KR20210145158A - 화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물 - Google Patents

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아리아드나 그라우-캄피스타니
실비아 파스토르
파트리샤 카룰라
후안 카를로스 에스쿠데로
줄리아 에이. 보라스
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Abstract

본 발명은 호메오도메인 단백질 모호크(homeodomain protein Mohawk)의 합성을 증가시킬 수 있고, 따라서 노화 방지제 및 회춘제(rejuvenating agent)로 유용한 펩타이드 계열에 관한 것이다.

Description

화장품에 사용하기 위한 펩타이드 및 조성물
본 발명은 분자 생물학 분야에 관한 것으로, 보다 정확하게는 화장품에 적용되는 분자 생물학, 더욱 더 정확하게는 모호크(Mohawk)의 발현 및 합성을 증가시킬 수 있는 펩타이드 및 상기 펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
지난 수십 년 동안 인구의 기대 수명이 크게 증가했다. 또한, 개인의 미학에 대한 관심이 증가하고 노화와 관련된 징후의 출현을 늦추거나 최소화하려는 노력이 증가하고 있다.
피부는 인간의 가장 큰 기관이며 신체 경계면에서 그의 위치로 인해 내재적(경시적(chronologic)) 노화 및 외적 노화의 영향을 받는다. 피부 노화는 내인성 및 외인성 요인(내인성: 유전학, 세포 대사, 호르론 및 대사 과정; 외인성: 만성 광 노출, 오염, 이온화 방사, 화학 물질, 독소)의 조합에 의해 영향을 받는 복잡한 생물학적 과정이며, 따라서 피부의 변화를 초래하고 피부에 결함이 나타난다(예: 탄력 상실, 주름, 거칠기 및/또는 처짐).
이들 요인은 피부의 다른 층에서 누적된 구조적 및 생리적 변화뿐 아니라 전반적인 피부 외양의 변화를 유발한다(Ganceviciene, R., Liakou, A.I., Theodoridis, A., et al.(2012) Skin Anti-Aging Strategies. Dermato-Endocrinology, 4, 308-319).
진피의 3가지 주요 구조 구성요소는 콜라겐, 엘라스틴 및 글리코사미노글리칸(GAG)이며, 이는 주름 방지 크림부터 다양한 충전재까지 포함하는, 피부와 관련된 미용적 노화 방지 전략을 위한 대부분의 노화 방지 연구 및 노력의 대상이었다(Baumann, L.(2007), Skin ageing and its treatment. J. Pathol., 211, 241-251.).
콜라겐은 다세포 동물에서 다양한 조직의 구조를 지지하는 데 있어서 기본적인 역할을 하는 세포외 기질(ECM) 단백질의 큰 계열을 구성한다. 섬유소 콜라겐의 기계적 강도는 개별 섬유소 사이의 공유 가교 결합 형성에 크게 의존하며, 이 과정은 리실 산화 효소(LOX) 계열 구성원의 효소 작용에 의해 시작된다. 콜라겐의 생합성은 연쇄 결합 및 접힘(folding), 분비, 프로콜라겐 가공 및 가교 결합을 비롯한 수많은 단계를 포함하는 매우 복잡한 과정이다. 2개의 α1 및 1개의 α2 쇄로 구성된 이종 삼량체 분자인 인간 타입 I 콜라겐에 대해 예시된 바와 같이, 리보솜에서 합성되고 거친 소포체로 유입된 후 콜라겐 쇄는 일련의 번역 후 변형을 거쳐 프로콜라겐 쇄의 집합을 생성한다(Rodriguez-Pascual, F., Slatter, D.A.(2016) Collagen cross-linking: insights on the evolution of metazoan extracellular matrix. Scientific Reports, 6, 37374.).
또한, 콜라겐은 신체에서 가장 풍부한 단백질(건조 중량으로 70%)이며 주로 섬유소 타입 I 콜라겐과 타입 III 콜라겐으로 구성되고, 함께 조직의 강도 및 강성의 대부분을 제공한다. 마이너 콜라겐은 전체 콜라겐 함량의 10% 미만을 차지하지만 ECM 조직에서 핵심적인 역할을 한다(Lovell, C., Smolenski, K., Duance, V., Light, N., Young, S., Dyson, M.(1987) Type I and III collagen content and fibre distribution in normal human skin during ageing. British Journal of Dermatology, 117, 419-428; and Theocharidis, G., Connelly, J.T.(2017) Minor collagens of the skin with not so minor functions. J. Anat.). 실제로, 콜라겐 VI이 콜라겐 I의 적절한 결합 및 구조에 기여한다는 것이 입증되었다(Bonaldo, P et.al.(1990) Structural and Functional Features of the α3 Chain Indicate a Bridging Role for Chicken Collagen VI in Connective Tissues. Biochemistry, 29, 1245-1254). 콜라겐은 필수적인 구조적 기능 외에도 세포 접착, 주화성(chemotaxis) 및 이동에 관여한다. 이들은 세포 성장, 분화, 형태 형성 및 상처 복구 과정에서 조직 리모델링을 조절하기 위해 세포, 성장 인자 및 사이토카인과 동적으로 상호 작용한다(van der Rest, M., Garrone, R.(1991) Collagen family of proteins. FASEB J., 13, 2814-23.; Singer, A.J., Clark, R.A.(1999) Cutaneous wound healing. N Engl J Med., 341(10), 738-46; Gelse, K., P
Figure pct00001
schl, E.,Aigner, T.(2003) Collagens―structure, function, and biosynthesis. Advanced Drug Delivery Reviews, 55(12), 1531-1546; and Ricard-Blum S.(2011). The collagen family. Cold Spring Harbor perspectives in biology, 3(1), a004978).
피부의 다른 구조적 구성요소(즉, 탄성 및 망상 섬유)에 대한 손상과 함께 콜라겐 파괴가 노화된 피부의 외관에 특징적인 변화의 기초가 되는 것으로 여겨진다(Bailey, A.J.(2001). Molecular mechanisms of ageing in connective tissue. Mech Ageing Dev, 122 pp. 735-755; Schwartz, E., Cruickshank, F.A., Perlish, J.S., Fleischmajer, R.(1989) Alterations in dermal collagen in ultraviolet irradiated hairless mice. J Invest Dermatol, 93, pp. 142-146; Schwartz, E., Cruickshank, F.A., Christensen, C.C., Perlish, J.S., Lebwohl, M.(1993) Collagen alterations in chronically sun-damaged human skin. Photochem Photobiol, 58, pp. 841-844; Smith, J.G., Davidson, E.A., Sams, W.M., Clark, R.D.(1962) Alterations in human dermal connective tissue with age and chronic sun damage. J Invest Dermatol, 39, pp. 347-350; Maloney, S.J., Edmonds, S.H., Giddens, L.D., Learn, D.B.(1992) The hairless mouse model of photoaging: Evaluation of the relationship between dermal elastin, collagen, skin thickness and wrinkles. Photochem Photobiol, 56, pp. 505-511; Fligiel, S.E.G., Varani, J., Datta, S.C., Kang, S., Fisher, G.J., Voorhees, J.J.(2003) Collagen Degradation in Aged/Photodamaged Skin in Vivo and after Exposure to Matrix Metalloproteinase-1 in Vitro. J. Invest. Dermatol., 120, pp. 842-848; and Marks, R. (Ed.)(1992) Sun-Damaged Skin. Martin Dunitz, London).
더욱, 호메오도메인 단백질 모호크(homeodomain protein Mohawk, MKx)가 피부에서 풍부하게 발현되는 것으로 기재되어 있으며(Uhlen, M. et al.(2015) Proteomics. Tissue-based map of the human proteome. Science 347, 1260419), 상기 단백질은 증가된 콜라겐 합성 및 증가된 콜라겐 피브릴 형성뿐만 아니라, 세포외 기질의 생성과 관련된 다른 유전자의 적절한 조절과 연관되어 있다(Nakamichi, R. et.al.(2016) Mohawk promotes the maintenance and regeneration of the outer annulus fibrosus of intervertebral discs. nature communications, 7:12503; Nakahara, H.(2013) Transcription Factor Mohawk and the Pthogenesis of Human Anterior Criciate Ligament Degradation. arthritis & rheumatism, vol. 65, 8, 2081-2089).
최근 들어 탄력 상실, 피부 결 및 주름 등과 같은 피부 노화의 징후를 개선하기 위한 활성 성분의 수가 상당히 증가되고 있다. 이러한 활성 성분의 예는 레티노이드, 비타민 또는 식물 추출물이다(Bradley E.J., Griffiths C.E.M., Sherratt M.J., Bell M. and Watson R.E.B.(2015), Over-the-counter anti-ageing topical agents and their ability to protect and repair photoaged skin. Maturitas, 80, 265-272).
레티노이드의 경우, 주목할만한 것은 오늘날 ECM의 여러 분자 합성 유도를 위한 "금 표준(gold-standard)"인 레티노산이다(예를 들면, 콜라켄, 피브로넥틴 또는 라미닌: Varani J., Mitra R.S., Gibbs D., Phan S.H., Dixit V.M., Mitra R., Wang T., Siebert K.J., Nickoloff B.J., Voorhees J.J.(1990), All-Trans Retinoic Acid Stimulates Growth and Extracellular Matrix Production in Growth-Inhibited Cultured Human Skin Fibroblasts. The Journal of Investigative Dermatology, 94, 717-723). 따라서 레티노산은 콜라겐 및 피브로넥틴과 같은 ECM 단백질의 전사 및 합성, 및 매트릭스 메탈로프로테이나제(이하 MMP)의 억제를 상향 조절하여 얼굴 주름의 임상적 외관을 크게 개선할 수 있기 때문에 노화 징후를 치료하는 가장 강력한 화합물 중 하나로 간주되었다(Varani J., Mitra R.S., Gibbs D., Phan S.H., Dixit V.M., Mitra R., Wang T., Siebert K.J., Nickoloff B.J., Voorhees J.J.(1990), All-Trans Retinoic Acid Stimulates Growth and Extracellular Matrix Production in Growth-Inhibited Cultured Human Skin Fibroblasts. The Journal of Investigative Dermatology, 94, 717-723). 그러나 레티노산의 사용에는 예를 들어, 다음과 같은 단점이 있다: 레티노산은 피부에 쉽게 자극을 줄 수 있으므로 주의해서 사용해야 하며, 레티노산과 태양 노출을 함께 하는 것은 권장되지 않는다. 레티노이드를 사용할 때의 또 다른 주요 관심사는 특히 산소 및 광의 존재 하에서 레티노이드가 불안정하다는 것이다(Sorg O., Antille C., Kaya G. and Saurat J-H.(2006), Retinoids in cosmeceuticals. Dermatologic Therapy, 19, 289-296).
항산화제는 또한 피부의 유리 라디칼 농도를 감소시켜, 콜라겐 분해를 방지하기 위해 사용된다. 상기 항산화제의 예는 아스코르브산(비타민 C로도 알려짐)이다. 아스코르브산은 항산화 효과 외에도 표피 분화를 촉진하고 매트릭스 메탈로프로테이나제-1(MMP1)을 억제하면서 ECM(콜라겐 I 및 III과 엘라스틴)에서 단백질의 합성을 유도한다. 불행하게도, 아스코르브산은 극도로 불안정하고, 특히 고온, 호기성 조건, 높은 pH에서 및/또는 광에 노출될 때 산화된다(Manela-Azulay M., Azulay V., Aguinaga F., Issa M.C.(2017), Vitamins and other Antioxidants. Daily Routine in Cosmetic Dermatology, 1-13).
화학적으로 합성된 화합물 외에도, 다양한 식물 추출물 및 식물 유래 화합물이 시장에서 예를 들어, 레스베라트롤(항산화제)을 포함하는 포도 추출물; 폴리페놀을 포함하는 녹차; 또는 이소플라본을 포함하는 콩과 같은 여러 용도로 발견된다. 그러나 이들 성분의 생체내 효능 및 조성은 과학적으로 충분히 검증되지 않았다.
히알루론산은 점탄성 특성과 수분 보유 능력으로 인해 화장품 산업에서 피부의 수분을 유지하고, 탄력을 유지하며, 거칠기를 개선하여 주름을 치료하거나, 피부 필러로서 사용되기도 한다. 그러나 현재 히알루론산은 닭 빗이나 박테리아 추출물과 같은 여러 공급원에서 얻어지며, 결과적으로 이들 생성물에는 불순물이 포함될 수 있어서 철저하게 특성화할 필요가 있다(Kogan G., Solt
Figure pct00002
s L., Stern R. and Gemeiner P.(2007), Hyaluronic acid: a natural biopolymer with a broad range of biomedical and industrial applications. Biotechnological Letters 29, 17-25).
다른 한편으로, 펩타이드는 피부 노화의 징후를 개선하기 위해 화장품 배합에 혼입될 수도 있다. 생체 활성 펩타이드는 체내 분자를 모방하여 콜라겐 합성과 같은 과정에 영향을 줄 수 있어 훨씬 더 나은 내약성 및 안정성을 갖는다는 장점이 있다. 또한, 광범위한 활성, 화학 및 적응증을 개발할 수 있다(Zhang L. and Falla T.J.(2009), Cosmeceuticals and peptides. Clinics in dermatology, 27, 485-494).
그 분야에서 광범위한 화합물 및/또는 추출물에도 불구하고, 피부 노화(경시적 및/또는 환경적 노화) 징후의 예방, 감소 및/또는 제거를 가능하게 하고/하거나 피부 회춘(skin rejuvenation)을 제공하는 새로운 작용 기전을 갖는 대체 조성물에 대한 필요성이 여전히 존재한다.
본 발명의 발명자들은 광범위하고 철저한 연구 끝에 놀랍게도 호메오도메인 단백질 모호크의 발현 및 합성 증가 및 결과적으로, 콜라겐의 발현 및 합성 증가를 제공하는 펩타이드를 발견하였다. 또한, 본 발명의 발명자들이 발견한 펩타이드는 세포외 기질의 합성 및 구조화를 담당하는 유전자의 발현을 촉진 또는 상향 조절하는 반면, 상기 세포외 기질의 분해를 담당하는 유전자는 억제 또는 하향 조절한다. 본 발명의 펩타이드는 또한 콜라겐 합성을 증가시키고, 피부 외식편에서 콜라겐 밀도 및 두께를 개선시킨다. 더욱, 피부를 매끄럽게 하는 특성, 주름 방지 및 노화 방지 효과가 생체 내에서 입증되었다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 노화 방지 및 회춘 활성을 나타내므로, 앞서 언급한 당해 기술 분야에 존재하는 문제를 해결한다.
본 발명자들은 상기 언급한 작용 기전 및 따라서 상기 언급한 활성을 갖는 펩타이드를 제공하는 어떠한 선행 기술도 알지 못한다.
제 1 관점에 있어서, 본 발명은 호메오도메인 단백질 모호크를 증가시킬 수 있는 펩타이드에 관한 것이다.
제 2 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
또한, 제 3 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에서 이의 화장품으로서의 용도에 관한 것이다.
제 4 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에 있어서 이의 미용적 용도에 관한 것이다.
제 5 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에서 이의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는 미용 방법에 관한 것이다.
본원에 사용된 용어 "비환상(non-cyclic) 지방족 그룹" 및 그의 복수형은 당해 기술 분야에서 상기 용어에 대해 주어진 공통 의미를 갖는다. 따라서, 이들 용어는 예를 들어, 선형 또는 분지형 알킬, 알케닐 및 알키닐 그룹을 가리키며, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "알킬 그룹" 및 그의 복수형은 1 내지 24개, 바람직하게는 1 내지 16개, 더 바람직하게는 1 내지 14개, 보다 더 바람직하게는 1 내지 12개, 훨씬 더 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 가지며, 단일 결합에 의해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 포화 선형 또는 분지형 그룹을 말하며, 예를 들어, 메틸, 에틸, 이소프로필, n-프로필, i-프로필, 이소부틸, tert-부틸, n-부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, 헵틸, 옥틸, 데실, 도데실, 라우릴, 헥사데실, 옥타데실, 아밀, 2-에틸헥실, 2-메틸부틸, 5-메틸헥실 등이 포함되며 이에 제한되지 않는다. 알킬 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알케닐 그룹" 및 그의 복수형은 2 내지 24개, 바람직하게는 2 내지 16개, 더 바람직하게는 2 내지 14개, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 12개, 여전히 훨씬 더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자와, 공액 또는 비공액의 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 가지며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되는 선형 또는 분지형 그룹을 말하며, 예를 들어, 비닐, 올레일, 리놀레일 및 유사한 그룹을 포함하며, 이에 제한되지 않는다. 알케닐 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "알키닐 그룹" 및 그의 복수형은 2 내지 24개, 바람직하게는 2 내지 16개, 더 바람직하게는 2 내지 14개, 더욱 더 바람직하게는 2 내지 12개, 여전히 더 바람직하게는 2, 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자와, 공액 또는 비공액의 하나 이상의 탄소 탄소 3중 결합, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 3중 결합을 가지며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지에 결합되는 선형 또는 분지형 그룹을 말하며, 예를 들어, 에티닐 그룹, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-부티닐, 2-부티닐, 3-부티닐, 펜티닐, 예를 들면, 1-펜티닐 및 유사한 그룹을 포함하며, 이에 제한되지 않는다. 알키닐 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "지환족(alicyclic) 그룹" 및 그의 복수형은 당해 기술 분야에서 상기 용어에 주어진 공통 의미를 갖는다. 따라서, 이들 용어는 예를 들어, 사이클로알킬 또는 사이클로알케닐 또는 사이클로알키닐 그룹을 말하며, 이에 제한되지 않는다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알킬" 및 그의 복수형은 3 내지 24개, 바람직하게는 3 내지 16개, 더 바람직하게는 3 내지 14개, 더욱 더 바람직하게는 3 내지 12개, 훨씬 더 바람직하게는 3, 4, 5 또는 6개의 탄소 원자를 가지며 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 포화 모노 또는 폴리사이클릭 지방족 그룹을 말하며, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸, 메틸 사이클로헥실, 디메틸 사이클로헥실, 옥타히드로인덴, 데카히드로나프탈렌, 도데카히드로페날렌, 아다만틸 등이 포함되고, 이에 제한되지 않으며, 이는 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알케닐" 및 그의 복수형은 5 내지 24개, 바람직하게는 5 내지 16개, 더 바람직하게는 5 내지 14개, 더욱 더 바람직하게는 5 내지 12개, 훨씬 더 바람직하게는 5 또는 6개의 탄소 원자와, 공액 또는 비공액의 하나 이상의 탄소-탄소 이중 결합, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 이중 결합을 가지며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 비방향족 모노 또는 폴리사이클릭 지방족 그룹을 말하며, 예를 들어, 사이클로펜트-1-엔-1-일 그룹 및 유사한 그룹을 포함하며, 이에 제한되지 않고, 이는 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "사이클로알키닐" 및 그의 복수형은 8 내지 24개, 바람직하게는 8 내지 16개, 더 바람직하게는 8 내지 14개, 더욱 더 바람직하게는 8 내지 12개, 훨씬 더 바람직하게는 8 또는 9개의 탄소 원자와, 공액 또는 비공액의 하나 이상의 탄소-탄소 3중 결합, 바람직하게는 1, 2 또는 3개의 탄소-탄소 3중 결합을 가지며, 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 비방향족 모노 또는 폴리사이클릭 지방족 그룹을 말하며, 예를 들어, 사이클로옥트-2-인-1-일 그룹 등을 포함하며, 이에 제한되지 않고, 이는 알킬, 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 그룹에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아릴 그룹" 및 그의 복수형은 6 내지 30개, 바람직하게는 6 내지 18개, 더 바람직하게는 6 내지 10개, 더욱 더 바람직하게는 6 또는 10개의 탄소 원자를 가지며, 탄소-탄소 결합에 의해 결합되거나 또는 융합된 1, 2, 3 또는 4개의 방향족 환을 포함하고, 단일 결합을 통해 분자의 나머지 부분에 결합되어 있는 방향족 그룹을 말하며, 예를 들어, 페닐, 나프틸, 디페닐, 인데닐, 페난트릴 또는 안트라닐 그룹을 포함하고, 이에 제한되지 않는다. 아릴 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "아르알킬 그룹" 및 그의 복수형은 방향족 그룹에 의해 치환되고, 7 내지 24개의 탄소 원자를 갖는 알킬 그룹을 말하며, 예를 들어, -(CH2)1-6-페닐, -(CH2)1-6-(1-나프틸), -(CH2)1-6-(2-나프틸), -(CH2)1-6-CH(페닐)2 및 유사한 그룹을 포함하며, 이에 제한되지 않는다. 아르알킬 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클릭 그룹" 및 그의 복수형은 환 원자의 하나 이상, 바람직하게는 환 원자의 1, 2 또는 3개가 탄소와 다른 원소, 예를 들면, 질소, 산소 또는 황이며, 포화 또는 불포화일 수 있는 3 내지 10원 헤테로사이클릴 또는 탄화수소 환을 말한다. 본 발명의 목적을 위해, 헤테로사이클릴은 융합 환계를 포함할 수 있는 사이클릭, 모노사이클릭, 비사이클릭 또는 트리사이클릭계일 수 있고, 헤테로사이클릴 라디칼에서 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 원자는 임의로 4급화될 수 있으며; 헤테로사이클릴 라디칼은 부분적으로 또는 완전히 포화될 수 있거나 방향족일 수 있다. 선호도가 증가함에 따라, 용어 헤테로사이클릭은 5 또는 6원 환과 관련된다. 헤테로사이클릭 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로아릴알킬 그룹" 및 그의 복수형은 치환 또는 비치환된 방향족 헤테로사이클릴 그룹으로 치환된 알킬 그룹을 말하며, 알킬 그룹은 1 내지 6개의 탄소 원자를 가지며 방향족 헤테로사이클릴 그룹은 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개의 탄소 이외의 원자를 가지고, 예를 들어, -(CH2)1-6-이미다졸릴, -(CH2)1-6-트리아졸릴, -(CH2)1-6-티에닐, -(CH2)1-6-푸릴, -(CH2)1-6-피롤리디닐 등을 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 헤테로아릴알킬 그룹은 할로, 히드록시, 알콕시, 카르복시, 카르보닐, 시아노, 아실, 알콕시-카르보닐, 아미노, 니트로, 머캅토 및 알콕시티오와 같은 하나 이상의 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "할로" 또는 "할로겐"은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드를 말하며, 그의 음이온은 할라이드(halide)라고 한다.
본원에 사용된 용어 "유도체" 및 이의 복수형은 화장용으로 허용되는 화합물, 즉 화장품 제조에 사용될 수 있는 관심 화합물에서 유래된 화합물과, 화장용으로 허용되지 않는 유도체를 모두 말하는데, 이들은 화장용으로 허용되는 유도체의 제조에서 유용할 수 있기 때문이다.
본 문서에서 사용된 바와 같이, 용어 "염" 및 그의 복수형은 당해 기술 분야에 공지된 것 중에서 임의의 유형의 염, 예를 들어, 할라이드염, 히드록시산 염(예, 옥시산 염, 산 염, 염기성 염 및 이중 염), 히드록소염, 혼합 염, 옥시 염 또는 기타 수화된 염을 말한다. 이 용어는 화장용으로 허용되는 염 및 화장용으로 허용되지 않는 염 모두를 포함하는데, 이는 후자가 화장용으로 허용되는 염의 제조에 유용할 수 있기 때문이다.
본 문서에서 사용된 용어 "이성질체" 및 그의 복수형은 광학 이성질체, 거울상 이성질체, 입체 이성질체 또는 부분 입체 이성질체를 말한다. 개개의 거울상 이성질체 또는 부분 입체 이성질체, 및 이들의 혼합물은 당해 기술 분야에서 알려진 통상의 기술에 의해 분리될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "용매화물" 및 그의 복수형은 극성, 무극성 또는 양쪽성 용매화물과 같은 당해 기술 분야에 공지된 임의의 용매화물을 말하고, 관심 대상에 투여되거나 적용될 때(직접 또는 간접적으로) 관심 화합물(본 발명의 펩타이드 또는 펩타이드들)을 제공하는 화장용으로 허용되는 임의의 용매화물을 포함한다. 바람직하게는 용매화물은 수화물, 메탄올, 에탄올, 프로판올 또는 이소프로판올과 같은 알코올과의 용매화물, 에틸 아세테이트와 같은 에스테르와의 용매화물, 메틸 에테르, 에틸 에테르 또는 THF(테트라히드로푸란)와 같은 에테르와의 용매화물 또는 DMF(디메틸포름아미드)와의 용매화물, 보다 바람직하게는 수화물 또는 에탄올과 같은 알코올과의 용매화물이다.
또한, 본원에서 사용되는 용어 "아미노산" 및 그의 복수형은 천연인지의 여부 또한 D- 및 L-아미노산인지의 여부에 관계없이, 유전자 코드에 의해 코딩된 아미노산뿐만 아니라, 코딩되지 않은 아미노산을 포함한다. 코딩되지 않은 아미노산의 예로는 제한없이, 시트룰린, 오르니틴, 사르코신, 데스모신, 노르발린, 4-아미노부티르산, 2-아미노부티르산, 2-아미노이소부티르산, 6-아미노헥사노산, 1-나프틸알라닌, 2-나프틸알라닌, 2-아미노벤조산, 4-아미노벤조산, 4-클로로페닐알라닌, 2,3-디아미노프로피온산, 2,4-디아미노부티르산, 사이클로세린, 카르니틴, 시스테인, 페니실아민, 피로글루탐산, 티에닐알라닌, 히드록시프롤린, 알로-이소류신, 알로-트레오닌, 이소니페코트산, 이소세린, 페닐글리신, 스타틴, β-알라닌, 노르류신, N-메틸아미노산, α-아미노산 및 β-아미노산 및 이들의 유도체가 포함된다. 그럼에도 불구하고, 더 많은 비천연 아미노산이 당해 기술 분야에 알려져 있다(예를 들어,"Unusual amino acids in peptide synthesis" by D. C. Roberts and F. Vellaccio, The Peptides, Vol. 5(1983), Chapter VI, Gross E. and Meienhofer J., Eds., Academic Press, New York, USA 참조).
본원에 사용된 바와 같이, 펩타이드, 폴리펩타이드 및 단백질에 관한 "동일성 백분율(percentage of identity)"은 당해 기술 분야에서 통상 주어지는 의미를 가지며, 따라서, 이들 서열의 최적 정렬 후에 비교되는 두 아미노산 서열간에 동일한 아미노산의 백분율과 관련되며, 여기서 상기 백분율은 단지 통계적이며 두 아미노산 서열간의 차이는 서열 전체에 걸쳐 무작위로 분포된다. "최적 정렬(optimal alignment)"은 아미노산 서열의 정렬이 더 큰 동일성 백분율을 야기하는 것으로 이해된다. 동일성 백분율은 두 개의 비교된 서열에서 아미노산이 동일한 동일 위치의 수를 결정하고, 동일 위치의 수를 비교된 위치의 수로 나누어 얻은 결과에 100을 곱하여 두 서열간의 동일성 백분율을 구함으로써 계산된다. 두 아미노산 서열간의 서열 비교는 수동으로 또는 BLAST(Basic Local Alignment Search Tool) 알고리즘과 같은 당해 기술 분야에서 알려진 컴퓨터 프로그램을 사용하여 수행할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, "호메오도메인 단백질 모호크(homeodomain protein Mohawk)", "모호크(Mohawk)" 및 "Mkx"는 동등하며, 상호 교환적으로 사용되고, 달리 명시적으로 언급되지 않는 한 호메오도메인 단백질 모호크로서 공지된 단백질을 말한다.
앞서 언급한 바와 같이, 제 1 관점에서, 본 발명은 모호크(이하, Mkx)를 증가시킬 수 있는 펩타이드, 그의 허용 가능한 이성질체, 염, 용매화물 및/또는 유도체 및/또는 이들의 혼합물에 관한 것이다.
펩타이드가 적용된 대상에서 모호크가 증가한다. 보다 바람직하게는, 포유류에 있어서, 더욱 더 바람직하게는 인간이다.
바람직하게는 모호크의 증가는 모호크의 유전자 발현 및 단백질 합성의 증가이다.
본 발명의 펩타이드에 사용되거나 또는 존재하는 아미노산은 L-아미노산, D-아미노산 또는 이들의 조합인 것으로 고려된다. 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드에 사용되거나 존재하는 아미노산은 L-아미노산이다.
바람직하게는 상기 언급한 이성질체는 입체 이성질체이다. 상기 입체 이성질체는 거울상 이성질체 또는 부분 입체 이성질체인 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 펩타이드는 라세미 혼합물, 부분 입체 이성질체 혼합물, 순수한 거울상 이성질체 또는 순수한 부분 입체 이성질체이다.
바람직하게는 본 발명의 펩타이드는 2 내지 50개의 아미노산, 보다 바람직하게는 4 내지 10개의 아미노산, 더 바람직하게는 4 내지 6개의 아미노산, 훨씬 더 바람직하게는 4개의 아미노산을 포함한다.
본 발명의 펩타이드는 그의 N-말단 및/또는 C-말단에 결합된 적어도 하나의 부위를 포함하는 것으로 고려된다. 상기 적어도 하나의 부위는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 수단에 의해, 바람직하게는 공유적으로 펩타이드에 결합될 수 있다. 바람직한 실시형태에 있어서, 펩타이드는 그의 N-말단에 공유적으로 결합된 하나의 부위 및 그의 C-말단에 공유적으로 결합된 하나의 부위를 포함한다.
일 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 N-말단 부위(바람직하게는 하나의 N-말단 부위)는 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 아르알킬 및 R5-CO- 중에서 선택되며, 여기에서 R5 는 치환되거나 비치환된 C1-C24 알킬 라디칼, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알케닐, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알키닐, 치환되거나 비치환된 C3-C24 사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C5-C24 사이클로알케닐, 치환되거나 비치환된 C8-C24 사이클로알키닐, 치환되거나 비치환된 C6-C30 아릴, 치환되거나 비치환된 C7-C24 아르알킬, 치환되거나 비치환된 3내지 10원의 헤테로사이클릴 환, 및 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개의 탄소 이외의 원자를 가지며 알킬 쇄의 탄소 원자가 1 내지 6개인 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬로 형성된 그룹 중에서 선택된다. 더 바람직하게는, 적어도 하나의 N-말단 부위(바람직하게는 하나의 N-말단 부위)는 아세틸(이하, Ac) 또는 팔미토일(이하, Pal) 중에서 선택된다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 N-말단 부위(바람직하게는 하나의 N-말단 부위)는 Pal이다.
일 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 C-말단 부위(바람직하게는 하나의 C-말단 부위)는 H, -NR3R4- , -OR3 및 -SR3 중에서 선택되고, 여기에서 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족 그룹, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 및 치환되거나 비치환된 아르알킬 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 적어도 하나의 C-말단 부위(바람직하게는 하나의 C-말단 부위)는 H 또는 NH2 중에서 선택된다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 적어도 하나의 C-말단 부위(바람직하게는 하나의 C-말단 부위)는 NH2이다.
따라서, 보다 바람직하게는 본 발명의 펩타이드는 N-말단에 결합된 하나의 부위 및 C-말단에 결합된 하나의 부위를 포함하며, 여기서 N-말단에 결합된 부위는 Pal이고, C-말단에 결합된 부위는 NH2이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드의 서열은 하기 일반식(I)에 따르며, 그의 화장용으로 허용되는 이성질체, 염, 용매화물 및/또는 유도체, 및 이들의 혼합물이 제공된다:
R1-AA1-AA2-AA3-AA4-R2 (I)
상기 식에서,
AA1 은 His이고;
AA2 는 방향족 측쇄를 갖는 아미노산의 그룹 중에서 선택되며;
AA3 은 Lys 또는 Arg 중에서 선택되고;
AA4 는 지방족 비극성 측쇄를 갖는 아미노산의 그룹 중에서 선택되고;
R1 은 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 아르알킬 및 R5-CO- 중에서 선택되며, 여기에서 R5 는 치환되거나 비치환된 C1-C24 알킬 라디칼, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알케닐, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알키닐, 치환되거나 비치환된 C3-C24 사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C5-C24 사이클로알케닐, 치환되거나 비치환된 C8-C24 사이클로알키닐, 치환되거나 비치환된 C6-C30 아릴, 치환되거나 비치환된 C7-C24 아르알킬, 치환되거나 비치환된 3내지 10원의 헤테로사이클릴 환, 및 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개의 탄소 이외의 원자를 가지며 알킬 쇄의 탄소 원자가 1 내지 6개인 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬로 형성된 그룹 중에서 선택되고;
R2 는 H, -NR3R4- , -OR3 및 -SR3 중에서 선택되고, 여기에서 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족 그룹, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 및 치환되거나 비치환된 아르알킬 중에서 선택된다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드에 사용되거나 존재하는 아미노산은 L-아미노산, D-아미노산 또는 이들의 조합인 것으로 고려된다. 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드에 사용되거나 존재하는 아미노산은 L-아미노산이다.
상술한 바와 같이, 바람직하게는 상기 언급한 이성질체는 입체 이성질체이다. 상기 입체 이성질체는 거울상 이성질체 또는 부분 입체 이성질체인 것으로 고려된다. 따라서, 본 발명의 바람직한 실시형태에 있어서, 펩타이드는 라세미 혼합물, 부분 입체 이성질체 혼합물, 순수한 거울상 이성질체 또는 순수한 부분 입체 이성질체이다.
R1 은 바람직하게는 Pal 또는 Ac 중에서 선택되고, 더 바람직하게는 R1 은 Pal이다.
바람직하게는, R2 는 H 또는 NH2 중에서 선택되고, 더 바람직하게는 R2 는 NH2이다.
따라서, 더 바람직하게는 R1 은 Pal이고, R2 는 NH2이다.
바람직하게는 일반식(I)에서, AA2 는 Phe, Tyr 및 Trp의 그룹 중에서 선택되고, 더 바람직하게는 AA2 는 Tyr이다.
바람직하게는, 일반식(I)에서 AA3 은 Arg이다.
또한 바람직하게는, 일반식(I)에서 AA4 는 Ala, Val, Leu 및 Ile의 그룹 중에서 선택되며, 더 바람직하게는 AA4 는 Ala이다.
따라서, 바람직한 실시형태에서, 일반식(I) 중,
AA1 은 His이고;
AA2 는 Phe, Tyr 및 Trp의 그룹 중에서 선택되며;
AA3 은 Lys 또는 Arg 중에서 선택되고;
AA4 는 Ala, Val, Leu 및 Ile의 그룹 중에서 선택되며;
더 바람직하게는, 일반식(I)에서
AA1 은 His이고;
AA2 는 Phe, Tyr 및 Trp의 그룹 중에서 선택되며;
AA3 은 Arg이고;
AA4 는 Ala, Val, Leu 및 Ile의 그룹 중에서 선택된다.
훨씬 더 바람직하게는, 본 발명에 따른 펩타이드(즉, 일반식(I)의 펩타이드)의 서열은 다음과 같다:
- R1-His-Tyr-Arg-Ala-R2 (R1-SEQ ID NO: 1-R2)
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드(즉, 일반식(I)에 따른)의 서열은 다음과 같다:
- Pal-His-Tyr-Arg-Ala-NH2 (Pal-SEQ ID NO: 1-NH2).
본 발명의 펩타이드는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 수단에 의해 합성 및 생산될수 있다. 예를 들어, 이들은 화학적 합성에 의해(바람직하게는 고체상 펩타이드 합성에 의해), 세포 배양물에서 상기 펩타이드의 발현에 의해 또는 식물 또는 동물에서 펩타이드의 형질 전환 생산에 의해 합성 및 생성될 수 있다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 당해 기술 분야에 공지된 임의의 수단에 의해 정제될 수 있다.
이하에 포함된 실시예로부터 명백한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 콜라겐 VI뿐만 아니라, 모호크의 증가된 발현 및 합성을 제공한다. 또한, 이들은 세포외 기질의 합성 및 구조화를 담당하는 유전자를 촉진하거나 상향 조절하는 반면, 상기 세포외 기질의 분해를 담당하는 유전자를 억제하거나 하향 조절하여 유전자 발현을 조절한다. 본 발명의 펩타이드는 또한 콜라겐 합성을 증가시키고 피부 외식편에서 콜라겐 밀도 및 두께를 개선시킨다. 또한, 여성 대상의 얼굴에 국소적으로 적용하면 피부 매끄러움, 주름 방지 및 노화 방지 효과가 있다.
따라서, 본 발명의 펩타이드는 상술한 문제를 해결하고, 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화와 관련된 피부의 징후를 개선하거나; 또는 피부 회춘 및/또는, 예를 들어, 바디 퍼밍(body firming), 체형 조각(body sculpturing), 안면 재배치, 피부 탄력 강화(skin tightening) 및/또는 모공 개선(pore refining)과 같은 피부 결함의 개선을 제공할 수 있는 미용 활성(예를 들어, 노화 방지 및 회춘 활성)을 갖는 추가 또는 대안적인 펩타이드를 제공한다.
또한, 본 발명의 범위 내에는 상기 기재된 바와 같은 본 발명의 임의의 펩타이드와 관련하여 보존적 아미노산 치환을 포함하고 본 발명의 펩타이드에 대해 본원에 기재된 활성을 여전히 나타내는 펩타이드가 있다.
또한, 펩타이드 R1-His-Tyr-Arg-Ala-R2(바람직하게는, Pal-His-Tyr-Arg-Ala-NH2)와 70% 동일성, 바람직하게는 80%, 보다 바람직하게는 90%, 더욱 바람직하게는 95%, 더욱 더 바람직하게는 99% 동일성을 갖는 펩타이드도 본 발명의 범위 내에 포함된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 이온삼투법에 의해, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용하기에 적합하거나 적당하다.
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 국소 적용하기에 적합하거나 적당하다.
제 2 관점에서, 본 발명은 본 발명에 따른 적어도 하나의 펩타이드를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 본 발명의 한 유형의 펩타이드 또는 본 발명의 상이한 펩타이드의 조합 또는 혼합물, 바람직하게는 본 발명의 한 유형의 펩타이드를 포함하는 것으로 고려된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 화장용 조성물이다.
본 발명의 조성물은 화장용으로 유효한 양의 적어도 하나의 본 발명의 펩타이드를 포함한다. 더 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 0.0001%(질량/부피 g/100mL, 이하, m/v) 내지 0.05%(m/v)의 본 발명의 적어도 하나의 펩타이드를 포함한다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 0.0001%(m/v) 내지 0.001%(m/v)의 본 발명의 적어도 하나의 펩타이드, 더 바람직하게는 0.0005%(m/v)를 포함한다. 다른 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 0.05%(m/v) 내지 0.001%(m/v)의 본 발명의 적어도 하나의 펩타이드를 포함한다.
본 발명의 펩타이드의 활성 결과로서, 본 발명의 조성물은 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화와 관련된 피부 징후의 개선을 제공하거나; 예를 들어, 바디 퍼밍, 체형 조각, 안면 재배치, 피부 탄력 강화 및/또는 모공 개선과 같은 피부 결점 개선 및/또는 피부 회춘을 제공한다.
본 발명의 조성물은 또한 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분을 포함하는 것으로 고려된다. 상기 추가의 화장품 성분은 적어도 하나의 부형제 및/또는 적어도 하나의 추가적인 화장품 활성 성분일 수 있다.
추가의 화장품 성분은 예를 들어, 안정화제, 가용화제, 비타민, 착색제 및 향료와 같은 보조제; 담체; 및/또는 다른 화장품 활성 성분으로서 당해 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 성분을 포함한다.
상기 추가 화장품 성분은 조성물의 나머지 성분, 특히 본 발명의 조성물에 포함된 본 발명의 펩타이드와 물리적으로 및 화학적으로 양립 가능해야 한다. 마찬가지로, 상기 추가 화장품 성분의 성질은 본 발명의 펩타이드 및 조성물의 이점을 허용할 수 없을 정도로 변경해서는 안 된다. 상기 추가 화장품 성분은 합성 또는 천연 기원, 예를 들어, 식물 추출물일 수 있거나, 생체 발효 공정에서 유래할 수 있다(예를 들어, CTFA Cosmetic Ingredient Handbook, Eleventh Edition (2006) 참조).
상기 언급된 추가의 화장품 성분은 예를 들어, 멜라닌 합성 억제제, 미백제 또는 탈색제, 노화방지제, NO-신타제 억제제, 항산화제, 대기 오염 방지제 및/또는 유리 라디칼 포획제, 항당화제, 유화제, 보습물질(emollient), 유기 용매, 액상 추진제, 피부 컨디셔너, 예를 들면, 습윤제, 수분 유지 물질(moisture retaining substance), 알파 히드록시산, 보습제(moisturizer), 비타민, 안료 또는 착색제, 염료, 겔화 중합체, 증점제, 계면활성제, 유연제, 기타 주름 방지제, 눈 밑의 백을 줄이거나 제거할 수 있는 제제, 각질제, 항균제, 항진균제, 살균제, 진피 또는 표피 거대 분자 합성을 자극 하고/하거나 이들의 분해를 방지하거나 억제할 수 있는 제제, 예를 들면, 콜라겐 합성 자극제, 엘라스틴 합성 자극제, 라미닌 합성 자극제, 콜라겐 분해 억제제, 엘라스틴 분해 억제제, 섬유 아세포 증식 자극제, 케라티노사이트 증식 자극제, 케라티노사이트 분화(keratinocyte differentiation) 자극제, 지질 합성 및 각질층 성분(세라마이드, 지방산 등) 합성 자극제, 피부 이완제(dermorelaxing agents), 글리코사미노글리칸 합성 자극제, DNA 수복제, DNA 보호제, 프로테오좀 활성 촉진제, 항소양제, 민감성 피부 치료제, 재확인제(reaffirming agents), 수렴제, 피지 생성 조절제, 지방 분해 촉진제, 항셀룰라이트제, 진정제, 항염증제, 모세혈관 순환 및/또는 미세 순환에 작용하는 제제, 세포 미토콘드리아에 작용하는 제제, 진피-표피 접합을 개선하기 위한 제제, 방부제, 방향제, 킬레이트제, 식물 추출제, 정유(essential oil), 해양 추출물, 생체 발효 공정에서 유래된 제제, 미네랄염, 세포 추출물 및/또는 솔라 필터(자외선 A 및 B 광선에 대해 활성인 유기 또는 무기 광보호제) 등과 같은 피부 및/또는 모발 청결을 위한 케어용 조성물 및/또는 다한증을 예방하기 위한 데오도런트 및/또는 크림에 일반적으로 사용되는 성분을 포함하는 것으로 고려된다.
일 실시형태에 있어서, 추가의 화장품 성분 중 적어도 하나는 본 발명의 펩타이드에 대해 상기에 개시된 것과 동일하거나 유사하거나 보충적이거나 상이한 미용 활성을 발휘할 수 있는 화장품 활성 성분(principle) 또는 물질이다. 본 발명의 조성물은 다른 주름 방지 또는 노화 방지제, 예를 들어, 콜라겐, 엘라스틴, 성장 인자, 히알루론산 부스터, 장벽 기능제, 발광제, 콜라겐 I, III, IV 및/또는 VI 및 라미닌의 발현 및/또는 합성을 자극하는 제제; 글리코사미노글리칸 또는 히알루론산의 합성 촉진제; 엘라스틴 및 다른 탄성 섬유 관련 단백질의 발현 및/또는 합성을 자극하는 제제; 콜라겐 및/또는 탄성 섬유 분해를 억제하는 제제; 미토콘드리아 관련 단백질(예를 들어, 시르투인 및 아코니타제)의 발현 및/또는 합성을 자극하는 제제; 초점 접착 단백질의 발현 및/또는 합성을 자극하는 제제; 케라티노사이트 및/또는 섬유 아세포 증식 및/또는 분화를 자극하는 제제; 항산화제; 대기 오염 방지 및 유리 라디칼 포획제; 항당화제(anti-glycation agent), 해독제; 경시 노화, 환경 노화 및 염증 노화를 감소시키는 제제; 및 멜라닌 생성 감소 및/또는 티로시나제 억제 제제 및/또는 지질 합성 및 표피 성분(케라틴) 및 보다 구체적으로 각질층 성분(케라틴, 세라마이드, 필라그린, 로리크린 및 SPRR1B)의 합성을 자극하는 제제를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 추가 화장품 성분의 적어도 하나는 Argireline® (아세틸 헥사펩타이드-8), Leuphasyl® (펜타펩타이드-3), Inyline® (아세틸 헥사펩타이드-30), Syn-Ake® (트리펩타이드-3) 또는 이들의 조합이다.
또한, 본 발명의 화장용 조성물(또는 본 발명의 펩타이드)은 "리브 온(leave on)" 및 "린스 오프(rinse-off)" 제형을 포함하여, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼, 페이스트, 겔, 크림, 분말, 스프레이, 로션, 오일, 도포제(liniment), 세럼, 무스, 연고, 바 또는 연필과 같은 당해 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 타월렛(towelette), 하이드로겔, 접착성(또는 비접착성) 패치 또는 안면 마스크와 같은 다양한 유형의 고체 액세서리에 당해 기술 분야에 공지된 기술에 의해 혼입될 수 있거나, 또는 컨실러(concealer), 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션 등과 같은 다양한 메이크업 라인 제품에 혼입될 수 있다.
본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 펩타이드는 둘 다 화장 지속 방출 시스템 및/또는 담체, 예를 들면, 리포좀, 밀리입자, 마이크로입자 및 나노입자뿐 아니라, 스펀지, 소포(vesicle), 미셀, 밀리스피어, 마이크로스피어, 나노스피어, 리포스피어, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐뿐 아니라, 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼에 활성 성분의 더 큰 침투를 얻기 위한 목적으로 혼입될 수 있는 것으로 고려된다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 이온삼투법에 의해, 더 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는, 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용하기에 적합하거나 적당하다.
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 조성물은 국소적으로(더 바람직하게는 크림 형태로), 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다라, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용하기에 적합하거나 적당하다.
이미 위에서 언급한 바와 같이, 제 3 관점에서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에서 이의 화장품으로서의 용도에 관한 것이다.
상기 언급된 바와 같이, 바람직하게는, 본 발명의 조성물은 화장용 조성물이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 화장품으로서의 용도는 피부 노화의 징후를 감소, 예방 및/또는 제거하기 위한 것이다.
위에서 언급한 피부 노화의 징후는 명백한 바와 같이, 피부 노화의 미용적 징후이다.
피부 노화는 경시 및/또는 환경 노화로 인한 것이다.
피부 노화의 미용적 징후는 바람직하게는 주름, 거칠기 및/또는 처짐, 더 바람직하게는 얼굴 주름, 얼굴 처짐 및/또는 얼굴 거칠기, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 주름이다.
또 다른 바람직한 실시형태에 있어서, 화장품으로서의 용도는 피부 회춘 및/또는 피부 결점의 감소, 예방 및/또는 제거를 위한 것이며, 보다 바람직하게는 바디 퍼밍, 체형 조각, 안면 재배치, 피부 탄력 강화 및/또는 모공 개선, 보다 바람직하게는 바디 퍼밍, 체형 조각, 안면 재배치, 얼굴 피부 탄력 강화 및/또는 얼굴 모공 개선, 훨씬 더 바람직하게는 안면 재배치 및/또는 얼굴 피부 탄력 강화를 위한 것이다.
바디 퍼밍 및/또는 체형 조각은 바람직하게는 엉덩이, 가슴, 팔 및/또는 다라 탄력 및/또는 조각을 의미한다.
따라서, 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 피부의 탄력(firmness) 또는 팽팽함(tightness)의 상실, 바람직하게는 피부 팽팽함의 상실, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 피부 팽팽함의 상실을 처리하는 데 사용할 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 또한 조직화된 콜라겐 섬유 손실의 처리, 따라서 바람직하게는 안면 재배치의 처리에 사용할 수도 있다. 하기 실시예에서 직접 파생된 바와 같이, 조직화된 콜라겐 섬유의 손실에 대한 이러한 처리는 적어도 호메오도메인 단백질 모호크 및 콜라겐 VI의 생산을 개선하도록 수행된다.
또한, 바람직한 실시형태에 있어서, 대상은 포유류, 더욱 더 바람직하게는 인간이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 이온삼투법에 의해, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이에, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 국소적으로(더 바람직하게는 크림 형태로), 더 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 보다 더 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이에, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
또한, 본 발명의 화장품으로서의 용도에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 화장용으로 유효한 양으로 사용된다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.05%(m/v)의 농도로 사용된다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.001%(m/v), 더 바람직하게는 0.0005%(m/v)의 농도로 사용된다. 또 다른 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.05%(m/v) 내지 0.001%(m/v)의 농도로 사용된다.
위에서 이미 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 또한 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분을 포함하는 것으로 고려된다. 상기 추가적인 화장품 성분은 적어도 하나의 부형제 및/또는 적어도 하나의 추가적인 화장품 활성 성분일 수 있으며, 이는 상기 설명된 바와 같다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 상기 언급한 바에 따른 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분과 조합하여 사용되는 것으로 고려된다.
또한, 본 발명의 펩타이드 및 본 발명의 조성물은 "리브 온(leave on)" 및 "린스 오프(rinse-off)" 제형을 포함하여, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼, 페이스트, 겔, 크림, 분말, 스프레이, 로션, 오일, 도포제(liniment), 세럼, 무스, 연고, 바 또는 연필과 같은 당해 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 타월렛(towelette), 하이드로겔, 접착성(또는 비접착성) 패치 또는 안면 마스크와 같은 다양한 유형의 고체 액세서리에 당해 기술 분야에 공지된 기술에 의해 혼입될 수 있거나, 또는 컨실러(concealer), 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션과 같은 다양한 메이크업 라인 제품에 혼입될 수 있다.
본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 펩타이드는 둘 다 화장 지속 방출 시스템 및/또는 담체, 예를 들면, 리포좀, 밀리입자, 마이크로입자 및 나노입자뿐 아니라, 스펀지, 소포(vesicle), 미셀, 밀리스피어, 마이크로스피어, 나노스피어, 리포스피어, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐뿐 아니라, 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼에 활성 성분의 더 큰 침투를 얻기 위한 목적으로 혼입될 수 있다.
제 4 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에서 이의 미용적 용도(즉, 상기 설명한 바와 같음)에 관한 것이다.
상기 언급한 바와 같이, 바람직하게는 본 발명의 조성물은 화장용 조성물이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 미용적 용도는 피부 노화의 징후를 감소, 예방 및/또는 제거하는 것이다.
상기에서 언급한 피부 노화의 징후는 명백한 바와 같이 피부 노화의 미용적 징후이다.
피부 노화는 경시적 및/또는 환경적 노화로 인한 것이다.
피부 노화의 미용적 징후는 바람직하게는 주름, 거칠기 및/또는 처짐, 보다 바람직하게는 얼굴 주름, 얼굴 처짐 및/또는 얼굴 거칠기, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 주름이다.
또 다른 바람직한 실시형태에 있어서, 미용적 용도는 피부 회춘 및/또는 피부 결점의 감소, 예방 및/또는 제거를 위한 것이며, 보다 바람직하게는 피부 탄력, 체형 조각, 안면 재배치, 피부 탄력 강화 및/또는 모공 개선, 보다 바람직하게는 바디 퍼밍, 체형 조각, 안면 재배치, 얼굴 피부 탄력 강화 및/또는 얼굴 모공 개선, 훨씬 더 바람직하게는 안면 재배치 및/또는 얼굴 피부 탄력 강화를 위한 것이다.
바디 퍼밍 및/또는 체형 조각은 바람직하게는 엉덩이, 가슴, 팔 및/또는 다리 퍼밍 및/또는 조각을 의미한다.
따라서, 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 피부의 탄력 또는 팽팽함의 상실, 바람직하게는 피부의 팽팽함 상실, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 피부의 팽팽함의 상실을 처리하는 데 사용할 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 또한 조직화된 콜라겐 섬유의 손실의 처리, 따라서 바람직하게는 안면 재배치의 처리에 사용될 수 있다. 하기 실시예에서 직접 파생되는 바와 같이, 조직화된 콜라겐 섬유의 손실에 대한 이러한 처리는 적어도 호메오도메인 단백질 모호크 및 콜라겐 VI의 생산을 개선하도록 수행된다.
또한, 바람직한 실시형태에 있어서, 대상은 포유류, 더 바람직하게는 인간이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 이온삼투법에 의해, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 다리, 팔, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 국소적으로(더 바람직하게는 크림 형태로), 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
또한, 본 발명의 미용적 용도에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 화장용으로 유효한 양으로 사용된다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.05%(m/v)의 농도로 사용된다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.001%(m/v), 더 바람직하게는 0.0005%(m/v)의 농도로 사용된다. 또 다른 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.05%(m/v) 내지 0.001%(m/v)의 농도로 사용된다.
위에서 이미 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 또한 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분을 포함하는 것으로 고려된다. 상기 추가적인 화장품 성분은 적어도 하나의 부형제 및/또는 적어도 하나의 추가적인 화장품 활성 성분일 수 있으며, 이는 상기 설명된 바와 같다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 상기 언급한 바에 따른 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분과 조합하여 사용되는 것으로 고려된다.
또한, 본 발명의 펩타이드 및 본 발명의 조성물은 "리브 온(leave on)" 및 "린스 오프(rinse-off)" 제형을 포함하여, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼, 페이스트, 겔, 크림, 분말, 스프레이, 로션, 오일, 도포제(liniment), 세럼, 무스, 연고, 바 또는 연필과 같은 당해 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 타월렛(towelette), 하이드로겔, 접착성(또는 비접착성) 패치 또는 안면 마스크와 같은 다양한 유형의 고체 액세서리에 당해 기술 분야에 공지된 기술에 의해 혼입될 수 있거나, 또는 컨실러(concealer), 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션과 같은 다양한 메이크업 라인 제품에 혼입될 수 있다
본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 펩타이드는 둘 다 화장 지속 방출 시스템 및/또는 담체, 예를 들면, 리포좀, 밀리입자, 마이크로입자 및 나노입자뿐 아니라, 스펀지, 소포(vesicle), 미셀, 밀리스피어, 마이크로스피어, 나노스피어, 리포스피어, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐뿐 아니라, 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼에 활성 성분의 더 큰 침투를 얻기 위한 목적으로 혼입될 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 제 5 관점에 있어서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드 또는 조성물을 필요로 하는 대상에서 이의 사용을 포함하는 것을 특징으로 하는 미용 방법에 관한 것이다.
상기 언급한 바와 같이, 바람직하게는 본 발명의 조성물은 화장용 조성물이다.
상기로부터 유도할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 펩타이드 또는 조성물의 본 발명의 미용 방법에서의 사용은 화장품으로서의 용도이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 미용 방법은 이를 필요로 하는 대상에서 피부 노화 징후를 감소, 예방 및/또는 제거하는 것이다.
위에서 언급한 피부 노화의 징후는 명백한 바와 같이, 피부 노화의 미용적 징후이다.
피부 노화는 경시적 및/또는 환경적 노화로 인한 것이다.
피부 노화의 미용적 징후는 바람직하게는 주름, 거칠기 및/또는 처짐, 보다 바람직하게는 얼굴 주름, 얼굴 처짐 및/또는 얼굴 거칠기, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 주름이다.
또 다른 바람직한 실시형태에 있어서, 미용 방법은 이를 필요로 하는 대상에서 피부 회춘 및/또는 피부 결점의 감소, 예방 및/또는 제거를 위한 것이며, 보다 바람직하게는 피부 탄력, 체형 조각, 안면 재배치, 피부 탄력 강화 및/또는 모공 개선, 보다 바람직하게는 바디 퍼밍, 체형 조각, 안면 재배치, 얼굴 피부 탄력 강화 및/또는 얼굴 모공 개선, 훨씬 더 바람직하게는 안면 재배치 및/또는 얼굴 피부 탄력 강화를 위한 것이다.
바디 퍼밍 및/또는 체형 조각은 바람직하게는 엉덩이, 가슴, 팔 및/또는 다리 퍼밍 및/또는 조각을 의미한다.
따라서, 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 피부의 탄력 또는 팽팽함의 상실, 바람직하게는 피부의 팽팽함 상실, 훨씬 더 바람직하게는 얼굴 피부 팽팽함의 상실을 처리하는 데 사용할 수 있다.
상기 언급한 바와 같이, 본 발명의 펩타이드는 또한 조직화된 콜라겐 섬유의 손실의 처리, 따라서 바람직하게는 안면 재배치의 처리에 사용될 수 있다. 하기 실시예에서 직접 파생되는 바와 같이, 조직화된 콜라겐 섬유의 손실에 대한 이러한 처리는 적어도 호메오도메인 단백질 모호크 및 콜라겐 VI의 생산을 개선하도록 수행된다.
또한, 바람직한 실시형태에 있어서, 대상은 포유류, 더 바람직하게는 인간이다.
바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 이온삼투법에 의해, 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 다리, 팔, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 국소적으로(더 바람직하게는 크림 형태로), 보다 바람직하게는 대상의 얼굴 및/또는 신체에, 더욱 바람직하게는 대상의 얼굴, 목, 손, 팔, 다리, 가슴 및/또는 엉덩이, 훨씬 더 바람직하게는 대상(바람직하게는 인간)의 얼굴 및/또는 목에 적용된다.
바람직하게는 대상은 포유류, 더 바람직하게는 인간이다.
또한, 본 발명의 미용 방법에서, 본 발명의 펩타이드 또는 조성물은 화장용으로 유효한 양으로 사용된다. 보다 바람직하게는, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.05%(m/v)의 농도로 사용된다. 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.0001%(m/v) 내지 0.001%(m/v), 더 바람직하게는 0.0005%(m/v)의 농도로 사용된다. 또 다른 가장 바람직한 실시형태에 있어서, 본 발명의 펩타이드는 0.05%(m/v) 내지 0.001%(m/v)의 농도로 사용된다.
위에서 이미 언급한 바와 같이, 본 발명의 조성물은 또한 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분을 포함하는 것으로 고려된다. 상기 추가적인 화장품 성분은 적어도 하나의 부형제 및/또는 적어도 하나의 추가적인 화장품 활성 성분일 수 있으며, 이는 상기 설명된 바와 같다. 또한, 본 발명의 펩타이드는 상기 언급한 바에 따른 적어도 하나의 추가적인 화장품 성분과 조합하여 사용되는 것으로 고려된다.
또한, 본 발명의 펩타이드 및 본 발명의 조성물은 "리브 온(leave on)" 및 "린스 오프(rinse-off)" 제형을 포함하여, 예를 들어, 용액, 현탁액, 에멀젼, 페이스트, 겔, 크림, 분말, 스프레이, 로션, 오일, 도포제(liniment), 세럼, 무스, 연고, 바 또는 연필과 같은 당해 기술 분야에서 일반적으로 사용되는 임의의 형태로 제형화할 수 있다. 본 발명의 펩타이드 및 조성물은 또한 타월렛(towelette), 하이드로겔, 접착성(또는 비접착성) 패치 또는 안면 마스크와 같은 다양한 유형의 고체 액세서리에 당해 기술 분야에 공지된 기술에 의해 혼입될 수 있거나, 또는 컨실러(concealer), 메이크업 파운데이션, 로션 또는 메이크업 제거 로션과 같은 다양한 메이크업 라인 제품에 혼입될 수 있다
본 명세서에 개시된 바와 같이, 본 발명의 조성물 또는 본 발명의 펩타이드는 둘 다 화장 지속 방출 시스템 및/또는 담체, 예를 들면, 리포좀, 밀리입자, 마이크로입자 및 나노입자뿐 아니라, 스펀지, 소포(vesicle), 미셀, 밀리스피어, 마이크로스피어, 나노스피어, 리포스피어, 밀리캡슐, 마이크로캡슐 및 나노캡슐뿐 아니라, 마이크로에멀젼 및 나노에멀젼에 활성 성분의 더 큰 침투를 얻기 위한 목적으로 혼입될 수 있다.
더 나은 이해를 위해, 본 발명은 첨부된 도면을 참조하여 이하에서 더 상세히 설명되며, 이는 실시예로서, 예시적이고 비제한적인 실시예를 참조하여 제시된다.
도 1은 기저 상태와 비교하여(즉, 기저 상태의 세포 생존율을 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플과의 비교를 수행함) 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 증가하는 농도로 처리한 후의 HEKa 세포 생존율을 나타낸다. 도 1의 경우, x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 기저 상태(처리하지 않은 세포) 및 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL, 0.01 mg/mL, 0.05 mg/mL 및 0.1 mg/mL로 각각 처리된 세포에 해당한다. y축은 세포 생존율(기저 상태 기준)을 나타낸다.
도 2는 기저 상태와 비교하여(즉, 기저 상태의 세포 생존율을 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플과의 비교를 수행함), 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리한 후의 HDFa 세포 생존율을 나타낸다. 도 2의 경우, x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 기저 상태(처리하지 않은 세포) 및 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL, 및 0.01 mg/mL로 각각 처리된 세포에 해당한다. y축은 세포 생존율(기저 상태 기준)을 나타낸다. ** 는 p < 0.01 을 나타내고, *** 는 p < 0.001을 나타낸다.
도 3은 처리되지 않은 1차 인간 진피 섬유아세포와 관련하여 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리하여 유도되고 하우스키핑 유전자 GAPDH(글리세르알데히드 3-인산염 탈수소효소)에 의해 규정화된 1차 인간 진피 섬유아세포에서 유전자 발현 프로파일의 조절을 나타낸다. 도 3은 상기 언급한 펩타이드(0.005 mg/mL의 농도, 모든 유전자에 대해 6시간 동안)로 처리하여 얻어진 결과를 나타내며, 여기서 위에서 아래로 막대는 각각 다음 유전자를 말한다: MMP3(매트릭스 메탈로프로테이나제-3), MMP1(매트릭스 메탈로프로테이나제-1), COL14A1(콜라겐 타입 XIV 알파 1 쇄), COL12A1(콜라겐 타입 XII 알파 1 쇄), COL7A1(콜라겐 타입 VII 알파 1 쇄), COL6A1(콜라겐 타입 VI 알파 1 쇄), COL5A1(콜라겐 타입 V 알파 1 쇄), COL4A5(콜라겐 타입 IV 알파 5 쇄), COL3A1(콜라겐 타입 III 알파 1 쇄), MKX(모호크 호메오박스) 및 ZEB2(아연 핑거 E-박스 바인딩 호메오박스 2). x축은 기저 상태에 대한 배수 변화를 말한다. 음수 배수 변화는 유전자 발현의 하향 조절을 의미하는 반면 양성 배수 변화는 상향 조절을 의미한다.
도 4는 처리되지 않은 1차 인간 진피 섬유아세포와 관련하여 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리하여 유도되고 하우스키핑 유전자 GAPDH(글리세르알데히드 3-인산염 탈수소효소)에 의해 규정화된 1차 인간 진피 섬유아세포에서 유전자 발현 프로파일의 조절을 나타낸다. 도 4는 상기 언급한 펩타이드(0.005 mg/mL의 농도, 24시간 동안)로 처리하여 얻어진 결과를 나타내며, 여기에서 막대는 유전자 COL13A1(콜라겐 타입 XIII 알파 1 쇄)에 해당한다. x축은 기저 상태에 대한 배수 변화를 말한다. 음수 배수 변화는 유전자 발현의 하향 조절을 의미하는 반면 양수 배수 변화는 상향 조절을 의미한다.
도 5는 처리되지 않은 1차 인간 진피 섬유아세포와 관련하여 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리하여 유도되고 하우스키핑 유전자 GAPDH(글리세르알데히드 3-인산염 탈수소효소)에 의해 규정화된 1차 인간 진피 섬유아세포에서 유전자 발현 프로파일의 조절을 나타낸다. 도 5는 상기 언급한 펩타이드(0.005 mg/mL의 농도, 모든 유전자에 대해 6시간 동안)로 처리하여 얻어진 결과를 나타내며, 여기에서 위에서 아래로 막대는 다음 유전자를 각각 말한다: TGFB1(변형 성장 인자 베타-1), FN1(피브로넥틴 1), LOXL3(3형 리실 옥시다제), LOXL2(2형 리실 옥시다제) 및 HSP47(세르핀 H1). x축은 기저 상태에 대한 배수 변화를 말한다. 음수 배수 변화는 유전자 발현의 하향 조절을 의미하는 반면 양수 배수 변화는 상향 조절을 의미한다.
도 6은 증가하는 농도의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 로 처리된 인간 진피 섬유아세포에 의한 콜라겐 VI 합성의 백분율 증가를 음성 대조군(디메틸 설폭사이드로 처리됨)과 비교하여 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 콜라겐 VI 합성을 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플의 콜라겐 VI 합성과 비교를 수행함). 도 6의 경우, x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 음성 대조군(디메틸 설폭사이드로 처리된 세포) 및 0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL, 0.01 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 각각 처리된 세포에 해당한다. y축은 콜라겐 VI 합성율을 보여준다(음성 대조군과 관련하여). **는 p < 0.01을 나타내고, ***는 p < 0.001을 나타낸다.
도 7은 증가하는 농도의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리된 인간 진피 섬유아세포에 의한 모호크 합성의 백분율 증가를 음성 대조군(디메틸 설폭사이드로 처리됨)과 비교하여 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 모호크 합성을 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플의 모호크 합성과 비교를 수행함). 도 7의 경우, 검은색 칼럼은 24시간 처리를 말하고, 흰색 칼럼은 48시간 처리를 나타낸다. 또한, 이 도면의 x축에서 왼쪽부터 오른쪽으로 2개의 칼럼(검은색 1개, 흰색 1개)의 각 그룹은 음성 대조군(디메틸 설폭사이드로 처리된 세포), 처리되지 않은 세포 및 0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL, 0.01 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 각각 처리된 세포에 해당한다. y축은 모호크 합성율을 보여준다(음성 대조군과 관련하여). **는 p < 0.01을 나타내고, ***는 p < 0.001을 나타낸다.
도 8은 콜라겐의 가교 결합을 나타낸다. "a" 표시의 라인은 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 0.04 mg/mL의 농도에서 처리된 세포를 나타내고; "b" 표시의 라인은 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 0.02 mg/mL 농도에서 처리된 세포를 나타내며; "c" 표시의 라인은 디메틸 설폭사이드로 처리된 세포(음성 대조군)를 나타낸다. x축은 초 단위의 시간을 나타내고, y축은 450nm에서 흡광도 단위의 광학 밀도를 나타낸다.
도 9는 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 비교하여 방출된 LDH의 백분율에 의해 조직 생존율을 나타낸다(즉, 음성 대조군의 방출된 LDH를 100%로 안정화한 다음 실시예 11에서 시험한 샘플의 나머지에서 방출된 LDH와의 비교를 수행함). 마름모가 있는 라인은 처리되지 않은 hOSEC(음성 대조군)를 나타내고; 사각형이 있는 라인은 노화된 hOSEC를 나타내며; 삼각형이 있는 라인은 노화된 hOSEC+제품 A(크림)를 말하며; 십자 표시의 라인은 노화된 hOSEC+ 제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)를 나타낸다. x축은 일 단위의 시간을 나타내고, y축은 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 관련하여 방출된 LDH의 %를 나타낸다.
도 10은 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 비교하여 레조루핀의 대사 활성을 백분율로 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 레조루핀을 100%로 안정화한 다음 실시예 11에서 시험한 샘플의 나머지에서 레조루핀과의 비교를 수행함). 마름모가 있는 라인은 처리되지 않은 hOSEC(음성 대조군)를 나타내고; 사각형이 있는 라인은 노화된 hOSEC를 나타내며; 삼각형이 있는 라인은 노화된 hOSEC+제품 A(크림)를 나타내고; 십자 표시가 있는 선은 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)를 나타낸다. x축은 일 단위의 시간을 나타내고, y축은 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 관련하여 레조루핀의 %를 나타낸다.
도 11은 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 비교하여 실시예 11의 상이한 실험군에서 콜라겐 정량을 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 콜라겐 함량을 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플의 콜라겐 함량을 비교하여 수행함). x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 처리되지 않은 hOSEC(음성 대조군); 노화된 hOSEC; 노화된 hOSEC+제품 A(크림); 및 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)에 각각 해당한다. y축은 음성 대조군에 대한 콜라겐 양의 백분율을 나타낸다. *는 p < 0.05를 나타내고, **는 p < 0.01을 나타낸다.
도 12는 실시예 11의 상이한 실험군의 투과 전자 현미경 이미지를 나타낸다. 보다 정확하게는 도 12A는 처리되지 않은 hOSEC에 해당하고; 도 12B는 노화된 hOSEC에 해당하며; 도 12C는 제품 A(크림)로 처리된 노화된 hOSEC에 해당하고; 도 12D는 제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)로 처리된 노화된 hOSEC에 해당한다.
도 13은 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 비교하여 실시예 11의 상이한 실험군에서 콜라겐 밀도를 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 콜라겐 밀도를 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플의 콜라겐 밀도를 비교하여 수행함). x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 처리되지 않은 hOSEC(음성 대조군); 노화된 hOSEC; 노화된 hOSEC+제품 A(크림); 및 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)에 각각 해당한다. y축은 음성 대조군에 대한 콜라겐 밀도의 백분율을 나타낸다. *는 p < 0.05를 나타낸다.
도 14는 음성 대조군(처리하지 않은 hOSEC)과 비교하여 실시예 11의 상이한 실험군에서 콜라겐 섬유 두께를 나타낸 것이다(즉, 음성 대조군의 콜라겐 섬유 두께를 100%로 안정화한 다음 시험한 나머지 샘플의 콜라겐 섬유 두께를 비교하여 수행함). x축의 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 처리되지 않은 hOSEC(음성 대조군); 노화된 hOSEC; 노화된 hOSEC+제품 A(크림); 및 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)에 각각 해당한다. y축은 음성 대조군에 대한 콜라겐 섬유 두께의 백분율을 나타낸다. *는 p < 0.05를 나타낸다.
도 15는 44명의 여성 지원자에 대한 국소 적용 후 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 효능을 나타낸다(50% 밝은 색소(포토타입 II-III) 및 50% 어두운 색소(포토타입 V-VI)). 스톡으로부터 2%(m/v)의 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드 0.05%(m/v) 및 위약을 포함하는 화장품 제형을 각각 지원자의 얼굴 전체에 56일 동안 적용하였다. 도 15(A)는 AEVA(Eotech, France)에 의한 지원자의 볼 거칠기 개선을 보여준다. AEVA 평가는 프린지 프로젝션 시스템과 결합된 스테레오 카메라로 얻은 피부 토포그래피의 3D 이미지를 기반으로 한다. x축에서, 왼쪽에서 오른쪽으로 6개의 칼럼 그룹은 각각 다음에 해당한다: 처리 개시로부터 28일째 모든 지원자의 평균, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 28일째, 포토타입 II-III 지원자의 경우 28일째, 56일째 모든 지원자의 평균, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 56일째 및 포토타입 II-III의 경우 56일째. 또한, x축에서, 칼럼 그룹 각각에 있어서, 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 화장품 제형(위약) 및 동일한 제형이나 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드를 또한 포함하는 제형으로 처리된 지원자에 해당한다. y축은 초기 시간에 대한 거칠기 파라미터(Ra)의 변동 비율을 나타낸다. 도 15(B)는 AEVA에 의한 지원자의 볼의 완화 개선을 보여준다. x축에서, 왼쪽에서 오른쪽으로 6개의 칼럼 그룹은 각각 다음에 해당한다: 처리 개시로 부터 28일째 모든 지원자의 평균, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 28일째, 포토타입 II-III 지원자의 경우 28일째, 56일째 모든 지원자의 평균, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 56일째 및 포토타입 II-III의 경우 56일째. 또한, x축에서, 칼럼 그룹 각각에 있어서, 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 화장품 제형(위약) 및 동일한 제형이나 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드를 또한 포함하는 제형으로 처리된 지원자에 해당한다. y축은 초기 시간에 대한 완화 파라미터(Rz)의 변동 비율을 나타낸다. 도 15(C)는 눈가 주름 부위의 주름 깊이 변화량(%)을 나타낸다. x축에서, 왼쪽에서 오른쪽으로 6개의 칼럼 그룹은 각각 다음에 해당한다: 처리 개시로 부터 28일째 모든 지원자의 평균, 56일째 모든 지원자의 평균, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 28일째, 포토타입 V-VI 지원자의 경우 56일째, 포토타입 II-III 지원자의 경우 28일째, 및 포토타입 II-III 지원자의 경우 56일째. 또한, x축에서, 칼럼 그룹 각각에 있어서, 왼쪽에서 오른쪽으로 칼럼은 화장품 제형(위약) 및 동일한 제형이나 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드를 또한 포함하는 제형으로 처리된 지원자에 해당한다. y축은 초기 시간에 대한 눈가 주름 부위의 주름 깊이 변화량(%)을 나타낸다.
실시예
약어:
아미노산에 사용되는 약어는 Eur. J. Biochem.(1984)138:937에 요약된 1983 IUPAC-IUB 생화학 명명법 공동위원회 권장 사항(IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature recommendations)을 따른다.
Ac, 아세틸; Ala, 알라닌; Arg, 아르기닌; C-terminal, 카르복시-말단; DCM, 디클로로메탄; DIEA, N,N'-디이소프로필에틸아민; DIPCDI, N,N'-디이소프로필카르보디이미드; DMF, N,N-디메틸포름아미드; EDGS, EpiLife 정의 성장 보충제; equiv, 당량; ESI-MS, 일렉트로스프레이 이온화 질량 분광분석(electrospray ionization mass spectrometry); Fmoc, 9-플루오레닐메틸옥시카르보닐; His, 히스티딘; HOBt, 1-히드록시벤조트리아졸; hOSEC, 인간 기관형 피부 이식 배양; HPLC, 고성능 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography); HRP, 양고추냉이 과산화 효소; Ile, 이소류신(Isoleucine); LSGS, 저 혈청 성장 보조제; MBHA, p-메틸벤즈히드릴아민: Leu, 류신(leucine); Lys, 리신(lysine); Me, 메틸; MeCN, 아세토니트릴; MeOH, 메탄올; Met, 메티오닌; N-terminal, 아미노-말단; Pal, 팔미토일; Pbf, 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-설포닐; Phe, 페닐알라닌; rpm, 분당 회전수; RT, 실온; tBu, tert-부틸; TFA, 트리플루오로아세트산; TIS, 트리이소프로필실란; TMB, 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘; Trt, 트리페닐메틸 또는 트리틸; Val, 발린; Trp, 트립토판; Tyr, 티로신; Val, 발린.
실시예에 포함된 화학 합성 절차와 관련하여, 모든 합성 공정은 다공성 폴리에틸렌 디스크가 장착된 폴리프로필렌 주사기 또는 다공성 플레이트가 장착된 Pyrex® 반응기에서 수행되었다. 모든 시약과 용매는 합성 품질이었으며 추가 처리 없이 사용되었다. 용매와 가용성 시약은 흡입에 의해 제거되었다. Fmoc 그룹을 피페리딘-DMF(2:8, v/v)로 제거했다(적어도 1Х1분, 2Х10분, 5 mL/g 수지)(Lloyd Williams P. et al., Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins, CRC, 1997, Boca Raton(Fla., USA)). 탈보호, 커플링 및 다시 탈보호 단계 사이의 세척은 10ml 용매/수지 g을 사용하여 매회 DMF(3Х1분) 및 DCM(3Х1분)으로 수행했다. 커플링 반응은 3ml 용매/수지 g으로 실시했다. 커플링 제어는 닌히드린 테스트를 수행하여 실시했다(Kaiser E. et al., Anal. Biochem., 1970, 34: 595598). 모든 합성 반응 및 세척은 RT에서 수행했다.
실시예 1: 펩타이드의 합성 및 제조
- Fmoc-AA1-AA2-AA3-AA4-Rink-MBHA-수지(여기서, AA1은 L-His; AA2는 L-Tyr; AA3은 L-Arg; AA4는 L-Ala임)의 수득
가중치를 정규화했다. 0.52 mmol/g의 관능화를 갖는 Fmoc-Rink-MBHA 수지 4.8 g(2.5 mmol)을, Fmoc 그룹을 제거하기 위해 당해 기술 분야에 알려진 일반 프로토콜에 따라 피페리딘-DMF로 처리했다. 2.33 g의 Fmoc-L-Ala-OH(7.5 mmol; 3 equiv)를 DIPCDI(1.17 mL; 7.5 mmol; 3 equiv) 및 HOBt(1.01 g; 7.5 mmol; 3 equiv)의 존재 하에 DMF를 용매로서 사용하여 1시간 동안 탈보호된 수지에 혼입시켰다.
다음에는, 수지를 당해 기술 분야에 알려진 일반적인 방법에 기술된 바와 같이 세척하고 Fmoc 그룹의 탈보호 처리를 반복하여 다음 아미노산을 커플링 했다. 이전에 기술된 프로토콜에 따라 4.87 g의 Fmoc-Arg(Pbf)-OH(7.5 mmol; 3 equiv); 이어서 3.45 g의 Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH(7.5 mmol; 3 equiv); 이어서 4.65 g의 Fmoc-L-His(Trt)-OH(7.5 mmol; 3 equiv)를 차례로 커플링하고, 각 커플링은 1.01 g의 HOBt(7.5 mmol; 3 equiv) 및 1.17 mL의 DIPCDI(7.5 mmol; 3 equiv)의 존재 하에 수행했다. 이미 상기 언급한 바와 같이, 각 아미노산 첨가 단계 사이에, Fmoc 그룹의 탈보호 처리를 수행하였다.
합성 후에, 펩타이드 수지를 DCM으로 세척(각각 3분 동안 5회)하여 진공 하에 건조시켰다.
위에서 언급한 합성 절차를 사용하여 다음 서열을 합성하였다:
His-Tyr-Arg-Ala(SEQ ID NO: 1).
실시예 2. 실시예 1에 따라 합성된 펩타이드의 Fmoc N-말단 보호 그룹의 제거
펩티딜 수지의 N-말단 Fmoc 그룹을 DMF(1Х1분+2Х10분) 중의 20%(volume/volume, 이하 v/v) 피페리딘으로 탈보호했다(Lloyd Williams P. et al.(1997) "Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins" CRC, Boca Raton(Fla., USA)). 펩티딜 수지를 DMF(5Х1분), DCM(4Х1분)으로 세척하여 진공 하에 건조시켰다.
실시예 3. 실시예 2에 따라 얻은 펩티딜 수지 상에 R1 팔미토일 그룹을 도입시키기 위한 방법
실시예 2에 따라 얻은 펩티딜 수지 1 mmol(1 equiv)을 10 당량의 DIEA 및 10 당량의 HOBt의 존재 하에 용매로서 DMF 5mL를 사용하여 10 당량의 헥사데세노산(팔미트산)으로 처리했다. 이를 정치시켜 30분간 반응시킨 후에 펩티딜 수지를 DMF(5Х1분), DCM(4Х1분)으로 세척하여 진공 하에 건조시켰다.
실시예 4. 실시예 2, 및 3에 따라 얻은 펩티딜 수지의 중합성 지지체로부터 분열(cleavage) 공정
가중치를 규정화했다. 실시예 2 또는 3의 어느 하나에서 수득된 건조 펩티딜 수지 200 mg을 실온에서 2시간 동안 교반 하에 5 mL의 TFA/TIS/H2O(90:5:5)로 처리했다. 여액을 수거하여 50 mL(8 내지 10배)의 냉 디에틸 에테르를 사용하여 침전시켰다. 에테르성 용액을 감압 및 실온에서 증발 건고시키고, 침전물을 H2O 중의 50%(v/v) MeCN에 재용해시켜 동결 건조시켰다.
실시예 5. 실시예 4에 따라 합성 및 제조된 펩타이드의 특성화
실시예 4에 따라 수득된 펩타이드의 HPLC 분석은 역상 칼럼(150x4.6 mm, XBridge Peptide BEH C18, 3.5μm, Waters, USA)을 사용하여 시마즈 장비(Kyoto, Japan)로 1.25 mL/분의 유속으로 H2O(+0.045%(v/v) TFA) 중의 MeCN(+0.036%(v/v) TFA) 구배로 수행하고 검출은 220nm에서 수행하였다. 모든 펩타이드는 80%를 초과하는 순도를 나타냈다. 수득된 펩타이드의 동일성은 이동상으로서 MeOH를 사용하고 0.2 mL/분의 유속으로 Water ZQ 4000 검출기에서 ESI-MS로 확인하였다. 얻어진 결과는 펩타이드 Pal-His-Tyr-Arg-Ala-NH2(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2)가 정확하게 효과적으로 합성되었음을 입증했다.
실시예 6. HEKa 및 HDFa 세포에서 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 세포 독성 분석
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 세포 독성을 HEKa(인간 표피 케라티노사이트, 성인) 및 HDFa(인간 진피 섬유아세포, 성인) 세포에서 생존력 검정에 의해 분석하였다.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조하였다.
세포 독성은 MTT 분석에 의해 평가되었다. 간략하게 HEKa 및 HDFa 세포를 96웰 플레이트에 1x105 cells/mL의 농도로 접종하고 1%(v/v) EDGS and 1%(v/v)의 페니실린/스트렙토마이신(HEKa 세포의 경우)이 보충된 Epilife 배지 및 2%(v/v)의 저 혈청 성장 보조제(LSGS)(HDFa 세포의 경우)가 보충된 배지 106 중, 37℃, 5% CO2 및 포화 습도에서 24시간 동안 인큐베이션했다. 이어서, 세포를 상이한 농도의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2(0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL, 0.01 mg/mL, 0.05 mg/mL, 및 0.1 mg/mL, HEKa 세포의 경우; 및 0.001 mg/mL, 0.005 mg/mL 및 0.01 mg/mL, HDFa 세포의 경우)로 MTT 평가를 위해 3회 반복 처리했다. 해당 농도의 펩타이드로 24시간 처리한 후, 10 μL 의 황색 테트라졸륨(MTT)을 각 웰에 첨가하고 세포를 37℃에서 추가로 4시간 동안 인큐베이션하였다. MTT로 인큐베이션한 후, 각 웰의 배지를 흡인하고 형성된 포르마잔 결정을 가용화하기 위해서 150 μL의 디메틸 설폭사이드(이하 DMSO)(100%)를 첨가했다. 플레이트를 진탕기 상에서 5분간 놓아 결정을 완전히 가용화한 다음, 마이크로플레이트 판독기 Multiskan FC를 사용하여 각 웰의 450nm에서의 흡광도를 측정했다. 이는 배양물 중의 살아있는 세포 수에 정비례한다. 비처리 세포(기저 상태)에 대해 얻은 데이터를 사용하여 흡광도값을 정규화했다.
결과를 요약하여 도 1 및 2에 나타내었다.
상기 도면으로부터 직접적으로 유도될 수 있는 바와 같이, 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2에 의해 예시됨)는 시험된 농도에서 HEKa 및 HDFa 세포의 생존력을 변경하지 않았으므로, 세포 독성이 아니다.
실시예 7. 1차 인간 진피 섬유아세포에서 유전자 발현 조절 분석.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 콜라겐 및 세포외 기질의 생산과 관련된 유전자의 발현을 조절하는 능력에 대해 분석하였다(분석된 유전자에 대해 표 1을 참조).
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1-NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조했다.
펩타이드의 스톡 용액을 DMSO 중에서 12.5 mg/mL로 제조하였다. 작업 용액은 해당 보충된 배지 중의 스톡 용액으로부터 지정된 농도로 새로 준비했다.
처리되지 않은 세포를 음성 대조군 샘플로 사용했다.
RNA(리보핵산) 추출 및 RT-qPCR(역전사 정량적 폴리머라제 연쇄 반응)을 수행했다. 간단히 말해서, HDFa 세포를 4 x 105 cells/well의 밀도로 6웰 플레이트에 2회 접종(n=2)하고 표준 배양 조건(1%(v/v) LSGS로 보충된 106 배지; 37℃, 95% 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 유지했다. 이어서, 세포를 추가로 6시간(또는 COL13A1의 경우 24시간) 동안 0.05 mg/m의 농도로 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1-NH2로 처리했다. 처리하지 않은 세포를 기저 대조군으로 사용했다.
세포를 마지막으로 용해하고, Qiagen RNeasy 미니 키트를 사용하여 제조업체 지침에 따라 RNA 추출을 위해 복제물을 함께 모았다. 이어서, 정제된 RNA를 사용하여 증폭을 위한 템플릿 역할을 하는 상업적으로 구입할 수 있는 키트 고성능 cDNA 역전사 키트((High-Capacity cDNA Reverse Transcription kit)(Applied Biosyttems)를 사용하여 역전사에 의해 상응하는 cDNA(상보적 데옥시리보핵산)를 생성하였다. 표 1에 표시된 유전자(플러스 하우스키핑 유전자로서 사용된 GAPDH-글리세르알데히드 3-인산염 탈수소효소)에 대한 적절한 TaqMan 분석 프로브의 패널과 StepOne 플러스 실시간(Real-Time) PCR 기기를 사용한 2x 유전자 발현 매스터 믹스로 RTqPCR을 수행하였다. 증폭에는 95℃에서 15초(변성) 및 60℃에서 1분(어닐링 및 확장)의 40주기가 포함되었다(Arya, M., Shergill, I.S., Williamson, M., Gommersall, L., Arya, N., Patel, H.R.(2005) Basic principles of real-time quantitative PCR. Expert Rev. Mol. Diagn.; 5(2):209-19; and Jozefczuk, J. and Adjaye, J.(2011) Quantitative real-time PCR-based analysis of gene expression. Methods Enzymol. 500; 99-109).
표 1. 실시예 7에서 분석된 유전자
약자 유전자
TGFB1 변형 성장 인자 베타-1
FN1 피브로넥틴 1
LOXL3 3형 리실 옥시다제
LOXL2 2형 리실 옥시다제
HSP47 세르핀 H1
COL3A1 콜라겐 타입 III 알파 1 쇄
COL4A5 콜라겐 타입 IV 알파 5 쇄
COL5A1 콜라겐 타입V 알파 1 쇄
COL6A1 콜라겐 타입 VI 알파 1 쇄
COL7A1 콜라겐 타입 VII 알파 1 쇄
COL12A1 C콜라겐 타입 XII 알파 1 쇄
COL14A1 콜라겐 타입 XIV 알파 1 쇄
COL13A1 콜라겐 타입 XIII 알파 1 쇄
MKX 모호크 호메오박스(Mohawk homeobox)
ZEB2 아연 핑거(Zinc Finger) E-Box 바인딩 호메오박스 2
MMP1 매트릭스 메탈로프로테이나제-1
MMP3 매트릭스 메탈로프로테이나제-3
얻어진 데이터는 △△Ct 방법을 사용하여 분석했는데, 이는 처리되지 않은 기본 샘플과 비교하여 처리된 샘플의 배수 변화로서 표적 유전자 발현값을 제공한다. 두 샘플을 모두 하우스키핑 유전자 GAPDH(글리세르알데히드 3-인산염 탈수소효소)의 상대적 발현으로 정규화되었다.
분석 단계에는 다음이 포함된다:
1. 각 조건에 대한 평균 Ct 계산
2. △CT 테스트 샘플과 △CT 처리하지 않은 샘플 계산
3. △△CT 계산: △△CT = △CT 테스트 샘플- △CT 처리하지 않은 샘플
4. 2-△△CT로 비율 구하기.
이 분석의 결과는 도 3 내지 5에 요약하여 나타나 있다.
상기 도면으로부터 용이하게 유도될 수 있는 바와 같이, 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 :
- 처리 6시간 후: 널리 알려진 바와 같이, 세포외 기질 단백질을 분해하는 유전자 MMP1 및 MMP3을 하향 조절한다.
- 처리 6시간 후: 콜라겐 구조 및 세포외 구조의 여러 핵심 유전자: - COL3A1, COL4A5, COL5A1, COL6A1, COL7A1, COL12A1, COL14A1, COL13A1 (처리 24시간 후), MKX y ZEB2를 상향 조절함.
- 처리 6시간 후 여러 콜라겐 가교 결합 관련 유전자: TGFB1, FN1, LOXL3, LOXL2 및 HSP47를 상향 조절함.
따라서, 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2에 의해 예시됨)는 콜라겐의 합성 및 가교 결합 증가에 기여하면서 세포외 기질 분해를 피하거나 방지하여, 노화 방지 활성 및 회춘 활성을 나타낸다.
실시예 8. 인간 진피 섬유아세포에서 콜라겐 VI 합성의 분석
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 인간 진피 섬유아세포에서 콜라겐 VI 합성을 유도하는 능력에 대해 분석하였다.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조했다.
이 검정에서, 테스트된 펩타이드가 인간 진피 섬유아세포에서 콜라겐 VI 합성을 증가시키는 능력을 시험관 내에서 평가했다. 이 평가는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 세포 처리 후 콜라겐 VI의 양을 결정함으로써 수행되었다.
다음 실험 그룹에 제공되는 실험 프로토콜:
- 음성 대조군: 가용화 비히클(DMSO)로만 처리된 세포 배양물;
- 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 3가지 농도(0.01 mg/mL, 0.005 mg/mL 및 0.001 mg/mL)로 처리된 세포 배양물.
DMSO 중의 펩타이드의 스톡 용액을 제조한 다음 세포 배양 배지에서 0.01 mg/mL, 0.005 mg/mL 및 0.001 mg/mL 의 3가지 연속 희석액을 제조했다.
이 경우에 사용된 생물학적 모델은 정상적인 인간 진피 섬유아세포로 구성되었다. 세포를 96웰 플레이트에 1 x 104 cells/well로 접종하여 표준 배양 조건(37℃, 95% 실내 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 유지했다.
24시간 인큐베이션한 후, 배지를 제거하고 처리제(DMSO 또는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2)를 함유하는 새로운 배지를 웰에 첨가했다. 샘플 처리는 48시간 동안 지속되었고 처리가 끝날 때 세포 배양 배지를 수집했다. DMSO로 처리된 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다.
시험 실행을 위해, 인간 진피 섬유아세포의 세포 배양물을 상기 언급한 3가지 농도의 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리했다.
48시간 처리 후, 세포에 의해 생산 및 방출된 콜라겐 VI의 양(ex-novo 콜라겐 VI 합성)을 ELISA 분석에 의해 세포 배양 배지에서 측정하였다. 결과를 음성 대조군(DMSO로 처리된 세포)의 결과와 비교하였다. 처리는 3회 및 3가지 다른 실험 세션에서 수행되었다.
콜라겐 VI 합성의 측정은 ELISA 방법에 의해 수행하였다. 이러한 목적을 위해 상업용 키트를 사용하였다. 테스트 키트는 샌드위치 ELISA 방법을 사용하여 인간 콜라겐 VI의 함량을 검출하였다. 키트에 제공된 마이크로 ELISA 플레이트를 콜라겐 VI에 특이적인 항체로 미리 코팅하였다. 표준물 또는 샘플을 적절한 마이크로 ELISA 플레이트 웰에 첨가하여 특이 항체와 결합하였다. 이어서, 콜라겐 VI에 특이적인 비오틴화된 검출 항체 및 아비딘-양고추냉이 과산화 효소(HRP) 접합체를 각 마이크로 플레이트 웰에 연속적으로 첨가하여 인큐베이션했다. 유리 구성 성분을 세척해 내었다. 기질 용액(TMB)을 각 웰에 가했다. 콜라겐 VI가 함유된 웰만 파란색으로 나타난다. 황산 용액을 첨가하여 효소 기질 반응을 종결시키면 색이 황색으로 변하였다. 광학 밀도(OD)는 450nm의 파장에서 마이크로플레이트 판독기기로 측정하였다. OD값은 콜라겐 VI의 농도에 비례했다.
정량적 측정은 표준 콜라겐 VI의 알려진 농도 및 증가하는 농도로 구성된 검량선을 사용했다. 콜라겐 VI 합성을 증가시키는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 효능의 직접적인 지수인, 음성 대조군(DMSO)과 샘플간의 콜라겐 VI 함량의 % 변동을 계산하였다.
이 실험에서 얻은 결과는 표 2와 도 6에 요약하였다.
표 2. 상이한 그룹에 대한 실시예 8의 콜라겐 VI 함량에 대한 평균 결과 및 음성 대조군에 대한 상기 함량의 백분율 변동.
그룹 콜라겐 VI 함량(ng/mL) 음성 대조군에 대한 % 변동
음성 대조 11.06 ± 0.75 -
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.01 mg/mL로 처리된 세포 배양물 15.52 ± 0.80 40%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.005 mg/mL로 처리된 세포 배양물 12.87 ± 0.97 16%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.001 mg/mL로 처리된 세포 배양물 12.22 ± 0.78 11%
표 2와 도 6으로부터 직접 도출할 수 있는 바와 같이, 모든 경우(즉, 테스트된 모든 농도에 대해)에서 콜라겐 VI 합성의 통계적으로 유의한 증가가 관찰되었으며, 이는 더욱이 용량 의존성으로 설명될 수 있다: 0.001 mg/mL에서 11%, 0.005 mg/mL에서 16%, 및 0.01 mg/mL에서 40% 증가. 도 6에 나타난 바와 같이, 음성 대조군과 관련하여 처리군의 콜라겐 VI 함량의 차이는 통계적으로 유의하다.
상기 결과는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 단백질 콜라겐 VI의 합성을 증가시키고, 따라서 세포외 기질 조립을 개선하는 데 기여함을 입증한다. 따라서, 상기 펩타이드는 피부의 노화 및/또는 상기 노화의 피부 징후, 예를 들면, 주름, 거칠기 및/또는 처짐을 예방하거나 치료할 수 있다.
또한, 이 실시예의 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공 하고/하거나 피부 결함을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 보다 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 안면 재배치 및/또는 얼굴 피부 탄력 강화를 제공할 수 있다.
실시예 9. 인간 진피 섬유아세포에서 모호크 합성의 분석
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 인간 진피 섬유아세포에서 모호크의 합성을 유도하는 능력에 대해 분석하였다.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조하였다.
이 분석은 인간 진피 섬유아세포에서 호메오도메인 단백질 모호크 합성을 증가시키는 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 능력의 시험관내 평가에 관한 것이다. 이 평가는 상기 펩타이드로 세포 처리 후에 모호크 양의 결정에 의해 수행되었다.
다음 실험 그룹에 제공되는 실험 프로토콜:
- 처리하지 않은 세포 배양물;
- 가용화 비히클(DMSO)로만 처리된 세포 배양물(음성 대조군);
- Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 3가지 농도(0.01 mg/mL, 0.005 mg/mL 및 0.001 mg/mL)로 처리된 세포 배양물.
DMSO 중의 펩타이드의 스톡 용액을 제조한 다음 세포 배양 배지에서 0.01 mg/mL, 0.005 mg/mL 및 0.001 mg/mL의 3가지 연속 희석액을 제조했다.
위에서 언급한 바와 같이 사용된 생물학적 모델은 정상적인 인간 진피 섬유아세포로 구성된다.
세포를 1 x 104 cells/well로 96웰 플레이트에 접종하고 표준 배양 조건(37℃, 95% 실내 습도, 5% CO2)에서 24시간 동안 유지했다. 24시간 인큐베이션한 후, 배지를 제거하고 시험된 제품을 함유하는 새로운 배지를 웰에 가했다.
샘플 처리는 24시간 및 48시간 동안 지속한 다음 ELISA 분석에 의해 세포내 모호크의 농도를 결정하기 위해 세포를 용해시켰다. 결과를 음성 대조군(DMSO로 처리된 세포)과 비교하였다.
이 처리는 3가지 다른 실험 세션에서 3회 수행되었다.
위에서 언급한 바와 같이, 모호크 합성의 결정은 ELISA 방법에 의해 수행하였다. 이를 위해 상업용 키트를 사용하였다. 테스트 키트는 인간 호메오도메인 단백질 모호크의 함량을 검출하기 위해 2-사이트 샌드위치 ELISA 방법을 적용하였다. 모호크에 특이적인 항체는 마이크로플레이트에 미리 코팅되어 있었다. 표준물 및 샘플을 웰에 피펫으로 옮기고 존재하는 모호크는 고정된 항체에 의해 결합되었다. 결합되지 않은 기질을 제거한 후, HRP-접합 인간 모호크 검출 항체를 웰에 가했다. 결합되지 않은 HRP 시약을 제거하기 위해 세척한 후, 크로모겐 용액을 웰에 가하고(기질은 TMB임), 초기 단계에서 결합된 모호크의 양에 비례하여 색이 전개되었다. 색 전개를 멈추고 450nm에서 비색으로 농도를 측정하였다.
정량적 측정에는 표준 모호크의 알려진 농도 및 증가하는 농도로 구성된 검량선을 사용했다. 음성 대조군(DMSO)과 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리된 그룹간의 모호크 함량의 % 변동을 계산하였고 이는 모호크 합성을 증가시키는 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 효능의 직접적인 지표였다.
얻어진 결과는 표 3 및 도 7에 요약하였다.
표 3. 상이한 그룹에 대한 실시예 9의 모호크 함량에 대한 평균 결과 및 음성 대조군에 대한 상기 함량의 백분율 변동.
그룹 시간 (h) 모호크 함량 (pg/mL) 음성 대조군에 대한 % 변동
처리하지 않은 세포 24 137.40 ± 6.87 -
음성 대조군 24 136.14 ± 5.44 -
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.01 mg/mL로 처리된 세포 배양물 24 194.37 ± 7.30 43%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.005 mg/mL로 처리된 세포 배양물 24 165.31 ± 7.24 21%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.001 mg/mL로 처리된 세포 배양물 24 148.19 ± 8.44 9%
처리하지 않은 세포 48 154.98 ± 9.91 -
음성 대조군 48 157.20 ± 7.57 -
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.01 mg/mL로 처리된 세포 배양물 48 284.72 ± 13.51 81%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.005 mg/mL로 처리된 세포 배양물 48 237.03 ± 10.44 51%
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.001 mg/mL로 처리된 세포 배양물 48 205.30 ± 11.53 31%
표 3 및 도 7로부터 직접 도출할 수 있는 바와 같이, 모든 경우(즉, 시험된 모든 농도 및 기간에 대해)에서, 호메오도메인 단배질 모호크의 합성에서 통계적으로 유의한 증가가 관찰되었으며, 이는 더욱이 용량 의존성으로 설명될 수 있다: 24시간에 0.001 mg/mL에서 9%, 0.005 mg/mL에서 21% 및 0.01 mg/mL에서 43% 증가; 48시간에 0.001 mg/mL에서 31%, 0.005 mg/mL에서 51% 및 0.01 mg/mL에서 81% 증가. 도 7에서 알수 있는 바와 같이, 시험된 각 시간 프레임에서 음성 대조군과 관련하여 처리군에서의 모호크 함량 차이는 통계적으로 유의하다.
상기 결과는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 모호크의 합성을 증가시키고, 따라서, 피부의 노화 및/또는 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화와 관련된 피부 징후의 예방 또는 치료에 대한 잠재력을 입증한다.
또한, 이 실시예의 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공하고/하거나 피부 결함을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 보다 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)는 안면 재배치 및/또는 안면 피부 탄력 강화를 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 10. 콜라겐 가교 결합의 분석
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 는 콜라겐 가교 결합을 유도하거나 개선하는 능력에 대해 분석하였다.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조했다.
이 분석은 콜라겐 피브릴 형성/콜라겐 가교 결합을 증가시키고 가속화시키는 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1-NH2의 능력의 관내 평가에 관한 것이다. 이 평가는 RT에서 용액(0.02M 아세트산, 0.125M NaCl 및 1/10 인산염 완충 식염수(pH=7.4)) 중의 상기 펩타이드로 콜라겐 처리 후 콜라겐 피브릴 형성을 측정하여 수행하였다.
다음 실험 그룹에 제공되는 실험 프로토콜:
- Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 2가지 농도(0.02 또는 0.04 mg/mL)로 처리된 콜라겐 용액
- 상기 언급한 처리군과 동일한 용액으로만 처리되었지만 펩타이드는 포함하지 않으며, 따라서, 펩타이드를 함유하는 샘플과 동일한 부피의 DMSO로 처리된 콜라겐 용액(음성 대조군)
DMSO 중의 펩타이드의 스톡 용액을 제조한 다음 콜라겐 용액 중의 펩타이드의 최종 농도가 0.02 mg/mL 또는 0.04 mg/mL가 되도록 2개의 연속 희석액을 제조했다.
콜라겐 가교 결합 및 피브릴 형성은 대조군(처리군과 동일한 용액이지만 펩타이드를 함유하지 않으므로 펩타이드를 함유하는 샘플과 같은 부피의 DMSO) 및 처리군에서 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 함유하는 용액에 콜라겐을 첨가한 직후에 추적되었다.
결과를 음성 대조군(DMSO를 함유하고 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 함유하지 않는 용액)과 비교하였다.
실험은 4개의 다른 실험 세션에서 수행하였다.
콜라겐 가교 결합의 결정은 450nm에서의 흡광도 측정에 의해 수행되었다.
샘플을 피펫으로 웰에 옮기고 마이크로플레이트 판독기 Multiskan FC를 사용하여 100분 동안 각 웰의 450nm에서의 흡광도를 2분마다 측정했다.
음성 대조군(DMSO로만 처리된 그룹) 및 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 처리된 그룹간의 콜라겐 피브릴 형성의 % 변동을 계산하였고, 이는 콜라겐 피브릴 형성을 증가시키는 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 효능의 직접적인 지표이며, 더욱이 용량 의존성이라고 설명할 수 있다: 0.02 mg/mL에서 59%, 0.04 mg/mL에서 111% 증가.
결과는 도 8에 요약하여 나타내었다.
도 8로부터 유도될 수 있는 바와 같이, 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2는 시험된 2가지 농도: 0.02(b) 및 0.04(a) mg/mL에서 콜라겐의 가교 결합을 증가시키고 가속화시킨다.
이상에서는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)의 노화 방지 활성, 따라서 노화와 관련된 피부 징후, 예를 들면, 주름, 거칠기 및/또는 처짐의 예방 또는 치료에서의 유용성을 지지한다.
또한, 이 실시예의 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공 하고/하거나 피부 결함을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 더 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)는 안면 재배치 및/또는 안면 피부 탄력 강화를 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 11. 인간 기관형 피부 외식편 배양물에서 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 세포 독성 및 콜라겐 생성의 분석
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 세포 독성 및 콜라겐 생성은 세포 독성의 경우, LDH 세포 독성 분석 및 레자주린(resazurin) 분석에 의해, 콜라겐 생성과 관련하여 콜라겐 함량 분석 및 조직학적 분석에 의해 분석하였다.
펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 실시예 1 내지 5에 따라 제조하였다.
이 경우에, 건강하고 노화된 인간 기관형 피부 외식편 배양물(hOSEC)을 실험 시스템으로 사용하였다.
노화된 hOSEC는 연구의 처음 5일 동안 건강한 hOSEC를 하이드로코르티손(5 μg/m)에 노출시켜 얻었다.
처리 그룹의 총 수는 다음과 같다:
1. 대조군(음성 대조군): 처리하지 않은 hOSEC
2. 노화된 hOSEC: 하이드로코르티손 5 μg/m으로 처리된 hOSEC(Abraham A, Roga G.(2014) Topical steroid-damaged skin. Indian J Dermatol. 59(5),456-9.)
3. 노화된 hOSEC + 제품 A(크림, 즉 위약): 하이드로코르티손 5 μg/m으로 처리하여 제품 A(10 μL)와 인큐베이션한 hOSEC
4. 노화된 hOSEC + 제품 B(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 0.005 mg/mL의 농도로 갖는 크림): 하이드로코르티손 5 μg/m으로 처리하여 제품 B(10 μL)와 인큐베이션한 hOSEC
각 실험 그룹에 대해 4회 반복 실험을 수행하고 1회의 독립적인 실험을 실시했다.
분석의 총 기간은 10일(1일부터 10일까지)이었다. 하이드로코르티손은 1일부터 5일까지 매일 적절하거나 상응하는 그룹에 적용하였다. 한편, 제품 B 또는 제품 A는 2일부터 9일까지 매일 해당하거나 적절한 그룹에 적용하였다.
세포 독성 분석은 0일(연구 개시 전), 1일, 3일, 5일, 8일 및 10일에 수행하였다.
콜라겐 생성은 10일에 측정하였다.
LDH 세포 독성 분석
LDH 세포 독성 시험은 세포질막 손상 시 배양 배지 상청액으로 방출되는 안정한 세포질 효소인 젖산 탈수소 효소(LDH)를 정량적으로 측정하는 비색 분석법이다. 배양 배지 상청액 중의 방출된 LDH는 30분간 결합된 효소 반응을 측정한다: LDH가 젖산을 피루브산으로 산화시킨 다음 테트라졸륨염 WST-1과 반응하여 포르마잔을 형성한다. 배양 상청액에서 측정된 포르마잔 양의 증가는 피부 외식편에서 용해된 세포(손상) 수의 증가와 직접적인 상관 관계가 있다.
각 샘플의 상청액 100 μL를 제거하여 96웰 마이크로플레이트로 옮겼다. 배양 배지 상청액 중의 방출된 LDH는 결합된 효소 반응으로 측정하였다: LDH가 젖산을 피루브산으로 산화시킨 다음 테트라졸륨 염 WST-1과 반응하여 포르마잔을 형성한다. 포르마잔 양의 증가는 세포질막이 손상될 때 LDH 효소가 배양 배지 상청액으로 방출됨에 따라 용해된 세포(손상) 수의 증가와 직접적인 상관 관계가 있다. 포르마잔 염료는 수용성이며 500nm에서 표준 ELISA 플레이트 판독기를 사용하여 측정할 수 있다.
이 분석의 결과는 음성 대조군, 즉 처리하지 않은 hOSEC를 LDH 규정 농도의 100%로 고려하여 계산하였다. 얻어진 결과는 도 9에 요약하였다.
도 9에서 유추할 수 있듯이, 모든 그룹에서 발견된 LDH값은 대조군(음성 대조군)과 유사하였다. 이 사실은 하이드로코르티손이 분석 조건 중 hOSEC에서 어떠한 역효과도 일으키지 않았음(원형막 손상을 일으키지 않음)을 나타낸다. 마찬가지로, 제품 B(즉 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림) 또는 제품 A 및 하이드로코르티손 5 μg/mL로의 처리는 대조군과 관련하여 LDH값의 차이를 나타내지 않았다. 이들 데이터는 하이드로코르티손 인큐베이션 및 두 화합물 모두 분석 조건 중 hOSEC에서 역효과인 원형질막 손상을 일으키지 않았음을 의미한다.
레자주린 분석
레자주린 염료(7-히드록시-3H-페녹사진-3-온 10-옥사이드)는 증식 및 세포 독성 분석에서 세포 생존력의 지표로서 널리 사용되었다. 이 분석은 레자주린을 레조루핀 및 디히드로레조루핀으로 환원시키는 생존 가능한 대사 활성 세포의 능력을 기반으로 한다. 이 전환은 세포내에서 미토콘드리아, 마이크로솜 및 세포질 산화환원효소에 의해 촉진된다. 레자주린은 세포에 독성이 없으며 배양 배지에서 안정하다. 따라서, 동력학 또는 종말점 분석으로 시험관 내에서 세포 증식을 지속적으로 측정할 수 있다.
따라서, 레자주린 염료는 여러 세포 독성 분석에서 세포 생존력의 지표로서 널리 사용되었다. 이 분석은 대사활성 세포가 미토콘드리아, 마이크로솜 및 세포질 산화환원효소에 의해 레자주린을 레조루핀 및 디히드로레조루핀으로 환원시키는 능력을 기반으로 하기 때문에 대사 활성 지표이기도 하다.
세포 생존 및 증식을 손상시키는 독성 손상은 또한 레자주린을 환원시키는 배양 능력에 영향을 미치며 염료 환원의 속도는 존재하는 생존 세포 수에 정비례한다. 따라서, 레자주린 환원은 세포 배양물의 대사 능력의 직접적인 척도이므로, 편리한 세포 생존 지수를 제공한다. hOSEC에 의해 환원된 레자주린 양의 감소는 또한 죽은 세포 수의 증가와 직접적인 상관 관계가 있다.
레자주린 분석을 위해, 피부 외식편을 NaCl 용액 중의 6 μM의 레자주린으로 1시간 동안 처리하였다. 계속해서, 각 샘플의 100 μL의 부피를 제거하여 96웰 마이크로플레이트에 옮겼다. 형성된 레조루핀을 형광계 플레이트 판독기에서 정량화하였다.
형광 신호는 530-560nm 여기 파장 및 590nm 방출 파장을 사용하여 모니터링하였다.
레자주린 분석의 결과는 음성 대조군인 처리하지 않은 건강한 hOSEC를 100% 생존율로 고려하여 계산하였다. 얻어진 결과는 도 10에 나타내었다.
대조군(음성 대조군)에 비해 5 μg/mL의 하이드로코르티손으로 hOSEC를 처리했을 때 레조루핀 백분율의 10% 감소가 관찰되었다. 제품 B(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림) 또는 제품 A 및 5 μg/mL의 하이드로코르티손으로 처리된 hOSEC는 대조군(음성 대조군)에 비해 레조루핀 값의 감소를 나타내지 않았다.
이들 데이터는 제품 B 또는 제품 A가 분석 조건 중 hOSEC에서 대사 활성화를 일으켰다는 발상을 지지한다. 레조루핀은 세포의 대사 능력을 직접적으로 측정하기 때문에 레조루핀 증가는 두 화합물에 hOSEC가 노출된 후 산화 환원 효소의 대사 활성화를 나타낼 수 있다.
따라서, LDH 세포 독성 분석 및 레자주린 분석에서 얻은 결과로부터 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2가 독성이 없고, 실제로 하이드로코르티손에 의해 생성된 부정적인 효과를 역전시킨다는 것을 추론할 수 있다.
콜라겐 생성
- 콜라겐 함량 분석:
콜라겐 분석은 산 및 펩신 가용성 콜라겐(주로, 타입 I, 타입 II, III, IV 및 V)의 분석을 위한 염료 결합 방법이다. 이 분석은 급속한 증식 및 발달 기간 동안 생성된 새로 합성된 콜라겐의 비율을 평가할 수 있다.
콜라겐 염료 시약(1mL)을 각 샘플(튜브)에 가하여 30분간 진탕하였다. 튜브를 12,000rpm에서 10분간 원심분리했다. 이어서, 빙냉 산-염 세척 시약 750 μL 를 콜라겐-염료 펠릿에 가하여 펠릿의 표면과 미세원심분리기 튜브의 내부 표면에서 결합되지 않은 염료를 제거했다. 튜브를 다시 12,000rpm에서 10분간 원심분리했다. 마지막으로, 250 μL의 알칼리 시약을 가했다. 결합된 염료가 모두 용해되면(5분), 샘플을 측정할 준비가 된 것이다. 550nm에서 표준 ELISA 플레이트 판독기를 사용하여 용해된 염료(96 마이크로 웰 플레이트에 있는 각 샘플 200 μL)를 측정했다.
상기에서 언급한 바와 같이, 콜라겐 함량 분석은 연구 10일째에 수행하였다. 콜라겐 함량(마이크로그램) 분석의 결과는 신선한 진피 조직 밀리그램당 계산되었다. 얻어진 결과는 도 11 및 표 4에 요약하였다.
표 4. 실시예 11에서 분석된 상이한 그룹에서의 콜라겐 양
그룹 평균 콜라겐 양 (콜라겐 μg/ 피부 mg) 표준 편차 (콜라겐 μg/ 피부 mg)
처리하지 않은 hOSEC (대조군) 0.863 0.09
노화된 hOSEC 0.617 0.07
노화된 hOSEC + 제품 A 0.610 0.06
노화된 hOSEC + 제품 B 0.858 0.03
도 11 및 표 4에 나타난 바와 같이, 제품 B(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 0.005 mg/mL를 갖는 크림)로 처리된 노화된 hOSEC에서 콜라겐 생성의 증가는 노화된 hOSEC 그룹(5 μg/mL의 하이드로코르티손으로만 처리하거나 또는 하이드로코르티손 및 제품 A로 처리)과 비교하여 관찰되었다.
그룹 노화된 hOSEC + 제품 B는 처리하지 않은 hOSEC와 유사한 콜라겐 양을 나타냈다.
도 11에서 알 수 있는 바와 같이, 처리하지 않은 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 B의 그룹과 노화된 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 A의 그룹간에서 콜라겐 양의 차이는 유의하다. 처리되지 않은 hOSEC와 노화된 hOSEC+제품 B간에는 통계적으로 유의한 차이가 없었다.
이들 결과는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 국소 적용이 하이드로코르티손 노화 효과를 역전시켰고, 따라서, 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 노화 방지 제품으로서, 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화의 징후를 예방, 감소 및/또는 제거하는 잠재력을 입증한다.
또한, 이들 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공할 수 있고/있거나 피부 결점을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 보다 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)는 안면 재배치 및/또는 안면 피부 탄력 강화를 제공할 수 있음을 입증한다.
- TEM 분석을 위한 조직 수집 및 처리:
피부 샘플은 투과 전자 현미경 분석을 위해 처리하였다. 간단히 말해서, 피부 샘플을 4%(v/v) 포름알데히드 및 1%(v/v) 글루타르알데히드에 고정했다. 이어서, 피부 샘플을 0.1M 수크로스 중에서 밤새 인큐베이션하고 0.1M의 1%(v/v) 사산화 오스뮴에서 인큐베이션했다. 마지막으로, 샘플을 순차적으로된 에탄올 용액으로 탈수하여 빔 캡슐에 포매하였다.
초박형 섹션(60-90nm 두께)을 15분간 우라닐 아세테이트로 염색하고 5분간 납 시트레이트로 염색했다. 이어서, 샘플을 전자 현미경 하에서 분석할 준비를 하였다.
처리된 피부 외식편에서 콜라겐 피브릴의 상태를 관찰하기 위해서 투과 전자 현미경 연구를 수행하였다.
결과는 도 12A 내지 12D에 요약하였다. 도 12A는 처리되지 않은 hOSEC에 해당하며, 올바른 진피 구조(진피의 완전하고 구조화된 진피 섬유)를 나타낸다. 마찬가지로, 도 12B는 구조화되지 않은 콜라겐 섬유(확산된 비압축 섬유)를 갖는 노화된 hOSEC를 나타낸다. 이 이미지는 콜라겐 정량화(상기에 포함됨)와 일치하는 피부에서의 하이드로코르티손의 역효과를 확증했다. 조밀하지 않은 콜라겐 섬유의 유사한 이미지가 제품 A로 처리된 노화된 피부에 대해 얻어졌다(도 12C). 그러나 도 12D에서 볼 수 있는 바와 같이, 노화된 hOSEC를 제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2를 갖는 크림)와 인큐베이션할 때, 콜라겐 섬유의 양호한 재생(완전하고 확산되지 않은 섬유)을 달성했다. 이 이미지는 위에서 언급한 ELISA 방법에 의해 얻은 콜라겐 값을 확증한다.
마찬가지로, 콜라겐 섬유 두께 및 콜라겐 밀도를 이미지 분석으로 분석했으며(하기 표 5 및 6을 참조), 얻어진 값은 시각적 평가를 뒷받침한다.
콜라겐 밀도는 TEM 이미지에서 관찰된 각 콜라겐 섬유의 조밀함을 나타낸다. 이를 위해, GIMP2로 광학 이미지를 분석했다. 반대 사실 분석은 건강하고 노화된 hOSEC+제품 B 그룹이 노화된 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 A 그룹에서 관찰된 값보다 더 높은 밀도 값을 제시했음을 입증했다(하기 표 5 및 도 13을 참조).
상기 언급된 바와 같이, 콜라겐 생성의 증가가 인정되는 경우, 그룹 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 를 갖는 크림)가 처리되지 않은 hOSEC와 유사한 콜라겐 밀도를 나타냈다(하기 표 5 및 도 13을 참조).
표 5. 실시예 11에서 분석된 상이한 그룹에서의 콜라겐 밀도
그룹 콜라겐 밀도 (처리하지 않은 hOSEC에 대한 % ) 표준 편차(%)
처리하지 않은 hOSEC (대조군) 100 11.62
노화된 hOSEC 82.22 6.54
노화된 hOSEC + 제품 A 77.22 8.39
노화된 hOSEC + 제품 B 95.56 3.63
도 13에 나타난 바와 같이, 처리하지 않은 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 B의 그룹과 노화된 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 A의 그룹간에서 콜라겐 밀도 차이는 통계적으로 유의했다. 처리하지 않은 hOSEC와 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 를 갖는 크림) 간에는 통계적으로 유의한 차이가 없었다.
이들 결과는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 국소 적용이 하이드로코르티손 노화 효과를 역전시켰고, 따라서 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 로 예시됨)가 노화 방지 제품으로서, 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화의 징후를 예방, 감소 및/또는 제거하는 잠재력을 입증한다.
또한, 이들 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공할 수 있고/있거나 피부 결점을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 보다 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)는 안면 재배치 및/또는 안면 피부 탄력 강화를 제공할 수 있음을 입증한다.
콜라겐 섬유 두께도 GIMP2로 분석했다. 섬유 두께 분석은 건강하고 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 를 갖는 크림) 그룹이 더 나은 압축 및 구조화(완전하고 확산되지 않은 섬유)로 인해 노화된 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 A 그룹에서 관찰된 값보다 더 낮은 섬유 두께 값을 나타내었음을 확증했다. 노화된 hOSEC에 적용된 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드는 처리하지 않은 hOSEC와 유사한 콜라겐 섬유 두께를 나타냈다(표 6 및 도 14를 참조).
노화된 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 A 그룹에서 더 높은 섬유 두께는 생체 내 노화된 피부에서 발생하는 것으로 설명되는 섬유에서 콜라겐의 비정상적인 축적을 나타낸다.
처리하지 않은 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 B는 유사한 두께의 콜라겐 섬유를 나타내었다.
표 6. 실시예 11에서 분석된 상이한 그룹에서의 콜라겐 섬유 두께
그룹 콜라겐 섬유 두께 (nm) 표준 편차 (nm)
처리하지 않은 hOSEC (대조군) 88.26 7.82
노화된 피부 98.77 8.44
노화된 피부 + 제품 A 95.44 8.70
노화된 피부 + 제품 B 84.87 6.85
도 14에서 볼 수 있는 바와 같이, 처리하지 않은 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 B의 그룹과 노화된 hOSEC의 그룹간의 콜라겐 섬유 두께의 차이는 통계적으로 유의했다. 처리하지 않은 hOSEC 및 노화된 hOSEC+제품 B의 그룹과 노화된 hOSEC+제품 A의 그룹간의 콜라겐 섬유 두께의 차이는 거의 통계적으로 유의했다. 처리하지 않은 hOSEC와 노화된 hOSEC+제품 B(0.005 mg/mL의 펩타이드 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 를 갖는 크림)간에는 통계적으로 유의한 차이가 없었다.
이들 결과는 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2의 국소 적용이 하이드로코르티손 노화 효과를 역전시켰고, 따라서 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 로 예시됨)가 노화 방지 제품으로서, 예를 들어, 주름, 거칠기 및/또는 처짐과 같은 노화의 징후를 예방, 감소 및/또는 제거하는 잠재력을 입증한다.
또한, 이들 결과는 또한 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)가 피부 회춘을 제공할 수 있고/있거나 피부 결점을 감소, 예방 및/또는 제거할 수 있으며, 보다 정확하게는 본 발명의 펩타이드(Pal-SEQ ID NO: 1- NH2로 예시됨)는 안면 재배치 및/또는 안면 피부 탄력 강화를 제공할 수 있음을 입증한다.
실시예 12. 상이한 포토타입을 갖는 여성 지원자의 피부 회춘 및 주름 개선 및 노화 방지 효능에 대한 임상적 평가
얼굴 피부 노화 방지에 대한 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 펩타이드(실시예 1 내지 5에 따라 합성)의 효과를 44명의 여성 지원자에서 평가하였다(50% 밝은 색소(포토타입 II-III) 및 50% 어두운 색소(포토타입 V-VI)).
간단히 말해서, 지원자는 0.05%(m/v)의 Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 또는 Pal-SEQ ID NO: 1-NH2가 없는 화장품 제형(위약)의 스톡에서 2%(m/v)로 화장품 제형을 적용했다. 적용 방식은 56일 동안 이른 아침과 취침 전에 1일 2회였다. 지원자간에, 그리고 다른 포토타입 지원자간에 위약 및 활성 성분의 효과를 비교하기 위해 얼굴 전체에 화장품 제형을 적용했다.
28일과 56일에 주름 깊이 및 볼 거칠기를 평가하기 위해 각 지원자에게 AEVA 시스템을 사용했다. 치료 기간 내에 파라미터가 감소하면 피부가 부드러워져 주름 방지 및 노화 방지 효과가 나타난다.
얻어진 결과는 도 15에 나타내었다.
도 15(A) 내지 (C)에서 쉽게 알 수 있는 바와 같이, Pal-SEQ ID NO: 1- NH2 를 포함하는 화장품 제형은 연구된 모든 피부 포토타입에 대해 초기 시간과 비교할 때, 모든 연구된 시간에 연구된 얼굴 피부 영역에서 거칠기(Ra) 및 완화(Rz) 및 주름 깊이의 감소를 나타내었다(이들 파라미터 중 일부 또는 전부에서의 감소는 유연화 효과 및 주름 방지 및 노화 방지 효과를 나타냄). 처리 56일 후에 볼 거칠기에서 4% 감소(위약 대비 평균 5%) 및 볼 완화에서 7% 감소(위약 대비 평균 10%)가 나타났다. 주름 깊이의 경우, 평균 9% 감소에 달하는 더 뚜렷한 효과가 관찰되었으며, 특히 포토타입 V-VI 피부를 갖는 지원자의 경우, 주름 깊이의 12% 감소(위약 대비 20%)가 관찰된 한편, 포토타입 II-III 피부를 갖는 지원자는 시간이 지남에 따라 주름 깊이가 6-7% 감소하는 것을 경험했다.

Claims (15)

  1. 모호크를 증가시킬 수 있는 펩타이드, 그의 허용 가능한 이성질체, 염, 용매화물 및/또는 유도체 및/또는 이들의 혼합물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    하기 일반식(I)에 따른 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 펩타이드, 그의 화장용으로 허용 가능한 이성질체, 염, 용매화물 및/또는 유도체 및/또는 이들의 혼합물:
    R1-AA1-AA2-AA3-AA4-R2 (I)
    상기 식에서,
    AA1 은 His이고;
    AA2 는 방향족 측쇄를 갖는 아미노산의 그룹 중에서 선택되며;
    AA3 은 Lys 또는 Arg 중에서 선택되고;
    AA4 는 지방족 비극성 측쇄를 갖는 아미노산의 그룹 중에서 선택되며;
    R1 은 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 치환되거나 비치환된 아르알킬 및 R5-CO- 중에서 선택되며, 여기에서 R5 는 치환되거나 비치환된 C1-C24 알킬 라디칼, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알케닐, 치환되거나 비치환된 C2-C24 알키닐, 치환되거나 비치환된 C3-C24 사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C5-C24 사이클로알케닐, 치환되거나 비치환된 C8-C24 사이클로알키닐, 치환되거나 비치환된 C6-C30 아릴, 치환되거나 비치환된 C7-C24 아르알킬, 치환되거나 비치환된 3내지 10원의 헤테로사이클릴 환, 및 2 내지 24개의 탄소 원자와 1 내지 3개의 탄소 이외의 원자를 가지며 알킬 쇄의 탄소 원자가 1 내지 6개인 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬로 형성된 그룹 중에서 선택되고;
    R2 는 H, -NR3R4- , -OR3 및 -SR3 중에서 선택되고, 여기에서 R3 및 R4 는 독립적으로 H, 치환되거나 비치환된 비환상 지방족 그룹, 치환되거나 비치환된 알리사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 헤테로아릴알킬, 치환되거나 비치환된 아릴, 및 치환되거나 비치환된 아르알킬 중에서 선택된다.
  3. 제 2 항에 있어서,
    AA1 이 His이고; AA2 가 Phe, Tyr 및 Trp의 그룹 중에서 선택되며; AA3 이 Lys 또는 Arg 중에서 선택되고; AA4 가 Ala, Val, Leu 및 Ile의 그룹 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  4. 제 2 항 또는 제 3 항에 있어서,
    일반식(I)의 펩타이드가 R1-His-Tyr-Arg-Ala-R2 (R1-SEQ ID NO: 1-R2)인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  5. 제 2 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이 Pal 또는 Ac 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  6. 제 2 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, R2 가 H 또는 NH2 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  7. 제 2 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, R1 이 Pal이고, R2 가 NH2인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  8. 제 4 항에 있어서,
    일반식(I)의 펩타이드가 Pal-His-Tyr-Arg-Ala-NH2(Pal-SEQ ID NO: 1-NH2)인 것을 특징으로 하는 펩타이드.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드를 포함하는 조성물.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드 또는 제 9 항에 따른 조성물의 이를 필요로 하는 대상에서의 화장품으로서의 용도.
  11. 제 10 항에 있어서,
    화장품으로서의 용도가 피부 노화의 징후를 감소, 예방 및/또는 제거하고, 피부 회춘을 위하고, 및/또는 피부 결점을 감소, 예방 및/또는 제거하기 위한 것임을 특징으로 하는 용도.
  12. 제 11 항에 있어서,
    피부 노화의 징후가 주름, 거칠기 및/또는 처짐인 것을 특징으로 하는 화장품으로서의 용도.
  13. 제 11 항에 있어서,
    피부 회춘 및/또는 피부 결점의 감소, 예방 및/또는 제거를 위한 화장품으로서의 용도가 피부 탄력(skin firming), 체형 조각(body sculpturing), 안면 재배치(facial repositioning), 피부 탄력 강화(skin tightening) 및/또는 모공 개선(pore refining)을 위한 것임을 특징으로 하는 화장품으로서의 용도.
  14. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 펩타이드 또는 제 9 항에 따른 조성물의 이를 필요로 하는 대상에서의 미용적 용도.
  15. 제 14 항에 있어서,
    미용적 용도가 피부 노화 징후를 감소, 예방 및/또는 제거하고, 피부 회춘을 위하고, 및/또는 피부 결점의 감소, 예방 및/또는 제거를 위한 것임을 특징으로 하는 미용적 용도.

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