드를 형성한다. 스페로이드(spheroid)는 구형의 세포 응집체를 의미하나, 기하학적으로 완전한 구형일 필요는 없다.
상기 단계 (1) 및 단계 (2)에서 2차례에 걸친 3차원 부유배양을 진행한 뒤, 이를 통해 형성된 스페로이드를 점착성 고분자가 코팅된 배양 용기에 부착 배양함으로써 중간엽 줄기세포로 분화시킬 수 있다.
본 발명에서의 용어, “고분자”는 동일하거나 상이한 종류의 단량체가 연속적으로 결합된 합성 또는 천연 중합체 화합물을 지칭한다. 따라서, 고분자에는 단독 중합체(한 종류의 단량체가 중합화된 중합체)와 적어도 2종의 상이한 단량체의 중합에 의해 제조된 혼성중합체를 포함되며, 혼성중합체에는 공중합체(2종의 상이한 단량체로부터 제조된 중합체)와 2종 초과의 상이한 단량체로부터 제조된 중합체를 모두 포함한다.
본 발명에서의 용어, “점착성 고분자”는 배양 표면과 세포 또는 그 응집체(예를 들어 스페로이드) 간의 공유 또는 비공유 결합을 통한 가교를 형성하여 세포 또는 그 응집체가 배양 용기의 바닥 또는 측면에서 이탈하지 않고 부착된 채 배양이 진행될 수 있도록 하는 천연 또는 인공 고분자를 의미한다.
일 구현예에 있어서, 상기 점착성 고분자는 히알루론산(hyaluronic acid), 알긴산(alginate), 헤파린(heparin), 후코이단(fucoidan), 셀룰로스(cellulose), 덱스트란(dextran), 키토산(chitosan), 알부민(albumin), 피브린(fibrin), 콜라겐(collagen) 및 젤라틴(gelatin) 중에서 선택되는 어느 하나일 수 있고, 바람직하게는 젤라틴일 수 있다.
본 발명의 구체적인 일 실시예에 의하면, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 종래의 중간엽 줄기세포 소포체, 특히 일반 hWJ-MSC(대조군)와 비교하여 유전자 마커 발현 특성에 있어서 명확한 차이를 보인다. 하기 실시예에서 보는 바와 같이, 본 발명의 중간엽 줄기세포는 일반 hWJ-MSC(대조군)에 비해 SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량이 유의적으로 증가하고, 상기 PTGS2 마커의 발현량이 유의적으로 감소한다.
또한, 본 발명의 다른 측면은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 중간엽 줄기세포에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.
본 발명에서의 용어, “세포외 소포체(extracellular vesicle)"는 다양한 세포에서 다낭체와 원형질막의 융합을 통해 세포 밖 환경으로 분비되는 30-1,000 nm 범위 직경의 지질 이중막 구조의 소낭을 의미한다.
일 구현예에 있어서, 본 발명의 세포외 소포체는 상기 중간엽 줄기세포의 배양액으로부터 복수 회의 원심분리를 통해 분리된 것일 수 있다.
일 구현예에 있어서, 본 발명의 세포외 소포체는 100 - 250 nm의 평균 직경을 가지며, 보다 구체적으로는 150 - 220 nm, 더욱 구체적으로는 180 - 200 nm, 더욱 구체적으로는 185 - 195 nm의 평균 직경을 가진다. 이러한 범위의 미세 직경을 가지는 세포외 소포체를 엑소좀(exosome)이라 한다.
본 발명에서의 용어, “예방”은 질환 또는 질병을 보유하고 있다고 진단된 적은 없으나, 이러한 질환 또는 질병에 걸릴 가능성이 있는 대상체에서 질환 또는 질병의 발생을 억제하는 것을 의미한다.
본 발명에서의 용어, “치료”는 (a) 질환, 질병 또는 증상의 발전의 억제; (b) 질환, 질병 또는 증상의 경감; 또는 (c) 질환, 질병 또는 증상을 제거하는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물은 T 세포 매개 면역활성을 효율적으로 억제함으로써 과도하거나 원치 않는 면역반응을 원인으로 하는 다양한 염증 또는 자가면역 질환의 증상의 발전을 억제하거나, 이를 제거하거나 또는 경감시키는 역할을 한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 그 자체로 이들 질환 치료의 조성물이 될 수도 있고, 혹은 염증 또는 자가면역 질환에 대한 치료효과를 가지는 다른 약리성분과 함께 투여되어 상기 질환에 대한 치료 보조제로 적용될 수도 있다. 이에, 본 명세서에서 용어“치료”또는“치료제”는“치료 보조”또는“치료 보조제”의 의미를 포함한다.
본 발명에서의 용어, “투여”는 본 발명의 조성물의 치료적 유효량을 대상체에 직접적으로 투여함으로써 대상체의 체내에서 동일한 양이 형성되도록 하는 것을 말하며, “이식”또는“주입”과 동일한 의미를 가진다.
본 발명에서의 용어, “치료적 유효량”은 본 발명의 조성물을 투여하고자 하는 개체에게 치료적 또는 예방적 효과를 제공하기에 충분한 정도로 함유된 조성물의 함량을 의미하며, 이에“예방적 유효량”을 포함하는 의미이다.
본 발명에서의 용어, “대상체”는 제한 없이 인간, 마우스, 래트, 기니아 피그, 개, 고양이, 말, 소, 돼지, 원숭이, 침팬지, 비비 또는 붉은털 원숭이를 포함한다. 구체적으로는, 본 발명의 대상체는 인간이다.
일 구현예에서, 본 발명의 조성물은 다양한 염증 질환에 대하여 예방 또는 치료 효과가 있다. 본 발명의 약학 조성물을 적용할 수 있는 염증 질환은 당 업계에 염증 질환으로 공지된 것이면 되고 특별히 제한되지 않는다. 본 발명의 약학 조성물로 예방 또는 치료되는 자가면역 질환 또는 염증성 질환은 예를 들어 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 전신성 홍반성 낭창, 다발성경화증, 특발성섬유성폐포염, 다발성근염, 피부근염, 국한피부경화증, 전신피부경화증, 대장염, 염증성 장질환, 조르젠신드롬(Sjorgen's syndrome), 레이노현상(Raynaud's phenomenon), 베쳇병(Bechet's disease), 가와사키병(Kawasaki's disease), 원발성담즙성경화증(primary biliary sclerosis), 원발성경화성담관염(primary sclerosing cholangitis), 궤양성대장염(ulcerative olitis), 이식편대숙주병(Graft-versus-host disease, GVHD) 및 크론병(Crohn's disease)을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다. 바람직하게는 방광염일 수 있다.
일 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물로 예방 또는 치료되는 방광염은 간질성 방광염(Interstitial Cystitis), 만성 방광염 및 케타민 유발 방광염 중에서 선택되는 1종 이상일 수 있고, 바람직하게는 간질성 방광염일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에서는, 항염증 세포 모델에 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이의 배양액, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 투여하는 경우, TNF-α, IL-6의 농도가 현저하게 감소하므로, 항염증 치료 효과가 우수한 것을 구체적으로 확인하였다.
또한 본 발명의 일 실시예에서는, in vivo 간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 동물모델에 본 발명의 중간엽 줄기세포를 투여하는 경우, IC/BPS 유도 과정에서 무너진 방광 내벽이 회복되고, 염증 정도가 완화되는 등, 간질성 방광염/방광통증 증후군에 대하여 우수한 치료 효능을 보임을 구체적으로 확인하였다.
일 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 단독으로 포함하거나, 또는 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다.
약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).
본 발명의 조성물은 인간을 비롯한 포유동물에 어떠한 방법으로도 투여할 수 있다. 예를 들면, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내 투여, 근육내 투여, 동맥내 투여, 골수 내 투여, 경막내 투여, 맥락막위공간 주입(suprachoroidal injection), 경피 투여, 피하 투여, 복강내 투여, 비강내 투여, 장관 투여, 국소 투여, 설하 투여 또는 직장내 투여일 수 있고, 바람직하게는 정맥내 투여일 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 상술한 바와 같은 투여 경로에 따라 경구 투여용 또는 비경구 투여용 제제로 제형화 할 수 있다.
경구 투여용 제제의 경우에 본 발명의 조성물은 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 슬러리제, 현탁액 등으로 당 업계에 공지된 방법을 이용하여 제형화될 수 있다. 예를 들어, 경구용 제제는 활성성분을 고체 부형제와 배합한 다음 이를 분쇄하고 적합한 보조제를 첨가한 후 과립 혼합물로 가공함으로써 정제 또는 당의정제를 수득할 수 있다. 적합한 부형제의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
비경구 투여용 제제의 경우에는 주사제, 연고제, 크림제, 로션제, 오일제, 겔제, 에어로졸 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법으로 제형화할 수 있다. 이들 제형은 모든 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975. Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042, Chapter 87: Blaug, Seymour)에 기재되어 있다.
바람직하게는, 본 발명의 상기 약학 조성물은 경구제, 주사제 및 연고제로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 형태로 제조되는 것일 수 있고, 더욱 바람직하게는 주사제일 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효량으로 포함할 때 바람직한 염증 질환의 예방, 개선 또는 치료 효과를 제공할 수 있다. 본 명세서에서, '유효량'이라 함은 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 염증 질환, 특히 간질성 방광염을 개선 또는 치료하기에 충분한 양을 말한다.
상기 중간엽 줄기세포는 약학 조성물 총 함량에 대하여 5 X 104 내지 2 X 105 cell/ml, 바람직하게는 7.5 X 104 내지 1.5 X 105 cell/ml, 더욱 바람직하게는 8 X 104 내지 1.2 X 105 cell/ml로 포함될 수 있다. 이때, 상기 중간엽 줄기세포의 함량이 상기 하한치 미만이면, 세포 생존율은 우수하나 염증 질환 개선 또는 치료 효과가 원하는 정도로 나타나지 않을 수 있다. 반대로 상기 상한치를 초과하는 경우 농도가 증가하는 만큼 염증 질환 개선 또는 치료 효과가 증가하지 않거나 독성이 있을 수 있다. 한편, 인 비트로 실험 결과, 본 발명의 중간엽 줄기세포의 농도가 상기 범위인 경우에는 염증 질환 개선 또는 치료에 대하여 유의적인 효과가 나타나면서도 세포독성 등의 부작용이 나타나지 않았다.
또한, 본 발명의 중간엽 줄기세포로부터 분리된 세포외 소포체는 5x108 내지 5x1010 particles/ml, 바람직하게는 5x109 내지 5x1010 particles/ml, 더욱 바람직하게는 1x1010 내지 2x1010 particles/ml로 포함될 수 있다. 이때, 상기 줄기세포 유래 세포외 소포체의 함량이 상기 하한치 미만이면, 세포 생존율은 우수하나 염증 질환 개선 또는 치료 효과가 원하는 정도로 나타나지 않을 수 있다. 반대로 상기 상한치를 초과하는 경우 농도가 증가하는 만큼 염증 질환 개선 또는 치료 효과가 증가하지 않거나 독성이 있을 수 있다. 한편, 인 비트로 실험 결과, 본 발명의 줄기세포 유래 세포외 소포체의 농도가 상기 범위인 경우에는 염증 질환 개선 또는 치료에 대하여 유의적인 효과가 나타나면서도 세포독성 등의 부작용이 나타나지 않았다.
본 발명의 약학 조성물에 포함되는 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체의 유효량은 조성물이 제제화되는 형태 등에 따라 달라질 것이다.
본 발명의 약학적 조성물의 총 유효량은 단일 투여량(single dose)으로 환자에게 투여될 수 있으며, 다중 투여량(multiple dose)으로 장기간 투여되는 분할 치료 방법(fractionated treatment protocol)에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 바람직한 투여량은 성인 기준으로 0.001-100 ㎎/kg 범위 내이다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 상처치유용 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 약학 조성물 및 유효량에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.
본 발명의 일 실시예에서는, 상처를 생성한 세포 모델에 본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 투여하는 경우, 세포 이동이 현저히 증가하는 것을 구체적으로 확인하였다(도 13a 및 도 13b).
본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체는 세포의 이동(migration)을 현저히 증가시키며, 상처치유 효과가 우수하므로, 상처치유용으로 유용하게 이용될 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체의 치료 용도(for use in therapy)에 관한 것이다.
본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.
상기 치료 용도는 염증 질환 또는 자가면역 질환, 바람직하게는 염증 질환의 치료 용도일 수 있다.
상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 방광염, 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 전신성 홍반성 낭창, 다발성경화증, 특발성섬유성폐포염, 다발성근염, 피부근염, 국한피부경화증, 전신피부경화증, 대장염, 염증성 장질환, 조르젠신드롬(Sjorgen's syndrome), 레이노현상(Raynaud's phenomenon), 베쳇병(Bechet's disease), 가와사키병(Kawasaki's disease), 원발성담즙성경화증(primary biliary sclerosis), 원발성경화성담관염(primary sclerosing cholangitis), 궤양성대장염(ulcerative olitis), 이식편대숙주병(Graft-versus-host disease, GVHD) 또는 크론병(Crohn's disease)일 수 있다.
상기 방광염은 간질성 방광염(Interstitial Cystitis), 만성 방광염 및 케타민 유발 방광염 중에서 선택되는 1종 이상일 수 있다.
또한, 본 발명의 또 다른 측면은 상기 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 필요로 하는 대상체(subject)에게 투여하는 단계;를 포함하는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 예방, 개선 또는 치료 방법에 관한 것이다.
본 발명의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체에 대해서는 이미 상술하였으므로, 과도한 중복을 피하기 위해 그 기재를 생략한다.
상기 “대상체(subject)”는 예방, 개선, 치료, 관찰 또는 실험의 대상인 포유동물을 말하며, 바람직하게는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 예방, 개선 및/또는 치료를 필요로 하는 인간 또는 포유동물일 수 있다.
이하, 실시예에 의하여 본 발명을 상세히 설명하겠으나, 다음 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예>
실험방법
단일 콜로니 배양
유도만능 줄기세포(induced Pluripotent Stem Cell, iPSC)를 마트리젤(354234, corning, 미국)이 코팅된 96 웰-플레이트에 단일 세포로 부착시킨 iPSC 배지에서 일주일간 배양하여 단일 콜로니를 생성하였다. 생성된 각 콜로니는 마트리젤이 코팅된 24 웰 디쉬, 6 웰 디쉬에 순서대로 계대 후 1 X 105 정도로 세포수가 늘어나면 스페로이드(spheroid) 실험에 사용하였다(도 1).
BAM 시스템을 이용한 스페로이드 생성
iPSC를 Aggrewell 플레이트(34460, stemcell, 캐나다)에 1 X 105 정도로 씨딩한 다음 300g로 5분간 원심분리하여 세포를 응집시킨 후, 5% CO2 배양기 하에서 24시간 배양하여 배아체(Embryoid Body, EB)를 생성하였다. 24시간 후 생성된 EB는 생물반응기(Bioreactor, CelVivo, Denmark) 안으로 조심스럽게 옮기고 생물반응기를 미세 중력장치인 BAM 시스템(CelVivo, Denmark)에 장착하여 5일간 회전하였다. 회전 시 처음에는 50 rpm으로 시작하여 매일 5 rpm씩 증가시켰다(도 1).
유도만능 줄기세포 유래 중간엽 줄기세포(iPSC-MSC) 생성
BAM 시스템에서 키운 스페로이드를 0.1% 젤라틴 코팅된 6-웰 배양접시로 옮기고 DMEM/F12에 10% FBS와 1% P/S를 첨가한 배지에서 배양하고 2-3일 마다 배지를 교체하였다. 코팅된 바닥에 붙은 스페로이드로부터 세포가 나와서, 70~80% 컨플루언시가 되면 Tryple을 사용하여 계대하였다. 첫 계대를 P0로 명명하고, 세포 모양이 균질화(homogenous)될 때까지 계대하였다.
면역세포화학(ICC) 염색을 이용한 만능성 및 중간엽 줄기 세포 확인
iPSC 단계에서 생성된 스페로이드는 생물반응기에서 일부 꺼내고 4% 파라포름알데히드(PFA)로 고정하였다. iPSC의 스페로이드에서 만들어진 iPSCMSC는 공초점 디쉬(101350, SPL, 한국)에 1 x 105의 농도로 씨딩 후 60~70% 컨플루언시에서 4% PFA로 고정하였다. 고정된 스페로이드 및 iPSC-MSC는 DPBS로 5분 간 3회 수세 후, 항체가 잘 투과할 수 있도록 0.3% Triton X-100으로 표면을 투과화하였다. 그 후 DPBS로 5분간 3회 수세하였다. 수세된 스페로이드는 블로킹을 위해 3% BSA/PBS로 1시간 동안 실온에서 배양하였다. 1시간 후 3% BSA/PSB를 제거한 후 1차 항체(1:200)인 Anti-OCT4, Anti-SSEA4, Anti-PDGFRβ를 넣고 냉장고에서 12시간 동안 반응시켰다. 12시간 후 실온으로 꺼내고, DPBS 로 5분씩 3회 수세하였다.
수세 후 2차 항체(1:200)인 고트 항-마우스 488과 함께 1시간 동안 실온에서 배양하였다. 1시간 후 2차 항체를 제거하고 핵을 염색하는 DAPI 또는 Topro3로 20분간 염색 후 DPBS로 5분씩 3회 수세하였다. 수세된 시료는 Antifade Mounting Medium(H-1000, VECTOR LABORATORY, 영국)을 사용하여 형광의 소실을 방지하였다.
iPSC-MSC 계대 및 세포 증식 곡선
iPSC-MSC 의 모양이 균질화된 계대부터 세포 형태를 기록하고 세포수를 계산하여 증식곡선을 그렸다. P5부터 iPSC-MSC를 60mm 배양접시에 2 x 105의 세포수로 씨딩 후 5일간 배양하고 5일 동안 1회 배지를 교체하였다. 세포 증식은 3가지의 증식곡선으로 나타내었다. 먼저, 세포성장률(Cummulative Population Doubling level: CPD)의 세포 수는“CPD = log(나중 세포 수/처음 세포 수)/log(2)”로 계산하였다. 다음으로 세포가 두 배로 증식하는 시간인 Doubling time은 “Doubling Time = 배양일수 x log(2)/(log(나중 세포 수)-log(처음 세포 수))”로 계산하였다. 세 째, 계대시 세포 수를 계산하여 log를 취한 값인 세포 수는 “cell number= log (세포 수)”로 계산하였다. 계산된 수치는 선 그래프로 나타내었으며, 대조군으로 AD-MSC(간엽 줄기세포) 및 hWJ-MSC(탯줄 유래 중간엽 줄기세포)를 사용하였다.
유세포 (FACS) 분석을 이용한 면역표현형 검사
배양 중인 세포를 TrypLE™ Express(10624013, gibco, 미국)를 이용하여 떼어내고, 1,500 rpm으로 5분간 원심분리 후 상층액을 제거한 다음 FACS 완충액(2% FBS가 포함된 D-PBS)로 부유한 다음, 마우스 항-CD34, 마우스 항-CD45, 마우스 항-CD73, 쉽 항-CD90 로 1차 반응하였다. 이들 1차 항체는 1:500으로 희석하고 세포에 200μl씩 첨가하한 뒤 4 ℃에서 30분간 배양하였다. 다음으로 D-PBS로 세척 후 1,500 rpm으로 5분간 원심분리 후 상층액을 제거 후 1:500으로 희석된 2차 항체인 래빗 항-마우스 488 또는 동키 항-쉽 PE를 200μl씩 첨가하고 4℃에서 20분간 배양하였다. 이후, 염색된 세포는 FACS 완충액 500μL에 부유하여 유세포 분석기(FACS Calibur; Becton Dickinson, Heidelberg, Germany)로 유세포 분석을 수행하였고, Cell Quest pro software를 이용하여 분석하였다.
항염증 세포 모델
본 발명의 iPSC-MSC의 항염증 능력을 평가하기 위해, 염증 세포 모델에 사용하는 Macrophage 세포인 Raw 264.7 세포를 이용하였다. Raw 264.7 세포는 10% FBS 및 1% P/S가 함유된 α-MEM(Minimum Essential Medium) 배지에서 키웠다. 먼저, 배양 용기에서 hWJ-MSC(대조군) 또는 iPSC-MSC(본 발명)를 배양 후, 50% 차게 되면 새로운 배지를 공급 후 48시간 배양한다. 48시간 후, 컨디션 배지를 모은 후, 0.20㎛ 주사기 필터를 이용하여 여과 후 4 ℃ 냉장고에 보관하였다.
Raw 264.7 세포는 세포를 well 당 3.75 X 105 의 세포 수로 6 well 배양 접시에 나눠서 접종하였다. 12시간 후 세포가 부착되면 준비된 컨디션 배지 100%로 교체하였다. 다시 12시간 후 도 9에 나타낸 바와 같이 대조군을 제외하고 컨디션 배지 군을 포함한 모든 군에 LPS(lipopolysaccharide, Sigma, 미국)를 200 ng/㎖ 로 처리하였다. 양성 대조군으로 DEX(Dexamathasone, Peprotech, 미국)를 1 uM로 처리하였다. 7시간 뒤에 이미지 기록하고 PFA 4%로 세포를 고정 후, 면역세포화학 염색을 실시하였다.
총 RNA 분리, RT-PCR
Labo Pass Kit, TRIzol(Cosmogenetech, Seoul, Korea)을 사용하여 제조자의 매뉴얼에 따라 Raw264.7 세포의 총 RNA를 추출하였다. 전체 RNA의 농도는 Nanodrop (ND1000) 분광 광도계(Nanodrop Technologies Inc., Wilmington DE, USA)로 측정하였다. 총 RNA 2μg 및 M-MLV 역전사효소(Promega)를 사용하여 제조사의 매뉴얼에 따라 cDNA을 합성하였다. RT-PCR 반응은 끝난 후 2% 아가로스 젤에서 분석하였다. 사용된 프라이머의 서열은 표 1에 나열하였다:
유전자 | 정방향 | 역방향 |
IL-6 | GTC CTT CCT ACC CCA ATT TCC A | TAA CGC ACT AGG TTT GCC GA |
GAPDH | CTC ACT CAA GAT TGT CAG CA | GTC ATC ATA CTT GGC AGG TT |
면역세포화학 염색
상기 고정된 세포는 2회 PBS로 세척하였다. 0.3 % Triton X-100을 사용하여 10 분간 세포의 핵내로 침투를 실시하고 PBS로 세척한 뒤, 비특이적 항체 결합을 차단하기 위해 10% 정상 염소 혈청과 함께 1 시간 동안 실온에서 정치하였다. 세포를 1차 항체인 TRAP mouse monoclonal항체 (Santa cruz. 미국)로 4 ℃에서 12시간 동안 반응시킨 뒤, 세포를 DPBS로 3회 세척하고 실온에서 1 시간 동안 2차 항체로 Alexa-488 접합 염소 항 마우스 항체와 함께 실온에서 1시간 반응시켰다. 1시간 후 DPBS로 정치하고 세포핵은 염색하기 위해서 ToPro 3(Thermo Fisher Scientific, 미국) 로 15분간 실온에서 반응시켰다. 15분 후 DPBS로 3회 수세 후 Antifade 마운팅 용액(H-1000, VECTOR LABORATORY, 영국)을 이용하여 마운팅하였다.
엑소좀의 분리 및 NTA 분석
본 발명에 따른 iMSC를 5,000 cells/cm2로 씨딩하고, 배양한 후 70~80% 정도 차게 되면 새로운 DMEM-F12 media(D8437, Sigma) (exosome depletion FBS 10%와 P/S 1%가 포함) 로 교체하였다. 48시간 후 컨디션 배지를 50 ml 튜브에 모은 후 300g에서 3분간 원심분리하였다. 원심분리한 뒤 새로운 50 ml 튜브 (50050, SPL)로 옮긴 뒤, 4 ℃에서 2,000g로, 10분간 원심분리하였다. 원심분리 후 새로운 50 ml 튜브로 옮긴 뒤, 4 ℃에서 10,000g로, 30분간 원심분리하였다. 원심분리 후 새로운 50 ml 튜브에 옮겼다. Ultracentrifuge tube(344058, Beckman)에 32~36 ml의 컨디션 배지를 옮긴 뒤, 4 ℃에서 32,000 rpm(187,000g, Beckman, SW 32Ti rotor)으로 2시간 원심분리하였다. 원심분리 후 Ultra centrifuge tube 1개에 200 ul의 0.2 um filtered(S6534-FMOSK, ,Sartorious) 1X PBS(10010-031, gibco)로 엑소좀을 수집하였다.
상기에서 수득한 엑소좀을 각각 0.2 um filtered 1x PBS로 500배 내지 2000배 희석한 후 NTA장비(Zetaview)를 이용하여 엑소좀의 크기 및 농도(particles/ml)를 측정하였다.
상처 치유능 분석
대조군의 세포외 소포체(Cont EV)와 본 발명의 중간엽 줄기세포 유래 세포외 소포체(iMSC EV)의 NHDF 세포에 대한 migration 효과를 확인하기 위해, 6well plate(30006, SPL)에 NHDF 세포를 2.5E+05 cells/well로 씨딩하고 약 100%의 confluency가 되도록 incubation하였다. 세포의 confluency가 차면 DMEM high glucose(D6429,sigma)에 1% penicillin streptomycin(1514-163, gibco)를 넣은 SFM(Serum free medium)에 Mitomycin C(M4287, Sigma-Aldrich)를 10 ug/ml로 희석한 후 1 ml/well로 처리하였다. 2시간 동안 incubation하고, DPBS로 wash 한 후 1000 ul pipet tip을 이용하여 well에 세로로 세포를 긁었다. DPBS로 wash하여 cell debris를 제거하고 DMEM high SFM에 각 세포외 소포체를 1E+09particles/well로 처리하였다. 상기 처리 후 0, 12, 24, 48시간마다 일정한 위치에 사진을 찍어 세포의 이동 정도를 확인하였다. Migration 정도의 분석은 TScratch software를 이용하여 비교하였다.
RNA 시퀀스 분석
탯줄 유래 중간엽 줄기세포(Umbilical Cord-Derived Mesenchymal Stem Cells; UC-MSC) (ATCC :PCS-500-010)와 본 발명의 iMSC 세포를 pellet 상태로 엘에스에이(LAS, 김포, 한국)에 제공하여 RNA를 분리하고, QC test 실시 후 Microarray 분석을 통한 Vocano plot 자료를 받았다. 상기 Vocano plot을 통해, 상향 조절 유전자가 183개, 하향 조절 유전자가 322개임을 확인하였다. 또한, 각각의 유전자들을 DAVID 분석을 통해 유전자의 주요 기능(역할)을 예측하는 자료를 받았다. 분석된 자료는 먼저 각각의 유전자들의 Protein-Protein Interaction을 알기 위해 데이터베이스 기반인 String-db tool을 이용하여 (https://string-db.org/)를 network를 분석한 것이다. 상기 DAVID 분석으로 예측된 유전자의 주요 기능은 Venn Diagram (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/)을 이용하여 서로 겹쳐진 유전자의 기능을 찾았다.
간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델
8주령의 BALB/cAnNCrlOri Female mouse를 받아 2주간 적응 기간을 두었다. 알팍산과 럼푼을 4:1 비율로 섞고 90 ul/Mouse로 복강주사하여 Mouse를 마취하였다. 요도에 카테터(382412, BD)를 삽입하여 방광 내부의 오줌을 제거하고 PBS 50 ul를 넣어 wash하였다. 5 mg/ml Protamine sulfate(P3369, Sigma)를 주입하고 30분 후에 PBS로 wash하였다. LPS 30 ug/ml(L4391, Sigma)를 주입하고 PBS로 wash하였다. hot plate에서 마우스의 회복을 확인하고 일주일간 사육하였다. 이 과정을 4회 반복하여 mouse IC/BPS model을 유도하였다. 실험 5주차에는 Mouse를 동일한 방법으로 마취 후 하복부를 절개하여 방광의 표면에 본 발명의 iMSC를 1×105 세포수로 PBS(10 ul)에 현탁하여 주입하였다. 하복부를 봉합하고 마취에서 회복되는 것을 확인한 후 사육하였다. 일주일 후 Mouse를 마취한 후 방광을 적출하여 실험에 사용하였다. 일부 방광은 homogenization 후 RNA를 추출하였고, 일부는 조직 section 및 염색을 통해 방광의 형태 및 염증 정도를 확인하였다.
qPCR
추출된 방광을 균질화한 후 Labozol reagent(CMRZ001, 코스모진텍)에 재현탁하였다. 클로로포름(C2432,Sigma)을 labozol과 5:1 비율로 섞고 볼텍싱하였다. 13,000rpm, 15분 원심분리하여 RNA가 녹아있는 상층액을 천천히 새로운 튜브에 옮기고 동량의 2-propanol(64605-0380, junsei, 1:1)을 넣었다. 상층액과 2-propanol 이 있는 튜브를 1~2회 inverting 후 13,000rpm, 15분 원심분리하였다. RNA pellet을 75% EtoH로 wash 후 13,000rpm, 10분 원심분리하고, DEPC에 RNA를 재현탁하였다. RNA는 rTaq Plus 5x PCR master mix(EBT-1319, ELPISBIO)를 이용하여 cDNA를 합성하였고, HiPi Real-Time PCR 2x Master Mix(SYBR green, ROX)(EBT-1802, ELPISBIO)을 이용하여 유전자의 발현량을 확인하였다(7500, Amersham Phamacia Biotech).
실험결과
BAM 시스템을 이용한 스페로이드 생성
Aggrewell 플레이트에 올려진 iPSC는 24시간 후 모양과 크기가 균질한 둥근 EB를 형성함을 확인하였다(도 2).
면역세포화학 염색을 통한 스페로이드의 만능성 세포 확인
스페로이드를 만능성 마커인 OCT4로 염색을 하였을 때, 녹색으로 염색이 되었으며, 핵을 염색하는 DAPI로 염색하였을 때, 특이적으로 핵 부위에 녹색과 파란색으로 염색이 됨을 확인할 수 있었다. OCT4가 핵에서 발현됨을 알 수 있으며 iPSC에서 유래한 스페로이드가 만능성을 유지함을 알 수 있었다(도 3).
iPSC-MSC 생성
0.1% 젤라틴으로 코팅된 배양접시에서 스페로이드(검은색 화살표)가 바닥에 부착되었으며, 세포가 돌출하여 나오는 것(흰색 화살표)을 관찰할 수 있었다. 시간이 지날수록 돌출 세포가 증가하였으며 70~80% 컨플루언시에서 계대하였다. 계대를 진행할수록 세포 모양이 방추형(흰색 점선 화살표)으로 균질화되었다(도 4).
iPSC-MSC 계대 및 세포 증식 곡선
iPSC-MSC는 P5부터 세포가 방추형태를 띄며 P13까지 계대할 수 있었다(도 5). 그 후 세포는 저장액을 만들어 LN2에 저장하였다. 세포 증식 곡선은 대조군인 hWJ-MSC, AD-MSC와 비교하였으며, 그 결과 AD-MSC는 P9까지 세포 수가 늘어나다가 이후 감소하며, hWJ-MSC는 P13에서도 꾸준히 세포가 증식하였다. iPSC-MSC는 대조군보다 CPD 및 누적 세포 수가 월등히 높으며, 2배수 시간도 대조군보다 빨랐다(도 6).
유세포 분석(FACS)을 이용한 면역표현형 검사
FACS 분석결과 대조군인 AD-MSC와 비교하여 iPSC-MSC가 항-CD73, 항-CD90에 대해 양성이고 항-CD34, 항-CD45는 음성임을 확인하였다(도 7). 이를 통해, BAM 시스템을 통해 만들어진 iPSC-MSC가 중간엽 줄기세포의 명확한 특성을 가짐을 알 수 있었다.
면역세포화학 염색을 통한 iPSC-MSC의 중간엽 줄기 세포 확인
iPSC-MSC 세포를 만능성 마커인 OCT4, SSEA4와 중간엽 줄기세포 마커인 PDGFRβ를 이용하여 ICC를 진행하였다. iPSC-MSC에서는 녹색으로 염색된 OCT4, SSEA4 마커에서는 녹색으로 염색된 세포가 적었으며, 녹색 PDFGRβ 마커에서는 녹색으로 염색된 세포가 많이 분포하였다(도 8). 이를 통해 iPSC-MSC가 전분화능을 상실하면서 중간엽 줄기세포로 전환되었음을 알 수 있었다.
항염증 세포 모델
줄기 세포의 염증제어 효과를 확인하기 위한 실험 절차의 모식도에 따라 실험을 수행하였다(도 9). 염증 실험결과, Raw 264.7 세포에 LPS를 처리하여 염증을 유발한 LPS 군에서는 거대한 다핵 세포를 관찰할 수 있었으며, LPS 처리와 함께 DEX를 처리한 양성 대조군(LPS+DEX), LPS 처리와 함께 각각 hWJ-MSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+hWJ-MSC CM) 및 iMSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+iMSC CM)에서는 다핵 세포를 관찰할 수 없었다(도 10). 또한, 각각의 실험군에 대하여 RT-PCR을 수행한 결과, IL-6의 발현이 LPS 군에서 가장 높게 나타났고, LPS 처리와 함께 각각 hWJ-MSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+hWJ-MSC CM) 및 iMSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+iMSC CM)에서는 LPS 군보다 IL-6의 발현이 유의적으로 감소한 것을 확인하였다(도 10). 한편, LPS 처리와 함께 DEX를 처리한 양성 대조군(LPS+DEX)에서 IL-6의 발현이 현저히 낮게 나타났다.
면역세포화학 염색을 통한 다핵세포의 유무 확인
상기 항염증 세포 모델 시험 후, 각각의 시험군에 대하여 TRAP 항체를 이용한 다핵세포의 유무를 확인하였다. 다핵 세포는 염증 반응이 진행될 때 세포가 모이면서 생성되는 것으로, 다핵 세포의 존재 여부를 통해 염증의 유무를 확인할 수 있다. 실험 결과, LPS 군에서는 TRAP 으로 염색된 세포(TRAP Positive)의 비율이 매우 높았고, LPS 처리와 함께 각각 hWJ-MSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+hWJ-MSC CM) 및 iMSC의 컨디션 배지를 처리한 시험군(LPS+iMSC CM)에서는 상기 LPS 군에 비하여 TRAP positive 세포가 현저히 적었다(도 11).
엑소좀의 분리 및 NTA 분석
NTA 장비를 이용하여 엑소좀의 크기 및 농도(particles/ml)를 측정한 결과, 본 발명의 iPSC-MSC에서 분리한 엑소좀의 particle의 크기는 약 100 nm에 해당하고 WJ-MSC에서 분리한 엑소좀에 비하여 전체 particles의 수가 약 4배 정도 많은 것으로 나타났다(도 12).
상처 치유능 분석
상기 본 발명의 iPSC-MSC에서 분리한 엑소좀을 Scratch 된 정상 인간 섬유아세포(NHDF, Normal human dermal fibroblast)에 넣고, 48시간 동안 관찰하였을 때 48시간 후 대조군인 PBS군에서는 50% 정도 상처가 치유되었으나, 본 발명의 iPSC-MSC에서 분리한 엑소좀을 처리한 시험군(Exosome)에서는 90% 이상 상처가 치유된 것을 확인할 수 있었다(도 13a 및 도 13b). 이러한 결과로부터, 본 발명의 iPSC-MSC에서 분리한 엑소좀의 상처 치유능이 대조군인 PBS에 비해 현저히 높은 것을 알 수 있다.
RNA 시퀀스 분석
RNA 시퀀스 데이터를 이용하여 Vocano plot을 그린 결과, 상위 조절 유전자 183개, 하위 조절 유전자 322개를 찾을 수 있었다. 이들을 이용하여 각각 String data 및 Venn Diagram으로 나타내었다.
먼저 상위 조절 유전자 183를 이용한 string data에서, 발현이 증가한 마커(Up-regulated Genes)인 SPP1(secreted phosphoprotein 1; Osteopontin), PLAU(Plasminogen Activator, Urokinase), ITGA6(integrin subunit alpha 6), CENPI(Centromere Protein I), BUB1(Budding Uninhibited By Benzimidazoles 1 Homolog; Mitotic checkpoint serine/threonine-protein kinase) 등의 유전자가 인터렉션이 많이 되어있는 것으로 나타났다(도 14a). 이들 유전자의 volcano plot의 발현 차이는 다음과 같다. SPP1의 발현은 대조군(hWJ-MSC) 대비 대략 3.0 배 내지 4.0배, 구체적으로는 3.50배 내지 4.00배, 더욱 구체적으로는 3.80 배 내지 3.90배 중량으로 증가하였고, PLAU의 발현은 대략 1.5배 내지 2.2배, 구체적으로는 1.80배 내지 2.10배, 더욱 구체적으로는 1.90배 내지 2.00배 중량으로 증가하였으며, ITGA6의 발현은 대략 2.1배 내지 3.0배, 구체적으로는 2.30배 내지 2.60배, 더욱 구체적으로는 2.40배 내지 2.50배 중량으로 증가하였고, CENPI의 발현은 대략 1.5배 내지 2.0배, 구체적으로는 1.60배 내지 1.90배, 더욱 구체적으로는 1.70배 내지 1.80배 중량으로 증가하였으며, BUB1의 발현은 대략 1.4배 내지 2.1배, 구체적으로는 1.50배 내지 1.90배, 더욱 구체적으로는 1.65 배 내지 1.75배 중량으로 증가하였다. 상기 발현이 증가한 마커들(Up-regulated Genes)을 이용한 vocano plat data의 GOTERM을 이용하여 venn Diagram으로 나타낸 결과, Positive RNA 중합 프로모터에 의한 전사조절 관련 유전자와, 세포 부착 및 증식 관련 유전자에 ITGA6 유전자가 겹치는 것을 확인할 수 있었다(도 15a). SSP1은 뼈 분화 마커로 사용하는 것으로 뼈 분화가 촉진함을 볼 수 있고, PLAU는 소변에서 분리한 효소로 응고된 혈액이나 섬유소에 의해 차단된 정맥로의 혈류 회복에 치료제로 사용할 수 있으며, ITGA6는 상피세포에서 laminin에 대한 수용체로 hemidesmosome에서 중요한 구조적 역할을 하고, CENPI는 난포자극호르몬에 대한 생식선 조직의 반응에 관여하며, BUB1은 유사분열 방추 체크포인트 및 염색체 응집의 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
다음으로 하위 유전자 322를 이용한 string data에서, 발현이 감소한 마커(Down-regulated Gene)인 PTGS2(Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2, or COX2;)가 인터렉션이 많이 되어 있는 것으로 나타났다(도 14b). 상기 PTGS2 유전자의 volcano plot의 발현 차이는 다음과 같다. PTGS2의 발현은 대조군(hWJ-MSC) 대비 대략 2.0배 내지 3.0배, 구체적으로는 2.30배 내지 2.90배, 더욱 구체적으로는 2.50배 내지 2.70배 중량으로 감소하였다. 상기 발현이 감소한 마커를 이용한 vocano plat data의 GOTERM을 이용하여 venn Diagram으로 나타낸 결과, 음성 세포 증식 조절 관련 유전자와 LPS 반응 및 염증 관련 유전자에 PTGS2가 겹치는 것을 확인할 수 있었다(도 16a). PTGS2은 염증 반응 동안 prostaglandin의 생성을 담당하는 효소이다.
상기 상향 조절 유전자 5개와 하향 조절 유전자 1개의 상대적 발현량의 차이를 수치화하여 하기 표 2에 나타내었다.
유전자 | hWJ-MSC | iMSC |
SPP1 | 1 | 3.81 |
PLAU | 1 | 2.00 |
ITGA6 | 1 | 2.59 |
CENPI | 1 | 1.76 |
BUB1 | 1 | 1.62 |
PTGS2 | 1 | -2.65 |
상기 표 2를 살펴보면, 상기 5개의 상향 조절 유전자들은 hWJ-MSC에 비해 본 발명의 iMSC에서 현저히 발현이 증가하고, 상기 1개의 하향 조절 유전자는 hWJ-MSC에 비해 본 발명의 iMSC에서 현저히 발현이 감소한 것을 확인할 수 있다.
이러한 결과로부터 본 발명의 iMSC가 종래 MSC와 차별화된 효능을 가지는 것이 상기의 유전자 발현의 차이로 인한 것임을 유추할 수 있다.
간질성 방광염/방광통증 증후군(IC/BPS) 유도 마우스 모델
Mouse의 방광 조직을 section하여 H&E 염색을 한 결과 IC/BPS 유도 mouse에서는 방광 내벽이 무너져 있는 것을 확인하였으며, iMSC 및 hWJ-MSC를 처리한 그룹에서는 방광 내벽이 회복된 것을 확인하였다. 추가로 masson’s trichome 염색과 toluidine blue 염색을 통해 Fibrosis 정도(%)와 Mast cell의 침투를 확인하였으며 iMSC, hWJ-MSC를 처리한 그룹에서 염증 정도가 완화된 것을 확인하였다(도 17a, 도 17b). 특히, 본 발명의 iMSC를 처리한 그룹이 hWJ-MSC를 처리한 그룹에 비해 Fibrosis 정도(%)와 Mast cell의 침투가 약 50% 수준으로 현저히 감소하는 것으로 나타나, 본 발명의 iMSC가 hWJ-MSC와 비교하여 염증의 예방, 개선 또는 치료에 더욱 효과적임을 알 수 있다.
qPCR
IC/BPS 유도 mouse의 방광 조직에서 mRNA를 추출하여 염증 관련 사이토카인(IL6, TNF-alpha), 본 발명의 iMSC를 처리한 군에서 발현도가 낮아진 것을 확인하였다(도 18a). 또한, 요로 상피(Urothelial) 마커(UPK1A, UPK1B, UPK2)의 발현을 확인한 결과, 본 발명의 iMSC를 처리한 군에서 발현도가 높아진 것을 확인하였다(도 18b). 마지막으로 본 발명자들의 선행연구에서 발굴한 IC/BPS 마커(KLRB1, PSMB9, ITGAL)가 본 발명의 iMSC를 처리한 군에서 낮게 발현되는 것을 확인하였다(도 18c)(한국 공개특허공보 제10-2331138호 참조).
상기 실험 결과들로부터, 본 발명의 iMSC가 간질성 방광염(IC) 등의 방광 통증 증후군(BPS)의 치료에 유용하게 이용될 수 있음을 유추할 수 있다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한, 첨부된 특허청구범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.
<110> KONKUK UNIVERSITY INDUSTRIAL COOPERATION CORP
KONKUK UNIVERSITY GLOCAL INDUSTRY-ACADEMIC COLLABORATION FOUNDATION
STEMEXONE., LTD
<120> Mesenchymal stem cells, extracellular vesicles isolated
therefrom, and uses thereof
<130> HPC-10492
<160> 4
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-6 F primer
<400> 1
gtccttccta ccccaatttc ca 22
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> IL-6 R primer
<400> 2
taacgcacta ggtttgccga 20
<210> 3
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH F primer
<400> 3
ctcactcaag attgtcagca 20
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> GAPDH R primer
<400> 4
gtcatcatac ttggcaggtt 20
Claims (16)
- 아래 (A) 및 (B) 중에서 선택되는 1종 이상의 특성을 나타내는 중간엽 줄기세포:
(A) SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 중에서 선택되는 1종 이상의 마커의 발현량의 증가; 및
(B) PTGS2 마커의 발현량의 감소. - 제1항에 있어서, 상기 중간엽 줄기세포는,
SPP1, PLAU, ITGA6, CENPI 및 BUB1 마커의 발현량이 증가하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제1항에 있어서, 상기 중간엽 줄기세포는,
(1) 대상체로부터 분리된 전분화능 줄기세포를 배양하여 배아체(Embryoid Body, EB)를 형성하는 단계;
(2) 상기 배아체를 미세중력(microgravity) 하의 생물반응기(bioreactor)에서 3차원 배양하여 스페로이드(spheroid)를 형성하는 단계; 및
(3) 상기 스페로이드를 배양 표면에 점착성 고분자가 코팅된 배양 용기에서 부착 배양하여 중간엽 줄기세포로 분화시키는 단계;를 포함하는 방법으로 제작된 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 전분화능 줄기세포는 배아줄기세포(Embryonic Stem Cell, ESC) 또는 유도만능 줄기세포(induced Pluripotent Stem Cell, iPSC)인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 전분화능 줄기세포는 유도만능 줄기세포인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 단계 (1)은 상기 전분화능 줄기세포를 다중 웰(multi-well) 배양 용기에서 3차원 배양함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 단계 (1)은 상기 3차원 배양 시 원심 분리를 통해 세포 응집을 유도하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 단계 (2)의 미세중력은 상기 생물반응기를 회전시킴으로써 상기 생물반응기에 가해지는 중력을 상쇄시키는 미세중력 모사장치에 의해 유도되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제8항에 있어서,
상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 15 내지 80 rpm으로 회전시키면서 3 내지 8일 간 배양함으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제9항에 있어서,
상기 단계 (2)는 상기 미세중력 모사장치를 40 내지 60 rpm에서 시작하여 매일 3 내지 7 rpm씩 증가시키면서 회전시킴으로써 수행되는 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제3항에 있어서,
상기 점착성 고분자는 히알루론산(hyaluronic acid), 알긴산(alginate), 헤파린(heparin), 후코이단(fucoidan), 셀룰로스(cellulose), 덱스트란(dextran), 키토산(chitosan), 알부민(albumin), 피브린(fibrin), 콜라겐(collagen) 및 젤라틴(gelatin) 중에서 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제11항에 있어서,
상기 점착성 고분자는 젤라틴인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포. - 제1항의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 염증성 질환 또는 자가면역 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
- 제13항에 있어서,
상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 방광염, 류마티스 관절염, 반응성 관절염, 1형 당뇨병, 2형 당뇨병, 전신성 홍반성 낭창, 다발성경화증, 특발성섬유성폐포염, 다발성근염, 피부근염, 국한피부경화증, 전신피부경화증, 대장염, 염증성 장질환, 조르젠신드롬(Sjorgen's syndrome), 레이노현상(Raynaud's phenomenon), 베쳇병(Bechet's disease), 가와사키병(Kawasaki's disease), 원발성담즙성경화증(primary biliary sclerosis), 원발성경화성담관염(primary sclerosing cholangitis), 궤양성대장염(ulcerative olitis), 이식편대숙주병(Graft-versus-host disease, GVHD) 또는 크론병(Crohn's disease)인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제14항에 있어서,
상기 방광염은 간질성 방광염(Interstitial Cystitis), 만성 방광염 및 케타민 유발 방광염 중에서 선택되는 1종 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항의 중간엽 줄기세포, 또는 이로부터 분리된 세포외 소포체를 유효성분으로 포함하는 상처치유용 약학 조성물.
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2023580964A JP2024527558A (ja) | 2021-07-06 | 2022-01-25 | 間葉系幹細胞、これから分離された細胞外小胞、及びこれらの用途 |
PCT/KR2022/001337 WO2023282423A1 (ko) | 2021-07-06 | 2022-01-25 | 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
KR1020210088371 | 2021-07-06 | ||
KR20210088371 | 2021-07-06 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
KR20230007923A true KR20230007923A (ko) | 2023-01-13 |
Family
ID=84900331
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
KR1020220011024A KR20230007923A (ko) | 2021-07-06 | 2022-01-25 | 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
KR (1) | KR20230007923A (ko) |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160023477A (ko) | 2014-08-22 | 2016-03-03 | 울산대학교 산학협력단 | 방광 통증증후군 치료를 위한 간엽줄기세포의 용도 |
-
2022
- 2022-01-25 KR KR1020220011024A patent/KR20230007923A/ko not_active Application Discontinuation
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR20160023477A (ko) | 2014-08-22 | 2016-03-03 | 울산대학교 산학협력단 | 방광 통증증후군 치료를 위한 간엽줄기세포의 용도 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP7407864B2 (ja) | Cd201、cd46、cd56、cd147及びcd165からなる群より選択される少なくとも1種の細胞表面マーカーを発現する間葉系幹細胞及びその調製方法、並びに上記間葉系幹細胞を含む医薬組成物及びその調製方法 | |
AU2013290146B2 (en) | Mesenchymal-like stem cells derived from human embryonic stem cells, methods and uses thereof | |
TWI812867B (zh) | 利用血管母細胞產生間葉基質細胞之方法 | |
WO2018164228A1 (ja) | Ror1陽性の間葉系幹細胞を含有する、線維症を伴う疾患の予防又は処置のための医薬組成物、及びその調製方法、並びにror1陽性の間葉系幹細胞を用いる線維症を伴う疾患の予防又は処置方法 | |
AU2016250905B2 (en) | Generation of muscle-lineage cells from stem cells | |
US20120276064A1 (en) | Methods and compositions for rejuvenation and expansion of stem cells | |
KR102576875B1 (ko) | 줄기 세포 배양을 위한 유도 배지 및 방법 및 요법 | |
US10724000B2 (en) | Small molecule based conversion of somatic cells into neural crest cells | |
JP2022078044A (ja) | コロニー形成培地及びその使用 | |
EP2970880A2 (en) | Multifunctional immature dental pulp stem cells and therapeutic applications | |
JP2019528057A (ja) | インビボで血管形成能を有する中胚葉細胞および/または血管内皮コロニー形成細胞様細胞を作製する方法 | |
WO2014046417A1 (en) | Method for preparing mesenchymal stem cell aggregates | |
JP2012510279A (ja) | 脂肪由来幹細胞の産生方法および疾患の治療における当該細胞の使用 | |
CA3168330A1 (en) | Method for treating chronic graft versus host disease | |
WO2022259721A1 (ja) | 間葉系幹細胞の製造方法 | |
KR20230007923A (ko) | 중간엽 줄기세포, 이로부터 분리된 세포외 소포체, 및 이들의 용도 | |
US20230277594A1 (en) | Method for differentiating mesenchymal stem cells from pluripotent stem cells | |
US9896657B2 (en) | Method of inducing differentiation of stem cell into corneal limbal stem cell | |
WO2013162057A1 (ja) | 心筋指向性細胞を含む細胞製剤 | |
WO2017170925A1 (ja) | Egfr及びmic-abからなる群より選択される少なくとも1種の細胞表面マーカーを高発現する間葉系幹細胞及びその調製方法、並びに上記間葉系幹細胞を含む医薬組成物及びその調製方法 | |
JP2024527558A (ja) | 間葉系幹細胞、これから分離された細胞外小胞、及びこれらの用途 | |
KR20150110894A (ko) | 저산소 조건에서 배양된 성체줄기세포를 유효성분으로 함유하는 항노화용 세포치료제 | |
EP3873503B1 (en) | Treatment of cachexia using fibroblast cells and products thereof | |
JP2024096794A (ja) | 脊髄損傷の治療のための多能性幹細胞由来オリゴデンドロサイト前駆細胞 | |
KR20230046807A (ko) | 배아줄기세포 유래 레이디그유사세포, 그 제조방법, 및 그의 용도 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
E902 | Notification of reason for refusal |