KR20220105655A - 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 부티레이트-포르메이트 유도체 및 이의 가교 방법 - Google Patents

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마르코 마스트로도나토
루카 스투치
알레산드라 세치
파브리지오 피코티
리타 지아니
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비엠지 파르마 에스.피.에이
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Abstract

본 발명은 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 허용 가능한 염을 제조하는 방법에 관한 것으로서, 상기 방법은 유기 용매 중 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 카복실 활성화 시약과 가교 반응시키는 단계를 포함하고, 상기 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 고분자량 폴리사카라이드 및 저분자량 폴리사카라이드의 혼합물인 것을 특징으로 한다.

Description

가교된 히알루론산 부티레이트 또는 부티레이트-포르메이트 유도체 및 이의 가교 방법
본 발명은 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 염의 제조 방법, 상기 방법에 의해 수득된 생성물, 및 의약 또는 화장료 사용을 위한 또는 의료 기기로서 이의 제제에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명은 상이한 분자량의 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 염의 조합의 가교에 관한 것으로서, 이는 놀랍게도 미리 가교된 동일한 폴리머들을 조합하여 수득된 폴리머의 유동학적 프로파일과는 상이한 유동학적 프로파일을 갖는 폴리머를 생성하였다.
상기 방법에 의해 제조된 가교된 히알루론산의 부티르산-포름산 에스테르는 미리 가교된 상이한 분자량을 갖는 폴리사카라이드들을 조합함으로써 수득된 겔보다 우수한 점탄성 특성을 가지며, 그러므로 의약 및 피부미용 분야 및 의료 기기, 구체적으로 주사제 (injectables)로서 유리하게 사용될 수 있다.
히알루론산은 글리코시드 결합 β1→4 및 β1→3을 통해, 글루쿠론산 및 N-아세틸글루코사민이 교대로 함께 결합되는 반복 단위로 구성된 글리코사미노글리칸이다. 히알루론산은 결합 조직의 필수 요소이며, 또한 활액, 유리체액 및 탯줄에 존재한다.
WO98/23648은 히알루론산의 하이드록실기가 부티르산 잔기로 에스테르화된, 히알루론산 부티레이트 (SHB)의 제조를 개시한다. 히알루론산 부티레이트는 피부 탄력 및 보습제로서 항-염증, 항-증식 및 피부-보호 특성을 가지고 있다.
WO2009/068215는 히알루론산의 혼합된 부티르산-포름산 에스테르의 제조 및 피부-보호 및 항-염증 활성을 갖는, 피부 미용에서 이의 용도를 개시한다. 상기 혼합된 에스테르는 염기성 촉매로서 N,N-디메틸아미노 피리딘 (N,N-DMAP)을 사용하여 부티르산 무수물 및 포름아미드 (FA)로 제조된다.
EP 341745는 히알루론산, 또는 카복실기가 다양한 타입의 알코올로 부분적으로 에스테르화된 히알루론산으로 출발하는 자가-가교된 히알루론산의 제조를 개시한다. 히알루론산 (또는 이의 에스테르 유도체, 이는 "외부 에스테르 (external esters)"로 정의됨)의 카복실 기능은 히알루론산의 반복 단위의 알코올 하이드록실과의 분자내 또는 분자간 에스테르의 형성에 관여하며, 결과적으로 가교 ("자가-가교 (autocrosslinking)"로 정의됨)된다.
WO2008/081255는 부티르산-포름산을 포함하는 비-폴리사카라이드 카복실산과의 에스테르, 및 폴리사카라이드 사슬들 간의 가교를 갖는 개시 폴리사카라이드의 산 기 및 알코올 기 사이의 에스테르와의 동시 존재를 특징으로 하는 자가-가교된 히알루론산의 제조를 개시한다.
EP 2614090은 저분자량 히알루론산 및 고분자량 히알루론산 간의 협동적 혼성 복합체 (cooperative hybrid complexes)를 개시하고, 여기서 용액내 히알루론산 분자는 소수성 결합, 및 사슬내 및 사슬간 수소 결합의 형성에 기반한 협동적 상호작용을 특징으로 하고, 그 정도는 폴리사카라이드의 분자량에 따라 다르다.
상이한 분자량을 갖는 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트를 가교시키면 폴리사카라이드의 화학적 및 생물학적 안정성을 증가시키고, 동시에 개선된 유동학적 프로파일을 제공하는 것을 발견하였고, 이는 특히 의약 및 피부미용 분야, 및 의료 기기, 구체적으로 주사제로서의 적용에 유익하다.
본 발명의 목적은 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 허용 가능한 염의 제조 방법이고, 상기 방법은 유기 용매 중 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 카복실기 활성화 시약 및 염기와 반응시키는 단계를 포함하며, 상기 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1000 kDa 내지 10000 kDa, 바람직하게는 1000 kDa 내지 6000 kDa, 더욱 바람직하게는 1000 kDa 내지 2000 kDa 범위의 중량-평균 분자량을 갖는 고분자량 폴리사카라이드, 및 1 kDa 내지 900 kDa, 바람직하게는 10 kDa 내지 500 kDa, 더 바람직하게는 50 kDa 내지 300 kDa 범위의 중량-평균 분자량을 갖는 저분자량 폴리사카라이드의 혼합물인 것을 특징으로 한다.
히알루론산의 GlcNAc-GlcUA 디사카라이드 단위당 부티르산 또는 부티르산-포름산 잔기의 수 사이의 비율로 정의되는, 치환도 (degree of substitution: DS)는 예를 들어 0.1 내지 2.2의 범위일 수 있다.
고분자량 폴리사카라이드 및 저분자량 폴리사카라이드는 바람직하게는 중량 기준으로 80:20 내지 20:80의 범위의 비율로 사용된다.
본원에서 "허용 가능한 염"은 의약 또는 화장료 용도 또는 의료 기기에 허용 가능한 염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 리튬 또는 4차 암모늄 염, 예를 들어 테트라부틸암모늄, 바람직하게는 나트륨 염을 의미한다.
가교 반응은 바람직하게는 N,N-디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 디메틸설폭시드, N-메틸피롤리돈 또는 포름아미드와 같은 극성 비양성자성 유기 용매로부터 선택되는 유기 용매에서 수행된다. 바람직한 용매는 포름아미드이다.
카복실기 활성화 시약은 바람직하게는 카보닐디이미다졸, 1,1'-카보닐-디-(1,2,4-트리아졸), 1,1'-옥살릴이미다졸, 1,1'-티오카보닐이미다졸, 1,1'-카보닐 비스(2-메틸이미다졸), N-하이드록시숙신이미드, p-니트로페놀, p-니트로페닐트리플루오로아세테이트, 2-할로-N-알킬피리딘 염 및 아실 할라이드로 구성된 그룹으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 카복실기 활성화 시약은 카보닐디이미다졸이다.
가교 반응에 사용되는 염기는 바람직하게는 알칼리 또는 알칼리 토금속, 구체적으로 나트륨, 칼륨 또는 마그네슘의 탄산염, 중탄산염 또는 수산화물과 같은 무기 염기, 피리딘 또는 이의 동족체, 예컨대 콜리딘과 같은 적어도 하나의 3치환된 질소 원자, 또는 트리에틸아민, 이미다졸, N-메틸-피페라진 또는 디메틸아미노피리딘과 같은 염기성 아민을 포함하는 방향족 또는 지방족 유기 염기, 또는 아세트산 나트륨 또는 칼륨과 같은 유기산의 알칼리 또는 알칼리 토금속 염으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 사용되는 염기는 탄산나트륨 또는 디메틸아미노피리딘이다.
반응 혼합물은 바람직하게는 20℃ 내지 30℃ 범위의 온도에서 4 내지 24시간 동안 유지된다.
반응이 완료되면, 혼합물을 물로 희석하고, 적절한 용매에서 침전에 의해 생성물을 회수한다. 이에 따라 수득된 생성물은 그 다음에 예를 들어 적합한 용매를 사용한 연속 세척 및 여과에 의해 정제된다.
가교 반응에 사용되는 히알루론산의 고분자량 및 저분자량 유도체 (히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 염)의 혼합물은 고분자량 히알루론산 유도체를 이의 저분자량 유도체와 혼합하거나, 또는 고분자량 및 저분자량 히알루론산의 혼합물에서 부티르산 또는 부티르산 및 포름아미드로의 유도체화 반응을 수행함으로써 생성될 수 있다.
본 발명의 추가의 목적은 상기 기재된 방법에 의해 수득된 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염이다.
상기 방법에 의해 수득된 가교된 폴리사카라이드는 미리 가교된 동일한 출발 폴리사카라이드를 조합하여 수득된 것과는 상이한 유동학적 프로파일을 갖는다.
본 발명에 따른 가교된 폴리사카라이드의 유동학적 프로파일은 높은 점도 및 더 높은 탄성 계수 (G') 및 점도 (G'') 값을 특징으로 한다. 구체적으로, 고분자량 및 저분자량 폴리사카라이드의 혼합물을 가교시켜서 수득된 본 발명에 따른 가교된 폴리사카라이드는 가교된 고분자량 폴리사카라이드 및 가교된 저분자량 폴리사카라이드의 혼합물보다 더 큰 점도 및 더 높은 탄성 계수 (G') 및 점도 (G'')를 갖는다.
또한, 상이한 분자량을 갖는 폴리사카라이드의 존재는 고분자량 히알루론산 나트륨의 전형적인 생물학적 특성, 예컨대 세포외 기질을 구성하는 세포의 증식 활성 및 항-염증 활성을 유도할 뿐만 아니라, 저분자량 히알루론산 나트륨의 전형적인 특성, 예컨대 혈관신생 활성 및 염증 과정의 조절을 유도하여, 히알루론산의 전형적인 생체적합성을 여전히 유지하면서 생물학적 활성의 고유한 프로파일을 제공한다.
마지막으로, 본 발명에 따른 방법에 의해 수득된 가교된 폴리사카라이드는 효소 분해에 대한 저항성을 개선하고, 이는 인 비보에서 장기-지속 활성을 촉진한다.
본 발명의 추가의 목적은 상기 기재된 방법에 의해 수득된 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 적어도 하나의 약학적 또는 미용상 허용 가능한 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학적 또는 화장료 제제 또는 의료 기기이다.
약학적 또는 화장료 제제 또는 의료 기기는 또한 국소 마취제, 예컨대 리도카인 (lidocaine)을 함유할 수 있다.
화장료 제제는 피부미용 안티-에이징 또는 리바이탈라이징 처치 (dermocosmetic anti-aging or revitalising treatments) 및 메조테라피 (mesotherapy) 적용에 사용될 수 있다.
약학적 제제 또는 의료 기기는 피부 병변 및 발진 및 안구 병변 (ophthalmic lesions)의 국소 치료에 사용될 수 있다.
본 발명의 추가의 목적은 예를 들어 안구 수술 또는 안구건조증 치료에서 안구 적용을 위한 아쥬반트 (adjuvants)로서, 또는 골관절염 치료에서 아쥬반트로서 또는 더말 필러 (dermal fillers)로서 사용 가능한 의료 기기이다.
히알루론산 부티르산-포르메이트 에스테르는 WO2009/068215에 개시된 바와 같이 제조되고, 히알루론산 부티르산 에스테르는 WO2016/113192에 개시된 바와 같이 제조된다.
상기 보고된 방법에 의해 수득된 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 염은 급성 염증 반응에 영향을 주는 상당한 항-자극, 항-염증 및 항산화 활성을 갖는다. 상기 특성으로 인해, 본 발명에 따른 가교된 폴리사카라이드는 특히 피하 주사로 인한 급성 염증 또는 골관절염과 관련된 염증이 문제가 되는 표적을 구성하는 경우, 주사, 피부미용 또는 관절내 적용을 위해 표시된다.
실시예
방법
사용된 기기:
Figure pct00001
치환도 (DS) 결정을 위해 z 구배를 갖는 5 mm 다핵 역방향 프로브가 장착된 VARIAN VNMR 500 MHz 분광계;
Figure pct00002
25℃로 온도 조절된 평행 플레이트 (직경 25 mm, 새틴-마감)가 장착된 Anton Paar MCR 301 레오미터.
치환도 (DS) 결정
히알루론산 유도체에 대한 부티레이트 에스테르의 치환도를 NMR 분광법으로 정량분석하였다. 1H NMR 스펙트럼은 z 구배를 갖는 5 mm 다핵 역방향 프로브가 장착된 VARIAN VNMR 500 MHz 분광계를 사용하여 D2O에서 수행하였다. 테스트는 측정 프로브를 298°K로 온도 조절하여 수행하였다.
부티레이트 에스테르에서 DS의 정량분석은 NMR 튜브에서 직접 NaOD로 완전 가수분해 (exhaustive hydrolysis) 후에 수행하였다.
가수분해물의 1H NMR 스펙트럼은 부티르산 (인접 메틸 및 메틸렌 양성자)에 기인한 신호 및 히알루론산 (2개의 아노머 양성자를 제외한, 사카라이드 양성자)에 기인하는 신호의 통합을 가능하게 하고; 이들의 비율은 치환도를 결정한다.
유동학 테스트 (rheology testing)에 의한 탄성 및 점성 계수의 결정.
겔의 유동학 테스트는 25℃로 온도 조절된 평행 플레이트 (직경 25 mm, 새틴-마감)가 장착된 Anton Paar MCR 301 레오미터로 수행하였다. 측정은 혼합 24시간 후에, 1% w/v 농도의 초순수에 팽윤된 샘플에 대해 수행하였다.
기계적 스펙트럼은 1 Hz의 일정한 주파수에서 진동 모드 (스트레스 스윕)로 각 겔에 대해 기록하였고, 이를 통해 탄성 계수 G' 및 점성 계수 G" (측정 단위 Pa)를 결정할 수 있었고; 일부 겔의 경우, 적용된 힘의 변화에 따라 점도 η (측정 단위 Pa*s)를 측정하는 유동 곡선 (flow curve)을 또한 기록하였다.
실시예 1: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500 kDa; DS but : 0.3; DS for :0.01)의 합성
100 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 5.0 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 혼합물을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 262.0 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (1.1 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 (acid water) 50 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 24시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.3, 포름산에서 DS 0.01을 나타내었다.
실시예 2: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500 kDa; DS but : 0.95; DS for :0.01)의 합성
150 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 7.5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 혼합물을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 600 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (6.7 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 65 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 24시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.95, 포름산에서 DS 0.01을 나타내었다.
실시예 3: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03)의 합성
200 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 HANa 10.15 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 혼합물을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 2.7 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (26.2 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 200 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅 (decanting)하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 1.6, 포름산에서 DS 0.03을 나타내었다.
실시예 4: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 300 kDa; DS but : 0.3; DS for :0.02)의 합성
2.67 l의 포름아미드를 15 리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 300 kDa인 소듐 히알루로네이트 200.5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 혼합물을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 10.57 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (36.81 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 1.38 l를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.3, 포름산에서 DS 0.02를 나타내었다.
실시예 5: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 300 kDa; DS but : 0.95; DS for :0.01)의 합성
80 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 300 kDa인 소듐 히알루로네이트 6 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추었다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 480 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (4.2 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 24시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.95, 포름산에서 DS 0.01을 나타내었다.
실시예 6: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 300 kDa; DS but : 2,16; DS for :0.02)의 합성
50 ml의 포름아미드를 0.5 리터 플라스크에 도입한 후에, 분자량이 300 kDa인 소듐 히알루로네이트 5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 1.34 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (18.41 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 70 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 ≤60℃ 온도에서 약 24시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산-포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 2.16, 포름산에서 DS 0.02를 나타내었다.
실시예 7: 소듐 히알루로네이트 부티레이트 (MW: 25 kDa; DS but : 0,35)의 합성
25 ml의 물을 0.5 리터 플라스크에 도입한 후에, 분자량이 25 kDa인 소듐 히알루로네이트 5 g을 부가하였다. 혼합물을 25℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 0.8 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (0.9 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.0시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 5 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 이소프로판올로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 이소프로판올 및 물로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 25℃에서 약 48시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.35를 나타내었다.
실시예 8: 소듐 히알루로네이트 부티레이트 (MW: 25 kDa; DS but : 0.9)의 합성
25 ml의 물을 0.5 리터 플라스크에 도입한 후에, 분자량이 25 kDa인 소듐 히알루로네이트 5 g을 부가하였다. 혼합물을 25℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 4.0 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (2.5 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.0시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 20 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 이소프로판올로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 이소프로판올 및 물로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 25℃에서 약 48시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.9를 나타내었다.
실시예 9: 소듐 히알루로네이트 부티레이트 (MW: 25 kDa; DS but : 1,6)의 합성
35 ml의 물을 0.5 리터 플라스크에 도입한 후에, 분자량이 25 kDa인 소듐 히알루로네이트 5 g을 부가하였다. 혼합물을 25℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 6.61 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (11.9 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.0시간 동안 교반하에 두었다. 산성수 20 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 이소프로판올로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 이소프로판올 및 물로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 25℃에서 약 48시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.9 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 테스트 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 1.6을 나타내었다.
실시예 10: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03: MW: 300 kDa; DS but : 0.3; DS for : 0.02)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 3에서 수득된 생성물 0.8 g 및 실시예 4에서 수득된 생성물 0.2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 60 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.2 ml의 DMSO 중에 용해된 300 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
50 mg의 샘플을 5 ml의 초순수 (농도 1% w/v)에 부가하고; 혼합 24시간 후에, 생성된 겔은 유동학 테스트에서 G' = 1550 Pa 및 G" = 186 Pa를 제공하였다.
실시예 11: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (50: 50; MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03: MW: 300 kDa; DS but : 0.3; DS for : 0.02)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 3에서 수득된 생성물 0.5 g 및 실시예 4에서 수득된 생성물 0.5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 60 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.2 ml의 DMSO 중에 용해된 300 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
50 mg의 샘플을 5 ml의 초순수 (농도 1% w/v)에 부가하고; 혼합 24시간 후에, 생성된 겔은 유동학 테스트에서 G' = 73 Pa 및 G" = 16 Pa를 제공하였다.
실시예 12: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (20: 80; MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03: MW: 300 kDa; DS but : 0.3; DS for :0.02)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 3에서 수득된 생성물 0.2 g 및 실시예 4에서 수득된 생성물 0.8 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다.
그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 73 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 345 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 5시간 동안 건조시켰다.
실시예 13: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 1500 kDa; DS but : 0.95; DS for : 0.01: MW: 300 kDa; DS but : 0.95; DS for : 0.01)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 2에서 수득된 생성물 0.8 g 및 실시예 5에서 수득된 생성물 0.2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 60 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 340 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 14: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 25 kDa; DS but : 0.9: MW: 1500 kDa; DS but : 0.95; DS for : 0.01)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 8에서 수득된 생성물 0.8 g 및 실시예 2에서 수득된 생성물 0.2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 65 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 345 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 15: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (20:80; MW: 25 kDa; DS but : 0.9: MW: 1500 kDa; DS but : 0.95; DS for :-0.01)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 8에서 수득된 생성물 0.2 g 및 실시예 2에서 수득된 생성물 0.8 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 70 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 348 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 16: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 25 kDa; DS but : 0.35: MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 7에서 수득된 생성물 0.8 g 및 실시예 3에서 수득된 생성물 0.2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 78 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.3 ml의 DMSO 중에 용해된 360 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 18시간 동안 건조시켰다.
실시예 17: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (20:80; MW: 25 kDa; DS but : 0.35: MW: 1500 kDa; DS but : 1.6; DS for :0.03)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 7에서 수득된 생성물 0.2 g 및 실시예 3에서 수득된 생성물 0.8 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 68 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 340 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 20시간 동안 건조시켰다.
실시예 18: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 25 kDa; DS but : 1.6: MW: 1500 kDa; DS but : 0.3; DS for : 0.01)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 9에서 수득된 생성물 0.8 g 및 실시예 1에서 수득된 생성물 0.2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 75 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 372 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 19: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (20:80; MW: 25 kDa; DS but : 1.6: MW: 1500 kDa; DS but : 0.3; DS for :0.01)의 합성
20 ml의 포름아미드를 100 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 9에서 수득된 생성물 0.2 g 및 실시예 1에서 수득된 생성물 0.8 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 2.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 70 mg)을 부가하고, 0.5시간 후에 CDI (1.4 ml의 DMSO 중에 용해된 3348 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 40 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 20시간 동안 건조시켰다.
실시예 20: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500: 300 kDa 80:20; DS but : 0.9; DS for :0.02)의 합성
150 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 6 g 및 분자량이 300 kDa인 소듐 히알루로네이트 1.5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 0.6 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (5.7 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다.
산성수 65 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 18시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.8 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 및 포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.9, 포름산에서 DS 0.02를 나타내었다.
실시예 21: 실시예 20의 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 + 카보닐디이미다졸 (CDI)의 합성
20 ml의 포름아미드 및 2 g의 실시예 20에서 수득된 생성물을 2개의 상이한 100 ml 3구 플라스크 (A 및 B로 불림)에 도입하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 생성물이 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반하에 유지하였다. 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
디메틸아미노피리딘 (DMAP-263 mg, 1.5 ml의 포름아미드에 용해시킴)을 플라스크 A에 부가하고, 1시간 후에 CDI (1.5 ml의 DMSO에 용해된 350 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하에 두었다.
디메틸아미노피리딘 (DMAP-263 mg, 1.5 ml의 FA에 용해시킴)을 플라스크 B에 부가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하에 두었다.
혼합물 A를 혼합물 B에 부가하고, 시스템을 약 4시간 동안 교반하에 반응하도록 두었다. 물 70 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 0.5 M HCl 10 ml을 부가하여 pH를 10에서 7.5로 조정하였다.
미정제 생성물을 아세톤으로 침전시켜서 분리하고, 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
50 mg의 샘플을 5 ml의 초순수 (농도 1% w/v)에 부가하고; 혼합 24시간 후에, 생성된 겔은 유동학 테스트에서 G' = 480 Pa 및 G" = 70 Pa를 제공하였다.
실시예 22: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500: 300 kDa 20:80; DS but : 0.9; DS for :0.02)의 합성 + 가교
150 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 1.5 g 및 분자량이 300 kDa인 소듐 히알루로네이트 6 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 0.6 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (5.7 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다.
그 다음에 탄산나트륨 547.5 mg을 부가하고, 혼합물을 0.5시간 동안 교반하에 둔 후에, 디메틸설폭시드 11 ml에 용해된 CDI 2.6 g을 부가하였다.
24시간 후에, 미정제 반응 생성물에 아세톤을 부가하여 생성물을 침전시켰다.
분리된 미정제 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 연속 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 10시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.8 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 및 포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.9, 포름산에서 0.02를 나타내었다.
실시예 23: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500: 25 kDa 20:80; DS but : 0.9; DS for :0.02)의 합성
150 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 1.5 g 및 분자량이 25 kDa인 소듐 히알루로네이트 6 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 0.6 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (5.7 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다.
산성수 65 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 디캔팅하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 18시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.8 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 및 포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.9, 포름산에서 0.02를 나타내었다.
실시예 24: 실시예 23의 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 + 카보닐디이미다졸 (CDI)의 합성
20 ml의 포름아미드 및 2 g의 실시예 23에서 수득된 생성물을 2개의 상이한 100 ml 3구 플라스크 (A 및 B로 불림)에 도입하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 생성물이 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반하에 유지하였다. 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3-114.4 mg)을 플라스크 A에 부가하고, 1시간 후에 CDI (1.5 ml의 DMSO에 용해된 350 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하에 두었다.
탄산나트륨 (Na2CO3-114.4 mg)을 플라스크 B에 부가하고, 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하에 두었다.
혼합물 A를 혼합물 B에 부가하고, 시스템을 약 4시간 동안 교반하에 반응하도록 두었다. 물 70 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 0.5 M HCl을 부가하여 pH를 10에서 7.5로 조정하였다.
미정제 생성물을 아세톤으로 침전시켜서 분리하고, 아세톤 및 메탄올로 수회 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 25: 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500: 25 kDa 80:20; DS but : 0.9; DS for :0.02)의 합성 + 가교
150 ml의 포름아미드를 1-리터 반응기에 도입한 후에, 분자량이 1500 kDa인 소듐 히알루로네이트 6.0 g 및 분자량이 25 kDa인 소듐 히알루로네이트 1.5 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1.5시간 동안 교반하에 유지하였다. 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반하에 유지하였다.
그 다음에 탄산나트륨 (Na2CO3- 0.65 g)을 부가하고, 0.5시간 후에 부티릴-이미다졸리드 (5.9 g)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하에 두었다.
그 다음에 탄산나트륨 550.0 mg을 부가하고, 혼합물을 0.5시간 동안 교반하에 둔 후에, 디메틸설폭시드 11 ml에 용해된 CDI 2.7 g을 부가하였다.
24시간 후에, 미정제 반응 생성물에 아세톤을 부가하여 침전시켰다.
분리된 미정제 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 연속 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 10시간 동안 건조시켰다.
10 mg의 샘플을 0.8 ml의 중수 (D2O) 중에 용해시키고, NMR 튜브로 옮겼다.
NaOD (중수소화 수산화나트륨)를 부가하여 부티르산 및 포름산 에스테르의 가수분해 후에, NMR 스펙트럼은 부티르산에서 DS 0.9, 포름산에서 0.02를 나타내었다.
실시예 26: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (80: 20; MW: 1500 kDa; DS but : 1.6 DS for :0.03, MW: 300 kDa; DS but : 2.16; DS for : 0.02)의 합성
40 ml의 포름아미드를 250 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 3에서 수득된 생성물 1.6 g 및 실시예 6에서 수득된 생성물 0.4 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반 하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반 하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 122 mg)을 부가하고, 0.75시간 후에 CDI (1 ml의 DMSO 중에 용해된 252 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 80 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 연속 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
2가지 팽윤 테스트 (swelling tests)를 수행하였다:
1. 100 mg의 폴리머를 10 mM PBS pH 7.2에 2% 농도로 용해시켰다. 그 다음에 수득된 샘플은 15분 동안 121℃의 오토클레이브에서 멸균 사이클을 수행하였다. 24시간 동안 정치시킨 후에, 유동학적 측정을 수행하였다.
2. 100 mg의 폴리머를 10 ml의 물에 용해시켰다 (1% 농도). 24시간 후에, 겔을 수동으로 균질화하고, 유동학적 측정을 수행하였다.
결과를 하기 표 1에 개시하였다.
점도 (Pa*s) G' (Pa) G"(Pa)
1 51.600 93 29
2 270.000 788 95
tau 1 Pa에서 SS에 대해 평가된 계수
실시예 27: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500 kDa; DS but : 1.6 DS for :0.03)의 합성
40 ml의 포름아미드를 250 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 3에서 수득된 생성물 2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반 하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 밤새 교반 하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 124 mg)을 부가하고, 0.75시간 후에 CDI (1 ml의 DMSO 중에 용해된 258 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 80 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 아세톤으로 침전시킨 후에 여과하여 분리하였다.
미정제 반응 생성물을 아세톤 및 메탄올로 수회 연속 세척한 후에 각각 진공 여과하여 정제하였다. 침전물을 진공하에 실온에서 약 16시간 동안 건조시켰다.
실시예 28: 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 300 kDa; DS but : 2.16; DS for : 0.02)의 합성
40 ml의 포름아미드를 250 ml 3구 플라스크에 도입한 후에, 실시예 6에서 수득된 생성물 2 g을 부가하였다. 혼합물을 95℃로 온도 조절하고, 폴리머가 완전히 용해될 때까지 일정한 온도에서 1시간 동안 교반 하에 유지하였다. 그 다음에 상기 온도를 25℃로 낮추고, 시스템을 3시간 동안 교반 하에 유지하였다.
탄산나트륨 (Na2CO3- 116 mg)을 부가하고, 0.75시간 후에 CDI (1 ml의 DMSO 중에 용해된 240 mg)를 부가하였다. 혼합물을 25℃에서 24시간 동안 교반하에 두었다.
물 80 ml를 부가하여 반응을 ??칭하고, 생성물을 투석으로 정제하고, 동결-건조로 회수하였다.
실시예 29 (비교): 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 1500 kDa; DS but : 1.6 DS for :0.03) 및 가교된 소듐 히알루로네이트 부티레이트-포르메이트 (MW: 300 kDa; DS but : 2.1; DS for : 0.02)의 혼합물 (80:20)
1. 실시예 27의 생성물 80 mg 및 실시예 28로부터 유래된 20 mg을 10 mM PBS pH 7.2에 2% 농도로 용해시켰다. 그 다음에 수득된 샘플은 15분 동안 121℃의 오토클레이브에서 멸균 사이클을 수행하였다. 24시간 동안 정치시킨 후에, 유동학적 측정을 수행하였다.
2. 실시예 27의 생성물 80 mg 및 실시예 28로부터 유래된 20 mg을 물 10 ml에 용해시켰다 (농도 1%). 24시간 후에, 겔을 수동으로 균질화하고, 유동학적 측정을 수행하였다.
결과를 하기 표 2에 개시하였다.
점도
(Pa*s)		 G'
(Pa)		 G"
(Pa)
1 3.200 6.4 7.6
2 8.7 9 16
tau 1 Pa에서 SS에 대해 평가된 계수
실시예 30: 리도카인 0.3% w/v 및 실시예 26에 따라 수득된 가교된 생성물의 2% w/v 하이드로겔 2.0 ml를 함유하는 주사기 형태의 의료 기기의 제조.
실시예 26에 따라 수득된 분말 형태의 가교된 에스테르화 폴리머 40 mg을 6 mg의 리도카인 염산염이 포함된 멸균 2.5 ml 주사기에서 칭량하고; 10 mM PBS 버퍼 pH 7.2의 수용액 2.0 ml를 주사기에 도입하였다. 폴리머를 실온에서 24시간 동안 팽윤되도록 두었다. 그 다음에 주사기를 오토클레이브에서 15분 동안 121℃에서 표준 사이클에 따라 증기-멸균하였다. 멸균 24시간 후에, 생성된 겔을 주사기로부터 압출하고, 유동학적 특성규명을 수행하였다.
결과를 하기 표 3에 개시하였다.
점도 (Pa*s) G' (Pa) G" (Pa)
2 PBS 10mM pH 7.2 30.000 82 28
실시예 31: 아미노산을 함유하는, 실시예 26에 따라 수득된 가교된 생성물의 2% w/v 하이드로겔의 제조.
실시예 26에 따라 수득된 분말 형태의 가교된 에스테르화 폴리머 107 mg을 멸균 10.0 ml 바이알에서 칭량하고; pH 7.0의 50 mM 농도의 히스티딘 함유 링거 락테이트 수용액 5.0 ml를 바이알에 부었다. 폴리머를 실온에서 24시간 동안 팽윤되도록 두었다. 그 다음에 밀봉된 바이알을 오토클레이브에서 15분 동안 121℃에서 표준 사이클에 따라 증기-멸균하였다. 멸균 30일 후에, 생성된 겔은 유동학적 특성규명을 수행하였다.
결과를 하기 표 4에 개시하였다.
점도 (Pa*s) G' (Pa) G" (Pa)
2% 링거 락테이트 - 히스티딘 50mM pH 7.0 89.500 130 35
실시예 32: 실시예 26에 따라 수득된 가교된 생성물로 출발하는 안과용 제제
물 5 ml를 10 ml 바이알에 넣고, 염화나트륨 0.045 g을 이에 용해시켰다. 그 다음에 실시예 26에 따라 수득된 분말 형태의 가교된 에스테르화 폴리머 0.025 g을 부가하였다. 폴리머를 실온에서 24시간 동안 팽윤되도록 두었다. 그 다음에 밀봉된 바이알을 오토클레이브에서 15분 동안 121℃에서 표준 사이클에 따라 증기-멸균하였다.
실시예 33: 실시예 26에 따라 수득된 가교된 생성물로 출발하는 국소 제제
INCI 명칭 양
% w/w
물 (Aqua) 60.1
마그네슘 알루미늄 실리케이트 2
실시예 26의 생성물 0.2
베타인 1
자일리톨 1
토코페릴 아세테이트 0.5
D-판테놀 0.2
바이오틴 0.05
페녹시에탄올, 카프릴로일 글리콜 0.7
글리세린 34.25

Claims (20)

  1. 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 허용 가능한 염을 제조하는 방법으로서, 상기 방법은 유기 용매 중 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염을 카복실기 활성화 시약 및 염기와 가교 반응 (crosslinking reaction)시키는 단계를 포함하고, 상기 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 1000 kDa 내지 10000 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 고분자량 폴리사카라이드, 및 1 kDa 내지 900 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 저분자량 폴리사카라이드의 혼합물인 것을 특징으로 하는 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 저분자량 폴리사카라이드는 1 kDa 내지 500 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖고, 고분자량 폴리사카라이드는 1000 kDa 내지 6000 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 저분자량 폴리사카라이드는 50 kDa 내지 300 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖고, 고분자량 폴리사카라이드는 1000 kDa 내지 2000 kDa 범위의 중량 평균 분자량을 갖는 것인 방법.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 고분자량 폴리사카라이드 및 저분자량 폴리사카라이드는 80:20 내지 20:80 중량비로 존재하는 것인 방법.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염은 0.1 내지 2.2 범위의 치환도 (degree of substitution)를 갖는 것인 방법.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서, 상기 히알루론산 부티레이트 또는 히알루론산 부티레이트-포르메이트의 허용 가능한 염은 나트륨, 칼륨 또는 리튬 염, 또는 4차 암모늄 염, 예컨대 테트라부틸암모늄인 것인 방법.
  7. 청구항 6에 있어서, 상기 허용 가능한 염은 나트륨 염인 것인 방법.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서, 유기 용매는 염기성 극성 비양성자성 용매 (basic polar aprotic solvents), 예컨대 N,N-디메틸포름아미드, 디메틸아세트아미드, 디메틸설폭시드, N-메틸피롤리돈 및 포름아미드로부터 선택되는 것인 방법.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 유기 용매는 포름아미드인 것인 방법.
  10. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카복실기 활성화 시약은 카보닐 디이미다졸, 1,1'-카보닐-디-(1,2,4-트리아졸), 1,1'-옥살릴이미다졸, 1,1'-티오카보닐이미다졸, 1,1'-카보닐 비스(2-메틸이미다졸), N-하이드록시숙신이미드, p-니트로페놀, p-니트로페닐 트리플루오로아세테이트, 2-할로-N-알킬피리딘 염 및 아실 할라이드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 것인 방법.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 카복실기 활성화 시약은 카보닐 디이미다졸인 것인 방법.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염기는 알칼리 또는 알칼리 토금속, 구체적으로 나트륨, 칼륨 또는 마그네슘의 탄산염, 중탄산염 및 수산화물과 같은 무기 염기, 피리딘 또는 이의 동족체, 예컨대 콜리딘과 같은 적어도 하나의 3치환된 질소 원자, 또는 트리에틸아민, N-메틸-피페라진 또는 디메틸아미노피리딘과 같은 염기성 아민을 포함하는 방향족 또는 지방족 유기 염기, 또는 아세트산 나트륨 또는 칼륨과 같은 유기산의 알칼리 또는 알칼리 토금속 염으로부터 선택되는 것인 방법.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 염기는 탄산나트륨 또는 디메틸아미노피리딘인 것인 방법.
  14. 청구항 1 내지 13 중 어느 한 항에 있어서, 반응 혼합물은 20℃ 내지 30℃ 범위의 온도에서 4 내지 24시간 범위의 기간 동안 유지되는 것인 방법.
  15. 청구항 1 내지 14에 개시된 방법에 의해 수득된 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 허용 가능한 염.
  16. 청구항 15에 개시된 가교된 히알루론산 부티레이트 또는 가교된 히알루론산 부티레이트-포르메이트 또는 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학적 또는 화장료 제제 또는 의료 기기.
  17. 청구항 16에 있어서, 국소 마취제, 예컨대 리도카인 (lidocaine)을 함유하는 것인 약학적 또는 화장료 제제 또는 의료 기기.
  18. 피부미용 안티-에이징 또는 리바이탈라이징 처치 (dermocosmetic anti-aging or revitalising treatments) 및 메조테라피 (mesotherapy) 적용을 위한, 청구항 16에 따른 화장료 제제의 비-치료적 용도 (non-therapeutic use).
  19. 피부 병변, 발진 및 안구 병변 (ophthalmic lesions)의 국소 치료에 사용하기 위한, 청구항 16에 따른 약학적 제제 또는 의료 기기.
  20. 안구 수술, 안구건조증 치료, 또는 골관절염 치료에서 아쥬반트 (adjuvant)로서, 또는 더말 필러 (dermal filler)로서, 청구항 16에 따른 의료 기기의 용도.
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IT1219587B (it) 1988-05-13 1990-05-18 Fidia Farmaceutici Polisaccaridi carbossiilici autoreticolati
IT1288290B1 (it) * 1996-06-21 1998-09-11 Fidia Spa In Amministrazione S Acido ialuronico autoreticolato e relative composizioni farmaceutiche per il trattamento delle artropatie
IT1286510B1 (it) 1996-11-29 1998-07-15 Cooperativa Centro Ricerche Po Esteri butirrici ad attivita' antiproliferativa e composizioni farmaceutiche che li contengono
FR2861734B1 (fr) * 2003-04-10 2006-04-14 Corneal Ind Reticulation de polysaccharides de faible et forte masse moleculaire; preparation d'hydrogels monophasiques injectables; polysaccharides et hydrogels obtenus
EP1942117A1 (en) 2006-12-29 2008-07-09 Sigea S.R.L. Derivatives of acid polysaccharides
ITMI20072237A1 (it) * 2007-11-27 2009-05-28 Sigea Srl Esteri misti butirrico-formico di polisaccaridi acidi, loro preparazione ed uso come dermocosmetici
IT1402382B1 (it) 2010-09-09 2013-09-04 Ibsa Inst Biochimique Sa Complessi cooperativi ibridi di acido ialuronico
WO2013011504A1 (en) * 2011-07-20 2013-01-24 Theracoat Ltd. Materials and method for treating internal body cavities
US20140256695A1 (en) * 2011-11-11 2014-09-11 Phi Nguyen Injectable filler
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