KR20220063139A - Peptides binding to antibodies and analyzing method using the same - Google Patents

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KR20220063139A
KR20220063139A KR1020220055424A KR20220055424A KR20220063139A KR 20220063139 A KR20220063139 A KR 20220063139A KR 1020220055424 A KR1020220055424 A KR 1020220055424A KR 20220055424 A KR20220055424 A KR 20220055424A KR 20220063139 A KR20220063139 A KR 20220063139A
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변재철
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(주)옵토레인
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    • G—PHYSICS
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    • G01N33/6878—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids in eptitope analysis

Abstract

The present invention relates to a peptide binding to an antigen-binding site of an antibody and an analysis method using the same. The peptide according to one embodiment of the present invention binds reversibly to at least part of the framework region (FR) of the antibody. When a target antigen which specifically makes a reaction with the antibody binds to the antibody, the peptide can be separated from the framework region.

Description

항체의 항원 결합 부위에 결합하는 펩티드 및 이를 이용한 분석 방법{Peptides binding to antibodies and analyzing method using the same}Peptides binding to antibodies and analyzing method using the same

본 발명은 임뮤노어세이 기술에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는, 항체의 항원 결합 부위에 결합하는 펩티드 및 이를 이용한 분석 방법에 관한 것이다.The present invention relates to immunoassay technology, and more particularly, to a peptide binding to an antigen-binding site of an antibody and an analysis method using the same.

바이오 기술 분야에서 다양한 면역진단검사 또는 환경모니터링과 같은 바이오 검사를 위하여 임뮤노어세이가 사용되고 있다. 상기 임뮤노어세이는 항원-항체 반응의 특이성을 이용하여 특정 물질의 정량적 분석이 가능하며, 다른 분석방법에 비하여 높은 민감도를 갖는 이점이 있다.In the field of biotechnology, immunoassays are being used for bioassays such as various immunodiagnostic tests or environmental monitoring. The immunoassay can quantitatively analyze a specific substance using the specificity of the antigen-antibody reaction, and has the advantage of having high sensitivity compared to other analysis methods.

상기 임뮤노어세이는 암 마커, 감염성 질환, 갑상선 기능, 빈혈, 알레르기, 임신, 약물남용 또는 통풍 진단과 같은 다양한 진단에 이용될 수 있다. 상기 임뮤노어세이를 다양한 종류의 항원의 진단 또는 분석에 이용하기 위해서는 상기 항원들 각각에 대하여 특이적인 반응성을 갖는 항체를 준비해야 한다.The immunoassay can be used for various diagnoses such as cancer markers, infectious diseases, thyroid function, anemia, allergy, pregnancy, drug abuse or gout diagnosis. In order to use the immunoassay for diagnosis or analysis of various types of antigens, antibodies having specific reactivity with respect to each of the antigens must be prepared.

그러나, 이러한 방법은 최근 빠른 속도로 다양화되고 있는 현대화된 질병들 또는 다수의 돌연변이종을 갖는 바이러스들을 감지하는 데에는 한계점이 있다. 특히, 상기 바이러스의 경우, 상기 바이러스와 특이적 결합성을 갖는 항체를 찾는 것이 불가능한 경우도 다수 있다.However, this method has limitations in detecting modern diseases that are rapidly diversifying in recent years or viruses having multiple mutant species. In particular, in the case of the virus, there are many cases in which it is impossible to find an antibody having specific binding to the virus.

또한, 상기 항원-항체 반응을 이용하는 경우, 상기 항체를 표지 물질과 결합시키는 추가적인 단계가 요구될 수 있다. 상기 표지 물질과 상기 항체의 결합성이 떨어지는 경우, 임뮤노어세이 분석 정확도 또는 신뢰도가 저하될 수 있다. 전술한 것과 같이 다양한 항체에 대하여 결합할 수 있는 다양한 종류의 표지 물질을 각각 개발해야 하는 문제도 있다.In addition, when using the antigen-antibody reaction, an additional step of binding the antibody to a labeling material may be required. When the binding property of the labeling material and the antibody is low, the accuracy or reliability of the immunoassay analysis may be reduced. As described above, there is also a problem in that various types of labeling substances capable of binding to various antibodies must be developed, respectively.

본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는, 다양한 종류의 질병들 또는 상기 질병들의 원인이 되는 항원을 검출할 수 있어 항원의 종류에 제한되지 않고, 적용 가능성이 향상된 펩티드를 제공하는 것이다.The technical problem to be achieved by the present invention is to provide a peptide with improved applicability without being limited to the type of antigen as it can detect various types of diseases or antigens that cause the diseases.

본 발명이 이루고자 하는 다른 기술적 과제는, 전술한 이점을 갖고, 분석 대상 항원에 대한 민감도가 향상되어 분석 신뢰도 및 정확도가 향상되고, 분석을 위한 처리 단계들이 간소화되어 신속성 및 사용 용이성이 향상된 분석 방법을 제공하는 것이다.Another technical problem to be achieved by the present invention is to provide an analysis method that has the above-described advantages, improves sensitivity to an analyte antigen, improves analysis reliability and accuracy, and simplifies processing steps for analysis, thereby improving speed and ease of use will provide

상기의 과제를 해결하기 위한 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드는 항체의 프레임워크 영역(framework region; FR)의 적어도 일 부분에 가역적으로 결합하고, 상기 항체와 특이적으로 반응하는 타겟 항원이 상기 항체에 결합하는 경우, 상기 프레임워크 영역으로부터 분리될 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 펩티드는 상기 항체의 3차원 구조에 의하여 상기 프레임워크 영역에 결합될 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 펩티드와 상기 항체가 결합된 상태에서 상기 항체와 상기 타겟 항원의 결합이 가능할 수 있다.The peptide according to an embodiment of the present invention for solving the above problems reversibly binds to at least a portion of a framework region (FR) of an antibody, and the target antigen that specifically reacts with the antibody is the When bound to the antibody, it can be separated from the framework region. In another embodiment, the peptide may be bound to the framework region by the three-dimensional structure of the antibody. In another embodiment, in a state in which the peptide and the antibody are bound, binding of the antibody and the target antigen may be possible.

일 실시예에서, 상기 펩티드는 상기 항체와 상기 타겟 항원의 결합에 영향을 끼치지 않을 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 펩티드는 인간 항체, 비인간 항체, 인간화된 비인간 항체 또는 이들의 조합과 결합 가능할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 펩티드는 적어도 하나 이상의 상기 프레임워크 영역에 결합 가능한 FR 결합부 및 적어도 하나 이상의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions CDR)에 결합 가능한 CDR 결합부를 포함할 수 있다.In one embodiment, the peptide may not affect the binding of the antibody to the target antigen. In other embodiments, the peptide may be capable of binding to a human antibody, a non-human antibody, a humanized non-human antibody, or a combination thereof. In another embodiment, the peptide may comprise an FR binding region capable of binding to at least one or more of the framework regions and a CDR binding region capable of binding to at least one or more complementarity determining regions CDR.

일 실시예에서, 상기 펩티드는 프레임워크 영역의 전체 또는 일 부분에 결합될 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 중 쇄의 프레임워크 영역일 수 있다.In one embodiment, the peptide may be bound to all or a portion of the framework region. In another embodiment, the framework region may comprise FR1, FR2, FR3, FR4, or a combination thereof of the antibody. In another embodiment, the framework region may be a framework region of a heavy chain of the antibody.

일 실시예에서, 상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 경 쇄의 프레임워크 영역일 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 어느 하나에 결합하는 펩티드는 상기 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 다른 하나에 결합하는 펩티드와 결합될 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 1 내지 서열번호 4 중 어느 하나를 포함할 수 있다.In one embodiment, the framework region may be a framework region of the light chain of the antibody. In another embodiment, the peptide that binds to any one of FR1, FR2, FR3 or FR4 may be combined with a peptide that binds to the other one of FR1, FR2, FR3 or FR4. In another embodiment, the amino acid sequence of the peptide may include any one of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4.

일 실시예에서, 상기 펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 1의 일부, 서열번호 2, 서열번호 2의 일부, 서열번호 3, 서열번호 3의 일부, 서열번호 4, 서열번호 4의 일부 또는 이들의 조합일 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 펩티드는 광학적, 화학적 또는 전기적 표지 반응을 나타내는 표지 물질로 표지될 수 있다.In one embodiment, the amino acid sequence of the peptide is SEQ ID NO: 1, part of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, part of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, part of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, part of SEQ ID NO: 4 or a combination thereof. In another embodiment, the peptide may be labeled with a labeling material that exhibits an optical, chemical or electrical labeling reaction.

상기의 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다른 실시예에 따른 펩티드를 이용한 분석 방법은 타겟 항원과 특이적으로 반응하는 항체에 상기 펩티드를 제공하여 상기 항체의 프레임워크 영역(framework region; FR)의 적어도 일부분에 가역적으로 결합시키는 전처리 단계, 상기 항체에 피분석물을 제공하여 상기 피분석물 내의 상기 타겟 항원을 상기 항체와 결합시켜 상기 펩티드를 상기 프레임워크 영역으로부터 분리시키는 항원 처리 단계 및 상기 항원 처리 단계 이후에 상기 프레임워크 영역에 결합된 잔량의 펩티드, 또는 상기 프레임워크 영역으로부터 분리된 펩티드 중 적어도 어느 하나를 정량하여 상기 타겟 항원을 분석하는 분석 단계를 포함할 수 있다.In an analysis method using a peptide according to another embodiment of the present invention for solving the above problems, the peptide is provided to an antibody that specifically reacts with a target antigen, so that at least the framework region (FR) of the antibody is A pretreatment step of reversibly binding to a portion, an antigen treatment step of providing an analyte to the antibody to bind the target antigen in the analyte with the antibody to separate the peptide from the framework region, and the antigen treatment step Thereafter, an analysis step of analyzing the target antigen by quantifying at least one of the residual amount of the peptide bound to the framework region or the peptide separated from the framework region may be included.

일 실시예에서, 상기 항체는 기판, 비드(bead), 고분자 구조체 또는 이들의 조합인 지지체에 고정될 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 분석 단계에서, 상기 결합된 잔량의 펩티드 및 상기 분리된 펩티드를 모두 정량할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 분석 단계는 상기 타겟 항원을 식별 또는 정량할 수 있다. 또 다른 실시예에서, 상기 전처리 단계에서, 상기 항체에 결합된 펩티드를 정량할 수 있다.In one embodiment, the antibody may be immobilized on a support such as a substrate, a bead, a polymer structure, or a combination thereof. In another embodiment, in the analysis step, both the bound peptide and the isolated peptide may be quantified. In another embodiment, the analyzing step may identify or quantify the target antigen. In another embodiment, in the pretreatment step, the peptide bound to the antibody may be quantified.

일 실시예에서, 상기 펩티드는 광학적, 화학적 또는 전기적 표지 반응을 나타내는 표지 물질로 표지되고, 상기 분석 단계에서, 상기 타겟 항원의 분석은 상기 표지 반응을 측정하여 이루어지는 펩티드를 이용할 수 있다. 일 실시예에서, 상기 전처리 단계는, 상기 항체에 상기 펩티드를 제공하여 상기 항체와 상기 펩티드의 제 1 결합체 및 상기 항체와 결합되지 않은 펩티드를 포함하는 혼합 용액을 얻는 단계 및 상기 혼합 용액으로부터 상기 항체와 결합되지 않은 펩티드를 제거하는 단계를 포함할 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 분석 단계는, 상기 항체로부터 분리된 펩티드와 상기 항체와 상기 타겟 항원의 제 2 결합체를 분리하는 단계 및 상기 분리된 펩티드를 정량하는 단계를 더 포함할 수 있다.In one embodiment, the peptide is labeled with a labeling material exhibiting an optical, chemical or electrical labeling reaction, and in the analysis step, the target antigen may be analyzed using a peptide obtained by measuring the labeling reaction. In one embodiment, the pretreatment step includes providing the peptide to the antibody to obtain a mixed solution comprising a first conjugate of the antibody and the peptide and a peptide not bound to the antibody, and the antibody from the mixed solution and removing the unbound peptide. In another embodiment, the analyzing step may further include separating the peptide isolated from the antibody and a second conjugate of the antibody and the target antigen, and quantifying the isolated peptide.

본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드는, 여러 종류의 항체에서 동일 또는 유사한 아미노산 서열을 갖는 항체의 프레임워크 영역(framework region; FR)의 적어도 일부분에 가역적으로 결합함으로써, 상기 프레임워크 영역은 상기 여러 종류의 항체에 결합이 가능하여 상기 여러 종류의 항체의 식별 또는 정량과 같은 분석에 이용할 수 있고, 적용 범위가 확장되는 이점이 있다.The peptide according to an embodiment of the present invention reversibly binds to at least a portion of a framework region (FR) of an antibody having the same or similar amino acid sequence in various types of antibodies, so that the framework region is Since it can bind to various types of antibodies, it can be used for analysis such as identification or quantification of the various types of antibodies, and has the advantage of expanding the scope of application.

본 발명의 다른 실시예에 따른 펩티드를 이용한 분석 방법은, 전술한 이점을 갖는 펩티드를 타겟 항원과 특이적으로 반응하는 항체에 결합시키고, 상기 항체에 상기 타겟 항원을 결합시켜 상기 펩티드를 상기 프레임워크 영역으로부터 분리시킴으로써, 분석 대상물을 세척하는 추가적인 단계를 생략하여 신속하게 분석이 가능하고, 사용 용이성이 향상된 임뮤노어세이가 가능할 수 있다. In the analysis method using a peptide according to another embodiment of the present invention, a peptide having the above-described advantages is bound to an antibody that specifically reacts with a target antigen, and the target antigen is bound to the antibody to convert the peptide into the framework. By separating from the region, an additional step of washing the analyte is omitted, enabling rapid analysis, and improving ease of use may be possible in an immunoassay.

도 1a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드의 결합을 나타낸 도면이고, 도 1b는 본 발명의 다른 실시예에 따른 펩티드의 결합을 나타낸 도면이다.
도 2a는 본 발명의 일 실시예에 따른 경 쇄에 결합된 펩티드를 나타낸 도면이고, 도 2b는 본 발명의 일 실시예에 따른 중 쇄에 결합된 펩티드를 나타낸 도면이다.
도 3a 및 도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 서로 다른 프레임워크 영역에 결합되는 펩티드들의 결합성을 측정한 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드를 나타낸 도면이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드를 이용한 분석 방법의 순서도를 나타낸 도면이다.
도 6a 내지 도 6c는 본 발명의 다양한 실시예에 따른 타겟 항원의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드를 이용한 분석 방법의 순서도이고, 도 7b는 도 7a의 분석 방법에 따른 분석 그래프이다.
도 8a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드를 이용한 분석 방법의 순서도이고, 도 8b는 도 8a의 분석 방법에 따른 분석 그래프이다.Figure 1a is a diagram showing the binding of a peptide according to an embodiment of the present invention, Figure 1b is a diagram showing the binding of a peptide according to another embodiment of the present invention.
Figure 2a is a view showing a peptide bound to a light chain according to an embodiment of the present invention, Figure 2b is a view showing a peptide bound to a heavy chain according to an embodiment of the present invention.
3A and 3B are graphs measuring the binding properties of peptides bound to different framework regions according to an embodiment of the present invention.
4 is a view showing a peptide according to an embodiment of the present invention.
5 is a diagram showing a flowchart of an analysis method using a peptide according to an embodiment of the present invention.
6A to 6C are graphs showing analysis results of target antigens according to various embodiments of the present invention.
7A is a flowchart of an analysis method using a peptide according to an embodiment of the present invention, and FIG. 7B is an analysis graph according to the analysis method of FIG. 7A.
8A is a flowchart of an analysis method using a peptide according to an embodiment of the present invention, and FIG. 8B is an analysis graph according to the analysis method of FIG. 8A.

이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail with reference to the accompanying drawings.

본 발명의 실시예들은 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 본 발명을 더욱 완전하게 설명하기 위하여 제공되는 것이며, 하기 실시예는 여러 가지 다른 형태로 변형될 수 있으며, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 오히려, 이들 실시예는 본 개시를 더욱 충실하고 완전하게 하고, 당업자에게 본 발명의 사상을 완전하게 전달하기 위하여 제공되는 것이다.Examples of the present invention are provided to more completely explain the present invention to those of ordinary skill in the art, and the following examples may be modified in various other forms, and the scope of the present invention is as follows It is not limited to an Example. Rather, these examples are provided so that this disclosure will be more thorough and complete, and will fully convey the spirit of the invention to those skilled in the art.

도면에서 동일 부호는 동일한 요소를 지칭한다. 또한, 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "및/또는"은 해당 열거된 항목 중 어느 하나 및 하나 이상의 모든 조합을 포함한다.In the drawings, like reference numerals refer to like elements. Also, as used herein, the term “and/or” includes any one and all combinations of one or more of those listed items.

본 명세서에서 사용된 용어는 실시예를 설명하기 위하여 사용되며, 본 발명의 범위를 제한하기 위한 것이 아니다. 또한, 본 명세서에서 단수로 기재되어 있다 하더라도, 문맥상 단수를 분명히 지적하는 것이 아니라면, 복수의 형태를 포함할 수 있다. 또한, 본 명세서에서 사용되는 "포함한다(comprise)" 및/또는 "포함하는(comprising)"이란 용어는 언급한 형상들, 숫자, 단계, 동작, 부재, 요소 및/또는 이들 그룹의 존재를 특정하는 것이며, 다른 형상, 숫자, 동작, 부재, 요소 및/또는 그룹들의 존재 또는 부가를 배제하는 것이 아니다.The terminology used herein is used to describe the embodiment, and is not intended to limit the scope of the present invention. Also, although the singular is used herein, the plural form may be included unless the context clearly indicates the singular. Also, as used herein, the terms "comprise" and/or "comprising" specify the presence of the recited shapes, numbers, steps, actions, members, elements, and/or groups thereof. It does not preclude the presence or addition of other shapes, numbers, movements, members, elements and/or groups.

본 명세서에서 기판 또는 다른 층 "상에(on)" 형성된 층에 대한 언급은 상기 기판 또는 다른 층의 바로 위에 형성된 층을 지칭하거나, 상기 기판 또는 다른 층 상에 형성된 중간 층 또는 중간 층들 상에 형성된 층을 지칭할 수도 있다. 또한, 당해 기술 분야에서 숙련된 자들에게 있어서, 다른 형상에 "인접하여(adjacent)" 배치된 구조 또는 형상은 상기 인접하는 형상에 중첩되거나 하부에 배치되는 부분을 가질 수도 있다. Reference herein to a layer formed “on” a substrate or other layer refers to a layer formed directly on the substrate or other layer, or an intermediate layer or intermediate layers formed on the substrate or other layer. It may also refer to a layer. Also, for those skilled in the art, a structure or shape disposed "adjacent" to another shape may have a portion disposed above or below the adjacent shape.

본 명세서에서, "아래로(below)", "위로(above)", "상부의(upper)", "하부의(lower)", "수평의(horizontal)" 또는 "수직의(vertical)"와 같은 상대적 용어들은, 도면들 상에 도시된 바와 같이, 일 구성 부재, 층 또는 영역들이 다른 구성 부재, 층 또는 영역과 갖는 관계를 기술하기 위하여 사용될 수 있다. 이들 용어들은 도면들에 표시된 방향뿐만 아니라 소자의 다른 방향들도 포괄하는 것임을 이해하여야 한다.As used herein, “below”, “above”, “upper”, “lower”, “horizontal” or “vertical” Relative terms such as , as shown in the drawings, may be used to describe the relationship that one constituent member, layer or region has with another constituent member, layer or region. It should be understood that these terms encompass not only the orientation indicated in the drawings, but also other orientations of the device.

이하에서, 본 발명의 실시예들은 본 발명의 이상적인 실시예들(및 중간 구조들)을 개략적으로 도시하는 단면도들을 참조하여 설명될 것이다. 이들 도면들에 있어서, 예를 들면, 부재들의 크기와 형상은 설명의 편의와 명확성을 위하여 과장될 수 있으며, 실제 구현시, 도시된 형상의 변형들이 예상될 수 있다. 따라서, 본 발명의 실시예는 본 명세서에 도시된 영역의 특정 형상에 제한된 것으로 해석되어서는 아니 된다. 또한, 도면의 부재들의 참조 부호는 도면 전체에 걸쳐 동일한 부재를 지칭한다.DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS Hereinafter, embodiments of the present invention will be described with reference to cross-sectional views schematically illustrating ideal embodiments (and intermediate structures) of the present invention. In these drawings, for example, the size and shape of the members may be exaggerated for convenience and clarity of description, and in actual implementation, variations of the illustrated shape may be expected. Accordingly, embodiments of the present invention should not be construed as limited to the specific shapes of the regions shown herein. Also, reference numerals for members in the drawings refer to the same members throughout the drawings.

용어 "항체"에는 항체, 항체 유도체 또는 이의 단편이 포함될 수 있고, 항체에 관한 상세한 설명은 본 발명의 항체 선별 방법에도 적용된다. 항체는 상기 단편들 중 폴리펩타이드와 같은 항체의 등가물 또는 항체 동족체들은 Fc 영역, 면역글로불린 결합 도메인, 결합 도메인을 모방하는 펩타이드, Fc 영역에 상동성인 영역 또는 적어도 이의 일부를 포함한다. 또한, 항체는 다른 폴리펩타이드에 융합된 면역글로불린 결합 도메인을 포함하는 키메라 분자 또는 그의 등가물을 포함할 수 있다. 상기 항체들은 온전한(intact) 면역글로불린 분자일 수 있고, Fab, Fab', F(ab')2, Fc 및 F(v) 및 N-글리칸 구조 및 파라토프와 같은 상기 항체의 구성 부분들 및 상기 구성 부분들 중 적어도 일부를 포함할 수도 있다. The term "antibody" may include an antibody, an antibody derivative, or a fragment thereof, and the detailed description of the antibody also applies to the antibody screening method of the present invention. Antibodies include an Fc region, an immunoglobulin binding domain, a peptide mimicking a binding domain, a region homologous to the Fc region, or at least a portion thereof, among the fragments of the antibody, such as a polypeptide, or an antibody homologue. Antibodies may also comprise chimeric molecules or equivalents thereof comprising an immunoglobulin binding domain fused to another polypeptide. The antibodies may be intact immunoglobulin molecules, and constituent parts of the antibody such as Fab, Fab', F(ab')2, Fc and F(v) and N-glycan structures and paratopes and It may include at least some of the constituent parts.

상기 항체는 혈청의 기본 구성요소이며, 상기 항체들, 면역글로불린분자들 또는 이의 단편들의 집합체일 수 있고, 항체 또는 면역글로불린의 단일 분자일 수 있다. 상기 항체 분자는 항원 또는 상기 항원의 에피토프와 같은 특이적인 항원 결정기에 결합되거나 상기 항원 결정기와 반응함으로써 면역학적 이펙터 메카니즘을 유도할 수 있다. 상기 항체는 단일특이(monospecific)적일 수 있으며, 상기 항체들의 조성물은 동일한 항체들로 구성되어 모노클로날일 수 있고, 동일한 항원의 다른 에피토프들 또는 다른 항원들의 에피토프들과 반응하는 다른 종류의 항체들을 포함하여 폴리클로날일 수 있다. 각 항체는 상기 항체의 대응하는 항원에 대한 특이적인 결합을 가능케 해주는 독특한 구조를 가질 수 모든 천연 항체 분자들은 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄라는 전체적으로 동일한 기본 구조를 가질 수 있다.The antibody is a basic component of serum, and may be an aggregate of the antibodies, immunoglobulin molecules or fragments thereof, or may be a single antibody or immunoglobulin molecule. The antibody molecule can induce an immunological effector mechanism by binding to or reacting with an antigen or a specific antigenic determinant such as an epitope of the antigen. The antibody may be monospecific, and the composition of the antibodies may be monoclonal composed of identical antibodies, and may include different types of antibodies that react with different epitopes of the same antigen or with epitopes of different antigens. Therefore, it may be polyclonal. Each antibody may have a unique structure that enables specific binding of the antibody to its corresponding antigen. All native antibody molecules may have the same overall basic structure of two identical light chains and two identical heavy chains.

상기 항체는 2개의 동일한 경쇄와 2개의 동일한 중쇄라는 전체적으로 동일한 기본 구조를 가질 수 있다. 상기 중쇄 또는 경쇄는 각각 가변 영역(variable region) 및 불변 영역(constant region)을 포함할 수 있다. 상기 중쇄와 경쇄의 가변 영역이 합쳐져 항원 결합 부위(antigen binding site)를 형성할 수 있다. 상기 항원 결합 부위는 상기 항체의 Fab(antibody binding fragment)에 포함될 수 있다. The antibody may have the same overall basic structure of two identical light chains and two identical heavy chains. The heavy or light chain may include a variable region and a constant region, respectively. The variable regions of the heavy and light chains may combine to form an antigen binding site. The antigen-binding site may be included in an antibody binding fragment (Fab) of the antibody.

상기 항체는 인간 항체, 비인간 항체 또는 인간화된 비인간 항체일 수 있다. 상기 인간 항체는 인간에 의해 생산된 항체에 대응하고/하거나 본원에서 개시된 바와 같은 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 이용해서 제조된 아미노산 서열을 보유하는 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 특히 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 배제한다. 상기 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 포함하는 당해기술에 공지된 다양한 기술을 이용해서 생성될 수 있다. 상기 비인간 항체는 다양한 종의 공급원, 예를 들면, 설치류, 토끼, 소, 양, 돼지, 개, 인간을 제외한 포유 동물 또는 조류로부터 획득된 항체일 수 있다. 상기 비인간 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 면역글로불린으로부터 유래하는 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 일 실시예에서, 인간화 항체는 수용자의 초가변 영역으로(이하, 정의됨)부터의 잔기가 목적 특이성, 친화도 및/또는 수용력을 갖는 전술된 비인간 항체(공여자 항체)의 초가변 영역으로 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 경우에, 인간 면역글로불린의 프레임워크 잔기들은 상응하는 비-인간 잔기들에 의해 대체된다. 또한, 상기 인간화 항체는 수령체 항체 또는 공여체 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능, 예컨대 결합 친화도를 추가 정련하기 위해 제조될 수 있다. The antibody may be a human antibody, a non-human antibody, or a humanized non-human antibody. Said human antibody is an antibody having an amino acid sequence corresponding to an antibody produced by a human and/or prepared using any technique for making a human antibody as disclosed herein. This definition of a human antibody excludes, inter alia, a humanized antibody comprising non-human antigen-binding residues. Such human antibodies can be generated using a variety of techniques known in the art, including phage-display libraries. The non-human antibody may be an antibody obtained from a source of various species, for example, rodents, rabbits, cattle, sheep, pigs, dogs, non-human mammals or birds. "Humanized" forms of such non-human antibodies are chimeric antibodies that contain minimal sequence derived from non-human immunoglobulin. In one embodiment, a humanized antibody is a hypervariable region of a non-human antibody (donor antibody) described above having the desired specificity, affinity and/or capacity in which residues from the hypervariable region of the recipient (as defined below) are replaced Human immunoglobulin (recipient antibody). In some cases, framework residues of a human immunoglobulin are replaced by corresponding non-human residues. In addition, the humanized antibody may comprise residues that are not found in the recipient antibody or donor antibody. These modifications can be made to further refine antibody performance, such as binding affinity.

상기 가변 영역은 초가변 영역(hypervariable region; HVR) 즉, 상보성 결정 영역(complementarily determining regions, CDRs) 및 상기 상보성 결정 영역을 구조적으로 지지하는 프레임 워크 영역(framework region)을 포함할 수 있다. 상기 상보성 결정 영역은 항체마다 상이한 아미노산 서열을 가져 각각의 항원과 특이적으로 결합할 수 있다.The variable region may include a hypervariable region (HVR), that is, complementarily determining regions (CDRs) and a framework region structurally supporting the complementarity determining region. The complementarity determining region has a different amino acid sequence for each antibody, so that it can specifically bind to each antigen.

"프레임워크 영역" 또는 "FR"은 초가변 영역(Hypervariable regions; HVR) 잔기 이외의 불변 도메인 잔기를 지칭한다. 불변 도메인의 상기 프레임워크 영역은 일반적으로 4개의 FR 도메인: FR1, FR2, FR3 및 FR4로 이루어진다. 따라서, 상기 HVR 및 상기 FR 서열은 일반적으로 중 쇄의 가변 영역(VH) 또는 경 쇄의 가변 영역(VL)에서 하기 순서로 나타난다: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4. “Framework regions” or “FR” refer to constant domain residues other than Hypervariable regions (HVR) residues. This framework region of the constant domain generally consists of four FR domains: FR1, FR2, FR3 and FR4. Thus, the HVR and the FR sequences generally appear in the variable region of the heavy chain (V H ) or the variable region of the light chain (V L ) in the following order: FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)- FR3-H3(L3)-FR4.

도 1a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드(100a)의 결합을 나타낸 도면이고, 도 1b는 본 발명의 다른 실시예에 따른 펩티드(100b)의 결합을 나타낸 도면이다.Figure 1a is a view showing the binding of the peptide (100a) according to an embodiment of the present invention, Figure 1b is a view showing the binding of the peptide (100b) according to another embodiment of the present invention.

도 1a를 참조하면, 일 실시예에서, 펩티드(100a)는 항체(10)의 프레임워크 영역(framework region; FR)의 적어도 일부분에 가역적으로 결합할 수 있다. 항체(10)는 면역글로불린 M(IgM), 면역글로불린 D(IgD), 면역글로불린 G(IgG), 면역글로불린 A(IgA) 또는 면역글로불린 E(IgE)일 수 있다. 프레임워크 영역(FR)은 타겟 항원(20) 및/또는 항체(10)의 종류가 상이하더라도 동일하거나, 상당히 유사한 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 프레임워크 영역(FR)은 초가변 영역과 달리, 항체(10)의 종류에 따라 변하지 않는 불변 영역으로서, 여러 종류의 항체에 결합이 가능하여 상기 여러 종류의 항체의 식별 또는 정량과 같은 분석에 이용할 수 있어 분석 가능한 항원의 범위가 확장되는 이점이 있다.Referring to FIG. 1A , in one embodiment, peptide 100a may reversibly bind to at least a portion of a framework region (FR) of antibody 10 . Antibody 10 may be immunoglobulin M (IgM), immunoglobulin D (IgD), immunoglobulin G (IgG), immunoglobulin A (IgA), or immunoglobulin E (IgE). The framework region (FR) may include the same or substantially similar amino acid sequence even if the target antigen 20 and/or the antibody 10 are different. According to an embodiment of the present invention, the framework region (FR) is a constant region that does not change depending on the type of antibody 10, unlike the hypervariable region, and can bind to various types of antibodies, so that the Since it can be used for analysis such as identification or quantification, it has the advantage of expanding the range of antigens that can be analyzed.

일 실시예에서, 펩티드(100a~100f)가 결합되는 프레임워크 영역(FR)은 항체(10)의 FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100a)는 FR1, FR2, FR3 또는 FR4에 결합할 수 있다. 도 1a는 펩티드(100a)가 FR3에 결합된 것을 도시하고 있으나 이에 한정되는 것은 아니다 도 1b 내지 도 2b는 펩티드(100b~100f)가 FR1 또는 FR2에 결합된 것을 도시하고 있다. 또는, 펩티드(100a)는 FR4에 결합될 수도 있다. 다른 실시예에서, 펩티드(100)는 FR1 및 FR2에 동시에 결합할 수도 있다. In one embodiment, the framework region (FR) to which the peptides 100a to 100f are bound may be FR1, FR2, FR3, FR4 of the antibody 10, or a combination thereof. For example, peptide 100a may bind to FR1, FR2, FR3 or FR4. Figure 1a shows that the peptide (100a) is bound to FR3, but is not limited thereto. Alternatively, the peptide 100a may be bound to FR4. In another embodiment, peptide 100 may bind FR1 and FR2 simultaneously.

일 실시예에서, 펩티드(100a)는 항체(10)의 3차원 구조에 의하여 프레임워크 영역(FR)에 결합될 수 있다. 펩티드(100a)는 프레임워크 영역(FR)에 적절히 결합될 수 있는 구조를 갖도록 설계될 수 있다. 펩티드(100a)와 프레임워크 영역(FR)은 정전기 상호작용, 수소 결합, 반데르발스 힘, 소수성 상호작용 또는 이들의 조합에 의하여 결합될 수 있다.In one embodiment, the peptide 100a may be bound to the framework region (FR) by the three-dimensional structure of the antibody 10 . The peptide 100a may be designed to have a structure that can be properly bound to the framework region (FR). The peptide 100a and the framework region (FR) may be bound by electrostatic interaction, hydrogen bonding, van der Waals force, hydrophobic interaction, or a combination thereof.

일 실시예에서, 항체(10)의 프레임워크 영역(FR)에 결합된 펩티드(100a)는 항체(10)와 특이적으로 반응하는 타겟 항원(20)이 항체(10)에 결합되는 경우, 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리될 수 있다. 타겟 항원(20)이 항체(10)와 결합되면 타겟 항원(20) 또는 펩티드(100a)와 결합되지 않은 상태의 항체(10)의 농도가 감소할 수 있고, 상기 농도의 감소에 따라 항체(10)와 펩티드(100a)의 결합 반응의 평형을 유지하기 위하여 펩티드(100a)가 결합된 항체(10)의 농도도 감소할 수 있다. 다른 실시예에서, 펩티드(100a)가 프레임워크 영역(FR)에 결합된 항체(10)가 타겟 항원(20)과 결합되는 경우, 타겟 항원(20)의 입체 장애(steric hindrance) 효과에 의하여 펩티드(100a)가 프레임워크 영역(FR)으로부터 떨어져 나갈 수 있다. 이는 비제한적 예시로서, 항체(10)에 타겟 항원(20)이 결합하는 경우 다양한 요인에 의하여 펩티드(100a)와 프레임워크 영역(FR)의 결합이 약화되거나 파괴될 수 있으며, 전술한 예시들은 본원 발명을 한정하지 않는다.In one embodiment, the peptide 100a bound to the framework region (FR) of the antibody 10 is a target antigen 20 that specifically reacts with the antibody 10 is bound to the antibody 10, the frame It can be separated from the work area (FR). When the target antigen 20 is bound to the antibody 10, the concentration of the antibody 10 in a state that is not bound to the target antigen 20 or the peptide 100a may decrease, and according to the decrease in the concentration, the antibody 10 ) and the concentration of the peptide (100a) bound antibody (10) to maintain the equilibrium of the binding reaction of the peptide (100a) can also be reduced. In another embodiment, when the antibody 10 in which the peptide 100a is bound to the framework region (FR) is bound to the target antigen 20, the peptide is caused by the steric hindrance effect of the target antigen 20. (100a) may be pulled away from the framework region (FR). This is a non-limiting example, and when the target antigen 20 binds to the antibody 10, the binding of the peptide 100a and the framework region (FR) may be weakened or destroyed by various factors. It does not limit the invention.

일 실시예에서, 펩티드(100a)와 항체(10)가 결합된 상태에서 항체(10)와 타겟 항원(20)의 결합이 가능할 수 있다. 예를 들면, 항체(10)의 프레임워크 영역(FR)의 적어도 일 부분에 펩티드(100a)가 결합되어 있는 상태에서, 타겟 항원(20)은 항체(10)와 결합할 수 있으며, 펩티드(100a)에 의해 항체(10)와 타겟 항원(20)의 결합이 방해받지 않을 수 있다. 바람직하게는, 항체(10)에 결합된 펩티드(100a)는 항체(10)와 타겟 항원(20)의 결합에 영향을 미치지 않을 수 있다. 일 실시예에서, 타겟 항원(20)은 항체(10)의 초가변 영역에 접촉하여 결합되어 프레임워크 영역(FR)에 결합되는 펩티드(100a)로부터 영향을 받지 않을 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 펩티드(100a)는 항체(10)와 타겟 항원(20)의 결합을 저해하지 않아 펩티드(100a)와 타겟 항원(20)의 결합이 가능함으로써, 타겟 항원(20)의 검출 또는 분석이 가능할 수 있다.In one embodiment, in a state in which the peptide 100a and the antibody 10 are bound, the binding of the antibody 10 and the target antigen 20 may be possible. For example, in a state in which the peptide 100a is bound to at least a portion of the framework region (FR) of the antibody 10, the target antigen 20 may bind to the antibody 10, and the peptide 100a ), the binding of the antibody 10 and the target antigen 20 may not be disturbed. Preferably, the peptide 100a bound to the antibody 10 may not affect the binding of the antibody 10 to the target antigen 20 . In one embodiment, the target antigen 20 may be unaffected by the peptide 100a binding to the framework region (FR) by contacting and binding to the hypervariable region of the antibody 10 . According to an embodiment of the present invention, the peptide (100a) does not inhibit the binding of the antibody (10) and the target antigen (20), so that the binding of the peptide (100a) and the target antigen (20) is possible, so that the target antigen (20) detection or analysis of

일 실시예에서, 펩티드(100a)는 인간 항체, 비인간 항체, 인간화된 비인간 항체 또는 이들의 조합과 결합 가능할 수 있다. 예를 들면, 동일 또는 유사 아미노산 서열을 갖는 펩티드(100a)는 인간 항체의 프레임워크 영역(FR)에 결합 가능하고, 비인간 항체의 프레임워크 영역(FR)에도 결합 가능할 수 있다. 또는, 동일한 아미노산 서열을 갖는 펩티드(100a)는 인간 항체, 비인간 항체 및 인간화된 비인간 항체 모두에 결합 가능할 수 있다. 이는, 프레임워크 영역(FR)의 아미노산 서열은 항체의 종류, 즉, 항체의 발현 종이 달라지더라도 상보성 결정 영역에 비하여 변화가 적어 유사하게 유지되기 때문이다. 본 발명의 실시예에 따르면, 다양한 종으로부터 유래된 항체(10)와 결합이 가능하여 가용 범위가 확장된 펩티드(100a)가 제공될 수 있다. In one embodiment, peptide 100a may be capable of binding to a human antibody, a non-human antibody, a humanized non-human antibody, or a combination thereof. For example, the peptide 100a having the same or similar amino acid sequence may be capable of binding to the framework region (FR) of a human antibody, and may also be capable of binding to the framework region (FR) of a non-human antibody. Alternatively, the peptide 100a having the same amino acid sequence may be capable of binding to both a human antibody, a non-human antibody, and a humanized non-human antibody. This is because the amino acid sequence of the framework region (FR) remains similar to that of the complementarity determining region even if the type of antibody, ie, the expression species of the antibody, is changed. According to an embodiment of the present invention, it is possible to bind to the antibody 10 derived from various species, thereby providing the peptide 100a with an extended usable range.

도 1b를 참조하면, 일 실시예에서, 펩티드(100b)는 프레임워크 영역(FR)의 일 부분에 결합될 수 있다. 도 1a에서는 펩티드(100b)가 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 전체에 결합된 것을 도시하고 있으나, 도 1b와 같이 펩티드(100b)는 FR1, FR2, FR3 또는 FR4의 일 부분에 결합될 수도 있다. 예를 들면, 펩티드(100b)는 FR1 도메인의 30% 내지 70 %에 해당하는 도메인에 결합될 수 있다. 또는, 50% 내지 60%에 해당하는 도메인에 결합될 수 있다. Referring to FIG. 1B , in one embodiment, peptide 100b may be bound to a portion of a framework region (FR). Figure 1a shows that the peptide (100b) is bound to the entirety of FR1, FR2, FR3 or FR4, but as shown in Figure 1b, the peptide (100b) may be bound to a portion of FR1, FR2, FR3 or FR4. For example, peptide 100b may bind to a domain corresponding to 30% to 70% of the FR1 domain. Alternatively, it may be bound to a domain corresponding to 50% to 60%.

일 실시예에서, 펩티드(100b)는 FR1, FR2, FR3, FR4, FR1의 일 부분, FR2의 일 부분, FR3의 일 부분, FR4의 일 부분 또는 이들의 조합에 결합될 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100b)는 FR1의 일 부분 및 FR2의 전체에 동시에 결합하거나, FR1의 일 부분 및 FR2의 일 부분에 결합할 수 있다. In one embodiment, peptide 100b may bind to FR1, FR2, FR3, FR4, a portion of FR1, a portion of FR2, a portion of FR3, a portion of FR4, or a combination thereof. For example, peptide 100b may simultaneously bind a portion of FR1 and all of FR2, or may bind a portion of FR1 and a portion of FR2.

일 실시예에서, 전체 펩티드(100b) 중 일 부분만이 프레임워크 영역(FR)에 결합될 수 있다. 예를 들어, 펩티드(100b)는 입체 형상을 갖고, 상기 입체 형상의 적어도 하나 이상의 지점에서 펩티드(100b)가 프레임워크 영역(FR)과 결합될 수 있다. 펩티드(100b)는 프레임워크 영역(FR)과 결합되어 항체(10)의 입체 구조의 빈 공간에 삽입되거나, 항체(10)의 외부에 체결되거나, 항체(10)의 상보성 결정 영역 사이에 삽입될 수 있다. 상기 상보성 결정 영역이 고리 형태인 경우, 펩티드(100b)는 적어도 하나 이상의 고리들 사이에 배치될 수 있다.In one embodiment, only a portion of the total peptide 100b may be bound to the framework region (FR). For example, the peptide 100b may have a conformational shape, and the peptide 100b may be bound to the framework region FR at at least one or more points of the conformational shape. The peptide 100b is bound to the framework region (FR) to be inserted into the empty space of the three-dimensional structure of the antibody 10, to the outside of the antibody 10, or to be inserted between the complementarity determining regions of the antibody 10. can When the complementarity determining region is in the form of a ring, the peptide 100b may be disposed between at least one or more rings.

일 실시예에서, 펩티드(100b)는 적어도 하나 이상의 프레임워크 영역(FR)에 결합 가능한 FR 결합부 및 적어도 하나 이상의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions CDR)에 결합 가능한 CDR 결합부를 포함할 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100b)의 전체 아미노산 서열 중 일부는 프레임워크 영역(FR)에 결합되고, 다른 일부는 상기 상보성 결정 영역에 결합될 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 상보성 결정 영역은 펩티드(100a)가 결합되는 프레임워크 영역(FR)으로부터 연장되는 영역일 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100b)의 아미노산 서열 중 일 부분이 FR2와 결합되는 경우, 다른 부분은 CDR1 또는 CDR2와 접촉되어 결합될 수 있다.In one embodiment, the peptide 100b may comprise an FR binding region capable of binding to at least one or more framework regions (FR) and a CDR binding region capable of binding to at least one or more complementarity determining regions CDR. For example, a portion of the entire amino acid sequence of the peptide 100b may be bound to a framework region (FR), and another portion may be bound to the complementarity determining region. In another embodiment, the complementarity determining region may be a region extending from a framework region (FR) to which the peptide 100a is bound. For example, when a portion of the amino acid sequence of the peptide 100b binds to FR2, the other portion may contact and bind to CDR1 or CDR2.

도 2a는 본 발명의 일 실시예에 따른 경 쇄에 결합된 펩티드(100c)를 나타낸 도면이고, 도 2b는 본 발명의 일 실시예에 따른 중 쇄에 결합된 펩티드(100d)를 나타낸 도면이다.Figure 2a is a view showing a peptide (100c) bound to a light chain according to an embodiment of the present invention, Figure 2b is a view showing a peptide (100d) bound to a heavy chain according to an embodiment of the present invention.

도 2a를 참조하면, 일 실시예에서, 펩티드(100c)는 중 쇄의 프레임워크 영역(FR)에 결합될 수 있다. 전술한 것과 같이, 중 쇄의 프레임워크 영역(FR')은 FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100c)는 중 쇄의 FR1 도메인(FR1')에 결합될 수 있다. 또는, 펩티드(100c)는 중 쇄의 FR2 도메인(FR2')에 결합할 수 있다. 다른 실시예에서, 중 쇄의 FR1(FR1')에 결합하는 펩티드(100c)와 중 쇄의 FR2(FR2')에 결합하는 펩티드(100d)의 아미노산 서열은 상이할 수 있다. Referring to FIG. 2A , in one embodiment, peptide 100c may be bound to a framework region (FR) of a heavy chain. As described above, the framework region (FR′) of the heavy chain may be FR1, FR2, FR3, FR4, or a combination thereof. For example, peptide 100c may bind to the FR1 domain of the heavy chain (FR1'). Alternatively, the peptide 100c may bind to the FR2 domain of the heavy chain (FR2'). In another embodiment, the amino acid sequence of the peptide 100c that binds to FR1 (FR1') of the heavy chain and the peptide 100d that binds FR2 (FR2') of the heavy chain may be different.

도 2b를 참조하면, 일 실시예에서, 펩티드(100d)는 경 쇄의 프레임워크 영역(FR'')에 결합될 수 있다. 전술한 것과 같이, 펩티드(100d)가 결합되는 경 쇄의 프레임워크 영역(FR'')도 중 쇄와 마찬가지로, FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100d)는 경 쇄의 FR1 도메인(FR1'')에 결합될 수 있다. 또는, 펩티드(100d)는 경 쇄의 FR2 도메인(FR2'')에 결합할 수 있다. 다른 실시예에서, 경 쇄의 FR1(FR1'')에 결합하는 펩티드(100d)와 경 쇄의 FR2(FR2'')에 결합하는 펩티드(100d)의 아미노산 서열은 상이할 수 있다. Referring to FIG. 2B , in one embodiment, the peptide 100d may be bound to the framework region (FR″) of the light chain. As described above, the framework region (FR'') of the light chain to which the peptide 100d is bound may also be FR1, FR2, FR3, FR4, or a combination thereof, like the heavy chain. For example, peptide 100d may be bound to the FR1 domain of the light chain (FR1''). Alternatively, the peptide 100d may bind to the FR2 domain of the light chain (FR2''). In another embodiment, the amino acid sequence of the peptide 100d binding to FR1 (FR1'') of the light chain and the peptide 100d binding to FR2 (FR2'') of the light chain may be different.

일 실시예에서, 펩티드(100a~100f)는 서열번호 1 내지 서열번호 4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 서열번호 1 내지 서열번호 4의 아미노산 서열은 인공적으로 합성된 아미노산 서열일 수 있다. 본 발명의 펩타이드는 유전자 재조합 기법, 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis) 또는 액체상 펩타이드 합성법이 사용될 수 있다. 예시적으로, 통상의 펩티드 라이브러리 서비스가 이용될 수도 있다. 전술한 펩티드 합성 방법들은 비제한적 예시이며, 공지된 다양한 종류의 펩티드 합성 방법들이 적용될 수 있다. 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열의 N 터미널에서 C 터미널 방향의 아미노산 서열은 다음과 같을 수 있다.In one embodiment, the peptides 100a to 100f may include the amino acid sequence of any one of SEQ ID NOs: 1 to 4. The amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4 may be an artificially synthesized amino acid sequence. For the peptide of the present invention, a genetic recombination technique, a solid phase peptide synthesis method, or a liquid phase peptide synthesis method may be used. Illustratively, a conventional peptide library service may be used. The above-described methods for synthesizing peptides are non-limiting examples, and various known methods for synthesizing peptides may be applied. The amino acid sequence in the N-terminal to C-terminal direction of the amino acid sequence of the peptides (100a to 100f) may be as follows.

서열번호 1(peptide1): SYWIHWVKQRPGQGLEWIGESEQ ID NO: 1 (peptide1): SYWIHWVKQRPGQGLEWIGE

서열번호 2(peptide2): VYYCAREPTGTGIYFDVWGKSEQ ID NO: 2 (peptide2): VYYCAREPTGTGIYFDVWGK

서열번호 3(peptide3): VYYCAREPTGTGIYFDVWGKSEQ ID NO: 3 (peptide3): VYYCAREPTGTGIYFDVWGK

서열번호 4(peptide4): VYYCAREPTGTGIYFDVWGKSEQ ID NO: 4 (peptide4): VYYCAREPTGTGIYFDVWGK

일 실시예에서, 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드(100c)는 중 쇄의 FR1 도메인에 결합될 수 있다. 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드(100d)는 중 쇄의 FR2 도메인에 결합될 수 있다. 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드(100e)는 경 쇄의 FR1 도메인에 결합될 수 있다. 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드(100f)는 경 쇄의 FR2 도메인에 결합될 수 있다. In one embodiment, the peptide 100c comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 may be bound to the FR1 domain of the heavy chain. The peptide 100d comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 may be bound to the FR2 domain of the heavy chain. The peptide 100e comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 may be bound to the FR1 domain of the light chain. The peptide 100f comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 may be bound to the FR2 domain of the light chain.

일 실시예에서, 상기 서열번호 1 내지 서열번호 4는 상기 FR 결합부일 수 있고, 펩티드(100a~100f)는 상기 서열번호 1 내지 서열번호 4의 N 터미널 및/또는 C 터미널에 결합된 CDR 결합부를 더 포함할 수 있다. 다른 실시예에서, 상기 서열번호 1 내지 서열번호 4의 일 부분이 FR 결합부이고, 다른 일 부분은 CDR 결합부일 수 있다. 예를 들면, 상기 서열번호 1의 가운데 8 개의 아미노산 서열인 KQRPGQGL가 FR 결합부이고, N 터미널의 SYWIHWV 및 C 터미널의 EWIGE는 CDR 결합부일 수 있다. 이는 예시적인 것으로, 서열번호 2 내지 4의 아미노산 서열 및 다양한 종류의 아미노산 서열에 적용될 수 있다. 상기 FR 결합부 및 CDR 결합부에 관한 상세한 설명은 전술한 것과 같다.In one embodiment, the SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4 may be the FR binding region, and the peptides (100a to 100f) include the CDR binding region bound to the N-terminal and/or C-terminal of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4 may include more. In another embodiment, a portion of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4 may be an FR-binding portion, and another portion may be a CDR-binding portion. For example, KQRPGQGL, which is an amino acid sequence of eight amino acids in the middle of SEQ ID NO: 1, may be an FR binding region, and SYWIHWV of the N terminal and EWIGE of the C terminal may be a CDR binding region. This is exemplary, and may be applied to the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 2 to 4 and various types of amino acid sequences. Detailed descriptions of the FR binding region and the CDR binding region are the same as described above.

다른 실시예에서, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 1의 일부, 서열번호 2, 서열번호 2의 일부, 서열번호 3, 서열번호 3의 일부, 서열번호 4, 서열번호 4의 일부 또는 이들의 조합일 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100a~100f)는 서열번호 1의 전체 20개의 아미노산 서열 중 5 개 내지 10 개의 일부 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또는, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 상기 서열번호 1의 일 부분 및 상기 서열번호 1의 일 부분에 연속적으로 결합된 상기 서열번호 2의 일 부분을 포함할 수 있다. 또는, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 상기 서열번호 1의 일 부분과 상기 서열번호 2의 일 부분이 중간의 소정의 아미노산 서열을 매개로 결합될 수도 있다. 또는, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 상기 서열번호 1 및 상기 서열번호 2를 모두 포함할 수도 있다. In another embodiment, the amino acid sequence of the peptides (100a-100f) is SEQ ID NO: 1, part of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, part of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, part of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, sequence It may be a part of number 4 or a combination thereof. For example, the peptides 100a to 100f may include 5 to 10 partial amino acid sequences out of the total 20 amino acid sequences of SEQ ID NO: 1. Alternatively, the amino acid sequence of the peptides (100a to 100f) may include a portion of SEQ ID NO: 1 and a portion of SEQ ID NO: 2 successively linked to a portion of SEQ ID NO: 1. Alternatively, the amino acid sequence of the peptides (100a to 100f) may be coupled to a portion of SEQ ID NO: 1 and a portion of SEQ ID NO: 2 through a predetermined amino acid sequence in the middle. Alternatively, the amino acid sequence of the peptides (100a to 100f) may include both SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2.

또 다른 실시예에서, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 양 말단에 연장된 아미노산 서열을 더 포함할 수도 있다. 예를 들면, 펩티드(100a~100f)의 아미노산 서열은 서열번호 1의 N 터미널 및/또는 C 터미널에 연장된 아미노산 서열을 더 포함할 수 있다. 상기 연장된 아미노산 서열의 개수는 5 개 내지 50 개, 예시적으로는 5 개 내지 15 개일 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 프레임워크 영역(FR)의 적어도 일부분에 결합하는 아미노산 서열의 양 말단에 아미노산을 결합시킴으로써, 타겟 항원(도 5의 20)이 제공되어 항체(10)와 결합된 경우, 펩티드(100a~100f)와 프레임워크 영역(FR)과의 결합이 용이하게 해제되어 타겟 항원(20)에 대한 민감도를 향상시킬 수 있는 이점이 있다.In another embodiment, the amino acid sequence of the peptides 100a to 100f may further include amino acid sequences extended at both ends. For example, the amino acid sequence of the peptides (100a-100f) may further include an amino acid sequence extending to the N-terminal and/or C-terminal of SEQ ID NO: 1. The number of the extended amino acid sequence may be 5 to 50, for example, 5 to 15. According to an embodiment of the present invention, by binding amino acids to both ends of the amino acid sequence binding to at least a portion of the framework region (FR), when the target antigen (20 in FIG. 5) is provided and bound to the antibody 10 , there is an advantage in that the binding between the peptides (100a to 100f) and the framework region (FR) is easily released to improve the sensitivity to the target antigen (20).

도 3a 및 도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 서로 다른 프레임워크 영역(FR)에 결합되는 펩티드(100)들의 결합성을 측정한 그래프이다.3A and 3B are graphs measuring the binding properties of peptides 100 bound to different framework regions (FR) according to an embodiment of the present invention.

일 실시예에서, FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 어느 하나에 결합하는 펩티드(100a~100f)는 상기 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 다른 하나에 결합하는 펩티드(100a~100f)와 결합될 수 있다. 예를 들면, 중 쇄의 FR1에 결합하는 펩티드(100)는 중 쇄의 FR2에 결합하는 펩티드(100)와 결합할 수 있다. 또는, 중 쇄의 FR1에 결합하는 펩티드(100c)는 경 쇄의 FR1에 결합하는 펩티드(100e) 또는 경 쇄의 FR2에 결합하는 펩티드(100)와 결합할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 일 실시예에서, 서로 다른 프레임워크 영역(FR)에 결합하는 펩티드(100f) 사이에 결합성을 가짐으로써, 항체(10)의 식별 또는 정량에 이용할 수 있고, 항체(10)와의 결합력이 상이한 펩티드들(100a~100f)을 상호간에 비교하여 정확한 분석 결과를 얻을 수 있는 이점이 있다. In one embodiment, the peptide (100a-100f) that binds to any one of FR1, FR2, FR3, or FR4 may be combined with a peptide (100a-100f) that binds to the other one of FR1, FR2, FR3 or FR4. . For example, a peptide 100 that binds to FR1 of a heavy chain may bind a peptide 100 that binds FR2 of a heavy chain. Alternatively, the peptide 100c that binds to FR1 of the heavy chain may bind to the peptide 100e that binds to FR1 of the light chain or the peptide 100 that binds to FR2 of the light chain. According to an embodiment of the present invention, in one embodiment, by having a binding property between the peptides 100f binding to different framework regions (FR), it can be used for identification or quantification of the antibody 10, and the antibody (10) There is an advantage in that it is possible to obtain an accurate analysis result by comparing the peptides (100a to 100f) having different binding strengths with each other.

도 3a를 참조하면, 일 실시예에서, 고체 지지체(도 5의 30) 상에 Applied Biosystems 사의 FAMTM으로 형광 표지된 서열번호 2의 아미노산 서열을 갖는 펩티드(H2)(이하, 서열번호 2 펩티드라 함)를 공유 결합으로 지지체(30) 상에 고정하고, tetramethylrhodamine-5-maleimide(TAMRA)로 형광 표지된 서열번호 3의 아미노산 서열을 갖는 펩티드(L1)(이하, 서열번호 3 펩티드라 함)를 제공하였다. 이후, 파란색 광을 처리하는 경우, 상기 서열번호 2 펩티드(H2)와 상기 서열번호 3 펩티드(L2)가 결합되지 않는 경우, 상기 FAM이 상기 파란색 광을 흡수하여 녹색 광을 발생시킨다. 상기 서열번호 2 펩티드(H2)와 상기 서열번호 3 펩티드(L1)가 결합하는 경우, 상기 TAMRA가 상기 녹색 광을 흡수하여 주황색 광을 발생시킨다. 이에 따라, 상기 주황색 광을 FRET으로 측정하여 서열번호 2 펩티드(H2)와 서열번호 3 펩티드(L1)의 결합여부를 확인할 수 있다.Referring to FIG. 3a, in one embodiment, a peptide (H2) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2 fluorescently labeled with FAM TM of Applied Biosystems on a solid support (30 in FIG. 5) (hereinafter, referred to as SEQ ID NO: 2 peptide) ) is fixed on the support 30 by a covalent bond, and a peptide (L1) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 fluorescently labeled with tetramethylrhodamine-5-maleimide (TAMRA) (hereinafter referred to as SEQ ID NO: 3 peptide) provided. Then, when processing blue light, when the SEQ ID NO: 2 peptide (H2) and the SEQ ID NO: 3 peptide (L2) do not bind, the FAM absorbs the blue light to generate green light. When the SEQ ID NO: 2 peptide (H2) and the SEQ ID NO: 3 peptide (L1) bind, the TAMRA absorbs the green light to generate orange light. Accordingly, by measuring the orange light by FRET, it is possible to determine whether the SEQ ID NO: 2 peptide (H2) and SEQ ID NO: 3 peptide (L1) are bound.

도 3b를 참조하면, FAM으로 형광 표지된 서열번호 1의 아미노산 서열을 갖는 펩티드(H1)(이하, 서열번호 1 펩티드라 함)를 공유 결합으로 지지체(30) 상에 고정하고, TAMRA로 형광 표지된 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 펩티드(L2) (이하, 서열번호 4 펩티드라 함)를 제공하였다. 상기 서열번호 1 펩티드(H1)와 상기 서열번호 4 펩티드(L2)의 결합 여부를 측정하는 방법은 도 3a에 관한 개시 사항들을 참조할 수 있다. 도 3a 및 도 3b의 측정 방법은 예시적인 것으로, 본원 발명을 한정하지 않는다.Referring to FIG. 3B , a peptide (H1) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1 (hereinafter referred to as SEQ ID NO: 1 peptide) fluorescently labeled with FAM is immobilized on the support 30 by a covalent bond, and fluorescently labeled with TAMRA. A peptide (L2) having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4 (hereinafter referred to as SEQ ID NO: 4 peptide) was provided. For a method of measuring the binding of the SEQ ID NO: 1 peptide (H1) to the SEQ ID NO: 4 peptide (L2), the disclosure of FIG. 3A may be referred to. The measuring method of FIGS. 3A and 3B is exemplary and does not limit the present invention.

도 3a 및 도 3b를 참조하면, 상기 서열번호 3 펩티드(L1)의 농도가 높아질수록 상기 주황색 광의 세기가 증가하는 것을 알 수 있다. 도 3b를 참조하면, 상기 서열번호 1 펩티드(H1)의 농도가 증가할수록 상기 주황색 광의 세기가 증가하는 것을 알 수 있다. 이에 따라, 상기 서열번호 3 펩티드(L1)는 상기 서열번호 2 펩티드(H2)와 결합하고, 상기 서열번호 1 펩티드(H1)는 상기 서열번호 4 펩티드(L2)와 결합하는 것을 알 수 있다. 3A and 3B , it can be seen that the intensity of the orange light increases as the concentration of the SEQ ID NO: 3 peptide (L1) increases. Referring to FIG. 3B , it can be seen that the intensity of the orange light increases as the concentration of the SEQ ID NO: 1 peptide (H1) increases. Accordingly, it can be seen that the SEQ ID NO: 3 peptide (L1) binds to the SEQ ID NO: 2 peptide (H2), and the SEQ ID NO: 1 peptide (H1) binds to the SEQ ID NO: 4 peptide (L2).

도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드(100g)를 나타낸 도면이다.4 is a view showing a peptide (100 g) according to an embodiment of the present invention.

도 4를 참조하면, 일 실시예에서, 펩티드(100g)는 광학적, 화학적 또는 전기적 표지 반응을 나타내는 표지 물질(200)로 표지될 수 있다. 일 실시예에서, 표지 물질(200)은 펩티드(100g)의 적어도 어느 일부에 결합될 수 있다. 표지 물질(200)은 발색 물질, 발광 물질, 형광 물질 또는 이들의 조합할 수 있다. 상기 형광 물질은 Applied Biosystems 사의 HEXTM, TAMRA, lumiprobe 사의 Cy5 또는 술포로다민 101 산 클로라이드(술포로다민 101 산 클로라이드; Texas Red)일 수 있으며, 바람직하게는 FAM 형광 또는 TAMRA 형광일 수 있다. 다른 실시예에서, 표지 물질(200)은 기질을 분해하여 광학 반응, 화학 반응 또는 전기 반응을 나타내는 효소일 수 있다. 예를 들면, 표지 물질(200)은 홀스래디쉬 퍼옥시다아제(Horseradish peroxidase; HRP)이고, 상기 기질은 과산화수소와 같은 과산화물 및/또는 3,3 ', 5,5'- 테트라 메틸 벤지딘 (Tetramethylbenzidine; TMB)일 수 있다. 또는, 표지 물질(20)은 알칼라인 포스파타아제(Alkaline phosphatase; AP)일 수 있고, 상기 기질은 브로모클로로인돌일 포스페이트(BCIP), 니트로 블루 테트라졸리움(NBT), 나프톨-ASB1-포스페이트(naphthol-AS-B1-phosphate) 및 ECF(enhanced chemifluorescence)와 같은 발색 물질이 이용될 수 있다. 이는, 비제한적인 예시이며, 펩티드(100)를 분석하기 위한 다양한 종류의 공지 기술들이 참조될 수 있다. Referring to FIG. 4 , in one embodiment, the peptide 100g may be labeled with a labeling material 200 that exhibits an optical, chemical or electrical labeling reaction. In one embodiment, the labeling material 200 may be bound to at least any part of the peptide (100 g). The labeling material 200 may be a color emitting material, a light emitting material, a fluorescent material, or a combination thereof. The fluorescent material may be HEX TM from Applied Biosystems, TAMRA, Cy5 from lumiprobe, or sulforodamine 101 acid chloride (sulforodamine 101 acid chloride; Texas Red), preferably FAM fluorescence or TAMRA fluorescence. In another embodiment, the labeling material 200 may be an enzyme that decomposes a substrate to exhibit an optical reaction, a chemical reaction, or an electrical reaction. For example, the labeling material 200 is Horseradish peroxidase (HRP), and the substrate is a peroxide such as hydrogen peroxide and/or 3,3 ', 5,5'-tetramethylbenzidine (Tetramethylbenzidine; TMB). ) can be Alternatively, the labeling material 20 may be alkaline phosphatase (AP), and the substrate may be bromochloroindolyl phosphate (BCIP), nitro blue tetrazolium (NBT), or naphthol-ASB1-phosphate (naphthol). -AS-B1-phosphate) and chromogenic substances such as ECF (enhanced chemifluorescence) can be used. This is a non-limiting example, and various kinds of known techniques for analyzing the peptide 100 may be referred to.

도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드(100)를 이용한 분석 방법의 순서도를 나타낸 도면이다.5 is a view showing a flowchart of an analysis method using the peptide 100 according to an embodiment of the present invention.

도 5를 참조하면, 일 실시예에 따른 분석 방법은, 타겟 항원(20)과 특이적으로 반응하는 항체(10)에 펩티드(100)를 제공하여 항체(10)의 프레임워크 영역(FR)의 적어도 일부분에 가역적으로 결합시키는 전처리 단계(S100)를 포함할 수 있다. 펩티드(100)에 관한 상세한 설명은 모순되지 않는 범위 내에서 도 1a 내지 도 4의 개시 사항을 참조할 수 있다. 일 실시예에서, 항체(10)는 지지체(30)에 고정되어 준비될 수 있다. 예를 들면, 지지체(30)는 기판, 비드(bead) 또는 고분자 구조체일 수 있다. 도 5는 항체(10)가 고체 지지체(30)를 이용하여 기판 상에 고정된 것을 도시하고 있으나, 이에 제한되지 않고, 항체(10)는 비드에 고정되어 용액 내에 배치되거나(도 7a 참조), 항체는 고정되지 않고, 용액 내에 혼합 상태로 제공될 수도 있다(도 8a 참조). 본 명세서에서, 펩티드(100)의 '양'은 펩티드(100)의 '농도'와 상호 호환되어 사용될 수 있고, 펩티드(100)의 양이 '많다' 또는 '적다'는 기재는 펩티드(100)의 농도가 '높다' 또는 '낮다'는 것으로 이해될 수 있다.Referring to FIG. 5 , in the analysis method according to an embodiment, the framework region (FR) of the antibody 10 is provided by providing the peptide 100 to the antibody 10 that specifically reacts with the target antigen 20 . It may include a pre-processing step (S100) of reversibly binding to at least a portion. For a detailed description of the peptide 100, reference may be made to the disclosures of FIGS. 1A to 4 without contradiction. In one embodiment, the antibody 10 may be prepared by being fixed to the support 30 . For example, the support 30 may be a substrate, a bead, or a polymer structure. 5 illustrates that the antibody 10 is immobilized on a substrate using a solid support 30, but is not limited thereto, and the antibody 10 is fixed to a bead and placed in a solution (see FIG. 7a ); The antibody is not immobilized and may be provided in a mixed state in solution (see FIG. 8A ). In the present specification, the 'amount' of the peptide 100 may be used interchangeably with the 'concentration' of the peptide 100, and the description that the amount of the peptide 100 is 'large' or 'small' is the peptide 100 It can be understood that the concentration of 'high' or 'low'.

일 실시예에서, 전처리 단계(S100)에서 항체(10)에 결합된 펩티드(110)를 정량할 수 있다. 예를 들면, 펩티드(100)에 표지 물질(200)이 결합되어 표지 반응을 나타내고, 항체(10)는 기판에 고정된 경우, 상기 기판 하면에서 상기 표지 반응의 강도를 측정할 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 항체(10)에 타겟 항원(20)이 결합되기 전, 항체(10)에 결합된 펩티드(110)를 정량함으로써, 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양을 초깃값으로 이용하여, 정확도 높은 타겟 항원(20)의 식별 또는 정량이 가능한 이점이 있다. 표지 물질(200) 및 표지 반응에 관한 상세한 설명은 도 4의 개시 사항을 참조할 수 있다.In one embodiment, the peptide 110 bound to the antibody 10 in the pretreatment step (S100) may be quantified. For example, when the labeling material 200 is bound to the peptide 100 to exhibit a labeling reaction and the antibody 10 is immobilized on the substrate, the intensity of the labeling reaction can be measured from the lower surface of the substrate. According to an embodiment of the present invention, by quantifying the peptide 110 bound to the antibody 10 before the target antigen 20 is bound to the antibody 10, the peptide 110 bound to the antibody 10 is By using the amount as an initial value, there is an advantage in that it is possible to identify or quantify the target antigen 20 with high accuracy. For a detailed description of the labeling material 200 and the labeling reaction, reference may be made to the disclosure of FIG. 4 .

이후, 항체(10)에 타겟 항원(20)을 결합시켜 펩티드(100)를 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리시키는 항원 처리 단계(S200)가 수행될 수 있다. 피분석물 내에는 타겟 항원(20)이 포함되거나, 포함되지 않을 수 있다. 상기 피분석물 내에 타겟 항원(20)이 포함되어 항체(10)에 타겟 항원(20)이 제공되는 경우, 타겟 항원(20)의 항체(10)와의 특이적 반응성에 의하여, 항체(10)와 결합된 펩티드(110) 중 적어도 어느 일부의 펩티드(100)는 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리되어 항체(10)가 포함된 용액 상으로 유리될 수 있다. 일 실시예에서, 타겟 항원(20)의 농도가 높을수록, 항체(10)에 결합된 펩티드(110) 중 항체(10)로부터 분리되는 펩티드(100)의 비율이 증가할 수 있다.Thereafter, the antigen processing step (S200) of binding the target antigen 20 to the antibody 10 to separate the peptide 100 from the framework region (FR) may be performed. The target antigen 20 may or may not be included in the analyte. When the target antigen 20 is included in the analyte and the target antigen 20 is provided to the antibody 10, by specific reactivity with the antibody 10 of the target antigen 20, the antibody 10 and The peptide 100 of at least any part of the bound peptide 110 may be separated from the framework region (FR) and released into a solution phase containing the antibody 10 . In one embodiment, as the concentration of the target antigen 20 increases, the ratio of the peptide 100 separated from the antibody 10 among the peptides 110 bound to the antibody 10 may increase.

다음으로, 항원 처리 단계 이후에 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120), 또는 프레임워크로부터 분리된 펩티드(130) 중 적어도 어느 하나를 정량하여 타겟 항원(20)을 분석하는 분석 단계(S300)가 수행될 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 항체(10)에 피분석물을 제공한 후 세척 단계를 수행하지 않고 피분석물 내의 타겟 항원(20)을 분석함으로써, 신속한 분석이 가능하며, 세척을 위한 부가적인 장비가 요구되지 않아 간소화 및 소형화가 가능하며, 사용 용이성이 향상된 임뮤노어세이를 제공할 수 있다.Next, analysis of analyzing the target antigen 20 by quantifying at least one of the residual amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) or the peptide 130 separated from the framework after the antigen processing step Step S300 may be performed. According to an embodiment of the present invention, by analyzing the target antigen 20 in the analyte without performing a washing step after providing the analyte to the antibody 10, rapid analysis is possible, and additional Simplification and miniaturization are possible because no equipment is required, and an immunoassay with improved ease of use can be provided.

일 실시예에서, 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)를 정량할 수 있다. 이 경우, 전처리 단계의 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양보다 분석 단계에서 측정된 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양이 감소된 경우, 상기 피분석물 내에 타겟 항원(20)이 포함되었다는 정보를 획득 수 있다. 또한, 전처리 단계의 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양에 대한 분석 단계에서 측정된 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양의 차이 클수록 타겟 항원(20)의 양이 많다는 정보 또는 타겟 항원(20)의 농도가 높다는 정보를 획득할 수 있다. 이에 따라, 본원 발명은 피분석물에 포함된 타겟 항원(20)을 식별 또는 정량할 수 있다. In one embodiment, the residual amount of peptide 120 bound to the framework region (FR) may be quantified. In this case, if the amount of the peptide 120 of the residual amount bound to the framework region (FR) measured in the analysis step is reduced than the amount of the peptide 110 bound to the antibody 10 in the pretreatment step, the analyte It is possible to obtain information that the target antigen 20 is included in the water. In addition, the greater the difference in the amount of the residual peptide 120 bound to the framework region (FR) measured in the analysis step for the amount of the peptide 110 bound to the antibody 10 in the pretreatment step, the greater the target antigen 20 It is possible to obtain information indicating that the amount of is large or that the concentration of the target antigen 20 is high. Accordingly, the present invention can identify or quantify the target antigen 20 included in the analyte.

다른 실시예에서, 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)를 정량할 수 있다. 이 경우, 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)의 양이 임계 값 이상인 경우, 상기 피분석물에 타겟 항원(20)이 포함된 것일 수 있다. 또는, 프레임워크로부터 분리된 펩티드(130)의 양이 증가할수록 상기 피분석물 내에 많은 양의 타겟 항원(20)이 포함된 것일 수 있다.In another embodiment, the peptide 130 isolated from the framework region (FR) can be quantified. In this case, when the amount of the peptide 130 separated from the framework region (FR) is equal to or greater than the threshold value, the target antigen 20 may be included in the analyte. Alternatively, as the amount of the peptide 130 separated from the framework increases, a large amount of the target antigen 20 may be included in the analyte.

또 다른 실시예에서, 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120) 및 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)를 모두 정량할 수 있다. 정량된 결과 분석에 관한 상세한 설명은 전술한 개시 사항들이 참조될 수 있다. 이에 따라, 전처리 단계(S100)에서 측정된 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양과 분석 단계(S300)에서 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양의 차이값 및 프레임워크로부터 분리된 펩티드(130)의 양의 2 가지 정량값을 이용하여 타겟 항원(20)을 정량할 수 있으므로, 타겟 항원(20) 분석의 정확도 및 신뢰도를 향상시킬 수 있는 이점이 있다. In another embodiment, both the residual amount of peptide 120 bound to the framework region (FR) and the peptide 130 isolated from the framework region (FR) can be quantified. For a detailed description of the analysis of quantified results, reference may be made to the foregoing disclosures. Accordingly, the difference between the amount of the peptide 110 bound to the antibody 10 measured in the pretreatment step (S100) and the remaining amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) in the analysis step (S300) And since the target antigen 20 can be quantified using two quantitative values of the amount of the peptide 130 separated from the framework, there is an advantage in that the accuracy and reliability of the target antigen 20 analysis can be improved.

상기 정량은 잔량의 펩티드(120) 및/또는 분리된 펩티드(130)에 결합된 표지 물질(200)에 의한 광학적, 화학적 또는 전기적 표지 반응을 측정하여 이루어질 수 있다. 예를 들면, 상기 표지 반응은 형광 반응일 수 있으며, 상기 형광의 양을 형광 공명 에너지 전이(fluorescence resonance energy transfer; FRET) 방법을 이용하여 측정할 수 있다. 상기 표지 반응 또는 표지 물질(200)에 관한 상세한 설명은 도 4의 개시 사항들을 참조할 수 있다.The quantification may be accomplished by measuring the optical, chemical or electrical labeling reaction of the remaining amount of the peptide 120 and/or the labeling material 200 bound to the separated peptide 130 . For example, the labeling reaction may be a fluorescence reaction, and the amount of fluorescence may be measured using a fluorescence resonance energy transfer (FRET) method. For a detailed description of the labeling reaction or the labeling material 200, reference may be made to the disclosures of FIG. 4 .

도 6a 내지 도 6c는 본 발명의 다양한 실시예에 따른 타겟 항원(20)의 분석 결과를 나타낸 그래프이다.6A to 6C are graphs showing analysis results of the target antigen 20 according to various embodiments of the present invention.

도 6a에서, 항체(10)는 항-hCG 항체(10)이고, 타겟 항원(20)은 hCG일 수 있다. 도 6b에서, 항체(10)는 항-CRP 항체(10)이고, 타겟 항원(20)은 CRP일 수 있다. 도 6c에서, 항체(10)는 항-인플루엔자B 항체(10)이고, 타겟 항원(20)은 인플루엔자 B일 수 있다. 도 6a 내지 도 6c를 참조하면, 펩티드(100)는 서열번호 1 내지 서열번호 4의 아미노산 서열을 갖는 펩티드를 이용하였다. 도 6a 내지 도 6c에서 그래프 A는 전처리 단계(S100)에서 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 측정값, 그래프 B는 분석 단계(S300)에서 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 측정값, 그래프 C는 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)의 측정값일 수 있으며, 예시적으로, 펩티드(100)에 결합된 표지 물질(200)이 나타내는 표지 반응의 세기를 측정하여 정량하였다. 상기 표지 반응은 형광 반응일 수 있다. 전술한 물질들은 비제한적인 예시이며, 본 발명을 한정하는 것은 아니다.6A , the antibody 10 may be an anti-hCG antibody 10 , and the target antigen 20 may be hCG. In FIG. 6B , the antibody 10 may be an anti-CRP antibody 10 , and the target antigen 20 may be CRP. In FIG. 6C , the antibody 10 may be an anti-influenza B antibody 10, and the target antigen 20 may be influenza B. Referring to FIGS. 6A to 6C , as the peptide 100, peptides having the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1 to 4 were used. 6a to 6c, graph A is the measured value of the peptide 110 bound to the antibody 10 in the pretreatment step (S100), and graph B is the residual amount bound to the framework region (FR) in the analysis step (S300) The measured value of the peptide 120, graph C, may be the measured value of the peptide 130 separated from the framework region (FR), for example, a labeling reaction exhibited by the labeling material 200 bound to the peptide 100 was quantified by measuring the intensity of The labeling reaction may be a fluorescence reaction. The materials described above are non-limiting examples and do not limit the present invention.

도 6a 내지 도 6c를 참조하면, 서열번호 1의 펩티드(H1), 서열번호 2의 펩티드(H2), 서열번호 3의 펩티드(L1) 및 서열번호 4의 펩티드(L2)에서 모두 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양(A)보다 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양(B)이 감소하였음을 알 수 있다. 또한, 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)의 양(C)이 측정됨을 알 수 있다. 6A to 6C, the peptide of SEQ ID NO: 1 (H1), the peptide of SEQ ID NO: 2 (H2), the peptide of SEQ ID NO: 3 (L1), and the peptide of SEQ ID NO: 4 (L2) are all antibodies (10) It can be seen that the amount (B) of the residual amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) was reduced than the amount (A) of the peptide 110 bound to it. In addition, it can be seen that the amount (C) of the peptide 130 isolated from the framework region (FR) is measured.

또한, 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양(A)에 대한 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양(B)의 감소량이 분리된 프레임워크 영역(FR)으로부터 펩티드(100)의 양(C)보다 큰 것을 알 수 있다. 이는, 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양(A)은 지지체(30)의 면 상에서 관찰된 형광의 세기이나, 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)의 양(C)은 용액 상에서 관찰된 형광의 세기이기 때문이다. 이에 따라, 타겟 항원(20)이 항체(10)에 결합되는 경우, 항체(10)에 결합된 펩티드(110)는 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리되어 용액 상으로 유리됨을 알 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 전처리 단계(S100)에서 측정된 항체(10)에 결합된 펩티드(110)의 양과 분석 단계(S300)에서 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 양의 차이값에 의한 타겟 항원(20)의 정량이 가능하고, 동시에, 프레임워크로부터 분리된 펩티드(130)의 양을 이용한 타겟 항원(20)의 정량이 가능하여, 타겟 항원(20)의 분석을 2 트랙(2 track)으로 수행할 수 있어, 분석의 정확도 및 신뢰도를 향상시킬 수 있는 이점이 있다.In addition, the decrease in the amount (B) of the residual amount of peptide 120 bound to the framework region (FR) relative to the amount (A) of the peptide 110 bound to the antibody 10 is the separated framework region (FR) ), it can be seen that the amount (C) of the peptide 100 is greater. This means that the amount (A) of the peptide 110 bound to the antibody 10 is the intensity of fluorescence observed on the side of the support 30, but the amount of the peptide 130 separated from the framework region (FR) (C) ) is the intensity of the observed fluorescence in the solution phase. Accordingly, it can be seen that when the target antigen 20 is bound to the antibody 10, the peptide 110 bound to the antibody 10 is separated from the framework region (FR) and released into a solution phase. According to an embodiment of the present invention, the amount of peptide 110 bound to the antibody 10 measured in the pretreatment step (S100) and the remaining amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) in the analysis step (S300). It is possible to quantify the target antigen 20 by the difference in the amount of Since the analysis can be performed in two tracks, there is an advantage in that the accuracy and reliability of the analysis can be improved.

도 7a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드(100)를 이용한 분석 방법의 순서도이고, 도 7b는 도 7a의 분석 방법에 따른 분석 그래프이다.7A is a flowchart of an analysis method using the peptide 100 according to an embodiment of the present invention, and FIG. 7B is an analysis graph according to the analysis method of FIG. 7A .

도 7a를 참조하면, 일 실시예에서, 전처리 단계(S100')에서 항체(10)는 비드에 고정될 수 있다. 상기 비드는 비제한적인 예시로서, 글래스(glass) 비드, 마그네틱 비드 또는 고분자 비드일 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 항체(10)를 고정하기 위한 지지체(30)로 기판이 아닌 용액 중에 배치되거나 분산될 수 있는 비드를 사용함으로써, 상기 비드에 항체(10)를 균일하게 고정시키기 용이하고, 항원 처리 단계(S200')에서 항체(10)와 타겟 항원(20)이 혼합되어 항체(10)와 타겟 항원(20)의 결합도가 상승하는 이점이 있다. 또한, 상기 비드는 기판과 같은 고정된 지지체와 달리 용액 상에 분산 또는 배치될 수 있어, 타겟 항원(20) 분석을 위한 용액 상의 공정이 가능한 이점이 있어 항체(10)를 고정시키는 단계가 생략될 수 있고, 타겟 항원(20)과 항체(10)가 높은 확률로 결합하여 분석의 정확도가 향상되는 이점이 있다.Referring to FIG. 7A , in one embodiment, the antibody 10 may be immobilized on the beads in the pretreatment step S100 ′. The bead is a non-limiting example, and may be a glass bead, a magnetic bead, or a polymer bead. According to an embodiment of the present invention, by using beads that can be disposed or dispersed in a solution rather than a substrate as the support 30 for fixing the antibody 10, it is easy to uniformly fix the antibody 10 to the beads. And, there is an advantage in that the antibody 10 and the target antigen 20 are mixed in the antigen processing step (S200'), so that the degree of binding between the antibody 10 and the target antigen 20 is increased. In addition, since the beads can be dispersed or placed in a solution phase unlike a fixed support such as a substrate, there is an advantage that a solution phase process for analysis of the target antigen 20 is possible, so that the step of fixing the antibody 10 can be omitted. There is an advantage in that the accuracy of the analysis is improved by binding the target antigen 20 and the antibody 10 with a high probability.

이후, 분석 단계(S300')에서, 항원 처리 단계 이후에 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)와 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)를 분리할 수 있다. 예를 들면, 비드, 비드에 고정된 항체(10) 및 항체(10)의 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)의 결합체와 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)를 분리할 수 있다. 상기 결합체의 밀도는 분리된 펩티드(130)의 밀도보다 클 수 있다. 이에 따라, 상기 결합체와 분리된 펩티드(130)의 밀도 차이를 이용하여 상기 결합체를 분리할 수 있다. 예를 들면, 원심 분리기를 이용하거나, 상기 결합체를 침전시킬 수 있다. Then, in the analysis step (S300'), the residual amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) after the antigen processing step and the peptide 130 separated from the framework region (FR) may be separated. For example, a conjugate of the bead, the antibody 10 immobilized on the bead, and the residual amount of the peptide 120 bound to the framework region (FR) of the antibody 10, and the peptide 130 separated from the framework region (FR) ) can be separated. The density of the conjugate may be greater than that of the isolated peptide 130 . Accordingly, the conjugate can be separated using the difference in density between the conjugate and the separated peptide 130 . For example, a centrifugal separator may be used or the binder may be precipitated.

도 7b를 참조하면, 일 실시예에서, 전처리 단계(S100')에서 항-인플루엔자 B 항체(10)를 비드에 고정시키고, 항원 처리 단계(S200')에서 피분석물은 10 ng/mL 농도의 CRP를 포함하거나, 10 ng/mL 농도의 인플루엔자 B를 포함하거나, 100 ng/mL 농도의 인플루엔자 B를 포함할 수 있다. 좌측 그래프(A)는 서로 다른 타겟 항원(20)들을 포함하는 피분석물들의 프레임워크 영역(FR)으로부터 분리된 펩티드(130)를 정량한 그래프이고, 우측 그래프(B)는 프레임워크 영역(FR)에 결합된 잔량의 펩티드(120)를 정량한 그래프이다. 전술한 물질들은 비제한적 예시로서, 본 발명을 제한하지 않는다.Referring to Figure 7b, in one embodiment, in the pretreatment step (S100'), the anti-influenza B antibody (10) is fixed to the beads, and in the antigen treatment step (S200'), the analyte is 10 ng/mL at a concentration of CRP, or influenza B at a concentration of 10 ng/mL, or influenza B at a concentration of 100 ng/mL. The left graph (A) is a graph quantifying the peptide 130 isolated from the framework region (FR) of analytes containing different target antigens (20), and the right graph (B) is the framework region (FR) ) is a graph quantifying the remaining amount of the peptide 120 bound to it. The materials described above are non-limiting examples and do not limit the present invention.

일 실시예에서, 피분석물이 인플루엔자 B를 포함하는 경우에 비하여 피분석물이 CRP를 포함하는 경우, 분리된 펩티드(130)의 양이 작고, 잔량의 펩티드(120)의 양이 많은 것을 알 수 있다. 이는, 피분석물이 인플루엔자 B인 경우, 상기 인플루엔자 B가 항-인플루엔자 B 항체(10)와 반응하여 펩티드(100)가 항체(10)의 프레임워크 영역(FR)으로부터 해리되기 때문이다. 반면에, 피분석물이 CRP를 포함하는 경우에는 상기 CRP가 항-인플루엔자 B와 특이적으로 결합하지 않아 펩티드(100)가 프레임워크 영역(FR)으로부터 해리되지 않는다.In one embodiment, when the analyte contains CRP compared to when the analyte contains influenza B, it is known that the amount of the isolated peptide 130 is small and the amount of the remaining peptide 120 is large. can This is because, when the analyte is influenza B, the influenza B reacts with the anti-influenza B antibody (10) and the peptide (100) is dissociated from the framework region (FR) of the antibody (10). On the other hand, when the analyte contains CRP, the CRP does not specifically bind to anti-influenza B, so that the peptide 100 does not dissociate from the framework region (FR).

일 실시예에서, 피분석물 내의 타겟 항원(20)의 농도가 높을수록 분리된 펩티드(130)의 양이 많을 수 있다. 또한, 피분석물 내의 타겟 항원(20)의 농도가 높을수록 잔량의 펩티드(120)의 양은 적을 수 있다. 도 7b를 참조하면, 피분석물들이 동일하게 타겟 항원(20)으로 인플루엔자 B를 포함하는 경우에, 상기 인플루엔자 B의 농도가 높을수록 분리된 펩티드(130)의 양이 많은 것을 볼 수 있다. 예를 들면, 상기 피분석물에 포함된 상기 인플루엔자 B의 농도가 100 ng/mL인 경우에, 농도가 10 ng/mL인 경우에 비하여 분리된 펩티드(130)의 양이 많을 수 있다. 이는 타겟 항원(20)의 농도가 높을수록 많은 양의 타겟 항원(20)들이 항체(10)와 특이적으로 반응하여, 더 많은 양의 펩티드(100)가 프레임워크 영역(FR)으로부터 해리되기 때문이다. 본 발명의 실시예에 따르면, 분리된 펩티드(130)의 양 및/또는 잔량의 펩티드(120)의 양을 측정함으로써, 피분석물 내에 포함된 타겟 항원(20)을 식별할 수 있을 뿐만 아니라, 정량 또는 농도 측정까지 가능한 분석 방법이 제공될 수 있다.In one embodiment, the higher the concentration of the target antigen 20 in the analyte, the greater the amount of the isolated peptide 130 may be. In addition, the higher the concentration of the target antigen 20 in the analyte, the less the residual amount of the peptide 120. Referring to FIG. 7B , when the analytes equally contain influenza B as the target antigen 20, it can be seen that the higher the concentration of influenza B, the greater the amount of the isolated peptide 130. For example, when the concentration of influenza B included in the analyte is 100 ng/mL, the amount of the isolated peptide 130 may be greater than when the concentration is 10 ng/mL. This is because as the concentration of the target antigen 20 increases, a large amount of the target antigen 20 specifically reacts with the antibody 10, so that a larger amount of the peptide 100 is dissociated from the framework region (FR). am. According to an embodiment of the present invention, by measuring the amount of the isolated peptide 130 and / or the amount of the remaining peptide 120, it is possible to identify the target antigen 20 contained in the analyte, An analysis method capable of quantitative or even concentration measurement may be provided.

도 8a는 본 발명의 일 실시예에 따른 펩티드(100)를 이용한 분석 방법의 순서도이고, 도 8b는 도 8a의 분석 방법에 따른 분석 그래프이다.8A is a flowchart of an analysis method using the peptide 100 according to an embodiment of the present invention, and FIG. 8B is an analysis graph according to the analysis method of FIG. 8A.

도 8a를 참조하면, 전처리 단계(S100'')는 항체(10)에 펩티드(100)를 제공하여 항체(10)와 펩티드(100)의 제 1 결합체(b1) 및 항체(10)와 결합되지 않은 펩티드(100)를 포함하는 혼합 용액을 얻는 단계(S110) 및 상기 혼합 용액으로부터 항체(10)와 결합되지 않은 펩티드(100)를 제거하는 단계(S120)를 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 혼합 용액을 탈염 컬럼(desalting column)에 통과시켜 상기 탈염 컬럼을 먼저 통과하는 결합되지 않은 펩티드를 제거하고, 상기 탈염 컬럼을 나중에 통과하는 제 1 결합체(b1)만을 획득할 수 있다. 전술한 방법은 예시적인 것으로, 상기 결합체와 펩티드(100)를 분리하기 위한 다양한 공지 기술들이 참조될 수 있다.Referring to FIG. 8A , the pretreatment step (S100 '') provides the antibody 10 with the peptide 100, so that the antibody 10 and the first conjugate (b1) of the peptide 100 and the antibody 10 are not combined. It may include a step of obtaining a mixed solution containing the non-peptide 100 (S110) and a step of removing the peptide 100 that is not bound to the antibody 10 from the mixed solution (S120). For example, the mixed solution is passed through a desalting column to remove unbound peptides that pass first through the desalting column, and only the first conjugate (b1) that passes through the desalting column later can be obtained. . The above-described method is exemplary, and various known techniques for separating the conjugate and the peptide 100 may be referred to.

일 실시예에서, 분석 단계(S300'')는, 항체(10)로부터 분리된 펩티드(130)와 항체(10)와 타겟 항원(20)의 제 2 결합체(b2)를 분리하는 단계(S310) 및 분리된 펩티드(130)를 정량하는 단계(S320)를 더 포함할 수 있다. 제 2 결합체(b2)와 분리된 펩티드(130)는 예시적으로, 단백질-A 컬럼을 이용하여 분리될 수 있다. 이후, 분리된 펩티드(130)만을 선택적으로 획득하여 표지 반응을 통해 정량할 수 있다.In one embodiment, the analysis step (S300'') is a step of separating the peptide 130 separated from the antibody 10 and the second conjugate (b2) of the antibody 10 and the target antigen 20 (S310) and quantifying the isolated peptide 130 (S320). The peptide 130 separated from the second conjugate (b2) may be separated using, for example, a protein-A column. Thereafter, only the isolated peptide 130 may be selectively obtained and quantified through a labeling reaction.

일 실시예에서, 분석 단계(S300'')는 타겟 항원(20)의 농도의 증가에 따른 분리된 펩티드(130)의 양을 측정하여 항체(10)의 항원결합계수(Kd)를 측정할 수 있다. 상기 항원결합계수는 항원과 항체의 결합 상호 작용의 세기를 나타내는 평형 해리 상수일 수 있다. 상기 항원결합계수가 클수록 항원과 항체(10)의 결합 친화도가 높을 수 있다. 본 발명의 실시예에 따르면, 고체 지지체(30)에 항체(10)를 고정시키지 않고 용액 내에 포함된 항체(10)를 측정할 수 있어 항체(10)를 고정시키는 단계가 생략될 수 있고, 측정의 신뢰도 및 정확도가 향상되는 이점이 있다.In one embodiment, the analysis step (S300 '') can measure the antigen binding coefficient (Kd) of the antibody 10 by measuring the amount of the isolated peptide 130 according to the increase in the concentration of the target antigen 20 there is. The antigen binding coefficient may be an equilibrium dissociation constant indicating the strength of the antigen-antibody binding interaction. The greater the antigen binding coefficient, the higher the binding affinity between the antigen and the antibody (10). According to an embodiment of the present invention, it is possible to measure the antibody 10 contained in the solution without fixing the antibody 10 to the solid support 30, so the step of fixing the antibody 10 can be omitted, and the measurement There is an advantage in that the reliability and accuracy of the

도 8b를 참조하면, 일 실시예에서, 타겟 항원(20)은 HRP일 수 있고, 항체(10)는 항-HRP 항체(10)일 수 있다. 전술한 물질은 예시적인 것으로 본 발명을 한정하지 않는다. 일 실시예에서, 피분석물 내의 타겟 항원(20)의 농도를 증가시키면서 분리된 펩티드(130)의 양을 측정하고, 분리된 펩티드(130)의 양을 이용하여 항체(10)의 항원결합계수를 계산하였다. 본 발명의 실시예에서, 계산된 항원결합계수는 8.9ⅹ10-7 M으로 계산되었다.Referring to FIG. 8B , in one embodiment, the target antigen 20 may be HRP, and the antibody 10 may be an anti-HRP antibody 10 . The materials described above are exemplary and do not limit the present invention. In one embodiment, the amount of the isolated peptide 130 is measured while increasing the concentration of the target antigen 20 in the analyte, and the antigen binding coefficient of the antibody 10 is used using the amount of the isolated peptide 130. was calculated. In an embodiment of the present invention, the calculated antigen binding coefficient was calculated to be 8.9×10 -7 M.

일 실시예에서, 펩티드를 이용한 분석 방법은 면역분석(immunoassay) 키트를 이용하여 수행될 수 있다. 예를 들면, 상기 면역분석 키트는 루미넥스 분석 키트, 단백질 마이크로어레이 키트 또는 엘리사(ELISA) 키트일 수 있다. 다양한 실시예에서는, 방사능면역분석, 방사능면역침전, 면역침전, 면역조직화학염색, ELISA, 캡처-ELISA, 억제 또는 경재 분석, 샌드위치 분석, 유세포 분석(flow cytometry), 면역형광염색 및 면역친화성 정제를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 면역분석용 키트들에 관하여 상용화된 분석 방법에 관한 설명이 적용될 수 있다. In one embodiment, the analysis method using the peptide may be performed using an immunoassay kit. For example, the immunoassay kit may be a Luminex assay kit, a protein microarray kit, or an ELISA kit. In various embodiments, radioimmunoassays, radioimmunoprecipitation, immunoprecipitation, immunohistochemical staining, ELISA, capture-ELISA, inhibition or hardening assay, sandwich assay, flow cytometry, immunofluorescence staining, and immunoaffinity purification including, but not limited to. With respect to the kits for immunoassay, descriptions of commercially available assay methods may be applied.

이상에서 설명한 본 발명이 전술한 실시예 및 첨부된 도면에 한정되지 않으며, 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 여러가지 치환, 변형 및 변경이 가능하다는 것은, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 명백할 것이다.It is common in the art to which the present invention pertains that the present invention described above is not limited to the above-described embodiments and the accompanying drawings, and that various substitutions, modifications and changes are possible within the scope without departing from the technical spirit of the present invention. It will be clear to those who have knowledge.

10: 항체
20: 타겟 항원
30: 지지체
100: 펩티드
110: 결합된 펩티드
120: 잔량의 펩티드
130: 분리된 펩티드
200: 표지 물질10: antibody
20: target antigen
30: support
100: peptide
110: bound peptide
120: residual amount of peptide
130: isolated peptide
200: label material

<110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION YONSEI UNIV <120> Peptides binding to antibodies and analyzing method using the same <130> PN01317 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide1 <400> 1 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Thr Gly Thr Gly Ile Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val Trp Gly Lys 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide2 <400> 2 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Thr Gly Thr Gly Ile Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val Trp Gly Lys 20 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide3 <400> 3 Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Pro Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Tyr Lys 20 <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide4 <400> 4 Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr Lys 1 5 10 <110> INDUSTRY-ACADEMIC COOPERATION FOUNDATION YONSEI UNIV <120> Peptides binding to antibodies and analyzing method using the same <130> PN01317 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide1 <400> 1 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Thr Gly Thr Gly Ile Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val Trp Gly Lys 20 <210> 2 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide2 <400> 2 Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Pro Thr Gly Thr Gly Ile Tyr Phe Asp 1 5 10 15 Val Trp Gly Lys 20 <210> 3 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide3 <400> 3 Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Pro Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu 1 5 10 15 Leu Ile Tyr Lys 20 <210> 4 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide4 <400> 4 Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr Lys 1 5 10

Claims (14)

항체의 프레임워크 영역(framework region; FR)의 적어도 일 부분에 가역적으로 결합하고,
상기 항체와 특이적으로 반응하는 타겟 항원이 상기 항체에 결합하는 경우, 상기 프레임워크 영역으로부터 분리되는 펩티드.reversibly binds to at least a portion of a framework region (FR) of an antibody,
A peptide that is separated from the framework region when a target antigen that specifically reacts with the antibody binds to the antibody. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 상기 항체의 3차원 구조에 의하여 상기 프레임워크 영역에 결합되는 펩티드.The method of claim 1,
The peptide is a peptide bound to the framework region by the three-dimensional structure of the antibody. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드와 상기 항체가 결합된 상태에서 상기 항체와 상기 타겟 항원의 결합이 가능한 펩티드.The method of claim 1,
A peptide capable of binding the antibody to the target antigen in a state in which the peptide and the antibody are bound. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 상기 항체와 상기 타겟 항원의 결합에 영향을 끼치지 않는 펩티드.The method of claim 1,
The peptide does not affect the binding of the antibody to the target antigen. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 인간 항체, 비인간 항체, 인간화된 비인간 항체 또는 이들의 조합과 결합 가능한 펩티드.The method of claim 1,
The peptide is a peptide capable of binding to a human antibody, a non-human antibody, a humanized non-human antibody, or a combination thereof. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 적어도 하나 이상의 상기 프레임워크 영역에 결합 가능한 FR 결합부 및 적어도 하나 이상의 상보성 결정 영역(complementarity determining regions CDR)에 결합 가능한 CDR 결합부를 포함하는 펩티드. The method of claim 1,
wherein said peptide comprises a FR binding region capable of binding to at least one or more of said framework regions and a CDR binding region capable of binding to at least one or more complementarity determining regions CDR. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 프레임워크 영역의 전체 또는 일 부분에 결합되는 펩티드.The method of claim 1,
The peptide is a peptide that is bound to all or a part of a framework region. 제 1 항에 있어서,
상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 FR1, FR2, FR3, FR4 또는 이들의 조합을 포함하는 펩티드.The method of claim 1,
wherein the framework region is a peptide comprising FR1, FR2, FR3, FR4 or a combination thereof of the antibody. 제 1 항에 있어서,
상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 중 쇄의 프레임워크 영역인 펩티드.The method of claim 1,
wherein said framework region is a framework region of a heavy chain of said antibody. 제 1 항에 있어서,
상기 프레임워크 영역은 상기 항체의 경 쇄의 프레임워크 영역인 펩티드.The method of claim 1,
wherein said framework region is a framework region of a light chain of said antibody. 제 8 항에 있어서,
상기 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 어느 하나에 결합하는 펩티드는 상기 FR1, FR2, FR3 또는 FR4 중 다른 하나에 결합하는 펩티드와 결합되는 펩티드.9. The method of claim 8,
wherein the peptide that binds to any one of FR1, FR2, FR3 or FR4 binds to a peptide that binds to the other one of FR1, FR2, FR3 or FR4. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 1 내지 서열번호 4 중 어느 하나를 포함하는 펩티드.The method of claim 1,
The amino acid sequence of the peptide is a peptide comprising any one of SEQ ID NO: 1 to SEQ ID NO: 4. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드의 아미노산 서열은 서열번호 1, 서열번호 1의 일부, 서열번호 2, 서열번호 2의 일부, 서열번호 3, 서열번호 3의 일부, 서열번호 4, 서열번호 4의 일부 또는 이들의 조합인 펩티드.The method of claim 1,
The amino acid sequence of the peptide is SEQ ID NO: 1, part of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, part of SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, part of SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, part of SEQ ID NO: 4, or a combination thereof peptide. 제 1 항에 있어서,
상기 펩티드는 광학적, 화학적 또는 전기적 표지 반응을 나타내는 표지 물질로 표지된 펩티드.The method of claim 1,
The peptide is a peptide labeled with a labeling material that exhibits an optical, chemical or electrical labeling reaction.
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