JP2022536646A - 二重特異性ダイアボディの医薬製剤及びその使用 - Google Patents

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Abstract

本発明は、二重特異性１価ダイアボディを含む安定な水性医薬製剤（「ダイアボディ製剤」）、及び上記ダイアボディを安定化して投与するための水性安定剤溶液を対象とする。本発明は特に、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐Ａ」）を含むダイアボディ医薬製品を含む、上述の医薬製剤（ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）に関する。本発明は更に、患者の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）等の血液悪性腫瘍の治療における、上述のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の使用に関する。【選択図】図８Ａ

Description

［関連出願の相互参照］
本出願は、米国特許出願第６２／８６０，０８２号（２０１９年６月１１日出願；係属中）、及び６３／０３０，０１０号（２０２０年５月２６日出願；係属中）に対する優先権を主張するものであり、各上記出願は参照によりその全体が本出願に援用される。
配列表の参照
本出願は、連邦規則法典第３７巻第１．８２１節以下による１つ以上の配列表を含み、これらの配列表は、コンピュータ可読媒体（ファイル名：１３０１＿０１５６Ｐ２‐ＰＣＴ‐ＴＷ＿ＳＴ２５．ｔｘ、２０２０年５月２６日作成、サイズ：２９，７５４バイト）において開示されており、上記ファイルは、参照によりその全体が本出願に援用される。
本発明は、二重特異性ダイアボディを含む安定な水性医薬製剤（「ダイアボディ製剤」）、及び上記ダイアボディを安定化して投与するための水性安定剤溶液を対象とする。本発明は特に、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐Ａ」）を含むダイアボディ医薬製品を含む、上述の医薬製剤（「ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤」）に関する。本発明は更に、患者の急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）又は骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）等の血液悪性腫瘍の治療における、上述のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤の使用に関する。
Ｉ．二重特異性ダイアボディ
非単一特異性「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｙ）」は、異なるエピトープを発現する細胞を共連結（ｃｏ‐ｌｉｇａｔｅ）して共存させることができる能力によって、単一特異性天然抗体を上回る重要な利点を提供する。従って二重特異性ダイアボディは、療法及び免疫診断を含む広範な用途を有する。二重特異性は、様々な用途におけるダイアボディの設計及び操作の大幅な柔軟性を可能とし、これにより、多量体抗原の結合活性の上昇、異なる複数の抗原の架橋、及び両標的抗原の存在に基づく特定の細胞タイプに対する指向性標的化を提供する。当該技術分野において公知のダイアボディ分子は、（～５０ｋＤａ以下の小さいサイズのダイアボディに関して）その価数の増大、低い解離率及び循環からの迅速な排除により、腫瘍撮像の分野での特定の使用も示している（非特許文献１）。特に重要なのは、異なる複数の細胞の共連結、例えば腫瘍細胞に対する細胞傷害性Ｔ細胞の架橋である（非特許文献２、３）。
ダイアボディのエピトープ結合ドメインは、Ｔリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞又は他の単核細胞上で発現されるＣＤ３、ＣＤ１６、ＣＤ３２、又はＣＤ６４等の、免疫エフェクタ細胞の表面決定因子を対象にすることができる。多くの研究において、エフェクタ細胞決定因子、例えばＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）に結合するダイアボディは、エフェクタ細胞を活性化させることも分かった（非特許文献３、４；及び特許文献１～５）。通常、エフェクタ細胞の活性化は、Ｆｃ‐ＦｃγＲ相互作用によるエフェクタ細胞への抗原結合抗体の結合によってトリガされる。従ってこれに関して、ダイアボディ分子は、Ｆｃドメインを含むかどうかとは無関係に、（例えば当該技術分野において公知の、又は本明細書に例示されているいずれのエフェクタ機能アッセイ（例えばＡＤＣＣアッセイ）においてアッセイされるように）Ｉｇ様官能性を示し得る。腫瘍とエフェクタ細胞とを架橋させることによって、ダイアボディは腫瘍細胞近傍にエフェクタ細胞を移動させ、効果的な腫瘍殺滅をもたらす（例えば非特許文献５を参照）。
しかしながら、上述の利点は顕著なコストにつながる。このような非単一特異性ダイアボディの形成は、２つ以上の別個の異なるポリペプチドの良好な集合を必要とする（即ち上記形成は、ダイアボディが、異なるポリペプチド鎖種のヘテロ二量体形成によって形成されることを必要とする）。対照的に、単一特異性ダイアボディは、同一のポリペプチド鎖のホモ二量体形成によって形成される。非単一特異性ダイアボディを形成するために少なくとも２つの異なるポリペプチド（即ち２つのポリペプチド種）を提供しなければならないため、及びこのようなポリペプチドのホモ二量体形成は不活性分子をもたらす（非特許文献６）ため、このようなポリペプチドの産生は、同一種のポリペプチド間での共有結合を防止できる（即ちこれらのホモ二量体化を防止できる）ような方法で達成しなければならず（非特許文献６）、このようなポリペプチドの非共有結合的連結を促進する（例えば非特許文献７、８、６、９を参照）。
しかしながら、非共有結合的に連結したポリペプチドで構成される二重特異性ダイアボディは不安定であり、非官能性モノマーへと容易に分解する（例えば非特許文献９を参照）。
この課題をものともせず、安定した共有結合ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディが開発されている（例えば特許文献１～５；非特許文献１０～１２を参照）。このようなアプローチは、１つ以上のシステイン残基を、採用したポリペプチド種それぞれの中へと組み込むステップを伴う。例えば、このような構造のＣ末端へのシステイン残基の追加は、ポリペプチド鎖間のジスルフィド結合を可能とすることが分かっており、これは、２価分子の結合特性に干渉することなく、得られるヘテロ二量体を安定化する。
安定した、官能性ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディの生産は、採用したポリペプチド鎖のうちの１つ以上の中に、ヘテロ二量体促進ドメイン及びシステイン残基を注意深く考察して配置することによって、更に最適化できる。このような最適化されたダイアボディは、最適化されていないダイアボディに比べて高い収率及び高い活性で生産できる。本発明は、このようなヘテロ二量体ダイアボディの保管及び投与のために特に設計及び最適化された、製剤及び安定剤溶液を提供するという課題を対象とする。本発明は、二重特異性ダイアボディ、特に低用量（例えば約１μｇ／ｋｇ以下）で投与される及び／又は低濃度（例えば約５μｇ／ｍＬ以下）の投薬用溶液の調製が必要な二重特異性ダイアボディ、例えば最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの投与に使用できる、例示的なダイアボディ製剤及び安定剤溶液を提供することにより、この課題を解決する。
ＩＩ．ＣＤ１２３
ＣＤ１２３（インターロイキン３受容体α、ＩＬ‐３Ｒａ）は、４０ｋＤａ分子であり、インターロイキン３受容体複合体の一部である（非特許文献１３）。インターロイキン３（ＩＬ‐３）は、多能性幹細胞の赤血球、骨髄及びリンパ系前駆細胞への早期分化を促進する。ＣＤ１２３は、ＣＤ３４＋コミット前駆細胞上で発現される（非特許文献１４）が、ＣＤ３４＋／ＣＤ３８－正常造血幹細胞によっては発現されない。ＣＤ１２３は、好塩基球、肥満細胞、形質細胞様樹状細胞によって発現され、単球、マクロファージ、及び好酸球によって多少発現され、好中球及び巨核球によってはわずかしか又は全く発現されない。一部の非造血組織（胎盤、精巣のライディッヒ細胞、特定の脳細胞要素、及び一部の内皮細胞）はＣＤ１２３を発現するが、発現は大半が細胞質性である。
ＣＤ１２３は、白血病性芽球及び白血病幹細胞（ＬＳＣ）によって発現されることが報告されている（非特許文献１５、１６）。ヒトの正常前駆体集団では、ＣＤ１２３は造血前駆細胞（ＨＰＣ）のサブセットによって発現されるものの、正常な造血幹細胞（ＨＳＣ）によっては発現されない。ＣＤ１２３はまた、形質細胞様樹状細胞（ｐＤＣ）及び好塩基球によって、並びに程度はより低いものの単球及び好酸球によって発現される（非特許文献１７～２１）
ＣＤ１２３は、ＡＭＬ及びＭＤＳを含む広範な血液悪性腫瘍において、悪性細胞で過剰発現されることが報告されている（非特許文献１９）。ＣＤ１２３の過剰発現は、ＡＭＬの予後不良に関連している（非特許文献２２）。
ＩＩＩ．ＣＤ３
ＣＤ３は４つの別個の鎖で構成されたＴ細胞共受容体である（非特許文献２３）。哺乳類では、この複合体は、１つのＣＤ３γ鎖、１つのＣＤ３δ鎖、及び２つのＣＤ３ε鎖を含有する。これらの鎖は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）として知られる分子と会合して、Ｔリンパ球中で活性化シグナルを生成する。ＣＤ３が存在しない場合、ＴＣＲは適切に会合せず、崩壊する（非特許文献２４）。ＣＤ３は、全ての成熟Ｔ細胞の膜に結合し、実質的に他の全ての細胞タイプの膜に結合しないことが分かっている（非特許文献２５～２７を参照）。
ＩＶ．ＡＭＬ及びＭＤＳ
ＡＭＬ及びＭＤＳは、一般に休眠している（即ち急速に分裂しない細胞である）ため細胞死（アポトーシス）及び従来の化学療法剤に対する耐性を有する、白血病性幹細胞（ＬＳＣ）の小さな集団で発生し、それによって永続化すると考えられる。ＬＳＣは、高レベルのＣＤ１２３発現を特徴とし、これは、正常なヒト骨髄中の、対応する正常なＨＳＣには存在しない（非特許文献１６、１５）。ＣＤ１２３は、ＡＭＬの４５％～９５％、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）の８５％、及び急性Ｂリンパ芽球性白血病（Ｂ‐ＡＬＬ）の４０％で発現される。ＣＤ１２３発現は、以下の他の複数の悪性腫瘍／前悪性腫瘍にも関連する：慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）前駆細胞（急性転化ＣＭＬを含む）；ホジキン／リード・シュテルンベルグ（ＲＳ）細胞；形質転換された非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；一部の慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）（ＣＤ１１ｃ＋）；急性Ｔリンパ芽球性白血病（Ｔ‐ＡＬＬ）のサブセット（１６％、最も未成熟、大半が成人）、ｐＤＣ ＤＣ２悪性腫瘍、及びＣＤ３４＋／ＣＤ３８－ ＭＤＳ骨髄細胞悪性腫瘍。
ＡＭＬは、形質転換された骨髄前駆細胞の、骨髄中での増殖及び蓄積を特徴とするクローン性疾患であり、これは最終的に造血不全につながる。ＡＭＬの発生率は年齢と共に上昇し、高齢の患者ほど、若年の患者に比べて治療成績が悪くなるのが典型的ある（非特許文献２８）。残念ながら現在、ＡＭＬに罹患したほとんどの成人は、この疾患によって死亡している。
ＡＭＬの治療はまず、寛解の導入（導入療法）に焦点を合わせる。寛解が達成されると、治療は、このような寛解の確保（寛解後療法又は地固め療法）、及び場合によっては維持療法に焦点を合わせるようにシフトされる。ＡＭＬのための標準的な寛解導入パラダイムは、アントラサイクリン／シタラビンの併用による化学療法であり、またこれに続いて、集中治療に耐える患者の能力、及び化学療法単独での治癒の可能性に応じて、（通常は導入期間中に使用されたものと同一の薬剤をより多い用量で使用した）地固め化学療法、又はヒト幹細胞移植が行われる（例えば非特許文献２９を参照）。
導入療法に頻繁に使用される作用剤としては、シタラビン（ＡｒａＣとしても公知）及びアントラサイクリンが挙げられる。ＡｒａＣは、ＤＮＡ合成に干渉することによって、がん細胞（及び他の急速に分裂する正常な細胞）を殺滅する。ＡｒａＣ治療に関連する副作用としては：白血球産生の減少の結果としての、感染症に対する耐性の低下；血小板産生の減少の結果としての出血；及び赤血球細胞の潜在的減少による貧血が挙げられる。他の副作用としては、悪心及び嘔吐が挙げられる。アントラサイクリン（例えばダウノルビシン、ドキソルビシン、及びイダルビシン）は、ＤＮＡ及びＲＮＡ合成の阻害、ＤＮＡの高次構造の破壊、並びに細胞損傷性遊離酸素ラジカルの産生を含む、複数の作用機序を有する。アントラサイクリンの最も重要な副作用は心毒性であり、これにより、投与される生涯用量がかなり制限され、その有用性もある程度制限される。
従って残念なことに、新たに診断されたＡＭＬの治療における大幅な進歩にもかかわらず、患者の２０％～４０％は、標準的な導入化学療法で寛解を達成せず、第１完全寛解に達した患者の５０％～７０％は、３年以内の再発が予測される。再発時の、又は抵抗性疾患を有する患者のための最適な戦略は、依然として不確実である。幹細胞移植は、初回又はその後の寛解における、ＡＭＬに罹患した患者の抗白血病療法の最も有効な形態として確立されている（非特許文献２９）。
国際公開第２００６／１１３６６５号 国際公開第２００８／１５７３７９号 国際公開第２０１０／０８０５３８号 国際公開第２０１２／０１８６８７号 国際公開第２０１２／１６２０６８号
Fitzgerald et al. (1997) "Improved Tumour Targeting By Disulphide Stabilized Diabodies Expressed In Pichia pastoris," Protein Eng. 10:1221 Staerz et al. (1985) "Hybrid Antibodies Can Target Sites For Attack By T Cells," Nature 314:628-631, Holliger et al. (1996) "Specific Killing Of Lymphoma Cells By Cytotoxic T-Cells Mediated By A Bispecific Diabody," Protein Eng. 9:299-305 Holliger et al. (1999) "Carcinoembryonic Antigen (CEA)-Specific T-cell Activation In Colon Carcinoma Induced By Anti-CD3 x Anti-CEA Bispecific Diabodies And B7 x Anti-CEA Bispecific Fusion Proteins," Cancer Res. 59:2909-2916 Cao et al. (2003) "Bispecific Antibody Conjugates In Therapeutics," Adv. Drug. Deliv. Rev. 55:171-197 Takemura, S. et al. (2000) "Construction Of A Diabody (Small Recombinant Bispecific Antibody) Using A Refolding System," Protein Eng. 13(8):583-588 Olafsen et al. (2004) "Covalent Disulfide-Linked Anti-CEA Diabody Allows Site-Specific Conjugation And Radiolabeling For Tumor Targeting Applications," Prot. Engr. Des. Sel. 17:21-27 Asano et al. (2004) "A Diabody For Cancer Immunotherapy And Its Functional Enhancement By Fusion Of Human Fc Domain," Abstract 3P-683, J. Biochem. 76(8):992 Lu, D. et al. (2005) "A Fully Human Recombinant IgG-Like Bispecific Antibody To Both The Epidermal Growth Factor Receptor And The Insulin-Like Growth Factor Receptor For Enhanced Antitumor Activity," J. Biol. Chem. 280(20):19665-19672 Johnson, S. et al. (2010) "Effector Cell Recruitment With Novel Fv-Based Dual-Affinity Re-Targeting Protein Leads To Potent Tumor Cytolysis And In Vivo B-Cell Depletion," J. Molec. Biol. 399(3):436-449 Veri, M.C. et al. (2010) "Therapeutic Control Of B Cell Activation Via Recruitment Of Fcgamma Receptor IIb (CD32B) Inhibitory Function With A Novel Bispecific Antibody Scaffold," Arthritis Rheum. 62(7):1933-1943 Moore, P.A. et al. (2011) "Application Of Dual Affinity Retargeting Molecules To Achieve Optimal Redirected T-Cell Killing Of B-Cell Lymphoma," Blood 117(17):4542-4551 Stomski, F.C. et al. (1996) "Human Interleukin-3 (IL-3) Induces Disulfide-Linked IL-3 Receptor Alpha- And Beta-Chain Heterodimerization, Which Is Required For Receptor Activation But Not High-Affinity Binding," Mol. Cell. Biol. 16(6):3035-3046 Taussig, D.C. et al. (2005) "Hematopoietic Stem Cells Express Multiple Myeloid Markers: Implications For The Origin And Targeted Therapy Of Acute Myeloid Leukemia," Blood 106:4086-4092 Jordan, C.T. et al. (2000) "The Interleukin-3 Receptor Alpha Chain Is A Unique Marker For Human Acute Myelogenous Leukemia Stem Cells,"Leukemia 14:1777-1784 Jin, W. et al. (2009) "Regulation Of Th17 Cell Differentiation And EAE Induction By MAP3K NIK," Blood 113:6603-6610 Lopez, A.F. et al. (1989) "Reciprocal Inhibition Of Binding Between Interleukin 3 And Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor To Human Eosinophils," Proc. Natl. Acad. Sci. (U.S.A.) 86:7022-7026 Sun, Q. et al. (1996) "Monoclonal Antibody 7G3 Recognizes The N-Terminal Domain Of The Human Interleukin-3 (IL-3) Receptor Alpha Chain And Functions As A Specific IL-3 Receptor Antagonist," Blood 87:83-92 Munoz, L. et al. (2001) "Interleukin-3 Receptor Alpha Chain (CD123) Is Widely Expressed In Hematologic Malignancies,"Haematologica 86(12):1261-1269 Masten, B.J. et al. (2006) "Characterization Of Myeloid And Plasmacytoid Dendritic Cells In Human Lung," J. Immunol. 177:7784-7793 Korpelainen, E.I. et al. (1995) "Interferon-Gamma Upregulates Interleukin-3 (IL-3) Receptor Expression In Human Endothelial Cells And Synergizes With IL-3 In Stimulating Major Histocompatibility Complex Class II Expression And Cytokine Production," Blood 86:176-182 Tettamanti, M.S. et al. (2013) "Targeting Of Acute Myeloid Leukaemia By Cytokine-Induced Killer Cells Redirected With A Novel CD123-Specific Chimeric Antigen Receptor," Br. J. Haematol. 161:389-401 Wucherpfennig, K.W. et al. (2010) "Structural Biology Of The T-Cell Receptor: Insights Into Receptor Assembly, Ligand Recognition, And Initiation Of Signaling," Cold Spring Harb. Perspect. Biol. 2(4):a005140; pp. 1-14 Thomas, S. et al. (2010) "Molecular Immunology Lessons From Therapeutic T-Cell Receptor Gene Transfer," Immunology 129(2):170-177 Janeway, C.A. et al. (2005) In: Immunobiology: The Immune System In Health And Disease," 6th ed. Garland Science Publishing, NY, pp. 214- 216 Sun, Z. J. et al. (2001) "Mechanisms Contributing To T Cell Receptor Signaling And Assembly Revealed By The Solution Structure Of An Ectodomain Fragment Of The CD3ε:γ Heterodimer," Cell 105(7):913-923 Kuhns, M.S. et al. (2006) "Deconstructing The Form And Function Of The TCR/CD3 Complex," Immunity. 2006 Feb;24(2):133-139 Robak, T. et al. (2009) "Current And Emerging Therapies For Acute Myeloid Leukemia," Clin. Ther. 2:2349-2370 Roboz, G.J. (2012) "Current Treatment Of Acute Myeloid Leukemia," Curr. Opin. Oncol. 24:711-719
本発明は、二重特異性ダイアボディを含む安定な水性医薬製剤（「ダイアボディ製剤」）、及び上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を対象とする。本発明は特に、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ（「ＤＡＲＴ‐Ａ」）を含むダイアボディ医薬製品を含む、上述の医薬製剤（「ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤」）に関する。本発明は更に、患者のＡＭＬ又はＭＤＳ等の血液悪性腫瘍の治療における、上述のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤の使用に関する。
詳細には、本発明は、ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０（「ＰＳ８０」）を含む、安定な水性医薬製剤を提供する。
本発明は更に、リン酸ナトリウムの濃度が約５ｍＭ～約３０ｍＭであり、特にリン酸ナトリウムの上記濃度が約１０ｍＭである、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬであり、特にＰＳ８０の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、特に約１５０ｍＭである、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記製剤が約５．５～約７．０のｐＨ、特に約６．０のｐＨを有する、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記製剤が、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤が約６．０のｐＨを有する、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記ダイアボディの濃度が約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬ、特に約０．１ｍｇ／ｍＬである、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は特に、上記ダイアボディが、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、上記安定な水性医薬製剤の実施形態に関する。本発明は更に、上記共有結合ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、より詳細には上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、上記安定な水性医薬製剤を提供する。
本発明は更に、上記製剤が、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、また上記製剤のｐＨが約６．０である、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供する。
本発明は更に、上述の安定な水性医薬製剤のうちのいずれかを含むコンテナを提供し、特に上記コンテナは、無菌的に充填されるガラスバイアルである。
本発明は更に、バイアル内に無菌的に充填された、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供し、ここで上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する。
本発明は更に、バイアル内に無菌的に充填された、上記安定な水性医薬製剤の実施形態を提供し、ここで上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を２～８℃で約４８か月にわたって維持する。
本発明は更に、上記安定な水性医薬製剤のうちのいずれを含む、密封パッケージを提供する。
本発明は更に、リン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ベンジルアルコール（「ＢＡ」）、及びメチルパラベン（「ＭＰ」）を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、リン酸ナトリウムの濃度が約１５ｍＭ～約２５ｍＭであり、特にリン酸ナトリウムの上記濃度が約２０ｍＭである、水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、ＢＡの濃度が約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬであり、特にＢＡの上記濃度が約１３．２ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、ＭＰの濃度が約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬであり、特にＭＰの上記濃度が約４．２５ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、ＰＳ８０の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬであり、特にＰＳ８０の上記濃度が約０．２５ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が約７．７～約８．７のｐＨを有し、特に上記ｐＨが約８．２である、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記安定剤溶液が、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨが約８．２である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は特に、上記ダイアボディが、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、上記水性安定剤溶液に関する。
本発明は更に、上記共有結合ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、より詳細には上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、上記水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、上記溶液が上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約５～７日にわたって維持する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって阻害又は防止する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が微生物の増殖を約２５℃で約５～７日にわたって防止する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する、バイアル中の上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記安定した水性安定剤溶液のうちのいずれかを含むコンテナを提供し、特に上記コンテナは、無菌的に充填されるガラスバイアルである。
本発明は更に、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかを含む密封パッケージを提供する。
本発明は更に、塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭ、特に約１５０ｍＭである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬ、特に約０．１０ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有し、特に上記ｐＨが６．０である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨが約６．０である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は特に、上記ダイアボディが、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、上記水性安定剤溶液に関する。
本発明は更に、上記共有結合ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、より詳細には上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、上記水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、上記溶液が上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約５～７日にわたって維持する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって阻害又は防止する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が微生物の増殖を約２５℃で約５～７日にわたって防止する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する、バイアル中の上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記安定した水性安定剤溶液のうちのいずれかを含むコンテナを提供し、特に上記コンテナは、無菌的に充填されるガラスバイアルである。
本発明は更に、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかを含む密封パッケージを提供する。
本発明は更に、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液を提供する。本発明は更に、リン酸ナトリウムの濃度が約５ｍＭ～約３０ｍＭである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、リン酸ナトリウムの上記濃度が約１０ｍＭである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、塩化ナトリウムの上記濃度が約１５０ｍＭである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＢＡの濃度が約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＢＡの上記濃度が約９．０ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ＰＳ８０の上記濃度が約０．１０ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、組み換えヒトアルブミン（「ｒＨＡ」）を更に含む、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、ｒＨＡの濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬであり、特にｒＨＡの上記濃度が約０．１０ｍｇ／ｍＬである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有し、特に上記ｐＨが約６．０である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は特に、上記溶液が、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡを含み、上記溶液のｐＨが約６．０である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は特に、上記溶液が、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨが約６．０である、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記ダイアボディが共有結合二重特異性ダイアボディである、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記共有結合ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、より詳細には上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、上記水性安定剤溶液を提供する。
本発明は更に、上記溶液が上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３日にわたって維持する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって阻害又は防止する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記溶液が、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する、上記水性安定剤溶液の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかを含むコンテナ（特にガラスバイアルコンテナを提供する。
本発明は更に、上記水性安定剤溶液のうちのいずれかを含む密封パッケージを提供する。
本発明は更に：
ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
ｂ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１５ｍＭ～約２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
ｃ）上記コンテナＡ及び上記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
を含む、キットを提供する。
本発明は更に：
ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
ｂ）（ｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
（ｉｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
（ｉｉｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
ｃ）上記コンテナＡ及び上記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
を含む、キットを提供する。
本発明は更に、上記ダイアボディが、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記共有結合ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、より詳細には上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、上記キットを提供する。
本発明は更に、上記コンテナＡ中の上記安定な水性医薬製剤が、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤が約６．０のｐＨを有する、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液が、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約８．２のｐＨを有する、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液が、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約６．０のｐＨを有する、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液が、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約６．０のｐＨを有する、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液が、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約６．０のｐＨを有する、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記水性安定剤溶液が更に、ｒＨＡを約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、ｒＨＡの上記濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記被験者がヒト患者である、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記コンテナＡ及び上記コンテナＢがガラスバイアルである、上記キットの実施形態を提供する。
本発明は更に、上記キットのうちのいずれか、並びに任意に上記キットの保管及び／使用のための説明書を含む、密封パッケージを提供する。
本発明は更に、ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与する方法を提供し、上記方法は、上記キットのうちの１つを使用するステップを含み、ここで上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液はリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含み、且つ約７．７～約８．７のｐＨを有し；
上記方法では：
（ａ）上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液を、コンテナＣに入れて混合し；
（ｂ）上記コンテナＡの上記安定な水性医薬製剤を、上記コンテナＣに入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
（ｃ）上記投薬用溶液を内包する上記コンテナＣを、上記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける。
本発明は更に、上記コンテナＣが静脈内注入用の生理食塩水を含む、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記キットのうちの１つを用いて、それを必要とする被験者にダイアボディを投与する方法を提供し、ここで上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液はリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡのうちの１つ以上、並びに任意にｒＨＡを含み、且つ約５．５～約７．０のｐＨを有し；
上記方法では：
（ａ）上記コンテナＡの上記安定な水性医薬製剤を、上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液中に入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
（ｂ）任意に上記投薬用溶液を希釈し；
（ｃ）上記投薬用溶液をコンテナＣに入れ；
（ｄ）最終的な上記投薬用溶液を内包する上記コンテナＣを、上記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける。
本発明は更に、上記コンテナＣが静脈内注入用の生理食塩水又は静菌性生理食塩水を含む、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が注入ポンプによるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が移動式である、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記デバイスが移動式シングルポンプである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記デバイスが移動式デュアルポンプである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記デバイスがシリンジポンプである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が少なくとも約２４時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が少なくとも約４８時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が少なくとも約９６時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が少なくとも約７日間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が約０．１０ｍＬ／時間～約２．５ｍＬ／時間の流量で行われる、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が約０．５ｍＬ／時間～約１０．０ｍＬ／時間の流量で行われる、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．１ｍＬ／時間～約２．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも２４時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量での少なくとも４８時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍｌ／時間の流量での少なくとも７日間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投与が、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも７日間にわたる持続注入によるものである、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記流量が上記被験者の静脈閉塞を防止する、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記ダイアボディがＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであり、３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日からなる群から選択される治療投薬量で上記被験者に投与される、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投薬用溶液が４０ｍＬの上記水性安定剤溶液を含む、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投薬用溶液が、約０．０３ｍｇ／ｍＬ～約０．０４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、約１．７ｍｇ／ｍＬ～約２．１ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び約０．５５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬのＭＰを含む、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記投薬用溶液が、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、上記患者がヒト被験者である、上記方法の実施形態を提供する。
本発明は更に、それを必要とする被験者に、治療有効量の投薬用溶液を投与するステップを含む、血液悪性腫瘍を治療する方法を提供し、上記投薬用溶液は：
（Ａ）（１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約５ｍＭ～約３０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約１０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（６）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（７）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１５０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（８）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約５．５～約７．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（９）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１０）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの濃度が約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの上記濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤のｐＨは約６．０である、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；又は
（１５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を約２～８℃で約４８月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む水性安定剤溶液；あるいは、
（Ｂ）（１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約５ｍＭ～約３０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約１０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（６）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（７）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１５０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（８）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約５．５～約７．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（９）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（１０）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの濃度が約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（１１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの上記濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（１２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；又は
（１３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤のｐＨは約６．０である、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液；
（１４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液を含む水性安定剤溶液；又は
（１５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を約２～８℃で約４８月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びにリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡを含む水性安定剤溶液を含む水性安定剤溶液；あるいは、
（Ｃ）（１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約５ｍＭ～約３０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記リン酸ナトリウムの濃度が約１０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＰＳ８０の濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（６）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（７）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記塩化ナトリウムの濃度が約１５０ｍＭである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（８）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約５．５～約７．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（９）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有する、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１０）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの濃度が約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１１）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディの上記濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬである、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１２）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含み、上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディが：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１３）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤のｐＨは約６．０である、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１４）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液；又は
（１５）ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びＰＳ８０を含む安定な水性医薬製剤であって、上記溶液は上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディのモノマー純度を約２～８℃で約４８月にわたって維持する、安定な水性医薬製剤、並びに塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む水性安定剤溶液
を含む。
本発明は更に、上記キットのうちのいずれかを用いて、血液悪性腫瘍を治療する方法を提供する。
本発明は更に、血液悪性腫瘍の治療のための、上記投薬用溶液の使用に関する。
本発明は更に、血液悪性腫瘍の治療のための、上記キットの使用に関する。
本発明は更に、上記血液悪性腫瘍が：ＡＭＬ；ＣＭＬの急性転化及びＣＭＬに関連するＡｂｅｌｓｏｎ癌遺伝子（Ｂｃｒ‐ＡＢＬ転座）を含むＣＭＬ；ＭＤＳ；Ｂ‐ＡＬＬ；Ｔ‐ＡＬＬ；；リヒター症候群又はＣＬＬにおけるリヒター症候群の転化を含むＣＬＬ；ＨＣＬ；芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）；マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含むＮＨＬ；ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症；並びにバーキットリンパ腫からなる群から選択される、上記実施形態に関する。
本発明は特に、上記血液悪性腫瘍がＡＭＬ、ＢＰＤＣＮ、ＭＤＳ、又はＴ‐ＡＬＬである、上記実施形態に関する。
本発明は特に、上記被験者がヒト被験者である、上記実施形態に関する。
図１は、それぞれＥコイル又はＫコイルヘテロ二量体促進ドメインを有する（もう一方のヘテロ二量体促進ドメインは下に提示されている）２つのポリペプチド鎖で構成された２つのエピトープ結合部位を有する２鎖共有結合ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ、ＤＡＲＴ‐Ａ）の第１及び第２のポリペプチド鎖の全体構造を示す。システイン残基は、図示されているようにリンカーに、及び／又はヘテロ二量体促進ドメインに（図３～４を参照）、存在してよい。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の濃淡又は塗りつぶしパターンを用いて示されている。この図、及び結合分子ドメインの概略図を提供する全ての図における、波状の線（ＷＷＷ）は、存在することが好ましい１つ以上の任意のヘテロ二量体促進ドメインを表す。 図２は、会合した鎖がＦｃ領域の全体又は一部を形成するように、それぞれＣＨ２及びＣＨ３を有する２つのポリペプチド鎖で構成された２つのエピトープ結合部位を有する、代表的な共有結合ダイアボディ分子の概略図を提供する。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の濃淡又は塗りつぶしパターンを用いて示されている。 図３は、２ペアのポリペプチド鎖（即ち全部で４つのポリペプチド鎖）で構成された４つのエピトープ結合部位を有する代表的な共有結合４価ダイアボディを示す概略図を提供する。システイン残基はヘテロ二量体促進ドメイン内に示されており、任意のシステイン残基がリンカーに存在する。各ペアのうちの１つのポリペプチド鎖はＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有し、従って会合した鎖はＦｃ領域の全体又は一部を形成する。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の濃淡又は塗りつぶしパターンを用いて示されている。２ペアのポリペプチド鎖は同一であってよい。２ペアのポリペプチド鎖が同一であり、ＶＬ及びＶＨドメインが異なるエピトープを認識するこのような実施形態では、結果として得られる分子は４つのエピトープ結合部位を有し、結合する各エピトープに対して二重特異性かつ２価である。 図４は、３つのポリペプチド鎖で構成された２つのエピトープ結合部位を有する代表的な共有結合ダイアボディ分子の概略図を提供する。上記ポリペプチド鎖のうちの２つは、ＣＨ２及びＣＨ３ドメインを有し、従って会合した鎖はＦｃ領域の全体又は一部を形成する。システイン残基は（図示されているように）ヘテロ二量体促進ドメインに、並びに／又はリンカーに（図１及び３を参照）、存在してよい。ＶＬ及びＶＨドメインを含むポリペプチド鎖は更に、ヘテロ二量体促進ドメインを含む。同一のエピトープを認識するＶＬ及びＶＨドメインは、同一の濃淡又は塗りつぶしパターンを用いて示されている。 図５Ａ～５Ｂは、ＰＳ８０を含む２つのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）製剤、及びＰＳ８０を含まないＰＢＳ製剤中で、連続的に撹拌した後の、ＤＡＲＴ‐Ａ濁度（図５Ａ）及びサブビジブル粒子数（図５Ｂ）を示す。ＤＡＲＴ‐Ａ試料は２～８℃に保持され、６００ｒｐｍで２４時間撹拌された。 図６は、ＤＡＲＴ‐Ａの熱安定性を示す。示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて、ＰＳ８０を含まないもの（ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ緩衝液のみ）とＰＳ８０を含むもの（ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ緩衝液＋ＰＳ８０）との２つの医薬製品製剤中でのＤＡＲＴ‐Ａの安定性を試験した。対照ＤＰ製剤及びＰＳ８０含有ＤＰ製剤はいずれも、１５０ｍＭのＮａＣｌ、１０ｍＭのリン酸ナトリウムを含有し、ｐＨは６．０であった。ＤＳＣは、６４℃の融点（Ｔｍ）で実施された。 図７は、５±３℃で２４ヶ月間保管した後の時間を置いたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（上側のパネル）に関するアミノ酸レベルにおけるペプチド及び修飾を、参照標準（下側のパネル）と比較した、ペプチドマッピングの結果を示す。この図は、液体クロマトグラフィとエレクトロスプレーイオン化質量分析との組み合わせ（ＬＣ‐ＥＳＩＭＳ）を用いた、２つの試料のトリプシンペプチドマッピングの結果を示す。 図８Ａ～８Ｄは、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を５±３℃で４８ヶ月間保管した後の、ＣＤ１２３（図８Ａ）又はＣＤ３（図８Ｂ）に結合することによって示される、ＤＡＲＴ‐Ａの相対的効力を提供する。図８Ｃは、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を５±３℃で４８ヶ月間保管した後の、ＳＥ‐ＨＰＬＣで測定されたＤＡＲＴ‐Ａモノマーのパーセンテージを示す。図８Ｄは、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を５±３℃で４８ヶ月間保管した後の、ＣＥ‐ＳＤＳで測定されたＤＡＲＴ‐Ａのパーセント純度を示す。 図９は、ＤＡＲＴ‐Ａのための安定剤の開発の概要を示す。安定剤１は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と混合することによって、移動式デュアルポンプを用いた投与中の、吸収によるタンパク質の損失を低減するために開発された。（ｒＨＡを含有する）安定剤１を、（ＰＳ８０のみを含有する）修飾された安定剤１と比較するための研究が実施された。代替的な防腐剤が試験され、これらの研究により、移動式シングルポンプによる投与のための安定剤２が開発された。 図１０は、シングルポンプによる投与のための安定剤２の開発のために実施された研究の概要を提供する。防腐剤の選択を、図示された一連のステップで評価した。 図１１は、安定剤１中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａの持続投与のための、移動式デュアルポンプ注入構成を示す。移動式注入構成の研究におけるサンプリング点（点＃１～＃５）が図示されている。 図１２Ａ～１２Ｂは、安定剤１中でＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を希釈することによる、薬物カセットに装入するためのＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液の調製を示す。図１２Ａは、ＤＡＲＴ‐Ａ高濃度（５０００ｎｇ／ｍＬ）投薬用溶液の調製を示す。図１２Ｂは、ＤＡＲＴ‐Ａ低濃度（１００ｎｇ／ｍＬ）投薬用溶液の調製を示す。 図１３は、移動式シングルポンプによる投与のための投薬用溶液の調製を示す。安定剤２（４０ｍｌ）を、公称容積２７０ｍｌを内包する２５０ｍｌ生理食塩水バッグに加えた（あるいは／任意に、生理食塩水含有移動式ポンプカセットを生理食塩水バッグの代わりに使用できる）。生理食塩水バッグを十分に混合した後、ＤＡＲＴ‐Ａを含有する所望の体積の水性医薬製剤を加えた。生理食塩水バッグを十分に混合して、最終的な投薬用溶液を得た。ＤＡＲＴ‐Ａ及び防腐剤の安定性を、７２時間にわたる室温での保管中に監視した。 図１４は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤２を含む投薬用溶液を患者に投与するために使用できる、ＣＡＤＤ‐Ｌｅｇａｃｙ（登録商標）１移動式注入ポンプ（Ｄｅｌｔｅｃ（ミネソタ州セントポール））を示す。
本発明は、二重特異性ダイアボディを含む安定な水性医薬製剤（「ダイアボディ製剤」）、及び上記ダイアボディを安定化して投与するための水性安定剤溶液を対象とする。本発明は特に、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性１価ダイアボディであるＤＡＲＴ‐Ａを含む、上述のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤に関する。本発明は更に、患者のＡＭＬ又はＭＤＳ等の血液悪性腫瘍の治療における、上述のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤の使用に関する。
Ｉ．二重特異性ダイアボディ
本発明は、二重特異性ダイアボディ、特に２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合ダイアボディを含む、製剤に関する。以下で提供されるように、上記共有結合ダイアボディはＦｃドメインを更に含んでよい。
ＤＡＲＴ（登録商標）ダイアボディと呼ばれる、安定な共有結合ヘテロ二量体非単一特異性ダイアボディについて、既に言及されている（例えば国際公開第２００６／１１３６６５号；国際公開第２００８／１５７３７９号；国際公開第２０１０／０２７７９７号；国際公開第２０１０／０３３２７９号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２０１１／１０９４００号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１２／１６２０６７号；国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１４／１５９９４０号；国際公開第２０１５／０２１０８９号；国際公開第２０１５／０２６８９２号；及び国際公開第２０１５／０２６８９４号を参照）。このような共有結合ダイアボディは、２つ以上の共有結合的に複合体化したポリペプチドを含み、１つ以上のシステイン残基を、採用したポリペプチド種（これらはジスルフィド結合を形成でき、これによってこのようなポリペプチド鎖の１つ以上のペアを互いに共有結合させることができる）それぞれの中へと組み込むステップを伴う。例えば、このような構造のＣ末端へのシステイン残基の追加は、関与するポリペプチド鎖間のジスルフィド結合を可能とすることが分かっており、これは、ダイアボディの結合特性に干渉することなく、得られるダイアボディを安定化する。
最も単純な共有結合ダイアボディは、２つのポリペプチド鎖を含み、これらはそれぞれ３つのドメインを含む（図１）。第１のポリペプチド鎖は：（ｉ）第１の免疫グロブリンの軽鎖可変ドメイン（ＶＬ１）の結合領域を含むドメイン；（ｉｉ）第２の免疫グロブリンの重鎖可変ドメイン（ＶＨ２）の結合領域を含む、第２のドメイン；並びに（ｉｉｉ）上記第２のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化を促進する役割、及びダイアボディの第２のポリペプチド鎖に対する第１のポリペプチド鎖の共有結合を促進する役割を果たす、第３のドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン（Ｈｅｔｅｒｏｄｉｍｅｒ‐Ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ Ｄｏｍａｉｎ）を含む。第２のポリペプチド鎖は：相補的な第１のドメイン（ＶＬ２ドメイン）；相補的な第２のドメイン（ＶＨ１ドメイン）；並びに第１のポリペプチド鎖の第３のドメインと複合体化して、第１のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進する、第３のドメイン（「ヘテロ二量体促進ドメイン」）を含有する。このような分子は、安定かつ強力であり、２つ以上の抗原を同時に結合する能力を有する。一実施形態では、第１及び第２のポリペプチド鎖の第３のドメインはそれぞれ、システイン（「Ｃ」）残基を含有し、このシステイン残基は、ジスルフィド結合を介してポリペプチドを一体に結合させる役割を果たす。上記ポリペプチド鎖のうちの一方又は両方の第３のドメインは更に、ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインの配列を有してよく、これにより、ダイアボディのポリペプチドの複合体化によって、細胞（Ｂリンパ球、樹状細胞、ナチュラルキラー細胞、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球及び肥満細胞等）のＦｃ受容体に結合できるＦｃドメインが形成される（例えば図２～４を参照）。このような共有結合分子のいくつかの例は以下で詳述され、またこのような分子の多数の変形例が他の文献に記載されている（例えば米国公開特許第２０１３‐０２９５１２１号；米国公開特許第２０１０‐０１７４０５３号；米国公開特許第２００７‐０００４９０９号；米国公開特許第２００９‐００６０９１０号；欧州公開特許第２７１４０７９号；欧州公開特許第２６０１２１６号；欧州公開特許第２３７６１０９号；欧州公開特許第２１５８２２１号；及び国際公開第２０１２／１６２０６８号；国際公開第２０１２／０１８６８７号；国際公開第２０１０／０８０５３８号；国際公開第２００６／１１３６６５号を参照）。
Ａ．Ｆｃドメインを含まない共有結合ダイアボディ
Ｆｃを含まない共有結合ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は好ましくは、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端、第１又は第２のエピトープに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（即ちＶＬ１又はＶＬ２）、第１の介在スペーサペプチド（リンカー１）、（上記第１のポリペプチド鎖がＶＬ１を含有する場合は）第２のエピトープに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン、又は（上記第１のポリペプチド鎖がＶＬ２を含有する場合は）第１のエピトープに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン、任意にシステイン残基を含有する第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）、ヘテロ二量体促進ドメイン、及びＣ末端を含む（図１）。
第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に：Ｎ末端；第１又は第２のエピトープに結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（即ちＶＬ１又はＶＬ２；及び上記ＶＬドメインは上記ダイアボディの上記第１のポリペプチド鎖に含まれないよう選択される）；介在スペーサペプチド（リンカー１）；第１又は第２のエピトープに結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（即ちＶＨ１又はＶＨ２；及び上記ＶＨドメインは上記ダイアボディの上記第１のポリペプチド鎖に含まれないよう選択される）；任意にシステイン残基を含有する第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）；ヘテロ二量体促進ドメイン；及びＣ末端を含む（図１）。ある特定のエピトープに対して特異的な、採用されるＶＬ及びＶＨドメインは、好ましくは同一のモノクローナル抗体から得られる、又は同一のモノクローナル抗体に由来する。しかしながらこれらのドメインは、これらのドメインが集合して、上記エピトープに免疫特異的に結合できる官能性結合ドメインを形成する場合、異なるモノクローナル抗体に由来してもよい。このような異なる抗体は、本明細書では「対応する（ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ）」抗体と呼ばれる。
第１のポリペプチド鎖のＶＬドメインは、第２のポリペプチド鎖のＶＨドメインと相互作用して、上記エピトープのうちの１つ（例えば第１のエピトープ）に対して特異的な第１の官能性エピトープ結合ドメインを形成する。同様に、第２のポリペプチド鎖のＶＬドメインは、第１のポリペプチド鎖のＶＨドメインと相互作用して、他方のエピトープ（即ち第２のエピトープ）に対して特異的な第２の官能性エピトープ結合ドメインを形成する。よって、第１及び第２のポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインの選択は、ダイアボディのこれら２つのポリペプチド鎖が合わせて、第１のエピトープ及び第２のエピトープの両方に結合できるＶＬ及びＶＨドメインを含む（即ちこれらが合わせて、ＶＬ１／ＶＨ１及びＶＬ２／ＶＨ２を含む）ように、「調整（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｅ）」される。
最も好ましくは、介在スペーサペプチド（即ち上述のＶＬドメインとＶＨドメインとを隔てる「リンカー１」）の長さは、上記ポリペプチド鎖の上記ＶＬ及びＶＨドメインが互いに対して結合する（例えば０、１、２、３、４、５、６、７、８又は９個の介在リンカーアミノ酸残基からなる）のを実質的に又は完全に防止するよう選択される。従って第１のポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、互いに対して結合することが実質的に又は全くできない。同様に、第２のポリペプチド鎖のＶＬ及びＶＨドメインは、互いに対して結合することが実質的に又は全くできない。好ましい介在スペーサペプチド（リンカー１）は、配列（配列番号１）：GGGSGGGGを有する。
上記第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）の長さ及び組成は、上述のような二量体化を促進する１つ以上のポリペプチドドメイン（即ち「ヘテロ二量体促進ドメイン」）の選択に基づいて選択される。典型的には、上記第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）は、３～２０個のアミノ酸残基を含む。特に、採用した１つ以上のヘテロ二量体促進ドメインがシステイン残基を含まない場合、システイン含有第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）が利用される。システイン含有第２の介在スペーサペプチド（リンカー２）は、１つ、２つ、３つ又は４つ以上のシステインを含有する。好ましいシステイン含有スペーサペプチド（リンカー２）は、配列GGCGGG（配列番号２）を有する。あるいは、リンカー２はシステインを含まず（例えばASTKG（配列番号３））、以下で説明されるシステイン含有ヘテロ二量体促進ドメインが使用される。任意に、システイン含有リンカー２及びシステイン含有ヘテロ二量体促進ドメインの両方が使用される。
例示的なヘテロ二量体促進ドメインとしては、対向する電荷のポリペプチドコイルを含むものが挙げられる。好ましいヘテロ二量体促進ドメインは、グルタミン酸残基がｐＨ７において負の電荷を形成する「Ｅコイル」ヘテロ二量体促進ドメイン（配列番号４：EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK）、又はリシン残基がｐＨ７において正の電荷形成する「Ｋコイル」ヘテロ二量体促進ドメイン（配列番号５：KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE）を含む。このような荷電ドメインの存在により、第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとの間の関連付けが促進され、従ってヘテロ二量体形成が促進される。上述のＥコイル及びＫコイルの配列の、１つ以上のシステイン残基を含むような修飾を含む、ヘテロ二量体促進ドメインを利用してよい。このようなシステイン残基の存在により、一方のポリペプチド鎖に存在するコイルが、他方のポリペプチド鎖に存在する相補的なコイルと共有結合し、これにより上記ポリペプチド鎖を互いに共有結合させて、ダイアボディの安定性を向上できる。特に好ましい例は、アミノ酸配列EVAACEK‐EVAALEK‐EVAALEK‐EVAALEK（配列番号６）を有する修飾されたＥコイルと、アミノ酸配列KVAACKE‐KVAALKE‐KVAALKE‐KVAALKE（配列番号７）を有する修飾されたＫコイルとを含む、ヘテロ二量体促進ドメインである。
Ｂ．Ｆｃドメインを含む二重特異性ダイアボディ
上記ダイアボディポリペプチド鎖のうちの一方又は両方にＩｇＧ ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを追加して、上記ダイアボディ鎖の複合体化によってＦｃドメインが形成されるようにすると、上記ダイアボディの生物学的半減期が増大し、及び／又は価数が変化する。このようなダイアボディは、ポリペプチド鎖を互いに共有結合させて、第１のエピトープ及び第２のエピトープに同時に結合できる共有結合ダイアボディを形成できる配列を有する、２つ以上のポリペプチド鎖を含む。上記ダイアボディポリペプチドの両方にＩｇＧ ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを組み込むと、２鎖二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディの形成が可能となる（図２）。
あるいは、上記ダイアボディポリペプチドのうちの一方にＩｇＧ ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインを組み込むと、より複雑な４鎖二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディの形成が可能となる（図３）。第２のＣＨ２‐ＣＨ３ Ｆｃドメインを含むもののいずれの結合ドメインを含まない、第３のポリペプチド鎖を追加することにより、３鎖二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディの形成が可能となる（図４）。
このような分子のＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは、いずれのアイソタイプのもの（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）であってよい。上記分子は更に、ヒンジドメインを含んでよい。ヒンジドメインが存在する場合、これはいずれのアイソタイプのもの（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）であってよく、また好ましくは、所望のＦｃドメインと同一のアイソタイプのものである。ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインは更に、１つ以上のＦｃ受容体への結合を低減若しくは排除するための（例えば米国特許第５，６２４，８２１号を参照）、並びに／又は血清半減期を増大させるための（例えば米国特許第７，０８３，７８４号を参照）、並びに／又は２つの異なるポリペプチド鎖上に存在するＣＨ２‐ＣＨ３ドメイン間のヘテロ二量体化を促進するための（例えば米国特許第５，７３１，１６８号及び米国特許第７，１８３，０７６号を参照）、１つ以上のアミノ酸置換を含んでよい。
エフェクタ機能が低減された又は失われたＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する、ある例示的なＩｇＧ１配列は、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａを含むものとなる（配列番号８）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
血清半減期が増大したＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する、ある例示的なＩｇＧ１配列は、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａによって提供されるエフェクタ機能の低減又は喪失と、置換Ｍ２５２Ｙ／Ｓ２５４Ｔ／Ｔ２５６Ｅによって提供される血清半減期の増大とを組み合わせることができる（配列番号９）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LYITREPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
ヘテロ二量体化したＣＨ２及びＣＨ３ドメインに関する、ある例示的なＩｇＧ１配列は、一方の鎖にＴ３６６Ｗ（「ノブ（Ｋｎｏｂ）」）置換を含み、もう一方の鎖にＴ３６６Ｓ／Ｌ３６８Ａ／Ｙ４０７Ｖ（「ホール（Ｈｏｌｅ）」）置換を含むことになる。これらの置換を、エフェクタ機能を低減する若しくは喪失させる、及び／又は血清半減期を増大させる、更なる置換と組み合わせてよい。
ノブ担持ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに関する、ある例示的なＩｇＧ１アミノ酸配列は更に、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａによって提供されるエフェクタ機能の低減又は喪失を組み合わせる（配列番号１０）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLWCLVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNHYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
ホール担持ＣＨ２‐ＣＨ３ドメインに関する、ある例示的なＩｇＧ１アミノ酸配列は更に、置換Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａによって提供されるエフェクタ機能の低減又は喪失を組み合わせる（配列番号１１）：
APEAAGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD
GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA
PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLSCAVK GFYPSDIAVE
WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLVSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE
ALHNRYTQKS LSLSPGX
ここでＸはリシン（Ｋ）であるか、又は不在である。
本発明のＦｃドメイン含有ダイアボディ分子は、更なる介在スペーサペプチド（リンカー）を含んでよく、このようなリンカーは一般に、ヘテロ二量体促進ドメイン（例えばＥコイル若しくはＫコイル）とＣＨ２‐ＣＨ３ドメインとの間、及び／又はＣＨ２‐ＣＨ３ドメインと可変ドメイン（即ちＶＨ若しくはＶＬ）との間に組み込まれる。典型的には、この追加のリンカーは３～２０個のアミノ酸残基を含み、任意にＩｇＧヒンジドメインの全体又は一部分（好ましくは、１個、２個、３個、若しくは４個以上のシステイン残基を有するＩｇＧヒンジドメインのシステイン含有部分）を含有してよい。本発明の二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディ分子において採用できる例示的なリンカーとしては：GGGS（配列番号１２）、GGCGGG（配列番号１３）、ASTKG（配列番号１４）、APSSS（配列番号１５）、APSSSPME（配列番号１６）が挙げられる。更に、アミノ酸GGG又はLEPKSS（配列番号１７）の直後にDKTHTCPPCP（配列番号１８）を続けることによって、代替リンカー：GGGDKTHTCPPCP（配列番号１９）；及びLEPKSSDKTHTCPPCP（配列番号２０）を形成してよい。本発明の二重特異性Ｆｃドメイン含有分子は、リンカーに加えて又はリンカーに代えて、ＩｇＧヒンジドメインを組み込んでよい。例示的なヒンジドメインとしては：ＩｇＧ１からのEPKSCDKTHTCPPCP（配列番号２１）；ＩｇＧ２からのERKCCVECPPCP（配列番号２２）；ＩｇＧ３からのELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP（配列番号２３）；ＩｇＧ４からのESKYGPPCPSCP（配列番号２４）；及び鎖交換を低減するための安定化Ｓ２２８Ｐ置換を含むＩｇＧ４ヒンジ変異型からのESKYGPPCPPCP（配列番号２５）が挙げられる（Ｋａｂａｔに記載のＥＵインデックスに従って番号付与）。
図３に提示されているように、本発明のＦｃドメイン含有ダイアボディは４つの異なる鎖を含んでよい。このようなダイアボディの第１及び第３のポリペプチド鎖は、４つのドメイン：（ｉ）ＶＬ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ２含有ドメイン；（ｉｉｉ）ヘテロ二量体促進ドメイン；及び（ｉｖ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメインを含有する。第２及び第４のポリペプチド鎖は：（ｉ）ＶＬ２含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ１含有ドメイン；及び（ｉｉｉ）ヘテロ二量体促進ドメインを含有し、上記ヘテロ二量体促進ドメインは、第１／第３のポリペプチド鎖と第２／第４のポリペプチド鎖との二量体化を促進する。代表的な４鎖二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディのポリペプチド鎖の一般構造を表１に提示する。
Figure 2022536646000002
図４で提示されているように本発明のＦｃドメイン含有ダイアボディは、３つのポリペプチド鎖を含んでよい。このようなダイアボディの第１のポリペプチドは、３つのドメイン：（ｉ）ＶＬ１含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ２含有ドメイン；及び（ｉｉｉ）ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含有するドメインを含有する。このようなダイアボディの第２のポリペプチドは：（ｉ）ＶＬ２含有ドメイン；（ｉｉ）ＶＨ１含有ドメイン；並びに（ｉｉｉ）上記ダイアボディの第１のポリペプチド鎖とのヘテロ二量体化及び共有結合を促進するドメインを含有する。このようなダイアボディの第３のポリペプチドは、ＣＨ２‐ＣＨ３配列を含む。従ってこのようなダイアボディの上記第１及び第２のポリペプチド鎖は、一体に連結して、上記第１又は第２のエピトープに結合できるＶＬ１／ＶＨ１エピトープ結合ドメイン、及び上記エピトープ農地のもう一方に結合できるＶＬ２／ＶＨ２エピトープ結合ドメインを形成する。上記第１及び第２のポリペプチドは、それぞれの第３のドメインのシステイン残基が関わるジスルフィド結合によって、互いに結合する。特に上記第１及び第３のポリペプチド鎖は、互いに複合体化して、ジスルフィド結合によって安定化されたＦｃドメインを形成する。代表的な３鎖二重特異性Ｆｃドメイン含有ダイアボディのポリペプチド鎖の一般構造を（表２）で提示する。
Figure 2022536646000003
ＩＩ．ＤＡＲＴ‐Ａのポリペプチド鎖
ＤＡＲＴ‐Ａは、ＣＤ１２３のエピトープ及びＣＤ３のエピトープに同時に特異的に結合できる、配列最適化二重特異性ダイアボディＣＤ３（「ＣＤ１２３×ＣＤ３」二重特異性ダイアボディ）である（米国公開特許第２０１６‐０２００８２７号、国際公開第２０１５／０２６８９２号、Al-Hussaini, M. et al. (2016) “Targeting CD123 In Acute Myeloid Leukemia Using A T-Cell-Directed Dual-Affinity Retargeting Platform,” Blood 127:122-131, in Vey, N. et al. (2017) “A Phase 1, First-in-Human Study of MGD006/S80880 (CD123 x CD3) in AML/MDS,” 2017 ASCO Annual Meeting, June 2-6, 2017, Chicago, IL: Abstract TPS7070、これらの各文献は参照によりその全体が本出願に援用される）。ＤＡＲＴ‐Ａは、同様の組成の他の非配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディに比べて強化された機能的活性を示すことが分かっているため、「配列最適化（ｓｅｑｕｅｎｃｅ‐ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ）」ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディと呼ばれる。国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１７／０５０４７１は、患者にＤＡＲＴ‐Ａを投与するための好ましい投薬レジメンを記載しており、参照によりその全体が本出願に援用される。
ＤＡＲＴ‐Ａは、図１に示されている一般構造を有し、第１のポリペプチド鎖及び第２のポリペプチド鎖を含む。この二重特異性ダイアボディの第１のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に、Ｎ末端、ＣＤ３に結合できるモノクローナル抗体の軽鎖可変ドメイン（ＶＬドメイン）（ＶＬCD3）、介在リンカーペプチド（リンカー１）、ＣＤ１２３に結合できるモノクローナル抗体の重鎖可変ドメイン（ＶＨドメイン）（ＶＨCD123）、及びＣ末端を含むことになる。このようなＶＬCD3ドメインに関する好ましい配列は、配列番号２６：
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI
GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF
GGGTKLTVLG
である。
ＶＬCD3の抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１（配列番号２７）：RSSTGAVTTSNYAN、ＣＤＲ２（配列番号２８）：GTNKRAP、及びＣＤＲ３（配列番号２９）：ALWYSNLWVを含む。
このようなリンカー１に関する好ましい配列は、配列番号１：GGGSGGGGである。このようなＶＨCD123ドメインに関する好ましい配列は、配列番号３０：
EVQLVQSGAE LKKPGASVKV SCKASGYTFT DYYMKWVRQA PGQGLEWIGD
IIPSNGATFY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARSH
LLRASWFAYW GQGTLVTVSS
である。
ＶＨCD123の抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１（配列番号３１）：DYYMK、ＣＤＲ２（配列番号３２）：DIIPSNGATFYNQKFKG、及びＣＤＲ３（配列番号３３）：SHLLRASFAYを含む。
第２のポリペプチド鎖は、Ｎ末端からＣ末端への方向に、Ｎ末端、ＣＤ１２３に結合できるモノクローナル抗体のＶＬドメイン（ＶＬCD123）、介在リンカーペプチド（例えばリンカー１）、ＣＤ３に結合できるモノクローナル抗体のＶＨドメイン（ＶＨCD3）、及びＣ末端を含むことになる。このようなＶＬCD123ドメインに関する好ましい配列は、配列番号３４：
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP
KLLIYWASTR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY
PYTFGQGTKL EIK
である。
ＶＬCD123の抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１（配列番号３５）：KSSQSLLNSGNQKNYLT、ＣＤＲ２（配列番号３６）：WASTRES、及びＣＤＲ３（配列番号３７）：QNDYSYPYTを含む。
このようなＶＨCD3ドメインに関する好ましい配列は、配列番号３８：
EVQLVESGGG LVQPGGSLRL SCAASGFTFS TYAMNWVRQA PGKGLEWVGR
IRSKYNNYAT YYADSVKDRF TISRDDSKNS LYLQMNSLKT EDTAVYYCVR
HGNFGNSYVS WFAYWGQGTL VTVSS
である。
ＶＨCD3の抗原結合ドメインは、ＣＤＲ１（配列番号３９）：TYAMN、ＣＤＲ２（配列番号４０）：RIRSKYNNYATYYADSVKD、及びＣＤＲ３（配列番号４１）：HGNFGNSYVSWFAYを含む。
本発明の配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディを、上記第１及び第２のポリペプチドがその長さに沿ってシステイン残基を介して互いに共有結合するように、操作する。このようなシステイン残基は、上記ポリペプチドのＶＬドメインとＶＨドメインとを隔てる介在リンカー（例えばリンカー１）に導入してよい。あるいは、そしてより好ましくは、第２のペプチド（リンカー２）を、例えば上記ポリペプチド鎖のＮ末端からＶＬドメインまで、又はＣ末端からＶＨドメインまでの位置において、各ポリペプチド鎖に導入する。このようなリンカー２に関する好ましい配列は、配列番号１３：GGCGGGである。
上述のように、上記ポリペプチド鎖を、反対の電荷のポリペプチドコイルを含有するように更に操作することによって、ヘテロ二量体の形成を促進できる。従ってある好ましい実施形態では、ポリペプチド鎖のうちの一方を、「Ｅコイル（Ｅ‐ｃｏｉｌ）」ドメイン（配列番号４：EVAALEKEVAALEKEVAALEKEVAALEK）を含有するように操作し、２つのポリペプチド鎖のうちのもう一方を、「Ｋコイル（Ｋ‐ｃｏｉｌ）」ドメイン（配列番号５：KVAALKEKVAALKEKVAALKEKVAALKE）を含有するように操作することになる。
どのコイルを第１のポリペプチド鎖又は第２のポリペプチド鎖に提供するかは重要ではない。しかしながら、本発明のある好ましい配列最適化ＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ、即ちＤＡＲＴ‐Ａは、以下の配列（配列番号４２）：
QAVVTQEPSL TVSPGGTVTL TCRSSTGAVT TSNYANWVQQ KPGQAPRGLI
GGTNKRAPWT PARFSGSLLG GKAALTITGA QAEDEADYYC ALWYSNLWVF
GGGTKLTVLG GGGSGGGGEV QLVQSGAELK KPGASVKVSC KASGYTFTDY
YMKWVRQAPG QGLEWIGDII PSNGATFYNQ KFKGRVTITV DKSTSTAYME
LSSLRSEDTA VYYCARSHLL RASWFAYWGQ GTLVTVSSGG CGGGEVAALE
KEVAALEKEV AALEKEVAAL EK
を有する第１のポリペプチド鎖を有する。
ＤＡＲＴ‐Ａの鎖１は：配列番号２６‐配列番号１‐配列番号３０‐配列番号１３‐配列番号４で構成される。ＤＡＲＴ‐Ａの鎖１をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４３:
caggctgtgg tgactcagga gccttcactg accgtgtccc caggcggaac
tgtgaccctg acatgcagat ccagcacagg cgcagtgacc acatctaact
acgccaattg ggtgcagcag aagccaggac aggcaccaag gggcctgatc
gggggtacaa acaaaagggc tccctggacc cctgcacggt tttctggaag
tctgctgggc ggaaaggccg ctctgactat taccggggca caggccgagg
acgaagccga ttactattgt gctctgtggt atagcaatct gtgggtgttc
gggggtggca caaaactgac tgtgctggga gggggtggat ccggcggcgg
aggcgaggtg cagctggtgc agtccggggc tgagctgaag aaacccggag
cttccgtgaa ggtgtcttgc aaagccagtg gctacacctt cacagactac
tatatgaagt gggtcaggca ggctccagga cagggactgg aatggatcgg
cgatatcatt ccttccaacg gggccacttt ctacaatcag aagtttaaag
gcagggtgac tattaccgtg gacaaatcaa caagcactgc ttatatggag
ctgagctccc tgcgctctga agatacagcc gtgtactatt gtgctcggtc
acacctgctg agagccagct ggtttgctta ttggggacag ggcaccctgg
tgacagtgtc ttccggagga tgtggcggtg gagaagtggc cgcactggag
aaagaggttg ctgctttgga gaaggaggtc gctgcacttg aaaaggaggt
cgcagccctg gagaaa
である。
ＤＡＲＴ‐Ａの第２のポリペプチド鎖は、以下の配列（配列番号４４）：
DFVMTQSPDS LAVSLGERVT MSCKSSQSLL NSGNQKNYLT WYQQKPGQPP
KLLIYWASTR ESGVPDRFSG SGSGTDFTLT ISSLQAEDVA VYYCQNDYSY
PYTFGQGTKL EIKGGGSGGG GEVQLVESGG GLVQPGGSLR LSCAASGFTF
STYAMNWVRQ APGKGLEWVG RIRSKYNNYA TYYADSVKDR FTISRDDSKN
SLYLQMNSLK TEDTAVYYCV RHGNFGNSYV SWFAYWGQGT LVTVSSGGCG
GGKVAALKEK VAALKEKVAA LKEKVAALKE
を有する。
ＤＡＲＴ‐Ａの鎖２は：配列番号３４‐配列番号１‐配列番号３８‐配列番号１３‐配列番号５で構成される。ＤＡＲＴ‐Ａの鎖２をコードするポリヌクレオチドは、配列番号４５：
gacttcgtga tgacacagtc tcctgatagt ctggccgtga gtctggggga
gcgggtgact atgtcttgca agagctccca gtcactgctg aacagcggaa
atcagaaaaa ctatctgacc tggtaccagc agaagccagg ccagccccct
aaactgctga tctattgggc ttccaccagg gaatctggcg tgcccgacag
attcagcggc agcggcagcg gcacagattt taccctgaca atttctagtc
tgcaggccga ggacgtggct gtgtactatt gtcagaatga ttacagctat
ccctacactt tcggccaggg gaccaagctg gaaattaaag gaggcggatc
cggcggcgga ggcgaggtgc agctggtgga gtctggggga ggcttggtcc
agcctggagg gtccctgaga ctctcctgtg cagcctctgg attcaccttc
agcacatacg ctatgaattg ggtccgccag gctccaggga aggggctgga
gtgggttgga aggatcaggt ccaagtacaa caattatgca acctactatg
ccgactctgt gaaggataga ttcaccatct caagagatga ttcaaagaac
tcactgtatc tgcaaatgaa cagcctgaaa accgaggaca cggccgtgta
ttactgtgtg agacacggta acttcggcaa ttcttacgtg tcttggtttg
cttattgggg acaggggaca ctggtgactg tgtcttccgg aggatgtggc
ggtggaaaag tggccgcact gaaggagaaa gttgctgctt tgaaagagaa
ggtcgccgca cttaaggaaa aggtcgcagc cctgaaagag
である。
ＩＩＩ．ＤＡＲＴ‐Ａの特性
ＤＡＲＴ‐Ａは、ヒト及びカニクイザル細胞を用いてアッセイしたときに、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる能力を有することが分かった（表３）。ＤＡＲＴ‐Ａの提供はＴ細胞の活性化を引き起こし、芽球の減少を仲介し、Ｔ細胞膨張を促進し、Ｔ細胞活性化を誘発し、標的癌細胞の標的転換殺滅を引き起こすことが分かった。
Figure 2022536646000004
より詳細には、ＤＡＲＴ‐Ａは、最高活性の５０％（ＥＣ50）を達成するために必要な濃度がｎｇ／ｍＬ未満の範囲で、強力な標的転換殺滅能力を示すことが分かった。これは、ＣＤ１２３発現の程度が高い標的細胞株（Ｋａｓｕｍｉ‐３（ＥＣ50＝０．０１ｎｇ／ｍＬ））、ＣＤ１２３発現の程度が中程度の標的細胞株（Ｍｏｌｍ１３（ＥＣ50＝０．１８ｎｇ／ｍＬ）及びＴＨＰ‐１（ＥＣ50＝０．２４ｎｇ／ｍＬ））、並びにＣＤ１２３発現の程度が中程度のうちの低い方であるか又は低い標的細胞株（ＴＦ‐１（ＥＣ50＝０．４６ｎｇ／ｍＬ）及びＲＳ４‐１１（ＥＣ50＝０．５ｎｇ／ｍＬ））におけるＣＤ３エピトープ結合特異性とは無関係である。同様に、ＤＡＲＴ‐Ａ標的転換殺滅は、異なるドナーに由来するＴ細胞を含む複数の標的細胞株でも観察され、またＣＤ１２３を発現しない細胞株では標的転換殺滅は観察されなかった。結果を表４にまとめる。
Figure 2022536646000005
更に、ヒトＴ細胞及び腫瘍細胞（Ｍｏｌｍ１３又はＲＳ４‐１１）を組み合わせて、ＮＯＤ／ＳＣＩＤガンマ（ＮＳＧ）ノックアウトマウスに皮下注射した場合、ＭＯＬＭ１３腫瘍は、０．１６、０．５、０．２、０．１、０．０２、及び０．００４ｍｇ／ｋｇの用量レベルにおいて有意に阻害された。０．００４ｍｇ／ｋｇ以上の用量が、ＭＯＬＭ１３モデルにおいて活性であった。ＲＳ４‐１１モデルと比較した場合にＭＯＬＭ１３モデルにおいて腫瘍成長の阻害に関連するＤＡＲＴ‐Ａの用量がより少ないことは、ＭＯＬＭ１３細胞がＲＳ４‐１１細胞よりも高いＣＤ１２３発現レベルを有することを実証する試験管内データと一致しており、これは、ＭＯＬＭ１３細胞における試験管内でのＤＡＲＴ‐Ａ仲介細胞傷害性に対する感度の上昇と相関していた。
ＤＡＲＴ‐Ａは、ＡＭＬ患者由来の一次ＡＭＬ試験片（骨髄単核球（ＢＭＮＣ）及び末梢血単核球（ＰＢＭＣ））に対して活性を有することが分かった。一次ＡＭＬ骨髄試料をＤＡＲＴ‐Ａと共にインキュベートすると、これに付随する残留Ｔ細胞（ＣＤ４及びＣＤ８の両方）の膨張と、Ｔ細胞活性化マーカー（ＣＤ２５及びＫｉ‐６７）の誘発とを伴う、経時的な白血病細胞集団の枯渇がもたらされた。ＣＤ８及びＣＤ４ Ｔ細胞の両方における、グランザイムＢ及びパーフォリンレベルの上方制御が観察された。一次ＡＬＬ骨髄試料をＤＡＲＴ‐Ａと共にインキュベートすると、未処理の対照、即ち対照ＤＡＲＴに比べて、経時的な白血病細胞集団の枯渇がもたらされた。Ｔ細胞を計数し（ＣＤ８及びＣＤ４染色）、活性化（ＣＤ２５染色）をアッセイすると、未処理の、即ち対照ＤＡＲＴ試料に比べて、ＤＡＲＴ‐ＡではＴ細胞が膨張して活性化された。またＤＡＲＴ‐Ａは、ヒトＰＢＭＣ及びカニクイザルＰＢＭＣの両方において、ｐＤＣ細胞の枯渇を仲介できることが分かり、カニクイザルｐＤＣは、わずか１０ｎｇ／ｋｇのＤＡＲＴ‐Ａの点滴のわずか４日後に枯渇した。サイトカインであるインターフェロンガンマ、ＴＮＦアルファ、ＩＬ６、ＩＬ５、ＩＬ４、及びＩＬ２のレベルの上昇は、ＤＡＲＴ‐Ａで処置した動物では観察されなかった。これらのデータは、ＤＡＲＴ‐Ａ仲介標的細胞殺滅が、グランザイムＢ及びパーフォリン経路を介して仲介されたことを示している。
ＣＤ１２３陰性標的（Ｕ９３７細胞）又は対照ＤＡＲＴでは活性が観察されず、これは、観察されたＴ細胞の活性化が、標的細胞結合に強く依存していたこと、及びＤＡＲＴ‐ＡによるＣＤ３の１価結合は、Ｔ細胞の活性化をトリガするには不十分であったことを示している。
要約すると、ＤＡＲＴ‐Ａは、ＴＣＲのＣＤ３εサブユニットに結合して、いくつかの血液悪性腫瘍において上方制御される抗原であるＣＤ１２３を発現する細胞に対してＴリンパ球を標的転換する、抗体ベースの分子である。ＤＡＲＴ‐Ａは、ヒト及びカニクイザルの抗原に同様の親和性で結合し、両方の種からのＴ細胞を標的転換してＣＤ１２３＋細胞を殺滅する。週毎にＤＡＲＴ‐Ａの用量を増加させながら１週間に４又は７日の点滴を受けたサルは、処置の開始の７２時間後に、循環ＣＤ１２３＋Ｔ細胞の枯渇を示し、これは、投薬スケジュールに関係なく、４週間の処置全体を通して持続した。循環Ｔ細胞の減少も発生したが、４日の投薬スケジュールでは、サルにおける後の点滴の前のベースラインに回復し、これはＤＡＲＴ‐Ａ仲介型の固定化と一致していた。ＤＡＲＴ‐Ａの投与は、循環ＰＤ１＋Ｔ細胞を増大させたが、ＴＩＭ‐３＋Ｔ細胞を増大させず；更に、処置後のサル由来のＴ細胞の生体外分析により、標的転換された標的細胞の溶解が変化していないことが示され、これは疲弊が発生していないことを示している。細胞傷害性は、ＤＡＲＴ‐Ａの最初の点滴後、最小限の一過性のサイトカイン放出に制限されたが、後続の投与の後では、用量を増加させ、ＣＤ１２３＋骨髄前駆細胞の減少を伴う赤血球量の最小限の可逆的減少が発生した場合であっても制限されなかった。
ＩＶ．医薬製剤
本発明の安定な水性医薬製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は、水性安定剤と共に使用するための、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）と、任意に薬学的に許容可能な担体とを含む、共有結合ダイアボディを含む。
本明細書中で使用される場合、用語「薬学的に許容可能な担体（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｃｅｐｔａｂｌｅ ｃａｒｒｉｅｒ）」は、動物、より詳細にはヒトの体内への送達に好適なものとして、規制当局に承認されている、又は米国薬局方若しくは別の一般に認識されている薬局方に記載されている、希釈剤、アジュバント（例えばフロイントアジュバント（完全及び不完全）、賦形剤、又はビヒクルを指すことを意図したものである。このような薬学的担体は、無菌液体、例えば水及び油であってよく、油は、石油由来、動物由来、植物由来、又は合成によるもの、例えば落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油等を含む。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合に好ましい担体である。生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセロール水溶液も、特に駐車用溶液のための液体担体として採用できる。好適な薬学的賦形剤としては、デンプン、ブドウ糖、乳糖、ショ糖、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノール等が挙げられる。必要に応じて、上記組成物は少量の湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝剤も含有してよい。これらの組成物は、溶液、懸濁液、乳液、錠剤、丸剤、カプセル、粉体、徐放性製剤等の形態を取ることができる。
本明細書中で使用される場合、用語「約（ａｂｏｕｔ）」は、±１０％の標準偏差を指す。
本明細書中で使用される場合、用語「水性（ａｑｕｅｏｕｓ）」は、水含有溶液を指す。
本明細書中で使用される場合、用語「安定な（ｓｔａｂｌｅ）」は、医薬製剤中又は投薬用溶液中のダイアボディのモノマー純度であって、モノマー純度の喪失が、モノマーダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の約２０％未満であるか、又はより好ましくは約１５％未満の喪失、又はより好ましくは１０％未満の喪失、又はより好ましくは５％未満の喪失、又はより好ましくは４％未満の喪失、又はより好ましくは３％未満の喪失、又はより好ましくは２％未満の喪失、又はより好ましくは１％未満の喪失、又はより好ましくは０．６％未満の喪失、又はより好ましくは０．４％未満の喪失、又はより好ましくは０．２％未満の喪失である、モノマー純度を指し、ここで製剤中のダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のＨＭＷ及び／又はＬＭＷ種はＳＥ‐ＨＰＬＣで測定される。
医薬製剤中のダイアボディのモノマー純度は、２５℃で少なくとも約１か月、２５℃で少なくとも約２か月、約２５℃で少なくとも約３か月、２～８℃で少なくとも約６か月、２～８℃で少なくとも約１２か月、２～８℃で少なくとも約１８か月、２～８℃で少なくとも約２４か月、２～８℃で少なくとも約３６か月、又は２～８℃で少なくとも約４８か月にわたって維持される。好ましくは、医薬製剤中のダイアボディのモノマー純度は、２５℃で少なくとも約３か月にわたって維持される。より好ましくは、医薬製剤中のダイアボディのモノマー純度は、２～８℃で少なくとも約４８か月にわたって維持される。
Ａ．好ましい水性安定剤
本発明は特に：ダイアボディ、特に２つ、３つ、若しくは４つのポリペプチド鎖を有する共有結合ダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のモノマー純度を維持するように作用する；タンパク質の安定性を維持するように作用する；コンテナの表面に対するダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の非特異的吸収を低減若しくは防止するように作用する；及び／又は保管中の医薬製剤中での微生物の増殖を低減若しくは防止するように作用する、水性安定剤溶液に関する。
本明細書中で使用される場合、用語「水性安定剤溶液（ａｑｕｅｏｕｓ ｓｔａｂｉｌｉｚｅｒ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）」は：
（１）製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のダイアボディのモノマー純度を維持するように作用する（即ち、上記水性安定剤の不在下で観察されるものと比較して、ＤＡＲＴ‐Ａの凝集等のダイアボディの多量体化の程度を阻害するように作用する）；又は
（２）タンパク質の安定性を維持するように作用する（即ち、上記水性安定剤の不在下で観察されるものと比較して、ＤＡＲＴ‐Ａ等のダイアボディの低分子量断片、若しくはＤＡＲＴ‐Ａ等のダイアボディの高分子量凝集物といった、サブビジブル粒子の形成を阻害するように作用する）；又は
（３）コンテナ（例えばＩＶバッグ、ＩＶチューブ等）の表面に対する、製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のダイアボディの非特異的吸収を阻害若しくは防止するように作用する；又は
（４）保管中のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）中での微生物の増殖（例えば緑膿菌、黄色ブドウ球菌、大腸菌、カンジダ・アルビカンス、アスペルギルス・ブラジリエンシス等の増殖）を阻害若しくは防止するように作用する、水含有溶液を指す。
本明細書中で使用される場合、水性安定剤溶液は、その存在によって、モノマーダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のモノマー純度の約２０％未満の喪失、又はより好ましくは約１５％未満の喪失、又はより好ましくは１０％未満の喪失、又はより好ましくは５％未満の喪失、又はより好ましくは４％未満の喪失、又はより好ましくは３％未満の喪失、又はより好ましくは２％未満の喪失、又はより好ましくは１％未満の喪失、又はより好ましくは０．６％未満の喪失、又はより好ましくは０．４％未満の喪失、又はより好ましくは０．２％未満の喪失が引き起こされる場合に、ダイアボディのモノマー純度を維持するように作用すると表現され、ここで製剤中のダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のＨＭＷ及び／又はＬＭＷ種はＳＥ‐ＨＰＬＣで測定される。
本明細書中で使用される場合、水性安定剤溶液は、その存在によって、モノマーダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のタンパク質の安定性の約２０％未満の喪失、又はより好ましくは約１５％未満の喪失、又はより好ましくは１０％未満の喪失、又はより好ましくは５％未満の喪失、又はより好ましくは４％未満の喪失、又はより好ましくは３％未満の喪失、又はより好ましくは２％未満の喪失、又はより好ましくは１％未満の喪失、又はより好ましくは０．６％未満の喪失、又はより好ましくは０．４％未満の喪失、又はより好ましくは０．２％未満の喪失が引き起こされる場合に、ダイアボディのタンパク質の安定性を維持するように作用すると表現され、ここで製剤中のダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の高分子量及び／又は低分子量種はＳＥ‐ＨＰＬＣで測定される。
本明細書中で使用される場合、水性安定剤溶液は、その存在によって、モノマーダイアボディのダイアボディ濃度（例えばＤＡＲＴ‐Ａ濃度）の約２０％未満の喪失、又はより好ましくは約１５％未満の喪失、又はより好ましくは１０％未満の喪失、又はより好ましくは５％未満の喪失、又はより好ましくは４％未満の喪失、又はより好ましくは３％未満の喪失、又はより好ましくは２％未満の喪失、又はより好ましくは１％未満の喪失、又はより好ましくは０．６％未満の喪失、又はより好ましくは０．４％未満の喪失、又はより好ましくは０．２％未満の喪失が引き起こされる場合に、コンテナの表面に対する製剤のダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤のＤＡＲＴ‐Ａ）の非特異的吸収を阻害又は防止するように作用すると表現され、ここで製剤中のダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）のＨＭＷ及び／又はＬＭＷ種はＳＥ‐ＨＰＬＣで測定される。
本明細書中で使用される場合、水性安定剤溶液は、その存在により、上記微生物の増殖が、約１０％超、又はより好ましくは約２０％超、又はより好ましくは約３０％超、又はより好ましくは約４０％超、又はより好ましくは約５０％超、又はより好ましくは約７０％超、又はより好ましくは約９０％超、又はより好ましくは約９５％超、又はより好ましくは約９７％超、又はより好ましくは約９８％超だけ防止又は阻害されるか、あるいは更に好ましくは、その存在により、検出可能な微生物の増殖が完全に防止される場合に、保管中のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）中での微生物の増殖を阻害又は防止するように作用すると表現される。
１．安定剤１
安定剤１は、静脈内投与のためのＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液を調製するためにＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わされるよう設計された、ビヒクルである。特定の実施形態では、上記投与は２つの注入ポンプ（即ちシリンジ又は移動式ポンプ）を使用する。
ある好ましい実施形態では、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、安定剤１を含むコンテナに加える。コンテナを混合し、溶液を任意に希釈して、投薬用溶液を調製する。投薬用溶液をコンテナに入れ、被験者への投与のためのデバイスに取り付ける。
特に小児科での投与に好適な一実施形態では、上記水性安定剤、即ち安定剤１は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡのうちの１つ以上を含む。特に小児科での投与に好適な、ある具体的実施形態では、上記水性安定剤、即ち安定剤１は、リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０を含み、ＢＡを含まない。
好ましい実施形態では、上記水性安定剤は：
（Ａ）約５ｍＭ～約３０ｍＭの、より好ましくは約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（Ｂ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭの、より好ましくは約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（Ｃ）約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（Ｄ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（Ｅ）約５．５～約７．０のｐＨ、より好ましくは約６．０のｐＨ
を有する。
更に好ましい実施形態では、上記水性安定剤は：
（Ａ）約５ｍＭ～約３０ｍＭの、より好ましくは約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（Ｂ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭの、より好ましくは約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（Ｃ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（Ｄ）約５．５～約７．０のｐＨ、より好ましくは約６．０のｐＨ
を有する。
更に好ましい実施形態では、上記水性安定剤は更にｒＨＡを含み、より好ましくは、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのｒＨＡ濃度を有する。
よって例えば、上記水性安定剤は：
（Ａ）約５ｍＭ～約３０ｍＭの、より好ましくは約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度、並びに：
（１）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（２）約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（３）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約６．０のｐＨ
を有してよく、また任意に追加で、ｒＨＡを約０．１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むか；又は
（Ｂ）約５ｍＭ～約３０ｍＭの、より好ましくは約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度、並びに：
（１）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（２）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（３）約６．０のｐＨ
を有してよく；又は
（Ｃ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭの、より好ましくは約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（３）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約６．０のｐＨ
を有してよく、また任意に追加で、ｒＨＡを約０．１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むか；又は
（Ｄ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭの、より好ましくは約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（３）約６．０のｐＨ
を有してよく；又は
（Ｅ）約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（３）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約６．０のｐＨ
を有してよく、また任意に追加で、ｒＨＡを約０．１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むか；又は
（Ｆ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（３）約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；及び
（４）約６．０のｐＨ
を有してよく、また任意に追加で、ｒＨＡを約０．１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むか；又は
（Ｇ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；及び
（３）約６．０のｐＨ
を有してよく；又は
（Ｈ）約５．５～約７．０のｐＨ、より好ましくは約６．０のｐＨ、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（３）約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；及び
（４）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度
を有してよく、また任意に追加で、ｒＨＡを約０．１０ｍｇ／ｍＬの濃度で含むか；又は
（Ｉ）約５．５～約７．０のｐＨ、より好ましくは約６．０のｐＨ、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；及び
（３）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度
を有してよく；又は
（Ｊ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．１０ｍｇ／ｍＬのｒＨＡ濃度、並びに：
（１）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１５０ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（３）約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（４）約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（５）約６．０のｐＨ
を有してよい。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有し、更に約０．１０ｍｇ／ｍＬのｒＨＡを含む。
別の好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有する。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、共有結合ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）調製物（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のモノマー純度を、約２５℃で少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、又は少なくとも約５日にわたって維持するために十分なものである。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、約２５℃で少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、又は少なくとも約５日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。最も好ましくは、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、２５℃で少なくとも約５日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤溶液は、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する。
２．安定剤２
安定剤２は、静脈内投与のためにＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と共に使用されるように設計された安定剤である。特定の実施形態では、上記投与は、シングル注入ポンプ構成（即ちシリンジ又は移動式ポンプ）を使用する。
ある好ましい実施形態では、安定剤２は、シングル注入ポンプと共に使用するためのコンテナを予備コーティングするために使用される。予備コーティングされたコンテナにＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えて混合し、投薬用溶液を得る。投薬用溶液を含むコンテナを、被験者への投与のためのデバイスに取り付ける。
第２の実施形態では、上記水性安定剤、即ち安定剤２は：リン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含む。好ましい実施形態では、上記水性安定剤は：
（Ａ）約１５ｍＭ～約２５ｍＭの、より好ましくは約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（Ｂ）約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（Ｃ）約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度；
（Ｄ）約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（Ｅ）約７．７～約８．７のｐＨ、より好ましくは約８．２のｐＨ
を有する。
よって例えば、上記水性安定剤は：
（Ａ）約１５ｍＭ～約２５ｍＭの、より好ましくは約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度、並びに：
（１）約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（２）約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度；
（３）約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約８．２のｐＨ；又は
（Ｂ）約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度、並びに：
（１）約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度；
（３）約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約８．２のｐＨ；又は
（Ｃ）約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度、並びに：
（１）約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（３）約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（４）約８．２のｐＨ；又は
（Ｄ）約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬの、より好ましくは約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度、並びに：
（１）約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（３）約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度；及び
（４）約８．２のｐＨ；又は
（Ｅ）約７．７～約８．７のｐＨ、より好ましくは約８．２のｐＨ、並びに：
（１）約２０ｍＭのリン酸ナトリウム濃度；
（２）約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ濃度；
（３）約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ濃度；及び
（４）約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度
を有してよい。
別の好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、約８．２のｐＨを有する。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、共有結合ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）調製物（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のモノマー純度を、約２５℃で少なくとも約１日、約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、又は少なくとも約７日にわたって維持するために十分なものである。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、２５℃で少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、少なくとも約５日、少なくとも約６日、又は少なくとも約７日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。最も好ましくは、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、２５℃で少なくとも約７日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。
ある好ましい実施形態では、上記水性安定剤溶液は、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する。
３．安定剤３
安定剤３は、静脈内投与のための二重特異性ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液）を調製するために二重特異性ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）と組み合わされるように設計された、ビヒクルである。特定の実施形態では、上記投与は、シングル注入ポンプ構成（即ちシリンジ又は移動式ポンプ）を使用する。
一実施形態では、二重特異性ダイアボディ製剤を、安定剤３を含むコンテナに加える。コンテナを混合し、溶液を任意に希釈して、投薬用溶液を調製する。投薬用溶液をコンテナに入れ、被験者への投与のためのデバイスに取り付ける。
防腐剤不使用・緩衝液不使用の投与に特に好適な別の実施形態では、上記安定剤３は塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含むが、リン酸ナトリウム又はＢＡを含まない。
別の実施形態では、上記水性安定剤は：
（Ａ）約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム濃度；
（Ｂ）約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０濃度；及び
（Ｃ）約５．５～約７．０のｐＨ
を有する。
別の実施形態では、上記水性安定剤は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１０ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、約６．０のｐＨを有する。
ある具体的実施形態では、上記水性安定剤は、共有結合ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）調製物（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のモノマー純度を、約２５℃で少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、又は少なくとも約５日にわたって維持するために十分なものである。
特定の実施形態では、上記水性安定剤は静菌性生理食塩水と共に使用される。
ある具体的実施形態では、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、約２５℃で少なくとも約１日、少なくとも約２日、少なくとも約３日、少なくとも約４日、又は少なくとも約５日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。最も好ましくは、上記水性安定剤は、微生物の増殖を、２５℃で少なくとも約５日にわたって防止又は阻害するために十分なものである。
ある具体的実施形態では、上記水性安定剤溶液は、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３か月の貯蔵寿命を有する。
Ｂ．ダイアボディ製剤
一般に、本発明のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）の成分は、活性剤の量を示したバイアル、アンプル、又はサシェ等の気密性コンテナ中で、例えば液体製剤として、単位剤形に一体に混合された状態で供給される。ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は好ましくは、液体溶液として供給される。このような液体溶液は、投与の準備ができるまで、その元のコンテナ内で２～８℃で保管する必要がある。ダイアボディ製剤が注入によって投与される場合、ダイアボディ製剤を、滅菌生理食塩水を内包するコンテナ、バッグ、又は注入ボトルで分注できる。ダイアボディ製剤が注射によって投与される場合、本明細書中で詳述されているように、投与前に成分を混合できるよう、生理食塩水を提供できる。上記製剤は、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む、予防又は治療有効量の共有結合ダイアボディを含む。ある具体的実施形態では、上記製剤は、予防又は治療有効量のＤＡＲＴ‐Ａを含む。
Ｖ．キット
本発明はまた、ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）、安定剤１、安定剤２、又は安定剤３を内包する１つ以上のコンテナを含む、医薬パック又はキットも提供する。更に、疾患の治療に有用な１つ以上の他の予防剤又は治療剤も、上記医薬パック又はキットに含めることができる。任意に、このような１つ以上のコンテナに、医薬製品又は生物学的製品の製造、使用又は販売を規制する政府機関によって規定された形式の通知を関連付けることができ、上記通知は、ヒトへの投与のための製造、使用又は販売の機関による承認を反映したものである。任意に、このような１つ以上のコンテナに、ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）、安定剤１、安定剤２、又は安定剤３を含む投薬用溶液の調製及び投与に関する１つ以上の指示及び説明書が記載された製品ラベルが関連付けられる。
本発明は、ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）、安定剤１、安定剤２、又は安定剤３を含み、かつ上述の方法で使用できる、キットを提供する。このようなキットでは、ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）、安定剤１、安定剤２、又は安定剤３は好ましくは、アンプル、バイアル、サシェ等の気密性コンテナ内にパッケージされ、上記気密性コンテナには、それに内包される成分の量が示されていることが好ましい。コンテナは、ガラス、樹脂、プラスチック等の、薬学的に許容可能な材料で形成されていてよい。このようなキットのダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）、安定剤１、安定剤２、又は安定剤３は好ましくは、液体溶液として供給される。このような液体溶液は、投与の準備ができるまで、その元のコンテナ内で２～８℃で保管する必要がある。このような水性安定剤溶液は、２～８℃で少なくとも約２年、又は２５℃で少なくとも約３年の貯蔵寿命を有する。上記キットは、１つ以上のコンテナ内に、癌の治療に有用な１つ以上の他の予防及び／若しくは治療剤を更に含むことができ、並びに／又は癌に関連する１つ以上の癌抗原に結合する１つ以上の細胞傷害性抗体を更に含むことができる。特定の実施形態では、上記他の予防又は治療剤は化学療法剤である。他の実施形態では、上記予防又は治療剤は生物学的治療剤又はホルモン療法剤である。
Ａ．安定剤１と共に使用するために特に好適なキット
本発明は、特に安定剤１と共に使用するためのキットを特に企図しており、このキットは：
（Ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬの、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含むＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ（特にＤＡＲＴ‐Ａ等のＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）等の共有結合ダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
（Ｂ）（ｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
（ｉｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
（Ｃ）コンテナＡ及びコンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた投薬用溶液を投与するための、説明書
を含む。
ある好ましい実施形態では、上記コンテナＡは、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約６．０のｐＨを有する。
ある好ましい実施形態では、上記コンテナＢは、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する。
別の好ましい実施形態では、上記コンテナＢは、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する。
更に好ましい実施形態では、上記コンテナＢは、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬの濃度のｒＨＡを更に含み、より好ましくは、約０．１ｍｇ／ｍＬの濃度のｒＨＡを更に含む。
Ｂ．安定剤２と共に使用するために特に好適なキット
本発明は、特に安定剤２と共に使用するためのキットを特に企図しており、このキットは：
（Ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬの、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含むＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ（特にＤＡＲＴ‐Ａ等のＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）等の共有結合ダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、１００～３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
（Ｂ）上記ダイアボディ（例えばＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）を安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１５ｍＭ～約２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
（Ｃ）コンテナＡ及びコンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた投薬用溶液を投与するための、説明書
を含む。
ある好ましい実施形態では、上記コンテナＡは、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約６．０のｐＨを有する。
ある好ましい実施形態では、上記コンテナＢは、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含む。
Ｃ．安定剤３と共に使用するために特に好適なキット
本発明は、特に安定剤３と共に使用するためのキットを特に企図しており、このキットは：
（Ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬの、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含むＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ（特にＤＡＲＴ‐Ａ等のＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディ）等の共有結合ダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
（Ｂ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
（Ｃ）コンテナＡ及びコンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた投薬用溶液を投与するための、説明書
を含む。
ある好ましい実施形態では、上記コンテナＡは、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約６．０のｐＨを有する。
別の好ましい実施形態では、上記コンテナＢは、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する。
ＶＩ．投与方法
本発明のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、本発明のＣＤ１２３×ＣＤ３二重特異性ダイアボディ、即ちＤＡＲＴ‐Ａを含むがこれに限定されない有効量の共有結合ダイアボディを、被験者に投与することによる、疾患、障害又は感染症に関連する１つ以上の症状の治療、予防及び改善のために提供できる。ある好ましい実施形態では、上記医薬製剤は実質的に精製される（即ち上記組成物の効果を制限する、又は望ましくない副作用を生成する物質を実質的に含まない）。ある具体的実施形態では、被験者は動物、好ましくは非霊長類（例えばウシ属、ウマ科、ネコ科、イヌ科、げっ歯類等）又は霊長類（例えばカニクイザル等のサル、ヒト等）といった哺乳類である。ある好ましい実施形態では、被験者はヒトである。
本発明のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）を投与する方法としては、非経口投与（例えば皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内及び皮下）が挙げられるがこれらに限定されない。ある具体的実施形態では、本発明のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は、静脈内投与される。ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は、他の生物学的活性作用剤と共に投与してよい。
注入による投与は好ましくは、注入ポンプを用いて達成される。「注入ポンプ（ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｐｕｍｐ）」は、患者の体内に流体を制御下で、特に所定の速度で長期間にわたって送達する、医療デバイスである。注入ポンプは物理的に動力供給されてよいが、より好ましくは電気によって動力供給される。一部の注入ポンプは「据置型（ｓｔａｔｉｏｎａｒｙ）」注入ポンプであり、患者のベッドサイドで使用するために設計されている。「移動式（ａｍｂｕｌａｔｏｒｙ）」注入ポンプと呼ばれる他の注入ポンプは、携帯式又はウェアラブルなものとして設計される。「シリンジ（ｓｙｒｉｎｇｅ）」ポンプは、送達対象の流体がチャンバのリザーバ（例えばシリンジ）内に保持されている注入ポンプであり、可動ピストンを用いて、上記チャンバの容積、従って流体の送達を制御する。「エラストマ（ｅｌａｓｔｏｍｅｒｉｃ）」注入ポンプでは、流体が伸縮性のバルーンリザーバ内に保持され、バルーンの伸縮自在の壁による圧力によって流体の送達が実施される。「蠕動（ｐｅｒｉｓｔａｌｔｉｃ）」注入ポンプでは、複数のローラのセットが可撓性配管を挟んで、その長さに沿って下がり、流体を押し出す。「マルチチャネル（ｍｕｌｔｉ‐ｃｈａｎｎｅｌ）」注入ポンプでは、流体を複数のリザーバから複数の速度で送達できる。「スマートポンプ（ｓｍａｒｔ ｐｕｍｐ）」は、コンピュータ制御流体送達システムを備えた注入ポンプであり、有害な薬物相互作用のリスクに応じて、又はポンプのパラメータが指定された限界を超えて設定されている場合に、警告を発することができる。注入ポンプの例は公知であり、例えば［著者不明］2002 “General-Purpose Infusion Pumps,” Health Devices 31(10):353-387；及び米国特許第１０，０２９，０５１号、米国特許第１０，０２９，０４７号、米国特許第１０，０２９，０４５号、米国特許第１０，０２２，４９５号、米国特許第１０，０２２，４９４号、米国特許第１０，０１６，５５９号、米国特許第１０，００６，４５４号、米国特許第１０，００４，８４６号、米国特許第９，９９３，６００号、米国特許第９，９８１，０８２号、米国特許第９，９７４，９０１号、米国特許第９，９６８，７２９号、米国特許第９，９３１，４６３号、米国特許第９，９２７，９４３号等において提供されている。
本発明のダイアボディ製剤、特にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、患者が治療レジメン中に移動できるように、１つ以上の移動式ポンプによって促進される注入によって投与することが好ましい。
ある好ましい実施形態では、ダイアボディ製剤、特にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、上述のような被験者又は患者に、約１～７日（例えば約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、若しくは約７日のレジメン）若しくは８日を超える治療レジメンで、又は約１２～１６８時間（例えば約１２時間、約１８時間、約２４時間、約３０時間、約３６時間、約４２時間、約４８時間、約５４時間、約６０時間、約６６時間、約７２時間、約７８時間、約８４時間、約９０時間、約９６時間、約１０２時間、約１０８時間、約１１４時間、約１２０時間、約１２６時間、約１３２時間、約１３８時間、約１４４時間、約１５０時間、約１５６時間、約１６２時間、若しくは約１６８時間のレジメン）、若しくは１６８時間を超える治療レジメンで、投与される。
障害に関連する１つ以上の症状の治療、予防、又は緩和に有効な本発明のダイアボディ製剤の量は、投与されるダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の投薬量に応じて、標準的な臨床的技法で決定できる。投薬用溶液中に使用されることになるダイアボディ製剤、特にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の正確な量は、投与経路、及び状態の重篤度にも左右され、医師の判断及び各患者の状況に応じて決定する必要がある。有効投薬量は、試験管内又は動物モデルの試験システムから導出される用量応答曲線から、外挿によって推定できる。このような投薬量は好ましくは、レシピエント被験者の体重（ｋｇ）に基づいて決定される。
本発明の安定な水性医薬ダイアボディ製剤及び安定剤は、２つ、３つ、若しくは４つのポリペプチド鎖を含む共有結合ダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の、極めて低濃度（例えば５～５００ｎｇ／ｋｇ／日）での投与、及び／又は６～９６時間にわたる、若しくは最大７日にわたる、（例えば持続注入による）持続投与に、特に有用である。このような実施形態を、以下で更に詳細に提供する。
Ａ．ダイアボディ製剤及び安定剤１を含む投薬用溶液の投与
ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）及び安定剤１を含む投薬用溶液は、２つのシリンジポンプ又は２つの移動式ポンプを用いた静脈内投与に特に好適である（図１１）。安定剤１は、小児科患者、体重が少ない患者、及び／又はより高い合計ＩＶ流量（例えば両方のポンプを合わせた流れから約５ｍＬ／時間超）を必要とする患者の治療における使用に特に好適である。ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）及び安定剤１を組み合わせて、ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）を得る。ＢＡを含まない安定剤１は、小児科患者の治療における使用に特に好適である。このような安定剤１の溶液は、ＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液を得るためにＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わせた後２４時間以内の投与に特に好適である。
このような２ポンプ・システムでは、第１のポンプ（ポンプ１）を用いて、ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）を三方弁の１つのポートへと送達する。ポンプ１は好ましくは、１ｍＬ／時間以下の流量で、特に約０．９ｍＬ／時間以下、約０．８ｍＬ／時間以下、約０．７ｍＬ／時間以下、約０．６ｍＬ／時間以下、約０．５ｍＬ／時間、約０．４ｍＬ／時間、約０．３ｍＬ／時間、約０．２ｍＬ／時間、又は約０．１ｍＬ／時間以下の流量で、投薬用溶液を提供する。
第２のポンプ（ポンプ２）は、静脈閉塞を防止するために十分な流量（即ち約５ｍＬ／時間超の流量）（例えば１０ｍＬ／時間）が提供されることを保証するように、生理食塩水（０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰ）を三方弁の第２のポートに（例えば１０ｍＬ／時間の流量で）送達するために採用される。合わさった流れが患者に静脈内投与される。この２ポンプ注入構成が必要となるのは、ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）の注入速度が好ましくは１ｍＬ／時間以下であり、血餅を生じさせずに中心静脈カテーテル（ＣＶＣ）ポートを開放状態に保持するための推奨流量が１０ｍＬ／時間超であるためである。ポンプ２は、少なくとも１０ｍＬ／時間の合計流量を維持するために、生理食塩水を１０ｍＬ／時間で送達する。
治療的投薬量の投与は好ましくは、少なくとも６時間、少なくとも１２時間、少なくとも１８時間、少なくとも２４時間、又は少なくとも３０時間にわたる（例えば、約０．１ｍＬ／時間～約２．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも２４時間にわたる、持続注入による投与）。
具体的実施形態では、少なくとも約３０ｎｇ／ｋｇ／日～少なくとも約５００ｎｇ／ｋｇ／日の投薬量を、患者又は被験者に投与する。このような投薬量の投与は好ましくは、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、少なくとも６０時間、少なくとも７２時間、少なくとも８４時間、少なくとも９６時間、又は少なくとも７日（即ち１６８時間）にわたる。よって、例えばダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）の投与は、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量で少なくとも４８時間、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日、又は約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日等にわたる持続注入によるものであってよい。
高用量濃度を生成するために、安定剤１のアリコートをダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のアリコートと混合することにより、ダイアボディ濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬの初期希釈済みダイアボディ製剤（例えば希釈済みＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）を得る。次に、この初期希釈済みダイアボディ製剤を、追加の安定剤１で更に１：２０に希釈し（例えば初期希釈済みダイアボディ製剤５ｍＬを、９５ｍＬの追加の安定剤１と混合）、穏やかに混合して、ダイアボディ濃度が約５０００ｎｇ／ｍＬの高用量ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）を得る。
低用量濃度を生成するために、安定剤１のアリコートをダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）のアリコートと混合することにより、ダイアボディ濃度が約０．１ｍｇ／ｍＬの初期希釈済みダイアボディ製剤（例えば希釈済みＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）を得る。次に、この初期希釈済みダイアボディ製剤を、追加の安定剤１で更に１：１００に希釈し（例えば初期希釈済みダイアボディ製剤１ｍＬを、９９ｍＬの追加の安定剤１と混合）、穏やかに混合して、ダイアボディ濃度が約１０００ｎｇ／ｍＬの二次希釈済みダイアボディ製剤を得る。そして、この二次希釈済みダイアボディ製剤を、追加の安定剤１で更に１：１０に希釈し（例えば二次希釈済みダイアボディ製剤１０ｍＬを、９０ｍＬの追加の安定剤１と混合）、穏やかに混合して、ダイアボディ濃度が約１００ｎｇ／ｍＬ以上の低用量ダイアボディ投薬用溶液（例えば低用量ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）を得る。
Ｂ．ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤２を含むＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の投与
ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）及び安定剤２を含む投薬用溶液は、単一のシリンジポンプ又は移動式シングルポンプを用いた静脈内投与に特に好適である。図１４は、上記投薬用溶液の投与に使用できる移動式ポンプの一例を示す。安定剤２を用いて投薬用溶液を形成するために、４０ｍＬの安定剤２を２５０ｍＬ生理食塩水バッグ（公称容積２７０ｍＬ）に加えることにより、総体積３１０ｍＬを形成する。次に所望量のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）を生理食塩水バッグに加えて最終的な投薬用溶液を提供し、その後、移動式シングルポンプを用いてこれを患者に投与できる（図１５）。
好ましくは、少なくとも約３０ｎｇ／ｋｇ／日～少なくとも約５００ｎｇ／ｋｇ／日の投薬量を患者又は被験者に投与する。このような投薬量の投与は、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、少なくとも６０時間、少なくとも７２時間、少なくとも８４時間、少なくとも９６時間、又は少なくとも７日（即ち１６８時間）にわたることが好ましい。よって例えば、ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）の投与は、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量で少なくとも４８時間、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日、又は約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日等にわたる持続注入によるものであってよい。
従来、６０ｍＬ／日の最小流量で９６時間を超える持続注入が特に望ましい場合、静脈閉塞を防止するために必要な最小流量は約２．５ｍＬ／時間である。しかしながら、静脈閉塞を引き起こさない持続投与のために、０．３ｍＬ／時間～３．０ｍＬ／時間の流量が有効であることが分かった。より低い流量が望ましい場合、約０．３ｍＬ／時間～約３ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間又は少なくとも７日にわたる持続注入が好ましい。比較的低い流量を使用できる場合、約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間にわたる持続注入が特に望ましい。あるいは、約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日（１６８時間）にわたる持続注入が特に望ましい。
Ｃ．ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤３を含むＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の投与
二重特異性ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）及び安定剤３を含む投薬用溶液は、単一のシリンジポンプ又は移動式シングルポンプを用いた静脈内投与に特に好適である。安定剤３は、小児科患者の治療における、又は防腐剤不使用・緩衝液不使用の安定剤が好ましい他の状態における使用に特に好適である。図１４は、上記投薬用溶液の投与に使用できる移動式ポンプの一例を示す。投薬用溶液を形成するために、安定剤３を、生理食塩水を内包するＩＶバッグ又は静菌性生理食塩水バッグ等のコンテナ（公称容積１００ｍＬ）に加えてよい。静菌性生理食塩水は、二重特異性ダイアボディ製剤を安定剤３と共に投与するために特に好適である。例えば、１８ｍＬの安定剤３を、７０ｍＬの静菌性生理食塩水を内包するＩＶバッグに加えることにより、総体積８４ｍＬを形成する。次に所望量のダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）を生理食塩水バッグに加えて最終的な投薬用溶液を提供し、その後、移動式シングルポンプを用いてこれを患者に投与できる（図１５）。
特定の実施形態では、少なくとも約３０ｎｇ／ｋｇ／日～少なくとも約５００ｎｇ／ｋｇ／日の投薬量を患者又は被験者に投与する。このような投薬量の投与は、少なくとも２４時間、少なくとも３６時間、少なくとも４８時間、少なくとも６０時間、少なくとも７２時間、少なくとも８４時間、少なくとも９６時間、又は少なくとも７日（即ち１６８時間）にわたる。よって例えば、ダイアボディ投薬用溶液（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液）の投与は、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量で少なくとも４８時間、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日、又は約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日等にわたる持続注入によるものであってよい。より低い流量が望ましい場合、約０．３ｍＬ／時間～約３ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間又は少なくとも７日にわたる持続注入を用いてよい。比較的低い流量を使用できる場合、約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも９６時間にわたる持続注入、又は約０．５ｍＬ／時間の流量で少なくとも７日（１６８時間）にわたる持続注入を用いてよい。
ＶＩＩ．本発明の組成物の使用
本発明のダイアボディ製剤及び安定剤は、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合ダイアボディの、それを必要とする被験者への投与に有用である。特にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、ＣＤ１２３の発現に関連する又はＣＤ１２３の発現を特徴とする、いずれの疾患又は状態の治療に使用できる。特にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、血液悪性腫瘍の治療に使用できる。よって、限定するものではないが、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は：ＡＭＬ；ＣＭＬの急性転化及びＣＭＬに関連するＡｂｅｌｓｏｎ癌遺伝子（Ｂｃｒ‐ＡＢＬ転座）を含むＣＭＬ；ＭＤＳ；Ｂ‐ＡＬＬ；リヒター症候群又はＣＬＬにおけるリヒター症候群の転化を含むＣＬＬ；ＨＣＬ；ＢＰＤＣＮ；ＮＨＬ；ＭＣＬ；ＳＬＬ；ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症；並びにバーキットリンパ腫の、診断又は治療に使用できる。ＤＡＲＴ‐Ａは更に、上述の状態の治療のための薬品の製造に使用できる。
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、ＡＭＬ、ＢＰＤＣＮ、ＭＤＳ、及びＴ‐ＡＬＬの治療における使用に特に好適である。
ＶＩＩＩ．本発明の実施形態
本発明は、以下の実施形態Ｅ１～Ｅ１２９を対象とする：
Ｅ１ ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びポリソルベート８０（ＰＳ８０）を含む、安定な水性医薬製剤。
Ｅ２ リン酸ナトリウムの濃度は約５ｍＭ～約３０ｍＭである、Ｅ１に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ３ リン酸ナトリウムの上記濃度は約１０ｍＭである、Ｅ２に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ４ ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、Ｅ１～Ｅ３のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ５ ＰＳ８０の上記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、Ｅ４に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ６ 塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、Ｅ１～Ｅ５のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ７ 塩化ナトリウムの上記濃度は約１５０ｍＭである、Ｅ６に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ８ 上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、Ｅ１～Ｅ７のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ９ 上記ｐＨは約６．０である、Ｅ８に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１０ 上記製剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、また上記製剤は約６．０のｐＨを有する、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１１ 上記ダイアボディの濃度は約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１２ 上記ダイアボディの上記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、Ｅ１～Ｅ１１のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１３ 上記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、Ｅ１～Ｅ１２のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１４ 上記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、Ｅ１～Ｅ１３のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１５ 上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、Ｅ１４に記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１６ 上記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、また上記製剤のｐＨは約６．０である、Ｅ１～Ｅ１５のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１７ 上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する、Ｅ１～Ｅ１６のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１８ 上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を２～８℃で約４８か月にわたって維持する、Ｅ１～Ｅ１６のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤。
Ｅ１９ Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤を含む、コンテナ。
Ｅ２０ 上記コンテナはガラスバイアルである、Ｅ１９に記載のコンテナ。
Ｅ２１ Ｅ１～Ｅ１８のいずれか１つに記載の安定な水性医薬製剤、又はＥ１９若しくはＥ２０に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
Ｅ２２ リン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ベンジルアルコール（ＢＡ）、及びメチルパラベン（ＭＰ）を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
Ｅ２３ リン酸ナトリウムの濃度は約１５ｍＭ～約２５ｍＭである、Ｅ２２に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２４ リン酸ナトリウムの上記濃度は約２０ｍＭである、Ｅ２３に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２５ ＢＡの濃度は約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２１～２４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２６ ＢＡの濃度は約１３．２ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２５に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２７ ＭＰの濃度は約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２２～２６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２８ ＭＰの上記濃度は約４．２５ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２７に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ２９ ＰＳ８０の濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２２～２８のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３０ ＰＳ８０の上記濃度は約０．２５ｍｇ／ｍＬである、Ｅ２９に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３１ 上記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、Ｅ２２～３０のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３２ 上記ｐＨは約８．２である、Ｅ３１に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３３ 上記安定剤溶液は、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨは約８．２である、Ｅ２２～３２のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３４ 上記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、Ｅ２２～Ｅ３３のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３５ 上記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、Ｅ２２～Ｅ３４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３６ 上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、Ｅ３５に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３７ 上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約５～７日にわたって維持する、Ｅ２２～Ｅ３６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３８ 上記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約５～７日にわたって防止する、Ｅ２２～Ｅ３７のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ３９ Ｅ２２～Ｅ３８のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
Ｅ４０ 上記コンテナはガラスバイアルである、Ｅ３９に記載のコンテナ。
Ｅ４１ Ｅ２３～Ｅ３８のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液、又はＥ３９若しくはＥ４０に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
Ｅ４２ 塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
Ｅ４３ 塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、Ｅ４２に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４４ 塩化ナトリウムの上記濃度は約１５０ｍＭである、Ｅ４３に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４５ ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、Ｅ４２～Ｅ４４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４６ ＰＳ８０の上記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、Ｅ４５に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４７ 上記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、Ｅ４２～Ｅ４６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４８ 上記ｐＨは６．０である、Ｅ４７に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ４９ 上記溶液は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨは約６．０である、Ｅ４２～Ｅ４８のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５０ 上記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、Ｅ４２～Ｅ４９のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５１ 上記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、Ｅ４２～Ｅ５０のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５２ 上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、Ｅ５１に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５３ 上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、Ｅ４２～Ｅ５２のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５４ 上記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって防止する、Ｅ４２～Ｅ５３のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ５５ Ｅ４２～Ｅ５４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
Ｅ５６ 上記コンテナはガラスバイアルである、Ｅ５５に記載のコンテナ。
Ｅ５７ Ｅ４２～Ｅ５４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液、又はＥ５５若しくはＥ５６に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
Ｅ５８ リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡのうちの１つ以上を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
Ｅ５９ リン酸ナトリウムの濃度は約５ｍＭ～約３０ｍＭである、Ｅ５８に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６０ リン酸ナトリウムの上記濃度は約１０ｍＭである、Ｅ５９に関する水性安定剤溶液。
Ｅ６１ 塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、Ｅ５８又はＥ５９に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６２ 塩化ナトリウムの上記濃度は約１５０ｍＭである、Ｅ６１に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６３ ＢＡの濃度は約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬである、Ｅ５８～Ｅ６２のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６４ ＢＡの上記濃度は約９．０ｍｇ／ｍＬである、Ｅ６３に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６５ ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、Ｅ５８～Ｅ６４のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６６ ＰＳ８０の上記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、Ｅ６５に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６７ 組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）を更に含む、Ｅ５８～Ｅ６６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６８ ｒＨＡの濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬである、Ｅ６７に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ６９ ｒＨＡの上記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、Ｅ６８に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７０ 上記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、Ｅ５８～Ｅ６９のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７１ 上記ｐＨは６．０である、Ｅ７０に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７２ 上記溶液は：ａ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡを含み、上記溶液のｐＨが約６．０である；又はｂ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液のｐＨが約６．０である、Ｅ５８～Ｅ７１のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７３ 上記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、Ｅ５８～Ｅ７２のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７４ 上記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、Ｅ５８～Ｅ７３のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７５ 上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
（ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
（ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、Ｅ７４に記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７６ 上記溶液は、上記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、Ｅ５８～Ｅ７６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７７ 上記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって防止する、Ｅ５８～Ｅ７６のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液。
Ｅ７８ Ｅ５８～Ｅ７７のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
Ｅ７９ 上記コンテナはガラスバイアルである、Ｅ７８に記載のコンテナ。
Ｅ８０ Ｅ５８～Ｅ７７のいずれか１つに記載の水性安定剤溶液、又はＥ７８若しくはＥ７９に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
Ｅ８１ キットであって：
（ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
（ｂ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１５ｍＭ～約２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに
（ｃ）上記コンテナＡ及び上記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
を含む、キット。
Ｅ８２ キットであって：
（ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、上記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
（ｂ）（ｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
（ｉｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
（ｉｉｉ）上記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、上記溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
（ｃ）上記コンテナＡ及び上記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に上記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
を含む、キット。
Ｅ８３ 上記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、Ｅ８１又はＥ８２に記載のキット。
Ｅ８４ 上記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、Ｅ８１～Ｅ８３のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ８５ 上記ダイアボディは：
ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
を含み、
上記第１のポリペプチド鎖及び上記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、Ｅ８４に記載のキット。
Ｅ８６ 上記コンテナＡ中の上記安定な水性医薬製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの上記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記製剤は約６．０のｐＨを有する、Ｅ８１～Ｅ８５のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ８７ 上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液は、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約８．２のｐＨを有する、Ｅ８１及びＥ８３～Ｅ８６のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ８８ 上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液は：
ｉ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する；又は
ｉｉ）上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する；又は
（ｉｉｉ）上記コンテナＢ中の上記水性安定剤溶液は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約６．０のｐＨを有する、Ｅ８２～Ｅ８６のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ８９ 上記水性安定剤溶液は更に、ｒＨＡを約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、Ｅ８２～Ｅ８６のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ９０ ｒＨＡの上記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、Ｅ８９に記載のキット。
Ｅ９１ 上記被験者はヒト患者である、Ｅ８１～Ｅ９０のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ９２ 上記コンテナＡ及び上記コンテナＢはガラスバイアルである、Ｅ８１～Ｅ９１のいずれか１つに記載のキット。
Ｅ９３ Ｅ８１～Ｅ９２のいずれか１つに記載のキット、並びに任意に上記キットの保管及び／又は使用のための説明書を含む、密封パッケージ。
Ｅ９４ ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与する方法であって、上記方法は、Ｅ８１、Ｅ８３～Ｅ８５、Ｅ８７、及びＥ９１～Ｅ９３のいずれか１つに記載のキットを使用するステップを含み、ここで上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液はリン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含み、且つ約７．７～約８．７のｐＨを有し；
上記方法では：
（ａ）上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液を、コンテナＣに入れて混合し；
（ｂ）上記コンテナＡの上記安定な水性医薬製剤を、上記コンテナＣに入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
（ｃ）上記投薬用溶液を内包する上記コンテナＣを、上記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける、方法。
Ｅ９５ 上記コンテナＣは静脈内注入用の生理食塩水を含む、Ｅ９４に記載の方法。
Ｅ９６ ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与する方法であって、上記方法は、Ｅ８２～８６及びＥ８８～Ｅ９３のいずれか１つに記載のキットを使用するステップを含み、ここで上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液はリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡのうちの１つ以上、並びに任意にｒＨＡを含み、且つ約５．５～約７．０のｐＨを有し；
上記方法では：
（ａ）上記コンテナＡの上記安定な水性医薬製剤を、上記コンテナＢの上記水性安定剤溶液中に入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
（ｂ）任意に上記投薬用溶液を希釈し；
（ｃ）上記投薬用溶液をコンテナＣに入れ；
（ｄ）最終的な上記投薬用溶液を内包する上記コンテナＣを、上記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける、方法。
Ｅ９７ 上記コンテナＣは、静脈内注入用の生理食塩水又は静菌性生理食塩水を含む、Ｅ９６に記載の方法。
Ｅ９８ 上記投与は注入ポンプによるものである、Ｅ９４～Ｅ９７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ９９ 上記投与は移動式である、Ｅ９４～Ｅ９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１００ 上記デバイスは移動式シングルポンプである、Ｅ９４～Ｅ９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０１ 上記デバイスは移動式デュアルポンプである、Ｅ９４～Ｅ９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０２ 上記デバイスはシリンジポンプである、Ｅ９４～Ｅ９８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０３ 上記投与は少なくとも約２４時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０４ 上記投与は少なくとも約４８時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０５ 上記投与は少なくとも約９６時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０６ 上記投与は少なくとも約７日にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０７ 上記投与は約０．１０ｍＬ／時間～約２．５ｍＬ／時間の流量で行われる、Ｅ９４～Ｅ１０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０８ 上記投与は約０．５ｍＬ／時間～約１０．０ｍＬ／時間の流量で行われる、Ｅ９４～Ｅ１０６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１０９ 上記投与は、約０．１ｍＬ／時間～約２．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも２４時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１０ 上記投与は、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量での少なくとも４８時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１１ 上記投与は、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１２ 上記投与は、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１３ 上記投与は、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２及びＥ１１２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１４ 上記投与は、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも７日にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１５ 上記投与は、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも７日にわたる持続注入によるものである、Ｅ９４～Ｅ１０２及びＥ１１４のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１６ 上記流量は上記被験者の静脈閉塞を防止する、Ｅ９４～Ｅ１１５のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１７ 上記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは、３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日からなる群から選択される治療投薬量で上記被験者に投与される、Ｅ９４～Ｅ１１６のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１８ 上記投薬用溶液は４０ｍＬの上記水性安定剤溶液を含む、Ｅ９４、Ｅ９５、Ｅ９７～Ｅ９９、Ｅ１０２～Ｅ１１７のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１１９ 上記投薬用溶液は、約０．０３ｍｇ／ｍＬ～約０．０４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、約１．７ｍｇ／ｍＬ～約２．１ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び約０．５５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬのＭＰを含む、Ｅ９４、Ｅ９５、Ｅ９７～Ｅ９９、Ｅ１０２～Ｅ１１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２０ 上記投薬用溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、上記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、Ｅ９６～Ｅ１１８のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２１ 上記患者はヒト被験者である、Ｅ９４～Ｅ１２０のいずれか１つに記載の方法。
Ｅ１２２ Ｅ９４～Ｅ１２１のいずれか１つに記載の投与方法に従って、又はＥ８１～Ｅ９２のいずれか１つに記載のキットを用いて、ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与するステップを含む、血液悪性腫瘍を治療する方法。
Ｅ１２３ 血液悪性腫瘍の治療のための、Ｅ８１～Ｅ９２のいずれか１つに記載のキットの使用。
Ｅ１２４ 上記血液悪性腫瘍が：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；ＣＭＬの急性転化及びＣＭＬに関連するＡｂｅｌｓｏｎ癌遺伝子（Ｂｃｒ‐ＡＢＬ転座）を含む慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）；急性Ｂリンパ芽球性白血病（Ｂ‐ＡＬＬ）；急性Ｔリンパ芽球性白血病（Ｔ‐ＡＬＬ）；リヒター症候群又はＣＬＬにおけるリヒター症候群の転化を含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；有毛細胞白血病（ＨＣＬ）；芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）；マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症；並びにバーキットリンパ腫からなる群から選択される、Ｅ１２２に記載の方法、又はＥ１２３に記載の使用。
Ｅ１２５ 上記血液悪性腫瘍はＡＭＬである、Ｅ１２４に記載の方法又は使用。
Ｅ１２６ 上記血液悪性腫瘍はＢＰＤＣＮである、Ｅ１２４に記載の方法又は使用。
Ｅ１２７ 上記血液悪性腫瘍はＭＤＳである、Ｅ１２４に記載の方法又は使用。
Ｅ１２８ 上記血液悪性腫瘍はＴ‐ＡＬＬである、Ｅ１２４に記載の方法又は使用。
Ｅ１２９ 上記被験者はヒト被験者である、Ｅ１２２～Ｅ１２８のいずれか１つに記載の方法又は使用。
ここまで本発明を概説してきたが、本発明は、以下の実施例を参照することによって、より容易に理解される。これらの実施例は例として提供されており、特段の記載がない限り、本発明を限定することを意図したものではない。
実施例１
ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディを含有する安定な水性医薬製剤の開発
上述のように、ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディであるＤＡＲＴ‐Ａは、ＣＤ１２３及びＣＤ３に同時に結合できる二重特異性１価ダイアボディである。ＤＡＲＴ‐Ａは、配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖と、配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖とからなり、図１に示されている一般構造を有する。ＤＡＲＴ‐Ａを含む安定な水性医薬製剤、即ちＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、バイアル中の液体製剤として開発した。
１．１．ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の開発‐研究の設計及び結果
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の開発中に使用される分析試験方法を、以下の表５に列挙する。
Figure 2022536646000006
毒物学的な動物研究及び臨床使用のためのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を提供するために、３つの研究を実施した。これらの研究により、製剤の以下の属性を評価した：
（１）ＤＡＲＴ‐Ａの安定性及び凝集に対する界面活性剤のレベルの影響
（２）ＤＡＲＴ‐Ａの凝集及び粒子の形成に対する賦形剤及びタンパク質の濃度の影響
（３）質量分析による分析技法による、ＤＡＲＴ‐Ａペプチドマッピング。
１．２．ＤＡＲＴ‐Ａの安定性及び分解に対する界面活性剤のレベルの影響
ＤＡＲＴ‐Ａを０．１ｍｇ／ｍＬの濃度で製剤するために、ＤＡＲＴ‐Ａを製剤緩衝液（１０ｍＭのリン酸ナトリウム及び１５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．１）中で希釈した。初期サブビジブル粒子形成及び溶液濁度は、許容可能なものであることが観察された。しかしながら、出荷の１か月後、元のリリース時の仕様を超える、上昇した濁度及び上昇したサブビジブル粒子レベルが観察された。粒子の形成及び外見の変化の原因を特定するために、ＰＳ８０（０．１ｍｇ／ｍＬ）を含むものと含まないものの２つの開発ロットに対して、強制撹拌研究を実施した。強制撹拌研究の間、ＤＡＲＴ‐Ａ試料は２～８℃に保持され、６００ｒｐｍで２４時間にわたって撹拌された。
図５Ａ～５Ｂは、２４時間の撹拌の後、ＰＳ８０含有製剤が示すＤＡＲＴ‐Ａの濁度が低いことを示している。ＰＳ８０が存在しない場合、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の濁度は３～５倍上昇する。この傾向はサブビジブル粒子数データにおいても観察され、このデータでは、ＰＳ８０非含有ダイアボディ製剤は、ＰＳ８０を含有していた溶液に比べて、≧１０μｍの粒子の個数が５～６倍多い。
図６に示すように、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）を用いて、ＰＳ８０含有製剤の熱安定性を評価した。図６は、ＰＳ８０の存在下及び不在下における同様のＤＳＣプロファイルを示している。ＰＳ８０の存在は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の熱安定性に影響しない。
ＰＳ８０の存在下でのＤＡＲＴ‐Ａの順応性を更に特性決定するために、加速ストレス研究を実施して、ＤＡＲＴ‐Ａの凝集が温度依存性であるかどうか、及び凝集がＤＡＲＴ‐Ａの効力に影響するかどうかを判断した。この研究では、ＰＳ８０を含むＤＡＲＴ‐Ａ、及びＰＳ８０を含まないＤＡＲＴ‐Ａを、２５±２℃及び４０±２℃でインキュベートして、５±３℃で保管されている試料と比較した。加速ストレス研究はまた、ＤＡＲＴ‐Ａのタンパク質の安定性に対する残留過酸化物（１．０μｅｑ／Ｌ）の影響も評価した。これは、ポリソルベートが自動酸化して、タンパク質の酸化による分解を引き起こす可能性がある過酸化物形成をもたらすためである。研究の結果を以下の表６～８に提示する。
Figure 2022536646000007
表６は、ＰＳ８０を加えることによって、５±３℃、２５±２℃、及び４０±２℃で６週間の保管の後のＨＭＷの形成が減少することを示している。４０℃で６週間のインキュベーションの後、３つの試料は全て、モノマーＤＡＲＴ‐Ａタンパク質メインピークのパーセンテージのわずかな低下を示した。これらの低下は、ＨＭＷ種及びＬＭＷ種の両方のわずかな増大に関連する。
Figure 2022536646000008
表７は、ＰＢＳ製剤又はＰＢＳ＋ＰＳ８０製剤について、２５±２℃、又は４０±２℃でのインキュベーション後に溶液の濃度が変化しないことを示している。しかしながら、過酸化水素を含有する製剤は、４０±２℃において濁度の上昇を示した。３つの製剤全てに関して、４０±２℃で６週間のインキュベーションにより、タンパク質濃度の同様の低下が生成された。
Figure 2022536646000009
表８は、５±３℃及び２５±２℃の両方でのインキュベーション時に、３つの製剤全てにわたってチャージバリアントの有意な変化がないことを示している。４０±２℃でのインキュベーションにより、酸性バリアントの有意な増加が生成されたが、この増加は３つの製剤全てにわたって一貫していた。
この加速ストレス安定性研究は、典型的な保管温度又は加速ストレス温度に曝露された場合に、ＰＳ８０がタンパク質の安定性に影響を及ぼすことを示唆している。これは、ＰＳ８０の存在によって、典型的な出荷及び取り扱い中に発生し得る製剤中のＤＡＲＴ‐Ａの濁度の上昇及びサブビジブル粒子の増加が制限されることを示す、強制撹拌研究の結果において確認された。これらの結果に基づき、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０をＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、及び１５０ｍＭの塩化ナトリウム、ｐＨ６．０）に加えた。
１．３．ＤＡＲＴ‐Ａの構造及び機能に対する長期保管の影響
第２の研究では、濃度０．１ｍｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ製剤（１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０緩衝液）を、５±３℃及び２５±２℃での長期保管中に評価することにより、製剤がタンパク質構造及び機能をどのように維持するかを判断した。ＤＡＲＴ‐Ａ製剤の組成を以下の表９に示す。
Figure 2022536646000010
ＤＡＲＴ‐Ａ製剤を、提案された最終的な臨床症状に従ってバイアルに充填し（５ｍＬのＩ型ボロシリケートガラスバイアル中に５ｍＬの溶液体積）、以下の表１０の安定性マトリクスに従って、倒立状態で保管した。
Figure 2022536646000011
１５０ｍＭのＮａＣｌ＋ＰＳ８０製剤中の０．１ｍｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａの、安定性に関する結果を、以下の表１１及び表１２に示す。
Figure 2022536646000012
上記の結果は、推奨温度である５±３℃での保管が、４８か月後においてＤＡＲＴ‐Ａの構造及び機能に影響しないことを示している。サブビジブル粒子、ＳＥ‐ＨＰＬＣ、及び還元／非還元ＣＥ‐ＳＤＳの結果において観察されるように、製剤は、ＤＡＲＴ‐Ａの凝集及び分解を制限する。ＣＤ３及びＣＤ１２３の結合に関する結果によって確認されるように、ＤＡＲＴ‐Ａの効力は大きく変化しない。
Figure 2022536646000013
上記の結果は、２５±２℃の加速温度で６か月にわたるインキュベーション後に、ＤＡＲＴ‐Ａ製剤がサブビジブル粒子数に関して、依然として米国薬局方（ＵＳＰ）の仕様を満たすことを示している。更に、ＳＥ‐ＨＰＬＣ凝集及びＣＥ‐ＳＤＳ分解のプロファイルは、５±３℃で保管されたＤＡＲＴ‐Ａと遜色ない。
以上の安定性に関する複合的な結果に基づいて、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭのＮａＣｌ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０緩衝液が、推奨保管温度条件（５±３℃）下で４８か月、及び加速温度条件（２５±２℃）下で３か月にわたって、許容可能なタンパク質の安定性を提供することが確認された。従って、ｐＨ６．０の１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０緩衝液を、臨床用の市販のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤のために選択した。
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、ｐＨ６．０の約５ｍＭ～約１５ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約２００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０で構成された緩衝液中のＤＡＲＴ‐Ａ濃度が約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、透明からわずかに乳白色、かつ無色から淡黄色又は淡褐色の、無菌の安定な水性医薬溶液である。
１．４．ペプチドマッピングによるＤＡＲＴ‐Ａの安定性の分析
液体クロマトグラフィとエレクトロスプレーイオン化質量分析との組み合わせ（ＬＣ‐ＥＳＩＭＳ）を用いて、参照標準と、２～８℃で２４か月保管されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤とを比較することにより、製剤されたＤＡＲＴ‐Ａ（即ちＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）の安定性を更に評価した。試料は、インタクト分子及びそのトリプシンペプチドとして分析された。個々の試験結果を以下にまとめる。
１．５．インタクトＤＡＲＴ‐Ａ
インタクトＤＡＲＴ‐Ａの質量（単位：ダルトン（Ｄａ））を、そのＥＳＩ質量スペクトルにおいて多価イオンをデコンボリューションすることによって得た。参照標準及び時間を置いた製剤のスペクトルの主要な成分はそれぞれ、５８，８９７Ｄａ及び５８，８９８Ｄａの測定された質量を示した。これらの結果は、ＤＡＲＴ‐Ａのアミノ酸配列及びピログルタミンへのＮ末端のグルタミンの変換から導出された理論上の質量である５８，８９８Ｄａとほとんど一致していた。各試料からのスペクトル中で観察された２番目の成分は、主要な成分より低い１２８Ｄａの質量を有していたが、これはＣ末端のリシンのクリッピングと一致している。ＥＳＩ質量スペクトルの微量成分は、付加物イオンの形成及び他の修飾の結果である可能性がある。ＤＡＲＴ‐Ａに対するこれらの修飾について、トリプシンペプチドマッピングによって更に研究した。
１．６．トリプシンペプチドマッピング
この研究では、ＤＡＲＴ‐Ａをトリプシンペプチド中へと消化して、ＤＡＲＴ‐Ａに対する潜在的な修飾を調査した。ペプチド、及びそのアミノ酸レベルでの修飾を、前駆イオン及び断片イオンの正確な質量測定によって特定した。その結果を以下の図７に示す。図７の結果は、Ｎ末端のｐｙｒｏＥの形成及びＣ末端リシンのクリッピングに加えて、ペプチドマッピングによって明らかになった脱アミド化及び酸化といった他の修飾のレベルが、両方の試料についてわずかであることを示している。時間を置いたＤＡＲＴ‐Ａは、タイプ、及び対応する修飾の程度に関して、参照標準と一致している。
１．７．ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の長期安定性
２～８℃で４８か月にわたって保管したＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の安定性を、ＥＬＩＳＡ結合、ＳＥ‐ＨＰＬＣ、及びＣＥ‐ＳＤＳで評価することによって、モノマーのいずれの還元、並びに／又はＤＡＲＴ‐Ａの機能に影響を及ぼし得るＨＭＷ凝集物及び／若しくはＬＭＷ分解産物の形成を特定した。これらの研究の結果は図８Ａ～８Ｄにプロットされており、これは、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が、推奨保管条件下での長期保管において、許容可能な物理的安定性を示すことを示している。現在までに実施されている研究、質量分析ベースの特性決定、及びＧＭＰロットの安定性に基づいて、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、臨床研究及び市販化に推奨されるものであった。
実施例２
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の投与のための水性安定剤溶液の開発
上述のように、ＤＡＲＴ‐Ａの安定化のための好ましい水性安定剤溶液を、バイアル中の液体製剤として開発した。しかしながら、ＤＡＲＴ‐Ａは超低濃度で活性を有するため、投与前にＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を希釈することになる。この目的のために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を専用の安定剤溶液で希釈することにより、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を２４時間持続静脈内（ＩＶ）注入として投与する際の、１用量の調製及び投与中の、シリンジ又は移動式カセット及びＩＶチューブへのＤＡＲＴ‐Ａの非特異的結合を阻害する。
ＤＡＲＴ‐Ａを安定化するための第１の水性安定剤溶液、即ち安定剤１を調製した。これは、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡで構成され、ｐＨは６．０である。安定剤１は、２つのシリンジポンプ又は２つの移動式ポンプを用いた静脈内投与のために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わされるよう、設計される。
シングルポンプ投与を可能にするための、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤及び安定剤１に対する修正を評価した。以下で詳述されるように、提案されているＫＶＯ（ｋｅｅｐ ｖｅｉｎ ｏｐｅｎ：静脈を閉塞していない状態に維持する）流量において安全であると考えられ、（ｂ）１用量で調製された溶液で微生物の増殖を阻害し、また（ｃ）ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の安定性に影響を及ぼさない、防腐剤の有効濃度を決定するための、代替防腐剤スクリーニング研究に基づいて、新たな水性安定剤溶液、即ち安定剤２を開発した。
２．１．安定剤１溶液及び安定剤２溶液の開発‐研究の設計及び結果
安定剤１及び安定剤２の開発中に使用される分析試験方法を、以下の表１３に列挙する。
Figure 2022536646000014
上記安定剤のための製剤の開発は、図９～１０に記載の複数のステージで実施された。
安定剤１は、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡで構成され、ｐＨは６．０であり、２つのシリンジポンプ又は２つの移動式ポンプを用いた静脈内投与のために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わされるよう、設計される。ＢＡは、持続投与のための保管中に微生物の増殖を阻害する役割を果たす。しかしながらＢＡは、タンパク質の凝集及び粒子の形成を増加させる場合がある。潜在的な粒子の形成、及び投与流路表面へのタンパク質の吸着を阻害するために、ＰＳ８０及びｒＨＡを安定剤溶液に加えた。２ポンプ投与構成から移動式シングルポンプ構成に移行するために、潜在的な遮断剤及び代替防腐剤を評価する追加の製剤開発研究が必要となった。これらの研究について、以下で更に詳述する。
２．２．遮断剤の選択
第１相の安定剤１の溶液は、投与用部品の表面への非特異的なＤＡＲＴ‐Ａタンパク質の結合を制限するために、０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡを含有する。ｒＨＡは、タンパク質を加える前に反応性部位に結合することによって作用する、一般的な遮断剤である。製品の製造コスト（ＣＯＧ）を下げるために、（既に溶液中に存在する）界面活性剤ＰＳ８０を、代用の遮断剤として評価した。図９は、粒子形成及び吸着の阻害における、ＰＳ８０単独の有効性を評価するために実施された研究の概要である。
この研究中に、界面活性剤の遮断活性を評価するために、４つのレベルのＰＳ８０を試験した。簡潔に述べると、試験対象の安定剤溶液（ｐＨ６．０の１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、１．６ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び０、０．０５、０．１、又は０．２ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０）を、通常の生理食塩水内包ＩＶバッグに加えた。完全に混合した後、同じＩＶバッグにＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えた。投薬用溶液を内包したバッグを２５±２℃でインキュベートし、０、２４、及び４８時間（提案されている最長の投与時間）の時点で試料を回収した。各試料を、ＦＬＲ／ＳＥ‐ＨＰＬＣを用いて分析し、ＥＬＩＳＡを用いて検証して、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質の回収を定量した。この研究の結果は、以下の表１４で確認できる。
Figure 2022536646000015
上述のＥＬＩＳＡ定量アッセイの結果から、０．０１％のＰＳ８０及び１．６ｍｇ／ｍＬのＢＡを利用したＤＡＲＴ‐Ａの回収は、４８時間後に８８％を超えている。これらの結果は、この種のバイオアッセイの典型的なばらつきの範囲内（５０％～１５０％）である。更に、ベンジルアルコールの不在は、タンパク質の吸着を阻害するＰＳ８０の能力に影響しなかった。というのは、回収が９１％を超えているためである。これらの結果は、０．０５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、又は０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０というレベルが、十分な遮断活性を提供することを示している。
２．３．シングルポンプ投与を可能にするための防腐剤の選択の研究
安定剤１溶液は、防腐剤として作用するための０．９％のＢＡを含有する。２ポンプ投与を１ポンプ投与に変更するにあたって、患者の安全性の規格を満たすために、ＢＡ濃度を下げることが望ましい。これらの規格には、許容されるＢＡの１日摂取量が、望ましくは５ｍｇ／ｋｇを超えてはならないと言明されている。これらの規格を使用し、様々な臨床シナリオ（即ち体重が少ない患者、静脈を開放状態に維持する流量の保持）を計画して、シングルポンプ投与のための目標ＢＡ濃度を以下のように決定した：
・５ｍｇ／ｋｇ／日が、許容される最大ＢＡ用量である
・４０ｋｇの患者を想定した場合の、１日あたりのＢＡの最大量：２００ｍｇ
・静脈を開放状態に維持するための送達：５ｍＬ／時間
・２４時間にわたる持続注入が望ましい→最小流量は１２０ｍＬ／日である
・溶液中の最小ＢＡ濃度は、１．７ｍｇ／ｍＬ（２００ｍｇ／１２０ｍＬ）、即ち０．１７％である。
安定剤の防腐剤の選択を、一連の研究で評価した。図１０は、実施した様々な研究の概要であり、各研究については以下で詳述する。
２．４．比較的低いベンジルアルコール濃度の、防腐剤の有効性
この研究では、４８時間にわたって微生物の増殖を阻害するために必要なＢＡの最低濃度を決定するために、（以下の表１５に列挙されている）５つの異なるＢＡ濃度を評価した。
Figure 2022536646000016
移動式シングルポンプの１用量調製スキーム及び投与構成をシミュレーションした。この研究のために、生理食塩水、ＰＳ８０、ｒＨＡ、及びＢＡを組み合わせた後、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えた。再構成された緑膿菌（ＡＴＣＣ ９０２７）の１０個のバイアルをプールした後一定量に分割して、最終的な製剤を形成した。製剤調製ステップの完了時に、混合ボトルからＴ0における試料を回収した。対応するポンプカセットに残りの安定剤溶液を充填し、３２±２℃でインキュベートした。２４時間及び４８時間の時点でカセット内を完全に混合して、緑膿菌懸濁液を確実に均一にした後、試料を回収した。回収後、試料をすぐに生物負荷試験に供した。この微生物チャレンジ試験の結果は、以下の表１６で確認できる。
Figure 2022536646000017
上述の結果は、ＢＡの有効な防腐剤濃度が、緑膿菌に関しては０．２４％～０．１７％であることを示唆している。しかしながら、この有効なＢＡレベルは依然として、提案されているシングルポンプ投与構成での４０ｋｇの患者の１日摂取量を上回っている。またこの結果は、安定剤溶液中のｒＨＡの存在が、微生物の増殖に影響せず、安定剤１溶液からこれを除去しても防腐剤の有効性が変化しないことを示唆している。
２．５．代替防腐剤評価研究
この研究では、３つの防腐剤（ＢＡ、メタクレゾール、及びＭＰ）を加速ストレス条件（４０±２℃）下でのＤＡＲＴ‐Ａの安定性及び凝集に対するこれらの影響を比較することによって評価した。最終的な製剤を形成するために、各成分を重量分析によって組み合わせた。安定剤溶液の最終的な組成を、以下の表１７に列挙する。
Figure 2022536646000018
各安定剤溶液をアリコートとしてガラスバイアル内に入れ、４０±２℃でインキュベートし、０、１、及び２週間後に分析した。各溶液の結果は、以下の表１８で確認できる。
Figure 2022536646000019
上述の結果は、４０±２℃で２週間にわたるインキュベーションの後、ｐＨ及び浸透圧は一定のまま、３つ全ての安定剤溶液中で視認可能な粒子の個数が増加することを示している。しかしながら、クレゾール含有溶液は、ＢＡ及びＭＰを含有する溶液に比べて多くの視認可能な粒子及びサブビジブル粒子を含有し、≧１０μｍの粒子の個数を理由として、ＵＳＰの仕様を満たせない。更に、ＭＰ含有溶液は、２週間後にＤＡＲＴ‐Ａタンパク質の凝集の増加を示した。これは他の２つの溶液では観察されない。以上の研究に基づき、標的レベルのＢＡ（≦０．１７％）及び低いレベルのＭＰ（≦０．１％）を含有する組み合わせを、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質の凝集に対するそれらの効果を評価することによって更に評価した。溶液の組み合わせは、各成分を重量分析によって組み合わせた単一作用剤の研究と同様の様式で生成した。試験した組み合わせの最終的な組成を、以下の表１９に列挙する。
Figure 2022536646000020
全ての溶液を５±３℃及び２５±２℃とし、０、１、３、５、及び７日目に分析した。各溶液の結果は、以下の表２０及び表２１で確認できる。
Figure 2022536646000021
 ＊＊ＣＣＮ：透明、無色、視認可能な粒子なし；ＣＣＶ：透明、無色、ごくわずかな視認可能な粒子；ＣＣＦ：透明、無色、わずかな視認可能な粒子；ＩＲ：無効な結果
Figure 2022536646000022
以上の結果は、全ての安定剤溶液にわたって、ｐＨ又は浸透圧の大きな変化が観察されなかったことを示している。更に、全ての溶液は、サブビジブル粒子数に関してＵＳＰの仕様を満たした。７日後には全ての安定剤溶液中でわずかな視認可能な粒子が観察された。分析試験の結果が無効だったため、ＨＭＷ種の初期レベルは得られなかったが、７日後のＨＭＷ種のレベルは全ての溶液において許容可能なものであった。従って、製品の品質という観点から、これらの溶液の条件は全て許容可能なものと見なされた。
２．６．防腐剤としてのベンジルアルコールとメチルパラベンとの組み合わせを評価する、微生物チャレンジ試験
≦０．１７％のＢＡ及び≦０．１％のＭＰを含有する安定剤溶液の防腐剤効果を評価するために、微生物チャレンジ試験を実施した。微生物チャレンジ試験は、用量が無菌的に調製され、かつ溶液中に導出される可能性がある微生物の数が少ない、提案されている１用量の調製及び希釈スキームを、より正確に表現するため、選択された。微生物チャレンジ試験は２つのステージで実施した。第１のステージでは、ＢＡ及びＭＰの有効濃度を決定し、第２のステージでは、ＵＳＰの仕様に従って最終的な製剤を試験した。各ステージについて以下で詳述する。
２．７．有効なベンジルアルコール及びメチルパラベンの濃度の決定
この研究では、１６８時間にわたって微生物の増殖を阻害するために必要なＢＡ及びＭＰの有効濃度を決定するために、（以下の表２２に列挙されている）ＢＡとＭＰとの組み合わせを評価した。これらの組み合わせを緑膿菌（細菌）及びカンジダ・アルビカンス（真菌）の両方において試験して、これらの生物間での防腐剤効力を比較した。
Figure 2022536646000023
この研究のために、移動式シングルポンプの１用量調製スキームをシミュレーションした。緑膿菌及びカンジダ・アルビカンス微生物を再構成してプールした後、最終的な投薬用溶液に加えた。各溶液を対応するカセットに加え、カセットの充填後すぐに、Ｔ0における試料を回収した。この手順は、シリンジのストレスへの曝露に関連する可能性がある微生物の増殖パターンのいずれの変化の原因となった。Ｔ0における改修後、対応するカセットを３２±２℃でインキュベートした。２４時間、７２時間、及び１６８時間の時点で完全に混合して、微生物懸濁液を確実に均一にした後、試料を回収した。回収後、試料をすぐに微生物チャレンジ試験に供した。この微生物チャレンジ試験の結果は、以下の表２３及び表２４で確認できる。
Figure 2022536646000024
Figure 2022536646000025
表２３及び表２４からの結果は、安定剤１溶液中のＢＡ濃度（０．９％）が、殺細菌性及び殺真菌性の両方を有し、その一方で、シングルポンプ構成の標的ＢＡ濃度（０．１７％）だけでは増殖が阻害されないことを示した。また上述の結果は、ＭＰとＢＡとの組み合わせが、ＢＡ単独に比べて、安定剤溶液の抗菌特性を向上させることも示している。しかしながら、０．１７％のＢＡ＋０．０５％のＭＰの組み合わせの静菌性及び静真菌性は、２４時間しか観察されなかった。患者の安全性に関する懸念から、安定剤溶液中のＢＡ濃度が制限されているため、防腐剤の有効期間を増大させるために、安定剤溶液中のＭＰ濃度を０．１％まで上昇させることができた。しかしながら、濃縮安定剤溶液を２０ｍＬの添加体積として提供する場合、このレベルのＭＰは高い溶液ｐＨ（≧９．０）、溶液の濁度、ＰＳ８０の不混和性につながる。これらの問題に対処するために、一連の安定剤溶液最適化の研究を実施して、最終的な濃縮安定剤溶液を決定した。
第１の研究は、濁度と溶液の不安定性又は不混和性とに関する問題に対処できるかどうかを判断するために、濃縮安定剤溶液中の比較的低いレベルのＰＳ８０を調査した。その結果は、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質の回収が、ＰＳ８０の濃度が０．００３％未満の最終的な投薬用溶液では大幅に減少したことを示している。しかしながら、このＰＳ８０の濃度は、室温において濁ったままである。濃縮安定剤溶液中の全ての賦形剤のレベルを下げることが、高い濁度に関する問題への対処に役立つかどうかを判断するために、より大きな濃縮安定剤溶液の添加体積を評価する後続の研究を実施した。この研究の結果は、０．００３％を超えるＰＳ８０の最終的なレベルでの、４０ｍＬの安定剤添加体積が、保管時に液滴を形成せず、ごくわずかしか乳白色を呈さないことを示した。最適な濃縮安定剤溶液のｐＨを決定するために、製剤の緩衝液の強度を変更する研究を実施した。第１の研究は、濃縮安定剤溶液中のリン酸ナトリウムのレベルを上昇させると、溶液のｐＨが効果的に低下することを示した。しかしながら、ｐＨ８．４未満では、標的レベルのＭＰは溶液中に残らない。従って、後続の研究において様々な濃度のＭＰを試験した。これらの結果は、ｐＨ≦８．０において、標的ＭＰ濃度の３０～５０％が溶液中にとどまることを示した。以上のＰＳ８０及びＭＰの研究の結果に基づき、許容可能なｐＨにおいて溶液の濁度に対処する最適な組み合わせを決定するために、様々な濃度のＭＰ及びＰＳ８０を評価する最終的な研究を実施した。この研究の結果は、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０で構成された濃縮安定剤２溶液が許容可能であり、最終的な溶液のｐＨ８．２での保管時にごくわずかしか乳白色を呈さないことを示した。この安定剤溶液４０ｍＬを２５０ｍＬ生理食塩水バッグ内で希釈すると、結果として得られる投薬用溶液は、０．１７％のＢＡ及び０．０５５％のＭＰを含有することになる。この組み合わせは、静菌及び静真菌効果を２４時間しか示さないことが既に示されていた。しかしながら、ＭＰの抗微生物効果は高ｐＨ環境で低下し、安定剤溶液の再製剤によって最終的な投薬用溶液のｐＨが大幅に低下した。従って、投薬用溶液中で０．１７％のＢＡ及び０．０５％のＭＰという最終的な防腐剤レベルを有する、再製剤された安定剤２溶液の、防腐剤としての有効性を、ＵＳＰ推奨微生物の微生物チャレンジ試験によって調査した。
２．８．最終的な防腐剤濃度を定義するための微生物チャレンジ試験
防腐剤に関する現行のＵＳＰの規格を満たすためには、製剤を特定のＵＳＰ推奨微生物に対して試験した場合に、所望の投与回数にわたって増殖が一切観察されてはならない。過去の研究に基づくと、カンジダ・アルビカンス及びアスペルギルス・ブラジリエンシス微生物は、投薬用溶液中の防腐剤に対する耐性が極めて高かったため、これら２つの微生物のみを試験した。０．１７％のＢＡ＋０．０５％のＭＰの安定剤溶液のみを試験し、防腐剤対照との比較は行わなかった。微生物の増殖を７２時間にわたって監視し、０、４８、及び７２時間をサンプリング時点とした。既に実施した微生物チャレンジ試験と同様の、用量の調製、構成、及び方法を実施した。この研究の結果は、以下の表２５で確認できる。
Figure 2022536646000026
表２５の結果から、投薬用溶液中の０．１７％のＢＡ＋０．０５％のＭＰの組み合わせは、アスペルギルス・ブラジリエンシス及びカンジダ・アルビカンスの両方に対して静真菌性である。というのは、４８時間及び７２時間における個数が０時間における個数よりも対数で０．５大きくないためである。従って、最終的な投薬用溶液中で０．１７％のＢＡ及び０．０５％のＭＰという防腐剤濃度を提供する安定剤２は、４８時間にわたるＤＡＲＴ‐Ａのシングルポンプ投与を可能にする。
２．９．確認のための、５つのＵＳＰ推奨微生物全ての微生物チャレンジ試験
生理食塩水中（即ち投薬用溶液中）で希釈した場合の安定剤２の抗微生物特性を確認するために、ＳＧＳ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓによって微生物増殖試験が実施された。試験に必要なＵＳＰ推奨微生物を、以下の表２６に列挙する。
Figure 2022536646000027
最大の防腐剤の希釈物を表すために、高用量投薬用溶液（１，０００ｎｇ／ｋｇのコホートの１５０ｋｇの患者）を調製した。更に、ＢＡ及びＭＰの標的濃度をより低い防腐剤濃度、即ち０．１５７％及び０．０５％に調整して、わずかに低いレベルにおける防腐剤の有効性を実証した。微生物増殖研究を、５つ全てのＵＳＰ推奨微生物に対して、１０～１００ＣＦＵ／ｍＬの標的濃度で実施した。微生物の増殖の結果を以下の表２７に列挙する。
Figure 2022536646000028
以上の結果に基づくと、意図されている標的濃度よりわずかに低い安定剤２の希釈物は、微生物の初期濃度と比較した各微生物の増殖が、対数値で０．５を超えて大きくならないため、１２０時間にわたって増殖しないという基準を満たす。これらの研究は、シングルポンプ投与のために設計された用量調製スキームを用いて希釈された安定剤２が、１２０時間の期間にわたって微生物の増殖を良好に制限することを実証している。
２．１０．最終的な安定剤２溶液中の賦形剤の許容可能な範囲
患者の順応性及び快適性を促進するために、用量調製後のＩＶバッグ又はカセットからの製剤の４日間持続投与を実施できる。４日間の投与への移行には、ＫＶＯ速度を２．５ｍＬ／時間に低下させる必要があり、これにより、溶液中に、許容可能な１日摂取（ＡＤＩ）レベルに到達することなく、より多くの防腐剤を入れることができる。４日間にわたる２５０ｍＬバッグからの投与に基づくＡＤＩ値により、安定剤溶液中の許容可能な賦形剤範囲の、以下のような上限が可能となる：
・ＢＡ上限：２５．８ｍｇ／ｍＬ
・ＭＰ上限：５１．７ｍｇ／ｍＬ
しかしながら、１５．５ｍｇ／ｍＬを超えるＢＡレベルは、溶液の不安定性又は不混和性をもたらし、また５．３ｍｇ／ｍＬを超えるＭＰレベルは、ｐＨが８．４を超える最終的な溶液を生成する。従って、最終的な安定剤２溶液中のＢＡ及びＭＰに関して提案される許容可能な範囲は、以下の通りである：
・ＢＡ標的濃度：１３．２ｍｇ／ｍＬ（許容可能な範囲：１１．６～１５．５ｍｇ／ｍＬ）
・ＭＰ標的濃度：４．２５ｍｇ／ｍＬ（許容可能な範囲：３．９～５．３ｍｇ／ｍＬ）
４日間の投与への移行がＫＶＯ速度の低減を伴うため、（４０ｋｇの患者への、用量３０ｎｇ／ｋｇでの投薬に対応する）予想される最小のＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液濃度を、１０ｎｇ／ｍＬから２０ｎｇ／ｍＬに増加させなければならない。この２０ｎｇ／ｍＬのタンパク質濃度での臨床用量調製及び投与をシミュレーションした（ＥＬＩＳＡ（ｒｈＩＬ３Ｒα）で評価される）タンパク質の回収の研究を、標的濃度より低いＰＳ８０の濃度（０．２５ｍｇ／ｍＬ）を用いて実施した。これらの研究の結果は、以下の表２８に概説されている。
Figure 2022536646000029
タンパク質の回収の研究は、２４時間の保管及び９６時間の投与後に、この比較的高い２０ｎｇ／ｍＬの投薬用溶液が完全に回収されることを示している。４日間投与では、ＰＳ８０の上限の仕様のわずかな変化しか許容されない。というのは、この上限は溶液の外見（即ち混和性）によって決定されるためである。２５０ｍＬ生理食塩水バッグを用量調製に用いることを想定すると、最終的な安定剤溶液中のＰＳ８０に関して提案される許容可能な範囲は以下の通りである：
・ＰＳ８０標的濃度：０．２５ｍｇ／ｍＬ（許容可能な範囲：０．１０～０．３５ｍｇ／ｍＬ）
２．１１．結論
以上の研究は、０．１ｍｇ／ｍＬの最終的な組成が１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、ｐＨ６．０であるＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤をサポートする。このようなＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤５ｍＬを５ｃｃのバイアルに充填してよい。
以上の研究は更に、２つのシリンジポンプ又は２つの移動式ポンプを用いた静脈内投与のために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わせるための、１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡで構成されるｐＨ６．０の第１の安定剤溶液、即ち安定剤１をサポートする。安定剤１は、小児科患者、体重が少ない患者、及び／又は患者比較的高いＩＶ流量（例えば約５ｍＬ／時間超）を必要とする患者で使用するために特に有用である。１０ｍＭのリン酸ナトリウム、１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０で構成され、ＢＡを含まない、ｐＨ６．０の安定剤１は、小児科患者での仕様に特に好ましい。ＢＡを含まないこのような安定剤１溶液は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と組み合わせた後２４時間以内の投与に特に好適である。
移動式シングルポンプ投与をサポートするために、安定剤１に対する複数の変更が必要であった。第１の変更は、現行の遮断剤ｒＨＡの除去が含まれていた。第２の製剤変更は、移動式シングルポンプ投与のための安定剤１中に濃縮され過ぎているＢＡ防腐剤に関わる。上述の研究に基づくと、２０ｍＭのリン酸ナトリウム、１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０で構成される、ｐＨ８．２の第２の安定剤溶液、即ち安定剤２は、シングルポンプ投与をサポートする。（公称容積２７０ｍＬの）２５０ｍＬ生理食塩水バッグ中で希釈した場合、結果として得られる投薬用溶液は、０．０３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、１．７ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び０．５５ｍｇ／ｍＬのＭＰを含有する。その後、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えて最終的な投薬用溶液を生成し、これは、移動式シングルポンプを用いた４日間の持続ＩＶ投与に好適である。
実施例３
安定剤１溶液を用いたＤＡＲＴ‐Ａのデュアルポンプ移動式注入への順応性の研究
この実施例は、デュアルポンプ移動式注入構成における、（安定剤１中で希釈された）ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と注入成分との順応性及びＤＡＲＴ‐Ａの回収を概説する。この注入構成は、（安定剤１中で希釈された）ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を送達するポンプ１、及び生理食塩水を送達するポンプ２の２つの移動式ポンプを用いて、少なくとも１０ｍＬ／時間の合計流量を維持する。
研究の目標は、以下の通りであった：
（Ａ）２４、４８、及び７２時間にわたる室温での持続注入中の、安定剤１中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と注入成分との順応性、及び全体的なＤＡＲＴ‐Ａ回収を評価すること；
（Ｂ）安定剤１のＢＡ含有量を試験し、２４、４８、及び７２時間にわたる室温での振盪下での、薬物カセット中のＤＡＲＴ‐Ａの安定性を評価すること；並びに
（Ｃ）７２時間にわたる昇温（３７℃）での振盪下での、薬物カセット中のＤＡＲＴ‐Ａの安定性を評価すること。
３．１．研究の設計
２つの移動式ポンプを用いた注入構成を、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の持続投与のために設計した。図１１に示されているように、（安定剤１中で希釈された）ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、移動式ポンプ１の薬物カセットに装入し、約１ｍＬ／時間以下の流量で投与セット（チューブ）を通して３方向活栓のポートＢに流し込んだ。生理食塩水溶液（０．９％塩化ナトリウム注射液、ＵＳＰ）を移動式ポンプ２の薬物カセットに装入し、５ｍＬ／時間の流量で投与セット（チューブ）を通して３方向活栓のポートＡに流し込んだ。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と生理食塩水を混合し、０．２μｍインラインフィルタを備えた延長セットを通して、被験者への投与のための中心静脈カテーテル（ＣＶＣ）に流し込んだ。この２ポンプ注入構成が必要となるのは、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の注入速度が１ｍＬ／時間以下であり、血餅を生じさせずにＣＶＣポートを開放状態に保持するための推奨流量が＞１０ｍＬ／時間であるためである。ポンプ２は、少なくとも１０ｍＬ／時間の合計流量を維持するために、生理食塩水を１０ｍＬ／時間で送達する。薬物カセットに装入される投薬用溶液は、図１２Ａ～１２Ｂに示されているように、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を安定剤１中で希釈することによって調製された。
この研究は、３０ｎｇ／ｋｇ／日～１０００ｎｇ／ｋｇ／日の用量を試験することによって広い用量範囲をカバーするために、階層区分されたアプローチを使用した。表２９は、用量濃度、用量体積、及び流量を決定するために、一例として体重８０ｋｇの被験者に対して使用される、用量の計算を示す。他の被験者に関する用量の計算は、これらの被験者の対応する体重を用いて同様に計算できる。
Figure 2022536646000030
３．２．サンプリングの計画
これらの研究を実施して、最大７２時間にわたる振盪下での室温（２２℃±２℃）及び昇温（３７℃）での注入中の：ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤と注入成分との順応性；薬物回収；並びに薬物カセットに装入されたＤＡＲＴ‐Ａの安定性を評価した。図１３は、これらの研究で使用された５つのサンプリング（＃１～＃５）点を説明している。
３．２．１．研究１
研究１は、流入点であるサンプリング点＃５における、また２４、４８、及び７２時間にわたる室温（２２℃±２℃）での持続注入中の、順応性及び全体的なＤＡＲＴ‐Ａ回収を評価した。
３．２．２．研究２
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を安定剤１で希釈して、ＤＡＲＴ‐Ａ投薬用溶液を調製した。安定剤１は、抗微生物防腐剤として０．９％のＢＡを含有する。研究２はＢＡ含有量を試験し、２４、４８、及び７２時間にわたる振盪（１００ｒｐｍ）下での室温（２２℃±２℃）の薬物カセット中のＤＡＲＴ‐Ａの安定性を評価した。ＤＡＲＴ‐Ａの安定性は、ＳＥ‐ＨＰＬＣを用いて測定した。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤用量（５０００ｎｇ／ｍＬ）が、安定剤中で最も希釈された防腐剤濃度を有しており、最悪のシナリオを表しているため、ＢＡ濃度に関してはこの最高用量試料のみを試験した。試料は、図１１に示されているようなサンプリング点＃２において回収された。
３．２．３．研究３
研究３は、最大７２時間にわたる振盪（１００ｒｐｍ）下での３７℃の薬物カセット中の希釈ＤＡＲＴ‐Ａの安定性を評価した。試料は、図１１に示されているようなサンプリング点＃２において、７２時間の時点で回収された。
３．３．結果及び議論
上述の順応性研究の結果は、以下の表３０に概説されている。
Figure 2022536646000031
この研究で調製された低濃度は、（ＥＬＩＳＡ（ｒｈＩＬ３Ｒα）で評価される）ＤＡＲＴ‐Ａ定量アッセイによって、１１６．７ｎｇ／ｍＬであるものと決定された。図１１及び表２９に示されているように、ＤＡＲＴ‐Ａは１．０ｍＬ／時間で注入され、また１０ｍＬ／時間で注入される生理食塩水で希釈される。Ｔ0における予想ＤＡＲＴ‐Ａ濃度は、１１６．７ｎｇ／ｍＬ×１．０ｍＬ／時間÷（１．０ｍＬ／時間＋１０ｍＬ／時間）＝１０．６ｎｇ／ｍＬである。
この研究で調製された高濃度は、（ＥＬＩＳＡ（ｒｈＩＬ３Ｒα）で評価される）ＤＡＲＴ‐Ａ定量アッセイによって、５０６７．５ｎｇ／ｍＬであるものと決定された。図１１及び表２９に示されているように、ＤＡＲＴ‐Ａは０．６６ｍＬ／時間で注入され、また１０ｍＬ／時間で注入される食塩水で希釈される。Ｔ0における予想ＤＡＲＴ‐Ａ濃度は、５０６７．５ｎｇ／ｍＬ×０．６６ｍＬ／時間÷（０．６６ｍＬ／時間＋１０ｍＬ／時間）＝３１３．７ｎｇ／ｍＬである。
低濃度注入及び高濃度注入の両方について、試料を、２４、４８、及び７２時間においてサンプリング点＃５から回収した。上述のＤＡＲＴ‐Ａ定量アッセイを用いてＤＡＲＴ‐Ａ濃度を決定し、また蛍光検出器を用いたＳＥ‐ＨＰＬＣ（ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ）を用いて、ＤＡＲＴ‐Ａモノマーピークエリアを分析した。このデータを予想Ｔ０試料に対して計算して、ＤＡＲＴ‐Ａ回収を得た。表３０に示されているように、定量アッセイに基づくＤＡＲＴ‐Ａ回収は、低用量に関して６３．２％～１２１．７％、及び高用量に関して７５．０％～９３．８％であった。他の結合ＥＬＩＳＡアッセイと同様に、これらの範囲は、この種のバイオアッセイの典型的なばらつきの範囲内（５０％～１５０％）である。ＳＥ‐ＨＰＬＣモノマーピークエリアに基づく、これらと同じ試料に関するＤＡＲＴ‐Ａ回収は、低用量に関して８０．５％～１０６．８％、及び高用量に関して８１．８％～９９．５％であった。
研究１で２４、４８、及び７２時間においてサンプリング点＃５から回収した試料を、粒子数試験にも供した。表３１に示されているように、全ての試料に関する粒子数は低く、ＵＳＰの仕様を満たしていた。
Figure 2022536646000032
研究２で２４、４８、及び７２時間においてサンプリング点＃２から回収した試料を、ＤＡＲＴ‐Ａ定量アッセイ、及び蛍光検出器を用いたＳＥ‐ＨＰＬＣで分析した。表３２に示されているように、全ての試料は、定量アッセイにおけるＤＡＲＴ‐Ａのインタクトな結合活性によって実証されるように活性を有するままであり、また、ＳＥ‐ＨＰＬＣアッセイにおけるモノマーピークエリアの最小限の減少によって示されているように安定していた。これら両方のアッセイで評価されたＤＡＲＴ‐Ａ回収は、９１．１％～１１０．８％であった。
Figure 2022536646000033
研究２で２４、４８、及び７２時間において高濃度条件のサンプリング点＃２から回収した試料を、ＢＡ含有量分析にも供した。表３３に示されているように、ＢＡ含有量は、おそらく蒸発及び／又は吸着によって、わずかに低下したが、最大７２時間にわたって１００ｒｐｍでの振盪下で２５℃でインキュベートした後であっても、少なくとも０．７５％のままであった。このＢＡ濃度は、０．６１％のＢＡ濃度によって十分な抗微生物活性が提供された以前の研究において試験された防腐剤の有効濃度を超えるものである。
Figure 2022536646000034
研究３で回収した試料を、ＤＡＲＴ‐Ａ定量アッセイ、及び蛍光検出を伴うＳＥ‐ＨＰＬＣによる分析に供した。表３４に示されているように、最大７２時間にわたって１００ｒｐｍでの振盪下で３７℃でインキュベートした後、試料は、定量アッセイにおけるＤＡＲＴ‐Ａのインタクトな結合活性によって実証されるように活性を有するままであり、また、ＳＥ‐ＨＰＬＣアッセイにおけるモノマーピークエリアの最小限の減少によって示されているように安定していた。これら両方のアッセイで評価されたＤＡＲＴ‐Ａ回収は、８２．０％～９５．１％であった。
Figure 2022536646000035
３．４．結論
この研究からの結果に基づくと、デュアルポンプ移動式注入構成によって、２４、４８、及び７２時間にわたって、許容可能なＤＡＲＴ‐Ａ回収で、室温でのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の持続投与が可能である。持続注入中に回収された全ての試料に関する粒子数は、全て非常に少なく、ＵＳＰの仕様を満たしていた。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の調製に使用された安定剤１中のＢＡ含有量は、最悪の希釈シナリオを試験した場合でも、有効なレベルのままであった。薬物カセットに装入されたＤＡＲＴ‐Ａは、最大７２時間にわたる振盪（１００ｒｐｍ）下での、室温及び昇温（３７℃）での持続注入中、活性を有し、安定なままであった。これらの研究は、希釈ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が注入成分との順応性を有し、室温でのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の持続投与のためのデュアルポンプ移動式注入構成と共に使用できることを実証している。ＤＡＲＴ‐Ａは、１日目に希釈ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、最初の２日に必要な薬物用量をカバーするように薬物カセットに装入し、そして３日目に、次の２日の治療に必要な薬物用量をカバーするように再装入することによって、投与できる。薬物カセットに予備充填される生理食塩水は、治療サイクル中に移動式ポンプ２に毎日装入される。
実施例４
安定剤２溶液を用いたＤＡＲＴ‐Ａのシングルポンプへの順応性の研究
この実施例は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の調製のために安定剤２を用いて実施した、順応性及び微生物チャレンジ研究を概説する。可能な低用量及び高用量濃度を階層区分した２０ｎｇ／ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬという用量における、シングルポンプ構成でのＤＡＲＴ‐Ａの安定性を、用量調製の最大７２時間後、及び注入の９６時間後に評価し、これらは許容可能であることが示された。この研究の結果に基づくと、４０ｍＬの安定剤２溶液を（公称容積２７０ｍＬの）２５０ｍＬ生理食塩水含有ＩＶバッグ中で希釈した後、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えて、シングルポンプ構成を用いた投与のための最終的な投薬用溶液を調製することになる。最大７２時間にわたる保管の後、投薬用溶液を生理食塩水バッグから９６時間にわたって持続投与でき、これによって４日間の持続投与をサポートできる。
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ）（生理食塩水）中の安定剤２を用いた投薬用溶液調製物として、移動式又は注入ポンプを用いて、４日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与できる。ＩＶバッグ及びＩＶチューブへのダイアボディの吸着を防止するために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加える前に安定剤２を生理食塩水ＩＶバッグに加える。用量調製中に安定剤２を生理食塩水中で希釈する場合、投与に使用される投薬用溶液は、１．７ｍｇ／ｍＬのＢＡ、０．５５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び０．０３２ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含有することになる。ＰＳ８０は、ＩＶバッグ及びラインの表面へのＤＡＲＴ‐Ａの吸着を防止するために製剤中に含まれており、ＢＡ及びＭＰはいずれも、用量調製、保管、及び投与中の微生物の増殖を防止するために含まれている。
用量調製中の希釈後、最終的な投薬用溶液は、２０ｎｇ／ｍＬ～約１２５０ｎｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ濃度を有することになり、これにより、３０ｎｇ／ｋｇ／日から最大約５００ｎｇ／ｋｇ／日までの用量の２～４日間（４８～９６時間）の投与が可能となる。ＤＡＲＴ‐Ａの希釈のために計算される量は、被験者の体重（シミュレーション研究では最小範囲及び最大範囲を使用した）、並びに所望の投薬量に基づいている（表３５）。
安定剤２を内包した生理食塩水バッグ中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の安定性及び順応性、並びに移動式及び注入ポンプＩＶ構成を用いたこのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の投与をサポートするための、研究を実施した。研究の目的は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が、所望の用量範囲かつ意図された注入成分を有する安定剤２を内包した生理食塩水バッグとの順応性を有することを実証することであった。
Figure 2022536646000036
投薬用溶液の調製には、生理食塩水バッグへの安定剤２の追加と、それに続くＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の追加とを伴う、２ステッププロセスが必要となる。代表的な低用量及び低用量の最終的な投薬用溶液濃度が、表３６に概説されている。
Figure 2022536646000037
研究の目標は、以下の通りであった：
（Ａ）安定剤２を用いて用量を調製し、７２時間にわたって室温で保管した場合の、希釈ＤＡＲＴ‐Ａの安定性及び回収を評価すること；
（Ｂ）調製した投薬用溶液を７２時間にわたって室温で保管した後投与する場合の、安定剤２溶液防腐剤のレベルを試験すること；並びに
（Ｃ）室温での保管後の４８時間（１０ｎｇ／ｍＬ及び１，２５０ｎｇ／ｍＬ）並びに９６時間（２０ｎｇ／ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬ）にわたる室温での持続注入中の、安定剤２溶液中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａの、移動式シングルポンプ注入成分との順応性及び回収を評価すること。
それぞれ５００ｎｇ／ｋｇ／日及び３０ｎｇ／ｋｇ／日という代表的な治療的用量に対応する最高濃度（１，２５０ｎｇ／ｍＬ）及び最低濃度（２０ｎｇ／ｍＬ）を試験するために、階層区分されたアプローチを使用した。更に、１０ｎｇ／ｍＬ及び０．１ｍｇ／ｍＬ（１００，０００ｎｇ／ｍＬ）の投薬用溶液濃度も調製して評価した。低い方の１０ｎｇ／ｍＬの濃度を評価することにより、４０ｋｇの患者について、最小標的用量未満の投薬用溶液の順応性を実証した。０．１ｍｇ／ｍＬの投薬用溶液濃度は、標的投与量範囲外であるが、パーセントＨＭＷ種を特性決定するためのサイズ排除クロマトグラフィ（ＳＥ‐ＨＰＬＣ）法、及び医薬製品のチャージバリアントを特性決定するための毛細等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）法の定量限界（ＬＯＱ）閾値を満たすために評価するための用量濃度として使用された。
４．１．研究の設計
この順応性の研究のための用量調製は、図１３に記載の、提案されている移動式シングルポンプ用量調製スキームに従って行われた。順応性研究の一部として、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質及び防腐剤の安定性を、７２時間の室温保管中に監視した。保管後、投与は、図１４に示されている、提案されている移動式シングルポンプ用量投与構成に従って行われた。
ＩＶスパイクを有するＣＡＤＤ投与セットのみを試験した。２４０ｍＬの投薬用溶液の持続投与（４８時間にわたって５ｍＬ／時間、又は９６時間にわたって２．５ｍＬ／時間）を、タンパク質濃度に関する階層区分戦略を用いて実施した。用量調製及び投与に用いた方法を、以下のセクションで説明する。
４．２．投薬用溶液の調製
４０ｍＬの安定剤２を、（公称容積２７０ｍＬの）２５０ｍＬ生理食塩水バッグに加えた後、上述の標的薬物濃度を達成するために計算された量のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えることによって、投薬用溶液を調製した。保管中の光への曝露を最小限に抑えながら、投薬用溶液を生理食塩水バッグ中で７２時間にわたって室温で保管した。
Ｂ．Ｂｒａｕｎ ｅＸｃｅｌ生理食塩水バッグをこの研究に使用した。標準的な慣行では、生理食塩水バッグは、パッケージに記載されている２５０ｍＬを超える用量を含む。製造元の仕様に基づく公称充填体積は、Ｂ．Ｂｒａｕｎ ｅＸｃｅｌバッグ毎に２７０ｍＬである。この体積を用いて、防腐剤の最終的な濃度がＡＤＩレベル以下となることが保証されるように、製剤開発中の安定剤２の賦形剤濃度を計算した。投薬用溶液の調製には、生理食塩水バッグ内での安定剤２の希釈と、それに続くＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の追加とを伴う、２ステッププロセスが必要となる。
各用量は、４０ｍＬの安定剤２をＩＶバッグに加えることによって調製された。安定剤２のバイアルを十分に振盪した後、ＩＶバッグに加えた。安定剤溶液を加えた後、各生理食塩水バッグを、バッグを５分間倒立させることによって穏やかに混合した。混合後、１ｍＬのシリンジ（低用量の調製）又は５ｍＬのシリンジ（高用量の調製）を用いて、所定の体積のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（表３４を参照）を各バッグに加えた。各バッグを、バッグを５分間倒立させることによって再び完全に混合した。混合後、新たな６０ｍＬのシリンジを用いて、生理食塩水バッグから全ての空気を除去した。
用量調製後、外見、ｐＨ、浸透圧、及びサブビジブル微粒子のＴ＝０時間での分析のために、１５ｍＬを各バッグから回収した。全ての他の分析法は、全ての試料の生成後に完了した。各バッグを室温で７２時間にわたってインキュベートした。７２時間の保管後、各バッグから分析のために１５ｍＬの溶液を回収し、その後、投与成分に対する投薬用溶液の順応性を試験するために注入した。
４．３．投薬用溶液投与
保管後、調製された各濃度の投薬用溶液を、０．２２μｍのフィルタを有する非ＤＥＨＰ ＰＶＣ ＩＶ投与延長セットと連結されたＩＶバッグスパイクを介して、移動式ポンプに接続し、１０ｎｇ／ｍＬ及び１，２５０ｎｇ／ｍＬで４８時間、並びに４日間投与のための最低開始用量である２０ｎｇ／ｍＬ、及び０．１ｍｇ／ｍＬで室温において９６時間にわたって、持続注入した。
ＤＡＲＴ‐Ａ用量を、５ｍＬ／時間で４８時間、又は２．５ｍＬ／時間で９６時間にわたって送達するようにプログラムされた、Ｓｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ Ｌｅｇａｃｙ‐１移動式ポンプを用いて、用量投与中の順応性を評価した。上述の図１４で確認されるように、ＩＶバッグスパイクを有するＳｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ投与セットを用いて、投薬用溶液を内包した生理食塩水バッグを移動式ポンプに直接接続した。注入されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液を、試料回収中の非特異的タンパク質結合を防止するために生理食塩水中で希釈された安定剤２で予備コーティングされた２５０ｍＬガラスボトル中に回収した。試料回収前に、生理食塩水中で希釈された安定剤２の余剰分をボトルから除去して乾燥させた。注入が半分完了した後、新たな空の予備コーティング済み２５０ｍＬガラスボトルと、前の回収ボトルとを交換した。これにより、注入された最終的な投薬用溶液が、４８時間又は９６時間の試料の保持時間を正確に表すことが保証された。試料調製時（Ｔ＝０時間）に、並びに回収容器中の最終的な分注済みプールから（注入後試料、注入Ｔ＝４８時間及び注入Ｔ＝９６時間）試料を採取し、外観、サブビジブル微粒子、ｐＨ、浸透圧、逆相クロマトグラフィ（ＲＰ‐ＨＰＬＣ）による防腐剤濃度、蛍光サイズ排除クロマトグラフィ（ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ）及びＥＬＩＳＡアッセイによるタンパク質の回収、並びにＣＤ３及びＣＤ１２３結合による効力について試験した。レポータ遺伝子バイオアッセイを用いて、０．１ｍｇ／ｍＬの濃度の試料を効力について分析した。
４．４．分析試験
全ての投薬用溶液は、用量調製時（Ｔ＝０時間）、室温保管後（Ｔ＝７２時間）、及び注入後（注入時間、Ｔ＝４８時間又はＴ＝９６時間）に分析される。順応性を分析するために使用された分析試験を、以下の表３７に列挙する（ＮＴ：指定された用量では該属性を試験していない）。
Figure 2022536646000038
４．５．結果
ＩＶバッグ中での７２時間の室温保管、それに続く室温でのシングルポンプ構成を用いた注入の後の、低用量及び高用量溶液の順応性及び安定性に関する結果を、以下の表３８に列挙する。
Figure 2022536646000039
Figure 2022536646000040
用量調製時（Ｔ＝０時間）、保管後（Ｔ＝７２時間）、及び注入後（注入Ｔ＝４８時間又は注入Ｔ＝９６時間）において、全ての溶液が、透明、無色であり、視認可能な微粒子を含まないことが観察された。タンパク質の回収は、１，２５０ｎｇ／ｍＬの投薬用溶液に関してはＳＥ‐ＨＰＬＣ法を用いて、又は他の溶液に関してはＥＬＩＳＡ（ＣＤ３結合）によって、計算された。注入後のＤＡＲＴ‐Ａの％タンパク質回収（Ｔ＝０に対して計算されたタンパク質濃度）は、試験された投薬用溶液に関して許容可能なものであった。更に、Ｔ＝０と比較して、注入後試料においてｐＨ、外観、及び浸透圧の有意な変化は観察されなかった。≧２μｍ、≧１０μｍ、及び≧２５μｍの粒子に関するサブビジブル粒子数は、Ｔ＝０と比較して、投薬用溶液のための注入後試料において増大しなかった。全体として、表３７の結果は、移動式注入ポンプで投薬用溶液を投与する場合の、ｐＨ、タンパク質の回収、効力、サブビジブル粒子及び外観について、製品の有意な変化を示していない。４日間投与のための可能な最低濃度２０ｎｇ／ｍＬにおける、９６時間の比較的長い注入時間は、製品の品質に影響を及ぼさなかった。
０．１ｍｇ／ｍＬの最終的な溶液に関する、ＤＡＲＴ‐Ａの特性決定の結果を、以下の表３９に示す。
Figure 2022536646000041
表３９は、この濃度でＳＥ‐ＨＰＬＣによるＨＭＷ及びＬＭＷの変化がないことを示している。ｃＩＥＦによって監視される電荷の不均一性は、上記分析方法のばらつきの範囲内の微小な変化を示している。レポータ遺伝子バイオアッセイを用いて測定された相対的効力の値は、上記方法に関する許容基準の範囲内（５０～１５０％）である。保管及び投与中に、外観の変化は観察されなかった。ＵＳＰ推奨微生物を用いて評価された、用量製剤溶液に関する微生物増殖データは、４日間持続投与のための投薬用溶液の使用をサポートするものである。
４．６．結論
上記順応性研究は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が、安定剤２安定化生理食塩水溶液バッグ中で、試験された最低用量濃度（２０ｎｇ／ｍＬ）及び最高用量濃度（１，２５０ｎｇ／ｍＬ）で希釈され、室温で７２時間保管された場合に、安定していることを実証している。上記順応性研究はまた、シングルポンプを用いた室温での９６時間にわたる注入によって投与された場合に、順応性を有することを示している。微生物増殖データは、４日間持続投与のための投薬用溶液の使用をサポートするものである。
実施例５
安定剤２溶液を用いたＤＡＲＴ‐Ａの４日間及び７日間投与
この実施例は、ＤＡＲＴ‐Ａの４日間及び７日間投与のためのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の調製のために安定剤２を用いて実施した、順応性及び微生物チャレンジ研究のある代表的なスキームを概説する。３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の、在宅用移動式シングルポンプを備えたＩＶバッグ又はカセット中でのＤＡＲＴ‐Ａの安定性を、約０．３ｍＬ／時間～約０．５ｍＬ／時間という低流量を用いた４日間及び７日間投与について評価する。３２５０ｎｇ／ｍＬ（３．２５ｍｇ／ｍＬ）の用量という濃度における、シングルポンプ構成でのＤＡＲＴ‐Ａの安定性を、用量調製の最大２４時間後、並びに注入の４日（９６時間）及び７日（１６８時間）後に評価する。この研究の結果に基づくと、安定剤２溶液を生理食塩水含有ＩＶバッグ中で希釈した後、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を加えて、シングルポンプ構成を用いた投与のための最終的な投薬用溶液を調製することになる。最大２４時間にわたる保管の後、投薬用溶液を生理食塩水バッグから４日（９６時間）又は７日（１６８時間）にわたって持続投与でき、これによって４日間又は７日間の持続投与をサポートできる。
４日間投与
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、ＩＶバッグ又はカセットを備えた移動式ポンプを用いて、４日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与できる。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の希釈のために計算される量は、被験者の体重（シミュレーション研究では平均体重７８ｋｇを使用した）に基づいている。表４０は、投薬用溶液の調製のための複数のステップのある例示的なスキームを説明している。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ）（生理食塩水）中の安定剤２を用いて、投薬用溶液中で希釈する。生理食塩水（４５ｍＬ）を空のＩＶバッグに加える。次に、ＩＶバッグ及びＩＶチューブへのダイアボディの吸着を防止するために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（１．９５ｍＬ）を加える前に安定剤２（８ｍＬ）をＩＶバッグに加える。用量調製中に安定剤２を生理食塩水中で希釈する場合、投与に使用される投薬用溶液（合計体積６０ｍＬ）は、約１．８ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．５６ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．０３３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含有する。用量調製中の希釈後、最終的な投薬用溶液は、約３２５０ｎｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ濃度を含有することになり、これにより、５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の４日間投与が可能となる。
Figure 2022536646000042
７日間投与
ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤は、ＩＶバッグ又はカセットを備えた移動式ポンプを用いて、７日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与することもできる。ＤＡＲＴ‐Ａの希釈のために計算される量は、被験者の体重（シミュレーション研究では平均体重７８ｋｇを使用した）に基づいている。表４１は、投薬用溶液の調製のための複数のステップのある例示的なスキームを説明している。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ）（生理食塩水）中の安定剤２を用いて、投薬用溶液中で希釈する。生理食塩水（７０ｍＬ）を空のＩＶバッグに加える。次に、ＩＶバッグ及びＩＶチューブへのダイアボディの吸着を防止するために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（３．２５ｍＬ）を加える前に安定剤２（１８ｍＬ）をＩＶバッグに加える。用量調製中に安定剤２を生理食塩水中で希釈する場合、投与に使用される投薬用溶液（合計体積１００ｍＬ）は、約２．４ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．７７ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．０４７ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含有することになる。用量調製中の希釈後、最終的な投薬用溶液は、約３２５０ｎｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ濃度を含有することになり、これにより、５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の７日間投与が可能となる。
Figure 2022536646000043
安定剤２を内包した生理食塩水バッグ中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の安定性及び順応性、並びに表４０及び表４１に示されているような、移動式ＩＶバッグ及びカセット構成を用いたこのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の４日間及び７日間投与をサポートするための、研究を進める。研究の目的は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が、約０．３ｍＬ／時間～約０．５ｍＬ／時間の流量での４日間及び７日間投与のための、３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量かつ意図された注入成分を有する安定剤２を内包したＩＶバッグとの順応性を有することを実証することである。研究の目標は、室温での保管後の４日（９６時間）及び７日（１６８時間）にわたる室温での持続注入中の、安定剤２溶液中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａの、移動式シングルポンプ注入成分との順応性及び回収を評価することである。
５．１．研究の設計
この順応性の研究のための用量調製は、図１３に記載されているような、提案されている移動式シングルポンプ用量調製スキームに従って行うことができる。順応性研究の一部として、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質及び防腐剤の安定性を、２４時間の室温保管中に監視する。保管後、投与は、図１４に示されている、提案されている移動式シングルポンプ用量投与構成に従って行うことができる。
４日間投与のための４８ｍＬの投薬用溶液の持続投与（４日（９６時間）にわたって０．５ｍＬ／時間）、又は７日間投与のための８４ｍＬの投薬用溶液の持続投与（７日（１６８時間）にわたって０．５ｍＬ／時間）を実施する。用量調製及び投与に用いることになる方法を、以下のセクションで説明する。
５．２．投薬用溶液の調製
５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量での７８ｋｇの患者に好適な標的薬物濃度を達成するために、表４０（４日間投与）及び表４１（７日間投与）に示されているようにして投薬用溶液を調製する。保管中の光への曝露を最小限に抑えながら、投薬用溶液をＩＶバッグ中で２４時間にわたって室温で保管する。
投薬用溶液の調製には、空の静脈内（ＩＶ）バッグへの生理食塩水の追加と、生理食塩水含有ＩＶバッグ内での安定剤２の希釈と、それに続くＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の追加とを伴う、３ステッププロセスが必要となる。安定剤２のバイアルを十分に振盪した後、ＩＶバッグに加える。安定剤溶液を加えた後、各ＩＶバッグを、バッグを５分間倒立させることによって穏やかに混合する。混合後、所定の体積のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（表４０又は表４１を参照）を各バッグに加える。各バッグを、バッグを５分間倒立させることによって再び完全に混合する。混合後、シリンジを用いて、ＩＶバッグから全ての空気を除去する。
用量調製後、外見、ｐＨ、浸透圧、及びサブビジブル微粒子のＴ＝０時間での分析のために、アリコートを各バッグから回収する。全ての他の分析法は、全ての試料の生成後に完了する。各バッグを室温で２４時間～８日間にわたってインキュベートする。保管時間の完了後、各バッグから分析のために投薬用溶液のアリコートを回収し、その後、投与成分に対する投薬用溶液の順応性を試験するために注入する。
５．３．投薬用溶液投与及び分析試験
調製された投薬用溶液を投与できる方法の一例を説明する。保管後、調製された投薬用溶液を、フィルタを有する投与延長セットと連結されたＩＶバッグスパイクを介して、移動式ポンプに接続し、室温において４日間（９６時間）又は７日間（１６８時間）にわたって、持続注入した。ＤＡＲＴ‐Ａ用量を、０．３ｍＬ／時間若しくは０．５ｍＬ／時間で４日間（９６時間）、又は０．３ｍＬ／時間若しくは０．５ｍＬ／時間で７日（１６８時間）にわたって送達するようにプログラムされた、移動式ポンプ（例えばＳｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ Ｌｅｇａｃｙ‐１移動式ポンプ）を用いて、用量投与中の順応性を評価する。上述の図１４に示されているように、ＩＶバッグスパイクを有するＳｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ投与セットを用いて、投薬用溶液を内包した生理食塩水バッグを移動式ポンプに直接接続できる。注入されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液を、試料回収中の異物粒子を除去するために生理食塩水中で希釈された安定剤２ですすがれたガラスボトル中に回収する。試料回収前に、生理食塩水中で希釈された安定剤２の余剰分をボトルから除去して乾燥させる。注入が半分完了した後、新たな空のガラスボトルと、前の回収ボトルとを交換する。これにより、注入された最終的な投薬用溶液が、４日間（９６時間）又は７日間（１６８時間）の試料の保持時間を正確に表すことが保証される。試料調製時（Ｔ＝０時間）に、並びに回収容器中の最終的な分注済みプールから（注入後試料、注入Ｔ＝４日間／９６時間及び注入Ｔ＝７日間／１６８時間）試料を採取し、外観、サブビジブル微粒子、ｐＨ、浸透圧、逆相クロマトグラフィ（ＲＰ‐ＨＰＬＣ）による防腐剤濃度、蛍光サイズ排除クロマトグラフィ（ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ）及びＥＬＩＳＡアッセイによるタンパク質の回収、並びにレポータ遺伝子アッセイによる効力について、基本的に本明細書に記載されているように分析試験を実施する（特に実施例７を参照）。
実施例６
安定剤３溶液を用いた二重特異性ダイアボディの４日間及び７日間投与
この実施例は、二重特異性ダイアボディ（例えばＤＡＲＴ‐Ａ）の４日間及び７日間投与のためのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液等の二重特異性ダイアボディ投薬用溶液の調製のために（１５０ｍＭの塩化ナトリウム及び０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、ｐＨ６．０の）安定剤３を用いて実施した、順応性及び微生物チャレンジ研究のある代表的なスキームを概説する。３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の、在宅用移動式ポンプを備えたＩＶバッグ又はカセット中での二重特異性ダイアボディの安定性を、約０．３ｍＬ／時間～約０．５ｍＬ／時間という低流量を用いた４日間及び７日間投与について評価する。２５ｎｇ／ｍＬ～３２５０ｎｇ／ｍＬ（３．２５ｍｇ／ｍＬ）の用量という濃度における、シングルポンプ構成での二重特異性ダイアボディの安定性を、用量調製の最大２４時間後、並びに注入の４日（９６時間）及び７日（１６８時間）後に評価する。この研究の結果に基づくと、安定剤３溶液を静菌性生理食塩水含有ＩＶバッグ中で希釈した後、二重特異性ダイアボディ製剤を加えて、シングルポンプ構成を用いた投与のための最終的な投薬用溶液を調製することになる。最大２４時間にわたる保管の後、投薬用溶液を生理食塩水バッグから４日（９６時間）又は７日（１６８時間）にわたって持続投与でき、これによって４日間又は７日間の持続投与をサポートできる。
安定性研究
代表的な３鎖二重特異性ダイアボディ（「ＢＤ」）の順応性及び全体的な回収を評価するために、安定性研究を実施した。ＢＤはＦｃドメインを含み、室温（２２℃±２℃）での６時間にわたる持続注入中に、ＣＤ３及びＢ７‐Ｈ３に結合できる。二重特異性ダイアボディ製剤を安定剤３で希釈して、二重特異性ダイアボディ投薬用溶液を調製した。この研究は、使い捨てシリンジ内の二重特異性ダイアボディの安定性を試験した。試料を、Ｔ＝０及び６時間において回収した。二重特異性ダイアボディの安定性を、ＳＥ‐ＨＰＬＣで測定した。回収した試料を、粒子数試験にも供した。表４２及び表４３に示されているように、全ての試料に関する粒子数は低く、ＵＳＰの仕様を満たしていた。
Figure 2022536646000044
Figure 2022536646000045
これらの短期（６時間）安定性研究は、低用量の希釈二重特異性ダイアボディ製剤が、安定剤３及び注入成分の両方に順応することを実証している。希釈二重特異性ダイアボディ製剤及び安定剤３は、許容可能な二重特異性ダイアボディ回収及び低い粒子数で、室温での二重特異性ダイアボディ製剤の持続投与のためのシングルポンプ構成と共に使用できる。
４日間投与
二重特異性ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は、ＩＶバッグ又はカセットを備えた移動式シングルポンプを用いて、４日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与できる。二重特異性ダイアボディ製剤の希釈のために計算される量は、被験者の体重（シミュレーション研究では平均体重７８ｋｇを使用した）に基づいている。表４４は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の調製のための複数のステップのある例示的なスキームを説明している。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、静菌性生理食塩水（０．９％ＢＡ、０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ））中の安定剤３を用いて、投薬用溶液中で希釈する。静菌性生理食塩水（４５ｍＬ）を空のＩＶバッグに加える。次に、ＩＶバッグ及びＩＶチューブへのＤＡＲＴ‐Ａの吸着を防止するために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（１．９５ｍＬ）を加える前に安定剤３（８ｍＬ）をＩＶバッグに加える。用量調製中に安定剤３を静菌性生理食塩水中で希釈する場合、投与に使用される投薬用溶液（合計体積６０ｍＬ）は、約７．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ及び約０．０１３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含有する。用量調製中の希釈後、最終的な投薬用溶液は、約３２５０ｎｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ濃度を含有することになり、これにより、５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の４日間投与が可能となる。
Figure 2022536646000046
７日間投与
二重特異性ダイアボディ製剤（例えばＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤）は、ＩＶバッグ又はカセットを備えた移動式シングルポンプを用いて、７日間にわたる持続ＩＶ注入によって投与することもできる。二重特異性ダイアボディの希釈のために計算される量は、被験者の体重（シミュレーション研究では平均体重７８ｋｇを使用した）に基づいている。表４５は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の調製のための複数のステップのある例示的なスキームを説明している。ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤を、静菌性生理食塩水（０．９％ＢＡ、０．９％塩化ナトリウム（ＵＳＰ））中の安定剤３を用いて、投薬用溶液中で希釈する。静菌性生理食塩水（７０ｍＬ）を空のＩＶバッグに加える。次に、ＩＶバッグ及びＩＶチューブへのＤＡＲＴ‐Ａの吸着を防止するために、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（３．２５ｍＬ）を加える前に安定剤３（１８ｍＬ）をＩＶバッグに加える。用量調製中に安定剤３を静菌性生理食塩水中で希釈する場合、投与に使用される投薬用溶液（合計体積１００ｍＬ）は、約７．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び約０．０１３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含有することになる。用量調製中の希釈後、最終的な投薬用溶液は、約３２５０ｎｇ／ｍＬのＤＡＲＴ‐Ａ濃度を含有することになり、これにより、５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量の７日間投与が可能となる。
Figure 2022536646000047
安定剤３を内包した静菌性生理食塩水バッグ中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の安定性及び順応性、並びに表４４及び表４５に示されているような、移動式ＩＶバッグ及びカセット構成を用いたこのＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液の４日間及び７日間投与をサポートするための、研究を進める。研究の目的は、ＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤が、約０．３ｍＬ／時間～約０．５ｍＬ／時間の流量での４日間及び７日間投与のための、３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量かつ意図された注入成分を有する安定剤３を内包した静菌性生理食塩水バッグとの順応性を有することを実証することである。研究の目標は、室温での保管後の４日（９６時間）及び７日（１６８時間）にわたる室温での持続注入中の、安定剤３溶液中で希釈されたＤＡＲＴ‐Ａの、移動式シングルポンプ注入成分との順応性及び回収を評価することである。
６．１．研究の設計
この順応性の研究のための用量調製は、図１３に記載されているような、提案されている移動式シングルポンプ用量調製スキームに従って行うことができる。順応性研究の一部として、ＤＡＲＴ‐Ａタンパク質及び防腐剤の安定性を、２４時間の室温保管中に監視する。保管後、投与は、図１４に示されている、提案されている移動式シングルポンプ用量投与構成に従って行うことができる。
４日間投与のための４８ｍＬの投薬用溶液の持続投与（４日（９６時間）にわたって０．５ｍＬ／時間）、又は７日間投与のための８４ｍＬの投薬用溶液の持続投与（７日（１６８時間）にわたって０．５ｍＬ／時間）を実施する。用量調製及び投与に用いることになる方法を、以下のセクションで説明する。
６．２．投薬用溶液の調製
５００ｎｇ／ｋｇ／日の用量での７８ｋｇの患者に好適な標的薬物濃度を達成するために、表４４（４日間投与）及び表４５（７日間投与）に示されているようにして投薬用溶液を調製する。保管中の光への曝露を最小限に抑えながら、投薬用溶液をＩＶバッグ中で２４時間にわたって室温で保管する。
投薬用溶液の調製には、空の静脈内（ＩＶ）バッグへの生理食塩水の追加と、生理食塩水含有ＩＶバッグ内での安定剤３の希釈と、それに続くＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤の追加とを伴う、３ステッププロセスが必要となる。安定剤３のバイアルを十分に振盪した後、ＩＶバッグに加える。安定剤溶液を加えた後、各ＩＶバッグを、バッグを５分間倒立させることによって穏やかに混合する。混合後、所定の体積のＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ製剤（表４４又は表４５を参照）を各バッグに加える。各バッグを、バッグを５分間倒立させることによって再び完全に混合する。混合後、シリンジを用いて、ＩＶバッグから全ての空気を除去する。
用量調製後、外見、ｐＨ、浸透圧、及びサブビジブル微粒子のＴ＝０時間での分析のために、アリコートを各バッグから回収する。全ての他の分析法は、全ての試料の生成後に完了する。各バッグを室温で２４時間～８日間にわたってインキュベートする。保管の完了後、各バッグから分析のために投薬用溶液のアリコートを回収し、その後、投与成分に対する投薬用溶液の順応性を試験するために注入する。
６．３．投薬用溶液投与及び分析試験
調製された投薬用溶液を投与できる方法の一例を説明する。保管後、調製された投薬用溶液を、フィルタを有する投与延長セットと連結されたＩＶバッグスパイクを介して、移動式ポンプに接続し、室温において４日間（９６時間）又は７日間（１６８時間）にわたって、持続注入した。ＤＡＲＴ‐Ａ用量を、０．３ｍＬ／時間若しくは０．５ｍＬ／時間で４日間（９６時間）、又は０．３ｍＬ／時間若しくは０．５ｍＬ／時間で７日（１６８時間）にわたって送達するようにプログラムされた、移動式ポンプ（例えばＳｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ Ｌｅｇａｃｙ‐１移動式ポンプ）を用いて、用量投与中の順応性を評価する。上述の図１４に示されているように、ＩＶバッグスパイクを有するＳｍｉｔｈｓ Ｍｅｄｉｃａｌ ＣＡＤＤ投与セットを用いて、投薬用溶液を内包した静菌性生理食塩水バッグを移動式ポンプに直接接続できる。注入されたＤＡＲＴ‐Ａ ＤＰ投薬用溶液を、試料回収中の異物粒子を除去するために静菌性生理食塩水中で希釈された安定剤３ですすがれたガラスボトル中に回収する。試料回収前に、静菌性生理食塩水中で希釈された安定剤３の余剰分をボトルから除去して乾燥させる。注入が半分完了した後、新たな空のガラスボトルと、前の回収ボトルとを交換する。これにより、注入された最終的な投薬用溶液が、４日間（９６時間）又は７日間（１６８時間）の試料の保持時間を正確に表すことが保証される。試料調製時（Ｔ＝０時間）に、並びに回収容器中の最終的な分注済みプールから（注入後試料、注入Ｔ＝４日間／９６時間及び注入Ｔ＝７日間／１６８時間）試料を採取し、外観、サブビジブル微粒子、ｐＨ、浸透圧、逆相クロマトグラフィ（ＲＰ‐ＨＰＬＣ）による防腐剤濃度、蛍光サイズ排除クロマトグラフィ（ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ）及びＥＬＩＳＡアッセイによるタンパク質の回収、並びにレポータ遺伝子アッセイによる効力について、基本的に本明細書に記載されているように分析試験を実施する（特に実施例６を参照）。
実施例７
材料及び方法
７．１．ＨＩＡＣ液体粒子計数
粒子数分析は、ＵＳＰ＜７８７＞に従って実施した。分析は５±３℃で保管された試料のみに対して実施した。要約すると、各試料を室温まで温めた後、６０分間脱気した。適切な機械の機能を保証するために、Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ製の標準及びＲＯＤＩ水を分析した。キャリーオーバーを最小限に抑えるために、低濃度から高濃度までの試料を分析した。試料と試料の間にプローブを水ですすいだ。
７．２．示差走査熱量測定（ＤＳＣ）
示差走査熱量測定は、温度上昇中のタンパク質のアンフォールディングのエネルギ特性を測定する。ピークは見かけの融点を表し、ピークの下の面積は熱遷移のエンタルピーを表す。６０℃/時間の温度上昇速度を用いて、２０℃～９０℃にわたって、二重の試料に関してデータを収集した。
７．３．毛細等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）
ｃＩＥＦ分析は、医薬製品のチャージバリアントを特性決定するために実施された。その構成は、Ａｌｃｏｔｔ ７２０ＮＶオートサンプラーを備えたｉＣＥシステムを含んでいた。試料を０．１ｍｇ／ｍＬの最終濃度に調製し、５±３℃で４０分間遠心分離した後、分析した。
７．４．液体クロマトグラフィ／エレクトロスプレーイオン化質量分析（ＬＣ‐ＥＳＩＭＳ）
ＲＳ試料及び時間を置いたＤＰ試料に関して、ＬＣ分離に続いて、インタクト分子をエレクトロスプレーイオン化質量分析（ＥＳＩ‐ＭＳ）で分析した。分析の前に、時間を置いたＤＰ中のＰＳ８０をＤｅｔｅｒｇｅｎｔＯＵＴ Ｔｗｅｅｎスピンカラムを用いて除去した。次に試料をＬＣ‐ＥＳＩ‐ＭＳで分析した。エレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）によって生成されたタンパク質の多価イオン質量スペクトルを、ＭａｘＥｎｔ１アルゴリズムを用いてデコンボリューションして、インタクト分子の分子量を提供した。
７．５．蛍光検出を伴うサイズ排除高速液体クロマトグラフィ（ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ）
ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ分析を実施して、タンパク質純度、モノマー純度、及びタンパク質安定性を測定した。ＦＬＲ ＳＥ‐ＨＰＬＣ構成は、蛍光（ＦＬＲ）検出器（λX＝２８０ｎｍ、λE＝３４０ｎｍ）、移動相の移動相組成（１７５ｍＭＮａＨ２ＰＯ４、１７５ｍＭＮａ２ＳＯ、ｐＨ６．３）及びＴｏｓｏＢｉｏ ＴＳＫ Ｇ３０００ＳＷXLサイズ排除カラムを含んでいた。試料を０．１ｍｇ／ｍＬに希釈し、５±３℃で２４～９６時間にわたって保管した後、分析した。８μｇのタンパク質（又は１００μＬは０．１ｍｇ／ｍＬ未満であった試料濃度である）を、３０分の分析毎に注入した。ＨＭＷ及びＬＭＷ種、並びにモノマーのピークを監視した。
７．６．トリプシンペプチドマッピング
Ｗａｔｅｒｓ Ｘｅｖｏ Ｇ２‐ＸＳ ＱＴｏｆ機器に連結されたＷａｔｅｒｓ Ａｃｑｕｉｔｙ ＵＰＬＣ Ｈ‐Ｃｌａｓｓ Ｂｉｏ上のＬＣ‐ＭＳを用いて、還元ペプチドマッピング実験を実施した。ＭＳＥを取得することによって全ての実験を実施し、ペプチド配列を確認してアミノ酸修飾を解明した。Ｗａｔｅｒｓ ＵＮＩＦＩ Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍ Ｓｏｌｕｔｉｏｎを用いて全ての試料を処理した。
７．７．ＥＬＩＳＡ（ｒｈＩＬ３Ｒα）
要約すると、アッセイプレートを、可溶性組み換えヒトＩＬ‐３受容体アルファ（ｒｈＩＬ３Ｒα）で一晩コーティングした。非特異性部位をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中の５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）でブロックした後、プレートを、ＤＡＲＴ‐Ａ標準キャリブレータ、品質対照、及び試験試料と共にインキュベートした。標準キャリブレータ、品質対照、及び試験試料中に存在するＤＡＲＴ‐Ａを、固定化されたｒｈＩＬ３Ｒαでキャプチャした。キャプチャされたＤＡＲＴ‐Ａを、２Ａ５‐ビオチン（ＤＡＲＴタンパク質のＥコイル／Ｋコイル抗（ＥＫ）抗体ヘテロ二量体化領域を認識するビオチン化抗体）及びＳｕｌｆｏ‐ＴＡＧ標識ストレプトアビジン（電気化学発光（ＥＣＬ）標識）を加えることによって検出した。ＭＳＤ読み取り緩衝液を加えた後、プレートをＳｅｃｔｏｒ Ｉｍａｇｅｒ ２４００プレートリーダに挿入した。プレートの電極に電圧を印加すると、結合したＳｕｌｆｏ‐ＴＡＧ標識がＥＣＬ信号を生成し、プレートリーダは上記ＥＣＬ信号をキャプチャした。各ウェルが放出したＥＣＬ信号の定量的測定値を記録し、標準キャリブレータが放出したＥＣＬカウントを使用して、４パラメータロジスティック（４ＰＬ）フィッティングを用いて標準曲線を生成した。次に試料のＥＣＬカウント、及び標準曲線を記述する式から、ＤＡＲＴ‐Ａ試料の濃度を補間した。
７．８．ＣＤ３結合アッセイ
間接的な酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、ＥＬＩＳＡにおいて固定化された可溶性組み換えヒトＣＤ３（ｓｈＣＤ３‐Ｆｏｓ‐Ｊｕｎ）へのＤＡＲＴ‐Ａの結合を定量することによって、ＤＡＲＴ‐Ａの抗ＣＤ３アームの効力を評価した。２つのＣＤ３鎖（デルタ及びガンマ）は、ＣＤ３複合体の適切なフォールディング及び機能性を強化するために、Ｆｏｓタンパク質又はＪｕｎタンパク質を含有する。ＤＡＲＴ‐Ａに対するＥＬＩＳＡの特異性は、ＤＡＲＴ‐ＡによるＣＤ３抗原の認識、及びその後のＥ／Ｋコイルに対する特異性抗体を用いた結合ＤＡＲＴ‐Ａの検出によって提供される。可溶性ＣＤ３‐Ｆｏｓ‐ＪｕｎでＥＬＩＳＡプレートの表面をコーティングした。ＤＡＲＴ‐Ａ試料を加えて、ｓｈＣＤ３‐Ｆｏｓ‐Ｊｕｎと結合させた。結合したＤＡＲＴ‐Ａの検出は、ＤＡＲＴ分子のＥ／Ｋコイルを認識するビオチン結合抗体（１５Ｆ‐Ｂｔ）を用いて達成された。結合したプローブ抗体の定量は、比色ＡＰ基質（ＡＰ‐Ｙｅｌｌｏｗ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を添加することによって達成された。ＡＰによるＡＰ‐Ｙｅｌｌｏｗの酸化により、４０５±１０ｎｍで読み取ることができる着色産物が得られる。このアッセイは、４０５±１０ｎｍの最適波長に設定された分光光度計を用いて測定された色の強度によって定量された。以下の様々な制約を用いて、データを４パラメータモデルに対してフィッティングした：各用量応答曲線の最大値、最小値、及び勾配は、プレート上の全ての用量応答曲線間で共有されるように設定されている；ＥＣ50は曲線毎に個別に決定された。各アッセイプレートは、１～２つの試験物品を含むＤＡＲＴ‐Ａ較正参照標準と、プレート間のばらつきを制御するための第２の参照標準のセット（陽性対照）とを含んでいた。較正参照標準試料及び陽性対照参照標準試料が各プレートに含まれている場合、１回のアッセイの実行は複数のプレートからなってよい。報告可能な結果は、ＤＡＲＴ‐Ａ参照標準較正曲線のＥＣ50値を試験物品のＥＣ50で除算したものとして計算される、相対的効力である。
７．９．ＣＤ１２３結合アッセイ
間接的な酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）を用いて、ＥＬＩＳＡにおいて固定化された組み換えインターロイキン３受容体（ｒｈＩＬ３‐Ｒ）へのＤＡＲＴ‐Ａの結合を定量することによって、ＤＡＲＴ‐Ａの抗ＣＤ１２３アームの効力を評価した。ＤＡＲＴ‐Ａに対するＥＬＩＳＡの特異性は、ＤＡＲＴ‐ＡによるＩＬ３Ｒ抗原の認識、及びその後のＥ／Ｋコイルに対する特異性抗体を用いた結合ＤＡＲＴ‐Ａの検出によって提供される。可溶性ＩＬ３ＲでＥＬＩＳＡプレートの表面をコーティングした。ＤＡＲＴ‐Ａ試料を加えて、ＩＬ３‐Ｒと結合させた。結合したＤＡＲＴ‐Ａの検出は、ＤＡＲＴ分子のＥ／Ｋコイルを認識するビオチン結合抗体（１５Ｆ‐Ｂｔ）を用いて達成された。結合したプローブ抗体の定量は、比色ＡＰ基質（ＡＰ‐Ｙｅｌｌｏｗ １ Ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ）を添加することによって達成された。ＡＰによるＡＰ‐Ｙｅｌｌｏｗの酸化により、４０５±１０ｎｍで読み取ることができる着色産物が得られる。このアッセイは、４０５±１０ｎｍの最適波長に設定された分光光度計を用いて測定された色の強度によって定量された。以下の様々な制約を用いて、データを４パラメータモデルに対してフィッティングした：各用量応答曲線の最大値、最小値、及び勾配は、プレート上の全ての用量応答曲線間で共有されるように設定されている；ＥＣ50は曲線毎に個別に決定された。各アッセイプレートは、１～２つの試験物品を含むＤＡＲＴ‐Ａ較正参照標準と、プレート間のばらつきを制御するための第２の参照標準のセット（陽性対照）とを含んでいた。較正参照標準及び陽性対照参照標準が各プレートに含まれている場合、１回のアッセイの実行は複数のプレートからなってよい。報告可能な結果は、ＤＡＲＴ‐Ａ参照標準較正曲線のＥＣ50値を試験物品のＥＣ50で除算したものとして計算される、相対的効力である。
７．１０．レポータ遺伝子バイオアッセイ
抗体ベースの又は抗体様の薬物を用いて、抗体依存性細胞仲介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）によって癌細胞を標的とし、殺滅することができる。このＡＤＣＣ様受容体バイオアッセイは、ルシフェラーゼ遺伝子にリンクされたＮＦＡＴ応答要素を有するように操作されたＪｕｒｋａｔエフェクタ細胞株（Ｐｒｏｍｅｇａ， Ｉｎｃ．）を使用し、上記要素の活性化はＡＤＣＣ活性を反映してこれを測定する。Ｋａｓｕｍｉ‐３細胞は、ＣＤ１２３受容体を発現するヒトリンパ芽球であり、このバイオアッセイではＤＡＲＴ‐Ａの標的として使用された。ＤＡＲＴ‐Ａを、Ｊｕｒｋａｔエフェクタ細胞及びＫａｓｕｍｉ３標的細胞の存在下に加えると、これはＫａｓｕｍｉ細胞上のＣＤ１２３受容体及びＪｕｒｋａｔエフェクタ細胞上のＣＤ３受容体に結合する。この架橋は、Ｊｕｒｋａｔエフェクタ細胞及びＮＦＡＴ経路の活性化につながる。そしてＮＦＡＴ応答要素は、ホタルルシフェラーゼレポータ遺伝子の発現を促進でき、これは、検出基質（Ｂｉｏ‐Ｇｌｏ）の添加後、発光リーダを用いて正確に直接定量できる。
このアッセイでは、１つの試験物品を、ＤＡＲＴ‐Ａ参照標準と共に、単一のアッセイプレート上で試験できる。複数のプレートを含めることによって、更なる試験物品を試験できる。ＤＡＲＴ‐Ａ参照標準は各アッセイプレートに含まれていなければならず、試験物品と共に、１５０～０．０００６ｎｇ／ｍＬ（最終濃度５０～０．００２ｎｇ／ｍＬ）の濃度に希釈される。細胞の解凍後使い捨て式バイアルを指定された濃度に希釈し、９６ウェルプレート内でＤＡＲＴ‐Ａ希釈物と共に、３７℃で２０～２４時間にわたってインキュベートする。次に、Ｊｕｒｋａｔエフェクタ細胞のＡＤＣＣ受容体遺伝子活性化を、Ｂｉｏ‐Ｇｌｏを用いて、酵素反応によって放出された発光の測定された量によって評価した。データを４パラメータ制約モデルに対してフィッティングし、応答の半分を誘発する試験物品の濃度であるＥＣ50を決定して、参照標準のＥＣ50と比較した。報告可能な結果は、同一のアッセイプレート上のＤＡＲＴ‐Ａ参照標準に対する、各試験物品について計算された相対的効力である。
７．１１．ＢＡ及びＭＰ回収のためのＲＰ‐ＨＰＬＣ
防腐剤回収は、逆相（ＲＰ）ＨＰＬＣ分析を用いて測定された。ＲＰ‐ＨＰＬＣ構成は、フォトダイオードアレイ（ＰＤＡ）検出器（λBA＝２５４ｎｍ、λMP＝３４０ｎｍ）、４０％アセトニトリルの移動相組成、０．１％ギ酸、及びＺｏｒｂａｘ（登録商標）５μｍ Ｅｃｌｉｐｓｅ‐ＸＤＢ‐Ｃ１８ ８０オングストローム液体クロマトグラフィカラムを含んでいた。試料は１０倍に希釈された。カラム温度は４０±５℃に設定された。５０μＬの溶液を１０分毎に注入した。
７．１２．微生物チャレンジ試験
微生物チャレンジ試験は、安定剤溶液の防腐剤効果を評価するために実施された。要約すると、表３６に従って高濃度（１２５０ｎｇ／ｍＬ）投薬用溶液を調製した。ＵＳＰ＜５１＞推奨微生物を１０～１００ＣＦＵ／ｍＬの標的濃度で溶液に導入した。溶液を、各微生物に関するＵＳＰ＜５１＞推奨温度で補間し、所定の時点において試料を回収した。試料の試験はＵＳＰ＜１２２７＞に従って実施された。微生物が増殖しない閾値は、微生物の初期濃度と比較してコロニー数が対数で０．５以下であることであると確立された。
本明細書において言及されている全ての公刊物及び特許は、個々の公刊物又は特許出願それぞれの全体が参照により本明細書に援用されていることが具体的かつ独立に指示されている場合と同程度に、参照により本明細書に援用されている。本発明をその具体的実施形態に関して説明したが、更なる修正形態が可能であり、本出願は、本発明が属する分野の公知の方法又は慣例の範囲内であるような、及びこれまでに挙げた必須の特徴に適用できるような、本開示からの逸脱を含む、本発明の原理に概ね従う本発明のいずれの変形、使用又は改変を包含することを意図していることを理解されたい。

Claims (129)

  1. ダイアボディ、リン酸ナトリウム緩衝液、塩化ナトリウム、及びポリソルベート（ＰＳ８０）を含む、安定な水性医薬製剤。
  2. 前記リン酸ナトリウムの濃度は約５ｍＭ～約３０ｍＭである、請求項１に記載の安定な水性医薬製剤。
  3. リン酸ナトリウムの前記濃度は約１０ｍＭである、請求項２に記載の安定な水性医薬製剤。
  4. 前記ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、請求項１～３のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  5. ＰＳ８０の前記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、請求項４に記載の安定な水性医薬製剤。
  6. 前記塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、請求項１～５のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  7. 塩化ナトリウムの前記濃度は約１５０ｍＭである、請求項６に記載の安定な水性医薬製剤。
  8. 前記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、請求項１～７のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  9. 前記ｐＨは約６．０である、請求項８に記載の安定な水性医薬製剤。
  10. 前記製剤は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、また前記製剤は約６．０のｐＨを有する、請求項１～１１のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  11. 前記ダイアボディの濃度は約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  12. 前記ダイアボディの前記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  13. 前記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  14. 前記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、請求項１～１３のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  15. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
    ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
    ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
    を含み、
    前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖が、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、請求項１４に記載の安定な水性医薬製剤。
  16. 前記製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの前記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、また前記製剤のｐＨは約６．０である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  17. 前記溶液は、前記ダイアボディのモノマー純度を２５℃で約３か月にわたって維持する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  18. 前記溶液は、前記ダイアボディのモノマー純度を２～８℃で約４８か月にわたって維持する、請求項１～１６のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤。
  19. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤を含む、コンテナ。
  20. 前記コンテナはガラスバイアルである、請求項１９に記載のコンテナ。
  21. 請求項１～１８のいずれか１項に記載の安定な水性医薬製剤、又は請求項１９若しくは２０に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
  22. リン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ベンジルアルコール（ＢＡ）、及びメチルパラベン（ＭＰ）を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
  23. 前記リン酸ナトリウムの濃度は約１５ｍＭ～約２５ｍＭである、請求項２０に記載の水性安定剤溶液。
  24. リン酸ナトリウムの前記濃度は約２０ｍＭである、請求項２１に記載の水性安定剤溶液。
  25. 前記ＢＡの濃度は約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２２～２４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  26. 前記ＢＡの濃度は約１３．２ｍｇ／ｍＬである、請求項２５に記載の水性安定剤溶液。
  27. 前記ＭＰの濃度は約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬである、請求項２２～２６のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  28. 前記ＭＰの前記濃度は約４．２５ｍｇ／ｍＬである、請求項２７に記載の水性安定剤溶液。
  29. 前記ＰＳ８０の濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬである、請求項２２～２８のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  30. 前記ＰＳ８０の前記濃度は約０．２５ｍｇ／ｍＬである、請求項２９に記載の水性安定剤溶液。
  31. 前記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、請求項２２～３０のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  32. 前記ｐＨは約８．２である、請求項２１に記載の水性安定剤溶液。
  33. 前記安定剤溶液は、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液のｐＨは約８．２である、請求項２２～３２のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  34. 前記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を含む共有結合二重特異性ダイアボディである、請求項２２～３３のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  35. 前記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、請求項２２～３４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  36. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
    ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
    ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
    を含み、
    前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、請求項３５に記載の水性安定剤溶液。
  37. 前記溶液は、前記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約５～７日にわたって維持する、請求項２２～３６のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  38. 前記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約５～７日にわたって防止する、請求項２２～３７のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  39. 請求項２２～３８のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
  40. 前記コンテナはガラスバイアルである、請求項３９に記載のコンテナ。
  41. 請求項２３～３８のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液、又は請求項３９若しくは４０に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
  42. 塩化ナトリウム及びＰＳ８０を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
  43. 前記塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、請求項４２に記載の水性安定剤溶液。
  44. 前記塩化ナトリウムの前記濃度は約１５０ｍＭである、請求項４３に記載の水性安定剤溶液。
  45. 前記ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、請求項４２～４４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  46. 前記ＰＳ８０の前記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、請求項４５に記載の水性安定剤溶液。
  47. 前記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、請求項４２～４６のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  48. 前記ｐＨは６．０である、請求項４７に記載の水性安定剤溶液。
  49. 前記溶液は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液のｐＨは約６．０である、請求項４２～４８のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  50. 前記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、請求項４２～４９のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  51. 前記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、請求項４２～５０のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  52. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
    ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
    ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
    を含み、
    前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、請求項５１に記載の水性安定剤溶液。
  53. 前記溶液は、前記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、請求項４２～５２のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  54. 前記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって防止する、請求項４２～５３のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  55. 請求項４２～５４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
  56. 前記コンテナはガラスバイアルである、請求項５５に記載のコンテナ。
  57. 請求項４２～５４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液、又は請求項５５若しくは５６に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
  58. リン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＰＳ８０、及びＢＡのうちの１つ以上を含む、ダイアボディの安定化のための水性安定剤溶液。
  59. 前記リン酸ナトリウムの濃度は約５ｍＭ～約３０ｍＭである、請求項５８に記載の水性安定剤溶液。
  60. 前記リン酸ナトリウムの前記濃度は約１０ｍＭである、請求項５９に関する水性安定剤溶液。
  61. 前記塩化ナトリウムの濃度は約１００ｍＭ～約３００ｍＭである、請求項５８又は５９に記載の水性安定剤溶液。
  62. 前記塩化ナトリウムの前記濃度は約１５０ｍＭである、請求項６１に記載の水性安定剤溶液。
  63. 前記ＢＡの濃度は約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬである、請求項５８～６２のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  64. 前記ＢＡの前記濃度は約９．０ｍｇ／ｍＬである、請求項６３に記載の水性安定剤溶液。
  65. 前記ＰＳ８０の濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬである、請求項５８～６４のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  66. 前記ＰＳ８０の前記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、請求項６５に記載の水性安定剤溶液。
  67. 組み換えヒトアルブミン（ｒＨＡ）を更に含む、請求項５８～６６のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  68. 前記ｒＨＡの濃度は約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬである、請求項６７に記載の水性安定剤溶液。
  69. 前記ｒＨＡの前記濃度は約０．１０ｍｇ／ｍＬである、請求項６８に記載の水性安定剤溶液。
  70. 前記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、請求項５８～６９のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  71. 前記ｐＨは６．０である、請求項７０に記載の水性安定剤溶液。
  72. 前記溶液は：
    ａ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのｒＨＡを含み、前記溶液のｐＨが約６．０である；又は
    ｂ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液のｐＨが約６．０である、
    請求項５８～７１のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  73. 前記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、請求項５８～７２のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  74. 前記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、請求項５８～７３のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  75. 前記ＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディは：
    （ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
    （ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
    を含み、
    前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、請求項７４に記載の水性安定剤溶液。
  76. 前記溶液は、前記ダイアボディのモノマー純度を約２５℃で約３～５日にわたって維持する、請求項５８～７５のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  77. 前記溶液は、微生物の増殖を約２５℃で約３～５日にわたって防止する、請求項５８～７６のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液。
  78. 請求項５８～７７のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液を含む、コンテナ。
  79. 前記コンテナはガラスバイアルである、請求項７８に記載のコンテナ。
  80. 請求項５８～７７のいずれか１項に記載の水性安定剤溶液、又は請求項７８若しくは７９に記載のコンテナを含む、密封パッケージ。
  81. キットであって：
    （ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、前記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
    （ｂ）前記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、前記溶液は、約１５ｍＭ～約２５ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１１．５ｍｇ／ｍＬ～約１５．５ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約３．５ｍｇ／ｍＬ～約５．５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．１ｍｇ／ｍＬ～約０．４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液は約７．７～約８．７のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに
    （ｃ）前記コンテナＡ及び前記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に前記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
    を含む、キット。
  82. キットであって：
    （ａ）安定な水性医薬製剤を含むコンテナＡであって、前記製剤は、約０．０１ｍｇ／ｍＬ～約１ｍｇ／ｍＬのダイアボディ、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝液、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．３ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記製剤は約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＡ；並びに
    （ｂ）（ｉ）前記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、前記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約７．０ｍｇ／ｍＬ～約１１．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
    （ｉｉ）前記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、前記溶液は、約５ｍＭ～約３０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；又は
    （ｉｉｉ）前記ダイアボディを安定化するための水性安定剤溶液を含むコンテナＢであって、前記溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液が約５．５～約７．０のｐＨを有する、コンテナＢ；並びに任意に
    （ｃ）前記コンテナＡ及び前記コンテナＢの内容物を組み合わせて、それを必要とする被験者に前記組み合わせた溶液を投与するための、説明書
    を含む、キット。
  83. 前記ダイアボディは、２つ、３つ、又は４つのポリペプチド鎖を有する共有結合二重特異性ダイアボディである、請求項８１又は８２に記載のキット。
  84. 前記ダイアボディはＣＤ１２３×ＣＤ３ダイアボディである、請求項８１～８３のいずれか１項に記載のキット。
  85. 前記ダイアボディは：
    ａ）配列番号４２のアミノ酸配列を有する第１のポリペプチド鎖；及び
    ｂ）配列番号４４のアミノ酸配列を有する第２のポリペプチド鎖
    を含み、
    前記第１のポリペプチド鎖及び前記第２のポリペプチド鎖は、ジスルフィド結合によって互いに共有結合している、請求項８４に記載のキット。
  86. 前記コンテナＡ中の前記安定な水性医薬製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬの前記ダイアボディ、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、及び約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記製剤は約６．０のｐＨを有する、請求項８１～８５のいずれか１項に記載のキット。
  87. 前記コンテナＢ中の前記水性安定剤溶液は、約２０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１３．２ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約４．２５ｍｇ／ｍＬのＭＰ、及び約０．２５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含む、請求項８１及び８３～８６のいずれか１項に記載のキット。
  88. 前記コンテナＢ中の前記水性安定剤溶液は：
    （ｉ）約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約９．０ｍｇ／ｍＬのＢＡ、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液は約６．０のｐＨを有する；又は
    （ｉｉ）前記コンテナＢ中の前記水性安定剤溶液は、約１０ｍＭのリン酸ナトリウム、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液は約６．０のｐＨを有する；又は
    （ｉｉｉ）前記コンテナＢ中の前記水性安定剤溶液は、約１５０ｍＭの塩化ナトリウム、約０．１ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液は約６．０のｐＨを有する、請求項８２～８６のいずれか１項に記載のキット。
  89. 前記水性安定剤溶液は更に、ｒＨＡを約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬの濃度で含む、請求項８２～８６のいずれか１項に記載のキット。
  90. 前記ｒＨＡの前記濃度は約０．１ｍｇ／ｍＬである、請求項８９に記載のキット。
  91. 前記被験者はヒト患者である、請求項８１～９０のいずれか１項に記載のキット。
  92. 前記コンテナＡ及び前記コンテナＢはガラスバイアルである、請求項８１～９１のいずれか１項に記載のキット。
  93. 請求項８１～９２のいずれか１項に記載のキット、並びに任意に前記キットの保管及び／又は使用のための説明書を含む、密封パッケージ。
  94. ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与する方法であって、前記方法は、請求項８１、８３～８５、８７、及び９１～９３のいずれか１項に記載のキットを使用するステップを含み、ここで前記コンテナＢの前記水性安定剤溶液は前記リン酸ナトリウム、ＰＳ８０、ＢＡ、及びＭＰを含み、且つ約７．７～約８．７のｐＨを有し；
    前記方法では：
    （ａ）前記コンテナＢの前記水性安定剤溶液を、コンテナＣに入れて混合し；
    （ｂ）前記コンテナＡの前記安定な水性医薬製剤を、前記コンテナＣに入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
    （ｃ）前記投薬用溶液を内包する前記コンテナＣを、前記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける、方法。
  95. 前記コンテナＣは静脈内注入用の生理食塩水を含む、請求項９４に記載の方法。
  96. ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与する方法であって、前記方法は、請求項８２～８６及び８８～９３のいずれか１項に記載のキットを使用するステップを含み、ここで前記コンテナＢの前記水性安定剤溶液はリン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ＢＡ、及びＰＳ８０のうちの１つ以上、並びに任意にｒＨＡを含み、且つ約５．５～約７．０のｐＨを有し；
    前記方法では：
    （ａ）前記コンテナＡの前記安定な水性医薬製剤を、前記コンテナＢの前記水性安定剤溶液中に入れて混合することにより、投薬用溶液を得て；
    （ｂ）任意に前記投薬用溶液を希釈し；
    （ｃ）前記投薬用溶液をコンテナＣに入れ；
    （ｄ）最終的な前記投薬用溶液を内包する前記コンテナＣを、前記被験者への投与のためのデバイスに取り付ける、方法。
  97. 前記コンテナＣは、静脈内注入用の生理食塩水又は静菌性生理食塩水を含む、請求項９６に記載の方法。
  98. 前記投与は注入ポンプによるものである、請求項９４～９７のいずれか１項に記載の方法。
  99. 前記投与は移動式である、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。
  100. 前記デバイスは移動式シングルポンプである、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。
  101. 前記デバイスは移動式デュアルポンプである、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。
  102. 前記デバイスはシリンジポンプである、請求項９４～９８のいずれか１項に記載の方法。
  103. 前記投与は少なくとも約２４時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  104. 前記投与は少なくとも約４８時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  105. 前記投与は少なくとも約９６時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  106. 前記投与は少なくとも約７日にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  107. 前記投与は約０．１０ｍＬ／時間～約２．５ｍＬ／時間の流量で行われる、請求項９４～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  108. 前記投与は約０．５ｍＬ／時間～約１０．０ｍＬ／時間の流量で行われる、請求項９４～１０６のいずれか１項に記載の方法。
  109. 前記投与は、約０．１ｍＬ／時間～約２．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも２４時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  110. 前記投与は、約０．５ｍＬ／時間～約６ｍＬ／時間の流量での少なくとも４８時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  111. 前記投与は、約０．６ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  112. 前記投与は、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  113. 前記投与は、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも９６時間にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２及び１１２のいずれか１項に記載の方法。
  114. 前記投与は、約０．３ｍＬ／時間～約３．０ｍＬ／時間の流量での少なくとも７日にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２のいずれか１項に記載の方法。
  115. 前記投与は、約０．５ｍＬ／時間の流量での少なくとも７日にわたる持続注入によるものである、請求項９４～１０２及び１１４のいずれか１項に記載の方法。
  116. 前記流量は前記被験者の静脈閉塞を防止する、請求項９４～１１５のいずれか１項に記載の方法。
  117. 前記ダイアボディは、３０～５００ｎｇ／ｋｇ／日からなる群から選択される治療投薬量で前記被験者に投与される、請求項９４～１１６のいずれか１項に記載の方法。
  118. 前記投薬用溶液は４０ｍＬの前記水性安定剤溶液を含む、請求項９４、９５、９７～９９、及び１０２～１１７のいずれか１項に記載の方法。
  119. 前記投薬用溶液は、約０．０３ｍｇ／ｍＬ～約０．０４ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０、約１．７ｍｇ／ｍＬ～約２．１ｍｇ／ｍＬのＢＡ、及び約０．５５ｍｇ／ｍＬ～約０．７ｍｇ／ｍＬのＭＰを含む、請求項９４、９５、９７～９９、及び１０２～１１８のいずれか１項に記載の方法。
  120. 前記投薬用溶液は、約１００ｍＭ～約３００ｍＭの塩化ナトリウム、約０．０５ｍｇ／ｍＬ～約０．１５ｍｇ／ｍＬのＰＳ８０を含み、前記溶液は約５．５～約７．０のｐＨを有する、請求項９６～１１８のいずれか１項に記載の方法。
  121. 前記患者はヒト被験者である、請求項９４～１２０のいずれか１項に記載の方法。
  122. 請求項９４～１２１のいずれか１項に記載の投与方法に従って、又は請求項８１～９２のいずれか１項に記載のキットを用いて、ダイアボディを、それを必要とする被験者に投与するステップを含む、血液悪性腫瘍を治療する方法。
  123. 血液悪性腫瘍の治療のための、請求項８１～９２のいずれか１項に記載のキットの使用。
  124. 前記血液悪性腫瘍が：急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）；ＣＭＬの急性転化及びＣＭＬに関連するＡｂｅｌｓｏｎ癌遺伝子（Ｂｃｒ‐ＡＢＬ転座）を含む慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）；骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）；急性Ｂリンパ芽球性白血病（Ｂ‐ＡＬＬ）；急性Ｔリンパ芽球性白血病（Ｔ‐ＡＬＬ）；リヒター症候群又はＣＬＬにおけるリヒター症候群の転化を含む慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）；有毛細胞白血病（ＨＣＬ）；芽球性形質細胞様樹状細胞新生物（ＢＰＤＣＮ）；マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）及び小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）を含む非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）；ホジキンリンパ腫、全身性肥満細胞症；並びにバーキットリンパ腫からなる群から選択される、請求項１２２に記載の方法、又は請求項１２３に記載の使用。
  125. 前記血液悪性腫瘍はＡＭＬである、請求項１２４に記載の方法又は使用。
  126. 前記血液悪性腫瘍はＢＰＤＣＮである、請求項１２４に記載の方法又は使用。
  127. 前記血液悪性腫瘍はＭＤＳである、請求項１２４に記載の方法又は使用。
  128. 前記血液悪性腫瘍はＴ‐ＡＬＬである、請求項１２４に記載の方法又は使用。
  129. 前記被験者はヒト被験者である、請求項１２２～１２８のいずれか１項に記載の方法又は使用。

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