KR20220004637A - 수용성 보조제 - Google Patents

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KR20220004637A
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히토시 반
요스케 다카나시
마사시 고토
나츠코 스기노베
유스케 이마자키
요시코 이와타
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다이닛본 스미토모 세이야꾸 가부시끼가이샤
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Abstract

본 발명은 암 백신에 대한 백신 보조제로서 유용한 화합물, 상기 화합물의 제조 방법, 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물, 및 암 백신에 대한 백신 보조제로서의 상기 화합물의 용도에 관한 것이다.

Description

수용성 보조제
본 발명은 백신 (암 백신 또는 감염 백신) 에 대한 백신 보조제로서 유용한 화합물, 이의 제조 방법, 화합물을 포함하는 약학 조성물, 및 백신 (암 백신 또는 감염 백신) 에 대한 백신 보조제로서의 화합물의 용도에 관한 것이다.
일반적으로, 암 백신 치료요법은 종양 항원으로부터 수득한 단백질 또는 펩티드를 사용하여 종양에 특이적인 면역 세포를 활성화시켜 암을 치료한다. 치료요법 중에서, 종양 항원 펩티드를 항원으로 사용하는 치료요법을 암 펩티드 백신 치료요법으로 지칭한다. 일반적으로, 종양 항원 펩티드만을 사용한 치료요법은 낮은 면역원성을 초래한다. 따라서, 항종양 면역에 중요한 세포독성 T-림프구 (CTL) 를 유도하기 위해서, 백신 보조제를 함께 사용한다. 예를 들어, W/O 에멀젼은 내부 상에 수성 상을 갖기 때문에 내부 상에 항원 펩티드를 쉽게 보유할 수 있다. 따라서, 백신 보조제로서 W/O 에멀젼을 사용하는 것은 효과적인 CTL 유도를 나타내는 것으로 보고되었다 (특허 문헌 1).
종양 항원 펩티드에 대한 백신 보조제로서 사용되는 W/O 에멀젼은 희석용 에멀젼 조성물 (특허 문헌 1), 및 불완전 프로인트 보조제 (IFA) 및 MontanideTM (비특허 문헌 1 및 2) 를 포함한다. 또한, W/O 에멀젼에 불활성화된 마이코박테리움 투베르쿨로시스 (Mycobacterium Tuberculosis) 를 첨가하여 제조되는 완전 프로인트 보조제 (CFA) 가 또한 공지되어 있다. 그러나 CFA 는 독성으로 인해 인간에 사용이 허용되지 않았다 (비특허 문헌 2).
종래에는 CFA 와 같은 보조제에 불활성화된 세균체 자체를 첨가하여 제조된 보조제 조성물을 사용하여 표적 활성을 향상시켰으나, 최근에는 그의 작용 메커니즘이 알려진 화합물을 포함하는 백신 보조제가 개발되었다. 그 중, 톨 유사 수용체 7 (TLR7) 은 항종양 활성에 필요한 세포면역을 강화시키기 위해 Th1 세포를 활성화시키는 것으로 보고되었다 (비특허 문헌 3). TLR7 과 관련하여, 일부 소분자는 리간드로서 작용하는 것으로 알려져 있고, 시판되고 있는 이미퀴모드 뿐만 아니라 피리미딘 구조를 갖는 화합물이 TLR7 효능제로서 작용하는 것으로 보고되었다 (특허 문헌 2).
TLR7 효능제를 개선하여 보조제에 적합한 물리적 특성을 갖는 새로운 화합물을 발견하기 위한 몇몇 시도가 있었다. 예를 들어, 접합된 포스페이트 기의 구조를 갖는 TLR7 효능제가 알룸 (Alum) 보조제와 같은 불용성 금속 입자에 결합하는 것으로 보고되었다 (특허 문헌 3, 비특허 문헌 4 및 5).
WO 2006/078059 WO 2009/067081 WO 2012/031140
J Immunother Cancer. 2016 Sep 20; 4: 56 Semin Immunol. 2010 Jun; 22(3): 155-61. Vaccine. 2011 Apr 12; 29(17): 3341-55. Sci Transl Med. 2014 Nov 19; 6(263): 263ra160 J. Med. Chem., 2016, 59 (12), pp 5868-5878
본 발명의 목적은 보조제 활성을 향상시키기 위한 접합된 TLR7 효능제를 제공하는 것일 수 있다.
본 발명자들은 보조제 활성을 향상시키기 위한 TLR7 효능제를 찾기 위하여 많은 연구를 한 결과, 피리미딘 구조를 갖는 TLR7 효능제와 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 를 접합시켜 수 용해도를 첨가한 TLR7 효능제가 우수한 보조제 활성을 갖는다는 것을 발견하였다. 이러한 발견에 기초하여, 본 발명이 달성된다. 본 발명에 따르면, 하기 식 (1) 의 피리미딘 유도체 (이하, "본 발명의 화합물" 로도 지칭함) 가 제공된다.
본 발명은 하기 기재된 바와 같다.
(항목 1)
식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00001
식 중에서,
X 는 메틸렌, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2, 또는 NR5 이고, 여기서 R5 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
R1 은 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
R2 및 R3 은 독립적으로 수소 원자, 또는 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
R4 는 수소 원자, 할로겐, 히드록시, C1-6 알킬 (1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있음), C1-6 알콕시 (1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있음) 또는 시아노이고,
L 은 링커이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고, 여기서 R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, m 은 3 - 100 의 정수임.
(항목 2)
항목 1 에 있어서, X 가 메틸렌인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 3)
항목 1 또는 2 에 있어서, R1 이 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-3 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 4)
항목 3 에 있어서, R1 이 메틸인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 5)
항목 1 내지 4 중 어느 하나에 있어서, R4 가 수소 원자, 히드록시, C1-3 알킬, 또는 C1-3 알콕시인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 6)
항목 5 에 있어서, R4 가 수소 원자, 히드록시, 또는 메톡시인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 7)
항목 1 내지 6 중 어느 하나에 있어서, R2 가 C1-6 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 8)
항목 1 내지 7 중 어느 하나에 있어서, R3 이 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 9)
항목 1 내지 8 중 어느 하나에 있어서,
L 이 -O-, -NRY-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NRY-, -NRYC(O)-, -CH2NRY-, -CH2O-, -OC(O)O-, -NR7C(O)O-, -OC(O)NRY-, -NR7C(O)NRY-, -OC(S)NRY-, 또는 -NR7C(S)NRY- 이고, 여기서 R7 이 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, RY 가 수소 원자, C1-6 알킬, 또는 Y2 이고, 여기서 Y2 가 -(CH2CH2O)n-R8 (R8 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, n 은 3 - 100 의 정수임) 인
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 10)
항목 9 에 있어서, L 이 -C(O)NRY-, -CH2NRY-, -C(O)O-, 또는 -CH2O- 인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 11)
항목 9 에 있어서, L 이 -C(O)NRY- 또는 -CH2NRY- 인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 12)
항목 9 에 있어서,
L 이 -CH2NRY- 이고,
RY 가 수소 원자, C1-6 알킬, 또는 Y2 인
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 13)
항목 9 에 있어서,
L 이 -CH2NRY- 이고,
RY 가 수소 원자 또는 C1-6 알킬인
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 14)
항목 1 내지 13 중 어느 하나에 있어서,
Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
R6 이 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
m 이 3 - 40 의 정수인
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 15)
항목 14 에 있어서,
Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
R6 이 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
m 이 3 - 20 의 정수인
화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 16)
항목 1 에 있어서, 화합물이 식 (2) 의 화합물:
Figure pct00002
또는 식 (3) 의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00003
[식 중,
R2 는 C1-6 알킬이고,
R3 은 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
R4 는 수소 원자, 히드록시, 또는 메톡시이고,
L 은 -CH2NRY-, -C(O)NRY-, -C(O)O-, 또는 -CH2O- 이고,
RY 는 수소 원자, C1-6 알킬, 또는 Y2 이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
Y2 는 -(CH2CH2O)n-R8 이고,
R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
R8 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
m 및 n 은 독립적으로 3 - 40 의 정수임].
(항목 17)
항목 1 에 있어서, 화합물이 식 (2) 의 화합물:
Figure pct00004
또는 식 (3) 의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00005
[식 중,
R2 는 C1-6 알킬이고,
R3 은 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
R4 는 수소 원자, 히드록시, 또는 메톡시이고,
L 은 -CH2NRY- 이고,
RY 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
m 은 3 - 20 의 정수임].
(항목 18)
항목 1 에 있어서, 식 (2) 의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00006
[식 중,
R2 는 C1-6 알킬이고,
R3 은 수소 원자, 또는 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
R4 는 수소 원자 또는 메톡시이고,
L 은 -CH2NRY- 이고,
RY 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
m 은 3 - 40 의 정수임].
(항목 19)
항목 1 에 있어서, 하기에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 1),
1-{4-[(2-아미노-4-{[(3S)-1-히드록시헥산-3-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시페닐}-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 2),
1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 3),
1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-히드록시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 4),
4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-N-(20-히드록시-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코산-1-일)-3-메톡시벤즈아미드 (실시예 5),
2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일 4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시벤조에이트 (실시예 6),
5-{[2-메톡시-4-(2,5,8,11,14-펜타옥사펜타데칸-1-일)페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민 (실시예 7),
1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29-노나옥사-2-아자헨트리아콘탄-31-올 (실시예 8),
1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-트리코사옥사-2-아자트리헵타콘탄-73-올 (실시예 9),
1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86,89,92,95,98,101,104,107-펜타트리아콘타옥사-2-아자노나헥탄-109-올 (실시예 10), 및
12-[(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)메틸]-3,6,9,15,18,21-헥사옥사-12-아자트리코산-1,23-디올 (실시예 11).
(항목 20)
항목 1 에 있어서, 하기에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 1),
1-{4-[(2-아미노-4-{[(3S)-1-히드록시헥산-3-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시페닐}-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 2),
1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 3), 및
1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-히드록시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올 (실시예 4).
(항목 21)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
(항목 22)
항목 21 에 있어서, 에멀젼 제형, 유성 현탁액, 히드로겔 제형, 또는 지질 제형인 약학 조성물.
(항목 23)
항목 21 에 있어서, 에멀젼 제형인 약학 조성물.
(항목 24)
항목 23 에 있어서, 에멀젼 제형이 유중수 에멀젼인 약학 조성물.
(항목 25)
항목 24 에 있어서, 에멀젼 제형이 (1) 에틸 올레에이트, 옥틸도데실 미리스테이트, 소르비탄 모노올레에이트, 글리세릴 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 20, 글리세린, 및 소듐 디히드로겐 포스페이트, 또는 (2) Montanide ISA 51VG 를 포함하는 약학 조성물.
(항목 26)
항목 21 에 있어서, 지질 제형인 약학 조성물.
(항목 27)
항목 26 에 있어서, 지질 제형이 인지질을 포함하는 리포솜 제형인 약학 조성물.
(항목 28)
항목 26 또는 27 에 있어서, 지질 제형이 스테롤을 포함하는 리포솜 제형인 약학 조성물.
(항목 29)
항목 28 에 있어서, 스테롤이 콜레스테롤인 약학 조성물.
(항목 30)
항목 27 내지 29 중 어느 하나에 있어서, 리포솜 제형이 무기산, 무기산 염, 유기산, 유기산 염, 당, 완충제, 산화방지제 및 중합체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 첨가제를 포함하는 약학 조성물.
(항목 31)
항목 21 내지 30 중 어느 하나에 있어서, 항원을 추가로 포함하는 약학 조성물.
(항목 32)
항목 31 에 있어서, 항원이 병원체-유래 항원 또는 종양 항원인 약학 조성물.
(항목 33)
항목 31 에 있어서, 항원이 종양 항원인 약학 조성물.
(항목 34)
항목 33 에 있어서, 종양 항원이 종양 항원 펩티드인 약학 조성물.
(항목 35)
항목 34 에 있어서, 종양 항원 펩티드가 하기 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00007
식 (4):
Figure pct00008
[식 중,
C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임], 및
식 (5):
Figure pct00009
[식 중,
C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임]; 및
하기 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물:
Figure pct00010
.
(항목 36)
항목 34 에 있어서, 종양 항원 펩티드가 하기 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00011
및
식 (4):
Figure pct00012
[식 중,
C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임], 및
하기 아미노산 서열로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물:
Figure pct00013
.
(항목 37)
항목 34 에 있어서, 종양 항원 펩티드가 식 (4) 의 아미노산 서열로 나타내는 펩티드, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00014
[식 중,
C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임], 및
SEQ ID NO 3: WAPVLDFAPPGASAYGSL 의 아미노산 서열로 나타내는 펩티드, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 조합인 약학 조성물.
(항목 38)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 백신 보조제.
(항목 39)
항목 38 에 있어서, 암 백신에 대한 백신 보조제인 백신 보조제.
(항목 40)
항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 백신 보조제로서 사용되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 41)
항목 1 내지 20 중 어느 하나에 있어서, 암 백신에 대한 백신 보조제로서 사용되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
(항목 42)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 CTL 유도제.
(항목 43)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 면역자극제.
(항목 44)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 CTL 을 유도하는 방법.
(항목 45)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 CTL 유도를 향상시키기 위한 방법.
(항목 46)
항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 항원에 대한 특이적 면역 반응을 향상시키기 위한 방법.
(항목 47)
백신 보조제의 제조에서의 항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
(항목 48)
암 백신에 대한 백신 보조제의 제조에서의 항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도.
(항목 49)
하기를 포함하는 키트:
a) 항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 항목 1 내지 20 중 어느 하나의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 항원, 또는 항원을 포함하는 약학 조성물.
(항목 50)
하기를 포함하는 키트:
a) 항목 1 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 항목 1 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 종양 항원, 또는 종양 항원을 포함하는 약학 조성물.
(항목 51)
하기를 포함하는 키트:
a) 항목 1 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 항목 1 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 병원체-유래 항원, 또는 병원체-유래 항원을 포함하는 약학 조성물.
도 1 은 시험 3 의 결과, 즉, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 Montanide ISA 51 VG 와 혼합하여 칵테일 백신을 제조하고, 실시예 1 또는 참조예 12 에서 제조된 화합물을 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조된 백신에 의한 SEQ ID No. 2 에 대한 생체내 CTL 유도를 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에서 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 1 에서 나타낸다.
도 2 는 시험 5 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드와 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고, 백신을 마우스에 투여하고; MCA-A24/Kb-WT1 종양 세포를 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에 종양 이식 7 일 전 및 이식 7 일 후에, 백신을 마우스에 투여하고; 이식 27 일 후에, 종양 부피를 측정한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 2 에서 나타낸다.
도 3 은 시험 6 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 SEQ ID No. 6 의 펩티드 및 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 6 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 3 에서 나타낸다.
도 4 는 시험 7 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 SEQ ID No. 5 의 펩티드 및 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 5 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 4 에서 나타낸다.
도 5 는 시험 8 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 SEQ ID No. 18 의 펩티드 및 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 18 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*24:02 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 5 에서 나타낸다.
도 6 은 시험 9 의 결과, 즉, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조된 화합물 또는 참조예 12 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드와 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 각각의 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 6 에서 나타낸다.
도 7 은 시험 9 의 결과, 즉, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조된 화합물 또는 참조예 12 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드와 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 각각의 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 7 에서 나타낸다.
도 8 은 시험 10 의 결과, 즉, 실시예 11 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드와 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 8 에서 나타낸다.
도 9 는 시험 10 의 결과, 즉, 실시예 11 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드와 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 9 에서 나타낸다.
도 10 은 시험 11 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 1) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 10 에서 나타낸다.
도 11 은 시험 11 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 1) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 11 에서 나타낸다.
도 12 는 시험 12 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 2) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 12 에서 나타낸다.
도 13 은 시험 12 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 2) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 13 에서 나타낸다.
도 14 는 시험 13 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 3) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 14 에서 나타낸다.
도 15 는 시험 14 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유성 현탁액 제형) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 15 에서 나타낸다.
도 16 은 시험 14 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (유성 현탁액 제형) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 16 에서 나타낸다.
도 17 은 시험 15 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (히드로겔 제형) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 17 에서 나타낸다.
도 18 은 시험 15 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (히드로겔 제형) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 18 에서 나타낸다.
도 19 는 시험 16 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (리포솜 제형 1) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 19 에서 나타낸다.
도 20 은 시험 17 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (리포솜 제형 2) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 20 에서 나타낸다.
도 21 은 시험 17 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (리포솜 제형 2) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 4 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 21 에서 나타낸다.
도 22 는 시험 18 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 칵테일 백신 (리포솜 제형 3) 에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 22 에서 나타낸다.
도 23 은 시험 19 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 SEQ ID No. 1 의 펩티드 및 SEQ ID No. 17 의 펩티드와 예비 유화 조성물을 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 1 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*02:01/HLA-DRB1*01:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 23 에서 나타낸다.
도 24 는 시험 19 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 SEQ ID No. 1 의 펩티드 및 SEQ ID No. 17 의 펩티드와 예비 유화 조성물을 포함하는 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 17 에 대한 생체내 헬퍼 T-세포 유도에 관해, HLA-A*02:01/HLA-DRB1*01:01 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 24 에서 나타낸다.
도 25 는 시험 20 의 결과, 즉, 실시예 1 에서 제조된 화합물을 식 5 의 화합물 및 예비 유화 조성물을 포함하는 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을, SEQ ID No. 2 에 대한 생체내 CTL 유도에 관해, HLA-A*24:02 유전자도입 마우스를 사용하여 IFNγ ELISPOT 어세이에 의해 시험한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 25 에서 나타낸다.
도 26 은 시험 11 - 13 의 결과, 즉, 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 조성물을 유화시켜 칵테일 백신을 제조하고; 실시예 1 에서 제조된 화합물을 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을 마우스에 투여하고; 마우스의 비장을 칭량한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 26 에서 나타낸다.
도 27 은 시험 14 및 15 의 결과, 즉, 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 조성물을 유성 현탁 또는 히드로겔-제형화시켜 각각의 칵테일 백신을 제조하고; 실시예 1 에서 제조된 화합물을 칵테일 백신에 첨가하여 각각의 백신을 제조하고; 백신을 마우스에 투여하고; 마우스의 비장을 칭량한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 27 에서 나타낸다.
도 28 은 시험 16 - 18 의 결과, 즉, 식 4 의 화합물 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드를 포함하는 조성물을 리포솜-제형화시켜 칵테일 백신을 제조하고; 실시예 1 에서 제조된 화합물을 칵테일 백신에 첨가하여 백신을 제조하고; 백신을 마우스에 투여하고; 마우스의 비장을 칭량한, 결과를 나타낸다. 결과를 도 28 에서 나타낸다.
이하, 본원에서 사용되는 용어를 하기와 같이 설명한다.
치환이 가능한 경우, "임의로 치환된" 또는 "치환된" 뒤에 정의되는 치환기의 수는 제한되지 않아야 한다. 특별히 달리 명시되지 않는 한, 각 치환기의 정의는 치환기를 일부 포함하는 경우 또는 또 다른 치환기에 존재하는 치환기의 경우에도 확장된다.
본원에서 사용되는 "할로겐" 은 예를 들어, 플루오린, 염소, 브롬, 요오드를 포함한다. 이는 바람직하게는 플루오린 또는 염소, 보다 바람직하게는 플루오린이다.
"C1-6 알킬" 은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 기를 의미한다. C1-6 알킬은 바람직하게는 "C1-4 알킬", 보다 바람직하게는 "C1-3 알킬" 을 포함한다. "C1-6 알킬" 은 예를 들어, 메틸, 에틸, 프로필, 1-메틸에틸, 부틸, 2-메틸프로필, 1-메틸프로필, 1,1-디메틸에틸, 펜틸, 3-메틸부틸, 2-메틸부틸, 2,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 1,1-디메틸프로필, 헥실, 4-메틸펜틸, 3-메틸펜틸, 2-메틸펜틸 및 1-메틸펜틸을 포함하고, "C1-4 알킬" 은 탄소 원자의 수가 1 - 4 인 경우의 "C1-6 알킬" 의 예시를 포함한다. "C1-3 알킬" 은 탄소 원자의 수가 1 - 3 인 경우의 "C1-6 알킬" 의 예시를 포함한다.
"C1-6 알콕시" 는 "C1-6 알킬옥시" 를 의미하며, 부분 "C1-6 알킬" 은 상기 "C1-6 알킬" 에서 정의된 바와 같다. "C1-6 알콕시" 는 바람직하게는 "C1-4 알콕시", 보다 바람직하게는 "C1-3 알콕시" 를 포함한다. "C1-6 알콕시" 는 예를 들어, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 1-메틸에톡시, 부톡시, 2-메틸프로폭시, 1-메틸프로폭시, 1,1-디메틸에톡시, 펜틸옥시, 3-메틸부톡시, 2-메틸부톡시, 2,2-디메틸프로폭시, 1-에틸프로폭시, 1,1-디메틸프로폭시, 헥실옥시, 4-메틸펜틸옥시, 3-메틸펜틸옥시, 2-메틸펜틸옥시, 1-메틸펜틸옥시, 3,3-디메틸부톡시, 2,2-디메틸부톡시, 1,1-디메틸부톡시 및 1,2-디메틸부톡시를 포함하고, "C1-4 알콕시" 는 탄소 원자의 수가 1 - 4 인 경우의 "C1-6 알콕시" 의 예시를 포함한다. "C1-3 알콕시" 는 탄소 원자의 수가 1 - 3 인 경우의 "C1-6 알콕시" 의 예시를 포함한다.
"링커" 는 작용기에서 2 개의 결합 위치를 갖는 2가 기를 의미한다. 2가 기는 예를 들어, C1-6 알킬렌, C2-7 알케닐렌, C2-7 알키닐렌, C3-10 시클로알킬렌, C6-10 아릴렌, C5-10 헤테로아릴렌, 에테르, 아민, 카르보닐, 에스테르, 아미도, 카르보네이트, 카르바메이트, 티오카르바메이트 및 티오우레아를 포함한다. 그리고, 예시화된 2가 기를 임의 조합하여 제조한 2가 기를 본원에서 사용할 수 있다. 링커는 바람직하게는, -O-, -NRY-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NRY-, -NRYC(O)-, -CH2NRY-, -CH2O-, -OC(O)O-, -NR7C(O)O-, -OC(O)NRY-, -NR7C(O)NRY-, -OC(S)NRY- 및 -NR7C(S)NRY- (여기서, RY 및 R7 은 항목 9 에서 정의된 바와 같음), 보다 바람직하게는 -C(O)NRY- 및 -CH2NRY-, 보다 더 바람직하게는 -CH2NRY- 를 포함한다. 이들 예시화된 링커에서의 2 개 결합 위치에 대해서, 좌측 결합 위치는 식 (1) 의 화합물에서의 벤젠 고리에 부착되고, 우측 결합 위치는 식 (1) 의 화합물에서의 Y1 에 부착된다. 구체적으로, 링커 L 이 "-CH2NRY-" 인 경우, 식 (1) 의 화합물은 하기 구조로 표시된다.
Figure pct00015
"C1-6 알킬렌" 은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 기를 의미한다. "C1 -6 알킬렌" 은 예를 들어, 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 1-메틸에틸렌, 부틸렌, 2-메틸프로필렌, 1-메틸프로필렌, 1,1-디메틸에틸렌, 펜틸렌, 3-메틸부틸렌, 2-메틸부틸렌, 2,2-디메틸프로필렌, 1-에틸프로필렌, 1,1-디메틸프로필렌, 헥실렌, 4-메틸펜틸렌 및 3-메틸펜틸렌, 바람직하게는 메틸렌 및 에틸렌을 포함한다.
"C2-7 알케닐렌" 은 2 내지 7 개의 탄소 원자 및 1 내지 3 개의 이중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄 불포화 탄화수소 기를 의미한다. "C2-7 알케닐렌" 은 예를 들어, 비닐렌, 프로페닐렌, 메틸프로페닐렌, 부테닐렌, 메틸부테닐렌, 펜테닐렌, 헥세닐렌 및 헵테닐렌, 바람직하게는 비닐렌 및 프로페닐렌을 포함한다.
"C2-7 알키닐렌" 은 2 내지 7 개의 탄소 원자 및 1 개의 삼중 결합을 갖는 직쇄 또는 분지쇄 불포화 탄화수소 기를 의미한다. "C2-7 알키닐렌" 은 예를 들어, 에티닐렌, 프로피닐렌, 메틸 프로피닐렌, 부티닐렌, 메틸부티닐렌, 펜티닐렌, 헥시닐렌 및 헵티닐렌, 바람직하게는 에티닐렌 및 프로피닐렌을 포함한다.
"C3-10 시클로알킬렌" 은 브릿지연결된 (bridged) 구조를 가질 수 있는 3 내지 10 개의 탄소 원자를 갖는 시클릭 알킬렌을 의미한다. "C3-10 시클로알킬렌" 은, 예를 들어, 시클로포로필렌, 시클로부틸렌, 시클로펜틸렌, 시클로헥실렌, 시클로헵틸렌, 시클로옥틸렌 및 아다만틸렌, 바람직하게는 시클로포로필렌 및 시클로부틸렌을 포함한다.
"C6-10 아릴렌" 은 6 내지 10 개의 탄소 원자를 갖는 방향족 탄화수소 기를 의미한다. "C6-10 아릴렌" 은 예를 들어, 페닐렌, 1-나프틸렌 및 2-나프틸렌, 바람직하게는 페닐렌을 포함한다.
"C5-10 헤테로아릴렌" 은 독립적으로 질소 원자, 산소 원자 및 황 원자로 이루어지는 군에서 선택되는 1 내지 4 개의 원자를 갖는 모노시클릭 5- 내지 7-원 방향족 헤테로사이클 또는 바이시클릭 8- 내지 10-원 방향족 헤테로사이클을 의미한다. "C5-10 헤테로아릴렌" 은 예를 들어, 피리딜렌, 피리다지닐렌, 이소티아졸릴렌, 피롤릴렌, 푸릴렌, 티에닐렌, 티아졸릴렌, 이미다졸릴렌, 피리미디닐렌, 티아디아졸릴렌, 피라졸릴렌, 옥사졸릴렌, 이속사졸릴렌, 피라지닐렌, 트리아지닐렌, 트리아졸릴렌, 이미다졸리디닐렌, 옥사디아졸릴렌, 트리아졸릴렌, 테트라졸릴렌, 인돌릴렌, 인다졸릴렌, 퀴놀릴렌, 이소퀴놀리닐렌, 벤조푸라닐렌, 벤조티에닐렌, 벤조옥사졸릴렌, 벤조티아졸릴렌, 벤조이소옥사졸릴렌, 벤조이소티아졸릴렌, 벤조트리아졸릴렌, 벤조이미다졸릴렌 및 6,11-디히드로디벤조[b,e]티에피닐렌을 포함한다. 바람직하게는, 이는 피리딜렌, 피리미디닐렌, 퀴놀릴렌 및 이소퀴놀릴렌, 보다 바람직하게는 피리딜렌, 푸릴렌 및 티에닐렌을 포함한다.
본 발명의 식 (1) 의 화합물에서, 바람직한 X, Y1, Y2, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, R8, RY, L, m 및 n 을 하기에 나타내지만, 본 발명의 기술적 범주가 하기 열거한 화합물의 범주에 제한되지는 않는다.
X 는 바람직하게는 메틸렌, 산소 원자 및 NR5 (여기서, R5 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬임), 보다 바람직하게는 메틸렌을 포함한다.
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 을 포함한다.
Y2 는 -(CH2CH2O)n-R8 을 포함한다.
R1 은 바람직하게는 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이는 C1-6 알킬 예컨대 메틸, 에틸, 프로필, 1-메틸에틸, 부틸, 2-메틸프로필, 1-메틸프로필 및 1,1-디메틸에틸, 보다 더 바람직하게는 메틸을 포함한다.
R2 는 바람직하게는
(1) 수소 원자, 및
(2) 할로겐 및 히드록시에서 독립적으로 선택되는 1 - 3 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬
을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이는 수소 원자 및 C1-6 알킬, 더 바람직하게는 C1-6 알킬, 보다 더 바람직하게는 C3-4 알킬을 포함한다.
R3 은 바람직하게는
(1) 수소 원자, 및
(2) 할로겐 및 히드록시에서 독립적으로 선택되는 1 - 3 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬
을 포함한다.
R3 은 보다 바람직하게는
(1) 수소 원자, 및
(2) 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬
을 포함한다.
R3 은 보다 더 바람직하게는
(1) 수소 원자, 및
(2) 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬
을 포함한다.
R3 은 보다 더 바람직하게는
(1) 수소 원자, 및
(2) 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-2 알킬
을 포함한다.
R4 는 바람직하게는
(1) 수소 원자,
(2) 할로겐,
(3) 히드록시,
(4) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬,
(5) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알콕시, 및
(6) 시아노
를 포함한다.
R4 는 보다 바람직하게는
(1) 수소 원자,
(2) 할로겐,
(3) 히드록시,
(4) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬, 및
(5) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알콕시
를 포함한다.
R4 는 보다 더 바람직하게는 수소 원자, 히드록시, C1-3 알킬 및 C1-3 알콕시를 포함한다.
R4 는 보다 더 바람직하게는 수소 원자, 히드록시 및 메톡시, 보다 더 바람직하게는 히드록시 및 메톡시, 가장 바람직하게는 수소 원자 및 메톡시를 포함한다.
R5 는 바람직하게는 수소 원자 및 C1-3 알킬을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이는 수소 원자, 메틸, 에틸 및 프로필을 포함한다.
R6 및 R8 은 바람직하게는 독립적으로 수소 원자 및 C1-3 알킬, 보다 바람직하게는 독립적으로 수소 원자, 메틸, 에틸 및 프로필, 보다 더 바람직하게는 수소 원자 및 메틸을 포함한다.
R7 은 바람직하게는 수소 원자 및 C1-3 알킬을 포함한다. 보다 바람직하게는, 이는 수소 원자, 메틸, 에틸 및 프로필을 포함한다.
L 은 바람직하게는
(1) -O-,
(2) -NRY-,
(3) -C(O)-,
(4) -C(O)O-,
(5) -OC(O)-,
(6) -C(O)NRY-,
(7) -NRYC(O)-,
(8) -CH2NRY-,
(9) -CH2O-,
(10) -OC(O)O-,
(11) -NR7C(O)O-,
(12) -OC(O)NRY-,
(13) -NR7C(O)NRY-,
(14) -OC(S)NRY-, 및
(15) -NR7C(S)NRY-
를 포함한다.
L 은 보다 바람직하게는
(1) -O-,
(2) -NRY-,
(3) -C(O)-,
(4) -C(O)O-,
(5) -OC(O)-,
(6) -C(O)NRY-,
(7) -NRYC(O)-,
(8) -CH2NRY-, 및
(9) -CH2O-
를 포함한다.
L 은 보다 더 바람직하게는
(1) -C(O)NRY-,
(2) -CH2NRY-,
(3) -C(O)O-, 및
(4) -CH2O-
를 포함한다.
L 은 보다 더 바람직하게는
(1) -C(O)NRY-, 및
(2) -CH2NRY- 를 포함한다.
L 은 가장 바람직하게는 -CH2NRY- 를 포함한다.
벤젠 고리에서의 X, L 및 R4 의 치환 위치는 바람직하게는 하기 (1a) 또는 (1aa) 일 수 있다.
Figure pct00016
RY 는 바람직하게는 수소 원자, C1-6 알킬 및 Y2, 보다 바람직하게는 수소 원자 및 C1-6 알킬, 보다 더 바람직하게는 수소 원자, 메틸, 에틸 및 프로필을 포함한다.
또 다른 구현예에서, RY 는 바람직하게는 수소 원자, C1-6 알킬 및 Y2, 보다 바람직하게는 수소 원자, 메틸 및 Y2 를 포함한다.
m 및 n 은 바람직하게는 독립적으로 3 - 40 의 정수, 보다 바람직하게는 4 - 40 의 정수, 보다 더 바람직하게는 4 - 36 의 정수를 포함한다.
또 다른 구현예에서, m 및 n 은 독립적으로 3 - 40 의 정수, 바람직하게는 3 - 20 의 정수, 보다 바람직하게는 5 - 20 의 정수를 포함한다.
바람직한 식 (1) 의 화합물은 하기의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 식 (1) 의 화합물은 하기의 (A) 를 포함한다.
(A)
하기와 같은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
X 가 메틸렌, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2 또는 NR5 이고,
R1 이 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
R2 및 R3 이 독립적으로
(1) 수소 원자, 또는
(2) 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬
이고,
R4 가
(1) 수소 원자,
(2) 할로겐,
(3) 히드록시,
(4) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬,
(5) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알콕시, 또는
(6) 시아노
이고,
R5 가
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-6 알킬
이고,
R6 및 R8 이 독립적으로
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-6 알킬
이고,
R7 이
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-6 알킬
이고,
L 이
(1) -O-,
(2) -NRY-,
(3) -C(O)-,
(4) -C(O)O-,
(5) -OC(O)-,
(6) -C(O)NRY-,
(7) -NRYC(O)-,
(8) -CH2NRY-,
(9) -CH2O-,
(10) -OC(O)O-,
(11) -NR7C(O)O-,
(12) -OC(O)NRY-,
(13) -NR7C(O)NRY-,
(14) -OC(S)NRY-, 또는
(15) -NR7C(S)NRY-
이고,
RY 가
(1) 수소 원자,
(2) C1-6 알킬, 또는
(3) Y2
이고,
Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
Y2 가 -(CH2CH2O)n-R8 이고,
m 및 n 이 독립적으로 3 - 100 의 정수임.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 식 (1) 의 화합물은 하기의 (B) 를 포함한다.
(B)
하기와 같은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
X 가 메틸렌, 산소 원자 또는 NR5 이고,
R1 이 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
R2 가
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-6 알킬
이고,
R3 이
(1) 수소 원자, 또는
(2) 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-6 알킬
이고,
R4 가
(1) 수소 원자,
(2) 할로겐,
(3) 히드록시,
(4) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알킬, 또는
(5) 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-6 알콕시
이고,
R5 가
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-3 알킬
이고,
R6 및 R8 이 독립적으로
(1) 수소 원자, 또는
(2) C1-3 알킬
이고,
L 이
(1) -O-,
(2) -NRY-,
(3) -C(O)-,
(4) -C(O)O-,
(5) -OC(O)-,
(6) -C(O)NRY-,
(7) -NRYC(O)-,
(8) -CH2NRY-, 또는
(9) -CH2O-
이고,
RY 가
(1) 수소 원자,
(2) C1-6 알킬, 또는
(3) Y2
이고,
Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
Y2 가 -(CH2CH2O)n-R8 이고,
m 및 n 이 독립적으로 3 - 40 의 정수임.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 식 (1) 의 화합물은 하기의 (C) 를 포함한다.
(C)
하기와 같은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
X 가 메틸렌이고,
R1 이 메틸, 에틸, 프로필, 1-메틸에틸, 부틸, 2-메틸프로필, 1-메틸프로필 또는 1,1-디메틸에틸이고,
R2 가 C1-6 알킬이고,
R3 이
(1) 수소 원자, 또는
(2) 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬
이고,
R4 가
(1) 수소 원자,
(2) 히드록시,
(3) C1-3 알킬, 또는
(4) C1-3 알콕시
이고,
R6 및 R8 이 독립적으로 수소 원자, 메틸, 에틸 또는 프로필이고,
L 이
(1) -C(O)NRY-,
(2) -CH2NRY-,
(3) -C(O)O-, 또는
(4) -CH2O-
이고,
RY 가 수소 원자, 메틸, 에틸, 프로필 또는 Y2 이고,
Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
Y2 가 -(CH2CH2O)n-R8 이고,
m 및 n 이 독립적으로 3 - 40 의 정수임.
바람직한 구현예에서, 본 발명의 식 (1) 의 화합물은 하기의 (D) 를 포함한다.
(D)
식 (2) 또는 (3) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00017
[식 중,
R2 는 C1-6 알킬이고,
R3 은 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
R4 는 수소 원자, 히드록시 또는 메톡시이고,
L 은 -CH2NRY-, -C(O)NRY-, -C(O)O- 또는 -CH2O- 이고,
RY 는 수소 원자, 메틸, 에틸, 프로필 또는 Y2 이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
Y2 는 -(CH2CH2O)n-R8 이고,
R6 및 R8 은 독립적으로 수소 원자, 메틸, 에틸 또는 프로필이고,
m 및 n 은 독립적으로 3 - 40 의 정수임].
또 다른 구현예에서, 본 발명의 식 (1) 의 화합물은 하기의 (E) 를 포함한다.
(E)
식 (2) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
Figure pct00018
[식 중,
R2 는 C1-6 알킬이고,
R3 은 수소 원자, 또는 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
R4 는 수소 원자 또는 메톡시이고,
L 은 -CH2NRY- 이고,
RY 는 수소 원자, 메틸, 에틸 또는 프로필이고,
Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
R6 은 수소 원자, 메틸, 에틸 또는 프로필이고,
m 은 4 - 36 의 정수임].
본 발명의 화합물의 제조 방법을 하기에 나타낸다. 예를 들어, 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 하기 방법에 의해 제조될 수 있다.
방법 A-1
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, CRA1RA2NRY- 또는 -CRA1RA2O- 의 링커를 갖는 화합물 (a1-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00019
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, RA1 및 RA2 는 독립적으로 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, LGa1 은 이탈기이고, Nua1 은 친핵체이고, La1 은 본 방법에서 제조된 링커이다.
본 방법은 이탈기, LGa1 을 친핵체, Nua1-Y1 로 치환하기 위한 치환 반응이다. 본 방법에서, 화합물 (a1-2) 는 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 또는 부재 하에 화합물 (a1-1) 및 Nua1-Y1 을 반응시켜 수득될 수 있다. 이탈기는 바람직하게는 플루오린, 염소, 브롬, 요오드, 메탄술포네이트, 에탄술포네이트 및 p-톨루엔술포네이트, 보다 바람직하게는 염소, 브롬 및 메탄술포네이트를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 친핵체는 바람직하게는 항목 9 에서 정의된 RY 로 치환될 수 있는 아민, 알코올 및 티올, 보다 바람직하게는 항목 9 에서 정의된 RY 로 치환될 수 있는 아민, 및 알코올을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용된 염기는 하기에 예시화된 염기, 바람직하게는 소듐 히드라이드 및 포타슘 히드라이드를 포함하는 염기에서 선택될 수 있다. 본원에서 사용된 용매는 하기 예시화된 용매, 바람직하게는 DMF 를 포함하는 용매에서 선택될 수 있다. 반응 시간은 일반적으로 약 5 분 내지 약 48 시간, 바람직하게는 약 10 분 내지 약 24 시간이다. 반응 온도는 일반적으로 약 -78℃ 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 약 100℃ 이다.
방법 A-2
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -O-, -NRY-, -C(O)O-, -CH2NRY- 또는 -CH2O- 의 링커를 갖는 화합물 (a2-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00020
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, LGa2 는 이탈기이고, Nua2 는 친핵체이고, La2 는 본 방법에서 제조된 링커이다.
본 방법은 이탈기, LGa2 를 친핵체, Nua2 로 치환하기 위한 치환 반응이다. 본 방법에서, 화합물 (a2-2) 는 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 또는 부재 하에 화합물 (a2-1) 및 LGa2-Y1 을 반응시켜 수득될 수 있다. LGa2, Nua2 및 La2 는 각각 방법 A-1 에서 언급된 이탈기, 친핵체 및 링커와 동일하다. 본 방법의 각각의 반응 조건은 방법 A-1 을 따른다.
본 발명의 화합물의 제조 방법을 하기에 나타낸다. 예를 들어, 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 하기 방법에 의해 제조될 수 있다.
방법 B-1
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -CH2NRY- 의 링커를 갖는 화합물 (b1-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00021
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 는 항목 1 에서 정의된 바와 같고, RY 는 항목 9 에서 정의된 바와 같고, Lb1 은 본 발명에서 제조된 링커이다.
본 방법은 알데히드 및 아민으로의 환원성 아미노화이다. 본 방법에서, 화합물 (b1-2) 는 적합한 용매 중 적합한 환원제의 존재 하에 화합물 (b1-1) 및 RY-NH-Y1 을 반응시켜 수득될 수 있다. 본원에서 사용된 환원제는 바람직하게는 소듐 보로히드라이드, 트리아세톡시보로히드라이드 및 피콜린 보란을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용된 용매는 하기 예시화된 용매, 바람직하게는 THF 및 클로로포름을 포함하는 용매에서 선택될 수 있다. 반응 시간은 일반적으로 약 5 분 내지 약 48 시간, 바람직하게는 약 10 분 내지 약 24 시간이다. 반응 온도는 일반적으로 약 -78℃ 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 약 100℃ 이다.
방법 B-2
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -NRY- 또는 -CH2NRY- 의 링커를 갖는 화합물 (b2-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00022
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, RY 는 항목 9 에서 정의된 바와 같고, nb 는 0 또는 1 이고, Lb2 는 본 발명에서 제조된 링커이다.
본 방법은 알데히드 및 아민으로의 환원성 아미노화이다. 본 방법에서, 화합물 (b2-2) 는 적합한 용매 중 적합한 환원제의 존재 하에 화합물 (b2-1) 및 Y1-CHO 를 반응시켜 수득될 수 있다. 본 방법의 각각의 반응 조건은 방법 B-1 을 따른다.
본 발명의 화합물의 제조 방법을 하기에 나타낸다. 예를 들어, 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
방법 C-1
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -O-, -NRY- 또는 -NRYC(O)- 의 링커를 갖는 화합물 (c1-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00023
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, LGc1 은 이탈기이고, Nuc1 은 친핵체이고, Lc1 은 본 발명에서 제조된 링커이다.
본 방법은 이탈기 (LGc1) 및 친핵체 (Nuc1-Y1) 와의 커플링 반응이다. 본 방법에서, 화합물 (c1-2) 은 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 또는 부재 하 적합한 촉매의 존재 하에 화합물 (c1-1) 및 친핵체 (Nuc1-Y1) 를 반응시켜 수득될 수 있다. 본원에서 사용된 촉매는 팔라듐 또는 이의 염과 같은 전이 금속, 이를 함유하는 복합체, 및 담체-지지된 (예를 들어, 중합체-지지된) 것을 포함한다. 이탈기는 바람직하게는 보론산, 보로네이트, 할로겐 및 트리플루오로메탄술포네이트, 보다 바람직하게는 보론산, 보로네이트, 브롬 원자, 요오드 원자 및 트리플루오로메탄술포네이트를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 친핵체는 항목 9 에서 정의된 RY 로 치환될 수 있는 아민, 알코올, 알킬마그네슘, 알킬징크 및 알킬리튬, 보다 바람직하게는 C1-6 알킬로 치환될 수 있는 아민, 및 알코올을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 사용된 용매는 하기 예시화된 용매, 바람직하게는 디옥산-물 혼합물을 포함하는 용매에서 선택될 수 있다. 반응 시간은 일반적으로 약 5 분 내지 약 48 시간, 바람직하게는 약 10 분 내지 약 24 시간이다. 반응 온도는 일반적으로 약 -78℃ 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 약 100℃ 이다.
본 발명의 화합물의 제조 방법을 하기에 나타낸다. 예를 들어, 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
방법 D-1
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -C(O)O- 또는 -C(O)NRY-링커의 링커를 갖는 화합물 (d1-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00024
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, Nud1 은 친핵체이고, Ld1 은 본 발명에서 제조된 링커이다.
본 방법은 카르복실산을 갖는 화합물 (d1-1) 및 Nud1-Y1 과의 축합 반응이다. 본 방법에서, 화합물 (d1-2) 는 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 또는 부재 하 적합한 축합제의 존재 하에 화합물 (d1-1) 및 친핵체 (Nud1-Y1) 을 반응시켜 수득될 수 있다. 친핵체는 바람직하게는 항목 9 에서 정의된 RY 로 치환될 수 있는 아민, 알코올 및 티올, 보다 바람직하게는 1 개의 C1-6 알킬로 치환될 수 있는 아민, 및 알코올을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본원에 사용된 축합제는 종래의 방식으로 사용된 축합체, 바람직하게는 HBTU, HATU 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 (그의 히드로클로라이드 포함) 를 포함하는 축합체에서 선택될 수 있다. 본원에서 사용된 염기는 하기 예시화된 염기, 바람직하게는 tert-알킬아민, 보다 바람직하게는 DIPEA 및 트리에틸아민을 포함하는 염기에서 선택될 수 있다. 본원에서 사용된 용매는 하기 예시화된 용매, 바람직하게는 DMF, 디클로로메탄, 클로로포름 및 THF 를 포함하는 용매에서 선택될 수 있다. 반응 시간은 일반적으로 약 5 분 내지 약 48 시간, 바람직하게는 약 10 분 내지 약 24 시간이다. 반응 온도는 일반적으로 약 -78℃ 내지 약 100℃, 바람직하게는 약 0℃ 내지 약 100℃ 이다.
방법 D-2
식 (1) 에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염에서, -OC(O)- 또는 -NRYC(O)- 의 링커를 갖는 화합물 (d2-2) 를 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
Figure pct00025
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, X 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, Nud2 는 친핵체이고, Ld2 는 본 발명에서 제조된 링커이다.
본 방법은 카르복실산, Y1-COOH 를 갖는 화합물 및 친핵체 (Nud2) 를 갖는 화합물 (d2-1) 과의 축합 반응이다. 본 방법에서, 화합물 (d2-2) 는 적합한 용매 중 적합한 염기의 존재 또는 부재 하 적합한 축합제의 존재 하에 친전자체 (Y1-COOH) 및 친핵체를 갖는 화합물 (d2-1) 을 반응시켜 수득될 수 있다. 본 방법의 각각의 반응 조건은 방법 D-1 을 따른다.
방법 A ~ D 에서 사용되는 출발 물질 (a1-1, a2-1, b1-1, b2-1, c1-1, d1-1 및 d2-1) 은 예를 들어 WO 2009/067081 에 개시된 방법에 따라 제조될 수 있다.
예를 들어, 본 발명의 식 (1) 에 따른 화합물을 하기 방법에 의해 제조할 수 있다.
방법 E-1
Figure pct00026
여기서, R1, R2, R3, R4, R5, L 및 Y1 은 항목 1 에서 정의된 바와 같고, LGe1 및 LGe2 는 이탈기이고, Re 는 C1-6 알킬이다.
단계 e-1 의 출발 물질인 화합물 (e1-1) 은 시판 제품으로서 유도될 수 있거나 상응하는 출발 화합물을 사용하여 방법 A ~ D 에 따라 제조될 수 있다.
단계 e-1 ~ 단계 e-4 는 예를 들어, WO 2009/067081 에서 개시된 유사한 방법이다.
상기 방법의 각 단계에서 사용되는 염기는 반응, 출발 화합물 등을 기반으로 적합하게 선택되어야 하며, 이는 알칼리성 바이카르보네이트 예컨대 소듐 바이카르보네이트 및 포타슘 바이카르보네이트; 알칼리성 카르보네이트 예컨대 소듐 카르보네이트 및 포타슘 카르보네이트; 금속 히드라이드 예컨대 소듐 히드라이드 및 포타슘 히드라이드; 알칼리성 금속 히드록시드 예컨대 소듐 히드록시드 및 포타슘 히드록시드; 알칼리성 금속 알콕시드 예컨대 소듐 메톡시드 및 소듐 t-부톡시드; 유기 금속 염기 예컨대 부틸리튬 및 리튬 디이소프로필아미드; 및 유기 염기 예컨대 트리에틸아민, 디이소프로필에틸아민, 피리딘, 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP) 및 1,8-디아자바이시클로[5.4.0]운데크-7-엔 (DBU) 을 포함한다.
축합제는 Jikken Kagaku Kouza (The Chemical Society of Japan ed., Maruzen) Vol. 22 에 기재된 것들일 수 있으며, 이는 예를 들어, 포스페이트 예컨대 디에틸 시아노포스페이트 및 디페닐포스포릴 아지드; 카르보디이미드 예컨대 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)-카르보디이미드 히드로클로라이드 (WSCHCl) 및 디시클로헥실카르보디이미드 (DCC); 디술피드 예컨대 2,2'-디피리딜디술피드 및 포스핀 예컨대 트리페닐포스핀의 조합; 인 할라이드 예컨대 N,N'-비스(2-옥소-3-옥사졸리디닐)포스피닉 클로라이드 (BOPCl); 아조디카르복실레이트 디에스테르 예컨대 디에틸 아조디카르복실레이트 및 포스핀 예컨대 트리페닐포스핀의 조합; 2-할로-1-저급 알킬피리디늄 할라이드 예컨대 2-클로로-1-메틸피리디늄 요오디드; 1,1'-카르보닐디이미다졸 (CDI); 디페닐포스포릴 아지드 (DPPA); 디에틸포스포릴 시아니드 (DEPC); 테트라플루오로보레이트 예컨대 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트 (TBTU) 및 2-클로로-1,3-디메틸이미다졸리디늄 테트라플루오로보레이트 (CIB); 포스페이트 예컨대 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HBTU), 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (BOP), 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(피롤리디노)포스포늄 헥사플루오로포스페이트 (PYBOP) 및 2-(7-아자-1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트 (HATU) 를 포함한다.
상기 방법의 각각의 단계에서 사용되는 용매는 반응, 출발 화합물 등을 기반으로 적합하게 선택되어야 하며, 이는 예를 들어, 알코올 용매 예컨대 메탄올, 에탄올 및 이소프로판올; 케톤 용매 예컨대 아세톤 및 메틸케톤; 할로겐화 탄화수소 용매 예컨대 메틸렌 클로라이드 및 클로로포름; 에테르 용매 예컨대 테트라히드로푸란 (THF) 및 디옥산; 방향족 탄화수소 용매 예컨대 톨루엔 및 벤젠; 지방족 탄화수소 용매 예컨대 헥산 및 헵탄; 에스테르 용매 예컨대 에틸 아세테이트 및 프로필 아세테이트; 아미드 용매 예컨대 N,N-디메틸포름아미드 (DMF) 및 N-메틸-2-피롤리돈; 술폭시드 용매 예컨대 디메틸술폭시드 (DMSO); 니트릴 용매 예컨대 아세토니트릴; 및 물을 포함한다. 본원에서 사용되는 용매는 이들 용매 중 하나 또는 이들 용매에서 선택되는 둘 이상의 용매의 혼합물일 수 있다. 그리고, 반응에서 가능하다면, 본원에서 사용되는 용매로서 유기 염기를 사용할 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 염" 은 산 부가 염 및 염기 부가 염을 포함한다. 예를 들어, 산 부가 염은 무기 산 염 예컨대 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 술페이트, 히드로요오디드, 니트레이트 및 포스페이트; 및 유기 산 염 예컨대 시트레이트, 옥살레이트, 프탈레이트, 푸마레이트, 말레에이트, 숙시네이트, 말레이트, 아세테이트, 포르메이트, 프로피오네이트, 벤조에이트, 트리플루오로아세테이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트, 파라-톨루엔술포네이트 및 캄포르술포네이트를 포함하고; 염기 부가 염은 무기 염기 염 예컨대 소듐 염, 포타슘 염, 칼슘 염, 마그네슘 염, 바륨 염 및 알루미늄 염; 및 유기 염기 염 예컨대 트리메틸아민, 트리에틸아민, 피리딘, 피콜린, 2,6-루티딘, 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민 [트리스(히드록시메틸)메틸아민], tert-부틸아민, 시클로헥실아민, 디시클로헥실아민 및 N,N-디벤질에틸아민을 포함한다. 또한, 이들은 염기성 또는 산성 아미노산 염 예컨대 아르기닌, 리신, 오르니틴, 아스파르테이트 및 글루타메이트를 포함한다.
출발 화합물 또는 원하는 화합물의 적합한 염, 및 약학적으로 허용가능한 염은 종래의 비독성 염이며, 이는 산 부가 염 예컨대 유기 산 염 (예를 들어, 아세테이트, 트리플루오로아세테이트, 말레에이트, 푸마레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트, 벤젠술포네이트, 포르메이트, 파라-톨루엔술포네이트 등) 및 무기 산 염 (예를 들어, 히드로클로라이드, 히드로브로마이드, 히드로요오디드, 술페이트, 니트레이트, 포스페이트 등); 아미노산 (예를 들어, 아르기닌, 아스파르테이트, 글루타메이트 등) 과의 염; 금속 염 예컨대 알칼리성 금속 염 (예를 들어, 소듐 염, 포타슘 염 등) 및 알칼리 토금속 염 (예를 들어, 칼슘 염, 마그네슘 염 등); 암모늄 염; 및 유기 염기 염 (예를 들어, 트리메틸아민 염, 트리에틸아민 염, 피리딘 염, 피콜린 염, 디시클로헥실아민 염, N,N'-디벤질에틸렌디아민 염 등) 을 포함하며; 또한, 숙련자가 적합하게 선택하는 것이다.
본 발명의 화합물을 염으로서 고정하는 것이 바람직한 경우, 본 발명의 화합물이 염으로서 수득될 때, 이는 추가 반응 없이 정제될 수 있고, 이것이 유리 형태로 수득될 때, 이는 적절한 유기 용매에 용해 또는 현탁될 수 있으며, 산 또는 염기를 이에 첨가하여 일반적인 방식으로 염을 형성할 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 때때로 물 또는 다양한 용매와의 용매화물의 형태로 존재할 수 있다. 이러한 용매화물이 또한 본 발명에 포함된다.
임의의 하나 이상의 1H 원자가 2H(D) 원자에 의해 대체되는 식 (1) 의 화합물이 또한 식 (1) 의 본 발명의 범주 내에 있다.
본 발명은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다. 또한, 본 발명은 이의 수화물 및 이의 용매화물 예컨대 이의 에탄올레이트를 포함한다. 또한, 본 발명은 모든 호변이성질체, 입체이성질체 및 이의 결정 형태를 포함한다.
본 발명의 화합물 (1) 은 또한 키랄 중심을 기반으로 하는 광학 이성질체, 분자내 회전 장애 또는 평면-키랄성에 의해 야기된 축성을 기반으로 하는 회전장애 이성질체, 다른 입체이성질체, 호변이성질체 및 기하 이성질체를 포함하며, 이의 모든 가능한 이성질체 및 이의 혼합물이 본 발명에 포함된다.
본 발명의 화합물의 광학 이성질체 혼합물은 종래의 방식으로 제조될 수 있다. 비대칭 구조를 갖는 화합물은 예를 들어, 비대칭 중심을 갖는 출발 물질을 사용하거나 방법을 따라 임의 위치에서 비대칭 구조를 도입하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 광학 이성질체의 경우, 광학 이성질체는 광학 활성 출발 물질을 사용하거나 적절한 단계에서 광학 이성질체의 혼합물을 분할하여 수득될 수 있다. 식 (1) 의 화합물 또는 이의 중간체가 염기성 작용기를 갖는 경우, 이의 광학 분할은 예를 들어 부분입체이성질체 방법을 포함하는데, 여기서 화합물은 광학 활성 산 (예를 들어, 모노카르복실산 예컨대 만델산, N-벤질옥시알라닌 및 락트산; 디카르복실산 예컨대 타르타르산, o-디이소프로필리덴-타르타르산 및 말산; 또는 술폰산 예컨대 캄포르술폰산 및 브로모캄포르술폰산) 을, 불활성 용매 (예를 들어, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올 및 2-프로판올; 에테르 용매 예컨대 디에틸 에테르; 에스테르 용매 예컨대 에틸 아세테이트; 탄화수소 용매 예컨대 톨루엔; 비양성자성 용매 예컨대 아세토니트릴; 또는 이의 혼합 용매) 중에서 반응시켜 이의 염으로 변형된다. 식 (1) 의 화합물 또는 이의 중간체가 카르복실 기와 같은 산성 작용기를 갖는 경우, 화합물은 또한 광학 활성 아민 (예를 들어, 유기 아민 예컨대 1-페닐에틸아민, 키닌, 퀴니딘, 신코니딘, 신코닌 및 스트리키닌) 과 이의 염을 형성한 후 광학적으로 분할될 수 있다.
본 발명의 식 (1) 의 화합물 및 그의 중간체는 당업자에게 공지된 방식으로 단리 및 정제될 수 있다. 이는 예를 들어, 추출, 분배, 재침전, 컬럼 크로마토그래피 (예를 들어, 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피, 이온 교환 컬럼 크로마토그래피 및 분취용 액체 크로마토그래피), 및 재결정화를 포함한다.
본원에서 사용되는 재결정화용 용매는 예를 들어, 알코올 용매 예컨대 메탄올, 에탄올 및 2-프로판올; 에테르 용매 예컨대 디에틸 에테르; 에스테르 용매 예컨대 에틸 아세테이트; 방향족 탄화수소 용매 예컨대 벤젠 및 톨루엔; 케톤 용매 예컨대 아세톤; 할로겐화 용매 예컨대 디클로로메탄 및 클로로포름; 탄화수소 용매 예컨대 헥산; 비양성자성 용매 예컨대 디메틸포름아미드 및 아세토니트릴; 물; 및 이의 혼합 용매를 포함한다. 다른 정제 방법으로서, 예를 들어, Jikken Kagaku Kouza (The Chemical Society of Japan ed., Maruzen) Vol. 1 에 기재된 방법을 사용할 수 있다. 그리고, 본 발명의 화합물의 구조적 결정은 각각의 출발 화합물의 구조를 고려하여, 핵 자기 공명 방법, 적외선 흡수 기법, 및 원편광 이색성 스펙트럼 분석, 및 질량 분석과 같은 분광 분석 방법에 의해 용이하게 실시될 수 있다.
또한, 상기 제조 방법에서 각각의 중간체 또는 각각의 최종 생성물은 또한, 그의 작용기를 적합하게 개질하고, 특히 아미노, 히드록시, 카르보닐, 할로겐 등으로부터 다양한 측쇄를 연장시키고; 임의로는 필요한 경우 상기 언급된 보호 및 탈보호를 생성시켜, 본 발명의 또 다른 화합물로 변형될 수 있다. 작용기의 개질 및 측쇄의 연장은 종래의 방법에 의해 실시될 수 있다 (예를 들어, Comprehensive Organic Transformations, R. C. Larock, John Wiley & Sons Inc. (1999) 등 참조).
염을 형성하기 위한 온도는 일반적으로 -50℃ 내지 본원에서 사용되는 용매의 비등점, 바람직하게는 0℃ 내지 비등점, 보다 바람직하게는 실온 내지 비등점의 범위에서 선택된다. 광학 순도를 향상시키기 위해, 본원에서 사용되는 용매의 비등점 근처까지 온도를 상승시키는 것이 바람직하다. 필터 상에 침전된 결정을 수집함에 있어서, 선택적인 냉각은 수율을 증가시킬 수 있다. 본원에서 사용되는 광학 활성 산 또는 아민의 양은 물질 화합물의 양에 대해 적합하게는 약 0.5 - 약 2.0 당량, 바람직하게는 약 1 당량이다. 적절한 경우, 수득한 결정을 불활성 용매 (예를 들어, 알코올 예컨대 메탄올, 에탄올 및 2-프로판올; 에테르 용매 예컨대 디에틸 에테르; 에스테르 용매 예컨대 에틸 아세테이트; 탄화수소 용매 예컨대 톨루엔; 비양성자성 용매 예컨대 아세토니트릴; 또는 이의 혼합 용매) 중에서 재결정화하여 이의 고순도 염을 수득할 수 있다. 그리고, 적절한 경우, 광학적으로 분할된 염은 또한 산 또는 염기로 처리되어 그의 유리 형태가 수득될 수 있다.
상기 언급된 각각의 제조 방법에서의 출발 물질 및 중간체 중에서, 각각의 방법에서 기재되지 않은 화합물은 시판되는 것이거나, 숙련된 기술자에 의해 공지된 방식 또는 이와 유사한 방법으로 시판되는 물질을 사용하여 제조될 수 있다.
본 발명은 백신 보조제, 바람직하게는 암 백신에 대한 백신 보조제로서 유용한 상기 정의된 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.
또한, 본 발명은 상기 정의된 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체와 조합으로 포함하는 약학 조성물 (이하, 본 발명의 약학 조성물로 지칭함) 을 제공한다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 면역자극 활성을 갖는 활성 성분의 면역자극성을 유지 또는 향상시키기 위한 보조제로서 사용될 수 있다.
즉, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 항원-특이적 항체, 특히 항원-특이적 IgG, 보다 상세하게는 Th1-유형 항원-특이적 IgG (예를 들어, IgG2c) 를 유도 또는 향상시키기 위한 활성을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 세포독성 T-림프구 (CTL) 를 증가시키기 위한 활성을 갖는다. 또한, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 포유동물에서 CTL 을 유도하거나 포유동물에서 CTL 유도를 향상시키기 위한 활성을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 CD4-양성 (즉, MHC 클래스 II-제한) 및/또는 CD8-양성 (즉, MHC 클래스 I-제한) T-세포를 향상시키기 위한 활성을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 항원-특이적 T-세포를 증가시키기 위한 활성을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 기억 T-세포, 특히, CD8-양성 이펙터 기억 T-세포를 증가시키기 위한 활성을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 포유동물에게 투여시 PEG 구조를 갖지 않는 동일 몰의 화합물보다 CTL 를 더 크게 증가시키는 특징을 갖는다.
그리고, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 면역적격 세포를 활성화시키기 위한 활성을 갖는다.
본 발명의 약학 조성물은 종양 항원을 포함할 수 있다. 종양 항원으로서, 종양 항원 단백질, 또는 종양 항원 단백질에서 유래한 종양 항원 펩티드가 사용될 수 있다. 본원에서 사용되는 종양 항원 펩티드는 바람직하게는 하기 언급된 항원 펩티드, 보다 바람직하게는 NY-ESO-1, MAGE-3, WT1, OR7C1 및 Her2/neu 에서 유래한 종양 항원 펩티드, 보다 더 바람직하게는 WT1 에서 유래한 종양 항원 펩티드를 포함한다. 또한, 종양 유전적 이상으로 인한 신생항원에서 유래한 펩티드를 또한 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염과 함께 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 종양 항원을 포함하는 약학 조성물은 항원을 발현하는 종양의 성장 또는 항원을 발현하는 종양의 발생을 억제하는 작용을 갖는다.
따라서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 하기 언급된 종양 항원과 조합하여 약학 조성물로서 사용함으로써 암을 치료 또는 예방하기 위한 약제로서 유용하다.
본원에서 사용되는 종양 항원 펩티드는 특별한 것에 제한되어서는 안되나, WO 2014/157692 또는 WO 2014/157704 A1 에서 개시된 펩티드 등에서 선택될 수 있다.
종양 항원 펩티드의 한 구현예에서, 이는 예를 들어, 하기 아미노산 서열의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함한다:
Figure pct00027
.
그리고, 하기 아미노산 서열의 펩티드 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염;
식 (4):
Figure pct00028
[여기서, C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임], 및
식 (5):
Figure pct00029
[여기서, C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임]
이 본 발명에서 종양 항원 펩티드로서 사용될 수 있다.
종양 항원 펩티드는 펩티드 화학 분야에서 사용되는 일반적 방식으로 제조될 수 있다. 합성 방법은 참고문헌 (Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol. 2, Academic Press Inc., New York, 1976) 등이 개시하고 있는 것을 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물은 항원을 포함할 수 있다. 항원은 병원체-유래 항원, 예를 들어 바이러스 또는 박테리아에서 유래한 단백질 또는 이의 부분 단백질을 포함한다. 그리고, 항원 및 담체의 복합체 등이 본 발명에서의 항원의 범주에 포함된다. 복합체는 당업자에게 널리 공지된 링커를 통해 담체인 단백질에 브릿지연결된 항원 (단백질 및 펩티드를 포함하지만 이에 제한되지는 않음), 및 바이러스-유사 입자 (VLP) 에 함유된 항원을 포함한다. 따라서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 상기 언급된 항원과 조합으로 사용함으로써 바이러스 또는 박테리아의 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약제로서 유용하다.
본 발명의 약학 조성물의 투여 경로의 예는 비경구 투여, 구체적으로 혈관내 (예를 들어, 정맥내), 피하, 피내, 근육내, 종양내, 림프절, 및 경피 투여를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명의 약학 조성물은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 및 약학적으로 허용가능한 희석제 또는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 약물 제형은 액체 제형을 포함한다.
본 발명의 액체 제형은 수용액 제형/수성 현탁액 제형, 유성 용액 제형/유성 현탁액 제형, 히드로겔 제형, 지질 제형 및 에멀젼 제형을 포함한다.
수용액 제형 또는 수성 현탁액 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 물에 용해 또는 분산시켜 제조된 제형을 포함한다.
유성 용액 제형 또는 유성 현탁액 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유성 성분에 용해 또는 분산시켜 제조된 제형을 포함한다.
히드로겔 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 물에 용해 또는 분산시키고 제형에 점도를 부가하여 제조된 제형을 포함한다.
지질 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 리포솜 제형을 포함한다.
에멀젼 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 수용액 및 유성 조성물을 포함하는 제형을 포함한다.
본 발명의 액체 제형의 또 다른 구현예에서, 본 발명의 액체 제형은 종양 항원, 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 물에 용해 또는 분산시켜 제조된 수용액 제형 또는 수성 현탁액 제형; 종양 항원, 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유성 성분에 용해 또는 분산시켜 제조된 유성 용액 제형 또는 유성 현탁액 제형; 및 수용액 및 유성 조성물을 포함하는 에멀젼 제형을 포함한다.
본 발명의 수용액 제형 또는 수성 현탁액 제형에서 사용되는 첨가제는 예를 들어, 정제수, 주사용수, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 가용화제 및 용해제를 포함한다.
본 발명의 유성 용액 제형 또는 유성 현탁액 제형에 사용되는 첨가제는 예를 들어, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 동물성 또는 식물성 오일 및 지방, 탄화수소, 지방산, 지방산 에스테르, 가용화제 및 용해제를 포함한다.
본 발명의 히드로겔 제형에 사용되는 첨가제는 예를 들어, 정제수, 주사용수, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 가용화제, 용해제 및 증점제를 포함한다.
본 발명의 리포솜 제형에 사용되는 첨가제는 예를 들어, 정제수, 주사용수, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 가용화제, 용해제 및 지질을 포함한다.
본원에서 사용되는 본 발명의 에멀젼 제형은 수중유 에멀젼 (O/W 에멀젼으로도 지칭함), 유중수 에멀젼 (W/O 에멀젼으로도 지칭함), 수중유중수 에멀젼 (W/O/W 에멀젼으로도 지칭함) 및 유중수중유 에멀젼 (O/W/O 에멀젼으로도 지칭함) 을 포함한다. 본 발명의 에멀젼 제형은 바람직하게는 유중수 에멀젼 (W/O 에멀젼) 을 포함한다. 본 발명의 에멀젼 제형은 수성상 및 유상을 일반적 방식으로 유화시켜 제조될 수 있다. 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 유상 및/또는 수성상에 함유될 수 있다.
본 발명의 에멀젼 제형에서 사용되는 첨가제는 예를 들어, 물, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 동물성 또는 식물성 오일 및 지방, 탄화수소, 지방산, 지방산 에스테르, 글리세린지방산 에스테르, 친수성 계면활성제 및 친유성 계면활성제를 포함하며, 여기서
물은 정제수 및 주사용수를 포함하고,
완충제는 포스페이트 및 유기 산 염을 포함하고,
pH 조정제는 염산 및 소듐 히드록시드를 포함하고,
안정화제는 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 술파이트를 포함하고,
등장화제는 소듐 클로라이드, 글루코오스, 수크로오스 및 만니톨을 포함하고,
동물성 또는 식물성 오일 및 지방은 올리브 오일, 대두 오일 및 간유를 포함하고,
탄화수소는 액체 파라핀, 스쿠알렌 및 스쿠알란을 포함하고,
지방산은 올레산 및 미리스트산을 포함하고,
지방산 에스테르는 에틸 올레에이트, 옥틸도데실 미리스테이트, 세틸 2-에틸-헥사노에이트 및 이소프로필 미리스테이트를 포함하고,
글리세린 지방산 에스테르는 중간 사슬 트리글리세라이드, 중간 사슬 디글리세라이드 및 중간 사슬 모노글리세라이드를 포함하고,
친수성 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 피마자 오일, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르 및 폴리소르베이트를 포함하고,
친유성 계면활성제는 글리세릴 모노올레에이트, 글리세릴 디올레에이트, 소르비탄 모노올레에이트 (SpanTM 80), 소르비탄 세스퀴올레에이트, 소르비탄 디올레에이트, 소르비탄 트리올레에이트 (SpanTM 85), PEG-30 디폴리히드록시 스테아레이트 및 식물-유래 계면활성제 (사포닌 등) 를 포함한다.
본원에서 사용되는 본 발명의 에멀젼 제형에서 첨가제의 특정 조성은 WO 2006/078059 에 개시된 희석용 유화 조성물, Montanide ISA 51 VG (Seppic), Montanide ISA 720 VG (Seppic) 및 불완전 프로인트 보조제 (IFA) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 W/O 에멀젼 제형은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 에틸 올레에이트, 옥틸도데실 미리스테이트, 소르비탄 모노올레에이트, 글리세릴 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 20, 글리세린 및 소듐 디히드로겐 포스페이트를 포함하는 제제; 및 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 Montanide ISA 51 VG 를 포함하는 제제를 포함한다.
본 발명의 리포솜 제형에서, 리포솜은 내부상을 갖는, 양친매성 지질 분자의 이중층 멤브레인 (지질 이중층) 과 같은 지질 다중층으로 구성된 미세소포를 의미한다. 바람직한 지질 다중층은 지질 이중층이다.
본 발명의 리포솜 제형은 양친매성 지질 분자를 포함한다. 양친매성 지질 분자는 바람직하게는 하나 이상의 "인지질" 을 포함한다. "인지질" 은 예를 들어, 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딘산, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티딜이노시톨 및 스핑고미엘린을 포함한다. "인지질" 은 바람직하게는 포스파티딜콜린, 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜에탄올아민, 스핑고미엘린 및 포스파티딜세린을 포함한다. "인지질" 은 보다 바람직하게는 포스파티딜콜린, 스핑고미엘린 및 포스파티딜세린을 포함한다.
"인지질" 의 지방산 잔기는 C14-18 포화 또는 불포화 지방산 잔기, 예를 들어, 지방산 예컨대 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 올레산 및 리놀레산에서 유래하는 아실 기를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 그리고, 천연 유래 인지질 예컨대 난황 레시틴 및 대두 레시틴, 및 불포화 지방산 잔기가 수소화된 인지질 예컨대 수소화된 난황 레시틴 및 수소화된 대두 레시틴 (수소화된 대두 인지질, 또는 수소화된 대두 포스파티딜콜린으로도 지칭함) 이 또한 본원에서 사용될 수 있다.
리포솜 멤브레인의 전체 성분 당 인지질 함량 (몰 분율) 은 바람직하게는 30 - 80%, 보다 바람직하게는 40 - 70% 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 화합물을 내부에 포함하는 리포솜은 스테롤을 함유할 수 있다.
스테롤은 콜레스테롤, β-시토스테롤, 스티그마스테롤, 캄페스테롤, 브라시카스테롤, 에르고스테롤 및 푸코스테롤, 바람직하게는 콜레스테롤을 포함한다. 리포솜 멤브레인의 전체 성분 당 스테롤의 함량 (몰 분율) 은 바람직하게는 0 - 60%, 보다 바람직하게는 10 - 50%, 보다 더 바람직하게는 30 - 50% 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 화합물을 내부에 포함하는 리포솜은 중합체-개질 지질을 함유할 수 있다. 중합체-개질 지질은 중합체로 개질된 지질을 의미한다. 중합체-개질 지질은 "지질-중합체" 로 표시된다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 바람직하게는 친수성 중합체, 보다 바람직하게는 지질에 결합하지 않는 중합체-말단이 알콕시화되는 친수성 중합체이다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 보다 바람직하게는 지질에 결합하지 않는 중합체-말단이 메톡시화, 에톡시화 또는 프로폭시화되는 친수성 중합체이다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 가장 바람직하게는 지질에 결합하지 않는 중합체-말단이 메톡시화되는 친수성 중합체이다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리프로필렌 글리콜, 메톡시폴리비닐 알코올, 메톡시폴리비닐피롤리돈, 에톡시폴리에틸렌 글리콜, 에톡시폴리프로필렌 글리콜, 에톡시폴리비닐 알코올, 에톡시폴리비닐피롤리돈, 프로폭시폴리에틸렌 글리콜, 프로폭시폴리프로필렌 글리콜, 프로폭시폴리비닐 알코올 및 프로폭시폴리비닐피롤리돈을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리프로필렌 글리콜, 에톡시폴리에틸렌 글리콜, 에톡시폴리프로필렌 글리콜, 프로폭시폴리에틸렌 글리콜 및 프로폭시폴리프로필렌 글리콜을 포함한다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 보다 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜, 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 에톡시폴리에틸렌 글리콜, 에톡시폴리프로필렌 글리콜 및 프로폭시폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 보다 더 바람직하게는 폴리에틸렌 글리콜 및 메톡시폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분은 가장 바람직하게는 메톡시폴리에틸렌 글리콜을 포함한다. 중합체-개질 지질 중의 중합체 부분의 분자량은 예를 들어, 100 - 10000 달톤, 바람직하게는 500 - 8000 달톤, 보다 바람직하게는 1000 - 7000 달톤, 보다 더 바람직하게는 1500 - 5000 달톤, 가장 바람직하게는 1500 - 3000 달톤을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 중합체-개질 지질의 지질 부분은 예를 들어, 포스파티딜에탄올아민 및 디아실글리세롤을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 중합체-개질 지질의 지질 부분은 바람직하게는 C14-18 포화 또는 불포화 지방산 잔기를 갖는 포스파티딜에탄올아민 및 C14-18 포화 또는 불포화 지방산 잔기를 갖는 디아실글리세롤, 보다 바람직하게는 C14-18 포화 지방산 잔기를 갖는 포스파티딜에탄올아민 및 C14-18 포화 지방산 잔기를 갖는 디아실글리세롤, 보다 더 바람직하게는 팔미토일 기 또는 스테아로일 기를 갖는 포스파티딜에탄올아민 및 팔미토일 기 또는 스테아로일 기를 갖는 디아실글리세롤을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 중합체-개질 지질의 지질 부분은 가장 바람직하게는 디스테아로일포스파티딜에탄올아민을 포함한다. 리포솜 멤브레인의 전체 성분 당 중합체-개질 지질의 함량 (몰 분율) 은 바람직하게는 0 - 20%, 보다 바람직하게는 1 - 10%, 보다 더 바람직하게는 2 - 6% 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 화합물을 내부에 포함하는 리포솜은 약학적으로 허용가능한 첨가제를 함유할 수 있다. 첨가제는 예를 들어, 무기산, 무기산 염, 유기산, 유기산 염, 당, 완충제, 산화방지제 및 중합체를 포함한다. 무기산은 예를 들어, 인산, 염산 및 황산을 포함한다. 무기산 염은 예를 들어, 디소듐 히드로겐 포스페이트, 소듐 클로라이드, 암모늄 술페이트 및 마그네슘 술페이트를 포함한다. 유기산은 예를 들어, 시트르산, 아세트산, 숙신산 및 타르타르산을 포함한다. 유기산 염은 예를 들어, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 디소듐 숙시네이트 및 소듐 타르트레이트를 포함한다. 당은 예를 들어, 글루코오스, 수크로오스, 만니톨, 소르비톨 및 트레할로오스를 포함한다. 완충제는 예를 들어, L-아르기닌, L-히스티딘, 트로메타몰 (트리스히드록시메틸아미노메탄, Tris) 및 이의 염을 포함한다. 산화방지제는 예를 들어, 소듐 술파이트, L-시스테인, 소듐 티오글리콜레이트, 소듐 티오술페이트, 아스코르브산 및 토코페롤을 포함한다. 중합체는 예를 들어, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐피롤리돈, 카르복시 비닐 중합체 및 카르복시메틸셀룰로오스 소듐을 포함한다.
본 발명의 유성 현탁액 제형에서, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원) 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 유성 성분에, 용액 상태 또는 분산액 상태로, 또는 두 상태 모두로 함유될 수 있다. 본 발명의 유성 현탁액 제형에서 사용되는 첨가제는 예를 들어, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 동물성 또는 식물성 오일 및 지방, 탄화수소, 지방산, 지방산 에스테르, 가용화제 및 용해제를 포함하며, 여기서
완충제는 포스페이트 및 유기 산 염을 포함하고,
pH 조정제는 염산 및 소듐 히드록시드를 포함하고,
안정화제는 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 술파이트를 포함하고,
등장화제는 소듐 클로라이드, 글루코오스, 수크로오스 및 만니톨을 포함하고,
동물성 또는 식물성 오일 및 지방은 올리브 오일, 대두 오일 및 간유를 포함하고,
탄화수소는 액체 파라핀, 스쿠알렌 및 스쿠알란을 포함하고,
지방산은 올레산 및 미리스트산을 포함하고,
지방산 에스테르는 에틸 올레에이트, 옥틸도데실 미리스테이트, 세틸 2-에틸-헥사노에이트, 이소프로필 미리스테이트, 수크로오스 지방산 에스테르, 글리세린 지방산 에스테르, 소르비탄 지방산 에스테르 및 프로필렌 글리콜 지방산 에스테르를 포함하고,
가용화제 또는 용해제는 글리세린, 프로필렌 글리콜, 마크로골 및 에탄올을 포함한다.
본 발명의 히드로겔 제형은 예를 들어, 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 및/또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 물에 용해 또는 분산시키고 제형에 점도를 부가하여 제조된 제형을 포함한다. 본 발명의 히드로겔 제형에 사용되는 첨가제는 예를 들어, 정제수, 주사용수, 완충제, pH 조정제, 안정화제, 등장화제, 가용화제, 용해제 및 증점제를 포함하며, 여기서
완충제는 포스페이트 및 유기 산 염을 포함하고,
pH 조정제는 염산 및 소듐 히드록시드를 포함하고,
안정화제는 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 술파이트를 포함하고,
등장화제는 소듐 클로라이드, 글루코오스, 수크로오스 및 만니톨을 포함하고,
가용화제 또는 용해제는 글리세린, 프로필렌 글리콜, 마크로골 및 에탄올을 포함하고,
증점제는 카르멜로오스 소듐, 폴록사머 ‘D 포비돈을 포함한다.
식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 본 발명의 약학 조성물은 상기 종양 항원 외에 추가의 또 다른 약제 (병용 약물로도 지칭함) 와 조합으로 사용될 수 있다.
한 구현예에서, 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 본 발명의 약학 조성물은 상기 언급된 종양 항원 외에 "면역조절제" 와 조합으로 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "면역조절제" 는 공동자극 신호의 전달에 관여하며 항원-제시 세포 및/또는 T 세포 상에 존재하는 분자와 상호작용함으로써 항원-제시 세포에 의한 T 세포 활성화 동안 생성된 공동자극 신호의 전달을 제어하는 임의의 작용제, 및 면역계에서 면역 관용 (면역억제) 의 확립에 관여하는 분자의 기능을 직접 또는 간접적으로 제어하는 임의의 작용제를 의미한다. 종양 항원 펩티드가 종양에서 종양-반응성 CTL 을 증가시키는데 효과적이므로, 이는 면역조절제의 필요한 용량을 낮추거나 면역조절제에 의해 야기된 유해 사건을 감소시키기 위해, 면역조절제와 병용투여를 위한 작용제로서 잠재적으로 유용하다. 따라서, 본 개시물은 면역조절제와 조합된 WT1 항원 펩티드의 사용을 통해, 환자에게 개선된 효능 및 안전성을 갖는 치료요법을 제공한다.
"면역조절제" 는 항체, 핵산, 단백질, 펩티드 또는 소분자 형태의 작용제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. "면역조절제" 로서의 "항체" 는 항체 단편을 포함한다. 항체 단편의 예는 항체의 중쇄 및 경쇄 가변부 (VH 및 VL), F(ab')2, Fab', Fab, Fv, Fd, sdFv 및 scFV 를 포함한다. "면역조절제" 로서의 "단백질" 은 항체 외의 임의의 단백질을 의미한다. "면역조절제" 의 예는 예를 들어, 면역 체크포인트 억제제, 공동자극 분자 효능제, 면역 활성화제 및 소분자 억제제를 포함한다.
"면역 체크포인트 억제제" 는 암 세포 또는 항원 제시 세포에 의해 유도된 면역억제 효과를 억제한다. 면역 체크포인트 억제제의 예는 하기로 이루어지는 군에서 선택되는 분자에 대한 작용제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: (1) CTLA-4 (예를 들어, 이필리무맙 및 트레멜리무맙); (2) PD-1 (예를 들어, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, AMP-224, AMP-514 (MEDI0680) 및 피딜리주맙 (CT-011)); (3) LAG-3 (예를 들어, IMP-321 및 BMS-986016); (4) BTLA; (5) KIR (예를 들어, IPH2101); (6) TIM-3 (예를 들어, LY3321367 및 CA-327); (7) PD-L1 (예를 들어, 두르발루맙 (MEDI4736), MPDL3280A, BMS-936559, 아벨루맙 (MSB0010718C), BMS-1001, BMS-1116 및 CA-170, CA-327); (8) PD-L2; (9) B7-H3 (예를 들어, MGA-271); (10) B7-H4; (11) HVEM; (12) GAL9; (13) CD160; (14) VISTA (예를 들어, 온바틸리맙 (JNJ-61610588), HMBD-002 및 CA-170); (15) BTNL2; (16) TIGIT; (17) PVR; (18) BTN1A1; (19) BTN2A2; (20) BTN3A2 (Nat Rev Drug Discov. 2013; 12: 130-146; Nikkei Medical Cancer Review 2014; 9; Nat Rev Immunol. 2014; 14: 559-69); (21) CSF1-R; (22) VSIG-3; (23) CD112; (24) CD112R; 및 (25) CD96.
"공동자극 분자 효능제" 는 T 세포 및/또는 항원-제시 세포 상의 공동자극 분자를 통한 보조 신호의 전달에 의해 T 세포 활성화를 향상시키고, 암 세포 또는 항원 제시 세포의 면역억제 효과를 약화시킨다. 공동자극 분자 효능제의 예는 하기로 이루어지는 군에서 선택되는 분자에 대한 작용제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: (1) 4-1BB; (2) 4-1BB-L; (3) OX40; (4) OX40-L; (5) GITR; (6) CD28; (7) CD40; (8) CD40-L; (9) ICOS; (10) ICOS-L; (11) LIGHT; (12) CD27; 및 (13) DNAM-1.
"면역 활성화제" 는 T 세포 및 수지상 세포와 같은 면역 세포를 직접 또는 간접적으로 활성화시켜 림프절에서의 킬러 T 세포를 효율적으로 자극한다. 면역 활성화제의 예는 톨-유사 수용체 (TLR) 효능제, 인터페론 유전자의 자극제 (stimulator of interferon genes) (STING) 효능제, 사이토카인 및 열 충격 단백질 (heat shock protein) (HSP) 에 대한 작용제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"톨-유사 수용체 (TLR) 효능제" 의 예는 TLR1/2 효능제, TLR2 효능제, TLR3 효능제 (예를 들어, PolyI:C), TLR4 효능제 (예를 들어, S-유형 리포다당류, 파클리탁셀, 지질 A 및 모노포스포릴 지질 A), TLR5 효능제 (예를 들어, 플라젤린), TLR6/2 효능제 (예를 들어, MALP-2), TLR7 효능제, TLR7/8 효능제 (예를 들어, 가르디퀴모드, 이미퀴모드, 록소리빈 및 레시퀴모드 (R848)), TLR7/9 효능제 (예를 들어, 히드록시클로로퀸 술페이트), TLR8 효능제 (예를 들어, 모톨리모드 (VTX-2337)), TLR9 효능제 (예를 들어, CpG-ODN) 및 TLR11 효능제 (예를 들어, 프로필린) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"사이토카인" 의 예는 IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-13, IL-14, IL-15, IL-16, IL-17, IL-18, 인터페론 (INF)-α, INF-β, INF-γ, SCF, GM-CSF, G-CSF, M-CSF, 에리트로포이에틴, 트롬보포이에틴, 대식세포 염증 단백질 (macrophage inflammatory protein) (MIP) 및 단핵구 화학주성 단백질 (monocyte chemoattractant protein) (MCP) 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"열 충격 단백질 (HSP)" 의 예는 HSP70, HSP90, HSP90α, HSP90β, HSP105, HSP72 및 HSP40 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 열 충격 단백질에 대한 작용제는 HSP 억제제를 포함한다. HSP90 에 대한 억제제의 예는 타네스피마이신 (17-AAG), 루미네스핍 (AUY-922, NVP-AUY922), 알베스피마이신 (17-DMAG) 히드로클로라이드, 가네테스핍 (STA-9090), BIIB021, 오날레스핍 (AT13387), 겔다나마이신, NVP-BEP800, SNX-2112 (PF-04928473), PF-4929113 (SNX-5422), KW-2478, XL888, VER155008, VER-50589, CH5138303, VER-49009, NMS-E973, PU-H71, HSP990 (NVP-HSP990) 및 KNK437 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"소분자 억제제" 의 예는 히스톤 데아세틸라아제 억제제, 히스톤 데메틸라아제 억제제, 히스톤 아세틸트랜스퍼라아제 억제제, 히스톤 메틸트랜스퍼라아제 억제제, DNA 메틸트랜스퍼라아제 억제제, 안트라사이클린 항생제, 백금제, MAPK 억제제, β-카테닌 억제제, STAT3 억제제, NF-kB 억제제, JAK 억제제, mTOR 억제제, IDO 억제제, COX-2 억제제, CXCR4 억제제 및 아르기나아제 억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"히스톤 데아세틸라아제 억제제" 의 예는 보리노스타트 (SAHA, MK0683), 엔티노스타트 (MS-275), 파노비노스타트 (LBH589), 트리코스타틴 A (TSA), 모세티노스타트 (MGCD0103), BG45, BRD73954, 벨리노스타트 (PXD101), 로미뎁신 (FK228, 뎁시펩티드), 4SC-202, HPOB, LMK-235, CAY10603, 타스퀴니모드, TMP269, 넥스투라스타트 A, 로실리노스타트 (ACY-1215), RGFP966, RG2833 (RGFP109), 스크립타이드, 투바스타틴 A, 프라시노스타트 (SB939), CUDC-101, M344, PCI-34051, 다시노스타트 (LAQ824), 투바스타틴 A 히드로클로라이드, 아벡시노스타트 (PCI-24781), CUDC-907, AR-42, 소듐 페닐부티레이트, 레스미노스타트, 투바신, 퀴시노스타트 (JNJ-26481585) 디히드로클로라이드, MC1568, 기비노스타트 (ITF2357), 드록시노스타트, 치다미드 (C S055, HBI-8000), CHR-2485, CHR-3996, DAC-060, FRM-0334 (EVP-0334), MGCD-290, CXD-101 (AZD-9468), CG200745, 아르기닌 부티레이트, 술포라판, SHP-141, CUDC-907, YM753 (OBP-801), 소듐 발프로에이트, 아피시딘 및 CI994 (타케디날린) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"히스톤 데메틸라아제 억제제" 의 예는 GSK J4 HCl, OG-L002, JIB-04, IOX1, SP2509, ORY-1001 (RG-6016), GSK J1, ML324 및 GSK-LSD1 2HCl 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"히스톤 아세틸트랜스퍼라아제 억제제" 의 예는 C646, MG149, 레모델린 및 아나카르드산을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"히스톤 메틸트랜스퍼라아제 억제제" 의 예는 피노메토스타트 (EPZ5676), EPZ005678, GSK343, BIX01294, 타제메토스타트 (EPZ6438), 3-데아자네플라노신 A (DZNeP) HCl, UNC1999, MM-102, SGC0946, 엔타카폰, EPZ015666, UNC0379, EI1, MI-2 (메닌-MLL 억제제), MI-3 (메닌-MLL 억제제), PFI-2, GSK126, EPZ04777, BRD4770, GSK-2816126 및 UNC0631 을 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
"DNA 메틸트랜스퍼라아제 억제제" 의 예는 데시타빈, 아자티딘, RG108, 티오구아닌, 제불라린, SGI-110, CC-486, SGI-1027, 로메구아트립 및 프로카인아미드 히드로클로라이드를 포함하지만 이에 제한되는 것은 아니다.
"안트라사이클린 항생제" 는 DNA 이완을 억제하기 위해 DNA 가닥 사이에 삽입된다. 안트라사이클린 항생제의 예는 독소루비신, 리포솜 독소루비신, 다우노루비신, 피라루비신, 에피루비신, 이다루비신, 아클라루비신, 암루비신, 알로인 및 미톡산트론을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"백금제" 의 예는 시스플라틴, 카르보플라틴, 미보플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴 (JM-126), 옥살리플라틴 (ELOXATIN), 트리플라틴 테트라니트레이트 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"MAPK 억제제" 의 예는 SB203580, 도라마피모드 (BIRB796), SB202190 (FHPI), LY2228820, VX-702, SB239063, 팩스메티닙 (ARRY-614), PH-797804, VX-745 및 TAK-715 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"β-카테닌 억제제" 의 예는 XAV-939, ICG-001, IWR-1-엔도, Wnt-C59 (C59), LGK-974, KY02111, IWP-2, IWP-L6, WIKI4 및 FH535 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"STAT3 억제제" 의 예는 S3I-201, Stattic, 니클로사미드, 니푸록사지드, 나파부카신 (BBI608), 크립토탄쉬논, HO-3867, WHI-P154, FLLL32, STA-21, WP1066 및 SH-4-54 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"NF-kB 억제제" 의 예는 QNZ (EVP4593), 소듐 4-아미노살리실레이트, JSH-23, 페네틸 카페에이트, 소듐 살리실레이트, 안드로그라폴라이드 및 SC75741 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"JAK 억제제" 의 예는 룩솔리티닙 (INCB018424), 토파시티닙 (CP-690550) 시트레이트, AZD1480, 페드라티닙 (SAR302503, TG101348), AT9283, 티르포스틴 B42 (AG-490), 모멜로티닙 (CYT387), 토파시티닙 (CP-690550, 타소시티닙), WP1066, TG101209, 간도티닙 (LY2784544), NVP-BSK805 2HCl, 바리시티닙 (LY3009104, INCB02850), AZ960, CEP-33779, 파크리티닙 (SB1518), WHI-P154, XL019, S-룩솔리티닙 (INCB018424), ZM39923 HCl, 데세르노티닙 (VX-509), 세르둘라티닙 (PRT062070, PRT2070), 필고티닙 (GLPG0634), FLLL32, 페피시티닙 (ASP015K, JNJ-54781532), GLPG0634 유사체, Go6976 및 커큐몰을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"mTOR 억제제" 의 예는 시롤리무스 (라파마이신), 데포롤리무스 (AP23573, MK-8669), 에베롤리무스 (RAD-001), 템시롤리무스 (CCI-779, NSC683864), 조타롤리무스 (ABT-578), 비올리무스 A9 (우미롤리무스), AZD8055, KU-0063794, 복스탈리십 (XL765, SAR245409), MHY1485, 닥톨리십 (BEZ235, NVP-BEZ235), PI-103 및 토르키닙 (PP242) 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"IDO 억제제" 의 예는 NLG919, INCB024360 유사체, 인독시모드 (NLG-8189) 및 에파카도스타트 (INCB024360) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"COX-2 억제제" 의 예는 발데콕십, 로페콕십, 카르프로펜, 셀레콕십, 루미라콕십, 톨페남산, 니메술리드, 니플루믹산, 아사르알데히드, 로르녹시캄, 소듐 메클로페나메이트, 암페낙 소듐 히드레이트, 디클로페낙 소듐, 케토프로펜, 케토롤락, 나프록센 소듐, 인도메타신, 이부프로펜, 아스피린, 메페남산, 브롬페낙 소듐, 옥사프로진, 잘토프로펜 및 네파페낙을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"CXCR4 억제제" 의 예는 WZ811, 플레릭사포르 (AMD3100) 및 플레릭사포르 8HCl (AMD3100 8HCl) 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에 기재된 바와 같은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 조성물은 또한 "호르몬 요법제", "면역치료제", "생물약제", "세포 성장 인자", "세포 성장 인자 억제제", "세포 성장 인자 수용체 억제제", "방사선치료제", "보조제" 및 "화학요법제" 로 이루어지는 군에서 선택되는 하나 이상의 약물과 조합으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 상기 약물 군에서 선택되는 1 내지 5 개의 약물, 1 내지 3 개의 약물, 또는 1 개의 약물은 본원에 기재된 바와 같은 펩티드 또는 식 (1) 의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 이의 조합과 병용하여 사용될 수 있다.
"호르몬 요법제" 의 예는 부신 피질 호르몬제 (예를 들어, 스테로이드 항염증제, 에스트로겐 제제, 프로게스테론 제제 및 안드로겐 제제), 항-에스트로겐제, 에스트로겐 조절제, 에스트로겐 합성 억제제, 항-안드로겐제, 안드로겐 조절제, 안드로겐 합성 억제제, LH-RH 효능제 제제, LH-RH 길항제 제제, 아로마타아제 억제제, 스테로이드-락토나아제 억제제, 피임약, 레티노이드, 및 레티노이드의 대사를 지연시키는 작용제를 포함한다.
"호르몬 요법제" 의 예는 포스페스트롤, 디에틸스틸베스트롤, 플루옥시메스테롤, 클로로트리아니센, 메틸 테스토스테론, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메게스트롤 아세테이트, 클로르마디논 아세테이트, 시프로테론 아세테이트, 다나졸, 알릴레스트레놀, 게스트리논, 메파르트리신, 랄록시펜, 오르멜록시펜, 레보르멜록시펜, 타목시펜 시트레이트, 토레미펜 시트레이트, 요오독시펜, 알약 제형, 메피티오스탄, 테스토롤락톤, 아미노글루테티미드, 고세렐린 아세테이트, 부세렐린, 류프로렐린, 류프롤리드, 드롤록시펜, 에피티오스탄올, 에티닐에스트라디올 술포네이트, 에스트라무스틴, 파드로졸 히드로클로라이드, 아나스트로졸, 테로라졸, 케토코나졸, 레트로졸, 엑세메스탄, 보로졸, 포르메스탄, 엑세메스탄, 플루타미드, 비칼루타미드, 닐루타미드, 엔잘루타미드, 미페프리스톤, 피나스테라이드, 덱사메타손, 프레드니솔론, 베타메타손, 트리암시놀론, 아비라테론, 리아로졸, 벡사로텐 및 DN101 을 포함한다.
"면역치료제" 의 예는 피시바닐, 크레스틴, 시조피란, 렌티난, 우베니멕스, 인터페론 (IL)-α, 인터페론 (IL)-β, 인터페론 (IL)-γ, 인터류킨, 대식세포 콜로니 자극 인자, 과립구 콜로니 자극 인자, 에리트로포이에틴, 림포톡신, BCG 백신, 코리네박테리움 파르붐 (Corynebacterium parvum), 레바미솔, 다당류 K, 프로코다졸, 항-CTLA4 항체, 항-PD-1 항체 및 TLR 효능제 (예를 들어, TLR7 효능제, TLR8 효능제, TLR9 효능제) 를 포함한다.
"생물약제" 의 예는 인터류킨-2 (알데스류킨), 인터페론-α, 인터페론-β, 인터페론-γ, 에리트로포이에틴 (EPO), 과립구-콜로니 자극 인자 (필그라스팀), 과립구-대식세포-콜로니 자극 인자 (사르그라모스팀), IL13-PE38QQR, 바실 칼메트-구에린 (Bacille Calmette-Guerin), 레바미솔, 옥트레오티드, CPG7909, Provenge, GVAX, Myvax, Favld, 레날리도미드, 트라스투주맙, 리툭시맙, 겜투주맙 오조가미신, 알렘투주맙, 엔도스타틴, 이브리투모맙 티욱세탄, 토시투모맙, 세툭시맙, 자놀리무맙, 오파투무맙, HGS-ETR1, 페르투주맙, M200, SGN-30, 마투주맙, 아데카투무맙, 데노수맙, 잘루투무맙, MDX-060, 니모투주맙, MORAb-003, Vitaxin, MDX-101, MDX-010, DPC4 항체, NF-1 항체, NF-2 항체, Rb 항체, p53 항체, WT1 항체, BRCA1 항체, BRCA2 항체, 강글리오시드 (GM2), 전립선 특이적 항원 (PSA), α-태아단백질 (AFP), 암종배아 항원 (CEA), 흑색종 관련 항원 (MART-1, gap100, MAGE 1,3 티로신), 유두종 바이러스 E6 및 E7 단편, 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"세포 성장 인자", "세포 성장 인자 억제제" 및 "세포 성장 인자 수용체 억제제" 와 관련하여, 세포 성장 인자는 세포 증식을 촉진하는 임의의 작용제일 수 있다. 예를 들어, 세포 성장 인자는 수용체에 결합하여 낮은 농도에서 기능할 수 있는 20,000 이하의 분자량을 갖는 펩티드일 수 있다.
"세포 성장 인자" 의 예는 상피세포 성장 인자 (EGF), 인슐린-유사 성장 인자 (IGF (예를 들어, 인슐린, IGF-1 및 IGF-2)), 형질전환 성장 인자 (TGF (예를 들어, TGF-α 및 TGF-β)), 신경 성장 인자 (NGF), 뇌-유래 신경영양 인자 (BDNF), 혈관 내피 성장 인자 (VEGF), 콜로니 자극 인자 (CSF (예를 들어, 과립구-콜로니 자극 인자 (G-CSF)), 과립구-대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF)), 혈소판-유래 성장 인자 (PDGF), 에리트로포이에틴 (EPO), 섬유아세포 성장 인자 (FGF (예를 들어, 산성 FGF, 염기성 FGF, 각질세포 성장 인자 (KGK) 및 FGF-10)), 간세포 성장 인자 (HGF), 헤레귤린 및 안지오포이에틴을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용어 "세포 성장 인자" 는 용어 "성장 인자" 와 동의어이다.
"세포 성장 인자 억제제" 의 예는 상피세포 성장 인자 억제제 (EGF 억제제), 인슐린-유사 성장 인자 억제제 (IGF 억제제), 신경 성장 인자 억제제 (NGF 억제제), 뇌-유래 신경영양 인자 억제제 (BDNF 억제제), 혈관 내피 세포 성장 인자 억제제 (VEGF 억제제), 콜로니 자극 인자 억제제 (CSF 억제제), 혈소판-유래 성장 인자 억제제 (PDGF 억제제), 에리트로포이에틴 억제제 (EPO 억제제), 섬유아세포 성장 인자 억제제 (FGF 억제제), 간세포 성장 인자 억제제 (HGF 억제제), 헤레귤린 억제제 및 안지오포이에틴 억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용어 "세포 성장 인자 억제제" 는 용어 "성장 인자 억제제" 와 동의어이다.
"세포 성장 인자 수용체 억제제" 의 예는 상피세포 성장 인자 수용체 억제제 (EGFR 억제제), 인슐린-유사 성장 인자 수용체 억제제 (IGFR 억제제), 신경 성장 인자 수용체 억제제 (NGFR 억제제), 뇌-유래 신경영양 인자 수용체 억제제 (BDNFR 억제제), 혈관 내피 세포 성장 인자 수용체 억제제 (VEGFR 억제제), 콜로니 자극 인자 억제제 (CSF 억제제), 혈소판-유래 성장 인자 수용체 억제제 (PDGFR 억제제), 에리트로포이에틴 수용체 억제제 (EPOR 억제제), 섬유아세포 성장 인자 수용체 억제제 (FGFR 억제제), 간세포 성장 인자 수용체 억제제 (HGFR 억제제), 헤레귤린 수용체 억제제 및 안지오포이에틴 수용체 억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 용어 "세포 성장 인자 수용체 억제제" 는 용어 "성장 인자 수용체 억제제" 와 동의어이다.
"방사선치료제" 의 예는 방사선 물질 및 방사선증감제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"보조제" 는 항암제로 인한 부작용 또는 구토를 억제하기 위해 항암제와 함께 사용되는 작용제이다. "보조제" 의 예는 아프레피탄트, 온단세트론, 로라제팜, 덱사메타손, 디펜히드라민, 라니티딘, 시메티딘, 라니티딘, 파모티딘, 시메티딘, 프로크리트, 에포에틴 알파, 필그라스팀, 오프렐베킨, 류코보린 및 과립구-대식세포-콜로니 자극 인자 (GM-CSF) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"화학요법제" 의 예는 알킬화제, 백금제, 대사길항물질, 토포이소머라아제 억제제, DNA 삽입제, 항유사분열제, 항종양 항생제, 식물-유래 항암제, 후생유전적 약물, 면역조절제, 분자 표적화 약물, 혈관신생 억제제 및 다른 화학요법제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 화학요법제의 일부 전형적인 예를 하기에 열거한다.
"알킬화제" 의 예는 질소 머스터드, 질소 머스터드 N-옥시드 히드로클로라이드, 클로람부실, 시클로포스파미드, 이포스파미드, 티오테파, 카르보쿠온, 임프로술판 토실레이트, 부술판, 니무스틴 히드로클로라이드, 미토브로니톨, 멜팔란, 다카르바진, 프로카르바진, 라니무스틴, 에스트라무스틴 소듐 포스페이트, 트리에틸렌멜라민, 카르무스틴, 로무스틴, 스트렙토조신, 피포브로만, 에토글루시드, 알트레타민, 아바무스틴, 디브로스피듐 히드로클로라이드, 포테무스틴, 프레드니무스틴, 벤다무스틴, 우라무스틴, 세무스틴, 푸미테파, 리보무스틴, 테모졸로미드, 트레오술판, 트로포스파미드, 지노스타틴 스티말라머, 아도젤레신, 시스테무스틴, 비젤레신, 메클로레타민, 우라실 머스터드, 스트렙토조신, 트라벡테딘, 베카테린, 클로르메틴, 만노술판, 트리아지쿠온, 프로카르바진, 칸포스파미드, 니트로소우레아 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"백금제" 의 예는 시스플라틴, 카르보플라틴, 미보플라틴, 네다플라틴, 사트라플라틴, 옥살리플라틴, 트리플라틴 테트라니트레이트 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"대사길항물질" 의 예는 엽산길항제, 피리미딘 대사 억제제, 퓨린 대사 억제제, 리보뉴클레오티드 리덕타아제 억제제 및 뉴클레오티드 유사체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"대사길항물질" 의 예는 머캅토퓨린, 6-머캅토퓨린 리보시드, 티오이노신, 메토트렉세이트, 페메트렉세드, 에오시타빈, 에노시타빈, 시타라빈, 시타라빈 옥포스페이트, 안시타빈 히드로클로라이드, 5-FU 작용제 (예를 들어, 플루오로우라실, 카르조날, 벤난, 루나콜, 루나폰, 테가푸르, 테가푸르-우라실, 테가푸르-기메라실-오터라실 포타슘 (TS-1), UFT, 독시플루리딘, 카르모푸르, 갈로시타빈, 에미테푸르 및 카페시타빈), 아미노프테린, 넬라라빈, 류코보린 칼슘, 타블로이드, 부토신, 폴리네이트 칼슘, 레보폴리네이트 칼슘, 클라드리빈, 에미테푸르, 플루다라빈, 겜시타빈, 히드록시카르바미드, 펜토스타틴, 피리트렉심, 이독수리딘, 미토구아존, 티아조푸린, 암바무스틴, 벤다무스틴, 플록수리딘, 넬라라빈, 류코보린, 히드록시우레아 티오구아닌, 아스파라기나아제, 보르테조밉, 랄티트렉세드, 클로파라빈, 에노시타빈, 사파시타빈, 아자시티딘, 술파디아진, 술파메톡사졸, 트리메토프림, 리프록스스타틴-1, D4476, 잔토후몰, 에파카도스타트 (INCB024360), 비도플루디무스, P7C3, GMX1778 (CHS828), NCT-501, SW033291, Ro61-8048 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"토포이소머라아제 억제제" 의 예는 독소루비신, 다우노루비신, 에피루비신, 이다루비신, 안트라센디온, 미톡산트론, 미토마이신 C, 블레오마이신, 닥티노마이신, 플리카토마이신, 이리노테칸, 캄프토테신, 루비테칸, 벨로테칸, 에토포시드, 테니포시드, 토포테칸, 암사크린 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"DNA 삽입제" 의 예는 프로플라빈, 독소루비신 (아드리아마이신), 다우노루비신, 닥티노마이신, 탈리도마이드 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"항유사분열제" 의 예는 파클리탁셀, 파클리탁셀 유도체 (예를 들어, DHA 파클리탁셀, 파클리탁셀 폴리글루타메이트, nab-파클리탁셀, 미셀 파클리탁셀, 7α-글루코실옥시아세틸파클리탁셀 및 BMS-275183), 도세탁셀, 비노렐빈, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 빈데신, 빈졸리딘, 에토포시드, 테니포시드, 익사베필론, 라로탁셀, 오르타탁셀, 테세탁셀, 이스피네십, 콜치신, 빈플루닌 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"항종양 항생제" 의 예는 악티노마이신 D, 악티노마이신 C, 미토마이신 C, 크로모마이신 A3, 미트라마이신 A, 블레오마이신 히드로클로라이드, 블레오마이신 술페이트, 페플로마이신 술페이트, 다우노루비신 히드로클로라이드, 독소루비신 히드로클로라이드, 아클라루비신 히드로클로라이드, 피라루비신 히드로클로라이드, 에피루비신 히드로클로라이드, 암루비신 히드로클로라이드, 네오카르지노스타틴, 지노스타틴 스티말라머, 미트라마이신, 사르코마이신, 카르지노필린, 미토탄, 조루비신 히드로클로라이드, 미톡산트론 히드로클로라이드, 이다루비신 히드로클로라이드, 리포솜 독소루비신 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"식물-유래 항암제" 의 예는 이리노테칸, 노기테칸, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 에리불린, 소부족산, 빈블라스틴 술페이트, 빈크리스틴 술페이트, 빈데신 술페이트, 테니포시드, 파클리탁셀, 파클리탁셀 주입물, 도세탁셀, DJ-927, 비노렐빈, 토포테칸 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"후생유전적 약물" 의 예는 DNA 메틸화 억제제, 히스톤 데아세틸라아제 (HDAC) 억제제, DNA 메틸 트랜스퍼라아제 (DNMT) 억제제, 히스톤 데아세틸라아제 활성화제, 히스톤 데메틸라아제 억제제 및 메틸화된 뉴클레오티드를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"후생유전적 약물" 의 구체적인 예는 보리노스타트, 벨리노스타트, 모세티노스타트 (MGCD0103), 엔티노스타트 (SNDX-275), 로미뎁신, 아자시티딘, 데시타빈, GSK2879552 2Hl, SGC707, ORY-1001 (RG-6016), PFI-4, SirReal2, GSK2801, CPI-360, GSK503, AMI-1, CPI-169 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"면역조절제" 의 예는 탈리도마이드, 레날리도마이드, 포말리도마이드 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"분자 표적화 약물" 은 소분자 또는 항체일 수 있다. "분자 표적화 약물" 의 예는 키나아제 억제제, 프로테아좀 억제제, 단일클론 항체, mTOR 억제제, TNF 억제제 및 T-세포 억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"키나아제 억제제" 의 예는 티로신 키나아제 억제제, 세린/트레오닌 키나아제 억제제, Raf 키나아제 억제제, 사이클린-의존적 키나아제 (CDK) 억제제 및 미토겐-활성화 단백질 키나아제 (MEK) 억제제를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"키나아제 억제제" 의 구체적인 예는 이마티닙, 게피티닙, 에를로티닙, 아파티닙, 다사티닙, 보수티닙, 반데타닙, 수니티닙, 악시티닙, 파조파닙, 렌바티닙, 라파티닙, 닌테다닙, 닐로티닙, 크리조티닙, 세리티닙, 알렉티닙, 룩솔리티닙, 토파시티닙, 이브루티닙, 소라페닙, 베무라페닙, 다브라페닙, 팔보시클립, 트라메티닙, 레고라페닙, 세디바닙, 레스타우르티닙, 반데티닙, 바탈라닙, 셀리시클립, 티반티닙, 카네르티닙, 펠리티닙, 테세바티닙, 세디라닙, 모테사닙, 미도스타우린, 포레티닙, 카보잔티닙, 셀루메티닙, 네라티닙, 볼라세르팁, 사라카티닙, 엔자스타우린, 탄두티닙, 세막사닙, 알보시딥, ICR-62, AEE788, PD0325901, PD153035, TK787, 암카세르팁 (BBI503), E6201, E7050 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"프로테아좀 억제제" 의 예는 보르테조밉, 카르필조밉 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"단일클론 항체" 의 예는 항-CD22 항체, 항-CD20 항체, 항-CD25 항체, 항-CD30 항체, 항-CD33 항체, 항-CD5 항체, 항-CD52 항체, 항-상피세포 성장 인자 수용체 항체 (EGFR 항체), 항-혈관 내피 세포 성장 인자 항체 (VEGF 항체), 항-TNF-α 항체, 항-IL-1 수용체 항체, 항-IL-2 수용체 항체, 항-IL-5 수용체 항체, 항-IL-6 수용체 항체, 항-HER2 항체, 항-IgE 항체, 항-IgG 항체, 항-RS 바이러스 항체, 항-CCR4 항체, 항-세포독성 T 림프구-연관 항원 4 (CTLA-4, CD152) 항체, 항-PD-1 항체, 항-RANKL (receptor activator of nuclear factor κB ligand) 항체, 항-c-Met 항체 및 항-CXCR4 항체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"단일클론 항체" 의 구체적인 예는 이브리투모맙 티욱세탄, 리툭시맙, 세툭시맙, 인플릭시맙, 바실릭시맙, 브렌툭시맙 베도틴, 토실리주맙, 트라스투주맙, 베바시주맙, 오말리주맙, 메폴리주맙, 겜투주맙, 오조가마이신, 팔리비주맙, 라니비주맙, 세르톨리주맙, 오크렐리주맙, 모가물리주맙, 에쿨리주맙, 페르투주맙, 알렘투주맙, 이노투주맙, 파니투무맙, 오파투무맙, 골리무맙, 아달리무맙, 라무시루맙, 니볼루맙, 아나킨라, 데노수맙, 이필리무맙, 펨브롤리주맙, 마투주맙, 팔레투주맙, MORAb-004, MORA-b009 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"mTOR 억제제" 의 예는 에베롤리무스 (RAD001), 라파마이신 (시롤리무스), AZD8055, 템시롤리무스 (CCI-779, NSC683864), KU-0063794, 복스탈리십 (XL-765, SAR245409), MHY1485, 닥톨리십 (BEZ235), PI-103, 토르키닙 (PP242), 리다포롤리무스 (데포롤리무스, MK-8669), INK-128 (MLN0128), Torin1, 오미팔리십 (GSK2126458, GSK458), OSI-027, PF-04691502, 아피톨리십 (GDC-0980, RG7422), GSK1059615, 게다톨리십 (PF-05212384, PKI-587), WYE-132, PP121, WYE-354, AZD2014, Torin2, WYE-687, CH5132799, WAY-600, ETP-46464, GDC-0349, XL388, 조타롤리무스 (ABT-578), 타크롤리무스 (FK506), BGT226 (NVP-BGT226), 팔로미드 529 (P529), 크리소판산 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"TNF 억제제" 의 예는 에타네르셉트, 레날리도마이드 (CC-5013), 포말리도마이드, 탈리도마이드, 네크로스타틴-1 및 QNZ (EVP4593) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"T-세포 억제제" 의 예는 아바타셉트를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"혈관신생 억제제" 의 예는 CM101, IFN-α, IL-12, 혈소판 인자-4, 수라민, 세막사닙, 트롬보스폰딘, VEGFR 길항제, 혈관신생억제 (angiostatic) 스테로이드와 헤파린의 조합, 연골-유래 혈관신생 억제제, 매트릭스 메탈로프로테이나아제 억제제, 바티마스타트, 마리마스타트, 안지오스타틴, 엔도스타틴, 2-메톡시에스트라디올, 테코갈란, 트롬보스폰딘, αVβ3 억제제, 리노미드, ADH-1, E7820 및 이의 DDS 제형을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
"다른 화학요법제" 의 예는 피나스테라이드, 소부족산, 오바토클락스, 에파프록시랄, 티피파르닙 및 로나파르닙을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 다른 첨가제를 추가로 함유할 수 있으며, 이러한 첨가제의 예는 계면활성제, 산화방지제, 보존제 및 수딩제 (soothing agent) 를 포함한다.
식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 일반적으로 5 내지 5000 mg/m2 (체표면적), 즉 약 0.1 ng/kg 내지 100 mg/kg 범위의 단위 용량으로 항원성 물질 (면역원) 과 동시에 또는 전후 임의의 간격으로 투여될 수 있으며, 이는 백신 보조제에 대한 유효 용량을 제공한다. 주사제에 대한 단위 투약 형태는 일반적으로 예를 들어 1 ng 내지 250 mg 의 활성 성분을 함유하며, 바람직하게는 1 일 당 1 ng 내지 50 mg/kg (활성 성분) 범위의 용량으로 사용된다. 그러나, 1 일 용량은 치료할 숙주, 투여 경로 및 치료하는 질환의 중증도에 따라 가변적일 수 있다. 따라서, 최적 용량은 개별 환자 또는 온혈 동물을 치료하는 의사에 의해 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "치료" 는 질환 증상의 일부 또는 전부를 전체적으로 또는 부분적으로 완화시키거나, 질환의 진행을 예방 또는 지연시키는 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 용어 "예방" 은 질환의 1 차적인 예방 (질환 발병의 예방) 또는 질환의 2 차적인 예방 (질환의 발병 후 증상이 완화되거나 질환이 치유된 환자에서의 재발의 예방, 재연의 예방) 을 의미한다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염이 시험관내 또는 생체내 면역 보조제 활성을 가지므로, 이는 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원) 의 면역원성을 유지 또는 향상시키기 위한 백신 보조제로서 유용하다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 시험관내 또는 생체내 세포 면역을 위한 보조제 활성을 가지므로, 이는 종양 항원의 면역원성을 유지 또는 향상시키기 위한 백신 보조제로서 유용하다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 질환을 치료 또는 예방하기 위한 면역자극제, 즉 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원)-특이적 면역 반응을 유도하는 물질의 효과를 유지 또는 향상시키는데 사용될 수 있다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 종양 항원 또는 병원체 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원으로도 지칭함) 에 대한 특이적인 면역 반응을 향상시키는 물질을 포함하는 약학 조성물이 또한 본 발명의 한 구현예에 포함된다. 종양 항원은 항원 단백질 또는 상기 항원 단백질에서 유래한 항원 펩티드 (부분 펩티드), 종양 항원 단백질 또는 상기 종양 항원 단백질에서 유래한 종양 항원 펩티드 (부분 펩티드), 또는 담체와의 이의 복합체를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본 발명의 특정 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 암 면역요법을 위한 종양 항원 단백질 또는 종양 항원 펩티드와 함께 투여함으로써 암을 치료 또는 예방할 수 있다. 암은 예를 들어, 백혈병, 골수이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 결장암, 폐암, 유방암, 생식 세포 암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경부암, 난소암, 뇌 종양, 뼈암, 췌장암, 두경부암, 피부 또는 안와내 악성 흑색종, 직장암, 항문암, 고환암, 나팔관 암종, 자궁내막 암종, 자궁경부 암종, 질 암종, 외음부 암종, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연조직 육종, 요도암, 음경암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프모구 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형암, 림프구성 림프종, 신장/요관암, 신장 골반 암종, 중추신경계 (CNS) 종양, 원발성 CNS 림프종, 종양 혈관신생, 척추 종양, 뇌교 신경교종, 뇌하수체 선종, 카포시 육종, 편평 세포 암종, 편평세포 암종, T-세포 림프종, 다형 교모세포종, 악성 흑색종, 비-소세포 폐암, 신세포암 및 석면-유발 암을 포함한다. 암의 치료 또는 예방은 전이성 질환 및 종양 재발을 예방하는 것, 그리고 부종양성 증후군을 예방 및 치료하는 것을 포함한다.
특정 구현예에서, 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은, 감염성 질환을 예방하기 위한 백신의 활성 성분과 조합으로 투여하여, 다양한 감염성 질환 예컨대 생식기 사마귀, 일반 사마귀, 발바닥 사마귀, B 형 간염, C 형 간염, 단순 포진 바이러스, 전염성 연속종, 천연두, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV), 인유두종 바이러스 (HPV), RS 바이러스, 노로바이러스, 거대세포바이러스 (CMV), 수두 대상포진 바이러스 (VZV), 리노바이러스, 아데노바이러스, 코로나바이러스, 인플루엔자 및 파라인플루엔자; 박테리아 질환 예컨대 결핵, 마이코박테리움 아비움 (mycobacterium avium) 및 한센병; 감염 예컨대 진균증, 클라미디아, 칸디다 (Candida), 아스페르길루스 (Aspergillus), 크립토코커스 뇌수막염 (cryptococcal meningitis), 뉴모시스티스 카리니 (Pneumocystis carini), 크립토스포리디움증 (cryptosporidiosis), 히스토플라스마증 (histoplasmosis), 톡소플라스마증 (toxoplasmosis), 말라리아, 트리파노소마 (Trypanosoma) 감염 및 리슈만편모충증 (leishmaniasis) 을 예방할 수 있다. 감염성 질환을 예방하기 위한 백신의 활성 성분의 예는 감염성 질환을 유발하는 박테리아, 진균, 원생균 및 바이러스를 포함하는 미생물/병원체에서 유래한 물질, 예컨대 항원 단백질, 상기 항원 단백질에서 유래한 항원 펩티드 (부분 펩티드), 다당류, 지질 및 이의 조합 또는 상기 미생물/병원체에서 유래한 물질 및 담체의 조합을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
바이러스 항원에서 유래하는 바이러스 항원 펩티드의 예는 인플루엔자 매트릭스 단백질 펩티드 58-66 (Jager E et al., Int. J. Cancer 67: 54 (1996)), HPV16 E7 펩티드 86-93 (van Driel WJ et al., Eur. J. Cancer 35:946 (1999)), HPV E7 펩티드 12-20 (Scheibenbogen C et al., J. Immunother 23: 275 (2000)), HPV16 E7 펩티드 11-20 (Smith JWI et al., J. Clin. Oncol. 21: 1562 (2003)), HSV2 gD (Berman PW et al., Science 227: 1490 (1985)), CMV gB (Frey SE et al., Infect Dis. 180: 1700 (1999), Gonczol E. et al., Exp. Opin. Biol. Ther. 1: 401 (2001)), 및 CMV pp65 (Rosa CL et al., Blood 100: 3681 (2002), Gonczol E. et al., Exp. Opin. Biol. Ther. 1: 401 (2001)) 를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 담체는 항원 단백질 또는 항원 펩티드가 화학적으로 및/또는 물리적으로 결합하는 단백질 및 지질과 같은 물질이며, 이의 예는 CRM 197 (Vaccine. 2013 Oct 1; 31(42):4827-33), KLH (Cancer Immunol Immunother. 2003 Oct; 52(10):608-16), 바이러스-유사 입자 (PLoS ONE 5(3): e9809) 및 리포솜 (J Liposome Res. 2004; 14(3-4):175-89) 을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
항원 단백질은 Molecular Cloning 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989) 와 같은 교재에 따라, 항원 단백질을 인코딩하는 cDNA 를 클로닝하고 숙주 세포에서 발현시킴으로써 제조될 수 있다.
항원 펩티드의 합성은 예를 들어, 문헌 (Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol. 2, Academic Press Inc., New York, 1976) 에서 기재된 바와 같은, 펩티드 화학에서 일반적으로 사용되는 방법에 따라 실행될 수 있다.
한 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 추가로 제공한다:
a) 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원), 또는 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원) 을 포함하는 약학 조성물.
항원은 백신의 활성 성분으로서 사용될 수 있는 항원이면 제한되지 않으며, 이는 상기 언급된 바와 같은 항원 단백질, 이러한 항원 단백질에서 유래한 항원 펩티드 (부분 펩티드), 및 담체와 이의 복합체를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 제공한다:
a) 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 종양 항원, 또는 종양 항원을 포함하는 약학 조성물.
본원의 종양 항원은 종양 항원이 암 백신에 대한 활성 성분으로서 사용될 수 있는 것이면 제한되지 않으며, 이는 상기 언급된 종양 항원 단백질 또는 상기 항원 단백질에서 유래한 종양 항원 펩티드 (부분 펩티드), 및 또한 담체와 이의 복합체를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 하기를 포함하는 키트를 제공한다:
a) 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
b) 병원체-유래 항원, 또는 병원체-유래 항원을 포함하는 약학 조성물.
본원의 병원체-유래 항원은 병원체-유래 항원이 감염성 백신에 대한 활성 성분으로서 사용될 수 있는 것이면 제한되지 않으며, 이는 상기 언급된 병원체-유래 항원 단백질 또는 상기 병원체-유래 항원 단백질에서 유래한 병원체-유래 항원 펩티드 (부분 펩티드), 및 또한 담체와 이의 복합체를 포함한다.
본 발명의 한 구현예에서, 본 발명은 백신 보조제의 제조에서의 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또한 본 발명의 한 구현예에서, 본 발명은 암 또는 감염을 치료하기 위한 백신의 제조에서의 백신 보조제로서의 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 본 발명은 암 백신에 대한 백신 보조제의 제조에서의 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
또한 본 발명의 한 구현예에서, 본 발명은 암을 치료하기 위한 암 백신의 제조에서의 백신 보조제로서의 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도를 제공한다.
본 발명의 한 구현예에서, 감염 백신에 대한 백신 보조제의 제조를 위한 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
본 발명의 한 구현예에서, 감염의 치료를 위한 감염 백신의 제조에서의 백신 보조제로서의 상기 정의된 바와 같은 식 (I) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 용도가 제공된다.
또한, 본 발명의 한 구현예는 상기 정의된 바와 같은 식 (I) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 항원 (종양 항원 또는 병원체-유래 항원) 과 함께 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 또는 감염의 치료 또는 예방, 또는 이의 진행의 예방을 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 한 구현예는 상기 정의된 바와 같은 식 (I) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 종양 항원과 함께 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료 또는 예방, 또는 이의 진행의 예방을 위한 방법을 제공한다.
본 발명의 한 구현예는 상기 정의된 바와 같은 식 (I) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 병원체-유래 항원과 함께 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 감염의 치료 또는 예방, 또는 이의 진행의 예방을 위한 방법을 제공한다.
실시예
본 발명을, 어떠한 면에서도 제한하는 것으로서 간주되어서는 안 되는 하기 실시예를 참조로 추가로 기재할 것이다.
Fmoc: 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐
Boc: tert-부톡시카르보닐
Alko: p-알콕시벤질 알코올
PEG: 폴리에틸렌 글리콜
tBu: tert-부틸
HBTU: O-(벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트
DIPEA: N,N-디이소프로필에틸아민
DMF: N,N-디메틸포름아미드
TFA: 트리플루오로아세트산
TIS: 트리이소프로필실란
THF: 테트라히드로푸란
TBS: tert-부틸디메틸실릴 기
TBDPS: tert-부틸디페닐실릴 기
고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석계 (LCMS) 의 분석 조건을 하기에 나타낸다.
LCMS 조건 A
MS 검출기: LCMS-IT-TOF
HPLC: Shimadzu Nexera X2 LC 30AD
컬럼: Kinetex 1.7 μ C18 100A New column 50 Х 2.1 mm
유량: 1.2 ml/분
파장: 254/220 nm
이동상: A: 0.1% 포름산/물
B: 아세토니트릴
시간 프로그램:
단계 시간 (분)
1 0.01-1.40 A:B = 90:10 - 5:95
2 1.40-1.60 A:B = 5:95
3 1.61-2.00 A:B = 99:1
LCMS 조건 B
MS 검출기: ACQUITYTM SQ 검출기 (Waters)
HPLC: ACQUITYTM 시스템
컬럼: Waters ACQUITYTM UPLC BEH C18 (1.7 μm, 2.1 mm Х 30 mm)
유량: 0.8 ml/분
파장: 254/220 nm
이동상: A: 0.06% 포름산/아세토니트릴
B: 0.06% 포름산/물
시간 프로그램: 0.0-1.30 A:B = 2:98 - 96:4
컬럼 온도: 25℃
참조예 1
아미노산 서열: RMFPNAPYL ( Arg -Met- Phe -Pro- Asn -Ala-Pro- Tyr -Leu)( SEQ ID NO: 1) 로 이루어지는 펩티드의 합성
출발 물질로서 1.00 g 의 (Fmoc-Lys(Boc)-Alko-PEG Resin) (WATANABE CHEMICAL INDUSTRIES, LTD.; 0.23 mmol/g, 0.23 mmol) 로부터, 펩티드 사슬을 Fmoc/tBu 방법의 고체상 합성에 의해 신장시켰다. 고체상 합성을 CS336X 펩티드 합성기 (CSBio) 로 수행하고, Fmoc 기를 DMF 중 20% 피페리딘으로 5 분 또는 20 분 동안 처리하여 탈보호하였다. 수지 화합물과 DMF 중 1.05 mmol 의 보호된 아미노산, 1 mmol 의 HBTU 및 2 mmol 의 DIPEA 의 용액을 1 시간 동안 반응시켜, 보호된 아미노산의 수지 화합물에 대한 커플링을 수행하였다. 수득한 수지를 DMF 및 에테르로 세척하고 진공 하 건조시켜, 펩티드 수지를 수득하였다. 펩티드 수지에 10 mL 의 TFA/물/TIS 혼합물 (부피비: 94/2.5/2.5) 을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 진탕하였다. 수지를 여과에 의해 제거하고, 반응 용액을 감압 하 농축하였다. 반응 용액을 얼음 온도에서 냉각시키고, 디에틸 에테르 (50 mL) 를 이에 첨가하였다. 생성 침전물을 필터 상에 수집하고, 에테르로 세척하고, 진공 하 건조시켜 미정제 펩티드를 수득하였다. 수득한 미정제 펩티드를 20% 아세트산/물 및 아세토니트릴의 혼합물 (부피비: 1/1) 에 용해하고, 하기 나타낸 조건에 따라 정제하여, RMFPNAPYL (Arg-Met-Phe-Pro-Asn-Ala-Pro-Tyr-Leu)(SEQ ID NO: 1) 의 트리플루오로아세테이트 (0.16 g) 를 수득하였다. 수득한 트리플루오로아세테이트를 통상의 방식으로 이의 아세테이트로 전환하였고, 이를 평가하였다.
질량 분석법: m/z = 554.73 [M+2H]+2, 체류 시간: 0.82 분 (LCMS 조건 A)
정제 조건
HPLC 시스템: 고처리량 HPLC 분취용 시스템 (Gilson)
컬럼: YMC ODS-A 3 cmφ Х 25 cm, 10 μm
용출액 1: 0.1% TFA/물
용출액 2: 0.035% TFA/아세토니트릴
유량: 20 mL/분
구배 방법:
Figure pct00030
참조예 1 에 기재된 방법에 따라, 표 1 에 나타낸 펩티드를 각각의 상응하는 출발 물질로부터 이들의 트리플루오로아세테이트로서 제조하였다. 이들 화합물은 본 발명의 화합물 내에 있지 않기 때문에 참조예로서 다루어졌다. 참조예 3 을 통상의 방식으로 이의 아세테이트로 전환하였고, 이것을 하기와 같이 평가하였다.
표 1
Figure pct00031
WO 2014/157692 에 기재된 방법에 따라, 표 2 에 나타낸 화합물 (여기서, C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임) 을 이의 트리플루오로아세테이트로서 제조하였다. 이 화합물은 본 발명의 화합물 내에 있지 않기 때문에 참조예로서 다루어졌다.
표 2
Figure pct00032
참조예 9
N-2,2,3,3-펜타메틸-4,7,10,13,16-펜타옥사-3-실라옥타데칸-18-아민의 제조
Figure pct00033
단계 1
Figure pct00034
공지된 화합물인 14-아미노-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-올 (1.60 g) 의 THF (25 mL) 중의 용액에 트리에틸아민 (4.7 mL) 및 에틸 트리플루오로아세테이트 (2.4 mL) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 하 농축하고, 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 로 정제하여 2,2,2-트리플루오로-N-(14-히드록시-3,6,9,12-테트라옥사테트라데칸-1-일)아세트아미드 (1.00 g) 를 수득하였다.
m/z = 334 [M+H]+, Rt = 0.507 (LCMS 조건 B)
단계 2
Figure pct00035
DMF (20 mL) 중 참조예 9 (단계 1) 에서 제조한 화합물 (3.91 g) 의 용액에 트리에틸아민 (4.90 mL) 및 tert-부틸디메틸클로로실란 (3.54 g) 을 첨가하고, 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 감압 하 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (이동상: 헥산/에틸 아세테이트) 로 정제하여, 2,2,2-트리플루오로-N-(2,2,3,3-테트라메틸-4,7,10,13,16-펜타옥사-3-실라옥타데칸-18-일)아세트아미드 (3.70 g) 를 수득하였다.
m/z = 448 [M+H]+, Rt = 1.153 (LCMS 조건 B)
단계 3
Figure pct00036
DMF (20 mL) 중 참조예 9 (단계 2) 에서 제조한 화합물 (4.44 g) 의 용액에 세슘 카르보네이트 (6.46 g) 및 메틸 요오디드 (1.6 g) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 소듐 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 감압 하 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (이동상: 헥산/에틸 아세테이트) 로 정제하여, 2,2,2-트리플루오로-N-메틸-N-(2,2,3,3-테트라메틸-4,7,10,13,16-펜타옥사-3-실라옥타데칸-18-일)아세트아미드 (3.31 g) 를 수득하였다.
m/z = 463 [M+H]+, Rt = 1.210 (LCMS 조건 B)
단계 4
Figure pct00037
메탄올 (5 mL) 중 참조예 9 (단계 3) 에서 제조한 화합물 (117 mg) 의 용액에 포타슘 카르보네이트 (70 mg) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 로 정제하여, N-2,2,3,3-펜타메틸-4,7,10,13,16-펜타옥사-3-실라옥타데칸-18-아민 (67 mg) 을 수득하였다.
m/z = 366 [M+H+], Rt = 0.718 (LCMS 조건 B)
참조예 10
N,2,2-트리메틸-3,3-디페닐-4,7,10,13,16-펜타옥사-3-실라옥타데칸-18-아민의 제조
Figure pct00038
표제 화합물을 참조예 9 의 방법에 따라 제조하였다.
m/z = 490 [M+H]+, Rt = 0.953 (LCMS 조건 B)
참조예 11
(3S)-3-{[2-아미노-5-({2-메톡시-4-[(메틸아미노)메틸]페닐}메틸)-6-메틸피리미딘-4-일]아미노}헥산-1-올의 제조
Figure pct00039
표제 화합물을 WO 2012/066336 에 개시된 방법에 따라 제조하였다.
m/z = 194 [M+2H]+2, Rt = 0.552 (LCMS 조건 B)
참조예 12
5-({2-메톡시-4-[(메틸아미노)메틸]페닐}메틸)-6-메틸-N 4 -펜틸피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure pct00040
표제 화합물을, 실시예 1 의 절차와 유사한 반응 및 처리에 따라 공지된 화합물인 5-{[4-(클로로메틸)-2-메톡시페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민으로부터 제조하였다.
m/z = 179 [M+2H]+2, Rt = 0.475 (LCMS 조건 B)
참조예 13
3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-메톡시벤즈알데히드의 제조
Figure pct00041
표제 화합물을, WO 2017/061532 에 개시된 절차와 유사한 반응 및 처리에 따라 공지된 화합물인 메틸 3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-메톡시벤조에이트로부터 제조하였다.
m/z = 179 [M+2H]+2, Rt = 0.475 (LCMS 조건 B)
참조예 14
3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-히드록시벤즈알데히드의 제조
Figure pct00042
디클로로메탄 (5 mL) 중 참조예 13 (104 mg) 의 용액에 디클로로메탄 중 보론 트리브로마이드 용액 (1.0 M, 0.8 mL) 을 얼음 냉각 하에 첨가하고, 용액을 실온에서 6 시간 동안 교반하였다. 수성 포화 소듐 바이카르보네이트를 반응 용액에 첨가하였다. 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 유기층을 소듐 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (54 mg) 을 수득하였다.
m/z = 329 [M+H]+, Rt = 0.748 (LCMS 조건 B)
참조예 15
5-({2-메톡시-5-[(메틸아미노)메틸]페닐}메틸)-6-메틸-N 4 -펜틸피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure pct00043
표제 화합물을 실시예 3 의 절차와 유사한 반응 및 처리에 따라 참조예 13 으로부터 제조하였다.
m/z = 179 [M+2H]+2, Rt = 0.599 (LCMS 조건 B)
참조예 16
2-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-[(메틸아미노)메틸]페놀의 제조
Figure pct00044
표제 화합물을 실시예 3 의 절차와 유사한 반응 및 처리에 따라 참조예 14 로부터 제조하였다.
m/z = 173 [M+2H]+2, Rt = 0.562 (LCMS 조건 B)
참조예 17
N,2,2,3,3-펜타메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31-데카옥사-3-실라트리트리아콘탄-33-아민의 제조
Figure pct00045
표제 화합물을 참조예 9 의 방법에 따라 제조하였다.
m/z = 587 [M+H]+, Rt = 0.865 (LCMS 조건 B)
참조예 18
N,2,2,3,3-펜타메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73-테트라코사옥사-3-실라펜타헵타콘탄-75-아민의 제조
Figure pct00046
표제 화합물을 참조예 9 의 방법에 따라 제조하였다.
m/z = 402 [M+3H]+3, Rt = 0.946 (LCMS 조건 B)
참조예 19
N,2,2,3,3-펜타메틸-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76,79,82,85,88,91,94,97,100,103,106,109-헥사트리아콘타옥사-3-실라헨데카헥탄-111-아민의 제조
Figure pct00047
표제 화합물을 참조예 9 의 방법에 따라 제조하였다.
m/z = 866 [M+2H]+2, Rt = 0.948 (LCMS 조건 B)
실시예 1
1-(4-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올ㆍ트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00048
공지된 화합물인 5-{[4-(클로로메틸)-2-메톡시페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민 (75 mg) 의 아세토니트릴 (3 mL) 중의 용액에 참조예 9 (76 mg), 포타슘 카르보네이트 (65 mg) 및 포타슘 요오디드 (67 mg) 를 첨가하고, 용액을 60℃ 에서 8 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 참조예 1 의 경우와 같이 역상 HPLC 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (96 mg) 을 수득하였다.
m/z = 290 [M+2H]+2, Rt = 0.623 (LCMS 조건 B)
Figure pct00049
실시예 2
1-{4-[(2-아미노-4-{[(3S)-1- 히드록시헥산 -3-일]아미노}-6- 메틸피리미딘 -5-일)메틸]-3-메톡시페닐}-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올ㆍ트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00050
표제 화합물을 실시예 1 의 절차와 유사한 반응 및 처리에 따라 공지된 화합물인 (3S)-3-[(2-아미노-5-{[4-(클로로메틸)-2-메톡시페닐]메틸}-6-메틸피리미딘-4-일)아미노]헥산-1-올로부터 제조하였다.
m/z = 305 [M+2H]+2, Rt = 0.527 (LCMS 조건 B)
실시예 3
1-(3-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-4- 메톡시페닐 )-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올ㆍ트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00051
THF (5 mL) 중 참조예 13 (64.3 mg) 의 용액에 참조예 9 (101 mg), 아세트산 (5.4 μL) 및 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (199 mg) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 물을 반응 용액에 첨가하고, 수성 포화 소듐 바이카르보네이트를 이에 첨가하여 용액을 중화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 소듐 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 HPLC 에 의해 정제하여 TBDPS-보호된 원하는 화합물을 수득하였다. 수득한 보호된 화합물을 메탄올에 용해하고, 용액을 실온에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 역상 HPLC 에 의해 정제하여 표제 화합물 (26 mg) 을 수득하였다.
m/z = 290 [M+2H]+2, Rt = 0.661 (LCMS 조건 B)
Figure pct00052
실시예 4
1-(3-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-4-히드록시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올ㆍ트리플루오로아세테이트의 제조
Figure pct00053
THF (5 mL) 중 참조예 14 (30 mg) 의 용액에 참조예 9 (49 mg), 아세트산 (2.6 μL) 및 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (97 mg) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 물을 반응 용액에 첨가하고, 수성 포화 소듐 바이카르보네이트를 이에 첨가하여 용액을 중화하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고, 소듐 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 HPLC 에 의해 정제하여 TBDPS-보호된 원하는 화합물을 수득하였다. 수득한 보호된 화합물을 메탄올에 용해하고, 용액을 실온에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고, 역상 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 (13 mg) 을 수득하였다.
m/z = 290 [M+2H]+2, Rt = 0.661 (LCMS 조건 B)
Figure pct00054
실시예 5
4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1- 히드록시펜탄 -2-일]아미노}-6- 메틸피리미딘 -5-일)메틸]-N-(20-히드록시-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코산-1-일)-3-메톡시벤즈아미드의 제조
Figure pct00055
공지된 화합물인 4-[(2-아미노-4-{[(2S)-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시벤조산 (30 mg) 의 DMF (1 mL) 중의 용액에 디이소프로필에틸아민 (25.9 mg), 20-아미노-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코산-1-올 (31.3 mg) 및 HATU (33.5 mg) 를 첨가하고, 용액을 실온에서 24 시간 동안 교반하였다. 수성 포화 소듐 바이카르보네이트를 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 클로로포름/메탄올 (10:1) 의 혼합물로 추출하고, 마그네슘 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 아미노 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (28.1 mg) 을 수득하였다.
m/z = 683 [M+H]+, Rt = 0.558 (LCMS 조건 B)
Figure pct00056
실시예 6
2,5,8,11- 테트라옥사트리데칸 -13-일 4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시벤조에이트의 제조
Figure pct00057
공지된 화합물인 4-[(2-아미노-4-{[(2S)-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시벤조산 (30 mg) 의 THF (1.5 mL) 중의 용액에 2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-올 (501 mg), 디이소프로필에틸아민 (36.2 mg) 및 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 히드로클로라이드 (46.1 mg) 를 첨가하고, 용액을 60℃ 에서 10 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (16.2 mg) 을 수득하였다.
m/z = 565 [M+H]+, Rt = 0.665 (LCMS 조건 B)
Figure pct00058
실시예 7
5-{[2- 메톡시 -4-(2,5,8,11,14- 펜타옥사펜타데칸 -1-일)페닐] 메틸 }-6- 메틸 -N 4 -펜틸피리미딘-2,4-디아민의 제조
Figure pct00059
2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-올에 소듐 히드라이드 (7.2 mg, 함량 >55%) 를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 공지된 화합물인 5-{[4-(클로로메틸)-2-메톡시페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민 (20 mg) 을 이에 첨가하고, 혼합물을 60℃ 에서 3 시간 동안 교반하였다. 물을 반응 용액에 첨가하고, 혼합물을 클로로포름으로 추출하고, 마그네슘 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (6.7 mg) 을 수득하였다.
m/z = 536 [M+H]+, Rt = 0.850 (LCMS 조건 B)
Figure pct00060
실시예 8
1-(4-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29-노나옥사-2-아자헨트리아콘탄-31-올의 제조
Figure pct00061
공지된 화합물인 5-{[4-(클로로메틸)-2-메톡시페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민 (40 mg), 참조예 17 (64.6 mg), 포타슘 요오디드 (36.6 mg) 및 포타슘 카르보네이트 (30.5 mg) 의 혼합물에 아세토니트릴 (1 mL) 을 첨가하고, 혼합물을 80℃ 에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 클로로포름으로 희석하고 여과하여 불용성 물질을 제거하고, 농축하였다. 잔류물에 클로로포름 (1 mL) 및 TFA (0.1 mL) 를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 수성 소듐 카르보네이트로 중화하고, 클로로포름으로 추출하고, 마그네슘 술페이트로 건조시키고, 여과하고, 농축하였다. 수득한 미정제 생성물을 아미노 실리카 겔 컬럼 크로마토그래피 (이동상: 클로로포름/메탄올) 에 의해 정제하여, 표제 화합물 (28.4 mg) 을 수득하였다.
m/z = 400 [M+2H]+2, Rt = 0.583 (LCMS 조건 B)
Figure pct00062
실시예 9
1-(4-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-트리코사옥사-2-아자트리헵타콘탄-73-올의 제조
Figure pct00063
표제 화합물 (31.6 mg) 을 실시예 8 의 절차와 유사한 반응에 따라 참조예 18 (83 mg) 로부터 제조하였다.
m/z = 708 [M+2H]+2, Rt = 0.672 (LCMS 조건 B)
Figure pct00064
실시예 10
1-(4-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86,89,92,95,98,101,104,107-펜타트리아콘타옥사-2-아자노나헥탄-109-올의 제조
Figure pct00065
표제 화합물 (26.3 mg) 을 실시예 8 의 절차와 유사한 반응에 따라 참조예 19 (95 mg) 로부터 제조하였다.
m/z = 487 [M+4H]+4, Rt = 0.693 (LCMS 조건 B)
Figure pct00066
실시예 11
12-[(4-{[2-아미노-4- 메틸 -6-( 펜틸아미노 )피리미딘-5-일] 메틸 }-3-메톡시페닐)메틸]-3,6,9,15,18,21-헥사옥사-12-아자트리코산-1,23-디올의 제조
Figure pct00067
표제 화합물 (13.1 mg) 을 실시예 1 의 절차와 유사한 반응에 따라 3,6,9,15,18,21-헥사옥사-12-아자트리코산-1,23-디올 (40.7 mg) 로부터 제조하였다.
m/z = 349 [M+2H]+2, Rt = 0.554 (LCMS 조건 B)
Figure pct00068
시험 1
인간 TLR7 리포터 유전자 어세이
TLR7/NF-κB/SEAPorterTM HEK293 세포주 (Imgenex Corporation) 는, NF-κB 반응 요소의 전사 조절 하에 전장 인간 TLR7 및 분비성 알칼리성 포스파타아제 (SEAP) 리포터 유전자를 발현하는 안정적으로 동시 형질주입된 세포주이다. 세포주의 TLR7 발현은 유세포 분석에 의해 이미 시험되었다. 항생제 블라스티시딘 및 제네티신을 사용하여 안정한 발현을 갖는 형질주입체를 선택하였다. TLR 신호전달은 NF-κB 의 전좌를 일으키며 프로모터의 활성화는 SEAP 유전자의 발현을 초래한다. TLR7-특이적 활성화를, 0.1% (v/v) 디메틸술폭시드 (DMSO) 의 존재 하에 실시예 및 참조예에서 제조된 각각의 화합물과 함께 37℃ 에서 세포를 24 시간 인큐베이션한 후에 생성된 SEAP 의 수준을 결정함으로써 평가하였다. 본 발명의 화합물에 대한 인간 TLR7 활성을 인간 TLR7 리포터 유전자 어세이에 의해 평가하고, 결과를 SEAP 유도 최고 수준의 절반을 생성하는 화합물 농도 (EC50) 로서 표 3 및 4 에서 나타낸다.
표 3
Figure pct00069
표 4
Figure pct00070
시험 2
마우스 TLR7 리포터 유전자 어세이
HEK-BlueTM mTLR7 세포주 (Invivogen) 는, NF-κB 반응 요소의 전사 조절 하에 전장 마우스 TLR7 및 분비성 SEAP 리포터 유전자를 발현하는 안정적으로 동시 형질주입된 세포주이다. 세포주의 TLR7 발현은 RT-PCR 에 의해 이미 시험되었다. 항생제 블라스티시딘 및 제오신을 사용하여 안정한 발현을 갖는 형질주입체를 선택하였다. TLR 신호전달은 NF-κB 의 전좌를 일으키며 프로모터의 활성화는 SEAP 유전자의 발현을 초래한다. TLR7-특이적 활성화를, 0.1% (v/v) DMSO 의 존재 하에 실시예 및 참조예에서 제조된 각각의 화합물과 함께 37℃ 에서 세포를 20-24 시간 인큐베이션한 후에 생성된 SEAP 의 수준을 결정함으로써 평가하였다. 본 발명의 화합물에 대한 마우스 TLR7 활성을 마우스 TLR7 리포터 유전자 어세이에 의해 평가하고, 결과를 SEAP 유도 최고 수준의 절반을 생성하는 화합물 농도 (EC50) 로서 표 5 및 6 에서 나타낸다.
표 5
Figure pct00071
표 6
Figure pct00072
시험 1 및 2 에서의 결과는 본 발명의 실시예 화합물 및 참조예 화합물 둘 모두가 인간 및 마우스 TLR7 효능제로서 작용할 수 있다는 것을 시사한다.
시험 3
HLA -A * 24:02 유전자도입 마우스에서의 생체내 CTL 유도 평가
실시예 1 의 화합물 및 참조예 12 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 과 Montanide ISA 51 V 를 포함하는 칵테일 백신 (이하, "칵테일 백신 b" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 각각 첨가하여, 각각의 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에 투여하고, 각각의 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 세포독성 T-림프구 (CTL) 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
식 4 의 화합물에서의 CYTWNQMNL (SEQ ID No. 2) 은 HLA-A*24:02-제한된 WT1 단백질에서 유래한 항원 펩티드에 상응한다.
HLA-A*24:02 유전자도입 마우스 (C57BL/6CrHLA-A2402/Kb) 는 인간 MHC (HLA-A*24:02) 및 마우스 MHC (H-2Kb) 의 키메라 HLA 를 발현한다. 마우스는 HLA-A*24:02-양성 인간에서 CTL 을 유도할 수 있는 펩티드로 CTL 을 유도할 수 있다 (Int J Cancer. 2002; 100: 565-70).
칵테일 백신 b 에 의해 펩티드 (SEQ ID No. 2) 에 특이적인 CTL 을 유도하는 특징은 펩티드 (SEQ ID No. 2) 로 마우스로부터의 비장세포 자극시 IFNγ 가 생성될 수 있는지 여부를 측정하여 평가하였다. 또한, 실시예 1 에서의 화합물 또는 참조예 12 에서의 화합물에 의해 생체내 보조제 활성을 발휘하는 특징은 칵테일 백신 b 에 의해 유도된 CTL 의 수와 실시예 1 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서의 화합물을 칵테일 백신 b 에 첨가하여 제조된 백신에 의해 유도된 CTL 의 수를 비교하고, 수의 증가 여부를 확인하여 평가하였다.
구체적으로, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 DMSO 에 용해한 다음, 식 4 의 화합물 6 mg/ml 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드 4.5 mg/ml 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 ISA 51 VG 로 유화시켜 칵테일 백신 b 를 제조하였다. 칵테일 백신 b 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 b 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 100 ng 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 b 를 제조하는 단계에서, 참조예 12 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 69 ng 의 참조예 12 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. IFNγ-생성 비장세포를 검출하기 위해, IFNγ ELISPOT 어세이 키트를 사용하였다. 특히, ELISPOT 플레이트를 비장세포 샘플 준비 전날에 항-마우스-IFNγ 항체로 처리하였다. 다음 날, 10% 소 태아 혈청 (FBS) 을 갖는 RPMI 1640 배지로 처리하여 플레이트를 블로킹하였다. 블로킹된 ELISPOT 플레이트에, HLA-A*24:02 유전자도입 마우스로부터의 비장세포 샘플을 2.5 Х 105 세포/웰로 첨가하였다. 펩티드 (SEQ ID No. 2) 를 0.1% (v/v) DMSO 의 존재 하에 비장세포-함유 웰에 10 μg/ml 의 최종 농도로 첨가하였다. 펩티드-첨가된 비장세포를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 ImmunoSpot Analyzer (C.T.L.) 상에서 계수하였다.
도 1 은 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스를 사용하는 IFNγ ELISPOT 어세이로부터의 결과를 나타낸다. 도 1 의 그래프의 세로축 상의 눈금은 첨가된 세포로의 자극에 반응하여 IFNγ 를 생성하는 세포의 수를 나타낸다. 마우스에 투여되는 백신은 가로축에 나타낸다. 도 1 에서의 흑색 막대 및 백색 막대는 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스로부터의 비장세포를 각각 펩티드 SEQ ID No. 2 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션한 결과를 나타낸다. 따라서, 흑색 막대와 백색 막대 사이의 세포 계수 차이는 백신의 투여에 의해 마우스의 몸에서 유도된 펩티드 SEQ ID No. 2 에 특이적인 IFNγ-생산 세포의 계수, 즉 CTL 계수를 나타낸다. 도 1 에서의 백색 막대의 계수는 거의 감지할 수 없었다. 이는 마우스의 비장세포가 원하는 펩티드의 부재 하에 매우 적게 반응하였음을 시사한다. 본 시험의 결과는, 칵테일 백신 b 가 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에서 펩티드 SEQ ID No. 2 에 반응성인 CTL 을 유도하였다는 것을 나타내었다. 그리고, 펩티드 SEQ ID No. 2 에 반응성인 CTL 계수는 실시예 1 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 b 에 첨가함으로써 증가하였다. 또한, CTL 계수의 증가는, 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 b 에 첨가하는 경우에 더 많았다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다. 또한 결과는, PEG 구조를 갖지 않는 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물로의 CTL 증가 효과가 더 높다는 것도 나타낸다.
시험 4
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물 및 참조예 12 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 과 예비 유화 조성물을 포함하는 칵테일 백신 (이하, "칵테일 백신 a" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 각각 첨가하여, 각각의 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 각각의 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
식 4 의 화합물:
Figure pct00073
[여기서, C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임].
식 4 의 화합물에서의 RMFPNAPYL (SEQ ID No. 1) 및 펩티드 SEQ ID No. 3 에서의 VLDFAPPGA (SEQ ID No. 4) 는 HLA-A*02:01-제한된 WT1 단백질에서 유래한 항원 펩티드에 상응한다.
HLA-A*02:01 유전자도입 마우스 (C57BL/6CrHLA-A2.1DR1) 는 MHC 가 결여되어 있으며, 대신에 인간 MHC (HLA-A*02:01) 및 마우스 MHC (H-2Db) 의 키메라 HLA 및 HLA-DRB1*01:01 을 발현한다. 마우스는 HLA-A*02:01-양성 인간에서 CTL 을 유도할 수 있는 펩티드로 CTL 을 유도할 수 있다 (Eur J Immunol. 2, 004; 34: 3, 060-9).
칵테일 백신 a 에 의해 항원 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 에 특이적인 CTL 을 유도하는 특징은 상응하는 펩티드로 마우스로부터의 비장세포 자극시 IFNγ 가 생성될 수 있는지 여부를 측정하여 평가하였다. 또한, 실시예 1 에서의 화합물 또는 참조예 12 에서의 화합물에 의해 생체내 보조제 활성을 발휘하는 특징은 칵테일 백신 a 에 의해 유도된 CTL 의 수와 실시예 1 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서의 화합물을 칵테일 백신 a 에 첨가하여 제조된 백신에 의해 유도된 CTL 의 수를 비교하고, 수의 증가 여부를 확인하여 평가하였다.
구체적으로, 생체내 보조제 활성을 하기와 같이 평가하였다.
0.312 g 의 소듐 디히드로겐 포스페이트 디히드레이트를 80 g 의 주사용수에 용해하였다. 14.0 g 의 에틸 올레에이트, 14.0 g 의 옥틸도데실 미리스테이트, 2.0 g 의 소르비탄 모노올레에이트, 2.8 g 의 글리세릴 모노올레에이트, 0.4 g 의 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 20, 및 0.4 g 의 글리세린을 혼합하였다. 2.354 mL 의 혼합물 (2.077 g 에 상응함) 을 시험관에 넣고, 0.396 mL 의 수성 소듐 디히드로겐 포스페이트 (0.396 g 에 상응) 를 시험관에 서서히 첨가하여 이를 혼합기 (ULTRA-TURRAX T10, IKA, 또는 Touch Mixer MT-51, Yamato Scientific) 에서 교반하여, 시험관에서 혼합물을 유화시켰다. 수득한 에멀젼을 예비 유화 조성물로 지칭하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 DMSO 에 용해한 다음, 식 4 의 화합물 3 mg/ml 및 SEQ ID No. 3 의 펩티드 2.25 mg/ml 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 상기 예비 유화 조성물로 유화시켜 칵테일 백신 a 를 제조하였다. 칵테일 백신 a 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 a 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 32.5 ng 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 a 를 제조하는 단계에서, 참조예 12 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 22.5 ng 의 참조예 12 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. IFNγ-생성 비장세포를 검출하기 위해, IFNγ ELISPOT 어세이 키트를 사용하였다. 특히, ELISPOT 플레이트를 비장세포 샘플 준비 전날에 항-마우스-IFNγ 항체로 처리하였다. 다음 날, 10% FBS 를 갖는 RPMI 1640 배지로 처리하여 플레이트를 블로킹하였다. 블로킹된 ELISPOT 플레이트에, 준비된 비장세포 샘플을 1.25 Х 105 세포/웰로 첨가하였다. 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 0.1% (v/v) DMSO 의 존재 하에 비장세포-함유 웰에 10 μg/ml 의 최종 농도로 첨가하였다. 펩티드-첨가된 비장세포를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트를 제조사의 프로토콜에 따라 세포 염색 처리하였다. 염색된 스팟을 ImmunoSpot Analyzer 에서 계수하였다.
결과는, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 칵테일 백신이 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에서 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 의 펩티드에 반응성인 CTL 을 유도하였다는 것을 나타낸다. 그리고, 시험 3 의 결과와 같이, SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 의 펩티드에 반응성인 CTL 계수는, 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 a 에 첨가하는 경우에 더 많았다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다. 또한 결과는, PEG 구조를 갖지 않는 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물로의 CTL 증가 효과가 더 높다는 것도 나타낸다.
시험 5
백신의 생체내 종양 성장 억제 효과를 향상시키기 위한 효과
옥수수 오일 중의 3-메틸콜란트렌의 현탁액을 복측 부위에서 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에 피내 투여하였다. 투여 위치에서 생성된 종양으로부터, HLA-A*2402/Kb-발현 종양 세포를 수득하였다. 세포에서 WT1 항원 펩티드 (SEQ ID No. 2) 를 안정적으로 발현시켜 확립된 세포주 (이하, MCA-A24/Kb-WT1 종양 세포로도 지칭함) 를 행크스 균형 염류 용액 (Hanks' Balanced Salt Solution) 에 현탁하고, HLA-A*24:02 유전자도입 마우스의 복측 부위에 피내 이식하였다 (마우스 당 5 Х 105 세포). 비히클 (군 a), 백신 (군 b) 또는 실시예 1 에서 제조한 화합물을 함유하는 백신 (군 c) 을 투여받은 마우스를 분류하였다. 군 당 6 마리 마우스를 사용하였다. 종양 이식 7 일 전 및 종양 이식 7 일 후, 군 a 의 마우스에 대해, 주사용수를 포함하는 조성물을 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시키고, 에멀젼을 꼬리 기단부에 피내 투여하였다 (마우스 당 투여 당 0.1 mL). 군 b 의 마우스에 대해, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 조성물을 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시키고, 에멀젼을 꼬리 기단부에 피내 투여하였다 (투여 당, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3). 군 c 의 마우스에 대해, 식 4 의 화합물, 펩티드 SEQ ID No. 3 및 실시예 1 에서 제조한 화합물을 포함하는 조성물을 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시키고, 에멀젼을 꼬리 기단부에 피내 투여하였다 (투여 당, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 100 ng 의 화합물). 종양 직경을 종양 이식 27 일 후에 측정하고, 종양 부피를 계산하였다.
도 2 는 종양 이식 후 27 일째에 각 군에서 6 마리 마우스의 평균 종양 부피를 나타낸다. 백신 (군 b) 는 비히클 (군 a) 의 경우에 비해 종양 세포의 성장을 상당히 억제하였다 (비-모수 던넷 다중 시험 (Dunnett's multiple test), *: p < 0.05). 또한, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가한 백신은 종양 세포의 성장을 더 강하게 억제하였다 (군 c, **: p < 0.01).
결과는 본 발명의 화합물을 백신에 첨가함으로써 백신으로 종양 성장을 억제하기 위한 예방 효과가 향상될 수 있다는 것을 나타낸다.
참조예 1 에 기재된 방법에 따라, 표 7 에 나타낸 펩티드를 각각의 상응하는 출발 물질로부터 그의 트리플루오로아세테이트로서 제조하였다. 이들 화합물은 본 발명의 화합물 내에 있지 않기 때문에 참조예로서 다루어졌다.
표 7
Figure pct00074
WO 2007/0639032 에서 기재된 방법에 따라, 표 8 에 나타낸 화합물 (여기서, C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임) 을 이의 트리플루오로아세테이트로서 제조하였다. 화합물은 본 발명의 화합물 내에 있지 않기 때문에 참조예로서 다루어졌다.
표 8
Figure pct00075
시험 6
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 6 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 6 을 Montanide ISA 51 VG 와 혼합하여 제조한 백신 (이하, "백신 c" 로 지칭함) 에, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다. 펩티드 SEQ ID No. 6 에서의 GLYDGMEHL 은 HLA-A*02:01-제한된 MAGE-A10 단백질에서 유래한 항원 펩티드에 상응한다.
백신 c 에 의해 항원 펩티드 (SEQ ID No. 6) 에 특이적인 CTL 을 유도하는 특징은 펩티드로 마우스로부터의 비장세포 자극시 IFNγ 가 생성될 수 있는지 여부를 측정하여 평가하였다. 또한, 실시예 1 에서의 화합물에 의해 생체내 보조제 활성을 발휘하는 특징은 백신 c 에 의해 유도된 CTL 의 수와 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 c 에 첨가하여 제조된 백신에 의해 유도된 CTL 의 수를 비교하고, 수의 증가 여부를 확인하여 평가하였다.
구체적으로, SEQ ID No. 6 의 펩티드를 DMSO 에 용해한 다음, 0.1 mg/mL 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시켜 백신 c 를 제조하였다. 백신 c 를, 마리 당 10 μg 의 SEQ ID No. 6 의 펩티드를 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 백신 c 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 10 μg 의 SEQ ID No. 6 의 펩티드 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 6) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 3 에 나타내었다. 도 3 에서, 세로축은 군 당 각각의 3 마리 마우스로부터, 첨가된 세포로의 자극에 반응하여 IFNγ 를 생성하는 세포의 평균 수를 나타낸다. 마우스에 투여되는 백신은 가로축에 나타낸다. 도 3 에서의 흑색 막대 및 백색 막대는 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스로부터의 비장세포를 각각 펩티드 SEQ ID No. 6 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션한 결과를 나타낸다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 6 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 c 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 7
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 5 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 5 를 Montanide ISA 51 VG 와 혼합하여 제조한 백신 (이하, "백신 d" 로 지칭함) 에, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다. 펩티드 SEQ ID No. 5 에서의 VLQELNVTV 는 HLA-A*02:01-제한된 프로테이나아제-3 단백질에서 유래한 항원 펩티드에 상응한다.
백신 d 에 의해 항원 펩티드 (SEQ ID No. 5) 에 특이적인 CTL 을 유도하는 특징은 펩티드로 마우스로부터의 비장세포 자극시 IFNγ 가 생성될 수 있는지 여부를 측정하여 평가하였다. 또한, 실시예 1 에서의 화합물에 의해 생체내 보조제 활성을 발휘하는 특징은 백신 d 에 의해 유도된 CTL 의 수와 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 d 에 첨가하여 제조된 백신에 의해 유도된 CTL 의 수를 비교하고, 수의 증가 여부를 확인하여 평가하였다.
구체적으로, SEQ ID No. 5 의 펩티드를 DMSO 에 용해한 다음, 2 mg/mL 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시켜 백신 d 를 제조하였다. 백신 d 를, 마리 당 100 μg 의 SEQ ID No. 5 의 펩티드를 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 백신 d 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 100 μg 의 SEQ ID No. 5 의 펩티드 및 마리 당 330 ng 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 5) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 4 에 나타내었다. 도 4 에서, 세로축은 군 당 각각의 3 마리 마우스로부터, 첨가된 세포로의 자극에 반응하여 IFNγ 를 생성하는 세포의 평균 수를 나타낸다. 마우스에 투여되는 백신은 가로축에 나타낸다. 도 4 에서의 흑색 막대 및 백색 막대는 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스로부터의 비장세포를 각각 펩티드 SEQ ID No. 5 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션한 결과를 나타낸다. 본 실험의 결과는, SEQ ID No. 5 의 펩티드에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 d 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 8
HLA-A * 24:02 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 20 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 18 을 Montanide ISA 51 VG 와 혼합하여 제조한 백신 (이하, "백신 e" 로 지칭함) 에, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다. 펩티드 SEQ ID No. 18 에서의 TYAGCLSQIF 는 HLA-A*24:02-제한된 Or7c1 단백질에서 유래한 항원 펩티드에 상응한다.
백신 e 에 의해 항원 펩티드 (SEQ ID No. 18) 에 특이적인 CTL 을 유도하는 특징은 펩티드로 마우스로부터의 비장세포 자극시 IFNγ 가 생성될 수 있는지 여부를 측정하여 평가하였다. 또한, 실시예 1 에서의 화합물에 의해 생체내 보조제 활성을 발휘하는 특징은 백신 e 에 의해 유도된 CTL 의 수와 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 e 에 첨가하여 제조된 백신에 의해 유도된 CTL 의 수를 비교하고, 수의 증가 여부를 확인하여 평가하였다.
구체적으로, SEQ ID No. 18 의 펩티드를 DMSO 에 용해한 다음, 3 mg/mL 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시켜 백신 e 를 제조하였다. 백신 e 를, 마리 당 300 μg 의 SEQ ID No. 18 의 펩티드를 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 백신 e 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 SEQ ID No. 18 의 펩티드 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 3 과 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 18) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 5 에 나타내었다. 도 5 에서, 세로축은 군 당 각각의 3 마리 마우스로부터, 첨가된 세포로의 자극에 반응하여 IFNγ 를 생성하는 세포의 평균 수를 나타낸다. 마우스에 투여되는 백신은 가로축에 나타낸다. 도 5 에서의 흑색 막대 및 백색 막대는 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스로부터의 비장세포를 각각 펩티드 SEQ ID No. 18 의 존재 또는 부재 하에 인큐베이션한 결과를 나타낸다. 본 실험의 결과는, SEQ ID No. 18 의 펩티드에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 e 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 9
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 8, 9 및 10 에서 제조한 화합물 및 참조예 12 에서 제조한 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 과 Montanide ISA51 VG 를 포함하는 칵테일 백신 b 에 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 각각의 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 각각의 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
구체적으로, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 DMSO 에 용해한 다음, 식 4 의 화합물 3 mg/mL 및 펩티드 SEQ ID No. 3 2.25 mg/mL 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시켜 칵테일 백신 b 를 제조하였다. 칵테일 백신 b 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 b 를 제조하는 단계에서, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 6 및 도 7 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물 또는 참조예 12 에서 제조한 화합물을 백신 b 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다. 또한 결과는, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물을 첨가한 경우의 펩티드에 반응성인 CTL 계수가, 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여 더 많다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다. 또한 결과는, PEG 구조를 갖지 않는 참조예 12 에서 제조한 화합물의 경우와 비교하여, 실시예 8, 9 또는 10 에서 제조한 화합물로의 CTL 증가 효과가 더 높다는 것도 나타낸다.
시험 10
HLA -A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 11 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 시험 9 와 같은 칵테일 백신 b 에 실시예 11 에서 제조한 화합물을 첨가하여 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
구체적으로, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 DMSO 에 용해한 다음, 식 4 의 화합물 3 mg/mL 및 펩티드 SEQ ID No. 3 2.25 mg/mL 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 희석된 펩티드 용액을 혼합하고 동일 부피의 Montanide ISA 51 VG 로 유화시켜 칵테일 백신 b 를 제조하였다. 칵테일 백신 b 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 b 를 제조하는 단계에서, 실시예 11 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 11 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 8 및 도 9 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 11 에서 제조한 화합물을 백신 b 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 11 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 11 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 11
HLA -A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 1) (이하, "칵테일 백신 f" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 유화 조성물 1 을 하기와 같이 제조하였다. 95.8% (w/w) 의 대두 오일, 3% (w/w) 의 PEG-30 디폴리히드록시 스테아레이트 및 1.2% (w/w) 의 폴리소르베이트 80 을 혼합하여 오일상 혼합물을 제조하였다. 제조량은 적절히 조정하였다. 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 와 혼합하여, 각 농도를 각각 3 mg/mL 및 2.25 mg/mL 로 조정하였다. 제조된 펩티드 희석물을 동일 부피의 오일상 혼합물과 혼합하여, 유화된 생성물, 칵테일 백신 f 를 수득하였다. 칵테일 백신 f 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 f 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.04 nmol 또는 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 10 및 도 11 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 f 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 12
HLA -A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 2) (이하, "칵테일 백신 g" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 유화 조성물 2 를 하기와 같이 제조하였다. 95.8% (w/w) 의 중간 사슬 트리글리세라이드 (MYGLYOL 812), 3% (w/w) 의 PEG-30 디폴리히드록시 스테아레이트 및 1.2% (w/w) 의 폴리소르베이트 80 을 혼합하여 오일상 혼합물을 제조하였다. 제조량은 적절히 조정하였다. 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 와 혼합하여, 각 농도를 각각 3 mg/mL 및 2.25 mg/mL 로 조정하였다. 제조된 펩티드 희석물을 동일 부피의 오일상 혼합물과 혼합하여, 유화된 생성물, 칵테일 백신 g 를 수득하였다. 칵테일 백신 g 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 g 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.04 nmol 또는 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 12 및 도 13 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 g 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 13
HLA -A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 칵테일 백신 (유화 조성물 3) (이하, "칵테일 백신 h" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 유화 조성물 3 을 하기와 같이 제조하였다. 95.8% (w/w) 의 이소프로필 미리스테이트, 3% (w/w) 의 PEG-30 디폴리히드록시 스테아레이트 및 1.2% (w/w) 의 폴리소르베이트 80 을 혼합하여 오일상 혼합물을 제조하였다. 제조량은 적절히 조정하였다. 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 와 혼합하여, 각 농도를 각각 3 mg/mL 및 2.25 mg/mL 로 조정하였다. 제조된 펩티드 희석물을 동일 부피의 오일상 혼합물과 혼합하여, 유화된 생성물, 칵테일 백신 h 를 수득하였다. 칵테일 백신 h 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 h 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.04 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 14 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 h 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
도 26 은 시험 11 - 13 에서 시험한 마우스에서 각각의 비장 중량의 결과를 나타낸다. 본 결과는, 실시예 1 의 투여가 비장 중량의 현저한 증가를 유도하지 않는다는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 비장비대를 일으키지 않으면서 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 시사한다.
시험 14
HLA -A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 칵테일 백신 (유성 현탁액 제형) (이하, "칵테일 백신 i" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 유성 현탁액 제형을 하기와 같이 제조하였다. 수크로오스 지방산 에스테르 (RYOTO SUGAR ESTER L-195) 를 시클로헥산에 용해하여 농도를 12.5 mg/mL 로 조정한 다음, 식 4 의 화합물 및 펩티드 SEQ ID No. 3 을 용액에 첨가하여 각각의 농도를 0.75 mg/mL 및 0.5625 mg/mL 로 조정하여 오일상 혼합물을 수득하였다. 오일상 혼합물 2 mL 에 대해 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 를 1 mL 로 오일상 혼합물에 첨가하고, 혼합물을 균질화기로 분산시키고 동결건조시켰다. 동결건조된 생성물에 1 mL 의 이소프로필 미리스테이트를 첨가하여 유성 현탁액 제형, 칵테일 백신 i 를 수득하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
칵테일 백신 i 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 i 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 pH 2.5 완충제에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.04 nmol 또는 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 15 및 도 16 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 i 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 15
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 백신 (히드로겔 제형) (이하, "칵테일 백신 j" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 히드로겔 제형을 하기와 같이 제조하였다. 식 4 의 화합물, 펩티드 SEQ ID No. 3, 및 폴리옥시에틸렌(196)폴리옥시프로필렌(67) 글리콜을 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산) 과 혼합하여, 각 농도를 각각 1.5 mg/mL, 1.125 mg/mL 및 200 mg/mL 로 조정하였다. 혼합물을 얼음 농도로 냉각시켜 히드로겔 제형, 칵테일 백신 j 를 수득하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
칵테일 백신 j 를, 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 j 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 pH 2.5 완충제에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 300 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 225 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 17 및 도 18 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 j 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
도 27 은 시험 14 및 15 에서 시험한 마우스에서 각각의 비장 중량의 결과를 나타낸다. 본 결과는, 실시예 1 의 투여가 비장 중량의 현저한 증가를 유도하지 않는다는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 비장비대를 일으키지 않으면서 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 시사한다.
시험 16
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 백신 (리포솜 제형 1) (이하, "칵테일 백신 k" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 리포솜 제형 1 을 하기와 같이 제조하였다. 47.1 mg 의 수소화 대두 포스파티딜콜린 및 15.47 mg 의 콜레스테롤을 t-부틸 알코올에 용해하고, 혼합물을 동결건조시켰다. 동결건조된 생성물에 2.5 mg/mL 의 식 4 의 화합물 및 1.875 mg/mL 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 함유하는 2 mL 의 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 를 첨가하고, 용액을 약 65℃ 로 가온한 압출기 (Mini-Extruder, Avanti Polar Lipids) 를 사용하여 0.1 μm 폴리카르보네이트 멤브레인 필터를 통해 여과하여, 리포솜 제형 1, 칵테일 백신 k 를 수득하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
칵테일 백신 k 를, 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 k 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 pH 2.5 완충제에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 19 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 k 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 17
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다.
참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 백신 (리포솜 제형 2) (이하, "칵테일 백신 l" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 리포솜 제형 2 를 하기와 같이 제조하였다. 42.66 mg 의 스핑고미엘린 및 15.47 mg 의 콜레스테롤을 t-부틸 알코올에 용해하고, 혼합물을 동결건조시켰다. 동결건조된 생성물에 2.5 mg/mL 의 식 4 의 화합물 및 1.875 mg/mL 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 함유하는 2 mL 의 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 를 첨가하고, 용액을 약 65℃ 로 가온한 압출기 (Mini-Extruder, Avanti Polar Lipids) 를 사용하여 0.1 μm 폴리카르보네이트 멤브레인 필터를 통해 여과하여, 리포솜 제형 2, 칵테일 백신 l 을 수득하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
칵테일 백신 l 을, 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 l 을 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 pH 2.5 완충제에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 20 및 도 21 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 4 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 l 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 18
HLA-A * 02:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 8 에서 제조한 식 4 의 화합물 및 참조예 3 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 3 을 포함하는 백신 (리포솜 제형 3) (이하, "칵테일 백신 m" 으로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
예를 들어, 상기 리포솜 제형 3 을 하기와 같이 제조하였다. 36.7 mg 의 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포콜린, 7.58 mg 의 1,2-디팔미토일-sn-글리세로-3-포스포-L-세린 소듐 염 및 15.47 mg 의 콜레스테롤을 t-부틸 알코올/물 혼합물에 용해하고, 혼합물을 동결건조시켰다. 동결건조된 생성물에 2.5 mg/mL 의 식 4 의 화합물 및 1.875 mg/mL 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 함유하는 2 mL 의 pH 2.5 완충제 (10 mM 타르타르산, 10% 트레할로오스) 를 첨가하고, 용액을 약 65℃ 로 가온한 압출기 (Mini-Extruder, Avanti Polar Lipids) 를 사용하여 0.1 μm 폴리카르보네이트 멤브레인 필터를 통해 여과하여, 리포솜 제형 3, 칵테일 백신 m 을 수득하였다. 제조량은 적절히 조정하였다.
칵테일 백신 m 을, 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물 및 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 m 을 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 pH 2.5 완충제에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 500 μg 의 식 4 의 화합물, 마리 당 375 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 3 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 22 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 m 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
도 28 은 시험 16 - 18 에서 시험한 마우스에서 각각의 비장 중량의 결과를 나타낸다. 본 결과는, 실시예 1 의 투여가 비장 중량의 현저한 증가를 유도하지 않는다는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 비장비대를 일으키지 않으면서 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 시사한다.
시험 19
HLA-A * 02:01/HLA-DRB1 * 01:01 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 1 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 1 및 참조예 20 에서 제조한 펩티드 SEQ ID No. 17 과 예비 유화 조성물을 포함하는 칵테일 백신 (이하, "칵테일 백신 n" 으로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여, 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*02:01/HLA-DRB1*01:01 유전자도입 마우스 (C57BL/6CrHLA-A2.1DR1) 에 투여하고, 각각의 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 및 항원-특이적 헬퍼 T-세포 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다. 펩티드 SEQ ID No. 17 은 WT1 단백질에서 유래한 헬퍼 펩티드이다.
구체적으로, 펩티드 SEQ ID No. 1 및 펩티드 SEQ ID No. 17 을 DMSO 에 용해한 다음, 2 mg/mL 의 펩티드 SEQ ID No. 1 및 4 mg/mL 의 펩티드 SEQ ID No. 17 의 농도로 주사용수로 희석하였다. 제조된 펩티드 희석물을 동일 부피의 시험 4 에서와 같이 제조한 예비 유화 조성물과 혼합하여, 유화된 생성물, 칵테일 백신 n 을 수득하였다. 칵테일 백신 n 을, 마리 당 200 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 1 및 마리 당 400 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 17 을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 칵테일 백신 n 을 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 마리 당 200 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 1, 마리 당 400 μg 의 펩티드 SEQ ID No. 17 및 마리 당 0.04 nmol 또는 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 4 와 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 1 또는 SEQ ID No. 17) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 23 및 도 24 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 1 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 n 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다. 또한 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 17 에 반응성인 헬퍼 T-세포 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 칵테일 백신 n 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수 및 헬퍼 T-세포 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 20
HLA-A * 24:02 유전자도입 마우스에서의 생체내 보조제 활성 평가
실시예 1 의 화합물의 생체내 보조제 활성을 하기 절차에서 평가하였다. 참조예 22 에서 제조한 식 5 의 화합물을 예비 유화 조성물과 혼합하여 제조한 백신 (이하, "백신 o" 로 지칭함) 에 실시예 1 에서 제조한 화합물을 첨가하여 백신을 제조하였다. 백신을 HLA-A*24:02 유전자도입 마우스에 투여하고, 백신의 보조제 활성을 항원-특이적 CTL 유도를 시험하는 방법에 의해 평가하였다.
구체적으로, 식 5 의 화합물을 DMSO 에 용해한 다음, 3 mg/mL 의 식 5 의 화합물 농도로 주사용수로 희석하였다. 제조된 화합물 희석물을 동일 부피의 시험 4 에서와 같이 제조한 예비 유화 조성물과 혼합하여 유화된 생성물, 백신 o 를 수득하였다. 백신 o 를 마리 당 300 μg 의 식 5 의 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 또는, 백신 o 를 제조하는 단계에서, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 희석된 펩티드 용액에 첨가하여 백신을 제조하고, 제조한 백신을 300 μg 의 식 5 의 화합물 및 마리 당 0.4 nmol 의 실시예 1 에서 제조한 화합물을 투여하기 위한 양으로 마우스 꼬리 기단부에 피내 주사하였다. 1 주 간격으로 투여를 2 회 수행하였다. 최종 투여 1 주 후, 마우스를 CO2 기체로 희생시켰다. 비장세포를 마우스로부터 제거한 비장으로부터 수확하였다. 시험 3 과 마찬가지로, 펩티드 (SEQ ID No. 2) 를 10 μg/ml 의 최종 농도로 비장세포-함유 ELISPOT 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 5% CO2 의 분위기 하에 37℃ 에서 밤새 인큐베이션하여, 펩티드를 시험관내 재자극하였다. 그런 다음, 웰로부터 상청액 제거 후, ELISPOT 플레이트 상의 염색된 스팟을 계수하였다.
결과를 도 25 에 나타내었다. 본 실험의 결과는, 펩티드 SEQ ID No. 2 에 반응성인 CTL 계수가 화합물을 첨가하지 않은 경우와 비교하여, 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신 o 에 첨가한 경우에 더 많았다는 것을 나타내었다.
상기 결과는, 유도된 CTL 계수가 실시예 1 에서 제조한 화합물을 백신에 첨가함으로써 증가하는 것을 나타내며, 실시예 1 에서 제조한 화합물이 생체내 보조제 활성을 갖는다는 것을 강력하게 시사한다.
시험 21
시험 1 의 방법에 따라서, 인간 TLR7 리포터 유전자 어세이를 하기 샘플로 수행하고, 결과를 하기 표에 나타내었다.
표 9
Figure pct00076
시험 21 의 결과는 본 발명의 실시예 화합물이 인간 TLR7 효능제로서 작용할 수 있다는 것을 시사한다.
시험 22
시험 1 의 방법에 따라서, 인간 TLR7 리포터 유전자 어세이를 하기 샘플로 수행하고, 결과를 하기 표에 나타내었다. 본원에서 사용한 세포는 HEK-BlueTM hTLR7 세포주 (Invivogen) 였다. HEK-BlueTM hTLR7 세포주는, NF-κB 반응 요소의 전사 조절 하에 전장 인간 TLR7 및 분비성 SEAP 리포터 유전자를 발현하는 안정적으로 동시 형질주입된 세포주이다. 세포주의 TLR7 발현은 RT-PCR 에 의해 이미 시험되었다. 항생제 블라스티시딘 및 제오신을 사용하여 안정한 발현을 갖는 형질주입체를 선택하였다.
표 10
Figure pct00077
<110> Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. <120> Water-soluble adjuvant <130> 675544 <150> JP 2019-072910 <151> 2019-04-05 <160> 18 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 1 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 2 Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 3 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 3 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 4 Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 5 Val Leu Gln Glu Leu Asn Val Thr Val 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 6 Gly Leu Tyr Asp Gly Met Glu His Leu 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 7 Lys Ile Phe Gly Ser Leu Ala Phe Leu 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 8 Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro Ser Leu 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 9 Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 10 Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 11 Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 12 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 12 Cys Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 1 5 10 15 Gly Ser Leu <210> 13 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 13 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu Cys <210> 14 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 14 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His Thr Gly 20 <210> 15 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 15 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 16 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys <210> 17 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 17 Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His 1 5 10 15 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide <400> 18 Thr Tyr Ala Gly Cys Leu Ser Gln Ile Phe 1 5 10

Claims (31)

  1. 하기와 같은 식 (1) 의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00078

    [식 중,
    X 는 메틸렌, 산소 원자, 황 원자, SO, SO2 또는 NR5 이고, 여기서 R5 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    R1 은 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
    R2 및 R3 은 독립적으로 수소 원자, 또는 할로겐, 히드록시 및 C1-6 알콕시로 이루어지는 군에서 독립적으로 선택되는 1 - 5 개의 치환기로 치환될 수 있는 C1-6 알킬이고,
    R4 는 수소 원자, 할로겐, 히드록시, C1-6 알킬 (1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있음), C1-6 알콕시 (1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있음) 또는 시아노이고,
    L 은 링커이고,
    Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고, 여기서 R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, m 은 3 - 100 의 정수임].
  2. 제 1 항에 있어서, X 가 메틸렌인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, R1 이 1 - 3 개의 동일하거나 상이한 할로겐으로 치환될 수 있는 C1-3 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  4. 제 3 항에 있어서, R1 이 메틸인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, R4 가 수소 원자, 히드록시, C1-3 알킬 또는 C1-3 알콕시인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  6. 제 5 항에 있어서, R4 가 수소 원자, 히드록시 또는 메톡시인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, R2 가 C1-6 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, R3 이 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    L 이 -O-, -NRY-, -C(O)-, -C(O)O-, -OC(O)-, -C(O)NRY-, -NRYC(O)-, -CH2NRY-, -CH2O-, -OC(O)O-, -NR7C(O)O-, -OC(O)NRY-, -NR7C(O)NRY-, -OC(S)NRY- 또는 -NR7C(S)NRY- 이고, 여기서 R7 이 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, RY 가 수소 원자, C1-6 알킬 또는 Y2 이고, 여기서 Y2 가 -(CH2CH2O)n-R8 임 (R8 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고, n 은 3 - 100 의 정수임).
  10. 제 9 항에 있어서, L 이 -C(O)NRY-, -CH2NRY-, -C(O)O- 또는 -CH2O- 인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  11. 제 9 항에 있어서, 하기와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    L 이 -CH2NRY- 이고,
    RY 가 수소 원자, C1-6 알킬 또는 Y2 임.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Y1 이 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
    R6 이 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    m 이 3 - 40 의 정수임.
  13. 제 1 항에 있어서, 화합물이 식 (2) 의 화합물:
    Figure pct00079

    또는 식 (3) 의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00080

    [식 중:
    R2 는 C1-6 알킬이고,
    R3 은 수소 원자, 또는 1 - 3 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
    R4 는 수소 원자, 히드록시 또는 메톡시이고,
    L 은 -CH2NRY- 이고,
    RY 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
    R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    m 은 3 - 20 의 정수임].
  14. 제 1 항에 있어서, 화합물이 식 (2) 의 화합물인 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00081

    [식 중:
    R2 는 C1-6 알킬이고,
    R3 은 수소 원자, 또는 1 개의 히드록시로 치환될 수 있는 C1-3 알킬이고,
    R4 는 수소 원자 또는 메톡시이고,
    L 은 -CH2NRY- 이고,
    RY 는 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    Y1 은 -(CH2CH2O)m-R6 이고,
    R6 은 수소 원자 또는 C1-6 알킬이고,
    m 은 3 - 40 의 정수임].
  15. 제 1 항에 있어서, 하기에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올,
    1-{4-[(2-아미노-4-{[(3S)-1-히드록시헥산-3-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시페닐}-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올,
    1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올,
    1-(3-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-4-히드록시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올,
    4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-N-(20-히드록시-3,6,9,12,15,18-헥사옥사이코산-1-일)-3-메톡시벤즈아미드,
    2,5,8,11-테트라옥사트리데칸-13-일 4-[(2-아미노-4-{[(2S)-1-히드록시펜탄-2-일]아미노}-6-메틸피리미딘-5-일)메틸]-3-메톡시벤조에이트,
    5-{[2-메톡시-4-(2,5,8,11,14-펜타옥사펜타데칸-1-일)페닐]메틸}-6-메틸-N4-펜틸피리미딘-2,4-디아민,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29-노나옥사-2-아자헨트리아콘탄-31-올,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-트리코사옥사-2-아자트리헵타콘탄-73-올,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86,89,92,95,98,101,104,107-펜타트리아콘타옥사-2-아자노나헥탄-109-올, 및
    12-[(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)메틸]-3,6,9,15,18,21-헥사옥사-12-아자트리코산-1,23-디올.
  16. 제 1 항에 있어서, 하기에서 선택되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14-테트라옥사-2-아자헥사데칸-16-올,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29-노나옥사-2-아자헨트리아콘탄-31-올,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-트리코사옥사-2-아자트리헵타콘탄-73-올,
    1-(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)-2-메틸-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,77,80,83,86,89,92,95,98,101,104,107-펜타트리아콘타옥사-2-아자노나헥탄-109-올, 및
    12-[(4-{[2-아미노-4-메틸-6-(펜틸아미노)피리미딘-5-일]메틸}-3-메톡시페닐)메틸]-3,6,9,15,18,21-헥사옥사-12-아자트리코산-1,23-디올.
  17. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
  18. 제 17 항에 있어서, 에멀젼 제형, 유성 현탁액, 히드로겔 제형 또는 지질 제형인 약학 조성물.
  19. 제 18 항에 있어서, 에멀젼 제형인 약학 조성물.
  20. 제 19 항에 있어서, 에멀젼 제형이 유중수 에멀젼인 약학 조성물.
  21. 제 20 항에 있어서, 에멀젼 제형이 (1) 에틸 올레에이트, 옥틸도데실 미리스테이트, 소르비탄 모노올레에이트, 글리세릴 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 수소화 피마자 오일 20, 글리세린 및 소듐 디히드로겐 포스페이트, 또는 (2) Montanide ISA 51VG 를 포함하는 약학 조성물.
  22. 제 18 항에 있어서, 지질 제형인 약학 조성물.
  23. 제 22 항에 있어서, 지질 제형이 인지질을 포함하는 리포솜 제형인 약학 조성물.
  24. 제 22 항 또는 제 23 항에 있어서, 지질 제형이 스테롤을 포함하는 리포솜 제형인 약학 조성물.
  25. 제 24 항에 있어서, 스테롤이 콜레스테롤인 약학 조성물.
  26. 제 23 내지 제 25 항 중 어느 한 항에 있어서, 리포솜 제형이 무기산, 무기산 염, 유기산, 유기산 염, 당, 완충제, 산화방지제 및 중합체로 이루어지는 군에서 선택되는 적어도 하나의 첨가제를 포함하는 약학 조성물.
  27. 제 17 항 내지 제 26 항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 항원을 추가로 포함하는 약학 조성물.
  28. 제 27 항에 있어서, 종양 항원이 종양 항원 펩티드인 약학 조성물.
  29. 제 28 항에 있어서, 종양 항원 펩티드가 식 (4) 의 아미노산 서열로 나타내는 펩티드, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    Figure pct00082

    [식 중,
    C-C 사이의 결합은 디술피드 결합임], 및
    SEQ ID NO 3: WAPVLDFAPPGASAYGSL 의 아미노산 서열로 나타내는 펩티드, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 조합인 약학 조성물.
  30. 제 1 항 내지 제 16 항 중 어느 한 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 암 백신에 대한 백신 보조제.
  31. 하기를 포함하는 키트:
    a) 제 1 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염, 또는 제 1 항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학 조성물; 및
    b) 종양 항원, 또는 종양 항원을 포함하는 약학 조성물.
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