KR20220127826A - 화합물 및 α1-항트립신 결핍의 치료를 위한 이의 용도 - Google Patents

화합물 및 α1-항트립신 결핍의 치료를 위한 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20220127826A
KR20220127826A KR1020227024042A KR20227024042A KR20220127826A KR 20220127826 A KR20220127826 A KR 20220127826A KR 1020227024042 A KR1020227024042 A KR 1020227024042A KR 20227024042 A KR20227024042 A KR 20227024042A KR 20220127826 A KR20220127826 A KR 20220127826A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
carboxylic acid
piperidine
sulfonyl
compound
a1at
Prior art date
Application number
KR1020227024042A
Other languages
English (en)
Inventor
니겔 램스덴
데이빗 존 폭스
제임스 앤드류 헌팅턴
제임스 마이클 톰린슨
Original Assignee
제트 팩터 리미티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 제트 팩터 리미티드 filed Critical 제트 팩터 리미티드
Publication of KR20220127826A publication Critical patent/KR20220127826A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/451—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine having a carbocyclic group directly attached to the heterocyclic ring, e.g. glutethimide, meperidine, loperamide, phencyclidine, piminodine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4015—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. piracetam, ethosuximide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/46—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with hetero atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/48—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/40—Oxygen atoms
    • C07D211/44—Oxygen atoms attached in position 4
    • C07D211/48—Oxygen atoms attached in position 4 having an acyclic carbon atom attached in position 4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/92—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with a hetero atom directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/96—Sulfur atom

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 화학식 (1)의 특정 카복실산 화합물, 및 상기 화합물을 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다. 상기 화합물은 α1-항트립신 (A1AT)의 유도제일 수 있고, α1-항트립신 결핍 (A1AD 또는 AATD)과 같은 질병 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다.

Description

화합물 및 α1-항트립신 결핍의 치료를 위한 이의 용도
본 발명은 특정 카복실산 및 이의 의약 용도에 관한 것이다.
α1-항트립신 (α1-Antitrypsin: A1AT)은 간에서 생성되어 혈액으로 분비되는 세르핀 수퍼패밀리 (serpin superfamily)의 구성원이다. 이는 다양한 세린 프로테아제, 특히 호중구 엘라스타제를 억제한다. 혈중 A1AT 수준이 낮은 경우, 과도한 호중구 엘라스타제 활성은 폐 조직을 분해하여 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD)과 같은 호흡기 합병증을 초래한다.
혈중 A1AT의 참고 범위는 0.9-2.3 g/L이다. 이보다 낮은 수준은 전형적인 α1-항트립신 결핍 (A1AD 또는 AATD)으로, A1AT를 코딩하는 SERPINA1 유전자의 돌연변이로 유발되는 유전 질환이다. AATD의 가장 흔한 원인인 Z 돌연변이는 성숙한 단백질 (Z A1AT)의 위치 342에 해당하는, A1AT (UniProtKB - P01009 (A1AT_HUMAN))의 위치 366에서 글루타메이트가 리신으로 치환된 것이다. 상기 Z 돌연변이는 A1AT의 폴딩 (folding)에 영향을 미쳐서 오직 작은 비율만이 천연/활성 상태를 획득하게 된다. 나머지는 미스폴딩된 단백질로서 제거되거나, 또는 안정한 폴리머로서 간에 축적된다. 미스폴딩의 결과로, Z 돌연변이 (ZZ)의 동형접합 보인자 (homozygous carriers)는 정상의 10-15%인 A1AT 혈장 수준을 가지며, 이는 보인자가 COPD 소인을 갖게 한다. 간 세포에 Z A1AT 폴리머가 축적되면 보인자는 간경변, 간암 및 기타 간 병리 (liver pathologies)에 걸리기 쉽다.
AATD의 폐 증상에 대한 현재 치료는 혈액 공여자의 혈장으로부터 제조된 A1AT 농축물을 사용하는 강화 요법 (augmentation therapy)을 포함한다. 미국 FDA는 Prolastin, Zemaira, Glassia, 및 Aralast의 4개의 A1AT 제품의 사용을 승인하였다. 투여는 매주 1회 정맥 주입을 통해 이루어진다. 강화 요법은 COPD의 진행을 늦추는 것으로 입증되었다. AATD의 간 증상 (예: 간경변 및 암)은 스테로이드 및 간 이식으로 치료한다. 간 증상의 개선된 치료에 대한 연구 단계의 접근법은 Z A1AT 중합 억제, 및 자가 포식 활성화를 통한 폴리머 클리어런스 증가를 포함한다. 폐 및 간 증상 모두의 개선된 치료에 대한 연구 단계의 접근법은 Z A1AT 폴딩 및 분비의 개선을 지향하고 있다.
Elliott et al (Protein Science, 2000, 9, 1274-1281)은 A1AT의 X-선 결정 구조를 설명하고, Z A1AT 중합에 영향을 미칠 제제를 개발하기 위한 합리적 약물 디자인으로 잠재적 표적인 5개의 공동 (cavities)을 규명하였다.
Parfrey et al (J. Biol. Chem., 2003, 278, 35, 33060-33066)은 Z A1AT 중합에 영향을 미칠 제제를 개발하기 위한 합리적 약물 디자인으로 잠재적 표적인 하나의 공동을 추가로 정의하였다.
Knaupp et al (J. Mol. Biol., 2010, 396, 375-383)은 비스-ANS (4,4'-디아닐리노-1,1'-바이나프틸-5,5'-디설포네이트)가 1:1 화학양론 및 Kd 700 nM으로 Z A1AT에는 결합할 수 있지만 야생형 A1AT (M)에는 결합하지 않는다는 것을 보여주었다.
Chang et al (J. Cell. Mol. Med., 2009, 13, 8B, 2304-2316)은 Z A1AT 중합을 억제하는, Ac-TTAI-NH2를 포함한 일련의 펩티드를 보고하였다.
Burrows et al (Proc. Nat. Acad. Sci., 2000, 97, 4, 1796-1801)은 4-페닐부티르산, 글리세롤 및 트리메틸아민 옥사이드를 포함한 일련의 비-선택적 샤페론이 세포 상등액 및 마우스 모델의 Z A1AT 수준을 증가시킬 수 있음을 보여주었다.
Bouchecareilh et al. (Journal of Biological Chemistry, 2012, 287, 45, 38265-38278)은 세포로부터 야생형 (M) 및 Z A1AT 모두의 분비를 증가시키기 위한 히스톤 데아세틸라제 (histone deacetylase) 억제제, 구체적으로 SAHA (suberoylanilide hydroxamic acid)의 용도를 서술한다.
Berthelier et al (PLOS ONE, May 11, 2015)은 S-(4-니트로벤질)-6-티오구아노신이 인 비트로에서 Z A1AT 중합을 방지할 수 있음을 입증하였다.
Mallya et al (J. Med. Chem., 2007, 50, 22, 5357-5363)은 인 비트로에서 Z A1AT의 중합을 차단할 수 있는, N-(4-하이드록시-3,5-디메틸페닐)-2,5-디메틸티오펜-3-설폰아미드와 같은 일련의 페놀을 서술한다.
Huntington (XIIIth International Symposium on Proteinases, Inhibitors and Biological Control, 23 September 2012, and 7th International Symposium on Serpin Biology, Structure and Function, 1st April 2014)은 Z A1AT 중합에 영향을 미칠 제제를 개발하기 위한 합리적 약물 디자인으로 잠재적인 표적인 Z A1AT의 X-선 결정 구조의 공동에 대해 논의하였다.
US8,436,013B2는 마이크로몰 (micromolar) 범위에서 세포로부터 Z A1AT의 분비를 증가시킬 수 있는 다양한 구조를 개시한다.
Angewandte Chemie International Edition vol 56, no 33, 2017, 9881-9885는 제초제로서 1-((4-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산을 개시한다.
Journal of Applicable Chemistry vol 2, no 6, 2013, 1501-1508은 항박테리아제로서 1-(4-(트리플루오로메틸)페닐설포닐)피페리딘-4-카복실산의 합성을 개시한다.
US2011/0065707A1은 시약으로서 1-(2-클로로벤젠-설포닐)-피페리딘-4-카복실산의 용도를 개시한다.
EP0520336A2는 1-(8-퀴노일-설포닐)-피페리딘-4-카복실산을 개시한다.
WO2019/243841A1은 알파-1-항트립신의 조절제로서 옥소인돌린-4-카복사미드 화합물, 및 알파-1-항트립신과 관련된 질병 치료에서의 용도를 개시한다.
WO2020/081257A1은 알파-1-항트립신의 조절제로서 피롤로-인다졸릴-프로판산 화합물을 개시한다.
US2020/0361939A1은 알파-1-항트립신의 조절제로서 추가의 피롤로-인다졸릴-프로판산 화합물을 개시한다.
1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산의 구조에 기반한 선행 기술의 검색을 본 발명이 이루어진 후에 수행하였다. 검색에 의해 사후에 확인된 가장 밀접한 선행 기술의 분자는 라세미 화합물인, 1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 (CAS registry number 891392-68-0)이었다. 이러한 화합물은 Aurora, ChemDiv 및 the FCH Group으로부터 상업적으로 입수 가능한 것으로 나열되어 있지만, 간행물은 기록되어 있지 않다. 또 다른 유사한 선행 기술의 분자는 1-(1-토실-1,2,5,6-테트라하이드로피리딘-3-일)에탄-1-온 (US9084782B2의 실시예 16)이다. 상기 화합물은 혈관신생을 억제하고, 세포 콜레스테롤 수준을 낮추는 것으로 명시되어 있다 (US9084782B2에는 이 화합물에 대한 생물학적 데이터를 제공하지 않음).
본 발명의 일 양상에 따르면, 하기 화학식 (1)의 화합물 (카복실산)이 제공된다:
Figure pct00001
여기서
Figure pct00002
R1은 선택적으로 치환되거나 또는 융합된 아릴 또는 헤테로아릴 고리 시스템이고,
Figure pct00003
m 및 n은 독립적으로 1, 2 또는 3이지만, n 및 m이 모두 1인 경우의 조합은 제외되며,
Figure pct00004
m 및 n의 조합이 키랄 중심을 생성하는 경우, 선택적으로 거울상 이성질체 및 라세미 혼합물이 모두 포함되고,
상기 화합물은 하기와 같다:
Figure pct00005
1-(퀴놀린-8-일설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00006
1-((2-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00007
1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00008
1-((2,3-디클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00009
(S)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00010
(S)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00011
(R)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00012
(R)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00013
1-((4-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00014
1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00015
1-((3-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00016
1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00017
1-((2,5-비스(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00018
1-((2-(트리플루오로메톡시)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
Figure pct00019
(S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00020
(R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00021
(S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
Figure pct00022
(R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산.
본 발명자들은 본 발명의 화합물이 놀랍게도 올바르게 폴딩되어 활성인 Z A1AT의 수준을 증가시키는데 매우 효과적인 것으로 나타났지만, 야생형 (M) A1AT 또는 A1AT의 Siiyama 변이체의 분비에는 영향을 미치지 않는다는 것을 발견하였다.
또한, 본 발명에 따르면 키랄 중심을 갖는 청구항 1에 따른 화합물의 2개의 거울상 이성질체들의 혼합물이 제공되며, 여기서 혼합물은 라세미이거나 또는 하나의 거울상 이성질체를 다른 거울상 이성질체보다 과량으로 갖는다.
본 발명의 화합물 또는 혼합물은 약학적으로 허용 가능한 염 형태 또는 결정형일 수 있다.
용어 "약학적으로 허용 가능한 염 (pharmaceutically acceptable salt)"은 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 모노 유기 또는 무기 염을 지칭한다. 이는 염기 예컨대 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화리튬, 수산화칼슘, 1-데옥시-2-(메틸아미노)-D-글루시톨, 수산화마그네슘, 수산화아연, 수산화알루미늄, 수산화 제1철 또는 수산화 제2철, 수산화암모늄 또는 유기 아민 예컨대 N-메틸글루카민, 콜린, 아르기닌 및 유사물로부터 유래된 것을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 염의 다른 예시에 대해서는 Gould (1986, Int J Pharm 33: 201-217)를 참조할 수 있다.
본 발명의 추가적인 양상에 따르면, 본원에 기재된 본 발명의 화합물 또는 혼합물, 및 약학적으로 또는 치료적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
용어 "약학적으로 또는 치료적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체"는 활성 성분의 유효성 또는 생물학적 활성을 방해하지 않고, 이것이 투여되는 인간 또는 동물일 수 있는 숙주에 독성이 없는, 고체 또는 액체 충전제, 희석제 또는 캡슐화 물질을 지칭한다. 특정 투여 경로에 따라, 당해 기술분야에 잘 알려진 것과 같은 다양한 약학적으로 허용 가능한 담체가 사용될 수 있다. 비-제한적인 예로는 당, 전분, 셀룰로스 및 이의 유도체, 맥아, 젤라틴, 탈크, 칼슘 설페이트, 식물성 오일, 합성 오일, 폴리올, 알긴산, 포스페이트 완충 용액, 유화제, 등장성 식염수 및 발열성물질-제거수 (pyrogen-free water)를 포함한다.
본 발명에 따르면 모든 적절한 투여 방식이 고려된다. 예를 들어, 약제의 투여는 경구, 피하, 직접 정맥내, 느린 정맥내 주입, 연속 정맥내 주입, 정맥내 또는 경막외 환자 제어 진통 (PCA 및 PCEA), 근육내, 척수강내, 경막외, 낭강내 (intracistemal), 복강내, 경피, 국소, 경점막, 협측 (buccal), 설하, 경점막, 흡입, 비강내, 관절내 (intra-atricular), 비강내, 직장 또는 안구 경로를 통해 수행될 수 있다. 상기 약제는 별개의 투여량 단위로 제제화될 수 있고, 약제학 분야에 잘 알려진 임의의 방법에 의해 제조될 수 있다.
모든 적절한 약학적 투여 제형이 고려된다. 약제의 투여는 예를 들어 경구 용액 및 현탁액, 정제, 캡슐, 로젠지, 발포성 정제, 경점막 필름, 좌제, 협측 제품, 구강 점막 제품 (oral mucoretentive products), 국소 크림, 연고, 겔, 필름 및 패치, 경피 패치, 남용 억제 및 남용 저항성 제제, 비경구 사용을 위한 멸균 용액 현탁액 및 디포 (depots) 등의 형태일 수 있으며, 즉시 방출, 지속 방출, 지연 방출, 제어 방출, 연장 방출 등으로 투여된다.
본 발명의 다른 양상은 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물 또는 혼합물의 용도이다.
본 발명의 추가적인 양상은 Z A1AT 분비의 유도제로 사용하기 위한 본 발명의 화합물 또는 혼합물이다.
추가로 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물 또는 혼합물이 제공된다.
본 발명은 또한 질병 또는 장애를 치료하는 방법을 포함하며, 상기 방법은 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물 또는 혼합물 또는 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 발명은 Z A1AT 분비의 유도제로서 본 발명의 화합물 또는 혼합물의 용도를 추가로 포함한다. 상기 용도는 질병 또는 장애의 치료일 수 있다. 추가적으로 또는 대안으로서, 인 비트로, 예를 들어 인 비트로 분석에서의 용도일 수 있다.
본 발명의 관련 양상에 따른 치료에 적합한 질병 또는 장애는 A1AT의 낮은 혈장 수준을 특징으로 하는 것, 예를 들어 AATD이다.
본 발명은 또한 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 (1)의 라세미 화합물의 용도를 제공하며, 상기 질병 또는 장애는 AATD이다.
또한, Z A1AT 분비의 유도제로서 화학식 (1)의 라세미 화합물의 용도가 제공된다.
본 발명의 설명에서 수치 범위의 사용은 범위 내의 모든 개별 정수 및 주어진 범위의 가장 넓은 범위 내의 상한 및 하한 수치의 모든 조합을 본 발명의 범위 내에 포함하는 것으로 명확하게 의도된다.
본원에서 사용된, 용어 "포함하는 (comprising)"은 포함하는 (comprising) 및 구성된 (consisting of) 모두를 의미하는 것으로 해석되어야 한다. 결과적으로, 본 발명이 "활성 성분으로서 화합물을 포함하는 약학적 조성물"에 관한 것인 경우, 이 용어는 다른 활성 성분이 존재할 수 있는 조성물, 및 또한 정의된 바와 같은 하나의 활성 성분으로만 구성된 조성물 모두를 포함하는 것으로 의도된다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 분야의 통상적인 전문가가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 유사하게, 본원에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 모든 특허 및 기타 모든 참고 문헌은 그 전체가 본원에 참조로 통합된다 (법적으로 허용 가능한 경우).
본 발명의 특정 비-제한적인 예를 하기에 기재한다.
도 1은 인간 Z A1AT를 발현하는 마우스 (huZ 마우스)에서 Z A1AT 수준에 대한 (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산의 효과를 나타내는 그래프이다. 마우스를 비히클, 5, 15 및 50 mg/kg의 (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산으로, 14일 연속 기간 동안 경구 위관 영양법 (oral gavage)으로 1일 2회 치료하였다. 혈액을 -12, -7 및 -5일째에 채취하고, 혈장을 준비하여 인간 Z A1AT의 순환 기저 수준 (circulating basal levels)을 결정하였다. 연구의 마지막 3일 (12일, 13일 및 14일)에 수집된 혈장 샘플을 사용하여 기저 수준과 비교하여 순환하는 인간 Z A1AT 수준에 대한 (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 치료의 효과를 결정하였다. x-축은 (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산의 mg/kg 단위의 치료 투여량이고; y-축은 각 치료 그룹에 대한 기저 수준과 비교하여 인간 Z A1AT의 평균 퍼센트 수준 (즉, A1AT %기준선)이다.
실험
일반적인 방법
하기 합성 절차를 사용하여 화학식 1의 화합물을 제조하였다.
Figure pct00023
카복실산 (1 당량), 수산화칼륨 (1 당량) 및 탄산칼륨 (2 당량)을 물에 부가하고, 교반하였다. 설포닐 클로라이드 (1 당량)를 부가하고, 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 0℃로 냉각시키고, 2M 염산으로 산성화하여 백색 침전물을 수득하였다. 상기 침전물을 건조시키고, n-펜탄으로 연마하여 화학식 (1)의 화합물을 수득하였다.
실시예 1: 1-(퀴놀린-8-일설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 1의 화합물은 일반적인 방법 및 1-퀴놀린-8-일설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.26 (1H, s), 9.07 (1H, s), 8.54 (1H, d), 8.36 (1H, d), 8.30 (1H, d), 7.74 (1H, m), 7.70 (1H, m), 3.81 (2H, m), 2.82 (2H, m), 2.31 (1H, m), 1.82 (2H, m), 1.44 (1H, m).
실시예 2: 1-((2-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 2의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2-클로로페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.38 (1H, br s), 7.97 (1H, d), 7.88 (2H, m), 7.56 (1H, m), 3.60 (2H, m), 2.83 (2H, t), 2.40 (1H, m), 1.86 (2H, m),1.48 (2H, m).
실시예 3: 1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 3의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-클로로페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.77 (1H, s), 7.76 (1H, d), 7.63 (1H, m), 7.60 (1H, m), 3.68 (2H, m), 2.55 (2H, t), 2.37 (1H, m), 2.02 (2H, m),1.86 (2H, m).
실시예 4: 1-((2,3-디클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 4의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2,3-디클로로페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.36 (1H, br s), 7.97 (2H, d), 7.59 (1H, m), 3.64 (2H, m), 2.90 (2H, t), 2.43 (1H, m), 1.80 (2H, m),1.54 (2H, m).
실시예 5: (S)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
실시예 5의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-플루오로페닐)설포닐클로라이드 및 (S)-피페리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.52 (2H, m), 7.48 (1H, m), 7.44 (1H, m), 3.73 (1H, d), 3.53 (1H, d), 2.60 (3H, m), 1.97 (1H, m),1.81 (1H, m), 1.59 (1H, m), 1.50 (1H, m).
실시예 6: (S)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
실시예 6의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-클로로페닐)설포닐클로라이드 및 (S)-피페리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.79 (1H, s), 7.68 (2H, m), 7.62 (1H, m), 3.72 (1H, d), 3.51 (1H, d), 2.60 (3H, m), 1.97 (1H, m),1.81 (1H, m), 1.58 (1H, m), 1.51 (1H, m).
실시예 7: (R)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
실시예 7의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-플루오로페닐)설포닐클로라이드 및 (R)-피페리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.52 (2H, m), 7.48 (1H, m), 7.44 (1H, m), 3.73 (1H, d), 3.53 (1H, d), 2.60 (3H, m), 1.97 (1H, m),1.81 (1H, m), 1.59 (1H, m), 1.50 (1H, m).
실시예 8: (R)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
실시예 8의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-클로로페닐)설포닐클로라이드 및 (R)-피페리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 7.79 (1H, s), 7.68 (2H, m), 7.62 (1H, m), 3.73 (1H, d), 3.53 (1H, d), 2.60 (3H, m), 1.97 (1H, m),1.81 (1H, m), 1.59 (1H, m), 1.50 (1H, m).
실시예 9: 1-((4-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 9의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(4-클로로페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.32 (1H, s), 7.73 (4H, m), 3.47 (2H, m), 2.44 (2H, m), 2.28 (1H, m), 1.86 (2H, m), 1.57 (2H, m).
실시예 10: 1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 10의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.36 (1H, s), 8.03 (2H, m), 7.90 (2H, m), 3.61 (2H, m), 2.85 (2H, m), 2.41 (1H, m), 1.90 (2H, m), 1.55 (2H, m).
실시예 11: 1-((3-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 11의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(3-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.33 (1H, s), 8.13 (1H, m), 8.07 (1H, m), 7.95 (1H, m), 7.90 (1H, m), 3.53 (2H, m), 2.45 (2H, m), 2.32 (1H, m), 1.89 (2H, m), 1.57 (2H, m).
실시예 12: 1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 12의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 8.00 (2H, m), 7.92 (2H, m), 3.20 (2H, m), 2.54 (2H, m), 1.70 (3H, m), 1.57 (2H, m).
실시예 13: 1-((2,5-비스(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 13의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2,5-비스(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.36 (1H, s), 8.30 (2H, m), 8.24 (1H, s), 3.65 (2H, m), 2.87 (2H, m), 2.43 (1H, m), 1.89 (2H, m), 1.54 (2H, m).
실시예 14: 1-((2-(트리플루오로메톡시)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산
실시예 14의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2-(트리플루오로메톡시)페닐)설포닐클로라이드 및 피페리딘-4-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.33 (1H, s), 7.93 (1H, m), 7.83 (1H, m), 7.62 (2H, m), 3.56 (2H, m), 2.71 (2H, m), 2.36 (1H, m), 1.87 (2H, m), 1.52 (2H, m).
실시예 15: (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산
실시예 15의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 (S)-피롤리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.62 (1H, br s), 8.05 (2H, m), 7.90 (2H, m), 3.48 (2H, m), 3.38 (2H, m), 3.15 (1H, m), 2.11 (2H, m).
실시예 16: (R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산
실시예 16의 화합물은 일반적인 방법 및 1-(2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐클로라이드 및 (R)-피롤리딘-3-카복실산을 사용하여 제조하였다.
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.62 (1H, br s), 8.05 (2H, m), 7.90 (2H, m), 3.48 (2H, m), 3.38 (2H, m), 3.15 (1H, m), 2.11 (2H, m).
실시예 17: (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
(S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산을 하기 합성 절차를 사용하여 제조하였다.
Figure pct00024
(S)-피페리딘-3-카복실산 (1 g, 7.7 mmol), 수산화칼륨 (434 mg, 7.7 mmol) 및 탄산칼륨 (2.14 g, 15.4 mmol)을 물 (20 ml)에 부가하고, 교반하였다. 2-(트리플루오로메틸)벤젠설포닐 클로라이드 (1.89 g, 7.7 mmol)를 부가하고, 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응을 0℃로 냉각시키고, 2M 염산으로 산성화하여 백색 침전물을 수득하였다. 상기 침전물을 건조시키고, n-펜탄으로 연마하여 (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산을 수득하였다.
Tlc Rf 0.3 헥산 중 70% 에틸 아세테이트.
m/z: 337.98 (calc 338.03)
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.33 (1H, s), 8.04 (2H, m), 7.90 (2H, m), 3.69 (1H, dd), 3.50 (1H, dd), 2.93 (1H, m), 2.81 (1H, m), 1.91 (1H, m), 1.72 (1H, m), 1.50 (2H, m).
실시예 18: (R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산
(R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산은 (R)-피페리딘-3-카복실산을 사용하여, (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산과 동일한 방식으로 제조하였다.
Tlc Rf 0.3 헥산 중 70% 에틸 아세테이트
m/z: 338.03 (calc 338.03)
1H NMR (400 MHz, d6 DMSO) δ 12.53 (1H, s), 8.04 (2H, m), 7.90 (2H, m), 3.69 (1H, dd), 3.49 (1H, dd), 2.93 (1H, m), 2.81 (1H, m), 1.90 (1H, m), 1.72 (1H, m), 1.49 (2H, m).
실시예 19: HEK-Z 세포를 사용한 A1AT 세포 분비 분석에서 실시예 1-18의 화합물의 활성
방법
인간 Z A1AT 유전자로 안정적으로 형질감염된 인간 배아 신장 세포주인 HEK-Z 세포를 5% CO2를 함유하는 가습된 대기에서 37℃로 밤새 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (웰당 배지 200 μl를 갖는 3.0 x 105 세포/ml). 인큐베이션 후에, 세포를 200 μl 무-혈청 배지로 3회 세척하고, 최종 부피 200 μl로 37℃ 인큐베이터에서 48시간 동안, 비히클, 10 μM 수베라닐로하이드록삼산 (SAHA), 또는 실시예 1-18의 화합물 (농도 10, 33, 100 및 333 nM)을 함유하는 무-혈청 배지를 사용하여 4중 (quadruplicate) 처리로 배지를 교체하였다. 인큐베이션 단계 종료 시에, 상등액을 웰로부터 꺼내고, 1000 x g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 제조자의 지침에 따라 ELISA (인간 세르핀 A1/α1-항트립신 듀오 세트 ELISA, R& D Systems, DY1268)에 의해 인간 A1AT 수준에 대해 분석하였다.
간략하게는, 96 웰 플레이트를 실온에서 밤새 인간 A1AT 포획 항체 (capture antibody)로 코팅하였다 (스톡으로부터 1:180 희석, 100 μl 최종 부피/웰). 그 다음에 포획 항체를 제거하고, 웰을 300 μl의 세척 버퍼 (PBS 중 0.05% Tween 20)로 3회 세척한 다음에, 200 μl의 시약 희석제 (PBS 중 25% Tween 20)를 실온에서 1시간 동안 각 웰에서 인큐베이션하였다. 그 다음에, 희석된 샘플, 표준 물질 (125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 및 8000 pg/ml A1AT), 또는 블랭크 (blanks)를 각 웰에 이중으로 부가하고, 플레이트를 플레이트 실러 (plate sealer)로 커버하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. 샘플 인큐베이션 단계 종료 시에, 샘플을 꺼내고, 모든 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 검출 항체 (스톡으로부터 1:180 희석)를 각 웰에 부가하고, 실온에서 추가 2시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 상등액을 꺼내고, 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 스트렙타비딘-HRP 용액 (스톡으로부터 1:200 희석)을 암실에서 20분 동안 각 웰에 부가하였다. 그 후에, 50 μl의 정지 용액 (2M H2SO4)을 부가하고, 마이크로플레이트 리더 (microplate reader)를 사용하여 각 웰로부터 570 nm 블랭크를 제하고 (subtracted), 450 nm에서 각 웰의 광학 밀도 (OD)를 판독하였다. GraphPad Prism 7을 사용하여 4 파라미터 로지스틱 곡선 (4 parameter logistic curve)을 제작하고, 표준 곡선에서 보간하고 적절한 희석 계수를 곱하여 각 샘플에서 A1AT 농도를 결정하였다.
결과
형질감염된 HEK-EBNA 세포로부터 배지로 분비된 인간 A1AT의 양을 ELISA로 측정하였다. 10 μM의 SAHA를 모든 인 비트로 A1AT 분비 실험에 대한 포지티브 대조군으로 사용하였다.
표 1의 데이터는 실시예 1-18의 화합물이 ELISA에 의해 측정된 바와 같이 용량 의존적 방식으로 HEK-Z 세포로부터 인간 Z A1AT의 분비를 증가시키는 것을 보여준다.
실시예 300 nM에서 비히클에 대한 중간값 A1AT 증가
1 247
2 235
3 166
4 147
5 220
6 240
7 280
8 260
9 200
10 235
11 215
12 200
13 213
14 227
15 230
16 200
17 310
18 200
실시예 20: HEK-M 세포를 사용한 A1AT 세포 분비 분석에서 실시예 1-18의 화합물의 활성
방법
M A1AT로 안정적으로 형질감염된 인간 배아 신장 세포주인 HEK-M 세포를 5% CO2를 함유하는 가습된 대기에서 37℃로 밤새 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (웰당 배지 200 μl를 갖는 3.0 x 105 세포/ml). 인큐베이션 후에, 세포를 200 μl 무-혈청 배지로 3회 세척하고, 최종 부피 200 μl로 37℃ 인큐베이터에서 48시간 동안, 비히클, 10 μM 수베라닐로하이드록삼산 (SAHA), 또는 실시예 1-16의 화합물을 함유하는 무-혈청 배지로 6중으로 배지를 교체하였다. 인큐베이션 단계 종료 시에, 상등액을 웰로부터 꺼내고, 1000 x g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 제조자의 지침에 따라 ELISA (인간 세르핀 A1/α1 항트립신 듀오 세트 ELISA, R& D Systems, DY1268)에 의해 인간 A1AT 수준에 대해 분석하였다.
간략하게는, 96 웰 플레이트를 실온에서 밤새 인간 A1AT 포획 항체로 코팅하였다 (스톡으로부터 1:180 희석, 100 μl 최종 부피/웰). 그 다음에 포획 항체를 제거하고, 웰을 300 μl의 세척 버퍼 (PBS 중 0.05% Tween 20)로 3회 세척한 다음에, 200 μl의 시약 희석제 (PBS 중 25% Tween 20)를 실온에서 1시간 동안 각 웰에서 인큐베이션하였다. 그 다음에, 희석된 샘플, 표준 물질 (125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 및 8000 pg/ml A1AT), 또는 블랭크를 각 웰에 이중으로 부가하고, 플레이트를 플레이트 실러로 커버하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. 샘플 인큐베이션 단계 종료 시에, 샘플을 꺼내고, 모든 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 검출 항체 (스톡으로부터 1:180 희석)를 각 웰에 부가하고, 실온에서 추가 2시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 상등액을 꺼내고, 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 스트렙타비딘-HRP 용액 (스톡으로부터 1:200 희석)을 암실에서 20분 동안 각 웰에 부가하였다. 그 후에, 50 μl의 정지 용액 (2M H2SO4)을 부가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 각 웰로부터 570 nm 블랭크를 제하고, 450 nm에서 각 웰의 광학 밀도 (OD)를 판독하였다. GraphPad Prism 7을 사용하여 4 파라미터 로지스틱 곡선을 제작하고, 표준 곡선에서 보간하고 적절한 희석 계수를 곱하여 각 샘플에서 A1AT 농도를 결정하였다.
결과
형질감염된 HEK-EBNA 세포로부터 배지로 분비된 인간 M A1AT의 양을 ELISA로 측정하였다. 10 μM의 SAHA를 모든 인 비트로 A1AT 분비 실험에 대한 포지티브 대조군으로 사용하였다. 실시예 1, 3, 4, 10, 17 및 18의 화합물은 10 μM에서 HEK-M 세포로부터 인간 M A1AT의 분비를 증가시키지 않았다.
실시예 21: HEK-Siiyama 세포를 사용한 A1AT 세포 분비 분석에서 실시예 1 및 17의 화합물의 활성
AATD를 가진 일본 남성에서 희귀 (rare) Siiyama 돌연변이 (Ser 53에서 Phe로, 성숙한 A1AT 넘버링)를 확인하였다 (Seyama et al J Biol Chem (1991) 266:12627-32). Ser53은 보존된 세르핀 잔기 중 하나이며, A1AT 분자의 내부 코어의 조직에 중요한 것으로 사료된다. 단백질의 보존된 백본에서 하전되지 않은 극성으로부터 큰 비-극성 아미노산으로의 변화는 Siiyama A1AT의 폴딩 및 세포내 처리에 영향을 미친다.
방법
인간 Siiyama A1AT 유전자로 안정적으로 형질감염된 인간 배아 신장 세포주인 HEK-Siiyama 세포를 5% CO2를 함유하는 가습된 대기에서 37℃로 밤새 96 웰 플레이트에 플레이팅하였다 (웰당 배지 200 μl를 갖는 3.0 x 105 세포/ml). 인큐베이션 후에, 세포를 200 μl 무-혈청 배지로 3회 세척하고, 최종 부피 200 μl로 37℃ 인큐베이터에서 48시간 동안, 비히클, 10 μM 수베라닐로하이드록삼산 (SAHA), 또는 실시예 1의 화합물 (1 및 10 μM)을 함유하는 무-혈청 배지로 8중으로 배지를 교체하였다. 인큐베이션 단계 종료 시에, 상등액을 웰로부터 꺼내고, 1000 x g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하고, 제조자의 지침에 따라 ELISA (인간 세르핀 A1/α1-항트립신 듀오 세트 ELISA, R& D Systems, DY1268)에 의해 인간 A1AT 수준에 대해 분석하였다.
간략하게는, 96 웰 플레이트를 실온에서 밤새 인간 A1AT 포획 항체로 코팅하였다 (스톡으로부터 1:180 희석, 100 μl 최종 부피/웰). 그 다음에 포획 항체를 제거하고, 웰을 300 μl의 세척 버퍼 (PBS 중 0.05% Tween 20)로 3회 세척한 다음에, 200 μl의 시약 희석제 (PBS 중 25% Tween 20)를 실온에서 1시간 동안 각 웰에서 인큐베이션하였다. 그 다음에, 희석된 샘플, 표준 물질 (125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 및 8000 pg/ml A1AT), 또는 블랭크를 각 웰에 이중으로 부가하고, 플레이트를 플레이트 실러로 커버하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. 샘플 인큐베이션 단계 종료 시에, 샘플을 꺼내고, 모든 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 검출 항체 (스톡으로부터 1:180 희석)를 각 웰에 부가하고, 실온에서 추가 2시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 상등액을 꺼내고, 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 스트렙타비딘-HRP 용액 (스톡으로부터 1:200 희석)을 암실에서 20분 동안 각 웰에 부가하였다. 그 후에, 50 μl의 정지 용액 (2M H2SO4)을 부가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 각 웰로부터 570 nm 블랭크를 제하고, 450 nm에서 각 웰의 광학 밀도 (OD)를 판독하였다. GraphPad Prism 7을 사용하여 4 파라미터 로지스틱 곡선을 제작하고, 표준 곡선에서 보간하고 적절한 희석 계수를 곱하여 각 샘플에서 A1AT 농도를 결정하였다.
결과
형질감염된 HEK-EBNA 세포로부터 배지로 분비된 인간 Siiyama A1AT의 양을 ELISA로 측정하였다. 10 μM의 SAHA를 모든 인 비트로 A1AT 인간 분비 실험에 대한 포지티브 대조군으로 사용하였다. 실시예 1 및 17의 예시되는 화합물은 ELISA에 의해 측정된 바와 같이, 1 또는 10 μM에서 HEK-Siiyama 세포로부터 Siiyama A1AT의 분비를 자극하지 않았다. 대조적으로, 포지티브 대조군 10 μM SAHA는 Siiyama A1AT 분비의 증가를 자극하였다.
실시예 22: 인간 Z 발현 마우스 (huZ 마우스)에서 실시예 1 및 17의 화합물의 활성
huZ 마우스 (또한, PiZZ 마우스라고 함)는 인간 A1AT 유전자의 Z 변이체의 다수의 카피를 함유하는 유전자이식 마우스 균주로, 2개의 개별 그룹에 의해 개발되었다 (Dycaico et al Science (1988) 242:1409-12) 및 Carlson et al J. Clin Invest (1989) 83:1183-90). HuZ 마우스는 C57Bl/6 계통 (background)이며, 간 조직에서 인간 Z A1AT 단백질을 발현한다. 본 연구에 사용된 마우스는 Carlson 및 동료의 자손 (transgenic line Z11.03)이다. HuZ 마우스는 혈장에서 Z A1AT의 순환 수준을 증가시키는데 본 발명의 예시되는 화합물의 효과, 또는 간 및 관련 간 병리에서 Z A1AT 폴리머의 축적에 대한 화합물의 효과를 평가하는 수단 (tool)으로서 사용되어 왔다.
기저 인간 Z A1AT 혈장 수준이 200-600 μg/ml인 HuZ 마우스 (n = 4/그룹; 수컷 또는 암컷)를 비히클 또는 실시예 1 또는 17의 화합물 5, 15 또는 50 mg/kg으로, 14 일 연속 기간 동안 경구 위관 영양법으로 1일 2회 치료하였다. 마우스는 음식 (표준 마우스 먹이 (chow), SAFE 식이) 및 물에 자유롭게 접근할 수 있었다. 연구 14일째에, 최종 절차 1시간 전에 각 마우스에게 투여하였다. 투여 전 -12, -7 및 -5 일, 및 투여일 12, 13 및 14일째에 꼬리 정맥으로부터 각 마우스의 혈액을 채취하였다. 혈액을 EDTA를 함유하는 microvettes로 수집하고, 2700 x g에서 4℃로 10분 동안 원심분리하여 혈장을 준비하였다. 혈장을 바이오 분석을 위해 분취하여 -80℃에 저장하였다. 투여 전 -12, -7 및 -5 일째로부터의 혈장 샘플을 사용하여 각 마우스에 대한 인간 Z A1AT의 평균 기저 수준을 결정하였다. 연구의 마지막 3일 투여일 (12, 13 및 14 일)에 수집된 혈장 샘플을 사용하여, 인간 Z A1AT 수준을 측정하고 각 마우스에 대한 기저 수준과 비교하여, 인간 Z A1AT 분비에 대한 실시예 1 또는 17의 화합물의 효과를 결정하였다. 마우스 혈장 샘플의 인간 Z A1AT 수준을 제조자의 지침에 따라 ELISA (인간 세르핀 A1/α1 항트립신 듀오 세트 ELISA, R& D Systems, DY1268)로 측정하였다.
간략하게는, 96 웰 플레이트를 실온에서 밤새 인간 A1AT 포획 항체로 코팅하였다 (스톡으로부터 1:180 희석, 100 μl 최종 부피/웰). 그 다음에 포획 항체를 제거하고, 웰을 300 μl의 세척 버퍼 (PBS 중 0.05% Tween 20)로 3회 세척한 다음에, 200 μl의 시약 희석제 (PBS 중 25% Tween 20)를 실온에서 1시간 동안 각 웰에서 인큐베이션하였다. 그 다음에, 희석된 샘플, 표준 물질 (125, 250, 500, 1000, 2000, 4000 및 8000 pg/ml A1AT), 또는 블랭크를 각 웰에 이중으로 부가하고, 플레이트를 플레이트 실러로 커버하고, 실온에서 2시간 동안 정치하였다. 샘플 인큐베이션 단계 종료 시에, 샘플을 꺼내고, 모든 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 검출 항체 (스톡으로부터 1:180 희석)를 각 웰에 부가하고, 실온에서 추가 2시간 동안 인큐베이션하였다. 검출 항체와 함께 인큐베이션한 후에, 상등액을 꺼내고, 웰을 이전과 같이 세척하고, 100 μl의 스트렙타비딘-HRP 용액 (스톡으로부터 1:200 희석)을 암실에서 20분 동안 각 웰에 부가하였다. 그 후에, 50 μl의 정지 용액 (2M H2SO4)을 부가하고, 마이크로플레이트 리더를 사용하여 각 웰로부터 570 nm 블랭크를 제하고, 450 nm에서 각 웰의 광학 밀도 (OD)를 판독하였다. GraphPad Prism 7을 사용하여 4 파라미터 로지스틱 곡선을 제작하고, 표준 곡선에서 보간하고 적절한 희석 계수를 곱하여 각 샘플에서 A1AT 농도를 결정하였다.
결과
인간 Z A1AT의 순환 수준에 대한 실시예 1 또는 17의 화합물의 효과를 huZ 마우스 모델에서 평가하였다.
실시예 1 및 17의 화합물은 huZ 마우스의 기저 수준과 비교하여 인간 Z A1AT의 분비를 자극하였다. 도 1은 실시예 17의 화합물에 대한 각 치료 투여량의 데이터를 보여준다.

Claims (14)

  1. 하기 화학식 (1)의 화합물:
    Figure pct00025

    여기서
    Figure pct00026
    R1은 선택적으로 치환되거나 또는 융합된 아릴 또는 헤테로아릴 고리 시스템이고,
    Figure pct00027
    m 및 n은 독립적으로 1, 2 또는 3이지만, n 및 m이 모두 1인 경우의 화합물은 제외되며,
    상기 화학식 (1)의 화합물은
    Figure pct00028
    1-(퀴놀린-8-일설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00029
    1-((2-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00030
    1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00031
    1-((2,3-디클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00032
    (S)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00033
    (S)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00034
    (R)-1-((3-플루오로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00035
    (R)-1-((3-클로로페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00036
    1-((4-클로로페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00037
    1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00038
    1-((3-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00039
    1-((4-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00040
    1-((2,5-비스(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00041
    1-((2-(트리플루오로메톡시)페닐)설포닐)피페리딘-4-카복실산 또는
    Figure pct00042
    (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00043
    (R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피롤리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00044
    (S)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산 또는
    Figure pct00045
    (R)-1-((2-(트리플루오로메틸)페닐)설포닐)피페리딘-3-카복실산이다.
  2. 키랄 중심을 갖는 청구항 1에 따른 임의의 화합물의 2개의 거울상 이성질체들의 혼합물로서, 상기 혼합물은 라세미이거나 또는 하나의 거울상 이성질체를 다른 거울상 이성질체보다 과량으로 갖는 것인 혼합물.
  3. 청구항 1 또는 2에 있어서, 약학적으로 허용 가능한 염 형태인 것인 화합물 또는 혼합물.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 항에 따른 화합물 또는 혼합물, 및 약학적으로 또는 치료적으로 허용 가능한 부형제 또는 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  5. 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 청구항 1 내지 3에 따른 화합물 또는 혼합물의 용도.
  6. 청구항 1 내지 3에 있어서, 질병 또는 장애의 치료에 사용하기 위한 것인 화합물 또는 혼합물.
  7. 청구항 1 내지 3에 있어서, Z A1AT 분비의 유도제로서 사용하기 위한 것인 화합물 또는 혼합물.
  8. 청구항 1 내지 3에 따른 화합물 또는 혼합물, 또는 청구항 4에 따른 약학적 조성물을 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 질병 또는 장애의 치료 방법.
  9. 질병 또는 장애의 치료에서 청구항 1 내지 3에 따른 화합물 또는 혼합물의 용도.
  10. 청구항 9에 있어서, Z A1AT 분비의 유도제로서의 용도.
  11. 청구항 9 또는 10에 있어서, 상기 용도는 인 비트로 (in vitro)인 것인 용도.
  12. 질병 또는 장애가 AATD인 것인, 청구항 5에 따른 용도, 청구항 6에 따른 화합물 또는 혼합물, 청구항 8에 따른 치료 방법, 또는 청구항 9 내지 11 중 어느 항에 따른 용도.
  13. 질병 또는 장애의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 화학식 (1)의 라세미 화합물의 용도로서, 상기 질병 또는 장애는 AATD인 것인 용도.
  14. Z A1AT 분비의 유도제로서 화학식 (1)의 라세미 화합물의 용도.
KR1020227024042A 2019-12-13 2020-12-11 화합물 및 α1-항트립신 결핍의 치료를 위한 이의 용도 KR20220127826A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1918410.0A GB201918410D0 (en) 2019-12-13 2019-12-13 Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
GB1918410.0 2019-12-13
PCT/GB2020/053187 WO2021116703A1 (en) 2019-12-13 2020-12-11 COMPOUNDS AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF α1-ANTITRYPSIN DEFICIENCY

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220127826A true KR20220127826A (ko) 2022-09-20

Family

ID=69186879

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227024042A KR20220127826A (ko) 2019-12-13 2020-12-11 화합물 및 α1-항트립신 결핍의 치료를 위한 이의 용도

Country Status (13)

Country Link
US (1) US20230089087A1 (ko)
EP (1) EP4072671A1 (ko)
JP (1) JP2023506196A (ko)
KR (1) KR20220127826A (ko)
CN (1) CN115003380B (ko)
AU (1) AU2020401452A1 (ko)
BR (1) BR112022011527A2 (ko)
CA (1) CA3164297A1 (ko)
GB (1) GB201918410D0 (ko)
IL (1) IL293747A (ko)
MX (1) MX2022007174A (ko)
WO (1) WO2021116703A1 (ko)
ZA (1) ZA202207493B (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB202108523D0 (en) * 2021-06-15 2021-07-28 Z Factor Ltd Compositions and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
GB202108542D0 (en) * 2021-06-15 2021-07-28 Z Factor Ltd Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2071621C (en) * 1991-06-19 1996-08-06 Ahihiko Hosoda Aldehyde derivatives
US20060035884A1 (en) * 2004-05-20 2006-02-16 Elan Pharmaceuticals, Inc. N-cyclic sulfonamido inhibitors of gamma secretase
EP2114141A2 (en) * 2007-01-10 2009-11-11 University of Florida Compounds and methods for treatment of alpha-1 antitrypsin deficiency
US8258158B2 (en) * 2009-09-11 2012-09-04 Hoffmann-La Roche Inc. HSL inhibitors useful in the treatment of diabetes
WO2011110852A1 (en) * 2010-03-10 2011-09-15 Astrazeneca Ab Polymorphic forms of 6- [2- (4 -cyanophenyl) - 2h - pyrazol - 3 - yl] - 5 -methyl - 3 - oxo - 4 - (trifluoromethyl - phenyl) 3,4-dihydropyrazine-2-carboxylic acid ethylamide
WO2012097371A2 (en) 2011-01-14 2012-07-19 The Regents Of The University Of California Chemical inhibitors of cholesterol biosynthesis and venous angiogenesis
US10793522B2 (en) * 2016-12-09 2020-10-06 Boehringer Ingelheim International Gmbh Sulfonamides as inhibitors of the uptake of extracellular citrate
CN113286586A (zh) 2018-06-22 2021-08-20 Ucl商业有限公司 新化合物
WO2020081257A1 (en) 2018-10-05 2020-04-23 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Modulators of alpha-1 antitrypsin
UY38696A (es) 2019-05-14 2020-11-30 Vertex Pharma Moduladores de alfa-1 antitripsina

Also Published As

Publication number Publication date
WO2021116703A1 (en) 2021-06-17
MX2022007174A (es) 2022-08-25
EP4072671A1 (en) 2022-10-19
JP2023506196A (ja) 2023-02-15
CN115003380A (zh) 2022-09-02
BR112022011527A2 (pt) 2022-09-20
CN115003380B (zh) 2024-04-02
GB201918410D0 (en) 2020-01-29
CA3164297A1 (en) 2021-06-17
ZA202207493B (en) 2023-12-20
US20230089087A1 (en) 2023-03-23
AU2020401452A1 (en) 2022-07-14
IL293747A (en) 2022-08-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CA2662320C (en) Bcl inhibitors treating platelet excess
US20230089087A1 (en) Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
US20230102488A1 (en) Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
US20230129181A1 (en) Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
JP2023505587A (ja) 化合物及びα１－アンチトリプシン欠損症の治療のためのそれらの使用
WO2022263816A1 (en) COMPOSITIONS AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF α1-ANTITRYPSIN DEFICIENCY
CA3164304A1 (en) Compounds and their use for the treatment of .alpha.1-antitrypsin deficiency
WO2022263817A1 (en) Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
WO2022263819A1 (en) Compounds and their use for the treatment of alpha1-antitrypsin deficiency
WO2021255436A1 (en) 4-((6-oxopyrimidin-1(6h)-yl)methyl)benzoic acid as an inducer of z a1 at secretion for treating aatd
WO2022263820A1 (en) COMPOUNDS AND THEIR USE FOR THE TREATMENT OF α1-ANTITRYPSIN DEFICIENCY

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination