KR20220062352A - 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법 - Google Patents

아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20220062352A
KR20220062352A KR1020227011743A KR20227011743A KR20220062352A KR 20220062352 A KR20220062352 A KR 20220062352A KR 1020227011743 A KR1020227011743 A KR 1020227011743A KR 20227011743 A KR20227011743 A KR 20227011743A KR 20220062352 A KR20220062352 A KR 20220062352A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
eye
unit dose
raav particles
sequence
seq
Prior art date
Application number
KR1020227011743A
Other languages
English (en)
Inventor
메흐디 가스미
실라드 키스
아론 오스본
Original Assignee
애드베룸 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 애드베룸 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드 filed Critical 애드베룸 바이오테크놀로지스, 인코포레이티드
Priority claimed from PCT/US2019/062066 external-priority patent/WO2021050094A1/en
Publication of KR20220062352A publication Critical patent/KR20220062352A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • A61K38/179—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/0075—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the delivery route, e.g. oral, subcutaneous
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/71—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for growth factors; for growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/32—Fusion polypeptide fusions with soluble part of a cell surface receptor, "decoy receptors"
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/14011—Baculoviridae
    • C12N2710/14111—Nucleopolyhedrovirus, e.g. autographa californica nucleopolyhedrovirus
    • C12N2710/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/14144—Chimeric viral vector comprising heterologous viral elements for production of another viral vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
    • C12N2750/00011—Details
    • C12N2750/14011—Parvoviridae
    • C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
    • C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

개체의 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함하는 것인, 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법이 제공된다.

Description

아플리베르셉트를 코딩하는 AAV2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 9월 11일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/899,070 및 2019년 10월 10일에 출원된 미국 특허 가출원 번호 62/913,648을 우선권 주장하며, 이들 각각의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
ASCII 텍스트 파일의 서열 목록 제출
ASCII 텍스트 파일의 하기 제출 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 서열 목록의 컴퓨터 판독가능 형태 (CRF) (파일명: 627002001240SEQLIST.TXT, 기록된 날짜: 2019년 11월 18일, 크기: 29 KB).
분야
본 개시내용은 개체의 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 재조합 아데노 연관 바이러스 (rAAV) 입자의 단일 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 안구 신생혈관 질환 및 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
연령-관련 황반 변성 (AMD)은 읽기 및 정밀 시각을 담당하는 망막 중심 내의 광 감수성의 작은 영역인 황반에 영향을 미치는 퇴행성 안구 질환이다. 황반에 영향을 미치는 상태는 중심 시각을 감소시키면서 주변 시각은 무손상 상태로 둔다. 중증 사례에서, 이러한 질환은 중심 실명으로 이어질 수 있다. AMD는 미국 인구에서 65세 이상의 사람 중 시각 상실의 주목할만한 원인이고, 40세 초과의 사람 중 임의의 AMD의 추정 유병률은 대략 6.5%이다 (Klein et al., (2011) Arch Ophthalmol, 129(1):75-80). 신생혈관성 또는 삼출성 또는 습성 AMD (nAMD, wAMD 또는 nwAMD)는 진행된 형태의 AMD이다. wAMD의 특징은 기저 맥락막 층으로부터의 망막 내 비정상적 혈관의 침윤인 맥락막 신생혈관화 (CNV)이며, 이는 망막 세포 손상 및 중심 실명을 초래한다. 이러한 비정상적 혈관신생 과정은 성장 인자, 특히 혈관 내피 성장 인자 (VEGF)에 의해 조정된다.
wAMD의 표준 관리는 VEGF에 결합하여 그를 격리시키는 분자의 부류, 예컨대 라니비주맙 (루센티스(Lucentis)) 및 아플리베르셉트 (아일리아(Eylea))이다. 예를 들어, 아플리베르셉트는 혈관 내피 성장 인자 하위유형 A 및 B (VEGF-A 및 VEGF-B) 및 태반 성장 인자 (PGF)에 대한 디코이 수용체로서 작용하는 재조합 융합 단백질이다. 아플리베르셉트는 이들 리간드에 결합함으로써, 이들이 혈관 내피 성장 인자 수용체 (VEGFR)인 VEGFR-1 및 VEGFR-2에 결합하는 것을 방지하여, 신생혈관화를 억제하고 혈관 투과성을 감소시킬 수 있다. 아플리베르셉트는 IgG1의 Fc 단편과 융합된 VEGFR-1의 도메인 2 및 VEGFR-2의 도메인 3으로 이루어진다.
현행 표준 관리 항-VEGF 작용제는 최적 치료 결과를 달성하고 시력을 유지하기 위해 4 내지 8주마다 유리체내 주사 (IVT) 주사를 통해 재투여될 필요가 있다. 이러한 요법의 준수는 환자, 그의 보호자 및 건강관리 시스템에 부담이 되고, 대부분의 환자는 시간 경과에 따라 최적 요법의 준수에서 벗어나게 되며, 이는 시각 상실과 상관관계가 있다 (Khanani AM, et al.). 추가로, 안내염, 망막 박리, 외상성 백내장 및 상승된 안내압 (IOP)을 포함한 합병증이 존재하며; 이들 합병증의 위험은 반복된 IVT 주사로 증가할 가능성이 있다 (Falavarjani et al., (2013) Eye (Lond), 27(7):787-794).
따라서, 효과적이고, 부작용의 위험을 감소시키며, 매우 장기간 환자가 준수할 수 있는 안구 신생혈관 질환, 예컨대 wAMD의 요법에 대한 필요가 관련 기술분야에 존재한다.
한 측면에서, 개체의 한쪽 눈에 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg) 이하의 재조합 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는 (a) 서열식별번호(SEQ IN NO): 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 (b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함하는 것인, 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 방법은 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 것을 포함한다.
또 다른 측면에서, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는 (a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 (b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함하는 것인, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 마지막 12주 내에 적어도 1회의 항-VEGF 작용제 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에서의 망막액의 양 또는 존재는 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료에 대해 불응성이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트이다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈에서의 망막액은 적어도 약 60%만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈에서의 망막액은 개체에게 rAAV를 투여하기 전 개체의 한쪽 눈에서의 망막액 수준과 비교하여 약 80%만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 망막액은 망막하액 (SRF) 또는 망막내액 (IRF)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg/눈) 이하이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 벡터 게놈 (vg/눈)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 약 2 x 1011 또는 약 6 x 1010 벡터 게놈 (vg/눈)이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하거나 그보다 적은 눈당 벡터 게놈 (vg/눈)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 많은 눈당 벡터 게놈 (vg/눈)을 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 핵산은 제1 인핸서 영역, 프로모터 영역, 5'UTR 영역, 제2 인핸서 영역 및 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 5'에서 3' 순서로 (a) 제1 인핸서 영역; (b) 프로모터 영역; (c) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산; (d) 5'UTR 영역; (e) 제2 인핸서 영역; 및 (f) 폴리아데닐화 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 인핸서 영역은 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 프로모터 영역은 서열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다. 일부 실시양태에서, 5'UTR 영역은 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 인핸서 영역은 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리아데닐화 부위는 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 (a) 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 제1 인핸서 영역; (b) 서열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (e) 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 요소에 플랭킹된 AAV ITR을 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, AAV2 캡시드 단백질은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함한다. 일부 실시양태에서, AAV2 캡시드 단백질은 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함한다. 일부 실시양태에서, AAV2 캡시드 단백질은 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 투여에 의한 것이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 염화나트륨, 인산나트륨 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 150 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨, 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188 및 mL당 약 6 x 1013 내지 약 6 x 1010 벡터 게놈 (vg) (vg/mL)의 rAAV 입자를 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1011 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 25 μL 내지 약 250 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL의 부피를 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제를 사용한 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 습성 연령-관련 황반 변성 (AMD), 망막 신생혈관화, 맥락막 신생혈관화 당뇨병성 망막병증, 증식성 당뇨병성 망막병증, 망막 정맥 폐쇄, 중심 망막 정맥 폐쇄, 분지 망막 정맥 폐쇄, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막 허혈, 허혈성 망막병증, 당뇨병성 망막 부종 또는 그의 임의의 조합이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료이고, 국소 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여로부터 최대 약 4주, 최대 약 6주 또는 최대 약 8주 동안의 매일 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 제1주에 국소 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 1 μg 내지 약 3 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 2.5 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 유지 또는 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 망막 두께의 감소는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 적어도 약 10%이다. 일부 실시양태에서, 망막 두께는 중심 서브필드 두께 (CST) 또는 중심 망막 두께 (CRT)이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 유지 또는 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 황반 부피의 감소는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10%이다.
상기 실시양태 중 어느 것과 조합될 수 있는 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 시력은 최대 교정 시력 (BCVA)이다.
참조로 포함됨
특허 출원 및 공개를 포함한 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전문이 참조로 포함된다.
본 발명의 신규 특색은 첨부된 청구범위에 구체적으로 제시된다. 본 발명의 특색 및 이점의 보다 나은 이해는 본 발명의 원리가 이용되는 예시적 실시양태를 제시하는 하기 상세한 설명 및 첨부된 도면을 참조하여 얻어질 것이다:
도 1a-1b는 실시예 1 및 2에 기재된 임상시험용 의약품 및 I상 연구의 개략도를 제공한다. 도 1a는 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 개략도이다. AAV2.7m8-아플리베르셉트는 AAV2.7m8 단백질 캡시드를 함유하는 재조합, 복제-결핍 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 벡터이고, 편재성 키메라 프로모터 (C11)의 제어 하에 아플리베르셉트 cDNA의 코돈-최적화된 버전의 발현 카세트를 함유하는 벡터 게놈이다. AAV2.7m8-아플리베르셉트 벡터 게놈은 또한, 아플리베르셉트 cDNA 발현 카세트에 플랭킹된 2개의 AAV2 역전된 말단 반복 서열 (ITR)을 함유한다. 도 1b는 실시예 1 및 2에 기재된 I상 연구를 위한 연구 설계를 요약한 다이어그램이다.
도 2a-2l은 실시예 1에 기재된 연구의 코호트 1의 대상체로부터 찍은 광 간섭 단층촬영 (OCT) 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 보여준다. AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 (제1일) 전 및 후 나타낸 시간에서 OCT 영상을 찍었다. 항-VEGF IVT 치료 간격이 모든 대상체에 대해 나타나 있다. 도 2a는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 5회 진료소 방문시에 대상체 1로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 아플리베르셉트 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 대상체 1은 5-7주마다 아플리베르셉트 IVT를 필요로 하였고, 아플리베르셉트 표준 관리 치료에도 불구하고 불응성 망막하액 및 색소 상피 박리 (PED)를 나타냈다. 도 2b는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-7일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 1로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 1은 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. 대상체 1은 제4주에 시작하여 망막하액의 해소를 나타냈고, 망막하액 및 망막내액이 없도록 유지되었다 (건성으로 유지됨). 도 2c는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 5회 진료소 방문시에 대상체 2로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 아플리베르셉트 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 대상체 2는 망막 해부학을 유지하기 위해 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 전 8개월 내 6회 아플리베르셉트 IVT 치료를 필요로 하였다. 도 2d는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-7일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 2로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 2는 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. 대상체 2는 제24주까지 망막하액 또는 망막내액이 없는 안정한 망막 해부학을 나타냈다. 도 2e는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 4회 진료소 방문시에 대상체 3으로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 제-27주에 찍은 OCT 영상은 제시되지 않는다. 아플리베르셉트 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 대상체 3은 아플리베르셉트 IVT 사이의 간격이 5주에서 7주로 증가되었을 때 증가된 망막하액을 나타냈다. 도 2f는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-7일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 3으로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 3은 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. 대상체 3은 제8주까지 불응성 망막하액의 해소 및 제24주까지 안정한 망막 해부학을 나타냈다. 도 2g는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 5회 진료소 방문시에 대상체 4로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 라니비주맙 0.5 mg IVT 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 대상체 4는 라니비주맙 IVT 주사에 대해 불응성인 망막하액을 나타냈다. 도 2h는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-14일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 4로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 4는 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. 대상체 4는 제8주까지 불응성 망막하액의 해소 및 제24주까지 안정한 망막 해부학을 나타냈다. 도 2i는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 5회 진료소 방문시에 대상체 5로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 아플리베르셉트 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 도 2j는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-14일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 5로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 5는 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 시점에 존재하는 망막하액 및 PED는 시간 경과에 따라 해소되었고, 망막 해부학은 제24주까지 안정하게 유지되었으며 망막하액 또는 망막내액이 없었다. 도 2k는 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전 나타낸 시간에서의 5회 진료소 방문시에 대상체 6으로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 나타낸 바와 같이, 베바시주맙 1.5 mg IVT 표준 관리 또는 라니비주맙 0.5 mg IVT 표준 관리로 치료하기 직전에 OCT 영상을 찍었다. 대상체 6의 망막의 외관은 폴립양 맥락막 혈관병증 (PCV)과 일치하였다. 도 2l은 스크리닝 아플리베르셉트 주사 (제-10일), AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 (제1일) 및 나타낸 시간에서의 추적 방문시에 대상체 6으로부터 찍은 OCT 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 제공한다. 대상체 6은 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 후에 어떠한 구제 주사도 필요로 하지 않았다. 대상체 6은 망막하액의 어떠한 증가도 나타내지 않았고, 제24주까지 일부 해부학적 개선을 달성하였다. 대상체 6의 반대쪽 눈은 시험 과정에 걸쳐 4주마다 표준 관리 아플리베르셉트 주사를 받았고, AAV2.7m8-아플리베르셉트-치료된 눈과 유사한 망막 형태를 나타냈다.
도 3은 나타낸 시점에서 실시예 1에 기재된 연구의 코호트 1의 대상체에 대한 평균 중심 망막 두께 (CST)의 변화를 보여준다. 오차 막대는 T-분포를 사용하여 계산된 90% 신뢰 구간을 나타낸다. 기준선 (BL)은 제1일의 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 7 내지 15일 (예를 들어, 7-14일) 전 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전에 취한 측정치를 나타낸다. AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 24주 후에, 대상체는 평균 -52.7 μm (90% CI -86.5, -18.8)의 CRT 변화를 나타냈다. BL = 기준선; D = 일; W = 주. 제1일 방문은 기준선 방문 7-14일 후에 이루어졌다.
도 4는 나타낸 시점에서 실시예 1에 기재된 연구의 코호트 1의 대상체에 대한 조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구 (ETDRS) 문자 평가에 기초한 평균 최대 교정 시력 (BCVA) 측정치를 보여준다. 오차 막대는 T-분포를 사용하여 계산된 90% 신뢰 구간을 나타낸다. 기준선 (BL)은 제1일의 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 7 내지 15일 (예를 들어, 7-14일) 전 스크리닝 아플리베르셉트 주사 전에 취한 측정치를 나타낸다. AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 24주 후에, 대상체는 평균 -2개 문자 (90% CI -9.1, 5.1)의 BCVA의 변화를 나타냈다. BL = 기준선; D = 일; W = 주. 제1일 방문은 기준선 방문 7-14일 후에 이루어졌다.
도 5는 아플리베르셉트의 핵산 서열 (서열식별번호: 36)을 제공한다.
도 6은 실시예 1에 기재된 연구의 대상체 1-6에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트로의 치료 후 전방 세포 및 유리체 세포 수의 플롯을 보여준다. 각각의 환자에게 투여된 스테로이드 치료는 각각의 플롯 아래에 나타다 있다. 방수 세포 수 카테고리는 포도막염 명명법 표준화 (SUN) 기준에 기초하였다 (Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005;140:509-516). 유리체 세포 수 카테고리는 미국 국립 보건원 (NIH) 가이드라인에 기초하였다. 방수 세포의 경우, 0.5+의 세포 수 값은 1-5개의 세포를 나타내고; 1+의 세포 수 값은 6-15개의 세포를 나타내고; 2+의 세포 수 값은 16-25개의 세포를 나타내고; 3+의 세포 수 값은 26-50개의 세포를 나타내고; 4+의 세포 수 값은 >50개의 세포를 나타낸다. 유리체 세포의 경우, 0.5+의 세포 수 값은 1-10개의 세포를 나타내고; 1+의 세포 수 값은 11-20개의 세포를 나타내고; 2+의 세포 수 값은 21-30개의 세포를 나타내고; 3+의 세포 수 값은 31-100개의 세포를 나타내고; 4+의 세포 수 값은 >100개의 세포를 나타낸다. 본 도면에 제시된 분석을 위해 희귀 세포를 0.5+로서 포착하였다.
도 7a-7b는 34주의 중앙 추적 시간에서 실시예 1에 기재된 연구의 코호트 1의 대상체 1-6으로부터 찍은 광 간섭 단층촬영 (OCT) 영상 및 OCT 영상으로부터 유래된 망막 두께 맵을 보여준다. 추가로, 기준선으로부터의 BCVA 변화, AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 전 8개월 내 항-VEGF IVT 주사 횟수 및 연구 동안 투여된 구제 항-VEGF IVT 주사 횟수가 대상체 1-6 각각에 대해 또한 제공된다. 각각의 대상체에 대해 OCT 영상 및 망막 두께 맵을 얻은 실제 주가 나타나 있다 (대상체 1 = 제44주; 대상체 2 = 제40주; 대상체 3 = 제36주; 대상체 4 = 제32주; 대상체 5 = 제28주; 및 대상체 6 = 제28주). 연구 동안 구제 항-VEGF IVT 주사를 필요로 한 대상체는 없었고, 44주까지의 추적 기간 동안 어느 시점에서도 재치료 기준은 충족되지 않았다. OCT 영상화에서 질환 재활성화의 징후를 나타낸 대상체도 없었다.
여러 측면이 예시를 위해 예시적인 적용을 참조하여 하기 기재된다. 본원에 기재된 특색의 완전한 이해를 제공하기 위해 수많은 구체적 세부사항, 관계 및 방법이 제시된다는 것이 이해되어야 한다. 그러나, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본원에 기재된 특색이 구체적 세부사항 중 하나 이상 없이 또는 다른 방법으로 실시될 수 있다는 것을 용이하게 인식할 것이다. 일부 행위가 상이한 순서로 및/또는 다른 행위 또는 사건과 공동으로 발생할 수 있기 때문에, 본원에 기재된 특색은 행위 또는 사건의 예시된 순서에 의해 제한되지는 않는다. 추가로, 모든 예시된 행위 또는 사건이 본원에 기재된 특색에 따른 방법론을 실행하는데 요구되는 것은 아니다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해된 바와 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 용어는 단지 특정한 예를 기재하려는 목적을 위한 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다. 본원에 사용된 단수 형태는 문맥이 달리 명백하게 나타내지 않는 한 복수 형태를 또한 포함하는 것으로 의도된다. 추가로, 용어 "포함한", "포함한다", "갖는", "갖는다", "가진" 또는 그의 변형어가 상세한 설명 및/또는 청구범위에 사용되는 경우에, 이러한 용어는 용어 "포함하는"과 유사한 방식으로 포괄적인 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "포함하는"은 "포함한" 또는 "함유하는"과 동의어이고, 포괄적이거나 개방형이다.
본원에서 "또는"에 대한 임의의 언급은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 포괄하는 것으로 의도된다. 본원에 사용된 용어 "약" 숫자는 그 숫자의 플러스 또는 마이너스 10%의 숫자를 지칭한다. 용어 "약" 범위는 그 범위 마이너스 그의 최저 값의 10% 및 플러스 그의 최대 값의 10%를 지칭한다.
용어 "대상체", "환자" 또는 "개체"는 영장류, 예컨대 인간 및 비-인간 영장류, 예를 들어 아프리카 녹색 원숭이 및 레서스 원숭이를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 인간이다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는", "치료", "호전시키다" 또는 "호전시키는" 및 다른 문법적 등가물은 안구 신생혈관 질환 또는 장애 또는 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 증상을 완화, 약화 또는 호전시키는 것, 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 추가의 증상을 예방하는 것, 증상의 기저 대사 원인을 호전 또는 예방하는 것, 안구 신생혈관 질환 또는 장애를 억제하는 것, 예를 들어 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 발생을 중지시키는 것, 안구 신생혈관 질환 또는 장애를 경감시키는 것, 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 퇴행을 유발하는 것, 또는 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 증상을 정지시키는 것을 지칭하며, 예방을 포함하는 것으로 의도된다. 상기 용어는 치료적 이익 및/또는 예방적 이익을 달성하는 것을 추가로 포함한다. 용어 "치료적 이익"은 치료될 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 근절 또는 호전을 지칭한다. 또한, 치료적 이익은, 일부 실시양태에서 대상체가 여전히 안구 신생혈관 질환 또는 장애를 앓고 있음에도 불구하고 대상체에서 개선이 관찰되도록 하는 안구 신생혈관 질환 또는 장애와 연관된 생리학적 증상 중 1종 이상의 근절 또는 호전에 의해 달성된다. 예방적 이익을 위해, 제약 조성물은 안구 신생혈관 질환 또는 장애가 발생할 위험이 있는 대상체에게 또는 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 생리학적 증상 중 1종 이상을 보고하는 대상체에게, 이러한 질환 또는 장애의 진단이 이루어지지 않은 경우에도, 투여된다.
본원에 사용된 용어 "투여하다", "투여하는", "투여" 등은 치료제 또는 제약 조성물을 목적하는 생물학적 작용 부위에 전달할 수 있게 하는데 사용되는 방법을 지칭할 수 있다. 이들 방법은 눈에 대한 유리체내 또는 망막하 주사를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "유효량", "치료 유효량" 또는 "제약 유효량"은 치료될 안구 질환 또는 장애의 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 경감시킬, 투여될 적어도 1종의 제약 조성물 또는 화합물의 충분한 양을 지칭할 수 있다. 제약 조성물의 "유효량", "치료 유효량" 또는 "제약 유효량"은 그를 필요로 하는 대상체에게 단위 용량 (본원 다른 곳에 추가로 상세히 기재된 바와 같음)으로서 투여될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는"은 본원에 개시된 화합물의 생물학적 활성 또는 특성을 제거하지 않고 비교적 비독성인 물질, 예컨대 담체 또는 희석제를 지칭할 수 있다 (즉, 물질이 개체에게 투여되는 경우에, 이는 바람직하지 않은 생물학적 효과를 유발하지도 않고, 이것이 함유되어 있는 조성물의 성분 중 어떠한 것과도 유해한 방식으로 상호작용하지 않음).
본원에 사용된 용어 "제약 조성물" 또는 간단히 "조성물"은 적어도 1종의 제약상 허용되는 화학적 성분, 예컨대 비제한적으로 담체, 안정화제, 희석제, 분산제, 현탁화제, 증점제, 부형제 등과 임의로 혼합된 생물학적 활성 화합물을 지칭할 수 있다.
본원에 사용된 "AAV 벡터" 또는 "rAAV 벡터"는 표적 세포 또는 표적 조직 내로의 형질도입을 위한, AAV 기원이 아닌 폴리뉴클레오티드 서열 (예를 들어, AAV에 대해 이종인 폴리뉴클레오티드, 예컨대 치료 트랜스진, 예를 들어 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산 서열)을 포함하는 아데노-연관 바이러스 (AAV) 벡터 또는 재조합 AAV (rAAV) 벡터를 지칭한다. 일반적으로, 이종 폴리뉴클레오티드는 적어도 1개, 일반적으로 2개의 AAV 역전된 말단 반복 서열 (ITR)이 플랭킹된다. 용어 rAAV 벡터는 rAAV 벡터 입자 및 rAAV 벡터 플라스미드 둘 다를 포괄한다. rAAV 벡터는 단일-가닥 (ssAAV) 또는 자기-상보적 (scAAV)일 수 있다.
"AAV 바이러스" 또는 "AAV 바이러스 입자" 또는 "rAAV 벡터 입자" 또는 "rAAV 입자"는 적어도 1종의 AAV 캡시드 단백질 및 폴리뉴클레오티드 rAAV 벡터를 포함하는 바이러스 입자를 지칭한다. 일부 경우에, 적어도 1종의 AAV 캡시드 단백질은 야생형 AAV로부터의 것이거나 또는 변이체 AAV 캡시드 단백질 (예를 들어, 삽입, 예를 들어 하기 제시된 바와 같은 7m8 아미노산 서열의 삽입을 갖는 AAV 캡시드 단백질)이다. 입자가 이종 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 야생형 AAV 게놈 이외의 다른 폴리뉴클레오티드, 예컨대 표적 세포 또는 표적 조직에 전달될 트랜스진)를 포함하는 경우에, 이는 "rAAV 입자", "rAAV 벡터 입자" 또는 "rAAV 벡터"로 지칭된다. 따라서, rAAV 입자의 생산은 rAAV 벡터의 생산을 반드시 포함하며, 이는 이러한 벡터가 rAAV 입자 내에 함유되기 때문이다.
본원에 사용된 용어 "패키징"은 rAAV 입자의 어셈블리 및 캡시드화를 유발할 수 있는 일련의 세포내 사건을 지칭할 수 있다.
AAV "rep" 및 "cap" 유전자는 아데노-연관 바이러스의 복제 및 캡시드화 단백질을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열을 지칭한다. AAV rep 및 cap는 본원에서 AAV "패키징 유전자"로 지칭된다.
용어 "폴리펩티드"는 그의 자연 발생 및 비-자연 발생 단백질 (예를 들어, 융합 단백질), 펩티드, 단편, 돌연변이체, 유도체 및 유사체 둘 다를 포괄할 수 있다. 폴리펩티드는 단량체, 이량체, 삼량체 또는 중합체일 수 있다. 추가로, 폴리펩티드는 각각 1종 이상의 별개의 활성을 갖는 다수의 상이한 도메인을 포함할 수 있다. 의심을 피하기 위해, "폴리펩티드"는 2개 초과의 아미노산의 임의의 길이일 수 있다.
본원에 사용된 "폴리펩티드 변이체" 또는 간단히 "변이체"는 그의 서열이 아미노산 변형을 함유하는 폴리펩티드를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형은 참조 단백질 또는 폴리펩티드, 예컨대 천연 또는 야생형 단백질의 아미노산 서열과 비교하여 1개 이상의 아미노산의 삽입, 중복, 결실, 재배열 또는 치환이다. 변이체는 한 위치에서의 단일 아미노산이 또 다른 아미노산으로 변화된 1개 이상의 아미노산 점 치환, 참조 단백질의 서열에서 1개 이상의 아미노산이 각각 삽입 또는 결실된 1개 이상의 삽입 및/또는 결실, 및/또는 아미노 또는 카르복시 말단 중 어느 하나 또는 둘 다에서의 아미노산 서열의 말단절단을 가질 수 있다. 변이체는 참조 단백질 또는 비변형 단백질과 비교하여 동일하거나 상이한 생물학적 활성을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 변이체는, 예를 들어 그의 대응 참조 단백질에 대해 적어도 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 전체 서열 상동성을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체는 야생형 단백질에 대해 적어도 약 90% 전체 서열 상동성을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 변이체는 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.5% 또는 적어도 약 99.9% 전체 서열 동일성을 나타낸다.
본원에 사용된 "재조합"은 (1) 그의 자연 발생 환경으로부터 제거되었거나, (2) 자연에서 유전자가 발견되는 폴리뉴클레오티드의 모두 또는 부분과 회합되지 않거나, (3) 자연에서는 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나, 또는 (4) 자연에서는 발생하지 않는 생체분자, 예를 들어 유전자 또는 단백질을 지칭할 수 있다. 용어 "재조합"은 클로닝된 DNA 단리물, 화학적으로 합성된 폴리뉴클레오티드 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 폴리뉴클레오티드 유사체, 뿐만 아니라 이러한 핵산에 의해 코딩된 단백질 및/또는 mRNA와 관련하여 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어 미생물에 의해 합성된 단백질은, 예를 들어 세포에 존재하는 재조합 유전자로부터 합성된 mRNA로부터 합성되는 경우에 재조합이다.
용어 "항-VEGF 작용제"는 내인성 VEGF 및/또는 내인성 VEGF 수용체 (VEGFR)의 활성 또는 기능 또는 생체내 VEGF-VEGFR 상호작용 또는 경로를 감소, 방해, 파괴, 차단 및/또는 억제할 수 있는, 단백질, 폴리펩티드, 펩티드, 융합 단백질, 다량체 단백질, 유전자 생성물, 항체, 인간 모노클로날 항체, 항체 단편, 압타머, 소분자, 키나제 억제제, 수용체 또는 수용체 단편, 또는 핵산 분자를 포함한 임의의 치료제를 포함한다. 항-VEGF 작용제는 생체내에서 세포, 조직 또는 대상체 내로 전달되는 경우에 새로운 혈관 성장 또는 형성 및/또는 부종 또는 팽윤을 감소시킬 수 있는 공지된 치료제, 예를 들어 라니비주맙, 브롤루시주맙 또는 베바시주맙 중 어느 하나일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 자연 발생, 비-자연 발생 또는 합성일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 항-VEGF 활성을 부여하기 위해 후속적으로 변형 또는 돌연변이된 자연 발생 분자로부터 유래될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 융합 또는 키메라 단백질이다. 이러한 단백질에서, 기능적 도메인 또는 폴리펩티드는 모이어티 또는 폴리펩티드에 인공적으로 융합되어 생체내에서 VEGF를 격리하거나 VEGFR 디코이로서 기능할 수 있는 융합 또는 키메라 단백질을 만든다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 내인성 VEGFR이 그의 리간드와 상호작용하는 것을 차단하는 융합 또는 키메라 단백질이다.
본원에 사용된 "VEGF"는 달리 요구되지 않는 한, VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F 또는 그의 임의의 조합 또는 임의의 기능적 단편 또는 변이체를 포함하나 이에 제한되지는 않는 VEGF의 임의의 이소형을 지칭할 수 있다. 달리 요구되지 않는 한, "VEGF"는 VEGF-A, 태반 성장 인자 (PGF), VEGF-B, VEGF-C 및 VEGF-D 또는 그의 임의의 조합, 기능적 단편 또는 변이체의 구성원을 포함한 VEGF 패밀리의 임의의 구성원을 지칭할 수 있다. 본원에 사용된 "VEGF 수용체" 또는 "VEGFR" 또는 "VEGF-R"은 VEGFR-1 (또는 Flt-1), VEGFR-2 (또는 Flk-1/KDR) 및 VEGFR-3 (또는 Flt-4)을 포함하나 이에 제한되지는 않는 VEGF의 수용체 중 어느 하나를 지칭하는 것으로 사용될 수 있다. VEGFR은 막 결합 또는 가용성 형태 또는 수용체의 기능적 단편 또는 말단절단물일 수 있다. 항-VEGF 작용제의 예는 라니비주맙, 베바시주맙, 브롤루시주맙 또는 그의 임의의 조합, 변이체 또는 기능적 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"작동가능하게 연결된" 또는 "작동가능하도록 연결된" 또는 "커플링된"은 유전적 요소의 병치를 지칭할 수 있으며, 여기서 요소는 이들이 예상된 방식으로 작동하는 것을 허용하는 관계로 존재한다. 예를 들어, 프로모터가 코딩 서열의 전사를 개시하는 것을 돕는 경우에 프로모터는 코딩 영역에 작동가능하게 연결될 수 있다. 이러한 기능적 관계가 유지되는 한, 프로모터와 코딩 영역 사이에 개재 잔기가 존재할 수 있다.
용어 "발현 벡터" 또는 "발현 구축물" 또는 "카세트" 또는 "플라스미드" 또는 간단히 "벡터"는 핵산 코딩 서열의 일부 또는 모두가 전사될 수 있고 유전자 요법을 위해 적합화된 유전자 생성물을 코딩하는 핵산 또는 폴리뉴클레오티드를 함유하는, AAV 또는 rAAV 벡터를 포함한 임의의 유형의 유전자 구축물을 포함할 수 있다. 전사체는 단백질로 번역될 수 있다. 일부 실시양태에서, 전사체는 부분적으로 번역되거나 또는 번역되지 않는다. 특정 측면에서, 발현은 유전자의 전사 및 mRNA의 유전자 생성물로의 번역 둘 다를 포함한다. 다른 측면에서, 발현은 관심 유전자를 코딩하는 핵산의 전사만을 포함한다. 발현 벡터는 또한 표적 세포에서 단백질의 발현을 용이하게 하기 위해 코딩 영역에 작동가능하게 연결된 제어 요소를 포함할 수 있다. 제어 요소 및 발현을 위해 작동가능하게 연결된 유전자 또는 유전자들의 조합은 때때로 "발현 카세트"로 지칭될 수 있으며, 이들 중 다수는 관련 기술분야에 공지되어 있고 이용가능하거나 또는 관련 기술분야에서 이용가능한 성분으로부터 용이하게 구축될 수 있다.
용어 "이종"은 비교될 나머지 개체의 것과 유전자형적으로 별개인 개체를 지칭할 수 있다. 예를 들어, 상이한 종으로부터 유래된 플라스미드 또는 벡터 내로 유전자 조작 기술에 의해 도입된 폴리뉴클레오티드는 이종 폴리뉴클레오티드일 수 있다. 천연 코딩 서열로부터 제거되고 자연적으로 연결된 것으로 발견되지 않는 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 프로모터는 이종 프로모터일 수 있다.
본원에 사용된 "7m8"은 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 지칭한다.
"7m8 변이체"는 캡시드 단백질의 용매 노출된 GH 루프에 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)가 삽입된, 임의의 혈청형의 것일 수 있는 rAAV를 지칭한다.
7m8이 rAAV2에 삽입되는 경우 (AAV2.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV2 캡시드 단백질의 아미노산 570-611 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV2 캡시드 단백질 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된다. 일부 경우에, 7m8이 rAAV2에 삽입되는 경우 (AAV2.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV2 캡시드 단백질의 GH 루프 내로, 예를 들어 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV1에 삽입되는 경우 (AAV1.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV1 캡시드 단백질의 AAV1의 아미노산 571-612 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV1 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV5에 삽입되는 경우 (AAV5.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV5 캡시드 단백질의 AAV5의 아미노산 560-601 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV5 캡시드 단백질의 아미노산 575와 576 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV6에 삽입되는 경우 (AAV6.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 571 내지 612 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV7에 삽입되는 경우 (AAV7.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV7 캡시드 단백질의 아미노산 572 내지 613 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV7 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV8에 삽입되는 경우 (AAV8.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 573 내지 614 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV9에 삽입되는 경우 (AAV9.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV9 캡시드 단백질의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV9 캡시드 단백질의 아미노산 588과 589 사이에 삽입된다. 7m8이 rAAV10에 삽입되는 경우 (AAV10.7m8로도 지칭됨), 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)는 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 573 내지 614 내의 GH 루프 내로, 예를 들어 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된다.
개관
안구 신생혈관 질환, 예컨대 wAMD에 대한 현행 요법 (예를 들어, 아플리베르셉트)은 대략 4-8주마다 평생 IVT 투여를 필요로 한다. 이는 일부 환자에서 염증, 감염 및 다른 부작용의 위험을 증가시킬 수 있다. 추가로, 현행 요법은, 특히 wAMD에 의해 가장 영향을 받는 고령 환자에서, 요법의 투여를 위한 진료소로의 반복적 및/또는 빈번한 방문으로 인해 준수라는 난제를 야기한다. 투여 빈도의 감소는 시각 상실 및 눈 질환 또는 상태의 악화와 연관된다. IVT 주사 후 표적 망막 세포에 효율적으로 형질도입하는 AAV 벡터의 능력은 치료 유전자를 광수용체, 망막 색소 상피 및 내부 망막 내로 성공적으로 전달하여 다양한 망막 질환을 치료하기 위해 이용되어 왔다. 따라서, 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 rAAV 입자의 투여는 생체내에서 항-VEGF 작용제의 연장 및/또는 지속 방출을 제공할 수 있다.
놀랍게도, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에 눈당 6 x 1011 벡터 게놈 (vg)의 아플리베르셉트를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 저 단위 용량을 투여한 것은 모든 치료된 개체에서 질환의 안정화 및 강건한 해부학적 반응으로 이어졌다 (실시예 1 참조). 추가로, 6 x 1011 vg/눈의 아플리베르셉트를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 저 단위 용량의 투여 후에, 모든 치료된 개체에서 시력이 안정화되었고, 구제 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 IVT 주사)를 필요로 한 개체는 없었다. 더욱이, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에 아플리베르셉트를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여한 것은 예상외로, 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 라니비주맙 또는 베바시주맙의 만성 IVT 주사)에 대해 불응성인 망막내액 및 망막하액을 포함한 증상의 감소 (예를 들어, 해소)를 유발하였다.
따라서, 본 개시내용은 6 x 1011 vg/눈 이하의 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여함으로써 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 추가로, 본 개시내용은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 rAAV 입자의 단일 단위 용량을 투여함으로써 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 방법을 제공한다. 본원에 개시된 방법은 장기간 효능을 제공하면서 반복된 IVT 주사에 대한 필요를 감소시키거나 제거함으로써 비-준수 및 비-고수 문제를 해결한다. 추가로, 본원에 제공된 방법은 다중 IVT 주사와 연관된 부작용을 감소시킨다.
치료 방법
개체의 눈에 재조합 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는, 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
또한, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하는, 상기 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 방법이 본원에 제공된다.
일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 습성 연령-관련 황반 변성 (wAMD), 망막 신생혈관화, 맥락막 신생혈관화 당뇨병성 망막병증, 증식성 당뇨병성 망막병증, 망막 정맥 폐쇄, 중심 망막 정맥 폐쇄, 분지 망막 정맥 폐쇄, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막 허혈, 허혈성 망막병증, 당뇨병성 망막 부종 또는 그의 임의의 조합이다.
일부 실시양태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 마지막 8주, 약 마지막 9주, 약 마지막 10주, 약 마지막 11주, 약 마지막 12주, 약 마지막 13주, 약 마지막 14주, 약 마지막 15주 또는 약 마지막 16주 내에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 안구 신생혈관 질환에 대한 적어도 1회의 선행 치료 (예를 들어, 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 초과의 치료)를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 나타냈다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체의 눈에서의 망막액은 망막내액 (IRF) 및/또는 망막하액 (SRF)이다. 일부 실시양태에서, 개체의 눈에서의 망막액의 양 또는 존재는 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료에 대해 불응성이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 단위 용량은 벡터 게놈의 수 (vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수 (vg) (vg/눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 2 x 1011 또는 약 6 x 1010 vg/눈이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안 또는 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이고, 반대쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이고, 반대쪽 눈은 우안이다.
일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 (예를 들어, 약 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일) 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 거의 동일하거나 (예를 들어, 1% 미만 더 높거나 더 낮거나, 5% 미만 더 높거나 더 낮거나, 10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음) 또는 더 낮다 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90% 더 낮음).
일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 (예를 들어, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년 또는 그 초과) 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높다 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많음).
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 서열식별번호: 35의 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00001
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및 b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.99% 또는 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 100% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 코딩하는 코돈-최적화된 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편의 cDNA 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편의 코돈-최적화된 cDNA 서열을 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 36의 핵산 서열을 포함하는 핵산을 포함한다.
일부 실시양태에서, 핵산은 (a) CMV 서열을 포함하는 제1 인핸서 영역; (b) CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 TPL 서열 및 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (e) HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, CMV 서열을 포함하는 인핸서 영역은 서열식별번호: 22의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역은 서열식별번호: 23의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, TPL 서열은 서열식별번호: 24의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, eMLP 서열은 서열식별번호: 25의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역은 서열식별번호: 26의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, HGH 폴리아데닐화 부위는 서열식별번호: 27의 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 서열식별번호: 13의 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00002
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 하기 아미노산 서열 중 어느 것을 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다: LALGETTRPA (서열식별번호: 1); LANETITRPA (서열식별번호: 2), LAKAGQANNA (서열식별번호: 3), LAKDPKTTNA (서열식별번호: 4), KDTDTTR (서열식별번호: 5), RAGGSVG (서열식별번호: 6), AVDTTKF (서열식별번호: 7), STGKVPN (서열식별번호: 8), LAKDTDTTRA (서열식별번호: 9), LARAGGSVGA (서열식별번호: 10), LAAVDTTKFA (서열식별번호: 11), LASTGKVPNA (서열식별번호: 12), LGETTRP (서열식별번호: 14), NETITRP (서열식별번호: 15), KAGQANN (서열식별번호: 16), KDPKTTN (서열식별번호: 17), KDTDTTR (서열식별번호: 18), RAGGSVG (서열식별번호: 19), AVDTTKF (서열식별번호: 20) 및 STGKVPN (서열식별번호: 21). 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 하기 아미노산 서열 중 어느 것을 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다: LALGETTRPA (서열식별번호: 1); LANETITRPA (서열식별번호: 2), LAKAGQANNA (서열식별번호: 3), LAKDPKTTNA (서열식별번호: 4), KDTDTTR (서열식별번호: 5), RAGGSVG (서열식별번호: 6), AVDTTKF (서열식별번호: 7), STGKVPN (서열식별번호: 8), LAKDTDTTRA (서열식별번호: 9), LARAGGSVGA (서열식별번호: 10), LAAVDTTKFA (서열식별번호: 11), LASTGKVPNA (서열식별번호: 12), LGETTRP (서열식별번호: 14), NETITRP (서열식별번호: 15), KAGQANN (서열식별번호: 16), KDPKTTN (서열식별번호: 17), KDTDTTR (서열식별번호: 18), RAGGSVG (서열식별번호: 19), AVDTTKF (서열식별번호: 20) 및 STGKVPN (서열식별번호: 21).
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 (IVT) 주사, 안내 투여 또는 망막내 주사에 의한 것이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 (IVT) 주사에 의한 것이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 1종 이상의 삼투 또는 이온 강도 작용제, 1종 이상의 완충제, 1종 이상의 계면활성제 및 1종 이상의 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서, 삼투 또는 이온 강도 작용제는 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 완충제는 일염기성 인산나트륨 및/또는 이염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴록사머 188이다. 일부 실시양태에서, 용매는 물이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 염화나트륨, 인산나트륨 및 계면활성제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 1x1010 vg/mL 내지 약 1x1013 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨 (예를 들어, 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM 또는 약 200 mM 중 어느 것)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨 (예를 들어, 약 1mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 (예를 들어, 약 1mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188 (예를 들어, 약 0.0005% (w/v), 0.0006% (w/v), 0.0007% (w/v), 0.0008% (w/v), 0.0009% (w/v), 0.001% (w/v), 0.002% (w/v), 0.003% (w/v), 0.004% (w/v) 또는 약 0.005% (w/v) 중 어느 것)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5 (예를 들어, 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5 중 어느 것)의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 25 μL 내지 약 250 μL (예를 들어, 약 25 μL, 약 30 μL, 약 40 μL, 약 50 μL, 약 60 μL, 약 70 μL, 약 80 μL, 약 90 μL, 약 100 μL, 약 110 μL, 약 120 μL, 약 130 μL, 약 140 μL, 약 150 μL, 약 160 μL, 약 170 μL, 약 180 μL, 약 190 μL, 약 200 μL, 약 210 μL, 약 220 μL, 약 230 μL, 약 240 μL 또는 약 250 μL 중 어느 것)의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자의 농도는 개체의 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량의 부피가 약 25 μL 내지 약 250 μL가 되도록 조정된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL의 부피를 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료 (예를 들어 점안제), 안구주위 스테로이드 치료 (예를 들어 테논낭하, 결막하), 유리체내 스테로이드 치료 또는 맥락막상 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료, 메드리손 치료, 로테프레드놀 치료, 프레드니솔론 치료, 플루오시놀론 치료, 트리암시놀론 치료, 리멕솔론 치료, 덱사메타손 치료, 플루오로메톨론 치료, 플루오시놀론 치료, 리멕솔론 치료 또는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료 (예를 들어, 디플루프레드네이트)이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료 (예를 들어, 디플루프레드네이트)는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 4주, 약 6주 또는 약 8주 동안의 매일 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 약 제1주에 안과용 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 안과용 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 안과용 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 안과용 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.4%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 디플루프레드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트 0.05%의 용량은 안과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서, 한 방울은 약 50 μl (예를 들어, 약 25 μl 내지 약 50 μl, 약 50 μl 내지 약 100 μl)이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료 (예를 들어, 디플루프레드네이트)이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료 (예를 들어, 디플루프레드네이트)는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 4주, 약 6주 또는 약 8주 동안의 매일 국소 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 제1주에 국소 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 1 μg 내지 약 3 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 2.5 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함한다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.4%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드는 디플루프레드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트 0.05%의 용량은 안과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서, 한 방울은 약 50 μl (예를 들어, 약 25 μl 내지 약 50 μl, 약 50 μl 내지 약 100 μl)이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다.
일부 실시양태에서, 개체의 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후에 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 100% 중 어느 것 초과만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 개체의 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후에, rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 개체의 눈에서의 망막액 수준과 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90% 또는 약 100% 중 어느 것 초과만큼 감소된다. 일부 실시양태에서, 개체의 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후에, rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 개체의 눈에서의 망막액 수준과 비교하여 약 100%만큼 감소된다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 수준을 모니터링하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 약 1일, 약 3일, 약 8일, 약 2주, 약 4주, 약 6주, 약 8주, 약 12주, 약 16주, 약 20주, 약 24주, 약 28주, 약 32주, 약 36주, 약 40주, 약 44주, 약 48주, 약 52주, 약 56주, 약 60주, 약 64주, 약 68주, 약 72주, 약 76주, 약 80주, 약 84주, 약 88주, 약 92주, 약 96주, 약 100주, 약 104주 또는 그 초과 중 어느 것 후에 처음 관찰된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 4주, 적어도 6주, 적어도 8주, 적어도 12주, 적어도 16주, 적어도 20주, 적어도 24주, 적어도 28주, 적어도 32주, 적어도 36주, 적어도 40주, 적어도 44주, 적어도 48주, 적어도 52주, 적어도 56주, 적어도 60주, 적어도 64주, 적어도 68주, 적어도 72주, 적어도 76주, 적어도 80주, 적어도 84주, 적어도 88주, 적어도 92주, 적어도 96주, 적어도 100주, 적어도 104주 또는 그 초과 동안 계속되거나 유지된다.
일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 광 간섭 단층촬영 (OCT), 스펙트럼 도메인 OCT (SD-OCT), OCT 혈관조영, 플루오레세인 혈관조영에 의해 또는 직접 망막 관찰에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 광 간섭 단층촬영 (OCT)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 스펙트럼 도메인 OCT (SD-OCT)에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 OCT 혈관조영에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 플루오레세인 혈관조영에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 눈에서의 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 감소는 직접 망막 관찰에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 (예를 들어, 망막하액 (SRF) 및/또는 망막내액 (IRF))의 수준과 비교한 망막액 (예를 들어, SRF 및/또는 IRF)의 수준에 기초하여 평가된다 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같음). 일부 실시양태에서, 망막액은 망막하액 (SRF) 또는 망막내액 (IRF)이다. 일부 실시양태에서, 망막액은 망막하액 (SRF)이다. 일부 실시양태에서, 망막액은 망막내액 (IRF)이다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 (예를 들어, IRF 및/또는 SRF)의 수준과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 망막액 (예를 들어, IRF 및/또는 SRF)의 감소가 관찰되는 경우에 (예를 들어, 상기 기재된 바와 같음) 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 유지 또는 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 망막 두께는 중심 서브필드 두께 (CST) 또는 중심 망막 두께 (CRT)이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 99% 또는 약 100% 중 어느 것 초과의 망막 두께의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 망막 두께 (예를 들어, CST 또는 CRT)는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 약 10 μm 내지 약 100 μm (예를 들어, 약 10 μm, 약 15 μm, 약 20 μm, 약 25 μm, 약 30 μm, 약 35 μm, 약 40 μm, 약 45 μm, 약 50 μm, 약 55 μm, 약 60 μm, 약 65 μm, 약 70 μm, 약 75 μm, 약 80 μm, 약 85 μm, 약 90 μm, 약 95 μm, 약 100 μm 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많음)의 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 99% 또는 약 100% 중 어느 것 초과의 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 적어도 약 10%의 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 약 15% 이상의 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 감소를 유발한다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 유지 또는 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45% 또는 약 50% 중 어느 것 초과의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10%의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 황반 부피는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10%의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 약 15% 이상의 황반 부피의 감소를 유발한다. 일부 실시양태에서, 황반 부피는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많은 시력의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 시력은 최대 교정 시력 (BCVA)이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점수로서 표현된다 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047). 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 적어도 15개 ETDRS 문자 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134 (9):1041:1047) (예를 들어, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 30개, 적어도 약 40개, 적어도 약 50개, 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자)의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 5개 ETDRS 문자의 BCVA의 개선을 유발한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 15개 미만의 ETDRS 문자 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047) (예를 들어, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 1개 또는 0개 문자 중 어느 것)를 상실한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 BCVA의 유지를 유발하며, 여기서 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 약 2개 문자를 상실한다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 최대 교정 시력 (BCVA)에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점수로서 표현된다 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047). 일부 실시양태에서, 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 ETDRS 점수에서의 15개 미만의 문자 (예를 들어, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 1개 또는 0개 문자 중 어느 것)를 상실하는 경우에, 개체는 시각 및/또는 시력의 유지를 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 적어도 15개 문자 (예를 들어, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 30개, 적어도 약 40개, 적어도 약 50개, 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자 중 어느 것)를 획득하는 경우에, 개체는 시각 및/또는 시력의 개선을 갖는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 중심 서브필드 두께 (CST) 또는 중심 망막 두께 (CRT)에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, CST 또는 CRT는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 CST 또는 CRT가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 감소되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 CST 또는 CRT가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 유지되는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 황반 부피에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 황반 부피는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 감소되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 유지되는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)) 및 황반 부피에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, CST 및 황반 부피는 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 CST 및 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 감소되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 SD-OCT에 의해 평가된 CST 및 황반 부피가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 유지되는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체가 필요로 하는 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)의 횟수에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 9주마다, 10주마다 또는 그 초과 중 어느 것에서 1회 미만의 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)를 필요로 하는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 적어도 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 적어도 10주, 적어도 15주, 적어도 20주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 80주, 적어도 90주, 적어도 100주, 적어도 110주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 어떠한 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)도 필요로 하지 않는 경우에 결정된다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 수준과 비교한 망막액 수준에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 수준과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 망막액의 감소가 관찰되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 색소 상피 박리 (PED)와 비교한 PED의 해소에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 PED와 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 PED의 해소가 관찰되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 플루오레세인 혈관조영에 의해 결정된 맥락막 신생혈관화 (CNV) 병변 성장에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 100% 중 어느 것 초과만큼) 수축하는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후에 성장하지 않는 (예를 들어, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 약 5%, 약 6%, 약 7%, 약 8%, 약 9%, 약 10%, 약 15% 또는 약 20% 중 어느 것 미만으로 성장하는) 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법 (예를 들어, SD-OCT, OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안저 촬영 등)에 기초한 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색의 개선이 관찰되는 경우에 결정된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체에서의 안구 신생혈관 질환의 치료는 안과 검사, 안내압 (예를 들어, 골드만(Goldmann) 압평 안압측정계 또는 토노-펜(Tono-pen)을 사용함), 간접 검안경검사, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 및 부속기의 검사, 안검 및/또는 동공 반응성, 안검하수, 비정상적 동공 형상, 불균등 동공, 광에 대한 비정상적 반응, 구심신경 동공 결손, 슬릿-램프 검사 (안검, 결막, 각막, 수정체, 홍채 및 전방에 대한 것 포함), 유리체, 시신경, 주변 망막 및 망막 혈관계의 후안부 이상, SD-OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안저 촬영 (망막, 시신경 유두 및/또는 황반의 영상 포함), 방수 샘플링, 유리체액 샘플링, OCT-혈관조영 (OCT-A), 굴절 및/또는 시력 (BCVA)에 기초하여 평가된다. 일부 실시양태에서, SD-OCT는 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 또는 중심 서브필드 두께), 황반 부피 및/또는 유체 (예를 들어, 망막하액 또는 망막내액)의 존재를 평가하기 위해 수행된다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 wAMD이다.
rAAV 입자의 단위 용량은 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여될 수 있다. 예를 들어, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 안내로 또는 유리체내 주사에 의해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 안내 투여이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 주사 (IVT) 또는 망막하 주사에 의한 것이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 IVT 주사에 의한 것이다. 일부 실시양태에서, 유리체내 주사에 의해 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는데 무균 기술이 사용된다. 일부 실시양태에서, 유리체내 주사에 의해 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는데 프로비돈-아이오딘을 사용한 무균 기술이 사용된다.
일부 실시양태에서, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다.
스테로이드 치료
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 스테로이드 치료와 조합되어 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 코르티코스테로이드 치료이다. 예시적인 코르티코스테로이드는 비제한적으로 알클로메타손, 암시노니드, 베클로메타손, 베타메타손, 부데소니드, 시클레소니드, 클로베타솔, 클로베타손, 클로코르톨론, 클로프레드놀, 코르티바졸, 데플라자코르트, 데옥시코르티코스테론, 데소니드 데스옥시메타손, 덱사메타손, 디플로라손, 디플루코르톨론, 디플루프레드네이트, 플루클로롤론, 플루드로코르티손, 플루드록시코르티드, 플루메타손, 플루니솔리드, 플루오시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루오코르틴, 플루오코르톨론, 플루오로메톨론, 플루페롤론, 플루티카손, 푸프레드니덴, 포르모코르탈, 할시노니드, 할로메타손, 히드로코르티손 아세포네이트, 히드로코르티손 부테프레이트, 히드로코르티손 부티레이트, 로테프레드놀, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세포네이트, 모메타손 푸로에이트, 파라메타손, 프레드니카르베이트, 프레드니손, 프레드니솔론, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코르톨, 트리암시놀론 및 울로베타솔을 포함한다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 국소 스테로이드 치료 (예를 들어 점안제), 안구주위 스테로이드 치료 (예를 들어 테논낭하, 결막하), 유리체내 스테로이드 치료 또는 맥락막상 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료, 메드리손 치료, 로테프레드놀 치료, 프레드니솔론 치료, 플루오시놀론 치료, 트리암시놀론 치료, 리멕솔론 치료, 덱사메타손 치료, 플루오로메톨론 치료, 플루오시놀론 치료, 리멕솔론 치료 또는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료 및 국소 스테로이드 치료를 포함한다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료는 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료 및 국소 스테로이드 치료는 동시에 (예를 들어, 동일한 날에) 투여된다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료 및 국소 스테로이드 치료는 개별적으로 (예를 들어, 상이한 날에) 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 전신 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 전신 스테로이드 치료는 경구 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 경구 프레드니손 치료이다. 일부 실시양태에서, 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 개시된다. 일부 실시양태에서, 초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 약 7일, 약 6일, 약 5일, 약 4일, 약 3일, 약 2일, 약 1일 또는 0일 중 어느 것 전 1일에 약 40 mg, 약 45 mg, 약 50 mg, 약 55 mg, 약 60 mg, 약 65 mg 또는 약 70 mg의 프레드니손 중 어느 것의 용량으로 투여되고, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 약 7일, 약 8일, 약 9일 또는 약 10일 또는 그 초과 중 어느 것 동안 계속된다. 일부 실시양태에서, 초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV의 단위 용량을 투여하기 약 3일 전 1일에 약 60 mg의 프레드니손의 용량으로 투여되고, 약 3일 동안 계속된다.
일부 실시양태에서, 초기 경구 프레드니손 치료 후에 경구 프레드니손 치료 용량 점감이 이어진다. 일부 실시양태에서, 경구 프레드니손 치료 용량 점감은 총 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일 또는 약 7일 중 어느 것 동안 1일에 약 20 mg, 약 25 mg, 약 30 mg, 약 35 mg, 약 40 mg, 약 45 mg 또는 약 50 mg의 프레드니손 중 어느 것의 용량으로 투여되고, 이어서 약 1일, 약 2일, 약 3일 또는 약 4일 중 어느 것 동안 1일에 약 10 mg, 약 15 mg, 약 20 mg 또는 약 25 mg의 프레드니손의 용량으로 투여되고, 이어서 약 1일, 약 2일, 약 3일 또는 약 4일 동안 1일에 약 5 mg, 약 10 mg 또는 약 15 mg의 프레드니손의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 프레드니손 용량 점감은 3일 동안 1일에 약 40 mg의 프레드니손의 용량, 이어서 2일 동안 1일에 약 20 mg의 프레드니손의 용량, 이어서 2일 동안 1일에 약 10 mg의 프레드니손의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 초기 경구 프레드니손 치료는 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 3일 전에 총 6일 동안 1일에 60 mg의 프레드니손 용량, 이어서 총 3일 동안 1일에 40 mg의 프레드니손 용량, 이어서 2일 동안 1일에 20 mg의 프레드니손 용량, 이어서 2일 동안 1일에 10 mg의 프레드니손 용량으로 개시된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 디플루프레드네이트 치료이다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 동안 및 투여 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및 투여 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, 스테로이드 치료는 안과용 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 최대 4주, 최대 6주 또는 최대 8주 동안의 매일 스테로이드 치료이다. 일부 실시양태에서, 국소 스테로이드 치료는 약 제1주에 국소 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드 치료는 치료 의사의 판단에 따라 연장된다.
일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005% 내지 약 0.5% 디플루프레드네이트이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 약 0.005%, 약 0.006%, 약 0.007%, 약 0.008%, 약 0.009%, 약 0.01%, 약 0.02%, 약 0.03%, 약 0.4%, 약 0.05%, 약 0.06%, 약 0.07%, 약 0.08%, 약 0.09% 또는 약 0.1% 디플루프레드네이트 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 안과용 스테로이드는 디플루프레드네이트 0.05%이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트 0.05%의 용량은 안과용 용액 한 방울이다. 일부 실시양태에서, 한 방울은 약 50 μl (예를 들어, 약 25 μl 내지 약 50 μl, 약 50 μl 내지 약 100 μl)이다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 1 μg 내지 약 5 μg 또는 약 2 μg 내지 약 3 μg 또는 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 디플루프레드네이트의 용량은 약 2.5 μg 디플루프레드네이트를 포함한다.
트랜스진을 표적 세포에 전달하기 위한 벡터
일부 실시양태에서, 재조합 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 입자는 대상체 (예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류)에서 복제-결손이도록 변경된 아데노-연관 바이러스 (AAV)로부터 유래된 재조합 바이러스 벡터를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아데노-연관 바이러스 (AAV)는 재조합 AAV (rAAV)이다.
AAV 또는 rAAV는 작은 비-외피보유 단일-가닥 DNA 바이러스이다. rAAV는 비-병원성 인간 파르보바이러스이고, 복제를 위해 아데노바이러스, 단순 포진 바이러스, 백시니아 바이러스 및 CMV를 포함한 헬퍼 바이러스에 의존성이도록 제조될 수 있다.
야생형 (wt) AAV에 대한 노출은 임의의 인간 병리상태를 유발하는 것과 연관되지 않거나 유발하는 것으로 공지되어 있지 않고, 일반적 집단에서 통상적이므로, AAV 또는 rAAV는 유전자 요법에 적합한 전달 시스템이다. 항-VEGF 작용제, 예를 들어 아플리베르셉트의 전달을 위한 유전자 요법에 사용된 AAV 및 rAAV는 임의의 혈청형의 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 AAV1, AAV2, AAV2.5, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, rh10, AAV-DJ 및 그의 임의의 하이브리드 또는 키메라 AAV를 포함한 임의의 적합한 AAV 혈청형의 사용을 제공한다. 일부 실시양태에서, 사용된 혈청형은 바이러스의 향성 또는 관심 표적 세포의 감염성에 기초한다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제 트랜스진 (예를 들어, 아플리베르셉트 트랜스진)과 함께 사용하기 위한 가장 최적의 혈청형의 선택을 가능하게 하는 여러 AAV 벡터가 생성될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 방법은 위형화 AAV의 사용을 제공한다. 위형화 AAV 입자는 하나의 AAV 혈청형의 AAV 게놈 역전된 말단 반복부 (ITR)가 또 다른 AAV 혈청형의 AAV 캡시드에 의해 캡시드화된 것을 포함한다. 전형적으로, 위형화 AAV는 "AAV#/#"로 지정되며, 여기서 첫번째 "#"은 AAV ITR 혈청형을 나타내고, 두번째 "#"은 캡시드 혈청형을 나타낸다. 예를 들어, AAV2 ITR 및 AAV1 캡시드를 포함하는 AAV 입자는 "AAV2/1"로 지정될 것이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 핵산, 예를 들어 이종 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산은 트랜스진, 예를 들어 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 코딩된 트랜스진, 예를 들어 항-VEGF 작용제는 핵산의 전사를 개시하는 프로모터의 전사 제어 하에 있다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 "편재성" 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 "강한" 또는 구성적으로 활성인 프로모터, 예를 들어 시토메갈로바이러스 (CMV) 프로모터, 신장 인자 1 알파 (EFla) 프로모터, 글리세르알데히드 3-포스페이트 데히드로게나제 (GAPDH) 프로모터 또는 코넥신36 (또는 "Cx36") 프로모터이다. 일부 실시양태에서, 프로모터는 특이적 조직 또는 세포, 예컨대 망막 세포에서 활성화되어 비-표적화 세포에 대한 잠재적 독성 또는 바람직하지 않은 효과를 감소시키는 조직-특이적 프로모터이다. 일부 측면에서, 항-VEGF 작용제 트랜스진 (예를 들어, 아플리베르셉트 트랜스진)과 함께 사용하기 위한 가장 최적의 혈청형 및 프로모터의 선택을 가능하게 하는 여러 AAV 벡터가 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산에 AAV 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서, 핵산에 AAV2 ITR가 플랭킹된다.
일부 실시양태에서, AAV 벡터는 표적 세포 (예를 들어, 망막 세포)에서의 트랜스진 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 증진된 발현을 위한 폴리뉴클레오티드 카세트를 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트는 5'에서 3' 순서로 (a) CMV 서열 (서열식별번호: 22)을 포함하는 제1 인핸서 영역; (b) CMV 서열 (서열식별번호: 23)을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 TPL 및 eMLP 서열 (각각 서열식별번호: 24 및 서열식별번호: 25)을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 펩티드 또는 폴리펩티드 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)를 코딩하는 코딩 서열; (e) 전체 EES 서열 (서열식별번호: 26)을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (f) HGH 폴리아데닐화 부위 (서열식별번호: 27)를 포함한다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트는 서열식별번호: 28-32 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열로부터 선택된 1개 이상의 서열을 포함한다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트의 5' 아암은 서열식별번호: 33 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 그로 이루어진다. 이들 중 특정 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드 카세트의 3' 아암은 서열식별번호: 34 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하거나 그로 이루어진다. 서열식별번호: 22-34의 핵산 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00003
Figure pct00004
표적 세포 (예컨대 망막 세포)에서 트랜스진 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 트랜스진)의 증진된 발현을 위한 추가의 폴리뉴클레오티드 카세트는 WO2018/170473에 개시되어 있으며, 표적 세포에서 트랜스진의 증진된 발현을 위한 폴리뉴클레오티드 카세트에 관한 그의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 표적 세포, 예를 들어 망막 세포의 증가된 감염성을 갖는 변이체 캡시드 단백질을 포함하고, 개체에서 망막 세포의 형질도입을 증가시키거나 또는 망막 세포로의 유전자 전달의 표적화를 증가시키는데 사용된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 AAV 캡시드 단백질의 캡시드 단백질 GH 루프/루프 IV에 아미노산 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형 부위는 AAV 캡시드 단백질의 GH 루프/루프 IV의 용매-접근가능한 부분이다. AAV 캡시드의 GH 루프/루프 IV의 설명에 대해서는, 예를 들어 문헌 [van Vliet et al. (2006) Mol. Ther. 14:809; Padron et al. (2005) J. Virol. 79:5047; 및 Shen et al. (2007) Mol. Ther. 15:1955]을 참조한다. 7m8 변이체를 포함한 여러 AAV 캡시드 변이체가 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질에 비해 캡시드 단백질의 GH 루프에 5개 아미노산 내지 11개 아미노산, 예를 들어 7개 아미노산 서열의 삽입을 포함하는 변이체 AAV 캡시드 단백질을 포함하고, 여기서 변이체 캡시드 단백질은 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자에 의한 망막 세포의 감염성과 비교하여 망막 세포의 증가된 감염성을 부여한다. 일부 실시양태에서, 하기 아미노산 서열 중 어느 하나가 캡시드 단백질의 GH 루프에 삽입될 수 있다: LALGETTRPA (서열식별번호: 1); LANETITRPA (서열식별번호: 2), LAKAGQANNA (서열식별번호: 3), LAKDPKTTNA (서열식별번호: 4), KDTDTTR (서열식별번호: 5), RAGGSVG (서열식별번호: 6), AVDTTKF (서열식별번호: 7), STGKVPN (서열식별번호: 8), LAKDTDTTRA (서열식별번호: 9), LARAGGSVGA (서열식별번호: 10), LAAVDTTKFA (서열식별번호: 11) 및 LASTGKVPNA (서열식별번호: 12), LGETTRP (서열식별번호: 14), NETITRP (서열식별번호: 15), KAGQANN (서열식별번호: 16), KDPKTTN (서열식별번호: 17), KDTDTTR (서열식별번호: 18), RAGGSVG (서열식별번호: 19), AVDTTKF (서열식별번호: 20) 및 STGKVPN (서열식별번호: 21). 일부 실시양태에서, 서열식별번호: 1-12 및 14-21에 제시된 아미노산 서열 중 어느 하나가 rAAV 중 VP1 캡시드 단백질의 용매-노출된 GH 루프에 삽입된다. 예를 들어, IVT 주사 후 관심 핵산의 망막 세포로의 형질도입을 용이하게 하기 위해 캡시드 단백질의 GH 루프 내로 삽입될 수 있는 아미노산 서열에 관한 추가의 세부사항은 WO2012145601, US9587282, US10202657 및 US10214785에 제공되어 있으며, 캡시드 단백질의 GH 루프 내로 삽입될 수 있는 아미노산 서열에 관한 그의 내용은 본원에 참조로 포함된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 하기 위치: AAV2 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이; AAV1 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV5 캡시드 단백질의 아미노산 575와 576 사이; AAV6 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV7 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이; AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 590과 591 사이; AAV9 캡시드 단백질의 아미노산 588과 589 사이; 또는 AAV10 캡시드 단백질의 아미노산 589와 590 사이에 삽입된 하기 아미노산 서열: LALGETTRPA (서열식별번호: 1); LANETITRPA (서열식별번호: 2), LAKAGQANNA (서열식별번호: 3), LAKDPKTTNA (서열식별번호: 4), KDTDTTR (서열식별번호: 5), RAGGSVG (서열식별번호: 6), AVDTTKF (서열식별번호: 7), STGKVPN (서열식별번호: 8), LAKDTDTTRA (서열식별번호: 9), LARAGGSVGA (서열식별번호: 10), LAAVDTTKFA (서열식별번호: 11) 및 LASTGKVPNA (서열식별번호: 12), LGETTRP (서열식별번호: 14), NETITRP (서열식별번호: 15), KAGQANN (서열식별번호: 16), KDPKTTN (서열식별번호: 17), KDTDTTR (서열식별번호: 18), RAGGSVG (서열식별번호: 19), AVDTTKF (서열식별번호: 20) 및 STGKVPN (서열식별번호: 21) 중 어느 하나를 포함하는 AAV 캡시드 단백질, 예를 들어 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2로부터의 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함한다. AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 AAV2로부터의 7m8 변이체 캡시드 단백질의 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00005
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 캡시드 단백질 VP1을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 캡시드 단백질 VP2를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 캡시드 단백질 VP3을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 캡시드 단백질 VP1, VP2 및 VP3을 포함하며, 여기서 각각의 VP1, VP2 및 VP3은 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 캡시드 단백질 VP1을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 캡시드 단백질 VP2를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 캡시드 단백질 VP3을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 캡시드 단백질 VP1, VP2 및 VP3을 포함하며, 여기서 각각의 VP1, VP2 및 VP3은 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기 넘버링은 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응한다.
일부 실시양태에서, rAAV 바이러스를 생성하는데 사용된 재조합 바이러스 및/또는 플라스미드는 다른 전사 또는 조절 요소, 예컨대 폴리 A (폴리아데닐화) 서열, 비번역 영역 (UTR), 3' UTR 또는 종결 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 1개 초과의 유전자는 내부 리보솜 진입 부위 (IRES) 또는 2개 이상의 단백질의 공동-발현을 가능하게 하거나 다유전자 또는 폴리시스트론 mRNA를 생성하는 유사한 요소를 사용하여 벡터 또는 플라스미드로부터 발현된다.
일부 실시양태에서, rAAV 및/또는 rAAV를 생성하는데 사용된 플라스미드는 하기 핵산 요소 중 1종 이상을 포함한다: 제1 ITR 서열; 프로모터 서열; 인트론 서열; 제1 UTR 서열; 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 이종 핵산; 제2 UTR 서열; 폴리A 서열; 및 제2 ITR 서열. 일부 실시양태에서, 링커 서열(들)은 핵산 요소들 중 2종 이상 사이에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 이종 핵산은 아플리베르셉트 (또는 그의 기능적 단편 또는 기능적 변이체)를 코딩하는 치료 폴리펩티드를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 벡터는 표적화 벡터, 특히 특이적 세포, 예컨대 망막 세포 (예를 들어, 광수용체, 망막 신경절 세포, 뮐러 세포, 양극성 세포, 무축삭 세포, 수평 세포 또는 망막 색소 상피 세포)의 보다 높은 감염성을 나타내는 표적화 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)이다. 본 개시내용에 사용하기 위한 바이러스 벡터는 개체에서 낮은 독성 및/또는 낮은 면역원성을 나타내고 개체, 예를 들어 인간에서 치료 유효량의 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 발현하는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어 본원 다른 곳에 기재된 제약 조성물의 제조를 위한 재조합 바이러스 (예를 들어, rAAV)의 생화학적 정제에 관련 기술분야에 공지된 임의의 적합한 방법이 사용될 수 있다. 재조합 AAV 바이러스는 세포로부터 또는 세포를 포함하는 배양 배지로부터 직접 수거될 수 있다. 바이러스는 다양한 생화학적 수단, 예컨대 겔 여과, 여과, 크로마토그래피, 친화도 정제, 구배 초원심분리 또는 크기 배제 방법을 사용하여 정제될 수 있다. 일부 실시양태에서, 바이러스는 동결건조된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 7m8 변이체 캡시드 단백질, 예를 들어 rAAV2.7m8 및 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 기능적 변이체)를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자 (예를 들어, 7m8 변이체)는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 망막 세포 감염성의 증가를 갖는다. 일부 실시양태에서, 망막 세포의 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 5% 내지 100%, 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15%, 5% 내지 10% 중 어느 것의 증가이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 1배, 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4배, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배 또는 적어도 2배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 감염성의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어도 10배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 적어도 30배, 적어도 35배, 적어도 40배, 적어도 45배, 적어도 50배, 적어도 55배, 적어도 60배, 적어도 65배, 적어도 70배, 적어도 75배, 적어도 80배, 적어도 85배, 적어도 90배 또는 적어도 100배 중 어느 것이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 10배 내지 100배, 10배 내지 95배, 10배 내지 90배, 10배 내지 85배, 10배 내지 80배, 10배 내지 75배, 10배 내지 70배, 10배 내지 65배, 10배 내지 60배, 10배 내지 55배, 10배 내지 50배, 10배 내지 45배, 10배 내지 40배, 10배 내지 35배, 10배 내지 30배, 10배 내지 25배, 10배 내지 20배 또는 10배 내지 15배이다.
일부 실시양태에서, 망막 세포 감염성의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 2배 내지 20배, 2배 내지 19배, 2배 내지 18배, 2배 내지 17배, 2배 내지 16배, 2배 내지 15배, 2배 내지 14배, 2배 내지 13배, 2배 내지 12배, 2배 내지 11배, 2배 내지 10배, 2배 내지 9배, 2배 내지 8배, 2배 내지 7배, 2배 내지 6배, 2배 내지 5배, 2배 내지 4배 또는 2배 내지 3배이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 캡시드 단백질의 아미노산 변형은 대상체의 눈에서 내경계막 (ILM)을 횡단하는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자의 능력과 비교하여, 개체, 예를 들어 인간의 눈에서 ILM을 횡단하는 능력의 증가를 부여할 수 있다. 일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 증가이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질과 비교하여 5% 내지 100%, 5% 내지 95%, 5% 내지 90%, 5% 내지 85%, 5% 내지 80%, 5% 내지 75%, 5% 내지 70%, 5% 내지 65%, 5% 내지 60%, 5% 내지 55%, 5% 내지 50%, 5% 내지 45%, 5% 내지 40%, 5% 내지 35%, 5% 내지 30%, 5% 내지 25%, 5% 내지 20%, 5% 내지 15% 또는 5% 내지 10%의 증가이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 1배, 적어도 1.1배, 적어도 1.2배, 적어도 1.3배, 적어도 1.4배, 적어도 1.5배, 적어도 1.6배, 적어도 1.7배, 적어도 1.8배, 적어도 1.9배 또는 적어도 2배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 2배, 적어도 3배, 적어도 4배, 적어도 5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어도 10배 중 어느 것이다. 일부 실시양태에서, ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 적어도 15배, 적어도 20배, 적어도 25배, 적어도 30배, 적어도 35배, 적어도 40배, 적어도 45배, 적어도 50배, 적어도 55배, 적어도 60배, 적어도 65배, 적어도 70배, 적어도 75배, 적어도 80배, 적어도 85배, 적어도 90배 또는 적어도 100배 중 어느 것이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 10배 내지 100배, 10배 내지 95배, 10배 내지 90배, 10배 내지 85배, 10배 내지 80배, 10배 내지 75배, 10배 내지 70배, 10배 내지 65배, 10배 내지 60배, 10배 내지 55배, 10배 내지 50배, 10배 내지 45배, 10배 내지 40배, 10배 내지 35배, 10배 내지 30배, 10배 내지 25배, 10배 내지 20배 또는 10배 내지 15배이다.
일부 실시양태에서, rAAV 변이체, 예를 들어 rAAV2.7m8의 ILM 횡단 능력의 증가는 상응하는 모 또는 비변형 AAV 캡시드 단백질을 포함하는 AAV 입자와 비교하여 2배 내지 20배, 2배 내지 19배, 2배 내지 18배, 2배 내지 17배, 2배 내지 16배, 2배 내지 15배, 2배 내지 14배, 2배 내지 13배, 2배 내지 12배, 2배 내지 11배, 2배 내지 10배, 2배 내지 9배, 2배 내지 8배, 2배 내지 7배, 2배 내지 6배, 2배 내지 5배, 2배 내지 4배 또는 2배 내지 3배이다.
일부 실시양태에서, 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산을 포함하는 rAAV.7m8이 유전자 요법에 사용된다. 일부 실시양태에서, AAV2 또는 rAAV2는 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열을 유리체내 또는 망막하 주사를 통해 대상체의 눈 또는 망막 세포 내로 전달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, AAV2 또는 rAAV2는 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열을 유리체내 주사를 통해 대상체의 눈 또는 망막 세포 내로 전달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, rAAV2.7m8은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)의 핵산 서열을 대상체의 망막 세포 내로 전달하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 이종 핵산 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산)은 표적 세포 게놈 (예를 들어, 망막 세포 게놈) 내로 통합되어, 표적 세포에서, 예를 들어 항-VEGF 작용제 (예컨대 아플리베르셉트)의 장기간 발현을 유발한다. 일부 실시양태에서, 바이러스 벡터는 이종 핵산 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산)을 포함하는 플라스미드 또는 다른 염색체외 유전 요소를 표적 세포 (예를 들어, 망막 세포)에 전달한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99% 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 서열식별번호: 35의 서열은 하기에 제공된다:
Figure pct00006
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 서열식별번호: 36의 핵산 서열에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.9% 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 갖는 핵산을 포함하고, 여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된다. 서열식별번호: 36의 서열은 도 5에 제공된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트의 핵산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36)에 대해 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 81%, 적어도 약 82%, 적어도 약 83%, 적어도 약 84%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 적어도 약 99.9% 또는 적어도 약 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 갖는 핵산을 포함하고, 여기서 핵산에 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 그의 아미노산 서열로부터 유래된다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 대상체에서 그의 발현을 개선시키기 위해 코돈 최적화된다.
일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 영장류 또는 인간 대상체에서의 발현을 위해 코돈-최적화된다. 아플리베르셉트 아미노산 서열에 상응하는 합성 유전자의 구축은 문헌, 예를 들어 [Kanda A, Noda K, Saito W, Ishida S. Aflibercept Traps Galectin-1, an Angiogenic Factor Associated with Diabetic Retinopathy. Scientific Reports 5:17946 (2015)] ("VEGF-TrapR1R2 (아플리베르셉트에 상응함) cDNA를 IDT (아이오와주 코랄빌)가 합성 유전자로서 생성하였다"는 것을 기재함)에 기재되었다. 아플리베르셉트의 이용가능한 아미노산 서열을 고려하면서, 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 본원에 기재된 유전자 요법 또는 rAAV에 사용하기 위한 아플리베르셉트의 cDNA를 생성할 수 있다.
코돈 최적화는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법으로 달성될 수 있다. 코돈 최적화는 천연 서열의 적어도 1개의 코돈 (예를 들어, 약 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 50, 100개 또는 그 초과의 코돈 또는 이보다 많음)을, 천연 아미노산 서열을 유지하면서 숙주 세포에서 보다 빈번하게 사용되거나 또는 가장 빈번하게 사용되는 코돈으로 대체함으로써, 관심 표적 또는 숙주 세포, 예를 들어 인간 망막 세포에서의 유전자의 증진된 발현을 위해 핵산 서열을 변형시키는 과정을 지칭한다. 예를 들어, 하기를 포함한 코돈 용법 표가 용이하게 이용가능하다: www(dot)genscript(dot)com/tools/codon-frequency-table 하의 진스크립트(GenScript) 코돈 용법 빈도 표 도구; www(dot)kazusa(dot)or(dot)jp/codon/ 하의 코돈 용법 데이터베이스; 및 문헌 [Nakamura, Y., et al. "Codon usage tabulated from the international DNA sequence databases: status for the year 2000" Nucl. Acids Res. 28:292 (2000)].
상동성은 기능적 단편, 삽입, 결실, 치환을 포함하는 서열, 위단편, 위유전자, 스플라이스 변이체 또는 인공적으로 최적화된 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는 2개의 서열 사이의 정렬 잔기의 퍼센트 보존을 지칭한다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다.
본원에 사용된 "아플리베르셉트"는 상기 확인된 아플리베르셉트 아미노산 서열 (서열식별번호: 35)에 대해 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과 또는 100% 중 어느 것의 상동성을 갖는 폴리펩티드 또는 단백질 서열 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체 또는 돌연변이체를 지칭한다. 상동성은 기능적 단편, 삽입, 결실, 치환을 포함하는 서열, 위단편, 위유전자, 스플라이스 변이체 또는 인공적으로 최적화된 서열을 포함하나 이에 제한되지는 않는 2개의 서열 사이의 정렬 잔기의 퍼센트 보존을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 아미노산 서열은 서열식별번호: 35의 아플리베르셉트 아미노산 서열에 대해 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100% 중 어느 것 상동이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산 서열은 상기 확인된 아플리베르셉트 아미노산 서열의 상응하는 cDNA 서열과 비교되고, 아플리베르셉트의 핵산 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36) 사이에 적어도 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100% 중 어느 것의 서열 상동성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트는 아플리베르셉트에 대해 (예를 들어, 그의 2차, 3차 및 4차 구조 또는 입체형태의 관점에서) 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100% 중 어느 것 공간적으로 상동이다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트는 표준 관리에 사용된 아플리베르셉트에 대해 (예를 들어, 2차, 3차 및 4차 구조 또는 입체형태에서) 최대 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.9% 또는 100% 중 어느 것 공간적으로 상동이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 캡시드 변이체 (예를 들어, 7m8 변이체)를 포함하는 rAAV에 기초한 유전자 요법에 포함된 바와 같은 아플리베르셉트 유전자 생성물 또는 아플리베르셉트 트랜스진은 상기 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 또는 아플리베르셉트의 상응하는 cDNA 서열 (예를 들어, 서열식별번호: 36과 비교하여 유전자 요법에 사용된 아플리베르셉트 서열의 cDNA) 사이에 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 적어도 100% 중 어느 것의 상동성을 갖는 단백질, 융합 단백질 또는 폴리펩티드를 코딩한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법 및 조성물은 아플리베르셉트의 기능적 단편 또는 그의 변이체 또는 돌연변이체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 아플리베르셉트의 핵산 서열은 그의 생체내 활성, 발현, 안정성 및/또는 용해도를 증진시키도록 변형되거나 또는 코돈 최적화된다.
아플리베르셉트는 글리코실화될 수 있는 115 kDa 융합 단백질이다. 아플리베르셉트는 인간 VEGFR-1 및 VEGFR-2의 세포외 VEGF 수용체 서열에 융합된 IgG 백본을 포함하고, 그의 천연 또는 내인성 수용체보다 더 큰 친화도로 VEGF-A에 결합함으로써 가용성 디코이 수용체와 같이 기능한다. 예를 들어, 문헌 [Stewart MW. Aflibercept (VEGF Trap-eye): the newest anti-VEGF drug. Br. J. Ophthalmol. 2012 Sep;96(9):1157-8]을 참조한다. VEGF에 대한 아플리베르셉트의 고친화도는 천연 또는 내인성 VEGF 수용체의 후속 결합 및 활성화를 방해하거나 파괴한다. 감소된 VEGF 활성은 감소된 혈관신생 및 혈관 투과성으로 이어질 수 있다. 아플리베르셉트에 의한 태반 성장 인자 PIGF 및 VEGF-B의 억제는 또한 비정상적 (예를 들어, 과도한) 혈관신생 및/또는 신생혈관화를 특징으로 하는 안구 질환 또는 장애의 치료에 기여할 수 있다. PIGF는 혈관신생과 연관되었고, 특정 안구 질환 또는 장애, 예컨대 습성 AMD는 상승된 수준의 PIGF와 연관될 수 있다. VEGF-B 과다발현은 혈액-망막 장벽 및 망막 혈관신생의 붕괴와 연관될 수 있다. 따라서, VEGF-A, VEGF-B 및 PIGF의 억제는 모두 아플리베르셉트의 효능에 기여할 수 있다.
트랜스진을 표적 세포에 전달하기 위한 벡터의 제조 방법
일부 실시양태에서, rAAV 입자는 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법을 사용하여 제조된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 Sf9 세포에서 바큘로바이러스 발현 벡터 시스템을 사용하여 제조된다. Sf9 세포는 바큘로바이러스를 사용한 재조합 단백질 생산에 통상적으로 사용되는 곤충 세포 배양 세포주이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며, 여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고, 제2 바큘로바이러스는 항-VEGF 작용제를 코딩한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며, 여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고, 제2 바큘로바이러스는 아플리베르셉트 (예를 들어, 인간 아플리베르셉트) cDNA 발현 카세트를 코딩한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 Sf9 세포에서 2종의 바큘로바이러스를 사용하여 제조되며, 여기서 제1 바큘로바이러스는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고, 제2 바큘로바이러스는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 아플리베르셉트이다.
용량
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안 또는 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 우안이고, 반대쪽 눈은 좌안이다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈은 좌안이고, 반대쪽 눈은 우안이다.
일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 (예를 들어, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주, 적어도 약 1개월, 적어도 약 2개월, 적어도 약 3개월, 적어도 약 4개월, 적어도 약 5개월, 적어도 약 6개월, 적어도 약 7개월, 적어도 약 8개월, 적어도 약 9개월, 적어도 약 10개월, 적어도 약 11개월, 적어도 약 12개월, 적어도 약 1년, 적어도 약 2년, 적어도 약 3년, 적어도 약 4년, 적어도 약 5년 또는 그 초과) 후이다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높다 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많음).
일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 1주, 최대 약 2주, 최대 약 3주 또는 최대 약 4주 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 (예를 들어, 약 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일) 후이다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 (예를 들어, 약 0일, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일, 8일, 9일, 10일, 11일, 12일, 13일 또는 14일) 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 거의 동일하거나 (예를 들어, 1% 미만 더 높거나 더 낮거나, 5% 미만 더 높거나 더 낮거나, 10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음) 또는 더 낮다 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90% 더 낮음). 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 거의 동일하다 (예를 들어, 1% 미만 더 높거나 더 낮거나, 5% 미만 더 높거나 더 낮거나, 10% 미만 더 높거나 더 낮거나 또는 20% 미만 더 높거나 더 낮음). 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후이고, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 낮다 (예를 들어, 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80% 또는 약 90% 더 낮음).
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 벡터 게놈의 수 (vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010, 약 2x1010 내지 약 3x1010, 약 3x1010 내지 약 4x1010, 약 4x1010 내지 약 5x1010, 약 5x1010 내지 약 6x1010, 약 6x1010 내지 약 7x1010, 약 7x1010 내지 약 8x1010, 약 8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5x1011 또는 약 5x1011 내지 약 6x1011 vg의 rAAV 입자 (이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 벡터 게놈 (vg) 내지 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 2x1011 vg, 약 7x1010 vg 내지 약 2x1011 vg, 약 8x1010 vg 내지 약 2x1011 vg, 약 9x1010 vg 내지 약 2x1011 vg, 약 10x1010 vg 내지 약 2x1011 vg 또는 약 1x1011 vg 내지 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg 내지 약 7x1010 vg, 약 7x1010 vg 내지 약 8x1010 vg, 약 8x1010 vg 내지 약 9x1010 vg, 약 9x1010 vg 내지 약 10x1010 vg, 약 10x1010 vg 내지 약 1x1011 vg 또는 약 1x1011 vg 내지 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg, 약 7x1010 vg, 약 8x1010 vg, 약 9x1010 vg, 약 10x1010 vg, 약 1x1011 vg 또는 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg 또는 약 2x1011 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg, 약 2 x 1011 vg 또는 약 6 x 1011 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 2 x 1011 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수 (vg) (vg/눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010, 약 2x1010 내지 약 3x1010, 약 3x1010 내지 약 4x1010, 약 4x1010 내지 약 5x1010, 약 5x1010 내지 약 6x1010, 약 6x1010 내지 약 7x1010, 약 7x1010 내지 약 8x1010, 약 8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5x1011 또는 약 5x1011 내지 약 6x1011 vg/눈의 rAAV 입자 (이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈 또는 약 1x1011 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 7x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 8x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 9x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 10x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 1x1011 vg/눈 또는 약 1x1011 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈, 약 1x1011 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈, 약 2 x 1011 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, E는 지수화에 대한 밑수 10의 약칭이고, xEy는 x 곱하기 밑수 10의 y 거듭제곱/지수를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 벡터 게놈의 수 (vg)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E11 벡터 게놈 (vg) 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1E10 내지 약 2E10, 약 2E10 내지 약 3E10, 약 3E10 내지 약 4E10, 약 4E10 내지 약 5E10, 약 5E10 내지 약 6E10, 약 6E10 내지 약 7E10, 약 7E10 내지 약 8E10, 약 8E10 내지 약 9E10, 약 9E10 내지 약 10E10, 약 1E11 내지 약 2E11, 약 2E11 내지 약 3E11, 약 3E11 내지 약 4E11, 약 4E11 내지 약 5E11 또는 약 5E11 내지 약 6E11 vg의 rAAV 입자 (이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 벡터 게놈 (vg) 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 2E11 vg, 약 7E10 vg 내지 약 2E11 vg, 약 8E10 vg 내지 약 2E11 vg, 약 9E10 vg 내지 약 2E11 vg, 약 10E10 vg 내지 약 2E11 vg 또는 약 1E11 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg 내지 약 7E10 vg, 약 7E10 vg 내지 약 8E10 vg, 약 8E10 vg 내지 약 9E10 vg, 약 9E10 vg 내지 약 10E10 vg, 약 10E10 vg 내지 약 1E11 vg 또는 약 1E11 vg 내지 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg, 약 7E10 vg, 약 8E10 vg, 약 9E10 vg, 약 10E10 vg, 약 1E11 vg 또는 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg 또는 약 2E11 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg, 약 2E11 vg 또는 약 6 x 1011 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 2E11 vg이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수 (vg) (vg/눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E11 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 1E10 내지 약 2E10, 약 2E10 내지 약 3E10, 약 3E10 내지 약 4E10, 약 4E10 내지 약 5E10, 약 5E10 내지 약 6E10, 약 6E10 내지 약 7E10, 약 7E10 내지 약 8E10, 약 8E10 내지 약 9E10, 약 9E10 내지 약 10E10, 약 1E11 내지 약 2E11, 약 2E11 내지 약 3E11, 약 3E11 내지 약 4E11, 약 4E11 내지 약 5E11 또는 약 5E11 내지 약 6E11 vg/눈의 rAAV 입자 (이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈, 약 7E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈, 약 8E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈, 약 9E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈, 약 10E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈 또는 약 1E11 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 내지 약 7E10 vg/눈, 약 7E10 vg/눈 내지 약 8E10 vg/눈, 약 8E10 vg/눈 내지 약 9E10 vg/눈, 약 9E10 vg/눈 내지 약 10E10 vg/눈, 약 10E10 vg/눈 내지 약 1E11 vg/눈 또는 약 1E11 vg/눈 내지 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈, 약 7E10 vg/눈, 약 8E10 vg/눈, 약 9E10 vg/눈, 약 10E10 vg/눈, 약 1E11 vg/눈 또는 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈 또는 약 2E11 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈, 약 2E11 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6E10 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 2E11 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액에서 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/ml 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 어느 하나의 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 유리체액 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/ml 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 어느 하나의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 방수액에서 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 방수액 중 적어도 약 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95, 1.0 μg/ml 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)의 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 방수액에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 방수액 중 적어도 약 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95, 1.0 μg/ml 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막에서 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막 중 적어도 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)의 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 망막 중 적어도 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막에서 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 어느 하나의 치료 단백질 (예를 들어, 항-VEGF 작용제, 예컨대 아플리베르셉트)의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막에서 아플리베르셉트의 발현을 유발하기에 충분한 단위 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 맥락막 중 약 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, 7.5, 8, 8.5, 9, 9.5, 10 μg/g 또는 그 초과 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함) 중 어느 하나의 아플리베르셉트의 농도를 달성하기에 충분한 단위 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 유지 또는 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, 망막 두께는 중심 서브필드 두께 (CST) 또는 중심 망막 두께 (CRT)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95%, 약 99% 또는 약 100% 중 어느 것 초과의 망막 두께의 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, 망막 두께 (예를 들어, CST 또는 CRT)는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 유지 또는 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60% 또는 약 65% 중 어느 것 초과의 황반 부피의 감소를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, 황반 부피는 OCT 또는 SD-OCT에 의해 결정된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 약 5%, 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 많은 시력의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, 시력은 최대 교정 시력 (BCVA)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 BCVA의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, BCVA는 정확하게 읽힌 문자의 개수에 상응하는 ETDRS 점수로서 표현된다 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047). 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 단위 용량이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 적어도 15개 ETDRS 문자 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047) (예를 들어, 적어도 약 15개, 적어도 약 20개, 적어도 약 30개, 적어도 약 40개, 적어도 약 50개, 적어도 약 60개 또는 약 70개 문자)의 BCVA의 개선을 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은, 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 BCVA와 비교하여 15개 미만의 ETDRS 문자 (Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047) (예를 들어, 15개 이하, 14개 이하, 13개 이하, 12개 이하, 11개 이하, 10개 이하, 9개 이하, 8개 이하, 7개 이하, 6개 이하, 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 1개 또는 0개 문자)를 상실하는, 단위 용량이 BCVA의 유지를 유발하기에 충분한 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 시각의 유지를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 시각의 개선을 갖는 것으로 결정되는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 SD-OCT에 의해 평가된 CST 또는 CRT가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 감소되는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 SD-OCT에 의해 평가된 CST 또는 CRT가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 유지되는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 황반 부피가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 감소되는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 황반 부피가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 유지되는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)) 및 황반 부피가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 감소되는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)) 및 황반 부피가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전과 비교하여 유지되는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 약 4주마다, 5주마다, 6주마다, 7주마다, 8주마다, 9주마다, 10주마다 또는 그 초과 중 어느 것에서 1회 미만의 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)를 필요로 하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 적어도 약 1주, 적어도 2주, 적어도 3주, 적어도 4주, 적어도 5주, 적어도 6주, 적어도 7주, 적어도 8주, 적어도 9주, 적어도 10주, 적어도 15주, 적어도 20주, 적어도 30주, 적어도 40주, 적어도 50주, 적어도 60주, 적어도 70주, 적어도 80주, 적어도 90주, 적어도 100주, 적어도 110주 또는 그 초과 중 어느 것 동안 어떠한 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)도 필요로 하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 수준과 비교하여 망막액의 감소를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 망막액 수준과 비교하여 망막액의 유지를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 IRF 및/또는 SRF의 수준과 비교하여 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 IRF 및/또는 SRF의 감소를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 색소 상피 박리 (PED)와 비교하여 PED의 해소를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 수축하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 약 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 중 어느 것 초과만큼 수축하는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 성장하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 CNV 병변이 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 존재하는 CNV 병변과 비교하여 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15% 또는 20% 중 약 어느 것 초과만큼 성장하지 않는 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색과 비교하여 해부학적 특색의 개선을 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 후 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 해부학적 특색과 비교하여 해부학적 특색의 안정화 및/또는 유지를 갖는 것으로 결정된 경우에 치료 유효 용량이다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 적어도 1종의 증상을 감소, 정지 또는 예방하는 경우에 치료상 유효하다. 비정상적 (예를 들어, 과도한) 혈관신생을 특징으로 하는 안구 신생혈관 질환 또는 장애의 경우에, 이러한 증상은, 예를 들어 시각 왜곡 (예컨대 색각 장애, 흐린 시각, 중심 시각의 악화) 및 시각 상실을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 단위 용량의 투여가 안구 신생혈관 질환의 1종 이상의 임상 특색의 유지, 부분 해소 또는 완전 해소를 유발하는 경우에 치료 유효 용량이다. 예를 들어, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법에 의해 측정시 안구 신생혈관 질환의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 최대 교정 시력 (BCVA) (예를 들어, ETDRS 점수에 기초함; 문헌 [Vitale et al., (2016) JAMA Opthalmol 134(9):1041:1047]), SD-OCT에 의해 결정된 중심 망막 두께, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한 후 개체가 필요로 하는 구제 요법 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트 주사)의 횟수, 망막내액 (IRF) 및/또는 망막하액 (SRF)의 존재, 색소 상피 박리 (PED)의 해소, 맥락막 신생혈관화 (CNV) 병변 성장, 관련 기술분야에 공지된 임의의 방법 (예를 들어, SD-OCT, OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안저 촬영 등)에 기초한 해부학적 특색에 의해 평가시 안구 신생혈관 질환의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에의 용량의 투여가 안과 검사, 안내압 (예를 들어, 골드만 압평 안압측정계 또는 토노-펜을 사용함), 간접 검안경검사, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈 및 부속기의 검사, 안검 및/또는 동공 반응성, 안검하수, 비정상적 동공 형상, 불균등 동공, 광에 대한 비정상적 반응, 구심신경 동공 결손, 슬릿-램프 검사 (안검, 결막, 각막, 수정체, 홍채 및 전방에 대한 것 포함), 유리체, 시신경, 주변 망막 및 망막 혈관계의 후안부 이상, SD-OCT, 플루오레세인 혈관조영, 디지털 컬러 안저 촬영 (망막, 시신경 유두 및/또는 황반의 영상 포함), 방수 샘플링, 유리체액 샘플링, OCT-혈관조영 (OCT-A), 굴절 및 시력 (BCVA)에 의해 평가시 안구 신생혈관 질환의 완전 해소, 부분 해소 또는 유지를 유발하는 경우에 치료상 유효하다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 상이하다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높고, 예를 들어 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많다. 일부 실시양태에서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 높고, 예를 들어 약 10%, 약 20%, 약 30%, 약 40%, 약 50%, 약 60%, 약 70%, 약 80%, 약 90%, 약 100%, 약 125%, 약 150%, 약 175%, 약 200%, 약 225%, 약 250%, 약 275%, 약 300% 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 눈당 벡터 게놈의 수 (vg) (vg/눈)로서 표현된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈 이하의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 1x1010 내지 약 2x1010, 약 2x1010 내지 약 3x1010, 약 3x1010 내지 약 4x1010, 약 4x1010 내지 약 5x1010, 약 5x1010 내지 약 6x1010, 약 6x1010 내지 약 7x1010, 약 7x1010 내지 약 8x1010, 약 8x1010 내지 약 9x1010, 약 9x1010 내지 약 10x1010, 약 1x1011 내지 약 2x1011, 약 2x1011 내지 약 3x1011, 약 3x1011 내지 약 4x1011, 약 4x1011 내지 약 5x1011 또는 약 5x1011 내지 약 6x1011 vg/눈의 rAAV 입자 (이들 범위 내의 임의의 값의 rAAV 입자 포함)이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈 또는 약 1x1011 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 내지 약 7x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈 내지 약 8x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈 내지 약 9x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈 내지 약 10x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈 내지 약 1x1011 vg/눈 또는 약 1x1011 vg/눈 내지 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈, 약 7x1010 vg/눈, 약 8x1010 vg/눈, 약 9x1010 vg/눈, 약 10x1010 vg/눈, 약 1x1011 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈 또는 약 2x1011 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6x1010 vg/눈의 rAAV 입자이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈, 약 2 x 1011 vg/눈 또는 약 6 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1010 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 2 x 1011 vg/눈이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 6 x 1011 vg/눈이다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량 및 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 동시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량 및 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량은 상이한 시간에 투여된다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 투여되는 단위 용량은 한쪽 눈에 단위 용량을 투여한지 적어도 약 1시간, 적어도 약 2시간, 적어도 약 4시간, 적어도 약 8시간, 적어도 약 12시간, 적어도 약 24시간, 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 1주, 적어도 약 2주, 적어도 약 3주, 적어도 약 4주 또는 그 초과 중 어느 것 후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 반대쪽 눈에 투여되는 단위 용량은 한쪽 눈에 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후에 투여된다.
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단일 단위 용량이 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단일 단위 용량은 치료 유효 용량이다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 1회 초과의 용량 (예를 들어, 약 2, 3, 4, 5회 또는 그 초과 중 어느 것보다 더 많은 단위 용량)이 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 1회 초과의 용량은 치료 유효 용량이다.
제약 제제
일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 제약 제제 중에 있다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 1종 이상의 삼투 또는 이온 강도 작용제, 1종 이상의 완충제, 1종 이상의 계면활성제 및 1종 이상의 용매를 포함한다. 일부 실시양태에서, 삼투 또는 이온 강도 작용제는 염화나트륨이다. 일부 실시양태에서, 1종 이상의 완충제는 일염기성 인산나트륨 및/또는 이염기성 인산나트륨이다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 폴록사머 188이다. 일부 실시양태에서, 용매는 물이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 rAAV 입자, 염화나트륨, 일염기성 인산나트륨, 이염기성 인산나트륨 및 계면활성제를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 1x1010 vg/mL 내지 약 1x1013 vg/mL의 rAAV 입자, 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자, 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 150 mM 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 mM 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1010 vg/ml 내지 약 1x1013 vg/ml의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1009 vg/ml 내지 약 6x1014 vg/ml의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 제약 제제 중 rAAV 입자는 약 1x1009 vg/ml 내지 약 2x1009 vg/ml, 약 2x1009 vg/ml 내지 약 3x1009, 약 3x1009 vg/ml 내지 약 4x1009, 약 4x1009 vg/ml 내지 약 5x1009, 약 5x1009 vg/ml 내지 약 6x1009, 약 6x1009 vg/ml 내지 약 7x1009, 약 7x1009 vg/ml 내지 약 8x1009, 약 8x1009 vg/ml 내지 약 9x1009, 약 9x1009 vg/ml 내지 약 10x1009, 약 10x1009 vg/ml 내지 약 1x1010, 약 1x1010 vg/ml 내지 약 2x1010, 약 2x1010 vg/ml 내지 약 3x1010, 약 3x1010 vg/ml 내지 약 4x1010, 약 4x1010 vg/ml 내지 약 5x1010, 약 5x1010 vg/ml 내지 약 6x1010, 약 6x1010 vg/ml 내지 약 7x1010, 약 7x1010 vg/ml 내지 약 8x1010, 약 8x1010 vg/ml 내지 약 9x1010, 약 9x1010 vg/ml 내지 약 10x1010, 약 10x1010 vg/ml 내지 약 1x1011, 약 1x1011 vg/ml 내지 약 2x1011, 약 2x1011 vg/ml 내지 약 3x1011, 약 3x1011 vg/ml 내지 약 4x1011, 약 4x1011 vg/ml 내지 약 5x1011, 약 5x1011 vg/ml 내지 약 6x1011, 약 6x1011 vg/ml 내지 약 7x1011, 약 7x1011 vg/ml 내지 약 8x1011, 약 8x1011 vg/ml 내지 약 9x1011, 약 9x1011 vg/ml 내지 약 10x1011, 약 1x1012 vg/ml 내지 약 2x1012, 약 2x1012 vg/ml 내지 약 3x1012, 약 3x1012 vg/ml 내지 약 4x1012, 약 4x1012 vg/ml 내지 약 5x1012, 약 5x1012 vg/ml 내지 약 6x1012, 약 6x1012 vg/ml 내지 약 7x1012, 약 7x1012 vg/ml 내지 약 8x1012, 약 8x1012 vg/ml 내지 약 9x1012, 약 9x1012 vg/ml 내지 약 10x1012, 약 1x1013 vg/ml 내지 약 2x1013, 약 2x1013 vg/ml 내지 약 3x1013, 약 3x1013 vg/ml 내지 약 4x1013, 약 4x1013 vg/ml 내지 약 5x1013, 약 5x1013 vg/ml 내지 약 6x1013, 약 6x1013 vg/ml 내지 약 7x1013, 약 7x1013 vg/ml 내지 약 8x1013, 약 8x1013 vg/ml 내지 약 9x1013, 약 9x1013 vg/ml 내지 약 10x1013, 약 1x1014 vg/ml 내지 약 2x1014, 약 2x1014 vg/ml 내지 약 3x1014, 약 3x1014 vg/ml 내지 약 4x1014, 약 4x1014 vg/ml 내지 약 5x1014 또는 약 5x1014 vg/ml 내지 약 6x1014 vg/mL의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL 내지 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자를 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제 중 염화나트륨은 약 150 mM 내지 약 200 mM의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 제약 제제 중 염화나트륨은 약 150 mM, 약 160 mM, 약 170 mM, 약 180 mM, 약 190 mM 또는 약 200 mM의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 제약 제제 중 염화나트륨은 약 180 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 일염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM 내지 약 10 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 일염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 일염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 5 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 이염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM 내지 약 10 mM의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 이염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 1 mM, 약 2 mM, 약 3 mM, 약 4 mM, 약 5 mM, 약 6 mM, 약 7 mM, 약 8 mM, 약 9 mM 또는 약 10 mM 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 이염기성 인산나트륨은 제약 제제 중에 약 5 mM의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v)의 농도로 존재한다. 일부 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.0005% (w/v), 약 0.0006% (w/v), 약 0.0007% (w/v), 약 0.0008% (w/v), 약 0.0009% (w/v), 약 0.001% (w/v), 약 0.002% (w/v), 약 0.003% (w/v), 약 0.004% (w/v) 또는 약 0.005% (w/v) 중 어느 것의 농도로 존재한다. 특정 실시양태에서, 폴록사머 188은 제약 제제 중에 약 0.001% (w/v)의 농도로 존재한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.0, 약 7.1, 약 7.2, 약 7.3, 약 7.4 또는 약 7.5의 pH를 갖는다. 특정 실시양태에서, 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 염산 및 수산화나트륨이 제약 제제의 pH를 조정하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1012 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 약 6x1011 vg/mL의 rAAV 입자, 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제는 약 7.3의 pH를 갖는다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 목적하는 치료적 또는 예방적 효과를 달성하기 위해 유리체내 (IVT) 주사를 통해 개체, 예를 들어 인간 환자의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 재구성된 균질 용액으로서 공급된다. 일부 실시양태에서, 용액은 현탁액이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 동결 현탁액으로서 공급되고, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 해동된다. 일부 실시양태에서, 용액은 등장성이다.
다른 실시양태에서, 예를 들어 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 그의 기능적 단편 또는 변이체)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 AAV2.7m8 벡터를 포함하는 제약 조성물은 동결건조 형태로 공급되고, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 재구성된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 대상체로의 투여 전에, 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체)를 코딩하고 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 동결건조 제약 조성물을 완충제 중에 재구성, 용해 또는 가용화시키는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 동결건조 제약 조성물은 하기: 동결보호제, 계면활성제, 염, 안정화제 또는 그의 임의의 조합 중 1종 이상을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 균질 용액이다. 일부 실시양태에서, 균질 용액은 사전-충전 시린지에 공급된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 현탁액으로서 공급된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 용액이다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 냉장된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 동결된다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 (예를 들어, IVT 주사를 통해) 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에, 활성 성분(들)이 용액 중에 용해 및/또는 고르게 분포되도록 보장하기 위해 냉장 현탁액을 실온으로 가온하고/거나 현탁액을 교반하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 (예를 들어, IVT 주사를 통해) 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에, 활성 성분(들)이 용액 중에 용해되고/거나 고르게 분포되는 것을 보장하기 위해 동결 현탁액을 해동시키고 현탁액을 실온으로 가온하고/거나 교반하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 (예를 들어, IVT 주사를 통해) 대상체에게 투여하기 전에 희석된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 사전-충전 시린지로서 공급된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 동결 현탁액으로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 제약상 허용되는 부형제, 예를 들어 계면활성제, 글리세롤, 비-이온성 계면활성제, 완충제, 글리콜, 염 및 그의 임의의 조합을 포함한다.
일부 실시양태에서, 현탁액은 용액이다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 미셀을 포함한다.
일부 실시양태에서, 저장 안정성 및 취급 편의성을 위해, 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트 또는 그의 기능적 단편 또는 변이체)를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 제약 제제는 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여하기 전에 염수, 완충제 또는 물로 재구성되는 동결건조, 동결 건조 또는 진공 건조 분말로서 제제화된다. 대안적으로, 제약 제제는 수용액, 예컨대 현탁액 또는 균질 용액으로서 제제화된다. 제약 제제는 아플리베르셉트를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV 입자를 함유할 수 있다. 다양한 부형제, 예컨대 포스페이트, PBS 또는 트리스 완충제, 글리콜, 글리세롤, 염수, 계면활성제 (예를 들어, 플루로닉 또는 폴리소르베이트) 또는 그의 임의의 조합이 제약 제제를 안정화시키는데 사용될 수 있다. 추가적으로, 동결보호제, 예컨대 알콜은 동결 또는 건조 조건 하에 안정화제로서 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 유전자 요법은 현탁액, 냉장 현탁액 또는 동결 현탁액으로서 제공된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 20 μL, 30 μL, 40 μL, 50 μL, 60 μL, 70 μL, 80 μL, 90 μL, 100 μL, 200 μL, 300 μL, 400 μL, 500 μL, 600 μL, 700 μL, 800 μL, 900 μL 또는 1000 μL 중 어느 것의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 250 μL의 부피를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 0.1 내지 0.5 mL, 0.1 내지 0.2 mL, 0.3 내지 0.5 mL, 0.5 내지 1.0 mL, 0.5 내지 0.7 mL, 0.6 내지 0.8 mL, 0.8 내지 1 mL, 0.9 내지 1.1 mL, 1.0 내지 1.2 mL 또는 1.0 내지 1.5 mL의 부피를 갖는다. 다른 실시양태에서, 부피는 0.1 mL, 0.2 mL, 0.3 mL, 0.4 mL, 0.5 mL, 0.6 mL, 0.7 mL, 0.8 mL, 0.9 mL, 1.0 mL, 1.1 mL, 1.2 mL, 1.3 mL, 1.4 mL 또는 1.5 mL 이하이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 약 0.25 mL의 부피를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스(Crystal Zenith)® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되며, 여기서 바이알은 0.1 내지 0.5 mL, 0.1 내지 0.2 mL, 0.2 내지 0.3 mL, 0.3 내지 0.4 mL 또는 0.4 mL 내지 0.5 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 제약 제제의 현탁액은 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되며, 여기서 바이알은 약 0.25 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제약 제제는 유리체내 또는 망막하 주사를 통해 영장류 (예를 들어, 비-인간 영장류 및 인간 대상체)에게 투여하기 위해 설계, 조작 또는 적합화된다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제는 개체의 눈 내로의 유리체내 주사를 위해 제제화된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 약 25 μL, 30 μL, 35 μL, 40 μL, 45 μL, 50 μL, 55 μL, 60 μL, 65 μL, 70 μL, 75 μL, 80 μL, 85 μL, 90 μL, 95 μL, 100 μL, 110 μL, 120 μL, 130 μL, 140 μL, 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 것 이하 또는 정확히 상기 수치들 중 어느 것 이하의 부피의 유리체내 주사를 가능하게 하는 농도로 제제화되거나 재구성된다. 일부 실시양태에서, 제약 제제의 단위 용량은 약 25 μL, 30 μL, 35 μL, 40 μL, 45 μL, 50 μL, 55 μL, 60 μL, 65 μL, 70 μL, 75 μL, 80 μL, 85 μL, 90 μL, 95 μL, 100 μL, 110 μL, 120 μL, 130 μL, 140 μL, 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 것 이하 또는 정확히 상기 수치들 중 어느 것 이하의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 25 μL, 30 μL, 35 μL, 40 μL, 45 μL, 50 μL, 55 μL, 60 μL, 65 μL, 70 μL, 75 μL, 80 μL, 85 μL, 90 μL, 95 μL, 100 μL, 110 μL, 120 μL, 130 μL, 140 μL, 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 것의 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 30 μL 또는 약 100 μL 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 30 μL의 부피의 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 핵산 서열 및 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 제약 제제의 용액 또는 현탁액 약 100 μL의 부피의 유리체내 주사를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트) 트랜스진의 핵산 서열을 포함하는 AAV2.7m8 입자는 유전자 요법 제약 제제의 성분이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 바와 같은 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함하는 임의의 혈청형의 rAAV 입자는 동결 현탁액 또는 동결-건조 또는 동결건조 제제 조성물을 제조하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 유전자 요법은 냉장 또는 동결 현탁액으로서 제제화된다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자는 rAAV2이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제의 동결건조물 또는 현탁액은 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트)를 코딩하는 DNA 서열 및 7m8 변이체 캡시드 단백질을 포함하는 rAAV2를 포함한다. 일부 실시양태에서, 현탁액은 냉장 또는 동결된다.
일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것은 유리체내 (IVT) 주사에 의한 것이다. IVT 주사를 위해, rAAV 입자는 제약 제제 (예를 들어, 본원에 기재된 바와 같음)의 현탁액 형태로 전달될 수 있다. 초기에, 국소 마취제를 눈의 표면에 적용하고, 이어서 안과용 방부 용액을 적용한다. 눈을 기기에 의해 또는 기기 없이 개방한 채로 유지하고, rAAV 입자를 직접 관찰 하에 짧고 좁은 바늘, 예를 들어 30-게이지 바늘에 의해 공막을 통해 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈의 유리체강 내로 주사한다. 전형적으로, 약 25 μL 내지 약 250 μL (예를 들어, 약 25 μL, 약 30 μL, 약 40 μL, 약 50 μL, 약 60 μL, 약 70 μL, 약 80 μL, 약 90 μL, 약 100 μL, 약 110 μL, 약 120 μL, 약 130 μL, 약 140 μL, 약 150 μL, 약 160 μL, 약 170 μL, 약 180 μL, 약 190 μL, 약 200 μL, 약 210 μL, 약 220 μL, 약 230 μL, 약 240 μL 또는 약 250 μL 중 어느 것) 부피의 rAAV 입자 현탁액이 IVT 주사에 의해 눈에 전달될 수 있다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 100 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, rAAV 입자의 단위 용량은 약 30 μL의 부피를 포함한다. 일부 실시양태에서, IVT 주사는 유리체액의 제거와 조합되어 수행된다. 일부 실시양태에서, 유리체절제술이 수행될 수 있고, 유리체 겔의 전체 부피가 rAAV 입자 현탁액 (예를 들어, 약 4 mL의 rAAV 입자 현탁액)의 주입에 의해 대체된다. 유리체절제술은 적절한 구멍 크기 (예를 들어, 20 게이지 내지 27 게이지)의 캐뉼라를 사용하여 수행되며, 여기서 제거되는 유리체 겔의 부피는 주입 캐뉼라로부터의 유체, 예를 들어 염수, 등장성 용액, rAAV 입자 현탁액의 주입에 의해 대체된다. IVT 투여는 일반적으로 잘 허용된다. 절차의 종결시에, 때때로 주사 부위에 경도 발적이 존재한다. 가끔 압통이 있지만, 대부분의 환자는 어떠한 통증도 보고하지 않는다. 이 절차 후에 아이 패치 또는 아이 쉴드는 필요하지 않고, 활동도 제한되지 않는다. 때때로, 감염 예방을 돕기 위해 항생제 점안제가 수일 동안 처방된다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 비정상적 (예를 들어, 과도한) 혈관신생 또는 신생혈관화를 특징으로 하는 안구 질환 또는 장애의 치료를 위해 IVT 주사를 통해 개체 (예를 들어, 인간 또는 비-인간 영장류)의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 투여될 단위 용량 (예를 들어, 치료 유효 용량)이다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 본원 다른 곳에 추가로 상세히 기재된 바와 같은 단위 용량 (예를 들어, 치료 유효 용량)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 투여되는 바이러스 벡터 (예를 들어, 본원에 개시된 rAAV 벡터)의 단위 용량 (예를 들어, 치료 유효 용량)의 부피는 약 25 μL, 30 μL, 35 μL, 40 μL, 45 μL, 50 μL, 55 μL, 60 μL, 65 μL, 70 μL, 75 μL, 80 μL, 85 μL, 90 μL, 95 μL, 100 μL, 110 μL, 120 μL, 130 μL, 140 μL, 150 μL, 160 μL, 170 μL, 180 μL, 190 μL, 200 μL, 210 μL, 220 μL, 230 μL, 240 μL 또는 250 μL 중 어느 하나 이하 (이들 값 사이의 임의의 범위 포함)이다. 대상체에게 투여될 단위 용량의 부피를 최소화하는 것은 안압의 변화 및 IVT 주사와 연관된 다른 부작용 (예를 들어, 상승된 안내압, 염증, 자극 또는 통증)을 제거하거나 완화시킬 수 있다.
안구 사용에 적합한 제약 제제는 멸균 수용액 또는 분산액 및 멸균 주사가능한 용액, 현탁액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 유리체내 투여를 위해, 적합한 담체는 생리 염수, 정균수, 포스페이트 완충 염수 (PBS) 및/또는 등장화제, 예를 들어 글리세롤을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제약 제제는 멸균되고, 용이한 시린지성 또는 주사성이 존재하는 정도로의 유체이다. 특정 실시양태에서, 제약 제제는 제조 및 저장 조건 하에 안정하고, 미생물, 예컨대 박테리아 및 진균의 오염 작용에 대해 보존된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 등장화제, 예컨대 염 또는 글리세롤을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 계면활성제 또는 안정화제가 제약 조성물에 첨가되어 응집을 방지한다.
일부 실시양태에서, 제약 제제는 부형제 또는 담체를 함유한다. 담체는, 예를 들어 물, 염수, 에탄올, 폴리올 (예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등) 및 그의 임의의 조합을 함유하는 용매 또는 분산 매질이다. 적절한 유동성은, 예를 들어 코팅, 예컨대 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우 요구되는 입자 크기의 유지에 의해 및 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트 (예를 들어, 트윈(Tween)™, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80), 소듐 도데실 술페이트 (소듐 라우릴 술페이트), 라우릴 디메틸 아민 옥시드, 세틸트리메틸암모늄 브로마이드 (CTAB), 폴리에톡실화 알콜, 폴리옥시에틸렌 소르비탄, 옥톡시놀 (트리톤(Triton) X100™), N,N-디메틸도데실아민-N-옥시드, 헥사데실트리메틸암모늄 브로마이드 (HTAB), 폴리옥실 10 라우릴 에테르, 브리즈(Brij) 721™, 담즙 염 (데옥시콜산나트륨, 콜산나트륨), 플루론산 (F-68, F-127), 폴리옥실 피마자 오일 (크레모포르(Cremophor)™), 노닐페놀 에톡실레이트 (테르기톨(Tergitol)™), 시클로덱스트린 및 에틸벤제토늄 클로라이드 (히아민(Hyamine)™)의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 크레졸, 티메로살 등에 의해 달성될 수 있다. 많은 실시양태에서, 등장화제, 예를 들어 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 및/또는 염화나트륨이 제약 제제에 포함된다. 내부 조성물의 지속 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 조성물에 포함시킴으로써 이루어질 수 있다. 일부 실시양태에서, 제약 담체는 인산나트륨, 염화나트륨, 폴리소르베이트 및 수크로스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 제제는 계면활성제, 예를 들어 비-이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 플루로닉을 포함한다. 일부 실시양태에서, 비-이온성 계면활성제의 첨가는 제약 조성물에서의 응집을 감소시킨다.
또한, 본원에 기재된 적어도 1종의 제약 제제를 포함하는 키트가 본원에 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 제약 제제의 동결 현탁액 (예를 들어, 바이알 내의 1 단위 용량)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 개시된 동결건조 또는 동결-건조 제약 제제 (예를 들어, 바이알 내의 1 단위 용량) 및 동결건조 제약 조성물을 용해, 희석 및/또는 재구성하기 위한 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 재구성 또는 희석을 위한 용액은 사전-충전 시린지로서 공급된다. 일부 실시양태에서, 키트는 rAAV (예를 들어, AAV2.7m8)를 포함하는 동결-건조 또는 동결건조 제약 조성물 및 제약 조성물을 목적하는 농도 또는 부피로 재구성하기 위한 용액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 본원에 개시된 제약 조성물의 재구성시 응집을 방지하는 것을 돕는 완충제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 사전-충전 시린지에 제공된다. 일부 실시양태에서, 키트는 이중-챔버 시린지 또는 용기를 포함하며, 여기서 챔버 중 하나는 제약 조성물을 용해 또는 희석하기 위한 완충제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 키트는 주사용 시린지를 포함한다. 일부 실시양태에서, 재구성된 용액은 투여 전에 여과된다. 일부 실시양태에서, 키트는 환자에게 투여하기 전에 재구성된 제약 조성물을 여과하기 위한 필터 또는 필터 시린지를 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되는 본원에 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 키트는 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되는 본원에 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함하며, 여기서 바이알은 0.1 내지 0.5 mL, 0.1 내지 0.2 mL, 0.2 내지 0.3 mL, 0.3 내지 0.4 mL 또는 0.4 mL 내지 0.5 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서, 키트는 즉석-사용 마개 (예를 들어, 클로로부틸로 제조된 마개)가 구비되고 (예를 들어, 멸균 알루미늄 티어-오프 밀봉재로) 밀봉된 멸균 즉석-사용 바이알 (예를 들어, 0.5 mL 바이알; 예를 들어, 크리스탈 제니스® 바이알) 내에 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 제공되는 개시된 바와 같은 rAAV 입자를 포함하는 제약 제제의 현탁액을 포함하며, 여기서 바이알은 약 0.25 mL 부피의 제약 제제의 현탁액을 함유한다. 일부 실시양태에서, 키트는 사용에 대한 지침서; 예를 들어 본원에 개시된 rAAV 입자를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 것에 대한 지침서를 추가로 포함한다.
안구 신생혈관 질환
한 측면에서, 본 개시내용은 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 개시내용은 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 연령-관련 황반 변성 (AMD), 습성-AMD, 망막 신생혈관화, 맥락막 신생혈관화 당뇨병성 망막병증, 증식성 당뇨병성 망막병증, 망막 정맥 폐쇄, 중심 망막 정맥 폐쇄, 분지 망막 정맥 폐쇄, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막 허혈, 허혈성 망막병증, 당뇨병성 망막 부종 또는 그의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 연령-관련 황반 변성 (AMD)에 속발성인 활성 맥락막 신생혈관화 (CNV)이다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 재발성 및/또는 지속성 wAMD이다. 일부 실시양태에서, 안구 신생혈관 질환은 AMD에 속발성인 활성 중심와하 CNV이다. 일부 실시양태에서, AMD에 속발성인 활성 중심와하 CNV는 총 병변 크기의 ≥50%를 점유한다. 일부 실시양태에서, AMD에 속발성인 활성 중심와하 CNV는 플루오레세인 혈관조영상 (FA)에서의 누출, 스펙트럼 도메인 광 간섭 단층촬영 (SD-OCT)에서의 유체 및/또는 컬러 안저 촬영에서의 망막하 출혈의 증거와 함께 총 병변 크기의 ≥ 50%를 점유한다. 일부 실시양태에서, AMD에 속발성인 활성 중심와하 CNV는 플루오레세인 혈관조영상 (FA)에서의 누출, 스펙트럼 도메인 광 간섭 단층촬영 (SD-OCT)에서의 유체 및/또는 컬러 안저 촬영에서의 망막하 출혈의 증거와 함께 총 병변 크기의 ≥ 50%를 점유하고, 병변의 전체 치수는 12개의 황반 광응고 연구 디스크 영역을 초과하지 않는다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈은 본 개시내용의 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 78-25개 (예를 들어, 약 78, 약 75, 약 70, 약 65, 약 60, 약 55, 약 50, 약 45, 약 40, 약 35, 약 30 또는 약 25개 중 어느 것 미만)의 ETDRS 문자 평가에 기초한 최대 교정 시력 (BCVA)을 나타냈다. 일부 실시양태에서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈은 본 개시내용의 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 약 5, 약 10, 약 15, 약 20, 약 25, 약 30, 약 35, 약 40, 약 45, 약 50, 약 55, 약 60, 약 65, 약 70, 약 75, 약 80, 약 85, 약 90, 약 95 또는 약 100개 중 어느 것 초과의 ETDRS 문자 평가에 기초한 최대 교정 시력 (BCVA)을 나타냈다.
일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 폴립양 맥락막 혈관병증 (PCV)을 가졌다.
일부 실시양태에서, ETDRS 문자 평가는 약 0.5 미터, 약 1 미터, 약 2 미터, 약 3 미터 또는 약 4 미터에서 수행된다. 일부 실시양태에서, ETDRS 문자 평가는 약 4 미터에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 개체는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 마지막 12주 (예를 들어, 약 4개월) 내에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 적어도 1회의 선행 치료 (예를 들어, 적어도 1회, 적어도 2회, 적어도 3회, 적어도 4회, 적어도 5회 또는 그 초과의 치료)를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전 약 마지막 12주 (예를 들어, 약 4개월) 동안 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 2 또는 3회의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 적어도 약 1회, 적어도 약 5회, 적어도 약 10회, 적어도 약 20회, 적어도 약, 적어도 약 40회, 적어도 약 50회, 적어도 약 60회, 적어도 약 70회, 적어도 약 80회, 적어도 약 90회, 적어도 약 100회, 적어도 약 110회, 적어도 약 120회 또는 그 초과의 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 계산된 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙 및/또는 아플리베르셉트) 주사 간격이 약 2주, 약 3주, 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주 또는 그 초과였다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 계산된 항-VEGF (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙 및/또는 아플리베르셉트) 주사 간격이 약 5-7주, 약 4-10주, 약 4-7주 또는 약 4-6주였다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일, 적어도 약 18일, 적어도 약 19일 또는 적어도 약 20일 중 어느 것 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 약 7일, 약 10일 또는 약 14일 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트)를 사용한 선행 치료를 받았다. 일부 실시양태에서, 선행 치료는 항-VEGF 작용제를 사용한 안내, 망막하 또는 유리체내 주사를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트이다.
일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 나타냈다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편이다. 일부 실시양태에서, 항-VEGF 작용제는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 전에 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)에 대해 의미있는 반응을 나타냈다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 초기 진단시 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)와 비교하여, 항-VEGF 치료 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일 또는 그 초과 중 어느 것 후에 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 ≥30% (예를 들어, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서의 선행 항-VEGF 치료의 투여 전 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)와 비교하여, 항-VEGF 치료 약 7일, 약 10일 또는 약 14일 중 어느 것 초과 후에 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 ≥30% (예를 들어, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 SD-OCT에 의해 결정된다. 중심 서브필드 두께는 중심와 상에 중심을 둔 1 mm 직경 원인 ETDRS 격자의 중심 서브필드를 가로지르는 망막의 평균 두께이다.
일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료의 투여 전 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께와 비교하여 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께의 ≥20% (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 안구 신생혈관 질환에 대한 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 개체는 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료의 투여 전 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께와 비교하여, 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료의 투여 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일 또는 그 초과 중 어느 것 전에 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께의 ≥20% (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 안구 신생혈관 질환에 대한 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 개체는, 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료의 투여 전 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께와 비교하여, 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료의 투여 약 7일, 약 10일 또는 약 14일 후에 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께의 ≥20% (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 안구 신생혈관 질환에 대한 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 중심 서브필드 두께 및/또는 중심 망막 두께는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 SD-OCT에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 항-VEGF 치료 후 관찰가능한 혈관 삼출 없이 CST의 정상화가 관찰되는 경우에, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 항-VEGF 작용제 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)를 사용한 선행 치료에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 정규화는 (예를 들어, 연령, 성별 등에 기초하여) 그 부류의 환자에 대해 정상인 CST 값을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 SD-OCT에 의해 결정시, 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트)의 투여 전 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)와 비교하여, 항-VEGF 치료 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 적어도 약 7일, 적어도 약 8일, 적어도 약 9일, 적어도 약 10일, 적어도 약 11일, 적어도 약 12일, 적어도 약 13일, 적어도 약 14일, 적어도 약 15일, 적어도 약 16일, 적어도 약 17일 또는 그 초과 중 어느 것 후에 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 ≥20% (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다. 일부 실시양태에서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에서 SD-OCT에 의해 결정시, 항-VEGF 치료의 투여 전 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)와 비교하여, 항-VEGF 치료 약 7일, 약 10일 또는 약 14일 후에 중심 망막 두께 (CRT) 또는 중심 서브필드 두께 (CST)의 ≥20% (예를 들어, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 90% 또는 100% 중 어느 것)의 감소가 관찰되는 경우에, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 항-VEGF 치료 (예를 들어, 아플리베르셉트, 그의 기능적 변이체 또는 그의 기능적 단편)에 대해 의미있는 반응을 갖는 것으로 결정된다.
일부 실시양태에서, 개체는 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 선행 항-VEGF 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 선행 항-VEGF 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다. 일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 선행 아플리베르셉트 치료를 받지 않았다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 안구 질환 또는 장애는 당뇨병성 황반 부종이다. 당뇨병성 황반 부종 (DME)은 황반 내의 혈관으로부터의 유체의 누출로 인한 당뇨병에서의 망막 팽윤이다. 황반은 망막의 중심 부분, 원추가 풍부한 작은 영역, 색을 검출하는 특수 신경 말단이고, 주간 시각에 의존한다. 황반 부종이 발생함에 따라, 중심 시야의 중간 또는 바로 옆에서 흐림이 발생한다. 당뇨병성 황반 부종으로 인한 시각 상실은 수개월의 기간에 걸쳐 진행되어 명확하게 초점을 맞추는 것이 불가능할 수 있다. DME의 흔한 증상은 흐린 시각, 부유물, 복시이며, 치료하지 않으면 결국 실명하게 된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법 및 제약 조성물은 DME를 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 안구 질환 또는 장애는 망막 정맥 폐쇄이다. 망막 정맥 폐쇄는 망막으로부터 혈액을 운반하는 작은 정맥이 막히는 것이다. 망막은 광 영상을 신경 신호로 전환하여 뇌로 보내는 내안의 뒤쪽에 있는 조직 층이다. 망막 정맥 폐쇄는 동맥의 경화 (아테롬성동맥경화증) 및 혈병의 형성에 의해 가장 종종 유발된다. 망막 내의 보다 작은 정맥 (분지 정맥 또는 BRVO)의 차단은 아테롬성동맥경화증에 의해 비후되거나 경화된 망막 동맥이 교차하여 망막 정맥에 압력을 가하는 위치에서 종종 발생한다. 망막 정맥 폐쇄의 증상은 한쪽 눈의 모두 또는 일부에서의 갑작스런 흐림 또는 시각 상실을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 안구 질환 또는 장애는 습성 연령-관련 황반 변성 (wAMD)으로도 공지된 맥락막 신생혈관화 (CNV)이다. 맥락막 신생혈관화는 맥락막으로부터 기원하는 새로운 혈관이 브루크 막의 파괴를 통해 망막하 색소 상피 (서브-RPE) 또는 망막하 공간으로 성장하는 것을 수반할 수 있으며, 이는 시각 상실의 주요 원인일 수 있다. CNV는 수주 내에 주목할만한 중심 시각의 갑작스런 악화를 일으킬 수 있다. 다른 증상은 색 장애 및 변시증 (직선이 물결모양으로 보이는 왜곡)을 포함할 수 있다. 새로운 혈관의 출혈은 CNV의 증상의 개시를 가속화할 수 있다. CNV는 또한 눈 뒤의 압박감을 포함할 수 있다.
AMD의 진행된 "습성" 형태 (신생혈관성 또는 삼출성)는 환자에서 중심 시각의 신속하고 종종 실질적인 상실을 빈번하게 유발할 수 있다. 습성 형태의 AMD에서, 맥락막 신생혈관화가 형성되고, 망막 색소 상피 아래에서 및 이를 통해 성장할 수 있는 혈관 네트워크로 발달한다. 이것은 혈장 누출 및/또는 망막하 공간으로의 출혈을 동반하기 때문에, 황반에서 발생하면 중심 시각이 갑자기 심하게 상실될 수 있다. 본 개시내용은 AMD, 습성 AMD의 치료 또는 예방을 고려한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 바와 같은 방법 및 제약 조성물은 AMD를 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙, 파리시맙, 아비시파르 페골 및/또는 아플리베르셉트를 사용한 선행 치료를 받은 대상체에서 안구 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는데 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 베바시주맙, 브롤루시주맙, 라니비주맙 및/또는 아플리베르셉트를 사용한 치료에 대해 반응성인 안구 질환 또는 장애를 예방 또는 치료하는데 사용된다.
일부 실시양태에서, 개체는 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하기 적어도 1일, 적어도 1주, 적어도 1개월, 적어도 2개월, 적어도 4개월, 적어도 6개월, 적어도 12개월, 적어도 18개월, 적어도 24개월, 적어도 30개월, 적어도 36개월, 적어도 42개월, 적어도 48개월, 적어도 54개월, 적어도 60개월, 적어도 66개월, 적어도 72개월, 적어도 78개월, 적어도 84개월, 적어도 90개월, 96개월, 적어도 102개월, 적어도 108개월, 적어도 114개월, 적어도 120개월, 적어도 126개월, 적어도 132개월 또는 그 초과 전에 안구 신생혈관 질환으로 진단되었다.
하기 설명은 관련 기술분야의 통상의 기술자가 다양한 실시양태를 만들고 사용할 수 있게 하기 위해 제시된다. 특정 장치, 기술 및 적용의 설명은 단지 예로서 제공된다. 본원에 기재된 실시예에 대한 다양한 변형은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이고, 본원에 정의된 일반적 원리는 다양한 실시양태의 취지 및 범위를 벗어나지 않으면서 다른 실시예 및 적용에 적용될 수 있다. 따라서, 다양한 실시양태는 본원에 기재되고 제시된 실시예에 제한되는 것으로 의도되지 않으며, 청구범위와 일치하는 범주에 따라야 한다.
실시예
실시예 1: 신생혈관성 (습성) 연령-관련 황반 변성에서의 6 x 1011 vg/눈의 용량의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 개방 표지 1상 연구.
본 실시예는 맥락막 신생혈관화 (습성 AMD; wAMD)를 동반한 연령-관련 황반 변성 (AMD)의 치료를 위한, VEGF 억제제 아플리베르셉트 및 AAV2.7m8 단백질 캡시드를 함유하는 rAAV 벡터인 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 개방 표지 1상 연구를 기재한다.
I. 연구 목적
A. 1차 목적
이 연구의 1차 목적은 wAMD를 갖는 대상체에서 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 유리체내 (IVT) 주사의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이었다.
1차 종점
이 연구의 1차 종점은 안구 및 전신 유해 사건 (AE)의 유형, 중증도 및 발생률이었다.
B. 2차 목적
이 연구의 2차 목적은 하기와 같았다:
● 최대 교정 시력 (BCVA)에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과를 평가하기 위함.
● 중심 망막 두께 (CRT)로도 공지된 중심 서브필드 두께 (CST)에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과를 평가하기 위함.
● 제4주 내지 제104주의 구제 요법에 대한 필요를 평가하기 위함.
● 망막내액 (IRF) 및 망막하액 (SRF)의 존재에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과를 평가하기 위함.
● 기준선에서 색소 상피 박리 (PED)를 갖는 환자 중 PED 해소에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효과를 평가하기 위함.
2차 종점
이 연구의 2차 종점은 다음과 같았다:
● 기준선과 비교하여 제8일부터 제104주까지 시간 경과에 따른 ETDRS 문자에 의해 평가된, 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 BCVA의 평균 변화.
● 기준선과 비교하여 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 ≥15개 ETDRS 문자의 BCVA 획득을 갖는 대상체의 백분율.
● 기준선과 비교하여 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 ≤15개 ETDRS 문자의 BCVA 감소를 갖는 대상체의 백분율.
● 기준선과 비교하여 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 기준선으로부터의 CST 및 황반 부피의 평균 변화.
● 제4주부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 평균 아플리베르셉트 주사 횟수.
● 제4주부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 아플리베르셉트 주사를 필요로 하는 대상체의 백분율.
● 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 IRF가 없는 대상체의 백분율.
● 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 SRF가 없는 대상체의 백분율.
● 기준선에서 PED를 갖는 대상체 중 제8일부터 제104주까지 평가된, 시간 경과에 따른 PED를 갖지 않는 대상체의 백분율.
II. 연구 대상체
이 연구에서의 대상체는 연령-관련 황반 변성 (AMD)에 속발성인 활성 맥락막 신생혈관화 (CNV)로 진단되었고, 항-VEGF 치료에 대한 최근 반응성의 병력을 가졌으며, 빈번한 항-VEGF 요법 주사를 필요로 하였다.
연구 지속기간 동안 단지 한쪽 눈만을 연구 눈으로서 선택하였다. 양쪽 눈이 모든 포함 및 배제 기준을 충족하는 경우에, 스크리닝에서 평가된 최악의 BCVA를 갖는 눈을 연구 눈으로서 선택하였다. 양쪽 눈이 모든 포함 및 배제 기준을 충족하고 BCVA 값이 양쪽 눈에 대해 동일한 경우에, 대상체는 치료를 위해 그의/그녀의 비-우세한 눈을 선택하기로 하거나, 또는 디폴트로 우안을 연구 눈으로서 선택하였다.
A. 포함 기준
하기 포함 기준을 충족하는 대상체를 이 연구에 등록시켰다:
● 남성 또는 여성 대상체, 연령 ≥ 50세.
● 연구 눈은 AMD에 속발성인 활성 중심와하 CNV가 총 병변 크기의 ≥ 50%를 점유한다는 이전 또는 현재 증거와 함께 하기 증거를 가졌다:
○ 플루오레세인 혈관조영상 (FA)에서의 누출, 스펙트럼 도메인 광 간섭 단층촬영 (SD-OCT)에서의 유체 또는 컬러 안저 사진에서의 망막하 출혈; 및
○ 병변의 전체 치수는 12개의 황반 광응고 연구 디스크 영역을 초과하지 않았다.
● 대상체는 스크리닝 전 4개월 내에 최소 2회 주사로 wAMD에 대한 적극 항-VEGF 치료 하에 있었다.
● 스크리닝 방문시 (아플리베르셉트 주사 전) 연구 눈의 시각:
○ 78-25개의 BCVA ETDRS.
● 비-연구 눈의 시각:
○ ≥35개의 BCVA ETDRS.
● 임상연구자에 의해 확인되고 하기와 같이 정의된 의미있는 항-VEGF 반응을 나타냈다:
○ SD-OCT를 사용하여 평가시 초기 진단으로부터 중심 서브필드 두께의 ≥ 30%의 감소; 또는
○ SD-OCT를 사용하여 평가시 스크리닝으로부터 중심 서브필드 두께의 ≥ 20%의 감소; 또는
○ 관찰가능한 혈관 삼출이 없는 CST의 정상화.
VEGF 반응성은 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 제1일 방문시에 항-VEGF 반응을 확인할 목적으로 임상연구자가 확인하였다. 의미있는 항-VEGF 반응을 갖지 않는 것으로 결정된 대상체는 스크리닝하지 못하였고, 이 연구에 등록시키지 않았다.
B. 배제 기준
하기 배제 기준을 충족하는 대상체는 이 연구에 등록시키지 않았다:
중화 항체
● 혈청 및 유리체액 중 AAV에 대한 중화 항체 (NAb)의 수준 사이에 확립된 상관관계는 없지만 (Lukason et al., (2011) Mol Ther 19 (2):260-265), 예방조치로서 AAV2.7m8 벡터에 대한 NAb에 대해 대상체를 스크리닝하였다. AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 6개월 내에 기록된 항-AAV2.7m8 중화 항체 역가 수준 > 1:125를 갖는 대상체를 이 연구로부터 배제하였다.
CNV 병변
● 하기 CNV 병변 특징의 알려진 병력 또는 증거:
○ 섬유증 또는 위축, 연구 눈에서 중심와 내 망막 상피 파열, 또는 시력 개선을 막는 임의의 상태.
○ 총 병변 면적의 > 50%를 구성하는 반흔형성 또는 섬유증.
○ 플루오레세인 혈관조영 (FA)에 의해 평가시 혈액, 반흔 및 신생혈관화를 포함한 병변 크기 > 12개의 황반 광응고 연구 디스크 영역 (30.5 mm2).
○ 총 병변 면적의 ≥ 50%인 망막하 출혈, 또는 연구 눈에서 크기가 ≥ 1개의 디스크 영역인 중심와 하의 혈액의 존재 (중심와 하에 혈액이 있는 경우에는, 중심와가 가시적 CNV에 의해 270도 둘러싸여 있음).
안구 상태 (망막/후안)
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여한 시점에 연구 눈에서 유의한 망막전막 또는 유리체황반 견인 (VMT) 증후군, 또는 연구 눈에서 전체 두께 황반 원공 (가스(Gass) 단계 2 이상)의 병력.
● 당뇨병성 망막병증 (어느 한쪽 눈에서), 망막 정맥 폐쇄, 포도막염, 의심되는 망막 혈관종성 증식, 폴립양 맥락막병증 또는 다른 원인 (예를 들어, 안구 히스토플라스마증, 외상 또는 병리학적 근시)으로 인한 CNV 또는 눈에서의 임의의 다른 혈관 질환 (유리체 또는 주변 망막의 양성 상태는 비-배제적임)을 포함한, 연구 눈에서의 wAMD 이외의 다른 망막 질환의 병력.
● 연구 눈에서의 망막 박리 (복구가 있거나 없음)의 병력.
다른 상태 (비-망막)
● 수술을 필요로 하고/거나 망막의 적절한 가시화 또는 영상화를 방해하는, 연구 과정 동안 시각을 손상시킬 수 있는 연구 눈에서의 유의한 비-망막 질환 또는 중막 혼탁의 알려진 병력 또는 증거 (예를 들어, 중심 각막 반흔형성, 유의한 백내장, 각막 이영양증, 공막연화증).
● AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 시점에 연구 눈에서의 비제어된 고안압증 또는 녹내장 (항녹내장 의약으로의 치료에도 불구하고 안내압 [IOP] > 22 mmHg로 정의됨) 또는 스크리닝 시점에 > 2종의 IOP 저하 의약의 사용.
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 4주 내에 어느 한쪽 눈에서의 안구 또는 안구주위 감염의 활성 또는 병력.
● 안구 수술/절차
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여한지 6개월 내에 연구 눈에 대한 임의의 이전 안내 또는 안구주위 수술 또는 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여한지 6개월 내에 임의의 계획된 대수술 절차. AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여한지 > 1개월의 안검 수술은 배제 기준이 아니었다.
● 연구 눈에서의 유리체절제술, 섬유주절제술 또는 다른 여과 수술의 이력.
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 3개월 내에 이트륨 알루미늄 가넷 (YAG) 후낭절개술.
● 연구 눈 영역에서 wAMD의 치료를 위한 광역학 요법 또는 망막 레이저를 사용한 임의의 선행 치료 및 임의의 이전 치료 방사선.
일반/전신 조건
● 명시되지 않는 한, 투여 6개월 내에 하기 심혈관 질환 중 어느 것의 병력 또는 증거:
○ 중증 심장 질환 (예를 들어, 뉴욕 심장 학회 [NYHA] 기능적 부류 III 또는 IV) 병력 또는 불안정형 협심증의 임상 증거.
○ 급성 관상동맥 증후군, 심근경색 또는 관상 동맥 재혈관화.
○ 진행중인 치료를 필요로 하는 심실성 부정빈맥 또는 비제어된 부정맥.
○ 투여 전 스크리닝 기간 내에 BP-저하 의약을 사용함에도 불구하고, 평균 수축기 혈압 (SBP) ≥160 mmHg 또는 평균 확장기 혈압 (DBP) ≥100 mmHg로 정의되는 비제어된 고혈압.
○ 뇌혈관 사고 또는 일과성 허혈 발작의 병력.
● 진행중인 출혈 장애의 임의의 병력 또는 국제 정규화 비 (INR) >3.0. 아스피린 또는 다른 항응고제 (예를 들어, 인자 Xa 억제제)의 사용은 배제 기준이 아니었다. INR을 스크리닝 기간 동안 반복하여 적격성 기준이 충족되었다는 것을 확인하였다.
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 스크리닝 기간 내에 HbA1c >7.0%인 비제어된 당뇨병의 증거.
● 적절하게 치료된 경우, 하기를 제외한 지난 5년 내의 악성종양의 병력:
○ 피부의 국부 기저 세포 또는 편평 세포 암종.
○ 자궁경부 또는 유방의 상피내 암종.
○ 유두상, 비침습성 방광암.
○ 6개월 동안 관찰시 안정한 전립선-특이적 항원 (PSA)에 의해 임상적으로 나타난 전립선암 1기 및 2기.
○ 적어도 2년 동안 완전 완화 상태에 있거나 또는 수술로 치유된 것으로 간주된 임의의 다른 암.
● 양성 HIV, B형 간염 또는 C형 간염 (기록된 치유법으로 치료되지 않는 한).
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 36시간 내에, 임상 검사 및/또는 온도 >38.5℃에 기초하여 임상연구자에 의해 임상적으로 유의한 것으로 간주된 임의의 유형의 전신 활성 감염의 증거 또는 의심.
● 하기에 대한 알려진 심각한 알레르기:
○ 혈관조영에 사용된 플루오레세인 염료 또는 소듐 플루오레세인 (치료가 가능한 경도 알레르기는 허용됨); 또는
○ 아플리베르셉트.
● 임신하였거나, 모유수유 중이거나 또는 연구 동안 임신하게 될 예정인 여성.
● 임상연구자의 관점에서 대상체의 안전성을 손상시킨 다른 유의한 실험실 이상 또는 의학적 상태.
의약
● AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 5회 반감기 내에 전신 항염증 스테로이드 또는 면역억제제 의약 (프로토콜-명시된 프레드니손 이외의 다른 것)의 사용. 흡입 또는 국소 스테로이드 및 비스테로이드성 항염증 약물 (NSAID)은 허용되었다.
● 하기 중 어느 것을 받았다:
○ AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하기 전 30일 또는 5회 반감기 (어느 것이든 더 긴 것) 내에 임상시험용 의약품.
○ 선행 유전자 요법.
III. 임상시험용 의약품
임상시험용 의약품 (IMP)인 AAV2.7m8-아플리베르셉트는 AAV2 캡시드에 대한 생체내 방향적 진화에 의해 유래된 AAV2.7m8 단백질 캡시드를 함유하는 재조합 복제-결핍 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 벡터였다 (Dalkara et al., (2013) Sci Transl Med 5(189):189ra76; US2014/0364338). AAV2.7m8-아플리베르셉트는 편재성 키메라 프로모터의 제어 하에 아플리베르셉트 cDNA의 코돈-최적화된 버전의 발현 카세트를 보유하였다 (도 1a) (WO2018170473A1 참조). AAV2.7m8-아플리베르셉트는, 하나는 AAV2 Rep 및 AAV2.7m8 Cap 단백질에 대한 유전자를 코딩하고 다른 것은 인간 아플리베르셉트 cDNA 발현 카세트를 코딩하는 2종의 상이한 바큘로바이러스를 사용하여 Sf9 세포에서 바큘로바이러스 발현 벡터 시스템을 사용함으로써 제조하였다.
AAV2.7m8-아플리베르셉트는 표 1에 제시된 바와 같이 제제화된 0.25 mL의 IMP를 함유하는 멸균 즉석-사용 0.5 mL 크리스탈 제니스 바이알 내의 멸균-여과된 동결 현탁액으로서 공급되었다.
표 1: 코호트 1에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트 임상시험용 의약품의 제제.
Figure pct00007
IV. 연구 설계
A. 용량 및 투여 방법
코호트 1
코호트 1의 대상체에게 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6 x 1011 vg/눈의 용량 1로 100 μL의 주사 부피로 투여하였다.
AAV2.7m8-아플리베르셉트 바이알을 ≤ -60℃ 하의 동결 저장고로부터 꺼내고, 실온에서 해동시켰다. AAV2.7m8-아플리베르셉트를 IVT 주사를 통해 투여하였다. 국소 또는 결막하 마취 하에 포비돈-아이오딘에 의한 무균 기술을 사용하였다. 주사후 관리 및 의약 요법을 임상시험 표준 관리에 기초하여 제공하였다.
B. 연구 방문
스크리닝 (제-15일 내지 제-7일)
도 1b에 제시된 바와 같이, 대상체는 스크리닝 동안 제-15일 내지 제-7일 (예를 들어, 제-14일 내지 제-7일)에 아플리베르셉트 2 mg의 단일 IVT 주사를 받았으며, 이는 표준 관리와 일치한다. 대상체는 상용의 임상시험 표준 주사후 관리를 받았다.
연구 제1일
연구 제1일 (아플리베르셉트의 IVT 주사 7일 내지 15일, 예를 들어 7일 내지 14일 후)에, 연구 대상체는 이들이 AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 전 항-VEGF 요법에 대해 반응성이었다는 것을 확인하기 위해 SD-OCT 연구를 받았다. 항-VEGF 반응성을 임상연구자에 의해 확인하였다. 상기 기재된 바와 같이 (포함 기준 참조), 의미있는 항-VEGF 반응을 갖는 것으로 확인된 대상체만이 이 연구에 등록시키기에 적격이었다.
항-VEGF 요법에 대해 반응성인 대상체를 연구 코호트에 순차적으로 등록시키켰으며, 이들은 연구 눈에 단일 AAV2.7m8-아플리베르셉트 IVT 주사를 받았다. 상기 기재된 바와 같이, 연구 지속기간 동안 연구 눈으로서 한쪽 눈만을 선택하였다.
AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 후
대상체는 임상 평가 및 치료 (필요한 경우)를 위해 제3일 및 제8일에, 제2주, 제4주, 제6주 및 제8주 동안 및 그 후 4주마다 (즉, 제12주, 제16주, 제20주 및 제24주) 복귀하였다. 코호트 1의 안전성 및 효능 분석을 제24주에 수행하였다.
제4주에 시작하여, 재치료 기준 (하기 참조)에 따라 증가된 질환 활성의 증거가 있는 경우에, 대상체는 아플리베르셉트 2 mg IVT의 구제 주사를 받을 자격이 있었다. 하기 중 어느 하나의 존재는 2 mg IVT 아플리베르셉트를 사용한 표준 항-VEGF 치료의 재개를 필요로 하였다:
● 기준선으로부터 BCVA의 ≥ 10개 문자의 상실 (ETDRS 프로토콜을 사용함) 및 SD-OCT에 의해 관찰되고 임상연구자에 의해 BCVA 상실의 원인인 것으로 판단된 망막내액 또는 망막하액.
● SD-OCT에 의해 평가시 기준선으로부터 중심 서브필드 두께 > 75 μm의 증가.
● 황반 변성으로 인한 시각-위협 출혈의 존재.
대상체를 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후 제52주에 안전성 및 효능에 대해 다시 평가하였다. 추적 기간은 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후 제104주까지 계속된다.
C. 코르티코스테로이드 요법
주사후 안구 염증의 가능한 위험을 감소시키기 위해, 대상체에게 예방적 코르티코스테로이드 요법 (예를 들어, 프레드니손)을 투여하고, 벡터의 안구 및 전신 내약성에 대해 면밀히 모니터링하였다.
코호트 1의 대상체에게 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 3일 전 (제-3일)부터 치료 3일 후까지 총 6일 동안 60 mg/일의 프레드니손으로 시작하여 예방적 13일 경구 코르티코스테로이드 요법을 투여하였다. 이 후 7일 프레드니손 점감이 이어졌다. 경구 프레드니손 요법의 요약이 표 2에 제공된다.
표 2: 경구 프레드니손 요법.
Figure pct00008
AAV2.7m8-아플리베르셉트 IVT 주사 전에 면역억제 (즉, 프레드니손)를 개시하도록 설계하여 캡시드 항원에 대한 노출시 면역 반응을 제한하였다. 대상체는 13일 요법을 위해 프레드니손을 자기-투여하였다.
대상체는 연구 제2주-제24주 동안 필요에 따라 국소 또는 경구 코르티코스테로이드 (프레드니손)를 받았다.
D. 금지된 의약 및 치료
하기 의약은 연구 동안 금지되었다:
● 베바시주맙을 포함한 임의의 전신 항-VEGF 작용제.
● 이 연구에서의 구제 항-VEGF 주사 기준에 따라, 연구 약물 또는 아플리베르셉트 주사 2 mg 이외의 다른 연구 눈에서의 임의의 항-VEGF 작용제.
● 연구 눈에서의 IVT 스테로이드.
● 면역 억제 약물. 전신, 흡입 또는 국소 스테로이드 및 NSAID는 허용되었다.
● 임의의 다른 임상시험용 연구에서의 사용 및 참여.
● 연구 눈에서의 백내장 수술은 임상적으로 나타나고 IVT 투여 > 90일 후 및/또는 아플리베르셉트의 마지막 주사 >7일 후로 스케줄링된 경우 수행될 수 있다.
● 비-연구 눈에서 AMD가 발생한 대상체는 비-연구 눈에서 표준 관리 요법을 받을 수 있다.
E. 코호트 1에 대한 연구 설계의 요약
6명의 대상체를 코호트 1에 등록시켰다.
코호트 1의 대상체에게 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6 x 1011 vg/눈의 용량 1로 투여하였다. 코호트 1에 등록된 제1 (감시) 대상체는 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 IVT 주사를 받았으며, 그를 29일 동안 평가한 후에 코호트 내의 후속 5명의 대상체 (대상체 2-6)에게 투여하였다.
코호트 1에 대한 연구 설계의 요약이 표 3에 제공된다.
표 3: 코호트 1에 대한 연구 설계의 요약.
Figure pct00009
F. 연구 지속기간
이 연구에서 대상체 참여의 지속기간은 각각의 대상체에 대해 대략 108주이다. 이는 4주의 스크리닝 기간 및 추가의 104주 연구 기간을 포함한다.
연구의 완료 또는 중단시에, 적절한 경우, 대상체에게 이러한 유전자 요법의 안전성을 추가로 평가하기 위한 장기간 추적 연구에 등록할 기회를 제공한다.
V. 연구 평가
A. 일반 신체 검사 및 활력 징후
각각의 대상체의 관련 의료 및 안과 병력을 수집하고 기록하였다. 일반 신체 검사는 키 (스크리닝에서만), 체중 및 활력 징후로 이루어졌다.
활력 징후는 혈압, 맥박수 측정, 체온 및 호흡률로 이루어졌다. 12-리드 심전도 (ECG)를 각각의 대상체에 대해 취하였다. 하기 임상 실험실 및 항체 시험을 수행하였다: 화학, 전혈구 계수 (CBC), 응고 연구, 요분석, HIV 또는 간염의 혈청학적 증거 및 임신 검사.
제104주, 연구 종료 (EOS) 및/또는 조기 종결 방문시에, 신체 검사는 스크리닝 검사 이후 대상체의 신체 상태에 임의의 변화가 발생하였는지를 평가한다.
B. 면역 반응 및 아플리베르셉트 발현
총 항-AAV2.7m8 항체를 측정하였다. 컷포인트에 의해 평가되는 리포터 유전자-기반 형질도입 간섭 검정을 사용하여 대상체의 혈청 내 중화 항-AAV2.7m8 항체를 결정하였다.
ELISA-기반 컷포인트 항체 검정을 사용하여 혈청에서 항-아플리베르셉트 항체에 대한 체액성 면역 반응을 측정하였다.
혈청을 수집하여 아플리베르셉트 단백질의 존재를 결정하였다.
ELISPOT 검정을 사용하여 AAV2.7m8 캡시드 단백질 및 아플리베르셉트 단백질에 대한 세포성 면역을 측정하였다.
C. 전체 안과 검사 및 다른 평가 방법
연구 평가는 안과 검사, 안내압 (IOP) 및 간접 검안경검사를 포함하였다.
안과 검사는 눈 및 부속기의 외부 검사, 안검/동공 반응성 (안검하수, 비정상적 동공 형상, 불균등 동공, 광에 대한 비정상적 반응 및 구심신경 동공 결손을 포함하나 이에 제한되지는 않음)에 대한 상용 스크리닝 및 슬릿-램프 검사 (안검, 결막, 각막, 수정체, 홍채, 전방)로 이루어졌다. 슬릿-램프 검사는 전안구 구조를 검사하였고, 임의의 소견을 등급화하는데 사용되었다. 슬릿-램프 검사 동안 임의의 소견이 주목된 경우에, 임의의 방문시에, 중증도를 임상연구자에 의해 등급화하고, 소견을 임상적으로 유의한 것으로 또는 임상적으로 유의하지 않은 것으로 기재하였다.
골드만 압평 안압측정계 또는 토노-펜™을 사용하여 IOP 측정을 수행하였다. IOP 측정은 임의의 IVT 주사 전 및 눈 확장 전에 수행하였다. 제1일 방문은 주사전 및 주사후 (주사 30분 후) IOP 측정을 필요로 하였다.
확장 간접 검안경검사는 유리체, 시신경, 주변 망막 및 망막 혈관계의 후안부 이상의 평가를 포함하였다. 검안경검사 동안 임의의 소견이 주목된 경우에, 임의의 방문시에, 중증도를 임상연구자에 의해 등급화하고, 소견을 임상적으로 유의한 것으로 또는 임상적으로 유의하지 않은 것으로 기재하였다. 제1일 방문은 주사전 및 주사후 간접 검안경검사 평가를 필요로 하였다.
스펙트럼 도메인 광 간섭 단층촬영 (SD-OCT)
SD-OCT를 사용하여 간섭 프린지 패턴의 스펙트럼 분석에 의해 후방-산란 광의 크기 및 지연으로 부호화된 깊이-분해 조직 구조 정보를 수득하였다.
플루오레세인 혈관조영
플루오레세인 혈관조영 영상을 사용하여 연구 등록에 대한 환자 적격성을 확인하고, CNV 병변 성장의 효능을 평가하고, 기준선과 비교하여 누출을 평가하였다.
디지털 컬러 안저 촬영
망막, 시신경 유두 및 황반의 컬러 안저 영상을 찍었다.
광 간섭 단층촬영 혈관조영 (OCT-A)
OCT-A 영상화 (스웹트-소스 또는 스펙트럼-도메인)를 사용하여 망막 및 맥락막의 용적 3차원 맵뿐만 아니라 혈류에 대한 정보를 수득하였다.
굴절 및 시력
연구 현장에서 훈련되고 인증된 시력 검사자에 의해 굴절 및 BCVA를 측정하였다. 눈을 확장시키기 전에 4 미터의 출발 거리에서 시력을 측정하였다.
D. 안전성 평가
AAV2.7m8-아플리베르셉트의 IVT 투여와 연관된 위험을 완화시키기 위해, IVT AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 당일 및 그 후 치료후에 대상체를 면밀히 모니터링하였다.
AE, 활력 징후, 신체 및 눈 검사, ECG, 임신 검사 및 실험실 평가의 수집을 통해 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 안전성을 평가하였다.
연구의 처음 8주에 대상체의 집중 모니터링을 수행하고, 이어서 그 후 안전성 및 효능에 대한 정기적 안전성 평가를 수행하였다. 모든 대상체는 각각의 연구 방문시에 조기 치료 당뇨병성 망막병증 연구 (ETDRS) 문자 평가에 의해 그의 시력을 시험하였고, 표준 관리 아플리베르셉트 IVT 주사를 구제 치료로서 사용하였다.
AE의 중증도 또는 강도를 하기 척도로 등급화하였다:
● 경도: AE가 주목할만하였지만, 대상체의 일상 활동을 유의하게 손상시키지 않았다.
● 중등도: AE는 정상적인 일상 활동을 감소 또는 손상시켰지만, 무력화하지는 않았다.
● 중증: AE는 정상적인 일상 활동을 무력화하고 수행하지 못하게 하였다.
연구 치료의 투여후 104주에 걸쳐 안전성을 평가한다. 연구 종료 (EOS) 방문의 완료시에, 대상체에게 트랜스진 발현의 안전성 및 지속성을 추가로 평가하기 위한 장기간 연장 연구에 등록할 것을 제안한다.
E. 효능 평가
wAMD의 치료에서의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효능을 하기 척도에 의해 평가하였다. 주요 평가 시점은 24주였다. BCVA 및 SD-OCT의 기준선 값은 아플리베르셉트 주사 전 제-15일 내지 제-7일 (예를 들어, 제-14일 내지 제-7일)에 스크리닝 방문 동안 취한 값을 지칭한다. 분석을 위해 기준선 값을 비교에 사용하였다.
시각은 주로 ETDRS 점수 (정확하게 읽힌 문자의 개수)로서 표현되는 BCVA를 통해 평가하였다 (Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134(9):1041-1047). 대상체가 기준선과 비교하여 ETDRS 점수에서 15개 미만의 문자를 상실한 경우에 시각 유지로 분류하였다. 계산된 종점은 기준선으로부터의 평균 변화, 기준선과 비교하여 적어도 15개 문자의 획득 퍼센트 및 기준선과 비교하여 15개 이상의 문자의 상실 퍼센트를 포함하였다.
표준 기술을 사용하여 CNV 병변을 평가하는 FA를 수행함으로써 기준선과 비교하여 누출을 평가하였다.
승인된 장비 및 표준 기술을 사용하여 SD-OCT를 수행함으로써 기준선 값과 비교하여 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 또는 중심 서브필드 두께), 황반 부피 및 유체 (예를 들어, 망막하액 및 망막내액)의 존재를 평가하였다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, 대상체당 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 후 제공되는 아플리베르셉트 주사 횟수를 결정하였다. 추가로, AAV2.7m8-아플리베르셉트를 사용한 치료 후 제1 아플리베르셉트 주사까지의 시간 및 아플리베르셉트 구제 치료를 필요로 하지 않은 대상체의 비율을 결정하였다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, IRF가 없는 대상체의 비율을 결정하였다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, SRF가 없는 대상체의 비율을 결정하였다.
기준선에서 PED를 갖는 대상체 중, 제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, PED를 갖지 않는 대상체의 비율을 결정하였다.
F. 통계
안전성 집단은 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 받은 모든 대상체를 포함하였고, 이들을 받은 용량에 따라 분석하였다.
모든 다른 안전성 파라미터를 코호트별로 요약하였다. 규제 활동을 위한 의학 사전 (MedDRA, 버전 21) 분류를 사용하여 AE를 부호화함으로써 각각의 사건에 대한 바람직한 용어 (PT) 및 기관계 분류 (SOC)를 제공하였다. 연구 철회로 이어지는 SAE 및 AE를 개별적으로 열거하였다.
효능 분석은 모든 대상체를 포함하였다. 효능 분석 종점을 평가하고, 기술 통계를 코호트별로 계산할 것이다. 주요 평가 시점은 24주였다. 효능은 받은 용량에 따라 및 종합하여 평가하였다.
VI. 결과
A. 대상체 특징
코호트 1에 등록된 모든 6명의 대상체는 wAMD로 진단되었다. 등록 시점에, 대상체는 항-VEGF 치료에 대한 높은 요건 (예를 들어, 빈번한 항-VEGF 치료를 필요로 함), 대략 20/50의 기능적 시각, OCT 상의 일부 과도한 중심 서브필드 두께를 가졌고, 항-VEGF 치료의 정기적 IVT 주사를 받고 있었으며, 요법에 대해 반응하였다. 모든 대상체에 대한 질환 특징 및 치료 이력이 표 4-5에 제공된다.
표 4에 제시된 바와 같이, 코호트 1의 대상체는 AAV2.7m8-아플리베르셉트가 투여되기 전 대략 1년 (대상체 5) 내지 대략 10년 이상 (대상체 4) 사이에 wAMD로 진단되었다. 대상체는 연구 눈에 7회 (대상체 5) 내지 109회 (대상체 4) 선행 주사로 폭넓은 범위의 선행 항-VEGF IVT 주사를 받았다. 이 연구 전에 계산된 평균 항-VEGF IVT 주사 간격은 4주마다 내지 10주마다의 범위였다. 모든 대상체는 이 연구에의 등록을 위해 스크리닝 전 4개월 내 2 또는 3회의 항-VEGF 주사를 받았다. 연구 시작 전 스크리닝 항-VEGF 주사 7일 (대상체 1-3) 또는 14일 (대상체 4-6) 후에 대상체에게 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 투여하였다.
표 4: 코호트 1의 대상체의 기준선 특징.
Figure pct00010
표 5: 코호트 1의 연구 대상체의 질환 특징 및 치료 이력.
Figure pct00011
B. 안전성
AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후 24주 동안, SAE는 발생하지 않았고, 용량 제한 독성 (DLT)에 대한 기준을 충족하는 어떠한 AE도 없었다. 약물-관련 비-안구 AE도 관찰되지 않았다. 안구 염증이 모든 대상체에서 관찰되었고, 국소 스테로이드로 관리가능하였다. 추가로, 혈관염, 망막염 또는 맥락막염도 관찰되지 않았다. AAV2.7m8-아플리베르셉트와 잠재적으로 관련된 것으로 간주된 19건의 안구 AE가 관찰되었으며, 14건은 경도였고, 5건은 중등도였다 (2건의 AE는 중간 포도막염이었고, 1건의 AE는 유리체 세포였으며, 2건의 AE는 전방 세포였음). 1명의 환자는 2건의 전방 세포 사건 (1건의 경도 사건 및 1건의 중등도 사건)을 가졌다. 국소 또는 경구 코르티코스테로이드에 대해 반응성인 경도 내지 중등도 안내 염증이 초기 추적 동안 빈번하게 관찰되었다. OCT 영상은 대부분의 대상체에서 지속적인 유체의 해소를 보여주었으며, 악화의 징후는 없었다. 시력은 일반적으로 안정하였다. 24주까지의 AAV2.7m8-아플리베르셉트와 관련된 모든 안전성 사건의 요약이 표 6에 제공된다.
표 6: AAV2.7m8-아플리베르셉트와 관련된 모든 안전성 사건.
Figure pct00012
모든 대상체는 제-3일에 시작하여 6일 동안 60 mg의 경구 프레드니손을 받았고, 이 후 프레드니손의 7일 점감 과정이 이어졌다. 안구 세포 염증의 임상 평가는 AAV2.7m8-아플리베르셉트 후 초기에 임상적으로 유의한 염증이 발생하지 않았다는 것을 밝혀냈다. 추가로, 도 6에 제시된 바와 같이, 대상체가 스테로이드 점안제를 받았을 때 악화 또는 새로운 염증도 관찰되지 않았다. 제24주까지, 전방 세포 염증이 해소되거나 개선되었다. 관찰된 세포 염증은 일반적으로 경도였다. 도 6에 제시된 방수 세포 수 카테고리는 포도막염 명명법의 표준화 (SUN) 기준에 기초한 반면 (Jabs, DA et al., J Ophthalmol. 2005;140:509-516), 유리체 세포 수 카테고리는 국립 보건원 (NIH) 가이드라인에 기초하였다.
종합하면, 안전성 평가는 AAV2.7m8-아플리베르셉트가 내약성이 우수하였으며 DLT 또는 SAE는 보고되지 않았다는 것을 보여주었다. 모든 안전성 사건은 경도 내지 중등도였고, 대부분 염증-관련이었다. 계속된 AE 추적은 평균 시력이 안정하게 유지되었고 항-VEGF 구제 주사가 필요하지 않았다는 것을 보여주었다. 따라서, 결과는 이전에 빈번한 항-VEGF 주사를 필요로 한 wAMD 환자에게 6x1011 vg/눈의 용량으로 단일 IVT 주사로서 투여된 AAV2.7m8-아플리베르셉트가 허용되는 안전성 프로파일을 갖는다는 것을 나타낸다.
C. 효능
AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 후, 모든 6명의 대상체는 OCT 평가에 기초하여 질환 활성의 안정화를 나타냈다. 도 2a-2l에 제시된 바와 같이, AAV2.7m8-아플리베르셉트로의 치료 전 및 후에 찍은 OCT 영상은 코호트 1의 모든 6명의 대상체에서 강건한 해부학적 반응이 분명하였다는 것을 나타냈다. 예를 들어, 대상체 1 (예를 들어, 도 2a와 2b를 비교함), 대상체 2 (예를 들어, 도 2b와 2c를 비교함), 대상체 3 (예를 들어, 도 2d와 2e를 비교함), 대상체 4 (예를 들어, 도 2f와 2g를 비교함) 및 대상체 5 (예를 들어, 도 2h와 2i를 비교함)에서, 망막하액은 표준 관리 항-VEGF 치료 하에 지속되었지만, AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후에 해소되었고 해소된 채로 유지되었다. 대상체 6은 폴립양 맥락막 혈관병증 (PCV)과 일치하는 망막 형태를 나타냈고 (도 2k), 일부 유체는 AAV2.7m8-아플리베르셉트로의 치료 후에 지속되었지만, 질환 진행의 증거는 없었다 (도 2l). 추가로, 도 3에 제시된 바와 같이, 어떠한 대상체도 중심 서브필드 두께 (CST)의 증가를 나타내지 않았고, -52.7 μm의 평균 감소가 관찰되었다 (90% CI -86.5, -18.8). 증가된 CST는 wAMD에서의 질환 진행의 지표이다. 중요하게는, 어떠한 대상체도 표준 관리 아플리베르셉트 구제 주사 ("구제 주사")를 투여받거나 필요로 하지 않았다.
최대 교정 시력 (BCVA)을 연구 전반에 걸쳐 모든 대상체에서 ETDRS 문자 평가에 기초하여 측정하였다. 도 4에 제시된 바와 같이, BCVA는 평균 -2개 문자의 감소 (90% CI -9.1, 5.1)로 코호트 1의 대상체에 걸쳐 안정하였다.
AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후 34주의 중앙 추적 시간에서, OCT 영상화에서 질환 재활성화의 징후를 나타낸 대상체는 없었다 (도 7a-7b). 추가로, 임의의 구제 항-VEGF IVT 주사를 필요로 한 대상체는 없었고, 44주까지의 추적 기간 동안 임의의 시점에서 재치료 기준을 충족한 대상체도 없었다. 마지막으로, 24주 이후 추가의 추적 기간 동안, BCVA는 유지되었고 (즉, 어떠한 환자도 10개 초과의 ETDRS 문자를 상실하거나 획득하지 않았음), 제24주에 관찰된 해부학적 개선 (즉, 망막하액 및 망막내액의 해소 및 CST의 감소)도 유지되었으며, 안전성 우려는 발생하지 않았다.
34주의 중앙 추적 시간에서 평가된 안전성 및 효능 결과의 요약이 표 7에 제공된다.
표 7: 34주의 중앙 추적 시간에서의 안전성 및 효능 결과의 요약.
Figure pct00013
D. 결론
wAMD에 대한 현행 표준 관리 요법은 약 4-8주마다 전형적으로 장기간 요구되는 항-VEGF IVT 주사이다. 이러한 요법의 준수는 환자, 보호자 및 건강관리 시스템에 대해 어려울 수 있어, 준최적 투여 및 과소치료로 인한 시각 상실로 이어진다.
본 실시예에 제시된 결과는 AAV2.7m8-아플리베르셉트가 허용되는 안전성 프로파일을 나타내면서 망막 해부학을 개선시키고 시각을 안정화시키는데 명확한 이익을 제공하였다는 것을 보여준다. 구체적으로, 환자는 연구 동안 시각을 유지하였고, AAV2.7m8-아플리베르셉트는 안전하고 내약성이 우수한 것으로 나타났으며, 관찰된 염증은 일반적으로 경도이고 스테로이드 점안제에 대해 반응성이다.
이 연구의 코호트 1의 대상체는 이전에 그의 질환의 진행을 늦추거나 예방하기 위해 빈번한 항-VEGF 주사를 필요로 하였지만 (표 4), 이 연구 동안 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 투여 후에 항-VEGF 구제 주사를 필요로 하지 않았다는 것을 주목하였다.
망막하액은 20주 초과 동안 표준 관리 항-VEGF 치료를 받고 있는 대상체의 OCT 스캔 상에 존재하였고, 스크리닝 아플리베르셉트 IVT 주사 1-2주 후에 계속되었다는 것을 주목하였다. 이러한 유체는 대상체가 반복적으로 치료되었음에도 존재하였고, 따라서 표준 관리 항-VEGF 단백질의 IVT 볼루스에 대해 불응성이었다. 예상외로, 이러한 불응성 SRF는 AAV2.7m8-아플리베르셉트로의 치료 후에 해소되었으며, 이는 전임상 연구로부터 예측되지 않았을 결과이다.
6x1011 vg/눈의 용량으로 투여된 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 관찰된 안전성 및 효능은 실시예 2에 기재된 바와 같이 국소 코르티코스테로이드와 함께 더 낮은 용량으로 투여된 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 본 1상 연구의 계속으로 이어졌다.
실시예 2: 신생혈관성 (습성) 연령-관련 황반 변성에서 국소 코르티코스테로이드와 함께 6 x 1011 vg/눈보다 더 낮은 용량의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 개방 표지 1상 연구.
하기 실시예는 wAMD를 갖는 대상체에서 국소 코르티코스테로이드와 함께 6x1011 vg/눈보다 더 낮은 용량으로 투여된 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 안전성 및 효능을 평가하기 위한 실시예 1에 기재된 1상 연구의 계속을 기재한다.
I. 연구 목적 및 종점
1차 목적, 2차 목적 및 1차 및 2차 종점은 실시예 1의 섹션 I에 기재된 바와 같다.
II. 연구 대상체
이 연구에서의 연구 대상체는 실시예 1의 섹션 II에 기재된 바와 같다.
III. 임상시험용 의약품
임상시험용 의약품은 실시예 1의 섹션 III에 상세히 기재된 바와 같고 도 1a에 도시된 바와 같은 AAV2.7m8-아플리베르셉트이며, 예외로 하기 표 8에 기재된 바와 같이 적합한 주사 부피를 유지하기 위해 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 농도를 달리하였다.
표 8: 코호트 2-4에 대한 AAV2.7m8-아플리베르셉트 임상시험용 의약품의 제제.
Figure pct00014
IV. 연구 설계
A. 용량 및 투여 방법
하기 기재된 용량의 AAV2.7m8-아플리베르셉트를 실시예 1의 섹션 IV에 기재된 바와 같이 투여하였다.
연구 코호트 2-4
코호트 2: wAMD로 진단된 6명의 대상체를 코호트 2에 등록시킨다. 코호트 2의 대상체에게 예방적 경구 프레드니손 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 2 x 1011 vg/눈의 용량 2로 투여한다.
코호트 3: wAMD로 진단된 9명의 대상체를 코호트 3에 등록시킨다. 코호트 3의 대상체에게 예방적 국소 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 2 x 1011 vg/눈의 용량 2로 투여한다.
코호트 4: wAMD로 진단된 9명의 대상체를 코호트 4에 등록시킨다. 코호트 2 및 3의 대다수의 대상체에서 구제 요법을 필요로 하는 맥락막 신생혈관화 삼출의 징후가 관찰되는 경우에, 코호트 4의 대상체에게 국소 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6x1010 vg/눈의 용량 3으로 투여한다 (코호트 4b). 코호트 2 및 3의 대다수의 대상체에서 구제 요법을 필요로 하는 맥락막 신생혈관화 삼출의 징후가 관찰되지 않는 경우에, 코호트 4의 대상체에게 국소 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6x1011 vg/눈의 용량 1로 투여한다 (코호트 4a).
B. 연구 방문
연구 방문은 실시예 1의 섹션 IV 및 도 1b에 기재된 바와 같다.
C. 코르티코스테로이드 요법
코호트 2의 대상체에게 실시예 1에서 코호트에 대해 상세히 기재된 바와 같은 예방적 13일 경구 코르티코스테로이드 요법을 투여한다:
코호트 2: 코호트 2의 대상체에게 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 3일 전 및 3일 후 총 6일 동안 60 mg의 프레드니손으로 시작하는 예방적 13일 경구 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 2 x 1011 vg/눈의 용량 2로 투여한다. 이 후 7일 프레드니손 점감이 이어진다. 코호트 2에 대한 경구 프레드니손 요법의 요약은 실시예 1의 표 2에 제공된다.
코호트 3 및 4의 대상체에게 하기 기재된 바와 같이 국소 코르티코스테로이드의 예방적 점감 요법 (디플루프레드네이트 0.05% 점안제)을 투여한다:
코호트 3: 코호트 3의 대상체에게 예방적 국소 4주 점감 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 2 x 1011 vg/눈의 용량 2로 투여한다.
코호트 4: 코호트 4b의 대상체에게 치료 의사의 판단으로 연장될 수 있는 예방적 국소 4주 점감 코르티코스테로이드 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6x1010 vg/눈의 용량 3으로 투여한다. 코호트 4a의 대상체에게 디플루프레드네이트 요법 치료 의사의 판단으로 연장될 수 있는 예방적 국소 4주 점감 디플루프레드네이트 요법과 함께 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 단일 IVT 주사를 6x1011 vg/눈의 용량 3으로 투여한다.
국소 디플루프레드네이트 요법의 요약이 하기 표 9에 제공된다.
표 9: 국소 디플루프레드네이트 요법의 요약.
Figure pct00015
AAV2.7m8-아플리베르셉트 IVT 주사에 대한 노출 직후에 면역억제를 개시하도록 설계하여 캡시드 항원에 대한 노출시 면역 반응을 제한한다. 대상체는 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 주사 당일 (제1일, 주사후)에 시작하여 제1주 동안 1일에 4회 치료 눈의 결막낭에 한 방울의 디플루프레드네이트 0.05% 용액 (2.5 μg 디플루프레드네이트)을 자기-투여한다. 이 후 제2 주 동안 1일에 3회, 제3 주 동안 1일에 2회 및 제4 주 동안 1일에 1회가 이어진다. 점감 코르티코스테로이드 요법은 치료 의사의 판단으로 연장될 수 있다.
D. 금지된 의약 및 치료
이 연구에 대한 금지된 의약 및 치료는 실시예 1의 섹션 IV에 기재된 바와 같다.
E. 코호트 2-4에 대한 연구 설계의 요약
코호트 2-4에 대한 연구 설계의 요약이 표 10에 제공된다.
표 10: 코호트 2-4에 대한 연구 설계의 요약.
Figure pct00016
F. 연구 지속기간
이 연구에서 대상체 참여의 지속기간은 실시예 1의 섹션 IV에 기재된 바와 같다.
V. 연구 평가
이 연구에서 수행된 평가는 실시예 1의 섹션 V에 기재된 바와 같다. 추가로, 방수 및 유리체액으로부터 샘플을 취한다.
방수 샘플링
스크리닝시 (아플리베르셉트 주사 전) 및 제1일 (AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 전), 제12주, 제24주, 제36주, 제52주, 제76주, 제88주, 제104주 및 제1 아플리베르셉트 (아일리아) 구제 치료 또는 조기 종결을 필요로 하는 임의의 방문시에 방수 샘플을 수득한다. 방수 샘플을 아플리베르셉트, VEGF-A 및 NAb 농도에 대해 분석한다.
유리체액 샘플링
연구 동안 임의의 시점에 유리체절제술을 수행할 때 유리체액 샘플을 수득한다. 유리체액 샘플을 주로 아플리베르셉트 농도에 대해 분석한다. 나머지 샘플을 VEGF-A 농도에 대해 분석한다.
VI. 결과
A. 대상체 특징
모든 대상체에 대한 질환 특징 및 치료 이력을 기록한다. 특히, 신생혈관성 AMD 진단 날짜 또는 년수, 연구 눈에서의 선행 항-VEGF 주사 횟수, 연구전 평균 계산된 항-VEGF 주사 간격, 스크리닝 전 4개월 내에 받은 항-VEGF 주사 횟수, 스크리닝 아플리베르셉트 IVT 용량 날짜 및 AAV2.7m8-아플리베르셉트 주사 날짜를 기록한다.
B. 안전성
IVT AAV2.7m8-아플리베르셉트 투여 당일 및 그 후 치료후에 대상체를 면밀히 모니터링한다.
활력 징후, 신체 및 눈 검사, ECG, 임신 검사 및 실험실 평가의 수집을 통해 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 안전성을 평가한다.
AE, SAE 및 DLT의 발생률, 중증도 및 치료에 대한 관계를 모든 대상체에서 평가한다.
안내 염증의 발생, 중증도 및 치료에 대한 관계를 모든 대상체에서 평가한다.
시력은 ETDRS 점수 (정확하게 읽힌 문자의 개수)로서 표현되는 BCVA를 통해 모든 대상체에서 평가한다 (Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134(9):1041-1047).
항-VEGF 구제 주사에 대한 요건을 모든 대상체에서 모니터링한다.
대상체의 혈청 중 기존 항-AAV NAb-수준과 AE, SAE 및 DLT 사이의 상관관계의 존재를 결정한다.
AE, SAE, DLT 및 안내 염증의 발생 및 해소에 대한 스테로이드 예방 (국소 또는 경구)의 효과를 평가한다.
표준 관리 아플리베르셉트 IVT 주사를 구제 치료로서 사용한다.
C. 효능 평가
질환 안정화를 모든 대상체에서 평가한다. 연구 치료의 투여 전 및 후에 망막 두께, 중심 서브필드 두께, 유체 및 다른 해부학적 특색을 측정한다 (예를 들어, OCT 영상화에 의해).
wAMD의 치료에서의 AAV2.7m8-아플리베르셉트의 효능을 하기 척도에 의해 평가한다. 주요 평가 시점은 24주이다. BCVA 및 SD-OCT의 기준선 값은 아플리베르셉트 주사 전 제-15일 내지 제-7일 (예를 들어, 제-14일 내지 제-7일)에 스크리닝 방문 동안 취한 값을 지칭한다. 분석을 위해 기준선 값을 비교에 사용한다.
시각은 주로 ETDRS 점수 (정확하게 읽힌 문자의 개수)로서 표현되는 BCVA를 통해 평가한다 (Vitale et al., (2016) JAMA Ophtalmol 134(9):1041-1047). 대상체가 기준선과 비교하여 ETDRS 점수에서 15개 미만의 문자를 상실한 경우에 시각 유지로 분류한다. 계산된 종점은 기준선으로부터의 평균 변화, 기준선과 비교하여 적어도 15개 문자의 획득 퍼센트 및 기준선과 비교하여 15개 이상의 문자의 상실 퍼센트를 포함한다.
표준 기술을 사용하여 CNV 병변을 평가하는 FA를 수행함으로써 기준선과 비교하여 누출을 평가한다.
승인된 장비 및 표준 기술을 사용하여 SD-OCT를 수행함으로써 기준선 값과 비교하여 망막 두께 (예를 들어, 중심 망막 두께 또는 중심 서브필드 두께), 황반 부피 및 유체 (예를 들어, 망막하액 및 망막내액)의 존재 및 유체를 평가한다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, 대상체당 AAV2.7m8-아플리베르셉트 치료 후 제공되는 아플리베르셉트 주사 횟수를 결정한다. 추가로, AAV2.7m8-아플리베르셉트를 사용한 치료 후 제1 아플리베르셉트 주사까지의 시간 및 아플리베르셉트 재치료를 필요로 하지 않은 대상체의 비율을 결정한다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, IRF가 없는 대상체의 비율을 결정한다.
제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, SRF가 없는 대상체의 비율을 결정한다.
기준선에서 PED를 갖는 대상체 중, 제4주에서 제104주까지 시간 경과에 따른, PED를 갖지 않는 대상체의 비율을 결정한다.
본 개시내용이 이해의 명확성을 목적으로 예시 및 실시예에 의해 어느 정도 상세히 기재되었지만, 설명 및 실시예는 본 개시내용의 범주를 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 본원에 인용된 모든 특허 및 과학 문헌의 개시내용은 명백하게 그 전문이 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> Adverum Biotechnologies, Inc. <120> METHODS OF TREATING OCULAR NEOVASCULAR DISEASES USING AAV2 VARIANTS ENCODING AFLIBERCEPT <130> 62700-20012.40 <140> Not Yet Assigned <141> Concurrently Herewith <150> US 62/913,648 <151> 2019-10-10 <150> US 62/899,070 <151> 2019-09-11 <160> 37 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 1 Leu Ala Leu Gly Glu Thr Thr Arg Pro Ala 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 2 Leu Ala Asn Glu Thr Ile Thr Arg Pro Ala 1 5 10 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 3 Leu Ala Lys Ala Gly Gln Ala Asn Asn Ala 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 4 Leu Ala Lys Asp Pro Lys Thr Thr Asn Ala 1 5 10 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 5 Lys Asp Thr Asp Thr Thr Arg 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 6 Arg Ala Gly Gly Ser Val Gly 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 7 Ala Val Asp Thr Thr Lys Phe 1 5 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 8 Ser Thr Gly Lys Val Pro Asn 1 5 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 9 Leu Ala Lys Asp Thr Asp Thr Thr Arg Ala 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 10 Leu Ala Arg Ala Gly Gly Ser Val Gly Ala 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 11 Leu Ala Ala Val Asp Thr Thr Lys Phe Ala 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 12 Leu Ala Ser Thr Gly Lys Val Pro Asn Ala 1 5 10 <210> 13 <211> 735 <212> PRT <213> Adeno-associated virus - 2 <400> 13 Met Ala Ala Asp Gly Tyr Leu Pro Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 1 5 10 15 Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30 Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45 Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80 Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95 Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125 Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly 145 150 155 160 Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 165 170 175 Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 195 200 205 Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220 Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240 Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255 Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270 Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 280 285 Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300 Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 305 310 315 320 Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335 Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 340 345 350 Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365 Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380 Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400 Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415 Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 420 425 430 Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr 435 440 445 Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln 450 455 460 Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn 485 490 495 Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly 500 505 510 Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525 Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540 Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr 545 550 555 560 Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr 565 570 575 Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Arg Gln Ala Ala Thr 580 585 590 Ala Asp Val Asn Thr Gln Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp 595 600 605 Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr 610 615 620 Asp Gly His Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys 625 630 635 640 His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn 645 650 655 Pro Ser Thr Thr Phe Ser Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln 660 665 670 Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys 675 680 685 Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr 690 695 700 Asn Lys Ser Val Asn Val Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr 705 710 715 720 Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 14 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 14 Leu Gly Glu Thr Thr Arg Pro 1 5 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 15 Asn Glu Thr Ile Thr Arg Pro 1 5 <210> 16 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 16 Lys Ala Gly Gln Ala Asn Asn 1 5 <210> 17 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 17 Lys Asp Pro Lys Thr Thr Asn 1 5 <210> 18 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 18 Lys Asp Thr Asp Thr Thr Arg 1 5 <210> 19 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 19 Arg Ala Gly Gly Ser Val Gly 1 5 <210> 20 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 20 Ala Val Asp Thr Thr Lys Phe 1 5 <210> 21 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 21 Ser Thr Gly Lys Val Pro Asn 1 5 <210> 22 <211> 293 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 22 acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat 60 aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc aatgggtgga 120 gtatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc caagtccgcc 180 ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt 240 acgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta cca 293 <210> 23 <211> 220 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 23 tgctgatgcg gttttggcag tacaccaatg ggcgtggata gcggtttgac tcacggggat 60 ttccaagtct ccaccccatt gacgtcaatg ggagtttgtt ttggcaccaa aatcaacggg 120 actttccaaa atgtcgtaat aaccccgccc cgttgacgca aatgggcggt aggcgtgtac 180 ggtgggaggt ctatataagc agagctcgtt tagtgaaccg 220 <210> 24 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 24 ctcactctct tccgcatcgc tgtctgcgag ggccagctgt tgggctcgcg gttgaggaca 60 aactcttcgc ggtctttcca gtactcttgg atcggaaacc cgtcggcctc cgaacggtac 120 tccgccaccg agggacctga gcgagtccgc atcgaccgga tcggaaaacc tctcgagaaa 180 ggcgtctaac cagtcacagt cgcaaggtag gctgagcacc gtggcgggcg gcagcgggtg 240 gcggtcgggg ttgtttctgg cggaggtgct gctgatgatg taattaaagt aggcggtctt 300 gagacggcgg atggtcga 318 <210> 25 <211> 102 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 25 ccagctgttg gggtgagtac tccctctcaa aagcgggcat tacttctgcg ctaagattgt 60 cagtttccaa aaacgaggag gatttgatat tcacctggcc cg 102 <210> 26 <211> 810 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 26 ctgttctcat cacatcatat caaggttata taccatcaat attgccacag atgttactta 60 gccttttaat atttctctaa tttagtgtat atgcaatgat agttctctga tttctgagat 120 tgagtttctc atgtgtaatg attatttaga gtttctcttt catctgttca aatttttgtc 180 tagttttatt ttttactgat ttgtaagact tctttttata atctgcatat tacaattctc 240 tttactgggg tgttgcaaat attttctgtc attctatggc ctgacttttc ttaatggttt 300 tttaatttta aaaataagtc ttaatattca tgcaatctaa ttaacaatct tttctttgtg 360 gttaggactt tgagtcataa gaaatttttc tctacactga agtcatgatg gcatgcttct 420 atattatttt ctaaaagatt taaagttttg ccttctccat ttagacttat aattcactgg 480 aatttttttg tgtgtatggt atgacatatg ggttcccttt tattttttac atataaatat 540 atttccctgt ttttctaaaa aagaaaaaga tcatcatttt cccattgtaa aatgccatat 600 ttttttcata ggtcacttac atatatcaat gggtctgttt ctgagctcta ctctatttta 660 tcagcctcac tgtctatccc cacacatctc atgctttgct ctaaatcttg atatttagtg 720 gaacattctt tcccattttg ttctacaaga atatttttgt tattgtcttt gggctttcta 780 tatacatttt gaaatgaggt tgacaagtta 810 <210> 27 <211> 202 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 27 ctgcccgggt ggcatccctg tgacccctcc ccagtgcctc tcctggccct ggaagttgcc 60 actccagtgc ccaccagcct tgtcctaata aaattaagtt gcatcatttt gtctgactag 120 gtgtccttct ataatattat ggggtggagg ggggtggtat ggagcaaggg gcccaagttg 180 ggaagaaacc tgtagggcct gc 202 <210> 28 <211> 68 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 28 aggcggtctt gagacggcgg atggtcgagg tgaggtgtgg caggcttgag atccagctgt 60 tggggtga 68 <210> 29 <211> 129 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 29 cgctgttttg acctccatag tggacaccgg gaccgatcca gcctccgcgt ctcaggggag 60 atctcgttta gtgaaccgtc agatcctcac tctcttccgc atcgctgtct gcgagggcca 120 gctgttggg 129 <210> 30 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 30 ttgatattca cctggcccga tctggccata cacttg 36 <210> 31 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 31 cccaggtcca agtttaaacg cc 22 <210> 32 <211> 77 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 32 tctttgggct ttctatatac attttgaaat gaggttgaca agttacctag gaaaactgtc 60 ttcctgcccg ggtggca 77 <210> 33 <211> 1172 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 33 ctctggagac gacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca 60 ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt 120 caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg 180 ccaagtccgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag 240 tacatgacct tacgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt 300 accatgctga tgcggttttg gcagtacacc aatgggcgtg gatagcggtt tgactcacgg 360 ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca ccaaaatcaa 420 cgggactttc caaaatgtcg taataacccc gccccgttga cgcaaatggg cggtaggcgt 480 gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat cgcctggaga 540 ggccatccac gctgttttga cctccatagt ggacaccggg accgatccag cctccgcgtc 600 tcaggggaga tctcgtttag tgaaccgtca gatcctcact ctcttccgca tcgctgtctg 660 cgagggccag ctgttgggct cgcggttgag gacaaactct tcgcggtctt tccagtactc 720 ttggatcgga aacccgtcgg cctccgaacg gtactccgcc accgagggac ctgagcgagt 780 ccgcatcgac cggatcggaa aacctctcga gaaaggcgtc taaccagtca cagtcgcaag 840 gtaggctgag caccgtggcg ggcggcagcg ggtggcggtc ggggttgttt ctggcggagg 900 tgctgctgat gatgtaatta aagtaggcgg tcttgagacg gcggatggtc gaggtgaggt 960 gtggcaggct tgagatccag ctgttggggt gagtactccc tctcaaaagc gggcattact 1020 tctgcgctaa gattgtcagt ttccaaaaac gaggaggatt tgatattcac ctggcccgat 1080 ctggccatac acttgagtga caatgacatc cactttgcct ttctctccac aggtgtccac 1140 tcccaggtcc aagtttaaac gccgccacca tg 1172 <210> 34 <211> 1043 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 34 actgttctca tcacatcata tcaaggttat ataccatcaa tattgccaca gatgttactt 60 agccttttaa tatttctcta atttagtgta tatgcaatga tagttctctg atttctgaga 120 ttgagtttct catgtgtaat gattatttag agtttctctt tcatctgttc aaatttttgt 180 ctagttttat tttttactga tttgtaagac ttctttttat aatctgcata ttacaattct 240 ctttactggg gtgttgcaaa tattttctgt cattctatgg cctgactttt cttaatggtt 300 ttttaatttt aaaaataagt cttaatattc atgcaatcta attaacaatc ttttctttgt 360 ggttaggact ttgagtcata agaaattttt ctctacactg aagtcatgat ggcatgcttc 420 tatattattt tctaaaagat ttaaagtttt gccttctcca tttagactta taattcactg 480 gaattttttt gtgtgtatgg tatgacatat gggttccctt ttatttttta catataaata 540 tatttccctg tttttctaaa aaagaaaaag atcatcattt tcccattgta aaatgccata 600 tttttttcat aggtcactta catatatcaa tgggtctgtt tctgagctct actctatttt 660 atcagcctca ctgtctatcc ccacacatct catgctttgc tctaaatctt gatatttagt 720 ggaacattct ttcccatttt gttctacaag aatatttttg ttattgtctt tgggctttct 780 atatacattt tgaaatgagg ttgacaagtt acctaggaaa actgtcttcc tgcccgggtg 840 gcatccctgt gacccctccc cagtgcctct cctggccctg gaagttgcca ctccagtgcc 900 caccagcctt gtcctaataa aattaagttg catcattttg tctgactagg tgtccttcta 960 taatattatg gggtggaggg gggtggtatg gagcaagggg cccaagttgg gaagaaacct 1020 gtagggcctg cgaagacagt cag 1043 <210> 35 <211> 431 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 35 Ser Asp Thr Gly Arg Pro Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu 1 5 10 15 Ile Ile His Met Thr Glu Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val 20 25 30 Thr Ser Pro Asn Ile Thr Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr 35 40 45 Leu Ile Pro Asp Gly Lys Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe 50 55 60 Ile Ile Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu 65 70 75 80 Ala Thr Val Asn Gly His Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg 85 90 95 Gln Thr Asn Thr Ile Ile Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile 100 105 110 Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr 115 120 125 Glu Leu Asn Val Gly Ile Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys 130 135 140 His Gln His Lys Lys Leu Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly 145 150 155 160 Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr 165 170 175 Arg Ser Asp Gln Gly Leu Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met 180 185 190 Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr 195 200 205 His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 210 215 220 Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg 225 230 235 240 Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 245 250 255 Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 260 265 270 Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 275 280 285 Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 290 295 300 Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr 305 310 315 320 Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 325 330 335 Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 340 345 350 Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser 355 360 365 Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 370 375 380 Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 385 390 395 400 Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 405 410 415 Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 420 425 430 <210> 36 <211> 1377 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Construct <400> 36 atggtcagct actgggacac cggggtcctg ctgtgcgcgc tgctcagctg tctgcttctc 60 acaggatcta gttccggaag tgataccggt agacctttcg tagagatgta cagtgaaatc 120 cccgaaatta tacacatgac tgaaggaagg gagctcgtca ttccctgccg ggttacgtca 180 cctaacatca ctgttacttt aaaaaagttt ccacttgaca ctttgatccc tgatggaaaa 240 cgcataatct gggacagtag aaagggcttc atcatatcaa atgcaacgta caaagaaata 300 gggcttctga cctgtgaagc aacagtcaat gggcatttgt ataagacaaa ctatctcaca 360 catcgacaaa ccaatacaat catagatgtg gttctgagtc cgtctcatgg aattgaacta 420 tctgttggag aaaagcttgt cttaaattgt acagcaagaa ctgaactaaa tgtggggatt 480 gacttcaact gggaataccc ttcttcgaag catcagcata agaaacttgt aaaccgagac 540 ctaaaaaccc agtctgggag tgagatgaag aaatttttga gcaccttaac tatagatggt 600 gtaacccgga gtgaccaagg attgtacacc tgtgcagcat ccagtgggct gatgaccaag 660 aagaacagca catttgtcag ggtccatgaa aaggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720 ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780 accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840 gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900 aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960 caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020 gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080 accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140 aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200 aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1260 ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320 gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga 1377 <210> 37 <211> 745 <212> PRT <213> Adeno-associated virus - 2 <400> 37 Ile His Ser Leu Pro Ile Val Ser Asp Trp Leu Glu Asp Thr Leu Ser 1 5 10 15 Glu Gly Ile Arg Gln Trp Trp Lys Leu Lys Pro Gly Pro Pro Pro Pro 20 25 30 Lys Pro Ala Glu Arg His Lys Asp Asp Ser Arg Gly Leu Val Leu Pro 35 40 45 Gly Tyr Lys Tyr Leu Gly Pro Phe Asn Gly Leu Asp Lys Gly Glu Pro 50 55 60 Val Asn Glu Ala Asp Ala Ala Ala Leu Glu His Asp Lys Ala Tyr Asp 65 70 75 80 Arg Gln Leu Asp Ser Gly Asp Asn Pro Tyr Leu Lys Tyr Asn His Ala 85 90 95 Asp Ala Glu Phe Gln Glu Arg Leu Lys Glu Asp Thr Ser Phe Gly Gly 100 105 110 Asn Leu Gly Arg Ala Val Phe Gln Ala Lys Lys Arg Val Leu Glu Pro 115 120 125 Leu Gly Leu Val Glu Glu Pro Val Lys Thr Ala Pro Gly Lys Lys Arg 130 135 140 Pro Val Glu His Ser Pro Val Glu Pro Asp Ser Ser Ser Gly Thr Gly 145 150 155 160 Lys Ala Gly Gln Gln Pro Ala Arg Lys Arg Leu Asn Phe Gly Gln Thr 165 170 175 Gly Asp Ala Asp Ser Val Pro Asp Pro Gln Pro Leu Gly Gln Pro Pro 180 185 190 Ala Ala Pro Ser Gly Leu Gly Thr Asn Thr Met Ala Thr Gly Ser Gly 195 200 205 Ala Pro Met Ala Asp Asn Asn Glu Gly Ala Asp Gly Val Gly Asn Ser 210 215 220 Ser Gly Asn Trp His Cys Asp Ser Thr Trp Met Gly Asp Arg Val Ile 225 230 235 240 Thr Thr Ser Thr Arg Thr Trp Ala Leu Pro Thr Tyr Asn Asn His Leu 245 250 255 Tyr Lys Gln Ile Ser Ser Gln Ser Gly Ala Ser Asn Asp Asn His Tyr 260 265 270 Phe Gly Tyr Ser Thr Pro Trp Gly Tyr Phe Asp Phe Asn Arg Phe His 275 280 285 Cys His Phe Ser Pro Arg Asp Trp Gln Arg Leu Ile Asn Asn Asn Trp 290 295 300 Gly Phe Arg Pro Lys Arg Leu Asn Phe Lys Leu Phe Asn Ile Gln Val 305 310 315 320 Lys Glu Val Thr Gln Asn Asp Gly Thr Thr Thr Ile Ala Asn Asn Leu 325 330 335 Thr Ser Thr Val Gln Val Phe Thr Asp Ser Glu Tyr Gln Leu Pro Tyr 340 345 350 Val Leu Gly Ser Ala His Gln Gly Cys Leu Pro Pro Phe Pro Ala Asp 355 360 365 Val Phe Met Val Pro Gln Tyr Gly Tyr Leu Thr Leu Asn Asn Gly Ser 370 375 380 Gln Ala Val Gly Arg Ser Ser Phe Tyr Cys Leu Glu Tyr Phe Pro Ser 385 390 395 400 Gln Met Leu Arg Thr Gly Asn Asn Phe Thr Phe Ser Tyr Thr Phe Glu 405 410 415 Asp Val Pro Phe His Ser Ser Tyr Ala His Ser Gln Ser Leu Asp Arg 420 425 430 Leu Met Asn Pro Leu Ile Asp Gln Tyr Leu Tyr Tyr Leu Ser Arg Thr 435 440 445 Asn Thr Pro Ser Gly Thr Thr Thr Gln Ser Arg Leu Gln Phe Ser Gln 450 455 460 Ala Gly Ala Ser Asp Ile Arg Asp Gln Ser Arg Asn Trp Leu Pro Gly 465 470 475 480 Pro Cys Tyr Arg Gln Gln Arg Val Ser Lys Thr Ser Ala Asp Asn Asn 485 490 495 Asn Ser Glu Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Thr Lys Tyr His Leu Asn Gly 500 505 510 Arg Asp Ser Leu Val Asn Pro Gly Pro Ala Met Ala Ser His Lys Asp 515 520 525 Asp Glu Glu Lys Phe Phe Pro Gln Ser Gly Val Leu Ile Phe Gly Lys 530 535 540 Gln Gly Ser Glu Lys Thr Asn Val Asp Ile Glu Lys Val Met Ile Thr 545 550 555 560 Asp Glu Glu Glu Ile Arg Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Gln Tyr 565 570 575 Gly Ser Val Ser Thr Asn Leu Gln Arg Gly Asn Leu Ala Leu Gly Glu 580 585 590 Thr Thr Arg Pro Ala Arg Gln Ala Ala Thr Ala Asp Val Asn Thr Gln 595 600 605 Gly Val Leu Pro Gly Met Val Trp Gln Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln 610 615 620 Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His Thr Asp Gly His Phe His Pro 625 630 635 640 Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Leu Lys His Pro Pro Pro Gln Ile 645 650 655 Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala Asn Pro Ser Thr Thr Phe Ser 660 665 670 Ala Ala Lys Phe Ala Ser Phe Ile Thr Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val 675 680 685 Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp 690 695 700 Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn Tyr Asn Lys Ser Val Asn Val 705 710 715 720 Asp Phe Thr Val Asp Thr Asn Gly Val Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile 725 730 735 Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 740 745

Claims (66)

  1. 개체의 한쪽 눈에 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg) 이하의 재조합 아데노-연관 바이러스 (rAAV) 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인, 개체에서 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에서의 망막액이 감소되는 것인 방법.
  3. 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 개체는 인간이고, 여기서 rAAV 입자는
    a) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 핵산, 및
    b) 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는, 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 AAV2 캡시드 단백질
    을 포함하는 것인, 안구 신생혈관 질환을 갖는 개체의 눈에서 망막액을 감소시키는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 개체가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 약 12주 내에 적어도 1회의 항-VEGF 작용제 치료를 받은 것인 방법.
  5. 제3항 또는 제4항에 있어서, 개체의 한쪽 눈에서의 망막액의 양 또는 존재가 항-VEGF 작용제를 사용한 선행 치료에 대해 불응성인 방법.
  6. 제4항 또는 제5항에 있어서, 항-VEGF 작용제가 아플리베르셉트인 방법.
  7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 한쪽 눈에서의 망막액이 적어도 약 60%만큼 감소되는 것인 방법.
  8. 제2항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 한쪽 눈에서의 망막액이 개체에게 rAAV를 투여하기 전 개체의 한쪽 눈에서의 망막액 수준과 비교하여 약 80%만큼 감소되는 것인 방법.
  9. 제2항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 망막액이 망막하액 (SRF) 또는 망막내액 (IRF)인 방법.
  10. 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 x 1011 벡터 게놈 (vg/눈) 이하인 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 6 x 1010 내지 약 2 x 1011 벡터 게놈 (vg/눈)인 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 눈당 약 2 x 1011 또는 약 6 x 1010 벡터 게놈 (vg/눈)인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
  14. 제13항에 있어서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 최대 약 2주 후인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량이 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량과 동일하거나 그보다 적은 눈당 벡터 게놈 (vg/눈)을 포함하는 것인 방법.
  16. 제13항에 있어서, 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 한쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여한지 적어도 약 2주 후인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 개체의 반대쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량이 개체의 한쪽 눈에 투여된 rAAV 입자의 단위 용량보다 더 많은 눈당 벡터 게놈 (vg/눈)을 포함하는 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 아플리베르셉트인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 제1 인핸서 영역, 프로모터 영역, 5'UTR 영역, 제2 인핸서 영역 및 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함하는 것인 방법.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 5'에서 3' 순서로
    (a) 제1 인핸서 영역;
    (b) 프로모터 영역;
    (c) 서열식별번호: 35의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 95% 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 코딩하는 핵산;
    (d) 5'UTR 영역;
    (e) 제2 인핸서 영역; 및
    (f) 폴리아데닐화 부위
    를 포함하고 AAV2 역전된 말단 반복부 (ITR)가 플랭킹된 것인 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 제1 인핸서 영역이 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 것인 방법.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 프로모터 영역이 서열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 것인 방법.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 서열식별번호: 35의 아미노산 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 방법.
  25. 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리펩티드가 아플리베르셉트인 방법.
  26. 제20항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 5'UTR 영역이 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 것인 방법.
  27. 제20항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 인핸서 영역이 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 것인 방법.
  28. 제20항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 폴리아데닐화 부위가 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 포함하는 것인 방법.
  29. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 핵산이 (a) 서열식별번호: 22의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 제1 인핸서 영역; (b) 서열식별번호: 23의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 CMV 서열을 포함하는 프로모터 영역; (c) 5'에서 3' 순서로 서열식별번호: 24의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 TPL 서열 및 서열식별번호: 25의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 eMLP 서열을 포함하는 5'UTR 영역; (d) 서열식별번호: 26의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 전체 EES 서열을 포함하는 제2 인핸서 영역; 및 (e) 서열식별번호: 27의 서열 또는 그에 대해 적어도 85% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HGH 폴리아데닐화 부위를 추가로 포함하는 것인 방법.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, AAV2 캡시드 단백질이 캡시드 단백질의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하고, 여기서 아미노산 잔기 넘버링이 AAV2 VP1 캡시드 단백질에 상응하는 것인 방법.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, AAV2 캡시드 단백질이 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LGETTRP (서열식별번호: 14)를 포함하는 것인 방법.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, AAV2 캡시드 단백질이 서열식별번호: 13의 서열을 포함하는 AAV2 VP1의 위치 587과 588 사이에 삽입된 아미노산 서열 LALGETTRPA (서열식별번호: 1)를 포함하는 것인 방법.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 유리체내 투여에 의한 것인 방법.
  34. 제1항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 제약 제제 중에 있는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, 제약 제제가 rAAV 입자, 염화나트륨, 인산나트륨 및 계면활성제를 포함하는 것인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 제약 제제가 약 150 내지 약 200 mM 염화나트륨, 약 1 내지 약 10 mM 일염기성 인산나트륨, 약 1 내지 약 10 mM 이염기성 인산나트륨, 약 0.0005% (w/v) 내지 약 0.005% (w/v) 폴록사머 188 및 mL당 약 6 x 1013 내지 약 6 x 1010 벡터 게놈 (vg) (vg/mL)의 rAAV 입자를 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.0 내지 약 7.5의 pH를 갖는 것인 방법.
  37. 제36항에 있어서, 제약 제제가 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1012 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.3의 pH를 갖는 것인 방법.
  38. 제36항에 있어서, 제약 제제가 약 180 mM 염화나트륨, 약 5 mM 일염기성 인산나트륨, 약 5 mM 이염기성 인산나트륨, 약 6 x 1011 vg/mL의 rAAV 입자 및 약 0.001% (w/v) 폴록사머 188을 포함하며, 여기서 제약 제제가 약 7.3의 pH를 갖는 것인 방법.
  39. 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 약 25 μL 내지 약 250 μL의 부피를 포함하는 것인 방법.
  40. 제39항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 약 100 μL의 부피를 포함하는 것인 방법.
  41. 제39항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 약 30 μL의 부피를 포함하는 것인 방법.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 항-VEGF 작용제를 사용한 안구 신생혈관 질환에 대한 선행 치료를 받은 것인 방법.
  43. 제42항에 있어서, 항-VEGF 작용제가 아플리베르셉트인 방법.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 안구 신생혈관 질환이 습성 연령-관련 황반 변성 (AMD), 망막 신생혈관화, 맥락막 신생혈관화 당뇨병성 망막병증, 증식성 당뇨병성 망막병증, 망막 정맥 폐쇄, 중심 망막 정맥 폐쇄, 분지 망막 정맥 폐쇄, 당뇨병성 황반 부종, 당뇨병성 망막 허혈, 허혈성 망막병증, 당뇨병성 망막 부종 또는 그의 임의의 조합인 방법.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, rAAV 입자의 단위 용량이 스테로이드 치료와 조합되어 투여되는 것인 방법.
  46. 제45항에 있어서, 스테로이드 치료가 코르티코스테로이드 치료인 방법.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 스테로이드 치료가 전신 스테로이드 치료인 방법.
  48. 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 치료가 경구 스테로이드 치료인 방법.
  49. 제45항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 치료가 프레드니손 치료인 방법.
  50. 제45항 또는 제46항에 있어서, 스테로이드 치료가 국소 스테로이드 치료인 방법.
  51. 제50항에 있어서, 스테로이드 치료가 디플루프레드네이트 치료인 방법.
  52. 제45항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전, 투여 동안 및/또는 투여 후에 투여되는 것인 방법.
  53. 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드 치료가 국소 스테로이드 치료이고, 국소 스테로이드 치료가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여로부터 최대 약 4주, 최대 약 6주 또는 최대 약 8주 동안의 매일 스테로이드 치료인 방법.
  54. 제53항에 있어서, 국소 스테로이드 치료가 약 제1주에 국소 스테로이드의 약 4회 투여, 약 제2주에 국소 스테로이드의 약 3회 투여, 약 제3주에 국소 스테로이드의 약 2회 투여 및 약 제4주에 국소 스테로이드의 약 1회 투여를 포함하며; 시기는 rAAV 입자의 단위 용량의 투여와 함께 시작하여 그 후인 방법.
  55. 제54항에 있어서, 국소 스테로이드가 약 1 μg 내지 약 3 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함하는 것인 방법.
  56. 제54항에 있어서, 국소 스테로이드가 약 2.5 μg의 용량의 디플루프레드네이트 0.05%를 포함하는 것인 방법.
  57. 제1항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 유지 또는 감소를 유발하는 것인 방법.
  58. 제57항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 망막 두께의 감소를 유발하는 것인 방법.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 망막 두께의 감소가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 망막 두께와 비교하여 적어도 약 10%인 방법.
  60. 제57항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 망막 두께가 중심 서브필드 두께 (CST) 또는 중심 망막 두께 (CRT)인 방법.
  61. 제1항 내지 제60항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 유지 또는 감소를 유발하는 것인 방법.
  62. 제61항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 황반 부피의 감소를 유발하는 것인 방법.
  63. 제62항에 있어서, 황반 부피의 감소가 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 황반 부피와 비교하여 적어도 약 10%인 방법.
  64. 제1항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 유지 또는 개선을 유발하는 것인 방법.
  65. 제1항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 한쪽 눈 및/또는 반대쪽 눈에 rAAV 입자의 단위 용량을 투여하는 것이 rAAV 입자의 단위 용량의 투여 전 시력과 비교하여 시력의 개선을 유발하는 것인 방법.
  66. 제64항 또는 제65항에 있어서, 시력이 최대 교정 시력 (BCVA)인 방법.
KR1020227011743A 2019-09-11 2019-11-18 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법 KR20220062352A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962899070P 2019-09-11 2019-09-11
US62/899,070 2019-09-11
US201962913648P 2019-10-10 2019-10-10
US62/913,648 2019-10-10
PCT/US2019/062066 WO2021050094A1 (en) 2019-09-11 2019-11-18 Methods of treating ocular neovascular diseases using aav2 variants encoding aflibercept

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220062352A true KR20220062352A (ko) 2022-05-16

Family

ID=80533961

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227011743A KR20220062352A (ko) 2019-09-11 2019-11-18 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP4028037A4 (ko)
JP (1) JP2023509263A (ko)
KR (1) KR20220062352A (ko)
CN (1) CN114390928A (ko)
AU (1) AU2019465527A1 (ko)
BR (1) BR112022003206A2 (ko)
CA (1) CA3147843A1 (ko)
IL (1) IL291226A (ko)
MX (1) MX2022002960A (ko)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2024515459A (ja) * 2021-04-27 2024-04-10 アドヴェラム バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド アフリベルセプトをコードするａａｖ２バリアントを使用する眼疾患の治療方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2018015512A (es) * 2016-06-16 2019-04-24 Adverum Biotechnologies Inc Tratamiento de dmre utilizando variante de aav2 con aflibercept.
CA3054942A1 (en) * 2017-03-17 2018-09-20 Adverum Biotechnologies, Inc. Compositions and methods for enhanced gene expression

Also Published As

Publication number Publication date
BR112022003206A2 (pt) 2022-08-16
EP4028037A1 (en) 2022-07-20
EP4028037A4 (en) 2023-06-28
JP2023509263A (ja) 2023-03-08
IL291226A (en) 2022-05-01
CA3147843A1 (en) 2021-03-18
MX2022002960A (es) 2022-04-06
AU2019465527A1 (en) 2022-03-10
CN114390928A (zh) 2022-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102218265B1 (ko) Aav2 변이체를 아플리베르셉트와 함께 사용하는 amd의 치료
US20230322911A1 (en) Compositions and methods for reducing ocular neovascularization
KR20220062353A (ko) 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법
US20200297869A1 (en) Sequential intravitreal administration of aav gene therapy to contralateral eyes
WO2021050094A1 (en) Methods of treating ocular neovascular diseases using aav2 variants encoding aflibercept
KR20220062352A (ko) 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 신생혈관 질환을 치료하는 방법
US20210100856A1 (en) Methods of treating ocular neovascular diseases using aav2 variants encoding aflibercept
KR20240005764A (ko) 아플리베르셉트를 코딩하는 aav2 변이체를 사용하여 안구 질환을 치료하는 방법
WO2023158990A1 (en) Method of reducing cst fluctuation in neovascular amd by a recombinant adeno-associated virus
WO2023150566A1 (en) Methods of treating ocular neovascular diseases using aav2 variants encoding aflibercept