KR20210100554A - Anitbacterial composition comprising selaginella tamariscina extract and fractions thereof as an active ingredient - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물의 용도에 관한 것이다.The present invention relates to the use of an extract or a fraction thereof.
식품, 의약품, 화장품 및 일반 생활용품 등에서 미생물에 의한 제품 변성을 방지하고자 다양한 종류의 화학 방부제가 사용되고 있다. 그러나, 2011년에 가습기 살균제 성분인 CMIT/MIT 문제나, 파라벤 계열의 화합물이 포함된 화장품 등이 논란이 되면서 화장품, 생활용품 등과 같은 다양한 소비재에 사용되는 화학 방부제의 유해성이 대두되었다. 이에 의해 최근에는 케모포비아(chemophobia) 또는 노케미족이라는 용어가 생기고, 인체에 무해한 천연 방부제에 대한 관심도 높아지고 있다.Various kinds of chemical preservatives are used to prevent product denaturation by microorganisms in food, medicine, cosmetics, and general household products. However, in 2011, as the issue of CMIT/MIT, which is a component of a humidifier disinfectant, and cosmetics containing paraben-based compounds became controversial, the harmfulness of chemical preservatives used in various consumer goods such as cosmetics and household goods emerged. As a result, the term chemophobia or nochemi has recently been coined, and interest in natural preservatives harmless to the human body is increasing.
천연 방부제는 화학 방부제에 비해 인체에 안전하다는 점 이외에도 다양한 이점을 가지고 있어 최근 새로운 트렌드로 부상하고 있다. 천연 방부제는 알레르기를 덜 일으키고, 박테리아에 특이적으로 작용하며, 제품 본연의 맛, 향기, 효능 등을 해치지 않아 많은 소비자로부터 각광받고 있다. 반면, 프로피오네이트(propionate) 계열의 화학 방부제는 음식에 첨가되었을 때 쓴맛을 낸다고 알려져 있다.Natural preservatives are emerging as a new trend in recent years as they have various advantages in addition to being safer than chemical preservatives. Natural preservatives are attracting attention from many consumers because they cause less allergy, act specifically on bacteria, and do not harm the original taste, fragrance, and efficacy of the product. On the other hand, propionate-based chemical preservatives are known to give a bitter taste when added to food.
이와 관련하여, 대한민국 특허공개 제10-2020-0144066호는 Romo1 단백질의 두번째 알파 헬릭스 영역의 아미노산 서열을 갖는 다양한 펩티드의 항균활성을 확인함으로써 광범위한 세균 감염성 질환의 치료에 사용할 수 있고, 우수한 항균활성을 갖는 기능성 소재로서 사용될 수 있음을 개시하고 있다.In this regard, Korean Patent Laid-Open No. 10-2020-0144066 confirms the antibacterial activity of various peptides having the amino acid sequence of the second alpha helix region of the Romo1 protein, so that it can be used for the treatment of a wide range of bacterial infectious diseases, and has excellent antibacterial activity. It is disclosed that it can be used as a functional material with
한편, 바위손(Selaginella tamariscina (P.Beauv.) Spring, 산림청 국립수목원, 2020, 국가표준식물목록 자생식물)은 부처손과(Selaginellaceae) 부처손속(Genus Selaginella P.Beauv.)에 속하는 상록성 다년초로 가지가 방사성으로 형성되며, 우상으로 분지하고 15 내지 25 ㎝의 높이로 성장한다. 바위손의 표면은 짙은 녹색이며 뒷면은 흰빛이 도는 녹색이다. 바위손은 건조한 때에는 안으로 말려서 공모양을 형성하나, 습한 환경에서 다시 펴지는 특징을 갖는다. 바위손의 생약명은 권백으로, 한방에서 토혈, 대변출혈, 자궁출혈, 혈액순환, 월경통, 어혈 및 통증 완화 등에 사용된다(안덕균, 2008, 한국본초도감).On the other hand, S elaginella tamariscina (P.Beauv.) Spring, National Arboretum of the Korea Forest Service, 2020, National Plant List Native Plant) is an evergreen perennial plant belonging to the genus Selaginella P.Beauv. of the Selaginellaceae. branches and grows to a height of 15 to 25 cm. The surface of the rock hand is dark green and the back side is whiteish green. When it is dry, it is rolled inward to form a ball shape, but it has the characteristic of being stretched again in a humid environment. The herbal name of Baoxon is Kwonbaek, and it is used in oriental medicine for hematemesis, fecal bleeding, uterine bleeding, blood circulation, menstrual pain, eohyeol and pain relief (Deokkyun Ahn, 2008, Korean Herbal Encyclopedia).
본 발명의 목적은 바위손 추출물 또는 이의 분획물의 박테리아 감염에 의한 질병의 치료 용도를 제공하는 것이다.It is an object of the present invention to provide a use for the treatment of diseases caused by bacterial infection of an extract or a fraction thereof.
본 발명의 다른 목적은 바위손 추출물 또는 이의 분획물의 항균 용도를 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide an antibacterial use of an extract or a fraction thereof.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 바위손(Selaginella tamariscina) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 박테리아 감염에 의한 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention rock son ( Selaginella tamariscina ) Provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by bacterial infection comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 박테리아 감염에 의한 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for the prevention or improvement of diseases caused by bacterial infection comprising the extract or a fraction thereof as an active ingredient.
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial cosmetic composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
나아가, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 피부외용제를 제공한다.Furthermore, the present invention provides an antibacterial external preparation for skin comprising the extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 바위손 분획물은 스타필로코커스 오레우스 균주에 대해 우수한 항균활성을 나타냄으로써, 상기 분획물뿐 아니라 이를 포함하는 추출물 또한 박테리아 감염에 의한 질병의 치료나, 항균활성을 나타내는 기능성 소재로서 유용하게 사용될 수 있다.The basalt fraction according to the present invention exhibits excellent antibacterial activity against Staphylococcus aureus strains, so that not only the fraction but also the extract containing the fraction is useful as a functional material for treating diseases caused by bacterial infection or exhibiting antibacterial activity can be used
도 1은 본 발명의 일 실시예에서 사용된 바위손을 촬영한 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에서 바위손 분획물을 제조하는 과정을 나타내는 모식도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에서 바위손 에틸아세테이트 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 항균활성을 MIC 방법으로 확인한 결과 도면이다(Ctrl: 무처리군, Amp: 암피실린 처리군, Veh: 용매처리군).
도 4는 본 발명의 일 실시예에서 바위손 에틸아세테이트 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 항균활성을 생장저해 농도곡선으로 나타낸 그래프이다(Ctrl: 무처리군, Amp: 암피실린 처리군, Veh: 용매처리군).
도 5는 본 발명의 일 실시예에서 박층 크로마토그래피로 수득한 OC2 및 OC3 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 항균활성을 MIC 방법으로 확인한 결과 도면이다(Ctrl: 균주 미접종군, NC: 무처리군, PC: 암피실린 처리군, Veh: 용매처리군, GWS-01: 에틸아세테이트 분획물 처리군, GWS-OC2: OC2 분획물 처리군, GWS-OC3: OC3 분획물 처리군).
도 6은 본 발명의 일 실시예에서 박층 크로마토그래피로 수득한 OC2 및 OC3 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 항균활성을 생장저해 농도곡선으로 나타낸 그래프이다(NC: 무처리군, PC: 암피실린 처리군, Veh: 용매처리군, GWS: 에틸아세테이트 분획물 처리군).
도 7은 본 발명의 일 실시예에서 박층 크로마토그래피로 수득한 OC2 및 OC3 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 제균활성을 확인한 결과 도면이다(Ctrl: 균주 미접종군, NC: 무처리군, PC: 암피실린 처리군, Veh: 용매처리군, OC2: OC2 분획물 처리군, OC3: OC3 분획물 처리군).
도 8은 본 발명의 일 실시예에서 박층 크로마토그래피로 수득한 OC1(A), OC2(B), OC3(C), OC4(D) 또는 OC5(E) 분획물의 스타필로코커스 오레우스 균주에 대한 항균 활성을 디스크확산법으로 확인한 결과 도면이다.1 is a view of taking a rock hand used in an embodiment of the present invention.
Figure 2 is a schematic diagram showing a process for producing a rock-son fraction in an embodiment of the present invention.
3 is a view showing the result of confirming the antibacterial activity of the ethyl acetate fraction of Basison in an embodiment of the present invention against the Staphylococcus aureus strain by the MIC method (Ctrl: untreated group, Amp: ampicillin treated group, Veh: solvent treatment group).
4 is a graph showing the antibacterial activity of the ethyl acetate fraction of Basison in an embodiment of the present invention as a growth inhibitory concentration curve for Staphylococcus aureus (Ctrl: untreated group, Amp: ampicillin treated group, Veh: solvent treatment group).
5 is a view showing the results of confirming the antibacterial activity against Staphylococcus aureus strains of OC2 and OC3 fractions obtained by thin layer chromatography in an embodiment of the present invention by the MIC method (Ctrl: strain uninoculated group, NC: no Treatment group, PC: ampicillin treatment group, Veh: solvent treatment group, GWS-01: ethyl acetate fraction treatment group, GWS-OC2: OC2 fraction treatment group, GWS-OC3: OC3 fraction treatment group).
6 is a graph showing the antibacterial activity against Staphylococcus aureus strains of OC2 and OC3 fractions obtained by thin layer chromatography in an embodiment of the present invention as a growth inhibitory concentration curve (NC: untreated group, PC: ampicillin) Treatment group, Veh: solvent treatment group, GWS: ethyl acetate fraction treatment group).
7 is a view showing the results of confirming the bacteriostatic activity against Staphylococcus aureus strains of OC2 and OC3 fractions obtained by thin layer chromatography in an embodiment of the present invention (Ctrl: strain uninoculated group, NC: untreated group, PC: ampicillin treated group, Veh: solvent treated group, OC2: OC2 fraction treated group, OC3: OC3 fraction treated group).
8 is a Staphylococcus aureus strain of OC1 (A), OC2 (B), OC3 (C), OC4 (D) or OC5 (E) fractions obtained by thin layer chromatography in an embodiment of the present invention. This is the result of confirming the antibacterial activity by the disk diffusion method.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은 바위손(Selaginella tamariscina) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 박테리아 감염에 의한 질병의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention is a rock hand ( Selaginella tamariscina ) Provides a pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by bacterial infection comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
상기 바위손은 바위손의 줄기, 잎, 뿌리 및 가지로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나일 수 있고, 전초일 수 있다. 상기 바위손은 시판되는 것을 구입하여 사용하거나, 재배된 것을 사용할 수 있다.The rock hand may be any one selected from the group consisting of stems, leaves, roots and branches of the rock hand, and may be an outpost. The rock hand may be purchased and used commercially, or cultivated ones may be used.
상기 바위손 추출물은 하기의 단계를 포함하는 제조방법에 의해 제조될 수 있다:The rockson extract can be prepared by a manufacturing method comprising the following steps:
1) 바위손에 추출용매를 가하여 추출물을 제조하는 단계;1) preparing an extract by adding an extraction solvent to the rock hand;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계; 및2) filtering the extract of step 1); and
3) 단계 2)의 여과된 여과물을 감압농축한 후 건조하는 단계.3) drying the filtered filtrate of step 2) after concentrating under reduced pressure.
또한, 상기 추출용매는 물, 알코올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 상기 알코올은 C1 내지 C2의 저급 알코올일 수 있고, 구체적으로, 상기 알코올은 에탄올, 메탄올 및 주정을 포함할 수 있다. 상기 추출용매는 바위손 질량의 1 내지 30배, 1 내지 25배, 1 내지 20배, 1 내지 15배 또는 1 내지 5배로 첨가될 수 있다.In addition, the extraction solvent may be water, alcohol, or a mixture thereof. The alcohol may be a C 1 to C 2 lower alcohol, and specifically, the alcohol may include ethanol, methanol, and alcohol. The extraction solvent may be added in an amount of 1 to 30 times, 1 to 25 times, 1 to 20 times, 1 to 15 times, or 1 to 5 times the mass of the rock.
상기 추출방법은 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류추출일 수 있다. 이때, 추출 시간은 1 내지 70시간, 1 내지 60시간, 1 내지 50시간, 1 내지 40시간, 1 내지 30시간, 1 내지 20시간, 1 내지 10시간 또는 1 내지 5시간일 수 있다. 상기 추출은 1회 이상 반복 수행될 수 있다.The extraction method may be shaking extraction, Soxhlet extraction, or reflux extraction. In this case, the extraction time may be 1 to 70 hours, 1 to 60 hours, 1 to 50 hours, 1 to 40 hours, 1 to 30 hours, 1 to 20 hours, 1 to 10 hours, or 1 to 5 hours. The extraction may be repeated one or more times.
한편, 상기 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용할 수 있다. 또한, 상기 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조일 수 있다.On the other hand, the vacuum concentration in step 3) may use a vacuum vacuum concentrator or a vacuum rotary evaporator. In addition, the drying may be reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying.
또한, 상기 바위손 분획물은 상술한 바와 같은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 순차분획하여 수득될 수 있다. 구체적으로, 상기 순차분획은 통상적인 방법으로 수행될 수 있으며, 필요에 따라 통상의 기술자에 의해 적절히 변형될 수 있다. 상기 유기용매는 통상의 기술분야에 알려진 모든 유기용매를 포함할 수 있고, 구체적으로, 상기 유기용매는 식물로부터 분획물을 제조하기 위해 일반적으로 사용되는 모든 유기용매를 포함할 수 있다. 일례로, 상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.In addition, the rock-son fraction can be obtained by sequential fractionation by adding an organic solvent to the rock-son extract as described above. Specifically, the sequential fractionation may be performed by a conventional method, and may be appropriately modified by a person skilled in the art if necessary. The organic solvent may include any organic solvent known in the art, and specifically, the organic solvent may include any organic solvent generally used for preparing a fraction from a plant. For example, the organic solvent may be any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol.
한편, 상기 바위손 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 수득된 분획물일 수 있다. 구체적으로, 상기 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 수득된 분획물일 수 있다. 이례로, 상기 바위손 분획물은 바위손 추출물에 n-헥산, 에틸아세테이트 또는 부탄올을 첨가하여 수득된 분획물 일 수 있다.On the other hand, the rock-son fraction may be a fraction obtained by adding an organic solvent to the rock-son extract. Specifically, it may be a fraction obtained by adding an organic solvent to the rock-son extract. In this case, the rock-son fraction may be a fraction obtained by adding n-hexane, ethyl acetate or butanol to the rock-son extract.
또한, 상기 바위손 분획물은 상기 서술한 바와 같은 바위손 유기용매 분획물을 추가분획하여 수득된 분획물일 수 있다. 구체적으로, 상기 추가분획은 박층 크로마토그래피, 실리카겔 컬럼 크로마토그래피, 흡착 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 가스 크로마토그래피 등과 같이 통상의 기술분야에 알려진 방법으로 수행될 수 있다.In addition, the rock-son fraction may be a fraction obtained by further fractionating the rock-son organic solvent fraction as described above. Specifically, the additional fractionation may be performed by methods known in the art, such as thin layer chromatography, silica gel column chromatography, adsorption chromatography, high performance liquid chromatography, gas chromatography, and the like.
상기 박테리아는 통상의 기술분야에서 질병을 일으키는 것으로 알려진 모든 종류의 병원성 박테리아를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 박테리아는 그람 양성균일 수 있고, 일례로, 상기 그람 양성균은 스타필로코커스(Staphylococcus) 속, 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 리스테리아(Listeria) 속, 클로스트리디움(Clostridium) 속, 코리네박테리움 디프테리아(Corynebacterium diphtheria) 및 바실러스 안트라시스(Bacillus anthracis) 균주 등을 포함할 수 있다. 더욱 구체적으로, 상기 스타필로코커스 속 균주는 스타필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus) 및 스타필로코커스 에피더미디스(Staphylococcus epidermidis) 등을 포함할 수 있고, 상기 스트렙토코커스 속 균주는 스트렙토코커스 표진스(Streptococcus pyogenes), 스트렙토코커스 뉴모코커스(Streptococcus pneumococcus), 스트렙토코커스 페칼리스(Streptococcus faecalis) 및 스트렙토코커스 페시움(Streptococcus faecium) 등을 포함할 수 있다.The bacteria may include all kinds of pathogenic bacteria known in the art to cause disease. Specifically, the bacteria may be uniformly positive gram, for example, the Gram-positive bacteria are Staphylococcus (Staphylococcus), A Streptococcus (Streptococcus) genus Listeria (Listeria) genus, Clostridium (Clostridium) in, Corey Yes Bacteria diphtheria ( Corynebacterium diphtheria ) and Bacillus anthracis ( Bacillus anthracis ) It may include strains and the like. More specifically, the Staphylococcus sp. strain may include Staphylococcus aureus and Staphylococcus epidermidis , and the like, and the Streptococcus sp. strain is Streptococcus. pyogenes ), Streptococcus pneumococcus , Streptococcus faecalis , and Streptococcus faecium , and the like.
본 발명에 따른 약학적 조성물은 조성물 전체 중량에 대하여 유효성분인 바위손 추출물 또는 분획물을 10 내지 95 중량%로 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 상기 유효성분 이외에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 추가로 포함할 수 있다.The pharmaceutical composition according to the present invention may contain 10 to 95% by weight of the active ingredient, the extract or fraction, based on the total weight of the composition. In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may further include at least one active ingredient exhibiting the same or similar function in addition to the active ingredient.
본 발명의 약학적 조성물은 생물학적 제제에 통상적으로 사용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 담체는 조성물을 생체 내에 전달하는데 적합한 것이면 모두 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 담체는 Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc.에 기재된 화합물, 식염수, 멸균수, 링거액, 덱스트로스 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등과 같은 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may include a carrier, a diluent, an excipient or a mixture thereof commonly used in biological agents. Any pharmaceutically acceptable carrier may be used as long as it is suitable for delivering the composition in vivo. Specifically, the carrier is Merck Index, 13th ed., Merck & Co. Inc., saline, sterile water, Ringer's solution, dextrose solution, maltodextrin solution, glycerol, ethanol, or mixtures thereof. In addition, conventional additives such as antioxidants, buffers, and bacteriostats may be added as needed.
상기 조성물을 제제화하는 경우, 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 첨가할 수 있다.When formulating the composition, commonly used fillers, extenders, binders, wetting agents, disintegrants, diluents or excipients such as surfactants may be added.
본 발명의 조성물은 경구용 제제 또는 비경구용 제제로 제형화될 수 있다. 경구용 제제로는 고형 제제 및 액상 제제가 포함될 수 있다. 상기 고형 제제는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 또는 트로키제일 수 있고, 이러한 고형 제제는 상기 조성물에 적어도 하나 이상의 부형제를 첨가하여 조제할 수 있다. 상기 부형제는 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스, 젤라틴 또는 이의 혼합물일 수 있다. 또한, 상기 고형 제제는 윤활제를 포함할 수 있고, 그 예로는 마그네슘 스티레이트, 탈크등이 있다. 한편, 상기 액상 제제는 현탁제, 내용액제, 유제 또는 시럽제일 수 있다. 이때, 상기 액상 제제에는 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등과 같은 부형제가 포함될 수 있다.The composition of the present invention may be formulated as an oral preparation or a parenteral preparation. Oral formulations may include solid formulations and liquid formulations. The solid preparation may be a tablet, pill, powder, granule, capsule, or troche, and the solid preparation may be prepared by adding at least one excipient to the composition. The excipient may be starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, or a mixture thereof. In addition, the solid formulation may contain a lubricant, examples of which include magnesium stearate, talc, and the like. Meanwhile, the liquid formulation may be a suspension, an internal solution, an emulsion, or a syrup. In this case, the liquid formulation may include excipients such as wetting agents, sweetening agents, fragrances, and preservatives.
상기 비경구용 제제는 주사제, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 파우더 및 크림 등을 포함할 수 있다. 상기 주사제는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁용제, 유제 등을 포함할 수 있다. 이때, 비수성용제 또는 현탁용제로서는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름이나, 에틸올레이트와 같이 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.The parenteral formulation may include injections, suppositories, powders for respiratory inhalation, aerosols for sprays, powders and creams, and the like. The injection may include a sterile aqueous solution, a non-aqueous solution, a suspension solution, an emulsion, and the like. In this case, as the non-aqueous solvent or suspension solution, vegetable oils such as propylene glycol, polyethylene glycol, and olive oil, or injectable esters such as ethyl oleate may be used.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 복강내, 직장내, 피하, 정맥, 근육내 또는 흉부내 주사 방식을 포함할 수 있다.The composition of the present invention may be administered orally or parenterally according to a desired method. Parenteral administration may include intraperitoneal, intrarectal, subcutaneous, intravenous, intramuscular or intrathoracic injection.
상기 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있다. 이는 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 환자의 민감도, 투여 시간, 투여 경로, 치료기간, 동시에 사용되는 약물 등에 따라 달라질 수 있다. 그러나, 바람직한 효과를 위해서, 본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함되는 유효성분의 양은 0.0001 내지 1,000 ㎎/㎏, 구체적으로 0.001 내지 500 ㎎/㎏일 수 있다. 상기 투여는 하루에 1회 또는 수회일 수 있다.The composition may be administered in a pharmaceutically effective amount. This may vary depending on the type of disease, severity, drug activity, patient's sensitivity to the drug, administration time, administration route, treatment period, drugs used simultaneously, and the like. However, for a desirable effect, the amount of the active ingredient included in the pharmaceutical composition according to the present invention may be 0.0001 to 1,000 mg/kg, specifically 0.001 to 500 mg/kg. The administration may be once or several times a day.
본 발명의 조성물은 단독 또는 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 병용 투여시, 투여는 순차적 또는 동시일 수 있다.The composition of the present invention may be administered alone or in combination with other therapeutic agents. When administered in combination, the administration may be sequential or simultaneous.
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 박테리아 감염에 의한 질병의 예방 또는 개선용 건강기능식품을 제공한다.In addition, the present invention provides a health functional food for the prevention or improvement of diseases caused by bacterial infection comprising the extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 건강기능식품에 포함되는 바위손 추출물 또는 이의 분획물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 본 발명에 따른 바위손 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이의 혼합물로 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 순차분획한 분획물일 수 있고, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 분획한 분획물일 수 있다. 일례로, 상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.The extract or a fraction thereof contained in the health functional food according to the present invention may have the characteristics as described above. As an example, the rockson extract according to the present invention may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixture thereof. In addition, the fraction may be a fraction sequentially fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract, and the fraction may be a fraction fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract. For example, the organic solvent may be any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol.
상기 박테리아는 통상의 기술분야에서 질병을 일으키는 것으로 알려진 모든 종류의 병원성 박테리아를 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 박테리아는 그람 양성균일 수 있고, 일례로, 상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속, 스트렙토코커스 속, 리스테리아 속, 클로스트리디움 속, 코리네박테리움 디프테리아 및 바실러스 안트라시스 균주 등을 포함할 수 있다. The bacteria may include all kinds of pathogenic bacteria known in the art to cause disease. Specifically, the bacteria may be Gram-positive bacteria, for example, the Gram-positive bacteria may include Staphylococcus genus, Streptococcus genus, Listeria genus, Clostridium genus, Corynebacterium diphtheria and Bacillus anthracis strains. can
본 발명의 바위손 추출물 또는 이의 분획물은 식품에 그대로 첨가하거나, 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있다. 이때, 첨가되는 유효성분의 함량은 목적에 따라 결정될 수 있고, 일반적으로는 전체 식품 중량의 0.01 내지 90 중량부일 수 있다.The extract or a fraction thereof of the present invention may be added to food as it is, or used in combination with other foods or food ingredients. In this case, the content of the added active ingredient may be determined according to the purpose, and generally may be 0.01 to 90 parts by weight of the total food weight.
건강기능식품의 형태 및 종류는 특별히 제한되지 않는다. 구체적으로, 상기 건강기능식품은 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환의 형태일 수 있다. 상기 건강기능식품은 추가성분으로서 여러 가지 향미제, 감미제 또는 천연 탄수화물을 포함할 수 있다. 상기 감미제는 천연 또는 합성 감미제일 수 있고, 천연 감미제의 예로는 타우마틴, 스테비아 추출물 등이 있다. 한편, 합성 감미제의 예로는 사카린, 아스파르탐 등이 있다. 또한, 상기 천연 탄수화물은 모노사카라이드, 디사카라이드, 폴리사카라이드, 올리고당 및 당알코올 등일 수 있다.The form and type of health functional food is not particularly limited. Specifically, the health functional food may be in the form of tablets, capsules, powders, granules, liquids and pills. The health functional food may include various flavoring agents, sweetening agents, or natural carbohydrates as additional ingredients. The sweetener may be a natural or synthetic sweetener, and examples of the natural sweetener include thaumatin, stevia extract, and the like. Meanwhile, examples of synthetic sweeteners include saccharin, aspartame, and the like. In addition, the natural carbohydrates may be monosaccharides, disaccharides, polysaccharides, oligosaccharides and sugar alcohols.
본 발명의 건강기능식품은 상기 서술한 추가성분 외에, 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙스탄 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 등을 더 포함할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합으로 사용될 수 있다. 상기 첨가제의 비율은 본 발명의 조성물의 100 중량부당 0.01 내지 0.1 중량부의 범위에서 선택될 수 있다.The health functional food of the present invention includes, in addition to the above-described additional ingredients, nutrients, vitamins, electrolytes, flavoring agents, colorants, pextan and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives , glycerin, alcohol, and the like may be further included. These components may be used independently or in combination. The proportion of the additive may be selected from 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the composition of the present invention.
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 항균용 조성물에 포함되는 바위손 추출물 또는 이의 분획물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 본 발명에 따른 바위손 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이의 혼합물로 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 순차분획한 분획물일 수 있고, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 분획한 분획물일 수 있다. 일례로, 상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.The extract or a fraction thereof contained in the antibacterial composition according to the present invention may have the characteristics as described above. As an example, the rockson extract according to the present invention may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixture thereof. In addition, the fraction may be a fraction sequentially fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract, and the fraction may be a fraction fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract. For example, the organic solvent may be any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol.
상기 항균용 조성물은 통상의 기술분야에서 질병을 일으키는 것으로 알려진 모든 종류의 병원성 박테리아에 대해 항균 활성을 나타낼 수 있다. 구체적으로, 상기 박테리아는 그람 양성균일 수 있고, 일례로, 상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속, 스트렙토코커스 속, 리스테리아 속, 클로스트리디움 속, 코리네박테리움 디프테리아 및 바실러스 안트라시스 균주 등을 포함할 수 있다. The antibacterial composition may exhibit antibacterial activity against all kinds of pathogenic bacteria known to cause disease in the art. Specifically, the bacteria may be Gram-positive bacteria, for example, the Gram-positive bacteria may include Staphylococcus genus, Streptococcus genus, Listeria genus, Clostridium genus, Corynebacterium diphtheria and Bacillus anthracis strains. can
또한, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 화장료 조성물을 제공한다.In addition, the present invention provides an antibacterial cosmetic composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 화장료 조성물에 포함되는 바위손 추출물 또는 이의 분획물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 본 발명에 따른 바위손 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이의 혼합물로 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 순차분획한 분획물일 수 있고, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 분획한 분획물일 수 있다. 일례로, 상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.The rock-son extract or a fraction thereof included in the cosmetic composition according to the present invention may have the characteristics as described above. As an example, the rockson extract according to the present invention may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixture thereof. In addition, the fraction may be a fraction sequentially fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract, and the fraction may be a fraction fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract. For example, the organic solvent may be any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol.
상기 항균용 화장료 조성물은 통상의 기술분야에서 질병을 일으키는 것으로 알려진 모든 종류의 병원성 박테리아에 대해 항균 활성을 나타낼 수 있다. 구체적으로, 상기 박테리아는 그람 양성균일 수 있고, 일례로, 상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속, 스트렙토코커스 속, 리스테리아 속, 클로스트리디움 속, 코리네박테리움 디프테리아 및 바실러스 안트라시스 균주 등을 포함할 수 있다. The antibacterial cosmetic composition may exhibit antibacterial activity against all kinds of pathogenic bacteria known to cause disease in the art. Specifically, the bacteria may be Gram-positive bacteria, for example, the Gram-positive bacteria may include Staphylococcus genus, Streptococcus genus, Listeria genus, Clostridium genus, Corynebacterium diphtheria and Bacillus anthracis strains. can
본 발명의 화장료 조성물은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 0.1 내지 50 중량%, 구체적으로 1 내지 10 중량%로 포함할 수 있다. 상기 화장료 조성물은 항균 활성을 목적으로 피부에 직접 도포될 수 있다.The cosmetic composition of the present invention may contain 0.1 to 50% by weight, specifically, 1 to 10% by weight of the extract or a fraction thereof. The cosmetic composition may be applied directly to the skin for the purpose of antibacterial activity.
화장료 조성물은 통상적으로 제조되는 화장료 제형으로 제제화될 수 있다. 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 로션, 크림, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있다. 구체적으로는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더일 수 있다.The cosmetic composition may be formulated in a conventionally prepared cosmetic formulation. The cosmetic composition may be formulated as a solution, suspension, emulsion, paste, gel, lotion, cream, powder, soap, surfactant-containing cleansing, oil, powder foundation, emulsion foundation, wax foundation and spray. Specifically, it may be a flexible lotion, a nourishing lotion, a nourishing cream, a massage cream, an essence, an eye cream, a cleansing cream, a cleansing foam, a cleansing water, a pack, a spray, or a powder.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 하이드록시드, 칼슘 실리케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 특히, 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로하이드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸에테르 등을 더 포함할 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tragacanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide or mixtures thereof. In addition, when the formulation of the cosmetic composition is powder or spray, it may include lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder, or a mixture thereof. In particular, in the case of a spray, chlorofluorohydrocarbon, propane/butane or dimethyl ether may be further included.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체로서 용매, 용매화제, 유탁화제 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 이의 예로는, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌글리콜, 소르비탄 지방산 에스테르 등이 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a solution or emulsion, it may include a solvent, a solvating agent, an emulsifying agent, or a mixture thereof as a carrier. Examples thereof include water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol, sorbitan fatty acid ester, and the like.
본 발명의 화장료 조성물의 제형이 현탁액인 경우에는 담체로서 물, 에탄올 또는 프로필렌글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미세결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가, 트라가칸트 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 또한, 상기 화장료 조성물의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르설페이드, 알칼아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체, 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다.When the formulation of the cosmetic composition of the present invention is a suspension, a liquid diluent such as water, ethanol or propylene glycol as a carrier, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester; microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar, tragacanth or mixtures thereof. In addition, when the formulation of the cosmetic composition is surfactant-containing cleansing, aliphatic alcohol sulfate, aliphatic alcohol ether sulfate, sulfosuccinic acid monoester, isethionate, imidazolinium derivative, methyl taurate, sarcosinate, fatty acid amide ethersulfide, alklamidobetaine, fatty alcohol, fatty acid glyceride, fatty acid diethanolamide, vegetable oil, lanolin derivative, ethoxylated glycerol fatty acid ester, or mixtures thereof.
본 발명의 화장료 조성물은 담체 성분 이외에도, 보조제로서 항산화제, 안정화제, 용해화제, 보습제, 안료, 향료, 자외선 차단제, 발색제, 계면활성제 또는 이의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 보조제는 화장료 조성물의 제조에 통상적으로 사용되는 물질이라면 모두 사용가능하다.In addition to the carrier component, the cosmetic composition of the present invention may include an antioxidant, a stabilizer, a solubilizer, a moisturizer, a pigment, a fragrance, a sunscreen, a color developer, a surfactant, or a mixture thereof as an adjuvant. The adjuvant may be used as long as it is a material commonly used in the preparation of a cosmetic composition.
나아가, 본 발명은 바위손 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 항균용 피부외용제를 제공한다.Furthermore, the present invention provides an antibacterial external preparation for skin comprising the extract or a fraction thereof as an active ingredient.
본 발명에 따른 피부외용제에 포함되는 바위손 추출물 또는 이의 분획물은 상술한 바와 같은 특징을 가질 수 있다. 일례로, 본 발명에 따른 바위손 추출물은 물, C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이의 혼합물로 추출된 것일 수 있다. 또한, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 순차분획한 분획물일 수 있고, 상기 분획물은 바위손 추출물에 유기용매를 첨가하여 분획한 분획물일 수 있다. 일례로, 상기 유기용매는 n-헥산, 에틸아세테이트 및 부탄올로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상일 수 있다.The extract or a fraction thereof contained in the external preparation for skin according to the present invention may have the characteristics as described above. As an example, the rockson extract according to the present invention may be extracted with water, C 1 to C 2 lower alcohol or a mixture thereof. In addition, the fraction may be a fraction sequentially fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract, and the fraction may be a fraction fractionated by adding an organic solvent to the Basison extract. For example, the organic solvent may be any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol.
상기 항균용 피부외용제는 통상의 기술분야에서 질병을 일으키는 것으로 알려진 모든 종류의 병원성 박테리아에 대해 항균 활성을 나타낼 수 있다. 구체적으로, 상기 박테리아는 그람 양성균일 수 있고, 일례로, 상기 그람 양성균은 스타필로코커스 속, 스트렙토코커스 속, 리스테리아 속, 클로스트리디움 속, 코리네박테리움 디프테리아 및 바실러스 안트라시스 균주 등을 포함할 수 있다. The antibacterial external preparation for skin may exhibit antibacterial activity against all kinds of pathogenic bacteria known to cause disease in the art. Specifically, the bacteria may be Gram-positive bacteria, for example, the Gram-positive bacteria may include Staphylococcus genus, Streptococcus genus, Listeria genus, Clostridium genus, Corynebacterium diphtheria and Bacillus anthracis strains. can
본 발명의 피부외용제는 약학적으로 허용가능한 담체 및 부형제를 포함할 수 있다. 상기 담체 및 부형제는 방부제, 안정화제, 수화제, 유화 촉진제 및 완충제 등을 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 부형제는 유당, 덱스트린, 전분, 만니톨, 소르비톨, 글루코스, 사카로스, 미세결정 셀룰로스, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 또는 이의 혼합물일 수 있다. 상기 피부외용제는 당업계에 잘 알려진 방법에 따라 적절히 제조될 수 있다. 상기 피부외용제는 파우더, 젤, 연고, 크림, 액체 및 에어로졸의 형태로 제조될 수 있다.The external preparation for skin of the present invention may include a pharmaceutically acceptable carrier and excipient. The carrier and excipient may include preservatives, stabilizers, wetting agents, emulsification accelerators and buffers, and the like. Specifically, the excipient may be lactose, dextrin, starch, mannitol, sorbitol, glucose, saccharose, microcrystalline cellulose, gelatin, polyvinylpyrrolidone, or a mixture thereof. The external preparation for skin may be appropriately prepared according to a method well known in the art. The external preparation for skin may be prepared in the form of powder, gel, ointment, cream, liquid and aerosol.
이하, 본 발명을 하기 실시예에 의해 상세히 설명한다, 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐, 이들에 의해 본 발명이 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 청구범위에 기재된 기술적 사상과 실질적으로 동일한 구성을 갖고 동일한 작용 효과를 이루는 것은 어떠한 것이라도 본 발명의 기술적 범위에 포함된다.Hereinafter, the present invention will be described in detail with reference to the following examples, provided that the following examples are only for illustrating the present invention, and the present invention is not limited thereto. Anything that has substantially the same configuration as the technical idea described in the claims of the present invention and achieves the same operation and effect is included in the technical scope of the present invention.
실시예Example 1. 바위손의 추출물 제조 1. Preparation of extract of rock hand
바위손(Selaginella tamariscina)의 에탄올 추출물을 하기와 같은 방법으로 제조하였다.rock hand ( Selaginella) tamariscina ) was prepared in the following way.
먼저, 채취한 바위손을 세척, 건조 및 파쇄하여 준비하고, 준비된 10 ㎏의 바위손에 이의 5배수의 양으로 에탄올을 첨가하여 2시간 동안 추출을 수행하였다. 상기 추출을 4회 반복하여 수득된 추출물을 모두 취합함으로써, 바위손의 에탄올 추출물을 수득하였다.First, the collected rock hand was prepared by washing, drying, and crushing, and ethanol was added in an amount five times the amount of 10 kg of the prepared rock hand, and extraction was performed for 2 hours. By repeating the
실시예Example 2. 바위손의 에틸아세테이트 2. Basson's ethyl acetate 분획물fraction 제조 manufacturing
상기 제조된 바위손 추출물로부터 분획물을 다음과 같이 제조하였다.Fractions were prepared from the prepared rock-son extract as follows.
구체적으로, 실시예 1에서 수득된 바위손의 에탄올 추출물에 동량의 에틸아세테이트를 첨가하고, 분리된 에틸아세테이트 분획물을 수득하였다.Specifically, the same amount of ethyl acetate was added to the ethanol extract of Basson obtained in Example 1, and a separated ethyl acetate fraction was obtained.
실시예Example 3. 바위손의 3. of the rock hand 박층thin layer 크로마토그래피(TLC) Chromatography (TLC) 분획물의fraction of 제조 manufacturing
상기 수득된 바위손의 에틸아세테이트 분획물을 박층 크로마토그래피 방법을 이용하여 극성에 따라 추가 분획물을 제조하였다.Additional fractions were prepared according to the polarity of the obtained ethyl acetate fraction of baxson using thin layer chromatography.
구체적으로, 실리카 TLC 플레이트(silica TLC plate)에 실시예 2에서 제조된 바위손의 에틸아세테이트 분획물을 점적하고, 염화메틸렌(methylene chloride, MC) 및 메탄올(MeOH)을 90:10의 부피비로 혼합한 용매를 이용하여 스팟(spot)을 전개하였다. 전개가 끝난 뒤, TLC 플레이트 상에 분리된 화합물은 자외선 감광 및 아니스알데하이드(anisaldehyde) 발색을 이용하여 가시화하였다. 이를 통해 바위손의 에틸아세테이트 분획물로부터 추가분획된 5개의 박층 크로마토그래피 분획물(OC1, OC2, OC3, OC4 또는 OC5)을 수득하였다.Specifically, the ethyl acetate fraction prepared in Example 2 was dropwise added to a silica TLC plate on a silica TLC plate, and methylene chloride (MC) and methanol (MeOH) were mixed in a volume ratio of 90:10. A spot was developed using a solvent. After development, the separated compounds on the TLC plate were visualized using UV light sensitization and color development with anisaldehyde. Through this, five thin-layer chromatography fractions (OC1, OC2, OC3, OC4 or OC5) were obtained from the ethyl acetate fraction of Basson.
실험예 1. 바위손 분획물의 항균활성 확인-(1)Experimental Example 1. Confirmation of antibacterial activity of the rock-son fraction-(1)
1-1. 에틸아세테이트 분획물의 항균활성 확인1-1. Confirmation of antibacterial activity of ethyl acetate fraction
상기에서 수득한 바위손 에틸아세테이트 분획물의 항균활성을 최소저해농도 측정법(minimal inhibitory concentration, MIC)으로 확인하였다. 최소저해농도 측정법은 세균의 증식을 억제할 수 있는 최저 농도를 확인하기 위한 실험방법으로서, 희석된 항균제가 포함된 배지에 균주를 접종 및 배양한 뒤, 균주의 증식이 관찰되지 않는 항균제의 농도를 MIC로 판정한다.The antibacterial activity of the ethyl acetate fraction obtained above was confirmed by minimal inhibitory concentration (MIC). The minimum inhibitory concentration measurement method is an experimental method for confirming the lowest concentration that can inhibit the growth of bacteria. After inoculating and culturing the strain in a medium containing the diluted antimicrobial agent, the concentration of the antimicrobial agent in which the growth of the strain is not observed is measured. It is judged by MIC.
구체적으로, 실시예 2의 바위손 에틸아세테이트 분획물을 100 ㎎/㎖의 농도가 되도록 DMSO(dimethyl sulfoxide)에 용해시켜 준비하였다. 한편, 스타필로코커스 오레우스(Staphylococcus aureus, ATCC 25923)(ATCC, 미국) 균주는 트립티케이스 소이(trypticase soy) 배지를 이용하여 37℃하에서 교반하며 배양하였다. 상기 균주를 대수기까지 배양한 뒤, PBS(phosphate buffered saline) 완충액에 0.5 맥팔랜드 표준(McFarland standard, 1×108 내지 1.5×108 CFU/㎖)이 되도록 현탁하였다. 상기 현탁액을 2 ㎖의 MH(Mueller-Hinton) 액체 배지에 1×108 내지 1.5×106 CFU/㎖이 되도록 접종하였다. 여기에 상기 준비한 에틸아세테이트 분획물을 125, 250, 500 또는 1,000 ㎍/㎖의 농도로 첨가하여 37℃하에서 교반하며 6시간 동안 배양하였다. 이때, 대조군으로 아무것도 처리하지 않은 무처리군 및 에틸아세테이트 용매 처리군과 양성 대조군으로 암피실린(ampicillin)을 동일한 농도로 사용하였다. 배양 0, 1, 2, 4 또는 6시간에 육안으로 스타필로코커스 오레우스 균주의 성장을 확인하여 도 3에, 600 ㎚의 파장하에서 OD(optical density)를 측정함으로써 작성한 생장저해 농도곡선을 도 4에 나타내었다.Specifically, the ethyl acetate fraction of Basison of Example 2 was prepared by dissolving it in DMSO (dimethyl sulfoxide) to a concentration of 100 mg/ml. On the other hand, Staphylococcus aureus ( Staphylococcus aureus , ATCC 25923) (ATCC, USA) strain was cultured with agitation at 37 ℃ using trypticase soy medium. After culturing the strain until the log phase, 0.5 McFarland standard (McFarland standard, 1×10 8 to 1.5×10 8 CFU/ml) was suspended in phosphate buffered saline (PBS) buffer. The suspension was inoculated to 1×10 8 to 1.5×10 6 CFU/ml in 2 ml of MH (Mueller-Hinton) liquid medium. Here, the ethyl acetate fraction prepared above was added at a concentration of 125, 250, 500 or 1,000 μg/ml, and incubated for 6 hours with stirring at 37°C. At this time, the untreated group and the ethyl acetate solvent-treated group were used as a control group, and ampicillin was used at the same concentration as the positive control group. The growth inhibition concentration curve created by measuring the OD (optical density) under a wavelength of 600 nm in FIG. 3 by visually confirming the growth of the Staphylococcus aureus strain at 0, 1, 2, 4 or 6 hours of culture is shown in FIG. shown in
도 3 및 4에 나타난 바와 같이, 바위손의 에틸아세테이트 분획물이 스타필로코커스 오레우스 균주의 성장을 억제하였다. 특히, 125 ㎍/㎖ 이상의 농도로 바위손의 에틸아세테이트 분획물을 첨가한 군에서 균주의 성장이 유의적으로 억제되었고, 특히 500 ㎍/㎖ 이상의 농도로 처리한 경우에는 육안으로도 확인이 가능하였다.As shown in Figures 3 and 4, the ethyl acetate fraction of rock son inhibited the growth of Staphylococcus aureus strains. In particular, the growth of the strain was significantly inhibited in the group to which the ethyl acetate fraction of Basison was added at a concentration of 125 μg/ml or more, and in particular, when treated at a concentration of 500 μg/ml or more, it was possible to confirm with the naked eye.
1-2. 1-2. 박층thin layer 크로마토그래피 chromatography 분획물의fraction of 항균활성 확인 Confirmation of antibacterial activity
상기에서 박층 크로마토그래피를 수행하여 수득된 5개 분획물 중, OC2 또는 OC3를 대상으로 MIC를 수행하여 이들의 항균활성을 확인하였다. 실험은 실시예 2의 바위손 에틸아세테이트 분획물 대신, 실시예 3에서 제조된 OC2 또는 OC3 분획물을 62.5, 125, 250, 500 또는 1,000 ㎍/㎖의 농도로 사용하고, 균주를 24시간 동안 배양하면서, 배양 3, 6, 12 또는 24시간에 균주의 성장을 관찰한 것을 제외하고는, 상기 실험예 1-1과 동일한 조건 및 방법으로 수행하였다. 그 결과, 육안으로 스타필로코커스 오레우스 균주의 성장을 확인한 결과를 도 5에, 600 ㎚의 파장하에서 OD를 측정함으로써 작성한 생장저해 농도곡선을 도 6에 나타내었다.Among the five fractions obtained by performing thin layer chromatography, MIC was performed on OC2 or OC3 to confirm their antibacterial activity. The experiment was carried out using the OC2 or OC3 fraction prepared in Example 3 instead of the bacson ethyl acetate fraction of Example 2 at a concentration of 62.5, 125, 250, 500 or 1,000 μg/ml, and culturing the strain for 24 hours, Except for observing the growth of the strain at 3, 6, 12 or 24 hours of culture, the same conditions and methods as those of Experimental Example 1-1 were performed. As a result, the result of visually confirming the growth of the Staphylococcus aureus strain is shown in FIG. 5, and the growth inhibitory concentration curve prepared by measuring the OD under a wavelength of 600 nm is shown in FIG.
도 5에 나타난 바와 같이, 박층 크로마토그래피를 통해 수득된 OC2 및 OC3 분획물에서 항균활성을 나타내었다.As shown in FIG. 5 , the OC2 and OC3 fractions obtained through thin layer chromatography exhibited antimicrobial activity.
실험예 2. 바위손 분획물의 제균활성 확인Experimental Example 2. Confirmation of bactericidal activity of the rock-son fraction
상기에서 확인된 본 발명에 따른 바위손 분획물의 항균활성이 균주를 사멸시키는 제균활성인지를 최소사멸농도(minimal bacteriocidal concentraiton, MBC) 시험을 통해 확인하였다.Whether the antibacterial activity of the rock-son fraction according to the present invention confirmed above is the bacteriostatic activity to kill the strain was confirmed through a minimal bacteriocidal concentration (MBC) test.
먼저, 1.7%의 한천을 포함하는 MH 고체 배지에 상기 실험예 1-2에서 박층 크로마토그래피 분획물인 OC2 또는 OC3를 1,000 ㎍/㎖ 농도로 처리하여 배양한 스타필로코커스 오레우스 균주의 배양액을 10 ㎕ 수득하여 분주하였다. 이를 다시 37℃하에서 추가로 16시간을 배양하여 균주의 성장을 확인하였다. 그 결과, 스타필로코커스 오레우스 균주의 사멸여부를 육안으로 확인한 결과를 도 7에 나타내었다.First, 10 μl of a culture solution of Staphylococcus aureus strain cultured by treating OC2 or OC3, which is the thin layer chromatography fraction in Experimental Example 1-2, at a concentration of 1,000 μg/ml in MH solid medium containing 1.7% agar obtained and aliquoted. The growth of the strain was confirmed by culturing it again for an additional 16 hours at 37°C. As a result, the result of visually confirming whether the Staphylococcus aureus strain was killed is shown in FIG. 7 .
도 7에 나타난 바와 같이, 박층 크로마토그래피로 분획물인 OC2 분획물은 균주를 사멸시키는 반면, OC3 분획물은 균주를 사멸시키지 않고 성장만 억제시키는 것을 확인하였다.As shown in FIG. 7 , it was confirmed that the OC2 fraction as a fraction by thin layer chromatography killed the strain, while the OC3 fraction only inhibited growth without killing the strain.
실험예 3. 바위손 분획물의 항균활성 확인-(2)Experimental Example 3. Confirmation of antibacterial activity of the rock-son fraction-(2)
상기에서 박층 크로마토그래피를 수행함으로써 수득된 5개 분획물(OC1, OC2, OC3, OC4 또는 OC5)을 대상으로 디스크확산법(disc diffusion method, DD)을 수행하여 이들의 항균활성을 확인하였다.The five fractions (OC1, OC2, OC3, OC4 or OC5) obtained by performing thin layer chromatography above were subjected to a disk diffusion method (DD) to confirm their antibacterial activity.
먼저, 스타필로코커스 오레우스 균주를 실험예 1-1에 기재된 바와 동일한 방법 및 조건으로 준비하여 현탁액을 제조하였다. 100 ㎕의 제조된 현탁액을 취하여 MH 고체 배지에 멸균된 면봉을 이용하여 고르게 도포하고, 이를 배양하였다. 한편, 실시예 2의 5개 분획물을 250, 500 또는 1,000 ㎍/㎖의 농도가 되도록 DMSO에 희석한 뒤, 직경 6 ㎜의 BBL TM 블랭크 종이 디스크(BBL TM blank paper discs, BD, 미국)에 점적하고, 이를 상온에서 완전히 건조시켜 준비하였다. 상기 배양된 고체 배지에 준비된 디스크를 올리고, 37℃하에서 16시간 동안 추가 배양하였다. 이때, 양성 대조군으로 암피실린을 동일한 농도로 사용하였다. 배양 후, 확인된 결과를 도 8에 나타내었다.First, a Staphylococcus aureus strain was prepared in the same manner and under the same conditions as described in Experimental Example 1-1 to prepare a suspension. 100 μl of the prepared suspension was taken and evenly applied to MH solid medium using a sterile cotton swab, and cultured. On the other hand, the five fractions of Example 2 were diluted in DMSO to a concentration of 250, 500 or 1,000 μg/ml, and then dropped onto a BBL TM blank paper discs of 6 mm in diameter (BBL TM blank paper discs, BD, USA). and dried completely at room temperature. The prepared disk was placed on the cultured solid medium, and further cultured at 37°C for 16 hours. At this time, ampicillin was used at the same concentration as a positive control. After incubation, the confirmed results are shown in FIG. 8 .
도 8에 나타난 바와 같이, OC2, OC3 및 OC4 분획물을 처리한 경우 스타필로코커스 오레우스 균주의 성장이 억제되었다. 특히, OC2 분획물이 가장 우수한 항균활성을 나타내어 13 내지 14 ㎜의 클리어 존(clear zone)을 형성하였다.As shown in FIG. 8, when the OC2, OC3 and OC4 fractions were treated, the growth of the Staphylococcus aureus strain was inhibited. In particular, the OC2 fraction showed the best antibacterial activity, forming a clear zone of 13 to 14 mm.
따라서, 상기로부터 바위손의 유기용매 분획물 또는 이를 포함하는 추출물이 항균활성을 나타냄을 알 수 있었다.Therefore, it can be seen from the above that the organic solvent fraction of rock son or an extract containing the same exhibits antibacterial activity.
Claims (11)
rock hand ( Selaginella) tamariscina ) A pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by bacterial infection comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the extract is extracted with water, a lower alcohol of C 1 to C 2 , or a mixture thereof, for preventing or treating diseases caused by bacterial infection.
The pharmaceutical composition for preventing or treating diseases caused by bacterial infection according to claim 1, wherein the fraction is a fraction sequentially fractionated by adding an organic solvent to the extract of Basson.
According to claim 3, wherein the organic solvent is any one or more selected from the group consisting of n-hexane, ethyl acetate and butanol, a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of diseases caused by bacterial infection.
According to claim 1, wherein the bacteria is a gram-positive bacteria, a pharmaceutical composition for the prevention or treatment of diseases caused by bacterial infection.
According to claim 5, wherein the Gram-positive bacteria is Staphylococcus (Staphylococcus) sp. strain, a pharmaceutical composition for preventing or treating a disease caused by a bacterial infection.
A health functional food for the prevention or improvement of diseases caused by bacterial infection, comprising a rock extract or a fraction thereof as an active ingredient.
An antibacterial composition comprising a rockson extract or a fraction thereof as an active ingredient.
The antibacterial composition according to claim 8, wherein the antibacterial composition exhibits antibacterial activity against Gram-positive bacteria.
An antibacterial cosmetic composition comprising an extract or a fraction thereof as an active ingredient.
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