KR20210096539A

KR20210096539A - Sag1-vlp를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소포자충증의 예방용 백신 조성물

Info

Publication number: KR20210096539A
Application number: KR1020200010143A
Authority: KR
Inventors: 최원형
Original assignee: 최원형
Priority date: 2020-01-28
Filing date: 2020-01-28
Publication date: 2021-08-05

Abstract

본 발명은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충 감염으로 유발되는 톡소플라즈마증(톡소포자충증, Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물 및 동물의약품 백신 조성물을 제공한다.
보다 구체적으로, 톡소포자충의 SAG1 단백질과 인플루엔자 A 바이러스 매트릭스 단백질 1을 포함하는 SAG1-VLP(SAG1-Virus like particle)가 인수공통전염병인 톡소플라즈마증을 유발하는 기생충인 톡소포자충(Toxoplasma gondii: T. gondii)에 대한 특이적 항체를 생성하고 면역성을 형성하여 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용을 유발함으로써, 톡소포자충의 감염을 예방하는 효과가 있으므로 톡소포자충으로 야기되는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물 및 동물의약품 백신 조성물로 유용하다.

Description

SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소포자충증의 예방용 백신 조성물{A vaccine composition for preventing toxoplasmosis induced by Toxoplasma gondii infection comprising SAG1-VLP}

본 발명은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충 감염으로 유발되는 톡소플라즈마증(톡소포자충증, Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물 및 동물의약품 백신 조성물에 관한 것이다.

보다 구체적으로, 톡소포자충의 SAG1 단백질과 인플루엔자 A 바이러스 매트릭스 단백질 1을 포함하는 SAG1-VLP(SAG1-Virus like particle)가 인수공통전염병인 톡소플라즈마증을 유발하는 기생충인 톡소포자충(Toxoplasma gondii: T. gondii)에 대한 면역화와 특이적 항체생성를 통해 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용을 유발함으로써, 톡소포자충의 감염을 예방하는 효과가 있으므로 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물 및 동물의약품 백신 조성물로 유용하다.

수백 년 전만 해도 폐렴, 페스트(흑사병), 천연두, 콜레라, 결핵, 독감와 같은 감염성 질병은 전 인류에 급격한 사망을 초래하는 고위험 전염성 질병이었다. 이러한 전염성 질병은 수세기에 걸쳐 전세계의 수많은 사람들을 사망시켰으며 현재까지도 전염성 질병의 예방, 치료 및 억제는 전세계적으로 어려움에 처해있는 실정이다. 이러한 감염성 질병의 억제를 위한 다양한 연구 중 우두를 통한 천연두 백신개발과 파스테르에 의한 광견병, 콜레라 백신의 개발, 그리고 항생제인 페니실린의 발견은 전염성 또는 병원성 미생물의 억제 또는 치료, 질병억제 및 건강보건향상과 인간의 수명연장에 큰 변화를 유발시키는 전환점이 되었다. 현재 전세계적으로 감염성 질병의 억제를 위한 치료제 개발에도 불구하고 감염성 질병의 치료, 억제 및 차단에 한계를 나타내고 있으며, 감염성 질병의 근본적인 차단과 예방에 어려움이 야기되고 있어 감염성 미생물의 차단에 한계를 나타내고 있다. 이러한 측면에서 여전히 병원성을 띠는 감염성 미생물에 의한 피해는 국가간의 경계를 띄어넘어 경제, 환경, 의학 및 공중보건학적으로 다양한 문제와 질병을 유발함으로써 막대한 경제적 손실을 야기시키고 있다.

톡소포자충(톡소플라즈마 곤디, Toxoplasma gondii: T. gondii)은 AIDS 환자, 유아, 면역결핍 또는 면역체계에 장애가 있는 환자, 임신부 및 일반 정상인에 감염되어 톡소포자충증 또는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)을 유발하는 원인 기생충이다. 톡소플라즈마 곤디 또는 톡소포자충은 동물세포에 비해 매우 작은 기생 생물로서 길이 8 ㎛, 직경 2㎛인 초승달 모양의 기생 생물체이며, 감염 후 숙주의 세포내에서 분열증식 및 성장을 통해 신체 부위로 이동, 조직에 기생하면서 생존하며 살아간다.

톡소포자충(톡소플라즈마 곤디, Toxoplasma gondii)을 구성하는 내부 기관은 Inner mambrane complex(IMC), 단일 원추체, 아피코플라스트, 미토콘드리아, 리보솜, 핵, 골지체, 롭트리 (Rhoptry), 밀도과립 및 마이크로넴즈(Micronemes) 등이 있으며 다양한 조직과 단백질 성분들을 함유하고 있다. 톡소포자충은 타키조이트(tachyzoites), 브라디조이트(bradyzoites) 및 스포로조이트(sporozoites)를 포함하는 세 단계의 감염기를 포함하며 이러한 단계는 톡소포자충의 분열증식 및 성장에 필요한 기생 생활사로 구성된다. 사람은 모체로부터 태아로의 톡소포자충의 전염을 의미하는 태반 감염에 의해 감염될 수 있으며, 톡소플라즈마 곤디에 감염된 조리되지 않은 음식 또는 덜 조리된 음식을 먹거나 날고기등을 통해 감염될 수 있고, 토양이나 물에 존재하는 포자성 오시스트(oocysts) 또는 고양이 배설물을 통해 감염될 수 있다. 타키조이트기는 숙주의 세포내에서 급속하게 분열 증식되어 복제되는 단계를 의미한다. 톡소포자충을 동물세포(animal cells)에 감염시키면 세포내부에서 톡소포자충이 분열증식(proliferation)하면서 공포(parasitephorous vacuole: PV)를 형성시키고 공포막(parasitophorous vacuole membrane: PVM) 내에서 분열증식된 톡소포자충은 막(membrane)을 통해 숙주세포로부터 영양분을 획득하고 산성화로부터 보호 받으며 PVM 안에서 분열증식하고, 결국 공포막을 제거하고 바이러스처럼 숙주세포를 사멸시키며 숙주세포 밖으로 나오며 증식하게 된다.

최근까지 톡소포자충에 관한 연구에 따르면 톡소포자충의 마이코넴즈(miconemes), IMC, 롭트리(rhoptries), Apicoplast, Conoid 및 고밀도과립(dense granule) 등을 포함하는 다양한 미세 기관과 물질들이 톡소포자충의 기생 기능과 밀접하게 연관되어 있다고 보고되었다. 각각의 소기관은 숙주세포(host cells)로의 톡소포자충 침투 과정에서 각 단계 중 서로 다른 기능을 유발하는 관련 단백질들을 방출한다. 마이코넴즈는 숙주세포에서 톡소포자충의 부착과 관련되어 있고, 롭트리는 PVM 형성 단계 및 숙주세포와의 상호작용에서 중요한 역할을 하며, 고밀도과립(Dense granule) 단백질은 숙주세포로부터 영양분의 수송기능을 하는 것으로 보고되고 있다.

현재 톡소플라즈마증을 치료하기 위한 상용화된 효과적인 백신은 없으며, 설파다이아진(sulfadiazine), 피리메타마인(pyrimethamine) 등이 항톡소플라즈마증(항톡소포자충증) 치료 제제로 사용되고 있다. 현재까지 효과적이고 만족스러운 약제는 아직 없으며, 항말라리아제인 pyrimethamine과 설파제인 sulfonamide의 병용투여, pyrimethamine에 sulfadiazine 또는 spiramycin을 병용투여함으로서 톡소플라즈마증 치료에 사용되고 있다. 현재는 pyrimethamine-sulfamethoxazole 합제가 처방되고 있지만 임신부에게 pyrimethamine의 투여는 신중한 진단과 처방이 요구된다. 또한, 망막질환이 있을 경우 clindamycin-sulfadiazine 합제가 좋은 진전을 보일 수 있으며, 염증반응을 줄이기 위해 스테로이드(steroid) 제제가 함께 사용될 수 있다. 그러나 최근 상기 약제들이 나타내는 여러가지 독성 및 내성 등으로 부작용이 야기됨에 따라, 다양한 천연자원을 사용하여 톡소포자충의 억제 및 살충에 효과를 야기하는 의약품 개발에 관한 연구가 활발히 진행되고 있다. 최근, 새로운 항톡소포자충(Anti-Toxoplasma gondii) 약물 개발을 위한 연구개발 약물들은 톡소포자충증 치료에 효과적이고 사람 및 동물에게는 독성이 없거나 미미해야 하며, 감염원인 톡소포자충을 강하고 효과적으로 억제하거나 살충해야 한다. 하지만 톡소포자충의 감염으로 유발되는 톡소포자충증의 근본적인 억제, 차단 및 예방에 한계를 나타내고 있어 예방백신의 개발이 절실히 요구되고 있다.

이에, 본 발명자는 톡소포자충의 SAG1 단백질과 인플루엔자 A 바이러스 매트릭스 딘백질 1을 포함하는 SAG1-VLP가 인수공통전염병인 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)을 유발하는 기생충인 톡소포자충(Toxoplasma gondii: T. gondii)에 대한 특이적 항체 생성을 유발하고 면역력을 형성시켜 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용을 유도함으로써, 톡소포자충의 감염 예방과 톡소포자충으로 야기되는 톡소플라즈마증을 예방하고 차단하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 하나의 목적은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 동물의약품 백신 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "SAG1"은 톡소포자충의 "Surface antigen 1" or "P30" 이라 불린다. 또한, 본 발명에서 사용되는 용어 "VLP"는 "Virus like particle"이라 불리며 Influenza A virus matrix protein 1에 의해 형성되는 인플루엔자 바이러스 A의 캡시드 내부 단백질 막이다.

본 발명에서는 SAG1-VLP 유잔자를 선별 재조합하고 베큘로바이러스 벡터에 삽입한 후 대장균을 통해 클로닝하여 SAG1-VLP를 발현하는 재조합 벡터를 제조한 후 재조합 벡터를 곤충세포에 도입하여 SAG1-VLP를 발현시킨 후 SAG1-VLP를 대량으로 단리하였다.

본 발명의 일 실시 예에서 SAG1과 VLP의 유전자를 각각 선별하여 재조합하고 전기영동을 통해 해당 유전자를 확인한 후, 베큘로바이러스 벡터에 삽입하여 재조합시킨 후 대장균을 사용하여 클로닝(Cloning)한 후 SAG1-VLP를 발현하는 재조합 벡터를 대량으로 제조하였다 (도 1).

이후, 곤충세포를 이용하여 SAG1-VLP를 발현하는 재조합 벡터를 transfection 방법을 통해 곤충세포에 도입하고, 도입된 곤충세포를 4~5일 배양한 후 세포로부터 발현된 재조합 단백질 SAG1-VLP를 대량으로 단리하여 western blot 방법을 통해 측정, 확인하였다 (도 2).

본 발명의 일 실시예에서 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성을 유발하는 SAG1-VLP를 재조하여 효과적으로 발현시켜 단리함으로써, 톡소포자충증을 예방하기 위한 SAG1-VLP를 대량으로 확보할 수 있음을 확인하였다(도 1 내지 도 2).

본 발명의 일 실시예에서 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성을 유발하는 톡소포자충 특이적 SAG1-VLP를 생쥐에 근육투여를 통해 4주 간격으로 각각 1차, 2차 총 2회 접종하여 면역화하였고, 1차 면역화 4주 후 쥐의 혈청을 채취하여 항체반응 측정법을 통해 톡소포자충 특이적 항체생성을 측정한 결과, 비면역화된 정상군과 SAG1이 없는 VLP로 면역화된 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 Group의 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 특이적으로 강하게 생성되었으며, 2차 면역화 4주 후 시점에서도 정상군과 SAG1이 없는 VLP로 접종된 Group에 비해 면역화된 Group의 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었음을 확인하였다(도 4 내지 도 5).

본 발명의 일 실시예에서 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성을 유발하는 SAG1-VLP를 생쥐에 근육투여를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충을 감염시키고 1주일 후 생쥐로부터 혈청을 채취하여 항체반응 측정법을 통해 톡소포자충 특이적 항체 생성을 측정한 결과, 정상 Group과 비면역화된 톡소포자충 감염 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화 Group에서 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었음을 확인하였다(도 4). 이러한 결과를 통하여 SAG1-VLP가 체내에서 톡소포자충 특이적 항체를 강하게 생성하여 감염 후에도 톡소포자충(Toxoplasma gondii)에 대한 특이적 면역력을 형성, 증가시켜 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용을 유발함으로써, 톡소포자충의 감염 예방과 톡소포자충으로 야기되는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선효과를 달성할 수 있음을 확인하였다.

본 발명의 일 실시예에서 VLP가 없는 단독 SAG1과 SAG1-VLP를 각각 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 각각 1차, 2차 면역화 4주 후, 혈청를 채취하여 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 측정하였다. 면역화되지 않은 정상군에 비해 VLP가 없는 SAG1로 면역화된 Group에서 항체가 생성되어 증가 되었으나, 이에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 Group에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하고 더 효과적으로 생성되었음이 측정되었다. 이러한 결과를 통해 VLP가 없는 SAG1의 면역화에 비해 SAG1-VLP의 면역화가 톡소포자충 특이적 항체 생성을 더 효과적으로 유발하고 있음을 확인하였다(도 6).

본 발명의 일 실시예에서 SAG1-VLP로 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충을 감염시키고 1주일 후 정상 Group, 비면역화된 감염 Group과 면역화된 감염 Group의 생쥐로부터 비장을 채취하여 파쇄한 후 비장액을 제조하여 면역세포 상호작용과 면역반응에 의해 유발되는 Cytokine의 생성변화를 ELISA 측정법을 통해 측정한 결과, IL-1β(Interleukin-1beta), IL(Interleukin)-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12, GM-CSF(Granulocyte macrophage colony stimulating factor), TNF-α(Tumor necrosis factor-alpha), IFN-γ(Interferon-gamma)의 생성이 비면역화 감염 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 감염 Group에서 현저히 감소되었음을 확인하였다(도 7).

본 발명의 일 실시예에서 SAG1-VLP로 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 면역화된 생쥐와 정상 생쥐로부터 혈청을 채취하여 톡소포자충(Toxoplasma gondii RH, 2×10³ 개)과 혼합하여 6시간 배양하고 혈청 톡소포자충 혼합액을 복강을 통하여 정상 생쥐에 감염시키고 6일 후 톡소포자충을 생쥐의 복강으로부터 채취한 후 톡소포자충의 분열증식율을 측정한 결과, 비면역화 혈청 톡소포자충 혼합액 Group에 비해 면역화된 혈청 톡소포자충 혼합액 Group의 톡소포자충 분열증식율이 현저히 억제됨을 확인하였다(도 8).

본 발명의 일 실시예에서 SAG1-VLP가 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성을 통하여 면역력을 증강시킴으로써, 염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인의 생성을 현저히 감소시키는 효과를 가지고 있음이 확인되었으며, 면역화된 혈청의 톡소포자충 Neuralization(중화) 작용을 통하여 톡소포자충의 저해작용 또는 분열증식 억제작용을 유발하는 항톡소포자충 효과를 가지고 있음을 확인함으로써, SAG1-VLP가 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다(도 7 내지 도 8).

본 발명의 일 실시예에서 SAG1-VLP의 2차 면역화 4주 후, 면역화된 생쥐와 정상 생쥐로부터 비장을 채취한 후 비장세포를 분리하여 플라스크에 배양하고 톡소포자충 항원액(Toxoplasma gondii RH lysate antigen, TLA)을 제조하여 비장세포에 감염시키고 3일간 배양하여 비장세포의 생존율을 측정한 결과, 면역화되지 않은 항원 감염 비장세포 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 비장세포 Group의 생존율이 현저히 증가하였음이 측정되었다(도 9).

또한, 본 발명의 일 실시예에서 SAG1-VLP의 2차 면역화 4주 후, 생쥐에 톡소포자충을 감염시키고 35일 동안 생쥐의 생존율을 관찰한 결과, 비면역화된 톡소포자충 감염 Gruop은 18일 이내에 모두 사망하였으나 SAG1-VLP로 면역화된 Group의 생존율은 75%로 측정되었다(도 10).

본 발명의 일 실시예에서 비장세포의 생존율 변화, 비면역화된 톡소포자충 감염 생쥐 Group과 SAG1-VLP로 면역화된 톡소포자충 감염 생쥐 Group의 생존율 변화를 통해 SAG1-VLP가 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성을 강하게 유발하고 면역력을 형성, 증가시켜 톡소포자충의 생존을 저해하고 톡소포자충에 대한 특이적 면역력을 강하게 유발하여 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용, 톡소포자충 감염에 대한 생존율을 지속적으로 유도함으로써, 톡소포자충의 감염 예방과 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선효과를 달성할 수 있음을 확인하였다(도 9 내지 도 10).

본 발명에서 사용되는 용어, "톡소포자충증"은 "톡소플라즈마증"이라 불리며 원충의 일종인 톡소포자충(Toxoplama gondii, 톡소플라즈마 곤디) 감염에 의해 일어나는 기생충유래 인수공통 감염성 질병이며, 여성이 임신 중에 톡소포자충에 감염될 경우 유산과 불임을 유발하며 "태반 감염"을 통해 태아에게 기형 및 선천성 톡소포자충증을 일으키며 주요 증상으로는 뇌수종(hydrocephalus), 망막맥락막염(retinochoroiditis), 경련(convulsion), 뇌석회화(cerebral calcification), 정신운동지연(psychomotor retardation) 등과 같은 다양한 증상을 유발한다. 또한, 후천적으로 톡소포자충에 감염되면 림프선병증(lymphadenopathy), 발열, 두통, 근육통, 비종대와 홍반성 발진, 심근염 또는 뇌수막염, 뇌석회화, 비정형 폐렴(atypical pneumonia) 등의 증상이 나타나기도 한다. 또한 "톡소플라즈마증"은 톡소포자충에 의한 감염 때문에 발생하는 질환으로 톡소인포자충이 인체에 감염될 경우 주로 근육조직에 기생하지만 근육 이외에도 림프선, 뇌, 신경, 위장관, 생식기, 안구 등 대부분의 조직이나 장기에 침입하여 기생함으로써 다양한 증상을 일으킨다.

톡소플라즈마증은 톡소포자충에 감염된 장기에 따라서 그 증상이 다양하게 나타나며 톡소포자충이 조직내에 기생하며 급성 및 만성화 증상을 유발한다. 톡소포자충은 숙주의 영양분을 이용해 증식하며 다양한 기관으로 전이하여 염증을 유발하고 사람이 톡소포자충에 감염되면 조직내에서 면역세포와의 염증반응에 의해 점차 몸의 정상조직이 파괴되며 그 주위에 육아종(Granuloma, 덩어리로 된 혹)이 발생될 수 있다.

톡소포자충은 종숙주인 고양이 또는 고양이과 동물이 서식하는 곳이면 전세계 어디에서나 발견되며, 사람과 애완동물 및 가축을 포함한 모든 포유류와 조류 및 기타 동물들이 중간숙주 역할을 하는 것으로 알려져 있고, 미국의 경우 약 6천만명 이상의 사람이 톡소포자충에 감염되어 있는 것으로 보고되어 있다.

본 발명에서 사용되는 용어, "예방"은 본 발명에 따른 SAG1-VLP를 포함하는 조성물의 섭취 또는 투여로 톡소플라즈마증의 발병을 억제, 지연 또는 예방시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 사용되는 용어, "개선"이란 본 발명에 따른 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 조성물을 섭취 또는 투여함으로서 상기 질환의 발병 또는 증상을 감소시킴으로써 톡소플라즈마증의 증상을 완화시키는 효과를 의미한다.

본 발명에서 상기 백신 조성물의 톡소플라즈마증에 대한 예방 또는 개선 효과는 SAG1-VLP가 체내에서 톡소포자충에 대한 특이적 항체를 생성하고 면역력을 형성, 유발함으로써 톡소포자충에 대한 감염 차단 또는 저해작용을 나타내어 톡소플라즈마증의 예방 효과 또는 활성를 가짐으로써 달성되는 것일 수 있다.

본 발명의 실시예에서 확인한 바와 같이, 본 발명의 SAG1-VLP는 면역화를 통해 톡소포자충의 특이적 항체를 생성함으로써 톡소포자충의 감염을 저해하고 억제함으로써 톡소포자충 감염에 의해 유발되는 톡소플라즈마증을 예방하는 활성과 효과를 갖는바, 본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물로 제공될 수 있다.

본 발명의 SAG1-VLP는 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 인플루엔자 A 바이러스 메트릭스 단백질 1(Influenza A virus matrix protein 1: Influenza A MP1)과 톡소포자충의 표면단백질인 Surface Antigen 1(SAG1)의 재조합에 의해 생성되는 물질일수 있다. SAG1-VLP는 업계에 공지된 일반적인 재조합 방법과 기술, 즉 클로닝, 바이러스 벡터, 재조합 벡터와 재조합 벡터가 삽입된 숙주 세포 또는 세균의 단백질 발현을 통해 통해 제조될 수 있으며, 제조된 재조합 단백질은 통상적인 추출방법이나 분리방법 또는 정제방법을 이용하여 얻어질 수 있다. 또한, 상기 추출방법이나 분리방법은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 컬럼크로마토그래피, 원심분리, 고속원심분리 또는 초고속원심분리 등의 방법을 사용할 수 있다.

상기 인플루엔자 A 바이러스 메트릭스 단백질 1(Influenza A MP1)은 서열번호 1의 핵산 서열에 의해 암호화되어 번역되며, 상기 톡소포자충 표면단백질 SAG1은 서열번호 2의 핵산 서열에 의해 암호화되어 번역된다. 상기 Influenza A MP1은 서열번호 3의 아미노산 서열로 구성되며, 상기 톡소포자충의 표면단백질 SAG1은 서열번호 4의 아미노산 서열로 구성되어 이를 통해 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 백신 조성물이 제공된다.

본 발명의 SAG1-VLP는 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 재조합 발현 벡터가 삽입된 곤충세포에서 발현되어 생성될 수 있으며, 또한 동물세포, 식물세포, 미생물을 통해 발현되어 생성될 수 있다.

본 발명의 약학 백신 조성물은 주사제, 경피흡수제, 점막흡수제, 구강붕해제, 캡슐제, 서방형제제, 설하정, 패치제, 필름제, 도포제, 첩부제, 흡입제, 또는 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 상기 예에 의해 제조 가능한 제형의 형태가 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학 백신 조성물의 투여용량은 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태, 투여방법 및 앓고 있는 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 본 발명의 조성물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정 시간의 간격으로 수회 투여 할 수 있다.

본 발명의 약학 백신 조성물을 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 사용하거나 다른 의약품 성분 또는 안정화제와 함께 혼합, 병용하여 사용될 수 있으며 단일 또는 다중으로 사용될 수 있다. 유효성분의 함량은 유효량 범위를 고려하여 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있고, 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정되어 사용될 수 있다.

다른 하나의 양태로서, 본 발명은 SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 동물의약품 백신 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 바람직하게는 SAG1-VLP가 면역화를 통해 톡소포자충의 특이적 항체를 생성하고 톡소포자충에 대한 면역력을 유발하여 톡소포자충의 감염을 저해하고 억제함으로써 톡소포자충 감염에 의해 유발되는 톡소플라즈마증을 예방하는 활성과 효과를 갖는바, 본 발명의 조성물을 유효성분으로 포함하는 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 동물의약품 백신 조성물로 사용할 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명의 조성물을 동물의약품 백신 조성물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 사용하거나 다른 의약품 성분 또는 안정화제와 함께 사용할 수 있고, 단일 또는 다중으로 사용될 수 있다. 유효성분의 함량은 유효량 범위를 고려하여 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있고, 사용 목적(예방 또는 개선)에 따라 적합하게 결정될 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에 따른 약학적 백신 조성물 또는 동물의약품 백신 조성물은 톡소포자충의 특이적 항체를 생성하여 톡소포자충에 대한 면역력을 형성, 유발하고 톡소포자충의 감염 저해 또는 억제 효과를 통하여 톡소포자충에 의해 유발되는 톡소플라즈마증을 예방하는 활성과 효과를 가짐으로써, 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 백신 조성물로 유용하게 사용할 수 있다.

도 1은 클로닝을 통해 pFastBac vector에 삽입되어 세포내에서 SAG1-VLP를 발현하는 SAG1-VLP 구성유전자를 나타낸다. (A)는 PCR을 통해 증폭된 톡소포자충 Surface antigen1(SAG1), Influenza A virus matrix pretein 1(MP1), 두 유전자가 결합된 SAG1-VLP(MP1-SAG1) 유전자를 나타내며, (B)는 두 유전자가 삽입된 pFastBac vector 전체를 크기를 나타낸다. M은 DNA Marker를 나타낸다.
도 2는 SAG1-VLP 단백질을 Western blotting method로 측정한 결과를 나타낸다. (A)는 세포에서 발현된 Influenza A virus matrix protein 1(MP1)과 톡소포자충 Surface antigen1(SAG1)을 SDS-PAGE에 각각 10, 20μg씩 loading하여 측정한 결과이며, (B)는 SAG1과 Influenza A virus matrix protein 1을 포함하는 SAG1-VLP 단백질을 각각 5, 10, 20μg씩 loading하여 측정한 결과를 나타낸다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 실험일정과 SAG1-VLP의 구성과 형태를 도식화하여 나타낸 것이다. (A)는 실험일정을 나타내며 (B)는 SAG1-VLP의 구성과 형태를 도식화한 것이다.
도 4는 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하였고 각각 1차, 2차 면역화 4주 후, 혈청를 채취하여 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 측정한 결과, 면역화되지 않은 정상군에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 군에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었음을 나타낸다. 또한, SAG1-VLP를 생쥐에 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충을 감염시키고 7일 후 생쥐로부터 혈청을 채취하여 항체반응 측정법을 통해 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 측정한 결과, 비면역화된 톡소포자충 감염군에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 감염군에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었음을 나타낸다. (A)는 IgG, (B)는 IgG1, (C)는 IgG2a, (D)는 IgA를 나타낸다.
도 5는 SAG1이 없는(비발현된) VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하고 각각 1차, 2차 접종 4주 후, 혈청를 채취하여 정상군과 SAG1이 없는 VLP 접종군의 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성 반응을 측정한 결과를 나타낸다. (A)는 IgG, (B)는 IgG1, (C)는 IgG2a, (D)는 IgA를 나타낸다.
도 6은 VLP가 없는 단독 SAG1과 SAG1-VLP를 각각 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 각각 1차, 2차 면역화 4주 후, 혈청를 채취하여 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 측정한 결과이다. 면역화되지 않은 정상군에 비해 VLP가 없는 SAG1로 면역화된 군에서 항체가 생성되어 증가되었으나, 이에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 군에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 더 강하고 효과적으로 생성되었음을 나타낸다. (A)는 IgG, (B)는 IgG1, (C)는 IgG2a, (D)는 IgA를 나타낸다.
도 7은 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충을 감염시키고 7일 후 생쥐의 비장(spleen)을 채취하여 면역반응에 의해 유발되는 염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인을 측정한 결과이다. 비면역화된 톡소포자충 감염 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 감염 Group에서 사이토카인의 생성이 현저히 감소되었음을 나타낸다. (A)는 Interleukin(IL)-1β, IL-6와 Tumor necrosis factor(TNF)-α, (B)는 Interferon-γ, IL-4와 IL-12, 그리고 (C)는 Granulocyte macrophage colony stimulating factor(GM-CSF), IL-2와 IL-10을 나타낸다.
도 8은 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 생쥐로부터 혈청을 채취하여 톡소포자충과 혼합하고 6시간 배양한 후 혈청 톡소포자충 혼합액을 정상 생쥐의 복강에 감염시키고 6일 후 생쥐의 복강으로부터 톡소포자충을 채취하여 톡소포자충의 분열증식율을 측정한 결과이다. 비면역화된 혈청 톡소포자충 혼합액 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 혈청 톡소포자충 혼합액 Group에서 톡소포자충의 분열증식율이 현저히 감소됨을 측정한 결과로 상기 SAG1-VLP의 면역화 혈청의 항톡소포자충 중화 효과를 나타낸다.
도 9는 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 생쥐로부터 비장을 채취하여 비장세포를 단리한 후 배양하고 톡소포자충 항원을 제조하여 배양된 각각의 비장세포에 항원을 감염시키고 배양 3일 후 비장세포의 생존율을 측정한 결과이다. 비면역화 항원 감염 비장세포에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 항원 감염 비장세포의 생존율이 강하게 증가되었음을 측정한 결과로 상기 SAG1-VLP의 면역화 효과를 나타낸다.
도 10은 SAG1-VLP의 톡소포자충에 대한 특이적 항체 생성과 면역력 형성 효과를 평가하기 위해 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충을 감염시고 35일동안 생쥐의 생존율을 관찰하여 SAG1-VLP의 면역화 효과를 측정한 결과이다. 비면역화된 톡소포자충 감염 Group의 생존율은 18일 이내에 0%로 감소한 반면, SAG1-VLP로 면역화된 톡소포자충 감염 Group의 생존율은 35일 동안 75%로 확인됨으로써 톡소포자충 감염에 대한 SAG1-VLP의 면역화 효과를 나타낸다.

이하, 본 발명을 실시 예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시 예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시 예에 한정되는 것은 아니다.

: 재료

: RPMI 1640 media와 FBS(Fetal Bovine Serum, 소혈청)는 Gibco(USA)에서 구입하였으며 Trypan blue, MTT(Methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide), DMSO(Dimethyl Sulfoxide)는 시그마 알드리치 주식회사(Sigma-Aldrich Co. LLC, St. Louis, MO, USA)에서 구입하였다. 세포배양 디스크, 1.5ml tube, 10~50ml tube, PCR microtube, 96 well plate는 (주)동인바이오텍에서 구입하였다. 항체는 R&D Systems Inc.(USA), Southern Biotech(Birmingham, AL, USA), 머크밀리포어 주식회사(독일), Thermo Fisher Scientific(USA), Invitrogen Corporation(USA), Santa Cruz Biotechnology Inc.(UAS), Abcam(UK), Mybiosource Inc.(San Diego, USA)에서 구입하였으며, Cytokine ELISA 측정 kit는 Thermo Fisher Scientific(USA), Invitrogen Corporation(USA)과 Qiagen(Hilden, Germany)에서 구입하였다. Bac-to-Bac Baculovirus expression system, pFastBac vector system, Cellfectin II reagent, SF9 cells와 serum-free SF900 III medium은 Invitrogen(USA)에서 구입하였고, 핵산추출 kit는 Qiagen(Hilden, Germany), Thermo Fisher Scientific(USA), (주)동인바이오텍에서 구입하였고, PCR kit와 RT-PCR kit는 (주)바이오니아, Takara(Japan)에서 구입하였으며 다른 화학제제, 시약, 소모품 등은 (주)동인바이오텍, (주)큐어바이오, (주)다윈바이오, 머크 화학 주식회사(독일) 및 시그마 알드리치 주식회사(미국)에서 구입하였다.

: 톡소포자충 및 세포 배양

: 톡소포자충(Toxoplasma gondii, Toxoplasma gondii RH strain)은 ATCC(미국)에서 구입하였으며 톡소포자충은 BALB/c 마우스의 복강에서 증식시킨 후 채취하여 사용하였고 SF9 cells은 serum-free SF900 III medium에서 배양되었다.

: 톡소포자충 특이적 SAG1-VLP 제조, 발현 및 단리

: 톡소포자충 특이적 SAG1 유전자는 특이적 Forward primer(5-GAATTCATGTCGGTTTCGCTGCAC-3)와 Reverse primer(5'-AGGCCTTCACGCGACACAAGCTGC-3')를 사용해 PCR을 통해 증폭되었고, 재조합을 위해 밑줄로 표시된 제한효소 자리(EcoRI와 StuI sites)가 SAG1 유전자에 각각 도입되었다. VLP 생성을 위해 "Influenza A virus segment 7 matrix protein 1"(이하 'Influenza A MP 1'이라 한다)유전자는 특이적 Forward primer(5'- GGATCCAGCGAAAGCAGGTAGATAT-3')와 Reverse primer(5'- GCGCGCAGGTAGTTTTTTACTCCAG-3')를 사용해 PCR을 통해 증폭되었고, 재조합을 위해 밑줄로 표시된 제한효소 자리(Bam HI and BssH II sites)가 Influenza A MP 1 유전자에 각각 도입되었다. 톡소포자충 특이적 SAG1과 Influenza A MP 1 유전자의 증폭을 위해 사용된 Primer는 NCBI에 공지된 톡소포자충 SAG1(accession number: JX045360, 1011 bp)과 Influenza A virus segment 7 matrix protein 1(accession number: EF467824, 1027 bp) 유전자를 사용하여 각각 제작되어 pFastBac vector에 도입되었다. pFastBac vector에 각각 도입된 SAG1, Influenza A MP 1, 두 유전자가 결합된 SAG1-VLP 유전자는 증폭 후 1.2% agarose gel를 사용하여 전기영동을 통해 확인되었다(도 1).

상기 재조합된 유전자 SAG1-VLP는 제한효소를 통해 pFastBac vector에 삽입된 후 Transformation method을 통해 E.coli에 도입, 배양된 후 E.coli로 부터 재조합 vector를 추출하고 Transfection method을 통해 SF9 cells에 도입되었다. 이후 SF9 cells는 5일간 배양되었고 세포에서 발현된 SAG1-VLP는 초고속원심분리에 의해 추출되었다. 각각의 SAG1와 matrix protein 1도 상기 방법에 의해 도입, 발현, 추출되어 사용되었고 상기 유전자의 도입과 발현은 Invitrogen Corporation (USA)의 재조합 단백질 발현 시스템인 Bac-to-Bac Baculovirus expression system의 제조사 메뉴얼에 따라 수행되었다. 이후 각각의 단백질을 정량하고 Western blotting method를 사용하여 농도별로 단백질의 발현을 확인하였다(도 2).

: SAG1-VLP의 면역화와 톡소포자충 특이적 항체 생성

: SAG1-VLP의 면역화를 통한 톡소포자충 특이적 항체 생성을 측정하기 위해 SAG1-VLP와 SAG1이 없는(비발현된) VLP를 근육주사를 통해 생쥐에 4주 간격으로 1차, 2차 접종하여 면역화하고, 각각 1차, 2차 접종 4주 후에 각 Group으로부터 혈청를 채취하여 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 항체반응 측정법을 통해 ELISA reader 측정기를 사용하여 측정하였다. 비면역화된 정상 Group과 SAG1이 없는 VLP로 면역화된 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 Group에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었다(도 4). 특히 SAG1이 없는(비발현된) VLP로 접종 면역화된 군에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성은 정상군과 유사함이 측정되었다(도 5). 이는 SAG1-VLP의 면역화에 의해 톡소포차층 특이적 항체가 면역화 Group에서 강하게 생성됨을 나타낸다.

: 톡소포자충 감염과 항체 생성 측정

: 톡소포자충 감염에 대한 상기 시험물질의 면역화 효과를 확인하기 위해 SAG1-VLP를 생쥐에 근육투여를 통해 4주 간격으로 1차, 2차 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 경구를 통해 톡소포자충(Toxoplasma gondii RH, 8 ×10⁴ 개)을 감염시키고 7일 후 생쥐로부터 혈청을 채취하여 항체반응 측정법을 통해 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 항체반응 측정법을 통해 ELISA reader 측정기를 사용하여 측정하였다. 정상 Group과 비면역화된 톡소포자충 감염 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 Group에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체가 강하게 생성되었다(도 4). 이러한 결과는 SAG1-VLP의 면역화에 의해 톡소포차층에 대한 특이적 항체 생성과 면역력이 효과적으로 유발되어 감염 후에도 지속적으로 항체가 생성됨으로써, 톡소포자충에 대한 면역력이 형성되었음을 나타낸다.

: 면역화와 톡소포자충 특이적 항체 생성 비교

: VLP가 없는 단독의 SAG1과 SAG1-VLP를 각각 생쥐에 근육주사를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 각각 1차, 2차 면역화 4주 후, 혈청를 채취하여 톡소포자충 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성을 항체반응 측정법을 통해 ELISA reader 측정기를 사용하여 측정하였다. 면역화되지 않은 정상군에 비해 VLP가 없는 SAG1로 면역화된 Group에서 항체가 생성되어 증가 하였으나, SAG1-VLP로 면역화된 Group에서 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체의 생성이 SAG1로 면역화된 Group에 비해 강하게 생성되었음이 측정되었다(도 6). 이는 단독의 SAG1 단백질에 비해 SAG1-VLP의 면역화가 톡소포차충에 대한 특이적 항체를 더 효과적으로 생성하고 유도하고 있음을 나타낸다.

: 면역반응에 의한 Cyrokine 측정

: SAG1-VLP를 생쥐에 근육투여를 통해 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화한 후, 2차 면역화 4주 후에 톡소포자충(Toxoplasma gondii RH, 8×10⁴ 개)을 경구를 통해 감염시키고 7일 후 생쥐의 비장(spleen)을 채취하여 조직 파쇄기로 분쇄하고 원심분리하여 비장 용출액을 채취한 후 사이토카인 측정 ELISA kit를 사용하여 면역세포에 의해 생성되는 염증성 사이토카인과 항염증성 사이토카인을 측정하였다. 상기 사이토카인 측정은 cytokine kit 측정 메뉴얼에 따라 수행되었으며 측정 결과, 비면역화된 톡소포자충 감염 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 감염 Group에서 사이토카인의 생성이 현저히 감소되었음이 측정되었다(도 7). 이러한 결과는 SAG1-VLP 면역화 후 톡소포자충 특이적 항체가 생성되고 면역력이 형성됨으로써, 톡소포자충 감염으로 유발되는 사이토카인의 생성이 현저히 감소되었음을 나타낸다.

: 면역화 항체에 의한 항톡소포자충 효과

: SAG1-VLP의 면역화를 통한 톡소포자충 특이적 항체의 항톡소포자충 효과 또는 활성 측정은 다음과 같다. SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사를 통하여 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 생쥐로부터 혈청을 채취하여 톡소포자충(Toxoplasma gondii RH, 2×10³ 개)과 혼합하고 6시간 배양한 후 혈청 톡소포자충 혼합액을 정상 생쥐의 복강에 감염시키고 6일 후, 생쥐의 복강으로부터 톡소포자충을 채취하여 분열증식율을 MTT Assay 측정법을 사용하여 측정한 하였다. 비면역화된 혈청 톡소포자충 혼합액 Group에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 혈청 톡소포자충 혼합액 Group의 톡소포자충 분열증식율이 현저히 억제되었음이 측정되었다(도 8). 이러한 결과는 SAG1-VLP 면역화 후 생성된 톡소포자충 특이적 항체에 의해 톡소포자충이 비활성화되어 분열증식율이 현저히 억제되었음을 나타낸다.

: SAG1-VLP 면역화에 의한 비장세포의 생존율 측정

: SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사로 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 생쥐로부터 비장을 채취하여 파쇄하고 비장세포를 단리한 후 37℃에서 배양하고 세포가 배양 디스크에 70% 분열증식 되었을 때 톡소포자충 항원(2 ㎍/ml)을 제조하여 배양된 각각의 비장세포에 감염시키고 37℃에서 3일 배양 후 비장세포의 생존율을 MTT Assay로 측정하였다. 비면역화된 톡소포자충 항원 감염 비장세포에 비해 SAG1-VLP로 면역화된 톡소포자충 항원 감염 비장세포의 생존율이 강하게 증가 되었음이 확인되었다(도 9). 이러한 결과는 SAG1-VLP 면역화 후 톡소포자충 특이적 항체가 비장세포에서 생성됨으로써, 톡소포자충 항원-항체 반응을 통해 톡소포자충 항원의 독성이 중화되어 세포 생존율이 강하게 저해되지 않았음을 나타낸다.

: SAG1-VLP 면역화에 의한 생쥐의 생존율 측정

: SAG1-VLP의 면역화에 의한 톡소포자충 감염 생쥐의 생존율 평가는 다음과 같다. 먼저 SAG1-VLP를 생쥐에 근육주사로 4주 간격으로 2회 접종하여 면역화하고 2차 면역화 4주 후, 톡소포자충(Toxoplasma gondii RH, 8 ×10⁴ cells)를 경구를 통해 감염시킨 후 35일동안 생쥐의 생존율을 관찰하여 톡소포자충 감염에 대한 SAG1-VLP의 면역화 효과를 측정하였다. 측정 결과, 비감염된 정상군은 35일간 생존하였으며 비면역화된 톡소포자충 감염군은 18일 이내에 모두 사망한 반면, SAG1-VLP로 면역화된 톡소포자충 감염군은 35일동안 75%의 생존율을 나타냈다. 이러한 결과는 SAG1-VLP의 면역화 후 톡소포자충 특이적 항체 생성과 면역력이 형성되어 톡소포자충 항원-항체 반응을 통해 감염 후에도 톡소포자충이 저해되고 분열증식이 억제됨으로써, 생쥐의 생존율이 유지되어 생존이 지속되었음을 나타낸다(도 10).

본 발명에 따른 약학 백신 조성물 및 동물의약품 백신 조성물은 톡소포자충에 대한 특이적 항체를 생성하고 면역성을 형성하여 톡소포자충에 대한 면역력을 증가시켜 톡소포자충의 감염 억제 및 차단작용을 유발함으로써 톡소포자충의 감염을 예방하는 효과가 있으므로 톡소플라즈마증의 예방 또는 개선용 백신 조성물로 유용하게 사용할 수 있으며 다양한 용도로 이용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 산업적으로 제약업, 농축산업 및 제조업 등의 산업분야에 유용하게 사용될 수 있다.

<110> CHOI, Won Hyung <120> A vaccine composition for preventing toxoplasmosis induced by Toxoplasma gondii infection comprising SAG1-VLP <130> P-2020-1 <160> 4 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1027 <212> DNA <213> Influenza A virus <400> 1 agcgaaagca ggtagatatt gaaagatgag tcttctaacc gaggtcgaaa cgtacgtact 60 ctctatcatc ccgtcaggcc ccctcaaagc cgagatcgca cagagacttg aagatgtctt 120 tgcagggaag aacaccgatc ttgaggttct catggaatgg ctaaagacaa gaccaatcct 180 gtcacctctg actaagggga ttttaggatt tgtgttcacg ctcaccgtgc ccagtgagcg 240 aggactgcag cgtagacgct ttgtccaaaa tgcccttaat gggaacgggg atccaaataa 300 catggacaaa gcagttaaac tgtataggaa gctcaagagg gagataacat tccatggggc 360 caaagaaatc tcactcagtt attctgctgg tgcacttgcc agttgtatgg gcctcatata 420 caacaggatg ggggctgtga ccactgaagt ggcatttggc ctggtatgtg caacctgtga 480 acagattgct gactcccagc atcggtctca taggcaaatg gtgacaacaa ccaatccact 540 aatcagacat gagaacagaa tggttttagc cagcactaca gctaaggcta tggagcaaat 600 ggctggatcg agtgagcaag cagcagaggc catggaggtt gctagtcagg 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Thr Lys Gly Ile Leu Gly Phe Val Phe 50 55 60 Thr Leu Thr Val Pro Ser Glu Arg Gly Leu Gln Arg Arg Arg Phe Val 65 70 75 80 Gln Asn Ala Leu Asn Gly Asn Gly Asp Pro Asn Asn Met Asp Lys Ala 85 90 95 Val Lys Leu Tyr Arg Lys Leu Lys Arg Glu Ile Thr Phe His Gly Ala 100 105 110 Lys Glu Ile Ser Leu Ser Tyr Ser Ala Gly Ala Leu Ala Ser Cys Met 115 120 125 Gly Leu Ile Tyr Asn Arg Met Gly Ala Val Thr Thr Glu Val Ala Phe 130 135 140 Gly Leu Val Cys Ala Thr Cys Glu Gln Ile Ala Asp Ser Gln His Arg 145 150 155 160 Ser His Arg Gln Met Val Thr Thr Thr Asn Pro Leu Ile Arg His Glu 165 170 175 Asn Arg Met Val Leu Ala Ser Thr Thr Ala Lys Ala Met Glu Gln Met 180 185 190 Ala Gly Ser Ser Glu Gln Ala Ala Glu Ala Met Glu Val Ala Ser Gln 195 200 205 Ala Arg Gln Met Val Gln Ala Met Arg Thr Ile Gly Thr His Pro Ser 210 215 220 Ser Ser Ala Gly Leu Lys Asn Asp Leu Leu Glu Asn Leu Gln Ala Tyr 225 230 235 240 Gln Lys Arg Met Gly Val Gln Met Gln Arg Phe Lys 245 250 <210> 4 <211> 336 <212> PRT <213> Toxoplasma gondii <400> 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Val Cys Gly Lys Asp Gly Val Lys Val Pro Gln 210 215 220 Asp Asn Asn Gln Tyr Cys Ser Gly Thr Thr Leu Thr Gly Cys Asn Glu 225 230 235 240 Lys Ser Phe Lys Asp Ile Leu Pro Lys Leu Thr Glu Asn Pro Trp Gln 245 250 255 Gly Asn Ala Ser Ser Asp Lys Gly Ala Thr Leu Thr Ile Lys Lys Glu 260 265 270 Ala Phe Pro Ala Glu Ser Lys Ser Val Ile Ile Gly Cys Thr Gly Gly 275 280 285 Ser Pro Glu Lys His His Cys Thr Val Lys Leu Glu Phe Ala Gly Ala 290 295 300 Ala Gly Ser Ala Lys Ser Ala Ala Gly Thr Ala Ser His Val Ser Ile 305 310 315 320 Phe Ala Met Val Ile Gly Leu Ile Gly Ser Ile Ala Ala Cys Val Ala 325 330 335

Claims

SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 약학 백신 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 톡소포자충(Toxoplasma gondii) 특이적 IgG, IgG1, IgG2a, IgA 항체를 증가시키는 작용을 나타내는 것을 특징으로 하는 조성물.
SAG1-VLP는 서열번호 1의 핵산 서열과 서열번호 2의 핵산 서열에 의해 암호화되고, 서열번호 3의 아미노산 서열과 서열번호 4의 아미노산 서열로 구성되어 발현되는 단백질.
SAG1-VLP는 인플루엔자 A 바이러스 매트릭스 단백질 1과 그 표면에 형성되는 톡소포자충의 SAG1 단백질로 구성되는 단백질.
제3항 또는 제4항의 단백질 발현 벡터를 사용하여 숙주세포를 형질전환하는 단계 및 상기 숙주세포를 배양하여 톡소포자충 특이적 SAG1-VLP를 발현하는 단계를 포함하는 SAG1-VLP의 제조 방법.
SAG1-VLP를 유효성분으로 포함하는 톡소포자충으로 유발되는 톡소플라즈마증(Toxoplasmosis)의 예방 또는 개선용 동물의약품 백신 조성물.