KR20220007085A - 식도 협착 억제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은, CHST15 siRNA를 유효 성분으로 하는 신규 식도 협착 억제제에 관한 것이다.

Description

식도 협착 억제제

본 발명은, CHST15 siRNA를 유효 성분으로 하는 신규 식도 협착 억제제에 관한 것이다.

식도암이나 바렛 식도에 대한 저침습 또한 식도 기능 온존 유지를 가능하게 한 식도암 내시경 치료는, 식도 표재암이나 바렛 식도에 대한 근치적 치료로서 근년 정착해 왔다(문헌 1-5). 특히 내시경적 점막 하층 박리술(endoscopic submucosal dissection: ESD)의 기술의 진보는 놀랍고, 광범위한 병변에 있어서도 근치 요법이 될 수 있는, 새로운 치료법으로서 확립되어 왔다. 그러나 ESD 후에 반흔 협착이 고율로 발생하기 때문에, 환자는 협착에 의한 연하 장해뿐만 아니라, 협착에 의한 외과 수술에 이르기도 하고, 애써 암을 근절했음에도 그 후의 QOL이 현저하게 저해된다. 그 때문에, ESD 후의 협착 억제(예방·치료)는, 내시경 치료 기술의 진보에 수반하여, 반대로 새롭게 발생해 온 임상 과제로 되어 있다(문헌 1-6). 협착 발증에 관해서는, 식도 점막 절제 범위에 의존하고 있는 것이 명확해지고 있고, 특히 절제 범위가 3/4주, 즉 75％ 이상인지 그 이하인지가 매우 크리티컬한 포인트라는 에비던스가 축적되어 왔다(문헌 2, 4). 즉, 3/4주 이상의 범위에서 ESD를 실시한 경우, 수술 후의 식도 협착이 필발인 점에서, 3/4주 이상·이하에서 따로따로의 임상 처치가 요구되는 것도 명확하게 되어 있다.

식도 ESD 후의 협착 억제 전략으로서는, 위산 역류에 대한 식도 점막의 보호, 항염증, 항섬유화, 점막 재생 촉진, 기계적 확장이 고려되어 있고, 플로톤펌프 저해제(식도 점막 보호), 스테로이드 제제(항염증), 세포 시트(재생 촉진), 내시경적 벌룬 확장술(기계적 확장), 식도 스텐트(기계적 확장) 등의 시도가 이루어져 있지만, 아직도 병상 제어가 곤란하다(문헌 5, 6). 벌룬 확장술은 고통과 식도 파열의 위험을 수반하기는 하지만 실시할 수밖에 없는 것이 현 상황이지만, 고율로 재협착, 여러번 협착을 일으키기 때문에, 확장술을 반복해서 필요로 하는 경우가 많고, 수개월에 걸쳐서 난치성이고, QOL은 현저하게 저해된다.

그래서, 근년 스테로이드의 국주가 행해지고 있다(문헌 6, 7). 이것은 ESD 시행 직후에 국주 침으로 ESD 후 궤양의 부분에 스테로이드 용액을 내시경 아래에 주입하는 것이고, 벌룬 확장과 비교하면 안전성이 높은 것으로 되어 있다. 그러나, 스테로이드는 농양 형성을 포함하는 감염 리스크가 있을뿐만 아니라, 국소 투여에 의해 지연성의 식도 천공을 유발하는 것이 보고되어 있다(문헌 2-6, 8). 근층을 상해하는 것이 그 원인이기 때문에, ESD 후에 근층을 피해 신중하게 투여하는 것이 요구되지만, 광범 ESD에 수반하는 거대한 인공 궤양 부분에 대한 주사 시에, 해부학적으로 근층을 피해 투여하는 것은 곤란하여, 상시 천공 리스크가 수반된다. 또한 결정적으로는, 3/4주 이하의 비교적 작은 범위의 ESD 후의 협착에는 일정한 효과를 갖는다는 보고도 있지만, 3/4주 이상의 광범위한 ESD 후의 협착에는 전혀 효과가 없는 것이 명확하게 되어 있다(문헌 2-6). 따라서, 3/4주 이상의 ESD 후의 협착에 관해서는, 스테로이드를 포함하여 약물 요법이 전무하고, 벌룬 확장이나 스텐트 등의 기계적 확장을 할 수밖에 없는 것이 현 상황이다. 한편, 식도암뿐만 아니라, 특히 근년 증가하고 있는 바렛 식도에 있어서는 3/4주 이상의 광범위 내지는 전주성에 병변을 나타내는 케이스가 많기 때문에, 3/4주 이상의 광범위한 내시경 치료·ESD 치료가 요구된다.

또한, ESD 후의 식도 협착은, 암성 협착과는 전혀 다르고, 암을 근치시킨 후의 양성 협착이라는 사실은, 실제 임상적으로는 매우 중요하다. 절제할 수 없어 증대되는 암에 의한 진행성의 식도 협착을 임시 방편으로 방지하는 스텐트나, 더구나 근층 파괴에 의한 천공이나 종격농양을 유발하는 의원성 리스크는 최대한 회피해야만 하는 것이 양성 협착이다. 즉, 협착 억제 효과와 동시에, 높은 안전성을 확보한다는 매우 허들이 높은 치료가 실제 임상에서는 요구된다. 그래서, 상술한 바와 같은 광범위 ESD 후에 필발하는 식도 협착을 어떻게 안전하게 억제할지가, 신규 약제의 개발도 포함하여 긴요한 임상 과제로 되어 있다.

당황 산전이 효소인 CHST15(Carbohydratesulfotransferase(탄수화물 술포트랜스퍼라제)15)는 콘드로이틴 황산 A(CS-A)의 GalNAc(4SO₄) 잔기의 6위에 황산기를 전이하고, 고도로 황산화된 콘드로이틴 황산 E(CS-E)를 합성하는 II형의 막 관통형 골지 단백질이다(문헌 9, 10). 정상적인 인간 조직에서는 거의 발현되어 있지 않지만, 염증·섬유화나, 암에 있어서 그 발현이 증강하는 것이 알려져 있다. CS-E는, 콜라겐 섬유(피브릴) 형성을 촉진하는 것(문헌 11)이 보고되어 있고, CS-E는 국소 섬유화 병변의 유지와 증강에 관여되어 있다고 생각되고 있다. 또한, 고도로 황산화된 CS는, 섬유아세포의 접착에 관계되는 분자 CD44, 섬유아세포의 유주에 관계되는 케모카인 MCP-1, SDF-1, 섬유아세포의 증식에 관계되는 PDGF, TGF-β와 결합하는 것이 보고되어 있고(문헌 12, 13), 병변 국소에 있어서의 이들 분자의 농축을 통해서도 섬유아세포의 정착과 활성화에 관계되어 있는 것이 시사된다.

식도에 있어서는, 돼지의 반주성(50％)의 ESD 모델에서, ESD 후의 협착 식도 조직에 있어서 CHST15의 mRNA가 증가하고 있고, CHST15 siRNA에 의해 mRNA의 발현을 억제하면 섬유화가 억제된다고 보고되어 있다(문헌 14)는 점에서, 스테로이드와 마찬가지로 3/4주 이하의 ESD 후의 협착 억제 효과를 가질 가능성이 시사되어 있다. 그러나, 비특허문헌 14에도 리미테이션(limitation)으로서 명기되어 있는 바와 같이, 3/4주 이상 또한 전주성 ESD 후의 협착을 억제할 수 있는지 여부는 불분명하다. 스테로이드가 3/4주 이상인 협착에 대해서는 무효인 것과 마찬가지로, 3/4주 이상이나 전주성의 협착에 대한 억제 효과를 나타내는 것은 현저하게 허들이 높기 때문에, 예측은 곤란하다. 또한, 비특허문헌 14에서는, 동일 개체에 있어서 ESD를 2개소 작성하여, 1개소에 CHST15 siRNA를, 다른 1개소에 음성 대조 siRNA를 투여하고 있고, 음성 대조 siRNA 투여 부분이 나타내는 협소화 병변이 임상 증상에 끼치는 영향이 혼재하고 있던 점에서, CHST15 siRNA가 임상 증상(연하 장해에 수반하는 체중 감소 등)에 어떤 영향을 끼치는 것인지도 전혀 불분명했다.

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본 발명은, 양성 식도 협착에 대한, 안전한 신규 협착 억제제의 제공을 과제로 한다.

본 발명자들은, 전주성(100％) ESD 모델을 사용하여, CHST15 siRNA의 국소 투여의 효과를 조사함으로써, 종래 기술에 의한 치료로부터는 예측할 수 없었던 협착 억제 효과를 갖는 것을 알아냈다. 또한, 그 효과는 CHST15 siRNA의 항섬유화 효과에만 기초하는 것은 아니고, 성숙 상피의 출현과 근층의 거의 완벽한 보호라는, 전혀 이질적인 효과에 의한 것이 명확해졌다. 현저하게 곤란했던 전주성 ESD에 대하여 협착 억제 효과를 나타내는 약제이고, 또한 근층 파괴에 수반하는 천공이나 종격농양의 리스크가 없고, 실제 임상의 안전성의 면에서 매우 우수한 효과를 나타내는 약제인 것이 판명되고, 광범 내시경 치료에 수반하는 양성 식도 협착 치료에 대한 응용이 기대되었다.

본 발명자들은, 스테로이드를 포함하는 공지의 약물 요법에서는 유효한 효과를 발휘할 수 없는 레벨인 돼지 식도 전주성(100％) ESD 후의 식도 협착에 있어서, CHST15 siRNA를 단독으로 투여함으로써, 현저한 협착 억제 효과가 얻어지는 것을 알아냈다. 또한 본 발명자는, 그 효과는 근층 보호 작용을 수반하고 있는 것을 알아내고, 공지의 스테로이드 제제나 기계적 확장에 수반하는 근층 파괴의 리스크를 회피할 수 있는 것도 발견했다. 종래는 기계적 확장 이외에 대증 방법이 없었던 전주성 ESD 후의 양성 식도 협착에 있어서, CHST15 siRNA는 높은 안전성과 현저한 협착 억제 효과를 동시에 갖는 것을 실증했다.

더 구체적으로는, 본 발명은 이하의 〔1〕 내지 〔8〕을 제공하는 것이다.

〔1〕 CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA를 유효 성분으로서 포함하는, 양성 식도 협착을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.

〔2〕 식도 협착이, 이완 불능증에 의한 협착, 소화성 협착, 샤츠키·링, 내시경 치료에 의한 협착, 호산구성 식도염에 의한 협착, 외과 수술 후 협착, 방사선 요법에 수반하는 협착, 부식성 협착 및 난치성 협착으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 협착인, 〔1〕의 의약 조성물.

〔3〕 식도 협착이, 식도의 3/4주 이상에서 발생하고 있는, 〔1〕 또는 〔2〕의 의약 조성물.

〔4〕 식도의 근층 상해를 수반하지 않는 것을 특징으로 하는, 〔1〕 내지 〔3〕 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

〔5〕 스테로이드를 병용하지 않는, 〔1〕 내지 〔4〕 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

〔6〕 내시경적 벌룬 확장술을 병용하지 않거나 또는 내시경적 벌룬 확장술의 병용 횟수를 줄인, 〔1〕 내지 〔5〕 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

〔7〕 siRNA가, 100 내지 10,000nM으로 포함되는, 〔1〕 내지 〔6〕 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

〔8〕단회 투여 또는 1주간 간격으로 투여되는, 〔1〕 내지 〔7〕 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물.

본 발명은 또한 이하에 관한 것이다.

[A-1] CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA를 투여하는 공정을 포함하는, 식도 협착을 치료하는 방법.

[B-1] 식도 협착의 치료에 있어서 사용하기 위한, CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA.

[C-1] 식도 협착 억제제의 제조에 있어서의, CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA의 사용.

[D-1] CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA를 사용하는 공정을 포함하는, 식도 협착 억제제의 제조 방법.

식도의 3/4주성 이상 특히 전주성 ESD 후는 매우 강력한 협착을 나타내는 점에서, 그것을 억제하는 약제는 지금까지 알려져 있지 않았지만, 놀랍게도, CHST15 siRNA를 국소 투여함으로써, 협착 억제 효과를 얻을 수 있는 것이, 본 발명에 의해 처음으로 명확해졌다. 또한, CHST15 siRNA는, 지금까지는 점막 하층에 한정된 항섬유화 작용밖에 알려져 있지 않고, 금회 섬유화와는 다른 근층(고유 근층) 보호의 용도를 갖는 것도, 본 발명에 의해 처음으로 명확해졌다. 이와 같이, 종래의 약물요법에서는 치료 불가능했던 식도 협착에 대해서도 유효하고 또한 안전한 신규 치료법이 제공되었다.

도 1은 돼지 전주성 ESD 모델에 있어서의 식도 협착을 나타내는 식도 적출 표본 전체의 육안상 및 마송 염색상이다. ESD 실시 직후에, 생리 식염수(상단), 스테로이드 제제·케나코트(중단), CHST15 siRNA(하단)를 국소 주사 후, 14일째(Day14)에 도살했다.
도 2는 도 1의 상단과 마찬가지로, 생리 식염수가 전주성 ESD 후 식도 협착에 끼치는 영향을 나타내는 마송 염색상의 확대도이다.
도 3은 도 1의 중단과 마찬가지로, 스테로이드 제제(케나코트)가 전주성 ESD 후 식도 협착에 끼치는 영향을 나타내는 마송 염색상의 확대도이다.
도 4는 도 1의 하단과 마찬가지로, CHST15 siRNA가 전주성 ESD 후 식도 협착에 끼치는 영향을 나타내는 마송 염색상의 확대도이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명자는, CHST15(Carbohydrate sulfotransferase 15) 유전자의 발현을 억제함으로써, 식도 전주성 ESD 후의 식도 협착에 대한 억제 효과가 발휘되는 것을 알아냈다. 더 상세하게는, 본 발명자는, CHST15 유전자의 발현을 RNAi(RNA interferance; RNA 간섭) 효과에 의해 억제함으로써, 식도 협착이 억제되는 것을 알아냈다. 또한, 본 발명자는, 기존에 사용되고 있는 스테로이드 제제에서는 유의한 치료 효과가 인정되지 않는 레벨의 전주성 ESD 후의 식도 협착에 대해서도, CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA에 의해 현저하게 협착이 억제되고, 또한 근층 보호 작용에 의해 안전하게 효과가 발휘되는 것을 알아냈다.

본 발명의 CHST15 유전자는 특별히 제한되는 것은 아니지만, 통상, 동물 유래이고, 보다 바람직하게는 포유 동물 유래이고, 가장 바람직하게는 인간 유래이다. 또한, 본 발명의 CHST15는, 별칭으로서, GalNAc4S-6ST(N-아세틸갈락토사민 4-술페이트 6-0 술포트랜스퍼라제)(N-acetylgalactosamine 4-sulfate 6-0 sulfotransferase)라고도 불린다.

본 발명의 CHST15(GalNAc4S-6ST)의 서열은, 예를 들어 액세션 번호 NM_015892에 기초하여 취득할 수 있다. 일례로서, 본 발명의 CHST15 유전자의 염기 서열을 서열 번호: 3에, 해당 유전자에 의해 코드되는 아미노산 서열을 서열 번호: 4에 기재한다. 상기 이외의 아미노산 서열을 포함하는 단백질이라도, 예를 들어 서열 번호: 4에 기재된 서열과 높은 동일성(통상 70％ 이상, 바람직하게는 80％ 이상, 보다 바람직하게는 90％ 이상, 가장 바람직하게는 95％ 이상)을 갖고, 또한 상기 단백질이 갖는 기능을 갖는 단백질은, 본 발명의 CHST15 단백질에 포함된다. 상기 단백질이란, 예를 들어 서열 번호: 4에 기재된 아미노산 서열에 있어서, 1 이상의 아미노산이 부가, 결실, 치환, 삽입된 아미노산 서열을 포함하는 단백질이며, 통상 변화되는 아미노산 수가 30아미노산 이내, 바람직하게는 10아미노산 이내, 보다 바람직하게는 5아미노산 이내, 가장 바람직하게는 3아미노산 이내이다.

본 발명에 있어서의 상기 유전자에는, 예를 들어 서열 번호: 3에 기재된 염기 서열을 포함하는 DNA에 대응하는 다른 생물에 있어서의 내재성의 유전자(인간의 상기 유전자의 호몰로그 등)가 포함된다. 또한, 서열 번호: 3에 기재된 염기 서열을 포함하는 DNA에 대응하는 다른 생물의 내재성의 DNA는, 일반적으로, 각각 서열 번호: 3에 기재된 DNA와 높은 동일성(상동성)을 갖는다. 높은 동일성이란, 바람직하게는 70％ 이상, 더욱 바람직하게는 80％ 이상, 보다 바람직하게는 90％ 이상(예를 들어, 95％ 이상, 나아가 96％, 97％, 98％ 또는 99％ 이상)의 상동성을 의미한다. 이 상동성은, mBLAST 알고리즘(Altschul et al.(1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-8; Karlin and Altschul(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-7)에 의해 결정할 수 있다. 또한, 해당 DNA는, 생체 내로부터 단리한 경우, 각각 서열 번호: 3에 기재된 DNA와 엄격한 조건 하에서 하이브리다이즈한다고 생각된다. 여기서 「엄격한 조건」으로서는, 예를 들어 「2×SSC, 0.1％ SDS, 50℃」, 「2×SSC, 0.1％ SDS, 42℃」, 「1×SSC, 0.1％ SDS, 37℃」, 보다 엄격한 조건으로서 「2×SSC, 0.1％ SDS, 65℃」, 「0.5×SSC, 0.1％ SDS, 42℃」 및 「0.2×SSC, 0.1％ SDS, 65℃」의 조건을 들 수 있다.

본 명세서에 있어서, 「CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA」는, 「CHST15 siRNA」라고 표현할 수도 있고, 바람직하게는 서열 번호: 1(5'-ggagcagagc aagaugaaua caaucag-3') 및 서열 번호 2(5'-gauuguauuc aucuugcucu gcuccau-3')에 기재된 RNA가 하이브리다이즈한 구조의 siRNA이다.

본 발명에 있어서의 siRNA는, 반드시 모든 뉴클레오티드가 리보뉴클레오티드(RNA)가 아니어도 된다. 즉, 본 발명에 있어서, siRNA를 구성하는 1 혹은 복수의 리보뉴클레오티드는, 분자 자체로서 CHST15 유전자의 발현을 억제하는 기능을 갖는 것이라면, 대응하는 데옥시리보뉴클레오티드여도 된다. 이 「대응한다」란, 당 부분의 구조는 다르기는 하지만, 동일한 염기종(아데닌, 구아닌, 시토신, 티민(우라실))인 것을 가리킨다. 예를 들어, 아데닌을 갖는 리보뉴클레오티드에 대응하는 데옥시리보뉴클레오티드란, 아데닌을 갖는 데옥시리보뉴클레오티드의 것을 의미한다. 또한, 상기 「복수」란 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 2 내지 5개 정도의 소수를 가리킨다.

본 발명의 siRNA는, 당업자에게 있어서는 시판되고 있는 핵산 합성기를 사용하여 적절히 제작하는 것이 가능하다. 또한, 원하는 RNA의 합성에 대해서는, 일반의 합성 수탁 서비스를 이용하는 것이 가능하다.

본 발명의 CHST15 siRNA는, 단제이고 양성 식도 협착에 대한 억제 효과를 갖는 점에서, 본 발명은, CHST15 siRNA를 유효 성분으로서 포함하는, 식도 협착 억제제(양성 식도 협착을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물)를 제공한다. 혹은, 본 발명은, CHST15 siRNA를 투여하는 공정을 포함하는 양성 식도 협착을 치료하는 방법, 양성 식도 협착의 치료에 있어서 사용하기 위한 CHST15 siRNA, 식도 협착 억제제의 제조에 있어서의 CHST15 siRNA의 사용 및 CHST15 siRNA를 사용하는(제제화하거나 및/또는 약학적 혹은 생리학적으로 허용되는 담체와 혼합함) 공정을 포함하는 식도 협착 억제제의 제조 방법을 제공한다.

본 발명에 있어서 치료 또는 예방의 대상이 되는 식도 협착은, 본 발명의 항CHST15 siRNA가 치료 효과를 발휘하는 양성 식도 협착이라면 특별히 한정되지 않지만, 이완 불능증에 의한 협착, 소화성 협착, 샤츠키·링, 내시경 치료에 의한 협착, 호산구성 식도염에 의한 협착, 외과 수술 후 협착, 방사선 요법에 수반하는 협착, 부식성 협착 및 난치성 협착으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 협착이고, 바람직하게는 3/4주 이상의 광범위 식도 ESD 후의 식도 협착이다. 또한, 본 발명에 있어서의 「치료」에는, 반드시 완전한 치료 효과를 갖는 경우에 한정되지 않고, 부분적인 효과를 갖는 경우여도 된다.

본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물은, 약학적 또는 생리학적으로 허용되는 담체, 부형제, 혹은 희석제 등과 혼합하여, 경구, 혹은 비경구적으로 투여할 수 있다. 경구제로서는, 과립제, 산제, 정제, 캡슐제, 용제, 유제, 혹은 현탁제 등의 제형으로 할 수 있다. 비경구제로서는, 주사제, 점적제, 외용약제, 흡입제(네블라이저) 혹은 좌제 등의 제형을 선택할 수 있다. 주사제에는, 피하 주사제, 근육 주사제, 복강내 주사제, 두개내 투여 주사제, 혹은 비강내 투여 주사제 등을 나타낼 수 있다. 외용약제에는, 경비 투여제, 혹은 연고제 등을 나타낼 수 있다. 주성분인 본 발명의 항암제 또는 의약 조성물을 포함하도록, 상기한 제형으로 하는 제제 기술은 공지이다.

예를 들어, 경구 투여용의 정제는, 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물에 부형제, 붕괴제, 결합제 및 활택제 등을 더하여 혼합하고, 압축 정형함으로써 제조할 수 있다. 부형제에는, 유당, 전분, 혹은 만니톨 등이 일반적으로 사용된다. 붕괴제로서는, 탄산칼슘이나 카르복시메틸셀룰로오스칼슘 등이 일반적으로 사용된다. 결합제에는, 아라비아 고무, 카르복시메틸셀룰로오스, 혹은 폴리비닐피롤리돈이 사용된다. 활택제로서는, 탈크나 스테아르산마그네슘 등이 공지이다.

본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 포함하는 정제는, 마스킹이나, 장용성 제제로 하기 위해, 공지의 코팅을 실시할 수 있다. 코팅제에는, 에틸셀룰로오스나 폴리옥시에틸렌글리콜 등을 사용할 수 있다.

또한 주사제는, 주성분인 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 적당한 분산제와 함께 용해, 분산매에 용해, 혹은 분산시킴으로써 얻을 수 있다. 분산매의 선택에 의해, 수성 용제와 유성 용제의 어느 제형으로 할 수도 있다. 수성 용제로 하기 위해서는, 증류수, 생리 식염수, 혹은 링거액 등을 분산매로 한다. 유성 용제에서는, 각종 식물유나 프로필렌글리콜 등을 분산매에 이용한다. 이때, 필요에 따라 파라벤 등의 보존제를 첨가할 수도 있다. 또한 주사제 중에는, 염화나트륨이나 포도당 등의 공지의 등장화제를 더할 수 있다. 또한, 염화벤잘코늄이나 염산프로카인과 같은 무통화제를 첨가할 수 있다.

또한, 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 고형, 액상, 혹은 반고 형상의 조성물로 함으로써 외용제로 할 수 있다. 고형, 혹은 액상의 조성물에 대해서는, 먼저 설명한 것과 동일한 조성물로 함으로써 외용제로 할 수 있다. 반고 형상의 조성물은, 적당한 용제에 필요에 따라 증점제를 더하여 조제할 수 있다. 용제에는, 물, 에틸알코올, 혹은 폴리에틸렌글리콜 등을 사용할 수 있다. 증점제에는, 일반적으로 벤토나이트, 폴리비닐알코올, 아크릴산, 메타크릴산, 혹은 폴리비닐피롤리돈 등이 사용된다. 이 조성물에는, 염화벤잘코늄 등의 보존제를 더할 수 있다. 또한, 담체로서 카카오 버터와 같은 유성 기재, 혹은 셀룰로오스 유도체와 같은 수성 겔 기재를 조합함으로써, 좌제로 할 수도 있다.

본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 유전자 치료제로서 사용하는 경우는, 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 주사에 의해 직접 투여하는 방법 외에, 핵산이 내장된 벡터를 투여하는 방법을 들 수 있다. 상기 벡터로서는, 아데노바이러스 벡터, 아데노 수반 바이러스 벡터, 헤르페스 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 등을 들 수 있고, 이들 바이러스 벡터를 사용함으로써 효율적으로 투여할 수 있다.

또한, 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 리포솜 등의 인지질 소포체에 도입하고, 그 소포체를 투여하는 것도 가능하다. siRNA를 유지시킨 소포체를 리포펙션법에 의해 소정의 세포에 도입한다. 그리고, 얻어지는 세포를, 예를 들어 정맥내, 동맥내 등에 전신 투여한다.

또한 본 발명은, 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물을 개체(예를 들어, 환자) 또는 그 식도 조직에 투여하는 공정을 포함하는, 대상에 있어서의 식도 협착을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 치료 또는 예방 방법의 대상이 되는 개체는, 식도 협착을 발증할 수 있는 생물이라면 특별히 제한되지 않지만, 바람직하게는 인간이다. 대상에 대한 투여는, 예를 들어 경구 투여, 피내 투여, 혹은 피하 투여 또는 정맥내 주사 등 당업자에게 공지의 방법에 의해 행할 수 있다. 전신 투여 또는 식도 조직 내에 대한 직접적인 국소 투여가 가능하다. 또한, 본 발명의 siRNA를 목적의 조직 또는 기관에 도입하기 위해, 시판되고 있는 유전자 도입 키트를 사용할 수도 있다.

본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물은, 안전하게 되어 있는 투여량의 범위 내에 있어서, 인간을 포함하는 포유 동물 대상에 대하여, 필요량(유효량)이 투여된다. 본 발명의 식도 협착 억제제 또는 의약 조성물의 투여량은, 제형의 종류, 투여 방법, 대상의 연령이나 체중, 대상의 증상 등을 고려하여, 최종적으로는 당업자(의사 또는 수의사)의 판단에 의해 적절히 결정할 수 있다. 일례를 나타내면, 연령, 성별, 증상, 투여 경로, 투여 횟수, 제형에 따라 다르지만, 예를 들어 본 발명의 CHST15 siRNA의 국소 투여에서의 투여량은 1일 1회 100 내지 10,000nM 정도이고, 단회 투여 또는 1주간 간격 내지 1개월 간격(예를 들어, 1주간 간격, 2주간 간격 또는 1개월 간격) 투여된다.

또한, 본 명세서에 있어서 인용된 모든 선행기술문헌은, 참조로서 본 명세서에 포함된다.

실시예

이하, 실시예를 사용하여 본 발명을 더 구체적으로 설명한다. 단, 본 발명의 기술적 범위는 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

또한, 본 실시예에 있어서 사용한 「CHST15 siRNA」는, 서열 번호: 1 및 2에 기재된 RNA가 하이브리다이즈한 구조의 siRNA이다.

<실시예 1>

식도 전주성(100％) ESD 모델의 제작에 대해서는, 실험용 미니 돼지를 사용했다. 실험동물로서 범용되는 마우스·래트에 있어서는, 해부학적으로 인간과 같은 중층 편평 상피가 없고, 생리적으로 역류가 일어나지 않기 때문에, 인간 식도 질환의 중요한 병태에 관여하는 요소를 반영하기 어렵다. 한편, 체중 40㎏ 정도의 미니 돼지의 식도는 전체 길이 30㎝ 정도이고, 인간 성인의 식도 길이 약 40㎝에 비교해도 손색 없고, 인간과 마찬가지로 중층 편평 상피를 갖고, 생리적 역류도 일어나는 데다가, 인간의 상부 소화관 내시경 세트를 사용한 ESD 실험을 행할 수 있는 이점도 있다.

미니 돼지는, 생리 식염수 투여군, 스테로이드 제제(케나코트) 투여군, CHST15 siRNA(홋카이도 시스템 사이언스사제, 로트 번호 40481638) 투여군의 3군을 사용했다(n＝1/군). 각 군의 미니 돼지를 전신 마취 호흡기 관리 하에, 상부 소화관 내시경을 경구 삽입하고, 앞니열로부터 15㎝ 내지 25㎝ 사이에, 듀얼 나이프를 사용하여 전체 길이 5㎝의 전주성(100％) ESD를 시행했다. ESD 실시 직후의 전주성 인공 궤양에 대하여, 궤양저로부터 주위의 전체에 균등하게 덮도록 합계 20개소에, 내시경용 주사 바늘을 사용하여 투여 용액(생리 식염수, 스테로이드 제제, CHST15 siRNA, 250nM 용액)을 합계 2mL 주입했다.

ESD 후 무처치이면 2주간 이내에 식도 협착이 발현되어, 음식물도 통과하지 않게 되므로, 그 이후 4주 이내에 미니 돼지가 사망하는 점에서, 단회 투여 후의 관찰 기간을 2주간으로 설정하고, 2주간 후(Day14)에 전군 도살하고, 육안 소견, 그리고 병리 조직학적 해석(마송 염색)에 의해, 식도 협착의 정도를 검토했다.

결과:

생리 식염수 투여군:

<육안 소견>

식도 길이의 단축과 완전 폐색을 인정했다. 섭식 불가의 상태였다.

<병리 소견>

일부 미숙한 재생 상피의 출현을 인정하기는 하지만, ESD에 의한 인구 궤양이 잔존하여, 궤양저 이심의 광범위한 섬유화와 근층의 으스러짐을 인정했다.

스테로이드 제제(케나코트) 투여군:

<육안 소견>

식도 길이의 단축의 정도는 생리 식염수 투여군과 비교하여 경도였지만, 완전 폐색을 인정했다. 섭식 불가의 상태였다.

<병리 소견>

ESD에 의한 인구 궤양이 잔존하기는 지만, 생리 식염수 투여군과 비교하면, 비교적 성숙한 재생 상피에 의한 수복 소견을 인정했다. 그러나, 이심은 전층성에 광범위한 섬유화를 인정하고, 그 정도는 생리 식염수 투여군보다도 강도였다. 또한, 결손을 수반하는 광범위한 근층의 파괴를 인정했고, 장막층까지 섬유화가 미치고 있었다.

CHST15 siRNA 투여군:

<육안 소견>

식도 길이의 단축은 거의 인정되지 않고, 일부 내강의 협소화는 인정되기는 하지만, 협착·폐색은 없고, 섭식 가능의 상태였다.

<병리 소견>

ESD에 의한 인구 궤양은 거의 재생 상피에 피복되어, 스테로이드 투여군과 비교해도 중층 편평 상피가 규칙적으로 구축된, 더 성숙한 재생 상피이었다. 이심은 병적 섬유화는 없고, 상피를 지지하는 거의 생리적인 레벨의 섬유였다. 또한, 근층의 장해를 전혀 인정하지 않았다.

고찰:

스테로이드 제제 투여군에 있어서는 전주성 ESD 후의 식도 협착 억제 효과는 없고, 이것은 임상 치험과 동일한 결과라고 생각되었다. 생리 식염수 투여군과 비교하여, 재생 상피를 수반하는 궤양저의 축소 경향은 인정되기는 했지만, 근층의 광범위한 상해를 드러내고 있었다. 이것은 스테로이드가 갖는 단백 이화 작용에 의한 것이라고 생각되고, 임상에서 인정되는 지발성 천공의 원인으로 되는 것이 시사되었다.

한편, CHST15 siRNA 투여군에 있어서 인정된 협착 억제 효과는, 근층을 거의 정상 상태로 유지한 채 획득할 수 있는 효과였다. 그것은 식도의 연동 운동, 즉 연하 기능을 거의 정상적으로 유지한 채 협착이 억제되어 있는 것을 나타냄과 함께, 실제 임상적으로도 매우 안전하게 치료할 수 있는 것이 강하게 시사되었다.

실제 임상에 있어서의 ESD 후 식도 협착에 있어서는, 벌룬 확장을 반복해서 실시하고 있는 것이 현 상황이고, 근층에 대한 대미지는 최대한 회피해야 하기 때문에, 스테로이드의 복수회 투여는 회피해야 한다고 생각된다. 또한, 식도암에 있어서는 재발이 있고, 그 재발 식도암에 대해서도 ESD 치료를 안전하게 설비할 수 있도록 해 두기 위해서는, 근층의 보호는 절대적 조건으로 된다. 반복되는 내시경 치료를 실시하기 위해서라도, 스테로이드 제제에 비교하여 CHST15 siRNA의 임상적 유용성이 매우 높다고 생각되었다.

본 발명의 CHST15 siRNA는, 기존 요법에서는 전혀 효과가 나오지 않는 돼지 식도 전주성(100％) ESD 후의 식도 협착 모델을 이용한 시험에 있어서, 현저한 협착 억제 효과를 나타냈다. 또한, 근층 보호 효과를 갖는 점에서, 높은 안전성(기존 치료와 같은 천공의 리스크가 없음)과 함께, 근층의 기능(연하 기능)의 유지, 혹은 반복하는 내시경 치료를 실현 가능하게 한다는 종래에 전혀 그려지지 않았던 임상 현장의 모습을 도출할 수 있는 것이 생각되었다.

이들 결과로부터, 본 발명의 CHST15 siRNA는 신규 식도 협착 억제제로서 유용한 것이 나타났다.

SEQUENCE LISTING <110> TME therapeutics Inc. <120> Agent for inhibiting esophageal stricture <130> FP4429PCT <160> 4 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 27 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sirna <400> 1 ggagcagagc aagaugaaua caaucag 27 <210> 2 <211> 27 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sirna <400> 2 gauuguauuc aucuugcucu gcuccau 27 <210> 3 <211> 4713 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (514)..(2199) <400> 3 ggaaatctgg cattttttaa agtttgcgcc ccacaaagag gaaatattcc aaaggtactc 60 aggatgtaaa aggggagatc ttcacagatg cctccgtgga tggcatggca atccatccat 120 caatgagaag accatgattt cttttaattt tctgtgtgtt tccacattcc ccagtgagaa 180 ttcttccacc tttttttgtg ccatgggaaa aacctgaagg gcaggcagag ctgctcccga 240 acttgtgacc ttctctgagg ttgcagcggc tcttgtagaa catgactctg ggacatcact 300 tccttttgtt ttctttcgga gctgaaccaa agaatgtgca ccctctttct ctagtgctgt 360 ggtgtctgct tatttttgta tttgtgcttt ccatccatct tctgtgatca caaggcattc 420 ttaaggtttt ctagcacgac ttgcggacat ccagactcgt 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Claims (8)

1. CHST15 유전자의 발현을 억제하는 siRNA를 유효 성분으로서 포함하는, 식도 협착을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물.
2. 제1항에 있어서, 식도 협착이, 이완 불능증에 의한 협착, 소화성 협착, 샤츠키·링, 내시경 치료에 의한 협착, 호산구성 식도염에 의한 협착, 외과 수술 후 협착, 방사선 요법에 수반하는 협착, 부식성 협착 및 난치성 협착으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 협착인 의약 조성물.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 식도 협착이, 식도의 3/4주 이상에서 발생하고 있는 의약 조성물.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 식도의 근층 상해를 수반하지 않는 것을 특징으로 하는 의약 조성물.
5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 스테로이드를 병용하지 않는 의약 조성물.
6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 내시경적 벌룬 확장술을 병용하지 않거나 또는 내시경적 벌룬 확장술의 병용 횟수를 줄인 의약 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, siRNA가, 100 내지 10,000nM으로 포함되는 의약 조성물.
8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 단회 투여 또는 1주간 간격으로 투여되는 의약 조성물.

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