JP2022538686A - 改変型ｂｃｌ９模倣ペプチド - Google Patents

Abstract

改変されたα－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を有し、任意選択的に細胞膜透過性領域を有するＢＣＬ９模倣ペプチド、ＢＣＬ９模倣ペプチドを含む組成物、ならびにＢＣＬ９模倣ペプチドを使用して新生物細胞における増殖を阻害する及び／または細胞傷害性を促進する方法を提供する。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１９年７月５日に出願された米国仮特許出願第６２／８７０，９３８号の優先権の利益を主張する。

配列表
本出願は、ＡＳＣＩＩ形式で電子提出された配列表を含有し、これをもって参照によりその全体を援用する。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２０年７月６日に作成されたものであり、名前がＳａｐｉｅｎｃｅ＿００４＿ＷＯ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズが４９，０８１バイトである。

Ｂ細胞ＣＬＬ／リンパ腫９（ＢＣＬ９）は、β－カテニン媒介転写のための共活性化因子として働くタンパク質である。ＢＣＬ９は多くの腫瘍において過剰発現し、がん細胞ではβ－カテニンシグナル伝達を増強するが、腫瘍の元となる正常細胞では増強しない（Ｚｈａｎ ｅｔ ａｌ．２０１７）。ＢＣＬ９は、そのα－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）を介してβ－カテニンと相互作用する。従来の研究では、炭化水素ステープルドＢＣＬ９ペプチドを使用してＢＣＬ９／β－カテニン相互作用を妨害することで、腫瘍細胞の増殖、遊走、侵襲及び転移潜在能力を調節するＷｎｔ標的遺伝子の転写が抑制されることが示された（Ｔａｋａｄａ ｅｔ ａｌ．，２０１２、ＷＯ２０１７／０６２５１８）。

本発明の主要な態様のいくつかを以下にまとめる。さらなる態様は、本開示の発明を実施するための形態、実施例、図面及び特許請求の範囲の節に記載されている。本開示の各節における記載は、他の節と関連付けて解釈されることを意図したものである。さらに、本開示の各節に記載される様々な実施形態を多様に組み合わせることができるが、そのような組合せを全て本発明の範囲に含むことを意図する。

本発明は、改変されたＢＣＬ９α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドを提供する。一実施形態では、本発明は、改変されたＢＣＬ９α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域がアミノ酸配列ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＱＴＬＲＤＩＱＲＭＬＦ（配列番号１）の変異体を含み、変異体が、配列番号１の１つ以上の位置において以下：（ｉ）Ｅ７をＲに置換する；（ｉｉ）Ｒ１１をＥに置換する；（ｉｉｉ）Ｓ１２をＡに置換する；（ｉｖ）Ｑ１４をＡまたはＥに置換する；（ｖ）Ｔ１５をＡに置換する；（ｖｉ）Ｄ１８をＡまたはＲに置換する；（ｖｉｉ）Ｉ１９をＬに置換する；（ｖｉｉｉ）Ｒ２１をＥに置換する；（ｉｘ）Ｍ２２をＡまたはＬに置換する；（ｘ）Ｗ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを位置２５に付加する、という改変がなされている、当該ＢＣＬ９模倣ペプチドを提供する。ＢＣＬ９模倣ペプチドは、Ｆ２４をＷ、１－Ｎａｌもしくは２－Ｎａｌに置換する、及び／または配列番号１のＬ１から始めて１～１５連続アミノ酸を切断する、という改変をさらに含み得る。一実施形態では、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＡＴＬＲＡＩＱＲＭＬＦ（配列番号３）、ＬＳＱＥＱＬＲＨＲＥＥＳＬＥＴＬＲＲＩＱＥＭＬＦ（配列番号４）、ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号５）、及びＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。さらには、本明細書に開示されるアミノ酸配列と比較して逆転したアミノ酸配列でＤ－アミノ酸を含むレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドも含まれる。

本発明の一実施形態は、改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、Ｄ－アミノ酸配列ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＳ（配列番号７）の変異体を含むＤ－アミノ酸配列であり、変異体が、配列番号７の１つ以上の位置において以下：（ｉ）Ｆ１をＬまたはＷに置換する；（ｉｉ）Ｍ３をＡ、Ｅ、ＬまたはＶに置換する；（ｉｉｉ）Ｒ４をＯ（オルニチン）に置換する；（ｉｖ）Ｉ６をＬに置換する；（ｖ）Ｄ７をＡまたはＥに置換する；（ｖｉ）Ｒ８をＡに置換する；（ｖｉｉ）Ｔ１０をＡ、Ｋ、ＱまたはＲに置換する；（ｖｉｉｉ）Ｑ１１をＡ、ＫまたはＲに置換する；（ｉｘ）Ｓ１３をＡに置換する、という改変がなされている、当該ＢＣＬ９模倣ペプチドである。特定の実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、Ｄ体かＬ体かのどちらかであるＷ、Ｆ、Ｒ、１－Ｎａｌまたは２－ＮａｌをペプチドのＮ末端にさらに含む。

ある実施形態では、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号８）、ＦＬＭＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号９）、ＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０）、ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２）、ＦＬＭＥＱＬＲＲＬＴＥＬＡ（配列番号１３）、ＦＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１４）、ＷＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１５）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＱＬＡ（配列番号１６）、１－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１７）、ＦＬＬＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１８）、ＦＬＬＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１９）、ＦＬＬＲＱＬＥＲＬＴＱＬＡ（配列番号２０）、ＷＷＬＬＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０２）、２－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１５）、ＦＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１６）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１１７）、ＷＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１８）、ＷＬＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１９）、ＷＷＬＥＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２０）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＱＱＬＡ（配列番号１２２）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ（配列番号１２３）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ（配列番号１２４）、ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＫＱＬＡ（配列番号１２５）、ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＫＬＡ（配列番号１２６）、ＷＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２７）及びＷＷＬＡＯＱＬＡＯＬＡＱＬＡ（配列番号１４０）からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を含む。

ある実施形態では、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、キラリティーが混交する、改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含む。特定の実施形態では、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、（ｉ）Ｆ_ＤＲ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０３）、（ｉｉ）Ｆ_ＤＲ_Ｌ［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０４）、（ｉｉｉ）Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０５）、（ｉｖ）Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＡＬＡ］_Ｄ（配列番号１０６）、（ｖ）Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＡＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０７）、（ｖｉ）Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０８）、（ｖｉｉ）Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０９）、（ｖｉｉｉ）Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ］_Ｄ（配列番号１１０）、（ｉｘ）Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ］_Ｄ（配列番号１１１）、（ｘ）Ｆ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１２）、（ｘｉ）Ｒ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１３）、（ｘｉｉ）Ｆ_Ｄ－Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１４）、及びＷ_Ｌ－［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１４１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含み、ここで、下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す。

いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは細胞膜透過性領域を含み、ＢＣＬ９模倣ペプチドは細胞膜透過性ペプチドである。ある実施形態では、細胞膜透過性領域は、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号６１）及びＶＰＴＬＫ（配列番号３２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、または細胞膜透過性領域は、ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ（配列番号７３）、ＫＬＴＰＶ（配列番号７４）、ＰＳＤＧＲＧ（配列番号７５）及びＯＬＴＰＶ（配列番号１４３）からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、アセチル、ナフチル、オクタノイル、フェニル及びイソバレリルからなる群から選択されるＮ末端基を含む、及び／またはＢＣＬ９模倣ペプチドはＣ末端アミド基を含む。

一態様では、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、新生物細胞における増殖を阻害する及び／または細胞傷害性を促進するのに使用するためのものである。

本発明のさらなる態様は、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドを含む組成物、例えば医薬組成物；本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドを含むキット；及び本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドをコードする核酸分子を提供する。

本発明はさらに、新生物細胞における増殖を阻害する及び／または細胞傷害性を促進する方法であって、新生物細胞を本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドと接触させることを含む、当該方法を提供する。

培養ＭＣＦ７乳癌細胞において本発明の改変型ＢＣＬ９模倣ペプチドがβ－カテニンと拮抗して抗増殖活性を働かせることを示す。 培養ＭＣＦ７乳癌細胞において本発明のレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドが抗増殖活性を呈することを示す。ペプチドＢＣＬ－２６（図２Ａ）及びペプチドＢＣＬ－２７（図２Ｂ）の細胞傷害性データを示す。 培養ＭＣＦ７乳癌細胞において本発明のレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドが抗増殖活性を呈することを示す。ペプチドＢＣＬ－２６（図２Ａ）及びペプチドＢＣＬ－２７（図２Ｂ）の細胞傷害性データを示す。 ＭＣＦ７乳癌マウスモデルにおいて本発明のレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドが抗腫瘍活性を呈することを示す。データ点は平均±標準誤差を表す。腫瘍接種後２日目にＢＣＬ－２６（１２．５ｍｇ／ｋｇ）をヌードマウスに投与した（図３Ａ、ｐ＜０．０００１）。 ＭＣＦ７乳癌マウスモデルにおいて本発明のレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドが抗腫瘍活性を呈することを示す。データ点は平均±標準誤差を表す。腫瘍接種後２１日目にＢＣＬ－８７（５ｍｇ／ｋｇ）を投与した（図３Ｂ、ｐ＜０．００５）。 ＭＣＦ７乳癌マウスモデルにおいて本発明のレトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドが抗腫瘍活性を呈することを示す。データ点は平均±標準誤差を表す。腫瘍接種後１４日目に２つの濃度（１ｍｇ／ｋｇ及び５ｍｇ／ｋｇ）のＢＣＬ－８７及びＢＣＬ－２７を投与した（図３Ｃ、全ての供試ペプチドで対照に対してｐ≦０．０００４）。

本発明の実施は、特に示されていない限り、当業者の技量の範囲内に入る薬学、製剤化科学、タンパク質化学、細胞生物学、細胞培養、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ及び免疫学の従来技術を採用することになる。

本発明がより容易に理解され得るために、まず用語をいくつか最初に定義する。さらなる定義は本開示の全体を通して示されている。特に定義されていない限り、本明細書中で使用される全ての科学技術用語は、本発明に関係する分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。

本明細書に提供されるいかなる見出しも、総じて本明細書を参照することによってなされ得る本発明の様々な態様または実施形態の限定ではない。したがって、このすぐ下で定義されている用語は、本明細書の全体を参照することによってより十分に定義される。

本開示の中で引用される参考文献は全て、これをもって参照によりその全体が援用される。加えて、本明細書中で引用または言及される任意の製品に対する任意の製造業者の説明書またはカタログを参照により援用する。参照により本書に援用される文書、またはその中の任意の教示内容が本発明の実施に用いられ得る。参照により本書に援用される文書は、従来技術であることを認めるものではない。

Ｉ．定義
本開示の中の表現または専門用語は、当業者によって本明細書の専門用語または表現が教示内容及び指針に照らして解釈されることになるような、説明を目的としたものであり、限定を目的としたものではない。

本明細書及び別記の特許請求の範囲の中で使用する場合、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は複数形の意味を含み、但し、そうでないことを文脈が明らかに示している場合を除く。「ａ」（または「ａｎ」）という用語、ならびに「１つ以上」及び「少なくとも１つ」という用語は互換的に使用され得る。

さらに、「及び／または」は、２つの指定された特徴または成分の各々を他のものの有無にかかわらず具体的に開示しているとみなされるべきである。したがって、「Ａ及び／またはＢ」などの語句の中で使用される「及び／または」という用語は、Ａ及びＢ、ＡまたはＢ、Ａ（単独）、ならびにＢ（単独）を含むことを意図している。同様に、「Ａ、Ｂ及び／またはＣ」という語句の中で使用される「及び／または」という用語は、Ａ、Ｂ及びＣ；Ａ、ＢまたはＣ；ＡまたはＢ；ＡまたはＣ；ＢまたはＣ；Ａ及びＢ；Ａ及びＣ；Ｂ及びＣ；Ａ（単独）；Ｂ（単独）；ならびにＣ（単独）を含むことを意図している。

実施形態が「含んでいる」という言葉を使用して記載されているいかなる場合においても、「からなる」及び／または「から本質的になる」の言葉で記載される他の類似する実施形態が含まれる。

単位、接頭辞及び記号はそれらの国際単位系（ＳＩ）認可形式で表されている。数値範囲は、範囲を画定している数字を含み、本明細書に提供される任意の個々の値は、本明細書に提供される他の個々の値を含む範囲の端点としての役割を果たし得る。例えば、一組の値、例えば、１、２、３、８、９及び１０は、１～１０、１～８、３～９などの数の範囲の開示でもある。同様に、開示されている範囲は、範囲に包含される各個の値の開示である。例えば、明示された５～１０の範囲は、５、６、７、８、９及び１０の開示でもある。

「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味して本明細書中で互換的に使用される。ポリマーは、直鎖型または分岐型であり得、修飾アミノ酸を含み得、非アミノ酸が割り込んでいてもよい。特に示されていない限り、例えば本明細書に示される非一般的または非天然アミノ酸の略号として、当技術分野で使用されているような３文字及び１文字の略号を本明細書中で使用してアミノ酸残基を表す。アミノ酸は、「Ｄ」が前に付いているかまたは小文字になっている場合を除いてＬ－アミノ酸である。一まとまりまたは一繋がりのアミノ酸略号を使用してペプチドを表す。具体的に示される場合を除いて、ペプチドはＮ末端を左にして示されており、配列はＮ末端からＣ末端に向かって書かれている。

ポリペプチド、ペプチド及びタンパク質は、天然または合成の修飾、例えば、ジスルフィド結合、ラクタム架橋、グリコシル化、脂質化、アセチル化、アシル化、アミド化、リン酸化、または他の操作もしくは修飾、例えば標識成分との結合体化または保護基の付加を包含し得る。さらには、例えば、アミノ酸の１つ以上の類縁体（例えば、アミノ－イソ酪酸（Ａｉｂ）、非天然アミノ酸、例えばナフチルアラニン（Ｎａｌ）などを含む）を含有するポリペプチド、ならびにＤ－アミノ酸及び当技術分野で知られている他の修飾を含むまたはそれからなるポリペプチドも含まれる。ポリペプチドは、１つまたは複数の塩形態であり得る。好ましい塩形態としては、酢酸塩、塩化物またはトリフルオロ酢酸塩が挙げられる。ある実施形態では、ポリペプチドは、一本鎖、共有結合型二量体または非共有結合的会合鎖として存在し得る。ポリペプチドが環式形態である場合もある。環式ポリペプチドは、例えば、遊離アミノ酸と遊離カルボキシル基とを架橋することによって調製され得る。環式化合物の形成は、必要に応じて好適な保護を行って脱水剤で処理することによって成し遂げられ得る。開放鎖（直鎖形態）から環式形態への反応には分子内環化が伴い得る。環式ポリペプチドを、当技術分野で知られている他の方法で、例えば１つ以上のラクタム架橋、水素結合代用物（Ｐａｔｇｉｒｉ ｅｔ ａｌ．２００８）、炭化水素ステープル（Ｓｃｈａｆｍｅｉｓｔｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００）、トリアゾールステープル（Ｌｅ Ｃｈｅｖａｌｉｅｒ Ｉｓａａｄ ｅｔ ａｌ．２００９）、またはジスルフィド架橋（Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．２００６）を用いて調製することもできる。架橋またはステープル同士を隔てている間隔は例えば３、４、７または８アミノ酸であり得る。

「変異体」という用語は、基準配列と比較して１つ以上のアミノ酸置換、欠失及び／または挿入を有するポリペプチドを指す。欠失及び挿入は、内部におけるもの、及び／または１つ以上の末端におけるものであり得る。置換は、類似もしくは相同アミノ酸（複数可）または非類似アミノ酸（複数可）による１つ以上のアミノ酸の置換えを含み得る。例えば、いくつかの変異体は１つ以上のアミノ酸位置にアラニン置換を含む。他の置換としては、タンパク質の全体的な正味の電荷、極性または疎水性に影響をほとんどまたは全く有さない保存的置換が挙げられる。いくつかの変異体は、アミノ酸の電荷または極性を変化させる非保存的置換を含む。置換は、Ｌ型かＤ型かのどちらかのアミノ酸によるものであり得る。

「レトロインベルソ」ポリペプチドは、天然Ｌ－アミノ酸配列と比較して逆転したアミノ酸配列を有し、（アミノ酸サブユニットのα中心キラリティーが反転した）Ｄ－アミノ酸から構成されており、その結果、本来のＬ－アミノ酸ペプチドに類似する側鎖トポロジーを維持するのに役立つ。

本明細書中で使用される「保存的置換」という用語は、１つ以上のアミノ酸を別の生物学的に類似する残基に置き換えることを表す。例としては、類似する特質を有するアミノ酸残基、例えば、小さなアミノ酸、酸性アミノ酸、極性アミノ酸、塩基性アミノ酸、疎水性アミノ酸及び芳香族アミノ酸の置換が挙げられる。ペプチド及びタンパク質における表現型としてサイレントな置換に関するさらなる情報については、例えば、Ｂｏｗｉｅ ｅｔ．ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１３０６－１３１０（１９９０）を参照されたい。以下の表では、アミノ酸の保存的置換を物理化学特性によって分類しており、Ｉは中性及び／または親水性、ＩＩは酸及びアミド、ＩＩＩは塩基性、ＩＶは疎水性、Ｖは芳香族の嵩高いアミノ酸である。

以下の表では、アミノ酸の保存的置換を物理化学特性によって分類しており、ＶＩは中性または疎水性、ＶＩＩは酸性、ＶＩＩＩは塩基性、ＩＸは極性、Ｘは芳香族である。

タンパク質機能に影響を及ぼさない保存的なヌクレオチド及びアミノ酸置換を同定する方法は当技術分野でよく知られている（例えば、Ｂｒｕｍｍｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．３２：１１８０－１１８７（１９９３）、Ｋｏｂａｙａｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１２（１０）：８７９－８８４（１９９９）、及びＢｕｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４：４１２－４１７（１９９７）を参照されたい）。

２つ以上の核酸またはポリペプチドに関して「同一な」または「同一性」パーセントという用語は、２つ以上の配列または部分配列が同じであること、または任意の保存的アミノ酸置換を配列同一性の一部とみなさずに最大の一致を得るべく比較及び（必要に応じてギャップを導入する）アラインメントを行ったときに同じヌクレオチドもしくはアミノ酸残基の指定の百分率を有することを意味する。同一性パーセントは、配列比較ソフトウェアもしくはアルゴリズムを使用して、または目視検査によって測定され得る。アミノ酸またはヌクレオチド配列のアラインメントを得るために使用され得る様々なアルゴリズム及びソフトウェアが当技術分野で知られている。

配列アラインメントアルゴリズムの１つのそのような非限定的な例は、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，８７：２２６４－２２６８（１９９０）に記載されており、これは、Ｋａｒｌｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９０：５８７３－５８７７（１９９３）において改変されており、ＮＢＬＡＳＴ及びＸＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，２５：３３８９－３４０２（１９９１））に組み込まれている。ある実施形態では、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５：３３８９－３４０２（１９９７）に記載されているようなギャップ付きＢＬＡＳＴが用いられ得る。ＢＬＡＳＴ－２、ＷＵ－ＢＬＡＳＴ－２（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，２６６：４６０－４８０（１９９６））、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ－２（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｓｏｕｔｈ Ｓａｎ Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）は、配列を整列させるために使用され得るまた別の公共利用可能なソフトウェアプログラムである。ある実施形態では、２つのヌクレオチド配列の同一性パーセントは、ＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを使用して（例えば、ＮＷＳｇａｐｄｎａ．ＣＭＰ行列、及び４０、５０、６０、７０または９０のギャップ重み、及び１、２、３、４、５または６の長さ重みを使用して）決定される。ある代替実施形態では、２つのアミノ酸配列の同一性パーセントは、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ａｎｄ Ｗｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（４８）：４４４－４５３（１９７０））のアルゴリズムを組み込んだＧＣＧソフトウェアパッケージ内のＧＡＰプログラムを使用して（例えば、ＢＬＯＳＵＭ ６２行列かＰＡＭ２５０行列かのどちらか、及び１６、１４、１２、１０、８、６または４のギャップ重み、及び１、２、３、４、５の長さ重みを使用して）決定され得る。あるいは、ある実施形態では、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列の同一性パーセントは、Ｍｙｅｒｓ ａｎｄ Ｍｉｌｌｅｒ（ＣＡＢＩＯＳ ４：１１－１７（１９８９））のアルゴリズムを使用して決定される。例えば、同一性パーセントは、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）を使用して、及びＰＡＭ１２０を残基表、１２のギャップ長さペナルティ及び４のギャップペナルティと共に使用して決定され得る。当業者であれば、特定のアラインメントソフトウェアによる最大限のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。ある実施形態では、アラインメントソフトウェアのデフォルトパラメータを使用する。同一性を計算するための他の手段としては、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｌｅｓｋ ｅｄ．，１９８８）、Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ（Ｓｍｉｔｈ ｅｄ．，１９９３）、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ １（Ｇｒｉｆｆｉｎ ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ ｅｄｓ．，１９９４）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｇ．ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ，１９８７）、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ（Ｇｒｉｂｓｋｏｖ ｅｔ ａｌ．ｅｄｓ．，１９９１）、及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．，ＳＩＡＭ Ｊ．Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）に記載されている方法が挙げられる。

本明細書中で使用される「ポリヌクレオチド」は、１つ以上の「核酸」、「核酸分子」または「核酸配列」を含み得、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを指し、ＤＮＡ及びＲＮＡを含む。ポリヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、改変されたヌクレオチドもしくは塩基、及び／またはそれらの類縁体、またはＤＮＡもしくはＲＮＡポリメラーゼによってポリマー中に組み込まれ得る任意の基質であり得る。ポリヌクレオチドは、改変されたヌクレオチド、例えばメチル化ヌクレオチド及びその類縁体を含み得る。上記は、ＲＮＡ及びＤＮＡを含めた本明細書中で言及されるあらゆるポリヌクレオチドに当てはまる。

「単離された」分子は、天然にはみられない形態にあるものであり、精製されたものを含む。

「標識」は、「標識付けされた」分子を生成すべく分子に直接的または間接的に結合体化され得る検出可能な化合物である。標識は、それ自体が検出可能であり得（例えば放射性同位体標識または蛍光標識）、あるいは間接的に、例えば基質化合物もしくは組成物の検出可能な化学変化を触媒すること（例えば酵素標識）によって、または他の間接的検出手段（例えばビオチン化）によって検出され得る。

「結合親和性」は、一般に、分子の単一の結合部位とその結合相手との間（例えば、受容体とそのリガンド、抗体とその抗原、二量体を形成する２つのモノマーなど）の非共有結合的相互作用の合計の強さを指す。特に示していない限り、「結合親和性」は、本明細書中で使用される場合、結合対のメンバー間の１：１の相互作用を反映する本質的な結合親和性を指す。分子Ｘのその相手Ｙに対する親和性は大抵、解離定数（Ｋ_Ｄ）によって表され得る。親和性は、本明細書中に記載されているものを含めた当技術分野で知られている一般的な方法によって測定され得る。低親和性結合相手が大抵ゆっくりと結合し、速やかに解離する傾向にあるのに対し、高親和性結合相手は大抵より速やかに結合し、より長い間結合したままとなる傾向にある。

分子のその結合相手に対する親和性またはアビディティーは、当技術分野で知られている任意の好適な方法、例えば、フローサイトメトリー、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、または放射免疫アッセイ（ＲＩＡ）、または速度論（例えば、ＫＩＮＥＸＡ（登録商標）またはＢＩＡＣＯＲＥ（商標）またはＯＣＴＥＴ（登録商標）分析）を用いて実験的に決定され得る。直接的結合アッセイ及び競合的結合アッセイ形式は容易に採用できる。（例えば、Ｂｅｒｚｏｆｓｋｙ ｅｔ ａｌ．，“Ａｎｔｉｂｏｄｙ－Ａｎｔｉｇｅｎ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ，”Ｉｎ Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９８４）、Ｋｕｂｙ，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ：Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）を参照されたい）。特定の結合対相互作用の測定された親和性は、異なる条件（例えば、塩濃度、ｐＨ、温度）の下で測定された場合には変動し得る。それゆえ、親和性及び他の結合パラメータ（例えば、Ｋ_ＤまたはＫｄ、Ｋ_ｏｎ、Ｋ_ｏｆｆ）の測定は、当技術分野で知られているように、結合相手の標準液及び標準緩衝液を使用して行われる。

「活性薬剤」は、生物活性をもたらすことを意図した成分である。活性薬剤は、１つ以上の他の成分と会合した状態にあり得る。ペプチドである活性薬剤を「活性ペプチド」と呼ぶこともある。

活性薬剤の「有効量」は、具体的に示された目的を実行するのに十分な量である。

「医薬組成物」という用語は、活性成分の生物活性が有効となるのを可能にするような形態であり、組成物が投与されることになる対象に対して許容できない毒性を有する付加的成分を何ら含有しない、配合物を指す。そのような組成物は無菌であり得、薬学的に許容される担体、例えば生理食塩水を含み得る。好適な医薬組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸、リン酸またはクエン酸緩衝剤）、界面活性剤（例えばポリソルベート）、安定化剤（例えばポリオールまたはアミノ酸）、保存剤（例えば安息香酸ナトリウム）、及び／または他の慣用されている可溶化剤もしくは分散剤の１つ以上を含み得る。

「阻害する」、「遮断する」及び「抑制する」という用語は互換的に使用され、発生または活性の任意の統計学的に有意な低下を意味し、これには発生または活性を完全に遮断することが含まれる。例えば、「阻害」は、活性または発生の約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％または１００％の低下を意味し得る。「阻害剤」は、プロセス、経路または分子の発生または活性の統計学的に有意な低下をもたらす分子、因子または物質である。

「新生物細胞」または「新生物」は、典型的には、何らかの形態の突然変異／形質転換を経てその結果として同じ種類の正常な細胞または組織に比べて異常に成長したものである。新生物は、形態学的変則性、及び病的増殖を含む。新生物細胞は良性または悪性であり得る。悪性新生物、すなわちがんは、細胞の分化及び配向の喪失を示し浸潤及び転移の特性を有するという点で良性とは区別される。

ＩＩ．ＢＣＬ９模倣ペプチド及び組成物
ＢＣＬ９模倣ペプチド
ＢＣＬ９は、Ｗｎｔ経路を介したシグナル伝達に関与する１４９ｋＤａの真核タンパク質である。ＢＣＬ９は、β－カテニンに結合し、その転写活性を促進する。ＢＣＬ９のβ－カテニン結合性領域または「ＨＤ２ドメイン」は、ＢＣＬ９のアミノ酸３５１～３７４にある２４残基のα－ヘリックス（配列番号１）である。野生型ヒトＢＣＬ９の完全アミノ酸配列はＮＣＢＩ受託番号ＮＰ＿００４３１７．２に示されている。

ペプチドＳＴ－ＢＣ１（配列番号２）は、残基１４と残基１８との間にラクタム架橋を有する天然ＢＣＬ９ ＨＤ２ドメインの環式変異体である。従来の研究では、残基１４と残基１８との間に炭化水素架橋を有するＳＴ－ＢＣ１の類縁体がヒト結腸癌腫細胞においてＷｎｔ転写活性を阻害し、マウスモデルにおいて抗腫瘍活性を呈することが示された（Ｔａｋａｄａ ｅｔ ａｌ．２０１２）。本発明者らは、ＳＴ－ＢＣ１の非保存的な直鎖型変異体が新生物細胞における細胞死を誘発し動物モデルにおいて腫瘍体積を減少させることを発見した。本発明のＢＣＬ９由来ペプチドが野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２領域に対する複数の非保存的アミノ酸置換を有しながら、新生物細胞を特異的に指向し殺滅する能力を保持している、という発見は、本発明よりも前には予測し得なかったことである。さらには、レトロインベルソ変異体は、活性を有していただけでなく、ＳＴ－ＢＣ１及び直鎖型「Ｌ」変異体と比較して同程度の活性を有していたが、これもまた予測し得なかったことである。

本発明は、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域を有し、任意選択的に細胞膜透過性領域を有するＢＣＬ９模倣ペプチドを提供する。本発明のＢＣＬ９ペプチドは、それが導入された細胞において野生型ＢＣＬ９活性を妨害または阻害することができる、という意味での「模倣体」である。より具体的には、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、β－カテニンに結合し、β－カテニンに対する天然ＢＣＬ９の結合と競合することができる。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、Ｗｎｔシグナル伝達経路の１つ以上のメンバー、例えば、アキシン、ＣＤ４４、ｃ－Ｍｙｃ、サイクリンＤ１、ＬＥＦ１、ＬＧＲ５、サバイビン及びＶＥＧＦ－Ａの発現を下方制御することができる。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドは、細胞増殖、血管新生及び／または細胞遊走を阻害することができる。ＢＣＬ９活性は、本明細書に記載されている細胞殺滅アッセイを含めた当技術分野で知られているいくつかのアッセイ（Ｋａｗａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ．２００９、ＷＯ２０１７／０６２５１８）のいずれかによって評価され得る。

「改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域」は、野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２領域に由来する配列であって、野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列と比較して少なくとも１つの付加、欠失または置換を有する、当該配列である。改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、好ましくは、配列番号１の少なくとも位置１６～２３に対応しており配列番号１と比較して少なくとも１つの付加、欠失または置換を含んでいるペプチドを含む。改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、例えば、表１に示されるアミノ酸配列を含み得る。基準点として天然ＢＣＬ９ ＨＤ２配列（配列番号１）を示す。配列番号１における置換を下線付きの太字で示す。

改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、レトロインベルソ形態であり得、例えば、Ｄ－アミノ酸配列Ｘ_１ＬＸ_２Ｘ_３ＱＬＸ_４Ｘ_５ＬＸ_６Ｘ_７ＬＡ（配列番号１４２）を有し得、ここで、位置１～１３にある各アミノ酸は独立して、表２に示されるものから選択される。

表２に示されるＤ－アミノ酸ＨＤ２ドメイン配列において、位置４または位置８のうちの１つのみがアラニンとなり得、つまり、位置４がＡである場合には位置８はＡではなく、その逆も同様である。ＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、任意選択的に、Ｆ、１－Ｎａｌ、２－Ｎａｌ、Ｒ及びＷからなる群から選択されるＤ－アミノ酸またはＬ－アミノ酸を位置－１に含み得る。さらには、ＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、任意選択的に、Ｆ、１－Ｎａｌ、２－Ｎａｌ及びＷからなる群から選択されるＤ－アミノ酸またはＬ－アミノ酸を位置－２に含み得る。一実施形態では、位置－１がＲである場合、位置１はＦもしくはＷである、及び／または位置－２はＦ、１－Ｎａｌ、２－ＮａｌもしくはＷである。

レトロインベルソＢＣＬ９ ＨＤ２領域の具体例を表３に示す。基準点として野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２領域の部分のレトロインベルソ配列（配列番号７）を示す。配列番号７における置換を下線付きの太字で示す。

改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、配列番号１の完全レトロインベルソ配列に対応するさらなるＤ－アミノ酸を含み得る。例えば、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、Ｄ－アミノ酸配列

を含み得、ここで、レトロインベルソ野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列に対する置換及び付加は下線付きの太字で示されている。

改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、ペプチド中の１つ以上のアミノ酸がＬ体であり１つ以上のアミノ酸がＤ体であるような、キラリティーが混交するアミノ酸を含み得る。例えば、Ｌ－ペプチドは１つ以上のＤ－アミノ酸を含み得る。同様に、レトロインベルソＤ－ペプチドは、１つ以上のＬ－アミノ酸を含み得る。ある実施形態では、ＢＣＬ９ ＨＤ２領域は、

からなる群から選択される配列を有し、ここで、下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表し、レトロインベルソ野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列（配列番号７）に対する置換及び付加は下線付きの太字で示されている。

これらの配列の変異体も本発明の範囲に含まれる。本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、本明細書に開示される配列との同一性が少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％であるＨＤ２領域を有し得る。

ＢＣＬ９模倣ペプチドが別の活性ペプチド、例えば細胞膜透過性領域またはＲＧＤ様配列を含む実施形態では、活性ペプチドは、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域に機能可能に連結されている。いくつかの実施形態では、活性ペプチドは、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域に共有結合で、例えば、ペプチド結合、ジスルフィド結合、チオエーテル結合または当技術分野で知られているリンカーによって連結されている。例示的なリンカーとしては、置換アルキル、置換シクロアルキル、ポリエチレングリコール及びその誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。リンカーは、ペプチドが細胞内に送達された後に切断可能となるものであり得る。活性ペプチドと改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域とがアミド結合によって直接連結されたものを「融合体」と呼ぶことがある。融合体は、活性ペプチドに関して上に述べたアミノ酸リンカー配列を、活性ペプチドと改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域との間に含有し得る。活性ペプチドは、改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域のＮ末端もしくはＣ末端に、または残基側鎖を介して連結され得る。活性ペプチド及び改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域は同じまたは反対のキラリティーを有し得る。

本発明の細胞膜透過性ＢＣＬ９模倣ペプチドは、本明細書に開示される細胞膜透過性の及び改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域の任意の組合せを含み得る。そのようなペプチドの非限定的な例を表４に示す。細胞膜透過性領域を斜体にしている。ペプチドＢＣＬ－２１は、天然ＢＣＬ９ ＨＤ２配列を含み、細胞増殖の阻害が非効率的である。天然ＢＣＬ９ ＨＤ２配列に対する置換を下線付きの太字で示す。

また、ＢＣＬ９模倣ペプチドのレトロインベルソ形態も含まれる。細胞膜透過性レトロインベルソＢＣＬ９模倣ペプチドの例示的実施形態を表５に示す。

細胞膜透過性及びＲＧＤ様領域を斜体にしている。レトロインベルソ野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列（配列番号７）に対する置換及び付加は下線付きの太字で示されている。本発明には、表５に示されるＢＣＬ９ ＨＤ２領域と、異なる活性ペプチド、例えば異なる細胞膜透過性領域とを含んだペプチド、及び活性ペプチドを含まず表５に示されるＢＣＬ９－ＨＤ２領域を含んだペプチドも含まれる。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、ペプチド中の１つ以上のアミノ酸がＬ体であり１つ以上のアミノ酸がＤ体であるような、キラリティーが混交するアミノ酸を含み得る。混交するキラリティーを有するＢＣＬ９模倣ペプチドの非限定的な例を表６に示す。

下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す。細胞膜透過性領域を斜体にしている。レトロインベルソ野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列（配列番号７）に対する置換及び付加は下線付きの太字で示されている。本発明には、表６に示されるＢＣＬ９ ＨＤ２領域と、異なる活性ペプチド、例えば異なる細胞膜透過性領域とを含んだペプチド、及び活性ペプチドを含まず表６に示されるＢＣＬ９－ＨＤ２領域を含んだペプチドも含まれる。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドには、本明細書に開示される配列との少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有するペプチドが含まれる。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドの長さは、好ましくは、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９または５０アミノ酸であり、それらの長さのいずれかを端点として有する範囲、例えば１３～３５アミノ酸を含む。

ＢＣＬ９模倣ペプチドは、改変されたＮ末端及び／または改変されたＣ末端を有し得る。例えば、ＢＣＬ９模倣ペプチドは任意選択的に、Ｎ末端アセチル基及び／またはＣ末端アミド基を含み得る。任意選択のＮ末端及び／またはＣ末端基の他の例としては、疎水性基、例えば直鎖型または環式のＣ_２－Ｃ_１８脂肪族または芳香族の炭化水素、ナフチル基、フェニル基、オクタノイル基、及びイソバレリル基を含めたバレリル基が挙げられる。いくつかの実施形態では、ＢＣＬ９模倣ペプチドはペプチドと疎水性基との間にリンカーまたはスペーサーを含む。そのようなリンカーまたはスペーサーとしては、例えば、アミノヘキサン酸、ベータ－アラニン、置換アルキル、置換シクロアルキル、及びポリエチレングリコールが挙げられる。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは任意選択的に環式であり得る。例えば、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、１つ以上のラクタム架橋を含み得る。ラクタム架橋は、必ずというわけではないが好ましくは、３、４、７または８アミノ酸残基の間隔をおいた側鎖の間に作り出される（つまり、ＢｘｘＢ、ＢｘｘｘＢ、ＢｘｘｘｘｘｘＢ、ＢｘｘｘｘｘｘｘＢ）。ラクタム架橋は、例えば、ＡｓｐまたはＧｌｕと、ＬｙｓまたはＯｒｎとの側鎖間に形成され得る。連結を容易にするためにラクタム架橋の部位でアミノ酸置換がなされることがある。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、任意選択的に、精製または検出などのための１つ以上のエピトープ及び／または親和性タグを含み得る。そのようなタグの非限定的な例としては、ＦＬＡＧ、ＨＡ、Ｈｉｓ、Ｍｙｃ、ＧＳＴなどが挙げられる。本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、任意選択的に、１つ以上の標識を含み得る。

ある態様において、本発明は、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドを含み、任意選択的に１つ以上の担体、希釈剤、賦形剤または他の添加剤をさらに含む、組成物、例えば医薬組成物を提供する。

本明細書に提供されるＢＣＬ９模倣ペプチド及び組成物ならびに、任意選択的に使用説明書を含むキットも、本発明の範囲に含まれる。キットは、少なくとも１つの付加的な試薬及び／または１つ以上の付加的な活性薬剤をさらに含有していてもよい。キットは、キットの内容物の意図した用途を表示したラベルを含むのが典型的である。これに関して、「ラベル」という用語は、キット上もしくはキットと共に提供される、または別様にキットに付帯する、任意の記載物または記録物を含む。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、新生物細胞における増殖を阻害する及び／または細胞傷害性を促進するために使用され得る。増殖及び細胞傷害性は、本明細書に記載の細胞殺滅アッセイを含めた既知のアッセイによって測定され得る。

細胞標的化
本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、当技術分野で知られている方法によって標的細胞内に導入され得る。選択される導入方法は、例えば、意図した用途に応じて決まり得る。

場合によっては、ＢＣＬ９模倣ペプチドをコードするＤＮＡまたはＲＮＡは、標的細胞に送達され、そこで発現する。用途にもよるが、送達は任意の好適なベクターを介して成し遂げられ得る。ベクターの例としては、プラスミド、コスミド、ファージ、細菌、酵母ならびに作製ウイルスベクター、例えば、レンチウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス及びエンベロープ偽型化ウイルスを含めたレトロウイルス由来のものが挙げられる。ベクターは、例えば、ナノ粒子、流体力学的送達、電気穿孔、超音波穿孔、リン酸カルシウム沈澱、またはカチオン性ポリマー、例えばＤＥＡＥ－デキストランを用いて細胞内に導入され得る。ベクターを、脂質と複合体化させる、例えばリポソーム中にカプセル封入することもあるし、またはカチオン性縮合剤と会合させることもある。

本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、細胞受容体を利用する機序を介して細胞に送達され得る。そのような機序の例としては、抗体－薬物複合体、キメラ抗原受容体、多重抗原提示（ＭＡＰ）システム、及びインテグリン標的化、ＲＧＤ様配列が挙げられる。ＲＧＤ様配列の例としては、ＧＲＧＤＳ（配列番号２８）及びＧＲＧＤＮＰ（配列番号２９）が挙げられる。本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、本明細書に記載されるように、または当技術分野で知られている任意の方法によって連結された、１つ以上のＲＧＤ様配列、例えば、２つ、３つ、４つまたは５つのＲＧＤ様配列を含み得る。１つ以上のＲＧＤ様配列（複数可）は、ＢＣＬ９ ＨＤ２領域のＮ末端側またはＣ末端側に組み込まれ得る。そのようなＲＧＤ様配列もまた、互い及びＢＣＬ９ ＨＤ２領域に対して独立して、レトロインベルソ形態であってもよい。レトロインベルソＲＧＤ様配列の１つの詳しい例はＰＳＤＧＲＧ（配列番号７５）である。あるいは、ＢＣＬ９模倣ペプチドをベシクル、例えばエキソソームもしくはリポソーム、またはミセルの中にカプセル封入して細胞に送達してもよい。ＢＣＬ９模倣ペプチドを細胞内に導入するための別の方法は、環化によるもの、例えば炭化水素ステープルを用いるもの（Ｂｅｒｎａｌ ｅｔ ａｌ．２００７、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．２０１６）、または当技術分野で知られている他の環化方法である。

本発明のあるＢＣＬ９模倣ペプチドは、細胞膜透過性ドメインまたは細胞膜透過性ペプチド（ＣＰＰ）を含む。「細胞膜透過性ドメイン」、「細胞膜透過性領域」及び「細胞膜透過性ペプチド」という用語は本明細書中で互換的に使用される。

ＣＰＰは、細胞膜を横切ることができる短い（典型的には約６～４０アミノ酸の）ペプチドである。多くのＣＰＰは、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切ることができる。いくつかの実施形態では、ＣＰＰは長さが７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８または３９アミノ酸であり、それらの長さのいずれかを端点として有する範囲、例えば１０～３０アミノ酸を含む。ＣＰＰは、共有結合または非共有結合で連結された分子積荷、例えば、ポリペプチド、ポリヌクレオチド及びナノ粒子を、細胞膜及びＢＢＢをまたいで輸送する能力を有する。移行は、移行経由でエンドサイトーシスによるものまたはエネルギーに無関係なもの（例えばエンドサイトーシスによらないもの）であり得る。文献の中で数々のＣＰＰが記載され特性評価されている（例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｅｌｌ－Ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ （２ｄ ｅｄ．Ｕｌｏ Ｌａｎｇｅｌ ｅｄ．，２００７）、Ｈｅｒｖｅ ｅｔ ａｌ．２００８、Ｈｅｉｔｚ ｅｔ ａｌ．２００９、Ｍｕｎｙｅｎｄｏ ｅｔ ａｌ．２０１２、Ｚｏｕ ｅｔ ａｌ．２０１３、Ｋｒａｕｔｗａｌｄ ｅｔ ａｌ．２０１６を参照されたい）。監修されたＣＰＰのデータベースがｃｒｄｄ．ｏｓｄｄ．ｎｅｔ／ｒａｇｈａｖａ／ｃｐｐｓｉｔｅにて管理されている（Ｇａｕｔａｍ ｅｔ ａｌ．２０１２）。

核局在化配列（ＮＬＳ）と呼称されるペプチドは、ＣＰＰのサブセットである。古典的なＮＬＳは、１つ（一元）または２つ（二元）の塩基性アミノ酸領域を含有する。古典的な一元及び二元ＮＬＳのコンセンサス配列はそれぞれＫ（Ｋ／Ｒ）Ｘ（Ｋ／Ｒ）（配列番号３０）及び（Ｋ／Ｒ）（Ｋ／Ｒ）Ｘ_{１０－１２}（Ｋ／Ｒ）_３／５（配列番号３１）であり、ここで、３／５は、５連続アミノ酸のうちの少なくとも３つがリジンまたはアルギニンであることを表す（Ｋｏｓｕｇｉ ｅｔ ａｌ．２００９）。ＳＶ４０大型Ｔ抗原からのＮＬＳ配列ＰＫＫＫＲＫＶ（配列番号５７）が古典的な一元ＮＬＳの一例である一方、ヌクレオプラスミンからのＮＬＳ配列ＫＲＰＡＡＴＫＫＡＧＱＡＫＫＫ（配列番号４４）は古典的な二元ＮＬＳの一例である（Ｌａｎｇｅ ｅｔ ａｌ．２００７、Ｋｏｓｕｇｉ ｅｔ ａｌ．２００９）。非古典的ＮＬＳ、例えば、リボ核タンパク質（ＲＮＰ）ｈｎＲＮＰ Ａ１、ｈｎＲＮＰ Ｋ、及びＵ ｓｎＲＮＰからのものが数多く存在する（Ｍａｔｔａｊ ｅｔ ａｌ．１９９８）。

本発明に使用するのに適するＣＰＰの非限定的な例としては、タンパク質に由来するペプチド、例えば、Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａのａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ転写因子（ペネトラチンならびにその誘導体ＲＬ－１６及びＥＢ１）由来のもの（Ｄｅｒｏｓｓｉ ｅｔ ａｌ．１９９８、Ｔｈｏｒｅｎ ｅｔ ａｌ．２０００、Ｌｕｎｄｂｅｒｇ ｅｔ ａｌ．２００７、Ａｌｖｅｓ ｅｔ ａｌ．２００８）、ＨＩＶ－１トランス転写活性化因子（Ｔａｔ）由来のもの（Ｖｉｖｅｓ ｅｔ ａｌ．１９９７、Ｈａｌｌｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．２００１）、狂犬病ウイルス糖タンパク質（ＲＶＧ）由来のもの（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．２００７）、単純ヘルペスウイルスＶＰ２２由来のもの（Ｅｌｌｉｏｔｔ ｅｔ ａｌ．１９９７）、抗菌プロテグリン１（ＳｙｎＢ）由来のもの（Ｒｏｕｓｓｅｌｌｅ ｅｔ ａｌ．２００１）、ラットインスリン１遺伝子エンハンサータンパク質（ｐＩＳ１）由来のもの（Ｋｉｌｋ ｅｔ ａｌ．２００１、Ｍａｇｚｏｕｂ ｅｔ ａｌ．２００１）、マウス血管内皮カドヘリン由来のもの（ｐＶＥＣ）（Ｅｌｍｑｕｉｓｔ ｅｔ ａｌ．２００１）、ヒトカルシトニン（ｈＣＴ）由来のもの（Ｓｃｈｍｉｄｔ ｅｔ ａｌ．１９９８）、及び線維芽細胞成長因子４（ＦＧＦ４）由来のもの（Ｊｏ ｅｔ ａｌ．２００５）が挙げられる。本発明に使用するのに適するＣＰＰとしてはまた、合成及びキメラペプチド、例えば、トランスポータン（ＴＰ）及びその誘導体（Ｐｏｏｇａ ｅｔ ａｌ．１９９８、Ｓｏｏｍｅｔｓ ｅｔ ａｌ．２０００）、膜移行配列（ＭＴＳ）（Ｂｒｏｄｓｋｙ ｅｔ ａｌ．１９９８、Ｌｉｎｄｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ．２０００、Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．２００１）、例えばＭＰＳペプチド（融合配列系ペプチドまたはＦＢＰとしても知られる）（Ｃｈａｌｏｉｎ ｅｔ ａｌ．１９９８）、配列シグナル系ペプチド（ＳＢＰ）（Ｃｈａｌｏｉｎ ｅｔ ａｌ．１９９７）、モデル両親媒性ペプチド（ＭＡＰ）（Ｏｅｈｌｋｅ ｅｔ ａｌ．１９９８、Ｓｃｈｅｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．１９９９、Ｈａｌｌｂｒｉｎｋ ｅｔ ａｌ．２００１）、移行ペプチド２（ＴＰ２）（Ｃｒｕｚ ｅｔ ａｌ．２０１３）、ＭＰＧ（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．１９９７、Ｋｗｏｎ ｅｔ ａｌ．２００９）、Ｐｅｐ－１（Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．２００１、Ｍｕｎｏｚ－Ｍｏｒｒｉｓ ｅｔ ａｌ．２００７）、ならびにポリアルギニン（例えば、Ｒ_７－Ｒ_１２（配列番号１４４））（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ ｅｔ ａｌ．２０００、Ｗｅｎｄｅｒ ｅｔ ａｌ．２０００、Ｆｕｔａｋｉ ｅｔ ａｌ．２００１、Ｓｕｚｕｋｉ ｅｔ ａｌ．２００２）も挙げられる。限定はしないが代表的な配列を表７に示す。

ＣＰＰの機能は配列特異的な相互作用ではなくその物理特性に依存するため、それは、表７に示されているもの及び／または当技術分野で知られているもののように、逆の配列及び／または逆のキラリティーを有することができる。例えば、ＣＰＰのレトロインベルソ形態（逆の配列及び逆のキラリティー）は本発明に使用するのに適している。レトロインベルソＣＰＰの例としては、Ｄ－アミノ酸配列ＫＫＷＫＭＲＲＮＱＦＷＩＫＩＱＲ（配列番号７１）、ＫＫＷＫＭＲＲＮＱＦＷＬＫＬＱＲ（配列番号７２）、ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ（配列番号７３）、ＫＬＴＰＶ（配列番号７４）またはＯＬＴＰＶ（配列番号１４３）を有するものが挙げられる。細胞膜及び／またはＢＢＢを横切る能力を保持する１つ以上のアミノ酸付加、欠失及び／または置換を有するこれらの配列の変異体も、本発明に使用するのに適している。本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドは、表７に示される例示的配列と少なくとも約６０％、６１％、６２％、６３％、６４％、６５％、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を有する細胞膜透過性ドメインを含み得る。細胞膜透過を媒介するＣＰＰの能力にアミノ酸付加（複数可）、欠失（複数可）及び／または置換（複数可）が及ぼす影響は、当技術分野で知られている方法を用いて試験され得る。

ＩＩＩ．調製方法
本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドを、例えば固相ペプチド合成もしくは溶液法ペプチド合成を用いて化学合成することができ、または組換え法を用いて発現させることができる。合成または発現をペプチドの断片として起こさせて、その後にこれらを化学的あるいは酵素的に結合させてもよい。

したがって、本発明のＢＣＬ９模倣ペプチドをコードする核酸分子も提供される。そのような核酸は、オリゴヌクレオチド合成装置を使用して化学合成によって構築され得る。本発明の核酸分子は、所望のＢＣＬ９模倣ペプチドのアミノ酸配列、及び組換えＢＣＬ９模倣ペプチドを産生することになる宿主細胞で有利となるコドンの選択に基づいて設計され得る。関心対象のＢＣＬ９模倣ペプチドをコードする核酸分子を合成するために標準的な方法が適用され得る。

特定のＢＣＬ９模倣ペプチドをコードする核酸は、調製され次第、発現ベクター中に挿入され得、所望の宿主におけるペプチドの発現に適する発現制御配列に機能可能に連結され得る。ＢＣＬ９模倣ペプチドの高い発現レベルを得るために、核酸を、選択された発現宿主において機能する転写及び翻訳発現制御配列に機能可能に連結するまたは会合させることができる。

当技術分野で知られているいずれのものに対しても、多様な発現宿主／ベクターの組合せが採用され得る。真核生物宿主のための有用な発現ベクターとしては、例えば、ＳＶ４０、ウシパピローマウイルス、アデノウイルス及びサイトメガロウイルスからの発現制御配列を含むベクターが挙げられる。細菌宿主のための有用な発現ベクターとしては、既知の細菌プラスミド、例えば、ｐＣＲ１、ｐＢＲ３２２、ｐＭＢ９及びそれらの誘導体を含めたＥ．ｃｏｌｉ由来のプラスミド、より広い宿主範囲のプラスミド、例えばＭ１３、ならびに繊維状一本鎖ＤＮＡファージが挙げられる。

好適な宿主細胞としては、原核生物、酵母、昆虫、または適切なプロモーターの制御下にある高等真核細胞が挙げられる。原核生物としては、グラム陰性またはグラム陽性生物、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたは桿菌が挙げられる。高等真核細胞は、樹立されたもの、または哺乳動物から得られた細胞株であり得、この例としては、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ、２９３細胞、ＣＯＳ－７細胞、Ｌ細胞、Ｃ１２７細胞、３Ｔ３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＨｅＬａ細胞及びＢＨＫ細胞が挙げられる。無細胞移行系を採用することもできる。

本開示の実施形態は、以下の非限定的な例を参照することによってさらに定義され得る。本開示の範囲から逸脱することなく材料及び方法の両方に対する多くの改変形態が実施され得ることは、当業者には明らかであろう。

実施例１．ＢＣＬ９ペプチドは試験管内でがん細胞において抗増殖活性を呈する
本発明者らは、細胞膜透過領域及びＢＣＬ９ ＨＤ２ドメインを含有するペプチドのパネルを生成し、その活性を、以前に記載がなされている環式ペプチド（Ｔａｋａｄａ ｅｔ ａｌ．２０１２）、ＳＴ－ＢＣ１と比較した。本実施例の中で述べるＢＣＬ９ペプチドを表８にまとめる。

ＳＴ－ＢＣ１は、太字の下線付きの残基の間にラクタム架橋を含有する。その他の５つのペプチドは、斜体で示されたＴＡＴ細胞膜透過性領域を有する直鎖型のものである。ペプチドＢＣＬ－２１が天然ＨＤ２ドメインを含有する一方、ペプチドＢＣＬ－２２～２５の各々は、天然ＢＣＬ９ ＨＤ２ドメインにアミノ酸置換を有する。ペプチドＢＣＬ－２５は、置換に加えて、天然配列と比較して短くされたＨＤ２ドメインも有する。

２．５×１０^４細胞／ウェルの密度に定めたＭＣＦ－７乳癌細胞を含む１５０μＬのＭＥＭ培地＋１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）が入った９６ウェルディッシュ。凍結乾燥させたＢＣＬ９ペプチドを２７０ｍＭのトレハロース緩衝液で１０ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成し、５０μＬの体積を各ウェルに加えて終濃度範囲を２．５～４０μＭにした。３７℃で９６時間、細胞をＢＣＬ９ペプチドとインキュベートした。

細胞生存能を、製造業者の指示に従ってＲｏｃｈｅ ＭＴＴ細胞増殖アッセイキットを使用する分光測光法によって定量した。手短に述べると、細胞をＰＢＳで洗浄し、１０％のＦＢＳと１％のペニシリン／ストレプトマイシンと１％の非必須アミノ酸とを含む新鮮なＭＥＭ培地に１０μＬのＭＴＴ試薬を加えたものの中で４時間、３７℃でインキュベートした。４時間後、１００μＬの可溶化溶液を添加し、細胞を一晩、二酸化炭素を５％として３７℃でインキュベートした。ＯＤ６５０ｎｍを基準としてＯＤ５７０ｎｍで吸光度を測定した。吸光度は生細胞数に比例する。未処理対照に対する相対的な吸光度の百分率を定量し、細胞生存能％として表した。

天然ＢＣＬ９ ＨＤ２ドメイン配列を有するＢＣＬ－２１ではなく、本発明の改変型ＢＣＬ９ペプチドは、ＭＣＦ７乳癌細胞においてペプチドＳＴ－ＢＣ１に比べて等しいまたはより大きな抗増殖活性を実証した（ＥＣ_５０値＜１０μＭ）（図１）。機能アッセイにおいて、ＥＣ_５０は、生物学的応答をその最大値の５０％分だけ減少させる濃度である。ＢＬＣ９ペプチドの場合、ＥＣ_５０は、細胞生存能をその最大値の５０％分だけ減少させる濃度として測定される。ＥＣ_５０は、当技術分野で知られている任意の数の手段によって算出され得る。

実施例２．レトロインベルソＢＣＬ９ペプチドは試験管内でがん細胞において抗増殖活性を呈する
本発明者らはレトロインベルソペプチドを調製した：Ｄ－アミノ酸配列

を有するＢＣＬ－２６、及びＤ－アミノ酸配列

を有するＢＣＬ－２７。Ｂａｘ阻害ペプチドに由来する細胞膜透過性領域は斜体で示されている。ＢＣＬ－２６では、ＨＤ２ドメインの配列は１１アミノ酸だけ短くされており、天然配列と比較して２つの位置において置換されている。ＢＣＬ－２７では、ＨＤ２ドメインの配列は１１アミノ酸だけ短くされており、天然配列と比較して６つの位置において置換されており、付加的なＮ末端トリプトファンを含有する。

本発明者らは、ＨＬ６０前骨髄球性白血病細胞におけるアッセイを用いてペプチドＢＣＬ－２６及びＢＣＬ－２７の細胞傷害性を調べた。９６ウェルディッシュの中に入れた１５０μＬのＲＰＭＩ＋１．５％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）の中のＨＬ６０ＰＭＬ懸濁細胞の密度を３．５×１０^３細胞／ウェルに定めた。２０ｍＭのＨｉｓ、ｐＨ７．５で１０ｍｇ／ｍＬの濃度に再構成したＢＣＬ－２６またはＢＣＬ－２７を５０μＬの体積で各ウェルに加えて０～８０μＭの終濃度範囲にした。３７℃で４８時間にわたって細胞をペプチドとインキュベートした。細胞生存能を、ａｂｃａｍアネキシンＶ ＦＩＴＣアポトーシス検出キットを使用するフローサイトメトリーによって定量した。手短に述べると、細胞をＰＢＳで洗浄し、アネキシンＶ ＦＩＴＣ及びヨウ化プロピジウム（ＰＩ）を含有する１ｘのアッセイ用緩衝液の中に再懸濁させた。アネキシンＶはアポトーシス細胞を検出し、ＰＩは死細胞を染色する。染色後にアポトーシス細胞は緑色の蛍光を示し、死細胞は赤色及び緑色の蛍光を示し、生細胞は蛍光をほとんどまたは全く示さない。細胞を側方散乱（ＳＳＣ）に対する前方散乱（ＦＳＣ）に基づいて分析のために選択し、ＦＩＴＣ信号検出器を使用してアネキシンＶ－ＦＩＴＣ結合を検出するＢＤ Ａｃｃｕｒｉ Ｃ６ Ｐｌｕｓフローサイトメータ（Ｅｘ＝４８８ｎｍ、Ｅｍ＝５３０ｎｍ）によって分析し、ＰＩ染色をフィコエリスリン発光信号検出器によって分析した。アネキシンＶ^低及びＰＩ^低の百分率を定量し、生存能％として表した。レトロインベルソペプチドは、実施例１で試験した標準ペプチドと同程度の活性を有していた（図２Ａ～２Ｂ）。

本発明者らは、さらなるレトロインベルソ及び混交キラリティーＢＣＬ９模倣ペプチドの細胞傷害性を、ＨＬ６０細胞において上記アッセイを用いて調べた。結果を表９に示す。

下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す。レトロインベルソ野生型ＢＣＬ９ ＨＤ２配列（配列番号７）と比較したときの置換及び付加は下線付きの太字で示されている。細胞膜透過性及びＲＧＤ様領域を斜体にしている。予想されるように、ＢＣＬ－１２は細胞膜透過のための配列が欠如しているために細胞傷害活性を何ら呈さなかった。

ＢＣＬ－１３４による細胞傷害活性の欠如は、配列番号７と比較してＨＤ２ドメインの位置４または位置８の少なくとも１つにおいて正に帯電したアミノ酸が必要であることを示している。（ＢＣＬ－１３３の活性をＢＣＬ－１３４の活性と比較されたい。）

ＢＣＬ－１３８による細胞傷害活性の欠如は、ＨＤ２ドメインの２つのＮ末端アミノ酸のうちの少なくとも１つが疎水性であることの必要性を示している。（ＢＣＬ－９１ｂの活性をＢＣＬ－１３８の活性を比較されたい。）

実施例３．レトロインベルソＢＣＬ９ペプチドは生体内で抗腫瘍活性を呈する
この実験では、本発明者らは、ＭＣＦ７皮下腫瘍モデルにおいて腫瘍体積に対するペプチドＢＣＬ－２６の影響を調べた。手短に述べると、マトリゲル中に１：１で懸濁させた２×１０^６個のＭＣＦ７乳癌細胞をＮＵ／Ｊマウスの腋窩への皮下注射によって移植した。ペプチドＢＣＬ－２６を１２．５ｍｇ／ｋｇの用量で週に３回、３週間にわたって皮下注射によって投与した。投薬は腫瘍接種後２日目に約２５ｍｍ^３の平均出発腫瘍体積で開始した。ペプチドＢＣＬ－２６はビヒクルと比較して腫瘍体積を有意に減少させた（図３Ａ）。

本発明者らはまた、樹立された腫瘍においてもＢＣＬ９模倣ペプチドの影響を調べた。ＭＣＦ７細胞を上記のとおりにマウスに移植した。ペプチドＢＣＬ－８７を５ｍｇ／ｋｇの用量で週に３回、３週間にわたって皮下注射によって投与した。投薬は腫瘍接種後２１日目に約４７０ｍｍ^３の平均出発腫瘍体積で開始した。ペプチドＢＣＬ－８７はビヒクルと比較して腫瘍体積を有意に減少させた（図３Ｂ）。

本発明者らはさらに、樹立された腫瘍において、異なる濃度の模倣ペプチドの影響を調べた。ＭＣＦ７細胞を上記のとおりにマウスに移植した。ペプチドＢＣＬ－２７及びＢＣＬ－８７を１ｍｇ／ｋｇまたは５ｍｇ／ｋｇの用量で週に３回、３週間にわたって皮下注射によって投与した。投薬は腫瘍接種後１４日目に約３４０ｍｍ^３の平均出発腫瘍体積で開始した。どちらのペプチドも、ビヒクル及びペプチド対照ＢＣＬ－１３４と比較して腫瘍体積を有意に減少させた（図３Ｃ）。
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Ｍｕｎｏｚ－Ｍｏｒｒｉｓ ＭＡ ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｃａｒｒｉｅｒ Ｐｅｐ－１ ｆｏｒｍｓ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅ ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３５５：８７７－８８２（２００７）。
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Ｐａｔｇｉｒｉ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｂｏｎｄ ｓｕｒｒｏｇａｔｅ ａｐｐｒｏａｃｈ ｆｏｒ ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｈｏｒｔ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｉｎ ａｌｐｈａ ｈｅｌｉｃａｌ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ．Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．４１：１２８９－１３００（２００８）。
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Ｒｏｕｓｓｅｌｌｅ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ ｖｉａ ａ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｖｅｃｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｔｒａｔｅｇｙ：ｓａｔｕｒａｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２９６：１２４－１３１（２００１）。
Ｓａｍｐｉｅｔｒｏ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｏｆ ａ β－Ｃａｔｅｎｉｎ／ＢＣＬ９／Ｔｃｆ４ Ｃｏｍｐｌｅｘ．Ｍｏｌｅｃ．Ｃｅｌｌ ２４：２９３－３００（２００６）。
Ｓｃｈａｆｍｅｉｓｔｅｒ ＣＥ，ｅｔ ａｌ．Ａｎ Ａｌｌ－Ｈｙｄｒｏｃａｒｂｏｎ Ｃｒｏｓｓ－Ｌｉｎｋｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ ｆｏｒ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｔｈｅ Ｈｅｌｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｍｅｔａｂｏｌｉｃ Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１２２：５８９１－５８９２（２０００）。
Ｓｃｈｅｌｌｅｒ Ａ，ｅｔ ａｌ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ ｏｆ ａｌｐｈａ－ｈｅｌｉｃａｌ ａｍｐｈｉｐａｔｈｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｊ．Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｃｉ．５：１８５－１９４（１９９９）。
Ｓｃｈｍｉｄｔ ＭＣ，ｅｔ ａｌ．Ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ ｉｎ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｎａｓａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ ｉｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｅｌｆ ａｓｓｅｍｂｌｙ ｉｎ ｌｉｐｉｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３７：１６５８２－１６５９０（１９９８）。
Ｓｏｏｍｅｔｓ Ｕ，ｅｔ ａｌ．Ｄｅｌｅｔｉｏｎ ａｎａｌｏｇｕｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ Ａｃｔａ １４６７：１６５－１７６（２０００）。
Ｓｕｚｕｋｉ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｍｍｏｎ ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚａｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ａｍｏｎｇ ａｒｇｉｎｉｎｅ－ｒｉｃｈ ｐｅｐｔｉｄｅｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２４３７－２４４３（２００２）。
Ｔａｋａｄａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｔａｒｇｅｔｅｄ Ｄｉｓｒｕｐｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＢＣＬ９／β－ｃａｔｅｎｉｎ Ｃｏｍｐｌｅｘ Ｉｎｈｉｂｉｔｓ Ｏｎｃｏｇｅｎｉｃ Ｗｎｔ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ．Ｓｃｉ．Ｔｒａｎｓｌ．Ｍｅｄ．４：１４８ｒａ１１７（２０１２）。
Ｔｈｏｒｅｎ ＰＥＧ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ Ａｎｔｅｎｎａｐｅｄｉａ ｐｅｐｔｉｄｅ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ａｃｒｏｓｓ ｌｉｐｉｄ ｂｉｌａｙｅｒｓ－ｔｈｅ ｆｉｒｓｔ ｄｉｒｅｃｔ ｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎ．ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．４８２：２６５－６８（２０００）。
Ｖｉｖｅｓ Ｅ，ｅｔ ａｌ．Ａ ｔｒｕｎｃａｔｅｄ ＨＩＶ－１ Ｔａｔ ｐｒｏｔｅｉｎ ｂａｓｉｃ ｄｏｍａｉｎ ｒａｐｉｄｌｙ ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｅｓ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｐｌａｓｍａ ｍｅｍｂｒａｎｅ ａｎｄ ａｃｃｕｍｕｌａｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｎｕｃｌｅｕｓ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１６０１０－１６０１７（１９９７）。
Ｗａｎｇ Ｘ－Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｓｍａｌｌ ｃｙｃｌｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ ｂｏｎｄ．ＡＲＫＩＶＯＣ ｘｉ：１４８－１５４（２００６）。
Ｗｅｎｄｅｒ ＰＡ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅ ｄｅｓｉｇｎ，ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｈａｔ ｅｎａｂｌｅ ｏｒ ｅｎｈａｎｃｅ ｃｅｌｌｕｌａｒ ｕｐｔａｋｅ：ｐｅｐｔｏｉｄ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９７：１３００３－１３００８（２０００）。
Ｚｈａｎ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｃａｎｃｅｒ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ３６：１４６１－１４７３（２０１７）。
Ｚｈａｏ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｏｆ ｃｅｌｌ ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２５４：１３７－４５（２００１）。
Ｚｏｕ ＬＬ，ｅｔ ａｌ．Ｃｅｌｌ－ｐｅｎｅｔｒａｔｉｎｇ ｐｅｐｔｉｄｅ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｃｅｎｔｒａｌ ｎｅｒｖｏｕｓ ｓｙｓｔｅｍ．Ｃｕｒｒ．Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．１１：１９７－２０８（２０１３）。
＊＊＊
以下の特許請求の範囲で本発明についてさらに記載する。

Claims (21)

1. 改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、
   ｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２）、
   ｉｉ．ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号８）、
   ｉｉｉ．ＦＬＭＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号９）、
   ｉｖ．ＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０）、
   ｖ．ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１）、
   ｖｉ．ＦＬＭＥＱＬＲＲＬＴＥＬＡ（配列番号１３）、
   ｖｉｉ．ＦＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１４）、
   ｖｉｉｉ．ＷＬＡＥＱＬＲＲＬＡＥＬＡ（配列番号１５）、
   ｉｘ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＱＬＡ（配列番号１６）、
   ｘ．１－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１７）、
   ｘｉ．ＦＬＬＲＱＩＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１８）、
   ｘｉｉ．ＦＬＬＲＱＬＤＲＬＴＱＬＡ（配列番号１９）、
   ｘｉｉｉ．ＦＬＬＲＱＬＥＲＬＴＱＬＡ（配列番号２０）、
   ｘｉｖ．ＷＷＬＬＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１０２）、
   ｘｖ．２－Ｎａｌ－ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１５）、
   ｘｖｉ．ＦＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１６）、
   ｘｖｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ（配列番号１１７）、
   ｘｖｉｉｉ．ＷＦＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１８）、
   ｘｉｘ．ＷＬＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１１９）、
   ｘｘ．ＷＷＬＥＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２０）、
   ｘｘｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＱＱＬＡ（配列番号１２２）、
   ｘｘｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ（配列番号１２３）、
   ｘｘｉｉｉ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ（配列番号１２４）、
   ｘｘｉｖ．ＷＷＬＡＲＱＬＡＲＬＫＱＬＡ（配列番号１２５）、
   ｘｘｖ．ＷＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＫＬＡ（配列番号１２６）、
   ｘｘｖｉ．ＷＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ（配列番号１２７）、及び
   ｘｘｖｉｉ．ＷＷＬＡＯＱＬＡＯＬＡＱＬＡ（配列番号１４０）
   からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
2. 改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、
   ｉ．Ｆ_ＤＲ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０３）、
   ｉｉ．Ｆ_ＤＲ_Ｌ［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０４）、
   ｉｉｉ．Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０５）、
   ｉｖ．Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＡＬＡ］_Ｄ（配列番号１０６）、
   ｖ．Ｆ_ＤＷ_Ｌ［ＷＬＡＲＱＬＡＡＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０７）、
   ｖｉ．Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０８）、
   ｖｉｉ．Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＲＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１０９）、
   ｖｉｉｉ．Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＲＲＬＡ］_Ｄ（配列番号１１０）、
   ｉｘ．Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＥＲＬＡＲＬＡ］_Ｄ（配列番号１１１）、
   ｘ．Ｆ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１２）、
   ｘｉ．Ｒ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１３）、
   ｘｉｉ．Ｆ_Ｄ－Ｗ_Ｌ－［ＷＬＡＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１１４）、及び
   ｘｉｉｉ．Ｗ_Ｌ－［ＷＬＶＲＱＬＡＲＬＡＱＬＡ］_Ｄ（配列番号１４１）
   〔ここで、下付き文字Ｄ及びＬはアミノ酸のキラリティーを表す〕
   からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
3. 改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、Ｄ－アミノ酸配列ＦＬＭＲＱＩＤＲＬＴＱＬＳ（配列番号７）の変異体を含むＤ－アミノ酸配列であり、前記変異体が、配列番号７の１つ以上の位置において以下：
   ｉ．Ｆ１をＬまたはＷに置換する；
   ｉｉ．Ｍ３をＡ、Ｅ、ＬまたはＶに置換する；
   ｉｉｉ．Ｒ４をＯに置換する；
   ｉｖ．Ｉ６をＬに置換する；
   ｖ．Ｄ７をＡまたはＥに置換する；
   ｖｉ．Ｒ８をＡに置換する；
   ｖｉｉ．Ｔ１０をＡ、Ｋ、ＱまたはＲに置換する；
   ｖｉｉｉ．Ｑ１１をＡ、ＫまたはＲに置換する；
   ｉｘ．Ｓ１３をＡに置換する、
   という改変がなされている、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
4. Ｄ体かＬ体かのどちらかであるＷ、Ｆ、Ｒ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを前記ペプチドのＮ末端にさらに含む、請求項３に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
5. 改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、アミノ酸配列ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＱＴＬＲＤＩＱＲＭＬＦ（配列番号１）の変異体を含み、前記変異体が、配列番号１の１つ以上の位置において以下：
   ｉ．Ｅ７をＲに置換する；
   ｉｉ．Ｒ１１をＥに置換する；
   ｉｉｉ．Ｓ１２をＡに置換する；
   ｉｖ．Ｑ１４をＡまたはＥに置換する；
   ｖ．Ｔ１５をＡに置換する；
   ｖｉ．Ｄ１８をＡまたはＲに置換する；
   ｖｉｉ．Ｉ１９をＬに置換する；
   ｖｉｉｉ．Ｒ２１をＥに置換する；
   ｉｘ．Ｍ２２をＡまたはＬに置換する；
   ｘ．Ｗ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌを位置２５に付加する、
   という改変がなされている、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
6. Ｆ２４がＷ、１－Ｎａｌまたは２－Ｎａｌに置換されている、請求項５に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
7. 配列番号１のＬ１から始めて１～１５連続アミノ酸が切断されている、請求項５または請求項６に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
8. 前記ペプチドが、任意の先行請求項に記載のアミノ酸配列と比較して逆転したアミノ酸配列でＤ－アミノ酸を含む、請求項５～７のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
9. 改変されたＢＣＬ９ α－ヘリカル相同性ドメイン－２（ＨＤ２）領域を含むＢＣＬ９模倣ペプチドであって、前記改変されたＢＣＬ９ ＨＤ２領域が、
   ｉ．ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＳＬＡＴＬＲＡＩＱＲＭＬＦ（配列番号３）、
   ｉｉ．ＬＳＱＥＱＬＲＨＲＥＥＳＬＥＴＬＲＲＩＱＥＭＬＦ（配列番号４）、
   ｉｉｉ．ＬＳＱＥＱＬＥＨＲＥＲＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号５）、及び
   ｉｖ．ＡＬＱＡＬＲＡＩＱＲＡＬＦ（配列番号６）
   からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、前記ＢＣＬ９模倣ペプチド。
10. 細胞膜透過性領域をさらに含み、前記ＢＣＬ９模倣ペプチドが細胞膜透過性ペプチドである、任意の先行請求項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
11. 前記細胞膜透過性領域が、ＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ（配列番号６１）及びＶＰＴＬＫ（配列番号３２）からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、または
    前記細胞膜透過性領域が、ＲＲＲＱＲＲＫＫＲＧＹ（配列番号７３）、ＫＬＴＰＶ（配列番号７４）、ＰＳＤＧＲＧ（配列番号７５）及びＯＬＴＰＶ（配列番号１４３）からなる群から選択されるＤ－アミノ酸配列を有する、
    請求項１０に記載の細胞膜透過性ＢＣＬ９模倣ペプチド。
12. 前記ペプチドが、アセチル、ナフチル、オクタノイル、フェニル及びイソバレリルからなる群から選択されるＮ末端基を含む、任意の先行請求項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
13. 前記ペプチドがＣ末端アミド基を含む、任意の先行請求項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチド。
14. 任意の先行請求項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドを含む組成物。
15. 医薬組成物である、請求項１４に記載の組成物。
16. 請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドまたは請求項１４もしくは請求項１５に記載の組成物を含む、キット。
17. 請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドをコードする核酸分子。
18. 新生物細胞における細胞傷害性を促進する方法であって、
    前記新生物細胞を請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドまたは請求項１４もしくは請求項１５に記載の組成物と接触させること
    を含む、前記方法。
19. 新生物細胞の増殖を阻害する方法であって、
    前記新生物細胞を請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドまたは請求項１４もしくは請求項１５に記載の組成物と接触させること
    を含む、前記方法。
20. 新生物細胞における細胞傷害性を促進するのに使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドまたは請求項１４もしくは請求項１５に記載の組成物。
21. 新生物細胞の増殖を阻害するのに使用するための、請求項１～１３のいずれか１項に記載のＢＣＬ９模倣ペプチドまたは請求項１４もしくは請求項１５に記載の組成物。

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