KR20220030992A

KR20220030992A - 변형된 bcl9 모방체 펩티드

Info

Publication number: KR20220030992A
Application number: KR1020227000222A
Authority: KR
Inventors: 배리 제이 카펠; 진 메룻카; 지미 앤드류 로톨로; 에린 이. 갤러거
Original assignee: 사피엔스 테라퓨틱스, 인코포레이티드
Priority date: 2019-07-05
Filing date: 2020-07-06
Publication date: 2022-03-11
Also published as: US20220275036A1; BR112022000004A2; AU2020311873A1; AU2020311873B2; CN114144424A; CA3144458A1; IL289460A; JP2022538686A; WO2021007158A1; EP3994160A4; MX2022000283A; EP3994160A1

Abstract

요약서
변형된 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역, 그리고 임의선택적으로, 세포-침투성 영역을 갖는 BCL9 모방체 펩티드, 이들 BCL9 모방체 펩티드를 포함하는 조성물, 그리고 이들 BCL9 모방체 펩티드를 이용한 신생물 세포의 증식 억제 및/또는 세포독성 촉진시키는 방법들이 제공된다.

Description

변형된 BCL9 모방체 펩티드

관련 출원들에 대한 교차-참조

본 출원은 2019년 7월 5일자로 제출된 미국 가특허출원 번호 62/870,938을 청구한다.

서열 목록

본 출원은 ASCII 포멧으로 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함하며, 이의 전문은 본 명세서의 참고자료에 편입된다. 전술한 ASCII 사본은 2020년 7월 6일자로 생성되었으며, 화일명은 Sapience_004_WO1_SL.txt이며, 크기는 49,081바이트이다.

배경

B-세포 CLL/림프종 9 (BCL9)은 β-카테닌-매개된 전사를 위한 공동-활성제로 역할을 하는 단백질이다. BCL9는 많은 종양에서 과다-발현되고, 암세포에서 β-카테닌 신호전달을 강화하지만, 그러나 이들 종양이 시작되는 정상 세포에서는 그렇지 않다(Zhan et al. 2017). BCL9는 이의 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2)를 통하여 β-카테닌과 상호작용한다. 이전 연구에서 탄화수소-스테이플된 BCL9 펩티드를 사용한 BCL9/β-카테닌 상호작용의 파괴가 종양 세포의 증식, 이동, 침입 및 전이 가능성을 조절하는 Wnt 표적 유전자의 전사를 억제한다는 것을 보여주었다 (Takada et al., 2012; WO 2017/062518).

발명의 요약

본 발명의 주요 측면 중 일부는 아래에 요약되어 있다. 추가 측면들은 본 발명의 상세한 설명, 실시예, 도면 및 청구 범위에 기재되어 있다. 본 명세서의 각 섹션에서의 설명은 다른 섹션들과 함께 읽도록 의도된다. 더욱이, 본 개시의 각 섹션에서 설명된 다양한 실시예는 다양한 다른 방식으로 결합될 수 있으며, 이러한 모든 조합은 본 발명의 범위 내에 포함된다.

본 발명은 변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드를 제공한다. 한 구체예에서, 본 발명은 변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드를 제공하며, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 아미노산 서열 LSQEQLEHRERSLQTLRDIQRMLF (서열 식별 번호: 1)의 변이체를 포함하며, 이때 상기 변이체는 서열 식별 번호: 1의 하나 또는 그 이상의 위치에서 다음과 같이 변형된다: (i) E7은 R로 치환되며; (ii) R11은 E로 치환되며; (iii) S12는 A로 치환되며; (iv) Q14는 A 또는 E로 치환되며; (v) T15는 A로 치환되며; (vi) D18은 A 또는 R로 치환되며; (vii) I19는 L로 치환되며; (viii) R21은 E로 치환되며; (ix) M22는 A 또는 L로 치환되며; (x) W, 1-Nal, 또는 2-Nal은 위치 25에 추가된다. 상기 BCL9 모방체 펩티드는 추가적으로 변형을 포함할 수 있고, 이때 F24는 W, 1-Nal, 또는 2-Nal로 치환되거나 및/또는 이때 서열 식별 번호: 1의 1 내지 15개의 연속 아미노산이 L1에서 시작하여 절두된다. 한 구체예에서, 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다: LSQEQLEHRERSLATLRAIQRMLF (서열 식별 번호: 3); LSQEQLRHREESLETLRRIQEMLF (서열 식별 번호: 4); LSQEQLEHRERALQALRAIQRALF (서열 식별 번호: 5); 그리고 ALQALRAIQRALF (서열 식별 번호: 6). 본원에서 기술된 아미노산 서열과 비교하여 역전된 아미노산 서열에 D-아미노산을 포함하는 레트로-역전된(retro-inverso) BCL9 모방체 펩티드가 또한 내포된다.

본 발명의 하나의 구체예는 변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드이며, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 D-아미노산 서열 FLMRQIDRLTQLS (서열 식별 번호: 7)의 변이체를 포함하는 D-아미노산 서열이며, 이때 상기 변이체는 서열 식별 번호: 7의 하나 또는 그 이상의 위치에서 다음과 같이 변형된다: (i) F1은 L 또는 W로 치환되며; (ii) M3은 A, E, L, 또는 V로 치환되며; (iii) R4는 O (오르니틴)으로 치환되며; (iv) I6은 L로 치환되며; (v) D7은 A 또는 E로 치환되며; (vi) R8은 A로 치환되며; (vii) T10은 A, K, Q, 또는 R로 치환되며; (viii) Q11은 A, K, 또는 R로 치환되며; (ix) S13은 A로 치환된다. 특정 구체예에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 이 팹티드의 N-말단에서 D-형태 또는 L-형태의 W, F, R, 1-Nal, 또는 2-Nal을 더 포함한다.

특정 구체예들에서, 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 서열을 포함한다: FLMRQIDRLTQLA (서열 식별 번호: 8); FLMRQLDRLTQLA (서열 식별 번호: 9); FLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 10); WLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 11); WWLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 12); FLMEQLRRLTELA (서열 식별 번호: 13); FLAEQLRRLAELA (서열 식별 번호: 14); WLAEQLRRLAELA (서열 식별 번호: 15); WWLARQLERLAQLA (서열 식별 번호: 16); 1-Nal-WLARQLARLRQLA (서열 식별 번호: 17); FLLRQIDRLTQLA (서열 식별 번호: 18); FLLRQLDRLTQLA (서열 식별 번호: 19); FLLRQLERLTQLA (서열 식별 번호: 20); WWLLRQLARLAQLA (서열 식별 번호: 102); 2-Nal-WLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 115); FWLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 116); WWLARQLARLRQLA (서열 식별 번호: 117); WFLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 118); WLLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 119); WWLERQLARLAQLA (서열 식별 번호: 120); WWLARQLARLQQLA (서열 식별 번호: 122); WWLARQLERLARLA (서열 식별 번호: 123); WWLARQLERLRRLA (서열 식별 번호: 124); WWLARQLARLKQLA (서열 식별 번호: 125); WWLARQLERLAKLA (서열 식별 번호: 126); WWLVRQLARLAQLA (서열 식별 번호: 127); 그리고 WWLAOQLAOLAQLA (서열 식별 번호: 140).

특정 구체예들에서, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 혼합된 키랄성의 변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함한다. 특정 구체예에서, 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다: (i) F_DR_L[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 103); (ii) F_DR_L[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 104); (iii) F_DW_L[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 105); (iv) F_DW_L[WLARQLARLAALA]_D (서열 식별 번호: 106); (v) F_DW_L[WLARQLAALAQLA]_D (서열 식별 번호: 107); (vi) W_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 108); (vii) W_L-[WLARQLARLRQLA]_D (서열 식별 번호: 109); (viii) W_L-[WLARQLERLRRLA]_D (서열 식별 번호: 110); (ix) W_L-[WLARQLERLARLA]_D (서열 식별 번호: 111); (x) F_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 112); (xi) R_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 113); (xii) F_D-W_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 114); 그리고 W_L-[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 141); 이때 아래첨자 D 및 L은 아미노산의 키랄성을 나타낸다.

일부 구체예들에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 세포-침투성 영역을 포함하며, 이때 상기 BCL9 모방체 펩티드는 세포-침투성 펩티드이다. 특정 구체예들에서, 상기 세포-침투성 영역은 YGRKKRRQRRR (서열 식별 번호: 61) 및 VPTLK (서열 식별 번호: 32)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖거나, 또는 상기 세포-침투성 영역은 RRRQRRKKRGY (서열 식별 번호: 73), KLTPV (서열 식별 번호: 74), PSDGRG (서열 식별 번호: 75), 및 OLTPV (서열 식별 번호: 143)으로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 서열을 갖는다.

일부 구체예들에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 아세틸, 나프틸, 옥타노일, 페닐 및 이소발레릴로 구성된 군에서 선택된 N-말단기를 포함하거나, 및/또는 상기 BCL9 모방체 펩티드는 C-말단 아미드기를 포함한다.

한 측면에서, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 신생물 세포의 증식 억제 및/또는 세포독성 촉진에 사용하기 위한 것이다.

본 발명의 추가 측면들은 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 포함하는 조성물, 예를 들면, 약제학적 조성물; 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 포함하는 키트; 그리고 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자를 제공한다.

본 발명은 신생물 세포의 증식 억제 및/또는 세포독성 촉진하는 방법을 추가적으로 제공하며, 이들 방법은 이 신생물 세포에 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 접촉시키는 것을 포함한다.

도면의 간단한 설명
도 1은 변형된 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드가 β-카테닌을 길항하고, 배양된 MCF7 유방암 세포에서 항-증식성 활성을 발휘함을 보여준다.
도 2A-2B에서 본 발명의 레트로 역전된 BCL9 모방체 펩티드가 배양된 MCF7 유방암 세포에서 항-증식성 활성을 발휘함을 보여준다. 펩티드 BCL-26 (도 2A) 및 펩티드 BCL-27 (도 2B)에 대한 세포독성 데이터를 나타낸다.
도 3A-3C에서 본 발명의 레트로 역전된 BCL9 모방체 펩티드가 MCF7 유방암 마우스 모델에서 항-종양 활성을 나타내는 것을 보여준다. 데이터 점은 평균±SEM를 나타낸다. BCL-26 (12.5 mg/kg)를 종양 접종-후 2일차 시점에서 누드 마우스에게 투여하였다 (도 3A; p<0.0001). BCL-87 (5 mg/kg)은 접종 접종-후 21일차 시점에 투여하였다 (도 3B; p<0.005). 두 가지 농도 (1 mg/kg 및 5 mg/kg)의 BCL-87 및 BCL-27을 접종 접종-후 14일차 시점에 투여하였다 (도 3C; 테스트 펩티드 모두에 대한 대조군에 대해 p≤0.0004).

발명의 상세한 설명

달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 실시는 약학, 제형 과학, 단백질 화학, 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학의 통상적인 기술을 이용할 것이며, 이들 모두 당업계의 기술 범위 안에 있다.

본 발명이 보다 쉽게 이해될 수 있도록, 특정 용어가 먼저 정의된다. 본 명세서 전반에 걸쳐 추가적인 정의가 제시된다. 명시적으로 다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 이용된 모든 기술적 그리고 과학적 용어는 본 발명이 속하는 당업계 숙련자들에 의해 공통적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다.

본 명세서에 제공된 임의의 제목은 본 발명의 다양한 측면 또는 구체예들을 제한하는 것이 아니며, 본 명세서를 전체적으로 참조할 수 있다. 따라서, 바로 아래에 정의된 용어들은 이들 모두 명세서를 참조하여 보다 완전하게 정의된다.

본원에 인용된 모든 문헌은 그 전체가 본원에 참고로 편입되어 있다. 또한, 여기에 인용되거나 또는 언급된 제품에 대한 제조업체의 지침 또는 카탈로그는 참조에 편입된다. 본 명세서에 참조에 편입된 문서 또는 그 안의 모든 교시가 본 발명의 실시에 사용될 수 있다. 이 본문에 참조로 포함된 문서는 선행 기술로 인정되지 않는다.

I. 정의

본 명세서의 문구 또는 용어는 설명의 목적을 위한 것이지 제한하기 위한 것이 아니며, 본 명세서의 용어 또는 문구는 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 한다.

본 명세서와 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수("a", "an" 및 "the")형은 다른 명시적인 언급이 없는 한 복수 개념을 포함한다는 것으로 주지되어야 한다. 용어 단수 부정관사("a", "an"), "하나 또는 그 이상의" 및 "적어도 하나"는 상호 교환적으로 사용된다.

더욱이, "및/또는"은 명시된 특징 또는 구성 요소의 각각의 구체적인 설명으로서 취해질 것이다. 따라서, 구절에서 사용된 용어 "및/또는", 이를 테면 "A 및/또는 B"는 "A와 B", "A 또는 B", "A" (단독), 및 "B" (단독)이 내포되는 것으로 의도된다. 유사하게, 구절, 이를 테면 "A, B, 및/또는 C"에 사용된 용어 "및/또는"은 A, B, 그리고 C; A, B, 또는 C; A 또는 B; A 또는 C; B 또는 C; A와 B; A와 C; B와 C; A (단독); B (단독); 그리고 C (단독)가 내포된 것으로 의도된다.

"포함하는(comprising)"이라는 언어는 구체예들이 기술되는 경우, 그렇지 않으면 "구성되는(consisting of)" 및/또는 "본질적으로 구성되는(consisting essentially of)"으로 설명된 유사한 구체예들이 내포된다.

단위, 접두사 및 기호는

International de Unites (SI) 승인 양식에 표시되어 있다. 숫자 범위는 범위를 정의하는 숫자를 포함하며, 본원에 제공된 임의의 개별 값은 본원에 제공된 다른 개별 값을 포함하는 범위에 대한 종점으로서 작용할 수 있다. 예를 들어, 1, 2, 3, 8, 9 및 10과 같은 일련의 값은 1-10, 1-8, 3-9, 등등의 숫자 범위를 나타낸다. 마찬가지로, 개시된 범위는 그 범위에 포함된 각각의 개별 값의 개시이다. 예를 들어, 명시된 5-10 범위는 또한 5, 6, 7, 8, 9 및 10의 개시이다.

용어 "폴리펩티드", "펩티드", 및 "단백질"은 본원에서 호환되며, 임의의 길이의 아미노산 중합체를 지칭한다. 상기 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 변형된 아미노산을 포함할 수 있고, 비-아미노산에 의해 중단될 수 있다. 예를 들어, 본원에 제시된 비통상적 또는 비천연 아미노산에 대한 약어의 경우와 같이 달리 지시된 경우를 제외하고, 당업계에 사용된 3-문자 및 1-문자 약어가 본원에서 아미노산 잔기를 나타내는데 사용된다. "D" 또는 소문자가 붙은 경우를 제외하고, 아미노산은 L-아미노산이다. 아미노산 약어의 그룹 또는 스트링이 펩티드를 나타내는데 사용된다. 구체적으로 지시된 경우를 제외하고, 펩티드는 좌측이 N- 말단으로 표시되고, 서열은 N-말단으로부터 C-말단 방향으로 기재된다.

폴리펩티드, 펩티드, 및 단백질은 또한 자연적으로 또는 합성에 의해 변형된 것을 포괄하는데, 예를 들면, 디설파이드 결합, 락탐 다리, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 아실화, 아미드화, 인산화, 또는 라벨링 성분과의 컨쥬게이션, 또는 보호기의 추가와 같은 다른 조작 또는 변형을 포괄할 수 있다. 예를 들어, 아미노산의 하나 또는 그 이상의 유사체 (예를 들어, 아미노-이소부틸산(Aib), 비천연 아미노산, 이를 테면, 나프틸알라닌 (Nal) 등을 비롯하여), 그리고 D-아미노산을 포함하는 또는 이로 구성된 폴리펩티드, 뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 함유하는 폴리펩티드가 또한 내포된다. 폴리펩티드는 하나의 또는 다중 염 형태일 수 있다. 바람직한 염 형태에는 아세테이트, 클로라이드 또는 트리플루오르아세테이트가 내포된다. 특정 구체예들에서, 상기 폴리펩티드는 단일 쇄, 공유결합 이량체, 또는 비-공유 연합된 쇄로 발생될 수 있다. 폴리펩티드는 또한 환(cyclic) 형태일 수도 있다. 환형태의 폴리펩티드는 예를 들면, 자유 아미노 및 자유 카르복실기의 다리 연결에 의해 만들어질 수 있다. 환형태 화합물의 형성은 탈수제로 처리하고, 필요한 경우 적절한 보호기를 제공함으로써, 달성할 수 있다. 개방 사슬 (선형 형태)의 환형태 반응은 분자 내 고리화를 수반할 수 있다. 환형태 폴리펩티드는 당분야에 공지된 기타 방법들, 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 락탐 다리, 수소 결합 대행(surrogates) (Patgiri et al. 2008), 탄화수소 스테이플 (Schafmeister et al. 2000), 트리아졸 스테이플 (Le Chevalier Isaad et al. 2009), 또는 이황화 다리 (Wang et al. 2006)에 의해 또한 만들어질 수 있다. 다리 또는 스테이플(staples)은 예를 들어, 3, 4, 7, 또는 8개의 아미노산 길이로 공간적으로 떨어져 있을 수 있다.

"변이체"란 기준 서열과 비교하였을 때, 하나 또는 그 이상의 아미노산 치환, 결손, 및/또는 삽입을 갖는 폴리펩티드를 지칭한다. 결손 및 삽입은 내부에 있거나 및/또는 하나 또는 그 이상의 말단에 있을 수 있다. 치환에는 하나 또는 그 이상의 아미노산이 유사한 또는 상동성 아미노산(들) 또는 비유사 아미노산(들)로 대체되는 것을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일부 변이체들은 하나 또는 그 이상의 아미노산 위치에서 알라닌 치환을 포함한다. 기타 치환에는 당해 단백질의 전체적인 네트 하전, 극성 또는 소수성에 영향이 없거나 또는 거의 없는 보존적 치환이 포함된다. 일부 변이체들에는 당해 아미노산의 하전 또는 극성을 변화시키는 비-보존적 치환이 포함된다. 치환은 아미노산의 L-형태 또는 D-형태로 이루어질 수 있다.

"레트로 역전된(retro inverso)" 폴리펩티드는 고유 L-아미노산 서열과 비교하였을 때, 역전된 아미노산 서열을 갖고, 그리고 원래 L-아미노산 펩티드의 것과 유사한 측쇄 위상배치(topology)를 유지하는데 도움이 되는 D-아미노산(당해 아미노산 소단위의 α-중심 키랄성을 역전시킴)으로 구성된다.

본원에서 이용된 용어 "보존적 치환"이란 하나 또는 그 이상의 아미노산이 또다른 생물학적으로 유사한 잔기로 대체되는 것을 나타낸다. 예로는 아미노산 잔기를 유사한 특징, 가령, 작은 아미노산, 산성 아미노산, 극성 아미노산, 염기성 아미노산, 소수성 아미노산, 그리고 방향족 아미노산으로의 치환을 포함한다. 펩티드 및 단백질에서 표현형적으로 침묵 치환과 관련된 추가 정보는 예를 들어, Bowie et. al., Science 247:1306-1310 (1990)를 참고한다. 하기 표에서, 아미노산의 보존적 치환은 물리화학적 성질에 의해 집단화된다; I: 중성 및/또는 친수성, II: 산성 및 아미드, III: 염기성, IV: 소수성, V: 방향족, 거대(bulky) 아미노산.

표 I

하기 표에서, 아미노산의 보존적 치환은 물리화학적 성질에 의해 집단화된다; VI: 중성 또는 소수성, VII: 산성, VIII: 염기성, IX: 극성, X: 방향족.

표 II

단백질 기능에 영향을 미치지 않는 보존적 뉴클레오티드 및 아미노산 치환을 확인하는 방법은 당업계에 잘 알려져 있다(가령, Brummell et al., Biochem. 32 :1180-1187 (1993); Kobayashi et al., Protein Eng. 12(10):879-884 (1999); 그리고 Burks et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:412-417 (1997)).

2개 또는 그 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 내용에서 용어 "동일한" 또는 "동일성" 백분율이란 서열 동일성의 일부로서 보존적 아미노산 치환을 고려하지 않고, 최대 대응성을 위해 비교되고 정렬될 때 (필요한 경우, 갭을 도입), 동일하거나 특정 비율의 동일한 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기를 갖는 둘 또는 그 이상의 서열 또는 준서열을 지칭한다. 동일성 백분율은 서열 비교 소프트웨어 또는 알고리즘을 사용하거나 또는 육안으로 측정할 수 있다. 아미노산 또는 뉴클레오티드 서열의 정렬을 얻는데 사용될 수 있는 다양한 알고리즘 및 소프트웨어가 당업계에 공지되어 있다.

서열 정렬 알고리즘의 이러한 비-제한적인 한 가지 예는 Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 87:2264-2268 (1990)에 기술된 알고리즘, Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 90:5873-5877 (1993)에서 변형되고, 그리고 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 통합된 (Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1991)) 알고리즘이다. 특정 구체예들에서, Gapped BLAST는 Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997). BLAST-2, WU-BLAST-2 (Altschul et al., Methods in Enzymology, 266:460-480 (1996)), ALIGN, ALIGN-2 (Genentech, South San Francisco, California)에서 기술된 바와 같이 이용되거나, 또는 Megalign (DNASTAR)는 서열을 정렬시키는데 이용될 수 있는 추가적으로 공개적으로 이용가능한 소프트웨어다. 특정 구체예들에서, GCG 소프트웨어 패키지에서 GAP 프로그램을 이용하여 두 뉴클레오티드 간의 동일성 백분율이 결정된다(가령, NWSgapdna.CMP 매트릭스 및 40, 50, 60, 70, 또는 90의 갭 가중치, 그리고 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6의 길이 가중치 이용). 특정 대체 구체예들에서, Needleman 및 Wunsch의 알고리즘이 편입된 (J. Mol. Biol. (48):444-453 (1970)) GCG 소프트웨어 패키지의 GAP 프로그램을 이용하여 두 아미노산 서열 간에 동일성 백분율을 결정할 수 있다 (가령, BLOSUM 62 매트릭스 또는 PAM250 매트릭스, 그리고 16, 14, 12, 10, 8, 6, 또는 4의 갭 가중치와 1, 2, 3, 4, 5의 길이 가중치 사용). 대안으로, 특정 구체예들에서, 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은 Myers 및 Miller (CABIOS, 4:11-17 (1989))의 알고리즘을 이용하여 결정된다. 예를 들면, ALIGN 프로그램 (버젼 2.0)을 이용하고, 그리고 잔기 표, 갭 길이 패널티 12 그리고 갭 패널티 4와 함께, PAM120을 이용하여 동일성 백분율이 결정될 수 있다. 특정 정렬 소프트웨어에 의한 최대 정렬을 위한 적절한 매개변수는 당업자에 의해 결정될 수 있다. 특정 구체예들에서, 정렬 소프트웨어의 디폴트 매개변수들이 이용된다. 동일성을 산출하는 다른 자료는 Computational Molecular Biology (Lesk ed., 1988); Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith ed., 1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part 1 (Griffin and Griffin eds., 1994); Sequence Analysis in Molecular Biology (G. von Heinje, 1987); Sequence Analysis Primer (Gribskov et al., eds., 1991); 그리고 Carillo et al., SIAM J. Applied Math., 48:1073 (1988)에 기술된 방법들이 포함된다.

본원에 사용된 "폴리뉴클레오티드"란 하나 또는 이상의 "핵산", "핵산 분자" 또는 "핵산 서열"을 포함할 수 있으며, 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 말하는 것으로써, DNA 및 RNA가 포함된다. 이 폴리뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합효소 안으로 혼입될 수 있는 임의의 물질일 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 그의 유사체와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 상기 설명은 RNA 및 DNA를 포함하여 본원에 언급 된 모든 폴리 뉴클레오티드에 적용된다.

"단리된(isolated)" 분자란 정제된 것들을 포함하여 자연에서 발견되지 않은 형태의 분자이다.

"라벨(label)"이란 "라벨된" 분자를 생성하기 위해 분자에 직접 또는 간접적으로 접합될 수 있는 검출 가능한 화합물이다. 상기 라벨은 자체적으로 탐지가능하거나 (가령, 방사능동위원소 라벨 또는 형광 라벨), 또는 예를 들어, 탐지가능한(가령, 효소 라벨) 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매함으로써 간접적으로 탐지되거나, 또는 다른 간접 탐지(가령, 바이오티닐화)에 의해 탐지될 수 있다.

"결합 친화력"이란 일반적으로 분자의 단일 결합 부위와 이의 결합 파트너 (예를 들어, 수용체와 이의 리간드, 항체와 이의 항원, 이량체를 형성하는 2 개의 단량체 등등) 사이의 비-공유 상호 작용의 총합의 강도를 의미한다. 다른 언급이 없는 한, 본 명세서에서 이용된 바와 같이, "결합 친화력"이란 결합 쌍의 구성요소들간에 1:1 상호작용을 반영한 고유한 결합 친화력을 지칭한다. 분자 X가 이의 짝 Y에 대한 친화력은 해리 상수 (K_D)로 나타낼 수 있다. 친화력은 본 명세서에서 설명된 것이 포함된 당분야에 공지된 공통적 방법들에 의해 측정될 수 있다. 낮은-친화력 파트너는 일반적으로 항원을 천천히 결합 시키며 쉽게 해리되는 경향이 있는 반면, 높은-친화력 파트너는 일반적으로 더 빨리 결합하고, 더 오랫동안 결합을 유지하는 경향이 있다.

이의 결합 파트너에 대한 분자의 친화력 또는 결합력(avidity)은 당업계에 공지된 임의의 적합한 방법, 예를 들어, 유동 세포 분석법, 효소-연계된 면역흡착 분석법 (ELISA), 또는 방사성 면역 분석법 (RIA), 또는 동역학(가령, KINEXA® 또는 BIACORE™ 또는 OCTET® 분석)을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 직접 결합 분석 뿐만 아니라 경쟁적 결합 분석 포멧이 바로 이용될 수 있다. (가령, Berzofsky et al., "Antibody-Antigen Interactions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., ed., Raven Press: New York, N.Y. (1984); Kuby, Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, N.Y. (1992) 참고). 특정 결합 쌍 상호작용의 측정된 친화력은 상이한 조건 (가령, 염 농도, pH, 온도) 하에서 측정될 때 가변적일 수 있다. 따라서, 친화력 및 기타 항원-결합 매개변수 (가령, K_D 또는 Kd, K_on, K_off)의 측정은 결합 파트너의 표준화된 용액 그리고 당분야에 공지된 표준화된 완충액으로 이루어진다.

"활성제"는 생물학적 활성을 제공하려는 의도의 성분이다. 상기 활성제는 하나 이상의 다른 성분과 연합될 수 있다. 펩티드인 활성제는 "활성 펩티드"로 또한 지칭될 수 있다.

활성제의 "유효량"은 구체적으로 언급된 목적을 수행하기에 충분한 양이다.

용어 "약학적 조성물"은 활성 성분의 생물학적 활성이 효과가 있도록 하기 위한 형태의 조제물을 지칭하며, 조성물이 투여되는 대상에게 수용불가능한 독성을 주는 추가 성분들은 포함하지 않는다. 이러한 조성물은 멸균될 수 있고, 생리 식염수와 같은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다. 적합한 약제학적 조성물은 하나 또는 그 이상의 완충제 (가령, 아세테이트, 포스페이트 또는 시트레이트 완충제), 계면 활성제 (가령, 폴리 소르베이트), 안정화제 (가령, 폴리올 또는 아미노산), 보존제 (가령, 벤조산 나트륨) 및/또는 다른 통상적인 가용화제 또는 분산제를 포함할 수 있다.

용어 "저해하다", "차단하다" 및 "억제하다"는 상호 호환적으로 사용되며, 발생 또는 활동의 완전한 차단을 비롯한, 발생 또는 활동의 통계적으로 유의미한 감소를 지칭한다. 예를 들어, "저해(inhibition)"란 활성 또는 발생의 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100% 감소를 지칭할 수 있다. "저해제(inhibitor)"는 공정, 경로 또는 분자의 발생 또는 활성을 통계적으로 유의하게 감소시키는 분자, 인자 또는 물질이다.

"신생종양 세포" 또는 "신생물(neoplasm)"은 전형적으로 동일한 형태의 정상 세포 또는 조직과 비교하여, 비정상적 성장을 초래하는 일부 형태의 돌연변이/변형을 겪었다. 신생물은 형태학적 불규칙성 뿐만 아니라, 병리학적 증식을 포함한다. 신생종양 세포는 양성이거나 또는 악성일 수 있다. 악성 신생물, 즉 암은 세포의 분화 및 배향 상실을 나타내며 침습 및 전이의 특성을 갖는다는 점에서 양성과 구별된다.

II. BCL9 모방체 펩티드 및 조성물

BCL9 모방체 펩티드

BCL9는 Wnt 경로를 통한 신호전달에 관여하는 149kDa의 진핵생물 단백질이다. BCL9는 β-카테닌에 결합하여, 이의 전사 활성을 촉진한다. BCL9의 β-카테닌 결합 영역 또는 "HD2 도메인"은 BCL9 (서열 식별 번호: 1)의 아미노산 351-374에서 24개-잔기의 α-나선이다. 야생형 인간 BCL9의 전체 아미노산 서열은 NCBI 수탁번호. NP_004317.2에서 제시된다.

펩티드 ST-BC1 (서열 식별 번호:2)는 고유의 BCL9 HD2 도메인에서 잔기 14와 18 사이에 락탐 다리를 갖는 환형 변이체다. 이전 연구에서는 잔기 14와 18 사이에 탄화수소 다리가 있는 ST-BC1 유사체가 인간 결장암 세포에서 Wnt 전사 활성을 억제하고, 마우스 모델에서 항-종양 활성을 나타내는 것으로 나타났다 (Takada et al. 2012). 본 발명자들은 ST-BC1의 비-보존적, 그리고 선형 변이체가 신생물 세포에서 세포 사멸을 유도하고, 동물 모델에서 종양 부피를 감소시킨다는 것을 발견하였다. 본 발명의 BCL9-유래된 펩티드가 야생형 BCL9 HD2 영역에 대한 다수의 비-보존적 아미노산 치환을 가지고, 신생물 세포를 특이적으로 표적화하고, 이를 사멸시키는 능력을 유지한다는 발견은 본 발명 이전에는 예상하지 못하였다. 또한, 레트로 역전된 변이체는 활성일 뿐만 아니라, ST-BC1 및 선형 "L" 변이체들과 비교하여 필적할 수준의 활성을 가졌으며, 이는 또한 예측할 수 없었던 것이다.

본 발명은 변형된 BCL9 HD2 영역을 갖고, 그리고 임의선택적으로, 세포-침투성 영역을 갖는 BCL9 모방체 펩티드를 제공한다. 본 발명의 BCL9 펩티드는 "모방체(mimetics)"이며, 이것은 이들이 도입된 세포에서 야생형 BCL9 활성을 방해하거나, 또는 억제할 수 있음을 의미한다. 좀더 구체적으로, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 β-카테닌에 결합할 수 있고, 고유의 BCL9가 β-카테닌에 결합과 경쟁한다. 일부 구체예들에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 Wnt 신호전달 경로의 하나 또는 그 이상의 구성원, 예를 들면, 악신(axin), CD44, c-Myc, 사이클린(cyclin) D1, LEF1, LGR5, 설바이빈, 및 VEGF-A의 발현을 하향조절할 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 세포 증식, 혈관신생, 및/또는 세포 이동을 억제시킬 수 있다. BCL9 활성은 본원에서 기술된 세포-사멸 검정을 비롯하여 당분야에 공지된 임의의 검정(Kawamoto et al. 2009; WO 2017/062518)에 의해 평가될 수 있다.

"변형된 BCL9 HD2 영역"은 야생형 BCL9 HD2 영역으로부터 파생된 서열이며, 이 서열은 야생형 BCL9 HD2 서열과 비교하여 적어도 하나의 추가, 결손, 또는 치환을 갖는다. 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 바람직하게는 서열 식별 번호: 1의 적어도 16-23의 위치에 대응하고, 서열 식별 번호: 1에 비교하여 적어도 하나의 추가, 결손, 또는 치환을 포함한다. 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 예를 들면, 표 1에 나타낸 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 상기 고유의 BCL9 HD2 서열 (서열 식별 번호: 1)은 참고용으로 나타난대.서열 식별 번호:1에서 치환은 밑줄과 함께 굵게 표시된다.

표 1

상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 레트로 역전된 형태일 수 있고, 그리고 예를 들면, D-아미노산 서열 X₁LX₂X₃QLX₄X₅LX₆X₇LA (서열 식별 번호: 142)을 보유할 수 있으며, 이때 위치 1-13에서 각 아미노산은 표 2에 나타낸 것들로부터 독립적으로 선택된다.

표 2

표 2에 나타낸 D-아미노산 HD2 도메인 서열에서, 위치 4 또는 8중 오직 하나만이 알라닌일 수 있고, 즉, 위치 4가 A라면, 위치 8은 A가 아니며, 그리고 이 역도 성립된다. 상기 BCL9 HD2 영역은 위치 -1에서 F, 1-Nal, 2-Nal, R, 및 W로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 또는 L-아미노산을 임의선택적으로 포함할 수 있다. 상기 BCL9 HD2 영역은 위치 -2에서 F, 1-Nal, 2-Nal, 및 W로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 또는 L-아미노산을 임의선택적으로 더 포함할 수 있다. 한 구체예에서, 위치 -1이 R이라면, 위치 1은 F 또는 W이고, 및/또는 위치 -2는 F, 1-Nal, 2-Nal, 또는 W이다.

레트로 역전된 BCL9 HD2 영역들의 특정 예시들은 표 3에 나타낸다. 야생형 BCL9 HD2 영역 (서열 식별 번호: 7)의 일부의 레트로 역전된 서열은 참고용으로 나타낸다. 서열 식별 번호: 7에서 치환은 밑줄과 함께 굵게 표시된다.

표 3

*1N = 1-나프틸알라닌; 2N = 2-나프틸알라닌; O = 오르니틴

상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 서열 식별 번호: 1의 전체 레트로 역전된 서열에 대응하는 추가적인 D-아미노산을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 D-아미노산 서열 WW L A RQ LA RL A QL A RERHELQEQSL (서열 식별 번호: 121)을 포함할 수 있고, 이때 상기 레트로 역전된 야생형 BCL9 HD2 서열에 대한 치환 및 추가는 굵은 밑줄로 나타낸다.

상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 혼합된 키랄성 아미노산을 포함할 수 있고, 따라서 해당 펩티드에서 하나 또는 그 이상의 아미노산은 L-형태이며, 하나 또는 그 이상의 아미노산은 D-형태이다. 예를 들면, L-펩티드는 하나 또는 그 이상의 D-아미노산을 포함할 수 있다. 유사하게, 레트로 역전된 D-펩티드는 하나 또는 그 이상의 L-아미노산을 포함할 수 있다. 특정 구체예들에서, 상기 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 서열을 갖는다: (i) F _D R _L[ W L A RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 103); (ii) F _D R _L[ W L V RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 104); (iii) F _D W _L[ W L V RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 105); (iv) F _D W _L[ W L A RQ LA RL AA L A ]_D (서열 식별 번호: 106); (v) F _D W _L[ W L A RQ LAA L A QL A ]_D (서열 식별 번호: 107); (vi) W _L-[ W L A RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 108); (vii) W _L-[ W L A RQ LA RL R QL A ]_D (서열 식별 번호: 109); (viii) W _L-[ W L A RQ LE RL RR L A ]_D (서열 식별 번호: 110); (ix) W _L-[ W L A RQ LE RL AR L A ]_D (서열 식별 번호: 111); (x) F _L-[ W L A RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 112); (xi) R _L-[ W L A RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 113); (xii) F _D- W _L-[ W L A RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 114); 그리고(xiii) W _L-[ W L V RQ LA RL A QL A ]_D (서열 식별 번호: 141);이때 D 및 L 아래첨자는 해당 아미노산들의 키랄성을 나타내고, 이때 상기 레트로 역전된 야생형 BCL9 HD2 서열(서열 식별 번호: 7)에 대한 치환 및 추가는 굵은 밑줄로 나타낸다.

이들 서열의 변이체들 또한 본 발명의 범위 안에 있다. 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 본원에서 개시된 서열에 대하여 최소한 약 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%, 70%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성의 HD2 영역을 가질 수 있다.

상기 BCL9 모방체 펩티드가 또다른 활성 펩티드, 이를 테면, 세포-침투성 영역 또는 RGD-유사 서열을 포함하는 구체예들에서, 상기 활성 펩티드는 상기 변형된 BCL9 HD2 영역에 작동가능하도록 연계된다. 일부 구체예들에서, 상기 활성 펩티드는 예를 들면, 펩티드 결합, 이황화 결합, 티오에테르 결합 또는 당분야에 공지된 링커를 통하여 상기 변형된 BCL9 HD2 영역에 공유적으로 연계된다. 예시적인 링커에는 치환된 알킬, 치환된 사이클로알킬, 폴리에틸렌 글리콜, 및 이들의 유도체가 내포되지만, 이에 국한되지 않는다. 당해 펩티드를 세포 안으로 운반한 후, 링커는 절단될 수 있다. 활성 펩티드 및 아미드 결합에 의해 직접 연계된 변형된 BCL9 HD2 영역은 "융합(fusion)"이라고 부를 수 있다. 융합은 상기 활성 펩티드에서 논의된 바와 같이, 상기 활성 펩티드와 변형된 BCL9 HD2 영역 사이의 아미노산 링커 서열을 함유할 수 있다. 상기 활성 펩티드는 상기 변형된 BCL9 HD2 영역의 N-말단 또는 C-말단에 연계되거나, 또는 잔기 측쇄를 통하여 연계될 수 있다. 상기 활성 펩티드와 변형된 BCL9 HD2 영역은 동일한 또는 반대되는 키랄성(chirality)을 가질 수 있다.

본 발명의 세포-침투성 BCL9 모방체 펩티드는 본원에서 기술된 세포-침투성 및 변형된 BCL9 HD2 영역들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 이러한 펩티드의 예는 표 4에 나타내지만, 이에 국한되지는 않는다. 상기 세포-침투성 영역은 이태리체로 표시된다. 펩티드 BCL-21은 고유의 BCL9 HD2 서열을 포함하고, 이는 세포 증식 억제에 있어서 무력하다. 고유의 BCL9 HD2 서열에 대한 치환은 밑줄과 함께 굵게 표시된다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드의 레트로 역전된 형태가 또한 내포된다. 세포-침투성 레트로 역전된 BCL9 모방체 펩티드의 예시적인 구체예들은 표 5에 나타낸다.

표 5

상기 세포-침투성 및 RGD-유사 영역들은 이태리체로 나타낸다. 이때 상기 레트로 역전된 야생형 BCL9 HD2 서열(서열 식별 번호: 7)에 대한 치환 및 추가는 굵은 밑줄로 나타낸다. 본 발명에는 표 5에 나타낸 BCL9 HD2 영역들과 상이한 활성 펩티드, 이를 테면, 상이한 세포-침투성 영역을 포함하는 펩티드, 그리고 활성 펩티드 없이 표 5에 나타낸 BCL9-HD2 영역을 포함하는 펩티드들이 또한 내포된다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 혼합된 키랄성 아미노산을 포함할 수 있고, 따라서 해당 펩티드에서 하나 또는 그 이상의 아미노산은 L-형태이며, 하나 또는 그 이상의 아미노산은 D-형태이다. 혼합된 키랄성을 갖는 BCL9 모방체 펩티드의 비-제한적 예들은 표 6에 나타낸다.

표 6

아래첨자의 D와 L은 해당 아미노산들의 키랄성을 나타낸다. 상기 세포-침투성 영역은 이태리체로 표시된다. 이때 상기 레트로 역전된 야생형 BCL9 HD2 서열(서열 식별 번호: 7)에 대한 치환 및 추가는 굵은 밑줄로 나타낸다. 본 발명에는 표 6에 나타낸 BCL9 HD2 영역들과 상이한 활성 펩티드, 이를 테면, 상이한 세포-침투성 영역을 포함하는 펩티드, 그리고 활성 펩티드 없이 표 6에 나타낸 BCL9-HD2 영역을 포함하는 펩티드들이 또한 내포된다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 본원에서 개시된 서열에 대하여 최소한 약 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 펩티드를 포함한다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 종점으로 이들 길이중 임의의 범위, 예를 들면, 13-35개 아미노산의 범위를 비롯하여, 바람직하게는 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50개 아미노산 길이의 아미노산이다.

상기 BCL9 모방체 펩티드는 변형된 N-말단 및/또는 변형된 C-말단을 가질 수 있다. 예를 들면, BCL9 모방체 펩티드는 N-말단 아세틸기 및/또는 C-말단 아미드기를 임의선택적으로 포함할 수 있다. 선택적 N-말단 및/또는 C-말단 기의 다른 예시들에는 소수성기, 이를 테면, 선형 또는 환형 C₂-C₁₈ 지방족 또는 방향족 탄화수소, 나프틸기, 페닐기, 옥타노일기 그리고 이소발레릴기를 비롯한 발레릴기들이 내포된다. 일부 구체예들에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드는 해당 펩트드와 소수성기 사이에 링커 또는 스페이서를 포함한다. 이러한 링커 또는 스페이서들에는 예를 들어, 아미노헥산산, 베타-알라닌, 치환된 알킬, 치환된 시클로알킬, 및 폴리에틸렌 글리콜이 내포된다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 임의선택적으로 환형일 수 있다. 예를 들면, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드에는 하나 또는 그 이상의 락탐 다리가 내포될 수 있다. 락탐 다리는 바람직하게는 3개, 4개, 7개, 또는 8개의 아미노산 길이의 공간을 두고 (가령, BxxB, BxxxB, BxxxxxxB, BxxxxxxxB) 있는 측쇄 사이에서 만들어지지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 락탐 다리는 예를 들어, Asp 또는 Glu 그리고 Lys 또는 Orn의 측쇄 사이에서 형성될 수 있다. 아미노산 치환은 링키지(linkage)를 촉진시키기 위하여 락탐 다리 부위에서 만들어질 수 있다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 이를 테면, 정제 또는 탐지를 위하여 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 에피토프 및/또는 친화력 테그를 포함할 수 있다. 이러한 테그의 비-제한적 예시들에는 FLAG, HA, His, Myc, GST, 그리고 이와 유사한 것들이 내포된다. 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드에는 하나 또는 그 이상의 라벨이 임의선택적으로 내포될 수 있다.

특정 측면들에서, 본 발명은 조성물, 가령, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 포함하고, 임의선택적으로 하나 또는 그 이상의 운반체, 희석제, 부형제, 또는 다른 첨가제들을 더 포함하는 약제학적 조성물이다.

본원에서 제공된 상기 BCL9 모방체 펩티드 및 조성물을 포함하고, 임의선택적으로, 사용 지침이 포함된 키트 또한 본 발명의 범위 안에 있다. 상기 키트는 최소한 하나의 추가 시약, 및/또는 하나 또는 그 이상의 추가 활성제를 더 포함할 수 있다. 키트에는 전형적으로 당해 키트 내용물의 의도된 용도를 명시한 라벨이 내포된다. 이 문맥에서, 용어 "라벨"에는 당해 키트 상에 또는 당해 키트와 함께 공급되는, 또는 그렇지 않으면 키트에 수반된 임의의 기재된 또는 기록된 물질이 내포된다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 신생종양 세포에서 증식을 억제 및/또는 세포독성의 촉진에 이용될 수 있다. 증식 및 세포독성은 본원에서 기술된 세포 사멸 검증을 비롯한 공지의 검정에 의해 측정될 수 있다.

세포 표적화

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 당분야에 공지된 방법에 의해 표적 세포 안으로 도입될 수 있다. 상기 도입 방법은 예를 들면, 의도된 적용에 따라 달라질 수 있다.

일부 경우에서, 상기 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 DNA 또는 RNA가 표적 세포 안으로 운반되고, 이 안에서 발현될 수 있다. 운반은 적용에 따라 임의의 적절한 벡터를 통하여 이루어질 수 있다. 벡터의 예로는 플라스미드, 코스미드, 파아지, 박테리아, 효모 및 바이러스 벡터, 예를 들어 렌티바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연합 바이러스 및 외피-위형(pseudotyped) 바이러스를 포함하는 레트로바이러스로부터 제조된 벡터가 포함된다. 벡터는 예를 들어, 나노입자, 유체역학적 전달, 전기천공, 소노포레이션(sonoporation), 인산 칼슘 침전 또는 DEAE-덱스 트란과 같은 양이온 성 중합체를 사용하여 세포로 도입될 수 있다. 벡터는 리포좀에 캡슐화되거나 또는 양이온성 축합제와 관련된 지질과 복합체화될 수 있다.

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 세포 반응을 이용하는 기전을 통하여 세포 안으로 전달될 수 있다. 이러한 기전의 예시들에는 항체-약물 콘쥬게이트, 키메라 항원 수용체, 다중 항원 제시(MAP) 시스템, 그리고 인테그린-표적화, RGD-유사 서열이 내포된다. RGD-유사 서열의 예로는 GRGDS (서열 식별 번호: 28) 및 GRGDNP (서열 식별 번호: 29)이 내포된다. 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 본원에 기술된 또는 당분야에 공지된 임의의 방법에 의해 연계된, 하나 또는 그 이상의 RGD-유사 서열, 이를 테면, 2개, 3개, 4개, 또는 5개의 RGD-유사 서열을 포함할 수 있다. 상기 하나 또는 그 이상의 RGD-유사 서열(들)은 상기 BCL9 HD2 영역의 N-말단 또는 C-말단 측면에 통합될 수 있다. 이러한 RGD-유사 서열들은 서로 독립적으로, 그리고 상기 BCL9 HD2 영역과 독립적으로 레트로 역전된 형태가 될 수 있다. 레트로 역전된 RGD-유사 서열의 하나의 특정 예시가 PSDGRG (서열 식별 번호: 75)이다. 대안으로, BCL9 모방체 펩티드는 엑소좀, 또는 리포좀과 같은 소포 또는 미셀(micelles)에 포집되어, 세포로 전달될 수 있다. BCL9 모방체 펩티드를 세포로 도입시키는 또다른 방법은 예를 들면 탄화수소 스테이플을 통한 고리화 (Bernal et al. 2007; Bird et al. 2016) 또는 당분야에 공지된 다른 고리화 방법에 의해 이루어진다.

본 발명의 특정 BCL9 모방체 펩티드는 세포-침투성 도메인 또는 세포-침투성 펩티드 (CPP)를 포함한다. 용어 "세포-침투성 도메인", "세포-침투성 영역", 그리고 "세포-침투성 펩티드"는 본원에서 호환사용된다.

CPPs는 세포 막을 가로지를 수 있는 짧은 (전형적으로 약 6-40개의 아미노산) 펩티드다. 많은 CPPs들이 혈관-뇌 장벽(BBB)을 가로지를 수 있다. 일부 구체예들에서, 상기 CPP는 종점으로써, 예를 들어, 10-30개 아미노산을 갖는 범위를 비롯한, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38개 또는 39개 길이의 아미노산이다. CPPs는 세포막 및 BBB를 가로 질러 폴리펩티드, 폴리뉴클레오티드 및 나노입자와 같은 공유적으로 또는 비-공유적으로 연결된 분자 카고(cargo)를 수송하는 능력을 갖는다. 전위(translocation)는 전위를 통해 엔도사이토시스이거나, 또는 에너지-독립존적 (즉, 비-엔도사이토시스성)일 수 있다. 다수의 CPPs가 문헌에 기술되며, 특징화되었다 (가령, Handbook of Cell-Penetrating Peptides (2d ed. Ulo Langel ed., 2007);

et al. 2008; Heitz et al. 2009; Munyendo et al. 2012; Zou et al. 2013; Krautwald et al. 2016 참고). CPP의 선별된 데이터베이스는 crdd.osdd.net/raghava/cppsite에서 유지된다 (Gautam et al. 2012).

핵 국소화 서열 (NLSs)로 지칭되는 펩티드는 CPPs의 부분집합이다. 고전적 NLS는 염기성 아미노산의 1 개 (단일분자) 또는 2 개 (이분자) 영역을 함유한다. 고전적인 단일분자 및 이분자 NLSs의 콘센수스(consensus) 서열은 차례로 K(K/R)X(K/R) (서열 식별 번호: 30) 및 (K/R)(K/R)X_10-12(K/R)_3/5 (서열 식별 번호: 31)이며, 여기에서 3/5는 5개 연속 아미노산중 최소한 3개는 리신 또는 아르기닌임을 나타낸다 (Kosugi et al. 2009). SV40 거대 T 항원의 NLS 서열, PKKKRKV (서열 식별 번호: 57)은 고전적인 단일분자 NLS의 예가 되며, 한편 핵플라스민의 NLS 서열, KRPAATKKAGQAKKK (서열 식별 번호: 44)은 고전적인 이분자 NLS의 예시가 된다 (Lange et al. 2007; Kosugi et al. 2009). 다수의 비-고전적인 NLSs이 또한 있는데, 이를 테면, 리보핵 단백질 (RNPs) hnRNP A1, hnRNP K, 그리고 U snRNP이 있다 (Mattaj et al. 1998).

본 발명에 사용에 적합한 CPPs의 비-제한적인 예로는 단백질, 이를 테면, 초파리(Drosophila) 안테나페디아 전사 인자 (페네트라틴 및 이의 유도체 RL-16 및 EB1) (Derossi et al. 1998;

et al, 2000; Lundberg et al. 2007; Alves et al. 2008); HIV-1 전사의 트란스-활성인자 (Tat) (

et al. 1997;

et al. 2001); 광견병 바이러스 당단백질 (RVG) (Kumar et al. 2007); 헤르페스 단순체 바이러스 VP22 (Elliott et al. 1997); 항균 프로테그린 1 (SynB) (Rousselle et al. 2001), 래트 인슐린 1 유전자 강화제 단백질 (pIS1) (Kilk et al. 2001; Magzoub et al. 2001); 뮤린 맥관 내피 캐드해린 (pVEC) (Elmquist et al. 2001); 인간 칼시토닌 (hCT) (Schmidt et al. 1998); 그리고 섬유아세포 성장 인자 4 (FGF4) (Jo et al. 2005)와 같은 단백질로부터 유래된 펩티드다. 본 발명에 사용하기에 적합한 CPPs에는 합성 그리고 키메라 펩티드, 이를 테면 Transportan (TP) 및 이의 유도체 (Pooga et al. 1998; Soomets et al. 2000); 막 전위(translocating) 서열 (MTSs) (Brodsky et al. 1998; Lindgren et al. 2000; Zhao et al. 2001), 이를 테면, MPS 펩티드 (일명 융합 서열-기반의 펩티드 또는 FBP) (Chaloin et al. 1998); 서열 신호-기반 펩티드 (SBP) (Chaloin et al. 1997); 모델 양쪽성 펩티드 (MAP) (Oehlke et al. 1998; Scheller et al. 1999;

et al. 2001), 전위(translocating) 펩티드 2 (TP2) (Cruz et al. 2013), MPG (Morris et al. 1997; Kwon et al. 2009), Pep-1 (Morris et al. 2001;

-Morris et al. 2007), 그리고 폴리-아르기닌 (가령, R₇-R₁₂) (서열 식별 번호: 144) (Mitchell et al. 2000; Wender et al. 2000; Futaki et al. 2001; Suzuki et al. 2002)을 또한 포함한다. 대표적인, 그러나, 비-제한적인 서열은 표 7에 나타낸다.

표 7

CPPs의 기능은 서열-특이적 상호 작용보다는 이의 물리적 특성에 의존하기 때문에, 이들은 표 7에 제공되고, 및/또는 당업계에 공지된 바와 같이 역 서열 및/또는 역 키랄성을 가질 수 있다. 예를 들어, 상기 CPPs의 레트로 역전된 형태 (역 서열 및 역 키랄성)는 본 발명에서 사용하기에 적합하다. 레트로 역전된 CPPs의 예시로는 D-아미노산 서열 KKWKMRRNQFWIKIQR (서열 식별 번호: 71), KKWKMRRNQFWLKLQR (서열 식별 번호: 72), RRRQRRKKRGY (서열 식별 번호: 73), KLTPV (서열 식별 번호: 74), 또는 OLTPV (서열 식별 번호: 143)을 갖는 것들이 내포된다. 세포 막 및/또는 BBB를 가로지르는 능력을 유지하고, 하나 또는 그 이상의 아미노산 추가, 결손, 및/또는 치환을 갖는 이들 서열의 변이체들이 또한 본 발명에서 사용하기에 적합하다. 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드는 표 7에서 제공되는 예시적인 서열에 대하여 최소한 약 60%, 61%, 62%, 63%, 64%, 65%, 66%, 67%, 68%, 69%,70%, 71%, 72%, 73%, 74%, 75%, 76%, 77%, 78%, 79%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일성을 갖는 세포-침투성 도메인을 또한 포함한다. 세포 침투성을 중재하는 CPP의 능력에 있어서 아미노산 추가(들), 결손(들), 및/또는 치환(들)의 효과는 당분야에 공지된 방법을 이용하여 테스트될 수 있다.

III. 제조 방법

본 발명의 BCL9 모방체 펩티드들은 화학적으로 합성될 수 있는데, 예를 들어, 고체-상 펩티드 합성 또는 용액-방법 펩티드 합성을 사용하거나, 또는 재조합 방법을 사용하여 발현될 수 있다. 합성 또는 발현은 후속적으로 화학적 또는 효소적으로 조합되는 펩티드의 단편을 만들 수 있다.

따라서, 본 발명의 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자를 또한 제공한다. 이러한 핵산은 올리고뉴클레오티드 합성기를 사용하여 화학적 합성에 의해 구축될 수 있다. 본 발명의 핵산 분자는 목적하는 BCL9 모방체 펩티드의 아미노산 서열 및 재조합 BCL9 모방체 펩티드가 생성될 숙주 세포에서 선호되는 코돈의 선택에 기초하여 설계될 수 있다. 관심대상 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자를 합성하기 위해 표준 방법이 적용될 수 있다.

일단 제조되면, 특정 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 핵산은 발현 벡터에 삽입될 수 있고, 원하는 숙주에서 펩티드의 발현에 적합한 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결될 수 있다. BCL9 모방체 펩티드의 높은 발현 수준을 수득하기 위해, 핵산은 선택된 발현 숙주에서 기능하는 전사 및 해독 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결되거나 또는 회합될 수 있다.

광범위한 발현 숙주/벡터 조합은 당업계에 공지된 임의의 사람에게 사용될 수 있다. 진핵 생물 숙주에 유용한 발현 벡터는 예를 들어, SV40, 소 유두종 바이러스, 아데노바이러스 및 사이토메갈로 바이러스로부터의 발현 제어 서열을 포함하는 벡터를 포함한다. 박테리아 숙주에 유용한 발현 벡터는 pCR1, pBR322, pMB9 및 이들의 유도체를 비롯한 대장균(E. coli) 유래의 플라스미드와 같은 공지된 박테리아 플라스미드, M13과 같은 더 넓은 숙주 범위 플라스미드 및 필라멘트성 단일-가닥 DNA 파아지를 포함한다.

적합한 숙주 세포는 적절한 프로모터의 제어 하에 원핵 생물, 효모, 곤충 또는 고등 진핵 세포를 포함한다. 원핵 생물에는 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예를 들어 대장균(E. coli) 또는 바실리가 내포된다. 고차원 진핵 세포 또는 포유동물 기원의 세포주가 확립될 수 있으며, 이의 예로는 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 293 세포, COS-7 세포, L 세포, C127 세포, 3T3 세포, 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포 및 BHK가 포함된다. 무-세포 해독 시스템도 또한 사용될 수 있다.

실시예

본 발명의 구체예들은 본 발명의 방법을 다음의 비-제한적인 실시예들을 참조하여 추가로 정의될 수 있다. 본 명세서의 범위를 벗어나지 않으면서, 재료 및 방법 모두에 대한 많은 변형이 실시될 수 있다는 것이 당업자에게 명백할 것이다.

실시예 1. BCL9 펩티드는 시험관내 암 세포에서 항-증식성 활성을 나타낸다

우리는 세포-침투성 영역과 BCL9 HD2 도메인을 함유하는 펩티드 패널을 생성하였고, 이들의 활성을 앞서 설명한 환형 펩티드(Takada et al. 2012), ST-BC1과 비교했다. 본 실시예에서 논의되는 BCL9 펩티드는 표 8에 요약된다.

표 8

ST-BC1은 밑줄친 굵게 표시된 잔기들 사이에 락탐 다리를 함유한다. 다른 5개 펩티드는 선형이며, 이태리체로 표시된 TAT 세포-침투성 영역을 갖는다. 펩티드 BCL-21은 고유의 HD2 도메인을 함유하는 한편, 펩티드 BCL-22-25 각각은 고유의 BCL9 HD2 도메인에서 아미노산 치환을 갖는다. 치환에 추가하여, 펩티드 BCL-25는 상기 고유의 서열과 비교하여 짧아진 HD2 도메인을 또한 보유한다.

MCF-7 유방암 세포는 96개 웰 배양 접시에서 150 μL의 MEM 배지 + 10% 태아 소 혈청(FBS)에서 웰당 2.5 x 10⁴세포의 밀도로 설정되었다. 동결건조된 BCL9 펩티드는 270 mM 트레할로스 완충액에서 10 mg/mL 농도로 재구성되었으며, 각 웰에 최종 농도 범위가 2.5-40 μM가 되도록 50 μL의 용적으로 추가하였다. 세포를 37℃에서 96시간 동안 BCL9 펩티드와 함께 항온처리하였다.

제조업체의 지침에 따라, Roche MTT 세포 증식 분석 키트를 사용하여 분광광도법으로 세포 생존율을 정량화했다. 간략하게 설명하자면, 세포를 PBS로 세척하였고, 그리고 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신, 그리고 1% 비-필수 아미노산, + 10 μL MTT 시약과 함께 새로운 MEM 배지에서 37℃에서 4 시간 동안 항온처리하였다. 4 시간 후, 100 μL의 가용화 용액을 추가하였고, 세포를 37℃, 5% 이산화탄소에서 하룻밤 동안 항온처리하였다. 흡광도는 OD570 nm에서 측정되었고, 참조는 OD650 nm에서 측정되었다. 흡수 정도는 살아있는 세포의 수에 비례한다. 미처리 대조군에 대한 흡광도의 백분율을 정량화하고, 세포 생존율 %로 제시하였다.

본 발명의 변형된 BCL9 펩티드는 펩티드 ST-BC1와 비교하였을 때, MCF7 유방암 세포에서 대등한 또는 그 이상의 항-증식성 활성을 갖는 것으로 입증되었지만, 고유의 BCL9 HD2 도메인 서열을 갖지 않는 BCL-21는 그렇지 않다 (EC₅₀ 값 <10 μM) (도 1). 기능적 검정에서, EC₅₀은 최대 반응의 50%로 생물학적 반응이 감소되는 농도다. BLC9 펩티드 펩티드의 경우, EC₅₀은 세포 생존능이 이의 최대치에서 50% 감소된 농도로 측정된다. EC₅₀은 당분야에 공지된 임의의 수단에 의해 산출될 수 있다.

실시예 2. 레트로 역전된 BCL9 펩티드는 시험관내 암 세포에서 항-증식성 활성을 나타낸다

우리는 다음의 레트로-역전된 펩티드: D-아미노산 서열 FLMRQLDRLTQLAKLTPV (서열 식별 번호: 26)을 갖는 BCL-26, 그리고 D-아미노산 서열 WWLARQLARLAQLAKLTPV (서열 식별 번호: 27)을 갖는 BCL-27을 준비하였다. Bax-억제 펩티드로부터 파생된 세포-침투성 영역은 이태리체로 나타낸다. BCL-26의 경우에서, HD2 도메인의 서열은 11개 아미노산만큼 단축되었으며, 고유의 서열과 비교하여 2개 위치에서 치환된다. BCL-27의 경우에서, HD2 도메인의 서열은 11개 아미노산만큼 단축되었으며, 고유의 서열과 비교하여 6개 위치에서 치환되었으며, 고유의 서열과 비교하여 추가적으로 N-말단 트립토판을 함유한다.

우리는 HL60 전-골수구성 백혈병 세포에서 검정을 사용하여 펩티드 BCL-26 및 BCL-27의 세포독성을 조사하였다. HL60 PML 현탁 세포는 96개 웰 배양 접시에서 150 μL의 RPMI + 1.5% 태아 소 혈청(FBS)에서 웰당 3.5 x 10³세포의 밀도로 설정되었다. 20 mM His, pH 7.5에서 10 mg/mL 농도에서 재구성된 펩티드 BCL-26 또는 BCL-27은 최종 농도 범위 0-80 μM가 되도록 50 μL 용적으로 각 웰에 추가되었다. 세포는 펩티드와 함께 48 시간 동안 37℃에서 항온처리되었다. 세포 생존력은 abcam Annexin V FITC 아팝토시스 탐지 키트를 이용하여 유동세포측정에 의해 정량화되었다. 간략하게 설명하자면, 세포를 PBS로 세척하고, Annexin V FITC 및 프로피디움 요오드화물 (PI)을 포함하는 1x 검정 완충액에 재현탁시켰다. Annexin V는 아팝토시스 세포를 탐지하고, 그리고 PI는 죽은 세포를 착색시킨다. 착색 후, 아팝토시스 세포는 녹색 형광을 나타내고, 죽은 세포는 적색 및 녹색 형광을 나타내고, 살아있는 세포는 형광을 나타내지 않거나, 또는 거의 나타내지 않는다. 전방 산란(FSC) 대비. 측면 산란(SSC)에 근거한 분석으로 세포들이 선별되었으며, 피코에리틴 방출 신호 탐지기에 의해 FITC 신호 탐지기 및 PI 착색을 이용하여 Annexin V-FITC 결합 (Ex = 488 nm; Em = 530 nm)을 탐지하기 위하여, BD Accuri C6 Plus 유동세포측정기에 의해 분석되었다. Annexin V^낮음(low) 및 PI^낮음(low) 의 백분율을 정량화시키고, 생존능 %로 나타냈다. 상기 레트로 역전된 펩티드는 실시예 1에서 테스트된 표준 펩티드에 필적하는 활성을 가졌다 (도 2A-2B).

우리는 위에서 설명한 분석을 사용하여, HL60 세포에서 추가 레트로 역전된, 그리고 혼합된 키랄성 BCL9 모방 펩티드의 세포독성을 조사했다. 결과는 표 9에 나타낸다.

표 9

+++는 EC₅₀ < 2 μM을 나타내고; ++는 EC₅₀ = 2-10 μM을 나타내고; +는 EC₅₀ > 10 μM을 나타내고; NA는 활성이 없음을 나타낸다.

아래첨자의 D와 L은 해당 아미노산들의 키랄성을 나타낸다. 이때 상기 레트로 역전된 야생형 BCL9 HD2 서열(서열 식별 번호: 7)에 대한 치환 및 추가는 굵은 밑줄로 나타낸다. 상기 세포-침투성 및 RGD-유사 영역들은 이태리체로 나타낸다. 예상대로, BCL-12는 세포 침투를 위한 서열이 없기 때문에, 세포 독성 활성을 나타내지 않았다.

BCL-134에 의한 세포독성 활성 결여는 서열 식별 번호: 7과 비교하여, HD2 도메인의 위치 4 또는 위치 8중 적어도 하나에서 양으로 하전된 아미노산에 대한 요구를 입증한다. (BCL-133의 활성과 BCL-134의 활성을 비교한다.)

BCL-138에 의한 세포독성 활성의 결여는 HD2 도메인의 두 개 N-말단 아미노산중 적어도 하나는 소수성이어야 한다는 요구를 입증한다. (BCL-91b의 활성과 BCL-138의 활성을 비교한다.)

실시예 3. 레트로 역전된 BCL9 펩티드는 시험관내 항-종양 활성을 나타낸다

이 실험에서 우리는 MCF7 피하 종양 모델에서 종양 용적에 있어서 펩티드 BCL-26의 효과를 조사하였다. 간략하게 설명하자면, 2 x 10⁶ MCF7 유방암 세포를 Matrigel에 1:1로 현탁시키고, NU/J 마우스의 겨드랑이로 피하 주사를 통하여 삽입하였다. 펩티드 BCL-26은 12.5 mg/kg의 투여량으로 3주 동안 주당 3회 피하 주사를 통하여 투여되었다. 투여는 종양 접종 후 2일차에 시작되었고, 출발 종양 평균 용적 범위는 약 25 mm³이었다. 펩티드 BCL-26은 비히클과 비교하여, 종양 용적을 유의적으로 감소시켰다 (도 3A).

우리는 또한 확립된 종양에서 BCL9 모방체 펩티드의 효과를 조사하였다. MCF7 세포들을 상기에서 기술한 바와 같이 이식하였다. 펩티드 BCL-87은 5 mg/kg의 투여량으로 3주 동안 주당 3회 피하 주사를 통하여 투여되었다. 투여는 종양 접종 후 21일차에 시작되었고, 출발 종양 평균 용적 범위는 약 470 mm³이었다. 펩티드 BCL-87은 비히클과 비교하여 종양 용적을 유의적으로 감소시켰다 (도 3B).

우리는 확립된 종양에서 상이한 농도의 모방체 펩티드의 효과를 추가적으로 조사하였다. MCF7 세포들을 상기에서 기술한 바와 같이 이식하였다. 펩티드 BCL-27 및 BCL-87은 3주 동안 주당 3회 피하 주사를 통하여 1 mg/kg 또는 5 mg/kg의 투여량으로 투여되었다. 투여는 종양 접종 후 14일차에 시작되었고, 출발 종양 평균 용적 범위는 약 340 mm³이었다. 두 펩티드는 모두 비히클, 그리고 펩티드 대조군, BCL-134와 비교하여 종양 용적을 유의적으로 감소시켰다 (도 3C).

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본 발명은 다음의 청구 범위에 의해 추가로 설명된다.

SEQUENCE LISTING <110> SAPIENCE THERAPEUTICS, INC. <120> MODIFIED BCL9 MIMETIC PEPTIDES <130> SAPIENCE.004.WO1 <140> <141> <150> 62/870,938 <151> 2019-07-05 <160> 144 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Leu Ser Gln Glu Gln Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu 1 5 10 15 Arg Asp Ile Gln Arg Met Leu Phe 20 <210> 2 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 2 Leu Ser Gln Glu Gln Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Lys Thr Leu 1 5 10 15 Arg Glu Ile Gln Arg Met Leu Phe 20 <210> 3 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 3 Leu Ser Gln Glu Gln Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Ala Thr Leu 1 5 10 15 Arg Ala Ile Gln Arg Met Leu Phe 20 <210> 4 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 4 Leu Ser Gln Glu Gln Leu Arg His Arg Glu Glu Ser Leu Glu Thr Leu 1 5 10 15 Arg Arg Ile Gln Glu Met Leu Phe 20 <210> 5 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 5 Leu Ser Gln Glu Gln Leu Glu His Arg Glu Arg Ala Leu Gln Ala Leu 1 5 10 15 Arg Ala Ile Gln Arg Ala Leu Phe 20 <210> 6 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 6 Ala Leu Gln Ala Leu Arg Ala Ile Gln Arg Ala Leu Phe 1 5 10 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 7 Phe Leu Met Arg Gln Ile Asp Arg Leu Thr Gln Leu Ser 1 5 10 <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 8 Phe Leu Met Arg Gln Ile Asp Arg Leu Thr Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 9 <211> 13 <212> PRT 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<220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 13 Phe Leu Met Glu Gln Leu Arg Arg Leu Thr Glu Leu Ala 1 5 10 <210> 14 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 14 Phe Leu Ala Glu Gln Leu Arg Arg Leu Ala Glu Leu Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 15 Trp Leu Ala Glu Gln Leu Arg Arg Leu Ala Glu Leu Ala 1 5 10 <210> 16 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(14) <223> D-amino acid <400> 16 Trp Trp Leu Ala Arg Gln Leu Glu Arg Leu Ala Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 17 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> 1-Nal <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(14) <223> D-amino acid <400> 17 Xaa Trp Leu Ala Arg Gln Leu Ala Arg Leu Arg Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 18 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 18 Phe Leu Leu Arg Gln Ile Asp Arg Leu Thr Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 19 Phe Leu Leu Arg Gln Leu Asp Arg Leu Thr Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <400> 20 Phe Leu Leu Arg Gln Leu Glu Arg Leu Thr Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 21 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Ser Gln Glu Gln 1 5 10 15 Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Gln Thr Leu Arg Asp Ile Gln Arg 20 25 30 Met Leu Phe 35 <210> 22 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 22 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Ser Gln Glu Gln 1 5 10 15 Leu Glu His Arg Glu Arg Ser Leu Ala Thr Leu Arg Ala Ile Gln Arg 20 25 30 Met Leu Phe 35 <210> 23 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Leu Ser Gln Glu Gln 1 5 10 15 Leu Arg His Arg Glu Glu Ser Leu Glu Thr Leu Arg Arg Ile Gln Glu 20 25 30 Met Leu Phe 35 <210> 24 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg 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Synthetic peptide <400> 28 Gly Arg Gly Asp Ser 1 5 <210> 29 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 29 Gly Arg Gly Asp Asn Pro 1 5 <210> 30 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(2) <223> Lys or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Any amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Lys or Arg <400> 30 Lys Xaa Xaa Xaa 1 <210> 31 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(2) <223> Lys or Arg <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(14) <223> Any amino acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(14) <223> This region may encompass 10-12 residues <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(19) <223> Any amino acid, wherein at least 3 of the 5 consecutive amino acids in this region are Lys or Arg <400> 31 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 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Synthetic peptide <400> 55 Arg Arg Trp Trp Arg Arg Trp Arg Arg 1 5 <210> 56 <211> 27 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <400> 56 Met Gly Leu Gly Leu His Leu Leu Val Leu Ala Ala Ala Leu Gln Gly 1 5 10 15 Ala Trp Ser Gln Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 20 25 <210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Simian virus 40 <400> 57 Pro Lys Lys Lys Arg Lys Val 1 5 <210> 58 <211> 17 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: SynB1 CPP sequence <400> 58 Arg Gly Gly Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Phe Ser Thr Ser Thr Gly 1 5 10 15 Arg <210> 59 <211> 10 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: SynB3 CPP sequence <400> 59 Arg Arg Leu Ser Tyr Ser Arg Arg Arg Phe 1 5 10 <210> 60 <211> 17 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Description of Unknown: SynB5 CPP sequence <400> 60 Arg Gly Gly Arg Leu Ala Tyr Leu Arg Arg Arg Trp Ala Val Leu Gly 1 5 10 15 Arg <210> 61 <211> 11 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus 1 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Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(20) <223> D-amino acid <400> 131 Phe Trp Trp Leu Val Arg Gln Leu Ala Arg Leu Ala Gln Leu Ala Lys 1 5 10 15 Leu Thr Pro Val 20 <210> 132 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(20) <223> D-amino acid <400> 132 Phe Trp Trp Leu Ala Arg Gln Leu Ala Arg Leu Ala Ala Leu Ala Lys 1 5 10 15 Leu Thr Pro Val 20 <210> 133 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(20) <223> D-amino acid <400> 133 Phe Trp Trp Leu Ala Arg Gln Leu Ala Ala Leu Ala Gln Leu Ala Lys 1 5 10 15 Leu Thr Pro Val 20 <210> 134 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(25) <223> D-amino acid <400> 134 Pro Ser Asp Gly Arg Gly Trp Trp Leu Ala Ala Gln Leu Ala Ala Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Ala Lys Leu Thr Pro Val 20 25 <210> 135 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(25) <223> D-amino acid <400> 135 Pro Ser Asp Gly Arg Gly Trp Trp Leu Ala Arg Gln Leu Ala Arg Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Ala Lys Leu Thr Pro Val 20 25 <210> 136 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(25) <223> D-amino acid <400> 136 Pro Ser Asp Gly Arg Gly Trp Trp Leu Val Arg Gln Leu Ala Arg Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Ala Lys Leu Thr Pro Val 20 25 <210> 137 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(25) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Orn <220> <221> MOD_RES <222> (15)..(15) <223> Orn <220> <221> MOD_RES <222> (21)..(21) <223> Orn <400> 137 Pro Ser Asp Gly Arg Gly Trp Trp Leu Ala Xaa Gln Leu Ala Xaa Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Ala Xaa Leu Thr Pro Val 20 25 <210> 138 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(17) <223> D-amino acid <400> 138 Leu Val Arg Gln Leu Ala Arg Leu Ala Gln Leu Ala Lys Leu Thr Pro 1 5 10 15 Val <210> 139 <211> 25 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(6) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(25) <223> D-amino acid <400> 139 Pro Ser Asp Gly Arg Gly Trp Trp Leu Val Arg Gln Leu Ala Arg Leu 1 5 10 15 Ala Gln Leu Ala Lys Leu Thr Pro Val 20 25 <210> 140 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(14) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Orn <220> <221> MOD_RES <222> (9)..(9) <223> Orn <400> 140 Trp Trp Leu Ala Xaa Gln Leu Ala Xaa Leu Ala Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 141 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (2)..(14) <223> D-amino acid <400> 141 Trp Trp Leu Val Arg Gln Leu Ala Arg Leu Ala Gln Leu Ala 1 5 10 <210> 142 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(13) <223> D-amino acid <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Phe, Leu or Trp <220> <221> MOD_RES <222> (3)..(3) <223> Ala, Glu, Leu, Met or Val <220> <221> MOD_RES <222> (4)..(4) <223> Ala, Lys, Arg or Orn <220> <221> MOD_RES <222> (7)..(7) <223> Ala, Asp or Glu <220> <221> MOD_RES <222> (8)..(8) <223> Ala, Lys, Arg or Orn <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Ala, Lys, Gln, Arg or Thr <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> Ala, Lys, Gln or Arg <400> 142 Xaa Leu Xaa Xaa Gln Leu Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Leu Ala 1 5 10 <210> 143 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(1) <223> Orn <220> <221> MOD_RES <222> (1)..(5) <223> D-amino acid <400> 143 Xaa Leu Thr Pro Val 1 5 <210> 144 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(12) <223> This sequence may encompass 7-12 residues <400> 144 Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 1 5 10

Claims

변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드에 있어서, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 서열을 포함하는, 펩티드:
i. WWLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 12);
ii. FLMRQIDRLTQLA (서열 식별 번호: 8);
iii. FLMRQLDRLTQLA (서열 식별 번호: 9);
iv. FLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 10);
v. WLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 11);
vi. FLMEQLRRLTELA (서열 식별 번호: 13);
vii. FLAEQLRRLAELA (서열 식별 번호: 14);
viii. WLAEQLRRLAELA (서열 식별 번호: 15);
ix. WWLARQLERLAQLA (서열 식별 번호: 16);
x. 1-Nal-WLARQLARLRQLA (서열 식별 번호: 17);
xi. FLLRQIDRLTQLA (서열 식별 번호: 18);
xii. FLLRQLDRLTQLA (서열 식별 번호: 19);
xiii. FLLRQLERLTQLA (서열 식별 번호: 20);
xiv. WWLLRQLARLAQLA (서열 식별 번호: 102);
xv. 2-Nal-WLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 115);
xvi. FWLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 116);
xvii. WWLARQLARLRQLA (서열 식별 번호: 117);
xviii.WFLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 118);
xix. WLLARQLARLAQLA (서열 식별 번호: 119);
xx. WWLERQLARLAQLA (서열 식별 번호: 120);
xxi. WWLARQLARLQQLA (서열 식별 번호: 122);
xxii. WWLARQLERLARLA (서열 식별 번호: 123);
xxiii. WWLARQLERLRRLA (서열 식별 번호: 124);
xxiv. WWLARQLARLKQLA (서열 식별 번호: 125);
xxv. WWLARQLERLAKLA (서열 식별 번호: 126);
xxvi. WWLVRQLARLAQLA (서열 식별 번호: 127); 그리고
xxvii. WWLAOQLAOLAQLA (서열 식별 번호: 140).
변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드에 있어서, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 펩티드:
i. F_DR_L[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 103);
ii. F_DR_L[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 104);
iii. F_DW_L[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 105);
iv. F_DW_L[WLARQLARLAALA]_D (서열 식별 번호: 106);
v. F_DW_L[WLARQLAALAQLA]_D (서열 식별 번호: 107);
vi. W_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 108);
vii. W_L-[WLARQLARLRQLA]_D (서열 식별 번호: 109);
viii. W_L-[WLARQLERLRRLA]_D (서열 식별 번호: 110);
ix. W_L-[WLARQLERLARLA]_D (서열 식별 번호: 111);
x. F_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 112);
xi. R_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 113);
xii. F_D-W_L-[WLARQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 114); 그리고
xiii. W_L-[WLVRQLARLAQLA]_D (서열 식별 번호: 141);
이때 아래첨자의 D와 L은 해당 아미노산들의 키랄성을 나타내는, 펩티드.
변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드에 있어서, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 D-아미노산 서열 FLMRQIDRLTQLS (서열 식별 번호: 7)의 변이체를 포함하는 D-아미노산 서열이며, 이때 상기 변이체는 다음과 같이 서열 식별 번호: 7의 하나 또는 그 이상의 위치에서 변형되는, 펩티드:
i. F1은 L 또는 W로 치환되며;
ii. M3은 A, E, L, 또는 V로 치환되며;
iii. R4는 O로 치환되며;
iv. I6은 L로 치환되며;
v. D7은 A 또는 E로 치환되며;
vi. R8은 A로 치환되며;
vii. T10은 A, K, Q, 또는 R로 치환되며;
viii. Q11은 A, K, 또는 R로 치환되며;
ix. S13은 A로 치환된다.
청구항 3에 있어서, 해당 팹티드의 N-말단에서 D-형태 또는 L-형태의 W, F, R, 1-Nal, 또는 2-Nal를 더 포함하는, BCL9 모방체 펩티드.
변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드에 있어서, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 아미노산 서열 LSQEQLEHRERSLQTLRDIQRMLF (서열 식별 번호: 1)의 변이체를 포함하며, 이때 상기 변이체는 서열 식별 번호: 1의 하나 또는 그 이상의 위치에서 다음과 같이 변형되는, 펩티드:
i. E7은 R로 치환되며;
ii. R11은 E로 치환되며;
iii. S12는 A로 치환되며;
iv. Q14는 A 또는 E로 치환되며;
v. T15는 A로 치환되며;
vi. D18은 A 또는 R로 치환되며;
vii. I19는 L로 치환되며;
viii. R21은 E로 치환되며;
ix. M22는 A 또는 L로 치환되며;
x. W, 1-Nal, 또는 2-Nal는 위치 25에 추가된다.
청구항 5에 있어서, 이때 F24는 W, 1-Nal, 또는 2-Nal인, BCL9 모방체 펩티드.
청구항 5 또는 청구항 6에 있어서, 이때 서열 식별 번호: 1의 1 내지 15개의 연속 아미노산이 L1에서 시작하여 절두된, BCL9 모방체 펩티드.
청구항 5 내지 7중 임의의 한 항에 있어서, 이때 상기 펩티드는 전술한 임의의 청구항에 따른 아미노산 서열에 대하여 역전된 아미노산 서열로 D-아미노산들을 포함하는, BCL9 모방체 펩티드.
변형된 BCL9 α-나선형 상동성 도메인-2 (HD2) 영역을 포함하는 BCL9 모방체 펩티드에 있어서, 이때 상기 변형된 BCL9 HD2 영역은 다음으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 펩티드:
i. LSQEQLEHRERSLATLRAIQRMLF (서열 식별 번호: 3);
ii. LSQEQLRHREESLETLRRIQEMLF (서열 식별 번호: 4);
iii. LSQEQLEHRERALQALRAIQRALF (서열 식별 번호: 5); 그리고
iv. ALQALRAIQRALF (서열 식별 번호: 6).
임의의 선행 청구항에 있어서, 세포-침투성 영역을 더 포함하며, 이때 상기 BCL9 모방체 펩티드는 세포-침투성 펩티드인, BCL9 모방체 펩티드.
청구항 10에 있어서, 이때 상기 세포-침투성 영역은 YGRKKRRQRRR (서열 식별 번호: 61) 및 VPTLK (서열 식별 번호: 32)으로 구성된 군에서 선택된 아미노산 서열을 갖거나, 또는 이때 상기 세포-침투성 영역은 RRRQRRKKRGY (서열 식별 번호: 73), KLTPV (서열 식별 번호: 74), PSDGRG (서열 식별 번호: 75), 및 OLTPV (서열 식별 번호: 143)으로 구성된 군에서 선택된 D-아미노산 서열을 갖는, 세포-침투성 BCL9 모방체 펩티드.
임의의 선행 청구항에 있어서, 이때 상기 펩티드는 아세틸, 나프틸, 옥타노일, 페닐 및 이소발레릴로 구성된 군에서 선택된 N-말단기를 포함하는, BCL9 모방체 펩티드.
임의의 선행 청구항에 있어서, 이때 상기 펩티드는 C-말단 아미드기를 포함하는, BCL9 모방체 펩티드.
임의의 선행 청구항에 따른 BCL9 모방체 펩티드를 포함하는 조성물.
청구항 14에 있어서, 약제학적 조성물인, 조성물.
청구항 1 내지 13중 임의의 한 항에 따른 BCL9 모방체 펩티드, 또는 청구항 14 또는 청구항 15에 따른 조성물을 포함하는 키트.
청구항 1 내지 13에 따른 BCL9 모방체 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자.
신생물 세포에서 세포독성을 촉진시키는 방법에 있어서, 이 방법은 청구항 1 내지 13중 임의의 한 항에 따른 BCL9 모방체 펩티드, 또는 청구항 14 또는 청구항 15에 따른 조성물을 해당 신생물 세포에 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
신생물 세포의 증식을 억제시키는 방법에 있어서, 이 방법은 청구항 1 내지 13중 임의의 한 항에 따른 BCL9 모방체 펩티드, 또는 청구항 14 또는 청구항 15에 따른 조성물을 해당 신생물 세포에 접촉시키는 것을 포함하는, 방법.
신생물 세포에서 세포독성을 촉진시키는 용도를 위한 청구항 1 내지 13중 임의의 한 항에 따른 BCL9 모방체 펩티드, 또는 청구항 14 또는 청구항 15에 따른 조성물.
신생물 세포의 증식을 억제시키는 용도를 위한 청구항 1 내지 13중 임의의 한 항에 따른 BCL9 모방체 펩티드, 또는 청구항 14 또는 청구항 15에 따른 조성물.