KR20220166819A - 예방 및 치료에서의 천연 항체 - Google Patents

Abstract

대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 기재되어 있다. 더욱이, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 천연 IgM 및/또는 IgA는 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는, 항체가 기재되어 있다. 추가로, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 항체는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 항체인, 항체가 기재되어 있다. 더욱이, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 백신으로서, 상기 백신은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는, 백신이 기재되어 있다. 추가로, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 이러한 백신으로서, 상기 화합물은 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 천연 IgM 및 /또는 IgA 항체인, 백신이 기재되어 있다.

Description

예방 및 치료에서의 천연 항체

본 발명은, 대상체(subject)에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질(oxidized phospholipid) 및/또는 산화-특이적 에피토프(oxidation-specific epitope)를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 천연 IgM 및/또는 IgA는 건강한 개체(individual)로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀(IgA enriched plasma pool)로부터 유래하는, 항체에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 항체는 재조합 인간 모노클로날(recombinant human monoclonal) 천연 IgM 및/또는 IgA 항체인, 항체에 관한 것이다. 더욱이, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후(clinical sign) 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 백신으로서, 상기 백신은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제(excipient)를 포함하는, 백신에 관한 것이다. 추가로, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 이러한 백신으로서, 상기 화합물은 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 유도하는, 백신에 관한 것이다.

B2 세포 또는 여포(FO) B 세포라고도 하는 종래의 B 림프구는 조혈 줄기 세포로부터 유래하고, 항원-챌린지 세포가 면역글로불린(항체) 분비 형질 세포 또는 기억 B 세포로 최종적으로 분화될 때까지 발달 중에 명확하게 정의가능한 단계를 거친다.

대부분의 포유동물에서, B2 세포 발생의 초기 단계는 골수에서 수행되고, 최종적 성숙 프로세스는 비장, 림프절, 파이에르 패치(Peyer's Patches) 등의 말초 림프 기관에서 발생한다. B 림프구의 가장 중요한 특징은 이들의 B 세포 항원 수용체(BCR)이고, 이의 특이성은 생식세포계열로 코딩되지 않기 때문에, 림프구의 초기 발생시에 개별적으로 생성되어야 한다. BCR은 기본적으로 신호 변환기 Ig-α/Ig-β와 CD19 등의 공-수용체와 연관하는 면역글로불린의 막 고정 버전으로 구성된다. 소정 B 세포는 1개의 고유한 특이성을 갖는 면역글로불린을 발현하지만, 모든 림프구 풀이 함께 실질적으로 모든 이물질을 인식할 수 있다.

이 막대한 다양성은 중쇄 유전자좌에서 가변(V_H), 다양성(D_H) 및 결합(J_H) 유전자 세그먼트, 및 경쇄 유전자좌에서 V_L 및 J_L 유전자 세그먼트의 랜덤 재조합에 의해 달성되고, 조립되면, 면역글로불린의 가변 도메인을 코딩한다. 각 세그먼트에 대해, 척추동물 게놈에는 복수의 변이체가 있다. 예를 들면, 인간 면역글로불린 중쇄 유전자좌에는 경쇄 유전자좌에 최대 51개의 V_H-, 27개의 D_H- 및 6개의 J_H-유전자 세그먼트와 다수의 V_L- 및 J_L-유전자 세그먼트가 포함되어 있다. 결과적으로, 이들 유전자 세그먼트의 랜덤 재조합에 의해, 대략 3×10¹¹개의 상이한 특이성을 갖는 면역글로불린 레퍼토리를 생성할 수 있다.

이 접합부의 다양성은, B2 세포 발생의 초기 단계에서 특이적으로 발현되는 효소 말단 데옥시뉴클레오티딜 트랜스퍼라제(TdT)에 의해, 유전자 세그먼트의 결합 부위에 비주형 코딩된 N-뉴클레오티드를 도입함으로써 추가로 증가시킬 수 있다. 면역글로불린 유전자 재배열에는 DNA 서열의 비가역적 변화가 포함되기 때문에, 특정 병원체에 대한 장기 면역의 기초가 되는 기억 B 세포를 포함하여, 소정 활성화 B 세포의 모든 자손은 동일한 수용체 특이성을 계승한다.

성숙한 B2 세포가 항원과 조우하여 활성화되면, 림프절이나 비장 등의 림프 기관내의 B 세포-T 세포 경계로 이동하고, 여기서 MHC 클래스 II 분자를 통해 내재화된 항원의 단편을 제시한다. 프라이밍된 CD4^pos 여포 헬퍼(TFH) T 세포가, 활성화된 B 세포에 의해 제시된 MHC-II/항원 복합체에 특이적인 T 세포 항원 수용체(TCR)를 발현하면, b 세포 활성화를 완료하기 위해 필요한 CD40 리간드 및 인투루킨 4(il-4) 등의 사이토카인 등의 공-자극 분자를 제공한다. 완전히 활성화된 B 세포의 작은 부분은 적응성 또는 면역성 IgM이라고도 하는 항원 특이적 IgM 항체를 분비하는 단명 형질 세포로 급속하게 분화한다. 그러나, 가장 활성화된 B 세포는 동족 T_FH 세포와 함께 친화성 성숙 및 클래스 스위치 재조합(CSR)이 발생하는 림프 기관내의 특수한 구조인 생식 중심(GC)을 형성한다.

친화성 성숙은, 특정 항원에 대해 발현된 BCR의 친화성을 변경할 목적으로, 면역글로불린 유전자의 가변 영역내에 체세포 초돌연변이(SHM)를 도입하는 프로세스이다. 항원에 대한 친화성이 감소된 돌연변이 BCR을 발현하는 B 세포는 역선택되어 사멸하지만, 개선된 친화성을 갖는 돌연변이 BCR을 발현하는 이러한 B 세포 클론은 추가로 발달할 수 있다. CSR의 동시 진행 프로세스는 C-μ 및 C-δ의 하류의 불변 영역, 예를 들면, C-γ의 불변 영역으로 VDJ 서열의 유전적 재배열을 유도한다. 결과적으로, IgM 및 IgD 이소형을 각각 발현하는데 필요한 C-μ 또는 C-δ 서열은 각각의 B 세포의 게놈에서 비가역적으로 결실되기 때문에, B 세포는 γ-HC를 함유하는 IgG 분자를 생산한다. 최단으로 7일 후, GC 반응에 의해, 혈청 IgG 수준의 대부분을 점유하는 대량의 고친화성 IgG 항체를 분비하는 형질 세포와, 동일한 병원체와의 재-조우시에 IgG-분비 혈장 세포로 신속하게 분화하는 고친화성 IgG BCR을 발현하는 기억 B 세포를 생성한다.

상기에서 설명한 종래의 B2 세포와는 별도로, B1 세포로 명명된 또 다른 성숙 B 세포 모집단이 기재되었다. B1 세포는 B 세포의 작은 서브세트이고, 이의 독자의 기능 때문에, 종종 선천성 림프구라고 한다.

실제로, 이러한 세포는 B2/FO B 세포와 상이한 몇 가지 특징을 갖고 있다. B1 세포와 이의 특정 기능에 대한 대부분의 지식은 마우스에서의 연구에 기초하고, 정의된 일련의 표면 마커의 발현에 의해 간단하게 식별할 수 있다. 마우스 B1 세포는 통상 IgM^hi/IgD^low/B220^low/CD23^neg/CD43^pos/Mac-1^pos이고, 이는 나이브 성숙 B2 세포의 IgM^low/IgD^hi/B220^hi/CD23^pos/CD43^neg/Mac-1^neg 표현형과 대조적이다. CD5의 발현에 기초하여, B1 세포는 CD5^pos B1a 및 CD5^neg B1b 세포로 추가로 세분화될 수 있다. 이 B 세포 모집단은, 개체발생에 나타나는 최초의 B 세포 모집단이고 출생시에 존재하기 때문에, B1이라고 명명되어 있지만, B2 세포 모집단은 출생 후에 발생한다. 과거 수십년 동안의 광범위한 조사에도 불구하고, 어느 전구 세포 B1 세포가 발생하는지는 여전히 불분명한다.

하나의 가설은, B1 세포는, 태아 간에서 별개의 계통의 신생아 전구체 세포로부터 유래하고, 이 모집단은 이의 자가 재생 능력에 의해 성체에서 유지된다는 것을 제안한다.

제2 모델은, 적절한 자가 반응성을 갖는 BCR을 발현하는 골수 유래 미성숙 B 세포로부터 B1 세포가 지속적으로 발생하는 것을 시사한다. 현재의 견해에 따르면, 자가-항원의 인식에 의한 BCR 신호전달의 증강은 B1 세포의 발생과 유지에 중요하다.

이의 기원에 관계없이, B1 세포 모집단은 연령 증가에 따라 감소하는 것으로 공지되어 있다. 성체 마우스에서, B1 세포는 주로 복막과 흉막 강에 위치하고, 림프절 또는 비장에서는 거의 발견되지 않지만, T 세포의 도움 없이 보호 IgM 항체를 생산하는 감염 부위로 급속하게 이동할 수 있다.

중요하게도, B2 세포와는 극명하게 대조적으로, B1 세포는 감염 또는 특이적 면역이 없는 경우에도 자발적으로 항체를 분비하는 독자의 능력을 갖고 있다. 사실, 엄격한 무균 조건에서 사육된 노토바이오틱 마우스에서도, B1 세포는 종래의 방법으로 사육된 마우스와 유사하게 정상 혈청 IgM 수준을 유지하기 때문에, 이러한 항체는 천연 항체로서 지칭된다[참조: Chou, Fogelstrand et al., 2009, J Clin Invest, Vol. 119(5)].

이것은 동일한 무균 조건에서 사육된 마우스에서는 거의 존재하지 않는 면역 항체와 대조적이다. 마우스에서, 혈청 IgM의 약 80%는 천연 항체이고, 나머지 20%는 면역 IgM인 것으로 추정된다. 또한, 혈청 IgA 항체의 대부분은 천연 항체에 의한 것이다. 천연 항체는 몇몇 관점에서 B2 세포에 의해 분비되는 면역 항체와는 상이하다. 예를 들면, 천연 항체는 기존의 생식세포계로 코딩된 가변 도메인 서열을 공유하고, 즉 특별히 제한된 D_H-근위 V_H-유전자 세그먼트의 세트를 사용하고 특정 LC 유전자와 조합하여 생성된다. 천연 항체의 유전자는, B1 세포에서 TdT 발현이 낮기 때문에, 결합 부위에서 유의한 체세포 초돌연변이 또는 N-뉴클레오티드 삽입을 갖지 않는다.

천연 항체는 세균의 세포벽 성분, 인플루엔자 바이러스, 수포성 구내염 바이러스, 림프구성 문맥수막염 바이러스 등의 바이러스, 및 인지질, DNA 또는 사멸하는 세포에 의해 노출된 미스-폴딩된 단백질(misfolded protein)을 포함하는 자가-항원 등의 다양한 구조에 결합하고, 이 때문에 천연 항체는 자가 및 다중 반응성으로 간주된다. 또한, 천연 항체는 진균 및 기생충 감염에 대한 보호적 역할을 한다.

인간 B1 세포 모집단은 자발적 IgM 분비, 효율적 T 세포 자극 및 긴장성 세포내 신호전달의 특징을 구비하는 것으로 기재되어 있다[참조: Griffin, Holodick et al., 2011, J Exp Med, Vol. 208(1)]. 이러한 기준에 기초하여, 제대혈 및 성체 말초혈에 존재하고, CD20^posCD27^posCD43^posCD5^posCD70^neg의 독특한 표현형을 발현하는 B 세포의 작은 모집단은 마우스 B1 세포의 표현형과는 상이한 인간 B1 세포에 기인할 수 있다. 흥미롭게도, 이 B 세포 모집단은 특히 제대혈이 풍부하고, 연령과 함께 감소하는 것으로 나타났다. 주목할 점으로, 인간 B1 세포 유래 면역글로불린의 상당 부분이 포스포릴콜린 및 dsDNA 미모토프 등의 원형적 천연 항체 항원에 결합하지만, 이들의 V_H 및 V_L 영역은 대응하는 마우스의 경우처럼 왜곡된 유전자 레퍼토리를 나타내지 않고, 인간 B1 세포 면역글로불린의 V_H 유전자에는 V_H-D_H 및 D_H-J_H 접합부에 N-뉴클레오티드 부가가 함유되어 있다.

특정 병원체에 대한 천연 항체의 보호적 역할에 관한 대부분의 지식은 B 세포가 IgM을 분비할 수 없거나, 또는 B1a 세포 등의 특정 B 세포 모집단이 결핍되어 있는 유전자 변형 마우스를 사용한 생체내 연구로부터 수득된다. 이러한 실험에 의해, B1 세포 유래의 천연 IgM이 결핍된 마우스는 인플루엔자 바이러스 감염 후에 유의하게 증강된 사망률을 나타냈지만, 감염에 대한 반응으로 B2 세포 유래의 면역 IgM이 여전히 생산된 것으로 밝혀졌다. 흥미롭게도, 감염된 마우스는 천연 IgM을 함유하는 감염되지 않은 야생형 마우스로부터 혈청을 전달함으로써 치명적 감염으로부터 보호될 수 있지만, 가용성 IgM이 결핍된 마우스로부터 유래하는 혈청에서는 보호되지 않는다. 천연 IgM의 항바이러스 활성은 감염되지 않은 마우스의 기관지폐포 세척액(BAL)을 사용한 헤마글루티닌(HA) 억제 검정에 의해 추가로 입증되었다. IgM을 함유한 BAL 액은 거의 100% 중화 활성을 나타낸 반면, IgM 항체를 고갈시키면 HA 억제가 >75%까지 감소되었다. 따라서, 천연 IgM은 HA 활성의 중화 및 IgM-유도된 바이러스 입자의 클리어런스에 의해 심각한 인플루엔자 바이러스 감염으로부터 보호한다고 가정한다. 천연 IgM은 또한, 폐렴의 가장 일반적 원인인 스트렙토콕쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae) 등에 의한 중증 세균 감염으로부터 중요한 보호를 제공한다. 유전자도입 마우스를 사용한 연구에 따르면, B1a 세포와 천연 IgM의 존재가 에스. 뉴모니아에 감염으로부터의 생존에 중요한 반면, B1a 세포와 천연 IgM 항체가 결핍된 마우스는 치명적 감염 경로에 대해 보다 감수성이 높았다[참조: Haas, Poe et al., 2005, Immunity , Vol. 23(1)].

흥미롭게도, 또 다른 연구에서는 나이브 어린 마우스로부터 천연 IgM이 결핍된 감염 마우스로의 IgG 고갈 혈청의 전달이 보호적인 반면, 고령 기증 마우스로부터의 혈청은 유익한 효과가 없음을 나타냈다[참조: Holodick, Vizconde et al., 2016, J Immunol, Vol. 196(10)]. 이러한 데이터는 보호적 천연 IgM 항체의 혈청 수준이 연령 증가에 따라 감소하는 것을 나타내고, 이는 고령 마우스에서 관찰된 B1a 세포 수의 감소와 일치한다. 요약하면, 천연 IgM 및 가능하게는 IgA 항체는 침입하는 병원체에 대한 1차 방어로서 기능하고, 이는 FO/B2 세포에 의해 클래스-스위치 고친화성 면역 항체를 생산하는 데 필요한 일시적 갭을 연결하는 데 중요하다.

IgM 항체의 분비가 결핍된 마우스는 또한 자가면역 또는 아테롬성 동맥경화증 등의 특정 질환의 발증에 대한 증강된 감수성을 나타내고, 이들 질환은 감염원(infectious agent)과는 무관한 염증유발성 상태의 공통의 특징을 공유한다[참조: Boes, Schmidt et al., 2000, Proc Natl Acad Sci U S A , Vol.97(3)][Lewis, Malik et al., 2009, Circulation, Vol.120(5)]. 유사한 관찰이 인간의 연구에서도 수행되었고, 자가면역 장애인 전신 홍반성 루푸스(SLE) 환자의 말초 혈액 중의 IgM 항체가 감소되어 있음을 나타내지만, 이러한 감소의 이유는 아직 불분명한다[참조: Senaldi, Ireland et al., 1988, Arthritis Rheum, Vol.31(9)].

순환으로부터의 아폽토시스 세포 및 세포 폐기물의 클리어런스를 촉진할 때의 천연 IgM/IgA의 역할은 이의 조절 특성 및 만성 염증 질환에서 이의 의미에 대하여 기계적 설명을 제공했다. 아폽토시스 세포의 세포-막은 산화적 손상을 받기 쉽고, 이는 산화 인지질 및 분해 생성물의 불균일한 혼합물을 초래한다. 효소적 프로세스와 비효소적 프로세스 모두가 인지질, 특히 세포-막의 주성분인 포스파티딜콜린 등의 폴리불포화 지방산의 산화를 유도할 수 있다.

사이토크롬 P450, 리포옥시게나제 및 사이클로옥시게나제 등의 효소 매개체, 및 활성 산소종(ROS) 또는 미토콘드리아에서의 세포 산소 사용 또는 흡연 등의 환경 요인으로부터 유래하는 유리 라디칼을 포함한 비효소 성분은 세포-막 지질의 과산화 반응에 기여하지만, 정확한 메커니즘은 여전히 해결될 필요가 있다[참조: Bochkov, Oskolkova et al., 2010, Antioxid Redox Signal, Vol. 12(8)].

산화 포스파티딜콜린(oxPC), 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린(oxPAPC), 산화 카디오리핀(oxCL), 산화 포스파티딜세린(oxPS) 및 산화 포스파티딜에탄올아민(oxPE) 등의 산화 인지질의 연속 단편화는 말론디알데히드(MDA) 및 4-하이드록시노네날(4-HNE) 등의 반응성이 높은 분해 생성물의 생성을 초래하고, 이어서 단백질의 라이신 잔기에 의해 노출된 아미노 그룹 및 인접한 아미노인지질 분자와 반응한다. 추가로, 2-(ω-카복시에틸)-피롤(CEP)은 (E)-4-하이드록시-7-옥소헵트-5-엔산(도코사헥사엔산의 산화 단편)과 라이신 또는 아미노인지질의 아미노 그룹 사이의 부가물을 나타낸다. 수득된 산화 지질-단백질 부가물 및 변형된 구조를 갖는 변형된 지질은 네오-자가항원이고, 산화-특이적 에피토프(OSE)라고도 하며, 선천성 면역의 다양한 세포 및 가용성 패턴-인식 수용체(PRR)에 의해 인식되는 손상-연관 분자 패턴(DAMP)을 나타낸다. OSE는 마우스로부터 유래하는 모노클로날 천연 항체의 현저한 표적인 것으로 밝혀졌고, 마우스 및 인간 혈청 중의 천연 IgM 항체의 20% 내지 30%가 MDA 및 4-HNE 부가물, 및 oxPC 또는 oxPAPC에 의해 노출된 포스포콜린 헤드그룹을 포함하는 상이한 OSE를 인식하는 것으로 추정되었다(이하 OSE-특이적 IgM이라고 함)[참조: Chou, Fogelstrand et al., 2009, J Clin Invest, Vol. 119(5)].

트리거에 관계없이, 모든 세포 기원의 모든 포유동물 아폽토시스 세포가 이의 표면에 OSE를 표시하고, 진행중의 아폽토시스 프로세스에서 OSE의 함유량이 증가한다. 아폽토시스 세포는 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체에 의해 인식되고, 이들의 결합에 의해 세포 파편(cellular debris)의 정지 클리어런스가 유도된다. C-반응성 단백질(CRP) 등의 몇몇 가용성 PRR은 아폽토시스 세포에 결합할 수 있지만, 마크로파지에 의한 이들의 클리어런스는 IgM 항체의 부재하에 4배 감소하고, 이는 이 프로세스에서 천연 IgM의 필수적이고 비중복적인 역할을 나타낸다. 아폽토시스 세포에 결합한 후, 오량체 IgM 분자는, 보체 시스템에 속하는 단백질인 C1q를 동원하는 것으로 생각되는 Fc 부분의 중앙 돌출 영역을 갖는 버섯-형상의 형태를 채용한다. 이어서, C1q는 보체 캐스케이드의 다른 혈청 단백질을 절단하여 동원하고, 아폽토시스 세포의 표면에 iC3b라고 하는 대량의 절단 단편을 침착시킨다. 아폽토시스 세포는 이에 의해 iC3b로 옵소닌화되고, 수지상 세포 및 보체 수용체 3(CR3) 또는 CD91 등의 특정 수용체를 발현하는 마크로파지에 의해 인식되고, 하류 세포내 신호전달 이벤트를 유발하고, 세포 파편의 섭취 및 IL-10 및 TGFβ 등의 항염증성 분자의 생산을 초래한다. 이 메커니즘에 의한 아폽토시스 세포 및 세포 폐기물의 클리어런스는 항염증성이기 때문에, 정상 조직의 항상성을 유지하는 데는 OSE-특이적 IgM의 최소 혈청 수준이 필요하다.

그러나, 특정 상황에서, 선천성 면역 메커니즘에 의한 OSE의 형성과 클리어런스 사이의 밸런스가 상실되고, 이는 아폽토시스 비율 또는 산화 스트레스의 증가 또는 OSE-특이적 IgM 항체의 혈청 수준의 감소 등의 면역 기능의 기능부전에 기인한다. 이러한 시나리오에서, 대량의 OSE를 제시하는 아폽토시스 세포가 조직 또는 혈관 벽에 축적하고, 여기서 통상 순환에서 발견되지 않는 세포내 내용물을 방출하고, 선천성 및 적응 면역 반응을 유발하고, 이에 의해 만성 염증 프로세스에 기여하는 경향이 있다.

특히, 저밀도 지단백질(LDL)에 존재하는 인지질도, 아폽토시스 세포의 세포-막에서 생성되는 것과 유사한 OSE의 형성을 유도하는 산화 스트레스에 의해 변형될 수 있다. 만성 염증 반응의 개시자로서 OSE의 역할은 심혈관 질환의 아테롬성 동맥경화증에 대해 충분히 문서화되어 있다. 이러한 환자에서, 산화 LDL(oxLDL)에 노출된 다양한 종의 OSE가 고농도에서, 중형 및 대형의 동맥의 내막에서 특징으로 발견되고, 여기서 이들은 내피하 공간에 위치하는 마크로파지에 의해 발현되는 SRA-I, SRA-II, SRB-I, CD36, TLR-4 및 TLR-6 등의 세포 PRR에 결합한다. 이종삼량체 CD36/TLR-4/TLR-6 수용체 복합체에 의한 oxLDL의 감지는 마크로파지에 의한 조절되지 않은 흡수, NFκB 신호전달을 통한 인플라마좀 프라이밍, 및 IL-6, TNFα 및 IL-1β 등의 염증유발성 사이토카인 및 CCL2 및 CXCL8 등의 추가 단핵구의 활성화를 유도하여, 병변에 대한 추가 단핵구 및 T 세포의 동원 및 활성화 및 염증유발성 환경의 확립을 유발한다[참조: Stewart, Stuart et al., 2010, Nat Immunol, Vol. 11(2)]. oxLDL의 흡수 증강은 세포내 엔도솜에 콜레스테롤 풍부 지질의 침착을 유도하고, 아테롬성 동맥경화증 병변 발달의 특징으로 간주되는 소위 포말 세포로의 마크로파지의 변형을 유도한다. 세포내 콜레스테롤의 비효율적 분해와 조합된 oxLDL의 지속적 흡수는 리소좀 막을 손상시키는 콜레스테롤 결정의 형성을 유도할 수 있고, 이는 NOD/LRR/Pyrin 도메인 함유 단백질 3(NLRP3) 인플라마좀 복합체를 활성화하고, 이에 의해 IL-1β의 분비와 염증 반응의 전파를 추가로 증강시킨다. 마크로파지뿐만 아니라, 내피 세포도 세포 PRR LOX-1을 통해 OSE를 감지할 수 있고, 이는 oxLDL 흡수 및 세포내 구획에서 콜레스테롤 축적을 유도한다. 리소좀 막의 손상으로 인한 세포질 내로의 콜레스테롤 방출은 각각의 마크로파지 및 내피 세포의 아폽토시스를 유도하는 소포체(ER) 스트레스 반응을 유도한다.

결과적으로, 이는 세포 파편과 지질 그루엘로 충전되고 섬유질 격자 구조로 캡핑되는 무세포 괴사성 코어를 포함하는 플라크의 발달을 유도한다. 이러한 플라크가 침식 또는 파열되면, 방출된 물질이 순환 응고 시스템과 접촉하고, 이에 의해 혈전 형성을 유발하여, 심근 경색 또는 뇌졸중 등의 중증의 임상 증상을 초래할 수 있다.

건강한 개체에서, oxLDL에 표시되는 OSE는 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체에 의해 결합되고, 이에 의해 oxLDL이 마크로파지에서 발현되는 세포 PRR에 결합하는 것을 차단하고, 이는 oxLDL의 제어되지 않은 흡수, 포말 세포 형성 및 염증유발성 반응을 방지한다. 또한, OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체는 아폽토시스 세포 표면에서 OSE를 인식하고, C1q-의존적 방식으로 정지 클리어런스를 유도함으로써 병변 발생에서 아폽토시스 세포의 축적을 제한한다.

이 설명에 따라, 혈청 OSE-특이적 IgM 및 IgA 수준이 감소된 개체는 심혈관 질환(CVD)을 발증하는 경향이 있을 것으로 예상된다. 사실, 인간에서 몇몇 연구는, OSE-특이적 IgM의 혈장 수준이 CVD 발증 위험과 역상관하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, MDA-LDL-특이적 IgM 항체의 농도는 경동맥 내막-중막의 두께, 또는 관상 동맥에서 직경 50% 초과의 협착증 발증 위험과 역상관한다[참조: Karvonen, Paivansalo et al., 2003, Circulation, 108(17)] [Tsimikas, Brilakis et al., 2007, J Lipid Res, Vol. 48(2)]. 이러한 관찰과 일치하여, oxPC에 대한 IgM 역가는 심장 발작 또는 뇌졸중의 발생률과 역상관하는 것으로 보고되었다[참조: Fiskesund, Stegmayr et al., 2010, Stroke, Vol. 41(4)][Gronlund, Hallmans et al. ., 2009, Eur J Cardiovasc Prev Rehabil, Vol.16(3)]. 따라서, 이러한 관찰은 OSE-특이적 IgM 항체가 CVD 발증 위험을 경감하는 특성을 가질 수 있음을 나타내지만, 메커니즘은 완전히는 해결되지 않았다.

병적 조직에서 OSE의 축적은 또한 무균 급성 폐 손상(ALI), 연령 관련 황반 변성(AMD), 다발성 경화증(MS) 또는 알츠하이머병(AD) 등의 기타 무균성 염증 질환을 앓고 있는 환자에게서 발견되었다[참조: Weismann and Binder, 2012, Biochim Biophys Acta, Vol. 1818(10)]. 또한, OSE는 병원체 감염에 의해 유발되는 다양한 급성 상황에서도 축적된다. 예를 들면, 조류 인플루엔자 바이러스 H5N1은 감염된 마우스의 폐에서 ALI를 유도하고, 폐 조직은 산화 인지질 및 OSE의 높은 함유량을 특징으로 한다[참조: Imai, Kuba et al., 2008, Cell, Vol. 133(2))].

폐에서 인지질의 주요 공급원은 계면활성제이고, 이는 폐포의 액체-공기 계면에서 막을 형성하고, 표면 장력을 감소시킨다. 계면활성제는 산화될 수 있는 폴리불포화 지방산을 포함한 인지질을 최대 90% 포함한다. H5N1 인플루엔자 바이러스 감염 마우스의 BAL 액에는 TLR4-TRIF-TRAF6 신호전달 경로를 통해 폐포 마크로파지에 의한 대량의 염증유발성 사이토카인 IL-6의 분비를 자극하는 oxPAPC 및 MDA 부가물 등의 OSE가 포함되어 있다. 흥미롭게도, 감염되지 않은 건강한 야생형 마우스의 폐로 정제된 합성 산화된 계면활성제 인지질을 전달하는 것은 강력한 폐포 마크로파지 활성화 및 ALI를 유발하기에 충분하고, 계면활성제 산화 인지질에 대한 반응으로 IL-6 생산은 oxPC 및 oxPAPC의 포스포콜린 헤드그룹을 인식하는 마우스 모노클로날 항체 EO6에 의해 감소될 수 있다. 특히, 포스포콜린에 노출된 oxPC 및 MDA 부가물은 H5N1 및 SARS 코로나바이러스(CoV) 감염에 의해 유발된 급성 호흡 곤란 증후군(ARDS)(ALI의 가장 심각한 형태)으로 사망한 환자의 폐 조직에서 발견될 수 있다. 또한, 산화 인지질 및 OSE의 형성은 탄저병에 감염된 붉은털 원숭이, 탄저균에 감염된 래빗, 원숭이 두창에 감염된 사이노몰구스 원숭이 및 예르시니아 페스티스에 감염된 사이노몰구스 원숭이의 폐 조직에서도 발견될 수 있다. 따라서, 복수의 종에 걸쳐, H5N1 인플루엔자 바이러스, SARS-CoV, 탄저균(Anthrax), 와이. 페스트균(Y. pestis) 또는 원숭이 두창(Monkey Pox) 바이러스 등의 다양한 치명적 폐 병원체에 의한 감염은 폐에서 OSE 형성을 유발한다. 이러한 관찰은 산화 스트레스와 OSE의 축적이 마크로파지 활성화 및 종 전반에 걸친 ALI의 중요한 요인임을 나타낸다.

최근에 보고된 신규 코로나바이러스 SARS-CoV-2는 전 세계에서 진행 중의 비정형 폐렴(COVID-19)의 펜데믹 발생의 원인이고, 2020년 4월 5일 기준으로 140만명 이상이 감염되었고, 200개 초과의 국가 및 지역에서 그 중 65000명 이상이 사망했다. SARS-CoV-2 감염의 전체 사망률은 5%를 초과하고, 사망한 대부분의 환자는 ARDS를 발증했다.

선행 기술에 비추어, 코로나바이러스 SARS-CoV-2에 의해 유발되는 장애 또는 질환의 효과적 치료 또는 예방을 위한 추가 수단 및 방법을 제공할 필요가 있다.

본 발명은, SARS-CoV-2에 감염된 개체에서 중증 증상 및 ARDS의 발증 확률이 고령 및 CVD, 당뇨병, 호흡기 질환 또는 고혈압을 포함한 기저 의학적 상태 등의 위험 인자에 크게 의존한다는 놀라운 관찰에 기초한다. 또한, 역학적 데이터는 폐렴구균 또는 결핵 등의 예방접종을 받은 여성과 남성의 모집단 및 개인(예: w/BCG)에서 중증 COVID-19 질환으로부터 상대적 보호를 나타내고: 중요하게는, SARS-CoV-2 감염 환자에서 ARDS의 중요 병리학적 소견은 H5N1 인플루엔자 바이러스 및 SARS-CoV 감염과 유사한 것으로 보이고, 염증 세포의 축적, 부종 형성 및 IL-1β, IL-6, IL-8 및 사이토카인 폭풍 프로파일과 유사한 TNFα 등의 염증유발성 사이토카인의 현저한 증가를 특징으로 한다. 이것은 병원체와는 독립적인 감염된 개체의 최종적 면역 감시 실패에 공통하는 특성을 나타낸다.

따라서, 본 발명은, 다양한 감염성 질환에서 최종적 숙주 면역 부전의 공통 특징으로서, 산화 인지질 및 OSE의 대량 형성이 또한 SARS-CoV-2 감염 환자의 폐에 축적되고, 마크로파지에서 염증유발성 사이토카인 생산을 유발하고, 이에 의해 COVID-19(및 기타 감염성 질환)의 악화 단계를 개시한다는 제안에 기초한다.

본 발명과 관련하여, 높은 수준의 순환 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체는, 이들이 산화 인지질 및 OSE에 결합하고, 이에 의해 항염증성 사이토카인, 예를 들면, 식세포에 의한 IL-10 및 TGFβ의 생산을 수반하는 C1q 경로를 사용하여 이들의 저장 클리어런스를 촉진하기 때문에 보호를 제공하고, 이는 폐포 마크로파지의 활성화와 치명적 사이토카인 폭풍 증후군 및 ARDS의 유도에 대항한다.

COVID-19 질환의 병리에서 OSE-특이적 IgM/IgA 항체의 가능한 영향은 몇몇 관찰에 의해 뒷받침된다.

첫째, 사망률이 1% 미만인 젊은 환자(0 내지 29세)와 비교하여, 고령(>60세) 환자의 사망률이 현저히 높다(최대 30%). 고령 환자가 중증 ALI 및 ARDS를 발증하는 경향이 높은 것은 인간 B1 세포 및 B1 세포 유래의 천연 항체가 연령 증가와 함께 감소한다는 관찰과 일치한다[참조: Griffin, Holodick et al., 2011, J Exp Med, Vol. 208(1)] [Rodriguez-Zhurbenko, Quach et al., 2019, Front Immunol, Vol. 10].

둘째, CVD 등의 기저 질환이 있는 환자는 기존 질환이 없는 환자와 비교하여 사망률이 유의하게 더 높다(>10%). 상기에서 설명한 바와 같이, CVD 발증 경향은 OSE-특이적 IgM 항체의 혈청 수준과 반비례하며, 이는 또한 중증 ALI 및 ARDS을 발증하는 위험 인자이다. 이 상관관계는, 남성과 비교하여 여성에서 검출된 IgM 혈청 수준이 높다는 것과 일치하여, 여성과 비교하여 남성이 보다 심각한 감염 경과와 보다 높은 사망률을 나타낸다는 사실에 의해 추가로 뒷받침된다[참조: Butterworth, McClellan et al., 1967, Nature, Vol. 214(5094)] [Palmer, Schulze et al., 2015, J Dev Orig Health Dis, Vol. 6(6)].

종합하면, 이러한 관찰결과는, OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체의 혈청 수준 및 COVID-19의 중증도의 역상관을 나타내고, 따라서 본 발명과 관련하여, COVID-19 환자에게 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체의 투여는 SARS-CoV-2(및 기타) 감염에 의해 유발된 ALI 및 ARDS를 개선하거나, 또는 감염된 개체를 ALI 및 ARDS 등의 중증 증상의 발증으로부터 보호하기 위해 매우 효과적인 방법이다.

요약하면, 병원체-독립적 만성 또는 감염-유발 급성 병태인 본 명세서에서 설명된 염증유발성 질환은, OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체 수준의 감소의 결과로서, 염증 조직에서 산화 인지질 및 OSE의 높은 부담이라는 공통의 특징을 공유한다.

명백히 매우 상이한 질환에서, OSE의 광범위한 축적에 의해, OSE-제시 파편 또는 분자의 정지 클리어런스로부터, 마크로파지에 의해 발현된 세포 PRR에 의한 OSE 감지로 밸런스가 이동하고, 그 결과, 마크로파지가 활성화되고, IL-6 등의 염증유발성 사이토카인이 대량 방출된다. 이러한 염증 경로를 방해하기 위해, IgM 및/또는 IgA 이소형의 OSE-특이적 항체, 또는 이들이 풍부한 혈장 풀을 발병 환자에게 투여하는 것은, 본 발명과 관련하여, C1q-의존성 메커니즘에 의한 OSE-보유 세포 파편 또는 oxLDL 등의 분자의 클리어런스를 촉진함으로써 항상성 상태를 회복시키고, 이는 식세포에 의한 IL-10 및 TGFb 등의 항염증성 사이토카인의 생산을 수반한다.

OxPL 및 OSE가 패혈증 및 급성 손상의 상황에서 항염증 및 보호 효과를 나타낸다는 것이 당업자에게 공지되어 있기 때문에, 본 발명의 발견은 더욱 놀라운 것이다.

사실, 상기에서 이미 언급한 바와 같이, oxPL과 OSE의 항염증 효과는 이의 농도에 따라 달라지고, (1) 바이러스 및 세균 유래 염증 매개체에 의해 유발된 "무균" 급성 폐 손상의 억제[참조: Ma et al., 2004, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.286:808-816, Nonas et al., 2006, Am J Respir Crit Care Med. 173:1130-1138]; (2) 유해한 기계적 환기에 의해 유발된 "무균" 급성 폐 손상의 억제(따라서, 1-팔미토일-2-(5,6-에폭시이소프로스탄 E2)-sn-글리세로-3-포스포릴콜린(PEIPC)- 및 1-팔미토일-2-(5,6-에폭시사이클로펜테논)-sn-글리세로-3-포스포릴콜린(PECPC)-유사 안정화 화합물의 사용은 허혈/재관류 등의 기타 "무균" 폐 손상 모델에서 유익한 효과를 나타낼 수 있음을 시사한다)[참조: Nonas et al., 2008, Crit Care. 12:R27]; 및 (3) 급성 괴사성 췌장염에 의해 유발된 2차 급성 폐 손상에서 폐 혈관 누출 및 염증의 억제[참조: Li et al., 2007, Pancreas. 35:27-36]를 포함한다.

이러한 항염증 효과는 내피 장벽 기능의 증강[참조: Birukov et al., 2004, Circ Res. 95:892-901; Birukova et al., 2007, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 292:924-935], 항-염증성 유전자의 상향조절, 염증유발성 유전자 발현의 억제를 유도하는 신호전달 경로의 유도[참조: Eligini et al., 2002, Cardiovasc Res. 55:406-415; Ma et al., 2004, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.286:808-816, Otterbein et al., 2000, Nat Med. 6:422-428, Otterbein et al., 2003, Nat Med. 9:183-190], 및 염증유발성 세균 생성물과 숙주 세포와의 상호작용의 방지[참조: Bochkov et al., 2002, Nature. 419:77-81; Walton et al., 2003, Arterioscler Throm Vasc Biol. 23:1197-1203]에 의해 매개된다. 그러나, SARS-CoV-2, SARS-CoV 및 가능하게는 H5N1 인플루엔자 바이러스 등의 폐 병원체 감염에 의해 유발된 ARDS를 경험하는 환자에서, 우리는, ROS의 형성에 관여하는 복수의 메커니즘 및 산화 스트레스가 본 발명에 기재된 생물학적 효과를 촉진하기에 충분한 고농도로 oxPL 및 OSE가 축적하는 발병 환자의 폐에 소집하는 것을 제안한다.

이러한 일반 원칙에 비추어, 본 발명은, 코로나바이러스 SARS-CoV-2에 의해 유발되는 장애 또는 질환, 특히 ALI 및 ARDS 등의 (중증) 증상의 치료 또는 예방을 위한 추가 수단 및 방법을 제공할 뿐이다.

오히려, 상기 일반 원칙은, 본 발명의 보다 일반적 용어로, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발되는 장애 또는 질환의 치료 또는 예방에 적용된다.

따라서, 본 발명에 따르면, 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹(subgroup), 바람직하게는 OSE-특이적 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환의 치료 또는 예방에 사용된다.

선행 기술을 고려하면, 본 발명의 기본이 되는 기술적 과제는, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환의 치료 또는 예방을 위한 추가 수단 및 방법을 제공하는 것이다.

기술적 과제는 특허청구범위에서 특징으로 하는 실시양태의 제공에 의해 해결된다.

따라서, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 제1 측면에서, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 천연 IgM 및/또는 IgA는 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는, 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체에 관한 것이다.

제2 측면에서, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서, 상기 항체는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 항체인, 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체에 관한 것이다.

제3 측면에서, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 백신으로서, 상기 백신은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함하는, 백신에 관한 것이다. 바람직하게는, 본 발명은, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 이러한 백신으로서, 상기 화합물은 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 유도하는, 백신에 관한 것이다.

상기에서 언급한 바와 같이, 놀랍게도, 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹, 즉, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다는 것이 본 출원에 기재되어 있다.

따라서, 본 발명은, 일반적으로, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체에 관한 것이다.

본 발명과 관련하여 "천연 IgM 및/또는 IgA 항체"는 건강한 동물 또는 인간 대상체의 혈청에 존재하는 IgM 및/또는 IgA 이소형의 항체이고, 이는 감염 또는 면역화와 무관하게 B1 세포에 의해 생산되고, 자가- 및/또는 다중 반응성 항원 결합 능력을 보유한다.

본 발명은 "천연 IgM 및/또는 IgA 항체"에 초점을 맞추고 있지만, 본 명세서에서 "천연 항체"에 대해 언급할 때마다, 이 용어는 "천연 IgM 및/또는 IgA 항체"에 관련할 뿐만 아니라, 또한 "천연 IgG", 특히 IgG2에 관련할 수 있다.

본 발명의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하고, 따라서 대상체의 천연 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 하위 그룹인 것을 추가로 특징으로 한다.

따라서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 본 발명의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 대상체의 천연 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 서브그룹/서브분획/서브모집단이다. "서브분획" 및 "서브모집단"이라는 용어는 "서브그룹"이라는 용어와 동일하게 이하에서 사용된다.

바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 본 발명의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 본 명세서에 기재된 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 천연 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 서브그룹/서브분획/서브모집단이다. 건강한 개체로부터의 상기 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀은 바람직하게는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 자체적으로 풍부화되어 있다.

산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 특이적으로 인식하는 항체를 풍부화하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 일상적으로 적용할 수 있다. 예를 들면, 항체 친화성 정제 방법을 적용하여, 특정 항체에 대한 샘플을 풍부화할 수 있다. 특정 항원 결합 도메인을 통해 특정 항원 분자(즉, 본 발명에 따른 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프)에 결합하는 샘플 중의 항체만의 항원-특이적 친화성-친화성 정제 방법은 당업자에게 공지되어 있다.

바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgM 및/또는 IgA 항체에 대한 풍부화는,

산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 농도가 대상체의 전체 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 농도와 비교하여 5% 이상 더 높고, 바람직하게는 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% 또는 70% 또는 심지어 80%, 90%, 95% 또는 99% 이상 더 높은 것을 의미한다.

다른 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 농도는 대상체의 전체 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 농도와 비교하여 5% 내지 70% 더 높고, 바람직하게는 10% 내지 70%, 20% 내지 70%, 30% 내지 70%, 40% 내지 70%, 50% 내지 70%, 또는 60% 내지 70% 더 높다.

다른 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 농도는 대상체의 전체 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 농도와 비교하여 5% 내지 99% 더 높고, 바람직하게는 10% 내지 99%, 20% 내지 99%, 30% 내지 99%, 40% 내지 99%, 50% 내지 99%, 60% 내지 99%, 70% 내지 99%, 80% 내지 99% 또는 90% 내지 99% 더 높다.

다른 바람직한 실시양태에서, 대상체의 전체 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 서브그룹/서브분획/서브모집단(및/또는 본 명세서에 기재된 건강한 개체의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터의 총 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 서브그룹/서브분획/서브모집단)인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 본 발명의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 본질적으로 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체를 포함한다. "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체를 본질적으로 함유하는"이라는 용어는 바람직하게는 서브그룹/서브분획/서브모집단이 본질적으로 순수하다는 것, 즉 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체로 본질적으로 이루어져 있음을 의미한다.

바람직하게는, 용어 "순수한" 또는 "본질적으로 이루어진"은, 본 발명의 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 포함하는 조성물이 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체를 상기 조성물 중 전체 IgM 및/또는 IgA 항체의 30% 초과, 바람직하게는 35%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 99% 또는 100% 초과로 함유하는 것을 의미한다.

다른 바람직한 실시양태에서, 용어 "순수한"은, 본 발명의 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 포함하는 조성물이 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체를 상기 조성물 중 전체 IgM 및/또는 IgA 항체의 30% 내지 100%, 바람직하게는 35% 내지 100%, 40% 내지 100%, 50% 내지 100%, 60% 내지 100%, 70% 내지 100%, 80% 내지 100%, 90% 내지 100% 또는 99% 내지 100%로 함유하는 것을 의미한다.

본 발명과 관련하여 용어 "인간" 및 "인간화" 항체는 하기에 추가로 정의된다.

본 발명의 문맥에서 사용되는 용어 "인식하는", "결합하는" 및 "~에 결합하는"은 본 발명에서 교환가능하게 사용되고, 서로에 대해 적어도 2개의 "항원-상호작용-부위"의 인식 및 결합(상호작용)을 정의한다. 용어 "항원-상호작용-부위"는, 본 발명에 따라, 폴리펩티드의 모티프, 즉, 본 발명의 항체 또는 항원 결합 단편의 일부를 정의하고, 이는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 특정 항원 또는 항원의 특정 그룹과의 특이적 상호작용의 능력을 나타낸다. 상기 결합/상호작용은 또한 "특이적 인식"을 정의하는 것으로 이해된다. 용어 "특이적으로 인식하는"은, 본 발명에 따라, 항체가 본 명세서에 정의된 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프 각각의 적어도 2개의 분자와 특이적으로 상호작용 및/또는 결합할 수 있는 것을 의미한다. 항체는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 상이한 에피토프를 인식, 상호작용 및/또는 결합할 수 있다. 이 용어는, 항체 분자의 특이성, 즉 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 특정 영역을 식별하는 능력과 관련되어 있다.

본 발명에 따라 사용되는 용어 "특이적 상호작용"은 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 유사한 구조의 (폴리)펩티드와 교차 반응하지 않거나, 또는 본질적으로 교차 반응하지 않는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명의 항체는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 구조에 특이적으로 결합/상호작용한다.

본 발명과 관련하여, 용어 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프(본 명세서에서 상기 및 하기에서 'OSE'로도 지칭됨)"는 포유동물의 세포 막에 존재하는 지질, 세균 세포 벽 및/또는 외피 바이러스의 막에서 저밀도 지단백질 및 고밀도 지단백질 등의 지단백질의 과산화 반응에 의해 생성되고 IgM 및/또는 IgA 항체에 의해 특이적으로 인식될 수 있는 면역원성 구조에 관한 것이다.

"산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프"의 구조는 충분히 특성화되어 있고, 본 발명은 특정 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프"로 한정되지 않는다.

바람직하게는, 상기 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프"는 산화 포스파티딜콜린, 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 산화 포스파티딜에탄올아민, 및 말론디알데히드(MDA), 4-하이드록시노네날(4-HNE) 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤(CEP) 등의 말단 분해 생성물이다.

조사 중의 항체 패널의 교차-반응성은, 예를 들면, 목적 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프, 게다가 다소의 (구조적으로 및/또는 기능적으로) 밀접하게 관련된 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에 대해 종래의 조건[참조: 예를 들면, Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1988) and Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, (1999)]하에서 상기 항체 패널의 결합을 평가함으로써 시험할 수 있다.

특정 구조의 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프, 예를 들면, 산화 인지질의 특이적 에피토프 및/또는 산화-특이적 에피토프에 결합하지만 동일한 산화 인지질의 임의의 다른 에피토프에 본질적으로 결합하지 않는 작제물(즉, 항체, 이의 항원-결합 단편 등)만이 목적하는 에피토프 또는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에 특이적인 것으로 간주되고, 본 명세서에 제공된 방법에 따라 추가 연구를 위해 선택된다. 이러한 방법은 특히 구조적 및/또는 기능적으로 밀접하게 관련된 분자와의 결합 연구, 차단 및 경쟁 연구를 포함할 수 있다. 이러한 결합 연구에는 FACS 분석, 표면 플라즈몬 공명(예: BIAcore^®를 사용한 SPR), 분석용 초원심분리, 등온 적정 열량측정, 형광 이방성, 형광 분광법 또는 방사성 표지된 리간드 결합 검정이 포함된다.

따라서, 특이성은 당해 기술분야에 공지된 방법 및 본 명세서에 기재된 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 이러한 방법은 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-검사 및 펩티드 스캔을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.

본 발명의 치료 또는 예방은 천연 IgM/IgA 항체 결핍증의 치료 또는 예방에 관한 것이다.

이와 관련하여, "천연 IgM/IgA 항체 결핍증"은 이러한 병태의 병인에 (실질적으로) 기여하는 충분한 양의 천연 'B1' 항체(특히 IgM 및 IgA)을 결여하는 공통점을 갖는 결핍증을 총칭한다. NAD는 동일한 정의가능한 메커니즘, 즉 선천성 면역 시스템에 의해 산화-특이적 에피토프(OSE) 분해 생성물을 효율적으로 제거할 수 없는 무능력에 의해 광범위한 질환을 유발하는 주요 원인으로 간주되기 때문에, 영향을 받는 환자에서 NAD를 조절하는 방법은 이러한 병태의 예방 및 치료를 위한 가치 있는 신규한 전략인 것으로 생각할 수 있다. 이 중요한 이벤트는 공통 원인을 갖는 다양한 질환의 발증을 유발하기 때문에, 이 병태에 대한 신규 용어, 산화-특이적 에피토프 축적 증후군(OSEAS)의 도입을 제안한다.

따라서, 본 발명의 제1, 제2 및 제3 측면에 각각 기재된 바와 같이, NAD는 2개의 방법, 즉 i.) 치료적 개입을 위한 천연 B1 항체 제제의 투여 또는 ii.) 적극적 면역화(예: BCG, 폐렴구균 백신접종)에 의한 질환 예방을 위한 B1 항체의 유도로 조절될 수 있다.

이론에 얽매이지 않고, 모든 NAD에는 산화 인지지질의 연속 단편, 예컨대, 산화 포스파티딜콜린, 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린 및 산화 포스파티딜에탄올아민이 있고, 이는 말론디알데히드(MDA) 및 4-하이드록시노네날(4-HNE) 등의 높은 반응성 분해 생성물의 형성을 초래하고, 이어서 단백질의 라이신 잔기에 의해 노출된 아미노 그룹 및 인접한 아미노인지질 분자와 반응하는 것으로 믿어진다. 추가로, 2-(ω-카복시에틸)-피롤(CEP)은 (E)-4-하이드록시-7-옥소헵트-5-엔산(도코사헥사엔산의 산화 단편)과 라이신 또는 아미노인지질의 아미노 그룹 사이의 부가물을 나타낸다. 수득된 산화 지질-단백질 부가물 및 변경된 구조를 갖는 변형된 지질은 네오-자가항원이고, 산화-특이적 에피토프(OSE)라고도 하며(즉, 본 발명에서는 총칭하여 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프"로 지칭됨), 선천성 면역의 다양한 세포 및 가용성 패턴-인식 수용체(PRR)에 의해 인식되는 손상-연관 분자 패턴(DAMP)을 나타낸다. 아폽토시스 세포는 본 발명에 따른 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프-특이적 IgM 항체에 의해 인식되고, 이들의 결합은 세포 파편의 정지 클리어런스를 유도한다. 아폽토시스 세포에 결합한 후, 오량체 IgM 분자는, 보체 시스템에 속하는 단백질인 C1q를 동원하는 것으로 생각되는 Fc 부분의 중앙 돌출 영역을 갖는 버섯-형상의 형태를 채용한다. 이어서, C1q는 보체 캐스케이드의 다른 혈청 단백질을 절단하여 동원하고, 아폽토시스 세포의 표면에 iC3b라고 하는 대량의 절단 단편을 침착시킨다. 따라서, 아폽토시스 세포는 iC3b로 옵소닌화되고, 수지상 세포, 및 보체 수용체 3(CR3) 및 CD91 등의 특정 수용체를 발현하는 마크로파지에 의해 인식되고, 이는 하류의 세포내 신호전달 이벤트를 유발하여, 세포 파편의 섭취 및 IL-10 및 TGFβ 등의 항-염증성 분자의 생산을 초래한다. 이 메커니즘에 의한 아폽토시스 세포 및 세포 폐기물의 클리어런스는 항염증성이기 때문에, 정상 조직의 항상성을 유지하는 데는 OSE-특이적 IgM의 최소 혈청 수준이 필요하다.

따라서, 본 발명에 따르면, 높은 수준의 순환 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프"-특이적 IgM 항체는, 이들이 산화 인지질 및 OSE에 결합하고, 이에 의해 식세포에 의한 IL-10 및 TGFβ 등의 항-염증성 사이토카인 생산에 의해 수반되는 C1q 경로를 사용하여 이의 저장 클리어런스를 촉진하고, 또한 폐포 마크로파지의 부적절한 활성화 및 치명적 사이토카인 폭풍 증후군의 유도를 방해하기 때문에 보호적이다.

하기에서 보다 상세히 설명되는 바와 같이, 용어 "치료" 및/또는 "예방" 등은 본 명세서에서 일반적으로 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 의미하기 위해 사용된다. 따라서, 본 발명의 치료는, 특정 질환의 (급성) 병태의 치료에 관한 것일 수 있지만, 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 점에서 예방적 치료에 관한 것일 수도 있다. 바람직하게는, "치료"라는 용어는 질환 및/또는 부작용 및/또는 질환에 기인한 증상을 부분적으로 또는 완전히 치유한다는 점에서 치료적인 것으로 이해되어야 한다. 이와 관련하여 "급성"은 대상체가 질환의 증상을 나타내는 것을 의미한다. 환언하면, 치료 대상체는 실제로 치료를 필요로 하고, 본 발명의 문맥에서 "급성 치료"라는 용어는 질환의 발증 또는 질환의 대유행 후에 질환을 실제로 치료하기 위해 취하는 조치에 관한 것이다. 치료는 또한, 예방적(prophylactic) 또는 예방적(preventive) 치료, 즉, 예를 들면, 감염 및/또는 질환의 발증을 예방하기 위해, 질환 예방을 위해 취해진 조치일 수 있다.

본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 인간화 또는 인간 항체, 즉 완전 인간 항체이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 뮤린 항체이다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 모노클로날 또는 폴리클로날 항체이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 또는 인간, 즉 완전 인간 항체이다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 뮤린 항체이다.

본 발명의 문맥에서 및 하기에 보다 상세히 기재되는 바와 같이, 본 명세서에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 모집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 본질적으로 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 변형된 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 모집단 중에 있는 것으로서 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler, Nature 256(1975), 495]에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "폴리클로날 항체"는 하나 이상의 다른 동일하지 않은 항체 사이에서 또는 이들의 존재하에 생산된 항체를 지칭한다. 일반적으로, 폴리클로날 항체는 동일하지 않은 항체를 생산하는 몇몇 다른 B-림프구의 존재하에 B-림프구로부터 생산된다. 통상, 폴리클로날 항체는 면역 동물로부터 직접 수득된다.

본 명세서에 사용된 용어 "인간 항체" 또는 용어 "완전 인간 항체"는 인간 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체는, 마우스, 마우스 세포 또는 마우스 세포 유래의 하이브리도마에서 생산되는 경우, 뮤린 탄수화물 쇄를 포함할 수 있다. 유사하게는, "마우스 항체" 또는 "뮤린 항체"는 마우스/뮤린 면역글로불린 단백질 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 또는, "완전 인간 항체"는, 랫트, 랫트 세포, 랫트 세포 유래의 하이브리도마에서 생산되는 경우, 랫트 탄수화물 쇄를 함유할 수 있다. 유사하게는, 용어 "랫트 항체"는 랫트 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 유사하게는, 용어 "래빗 항체"는 래빗 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 유사하게는, 보다 일반적인 용어로서, 용어 "설치류 항체"는 설치류 면역글로불린 서열만을 포함하는 항체를 지칭한다. 완전 인간 항체는 또한, 예를 들면, 완전 인간 항체의 생산 및 스크리닝을 가능하게 하는 광범위하게 사용되는 스크리닝 기술인 파지 디스플레이에 의해 생산될 수 있다. 또한, 파지 디스플레이 기술로부터 유래하는 인간 항체가 본 발명의 문맥에서 사용될 수 있다. 파지 디스플레이 방법은, 예를 들면, US 제5,403,484호, US 제5,969,108호 및 US 제5,885,793호에 기재되어 있다. 완전 인간 항체의 개발을 가능하게 하는 또 다른 기술에는 마우스 하이브리도마 기술의 변형이 포함된다. 마우스는 자신의 마우스 유전자와 교환하여 인간 면역글로불린 유전자좌를 함유하도록 유전자도입된다(예를 들면, US 제5,877,397호 참조).

용어 "키메라 항체"는 다른 인간 또는 비-인간 종(예: 마우스, 말, 래빗, 개, 소, 닭)으로부터의 항체 영역(예: 불변 영역)과 융합되거나, 또는 키메라화된 본 발명의 가변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다.

본 발명의 문맥에서 기재된 바와 같은 특정 측면에서, 용어 항체는 또한 재조합 인간 항체, 이종 항체 및 헤테로하이브리드 항체에 관한 것이다. 용어 "재조합 인간 항체"는, 인간 면역글로불린 유전자에 대해 유전자도입인 동물(예를 들면, 마우스)로부터 단리된 항체 등의 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 서열 항체; 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 또는 인간 면역글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열에 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 기타 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식계열 면역글로불린 서열로부터 유래하는 가변 및 불변 영역(존재하는 경우)을 갖는다. 그러나, 이러한 항체는 시험관내 돌연변이유발(또는 인간 Ig 서열에 대한 유전자도입 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)될 수 있고, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식계열 VH 및 VL 서열로부터 유래하고 관련되지만, 생체내에서 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.

"이종 항체"는 이러한 항체를 생산하는 유전자도입 비-인간 생물과 관련하여 정의된다. 이 용어는, 유전자도입 비-인간 동물로 이루어지지 않고 일반적으로 유전자도입 비-인간 동물 이외의 종으로부터 유래하는 생물에서 발견되는 것과 상응하는 아미노산 서열 또는 코딩 핵산 서열을 갖는 항체를 지칭한다.

용어 "헤테로하이브리드 항체"는 상이한 생물 기원의 경쇄 및 중쇄를 갖는 항체를 지칭한다. 예를 들면, 뮤린 경쇄와 결합된 인간 중쇄를 갖는 항체는 헤테로하이브리드 항체이다. 헤테로하이브리드 항체의 예에는 키메라 및 인간화 항체가 포함된다.

항체라는 용어는 또한 인간화 항체에 관한 것이다. "인간화" 형태의 비-인간(예: 뮤린 또는 래빗) 항체는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이의 단편(예: Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 항체의 기타 항원-결합 부분서열)이고, 비-인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 포함한다.

종종, 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이고, 수용자의 상보적 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기는 목적하는 특이성, 친화성 및 용량을 갖는 마우스, 랫트 또는 래빗 등의 비-인간 종(공여자 항체)의 CDR로부터의 잔기로 치환되어 있다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 치환된다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체나 수입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 추가로 개선 및 최적화하기 위해 수행된다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 1개, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이고, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비-인간 면역글로불린의 CDR 영역에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것들이다. 인간화 항체는 또한, 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 수 있다. 상세한 내용은 문헌[참조: Jones Nature 321(1986), 522-525; Reichmann Nature 332(1998), 323-327 및 Presta Curr Op Struct Biol 2(1992), 593-596]을 참조한다.

항체의 인간화를 위한 일반적 방법은 CDR 이식을 수반하고, 여기서 비-인간 '공여자' 항체의 기능적 항원 결합 부위는 인간 '수용자' 항체에 이식된다. CDR 이식 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, US 제5,225,539호, US 제5,693,761호 및 US 제6,407,213호에 기재되어 있다. 또 다른 관련된 방법은, 유전자 재배열 및 유전자 전환을 겪을 수 있는 하나 이상의 인간화 면역글로불린 유전자좌를 함유하도록 유전적으로 조작된 유전자도입 동물로부터 인간화 항체를 생산하는 것이다(예를 들면, US 제7,129,084호 참조).

따라서, 본 발명의 문맥에서, 용어 "항체"는 완전한 면역글로불린 분자, 및 이러한 면역글로불린 분자의 일부(즉, "이의 항원 결합 단편")에 관한 것이다. 추가로, 상기 용어는, 상기에서 논의된 바와 같이, 변형 및/또는 변경된 항체 분자에 관한 것이다. 이 용어는 또한, 재조합 또는 합성에 의해 생성/합성된 항체에 관한 것이다. 이 용어는 또한 무손상 항체, 게다가 분리된 경쇄 및 중쇄, Fab, Fv, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 등의 이의 항체 단편에 관한 것이다. 용어 항체는 또한 완전-인간 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, CDR-이식된 항체 및 일본쇄 Fv(scFv) 또는 항체-융합 단백질 등의 항체 작제물을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.

"일본쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 본 발명의 문맥에서 항체의 V_H 및 V_L 도메인을 갖고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 일반적으로, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 목적하는 구조를 형성할 수 있게 하는 V_H 및 V_L 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. 일본쇄 항체의 생산에 대해 기재된 기술은, 예를 들면, 문헌[참조: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, N.Y.(1994), 269-315]에 기재되어 있다.

본 명세서에 사용된 "Fab 단편"은 1개의 경쇄 및 1개의 중쇄의 C_H1 및 가변 영역으로 구성된다. Fab 분자의 중쇄는 또 다른 중쇄 분자와 디설파이드 결합을 형성할 수 없다.

"Fc" 영역은 항체의 C_H2 및 C_H3 도메인을 포함하거나, 또는 항체의 C_H2, C_H3 및 C_H4 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 함유한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 디설파이드 결합과 C_H3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 유지된다.

"Fab' 단편"은 1개의 경쇄, 및 VH 도메인 및 C_H1 도메인, 및 또한 C_H1 및 C_H2 도메인 사이의 영역을 함유하는 1개의 중쇄의 일부를 함유하여, 쇄간 디설파이드 결합이 2개의 Fab' 단편의 2개의 중쇄 사이에 형성되어 2개의 F(ab')₂ 분자를 형성할 수 있다.

"F(ab')₂ 단편"은, 쇄간 디설파이드 결합이 2개의 중쇄 사이에 형성되도록, 2개의 경쇄 및 2개의 경쇄와, C_H1 및 C_H2 도메인 사이의 불변 영역의 일부를 함유하는 2개의 중쇄를 포함한다. 따라서, F(ab')₂ 단편은 2개의 중쇄 사이의 디설파이드 결합에 의해 함께 유지되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다.

"Fv 영역"은 중쇄 및 경쇄 둘 다로부터의 가변 영역을 포함하지만, 불변 영역을 결여한다.

본 발명에 따라 사용되는 항체, 항체 작제물, 항체 단편, 항체 유도체(모두 Ig 유래임) 또는 이들의 상응하는 면역글로불린 쇄(들)는, 예를 들면, 아미노산 결실(들), 삽입(들), 치환(들), 부가(들), 및/또는 재조합(들) 및/또는 단독으로 또는 조합하여 당해 기술분야에 공지된 임의의 다른 변형(들)을 사용함으로써 당해 기술분야에 공지된 종래의 기술을 사용하여 추가로 변형시킬 수 있다. 면역글로불린 쇄의 아미노산 서열의 기초가 되는 DNA 서열에 이러한 변형을 도입하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Sambrook(1989), loc. cit.]. 용어 "Ig-유도된 도메인"은 특히 적어도 하나의 CDR을 포함하는 (폴리)펩티드 작제물에 관한 것이다. 열거된 Ig-유도된 도메인의 단편 또는 유도체는 상기 항체 분자의 일부이고/이거나, 화학적/생화학적 또는 분자 생물학적 방법에 의해 변형된 (폴리) 펩티드를 정의한다. 상응하는 방법이 당해 기술분야에 공지되어 있고, 특히 실험실 매뉴얼에 기재되어 있다[참조: Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd edition (1989) and 3rd edition (2001); Gerhardt et al., Methods for General and Molecular Bacteriology ASM Press (1994); Lefkovits, Immunology Methods Manual: The Comprehensive Sourcebook of Techniques; Academic Press (1997); Golemis, Protein-Protein Interactions: A Molecular Cloning Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press (2002)].

상기 및 하기와 같이 사용하기 위한 본 발명에서 사용되는 항체는 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgM 및/또는 IgA 항체"라면 특별히 한정되지 않는다.

따라서, 항체는 "산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프", 즉 도메인 또는 항원, 바람직하게는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 표면-항원에 특이적으로 결합하거나, 또는 이를 특이적으로 인식하거나, 또는 이와 상호작용하는 임의의 항체일 수 있다. 당업자는, 소정 도메인(즉, 항원, 바람직하게는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 표면 항원)에 대해 지시된 이러한 항체를 용이하게 생성하고, 각각의 항체가 소정 도메인, 항원, 바람직하게는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 표면-항원을 검출/결합할 수 있는지의 여부를 결정하는 위치에 있다.

산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 IgA 항체는 IgA 서브클래스 및 항체 글리코실화 패턴에 의존하는 항염증 또는 염증유발성 효과를 유발할 수 있다. 면역 복합체 중의 IgA2는 Fc-알파 수용체에 결합함으로써 마크로파지 및 호중구에 대해 염증유발성 작용을 나타내지만, IgA1은 이러한 효과를 결여하는 것으로 당해 기술분야에 공지되어 있다. 또한, 항염증성 IgA1은 IgA2와 비교하여 보다 많은 말단 시알산을 보유하고, 시알산을 제거하면, IgA1의 염증유발 능력이 증가한다. 건강한 인간의 혈청에서, IgA1은 IgA2보다 9:1의 비율로 우세한 반면, IgA2 서브클래스로의 이동은 염증 및 질환 활성과 관련이 있다[참조: Steffen et al., 2020, Nat Commun, Vol. 11(1)]. 따라서, 본 발명과 관련하여 천연 IgA 항체는 바람직하게는 항염증성 IgA1 항체이고, 바람직하게는 시알산이 풍부하다.

제1 측면 에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는 천연 IgM 및/또는 IgA이다.

하기에서 보다 상세히 설명하는 바와 같이, 이러한 제1 측면에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 천연 발생 천연 IgM 및/또는 IgA, 추가로 천연 IgM 및/또는 IgA가 풍부한 제제에 의해 제공된다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀은 이의 IgM 및/또는 IgA 함유량이 풍부한 "정맥내 정상 면역글로불린"(IVIG) 생성물이다.

"정맥내 정상 면역글로불린"(IVIG) 생성물은 고용량 풀링된 면역글로불린 G(IgG)를 함유하고, 헌혈자의 대규모 풀의 혈장으로부터 제조된다. IVIG 제제는 본래 감염성 질환의 치료에 사용되었다. 1980년대 초반 이래, IVIG가 면역 시스템을 또한 조절할 수 있다는 징후가 있었다.

면역 매개 질환(예: 특발성 혈소판 감소성 자반병(idiopathic thrombocytopenic purpura), 가와사키 증후군(Kawasaki syndrome), 길랑 바레 증후군(Guillain Barre syndrome), 중증 피부근염(severe dermatomyositis), 이식편대숙주병(graft-vs.-host disease) 및 패혈성 쇼크(septicemic shock))의 일부 증례에서, IVIG의 사용이 효과적인 것으로 나타났다. 자가면역 및 면역조절 장애에서 IVIG의 정확한 작용 방식은 아직 여전히 잘 이해되어 있지 않지만, IVIg는 염증 세포의 Fc 수용체를 차단하고, 자가-항체를 중화하고, 백혈구 사이토카인 생산을 조절하고, 보체 활성화를 차단할 수 있다[참조: Ott et al., J Allergy Clin Immunol 108(2001), Kazatchkine et al., Int Rev Immunol 5(1989), Basta et al., J Clin Invest 84(1989)].

렉틴 자극 및 혼합 림프구 반응(MLR) 등의 시험관내 모델을 사용하여, 상업적으로 이용가능한 IVIG 제제가 하나의 작용 모드로서 면역 세포의 활성화 및 증식을 방해한다는 것이 입증되었다[참조: Nachbaur et al., Immunology 90(212) (1997)). Andersson et al., Immunol Rev. 139(21)(1994), Amran et al., Clin Immunol Immunopathol 73(180)(1994)].

추가로, IVIG에 의한 사이토카인 조절은, 적어도 부분적으로, IVIG를 제공받은 인간 골수 또는 고형 장기 이식 수용자에서 관찰되는 이점의 원인일 수 있다고 가정되었다[참조: Sullivan et al., N Engl J Med 323 (1990); Peraldi et al., Transplant 62(1670) (1996)].

IVIG의 2개의 주요 용도는 원발성 또는 후천성 항체 결핍 장애에서 보충 요법으로서, 및 자가면역 또는 염증 상태의 환자에서 면역 시스템의 치료적 조절로서이다.

펜타글로빈(Pentaglobin^®)은 IgM 및 IgA를 특이적으로 풍부화한 상업적으로 이용가능한 IVIG이다. 펜타글로빈(Pentaglobin^®)의 활성 성분은 인간 혈장 단백질(50mg/ml)이고, 그 중 적어도 95%는, 면역글로불린 G(IgG) 38mg(76%), 면역글로불린 M(IgM) 6mg(12%) 및 면역글로불린 A(IgA) 6mg(12%)을 갖는 면역글로불린이다. IgG 서브클래스의 분포는 보다 자세히 지정되어 있고, 약 63%(IgG1), 26%(IgG2), 4%(IgG3), 7%(IgG4)이다. 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 슈도모나스(Pseudomonas) 및 클렙시엘라(Klebsiella) 등의 다양한 그람 양성 및 그람 음성 세균에 대한 독소 결합 및 중화 항체의 함유량은 중증 세균 감염의 치료 및 면역 결핍 환자의 면역 글로불린 치환에 특히 적합하다. 펜타글로빈(Pentaglobin^®)은 현재 이 목적으로 승인된 유일한 면역글로불린 제제이다. 패혈증 및 패혈성 쇼크의 보조 요법의 효능을 평가하는 연구의 메타 분석은 면역글로불린의 사용이 패혈증 환자의 사망 위험을 현저히 감소시키는 것을 나타냈다. 이 영향은 표준적 면역글로불린보다도 IgM-풍부 면역글로불린 치료에서 훨씬 더 강력하다.

펜타글로빈(Pentaglobin^®)은 라벨 외의 다양한 적응증에 사용되었다. 심근염이라고 공지되어 있는 바이러스성 심장병은 바이러스에 의해 유발되는 심장 병태이다. 바이러스는 심근을 공격하여, 염증을 유발하고 심장이 적절하게 박동하도록 신호를 보내는 전기 경로를 방해한다. 펜타글로빈(Pentaglobin^®)에 의한 치료는 심근 염증의 해소에 매우 효과적인 것으로 보고되었다. 아데노바이러스 감염은 파르보(Parvo) B19 감염보다 양호하게 근절되었다[참조: Maisch JACC, 2016, Abstract 1346¸ Maisch 23 Mar 2018 Circulation. 2010;122:A20154].

2002년 11월, 중증 급성 호흡기 증후군(SARS)이 수주 이내에 모든 대륙으로 확산되었고, 신종 코로나바이러스(SARS-CoV)가 원인물질로서 발견되었다. 홍콩 대학의 호 등(Ho et al.)의 연구진은 코르티코스테로이드 요법에 양호한 반응을 나타내지 않은 12명의 중증 SARS 환자의 코호트에 펜타글로빈(Pentaglobin^®)을 투여했다[참조: Ho et al., Int. J. Tuberc. Lung Dis. 8(10) (2004)]. 펜타글로빈(Pentaglobin^®) 치료의 개시 후, 방사선학적 스코어와 산소 요구량이 대폭 개선되고, 치료 후에 10명의 환자가 순조롭게 회복되었다. 사이토카인 방출에 대한 억제 효과는 펜타글로빈(Pentaglobin^®)에 의한 SARS 치료에서 중요한 메커니즘으로 논의되었다.

이의 다량체 구조로 인해, IgM은 단량체 IgG와 비교하여, 보다 높은 옵소닌화 활성, 보다 강력한 응집 강도, 보다 높은 식세포 활성 및 보다 높은 특이적 보체 활성화를 갖는다. IgM의 이러한 구조적 이점은 환자의 임상 상태에 결정적 영향을 미친다.

이론에 구속되지 않고, 바람직한 실시양태에서, SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS-CoV, 인플루엔자 바이러스, 탄저균(Anthrax) 또는 중증 ALI 및 ARDS를 유도하는 기타 병원체 등의 폐 병원체에 감염된 환자에 대한 펜타글로빈(Pentaglobin^®)의 정맥내 투여는 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 존재에 의존하는 보호 효과를 갖는다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 펜타글로빈(Pentaglobin^®)으로부터 유래하지만, 이는 전체 혈장 단백질의 76% 면역글로불린 G(IgG), 12% 면역글로불린 M(IgM) 및 12% 면역글로불린 A(IgA)를 갖는 펜타글로빈(Pentaglobin^®) 제제와 비교하여 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 풍부화되어 있다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 천연 IgM 및/또는 IgA는, IgM이 전체 혈장 단백질의 12% 초과, 바람직하게는 13%, 15%, 20%, 30%, 40% 또는 50% 초과라는 점에서 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래한다.

다른 바람직한 실시양태에서, IgM은 전체 혈장 단백질의 13% 내지 15%, 바람직하게는 13% 내지 20%, 13% 내지 30%, 13% 내지 40% 또는 13% 내지 50%이다.

IgA는 전체 혈장 단백질의 12% 초과, 바람직하게는 13%, 15%, 20%, 30%, 40% 또는 50% 초과이다.

다른 바람직한 실시양태에서, IgA는 전체 혈장 단백질의 13% 내지 15%, 바람직하게는 13% 내지 20%, 13% 내지 30%, 13% 내지 40% 또는 13% 내지 50%이다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, IgM 및/또는 IgA 함유량이 풍부한 "정맥내 정상 면역글로불린"(IVIG) 생성물인 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀은 시판되는 IVIG 트리모듈린이다.

트리모듈린은, IgG, IgM 및 IgA 함유량이 높은 인간 혈장으로부터 추출한 IgM 농축액이고, 현재 중증 지역사회-획득 폐렴(sCAP)의 치료용으로 개발되고 있다. 트리모듈린(IgM Concentrate)은 병태생리학적 프로세스를 방해하는 광범위한 메커니즘을 통해 작용하고, 그렇지 않으면, 중증 호흡 장애, 중증 패혈증, 다기관 부전 및 최종적으로 환자의 사망을 유도할 수 있다. 세균의 내독소 및 외독소의 중화 외에도, IgM은 특정 면역 세포에 의한 병원체의 인식 증가를 매개하고, 이들의 파괴를 촉진한다.

보다 구체적으로, 트리모듈린은 정맥내 투여용의 인간 혈장 유래의 천연 다가 항체 제제이다. 트리모듈린은 면역 글로불린 IgM 23%, IgA 21% 및 IgG 56%를 포함한다. 따라서, 트리모듈린의 활성 성분은 전체 혈장 단백질의 IgM 23%, IgA 21% 및 IgG 56%를 갖는 면역글로불린이다.

바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 트리모듈린으로부터 유래하지만, 이는 전체 혈장 단백질의 56% 면역글로불린 G(IgG), 23% 면역글로불린 M(IgM) 및 21% 면역글로불린 A(IgA)를 갖는 트리모듈린 제제와 비교하여 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 풍부하다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 천연 IgM 및/또는 IgA는, IgM이 전체 혈장 단백질의 23% 초과, 바람직하게는 24%, 25%, 30%, 40% 또는 50% 초과라는 점에서 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래한다.

다른 바람직한 실시양태에서, IgM은 전체 혈장 단백질의 24% 내지 27%, 바람직하게는 24% 내지 30%, 24% 내지 40%, 24% 내지 50% 또는 24% 내지 60%이다.

IgA는 전체 혈장 단백질의 21% 초과, 바람직하게는 23%, 25%, 30%, 40% 또는 50% 초과이다.

다른 바람직한 실시양태에서, IgA는 전체 혈장 단백질의 22% 내지 25%, 바람직하게는 22% 내지 30%, 22% 내지 40%, 22% 내지 50% 또는 22% 내지 60%이다.

따라서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 건강한 개체의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는 천연 IgM 및/또는 IgA이고, 여기서 풍부화는 몇몇 수단에 의해 달성될 수 있고, 이에 의해 이의 보호 효과가 향상된다:

1) 혈장은 29세 이하의 젊은 여성으로부터 유래하는 혈청으로 제조할 수 있고, 이는 이 모집단 그룹이 혈청 중에 OSE-특이적 항체를 최고 농도로 포함하고 있기 때문이다.

2) IgM 및/또는 IgA 항체의 농도는 IgM 및/또는 IgA 항체를 풍부화하기 위해 당업자에게 공지된 일상적 방법을 적용함으로써 상기 개설된 바와 같이 표준 제형 중의 12%로부터 더 높은 농도로 변경할 수 있다.

3) 생성물 중의 OSE-특이적 항체의 농도는 공지되어 있지 않지만, 생성물 제형은, 당업자에게 공지되어 있는 일상적 방법을 적용하여, 상응하는 특이적 항체를 풍부화함으로써 OSE-특이적 IgM 및 IgA 항체를 추가로 풍부화할 수 있다.

따라서, 상기에서 언급한 바와 같이, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 본 발명의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 바람직하게는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체가 풍부화/정제된 대상체의 천연 IgM 및/또는 IgA 레퍼토리의 서브그룹/서브분획/서브모집단이다. 따라서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체에 대한 상기 풍부화 및/또는 정제와 관련하여, 본 발명의 보다 일반적 개시의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 동일한 것이, 필요한 변경을 가하여, 본 발명의 이러한 제1 측면에 적용된다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 풍부한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, 하기에 추가로 기재되는 바와 같이, 본 발명의 제3 측면에 따른 백신으로 백신접종된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 백신은 폐렴구균(Pneumococcus) 또는 바실러스 칼멧-게린(Bacillus Calmette-Guerin; BCG) 백신이다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 25세 이하의 젊은 여성이다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제1 측면에 따른 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환은 천연 항체 결핍 감염성, 신경변성, 대사성, 자가면역성, 또는 심혈관 질환이다.

실제로, 자가면역 질환과 관련하여, 놀랍게도, 중증 COVID-19 환자에서, 자가면역 IgG 항체가 생성된다는 것이 본 발명(실시예 22 및 도 3 참조)에서 발견되었다. 이러한 데이터는 본 발명과 관련하여 천연 항체(nAB)의 결핍이 중증 COVID-19 경과 중에 자가면역 항체의 발생을 초래할 수 있음을 뒷받침한다. 이러한 자가면역 항체의 존재는 재발된 또는 장기간 지속되는 COVID-19 질환 증상의 증거를 제공하고, 이는, 본 발명과 관련하여, 충분한 수준의 천연 항체, (모노클로날) 천연 IgM 또는 IgA의 제공 또는 천연 항체가 풍부한 제제(예: 펜타글로빈^®)가 자가면역 항체의 생성을 방지하거나 이의 수준을 감소시킬 수 있음을 뒷받침한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 것이고, 여기서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환은 β-코로나바이러스 SARS-CoV-2에 의해 유발된 바이러스 감염 질환 COVID-19이다.

"SARS-CoV-2"라는 용어는, Genebank 참조 서열 NC_045512.2에 대해, 발현된 오픈 리딩 프레임의 아미노산 서열에서 적어도 70%의 동일성을 갖는 바이러스를 포함한다.

보다 구체적으로, 용어 "SARS-CoV-2"는 Genebank 참조 서열 NC_045512.2(서열번호 17)의 완전한 게놈 서열에서 적어도 70%의 동일성을 갖는 바이러스를 포함한다.

보다 바람직한 실시양태에서, 용어 "SARS-VoV-2"는 상기 서열과 적어도 n% 동일한 서열번호 17의 게놈 서열을 포함하고, n은 n이 10 내지 100의 정수, 바람직하게는 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99이다.

서열 동일성(sequence identity)의 결정과 관련하여, 하기가 적용되어야 한다: 비교되는 서열이 동일한 길이를 갖지 않는 경우, 동일성 정도는, 보다 긴 서열의 핵산 잔기와 동일한 보다 짧은 서열의 핵산 잔기의 백분율, 또는 보다 짧은 서열의 핵산 잔기와 동일한 보다 긴 서열의 핵산 잔기의 백분율을 지칭한다. 바람직하게는, 이는 보다 긴 서열의 핵산 잔기와 동일한 보다 짧은 서열의 핵산 잔기의 백분율을 지칭한다. 서열 동일성의 정도는 바람직하게는 CLUSTAL 등의 적절한 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 당해 기술분야에 공지된 방법에 따라 결정될 수 있다.

Clustal 분석 방법을 사용하여, 예를 들면, 특정 서열이 참조 서열과 적어도 60% 동일한지 여부를 결정하는 경우, 디폴트 설정을 사용할 수 있거나, 또는 설정은 바람직하게는 다음과 같다: 매트릭스: 블로섬(blosum) 30; 오픈 갭 페널티: 10.0; 갭 연장 페널티: 0.05; 지연 발산: 40; 갭 분리 거리: 아미노산 서열의 비교를 위한 8. 뉴클레오티드 서열 비교의 경우, 연장 갭 패널티는 바람직하게는 5.0으로 설정된다.

바람직하게는, 동일성 정도는 서열의 전체 길이에 걸쳐 계산된다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 것이고, 여기서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환은 장기 COVID-19이다.

SARS-CoV-2 감염의 급성 후유증, COVID-19의 급성 후유증(PASC), 만성 COVID 증후군(CCS) 및 장거리 COVID로서 공지된 장기 COVID는 이론화된 상태이고, 2019년의 코로나바이러스병(COVID-19)의 전형적 회복기의 후에 지속하는 장기적 후유증을 특징으로 하는 것으로 제안되었다. 피로, 두통, 숨가쁨, 후각상실(후각 상실), 근력 약화, 미열, 인지 기능 장애, 수면 장애, 간헐적 발열, 위장 증상, 불안 및/또는 우울증을 포함하는 광범위한 증상이 일반적으로 언급되어 있다.

바람직한 실시양태에서, 본 명세서에 언급된 장기 COVID는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 감염 후부터 최초 4주간의 징후 및 증상에 의해 정의되는 급성 COVID-19와는 대조적이다.

따라서, 본 발명과 관련하여 장기 COVID는, 바람직한 실시양태에서, 발증 후 4주 내지 12주 사이의 효과에 대해 진행 중의 징후성 COVID-19 및/또는 발증 후 12주 이상 지속하는 효과에 대해 포스트-COVID-19 증후군에 관한 것이다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 감염된 세포로부터 인접한 제2 비감염 세포로의 바이러스의 확산(세포-대-세포 확산)을 억제할 수 있는 항체이다.

세포-대-세포 확산은, 무세포 입자를 방출하지 않으면서, 바이러스가 인접한 제2 비감염 세포로 확산할 수 있는 능력이다.

항체가 감염된 세포로부터 인접한 제2 비감염 세포로의 바이러스 확산(세포-대-세포 확산)을 억제할 수 있는지 여부를 조사하기 위해, 당업자에게 공지된 방법을 사용할 수 있다.

예를 들면, 하기 검정을 사용할 수 있다: 24웰 조직 배양 플레이트의 유리 커버 슬립 상에서 컨플루언시로 될 때까지 성장시킨 베로 세포를, 400 TCID₅₀/웰의 일정한 양의 헤르페스 심플렉스 바이러스 유형 1(HSV-1)에서 37℃에서 4시간 동안 감염시킨다. 1 중앙 조직 배양 감염 용량(1 TCID₅₀)은 접종된 세포 배양물의 50%에서 세포변성 효과를 생성하는 바이러스 등의 세포변성제의 양이다. 이어서, 바이러스 접종물을 제거하고, 세포를 PBS로 2회 세척하고, 1ml DMEM, 2% FCS, 과량의 천연 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체를 함유하는 Pen/Strep 중에서 37℃에서 2일 동안 추가로 인큐베이팅하고, 이는 혈장 풀에서 유래할 수 있거나, 상청액을 통한 바이러스 확산을 방지하기 위해 양성 대조군으로서 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항-바이러스 대조군 혈청일 수 있다. 바이러스에 감염된 세포의 바이러스 항원은 바이러스에 대해 지시된 형광 표지된 혈청으로 검출된다. 바람직하게는, 인접한 세포의 20% 미만이 감염되는 경우, 항체는 세포-대-세포 확산을 억제하고, 바람직하게는 인접 세포의 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 보다 바람직하게는 3% 미만, 가장 바람직하게는 1% 미만이 상기 검정에서 감염된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 바이러스에 의한 감염을 중화시킬 수 있는, 바람직하게는 이에 의해 표적 세포의 감염을 예방할 수 있는 항체이다.

중화는 바이러스가 감염되지 않은 세포를 감염시키는 것을 방지하는 약제의 능력이다.

항체가 바이러스를 중화하고, 이에 의해 감염되지 않은 세포의 감염을 예방할 수 있는지 여부를 조사하기 위해, 당업자에게 공지된 방법을 사용할 수 있다.

예로서, 하기 검정을 사용할 수 있다:

단순 헤르페스 바이러스 유형 1(HSV-1) 양 100 TCID₅₀을, 천연 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 연속 희석액으로 실온에서 1시간 동안 인큐베이팅하고, 이는 혈장 풀로부터 유래할 수 있거나, 양성 대조군으로서 모노클로날 항체 또는 폴리클로날 항-바이러스 대조군 혈청 또는 제2 음성 대조군으로 DMEM, 2% FCS, Pen/Strep일 수 있다. 1 중앙 조직 배양 감염 용량(1 TCID₅₀)은 접종된 세포 배양물의 50%에서 세포변성 효과를 생성하는 바이러스 등의 세포변성제의 양이다.

96-웰 조직 배양 플레이트에서 80% 컨플루언시까지 성장한 베로 세포는, 100μl DMEM, 2% FCS, 바이러스 항체/혈장 접종물 또는 양성 대조군 또는 음성 대조군을 포함하는 Pen/Strep을 세포에 첨가하여 37℃에서 2일 동안 감염시킨다. 세포를 37℃에서 2일 동안 추가로 인큐베이팅한다. 바이러스 감염에 의해 유도된 세포변성 효과는, 플라크를 포함하는 웰을 계수하고, 바이러스-항체/혈장 풀 접종물의 감염성을 TCID₅₀/ml 접종물로서 결정함으로써 스코어링한다. 바람직하게는, 항체는, 음성 대조군과 비교하여, 20% 미만, 바람직하게는 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 보다 바람직하게는 3% 미만, 가장 바람직하게는 1% 미만의 감염성이 측정되는 경우, 바이러스 감염을 중화한다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, 항염증 활성, 바람직하게는 하기 능력을 갖는 항체이다:

바람직하게는 감염된 폐에서, 유리 산화 인지질(free oxidized phospholipid)의 축적을 감소시키는 능력,

폐 조직에서 세포 파편을 제거하는 능력,

IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하는 능력; 및/또는

사이토카인에 의해 유발되는 염증유발성 면역 반응을 중화하는 능력.

항체가 항염증 활성, 바람직하게는,

바람직하게는 감염된 폐에서, 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키는 능력,

폐 조직에서 세포 파편을 제거하는 능력,

IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하는 능력; 및/또는

사이토카인에 의해 유발되는 염증유발성 면역 반응을 중화하는 능력을 갖는지 여부를 조사하기 위해,

당업자에게 공지된 방법을 사용할 수 있다. 예로서, 산화 인지질 또는 산화-특이적 에피토프에 대한 모노클로날 또는 폴리클로날 IgM 및/또는 IgA 항체의 결합 능력은 ELISA 기술, 및 BSA 등의 단백질 담체에 결합된 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 사용하여 시험할 수 있다. 모노클로날 또는 폴리클로날 IgM 및/또는 IgA 항체의 아폽토시스 세포에 대한 결합 능력은 형광 표지된 1차 항체 또는 2차 항체를 사용하는 유세포 측정 또는 면역형광 현미경 검사법으로 시험할 수 있다. C1q의 동원을 시험하기 위해, 아폽토시스 세포는 마우스 또는 인간 혈청의 존재하에 모노클로날 또는 폴리클로날 IgM 및/또는 IgA 항체와 함께 인큐베이팅하고, 이어서 형광 표지된 C1q-특이적 항체 및 유세포 분석으로 염색할 수 있다. 식작용을 시험하기 위해, 동일한 수의 표지된 아폽토시스 세포와 식세포를, 마우스 또는 인간 혈청의 존재하 및 OSE-특이적 모노클로날 또는 폴리클로날 IgM 및/또는 IgA 항체의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅한다. IgM 및/또는 IgA 의존성 식작용은 유세포 분석을 사용하여 결정할 수 있다. OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 항염증 능력은 마우스 또는 인간 마크로파지 또는 단핵구를 사용하여 시험할 수 있고, 이는 LDL, BSA 등의 단백질 담체, 또는 인플루엔자 바이러스 등의 폐 병원체로 감염된 마우스로부터 유래하는 기관지 폐포 세정액에 존재하는 산화 인지질 또는 산화-특이적 에피토프와 함께 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 존재 또는 부재하에 인큐베이팅된다. 마크로파지 또는 단핵구의 수득되는 활성화는 ELISA 등의 방법을 사용하여 IL-6 등의 분비된 염증유발성 사이토카인의 농도를 측정함으로써 시험할 수 있다. OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 보호 효과는 치사량의 H5N1 인플루엔자 바이러스 또는 기타 폐 병원체에 감염된 마우스에 항체를 정맥내 주사함으로써 시험할 수 있다. OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 보호 효과는 아테롬성 동맥경화증을 발증하기 쉬운 ldlr-/- 또는 apoe-/- 마우스에 항체를 정맥내 주사함으로써 시험할 수 있다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 것이고, 여기서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환은 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환이다.

본 발명은 특정 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환에 특별히 제한되지 않는다. 본 출원에 열거된 질환의 예에 공통하는 특징은 체내로부터 충분히 제거될 수 없는 인지질 막으로부터 산화 특이적 에피토프(OSE)의 축적이다. 이 주요 이벤트는 공통의 원인을 갖는 다양한 질환의 발증을 촉발하기 때문에, 이 병태에 대한 새로운 용어, 인 산화-특이적 에피토프 축적 증후군(OSEAS)의 도입을 제안한다.

그러나, 바람직한 실시양태에서, 상기 염증성 질환은 호흡기 바이러스, 바람직하게는 COVID19, 인플루엔자, MERS-COV 또는 SARS-COV에 의해 매개되는 감염성 질환; 그람 양성 또는 그람 음성 병원체, 진균 또는 기생충에 의해 매개되는 세균 감염에 의해 유발되는 감염성 질환; 및 무균성 염증 질환, 바람직하게는 심혈관 질환(cardiovascular disease), 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis), 관상동맥 심장 질환(coronary heart disease), 심장 발작(heart attack) 및 뇌졸중(stroke), 진성 당뇨병(diabetes mellitus) 등의 대사 장애, 신경퇴행성 질환(neurodegenerative disease), 바람직하게는 알츠하이머병(Alzheimer's Disease), 및 자가면역 질환(automiinune diseses), 바람직하게는 전신성 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematodes) 또는 다발성 경화증(Multiple Sclerosis)으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

실제로, 자가면역 질환과 관련하여, 놀랍게도, 중증 COVID-19 환자에서 자가면역 IgG 항체가 생성된다는 것이 본 발명(실시예 22 및 도 3 참조)에서 발견되었다. 이러한 데이터는 본 발명과 관련하여 천연 항체(nAB)의 결핍이 중증 COVID-19 경과 중에 자가면역 항체의 발달을 초래할 수 있음을 뒷받침한다. 이러한 자가면역 항체의 존재는 재발 또는 장기간-지속하는 COVID-19 질환 증상의 증거를 제공하고, 이는, 본 발명과 관련하여, 충분한 수준의 천연 항체, (모노클로날) 천연 IgM 또는 IgA 또는 천연 항체가 풍부한 제제(예: 펜타글로빈^®)가 자가면역 항체의 생성을 방지 또는 이의 수준을 감소시킬 수 있다는 것을 뒷받침한다.

더욱이, 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 바이러스 감염 질환은 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명은, 본 발명에 따라 사용하기 위한, 유효량의 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

본 발명과 관련하여 "약제학적 조성물" 및 "약제학적으로 허용되는 부형제"라는 용어는, "약제학적 조성물" 및 "약제학적으로 허용되는 부형제"라는 용어와 관련하여, 본 발명의 제1 측면에 필요한 수정을 가하여 적용되는 본 발명의 제2 측면의 문맥에서 하기에 추가로 상세하게 설명된다.

제2 측면 에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, 예를 들면, 건강한 대상체로부터 상기 기재된 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀 등의 자연 발생 공급원으로부터 유래하는 IgM 및/또는 IgA가 아니다.

대조적으로, 이러한 제2 측면에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 또는 IgA 항체이다.

실제로, IgM 또는 IgA 이소형의 완전한 인간 모노클로날 OSE-특이적 항체는 본 발명의 상기 이론적 근거에 따라 병원체-유도 ALI 및 ARDS로부터 보호할 수 있고, 따라서 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis), SLE, MS, AMD 및 AD 등의 무균 염증 질환을 갖는 환자에게 투여하면, 유익한 효과를 가질 수 있다.

완전한 인간 OSE-특이적 IgM 항체를 단리하기 위해, 단일 인간 B1 세포를 표현형 CD20^posCD27^posCD43^posCD5^posCD70^neg에 따라 선별-정제하고, 단일 세포로부터 V_H 및 V_L 유전자를 증폭하고, 수득된 재조합 항체의 반응성을 시험했다.

2개의 클론("클론 1" 및 "클론 2"로 명명됨, 특히 실시예 23 참조)에 대해서는, DNA, oxCL 및 oxPC 등의 산화 인지질, oxLDL, MDA-LDL, 인플루엔자 바이러스, 지질다당류(LPS) 및 미스-폴딩된 아밀로이드-β 펩티드 올리고머를 포함하는 천연 항체에 전형적인 항원에 대한 결합 반응성을 하기에 추가로 기재한다. 따라서, 이들 2개의 모노클로날 천연 IgM 항체 클론은 OSEAS 관련 감염성, 대사성, 심혈관, 신경퇴행성, 및 ALI 및 ARDS 매개 감염성 질환(예: SARS-CoV-2, SARS-CoV, MERS- CoV, 인플루엔자 바이러스, 탄저병 또는 기타 중증의 ALI 및 ARDS를 매개하는 아직 미지의 폐 병원체)을 갖는 환자를 보호하는 적절한 후보로서 고려된다. 또한, 하기에서 추가로 자세히 설명하는 바와 같이, 이들 2개의 모노클로날 천연 IgM 항체 클론은 아테롬성 동맥경화증, SLE, DM II, MS, AMD 및 AD 등의 기타 무균성 만성 염증 OSEAS 매개 질환의 발증으로부터 인간을 보호하는 데 사용될 수 있다.

그러나, 본 발명은 이들 2개의 천연 항체에 한정되지 않는다. 오히려, 본 발명은, 이러한 제2 측면에서, 본 발명에 따라 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련되고, 여기서 상기 항체는, 보다 일반적으로, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 또는 IgA 항체이다.

이미 상기에서 언급한 바와 같이, 본 명세서에 사용된 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 균질한 항체 모집단으로부터 수득된 항체를 지칭하고, 즉 모집단을 구성하는 개별 항체는, 소량으로 존재할 수 있는 가능하게는 자연 발생 돌연변이를 제외하고는, 서열이 매우 유사하다. 모노클로날 항체는 본질적으로 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양에 의해 합성될 수 있다는 점에서 유리하다. 변형된 "모노클로날"은 항체의 실질적으로 균질한 모집단 중에 있는 것으로서 항체의 특성을 나타내고, 임의의 특정 방법에 의한 항체의 생산을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 상기 언급한 바와 같이, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 문헌[참조: Kohler, Nature 256(1975), 495]에 기재된 하이브리도마 방법에 의해 제조될 수 있다.

"재조합"이라는 용어는 일반적으로 이러한 조합에서 자연에 존재하지 않는 요소로 구성된 화합물을 지칭한다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 상기 기재된 바와 같은 상기 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체이다.

바람직하게는, 항체는 상기 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프, 바람직하게는, 예를 들면, oxLDL에 다중반응성 방식으로 결합한다.

다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 산화 카디오리핀; 바이러스 입자(예: 인플루엔자 바이러스의 입자); 염증유발성 사이토카인(예: TNFα) 및/또는 미스-폴딩된 단백질에 결합한다.

바람직하게는, 상기 항체는, 예를 들면, "올리고머 아밀로이드-β 펩티드" 등의 신경퇴행성 질환에서 미스-폴딩된 단백질에 결합한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 항체는 포유동물 세포의 원형질막, 순환 지단백질, 외피 바이러스의 막 또는 세균, 진균 또는 기생충의 세포벽, 아폽토시스 세포, 세포 파편에 존재하는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에, 산화 LDL, 바이러스, 바람직하게는 인플루엔자 바이러스 또는 SARS-코로나바이러스, 또는 미생물, 바람직하게는 스타필로콕쿠스 뉴모니아에(Staphylococcus pneumoniae); 바람직하게는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드로서 신경퇴행성 질환에 축적되는 미스-폴딩된 단백질에 결합한다.

바람직한 실시양태에서, 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다.

다른 바람직한 실시양태에서, 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다는 점에서 또한 정의된다. 본 발명의 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 또한 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린을 인식하고 이에 결합하지만, 비-산화 포스파티딜콜린 및 비-산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 노출된 포스포릴콜린에는 결합하지 않고, 산화 카디오리핀을 인식하고 이에 결합하지만, 비-산화 카디오리핀에는 결합하지 않고, 산화 포스파티딜세린을 인식하고 이에 결합하지만, 비-산화 포스파티딜세린에는 결합하지 않고, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및/또는 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질을 인식하고 이에 결합하지만, 천연 단백질에는 결합하지 않고/않거나, 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하지만, 단량체 아밀로이드-β 펩티드에는 결합하지 않는다.

항체가 상기 구조에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 상기 본 명세서에 기재된 바와 같이 평가할 수 있다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는,

서열번호 1을 포함하는 상보성 결정 영역(complementary determining region) V_HCDR1, 서열번호 2를 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 3을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 4를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 5를 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 6을 포함하는 V_LCDR3(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날-. 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다)을 포함하거나; 또는

서열번호 9를 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 10을 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 11을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 12를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 13을 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 14를 포함하는 V_LCDR3(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날-. 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다)를 포함한다.

항체가 상기 구조에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 본 명세서에 상기 기재된 바와 같이 평가할 수 있다.

각각 서열번호 1 내지 6 및 서열번호 9 내지 14를 참조하여 구조적으로 상기 기재된 모노클로날 항체는 하기 실시예 23에서 추가로 특성화되었다.

서열번호 1 내지 6은 "클론 1"로부터 유래된다.

서열번호 9 내지 14는 "클론 2"로부터 유래된다.

바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 1 내지 6 및 서열번호 9 내지 14를 참조하여 상기 기재된 모노클로날 항체는 단일특이성이 아니다.

바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 1 내지 6 및 서열번호 9 내지 14를 참조하여 상기 기재된 모노클로날 항체는 이중특이성 또는 다중특이성이다.

이러한 문맥에서 이중특이성은 모노클로날 항체가 2개의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다.

이러한 문맥에서 다중특이성은, 모노클로날 항체가 2개 초과의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프, 바람직하게는 3개, 4개 또는 5개의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다.

보다 바람직한 실시양태에서, 상기 별개의 항원 및/또는 항원의 에피토프는 위험-연관 분자 패턴(DAMP)이다.

손상-연관 분자 패턴(DAMP)은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 외상 또는 병원체로 인한 감염에 의해 손상되거나 사멸하는 세포로부터 방출되는 선천성 면역 반응의 구성요소인 세포 내의 분자이다. 이들은 위험-연관 분자 패턴, 위험 신호, 및 알람이라고도 공지되어 있고, 이는 생물이 이의 세포에 대한 손상 또는 감염을 경고하는 경고 사인으로서 기능하기 때문이다. DAMP는 외상 또는 병원체에 의한 세포 손상에 반응하여 세포외 공간으로 방출되는 내인성의 위험 신호이다.

특히 바람직한 실시양태에서, 상기 위험-연관 분자 패턴(DAMP)은 OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

따라서, 특히 바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 1 내지 6 및 서열번호 9 내지 14를 참조하여 상기 기재된 모노클로날 항체는 OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 2개의 위험-연관 분자 패턴(DAMP)에 결합한다.

또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 서열번호 1 내지 6("클론 1"에 상응함)을 참조하여 상기 기재된 모노클로날 항체는 위험-연관 분자 패턴(DAMP) OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA에 결합한다. 따라서, 이는 본 발명과 관련하여 다중특이성이다.

또 다른 보다 바람직한 실시양태에서, 서열번호 9 내지 14("클론 2"에 상응)를 참조하여 상기 기재된 모노클로날 항체는 위험-연관 분자 패턴(DAMP) OxLDL 및 DNA에 결합한다. 따라서, 이는 본 발명과 관련하여 이중특이성이다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "CDR"은 당해 기술분야에 공지된 "상보적 결정 영역"에 관한 것이다. CDR은 상기 분자의 특이성을 결정하고, 특정 리간드와 접촉하는 면역글로불린의 일부이다. CDR은 분자의 가장 가변적 부분이고, 이러한 분자의 다양성에 기여한다. 각 V 도메인에는 3개의 CDR 영역 CDR1, CDR2 및 CDR3이 있다. CDR-H는 가변 중쇄의 CDR 영역을 나타내고, CDR-L은 가변 경쇄의 CDR 영역에 관한 것이다. VH는 가변 중쇄를 의미하고, VL은 가변 경쇄를 의미한다. Ig-유도된 영역의 CDR 영역은 문헌[참조: Kabat “Sequences of Proteins of Immunological Interest”, 5th edit. NIH Publication no. 91-3242 U.S. Department of Health and Human Services (1991); Chothia J. Mol. Biol. 196 (1987), 901-917 or Chothia Nature 342 (1989), 877-883]에 기재된 바와 같이 결정할 수 있다.

따라서, 일반적으로, 본 명세서에 기재된 항체 분자는 완전 IgA 또는 IgM 또는 IgG 항체 다가 F(ab)-, Fab'-SH-, Fv-, Fab'-, F( ab')2- 단편, 키메라 항체, CDR-이식된 항체, 완전 인간 항체, 2가 항체-작제물, 항체-융합 단백질, 합성 항체, 2가 일본쇄 항체, 3가 일본쇄 항체 및 다가 일본쇄 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

그러나, 바람직한 실시양태에서, 재조합 인간 모노클로날 천연 항체는 IgM 및/또는 IgA 항체이다.

상기에서 이미 개설한 바와 같이, "인간화 접근법"은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 특히 항체 분자, 예를 들면, Ig-유도 분자에 대해 기재되어 있다. "인간화"라는 용어는, 비-인간 항체로부터 유래하는 서열의 일부를 함유하는, 비-인간(예: 뮤린) 항체 또는 이의 단편(예: Fv, Fab, Fab', F(ab'), scFv, 또는 항체의 기타 항원 결합 부분 서열)의 인간화 형태를 의미한다. 인간화 항체에는, 인간 면역글로불린의 상보적 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 목적하는 결합 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 랫트 또는 래빗 등의 비-인간 종의 CDR로부터의 잔기로 치환되어 있는 인간 면역글로불린이 포함된다. 일반적으로, 인간화 항체는, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역이 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역이 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것인, 적어도 1개, 일반적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이다. 인간화 항체는 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 최적으로 포함할 것이다[참조: 특히, Jones et al., Nature 321 (1986),522-525, Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2 (1992),593-596]. 비-인간 항체를 인간화하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 비-인간인 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산을 갖고, 여전히 항체의 본래 결합 활성을 유지한다. 항체/항체 분자의 인간화 방법은 문헌[참조: Jones et al., Nature 321 (1986),522-525; Reichmann et al., Nature 332 (1988),323-327; and Verhoeyen et al., Science 239 (1988),1534-1536]에 추가로 기재되어 있다. 인간화 항체의 구체적 예, 예를 들면, EpCAM에 대해 지시된 항체는 당해 기술분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, LoBuglio, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 1562 and Khor, Proceedings of the American Society of Clinical Oncology Abstract (1997), 847].

따라서, 본 발명의 문맥에서, 인간화되고 약제학적 조성물에 성공적으로 사용될 수 있는 항체 분자 또는 이의 항원 결합 단편이 제공된다.

또한, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는,

서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다)을 포함하거나; 또는

서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다)

을 포함한다.

각각 서열번호 7 내지 8 및 서열번호 15 내지 16을 참조하여 구조적으로 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 하기 실시예 23에서 추가로 특성화되었다.

서열번호 7 내지 8은 "클론 1"로부터 유래된다.

서열번호 15 내지 16은 "클론 2"로부터 유래된다.

바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 7 내지 8 및 서열번호 15 내지 16을 참조하여 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 단일특이성이 아니다.

바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 7 내지 8 및 서열번호 15 내지 16을 참조하여 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 이중특이성 또는 다중특이성이다.

이러한 문맥에서 이중특이성은 모노클로날 항체가 2개의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다.

이러한 문맥에서 다중특이성은 모노클로날 항체가 2개 초과의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프, 바람직하게는 3개, 4개 또는 5개의 상이한 항원 및/또는 항원의 에피토프에 특이적으로 결합하는 것을 의미한다.

보다 바람직한 실시양태에서, 상기 별개의 항원 및/또는 항원의 에피토프는 상기 본 명세서에서 이미 정의된 바와 같은 위험-연관 분자 패턴(DAMP)이다.

특히 바람직한 실시양태에서, 상기 위험-연관 분자 패턴(DAMP)은 OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

따라서, 특히 바람직한 실시양태에서, 각각 서열번호 7 내지 8 및 서열번호 15 내지 16을 참조하여 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA로 이루어진 그룹으로부터 선택된 적어도 2개의 위험-연관 분자 패턴(DAMP)에 결합한다.

또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 서열번호 7 내지 8("클론 1"에 상응)을 참조하여 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 위험-연관 분자 패턴(DAMP) OxLDL, MDA-LDL, MDA-BSA, PC-BSA 및 DNA에 결합한다. 따라서, 이는 본 발명과 관련하여 다중특이성이다.

또 다른 특히 바람직한 실시양태에서, 서열번호 15 내지 16("클론 2"에 상응)을 참조하여 상기 및 하기에 기재된 모노클로날 항체는 위험-연관 분자 패턴(DAMP) OxLDL 및 DNA에 결합한다. 따라서, 이는 본 발명과 관련하여 이중특이성이다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는, VH 도메인(중쇄 가변 영역) 및 VL 도메인(경쇄 사슬 가변 영역),

즉, 서열번호 7에 제시된 항체 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 서열번호 8에 제시된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다); 또는

즉, 서열번호 15에 제시된 항체 중쇄의 가변 영역의 아미노산 서열 및 서열번호 16에 제시된 항체의 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열(여기서, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다)

를 포함하거나, 이로 이루어진다.

항체가 상기 구조에 결합하는지 여부를 결정하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 예를 들면, 본 명세서에 상기 기재된 바와 같이 평가할 수 있다.

그러나, 본 발명에서 사용되는 항체는 이러한 가변 중쇄 및 경쇄 가변 영역으로 특별히 한정되지 않고,

상기 항체가 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는 능력을 갖는 한,

각각 서열번호 7 및 8의 서열 또는 각각 서열번호 15 및 16의 서열과 적어도 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 75%, 70%, 65%, 60%, 55% 또는 50%의 서열 동일성을 갖는 VH 도메인 및 VL 도메인을 포함하거나 이로 이루어지는 항체 또는 이의 항원-결합 단편일 수 있다.

추가로, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7 및 8 또는 서열번호 15 및 16의 서열을 참조하여 최대 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개 이상의 보존적 아미노산 치환을 갖는 VH 및 VL 도메인을 포함하는 분자이다. 더욱이, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, FV, scFV, F(ab')2, 및 디아바디로 이루어진 그룹으로부터 선택된 항체 단편이다.

아미노산 서열이 서열번호 7, 8, 15 및 16의 서열과 특정 정도의 동일성을 갖는지 여부를 결정하기 위해, 당업자는, 예를 들면, 수동으로 또는 또는 당업자에게 공지된 컴퓨터 프로그램을 사용하여 당해 기술분야에 공지된 수단 및 방법, 예를 들면, 정렬을 사용할 수 있다. 이러한 정렬은, 예를 들면, 당업자에게 공지된 수단 및 방법으로, 예를 들면, 리프만-피어슨(Lipman-Pearson) 방법(Science 227(1985), 1435) 또는 CLUSTAL 알고리즘 등의 공지된 컴퓨터 알고리즘을 사용하여 수행할 수 있다. 이러한 정렬에서는 아미노산 서열에 존재하는 보존된 아미노산 잔기에 최대 상동성이 할당되는 것이 바람직하다. 바람직한 실시양태에서, ClustalW2는 아미노산 서열의 비교에 사용된다. 쌍별 비교/정렬의 경우, 하기 설정이 바람직하게 선택된다: 단백질 중량 매트릭스: BLOSUM 62; 갭 오픈: 10; 갭 확장: 0.1. 다중 비교/정렬의 경우, 하기 설정이 바람직하게 선택된다: 단백질 중량 매트릭스: BLOSUM 62; 갭 오픈: 10; 갭 확장: 0.2; 갭 거리: 5; 종점 갭 없음.

본 발명에 따라, 2개 이상의 핵산 또는 아미노산 서열의 문맥에서 "동일한" 또는 "퍼센트 동일성"이라는 용어는, 비교 윈도우에 걸쳐, 또는 당해 기술분야에 공지된 서열 비교 알고리즘을 사용하여 측정된 지정 영역에 걸쳐, 또는 수동 정렬 및 시각적 검사에 의해, 최대 일치를 위해 비교 및 정렬하는 경우, 동일하거나, 특정 백분율의 아미노산 잔기 또는 동일한 뉴클레오티드(예를 들면, 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드와 결합할 수 있는, 상기 기재된 핵산 서열 또는 아미노산 서열과 60% 또는 65% 동일성, 바람직하게는 70 내지 95% 동일성, 보다 바람직하게는 적어도 95% 동일성)을 갖는 2개 이상의 서열 또는 서브서열을 지칭한다. 예를 들면, 60% 내지 95% 이상의 서열 동일성을 갖는 서열은 실질적으로 동일한 것으로 간주된다. 이러한 정의는 시험 서열의 보수에도 적용된다. 바람직하게는, 기재된 동일성은 길이가 적어도 약 15 내지 25개 아미노산 또는 뉴클레오티드인 영역에 걸쳐 존재하고, 보다 바람직하게는 길이가 약 50 내지 100개의 아미노산 또는 뉴클레오티드인 영역에 걸쳐 존재한다. 당업자는, 예를 들면, 당해 기술분야에 공지된 CLUSTALW 컴퓨터 프로그램(Thompson Nucl. Acids Res. 2 (1994), 4673-4680) 또는 FASTDB(Brutlag Comp. App. Biosci. 6 (1990), 237-245)에 기초하는 것들과 같은 알고리즘을 사용하여 서열 사이/중에서 퍼센트 동일성을 결정하는 방법을 알고 있다.

통상, FASTDB 알고리즘은 이의 계산에서 서열 내의 내부 비-정합 결실 또는 부가, 즉 갭을 고려하지 않지만, 이는 % 동일성의 과대평가를 회피하기 위해 수동으로 수정할 수 있다. 그러나, CLUSTALW에서는 이의 동일성 계산에서 서열 갭이 고려된다. BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘도 당업자에게 이용가능하다[참조: Altschul, (1997) Nucl. Acids Res. 25:3389-3402; Altschul (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; Altschul (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410]. 핵산 서열에 대한 BLASTN 프로그램은 디폴트로서 단어 길이(W) 11, 기대값(E) 10, M=5, N=4 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 단어 길이(W) 3, 기대값(E) 10을 사용한다. BLOSUM62 스코어링 매트릭스(Henikoff(1989) PNAS 89:10915)는 정렬(B) 50, 기대값(E) 10, M=5, N=4 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다.

바람직하게는, 아미노산 치환(들)은, 유사한 특성(예: 전하, 측쇄 크기, 소수성/친수성, 주쇄 형태 및 강성 등)을 갖는 기타 아미노산을 갖는 단백질에서 아미노산의 치환을 지칭하고, 이에 의해 단백질의 생물학적 활성을 변경하지 않으면서 변경을 빈번하게 수행할 수 있다. 당업자는, ,일반적으로 폴리펩티드의 비필수 영역에서 단일 아미노산 치환이 생물학적 활성을 실질적으로 변화시키지 않는다는 것을 인식한다[참조: 예를 들면, Watson Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co. 4th Ed. (1987), 224]. 또한, 구조적 또는 기능적으로 유사한 아미노산의 치환은 생물학적 활성을 저해할 가능성이 낮다. 본 발명의 문맥 내에서, 본 발명의 결합 화합물/항체는, 본 명세서에 개시된 특정 아미노산 서열과 비교하는 경우, 최대 0(변화 없음), 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20개 이상의 보존적 아미노산 치환을 포함하는 서열을 갖는 폴리펩티드 쇄, 예를 들면, 서열번호 9(항체의 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭함) 및 10(항체의 경쇄의 가변 영역을 지칭함)을 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, 문구 "최대 X개"의 보존적 아미노산 치환에는, 0개의 치환 및 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개의 치환을 포함하는 최대 10개의 임의 수의 치환이 포함된다.

이러한 예시적 치환은 바람직하게는 하기와 같이 표 1에 기재된 것에 따라 수행된다:

예시적 보존적 아미노산 치환

원래의 잔기	보존적 치환
Ala (A)	Gly; Ser
Arg (R)	Lys; His
Asn (N)	Gln; His
Asp (D)	Glu; Asn
Cys (C)	Ser; Ala
Gln (Q)	Asn
Glu (E)	Asp; Gln
Gly (G)	Ala
His (H)	Asn; Gln
Ile (I)	Leu; Val
Leu (L)	Ile; Val
Lys (K)	Arg; His
Met (M)	Leu; Ile; Tyr
Phe (F)	Tyr; Met; Leu
Pro (P)	Ala
Ser (S)	Thr
Thr (T)	Ser
Trp (W)	Tyr; Phe
Tyr (Y)	Trp; Phe
Val (V)	Ile; Leu

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96 및 116 내지 126 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다.

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다.

추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는, 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기와 비교하여, 프레임워크 영역에서 적어도 75%, 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 98%의 전체 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

이러한 항체는, 상기 및 하기에 기재된 바와 같이, 항체 또는 항원 결합 단편이 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드에 결합하는 한, 본 발명의 의학적 용도에 적합하다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는, 경쇄 및 중쇄의 상기 가변 영역(즉, 상기 정의된 CDR, 즉, 서열번호 1을 포함하는 V_HCDR1, 서열번호 2를 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 3을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 4를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 5를 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 6을 포함하는 V_LCDR3)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열은, 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기와 비교하여 프레임워크 영역에서 적어도 75%, 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 적어도 90%, 보다 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 98% 또는 심지어 99 또는 100%의 전체 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역에서 가변성을 갖는다.

추가의 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는, 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기와 비교하여 프레임워크 영역에서 적어도 75%, 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 및 가장 바람직하게는 98%의 전체 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.

이러한 항체는, 본 명세서에서 상기 및 하기에 기재된 바와 같이, 항체 또는 항원 결합 단편이 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드에 결합하는 한, 본 발명의 의학적 용도에 적합하다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체는 경쇄 및 중쇄의 상기 가변 영역(즉, 상기 정의된 CDR, 즉, 서열번호 9를 포함하는 V_HCDR1, 서열번호 10을 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 11을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 12를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 13을 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 14를 포함하는 V_LCDR3)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 상기 아미노산 서열은, 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기와 비교하여 프레임워크 영역에서 적어도 75%, 적어도 80%, 보다 바람직하게는 적어도 85%, 적어도 90%, 보다 더 바람직하게는 적어도 95%, 가장 바람직하게는 98% 또는 심지어 99 또는 100%의 전체 서열 동일성을 갖는 프레임워크 영역에 가변성을 갖는다.

이러한 문맥에서, 폴리펩티드는, 서열번호 7 또는 서열번호 8(또는 서열번호 15 또는 16)이 목적 폴리펩티드의 최상의 정합 서열로 정렬되고 이들 2개의 정렬된 서열 사이의 아미노산 동일성이 서열번호 7(또는 서열번호 15)의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 8(또는 서열번호 16)의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 걸쳐 적어도 X%인 경우, 서열번호 7 또는 8(또는 서열번호 16 또는 16)에 대해 프레임워크 영역에서 "적어도 X % 서열 동일성"을 갖는다. 상기 언급된 바와 같이, 아미노산 서열의 이러한 정렬은, 예를 들면, 국립 생명공학 정보 센터(NCBI) 홈페이지에서 제공되는 "BLAST" 프로그램 등의 공적으로 이용가능한 컴퓨터 상동성 프로그램을 사용하여, 거기에 제공된 기본 설정을 사용하여 수행할 수 있다. 아미노산 서열 또는 핵산 서열 세트의 서열 동일성 백분율을 계산하는 추가 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다.

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7의 V_H 및 서열번호 8의 V_L을 포함한다.

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 7의 V_H 및 서열번호 8의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다.

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 15의 V_H 및 서열번호 16의 V_L을 포함한다.

더욱이, 바람직한 실시양태에서, 본 발명에 따라 사용하기 위한 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 서열번호 15의 V_H 및 서열번호 15의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합한다.

특정 구조를 "인식하고 이에 결합하는"이라는 용어는, 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여, "산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는" 상기된 항체에 적용된다.

바람직한 실시양태에서, "산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는" 항체는 해리 상수 KD가 최대 0.5×10^-3nM, 최대 1.0×10^-3M, 최대 0.5×10^-4M, 최대 1.0×10^-4M, 최대 5×10^-4M, 최대 1×10^-5M, 최대 3×10^-5M, 최대 5.0×10^-5M, 최대 1.0×10^-6M, 바람직하게는 최대 0.5×10^-7M, 보다 바람직하게는 최대 1.0×10^-7M, 보다 더 바람직하게는 최대 1.0×10^-8M, 가장 바람직하게는 최대 1.0×10^-9M이다. KD는 복합체가 이의 성분으로 가역적으로 해리하는 경향(즉, 항원에 대한 항체의 친화성)의 척도로서 해리 상수를 나타내고, 결합 상수의 역수이다.

상기 값은 항체의 결합 부위당 결합에 관한 것이다.

KD는 스캐챠드(Scatchard) 방정식으로부터 계산될 수 있고, KD를 결정하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다.

이 경우, 항체는 바람직하게는 5개의 항체로 이루어진 IgM 항체에 관한 것이기 때문에(따라서, 10개의 결합 부위를 갖는 판타머의 형태로 존재한다), 결합력은 오히려 높고, 해리 상수 KD는 최대 0.5×10^-3nM, 최대 1.0×10^-3M, 최대 0.5×10^-4M, 최대 1.0×10^-4M, 최대 5×10^-4M, 최대 1×10^-5M, 최대 3×10^-5M, 최대 5.0×10^-5M, 최대 1.0×10^-6M, 바람직하게는 최대 0.5×10^-7M, 보다 바람직하게는 최대 1.0×10^-7M, 보다 더 바람직하게는 최대 1.0×10^-8M, 및 가장 바람직하게는 최대 1.0×10^-9M이다.

결합력은 항체와 이의 항원 사이 등의 개별 비공유 결합 상호작용의 복수의 친화성의 누적 강도의 척도이다. 따라서, 결합력은 단일 상호작용의 강도를 나타내는 친화성과는 상이하다.

본 발명에 따라 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 상기 특이적 항체/항체들로 한정되지 않지만, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하고 이에 결합하는 한, 임의의 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 항체일 수 있다.

당업자의 통상적인 기술 및 통상의 방법에 의해, 본 발명의 이러한 설명을 구비한 당업자는, 폴리클로날 및 모노클로날 항체 등의 항체의 생성에 유용한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프 관련 에피토프(또한 기능적 단편)의 구조로부터 용이하게 추론할 수 있다. 그러나, 당업자는 또한 CDR-이식된 항체 또는 인간화 항체 및 완전 인간 항체 등의 조작된 항체도 제공할 수 있는 위치에 있다.

상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 문맥에서 특히 바람직한 것은 모노클로날 항체이다. 모노클로날 항체의 제조에는, 세포주의 연속 배양에 의해 생산된 항체를 제공하는 모든 기술을 사용할 수 있다. 이러한 기술의 예에는 하이브리도마 기술, 트리오마 기술, 인간 B-세포 하이브리도마 기술 및 인간 모노클로날 항체를 생산하기 위한 EBV-하이브리도마 기술이 포함된다[참조: Shepherd and Dean (2000), Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Press, Goding and Goding(1996), Monoclonal Antibodies: Principles and Practice - Production and Application of Monoclonal Antibodies in Cell Biology, Biochemistry and Immunology, Academic Pr Inc, USA].

항체(유도체)는 또한 펩티드모방체에 의해 생산될 수 있다. 추가로, 일본쇄 항체의 생산에 대해 기재된 기술(특히, 미국 특허 제4,946,778호 참조)은 항원을 특이적으로 인식하는 일본쇄 항체를 생산하기 위해 적합시킬 수 있다. 또한, 유전자도입 동물을 사용하여, 목적하는 항원에 대한 인간화 항체를 발현시킬 수 있다.

본 발명은 또한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에 대한 특이적 항체의 생산을 상정한다. 이 생산은, 예를 들면, 마우스 등의 동물의 면역화를 기반으로 한다. 그러나, 항체/항혈청의 생산을 위한 기타 동물도 본 발명의 범위 내에서 상정된다. 예를 들면, 모노클로날 및 폴리클로날 항체는 래빗, 마우스, 염소, 당나귀 등에 의해 생산될 수 있다. 수득된 특이적 항체의 양은 ELISA를 사용하여 정량화할 수 있고, 이는 또한 하기에 기재되어 있다. 항체의 생산을 위한 추가 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다[참조: 예를 들면, Harlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual", CSH Press, Cold Spring Harbor, 1988].

제2 예로서, 이 생산은 인간 B 세포의 단일 세포 선별 및 이의 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자의 발현 클로닝을 기반으로 한다. 이 예에서, B1 세포를 식별하기 위한 CD20^posCD27^posCD43^posCD70^neg 등의 특이적 표면 마커의 발현을 기반으로, 또는 포스포릴콜린 또는 MDA 부가물 등의 형광 표지된 특이적 항원의 결합을 기반으로 단일 인간 B 세포를 선별할 수 있다. 제3 예로서, 이 생산은 B1 세포를 식별하기 위한 CD20^posCD27^posCD43^posCD70^neg 등의 특이적 표면 마커의 발현을 기반으로, 또는 포스포릴콜린 또는 MDA 부가물 등의 형광 표지된 특정 항원의 결합을 기반으로 하는 인간 B 세포의 선별을 기반으로 한다. 선별된 B 세포에 EBV 바이러스를 형질도입하여 B 세포를 불멸화하고, 이어서 단일 세포 FACS 선별 또는 제한 희석 등의 방법을 사용하여 단일 세포 클로닝을 수행할 수 있다. 이에 의해 생성된 B 세포주로부터 수득된 상청액을 항원-특이성에 대해 시험할 수 있고, 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 유전자를, 목적하는 항체 특이성을 발현하는 B 세포 클론으로부터 클로닝할 수 있다. 제4 예로서, 이 생산은 조합 항체-파지 디스플레이 라이브러리로부터 항체를 선택하는 것을 기반으로 한다. 이 예에서, 포스포릴콜린 또는 MDA 부가물 등의 항원을 사용하여, 특정 항체를 선택할 수 있다.

본 명세서에 사용된 용어 "특이적으로 결합하다"는, 단백질 및 기타 생물학적 제제의 이종 모집단의 존재하에 목적하는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프, 및 항체의 존재를 결정하는 결합 반응을 지칭한다.

따라서, 지정된 검정 조건하에서, 지정된 항체 및 상응하는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프는 서로 결합하고, 샘플 중에 존재하는 다른 성분에는 유의한 양으로 결합하지 않는다.

이러한 조건하에서 표적 분석물에 대한 특이적 결합은 특정 표적 분석물에 대한 특이성을 위해 선택된 결합 모이어티를 필요로 할 수 있다. 특정 항원과 특이적으로 반응성인 항체를 선택하기 위해, 다양한 면역검정 형식을 사용할 수 있다. 예를 들면, 고체상 ELISA 면역검정은 분석물과 특이적으로 면역반응하는 모노클로날 항체를 선택하기 위해 일상적으로 사용된다. 특정 면역반응성을 결정하기 위해 사용될 수 있는 면역검정 형식 및 조건에 대해서는 문헌[참조: Shepherd and Dean (2000), Monoclonal Antibodies: A Practical Approach, Oxford University Press and/ or Howard and Bethell (2000) Basic Methods in Antibody Production and Characterization, Crc. Pr. Inc.]을 참조한다. 전형적으로, 특이적 또는 선택적 반응은 노이즈에 대한 배경 신호의 적어도 2배, 보다 전형적으로 배경보다 10배 내지 100배 더 크다. 당업자는 신규 폴리펩티드에 대해 지시된 특이적 결합 분자를 제공 및 생성할 수 있는 위치에 있다. 특이적 결합-검정의 경우, 목적하지 않는 교차-반응성을 회피하기 위해 용이하게 사용할 수 있고, 예를 들면, 폴리클로날 항체는 공지된 방법으로 간단하게 정제 및 선택할 수 있다[참조: Shepherd and Dean, loc. cit.].

용어 "항체 또는 이의 항원 결합 단편"은, 본 발명에 따르면, 항체 분자 또는 이의 항원 결합 단편이 상기 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 적어도 부분 구조를 특이적으로 인식 또는 특이적으로 상호작용 및/또는 결합할 수 있는 것을 의미한다. 상기 용어는 항체 분자의 특이성, 즉 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 특정 영역을 식별하는 이의 능력과 관련된다. 따라서, 특이성은 당해 기술분야에 공지된 방법 및 본 명세서에 개시 및 기재된 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 이러한 방법에는 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-시험 및 펩티드 스캔이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 이러한 방법은 또한 당해 기술분야에 공지된 K_D-값의 결정을 포함한다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 관련 질환은 천연 항체 감염성, 신경퇴행성, 대사성, 자가면역 또는 심혈관 질환이다.

상기 천연 항체 결핍 감염성, 신경퇴행성, 대사성, 자가면역 또는 심혈관 질환과 관련하여, 본 발명의 제1 측면과 관련하여 상기 기재된 바와 같이 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

사실, 자가면역 질환과 관련하여, 놀랍게도, 본 발명(실시예 22 및 도 3 참조)에서, 중증 COVID-19 환자에서 자가면역 IgG 항체가 생성되는 것으로 밝혀졌다. 이러한 데이터는, 본 발명과 관련하여 천연 항체(nAB)의 결핍이 중증 COVID-19 경과 중에 자가면역 항체의 발생을 초래할 수 있다는 것을 뒷받침한다. 이러한 자가면역 항체의 존재는 COVID-19 질환 증상의 재발 또는 장기화의 증거를 제공하고, 이는 충분한 수준의 천연 항체, (모노클로날) 천연 IgM 또는 IgA의 제공, 또는 본 발명과 관련하여 천연 항체 풍부 제제(예: Pentaglobin^®)가 자가면역 항체의 생성을 방지하거나, 또는 이의 수준을 감소시킬 수 있다는 것을 뒷받침한다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 관련 질환은 β-코로나바이러스 SARS-CoV-2에 의한 바이러스 감염 질환 COVID-19이다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 관련 질환은 장기 COVID-19이다.

β-코로나바이러스 SARS-CoV-2 및 장기 COVID-19에 의해 각각 유발되는 상기 바이러스 감염 질환 COVID-19에 관련하여, 본 발명의 상기 제1 측면의 문맥에서 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 상기 항체는 바이러스 중화 및/또는 감염 세포로부터 인접한 제2 비-감염 세포로의 바이러스 확산(세포-대-세포 확산)을 억제할 수 있다.

감염된 세포로부터 인접한 제2 비-감염 세포로의 바이러스 확산(세포-대-세포 확산)을 억제하는 능력과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 상기 항체는 바이러스에 의한 감염을 중화하고, 이에 의해 표적 세포의 감염을 예방할 수 있다.

"바이러스 중화" 및/또는 "바이러스에 의한 감염을 중화하고, 이에 의해 표적 세포의 감염을 예방하는" 능력과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 상기 항체는 항-염증 활성, 바람직하게는

바람직하게는 감염된 폐에서, 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키는 능력,

폐 조직에서 세포 파편을 제거하는 능력, 및/또는

IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하는 능력을 갖는다.

상기 항염증 활성, 바람직하게는, 바람직하게는 감염된 폐에서 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키고, 폐 조직에서 세포 파편을 제거하고, IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하고/하거나; 염증유발성 사이토카인을 중화하는 능력과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 장애 또는 질환은 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환이다.

천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 장애 또는 질환이 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환인 것과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 상기 염증성 질환은 호흡기 바이러스, 바람직하게는 COVID19, 인플루엔자, MERS-COV 또는 SARS-COV에 의해 매개되는 감염성 질환; 그람 양성 또는 그람 음성 병원체, 진균 또는 기생충에 의해 매개되는 세균 감염에 의해 유발되는 감염성 질환; 및 무균 질환, 바람직하게는 심혈관 질환(cardiovascular diseases), 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis), 관상 심장 질환(coronary heart disease), 심장 발작(heart attack) 및 뇌졸중(stroke), 진성 당뇨병(diabetes mellitus), 신경퇴행성 질환(neurodegenerative diseases), 바람직하게는 알츠하이머병(Alzheimer's Disease) 및 자가면역 질환(autoimmune diseases), 바람직하게는 전신성 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematodes) 또는 다발성 경화증(Multiple Sclerosis) 등의 대사 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

상기 염증성 질환이 호흡기 바이러스, 바람직하게는 COVID19, 인플루엔자, MERS-COV 또는 SARS-COV에 의해 매개되는 감염성 질환; 그람 양성 또는 그람 음성 병원체, 진균 또는 기생충에 의해 매개되는 세균 감염에 의해 유발되는 감염성 질환; 및 무균 질환, 바람직하게는 심혈관 질환, 아테롬성 동맥경화증, 관상 심장 질환, 심장 발작 및 뇌졸중, 진성 당뇨병, 신경퇴행성 질환, 바람직하게는 알츠하이머병 및 자가면역 질환, 바람직하게는 전신성 홍반성 루푸스 또는 다발성 경화증 등의 대사 장애로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기에서 설명된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 제2 측면에 따라 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와 관련하여, 상기 바이러스 감염 질환은 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

상기 바이러스 감염 질환이 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것과 관련하여, 본 발명의 제1 측면의 문맥에서 상기에서 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

상기에서 정의한 항체는 의료 환경에서 특히 유용하다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 상기 기재된 바와 같이 본 발명에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 유효량의 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

용어 "치료" 및/또는 "예방" 등은 일반적으로 목적하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 수득하는 것을 의미하기 위해 본 명세서에서 사용된다. 따라서, 본 발명의 치료는 특정 질환의 (급성) 병태의 치료에 관한 것일 수 있지만, 질환 또는 이의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다는 점에서 이의 예방적 치료에 관한 것일 수도 있다. 바람직하게는, "치료"라는 용어는 질환 및/또는 부작용 및/또는 질환에 기인한 증상을 부분적으로 또는 완전히 치유한다는 점에서 치료적인 것으로 이해되어야 한다. 이와 관련하여 "급성"은 대상체가 질환의 증상을 나타내는 것을 의미한다. 환언하면, 치료 대상체는 실제 치료를 필요로 하고 있고, 본 발명의 문맥에서 "급성 치료"라는 용어는 질환의 발증 또는 질환의 발병 후에 질환을 실제로 치료하기 위해 취해진 조치에 관한 것이다. 치료는 또한 예방적(prophylactic) 또는 예방적(preventive) 치료, 즉, 예를 들면, 감염 및/또는 질환의 발증을 예방하기 위해, 질환 예방을 위해 취해진 조치일 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물은 당업자에게 공지된 광범위한 종류의 투여 형태를 통해 투여될 수 있다. 투여는 정제, 바늘 주사, 흡입기의 사용, 크림, 폼, 겔, 로션 및 연고를 포함하지만 이로 한정되지 않는 에어로졸을 통해 전신적, 국소적 또는 경구적으로 이루어질 수 있다.

부형제 또는 담체는 활성 성분, 즉, 강력한 활성 성분을 함유하는 벌크-업 제형의 목적을 위해 본 발명의 상기 기재된 항체와 함께 제형화되는 불활성 물질이다. 부형제는 종종 "증량제", "충전제" 또는 "희석제"로 지칭된다. 벌크-업은 제형을 생산할 때에 약물 물질의 편리하고 정확한 분주를 가능하게 한다. 이들은 또한 약물 흡수 또는 용해의 촉진, 또는 기타 약동학적 고려사항 등의 다양한 치료 증강 목적으로 작용할 수 있다. 부형제는 또한, 예상되는 저장 수명에 걸쳐 변성 방지 등의 시험관내 안정성을 보조하는 것에 추가하여, 분말 유동성 또는 비점착 특성을 촉진함으로써 관련 활성 물질의 취급을 지원하기 위해 제조 프로세스에서 유용할 수 있다. 적절한 부형제의 선택은 또한 투여 경로 및 투여 형태, 게다가 활성 성분 및 이의 기타 요인에 따라 달라진다.

따라서, 상기 기재된 본 발명의 항체의 유효량을 포함하는 약제학적 조성물은 고체, 액체 또는 기체의 형태일 수 있고, 특히 분말(들), 정제(들), 용액(들) 또는 에어로졸(들)의 형태일 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 것이 바람직하다.

이러한 약제학적 조성물은 적절한 용량으로 대상체에게 투여될 수 있다. 적합한 조성물의 투여는, 예를 들면, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 국소, 피내, 비강내 또는 기관지내 투여에 의해 상이한 방법으로 영향을 받을 수 있다. 상기 투여는, 예를 들면, 폐동맥 내의 부위로 또는 폐로 직접 주사 및/또는 전달에 의해 수행되는 것이 특히 바람직하다. 본 발명의 조성물은 또한, 예를 들면, 폐 등의 외부 또는 내부 표적 부위로의 미립자총 전달에 의해 표적 부위에 직접 투여될 수 있다. 복용량 섭생은 주치의 및 임상적 요인에 의해 결정된다. 의학 분야에서 공지되어 있는 바와 같이, 1인 환자에 대한 투여량은 환자의 체격, 체표면적, 연령, 투여할 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 경로, 일반적 건강 및 동시 투여되는 기타 약물을 포함하는 다수의 요인에 따라 달라진다. 단백질성의 약제학적 활성 물질은 용량당 1ng 내지 10mg/kg 체중의 양으로 존재할 수 있고; 그러나, 특히 전술한 인자를 고려하여, 이 예시적 범위 미만 또는 초과의 용량이 상정된다. 섭생이 연속 주입인 경우, 1분당 체중 킬로그램당 1μg 내지 10mg 단위의 범위에 있어야 한다.

적합한 약제학적 담체, 부형제 및/또는 희석제의 예는 당해 기술분야에 공지되어 있고, 인산염 완충 생리식염수 용액, 물, 오일/물 에멀젼 등의 에멀젼, 다양한 유형의 습윤제, 멸균 용액 등을 포함한다. 이러한 담체를 포함하는 조성물은 공지된 종래의 방법에 의해 제형화된다. 이들 약제학적 조성물은 적절한 용량, 즉 당업자가 당해 기술분야에 공지된 방법에 의해 용이하게 결정할 수 있는 "유효량"으로 대상체에게 투여될 수 있다. 복용량 섭생은 주치의 및 임상적 요인에 의해 결정된다. 의학 분야에서 공지된 바와 같이, 1인 환자에 대한 투여량은 환자 또는 대상체의 체격, 체표면적, 연령, 투여될 특정 화합물, 성별, 투여 시간 및 투여 경로, 일반적 건강, 및 동시 투여되는 기타 약물을 포함하는 다수의 요인에 의존한다.

따라서, 바람직하게는, 상기와 같은 본 발명의 항체는 유효량으로 포함된다. 용어 "유효량"은 약제학적 조성물이 투여될 대상체에서 검출가능한 치료 반응을 유도하기에 충분한 양을 지칭한다. 상기에 따르면, 약제학적 조성물 중의 본 발명의 항체의 함유량은 상기와 같은 치료에 유용한 것이라면 한정되지 않지만, 바람직하게는 전체 조성물에 대하여 0.0000001 내지 10중량%로 함유된다. 추가로, 본 명세서에 기재된 항체는 바람직하게는 담체 중에 사용된다. 일반적으로, 적절한 양의 약제학적으로 허용되는 염을 담체에 사용하여 조성물을 등장성으로 되게 한다. 담체의 예에는 생리식염수, 링거 용액 및 덱스트로스 용액이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 바람직하게는, 허용되는 부형제, 담체 또는 안정화제는 사용된 용량 및 농도에서 무독성이고, 시트레이트, 포스페이트 및 이의 기타 유기산 등의 완충제; 염 형성 대이온(예: 나트륨 및 칼륨); 저분자량(> 10개 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 단백질(예: 혈청 알부민 또는 젤라틴); 친수성 폴리머(예: 폴리비닐피롤리돈); 히스티딘, 글루타민, 라이신, 아스파라긴, 아르기닌 또는 글리신 등의 아미노산; 글루코스, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 탄수화물; 단당류; 이당류; 기타 당류(예: 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨); 킬레이트제(예: EDTA); 비이온성 계면활성제(예: 트윈, 플루로닉스 또는 폴리에틸렌 글리콜); 메티오닌, 아스코르브산 및 토코페롤을 포함하는 항산화제; 및/또는 방부제(예: 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드); 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤(예: 메틸 또는 프로필 파라벤); 카테콜; 레조르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸을 포함한다. 적합한 담체 및 이들의 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., 1985, Mack Publishing Co]에 보다 상세히 기재되어 있다.

치료의 진행 상황은 정기적 평가를 통해 모니터링할 수 있다. 본 발명의 항체 또는 본 발명의 약제학적 조성물은 멸균 수성 또는 비수성 용액, 현탁액, 및 에멀젼, 게다가 크림 및 좌제일 수 있다. 비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일 등의 식물성 오일 및 에틸 올레에이트 등의 유기 에스테르이다. 수성 담체에는, 생리식염수 및 완충 매질을 포함하는, 물, 알코올/수용액, 에멀젼 또는 현탁액이 포함된다. 방부제 및 기타 첨가제, 예를 들면, 항균제, 항산화제, 킬레이트제, 및 불활성 기체 등도 또한 존재할 수 있다. 추가로, 본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적 조성물의 의도된 용도에 따라 추가 약제를 포함할 수 있다. 상기 약제는, 예를 들면, 시판명 트윈(Tween)으로 시판되고 있는 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노라우레이트, 프로필렌 글리콜, EDTA, 시트레이트, 수크로스, 및 당업자에게 공지된 약제학적 조성물의 의도된 용도에 적합한 기타 약제일 수 있다.

본 발명에 따르면, 용어 "약제학적 조성물"은 환자, 바람직하게는 인간 환자에게 투여하기 위한 조성물에 관한 것이다.

본 발명은 또한, 상기 본 명세서에 정의된 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

치료 방법의 바람직한 실시양태와 관련하여, 상기 정의된 사용을 위한 항체 또는 약제학적 조성물의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 적용된다.

본 발명에서, 대상체는 바람직한 실시양태에서 포유동물, 예를 들면, 개, 고양이, 돼지, 소, 양, 말, 설치류, 예를 들면, 랫트, 마우스 및 기니 피그, 또는 영장류, 예를 들면, 고릴라, 침팬지, 및 인간이다. 가장 바람직한 실시양태에서, 대상체는 인간이다.

본 발명에서, 상기 정의된 제1 및 제2 측면의 바람직한 실시양태에서,

대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 면역조절제와 함께 투여되어야 한다. 바람직하게는, 이러한 병용 요법은 본 발명에 따른 치료에 대해 상승 효과를 발휘한다.

이러한 병용 요법의 바람직한 실시양태와 관련하여, 본 발명의 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

본 명세서에 사용된 용어 "조합"은, 본 명세서에 상기 기재된 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 및 본 명세서에 하기 기재된 면역조절제의 조합에 관한 것이다.

바람직한 실시양태에서, 동시 적용이 상정된다. 그러나, 이 조합은 또한 2개의 성분, 즉 상기에서 개설된 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 및 본 명세서에서 하기에 기재된 면역조절제의 후속 적용을 포함한다. 따라서, 이들 성분 중 1개는 조합 중 다른 1개보다 먼저, 동시에 또는 후에 투여될 수 있거나, 그 반대의 경우도 마찬가지이다.

따라서, 본 명세서에 사용된 "조합하여"는 상기 개략된 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 및 본 명세서에 하기 기재된 면역조절제의 투여 사이의 타이밍을 제한하지 않는다. 따라서, 2개 성분이 동시/동시에 투여되지 않는 경우, 투여는 1분, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간 또는 72시간 또는 당업자에 의해 용이하게 결정되고/되거나 본 명세서에 기재된 임의의 적합한 시간 차이에 의해 분리될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 2개의 성분이 동시/동시에 투여되지 않는 경우, 투여는 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 24시간, 48시간 또는 72시간 또는 당업자에 의해 용이하게 결정되고/되거나 본 명세서에 기재된 임의의 적합한 시간 차이에 의해 분리될 수 있다.

면역조절제는 당업자에게 공지되어 있고, 일반적으로, 특정 면역 세포 또는 숙주의 내피 세포 등의 기타 세포 유형의 거동 및/또는 기능을 조절하는 능력을 갖는 약제 또는 약물을 지칭한다.

면역조절제는 면역 시스템의 상이한 수준에서 작용하는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 면역 반응 세포, 즉 림프구, 마크로파지, 호중구, 천연 살해(NK) 세포 및 세포독성 T 림프구(CTL)의 특정 모집단 및 서브모집을 선택적으로 억제하거나 강화/증강시키는 상이한 종류의 약제 또는 약물이 개발되었다.

보다 구체적으로, 바람직한 실시양태에서, 이러한 면역조절제, 면역조절 약제 또는 약물은 면역 반응에 대한 면역자극(염증유발성) 효과를 가질 수 있다. 따라서, 바람직한 실시양태에서, 면역조절제, 면역조절 약제 또는 약물은 면역자극제일 수 있다.

또는, 다른 바람직한 실시양태에서, 이러한 면역조절제, 면역조절 약제 또는 약물은 면역 반응에 대한 면역억제(항-염증) 효과를 가질 수 있다.

면역조절제는 당업자에게 공지되어 있고, 본 발명에 따른 면역조절제는 특정 면역조절제로 한정되지 않는다. 오히려, 당업자는, 상기 기능적 능력을 갖는 한, 적절한 면역조절제를 선택할 수 있는 위치에 있다.

바람직한 실시양태에서, 면역조절 약물은 소분자 또는 생물학적 제제일 수 있다. 소분자 또는 생물학적 제제인 면역조절 약물의 특성은 한정되지 않는다. 바람직한 실시양태에서, 면역조절 약물은 항-PD-1, 항-PD-L1, 항-CD40(작용제), CD40-리간드, 항-GM-CSF, 항-CSF-1R, 항-CTLA-4, 항-IL-6, 항-IL-6R, 항-CCL2, 항-CCL5, 항-CCR5(길항제), 항-CCR2(길항제)로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다. 면역조절제의 예는 IL-6 등의 사이토카인 또는 IL-6R 등의 이의 특이적 수용체에 결합하고, 이에 의해 면역 세포를 포함하는 기타 세포 유형에 대한 사이토카인의 염증유발 효과를 중화시키는 항체이지만, 이로 한정되지 않는다.

면역조절제의 다른 예는 CCL2 및 CCL5 등의 케모카인 또는 CCR2 및 CCR5 등의 이들의 특이적 수용체에 결합하고, 이에 의해 면역 세포를 포함하는 다른 세포 유형에 대한 케모카인의 화학주성 효과를 중화시키는 항체이지만, 이로 한정되지 않는다.

면역조절 약제의 또 다른 예는 CCR5 등의 케모카인의 수용체에 결합하고, 이에 의해 면역 세포를 포함하는 다른 세포 유형에 대한 케모카인의 화학주성 효과를 중화시키는 마라비록 등의 합성 분자이지만, 이로 한정되지 않는다.

당업자는 본 발명 및 상기에 따라 특정 면역 세포 또는 내피 세포 등의 다른 세포 유형의 거동 및/또는 기능을 조절하기에 적합한 적절한 면역조절제를 선택하는 위치에 있다.

예로서, 면역조절제는 사이토카인(바람직하게는 IL-6)에 결합하는 항체, 이의 특정 사이토카인 수용체(바람직하게는 IL-6R)에 결합하는 항체, 케모카인(들)(바람직하게는 CCL2 및 CCL5)에 결합하는 항체, 이들의 특정 케모카인 수용체(들)(바람직하게는 CCR2 및 CCR5)에 결합하는 항체, 합성 분자(바람직하게는 마라비록)로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

보다 바람직한 실시양태에서, 면역조절제는 마라비록이다.

마라비록은 CCR5 수용체 길항제 클래스에 속하고, HIV 감염의 치료에서 항레트로바이러스 약물로서 사용된다. 또한, 침입 억제제로서도 분류된다. 또한, 백혈병에 대한 동종 골수 이식으로 치료받은 환자의 이식편 대 숙주 질환을 감소시킨다. 마라비록은 침입 억제제이다. 특히, 마라비록은 특정 인간 세포의 표면에서 발견되는 CCR5 수용체의 음성 알로스테릭 조절제이다. 케모카인 수용체 CCR5는 대부분의 HIV 균주에 필수적인 공-수용체이고, 바이러스의 숙주 세포로의 침입 프로세스에 필요하다. 이 약물은 CCR5에 결합하고, 이에 의해 HIV 단백질 gp120이 수용체와 결합하는 것을 차단한다. 이어서, HIV는 인간 마크로파지 및 T 세포에 침입할 수 없게 된다.

또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 면역조절제는 덱사메타손이다.

덱사메타손은, 항염증 및 면역억제 효과를 갖기 때문에, 다양한 염증성 질환에 사용되는 저가의 코르티코스테로이드 약물이다. 따라서, 덱사메타손은 항염증제 및 면역억제성 면역조절제이다. 영국 옥스퍼드 대학에서 실시한 RECOVERY 시험의 예비 보고서에 따르면, 덱사메타손의 사용에 의해, 중증 COVID-19의 인공 호흡기 환자의 사망 발병률이 약 1/3로 감소한 것으로 밝혀졌다. 이는, 강력한 염증유발성 프로파일을 나타내기 때문에, 중증 질환의 환자에서 가장 현저한 항염증 및 면역억제 효과에 의한 것일 수 있다. 대조적으로, 환기를 필요로 하지 않는 COVID-19 환자에서, 덱사메타손은 유익한 효과가 없었고, 역으로 사망 발생률의 증가를 유발했을 수도 있다. 덱사메타손 치료는, 안지오텐신 II의 생산을 유발하는 ACE의 발현을 유도하는 것으로 밝혀졌다. 또한, 안지오텐신 II 유형 1 수용체의 발현은 덱사메타손에 의해 증가되는 것으로 입증되었고, 따라서 덱사메타손은 안지오텐신 II를 통한 염증유발성 신호전달 및 산화 스트레스의 증가 및 산화 인지질/OSE의 축적에 기여할 가능성이 있다. 중증 COVID-19 사례에서, 덱사메타손의 면역억제 및 항염증 효과가 이러한 염증유발성 효과보다 클 가능성이 높지만, 환자가 환기를 필요로 하지 않는 경증의 COVID-19 사례에서, 덱사메타손-자극된 안지오텐신 II-유도 산화 스트레스의 효과가 가시화될 수 있고, 이는 관찰된 사망 발생률의 증가에 반영된다.

바람직하게는, 본 발명과 관련하여, 산화 인지질-/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체와 덱사메타손과의 병용 요법은 상승 효과를 발휘하고, 환기를 필요로 하지 않는 경증의 COVID-19 사례를 갖는 환자에서도 치료 효능을 증강시킨다.

본 발명에서, 상기 정의된 제1 및 제2 측면의 바람직한 실시양태에서,

대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 항바이러스 화합물과 조합하여 투여되어야 하고, 바람직하게는 상기 항바이러스 화합물은

렘데시비르;

파비피라비르;

카모스타트 메실레이트;

나파모스타트 메실레이트;

우미페노비르; 및/또는

보다 강력한 네오-미노파겐 C이다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은 본 발명에 따른 치료에 상승 효과를 발휘한다.

이러한 병용 요법의 바람직한 실시양태와 관련하여, 본 발명의 제1 및/또는 제2 측면 및 상기 정의된 사용하기 위한 약제학적 조성물의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

항바이러스제, 바람직하게는 렘데시비르; 파비피라비르; 카모스타트 메실레이트; 나파모스타트 메실레이트; 우미페노비르; 및/또는 보다 강력한 네오-미노파겐 C와의 조합 및 이러한 조합의 바람직한 실시양태에 관한 용어 "조합" 및 "병용 요법"과 관련하여, 면역조절제와의 병용 요법의 문맥에서 상기 기재된 바와 같이, 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

실제로, 상기에서 개략적으로 설명된 바와 같이, 본 발명은, 다양한 감염성 질환에서, 산화 인지질 및 OSE의 대량 형성이 또한 SARS-CoV-2 감염 환자의 폐에도 축적되어, 프로-마크로파지에서 염증유발성 사이토카인 생산을 유발하고, 이에 의해 COVID-19(및 기타 감염성 질환)의 악화 단계를 개시한다는 숙주 면역 부전의 공통 특징에 기초한다. 본 발명과 관련하여, 높은 수준의 순환 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체는, 이들이 산화 인지질 및 OSE에 결합하고, 이에 의해 이들의 저장 클리어런스를 촉진하기 때문에, 보호를 부여하고, 이는 차례로 치명적 사이토카인 폭풍 증후군 및 ARDS의 유도에 대항한다.

따라서, 상기 언급한 바와 같이, 놀랍게도, 본 출원에서는, 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹, 즉 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환의 치료 또는 예방에 사용될 수 있음이 기재되어 있다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명은, 마크로파지의 활성화 및 IL-6 등의 염증유발성 사이토카인의 분비에 대한 산화 인지질(oxPL) 및 산화-특이적 에피토프(OSE)의 자극 효과가 치명적 사이토카인 방출 증후군의 개시, 및 중증 COVID-19 환자에서 급성 폐 손상 및 ARDS의 발증에 기여한다는 놀라운 관찰에 기초한다.

이러한 관찰은, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용될 수 있다는 상기 정의된 본 발명의 제1 및 제2 측면을 유도한다.

본 발명의 이러한 실시양태에 의해, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 사용에 의한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 감소를 사용하여, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료하거나 예방하는 것이 밝혀지면, 이론에 구속되지 않고서, 이러한 놀라운 관찰은, 천연 IgM/IgA 항체의 생성을 자극하거나, 또는 천연 IgM/IgA 항체(예: 천연 IgM/IgA 항체-풍부 혈장 또는 혈청 제제)를 포함하거나, 또는 병원체에 대해 직접 작용하는 화합물, , 특히 SARS-CoV-2의 경우에, 배타적이지는 않지만, 항바이러스 화합물, 바람직하게는 렘데시비르, 파비피라비르(Avigan), 카모스타트 메실레이트, 나파모스타트 메실레이트, 우미페노비르(Arbidol) 및 보다 강력한 네오-미노파겐 C(SNMC)와 함께 재조합 모노클로날 산화 인지질- 또는 OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체를 포함하는 화합물의 병용 요법에 대한 가능성을 열어 주고, 1) 산화 인지질/OSE 생성의 증가 공급원, 즉 바이러스 복제의 제거, 및 2) 산화 인지질-/OSE-특이 천연 IgM/IgA 항체에 의한 축적된 산화 인지질/OSE 생성물의 감소에 의해 상승적 치료 효과를 생성한다.

항바이러스 화합물은 당업자에게 공지되어 있고, 일반적으로, 바이러스의 발생 및/또는 증식을 억제하는 능력을 갖는 약제 또는 약물 또는 화합물로도 지칭된다. 따라서, 항바이러스 화합물은 바이러스 감염을 치료하기 위해 사용되는 약제 또는 약물 또는 화합물을 지칭한다. 대부분의 항바이러스제는 특정 바이러스를 표적으로 하는 반면, 광범위한 항바이러스제는 광범위한 바이러스에 대해 효과적이다. 대부분의 항생물질과 달리, 항바이러스제는 표적 병원체를 파괴하지 않는다. 대신에, 이들은 이들의 발달을 억제한다. 따라서, 본 발명과 관련하여 항바이러스 화합물은 바이러스를 사멸하고/하거나, 바이러스의 복제 능력을 억제하고, 이에 의해 바이러스의 증식 및/또는 복제 능력을 억제하는 약제에 관한 것이다.

항바이러스 화합물은 당업자에게 공지되어 있고, 본 발명에 따른 항바이러스 화합물은 특정 항바이러스 화합물로 한정되지 않는다. 오히려, 당업자는 상기 기능적 능력을 갖는 한, 적합한 항바이러스 화합물을 선택할 수 있는 위치에 있다.

본 발명과 관련하여 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법과 관련하여, 당업자는 본 발명에 따라 바이러스의 발생을 억제하기에 적합한 적절한 항바이러스 화합물을 선택한다. 예로서, 항바이러스 화합물은 직접-작용 항바이러스 화합물 및 간접-작용 항바이러스 화합물의 약물 클래스로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

실제로, 항바이러스 화합물은 일반적으로 이의 작용 방식에 따라 2개의 주요 클래스, 즉 직접-작용 항바이러스 화합물 및 간접-작용 항바이러스 화합물로 분류된다는 것이 당업자에게 공지되어 있다.

직접-작용형 항바이러스 화합물은, 바이러스 복제 중의 효과 단계에 기초하여, 침입-억제제, 프로테아제-억제제, 레플리카제-억제제, 바이러스 생산의 억제제, 바이러스 방출의 억제제 및 바이러스 성숙의 억제제로 추가로 세분화된다.

간접-작용형 항바이러스 화합물은 바이러스 복제가 억제되도록 세포를 조절하는 세포 인자에 작용함으로써 이의 기능을 발휘한다.

바람직한 실시양태에서, 항바이러스 화합물은 렘데시비르; 파비피라비르; 카모스타트 메실레이트; 나파모스타트 메실레이트; 우미페노비르; 및 보다 강력한 네오-미노파겐 C(SNMC)로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

상기 렘데시비르 및 파비피라비르는 직접-작용형 항바이러스 화합물(바이러스 복제에 작용)으로 분류되고, 카모스타트 메실레이트, 나파모스타트 메실레이트 및 보다 강력한 네오-미노파겐 C(SNMC)는 간접-작용형 항바이러스 화합물로 분류되며, 우미페노비어는 이중 기능을 갖는다.

렘데시비르(GS-5734라고도 공지됨)는, 직접-작용형 항바이러스제이고, 필로바이러스, 파라믹소바이러스, 뉴모바이러스 및 코로나바이러스를 포함한 광범위한 항바이러스 스펙트럼을 갖는 아데노신 유사체의 모노포스포라미데이트 프로드러그이다. 렘데시비르는, RNA-의존성 RNA 폴리머라제를 차단하여 바이러스 복제를 억제하고, 바이러스 RNA 합성 중에 조기 지연된 쇄-종결을 유발한다. 에볼라 바이러스 감염에 대한 치료법으로서 임상 시험에서 조사되었고, 내약성은 우수했지만, 모노클로날 항체 치료법보다 덜 효과적이었다. 렘데시비르는 시험관내 SARS-CoV-2 복제의 강력한 억제제이고, SARS-CoV-2에 감염된 붉은털 원숭이에서 임상적 이점을 나타냈다. 중등도 COVID-19 환자의 임상 3상 SIMPLE 시험에서, 렘데시비르로 5일간 치료한 환자는 표준 치료 그룹과 비교하여 임상적 개선을 가질 가능성이 65% 더 높았다. 임상적 개선은, 다양한 질환 중증도를 갖는 입원 환자에서 국립 알레르기 감염성 질환 연구소(National Institute of Allergy and Infectious Diseases; NIAID)의 ACTT-1 시험에서도 나타났다. 렘데시비르는 COVID-19 환자의 치료를 위해 긴급사용허가(EUA)하에 승인되었다.

파비피라비르(Avigan)는, 항바이러스 제품인 파비피라비르-리보푸라노실-5'-트리포스페이트로 대사되고, 렘데시비르와 비교하여 유사한 작용 방식으로, 바이러스 게놈의 RNA-의존성 RNA 폴리머라제 매개된 복제 중에 쇄-터미네이터로서 바이러스 복제를 차단하는 프로드러그이다. 따라서, 파비피라비르도 몇몇 RNA 바이러스에 대해 광범위하게 작용한다. 파비피라비르는 2014년에 일본에서 신규 또는 재출현 인플루엔자 바이러스 치료제로서 승인되었고, 이후 중국과 러시아에서도 승인되었다. 파비피라비르는 SARS-CoV-2 복제를 차단하는 것으로 생각되고, 임상 시험에서 일부 유익한 효과를 나타냈고, 이후, COVID-19를 치료하기 위해 일본에서 인도적 사용 프로그램에서 사용하는 것이 승인되었다.

바람직하게는, 천연 IgM/IgA 항체와 직접-작용형 항바이러스 약물인 렘데시비르 또는 파비피라비르의 병용 요법은 산화 인지질/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체에 의한 축적된 산화 생성물의 클리어런스 증강과 조합되어 산화 인지질/OSE의 바이러스 복제-유도된 축적의 감소로 인한 상승 효과를 나타낸다.

카모스타트 메실레이트는, 1980년대 프로테아제 억제제로서 일본에서 개발되었고, 만성 췌장염 및 수술 후 역류성 식도염의 급성 증상의 치료에 사용되고 있다. 카모스타트 메실레이트는 SARS-CoV-1 및 SARS-CoV-2의 폐 세포로의 효율적 침입에 필요한 것으로 입증된 막관통 프로테아제 세린 2(TMPRSS2)에 대해 활성이다.

카모스타트 메실레이트와 유사하게, 세린 프로테아제 억제제인 나파모스타트 메실레이트는 일본에서 임상 사용 승인을 받았고, TMPRSS2도 차단하며, 시험관내에서 SARS-CoV-2 감염을 차단하는 것으로 나타났다. 두 약물 모두 TMPRSS2의 활성을 차단하고, 이에 의해 바이러스가 숙주 표적 세포로 침입하기 위한 전제 조건인 바이러스 S 단백질의 절단을 방지한다. 본 발명에서, 카모스타트 메실레이트 또는 나파모스타트 메실레이트 등의 바이러스 복제를 억제하도록 기능하는 TMPRSS2 억제 약물과 산화 인지질-/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체의 조합은 바람직하게는 상승적 치료 효과를 발휘한다.

나파모스타트 메실레이트는 또한 최종 당화 산물 수용체(RAGE) 리간드의 축적을 억제/길항하기 때문에, 산화 인지질/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체와의 조합은 바람직하게는 1) 바이러스 복제의 감소(TMPRSS2의 차단을 통해), 2) RAGE 리간드의 감소 및 3) 산화 인지질-/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체에 의한 산화 생성물의 제거에 의해 복수의 상승적 작용 효과를 갖는다.

우미페노비르(Arbidol)는 인플루엔자 A 및 B를 포함한 호흡기 바이러스 감염의 치료를 위해 러시아와 중국에서 승인된 이중 직접-작용/숙주-표적화 기능을 갖는 바이러스 억제제이다. 우미페노비르는 시험관내에서 SARS-CoV-2 복제를 억제할 수 있는 가능성을 나타냈고, 생체내에서 항바이러스 효과를 갖는 것으로 제안되었다. 우미페노비르는 바이러스 막과 표적 숙주 세포 막의 융합을 차단하여 바이러스가 세포로 침입하는 것을 차단하지만, 이중 활성으로 인해 바이러스 생산 및/또는 방출에 영향을 미칠 수도 있다. 이것은 특정 아미노산 잔기와 방향족 적층 상호작용을 형성할 수 있는 소수성 분자이고, 예를 들면, 바이러스 침입에 중요한 바이러스 당단백질에 결합함으로써 직접-작용형 항바이러스 활성에 기여할 가능성이 있다. 추가로, 우미페노비르는 바이러스 지질 이중층에 직접 결합할 뿐만 아니라, 표적 세포의 원형질막에 직접 결합하고, 엔도사이토시스를 통한 바이러스 흡수를 방지함으로써 지질 결합 능력 및 항바이러스 효과를 갖는 것이 제안된 바 있다. 흥미롭게도, 우미페노비르는 항산화능이 있는 것으로 나타났고, 항산화제인 트롤록스와 비교하여 시험관내에서 장기간 항산화 효과를 나타냈다.

바람직하게는, 우미페노비르는 산화 인지질/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체와 조합하여 1) 바이러스 복제의 방지 및 2) 항산화 특성을 통한 산화 스트레스의 감소의 2개 메커니즘에 의해 상승 효과를 발휘한다.

강력한 네오-미노파겐 C(SNMC)는 만성 간질환의 치료제로서 일본에서 승인된 글리시리진-함유 제제이다. 글리시리진(GL)은 감초(Glycyrrhiza glabra)의 뿌리 및 줄기에 존재하는 트리테르펜이고, 항염증, 항산화 및 항바이러스 효과를 갖는 것으로 나타났다. 감초 추출물은 LDL 산화를 억제하고, 항산화 효과를 발휘하는 것으로 입증되었다. 생체외 연구에서, 감초를 경구 보충한 정상지질혈증 대상체로부터 단리된 LDL은 감초 보충 전에 단리된 LDL보다 산화에 대한 내성이 높은 것으로 나타났다. SNMC에 의한 장기간 치료하의 C형 간염 바이러스 감염 환자는 간경변증 및 간세포 암종의 발생 빈도가 낮았다. 또한, GL은 시험관내에서 SARS-CoV-1의 복제를 효율적으로 차단하는 것으로 입증되었다. GL은 11-베타-하이드록시스테로이드 데하이드로게나제(11bHSD)를 억제하는 전신적 활성 글리시레틴산(GA)으로 대사되고, GL과 GA는 모두 항바이러스 효과를 나타낸다. 11bHSD의 억제는, 높은 수준의 알도스테론 활성과 유사한, 폐, 신장, 비강, 게다가 비강 및 내피 세포를 포함하는 알도스테론 특이적 말초 조직에서 미네랄 코르티코이드 수용체의 코티솔-매개 활성화를 유도할 수 있다. 동물 모델에서 알도스테론을 주입하면, 신장에서 SARS-CoV-1 및 -2 수용체의 ACE2 발현이 소실되었고, 이는 GL/GA-유도된 11bHSD의 억제가 알도스테론 특이적 조직에서 ACE2의 발현을 감소시켜 바이러스 침입 및 확산을 감소시킬 수 있음을 시사한다. GA는 또한 프로테아제 TMPRSS2의 전사 발현을 억제하는 것으로 제안되었고, TMPRSS2는, ACE2와 함께, SARS-CoV-2의 세포로의 효율적 침입에 필요한 단백질이다. 중요하게도, GL/GA는 안지오텐신 II 수준을 감소시키는 보호 ACE2를 추정적으로 감소시킬 수 있고, 동시에 GL과 GA는 모두 톨-유사 수용체 4(TLR4) 길항작용을 통해 항염증 효과를 갖고, GL은 RAGE에 대한 리간드 결합을 억제하는 것으로 나타났다.

따라서, GL과 GA는 효율적 바이러스 침입에 필요한 수용체(ACE2)와 프로테아제(TMPRSS2)를 하향조절함으로써 항바이러스 효과를 발휘할 뿐만 아니라, 염증유발성 사이토카인 생성 및 반응을 하향조절하는 항염증 효과를 발휘한다.

따라서, 바람직하게는, 바이러스 복제의 감소 및 산화 인지질/OSE 생산의 감소, 게다가 SNMC에 의해 발휘되는 항염증 및 항산화 효과는, 산화 인지질/OSE-특이적 천연 IgM/IgA 항체에 의한 산화 생성물의 클리어런스와 조합되어, 상승적 치료 효과를 발휘한다.

상기에서 언급한 바와 같이, 놀랍게도, 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹, 즉 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환의 치료 또는 예방에 사용될 수 있다는 것이 본 출원에 기재되어 있다. 상기에서 설명한 바와 같이, 마크로파지의 활성화 및 IL-6 등의 염증유발성 사이토카인의 분비에 대한 산화 인지질(oxPL) 및 산화-특이적 에피토프(OSE)의 자극 효과가, 치명적 사이토카인 방출 증후군의 개시 및 중증 COVID-19 환자에서 급성 폐 손상 및 ARDS의 발증에 기여한다는 놀라운 발견에 기초한다.

이러한 관찰은, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용될 수 있다는 상기 정의된 본 발명의 제1 및 제2 측면을 유도한다.

본 발명의 이러한 실시양태에 의해, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 사용에 의한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 감소가 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하기 위해 사용될 수 있는 것으로 밝혀지면, 이론에 구속되지 않고서, 이 놀라운 관찰은, 효율적 항미생물 면역 반응에 통상 중요한 기타 면역 세포 기능을 조절할 가능성을 열어 주고, 최종적으로 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 전체 생성에 대항한다.

이에 대해서는 하기에서 설명한다.

예를 들면, oxPAPC를 투여하면, 사망률이 가속하고, 세균 증식 및 전파가 촉진되는 것에 의해 나타난 바와 같이, 마우스는 이. 콜라이 복막염에 매우 취약하게 되는 것으로 나타났다. 이 실험 환경에서, 마크로파지는 다량의 IL-6을 방출하도록 자극되었지만, oxPAPC는 호중구 및 마크로파지의 식작용 능력을 강력하게 억제했다[참조: Knapp et al., 2007, J Immunol. 178:993-1001]. 이러한 데이터는 염증 반응 중에 형성된 oxPL이 마크로파지에 의한 식작용 특성의 손상을 통해 그람 음성 패혈증에 의해 유도된 사망률에 기여할 수 있고, 동시에 IL-6 등의 염증유발성 사이토카인의 분비를 자극할 수 있다는 것을 시사한다. 추가로, oxPL은 수지상 세포(DC)의 기능을 부정적으로 조절하는 것으로 나타났다. 예를 들면, TLR 리간드를 통한 병원체 유래의 신호에 의해 유도된 DC의 성숙은 감염을 제거하기 위해 필요한 적응 면역 반응의 개시에서 중요한 단계이다. 감염, 아폽토시스 및 조직 손상 동안 생성되는 oxPL은 CD40, CD80, CD83 및 CD86 등의 공-자극 분자의 TLR3 및 TLR4-매개 유도 및 사이토카인 IL-12 및 TNF의 분비를 차단함으로써 DC의 활성화 및 성숙을 방해한다는 것이 입증되었다. 그 결과, oxPAPC는, 항원-특이적 T 세포의 증식 및 이펙터 사이토카인 생산을 유도하는 능력의 감소에 의해 나타난 바와 같이, TLR 리간드에 의해 활성화된 DC의 공자극 활성을 현저하게 감소시켰다[참조: Bluml et al., 2005, J Immunol. 175:501-508]. DC 성숙의 차단에 의한 T 세포 기능에 대한 oxPL의 억제 효과에 추가하여, oxPL은 또한 T 세포의 이펙터 기능을 직접 억제하는 것으로 나타났다. 다양한 종류의 oxPL의 존재하에 자극된 1차 인간 T 세포는, 이들의 천연 비-산화 대응물에서는 없었지만, 증식 능력의 손상, MHC-II, CD25 및 CD69 등의 활성화 마커의 상향조절, IFNγ, IL-2 및 IL-10 등의 Th1 이펙터 사이토카인의 분비, 및 항원-양성 표적 세포에 대한 세포독성 활성을 나타냈다[참조: Seyerl et al., 2008, Eur J Immunol. 38:778-787].

종합하여, 이론에 얽매이지 않고, 이들 관찰에 기초하면, COVID-19 환자의 폐 및 SARS-CoV 및 H5N1 등의 기타 중증 폐 병원체에 감염된 환자에서 형성된 oxPL 및 OSE는, 마크로파지 및 호중구의 식세포 능력, DC의 성숙 및 이들의 공-자극 활성, 및 병원체-특이적 세포독성 T 세포의 Th1-유형 반응 및 이펙터 상의 발생을 포함하는 중요한 면역 세포 기능을 억제하고, 이에 의해 바이러스의 확산, 중증 폐렴 및 급성 폐 부전의 발증에 기여하는 것으로 이해된다.

상기에서 상세히 설명한 바와 같이, 중요한 면역 세포 기능에 대한 oxPL 및 OSE의 이러한 억제 효과를 방해하기 위해, IgM 및/또는 IgA 이소형의 OSE-특이적 항체 또는 이러한 항체가 풍부한 혈장 풀의 발병 환자로의 투여는, 본 발명과 관련하여, 항바이러스 면역 반응 및 병원체의 클리어런스를 회복시킨다.

OxPL 및 OSE가 패혈증 및 급성 손상의 상황에서 항염증 및 보호 효과를 나타낸다는 것이 당업자에게 알려져 있기 때문에, 본 발명의 발견은 더욱 놀라운 것이다.

실제로, 상기에서 이미 언급한 바와 같이, oxPL과 OSE의 항염증 효과는 농도에 의존하고, (1) 바이러스 및 세균 유래의 염증 매개체에 의해 유도된 "무균" 급성 폐 손상의 억제[참조: Ma et al., 2004, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 286:808-816, Nonas et al., 2006, Am J Respir Crit Care Med. 173:1130-1138]; (2) 유해한 인공 호흡기에 의해 유발된 "무균" 급성 폐 손상의 억제(따라서, 1-팔미토일-2-(5,6-에폭시이소프로스탄 E2)-sn-글리세로-3-포스포릴콜린(PEIPC)- 및 1-팔미토일-2-(5,6-에폭시사이클로펜테논)-sn-글리세로-3-포스포릴콜린(PECPC)-유사 안정화 화합물은 허혈/재관류 등의 기타 "무균" 폐 손상 모델에서 유익한 효과를 나타낼 수 있다)[참조: Nonas et al., 2008, Crit Care. 12:R27]; 및 (3) 급성 괴사성 췌장염에 의해 유도된 2차 급성 폐 손상에서 폐 혈관 누출 및 염증의 억제[참조: Li et al., 2007, Pancreas. 35:27-36]을 포함한다.

이러한 항염증 효과는 내피 장벽 기능의 증강[참조: Birukov et al., 2004, Circ Res. 95:892-901; Birukova et al., 2007, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 292:924-935], 항염증 유전자의 상향조절, 염증유발성 유전자 발현의 억제를 유도하는 신호전달 경로의 유도[참조: Eligini et al., 2002, Cardiovasc Res. 55:406-415; Ma et al., 2004, Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol.286:808-816, Otterbein et al., 2000, Nat Med. 6:422-428, Otterbein et al., 2003, Nat Med. 9:183-190], 및 염증유발성 생성물과 숙주 세포와의 상호작용의 방지[참조: Bochkov et al., 2002, Nature. 419:77-81; Walton et al., 2003, Arterioscler Throm Vasc Biol. 23:1197-1203]에 의해 매개된다. 그러나, SARS-CoV-2, SARS-CoV 및 H5N1 인플루엔자 바이러스 등의 폐 병원체 감염에 의해 유발된 ARDS를 경험하는 환자에서, 우리는, ROS의 형성에 관여하는 복수의 구조 및 산화 스트레스가, 본 발명에 기재된 생물학적 효과를 촉진하기에 충분한 고농도까지 oxPL 및 OSE가 축적하는 발병 환자의 폐에 소집한다는 것을 제안한다.

본 발명에서 상기 기재된 바와 같이 염증 조직에서 생성된 oxPL 및 OSE의 비효율적 항-염증 클리어런스를 유발하는, IgM 및 가능하게는 IgA 이소형의 충분한 양의 oxPL- 및 OSE-특이적 천연 항체의 결여에 추가하여, 이론에 얽매이지 않고, 이 놀라운 관찰은, 효율적 항미생물 면역 반응에 통상 중요한 기타 면역 세포 기능을 조절할 가능성을 열어 주고, 최종적으로 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항한다.

보다 구체적으로, 본 발명의 놀라운 발견을 알게 되면, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환에서 기타 몇몇 메커니즘이 염증유발성 농도까지 ROS의 대량 형성 및 oxPL 및 OSE의 축적에 기여할 수 있다는 것이 용이하게 명백해진다.

이러한 메커니즘에는 하기가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다:

(a) 안지오텐신-전환-효소 2(ACE2) 수용체 표면 발현의 바이러스-유도 하향조절;

(b) 최종 당화-산물 수용체(RAGE, AGER라고도 함)에 대한 리간드 축적 및 결과적으로 RAGE 신호전달의 증강; 및

(c) 마크로파지-수용체와 콜라겐-구조(MARCO) 수용체를 발현하는 보호 CD169+CD206+ 폐포 마크로파지의 고갈.

따라서, 이러한 메커니즘은 본 발명과 관련하여 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에서 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 사용을 보완할 가능성을 제공하고, 이에 의해 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 추가로 대항한다는 것이 즉시 명백하다.

산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 (추가로) 대항하는 이러한 추가 메커니즘 및 가능한 방법은 각각 도 2A 및 도 2B에 도시되어 있다.

따라서, 상기 정의된 제1 및 제2 측면의 바람직한 실시양태에서,

대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는

(a) 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절하는 화합물; 및/또는

Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제;

(b) 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물 및/또는 RAGE의 억제제/길항제; 및/또는

(c) 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 및/또는 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 화합물, 바람직하게는 아지트로마이신

과 조합하여 투여된다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은 본 발명에 따른 치료에 상승 효과를 발휘한다.

이러한 병용 요법의 바람직한 실시양태와 관련하여, 본 발명의 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같이 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물의 문맥에서, 상기 기재된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

(a) 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절하는 화합물; 및/또는

Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제;

(b) 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물 및/또는 RAGE의 억제제/길항제; 및/또는

(c) 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 및/또는 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 화합물, 바람직하게는 아지트로마이신

과의 병용 요법이 하기에서 보다 상세히 설명된다.

(a) 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절하는 화합물; 및/또는 Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제

ACE2 수용체는, SARS-CoV-2 및 SARS-CoV가 숙주 표적 세포에 침입하는 기능적 수용체로 동정되었다. ACE2는 폐 조직, 특히 II형 폐포(AT2) 상피 세포에서 고도로 발현되고, 기관지 및 기관 상피 세포에서는 중등도로 발현되고, 심장, 신장 및 소장의 상피 세포에서는 낮게 발현된다. 또한, ACE2 발현은, 통상, 1차 인간 상부 기도 상피 세포에서 I형 및 II형 인터페론에 의한 바이러스 감염에 반응하여 상향조절된다.

그러나, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환, 바람직하게는 SARS-CoV-2에서, 감염은 현저한 인터페론 반응을 유도하지 않는다는 점에서 상이하다. 따라서, 이론에 얽매이지 않고, 이것이 전체적으로 ACE2 수준의 저하를 설명하는 것으로 이해된다.

ACE2는 ACE와 매우 유사하며, 양쪽 수용체는 동맥 혈압, 전해질 항상성, 심혈관 조절 및 리모델링을 제어하는 레닌-안지오텐신-시스템의 조절에서 서로 상이한 중요한 역할을 한다. ACE는 안지오텐신-I(Ang-I)를 절단하여 안지오텐신-II(Ang-II)를 생성하는 반면, ACE2는 절단에 의해 Ang-II를 불활성화하여 Ang(1-7)을 생성하고, 시스템의 음성 조절인자이다. Ang-II는 2개의 하류 수용체, 안지오텐신 II형-1 수용체(AT1R) 및 안지오텐신 II형-2 수용체(AT2R)에 결합하는 반면, Ang(1-7)은 MAS 수용체(MAS1 프로토-종양유전자, GPCR)에 결합한다. AT1R을 통한 신호전달은 혈관 수축, 비대, 섬유증 및 염증을 유발하는 반면, AT2R 및 MAS 수용체는 모두 혈관 확장, 항섬유화 및 항염증 기능을 촉진한다.

유전자 변형 마우스를 사용하여, ACE2 및 AT2R은 산 흡인 또는 패혈증에 의해 유발된 중증 급성 폐 손상으로부터 마우스를 보호하는 반면, ACE, Ang-II 및 AT1R을 포함한 레닌-안지오텐신-시스템의 다른 성분은 질환의 병인을 촉진하고, 폐 혈관 투과성 및 폐 부종을 유도하고, 폐 기능을 손상시키는 것으로 밝혀졌다[참조: Imai et al., 2005, Nature. 436:112-116].

이에 비추어 볼 때, SARS-CoV-2 및 SARS-CoV에 대한 침입 수용체로서의 이용으로 인한 ACE2의 세포 표면 발현의 소실은 바이러스 복제에 의해 매개되는 유해한 영향에 추가하여 폐 손상의 병리에 기여한다.

따라서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 화합물; 및/또는 Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하기 위한 추가 수단이다.

본 발명의 문맥에서, "조절된(즉, 증가 또는 감소된) 발현"은 바람직하게는 소정 세포 및/또는 생물에서 ACE2 수용체의 발현 및/또는 활성이 각각의 화합물의 부재하에 상응하는 세포 및/또는 생물보다 각 화합물의 존재하에 적어도 10%, 바람직하게는 적어도 20%, 더 바람직하게는 적어도 30% 또는 50%, 보다 더 바람직하게는 적어도 70% 또는 80%, 특히 바람직하게는 적어도 90% 또는 100% 이상(또는 더 낮음)인 것을 의미한다. 보다 더 바람직한 실시양태에서, 발현의 증가(또는 감소)는 적어도 150%, 적어도 200% 또는 적어도 500%일 수 있다. 특히 바람직한 실시양태에서, 발현은 각 화합물의 부재하의 상응하는 세포 및/또는 생물보다 적어도 10배, 더욱 바람직하게는 적어도 100배 및 보다 더 바람직하게는 적어도 1000배 이상(또는 더 낮음)이다.

ACE2 수용체의 "감소된" 발현이라는 용어는 또한 상응하는 세포 및/또는 생물이 상응하는 ACE2 수용체를 발현하지 않기 때문에, 상응하는 발현이 0이 되는 상황을 포함한다. ACE2 수용체의 "증가된" 발현이라는 용어는 ACE2 수용체가 과발현되고, 과발현된 ACE2 수용체의 농도가 바람직하게는 전체 세포 및/또는 생물 단백질의 적어도 5%, 10%, 20%, 30% 또는 40%인 상황을 포함한다.

세포 및/또는 생물에서 소정 ACE2 수용체의 발현 수준을 측정하는 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 일 실시양태에서, 발현 수준의 측정은 상응하는 단백질의 양을 측정함으로써 수행된다. 상응하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 웨스턴 블롯, ELISA 등을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 발현 수준의 측정은 상응하는 RNA의 양을 측정함으로써 수행된다. 상응하는 방법은 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, 노던 블롯을 포함한다.

실제로, ACE2 결합에 관여하는 중요한 바이러스 단백질인 정제된 SARS-CoV 스파이크(S)-단백질의 복강내 투여에 의해, 산 흡인 처리된 마우스의 폐에 S-단백질이 축적되는 것으로 나타났다. 이는 ACE2 발현의 하향조절을 유도하고, 이에 의해 폐 탄성, 혈관 투과성 및 부종 형성의 증가에 의해 평가되는 바와 같이, 폐 실질의 병리학적 변화를 증가시켰다. 특히, 이들 마우스의 폐 조직에서는, S-단백질-유도 ACE2의 하향조절 및 특정 억제제인 로사르탄에 의한 AT1R 신호전달의 차단으로 인해 Ang-II 수준이 유의하게 증가하고, 급성 폐 손상 및 폐부종의 중증도가 현저히 감소되었다[참조: Kuba et al. , 2005, Nat Med. 11:875-879]. 유사하게는, ACE2 발현은, 감염되지 않은 대조군과 비교하여, SARS-CoV에 감염된 마우스의 폐 균질액에서 하향조절되었다. 이러한 결과를 뒷받침하기 위해, 소규모 사례 연구에서는, Ang-II의 혈장 수준이 현저하게 상승했고, COVID-19 환자의 바이러스 부하 및 폐 손상의 중증도와 선형적으로 연관되어 있다고 보고했다[참조: Liu et al., Sci China Life Sci. 2020; 63:364-74]. 흥미롭게도, 상승된 혈청 Ang-II 수준은 H5N1에 감염된 환자에서도 검출되었고, H5N1은 ARDS 유도 및 호흡 부전의 유도로 인해 인간에서 최대 70%의 치사율을 유발하는 인플루엔자-A 바이러스이다. 마우스에 대한 추가 분석에서는, H1N1 바이러스가 아닌 H5N1 감염이 폐 조직에서 ACE2 발현의 하향조절을 유발하고, Ang-II 혈청 수준이 중증 ARDS를 경험하는 동물에서 유의하게 증가하는 것으로 나타났다[참조: Zhou et al., 2014, Nat Comm. 5: 3594]. H5N1 인플루엔자 바이러스는 숙주 세포를 감염시키기 위한 침입 수용체로서 ACE2를 이용하는 것으로 기재되지 않았기 때문에, 이 발견은 놀라운 것이고, 이것은 H1N1 인플루엔자 바이러스가 아닌, H5N1 인플루엔자 바이러스만이 감염된 마우스의 폐 조직에서 ROS의 생성 및 oxPL의 축적을 유도하고, 폐 손상의 병리를 악화시킨 이유를 설명할 수 있다[참조: Imai et al., 2008, Cell. 133:235-249].

폐 손상의 조절에서 ACE2의 중심적 역할은 ACE2 결핍 마우스를 사용하여 추가로 강조되었고, 이는 ACE2의 결핍이 산 흡인, 패혈증 또는 H5N1에 의해 유발된 급성 폐 손상의 중증도를 증가시켰음을 나타내는 반면, 가용성 재조합 인간 ACE2의 투여가 보호 효과가 있었다. 역으로, ACE의 유전적 결실은 중증 폐 손상으로부터 마우스를 보호했다.

ACE2가 폐 부종 및 급성 폐 부전의 중증도에 대한 주요 음성 조절 인자인 것을 고려하면, ACE2의 하향조절 및 Ang-II 수준의 증가, 상이한 병원체-유도 폐 질환의 병리에 관여하는 공통 분자 메커니즘이 본 발명에서 제안된다. 흥미롭게도, Ang-II는 다양한 세포 유형에서 니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트-옥시다제(NAD(P)H)의 발현과 활성화의 효율적 자극인자이고, AT1R 활성화의 주요 효과 중 하나는 ROS의 생성이다.

따라서, 본 발명에서는 SARS-CoV-2, SARS-CoV 또는 H5N1에 감염된 환자에서 관찰된 Ang-II 농도의 상승이 AT1R 활성화를 통해 ROS의 형성을 지속적으로 유도하고, 이는 차례로 세포-막 및 계면활성제에 존재하는 인지질의 과산화반응을 활성화하여, 폐 및 감염 환자의 기타 염증 조직에 축적하는 oxPL 및 OSE를 생성하는 것을 제안한다. 본 발명에 기재된 바와 같이, 예를 들면, IgM 및 가능하게는 IgA 이소형의 oxPL 및 OSE-특이적 천연 항체의 혈청 수준의 감소로 인해, oxPL 및 OSE의 항염증성 클리어런스에 결함이 있는 경우, oxPL 및 OSE는 본 발명에 기재된 생물학적 효과를 촉진하기에 충분한 농도까지 축적한다.

따라서, 수용체 ACE 및/또는 AT1R의 발현을 특이적으로 억제 및/또는 감소시키고/거나 ACE2의 발현을 증가시키거나, Ang-II의 ACE2-유도 대사를 증강시키는 약물과 조합하여, oxPL 및 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체, 또는 이러한 항체가 풍부한 혈장 풀의 투여는, COVID-19 환자 및 SARS-CoV 및 H5N1 등의 기타 중증 폐 병원체에 감염된 환자에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해하는 부가적 또는 심지어 상승적 효과를 갖는 것으로 제안된다.

따라서, 본 발명의 제1 측면 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같이 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물의 병용 요법에서 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절하는 화합물; 및/또는 Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하는 추가 수단이다.

당업자는, 본 발명 및 상기에 따라 목적하는 능력을 갖는, 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 적절한 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 화합물을 선택할 수 있는 위치에 있다.

예로서, 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제 및/또는 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제는 라미프릴, 리시노프릴, 올메사르탄, 텔미사르탄, 로사르탄 및 아질사르탄으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

예로서, ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 화합물은 티아졸리딘디온 및 이부프로펜으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 화합물은 당업자에게 공지되어 있고, 본 발명에 따라 ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 화합물은 특정 화합물로 한정되지 않는다. 오히려, 당업자는, 상기 기능적 능력을 갖는 한, ACE2 수용체의 발현을 조절(즉, 증가 또는 감소)하는 적합한 화합물을 선택할 수 있는 위치에 있다.

실제로, 수용체 ACE(예: 라미프릴, 리시노프릴) 또는 AT1R(예: 올메사르탄, 텔미사르탄, 로사르탄, 아질사르탄)을 억제/길항하는 약물은 당해 기술분야에 공지되어 있고, 급성 및 만성 고혈압(hypertension)의 조절, 좌심실 기능장애(left ventricular dysfunction) 및 심부전(heart failure)의 치료, 고혈압 또는 당뇨병(diabetes) 환자의 신증(nephropathy)의 예방 및 치료에 임상적으로 광범위하게 사용되고 있다. 마찬가지로, ACE2 발현 수준은 티아졸리딘디온 또는 이부프로펜에 의해 증가될 수 있고, ACE2 발현의 상향조절은 Ang-II 수준을 감소시켜 oxPL 및 OSE의 축적의 감소에 기여한다. 따라서, 본 발명에서는, ACE2 발현을 상향조절하는 약물은 바이러스 감염이 해소된 후기 COVID-19의 oxPL 또는 OSE를 표적화하는 천연 IgM 및/또는 IgA 항체와의 병용 요법에 적합하다고 제안한다.

고혈압 및 심혈관 질환을 갖는 환자는 ACE 및/또는 AT1R 억제제로 치료될 가능성이 높고, 이 환자 모집단은 SARS-CoV-2에 감염되면 높은 치사율을 나타내기 때문에, 이러한 약물의 투여가 COVID-19의 이환율과 사망률을 악화시킬 수 있다는 개념이 제기되어 있다. 이러한 개념은 복수의 AT1R 억제제(예: 올메사르탄, 텔미사르탄, 로사르탄, 아질사르탄)가 심혈관 질환의 동물 모델에서 ACE2 mRNA의 발현과 단백질 수준을 증가시키고, 이것이 이어서 SARS-CoV-2의 숙주 세포로의 침입 및 바이러스 복제를 촉진한다는 관찰에 근거한 것이다.

COVID-19의 임상 경과에 대한 ACE 및 AT1R 억제제의 효과를 분석하기 위해, 112명의 환자를 등록한 후향적 단일-센터 분석에서는, 이러한 약물의 사용은 심혈관 질환을 갖는 COVID-19 환자의 사망률에 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 실제로, 올메사르탄으로 전처리한 마우스는 산 흡인 및 SARS-CoV S-단백질에 의해 유발된 급성 폐부종의 형성 및 폐 손상의 감소를 나타냈고, 이는 폐 손상의 중증도에 대한 로사르탄의 제안된 보호 효과와 일치한다.

레닌-안지오텐신 조절제에 의한 COVID-19 환자의 치료가 유익한 영향 또는 유해한 영향을 미치는지 여부를 해명하기 위해, 입원을 필요로 하는 환자(NCT04312009) 및 입원을 필요로 하지 않는 환자(NCT04311177)의 사망률 및 입원에 대한 로사르탄의 효과를 조사하기 위해, 다시설, 이중맹검, 위약 대조군, 랜덤화화 시험이 현재 수행되고 있다. 재조합 인간 ACE2는 산 흡인, SARS-CoV S-단백질 또는 H5N1 감염에 의해 유발된 급성 폐 손상에 대한 동물 모델에서 유익한 효과를 나타냈기 때문에, COVID-19 환자의 치료를 위한 이의 사용은 랜덤화, 대조군, 파일럿 임상 연구(NCT04287686)에서 시험되었다. 그러나, 이 연구는, 이유가 아직 불명확하기 때문에, 2020년 3월 17일에 취하되었다.

본 발명에서 기재된 바와 같이, SARS-CoV-2, SARS-CoV 및 H5N1 인플루엔자 바이러스에 의한 폐 손상의 병리에 관여하는 분자적 메커니즘에 기초하여, 본 발명에서는, oxPL- 및 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체, 또는 이들이 풍부한 혈장 풀을 인간 재조합 ACE2와 조합시킬 수 있음이 제안된다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 본 발명에 따른 치료에 상승효과를 발휘하고, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 상승 효과를 발휘한다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같이 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 ACE2, 바람직하게는 인간 ACE2 및 보다 바람직하게는 인간 재조합 ACE2의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하는 추가 수단이다.

실제로, 재조합 ACE2의 치료적 용도는, 예를 들면, 문헌[참조: Monteil et al., 2020, Cell. 181, 1-9; Imai et al., 2005, Nature. 436, 112-116; Zhou et al, 2014, Nat Comm. 5:3594 및 Khan et al., 2017, Critical Care. 21:234]에 기재되어 잇다.

인간 ACE2는 당업자에게 공지되어 있고, 서열번호 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

그러나, 본 발명과 관련하여, 본 발명은, 서열번호 18로 제시되는 아미노산 서열을 갖는 특정 인간 ACE2 뿐만 아니라, 서열번호 18에 대해 적어도 70%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 ACE2의 투여로 한정되지 않고, 여기서 상기 ACE2는 안지오텐신-II를 Ang(1-7)로 절단하는 활성을 갖는다.

보다 바람직한 실시양태에서, ACE2는, 안지오텐신-II를 Ang(1-7)로 절단하는 활성을 갖는 서열번호 18의 상기 서열과 적어도 n% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 n은 10 내지 100, 바람직하게는 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99의 정수이다.

서열 동일성의 결정과 관련하여, 상기 기재된 바와 동일하게 적용된다.

안지오텐신-II를 Ang(1-7)로 절단하는 활성에 대한 ACE2(및 이의 변이체)의 활성을 결정하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있다.

상기에서 기재된 바와 같이, ACE2는 Ang-II를 Ang(1-7)로 전환하고, 이에 의해 AT2R 및 MAS 수용체가 활성화되고, 이는 염증, 혈전증, 폐 손상 및 섬유증을 감소시킨다. Ang(1-7)은 또한 NAD(P)H 옥시다제(NOX)의 활성화를 방지하는 것으로 밝혀졌고, 항산화 효과를 갖는다. MAS 수용체의 활성화는 또한, MAS 수용체의 소분자 작용제인 BIO101을 개발한 바이오피티스(Biophytis)사에 의해 근감소증(sarcopenia)에 대한 치료법으로 제안되었다. 현재, COVID-19 환자에서 BIO101을 사용한 임상 2/3 상이 실시되고 있다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 본 명세서에 정의된 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하기 위한 추가 수단이고, 이에 의해 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 감소시킨다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환를 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 본 발명에 따르는 치료에 대한 상승적 효과를 발휘한다.

안지오텐신(1-7)(또는 Ang(1-7))은 펩티드 서열(Asp-Arg-Val-Tyr-Ile-His-Pro)를 갖는 레닌-안지오텐신 시스템(RAS)의 활성 헵타펩티드로서 당업자에게 공지되어 있다. 안지오텐신(1-7)은, RAS의 주요 이펙터 성분인 안지오텐신 II(Ang II)에 기여하는 것들과는 빈번하게 반대되는 기능을 갖는, 심장, 혈관, 신장 등의 심혈관 기관에서 중요한 역할을 하는 혈관 확장제이다. Ang(1-7)에는 항산화 및 항염증 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. Ang(1-7)은, 내피 및 뉴런 일산화질소 신타제 효소의 발현을 증가시킴으로써 자발적 고혈압 랫트의 심근세포에서 보호 역할을 하여, 일산화질소 생산의 증가를 유도한다. 최종적으로, Ang(1-7)은 동물 모델에서 항부정맥 효과를 유발한다. 혈관에서, Ang(1-7)은 프로스타노이드 및 일산화질소 등의 혈관 확장제의 방출을 유도한다.

당업자는 본 발명 및 상기에 따라 목적하는 능력을 갖는 AT2R 또는 MAS-수용체의 적절한 작용제를 선택할 수 있는 위치에 있다.

예로서, Ang(1-7) 또는 AT2R 또는 MAS-수용체의 작용제는 하기로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다:

AT2R-작용제: Ang(1-7), CG42112A 및 dKcAng(1-7)(LP2-3) 등의 펩티드 작용제, β-아미노산 치환된 안지오텐신 II, 안지오텐신 II에 도입된 감마-턴 모방체; 화합물 21 등의 소분자 작용제; 및 작용성 모노클로날 항체.

MAS-수용체 작용제: Ang(1-7), TXA127(Ang(1-7)), 환상 Ang(1-7), Ang(1-6)-O-Ser-Glc-NH2(PNA5) 등의 펩티드 작용제, 하이드록시프로필-β-사이클로덱스틴(HPβCD)/Ang(1-7), CGEN-856 및 CGEN-857; 사르코네오스(BIO101) 및 AVE0991 등의 소분자 작용제; 및 작용성 모노클로날 항체.

(b) 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물 및/또는 RAGE의 억제제/길항제

최종 당화 산물 수용체(RAGE)는 염증유발성 PRR이고, 다수의 염증성 질환의 병인에 관여하고 있다. RAGE는 막-결합 RAGE(mRAGE)와 가용성 RAGE(sRAGE)의 2개의 주요 형태로 체내에 존재한다. mRAGE는 리간드 결합에 반응하여 신호전달 활성을 갖는 반면, sRAGE는 RAGE 리간드를 격리하여 수용체로서 기능하고, 이에 의해 mRAGE 신호전달 및 염증 반응에 대항한다. 기준선의 성체 조직에서, RAGE는 구성적으로 폐에서 고도로 발현되고, 주로 유형 1 폐포 상피(AT1) 세포의 기저막에 국재화된다. 폐 상피에서의 발현에 추가하여, RAGE 발현은 혈관 평활근 세포, 기도 평활근 세포, 내피 세포, 뉴런 및 마크로파지, DC, 호산구, T 세포 및 B 세포 등의 면역 세포에서도 관찰되었다. 그러나, 다수의 세포와 조직은 RAGE 리간드의 국소적 이용가능성에 의해 활성화된 경우에만 RAGE 발현을 유도한다. RAGE는, 최종 당화 산물(AGE), S100/칼그래뉼린 단백질, 고이동성 그룹 박스 1 단백질(HMGB1), DNA 또는 RNA, OSE 및 포스파티딜세린을 포함하여 DAMP로 분류되는 다양한 내인성 리간드에 결합할 수 있다.

AGE는, 알도스 당(통상 글루코스)의 카보닐 그룹과 단백질 또는 인지질의 아미노 그룹 사이의 비효소적 메일라드 반응의 결과이고, 높은 혈당 수치로 인해 당뇨병 환자에서 AGE는 증가된 수준으로 발견된다. 특히, 연령과 산화 스트레스도 AGE 수치를 상승시킨다. S100 단백질은 염증 부위에 국재화되는 작은 칼슘 결합 단백질이고, 여기서 활성화된 염증 세포에 의해 방출되고, 다수의 S100 단백질은 다양한 조직에서 RAGE를 활성화하여 염증 반응을 개시할 수 있다. HMGB1은 통상 크로마틴 리모델링에 관여하는 핵 단백질이지만, 이는 손상된 세포로부터 염증유발성 알라민으로서 수동적으로 방출될 수도 있다. 또한, 호중구, 마크로파지, 천연 킬러 세포 및 DC는 종종 DNA와 관련된 HMGB1을 활발하게 분비할 수 있다. 호중구는 히스톤과 HMGB1에 의해 결합된 탈응축된 DNA로 구성된 NET(호중구 세포외 트랩)을 분비한다.

호중구에 의한 NET의 분비인 NETosis는 중증 COVID-19 경과에서 증가하는 것으로 제안되었고, NETosis 생성물(예: 무세포 DNA)의 혈청 농도는 COVID-19 중증도와 상관관계가 있다[참조: Middleton et al., 2020, Blood. doi: 10.1182/blood.2020007008]. RAGE의 양성 공동과 핵산 골격의 음전하 사이의 정전기적 상호작용을 통해, RAGE는 또한 DNA 또는 RNA에 직접 결합하여 세포 내로의 흡수를 촉진하고, 염증 반응을 촉진할 수 있다. RAGE의 활성화는 지속적 핵인자 카파 B(NFκB) 신호전달을 유발하고, RAGE 신호전달의 거대 부산물은 ROS의 과도한 형성이며, 이는 또한 NFκB 활성화에 기여하고, 혈관 세포 부착 분자 1(VCAM-1) 발현의 증가, oxPL 및 OSE의 생성, 또는 세포 아폽토시스 등의 다른 염증 메커니즘을 촉진한다.

세포외 환경에서 RAGE 리간드의 존재는 RAGE 발현을 상향조절하는 것으로 나타났고, 이는 NFκB가 RAGE를 코딩하는 유전자에 직접 결합하여 RAGE 발현을 촉진하고, 염증 신호전달 캐스케이드의 추가 증폭을 유도할 수 있다는 사실에서 유래한다. 중요하게도, RAGE 리간드는, 결합하여 RAGE를 통해 신호전달하는 경우, 추가 신호전달을 방지하기 위해 분해 또는 변경되지 않는다. 따라서, 증강된 RAGE 신호전달은, ROS 및 산화 스트레스의 생성으로 인해, AGE 및 OSE 등의 보다 많은 RAGE 리간드를 생성하고, 리간드가 축적됨에 따라, 이들은 염증 영역에 풀링함으로써 염증 반응을 지속적으로 증폭시키고, 이에 의해 다양한 호흡기 질환에서 만성 병리학적 염증을 유도할 수 있다.

폐 손상의 병태에서 RAGE의 중심적 역할은, RAGE-결핍 마우스가 과산소증-유도 급성 폐 손상 및 사망으로부터 보호된다는 관찰에 의해 뒷받침되고, 이는 손상되지 않은 RAGE 신호전달이 폐 염증 및 호흡 부전을 촉진하는 것을 시사한다. RAGE 결핍 마우스는 또한 그람 음성(E.coli) 또는 그람 양성(S.pneumoniae) 세균 챌린지 후의 폐 손상으로부터 부분적으로 보호되었다.

인간에서, 손상된 AT1 세포로부터의 HMGB1, S100A12 및 sRAGE의 전신 및 폐포 수준이 ARDS 환자에서 증가하고, 혈장 sRAGE 수준은 폐 손상의 중증도 및 사망률의 증가와 상관관계가 있다. RAGE, NFκB, ROS 사이의 파괴적 양성 피드백 루프와, 보다 많은 RAGE 리간드 생성은, 대체 스플라이싱 이벤트를 통해 손상된 세포로부터 sRAGE의 방출에 의해, 또는 ADAM10 또는 매트릭스 메탈로프로테이나제 9에 의한 mRAGE의 단백질분해 절단에 의해 약화될 수 있다. 흥미롭게도, 마우스에서, mRAGE는 또한 백혈구 상의 인테그린 Mac-1(aMb2, CD11b/CD18)에 결합하여, 염증 조직으로의 동원을 촉진하는 것으로 나타났다. 마우스 B1 세포가 구성적으로 Mac-1을 발현하고 인플루엔자 바이러스 감염에 의해 폐 조직에서 B1 세포가 동원되어 보호 천연 IgM 항체를 분비한다는 점을 고려하면, 염증 조직으로의 B1 세포 동원은 활성화된 RAGE에 의해 유도될 수 있다고 생각할 수 있다. 추가로, AGE, OSE, DNA 또는 RNA 및 포스파티딜세린 등의 다수의 RAGE 리간드는 마우스 및 인간에서 B1 세포-유래 천연 항체의 충분히 기재된 표적이다. 종합하면, 이러한 관찰은, RAGE가 염증 조직의 염증유발성 면역 반응에서 중심적 역할을 한다는 것을 시사하고, 이는, AGE, DNA/RNA, OSE 및 아폽토시스 세포 등의 RAGE-리간드가, 예를 들면, IgM 및 가능하게는 IgA 이소형의 천연 항체의 감소된 수준 때문에, 효율적으로 제거될 수 없는 상황에서 추가로 악화될 수 있다.

따라서, 본 발명에서는, RAGE 리간드의 축적이 산화 스트레스의 증가, 고령 및 당뇨병 등의 병존 질환으로 인한 AGE 축적, 및 통상 RAGE 리간드의 항염증 클리어런스에 기여하는 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 수준의 감소의 증거를 나타내는 중증 COVID-19 환자에서 병인 및 ARDS를 유도하는 것을 제안한다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같은 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하는 추가 수단이고, 이에 의해 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 감소시킨다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 본 발명에 따른 치료에 상승적 효과를 발휘한다.

당업자는 본 발명에 따라 및 상기에 따라 목적하는 능력을 갖는 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화시키는 적절한 화합물을 선택할 수 있는 위치에 있다.

예로서, 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물은 나파모스타트 메실레이트(NM), 가벡세이트 메실레이트(GM), 시벨레스타트, 아토르바스타틴, 심바스타틴, 메토트렉세이트(MTX), 알라게브리움(ALT-711), SYI-2074(ALT-2074) 및 파퀴니모드(ABR-215757)로 이루어진 그룹으로부터 선태될 수 있다.

최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물의 추가 예는 글리시리진(Glycyrrhizin; GL), 카베녹솔론(Carbenoxolone; CBX), 탄시논(Tanshinone) I, 탄시논 IIa, 크립토탄시논(Cryptotanshinone), 탄시논 IIa의 나트륨-설페이트-유도체(TSNIIA-SS), 에피갈로카테크닌-3-갈레이트(EGCG), 퀘르세틴(Quercetin), 리코펜(Lycopene), 나파모스타트 메실레이트(NM), 가벡세이트 메실레이트(GM), 시벨레스타트(Sivelestat), 아토르바스타틴(Atorvastatin), 심바스타틴(Simvastatin), 에틸 피루베이트(EP) 및 유도체, 메토트렉세이트(MTX), 알라게브리움(Alagebrium)(ALT-711), SYI-2074(ALT-2074), 크로몰린(Cromolyn), 파퀴니모드(Paquinimod)(ABR-215757) 및 타스퀴니모드(Tasquinimod)(ABR-215050) 등의 소분자; Box-A 단백질(HMGB1의 절단된 N-말단 도메인) 및 Box-A-산성 테일-융합 단백질 등의 재조합 단백질; S100P-유래 펩티드, 카르노신, 호모카르노신, 안세린, 글루타티온 등의 펩티드; 및 카복시메틸라이신(CML)-변형된 단백질, 지질 또는 기타 분자, 카복시에틸리신(CEL)-변형된 단백질, 지질 또는 기타 분자, 글루코스-변형된 단백질, 지질 또는 기타 분자, HMGB1 및 S100 단백질에 특이적인 모노클로날 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

또한, RAGE 리간드의 축적은 장기-지속성 자가면역 IgG의 발생에 기여할 수 있고, 이는 일부 COVID-19 회복기 환자에서 장기-지속성 증상을 설명한다.

실제로, 놀랍게도, 본 발명(실시예 22 및 도 3 참조)에서, 중증 COVID-19 환자에서 자가면역 항체가 생성되는 것이 발견되었다. 이러한 데이터는 천연 항체(nAB)의 결핍이 중증 COVID-19 경과 중에 자가면역 항체의 발생을 초래할 수 있음을 뒷받침한다. 이러한 자가면역 항체의 존재는 재발 또는 장기-지속성 COVID-19 질환 증상의 증거를 제공하고, 이는 본 발명과 관련하여, 충분한 수준의 천연 항체, 모노클로날 천연 IgM 또는 IgA의 제공, 또는 천연 항체가 풍부한 제제(예: Pentaglobin^®)가 자가면역 항체의 생성을 방지하거나, 또는 수준을 감소시킬 수 있다는 것을 뒷받침한다.

이 시나리오에서, oxPL- 및 OSE-특이적 IgM 및 가능하다면 IgA 항체, 또는 이들이 풍부한 혈장 풀의 투여는 RAGE 리간드의 저장 클리어런스를 촉진함으로써 파괴적 염증성 면역 반응에 대항하고, 이에 의해 RAGE에 의해 유도된 자가-증폭성 염증유발성 신호전달 캐스케이드의 해결에 관여하는 중요한 메커니즘을 나타낸다고 제안한다. 또한, 본 발명에서는, RAGE의 선택적 억제제 또는 길항제와 조합하여, 또는 항-HMGB1 항체 등의 RAGE 리간드에 특이적인 항체와 조합하여, oxPL- 및 OSE-특이적 IgM 및 가능하게는 IgA 항체, 또는 이들이 풍부한 혈장 풀의 투여는, 염증 조직에서 oxPL, OSE 및 기타 RAGE 리간드의 생성, 및 COVID-19 환자에서 oxPL, OSE 및 기타 RAGE 리간드의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해하는 상승적 효과를 갖는 것을 제안한다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같은 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 RAGE의 억제제/길항제의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이성 에피토프의 생성을 방해하고, 이에 의해 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 감소시키는 추가 수단이다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 본 발명에 따른 치료에 상승적 효과를 발휘한다.

당업자는 본 발명 및 상기에 따른 목적하는 능력을 갖는 RAGE의 적절한 억제제/길항제를 선택할 수 있는 위치에 있다.

예로서, RAGE의 억제제/길항제는 TTP488(Azeliragon) 및 유도체, FPS-ZM1 등의 소분자; 길항성 RAGE-특이적 펩티드; 및 길항성 RAGE-특이적 모노클로날 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.

(c) 과립구-마크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF) 및/또는 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 화합물, 바람직하게는 아지트로마이신

폐는, 상이한 해부학적 구획에 존재하는 2개의 주요 모집단, 간질(IM) 및 폐포 마크로파지(AM)를 포함하는 다수의 마크로파지를 포함한다.

AM은 통상 지질 대사의 중요한 조절인자인 퍼옥시좀 증식자-활성화 수용체 γ(PPARγ)를 발현하고, 이는 사이토카인 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF)에 의해 유도된다. TGFβ는 AM 발생 및 항상성에 필요한 또 다른 사이토카인이고, 2형 폐포(AT2) 상피 세포에서 분비되는 GM-CSF와는 대조적으로, AM에 의해 생성된 TGFβ 자체가 이들의 항상성을 뒷받침한다.

마우스 AM은, 폐에 파종하고, 출생 후에 GM-CSF, TGFβ 및 PPARγ의 영향으로 성숙 AM으로 분화하는 태아 단핵구로부터 유래한다. 축적된 증거는, 인간의 정상 상태의 폐에서, 마우스와 인간 사이에서 보존되는 GM-CSF 및 PPARγ의 중요한 영향하에서 AM이 자가-재생 능력에 의해 유지된다는 개념을 뒷받침한다. AM은 폐포의 내강에 위치하고, 여기서 가스 교환은 폐포-모세혈관 막에서 발생하고, 이들의 전략적 국소화에 의해, 식작용을 통해 병원체, 아폽토시스 세포 및 기타 공기 중 입자를 기도로부터 제거할 수 있고, 이는 생명 유지에 필요한 산소 섭취량을 유지하기 위해 불가결하다. AM은 TGFβ, 게다가 억제 수용체 등의 면역 관용을 촉진하는 몇몇 인자를 발현하고, 정상 상태에서 이들의 염증유발성 활성을 억제한다.

AM의 본질적 기능은 계면활성제를 이화하는 능력이고, GM-CSF 또는 PPARγ의 결핍, 따라서 AM의 결핍은 계면활성제 대사의 결함으로 인한 염증성 폐 질환을 초래한다는 것이다. AM이 계면활성제를 이화하는 능력은 SR-AI 및 콜라겐 구조를 갖는 마크로파지-수용체(MARCO) 등의 스캐빈저 수용체의 발현에 의존하며, 이는 계면활성제에 존재하는 oxPL에 결합하여 세포내 구획으로의 흡수를 촉진하고, 여기서 지질은 지방산 산화 경로에 의한 에너지 대사에 사용된다. 대조적으로, IM 및 단핵구-유래 마크로파지는 정상 상태의 조건에서 MARCO를 발현하지 않거나, 또는 훨씬 적은 정도로 발현하고, 해당작용에 의존하기 때문에, 에너지 대사에 지질을 사용하지 않는다. 계면활성제에 존재하는 oxPL의 AM-매개 클리어런스에 대한 MARCO의 중요성은 MARCO 발현을 결여하는 유전자 변형 마우스를 사용하여 입증되었다. 이들 마우스에서, 오존 노출은 계면활성제 중의 상이한 클래스의 oxPL을 과도하게 형성하여 염증 환경과 급성 폐 손상을 촉진하는 반면, MARCO-발현 야생형 마우스는 오존 주입에 의해 유도된 중증 폐 손상으로부터 보호되었다. 이 연구는 추가로 oxPL의 기관내 점적이 MARCO 결핍 마우스에서 상당한 호중구 유입을 유발했지만, 야생형 마우스에서는 효과가 없음을 나타냈고, 이는 MARCO 결핍 AM과 비교하여 정상 AM에 의한 oxPL의 흡수 개선과 일치한다[참조: Dahl et al., 2007, J Clin Invest. 117:757-764].

따라서, 이러한 결과는, 염증유발성 단핵구-유래 마크로파지 또는 호중구에 의해 매개되는 폐의 전형적 유해 반응에 관여하지 않고, AM이 MARCO를 통해 잠재적으로 염증유발성 oxPL을 내재화한다는 것을 나타낸다. 이러한 데이터는 또한 폐에서 AM의 감소된 수준이 SARS-CoV-2, SARS-CoV 또는 H5N1 인플루엔자 바이러스 등의 폐 병원체에 의한 감염에 의해 유발된 중증 폐 손상 및 ARDS의 발증에 대한 개체의 소인인 것을 시사한다.

실제로, COVID-19의 다양한 중증도를 갖는 환자 및 건강한 인간 기증자로부터 유래한 BAL 액에 함유된 면역 세포의 단일-세포 RNA-서열분석 분석에 의해, 고전적 MARCO 양성 AM이 중증 환자의 폐에서 고갈되어 있는 반면, AM은 경미한 COVID-19 사례 및 건강한 기증자로부터 유래한 BAL 액에 풍부한 것으로 나타냈다. 중증 COVID-19 병인을 갖는 환자의 BAL 액은, 경증 환자와 비교하여, 염증유발성 단핵구-유래 마크로파지 및 호중구의 비율이 더 높았고, DC 및 이펙터 T 세포의 비율이 더 낮았다. 추가로, 중증 COVID-19 환자의 폐 마크로파지는 경증의 COVID-19 사례의 BAL 액에 함유된 마크로파지와 비교하여, IL-6, IL-1β IL-8, TNFα, CCL2, CCL3, CCL4 및 CCL7 등의 염증성 사이토카인 및 케모카인을 현저히 높은 수준으로 발현했다.

따라서, AM의 결핍은, 치명적 ARDS의 발증에 관여하는 중증 COVID-19 환자의 폐에서 염증유발성 환경에 기여하지만, AM 고갈의 메커니즘은 불분명하다. AM은 AT1 및 AT2 폐세포에 매우 근접하고 낮은 수준의 ACE2 수용체를 발현하기 때문에, AM은 SARS-CoV-2에 직접 감염되어, 중증 COVID-19 환자에서 관찰되는 바와 같이 이들의 고갈을 유발할 수 있다. 이 개념을 뒷받침하기 위해, 인간 코로나바이러스 E229는 AM을 감염시키는 것으로 나타났고, 이는 CCL4, CCL5 및 TNFalpha 등의 염증유발성 사이토카인의 분비를 유도했다. 유사하게는, 미만성 폐포 손상은 AT2 폐세포의 SARS-CoV-1 감염, 및 입원 7일 후의 73세 남성의 폐에서 AM과 관련이 있었다[참조: Shieh et al., 2005, Hum Pathol. 36:303-309]. AT2 폐세포는 계면활성제의 주요 생산자이고, 이 세포 유형의 감염은 산화 스트레스의 증강 및 클리어런스 메커니즘의 결함으로 인해 더 높은 수준의 oxPL 및 OSE과 함께 계면활성제의 축적의 증가를 유발한다고 제안한다.

SARS-CoV-2는 S-매개 바이러스의 침입을 위해 동일한 침입 수용체(ACE2)와 세포 프로테아제(Furin, TMPRSS2)를 사용하기 때문에, SARS-CoV-2도 AT2 폐세포와 AM을 모두 감염시킬 가능성이 있고, 이는 염증성 수준의 oxPL 및 OSE를 수반하는 계면활성제의 축적의 증가, 세포 파편(cell debris) 및 이들의 감염의 결과로서 AM의 고갈에 기여한다고 제안된다.

SARS-CoV-2에 의한 직접 감염을 뒷받침하기 위해, CD169⁺ 림프절의 피막하 및 비장 변연부 마크로파지의 모집단은 SARS-CoV-2 침입 수용체 ACE2를 발현하고, 이들 마크로파지가 SARS-CoV-2 핵단백질(NP)을 함유하는 것으로 밝혀졌다[참조: Feng et al, 2020, medRxiv, doi: https://doi.org/10.1101/2020.03.27.20045427].

또는, 마우스에서 연구에 따르면, 전리 방사선, 바이러스 감염 및 LPS-유도 폐 손상 후 등의 복수 형태의 조직 손상 중에 AM 수가 감소하는 것으로 나타났다. 폐 상피에 대한 손상은 AM에서 인테그린 의존성 TGFβ 활성화의 소실을 유도하고, 이에 의해 AM의 감소를 유발할 수 있다고 제안되었다. COVID-19의 경우, SARS-CoV-2 복제로 인한 AT2 세포 수의 감소는 국소적 GM-CSF 생산을 억제하여 AM의 고갈을 유도한다고 제안된다.

또는, 마우스 연구에 따르면, AM은 노화가 진행됨에 따라 자연적으로 고갈되어 고령 마우스에서는 그 수가 감소하는 것으로 나타났고, 이는 AM 구획에 대한 HPSC-유래 단핵구의 기여가 연령 증가와 함께 착실하게 증가하는 것으로 제안되었다. AM의 증식 능력과 AM에 의한 아폽토시스 호중구의 클리어런스는 고령 마우스에서 손상된다. 추가로, 고령 마우스의 AM은 IFNg에 대해 불응성이고, 이는 식균된 병원체의 사멸 손상을 초래한다.

따라서, 폐 마크로파지의 연령-관련 변화는 폐에서 과도한 조직 손상을 유발하는 단핵구 및 호중구 염증과 결합된 숙주 방어 상태의 손상을 조장하는 것으로 보인다. 흥미롭게도, 마우스에서, 흉막 강에 존재하는 B1 세포는 감염에 대한 반응으로 폐로 이동하는 것으로 밝혀졌고, 여기서 이들은 IL-3 및 GM-CSF을 대량으로 생산하는 선천성 반응 활성제(IRA) B 세포라는 모집단을 생성하고, GM-CSF는 자가분비 메커니즘에서 천연 IgM 항체의 분비를 증강시킨다. 감염을 제거하기 위한 IRA B 세포의 중요성은 B 세포 제한 GM-CSF 결핍으로 인해 IRA B 세포를 결여하는 마우스를 사용하여 입증되었고, 이들 마우스는, 대조군 마우스보다 유의하게 높은 사망률로 표시되는 바와 같이, 특히 세균성 패혈증에 걸리기 쉽기 때문이고, 이는 현저한 염증, 사이토카인 방출 증후군의 유도, 패혈성 쇼크, 다기관 부전 및 사망을 유도하는 보다 중증 균혈증과 연관되어 있었다.

또한, 인간에서는, 표현형 CD5+CD19+CD20+IgM+IgD+를 갖는 GM-CSF 생산 IRA B 세포가 편도선에 존재하는 것으로 밝혀졌고, 이는 상부 호흡기의 감염에 대한 1차 방어선으로서 기능한다. B1 세포가 고령 마우스와 인간에서 감소한다는 점을 고려하면, 감염된 개체의 폐에서 GM-CSF 생산 IRA B 세포의 부재는 IgM 및/또는 IgA 이소형의 보호 천연 항체 수준을 감소시킬 뿐만 아니라, AM 고갈 및 폐 손상의 병인에도 기여할 수 있다. 이 모델을 뒷받침하기 위해, 최근 연구에서는, IL-3의 혈장 수준이 낮으면, SARS-CoV-2 감염시의 중증도 및 사망률의 증가와 관련되어 있다고 기재되어 있고, 이는 중증 COVID-19 환자에서는 IRA B 세포가 존재하지 않는 것을 나타낸다.

따라서, 본 발명에서는, COVID-19 환자에 대한 GM-CSF의 투여는 AM 모집단을 회복시키고, B1 및/또는 IRA B 세포에 의한 보호적 천연 IgM 및 가능하게는 IgA 항체의 생산을 회복시킨다는 점에서 유익한 효과를 가질 수 있다고 제안한다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같이 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 GM-CSF의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하는 추가 수단이고, 이에 의해 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 감소시킨다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 본 발명에 따르는 치료에 상승적 효과를 발휘한다.

GM-CSF는 당업자에게 공지되어 있고, 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는다.

그러나, 본 발명은, 본 발명과 관련하여, 서열번호 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 특정 GM-CSF의 투여로 한정되지 않고, 서열번호 19에 대해 적어도 70%의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 GM-CSF의 투여로 한정되지 않고, 여기서 상기 GM-CSF는 TF-1 세포의 증식을 유도하는 활성을 갖는다.

보다 바람직한 실시양태에서, GM-CSF는 서열번호 19의 상기 서열과 적어도 n% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 n은 10 내지 100의 정수, 바람직하게는 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99이고, 여기서 상기 GM-CSF는 TF-1 세포의 증식을 유도하는 활성을 갖는다.

서열 동일성의 결정과 관련하여, 상기 기재된 바와 동일하게 적용된다.

TF-1 세포의 증식을 유도하는 GM-CSF(및 이의 변이체)의 활성을 결정하기 위한 검정은 당해 기술분야에 공지되어 있다.

마찬가지로, 1438명의 입원 중의 COVID-19 환자를 아지트로마이신으로 치료하면, 유익한 효과가 나타났다. 아지트로마이신 치료된 환자의 위험 비는 0.56[95% CI, 0.26-1.21]였다. 아지트로마이신 치료된 환자의 사망률은, 치료받지 않은 환자(12.7%[95% CI, 8.3%-17.1%])와 비교하여, 약간 감소했다(10.0%[95% CI, 5.9%-14.0%])[참조: Rosenberg et al. , 2020, JAMA.323:2493-2502]. 명백하게 추가 연구가 필요하지만, 아지트로마이신은 폐포 마크로파지에 의한 아폽토시스 기관지 상피 세포의 식작용을 증강시키는 것으로 나타났기 때문에, 이러한 결과는 흥미로운 것이다[참조: Hodge et al., 2006, Eur Respir J. 28:486-495. Hodge et al., European Respiratory Journal, 2006].

따라서, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 상기 제1 및/또는 제2 측면 및/또는 상기 정의된 바와 같이 사용하기 위한 항체 또는 약제학적 조성물과의 병용 요법에서 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 화합물, 바람직하게는 아지트로마이신의 투여는 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 생성에 대항하는 추가 수단이고, 이에 의해 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 축적 및 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 감소시킨다.

바람직하게는, 이러한 병용 요법은, 즉 염증 조직에서 oxPL 및 OSE의 생성, 및 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 갖는 대상체, 바람직하게는 COVID-19 환자에서 oxPL 및 OSE의 염증유발성 및 면역조절 기능을 방해함으로써 본 발명에 따른 치료에 상승적 효과를 발휘한다.

당업자는, 본 발명에 따라 및 상기에 따라 목적하는 능력을 갖는 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 적절한 화합물을 선택할 수 있는 위치에 있다.

제3 측면 에서, 본 발명은, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 백신에 관한 것이고, 여기서 상기 백신은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제를 포함한다.

백신은, 일반적으로, 질환-유발 바이러스 또는 미생물과 유사한 적어도 하나의 약제를 포함하는 "면역원성 조성물"을 지칭한다. 따라서, 백신은 일반적으로 특정 감염성 질환에 대해 능동적 획득 면역을 통상 제공하는 생물학적 약제이다. 백신은 종종 약독화 또는 사멸된 형태의 미생물, 이의 독소 또는 이의 표면 단백질 중 1개로 제조된다. 약제는 신체의 면역 시스템을 자극하여, 병원체를 위협으로 인식하고, 파괴하고, 장래 조우할 수 있는 병원체와 관련된 미생물 또는 바이러스를 추가로 인식하여 파괴한다.

백신 또는 이의 면역원성 부분은, 일반적으로, 조성물에 대한 숙주의 면역학적 반응(세포성 또는 항체-매개 면역 반응)을 유발한다.

그러나, 본 발명의 특정 측면에서 사용되는 용어 "백신"은 동물 또는 대상체에서 (주로) 면역학적 반응을 유도하지 않지만, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 지칭한다.

역학 데이터는, 일부 경우에, 특정 병원체에 대해 백신을 접종받는 모집단이 다른 관련 없는 병원체에 대해서도 교차 면역을 획득했을 수 있음을 나타낸다. 최근의 현저한 예는 COVID-19이다. 여기에서, 관찰 데이터는, 예를 들면, 폐렴 구균 또는 결핵균에 대한 이전 백신접종을 받은 질환 모집단에서 COVID-19 질환은 빈도가 낮고 중증도가 낮을 수 있음을 나타낸다. 이러한 모집단에서 사전 백신접종을 기반으로 한 잠재적 교차-면역이 논의되었지만, 이러한 보호의 실제 원인에 대한 설득력 있는 설명은 아직 없다. 관련 없는 병원체에 대한 교차-면역 보호를 제공하는 백신 유도 OSE-특이적 항체와 관련되는, 예를 들면, BCG 또는 폐렴구균 백신접종된 개체에서 COVID-19에 대한 더 양호한 보호의 이유를 제안한다. 결과적으로, 백신접종된 병원체에 대한 특이적 면역 반응을 유도할 수 있을 뿐만 아니라, OSE-특이적 항체를 유도할 수 있는 백신은 능동 면역요법 개입을 위한 신규한 클래스의 시약을 정의할 수 있다.

이론에 얽매이지 않고, OSE-특이적 IgM 또는 IgA 항체의 내인성 생산의 유도를 목적으로 하는 백신접종 전략은 건강한 개체를 만성 무균성 염증 질환 또는 병원체-유도 중증 형태의 ALI 및 ARDS로부터 보호하기 위해 적용된다.

마우스에서, 결핵균(Mycobacterium tuberculosis) 지질 또는 바실러스 칼멧-게린(Bacillus Calmette-Guerin; BCG) 백신에 의한 백신접종은 B1 세포를 자극하여, 포스파티딜콜린 및 카디오리핀의 포스포콜린 헤드 그룹에 대한 특이성을 갖는 천연 IgM 항체를 생산한다[참조: Russo and Mariano, 2010, Immunobiology, Vol. 215(12))(Ordonez, Savage et al., 2018, Immunology, Vol.)]. 유사하게는, 불활성화된 폐렴구균 추출물에 의한 아테롬성 동맥경화증-경향 마우스의 면역화는 마크로파지에 의한 oxLDL의 흡수를 차단하기 때문에, 아테롬보호 기능을 갖는 높은 수준의 포스포콜린-특이적 IgM 항체를 초래했다[참조: Binder, Horkko et al., 2003, Nat Med, Vol. 9(6)]. 이러한 연구는 결핵균(M.tuberculosis) 및 폐렴구균(S. pneumoniae) 등의 세균의 세포벽 성분 내의 OSE와 에피토프 사이의 분자 모방을 나타내고, BCG 또는 Pneumovax23에 의한 인간 개체의 백신접종이 아테롬성 동맥경화증, SLE, MS 및 AD 등의 만성 염증 질환 뿐만 아니라, 병원체-유도 ALI 및 ARDS의 중증도 경과로부터도 보호하는 면역 반응을 유도할 수 있음을 나타낸다. 흥미롭게도, 최근 백신접종된 개체의 사망률은 백신접종을 받지 않은 인간과 비교하여 감소하기 때문에, BCG 백신에 대한 이전 노출은 치명적 COVID-19로부터 인간을 보호하는 것으로 보인다.

백신은 상기 정의된 약제학적 조성물에 전형적인 추가 성분을 추가로 포함할 수 있다. 구별로서, 백신의 면역학적 활성 성분은 완전한 바이러스 입자 또는 완전한 세균을 원래 형태로, 또는 약독화된 입자 또는 약독화된 세균(attenuated bacteria)으로서 포함할 수 있다.

다른 형태에서, 백신의 면역학적 활성 성분은 생물의 적절한 요소를 포함할 수 있고(서브유닛 백신), 이에 의해 이러한 요소는 전체 입자 또는 세균 또는 이러한 입자를 함유하는 성장 배양물을 파괴하고, 임의로 목적하는 구조를 생성하는 후속 정제 단계에 의해 생성되거나, 또는, 예를 들면, 세균, 곤충, 포유동물 또는 기타 종에 기반한 적절한 시스템의 사용과, 임의로 후속적 분리 및 정제 절차의 사용에 의한 적절한 조작을 포함하는 합성 프로세스에 의해 생성되거나, 또는 적절한 약제학적 조성물을 사용하여 유전 물질을 직접 도입함으로써 (폴리뉴클레오티드 백신접종) 백신을 필요로 하는 동물에서 합성 프로세스의 유도에 의해 생성된다. 백신은 상기에서 설명한 요소 중 1개 또는 동시에 1개 이상의 요소를 포함할 수 있다. 본 발명의 특정 측면에서 사용되는 용어 "백신"은 변형된 약독화 생 백신을 기재한다. 본 발명의 추가의 특정 측면에서, 백신은 특히 생백신, 약독화 생백신, 불활성화 백신, 또는 접합 백신일 수 있다.

불활성화의 다양한 물리적 및 화학적 방법이 당해 기술분야에 공지되어 있다. "불활성화된"이라는 용어는, 조사(자외선(UV), X-선, 전자빔 또는 감마선), 가열(예: 30분 내지 수시간 동안 55℃ 내지 65℃ 사이의 온도, 예를 들면, 56℃에서 3시간), 또는 면역원성을 유지하면서 이러한 바이러스 또는 세균을 불활성화, 사멸시키기 위해 화학적으로 처리된, 이전에 유도성 또는 부독성의 바이러스 또는 세균을 지칭한다.

보다 구체적으로, 바이러스의 문맥에서 "불활성화된"이라는 용어는 바이러스가 생체내 또는 시험관내에서 복제할 수 없다는 것을 의미한다. 예를 들면, "불활성화된"이라는 용어는, 시험관내에서 증식되고, 이어서 더 이상 복제할 수 없도록 화학적 또는 물리적 수단을 사용하여 불활성화된 바이러스를 지칭할 수 있다. 또 다른 예에서, "불활성화된"이라는 용어는, 증식되고, 이어서 화학적 또는 물리적 수단을 사용하여 불활성화되어, 바이러스, 바이러스의 단편 또는 성분의 현탁액을 초래하고, 백신 성분으로서 사용될 수 있는, 바이러스 및/또는 세균을 지칭할 수 있다. 본 명세서에 사용된 바와 같이, "불활성화된", "사멸된" 또는 "KV"라는 용어는 교환가능하게 사용된다.

용어 "생백신"은 살아있는, 특히 살아있는 바이러스 활성 성분을 포함하는 백신을 지칭한다.

본 명세서에 언급된 임의로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 보조제, 안정화제, 희석제, 보존제, 항균제 및 항진균제, 등장제, 흡착 지연제 등을 포함한다. 일부 측면에서, 특히 동결건조된 면역원성 조성물을 포함하는 측면에서, 안정화제는 동결건조 또는 동결-건조를 위한 안정화제를 포함한다.

본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "백신" 및 "백신 조성물"은 교환가능하게 사용되고, 특히 조성물에 노출된 대상체에서 보호 면역 반응을 유발하는 조성물을 지칭한다.

"대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한"이라는 용어와 관련하여, 본 발명의 제1 및 제2 측면에 대해 상기에서 개략적으로 설명된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 백신에 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 백신은, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 유도하는 화합물을 포함한다.

"산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체"와 관련하여, 본 발명의 제1 및 제2 측면에 대해 상기에서 개략적으로 설명한 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 백신에 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 백신은 바실러스 칼멧 게린(Bacillus Calmette-Guerin; BCG) 백신이다.

바람직한 실시양태에서, 상기 바실러스 칼멧-게린(BCG) 백신은 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis)의 약독화된 세균을 포함한다.

또 다른 바람직한 실시양태에서, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 백신은 폐렴구균 결핵(pneumococcus tuberculosis) 백신이다.

바람직한 실시양태에서, 폐렴구균 결핵 백신은 뉴모박스(Pneumovax^®)23 백신 또는 프레베나르(Prevenar^®)13 백신이다.

바람직한 실시양태에서, 상기 폐렴구균 백신은 복수의 폐렴구균 균주로부터의 다당류 에피토프를 포함한다.

바람직한 실시양태에서, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 백신은

산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에 특이적인 천연 IgM의 생산을 자극하고,

바람직하게는 감염된 폐에서, 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키고,

바람직하게는 아테롬성 동맥경화성 병변에서, LDL 상의 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 축적을 감소시키고;

바람직하게는 폐포 마크로파지에 의해, IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하고/하거나;

바람직하게는 뇌 조직에서, 올리고머 아밀로이드-β와 같은 미스-폴딩된 단백질의 축적을 감소시키고/시키거나,

염증유발성 사이토카인을 중화시킬 수 있는 백신이다.

"천연 IgM 생산의 촉진, 바람직하게는, 감염 폐에서 유리 산화 인지질 축적의 감소, 바람직하게는 폐포 마크로파지에 의한 IL-10 및/또는 TGFβ 분비의 자극; 및/또는 염증유발성 사이토카인의 중화"와 관련하여, 본 발명의 제1 및 제2 측면에 대해 상기에서 개략적으로 설명된 바와 같이, 필요한 변경을 가하여 백신에 동일하게 적용된다.

상기 기재된 백신의 바람직한 실시양태에서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 임상 징후 또는 질환은 감염성 질환이다.

보다 바람직하게는, 상기 감염성 질환은 바이러스 감염성 질환이다.

보다 더 바람직하게는, 상기 바이러스 감염 질환은 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.

보다 바람직한 실시양태에서, 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한 백신은, 바이러스 감염 질환이 β-코로나바이러스 SARS-CoV2에 의해 유발된 COVID-19인, 백신이다.

"β-코로나바이러스 SARS-CoV2에 의해 유발되는 COVID-19인 바이러스 감염 질환"과 관련하여, 본 발명의 제1 측면 및 제2 측면에 대해 상기에서 개략적으로 설명된 바와 같이, 백신에 필요한 변경을 가하여 동일하게 적용된다.

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 백신에 포함된 약제 또는 화합물, 바람직하게는 항원은 또한 재조합 또는 합성에 의해 생성/합성될 수 있다.

따라서, 바람직한 실시양태에서, 백신은 그 중에 함유된 항원의 적어도 일부가 재조합 기원의 것인 백신이다.

본 발명의 다른 측면 및 이점은 하기 실시예에서 설명되지만, 이들은 예시의 목적으로 제공되고, 한정하는 것은 아니다. 본 출원에 인용된 각 간행물, 특허, 특허 출원 또는 기타 문서는 참조에 의해 그 전체가 본 명세서에 편입된다.

도 1: 펜타글로빈(Pentaglobin ^® )으로 치료받은 COVID-19 환자의 임상 파라미터의 경과
악화하는 COVID-19 폐렴을 나타내는 5명의 환자는 펜타글로빈(Pentaglobin^®)으로 치료되었다. "P"는 환자가 펜타글로빈(Pentaglobin^®)으로 치료된 일자를 나타낸다(폐쇄 원). 임상 파라미터 IL-6(A), CRP(B), PCT(C) 또는 평균 1일 혈액 pCO₂(오차 막대는 표준 편차)(D)는 경시적으로 측정되었다. 기관지폐포 세척액(BAL) 중의 SARS-CoV-2의 존재(+) 또는 부재(-)를 모니터링했다.
도 2: COVID-19 환자의 과도한 염증을 유발하는 산화 스트레스.
ROS의 형성과 oxPL 및 OSE의 축적을 유도하는 메커니즘의 도(도 2A). 이러한 메커니즘의 조작에 의해, OSE의 생성이 억제된다(도 2B).
도 3: COVID-19 환자 혈청 중의 항핵 자가면역 항체의 검출.
HD: 건강한 기증자 혈청; COV: COVID-19 혈청; 양성 대조군(Kallestad HEp2 키트에 부속).
도 4: SARS-CoV-2에 감염된 폐 세포에서는 oxPL 수준이 증가했다. A) 폐 선암종 세포(Calu-3)에 SARS-CoV-2를 3일 동안 감염시킨 후, oxPL의 포스포릴콜린 헤드그룹을 검출하는 마우스 모노클로날 천연 IgM E06으로 면역염색을 실시했다. 감염을 입증하기 위해, 세포를 항-SARS-CoV-2 NC 단백질로 공-염색했다. DAPI 염색에 의해, 세포 핵의 시각화가 가능해졌다. 배율은, 아폽토시스 SARS-CoV-2 NC 양성 세포를 E06으로 반올림한 공-염색을 나타낸다. B) ImageJ 소프트웨어를 사용하여 4개의 독립적 이미지의 염색 강도의 정량화.
도 5: 건강한 기증자와 비교하여 COVID-19 환자의 혈청의 산화 스트레스의 증가. 알론디알데히드(MDA)는 지질 과산화에 가장 많이 사용되는 바이오마커 중 하나이다. MDA의 농도는, 시판 검정 키트(Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit, Abcam)를 사용하여 제조원의 지시에 따라 입원 중의 중증 COVID-19 환자 8명, 경증 COVID-19 외래 환자 20명, 건강한 기증자 10명의 혈청에서 측정되었다. 통계적 유의성은 스튜던트-t(Students-t) 검정을 사용하여 계산되었다. **** P < 0.0001.
도 6: COVID-19 환자에서 oxLDL의 혈청 수준의 현저한 상승. OxLDL 수준은 COVID-19 환자(COV, n=28) 및 건강한 인간 기증자(HD, n=10)로부터 유래하는 혈청에서 측정되었다. OxLDL 수준은 제조원의 지시에 따라 산화된 LDL ELISA 키트(카탈로그 번호 10-1143-01, Mercodia)를 사용하여 측정되었다. 통계적 유의성은 스튜던트-t(Students-t) 시험을 사용하여 계산되었다. **** P < 0.0001.
도 7: 건강한 대조군 또는 경증 COVID-19 사례의 혈청과 비교하여 중증 COVID-19 환자의 혈청에서 항-oxLDL IgG 및 IgA 자가항체의 상승. 플레이트를 oxLDL로 코팅하고, 코팅된 플레이트를 희석된 혈청(1:20)과 함께 인큐베이팅했다. 세척 후, 호스-레디쉬 퍼옥시다제에 결합된 항-인간 IgG 또는 항-인간 IgA 항체를 첨가하여, 결합된 혈청 유래의 항-oxLDL 항체를 측정했다. 450nm에서 광학 밀도(OD)의 판독은 기질 첨가 후에 수행되었다. COV, COVID-19 환자의 혈청(중증 질환, n=8; 경증 질환, n=20); HD, 건강한 기증자의 혈청(n=10). 통계적 유의성은 스튜던트-t 검정을 사용하여 계산되었다. * P < 0.05; **** P < 0.0001.
도 8: OxPL 특이적 모노클로날 항체는 oxLDL에의 결합에 대해 COVID-19 혈청으로부터의 IgG와 경쟁한다. ELISA 플레이트를 oxLDL로 코팅하고, 검정 완충액 또는 마우스 모노클로날 항체 E06, 509 또는 이 둘의 조합과 함께 사전 인큐베이팅했다. 이어서, 중증 질환으로 입원한 COVID-19 환자(n=8)로부터의 혈청 샘플을 코팅된 및 사전 인큐베이팅된 웰에 첨가하고, IgG 항체의 결합은 HRP-접합된 항-인간 IgG 2차 항체를 사용하여 검출했다. oxLDL에 대한 IgG 결합은 450nm에서 OD 값에 의해 결정되었고, 데이터는, 검정 완충액과 함께 사전 인큐베이팅된 웰과 비교하여, 지시된 모노클로날 항체와 함께 사전 인큐베이팅된 웰에서 oxLDL에 대한 IgG 결합의 억제 백분율로 표시된다. 각 혈청 샘플을 삼중으로 시험하고, 통계적 유의성은 편측 만-휘트니(Mann-Whitney) 검정에 의해 계산되었다. *** P < 0.001.
도 9: COVID-19 혈청에는 산화-특이적 에피토프에 대한 IgG 및 IgA 항체의 상승이 포함되어 있다. ELISA 플레이트를 10μg/ml의 지시된 항원으로 코팅했다. 코팅 및 차단된 웰을, 입원 중의 COVID-19 환자(COV; n=8) 또는 건강한 기증자(HD; n=8)로부터 유래하는 1:20으로 희석된 인간 혈청 샘플과 함께 인큐베이팅하고, 결합된 항체는 HRP-접합 및 이소형-특이적 이차 항체로 검출되었다. 각 혈청 샘플은 3중으로 시험되었고, 항체 결합은 광학 밀도(OD) 값으로 표시된다. COV 대 HD 혈청에서 항체 결합의 통계적 유의성은 스튜던트-t 검정을 사용하여 계산되었다. ** P < 0.01; *** P < 0.001; **** P < 0.0001.
도 10: 펜타글로빈으로부터의 IgM 분획은 oxPL을 표시하는 아폽토시스 세포에 결합한다. HEK293T 세포를 상이한 농도의 H₂O₂로 밤새 처리하고, 다음날, oxPL의 포스포릴콜린 헤드그룹에 결합하는 마우스 모노클로날 IgM E06 또는 펜타글로빈을 사용하여 면역염색을 실시하고, 이어서 종-특이적 APC-표지 IgM 항체로 염색했다. 대조군 세포는 2차 항체와만 인큐베이팅했다. 아폽토시스 세포는 Sytox 양성으로 동정되었다.
도 11: 펜타글로빈(Pentaglobin ^® )의 IgM 분획은 SARS-CoV-2 감염 세포에 결합한다. 폐 선암종 세포(Calu-3)에 SARS-CoV-2를 3일 동안 감염시킨 후, 펜타글로빈 및 SARS-CoV-2 NC 단백질에 의한 면역염색을 실시했다. FITC 표지된 항-인간 IgM 항체를 사용하여, 펜타글로빈 염색 세포에서 결합된 IgM 분획을 검출했다. DAPI 염색에 의해 세포 핵의 시각화가 가능했다. 배율은 SARS-CoV-2 NC 양성 세포의 염색 신호를 펜타글로빈으로부터의 IgM으로 나타낸다. ImageJ 소프트웨어를 사용하여 3개의 독립적 이미지의 염색 강도의 평균 값의 정량화를 우측에 표시하고, 오차 막대는 표준 편차이다. 스튜던트 t-검정을 사용하여, 통계적 유의성을 결정했다.
도 12: 펜타글로빈(Pentaglobin ^® )에는 oxLDL에 결합하는 항체가 포함되어 있다. ELISA 플레이트를 oxLDL로 코팅하고, 표시된 농도의 펜타글로빈과 함께 인큐베이팅했다. oxLDL에 대한 항체 결합은 HRP-접합 이소형-특이적 항체를 사용하여 검출했다. (A) 항체 결합은 펜타글로빈(Pentaglobin^®) 농도의 함수로서 OD 450nm 값으로 표시된다. (B) 모든 이소형에 대한 개별 이소형의 OD450 값의 비율을 기반으로 하여, oxLDL에 결합된 펜타글로빈 내의 항체 이소형의 정량화. (C) oxLDL에 대한 개별 이소형의 결합은 펜타글로빈 내의 각 이소형의 농도로 정규화되었다.
도 13: 펜타글로빈(Pentaglobin ^® )에는 산화-특이적 에피토프에 결합하는 항체가 포함되어 있다. ELISA 플레이트는 포스포릴콜린-BSA(PC-BSA), 말론디알데히드-BSA(MDA-BSA), 4-하이드록시노네날-BSA(HNE-BSA) 또는 비접합 소 혈청 알부민(BSA)으로 코팅하고, 지시된 농도의 펜타글로빈(Pentaglobin^®)과 함께 인큐베이팅했다. 코팅된 항원에 대한 항체의 결합은 이소형 IgG, IgM 및 IgA(항-IgG/M/A), 또는 특이적으로 IgM(항-IgM)을 인식하는 HRP-접합된 이소형-특이적 항체를 사용하여 검출되었다. 항체 결합은 펜타글로빈(Pentaglobin^®) 농도의 함수로서 OD 450nm 값으로 표시된다.

실시예

실시예 1: 생성된 nIgM과 산화된 지질의 결합 입증

상업적으로 이용가능한 ELISA(예: Creative Diagnostics의 MDA-BSA 코팅 플레이트 ELISA(DEIACP15) 또는 항 ox-LDL ELISA(DEIA081J))를 사용하여 산화 인지질에 대한 생성된 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 결합을 평가한다. 산화 포스파티디콜린으로 코팅된 아반티 리피드 스누퍼스(Avanti Lipid Snoopers^®) ELISA 테스트 스트립은 IgM 및/또는 IgA 항체의 결합을 분석하는 데 사용된다. 산화 카디오리핀 또는 산화 포스파티딜세린에 대한 IgM 및/또는 IgA 항체는 문헌[참조: Frostegard, Su et al., 2014, PLoS One, Vol. 9(12)]에 기재된 ELISA 방법을 사용하여 측정된다.

산화 지질에 대한 결합은 배양된 세포에서 세포-아폽토시스를 유도하고 생성된 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체, 펜타글로빈^® 또는 BCG/뉴모박스-백신접종 개체의 혈청으로 염색함으로써 추가로 조사된다. 유세포 계측 분석은 아폽토시스 세포(예: 마커 아넥신 V)를 구체적으로 관찰하는 데 사용되며, nIgM의 결합은 적절한 상업적으로 이용가능한 항-IgM 및 항-IgA 이차 항체에 의해 모니터링된다.

실시예 2: 바이러스 감염 세포에 대한 OSE-특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 결합의 입증

세포의 바이러스 감염은 세포막의 지질 조성의 변화를 포함하여 바이러스 복제를 보장하기 위한 과다한 이벤트를 초래한다. 예를 들면, 다양한 바이러스는 포스파티딜-세린을 세포막의 외부로 반전을 유도하고, 여기서 산화되기 쉽고, 이 과정은 아폽토시스 중에 일어나고 식세포에 대한 'eat-me' 신호를 반영한다. 세포막의 지질 조성의 유도된 변화는 바이러스 발아 동안 바이러스 막으로 통합된다. 따라서, 일부 바이러스는 이를 마스크로 사용하여 바이러스를 아폽토시스 실체로 인식하는 식세포에 의한 흡수를 개선하고, 이는 더 나은 감염 및 바이러스 확산에 도움이 될 수 있다. 바이러스 막의 지질 조성 변화뿐만 아니라 바이러스 표면 당단백질도 nIgM 결합에 직접적인 영향을 미칠 수 있다.

단순 포진 바이러스 유형 1 또는 2 감염 세포 또는 바이러스 표면 당단백질(예: 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2) 당단백질 S, 인간 면역결핍 바이러스(HIV-1) Env, 수포성 구내염 바이러스(VSV) 당단백질 G, HSV-1/2 당단백질 gB, gD, gH, gL, gI 또는 gE)를 발현하는 세포에 대한 생산된 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체의 결합을 시험한다. 이들 검정에서, 결합 친화성(Kd)는 각각의 바이러스 당단백질을 발현하는 세포 및 음성 대조군으로서 단백질을 발현하지 않는 세포에 대해 결정된다.

실시예 3: 시험관내 및 생체내에서 펜타글로빈 ^® , OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 및 BCG/ 뉴모박스 백신접종된 개체로부터의 혈청의 직접적인 항바이러스 활성의 입증

상이한 시험관내 및 생체내 모델은 바이러스 감염 및 확산에 대한 펜타글로빈^®, 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 및 BCG/뉴모박스 백신접종 개체의 혈청의 직접적인 항바이러스 효과를 다루는 데 사용된다.

다양한 바이러스 패밀리의 프로토타입 바이러스를 조사한다. 이들은 헤스페스비리다에(Herpesviridae)(HSV-1/2), 랍도비리다에(Rabdoviridae)(GFP 수용체가 있는 재조합 VSV, rVSVdeltaG-GFP), 및 뮤린 백혈병 바이러스(MLV) 및 VSV-G, HIV-1 Env 또는 SARS-CoV-2 당단백질 S를 포함하는 상이한 당단백질로 의사형화된 HIV-1 기반 벡터를 포함한다.

외피 바이러스는 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체에 의해 결합될 수 있는 막에 산화 인지질 및 OSE를 함유한다고 생각할 수 있다. 무세포 바이러스 감염에 대한 직접적인 영향은 BCG/뉴모박스 백신접종 전 및 백신접종 후 혈청, 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 또는 펜타글로빈^®의 연속 희석액을 바이러스 또는 바이러스 벡터와 함께 인큐베이팅하고 적절한 표적 세포주, 예를 들면, 아프리카 녹색 원숭이 세포주 Vero 또는 인간 배아 신장 세포주 HEK293T의 후속 감염에 의해 시험된다. 사용되는 바이러스 또는 벡터에 따라, 감염은 플라크 형성(HSV-1 또는 HSV-2) 또는 바이러스 또는 바이러스 벡터 감염(예: GFP 또는 루시페라제)을 통한 리포터 유전자 전달에 의해 측정된다.

BCG/뉴모박스 백신접종 전/후 혈청의 HSV-1 및 HSV-2 효과의 경우, 바이러스 세포 간 확산에 대한 펜타글로빈^® 및 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체는 표적 세포를 바이러스로 감염시킨 다음, OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체를 함유하는 앞서 언급한 약물의 연속 희석액을 적용함으로써 측정된다.

면역 결핍 및 면역 적격 마우스는 HSV-1 또는 HSV-2로 질내 감염시키고, 감염 전(예방적 접근) 또는 감염 후(치료적 접근) 상이한 용량의 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체, 펜타글로빈^® 또는 BCG/뉴모박스-백신접종 개체로부터 유래된 혈청을 주사한다.

생존 및 병변 발달은 시간 경과에 따라 모니터링된다. 바이러스 복제는 정량적 PCR을 통해 측정된다. 이들 실험에서 펜타글로빈^®은 양성 대조군으로 작용하는데, 이는 HSV의 높은 혈청 유병률로 인해 바이러스 중화 IgG를 함유할 가능성이 높기 때문이다.

천연 IgM은 또한 HSV-1에 의한 원발성 피부 감염으로부터 보호하는 것으로 공지되어 있다[참조: Deshpande, Kumaraguru et al., 2000, Cell Immunol, Vol. 202(2)]. OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 또는 BCG/뉴모박스 백신접종 개체의 혈청의 정맥내 예방적 또는 치료적 주사가 HSV-1 감염에 의해 유도된 피부 병변으로부터 보호하는지 여부를 조사한다.

또한 이러한 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 함유 화합물을 사용한 국소 치료가 원발성 피부 HSV-1 감염 후 병변 발달을 예방하는지 여부를 시험한다. 인간 집단에서 HSV-1 혈청 유병률이 약 80%이기 때문에, 본 발명자들은 HSV-1/2 혈청 음성(나이브) 개체의 혈청을 독점적으로 사용하고 있다.

실시예 4: 전염증 반응의 유도를 방지하기 위한 특정 백혈구 표면 단백질에 대한 nIgM의 결합의 분석

문헌[참조: Lobo, Schlegel et al., 2008, J Immunol, Vol. 180(3)) (Lobo, 2016, Front Immunol, Vol. 7)]은 IgM-ALA(백혈구 결합 nIgM)가 심장 및 신장 이식 수용자에서 긍정적인 역할을 한다는 것을 입증했다. IgM-ALA 수치가 낮거나 전혀 없으면 증가된 염증, 숙주 대 이식편 질환 및 이식편 손실과 관련이 있다. IgM-ALA는 (i) 특정 공자극 수용체, 즉 CD4, CD86, CD40 및 PD1 및 (ii) 케모카인 수용체에 결합한다는 것이 입증되었다. 그러나, 이들 다중반응성 IgM-ALA 자가항체는 다른 세포 수용체, 즉 CD8, CD80, CD40L, PDL1, CD28, CD1d 및 HLA 수용체 상의 당단백질에 무작위로 결합하지 않기 때문에 특정 형태의 특이성을 나타낸다. 또한, IgM-ALA는 TcR, CD3 및 CD45에 결합하는 것으로 나타났다.

확인되고 선택된 모노클로날 nIgM이 앞서 언급된 백혈구의 공자극 수용체에 결합하는지 여부는 ELISA 및 유세포 분석에 의해 조사된다. 이러한 nIgM에 의한 염증유발성 반응 유도의 예방은 자극 조건하에서 1차 혈액 단핵구 또는 정제된 백혈구 집단을 nIgM과 함께 인큐베이팅한 후, 확립된 유세포 분석 기반 방법(Biolegend)을 사용하여 분비된 사이토카인의 다중 분석으로 모니터링할 수 있다.

실시예 5: 생체내 급성 호흡기 질환 증후군( ARDS )에 대한 펜타글로빈 ^® 또는 모노클로날 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 또는 BCG/ 뉴모박스 백신접종 개체의 혈청의 항염증 효과

SARS-CoV-2 감염은 코로나바이러스 질환(COVID-19)의 발병을 유발하며, 이는 급성 호흡기 질환 증후군(ARDS)을 반영하는 중증 증상뿐만 아니라 무증상 또는 경증 증상을 나타낼 수 있다. 직접적인 폐 손상으로 인해 발생하는 ARDS의 2가지 전임상 마우스 모델이 기재되었다[참조: D'Alessio, 2018, Methods Mol Biol, Vol. 1809]. 이들은 LPS(멸균 염증) 또는 스트렙토콕쿠스 뉴모니아에(Streptococcus pneumoniae)의 기관내 점적을 사용하여 인간 폐렴을 모방한다. 이 모델은 재현성이 높고 강력한 호중구 폐포염 및 폐포-모세혈관 막의 파괴를 유발하고 쉽게 적정할 수 있고(폐 염증 정도), 급성 폐 손상(ALI)의 초기 및 해결 단계 모두의 평가를 허용하기 때문에 선택되었다.

ARDS 마우스는 펜타글로빈^® 주사, 또는 모노클로날 nIgM 또는 BCG/뉴모박스 백신접종 개체의 혈청 또는 비-백신접종 대조군 혈청의 주사로 치료된다. 치료에 대한 반응, 즉 ARDS의 완화가 모니터링된다.

실시예 6: SARS-CoV-2 감염 동안 증상이 경미하거나 증상이 없는 BCG/뉴모박스 백신접종 SARS- CoV -2 혈청 양성 개체로부터 OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 라이브러리의 생성

BCG/뉴모박스 백신접종 개체는 천연 항체의 증가된 수준으로 인해 면역학적으로 보이지 않는 병원체에 의한 중증 감염과 싸우는 데 이점이 있음이 입증되었다.

천연 IgM의 레퍼토리는 발현 수준 및 다양성 모두에서 연령에 따라 변한다는 것을 나타냈다[참조: Rodriguez-Zhurbenko, Quach et al., 2019, Front Immunol, Vol. 10]. 이 관찰의 결론은 젊은 개체의 nIgM 레퍼토리가 향상된 항병원성 특성을 가질 수 있다는 것이다.

이를 시험하기 위해, 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 파지-디스플레이 라이브러리를 SARS-CoV-2 감염 단계 동안 증상이 단지 경미한 증상 또는 무증상을 나타낸 젊은 BCG/뉴모박스 백신접종 SARS-CoV-2 혈청 양성 개체로부터 생성한다. 이러한 천연 항체 라이브러리로부터 천연 항체 특이적 항원에 대해 특징적인 저친화성 다중반응 결합 특성을 나타내고 바이러스 당단백질에 결합하고 바이러스 중화 활성을 나타낼 수 있는 몇몇 모노클로날 IgM 및/또는 IgA 항체가 클로닝된다. 모노클로날 IgM 및/또는 IgA 항체는 풀로 사용될 때 향상된 바이러스 중화 활성을 시험하기 위해 개별적으로 또는 조합하여(풀) 시험된다.

실시예 7. OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 항체 혈청 농도 및 BCG/ 뉴모박스 백신접종 상태와의 상관관계에 대한 모집단별 분석

BCG/뉴모박스 백신이 더 높은 수준의 nIgM 보호를 유도한다는 것을 입증하기 위해, nIgM 농도를 분석하고 BCG 및/또는 뉴모박스를 접종하지 않은 개체의 혈청과 BCG 및/또는 뉴모박스 백신접종 개체의 혈청에서 비교한다. OSE 특이적 IgM 및/또는 IgA 혈청 수준은 상기 기재된 ELISA 방법에 의해 결정된다. 백신접종한 개체와 백신접종하지 않은 개체의 풀링 혈청을 상기 기재된 바이러스 검정에서 바이러스 -중화 활성에 대해 비교한다.

실시예 8. 아테롬성 동맥경화증에 대한 펜타글로빈 ^® , 모노클로날 OSE -특이적 IgM 및/또는 IgA 및 BCG- 뉴모박스 백신접종 개체의 혈청의 생체내 효과의 정의

가장 자주 사용되는 마우스 아테롬성 동맥경화증의 두 모델은 apoE-/- 모델과 ldlr-/- 모델이다. 펜타글로빈^®, 모노클로날 nIgM 또는 BCG/뉴모박스 백신접종 개체의 혈청의 주사가 이 두 모델에서 아테롬성 동맥경화증을 감소시키는지 여부를 시험한다.

실시예 9. SARS-CoV-2 감염 폐 세포는 oxPL 수준을 증가시켰다.

상기 설명된 바와 같이, 병원체, 예를 들면, SARS-CoV-2, SARS-CoV 또는 H5N1 인플루엔자 바이러스는 세포막에서 지질 과산화 속도 증가를 유발하며, 이는 산화적 손상의 결과로 발생하는 산화 인지질(oxPL)의 생산이다. OxPL은 세포 스트레스 반응의 결과로서 SARS-CoV-2 감염 세포에 의해 생성되는 것으로 추정된다.

실제로, 천연 PL이 아니라 oxPL의 포스포릴콜린 헤드그룹을 검출하는 뮤린 천연 IgM E06으로 감염된 세포의 더 강력한 염색 강도에 의해 결정된 바와 같이 SARS-CoV-2 감염된 폐 선암종 세포(Calu-3)의 표면에서 oxPL의 축적이 검출되었다(도 4). 이들 데이터는 SARS-CoV-2 감염 세포가 천연 IgM 항체에 의해 효율적으로 제거되지 않을 때 잠재적으로 염증유발성 농도로 축적되는 oxPL의 중요한 공급원을 나타낸다는 것을 시사한다.

실시예 10. COVID-19 환자의 혈청에서 증가된 산화적 스트레스.

폴리불포화 지방산을 함유하는 지질은 전형적으로 활성 산소 종(ROS)에 의한 산화 공격에 특히 취약하여 감염된 조직에서 병원체 유도 염증의 병리에 추가로 기여하는 oxPL 및 최종 생성물, 예를 들면, 말론디알데히드(MDA)의 생산과 관련된 연쇄 반응을 초래한다. OxPL 및 알데히드, 예를 들면, MDA는 ROS 및 세포 스트레스 반응에 의해 형성된 조직에 독점적으로 국소화되지 않지만, 이들이 산화 스트레스하에 세포에 의해 방출된 후 순환으로 들어갈 수도 있다.

SARS-CoV-2 감염 세포에 의한 oxPL의 증가된 형성이 검출되었기 때문에(상기 참조), 분해 생성물, 예를 들면, MDA가 COVID-19 환자의 혈청에서 상승될 수 있다고 가정된다.

실제로, 유의하게 상승된 MDA의 농도가 입원한 COVID-19 환자로부터 유래된 혈청에서 발견되었고, 높은 MDA 혈청 농도는 중증 질환을 앓고 있는 환자를 경증 질환 환자 또는 건강한 공여자와 차별화했다(도 5). 중증 COVID-19 환자에서 높은 MDA 혈청 수준은 oxPL 및 OSE의 중화 및 분해와 관련된 결함 클리어런스 메커니즘으로부터 기인하며, 이로 인해 중증 COVID-19 환자에서 관찰되는 과염증 상태에 기여하는 염증유발성 면역 반응을 유도하기에 충분히 높은 농도로 oxPL 및 OSE의 축적을 초래하는 것으로 추정된다.

실시예 11. COVID-19 환자에서 oxLDL의 유의하게 상승된 혈청 수준.

인간 저밀도 지단백질(LDL)은 혈액의 주요 지질-단백질 복합체 중 하나이며 신체 전체에 걸쳐 지질의 수송을 담당하는 신진대사의 중요한 구성 요소이다. 순환 중인 OxPL 및 알데히드, 예를 들면, MDA는 순환성 LDL 및 기타 지단백질의 산화적 변형을 유도할 수 있다[참조: Parthasarathy et al., 2010, Methods Mol Biol, Vol. 610(403)].

LDL의 산화는 지질과 단백질이 모두 산화적 변화를 겪고 복잡한 생성물을 형성하는 복잡한 과정이다. 예를 들면, 과산화된 지질은 분해되어 LDL의 아포지단백질-B100(apoB-100)에서 라이신 잔기의 아미노 그룹을 공유적으로 변형시키는 알데히드, 예를 들면, MDA를 생성한다. 이것은 아미노산에 대한 전하를 변형하는 쉬프 염기(Schiff's bases)를 생성할 뿐만 아니라 apoB-100 단백질의 단백질 분해뿐만 아니라 단백질 분해된 apoB-100 사이의 분자내 및 분자간 가교결합을 모두 일으켜 단백질 조성 및 구조의 과도한 변경을 초래한다. 따라서, 천연 LDL과 대조적으로, 산화된 LDL(oxLDL) 입자는 선천적 및 후천적 면역의 수용체와 혈관벽 세포에 의해 인식되는 다양한 신규 항원성 결정인자를 보유하여 심혈관 질환(CVD)에서 중요한 병원성 역할을 한다. CVD에서, oxLDL의 염증유발성 기능은 스캐빈저 수용체를 통해 높은 친화성으로 oxLDL에 결합하는 수지상 세포 및 마크로파지에 의해 매개되어 oxLDL의 조절되지 않은 흡수와 마크로파지의 포말 세포로의 전환을 유발하며, 이는 지방 줄무늬 및 아테롬성 동맥경화성 병변의 특징을 정의한다. 또한, oxLDL로부터 유래된 펩티드가 T 세포에 의해 인식되는 것으로 나타났기 때문에 T 세포 활성화는 변형된 LDL과 연결되어 있다[참조: Stemme et al., 1995, Proc Natl Acad Sci, Vol. 92 (3893)].

중증 질환을 앓고 있는 COVID-19 환자가 혈청에 고농도의 MDA를 함유한다는 본 발명의 놀라운 발견(도 5)은 LDL과 같은 순환성 지단백질이 감염된 SARS-CoV-2 세포로부터 방출된 알데히드에 의해 산화적으로 변형될 수 있음을 나타낸다.

이에 따라, 건강한 공여자의 혈청과 비교하여 COVID-19 환자의 혈청에서 유의하게 상승된 수준의 oxLDL이 검출되었다(도 6). 흥미롭게도, 이 검정에서 oxLDL을 검출하는 데 사용된 마우스 모노클로날 항체 4E6은 apoB-100의 적어도 60개의 라이신 잔기의 알데히드로의 치환 결과로서 생성되는 LDL의 apoB-100 모이어티 중 형태적 에피토프에 결합한다. 이 치환된 리신의 수는 마크로파지에 의한 oxLDL의 스캐빈저 수용체 매개 흡수에 필요한 최소 수에 상응한다.

따라서, 본 결과는 세 가지 새롭고 놀라운 발견을 입증한다:

1) 다량의 oxPL 및 OSE 함유 구조, 예를 들면, SARS-CoV-2 감염 세포 및 세포 파편이 COVID-19 환자의 폐 및 가능한 다른 감염 조직에서 형성되고;

2) 알데히드, 예를 들면, MDA는, 예를 들면, SARS-CoV-2 감염 폐 세포에 의해 COVID-19 환자의 혈청으로 방출되고, 여기서 이들은 순환성 지단백질, 예를 들어, LDL에 대한 산화적 변형을 유도하고;

3) COVID-19 환자의 순환성 산화 LDL 입자는 선천적 면역 세포에 의해 발현되는 스캐빈저 수용체에 대한 고친화성 결합에 대한 요건을 나타내며, 따라서 효율적으로 제거되지 않을 때 CVD에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 전신 염증유발성 반응을 유발할 가능성을 포함한다.

실시예 12. 중증 COVID-19 환자의 혈청 중 상승된 항-oxLDL IgG 및 IgA 자가항체.

증가된 oxLDL 수준과 관련된 질환, 예를 들면, 아테롬성 동맥경화증 및 기타 CVD, 진성 당뇨병, 전신 홍반성 루푸스 또는 류마티스 관절염으로부터 oxLDL의 최대 90%가 oxLDL-면역 복합체를 생성하는 자가항체에 의해 복합체화되고, 이 수준은 종종 질환의 중증도와 관련된다는 것이 공지되어 있다.

질환 상태하에 oxLDL과 복합체화된 자가항체는 주로 IgG1 및 IgG3 이소형이며, 이는 둘 다 전관절형성성이고, 선척적 면역 세포, 예를 들면, 마크로파지에 의해 발현되는 Fc-감마 수용체와의 상호작용을 통해 염증유발성 반응을 발휘할 수 있다[참조: Mironova et al.; Arterioscler Thromb Vasc Biol.; 1996 Feb;16(2):222-9)(Virella et al., 2003, Clin Diagn Lab Immunol, Vol. 10(499)]. 이에 의해, oxLDL-IgG 면역 복합체는 면역 복합체가 스캐빈저 수용체 외에 Fc-감마 수용체와 결합하기 때문에 유리 oxLDL과 비교하여 더 강력한 염증유발성 반응을 유도한다. Fc-감마 수용체 매개 NLRP3 인플라마좀 활성화는 oxLDL-IgG 면역 복합체에 대한 반응으로 선천성 면역 세포로부터 염증유발성 사이토카인, 예를 들면, IL-1b 및 IL-6의 분비에 기여한다[참조: Rhoads et. al; J Immunol; 2017 Mar 1;198(5):2105-2114].

중증 질환을 앓고 있는 COVID-19 환자는, 놀랍게도, 경증 질환 환자 또는 건강한 공여자와 비교하여 혈청에서 매우 상승된 수준의 oxLDL를 나타냈기 때문에, 이들 환자가 잠재적으로 염증유발성 면역 복합체를 형성하는 증가된 역가의 항-oxLDL IgG 자가항체도 함유했는지 여부를 시험했다.

본 명세서에 제시된 개념을 완전히 뒷받침하기 위해, 건강한 공여자의 혈청과 비교하여 COVID-19 환자의 혈청에서 항-oxLDL IgG 자가항체의 수준이 유의하게 상승되었고, 이러한 수준은 질환의 중증도와 상관관계가 있었다(도 7).

혈청 IgA 항체의 분획, 특히 IgA2 서브타입의 분획이 Fc-알파 수용체를 발현하는 마크로파지 및 호중구에 대한 IgA2 함유 면역 복합체의 결합을 통해 염증유발성 반응을 발휘할 수 있기 때문에, 항-oxLDL IgA 자가항체 수준도 중증 질환 환자, 경증 질환을 갖는 COVID-19 환자 및 건강한 공여자 사이에서 비교되었다. 흥미롭게도, 항-oxLDL IgA 자가항체 수준이 경증 형태의 COVID-19 또는 건강한 공여자와 비교하여 중증 환자에서 특이적으로 그리고 유의하게 증가되었음이 밝혀졌다(도 7).

이러한 놀라운 발견은 중증 COVID-19 환자에서 병원성 oxLDL-IgG 및 oxLDL-IgA 면역 복합체의 역할을 지원하며, 여기서 이들은 전신 과염증 반응을 유발한다.

실시예 13. OxPL-특이적 모노클로날 항체는 oxLDL에 대한 결합에 대해 COVID-19 혈청의 IgG와 경쟁한다.

OxLDL 입자는 아직 자세히 정의되지 않았고, 항체에 의해 결합될 수 있는 매우 다양한 면역원성 결정인자를 나타낸다.

COVID-19 환자의 혈청 중 항-oxLDL 항체가 실제로 oxPL에 결합한다는 것을 나타내기 위해, oxPL-마스킹 검정이 oxPL의 별개의 부류에 결합하는 2개의 모노클로날 마우스 항체를 사용하여 수행되었다:

IgM 항체 E06은 산화 포스파티딜콜린(oxPC)에 의해 노출된 포스포릴콜린 헤드그룹에 결합하는 반면, IgM 항체 509는 산화 포스파티딜에탄올아민(oxPE)에 결합하지만 천연의 비산화 대응물에는 결합하지 않는다[참조: Bochkov et al., 2016, Biomark Med., Vol. 10(8), 797-810].

ELISA 플레이트를 oxLDL로 코팅하고, 코팅된 웰을 사전 인큐베이팅하여 이러한 모노클로날 항체 단독으로 또는 조합하여 oxLDL에 의해 노출된 oxPC 및/또는 oxPE를 차단했다. 이어서, COVID-19 혈청 샘플을 추가하고 oxLDL에 대한 IgG 결합을 HRP-접합된 항-인간 IgG 2차 항체에 의해 검출했다.

데이터는 이들 2개의 모노클로날 항체 중 하나와의 사전 인큐베이션에 의해 oxLDL 상에서 oxPC 또는 oxPE 단독을 차단하는 것이 oxLDL에 대한 IgG 결합의 검출 가능한 억제로 유도하지 않았다는 것을 밝혀냈다.

그러나, 두 부류의 oxPL이 동시에 차단되었을 때, oxLDL 입자에 대한 COVID-19 혈청 중 IgG 항체의 결합의 평균 약 20%까지의 유의한 억제가 관찰되었다(도 8). 이러한 데이터는 COVID-19 환자의 항-oxLDL IgG 자가항체가 실제로 oxPL에 대한 특이성을 함유하고 oxPC 및 oxPE 이외의 OSE를 인식하는 추가의 클론을 함유할 가능성이 있음을 시사한다.

실시예 14. COVID-19 혈청은 산화 특이적 에피토프에 대한 상승된 IgG 및 IgA 항체를 함유한다.

oxPC 및 oxPE와 같은 OxPL은 산화 초기 단계에서 OxLDL 입자에서 주로 발견될 수 있는 반면, 말론데알데히드 또는 4-하이드록시노네날과 같은 지질 과산화의 최종 생성물은 진행된 산화 상태를 갖는 LDL 입자에서 우세하다.

COVID-19 환자의 혈청 중 항-oxLDL 항체가 oxLDL 입자에 의해 노출된 상이한 유형의 OSE에 결합한다는 것을 나타내기 위해, ELISA 플레이트를 포스포릴콜린(PC), 말론디알데히드(MDA) 및 4-하이드록시노네날(HNE)로 코팅하여 초기 및 후기 산화 특이적 에피토프를 나타낸다. 코팅된 웰은 중증 질환을 앓고 있는 입원한 COVID-19 환자의 혈청 또는 건강한 공여자의 혈청과 함께 인큐베이팅하고, 항체 결합은 이소형 특이적 HRP-접합 이차 항체에 의해 검출되었다.

건강한 공여자의 혈청에는 PC에 결합하는 IgG 및 IgA 항체가 함유되어 있는 반면, 항-MDA 및 항-HNE IgG 및 IgA 항체의 수준은 각각 낮거나 검출 가능하지 않았음이 밝혀졌다(도 9).

PC는 폐렴구균 세포벽 다당류의 면역우세 결정인자이기 때문에, 건강한 공여자의 항-PC IgG 및 IgA 항체는 이전의 폐렴구균 감염 또는 백신접종 이력을 나타낼 수 있다. 그러나, 그리고 급격한 대조로, 건강한 공여자의 혈청과 비교하여 중증 COVID-19 환자의 혈청 중 MDA 및 HNE에 결합하는 IgG 및 IgA 항체의 매우 유의하게 상승된 수준이 검출되었고(도 9), 이는 COVID-19 환자의 혈청 내 항-oxLDL IgG 및 IgA 자가항체의 주요 분획이 실제로 LDL에 의해 노출된 산화 유래 에피토프에 결합한다는 것을 나타낸다.

이 새로운 발견은 심각한 COVID-19의 발병기전에 기여하는 다음 메커니즘을 지원한다:

1) oxPL 및 OSE는 COVID-19 환자에서 형성되고;

2) oxPL 및 OSE는, 예를 들면, 천연 항체 결핍으로 인해, COVID-19 환자 모집단에서 효율적으로 제거되지 않을 수 있어 SARS-CoV-2 감염 세포, 아폽토시스 세포 및 지단백질에 oxPL 및 OSE의 축적을 초래하고, 이는 이어서 자가면역 반응 및 IgG 및 IgA 자가항체의 생성을 유발하고;

3) 항-oxPL 및 OSE IgG 및 IgA 자가항체는, 예를 들면, LDL 입자 또는 감염된 세포 상에서 oxPL- 및 OSE-보유 구조에 결합하고, 선천적 면역 세포에 의해 발현되는 스캐빈저 수용체 및 Fc-수용체를 동시에 결합함으로써 염증유발성 면역 반응을 매개하고, 이에 의해 따라서 중증 COVID-19 환자에서 관찰되는 과염증 상태를 유발한다.

실시예 15. 펜타글로빈으로부터의 IgM 분획은 oxPL을 표시하는 아폽토시스 세포에 결합한다.

상기 제시된 바와 같이, COVID-19 환자는 산화 스트레스가 발생하고 SARS-CoV-2 감염 세포의 막과 순환성 지단백질 입자에서 oxPL의 노출 증가가 발견되었다. 이러한 구조는 IgG 및 IgA 자가항체 반응을 유도하는 능력을 갖고 있고, 효율적으로 제거되지 않으면 중증 COVID-19의 발병기전에 기여한다고 가정된다.

마우스에서, 선천적 면역의 천연 IgM 항체 및 다른 가용성 패턴 인식 수용체(PRR)는 oxPL- 및 OSE-보유 구조에 결합하고, 이에 의해 안전하고 항염증성 클리어런스를 촉진한다.

따라서, 새로운 개념은 oxPL 특이적 천연 IgM 항체를 사용한 중증 COVID-19 환자의 치료가 oxPL의 염증유발 효과를 중화시키고, 안전한 클리어런스를 촉진하고, 이에 의해 파괴적인 자가면역 반응의 유도를 방지한다는 것을 뒷받침한다.

펜타글로빈^®은 IgM 및 IgA 항체가 풍부한 인간 면역글로불린 주입 제제이며, 중증 세균 감염 및 패혈증 환자 및 내인성 면역글로불린이 부족한 면역결핍 환자를 치료하도록 승인되었다. 펜타글로빈^®의 면역글로불린은 수천 명의 건강한 인간 공여자로부터 수득된 풀링된 혈청 항체를 구성하기 때문에, 특히 펜타글로빈^®의 IgM 풀과 더 적은 확장으로 IgA 및 IgG 분획이 상이한 유형의 oxPL 및 OSE를 인식하는 천연 항체를 함유한다는 것이 본원에서 발견되었다.

oxPL 특이적 IgM 항체의 존재를 시험하기 위해, 펜타글로빈^®을 사용하여 이간 세포를 이들의 원형질막에서 상이한 유형의 oxPL 및 OSE를 노출시키는 산화적 스트레스하에 염색하고, IgM 결합은 형광 표지된 이차 항체로 검출했다.

산화적 스트레스는 지질 과산화 반응을 강력하게 개시하는 제제인 H₂O₂의 상이한 농도에 의한 세포의 인큐베이션으로 유도되었고, oxPL의 형성은 oxPL에 의해 노출된 포스포릴콜린 헤드그룹을 인식하는 마우스 천연 IgM E06으로 처리된 세포를 염색하여 모니터링했다. 실제로, 대부분의 H₂O₂ 처리 세포는 E06으로 양성으로 염색되었고, 이는 아폽토시스 유도에 의존하여 처리된 세포가 이들의 표면에 엄청난 양의 oxPL을 나타냈음을 나타낸다(도 10). 펜타글로빈이 염색에 사용되었을 때, 100μM H₂O₂로 처리된 세포의 유의한 분획이 제형 내의 IgM 분획에 의해 결합되었고, IgM 결합이 증가된 아폽토시스 비율 및 따라서 oxPL의 제시와 양성적으로 상관관계가 있었음을 발견했다. 따라서, 이러한 결과는 펜타글로빈^®이 실제로 아폽토시스 세포에 의해 노출된 oxPL에 결합하는 천연 IgM 항체의 분획을 함유한다는 새로운 발견을 나타낸다.

실시예 16. 펜타글로빈 ^® 의 IgM 분획은 SARS- CoV -2 감염 세포에 결합한다.

상기 제시된 바와 같이, SARS-CoV-2로 감염된 폐 선암종 세포(Calu-3)는 마우스 천연 IgM 항체 E06에 의해 결합된 막에 다량의 oxPL을 나타내는 것으로 밝혀졌다(도 4). 더욱이, 또한 상기 제시된 나타낸 바와 같이, 산화적 스트레스하에 세포에 의해 노출된 oxPL에 결합된 펜타글로빈^® 제형 내의 항체가 발견되었다(도 10).

펜타글로빈^®이 SARS-CoV-2 감염된 폐 세포, 예를 들면, 감염된 세포의 원형질막에 노출된 oxPL에 결합하는 항체를 함유하는지 여부를 시험하기 위해, 감염된 Calu-3 세포를 펜타글로빈^®으로 염색하고, IgM 결합을 형광 표지된 항-인간 IgM 이차 항체와 인큐베이팅하여 검출했다. 실제로, 데이터는 펜타글로빈^®이 감염된 세포에 결합할 수 있는 IgM 분획을 함유하고 이러한 항체의 대부분이 원형질막에 제시된 oxPL에 결합할 가능성이 있음을 시사한다(도 11).

실시예 17. 펜타글로빈 ^® 은 oxLDL에 결합하는 항체를 함유한다.

OxPL은 아폽토시스 세포의 막에 의해 독점적으로 노출되지는 않지만 LDL과 같은 순환성 지단백질에도 존재할 수 있고, 여기서 이들은 oxLDL의 주요 병원성 성분을 구성한다.

실제로, SARS-CoV-2 감염 세포의 원형질막과 COVID-19 환자의 혈청 내 순환성 oxLDL에서 다량의 oxPL이 발견되었다. 놀랍게도, 펜타글로빈^®이 다량의 oxPL을 나타내는 아폽토시스 세포에 결합하는 천연 IgM 항체를 함유한다는 것이 본원에서 발견되었기 때문에, 펜타글로빈^®이 oxLDL에 또한 결합하는 항체를 함유하는지 여부를 시험했다. 이를 시험하기 위해, ELISA 플레이트를 oxLDL로 코팅하고, 코팅된 웰을 상이한 농도의 펜타글로빈^®과 함께 인큐베이팅하고, 항체 결합을 표지된 이소형 특이적 이차 항체로 검출했다.

실제로, 펜타글로빈^®은 농도 의존적 방식으로 oxLDL에 결합하는 항체를 함유하는 것으로 밝혀졌다(도 12a). 이소형 특이적 이차 항체가 검출에 사용되었을 때, 펜타글로빈^® 제형 내 oxLDL 결합 항체의 대부분은 IgG(약 45%)이었고, IgM(약 35%) 및 IgA(약 19%)가 이어졌다(도 12b). 그러나, 펜타글로빈^®의 면역글로불린이 78% IgG, 6% IgM 및 6% IgA 이소형으로 구성되어 있음을 고려할 때, oxLDL 결합 이소형의 비율은 제형에 존재하는 비율로 정규화되었고, 대부분의 oxLDL 결합 항체가 실제로 IgM 이소형(약 61%)이고 IgA(약 33%) 및 IgG(약 6%)가 그 뒤를 잇는 것으로 밝혀졌다(도 12c).

감염되지 않은 마우스의 경우, IgM 풀의 약 80% 및 혈청 IgA의 약 50%가 B1 세포로부터 유래되고, 따라서 IgM 및 IgA는 천연 항체의 가장 일반적인 이소형을 나타내는 것으로 나타냈다[참조: Meyer-Bahlburg, 2015, Ann N Y Acad Sci, Vol. 1362, 122-31]. 따라서, 이는 펜타글로빈^® 내의 대부분의 oxLDL 결합 IgM 및 IgA 항체가 인간 천연 항체를 나타낸다는 것을 뒷받침한다.

실시예 18. 펜타글로빈 ^® 은 산화 특이적 에피토프에 결합하는 항체를 함유한다.

펜타글로빈^® 중의 항-oxLDL 항체가 실제로 산화 LDL 입자에 의해 노출된 OSE에 실제로 결합한다는 것을 나타내기 위해, ELISA 플레이트를 천연 항체에 대한 충분히 기재된 표적인 포스포릴콜린(PC), 말론디알데히드(MDA) 및 4-하이드록시노네날(HNE)을 포함한 상이한 부류의 OSE로 코팅했다.

코팅된 웰을 펜타글로빈^®의 4개의 연속 희석액과 함께 인큐베이팅하고, 항체 결합은 HRP-접합 이차 항체에 의해 검출했다. 결과는 펜타글로빈^®이 시험된 모든 부류의 OSE에 결합하는 항체를 실제로 함유하며, 항-PC 항체가 가장 두드러진 OSE-결합 분획을 구성하고, 그 다음으로 항-HNE 및 더 낮은 수준의 항-MDA 항체가 뒤따른다는 것을 나타냈다.

흥미롭게도, IgM 특이적 이차 항체를 사용하여 IgM 결합을 특이적으로 검출한 경우, 본 발명자들은 시험된 모든 부류의 OSE에 대한 유사한 결합 패턴을 발견했고, 이는 펜타글로빈^® 중의 OSE 결합 항체가 주로 IgM 풀에 속한다는 것을 나타낸다(도 13). 높은 항-PC IgM 역가는 전형적으로 건강한 인간 공여자의 혈청에서 발견되며, 이전의 세균 감염 또는 폐렴구균 추출물(예: Pneumovaxx23)을 사용한 면역화로 인해 가장 가능성이 높다[참조: Nishinarita, 1990, Med. Microbiol. Immunol., Vol. 179, 205-214].

이를 뒷받침하기 위해, 마우스의 폐렴구균 면역화가 높은 수준의 PC 특이적 천연 IgM 항체를 유도하여 에스. 뉴모니아에(S.pneumoniae)와 oxLDL 사이의 분자 모방으로 인해 아테롬성 동맥경화증으로부터 보호를 부여하는 것으로 나타났다[참조: Binder, 2003, Nat. Med., Vol. 9, 736-43].

종합하면, 이러한 결과는 펜타글로빈^®이 주로 상이한 부류의 OSE에 결합하는 IgM 이소형의 천연 항체를 함유하고 있음을 나타내며, 본 발명자들은 이러한 항체가 중증 COVID-19 환자에서 oxPL 유도 염증유발성 반응으로부터 보호를 부여할 수 있음을 시사한다.

실시예 19. 펜타글로빈 ^® 은 oxLDL에 대한 COVID -19 혈청의 IgG 및 IgA의 결합을 차단하는 항체를 함유한다.

상기 발견은 COVID-19의 중증도가 순환성 지단백질과 같은 산화적으로 변형된 입자와 면역 복합체를 형성하는 oxPL 및 OSE 특이적 IgG 및 IgA 자가항체의 발달에 의해 동반된다는 것을 나타내고, 이는 중증 COVID-19 환자에서 관찰된 과다염증 상태의 강력한 구동자이다.

상기 데이터는 천연 IgM 항체에 의한 oxPL 및 OSE의 중화가 몇몇 메커니즘에 의해 COVID-19 환자의 염증유발성 잠재력을 중화시킨다는 새로운 개념을 뒷받침한다:

1) 천연 IgM은 선천적 면역 세포 상의 스캐빈저 수용체에 대한 oxLDL과 같은 산화적으로 변형된 입자의 결합을 차단하고;

2) 천연 IgM은 oxLDL과 같은 산화적으로 변형된 입자에 대한 IgG 및 IgA 자가항체의 결합을 차단하여 염증유발성 IgG 및 IgA 함유 면역 복합체의 형성을 방지하고;

3) 천연 IgM은 세포 파편과 같은 oxPL을 노출시키는 구조의 안전하고 항염증성 클리어런스를 촉진하여 oxPL 및 OSE의 축적 및 IgG 및 IgA 자가항체의 발달을 방지한다.

모노클로날 마우스 IgM 항체에 의한 oxLDL 상의 두 부류의 oxPL의 중화가 oxLDL에 대한 COVID-19 혈청으로부터의 IgG 자가항체의 결합을 유의하게 억제하고 펜타글로빈^®이 주로 그의 IgM 풀에서 oxPL 특이적 인간 천연 항체의 유의한 분획을 함유한다는 상기 놀라운 발견은 펜타글로빈^®이 oxPL 특이적 마우스 모노클로날 IgM 항체와 유사하게 oxLDL에 대한 COVID-19 혈청에 존재하는 IgG 및 IgA 자가항체의 결합을 억제할 수 있다는 것을 뒷받침한다.

실제로, oxLDL 코팅된 웰과 펜타글로빈^®의 사전 인큐베이션은 oxLDL에 대한 COVID-19 환자의 혈청으로부터의 자가항체의 결합을 >20%까지 유의하게 억제했고, 이 효과는 IgG 및 IgA 자가항체 둘 다에 대해 명백했다(도 14).

이러한 새로운 발견은 상이한 부류의 oxPL 및 OSE를 중화하고 IgG 및 IgA 자가항체를 함유하는 면역 복합체의 형성을 방지하는 놀라운 특성으로 인해 중증 COVID-19 환자를 치료하기 위한 펜타글로빈^®의 적용을 뒷받침하며, 이에 의해 과염증성 면역 반응을 개선하고 임상 상태의 신속한 개선에 기여하는 잠재력을 나타낸다.

실시예 20. COVID-19에 대한 임상적 NAD 조절 중재 전략

COVID-19는 질환의 치료 및 예방하는 측면에서 매우 높은 의학적 요구가 있는 질환이다. 본 발명자들은 NAD 조절이 COVID-19의 치료와 예방 모두를 위한 귀중한 개입 전략으로 기대한다.

1. 임상 치료 시험

a. 기계적 환기가 필요한 최대 10명의 중증 COVID-19 감염 환자를 대상으로 한 소규모 연구에서 또는 의학적 평가에 따르면 급격한 폐 악화로 인해 1 내지 4시간 이내에 기계론적 환기가 필요할 것이며, 제형 펜타글로빈^®을 함유하는 천연 항체는 3일 연속 5mL/kg 28mL/h로 투여된다.

b. 이어서, 두 센터에서 최대 50명의 환자를 대상으로 한 제어된 임상 II상 연구가 시작된다. 이 시험에서, 펜타글로빈^®의 잠재적인 NAD 조절 활성의 효과는 체계적으로 평가되고, 주요 임상 결과 데이터와 상호관계가 있다.

c. 이어서, 대규모 III상 다국적 다기관 시험이 시행된다. 또한, 신규 천연 항체 풍부 혈장 제형(즉, 25세 미만 여성 공여자로부터)이 후속 승인 시험을 위해 개발되었고, 바람직하게는 III상 연구에서 처음으로 이용가능한 중간 데이터가 있는 시점에 이미 개발되었다.

d. 이어서, 재조합 모노클로날 천연 항체가 COVID-19 및 기타 NAD 관련 질환을 치료하기 위한 NAD 조절 펜타글로빈^®을 대체하기 위해 동시에 개발된다.

2. 임상 예방 시험

전임상 데이터는 BCG 또는 뉴모박스와 같은 현재 이용가능한 백신에 대한 잠재적인 NAD 조절 효과를 나타낸다.

시험관내 및 관련 동물 모델에서 이의 성공적인 전임상 확인에 이어, 각각의 화합물에 의한 천연 항체 백신접종 시험이 개시된다. 이러한 화합물 중 일부(예: BCG)의 경우, 중증 COVID19 질환을 획득하는 것으로부터의 보호가 역학적 데이터에 기초하여 가정되었기 때문이다. 그러나, 보호에 대한 잠재적인 원인 이유로서 천연 항체의 유도는 지금까지 밝혀지지 않았다. 결과적으로, NAD 변조는 이러한 시험의 탐색적 부분에서 체계적으로 분석되고 임상 결과 데이터와도 상관관계가 있다.

실시예 21. 펜타글로빈 ^® 을 사용한 COVID -19의 임상 치료

매우 심각한 COVID-19 질환 경과를 갖고 5명 중 4명이 침습적인 기계적 환기가 필요한 5명의 환자에게 펜타글로빈^®을 투여했다.

환자 1:

59세 남성(#1).

동반 질환: M. Bechterew(모르핀 의존성 만성 통증 환자), 골다공증, 고혈압.

병력: 2020년 3월 28일, 복통 및 같은 날, 전신 상태의 급속한 장애, 양성 SARS-CoV-2 면봉으로 지역 병원에 내원. 4월 4일에 삽관 및 침습적 CPAP 환기에 대한 과정 악화 및 요구 사항에서 호흡 부전의 급속한 발전. 카테콜아민(노르아드레날린)에 대한 입원 요건이 있는 경우 4월 14일에 ICU UKHD로 이송. 4월 14일 CT Thorax에서, 기존의 폐 섬유증이 의심되는 전형적인 COVID-19 폐렴의 징후. 4월 16일, 펜타글로빈 10g 투여, BAL에서 HSV-1 양성 반응을 시험한 후 아시클로비르 요법의 개시. 심폐 안정화, 그 후 BIPAP 환기, 기관종으로 변경. 4월 22일에, 자발 호흡 시도, 아직 잘 견디지 못한 빈호흡 및 병적 호흡 역학.

환자 2:

80세 남성(#2).

동반질환: M. Bechterew, 관상동맥 3 심장 질환, RCA 폐색으로 인한 급성 심근 경색, 붕괴 후 급성 경추 7 골절.

병력: 1주일 동안 호흡기 감염, 항생제에 반응하지 않음. 4월 2일에 환자는 머리 열상으로 집에서 의식을 잃은 채로 발견되어 응급 의사에게 경고를 보냈고, 도착시 경계가 현저히 감소했지만 반응성이었고, 12 l O2/분에서 SO2 87%, 병원 응급실로 이송. 진단: 면봉 Sars-2 양성, CT 스캔: 중추 폐 동맥 색전증, COVID-19 폐 질환의 전형적인 징후. 상승 온도 38.5℃. ECG에서, 심근 경색증(RCA)의 징후, RCA의 확장 및 스텐트 삽입 및 재소통 성공, 중재를 위한 삽관 필요, 카테콜아민 의존성. 이 과정에서, 폐 상황의 심각한 손상은 4월 12일 CT 스캔에서 COVID-19 폐의 심각한 손상이 통합 시작과 함께 침투한다. 2020년 4월 13일에서 4월 15일 사이에, 매일 22.5g의 펜타글로빈 투여. 4월 16일에, 유지 매개변수의 일시적인 손상이 있지만 이뇨작용이 개선됨(혈액투석 시작됨), 그 후 신장 및 폐 상태의 느린 임상적 안정화, 4월 20일에 간헐적 CPAP w/다음 날에 느린 PEEP 감소, 보조적 환기를 간헐적으로 일시 중지하려는 시도 성공, 산소화는 아직 만족스럽지 않다. 4월 22일에, Sars-2에 대한 3건의 후속 음성 시험, 따라서 심폐 상황의 추가 안정화 및 척추 골절의 후속 수술 계획을 위해 심장 ICU로 이송한다.

환자 3:

62세 여성(#3).

동반질환: 지방증, 클리펠-트레노네이 증후군.

병력: 2020년 3월 29일, 5일 동안 발열과 호흡곤란 및 전신 상태 장애, 같은 날 양성 SARS-CoV-2 면봉으로 지역 병원에 내원. 삽관 및 침습적 BIPAP 환기에 대한 과정 악화 및 요건에서 호흡 부전의 급속한 발전. 다른 지역 병원 ICU(Schwabisch Hall)로 이송한 후, 4월 13일 ICU UKHD로 이송, 일시적으로 낮은 용량의 카테콜로아민 요건. 4월 13일 CT Thorax에서 전형적인 COVID-19 폐렴의 징후. V. jug.에서 자유 부유 혈전의 검출, 전체 용량 헤파린화. 4월 14일 및 15일에는 매일 10g의 펜타글로빈 투여. 그 후 빠른 심폐 개선, 합병증 없이 이유식 및 발관. 4월 19일 기관액에서 HSV-1에 대해 양성 반응을 시험한 후, 아시클로비르 요법의 개시. 4월 20일에 SARS-CoV-2 음성 면봉. 코를 통해 1l/분 O2로 지역 병원으로 재이송.

환자 4:

76세 남성(#4).

동반 질환: 당뇨병 II 인슐린 의존성, 고혈압, 이상지질혈증, 서맥 심방세동을 동반한 중증 관상 동맥 3 심장 질환, 고등급 LCX 협착증 및 RCA 폐색이 있는 NSTEMI.

병력: 4월 3일 이후 발열, 호흡곤란, 전신 상태의 급속한 손상으로 시작하여 환자는 4월 13일 지역 병원에 입원했다. SARS-CoV2는 전날 가족 구성원에 의해 양성 판정을 받았다. 4월 14일부터 심폐 상태의 급속한 손상 및 삽관 및 침습적 삽관이 필요함. 증가된 트로포닌 수준 및 급성 신부전의 후속 발달. 4월 15일에 ICU UKHD로 이송. 즉각적인 관상동맥 조영술은 충분한 담보와 근위 LCX 협착이 있는 폐색된 RCA를 나타냈고, 동일한 세션에서 PTCA 및 LCX 스텐트 시술이 성공적으로 수행되었고 카테콜아민 및 혈액 투석이 필요했다. 4월 19일 CT 스캔에서 COVID-19 폐 질환의 전형적인 징후를 나타냈고, 공지되지 않은 기원의 대동맥 궤양이 의심되었다. 이 과정에서 4월 12일 CT 스캔에서 폐 상태의 심각한 손상, 통합 시작과 함께 COVID-19 폐의 심각한 손상이 침투했다. 4월 16일에 환자는 10g의 펜타글로빈을 받았다. 서맥 심방세동 에피소드의 발생, 클로니딘 투여 중단 후 개선. 심폐 안정화. 4월 19일에 추가 10g의 펜타글로빈 투여. 4월 20일에서 마지막 발열 에피소드, 38.8℃에서 진정 효과 감소. 4월 21일부터 이유식 시도, 4월 22일부터 심폐 상태 안정화.

환자 5:

62세 남성(#5).

동반질환: 없음.

병력: 2020년 3월 29일 COVID-19 양성자에 대한 무기억성 접촉. 4월 1일 마른 기침, 발열, 오한 및 전신 상태 손상, 지역 병원 내원, 4월 13일 SARS-CoV-2 면봉 검사에서 양성 판정을 받았다. 이어서, O2 요구량의 지속적 증가 및 호흡 부전 발생. 4월 15일, 호흡 악화로 인해 IMC 유닛 UKHD로 이송. UKHD에서 SARS-CoV-2 음성에 대한 인후 면봉. 같은 날 CT 흉부에서 전형적인 COVID-19 폐렴의 징후. 4월 15일부터 4월 21일까지 고유량 산소 요법(HFOT, Optiflow^®). 4월 16일, 스테로이드와 펜타글로빈 10g 투여. 추가 과정에서, 폐 상황의 안정화는 식욕 부진의 단계적 감소 및 4월 21일에 HFOT의 종료를 허용. 가래를 4월 17일에 SARS-CoV-2 음성에 시험했다. 특히, TNT는 임상 증상 및 ECG의 변화 없이 안정적으로 높게 유지되었다. 코를 통해 1l/분 O2로 양호한 상태로 지역 병원으로 재이송.

다음 표는 각각 시간 경과에 따라 환자 1, 환자 2, 환자 3, 환자 4 및 환자 5에 대해 결정된 임상 데이터를 나타낸다.

도 1은 펜타글로빈^®(P)으로 치료받은 COVID-19 폐렴이 악화된 5명의 환자의 상기 데이터를 요약한다. 도 1은 각각 임상 매개변수 IL-6(도 1a 참조), CRP(도 1b 참조), PCT(도 1c 참조) 및 평균 일일 혈액 pCO₂(도 1d 참조)의 결정된 농도를 도시한다. CRP, PCT 및 IL-6은 주요 염증 마커이다. "P": 펜타글로빈^®의 투여. 또한, 도 1은 기관지폐포 세척액(BAL)에서 SARS-CoV-2의 모니터링된 존재(+) 또는 부재(-)를 나타낸다.

요약하면, 매우 심각한 COVID-19 질환 경과를 가진 5명의 환자와 5명 중 4명이 침습적 기계적 환기가 필요한 환자에서 펜타글로빈 투여가 거의 모든 경우에서 임상 상태를 개선한 것으로 나타났다.

특히, 펜타글로빈은 제어된 임상 시험의 맥락에서 제공되지 않았기 때문에, 투여된 용량은 1일 10g에서 연속 3일 동안 1일 22g까지 다양했다. 총 1명의 환자만이 연속 3일 동안 5mL/kg의 세균 패혈증 치료에 대해 승인된 용량을 투여받았다. 그럼에도 불구하고, 대부분의 환자에서 인터루킨-6(IL-6) 및 기타 염증 마커는 임상 상태 및 가장 두드러진 환기 매개변수의 유의한 개선과 함께 매우 유의한 방식으로 떨어졌다.

특히, 모든 환자는 추가 실험 치료제로서 CCR 5 억제제 마라비록을 투여받았다. 염증 매개변수의 개선이 적어도 부분적으로 마라비록에 기인할 수 있지만, 펜타글로빈 투여, 염증의 감소(Il-6) 및 임상 개선 사이에 마라비록-독립적 시간적 관계에 대한 분명한 증거가 있다. 마라비록의 염증유발성 마크로파지 매개 효과도 또한 이전에 나타났기 때문에, 마라비록이 적어도 일부 경우에는 항염증성 펜타글로빈 효과를 길항할 수도 있다는 것도 가능하다.

이 사전 연구의 데이터는 종합적으로 중증 COVID-19 질환의 유의한 개선을 나타내고, 이에 의해 NAD 질환의 성공적인 치료 개념을 확인한다. 펜타글로빈에 의해 매개되는 치료 원리를 확인하는 제어된 임상 연구가 보증된다.

실시예 22. COVID-19 환자 혈청에서 항핵 자가면역항체의 검출.

혈청 내 항핵 자가면역 항체(ANA)을 검출하는데 일반적으로 사용되는 HEp2 Slides(Kallestad)를 중환자실에서 치료된 3명의 중증 COVID-19(COV#6, COV#7, COV#8) 환자로부터 유래된 혈청 또는 4명의 건강한 공여자(HD#1, HD#2, HD#3, HD#4)의 혈청과 함께 인큐베이팅했다. 결과는 도 3에 제시되어 있다.

도 3에 제시된 바와 같이, 상단 행은 1:5로 희석된 혈청을 나타내고, 하단 행은 1:10으로 희석된 혈청의 결과를 나타낸다.

시험 키트에 포함된 ANA를 함유하는 용액을 양성 대조군으로 사용했다. 희석되지 않은 각 혈청의 총 IgG 농도는 이하 나타낸다.

데이터는 COVID-19 환자의 혈청으로 유의하게 더 강력한 염색 신호를 나타내고, 이는 이들 혈청에서 ANA의 존재를 나타낸다. 대조적으로, 건강한 공여자 대조군 혈청은 염색이 거의 또는 전혀 나타나지 않았고, 이는 ANA의 부재를 나타낸다.

이러한 데이터는 천연 항체(nAB)의 부족이 심각한 COVID-19 과정 동안 자가면역 항체의 발달을 초래할 수 있음을 뒷받침한다. 이러한 자가면역 항체의 존재는 재발하거나 오래 지속되는 COVID-19 질환 증상에 대한 증거를 제공하며, 이는 본 발명과 관련하여 충분한 수준의 천연 항체, 모노클로날 천연 IgM 또는 IgA의 제공, 또는 천연 항체(예: 펜타글로빈^®)가 풍부한 제제가 자가면역 항체의 생성을 방지하거나 수준을 감소시킬 수 있음을 뒷받침한다.

실시예 1 내지 22의 요약

본 명세서에 제시된 상기 데이터는 본 발명의 기초가 되는 모델을 추가로 뒷받침하며, 본 명세서에 설명된 메커니즘에 따라 oxPL 및 OSE의 과도한 형성을 유발하는 SARS-CoV-2, SARS 또는 H5N1 인플루엔자 바이러스와 같은 폐 병원체의 비정상적인 특징에 의해 설명될 수 있다.

바이러스 복제 및 결과적으로 감염된 환자의 폐에서 oxPL 및 OSE의 축적은 보호 바이러스 특이적 IgG 및 oxPL 특이적 IgM 항체를 생산하는 것들을 포함하여 단핵구, T 세포 및 B 세포의 모집 및 국소 활성화를 포함하는 면역 반응을 유발한다. oxPL 및 OSE에 대한 IgM 항체를 생산하는 B 세포 클론 중 일부는, 예를 들면, 항원 산화 유래 펩티드 또는 바이러스 펩티드를 T 세포에 제시함으로써 IgM에서 IgA 또는 IgG로의 이소형 부류 전환을 겪도록 잘못 자극될 수 있다. 이어서, 이러한 부류 전환된 B 세포는 아폽토시스 세포 및 oxLDL을 포함하는 많은 상이한 산화적으로 변형된 구조에 의해 표시되는 oxPL 및 OSE에 결합하는 IgA 또는 IgG 자가항체를 생산한다. 실제로, oxLDL에 강력하게 결합된 중증 COVID-19 환자의 혈청에서 유의하게 상승된 수준의 IgG 및 IgA 자가항체가 발견되었고, 이러한 자가항체는 oxLDL-IgG- 및 oxLDL-IgA-면역 복합체를 형성할 가능성이 높다. OxPL 특이적 천연 IgM 항체는 상이한 방식으로, 예를 들면, 스캐빈저 수용체에 대한 oxPL 결합을 차단하고 병원성 IgG- 및 IgA-면역 복합체의 형성을 방지하며 oxPL-노출 구조의 안전한 클리어런스를 촉진함으로써 염증유발성 IgG 및 IgA 자가항체로부터 보호한다. 그러나, oxPL의 형성과 중화 사이의 균형이 붕괴되는 조건에서, 예를 들면, 내인성 천연 IgM 및 가능하게는 IgA1 항체 수준이 낮은 개체가 SARS-CoV-2로 감염되는 경우, IgG 및 IgA2 자가항체와 같은 염증유발성 이소형의 생산은 통제 불능 상태가 되고 새로 형성된 oxLDL의 IgG 및 IgA2 함유 면역 복합체가 결국 신체의 별개의 부위, 예를 들면, 혈관벽, 관절 또는 사구체 모세혈관벽에 침착되며, 여기서 이들은 수지상 세포, 마크로파지 및 호중구의 스캐빈저 수용체-, Fc-감마 및 Fc-알파-수용체 매개 활성화를 통해 염증 반응을 강력하게 유발한다.

이러한 자가면역 면역 반응은 더 이상 바이러스가 검출될 수 없을 경우, 중증 COVID-19 말기에 관찰되는 전신적 과염증 상태의 주요 구동자가 되며, 장기적으로는 결국 관절염, 혈관 손상, 급성 신장 손상, 프로응고 상태의 유도 및 다기관 손상과 같은 루푸스 유사 자가면역 발현에서 절정에 달하며, 아마도 Long-COVID로 공지된 현상에 기여한다. 따라서, 달리 oxPL-노출 구조의 염증유발성 기능을 중화시킬 수 있는 oxPL 및 OSE 특이적 천연 IgM 및 가능하게는 IgA1 항체의 수준이 감소된 개체는 특히 면역 복합체 oxPL-IgG 또는 oxPL-IgA2에 의해 유도되는 다기관 과염증 현상을 발생시키는 경향이 있다.

이 개념은 IgM 항체, IgG2 또는 IgG4 항체, Fc-이펙터 기능을 지우기 위한 변형을 운반하는 IgG 항체 또는 oxPL 및 OSE를 인식하는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 중증 질환이 있는 COVID-19 환자 또는 진행 중인 염증유발성 자가면역 상태를 겪고 있는 Long-COVID 환자를 치료하면 oxPL 및 OSE-노출 구조를 중화시킴으로써 과염증 상태의 현저한 감소를 유도하여 면역 복합체를 함유하는 병원성 oxPL-IgG 및 oxPL-IgA의 형성을 방지하고 이들의 안전한 클리어런스를 촉진한다는 것을 뒷받침한다.

실시예 23. OSE 및 DNA를 포함하는, 상이한 위험 관련 분자 패턴(DAMP)에 결합하는 2개의 모노클로날 항체.

OSE 및 DNA를 포함하는 상이한 위험 관련 분자 패턴(DAMP)에 결합하는 2개의 모노클로날 항체가 본 명세서에서 특성화된다.

이들 항체는 각각 서열번호 1 내지 6("클론 1"에 상응함) 및 서열번호 9 내지 14("클론 2"에 상응함)를 참조하여 구조적으로 상기 기재되어 있다(뿐만 아니라 각각 서열번호 7 내지 8("클론 1"에 상응함) 및 서열번호 15 내지 16("클론 2"에 상응함)를 참조하여).

항체는 IgM 이소형이고 CD5^posCD20^posCD27^posCD43^posCD70^neg의 표현형을 나타내는 단일 세포 분류 인간 B 세포로부터 단리되었다.

이 표현형을 나타내는 인간 B 세포는 마우스 B1 세포의 인간 대응물을 구성하는 것으로 기재되었다[참조: Griffin, Holodick et al., 2011, J Exp Med, Vol. 208(1)]. 따라서, 본 명세서에 개시된 2개의 모노클로날 항체는 천연 항체의 특성을 보유한다.

본 명세서에 기재된 방법에 의해 단리된 모노클로날 항체의 특이성을 시험하기 위해, 이들 항체를 완전 인간 IgM 분자로서 발현되었고, 이들의 항원 결합 특성을 시험했다. 마우스 및 인간 천연 항체에 대해 잘 기재된 표적인 적어도 2개의 항원에 결합하는 2개의 클론이 동정되었다. 하기 표는 본 명세서에 개시된 2개의 클론에 대한 결합 검정의 결과를 요약한다.

당업계에 공지된 천연 항체의 특성을 갖는 마우스 또는 인간 모노클로날 항체의 각 클론은 명확하게 정의할 수 있는 에피토프에 대해 미세한 특이성을 나타냈다.

예를 들면, apoE-결핍 마우스(여기에 제시된 실험 중 일부에 사용된 클론 E06 포함)로부터 단리된 OSE 특이적 모노클로날 IgM 항체 중 일부는 oxLDL, oxPL, 예를 들면, 2-(5-옥소발레릴) 포스파티딜콜린(POVPC), PC-단백질 부가물 또는 PC-함유 다당류에 의해 노출된 포스포릴콜린(PC)에 대한 독특한 결합 특이성을 나타내지만 MDA에 대해서는 그렇지 않는 반면, 다른 클론은 MDA-변형 LDL 및 MDA-단백질 부가물에 특이적으로 결합하지만 PC 에피토프에는 그렇지 않다[참조: Shaw et al., 2000, J Clin Invest, Vol.105(12)].

상기 여기에 제시된 일부 실험에서 사용된 마우스 모노클로날 IgM 항체 509는 산화 포스파티딜에탄올아민(PE)에 대한 특이성을 나타냈지만 산화 포스파티딜콜린, 산화 포스파티딜세린, 산화 포스파티드산 또는 이들의 천연 비산화 대응물에 대해서는 그렇지 않은 것으로 나타났다[참조: Bochkov et al., 2016, Biomark Med., Vol. 10(8)].

모노클로날 항체 LA25는 OSE 말론디알데히드-아세트알데히드(MAA)에 대해 배타적인 특이성을 나타냈지만 구조적으로 관련된 OSE MDA에는 그렇지 않았다(WO/2018/049083, PCT/US2017/050566).

따라서, 상기 특성화된 "클론 1" 및 "클론 2"의 모노클로날 항체가 산화 LDL, MDA-단백질 부가물, PC-단백질 부가물 및 DNA를 포함하는 DAMP의 적어도 2개의 에피토프에 결합한다는 것은 놀라운 일이다.

이 에피토프 각각은 만성 및 급성 염증유발성 질환에 연루되고 천연 항체의 표적이 되는 것으로 기재되었다.

이러한 독특한 특징 때문에, 본 명세서에 기재된 모노클로날 항체는 천연 항체 결핍과 관련된 염증 상태, 예를 들면, 급성 병원체 유발 염증, 급성 폐 손상, 아테롬성 동맥경화증 및 많은 다른 상태를 앓고 있는 환자를 치료하는 데 특히 적합하다. 이러한 환자에서, 산화 스트레스와 선천적 면역 반응은 oxPL, MDA와 같은 분해 생성물, 아폽토시스 세포 또는 호중구 세포외 트랩(NET)으로부터 유래된 DNA를 포함한 몇몇 형태의 DAMP를 생성하며, 이들 모두는, 예를 들면, 천연 항체에 의해 순환으로부터 효율적으로 제거되지 않을 때 강력한 염증유발성 효과를 보유한다. 따라서, 이러한 환자를 치료하는 데 사용되는 모노클로날 항체는 항염증 및 유익한 효과를 달성하기 위해 가능한 한 많은 DAMP 및 OSE를 인식하고 중화시키는 것이 바람직하며, 본 발명자들은 본원에서 모노클로날 항체 E06 및 509의 조합만이 oxLDL에 대한 COVID-19 환자의 혈청 내 자가반응성 IgG 항체의 결합의 유의한 억제를 나타냈음을 입증했다. 따라서, 본 명세서에 개시된 모노클로날 항체의 독특한 특징은 당업계에 공지된 단일특이성 천연 항체에 비해 중요한 이점을 제공한다.

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ttcaacctag 22380 gacttttcta ttaaaatata atgaaaatgg aaccattaca gatgctgtag actgtgcact 22440 tgaccctctc tcagaaacaa agtgtacgtt gaaatccttc actgtagaaa aaggaatcta 22500 tcaaacttct aactttagag tccaaccaac agaatctatt gttagatttc ctaatattac 22560 aaacttgtgc ccttttggtg aagtttttaa cgccaccaga tttgcatctg tttatgcttg 22620 gaacaggaag agaatcagca actgtgttgc tgattattct gtcctatata attccgcatc 22680 attttccact tttaagtgtt atggagtgtc tcctactaaa ttaaatgatc tctgctttac 22740 taatgtctat gcagattcat ttgtaattag aggtgatgaa gtcagacaaa tcgctccagg 22800 gcaaactgga aagattgctg attataatta taaattacca gatgatttta caggctgcgt 22860 tatagcttgg aattctaaca atcttgattc taaggttggt ggtaattata attacctgta 22920 tagattgttt aggaagtcta atctcaaacc ttttgagaga gatatttcaa ctgaaatcta 22980 tcaggccggt agcacacctt gtaatggtgt tgaaggtttt aattgttact ttcctttaca 23040 atcatatggt ttccaaccca ctaatggtgt tggttaccaa ccatacagag tagtagtact 23100 ttcttttgaa cttctacatg caccagcaac tgtttgtgga cctaaaaagt ctactaattt 23160 ggttaaaaac aaatgtgtca atttcaactt caatggttta acaggcacag gtgttcttac 23220 tgagtctaac aaaaagtttc tgcctttcca acaatttggc agagacattg ctgacactac 23280 tgatgctgtc cgtgatccac agacacttga gattcttgac attacaccat gttcttttgg 23340 tggtgtcagt gttataacac caggaacaaa tacttctaac caggttgctg ttctttatca 23400 ggatgttaac tgcacagaag tccctgttgc tattcatgca gatcaactta ctcctacttg 23460 gcgtgtttat tctacaggtt ctaatgtttt tcaaacacgt gcaggctgtt taataggggc 23520 tgaacatgtc aacaactcat atgagtgtga catacccatt ggtgcaggta tatgcgctag 23580 ttatcagact cagactaatt ctcctcggcg ggcacgtagt gtagctagtc aatccatcat 23640 tgcctacact atgtcacttg gtgcagaaaa ttcagttgct tactctaata actctattgc 23700 catacccaca aattttacta ttagtgttac cacagaaatt ctaccagtgt ctatgaccaa 23760 gacatcagta gattgtacaa tgtacatttg tggtgattca actgaatgca gcaatctttt 23820 gttgcaatat ggcagttttt gtacacaatt aaaccgtgct ttaactggaa tagctgttga 23880 acaagacaaa aacacccaag aagtttttgc acaagtcaaa caaatttaca aaacaccacc 23940 aattaaagat tttggtggtt ttaatttttc acaaatatta ccagatccat caaaaccaag 24000 caagaggtca tttattgaag atctactttt caacaaagtg acacttgcag atgctggctt 24060 catcaaacaa tatggtgatt gccttggtga tattgctgct agagacctca tttgtgcaca 24120 aaagtttaac ggccttactg ttttgccacc tttgctcaca gatgaaatga ttgctcaata 24180 cacttctgca ctgttagcgg gtacaatcac ttctggttgg acctttggtg caggtgctgc 24240 attacaaata ccatttgcta tgcaaatggc ttataggttt aatggtattg gagttacaca 24300 gaatgttctc tatgagaacc aaaaattgat tgccaaccaa tttaatagtg ctattggcaa 24360 aattcaagac tcactttctt ccacagcaag tgcacttgga aaacttcaag atgtggtcaa 24420 ccaaaatgca caagctttaa acacgcttgt taaacaactt agctccaatt ttggtgcaat 24480 ttcaagtgtt ttaaatgata tcctttcacg tcttgacaaa gttgaggctg aagtgcaaat 24540 tgataggttg atcacaggca gacttcaaag tttgcagaca tatgtgactc aacaattaat 24600 tagagctgca gaaatcagag cttctgctaa tcttgctgct actaaaatgt cagagtgtgt 24660 acttggacaa tcaaaaagag ttgatttttg tggaaagggc tatcatctta tgtccttccc 24720 tcagtcagca cctcatggtg tagtcttctt gcatgtgact tatgtccctg cacaagaaaa 24780 gaacttcaca actgctcctg ccatttgtca tgatggaaaa gcacactttc ctcgtgaagg 24840 tgtctttgtt tcaaatggca cacactggtt tgtaacacaa aggaattttt atgaaccaca 24900 aatcattact acagacaaca catttgtgtc tggtaactgt gatgttgtaa taggaattgt 24960 caacaacaca gtttatgatc ctttgcaacc tgaattagac tcattcaagg aggagttaga 25020 taaatatttt aagaatcata catcaccaga tgttgattta ggtgacatct ctggcattaa 25080 tgcttcagtt gtaaacattc aaaaagaaat tgaccgcctc aatgaggttg ccaagaattt 25140 aaatgaatct ctcatcgatc tccaagaact tggaaagtat gagcagtata taaaatggcc 25200 atggtacatt tggctaggtt ttatagctgg cttgattgcc atagtaatgg tgacaattat 25260 gctttgctgt atgaccagtt gctgtagttg tctcaagggc tgttgttctt gtggatcctg 25320 ctgcaaattt gatgaagacg actctgagcc agtgctcaaa ggagtcaaat tacattacac 25380 ataaacgaac ttatggattt gtttatgaga atcttcacaa ttggaactgt aactttgaag 25440 caaggtgaaa tcaaggatgc tactccttca gattttgttc gcgctactgc aacgataccg 25500 atacaagcct cactcccttt cggatggctt attgttggcg ttgcacttct tgctgttttt 25560 cagagcgctt ccaaaatcat aaccctcaaa aagagatggc aactagcact ctccaagggt 25620 gttcactttg tttgcaactt gctgttgttg tttgtaacag tttactcaca ccttttgctc 25680 gttgctgctg gccttgaagc cccttttctc tatctttatg ctttagtcta cttcttgcag 25740 agtataaact ttgtaagaat aataatgagg ctttggcttt gctggaaatg ccgttccaaa 25800 aacccattac tttatgatgc caactatttt ctttgctggc atactaattg ttacgactat 25860 tgtatacctt acaatagtgt aacttcttca attgtcatta cttcaggtga tggcacaaca 25920 agtcctattt ctgaacatga ctaccagatt ggtggttata ctgaaaaatg ggaatctgga 25980 gtaaaagact gtgttgtatt acacagttac ttcacttcag actattacca gctgtactca 26040 actcaattga gtacagacac tggtgttgaa catgttacct tcttcatcta caataaaatt 26100 gttgatgagc ctgaagaaca tgtccaaatt cacacaatcg acggttcatc cggagttgtt 26160 aatccagtaa tggaaccaat ttatgatgaa ccgacgacga ctactagcgt gcctttgtaa 26220 gcacaagctg atgagtacga acttatgtac tcattcgttt cggaagagac aggtacgtta 26280 atagttaata gcgtacttct ttttcttgct ttcgtggtat tcttgctagt tacactagcc 26340 atccttactg cgcttcgatt gtgtgcgtac tgctgcaata ttgttaacgt gagtcttgta 26400 aaaccttctt tttacgttta ctctcgtgtt aaaaatctga attcttctag agttcctgat 26460 cttctggtct aaacgaacta aatattatat tagtttttct gtttggaact ttaattttag 26520 ccatggcaga ttccaacggt actattaccg ttgaagagct taaaaagctc cttgaacaat 26580 ggaacctagt aataggtttc ctattcctta catggatttg tcttctacaa tttgcctatg 26640 ccaacaggaa taggtttttg tatataatta agttaatttt cctctggctg ttatggccag 26700 taactttagc ttgttttgtg cttgctgctg tttacagaat aaattggatc accggtggaa 26760 ttgctatcgc aatggcttgt cttgtaggct tgatgtggct cagctacttc attgcttctt 26820 tcagactgtt tgcgcgtacg cgttccatgt ggtcattcaa tccagaaact aacattcttc 26880 tcaacgtgcc actccatggc actattctga ccagaccgct tctagaaagt gaactcgtaa 26940 tcggagctgt gatccttcgt ggacatcttc gtattgctgg acaccatcta ggacgctgtg 27000 acatcaagga cctgcctaaa gaaatcactg ttgctacatc acgaacgctt tcttattaca 27060 aattgggagc ttcgcagcgt gtagcaggtg actcaggttt tgctgcatac agtcgctaca 27120 ggattggcaa ctataaatta aacacagacc attccagtag cagtgacaat attgctttgc 27180 ttgtacagta agtgacaaca gatgtttcat ctcgttgact ttcaggttac tatagcagag 27240 atattactaa ttattatgag gacttttaaa gtttccattt ggaatcttga ttacatcata 27300 aacctcataa ttaaaaattt atctaagtca ctaactgaga ataaatattc tcaattagat 27360 gaagagcaac caatggagat tgattaaacg aacatgaaaa ttattctttt cttggcactg 27420 ataacactcg ctacttgtga gctttatcac taccaagagt gtgttagagg tacaacagta 27480 cttttaaaag aaccttgctc ttctggaaca tacgagggca attcaccatt tcatcctcta 27540 gctgataaca aatttgcact gacttgcttt agcactcaat ttgcttttgc ttgtcctgac 27600 ggcgtaaaac acgtctatca gttacgtgcc agatcagttt cacctaaact gttcatcaga 27660 caagaggaag ttcaagaact ttactctcca atttttctta ttgttgcggc aatagtgttt 27720 ataacacttt gcttcacact caaaagaaag acagaatgat tgaactttca ttaattgact 27780 tctatttgtg ctttttagcc tttctgctat tccttgtttt aattatgctt attatctttt 27840 ggttctcact tgaactgcaa gatcataatg aaacttgtca cgcctaaacg aacatgaaat 27900 ttcttgtttt cttaggaatc atcacaactg tagctgcatt tcaccaagaa tgtagtttac 27960 agtcatgtac tcaacatcaa ccatatgtag ttgatgaccc gtgtcctatt cacttctatt 28020 ctaaatggta tattagagta ggagctagaa aatcagcacc tttaattgaa ttgtgcgtgg 28080 atgaggctgg ttctaaatca cccattcagt acatcgatat cggtaattat acagtttcct 28140 gtttaccttt tacaattaat tgccaggaac ctaaattggg tagtcttgta gtgcgttgtt 28200 cgttctatga agacttttta gagtatcatg acgttcgtgt tgttttagat ttcatctaaa 28260 cgaacaaact aaaatgtctg ataatggacc ccaaaatcag cgaaatgcac cccgcattac 28320 gtttggtgga ccctcagatt caactggcag taaccagaat ggagaacgca gtggggcgcg 28380 atcaaaacaa cgtcggcccc aaggtttacc caataatact gcgtcttggt tcaccgctct 28440 cactcaacat ggcaaggaag accttaaatt ccctcgagga caaggcgttc caattaacac 28500 caatagcagt ccagatgacc aaattggcta ctaccgaaga gctaccagac gaattcgtgg 28560 tggtgacggt aaaatgaaag atctcagtcc aagatggtat ttctactacc taggaactgg 28620 gccagaagct ggacttccct atggtgctaa caaagacggc atcatatggg ttgcaactga 28680 gggagccttg aatacaccaa aagatcacat tggcacccgc aatcctgcta acaatgctgc 28740 aatcgtgcta caacttcctc aaggaacaac attgccaaaa ggcttctacg cagaagggag 28800 cagaggcggc agtcaagcct cttctcgttc ctcatcacgt agtcgcaaca gttcaagaaa 28860 ttcaactcca ggcagcagta ggggaacttc tcctgctaga atggctggca atggcggtga 28920 tgctgctctt gctttgctgc tgcttgacag attgaaccag cttgagagca aaatgtctgg 28980 taaaggccaa caacaacaag gccaaactgt cactaagaaa tctgctgctg aggcttctaa 29040 gaagcctcgg caaaaacgta ctgccactaa agcatacaat gtaacacaag ctttcggcag 29100 acgtggtcca gaacaaaccc aaggaaattt tggggaccag gaactaatca gacaaggaac 29160 tgattacaaa cattggccgc aaattgcaca atttgccccc agcgcttcag cgttcttcgg 29220 aatgtcgcgc attggcatgg aagtcacacc ttcgggaacg tggttgacct acacaggtgc 29280 catcaaattg gatgacaaag atccaaattt caaagatcaa gtcattttgc tgaataagca 29340 tattgacgca tacaaaacat tcccaccaac agagcctaaa aaggacaaaa agaagaaggc 29400 tgatgaaact caagccttac cgcagagaca gaagaaacag caaactgtga ctcttcttcc 29460 tgctgcagat ttggatgatt tctccaaaca attgcaacaa tccatgagca gtgctgactc 29520 aactcaggcc taaactcatg cagaccacac aaggcagatg ggctatataa acgttttcgc 29580 ttttccgttt acgatatata gtctactctt gtgcagaatg aattctcgta actacatagc 29640 acaagtagat gtagttaact ttaatctcac atagcaatct ttaatcagtg tgtaacatta 29700 gggaggactt gaaagagcca ccacattttc accgaggcca cgcggagtac gatcgagtgt 29760 acagtgaaca atgctaggga gagctgccta tatggaagag ccctaatgtg taaaattaat 29820 tttagtagtg ctatccccat gtgattttaa tagcttctta ggagaatgac aaaaaaaaaa 29880 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 29903 <210> 18 <211> 723 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human Angiotensin-Converting-Enzyme 2 (ACE2) <400> 18 Gln Ser Thr Ile Glu Glu Gln Ala Lys Thr Phe Leu Asp Lys Phe Asn 1 5 10 15 His Glu Ala Glu Asp Leu Phe Tyr Gln Ser Ser Leu Ala Ser Trp Asn 20 25 30 Tyr Asn Thr Asn Ile Thr Glu Glu Asn Val Gln Asn Met Asn Asn Ala 35 40 45 Gly Asp Lys Trp Ser Ala Phe Leu Lys Glu Gln Ser Thr Leu Ala Gln 50 55 60 Met Tyr Pro Leu Gln Glu Ile Gln Asn Leu Thr Val Lys Leu Gln Leu 65 70 75 80 Gln Ala Leu Gln Gln Asn Gly Ser Ser Val Leu Ser Glu Asp Lys Ser 85 90 95 Lys Arg Leu Asn Thr Ile Leu Asn Thr Met Ser Thr Ile Tyr Ser Thr 100 105 110 Gly Lys Val Cys Asn Pro Asp Asn Pro Gln Glu Cys Leu Leu Leu Glu 115 120 125 Pro Gly Leu Asn Glu Ile Met Ala Asn Ser Leu Asp Tyr Asn Glu Arg 130 135 140 Leu Trp Ala Trp Glu Ser Trp Arg Ser Glu Val Gly Lys Gln Leu Arg 145 150 155 160 Pro Leu Tyr Glu Glu Tyr Val Val Leu Lys Asn Glu Met Ala Arg Ala 165 170 175 Asn His Tyr Glu Asp Tyr Gly Asp Tyr Trp Arg Gly Asp Tyr Glu Val 180 185 190 Asn Gly Val Asp Gly Tyr Asp Tyr Ser Arg Gly Gln Leu Ile Glu Asp 195 200 205 Val Glu His Thr Phe Glu Glu Ile Lys Pro Leu Tyr Glu His Leu His 210 215 220 Ala Tyr Val Arg Ala Lys Leu Met Asn Ala Tyr Pro Ser Tyr Ile Ser 225 230 235 240 Pro Ile Gly Cys Leu Pro Ala His Leu Leu Gly Asp Met Trp Gly Arg 245 250 255 Phe Trp Thr Asn Leu Tyr Ser Leu Thr Val Pro Phe Gly Gln Lys Pro 260 265 270 Asn Ile Asp Val Thr Asp Ala Met Val Asp Gln Ala Trp Asp Ala Gln 275 280 285 Arg Ile Phe Lys Glu Ala Glu Lys Phe Phe Val Ser Val Gly Leu Pro 290 295 300 Asn Met Thr Gln Gly Phe Trp Glu Asn Ser Met Leu Thr Asp Pro Gly 305 310 315 320 Asn Val Gln Lys Ala Val Cys His Pro Thr Ala Trp Asp Leu Gly Lys 325 330 335 Gly Asp Phe Arg Ile Leu Met Cys Thr Lys Val Thr Met Asp Asp Phe 340 345 350 Leu Thr Ala His His Glu Met Gly His Ile Gln Tyr Asp Met Ala Tyr 355 360 365 Ala Ala Gln Pro Phe Leu Leu Arg Asn Gly Ala Asn Glu Gly Phe His 370 375 380 Glu Ala Val Gly Glu Ile Met Ser Leu Ser Ala Ala Thr Pro Lys His 385 390 395 400 Leu Lys Ser Ile Gly Leu Leu Ser Pro Asp Phe Gln Glu Asp Asn Glu 405 410 415 Thr Glu Ile Asn Phe Leu Leu Lys Gln Ala Leu Thr Ile Val Gly Thr 420 425 430 Leu Pro Phe Thr Tyr Met Leu Glu Lys Trp Arg Trp Met Val Phe Lys 435 440 445 Gly Glu Ile Pro Lys Asp Gln Trp Met Lys Lys Trp Trp Glu Met Lys 450 455 460 Arg Glu Ile Val Gly Val Val Glu Pro Val Pro His Asp Glu Thr Tyr 465 470 475 480 Cys Asp Pro Ala Ser Leu Phe His Val Ser Asn Asp Tyr Ser Phe Ile 485 490 495 Arg Tyr Tyr Thr Arg Thr Leu Tyr Gln Phe Gln Phe Gln Glu Ala Leu 500 505 510 Cys Gln Ala Ala Lys His Glu Gly Pro Leu His Lys Cys Asp Ile Ser 515 520 525 Asn Ser Thr Glu Ala Gly Gln Lys Leu Phe Asn Met Leu Arg Leu Gly 530 535 540 Lys Ser Glu Pro Trp Thr Leu Ala Leu Glu Asn Val Val Gly Ala Lys 545 550 555 560 Asn Met Asn Val Arg Pro Leu Leu Asn Tyr Phe Glu Pro Leu Phe Thr 565 570 575 Trp Leu Lys Asp Gln Asn Lys Asn Ser Phe Val Gly Trp Ser Thr Asp 580 585 590 Trp Ser Pro Tyr Ala Asp Gln Ser Ile Lys Val Arg Ile Ser Leu Lys 595 600 605 Ser Ala Leu Gly Asp Lys Ala Tyr Glu Trp Asn Asp Asn Glu Met Tyr 610 615 620 Leu Phe Arg Ser Ser Val Ala Tyr Ala Met Arg Gln Tyr Phe Leu Lys 625 630 635 640 Val Lys Asn Gln Met Ile Leu Phe Gly Glu Glu Asp Val Arg Val Ala 645 650 655 Asn Leu Lys Pro Arg Ile Ser Phe Asn Phe Phe Val Thr Ala Pro Lys 660 665 670 Asn Val Ser Asp Ile Ile Pro Arg Thr Glu Val Glu Lys Ala Ile Arg 675 680 685 Met Ser Arg Ser Arg Ile Asn Asp Ala Phe Arg Leu Asn Asp Asn Ser 690 695 700 Leu Glu Phe Leu Gly Ile Gln Pro Thr Leu Gly Pro Pro Asn Gln Pro 705 710 715 720 Pro Val Ser <210> 19 <211> 128 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> human GM-CSF <400> 19 Met Ala Pro Ala Arg Ser Pro Ser Pro Ser Thr Gln Pro Trp Glu His 1 5 10 15 Val Asn Ala Ile Gln Glu Ala Arg Arg Leu Leu Asn Leu Ser Arg Asp 20 25 30 Thr Ala Ala Glu Met Asn Glu Thr Val Glu Val Ile Ser Glu Met Phe 35 40 45 Asp Leu Gln Glu Pro Thr Cys Leu Gln Thr Arg Leu Glu Leu Tyr Lys 50 55 60 Gln Gly Leu Arg Gly Ser Leu Thr Lys Leu Lys Gly Pro Leu Thr Met 65 70 75 80 Met Ala Ser His Tyr Lys Gln His Cys Pro Pro Thr Pro Glu Thr Ser 85 90 95 Cys Ala Thr Gln Ile Ile Thr Phe Glu Ser Phe Lys Glu Asn Leu Lys 100 105 110 Asp Phe Leu Leu Val Ile Pro Phe Asp Cys Trp Glu Pro Val Gln Glu 115 120 125

Claims (39)

1. 산화 인지질(oxidized phospholipid) 및/또는 산화-특이적 에피토프(oxidation-specific epitope)를 인식하는 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체로서,
   상기 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 건강한 개체(individual)로부터 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀(IgA enriched plasma pool)로부터 유래하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹(subgroup)이고, 상기 서브그룹은 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체로 본질적으로 이루어지는, 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
2. 대상체(subject)에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 장애 또는 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
3. 제2항에 있어서, 상기 천연 IgM 및/또는 IgA가 건강한 개체로부터의 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
4. 제2항 또는 제3항에 있어서, 상기 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체가 건강한 개체로부터 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹이고, 상기 서브그룹이 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체로 본질적으로 이루어지는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환이 천연 항체 결핍 감염성, 신경퇴행성, 대사성, 자가면역 또는 심혈관 질환인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
6. 제3항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환이 β-코로나바이러스 SARS-CoV2에 의해 유발된 바이러스 감염 질환 COVID-19이거나, 장기 COVID-19인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
7. 제3항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 감염 세포로부터 인접한 제2 비-감염 세포로의 바이러스의 확산(세포-대-세포 확산)을 억제할 수 있는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
8. 제3항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항염증 활성, 바람직하게는,
   바람직하게는 감염된 폐에서 유리 산화 인지질(free oxidized phospholipid)의 축적을 감소시키는 능력,
   폐 조직에서 세포 파편(cellular debris)을 제거하는 능력,
   IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하는 능력; 및/또는
   사이토카인에 의해 유발되는 염증유발성 면역 반응을 중화하는 능력
   을 갖는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
9. 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 장애 또는 질환이 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
10. 제9항에 있어서, 상기 염증성 질환이, 호흡기 바이러스, 바람직하게는 COVID19, 장기 COVID-19, 인플루엔자, MERS-COV 또는 SARS-COV에 의해 매개된 감염성 질환; 그람 양성 또는 그람 음성 병원체, 진균 또는 기생충에 의해 매개되는 세균 감염에 의해 유발되는 감염성 질환; 및 무균성 염증 질환, 바람직하게는 심혈관 질환(cardiovascular diseases), 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis), 관상동맥 심장 질환(coronary heart disease), 심장 발작(heart attack) 및 뇌졸중(stroke), 진성 당뇨병(diabetes mellitus)과 같은 대사 장애, 신경퇴행성 질환(neurodegenerative diseases), 바람직하게는 알츠하이머병(Alzheimer's Disease), 및 자가면역 질환(autoimmune diseases), 바람직하게는 전신성 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematodes) 또는 다발성 경화증(Multiple Sclerosis)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
11. 제9항에 있어서, 상기 바이러스 감염 질환이 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
12. 제2항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 유효량의 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
13. 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 유효량의 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    상기 인간 천연 IgM 및/또는 IgA 항체는 건강한 개체로부터 IgM 및/또는 IgA 풍부 혈장 풀로부터 유래하는 IgM 및/또는 IgA 항체의 서브그룹이고, 상기 서브그룹은 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 항체, 및 적어도 하나의 약제학적 부형제로 본질적으로 이루어지는, 약제학적 조성물.
14. 제2항에 있어서, 상기 항체가 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 또는 IgA 항체인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
15. 제14항에 있어서, 상기 항체가 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 항체는, 서열번호 1을 포함하는 상보성 결정 영역(complementarity determining region) V_HCDR1, 서열번호 2를 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 3을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 4를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 5를 포함하는 V_LCDR2 및 서열번호 6을 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 9를 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 10을 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 11을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 12를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 13을 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 14를 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노날-, 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
17. 제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 70% 서열 동일성(sequence identity)을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
18. 제14항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 서열번호 7의 V_H 및 서열번호 8의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 V_H 및 서열번호 16의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-β 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연(recombinant human monoclonal) IgM 및/또는 IgA 항체.
19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 여기서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환이 천연 항체 감염성, 신경퇴행성 또는 심혈관 질환인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 상기 장애 또는 질환이 β-코로나바이러스 SARS-CoV-2에 의해 유발되는 바이러스 감염 질환 COVID-19이거나, 장기 COVID-19인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
21. 제14항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 감염된 세포로부터 인접한 제2 비-감염 세포로의 바이러스의 확산(세포-대-세포 확산)을 억제할 수 있는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
22. 제14항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 항염증 활성, 바람직하게는,
    바람직하게는 감염된 폐에서 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키는 능력,
    폐 조직에서 세포 파편을 제거하는 능력,
    IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하는 능력; 및/또는 염증유발성 사이토카인을 중화하는 능력
    을 갖는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
23. 제14항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 장애 또는 질환이 염증성 질환 또는 바이러스 감염 질환인, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
24. 제23항에 있어서, 상기 염증성 질환이, 호흡기 바이러스, 바람직하게는 COVID19, 장기 COVID-19, 인플루엔자, MERS-COV 또는 SARS-COV에 의해 매개된 감염성 질환; 그람 양성 또는 그람 음성 병원체, 진균 또는 기생충에 의해 매개되는 세균 감염에 의해 유발되는 감염성 질환; 및 무균성 염증 질환, 바람직하게는 심혈관 질환(cardiovascular diseases), 아테롬성 동맥경화증(atherosclerosis), 관상동맥 심장 질환(coronary heart disease), 심장 발작(heart attack) 및 뇌졸중(stroke), 진성 당뇨병(diabetes mellitus)와 같은 대사 장애, 신경퇴행성 질환(neurodegenerative diseases), 바람직하게는 알츠하이머병(Alzheimer's Disease), 및 자가면역 질환(autoimmune diseases), 바람직하게는 전신성 홍반성 루푸스(Systemic Lupus Erythematodes) 또는 다발성 경화증(Multiple Sclerosis)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
25. 제23항에 있어서, 상기 바이러스 감염 질환이 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체.
26. 제14항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 유효량의 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
27. 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 인간 IgM 또는 IgA 항체로서,
    (a) 상기 항체는 서열번호 1을 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 2를 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 3을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 4를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 5를 포함하는 V_LCDR2 및 서열번호 6을 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 9를 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 10을 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 11을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 12를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 13을 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 14를 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    (b) 상기 항체는 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 위치 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    (c) 상기 항체는 서열번호 7의 V_H 및 서열번호 8의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 V_H 및 서열번호 16의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 인간 IgM 또는 IgA 항체.
28. 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하는 유효량의 인간 IgM 또는 IgA 항체, 및 적어도 하나의 약제학적 부형제를 포함하는 약제학적 조성물로서,
    (a) 상기 항체는 서열번호 1을 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 2를 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 3을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 4를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 5를 포함하는 V_LCDR2 및 서열번호 6을 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 9를 포함하는 상보성 결정 영역 V_HCDR1, 서열번호 10을 포함하는 V_HCDR2, 서열번호 11을 포함하는 V_HCDR3, 서열번호 12를 포함하는 V_LCDR1, 서열번호 13을 포함하는 V_LCDR2, 및 서열번호 14를 포함하는 V_LCDR3을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    (b) 상기 항체는 서열번호 7의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 위치 및 서열번호 8의 위치 1 내지 25, 35 내지 51, 55 내지 90, 및 101 내지 110에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 위치 1 내지 25, 34 내지 50, 59 내지 96, 및 116 내지 126 및 서열번호 16의 위치 1 내지 26, 34 내지 50, 54 내지 89, 및 99 내지 108에 제시된 아미노산 잔기에 대해 적어도 70%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    (c) 상기 항체는 서열번호 7의 V_H 및 서열번호 8의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하거나; 또는
    상기 항체는 서열번호 15의 V_H 및 서열번호 16의 V_L을 포함하고, 여기서 상기 항체는 산화 포스파티딜콜린 및/또는 산화 1-팔미토일-2-아라키도노일-포스파티딜콜린에 의해 노출된 포스포릴콜린, 산화 카디오리핀, 산화 포스파티딜세린, 말론디알데히드-, 4-하이드록시노네날- 및 2-(ω-카복시에틸)-피롤-변형 단백질, 및/또는 올리고머 아밀로이드-b 펩티드를 인식하고 이에 결합하는, 약제학적 조성물.
29. 제2항 내지 제11항 및 제14항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 제15항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 제12항 내지 제26항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 약제학적 조성물이
    (a) 안지오텐신-전환-효소(ACE)의 억제제/길항제, 안지오텐신-II-유형 1 수용체(AT1R)의 억제제/길항제 및/또는 ACE2 수용체의 발현을 조절하는 화합물; 및/또는 Ang(1-7), AT2R 작용제 및/또는 MAS-수용체 작용제;
    (b) 최종 당화 산물 수용체(RAGE)의 리간드를 억제/길항/중화하는 화합물 및/또는 RAGE의 억제제/길항제; 및/또는
    (c) 과립구-마크로파지 콜로니-자극 인자(GM-CSF) 및/또는 폐포 마크로파지(AM)의 식세포 활성을 증가시키는 화합물, 바람직하게는 아지트로마이신
    과 조합하여 투여되는,
    인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 또는 약제학적 조성물.
30. 제2항 내지 제11항 및 제14항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 제15항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 제12항 내지 제26항에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 약제학적 조성물이 항바이러스 화합물과 조합하여 투여되고, 바람직하게는 상기 항바이러스 화합물은
    렘데시비르;
    파비피라비르;
    카모스타트 메실레이트;
    나파모스타트 메실레이트;
    우미페노비르; 및/또는
    보다 강력한 네오미노파겐 C인,
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 약제학적 조성물.
31. 제2항 내지 제11항 및 제14항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 제15항 내지 제25항 중 어느 한 항에 따라 사용하기 위한 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 제12항 내지 제26항에 따라 사용하기 위한 약제학적 조성물로서,
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 상기 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체 또는 약제학적 조성물이 면역조절제와 조합하여 투여되고, 바람직하게는 상기 면역조절제는
    항-PD-1-, 항-PD-L1, 항-CD40-, CD40-리간드-, 항-CSF-1R-, 및/또는 항-CTLA-4-항체; 및/또는
    사이토카인(바람직하게는 IL-6)에 결합하는 항체, 특정 사이토카인 수용체(바람직하게는 IL-6R)에 결합하는 항체, 케모카인(들)(바람직하게는 CCL2 및 CCL5)에 결합하는 항체, 이들의 특정 케모카인 수용체(들)(바람직하게는 CCR2 및 CCR5) 및/또는 합성 분자(바람직하게는 마라비록)에 결합하는 항체; 및/또는
    덱사메타손인,
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 인간 또는 인간화 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 재조합 인간 모노클로날 천연 IgM 및/또는 IgA 항체, 또는 약제학적 조성물.
32. 대상체에서 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된/관련된/이에 의해 유발된 임상 징후(clinical sign) 또는 질환을 감소 또는 예방하는 방법에 사용하기 위한, 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프를 인식하는 천연 IgM 및/또는 IgA 항체의 생성을 유도하는 화합물을 포함하는 백신으로서,
    상기 백신은 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제(excipient)를 포함하는, 백신.
33. 제32항에 있어서, 상기 백신이 바실러스-칼멧-게린(Bacillus Calmette-Guerin; BCG) 백신 또는 결핵성 폐렴구균 백신인, 백신.
34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 바실러스-칼멧-게린(Bacillus Calmette-Guerin; BCG) 백신이 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis)의 약독화된 세균(attenuated bacterium)을 포함하는, 백신.
35. 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신이
    산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프에 특이적인 천연 IgM의 생산을 자극하고,
    바람직하게는 감염 폐에서, 유리 산화 인지질의 축적을 감소시키고,
    바람직하게는 아테롬성 동맥경화 병변에서, LDL 상의 산화 인지질 및/또는 산화-특이적 에피토프의 축적을 감소시키고;
    바람직하게는 폐포 마크로파지에 의해, IL-10 및/또는 TGFβ 분비를 자극하고/하거나;
    바람직하게는 뇌 조직에서, 올리고머 아밀로이드-β와 같은 미스-폴딩된 단백질(misfolded protein)의 축적을 감소시킬 수 있는, 백신.
36. 제32항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 천연 IgM/IgA 항체 결핍증(NAD)과 연관된 상기 임상 징후 또는 질환이 감염성 질환인, 백신.
37. 제36항에 있어서, 상기 감염성 질환이 바이러스 감염성 질환인, 백신.
38. 제37항에 있어서, 상기 감염성 질환이 바이러스 감염 질환이고, 바람직하게는 상기 바이러스 감염 질환은 코로나바이러스, 바람직하게는 SARS-CoV, SARS-CoV-2, MERS; 인플루엔자 바이러스, 파라인플루엔자 바이러스, 호흡기 합포체 바이러스(RSV), 라이노바이러스, 아데노바이러스, 엔테로바이러스, 인간 메타뉴모바이러스, 헤르페스바이러스, 바람직하게는 HSV-1, HSV-2, VZV, EBV, HCMV, HHV-6, HHV-7, HHV-8에 의한 감염으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는, 백신.
39. 제35항 또는 제38항에 있어서, 상기 바이러스 감염 질환이 β-코로나바이러스 SARS-CoV2에 의해 유발된 바이러스 감염 질환 COVID-19이거나, 또는 장기 COVID-19인, 백신.

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