KR20210145254A - 구획, 특히 cns로의 국소 전달을 위한 fc 변형 생물학적 제제 - Google Patents

구획, 특히 cns로의 국소 전달을 위한 fc 변형 생물학적 제제 Download PDF

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KR20210145254A
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베르크 요하네스 봄
데미안 모거
린다 셸해머
미카엘 베핑거
토르스텐 부히
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유니베르시태트 취리히
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Abstract

본 발명은 질환, 특히 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 폴리펩타이드에 관한 것이다. 상기 폴리펩타이드는 발병 구획, 특히 중추신경계에 국소 투여된다. Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 친화도를 감소시키고, 이에 따라 폴리펩타이드의 뇌 대 혈청 농도를 증가시키는 변형을 보유한다.

Description

구획, 특히 CNS로의 국소 전달을 위한 FC 변형 생물학적 제제
본 발명은 특히 신경 질환에 사용하기 위한, 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 갖는 Fc 폴리펩타이드를 특징으로 하는 국소 전달되는 생물학적 제제에 관한 것이다.
현재 유럽과 미국에서 신경계 질환의 발병률은 인구 10만 명당 200건 초과이며, 인구 고령화로 인해 더욱 증가할 것으로 예상된다. 전임상 연구의 발전은 사이토카인 요법(예를 들어, 뇌 종양의 경우 IL-12, MS의 경우 IL-10) 및 중화 항체(예를 들어, MS에서 인터루킨(IL)-12/23p40에 대한, 또는 파킨슨(Parkinson)병 및 알츠하이머병에서 종양 괴사 인자 α(TNFα)에 대한) 또는 면역 체크포인트 차단 분자(예를 들어, 뇌 종양에서 PD-1/PD-L1 축 차단)를 포함하는, 신경 질환의 국소 치료를 위한 많은 유망한 표적을 제시한다.
면역 요법은 뇌종양 치료에서 가장 유망한 시도 중의 하나이다. 인터루킨(IL)-12는 전염증성 사이토카인이며, 전임상 모델에서 뇌종양에 강력한 항종양 효과를 갖는다. 유망한 전임상 결과를 바탕으로 하여, IL-12를 사용한 정맥 내로(i.v.) 적용되는 전신 치료로서의 임상 시험이 90년대 후반에 빠르게 시작되었다. 그러나, 2상 임상 시험에서는 17명의 환자 중 12명이 입원하고 2명의 환자가 사망하는 심각한 부작용이 보고되었다. 이러한 부작용은 이후 IL-12 하류 이펙터 사이토카인인 인터페론(IFN)-γ의 높은 전신 수준의 빠른 유도에 기인하였다.
전신적으로 적용된 IL-12의 독성 및 종양 부위에서 고농도의 필요성을 감안할 때, 조직에서 IL-12 수준에 대한 엄격한 제어는 임상 적용을 위한 필수적인 전제 조건이다. 뇌에 대한 국소 투여는 최근에 대류 강화 전달(CED: convection enhanced delivery)과 같은 새로운 신경외과 기술을 사용하여 가능하게 되었다. 그러나, 국소 두개내 전달은 후속 전신 누출을 배제하지 않는다.
IL-12와 면역글로불린 G의 결정화 가능 단편(Fc)의 단일 사슬 융합 단백질인 뮤린 IL-12Fc는 변형되지 않은 재조합 IL-12와 비교하여 증가된 약리안정성, 생체 이용률 및 뇌로부터의 수동적 누출(passive leakage) 감소를 보여준다. 그러나, 뇌에 대한 국소 전달 후에, 뮤린 IL-12Fc는 뇌척수액으로부터 Fc 영역을 포함하는 모든 단백질의 배출을 매개하는 수용체인 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 의해 혈액 뇌 장벽(BBB)을 가로질러 능동적으로 배출된다. FcRn은 또한 내피 세포 및 적색 펄프 대식세포에서 활성을 나타내고, 여기서 분해를 방지하고 Fc 함유 분자 및 혈청 알부민의 혈청 반감기를 연장한다. 따라서, 비변형 IL-12와 비교하여, IL-12Fc는 증가된 전신 축적을 나타낸다.
FcRn 결합에 관여하는 것으로 알려진 IgG Fc 잔기(이소류신 253 - I253, 히스티딘 310 - H310 및 히스티딘 435 - H435) 및 이들 잔기와 FcRn 사이의 상호작용의 pH 의존성은 관련 기술로부터 공지되어 있다(Pyzik et al. Frontiers in Immunology (2019) 10:1540).
예를 들어, 비톤티(Bitonti) 등은 야생형 IgG의 Fc 도메인에서 잔기 I253, H310 및 H435를 각각 Ala 253 - A253, A310 및 A435(AAA)로 돌연변이시키면, pH 6에서 FcRn 결합이 중단된다고 보고하였다(Bitonti et al. Proceedings of the National Academy of Sciences 101(26):9763-9768).
그러나, 아미노산을 알라닌으로 치환하는 것은 관심 있는 단백질 내의 주어진 위치에서 기능적 역할을 스크리닝하는 일반적인 생화학적 방법이다. 상기 특정 돌연변이(AAA)를 제외하고, 상기 논문은 FcRn에 대한 생성되는 결합 특성에 대해 결론을 도출할 수 있는 임의의 다른 돌연변이를 개시하고 있지 않다. 또한, 이 논문은 인간이 아닌 영장류의 폐에서 적혈구 생성을 자극하는 당단백질 호르몬 약물인 에리트로포이에틴(Epo)을 포함하는 Fc 융합 단백질의 FcRn 매개 수송을 다룬다. 이 논문은 각각 상기 결과를 IL-12를 포함하는 융합 폴리펩타이드에 적용할 수 있다는 사실 및 뇌에 대한 Fc 융합 폴리펩타이드의 투여와 관련하여 어떠한 언급도 제시하지 않고 있다.
IL-12를 포함하는 융합 폴리펩타이드 및 이들의 혈청 반감기를 증가시키는 방법을 실제로 다루는 간행물이 있다.
예를 들어, 정(Jung) 등은 Fcγ 수용체에 대해 감소된 친화도를 제공하는 A107 돌연변이쌍을 갖는 IL-12 및 인간 IgG4 기반 이종이량체 Fc를 포함하는 융합 폴리펩타이드의 생성 및 항종양 활성을 기재한 바 있다(Jung et al., Oncoimmunology, 7(7):e1438800).
그러나, Fc 감마 수용체(FcγR) 패밀리는 항체의 불변 영역, 즉 Fc 부분에 결합하는 특징을 갖는 단백질의 기능적 그룹이기 때문에, 구조상의 차이, Fc 부분의 중첩되지 않은 결합 부위, 세포의 상이한 구획(세포내 대 세포외) 내의 존재, pH 의존적 결합(산성 대 중성) 및 전체 기능을 고려할 때 FcRn은 FcγR과 동일시될 수 없다는 것이 명백하다.
관련 기술의 또 다른 예에서는, 조직 보유 및 전신 순환계로의 누출과 관련하여 재조합 IL-12와 IL-12Fc가 비교된다(Beffinger et al., Neuro-Oncology (2017), 19(suppl-.6), vi273). 여기에서, 저자들은 IL-12Fc가 재조합 IL-12에 비해 두개내 적용 24시간 후에 더 높은 뇌 농도를 나타냈다고 기술한다.
그러나, 이 연구에서는 IgG의 Fc 영역에 돌연변이가 있는 융합 폴리펩타이드 또는 FcRn에 대한 결합에 대한 영향을 개시하고 있지 않다.
쿠퍼(Cooper) 등은 IgG1의 야생형 Fc에 비해 FcRn 결합을 증가시키거나(IgG1 아스파라긴 434의 알라닌으로의 치환, N434A) FcRn 결합을 감소시키는(IgG1 히스티딘 435의 알라닌으로의 치환, H435A) 재조합 인간 IgG1 mAb의 두 가지 변이체의 국소 전달시에 래트 뇌로부터의 IgG 유출에서 FcRn의 역할을 연구하였다(Cooper et al. Brain Research (2013) 1534: 13-21). 돌연변이체는 각각 434번 및 435번 아미노산 위치에 돌연변이를 도입함으로써 얻었다. 이 연구는 인간 항체를 사용하여 래트에서 수행되었다.
FcRn의 마우스 및 인간 형태에 대한 Fc 돌연변이체의 결합 특성과 관련하여, 앤더슨(Andersen) 등은 Ile253, His310 및 His435 수준에서의 돌연변이, 즉 H435Q, H435R, H310A, I253A 및 H310A/H435Q를 갖는 5개의 별개의 Fc 돌연변이체를 개시한 바 있다(Andersen et al. Journal of Biological Chemistry (2012) 287(27):22927-22937). 인간 FcRn에 대한 가장 낮은 친화도를 특징으로 하는 변이체는 H310A 및 H435Q 돌연변이(IAQ)를 모두 보유하는 돌연변이체였다.
여기에 언급된 마지막 두 연구에서 FcRn이 래트 뇌로부터의 IgG 유출에서 중요한 역할을 수행함을 입증하고 각각 FcRn에 대한 친화도가 감소된 별개의 돌연변이체를 공개했음에도 불구하고, 이러한 연구 중 어느 것도 IL-12Fc의 존재가 어떻게 FcRn에 대한 결합에 영향을 미쳤는지를 평가하기 위한 기초가 되지 않는다. 더욱이, 최대 뇌 농도 대 혈액 농도의 구배를 생성하는 개념은 개시되어 있지 않다.
상기 언급된 기술 상태에 기초하여, 본 발명의 목적은 특정 구획, 특히 뇌에 국소적으로 전달되는 약제의 치료 창을 확장하고, 상기 구획, 특히 뇌로부터의 배출 및 전신 축적을 방지함으로써 구획 대 혈청 비율, 특히 뇌 대 혈청 비율을 증가시키는 수단 및 방법을 제공하는 것이다. 상기 목적은 본 명세서의 청구범위에 의해 달성된다.
본 명세서의 측면에서, 용어 결정화 가능 단편(Fc) 영역은 디설파이드 결합에 의해 공유 연결된 2개의 동일한 중쇄 단편을 포함하는 IgG 항체의 분획 또는 단일 중쇄 단편을 지칭한다. 중쇄 단편은 불변 도메인(IgG 항체 이소형의 CH2 및 CH3 도메인)으로 이루어진다.
본 명세서의 측면에서, EU 넘버링 시스템(Edelman et al. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America (1969) 63(1):78-85)은 Fc 영역의 아미노산 잔기의 넘버링에 사용된다. EU 넘버링 방식은 일관된 방식으로 항체의 잔기를 넘버링하기 위해 널리 채택된 표준이다. 아미노산 서열은 아미노 말단으로부터 카르복실 말단까지 제시된다. 서열 위치의 대문자는 한 글자 코드의 L-아미노산을 나타낸다(Stryer, Biochemistry, 3rd ed. p. 21). 아미노산 서열 위치에 대한 소문자는 상응하는 D- 또는 (2R)-아미노산을 나타낸다.
아미노산 잔기 I253, H310 및 H435는 CH2-CH3 도메인 계면에 위치하며, 인간 IgG3의 R435를 제외하고, 종 내의 IgG 서브클래스 전반에 걸쳐 및 설치류와 인간 둘 모두에서 발견되는 IgG 분자 사이에 보존된다(Miyakawa et al. RNA (2008) 14:1154-1163). 본 발명에 따르면, 변형된 Fc 영역 또는 이의 단편은 IgG1, IgG2 또는 IgG4 면역글로불린으로부터 유래될 수 있으며, EU 넘버링 시스템에 따라 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 도메인의 적어도 아미노산 잔기 253, 310 및 435를 포함해야 한다.
본 명세서의 측면에서, IL-12는 인터루킨 12를 의미한다.
본 명세서의 측면에서, hIL-12는 인간 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, mIL-12는 뮤린 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, rhIL-12는 재조합 인간 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, rmIL-12는 재조합 뮤린 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, IL-12Fc WT는 특히 Gly-Ser-링커에 의해 또는 IgG4 태그의 부가에 의해 p40과 p35을 융합시킴으로써 야생형 비변형된 Fc 영역에 연결된 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, mIL-12hFc WT는 S228P 돌연변이를 포함하는 IgG4의 인간 야생형 Fc 영역에 연결된 뮤린 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, mIL-12hFc NHQ는 세린 228의 프롤린으로의 치환(S228P)뿐만 아니라, NHQ 돌연변이를 함유하는 IgG4의 인간 야생형 Fc 영역에 연결된 뮤린 IL-12에 관한 것이다.
본 명세서의 측면에서, mIL-12hFc:항-PD-L1 이기능성 분자는 인간 IgG1 Fc에 연결되고 완전한 인간 PD-L1 결합 IgG1 항체의 1/2 분자(하나의 중쇄 및 하나의 경쇄)로 이량체화된 뮤린 IL-12에 관한 것이다. 생성된 분자의 Fc 부분은 NHQ 돌연변이를 포함한다.
본 명세서의 측면에서, FcRntg는 대립유전자 기호 Tg(FCGRT)32Dcr에 의해 설명되는 천연 인간 조절 요소의 제어 하에 기능적 뮤린 FcRn이 결여되고 인간 FcRn α-사슬의 발현을 위한 이식유전자를 보유하는 마우스 균주에 관한 것이다.
본 발명의 측면에서, IL-12 폴리펩타이드는 p35의 서열(Uniprot ID 29459) 또는 그의 기능적 상동체를 포함하고 p40의 서열(Uniprot ID 29460) 또는 기능적 상동체를 포함하는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드이다. 한 실시양태에서, IL-12 폴리펩타이드는 동일한 연속적인 아미노산 사슬의 일부로서 p35 및 p40 서열 또는 그의 상동체 둘 모두를 포함하는 아미노산 서열을 갖는다. 상기 연속적인 아미노산 사슬에서, N-말단 폴리펩타이드(p40) 기능적 상동체만이 신호 펩타이드를 보유한다. 또 다른 실시양태에서, IL-12 폴리펩타이드는 2개의 별개의 아미노산 사슬을 포함하는데, 하나의 사슬은 p35 서열을 포함하고 또 다른 사슬은 p40 서열을 포함하며, 둘 모두 개개의 신호 펩타이드를 갖는다. IL-12 폴리펩타이드는 IL-12의 생물학적 활성을 갖는다. 본 발명의 측면에서 IL-12의 생물학적 활성은 상기 IL-12 폴리펩타이드에 의한 NK 또는 T 세포의 자극, 가장 현저하게는 페르포린을 통해 작용하는 T 이펙터 세포의 자극을 포함한다.
본 명세서의 측면에서, 용어 서열 동일성 및 서열 동일성 백분율은 2개의 정렬된 서열을 비교함으로써 결정된 값을 지칭한다. 비교를 위한 서열의 정렬 방법은 관련 기술 분야에 잘 알려져 있다. 비교를 위한 서열의 정렬은 문헌 [Smith and Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981)]의 국소 상동성 알고리즘에 의해, 문헌 [Needleman and Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970)]의 전역 정렬 알고리즘에 의해, 문헌 [Pearson and Lipman, Proc. Nat. Acad. Sci. 85:2444 (1988)]의 유사성 검색 방법에 의해, 또는 CLUSTAL, GAP, BESTFIT, BLAST, FASTA 및 TFASTA를 포함하지만 이에 국한되지 않는 상기 알고리즘의 컴퓨터에 의한 실행에 의해 수행될 수 있다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 예를 들어 미국 국립 생물공학 정보 센터(National Center for Biotechnology-Information) (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)에서 공개적으로 이용 가능하다.
아미노산 서열의 비교를 위한 한 가지 예는 다음과 같은 디폴트 설정을 사용하는 BLASTP 알고리즘이다: 예상 임계값: 10; 단어 크기: 3; 질의 범위의 최대 일치: 0; 매트릭스: BLOSUM62; 갭 비용: 존재 11, 연장 1; 구성 조정: 조건부 구성 점수 매트릭스 조정(conditional compositional score matrix adjustment). 핵산 서열의 비교를 위한 한 가지 예는 다음과 같은 기본 디폴트를 사용하는 BLASTN 알고리즘이다: 예상 임계값: 10; 단어 크기: 28; 질의 범위의 최대 일치: 0; 일치/불일치 점수: 1-2; 갭 비용: 선형.
달리 언급되지 않는 한, 본원에서 제공되는 서열 동일성 값은 각각 단백질 및 핵산 비교를 위한 상기 확인된 디폴트 파라미터를 사용하는 BLAST 프로그램 스위트(Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410 (1990))를 사용하여 수득한 값을 지칭한다.
본 명세서의 측면에서, IL-10은 인터루킨 10을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-10은 염증, 자가면역 염증, 치매 또는 뇌졸중의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-10의 중화는 폐 파라콕시디오이데스진균증(pulmonary paracoccidioidomycosis)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-2는 인터루킨 2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-2는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-7은 인터루킨 7을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-7은 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IFNγ는 인터페론 감마를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IFNγ는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-15는 인터루킨 15를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-15는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-23은 인터루킨 23을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-23은 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TNFα는 종양 괴사 인자 알파(카켁신 또는 카켁틴으로도 알려져 있음)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TNFα는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TNFα의 차단은 염증, 자가면역 염증 및 관절염의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TNFα의 차단은 포도막염의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TNFα의 차단은 류마티스 관절염의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TNFα의 차단은 사르코이드증의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TNFα의 차단은 낭포성 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CTLA-4는 CD152로도 알려진 세포독성 T-림프구 관련 단백질 4를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CTLA-4의 차단은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, CTLA-4의 차단은 폐암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TGFβ는 전환 성장 인자 베타를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TGFβ의 차단은 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TGFβ는 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TGFβ 길항제는 낭포성 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TGFα는 전환 성장 인자 알파를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TGFα 길항제는 낭포성 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TGFβRII는 전환 성장 인자 베타 수용체 II를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TGFβRII를 차단하거나 TGFβRII-Fc를 사용하는 것은 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, GDNF는 신경교 세포주 유래 신경영양 인자를 의미한다. 특정 실시양태에서, GDNF는 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-35는 인터루킨 35를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-35는 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD95는 FasR, 아폽토시스(apoptosis) 항원 1, APO-1, APT, 또는 TNFR 수퍼패밀리 구성원 6으로도 알려진 Fas를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD95의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-1RA는 인터루킨 1 수용체 길항제를 의미한다. 특정 실시양태에서, IL-1RA는 염증, 자가면역 염증, 류마티스 관절염, 통풍, 가성통풍, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-1RA의 차단은 류마티스 관절염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-4는 인터루킨 4를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-4는 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-13은 인터루킨 13을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-13은 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, 중화 항-IL-13은 조절되지 않는 중증 천식의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-13의 차단 및/또는 중화는 비용종을 동반한 만성 부비동염의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-13 길항제는 특발성 폐 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TSLP는 사이토카인 패밀리에 속하는 단백질인 흉선 기질 림포포이에틴을 의미한다. 특정 실시양태에서, TSLP의 중화는 알레르기성 천식의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, TSLP의 차단 및/또는 중화는 비용종을 동반한 만성 부비동염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, SIRPα는 신호 조절 단백질 알파를 지칭한다. 특정 실시양태에서, SIRPα는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, G-CSF는 콜로니 자극 인자 3(CSF 3)으로도 알려진 과립구-콜로니 자극 인자(G-CSF 또는 GCSF)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, G-CSF는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, GM-CSF는 콜로니 자극 인자 2(CSF2)로도 알려진 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, GM-CSF는 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, GM-CSF의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, GM-CSFR은 과립구-대식세포 콜로니 자극을 위한 수용체인, CD116(Cluster of Differentiation 116)으로도 알려진 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(GM-CSFR)를 지칭하며, 백혈구의 생성을 자극하는 것이다. 특정 실시양태에서, GM-CSFR의 차단은 류마티스 관절염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, OX40L은 CD134에 대한 리간드로도 알려진, OX40에 대한 리간드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, OX40L은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD80은 B7.1로도 알려진 B7-1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD80은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD86은 B7.2로도 알려진 B7-2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD86은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, GITRL은 TNFSF18, AITRL, TL6, TNLG2A, TNF 수퍼패밀리 구성원 18을 지칭한다. 특정 실시양태에서, GITRL은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, 4-1BBL은 ILA에 대한 리간드 또는 CD137에 대한 리간드 또는 TNFR 수퍼패밀리 구성원 9에 대한 리간드로도 공지된, 4-1BB에 대한 리간드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 4-1BB는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphrinA1은 EFNA1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphrinA1는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서에서 EphrinB2는 EFNB2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphrinB2는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서에서 EphrinB5는 EFNB5를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphrinB5는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, PD-L1은 CD274 또는 B7 상동체 1 또는 B7-H1로도 알려진 프로그램된 사멸-리간드 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, PD-L1 차단은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, PD-L1의 차단은 포도막 흑색종의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, PD-1의 차단은 폐암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, 히스톤은 히스톤 패밀리 H1/H5, H2A, H2B, H3 및 H4에 속하는 단백질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 결합 히스톤은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CXCL10은 인터페론 감마 유도 단백질 10(IP-10) 또는 작은 유도성 사이토카인 B10으로도 알려진 C-X-C 모티프 케모카인 10을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CXCL10은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, PD-1은 CD279로도 알려진 프로그램된 세포 사멸 단백질 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, PD-1의 결합은 암의 치료에 사용된다. 다른 특정 실시양태에서, PD-1의 결합은 치매의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, PD-1의 차단은 포도막 흑색종의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, PD-1의 차단은 폐암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TREM2는 골수 세포에서 발현되는 촉발 수용체 2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TREM2의 차단은 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-6은 인터루킨 6을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-6의 차단은 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-6R은 인터루킨 6 수용체를 의미한다. 특정 실시양태에서, IL-6R의 차단은 염증, 자가면역 염증, 류마티스 관절염, 소아 특발성 관절염 및 성인 발병 스틸(Still) 질환의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-6R의 차단 및/또는 중화는 2019 코로나 바이러스 질환(COVID-19) 및/또는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)에 의해 유발된 질환의 치료에 사용된다. 본 명세서의 측면에서, Cx3cr1은 프랙탈카인 수용체 또는 G-단백질 결합 수용체 13(GPR13)으로도 알려진 CX3C 케모카인 수용체 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, Cx3cr1의 결합은 암, 치매, 염증, 자가면역 염증 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, CD27의 차단은 염증 또는 자가면역 염증의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, CD27의 활성화는 암의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, CD25의 차단은 염증, 자가면역 염증 및 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, CD25의 결합는 암의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, CD28의 활성화는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, Nogo-A는 NOGO 또는 NSP 또는 NSP-CL 레티큘론 4로도 알려진 신경돌기 증식 억제제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, Nogo-A의 차단은 자가면역 염증, 외상성 CNS 손상 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-12Rb1은 인터루킨-12 수용체 베타 1 서브유닛을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-12Rb1의 차단은 염증, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD47은 인테그린 관련 단백질(IAP)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD47 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD147은 세포외 기질 메탈로프로테이나제 유도제(EMMPRIN)로도 알려진 바시긴(BSG)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD147의 차단은 2019 코로나 바이러스 질환(COVID-19)의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, CD147의 차단은 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)에 의해 유발되는 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EGFR은 ErbB-1로도 알려진 표피 성장 인자 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EGFR의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EGFRvIII은 ErbB-1의 vIII 돌연변이체로도 알려진 표피 성장 인자 수용체의 vIII 돌연변이체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EGFRvIII의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, Her2는 CD340 또는 원종양유전자 Neu로도 알려진 수용체 티로신-단백질 키나제 erbB-2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, Her2의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, PDGFR은 혈소판 유래 성장 인자 수용체(PDGF-R)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, PDGF-R의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, FGFR은 섬유모세포 성장 인자 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, FGFR의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-4RA는 IL-4R 또는 CD124로도 알려진 인터루킨 4 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-4RA의 차단은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-4R의 차단은 천식 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TfR은 트랜스페린 수용체를 의미한다. 특정 실시양태에서, TfR의 결합은 염증, 자가면역 염증, 치매, 외상성 CNS 손상, 암 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, LfR은 오멘틴(omentin) 또는 장내 락토페린 수용체로도 알려진 락토페린 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, LfR의 결합은 염증, 자가면역 염증, 치매, 외상성 CNS 손상, 암 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IR은 인슐린 수용체를 의미한다. 특정 실시양태에서, IR의 결합은 염증, 자가면역 염증, 치매, 외상성 CNS 손상, 암 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, LDL-R은 저밀도 지단백질 수용체를 의미한다. 특정 실시양태에서, LDL-R의 결합은 염증, 자가면역 염증, 치매, 외상성 CNS 손상, 암 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, LRP-1은 알파-2-거대글로불린 수용체(A2MR) 또는 아포지단백질 E 수용체(APOER) 또는 CD91로도 알려진 저밀도 지단백질 수용체 관련 단백질 1(LRP1)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, LRP-1의 결합은 염증, 자가면역 염증, 치매, 외상성 CNS 손상, 암 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD133은 프로미닌-1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD133의 결합은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD111은 넥틴-1로도 알려진 폴리오바이러스 수용체 관련 1(PVRL1)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD111의 결합은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, VEGFR은 혈관 내피 성장 인자에 대한 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, VEGFR의 차단은 암 또는 습성 AMD, 당뇨병성 황반 부종 또는 색소성 망막염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, VEGF-A는 혈관 내피 성장 인자 A를 지칭한다. 특정 실시양태에서, VEGF-A의 차단은 암 또는 습성 AMD, 당뇨병성 황반 부종, 색소성 망막염 또는 만성 혈우병성 활막염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, Ang-2는 안지오포이에틴 2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, VEGF-A의 차단은 암 또는 습성 AMD, 당뇨병성 황반 부종 또는 색소성 망막염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-10R은 사이토카인 합성 억제 인자에 대한 수용체로도 알려진 인터루킨 10 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-10R의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-13Rα2는 CD213A2로도 알려진 인터루킨-13 수용체 서브유닛 알파-2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-13Rα2의 결합은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-13Rα2는 암의 치료에 사용된다.
특정 실시양태에서, α-시누클레인의 결합은 파킨슨병의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CSF1R은 대식세포 콜로니 자극 인자 수용체(M-CSFR), 및 CD115로도 알려진 콜로니 자극 인자 1 수용체(CSF1R)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CSF1R의 차단은 암 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, GITR은 TFR 수퍼패밀리 구성원 18(TNFRSF18) 또는 활성화 유도성 TNFR 패밀리 수용체 또는 AITR로도 알려진 글루코코르티코이드 유도된 TNFR 관련 단백질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, GITR의 결합은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD22는 분화 클러스터-22를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD22의 차단은 신경퇴행성 질환, 자가면역 염증, 치매 및 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TIM-3은 A형 간염 바이러스 세포 수용체 2(HAVCR2)로도 알려진 T-세포 면역글로불린 및 뮤신-도메인 함유-3을 지칭한다. 특정 실시양태에서, TIM-3의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, LAG-3은 림프구 활성화 유전자 3을 지칭한다. 특정 실시양태에서, LAG-3의 차단은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, LAG-3의 차단은 폐암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TIGIT는 Ig 및 면역수용체 티로신 기반 억제 모티프 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TIGIT의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, BTLA는 CD272로도 알려진 B-림프구 및 T-림프구 약화인자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, BTLA의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, VISTA는 T 세포 활성화의 V 도메인 Ig 억제인자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, VISTA의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD96은 TACTILE로도 알려진, T 세포 활성화, 증가된 후기 발현을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CD96의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, 4-1BB는 TNFR 수퍼패밀리 구성원 9로도 알려져 있거나 림프구 활성화 또는 ILA에 의해 유도되는 CD137을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 4-1BB의 결합은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CCL-2는 단핵구 화학 유인 단백질 1(MCP1) 또는 작은 유도성 사이토카인 A2로도 알려진 케모카인(C-C 모티프) 리간드 2(CCL2)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CCL-2는 암, 뇌졸중 및 치매의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, CCL-2의 차단은 자가면역 염증 및 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-1은 IL-1 사이토카인 패밀리의 구성원을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-1의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-1R은 IL-1 사이토카인 패밀리의 사이토카인에 대한 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-1R의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphA2는 에프린 타입-A 수용체 2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphA2의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphA3은 에프린 타입-A 수용체 3을 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphA3의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphB2는 ERK로도 알려진 에프린 타입-B 수용체 2를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphB2의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphB3은 에프린 타입-B 수용체 3을 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphB3의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, EphB4는 에프린 타입-B 수용체 4를 지칭한다. 특정 실시양태에서, EphB4의 차단은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, OX40은 CD134 또는 OX40 수용체로도 알려진 TNFR 수퍼패밀리 구성원 4를 지칭한다. 특정 실시양태에서, OX40의 결합은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, LINGO-1은 류신 풍부 반복체 및 면역글로빈 유사 도메인 함유 단백질 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, LINGO-1의 차단은 다발성 경화증, 외상성 뇌 CNS 손상 또는 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, L1CAM은 L1으로도 알려진 L1 세포 부착 분자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, L1의 차단은 다발성 경화증, 외상성 뇌 CNS 손상 또는 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, NCAM은 신경 세포 부착 분자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, NCAM의 차단은 다발성 경화증, 외상성 뇌 CNS 손상 또는 뇌졸중의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, SOD-1은 수퍼옥사이드 디스뮤타제 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, SOD-1의 차단은 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, SIGMAR-1은 시그마-1 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, SIGMAR-1의 차단은 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, SIGMAR-2는 시그마-2 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, SIGMAR-2의 차단은 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TDP-43은 TAR DNA 결합 단백질 43을 지칭한다. 특정 실시양태에서, TDP-43의 결합은 근위축성 측삭 경화증(ALS)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, Aβ는 아밀로이드 베타를 지칭한다. 특정 실시양태에서, Aβ의 결합은 알츠하이머병(AD)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, 타우는 타우 단백질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 타우의 결합은 알츠하이머병(AD)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IFNα는 인터페론-알파를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IFNα는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IFNβ는 인터페론-베타를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IFNβ는 암 및 감염성 질환의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TRPM4는 일시적 수용체 전위 양이온 채널 서브패밀리 M 구성원 4를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TRPM4의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, ASIC1은 아밀로라이드 민감성 양이온 채널 2, 뉴런(ACCN2) 또는 뇌 나트륨 채널 2(BNaC2)로도 알려진 산 감지 이온 채널 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, ASIC1의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, VGCC는 전압 의존성 칼슘 채널(VDCC)로도 알려진 전압 개폐 칼슘 채널을 지칭한다. 특정 실시양태에서, VGCC의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CB1은 칸나비노이드 수용체 1이라고도 알려진 칸나비노이드 수용체 타입 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CB1의 차단은 다발성 경화증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TTR은 트랜스티레틴을 지칭한다. 특정 실시양태에서, TTR의 차단은 트랜스티레틴 아밀로이드증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, HTT는 헌팅틴 단백질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, HTT의 차단은 헌팅턴(Huntington) 병의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, JCV는 JC 바이러스 또는 존 커닝햄(John Cunningham) 바이러스를 지칭한다. 특정 실시양태에서, JCV의 주요 캡시드 단백질 VP1(바이러스 단백질 1)의 차단은 진행성 다초점 백질뇌병증(PML)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, C9orf72는 염색체 9 개방 해독 프레임 72 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 지칭한다. 특정 실시양태에서, C9orf72는 치매의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, C9orf72의 차단은 치매의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, BDNF는 뇌 유래 신경영양 인자를 의미한다. 특정 실시양태에서, BDNF는 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, NRTN은 뉴르투린을 지칭한다. 특정 실시양태에서, NRTN은 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, ARTN은 아르테민을 지칭한다. 특정 실시양태에서, ARTN은 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, PSPN은 페르세핀을 의미한다. 특정 실시양태에서, PSPN은 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CNTF는 섬모 신경영양 인자를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CNTF는 다발성 경화증, 파킨슨병, 치매, 뇌졸중 및 유전성 장애의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, TRAIL은 CD253 또는 종양 괴사 인자 수퍼패밀리, 구성원 10으로도 알려진 TNF 관련 아폽토시스 유도 리간드를 지칭한다. 특정 실시양태에서, TRAIL은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서에서 HA는 인플루엔자 바이러스의 표면에서 발견되는 동종삼량체 당단백질인 헤마글루티닌(또는 해마글루티닌)을 지칭한다. 특정 실시양태에서, HA의 중화는 인플루엔자의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-3은 인터루킨 3을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-3은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-5는 인터루킨 5를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-5는 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-5의 차단은 천식의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-5의 차단은 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-8은 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 8 또는 CXCL8로도 알려진 인터루킨 8을 의미한다. 특정 실시양태에서, IL-8은 암의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-8의 차단은 폐 부종의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, IL-8 길항제는 낭포성 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-17은 인터루킨 17을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-17의 중화는 포도막염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-17A는 인터루킨 17A를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-17A의 중화는 류마티스 관절염 및/또는 건선성 관절염 및/또는 강직성 척추염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-18은 인터페론-감마 유도 인자로도 알려진 인터루킨 18을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-18은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-21은 인터루킨 21을 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-21은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-21R은 인터루킨 21 수용체를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-21R의 차단은 알레르기성 천식의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-22는 인터루킨 22를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-22의 중화는 류마티스 관절염의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, IL-25는 인터루킨 25(인터루킨 17E 또는 IL-17E로도 알려짐)를 지칭한다. 특정 실시양태에서, IL-25의 중화는 알레르기성 천식의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CD20은 B-림프구 항원 CD20을 의미한다. 특정 실시양태에서, CD20 결합 항체는 간질성 폐 질환의 치료에 사용된다. 특정 실시양태에서, CD20 결합 항체는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CCL5는 케모카인(C-C 모티프) 리간드 5를 지칭한다. 특정 실시양태에서, CCL5는 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CCL21은 케모카인(C-C 모티프) 리간드 21을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CCL21은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CCL10은 CCL9 또는 케모카인(C-C 모티프) 리간드 9로도 알려진 케모카인(C-C 모티프) 리간드 10을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CCL10은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CCL16은 케모카인(C-C 모티프) 리간드 16을 지칭한다.
특정 실시양태에서, CCL16은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CX3CL1은 프랙탈카인으로도 알려진 케모카인(C-X3-C 모티프) 리간드 1을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CX3CL1은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, CXCL16은 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 16을 지칭한다. 특정 실시양태에서, CXCL16은 암의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, NF-kB는 활성화된 B 세포의 핵인자 카파-경쇄-인핸서를 지칭한다. 특정 실시양태에서, NF-kB 길항제는 낭포성 섬유증의 치료에 사용된다.
본 명세서의 측면에서, NRA는 비류마티스 관절염을 의미한다. 특정 실시양태에서, 항-신경 성장 인자(NGF) 항체 또는 항체 유사 분자는 염증, 자가면역 염증, 관절염 및 골관절염의 치료에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, NGF의 차단은 골관절염의 치료에 사용될 수 있다. 본 명세서의 측면에서, 용어 항체는 타입 G(IgG)의 항체, 이의 임의의 항원 결합 단편 또는 단일 사슬 및 관련되거나 유도된 구축물을 지칭한다. 전체 항체는 디설파이드 결합에 의해 상호 연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질이다. 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH) 및 중쇄 불변 영역(CH)으로 이루어진다. 중쇄 불변 영역은 세 개의 도메인, 즉 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역(본원에서 VL로 약칭됨) 및 경쇄 불변 영역(CL)으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인, 즉 CL로 이루어진다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역계의 다양한 세포(예를 들어, 이펙터 세포) 및 전통적인 보체 시스템의 제1 성분을 포함하는 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개한다. 본 명세서의 측면에서, 용어 항체는 2개의 H 사슬 및 2개의 L 사슬을 포함하는 전체 항체뿐만 아니라, 단지 하나의 H 사슬 및 하나의 L 사슬을 포함하는 특이한 항체, 또는 심지어 단지 하나의 H 사슬로 구성되는 항체를 포함하는 것을 의미한다.
본 명세서의 측면에서 특이적 결합이라는 용어는 높은 친화도(Kd ≤ 10E-8 mol/l)로 결합하는 것을 지칭한다.
본 명세서의 측면에서, 용어 항체 유사 분자는 IgG 항체의 Fc 단편의 적어도 일부 및 Fc 단편에 직접 또는 간접적으로 융합된 적어도 하나의 표적 결합 요소(특히, 중쇄 및 경쇄 가변 영역, 단일쇄 가변 단편, 이중 친화도 재표적화 단백질 또는 이중특이적 T 세포 연결제(engager))를 함유하는 분자를 지칭한다. 항체 유사 분자는 높은 친화도(Kd ≤ 10E-8 mol/l)로 또 다른 분자 또는 표적에 특이적으로 결합할 수 있다. 항체 유사 분자는 항체의 특이적 결합과 유사하게 그의 표적에 결합한다.
통상의 기술자는 본 발명이 항체 또는 항체 유사 분자가 Fc 영역을 포함하거나 Fc 영역에 융합되는 것을 필요로 한다는 것을 알고 있다.
본 명세서의 측면에서, 해리 상수(KD)라는 용어는 그의 구성 성분으로 가역적으로 해리되는 [대부분 2개의] 상이한 성분으로 구성된 복합체의 경향을 측정하는 평형 상수를 지칭한다. 복합체는 예를 들어 항체 Ab 및 항원 Ag로 구성된 항체-항원 복합체 AbAg일 수 있다. KD는 몰 농도[mol/l]로 표시되며, [Ag]의 결합 부위의 절반이 차지하는 [Ab]의 농도에 해당한다. 즉, 결합되지 않은 [Ab]의 농도는 [AbAg] 복합체의 농도와 같다. 해리 상수는 다음 식에 따라 계산될 수 있다:
Figure pct00001
[Ab]: 항체의 농도; [Ag]: 항원의 농도; [AbAg]: 항체 항원 복합체의 농도.
본 명세서의 측면에서, 용어 오프-레이트(Koff; [1/sec]) 및 온-레이트(Kon; [1/sec*M])은 화학 및 물리학 분야에서 알려진 의미로 사용되고, 이들은 그의 표적 항원과 항체의 해리(Koff) 또는 회합(Kon)을 측정하는 속도 상수를 나타낸다. Koff 및 Kon은 관련 기술 분야에 잘 확립된 방법을 사용하여 실험적으로 결정될 수 있다. 항체의 Koff 및 Kon을 결정하는 방법은 표면 플라즈몬 공명을 사용한다. 이것은 Biacore® 또는 ProteOn® 시스템과 같은 바이오센서 시스템의 근간을 이루는 원리이다. 또한, 이것은 다음 식을 사용하여 해리 상수 KD를 결정하기 위해 사용할 수도 있다:
Figure pct00002
본 명세서의 측면에서, KD는 또한 관련 기술 분야에 잘 확립된 방법을 사용하여 결정된 실험 데이터의 평형 분석에 의해 결정될 수 있다. 이것은 Biacore® 또는 ProteOn® 시스템과 같은 바이오센서 시스템을 사용하여 수행할 수 있다.
본 명세서의 측면에서, 고등급 신경교종(HGG)은 WHO 등급 IV 신경교종 또는 다형성 교모세포종을 지칭한다. 본 명세서의 측면에서, "NHQ"라는 명칭을 갖는 Fc 영역은 위치 253, 310 및 435(EU 넘버링 시스템에 의해 명시된 바와 같음)가 지시된 아미노산 잔기, 즉 위치 253에 N, 위치 310에 H 및 위치 435에 Q를 포함하는 Fc 영역을 지칭한다. 이것은 I253N 및 H435Q의 두 돌연변이를 보유하는 Fc 영역에 해당한다. 따라서, 명칭 "IAQ"를 갖는 Fc 영역은 위치 253에 I, 위치 310에 A 및 위치 435에 Q를 갖는 Fc 영역(즉, 돌연변이 H310A 및 H435Q를 보유하는 Fc 영역)을 지칭한다. 표 1은 변형된 Fc 영역의 몇 가지 예를 제시한다.
본 발명의 제1 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, IL-12, 및 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 융합 폴리펩타이드를 제공한다. Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도는 초래하는 변형을 갖는다. 상기 폴리펩타이드는 뇌에 투여된다.
뇌에 대한 투여는 두개내 전달에 의해 수행될 수 있다. 두개내 전달은 연속적이거나 간헐적이거나 반복적이지 않을 수 있다. "뇌에 대한 투여"라는 표현은 또한 수술 후 절제강(resection cavity)을 세정하는 것을 포함하는 것을 의미한다. 투여는 척수강내 또는 뇌실질내일 수 있다.
Fc 영역의 변형은 폴리펩타이드의 혈청 대 뇌 농도 비율을 감소시킨다. 혈청 대 뇌 농도 감소는 높은 전신 농도로 인한 부정적인 부작용을 방지하면서 뇌 내에서 높은 국소 농도를 달성할 수 있다는 이점이 있다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율은 미리 결정된 임계값 미만이다. 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 선조체 내로의 두개내 주사, 특히 두개내 볼러스 주사 또는 CED 24시간 후에 측정 가능한 다음 값으로부터 선택된다:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드, 특히 IL-12Fc WT의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 2/3, 또는
b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드, 특히 rhIL-12의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/8.
측정은 말단이 무딘 26s G 해밀턴(Hamilton) 주사기 또는 CED(내부 직경이 0.1 mm이고 벽 두께가 0.0325 mm인 용융 실리카로 만든 팁에 1 mm의 돌출부(step)가 있는 27 G 무딘 말단 바늘 및 5분 동안 0.2 μl/분, 4분 동안 0.5 μl/분 및 2.5분 동안 0.8 μl/분의 램프업 주사 방식을 사용; 총 부피 5 μl, 총량 1 μg)를 사용하여 1 μg을 1 μl/min으로 FcRntg 마우스의 선조체 내로 두개내 주사한지 24시간 후에 수행된다.
본 발명의 제1 측면에 따른 융합 폴리펩타이드는 비변형 Fc 영역에 연결된 IL-12(IL-12Fc WT)보다 더 낮은 혈청 대 뇌 농도 비율을 갖는다. IL-12Fc WT는 순환계에서 FcRn 매개 재순환으로 인해 긴 혈청 반감기를 가지고 있다.
본 발명의 제1 측면에 따른 융합 폴리펩타이드는 rhIL-12보다 더 낮은 혈청 대 뇌 농도 비율을 가지며, 이는 뇌로부터 높은 수동적 누출을 나타낸다.
특정 실시양태에서, FcRn에 대한 상기 폴리펩타이드의 감소된 친화도는 다음으로부터 선택되는 해리 상수(KD)를 특징으로 한다:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x 증가된 KD, 및
b. 상이하게 변형된 Fc 영역, 즉 IAQ(돌연변이 H310A 및 H435Q 보유) 및 AAA(돌연변이 I253A, H310A 및 H435A 보유)로부터 선택되는 하나의 돌연변이체를 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 1.5x 증가된 KD.
특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 3x 증가된다. 특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 4x 증가된다. 특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 5x 증가된다.
특정 실시양태에서, KD는 상기 상이하게 변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x 증가된다. 특정 실시양태에서, 상이하게 변형된 Fc 영역은 위치 253에 I, 위치 310에 A 및 위치 435에 Q를 갖는 Fc 영역(IAQ)이다. 특정 실시양태에서, 상이하게 변형된 Fc 영역은 위치 253에 A, 위치 310에 A 및 위치 435에 A를 갖는 Fc 영역(AAA)이다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 대류 강화 전달(CED) 또는 이의 변형 방법에 의해 수행된다. CED는 약물이 뇌(종양) 실질에 직접 전달되도록 하는 기술을 지칭한다. CED 절차는 뇌에 대한 최소 침습성 외과적 노출을 수행한 후, 작은 직경의 카테터를 뇌 내에 직접 삽입하여 혈액-뇌 장벽을 우회하는 것을 수반한다. 일반 볼러스 주사와 확산 기반 주입 요법의 주요 차이점은 조직 내의 대량 흐름에 도달할 때까지 주입을 증가시킴으로써 생성되는 압력 구배이다. 이제, 주입 속도가 아닌 지속 시간이 도달하는 조직의 범위를 결정한다. 이 접근법은 일반적으로 뇌에 들어가지 않는 거대분자 약물의 전달을 허용함으로써 뇌(종양) 조직 내에 높은 농도에 효과적으로 도달할 수 있다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 척수강내 전달에 의해 수행된다. 척수강내 투여는 약물을 뇌척수액(CSF) 내에 직접 투여하는 것을 지칭한다. 척수강내 투여는 뇌의 지주막하 공간(예를 들어, 옴마야 저장소(ommaya reservoir)를 통해) 또는 척수에 지주막 아래에서 물질을 적용하는 것으로 정의된다. 비제한적인 예는 각각 트라스투주맙 또는 리툭시맙을 사용하여 연수막 암종증 및 원발성 Her2/neu 양성 뇌종양뿐만 아니라 CD20 양성 CNS 림프종 및 안내 림프종을 치료하기 위한 척수강내 전달이다. 또 다른 예는 급성 척수 손상, 다발성 경화증 또는 뇌졸중의 치료를 위한 항-NogoA 항체의 척수강내 적용이다. 이 접근법은 일반적으로 뇌에 들어가지 않는 거대분자 약물의 전달을 허용함으로써 연수막 또는 뇌 실질 내에 높은 농도에 효과적으로 도달할 수 있다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 상기 폴리펩타이드의 뇌실내 전달에 의해 수행된다. 뇌실내 투여는 뇌실 내강으로의 카테터를 통해 약물을 뇌척수액(CSF) 내로 직접 투여하는 것을 지칭한다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 상기 폴리펩타이드의 계내 생산에 의해 수행된다. 계내 생산은 독점적으로 또는 실질적으로 독점적으로 뇌 또는 뇌종양 내에서의 폴리펩타이드의 국소 생산과 관련된다. 비제한적인 예로서, 국소 생산은 DNA 제제, mRNA, 변형된 mRNA, 자가 복제 mRNA, 바이러스 벡터, 캡슐화된 변형된 생산자 세포 또는 변형된 T 세포로부터 유래할 수 있다. 국소 생산에 대한 공간적 제어는 폴리펩타이드를 코딩하는 분자 또는 벡터의 국소 전달에 의해 또는 폴리펩타이드 생산의 국소 활성화에 의해 달성될 수 있다. 폴리펩타이드를 코딩하는 분자 또는 벡터의 국소 전달 및 후속적인 폴리펩타이드 생산의 국소 활성화를 통한 국소 생산은 조건부 발현 카세트의 전사 억제인자 또는 전사 활성인자로서 작용하는 작용제의 국소 또는 전신 투여를 통해 달성될 수 있다. 그 예에는 엑디손 수용체/무척추동물 레티노이드 x 수용체 기반 유도성 유전자 발현 시스템 또는 테트라사이클린 조절 전사 조절인자가 포함되지만, 이에 국한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 종양 또는 CNS에 대한 귀소(homing) 능력을 갖는 상기 폴리펩타이드를 생성하도록 변형된 세포의 전신 전달에 의해 수행된다. 폴리펩타이드는 구성적 또는 유도성 방식으로 생산될 수 있다. 그 예에는 변형된 T 세포 또는 중간엽 줄기 세포가 포함되지만, 이에 국한되지 않는다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 이식된 서방성/연장 방출/지속 방출/제어 방출 제제로부터의 방출에 의해 수행된다. 본 명세서의 측면에서, 이러한 제제는 부작용을 최소화하면서 특정 기간 동안 일정한 약물 농도를 유지하기 위해 미리 결정된 속도로 약물을 방출하도록 설계된 투여 형태에 관한 것이다. 통상의 기술자는 다양한 적합한 제제를 알고 있다. 비제한적인 예는 리포솜, 약물-중합체 접합체, 하이드로겔, 웨이버(waver) 또는 코팅된 나노입자이다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 상기 폴리펩타이드의 비강내 전달에 의해 수행된다.
특정 실시양태에서, 두개내 전달은 상기 폴리펩타이드의 수용체 매개 트랜스사이토시스(transcytosis)에 의해 수행된다. 그의 비제한적인 예는 TfR에 결합하는 이중특이적 구축물뿐만 아니라, 병든 뇌 실질에서 발견되는 표적, 특히 알츠하이머병(AD)의 Aβ 플라크이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 악성 질환이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 신경교종이다. 특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 고등급 신경교종(HGG)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 뇌 전이로도 공지된 속발성 뇌종양이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 허혈성 뇌 손상이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 뇌경색, 뇌졸중, 뇌 저산소증-허혈, 두개내 색전증 또는 두개내 혈전증이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 간질이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 외상성 뇌 손상이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 척수 손상이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 치매이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 파킨슨병(PD)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 루이 소체(Lewy Bodies) 치매이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 알츠하이머병(AD)이다. 특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 가족성 알츠하이머병(AD)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 전두측두엽 치매(FTD)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 가족성 전두측두엽 치매(FTD)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 루게릭(Lou Gehrig) 병으로도 알려진 근위축성 측삭 경화증(ALS)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 전염성 해면상 뇌병증, 특히 크로이츠펠트 야콥병(CJD), 쿠루(Kuru), 스크래피(Scrapie), 소 해면상 뇌병증(BSE)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 장애이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 장애, 특히 피질하 경색 및 백질뇌병증을 동반한 대뇌 상염색체 우성 동맥병증(CADASIL)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 장애, 특히 헌팅턴병이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 장애, 특히 자폐증, 자폐 스펙트럼 장애(ASD), 예를 들어 아스퍼거(Asperger) 증후군이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 백질이영양증, 특히 이염색성 백질영양증, 크라베(Krabbe) 병, 카나반(Canavan) 병, X 염색체 연관 부신 백질이영양증, 알렉산더(Alexander) 병이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 유전성 대사 장애, 특히 테이-삭스(Tay-Sachs) 병 또는 윌슨(Wilson) 병이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 정신 장애, 특히 기억상실, 주의력 결핍 과잉 행동 장애, 정신병, 불안 장애, 양극성 장애, 우울증, 조증, 지적 발달 장애, 전반적인 발달 지연, 외상후 스트레스 장애, 급성 스트레스 장애, 해리성 장애이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 간질이다. 특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 자가면역 뇌염이다. 특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 다발성 경화증이다. 특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 시신경척수염(NMO)이다. 특정 실시 양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 자가면역 뇌염, 특히 항-NMDAR 뇌염, 변연계의 뇌염, LGI1/CASPR2-항체 뇌염, 하시모토 뇌병증, 급성 파종성 뇌척수염(ADEM), 빈스방거(Binswanger) 병(피질하 백질뇌병증), 라스무센(Rasmussen) 뇌염이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 바이러스, 특히 광견병 바이러스, 인간 헤르페스 바이러스, 발진 유발 바이러스, 곤충 매개 바이러스, 진드기 매개 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)에 의해 유발되는 감염성 뇌척수염이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 박테리아에 의해 유발되는 감염성 뇌척수염이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 기생충에 의해 유발되는 감염성 뇌척수염이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 JC 폴리오마바이러스(대체로 JCPyV 또는 JCV로 약칭됨)에 의해 유발되는 진행성 다초점 백질뇌병증(PML)이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 감염후 뇌척수염이다.
특정 실시양태에서, 중추신경계에 발병하는 질환은 신생혈관 연령 관련 황반 변성(습성 AMD) 및 당뇨병성 황반 부종 또는 색소성 망막염이다.
본 발명의 추가의 측면에서, 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 폐에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용되며, 상기 질환은 2019 코로나 바이러스 질환, 중증 급성 호흡기 증후군, 천식, 알레르기성 천식, 중증의 조절되지 않는 천식, 섬유증, 낭포성 섬유증, 폐 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 인플루엔자, 폐 부종, 사르코이드증, 폐암, 결핵, 인간 오르토뉴모바이러스, 림프절 페스트, 폐 페스트, 탄저병, 폐의 침습성 진균 질환, 폐 파라콕시디오이데스진균증, 간질성 폐 질환, 특발성 폐 섬유증, 및 비용종을 동반한 만성 부비동염으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스 2(SARS-CoV-2)에 의해 유발된 2019 코로나 바이러스 질환(COVID-19)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 중증 급성 호흡기 증후군(SARS)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 바이러스, 특히 코로나바이러스에 의해 유발된 중증 급성 호흡기 증후군(SARS)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 천식, 알레르기성 천식, 중증의 조절되지 않는 천식, 또는 이들의 조합이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 섬유증, 낭포성 섬유증, 폐 섬유증, 또는 이들의 조합이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 인플루엔자 바이러스에 의해 유발되는 인플루엔자이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 사르코이드증(베스니에-뵈크-샤우만(Besnier-Boeck-Schaumann) 병으로도 공지됨)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 폐암이다.
특정 실시양태에서, 일반적으로 폐에 발병하는 질환은 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생충에 의해 유발된다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 미코박테리움 튜버큘로시스(Mycobacterium tuberculosis)(대체로 엠. 튜버큘로시스 또는 M. tb로 약칭됨)에 의해 유발되는 결핵이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 세포융합 바이러스 인간 오르토뉴모바이러스(인간 호흡기 세포융합 바이러스, 또는 HRSV, 또는 단지 RSV로도 공지됨)에 의해 유발되는 호흡기 감염이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 박테리아 예르시니아 페스티스(Yersinia pestis)에 의해 유발되는 림프절 페스트이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 박테리아 예르시니아 페스티스에 의해 유발되는 폐 페스트이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis)에 의해 유발되는 감염병인 탄저병이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 아스페르길루스(Aspergillus), 크립토코커스(Cryptococcus), 뉴모시스티스(Pneumocystis), 및 풍토성 진균과 같은 폐 진균 병원체에 의해 유발되는 침습성 진균 질환(진균 폐 질환으로도 알려짐)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 진균 파라콕시디오이데스 브라실리엔시스(Paracoccidioides brasiliensis)에 의해 유발되는 폐 파라콕시디오이데스진균증(전형적으로 PCM으로 약칭됨)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 만성 부비동염(CRS)의 하위군인 비용종을 동반한 만성 부비동염(전형적으로 CRSwNP로 약칭됨)이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 폐 부종이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 간질성 폐 질환이다.
특정 실시양태에서, 폐에 발병하는 질환은 특발성 폐 섬유증이다.
본 발명의 추가의 측면에서, 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 적어도 하나의 관절에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용되며, 상기 질환은 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 통풍, 가성통풍, 골관절염, 만성 혈우병성 활액막염, 건선성 관절염 및 강직성 척추염으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 류마티스 관절염(RA)이다. 특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 소아 류마티스 관절염이다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 혈액 내 요산의 지속적으로 상승된 수준에 의해 유발되는 염증성 관절염의 한 형태인 통풍이다. 특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 가성통풍이다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 관절 연골 및 밑에 있는 뼈의 파괴로 인한 골관절염(OA)이다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 만성 혈우병성 활액막염이다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 자가면역 질환인 건선에 의해 영향을 받는 사람에서 발생하는 장기간 염증성 관절염인 건선성 관절염이다.
특정 실시양태에서, 관절에 발병하는 질환은 강직성 척추염(베크테레프(Bekhterev) 병, 베흐테레브(Bechterew) 병 또는 베흐테레브병(morbus Bechterew)으로도 알려짐)이다.
본 발명의 추가의 측면에서, 본 발명에 따른 폴리펩타이드는 눈에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용되며, 상기 질환은 포도막 흑색종 및 포도막염으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 눈에 발병하는 질환은 포도막 흑색종, 홍채, 모양체, 또는 맥락막(집합적으로 포도막으로 지칭됨)을 포함하는 눈의 암(흑색종)이다.
특정 실시양태에서, 눈에 발병하는 질환은 포도막염, 즉 포도막의 염증이다.
본 발명에 따른 폴리펩타이드는 본 명세서에서 개시되는 여러 질환 또는 질환의 조합의 예방 또는 치료를 위해 동시에 및/또는 연속적으로 사용될 수 있는 것으로 이해된다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 인간 또는 인간화 아미노산 서열을 포함하는 키메라 Fc 영역이다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 인간 또는 인간화 Fc 영역이다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 1에 비해 위치 253에 돌연변이를 보유한다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A를 보유한다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N을 보유한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 1에 비해 위치 435에 돌연변이를 보유한다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 H435Q를 보유한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 1에 비해 위치 435에 돌연변이를 보유하지 않는다. 따라서, Fc 영역은 위치 435에 H를 보유한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 1에 비해 위치 310에 돌연변이를 보유하지 않는다. 따라서, Fc 영역은 위치 310에 H를 보유한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 다음을 포함한다:
- 돌연변이 I253A 및 H435Q, 및 위치 310의 H(AHQ);
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253A 및 위치 310 및 435의 H(AHH);
- 돌연변이 I253N 및 위치 310 및 435의 H(NHH);
- 돌연변이 I253A 및 H310A, 및 위치 435의 H(AAH);
- 돌연변이 I253N 및 H310A, 및 위치 435의 H(NAH);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435A(NAA);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435A(AAA); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
특정 실시양태에서, Fc 영역은 다음을 포함한다:
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE), 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 006(NAQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 012(NAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
치료에 사용하기 위한 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 폴리펩타이드
본 발명의 보다 넓은 측면은 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고, 폴리펩타이드는 질환에 의해 영향을 받는 조직에 대한 국소 투여에 의해 전달된다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드는 안내 투여에 의해 눈에 전달된다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드는 관절내 투여에 의해 관절에 전달된다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드는 흡입을 통해 폐로 전달된다.
본 발명은 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는
- IL-12; 또는
- VEGFR, Ang2, TNFα, IL-17, PD-1, PD-L1 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 VEGFR, Ang2, TNFα, IL-17 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드
를 추가로 포함하는, 눈에 발병하는 질환, 특히 눈에 발병하는 신생물 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드를 추가로 제공하고, 여기서 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H(NHQ)를 포함하고, 상기 폴리펩타이드는 안내 투여에 의해 눈에 전달된다.
본 발명은 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는
- IL-12; 또는
- TNFα, IL-1RA, IL-6R, IL-6, CD27, IL-22, IL-17, CD27 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 TNFα, IL-1RA, IL-6R, IL-6, CD27 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드
를 추가로 포함하는, 관절에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드를 추가로 제공하고, 여기서 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 관절내 투여에 의해 상기 관절에 전달된다.
본 발명은 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는
- IL-12; 또는
- IL-10; 또는
- IL-4RA, TNFα, IL-5, IL-6R, PD-1, PD-L1, CTLA-4, IL-8, IL-21R, CD25, CD20, NF-kB 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 IL-4RA, TNFα, IL-5, IL-6R, PD-1, PD-L1, CTLA-4 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드
를 추가로 포함하는, 폐에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드를 추가로 제공하고, 여기서 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 흡입을 통해 폐에 전달된다.
본 발명은 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 특히 IL-12를 추가로 포함하는, 의약으로서 사용하기 위한 융합 폴리펩타이드를 추가로 제공하며, 여기서 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함한다.
특정 실시양태에서, 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드의 결정화 가능 단편(Fc) 영역은 서열 번호 004의 서열(NHQ)이거나 이를 포함한다. 특정 실시양태에서, 의약으로서 사용하기 위한 융합 폴리펩타이드의 결정화 가능 단편(Fc) 영역은 서열 번호 004의 서열(NHQ)이거나 이를 포함한다.
국소 투여 후, FcRn에 대해 감소된 친화도는 순환계 내로의 수송 및 전신 농축이 감소되도록 하여 폴리펩타이드의 전신 독성 부작용을 감소시킨다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음으로부터 선택된다:
a. i. 이펙터 폴리펩타이드 및
ii. 상기 Fc 영역
을 포함하는 융합 단백질; 또는
b. 상기 Fc 영역을 포함하거나 상기 영역에 연결된 항체 또는 항체 유사 분자.
치료에 사용하기 위한 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 폴리펩타이드의 추가의 실시양태는 하기 "항목" 섹션에서 볼 수 있다.
치료에 사용하기 위한 PD-1/PD-L1 축의 표적화
본 발명의 또 다른 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 프로그램된 세포 사멸 단백질 1(PD-1) 또는 프로그램된 사멸-리간드 1(PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 항체 또는 항체 유사 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 친화도를 감소시키는 변형을 보유하는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자는 중추신경계, 특히 뇌에 투여된다.
치료에 사용하기 위한 항-OX40
본 발명의 또 다른 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 CD134, OX40 또는 OX40 수용체로도 알려진 종양 괴사 인자 수용체 수퍼패밀리, 구성원 4(TNFRSF4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 항체 또는 항체 유사 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자는 뇌에 투여된다.
치료에 사용하기 위한 항-CD47
본 발명의 또 다른 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 인테그린 결합 단백질(IAP)로도 알려져 있는, CD47에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 CD47의 리간드, 특히 Fc 영역과 융합된 SIRPα 또는 트롬보스폰딘-1(TSP-1)을 제공한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 뇌에 투여된다.
치료에 사용하기 위한 항-Nogo-A
본 발명의 또 다른 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, Nogo-A에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 Nogo-A의 리간드, 특히 Fc 영역과 융합된 Nogo 수용체 1(NgR1)로도 알려져 있는 Nogo-66 수용체를 제공한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 뇌에 투여된다.
치료에 사용하기 위한 T 세포 결합 이중특이적 항체
본 발명의 또 다른 측면은 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 암 세포 상의 종양 관련 항원(TAA)에 특이적으로 결합하고 동시에 T 세포 상의 CD3에 특이적으로 결합하여, TAA에 결합할 경우 T 세포 수용체 독립적 폴리클로날 활성화를 제공하는 T 세포 결합 이중특이적 항체, 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 본 발명의 또 다른 측면은 PD-L1에 특이적으로 결합하고 동시에 T 세포 상의 4-1BB에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 본 발명의 추가의 측면은 PD-L1에 특이적으로 결합하고 동시에 T 세포 상의 CD28에 특이적으로 결합하는 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 뇌에 투여된다.
치료에 사용하기 위한 무장 항체 및 표적화된 항체
본 발명의 또 다른 측면은 암 세포 상의 종양 관련 항원(TAA)에 특이적으로 결합하거나 종양 혈관계에 존재하는 항원 또는 종양의 괴사성 코어에 존재하는 항원에 특이적으로 결합하는 무장 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 또한 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 이펙터 분자, 특히 사이토카인, 방사성 동위원소 또는 세포독성 물질을 운반한다. 무장된 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 뇌에 투여된다.
종양 조건부 또는 조직 조건부 항체
본 발명의 또 다른 측면은 암 세포 상의 제1 종양 관련 항원(TAA)에 특이적으로 결합하거나, 또는 종양 미세환경에 존재하는 항원 또는 종양의 괴사성 코어에 존재하는 항원 또는 표적 조직에 존재하는 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자를 제공한다. 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 또한 제2 이펙터 분자, 특히 사이토카인을 포함하거나, 또는 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 제1 항원과 상이한 제2 항원에 결합하는 적어도 하나의 추가의 항체 또는 항체 유사 분자를 갖는 이중특이적 또는 다중특이적 항체이다. 이러한 구축물에서, 제2 항체 또는 항체 유사 도메인은 차폐되어 그의 표적 항원에 결합할 수 없다. 차폐 도메인은 종양 또는 표적 조직에서 우세하게 또는 배타적으로 발견되는 프로테아제에 의해 상기 종양 또는 표적 조직에서 절단될 프로테아제 민감성 링커 펩타이드를 통해 제2 항체 또는 항체 유사 구축물에 연결된다. 차폐 도메인은 제1 항원에 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자일 수 있다. 표적 조직 또는 종양 미세환경에서 차폐 도메인이 절단되면, 제2 항체 또는 항체 유사 분자는 그의 표적 항원에 결합하거나, 사이토카인 또는 케모카인의 경우에는 그의 수용체에 결합할 것이다. 종양 조건부 또는 조직 조건부 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 뇌에 투여된다.
통상의 기술자는 항체의 경우 항체 자체가 이미 Fc 영역을 포함한다는 것을 알고 있다. 항체 유사 분자의 경우, 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자는 Fc 영역에 연결된다.
치료에 사용하기 위한 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 항체 또는 항체 유사 분자 또는 Fc 융합 분자에 대한 추가의 실시양태는 하기 "항목" 섹션에서 볼 수 있다.
FcRn에 대해 감소된 친화도(증가된 K D )를 갖는 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드
본 발명의 제2 측면은 IgG의 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제공하고, 상기 Fc 영역은 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 친화도와 비교하여 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖는다.
특정 실시양태에서, FcRn에 대한 상기 폴리펩타이드의 감소된 친화도는 다음으로부터 선택되는 해리 상수(KD)를 특징으로 한다:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x 증가된 KD, 및
b. 상이하게 변형된 Fc 영역, 즉 IAQ(돌연변이 H310A 및 H435Q 보유) 및 AAA(돌연변이 I253A, H310A 및 H435A 보유)로부터 선택되는 하나의 돌연변이체를 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 1.5x 증가된 KD.
특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 3x 증가된다. 특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 4x 증가된다. 특정 실시양태에서, KD는 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 5x 증가된다.
특정 실시양태에서, KD는 상기 상이하게 변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x 증가된다.
특정 실시양태에서, 폴리펩타이드는 다음으로부터 선택된다:
a. i. 이펙터 폴리펩타이드 및
ii. 상기 Fc 영역
을 포함하는 융합 단백질; 또는
b. 상기 Fc 영역을 포함하거나 상기 영역에 연결된 항체 또는 항체 유사 분자.
통상의 기술자는 항체의 경우 항체 자체가 이미 Fc 영역을 포함한다는 것을 알고 있다. 항체 유사 분자의 경우, 항체 유사 분자는 Fc 영역에 연결된다.
특정 실시양태에서, 이펙터 폴리펩타이드는
a. 사이토카인 또는 호르몬 또는 성장 인자,
b. 사이토카인 수용체 또는 호르몬 수용체 또는 성장 인자 수용체, 또는
c. 대사산물
의 기능을 갖고, 질환, 특히 중추신경계에 발병하는 질환에 대한 치료 또는 예방 효과가 있는 것으로 알려져 있다.
특정 실시양태에서, 이펙터 폴리펩타이드는 세포외 기질(ECM)에 특이적으로 결합할 수 있고, 질환, 특히 중추신경계에 발병하는 질환에 대한 치료 또는 예방 효과를 갖는 것으로 알려져 있다. 특정 실시양태에서, 이펙터 폴리펩타이드는 RNA에 특이적으로 결합할 수 있고, 질환, 특히 중추신경계에 발병하는 질환에 대한 치료 또는 예방 효과를 갖는 것으로 알려져 있다.
특정 실시양태에서, 이펙터 폴리펩타이드는 IL-12, IL-10, IL-2, IL-7, IFNα, IFNβ, IFNγ, IL-15, TNFα, CTLA-4, TGFβ, TGFβRII, GDNF, IL-35, CD95, IL-1RA, IL-4, IL-13, IL-33, IL-23, SIRPα, G-CSF, GM-CSF, OX40L, CD80, CD86, GITRL, 4-1BBL, EphrinA1, EphrinB2, EphrinB5, BDNF, C9orf72, NRTN, ARTN, PSPN, CNTF, TRAIL, IL-4, IL-3, IL-1, IL-5, IL-8, IL-18, IL-21, CCL5, CCL21, CCL10, CCL16, CX3CL1, CXCL16을 포함하는 군으로부터 선택되고, 특히 상기 이펙터 폴리펩타이드는 IL-12이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 작용 또는 길항 방식으로 PD-L1, TNFα, 히스톤, IFNγ, CXCL10, CTLA4, PD-1, CD3, OX40, CD20, CD22, CD25, CD28, TREM2, IL-6, CX3CR1, Nogo-A, CD27, IL-12, IL-12Rb1, IL-23, IL-17, CD47, TGFβ, EGFR, EGFRvIII, Her2, PDGFR, TGFR, FGFR, IL-4RA, TfR, LfR, IR, LDL-R, LRP-1, CD133, CD111, VEGFR, VEGF-A, Ang-2, IL-10, IL-10R, IL-13Rα2, α-시누클레인, CSF1R, G-CSF, GM-CSF, GITR, TIM-3, LAG-3, TIGIT, BTLA, VISTA, CD96, CD147, 4-1BB, CCL2, IL-1 또는 IL-1R, EphA2, EphA3, EphB2, EphB3, EphB4, LINGO-1, L1CAM, NCAM, SOD-1, SIGMAR-1, SIGMAR-2, TDP-43, Aβ, 타우, IFNα, IFNβ, TRPM4, ASIC1, VGCC, CB1, TTR, HTT, JCV, C9orf72에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자로부터 선택된다.
본 발명의 상기 측면에 따른 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-1 또는 PD-L1 또는 PD-L2의 생리학적 리간드의 인식 부위 또는 전체 항체로부터 유래된 항체 유사 분자일 수 있다. 이러한 항체 또는 항체 유사 분자는 각각 PD-1 또는 PD-L1 또는 PD-L2에 대한 결합을 위해 생리학적 리간드와 경쟁한다. 특히, 비작용제 PD-1 항체 또는 항체 유사 분자 또는 비작용제 PD-L1 항체 또는 항체 유사 분자 또는 비작용제 PD-L2 항체 또는 항체 유사 분자는 T 세포의 표면 상의 PD-1에 결합할 때 약화된 T 세포 활성을 유발하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 비작용제 PD-1 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-1에 결합될 때, PD-1과 그의 결합 파트너 PD-L1 및/또는 PD-L2와의 상호작용을 입체적으로 차단할 수 있다.
일부 실시양태에서, 상기 비작용제 PD-1 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-1과 그의 결합 파트너 PD-L1 및/또는 PD-L2와의 상호작용의 생리학적 반응을 촉발하지 않으면서 PD-1에 결합하는 감마 면역글로불린이다.
일부 실시양태에서, 상기 비작용제 PD-L1(PD-L2) 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-1과 그의 결합 파트너 PD-L1 및/또는 PD-L2와의 상호작용의 생리학적 반응을 촉발하지 않으면서 PD-L1(PD-L2)에 결합하는 감마 면역글로불린이다.
PD-1 항체에 대한 비제한적인 예는 임상적으로 승인된 항체 펨브롤리주맙(CAS No. 1374853-91-4) 및 니볼루맙(CAS No. 946414-94-4)이다.
PD-L1 항체에 대한 비제한적인 예는 임상적으로 승인된 항체 아테졸리주맙(CAS No. 1380723-44-3), 두르발루맙(CAS No. 1428935-60-7) 및 아벨루맙(CAS No. 1537032-82-8)이다.
현재 임상 개발 중인 PD-1/PD-L1 또는 PD-L2 항체에 대한 비제한적인 예는 항체 MDX-1105/BMS-936559 또는 AMP-224이다. IL-12/23에 특이적으로 결합하는 항체의 비제한적인 예는 우스테키누맙(CAS No. 815610-63-0)이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 항체이다.
일부 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 작용성 OX40 항체 또는 항체 유사 분자는 OX40 리간드의 부재시에 OX40에 결합할 때 OX40 발현 세포에서 신호전달 캐스케이드를 촉발할 수 있다.
OX40 항체에 대한 비제한적인 예는 현재 임상 개발 중인 항체 PF-04518600/PF-8600m BMS-986178, GSK3174998, MOXR0916, INCAGN01949, 타볼리맙/MEDI0562이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 OX40에 특이적으로 결합하는 항체이다.
일부 실시양태에서, 본 발명에서 사용되는 항체 또는 항체 유사 분자는 암 세포의 식균 작용을 예방하는 CD47과 SIRPα 신호 사이의 상호작용을 차단할 수 있다.
CD47 차단 항체 또는 SIRPα 융합 단백질의 비제한적인 예는 Hu5F9-G4, CC-90002/INBRX-103, IBI188, OSE-172, NI-1801, DSP107, TTI-622, TTI-621, ALX148, 및 SRF231이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 Nogo-A에 특이적으로 결합하는 항체이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 동시에 2개의 항원에 결합할 수 있는 이중특이적 구축물이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 삼중특이적 구축물이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 다중특이적 구축물이다.
특정 실시양태에서, 항체 또는 항체 유사 분자는 IL-12 또는 IL-2로 무장한, 종양의 괴사성 코어에 존재하는 히스톤에 대해 작용하는 항체이다. 특정 예에서, 무장된 항체는 면역사이토카인이다. 면역사이토카인으로서의 무장된 항체의 비제한적인 예는 NHS-IL-12, NHS-IL2LT, Hu14.18-IL2, HuKS-IL2, huBC1-IL-12이다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 인간 아미노산 서열을 포함하는 키메라 Fc 영역이다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 인간 Fc 영역이다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 위치 253에 돌연변이를 갖는다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A를 갖는다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N을 갖는다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 위치 435에 돌연변이를 갖는다. 특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 H435Q를 갖는다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 위치 435에 돌연변이를 갖지 않는다. 따라서, Fc 영역은 위치 435에 H를 갖는다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 위치 310에 돌연변이를 갖지 않는다. 따라서, Fc 영역은 위치 310에서 H를 갖는다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 다음을 포함한다:
- 돌연변이 I253A 및 H435Q, 및 위치 310의 H(AHQ);
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253A 및 위치 310 및 435의 H(AHH);
- 돌연변이 I253N 및 위치 310 및 435의 H(NHH);
- 돌연변이 I253A 및 H310A, 및 위치 435의 H(AAH);
- 돌연변이 I253N 및 H310A, 및 위치 435의 H(NAH);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435A(NAA);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435A(AAA); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
특정 실시양태에서, Fc 영역은 다음을 포함한다:
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE), 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE)를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 006(NAQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 012(NAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
특정 실시양태에서, Fc 영역은 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함한다.
핵산
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 상기 측면에 따른 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 제공한다.
바이러스
본 발명의 또 다른 측면은 본 발명의 상기 측면에 따른 핵산을 포함하는 바이러스 벡터를 제공한다. 바이러스 벡터는 치료 중인 환자에게 적용하기에 적합한 복제 또는 비복제 바이러스일 수 있다.
본 발명의 임의의 측면의 특정 실시양태에서, 본 발명에 따른 변형된 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드는 FcRn 차단 항체와 조합하여 사용된다. FcRn 차단 항체는 Fc 포함 폴리펩타이드와 FcRn 사이의 결합을 억제할 수 있어, 본 발명의 기술적 효과를 모방할 수 있다. FcRn 차단 항체와의 조합은 본 발명에 따른 변형된 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드의 기재된 이점을 향상시킬 수 있다.
본 발명의 임의의 측면의 특정 실시양태에서, Fc 영역은 면역글로불린 G(IgG)의 Fc 영역이다. IgG는 사람의 체액성 면역 반응의 주요 이펙터 분자이다. IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 명명된 인간 IgG의 4개의 별개의 하위 그룹이 있다. 4개의 서브클래스는 중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에서 95% 초과의 상동성을 나타내지만, 힌지 영역의 구조 및 유연성, 특히 상기 도메인의 중쇄간 디설파이드 결합의 수에서 상이하다. IgG 서브클래스 사이의 구조적 차이는 단백질 분해 효소, 특히 파파인, 플라스민, 트립신 및 펩신에 대한 감수성에도 반영된다.
본 발명의 임의의 측면의 특정 실시양태에서, Fc 영역은 IgG4의 Fc 영역이다. 인간 IgG4의 단지 하나의 이소형만이 알려져 있다. 인간 IgG1, IgG2 및 IgG3과 대조적으로, 인간 IgG4는 보체를 활성화하지 않는다. 또한, IgG4는 IgG2 및 IgG3에 비해 단백질 분해 효소에 덜 민감하다. 이러한 예상과는 달리, 실제로 돌연변이 I253N 및 H435Q 특징을 갖는 IgG1 전장 항체 구축물이 상응하는 IgG4 전장 항체 구축물과 비교하여 결정된 더 높은 해리 상수 더 낮은 혈장 대 뇌 비율에 의해 예시되는 바와 같이 FcRn에 대한 더 낮은 친화도를 특징으로 한다는 것이 놀랍게도 밝혀졌다.
이와 유사하게, 본 발명의 범위 내에는 상기 설명된 본 발명의 측면 중 하나에 따른 변형된 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 또는 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 벡터를 환자에게 투여하는 것을 포함하는, 그 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에서 악성 신생물 질환, 특히 고형 조직 종양, 보다 특히 신경교종을 치료 또는 예방하는 용도가 포함된다.
이와 유사하게, 상기 설명된 본 발명의 측면 중 하나에 따른 변형된 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드 또는 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산 또는 상기 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산을 포함하는 바이러스 벡터를 포함하는, 악성 신생물 질환, 특히 고형 조직 종양, 보다 특히 신경교종을 예방 또는 치료하기 위한 투여 형태가 제공된다.
분리 가능한 하나의 특징에 대한 대안이 여기에서 "실시양태"로서 제시될 때마다, 상기 대안이 자유롭게 조합되어 본원에서 개시되는 본 발명의 개별적인 실시양태를 형성할 수 있음을 이해하여야 한다.
본 발명은 추가의 실시양태 및 이점이 도출될 수 있는 하기 실시예 및 도면에 의해 추가로 예시된다. 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것이지 그 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.
도 1: 인간 IL-12Fc는 IL-12보다 조직 보유력이 더 우수하다. a. 뮤린 IL-12FC의 개략 구조. rhIL-12 - 재조합 인간 IL-12, hIL-12Fc - 인간 IL-12Fc. IgG4 Fc - 인간 IgG4의 단편 결정화 가능 영역. b. 실험의 개략도. IL-12Fc의 IL-12를 FcRntg 마우스의 선조체에 주사하였다. 24시간 후, 주입된 단백질의 남은 양을 뇌에서 평가하고, 혈청에 존재하는 양과 비교하였다. c. ELISA에 의해 평가된, 혈청 대 뇌 IL-12 양의 비율. ELISA는 IL-12Fc의 일반적인 척도로서 hIL-12를 측정하였다. 독립 표본 스튜던트 t-검정(unpaired Student's t-test). **p<0.005. 평균 ± SD.
도 2: IL-12Fc는 FcRn 매개 방식으로 뇌로부터 배출된다. a. 뇌종양 보유 wt 및 FcRntg 마우스에게 12.5 μg/kg/일의 뮤린 IL-12Fc를 종양 병변에 직접 전달하는 삼투 펌프를 이식하였다. 비드 기반 어레이를 사용하여 혈청에서 뮤린의 IL-12 수준을 측정하였다. 그룹 wt mIL-12Fc 대 FcRntg mIL-12Fc의 독립 표본 스튜던트 t-검정. 평균 ± SD. 터키(Tukey)의 다중 비교 검정을 사용한 일원 분산 분석(One way ANOVA). b. 도 2a에서와 같이 처리한 마우스. 비드 기반 어레이를 사용하여 혈청에서 측정한 바와 같이 처리 시작 24시간 후에 순환계에 존재하는 IL-12의 양. 평균 ± SD. c. 도 2a에서와 같이 처리된 마우스. 비드 기반 어레이를 사용하여 혈청에서 측정한 바와 같이 처리 시작 24시간 후에 순환계 내의 IFNγ의 수준. 평균 ± SD. D. 제7일에서의 IFN-γ 수준, A에서의 실험, 평균 ± SD.
도 3: 열 이동 분석을 사용하여 측정된 단백질 안정성. 단백질은 PBS(a) 또는 인공 뇌척수액(aCSF, b)에서 배양되었다. IL-12Fc 변이체당 5회 측정. 위스커(whisker)는 최소 및 최대 스프레드를 나타낸다.
도 4: IL-12Fc의 Fc 단편의 돌연변이는 IL-12의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는다. a. HEK-Blue™ IL-12 분석을 사용하여 측정한 IL-12의 생체 활성. EC50 - 0 내지 50 ng/ml 범위의 IL-12Fc로 자극된 HEK-Blue™ IL-12 리포터 세포로부터 최대 신호의 50%를 유도하는 효과적인 농도(농도당 2회 반복). 비색법을 이용하여 분비된 알칼리성 포스파타제의 활성을 이용하여 측정한다. 각각의 점은 독립적인 실험의 결과를 보여준다. 평균 ± SD. b. 100 ng/ml의 항-CD3 및 10 ng/ml의 재조합 IL-12, IL-12Fc WT 또는 감소된 FcRn 친화도에 대해 설계된 3개의 변이체로 1 h 동안 자극된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 내의 STAT-4 인산화. 평균 ± SD. c. 100 ng/ml의 항-CD3 및 나타낸 농도의 재조합 IL-12, IL-12Fc WT 또는 감소된 FcRn 친화도에 대해 설계된 3개의 변이체로 24 h 동안 PBMC에 의한 IFNγ의 생산.
도 5: 인간 IL-12Fc 변이체는 감소된 FcRn 친화도를 갖는다. a. 표면에 고정된 인간 재조합 FcRn 및 액상의 IL-12FC 변이체에 대한 FcRn 친화도의 표면 플라즈몬 공명(SPR) 측정. pH = 6.0에서 측정된 친화도. IL-12Fc WT로 정규화된 데이터. b. 인간 FcRn에 결합하는 IL-12Fc 변이체. pH = 6.0에서 ELISA에 의해 측정하였다. 평균 ± SD.
도 6. 혈액과 주사된 반구의 IL-12Fc의 농도 비율. a. 1 μg의 IL-12Fc WT 또는 NHQ 변이체를 FcRntg 마우스의 선조체에 주사하였다. 24시간 후, 주사된 뇌 반구 및 혈청에서 IL-12의 양을 ELISA에 의해 평가하고, 그들의 비율을 계산하고, IL-12Fc WT 그룹에 대한 비율로 정규화하였다. 그룹당 4마리의 마우스. 독립 표본 스튜던트 t-검정. *p<0.05. 평균 ± SD. b. 1 μg의 IL-12Fc WT, IAQ, AAA 또는 NHQ를 대류 강화 전달(CED)을 사용하여 FcRntg 마우스의 선조체에 주사하였다. 24시간 후, 주사된 뇌 반구 및 혈장에서 IL-12의 양을 ELISA에 의해 평가하고, 그들의 비율을 계산하고, IL-12Fc WT 그룹에 대한 비율로 정규화하였다. 그룹당 7-8마리의 마우스. 터키의 다중 비교 검정을 사용한 일원 분산 분석. 평균 ± SD.
도 7: IL-12Fc 변이체로 국소 처리 후 뇌 유지. FcRntg 마우스에게 대류 강화 전달(CED)을 사용하여 선조체에 1 μg의 IL-12Fc WT, IAQ, AAA 또는 NHQ를 주사하였다. 뇌 조직에 남아있는 IL-12Fc의 양은 주사 6시간 후에 ELISA에 의해 측정되었고, IL-12Fc WT로 정규화되었다. 터키의 다중 비교 검정을 사용한 일원 분산 분석. 이상치 제거. 평균 ± SD.
도 8: a. 천연 및 rmIL-12, mIL-12hIgG4 wt, mIL-12hIgG4 NHQ 및 mIL-12hIgG1:항-hPD-L1 NHQ의 개략적인 구조. b. HEK-Blue™ IL-12 분석을 사용하여 측정된 뮤린 IL-12 구축물의 생체 활성. 5 내지 8회의 희석 단계 사용하여 0 내지 50 ng/mL 범위의 IL-12 또는 IL-12Fc 변이체로 자극된 HEK-Blue™ 리포터 세포(농도당 2회 반복), 비색법을 이용하여 분비된 알칼리성 포스파타제의 활성을 이용하여 측정한다. X-축 값: pmol/ml 단위의 IL-12 분자의 상응하는 양으로 플롯팅된 농도. 두 개의 개별 실험을 대표한다. c. 전체 항-PD-L1(아테졸리주맙) 항체와 비교한, 세포 상의 PD-L1에 대한 결합. PD-L1 발현을 자극하기 위해 뮤린 인터페론-감마(IFNγ)로 자극되고 항-PD-L1 항체 또는 h/mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ 변이체로 염색된 GL-261:luc 또는 PD-L1 결핍 GL-261:luc(PD-L1 KO) 세포. 항-인간-IgG-PE 2차 항체를 사용한 세포 결합 항체의 검출. d. 표면 플라즈몬 공명(SPR)에 의해 측정된, WT와 비교한 NHQ 돌연변이된 변이체의 FcRn에 대한 친화도. 표면에 고정된 인간 재조합 FcRn 및 액상의 PD-L1 결합제. pH = 6에서 측정된 친화도. 친화도 상수 KD(nM).
도 9: 뇌암의 국소 처리를 위한 최적화된 IL-12Fc 융합은 처리 효과에 영향을 미치지 않으면서 전신 노출을 감소시킨다.
a. 종양 주사 후 일수의 실험 타임라인. GL-261:luc 뇌종양 보유 동물을 제20일에 생물발광 영상화(BLI)를 통해 비교 가능한 종양 부하의 처리 그룹에 체계적으로 할당하고, 종양 이식 후 제21일 및 제28일에 완충제 단독(대조군) 또는 1 μg의 rmIL-12, mIL-12hFc:항-PD-L1 이중기능성 분자, mIL-12hFc WT 또는 mIL-12hFc NHQ로 대류 강화 전달(CED)을 통해 처리하였다. 혈장에 대한 혈액 샘플링 시점: CED 주사 후 0, 6시간, 24시간, 72시간, 7일 및 제2 CED 주사 후 14일.
b. 생물발광 영상화에 의해 모니터링된 처리시의 종양 진행. 처리 코호트별로 그룹화된 개별 동물의 관심 영역(ROI)으로부터 플로팅된 평균 광속발산도(radiance)(p/s/cm2/sr). 점선 수직선으로 표시된 CED를 통한 처리.
c. 처리에 반응한 IL-12(검정색 선, 왼쪽 Y축) 및 IFNγ(회색 선, 오른쪽 Y축)의 혈장 수준. 비드 기반 사이토카인 어레이에 의해 주어진 시점에서 측정됨. 점선 수직선으로 표시된 CED를 통한 처리.
d. 제21일에 CED 6시간 후 혈장 IL-12 수준의 FcRn 친화도 의존적 차이. mIL-12hFc WT 및 mIL-12hFc NHQ를 주사한 마우스. a-c에 제시된 실험 데이터.
e. a-d에서 처리된 마우스의 생존에 대한 카플란-마이어(Kaplan-Meyer) 분석. 그룹당 6-7마리의 마우스.
도 10: 항체
a. 표면에 고정된 인간 재조합 FcRn 및 액상의 IgG1 변이체에 대한 FcRn 친화도의 표면 플라즈몬 공명(SPR) 측정. pH = 6.0에서 측정된 친화도. 비변형된 Fc(WT)를 갖는 IgG1 항체에 대해 정규화된 데이터. 비변형된 Fc 부분이 있는 3개의 추가의 IgG1 임상 등급 항체를 추가의 참조물(IgG1_01 이필리무맙, IgG1_02 아테졸리주맙, IgG1_03 리툭시맙)로서 사용하였다. 평균 ± SD.
b. 대류 강화 전달(Convection Enhanced Delivery, CED)을 사용하여 FcRntg 마우스의 선조체에 1 μg의 IgG1 WT, IAQ, AAA 또는 NHQ 변이체를 주사하였다. 24시간 후에, 주사된 뇌 반구 및 혈장에서 인간 IgG의 양을 ELISA에 의해 평가하고, 그들의 비율을 계산하고, IL-12Fc WT 그룹에 대한 비율로 정규화하였다. 그룹당 5마리의 마우스. 평균 ± SD.
c. 표면에 고정된 인간 재조합 FcRn 및 액상의 IgG4 변이체에 대한 FcRn 친화도의 표면 플라즈몬 공명(SPR) 측정. pH = 6.0에서 측정된 친화도. 비변형된 Fc(WT)를 갖는 IgG4 항체에 대해 정규화된 데이터. 변형되지 않은 Fc 부분이 있는 제2 IgG4 항체(니볼루맙)를 추가의 참조물(IgG4)로서 사용하였다. 평균 ± SD.
d. 대류 강화 전달(Convection Enhanced Delivery, CED)을 사용하여 FcRntg 마우스의 선조체에 1 μg의 IgG4 WT, IAQ, AAA 또는 NHQ 변이체를 주사하였다. 24시간 후에, 주사된 뇌 반구 및 혈장에서 인간 IgG의 양을 ELISA에 의해 평가하고, 그들의 비율을 계산하고, IL-12Fc WT 그룹에 대한 비율로 정규화하였다. 그룹당 5마리의 마우스. 평균 ± SD.
실시예 1: 물질 및 방법
동물
C57BL/6J 마우스는 챨스 리버(Charles River)로부터 입수하였다. mFcRn-/-hFcRntg32(FcRntg) 마우스는 더 잭슨 래보러토리(The Jackson Laboratory)(스톡 번호 014565)로부터 수득하였다. 모든 동물은 음식과 물이 임의로 제공되는 12시간 명암 주기에서 특정 병원체 부재(SPH) 조건 하에서 기관 지침에 따라 수용되었다. 모든 동물 실험은 기관 지침에 따라 수행되었으며, 스위스 주 수의 사무소(Swiss Cantonal Veterinary Office)(면허 번호 246/2015)의 승인을 받았다.
종양 세포주
GL-261 세포는 에이. 폰타나(A. Fontana, Experimental Immunology, University of Zurich, 스위스 쮜리히 소재)에서 제공했으며, 10% 열 불활성화된 송아지 태아 혈청 및 L-글루타민(모두 Thermo Fisher Scientific에서 제공됨)이 보충된 DMEM에서 배양하였다. 뮤린 GL-261 뇌종양 세포주(C57BL/6과 동계)를 pGI3-ctrl 및 pGK-Puro(Promega)로 안정적으로 형질감염시키고, 루시퍼라제 안정 GL-261 세포를 생성하기 위해 퓨로마이신(Sigma-Aldrich)으로 선택하였다. GL-261:luc PD-L1 KO 종양 세포를 생성하기 위해, 세포는 sgRNA, 즉 5'-GTATGGCAGCAACGTCACGA-3'를 발현하도록 변형된 스트렙토코커스 피오게네스(Streptococcus pyogenes) Cas9 P2A GFP - 단일 가이드 RNA(sgRNA) 발현 벡터(pX458; Addgene)로 일시적으로 형질감염되었다. 형질감염 3일 후에, GFP 양성, PD-L1 KO 세포를 IFN-γ 자극(10 ng/ml) 48시간 후에 PD-L1 음성 세포에 게이팅함으로써 유세포 분석에 의해 정제하였다. 단일 클론을 추가로 증폭하고, PD-L1 발현의 손실을 실험에 사용하기 전에 유세포 분석을 통해 재확인하였다.
수술 절차
신경교종 접종을 위해, 6-10주령의 마우스를 펜타닐(Helvepharm AG), 미다졸람(Roche Pharma AG) 및 메데토미딘(Orion Pharma AG)의 혼합물을 사용하여 마취하였다. GL261 세포는 정위 로봇(Neurostar)을 사용하여 우반구에서 두개 내로(i.c.) 주사되었다. 간단히 설명하면, 말단이 무딘 주사기(Hamilton; 75N, 26s/2"/2, 5 μl)를 정수리의 측면 1.5 mm 및 전면 1 mm의 위치에 배치하였다. 바늘을 경질막 표면 아래의 4 mm 깊이까지 두개 천공(burr hole) 내로 밀어넣고, 1 mm 후퇴시켜 작은 저장소를 형성하였다. 주사는 1 μl/min의 속도로 2 μl의 부피로 수행되었다. 바늘을 2분 동안 제자리에 둔 후, 1 mm/min으로 후퇴시켰다. 두개 천공을 뼈 지혈제(bone wax)(Aesculap, Braun)로 막고, 두피 상처는 조직 접착제(Indermil, Henkel)로 밀봉하였다. 플루마제닐(Labatec Pharma AG)과 부프레노르핀(Indivior Schweiz AG)의 혼합물을 사용하여 마취를 중단하고, 20분 후에 아티파메졸(Janssen)을 주사하였다. 카르프로펜(Pfizer AG)은 수술 전후 진통을 위해 사용하였다.
7 내지 14일 후, 삼투 펌프(모델 2004, 0.25 μl/h; Alzet)를 뮤린 IL-12Fc(12.5 μg/kg/24 h) 또는 PBS 단독으로 채우고, PBS에서 37℃에서 프라이밍하였다. 상기와 같이 마우스를 마취하고, 이전의 신경교종 주사의 두개 천공을 위치시키고, 뼈 지혈제 및 골막골을 제거하고, 두개 천공을 통해 주입 캐뉼러를 종양의 추정되는 중심 내로 3 mm 삽입하였다. 진공채혈기(Vacutainer) 관을 사용하고 제조업체의 지침(Becton, Dickinson and Company)에 따라 펌프 이식의 제-1일부터 시작하여 꼬리 정맥으로부터 혈액 샘플링에 의해 2일마다 혈청 샘플을 수집하였다.
볼러스 주사 후 IL-12 및 IL-12Fc WT 혈청 대 뇌 농도 비율의 비교를 위해, 마우스를 마취하고, 종양 세포 주사에 대해 위에서 설명한 바와 같은 정위 로봇(Neurostar)을 사용하여 마우스의 오른쪽 반구에 두개 내로 주사하였다. 마우스에게는 100 ng의 재조합 인간 IL-12(Prospec) 또는 등가량의 IL-12Fc(69 ng/마우스)를 투여하였다. 투여량은 HEK-Blue IL-12 생체 활성 분석을 기반으로 계산되었다. 24시간 후에 제어된 CO2 질식에 의해 동물을 희생시켰다. 심장 천자에 의해 혈액 샘플을 수집하고, 20 ml의 빙냉 PBS로 마우스를 관류시켰다. 혈청을 위에서 설명한 대로 분리하고, 뇌 조직을 액체 질소에서 급속 동결하였다.
볼러스 주사 후에 IL-12 WT 및 IL-12Fc NHQ 혈청 대 뇌 농도 비율의 비교를 위해, 마우스를 마취하고, 종양 세포 주사에 대해 위에서 설명한 정위 로봇(Neurostar)을 사용하여 마우스의 오른쪽 반구에 두개 내로 주사하였다. 마우스에게 1 μg의 인간 IL-12Fc WT 또는 IL-12Fc NHQ를 투여하였다. 24시간 후에 제어된 CO2 질식에 의해 동물을 희생시켰다. 심장 천자에 의해 혈액 샘플을 수집하고, 20 ml의 빙냉 PBS로 마우스를 관류시켰다. 혈청을 위에서 설명한 대로 분리하고, 뇌 조직을 액체 질소에서 급속 동결하였다.
뇌 내로의 단백질의 대류 강화 전달(CED)을 위해, 마우스를 마취하고, 정위 로봇(Neurostar) 및 내부 직경이 0.1 mm이고 벽 두께가 0.0325 mm인 용융 실리카로 만든 팁에 1 mm의 돌출부가 있는 27 G 무딘 말단 바늘을 사용하여 만든 카테터를 사용하여 오른쪽 반구에 두개 내로 주사하였다. 간단히 설명하면, 정수리의 전후방 1 mm, 중외측(mediolateral) 2 mm의 위치에 두개 천공을 만들었다. 카테터를 경질막 표면 아래 3.5 mm 깊이까지 두개 천공으로 밀어넣었다. 주사는 0.2 μl/min에서 5 μl의 부피로 수행한 다음, 0.5 μl/min에서 2 μl 및 0.8 μl/min에서 2 μl의 부피로 수행하였다. 바늘을 2분 동안 제자리에 둔 후, 1 mm/min으로 후퇴시켰다. 마우스에게 1 μg의 재조합 인간 IL-12Fc WT, IL-12Fc IAQ, IL-12Fc AAA, IL-12Fc NHQ 또는 rmIL-12, mIL-12hFc WT, mIL-12hFc HNQ, mIL-12hFc:PD-L1 NHQ, Flu HA3.1 WT, Flu HA3.1 IAQ, Flu HA3.1 AAA, Flu HA3.1 NHQ 또는 아테졸리주맙 WT, 아테졸리주맙 IAQ, 아테졸리주맙 AAA 또는 아테졸리주맙 NHQ를 투여하였다. 6시간 후에 제어된 CO2 질식에 의해 동물을 희생시켰다. 동측(ipsilateral) 뇌 반구는 액체 질소에서 급속 동결하였다.
생체내 생물발광 영상화
종양이 있는 마우스에게 d-루시페린(150 mg/kg 체중; XenoLight d-루시페린 칼륨 염; BioVision 7903-1G; PBS 중의 15 mg/mL)을 주사하였다. 동물을 제노겐(Xenogen) IVIS 루미나(Lumina) III(PerkinElmer) 영상화 시스템의 어두운 챔버로 옮기고, 발광을 중간 비닝(medium binning)(4)에서 1 내지 2분 동안 기록하였다. 데이터는 이후 리빙 이미지(Living Image) 4.7.1 소프트웨어(PerkinElmer)를 사용하여 분석하였다. 관심 있는 원형 영역(ROI; 직경 1.5 cm)은 종양 부위 주위에서 정의되었고, 이 영역의 광자 플럭스가 판독되고 플로팅되었다.
BLI 및 체계적인 그룹 할당
GL-261luc 신경교종 세포를 이식한 후 d20에, 종양 보유 동물을 동일한 평균 BLI의 실험 그룹에 할당하였다.
혈액 샘플링
혈액 샘플을 CED 주사 10분 전 또는 CED 주사 6시간, 24시간, 72시간, 7일 후에 채취하였다. 20 내지 50 uL의 혈액을 꼬리 정맥으로부터 건조된 K2-EDTA(Becton, Dickinson and Company)를 함유하는 마이크로테이너(microtainer) 내로 채취하였다. 10,000 g에서 5분 동안 원심분리한 후, 혈장을 새로운 튜브로 옮기고, 동결하였다.
FcRn ELISA
대조군으로 작용하는 IL-12FC 변이체 또는 재조합 인간 IgG4 항-GFP 항체(클론 515, AbD Serotec)를 마이크로웰 플레이트(Greiner Bio-One)에 코팅하였다. 히스티딘 커플링된 FcRn(R&D Systems)을 pH=6.0에서 ELISA 희석제(Mabtech)에서 증가하는 농도로 인큐베이션하였다. FcRn은 비오티닐화된 항-His-항체(클론 13/45/31-2, Dianova), 스트렙타비딘 커플링된 양고추냉이 퍼옥시다제(Mabtech) 및 비색 기질(Chromogen-TMB, Thermo Fisher Scientific)에 의해 검출되었다. 분광광도계(Molecular Devices)를 사용하여 파장 450 nm에서의 광학 밀도를 측정하였다.
비드 기반 사이토카인 어레이
mIL-12 및 mIFNγ의 혈청 수준은 제조사의 지시에 따라 레전드플렉스 마우스 염증 패널(Legendplex Mouse Inflammation Panel)(Biolegend)을 사용하여 측정되었다. 샘플은 LSRII 포르테싸(Fortessa)(Becton, Dickinson and Company)를 사용하여 획득하였다. 데이터 분석은 FlowJo 버전 10.6(Tree Star)을 사용하여 수행되었다.
HEK-Blue IL-12 생체 활성 분석
HEK-Blue IL-12 세포(InvivoGen)를 노르모신을 포함하는 배지(InvivoGen)에서 50,000개 세포/웰의 밀도로 평평 바닥 96웰 플레이트(Corning)에 플레이팅하였다. 세포를 17시간 동안 IL-12, IL-12Fc WT 또는 감소된 FcRn 친화도에 대해 설계된 3개의 변이체의 양을 증가시키면서 인큐베이션하였다. 배양 배지를 수집하고, Quanti-Blue 검출 시약(InvivoGen)의 존재 하에 2시간 동안 인큐베이션하였다. 흡광도는 탁상용 분광광도계(Molecular Devices)를 사용하여 640 nm에서 측정되었다.
뇌에 주사한 후 뇌, 혈장 및 혈청에서 인간 IL-12의 검출 및 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 계산
샘플을 0.05% Tween-20 및 0.1% BSA를 함유하는 PBS에 희석하고, IL-12 수준을 hIL-12p70(Mabtech)에 대한 ELISA에 의해 평가하였다. 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율을 계산하기 위해, 혈청 또는 혈장 내의 IL-12의 농도를 pg/ml 단위로 기재한 반면, 뇌 내의 농도는 단백질 추출 효능에 대해 보정된 뇌로부터 추출된 IL-12의 총량을 반구의 중량으로 나누어 계산하였다(pg/mg(뇌 조직)).
뇌에 주입한 후 뇌 및 혈장에서 인간 IgG의 검출 및 혈장 대 뇌 농도 비율의 계산
샘플을 0.05% Tween-20 및 0.1% BSA를 함유하는 PBS에 희석하고, IgG 수준을 ELISA에 의해 평가하였다. 간단히 설명하면, 플레이트는 0.05% Tween-20 및 0.1% BSA를 함유하는 PBS로 차단된 폴리클로날 당나귀 항-인간 IgG(Jackson ImmunoResearch)로 코팅되었다. 분석물은 폴리클로날 염소 항-인간 IgG(Sigma-Aldrich)로 검출되었고, 폴리클로날 당나귀 항-염소 HRP 접합 항체(Promega)와 함께 증폭되었다. 혈장 대 뇌 비율의 계산을 위해, 혈장 및 뇌 내의 인간 IgG 농도를 pg/ml로 표시하였다.
인간 IgG1 변이체, IgG4 변이체 hIL-12hFc:aPD-L1 NHQ 및 mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ의 생산.
IgG4 변이체는 일시적으로 형질감염된 인간 배아 신장(HEK) 세포 배양물에서 발현되었다. IgG1 변이체, hIL-12hFc:aPD-L1 NHQ 및 mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ는 일시적으로 형질감염된 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 또는 세포 배양물에 의해 생산되었다. 간단히 설명하면, 배양 상청액을 수집하고, 단백질을 친화도 크로마토그래피(단백질 G)에 의해 정제하였다. 단백질은 이온 교환(IEC) 및 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 추가로 정제되었다. 스핀 컬럼(Sartorius, 30 kDa 컷오프)을 사용하여 단백질을 농축하였다. 단백질을 20 mM 히스티딘, 150 mM NaCl, pH=6.0 완충제에 저장하였다. 품질은 겔 전기영동(SDS-PAGE), 이어서 표준 프로토콜에 따라 쿠마시 염색에 의해 평가되었다. 니볼루맙, 아테졸리주맙, 이필리무맙 및 리툭시맙은 상업적으로 이용 가능하다.
IL-12FC로 자극된 림프구에 의한 IFN-γ의 생산
인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 100 ng/ml의 항-CD3 항체의 존재 하에 감소된 FcRn 친화도를 갖는 IL-12, IL-12Fc 또는 IL-12Fc 변이체의 농도를 증가시키면서 24시간 동안 자극하였다. 상청액 내의 IFN-γ 수준은 제조사(Mabtech)의 지시에 따라 ELISA에 의해 측정되었다.
뇌 단백질 단리
안락사시키고, 두개관(skullcap)을 조심스럽게 제거한 후, 뇌를 분리하였다. 소뇌 및 후신경구(olfactory bulb)를 제거하고, 반구를 정중선을 따라 분리하고, 주사된(동측) 반구를 액체 질소에서 급속 동결하였다. Halt 프로테아제 억제제 칵테일(Thermo Fisher Scientific)을 함유하는 빙냉 용해 완충제(Cell signaling)에서 균질화하여 뇌 용해물을 제조하였다. 10 mg의 뇌 조직당 0.1 ml의 용해 완충제를 첨가하였다. 뇌 조직을 가위를 사용하여 잘게 썬 다음, 20 G 바늘에 통과시키고, 최종적으로 20초 동안 초음파 처리하였다. 샘플을 4℃에서 15000 g에서 10분 동안 회전시키고, 상청액을 새로운 튜브로 옮겼다. 단백질 농도는 피어스(Pierce) BCA 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 측정하였으며, 이 데이터는 각각의 실험 내에서 단백질 추출 효율을 보정하는 데 사용되었다.
단백질 발현 및 정제
모든 인간 및 뮤린 IL-12Fc 변이체는 HEK239T에서 발현되었다. 단백질 G 친화도를 유지하는 변이체는 단백질 G 세파로스(Biovision)를 사용한 친화도 크로마토그래피 및 PBS를 사용한 철야 투석에 의해 배양 상청액으로부터 정제되었다. 단백질 G 친화도를 상실한 변이체는 50% 포화 상태에서 황산암모늄(VI)으로 침전시킨 후, PBS로 침전물을 용해시키고, 세라믹 하이드록시아파타이트(CHT) 컬럼(유형 II, 40 μm Bio-Rad)으로 정제함으로써 정제하였다. 단백질 G 또는 CHT 크로마토그래피 후, 샘플을 AKTA 퓨어(Pure) 크로마토그래피 시스템(GE Healthcare)에서 디에틸아미노에탄올 연결된 세파로스를 음이온 교환체로서 사용하는 이온 교환 크로마토그래피(HiTrap DEAE 세파로스 FF 컬럼, GE Healthcare)에 의해 추가로 정제하였다. 마지막으로, 모든 IL-12Fc 변이체를 AKTA 크로마토그래피 시스템(GE Healthcare)에서 미리 충전된 수퍼로스(Superose) 6 컬럼(GE Healthcare)을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피를 통해 정제하였다. 이량체 분획은 30 kDa 컷오프(GE Healthcare)의 비바스핀(Vivaspin) 2 ml 스핀 컬럼을 사용하여 농축되었다. 단백질 순도는 SDS-PAGE 전기영동, 이어서 쿠마시 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue)(VWR Life Science)로 염색하여 검증되었다. 단백질 농도는 피어스 BCA 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하고 IL-12p70에 대한 ELISA(Becton, Dickinson and Company)를 사용하여 측정하였다.
IL-12FC로 자극된 림프구에 의한 STAT-4의 인산화
인간 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 100 ng/ml의 항-CD3의 존재 하에 감소된 FcRn 친화도를 갖는 10 ng/ml의 IL-12, IL-12Fc 또는 IL-12Fc 변이체로 1시간 동안 자극하였다. 그런 다음, 피어스 RIPA 완충제(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 세포를 용해시켰다. 샘플을 SDS-PAGE 전기영동에 적용한 후, 이이서 트랜스-블롯 터보 블로팅(Trans-Blot Turbo Blotting) 시스템(Bio-Rad Laboratories, Inc.)을 사용하여 옮기고, 항-STAT4 pY693(클론 38/p-Stat4, Becton, Dickinson and Company)으로 염색하여 분석하였다. 밴드 가시화는 ECL 투명 기판(Bio-Rad Laboratories, Inc.) 및 BioRad MPCD 이미저(Bio-Rad Laboratories, Inc.)에서의 검출을 사용하여 수행되었다.
표면 플라즈몬 공명
SPR은 ProteOn NLC 센서 칩 상에 인간 재조합 비오티닐화 FcRn(Immunitrack)을 약 80 응답 단위(RU)로 코팅하는 ProteOn XPR36 시스템(Bio-Rad Laboratories, Inc.)을 사용하여 수행하였다. 농도를 3배 단계로 729 nM으로부터 9 nM로 감소시키면서 IL-12Fc 변이체를 10 mM 시트르산나트륨 완충제(pH = 6.0)에서 이동시켰다. 해리 시간은 600 s이었다. 주사 시간에 대한 데이터 정규화, 스팟간(interspot) 배경 제거 및 내장 인공물 제거 기능을 사용하여 ProteOn 매니저(Manager) 소프트웨어(Bio-Rad Laboratories, Inc.)를 사용하여 분석을 수행하였다. Kd는 평형 분석 모델을 사용하여 계산되었다.
열 이동 분석
간단히 설명하면, 0.2 mg/ml의 단백질 샘플을 1:1000으로 희석된 시프로 오렌지(Sypro Orange) 단백질 염색(Sigma-Aldrich)과 혼합하고, 온도를 20℃로부터 95℃로 30초마다 0.2℃ 증가시키면서 CFX384 열순환기(Biorad)에서 이동시키고, 형광을 판독하였다. 변성 온도는 온도에 따른 형광의 1차 도함수로서 결정되었다. 실험은 PBS 및 인공 뇌척수액(aCSF; 125 mM NaCl, 26 mM NaHCO3, 1.25 mM NaH2PO3, 및 2.5 mM KCl)을 용매로서 사용하였다.
통계 분석
그래프패드 프리즘(Graphpad Prism) 5 소프트웨어를 사용하여 통계 분석을 수행하였다. 그러브(Grubb) 검정(49)에 따라 최종 분석으로부터 이상치를 제거하였다. 독립 표본 스튜던트 t-검정을 사용하여 두 그룹을 비교하였다. 터키의 다중 비교 검정과 함께 일원 분산 분석을 사용하여 2개 초과의 그룹을 비교하였다.
유세포 분석 PD-L1 결합 분석
GL261:lucE9 또는 GL261:lucE9:PD-L1KO 세포를 20 ng/mL의 최종 농도로 뮤린 인터페론-감마를 첨가하여 밤새 배양하였다. 다음날, 세포를 DPBS로 세척하였다. 트립신-EDTA(Invitrogen 25300-054)를 플라스크에 첨가하고, 즉시 다시 제거하였다. 세포를 2-5분 동안 플라스크에서 분리되도록 두었다. 세포를 배양 배지로 세척하고, 350 x g에서 4℃에서 5분 동안 원심분리하였다. 이어서, 세포를 웰당 100,000개의 세포로 둥근 바닥 96웰 플레이트에 플레이팅하고, DPBS로 2회 세척하였다.
1:200으로 희석된 좀비 아쿠아(Zombie Aqua) 고정 가능 생존력 키트(BioLegend) 및 0.1 mg/mL의 최종 농도의 m/hIL-12hFc:aPD-L1 NHQ 또는 인간 항-PD-L1(아테졸리주맙)을 포함하는 웰당 25 μL의 PBS에서 염색을 수행하였다. 세포를 암실에서 4℃에서 20분 동안 염색하였다. PBS를 사용한 세척 단계 후에, 세포를 4℃에서 암실에서 30분 동안 PBS 중의 0.2 mg/mL의 이차 항체 항-인간 IgG-Fc-PE(Biolegend, 카탈로그 번호 409304, 로트 B260868) 또는 항-마우스-PD-L1-BV421(Biolegend, 카탈로그 번호 124315, 로트 B228149) 대조군 항체(데이터는 표시되지 않음)와 함께 인큐베이션하였다. 세포를 PBS로 2회 세척하고, 40 μm 메쉬를 통해 여과하고, LSRII 포르테싸 유세포 분석기(BD)를 사용하여 획득하였다. 데이터 분석은 FlowJo 버전 10.6(Tree Star)을 사용하여 수행하였다.
생존 분석
종양이 있는 동물의 신경학적 증상을 검사하고, 종양 세포 이식 후 제21일까지 매주 체중을 측정하였다. 제21일로부터, 모니터링 빈도를 일일 검사 및 주간 생물발광 영상화(BLI)으로 늘렸다. 주 정부의 수의 당국에 따라 사전 정의된 철회 기준(최대 체중의 20% 이상의 체중 감소 및/또는 빈사 상태)(ZH 194/19)에 도달하면, 제어된 CO2 질식을 통해 동물을 안락사시켰다.
실시예 2: 인간 IL-12의 두개내 주사는 hIL-12Fc보다 더 높은 전신 누출을 보인다.
뇌종양의 국소 치료를 위한 IL-12FC는 매우 유망하다. 그러나, 임상 시험에 사용하려면, 유사한 특성을 나타내야 하는 인간 버전의 IL-12Fc가 필요하다. 뮤린 IL-12IgG3에 대한 인간 유사체를 얻기 위해, 본 발명자들은 단일 사슬 인간 IL-12를 인간 면역글로불린 G4(hIgG4)의 결정화 가능 단편(Fc)에 융합시켰다(도 1a). mIgG3과 유사하게, hIgG4는 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 지원하지 않으며, 보체 시스템을 활성화하지 않는다. 인간 IL-12Fc(hIL-12Fc) 대 재조합 인간 IL-12(rhIL-12)의 누출 및 안정성을 시험하기 위해, 본 발명자들은 뮤린 FcRn 결핍 배경(FcRntg) 상에서 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스의 선조체에 단일 볼러스를 주사하였다([Postow et al., 2015, N Engl J Med 372:2006-2017]; [Kamran et al., 2016, Expert Opin Biol Ther 16:1245-1264]). 24시간 후, 본 발명자들은 동측 반구의 용해물 및 혈청 내의 인간 IL-12의 농도를 분석하여 주사 부위에서의 안정성 및 보유(잔류 농도) 및 혈류 내로의 누출 속도에 대해 더 알아보았다(도 1b). 각각의 마우스에 대해, 본 발명자들은 조직 보유에 대한 추정치로서 혈청내 농도 대 주사 부위에서의 농도의 비율을 계산하였다. 혈청 수준을 주사 부위의 국소 농도와 비교함으로써, hIL-12Fc는 본 발명자들이 상당히 더 낮은 비율을 관찰한 바와 같이 rhIL-12보다 우수한 조직 보유를 나타내었다(도 1c). 국소 GB 치료의 경우, 인간 IL-12Fc 융합 사이토카인은 그의 보다 높은 조직 보유, 안정성 및 용해도에 의해 그의 천연 대응물에 비해 우수한 화합물인 것으로 보이다.
실시예 3: FcRn 결합은 IL-12Fc의 전신 축적을 유도한다.
내피 세포 및 적수 대식세포(red pulp macrophage)의 신생아 Fc 수용체(FcRn) 기반 엔도솜 재순환 시스템은 IgG의 빠른 분해 및 제거를 방지한다. 엔도솜의 산성 pH에 의해 촉진되는 음세포작용 후에, FcRn은 IgG에 결합하고, 중성 pH가 그의 방출을 유도하는 세포 표면으로 이를 재순환시킨다. 국소 주사되면, IL-12Fc는 그의 Fc 태그로 인해 FcRn 매개 방식으로 뇌로부터 누출될 수 있다. 뇌로부터 누출되면, IL-12Fc 혈청이 축적되고, 궁극적으로 독성 수준에 도달할 수 있다. FcRn 기반 재순환이 실제로 혈청에서 hIL-12Fc의 축적을 촉진하는지의 여부를 시험하기 위해, 본 발명자들은 뮤린 FcRn 결핍 배경(FcRntg) 상에서 인간 FcRn을 발현하는 트랜스제닉 마우스를 이용하였다. 인간 FcRn은 뮤린 IgG에 대한 친화도가 약하지만 정상적인 알부민 재순환을 촉진하기 때문에, 상기 마우스 모델에서는 뮤린 IgG 재순환만이 손상된다. 따라서, 뮤린 IL-12Fc는 이들 FcRn 인간화 마우스에서 FcRn에 상당히 덜 결합해야 한다. 따라서, 본 발명자들은 삼투 미니펌프를 통해 국소 뮤린 IL-12Fc로 처리된 신경교종 보유 야생형(wt) 및 FcRntg 마우스의 혈청 mIL-12 수준을 비교하였다. 실제로, 일주일 후에 본 발명자들은 FcRntg 마우스에서는 덜 두드러진 IL-12 수준의 증가(도 2a), 이어서 IFN-g 수준의 증가(도 2d)를 wt 마우스에서 관찰하였다. 본 발명자들은 심지어 펌프 이식 후 제1일의 이른 시기에 일부 마우스의 혈청에서 IL-12의 수준 상승을 관찰하였다(도 2b). 결과적으로, 이것은 wt 마우스에서 IFN-γ 혈청 수준의 현저한 증가를 초래하였고, 이것은 FcRntg 코호트의 경우에는 그렇지 않았다(도 2c). 뮤린 IL-12Fc와 유사하게, 인간의 IL-12Fc도 역시 누출되고 축적되어 전신 부작용에 대한 위협을 제시할 것이다. 더욱이, IFN-γ는 IL-12 관련 부작용의 주요 매개인자 중 하나이며(Leonard et al., 1997, Blood 90:2541-2548), 그의 지속적인 전신 존재는 독성이 있을 수 있다(Weiss et al., 2007, Expert Opin Biol Ther 7: 1705-1721). 이런 사실을 함께 고려하여, 본 발명자들은 심지어 처리 부위로부터 미량의 IL-12Fc가 누출될 경우에도 검출 가능한 혈청 IFN-γ 수준을 촉발하기에는 충분하다고 결론내렸다.
실시예 4: 개선된 조직 보유를 위해 설계된 인간 IL-12Fc 변이체의 생성
감소된 FcRn 결합이 잠재적으로 뇌로부터의 배출을 중단시키고 뇌 밖으로의 누출시에 재순환을 극적으로 감소시킨다는 관찰은 hIL-12Fc의 안전 한계를 증가시키기 위해 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명자들은 인간 FcRn에 대한 hIL-12Fc의 Fc 부분의 결합을 감소시키는 데 착수했다. Fc 부분의 FcRn 결합 계면에서 양전하를 증가시킴으로써, 산성 pH에서의 이러한 상호작용, 따라서 재순환이 중단될 수 있으며, 이는 면역글로불린의 혈청 반감기를 감소시키는 것으로 나타났다. 본 발명자들은 누출의 경우 그의 혈청 반감기를 감소시킬 목적으로 hIL-12Fc의 FcRn 결합 부위에서 다수의 돌연변이를 hIL-12Fc에 도입하였다(표 1).
본 발명자들은 IAQ, AHH 및 AAA라고 불리는 감소된 FcRn 친화도를 갖는 이전에 공개된 항체와 유사한 돌연변이를 갖는 3개의 IL-12Fc 변이체를 생성하였다. 또한, 본 발명자들은 위치 253의 이소류신을 측쇄의 단순 단축을 나타내는 알라닌으로 치환하는 것이 아니라, 아스파라긴으로 치환(I253N)하였다. 아스파라긴은 그의 측쇄가 이소류신과 유사한 길이를 갖는 극성 아미노산이다. 본 발명자들은 또한 위치 310에서 히스티딘을 알라닌으로, 위치 435에서 글루타민, 알라닌 또는 글루탐산으로 변형하였다.
모든 변이체는 인간 배아 신장 293T 세포(HEK293T) 배양물에서 발현되었다. 모든 변이체에 대한 발현 수준은 유사하였다.
실시예 5: 인간 IL-12Fc 변이체는 유사한 단백질 안정성을 갖는다.
먼저, 본 발명자들은 Fc에 도입된 변화가 전체 단백질 안정성에 영향을 미치는지 검증하였다. 이를 위해, 본 발명자들은 PBS뿐만 아니라 인공 뇌척수액(aCSF)에서 수행된 열 이동 분석에서 변이체 각각에 대한 변성 온도를 측정하였다. 모든 변이체에 대한 변성 온도는 약 60℃에서 진동하였다(도 3a). aCSF에서 수행된 측정은 전체 변성 온도가 약 57℃로 더 낮았지만, 모든 변이체가 유사한 안정성을 가지고 있음을 확인해 주었다(도 3b).
실시예 6: 인간 IL-12Fc 변이체는 생물학적 활성을 유지한다.
본 발명자들은 FcRn에 대한 hIL-12Fc의 결합을 감소시키는 것을 목표로 하였지만, 본 발명자들은 이러한 변화가 IL-12의 생물학적 활성에 영향을 미친다는 것을 배제할 수 없었다. 이것은 IL-12 신호전달 성분 및 비색 반응을 촉매하는 하류의 효소로 안정적으로 형질감염된 HEK 세포주를 사용하여 먼저 시험되었다. NAQ 변이체만이 IL-12Fc에 비해 약 2x 감소된 활성을 보인 반면, 다른 모든 변이체는 IL-12Fc WT 범위의 EC50을 가졌다(도 4a). 중요하게는, IL-12Fc는 rL-12와 대등한 시험관내 활성을 가졌다.
IL-12Fc 변이체의 활성을 추가로 검증하기 위해, 본 발명자들은 3가지의 상이한 hIL-12Fc 변이체, 즉 IAQ, AHQ 및 NHQ를 사용하여 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)의 활성화를 수행한 후, STAT-4 인산화 분석을 수행하였다(도 4b). 보다 중요하게는, 상기 STAT-4 인산화는 24시간 후에 IFN-γ의 강력한 생산으로 번역되었으며(도 4c), 이것은 모든 변이체가 rhIL-12의 활성을 유지했음을 나타낸다.
실시예 7: 인간 IL-12Fc 변이체는 단백질 G에 대한 결합이 상이하다.
단백질 A 및 G 친화도 크로마토그래피는 재조합 항체 및 Fc-융합 단백질의 정제에 사용되는 표준 방법 중 하나이다. Fc와 FcRn 사이의 계면을 변형하는 것은 단백질 A 결합을 제거하는 것으로 알려져 있으며, 이것은 본 발명자들이 또한 IL-12Fc 변이체를 사용하여 확인하였다. 대규모 공정에서 생산 가능성을 확인하기 위해, 본 발명자들은 단백질 G 친화도 컬럼을 통해 IL-12Fc 변이체를 정제할 가능성을 검증하기로 결정하였다. 본 발명자들의 변이체의 대부분은 단백질 G에 대한 친화도를 유지했지만, 본 발명자들은 놀랍게도 H310A 돌연변이와 함께 I253N을 모두 함유하는 모든 변이체가 단백질 G 정제에 적합하지 않았다(표 2). 이 효과는 위치 435에 대한 추가의 돌연변이와 무관하였다. 추가의 연구를 위해, 본 발명자들은 단백질 G 친화도를 보유하는 변이체에 대해 주의를 집중하였다.
실시예 8: 인간 IL-12Fc 변이체는 감소된 FcRn 친화도를 갖는다.
FcRn에 대한 IL-12Fc 변이체의 친화도를 검증하기 위해, 본 발명자들은 단백질-단백질 상호작용을 특성화하기 위한 무표지 방법인 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하였다. 본 발명자들은 인간 FcRn을 고정하고, 다양한 농도에서 리소솜 pH 범위(pH = 6.0)에서 IL-12Fc 변이체의 결합을 측정하였다(43). 도 5a에 나타낸 바와 같이, 대부분의 변형된 IL-12Fc 변이체는 인간 FcRn에 대한 친화도를 낮추었으며, NHQ 변이체는 가장 강한 감소(약 8x 더 낮음)를 나타냈다. 본 발명자들은 상업적으로 입수가능한 인간 모노클로날 항-GFP IgG4 항체를 대조군으로 사용하였다.
또한, 본 발명자들은 IL-12FC WT, 항-GFP IgG4 및 공개된 변이체 IAQ를 참조물로 사용하여 NHQ 구축물에 대한 ELISA 데이터로 이들 데이터를 확증하였다. IAQ와 NHQ는 모두 감소된 결합을 보였고, NHQ의 친화도가 가장 낮았다(도 5b). 따라서, 본 발명자들은 NHQ 치환 조합이 FcRn에 대한 결합을 가장 극적으로 감소시키는 것으로 보인다고 결론지었다. 이것은 조합된 돌연변이 H310A 및 H435Q가 낮은 pH에서 FcRn에 대한 결합의 가장 강력한 감소에 대한 책임이 있다고 제안한 케나노바(Kenanova) 및 동료(Kenanova et al., 2005, Cancer Research 65:622-631)의 결과와 대조적인 것이다.
실시예 9: NHQ 돌연변이의 도입은 국소 전달된 hIL-12Fc에 대한 전신 노출을 감소시킨다.
본 발명자들은 FcRn 친화도를 감소시키는 것이 CNS에서 hIL-12Fc의 보유를 증가시키고 동시에 그의 전신 축적을 억제할 것이라는 가설을 세웠다. 이는 hIL-12Fc WT와 재조합 인간 IL-12의 비교와 유사한 방식으로 해결되었다(도 1b). FcRntg 마우스에게 1 μg의 IL-12Fc WT 또는 NHQ 변이체를 단일 용량으로 주사하고, IL-12를 동측 뇌 반구 및 혈청에서 ELISA에 의해 측정하였다. NHQ 변이체가 주사된 마우스는 hIL-12Fc WT를 주사한 마우스와 비교하여 낮은 혈청 대 뇌 비율을 나타내었다(도 6a). 본 발명자들은 이것이 FcRn 매개 재순환으로 인한 감소된 전신 축적뿐만 아니라 CNS에서의 증가된 체류의 효과일 수 있다고 가정한다.
또한, 볼러스 주사 대신 CED를 사용하여, 본 발명자들은 CED 24시간 후에 주사된 반구 및 혈장 내의 hIL-12Fc WT, IAQ, AAA 및 NHQ의 농도를 비교하고, NHQ 변이체가 또한 볼러스 주사와 비교하여 최적화된 전달 설정에서 가장 유의하게 감소된 혈장 대 뇌 비율을 나타내는 것을 관찰하였다(도 6b). 감소된 전신 노출과 결합된 이러한 증가된 CNS 보유는 국소 IL-12Fc 요법의 안전성 프로파일을 잠재적으로 개선할 수 있다.
실시예 10: IL-12Fc 변이체 NHQ는 다른 저친화도 변이체보다 더 높은 뇌 조직 보유력을 갖는다.
마지막으로, 본 발명자들은 단백질의 두개내 전달 후의 조직 보유를 측정하였다. 이를 위해, 본 발명자들은 1 μg의 비변형된 IL-12Fc WT, FcRn 친화도가 감소된 이전에 공개된 2개의 변이체, 즉 IAQ 및 AAA, 및 본 발명자들의 측정에 따라 가장 낮은 FcRn 친화도를 갖는 변이체인 NHQ를 주사하였다(도 5a). 뇌 반구의 최대 관류를 보장하기 위해, 단백질 용액의 볼러스 주사 대신에, 본 발명자들은 스텝 카테터 및 램프업(ramp-up) 주사 요법과 함께 CED 프로토콜을 사용하였다. 대부분의 생리학적 환경에서 FcRn 결합 계면에서 상이한 변형의 효과를 연구하기 위해, 본 발명자들은 FcRntg 마우스를 사용하였다. 앞서 논의한 바와 같이, FcRn은 CNS로부터의 배출과 혈청 내의 Fc 함유 분자의 축적 둘 모두에 중요하다. 두 효과를 분리하고 CNS로부터의 수송을 방지하는 데에만 초점을 맞추려는 시도에서, 본 발명자들은 CED 6시간 후에 뇌에 남아 있는 단백질의 양을 측정하였다. 마우스를 안락사시키고, PBS로 관류시키고, 동측 반구의 총 단백질을 단리하고, hIL-12를 ELISA에 의해 측정하였다. 도 7에 도시된 바와 같이, IL-12Fc NHQ는 IL-12Fc WT에 비해 우수한 조직 보유력을 갖는다. 중요하게도, 상기 변이체는 또한 FcRn 친화도가 감소된 다른 두 변이체, 즉 IAQ 및 AAA보다 우수하였다. 놀랍게도, IAQ 및 AAA는 IL-12Fc WT와 크게 상이하지 않았다.
실시예 11: 생체 내에서의 항종양 효과
인간 IL-12는 뮤린 IL-12 수용체와 교차 반응이 그다지 좋지 않다. 이것은 뮤린 모델에서 생체 내에서의 항종양 효과를 연구하기 위해서는 대리 분자를 사용해야 한다는 것을 의미한다. FcRn에 대해 감소된 친화도의 효과를 시험하기 위해, 본 발명자들은 단일쇄 뮤린 IL-12를 hIL-12Fc에 대한 것과 동일한 인간 IgG4 Fc에 융합시켰다(도 8a).
IL-12는 T 세포 및 NK 세포와 같은 표적 세포에서 IFNγ의 발현을 유도한다(Tugues et al., Cell death and differentiation (2015), 22:237-246)). IFNγ는 다시 적응 내성이라고 불리는 과정에서 골수계 세포 및 종양 세포에 대한 PD-L1의 상향조절을 초래할 수 있다(O'Rourke et al., Sci. Transl. Med. (2017), (9), eaaa0984). 따라서, 본 발명자들은 PD-L1이 IL-12 조직 보유를 추가로 증가시키는 유도된 앵커로서 작용할 것이라고 추론하였다.
국소 적용된 항-PD-L1 항체 요법과 조합된 IL-12Fc의 효능을 평가하기 위해, 이중특이적 Fc-융합 분자를 생성하였다. 이는 mIL-12hFc를 NHQ 돌연변이를 포함하는 hIgG1 Fc를 갖는 항-PD-L1 1/2 항체와 조합한다. 놉-인투-홀(knobs-into-holes) 방법이 이종이량체 중쇄 조립에 사용되었다(Ridgway et al., Protein Eng (1996), 9:617-621). 항-PD-L1 1/2 분자는 임상적으로 승인된 항체인 아테졸리주맙으로부터 유래되었으며, 뮤린 및 인간 PD-L1과 교차반응성을 나타낸다(US 8217149 B2)(도 8a).
본 발명자들은 시험관 내에서 mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ 분자의 생체 활성을 확인하였다: IL-12 기능을 위해, IL-12에 민감한 리포터 세포주가 사용되었으며, IL-12는 분비된 알칼리성 포스파타제를 유도하고, 이는 다시 비색 반응을 촉매한다(도 8b). 세포에 결합된 PD-L1에 대한 결합은 세포의 표면 상의 PD-L1에 대한 이종이량체 이중기능성 구축물의 결합을 검출하기 위해 유세포 분석에 의해 확인되었다(도 8c). 이중기능성 이종이량체 구축물은 그의 CH2 및 CH3 도메인에 NHQ 변이체를 보유하고, 따라서 표면 플라즈몬 공명 및 비변형된 항-PD-L1 항체와 비교하여 비교적 높은 KD 값에 의해 확인된 바와 같이 FcRn 결합이 제거된다(도 8d).
시험관내 특성화에 이어, 본 발명자들은 생체 내에서 그의 특성을 계속 측정하였다. 뮤린 신경교종 모델 GL-261을 사용하여, 항종양 효과 및 전신 분포를 생체 내에서 모니터링하였다. 간단히 설명하면, 종양이 있는 마우스에게 rmIL-12, mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ, mIL-12hFc WT 또는 NHQ 또는 비히클 대조군(완충제 단독 주사)을 CED를 통해 두개 내로 2회 주사하였다(도 9a). 종양 크기의 변화는 생물발광 영상화를 사용하여 모니터링되었고, 임상적 영향은 임상 점수를 통해 모니터링되었다(도 9b). CED시의 누출 및 배출을 평가하기 위해, 전신 IL-12 및 IFNγ 수준을 다양한 시점에서 혈장에서 측정하였다(도 9c). rmIL-12 또는 mIL-12hFc wt를 투여한 동물은 CED시에 전신 IL-12 신호의 급격한 증가, 바로 이어서 IFNγ의 급격한 증가를 나타낸 반면, mIL-12hFc NHQ 또는 mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ를 투여한 동물은 크게 감소된 전신 IL-12 신호(기준선으로 빠르게 복귀함)를 보였고, IFNγ 신호를 현저하게 감소시켰다(도 9c). CED1 6시간 후에 mIL-12hFc wt와 mIL-12hFc NHQ 사이의 조직 보유의 차이는 보다 낮은 전신 IL-12 신호를 유도하였다(도 9d). 처리된 동물의 임상 경과와 관련하여, IL-12 구축물을 투여받은 모든 그룹은 종양 접종 3주 후에 질환이 많이 진행되었을 때 개입 시점이 예외적으로 늦은 경우에도 대조군 그룹에 비해 생존에서 현저한 증가를 나타냈다(도 9e). 흥미롭게도, NHQ 구축물(mIL-12hFc NHQ 또는 mIL-12hFc:aPD-L1 NHQ)을 투여받은 그룹의 치료 반응은 mIL-12hFc wt 또는 rmIL-12를 투여받은 그룹과 비교할 때 치료에 대해 적어도 동등하게 잘 반응하지만, 크게 감소된 전신 IL-12 및 IFNγ를 보여주었다.
실시예 12: hFcRn에 대한 IL-12Fc 및 IgG 변이체의 친화도 측정
CNS로의 국소 전달시에 혈장 대 뇌 비율에 유리하게 영향을 미치는 것에 대한 낮은 FcRn 친화도의 영향을 추가로 평가하기 위해, IAQ, AAA 및 NHQ 변이체를 비변형 항체와 비교하였다(도 10). 본 발명자들은 PD-L1에 대해 작용하는 인간 IgG1(도 10a 및 도 10b, 아테졸리주맙), 및 인간 항-인플루엔자 A IgG4 항체(도 10c 및 도 10d, Flu HA3.1, US2014/0370032A1)을 선택하였다. hIL-12Fc가 기능적이며 rhIL-12보다 더 높은 조직 보유력을 가지며 누출시에 전신 재순환의 제거가 안전 한계를 증가시킬 수 있다는 발견은 임의의 Fc 함유 분자의 국소 투여에 잠재적으로 광범위한 의미를 갖는다. 이러한 변형은 신경계 질환의 국소 치료를 위한 임의의 항체 또는 Fc-융합 분자의 효과적인 국소 전달을 가능하게 한다.
전신 경로(os 또는 i.v.)를 통해 CNS 내로 치료제를 투여하는 것은 주로 BBB로 인해 간단하지 않은 문제이며, 신체의 나머지 부분과 비교하여 현재의 치료제 중 일부만이 실제로 뇌에 도달한다. 불행히도, 항체 및 Fc 함유 생물학적 제제, 특히 Fc-융합 단백질은 BBB를 쉽게 통과하지 못하고, 또한 활발하게 배출된다. BBB를 통해 뇌 실질로 항체를 수송하는 것을 가능하게 하는 것은 예를 들어 트랜스페린의 수용체 매개 트랜스사이토시스를 이용함으로써 광범위하게 연구되고 있다. 사이토카인은 순환 반감기가 짧고, 부작용의 위험이 높아 그의 치료 기회 범위를 좁게 만든다. 사이토카인은 그가 축적되는 종양으로 귀소하는 항체, 특히 NHS-IL-12에 연결될 수 있다. 피하 투여 후에도, 이러한 항체는 혈류를 통해 종양으로 이동할 때 IFNγ 반응을 유도한다. 처음에는 비뇌암 치료를 위해 IL-12의 전신 전달을 평가하였다. 그러나, 이러한 임상 시험은 유효 용량에서 정맥 투여가 사망을 포함한 심각한 부작용을 초래했기 때문에 조기에 종료되어야 하였다. 주된 이유 중의 하나는 IL-12에 의한 IFNγ의 유도인 것으로 보인다.
단백질 치료제의 혈청 반감기 및 용해도는 항체의 결정화 가능 단편(Fc)과 치료 모이어티의 직접적인 융합에 의해 개선될 수 있다. 해부학적으로 별개의 위치에 직접 국소 적용하는 경우, 이는 덜 바람직한 효과로 이어질 수도 있다. 이들 중 하나는 해부학적 면역 특권 부위(immune privileged anatomical site), 특히 뇌로부터 Fc 함유 분자의 FcRn 매개 배출 및 IgG 재순환과 유사한 이들의 혈청 축적일 수 있다.
본 발명자들은 뇌 내로의 IL-12Fc 융합 사이토카인의 국소 투여가 BBB를 통해 순환계 내로의 IL-12Fc의 FcRn 의존적 배출을 촉발한다는 것을 관찰하였다. IL-12Fc는 혈액에 축적되어 잠재적으로 위험한 IFNγ 생성을 촉발한다.
본 발명자들은 감소된 FcRn 친화도를 갖는 IL-12Fc가 기능적이며, 비변형 IL-12Fc뿐만 아니라 재조합 IL-12보다 더 높은 조직 보유력을 갖는다는 것을 발견하였다. 뇌 조직 보유 실험에서 비교했을 때, NHQ 돌연변이체는 IL-12Fc WT에 비해 개선된 보유력을 갖는 유일한 것이었다. 놀랍게도, FcRn 결합이 극적으로 감소된 것으로 보고된 두 가지 변이체, 즉 IAQ 및 AAA는 비변형 IL-12Fc와 다르지 않았으며, 이는 생물학적 차이를 얻기 위해서는 FcRn 친화도가 주어진 임계값 초과로 감소해야 하며, 이는 NHQ 변형만이 도달한다는 것을 시사한다. 또는 NHQ 돌연변이가 FcRn과 무관한 방식으로 조직 보유력을 개선하는 다른 특징을 도입한다는 것을 배제할 수 없다.
이것은 개선된 안전성 프로파일로 해석되고, 뇌종양의 IL-12Fc 치료를 위한 치료 창을 확장한다. 더욱이, 본 발명자들의 발견은 국소 두개내 투여에 대한 강력한 근거가 있는 임의의 Fc 함유 치료제, 주로 치료 항체로 해석될 수 있다. 이러한 적용 경로는 전신적으로 주어질 때 약한 효능, 잠재적으로 BBB를 통한 불량한 통과 효과 때문에, 또는 원하는 치료 효과가 국소적으로 포함되어야 하기 때문에 선호될 것이다. 이러한 전달에 최적화된 생물학적 제제를 사용한 국소 요법은 전신 독성을 배제하고 따라서 약물의 안전성 프로파일을 개선해야 한다.
Figure pct00003
Figure pct00004
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조합된 이중특이적 분자는 다음 서열로서 설명되는 분자로 이루어질 수 있다: 서열 번호 15와 서열 번호 21, 서열 번호 16과 서열 번호 21, 서열 번호 17과 서열 번호 22, 서열 번호 18과 서열 번호 22, 서열 번호 17과 서열 번호 23 및 서열 번호 24, 서열 번호 18과 서열 번호 23 및 서열 번호 24, 서열 번호 19와 서열 번호 22, 서열 번호 20은 서열 번호 22, 서열 번호 19와 서열 번호 23 및 서열 번호 24, 서열 번호 20과 서열 번호 23 및 서열 번호 24.
항목
1. 의약으로서 사용(의약에 사용)하기 위한, IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는 폴리펩타이드로서,
상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 갖고,
상기 폴리펩타이드는 질환에 의해 영향을 받는 조직에 국소 투여에 의해 전달되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
2. 항목 1에 있어서, 폴리펩타이드가
- 두개내 투여
- 척수강내 투여 또는
- 안내 투여
에 의해 전달되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
3. 항목 1 또는 항목 2에 있어서, 폴리펩타이드가 두개내 투여에 의해 투여되고, 상기 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율이 미리 결정된 임계값 미만이고, 상기 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 선조체 내로의 두개내 볼러스 주사 24시간 후에 측정 가능한, 다음으로부터 선택되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 2/3, 또는
b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/8.
4. 항목 1 내지 항목 3 중 어느 한 항목에 있어서, 폴리펩타이드가 뇌실내 또는 척수강내 투여에 의해 투여되고, 상기 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 CSF 농도 비율이 미리 결정된 임계값 미만이고, 상기 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 뇌실내 또는 척수강내 주사 24시간 후에 측정 가능한, 다음으로부터 선택되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 CSF 농도 비율의 최대 2/3, 또는
b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 CSF 농도 비율의 최대 1/8.
5. 항목 1 내지 항목 4 중 어느 한 항목에 있어서, FcRn에 대한 상기 폴리펩타이드의 상기 감소된 친화도가 다음으로부터 선택되는 해리 상수(KD)를 특징으로 하는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x, 특히 적어도 3x, 보다 특히 적어도 4x, 훨씬 보다 특히 적어도 5x 증가된 해리 상수(KD), 및
b. 상이하게 변형된 Fc 영역, 즉 IAQ(돌연변이 H310A 및 H435Q 보유) 및 AAA(돌연변이 I253A, H310A 및 H435A 보유)로부터 선택되는 하나의 돌연변이체를 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 1.5x, 특히 적어도 2x 증가된 KD.
6. 항목 1 내지 항목 5 중 어느 한 항목에 있어서, 두개내 전달이 다음으로부터 선택되는 방법에 의해 수행되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. 대류 강화 전달(CED)을 포함하는 단일, 간헐적 또는 연속적 국소 주입,
b. 척수강내 투여,
c. 상기 폴리펩타이드의 계내 생산,
d. 이식된 서방성 제제로부터의 방출,
e. CNS 내로의 분자 수송,
f. CNS 내로의 세포 수송, 또는
g. 비강내 적용 후 CNS로의 수송.
7. 항목 1 내지 항목 6 중 어느 한 항목에 있어서, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
8. 항목 7에 있어서, 중추신경계에 발병하는 상기 질환은 악성 질환, 특히 신경교종, 보다 특히는 고등급 신경교종(HGG)인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
9. 항목 1 내지 항목 8 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 Fc 영역, 또는 인간 아미노산 서열을 포함하는 키메라 Fc 영역이고, 위치 253에서의 돌연변이, 특히 I253A 또는 I253N, 보다 특히 I253N을 갖는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
10. 항목 9에 있어서, 상기 Fc 영역은 위치 310에 돌연변이를 갖지 않는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
11. 항목 1 내지 항목 10 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 다음을 포함하는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
- 돌연변이 H310A 및 H435Q(IAQ);
- 돌연변이 I253A 및 H435Q, 및 위치 310의 H(AHQ);
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253A 및 위치 310 및 435의 H(AHH);
- 돌연변이 I253N 및 위치 310 및 435의 H(NHH);
- 돌연변이 I253A 및 H310A, 및 위치 435의 H(AAH);
- 돌연변이 I253N 및 H310A, 및 위치 435의 H(NAH);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435A(NAA);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435A(AAA); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
12. 항목 1 내지 항목 11 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE)
를 포함하고, 특히 상기 Fc 영역은 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ)를 포함하는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
13. 항목 1 내지 항목 12 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
14. 항목 1 내지 항목 13 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
15. 항목 1 내지 항목 14 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 다음으로부터 선택되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. i. 이펙터 폴리펩타이드 및
ii. 상기 Fc 영역
을 포함하는 융합 단백질; 또는
b. 상기 Fc 영역을 포함하는 항체 또는 항체 유사 분자.
16. 항목 1 내지 항목 15 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 다음으로부터 선택되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. i. CD3 및 종양 관련 항원,
ii. 작용 방식의 히스톤 및 IL12 수용체;
iii. PD-L1 및 4-1BB,
iv. PD-L1 및 CD28,
v. 작용 방식의 PD-L1 및 IL12 수용체, 또는
vi. 작용 방식의 종양 관련 항원 및 IL12 수용체
에 특이적으로 결합하는 이중특이적, 삼중특이적 또는 다중특이적 항체 또는 항체 유사 분자, 특히 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자,
b. 이펙터 폴리펩타이드를 포함하는 무장 항체 또는 항체 유사 분자, 또는
c. 차폐 도메인 및 절단 가능 프로테아제 민감성 링커 펩타이드를 포함하는 종양 조건부 또는 조직 조건부 항체 또는 항체 유사 분자.
17. 항목 16에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 PD-L1에 특이적으로 결합하고 다음을 포함하는 이중특이적, 삼중특이적 또는 다중특이적 항체 또는 항체 유사 분자, 특히 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
i. 이펙터 폴리펩타이드,
ii. IL-12Fc,
iii. 서열 번호 015 - 016으로부터 선택되는 서열을 특징으로 하는 분자와 서열 번호 021의 서열을 특징으로 하는 분자의 조합물,
iv. 서열 번호 017 - 020으로부터 선택되는 서열을 특징으로 하는 분자와 서열 번호 022의 서열을 특징으로 하는 분자의 조합물, 또는
v. 서열 번호 017 - 020으로부터 선택되는 서열을 특징으로 하는 분자, 서열 번호 023의 서열을 특징으로 하는 분자와 서열 번호 024의 서열을 특징으로 하는 분자의 조합물.
18. 항목 16에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 두개내 투여에 의해 투여되고, 상기 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율이 미리 결정된 임계값 미만이고, 상기 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 선조체 내로의 두개내 볼러스 주사 24시간 후에 측정 가능한, 다음으로부터 선택되는 것인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/8, 또는
b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/20.
19. 항목 15 내지 항목 18 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 이펙터 폴리펩타이드는 hIL-12, hIL-10, hIL-2, hIL-7, IFNα, IFNβ, IFNγ, hIL-15, TNFα, CTLA-4, TGFβ, TGFβRII, GDNF, hIL-35, CD95, hIL-1RA, hIL-4, hIL-13, SIRPα, G-CSF, GM-CSF, OX40L, CD80, CD86, GITRL, 4-1BBL, EphrinA1, EphrinB2, EphrinB5, BDNF, C9orf72, NRTN, ARTN, PSPN, CNTF, TRAIL, IL-4, IL-3, IL-1, IL-5, IL-8, IL-18, IL-21, CCL5, CCL21, CCL10, CCL16, CX3CL1, 및 CXCL16을 포함하는 군으로부터 선택되고, 특히 상기 이펙터 폴리펩타이드는 hIL-12인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
20. 항목 15 내지 항목 18 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-L1, TNFα, 히스톤, IFNγ, CXCL10, CTLA4, PD-1, OX40, CD3, CD25, CD28, TREM2, IL-6, CX3CR1, CD25, Nogo-A, CD27, IL-12, IL-12Rb1, IL-23, CD47, TGFβ, EGFR, EGFRvIII, Her2, PDGFR, TGFR, FGFR, IL-4RA, TfR, LfR, IR, LDL-R, LRP-1, CD133, CD111, VEGFR, VEGF-A, Ang-2, IL-10, IL-10R, IL-13Rα2, α-시누클레인, CSF1R, CSF1R, GITR, TIM-3, LAG-3, TIGIT, BTLA, VISTA, CD96, 4-1BB, CCL2, IL-1 또는 IL-1R, EphA2, EphA3, EphB2, EphB3, EphB4, LINGO-1, L1CAM, NCAM, SOD-1, SIGMAR-1, SIGMAR-2, TDP-43, Aβ, 타우, IFNα, IFNβ, TRPM4, ASIC1, VGCC, CB1, TTR, HTT, JCV, C9orf72에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자로부터 선택되고, 특히 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-L1, OX40, CD47 또는 Nogo-A에 특이적으로 결합하는 항체인 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드.
21. IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고 OX40에 작용 방식으로 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자로서,
상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고,
상기 항체 또는 항체 유사 분자는 뇌에 투여되는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
22. 항목 21에 있어서, 상기 항체 또는 항체 유사 분자의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율이 미리 결정된 임계값 미만이고, 상기 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 선조체 내로의 두개내 볼러스 주사 또는 CED 24시간 후에 측정 가능한, 다음으로부터 선택되는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 2/3, 또는
b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/8.
23. 항목 21 또는 항목 22에 있어서, FcRn에 대한 상기 항체 또는 항체 유사 분자의 상기 감소된 친화도가 다음으로부터 선택되는 해리 상수(KD)를 특징으로 하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자:
a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 항체 또는 항체 유사 분자에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 2x, 특히 적어도 3x, 보다 특히 적어도 4x, 훨씬 보다 특히 적어도 5x 증가된 해리 상수(KD), 및
b. 상이하게 변형된 Fc 영역, 즉 IAQ(돌연변이 H310A 및 H435Q 보유) 및 AAA(돌연변이 I253A, H310A 및 H435A 보유)로부터 선택되는 하나의 돌연변이체를 포함하는 동일한 항체 또는 항체 유사 분자에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 1.5x, 특히 적어도 2x 증가된 KD.
24. 항목 21 내지 항목 23 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 두개내 전달은 다음으로부터 선택되는 방법에 의해 수행되는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자:
a. 대류 강화 전달(CED)을 포함하는 단일, 간헐적 또는 연속적 국소 주입,
b. 상기 폴리펩타이드의 계내 생산,
c. 척수강내 또는 뇌실내 투여,
d. 이식된 서방성 제제로부터의 방출,
e. CNS 내로의 분자 수송,
f. CNS 내로의 세포 수송, 또는
g. 비강내 적용 후 CNS로의 수송.
25. 항목 21 내지 항목 24 중 어느 한 항목에 있어서, 중추신경계에 발병하는 상기 질환은 악성 질환, 특히 신경교종, 보다 특히는 고등급 신경교종(HGG)인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
26. 항목 21 내지 항목 25 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 Fc 영역, 또는 인간 아미노산 서열을 포함하는 키메라 Fc 영역이고, 위치 253[카바트 넘버링 시스템]에서의 돌연변이, 특히 I253A 또는 I253N, 보다 특히 I253N을 갖는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
27. 항목 26에 있어서, 상기 Fc 영역은 위치 310에 돌연변이를 갖지 않는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
28. 항목 21 내지 항목 27 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 다음을 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자:
- 돌연변이 H310A 및 H435Q(IAQ);
- 돌연변이 I253A 및 H435Q, 및 위치 310의 H(AHQ);
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253A 및 위치 310 및 435의 H(AHH);
- 돌연변이 I253N 및 위치 310 및 435의 H(NHH);
- 돌연변이 I253A 및 H310A, 및 위치 435의 H(AAH);
- 돌연변이 I253N 및 H310A, 및 위치 435의 H(NAH);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435A(NAA);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435A(AAA); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
29. 항목 21 내지 항목 28 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 다음을 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자:
- 돌연변이 I253N 및 H435Q, 및 위치 310의 H(NHQ);
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435Q(AAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435Q(NAQ);
- 돌연변이 I253N, H310A 및 H435E(NAE); 또는
- 돌연변이 I253A, H310A 및 H435E(AAE).
30. 항목 21 내지 항목 29 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
31. 항목 21 내지 항목 30 중 어느 한 항목에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 항체 또는 항체 유사 분자.
SEQUENCE LISTING <110> University of Zurich <120> Fc-modified biologicals for local delivery to compartment, in particular to the CNS <130> PINCT001WO2 <160> 24 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser 1 5 10 15 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 20 25 30 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 35 40 45 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 50 55 60 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 65 70 75 80 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 85 90 95 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 100 105 110 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 115 120 125 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Pro Glu 130 135 140 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 145 150 155 160 Tyr Pro 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Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Pro Glu 130 135 140 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 165 170 175 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 180 185 190 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 195 200 205 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr 210 215 220 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 225 230 235 <210> 3 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 1 5 10 15 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 20 25 30 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ala Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 35 40 45 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn 50 55 60 Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg 65 70 75 80 Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val 85 90 95 Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser 100 105 110 Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys 115 120 125 Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Pro Glu 130 135 140 Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe 145 150 155 160 Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu 165 170 175 Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe 180 185 190 Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly 195 200 205 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr 210 215 220 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 225 230 235 <210> 4 <211> 235 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro 1 5 10 15 Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro 20 25 30 Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Asn Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr 35 40 45 Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro 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Val Arg Gln Ala Pro 180 185 190 Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser 195 200 205 Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp 210 215 220 Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu 225 230 235 240 Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe 245 250 255 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr 260 265 270 Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 275 280 285 Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 290 295 300 Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 305 310 315 320 Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 325 330 335 Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys 340 345 350 Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu 355 360 365 Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu 370 375 380 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 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<213> Artificial Sequence <220> <223> fusion protein <400> 22 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Gln Pro Ala Met Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly 130 135 140 Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly 145 150 155 160 Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 165 170 175 Phe Thr Phe Ser Asp Ser Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 180 185 190 Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr 195 200 205 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr 210 215 220 Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 225 230 235 240 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp 245 250 255 Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala Ala Ser Thr Lys 260 265 270 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 275 280 285 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 290 295 300 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 305 310 315 320 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 325 330 335 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 340 345 350 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 355 360 365 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu 370 375 380 Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp 385 390 395 400 Thr Leu Met Asn Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp 405 410 415 Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly 420 425 430 Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala 435 440 445 Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp 450 455 460 Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro 465 470 475 480 Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu 485 490 495 Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn 500 505 510 Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile 515 520 525 Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr 530 535 540 Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys 545 550 555 560 Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys 565 570 575 Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr Thr Gln Lys Ser Leu 580 585 590 Ser Leu Ser Pro Gly Lys 595 <210> 23 <211> 467 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fusion protein <400> 23 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Asp Ser Trp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Arg His Trp Pro Gly Gly Phe Asp Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Asn Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Ala Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn Gln Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly Lys 465 <210> 24 <211> 236 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> fusion protein <400> 24 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Gln Pro Ala Met Ala Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235

Claims (25)

  1. IL-12, 및 IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하는, 중추신경계(CNS)에 발병하는 질환, 특히 원발성 및 속발성 뇌암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 융합 폴리펩타이드로서,
    상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고,
    상기 폴리펩타이드는 뇌에 투여되는 것인 폴리펩타이드.
  2. 제1항에 있어서, 상기 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율이 미리 결정된 임계값 미만이고, 상기 미리 결정된 임계값은 FcRntg 마우스의 선조체 내로의 두개내 주사, 특히 두개내 볼러스 주사 또는 CED 24시간 후에 측정 가능한,
    a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 2/3, 또는
    b. Fc 영역 또는 펩타이드 링커를 포함하지 않는 동일한 폴리펩타이드의 혈청 또는 혈장 대 뇌 농도 비율의 최대 1/8
    로부터 선택되는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, FcRn에 대한 상기 폴리펩타이드의 상기 감소된 친화도는
    a. 비변형된 Fc 영역을 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 해리 상수(KD)에 비해 적어도 2x, 특히 적어도 3x, 보다 특히 적어도 4x, 훨씬 보다 특히 적어도 5x 증가된 KD, 및
    b. 상이하게 변형된 Fc 영역, 즉 IAQ 및 AAA로부터 선택되는 하나의 돌연변이체를 포함하는 동일한 폴리펩타이드에 대한 FcRn의 결합을 특성화하는 KD에 비해 적어도 1.5x, 특히 적어도 2x 증가된 KD
    로부터 선택되는 KD를 특징으로 하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 두개내 전달은
    a. 대류 강화 전달(CED)을 포함하는 단일, 간헐적 또는 연속적 국소 주입,
    b. 척수강내 또는 뇌실내 투여,
    c. 상기 폴리펩타이드의 계내 생산,
    d. 이식된 서방성 제제로부터의 방출,
    e. CNS로의 분자 수송,
    f. CNS로의 세포 수송, 또는
    g. 비강내 적용 후 CNS로의 수송
    으로부터 선택되는 방법에 의해 수행되는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 중추신경계에 발병하는 상기 질환은 악성 질환, 특히 신경교종, 보다 특히는 고등급 신경교종(HGG)인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 인간 Fc 영역, 또는 인간 아미노산 서열을 포함하는 키메라 Fc 영역이고, 위치 253에서의 돌연변이, 특히 I253A 또는 I253N, 보다 특히 I253N을 갖는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하고, 특히 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인, 중추신경계에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  9. IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는 IL-12; 또는 VEGFR, Ang2, TNFα, IL-17, PD-1, PD-L1 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 VEGFR, Ang2, TNFα, IL-17 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드를 추가로 포함하는, 눈에 발병하는 질환, 특히 눈에 발병하는 신생물 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드로서, 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 안내 투여에 의해 눈에 전달되는 것인 폴리펩타이드.
  10. IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는 IL-12; 또는 TNFα, IL-1RA, IL-6R, IL-6, CD27, IL-22, IL-17, CD27 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 TNFα, IL-1RA, IL-6R, IL-6, CD27 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드를 추가로 포함하는, 관절에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드로서, 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 관절내 투여에 의해 관절에 전달되는 것인 폴리펩타이드.
  11. IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 바람직하게는 IL-12 또는 IL-10; 또는 IL-4RA, TNFα, IL-5, IL-6R, PD-1, PD-L1, CTLA-4, IL-8, IL-21R, CD25, CD20, NF-kB 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드, 보다 바람직하게는 IL-4RA, TNFα, IL-5, IL-6R, PD-1, PD-L1, CTLA-4 중 어느 하나에 결합하는 폴리펩타이드를 추가로 포함하는, 폐에 발병하는 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드로서, 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하며, 상기 폴리펩타이드는 흡입을 통해 폐에 전달되는 것인 폴리펩타이드.
  12. IgG의 결정화 가능 단편(Fc) 영역을 포함하고, 특히 IL-12를 추가로 포함하는, 의약으로서 사용하기 위한 폴리펩타이드로서, 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고, 상기 Fc는 돌연변이 I253N 및 H435Q와 위치 310의 H를 포함하는 것인 폴리펩타이드.
  13. 제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 004의 서열(NHQ)이거나 이를 포함하는 것인, 질환의 예방 또는 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  14. IgG의 Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드로서, 상기 Fc 영역은 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대해 감소된 친화도를 초래하는 변형을 보유하고, 상기 Fc 영역은 서열 번호 002(IAQ), 서열 번호 003(AHQ), 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 007(AHH), 서열 번호 008(NHH), 서열 번호 009(AAH), 서열 번호 010(NAH), 서열 번호 011(NAA), 서열 번호 012(NAE), 서열 번호 013(AAA) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인 폴리펩타이드.
  15. 제14항에 있어서, 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ), 서열 번호 005(AAQ), 서열 번호 006(NAQ), 서열 번호 012(NAE) 또는 서열 번호 014(AAE)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하고, 특히 상기 Fc 영역은 서열 번호 004(NHQ)를 특징으로 하는 서열이거나 이를 포함하는 것인 폴리펩타이드.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는
    a. i. 이펙터 폴리펩타이드 및
    ii. 상기 Fc 영역
    을 포함하는 융합 단백질; 또는
    b. 상기 Fc 영역을 포함하는 항체 또는 항체 유사 분자
    로부터 선택되는 것인 폴리펩타이드.
  17. 제16항에 있어서, 상기 이펙터 폴리펩타이드는 hIL-12, IL-10, IL-2, IL-7, IFNα, IFNβ, IFNγ, IL-15, TNFα, CTLA-4, TGFβ, TGFβRII, GDNF, hIL-35, CD95, IL-1RA, IL-4, IL-13, SIRPα, G-CSF, GM-CSF, OX40L, CD80, CD86, GITRL, 4-1BBL, EphrinA1, EphrinB2, 및 EphrinB5, BDNF, C9orf72, NRTN, ARTN, PSPN, CNTF, TRAIL, IFNα, IFNβ, IL-4, IL-3, IL-1, IL-5, IL-8, IL-18, IL-21, CCL5, CCL21, CCL10, CCL16, CX3CL1, 및 CXCL16으로부터 선택되고, 특히 상기 이펙터 폴리펩타이드는 hIL-12인 폴리펩타이드.
  18. 제16항에 있어서, 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-L1, TNFα, 히스톤, IFNγ, CXCL10, CTLA4, PD-1, OX40, CD3, CD20, CD22, CD25, CD28, TREM2, IL-6, CX3CR1, Nogo-A, CD27, IL-12, IL-12Rb1, IL-23, CD47, TGFβ, EGFR, EGFRvIII, Her2, PDGFR, TGFR, FGFR, IL-4, IL-4RA, TfR, LfR, IR, LDL-R, LRP-1, CD133, CD111, VEGFR, VEGF-A, Ang-2, IL-10, IL-10R, IL-13Rα2, α-시누클레인, CSF1R, GITR, TIM-3, LAG-3, TIGIT, BTLA, VISTA, CD96, 4-1BB, CCL2, IL-1 또는 IL-1R, EphA2, EphA3, EphB2, EphB3, 및 EphB4, LINGO-1, L1CAM, NCAM, CD147, SOD-1, SIGMAR-1, SIGMAR-2, TDP-43, Aβ, 타우, IFNα, IFNβ, TRPM4, ASIC1, VGCC, CB1, TTR, HTT, JCV, 및 C9orf72로부터 선택되는 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항체 유사 분자로부터 선택되고, 특히 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 PD-L1, OX40, CD47 및 Nogo-A로부터 선택되는 분자에 특이적으로 결합하는 항체인 폴리펩타이드.
  19. 제14항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 상기 Fc 영역을 포함하거나 이에 연결된 항체 또는 항체 유사 분자이고, 바람직하게는 상기 항체 또는 항체 유사 분자는 2개의 항원에 동시에 결합할 수 있는 이중특이적 구축물이며, 특히 상기 이중특이적 항체 또는 항체 유사 분자는 작용 방식으로 PD-L1 및 IL-12 수용체에 결합하는 것인 폴리펩타이드.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 뇌암, 뇌졸중, 치매, 파킨슨병, 알츠하이머병, 다발성 경화증, 간질, 및 외상성 CNS 손상으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  21. 제11항 및 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 2019 코로나 바이러스 질환, 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV)에 의해 유발된 질환, 중증 급성 호흡기 증후군, 천식, 알레르기성 천식, 중증의 조절되지 않는 천식, 섬유증, 낭포성 섬유증, 만성 폐쇄성 폐 질환, 인플루엔자, 폐 부종, 사르코이드증, 폐암, 결핵, 인간 오르토뉴모바이러스, 림프절 페스트, 폐 페스트, 탄저병, 폐의 침습성 진균 질환, 폐 섬유증, 호흡기 세포융합 바이러스, 비용종을 동반한 만성 부비동염, 간질성 폐 질환, 특발성 폐 섬유증, 및 폐 파라콕시디오이데스진균증으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  22. 제10항 및 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 류마티스 관절염, 소아 류마티스 관절염, 통풍, 가성통풍, 골관절염, 만성 혈우병성 활액막염, 건선성 관절염 및 강직성 척추염으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  23. 제9항 및 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 포도막 흑색종, 포도막염, 및 습성 황반 변성으로부터 선택되는 질환의 치료에 사용하기 위한 폴리펩타이드.
  24. 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 따른 폴리펩타이드를 코딩하는 핵산.
  25. 제24항에 따른 핵산을 포함하는 바이러스 벡터.
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