KR20220034777A

KR20220034777A - 화합물 및 사용 방법

Info

Publication number: KR20220034777A
Application number: KR1020227000907A
Authority: KR
Inventors: 크리스토프 프레데릭 포탈
Original assignee: 에든버러 몰레큘라 이매징 리미티드
Priority date: 2019-06-14
Filing date: 2020-06-15
Publication date: 2022-03-18
Also published as: GB202115731D0; AU2020291197A1; US20220273830A1; GB2598676A; CN114222592A; SG11202113333SA; EP3983019A1; BR112021025124A2; MX2021015467A; GB202009064D0; JP2022537946A; GB2589398B; WO2020249980A1; CA3142866A1; GB2589398A

Abstract

인간 또는 동물 투여를 위한 화합물, 특히 cMet 결합 시클릭 펩티드를 포함하는 화합물 및 그의 사용 방법이 기재된다. 특히, 영상화 및/또는 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합한 화합물이 기재된다. 또한, 제약 조성물 및 제약 조성물의 제조를 위한 키트가 기재된다. 또한, 예컨대 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암과 같은 상태의 요법의 모니터링에서 화합물 또는 제약 조성물을 사용하는 영상화 방법이 기재된다. 추가로, 영상화제 및 방사선요법제 중 적어도 하나 또는 둘 다로서의 화합물 또는 제약 조성물의 용도가 기재된다.

Description

화합물 및 사용 방법

본 발명은 인간 또는 동물 투여를 위한 화합물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 방사성핵종을 사용하는 영상화 (즉, 내방사선학(endoradiology) 또는 핵 의학 영상화) 및/또는 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합한 화합물에 관한 것이다. 이러한 영상화 기술의 예는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 섬광조영 및 양전자 방출 단층촬영 (PET)이다. 방사선요법에 사용되는 방사성핵종의 예는 α-입자 방출체, β-입자 방출체 및 오거(Auger) 전자 방출체를 포함한다. 추가로, 본 발명은 핵 의학 영상화 및/또는 방사선요법에 사용하기 위한 키트 및 영상화제/방사선요법제에 관한 것이다.

방사성표지된 화합물은 분자 영상화 및 방사선요법 둘 다에 유용하고, 이들 중 몇몇은 선행 기술에 기재되어 있다.

WO2012/022676은 생체내 PET 영상화에 적합한 방사성표지된 cMet 결합 펩티드를 기재한다. cMet 결합 펩티드는 방사성동위원소 ¹⁸F로 표지된다. 또한, 제약 조성물, 작용제 및 조성물의 제조 방법, 및 특히 암의 관리에 사용하기 위한, 조성물을 사용한 생체내 영상화 방법이 기재된다.

WO2012/119937은 생체내 SPECT 또는 PET 영상화에 적합한 방사성표지된 cMet 결합 펩티드를 포함하는 테크네튬 영상화제를 기재한다. cMet 결합 펩티드는 킬레이트화제 접합체를 통해 표지된다. 또한, 제약 조성물, 작용제 및 조성물의 제조 방법, 및 특히 암의 진단에 사용하기 위한, 조성물을 사용한 생체내 영상화 방법이 기재된다.

WO2005/030266은 광학 영상화, 구체적으로 결장직장암 (CRC) 진단을 위한 조영제를 위한 바람직한 생물학적 표적으로서 cMet를 개시한다. WO2005/030266은 비정상적으로 발현된 표적에 대한 친화도를 갖는 벡터, 링커 모이어티 및 광학 영상화에서 검출가능한 1종 이상의 리포터 모이어티를 포함하는 광학 영상화제를 개시한다.

WO2004/078778은 cMet 또는 cMet 및 HGF를 포함하는 복합체에 결합하는 폴리펩티드 또는 다량체 펩티드 구축물을 개시한다. WO2004/078778은 펩티드가 시험관내 및 생체내 적용을 위한 검출가능한 표지로 또는 치료 용도를 위한 약물로 표지될 수 있다는 것을 개시한다.

문헌 [Arulappu et al. (Nucl. Med. 2016, 57, 765-770)]은 두경부 암종의 암 영상화를 위해 개발된 ¹⁸F PET 작용제를 개시한다. 작용제는 cMet 수용체에 특이적으로 결합하는 2개의 내부 디술피드 가교를 갖는 26개-아미노산 펩티드를 기재로 한다. 펩티드 상의 리신 잔기는 ¹⁸F로 표지된다.

그러나, 방사성핵종이 공유적으로 도입되는 이와 같은 작용제의 합성은 복잡하고, 수율이 낮으며, 영상화제를 충분한 순도로 얻기 위해 정제 단계가 요구된다. 추가로, 이러한 합성은 출발 물질로서 보결분자단, 예컨대 p-¹⁸F 벤즈알데히드의 사용이 요구되며, 이는 ¹⁸F-플루오라이드로부터 제조될 필요가 있다. 따라서, 대다수의 ¹⁸F 기재 PET 작용제와 유사하게, 제조에는 숙련된 방사화학자 및 전용 장비, 예컨대 특정 로봇 및 카세트 및 차폐된 "고온" 전지가 요구된다. 이에 따라, 전문가 사이트가 이러한 특정한 유형의 ¹⁸F PET 영상화제의 합성을 실행하는데 요구된다.

공유 결합된 ¹⁸F를 갖는 작용제를 제조하는 것과 연관된 문제로 인해, 킬레이트화제에 의해 결합될 수 있는 대안적 방사성핵종의 사용이 출현하였다. 예를 들어, SPECT 영상화를 위한 ⁶⁷Ga 및 PET 영상화를 위한 ⁶⁸Ga가 Al¹⁸F 염의 사용과 같이 보다 우세해졌다.

킬레이트화제 (방사성 동위원소를 킬레이트화할 수 있음)에 접합된 표적화 모이어티를 포함하는 영상화제의 예가 존재하긴 하지만, 고친화도 결합, 유리한 동역학 프로파일, 특이적 흡수 및/또는 신속한 전신 클리어런스로 세포-표면 cMet 과다발현을 표적화할 수 있는 영상화제 및/또는 방사선요법제가 존재하는 것이 유익할 것이며, 이는 이것이 투여 후 곧 (아마도 빠르면 1시간) 진단 영상화를 가능하게 할 것이고/거나 보다 표적화된 방사선요법 (표적을 벗어난 노출에 의해 야기되는 독성을 감소시킴)을 가능하게 할 것이기 때문이다.

따라서, 본 발명의 목적은 선행 기술의 단점 중 적어도 일부를 제거하거나 경감시키는 것이다.

본 발명의 추가 목적은 cMet 과다발현 부위 및/또는 연관된 상태를 표적화하는데 사용하기 위한 방사선영상화제 및/또는 방사선요법제를 제공하는 것이다.

본 발명의 제1 측면에 따르면, 영상화 및/또는 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합한, 화학식 I을 갖는 화합물이 제공된다.

여기서

Z¹은 cMBP의 N-말단에 부착되고, H 또는 Q이고;

Z²는 cMBP의 C-말단에 부착되고, OH, OB^c 또는 Q이고;

여기서 B^c는 생체적합성 양이온이고;

cMBP는 하기 아미노산 서열 (SEQ-1)을 포함하는, 17 내지 30개 아미노산의 cMet 결합 시클릭 펩티드이고:

Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶;

여기서 Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이고;

Cys^a-d는 각각 시스테인 잔기여서 잔기 a 및 b뿐만 아니라 c 및 d가 고리화되어 2개의 별개의 디술피드 결합을 형성하도록 하고;

각각의 경우의 Q는 독립적으로 하기 중 적어도 하나이고:

펩티드의 생체내 대사를 억제 또는 저해하는 생체적합성 기인 대사 억제 기 (M^IG),

생체내 종양 세포 등에서의 체류를 증진시키는 생체적합성 기인 종양 체류 기 (T^RG), 및

생체분포를 증진시키고/거나 생체내 혈액 체류를 연장시키는 생체적합성 기인 생체분포 증진 기 (D^EG);

L은 화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기이고, 여기서 각각의 A는 독립적으로 -CR₂-, -CR=CR-, -C≡C-, -CR₂CO₂-, -CO₂CR₂-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO₂NR-, -NRSO₂-, -CR₂OCR₂-, -CR₂SCR₂-, CR₂NRCR₂-, C_4-8 시클로헤테로알킬렌 기, C_4-8 시클로알킬렌 기, C_5-12 아릴렌 기, C_3-12 헤테로아릴렌 기, 아미노산, 당 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록이고;

각각의 R은 독립적으로 H, C_1-4 알킬, C_2-4 알케닐, C_2-4 알키닐, C_1-4 알콕시알킬 또는 C_1-4 히드록시알킬로부터 선택되고;

m은 값 1 내지 20의 정수이고;

n은 값 0 또는 1의 정수이고;

IM은 방사성 모이어티를 착화시키는데 적합한 킬레이트화제이다.

화합물은 방사성 모이어티를 포함할 수 있다.

Z¹ 기는 마지막 아미노산 잔기의 아민 기를 치환시킨다. 따라서, Z¹이 H인 경우에, cMBP의 아미노 말단은 마지막 아미노산 잔기의 유리 NH₂ 기로 종결된다. Z² 기는 마지막 아미노산 잔기의 카르보닐 기를 치환시킨다. 따라서, Z²가 OH인 경우에, cMBP의 카르복시 말단은 마지막 아미노산 잔기의 유리 CO₂H 기로 종결되고, Z²가 OB^c인 경우에, 그 말단 카르복시 기는 CO₂B^c 기로서 이온화된다.

용어 "대사 억제 기" (M^IG)는 아미노 말단 (Z¹) 또는 카르복시 말단 (Z²)에서 cMBP 펩티드의 생체내 대사를 억제 또는 저해하는 생체적합성 기를 의미한다. 이러한 기는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 펩티드 아민 말단에 대해 N-아실화 기 -NH(C=O)R^G로부터 적합하게 선택되며, 여기서 아실 기 -(C=O)R^G는 C_1-6 알킬, C_3-10 아릴 기로부터 선택된 R^G를 갖거나 또는 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록을 포함한다. 적합한 PEG 기는 하기 링커 기 (L)에 대해 기재된다. 이러한 PEG 기는 화학식 IA 또는 IB의 생체변형제일 수 있다. 이러한 아미노 말단 M^IG 기는 아세틸, 벤질옥시카르보닐 또는 트리플루오로아세틸, 전형적으로 아세틸일 수 있다.

펩티드 카르복실 말단에 적합한 대사 억제 기는 카르복스아미드, tert-부틸 에스테르, 벤질 에스테르, 시클로헥실 에스테르, 아미노 알콜 또는 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록을 포함한다. cMBP 펩티드의 카르복시 말단 아미노산 잔기에 적합한 M 기는 아미노산 잔기의 말단 아민이 C_1-4 알킬 기, 임의로 메틸 기로 N-알킬화된 것이다. 이러한 M^IG 기는 카르복스아미드 또는 PEG일 수 있고, 전형적으로 카르복스아미드이다.

화학식 I은 -(L)_n[IM] 모이어티가 Z¹, Z² 또는 cMBP의 임의의 적합한 위치에 부착될 수 있다는 것을 나타낸다. Z¹ 또는 Z²에 대해, -(L)_n[IM] 모이어티는 Z¹/Z² 중 어느 하나가 M^IG인 경우 M^IG 기에 부착될 수 있다. Z¹이 H이거나 또는 Z²가 OH인 경우에, Z¹ 또는 Z² 위치에의 -(L)_n[IM] 모이어티의 부착은 각각 화학식 [IM]-(L)_n-[cMBP]-Z² 또는 Z¹-[cMBP]-(L)_n-[IM]의 화합물을 제공한다. 또한 이러한 방식으로 -(L)_n[IM] 모이어티의 부착에 의해 펩티드 말단에서의 cMBP 대사의 억제가 달성될 수 있지만, -(L)_n[IM]은 본원의 M^IG 정의 밖에 있다.

화학식 I의 -(L)_n- 모이어티는 IM의 임의의 적합한 위치에 부착될 수 있다. -(L)_n- 모이어티는 IM의 기존 치환기를 대체하거나 또는 IM의 기존 치환기에 공유 부착된다. -(L)_n- 모이어티는 IM의 카르복시알킬 치환기를 통해 임의로 부착된다.

용어 "종양 체류 기" (T^RG)는 생체내 종양 세포 등에서 화합물의 체류를 증진 또는 개선시키는 생체적합성 기를 의미한다. 이러한 기는 전체 크기의 화합물에 부가되는 모이어티일 수 있고, 펩티드 아민 말단 또는 펩티드 카르복실 말단에 대해, 적합하게는 폴리아민, 폴리리신, PEG (단분산), 알부민, 지방 선형 탄소 쇄, 당 (글리코실화)으로부터 선택된다.

용어 "생체분포 증진 기" (D^EG)는 생체내에서 화합물의 생체분포를 증진시키거나 혈액 체류를 연장시키는 (약동학을 증진 또는 개선시키는) 생체적합성 기를 의미한다. 이러한 기는 펩티드 아민 말단 또는 펩티드 카르복실 말단에 대해, 적합하게는 폴리아민, 폴리리신, PEG (단분산), 알부민, 지방 선형 탄소 쇄, 당 (글리코실화)으로부터 선택되고, 가장 적합하게는 PEG (단분산)이다.

용어 "cMet 결합 시클릭 펩티드" (cMBP)는 cMet (c-Met 또는 간세포 성장 인자 수용체)로도 공지된 간세포 성장 인자 (HGF) 고친화도 수용체에 결합하는 펩티드를 의미한다. 적합한 cMBP 펩티드는 cMet/HGF 복합체의 cMet에 대한 겉보기 Kd가 약 10 μM 미만이다. cMBP 펩티드는 프롤린 잔기를 포함하고, 이러한 잔기는 백본 아미드 결합의 시스/트랜스 이성질체화를 나타낼 수 있는 것으로 공지되어 있다. 본원에 기재된 cMBP 펩티드는 임의의 이러한 이성질체를 포함한다.

용어 "생체적합성 양이온" (B^c)은 이온화된 음으로 하전된 기와 염을 형성하는 양으로 하전된 반대이온을 의미하며, 여기서 상기 양으로 하전된 반대이온은 또한 비-독성이고, 따라서 포유동물 신체, 특히 인간 신체에 투여하기에 적합하다. 적합한 생체적합성 양이온의 예는 알칼리 금속 나트륨 또는 칼륨; 알칼리 토금속 칼슘 및 마그네슘; 및 암모늄 이온을 포함한다. 전형적인 생체적합성 양이온은 나트륨 및 칼륨, 전형적으로 나트륨이다.

용어 "아미노산"은 L- 또는 D-아미노산, 아미노산 유사체 (예를 들어, 나프틸알라닌) 또는 아미노산 모방체를 의미하며, 이는 자연 발생이거나 또는 순수하게 합성 기원일 수 있고, 광학적으로 순수할 수 있으며, 즉 단일 거울상이성질체 및 이에 따른 키랄 또는 거울상이성질체의 혼합물일 수 있다. 아미노산에 대한 통상적인 3-문자 또는 단일 문자 약어가 본원에 사용된다. 사용된 아미노산은 광학적으로 순수할 수 있다. 용어 "아미노산 모방체"는 동배체인, 즉 천연 화합물의 입체 및 전자 구조를 모방하도록 설계된 자연 발생 아미노산의 합성 유사체를 의미한다. 이러한 동배체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 뎁시펩티드, 레트로-인버소 펩티드, 티오아미드, 시클로알칸 또는 1,5-이치환된 테트라졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다 [문헌 [M. Goodman, Biopolymers, 24, 137, (1985)] 참조].

용어 "펩티드"는 펩티드 결합 (즉, 한 아미노산의 아민을 또 다른 아미노산의 카르복실에 연결하는 아미드 결합)에 의해 연결된, 상기 정의된 바와 같은 2개 이상의 아미노산을 포함하는 화합물을 의미한다. 용어 "펩티드 모방체" 또는 "모방체"는 펩티드 또는 단백질의 생물학적 활성을 모방하지만 화학적 성질에 있어서 더 이상 펩티드성이 아닌, 즉 더 이상 임의의 펩티드 결합 (즉 아미노산들 사이의 아미드 결합)을 함유하지 않는 생물학적 활성 화합물을 지칭한다. 여기서, 용어 펩티드 모방체는 보다 넓은 의미로, 성질에 있어서 더 이상 완전히 펩티드성이 아닌 분자, 예컨대 슈도-펩티드, 세미-펩티드 및 펩토이드를 포함하는 것으로 사용된다.

용어 "킬레이트화제" (IM)는 특정 원자가 단일 금속 이온 또는 금속 이온 염에 여러 결합을 형성할 수 있는 물질을 의미한다. 킬레이트화제는 종종 전자 제공 원소, 예컨대 질소 또는 산소가 풍부한 마크로사이클로 이루어진 여러자리 리간드이다.

화학식 I의 링커 기 -(A)_m의 역할 중 하나는 cMBP 펩티드의 활성 부위로부터 IM을 이격시키는 것일 수 있다. 이는 화합물이 비교적 벌키한 경우, 표적 단백질과의 상호작용이 손상되지 않도록 하는데 특히 중요하다. 이는 벌키 기가 자유롭게 그 자체를 활성 부위로부터 떨어져 위치시키도록 하는 유연성 (예를 들어 단순 알킬 쇄) 및/또는 IM을 활성 부위로부터 떨어져 배향시키는 강성 (예컨대 시클로알킬 또는 아릴 스페이서)의 조합에 의해 달성될 수 있다. 링커 기의 성질은 또한 화합물의 생체분포를 변형시키는데 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어 링커 내의 에테르 기의 도입은 혈장 단백질 결합을 변형시키는 것을 도울 것이다. -(A)_m-이 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록 또는 1 내지 10개 아미노산 잔기의 펩티드 쇄를 포함하는 경우에, 링커 기는 생체내 화합물의 약동학 및 혈액 클리어런스율을 변경시키는 기능을 할 수 있다. 이러한 "생체변형제" 링커 기는 배경 조직, 예컨대 근육 또는 간으로부터 및/또는 혈액으로부터 화합물의 클리어런스율을 변경시켜, 보다 적은 배경 간섭으로 인한 보다 우수한 진단 영상을 제공할 수 있다. 생체변형제 링커 기는 또한, 예를 들어 간을 통한 것과는 대조적으로 신장을 통한 특정한 배출 경로에 유리하게 사용될 수 있다.

용어 "당"은 모노-, 디- 또는 트리-사카라이드를 의미한다. 적합한 당은 글루코스, 갈락토스, 말토스, 만노스 및 락토스를 포함한다. 임의로, 당은 아미노산에 대한 용이한 커플링을 허용하도록 관능화될 수 있다. 따라서, 예를 들어 아미노산의 글루코사민 유도체는 펩티드 결합을 통해 다른 아미노산에 접합될 수 있다. 아스파라긴의 글루코사민 유도체 (노바바이오켐(NovaBiochem)으로부터 상업적으로 입수가능함)가 이의 한 예이다:

영상화제의 분자량은 적합하게는 8,000 달톤 이하이다. 임의로, 분자량은 2,800 내지 6,000 달톤, 전형적으로 3,000 내지 4,500 달톤의 범위이며, 3,200 내지 4,000 달톤이 가장 전형적이다.

본 발명의 영상화제는 펩티드 말단 둘 다가 M^IG 기에 의해 보호되었을 수 있으며, 즉 임의로 Z¹ 및 Z² 둘 다가 M^IG이고, 이는 통상적으로 상이할 것이다. 상기 나타낸 바와 같이, Z¹/Z² 중 어느 하나는 임의로 -(L)_n[IM]과 동일할 수 있다. 펩티드 말단 둘 다가 이러한 방식으로 보호되는 것은 생체내 영상화 용도에 중요한데, 그렇지 않으면 신속한 대사와 그에 따른 결과로 cMet에 대한 선택적 결합 친화도의 상실이 예상될 것이기 때문이다. Z¹ 및 Z² 둘 다가 M^IG인 경우에, 임의로 Z¹은 아세틸이고, Z²는 1급 아미드이다. Z¹은 아세틸일 수 있고, Z²는 1급 아미드일 수 있고, -(L)_n[IM] 모이어티는 cMBP의 리신 잔기의 엡실론 아민 측쇄에 부착될 수 있다.

본 발명의 cMBP 펩티드는 cMet/HGF 복합체에의 cMet 결합에 대한 K_D가 약 10 nM 미만 (형광 편광 검정 측정에 기초함), 가장 전형적으로는 1 내지 5 nM의 범위일 수 있고, 3 nM 미만이 이상적이다.

화학식 I의 cMBP의 펩티드 서열 (SEQ-1):

Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶

(SEQ-1)

은 주로 cMet에 대한 선택적 결합을 담당하는 17량체 펩티드 서열이다. 본 발명의 cMBP 펩티드가 17개 초과의 아미노산 잔기를 포함하는 경우에, 나머지 아미노산은 시스테인 이외의 임의의 아미노산일 수 있다. 추가의 비보호된 시스테인 잔기는 정의된 Cys^a-Cys^b 및 Cys^c-Cys^d 디술피드 가교의 원치않는 스크램블링을 유발할 수 있다. 추가의 펩티드는 바람직하게는 -(L)_n[IM] 모이어티의 용이한 접합에 적합한 측쇄를 갖는 적어도 1개의 아미노산 잔기를 포함한다. 적합한 이러한 잔기는 아민-관능화된 -(L)_n[IM] 기와의 접합을 위한 Asp 또는 Glu 잔기, 또는 카르복시- 또는 활성 에스테르-관능화된 -(L)_n[IM] 기와의 접합을 위한 Lys 잔기를 포함한다. -(L)_n[IM]의 접합을 위한 아미노산 잔기는 적합하게는 cMBP 펩티드 (SEQ-1)의 17량체 결합 영역으로부터 떨어져 위치하고, 임의로 C- 또는 N-말단에 위치한다. 임의로, 접합을 위한 아미노산 잔기는 Lys 잔기이다.

SEQ-1의 트립토판 잔기의 치환을 공지된 아미노산 치환기인 페닐알라닌 및 나프틸알라닌을 사용하여 평가하였다. 그러나, cMet 친화도의 상실이 발견되었으며, 이는 트립토판 잔기가 활성에 중요하다는 것을 시사한다. 임의로, cMBP 펩티드는 N-말단 세린 잔기를 추가로 포함하여 하기 18량체 (SEQ-2)를 제공한다:

Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶.

(SEQ-2)

SEQ-1 또는 SEQ-2에 더하여, cMBP는 추가로

(i) cMBP 펩티드의 C- 또는 N-펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Asp 또는 Glu 잔기 또는 그의 유사체를 포함할 수 있고, -(L)_n[IM]은 아민 기로 관능화되어 상기 Asp 또는 Glu 잔기 또는 그의 유사체의 카르복실 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공하거나; 또는

(ii) cMBP 펩티드의 C- 또는 N-펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Lys 잔기 또는 그의 유사체를 포함할 수 있고, -(L)_n[IM]은 카르복실 기로 관능화되어 상기 Lys 잔기 또는 그의 유사체의 엡실론 아민 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공한다.

SEQ-1 또는 SEQ-2에 더하여, cMBP는 cMBP 펩티드의 C- 또는 N-펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Lys 잔기 또는 그의 유사체를 추가로 포함할 수 있고, -(L)_n[IM]은 카르복실 기로 관능화되어 상기 Lys 잔기 또는 그의 유사체의 엡실론 아민 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공한다.

Asp 및/또는 Glu의 유사체는 2-아미노부탄디오산, 2-아미노헥산디오산, 2-아미노헵탄디오산, 2-아미노옥탄디오산, 2-아미노노난디오산, 2-아미노데칸디오산, 2-아미노운데칸디오산 및 2-아미노도데칸디오산 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

Lys의 유사체는 2,3-디아미노프로판산, 2,4-디아미노부탄산, 2,5-디아미노펜탄산, 2,7-디아미노헵탄산, 2,8-디아미노옥탄산, 2,9-디아미노노난산, 2,10-디아미노데칸산, 2,11-디아미노운데칸산, 2,12-디아미노도데칸산 중 하나 이상을 포함할 수 있다.

합성 링커 기 (L)가 존재하는 경우, 이는 [IM] 및 Z¹-[cMBP]-Z²에 대한 접합을 용이하게 하는 말단 관능기를 포함할 수 있다. L이 1 내지 10개의 아미노산 잔기의 펩티드 쇄를 포함하는 경우에, 아미노산 잔기는 히스티딘, 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있고, 임의로 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 임의로, L은 1 내지 5개 아미노산의 펩티드 쇄를 포함할 수 있다. 임의로, L은 2개 아미노산의 펩티드 쇄를 포함할 수 있다. 임의로, L은 3개 아미노산의 펩티드 쇄를 포함할 수 있다. 아미노산 잔기는 히스티딘, 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있고, 임의로 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 아미노산 잔기는 글리신일 수 있다.

화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기에서, 각각의 A는 아미노산일 수 있고, m은 값 1 내지 5의 정수일 수 있다. 임의로, 각각의 A는 아미노산일 수 있고, m은 2일 수 있다. 임의로, 각각의 A는 아미노산일 수 있고, m은 3일 수 있다. 아미노산은 히스티딘, 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있고, 임의로 글리신, 리신, 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 또는 세린으로부터 독립적으로 선택될 수 있다. 상기 또는 각각의 아미노산은 글리신일 수 있다.

L이 PEG 모이어티를 포함하는 경우, 이는 화학식 IA (17-아미노-5-옥소-6-아자-3,9,12,15-테트라옥사헵타데칸산) 또는 IB의 단분산 PEG-유사 구조의 올리고머화로부터 유래된 단위를 포함할 수 있다:

여기서 p는 1 내지 10의 정수이다. 대안적으로, 화학식 IB의 프로피온산 유도체를 기재로 하는 PEG-유사 구조가 사용될 수 있다:

여기서 p는 화학식 IA에 대해 정의된 바와 같고, q는 3 내지 15의 정수이다. 화학식 IB에서, p는 1 또는 2일 수 있고, q는 5 내지 12일 수 있다.

L은 1 내지 10개 아미노산 잔기의 펩티드 쇄 및 PEG 모이어티를 포함할 수 있다. 화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기에서, 각각의 A는 독립적으로 아미노산 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록일 수 있다. 임의로, 각각의 A는 독립적으로 아미노산일 수 있다. m은 값 1 내지 5, 임의로 3, 임의로 2의 정수일 수 있다.

링커 기가 PEG 또는 펩티드 쇄를 포함하지 않는 경우에, L 기는 2 내지 10개 원자, 가장 바람직하게는 2 내지 5개 원자, 특히 바람직하게는 2 또는 3개 원자의 -(A)_m- 모이어티를 구성하는 연결된 원자의 백본 쇄를 가질 수 있다. 2개 원자의 최소 링커 기 백본 쇄는 영상화 모이어티가 잘 분리되어 임의의 바람직하지 않은 상호작용이 최소화되도록 한다는 이점을 부여한다.

화학식 Z¹-[cMBP]-Z²의 펩티드는 하기 단계를 포함하는 제조 방법에 의해 수득될 수 있다:

(i) 목적하는 cMBP 펩티드와 동일한 펩티드 서열을 갖고 Cys^a 및 Cys^b가 비보호되고 Cys^c 및 Cys^d 잔기가 티올-보호기를 갖는 선형 펩티드의 고체 상 펩티드 합성을 수행하는 단계;

(ii) 단계 (i)로부터의 펩티드를 고체 지지체로부터 절단하고, 이를 용액 중에서 수성 염기로 처리하여 Cys^a 및 Cys^b를 연결하는 제1 디술피드 결합을 갖는 모노시클릭 펩티드를 제공하는 단계;

(iii) Cys^c 및 Cys^d 티올-보호기를 제거하고 고리화하여 Cys^c 및 Cys^d를 연결하는 제2 디술피드 결합을 제공함으로써 목적하는 비시클릭 펩티드 생성물 Z¹-[cMBP]-Z²를 얻는 단계.

용어 "보호기"는 바람직하지 않은 화학 반응을 억제 또는 저해하지만, 분자의 나머지를 변형시키지 않는 충분히 온화한 조건 하에 해당 관능기로부터 절단될 수 있게 충분히 반응성이도록 설계된 기를 의미한다. 탈보호 후, 목적 생성물이 수득된다. 아민 보호기는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있고, 적합하게는 Boc (여기서 Boc는 tert-부틸옥시카르보닐임), Fmoc (여기서 Fmoc는 플루오레닐메톡시카르보닐임), 트리플루오로아세틸, 알릴옥시카르보닐, Dde [즉 1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥실리덴)에틸] 또는 Npys (즉 3-니트로-2-피리딘 술페닐)로부터 선택된다. 적합한 티올 보호기는 Trt (트리틸), Acm (아세트아미도메틸), t-Bu (tert-부틸), tert-부틸티오, 메톡시벤질, 메틸벤질 또는 Npys (3-니트로-2-피리딘 술페닐)이다. 추가 보호기의 사용은 문헌 ['Protective Groups in Organic Synthesis', Theorodora W. Greene and Peter G. M. Wuts, (John Wiley & Sons, 1991)]에 기재되어 있다. 전형적인 아민 보호기는 Boc 및 Fmoc, 가장 전형적으로 Boc이다. 다른 전형적인 티올 보호기는 Trt 및 Acm이다.

고체 상 펩티드 합성의 추가 세부사항은 문헌 [P. Lloyd-Williams, F. Albericio and E. Girald; Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC Press, 1997]에 기재되어 있다. cMBP 펩티드는 불활성 분위기 하에 최상으로 저장되고, 동결기에서 유지된다. 용액 중에 사용되는 경우에, 디술피드 가교의 스크램블링 위험 때문에 7 초과의 pH를 피하는 것이 최상이고, 낮은 pH는 펩티드의 응집을 촉발하기 때문에 이를 피하는 것이 최상이다.

Z¹-[cMBP]-Z²는 M^IG와 동등한 Z¹ 및 Z² 둘 다를 가질 수 있다. 전형적인 cMBP 펩티드 및 Z¹/Z² 기는 상기 기재된 바와 같다. 특히, 상기 기재된 전형적인 cMBP 펩티드에 대해 기재된 바와 같이 cMBP 펩티드는 접합을 용이하게 하기 위해 Asp, Glu 또는 Lys 잔기를 포함하는 것이 전형적이다. cMBP 펩티드가 Lys 잔기를 포함하는 것이 가장 전형적이다.

Z¹-[cMBP]-Z²의 제조는 상기 기재되어 있다. Z³이 활성 에스테르인 Z¹-[cMBP]-Z³ 펩티드는 Z²가 OH 또는 생체적합성 양이온 (B^c)인 Z¹-[cMBP]-Z²로부터 통상적인 방법에 의해 제조될 수 있다.

용어 "활성화된 에스테르" 또는 "활성 에스테르"는 보다 우수한 이탈기를 포함하여 친핵체, 예컨대 아민과의 보다 용이한 반응을 허용하도록 설계된 연관된 카르복실산의 에스테르 유도체를 의미한다. 적합한 활성 에스테르의 예는 N-히드록시숙신이미드 (NHS), 술포-숙신이미딜 에스테르, 펜타플루오로페놀, 펜타플루오로티오페놀, 파라-니트로페놀, 히드록시벤조트리아졸 및 PyBOP (즉, 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트)이다. 활성 에스테르는 N-히드록시숙신이미드 또는 펜타플루오로페놀 에스테르, 특히 N-히드록시숙신이미드 에스테르일 수 있다. 대안적으로, 무수물의 형성에 의한 카르복실산의 분자내 활성화 형태가 사용될 수 있다.

방사성 모이어티는 알파선 (α) 방출체, 베타선 (β) 방출체 및 감마선 (γ) 방출체 중 적어도 하나일 수 있다.

베타선 방출체는 전자 (β^-) 방출체 및 양전자 (β⁺) 방출체 중 적어도 하나일 수 있다.

화합물은 양전자-방출 단층촬영 (PET), 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 섬광조영 및 방사선요법 중 하나 이상에 사용하기 위한 것일 수 있다. 화합물은 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT) 및 방사선요법 중 하나 이상에 사용하기 위한 것일 수 있다. 화합물은 방사선요법에 사용하기 위한 것일 수 있다.

방사성 모이어티는 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ¹⁸⁶Re, ⁶⁷Cu, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²¹¹At, ²²⁵Ac, ¹³¹I, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁹⁹Au, ¹⁰⁵Rh, ²²⁷Th, ¹⁵³Sm, ⁸⁹Sr, ²²³Ra, ⁷⁷Br, ¹²³I, ¹²⁵I, ^99mTc, ⁶⁷Ga, ¹¹¹In, ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, ⁸²Rb 및 ¹⁸F 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ¹⁸⁶Re, ⁶⁷Cu, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²¹¹At, ²²⁵Ac, ¹³¹I, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁹⁹Au, ¹⁰⁵Rh, ²²⁷Th, ¹⁵³Sm, ⁸⁹Sr, ²²³Ra, ⁷⁷Br, ¹²³I 및 ¹²⁵I 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, ⁸²Rb 및 ¹⁸F 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ^99mTc, ⁶⁷Ga 및 ¹¹¹In 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ⁶⁸Ga, ¹⁸F, ⁸⁹Zr, ¹⁷⁷Lu, ²²⁵Ac, ²¹³Bi, ²²⁷Th 및 ⁹⁰Y 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ⁶⁸Ga 및 ¹⁷⁷Lu 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

방사성 모이어티는 ¹⁷⁷Lu 또는 그의 적합한 염일 수 있다.

킬레이트화제는 시클렌 (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), 시클람 (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸), TACN (1,4,7-트리아자시클로노난), THP (트리스(히드록시피리디논)), DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산), NODAGA (1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산), TRAP (1,4,7-트리아자시클로노난 포스핀산), NOPO (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4-비스 [메틸렌(히드록시메틸)포스핀산]-7-[메틸렌(2-카르복시에틸)포스핀산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리스아세트산), DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DATA ((6-펜탄산)-6-(아미노)메틸-1,4-디아제핀트리아세테이트)), AAZTA (1,4-비스(카르복시메틸)-6-[비스(카르복시메틸)]아미노-6-메틸퍼히드로-1,4-디아제핀), HBED-CC(N,N'-비스(2-히드록시-5-(에틸렌-베타-카르복시)벤질)에틸렌디아민 N,N'-디아세트산) 및 그의 유도체로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다.

킬레이트화제는 THP (트리스(히드록시피리디논)), DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 및 NODAGA (1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산) 중 적어도 하나일 수 있다.

킬레이트화제는 DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산) 및 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 중 적어도 하나일 수 있다.

킬레이트화제는 DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산)일 수 있다. 킬레이트화제는 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산)일 수 있다.

SEQ-1에 더하여, cMBP는 C- 또는 N- cMBP 펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Asp 또는 Glu 잔기를 추가로 포함하고, -(L)_nIM은 아민 기로 관능화되어 상기 Asp 또는 Glu 잔기의 카르복실 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공한다.

SEQ-1에 더하여, cMBP는 C- 또는 N- cMBP 펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Lys 잔기를 포함할 수 있고, -(L)_nIM은 카르복실 기로 관능화될 수 있어 상기 Lys 잔기의 엡실론 아민 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공한다.

cMBP는 하기 SEQ-2 또는 SEQ-3의 아미노산 서열을 포함할 수 있다:

Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶ (SEQ-2);

Ala-Gly-Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Gly-Thr (SEQ-3).

Xaa³은 Arg일 수 있다.

SEQ-1, SEQ-2 또는 SEQ-3에 더하여, cMBP는 N- 또는 C-말단에 -Gly-Gly-Gly-Lys (SEQ-4), -Gly-Ser-Gly-Lys- (SEQ-5) 및 -Gly-Ser-Gly-Ser-Lys (SEQ-6)로부터 선택된 링커 펩티드를 추가로 포함할 수 있다.

링커 펩티드의 Lys 잔기는 -(L)_n[IM] 모이어티의 접합을 위한 전형적인 위치이다. 일부 cMBP 펩티드는 SEQ-3을 SEQ-4의 링커 펩티드와 함께 포함하여, 하기 26량체 아미노산 서열 (SEQ-7)을 갖는다:

Ala-Gly-Ser-Cys^a-Tyr-Cys^c-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys.

(SEQ-7)

cMBP는 하기 아미노산 서열 (SEQ-7)을 가질 수 있다:

Z¹ 및 Z² 둘 다는 독립적으로 Q, 임의로 M^IG일 수 있다.

Z¹은 아세틸일 수 있고, Z²는 1급 아미드일 수 있다.

n은 1일 수 있다. n은 0일 수 있다.

SEQ-1, SEQ-2, SEQ-3 및 SEQ-7의 cMBP 펩티드는 Z¹ = Z² = M^IG를 가질 수 있고, Z¹ = 아세틸 및 Z² = 1급 아미드를 가질 수 있다.

-(L)_n[IM] 모이어티는 적합하게는 Z¹ 또는 Z² 기 또는 SEQ-1의 cMet 결합 서열과 상이한 cMBP 펩티드의 아미노산 잔기에 부착된다. 가능한 아미노산 잔기 및 접합 부위는 상기 기재된 바와 같다. -(L)_n[IM] 모이어티가 Z¹ 또는 Z²에 부착되는 경우에, 이는 N- 또는 C-말단에의 접합에 의해 Z¹ 또는 Z²를 대체할 수 있고, 이러한 방식으로 생체내 대사를 차단할 수 있다.

화학식 I을 갖는 화합물은 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합할 수 있다:

여기서

Z¹은 cMBP의 N-말단에 부착되고, Q이고;

Z²는 cMBP의 C-말단에 부착되고, Q이고;

여기서 Q는 펩티드의 생체내 대사를 억제 또는 저해하는 생체적합성 기인 대사 억제 기 (M^IG)이고;

여기서 Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이고;

m은 값 1 내지 20의 정수이고;

n은 값 0 또는 1의 정수이고;

IM은 방사성 모이어티를 착화시키는데 적합한 킬레이트화제이고,

여기서 킬레이트화제는 DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산) 및 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 중 적어도 하나이다.

여기서

Z¹은 cMBP의 N-말단에 부착되고, Q이고;

Z²는 cMBP의 C-말단에 부착되고, Q이고;

여기서 Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이고;

L은 화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기이고, 여기서 각각의 A는 독립적으로 아미노산 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록이고;

m은 값 1 내지 5의 정수이고;

n은 1이고;

본 발명의 제2 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 생체적합성 담체를 포함하는, 포유동물 투여에 적합한 형태의 제약 조성물이 제공된다. 제약 조성물은 제1 측면에 기재된 바와 같은 방사성 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 방사성 모이어티는 킬레이트화제에 의해 착화될 수 있다.

생체적합성 담체는 용매, 전형적으로 수성 용매, 전형적으로 물일 수 있다. 용매는 유체일 수 있다.

"생체적합성 담체"는 조성물이 생리학상 허용되도록, 즉 독성 또는 과도한 불편함 없이 포유동물 신체에 투여될 수 있도록 영상화제가 현탁 또는 용해될 수 있는 유체, 특히 액체일 수 있다. 생체적합성 담체는 적합하게는 주사가능한 담체 액체, 예컨대 멸균 발열원-무함유 주사용수; 수용액, 예컨대 염수 (유리하게는 주사용 최종 생성물이 등장성이도록 균형을 이룰 수 있음); 1종 이상의 장성-조정 물질의 수용액 (예를 들어, 혈장 양이온과 생체적합성 반대이온의 염), 당 (예를 들어, 글루코스 또는 수크로스), 당 알콜 (예를 들어, 소르비톨 또는 만니톨), 글리콜 (예를 들어, 글리세롤) 또는 다른 비-이온성 폴리올 물질 (예를 들어, 폴리에틸렌글리콜, 프로필렌 글리콜 등)이다. 생체적합성 담체는 발열원-무함유 주사용수 또는 등장성 염수일 수 있다. 영상화제 및 생체적합성 담체는 각각, 시린지 또는 캐뉼라에 의한 용액의 첨가 및 회수를 가능하게 하면서 멸균 완전성 및/또는 방사성 안전성의 유지를 가능하게 하는 밀봉된 용기 플러스 임의로 불활성 헤드스페이스 기체 (예를 들어, 질소 또는 아르곤)를 포함하는 적합한 바이알 또는 용기에 공급된다. 바람직한 이러한 용기는 격막-밀봉 바이알이며, 여기서 기밀 마개는 오버실 (전형적으로 알루미늄으로 이루어짐)로 크림핑된다. 마개는 멸균 완전성을 유지하면서 피하 바늘로 단일 또는 다중 천공하기에 적합하다 (예를 들어, 크림핑된 격막 밀봉 마개). 이러한 용기는 마개가 필요에 따라 (예를 들어, 헤드스페이스 기체를 변화시키거나 용액을 탈기시키기 위해) 진공을 견딜 수 있고, 외부 대기 기체, 예컨대 산소 또는 수증기의 유입을 허용하지 않으면서 압력 변화, 예컨대 압력 감소를 견딜 수 있다는 추가의 이점을 갖는다.

제약 조성물은 단일 환자를 위한 투여량을 가질 수 있고, 적합한 시린지 또는 용기에 제공될 수 있다.

본 발명의 제3 측면에 따르면, 제2 측면의 제약 조성물의 제조를 위한 키트이며, 멸균 고체 형태의 제1 측면의 화합물을 포함하여 제2 측면의 생체적합성 담체의 멸균 공급물에 의한 재구성시에 용해가 일어나 목적하는 제약 조성물을 제공하도록 하는 키트가 제공된다.

키트는 제1 측면에 기재된 바와 같은 방사성 모이어티를 추가로 포함할 수 있다. 방사성 모이어티는 킬레이트화제에 의해 착화될 수 있다.

본 발명의 추가 측면에 따르면 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 사용을 포함하는, 포유동물 신체의 영상화 방법이 제공된다.

영상화는 생체내 영상화일 수 있다.

영상화는 PET 영상화, 섬광조영 및 SPECT 영상화 중 적어도 하나일 수 있다.

영상화는 SPECT 영상화일 수 있다.

영상화는 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하기 위한 것일 수 있다.

영상화 방법은 임의로 제1 측면의 화합물 또는 제2 측면의 제약 조성물이 이전에 포유동물 신체에 투여되었다.

영상화 방법은 하기 단계를 포함할 수 있다:

a) 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 투여하는 단계;

b) 방사성 모이어티의 붕괴에 의해 생성되는, 방사성 모이어티로부터의 방출을 검출하는 단계; 및

c) 단계 (b)의 방출로부터 관심 조직 표면의 영상을 형성하는 단계.

영상화 방법은 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링을 보조하는데 사용될 수 있다.

영상화 방법은 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링을 보조하는데 사용될 수 있다.

검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 또는 요법의 모니터링 방법은 영상화 방법을 포함한다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 포유동물 신체의 영상화에서의 영상화제 및 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제 중 적어도 하나로서 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 또는 제2 측면의 제약 조성물이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제로서 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 또는 제2 측면의 제약 조성물이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 포유동물 신체의 영상화에서의 영상화제 및 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제 둘 다로서 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 또는 제2 측면의 제약 조성물이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 의약으로서 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링에 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링에 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링에 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하고/거나 그와 연관된 상태를 치료하는데 사용하기 위한 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 포유동물 신체에 대한 방사선요법 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 포유동물 신체에 대한 영상화 및 방사선요법 둘 다의 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하여 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하고/거나 그와 연관된 상태를 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 치료의 모니터링, 요법, 방사선요법, 질환 진행의 모니터링 및 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 영상화제 및 방사선요법제 중 적어도 하나로서의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 방사선요법제로서의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 임의의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

본 발명의 추가 측면에 따르면, 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하는 것 및 그와 연관된 상태를 치료하는 것 중 적어도 하나에 있어서의 제1 측면의 화합물 및 제2 측면의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도가 제공된다.

생체내 사용을 위해, 제제는, 예를 들어 생체적합성 담체를 사용한 재구성에 의해 포유동물 투여에 적합한 형태로 제조된다는 것이 인지될 것이다.

기재된 바와 같은 대안적 특색 및 상이한 실시양태는 필요한 변경을 가하여 각각의 및 모든 측면 및 그의 각각의 및 모든 실시양태에 적용된다.

본 발명의 실시양태는 이제 도면을 참조하여 예로서 기재될 것이며, 도면에서:
도 1은 NODAGA를 포함하는 본 발명의 화합물 (화합물 1) 및 화합물 1을 수득하기 위한 반응식을 도시하고;
도 2는 THP를 포함하는 본 발명의 화합물 (화합물 2) 및 화합물 2를 수득하기 위한 반응식을 도시하고;
도 3은 DOTA를 포함하는 본 발명의 화합물 (화합물 3) 및 화합물 3을 수득하기 위한 반응식을 도시하고;
도 4는 DOTAGA를 포함하는 본 발명의 화합물 (화합물 4) 및 화합물 4를 수득하기 위한 반응식을 도시하고;
도 5는 ⁶⁸Ga-화합물 3 (주사 1시간 및 3시간 후) 및 ¹⁸F-FDG (주사 1시간 후)의 생체내 PET/CT 영상화를 보여주고;
도 6은 ¹⁷⁷Lu-화합물 3 (주사 1.5시간, 17시간, 41시간, 65시간 및 141시간 후)의 생체내 SPECT 영상화를 보여주고;
도 7은 ¹⁸F-FDG (주사 1시간 후)의 생체내 PET/CT 영상화를 보여주고;
도 8은 ¹⁷⁷Lu-화합물 3 (주사 4.5시간, 20시간, 45시간, 67시간 및 141시간 후)의 생체내 SPECT 영상화를 보여준다.

영상화제 또는 방사선요법제로서 (또는 전구체로서 또는 키트의 일부로서) 유용한 화합물을 하기 기재된 바와 같이 제조하였다.

cMet 결합 펩티드의 제조

단계 (a): 보호된 전구체 선형 펩티드의 합성

전구체 선형 펩티드는 하기 구조를 갖는다:

Ac-Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys(Acm)-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys(Acm)-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys-NH₂ (SEQ-7 포함).

펩티딜 수지 H-Ala-Gly-Ser(tBu)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Cys(Acm)-Ser(tBu)-Gly-Pro-Pro-Arg(Pbf)-Phe-Glu(OtBu)-Cys(Acm)-Trp(Boc)-Cys(Trt)-Tyr(tBu)-Glu(OtBu)-Thr(Ψ^Me,Mepro)-Glu(OtBu)-Gly-Thr(tBu)-Gly-Gly-Gly-Lys(Boc)-중합체 (SEQ-7 포함)를 어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems) 433A 펩티드 합성기 상에서 0.1 mmol 링크 아미드 노바겔 수지로 출발하여 Fmoc 화학을 사용하여 어셈블링하였다. 과량의 1 mmol 사전-활성화된 아미노산 (HBTU 사용)을 커플링 단계에 적용하였다. Glu-Thr 슈도프롤린 (노바바이오켐(Novabiochem) 05-20-1122)을 서열에 혼입시켰다. 수지를 질소 버블러 장치로 옮기고, DCM (5 mL) 중에 용해된 아세트산 무수물 (1 mmol) 및 NMM (1 mmol)의 용액으로 60분 동안 처리하였다. 무수물 용액을 여과에 의해 제거하고, 수지를 DCM으로 세척하고, 질소 스트림 하에 건조시켰다.

2.5% TIS, 2.5% 4-티오크레졸 및 2.5% 물을 함유하는 TFA (10 mL) 중에서 2시간 30분 동안 측쇄 보호기의 제거 및 수지로부터의 펩티드의 절단을 동시에 수행하였다. 수지를 여과에 의해 제거하고, TFA를 진공 하에 제거하고, 디에틸 에테르를 잔류물에 첨가하였다. 형성된 침전물을 디에틸 에테르로 세척하고, 공기-건조시켜 264 mg의 조 펩티드를 수득하였다.

조 펩티드를 정제용 HPLC (구배: 40분에 걸쳐 20-30% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 10 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 5μ C18 (2) 50 x 21.20 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 30분)에 의해 정제하여 순수한 cMet 결합 펩티드 선형 전구체 100 mg을 수득하였다. 순수한 생성물을 분석용 HPLC (구배: 10분에 걸쳐 10-40% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 0.3 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 3μ C18 (2) 50 x 2 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 6.54분)에 의해 분석하였다. 추가 생성물 특징화를 전기분무 질량 분광측정법을 사용하여 수행하였다 (MH₂ ²⁺ 계산치: 1464.6, MH₂ ²⁺ 실측치: 1465.1).

단계 (b): 모노시클릭 Cys4-16 디술피드 가교의 형성

Cys4-16; Ac-Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys(Acm)-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys(Acm)-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys-NH₂ (SEQ-7 포함).

단계 (a)로부터의 선형 전구체 (100 mg)를 5% DMSO/물 (200 mL) 중에 용해시키고, 암모니아를 사용하여 용액을 pH 6으로 조정하였다. 반응 혼합물을 5일 동안 교반하였다. 이어서, TFA를 사용하여 용액을 pH 2로 조정하고, 대부분의 용매를 진공 하에 증발에 의해 제거하였다. 생성물 정제를 위해 정제용 HPLC 칼럼 상에 잔류물 (40 mL)을 여러 부분으로 주입하였다.

잔류물을 정제용 HPLC (구배: 10분 동안 0% B, 이어서 40분에 걸쳐 0-40% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 10 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 5μ C18 (2) 250 x 21.20 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 44분)에 의해 정제하여 순수한 cMet 결합 펩티드 모노시클릭 전구체 72 mg을 수득하였다. 순수한 생성물 (이성질체 P1 내지 P3의 혼합물로서)을 분석용 HPLC (구배: 10분에 걸쳐 10-40% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 0.3 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 3μ C18 (2) 50 x 2 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 5.37분 (P1); 5.61분 (P2); 6.05분 (P3))에 의해 분석하였다. 추가 생성물 특징화를 전기분무 질량 분광측정법을 사용하여 수행하였다 (MH₂ ²⁺ 계산치: 1463.6, MH₂ ²⁺ 실측치: 1464.1 (P1); 1464.4 (P2); 1464.3 (P3)).

단계 (c): 제2 Cys6-14 디술피드 가교의 형성

단계 (b)로부터의 모노시클릭 전구체 (72 mg)를 질소 블랭킷 하에 75% AcOH/물 (72 mL) 중에 용해시켰다. 1 M HCl (7.2 mL) 및 AcOH 중 0.05 M I₂ (4.8 mL)를 이 순서로 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 1 M 아스코르브산 (1 mL)을 첨가하여 무색 혼합물을 수득하였다. 대부분의 용매를 진공 하에 증발시키고, 잔류물 (18 mL)을 물/0.1% TFA (4 mL)로 희석하고, 정제용 HPLC를 사용하여 생성물을 정제하였다.

잔류물을 정제용 HPLC (구배: 10분 동안 0% B, 이어서 40분에 걸쳐 20-30% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 10 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 5μ C18 (2) 250 x 21.20 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 43-53분)에 의해 정제하여 순수한 cMet 결합 펩티드 52 mg을 수득하였다. 순수한 생성물을 분석용 HPLC (구배: 10분에 걸쳐 10-40% B, 여기서 A = H₂O/0.1% TFA 및 B = ACN/0.1% TFA, 유량: 0.3 mL/분, 칼럼: 페노메넥스 루나 3μ C18 (2) 50 x 2 mm, 검출: UV 214 nm, 생성물 체류 시간: 6.54분)에 의해 분석하였다. 추가 생성물 특징화를 전기분무 질량 분광측정법을 사용하여 수행하였다 (MH₂ ²⁺ 계산치: 1391.5, MH₂ ²⁺ 실측치: 1392.5).

화합물 1의 제조

도 1의 반응식을 참조하여, 화합물 1을 하기와 같이 제조하였다.

바켐(Bachem)으로부터 입수한 GMP 등급 cMet 결합 펩티드 (150.0 mg, 49.8 μmol)를 질소 하에 10 mL 둥근 바닥 플라스크 내 건조 DMF (1.9 mL) 중에 용해시켰다. 케마텍(CheMatec)으로부터 입수한 NODAGA-NHS 에스테르 (43.80 mg, 1.2 당량)를 건조 DMF (600 μL) 중에 용해시키고, 시그마 알드리치(Sigma Aldrich)로부터 입수한 건조 DIPEA (173 μL, 20.0 당량) (99.5% 바이오테크(Biotech) 등급)를 첨가하였다. 활성 에스테르 용액을 펩티드 용액에 첨가하고, 이때 침전물이 형성되었다. 현탁액을 25℃에서 1시간 동안 교반하고, 이 시점에 샘플을 HPLC에 의해 분석하였으며, 이는 불완전한 반응을 나타냈다. 현탁액을 추가로 1시간 동안 교반하고, 이 시점에 추가의 샘플을 HPLC에 의해 분석하였으며, 이는 다시 불완전한 반응을 나타냈다. NODAGA-NHS 에스테르 (8.7 mg, 0.52 당량) 및 DIPEA (34.7 μL, 4 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 출발 펩티드의 생성물로의 전환이 불완전하더라도 (대략 5% 출발 펩티드가 남아있음), 3시간 30분 후에 반응을 정지시켰다. 반응 혼합물에 빙냉 MTBE (15 mL)를 첨가하고, 침전물을 원심분리하였다 (2분, 3,260 rpm, 5℃). 조 생성물을 물 1 mL 중에 용해시켜 2상 액체를 수득하고, 이를 반정제용 HPLC (AA 100 mM, pH 7, AcN, 분당 1%, 분당 10 mL, 칼럼 조르박스 C18 30 x 250 mm, 3회 주입, t_R = 26.73분)에 의해 정제하였다. 화합물 1을 중간 수율 (76.9 mg, 49%) 및 탁월한 순도 (> 98%, 210 및 254 nm)로 수득하였다.

HPLC 및 MALDI/TOF에 의해 화합물 1이 수득되었다는 것을 확인하였다.

HPLC 결과

(용리액 A: H₂O 중 0.1% TFA, 용리액 B: 아세토니트릴 중 0.09% TFA; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 95A C18, 2.1 x 150mm, 3.5um P/N 959763-902; 구배: 2.5분 동안 5% B, 이어서 85분간 5%에서 90% B, 이어서 2.5분 동안 90% B, 이어서 2.5분간 90%에서 5% B, 이어서 2.5분 동안 5% B; 검출: 210 nm)

● t_R cMet 펩티드: 29.2분; t_R 생성물 = 30.1분

(용리액 A: 물 중 0.1M 아세트산암모늄, 용리액 B: 아세토니트릴; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 95A C18, 2.1 x 150mm, 3.5um P/N 959763-902; 구배: 2.5분 동안 5% B, 이어서 85분간 5%에서 90% B, 이어서 2.5분 동안 90% B, 이어서 2.5분간 90%에서 5% B, 이어서 2.5분 동안 5% B; 검출: 210 nm)

● t_R cMet 펩티드: 21.0분; t_R 생성물 = 19.15분

(용리액 A: H₂O 중 0.1% TFA, 용리액 B: 아세토니트릴 중 0.09% TFA; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 95A C18, 2.1 x 150mm, 3.5um P/N 959763-902; 구배: 2.5분 동안 5% B, 이어서 17분간 5%에서 90% B, 이어서 2.5분 동안 90%B, 이어서 2.5분간 90%에서 5% B, 이어서 2.5분 동안 5% B; 검출: 210 nm)

● t_R 생성물 = 12.6분

MALDI/TOF 결과

● 펩티드 (재분석): 2,786.98 (M+4H)

● 생성물: 3,141 (계산치 생성물 질량 = 3,140.43)

화합물 2의 제조

화합물 2를 도 2의 반응식에 따라 및 하기 설명에 따라 제조하였다.

케마텍으로부터 입수한 GMP 등급 c-Met 펩티드 (30.0 mg, 9.97 μmol) 및 p-NCS-Bz-THP (14.37 mg, 1.5 당량)를 10 mL 둥근 바닥 플라스크 내 건조 DMF (1 mL) 중에 용해시켰다. 건조 DIPEA (26.0 μL, 15.0 당량)를 첨가하고, 이때 침전물이 형성되었다. 부분적으로 가용화된 현탁액을 교반하였다. HPLC 분석은 2시간 후 펩티드의 거의 완전한 전환 및 4시간 후 완전한 전환을 나타냈고, 이 시간까지 용액은 일부 침전물에 의해 탁하였다. 반응 혼합물에 빙냉 MTBE (15 mL)를 첨가하고, 침전물을 원심분리하였다 (2분, 3260 rpm, 5℃). 세척을 차가운 MTBE (6 mL)로 반복하고, 침전물을 원심분리하였다 (2분, 3260 rpm, 5℃). 생성된 백색 고체를 아르곤 유동 하에 건조시킨 다음, 진공 하에 건조시켰다 (31.95 mg). 조 생성물을 400 μL 물 및 400 μL AcN 중에 용해시키고, 반정제용 HPLC (H₂O 중 TFA 0.1%, AcN, 분당 0.75%, 분당 20 mL, 칼럼 조르박스 C18 21.2x250mm, 1회 주입, t_R=34.3분, 트레이스 파일 521)에 의해 정제하였다. 화합물을 우수한 수율 및 순도 (89% UV 254 nm)로 수득하였다.

HPLC, ESI+/MS 및 MALDI/TOF에 의해 화합물 2가 수득되었다는 것을 확인하였다.

HPLC 결과

(용리액 A: H₂O 중 0.1% TFA, 용리액 B: 아세토니트릴 중 0.09% TFA; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 95A C18, 2.1 x 150mm, 3.5um P/N 959763-902; 구배: 2.5분 동안 5% B, 이어서 85분간 5%에서 90% B, 이어서 2.5분 동안 90%B, 이어서 2.5분간 90%에서 5% B, 이어서 2.5분 동안 5% B; 검출: 210 nm)

● t_R 생성물 = 13.7분

ESI+/MS 결과

● 생성물: 1,872.8.3 (M+2H)²⁺; 1,248.5 (M+3H)³⁺

MALDI/TOF 결과

● 출발 펩티드: 2,786.98 (M+4H)⁺

● 생성물: 3,738 (계산치 생성물 질량 = 3,741.43)

화합물 3의 제조

DOTA-NHS는 아민의 표지를 위한 활성화된 종으로서 상업적으로 입수가능하다. 이는 ⁶⁸Ga 및 ¹⁷⁷Lu 킬레이트화에 사용될 수 있다. DOTA-NHS를 도 3의 반응식에 따라 cMet 결합 펩티드와 접합시켜 화합물 3을 수득하였다. 추가 세부사항은 하기에 제공된다.

바켐으로부터 입수한 GMP 등급 cMet 결합 펩티드 (10 mg, 3.17 μmol)를 1.5 mL 에펜도르프 튜브 내 건조 DMF (100 μL) 중에 용해시키고, 시그마 알드리치로부터 입수한 DIPEA (8.26 μL, 15.0 당량) (99.5% 바이오테크 등급)를 첨가하였다. 케마텍으로부터 입수한 DOTA-NHS (4.10 mg, 1.7 당량)를 건조 DMF (50 μL) 중에 용해시키고, 아민 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤 기체로 플러싱하고, 아르곤 기체의 양압 하에 20℃에서 대략 24시간 동안 반응시켰다.

샘플을 1시간 후에 취하고, HPLC에 의해 분석하였다. 추가 샘플을 대략 24시간 후에 취하고, ESI+/MS 및 MALDI/TOF에 의해 분석하여 완전한 반응을 확인하였다.

HPLC, ESI+/MS 및 MALDI/TOF 모두에 의해 cMet 결합 펩티드의 화합물 3으로의 완전한 전환을 확인하였다.

HPLC 결과 (용리액 A: H₂O 중 0.1% TFA, 용리액 B: 아세토니트릴 중 0.09% TFA; 칼럼: 애질런트 조르박스 이클립스 플러스 95A C18, 2.1 x 150mm, 3.5um P/N 959763-902; 구배: 2.5분 동안 5% B, 이어서 85분간 5%에서 90% B, 이어서 2.5분 동안 90%B, 이어서 2.5분간 90%에서 5% B, 이어서 2.5분 동안 5% B; 검출: 210 nm)

● T₀ = t_R cMet 펩티드: 29.2분

● T_1H = t_R cMet 펩티드: 피크 없음; t_R 생성물: 28.9분

ESI+/MS 결과

● 대략 24시간 후 반응 혼합물 - 양성 이온화: 1,585.3 (M+2H)²⁺; 1,056.9 (M+3H)³⁺

MALDI/TOF 결과

● 펩티드 (재분석): 2,785.05

● 대략 24시간 후 반응 혼합물: 3,170 (계산치 생성물 질량 = 3,169.44)

화합물 4의 제조

DOTAGA 무수물은 아민의 표지를 위한 활성화된 종으로서 상업적으로 입수가능하다. 이는 ⁶⁸Ga 및 ¹⁷⁷Lu 킬레이트화에 사용될 수 있다. DOTAGA 무수물을 도 4의 반응식에 따라 cMet 결합 펩티드와 접합시켜 화합물 4를 수득하였다. 추가 세부사항은 하기에 제공된다.

바켐으로부터 입수한 GMP 등급 cMet 결합 펩티드 (25 mg, 7.92 μmol)를 미리 180℃ 오븐에 넣음으로써 수분이 없도록 만든 10 mL 둥근 바닥 플라스크 내 건조 DMF (300 μL) 중에 용해시켰다. 시그마 알드리치로부터 입수한 DIPEA (21 μL, 15.0 당량) (99.5% 바이오테크 등급)를 둥근 바닥 플라스크에 첨가하고, 아르곤 기체로 플러싱하였다. 케마텍으로부터 입수한 DOTAGA 무수물 (7.26 mg, 2.0 당량)을 에펜도르프 튜브 내 건조 DMF (300 μL) 중에 용해시키고, 아민 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 초음파처리하여 용해시킨 다음, 아르곤 기체로 플러싱하고, 아르곤 기체의 양압 하에 대략 90℃에서 대략 4시간 동안 반응시켰다.

샘플을 30분, 1시간, 1시간 30분, 2시간 및 4시간 후에 취하고, HPLC에 의해 분석하였다. 취한 각각의 샘플을 MALDI/TOF에 의해 분석하고, 4시간에 취한 샘플을 ESI+/MS에 의해 분석하여 완전한 반응을 확인하였다.

HPLC, ESI+/MS 및 MALDI/TOF 모두에 의해 cMet 결합 펩티드의 화합물 4로의 완전한 전환을 확인하였다.

● T_30MIN = t_R cMet 펩티드: 29.214분; t_R 생성물: 28.854분

● T_1H = t_R cMet 펩티드: 29.105분; t_R 생성물: 28.724분

● T_1H30MIN = t_R cMet 펩티드: 29.112분; t_R 생성물: 28.745분

● T_2H = t_R cMet 펩티드: 29.607분; t_R 생성물: 28.796분

● T_4H = t_R cMet 펩티드: 29.560분; t_R 생성물: 28.747분

ESI+/MS 결과

● 대략 4시간 후 반응 혼합물 - 양성 이온화: 1,621.4 (M+2H)²⁺, 1,632.3 (M+Na+H)²⁺, 1,081.0 (M+3H)³⁺

MALDI/TOF 결과

● 대략 4시간 후 반응 혼합물: 3,244.3 (M+H)⁺; 3266 (M+Na)⁺ (계산치 생성물 질량 = 3,241.50)

하기 실험을 화합물 3 및 화합물 4에 대해 수행하였다:

● 잔류 용매 분석 (실험 1);

● 반대 이온 화학량론의 결정 (실험 2);

● 형광 편광에 의한 경쟁 결합 검정 (실험 3);

● ¹⁷⁷Lu를 사용한 화합물 3 및 화합물 4의 방사성표지 (실험 4); 및

● ⁶⁸Ga를 사용한 화합물 3 및 화합물 4의 방사성표지 (실험 5).

실험 1: 화합물 3 및 4의 잔류 용매 분석

화합물 3 및 4를 하기 잔류 용매에 대해 시험하였다: 디메틸포름아미드 (DMF); 아세토니트릴 (MeCN); 디이소프로필에틸아민 (DIPEA); tert-부틸 메틸 에테르 (TBME); 디클로로메탄 (DCM); 및 트리플루오로아세트산 (TFA).

(a) 절차

DMF, MeCN, DIPEA, TBME 및 DCM 분석을 하기와 같이 헤드스페이스 기체 크로마토그래피 (GC)에 의해 수행하였다.

화합물 3 및 4의 샘플을, 대략 10 mg의 각각의 화합물을 별개의 HPLC 헤드스페이스 바이알에 정확하게 칭량하여 이중으로 제조하였다. 1 mL의 디메틸아민 (DMA)을 각각의 바이알에 첨가하고, 바이알을 크림프 캡으로 밀봉하였다.

제조된 샘플을 필요한 관심 용매를 포함하는 표준물에 대해 분석하였다.

표준물 중 용매를 표 1에 약술된 작업 표준 농도로 제조하였다.

주¹: ICH 한계 = 국제 의약품 규제 조화 위원회(International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use) 한계.

주²: 밀도 값은 시그마-알드리치로부터 취하였고, 모든 밀도 값은 25℃에서였다.

n/a = 적용 가능하지 않음

표 1: 작업 표준 농도

분석을 위해, 1 mL의 표준물을 20 mL 헤드스페이스 바이알 내에 정확하게 피펫팅하고, 단단히 캡핑하였다. 각각의 필요한 표준물 주입을 위해 1개의 바이알을 제조하였다.

샘플 및 표준물을 표 2에 약술된 조건 하에 트리-플러스 300 헤드스페이스 오토샘플러가 구비된 써모 트레이스 1300 GC 상에서 GC에 의해 분석하였다.

표 2: GC 및 헤드스페이스 파라미터

하기와 같이 HPLC에 의해 TFA 분석을 수행하였다.

335 μL TFA를 100 mL의 0.008N 황산 중에 피펫팅하여 5 mg/mL 원액을 수득함으로써 TFA의 표준 원액을 제조하였다. 이어서, 원액을 0.008N 황산으로 희석하여 0.1 mg/mL, 0.05 mg/mL, 0.025 mg/mL, 0.010 mg/mL 및 0.005 mg/mL의 표준물을 수득하였다.

표준물을 표 3에 약술된 조건 하에 HPLC에 의해 분석하였다. 이로써 화합물 3 및 4 중 TFA의 양의 정량화를 위한 표준 곡선을 생성하였다. 표준 곡선은 500 내지 10,000 ppm 범위를 포괄하였다.

화합물 3 및 4의 샘플은, 단독으로는 물질의 이용가능성 결여로 인해, 20 mg의 각각의 화합물을 별개의 2 mL 부피 플라스크 내로 정확하게 칭량하여 제조하였다. 이어서, 플라스크 부피를 0.008N 황산으로 채워 10 mg/mL 용액을 수득하였다.

샘플 둘 다는 10 mg/mL에서 겔을 형성하였으므로, 이들은 HPLC 칼럼 상으로의 주입에 적합하지 않았다. 샘플을 2 mg/mL로 추가로 희석하였다. 이들 샘플은 여전히 점성이었지만, HPLC 주입에 적합하였다. 샘플 중 희석 배율을 보상하기 위해 주입 부피를 증가시켰다.

TFA 분석을 위한 HPLC 조건이 표 3에 약술되어 있다.

표 3: TFA 분석을 위한 HPLC 조건

(b) 결과

화합물 3 및 4에 대한 기체 크로마토그래피 (GC)에 의한 잔류 용매 결정에 대해 수득된 결과가 표 4에 제시되어 있다.

주¹: ICH 한계 = 국제 의약품 규제 조화 위원회 한계.

주²: DMF는 GC에 의해 블랭크 주입에서 캐리오버로서 검출되었고, 최대 잠재적 결과로서 보고되며, 이는 여전히 ICH 한계 미만이다.

주³: DIPEA는 잔류 용매에 대한 ICH 가이드라인 Q3C (R5)에 의해 분류되지 않고, 그 결과 명시된 한계는 없다.

nd = 검출되지 않음

표 4: 잔류 용매 분석 결과의 요약

TFA 잔류 한계는 염으로부터의 TFA의 해리로 인해 제안된 방법으로는 결정할 수 없었다. TFA의 해리는 샘플로부터의 TFA 반응이 <5000 ppm의 예상 수준을 훨씬 초과하도록 하였다.

따라서, HPLC 분석은 샘플 중 잔류 TFA의 결정에 부적합한 것으로 간주되었다.

(c) 결론

화합물 3 및 4에서 검출된 잔류 용매는 그의 각각의 국제 의약품 규제 조화 위원회 (ICH) 한계 내에 있었으며, 이는 화합물 3 및 화합물 4 둘 다가 인간 투여에 적합하다는 것을 의미한다.

실험 2: 화합물 3 및 4의 반대 이온 화학량론의 결정

화합물 3 및 4의 트리플루오로아세트산 (TFA) 화학량론을 HPLC 분석에 의해 결정하였다.

(a) 절차

화합물 3 및 4는 둘 다 펜타 TFA 염으로 간주된다. 이에 따라, 화합물 중 TFA의 이론적 백분율을 하기와 같이 계산하였다:

● TFA의 분자량 = 114.02 g/mol

● 펜타 TFA 염의 분자량 = 570.1 g/mol

● 화합물 3 (펜타 염)의 분자량 = 3739.6 g/mol

● 화합물 4 (펜타 염)의 분자량 = 3811.6 g/mol

따라서, 각각의 화합물에서 TFA의 이론적 백분율은 다음과 같다:

● 화합물 3 = (570.1/3739.6) x 100 = 15.24% TFA

● 화합물 4 = (570.1/3811.6) x 100 = 14.96% TFA

화학량론을 결정하기 위해, 샘플을 1 mg/mL로 제조하고, 의도된 반대이온 함량 (15%)인 0.15 mg/mL의 TFA 표준물에 대해 분석하였다.

100 μL의 TFA를 10 mL의 0.008N 황산에 희석하여 15 mg/mL 원액을 수득한 다음, 이를 희석하여 (1 mL를 100 mL 0.008N 황산에) 0.15 mg/mL 표준 용액을 수득하는 것에 의해, TFA 표준물을 대략 0.15 mg/mL로 이중으로 제조하였다.

화합물 3 및 4의 샘플을, 5 mg의 각각의 화합물을 별개의 5 mL 부피 플라스크 내로 칭량하여 대략 1 mg/mL로 제조하였다. 플라스크 부피를 0.008N 황산으로 채웠다.

샘플 및 표준물을 표 5에 약술된 조건을 사용하여 HPLC에 의해 분석하였다.

표 5: TFA 분석을 위한 HPLC 조건

사용된 중량 및 희석률을 감안하여 표준물에 대한 샘플의 회수율을 계산하였다. 샘플의 회수율은 화학량론을 결정할 것이고, 결과는 이 패턴을 따를 것이다:

● 펜타 염 = 100% 회수율

● 테트라 염 = 80% 회수율

● 트리스 염 = 60% 회수율

● 비스 염 = 40% 회수율

● 모노 염 = 20% 회수율

(b) 결과

표준 회수율은 107.0%였다. 이는 이어지는 표준 제조 절차에 기인하였다. 구체적으로, 순수한 TFA는 그의 휘발성으로 인해 취급하기 어려웠다. 이는 순수한 휘발성 물질의 취급 및 측정에 문제를 야기하였다.

화합물 3은 91.86%의 회수율을 제공하였다.

화합물 4는 99.06%의 회수율을 제공하였다.

회수율은 반대이온 결정에 대한 정상 신뢰 한계 내에 있었다.

시험에 의해 화합물 3 및 화합물 4에 대한 펜타 화학량론을 10% 신뢰 한계 내에서 확인하였다.

실험 3: 형광 편광 (FP)에 의한 화합물 3 및 4의 경쟁 결합 검정

cMet 수용체에 대한 cMet 결합 시클릭 펩티드 (비표지), cMet-DOTA (화합물 3) 및 cMet-DOTAGA (화합물 4)의 결합의 경쟁 형광 편광 (FP) 검정에 의해 반수 최대 억제 농도 (IC₅₀) 및 해리 상수 (K_d) 값을 결정하였다.

형광 편광 방법의 원리는 하기와 같이 간략하게 기재될 수 있다:

단색 광은 수평 편광 필터를 통과하고, 샘플 내의 형광 분자를 여기시킨다. 수직 편광 평면에 적절하게 배향된 분자만이 광을 흡수하고, 여기되고, 후속적으로 광을 방출한다. 방출된 광을 수평 및 수직 평면 둘 다에서 측정한다. 이방성 값 (A)은 하기 방정식에 따른 광 강도 사이의 비이다:

A = (수평 편광자에 의한 강도 - 수직 편광자에 의한 강도)/(수평 편광자에 의한 강도 + 2* 수직 편광자에 의한 강도)

몰레큘라 디바이시스 M5 멀티-모드 플레이트 판독기를 사용하여 96-웰 편평 바닥 플레이트에서 형광 이방성 측정을 수행하였다.

사용된 검정 완충제는 0.01% 트윈 20을 함유한 포스페이트-완충 염수 (PBS), pH 7.4였다.

원액 제조

형광 프로브 (형광 표지 (Cy5)를 갖는 cMet 결합 시클릭 펩티드)를 검정 완충제 중에 용해시켜 1 mM 원액을 수득하였다. 1 μM 모 원액 및 50 nM 작업 원액을 또한 제조하였다.

cMet 수용체 (100 μg)를 검정 완충제 (1 mL) 중에 용해시켜 775 nM의 모 원액을 수득하였다. 500 nM 및 167 nM의 작업 원액을 또한 제조하였다.

펩티드 (cMet 결합 시클릭 펩티드 (비표지), 화합물 3 및 화합물 4)를 검정 완충제 중에 용해시켜 0.5 또는 1 mM의 모 원액을 수득하였다. 67 μM의 작업 원액을 또한 제조하였다.

펩티드 경쟁 검정

20 μM 내지 20 nM의 최종 농도를 제공하는 2배 희석 스크린의 펩티드 (cMet 결합 시클릭 펩티드 (비표지), 화합물 3 및 화합물 4; 30 μL/웰의 67 μM 원액)를 플레이트에 첨가하였다. 50 nM의 최종 농도를 제공하는 cMet 수용체 (30 μL/웰의 167 μM 원액)를 또한 첨가하였다. 20 nM의 최종 농도 (100 μL 총 부피)를 제공하는 형광 프로브 (40 μL/웰의 50 nM 원액)를 또한 첨가하였다. 각각의 웰을 삼중으로 반복하였다. 100 μL 검정 완충제 (삼중으로)를 비-형광 블랭크로서 사용하였다. 플레이트를 스캐닝 전 10분 동안 30℃에서 인큐베이션하였다. 플레이트를 실온 (25℃)에서 ex/em/컷-오프 필터 (COF) 640/675/665 nm에서 삼중으로 스캐닝하였다.

각각의 cMet 펩티드 (비표지), 화합물 3 및 화합물 4에 대한 경쟁 펩티드 농도에 대해 이방성을 플롯팅하였다.

칼레이다그래프(KaleidaGraph) v4.03을 사용하여 하기 방정식으로의 데이터 피팅에 의해 IC₅₀ 값을 결정하였다:

여기서 r은 관찰된 이방성이고, r₀은 유리 프로브의 이방성이고, r₁은 완전히 결합된 프로브의 이방성이고, [펩티드]는 경쟁 펩티드 농도이다.

칼레이다그래프 v4.03을 사용하여 하기 방정식으로의 데이터 피팅에 의해 K_d 값을 결정하였다:

여기서 r은 관찰된 이방성이고, r₀은 유리 프로브의 이방성이고, r₁은 완전히 결합된 프로브의 이방성이고, [펩티드]는 경쟁 펩티드 농도이고, K_dP는 cMet 수용체 및 형광 프로브에 대한 해리 상수이고, K_d는 cMet 수용체에 결합하는 경쟁 펩티드에 대한 해리 상수이다.

평균 IC₅₀값 및 K_d 값이 하기 표 6에 제공된다.

표 6: cMet 결합 시클릭 펩티드 (비표지), 화합물 3 및 화합물 4에 대한 평균 IC₅₀ 값 및 K_d 값

결과는 cMet 결합 시클릭 펩티드 (비표지), 화합물 3 및 화합물 4가 cMet 수용체에 대해 대등한 친화도를 갖고, IC₅₀ 및 K_d 값의 임의의 변동이 충분히 실험 오차 내에 있다는 것을 나타냈다.

실험 4: ¹⁷⁷Lu를 사용한 화합물 3 및 화합물 4의 방사성표지

루테튬-177 (¹⁷⁷Lu)을 사용한 화합물 3 및 4의 방사성표지 실행가능성을 결정하기 위해 연구를 수행하였다.

파일럿 연구

다양한 펩티드 (화합물 3 및 4) 대 ¹⁷⁷Lu 비를 시험하여 HPLC 및 순간 박층 크로마토그래피 (ITLC)에 의해 상응하는 방사성표지 수율을 평가하였다.

0.4 M 아세트산암모늄, pH 5.6 (시험 1 내지 8에 대한 완충제 1) 또는 0.4 M 아세트산암모늄 및 0.325 M 겐티스산, pH 4 (시험 9 내지 12에 대한 완충제 2)를 사용하여 방사성표지 절차를 수행하였다. 비활성이 > 500 MBq/nmol인 [¹⁷⁷Lu]LuCl₃을 방사성표지 연구에 사용하였다. 명시된 부피 (표 8에서 V_177LU)의 [¹⁷⁷Lu]LuCl₃을 적절한 완충제 및 1 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 써모믹서 시스템에서 10, 20 또는 30분의 인큐베이션 시간 동안 80℃에서 인큐베이션하였다. 화합물 3 및 4 대 ¹⁷⁷Lu의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험의 요약이 표 7에 약술되어 있다. 각각의 시험에 대한 구체적 조건이 표 8에 약술되어 있다. 인큐베이션의 종료시에, 1 μL의 혼합물을 HPLC 시스템 상에 주입하고, 표 9에 약술된 조건을 사용하여 분석하였다.

표 7: 화합물 3 및 4 대 ¹⁷⁷Lu의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험

V = 부피

m = 분

표 8: 표 7에 약술된 각각의 시험에 대한 실험 조건

표 9: HPLC 조건

방사성표지 수율 및 방사화학적 순도 (RCP)는 하기와 같이 HPLC 및 ITLC를 사용하여 결정하였다. 방사성표지 수율은 정제 전 ¹⁷⁷Lu의 혼입 백분율을 정의한다 (즉, 방사성표지의 효능).

ITLC에 의한 방사성표지 수율

ITLC에 의한 방사성표지 수율은 하기 방정식을 사용하여 결정하였다:

여기서 Rf는 샘플 중 성분이 이동한 거리 대 샘플의 원래 적용 지점으로부터 전방으로 용매가 이동한 거리의 비로 정의되는 체류 계수이다. 성분이 적용 지점 또는 기원에 남아있는 경우에 Rf는 0이다. 성분이 용매와 함께 전방으로 이동하는 경우에 Rf는 1이다.

HPLC에 의한 방사성표지 수율 및 방사화학적 순도

HPLC에 의한 방사성표지 수율은 하기 방정식을 사용하여 결정하였다:

여기서 면적 피크 #2는 유리 ¹⁷⁷Lu이고, 면적 피크 #3은 부산물 (또는 부산물 피크가 없는 경우에 ¹⁷⁷Lu로 표지된 화합물 3 또는 4)이고, 면적 피크 #4는 (부산물 피크가 있는 경우에) ¹⁷⁷Lu로 표지된 화합물 3 또는 4이다.

방사화학적 순도는 하기 방정식을 사용하여 결정하였다:

여기서 면적 피크 #2는 유리 ¹⁷⁷Lu이고, 면적 피크 #3은 ¹⁷⁷Lu로 표지된 화합물 3 또는 4이다.

방사성표지 시험의 결과가 표 10에 제공되어 있다.

표 10: 시험 1 내지 12에 대한 방사성표지 수율, 방사화학적 순도 및 비활성 결과.

화합물 3 및 4는 둘 다 80℃에서 10분간 30 및 60 MBq/nmol의 ¹⁷⁷Lu로 성공적으로 표지되었다.

인큐베이션 시간을 20 또는 30분으로 증가시키면 방사화학적 순도가 더 불량한 것으로 밝혀졌다. 완충제 1 및 완충제 2는 둘 다 화합물 3 및 4의 완전한 방사성표지를 가능하게 하였다.

초기 결과는 ¹⁷⁷Lu와 함께 10분 인큐베이션한 후 화합물 3 및 4에서 방사성핵종의 >99% 혼입율 (방사성표지 수율) 및 >99% 방사화학적 순도를 나타냈다.

최적화 연구

비활성을 적어도 120 MBq/nmol로 상승시키기 위해 추가의 시험을 수행하였다.

0.4 M 아세트산암모늄 및 0.325 M 겐티스산, pH 4 (완충제 2)를 사용하여 방사성표지 절차를 수행하였다. 비활성이 > 500 MBq/nmol인 ¹⁷⁷LuCl₃을 방사성표지 연구에 사용하였다. 명시된 부피 (표 12에서 V_177LU)의 ¹⁷⁷LuCl₃을 완충제 2 및 1 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 써모믹서 시스템에서 10분의 인큐베이션 시간 동안 80℃에서 인큐베이션하였다. 화합물 3 및 4 대 ¹⁷⁷Lu의 다양한 비를 사용한 추가 방사성표지 시험의 요약이 표 11에 약술되어 있다. 각각의 시험에 대한 구체적 조건이 표 12에 약술되어 있다. 인큐베이션의 종료시에, 1 μL의 혼합물을 HPLC 시스템 상에 주입하고, 표 9에 약술된 조건을 사용하여 분석하였다.

표 11: 화합물 3 및 4 대 ¹⁷⁷Lu의 다양한 비를 사용한 추가 방사성표지 시험

V = 부피

m = 분

표 12: 표 11에 약술된 각각의 시험에 대한 실험 조건

방사성표지된 화합물 3 및 4 (화합물 3-¹⁷⁷Lu 방사성접합체 및 화합물 4-¹⁷⁷Lu 방사성접합체)의 안정성을 초기 방사성표지로부터 24시간 후 HPLC에 의해 또한 분석하였다.

방사성표지 수율 및 방사화학적 순도 (RCP)는 상기 정의된 바와 같은 HPLC 및 ITLC를 사용하여 결정하였다.

추가 방사성표지 시험의 결과가 표 13에 제공되어 있다.

표 13: 시험 13 내지 24에 대한 방사성표지 수율, 방사화학적 순도 및 비활성 결과.

화합물 3 및 4는 둘 다 완충제로서 0.4 M 아세트산암모늄 및 0.325 M 겐티스산, pH 4를 사용하여 80℃에서 10분 동안 120 및 150 MBq/nmol의 ¹⁷⁷Lu로 성공적으로 표지되었다.

방사화학적 수율 및 방사화학적 순도는 > 95%였다.

용액 중에서 24시간 후에, HPLC 결과는 방사화학적 순도가 여전히 > 90%라는 것을 나타냈다. 24시간 후에 관찰된 불순물은 방사선분해로 인한 것일 수 있다.

임상 연구

임상 환경에서 방사성표지 실험을 또한 수행하였다. 이 실험에서, ¹⁷⁷Lu의 출발 활성은 7.6 GBq이었다.

방사성표지 실험을 하기와 같이 수행하였다. 화합물 3 (32 nmol)을 초순수 물 (2 μg/μL) 및 1.5 mL의 0.4 M 아세트산나트륨 완충제, pH 4.8 (8 mg/mL) 중에 용해시켰다. 겐티스산을 첨가하고, 혼합물을 ¹⁷⁷Lu V-바이알로 옮겼다. 바이알을 95℃에서 25분 동안 가열하였다. 혼합물을 주사용수로 용해시키고 후속 멸균 여과한 후에, 6.9 GBq의 ¹⁷⁷Lu에 접합된 화합물 3을 달성하였다. > 200MBq/nmol (n=3)의 비활성을 달성하였다.

방사화학적 수율 및 방사화학적 순도는 둘 다 > 99%였다.

또한, 주입 용액의 안정성은 실온에서 24시간 후에 관찰된 방사화학적 순도 > 98% 및 2종의 미지의 불순물 < 2%로 매우 우수한 것으로 밝혀졌다.

결론

수득된 방사화학적 순도 및 비활성은 이러한 접근법을 사용하여 표적화된 방사선요법을 위해 적절한 양의 방사능을 종양 (즉, cMet 과다발현 부위)에 이르게 할 수 있다는 것을 의미한다. 방사능의 적절한 양은 2 내지 8 GBq, 전형적으로 7.4 GBq로 기재된다. 추가로, 상기 기재된 절차를 사용하는 것은 cMet 수용체를 포화시키고 임의의 방사능을 종양 부위에 이르지 못하게 할 다량의 "콜드" 펩티드 (즉, 비표지된 펩티드)가 요구되지 않는다는 것을 의미한다.

실험 5: ⁶⁸Ga를 사용한 화합물 3 및 화합물 4의 방사성표지

파일럿 연구

⁶⁸Ga를 사용한 화합물 3 및 4의 방사성표지 실행가능성을 평가하기 위해 파일럿 연구를 수행하였다. 방사성표지 수율 및 방사화학적 순도 (RCP)를 HPLC에 의해 결정하였다.

1M 아세트산나트륨 완충제, pH 4.5를 사용하여 방사성표지 절차를 수행하였다. 양이온성 사전-정제에 의한 [⁶⁸Ga]GaCl₃ 용리물을 방사성표지 연구에 사용하였다. 명시된 부피 (표 15에서 V_68Ga)의 [⁶⁸Ga]GaCl₃을 완충제, 물, 에탄올 및 4 내지 16 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 써모믹서 시스템에서 5 내지 10분의 인큐베이션 시간 동안 95℃에서 인큐베이션하였다. 화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험의 요약이 표 14에 약술되어 있다. 각각의 시험에 대한 구체적 조건이 표 15에 약술되어 있다. 인큐베이션의 종료시에, 2.5 μL의 혼합물을 HPLC 시스템 상에 주입하고, 표 16에 약술된 조건을 사용하여 분석하였다.

표 14: 화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험

V = 부피

m = 분

표 15: 표 14에 약술된 각각의 시험에 대한 실험 조건

표 16: HPLC 조건

방사성표지 수율 및 방사화학적 순도 (RCP)는 HPLC를 사용하여 결정하였다. 방사성표지 수율은 정제 전 ⁶⁸Ga의 혼입 백분율을 정의한다 (즉, 방사성표지의 효능).

HPLC에 의한 방사성표지 수율 및 방사화학적 순도

여기서 면적 피크 #2는 유리 ⁶⁸Ga이고, 면적 피크 #3은 부산물 (또는 부산물 피크가 없는 경우에 ⁶⁸Ga로 표지된 화합물 3 또는 4)이고, 면적 피크 #4는 (부산물 피크가 있는 경우에) ⁶⁸Ga로 표지된 화합물 3 또는 4이다.

방사화학적 순도는 하기 방정식을 사용하여 결정하였다:

여기서 면적 피크#2는 유리 ⁶⁸Ga이고, 면적 피크 #3은 ⁶⁸Ga로 표지된 화합물 3 또는 4이다.

방사성표지 시험의 결과가 표 17에 제공되어 있다.

표 17: 시험 1 내지 3에 대한 방사성표지 수율, 방사화학적 순도 및 비활성 결과.

화합물 3 및 4는 둘 다 상기 약술된 조건을 사용하여 ⁶⁸Ga로 성공적으로 표지되었다. 그러나, 정제 후에, 비활성은 단지 12 MBq/nmol에 도달하였다.

파일럿 연구에서, ⁶⁸Ga와 함께 인큐베이션한 후 화합물 3 및 4 둘 다에 대해 대략 60% 방사화학적 순도를 얻었다. 방사선분해는 관찰되지 않았다.

연장된 표지 시간을 사용한 반복 파일럿 연구

다양한 펩티드 (화합물 3 및 4) 대 ⁶⁸Ga 비를 시험하여 HPLC 및 순간 박층 크로마토그래피 (ITLC)에 의해 상응하는 방사성표지 수율을 평가하였다.

1M 아세트산나트륨 완충제, pH 4.5를 사용하여 방사성표지 절차를 수행하였다. ⁶⁸GaCl₃: 분획화된 용리물을 방사성표지 연구에 사용하였다. 마이크로튜브에서, 명시된 부피인 표 19에서의 V_68Ga (마이크로튜브에서 측정된 활성 대략 7.3 MBq)의 ⁶⁸GaCl₃을 (0.11 x V_68Ga)의 완충제 및 0.24 내지 1.36 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4)와 혼합하였다. 반응 혼합물을 써모믹서 시스템에서 10분의 인큐베이션 시간 동안 95℃에서 인큐베이션하였다. 화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험의 요약이 표 18에 약술되어 있다. 각각의 시험에 대한 구체적 조건이 표 19에 약술되어 있다.

인큐베이션의 종료시에, 마이크로튜브를 원심분리하고, 2.5 μL의 혼합물을 HPLC 시스템 상에 주입하고, 표 16에 약술된 조건을 사용하여 분석하였다.

ITLC의 경우, 하기 절차를 따랐다:

● 1 μL의 혼합물을 ITLC-SG 종이 상에 스팟팅하고, 이동상으로서 시트레이트 완충제 (0.1M, pH 5)를 사용하여 용리시켰다 (ITLC 1); 및

● 1 μL의 혼합물을 ITLC-SG 종이 상에 스팟팅하고, 아세트산암모늄 (5 M)/메탄올 1/1의 용액을 사용하여 용리시켰다 (ITLC 2).

표 18: 화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험

V = 부피

m = 분

표 19: 표 18에 약술된 각각의 시험에 대한 실험 조건

방사성표지 수율 및 방사화학적 순도 (RCP)는 상기 기재된 바와 같이 HPLC를 사용하여 결정하였다. ITLC에 의한 방사성표지 수율은 하기와 같이 결정하였다.

ITLC에 의한 방사성표지 수율

방사성표지 시험의 결과가 표 20에 제공되어 있다.

표 20: 시험 4 내지 11에 대한 방사성표지 수율, 방사화학적 순도 및 비활성 결과.

화합물 3 및 4는 둘 다 상기 약술된 조건을 사용하여 ⁶⁸Ga로 성공적으로 표지되었다. 그러나, 방사성표지된 화합물 3 및 4 (화합물 3-⁶⁸Ga 방사성접합체 및 화합물 4-⁶⁸Ga 방사성접합체)는 인간 신체로의 정맥내 투여에 적합하기에 충분히 순수하지 않았다. 에탄올을 첨가하여 방사선분해를 방지할 수 있는 것으로 밝혀졌다.

대략 83%의 방사화학적 순도로 26 MBq/nmol의 비활성 (시험 8)을 달성하였다.

최적화 연구

파일럿 연구의 결과에 기초하여 화합물 3 및 4 내로의 ⁶⁸Ga 혼입을 최적화하기 위해 추가 시험을 수행하였다. 화합물 3을 최적화 연구에 사용하였다.

아세트산나트륨 완충제, 1 M, pH 4.5 (완충제 1) 또는 아세트산나트륨 완충제, 0.5 M, pH 4.5 (완충제 2)를 사용하여 방사성표지 절차를 수행하였다. ⁶⁸GaCl₃: 분획화된 용리물을 방사성표지 연구에 사용하였다.

95℃에서의 가열:

마이크로튜브에서, 명시된 부피인 표 22에서의 V_68Ga (마이크로튜브에서 측정된 활성 대략 7.3 MBq)의 ⁶⁸GaCl₃을 (0.11 x V_68Ga)의 적절한 완충제, 0.24 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4) 및 11.3 μL의 에탄올과 혼합하였다. 반응 혼합물을 써모믹서 시스템에서 10 또는 15분의 인큐베이션 시간 동안 95℃에서 인큐베이션하였다.

110℃에서의 가열:

밀봉된 유리 v-바이알에서, 명시된 부피인 표 22에서의 V_68Ga (마이크로튜브에서 측정된 활성 대략 29.2 MBq)의 ⁶⁸GaCl₃을 (0.11 x V_68Ga)의 적절한 완충제, 0.96 nmol의 펩티드 (화합물 3 또는 화합물 4) 및 45.4 μL의 에탄올과 혼합하였다. 반응 혼합물을 가열 블록에서 10분의 인큐베이션 시간 동안 110℃에서 인큐베이션하였다.

인큐베이션의 종료시에, 마이크로튜브를 원심분리하고, 2.5 내지 5 μL의 혼합물을 HPLC 시스템 상에 주입하고, 표 16에 약술된 조건을 사용하여 분석하였다.

화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험의 요약이 표 21에 약술되어 있다. 각각의 시험에 대한 구체적 조건이 표 22에 약술되어 있다.

ITLC의 경우, 하기 절차를 따랐다:

표 21: 화합물 3 및 4 대 ⁶⁸Ga의 다양한 비를 사용한 방사성표지 시험

V = 부피

m = 분

EtOH = 에탄올

표 22: 표 21에 약술된 각각의 시험에 대한 실험 조건

최적화 시험의 결과가 표 23에 제공되어 있다.

표 23: 시험 12 내지 23에 대한 방사성표지 수율, 방사화학적 순도 및 비활성 결과.

최적화 연구로부터 하기 결론이 유도되었다:

● 인큐베이션 온도를 110℃로 증가시키는 것은 더 낮은 방사성표지 수율을 유발하였다 (시험 16 내지 17 (110℃)과 비교하여 시험 12 내지 15 (95℃) 참조);

● 더 긴 인큐베이션 시간은 방사성표지 수율을 유의하게 증가시키지 않았다 (시험 13 및 15 (15분)과 비교하여 시험 12 및 14 (10분) 참조);

● 에탄올의 첨가는 방사선분해를 유의하게 방지하지 않았다 (결과는 에탄올을 첨가하였을 때 또는 첨가하지 않았을 때 방사선분해가 5%보다 높지 않았다는 것을 나타냈음);

● 에탄올의 첨가는 ⁶⁸Ga 콜로이드의 형성을 증가시키는 것으로 보였다;

● 허용되는 비활성에 도달하는 것을 보장하기 위해 3.8 미만의 pH가 요구되었다; 및

● 적합한 방사화학적 순도에 도달하기 위해 HPLC 주입 전 정제 단계 (바람직하게는 SEP-PAK C18 카트리지를 사용함)가 요구되었다.

최적화 연구 동안, 대략 83%의 방사화학적 순도로 25 MBq/nmol 이하의 비활성 (시험 18)을 달성하였다.

결론

수득된 방사화학적 순도 및 비활성은 이러한 접근법을 사용하여 영상화를 위해 적절한 양의 방사능을 종양 (즉, cMet 과다발현 부위)에 이르게 할 수 있다는 것을 의미한다. 방사능의 적절한 양은 개발 단계에서 실험 작용제에 대해 대략 12.5 내지 75 MBq로 기재된다.

하기 추가 실험을 화합물 3을 사용하여 수행하였다:

● 생체내 선량측정 연구 (실험 6).

실험 6: 화합물 3의 생체내 선량측정 연구

화합물 3을 사용하여 선량측정 연구를 수행함으로써 영상화 및 방사선요법에 사용하기 위한 본원에 기재된 화합물의 적합성을 조사하였다.

(a) 환자 배경

연구에 참여한 2명의 인간 환자의 세부사항이 표 24에 제공되어 있다.

표 24: 생체내 연구를 위한 환자 세부사항

(b) 절차

화합물 3을 ⁶⁸Ga로 방사성표지하여 영상화제 (⁶⁸Ga-화합물 3)를 제공하였다. 사용된 방사성표지 절차는 하기와 같았다. [⁶⁸Ga]GaCl₃을 완충제 (1M 아세트산나트륨 완충제, pH 4.5) 및 화합물 3과 혼합하였다. 반응 혼합물을 95℃에서 10분의 인큐베이션 시간 동안 인큐베이션하였다. 정제 없이 대략 98%의 방사화학적 순도로 25 MBq/nmol의 비활성을 달성하였다.

화합물 3을 ¹⁷⁷Lu로 방사성표지하여 치료제 (¹⁷⁷Lu-화합물 3)를 제공하였다. 사용된 방사성표지 절차는 하기와 같았다. 화합물 3을 초순수 물 (2 μg/μl) 및 1.5 mL의 0.4 M 아세트산나트륨 완충제, pH 4.8 (8 mg/mL) 중에 용해시켰다. 겐티스산을 첨가하고, 혼합물을 ¹⁷⁷Lu V-바이알로 옮겼다. 바이알을 95℃에서 25분 동안 가열하였다. 혼합물을 주사용수로 용해시키고 후속 멸균 여과한 후에, 6.9 GBq의 ¹⁷⁷Lu-화합물 3을 달성하였다. > 200MBq/nmol (n=3)의 비활성을 달성하였다.

환자 1에게 치료제 (¹⁷⁷Lu-화합물 3)를 주사하기 7일 전에 그 환자에게 영상화제 (⁶⁸Ga-화합물 3)를 투여하였다. 환자 1의 경우, ⁶⁸Ga는 240 MBq의 활성을 가졌고, ¹⁷⁷Lu는 835 MBq의 활성을 가졌다. 영상화제를 주사한지 1시간 및 3시간 후에 치료전 양전자 방출 단층촬영/컴퓨터 단층촬영 (PET/CT) 영상화를 수행하였다. 치료제를 투여하기 1일 전에, 환자 1에게 ¹⁸F-플루오로데옥시글루코스 (¹⁸F-FDG)를 투여하였다. ¹⁸F는 227 MBq의 활성을 가졌다. ¹⁸F-FDG를 주사한지 1시간 후에 PET/CT 영상화를 수행하였다. 이어서, 환자 1에게 치료제를 투여하였다. 이어서, 치료제를 주사한지 1.5시간, 17시간, 41시간, 65시간 및 141시간 후에 치료전 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT) 영상화를 수행하였다.

환자 2에게 치료제 (¹⁷⁷Lu-화합물 3)를 주사하기 4일 전에 그 환자에게 ¹⁸F-FDG를 투여하였다. 환자 2의 경우, ¹⁸F는 208 MBq의 활성을 가졌고, ¹⁷⁷Lu는 959 MBq의 활성을 가졌다. ¹⁸F-FDG를 주사한지 1시간 후에 PET/CT 영상화를 수행하였다. 이어서, 환자 2에게 치료제를 투여하였다. 이어서, 치료제를 주사한지 4.5시간, 20시간, 45시간, 67시간 및 141시간 후에 치료전 SPECT 영상화를 수행하였다.

비교를 위해, 전립선암을 나타내는 제3 환자에게 현재 핵 의학에서 영상화 및 요법을 위한 가장 성공적인 표적 중 하나로 간주되는 전립선-특이적 막 항원 (PSMA)을 투여하였다. 사용된 절차는 하기와 같았다. 환자에게 치료제 (¹⁷⁷Lu로 방사성표지된 PSMA)를 주사하기 19일 전에 환자에게 영상화제 (¹⁸F로 표지된 PSMA)를 투여하였다. ¹⁸F는 250 MBq의 활성을 가졌고, ¹⁷⁷Lu는 9185 MBq의 활성을 가졌다. ¹⁷⁷Lu-PSMA 치료제의 활성은 선량측정 연구에 사용된 ¹⁷⁷Lu-화합물 3 치료제의 활성보다 대략 10배 더 높았다. 이는 선량측정 연구가 PSMA 작용제에 대해 이미 완료되었고, 더 높은 선량이 생체내 사용에 안전한 것으로 간주되기 때문이었다. ¹⁸F-PSMA를 주사한지 1시간 후에 PET/CT 영상화를 수행하였다. 이어서, 환자에게 ¹⁷⁷Lu-PSMA 치료제를 투여하였다. 이어서, 치료제를 주사한지 19시간, 43시간 및 65시간 후에 치료전 SPECT 영상화를 수행하였다.

(c) 영상화

지멘스 바이오그래프(Siemens Biograph) mCT 플로우 PET/CT를 사용하여 PET/CT 영상화를 수행하였다. 지멘스 인테보(Siemens Intevo) SPECT/CT를 사용하여 SPECT 영상화를 수행하였다.

환자 1에 대한 치료전 PET/CT 영상화 결과는 도 5에 제시되어 있다. 영상은 주사 (p.i.) 1시간 및 3시간 후 둘 다에서 종양 내 ⁶⁸Ga-화합물 3의 축적 (영상에서 ⁶⁸Ga-cMET로 지칭됨)을 보여준다. 또한, 주사 1시간 후에 종양에 ¹⁸F-FDG가 축적된 것이 나타나 있다.

환자 1에 대한 치료전 SPECT 영상화 결과는 도 6에 제시되어 있다. 영상은 주사 (p.i.) 후 141시간까지 종양 내 ¹⁷⁷Lu-화합물 3의 축적 및 체류를 보여준다.

환자 2에 대한 치료전 PET/CT 영상화 결과는 도 7에 제시되어 있다. 영상은 주사 1시간 후 종양 내 ¹⁸F-FDG의 축적을 보여준다.

환자 2에 대한 치료전 SPECT 영상화 결과는 도 8에 제시되어 있다. 영상은 주사 (p.i.) 후 141시간까지 종양 내 ¹⁷⁷Lu-화합물 3의 축적 및 체류를 보여준다.

(d) 결과

환자 1에서의 치료제 (¹⁷⁷Lu-화합물 3)의 선량측정 연구의 결과는 표 25에 제공되어 있다. 환자 2에서의 치료제 (¹⁷⁷Lu-화합물 3)의 선량측정 연구의 결과는 표 26에 제공되어 있다. 비교를 위해, ¹⁷⁷Lu-PSMA 치료제에 대한 결과가 표 27에 제공되어 있다.

Vol = 부피

h = 시간

표 25: 환자 1에서의 ¹⁷⁷Lu-화합물 3의 선량측정 결과 (¹⁷⁷Lu 활성은 835 MBq이었음).

VOI = 관심 부피

Vol = 부피

h = 시간

표 26: 환자 2에서의 ¹⁷⁷Lu-화합물 3의 선량측정 결과 (¹⁷⁷Lu 활성은 959 MBq이었음).

VOI = 관심 부피

h = 시간

표 27: ¹⁷⁷Lu-PSMA 치료제의 선량측정 결과 (¹⁷⁷Lu 활성은 9185 MBq이었음).

결과는 주요 조직 및 기관에서의 치료제의 축적된 선량을 나타낸다.

¹⁷⁷Lu-화합물 3을 사용하여 종양에서 수득된 평균 선량이 ¹⁷⁷Lu-PSMA를 사용하여 수득된 것보다 더 낮았지만, 이는 화합물 3을 사용하여 환자에게 제공된 ¹⁷⁷Lu의 더 낮은 활성 때문에 예상되었던 것이다.

결과를 평가하기 위해, 승인된 방사선요법제에 대한 선량측정 값에 대해 문헌 검색을 수행하였다. ¹⁷⁷Lu-DOTATATE는 전신 방사선요법에 대해 승인된 화합물이다. 문헌 [Brogsitter et al. (Nuklearmedizin, 2017, Volume 56(1), pages 1-8)]은 ¹⁷⁷Lu-DOTATATE가 5.53 Gy/GBq (중앙값 2.70 Gy/GBq; 범위 0.44-15.3 Gy/GBq)의 종양 선량을 전달하였다고 보고하였다. 기관 선량은 하기와 같이 보고되었다: 신장 (2.03 ± 0.96 Gy/GBq), 간 (1.67 ± 1.73 Gy/GBq), 비장 (4.50 ± 3.69 Gy/GBq) 및 전신 (0.15 ± 0.08 Gy/GBq). 종양-대-신장 선량 비는 2.4 ± 5.6으로 보고되었다. 문헌 [Nicolas et al. (J Nucl Med, 2017, Volume 58, page 1435, doi: 10.2967/jnumed.117.191684)]은 ¹⁷⁷Lu-DOTATATE가 4 cm 종양에 대해 0.333 Gy/GBq의 종양 선량을 전달하였고 6.4시간 (범위 5.4-7.3시간)의 종양 체류 시간을 가졌다고 보고하였다.

추가로, 문헌 [Okamoto et al. (J Nucl Med, 2016, Volume 116, doi: 10.2967/jnumed.116.178483)]은 ¹⁷⁷Lu-PSMA-I&T가 종양 병변에 3.2 ± 2.6 Gy/GBq (범위 0.22-12 Gy/GBq)의 사이클당 평균 흡수 선량을 전달하였다고 보고하였다.

문헌 검색 동안 발견된 전형적인 한계는 신장에 대해 23 Gy 또는 골수에 대해 2 Gy였다.

(e) 결론

¹⁷⁷Lu-화합물 3에 의해 전달되는 종양 선량은 승인된 방사선요법제 ¹⁷⁷Lu-DOTATATE 및 후기 단계 임상 개발 방사선요법제 ¹⁷⁷Lu-PSMA의 범위 내에 있다. 종양 반감기는 또한 ¹⁷⁷Lu-PSMA와 유사한 시간범위 내에 있고 ¹⁷⁷Lu-DOTATATE보다 더 긴 것으로 밝혀졌다. 추가적으로, ¹⁷⁷Lu-화합물 3을 사용한 신장, 간 및 비장에 대한 기관 선량은 모두 ¹⁷⁷Lu-DOTATATE에 대해 보고된 결과 미만이었다.

따라서, 선량측정 연구는 종양에 전달되는 선량이 승인되었거나 임상 개발의 후기 단계에 있는 방사선요법제에 대해 관찰된 범위 내에 있기 때문에 본원에 기재된 화합물이 방사선요법에 사용하기 적합하다는 것을 제시한다.

본 발명의 기재된 실시양태에 대한 다양한 변형 및 변동은 본 발명의 범주 및 취지를 벗어나지 않으면서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 분명할 것이다. 본 발명이 구체적 실시양태와 관련하여 기재되었지만, 청구된 바와 같은 본 발명은 이러한 구체적 실시양태로 과도하게 제한되지 않아야 한다는 것이 이해되어야 한다. 실제로, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한, 기재된 본 발명의 수행 방식의 다양한 변형은 본 발명에 포괄되는 것으로 의도된다.

약어

통상적인 단일 문자 또는 3-문자 아미노산 약어가 사용된다.

AAZTA: 1,4-비스(카르복시메틸)-6-[비스(카르복시메틸)]아미노-6-메틸퍼히드로-1,4-디아제핀

Acm: 아세트아미도메틸

ACN (또는 MeCN): 아세토니트릴

Boc: tert-부틸옥시카르보닐

Bz: 벤조일

시클람: 1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸

시클렌: 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸

CRC: 결장직장암

CT: 컴퓨터 단층촬영

DATA: (6-펜탄산)-6-(아미노)메틸-1,4-디아제핀트리아세테이트)

DCM: 디클로로메탄

Dde: 1-(4,4-디메틸-2,6-디옥소시클로헥실리덴)에틸

DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민

DMA: 디메틸아민

DMF: 디메틸포름아미드

DMSO: 디메틸술폭시드

DOTA: 1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산

DOTAGA: 2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산

ESI+/MS: 전기분무 이온화 질량 분광측정법

EtOH: 에탄올

FDG: 플루오로데옥시글루코스

FP: 형광 편광

Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카르보닐

GC: 기체 크로마토그래피

GBq: 기가베크렐

GMP: 우수 제조 관리기준

HBED-CC: N,N'-비스(2-히드록시-5-(에틸렌-베타-카르복시)벤질)에틸렌디아민 N,N'-디아세트산

HBTU: O-벤조트리아졸-1-일-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트

HGF: 간세포 성장 인자

HPLC: 고성능 액체 크로마토그래피

HSPyU: O-(N-숙신이미딜)-N,N,N',N'-테트라메틸렌우로늄 헥사플루오로포스페이트

IC₅₀: 반수 최대 억제 농도

ITLC: 순간 박층 크로마토그래피

K_d: 해리 상수

MALDI/TOF: 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화 비행 시간 질량 분광측정법

MBq: 메가베크렐

MeCN: 아세토니트릴

MTBE: 메틸 tert-부틸 에테르

NCS: N-클로로-숙신이미드

NHS: N-히드록시-숙신이미드

NMM: N-메틸모르폴린

NMP: 1-메틸-2-피롤리디논

NODAGA: 1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산

NOPO: 1,4,7-트리아자시클로노난-1,4-비스[메틸렌(히드록시메틸)포스핀산]-7-[메틸렌(2-카르복시에틸)포스핀산

NOTA: 1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리스아세트산

Npys: 3-니트로-2-피리딘 술페닐

PEG: 폴리에틸렌글리콜

PET: 양전자 방출 단층촬영

Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-술포닐

PBS: 포스페이트-완충 염수

PSMA: 전립선-특이적 막 항원

PyBOP: 벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트

RCP: 방사화학적 순도

SPECT: 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영

tBu: t-부틸

TACN: 1,4,7-트리아자시클로노난

TBME: tert-부틸 메틸 에테르

TFA: 트리플루오로아세트산

THP: 트리스(히드록시피리디논)

TIS: 트리이소프로필실란

TRAP: 1,4,7-트리아자시클로노난 포스핀산

Trt: 트리틸

서열 목록 프리 텍스트

SEQ-1

Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이다.

17량체 cMET 결합 펩티드.

SEQ-2

Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶

Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이다.

18량체 cMET 결합 펩티드.

SEQ-3

Ala-Gly-Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Gly-Thr

Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;

Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;

Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;

Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;

Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;

Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이다.

22량체 cMET 결합 펩티드.

SEQ-4

Gly-Gly-Gly-Lys

cMET 결합 펩티드의 일부인 테트라펩티드 서열.

SEQ-5

Gly-Ser-Gly-Lys

cMET 결합 펩티드의 일부인 테트라펩티드 서열.

SEQ-6

Gly-Ser-Gly-Ser-Lys

cMET 결합 펩티드의 일부인 5개의 펩티드 서열.

SEQ-7

Ala-Gly-Ser-Cys-Tyr-Cys-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys-Trp-Cys-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys

26량체 cMET 결합 펩티드.

SEQUENCE LISTING <110> Edinburgh Molecular Imaging Limited <120> Compounds and Methods of Use <130> P150951.WO.01 <150> GB1908573.7 <151> 2019-06-14 <150> GB2004360.0 <151> 2020-03-26 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> Xaa at position 2 may be Asn, His or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..(4) <223> Xaa at position 4 may be Gly, Ser, Thr or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> Xaa at position 8 may be Thr or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> Xaa at position 15 may be Ala, Asp, Glu, Gly or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 may be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 may be Asp or Glu <400> 1 Cys Xaa Cys Xaa Gly Pro Pro Xaa Phe Glu Cys Trp Cys Tyr Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa <210> 2 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> Xaa at position 3 may be Asn, His or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa at position 5 may be Gly, Ser, Thr or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> Xaa at position 9 may be Thr or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..(16) <223> Xaa at position 16 may be Ala, Asp, Glu, Gly or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..(17) <223> Xaa at position 17 may be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 may be Asp or Glu <400> 2 Ser Cys Xaa Cys Xaa Gly Pro Pro Xaa Phe Glu Cys Trp Cys Tyr Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa <210> 3 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (5)..(5) <223> Xaa at position 5 may be Asn, His or Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> Xaa at position 7 may be Gly, Ser, Thr or Asn <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> Xaa at position 11 may be Thr or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..(18) <223> Xaa at position 18 may be Ala, Asp, Glu, Gly or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> Xaa at position 19 may be Ser or Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (20)..(20) <223> Xaa at position 20 may be Asp or Glu <400> 3 Ala Gly Ser Cys Xaa Cys Xaa Gly Pro Pro Xaa Phe Glu Cys Trp Cys 1 5 10 15 Tyr Xaa Xaa Xaa Gly Thr 20 <210> 4 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Gly Gly Gly Lys 1 <210> 5 <211> 4 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Gly Ser Gly Lys 1 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Gly Ser Gly Ser Lys 1 5 <210> 7 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Ala Gly Ser Cys Tyr Cys Ser Gly Pro Pro Arg Phe Glu Cys Trp Cys 1 5 10 15 Tyr Glu Thr Glu Gly Thr Gly Gly Gly Lys 20 25

Claims

영상화 및/또는 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합한, 화학식 I을 갖는 화합물.

여기서
Z¹은 cMBP의 N-말단에 부착되고, H 또는 Q이고;
Z²는 cMBP의 C-말단에 부착되고, OH, OB^c 또는 Q이고;
여기서 B^c는 생체적합성 양이온이고;
cMBP는 하기 아미노산 서열 (SEQ-1)을 포함하는, 17 내지 30개 아미노산의 cMet 결합 시클릭 펩티드이고:
Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶;
여기서 Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;
Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;
Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;
Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;
Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;
Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이고;
Cys^a-d는 각각 시스테인 잔기여서 잔기 a 및 b뿐만 아니라 c 및 d가 고리화되어 2개의 별개의 디술피드 결합을 형성하도록 하고;
각각의 경우의 Q는 독립적으로 하기 중 적어도 하나이고:
펩티드의 생체내 대사를 억제 또는 저해하는 생체적합성 기인 대사 억제 기 (M^IG),
생체내 종양 세포 등에서의 체류를 증진시키는 생체적합성 기인 종양 체류 기 (T^RG), 및
생체분포를 증진시키고/거나 생체내 혈액 체류를 연장시키는 생체적합성 기인 생체분포 증진 기 (D^EG);
L은 화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기이고, 여기서 각각의 A는 독립적으로 -CR₂-, -CR=CR-, -C≡C-, -CR₂CO₂-, -CO₂CR₂-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO₂NR-, -NRSO₂-, -CR₂OCR₂-, -CR₂SCR₂-, CR₂NRCR₂-, C_4-8 시클로헤테로알킬렌 기, C_4-8 시클로알킬렌 기, C_5-12 아릴렌 기, C_3-12 헤테로아릴렌 기, 아미노산, 당 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록이고;
각각의 R은 독립적으로 H, C_1-4 알킬, C_2-4 알케닐, C_2-4 알키닐, C_1-4 알콕시알킬 또는 C_1-4 히드록시알킬로부터 선택되고;
m은 값 1 내지 20의 정수이고;
n은 값 0 또는 1의 정수이고;
IM은 방사성 모이어티를 착화시키는데 적합한 킬레이트화제이다.
제1항에 있어서, 방사성 모이어티가 알파선 (α) 방출체, 베타선 (β) 방출체 및 감마선 (γ) 방출체 중 적어도 하나인 화합물.
제2항에 있어서, 베타선 방출체가 전자 (β^-) 방출체 및 양전자 (β⁺) 방출체 중 적어도 하나인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 양전자-방출 단층촬영 (PET), 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영 (SPECT), 섬광조영 및 방사선요법 중 하나 이상에 사용하기 위한, 임의로 방사선요법에 사용하기 위한 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ¹⁸⁶Re, ⁶⁷Cu, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²¹¹At, ²²⁵Ac, ¹³¹I, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁹⁹Au, ¹⁰⁵Rh, ²²⁷Th, ¹⁵³Sm, ⁸⁹Sr, ²²³Ra, ⁷⁷Br, ¹²³I, ¹²⁵I, ^99mTc, ⁶⁷Ga, ¹¹¹In, ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, ⁸²Rb 및 ¹⁸F 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ⁹⁰Y, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁸Re, ¹⁸⁶Re, ⁶⁷Cu, ²¹²Bi, ²¹³Bi, ²¹¹At, ²²⁵Ac, ¹³¹I, ¹⁶⁶Ho, ¹⁴⁹Pm, ¹⁹⁹Au, ¹⁰⁵Rh, ²²⁷Th, ¹⁵³Sm, ⁸⁹Sr, ²²³Ra, ⁷⁷Br, ¹²³I 및 ¹²⁵I 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr, ¹¹C, ¹⁵O, ¹³N, ⁸²Rb 및 ¹⁸F 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ^99mTc, ⁶⁷Ga 및 ¹¹¹In 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ⁶⁸Ga, ¹⁸F, ⁸⁹Zr, ¹⁷⁷Lu, ²²⁵Ac, ²¹³Bi, ²²⁷Th 및 ⁹⁰Y 및 그의 적합한 염으로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 방사성 모이어티가 ¹⁷⁷Lu 또는 그의 적합한 염인 화합물.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 킬레이트화제가 시클렌 (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸), 시클람 (1,4,8,11-테트라아자시클로테트라데칸), TACN (1,4,7-트리아자시클로노난), THP (트리스(히드록시피리디논)), DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산, NODAGA (1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산), TRAP (1,4,7-트리아자시클로노난 포스핀산), NOPO (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4-비스[메틸렌(히드록시메틸)포스핀산]-7-[메틸렌(2-카르복시에틸)포스핀산), NOTA (1,4,7-트리아자시클로노난-1,4,7-트리스아세트산), DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산), DATA ((6-펜탄산)-6-(아미노)메틸-1,4-디아제핀트리아세테이트)), AAZTA (1,4-비스(카르복시메틸)-6-[비스(카르복시메틸)]아미노-6-메틸퍼히드로-1,4-디아제핀), HBED-CC (N,N'-비스(2-히드록시-5-(에틸렌-베타-카르복시)벤질)에틸렌디아민 N,N'-디아세트산) 및 그의 유도체로 이루어진 군 중 하나 이상으로부터 선택된 것인 화합물.
제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 킬레이트화제가 THP (트리스(히드록시피리디논)), DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산), DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 및 NODAGA (1,4,7-트리아자시클로노난,1-글루타르산-4,7-아세트산) 중 적어도 하나인 화합물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 킬레이트화제가 DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산) 및 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 중 적어도 하나인 화합물.
제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ-1에 더하여, cMBP가 C- 또는 N- cMBP 펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Asp 또는 Glu 잔기를 추가로 포함하고, -(L)_nIM이 아민 기로 관능화되어 상기 Asp 또는 Glu 잔기의 카르복실 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공하는 것인 화합물.
제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ-1에 더하여, cMBP가 C- 또는 N- cMBP 펩티드 말단의 4개 아미노산 잔기 내에 Lys 잔기를 포함하고, -(L)_nIM이 카르복실 기로 관능화되어 상기 Lys 잔기의 엡실론 아민 측쇄에 접합됨으로써 아미드 결합을 제공하는 것인 화합물.
제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, cMBP가 하기 SEQ-2 또는 SEQ-3의 아미노산 서열을 포함하는 것인 화합물:
Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶ (SEQ-2);
Ala-Gly-Ser-Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶-Gly-Thr (SEQ-3).
제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, Xaa³이 Arg인 화합물.
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, SEQ-1, SEQ-2 또는 SEQ-3에 더하여, cMBP가 N- 또는 C-말단에 -Gly-Gly-Gly-Lys (SEQ-4), -Gly-Ser-Gly-Lys- (SEQ-5) 및 -Gly-Ser-Gly-Ser-Lys (SEQ-6)로부터 선택된 링커 펩티드를 추가로 포함하는 것인 화합물.
제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, cMBP가 하기 아미노산 서열 (SEQ-7)을 갖는 것인 화합물.
Ala-Gly-Ser-Cys^a-Tyr-Cys^c-Ser-Gly-Pro-Pro-Arg-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Glu-Thr-Glu-Gly-Thr-Gly-Gly-Gly-Lys.
제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, Z¹ 및 Z² 둘 다가 독립적으로 Q이고, 여기서 임의로 Q가 M^IG인 화합물.
제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, Z¹이 아세틸이고, Z²가 1급 아미드인 화합물.
제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, n이 1인 화합물.
제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 A가 독립적으로 아미노산 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록일 수 있고, 임의로 각각의 A가 아미노산일 수 있는 것인 화합물.
제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, m이 값 1 내지 5의 정수일 수 있고, 임의로 m이 2일 수 있는 것인 화합물.
제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 방사선요법에 사용하기 위한 작용제의 제조에 적합할 수 있는, 화학식 I을 갖는 화합물:

여기서
Z¹은 cMBP의 N-말단에 부착되고, Q이고;
Z²는 cMBP의 C-말단에 부착되고, Q이고;
여기서 Q는 펩티드의 생체내 대사를 억제 또는 저해하는 생체적합성 기인 대사 억제 기 (M^IG)이고;
cMBP는 하기 아미노산 서열 (SEQ-1)을 포함하는, 17 내지 30개 아미노산의 cMet 결합 시클릭 펩티드이고:
Cys^a-Xaa¹-Cys^c-Xaa²-Gly-Pro-Pro-Xaa³-Phe-Glu-Cys^d-Trp-Cys^b-Tyr-Xaa⁴-Xaa⁵-Xaa⁶;
여기서 Xaa¹은 Asn, His 또는 Tyr이고;
Xaa²는 Gly, Ser, Thr 또는 Asn이고;
Xaa³은 Thr 또는 Arg이고;
Xaa⁴는 Ala, Asp, Glu, Gly 또는 Ser이고;
Xaa⁵는 Ser 또는 Thr이고;
Xaa⁶은 Asp 또는 Glu이고;
Cys^a-d는 각각 시스테인 잔기여서 잔기 a 및 b뿐만 아니라 c 및 d가 고리화되어 2개의 별개의 디술피드 결합을 형성하도록 하고;
L은 화학식 -(A)_m-의 합성 링커 기이고, 여기서 각각의 A는 독립적으로 -CR₂-, -CR=CR-, -C≡C-, -CR₂CO₂-, -CO₂CR₂-, -NRCO-, -CONR-, -NR(C=O)NR-, -NR(C=S)NR-, -SO₂NR-, -NRSO₂-, -CR₂OCR₂-, -CR₂SCR₂-, CR₂NRCR₂-, C_4-8 시클로헤테로알킬렌 기, C_4-8 시클로알킬렌 기, C_5-12 아릴렌 기, C_3-12 헤테로아릴렌 기, 아미노산, 당 또는 단분산 폴리에틸렌글리콜 (PEG) 빌딩 블록이고;
각각의 R은 독립적으로 H, C_1-4 알킬, C_2-4 알케닐, C_2-4 알키닐, C_1-4 알콕시알킬 또는 C_1-4 히드록시알킬로부터 선택되고;
m은 값 1 내지 20의 정수이고;
n은 값 0 또는 1의 정수이고;
IM은 방사성 모이어티를 착화시키는데 적합한 킬레이트화제이고,
여기서 킬레이트화제는 DOTAGA (2,2',2"-(10-(1,4-디카르복시-에틸)-1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7-트리일)트리아세트산) 및 DOTA (1,4,7,10-테트라아자시클로도데칸-1,4,7,10-테트라아세트산) 중 적어도 하나이다.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 생체적합성 담체를 포함하고, 임의로 방사성 모이어티를 추가로 포함하는, 포유동물 투여에 적합한 형태의 제약 조성물.
제26항에 있어서, 단일 환자를 위한 투여량을 갖고, 적합한 시린지 또는 용기에 제공되는 제약 조성물.
제26항 또는 제27항의 제약 조성물의 제조를 위한 키트이며, 멸균 고체 형태의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물을 포함하여 제26항 또는 제27항의 생체적합성 담체의 멸균 공급물에 의한 재구성시에 용해가 일어나 목적하는 제약 조성물을 제공하도록 하고, 임의로 방사성 모이어티를 추가로 포함하는 키트.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 사용을 포함하는, 포유동물 신체의 영상화 방법.
제29항에 있어서, 영상화가 생체내 영상화인 방법.
제29항 또는 제30항에 있어서, 영상화가 PET 영상화, 섬광조영 및 SPECT 영상화 중 적어도 하나이고, 임의로 영상화가 SPECT 영상화인 방법.
제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 영상화가 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하기 위한 것인 방법.
제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제26항 또는 제27항의 제약 조성물이 이전에 포유동물 신체에 투여된 것인 방법.
제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
a) 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 투여하는 단계;
b) 방사성 모이어티의 붕괴에 의해 생성되는, 방사성 모이어티로부터의 방출을 검출하는 단계; 및
c) 단계 (b)의 방출로부터 관심 조직의 영상을 형성하는 단계
를 포함하는 방법.
제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링을 보조하는데 사용되는 방법.
제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링을 보조하는데 사용되는 방법.
제29항 내지 제35항 중 어느 한 항의 영상화 방법을 포함하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 또는 요법의 모니터링 방법.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 신체의 영상화에서의 영상화제 및 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제 중 적어도 하나로서 사용하기 위한, 임의로 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제로서 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물 신체의 영상화에서의 영상화제 및 포유동물 신체의 방사선요법에서의 방사선요법제 둘 다로서 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 의약으로서 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링에 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링에 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링에 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하고/거나 그와 연관된 상태를 치료하는데 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 요법의 모니터링 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 포유동물 신체에 대한 방사선요법 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 포유동물 신체에 대한 영상화 및 방사선요법 둘 다의 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하는, 검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및/또는 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나를 사용하여 생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하고/거나 그와 연관된 상태를 치료하는 방법.
제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.
검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 치료의 모니터링, 요법, 방사선요법, 질환 진행의 모니터링 및 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.
영상화제 및 방사선요법제 중 적어도 하나로서의, 임의로 방사선요법제로서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.
검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및 암 또는 전암 상태의 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.
검출, 진단, 예후, 결과의 예측, 수술, 병기결정, 치료, 요법, 방사선요법, 치료의 모니터링, 질환 진행의 모니터링 및 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 요법의 모니터링 중 적어도 하나에 있어서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.
생체내 cMet 과다발현 또는 국재화 부위의 영상을 수득하는 것 및 그와 연관된 상태를 치료하는 것 중 적어도 하나에 있어서의 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 화합물 및 제26항 또는 제27항의 제약 조성물 중 적어도 하나의 용도.