KR20220067418A - 매질 중 n2o 및 no 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법 - Google Patents

매질 중 n2o 및 no 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법 Download PDF

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Abstract

Paracoccus 속 미생물 또는 Pseudomonas 속 미생물을 이용하여 매질 중 N2O 및 NO 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법을 제공한다.

Description

매질 중 N2O 및 NO 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법{Method of reducing concentration of at least one of N2O and NO compounds in a medium}
매질 중 N2O 또는 NO의 농도를 감소시키는 방법에 관한 것이다.
N2O 및 NO와 같은 질소 산화물을 대기로 방출하는 것은 주요한 환경 문제이다. 질소 산화물은 NOx라고도 한다. 질소 산화물은 오존층 파괴, 기후 온난화, 및 토양 및 수계의 산성화에 기여한다.
Pseudomonas 속 또는 Paracoccus 속의 일부 미생물은 질소 산화물을 생물학적으로 환원시키는 것으로 알려져 있다. 이들 미생물을 이용한 탈질 과정은 거의 대부분의 나이트레이트 및 나이트라이트를 제거할 수 있게 한다. 그러나, 이러한 생물학적 탈질과정에서, 이들 두 화합물은 분자 질소로 전환되기 어렵고 그에 따라 처리 시스템으로 완전하게 제거할 수 없다.
따라서, 상기한 종래 기술에 의하더라도 N2O 및 NO와 같은 질소 산화물을 효율적으로 제거할 수 있는 대안적 방법이 여전히 요구되고 있다.
일 양상은 Paracoccus 속 미생물 또는 Pseudomonas 속 미생물을 Mg2+ 이온 및 Fe(II)(L)-NO 또는 N2O를 포함하는 액체 매질 중에서 배양하여 NO를 N2O 또는 N2로 환원시키는 단계를 포함하는, 매질 중 N2O 및 NO 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법으로서, 상기 L은 킬레이팅제인 것인 방법을 제공한다.
일 양상은 Paracoccus 속 미생물 또는 Pseudomonas 속 미생물을 Mg2+ 이온 및 Fe(II)(L)-NO 또는 N2O를 포함하는 액체 매질 중에서 배양하여 NO를 N2O 또는 N2로 환원시키는 단계를 포함하는, 매질 중 N2O 및 NO 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법으로서, 상기 L은 킬레이팅제인 것인 방법을 제공한다.
상기 방법에 있어서, 상기 Paracoccus 속 미생물은 Paracoccus versutus, Paracoccus denitrificans, Paracoccus pantothrophas, Paracoccus ferrooxidans, 및 Paracoccus denitrificans로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다. 상기 Pseudomonas 속 미생물은 Pseudomonas stuzeri, Pseudomonas putida, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas mendocina로 이루어진 군으로부터 선택되는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 액체 매질은 0.1 내지 7.5mM, 0.5 내지 7.5mM, 0.5 내지 5.0mM, 0.5 내지 2.5mM, 0.5 내지 1.5mM, 또는 1.0 내지 2.5mM의 Mg2+ 이온을 포함하는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, Fe(II)(L)-NO은 킬레이팅제(chelating agent) L과 Fe2+와 NO가 착화되어(chelate) 복합체를 형성한 것을 나타낸다. 상기 L은 예를 들면, 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라아민, 헥사메틸렌테트라아민, N-(2-히드록시에틸)에틸렌디아민-트리아세트산(HEDTA), 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 이미노디아세트산, 니트릴로-트리아세트산(NTA), 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA)인 것일 수 있다.
상기 액체 매질은 상기 미생물이 생육 가능하도록 하는 것일 수 있다. 상기 배양은 혐기 조건하에서 수행하는 것일 수 있다. 상기 배양은 25℃ 내지 40℃, 또는 25℃ 내지 35℃의 온도에서 수행하는 것일 수 있다. 상기 배양은 Paracoccus 속 미생물 단독 또는 Pseudomonas 속 미생물 단독 또는 Paracoccus 속 미생물 단독 및 Pseudomonas 속 미생물의 혼합 배양인 것일 수 있다. 상기 배양은 미생물이 증식 또는 유지할 수 있도록 하는 조건에서 수행될 수 있다. 상기 배양은 증식에 필요한 배지, 및 온도 조건에서 수행하는 것일 수 있다. 상기 배양은 교반하에서 수행되는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 배양하는 단계 외에 추가의 탈질 공정을 포함하지 않는 것일 수 있다. 상기 방법은 상기 배양에 의하여 N2O 또는 NO를 N2로 전환하는 것으로, 추가의 생물학적 탈질 공정을 포함하지 않는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 배양은 질소 산화물, 예를 들면, NO2-, 또는 NO를 Fe(II)EDTA를 포함하는 액체 매질과 접촉시켜 Fe(II)EDTA-NO를 형성하는 단계와 동시 또는 그 후에 수행하는 것일 수 있다. 상기 Fe(II)(L)-NO의 농도는 1 내지 200mM, 25 내지 150mM, 또는 0.1 내지 20mM인 것일 수 있다.
또한, 상기 액체 매질은 전자 공여체(electron donor)를 포함하는 것일 수 있다. 상기 전자 공여체는 유기 탄소 화합물일 수 있다. 상기 전자 공여체는 메탄올, 에탄올, 아세테이트, 락테이트, 시트레이트, 글루코스, 또는 수크로스인 것일 수 있다.
상기 액체 매질은 미생물 배양을 위한 배지 또는 버퍼 또는 이들을 포함하는 것일 수 있다. 상기 액체 매질은 화학적으로 정의된 배지(chemically defined medium)일 수 있다. 본 명세서에서 "화학적으로 정의된 배지"는 배지의 화학적 성분이 알려진 것을 나타낸다. 화학적으로 정의된 배지는 혈청 또는 가수분해물과 같은 복합 성분을 포함하지 않는 것일 수 있다. 상기 액체 매질은 LB 배지, M9 배지, 포스페이트 버퍼, 및 Tris 버퍼를 포함하는 것일 수 있다.
상기 방법에 있어서, 상기 N2O 또는 NO는 폐기체 또는 폐수로부터 유래된 것일 수 있다. 따라서, 상기 방법에 의하면, 폐기체 또는 폐수 중의 N2O 또는 NO의 농도를 감소시킬 수 있다.
일 양상에 따른 매질 중 N2O 또는 NO의 농도를 감소시키는 방법에 의하면, 매질 중 N2O 또는 NO의 농도를 효율적으로 감소시킬 수 있다.
도 1은 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 함유 배지에서 배양한 후 유리 혈청병 내 기체층 중 N2O의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다.
도 2는 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 Fe(II)EDTA-NO 함유 배지에서 배양한 후 유리 혈청병 내 기체층 중 NO, N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다.
도 3은 Mg2+, Ca2+, Mn2+, Mo2+, Cu2+ 또는 Co2+ 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 2.5mM 함유 배지에서 배양한 후 유리 혈청병 내 기체층 중 N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다.
도 4는 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus 또는 Pseudomonas stutzeri를 Fe(II)EDTA-NO 함유 배지에서 배양한 후 유리 혈청병 내 기체층 중 N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다.
이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 마그네슘 이온이 Paracoccus versutus 에 의한 N 2 O의 제거에 미치는 영향
본 실시예에서는 마그네슘 이온이 Paracoccus versutus에 의한 N2O의 제거에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, Paracoccus versutus를 LB 배지(10g/L Tryptone, 10 g/L NaCl, 5 g/L Yeast Extract)를 함유한 250 ml 삼각 플라스크에서 1차 배양한 후 원심분리하여 미생물만 분리하였다. 다음으로, 분리된 미생물을 M9 배지(Na2HPO4 6.78 g/L, KH2PO4 3 g/L, NaCl 0.5 g/L, NH4Cl 1 g/L, MnSO4 0.1 mg/L, Na2MoO4 0.1 mg/L, CuSO4 5H2O 0.1 mg/L, CaCl2 2 mg/L)를 사용하여 세척하고, 세척된 미생물을 60 ml 유리 혈청병 즉, 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 혈청병(serum bottle)에 30ml M9 배지에 섞어 배지 중에 세포 농도가 OD=1이 되도록 첨가한 후 이렇게 미생물과 배지가 들어 있으며 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 유리 혈청병에 주사기를 이용하여 2.5 mM N2O를 주입한 후 30℃에서 7 시간 동안 흔들면서 배양한 후 유리 혈청병내 상층부의 기체층 채취하여 N2O 또는 N2 농도를 Gas Chromatography Mass-Spectrum(GC-MS)을 사용하여 측정하였다. 이때 음성 대조군은 세포가 포함되지 않은 M9 배지를 사용하였고, 양성 대조군은 마그네슘 이온은 포함하지 않고 세포만 포함한 M9 배지를 사용하였고, 실험군은 마그네슘 이온 1mM 및 세포를 포함하는 M9 배지 사용하였다.
도 1은 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 함유 배지에서 배양한 후 유리 혈청병 내 기체층 중 N2O의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다. 상기 상대적 잔류율은 하기 식에 따라 계산하였다.
상대적 잔존율 (%)= (잔존량 /초기 주입량) x 100
표 1은 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 함유 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층 중 N2O 감소와 N2 생성량을 통해 N2O의 N2로의 전환율을 나타낸 표이다.
전환율 (%) = ((초기주입량 - 잔존량)/초기 주입량) x 100
시료 M9 배지 0mM Mg2+ 함유 M9 배지+ 세포 1mM Mg2+ 함유 M9 배지+ 세포
N2 전환율(%) 0 0 100
표 1에 나타낸 바와 같이, Mg2+ 함유하지 않은 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, N2O의 N2 전환율은 0%이었으나 Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, 전환율은 100%이었다. 이는 Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, N2O가 100% N2로 전환되는 것을 나타낸다.
실시예 2: 마그네슘 이온이 Paracoccus versutus 에 의한 NO의 제거에 미치는 영향
본 실시예에서는 마그네슘 이온이 Paracoccus versutus에 의한 NO의 제거에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, Paracoccus versutus를 LB 배지(10g/L Tryptone, 10 g/L NaCl, 5 g/L Yeast Extract)를 함유한 250 ml 삼각 플라스크에서 에서 1차 배양한 후 원심분리하여 미생물만 분리하였다. 다음으로, 분리된 미생물을 M9 배지(Na2HPO4 6.78 g/L, KH2PO4 3 g/L, NaCl 0.5 g/L, NH4Cl 1 g/L, MnSO4 0.1 mg/L, Na2MoO4 0.1 mg/L, CuSO4 5H2O 0.1 mg/L, CaCl2 2 mg/L)를 사용하여 세척하고, 세척된 미생물을 60 ml 유리 혈청병 즉, 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 혈청병에 5mM Fe(II)EDTA-NO를 포함한 M9 배지 30ml에 섞어 배지중에 세포 농도가 OD=1이 되도록 첨가한 후 이렇게 미생물, Fe(II)EDTA-NO와 배지가 들어 있으며 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 유리 혈청병을 30℃에서 7 시간 동안 흔들면서 배양한 후 유리 혈청병내 상층부의 기체층 채취하여 N2O 또는 N2 농도를 Gas Chromatography Mass-Spectrum(GC-MS)을 사용하여 측정하였다.
이때 음성 대조군은 세포가 포함되지 않은 Fe(II)EDTA-NO 함유 M9 배지를 사용하였고, 양성 대조군은 마그네슘 이온은 포함하지 않고 세포만 포함한 Fe(II)EDTA-NO 함유 M9 배지를 사용하였고, 실험군은 마그네슘 이온 1mM 및 세포를 포함하는 Fe(II)EDTA-NO 함유 M9 배지 사용하였다.
도 2는 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 Fe(II)EDTA-NO 함유 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층의 NO, N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다. 상기 상대적 잔존율은 하기 식에 따라 계산하였다.
상대적 잔존율 (%)= (잔존량 /초기 주입량) x 100
표 2는 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 Fe(II)EDTA-NO 함유 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층의 중 NO, N2O, N2의 상대적 잔존율을 나타낸 표이다.
시료 배지 Mg2+ 0 mM 함유 배지 + 세포 Mg2+ 1 mM 함유 배지 + 세포
NO N2O N2 NO N2O N2 NO N2O N2
상대적 잔존율 (%, 24시간 후) 100 0 0 0 100 0 0 0 100
표 2에 나타낸 바와 같이, Mg2+ 함유하지 않은 M9 배지에서 Paracoccus versutus 세포 없이 배양한 경우, NO만 존재하여 NO의 N2O 또는 N2로의 전환율은 0%이었으나 0 mM Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, NO는 N2O까지 100% 전환되지만 N2O의 N2로의 전환은 일어나지 않았다. 반면, 1 mM Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, N0는 100% N2로 전환되었다.
실시예 3: 2가 양이온이 Paracoccus versutus 에 의한 N 2 O의 제거에 미치는 영향
본 실시예에서는 마그네슘 이온 및 5개 다른 2가 양이온이 Paracoccus versutus에 의한 NO의 탈질에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, Paracoccus versutus를 LB 배지(10g/L Tryptone, 10 g/L NaCl, 5 g/L Yeast Extract)를 함유한 250 ml 삼각 플라스크에서에서 1차 배양한 후 원심분리하여 미생물만 분리하였다. 다음으로, 분리된 미생물을 M9 배지(Na2HPO4 6.78 g/L, KH2PO4 3 g/L, NaCl 0.5 g/L, NH4Cl 1 g/L, MnSO4 0.1 mg/L, Na2MoO4 0.1 mg/L, CuSO4 5H2O 0.1 mg/L, CaCl2 2 mg/L)를 사용하여 세척하고, 세척된 미생물을 60 ml 유리 혈청병 즉, 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 혈청병에 30ml M9 배지에 섞어 배지 중에 세포 농도가 OD=1이 되도록 첨가한 후 이렇게 미생물과 배지가 들어 있으며 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 유리 혈청병에 주사기를 이용하여 2.5 mM N2O를 주입한 후 30℃에서 7 시간 동안 흔들면서 배양한 후 유리 혈청병내 상층부의 기체층 채취하여 N2O 또는 N2 농도를 Gas Chromatography Mass-Spectrum(GC-MS)을 사용하여 측정하였다.
이때 음성 대조군은 세포가 포함되지 않은 M9 배지를 사용하였고, 실험군은 Mg2+, Ca2+, Mn2+, Mo2+, Cu2+ 또는 Co2+ 이온 1mM 및 세포를 포함하는 M9 배지 사용하였다.
도 3은 Mg2+, Ca2+, Mn2+, Mo2+, Cu2+ 또는 Co2+ 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 2.5 mM 함유 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층의 N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다. 상기 상대적 잔존율은 하기 식에 따라 계산하였다.
상대적 잔존율 (%)= (잔존량 /초기 주입량) x 100
표 3은 Mg2+, Ca2+, Mn2+, Mo2+, Cu2+ 또는 Co2+ 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus를 N2O 함유 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층 중 N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 표이다.
배지 배지 Mg2+ Ca2+ Mn2+ Mo2+ Cu2+ Co2+
N2O N2 N2O N2 N2O N2 N2O N2 N2O N2 N2O N2 N2O N2
잔존율
(%, 7시간 후)
100 0 0 100 95 0 97 0 97 0 95 0 96 0
표 3에 나타낸 바와 같이, Mg2+, Ca2+, Mn2+, Mo2+, Cu2+ 또는 Co2+ 이온 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus 세포를 배양한 경우, N2O만 존재하여 N2O의 N2로의 전환율은 0%이었으나 1 mM Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, N2O는 100% N2로 전환되었다.
실시예 4: Paracoccus versutus 또는 Pseudomonas stutzeri 에 의한 NO의 제거에 미치는 영향
본 실시예에서는 마그네슘 이온이 Paracoccus versutus 또는 Pseudomonas stutzeri(생물자원센터, KCTC 구매)에 의한 NO의 제거에 미치는 영향을 확인하였다. 구체적으로, Paracoccus versutus 또는 Pseudomonas stutzeri를 LB 배지(10g/L Tryptone, 10 g/L NaCl, 5 g/L Yeast Extract)를 함유한 250 ml 삼각 플라스크에서 1차 배양한 후 원심분리하여 미생물만 분리하였다. 다음으로, 분리된 미생물을 M9 배지(Na2HPO4 6.78 g/L, KH2PO4 3 g/L, NaCl 0.5 g/L, NH4Cl 1 g/L, MnSO4 0.1 mg/L, Na2MoO4 0.1 mg/L, CuSO4 5H2O 0.1 mg/L, CaCl2 2 mg/L)를 사용하여 세척하고, 세척된 미생물을 60 ml 유리 혈청병 즉, 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 혈청병에 5mM Fe(II)EDTA-NO를 포함한 M9 배지 30ml에 섞어 배지중에 세포 농도가 OD=1이 되도록 첨가한 후 이렇게 미생물, Fe(II)EDTA-NO와 배지가 들어 있으며 실리콘 마개와 알루미늄 캡으로 입구를 막은 유리 혈청병을 30℃에서 7 시간 동안 흔들면서 배양한 후 유리 혈청병내 상층부의 기체층 채취하여 N2O 또는 N2 농도를 Gas Chromatography Mass-Spectrum(GC-MS)을 사용하여 측정하였다.
도 4는 마그네슘 이온 존재 또는 부존재하에서 Paracoccus versutus 또는 Pseudomonas stutzeri를 Fe(II)EDTA-NO 배지에서 배양한 후 혈청병 내 기체층 중의 NO, N2O 및 N2의 상대적 잔존율을 나타낸 도면이다. 상기 상대적 잔존율은 하기 식에 따라 계산하였다.
상대적 잔존율 (%)= (잔존량 /초기 주입량) x 100
도 4에 나타낸 바와 같이, Mg2+ 함유하지 않은 M9 배지에서 Paracoccus versutus 세포 없이 배양한 경우, NO는 대부분 N2O로 전환되고 적은 비율이 N2로 전환되었으나 1 mM Mg2+ 함유 M9 배지에서 Paracoccus versutus를 배양한 경우, NO는 100% N2로의 전환되었다. 반면, Mg2+ 함유하지 않은 M9 배지에서 Pseudomonas stutzeri 세포를 배양한 경우, NO는 약 20%가 N2O로 전환되고 N2로는 거의 전환되지 않았으나 1 mM Mg2+ 함유 M9 배지에서 Pseudomonas stutzeri 세포를 배양한 경우, NO는 100% N2O 또는 N2로 전환되었다. 이는 Pseudomonas stutzeri 균주에서도 산화질소를 분해하기 위해서 Mg2+ 이온이 핵심적이라는 것을 나타낸다.

Claims (16)

  1. Paracoccus 속 미생물 또는 Pseudomonas 속 미생물을 Mg2+ 이온 및 Fe(II)(L)-NO 또는 N2O를 포함하는 액체 매질 중에서 배양하여 NO를 N2O 또는 N2로 환원시키는 단계를 포함하는, 매질 중 N2O 및 NO 중 하나 이상의 농도를 감소시키는 방법으로서, 상기 L은 킬레이팅제인 것인 방법.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 Paracoccus 속 미생물은 Paracoccus versutus, Paracoccus denitrificans, Paracoccus pantothrophas, Paracoccus ferrooxidans, 및 Paracoccus denitrificans로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 Pseudomonas 속 미생물은 Pseudomonas stuzeri, Pseudomonas putida, Pseudomonas cepacia, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas mendocina로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 상기 액체 매질은 0.1 내지 7.5mM의 Mg2+ 이온을 포함하는 방법.
  5. 청구항 1에 있어서, 상기 L은 에틸렌디아민, 디에틸렌트리아민, 트리에틸렌테트라아민, 헥사메틸렌테트라아민, N-(2-히드록시에틸)에틸렌디아민-트리아세트산(HEDTA), 에틸렌디아민-테트라아세트산(EDTA), 이미노디아세트산, 니트릴로-트리아세트산(NTA), 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA)인 것인 방법.
  6. 청구항 1에 있어서, 상기 액체 매질은 상기 미생물이 생육 가능하도록 하는 것인 방법.
  7. 청구항 1에 있어서, 상기 배양은 혐기 조건하에서 수행하는 것인 방법.
  8. 청구항 1에 있어서, 상기 배양은 25℃ 내지 40℃의 온도에서 수행하는 것인 방법.
  9. 청구항 1에 있어서, 상기 배양은 Paracoccus 속 미생물 단독 또는 Pseudomonas 속 미생물 단독 또는 Paracoccus 속 미생물 단독 및 Pseudomonas 속 미생물의 혼합 배양인 것인 방법.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 배양은 NO2 또는 NO를 Fe(II)EDTA를 포함하는 액체 매질과 접촉시켜 Fe(II)EDTA-NO를 형성하는 단계와 동시 또는 그 후에 수행하는 것인 방법.
  11. 청구항 1에 있어서, 상기 Fe(II)(L)-NO의 농도는 0.1 내지 20mM인 것인 방법.
  12. 청구항 1에 있어서, 상기 액체 매질은 전자 공여체(electron donor)를 포함하는 것인 방법.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 전자 공여체는 메탄올, 에탄올, 아세테이트, 또는 글루코스인 것인 방법.
  14. 청구항 1에 있어서, 상기 액체 매질은 미생물 배양을 위한 배지 또는 버퍼인 것인 방법.
  15. 청구항 1에 있어서, 상기 액체 매질은 LB 배지, M9 배지, 포스페이트 버퍼, 또는 Tris 버퍼를 포함하는 것인 방법.
  16. 청구항 1에 있어서, 상기 N2O 또는 NO는 폐기체 또는 폐수로부터 유래된 것인 방법.


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