KR20220019756A - 이중특이적 디아바디의 제약학적 제제 및 그것의 용도 - Google Patents

이중특이적 디아바디의 제약학적 제제 및 그것의 용도 Download PDF

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이안 렌트
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Abstract

본 발명은 이중특이적 일가 디아바디를 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제 ("디아바디 제제"), 및 상기 디아바디를 안정화하고 투여하기 위한 안정화제 수용액에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (DART-A)를 포함하는 디아바디 의약품을 포함하는 그러한 제약학적 제제 (DART-A DP 제제)에 관한 것이다. 발명은 추가로 환자에서 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수형성이상 증후군 (MDS)과 같은 혈액암의 치료에서 그러한 DART-A DP 제제의 용도에 관한 것이다.

Description

이중특이적 디아바디의 제약학적 제제 및 그것의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 미국 특허 출원 일련 번호 62/860,082 (2019년 6월 11일에 출원됨; 계류중) 및 63/030,010 (2020년 5월 26일에 출원됨; 계류중)의 우선권을 주장하며, 이들 출원은 각각 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
서열 목록에 대한 언급
본 출원은 37 C.F.R. 1.821 et seq.에 따라 하나 이상의 서열 목록을 포함하며, 그것은 컴퓨터 판독 가능한 매체에서 개시되고 (파일명: 1301_0156P2-PCT-TW_ST25.txt, 2020년 5월 26일에 작성되었고, 29,754 바이트의 크기임), 그 파일은 전문이 본원에 포함된다.
기술분야
본 발명은 이중특이적 디아바디를 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제 ("디아바디 제제"), 및 상기 디아바디를 안정화하고 투여하기 위한 안정화제 수용액에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 ("DART-A")를 포함하는 디아바디 약물 생성물을 포함하는 그러한 제약학적 제제 ("DART-A DP 제제")에 관한 것이다. 발명은 추가로 환자에서 급성 골수성 백혈병 (acute myeloid leukemia, AML) 또는 골수형성이상 증후군 (myelodysplastic syndrome, MDS)과 같은 혈액암(hematologic malignancy)의 치료에서 그러한 DART-A DP 제제 및 안정화제의 용도에 관한 것이다.
I. 이중특이적 디아바디
비-단일특이적 디아바디는 상이한 에피토프를 발현하는 세포를 공동 결찰하고 공동 국지화하는 그것의 능력으로 인해 단일특이적 자연 항체를 능가하는 상당한 장점을 제공한다. 이중특이적 디아바디는 치료법 및 면역진단을 포함한 광범위한 적용분야를 가진다. 이중특이성은 다양한 적용에서 디아바디의 설계 및 조작에 있어 커다란 유연성을 허용함으로써, 다량체 항원에 대한 증강된 결합력, 상이한 항원의 교차 결합, 및 두 표적 항원의 존재에 의존하는 특정 세포 유형에 대해 지시된 표적화를 제공한다. 증가된 결합가, 낮은 해리율 및 순환으로부터의 신속한 제거 (약 50 kDa 이하에서 작은 크기의 디아바디의 경우)로 인해, 기술분야에 알려져 있는 디아바디 분자는 또한 종양 이미징 분야에서 특별히 사용되는 것으로 나타났다 (Fitzgerald et al. (1997) "Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris", Protein Eng. 10:1221). 특히 중요한 것은 상이한 세포의 공동 결찰, 예를 들어 세포독성 T 세포의 종양 세포에 대한 교차 결합이다 (Staerz et al. (1985) "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells", Nature 314:628-631, and Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody", Protein Eng. 9:299-305).
디아바디 에피토프 결합 도메인은 또한 T 림프구, 천연 살해 (NK) 세포 또는 다른 단핵 세포 상에서 발현되는 CD3, CD16, CD32, 또는 CD64와 같은 면역 이펙터 세포의 표면 결정기에 대해 지시될 수 있다. 많은 연구에서, 이펙터 세포 결정기, 예컨대, Fcγ 수용체 (FcγR)에 대한 디아바디 결합은 또한 이펙터 세포에 의해 활성화되는 것으로 나타났다 (Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody", Protein Eng. 9:299-305; Holliger et al. (1999) "Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T-cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3 x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7 x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins", Cancer Res. 59:2909-2916; 및 PCT 공개 번호. WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; 및 WO 2012/162068). 일반적으로, 이펙터 세포 활성화는 Fc-FcγR 상호작용을 통한 항원 결합된 항체의 이펙터 세포에의 결합에 의해 촉발된다; 그러므로, 이런 관점에서, 디아바디 분자는 그것이 Fc 도메인을 포함하였는지의 여부와 무관하게 (예컨대, 기술분야에 알려져 있는 또는 본원에 예시된 (예컨대, ADCC 검정) 임의의 이펙터 기능 검정에서 검정된 바와 같이) Ig-유사 기능성을 나타낼 수 있다. 종양 및 이펙터 세포에 교차 결합함으로써, 디아바디는 이펙터 세포를 종양 세포와 근접한 곳으로 가져와서 효과적인 종양 사멸을 유도한다 (예컨대, Cao et al. (2003) "Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics", Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197 참고).
그러나, 상기 장점은 현저한 비용이 든다. 그러한 단일특이적 디아바디의 형성은 둘 이상의 뚜렷하고 상이한 폴리펩타이드의 성공적인 어셈블리를 필요로 한다 (즉, 그러한 형성은 디아바디가 상이한 폴리펩타이드 사슬 종의 헤테로다이머화(heterodimerization)를 통해 형성될 것을 필요로 한다). 대조적으로, 단일특이적 디아바디는 동일한 폴리펩타이드 사슬의 호모다이머화(homodimerization)를 통해 형성된다. 비-단일특이적 디아바디를 형성하기 위해서 적어도 2개의 유사하지 않은 폴리펩타이드 (즉, 2개의 폴리펩타이드 종)가 제공되어야 하기 때문에, 그리고 그러한 폴리펩타이드의 호모다이머화가 비활성 분자로 이어지기 때문에 (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588), 그러한 폴리펩타이드의 생성은 동일한 종의 폴리펩타이드 사이의 공유 결합을 방지하는 (즉, 호모다이머화를 방지하는) (Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588), 그리고 그러한 폴리펩타이드의 비공유 회합을 촉진하는 그런 방식으로 달성되어야 한다(예컨대, Olafsen et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications", Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27; Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain", Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992; Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System", Protein Eng. 13(8):583-588; Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672 참고).
그러나, 비공유적으로 회합된 폴리펩타이드로 구성된 이중특이적 디아바디는 불안정하며 비기능성 단량체로 쉽게 분해된다 (예컨대, Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity", J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672 참고).
이런 도전에 직면하여, 안정적인, 공유 결합된 헤테로다이머 비-단일특이적 디아바디가 개발되었다 (예컨대, PCT 공개 번호 WO 2006/113665; WO/2008/157379; WO 2010/080538; WO 2012/018687; 및 WO/2012/162068; Johnson, S. et al. (2010) "Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion", J. Molec. Biol. 399(3):436-449; Veri, M.C. et al. (2010) "Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold", Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943; Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma", Blood 117(17):4542-4551). 그러한 접근법은 하나 이상의 시스테인 잔기를 각각의 사용된 폴리펩타이드 종으로 조작하는 것을 포함한다. 예를 들어, 그러한 구성물의 C-말단에의 시스테인 잔기의 첨가는 폴리펩타이드 사슬 사이의 이황화 결합을 허용하여, 결과적으로 생성된 헤테로다이머를 이가 분자의 결합 특징을 간섭시키지 않으면서 안정화시키는 것으로 나타났다.
안정적인, 기능성 헤테로다이머, 비단일특이적 디아바디의 생성은 세심한 고려 및 사용된 하나 이상의 폴리펩타이드 사슬에서 헤테로다이머 촉진 도메인 및 시스테인 잔기의 배치에 의해 추가로 최적화될 수 있다. 그러한 최적화된 디아바디는 비-최적화된 디아바디보다 고수율로 및 더 큰 활성으로 생성될 수 있다. 본 발명은 그러한 헤테로다이머 디아바디의 보관 및 투여를 위해 특별히 설계되고 최적화된 제제 및 안정화제를 제공하는 문제에 관한 것이다. 발명은 이런 문제를 이중특이적 디아바디, 특히 저용량으로 (예컨대, 약 1μg/kg 이하) 투여되거나 및/또는 저농도 (예컨대, 약 5 μg/mL 이하)를 포함하는 투약 용액의 제조를 필요로 하는 것들, 예컨대 최적화된 CD123 x CD3 디아바디의 투여에 유용한 예시의 디아바디 제제 및 안정화제 용액의 제공을 통해 해결한다.
II. CD123
CD123 (인터류킨 3 수용체 알파, IL-3Ra)은 40 kDa 분자이며 인터류킨 3 수용체 복합체의 일부이다 (Stomski, F.C. et al. (1996) "Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding", Mol. Cell. Biol. 16(6):3035-3046). 인터류킨 3 (IL-3)은 다능 줄기 세포의 적혈구, 골수 세포 및 림프구 전구체로의 조기 분화를 구동한다. CD123은 CD34+ 전용 전구체 상에서 발현되지만 (Taussig, D.C. et al. (2005) "Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia", Blood 106:4086-4092), CD34+/CD38- 정상 조혈 줄기 세포에 의해서는 발현되지 않는다. CD123은 호염기성 세포, 비만 세포, 형질세포양 수지상 세포에 의해 발현되며, 일부는 단핵세포, 대식세포 및 호산성 세포에 의해 발현되고, 호중구 및 거핵세포에 의한 발현은 낮거나 없다. 일부 비-조혈 조직 (태반, 고환의 라이디히 세포, 특정 뇌 세포 요소 및 일부 내피 세포)은 CD123을 발현한다; 그러나, 발현은 대부분 세포질에서 일어난다.
CD123은 백혈병 모세포 및 백혈병 줄기 세포 (LSC)에 의해 발현되는 것으로 보고된다 (Jordan, C.T. et al. (2000) "The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells", Leukemia 14:1777-1784; Jin, W. et al. (2009) "Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK", Blood 113:6603-6610). 인간 정상 전구체 집단에서, CD123은 정상적인 조혈 줄기 세포 (HSC)에 의해서가 아니라 조혈 전구 세포 (HPC)의 하위세트에 의해 발현된다. CD123은 또한 형질세포양 수지상 세포 (pDC) 및 호염기성 세포에 의해 발현되며, 더 적은 정도로, 단핵세포 및 호산성 세포에 의해 발현된다 (Lopez, A.F. et al. (1989) "Reciprocal Inhibition Of Binding Between Interleukin 3 And Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor To Human Eosinophils", Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:7022-7026; Sun, Q. et al. (1996) "Monoclonal Antibody 7G3 Recognizes The N-Terminal Domain Of The Human Interleukin-3 (IL-3) Receptor Alpha Chain And Functions As A Specific IL-3 Receptor Antagonist", Blood 87:83-92; Mu
Figure pct00001
oz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies", Haematologica 86(12):1261-1269; Masten, B.J. et al. (2006) "Characterization Of Myeloid And Plasmacytoid Dendritic cells In Human Lung", J. Immunol. 177:7784-7793; Korpelainen, E.I. et al. (1995) "Interferon-Gamma Upregulates Interleukin-3 (IL-3) Receptor Expression In Human Endothelial Cells And Synergizes With IL-3 In Stimulating Major Histocompatibility Complex Class II Expression And Cytokine Production", Blood 86:176-182).
CD123은 AML 및 MDS를 포함한 광범위한 혈액암에서 악성 세포 상에서 과다발현되는 것으로 보고되었다 (Munoz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies", Haematologica 86(12):1261-1269). CD123의 과다발현은 AML에서 더 빈약한 진단과 관련된다 (Tettamanti, M.S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor", Br. J. Haematol. 161:389-401).
III. CD3
CD3은 4개의 구별되는 사슬로 구성된 T 세포 공동 수용체이다 (Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) "Structural Biology Of The T-Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling", Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(4):a005140; pp. 1-14). 포유류에서, 복합체는 CD3γ 사슬, CD3δ 사슬, 및 2개의 CD3ε 사슬을 함유한다. 이들 사슬은 T 세포 수용체 (TCR)로서 알려져 있는 분자와 회합하여 T 림프구에서 활성화 신호를 생성한다. CD3의 부재 시에, TCR은 적절하게 조립되지 않으며 분해된다 (Thomas, S. et al. (2010) "Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer", Immunology 129(2):170-177). CD3은 모든 성숙한 T 세포의 구성원에 결합되며, 실제로 다른 세포 유형에는 결합하지 않는 것으로 나타난다 (Janeway, C.A. et al. (2005) In: Immunobiology: The Immune System In Health And Disease", 6th ed. Garland Science Publishing, NY, pp. 214- 216; Sun, Z. J. et al. (2001) "Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γ Heterodimer", Cell 105(7):913-923; Kuhns, M.S. et al. (2006) "Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex", Immunity. 2006 Feb;24(2):133-139 참고).
IV. AML 및 MDS
AML 및 MDS는 일반적으로 휴면 상태이며 (즉, 신속하게 분할하는 세포가 아님) 따라서 세포 사멸 (세포자멸사) 및 종래의 화학요법제에 저항하는 백혈병 줄기 세포 (LSC)의 소집단에서 발생하고, 그것에 의해 영속되는 것으로 여겨진다. LSC는 정상인 골수에서 상응하는 정상 HSC 집단에 존재하지 않는 고수준의 CD123 발현에 의해 특징지어진다 (Jin, W. et al. (2009) "Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK", Blood 113:6603-6610; Jordan, C.T. et al. (2000) "The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells", Leukemia 14:1777-1784). CD123은 AML의 45%-95%, 85% of 털세포 백혈병 (Hairy cell leukemia, HCL), 및 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL)의 40%에서 발현된다. CD123 발현은 또한 다수의 다른 악성/전악성과도 관련된다: 만성 골수성 백혈병(만성 골수성 백혈병, CML) 전구 세포 (모세포 위기 CML 포함); 호지킨스 리드 스턴버그 (RS) 세포; 변형된 비호지킨 림프종 (NHL); 일부 만성 림프구성 백혈병 (CLL) (CD11c+); 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL)의 하위세트 (16%, 대부분 미성숙, 대부분 성인), pDC DC2 악성종양 및 CD34+/CD38- MDS 골수 세포 악성종양.
AML은 골수에서 변형된 골수성 전구 세포의 증식 및 축적에 의해 특징지어지며, 궁극적으로 조혈 부전으로 이어지는 클론 질환이다. AML의 발생률은 연령에 따라 증가하며, 고령의 환자가 전형적으로 어린 환자보다 더 나쁜 치료 결과를 가진다 (Robak, T. et al. (2009) "Current And Emerging Therapies For Acute Myeloid Leukemia", Clin. Ther. 2:2349-2370). 유감스럽게도, 현재, AML이 있는 대부분의 환자는 그들의 질환으로 사망한다.
AML에 대한 치료는 초기에 관해(remission)의 유도에 초점을 맞춘다 (유도 요법). 관해가 달성된 후에는, 치료는 그러한 관해를 확보하는 것 (관해후 또는 강화 요법), 일부 경우에, 유지 요법에 초점이 이동한다. AML에 대한 표준 관해 유도 패러다임은 안트라사이클린/시타라빈 조합으로의 화학요법과, 이어지는 강화 화학요법 (일반적으로 유도 기간 중에 사용되었던 것과 동일한 고용량의 약물을 사용함) 또는 환자의 집중 치료를 견디는 능력 및 화학요법만으로 치료될 가능성에 따라 인간 줄기 세포 이식이다 (예컨대, Roboz, G.J. (2012) "Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia", Curr. Opin. Oncol. 24:711-719 참고).
유도 요법에 자주 사용되는 작용제로는 (AraC로도 알려져 있음) 및 안트라사이클린을 들 수 있다. AraC는 DNA 합성을 간섭함으로써 암세포 (및 다른 급속하게 분할하는 정상 세포)를 죽인다. AraC 치료와 관련된 부작용으로는 감소된 백혈구 생성의 결과인 감염에 대한 감소된 내성; 감소된 혈소판 생성의 결과로서 출혈; 및 적혈구의 잠재적 감소로 인한 빈혈을 들 수 있다. 다른 부작용으로는 메스꺼움 및 구토를 들 수 있다. 안트라사이클린 (예컨대, 다우노루비신, 독소루비신, 및 이다루비신)은 DNA 및 RNA 합성의 억제, 고차 구조의 DNA의 파괴, 및 세포 손상 유리 산소 라디칼의 생성을 포함한 여러 작용 모드를 가진다. 안트라사이클린의 가장 중요한 부작용은 심장독성으로, 투여된 평생 용량 및 어느 정도로는 그것의 유용성을 상당히 제한한다.
그러므로, 유감스럽게도, 새롭게 진단된 AML의 치료에서 실질적인 진전에도 불구하고, 20% 내지 40%의 환자가 표준 유도 화학요법으로 관해를 달성하지 못하며, 제1 완전 관해에 돌입한 환자의 50% 내지 70%는 3년 내에 재발하는 것으로 예상된다. 재발시, 또는 내성 질환을 가진 환자의 경우 최적 전략은 불확실한 채로 남아 있다. 줄기 세포 이식이 제1 또는 후속 관해에서 ANL을 가진 환자의 항백혈병 치료법의 가장 효과적인 형태로서 확립되어 있다 (Roboz, G.J. (2012) "Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia", Curr. Opin. Oncol. 24:711-719).
본 발명은 이중특이적 디아바디를 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제 (디아바디 제제), 및 상기 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (DART-A)를 포함하는 디아바디 의약품을 포함하는 그러한 제약학적 제제 (DART-A DP 제제)에 관한 것이다. 발명은 추가로 환자에서 AML 또는 MDS와 같은 혈액암의 치료에서 그러한 DART-A DP 제제 및 안정화제의 용도에 관한 것이다.
상세하게, 발명은 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 디아바디), 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 폴리소르베이트 80 ("PS80")을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제를 제공한다.
발명은 추가적으로 인산 나트륨이 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는, 특히, 인산 나트륨의 농도가 약 10 mM인 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 PS80이 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는, 특히 PS80이 약 0.1 mg/mL의 농도를 가지는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 염화 나트륨이 약 100 mM 내지 약 300 mM, 특히 약 150 mM의 농도를 가지는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 제제가 약 5.5 내지 약 7.0의 pH, 특히 약 6.0D의 pH를 가지는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 제제가 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제가 약 6.0의 pH를 가지는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 디아바디가 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL, 특히 약 0.1 mg/mL의 농도를 가지는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 특히 디아바디가 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제에 관한 것이다. 발명은 추가적으로, 공유 결합된 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이고, 보다 구체적으로 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는, 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제를 제공한다.
발명은 추가적으로 제제가 약 0.1 mg/mL의 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제의 pH가 약 6.0인 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 안정적인 수성 제약학적 제제 중 임의의 것을 포함하는 용기를 제공하며, 특히, 그러한 용기는 무균적으로 충전되는 유리 바이알이다.
발명은 추가적으로 용액이 25℃에서 약 3개월 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 바이알에 무균적으로 충전되는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 2-8℃에서 약 48개월 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 바이알에 무균적으로 충전되는 그러한 안정적인 수성 제약학적 제제의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 안정적인 수성 제약학적 제제 중 임의의 것을 포함하는 밀봉된 포장을 제공한다.
발명은 추가적으로 인산 나트륨, PS80, 벤질 알코올 ("BA"), 및 메틸파라벤 ("MP")을 포함하는 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 인산 나트륨이 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도를 가지며, 특히 인산 나트륨의 농도가 약 20 mM인 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 BA가 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL의 농도를 가지며, 특히 BA의 농도가 약 13.2 mg/mL인 그러한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 MP가 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL의 농도를 가지며, 특히 MP의 농도가 약 4.25 mg/mL인 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 PS80이 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL의 농도를 가지며, 특히 PS80의 농도가 약 0.25 mg/mL인 임의의 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지며, 특히 pH가 약 8.2인 임의의 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 안정화제 용액이 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하고, 용액의 pH가 약 8.2인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 특히 디아바디가 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 그러한 안정화제 수용액에 관한 것이다.
발명은 추가적으로 공유 결합된 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이고 보다 구체적으로 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는, 그러한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3-5일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 5-7일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 억제하거나 방지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 5-7일 동안 미생물 성장을 방지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한을 가지는 바이알 중의 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 안정적인 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 용기를 제공하며, 특히, 그러한 용기는 무균적으로 충전되는 유리 바이알이다.
발명은 추가적으로 그러한 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 밀봉된 포장을 제공한다.
발명은 추가적으로 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는, 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 염화 나트륨이 약 100 mM 내지 약 300 mM, 특히 약 150 mM의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 PS80이 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 특히 약 0.10 mg/mL의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 특히 pH가 6.0인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.10 mg/mL PS80을 포함하고 용액의 pH가 약 6.0인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 특히 디아바디가 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 그러한 안정화제 수용액에 관한 것이다.
발명은 추가적으로 공유 결합된 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이고 보다 구체적으로 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는, 그러한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3-5일 동안 디아바디의 당량체 순도를 유지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 5-7일 동안 디아바디의 당량체 순도를 유지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 억제하거나 방지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 5-7일 동안 미생물 성장을 방지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한을 가지는 바이알 중의 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 안정적인 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 용기를 제공하며, 특히, 그러한 용기는 무균적으로 중전되는 유리 바이알이다.
발명은 추가적으로 그러한 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 밀봉된 포장을 제공한다.
발명은 추가적으로 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는, 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액을 제공한다. 발명은 추가적으로 인산 나트륨이 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 인산 나트륨의 농도가 약 10 mM인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 염화 나트륨이 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 염화 나트륨의 농도가 약 150 mM인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 BA가 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 BA의 농도가 약 9.0 mg/mL인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 PS80이 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 PS80의 농도가 약 0.10 mg/mL인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 재조합 인간 알부민 ("rHA")을 추가로 포함하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 rHA가 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 농도를 가지며, 특히 rHA의 농도가 약 0.10 mg/mL인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지며, 특히 pH가 6.0인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 특히 용액이 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80, 및 약 0.1 mg/mL rHA를 포함하며, 용액의 pH가 약 6.0인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 특히 용액이 용액이 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하며 용액의 pH가 약 6.0인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 디아바디가 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 공유 결합된 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이며 보다 구체적으로, CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는, 그러한 안정화제 수용액을 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 억제하거나 방지하는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용액이 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한을 가지는 그러한 안정화제 수용액의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 그러한 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 용기 (특히 유리 바이알 용기)를 제공한다.
발명은 추가적으로 그러한 안정화제 수용액 중 임의의 것을 포함하는 밀봉된 포장을 제공한다.
발명은 추가적으로:
a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
b) 약 15 mM 내지 약 25 mM 인산 나트륨 완충제, 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 BA, 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL MP 및 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL PS80을 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로
c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 용액을 투여하기 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함하는 키트를 제공한다.
발명은 추가적으로:
a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
b) (i) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL BA, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
(ii) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
(iii) 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로,
c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 용액을 투여하기 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함하는 키트를 제공한다.
발명은 추가적으로 디아바디가 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬를 포함하는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 공유 결합된 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이고 보다 구체적으로 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는, 그러한 키트를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제가 약 0.1 mg/mL의 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제의 pH가 약 6.0인 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 B의 안정화제 수용액이 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하고, 용액이 약 8.2의 pH를 가지는 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 B의 안정화제 수용액이 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 용액이 약 6.0의 pH를 가지는 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 B의 안정화제 수용액이 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 용액이 약 6.0의 pH를 가지는 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 B의 안정화제 수용액이 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.10 mg/mL PS80을 포함하고, 용액이 약 6.0의 pH를 가지는 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 안정화제 수용액이 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도로 rHA를 추가로 포함하는 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 rHA의 농도가 약 0.1 mg/mL인 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 대상체가 인간 환자인 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 용기 A 및 B가 유리 바이알인 그러한 키트의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 키트 중 임의의 것과, 선택적으로 그러한 키트의 보관 및/또는 사용을 위한 설명서를 포함하는 밀봉된 포장을 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 키트 중 하나를 사용하는 것을 포함하는, 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 용기 B의 안정화제 수용액은 인산 나트륨, PS80, BA, MP를 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지며;
방법에서:
(a) 용기 B의 안정화제 수용액은 용기 C에 배치되어 혼합되고;
(b) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제는 용기 C에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지며;
(c) 투약 용액을 함유한 용기 C는 대상체에 투여하기 위한 장치에 부착된다.
발명은 추가적으로 용기 C가 정맥내 주입을 위한 식염수를 포함하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 키트 중 하나를 사용하여 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법을 제공하며, 여기서 용기 B의 안정화제 수용액은 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, BA, 및 선택적으로 rHA 중 하나 이상을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지며;
방법에서:
(a) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제가 용기 B의 안정화제 수용액에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지는 단계;
(b) 선택적으로 투약 용액이 희석되는 단계;
(c) 투약 용액이 용기 C에 배치되는 단계; 및
(d) 최종 투약 용액을 함유한 용기 C를 대상체에게 투여하기 위한 장치에 부착시키는 단계를 포함한다.
발명은 추가적으로 용기 C가 정맥내 주입을 위해 식염수 또는 정균(bacteriostatic) 식염수를 포함하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 주입 펌프에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 이동형(ambulatory)인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 장치가 단일 이동형 펌프(ambulatory pump)인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 장치가 이중 이동형 펌프인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 장치가 주사기 펌프(syringe pump)인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 적어도 약 24시간 동안 연속 주입에 의해 이루어지는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 적어도 약 48시간 동안 연속 주입에 의해 이루어지는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 적어도 약 96시간 동안 연속 주입에 의해 이루어지는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 적어도 약 7일 동안 연속 주입에 의해 이루어지는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.10 mL/시간 내지 약 2.5 mL/시간의 유량으로 발생하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.5 mL/시간 내지 약 10.0 mL/시간의 유량으로 발생하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.1 mL/시간 내지 약 2.0 mL/시간의 유량으로 적어도 24시간 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량으로 적어도 48시간 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투여가 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 연속 주입에 의한 것인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 유량이 대상체에서 정맥내 폐쇄를 방지하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 디아바디가 CD123 x CD3 디아바디이고 30-500 ng/kg/일로 이루어지는 군으로부터 선택된 치료 투여량으로 대상체에게 투여되는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투약 용액이 40 mL의 안정화제 수용액을 포함하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 투약 용액이 약 0.03 mg/mL 내지 약 0.04 mg/mL의 PS80, 약 1.7 mg/mL 내지 약 2.1 mg/mL의 BA, 및 약 0.55 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL의 MP를 포함하는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 상기 투약 용액이 약 100 mM 내지 약 300 mM의 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 PS80을 포함하고, 상기 용액이 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 환자가 인간 대상체인 그러한 방법의 구체예를 제공한다.
발명은 추가적으로 그것을 필요로 하는 대상체에게 다음을 포함하는 치료적 유효량의 투약 용액을 투여하는 단계를 포함하는 혈액암의 치료 방법을 제공한다:
(A) (1) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(2) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(3) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 10 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(4) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(5) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(6) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(7) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 150 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(8) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(9) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 6.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(10) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(11) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디의 농도는 약 0.1 mg/mL인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(12) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(13) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 0.1 mg/mL의 상기 CD123 x CD3 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하며, 상기 제제의 pH는 약 6.0인 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(14) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 25℃에서 약 3개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(15) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 2-8℃에서 약 48개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(B) (1) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(2) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(3) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 10 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(4) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(5) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(6) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(7) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 150 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(8) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(9) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 6.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(10) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(11) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(12) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(13) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 0.1 mg/mL의 상기 CD123 x CD3 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하며, 상기 제제의 pH는 약 6.0인 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액;
(14) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 25℃에서 약 3개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(15) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 2-8℃에서 약 48개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(C) (1) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(2) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(3) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 인산 나트륨은 약 10 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(4) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(5) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 PS80은 약 0.1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(6) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(7) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 염화 나트륨은 약 150 mM의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(8) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(9) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 6.0의 pH를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(10) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(11) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(12) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(13) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 제제는 약 0.1 mg/mL의 상기 CD123 x CD3 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하며, 상기 제제의 pH는 약 6.0인 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액;
(14) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 25℃에서 약 3개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액; 또는
(15) CD123 x CD3 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 PS80을 포함하고, 여기서 상기 용액은 2-8℃에서 약 48개월 동안 상기 CD123 x CD3 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 안정적인 수성 제약학적 제제, 및 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액.
발명은 추가적으로 위에서 기술된 중 임의의 것을 사용하여 혈액암을 치료하는 방법을 제공한다.
발명은 추가적으로 혈액암의 치료를 위한 위에서 기술된 투약 용액의 용도에 관한 것이다.
발명은 추가적으로 혈액암의 치료를 위한 위에서 기술된 키트의 용도에 관한 것이다.
발명은 추가적으로 그러한 혈액암이: AML, CML, 이를테면 CML의 모세포 위기 및 CML과 관련된 아벨슨 발암유전자 (Bcr-ABL 전좌(translocation)), MDS, B-ALL, T-ALL, CLL, 이를테면 리히터 증후군(Richter's syndrome) 또는 CLL의 리히터 변형(Richter's transformation of CLL), HCL, 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), NHL, 이를테면 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프루성 림프종 (SLL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증(systemic mastocytosis), 및 버킷 림프종(Burkitt's lymphoma)으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 구체예에 관한 것이다.
발명은 특히 그러한 혈액암이 AML, BPDCN, MDS, 또는 T-ALL인 구체예에 관한 것이다.
발명은 특히 대상체가 인간 대상체인 구체예에 관한 것이다.
도 1은 각각이 E-코일 또는 K-코일 헤테로다이머 촉진 도메인 (대체 헤테로다이머 촉진 도메인이 하기에 제공됨)을 가지는, 2개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 2개의 사슬 공유 결합된 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 이중특이적 디아바디, DART-A)의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 전체 구조를 도시한다. 시스테인 잔기는 도시된 바와 같이 링커에 및/또는 헤테로다이머 촉진 도메인에 존재할 수 있다 (도 3-4 참고). 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 충전 패턴을 사용하여 도시된다. 이 도면, 및 결합 분자 도메인의 개략도를 제공하는 모든 도면에서 물결선 (
Figure pct00002
)은, 바람직하게 존재하는, 하나 이상의 선택적 헤테로다이머 촉진 도메인을 나타낸다.
도 2는 각각이 CH2 및 CH3 도메인을 가지는 2개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 2개의 에피토프-결합 부위를 가져서 결합된 사슬이 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 되는 대표적인 공유 결합된 디아바디 분자를 도시한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 충전 패턴을 사용하여 도시된다.
도 3은 2개 쌍의 폴리펩타이드 사슬 (즉, 전부 4개의 폴리펩타이드 사슬)로 구성된 4개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 사가 디아바디를 보여주는 개략도를 제공한다. 시스테인 잔기는 헤테로다이머 촉진 도메인에서 도시되며 선택적 시스테인 잔기가 링커에 존재한다. 각 쌍의 한 폴리펩타이드 사슬은 CH2 및 CH3 도메인을 가져서, 결합된 사슬이 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 된다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 충전 패턴을 사용하여 도시된다. 2개 쌍의 폴리펩타이드 사슬은 동일할 수 있다. 그러한 구체예에서, 2개 쌍의 폴리펩타이드 사슬은 동일하며 VL 및 VH 도메인은 상이한 에피토프를 이식하고, 결과적으로 생성된 분자는 4개의 에피토프-결합 부위를 가지며 이중특이적이고 각각의 결합된 에피토프와 관련하여 이가이다.
도 4는 3개의 폴리펩타이드 사슬로 구성된 2개의 에피토프-결합 부위를 가지는 대표적인 공유 결합된 디아바디 분자의 개략도를 제공한다. 2개의 폴리펩타이드 사슬은 CH2 및 CH3 도메인을 가져서, 결합된 사슬은 Fc 영역의 전부 또는 일부를 형성하게 된다. 시스테인 잔기는 헤테로다이머 촉진 도메인에서 (도시된 바와 같음) 및/또는 링커에서 존재할 수 있다(도 1 및 도 3 참고). VL 및 VH 도메인을 포함하는 폴리펩타이드 사슬은 헤테로다이머 촉진 도메인을 추가로 포함한다. 동일한 에피토프를 인식하는 VL 및 VH 도메인은 동일한 음영 또는 충전 패턴을 사용하여 도시된다.
도 5A-5B는 PS80을 포함한 2개의 인산염 완충 식염수 (PBS) 제제 및 PS80이 없는 2개의 PBS 제제에서 연속적인 교반 후 DART-A 혼탁도(turbidity) (도 5A) 및 눈에 보이지 않는 입자 수 (도 5B)를 도시한다. DART-A 샘플은 2-8℃에서 유지되었고 600 rpm에서 24시간에 걸쳐 교반되었다.
도 6은 DART-A의 열적 안정성(thermal stability)을 도시한다. 시차 주사 열량측정 (DSC)이 2개의 의약품 제제: PS80이 없거나 (DART-A DP 완충제 단독) 또는 PS80이 있는 (DART-A DP 완충제 + PS80) 제제에서 DART-A의 안정성을 테스트하기 위해 사용되었다. 대조군 및 PS80-함유 DP 제제는 모두 150 mM NaCl, 10 mM 인산 나트륨, pH 6.0을 함유하였다. DSC는 64℃의 용융 온도 (Tm)에서 수행되었다.
도 7은 5 ± 3℃에서 24개월 보관한 후 참조 표준 (하부 패널)과 비교하여 숙성된 DART-A DP 제제 (상부 패널)에 대한 아미노산 수준에서의 펩타이드 및 변형을 비교하는 펩타이드 맵핑 결과를 도시한다. 도는 전기분무 이온화 질량 분광분석과 결합된 액체 크로마토그래피 (LC-ESIMS)를 사용하는 2개의 샘플의 트립신처리 펩타이드 맵핑 결과를 나타낸다.
도 8A-8D는 5 ± 3℃에서 48개월 동안 DART-A DP 제제를 보관한 후 CD123 (도 8A) 또는 CD3 (도 8B)에 대한 결합에 의해 보여지는 바 DART-A의 상대적인 효능을 제공한다. 도 8C는 5 ± 3℃에서 48개월 동안 DART-A DP 제제의 보관 후, SE-HPLC에 의해 측정된 바 DART-A 단량체의 백분율을 도시한다. 도 8D는 5 ± 3℃에서 48개월 동안 DART-A DP 제제의 보관 후, CE-SDS에 의해 측정된 바 DART-A의 퍼센트 순도를 도시한다.
도 9는 DART-A에 대한 안정화제의 개발의 개요를 제공한다. 안정화제 1은 이중 이동형 펌프를 사용하는 투여 중에 흡착으로 인한 단백질 손실을 줄이기 위하여 DART-A DP 제제와 혼합되로독 개발되었다. 안정화제 1 (rHA 함유)과 변형된 안정화제 1 (PS80만을 함유함)을 비교하기 위한 연구가 수행되었다. 대체 보존제가 테스트되었고 이들 연구는 단일 이동형 펌프 투여를 위한 안정화제 2의 개발을 초래하였다.
도 10은 단일 펌프 투여를 위한 안정화제 2의 개발에 대해 수행된 연구의 개요를 제공한다. 보존제의 선택은 도시된 바와 같이 일련의 단계로 평가되었다.
도 11은 안정화제 1로 희석된 DART-A의 연속 투여를 위한 이중-펌프 이동형 주입 구성을 도시한다. 이동형 주입 구성 연구에서의 샘플링 지점 (지점 #1 - #5)이 도시된다.
도 12A-12B는 안정화제 1로 DART-A DP 제제의 희석에 의해 약물 카세트(medication cassettes) 위에 로딩될 DART-A 투약 용액의 제조를 도시한다. 도 12A는 DART-A 고농도 (5000 ng/mL) 투약 용액의 제조를 도시한다. 도 12B는 DART-A 저농도 (100 ng/mL) 투약 용액의 제조를 도시한다.
도 13은 단일 이동형 펌프 투여용 투약 용액의 제조를 도시한다. 안정화제 2 (40 ml)가 270 ml 공칭 부피를 함유한 250 ml 식염수 주머니에 첨가되었다 (대안으로/선택적으로 식염수 함유 이동형 펌프 카세트가 식염수 주머니 대신 사용될 수 있다). 식염수 주머니는 원하는 부피의 DART-A를 함유한 수성 제약학적 제제를 첨가하기 전에 잘 혼합되었다. 식염수 주머니는 잘 혼합되어 최종 투약 용액이 초래되었다. DART-A 및 보존제 안정성이 72시간 동안 실온 보관 중에 모니터링되었다.
도 14는 DART-A DP 제제 및 안정화제 2를 포함하는 투약 용액을 환자에게 투여하기 위해 활용될 수 있는 CADD-Legacy® 1 이동형 주입 펌프 (Deltec, St, Paul, MN)를 도시한다.
본 발명은 이중특이적 디아바디를 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제 (디아바디 제제), 및 상기 디아바디를 안정화하고 투여하기 위한 안정화제 수용액에 관한 것이다. 발명은 특히 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 일가 디아바디, DART-A를 포함하는 DART-A DP 제제에 관한 것이다. 발명은 추가로 환자에서 AML 또는 MDS와 같은 혈액암의 치료에서 그러한 DART-A DP 제제 및 안정화제의 용도에 관한 것이다.
I. 이중특이적 디아바디
본 발명은 이중특이적 디아바디, 특히 2, 3 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 디아바디를 포함하는 제제에 관한 것이다. 아래에서 제공되는 바, 그러한 공유 결합된 디아바디는 추가로 Fc 도메인을 포함할 수 있다.
DART® 디아바디로 명명된, 안정적인, 공유 결합된 헤테로다이머 비-단일특이적 디아바디가 기술되었다 (예컨대, PCT 공보 번호 WO 2006/113665; WO 2008/157379; WO 2010/027797; WO 2010/033279; WO 2010/080538; WO 2011/109400; WO 2012/018687; WO 2012/162067; WO 2012/162068; WO 2014/159940; WO 2015/021089; WO 2015/026892; 및 WO 2015/026894 참고). 그러한 공유 결합된 디아바디는 2개 이상의 공유적으로 복합된 폴리펩타이드를 포함하고 이황화 결합이 형성되는 것을 허용함으로써 그러한 폴리펩타이드 사슬의 하나 이상의 쌍이 서로 공유 결합되도록 하는 사용된 폴리펩타이드 종의 각각에 하나 이상의 시스테인 잔기를 조작하는 것을 포함한다. 예를 들어, 그러한 구성물의 C-말단에 시스테인 잔기의 첨가는 포함된 폴리펩타이드 사슬 사이의 이황화 결합을 허용하여, 결과적으로 생성된 디아바디를 디아바디의 결합 특징을 간섭하지 않으면서 안정화시키는 것으로 나타났다.
가장 간단한 공유 결합된 디아바디는 각각이 3개의 도메인을 포함하는 2개의 폴리펩타이드 사슬을 포함한다 (도 1). 제1 폴리펩타이드 사슬은: (i) 제1 면역글로불린의 경쇄 가변 도메인의 결합 영역을 포함하는 도메인 (VL1), (ii) 제2 면역글로불린의 중쇄 가변 도메인의 결합 영역을 포함하는 제2 도메인 (VH2), 및 (iii) 제2 폴리펩타이드 사슬과의 헤테로다이머화를 촉진하고 ("헤테로다이머 촉진 도메인") 제1 폴리펩타이드를 디아바디의 제2 폴리펩타이드 사슬에 공유 결합시키는 작용을 하는 제3 도메인을 포함한다. 제2 폴리펩타이드 사슬은 상보하는 제1 도메인 (VL2 도메인), 상보하는 제2 도메인 (VH1 도메인) 및 헤테로다이머화 ("헤테로다이머 촉진 도메인") 및 제1 폴리펩타이드 사슬과의 공유 결합을 촉진하기 위하여 제1 폴리펩타이드 사슬의 제3 도메인과 복합체를 형성하는 제3 도메인을 함유한다. 그러한 분자는 안정적이고, 강력하며 2개 이상의 항원에 동시에 결합하는 능력을 가진다. 한 구체예에서, 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬 각각의 제3 도메인은 이황화 결합을 통해 폴리펩타이드를 함께 결합시키는 작용을 하는 시스테인 ("C") 잔기를 함유한다. 폴리펩타이드 사슬의 하나 또는 둘 다의 제3 도메인은 추가적으로 CH2-CH3 도메인의 서열을 가질 수 있어서, 디아바디 폴리펩타이드의 복합화가 세포 (예컨대 B 림프구, 수지상 세포, 천연 살해 세포, 대식세포, 호중구, 호산성 세포, 호염기성 세포 및 비만 세포)의 Fc 수용체에 결합할 수 있는 Fc 도메인을 형성하게 된다 (예컨대, 도 2-4 참고). 그러한 공유 결합된 분자의 몇몇 예가 아래에서 상세하게 기술되며 그러한 분자의 많은 변이가 다른 곳에서도 기술되었다 (예컨대, 미국 특허 공개 번호 2013-0295121; 2010-0174053; 2007-0004909; 2009-0060910; 유럽 특허 공개 번호 EP 2714079; EP 2601216; EP 2376109; EP 2158221 및 PCT 공개 번호 WO 2012/162068; WO 2012/018687; WO 2010/080538; WO 2006/113665 참고).
A. Fc 도메인이 결핍된 공유 결합된 디아바디
Fc가 결핍된 공유 결합된 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬은 바람직하게, N-말단에서 C-말단 방향으로: N-말단, 제1 또는 제2 에피토프 중 어느 하나에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (즉, VL1 또는 VL2 중 어느 하나), 제1 개재 스페이서 펩타이드 (링커 1), 제2 에피토프에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (if 그러한 제1 폴리펩타이드 사슬이 VL1을 함유하는 경우) 또는 제1 에피토프에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (그러한 제1 폴리펩타이드 사슬이 VL2를 함유하는 경우), 선택적으로 시스테인 잔기를 함유하는 제2 개재 스페이서 펩타이드 (링커 2), 헤테로다이머 촉진 도메인 및 C-말단을 포함한다 (도 1).
제2 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로: N-말단, 제1 또는 제2 에피토프에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (즉, VL1 또는 VL2, 그리고 VL 도메인은 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬에 포함되기 위해 선택되지 않음), 개재 스페이서 펩타이드 (링커 1), 제1 또는 제2 에피토프 중 어느 하나에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (즉, VH1 또는 VH2, 그리고 VH 도메인은 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬에 포함되기 위해 선택되지 않음), 선택적으로 시스테인 잔기를 함유하는 제2 개재 스페이서 펩타이드 (링커 2), 헤테로다이머 촉진 도메인 및 C-말단을 포함한다 (도 1). 특정 에피토프에 대해 특이적인 사용된 VL 및 VH 도메인은 바람직하게 동일한 단클론성 항체로부터 얻어지거나 유래된다. 그러나, 그러한 도메인은 그것이 결합하여 그러한 에피토프에 면역특이적으로 결합할 수 있는 기능성 결합 도메인을 형성한다면 상이한 단클론성 항체로부터 유래될 수 있다. 그러한 상이한 항체는 본원에서 "상응하는" 항체로서 언급된다.
제1 폴리펩타이드 사슬의 VL 도메인은 제2 폴리펩타이드 사슬의 VH 도메인과 상호작용하여 에피토프 중 하나 (예컨대, 제1 에피토프)에 특이적인 제1 기능성 에피토프 결합 도메인을 형성한다. 마찬가지로, 제2 폴리펩타이드 사슬의 VL 도메인은 제1 폴리펩타이드 사슬의 VH 도메인과 상호작용하여 다른 에피토프 (즉, 제2 에피토프)에 특이적인 제2 기능성 에피토프 결합 도메인을 형성한다. 그러므로, 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인의 선택은 "조정"되어서, 디아바디의 2개의 폴리펩타이드 사슬이 종합적으로 제1 에피토프 및 제2 에피토프에 결합할 수 있는 VL 및 VH 도메인을 포함한다 (즉, 그것은 종합적으로 VL1/VH1 및 VL2/VH2를 포함한다).
가장 바람직하게, (즉, 그러한 VL 및 VH 도메인을 분리하는 "링커 1")의 길이는 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인이 서로 결합하는 것을 실질적으로 또는 완전하게 방지하도록 선택된다 (예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9개의 개재 링커 아미노산 잔기로 이루어짐). 그러므로, 제1 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인은 실질적으로 또는 완전하게 서로 결합할 수 없다. 마찬가지로, 제2 폴리펩타이드 사슬의 VL 및 VH 도메인은 실질적으로 또는 완전하게 서로 결합할 수 없다. 바람직한 개재 스페이서 펩타이드 (링커 1)는 서열 (SEQ ID NO:1): GGGSGGGG를 가진다.
제2 개재 스페이서 펩타이드 ("링커 2")의 길이 및 조성은 그러한 다이머화를 촉진하는 하나 이상의 폴리펩타이드 도메인 (즉, "헤테로다이머 촉진 도메인")의 선택을 토대로 선택된다. 전형적으로, 제2 개재 스페이서 펩타이드 (링커 2)는 3-20개의 아미노산 잔기를 포함할 것이다. 특히, 사용된 헤테로다이머 촉진 도메인(들)이 시스테인 잔기를 포함하지 않는 경우에 시스테인-함유 제2 개재 스페이서 펩타이드 (링커 2)가 활용된다. 시스테인-함유 제2 개재 스페이서 펩타이드 (링커 2)는 1, 2, 3개 또는 그 이상의 시스테인을 함유할 것이다. 바람직한 시스테인-함유 스페이서 펩타이드 (링커 2)는 서열 GGCGGG (SEQ ID NO:2)를 가진다. 대안으로, 링커 2는 시스테인을 포함하지 않으며 (예컨대, ASTKG (SEQ ID NO:3)), 아래에서 기술되는 것과 같이, 시스테인-함유 헤테로다이머 촉진 도메인이 사용된다. 선택적으로, 시스테인-함유 링커 2 및 시스테인-함유 헤테로다이머 촉진 도메인이 둘 다 사용된다.
예시의 헤테로다이머 촉진 도메인으로는, 예를 들어, 반대 전하의 폴리펩타이드 코일을 포함하는 것들을 들 수 있다. 바람직한 헤테로다이머 촉진 도메인은 pH 7에서 그것의 글루타메이트 잔기가 음전하를 형성할 "E-코일" 헤테로다이머 촉진 도메인 (SEQ ID NO:4: E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K), 또는 pH 7에서 그것의 리신 잔기가 양전하를 형성할 "K-코일" 헤테로다이머 촉진 도메인 (SEQ ID NO:5: K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E)을 포함할 것이다. 그러한 대전된 도메인의 존재는 제1 및 제2 폴리펩타이드 사이의 결합을 촉진하며, 그로써 헤테로다이머 형성을 강화한다. 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함하기 위해 위에서 기술된 E-코일 및 K-코일 서열을 포함하는 헤테로다이머 촉진 도메인이 활용될 수 있다. 그러한 시스테인 잔기의 존재는 한 폴리펩타이드 사슬 상에 존재하는 코일이 다른 폴리펩타이드 사슬 상에 존재하는 상보하는 코일에 공유 결합되는 것을 허용함으로써, 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유 결합되게 하고 디아바디의 안정성을 증가시킨다. 그러한 특히 바람직한 것의 예는 아미노산 서열 E VAAC E K- E VAAL E K- E VAAL E K- E VAAL E K (SEQ ID NO:6)을 가지는 변형된 E-코일, 및 아미노산 서열 K VAAC K E- K VAAL K E- K VAAL K E- K VAAL K E (SEQ ID NO:7)을 가지는 변형된 K-코일을 포함한다.
B. Fc 도메인을 포함하는 이중특이적 디아바디
디아바디 폴리펩타이드 사슬 중 하나 또는 둘 다에 IgG CH2-CH3 도메인의 첨가, 그로 인한 디아바디 사슬의 복합체화는 Fc 도메인의 형성을 초래하여, 디아바디의 생물학적 반감기를 증가시키거나 및/또는 결합력을 변경시킨다. 그러한 디아바디는, 그것의 서열이 폴리펩타이드 사슬이 서로 공유적으로 결합되어 제1 에피토프 및 제2 에피토프에 동시에 결합할 수 있는 공유 결합된 디아바디를 형성하는 것을 허용하는 2개 이상의 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. IgG CH2-CH3 도메인을 둘 다의 디아바디 폴리펩타이드에 통합시키는 것은 2-사슬 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디가 형성되는 것을 허용할 것이다 (도 2).
대안으로, IgG CH2-CH3 도메인을 디아바디 폴리펩타이드의 하나에만 통합시키는 것은 보다 복잡한 4-사슬 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디가 형성하게 할 것이다 (도 3). 제2 CH2-CH3 Fc 도메인을 함유하지만, 임의의 결합 도메인이 없는 제3 폴리펩타이드 사슬의 첨가는 3-사슬 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디의 형성을 허용한다 (도 4).
그러한 분자의 CH2-CH3 도메인은 임의의 아이소타입의 것일 수 있다 (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4). 분자는 추가로 힌지 도메인을 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 힌지 도메인은 임의의 아이소타입의 것이며 (예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4), 바람직하게 원하는 Fc 도메인과 동일한 아이소타입의 것이다. CH2-CH3 도메인은 Fc-수용체(들)에 대한 결합을 감소시키거나 제거하기 위하여 (예컨대, US 5,624,821 참고), 및/또는 혈청 반감기를 향상시키기 위하여 (예컨대, US 7,083,784 참고), 및/또는 2개의 상이한 폴리펩타이드 사슬에 존재하는 CH2-CH3 도메인 사이의 헤테로다이머화를 강화시키기 위하여 (예컨대, US 5,731,168 및 US 7,183,076 참고) 추가로 하나 이상의 아미노산 치환을 포함할 수 있다.
감소된 또는 제거된 이펙터 기능을 가지는 CH2 및 CH3 도메인에 대한 한 예시의 IgG1 서열은 치환 L234A/L235A를 포함할 것이다 (SEQ ID NO:8):
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서 X 는 리신 (K)이거나 없다.
증가된 혈청 반감기를 가지는 CH2 및 CH3 도메인에 대한 한 예시의 IgG1 서열은 치환 L234A/L235A에 의해 제공된 감소된 또는 제거된 이펙터 기능 및 치환 M252Y/S254T/T256E에 의해 제공된 증가된 혈청 반감기를 조합할 수 있다 (SEQ ID NO:9):
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT L Y I T R E PEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서 X는 리신 (K)이거나 없다.
헤테로다이머화하는 CH2 및 CH3 도메인에 대한 예시의 IgG1 아미노산 서열은 한 사슬에 T366W ("손잡이") 치환 및 다른 사슬에 T366S/L368A/Y407V ("구멍") 치환을 포함할 것이다. 이들 치환은 이펙터 기능을 감소 또는 제거하거나 및/또는 혈청 반감기를 증가시키는 추가의 치환과 조합될 수 있다.
손잡이-내재 CH2-CH3 도메인에 대한 한 예시의 IgG1 아미노산 서열은 추가로 치환 L234A/L235A에 의해 제공된 감소된 또는 제거된 이펙터 기능을 조합한다 (SEQ ID NO:10):
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSL W CLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPG X
여기서 X는 리신 (K)이거나 없다.
구멍-내재 CH2-CH3 도메인에 대한 한 예시의 IgG1 아미노산 서열은 추가로 치환 L234A/L235A에 의해 제공된 감소된 또는 제거된 이펙터 기능을 조합한다 (SEQ ID NO:11):
APE AA GGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK
PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT
LPPSREEMTK NQVSL S C A VK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFL V SKL
TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHN R YTQKS LSLSPG X
여기서 X는 리신 (K)이거나 없다.
본 발명의 Fc 도메인-함유 디아바디 분자는 추가 개재 스페이서 펩타이드 (링커)를 포함할 수 있고, 일반적으로 그러한 링커는 헤테로다이머 촉진 도메인 (예컨대, E-코일 또는 K-코일)과 CH2-CH3 도메인 사이 및/또는 CH2-CH3 도메인과 가변 도메인 (즉, VH 또는 VL) 사이에 포함될 것이다. 전형적으로, 추가 링커는 3-20개 아미노산 잔기를 포함할 것이고 선택적으로 IgG 힌지 도메인의 전부 또는 일부 (바람직하게 1, 2, 3개 또는 그 이상의 시스테인 잔기를 가지는 IgG 힌지 도메인의 시스테인-함유 부분)를 함유할 수 있다. 본 발명의 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디 분자에 사용될 수 있는 예시의 링커로는: GGGS (SEQ ID NO:12), GGCGGG (SEQ ID NO:13), ASTKG (SEQ ID NO:14), APSSS (SEQ ID NO:15), APSSSPME (SEQ ID NO:16)를 들 수 있다. 추가적으로, 아미노산 GGG, 또는 LEPKSS (SEQ ID NO:17) 바로 뒤에 DKTHTCPPCP (SEQ ID NO:18)가 있어서 대체 링커: GGGDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:19); 및 LEPKSSDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:20)를 형성한다. 본 발명의 이중특이적 Fc 도메인-함유 분자는 링커 외에 또는 링커 대신에 IgG 힌지 도메인을 포함할 수 있다. 예시의 힌지 도메인으로는: IgG1로부터의 EPKSCDKTHTCPPCP (SEQ ID NO:21), IgG2로부터의 ERKCCVECPPCP (SEQ ID NO: 22), IgG3으로부터의 ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP (SEQ ID NO:23), 가닥 교환을 줄이기 위하여 안정환 S228P 치환 (Kzbat에서 제시된 EU 인덱스에 의해 넘버링됨)을 포함하는 IgG4 힌지 변이체인 IgG4로부터의 ESKYGPPCPSCP (SEQ ID NO:24), 및 ESKYGPPCP P CP (SEQ ID NO:25)을 들 수 있다.
도 3에서 제공되는 바, 발명의 Fc 도메인-함유 디아바디는 4개의 사슬을 포함할 수 있다. 그러한 디아바디의 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 3개의 도메인: (i) VL1-함유 도메인, (ii) VH2-함유 도메인, (iii) 헤테로다이머 촉진 도메인, 및 (iv) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인을 함유한다. 제2 및 제4 폴리펩타이드 사슬은: (i) VL2-함유 도메인, (ii) VH1-함유 도메인, 및 (iii) 헤테로다이머 촉진 도메인을 함유하며, 헤테로다이머 촉진 도메인은 제1/제3 폴리펩타이드 사슬과 제2/제4 폴리펩타이드 사슬의 다이머화를 촉진한다. 대표적인 4-사슬 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디의 폴리펩타이드 사슬의 일반적인 구조는 표 1에서 제공된다:
이중특이적 제2 사슬 NH2-VL2-VH1-HPD-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2-HPD-CH2-CH3-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2-HPD-CH2-CH3-COOH
제2 사슬 NH2-VL2-VH1-HPD-COOH
HPD = 헤테로다이머 촉진 도메인
도 4에서 제공되는 바, 본 발명의 Fc 도메인-함유 디아바디는 3개의 폴리펩타이드 사슬을 포함할 수 있다. 그러한 디아바디의 제1 폴리펩타이드는 3개의 도메인: (i) VL1-함유 도메인, (ii) VH2-함유 도메인 및 (iii) CH2-CH3 서열을 함유하는 도메인을 함유한다. 그러한 디아바디의 제2 폴리펩타이드는: (i) VL2-함유 도메인, (ii) VH1-함유 도메인 및 (iii) 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬과의 헤테로다이머화 및 공유 결합을 촉진하는 도메인을 함유한다. 그러한 디아바디의 제3 폴리펩타이드는 CH2-CH3 서열을 포함한다. 그러므로, 그러한 디아바디의 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 함께 결합하여 제1 또는 제2 에피토프 중 어느 하나와 결합할 수 있는 VL1/VH1 에피토프 결합 도메인, 뿐만 아니라 그러한 에피토프의 다른 것에 결합할 수 있는 VL2/VH2 에피토프 결합 도메인을 형성한다. 제1 및 제2 폴리펩타이드는 각각의 제3 도메인에서 시스테인 잔기를 포함하는 이황화 결합을 통해 서로에게 결합된다. 특히, 제1 및 제3 폴리펩타이드 사슬은 서로 복합체화되어 이황화 결합을 통해 안정화되는 Fc 도메인을 형성한다. 대표적인 3-사슬 이중특이적 Fc 도메인-함유 디아바디의 폴리펩타이드 사슬의 일반적인 구조가 제공된다 (표 2):
제1 방향 제3 사슬 NH2-CH2-CH3-COOH
제1 사슬 NH2-VL1-VH2-HPD-CH2-CH3-COOH
제2 사슬 NH2-VL2-VH1-HPD-COOH
HPD = 헤테로다이머 촉진 도메인
II. DART-A의 폴리펩타이드 사슬
DART-A는 서열-최적화된 이중특이적 디아바디는 CD123의 에피토프 및 CD3의 에피토프에 동시에 및 특이적으로 결합할 수 있다 ("CD123 x CD3" 이중특이적 디아바디) (미국 특허 공개 번호 US 2016-0200827, PCT 공개 번호 WO 2015/026892, Al-Hussaini, M. et al. (2016) "Targeting CD123 In Acute Myeloid Leukemia Using A T-Cell-Directed Dual-Affinity Retargeting Platform", Blood 127:122-131, in Vey, N. et al. (2017) "A Phase 1, First-in-Human Study of MGD006/S80880 (CD123 x CD3) in AML/MDS", 2017 ASCO Annual Meeting, June 2-6, 2017, Chicago, IL: Abstract TPS7070, 이들 서류의 각각은 본원에서 그 전문이 참조로 포함됨). DART-A는 유사한 조성의 다른 비-서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디에 비해 향상된 기능적 활성을 나타내는 것으로 나타났고, 그로써 "서열-최적화된" CD123 x CD3 이중특이적 디아바디로 명명된다. PCT 출원 번호 PCT/US2017/050471은 DART-A를 환자에게 투여하기 위한 바람직한 투약 요법을 기술하고 있고, 본원에 그 전문이 참조로 포함된다.
DART-A는 도 1에 도시된 일반 구조를 가지며 제1 폴리펩타이드 사슬 및 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함한다. 이중특이적 디아바디의 제1 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD3에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 경쇄 가변 도메인 (VL 도메인) (VLCD3), 개재 링커 펩타이드 (링커 1), CD123에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 중쇄 가변 도메인 (VH 도메인) (VHCD123), 및 C-말단을 포함할 것이다. 그러한 VLCD3 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:26이다:
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT
PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG
VLCD3의 항원 결합 도메인은 CDR1 SEQ ID NO:27: RSSTGAVTTSNYAN, CDR2 SEQ ID NO:28: GTNKRAP, 및 CDR3 SEQ ID NO:29: ALWYSNLWV를 포함한다.
그러한 링커 1에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:1: GGGSGGGG이다. 그러한 VHCD123 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:30이다:
EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMKWVRQA PGQGLEWIGD IIPSNGATFY
NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSH LLRASWFAYW GQGTLVTVSS
VHCD123의 항원 결합 도메인은 CDR1 SEQ ID NO:31: DYYMK, CDR2 SEQ ID NO:32: DIIPSNGATFYNQKFKG, 및 CDR3 SEQ ID NO:33: SHLLRASFAY를 포함한다.
제2 폴리펩타이드 사슬은, N-말단에서 C-말단 방향으로, N-말단, CD123에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VL 도메인 (VLCD123), 개재 링커 펩타이드 (예컨대, 링커 1), CD3에 결합할 수 있는 단클론성 항체의 VH 도메인 (VHCD3), 및 C-말단을 포함할 것이다. 그러한 VLCD123 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:34이다:
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR
ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIK
VLCD123의 항원 결합 도메인은 CDR1 SEQ ID NO:35: KSSQSLLNSGNQKNYLT, CDR2 SEQ ID NO:36: WASTRES, 및 CDR3 SEQ ID NO:37: QNDYSYPYT를 포함한다.
그러한 VHCD3 도메인에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:38이다:
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR IRSKYNNYAT
YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
VHCD3의 항원 결합 도메인은 CDR1 SEQ ID NO:39: TYAMN, CDR2 SEQ ID NO:40: RIRSKYNNYATYYADSVKD, 및 CDR3 SEQ ID NO:41: HGNFGNSYVSWFAY를 포함한다.
본 발명의 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디는 그러한 제1 및 제2 폴리펩타이드가 서로에게 그것의 길이를 따라 시스테인 잔기를 통해 공유 결합하도록 조작된다. 그러한 시스테인 잔기는 폴리펩타이드의 VL 및 VH 도메인을 분리시키는 개재 링커 (예컨대, 링커 1)에 도입될 수 있다. 대안으로, 그리고 보다 바람직하게, 제2 펩타이드 (링커 2)는 각각의 폴리펩타이드 사슬에, 예를 들어, 그러한 폴리펩타이드 사슬의 VL 도메인에 대해 N-말단이거나 VH 도메인에 대햐 C-말단인 위치에서 도입된다. 그러한 링커 2에 대한 바람직한 서열은 SEQ ID NO:13: GGCGGG이다.
위에서 제시되는 바, 헤테로다이머의 형성은 그러한 폴리펩타이드 사슬을 반대 전하의 폴리펩타이드 코일을 함유하도록 추가로 조작함으로써 유도될 수 있다. 그러므로, 바람직한 구체예에서, 폴리펩타이드 사슬 중 하나는 "E-코일" 도메인 (SEQ ID NO:4: E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K E VAAL E K)을 함유하도록 조작되는 한편, 2개의 폴리펩타이드 사슬 중 다른 것은 "K-코일" 도메인 (SEQ ID NO:5: K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E K VAAL K E)을 함유하도록 조작될 것이다.
제1 또는 제2 폴리펩타이드 사슬에 어떤 코일이 제공되는지는 중요하지 않다. 그러나, 본 발명의 바람직한 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디, DART-A는 다음 서열 (SEQ ID NO:42)을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬을 가진다:
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI GGTNKRAPWT
PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV
QLVQSGAELK KPGASVKVSC KASGYTFTDY YMKWVRQAPG QGLEWIGDII PSNGATFYNQ
KFKGRVTITV DKSTSTAYME LSSLRSEDTA VYYCARSHLL RASWFAYWGQ GTLVTVSSGG
CGGGEVAALE KEVAALEKEV AALEKEVAAL EK.
DART-A 사슬 1은: SEQ ID NO:26 - SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:30 - SEQ ID NO:13 - SEQ ID NO:4.로 구성된다. DART-A 사슬 1 암화화 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO:43이다:
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg
acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag
aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc
cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca
caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg
cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag cttccgtgaa ggtgtcttgc
aaagccagtg gctacacctt cacagactac tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga
cagggactgg aatggatcgg cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag
aagtttaaag gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag
ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc acacctgctg
agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc ttccggagga
tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc
gctgcacttg aaaaggaggt cgcagccctg gagaaa.
DART-A의 제2 폴리펩타이드 사슬은 서열 (SEQ ID NO:44)을 가진다:
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP KLLIYWASTR
ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY PYTFGQGTKL EIKGGGSGGG
GEVQLVESGG GLVQPGGSLR LSCAASGFTF STYAMNWVRQ APGKGLEWVG RIRSKYNNYA
TYYADSVKDR FTISRDDSKN SLYLQMNSLK TEDTAVYYCV RHGNFGNSYV SWFAYWGQGT
LVTVSSGGCG GGKVAALKEK VAALKEKVAA LKEKVAALKE.
DART-A 사슬 2는: SEQ ID NO:34 - SEQ ID NO:1 - SEQ ID NO:38 - SEQ ID NO:13 - SEQ ID NO:5로 구성된다. DART-A 사슬 2 암호화 폴리뉴클레오타이드는 SEQ ID NO:45이다:
gacttcgtga tgacacagtc tcctgatagt ctggccgtga gtctggggga gcgggtgact
atgtcttgca agagctccca gtcactgctg aacagcggaa atcagaaaaa ctatctgacc
tggtaccagc agaagccagg ccagccccct aaactgctga tctattgggc ttccaccagg
gaatctggcg tgcccgacag attcagcggc agcggcagcg gcacagattt taccctgaca
atttctagtc tgcaggccga ggacgtggct gtgtactatt gtcagaatga ttacagctat
ccctacactt tcggccaggg gaccaagctg gaaattaaag gaggcggatc cggcggcgga
ggcgaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtcc agcctggagg gtccctgaga
ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc agcacatacg ctatgaattg ggtccgccag
gctccaggga aggggctgga gtgggttgga aggatcaggt ccaagtacaa caattatgca
acctactatg ccgactctgt gaaggataga ttcaccatct caagagatga ttcaaagaac
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta ttactgtgtg
agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg cttattgggg acaggggaca
ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa
gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag.
III. DART-A의 특성
DART-A는 인간 및 시노몰구스 원숭이 세포를 사용하여 검정되는 바 CD123 및 CD3에 동시에 결합하는 능력을 가진 것으로 나타났다 ((표 3). DART-A의 제공은 T 세포 활성화를 유발하고, 모세포 감소를 매개하며, T 세포 팽창을 구동시키고, T 세포 활성화를 유도하고, 표적 암세포의 재지시된 사멸을 유발하는 것으로 나타났다.
인간 및 시노몰구스 원숭이 CD3 및 CD123에 대한 DART-A의 결합에 대한 평형 해리 상수 (KK D )
항원 k a (± SD)
(M -1 s -1 ) 		k d (± SD)
(s -1 ) 		K D (± SD)
(nM)
인간 CD3ε/δ 5.7 (± 0.6) x 105 5.0 (± 0.9) x 10-3 9.0 ± 2.3
시노몰구스 CD3ε/δ 5.5 (± 0.5) x 105 5.0 (± 0.9) x 10-3 9.2 ± 2.3
인간 CD123-His 1.6 (± 0.4) x 106 1.9 (± 0.4) x 10-4 0.13 ± 0.01
시노몰구스 CD123-His 1.5 (± 0.3) x 106 4.0 (± 0.7) x 10-4 0.27 ± 0.02
보다 구체적으로, DART-A는 높은 CD123 발현 (Kasumi-3 (EC50=0.01 ng/mL)), 중간 CD123-발현 (Molm13 (EC50=0.18 ng/mL) 및 THP-1 (EC50=0.24 ng/mL)) 및 중간 낮은 또는 낮은 CD123 발현 (TF-1 (EC50=0.46 ng/mL) 및 RS4-11 (EC50=0.5 ng/mL))을 가진 표적 세포주에서 CD3 에피토프 결합 특이성에도 불구하고 ng 이하/mL 범위에서 최대 활성의 50% (EC50)를 달성하기 위해 필요한 농도로 강력한 재지시 사멸 능력을 나타내는 것으로 나타났다. 유사하게, DART-A-재지시된 사멸은 또한 상이한 도너로부터의 T 세포를 가진 다중 표적 세포주로 관찰되었고 재지시된 사멸 활성은 CD123을 발현하지 않는 세포주에서 관찰되지 않았다. 결과는 표 4에서 요약된다.
표적 세포주 CD123 표면 발현 (항체 결합 부위) 서열-최적화된 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디 (ng/mL) E:T = 10:1의 EC 50 최대 % 사멸
Kasumi-3 118620 0.01 94
Molm13 27311 0.18 43
THP-1 58316 0.24 40
TF-1 14163 0.46 46
RS4-11 957 0.5 60
A498 음성 활성 없음 활성 없음
HT29 음성 활성 없음 활성 없음
추가적으로, 인간 T 세포 및 종양 세포 (Molm13 또는 RS4-11)가 조합되어 NOD/SCID 감마 (NSG) 녹아웃 마우스에 피하 주사되었을 때, MOLM13 종양은 0.16, 0.5, 0.2, 0.1, 0.02, 및 0.004 mg/kg 용량 수준에서 상당히 억제되었다. 0.004 mg/kg 이상의 용량이 MOLM13 모델에서 활성이었다. RS4-11 모델과 비교하여 MOLM13 모델에서 종양 성장의 억제와 결부된 더 낮은 DART-A 용량은 MOLM13 세포가 RS4-11 세포보다 더 높은 수준의 CD123 발현을 가지는 것을 입증하는 시험관내 데이터와 일치하며, 그것은 MOLM13 세포에서 시험관내에서 DART-A-매개 세포독성에 대한 증가된 민감성과 상관이 있었다.
DART-A는 AML 환자로부터의 원발성 AML 시편 (골수 단핵세포 (BMNC) 및 말초혈 단핵세포 (PBMC))에 대해 활성인 것으로 나타났다. 원발성 AML 골수 샘플과 DART-A와의 인큐베이션은 시간 경과에 따라 백혈병 세포 집단의 고갈을 초래하였고, 이것에는 잔류 T 세포 (CD4 및 CD8 둘 다)의 부수적인 팽창 및 T 세포 활성화 마커 (CD25 및 Ki-67)의 유도가 동반되었다. 그랜자임 B의 상향조절 및 CD8 및 CD4 T 세포 둘 다에서의 퍼포린 수준이 관찰되었다. 원발성 ALL 골수 샘플과 DART-A와의 인큐베이션은 미처리 대조군 또는 대조군 CART와 비교하여 시간 경과에 따라 백혈병 세포 집단의 고갈을 초래하였다. T 세포가 계수되고 (CD8 및 CD4 염색) 활성화 (CD25 염색)가 검정되었을 때, 미처리 또는 대조군 DART 샘플과 비교하여 T 세포는 팽창되었고 DART-A 샘플에서 활성화되었다. DART-A는 또한 인간 및 시노몰구스 원숭이 PBMC에서 모두 pDC 세포의 고갈을 매개할 수 있는 것으로 나타났고, 이때 시노몰구스 원숭이 pDC는 10 ng/kg DART-A 정도로 아주 적은 양으로 주입후 4일 정도로 조기에 고갈되었다. 사이토카인 인터페론-감마, TNF-알파, IL-6, IL-5, IL-4 및 IL-2의 수준의 상승은 DART-A-처리된 동물에서 관찰되지 않았다. 이들 데이터는 DART-A-매개된 표적 세포 사멸이 그랜자임 B 및 퍼포린 경로를 통해 매개된 것을 나타낸다.
활성 없음은 CD123-음성 표적 (U937 세포)에 대해 또는 대조군 DART로 관찰되었고, 이것은 관찰된 T 세포 활성화가 표적 세포 맞물림(engagement)에 엄격하게 의존적이고 CD3의 DART-A에 의한 일가 맞물림이 T 세포 활성화를 촉발시키기에는 불충분하였음을 나타낸다.
요약하면, DART-A는 몇몇 혈액암에서 상향 조절되는 항원인 CD123을 발현하는 세포에 대해 T 림프구를 재지사하기 위해 TCR의 CD3ε 하위 유닛에 맞물리는 항체-기반 분자이다. DART-A는 유사한 친화도로 인간 및 시노몰구스 원숭이 항원 둘 다에 결합하고 CD123+ 세포를 사멸하도록 두 종으로부터의 T 세포를 재지시한다. 약간씩 상승하는 용량의 DART-A로 주당 4 또는 7일 주입된 원숭이는 치료 후 72시간 후에 순환하는 CD123+ 세포의 고갈을 보였고, 이것은 용량 스케줄과 무관하게, 치료하는 전체 4주 내내 지속되었다. 순환하는 T 세포의 감소가 또한 발생하였지만, 원숭이에서 4-일 용량 스케줄의 경우 후속 주입 전에 기준선으로 회복되었고, DART-A-매개된 동원과 일치한다. DART-A 투여는 순환하는 PD1+를 증가시켰지만, TIM-3+, T 세포는 그렇지 않았다; 나아가, 처리된 원숭이로부터의 T 세포의 생체외 분석은 변경되지 않은 재지시된 표적 세포 용해를 나타냈고, 이것은 소비가 없었음을 나타낸다. 독성은 용량이 상승되었을 때에도 후속적인 투여 후가 아닌 DART-A 제1 주입 후에 사이토카인의 최소한의 일시적 방출, 및 CD123+ 골수 전구세포의 감소가 수반되는 적색 세포 질량의 최소한의 가역적 감소로 제한되었다.
IV. 제약학적 제제
발명의 안정적인 수성 제약학적 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 디아바디 (예컨대, DART-A) 및 선택적으로, 수성 안정화제와 함께 사용하기 위한 제약학적으로 허용되는 담체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "제약학적으로 허용되는 담체"는 동물, 보다 구체적으로 인간에게 전달하기에 적합한 것으로서 규제 기관에 의해 승인되거나 미국 약전에 또는 다른 일반적으로 인정된 약전에서 열거된 희석제, 보조제 (예컨대, 프로인트 보조제 (완전 및 불완전)), 부형제, 또는 비히클을 나타내는 것으로 의도된다. 그러한 제약학적 담체는 멸균 액체, 예컨대 물 및 오일, 이를테면 석유, 동물성 식물성 또는 합성 기원의 오일, 예컨대 땅콩 기름, 대두유, 참기름 등일 수 있다. 제약학적 조성물이 정맥내로 투여될 때 물이 바람직한 담체이다. 식염수 용액 및 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액이 또한 액체 담체로서, 특히 주사 가능한 용액으로서 사용될 수 있다. 적합한 제약학적 부형제로는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카겔, 스테아르산 나트륨, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화 나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 들 수 있다. 필요하다면, 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀션, 정제, 환, 캡슐, 분말, 서방성 제제 등의 형태를 취할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "약"은 + 10%의 표준 편차를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "수성"은 물 함유 용액을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "안정적인"은 제약학적 제제 또는 투약 용액 중의 다이바디의 단량체 순도를 나타내며, 여기서 상기 단량체 순도의 손실은 약 20% 미만이며, 또는 보다 바람직하게, 단량체 디아바디 (예컨대, DART-A) 의 약 15% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 10% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 5% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 3% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 2% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 1% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.6% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.2% 미만의 손실이고, 여기서 제제에서의 디아바디 (예컨대, DART-A)의 HMW 및/또는 LMW 종은 SE-HPLC를 통해 측정된다.
제약학적 제제 중의 디아바디의 단량체 순도는 25℃에서 적어도 약 1개월 동안, 25℃에서 적어도 약 2개월 동안, 약 25℃에서 적어도 약 3개월 동안, 2-8℃에서 적어도 약 6개월 동안, 2-8℃에서 적어도 약 12개월 동안, 2-8℃에서 적어도 약 18개월 동안, 2-8℃에서 적어도 약 24개월 동안, 2-8℃에서 적어도 약 36개월 동안, 또는 2-8℃에서 적어도 약 48개월 동안 유지된다. 바람직하게, 제약학적 제제 중의 디아바디의 단량체 순도는 25℃에서 적어도 약 3개월 동안 유지된다. 보다 바람직하게, 제약학적 제제 중의 디아바디의 단량체 순도는 2-8℃에서 적어도 약 48개월 동안 유지된다.
A. 바람직한 수성 안정화제
본 발명은 특히 디아바디, 특히 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 디아바디 (예컨대, DART-A)의 단량체 순도를 유지하는 작용을 하고, 단백질 안정성을 유지하는 작용을 하며, 디아바디 (예컨대, DART-A)의 용기 표면에의 비특이적 흡착을 감소 또는 방지하는 약할을 하고, 및/또는 보관 중에 제약학적 제제에서의 미생물 성장을 감소 또는 방지하는 역할을 할 안정화제 수용액에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "안정화제 수용액"은:
(1) 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)의 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 작용을 하거나 (즉, 그러한 수성 안정화제의 부재 시에 관찰되는 것에 비해 디아바디의 다량체화의 정도, 예컨대 DART-A 응집을 억제하는 작용을 함); 또는
(2) 단백질 안정성을 유지하는 작용을 하거나 (즉, 그러한 수성 안정화제의 부재 시에 관찰되는 것 또는 것들에 비해 눈에 보이지 않는 입자, 예컨대 디아바디, 예컨대 DART-A의 저분자량 단편, 또는 디아바디, 예컨대 DART-A의 고분자량 응집체의 형성을 억제하는 작용을 함) 또는
(3) 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)의 디아바디의 용기 (예컨대, IV 주머니, IV 튜빙, 등) 표면에의 비특이적 흡착을 억제 또는 방지하는 작용을 하거나; 또는
(4) 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제) 내에서 그것의 보관 중에 미생물 성장 (예컨대 녹농균(Pseudomonas Aeruginosa), 황색 포도상구균(Staphylococcus Aureus), 대장균(Escherichia coli), 칸디다 알비칸스(Candida albicans), 아스페르길루스 브라실리엔시스(Aspergillus brasiliensis), 등의 성장)을 억제하거나 방지하는 작용을 하는 물-함유 용액을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바, 안정화제 수용액은 그것의 존재가 약 20% 미만의 단량체 순도의 손실, 또는 보다 바람직하게, 단량체 디아바디 (예컨대, DART-A)의 약 15% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 10% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 5% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 3% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 2% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 1% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.6% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.2% 미만의 손실을 유발한다면, 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 작용을 한다고 말할 수 있고, 여기서 제제 중의 디아바디 (예컨대, DART-A)의 HMW 및/또는 LMW 종은 SE-HPLC를 통해 측정된다.
본원에서 사용되는 바, 안정화제 수용액은 그것의 존재가 약 20% 미만의 단백질 안정성의 손실, 또는 보다 바람직하게, 단량체 디아바디 (예컨대, DART-A)의 약 15% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 10% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 5% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 3% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 2% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 1% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.6% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.2% 미만의 손실을 유발한다면, 디아바디의 단백질 안정성을 유지하는 작용을 한다고 말할 수 있고, 여기서 제제 중의 디아바디 (예컨대, DART-A)의 고분자량 및/또는 저분자량은 SE-HPLC를 통해 측정된다.
본원에서 사용되는 바, 안정화제 수용액은 그것의 존재가 약 20% 미만의 디아바디 농도 (예컨대, DART-A 농도)의 손실, 또는 보다 바람직하게, 단량체 디아바디의 약 15% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 10% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 5% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 3% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 2% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 1% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.6% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.4% 미만의 손실, 또는 보다 바람직하게, 약 0.2% 미만의 손실을 유발한다면, 제제의 디아바디 (예컨대, DART-A DP 제제의 DART-A)의 용기 표면에의 비특이적 흡착을 억제 또는 방지하는 작용을 한다고 말할 수 있고, 여기서 제제 중의 디아바디 (예컨대, DART-A)의 HMW 및/또는 LMW 종은 SE-HPLC를 통해 측정된다.
본원에서 사용되는 바, 안정화제 수용액은 그것이 미생물 성장을 약 10% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 20% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 30% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 40% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 50% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 70% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 90% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 95% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 97% 이상, 또는 보다 바람직하게, 약 98% 이상 방지하거나 또는 억제한다면, 또는 보다 바람직하게, 그것의 존재가 검출 가능한 미생물 성장을 완전하게 방지한다면 그것의 보관 중에 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제) 내에서 그러한 미생물 성장을 억제 또는 방지하는 작용을 한다고 말살 수 있다.
1. 안정화제 1
안정화제 1은 정맥내 투여를 위해 DART-A 투약 용액을 제조하기 위하여 DART-A DP 제제와 조합되도록 설계된 비히클이다. 특정 구체예에서, 그러한 투여는 2개의 주입 펌프 (즉, 주사기 또는 이동형 펌프)를 사용한다.
바람직한 구체예에서, DART-A DP 제제는 안정화제 1을 포함한 용기에 첨가된다. 용기는 혼합되고 용액은 선택적으로 희석되어 투약 용액이 제조된다. 투약 용액은 용기에 넣어지고 대상체에게 투여하기 위한 장치에 부착된다.
한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제, 안정화제 1의 소아 투여에 특히 적합한 것은 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA 중 하나 이상을 포함한다. 특정 구체예에서, 그러한 수성 안정화제, 안정화제 1의 소아 투여에 특히 적합한 것은 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80을 포함하며, BA를 포함하지 않는다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 5 mM 내지 약 30 mM, 및 보다 바람직하게, 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(B) 약 100 mM 내지 약 300 mM, 및 보다 바람직하게, 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(C) 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 9.0 mg/mL의 BA 농도;
(D) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도;
및
(E) 약 5.5 내지 약 7.0의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 6.0의 pH
를 가질 것이다.
추가로 바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 5 mM 내지 약 30 mM, 및 보다 바람직하게, 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(B) 약 100 mM 내지 약 300 mM, 및 보다 바람직하게, 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(C) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도;
및
(D) 약 5.5 내지 약 7.0의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 6.0의 pH
를 가질 것이다.
추가로 바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 추가로 rHA, 및 보다 바람직하게, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 rHA 농도를 포함할 것이다.
그러므로, 예를 들어, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 5 mM 내지 약 30 mM, 및 보다 바람직하게, 약 10 mM의 인산 나트륨 농도, 및:
(1) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(2) 약 9.0 mg/mL의 BA 농도;
(3) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 6.0의 pH를 포함할 수 있고;
선택적으로 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 농도로 rHA를 포함하거나; 또는
(B) 약 5 mM 내지 약 30 mM, 및 보다 바람직하게, 약 10 mM의 인산 나트륨 농도, 및:
(1) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도; 및
(3) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(3) 약 6.0의 pH를 포함하거나; 또는
(C) 약 100 mM 내지 약 300 mM, 및 보다 바람직하게, 약 150 mM의 염화 나트륨 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 9.0 mg/mL의 BA 농도;
(3) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 6.0의 pH를 포함할 수 있고;
선택적으로 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 농도로 rHA를 포함하거나; 또는
(D) 약 100 mM 내지 약 300 mM, 및 보다 바람직하게, 약 150 mM의 염화 나트륨 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(3) 약 6.0의 pH를 포함하거나; 또는
(E) 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 9.0 mg/mL의 BA 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 6.0의 pH를 포함할 수 있고;
선택적으로 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 농도로 rHA를 포함하거나; 또는
(F) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 PS80 (PS80) 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 9.0 mg/mL의 BA 농도; 및
(4) 약 6.0의 pH를 포함할 수 있고;
선택적으로 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 농도로 rHA를 포함하거나; 또는
(G) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 PS80 (PS80) 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 6.0의 pH를 포함하거나; 또는
(H) 약 5.5 내지 약 7.0의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 6.0의 pH, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 9.0 mg/mL의 BA 농도;
(4) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도를 포함할 수 있고;
선택적으로 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 농도로 rHA를 포함하거나; 또는
(I) 약 5.5 내지 약 7.0의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 6.0의 pH, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도를 포함하거나; 또는
(J) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.10 mg/mL의 rHA 농도, 및
(1) 약 10 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 150 mM의 염화 나트륨 농도;
(3) 약 9.0 mg/mL의 BA 농도; 및
(4) 약 0.10 mg/mL의 PS80 농도; 및
(5) 약 6.0의 pH을 포함할 수 있다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.10 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 약 6.0의 pH를 가질 것이며, 추가적으로 약 0.10 mg/mL의 rHA를 포함할 것이다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.10 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 약 6.0의 pH를 가질 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 25℃에서 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 또는 적어도 약 5일 동안 공유 결합된 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 디아바디) 조제물 (예컨대 DART-A DP 제제)의 단량체 순도를 유지하기에 충분할 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 25℃에서 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 또는 적어도 약 5일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다. 가장 바람직하게, 그러한 수성 안정화제는 25℃에서 적어도 약 5일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 안정화제 수용액는 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한을 가진다.
2. 안정화제 2
안정화제 2는 정맥내 투여를 위해 DART-A DP 제제와 함께 사용되도록 설계된 안정화제이다. 특정 구체예에서, 그러한 투여는 단일 주입 펌프 구성 (즉, 주사기 또는 이동형 펌프)을 사용한다.
바람직한 구체예에서, 안정화제 2는 단일 주입 펌프와 함께 사용하기 위해 용기를 사전 코팅하기 위해 사용된다. DART-A DP 제제는 사전 코팅된 용기에 첨가되고 혼합되어 투약 용액이 얻어진다. 투약 용액을 포함하는 용기는 대상체에게 투여하기 위한 장치에 부착된다.
제2 구체예에서, 그러한 수성 안정화제, 안정화제 2는: 인산 나트륨, PS80, BA, 및 MP를 포함한다. 바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 15 mM 내지 약 25 mM, 및 보다 바람직하게, 약 20 mM의 인산 나트륨 농도;
(B) 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 13.2 mg/mL의 BA 농도;
(C) 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 4.25 mg/mL의 MP 농도;
(D) 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도; 및
(E) 약 7.7 내지 약 8.7의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 8.2의 pH를 가질 것이다.
그러므로, 예를 들어, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 15 mM 내지 약 25 mM, 및 보다 바람직하게, of 약 20 mM의 인산 나트륨 농도, 및:
(1) 약 13.2 mg/mL의 BA 농도;
(2) 약 4.25 mg/mL의 MP 농도;
(3) 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 8.2의 pH;
또는
(B) 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 13.2 mg/mL의 BA 농도, 및
(1) 약 20 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 4.25 mg/mL의 MP 농도;
(3) 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 8.2의 pH;
또는
(C) 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 4.25 mg/mL의 MP 농도, 및:
(1) 약 20 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 13.2 mg/mL의 BA 농도;
(3) 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도; 및
(4) 약 8.2의 pH;
또는
(D) 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL, 및 보다 바람직하게, 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도, 및:
(1) 약 20 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 13.2 mg/mL의 BA 농도;
(3) 약 4.25 mg/mL의 MP 농도; 및
(4) 약 8.2의 pH;
또는
(E) 약 7.7 내지 약 8.7의 pH, 및 보다 바람직하게, 약 8.2의 pH, 및:
(1) 약 20 mM의 인산 나트륨 농도;
(2) 약 13.2 mg/mL의 BA 농도;
(3) 약 4.25 mg/mL의 MP 농도; 및
(4) 약 0.25 mg/mL의 PS80 농도
를 가질 수 있다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 약 8.2의 pH를 가질 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 25℃에서 적어도 약 1일, 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 또는 적어도 약 7일 동안 공유 결합된 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 디아바디) 조제물 (예컨대 DART-A DP 제제)의 단량체 순도를 유지하기에 충분할 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 25℃에서 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 적어도 약 5일, 적어도 약 6일, 또는 적어도 약 7일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다. 가장 바람직하게, 그러한 수성 안정화제는 25℃에서 적어도 약 7일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 안정화제 수용액는 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한을 가진다.
3. 안정화제 3
안정화제 3은 정맥내 투여를 위한 이중특이적 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A 투약 용액)을 제조하기 위해 이중특이적 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)와 조합되도록 설계된 비히클이다. 특정 구체예에서, 그러한 투여는 단일 주입 펌프 구성 (즉, 주사기 또는 이동형 펌프)을 사용한다.
한 구체예에서, 이중특이적 디아바디 제제는 안정화제 3을 포함하는 용기에 첨가된다. 용기는 혼합되고 용액은 투약 용액을 제조하기 위해 선택적으로 희석된다. 투약 용액은 용기에 넣어지고 대상체에 투여하기 위한 장치에 부착된다.
또 다른 구체예에서, 보존제가 없고 완충제가 없는 투여에 특히 적합한 그러한 안정화제 3은 염화 나트륨 및 PS80을 포함하지만, 인산 나트륨 또는 BA를 포함하지 않는다.
또 다른 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는:
(A) 약 100 mM 내지 약 300 mM의 염화 나트륨 농도;
(B) 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 PS80 농도;
및
(C) 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 포함한다.
또 다른 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.10 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 약 6.0의 pH를 가질 것이다.
특정 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 25℃에서 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 또는 적어도 약 5일 동안 공유 결합된 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 디아바디) 조제물 (예컨대 DART-A DP 제제)의 단량체 순도를 유지하기에 충분할 것이다.
특정 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 정균 식염수와 함께 사용된다.
특정 구체예에서, 그러한 수성 안정화제는 약 25℃에서 적어도 약 1일, 적어도 약 2일, 적어도 약 3일, 적어도 약 4일, 또는 적어도 약 5일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다. 가장 바람직하게, 그러한 수성 안정화제는 25℃에서 적어도 약 5일 동안 미생물 성장을 방지 또는 억제하기에 충분할 것이다.
특정 구체예에서, 그러한 안정화제 수용액 has 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3개월의 유통 기한.
B. 디아바디 제제
일반적으로, 발명의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)의 구성요소는 활성제의 양을 나타내는 바이알, 앰풀, 또는 사셰와 같은 밀폐 밀봉 용기에 단위 투여 형태로, 예를 들어, 액체 제제로서 함께 혼합되어 공급된다. 디아바디 제제 (예컨대 DART-A DP 제제)는 바람직하게 액체 용액으로서 공급된다. 그러한 액체 용액은 투여 준비가 될 때까지 2 내지 8℃에서 그것의 원래 용기에서 보관되어야 한다. 디아바디 제제가 주입에 의해 투여될 것인 경우에, 그것은 멸균 식염수가 들어 있는 용기, 주머니, 또는 주입 보틀로 분배될 수 있다. 디아바디 제제가 주사에 의해 투여되는 경우에, 본원에서 상세하게 설명되는 것과 같이 투여 전에 성분들이 혼합될 수 있도록 식염수가 제공될 수 있다. 그러한 제제는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 디아바디의 예방적 또는 치료적 유효량을 포함한다. 특정 구체예에서 그러한 제제는 예방적 또는 치료적 유효량의 DART-A를 포함한다.
V. 키트
발명은 또한 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제), 안정화제 1, 안정화제 2, 또는 안정화제 3을 함유하는 하나 이상의 용기를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트를 제공한다. 추가적으로, 질환을 치료하는 데 유용한 하나 이상의 다른 예방제 또는 치료제가 또한 제약학적 팩 또는 키트에 포함될 수 있다. 선택적으로 의약품 또는 생물학적 제품의 제조, 사용 또는 판매를 통제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태의 통지가 그러한 용기(들)와 연관될 수 있고, 그런 통지는 인간 관리를 위한 제조, 사용 또는 판매 기관에 의한 승인을 반영한다. 선택적으로 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제), 안정화제 1, 안정화제 2, 또는 안정화제 3을 포함하는 투약 용액의 제조 및 투여를 위한 지침 및 설명서가 씌여 있는 제품 라벨이 그러한 용기(들)와 연관된다.
본 발명은 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제), 안정화제 1, 안정화제 2, 또는 안정화제 3을 포함하고 위의 방법으로 사용될 수 있는 키트를 제공한다. 그러한 키트에서, 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제), 안정화제 1, 안정화제 2, 또는 안정화제 3은 바람직하게 밀폐 밀봉된 용기, 예컨대 바람직하게 그 안에 함유된 구성요소의 양을 표시하는 앰풀, 바이알, 사셰, 등에 포장된다. 용기는 임의의 제약학적으로 허용되는 물질, 예컨대 유리, 수지, 플라스틱, 등으로 형성될 수 있다. 그러한 키트의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제), 안정화제 1, 안정화제 2, 또는 안정화제 3은 바람직하게 액체 용액으로서 공급된다. 그러한 액체 용액은 투여 준비가 될 때까지 2 내지 8℃에서 그것의 원래 용기에서 보관되어야 한다. 그러한 안정화제 수용액은 2-8℃에서 적어도 약 2년 또는 25℃에서 적어도 약 3년의 유통기한을 가진다. 키트는 추가로 하나 이상의 용기에, 하나 이상의 다른 예방제 및/또는 암 치료에 유용한 치료제를 포함할 수 있거나; 및/또는 키트는 암과 관련된 하나 이상의 암 항원에 결합하는 하나 이상의 세포독성 항체를 추가로 포함할 수 있다. 특정 구체예에서, 다른 예방제 또는 치료제는 화학요법제이다. 다른 구체예에서, 예방제 또는 치료제는 생물학적 또는 호르몬 치료제이다.
A. 안정화제 1과 함께 사용하기에 특히 적합한 키트
발명은 특히 안정화제 1과 함께 사용하기 위한 키트를 고려하며, 키트는:
(A) 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 공유 결합된 디아바디, 예컨대 CD123 x CD3 디아바디 (특히, CD123 x CD3 디아바디, 예컨대 DART-A), 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
(B) (i) 상기 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 상기 용액은 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL BA, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
(ii) 상기 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 상기 용액은 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로,
(C) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 투약 용액의 투여를 위해 용기 A 및 용기 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함한다.
바람직한 구체예에서, 그러한 용기 A는 약 0.1 mg/mL의 상기 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 제제는 약 6.0의 pH를 가질 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 용기 B는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가진다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 그러한 용기 B는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가진다.
추가의 바람직한 구체예에서, 그러한 용기 B는 추가로 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 농도로 rHA를 포함할 것이고, 보다 바람직하게, 추가로 약 0.1 mg/mL의 농도로 rHA를 포함할 것이다.
B. 안정화제 2와 함께 사용하기에 특히 적합한 키트
발명은 특히 안정화제 2와 함께 사용하기 위한 키트를 고려하며, 키트는:
(A) 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 공유 결합된 디아바디, 예컨대 CD123 x CD3 디아바디 (특히, CD123 x CD3 디아바디, 예컨대 DART-A), 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 100 내지 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
(B) 상기 디아바디 (예컨대, CD123 x CD3 디아바디)를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 상기 용액은 약 15 mM 내지 약 25 mM 인산 나트륨 완충제, 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL BA, 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL MP 및 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로
(C) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 투약 용액의 투여를 위해 용기 A 및 용기 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함한다.
바람직한 구체예에서, 그러한 용기 A는 약 0.1 mg/mL의 상기 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 제제는 약 6.0의 pH를 가질 것이다.
바람직한 구체예에서, 그러한 용기 B는 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함할 것이다.
C. 안정화제 3과 함께 사용하기에 특히 적합한 키트
발명은 특히 안정화제 3과 함께 사용하기 위한 키트를 고려하며, 키트는:
(A) 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 공유 결합된 디아바디, 예컨대 CD123 x CD3 디아바디 (특히, CD123 x CD3 디아바디, 예컨대 DART-A), 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
(B) 상기 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 상기 용액은 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로
(C) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 투약 용액의 투여를 위해 용기 A 및 용기 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함한다.
바람직한 구체예에서, 그러한 용기 A는 약 0.1 mg/mL의 상기 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 제제는 약 6.0의 pH를 가질 것이다.
또 다른 바람직한 구체예에서, 그러한 용기 B는 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함할 것이고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가진다.
VI. 투여 방식
본 발명의 DART-A DP 제제는 대상체에게 한정하는 것은 아니지만 발명의 CD123 x CD3 이중특이적 디아바디, DART-A를 포함한 유효량의 공유 결합된 디아바디를 투여함으로써 질환, 장애 또는 감염과 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방, 및 개선을 위해 제공될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 그러한 제약학적 제제는 실질적으로 정제된다 (즉, 그것의 효과를 제한하거나 원치 않는 부작용을 유발하는 물질이 실질적으로 없다). 특정 구체예에서, 대상체는 동물, 바람직하게는 비영장류 (예컨대, 소과, 말과, 고양이과, 개과, 설치류, 등) 또는 영장류 (예컨대, 시노몰구스 원숭이와 같은 원숭이, 인간 등)와 같은 포유류이다. 바람직한 구체예에서, 대상체는 인간이다.
발명의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)를 투여하는 방법은, 한정하는 것은 아니지만, 비경구 투여 (예컨대, 피내, 근육내, 복강내, 정맥내 및 피하)를 들 수 있다. 특정 구체예에서, 발명의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)는 정맥내로 투여된다. 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)는 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다.
주입에 의한 투여는 바람직하게 주입 펌프를 사용하여 이루어질 수 있다. "주입 펌프"는 제어된 방식으로, 특히 규정된 속도로 장기간 동안 환자의 신체에 유체를 전달하는 의료 장치이다. 주입 펌프는 기계적으로 동력이 공급될 수 있지만, 보다 바람직하게 전기적으로 동력이 공급된다. 일부 주입 펌프는 "고정형" 주입 펌프이며 환자의 침상에서 사용하도록 설계된다. "이동형" 주입 펌프로 불리는 다른 것은 휴대형 또는 착용형으로 설계된다. "주사기" 펌프는 전달될 유체가 챔버의 저장소 (예컨대, 주사기)에 보유되고, 움직일 수 있는 피스톤이 사용되어 챔버 부피를 제어함으로써 유체의 전달을 제어하는 주입 펌프이다. "엘라스토머" 주입 펌프에서, 유체는 신장 가능한 풍선 저장소에 보유되고, 풍선의 탄성 벽으로부터의 압력이 유체 전달을 구동시킨다. "연동" 주입 펌프에서, 롤러 세트가 가요성 튜빙의 길이로 아래로 눌러서, 유체를 전방으로 밀어낸다. "다중 채널" 주입 펌프에서, 유체는 다중 저장소로부터 다중 속도로 전달될 수 있다. "스마트 펌프"는 해로운 약물 상호작용의 위험에 대한 반응으로, 또는 펌프의 파라미터가 명시된 한계를 넘어 설정되었을 때 경고할 수 있도록 컴퓨터-제어된 유체 전달 시스템이 장착된 주입 펌프이다. 주입 펌프의 예는 잘 알려져 있고, 예를 들어, [Anonymous] 2002 "General-Purpose Infusion Pumps", Health Devices 31(10):353-387; 및 미국 특허 제 10,029,051호, 제 10,029,047호, 제 10,029,045호, 제 10,022,495호, 제 10,022,494호, 제 10,016,559호, 제 10,006,454호, 제 10,004,846호, 제 9,993,600호, 제 9,981,082호, 제 9,974,901호, 제 9,968,729호, 제 9,931,463호, 제 9,927,943호, 등에서 제시된다.
발명의 디아바디 제제, 특히 DART-A DP 제제는 하나 이상의 이동형 펌프에 의해 용이해진 주입에 의해 투여되어서, 환자가 치료 요법 중에 이동할 수 있는 것이 바람직하다.
바람직한 구체예에서, 디아바디 제제, 특히 DART-A DP 제제는 그러한 대상체 또는 환자에게 약 1-7일 (예컨대, 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 7일의 요법) 또는 7일 이상의 치료 요법으로, 또는 약 12 내지 168시간 (예컨대, 약 12시간, 약 18시간, 약 24시간, 약 30시간, 약 36시간, 약 42시간, 약 48시간, 약 54시간, 약 60시간, 약 66시간, 약 72시간, 약 78시간, 약 84시간, 약 90시간, 약 96시간, 약 102시간, 약 108시간, 약 114시간, 약 120시간, 약 126시간, 약 132시간, 약 138시간, 약 144시간, 약 150시간, 약 156시간, 약 162시간, 또는 약 168시간의 요법), 또는 168시간 이상의 치료 요법으로 투여될 것이다.
장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 개선에 효과적일 발명의 디아바디 제제의 양은 투여될 디아바디 (예컨대, DART-A)의 투여량에 따라 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다. 투약 용액에 사용될 디아바디 제제, 특히 DART-A DP 제제의 정확한 양은 또한 투여 경로, 상태의 심각성에 따라 달라질 것이고, 전문가의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 효과적인 투여량은 시험관내 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 용량 반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다. 그러한 투여량은 바람직하게 수령 대상체의 체중 (kg)을 토대로 결정된다.
본 발명의 안정적인 수성 제약학적 디아바디 제제 및 안정화제는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 포함하는 공유 결합된 디아바디 (예컨대, DART-A)의 매우 낮은 농도 (예컨대, 5-500 ng/kg/일)에서의 투여 및/또는 6-96시간 동안, 또는 최대 7일 동안의 연속 투여 (예컨대, 연속 주입에 의한)에 특히 유용하다. 그러한 구체예는 아래에서 한층 더 상세하게 제공된다.
A. 디아바디 제제 및 안정화제 1을 포함하는 투약 용액의 투여
디아바디 제제 (예컨대 DART-A DP 제제) 및 안정화제 1을 포함하는 투약 용액은 2개의 주사기 펌프 또는 2개의 이동형 펌프를 사용하는 정맥내 투여에 특히 적합하다 (도 11). 안정화제 1은 소아과 환자, 저체중 환자, 및/또는 더 높은 총 유량의 (예컨대, 두 펌프의 조합된 흐름으로부터 약 5 mL/hr보다 많은) IV를 필요로 하는 환자의 치료에 특히 적합하다. 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제) 및 안정화제 1은 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)을 얻기 위해 조합된다. BA가 없는 안정화제 1은 소아과 환자의 치료에 사용하기에 특히 적합하다. 그러한 안정화제 1 용액은 DART-A 투약 용액을 얻기 위해 DART-A DP 제제와 조합된 후 24시간 내에 투여하기에 특히 적합하다.
그러한 2-펌프 시스템에서, 제1 펌프 (펌프 1)는 3-방향 밸브의 한 부분에 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)을 전달하기 위해 사용된다. 펌프 1은 바람직하게 1 mL/hr 이하의 유량, 특히 약 0.9 mL/hr 이하, 약 0.8 mL/hr 이하, 약 0.7 mL/hr 이하, 약 0.6 mL/hr 이하, 약 0.5 mL/hr, 약 0.4 mL/hr, 약 0.3 mL/hr, 약 0.2 mL/hr, 또는 약 0.1 mL/hr 이하의 유량으로 투약 용액을 제공한다.
제2 펌프 (펌프 2)는 정맥 폐쇄를 방지하기에 충분하게 (즉, 약 5 mL/hr보다 큰 유량) 흐름 부피 (예컨대, 10 mL/hr)가 제공되는 것을 보장하기 위해, 3-방향 밸브의 제2 부분으로 (예를 들어, 10 mL/hr의 유량으로) 식염수 (0.9% 염화 나트륨 주사 USP)를 전달하기 위해 사용된다. 조합된 흐름은 환자에게 정맥내로 투여된다. 2-펌프 주입 구성은 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)의 주입 속도가 바람직하게는 1 mL/hr 이하이고 권장된 유량은 중심 정맥 카테터 (CVC) 부분을 어떠한 혈액 응고 없이 개방된 채로 유지하기 위하여 10 mL/hr보다 크기 때문에 필요하다. 펌프 2는 적어도 10 mL/hr의 조합된 유량을 유지하기 위하여 10 mL/hr로 식염수를 전달한다.
치료 투여량의 투여는 바람직하게 적어도 6시간, 적어도 12시간, 적어도 18시간, 적어도 24시간, 또는 적어도 30시간 동안일 것이다 (예컨대, 약 0.1 mL/시간 내지 약 2.0 mL/시간의 유량으로 적어도 24시간 동안 연속 주입에 의한 투여).
특정 구체예에서, 적어도 약 30 ng/kg/일 내지 적어도 약 500 ng/kg/일의 투여량이 환자 또는 대상체에게 투여될 것이다. 그러한 투여량의 투여는 바람직하게 적어도 24시간, 적어도 36시간, 적어도 48시간, 적어도 60시간, 적어도 72시간, 적어도 84시간, 적어도 96시간, 또는 적어도 7일 (즉, 168시간) 동안 이루어질 것이다. 그러므로, 예를 들어, 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)의 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량으로 적어도 48시간 동안, 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 또는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안, 등으로 연속 주입에 의해 이루어질 수 있다.
고용량 농도를 유발하기 위하여, 안정화제 1의 분취액은 약 0.1 mg/mL의 다이바디 농도를 가진 초기 희석된 디아바디 제제 (예컨대, 희석된 DART-A DP 제제)를 유발하기 위하여, 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)의 분취액과 혼합된다. 그런 후 이 초기 희석된 디아바디 제제는 추가로 추가 안정화제 1 (예컨대, 95 mL의 추가 안정화제 1과 혼합된 5 mL의 초기 희석된 디아바디 제제)로 1:20으로 희석되고 부드럽게 혼합되어, 약 5000 ng/mL의 디아바디 농도를 가진 고용량 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)이 산출된다.
저용량 농도를 유발하기 위하여, 안정화제 1의 분취액은 약 0.1 mg/mL의 다이바디 농도를 가진 초기 희석된 디아바디 제제를 유발하기 위하여, 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)의 분취액과 혼합된다. 그런 후 이 초기 희석된 디아바디 제제 농도는 추가로 추가 안정화제 1 (예컨대, 99 mL의 추가 안정화제 1과 혼합된 1 mL의 초기 희석된 디아바디 제제)로 1:100으로 희석되고 부드럽게 혼합되어, 약 1000 ng/mL의 디아바디 농도를 가진 이차 희석된 디아바디 제제가 산출된다. 이 이차 희석된 디아바디 제제는 그런 후 추가로 추가 안정화제 1 (예컨대, 90 mL의 추가 안정화제 1과 혼합된 10 mL의 이차 희석된 디아바디 제제)로 1:10으로 희석되고 부드럽게 혼합되어, 약 100 ng/mL 이상의 디아바디 농도를 가진 저용량 디아바디 투약 용액 (예컨대, 저용량 DART-A DP 투약 용액)이 산출된다.
B. DART-A DP 제제 및 안정화제 2를 포함하는 DART-A DP 투약 용액의 투여
디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제) 및 안정화제 2를 포함하는 투약 용액은 단일 주사기 펌프 또는 단일 이동형 펌프를 사용하여 정맥내 투여에 특히 적합하다. 도 14는 상기 투약 용액의 투여에 사용될 수 있는 이동형 펌프의 예를 보여준다. 안정화제 2를 사용하는 투약 용액을 형성하기 위하여, 40 mL의 안정화제 2가 용기, 예컨대 250 mL 식염수 주머니 (공칭 부피 270 mL)에 첨가될 수 있고, 그로써 총 310 mL의 부피가 형성될 수 있다. 그런 후 원하는 양의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)가 식염수 주머니에 첨가되어 최종 투약 용액이 제공되고, 그런 후 단일 이동형 펌프를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다 (도 15).
바람직하게, 적어도 약 30 ng/kg/일 내지 적어도 약 500 ng/kg/일의 투여량이 환자 또는 대상체에 투여될 것이다. 그러한 투여량의 투여는 바람직하게 적어도 24시간, 적어도 36시간, 적어도 48시간, 적어도 60시간, 적어도 72시간, 적어도 84시간, 적어도 96시간, 또는 적어도 7일 (즉, 168시간) 동안 이루어질 것이다. 그러므로, 예를 들어, 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)의 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량으로 적어도 48시간 동안, 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 또는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안, 등으로 연속 주입에 의해 이루어질 수 있다.
역사적으로, 만약 60 mL/일의 최소 유량으로 96시간 동안 연속 주입이 특히 바람직하다면, 정맥 폐쇄를 방지하기 위해 필요한 최소 유량은 약 2.5 mL/hr이다. 그러나, 0.3 mL/시간 내지 3.0 mL/시간의 유량이 정맥 폐쇄를 유발하지 않으면서 연속 투여에 효과적인 것으로 나타났다. 더 낮은 유량이 바람직한 경우, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 또는 적어도 7일 동안 연속 주입하는 것이 바람직하다. 더 낮은 유량이 사용될 수 있는 경우 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안의 연속 주입이 특히 바람직하다. 대안으로 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 (168시간) 동안 연속 주입이 특히 바람직하다.
C. 이중특이적 디아바디 제제 및 안정화제 3을 포함하는 이중특이적 디아바디 투약 용액의 투여
이중특이적 디아바디 제제 (예컨대 DART-A DP 제제) 및 안정화제 3을 포함하는 투약 용액은 단일 주사기 펌프 또는 단일 이동형 펌프를 사용하는 정맥내 투여에 특히 적합하다. 안정화제 3은 특히 보존제가 없고 완충제가 없는 안정화제가 바람직한 경우인 소아 환자 또는 다른 상태의 치료에 사용하기에 적합하다. 도 14는 상기 투약 용액의 투여에 사용될 수 있는 이동형 펌프의 예를 도시한다. 안정화제 3은 용기, 예컨대 식염수가 들어 있는 IV 주머니 또는 정균 식염수 주머니 (공칭 부피 100 mL)에 첨가될 수 있다. 정균 식염수는 특히 안정화제 3과 함께 이중특이적 디아바디 제제의 투여에 적합하다. 예를 들어, 18 mL의 안정화제 3이 70 mL의 정균 식염수가 들어 있는 IV 주머니에 첨가되어 84 mL의 총 부피를 형성할 수 있다. 그런 후 원하는 양의 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)가 식염수 주머니에 첨가되어 최종 투약 용액이 제공되고, 단일 이동형 펌프를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다 (도 15).
특정 구체예에서, 적어도 약 30 ng/kg/일 내지 적어도 약 500 ng/kg/일의 투여량이 환자 또는 대상체에게 투여될 것이다. 그러한 투여량의 투여는 적어도 24시간, 적어도 36시간 동안, 적어도 48시간 동안, 적어도 60시간 동안, 적어도 72시간 동안, 적어도 84시간 동안, 적어도 96시간 동안, 또는 적어도 7일 (즉, 168시간) 동안 이루어질 것이다. 그러므로, 예를 들어, 디아바디 투약 용액 (예컨대, DART-A DP 투약 용액)의 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량으로 적어도 48시간 동안, 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 또는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안, 등으로 연속 주입에 의해 이루어질 수 있다. 더 낮은 유량이 바람직한 경우, 약 0.3 mL/시간 내지 약 3 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 또는 적어도 7일 동안 연속 주입이 사용될 수 있다. 더 낮은 유량이 사용될 수 있는 경우, 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안의 연속 주입 또는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 (168시간) 동안 연속 주입이 사용될 수 있다.
VII. 발명의 조성물의 용도
발명의 디아바디 제제 및 안정화제는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 디아바디를 그것을 필요로 하는 대상체에게 투여하기에 유용하다. 특히, DART-A DP 제제는 CD123의 발현과 관련된 또는 그것을 특징으로 하는 임의의 질환 또는 상태를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 특히, DART-A DP 제제는 혈액암을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 그러므로, 제한 없이, DART-A DP 제제는 AML, CML의 모세포성 위기 및 CML과 관련된 Abelson 발암유전자 (Bcr-ABL 전좌)를 포함한 CML, MDS, B-ALL, 리히터 증후군 또는 세포의 리히터 변형을 포함한 CLL, HCL, BPDCN, NHL, MCL, SLL, 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종의 진단 또는 치료에 사용될 수 있다. DART-A는 추가적으로 위에서 기술된 상태의 치료를 위한 의약의 제조에 사용될 수 있다.
DART-A DP 제제는 특히 AML, BPDCN, MDS, 및 T-ALL의 치료에 사용하기에 적합하다.
VIII. 발명의 구체예
발명은 다음의 구체예 E1-E129에 관한 것이다:
E1 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 폴리소르베이트 80 (PS80)을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
E2 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것인 E1의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E3 인산 나트륨의 농도는 약 10 mM인 것인 E2의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E4 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E1-E3의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E5 PS80의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것인 E4의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E6 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 E1-E5의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E7 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것인 E6의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E8 제제는 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 E1-7의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E9 pH는 약 6.0인 것인 E8의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E10 제제는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제의 pH는 약 6.0인 것인 E1-E11 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E11 디아바디는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E1-E11 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E12 디아바디의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것인 E1-E11 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E13 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것인 E1-E12 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E14 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것인 E1-E13 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E15 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 E14의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E16 제제는 약 0.1 mg/mL의 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제의 pH는 약 6.0인 것인 E1-E15 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E17 용액은 25℃에서 약 3개월 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 E1-E16 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E18 용액은 2-8℃에서 약 48개월 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 E1-E16 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제.
E19 E1-E18 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기.
E20 용기는 유리 바이알인 것인 E19의 용기.
E21 E1-E18 중 어느 하나의 안정적인 수성 제약학적 제제 또는 E19-E20 중 어느 하나의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
E22 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 인산 나트륨, PS80, 벤질 알코올 (BA), 및 메틸파라벤 (MP)을 포함하는 안정화제 수용액.
E23 인산 나트륨은 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도를 가지는 것인 E22의 안정화제 수용액.
E24 인산 나트륨의 농도는 약 20 mM인 것인 E23의 안정화제 수용액.
E25 BA는 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E21-24 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E26 BA의 농도는 약 13.2 mg/mL인 것인 E25의 안정화제 수용액.
E27 MP는 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E22-26 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E28 MP의 농도는 약 4.25 mg/mL인 것인 E27의 안정화제 수용액.
E29 PS80은 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E22-28 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E30 PS80의 농도는 약 0.25 mg/mL인 것인 E29의 안정화제 수용액.
E31 용액은 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는 것인 E22-30 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E32 pH는 약 8.2인 것인 E31의 안정화제 수용액.
E33 안정화제 용액은 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하고, 용액의 pH는 약 8.2인 것인 E22-32 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E34 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것인 E22-33 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E35 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것인 E22-34 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E36 CD123 x CD3 디아바디는:
(a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
(b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 E35의 안정화제 수용액.
E37 용액은 약 25℃에서 약 5-7일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 E22-36 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E38 용액은 약 25℃에서 약 5-7일 동안 미생물 성장을 방지하는 것인 E22-37 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E39 E22-38 중 어느 하나의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
E40 용기는 유리 바이알인 것인 E39의 용기.
E41 E23-E38 중 어느 하나의 안정화제 수용액 또는 E39-E40 중 어느 하나의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
E42 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로, 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액.
E43 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 E42의 안정화제 수용액.
E44 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것인 E43의 안정화제 수용액.
E45 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E42-E44 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E46 PS80의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것인 E45의 안정화제 수용액.
E47 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 E42-E46 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E48 pH가 6.0인 것인 E47의 안정화제 수용액.
E49 용액은 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 및 용액의 pH가 약 6.0인 것인 E42-E48 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E50 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것인 E42-E49 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E51 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것인 E42-E50 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E52 CD123 x CD3 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 E51의 안정화제 수용액.
E53 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 E42-E52 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E54 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 방지하는 것인 E42-E53 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E55 E42-E52 중 어느 하나의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
E56 용기는 유리 바이알인 것인 E55의 용기.
E57 E42-E54 중 어느 하나의 안정화제 수용액 또는 E55-E56 중 어느 하나의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
E58 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로서, 하나 이상의 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA를 포함하는 안정화제 수용액.
E59 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것인 E58의 안정화제 수용액.
E60 인산 나트륨의 농도는 약 10 mM인 것인 E59의 안정화제 수용액.
E61 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것인 E58 또는 E59의 안정화제 수용액.
E62 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것인 E61의 안정화제 수용액.
E63 BA는 약 7.0mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E58-E62 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E64 BA의 농도는 약 9.0 mg/mL인 것인 E63의 안정화제 수용액.
E65 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E58-E64 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E66 PS80의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것인 E65의 안정화제 수용액.
E67 재조합 인간 알부민 (rHA)을 추가로 포함하는 것인 E58-E66 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E68 rHA는 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 농도를 가지는 것인 E67의 안정화제 수용액.
E69 rHA의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것인 E68의 안정화제 수용액.
E70 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 E58-E69 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E71 pH가 6.0인 것인 E70의 안정화제 수용액.
E72 용액은: a) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80, 및 약 0.1 mg/mL rHA를 포함하며, 용액의 pH는 약 6.0이거나; 또는 b) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80, 및 용액의 pH가 약 6.0인 것인 E58-E71 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E73 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것인 E58-E72 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E74 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것인 E58-E73 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E75 CD123 x CD3 디아바디는:
(a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
(b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 E74의 안정화제 수용액.
E76 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것인 E58-E76 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E77 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 방지하는 것인 E58-E76 중 어느 하나의 안정화제 수용액.
E78 E58-E77 중 어느 하나의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
E79 용기는 유리 바이알인 것인 E78의 용기.
E80 E58-E77 중 어느 하나의 안정화제 수용액 또는 E78-E79 중 어느 하나의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
E81 키트로서,
(a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
(b) 약 15 mM 내지 약 25 mM 인산 나트륨 완충제, 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 BA, 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL MP 및 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL PS80을 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및
(c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 투약 용액의 투여를 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함하는 키트.
E82 키트로서,
(a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
(b) (i) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL BA, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
(ii) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
(iii) 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로,
(c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 투약 용액의 투여를 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
를 포함하는 키트.
E83 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것인 E81 또는 E82 중 어느 하나의 키트.
E84 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것인 E81 내지 E83 중 어느 하나의 키트.
E85 디아바디는:
a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
여기서 제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것인 키트인 것인 E84의 키트.
E86 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제는 약 0.1 mg/mL의 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 제제의 pH는 약 6.0인 것인 E81 내지 E85 중 어느 하나의 키트.
E87 용기 B의 안정화제 수용액은 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하고, 용액은 약 8.2의 pH를 가지는 것인 E81, E83 내지 E86 중 어느 하나의 키트.
E88 용기 B의 안정화제 수용액은:
i) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 용액은 약 6.0의 pH를 가지거나; 또는
ii) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 용액은 약 6.0의 pH를 가지거나; 또는
(iii) 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가지는 것인 E82 내지 E86 중 어느 하나의 키트.
E89 안정화제 수용액은 추가로 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도의 rHA를 포함하는 것인 E82 내지 E86 중 어느 하나의 키트.
E90 rHA의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것인 E89의 키트.
E91 대상체는 인간 환자인 것인 E81 내지 E90 중 어느 하나의 키트.
E92 용기 A 및 용기 B는 유리 바이알인 것인 E81 내지 E91 중 어느 하나의 키트.
E93 E81-E92 중 어느 하나의 키트 및 선택적으로 키트의 보관 및/또는 사용을 위한 설명서를 포함하는 밀봉된 포장.
E94 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법으로서, E81, E83-E85, E87, 또는 E91-E93 중 어느 하나의 키트를 사용하는 것을 포함하며, 용기 B의 안정화제 수용액은 인산 나트륨, PS80, BA, MP를 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지며;
방법에서:
(a) 용기 B의 안정화제 수용액은 용기 C에 배치되어 혼합되고;
(b) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제는 용기 C에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지며;
(c) 투약 용액을 함유한 용기 C는 대상체에 투여하기 위한 장치에 부착된다.
E95 용기 C는 정맥내 주입을 위해 식염수를 포함하는 것인 E94의 방법.
E96 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법으로서, E82-E86, 또는 E88-E93 중 어느 하나의 키트를 사용하는 것을 포함하며, 용기 B의 안정화제 수용액은 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA, 중 하나 이상, 및 선택적으로 rHA를 포함하고, 약 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지며;
방법에서:
(a) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제가 용기 B의 안정화제 수용액에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지는 단계;
(b) 선택적으로 투약 용액이 희석되는 단계;
(c) 투약 용액이 용기 C에 배치되는 단계; 및
(d) 최종 투약 용액을 함유한 용기 C를 대상체에게 투여하기 위한 장치에 부착시키는 단계를 포함한다.
E97 용기 C는 정맥내 주입을 위해 식염수 또는 정균 식염수를 포함하는 것인 E96의 방법.
E98 투여는 주입 펌프에 의한 것인 E94-E97 중 어느 하나의 방법.
E99 투여는 이동형인 것인 E94-E98 중 어느 하나의 방법.
E100 장치는 단일 이동형 펌프인 것인 E94-E98 중 어느 하나의 방법.
E101 장치는 이중 이동형 펌프인 것인 E94-E98 중 어느 하나의 방법.
E102 장치는 주사기 펌프인 것인 E94-E98 중 어느 하나의 방법.
E103 투여는 적어도 약 24시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E104 투여는 적어도 약 48시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E105 투여는 적어도 약 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E106 투여는 적어도 약 7일 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E107 투여는 약 0.10 mL/시간 내지 약 2.5 mL/시간의 유량으로 발생하는 것인 E94-E106 중 어느 하나의 방법.
E108 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 10.0 mL/시간의 유량으로 발생하는 것인 E94-E106 중 어느 하나의 방법.
E109 투여는 약 0.1 mL/시간 내지 약 2.0 mL/시간의 유량으로 적어도 24시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E110 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량으로 적어도 48시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E111 투여는 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E112 투여는 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E113 투여는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 96시간 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 또는 E112 중 어느 하나의 방법.
E114 투여는 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 중 어느 하나의 방법.
E115 투여는 약 0.5 mL/시간의 유량으로 적어도 7일 동안 연속 주입에 의한 것인 E94-E102 또는 E114 중 어느 하나의 방법.
E116 유량은 대상체에서 정맥 폐쇄를 방지하는 것인 E94-E115 중 어느 하나의 방법.
E117 CD123 x CD3 디아바디는 30 - 500 ng/kg/일로 이루어지는 군으로부터 선택된 치료 투여량으로 대상체에게 투여되는 것인 E94-E116 중 어느 하나의 방법.
E118 투약 용액은 40 mL의 안정화제 수용액을 포함하는 것인 E94-E95, E97-E99, E102-E117 중 어느 하나의 방법.
E119 투약 용액은 약 0.03 mg/mL 내지 약 0.04 mg/mL PS80, 약 1.7 mg/mL 내지 약 2.1 mg/mL BA, 및 약 0.55 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL MP를 포함하는 것인 E94-E95, E97-E99, E102-E118 중 어느 하나의 방법.
E120 투약 용액은 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것인 E96-E118 중 어느 하나의 방법.
E121 환자는 인간 대상체인 것인 E94-E120 중 어느 하나의 방법.
E122 혈액암을 치료하는 방법으로서, E94-E102 중 어느 하나의 방법을 따라 또는 E81-E92 중 어느 하나의 키트를 사용하여, 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
E123 혈액암의 치료에 사용하기 위한 E81-E92 중 어느 하나의 키트의 용도.
E124 혈액암은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML)의 모세포성 위기 및 CML과 관련된 Abelson 발암유전자 (Bcr-ABL 전좌)를 포함한 CML, 골수형성이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 CLL의 리히터 변형을 포함한 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 털세포 백혈병 (HCL), 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함한 비-호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것인 E122의 방법, 또는 E123의 용도.
E125 혈액암은 AML인 것인 E124의 방법 또는 용도.
E126 혈액암은 BPDCN인 것인 E124의 방법 또는 용도.
E127 혈액암은 MDS인 것인 E124의 방법 또는 용도.
E128 혈액암은 T-ALL인 것인 E124의 방법 또는 용도.
E129 대상체는 인간 대상체인 것인 E122-E128 중 어느 하나의 방법 또는 용도.
실시예
이제 본 발명을 일반적으로 설명하고, 이하의 실시예를 참조하여 동일한 것을 보다 쉽게 이해할 수 있을 것이며, 이는 예시를 위해 제공되며 명시되지 않는 한 본 발명을 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
실시예 1
CD123 x CD3 디아바디를 함유하는 안정적인 수성 제약학적 제제의 개발
위에서 개시된 것과 같이, CD123 x CD3 디아바디, DART-A는 CD123 및 CD3에 동시에 결합할 수 있는 이중특이적 일가 디아바디이다. DART-A는 SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬 및 SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬로 이루어지며 도 1에 도시된 일반 구조를 가진다. DART-A를 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제인 DART-A DP 제제를 바이알 중의 액체 제제로서 개발하였다.
1.1. DART-A DP 제제의 개발 - 연구 설계 및 결과
DART-A DP 제제의 개발 중에 사용한 분석용 테스트 방법을 아래의 표 5에 열거한다.
DART-A DP 제제에 대한 분석적 테스트
테스트한 속성 방법 *
단백질 농도 280 nm에서의 흡광도
용액 혼탁도 320 nm에서의 흡광도
눈에 보이지 않는 입자 수 빛 차단 방법 (HIAC)
열적 안정성 시차 주사 열량측정
전하 변화 모세관 등전점 포커싱
pH pH
외관 시각적 외관 모니터링
펩타이드 맵핑에 의한 안정성 LC-ESIMS
단백질 응집 SE-HPLC
* 모든 방법을 아래의 실시예 5에서 상세하게 기술한다.
독성학 동물 연구 및 임상 사용을 위해 3개의 연구를 수행하여 DART-A DP 제제를 제공하였다. 이들 연구는 다음의 제제 속성을 평가하였다:
(1) DART-A 안정성 및 응집에 미치는 계면활성제 수준의 영향
(2) DART-A 응집 및 입자 형성에 미치는 부형제 및 단백질 농도의 영향
(3) 질량 분석 분석 기법을 통한 DART-A 펩타이드 맵핑.
1.2. DART-A 안정성 및 분해에 미치는 계면활성제 수준의 영향
DART-A를 0.1 mg/mL 농도로 제제화하기 위하여, DART-A를 제제 완충제 (10 mM 인산 나트륨 및 150 mM 염화 나트륨, pH 6.1)에 희석하였다. 초기의 눈에 보이지 않는 입자 형성 및 용액 혼탁도는 허용 가능한 것으로 관찰되었다. 그러나, 이송 후 1개월 후, 원래의 방출 사양을 초과한 증가된 혼탁도 및 상승된 눈에 보이지 않는 입자 수준이 관찰되었다. 강제 교반 연구를 PS80 (0.1 mg/mL)이 있거나 없는 2개의 발달 로트에 대해 수행하여 입자 형성 및 외관 변화의 원인을 측정하였다. 강제 교반 연구 중에, DART-A 샘플을 2-8℃에서 유지하였고 600 rpm에서 24시간 동안 교반하였다.
도 5A-5B는 PS80 함유 제제가 24시간 교반 후에 DART-A의 낮은 혼탁도를 보이는 것을 도시한다. PS80이 존재하지 않을 때, DART-A DP 제제의 혼탁도는 3 내지 5배 증가한다. 이런 경향은 또한 눈에 보이지 않는 입자 수 데이터에서도 관찰되는데 이때 PS80이 없는 디아바디 제제는 PS80을 함유한 용액에 비해 5 내지 6배 더 높은 수의 ≥ 10 μm 입자를 가진다.
PS80 함유 제제의 열적 안정성을 도 6에서 도시된 바와 같이 시차 주사 열량측정 (DSC)을 사용하여 평가하였다. 도 6은 PS80의 존재 및 부재 하에 유사한 DSC 프로파일을 보인다. PS80의 존재는 DART-A DP 제제의 열안정성에 영향을 미치지 않는다.
PS80의 존재 하에 DART-A 적합성을 추가로 특성화하기 위하여, 가속 스트레스 연구를 수행하여 DART-A 응집이 온도 의존적인지, 그리고 응집이 DART-A 효능에 영향을 주는지를 측정하였다. 연구에서, PS80이 있거나 없는 DART-A를 25 ± 2℃ 및 40 ± 2℃에서 인큐베이션하고 5 ± 3℃에서 보관한 샘플과 비교하였다. 가속 스트레스 연구로 또한 DART-A 단백질 안정성에 미치는 잔류 과산화물 (1.0 μeq/L)의 영향을 평가하였는데, 이것은 폴리소르베이트가 자동 산화를 진행하여 과산화물 형성을 초래하고, 잠재적으로 단백질의 산화성 분해를 유발할 수 있기 때문이다. 연구 결과를 아래의 표 6-8에 제시한다.
6주 동안 인큐베이션 후 DART-A SE-HPLC 결과
제제 전하 변화 5 ± 3℃ 25 ± 2℃ 40 ± 2℃
PBS
pH 6.1		 % 주요 피크 99.2 98.9 97.0
% HMW 0.8 1.0 1.8
% LMW 0.1 0.2 1.2
PBS + PS80
pH 6.1		 % 주요 피크 99.7 99.7 98.1
% HMW 0.3 0.2 1.0
% LMW 0.0 0.0 1.0
PBS + PS80 + H2O2 pH 6.1 % 주요 피크 99.6 99.5 98.0
% HMW 0.2 0.3 0.9
% LMW 0.2 0.1 1.0
표 6은 PS80의 첨가가 5 ± 3℃, 25 ± 2℃, 및 40 ± 2℃에서 6주 보관 후에 HMW 형성을 감소시키는 것을 보여준다. 40℃에서 6주 인큐베이션 후에, 3개 샘플은 모두 단량체 DART-A 단백질 주요 피크 백분율의 약간의 감소를 보였다. 이들 감소는 HMW 및 LME 종에서 모두 약간의 증가와 관련된다.
6주 동안 인큐베이션 후 DART-A 농도 및 혼탁도
제제 전하 변화 5 ± 3℃ 25 ± 2℃ 40 ± 2℃
PBS
pH 6.1		 농도 (mg/mL) 0.089 0.095 0.085
혼탁도 (A320) 0.008 0.002 0.002
PBS + PS80
pH 6.1		 농도 (mg/mL) 0.097 0.097 0.087
혼탁도 (A320) 0.007 0.001 0.006
PBS + PS80 + H2O2 pH 6.1 농도 (mg/mL) 0.097 0.096 0.087
혼탁도 (A320) 0.003 0.002 0.016
표 7은 25 ± 2℃ 또는 40 ± 2℃에서 인큐베이션 후에 PBS 또는 PBS + PS80 제제에 대해 용액 혼탁도에 변화가 없는 것을 보여준다. 그러나, 과산화 수소를 함유한 제제는 40 ± 2℃에서 증가된 혼탁도를 보였다. 3개 전부의 제제의 경우, 40 ± 2℃에서 6주 동안의 인큐베이션은 단백질 농도의 유사한 감소를 유발하였다.
6주 동안 인큐베이션 후 DART-A 전하 변화
인큐베이션 온도 전하 변화 참조 표준 PBS
pH 6.1 		PBS + PS80
pH 6.1 		PBS + PS80 + H 2 O 2 pH 6.1
5 ± 3℃ % 산성 19.8 20.6 21.6 20.6
% 주요 피크 75.3 75.9 76.2 77.5
% 염기성 4.9 3.5 2.3 1.9
25 ± 2℃ % 산성 N/A 21.9 23.1 22.8
% 주요 피크 N/A 75.0 74.7 75.5
% 염기성 N/A 3.1 2.2 1.7
40 ± 2℃ % 산성 N/A 46.5 46.2 45.8
% 주요 피크 N/A 53.5 53.8 54.2
% 염기성 N/A 0.0 0.0 0.0
표 8은 5 ± 3℃ 및 25 ± 2℃에서 인큐베이션하였을 때 모두 전부 3개의 제제에 대해 전하 변화의 유의한 차이가 없는 것을 보여준다. 40 ± 2℃에서의 인큐베이션은 산성 변화의 유의한 증가를 유발한다; 그러나, 이 증가는 3개 제제 전부에서 일치하였다.
가속 스트레스 안정성 연구의 결과는 PS80이 전형적인 보관 또는 가속 스트레스 온도에 노출되었을 때 단백질 안정성에 영향을 미치는 것을 시사한다. 이것을 PS80의 존재가 전형적인 이송 및 취급 중에 발생할 수 있을 제제의 혼탁도 및 DART-A의 눈에 보이지 않는 입자의 증가를 제한하는 것을 보여주는, 강제 교반 연구의 결과에서 확인하였다. 이들 결과를 토대로, 0.1 mg/mL의 PS80을 DART-A DP 제제 (10 mM 인산 나트륨 및 150 mM 염화 나트륨, pH 6.0)에 첨가하였다.
1.3. DART-A 구조 및 기능에 미치는 장기 보관의 영향
제2 연구에서, 0.1 mg/mL의 농도에서의 DART-A 제제 (10 mM 인산 나트륨, 150 mM NaCl 및 0.1 mg/mL PS80 완충제)를 5 ± 3℃ 및 25 ± 2℃에서 장기 보관하는 중에 평가하여 제제가 어떻게 단백질 구조 및 기능을 유지하는지를 측정하였다. DART-A 제제 조성을 표 9에 열거한다.
DART-A 제제 조성
명칭 코드 DART-A 농도 일염기성 인산 나트륨 이염기성 인산 나트륨 염화 나트륨 PS80
제제 1 DART-A 0.1 1.1 0.26 8.8 0.1
DART-A 제제를 제안된 최종 임상 제시에 따라 바이알에 충전하고 (5 mL 타입 I 붕규산염 유리 바이알에 5 mL 용액 부피) 하기 표 10의 안정성 매트릭스에 따라 거꾸로 보관하였다.
온도 조건 및 시점을 포함한 모든 제제에 대한 안정성 매트릭스
온도 시점 (개월)
5 ± 3℃ 0, 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 36, 48
25 ± 2℃ 0, 1, 3, 5, 6
150 mM NaCl + PS80 제제에서의 0.1 mg/mL DART-A의 안정성 결과를 하기 표 11 및 표 12에서 제시한다.
5 ± 3℃에서 인큐베이션 후 DART-A 안정성 결과
제제 테스트 보고된 결과 시간 (개월)
0 12 24 36 48
150 mM NaCl, 0.01% PS80 중의
0.1 mg/mL DART-A 		효능
(CD123-결합)		 상대 효능 104 105 99 96 101
효능
(CD3-결합)		 상대 효능 109 106 100 102 97
감소된 CE-SDS 생성물
순도		 97.3 96.5 97.2 96.4 96.4
SE-HPLC A % 주요 피크 98.6 98.4 98.8 98.8 98.7
% HMW 1.4 1.4 1.2 1.1 1.2
% LMW 0.0 0.2 0.1 0.1 0.0
입자 수
(바이알당)		 ≥ 2 μm 11,048 18,858 4,592 2,226 2,368
≥ 10 μm 30 227 29 16 20
≥ 25 μm 0 8 1 0 0
A. SE-HPLC: %HMW = % 고분자량 종, %LMW = % 저분자량 종
상기 결과는 5 ± 3℃의 권장 온도에서의 보관이 48개월 후 DART-A 구조 및 기능에 영향을 미치지 않는 것을 보여준다. 제제는 눈에 보이지 않는 입자, SE-HPLC 및 환원/비환원 CE-SDS 결과에서 관찰된 것과 같이 DART-A 응집 및 분해를 제한한다. DART-A 효능은 CD3 및 CD123 결합 결과에 의해 확인된 바와 같인 유의하게 변화하지 않는다.
25 ± 2℃에서 인큐베이션 후 DART-A 안정성 결과
제제 테스트 보고된 결과 시간 (개월)
0 1 3 5 6
150 mM NaCl, 0.01% PS80 중의 DART-A 0.1 mg/mL 효능
(CD123-결합)		 상대 효능 104 96 99 93 82
효능
(CD3-결합)		 상대 효능 109 99 94 78 78
환원 CE-SDS 생성물 순도 97.3 96.6 95.9 95.8 94.9
비환원 CE-SDS 생성물 순도 97.1 95.7 94.7 91.8 92.4
SE-HPLC A % 주요 피크 98.6 98.6 98.6 98.4 98.5
% HMW 1.4 1.3 1.3 1.5 1.2
% LMW 0.0 0.1 0.1 0.1 0.2
입자 수
(바이알당)		 ≥ 2 μm 11,048 NS NS NS 4,574
≥ 10 μm 30 NS NS NS 63
≥ 25 μm 0 NS NS NS 1
A. SE-HPLC: %HMW = % 고분자량 종, %LMW = % 저분자량 종
상기 결과는 25 ± 2℃의 가속 온도에서의 인큐베이션 후, DART-A 제제가 눈에 보이지 않는 입자에 대한 미국 약전 (USP) 규정을 여전히 충족하는 것을 보여준다. 더불어, SE-HPLC 응집 및 CE-SDS 분해 프로파일은 5 ± 3℃에서 보관된 DART-A와 유리하게 비교된다.
조합된 안정성 결과를 바탕으로, 10 mM 인산 나트륨, 150 mM NaCl 및 0.1 mg/mL PS80 완충제가 권장된 보관 (5 ± 3℃) 온도 하에 48개월 동안 및 가속 온도 (25 ± 2℃) 조건 하에서 3개월 동안 허용 가능한 단백질 안정성을 제공한다고 결론내렸다. 따라서, 10 mM 인산 나트륨, pH 6.0, 150 mM 염화 나트륨, 0.1 mg/mL PS80 완충제를 임상 및 상업적 DART-A DP 제제에 대해 선택하였다.
DART-A DP 제제는 약 5 mM 내지 약 15 mM 인산 나트륨, pH 6.0, 약 100 mM 내지 약 200 mM 염화 나트륨, 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80으로 구성된 완충제에서 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 DART-A 농도를 가진 투명 내지 약간 유백색이며, 무색 내지 담황색의 멸균된, 안정적인 수성 제약학적 용액이다.
1.4. 펩타이드 맵핑에 의한 DART-A 안정성 분석
제제화된 DART-A (즉, DART-A DP 제제)의 안정성을 추가로 전기분무 이온화 질량 분석 (LC-ESIMS)과 결합된 액체 크로마토그래피에 의해 2-8℃에서 24개월 동안 보관된 DART-A DP 제제의 참조 표준과 비교함으로써 평가하였다. 샘플을 온전한 분자 및 그것의 트립신 펩타이드로서 분석하였다. 개별 테스트 결과를 아래에서 요약한다.
1.5. 온전한 DART-A
온전한 DART-A 의 달톤 (Da) 단위 질량을 ESI 질량 스펙트럼에서 다중 대전된 이온을 디컨볼루션함으로써 얻었다. 참조 표준 및 숙성된 제제 스펙트럼에서 주요 구성요소는 각각 58,897 Da 및 58,898 Da에서 측정된 질량을 나타냈다. 이들 결과는 N-말단 글루타민의 피로글루타메이트로의 전환과 함께 DART-A의 아미노산 서열로부터 유래된, 58,898 Da의 이론적 질량과 밀접하게 매칭되었다. 각 샘플로부터 스펙트럼에서 두 번째로 관찰된 구성요소는 주요 구성요소보다 적은 128 Da의 질량을 가졌다; 이것은 C-말단 리신의 클리핑(clipping)과 일치한다. ESI 질량 스펙트럼에서 미미한 구성요소는 부가 이온 형성 및 다른 변형으로 인한 것일 가능성이 있다. DART-A에 대한 이들 변형을 트립신 펩타이드 맵핑을 통해 추가로 연구하였다.
1.6. 트립신 펩타이드 맵핑
이 연구에서, DART-A를 트립신 펩타이드로 소화시켜서 DART-A에 대한 잠재적인 변형을 조사하였다. 펩타이드 및 아미노산 수준에서의 그것의 변형을 전구체 이온 및 단편 이온의 정확한 질량 측정으로 확인하였다. 결과를 아래의 도 7에서 도시한다. 도 7의 결과는 N-말단 피로E 형성 및 C-말단 리신 클리핑 외에, 펩타이드 맵핑에 의해 나타난 다른 변형, 예컨대 탈아미드화 및 산화의 수준이 두 샘플에 대해 모두 미약한 것을 보여준다. 숙성된 DART-A는 변형의 유형 및 그것의 상응하는 정도의 관점에서 참조 표준과 일치한다.
1.7. DART-A DP 제제 장기간 안정성
2-8℃에서 48개월 동안 보관된 DART-A DP 제제의 안정성을 ELISA 결합, SE-HPLC 및 CE-SDS에 의해 평가하여 DART-A 기능성에 영향을 미칠 수 있는 단량체의 임의의 감소 및/또는 HMW 응집체 및/또는 LMW 분해 생성물의 형성을 확이하였다. 이들 연구 결과를 도 8A-8D에 플롯화하며 DART-A DP 제제가 권장된 보관 조건에서 장기간 보관시 허용 가능한 물리적 안정성을 나타내는 것을 보여준다. 지금까지 수행된 연구, 질량 분석-기반 특성화 및 GMP 로트 안정성을 토대로, DART-A DP 제제를 임상 연구 및 상업화에 권장하였다.
실시예 2
DART-A DP 제제의 투여를 위한 안정화제 수용액의 개발
위에서 기술한 것과 같이, DART-A를 안정화하기 위한 바람직한 안정화제 수용액을 바이알 중의 액체 제제로서 개발하였다. 그러나, DART-A는 매우 낮은 농도에서 활성이며 따라서 DART-A DP 제제는 투여 전에 희석되어야 한다. 이 목적을 위해, DART-A DP 제제가 연속적인 23-시간 정맥내 주입으로서 투여되기 때문에 용량 제조 및 투여 중에 DART-A의 주사기 또는 이동형 카세트 및 정맥내 튜브에의 비특이적 결합을 억제하기 위하여 DART-A DP 제제를 맞춤 안정화제 용액으로 희석한다.
DART-A를 안정화하기 위한 제1 안정적인 안정화제 수용액인 안정화제 1을 제조하였고 10 mM 인산 나트륨, 150 mM 염화 나트륨, 0.1 mg/mL PS80, 9.0 mg/mL BA 및 0.1 mg/mL rHA, pH 6.0으로 구성되었다. 안정화제 1을 2개의 주사기 펌프 또는 2개의 이동형 펌프를 사용하는 정맥내 투여를 위해 DART-A DP 제제와 조합되도록 설계한다.
DART-A DP 제제 및 안정화제 1에 대한 변형을 평가하여 단일 펌프 투여를 가능하게 하였다. 아래에서 상세하게 기술하는 것과 같이, 새로운 안정화제 수용액, 안정화제 2를 (a) 제안된 KVO (정맥 개방 유지) 유량에서 안전한 것으로 여겨지고, (b) 용량 제조된 용액에서 미생물 성장을 억제하며 (c) DART-A DP 제제 안정성에 영향을 미치지 않을 보존제의 유효 농도를 측정하기 위한 대체 보존제 스크리닝 연구를 기반으로 개발하였다.
2.1 안정화제 1 및 안정화제 2 용액의 개발 - 연구 설계 및 결과
안정화제 1 및 안정화제 2의 개발 중에 사용한 분석적 테스트 방법의 목록을 아래의 표 13에서 열거한다.
안정화제 1 및 안정화제 2에 대한 분석적 테스트
테스트된 속성 방법 *
단백질 농도 280 nm에서의 흡광도
눈에 보이지 않는 입자 수 빛 차단 방법 (HIAC)
pH pH
외관 시각적 외관 모니터링
단백질 회수 A ELISA (rhIL3Rα)
단백질 응집 FLR SE-HPLC
벤질 알코올 회수 RP-HPLC
효능 CD3 및 CD123 결합
오스몰 농도 오스몰 농도
A ELISA 정량화 검정은 DART-A의 ng/mL 농도를 정량할 수 있는 검정이다.
* 모든 방법을 하기 실시예 5에서 상세하게 기술한다.
안정화제를 위한 제제 개발을 도 9-10에서 기술한 것과 같이 단계별로 수행하였다.
안정화제 1은 10 mM 인산 나트륨, 150 mM 염화 나트륨, 0.1 mg/mL PS80, 9.0 mg/mL BA, 및 0.1 mg/mL rHA, pH 6.0으로 구성되며 2개의 주사기 펌프 또는 2개의 이동형 펌프를 사용하는 정맥내 투여를 위해 DART-A DP 제제와 조합되도록 설계한다. BA는 연속적 투여를 위한 보관 중에 미생물 성장을 억제하는 작용을 한다. 그러나, BA는 증가된 단백질 응집 및 입자 형성을 유발할 수 있다. 잠재작 입자 형성 및 투여 흐름 경로 표면에 대한 단백질의 흡착을 억제하기 위하여, PS80 및 rHA를 안정화제 용액에 첨가하였다. 2개의-펌프 투여 구성으로부터 단일 이동형 펌프 구성으로 전환시키기 위하여, 잠재적 차단제 및 대체 보존제를 평가하는 추가 제제 개발 연구가 필요하였다. 이들 연구를 아래에서 한층 더 상세하게 기술한다.
2.2. 차단제의 선택
1상 안정화제 1 용액은 투여 구성요소의 표면에 대한 비특이적 DART-A 단백질 결합을 제한하기 위하여 0.1 mg/mL rHA를 함유한다. rHA는 단백질 첨가 전에 반응성 부위에 결합함으로써 작용하는 일반적인 차단제이다. 제품의 제조 비용 (COG)을 낮추기 위하여, 계면활성제 PS80 (이미 용액에 있음)을 대체 차단제로서 평가하였다. 도 9는 입자 형성 및 흡착을 억제하는 데 PS80 단독의 유효성을 평가하기 위해 수행한 연구를 요약한다.
이 연구 중에 4개 수준의 PS80을 테스트하여 계면활성제의 차단 활성을 평가하였다. 간단히 설명하며, 테스트 안정화제 용액 (10 mM 인산 나트륨, pH 6.0, 150 mM 염화 나트륨, 1.6 mg/mL BA 및 0, 0.05, 0.1, 또는 0.2 mg/mL PS80)을 생리 식염수 함유 IV 주머니에 첨가하였다. 철저하게 혼합한 후, DART-A DP 제제를 동일한 IV 주머니에 첨가하였다. 투약 용액이 들어 있는 주머니를 25 ± 2℃에서 인큐베이션하고 샘플을 0, 24 및 48시간 (가장 긴 제안된 투여 시간)에 수집하였다. 각각의 샘플을 FLR/SE-HPLC를 사용하여 분석하고 ELISA에 의해 검증하여 DART-A 단백질 회수율을 정량화하였다. 연구 결과를 아래의 표 14에서 알 수 있다.
다양한 PS80 함유 제제 내에서DART-A 단백질 회수율r
PS80 농도 (mg/mL) T 0
% 회수율 		24시간
% 회수율 		48시간
% 회수율
FLR ELISA FLR ELISA FLR ELISA
0 + 1.6 mg/mL BA ND 37.9 ND < LLOQ ND < LLOQ
0.05 + 1.6 mg/mL BA 111.8 88.0 117.3 88.0 126.0 89.9
0.1 + 1.6 mg/mL BA 97.5 96.1 87.7 91.6 99.1 88.8
0.2 + 1.6 mg/mL BA 92.6 93.7 97.9 99.4 88.3 90.6
0.1 단독 108.7 91.8 테스트하지 않음 테스트하지 않음 테스트하지 않음 테스트하지 않음
상기 ELISA 정량화 검정 결과로부터, 0.01% PS80 및 1.6 mg/mL BA를 활용한 DART-A 회수율은 48시간 후에 88%를 초과한다. 이들 결과는 이런 유형의 생물검정의 전형적인 변량 범위 내에 있다 (50% - 150%). 더불어, 벤질 알코올의 부재는 회수율이 91%를 초과하는 것으로 보아 단백질 흡착을 억제하는 PS80의 능력에 아무런 영향을 미치지 않는다. 이들 결과는 0.05 mg/mL PS80 또는 0.1 mg/mL PS80의 수준이 충분한 차단 활성을 제공하는 것을 나타낸다.
2.3. 단일 펌프 투여를 가능하게 하기 위한 보존제 선택 연구
안정화제 1 용액은 보존제로서 작용하기 위해 0.9% BA를 함유한다. 2개의-펌프 투여로부터 1-펌프 투여로 바꾸기 위하여, BA 농도를 바람직하게 환자 안전성 표준을 충족시키기 위해 낮춘다. 이들 표준은 BA의 최대 허용되는 일일 섭취량이 5 mg/kg을 초과하지 않을 것을 명시한다. 이들 표준 및 다양한 임상 시나리오 (즉 환자의 저체중, 정맥 개방 유지 유량)에 대한 계획을 사용하여, 단일 펌프 투여를 위한 표적 BA 농도를 아래와 같이 결정하였다.
Figure pct00003
5 mg/kg/일이 최대 허용 가능한 BA 용량임
Figure pct00004
40 kg 환자를 가정할 때, 1일당 BA의 최대량: 200 mg
Figure pct00005
정맥 개방 유지를 위한 펌프 전달: 5 mL/hr
Figure pct00006
24시간 동안의 연속 주입이 바람직함 → 최소 유량은 120 mL/일임
Figure pct00007
용액 중의 최소 BA 농도는 1.7 mg/mL (200 mg/ 120 mL) 또는 0.17%임.
안정화제 보존제의 선택을 일련의 연구로 평가하였다. 도 10은 수행된 다양한 연구를 요약하며 각각의 연구는 아래에서 보다 상세하게 설명된다.
2.4. 더 낮은 벤질 알코올 농도의 보존제 유효성
이 연구에서, 5가지 상이한 BA 농도 (아래 표 15에 열거함)를 평가하여 48시간 동안 미생물 성장을 억제하기 위해 필요한 BA의 최저 농도를 측정하였다.
테스트된 5가지BA 농도 및 이들 농도를 선택한 근거
농도 번호 BA 농도 (%) BA 농도 (mg/mL) 근거
1 0.90 9.0 안정화제 1의 농도
2 0.24 2.4 추가 연구 안정화제 용액을 측정하는 것을 돕기 위해 목표 농도보다 약간 위임
3 0.17 1.7 목표 안정화제 용액 농도
4 0.10 1.0 추가 연구 안정화제 용액을 측정하는 것을 돕기 위해 목표 농도보다 약간 아래임
5 0.00 0.0 음성 대조군
단일 이동형 펌프 용량 제조 계획 및 투여 구성을 시뮬레이션하였다. 이 연구를 위해 식염수, PS80, rHA 및 BA를 DART-A DP 제제를 첨가하기 전에 조합하였다. 재구성된 녹농균 (ATCC 9027)의 10개의 바이알을 분취액을 만들기 전에 모아서 최종 제제를 만들었다. 제제 제조 단계가 완료되었을 때 T0 샘플을 혼합 보틀로부터 수집하였다. 상응하는 펌프 카세트를 나머지 안정화제 용액으로 채우고 32 ± 2℃에서 인큐베이션하였다. 24-시간 및 48-시간 시점을 카세트 내에서 철저하게 혼합하여 샘플 수집 전 균일한 녹농균 현탁을 보장하였다. 수집 후에, 샘플을 즉시 미생물 오염도 테스트(bioburden testing)를 수행하였다. 미생물 도전 테스트 결과를 아래의 표 16에서 알 수 있다.
48시간 동안 BA 함유 제제에서 녹농균 콜로니 수
샘플 ID 0시간 24시간 48시간
0.9% BA + PS80 0 0 0
0.24% BA + PS80 20 4 0
0.17% BA + PS80 18 TNTC TNTC
0.0% BA + PS80 23 TNTC TNTC
0.9% BA + PS80 + rHA 0 0 -
0.24% BA + PS80 + rHA 17 2 -
0.17% BA + PS80 + rHA 17 TNTC TNTC
0.0% BA + PS80 + rHA 18 TNTC TNTC
TNTC: 계수하기에 너무 많은 수, 유의한 미생물 성장을 나타냄
위의 결과는 BA의 유효한 보존제 농도가 녹농균의 경우 0.24% 내지 0.17%인 것을 시사한다. 그러나, 이런 유효한 BA 수준은 40 kg 환자의 경우 제안된 단일 펌프 투여 구성 하에서 평균 일일 섭취량보다 여전히 높다. 결과는 또한 안정화제 용액 중의 rHA의 존재가 미생물 성장에 영향을 나타내지 않으며 안정화제 1 용액으로부터 그것의 제거가 보존제의 유효성을 변화시키지 않을 것임을 보여준다.
2.5. 대체 보존제 평가 연구
이 연구에서, 3개의 보존제 (BA, 메타 크레졸 및 MP)를 가속 스트레스 조건 (40 ± 2℃) 하에서 DART-A 안정성 및 응집에 미치는 그것의 영향을 비교함으로써 평가하였다. 최종 제제를 생성하기 위하여, 각각의 구성요소를 중량에 의해 조합하였다. 안정화제 용액의 최종 조성을 아래의 표 17에서 열거한다.
대체 보존제의 존재 하에 DART-A 단백질 응집을 평가하기 위해 테스트한 최종 안정화제 용액의 표
제제 번호 보존제 명칭 보존제 농도
(%) 		DART-A 농도
(mg/mL) 		PS80 농도
(mg/mL) 		NaCl 농도
(mg/mL)
1 BA 0.24 0.1 0.1 8.8
2 크레졸 0.30 0.1 0.1 8.8
3 MP 0.10 0.1 0.1 8.8
각각의 안정화제 용액을 유리 바이알에 분취하고 40 ± 2℃에서 인큐베이션하고 0, 1 및 2주 후에 분석하였다. 각각의 용액의 결과를 아래의 표 18에서 볼 수 있다.
대체 보존제 내에서 DART-A 안정성 및 응집 결과
제제 테스트 보고된 결과 시간 (주)
0 1 2
0.24% 벤질 알코올 함유 안정화제 용액 외관 투명, 무색, 입자 없음 투명, 무색, 약간의 입자 투명, 무색, 약간의 입자
pH pH 6.3 6.3 6.2
오스몰 농도 mOsm 324 326 328
SE-HPLC % 주요 피크 97.8 97.9 95.0
% HMW 1.8 2.0 3.2
% LMW 0.4 0.1 1.8
입자 수 ≥ 2 μm 1,005 4,748 10,973
≥ 5 μm 180 480 647
≥ 10 μm 38 102 85
≥ 25 μm 2 8 5
0.1% 메틸파라벤 함유 안정화제 용액 외관 투명, 무색, 입자 없음 투명, 무색, 약간의 입자 투명, 무색, 약간의 입자
pH pH 6.2 6.1 6.0
오스몰 농도 mOsm 309 308 310
SE-HPLC % 주요 피크 96.9 96.0 94.3
% HMW 2.2 3.8 5.2
% LMW 0.9 0.2 0.6
입자 수 ≥ 2 μm 323 8,644 10,401
≥ 5 μm 114 248 347
≥ 10 μm 64 64 68
≥ 25 μm 11 4 3
0.1% 크레졸 함유 안정화제 용액 외관 흐림, 백색, 많은 입자 투명, 무색, 많은 입자 투명, 무색, 많은 입자
pH pH 6.3 6.3 6.2
오스몰 농도 mOsm 322 324 326
SE-HPLC % 주요 피크 95.7 96.5 95.6
% HMW 3.3 2.4 2.8
% LMW 1.0 1.2 1.6
입자 수 ≥ 2 μm 36,773 67,536 56,547
≥ 5 μm 3,445 35,705 29,898
≥ 10 μm 261 5,707 7,335
≥ 25 μm 1 13 53
상기 결과는 2주 동안 40 ± 2℃에서 인큐베이션한 후 pH 및 오스몰 농도가 일정하게 유지된 한편 가시 입자의 수는 3개 전부의 안정화제 용액 내에서 증가한 것을 보여준다. 그러나, 크레졸-함유 용액은 BA 및 MP를 함유한 용액과 비교하여 더 많은 눈에 보이는 및 눈에 보이지 않는 입자를 함유하며 ≥ 10 μm 입자의 수로 인해 USP 사양을 충족하지 못한다. 더불어, MP-함유 용액은 다른 2개 용액에서는 관찰하지 못한, 2주 후 DART-A 단백질 응집의 증가를 보였다. 상기 연구를 기반으로, 목표 수준의 BA (≤ 0.17%) 및 낮은 수준의 MP (≤ 0.1%)를 함유한 조합을 DART-A 단백질 응집에 미치는 그것들의 영향을 평가함으로써 추가로 평가하였다. 용액 조합을 각각의 구성요소가 중량에 의해 조합된 단일 작용제 연구와 유사한 방식으로 생성하였다. 테스트한 조합의 최종 조성을 아래의 표 19에 열거한다.
DART-A 단백질 안정성을 평가하기 위해 테스트한 최종 대체 보존제 조합의 표
# 벤질 알코올 농도
(mg/mL) 		메틸파라벤 농도
(mg/mL) 		DART-A 농도
(μg/mL) 		PS80 농도
(mg/mL) 		NaCl 농도
(mg/mL)
1 1.7 0.5 0.4 0.1 8.8
2 1.7 0.1 0.4 0.1 8.8
3 1.7 0.0 0.4 0.1 8.8
4 1.2 0.5 0.4 0.1 8.8
5 1.2 0.1 0.4 0.1 8.8
6 1.2 0.0 0.4 0.1 8.8
모든 용액을 5 ± 3℃ 및 25 ± 2℃에서 준비하고 0, 1, 3, 5, 및 7일에 분석하였다. 각 용액의 결과를 아래의 표 20 및 표 21에서 볼 수 있다.
5 ± 3℃에서 A 및MP 함유 안정화제 용액에서 DART-A 단백질 안정성
0.17% BA +
0.05% MP 		0.17% BA +
0.01% MP 		0.17% BA +
0.0% MP
분석 T 0 7일째 T 0 7일째 T 0 7일째
pH 6.0 6.2 6.0 6.2 6.0 6.2
오스몰 농도 (mOsm) 327 326 327 324 324 324
HIAC ≥ 2 μm 57 128 53 168 93 158
HIAC ≥ 5 μm 25 37 22 50 40 42
HIAC ≥ 10 μm 10 22 10 15 20 3
HIAC ≥ 25 μm 3 2 2 2 3 0
SE-HPLC (% HMW) IR 1.5 IR 0.8 IR 1.1
SE-HPLC (% LMW) 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
외관** CCN CCF CCN CCF CCN CCF
0.12% BA +
0.05% MP 		0.12% BA +
0.01% MP 		0.12% BA +
0.0% MP
분석 T 0 7일째 T 0 7일째 T 0 7일째
pH 6.0 6.2 6.0 6.2 6.00 6.2
오스몰 농도 (mOsm) 323 323 320 319 318 318
HIAC ≥ 2 μm 152 177 85 193 83 308
HIAC ≥ 5 μm 50 52 37 68 30 103
HIAC ≥ 10 μm 27 12 13 23 10 25
HIAC ≥ 25 μm 2 2 0 2 0 5
SE-HPLC (% HMW) IR 1.7 IR 1.8 IR 1.7
SE-HPLC (% LMW) 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0
외관** CCV CCF CCN CCF CCV CCF
** CCN: 투명, 무색, 가시 입자 없음, CCV: 투명, 무색, 매우 적은 ㅅ수의 가시 입자; CCF: 투명, 무색, 소수의 가시 입자; IR: 잘못된 결과
25 ± 2℃에서 A 및MP 함유 안정화제 용액에서 DART-A 단백질 안정성
0.17% BA +
0.05% MP 		0.17% BA +
0.01% MP 		0.17% BA +
0.0% MP
분석 T 0 7일째 T 0 7일째 T 0 7일째
pH 6.0 6.2 6.0 6.2 6.0 6.2
오스몰 농도 (mOsm) 327 327 327 326 324 325
HIAC ≥ 2 μm 57 98 53 90 93 82
HIAC ≥ 5 μm 25 30 22 38 40 32
HIAC ≥ 10 μm 10 7 10 18 20 7
HIAC ≥ 25 μm 3 0 2 3 3 0
SE-HPLC (% HMW) 12.8 2.4 13.0 2.1 12.3 2.2
SE-HPLC (% LMW) 0.0 0.1 0.0 0.1 0.0 0.2
외관** CCN CCF CCN CCF CCN CCF
0.12% BA +
0.05% MP 		0.12% BA +
0.01% MP 		0.12% BA +
0.0% MP
분석 T 0 7일째 T 0 7일째 T 0 7일째
pH 6.0 6.2 6.0 6.2 6.0 6.2
오스몰 농도 (mOsm) 323 323 320 319 318 320
HIAC ≥ 2 μm 152 82 85 88 83 98
HIAC ≥ 5 μm 50 23 37 28 30 35
HIAC ≥ 10 μm 27 10 13 7 10 10
HIAC ≥ 25 μm 2 0 0 0 0 3
SE-HPLC (% HMW) 13.1 2.3 12.5 2.2 11.7 2.0
SE-HPLC (% LMW) 0.0 0.2 0.0 0.1 0.0 0.1
외관** CCV CCM CCN CCM CCV CCF
** CCN: 투명, 무색, 가시 입자 없음, CCV: 투명, 무색, 매우 소수의 가시 입자; CCF: 투명, 무색, 소수의 가시 입자; CCM: 투명, 무색, 많은 가시 입자
상기 결과는 모든 안정화제 용액에 걸쳐 pH 또는 오스몰 농도에서 유의한 변화가 관찰되지 않았음을 나타낸다. 더불어, 모든 안정화제 용액은 눈에 보이지 않는 입자 수에 대해 USP 사양을 충족한다. 7일 후 모든 안정화제 용액에서 소수의 가시 입자를 관찰하였다. HMW 종의 초기 수준은 잘못된 분석 테스트 결과로 인해 활용할 수 없었지만, 7일 후 HMW 종의 수준은 모든 용액에서 허용 가능하였다. 그러므로, 제품 품질 관점으로부터 모든 이들 용액 조건을 허용 가능한 것으로 간주하였다.
2.6. 보존제로서 벤질 알코올 및 메틸파라벤의 조합을 평가하기 위한 미생물 도전 테스트
미생물 도전 테스트를 수행하여 ≤ 0.17% BA 및 ≤ 0.1% MP를 함유하는 아정화제 용액의 보존 효과를 평가하였다. 미생물 도전 테스트를 선택하였는데, 그것이 용량이 무균적으로 제조되고 용액에 도입될 수 있는 미생물의 수가 낮은, 제안된 용량 제조 및 희석 계획을 보다 정확하게 나타내기 때문이다. 미생물 도전 테스트를 2 단계로 수행하였다. 제1 단계는 BA 및 MP의 유효 농도를 측정하는 한편 제2 단계는 USP 사양에 따라 최종 제제를 테스트하였다. 각 단계를 아래에서 상세하게 설명한다.
2.7. 효과적인 벤질 알코올 및 메틸파라벤 농도의 측정
이 연구에서, BA 및 MP의 조합 (아래의 표 22에서 열거됨)을 평가하여 168시간 동안 미생물 성장을 억제하기 위해 필요한 BA 및 MP의 유효 농도를 측정하였다. 이들 조합을 녹농균 (박테리아) 및 칸디다 알비칸스 (진균) 둘 다에서 테스트하여 유기체를 가로질러 보존제 유효성을 비교하였다.
테스트한 7개 조합 및 이들 농도를 선택한 근거
조합 농도 (%) 근거
BA MP
1 0.90 0.00 용량은 효과적인 것으로 알려져 있음 - 음성 대조군
2 0.24 0.00 이미 녹농균에 대해 효과적인 것으로 나타난 BA의 최저 농도
3 0.20 0.00 앞으로의 투여 옵션을 측정하는 것을 돕기 위해 목표 BA 농도보다 약간 높음
4 0.17 0.00 목표 BA 안정화제 용액 농도
5 0.17 0.05 목표 BA 안정화제 용액 농도
목표 MP 농도
6 0.17 0.01 목표 BA 안정화제 용액 농도
단백질 응집을 제한하기 위한 목표보다 낮은 MP 농도
7 0.12 0.05 목표 BA 농도보다 약간 낮아서 환자 ADI 제한이 목표 MP 농도에 도달하지 못함
8 0.00 0.00 양성 대조군
연구를 위해, 단일 이동형 펌프 용량 제조 계획을 시뮬레이션하였다. 녹농균 및 칸디다 알비칸스 미생물을 최종 투약 용액에 첨가하기 전에 재구성하고 모았다. 각 용액을 그것의 상응하는 카세트에 첨가하고 카세트 충전 즉시 T0 샘플을 수집하였다. 이 과정은 주사기 스트레스 노출과 관련될 수 있는 미생물 성장 패턴의 임의의 변화를 설명하였다. T0 수집 후, 상응하는 카세트를 32 ± 2℃에서 인큐베이션하였다. 24-, 72- 및 168-시간 시점의 샘플을 철저하게 혼합하여 샘플 수집 전 균일한 미생물 현탁을 보장하였다. 수집 후, 샘플을 즉시 미생물 도전 테스트를 수행하였다. 미생물 도전 테스트 결과를 아래의 표 23 및 표 24에서 볼 수 있다.
168시간 동안 BA 및MP 함유 안정화제 용액 중의 녹농균 콜로니 수
샘플 ID 0시간 24시간 72시간 168시간
0.9% BA 0 0 0 0
0.24% BA 3 7 15 TNTC
0.20% BA 3 10 NA 과잉성장
0.17% BA 5 196 NA 과잉성장
0.17% BA + 0.05% MP 5 5 NA 과잉성장
0.17% BA +　0.01% MP 3 2 NA 과잉성장
012% BA + 0.05% MP 4 0 1 0
0% BA + 0% MP 2 과잉성장 과잉성장 과잉성장
TNTC: 계수하기에 너무 많은 수, 유의한 미생물 성장을 나타냄
168시간 동안 BA 및MP 함유 안정화제 용액 중의 칸디다 알비칸TM 콜로니 수
샘플 ID 0시간 24시간 72시간 168시간
0.9% BA 16 0 0 0
0.17% BA 23 >50 > 50 > 2,500
0.17% BA + 0.05% MP 22 14 > 50 > 2,500
0.17% BA + 0.01% MP 22 > 50 > 50 > 2,500
012% BA + 0.05% MP 19 17 > 50 > 2,500
0% BA + 0% MP 23 > 50 > 50 > 2,500
5 mL 플레이팅된 샘플 부피로부터 "> 50"으로 기록된 플레이트를 TNTC (계수하기에 너무 많은 수)인 것으로 관찰하였음
0.1 mL 플레이팅된 샘플 부피로부터 "> 2,500"으로 기록된 플레이트를 TNTC인 것으로 관찰하였음
TNTC: 계수하기에 너무 많은 수, 유의한 미생물 성장을 나타냄
표 23 및 표 24 로부터의 결과는 안정화제 1 용액 중의 BA 농도 (0.9%)가 살균 및 살진균성인 한편 단일 펌프 구성 목표 BA 농도 (0.17%) 단독으로는 성장을 억제하지 못하는 것을 보여주었다. 상기 결과는 또한 MP와 BA의 조합이 BA 단독과 비교하여 안정화제 용액의 항미생물 특성을 증가시키는 것을 보여준다. 그러나, 0.17% BA + 0.05% MP 조합의 정균(bacteriostatic) 및 정진균(fungistatic) 특성만이 24시간 동안 관찰되었다. 안정화제 용액 중의 BA 농도는 환자 안전성 문제로 인해 제한되기 때문에, 보존제 유효 기간을 증가시키기 위해, 안정화제 용액 중의 MP 농도를 0.1%로 증가시킬 수 있었다. 그러나, 농축된 안정화제 용액이 20 mL 추가 부피로서 제공될 때, 이 수준의 MP는 높은 용액 pH (≥9.0), 용액 혼탁도, 및 PS80 비혼화성으로 이어진다. 이런 문제를 해결하기 위하여, 일련의 안정화제 용액 최적화 연구를 수행하여 최종 농축 안정화제 용액을 결정하였다.
제1 연구는 혼탁도 및 용액 불안정성 또는 비혼화성 문제가 해결될 수 있는 지를 측정하기 위하여 농축된 안정화제 용액 중의 PS80의 더 낮은 수준을 조사하였다. 결과는 DART-A 단백질 회수율이 0.003% 미만의 PS80 농도를 함유한 최종 투약 용액에서 상당히 감소한 것을 보여주었다. 그러나. PS80의 이 농도는 실온에서 혼탁하게 유지시킨다. 농축된 안정화제 용액의 더 큰 부가 부피 제공을 평가하는 후속 연구를 수행하여 농축된 안정화제 용액의 모든 부형제 수준의 저하가 높은 혼탁도 문제를 해결하는 것을 도울 수 있는지를 측정하였다. 이 연구 결과는 0.003%보다 위의 PS80 최종 수준을 가진 40 mL의 추가 안정화제 부피가 보관시 액적을 형성하지 못하였고 단지 약간 유백색이었음을 보여주었다. 최적의 농축된 안정화제 용액 pH를 측정하기 위해, 제제 완충제 강도를 다르게 하는 연구를 수행하였다. 제1 연구는 농축된 안정화제 용액의 인산 나트륨 수준을 증가시키는 것이 용액 pH를 저하시키는 것을 보여주었다. 그러나, pH 8.4 미만에서, MP의 목표 수준은 용액에서 유지되지 않는다. 그 결과로서, MP의 가변적인 농도를 후속 연구에서 평가하였다. 이들 결과는 목표 MP 농도의 30-50%가 유지디는 것을 보여주었다. 이전의 PS80 및 MP 연구의 결과를 토대로, 허용 가능한 pH에서 용액 혼탁도를 설명하는 최적의 조합을 측정하기 위하여 MP 및 PS80의 가변 농도를 평가하는 최종 연구를 수행하였다. 이 연구 결과는 20 mM 인산 나트륨, 13.2 mg/mL BA, 4.25 mg/mL MP 및 0.25 mg/mL PS80으로 구성된 농축된 안정화제 2 용액이 허용 가능하고 8.2의 최종 용액 pH를 가지며 보관시 단지 약간 유백색인 것을 보여주었다. 40 mL의 이 안정화제 용액을 250 mL 식염수 주머니에서 희석할 때, 결과적으로 생성된 투약 용액은 0.17% BA 및 0.055% MP를 함유할 것이다. 이 조합은 이전에 24시간 동안만 정균 및 정진균 효과를 보였다. 그러나, MP의 항미생물 효과는 높은 pH 환경에서 감소하며 안정화제 용액 재-제제는 최종 투약 용액의 pH를 상당히 저하시켰다. 그 결과로서, 투약 용액에서 0.17% BA 및 0.05% MP의 최종 보존제 수준을 가지는 재-제제화된 안정화제 2 용액의 보존제 유효성을 USP 권장 미생물의 미생물 도전 테스트를 통해 조사하였다.
2.8. 최종 보존제 농도를 규정하기 위한 미생물 도전 테스트
보존제에 대한 현재 USP 표준을 충족하기 위하여, 제제가 특정 USP 권장 미생물에 대해 테스트될 때 원하는 투여 시간 동안 성장이 관찰되지 않아야 한다. 이전 연구를 토대로, 칸디다 알비칸스 및 아스페르길루스 브라실리엔시스 미생물이 투약 용액 중의 보존제에 대해 가장 내성이었다: 그 결과로서, 이들 두 미생물만을 테스트하였다. 0.17% BA + 0.05% MP 안정화제 용액만을 테스트하였고 보존제 대조군과 비교하였다. 미생물 성장을 72시간 동안 모니터링하였고 샘플링 시점은 0, 48, 및 72시간이었다. 용량 제조, 셋업 및 방법을 앞서 수행한 미생물 도전 테스트와 유사한 방식으로 수행하였다. 이 연구 결과를 아래의 표 25에서 볼 수 있다.
모든 권장 미생물에 대한 0.17 BA + 0.05% MP 안정화제 용액의 미생물 도전 결과
미생물 투약 용액 0시간 48시간 72시간
플레이트 1 플레이트 2 플레이트 1 플레이트 2 플레이트 1 플레이트 2
칸디다 알비칸스 0.0% BA + 0.0% MP 85 87 >250 >250 >250 >250
칸디다 알비칸스 0.17% BA + 0.05% MP 46 35 11 10 15 10
아스페르길루스 브라실리엔시스 0.17% BA + 0.05% MP 46 35 11 10 15 10
표 25의 결과로부터, 투약 용액 중의 0.17% BA + 0.05% MP의 조합이 48-시간 및 72-시간 카운트가 0-시간 카운트보다 0.5 로그 이상 크지 않기 때문에 아스페르길루스 브라실리엔시스 및 칸디다 알비칸스 둘 다에 대해 정진균 작용을 한다. 그 결과로서, 최종 투약 용액에서 0.17% BA 및 0.05% MP의 최종 보존제 농도를 제공하는 안정화제 2가 48시간 동안 DART-A의 단일 펌프 투여를 가능하게 할 것이다.
2.9. 전부 5개의 USP 권장 미생물의 확인 미생물 도전 테스트
식염수에 (즉, 투약 용액에) 희석된 안정화제 2의 항미생물 특성을 확인하기 위하여, 미생물 성장 테스트를 SGS Life Sciences에 의해 수행하였다. 테스트에 필요한 USP 권장 미생물을 아래의 표 26에 열거한다.
미생물 도전 테스트를 위한 5개의 USP 권장 미생물
명칭 스트레인 ATCC 번호
녹농균 박테리아
(그람 음성)		 9027
황색 포도상구균 박테리아(그람 양성) 6538
대장균 박테리아(그람 음성) 8739
칸디다 알비칸스 진균 10231
아스페르길루스 브라실리엔시스 진균 16404
최대 보존제 희석을 나타내기 위해 고용량 용액 (150 kg 환자, 1,000 ng/kg 집단)을 제조하였다. 더불어, BA 및 MP의 목표 농도를 0.157% 및 0.05%의 더 낮은 보존제 농도로 조정하여 약간 더 낮은 수준에서의 보존제 유효성을 입증하였다. 미생물 성장 연구를 10 내지 100 CFU/mL의 목표 농도로 전부 5개의 USP 권장 미생물에 대해 수행하였다. 미생물 성장 결과를 아래의 표 27에서 열거한다.
단일 펌프 적합성 용량 제조 계획을 사용하는 5개의 USP 권장 미생물의 미생물 성장 결과
유기체 정량화 0시간 48시간 72시간 120시간
녹농균 CFU/g 650 < 100 < 100 < 100
로그(CFU/g) 2.81 < 2.00 < 2.00 < 2.00
대장균 CFU/g 1000 < 100 < 100 < 100
로그(CFU/g) 3.00 < 2.00 < 2.00 < 2.00
황색 포도상구균 CFU/g 400 < 100 < 100 < 100
로그(CFU/g) 2.60 < 2.00 < 2.00 < 2.00
칸디다 알비칸스 CFU/g 450 < 100 < 100 < 100
로그(CFU/g) 2.65 < 2.00 < 2.00 < 2.00
아스페르길루스 브라실리엔시스 CFU/g 850 < 100 < 100 < 100
로그(CFU/g) 2.93 < 2.00 < 2.00 < 2.00
상기 결과를 토대로, 각 미생물의 로그 성장 값이 미생물의 초기 농도와 비교하여 > 0.5 로그 값만큼 증가하지 않기 때문에 의도된 목표 농도보다 약간 아래의 안정화제 2의 희석은 120시간 동안 성장이 없어야 하는 기준을 충족한다. 이들 연구는 단일 펌프 투여를 위해 설계한 용량 제조 계획을 사용하여 희석된 안정화제 2가 120시간의 기간 동안 미생물 성장을 성공적으로 제한하는 것을 입증한다.
2.10. 최종 안정화제 2 용액 중의 부형제의 허용 가능한 범위
환자 순응 및 편안함을 촉진하기 위하여, 용량 제조 후 IV 주머니 또는 카세트로부터 제제의 4-일 연속 투여를 실행할 수 있다.4-일 투여로의 전환은 KVO가 허용 가능한 일일 섭취 (ADI) 수준에 도달하지 않으면서 용액에 더 많은 보존제가 존재하는 것을 허용하는 2.5 mL/hr로 감소되는 것을 필요로 할 것이다. 4일 동안 250 mL 주머니로부터의 투여를 토대로 한 ADI 값은 안정화제 용액 중의 허용 가능한 부형제 범위의 다음의 상한선을 허용할 것이다.
Figure pct00008
BA 상한: 25.8 mg/mL
Figure pct00009
MP 상한: 51.7 mg/mL
그러나, 15.5 mg/mL보다 위의 BA 수준은 용액 불안정성 또는 비혼화성 및 pH 8.4를 초과하는 최종 용액을 유발하는 5.3 mg/mL을 초과하는 MP 수준을 초래한다. 그러므로, 최종 안정화제 2 용액에서 BA 및 MP에 대한 제안된 허용 가능한 범위는 다음과 같다:
Figure pct00010
BA 목표 농도: 13.2 mg/mL (허용 가능한 범위: 11.6 내지 15.5 mg/mL)
Figure pct00011
MP 목표 농도: 4.25 mg/mL (허용 가능한 범위: 3.9 내지 5.3 mg/mL)
4-일 투여로의 전환이 KVO 속도를 저하시키는 것을 포함하기 때문에, 최소한의 예상된 DART-A 투약 용액 농도 (30 ng/kg의 용량으로 40 kg 환자에게 투약하는 것에 상응함)는 10에서 20 ng/ml로 증가하여야 한다. 이 20 ng/mL 단백질 농도에서 임상 용량 제조 및 투여를 시뮬레이션하는 단백질 회수율 연구 (ELISA (rhIL3Rα)에 의해 평가됨)를 PS80의 목표 (0.25 mg/mL) 농도보다 더 낮은 농도로 수행하였다. 이들 연구 결과를 표 28에서 요약한다.
보관 및 투여 후 DART-A 회수율
최종 PS80 농도 시점 목표 디아바디 농도 실제 농도 % 회수율
0.1 mg/mL T0 20 ng/mL 19.9 ng/mL -
24시간 보관 후 및 96시간 투여 후 20 ng/mL 19.3 ng/mL 97.0
0.12 mg/mL T0 20 ng/mL 21.6 ng/mL -
24시간 보관 후 및 96시간 투여 후 20 ng/mL 20.6 ng/mL 95.4
단백질 회수율 연구는 0.10 mg/mL PS80 안정화제 제제를 사용했을 때 24시간 보관 및 96시간 투여 후 이런 더 높은 20 ng/mL 투약 용액의 전체 회수율을 보여준다. 4-일 투여는 PS80 상한 사양의 약간의 변화만을 허용할 것인데 이런 한계가 용액 외관 (즉, 혼화성)에 의해 구동되기 때문이다. 용량 제조를 위해 250 mL 식염수 주머니가 사용된다고 가정하면, 최종 안정화제 용액 중의 PS80에 대한 제안된 허용 가능한 범위는 다음과 같다:
Figure pct00012
PS80 목표 농도: 0.25 mg/mL (허용 가능한 범위: 0.10 내지 0.35 mg/mL)
2.11. 결론
상기 연구는 10 mM 인산 나트륨, 150 mM 염화 나트륨, 0.1 mg/mL PS80, pH 6.0 중의 0.1 mg/mL의 최종 조성을 가진 DART-A DP 제제를 지지한다. 그러한 DART-A DP 제제는 5 cc 바이알에 5 mL 충전될 수 있다.
상기 연구는 추가로 10 mM 인산 나트륨, 150 mM 염화 나트륨, 0.1 mg/mL PS80, 9.0 mg/mL BA 및 0.1 mg/mL rHA, pH 6.0으로 구성된 제1 안정화제 용액, 안정화제 1이 2개의 주사기 펌프 또는 2개의 이동형 펌프를 사용하는 정맥내 투여를 위해 DART-A DP 제제와 조합될 수 있음을 지지한다. 안정화제 1은 특히 소아 환자, 저체중 환자, 및/또는 높은 IV 유량 (예컨대, 약 5 mL/hr 이상)을 필요로 하는 환자에게 사용하기에 유용하다.
10 mM 인산 나트륨, 150 mM 염화 나트륨, 및 0.1 mg/mL PS80, pH 6.0으로 구성되고, BA가 없는 안정화제 1이 특히 소아 환자에게 사용하기에 특히 바람직하다. BA가 결핍된 그러한 안정화제 1 용액은 DART-A DP 제제와 조합된 후 24시간 이내에 투여하기에 특히 적합한다.
안정화제 1에 대한 다중 변화는 단일 이동형 펌프 투여를 지지하기 위해 필요하였다. 제1 변화는 현재 차단제 rHA 를 제거하는 것을 포함한다. 제2 제제 변화는 단일 이동형 펌프 투여를 위해 안정화제 1에서 너무 농축된 BA 보존제를 포함한다. 상기 기술된 연구를 토대로, 20 mM 인산 나트륨, 13.2 mg/mL BA, 4.25 mg/mL MP 및 0.25 mg/mL PS80, pH 8.2로 구성된 제2 안정화제 용액, 안정화제 2가 단일 펌프 투여를 지지할 것이다. 250 mL 식염수 주머니 (270 mL의 공칭 부피를 가짐)에 희석될 때, 결과적으로 생성된 투약 용액은 0.03 mg/mL PS80, 1.7 mg/mL BA 및 0.55 mg/mL MP를 함유한다. DART-A DP 제제를 계속해서 첨가하여 최종 투약 용액을 생성하고 이것은 단일 이동형 펌프를 사용하는 4일의 연속 IV 투여에 적합하다.
실시예 3
안정화제 1 용액을 활용하는 DART-A 이중-펌프 이동형 주입 적합성 연구
이 실시예는 DART-A DP 제제 (안정화제 1에 희석됨)의 주입 구성요소와의 적합성 및 이중 펌프 이동형 주입 구성에서의 DART-A 회수를 요약한다. 주입 구성은 DART-A DP 제제 (안정화제 1에 희석됨)를 전달하는 펌프 1과 적어도 10 mL/hr의 조합 유량을 유지하기 위해 식염수를 전달하는 펌프 2를 가진 2개의 이동형 펌프를 사용한다.
연구의 목적은:
(A) 안정화제 1에 희석된 DART-A DP 제제의 주입 구성요소와의 적합성 및 24, 48, 및 72시간 동안 실온에서 연속 주입 중에 전체 DART-A 회수율을 평가하고;
(B) 안정화제 1의 BA 함량을 테스트하며 24, 48, 및 72시간 동안 실온에서 흔들어주면서 약물 카세트 중에서의 DART-A의 안정성을 평가하고; 및
(C) 72시간 동안 상승된 온도 (37℃)에서 흔들어주면서 약물 카세트 중의 DART-A의 안정성을 평가하는 것이었다.
3.1. 연구 설계
DART-A DP 투약 용액의 연속 투여를 위해 2개의 이동형 펌프를 사용하는 주입 구성을 설계하였다. 도 11에서 나타낸 것과 같이, DART-A DP 제제 (안정화제 1에 희석됨)를 이동형 펌프 1의 약물 카세트에 로딩하고 투여 세트 (튜빙)를 통해 약 1 mL/hr 이하의 유량으로 3-방향 스톱콕의 부분 B로 흘려보냈다. 식염수 용액 (0.9% 염화 나트륨 주사 USP)를 이동형 펌프 2의 약물 카세트에 로딩하고 투여 세트 (튜빙)를 통해 5 mL/hr 이하의 유량으로 3-방향 스톱콕의 부분 A로 흘려보냈다. DART-A DP 제제 및 식염수를 혼합하고 0.2 μm 인라인 필터가 있는 확장 세트를 통해 대상체로의 투여를 위해 중심 정맥 카테터 (CVC)로 흘려보냈다. 이런 2-펌프 주입 구성은 DART-A DP 투약 용액의 주입 속도가 1 mL/hr 이하이고 권장 유량이 >10 mL/hr이어서 어떠한 혈액 응고 없이 CVC 부분을 개방된 상태로 유지해야 하기 때문에 필요하다. 펌프 2는 식염수를 10 mL/hr로 전달하여 적어도 10 mL/hr의 조합 유량을 유지한다. 약물 카세트에 로딩될 투약 용액을 도 12A-12B에서 나타낸 것과 같이 안정화제 1에 DART-A DP 제제를 희석함으로써 제조하였다.
이 연구는 일괄 접근법(bracketed approach)을 사용하여 30 ng/kg/일 내지 1000 ng/kg/일의 용량을 테스트함으로써 광범위한 용량 범위를 포함하였다. 표 29는 용량 농도를 측정하기 위한 예로서 80 kg 체중의 대상체에 대해 사용한 용량 계산을 보여준다. 다른 대상체에 대한 용량 계산은 그들의 상응하는 체중을 사용하여 유사하게 계산할 수 있다.
80 Kg 체중의 대상체에게 투여하기 위한 DART-A의 계산을 예시하는 용량 제조 표
대상체 체중 (kg) 용량 DART-A/kg/일 (ng) 총 용량 DART-A/일 (ng) DART-A
용량 농도 (ng/mL) 		용량 부피/일 (mL) 유량 (mL/hr)
80 30 2400 100 24 1.0
80 100 8000 500 16 0.7
80 300 24000 1000 24.0 1.0
80 500 40000 2000 20.0 0.8
80 700 56000 2000 28.0 1.2
80 900 72000 4000 18.0 0.8
80 1000 80000 5000 16.0 0.7
3.2. 샘플링 계획
실온 (22℃ ± 2℃), 및 상승된 온도 (37℃)에서 72시간 동안 흔들어주면서 주입하는 중에 DART-A DP 제제의 주입 구성요소와의 적합성, 약물 회수율 및 약물 카세트에 로딩된 DART-A의 안정성을 평가하기 위해 3개의 연구를 수행하였다. 도 13은 이들 연구에 사용한 5개의 (5) 샘플링 지점 (#1 - #5)을 도시한다.
3.2.1. 연구 1
연구 1은 24, 48, 및 72시간 동안 실온 (22℃ ± 2℃)에서 유입 지점, 샘츨링 지점 #5에서의, 및 연속 주입 중의 적합성 및 전체 DART-A 회수율을 평가하였다.
3.2.2. 연구 2
DART-A DP 제제를 안정화제 1에 희석하여 DART-A 투약 용액을 제조하였다. 안정화제 1은 항미생물 보존제로서 0.9% BA를 함유한다. 연구 2는 BA 함량을 테스트하였고 24, 48, 및 72시간 동안 실온 (22℃ ± 2℃)에서 흔들어주면서 (100 rpm) 약물 카세트 중의 DART-A의 안정성을 평가하였다. DART-A의 안정성을 SE-HPLC를 사용하여 측정하였다. 최고 DART-A DP 제제 용량 (5000 ng/mL)이 안정화제에서 가장 희석된 보존제 농도를 가졌고 최악의 경우의 시나리오를 나타내기 때문에, 최고 용량 샘플만을 BA 농도에 대해 테스트하였다. 샘플을 도 11에서 도시한 것과 같이 샘플링 지점 #2에서 수집하였다.
3.2.3. 연구 3
연구 3은 최대 72시간 동안 37℃에서 흔들어주면서 (100 rpm) 약물 카세트에 희석된 DART-A의 안정성을 평가하였다. 샘플을 도 11에서 도시한 것과 같이 샘플링 지점 #2에서, 72시간 시점에서 수집하였다.
3.3. 결과 및 논의
상기 적합성 연구의 결과를 아래의 표 30에서 요약한다.
연구 1 - 이동형 주입 적합성 연구 - DART-A 회수율
목표 농도 용량 샘플 정량화 검정으로부터 유래된 DART-A 농도
(ng/mL) 		검정 유래된 농도를 토대로 한 DART-A 회수율 SE-HPLC
FLR에서 DART-A 단량체 피크 면적
(EU*분) 		SE-HPLC에서 단량체 피크 면적을 토대로 한 DART-A 회수율
낮은 농도
(100 ng/mL) 		예상된 또는
대조군 (T0 A) 		10.6 NA 46006 NA
T = 24시간 6.7 63.2% 37026 80.5%
T = 48시간 12.9 121.7% 44708 97.2%
T = 72시간 11.0 103.8% 49122 106.8%
높은 농도
(5000 ng/mL) 		예상된 또는
대조군 (T0) 		313.7 NA 1814623 NA
T = 24시간 235.2 75.0% 1483536 81.8%
T = 48시간 294.3 93.8% 1792023 98.8%
T = 72시간 254.4 81.1% 1804667 99.5%
A T0 = 시간 (T)=0
연구에서 제조된 낮은 농도는 DART-A 정량화 검정 (ELISA (rhIL3Rα)에 의해 평가됨)에 의해 116.7 ng/mL인 것으로 측정되었다. 도 11 및 표 29에서 나타낸 것과 같이, DART-A를 1.0 mL/hr로 주입하고 10 mL/hr로 주입하는 식염수에 의해 희석한다. T0에서 예상된 DART-A 농도는 116.7 ng/mL x 1.0 mL/hr ÷ (1.0 mL/hr + 10 mL/hr) = 10.6 ng/mL이다.
연구에서 제조된 높은 농도는 DART-A 정량화 검정 (ELISA (rhIL3Rα)에 의해 평가됨)에 의해 5067.5 ng/mL인 것으로 측정되었다. 도 11 및 표 29에서 나타낸 것과 같이, DART-A를 0.66 mL/hr로 주입하고 10 mL/hr로 주입하는 식염수에 의해 희석한다. T0에서 예상된 DART-A 농도는 5067.5 ng/mL x 0.66 mL/hr ÷ (0.66 mL/hr + 10 mL/hr) = 313.7 ng/mL이다.
낮은 및 높은 농도 주입 둘 다에 대해, 샘플을 24, 48, 및 72시간에 샘플링 지점 #5로부터 수집하였다. 상기와 같이, DART-A 정량화 검정을 사용하여 DART-A 농도를 측정하고 형광 검출기가 달린 SE-HPLC (FLR SE-HPLC)를 사용하여 DART-A 단량체 피크 면적을 분석하였다. 데이터를 예상된 T0 샘플에 대해 계산하여 DART-A 회수율을 얻었다. 표 30에서 나타낸 것과 같이, 정량화 검정을 토대로 한 DART-A 회수율은 저용량의 경우 63.2% 내지 121.7%였고, 고용량의 경우 75.0% 내지 93.8%였다. 다른 결합 ELISA 검정과 유사하게, 이들 범위는 이 유형의 생물검정의 전형적 편차 내에 있다 (50% - 150%). SE-HPLC 단량체 피크 면적을 토대로 한 이들 동일한 샘플에 대한 DART-A 회수율은 저용량의 경우 80.5% 내지 106.8%였고, 고용량의 경우 81.8% 내지 99.5%였다.
샘플을 연구 1에서 24, 48, 및 72시간에 샘플링 지점 #5로부터 수집하였고 또한 입자 수 테스트를 수행하였다. 표 31에서 나타낸 것과 같이, 모든 샘플에 대한 입자 수는 낮았고 USP 사용을 충족하였다.
연구 1 - 이동형 주입 적합성 연구 - 입자 수
목표 농도 용량 샘플 입자 수/mL
≥ 10 μm 		입자 수/mL
≥ 25 μm
낮은 농도
(100 ng/mL) 		식염수 대조군 1 0
T = 0 5 0
T = 24시간 4 1
T = 48시간 7 0
T = 72시간 1 0
높은 농도
(5000 ng/mL) 		식염수 대조군 1 0
T = 0 14 1
T = 24시간 2 1
T = 48시간 0 0
T = 72시간 0 0
연구 2에서 24, 48, 및 72시간에 샘플링 지점 #2로부터 수집한 샘플을 DART-A 정량화 검정 및 형광 검출기가 있는 SE-HPLC에 의해 분석하였다. 표 32에서 나타낸 것과 같이, 모든 샘플은 정량화 검정에서 DART-A의 온전한 결합 활성에 의해 입증된 바 활성을 유지하였고 SE-HPLC 검정에서 단량체 피크 면적의 최소 감소에 의해 나타난 바와 같이 안정적이었다. 두 검정 모두에 의해 평가된 DART-A 회수율은 91.1% 내지 110.8%였다.
연구 2 - 최대 72시간 동안 100 Rpm으로 흔들어주면서 25℃에서 인큐베이션한 후 약물 카세트에 로딩된 DART-A의 안정성 및 회수율
목표 농도 용량 샘플 정량화 검정으로부터 유래된 DART-A 농도 (ng/mL) 검정 유래된 농도를 토대로 한 DART-A 회수율 SE-HPLC
FLR에서 DART-A 단량체 피크 면적 (EU*분) 		SE-HPLC에서 단량체 피크 면적을 토대로 한 DART-A 회수율
낮은 농도
(100 ng/mL) 		T = 0 110.1 NA 355660 NA
T = 24시간 115.5 104.9% 379757 106.8%
T = 48시간 103.8 94.3% 377121 106.0%
T = 72시간 106.2 96.5% 394028 110.8%
높은 농도
(5000 ng/mL) 		T = 0 5398.7 NA 41031471 NA
T = 24시간 5241.2 97.1% 40529514 98.8%
T = 48시간 4967.5 92.0% 41438367 101.0%
T = 72시간 4916.7 91.1% 41582544 101.3%
연구 2에서 높은 농도 조건의 샘플링 지점 #2로부터 24, 48, 및 72시간에 수집한 샘플에 대해 또한 BA 함량 분석을 수행하였다. 표 33에서 나타낸 것과 같이, BA 함량은 증발 및/또는 흡착의 가능성으로 인해 약간 감소하였지만 최대 72시간 동안 100 rm에서 흔들어주면서 25℃에서 인큐베이션한 후에도 적어도 0.75%로 유지되었다. 이런 BA 농도는 0.61%의 BA 농도가 충분한 항미생물 활성을 제공한 이전 연구에서 테스트된 보존제 유효성 농도보다 위이다.
연구 2 - 최대 72시간 동안 100 Rpm으로 흔들어주면서 25℃에서 인큐베이션한 후 카세트에 로딩된 희석된 DART-A DP 제제의 벤질 알코올 함량
목표 농도 용량 샘플 예상된 벤질 알코올 농도 (%) 테스트된 벤질 알코올 농도 (%) 벤질 알코올 회수율
높은 농도
(5000 ng/mL) 		T = 0 0.86% 0.91% NA
T = 24시간 0.86% 0.78% 90.7%
T = 48시간 0.86% 0.76% 88.4%
T = 72시간 0.86% 0.75% 87.2%
연구 3에서 수집한 샘플에 대해 DART-A 정량화 검정 및 형광 검출을 포함한 SE-HPLC를 수행하였다. 표 34에서 나타낸 것과 같이, 최대 72시간 동안 100 rpm에서 흔들어주면서 37℃에서 인큐베이션한 후, 샘플은 정량화 검정에서 DART-A의 온전한 결합 활성에 의해 입증된 바 활성을 유지하였고 SE-HPLC 검정에서 단량체 피크 면적의 최소 감소에 의해 증명된 바 안정적이었다. 두 검정 모두에 의해 평가된 DART-A 회수율은 82.0% 내지 95.1%였다.
연구 3 - 최대 72시간 동안 100 rpm으로 흔들어주면서 37℃에서 인큐베이션한 후 약물 카세트에 로딩된 DART-A의 안정성 및 회수율
목표 농도 용량 샘플 정량화 검정으로부터 유래된
DART-A 농도 (ng/mL) 		검정 유래된 농도를 토대로 한 DART-A 회수율 SE-HPLC
FLR에서 DART-A 단량체 피크 면적 (EU*분) 		SE-HPLC에서 단량체 피크 면적을 토대로 한 DART-A 회수율
낮은 농도
(100 ng/mL) 		T = 0 111.4 NA 397095 NA
T = 72시간 99.4 89.2% 368950 92.9%
높은 농도
(5000 ng/mL) 		T = 0 5682.9 NA 41031489 NA
T = 72시간 4661.6 82.0% 39005201 95.1%
3.4. 결론
이 연구로부터의 결과를 토대로, 이중-펌프 이동형 주입 구성은 24, 48, 및 72시간 동안 허용 가능한 DART-A 회수율로 실온에서 DART-A DP 투약 용액의 연속 투여를 가능하게 한다. 연속 주입 중에 수집한 모든 샘플에 대한 입자 수는 모두 매우 낮았고 USP 사양을 충족하였다. DART-A DP 투약 용액 제조에 사용한 안정화제 1 중의 BA 함량은 최악의 희석 시나리오를 테스트했을 대에 유효 수준을 유지하였다. 약물 카세트에 로딩된 DART-A는 실온에서 및 심지어 상승된 온도 (37℃)에서도 최대 72시간 동안 흔들어주면서 (100 rpm) 연속 주입하는 동안 활성을 유지하였고 안정적이었다. 이들 연구는 희석된 DART-A DP 제제가 주입 구성요소와 적합하고 실온에서 DART-A DP 제제의 연속 투여를 위해 이중 펌프 이동형 주입 구성으로 사용될 수 있음을 입증한다. DART-A를 처음 2일 동안 필요한 약물 용량을 포함하기 위해 제1일에 약물 카세트에 희석된 DART-A DP 제제를 로딩함으로써 투여할 수 있고, 치료의 다음 2일 동안 필요한 약물 용량을 포함하기 위해 제3일에 재로딩할 수 있다. 약물 카세트에 미리 충전된 식염수는 치료 주기 중에 매일 이동형 펌프 2에 로딩된다.
실시예 4
안정화제 2 용액을 사용하는 DART-A 단일 펌프 적합성 연구
이 실시예는 DART-A DP 투약 용액의 제조를 위해 안정화제 2를 사용하여 수행된 적합성 및 미생물 도전 연구를 요약한다. 잠재적 낮은 및 높은 용량 농도를 일괄하는 20 ng/mL 및 0.1 mg/mL 용량에서의 단일 펌프 구성의 DART-A의 안정성을 용량 제조 후 최대 72시간 후 및 주입 후 96시간 후에 평가하였고 허용 가능한 것으로 나타났다. 연구 결과를 토대로, 40 mL의 안정화제 2 용액을 250 mL의 생리 식염수 함유 IV 주머니 (270 mL의 공칭 부피를 가짐)에서 희석한 후에 DART-A DP 제제에 첨가하여, 단일 펌프 구성을 사용하는 투여를 위한 최종 투약 용액을 제조하였다. 최대 72시간 동안 보관한 후, 투약 용액을 실온에서 96시간 동안 식염수 주머니로부터 연속 투여하여 4-일 연속 투여를 지지할 수 있다.
DART-A DP 제제를 0.9% 염화 나트륨, USP (생리 식염수) 중의 안정화제 2를 사용하는 투약 용액으로 4일 동안 이동형 또는 주입 펌프를 사용하여 연속 IV 주입에 의해 투여할 수 있다. 안정화제 2를 생리 식염수 IV 주머니에 첨가한 후에 DART-A DP 제제에 첨가하여 디아바디가 IV 주머니 및 IV 튜빙에 흡착되는 것을 방지한다. 안정화제 2가 용량 제조 중에 생리 식염수에 희석될 때, 투여에 사용될 투약 용액은 1.7 mg/mL BA, 0.55 mg/mL MP, 및 0.032 mg/mL PS80을 함유할 것이다. PS80은 제제에 DART-A의 IV 주머니의 표면 및 라인에 흡착되는 것을 방지하기 위해 포함되며, BA 및 MP는 둘 다 용량 제조, 보관 및 투여 중에 미생물 성장을 방지하기 위해 포함된다.
용량 제조 중에 희석 후, 최종 투약 용액은 20 ng/mL 내지 약 1250 ng/mL 범위의 DART-A 농도를 함유하여 30 ng/kg/일 내지 약 최대 500 ng/kg/일 범위의 2 내지 4-일 (48-96시간) 투여를 가능하게 할 것이다. DART-A의 희석을 위해 계산된 양은 대상체의 체중 (최소 및 최대 범위를 시뮬레이션 연구에 사용함) 및 원하는 투약을 토대로 한다 (표 35).
연구를 안정화제 2를 함유하는 생리 식염수 주머니에 희석된 DART-A DP 제제의 안정성 및 적합성 및 이동형 및 주입 펌프 IV 구성을 사용하는 이 DART-A DP 투약 용액의 투여를 지지하기 위해 수행하였다. 연구 목적은 DART-A DP 제제가 원하는 용량 범위로 안정화제 2를 함유하는 생리 식염수 주머니 및 의도된 주입 구성요소와 부합하는지를 입증하는 것이었다.
이동형 펌프 구성을 사용한 DART-A의 예시적인 전달
용량 (ng/kg/일) 환자 체중 (kg) 총 용량
(ng/일) 		투약 용액 농도
(ng/mL) 		4일 동안 1일당 전달된 부피 (mL)
30 40 1200 20.0 60
500 150 75000 1250.0 60
투약 용액 제조는 안정화제 2의 생리 식염수 주머니에의 첨가 후 DART-A DP 제제의 첨가를 포함하는 2-단계 과정을 필요로 할 것이다. 대표적인 낮은 및 높은 최종 투약 용액 농도를 표 36에 요약한다.
낮은 및 높은 용량에 대한 용량 제조 계획
용량 (ng/kg/일) 용량 250 mL 생리 식염수 IV 주머니의 공칭 부피 (mL) 부피 안정화제 (mL) 부피 DART-A
(mL) 		총 부피 (mL)
30 20 ng/mL 270.0 40 0.06 A 310.06
500 1,250 ng/mL 270.0 40 3.90 A 313.90
A. 0.1 mg/mL DART-A DP 제제를 사용하여 제조된 용량
연구의 목적은 다음과 같았다:
(A) 용량이 안정화제 2를 사용하여 제조되고 실온에서 72시간 동안 보관될 때 희석된 DART-A 의 안정성 및 회수율을 평가하고;
(B) 제조된 투약 용액이 실온에서 72시간 동안 보관된 후, 투여될 때 안정화제 2 용액 보존제의 수준을 테스트하며; 그리고
(C) 실온 보관 후 실온에서 48시간 (10 ng/mL 및 1,250 ng/mL) 및 96시간 (20 ng/mL 및 0.1 mg/mL) 동안 연속 주입하는 중에 안정화제 2 용액에 희석된 DART-A의 단일 이동형 펌프 주입 구성요소와의 적합성 및 회수율을 평가하는 것.
일괄 접근법을 사용하여 각각 500 ng/kg/일 및 30 ng/kg/일의 대표적인 치료 용량에 상응하는 최고 농도 (1,250 ng/mL) 및 최저 농도 (20 ng/mL)를 테스트하였다. 더불어, 10 ng/mL 및 0.1 mg/mL (100,000 ng/mL)의 투약 용액 농도를 또한 제조하고 평가하였다. 더 낮은 10 ng/mL의 농도를 평가하여 40 kg 환자에 대한 최소 목표 용량보다 아래의 투약 용액의 적합성을 입증하였다. 0.1 mg/mL 투약 용액 농도는 목표 투여 투약 범위 밖에 있지만 퍼센트 HMW 종을 특성화하기 위한 크기 배제 크로마토그래피 (SE-HPLC) 방법 및 의약품 전하 변화를 특성화하기 위한 모세관 등전점 포커싱 방법 (cIEF)의 정량화 한계값 한계 (LOQ)를 충족하는지 평가하기 위해 용량 농도로서 사용하였다.
4.1. 연구 설계
적합성 연구를 위한 용량 제조는 도 13에서 도시된 제안된 단일 이동형 펌프 용량 제조 계획을 따랐다. 적합성 연구의 일부로서, DART-A 단백질 및 보존제 안정성을 72시간 동안 실온 보관 중에 모니터링하였다. 보관 후, 투여는 도 14에서 도시된 제안된 단일 이동형 펌프 용량 투여 구성을 따랐다.
IV 스파이크를 포함한 CADD 투여 세트만을 테스트하였다. 240 mL의 투약 용액의 연속 투여 (48시간 동안 5 mL/hr 또는 96시간 동안 2.5 mL/hr)를 단백질 농도에 대한 일괄 전략을 사용하여 수행하였다. 용량 제조 및 투여에 사용된 방법을 다음 섹션에서 기술한다.
4.2. 투약 용액 제조
투약 용액을 40 mL의 안정화제 2를 250 mL 생리 식염수 주머니 (270 mL의 공칭 부피를 가짐)에 첨가한 후 계산된 양의 DART-A DP 제제에 첨가하여 상기 기술된 목표 약물 농도를 달성함으로써 제조하였다. 투약 용액을 실온에서 72시간 동안 생리 식염수 주머니에서 보관하면서 보관 중에 빛에 대한 노출을 최소화하였다.
B. Braun eXcel 생리 식염수 주머니를 이 연구에 사용하였다. 표준 실시는 생리 식염수 주머니에 포장에 명시된 250 mL 이상의 부피가 함유된 것을 나타낸다. 제조사 사양을 토대로 한 공칭 충전 부피는 각각의 B. Braun eXcel 주머니에 대해 270 mL이다. 이 부피를 사용하여 제제 개발 중에 안정화제 2의 부형제 농도를 계산하여 보존제의 최종 농도가 ADI 수준 이하인 것을 보장한다. 투약 용액 제조는 식염수 주머니에서 안정화제 2의 희석과 DART-A DP 제제의 첨가를 포함하는 2-단계 과정을 필요로 할 것이다.
각각의 용량을 40 mL의 안정화제 2를 IV 주머니에 첨가함으로써 제조하였다. 안정화제 2 바이알을 잘 흔들어준 후 IV 주머니에 첨가하였다. 안정화제 용액 첨가 후, 각각의 식염수 주머니를 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 주머니를 부드럽게 혼합하였다. 혼합 후, 미리 정해진 부피의 DART-A DP 제제 (표 34 참고)를 1 mL 주사기 (저용량 제조) 또는 5 mL 주사기 (고용량 제조)를 사용하여 각각의 주머니에 첨가하였다. 각각의 주머니를 다시 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 철저하게 혼합하였다. 혼합 후, 새로운 60 mL 주사기를 사용하여 식염수 주머니로부터 모든 공기를 제거하였다.
용량 제조 후, 외관, pH, 오스몰 농도, 및 눈에 보이지 않는 미립자 T = 0시간 분석을 위해 각 주머니로부터 15 mL을 수집하였다. 모든 샘플이 생성되었을 때 모든 다른 분석 방법을 완료하였다. 각각의 주머니를 실온에서 72시간 동안 인큐베이션하였다. 72시간 보관 후, 투약 용액의 투여 구성요소와의 적합성을 테스트하기 위해 주입되기 전에 분석을 위해 15 mL의 용액을 각 주머니로부터 수집하였다.
4.3. 투약 용액 투여
보관 후, 각 농도에서 제조된 투약 용액을 0.22 μm 여과된, 비-DEHP PVC IV 투여 연장 세트가 결합된 IV 주머니 스파이크를 통해 이동형 펌프에 연결하고 10 ng/mL 및 1,250 ng/mL에서 48시간 및 4-일 투여를 위해 20 ng/mL 및 또한 0.1 mg/mL인 최저 출발 용량에 대해 실온에서 96시간 동안 연속적으로 주입하였다.
용량 투여 중 적합성을 48시간 동안 5 mL/hr 또는 96시간 동안 2.5 mL/hr의 DART-A 용량을 전달하기 위해 프로그래밍된 Smiths Medical CADD Legacy-1 이동형 펌프를 사용하여 평가하였다. 상기 도 14에서 알 수 있는 것과 같이, IV 주머니 스파이크가 있는 Smiths Medical CADD 투여 세트를 사용하여 투약 용액이 들어 있는 식염수 주머니를 직접 이동형 펌프에 연결하였다. 주입된 DART-A DP 투약 용액을 샘플 수집 중에 비-특이적 단백질 결합을 방지하기 위해 식염수에 희석된 안정화제 2로 사전 코팅된 250 mL 유리 보틀에 수집하였다. 식염수에 희석된 과잉 안정화제 2를 보틀로부터 제거하고 건조시킨 후 샘플을 수집하였다. 주입의 절반이 완료된 후, 새로운, 빈, 사전 코팅된 250 mL 유리 보틀로 이전의 수집 보틀을 교체하였다. 이것은 최종 주입된 투약 용액이 48-시간 또는 96-시간 샘플의 유지 시간을 정확하게 나타내는 것을 보장하였다. 샘플을 용량 제조시 (T = 0시간) 및 수집 용기에 최종 분배된 풀(pool)로부터 취하였고 (주입 후 샘플, 주입 T = 48시간 및 주입 T = 96시간), 시각적 외관, 눈에 보이지 않는 미립자, pH, 오스몰 농도, 보존제 농도를 역상 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해, 단백질 회수율을 형광 크기 배제 크로마토그래피 (FLR SE-HPLC) 및 ELISA 검정에 의해, 그리고 효능을 CD3 및 CD123 결합에 의해 테스트하였다. 0.1 mg/mL 농도의 샘플을 리포터 유전자 생물검정을 사용하여 효능에 대해 분석하였다.
4.4. 분석 테스트
모든 투약 용액을 용량 제조시 (T = 0시간), 실온 보관 후 (T = 72시간), 및 주입 후 (주입 시간, T = 48시간 또는 T = 96시간)에 분석한다. 적합성을 분석하기 위해 사용한 분석 테스트를 아래의 표 37에서 열거한다 (NT: 속성을 명시된 용량에서 테스트하지 않음).
각각의 투약 용액 농도에 대해 테스트한 적합성 속성
테스트한
속성 		방법 10 ng/mL
저용량 용액 		20 ng/mL
저용량 용액 		1250 ng/mL
고용량 용액 		0.1 mg/mL 시뮬레이션된 DP 용량 용액
pH pH X X X NT A
외관 외관 X X X NT
오스몰 농도 오스몰 농도 X X X NT
단백질 회수율 ELISA X X NT X
단백질 회수율 FLR SE-HPLC NT NT X NT
눈에 보이지 않는 미립자 수 빛 차단 방법 (HIAC) X X X NT
벤질 알코올 회수율 역상 (RP)HPLC X X X NT
메틸파라벤 회수율 역상 (RP)HPLC X X X NT
단백질 효능 CD3 및 CD123 결합 NT NT X NT
단백질 효능 리포터 유전자 생물검정 NT X NT X
전하 변화 모세관 등전점 포커싱 (cIEF) NT NT NT X
단백질 순도 FLR SE-HPLC NT NT NT X
4.5 결과
IV 주머니에서 72-시간 실온 보관 및 실온에서 단일 펌프 구성을 사용한 주입 후 저 및 고용량 용액의 적합성 및 안정성 결과를 아래의 표 38에 열거한다.
안정화제 2 용액이 들어 있는 생리 식염수 IV 주머니에서 희석된 DART-A의 적합성 및 사용중 안정성
분석 방법 10 ng/mL
T=0 보관 후
(T = 72시간) 		주입 후
(주입 시간 = 48시간)
pH 8.1 8.1 8.1
시각적 외관 A C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP
오스몰 농도 (mOsm/kg) 275 275 274
% 단백질 회수율 B 100 99.8 88.3
USP<788>에 의한 눈에 보이지 않는 입자 C
≥ 2 μm /mL
≥ 10 μm /mL
≥ 25 μm /mL
206
7
1
192
10
1
140
2
1
RP-HPLC에 의한 보존제 회수율
% 벤질 알코올 D
% 메틸 4-하이드록시벤조에이트 나트륨 D
100
100
100.4
101.0
98.2
98.2
% 효능, CD3 결합 E NT F NT F NT F
% 효능, CD123 결합 E NT F NT F NT F
분석 방법 20 ng/mL
T=0 보관 후
(T = 72시간) 		주입 후
(주입 시간 = 96시간)
pH 8.1 8.1 7.9
시각적 외관 A C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP
오스몰 농도 (mOsm/kg) 276 276 276
% 단백질 회수율 B 100 101.6 93.7
USP<788>에 의한 눈에 보이지 않는 입자 C
≥ 2 μm /mL
≥ 10 μm /mL
≥ 25 μm /mL
344
8
0
412
8
0
85
9
3
RP-HPLC에 의한 보존제 회수율
% 벤질 알코올 D
% 메틸 4-하이드록시벤조에이트 나트륨 D
100
100
99.7
99.2
97.0
95.1
% 효능, CD3 결합 E NT F NT F NT F
% 효능, CD123 결합 E NT F NT F NT F
분석 방법 1250 ng/mL
T=0 보관 후
(T = 72시간) 		주입 후
(주입 시간 = 48시간)
pH 8.0 8.0 8.0
시각적 외관 A C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP		 C, L
FNP, FPP
오스몰 농도 (mOsm/kg) 275 275 276
% 단백질 회수율 B 100 95.5 92.4
USP<788>에 의한 눈에 보이지 않는 입자 C
≥ 2 μm /mL
≥ 10 μm /mL
≥ 25 μm /mL
664
21
1
146
7
1
188
4
1
RP-HPLC에 의한 보존제 회수율
% 벤질 알코올 D
% 메틸 4-하이드록시벤조에이트 나트륨 D
100
100
99.9
100.9
99.3
98.4
% 효능, CD3 결합 E 111 101 92
% 효능, CD123 결합 E 146 140 123
A. 시각적 외관: 투명 (C) 및 무색 (L); 미립자: FNP=본질적으로 가시적인 외래 입자 없음, FPP=본질적으로 단백질성 입자 없음.
B. 주입 후 샘플의 DART-A 회수율은 상응하는 T=0 샘플에 비례하는 백분율로서 표시됨. 단백질 회수율을 1,250 ng/mL 용량의 경우 FLR SE-HPLC 피크 면적을 사용하여, 또는 다른 용량의 경우 ELISA 정량화(CD3 결합)에 의해 계산함.
C. 눈에 보이지 않는 미립자를 USP <788> 빛 폐쇄 (Beckman Coulter HIAC)에 의해 측정함.
D. 보존제 회수율을 RP-HPLC에 의해 측정된 % 단량체로서 표시함.
E. 효능을 DART-A 참조 표준에 대해 계산된 상대 효능 (%)으로 기록함.
F. NT: 농도가 정성 분석 방법에 대해 LOQ 미만이기 때문에 테스트하지 않음.
모든 용액은 투명하고, 무색인 것으로 관찰되었고, 용량 제조시 (T = 0시간), 보관 후 (T = 72시간), 및 주입 후 (주입 T = 48시간 또는 주입 T = 96시간)에 가시적인 미립자는 없었다. 단백질 회수율을 1,250 ng/mL 투약 용액의 경우 SE-HPLC 방법을 사용하여, 또는 모든 다른 용액의 경우 ELISA (CD3 결합)에 의해 계산하였다. DART-A 주입 후의 % 단백질 회수율 (T = 0에 대해 계산된 단백질 농도)은 테스트된 투약 용액에 대해 허용 가능하였다. 더불어, T = 0와 비교할 때 주입 후 샘플에서 pH, 시각적 외관, 및 오스몰 농도에서 유의한 변화는 관찰되지 않았다. T = 0와 비교하여 투약 용액에 대해 주입 후 샘플에서 ≥ 2　μm, ≥ 10 μm 및 ≥ 25 μm 입자에 대한 눈에 보이지 않는 입자 수는 증가하지 않았다. 전체적으로, 표 37의 결과는 투약 용액을 이동형 주입 펌프로 투여할 때 pH, 단백질 회수율, 효능, 눈에 보이지 않는 입자 및 시각적 외관에서 유의한 생성물 변화를 보이지 않는다. 4-일 투여의 경우 20 ng/mL의 최저 잠재적 용량 농도에서 96시간의 더 긴 주입 시간은 생성물 품질에 영향을 미치지 않았다.
0.1 mg/mL 최종 용액에 대한 DART-A 특성화 결과를 아래의 표 39에 나타낸다.
72-시간 실온 보관 및 투여 후의 DART-A (0.1 mg/mL) 특성화 결과
수행된 테스트 테스트된 속성 시점
T = 0시간 Post 보관
(시간 = 72시간) 		주입 후
(주입 시간 = 96시간)
% 단백질 회수율 A 농도 (mg/mL)
% T0 		0.098
100		 0.096
97.8		 0.092
94.4
리포터 유전자 생물검정 상대 효능 (%) B 136 88 80
cIEF C % 주요 피크 67.3 67.0 65.2
% AV 28.3 29.1 31.4
% BV 4.4 3.9 3.4
FLR SE-HPLC D % 주요 피크 98.4 98.4 98.2
% HMW 0.8 0.8 0.9
% LMW 0.9 0.9 0.9
A. 단백질 회수율을 ELISA 정량화 (CD3 결합)에 의해 계산하였다.
B. 효능을 DART-A 참조 표준에 대해 계산된 상대 효능 (%)으로서 기록한다.
C. AV = 산성 변이체, BV = 염기성 변이체
D. HMW = 고분자량 종, LMW = 저분자량 종
표 39는 이 농도에서 SE-HPLC에 의한 HMW 및 LMW에 변화가 없음을 보여준다. cIEF에 의해 모니터링되는 바, 전하 이질성은 분석 방법의 가변성 내에서 미미한 변화를 나타낸다. 리포터 유전자 생물검정을 사용하여 측정된 상대 효능은 방법에 대한 허용 기준 (50 - 150%) 내에 있다. 보관 및 투여 중에 시각적 외관의 변화는 관찰되지 않았다. USP 권장 미생물을 사용하여 평가된 용량 제제화된 용액에 대한 미생물 성장 데이터는 4-일 연속 투여를 위한 투약 용액의 사용을 지지한다.
4.6. 결론
적합성 연구는 테스트된 최저 (20 ng/mL) 및 최고 (1,250 ng/mL) 용량 농도에서 안정화제 2-안정화된 생리 식염수 용액 주머니에 희석되고 72시간 동안 실온에서 보관될 때 DART-A DP 제제가 안정적인 것을 입증한다. 적합성 연구는 또한 투약 용액이 단일 펌프를 사용하여 실온에서 96시간 동안 주입에 의해 투여될 때 적합한 것을 보여준다. 미생물 성장 데이터는 4-일 연속 투여를 위한 투약 용액의 사용을 지지한다.
실시예 5
안정화제 2 용액을 사용하는 DART-A의 4일 및 7일 투여
이 실시예는 DART-A의 4-일 및 7-일 투여를 위한 DART-A DP 투약 용액의 제조를 위해 안정화제 2를 사용하여 적합성 및 미생물 도전 연구에 대한 하나의 대표적인 계획을 요약한다. 30-500 ng/kg/일 용량에서 가정용 단일 이동형 펌프가 달린 IV 주머니 또는 카세트에서의 DART-A의 안정성을 약 0.3 mL/시간 내지 약 0.5 mL/시간의 유량을 사용하여 4-일 및 7-일 투여에 대해 평가할 것이다. 3250 ng/mL (3.25 mg/mL) 용량의 단일 펌프 구성에서 DART-A의 안정성을 용량 제조 후 최대 24시간 후 및 보관 중에 4일 (96시간) 및 7일 (168시간) 후에 평가할 것이다. 연구 결과를 토대로, 안정화제 2 용액을 생리 식염수 함유 IV 주머니에서 희석한 후 DART-A DP 제제에 첨가하여, 단일 펌프 구성을 사용하는 투여를 위한 최종 투약 용액을 제조할 것이다. 최대 24시간 동안 보관 후, 투약 용액을 식염수 주머니로부터 4일 (96시간) 또는 7일 (168시간) 동안 실온에서 연속적으로 투여하여 4-일 또는 7-일 연속 투여를 지지할 수 있다.
4-일 투여
DART-A DP 제제를 IV 주머니 또는 카세트가 장착된 이동형 펌프를 사용하여 4일 동안 연속 IV 주입에 의해 투여할 수 있다. DART-A DP 제제의 희석을 위해 계산된 양은 대상체의 체중을 토대로 한다 (평균 78 kg의 체중을 시뮬레이션 연구에 사용하였다). 표 40은 투약 용액을 제조하기 위한 단계의 예시적인 계획을 나타낸다. DART-A DP 제제를 0.9% 염화 나트륨, USP (생리 식염수) 중의 안정화제 2를 사용하여 투약 용액에 희석한다. 생리 식염수 (45 mL)를 빈 IV 주머니에 첨가한다. 그런 후 안정화제 2 (8 mL)를 IV 주머니에 첨가한 후 DART-A DP 제제 (1.95 mL)를 첨가하여 디아바디가 IV 주머니 및 IV 튜빙에 흡착되는 것을 방지한다. 안정화제 2가 용량 제조 중에 생리 식염수에 희석될 때, 투여에 사용된 투약 용액 (60 mL의 총 부피)은 약 1.8 mg/mL BA, 약 0.56 mg/mL MP, 및 약 0.033 mg/mL PS80을 함유한다. 용량 제조 중에 희석한 후, 최종 투약 용액은 약 3250 ng/mL ng/mL의 DART-A 농도를 함유하여 500 ng/kg/일 용량의 4-일 투여를 가능하게 할 것이다.
IV 주머니 또는 카세트 및 이동형 펌프를 사용하여 60 mL 부피로 안정화제 2와 함께 DART-A의 예시적인 4-일 투여
환자 체중 78 kg
DART-A 용량 500 ng/kg/일
투여 유량 0.5 mL/시간
4일 동안 전달된 총 용량 부피 48 mL
프라임 부피를 포함한 총 최소 IV 주머니 부피 60 mL
용량 제조 단계 1. 45 mL의 생리 식염수 (0.9% 염화 나트륨)를 빈 IV 주머니에 첨가하는 단계.
2. 8 mL의 안정화제 2를 생리 식염수가 들어 있는 IV 주머니에 첨가하는 단계.
3. 1.95 mL의 DART-A DP 제제 (0.1 mg/mL)를 IV 주머니에 첨가하는 단계.
4. 5.05 mL의 생리 식염수를 첨가하여 IV 주머니 중의 투약 용액의 최종 부피를 60 mL로 만드는 단계.
용액 중의 최종 농도 DART A: 3250 ng/mL (3.25 mg/mL; 0.325%)
벤질 알코올: 1.8 mg/mL (0.18%)
메틸파라벤: 0.56 mg/mL (0.056%)
폴리소르베이트 80: 0.033 mg/mL (0.0033%)
7-일 투여
DART-A DP 제제를 또한 IV 주머니 또는 카세트가 장착된 이동형 펌프를 사용하여 7일 동안 연속 IV 주입에 의해 투여할 수 있다. DART-A의 희석을 위해 계산된 양은 대상체의 체중을 토대로 한다 (평균 78 kg의 체중을 시뮬레이션 연구에 사용하였다). 표 41은 투약 용액을 제조하기 위한 단계의 예시적인 계획을 나타낸다. DART-A DP 제제를 0.9% 염화 나트륨, USP (생리 식염수) 중의 안정화제 2를 사용하여 투약 용액에 희석한다. 생리 식염수 (70 mL)를 빈 IV 주머니에 첨가한다. 그런 후 안정화제 2 (18 mL)를 IV 주머니에 첨가한 후 DART-A DP 제제 (3.25 mL)를 첨가하여 디아바디가 IV 주머니 및 IV 튜빙에 흡착되는 것을 방지한다. 안정화제 2가 용량 제조 중에 생리 식염수에 희석될 때, 투여에 사용된 투약 용액 (100 mL의 총 부피)은 약 2.4 mg/mL BA, 약 0.77 mg/mL MP, 및 약 0.047 mg/mL PS80을 함유할 것이다. 용량 제조 중에 희석한 후, 최종 투약 용액은 약 3250 ng/mL ng/mL의 DART-A 농도를 함유하여 500 ng/kg/일 용량의 7-일 투여를 가능하게 할 것이다.
IV 주머니 또는 카세트 및 이동형 펌프를 사용하여 100 mL 부피로 안정화제 2와 함께 DART--A의 예시적인 7-일 투여
환자 체중 78 kg
DART-A 용량 500 ng/kg/일
유량 0.5 mL/시간
4일 동안 전달된 총 용량 부피 84 mL
프라임 부피를 포함한 총 최소 IV 주머니 부피 100 mL
용량 제조 단계 1. 70 mL의 생리 식염수 (0.9% 염화 나트륨)를 빈 IV 주머니에 첨가하는 단계.
2. 18 mL의 안정화제 2를 생리 식염수가 들어 있는 IV 주머니에 첨가하는 단계.
3. 3.25 mL의 DART-A DP 제제를 IV 주머니에 첨가하는 단계.
4. 8.75 mL의 생리 식염수를 첨가하여 IV 주머니 중의 투약 용액의 최종 부피를 100 mL로 만드는 단계.
용액 중의 최종 농도 DART A: 3250 ng/mL (3.25 mg/mL; 0.325%)
벤질 알코올: 2.4 mg/mL (0.24%)
메틸파라벤: 0.77 mg/mL (0.077%)
폴리소르베이트 80: 0.047 mg/mL (0.0047%)
안정화제 2가 들어 있는 생리 식염수 주머니에서 희석된 DART-A DP 제제의 안정성 및 적합성 및 표 40 및 표 41에서 나타낸 것과 같은 이동형 IV 주머니 및 카세트 구성을 사용하는 이 DART-A DP 투약 용액의 4-일 및 7-일 투여를 지지하는 연구가 진행 중이다. 연구 목적은 DART-A DP 제제가 원하는 30-500 ng/kg/일 용량에서 안정화제 2가 들어 있는 정상적인 IV 주머니 및 약 0.3 mL/시간 내지 약 0.5 mL/시간의 유량에서 4-일 및 7-일 투여를 위해 의도된 주입 구성요소와 부합하는 것을 입증하는 것이다. 연구 목적은 실온 보관 후 실온에서 4일 (96시간) 및 7일 (168시간) 동안 연속 주입하는 중에 안정화제 2 용액에 희석된 DART-A의 단일 이동형 펌프 주입 구성요소와의 적합성 및 회수율을 평가하는 것이다.
5.1. 연구 설계
적합성 연구를 위한 용량 제조는 도 13에 도시된 것과 같은 제안된 단일 이동형 펌프 용량 제조 계획을 따를 수 있다. 적합성 연구의 일부로서, DART-A 단백질 및 보존제 안정성을 24시간 동안 실온 보관 중에 모니터링할 것이다. 보관 후, 투여는 도 14에서 도시된 것과 같은 제안된 단일 이동형 펌프 용량 투여 구성을 따를 수 있다.
4-일 투여를 위한 48 mL의 투약 용액의 연속 투여 (4일 (96시간) 동안 0.5 mL/hr) 또는 84 mL의 투약 용액의 연속 투여 (7일 (168시간) 동안 0.5 mL/hr)를 수행할 것이다. 용량 제조 및 투여에 사용할 방법을 다음 섹션에서 기술한다.
5.2. 투약 용액 제조
투약 용액을 표 40 (4-일 투여) 및 표 41 (7-일 투여)에서 나타낸 것과 같이 제조하여 500 ng/kg/일 용량에서 78 kg 환자에게 적합한 목표 약물 농도를 달성할 것이다. 투약 용액을 보관 중에 빛에 대한 노출을 최소화하면서 실온에서 24시간 동안 정상적인 IV 주머니에 보관할 것이다.
투약 용액 제조는 생리 식염수의 빈 정맥내 (IV) 주머니에의 첨가, 생리 식염수 함유 IV 주머니에서 안정화제 2의 희석과 이어서 DART-A DP 제제의 첨가를 포함하는 3-단계 과정을 필요로 할 것이다. 안정화제 2 바이알을 잘 흔들어준 후 IV 주머니에 첨가할 것이다. 안정화제 용액 첨가 후, 각각의 IV 주머니를 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 부드럽게 혼합할 것이다. 혼합 후, 미리 결정된 부피의 DART-A DP 제제 (표 40 또는 표 41 참고)를 각 주머니에 첨가할 것이다. 각각의 주머니를 다시 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 철저하게 혼합할 것이다. 혼합 후, 모든 공기를 주사기를 사용하여 IV 주머니로부터 제거할 것이다.
용량 제조 후, 각 주머니로부터의 분취액을 외관, pH, 오스몰 농도, 및 눈에 보이지 않는 미립자 T = 0시간 분석을 위해 수집할 것이다. 모든 다른 분석 방법은 모든 샘플이 생성될 때 완료할 것이다. 각각의 주머니를 실온에서 24시간 내지 8일 동안 인큐베이션할 것이다. 보관 시간이 완료된 후, 투약 용액의 투여 구성요소와의 적합성을 테스트하기 위해 주입되기 전에 분석을 위해 투약 용액의 분취액을 각 주머니로부터 수집할 것이다.
5.3. 투약 용액 투여 및 분석 테스트
제조된 투약 용액이 투여될 수 있는 방법의 예를 기술한다. 보관 후, 제조된 투약 용액을 여과된, 투여 연장 세트가 결합된 IV 주머니 스파이크를 통해 이동형 펌프에 연결하고 실온에서 4일 (96시간) 또는 7일 (168시간) 동안 연속적으로 주입할 것이다. 용량 투여 중의 적합성을 4일 (96시간) 동안 0.3 mL/시간 또는 0.5 mL/시간에서 또는 7일 (168시간) 동안 0.3 mL/시간 또는 0.5 mL/시간에서 DART-A 용량을 전달하기 위해 프로그래밍될 이동형 펌프 (예컨대, Smiths Medical CADD Legacy-1 이동형 펌프)를 사용하여 평가할 것이다. 상기 도 14에서 나타낸 것과 같이, IV 주머니 스파이크가 구비된 Smiths Medical CADD 투여 세트를 사용하여 투약 용액이 들어 있는 식염수 주머니를 직접 이동형 펌프에 연결할 수 있다. 주입된 DART-A DP 투약 용액을 샘플 수집 중에 외래 입자를 제거하기 위해 식염수에 희석된 안정화제 2로 세정된 유리 보틀에 수집할 것이다. 식염수에 희석된 과잉 안정화제 2는 샘플 수집 전에 보틀로부터 제거되고 건조될 것이다. 주입의 절반을 완료한 후, 새로운, 빈 유리 보틀로 이전의 수집 보틀을 대체할 것이다. 이것은 최종 주입된 투약 용액이 4-일 (96시간) 또는 7-일 (168시간) 샘플의 보유 시간을 정확하게 나타내는 것을 보장할 것이다. 샘플을 용량 제조 시점 (T = 0시간)에 및 수집 용기에 최종 분배된 풀로부터 취하여 (주입 후 샘플, 주입 T = 4일/96시간 및 주입 T = 7일/168시간) 분석 테스트를 본질적으로 본원에 기술된 것과 같이 (특히, 실시예 7 참고) 시각적 외관, 눈에 보이지 않는 미립자, pH, 오스몰 농도, 보존제 농도를 역상 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해, 단백질 회수율을 형광 크기 배제 크로마토그래피 (FLR SE-HPLC) 및 ELISA 검정에 의해, 그리고 효능을 리포터 유전자 생물검정에 의해 수행하였다.
실시예 6
안정화제 3 용액을 사용하는 이중특이적 디아바디의 4일 및 7일 투여
이 실시예는 이중특이적 디아바디 (예컨대, DART-A)의 4-일 및 7-일 투여를 위한 이중특이적 디아바디 투약 용액, 예컨대 a DART-A DP 투약 용액의 제조를 위해 안정화제 3 (150 mM 염화 나트륨 및 0.1 mg/mL PS80, pH 6.0을 포함함)을 사용하는 적합성 및 미생물 도전 연구에 대한 한 대표적인 계획을 요약한다. 30-500 ng/kg/일 용량에서 가정용 이동형 펌프가 달린 IV 주머니 또는 카세트 중의 이중특이적 디아바디의 안정성을 약 0.3 mL/시간 내지 약 0.5 mL/시간의 유량을 사용하여 4-일 및 7-일 투여에 대해 평가할 것이다. 25 ng/mL 내지 3250 ng/mL (3.25 mg/mL) 용량에서 단일 펌프 구성의 이중특이적 디아바디의 안정성을 용량 제조 후 최대 24시간 후 및 보관 중에 4일 (96시간) 및 7일 (168시간) 후에 평가할 것이다. 연구 결과를 토대로, 안정화제 3 용액을 정균 식염수 함유 IV 주머니에서 희석한 후 이중특이적 디아바디 제제에 첨가하여, 단일 펌프 구성을 사용하는 투여를 위한 최종 투약 용액을 제조할 것이다. 최대 24시간 동안 보관 후, 투약 용액을 식염수 주머니로부터 4일 (96시간) 또는 7일 (168시간) 동안 실온에서 연속적으로 투여하여 4-일 또는 7-일 연속 투여를 지지할 수 있다.
안정성 연구
안정성 연구를 대표적인 3개의 사슬 이중특이적 디아바디 ("BD")의 적합성 및 전체 회수율을 평가하기 위해 수행하였다. BD는 Fc 도메인을 포함하고 실온 (22℃ ± 2℃)에서 6시간 동안 연속 주입 중에 CD3 및 B7-H3에 결합할 수 있다. 이중특이적 디아바디 제제를 안정화제 3으로 희석하여 이중특이적 디아바디 투약 용액을 제조하였다. 연구는 일회용 주사기로 이중특이적 디아바디의 안정성을 테스트하였다. 샘플을 T=0 및 6시간 째에 수집하였다. 이중특이적 디아바디의 안정성을 SE-HPLC를 사용하여 측정하였다. 수집한 샘플에 대해 또한 입자 수 테스트를 수행하였다. 표 42 및 표 43에서 나타낸 것과 같이, 모든 샘플에 대한 입자 수는 낮았고 USP 사양을 충족하였다.
안정화제 3에 희석되고 단일 펌프를 사용하여 8 mL/시간으로 투여된 이중특이적 디아바디 (BD)의 6-시간 안정성
용량 농도 용량 샘플 BD 농도 BD 회수율 (T = 0에 대해) 입자 수/mL
≥ 10 μm 		입자 수/mL
≥ 25 μm
10,000 μg/mL 용량 제조
(T = 0)		 9.90 mg/mL NA 37 6
주입 후 9.93 mg/mL 100.3% 17 2
1 μg/mL 용량 제조
(T = 0)		 0.89 μg/mL NA 3 0
주입 후 0.99 μg/mL 111.2% 3 2
안정화제 3에 희석되고 단일 펌프를 사용하여 30 mL/시간으로 투여된 이중특이적 디아바디 (BD)의 6-시간 안정성
용량 농도 용량 샘플 BD 회수율
(상대 이론 농도) 		입자 수/mL
≥ 10 μm 		입자 수/mL
≥ 25 μm
1,000 μg/mL 용량 제조
(T = 0)		 88% 13 5
주입 후 101% 7 0
1 μg/mL 용량 제조
(T = 0)		 111% 19 1
주입 후 106% 1 1
이들 단기 (6-시간) 안정성 연구는 저용량, 희석된 이중특이적 디아바디 제제가 안정화제 3 및 주입 구성요소 둘 다와 부합한 것을 입증한다. 희석된 이중특이적 디아바디 제제 및 안정화제 3을 실온에서 이중특이적 디아바디 제제의 연속 투여를 위해 허용 가능한 이중특이적 디아바디 회수율 및 낮은 입자 수로 단일 펌프 구성으로 사용할 수 있다.
4-일 투여
이중특이적 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)를 IV 주머니 또는 카세트가 장착된 이동형 펌프를 사용하여 4일 동안 연속 IV 주입에 의해 투여할 수 있다. 이중특이적 디아바디 제제의 희석을 위해 계산된 양은 대상체의 체중을 토대로 한다 (평균 78 kg의 체중을 시뮬레이션 연구에 사용하였다). 표 44는 DART-A DP 투약 용액을 제조하기 위한 단계의 예시적인 계획을 나타낸다. DART-A DP 제제를 정균 식염수 (0.9% BA, 0.9% 염화 나트륨, USP) 중의 안정화제 3을 사용하여 투약 용액에 희석한다. 정균 식염수 (45 mL)를 빈 IV 주머니에 첨가한다. 그런 후 안정화제 3 (8 mL)을 IV 주머니에 첨가한 후 DART-A DP 제제 (1.95 mL)를 첨가하여 DART-A가 IV 주머니 및 IV 튜빙에 흡착되는 것을 방지한다. 안정화제 3이 용량 제조 중에 정균 식염수에 희석될 때, 투여에 사용된 투약 용액 (60 mL의 총 부피)은 약 7.5 mg/mL BA 및 약 0.013 mg/mL PS80을 함유할 것이다. 용량 제조 중에 희석한 후, 최종 투약 용액은 약 3250 ng/mL ng/mL의 DART-A 농도를 함유하여 500 ng/kg/일 용량의 4-일 투여를 가능하게 할 것이다.
IV 주머니 또는 카세트 및 이동형 펌프를 사용하는 60 mL 부피로 안정화제 3과 함께 DART-A의 예시의 4-일 투여
환자 체중 78 kg
DART-A 용량 500 ng/kg/일
투여 유량 0.5 mL/시간
4일 동안 전달된 총 용량 부피 48 mL
프라임 부피를 포함한 총 최소 IV 주머니 부피 60 mL
용량 제조 단계 1. 45 mL의 생리 식염수 (생리 식염수 중의 0.9% BA)를 빈 IV 주머니에 첨가하는 단계.
2. 8 mL의 안정화제 3을 정균 식염수가 들어 있는 IV 주머니에 첨가하는 단계.
3. 1.95 mL의 DART-A DP 제제 (0.1 mg/mL)를 IV 주머니에 첨가하는 단계.
4. 5.05 mL의 정균 식염수를 첨가하여 IV 주머니 중의 투약 용액의 최종 부피를 60 mL로 만드는 단계.
용액 중의 최종 농도 DART A: 3250 ng/mL (3.25 mg/mL; 0.325%)
벤질 알코올: 7.5 mg/mL (0.75%)
폴리소르베이트 80: 0.013 mg/mL (0.0013%)
7-일 투여
이중특이적 디아바디 제제 (예컨대, DART-A DP 제제)를 또한 IV 주머니 또는 카세트가 장착된 이동형 펌프를 사용하여 7일 동안 연속 IV 주입에 의해 투여할 수 있다. 이중특이적 디아바디의 희석을 위해 계산된 양은 대상체의 체중을 토대로 한다 (평균 78 kg의 체중을 시뮬레이션 연구에 사용하였다). 표 45는 DART-A DP 투약 용액을 제조하기 위한 단계의 예시적인 계획을 나타낸다. DART-A DP 제제를 정균 식염수 (0.9% BA, 0.9% 염화 나트륨, USP) 중의 안정화제 3을 사용하여 투약 용액에 희석한다. 정균 식염수 (70 mL)를 빈 IV 주머니에 첨가한다. 그런 후 안정화제 3 (18 mL)을 IV 주머니에 첨가한 후 DART-A DP 제제 (3.25 mL)를 첨가하여 DART-A가 IV 주머니 및 IV 튜빙에 흡착되는 것을 방지한다. 안정화제 3이 용량 제조 중에 정균 식염수에 희석될 때, 투여에 사용된 투약 용액 (100 mL의 총 부피)은 약 7.5 mg/mL BA 및 약 0.013 mg/mL PS80을 함유할 것이다. 용량 제조 중에 희석한 후, 최종 투약 용액은 약 3250 ng/mL ng/mL의 DART-A 농도를 함유하여 500 ng/kg/일 용량의 7-일 투여를 가능하게 할 것이다.
IV 주머니 또는 카세트 및 이동형 펌프를 사용하는 100 mL 부피로 안정화제 3과 함께 DART-A의 예시의 7-일 투여
환자 체중 78 kg
DART-A 용량 500 ng/kg/일
유량 0.5 mL/시간
4일 동안 전달된 총 용량 부피 84 mL
프라임 부피를 포함한 총 최소 IV 주머니 부피 100 mL
용량 제조 단계 1. 70 mL의 생리 식염수 (생리 식염수 중의 0.9% BA)를 빈 IV 주머니에 첨가하는 단계.
2. 18 mL의 안정화제 3을 정균 식염수가 들어 있는 IV 주머니에 첨가하는 단계.
3. 3.25 mL의 DART-A DP 제제를 IV 주머니에 첨가하는 단계.
4. 8.75 mL의 정균 식염수를 첨가하여 IV 주머니 중의 투약 용액의 최종 부피를 100 mL로 만드는 단계.
용액 중의 최종 농도 DART A: 3250 ng/mL (3.25 mg/mL; 0.325%)
벤질 알코올: 7.5 mg/mL (0.75%)
폴리소르베이트 80: 0.013 mg/mL (0.0013%)
안정화제 3이 들어 있는 정균 식염수 주머니에서 희석된 DART-A DP 제제의 안정성 및 적합성 및 표 44 및 표 45에서 나타낸 것과 같은 이동형 IV 주머니 및 카세트 구성을 사용하는 이 DART-A DP 투약 용액의 4-일 및 7-일 투여를 지지하는 연구가 진행 중이다. 연구 목적은 DART-A DP 제제가 원하는 30-500 ng/kg/일 용량에서 안정화제 3이 들어 있는 정균 식염수 주머니 및 약 0.3 mL/시간 내지 약 0.5 mL/시간의 유량에서 4-일 및 7-일 투여를 위해 의도된 주입 구성요소와 부합하는 것을 입증하는 것이다. 연구 목적은 실온 보관 후 실온에서 4일 (96시간) 및 7일 (168시간) 동안 연속 주입하는 중에 안정화제 3 용액에 희석된 DART-A의 단일 이동형 펌프 주입 구성요소와의 적합성 및 회수율을 평가하는 것이다.
6.1. 연구 설계
적합성 연구를 위한 용량 제조는 도 13에 도시된 것과 같은 제안된 단일 이동형 펌프 용량 제조 계획을 따를 수 있다. 적합성 연구의 일부로서, DART-A 단백질 및 보존제 안정성을 24시간 동안 실온 보관 중에 모니터링할 것이다. 보관 후, 투여는 도 14에서 도시된 것과 같은 제안된 단일 이동형 펌프 용량 투여 구성을 따를 수 있다.
4-일 투여를 위한 48 mL의 투약 용액의 연속 투여 (4일 (96시간) 동안 0.5 mL/hr) 또는 84 mL의 투약 용액의 연속 투여 (7일 (168시간) 동안 0.5 mL/hr)를 수행할 것이다. 용량 제조 및 투여에 사용할 방법을 다음 섹션에서 기술한다.
6.2. 투약 용액 제조
투약 용액을 표 44 (4-일 투여) 및 표 45 (7-일 투여)에서 나타낸 것과 같이 제조하여 500 ng/kg/일 용량에서 78 kg 환자에게 적합한 목표 약물 농도를 달성할 것이다. 투약 용액을 보관 중에 빛에 대한 노출을 최소화하면서 실온에서 24시간 동안 정상적인 IV 주머니에 보관할 것이다.
투약 용액 제조는 생리 식염수의 빈 정맥내 (IV) 주머니에의 첨가, 생리 식염수 함유 IV 주머니에서 안정화제 3의 희석과 이어서 DART-A DP 제제의 첨가를 포함하는 3-단계 과정을 필요로 할 것이다. 안정화제 3 바이알을 잘 흔들어준 후 IV 주머니에 첨가할 것이다. 안정화제 용액 첨가 후, 각각의 IV 주머니를 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 부드럽게 혼합할 것이다. 혼합 후, 미리 결정된 부피의 DART-A DP 제제 (표 44 또는 표 45 참고)를 각 주머니에 첨가할 것이다. 각각의 주머니를 다시 5분 동안 주머니를 거꾸로 함으로써 철저하게 혼합할 것이다. 혼합 후, 모든 공기를 주사기를 사용하여 IV 주머니로부터 제거할 것이다.
용량 제조 후, 각 주머니로부터의 분취액을 외관, pH, 오스몰 농도, 및 눈에 보이지 않는 미립자 T = 0시간 분석을 위해 수집할 것이다. 모든 다른 분석 방법은 모든 샘플이 생성될 때 완료할 것이다. 각각의 주머니를 실온에서 24시간 내지 8일 동안 인큐베이션할 것이다. 보관 시간이 완료된 후, 투약 용액의 투여 구성요소와의 적합성을 테스트하기 위해 주입되기 전에 분석을 위해 투약 용액의 분취액을 각 주머니로부터 수집할 것이다.
6.3. 투약 용액 투여 및 분석 테스트
제조된 투약 용액이 투여될 수 있는 방법의 예를 기술한다. 보관 후, 제조된 투약 용액을 여과된, 투여 연장 세트가 결합된 IV 주머니 스파이크를 통해 이동형 펌프에 연결하고 실온에서 4일 (96시간) 또는 7일 (168시간) 동안 연속적으로 주입할 것이다. 용량 투여 중의 적합성을 4일 (96시간) 동안 0.3 mL/시간 또는 0.5 mL/시간에서 또는 7일 (168시간) 동안 0.3 mL/시간 또는 0.5 mL/시간에서 DART-A 용량을 전달하기 위해 프로그래밍될 이동형 펌프 (예컨대, Smiths Medical CADD Legacy-1 이동형 펌프)를 사용하여 평가할 것이다. 상기 도 14에서 나타낸 것과 같이, IV 주머니 스파이크가 구비된 Smiths Medical CADD 투여 세트를 사용하여 투약 용액이 들어 있는 정균 식염수 주머니를 직접 이동형 펌프에 연결할 수 있다. 주입된 DART-A DP 투약 용액을 샘플 수집 중에 외래 입자를 제거하기 위해 정균 식염수에 희석된 안정화제 3으로 세정된 유리 보틀에 수집할 것이다. 정균 식염수에 희석된 과잉 안정화제 3은 샘플 수집 전에 보틀로부터 제거되고 건조될 것이다. 주입의 절반을 완료한 후, 새로운, 빈 유리 보틀로 이전의 수집 보틀을 대체할 것이다. 이것은 최종 주입된 투약 용액이 4-일 (96시간) 또는 7-일 (168시간) 샘플의 보유 시간을 정확하게 나타내는 것을 보장할 것이다. 샘플을 용량 제조 시점 (T = 0시간)에 및 수집 용기에 최종 분배된 풀로부터 취하여 (주입 후 샘플, 주입 T = 4일/96시간 및 주입 T = 7일/168시간) 분석 테스트를 본질적으로 본원에 기술된 것과 같이 (특히, 실시예 6 참고) 시각적 외관, 눈에 보이지 않는 미립자, pH, 오스몰 농도, 보존제 농도를 역상 크로마토그래피 (RP-HPLC)에 의해, 단백질 회수율을 형광 크기 배제 크로마토그래피 (FLR SE-HPLC) 및 ELISA 검정에 의해, 그리고 효능을 리포터 유전자 생물검정에 의해 수행하였다.
실시예 7
물질 및 방법
7.1. HIAC 액체 입자 카운팅
입자 수 분석을 USP <787>을 따라 수행하였다. 분석을 5 ± 3℃에서 보관된 샘플에 대해서만 수행하였다. 요약하면, 각각의 샘플을 실온으로 가온한 후 60분 동안 탈기하였다. Thermo Scientific 표준 및 RODI 물을 분석하여 적절한 기계 기능을 보장하였다. 이월(carryover)을 최소화하기 위하여, 샘플을 저농도로부터 고농도까지 분석하였다. 샘플 사이에, 프로브를 물로 세정하였다.
7.2. 시차 주사 열량측정 (DSC)
시차 주사 열량측정은 온도 상승 중에 펼쳐지는 단백질의 에너지학을 측정한다. 피크는 외관 용융 온도를 나타내고 피크 아래의 면적은 열적 전환의 엔탈피를 나타낸다. 데이터를 중복 샘플에 대해 20℃ 내지 90℃ 범위에 걸쳐 60℃/시간의 온도 상승 속도를 사용하여 수집하였다.
7.3. 모세관 등전점 포커싱 (cIEF)
cIEF 분석을 수행하여 의약품 전하 변화를 특성화하였다. 구성은 Alcott 720NV 자동샘플러를 포함한 iCE 시스템을 포함하였다. 샘플을 0.1 mg/mL의 최종 농도로 제조하고 5 ± 3℃에서 40분 동안 원심분리한 후 분석하였다.
7.4. 액체 크로마토그래피 전기분무 이온화 질량 분광분석 (LC-ESIMS)
온전한 분자를 LC 분리 후에, RS 및 숙성된 DP 샘플에 대해 전기분부 이온화 질량 분광분석 (ESI-MS)으로 분석하였다. 분석 전에, 숙성된 DP에서 계면활성제-아웃 트윈 스핀 칼럼으로 PS80을 제거하였다. 그런 후 샘플을 LC-ESI-MS에 의해 분석하였다. 전기분무 이온화 (ESI)에 의해 생성된 단백질의 다중 대전 이온의 질량 스펙트럼을 MaxEnt1 알고리즘을 사용하여 디콘볼루션하여 온전한 분자의 분자량을 제공하였다.
7.5. 형광 검출을 포함한 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피 (FLR SE-HPLC)
FLR SE-HPLC 분석을 수행하여 단백질 순도, 단량체 순도 및 단백질 안정성을 측정하였다. FLR SE-HPLC 구성은 형광 (FLR) 검출기 (λX = 280 nm, λE = 340 nm), 350 mM 이동상의 이동상 조성물 (175 mM NaH2PO4, 175 mM Na2SO, pH 6.3) 및 TosoBio TSK G3000SWXL 크기 배제 칼럼을 포함하였다. 샘플을 0.1 mg/mL로 희석하고 5 ± 3℃에서 24시간 내지 96시간 동안 보관한 후 분석하였다. 8 μg의 단백질 (또는 100 μL은 0.1 mg/mL 미만의 샘플 농도임)을 각각 30분 실행으로 주사하였다. HMW 및 LMW 종 및 단량체 피크를 모니터링하였다.
7.6. 트립신 펩타이드 맵핑
환원된 펩타이드 맵핑 실험을 Waters Xevo G2-XS QTof 기기에 결합된 Waters Acuity UPLC H-Class Bio 상에서 LC-MS를 사용하여 수행하였다. 모든 실험을 MSE 획득을 사용하여 획득하여 펩타이드 서열을 확인하고 아미노산 변형을 명료하게 ㅎ하였다. 샘플을 Waters UNIFI Biopharmaceutical System 용액을 사용하여 처리하였다.
7.7. ELISA (rhIL3Rα)
간단히 설명하면, 검정 플레이트를 가용성 재조합 인간 IL-3 수용체 알파 (rhIL3Rα)로 밤새 코팅하였다. 비특이적 부위를 인산염 완충 식염수 (PBS) 중의 5% 소 혈청 알부민 (BSA)으로 차단한 후, 플레이트를 DART-A 표준 보정제, 품질 대조군 및 테스트 샘플과 함께 인큐베이션하였다. 표준 보정제에 존재하는 DART-A, 품질 대조군 및 테스트 샘플을 고정된 rhIL3Rα로 포획하였다. 포획된 DART-A를 2A5-비오틴 (DART 단백질의 E-코일/K-코일 항-(EK) 항체 헤테로다이머화 영역을 인식하는 비오티닐화된 항체) 및 설포-TAG 표지된 스트렙타아비딘 (전기화학발광 (ECL) 표지)을 첨가함으로써 검출하였다. MSD Read 완충제의 첨가 후에, 플레이트를 Sector Imager 2400 플레이트 판독기에 삽입하였다. 전압을 플레이트 전극에 인가했을 때, 결합된 설포-TAG 표지는 ECL 신호를 발생하고, 그것이 플레이트 판독기에 의해 포획되었다. 각각의 웰에 의해 방출된 ECL 신호의 정량적 측정을 기록하고, 표준 보정제에 의해 방출된 ECL 카운트를 사용하여 4-파라미터 로지스틱 (4PL) 피트를 사용하는 표준 곡선을 생성하였다. 그런 후 ART-A 샘플의 농도를 샘플의 ECL 카운트 및 표준 곡선을 설명하는 식으로부터 내삽하였다.
7.8. CD3 결합 검정
간접 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여, ELISA에서 고정된, 가용성 재조합 인간 CD3 (shCD3-Fos-Jun)에 대한 DART-A의 결합을 정량화함으로써, DART-A의 항-CD3 팔의 효능을 평가하였다. 2개의 CD3 사슬 (델타 및 감마)은 CD3 복합체의 적절한 접힘 및 기능성을 향상시키기 위하여 Fos 단백질 또는 Jun 단백질 중 어느 하나를 함유한다. DART-A에 대한 ELISA의 특이성은 DART-A에 의한 CD3 항원의 인식과, E/K 코일에 대한 특이적 항체를 사용한 결합된 DART-A의 후속 검출에 의해 제공된다. 가용성 CD3-Fos-Jun을 ELISA 플레이트의 표면 상에 코팅하였다. DART-A 샘플을 첨가하고 shCD3-Fos-Jun에 결합되도록 하였다. 결합된 DART-A의 검출을 DART 분자의 E/K 코일을 인식하는 비오틴 콘쥬게이션된 항체 (1F5-Bt)로 달성하였다. 결합된 프로브 항체의 정량화는 열량측정용 AP 기질 (AP-황색 1 구성요소 기질)의 첨가에 의해 달성하였다. AP에 의한 AP-황색의 산화로 405 ± 10 nm에서 판독될 수 있는 착색 생성물이 산출되었다. 검정을 405 ± 10 nm의 최적 파장으로 설정된 분광 광도계를 사용하여 측정된 색의 세기에 의해 정량화하였다. 데이터를 다음의 변수 제약으로 4-파라미터 모델에 피팅하였다: 각 용량 반응 곡선의 최대, 최소 및 기울기를 플레이트 상의 모든 용량 반응 곡선 사이에서 공유되도록 설정한다; EC50을 각 곡선에 대해 독립적으로 측정하였다. 각각의 검정 플레이트는 DART-A 보정 참조 표준 샘플을 함유하였고 1 내지 2개의 테스트 물품 및 플레이트내 가변성에 대해 제어하기 위하여 제2 세트의 참조 표준 (양성 대조군)을 포함하였다. 검정 실행은 다중 플레이트로 구성될 수 있고, 단 보정 및 양성 대조군 참조 표준 샘플이 각 플레이트 상에 포함된다. 기록 가능한 결과는 테스트 물품의 EC50에 의해 나누어진 DART-A 참조 표준 보정 곡선의 EC50 값으로서 계산된 상대 효능이다.
7.9. CD123 결합 검정
간접 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)을 사용하여 ELISA에서 고정된, 재조합 인터류킨 3 수용체 (rhIL3-R)에 대한 DART-A의 결합을 정량화함으로써, DART-A의 항-CD123 팔의 효능을 평가하였다. DART-A에 대한 ELISA의 특이성은 DART-A에 의한 IL3R 항원의 인식과, E/K 코일에 대한 특이적 항체를 사용한 결합된 DART-A의 후속 검출에 의해 제공된다. 가용성 IL3R을 ELISA 플레이트의 표면 상에 코팅하였다. DART-A 샘플을 첨가하고 IL3-R에 결합되도록 하였다. 결합된 DART-A의 검출을 DART 분자의 E/K 코일을 인식하는 비오틴 콘쥬게이션된 항체 (1F5-Bt)로 달성하였다. 결합된 프로브 항체의 정량화는 열량측정용 AP 기질 (AP-황색 1 구성요소 기질)의 첨가에 의해 달성하였다. AP에 의한 AP-황색의 산화로 405 ± 10 nm에서 판독될 수 있는 착색 생성물이 산출되었다. 검정을 405 ± 10 nm의 최적 파장으로 설정된 분광 광도계를 사용하여 측정된 색의 세기에 의해 정량화하였다. 데이터를 다음의 변수 제약으로 4-파라미터 모델에 피팅하였다: 각 용량 반응 곡선의 최대, 최소 및 기울기를 플레이트 상의 모든 용량 반응 곡선 사이에서 공유되도록 설정한다; EC50을 각 곡선에 대해 독립적으로 측정하였다. 각각의 검정 플레이트는 DART-A 보정 참조 표준 샘플을 함유하였고 1 내지 2개의 테스트 물품 및 플레이트내 가변성에 대해 제어하기 위하여 제2 세트의 참조 표준 (양성 대조군)을 포함하였다. 검정 실행은 다중 플레이트로 구성될 수 있고, 단 보정 및 양성 대조군 참조 표준 샘플이 각 플레이트 상에 포함된다. 기록 가능한 결과는 테스트 물품의 EC50에 의해 나누어진 DART-A 참조 표준 보정 곡선의 EC50 값으로서 계산된 상대 효능이다.
7.10. 리포터 유전자 생물검정
항체-기반 또는 항체-유사 약물을 사용하여 항체 의존적 세포-매개 세포독성 (ADCC)을 통해 암세포를 표적화하고 사멸할 수 있다. 이런 ADCC-유사 리포터 생무검정은 그것의 활성화가 ADCC 활성을 반영하며 측정하는 루시페라제 유전자에 결합된 NFAT 반응 요소로 조작되어 있는 Jurkat 이펙터 세포주 (Promega, Inc.)를 사용한다. Kasumi-3 세포는 CD123 수용체를 발현하는 인간 림프모세포이며 이 생물검정에서 DART-A에 대한 표적으로서 사용되었다. DART-A가 Jurkat 이펙터 세포 및 Kasumi3 표적 세포의 존재 하에 첨가될 때, 그것은 Kasumi 세포 상의 CD123 수용체 및 Jurkat 이펙터 세포 상의 CD3 수용체에 결합한다. 이런 교차결합은 Jurkat 이펙터 세포 및 NFAT 경로의 활성화로 이어진다. NFAT 반응 요소는 검출 기질 (Bio-Glo)의 첨가 후에 발광 판독기를 사용하여 정확하고 직접적으로 정량화될 수 있는 반딧불이 루시퍼라제 리포터 유전자의 발현을 구동할 수 있다.
이 검정을 위해, 단일 검정 플레이트 상에서 한 테스트 물품을 DART-A 참조 표준과 함께 실행시킬 수 있다. 추가 테스트 물품은 다중 플레이트를 포함함으로써 실행될 수 있다. DART-A 참조 표준은 각각의 검정 플레이트 상에 포함되어야 하며 테스트 물품과 함께 150 내지 0.0006 ng/mL (최종 농도는 50 내지 0.002 ng/mL)의 범위의 농도로 희석된다. 세포의 단일 사용 해동 및 이동 바이알을 명시된 농도로 희석하고 96 웰 플레이트에서 DART-A 희석과 함께 20-24시간 동안 37℃에서 인큐베이션한다. 그런 후 Jurkat 이펙터 세포의 ADCC 리포터 유전자 활성화를 효소 반응에 의해 방출된 발광의 측정된 양을 토?? Bio-Glo를 사용하여 평가하였다. 데이터를 4-파라미터 제약을 포함한 모델에 피팅하고, 반응의 절반을 유도하는 테스트 물품의 농도인 EC50을 측정하여 참조 표준의 EC50과 비교하였다. 기록 가능한 결과는 동일한 검정 플레이트 상에서 DART-A 참조 표준에 대해 각각의 테스트 물품에 대해 계산된 상대 효능이다.
7.11. BA 및 MP 회수율을 위한 RP-HPLC
보존제 회수율을 역상 (RP) HPLC 분석을 사용하여 측정하였다. RP-HPLC 구성은 광다이오드 어레이 (PDA) 검출기 (λBA = 254 nm, λMP = 340 nm), 40% 아세토니트릴, 0.1% 포름산의 이동상 조성물 및 Zorbax® 5 μm Eclipse-XDB-C18 80 Å 액체 크로마토그래피 칼럼을 포함하였다. 샘플을 10배 희석하였다. 칼럼 온도를 40 ± 5℃로 설정하였다. 50 μL의 용액을 각각 10분 실행에 대해 주사하였다.
7.12. 미생물 도전 테스트
미생물 도전 테스트를 수행하여 안정화제 용액의 보존제 효과를 평가하였다. 간단히 설명하면, 고농도 (1250 ng/mL) 투약 용액을 표 36에 따라 제조하였다. USP<51> 권장 미생물을 10 내지 100 CFU/mL의 목표 농도로 용액에 도입하였다. 용액을 USP<51> 권장 온도에서 각각의 미생물에 대해 보관하였고 미리 결정된 시점에 샘플을 수집하였다. 샘플의 테스트를 USP<1227>에 따라 수행하였다. 미생물 성장이 없음에 대한 한계값을 미생물의 초기 농도와 비교하여 0.5 로그 콜로니 카운트 이하가 되도록 확립하였다.
본 명세서에서 언급된 모든 출판물 및 특허는 각각의 개별 출판물 또는 특허 출원이 구체적이고 개별적으로 그 전문이 참조에 의해 포함된 것을 나타내는 것과 동일한 정도로 본원에 참조로 포함된다. 발명이 그것의 특정 구체예와 관련하여 기술되었지만, 추가의 변형이 가능한 것이 이해될 것이고 본 출원은 일반적으로 발명의 원리를 따르며 본 개시로부터의 그러한 벗어남을 발명이 속하는 기술분야 내에서 알려져 있거나 관습적인 관례 내에 속하는 것으로서 및 지금까지 제시된 본질적인 특정에 적용될 수 있는 것으로서 포함하는, 발명의 임의의 변형, 용도, 또는 적응을 포함하는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> MacroGenics, Inc Lent, Ian Sampathkumar, Krishnan <120> Pharmaceutical Formulations of Bi-Specific Diabodies and Use of the Same <130> 1301.0156P2-PCT-TW <150> US 62/860,082 <151> 2019-06-11 <150> US 63/030,010 <151> 2020-05-26 <160> 45 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Intervening Spacer Peptide (Linker 1) <400> 1 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Preferred Cysteine-Containing Spacer Peptide (Linker 2) <400> 2 Gly Gly Cys Gly Gly Gly 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Alternative Spacer Peptide (Linker 2) <400> 3 Ala Ser Thr Lys Gly 1 5 <210> 4 <211> 28 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> "E-coil" Heterodimer-Promoting Domain <400> 4 Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val 1 5 10 15 Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 20 25 <210> 5 <211> 28 <212> PRT 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Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 14 Ala Ser Thr Lys Gly 1 5 <210> 15 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 15 Ala Pro Ser Ser Ser 1 5 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 16 Ala Pro Ser Ser Ser Pro Met Glu 1 5 <210> 17 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 17 Leu Glu Pro Lys Ser Ser 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 18 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 19 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 19 Gly Gly Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 20 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide Linker <400> 20 Leu Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 15 <210> 21 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(15) <223> Exemplary Human IgG1 Hinge 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Ser Gly 130 135 140 Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 145 150 155 160 Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly Asp Ile Ile Pro Ser Asn Gly Ala Thr 165 170 175 Phe Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys 180 185 190 Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp 195 200 205 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser His Leu Leu Arg Ala Ser Trp 210 215 220 Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly 225 230 235 240 Cys Gly Gly Gly Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu 245 250 255 Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys Glu Val Ala Ala Leu Glu Lys 260 265 270 <210> 43 <211> 816 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Polynucleotide Encoding First Polypeptide Chain of DART-A <400> 43 caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac tgtgaccctg 60 acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact acgccaattg ggtgcagcag 120 aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc 180 cctgcacggt tttctggaag tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca 240 caggccgagg acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc 300 gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg aggcgaggtg 360 cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag cttccgtgaa ggtgtcttgc 420 aaagccagtg gctacacctt cacagactac tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga 480 cagggactgg aatggatcgg cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag 540 aagtttaaag gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag 600 ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc acacctgctg 660 agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg tgacagtgtc ttccggagga 720 tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc 780 gctgcacttg aaaaggaggt cgcagccctg gagaaa 816 <210> 44 <211> 280 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Second Polypeptide Chain of DART-A <400> 44 Asp Phe Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Glu Arg Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser 20 25 30 Gly Asn Gln Lys Asn 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tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta ttactgtgtg 660 agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg cttattgggg acaggggaca 720 ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa 780 gttgctgctt tgaaagagaa ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag 840

Claims (129)

  1. 디아바디, 인산 나트륨 완충제, 염화 나트륨, 및 폴리소르베이트 80 (PS80)을 포함하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  2. 제1항에 있어서, 상기 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  3. 제2항에 있어서, 상기 인산 나트륨의 농도는 약 10 mM인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  5. 제4항에 있어서, 상기 PS80의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  7. 제6항에 있어서, 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  9. 제8항에 있어서, 상기 pH는 약 6.0인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  10. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 제제는 약 6.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  11. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  15. 제14항에 있어서, 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
    a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
    b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
    제1 및 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 약 0.1 mg/mL의 상기 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 제제의 pH는 약 6.0인 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 25℃에서 약 3개월 동안 상기 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 2-8℃에서 약 48개월 동안 상기 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것을 특징으로 하는 안정적인 수성 제약학적 제제.
  19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기.
  20. 제19항에 있어서, 상기 용기는 유리 바이알인 것을 특징으로 하는 용기.
  21. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항의 안정적인 수성 제약학적 제제 또는 제19항 또는 제20항의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
  22. 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로서, 인산 나트륨, PS80, 벤질 알코올 (BA), 및 메틸파라벤 (MP)을 포함하는 안정화제 수용액.
  23. 제20항에 있어서, 상기 인산 나트륨은 약 15 mM 내지 약 25 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  24. 제21항에 있어서, 상기 인산 나트륨의 농도는 약 20 mM인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  25. 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 BA는 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  26. 제25항에 있어서, 상기 BA의 농도는 약 13.2 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  27. 제22항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MP는 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  28. 제27항에 있어서, 상기 MP의 농도는 약 4.25 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  29. 제22항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PS80은 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  30. 제29항에 있어서, 상기 PS80의 농도는 약 0.25 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  31. 제22항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  32. 제21항에 있어서, 상기 pH는 약 8.2인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  33. 제22항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화제 용액은 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액의 pH는 약 8.2인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  34. 제22항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  35. 제22항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  36. 제35항에 있어서, 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
    a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
    b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
    제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  37. 제22항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 5-7일 동안 상기 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  38. 제22항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 5-7일 동안 미생물 성장을 방지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  39. 제22항 내지 제38항 중 어느 한 항의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
  40. 제39항에 있어서, 상기 용기는 유리 바이알인 것을 특징으로 하는 용기.
  41. 제22항 내지 제38항 중 어느 한 항의 상기 안정화제 수용액 또는 제39항 또는 제40항 중 어느 한 항의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
  42. 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로서, 염화 나트륨 및 PS80을 포함하는 안정화제 수용액.
  43. 제42항에 있어서, 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  44. 제43항에 있어서, 상기 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  45. 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  46. 제45항에 있어서, 상기 PS80의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  47. 제42항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  48. 제47항에 있어서, 상기 pH는 6.0인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  49. 제42항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액의 pH는 약 6.0인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  50. 제42항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  51. 제42항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  52. 제51항에 있어서, 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
    a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
    b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
    제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  53. 제42항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 상기 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  54. 제42항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 방지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  55. 제42항 내지 제54항 중 어느 한 항의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
  56. 제55항에 있어서, 상기 용기는 유리 바이알인 것을 특징으로 하는 용기.
  57. 제42항 내지 제54항 중 어느 한 항의 상기 안정화제 수용액 또는 제55항 또는 제56항 중 어느 한 항의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
  58. 디아바디를 안정화시키기 위한 안정화제 수용액으로서, 인산 나트륨, 염화 나트륨, PS80, 및 BA 중 하나 이상을 포함하는, 안정화제 수용액.
  59. 제58항에 있어서, 상기 인산 나트륨은 약 5 mM 내지 약 30 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  60. 제59항에 있어서, 상기 인산 나트륨의 농도는 약 10 mM인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  61. 제58항 또는 제59항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 염화 나트륨은 약 100 mM 내지 약 300 mM의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  62. 제61항에 있어서, 상기 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  63. 제58항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 BA는 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  64. 제63항에 있어서, 상기 BA의 농도는 약 9.0 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  65. 제58항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 PS80은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  66. 제65항에 있어서, 상기 PS80의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  67. 제58항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 재조합 인간 알부민 (rHA)을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  68. 제67항에 있어서, 상기 rHA는 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 농도를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  69. 제68항에 있어서, 상기 rHA의 농도는 약 0.10 mg/mL인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  70. 제58항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  71. 제70항에 있어서, 상기 pH는 6.0인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  72. 제58항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은:
    a) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80, 및 약 0.1 mg/mL rHA를 포함하고, 상기 용액의 pH는 약 6.0이거나; 또는
    b) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액의 pH는 약 6.0인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  73. 제58항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  74. 제58항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  75. 제74항에 있어서, 상기 CD123 x CD3 디아바디는:
    a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
    b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
    제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  76. 제58항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 상기 디아바디의 단량체 순도를 유지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  77. 제58항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용액은 약 25℃에서 약 3-5일 동안 미생물 성장을 방지하는 것을 특징으로 하는 안정화제 수용액.
  78. 제58항 내지 제77항 중 어느 한 항의 안정화제 수용액을 포함하는 용기.
  79. 제78항에 있어서, 상기 용기는 유리 바이알인 것을 특징으로 하는 용기.
  80. 제58항 내지 제77항 중 어느 한 항의 상기 안정화제 수용액 또는 제78항 또는 제79항 중 어느 한 항의 용기를 포함하는 밀봉된 포장.
  81. 키트로서,
    a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
    b) 약 15 mM 내지 약 25 mM 인산 나트륨 완충제, 약 11.5 mg/mL 내지 약 15.5 mg/mL BA, 약 3.5 mg/mL 내지 약 5.5 mg/mL MP 및 약 0.1 mg/mL 내지 약 0.4 mg/mL PS80을 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지는, 상기 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및
    c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 용액을 투여하기 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
    를 포함하는 키트.
  82. 키트로서,
    a) 약 0.01 mg/mL 내지 약 1 mg/mL의 디아바디, 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨 완충제, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨 및 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.3 mg/mL PS80을 포함하며, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 안정적인 수성 제약학적 제제를 포함하는 용기 A; 및
    b) (i) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 7.0 mg/mL 내지 약 11.0 mg/mL BA, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 상기 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
    (ii) 약 5 mM 내지 약 30 mM 인산 나트륨, 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 상기 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 또는
    (iii) 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는, 상기 디아바디를 안정화하기 위한 안정화제 수용액을 포함하는 용기 B; 및 선택적으로,
    c) 그것을 필요로 하는 대상체에게 조합된 용액을 투여하기 위해 용기 A 및 B의 내용물을 조합하기 위한 설명서
    를 포함하는 키트.
  83. 제81항 또는 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 2, 3, 또는 4개의 폴리펩타이드 사슬을 가지는 공유 결합된 이중특이적 디아바디인 것을 특징으로 하는 키트.
  84. 제81항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 CD123 x CD3 디아바디인 것을 특징으로 하는 키트.
  85. 제84항에 있어서, 상기 디아바디는:
    a) SEQ ID NO:42의 서열을 가지는 제1 폴리펩타이드 사슬; 및
    b) SEQ ID NO:44의 서열을 가지는 제2 폴리펩타이드 사슬을 포함하며;
    제1 및 상기 제2 폴리펩타이드 사슬은 이황화 결합에 의해 서로에게 공유 결합되는 것을 특징으로 하는 키트.
  86. 제81항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 용기 A의 상기 안정적인 수성 제약학적 제제는 약 0.1 mg/mL의 상기 디아바디, 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 및 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하며, 상기 제제는 약 6.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 키트.
  87. 제81항 또는 제83항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 용기 B의 상기 안정화제 수용액은 약 20 mM 인산 나트륨, 약 13.2 mg/mL BA, 약 4.25 mg/mL MP 및 약 0.25 mg/mL PS80을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  88. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 용기 B의 상기 안정화제 수용액은:
    Ii) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 9.0 mg/mL BA, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가지거나; 또는
    (ii) 약 10 mM 인산 나트륨, 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가지거나; 또는
    (iii) 약 150 mM 염화 나트륨, 약 0.1 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 6.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 키트.
  89. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화제 수용액은 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL의 농도의 rHA를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  90. 제89항에 있어서, 상기 rHA의 농도는 약 0.1 mg/mL인 것을 특징으로 하는 키트.
  91. 제81항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간 환자인 것을 특징으로 하는 키트.
  92. 제81항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 용기 A 및 B는 유리 바이알인 것을 특징으로 하는 키트.
  93. 제81항 내지 제92항 중 어느 한 항의 상기 키트 및 선택적으로 상기 키트의 보관 및/또는 사용에 대한 설명서를 포함하는 밀봉된 포장.
  94. 제81항, 제83항 내지 제85항, 제87항, 또는 제91항 내지 제93항 중 어느 한 항의 키트를 사용하는 단계를 포함하는, 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법으로서, 상기 용기 B의 안정화제 수용액은 상기 인산 나트륨, PS80, BA, MP를 포함하고, 약 7.7 내지 약 8.7의 pH를 가지며;
    방법에서:
    (a) 용기 B의 안정화제 수용액은 용기 C에 배치되어 혼합되고;
    (b) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제는 용기 C에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지며;
    (c) 투약 용액을 함유한 용기 C는 대상체에 투여하기 위한 장치에 부착되는, 방법.
  95. 제94항에 있어서, 상기 용기 C는 정맥내 주입을 위한 식염수를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  96. 제82항 내지 제86항, 또는 제88항 내지 제93항 중 어느 한 항의 키트를 사용하는 단계를 포함하는, 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 방법으로서, 용기 B의 안정화제 수용액은 인산 나트륨, 염화 나트륨, BA, PS80, 및 선택적으로 rHA를 포함하고, 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지며;
    방법에서:
    (a) 용기 A의 안정적인 수성 제약학적 제제가 용기 B의 안정화제 수용액에 배치되어 혼합되어 투약 용액이 얻어지는 단계;
    (b) 선택적으로 투약 용액이 희석되는 단계;
    (c) 투약 용액이 용기 C에 배치되는 단계; 및
    (d) 최종 투약 용액을 함유한 용기 C를 대상체에게 투여하기 위한 장치에 부착시키는 단계가 포함되는, 방법.
  97. 제96항에 있어서, 상기 용기 C는 정맥내 주입을 위해 식염수 또는 정균 식염수를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  98. 제94항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 주입 펌프에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  99. 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 이동형인 것을 특징으로 하는 방법.
  100. 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장치는 단일 이동형 펌프인 것을 특징으로 하는 방법.
  101. 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장치는 이중 이동형 펌프인 것을 특징으로 하는 방법.
  102. 제94항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 장치는 주사기 펌프인 것을 특징으로 하는 방법.
  103. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 약 24시간 동안 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  104. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 약 48시간 동안 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  105. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 약 96시간 동안 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  106. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 약 7일 동안 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  107. 제94항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 약 0.10 mL/시간 내지 약 2.5 mL/시간의 유량에서 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  108. 제94항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 약 0.5 mL/시간 내지 약 10.0 mL/시간의 유량에서 발생하는 것을 특징으로 하는 방법.
  109. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 24시간 동안 약 0.1 mL/시간 내지 약 2.0 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  110. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 48시간 동안 약 0.5 mL/시간 내지 약 6 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  111. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 96시간 동안 약 0.6 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  112. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 96시간 동안 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  113. 제94항 내지 제102항 또는 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 96시간 동안 약 0.5 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  114. 제94항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 7일 동안 약 0.3 mL/시간 내지 약 3.0 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  115. 제94항 내지 제102항 또는 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 적어도 7일 동안 약 0.5 mL/시간의 유량에서의 연속 주입에 의한 것임을 특징으로 하는 방법.
  116. 제94항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유량은 상기 대상체에서 정맥 폐쇄를 방지하는 것을 특징으로 하는 방법.
  117. 제94항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 디아바디는 30-500 ng/kg/일로 이루어지는 군으로부터 선택된 치료 투여량으로 상기 대상체에게 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  118. 제94항 내지 제95항, 제97항 내지 제99항, 또는 제102항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 용액은 40 mL의 안정화제 수용액을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  119. 제94항 내지 제95항, 제97항 내지 제99항, 또는 제102항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 용액은 약 0.03 mg/mL 내지 약 0.04 mg/mL PS80, 약 1.7 mg/mL 내지 약 2.1 mg/mL BA, 및 약 0.55 mg/mL 내지 약 0.7 mg/mL MP를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  120. 제96항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투약 용액은 약 100 mM 내지 약 300 mM 염화 나트륨, 약 0.05 mg/mL 내지 약 0.15 mg/mL PS80을 포함하고, 상기 용액은 약 5.5 내지 약 7.0의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
  121. 제94항 내지 제120항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 인간 대상체인 것을 특징으로 하는 방법.
  122. 혈액암을 치료하는 방법으로서, 제94항 내지 제121항 중 어느 한 항의 방법을 따라 또는 제81항 내지 제92항 중 어느 한 항의 키트를 사용하여, 그것을 필요로 하는 대상체에게 디아바디를 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  123. 혈액암의 치료에 사용하기 위한 제81항 내지 제92항 중 어느 한 항의 키트의 키트의 용도.
  124. 제122항의 방법, 또는 제123항의 용도에 있어서, 상기 혈액암은 급성 골수성 백혈병 (AML), 만성 골수성 백혈병 (CML)의 모세포성 위기 및 CML과 관련된 Abelson 발암유전자 (Bcr-ABL 전좌)를 포함한 CML, 골수형성이상 증후군 (MDS), 급성 B 림프모세포성 백혈병 (B-ALL), 급성 T 림프모세포성 백혈병 (T-ALL), 리히터 증후군 또는 만성 림프구성 백혈병 (CLL)의 리히터 변형을 포함한 CLL, 털세포 백혈병 (HCL), 모세포성 형질세포양 수지상 세포 신생물 (BPDCN), 맨틀 세포 림프종 (MCL) 및 작은 림프구성 림프종 (SLL)을 포함한 비-호지킨 림프종 (NHL), 호지킨 림프종, 전신성 비만세포증, 및 버킷 림프종으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  125. 제124항에 있어서, 상기 혈액암은 AML인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  126. 제124항에 있어서, 상기 혈액암은 BPDCN인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  127. 제124항에 있어서, 상기 혈액암은 MDS인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  128. 제124항에 있어서, 상기 혈액암은 T-ALL인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  129. 제122항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간 대상체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
KR1020227000154A 2019-06-11 2020-05-29 이중특이적 디아바디의 제약학적 제제 및 그것의 용도 KR20220019756A (ko)

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