KR20210086662A - Aoah를 과발현하는 유전자조작된 중간엽 줄기 세포 및 이의 용도 - Google Patents

Abstract

아실옥시아실 가수분해효소(AOAH) 폴리펩타이드를 과발현하는 유전자 변형된 중간엽 줄기 세포(MSC), 예를 들어, AOAH 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 핵산을 포함하는 MSC가 기술된다. MSC는 안지오포에이틴-1(ANGPT1)과 같은 제2의 관심 폴리펩타이드를 추가로 과발현할 수 있다. 유전자 변형된 MSC를 포함하는 약제 학적 조성물이 또한 기술된다. 이러한 유전자 변형된 MSC 및/또는 이를 약제로서 포함하는 약제학적 조성물이, 예를 들어, 전신 염증 반응 증후군(SIRS) 또는 패혈증 치료에 사용되는 용도가 또한 기술된다.

Description

AOAH를 과발현하는 유전자조작된 중간엽 줄기 세포 및 이의 용도

관련 출원에 대한 상호 참조

본 출원은 2018년 10월 29일자로 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/752,000의 혜택을 주장하며, 상기 기초출원의 전문이 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

기술분야

본 개시내용은 일반적으로 전신 염증 반응 증후군(systemic inflammatory response syndrome: SIRS), 다발성 장기 기능장애 증상(multiple organ dysfunction symptom: MODS), 패혈성 쇼크 및 패혈증과 같은 염증 질환의 치료에 관한 것이다.

전신 염증 반응 증후군(SIRS)은 여러 장기 기능장애를 초래하는 전신 염증과 관련된 중증 상태이고; 급성 폐 손상(acute lung injury: ALI)은 가장 흔하고 가장 초기의 장기 부전을 나타낸다. SIRS는 다양한 병원성 사건의 결과로서 발생할 수 있으며 패혈증 증후군이 가장 만연하고 치명적인 원인이다.

패혈증은 매년 백만이 넘는 미국인에게 영향을 미치며, 패혈증으로 인한 사망 위험율이 30%, 중증 패혈증이 50%, 패혈성 쇼크가 80% 정도로 높다. 패혈증 치료는 미국 병원에서 치료된 가장 비용이 많이 드는 상태로서 올라와 있고, 2011년에 200억 달러가 넘는 비용이 들었다(Torio et al., Healthcare Cost and Utilization Project (HCUP) Statistical Brief, #160, 2013, 1-12). 매년 258,000명이 넘는 목숨을 잃어, 패혈증은 심장병과 암 다음으로 미국에서 세 번째 주요 사망 원인으로서 순위가 매겨져 있다. 그 결과, 생존자들은 종종 절단, 불안, 기억 상실, 만성 통증과 피로, 및 인지 기능 악화를 포함한 패혈증후(post-sepsis) 장기간 효과를 마주하게 된다.

패혈증은 면역계와 박테리아 및 박테리아 벽 구성요소의 상호작용의 결과로서 염증 매개인자의 과잉생산으로부터 비롯된다. 내독소 및 그람 음성 박테리아의 주요 외막 성분으로도 알려진 리포다당류(LPS)는 유해 면역 반응(adverse immune response)을 촉발하는 것으로 알려진 원인 인자 중 하나이다.

혈액 내 박테리아의 전파는 정상적으로 혈액계 감염을 제어하는 기능을 하는 건강한 면역계를 환자에게 책임으로 전환시키는 사이토카인 폭풍을 초래한다.

박테리아 패혈증에 대한 제어 전략으로서 항생제의 사용에도 불구하고, 최근 혈류 박테리아 분리물에 의한 항생제 내성 증가는 패혈증, 이의 증상 및 병리의 치료 및 관리를 위한 신규 화합물, 치료법 및 요법이 절실히 필요함을 부각시켰다.

본 명세서는 다수의 문서를 언급하며, 그 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조에 의해 원용된다.

본 개시내용은 다음 항목 1 내지 42를 제공한다:

1. 아실옥시아실 가수분해효소(acyloxyacyl hydrolase: AOAH) 폴리펩타이드를 과발현하도록 유전자 변형된 중간엽 줄기 세포(mesenchymal stem cell: MSC).

2. 항목 1에 있어서, MSC가 재조합 AOAH 폴리펩타이드를 발현하는 MSA.

3. 항목 2에 있어서, 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

4. 항목 3에 있어서, 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

5. 항목 4에 있어서, 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

6. 항목 5에 있어서, 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 24 내지 575의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

7. 항목 2 내지 6 중 어느 하나에 있어서, MSC가 프로모터 또는 프로모터/인핸서 조합에 작동 가능하게 연결된 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역을 포함하는 제1 외인성 핵산을 포함하는, MSC.

8. 항목 7에 있어서, 프로모터는 거대세포바이러스(CMV) 또는 신장 인자-1(EF1) 프로모터인, MSC.

9. 항목 7에 있어서, 프로모터/인핸서 조합이 CMV 프로모터/인핸서 조합인, MSC.

10. 항목 7 내지 9 중 어느 하나에 있어서, AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역이 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734와 적어도 70% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

11. 항목 10에 있어서, AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역이 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734와 적어도 90% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

12. 항목 11에 있어서, AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역이 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

13. 항목 1 내지 12 중 어느 하나에 있어서, MSC가 안지오포에이틴-1(angiopoeitin-1: ANGPT1)폴리펩타이드를 과발현하도록 유전자 변형된, MSC.

14. 항목 13에 있어서, MSC가 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드를 발현하는, MSC.

15. 항목 14에 있어서, 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

16. 항목 15에 있어서, 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

17. 항목 16에 있어서, 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.

18. 항목 13 내지 17 중 어느 하나에 있어서, MSC가 제2 프로모터 또는 프로모터/인핸서 조합에 작동 가능하게 연결된 ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역을 포함하는 제2 외인성 핵산을 포함하는, MSC.

19. 항목 18에 있어서, 제2 프로모터가 CMV 또는 EF1 프로모터인, MSC.

20. 항목 18에 있어서, 제2 프로모터/인핸서 조합이 CMV 프로모터/인핸서 조합인, MSC.

21. 항목 18 내지 20 중 어느 한 항목에 있어서, ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역이 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503과 적어도 70% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

22. 항목 21에 있어서, ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503과 적어도 90% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

23. 항목 22에 있어서, AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역이 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.

24. 항목 7 내지 23 중 어느 하나에 있어서, 제1 및/또는 제2 외인성 핵산(들)이 벡터 또는 플라스미드에 포함되어 있는, MSC.

25. 항목 24에 있어서, 제1 및 제2 외인성 핵산이 동일한 벡터 또는 플라스미드에 포함되어 있는, MSC.

26. 약제로서 사용하기 위한, 항목 1 내지 25 중 어느 하나의 MSC.

27. 항목 26에 따라 사용하기 위한 MSC로서, 상기 약제가 대상체의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위해 것인, MSC.

28. 항목 27에 따라 사용하기 위한 MSC로서, SIRS가 패혈증에 의해 유발되는, MSC.

29. 항목 27 또는 28에 따라 사용하기 위한 MSC로서, 대상체가 인간인, MSC.

30. 항목 27 내지 29 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 MSC로서, MSC가 대상체에 대해 동종이계인, MSC.

31. 항목 27 내지 29 중 어느 하나에 따라 사용하기 위한 MSC로서, MSC가 대상체에 대해 자가유래인, MSC.

32. 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위한 방법으로서, 항목 1 내지 25 중 어느 하나의 MSC의 유효량을 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

33. 항목 32에 있어서, SIRS가 패혈증에 의해 유발되는, 방법.

34. 항목 32 또는 33에 있어서, 대상체는 인간인, 방법.

35. 항목 32 내지 34 중 어느 하나에 있어서, MSC가 대상체에 대해 동종이계인, 방법.

36. 항목 32 내지 34 중 어느 하나에 있어서, MSC가 대상체에 대해 자가유래인, 방법.

37. 대상체의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위한 항목 1 내지 25 중 어느 하나의 MSC의 용도.

38. 대상체의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조를 위한 항목 1 내지 25 중 어느 하나의 MSC의 용도.

39. 항목 37 또는 38에 있어서, SIRS가 패혈증에 의해 유발되는, 용도.

40. 항목 37 내지 39 중 어느 하나에 있어서, 대상체가 인간인, 용도.

41. 항목 37 내지 40 중 어느 하나에 있어서, MSC가 대상체에 대해 동종이계인, 용도.

42. 항목 37 내지 40 중 어느 하나에 있어서, MSC가 대상체에 대해 자가유래인, 용도.

본 개시내용의 다른 목적, 장점 및 특징은 단지 첨부 도면을 참조하여 예시적으로 제공한, 이하 특정 실시형태의 비제한적인 설명을 읽으면 더욱 명백해질 것이다.

첨부 도면에서:
도 1a는 EF-1 프로모터의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 플라스미드(#2)의 작제를 도시한 것이다.
도 1b는 CMV 프로모터의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 플라스미드(#3)의 작제를 도시한 것이다.
도 1c는 CMV 프로모터 및 CMV 인핸서의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 플라스미드(#1)의 작제를 도시한 것이다.
도 2는 플라스미드 #1(검은 색 막대) (ii) 플라스미드 #2(짙은 회색 막대) 및 (iii) 플라스미드 #3(밝은 회색 막대)으로 형질감염된 MSC에 의한 AOAH의 발현을 보여주는 그래프이다. 발현은 세포 용해물에 대한 웨스턴 블롯(Western Blot)에 의해 측정하였고, 발현은 베타-액틴 발현을 기준으로 정규화하였다.
도 3a 및 도 3b는 플라스미드 #1에 의해 형질감염되고 형질감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간째에 수확한 MSC에서의 전체 내부 AOAH 발현(도 3a) 및 전체 AOAH 발현에 대한 성숙 AOAH의 비율(도 3b)을 보여주는 그래프이다. 발현은 세포 용해물에 대한 웨스턴 블롯에 의해 측정하였고, 발현은 베타-액틴 발현을 기준으로 정규화하였다.
도 3c는 플라스미드 #1로 형질감염되고 형질감염 후 24 시간, 48 시간 및 72 시간째에 수확된 MSC의 배양 배지 중 AOAH의 수준을 보여주는 그래프이다. 발현은 ELISA로 측정하였다.
도 4a는 본 연구에 사용된 내독소 유도 패혈증 동물 모델의 개략도이다. 내독소혈증은 LPS를 복강내 주사하여 마우스에서 유도하였고, 마우스를 LPS 주사 1시간 후에 AOAH-형질감염된 MSC(NT002), 비형질감염된 MSC 또는 비히클로 처리하였다. LPS 주입후 20시간째, 마우스의 혈장을 수확하여 친염증성(pro-inflammatory) 사이토카인 또는 케모카인의 혈장 수준을 결정하였다.
도 4b 내지 도 4i는 NT002(n=8), 비형질감염된 MSC(n=8) 또는 비히클(n=7)로 처리된 마우스의 혈장에서 LPS 주사 후 20시간째 친염증성 사이토카인 또는 케모카인 IL-6(도 4b), IL-10(도 4c), IL-12(도 4d), MIP-1a(도 4e), 에오탁신(도 4f), G-CSF(도 4g), KC(도 4h) 및 MCP-1(도 4i)의 수준을 나타내는 그래프이다. ^*P<0.05; ^**P<0.01(일원 ANOVA 시험).
도 5a는 본 연구에 사용된 이.콜라이(E. coli)-유도 패혈증 동물 모델의 개략도이다. 이.콜라이는 복강내 주사하여 마우스에서 유도하였고, 이 마우스를 박테리아 주사 1 시간 후 NT002(또는 비히클)로 처리하였다. 생존율을 결정하기 위해 5일 동안 동물 건강을 평가하였다.
도 5b는 이.콜라이에 감염되고 NT002 또는 비히클로 처리된 마우스의 생존율을 보여준다. 모의 마우스(패혈증 없음)는 대조군으로서 비히클 처리를 받았다. ^*P <0.05(로그 순위 시험).
도 6a는 AOAH 암호 서열 및 ANGPT1 암호 서열을 포함하는 플라스미드 #4의 작제를 도시한 것이다.
도 6b는 본 명세서에 기재된 연구에 사용된 인간 AOAH를 암호화하는 핵산의 코돈 최적화된 서열(서열번호 1)을 보여준다. 암호 서열은 굵은 글씨이고, 처음 6개 뉴클레오타이드는 코작(Kozak) 서열을 나타내고 마지막 3개 뉴클레오타이드는 정지 코돈에 해당한다.
도 6c는 본 명세서에 기재된 연구에 사용된 인간 ANGPT1을 암호화하는 핵산 서열(서열번호 3)을 보여준다. 암호 서열은 굵은 글씨이고, 처음 6개 뉴클레오타이드는 코작 서열을 나타내고 마지막 3개 뉴클레오타이드는 정지 코돈에 해당한다.
도 6d는 이.콜라이에 감염되고 NT003(AOAH/ANGPT1-형질감염된 MSC) 또는 비히클로 처리된 마우스의 생존율을 보여준다.
도 7a는 본 연구에 사용된 맹장 결찰 및 천자(CLP) 유도 패혈증 동물 모델의 개략도이다. 패혈증이 유도되면, CLP 6시간 후 마우스를 NT003(AOAH/ANGPT1 형질감염된 MSC) 또는 비히클로 처리하였다. 모의 마우스(패혈증 없음)는 대조군으로서 비히클 처리를 받았다. 생존율을 결정하기 위해 5일 동안 동물 건강을 평가하였다.
도 7b는 NT003 또는 비히클로 처리된 CLP 마우스의 조합된 생존 데이터를 보여준다.
도 8a는 인간 AOAH의 아미노산 서열[동형(isoform) 1, UniProtKB 수탁 번호 P28039, 서열번호 5]을 보여주며, 신호 펩타이드 서열에는 밑줄이 그어져 있고(잔기 1-23), 프로펩타이드 서열(잔기 24 내지 34)은 이탤릭체로, 성숙 형태의 서열(잔기 35 내지 575)은 굵은 글씨로 표시된 것이다.
도 8b는 인간 AOAH를 암호화하는 cDNA의 뉴클레오타이드 서열(동형 1, NCBI 참조 서열: NM_001637.3, 서열번호 6)을 보여주며, 암호 서열은 굵은 글씨로 표시된 것이다.
도 9a는 인간 ANGPT1의 아미노산 서열(동형 1, UniProtKB 수탁 번호 Q15389-1, 서열번호 7)을 보여주며, 신호 펩타이드 서열에는 밑줄이 그어져 있고(잔기 1-15), 성숙 형태의 서열(잔기 16 내지 498)은 굵은 글씨로 표시된 것이다.
도 9b 및 도 9c는 인간 ANGPT1을 암호화하는 cDNA의 뉴클레오타이드 서열 (동형 1, NCBI 참조 서열: NM_001146.4, 서열번호 8)을 보여주며, 암호 서열은 굵은 글씨로 표시된 것이다.

본 기술을 설명하는 문맥(특히, 이하 청구범위의 문맥)에서 단수 표현의 용어 및 유사 지시어의 사용은 본 명세서에서 달리 표시되거나 문맥에 의해 명확하게 모순되지 않는 한, 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

용어 "포함하는(comprising)", "갖는", "포함하는(including)" 및 "함유하는(containing)"은 달리 명시되지 않는 한 개방형 용어(즉, "포함하지만, 이들로 제한되지 않는"을 의미함)로 해석되어야 한다.

본 명세서에 설명된 모든 방법은 본 명세서에서 달리 표시되거나 문맥에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다.

본 명세서에 제공된 임의의 모든 예 또는 예시적인 언어("예를 들어", "예컨대")의 사용은 청구된 기술의 실시형태를 단지 더 잘 예시하기 위한 것이며, 달리 청구되지 않는 한, 범위를 제한하기 위한 것이 아니다.

본 명세서의 어떤 언어도 청구된 기술의 실시형태의 실행에 필수적인 것으로서 청구되지 않은 임의의 요소를 나타내는 것으로서 해석되지 않아야 한다.

본 명세서에서 "약"이라는 용어는 이의 일상적인 의미를 갖는다. 용어 "약"은 값이 이 값을 결정하기 위해 사용되고 있는 장치 또는 방법에 대한 내재적 오차 변동을 포함하거나, 예를 들어, 언급된 값(또는 값의 범위)의 10% 이내인, 언급된 값에 가까운 값을 포괄함을 나타내기 위해 사용된다.

본 명세서에서 값의 범위에 대한 언급은 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한, 범위 내에 속하는 각각 별개의 값을 개별적으로 지칭하는 약식 방법으로서 역할을 하기 위해 의도된 것뿐이며, 각각의 별개의 값은 마치 본 명세서에 개별적으로 언급된 것처럼 본 명세서에 통합된다. 그 범위 내의 값들의 모든 하위세트도 마치 본 명세서에 개별적으로 언급된 것처럼 본 명세서에 통합된다.

본 개시내용의 특징 또는 양상이 마커쉬(Markush) 군 또는 대안예의 목록에 의거하여 설명되는 경우, 본 기술분야의 기술자는 본 개시내용이 또한 마커쉬 군 또는 대안예의 목록 중 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 하위그룹에 의거하여 설명되기도 한다는 것을 인식할 것이다.

달리 구체적으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 기술분야(예컨대, 줄기 세포 생물학, 세포 배양, 분자 유전학, 면역학, 면역조직화학, 단백질 화학, 및 생화학)에서 통상의 기술을 가진 자가 공통적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는 것으로 간주되어야 한다.

달리 명시되지 않는 한, 본 개시내용에서 사용되는 재조합 단백질, 세포 배양 및 면역학적 기술은 본 기술분야의 기술자에게 잘 알려진 표준 절차이다. 이러한 기술은 다음과 같은 출처의 문헌 전반에 기술되고 설명되어 있다: 예컨대, 문헌[J. Perbal, A Practical Guide to Molecular Cloning, John Wiley and Sons (1984), J. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory Press (1989), T. A. Brown (editor), Essential Molecular Biology: A Practical Approach, Volumes 1 and 2, IRL Press (1991), D. M. Glover and B. D. Hames (editors), DNA Cloning: A Practical Approach, Volumes 1-4, IRL Press (1995 and 1996), and F. M. Ausubel et al. (editors), Current Protocols in Molecular Biology, Greene Pub. Associates and Wiley-Interscience (1988, 현재까지의 모든 개정판 포함), Ed Harlow and David Lane (editors) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbour Laboratory, (1988), and J. E. Coligan et al. (editors) Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (현재까지의 모든 개정판 포함)].

본 명세서에 기재된 연구에서는 특정 관심 단백질을 과발현하도록 유전자 변형된 중간엽 줄기 세포(MSC)의 제조가 기술된다. 보다 구체적으로, 아실옥시아실 가수분해효소(AOAH) 폴리펩타이드뿐만 아니라, AOAH 및 안지오포에이틴-1(ANGPT1) 둘 모두를 과발현하도록 유전자 변형된 MSC는 SIRS/패혈증의 뮤린 모델에서 염증을 감소시키고 생존율을 개선시키는 것으로 나타났다. 결과는 AOAH를 단독으로 또는 ANGPT1과 조합으로 과발현하도록 유전자 변형된 MSC가 인간에서 SIRS/패혈증의 예방 또는 치료에 유용할 수 있다는 증거를 제공한다.

제1 양상에서, 본 개시내용은 아실옥시아실 가수분해효소(AOAH) 폴리펩타이드를 과발현하도록 유전자 변형된 중간엽 줄기 세포(MSC)에 관한 것이다.

아실옥시아실 가수분해효소(AOAH, EC 3.1.1.77)는 23개 아미노산의 아미노-말단 신호 펩타이드뿐만 아니라 11개 아미노산의 프로펩타이드(잔기 24 내지 34)를 포함하는 인간의 575개 아미노산의 단백질(UniProtKB 수탁 번호 P28039, 도 8a, 서열번호 5)이다. 이것은 두 개의 이황화-연결된 서브유닛: 잔기 35-156을 포괄하는 작은 서브유닛 및 잔기 157 내지 575를 포괄하는 큰 서브유닛을 포함한다. AOAH는 주로 단핵구-대식세포, 호중구, 수지상 세포 및 신장 피질 상피 세포에 의해 생성되며 그람 음성 박테리아의 지질다당류(LPS)에 존재하는 지질 A로부터 2차 (아실옥시아실-연결된) 지방 아실을 선택적으로 제거한다. 이의 활성 부위는 Gly-Asp-Ser-(Leu)[GDS(L)] 모티프에 위치한 위치 263의 세린이다. 잔기 61, 173, 345 및 379의 돌연변이는 효소 활성에 영향을 미치지 않는 반면, 잔기 263, 372 및 419에서의 돌연변이는 효소 활성을 감소시키거나 상실시키는 것으로 나타났다.

일 실시형태에서, MSC는 제2 폴리펩타이드, 바람직하게는 SIRS/패혈증의 치료에 유용할 수 있는 폴리펩타이드를 과발현하도록 추가로 유전자 변형된다. 일 실시형태에서, 제2 폴리펩타이드는 안지오포에틴-1(ANGPT1) 폴리펩타이드이다.

안지오포이에틴-1(ANGPT1)은 15개 아미노산의 아미노-말단 신호 펩타이드를 포함하는 인간의 498개 아미노산의 단백질(UniProtKB 수탁 번호 Q15389, 도 9a, 서열번호 7)이다. 이것은 잔기 81 내지 119를 포괄하는 수퍼 클러스터링 도메인(super clustering domain) 및 ANGPT1 올리고머화에 관여하는 잔기 153 내지 261을 포괄하는 중심 나선형 도메인, 및 표적 수용체에 대한 결합에 관여하는 잔기 277 내지 497을 포괄하는 피브리노겐 C-말단 도메인을 포함한다. 분비된 이 당단백질은 이량체화 및 티로신 인산화를 유도함에 의해, 거의 내피 세포에서만 발현되는 TEK/TIE2 수용체 티로신 키나제(CD202B)에 결합하고 활성화한다. 위치 119의 돌연변이(A119S)는 수용체에 대한 결합 능력을 감소시키는 것으로 나타났다. 위치 249의 돌연변이(K249R)는 원발성 선천성 녹내장(PCG)[ANGPT/TEK 신호전달(signaling)의 결함과 관련됨]을 가진 대상체에서 검출되었고 그의 생물학적 활성을 감소시키는 것으로 여겨진다. 5개 C-말단 아미노산(R494^*)의 결실은 단백질을 불안정화하는 것으로 예상된다(Thomson et al., J Clin Invest. 2017 Dec 1; 127(12): 4421-4436).

본 명세서에 사용된 용어 "과발현하다"는 유전자 변형된 MSC에서 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 발현 수준이 유전자 변형(들)을 포함하지 않는 상응하는 MSC에서의 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예컨대, ANGPT1)의 발현 수준보다 높다는 것을 의미한다. 일 실시형태에서, 유전자 변형된 MSC에서 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 발현 수준은 유전자 변형을 포함하지 않는 상응하는 MSC에서의 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 발현 수준보다 적어도 20%, 50%, 100%(2배), 200%(3배), 300%(4배), 400%(5배), 900%(10배), 20배, 50배 또는 100배 더 높다.

일 실시형태에서, AOAH 단백질 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 과발현은 MSC에서 내인성 AOAH 유전자 및/또는 제2 폴리펩타이드(예컨대, ANGPT1)를 암호화하는 유전자의 발현을 증가시킴으로써 달성된다. 이것은, 예를 들어, 내인성 AOAH 유전자 및/또는 제2 폴리펩타이드(예컨대, ANGPT1)를 암호화하는 유전자와 전사 관계(즉, 작동 가능하게 연결된)로 적합한 프로모터(들) 및/또는 전사 조절(예를 들어, 인핸서) 서열을 도입시킴으로써 달성될 수 있다. 대안적으로, 이것은 내인성 AOAH 유전자 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)를 암호화하는 유전자의 발현을 저해하는 전사 억제인자 서열을 절제/불활성화함으로써 달성될 수 있다. MSC에서 내인성 AOAH 유전자의 과발현을 유도하기 위한 프로모터(들) 및/또는 전사 조절(예를 들어, 인핸서) 서열의 도입 및 전사 억제인자 서열의 절제/불활성화는 게놈 편집 기술을 사용하여 달성할 수 있다. 게놈 편집 기술은 인위적으로 조작된 뉴클레아제를 사용하여 게놈에 DNA를 삽입, 대체 또는 제거하여 표적 세포에서 유전자 발현을 변형시킬 수 있다. 이러한 뉴클레아제의 예는 아연 핑거 뉴클레아제(ZPN)(Gommans et al., J. Mol Biol, 354(3): 507-519 (2005)), 전사 활성인자-유사 이펙터 뉴클레아제(TALEN)(Zhang et al., Nature Biotechnol, 29: 149-153 (2011)), CRISPR/Cas 시스템(Cheng et al., Cell Res., 23: 1163-71 (2013)), 및 조작된 메가뉴클레아제(Riviere et al., Gene Ther., 21(5): 529-32 (2014)). 뉴클레아제는 게놈의 표적 위치에서 특이적인 이중 가닥 파손(double-stranded break: DSB)을 만들고, 유도된 파손을 상동성 재조합(homologous recombination: HR) 및 비상동성 말단-결합(nonhomologous end-joining: NHEJ)에 의해 복구하기 위해 세포의 내인성 메커니즘을 사용한다. 이러한 기술은 MSC에서 내인성 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)를 암호화하는 내인성 유전자의 과발현을 달성하기 위해 사용될 수 있다.

제1 핵산 서열은 이 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 배치될 때 제2 핵산 서열과 "작동 가능하게 연결"된다. 예를 들어, 프로모터가 암호 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우 프로모터는 암호 서열에 작동 가능하게 연결된다. 일반적으로, 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 인접하며, 두 개의 단백질 암호 영역을 결합시키는데 필요한 경우, 판독 프레임에 존재한다. 그러나, 프로모터로부터 수 킬로베이스 정도 분리된 경우, 예를 들어, 인핸서가 일반적으로 기능하고 인트론 서열이 가변적인 길이일 수 있기 때문에, 일부 핵산은 인접하지는 않지만, 작동 가능하게 연결될 수 있다. "전사 조절 서열" 또는 "전사 조절 요소"는 이들과 작동 가능하게 연결된 단백질 암호 서열의 전사를 유도하거나 조절하는 개시 및 종결 신호, 인핸서, 및 프로모터, 스플라이싱 신호, 폴리아데닐화 신호 등과 같은 DNA 서열을 지칭하는 일반적인 용어이다.

또 다른 실시형태에서, AOAH 단백질 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 과발현은 MSC에서 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드 및/또는 재조합 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)의 발현을 유도함으로써 달성된다. 따라서, 다른 양상에서, 본 개시내용은 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드를 포함하거나 과발현하는 유전자 변형된 MSC에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 유전자 변형된 MSC는 재조합(즉, 외인성) 제2 폴리펩타이드, 바람직하게는 ANGPT1을 추가로 포함하거나 과발현한다.

용어 "재조합체"는 무언가가 재조합되었음을 의미하므로, 핵산과 관련하여 언급될 때, 이 용어는 함께 결합되거나 분자 생물학적 기술에 의해 생성되는 핵산 서열로 구성된 분자를 지칭한다. 용어 "재조합체"는 단백질 또는 폴리펩타이드와 관련하여 언급될 때, 세포의 천연 게놈으로부터 합성되지 않은, 예를 들어, 분자 생물학 기술에 의해 만들어진 재조합 핵산 작제물(이 합성 핵산 작제물이 세포의 게놈에 통합되는지 여부에 상관없이)로부터 발현되는, 단백질 또는 폴리펩타이드 분자를 지칭한다. 재조합 핵산 작제물은 자연적으로 결찰되지 않거나, 또는 자연적으로 상이한 위치에 결찰된 핵산 서열에 결찰되거나, 또는 결찰되도록 조작된 뉴클레오타이드 서열을 포함할 수 있다. 따라서, 핵산 작제물을 "재조합체"라고 지칭하면, 이는 핵산 분자가 유전자 조작을 사용하여, 즉, 인간 개입에 의해 조작되었음을 나타낸다. 재조합 핵산 작제물은 예를 들어, 형질전환(예를 들어, 형질도입 또는 형질감염)에 의해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 이러한 재조합 핵산 작제물은 동일한 숙주 세포 종 또는 상이한 숙주 세포 종으로부터 유래된 서열을 포함할 수 있으며, 이것은 단리되어 숙주 종의 세포로 재도입되었다. 재조합 핵산 작제물 서열은 숙주 세포의 원래의 형질전환의 결과로서, 또는 후속 재조합 및/또는 복구 이벤트의 결과로서 숙주 세포 게놈에 통합될 수 있다.

일 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 성숙한 천연 인간 AOAH의 아미노산 서열(잔기 35 내지 575)과 적어도 50, 60 또는 70% 동일하고, 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 성숙한 천연 인간 AOAH의 아미노산 서열(잔기 35 내지 575)과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 일 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 천연 인간 AOAH 전구체의 아미노산 서열(잔기 24 내지 575)과 적어도 50, 60 또는 70% 동일하고 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 천연 인간 AOAH 전구체의 아미노산 서열(잔기 24 내지 575)과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 전체 길이의 천연 인간 AOAH의 아미노산 서열(잔기 1 내지 575)과 적어도 50, 60 또는 70% 동일하고 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 도 8a/서열번호 5에 도시된 전체 길이의 천연 인간 AOAH의 아미노산 서열(잔기 1 내지 575)과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고 천연 인간 AOAH의 효소 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다.

따라서, 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드는 천연 인간 AOAH 단백질 (전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태) 또는 효소 활성을 유의적으로 방해하지 않는 아미노산 결실, 치환 및/또는 첨가를 포함하는 상기 단백질의 효소적 활성 변이체일 수 있다. 일 실시형태에서, 변이체는 천연 인간 AOAH의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%인 효소 활성을 나타낸다. 일 실시형태에서, 변이체는 Gly-Asp-Ser-(Leu)[GDS(L)] 모티프에 돌연변이를 포함하지 않는다. 일 실시형태에서, 변이체는 전체 길이의 천연 인간 AOAH의 잔기 263, 372 또는 419에 상응하는 위치에 돌연변이를 포함하지 않는다. 일 실시형태에서, 변이체는 하나 이상의 보존적 치환을 포함한다. 보존적 아미노산 치환은 본 기술분야에 공지되어 있으며, 특정 물리적 및/또는 화학적 특성을 갖는 하나의 아미노산이 동일한 화학적 또는 물리적 특성을 갖는 다른 아미노산으로 교환되는 아미노산 치환을 포함한다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환은 다른 산성 아미노산을 대신하는 산성 아미노산(예를 들어, Asp을 Glu으로 또는 그 반대), 비극성 측쇄를 가진 다른 아미노산을 대신하는 비극성 측쇄를 가진 아미노산(예를 들어, Ala, Gly, Val, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, Val 등), 다른 염기성 아미노산을 대신하는 염기성 아미노산(Lys, Arg 등), 극성 측쇄를 가진 다른 아미노산을 대신하는 극성 측쇄를 가진 아미노산(Asn, Cys, Gln, Ser, Thr. Tyr 등)일 수 있다. 또 다른 실시형태에서, 변이체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 천연 AOAH 단백질 또는 폴리펩타이드의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 바람직하게는, 비보존적 아미노산 치환은 변이체의 효소 활성이 천연 AOAH 단백질 또는 폴리펩타이드에 비해 증가되도록, 변이체의 효소 활성을 향상시킨다.

일 실시형태에서, MSC는 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 핵산에 의해 형질전환된다. 따라서, 다른 양상에서, 본 개시내용은 AOAH 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합(즉, 외인성) 핵산을 포함하는 유전자 변형된 MSC에 관한 것이다.

일 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드는 도 9a/서열번호 7에 도시된 성숙한 천연 인간 ANGPT1의 아미노산 서열(잔기 16 내지 498)과 적어도 50, 60 또는 70% 동일하고, 천연 인간 ANGPT1의 생물학적 활성, 예를 들어, TEK/TIE2 수용체에 결합하고 활성화하는 능력을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드는 도 9a/서열번호 7에 도시된 성숙한 천연 인간 ANGPT1의 아미노산 서열(잔기 16 내지 498)과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 천연 인간 ANGPT1의 생물학적 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 일 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드는 도 9a/서열번호 7에 도시된 전체 길이의 천연 인간 ANGPT1의 아미노산 서열(잔기 1 내지 498)과 적어도 70% 동일하고, 천연 인간 ANGPT1의 생물학적 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다. 실시형태에서, 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드는 도 9a/서열번호 7에 도시된 전체 길이의 천연 인간 ANGPT1의 아미노산 서열(잔기 1 내지 498)과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일하고, 천연 인간 ANGPT1의 생물학적 활성을 나타내는 서열을 포함하거나, 그 서열로 이루어진다.

따라서, 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드는 천연 인간 ANGPT1 단백질(전체 길이 또는 성숙한 형태)이거나, 또는 생물학적 활성을 유의적으로 방해하지 않는 아미노산 결실, 치환 및/또는 첨가를 포함하는 상기 단백질의 생물학적 활성 변이체일 수 있다. 일 실시형태에서, 변이체는 천연 인간 ANGPT1의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 100%인 생물학적 활성을 나타낸다. 일 실시형태에서, 변이체는 ANGPT1 올리고머화에 관여하는 영역에 돌연변이, 예를 들어, 수퍼 클러스터링 도메인(잔기 81 내지 119) 또는 중심 나선형 도메인(잔기 153 내지 261)에 돌연변이를 포함하지 않는다. 또 다른 실시형태에서, 변이체는 피브리노겐 C-말단 도메인(잔기 277 내지 497)에 돌연변이를 포함하지 않는다. 추가 실시형태에서, 변이체는 위치 119의 돌연변이(예를 들어, A119S) 및/또는 위치 249의 돌연변이(예를 들어, K249R)를 포함하지 않는다. 다른 실시형태에서, 변이체는 5개의 C-말단 아미노산의 결실을 포함하지 않는다.

일 실시형태에서, 변이체는 AOAH에 대해 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 보존적 치환을 포함한다. 바람직하게는, 변이체의 생물학적 활성이 천연 ANGPT1 단백질 또는 폴리펩타이드에 비해 증가되도록 비보존적 아미노산 치환이 변이체의 생물학적 활성을 향상시킨다.

일 실시형태에서, MSC는 재조합(즉, 외인성) ANGPT1 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합 핵산에 의해 형질전환된다. 따라서, 다른 양상에서, 본 개시내용은 ANGPT1 폴리펩타이드를 암호화하는 재조합(즉, 외인성) 핵산을 포함하는 유전자 변형된 MSC에 관한 것이다.

본 명세서에 사용된 "핵산"은 DNA, RNA 및 이들의 혼성체 또는 변형된 변이체를 포함하나, 이에 제한되지 않는 임의의 핵산 분자를 의미할 것이다. "외인성" 또는 "재조합" 핵산은 세포의 "원래의" 또는 "천연" 게놈의 성분이 아닌, 세포에 도입된 임의의 핵산에 관한 것이다. 외인성 핵산은 통합되거나 또는 통합되지 않을 수 있고, 또는 안정적으로 형질감염된 핵산에 관한 것일 수 있다.

재조합 핵산은 재조합(즉, 외인성) AOAH 폴리펩타이드 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 DNA 또는 mRNA 분자일 수 있다. 재조합 핵산을 세포에 도입시키는 방법은 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 이러한 방법의 예는 핵산, 전기천공을 이용한 세포 형질전환을 촉진할 수 있는 지질, 단백질, 입자 또는 다른 분자의 사용을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 그러나, MSC는 또한 예를 들어, 유전자 총을 통해, AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)를 암호화하는 핵산과 생체내에서 접촉될 수 있다.

일 실시형태에서, AOAH를 암호화하는 재조합 핵산은 도 8b/서열번호 6에 도시된 인간 AOAH의 전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 70% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 실시형태에서, AOAH를 암호화하는 재조합 핵산은 도 8b/서열번호 6에 도시된 인간 AOAH의 전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 추가 실시형태에서, AOAH를 암호화하는 재조합 핵산은 도 8b/서열번호 6에 도시된 인간 AOAH의 전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, AOAH를 암호화하는 핵산은 인간 AOAH를 암호화하는 코돈-최적화된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 임의의 특정 이론이나 메커니즘에 얽매임이 없이, 뉴클레오타이드 서열의 코돈 최적화는 mRNA 전사체의 해독 효율을 증가시키는 것으로 사료된다. 뉴클레오타이드 서열의 코돈 최적화는 동일한 아미노산을 암호화하는 다른 코돈을 천연 코돈으로 대체하는 것을 수반할 수 있지만, 세포 내에서 더 쉽게 이용가능한 tRNA에 의해 해독될 수 있어 해독 효율을 증가시킬 수 있다. 뉴클레오타이드 서열의 최적화는 또한 해독을 방해하는 2차 mRNA 구조를 감소시킬 수 있어, 해독 효율을 증가시킬 수 있다. 이와 관련하여, AOAH를 암호화하는 핵산은 도 6b/서열번호 1에 도시된 코돈 최적화된 뉴클레오타이드 서열(뉴클레오타이드 7 내지 1734), 또는 이것의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 갖는 서열을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, ANGPT1을 암호화하는 재조합 핵산은 도 9b 및 도 9c/서열번호 8에 도시된 인간 ANGPT1의 전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 70% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 실시형태에서, 재조합 핵산은 도 9b 및 도 9c/서열번호 8에 도시된 인간 ANGPT1의 전체 길이, 전구체 또는 성숙 형태를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

일 실시형태에서, ANGPT1을 암호화하는 핵산은 인간 ANGPT1을 암호화하는 코돈-최적화된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.

코돈-최적화된 핵산을 합성하는 방법, 도구, 플랫폼 및 서비스는 GenScript의 OptimumGene™ 플랫폼, Integrated DNA Technologies의 Codon Optimization Tool, ThermoFisher Scientific의 GeneOptimizer™ 플랫폼, NCBI(Nucleic Acids Res. 2007 Jul; 35(Web Server issue): W126-W131), Codon Optimization OnLine (COOL) (Bioinformatics, Volume 30, Issue 15, 1 August 2014, Pages 2210-2212) 등과 같이 본 기술분야에 잘 알려져 있다.

일 실시형태에서, 재조합 핵산은 벡터 또는 플라스미드, 즉, 재조합 발현 벡터 또는 플라스미드에 존재한다. 따라서, 다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 바와 같은 AOAH 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터를 포함하는 유전자 변형된 MSC에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 유전자 변형된 MSC는 본 명세서에 기재된 바와 같은 ANGPT1 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 포함하는 재조합 발현 벡터를 추가로 포함한다. 일 실시형태에서, AOAH 및 ANGPT1을 암호화하는 핵산은 상이한 재조합 발현 벡터에 존재한다. 또 다른 실시형태에서, AOAH 및 ANGPT1을 암호화하는 핵산은 동일한 재조합 발현 벡터에 존재한다.

재조합 발현 벡터 또는 플라스미드는 전술한 바와 같은 재조합 핵산을 함유하는 임의의 적합한 재조합 발현 벡터 또는 플라스미드일 수 있다. 적합한 벡터는 본 기술분야에 잘 알려져 있는, MCS에서 관심 유전자의 발현을 위해 설계된 것들을 포함한다. 일 실시형태에서, 재조합 발현 벡터 또는 플라스미드는 미니플라스미드이다. 미니플라스미드는 포유류 세포의 유전자 변형을 위한 전이유전자(transgene) 운반체로서 사용되는, 모든 원핵 벡터 부분이 제거된 작은(약 4kb) 원형 플라스미드 유도체이다(즉, 이는 박테리아의 DNA 서열을 함유하지 않음). 미니플라스미드 및 이의 용도는, 예를 들어, 문헌[Minicircle and Miniplasmid DNA Vectors: The Future of Nonviral and Viral Gene Transfer, by Dr. Martin Schleef (editor), May 2013, Wiley-Blackwell, 258 pages]에 기재되어 있다.

일부 실시형태에서, 재조합 발현 벡터는 바이러스 벡터이다. 유전자 변형된 바이러스는 MSC를 포함한 줄기 세포 내로 유전자를 전달하는데 널리 적용되고 있다. 본 명세서에 기재된 MSC의 유전자 변형에 바람직한 바이러스 벡터는 레트로바이러스 벡터, 특히 감마 레트로바이러스 벡터에 관한 것이다. 감마 레트로바이러스(때때로 포유류 C형 레트로바이러스라고도 함)는 렌티바이러스 계통군에 대해 자매 속이며 레트로바이러스 과의 오르토레트로비리네(Orthoretrovirinae) 아과의 구성원이다. 뮤린 백혈병 바이러스(MLV 또는 MuLV), 고양이 백혈병 바이러스(FeLV), 제노트로픽 뮤린 백혈병 바이러스 관련 바이러스(XMRV) 및 긴팔원숭이 백혈병 바이러스(GALV)는 감마 레트로바이러스 속의 구성원이다. 본 기술분야의 기술자는 MSC의 유전자 변형에 감마 레트로바이러스를 활용하는데 필요한 기술을 잘 알고 있다. 예를 들어, 문헌[Maetzig et al. (Gamma retroviral vectors: biology, technology and application, 2001, Viruses 3(6):677-713)]에 기재된 벡터 또는 유사 벡터가 사용될 수 있다. 예를 들어, 단순 감마레트로바이러스인 뮤린 백혈병 바이러스(MLV)는 감마 레트로바이러스-변형된 MSC를 만들고 대상체에게 전달 후 상기 MSC로부터 치료용 전이유전자를 발현시키는 정황에서 유전자 치료제의 효율적인 비히클로 전환될 수 있다. 유전자 변형 바이러스는 줄기 세포로 유전자를 전달하는데 널리 적용되고 있다. 아데노바이러스, 또는 렌티바이러스와 같은 RNA 바이러스, 또는 다른 레트로바이러스가 적용될 수 있다. 아데노바이러스는 유전자 전달 세포의 조작을 위한 일련의 벡터를 생성하는 데 사용되었다. 아데노바이러스 벡터의 초기 세대는 E1 유전자(바이러스 복제에 필요함)를 결실시켜 4kb 클로닝 능력을 갖는 벡터를 생성함으로써 생산되었다. E3(숙주 면역 반응에 역할을 함)의 추가 결실은 8kb 클로닝 용량을 허용하였다. E2 및/또는 E4 결실을 포괄하는 추가 세대도 생산되었다. 렌티바이러스는 바이러스 중 레트로비리대(Retroviridae)과의 구성원이다(M. Scherr et al., Curr Gene Ther. 2002 Feb; 2(1): 45-55). 렌티바이러스 벡터는 LTR 및 시스 작용성 패키징 신호를 제외한 전체 바이러스 서열을 결실시킴에 의해 생성된다. 생성된 벡터는 약 8kb의 클로닝 용량을 갖는다. 이러한 벡터가 레트로바이러스 벡터와 구별되는 한 가지 특징은 분열 및 비분열 세포뿐만 아니라 최종 분화된 세포를 형질도입하는 능력이다.

재조합 발현 벡터 또는 플라스미드는 벡터가 DNA 기반 또는 RNA 기반인지를 감안하여, 적당한 경우 벡터가 도입되어야 하는 숙주의 유형(예를 들어, 인간과 같은 동물)에 특이적인 전사 및 해독 개시 및 종결 코돈과 같은 조절 서열을 포함할 수 있다. 재조합 발현 벡터 또는 플라스미드는 형질전환된 숙주 또는 형질감염된 숙주를 선택할 수 있게 하는 하나 이상의 마커 유전자를 포함할 수 있다. 마커 유전자는 살생물제 내성, 예컨대, 항생제, 중금속 등에 대한 내성, 영양요구성을 제공하는 영양요구성 숙주의 상보성 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터에 적합한 마커 유전자는, 예를 들어, 네오마이신 G418 내성 유전자, 하이그로마이신 내성 유전자, 테트라사이클린 내성 유전자, 및 앰피실린 내성 유전자 등을 포함한다. 재조합 발현 벡터 또는 플라스미드는 AOAH 및/또는 제2 폴리펩타이드(예를 들어, ANGPT1)를 암호화하는 핵산에 작동 가능하게 연결되고 MSC에서 기능적인 천연 또는 규범적 프로모터를 포함할 수 있다. 프로모터, 예컨대, 강, 약, 유도성, 조직-특이적, 및 발달-특이적 프로모터의 선택은 본 기술분야의 통상의 기술 범위 내이다. 이와 유사하게, 뉴클레오타이드 서열과 프로모터의 조합도 역시 본 기술분야의 기술 범위 내이다. 프로모터는 비-바이러스 프로모터 또는 바이러스 프로모터, 예를 들어, 거대세포바이러스(CMV) 프로모터, SV40 프로모터, RSV 프로모터, 또는 뮤린 줄기 세포 바이러스의 장말단 반복체에서 발견되는 프로모터일 수 있다. 프로모터는 전사 인자의 결합을 향상시키는 다양한 모티프, 예컨대, 개시인자(INR), 모티프 텐 요소(MTE) 및 다운스트림 프로모터 요소(DPE) 모티프를 포함할 수 있다(예를 들어, 문헌[Martinez, Transcription. 2012; 3(6): 295-299] 참조). 재조합 발현 벡터는 일시적 발현, 안정한 발현 또는 둘 모두를 위해 설계될 수 있다. 또한, 재조합 발현 벡터는 구성적 발현 또는 유도성 발현용으로 제조될 수 있다. 본 개시내용의 정황에서 유용한 벡터는 "네이키드(naked)" 핵산 벡터(즉, 이들을 캡슐화하는 단백질, 당 및/또는 지질을 거의 또는 전혀 갖지 않는 벡터), 또는 다른 분자와 복합체화된 벡터일 수 있다. 벡터와 적절하게 조합될 수 있는 다른 분자는 바이러스 코트, 양이온성 지질, 리포좀, 폴리아민, 금 입자 및 세포 분자를 표적으로 하는 리간드, 수용체 또는 항체와 같은 표적화 모이어티를 비제한적으로 포함한다.

임의의 주어진 유전자 전달 방법은 본 개시내용에 의해 포괄되어지며 바람직하게는 상기 기재된 바와 같은 바이러스 또는 비바이러스 벡터, 뿐만 아니라 생물학적 또는 화학적 형질감염 방법에 관한 것이다. 이 방법은 사용된 시스템에서 안정적이거나 일시적인 유전자 발현을 산출할 수 있다. 비바이러스 방법은 종래의 플라스미드 전달 및 위에서 설명한 바와 같은 게놈 편집 기술의 사용을 통한 표적화된 유전자 통합의 적용을 포함한다. 이것은 그 통합에 있어 종종 부위 특이적이고 효율적이라는 두 장점을 모두 가진 벡터 형질전환에 대한 접근법을 나타낸다. 벡터를 세포로 도입시키는 물리적 방법은 본 기술분야의 기술자에게 알려져 있다. 한 가지 예는 막의 정전용량을 압도하여 막에 일시적인 기공을 만드는 순간 고전압 전기 펄스의 사용에 의존하는 전기천공에 관한 것이다. 이 방법의 한 가지 장점은 대부분의 세포 유형에서 안정적이고 일시적인 유전자 발현 모두에 활용될 수 있다는 것이다. 대안적인 방법은 세포에 핵산 진입을 촉진하는 리포좀, 단백질 형질도입 도메인 또는 다른 적절한 시약의 사용에 관한 것이다. 적절한 방법은 본 기술분야의 기술자에게 알려져 있으며 본 개시내용의 실시형태를 제한하는 것으로서 의도된 것이 아니다.

중간엽 줄기 세포(MSC, 중간엽 기질 세포로도 지칭됨)는 골수, 혈액, 치수 세포, 지방 조직, 피부, 비장, 췌장, 뇌, 신장, 간, 심장, 망막, 뇌, 모낭, 장, 폐, 림프절, 흉선, 뼈, 인대, 힘줄, 골격근, 진피 및 골막에서 발견되는 세포이다. MSC는 중배엽, 내배엽 및 외배엽과 같은 다른 생식선으로 분화할 수 있다. 따라서, MSC는 지방조직, 골조직, 연골 조직, 탄성 조직, 근육 조직 및 섬유 결합 조직을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 매우 많은 세포 유형으로 분화할 수 있다. MSC에 의해 내부로 진입된 특정 계통-분화순응(lineage-commitment) 및 분화 경로는 기계적 영향 및/또는 내인성 생물활성 인자, 예컨대, 성장 인자, 사이토카인 및/또는 숙주 조직에 의해 확립된 국소 미세환경 조건을 포함한 다양한 영향에 따라 달라진다. 따라서, MSC는 분열하여 딸세포를 산출하는 비조혈 전구 세포이며, 이는 시간이 지나면 비가역적으로 분화하여 표현형 세포를 산출하는 전구체 세포이거나 줄기 세포이다. MSC의 예는 중간엽 전구체 세포(MPC)를 포함한다.

MSC는 환자에게 투여 후 면역 회피 성질을 나타내는 것으로 알려져 있다. MSC는 동종이계 공여자 물질을 이식하는 경우 유익한 면역 조정 효과를 나타내어(Le Blanc et al., Lancet 2004: 363, p. 1439), 잠재적 병원성 동종이계반응 및 거부반응을 감소시키는 것으로 나타났다. MSC의 치료적 전달은 전신 주사를 통해 수행하고, 이어서 MSC를 손상 부위로 귀환 및 생착시킬 수 있다(Kidd et al., Stem Cells 2009: 27, p. 2614).

일부 양상에서, MSC는 자손 세포(확장 세포라고도 지칭될 수 있음)일 수 있다. 자손 세포는 줄기 세포의 시험관내 배양물로부터 생산될 수 있다. 본 개시내용의 확장 세포(expanded cell)는 배양 조건(배양 배지 내의 자극 인자의 수 및/또는 유형 포함), 계대 횟수 등에 따라 매우 다양한 표현형을 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, 자손 세포는 모 집단으로부터 약 2, 약 3, 약 4, 약 5, 약 6, 약 7, 약 8, 약 9 또는 약 10 계대 후에 수득된다. 그러나, 자손 세포는 모 집단으로부터 임의의 계대 횟수 후에 수득될 수 있다. 그리고 자손 세포는 적절한 배양 배지에서 배양하여 수득할 수 있다.

일 실시형태에서, 자손 세포는 WO 2006/032092에 기재된 바와 같이 다능성 확장 MSC 자손(MEMP)이다. 자손이 유래될 수 있는 MSC의 농축 집단을 제조하는 방법은 WO 01/04268 및 WO 2004/085630에 기재되어 있다. 시험관내 정황에서 MSC는 절대적으로 순수한 제제로서 거의 존재하지 않으며, 일반적으로 조직 특이적 수임 세포(TSCC)인 다른 세포와 함께 존재할 것이다. WO 01/04268은 이러한 세포를 골수로부터 약 0.1% 내지 90%의 순도 수준으로 수확하는 것을 언급한다. 자손이 유래된 MSC를 포함하는 집단은 조직 공급원으로부터 직접 수확될 수 있거나, 또는 대안적으로 생체외에서 이미 확장된 집단일 수 있다.

예를 들어, 자손은 이들이 존재하는 집단의 전체 세포의 적어도 약 0.1, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 95%를 포함하는, 실질적으로 정제된 MSC의 수확된, 미확장된 집단으로부터 수득될 수 있다. 이 수준은, 예를 들어, CD29, CD44, CD90, CD49a-f, CD51, CD73(SH3), CD105(SH2), CD106, CD166, 및 Stro-1과 같은 MSC 상에서 전형적으로 발현되는 적어도 하나의 마커에 대해 양성이고, 그리고/또는 CD45, CD34, CD14 또는 CD11b, CD79a 또는 CD19 및 HLA-DR과 같은 마커에 대해 음성인 세포를 선택함으로써 달성될 수 있다.

예를 들어, 자손은 이들이 존재하는 집단의 전체 세포의 적어도 약 0.1, 1, 5, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 또는 95%를 포함하는, 실질적으로 정제된 MSC의 수확된, 미확장된 집단으로부터 수득될 수 있다. 이 수준은, 예를 들어, CD29, CD44, CD90, CD49a-f, CD51, CD73(SH3), CD105(SH2), CD106, CD166 및 Stro-1로부터 선택되는 적어도 하나의 마커에 대해 양성인 세포를 선택함으로써 달성될 수 있다.

MSC 출발 집단은 WO 01/04268 또는 WO 2004/085630에 명시된 임의의 하나 이상의 조직 유형, 즉, 골수, 치수 세포, 지방 조직 및 피부, 또는 아마도 더 광범위하게 지방 조직, 치아, 치수, 피부, 간, 신장, 심장, 망막, 뇌, 모낭, 장, 폐, 비장, 림프절, 흉선, 췌장, 뼈, 인대, 골수, 힘줄 및 골격근으로부터 유래될 수 있다.

MEMPS는 마커 Stro-1에 대해 양성이고 마커 알칼리성 포스파타제(ALP)에 대해 음성이라는 점에서 갓 수확한 MSC와 구별될 수 있다. 대조적으로, 새로 분리된 MSC는 Stro-1 및 ALP 둘 모두에 양성이다. 본 개시내용의 바람직한 실시형태에서, 투여된 세포의 적어도 15%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 95%는 표현형 Stro-1⁺, ALP-를 갖는다.

주어진 마커에 대해 "양성"(또한 "+")인 세포에 대한 언급은 그 마커가 세포 표면에 존재하는 정도에 따라 그 마커의 낮은(lo 또는 dim) 또는 높은(밝은, bri) 발현체일 수 있음을 의미하며, 이 용어는 세포의 비색 분류 과정에 사용되는 형광 또는 다른 색상 강도에 관한 것이다. lo(또는 희미함 또는 흐릿함)와 bri의 차이는 분류되는 특정 세포 집단에 사용되는 마커의 정황에서 이해될 것이다. 주어진 마커에 대해 "음성"(또는 "-")인 것으로 언급되는 세포는 그 마커가 그 세포에 의해 전혀 발현되지 않음을 의미하는 것은 아니다. 이는 그 마커가 그 세포에 의해 비교적 매우 낮은 수준으로 발현되고, 검출 가능하게 표지된 경우 매우 낮은 신호를 발생한다는 것을 의미한다.

일 실시형태에서, 세포는 SIRS 또는 패혈증이 있는 환자, 또는 SIRS 또는 패혈증을 앓고 있지 않은 대상체로부터 채취되고, AOAH(및 선택적으로 ANGPT1과 같은 제2 폴리펩타이드)를 과발현하도록 유전자 변형되고, 표준 기술을 사용하여 시험관내에서 선택적으로 배양되고, 자가이식 또는 동종이계 이식으로서 치료를 필요로 하는 환자에게 투여된다. 대안적인 실시형태에서, 하나 이상의 확립된 인간 세포주의 세포가 사용된다. 본 개시내용의 다른 유용한 실시형태에서, 비-인간 동물(또는 환자가 인간이 아닌 경우, 다른 종 유래)의 세포가 사용된다.

본 기술은 비인간 영장류 세포, 유제류, 개, 고양이, 토끼목 포유류(lagomorph), 설치류, 조류 및 어류 세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는 임의의 비인간 동물 종의 세포를 사용하여 실시할 수 있다. 본 개시내용이 수행될 수 있는 영장류 세포는 침팬지, 개코 원숭이, 사이노몰구스 원숭이 및 임의의 다른 신세계 또는 구세계 원숭이의 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 본 개시내용이 수행될 수 있는 유제류 세포는 소, 돼지, 양, 염소, 말, 물소 및 들소의 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용이 수행될 수 있는 설치류 세포는 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터 및 저빌 세포를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 본 개시내용이 수행될 수 있는 토끼목 포유류 종의 예는 사육 토끼, 잭 래빗(jack rabbits), 산토끼(hares), 솜꼬리토끼(cottontails), 눈신 토끼(snowshoe rabbits) 및 새앙토끼(pikas)를 포함한다. 닭(Gallus gattus)은 본 개시내용이 수행될 수 있는 조류 종의 예이다.

MSC는 사용 전에 보관될 수 있다. 진핵 세포, 특히 포유류 세포의 보존 및 보관에 대한 방법 및 프로토콜은 본 기술분야에 잘 알려져 있다(예를 들어, 문헌[Pollard, J. W. and Walker, J. M. (1997) Basic Cell Culture Protocols, Second Edition, Humana Press, Totowa, N.J.; Freshney, R. I. (2000) Culture of Animal Cells, Fourth Edition, Wiley-Liss, Hoboken, N.J.]). 중간엽 줄기/전구 세포 또는 이의 자손과 같은 단리된 줄기 세포의 생물학적 활성을 유지하는 임의의 방법이 본 개시내용과 관련하여 이용될 수 있다. 하나의 바람직한 실시형태에서, 세포는 동결보존을 사용하여 유지 및 보관된다.

MSC는 다양한 기술을 사용하여 수득할 수 있다. 예를 들어, 세포가 세포-항체 복합체와 관련된 성질 또는 항체에 부착된 표지를 참조하여 물리적으로 분리되는 많은 세포 분류 기술이 사용될 수 있다. 이 표지는 자성 입자 또는 형광 분자일 수 있다. 항체는 여러 세포의 응집체를 형성하도록 가교될 수 있으며, 이들의 밀도에 의해 분리될 수 있다. 대안적으로, 항체는 원하는 세포가 부착하는 고정 매트릭스에 부착될 수 있다.

본 명세서에 사용된 "배양 배지"는 (a) MSC의 존재 또는 부재 하에, MSC를 배양하는 데 사용되는 전형적인 성분, 예컨대, 아미노산, 글루코스 및 다양한 염을 함유하는 배양 배지, 및 (b) 배양 배지로부터 단리되는 조성물, 예컨대, 배양 동안 MSC로부터 방출된 성분을 포함하는 조성물을 모두 포괄한다. 배양 배지는 고체, 액체, 기체 또는 상 및 물질의 혼합물인 성분을 함유할 수 있다. 배양 배지 성분은 아가, 아가로스, 젤라틴 및 콜라겐 매트릭스를 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. "배양 배지"는 세포와 아직 접촉되지 않았지만, 세포 배양에 사용하고자 하는 물질을 포함한다. 예를 들어, 박테리아 배양을 위해 준비된 영양소 풍부 액체는 배양 배지일 수 있다.

일 실시형태에서, MSC는 원하는 성질을 부여하기 위해, 예를 들어, 항염증 매개인자의 발현/분비를 유도하기 위해 및/또는 염증촉진성 매개인자의 발현/분비를 저해하기 위해, 배양/확장 동안 또는 후(및 대상체에 투여/사용 전)에 하나 이상의 제제에 접촉되거나 노출된다. 예를 들어, 저농도 프로스타사이클린(예를 들어, 트레프로스티닐), 예를 들어, 약 10 ㎍/㎖의 트레프로스티닐에 노출된 MSC는 IL-10, IL-13, IDO, iNOS, HLA 및 TGFβ와 같은 특정한 항염증성 매개인자의 향상된 분비, 및 TNFα 및 IL-4와 같은 염증촉진성 매개인자의 감소된 분비를 MSC가 나타내는 것으로 밝혀졌다(예를 들어, WO 2018/080990 참조). 이러한 하나 이상의 제제에 대한 노출은 원하는 효과를 유도하기에 적합한 임의의 시간 동안, 예를 들어, 적어도 6, 12, 18, 24, 36 또는 48시간 동안일 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 개시내용은 약제로서 사용하기 위한, 본 명세서에 기재된 유전자 변형된 MSC 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일 실시형태에서, 약제는 대상체에서 SIRS, 예를 들어, 패혈증에 의해 유발된 SIRS를 예방 또는 치료하기 위한 것이다. 본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 유전자 변형된 MSC 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물의 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하는 방법에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 대상체에서 SIRS를 예방 또는 치료하기 위한, 본 명세서에 기재된 유전자 변형된 MSC 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 대상체에서 SIRS를 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 본 명세서에 기재된 유전자 변형된 MSC 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 명세서에 사용된 용어 "치료하는", "치료하다" 또는 "치료"는 질병 또는 상태가 "치료된" 또는 "치유된" 것으로 간주되는지 여부에 관계없이, 그리고 모든 증상이 해소된 것인지의 여부에 관계없이, 질병 또는 상태 또는 이의 하나 이상의 증상을 제거, 개선, 완화 또는 경감시키는 것을 포함한다. 이 용어는 또한 질병 또는 상태 또는 이의 하나 이상의 증상의 진행을 감소 또는 예방하고, 질환 또는 상태 또는 이의 하나 이상의 증상의 기저 메커니즘을 방해 또는 예방하고, 임의의 치료적 및/또는 예방적 유익을 달성하는 것을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "예방하는", "예방하다" 또는 "예방"은 미치료된 대조용 대상체에 비해 대상체(예를 들어, SIRS를 앓을 위험이 있는 대상체)에서 질병 또는 상태 또는 이의 하나 이상의 증상의 발생 및/또는 중증도를 감소시키는 것, 또는 미치료된 대조용 대상체에 비해 대상체(예를 들어, SIRS/패혈증을 앓을 위험이 있는 대상체)에서 질병 또는 상태의 하나 이상의 증상의 발병을 지연시키는 것을 포함한다.

용어 "전신 염증 반응 증후군" 또는 "SIRS"는 감염, 외상, 화상, 췌장염 또는 다양한 기타 손상과 같은 발작에 대해 반응한 전신 염증과 관련되고, 다발성 장기 기능장애를 초래하는 상태를 지칭하고; 급성 폐 손상(ALI)은 가장 흔하고 가장 빠른 장기 부전을 나타낸다. SIRS는 다양한 병원성 사건의 결과로서 발생할 수 있으며 패혈증 증후군이 가장 만연하고 치명적인 원인이다. SIRS는 발열 또는 저체온증, 빈맥, 빈호흡 및 혈액 백혈구 수의 변화를 포함한 두 가지 이상의 증상에 의해 식별된다.

일 실시형태에서, SIRS는 패혈증과 관련이 있거나, 패혈증에 의해 유발된다. 용어 "패혈증"은 감염성(예를 들어, 바이러스성, 박테리아성 및/또는 진균성) 병인을 가질 수 있는 다수의 질병, 상태 및/또는 증후군에 적용된다. 이것은 패혈증(종종 "감염 과정에 대한 반응의 SIRS"로 정의됨), 중증 패혈증(즉, 패혈증 유도 장기 기능장애 또는 조직 관류감소(저혈압, 젖산 증가 또는 소변 배출량 감소로서 스스로 드러나기도 함)를 동반한 패혈증 및 패혈성 쇼크(예를 들어, 정맥내 수액 투여에도 불구하고 중증 패혈증 및 지속적으로 낮은 혈압)를 포괄한다.

용어 "패혈증(sepsis)"은 "박테리아성 패혈증"으로 인한 질병, 상태 및/또는 증후군에 가장 자주 적용된다. 박테리아성 패혈증은 혈액 내 박테리아의 존재로부터 유래될 수 있고 때로는 "균혈증" 또는 "패혈증(septicemia)"이라고도 지칭될 수 있다. 용어 "패혈증"은 또한 혈액 내 LPS, 독소 및/또는 막 단편과 같은 박테리아 성분의 존재에 의해 야기되거나 기여하는 질병 및/또는 상태를 포함할 수 있다. 이러한 유형의 성분은 다른 조직 및/또는 장기에 존재하는 1차 감염, 예를 들어, 폐, 뇌, 피부, 요로, 골반 및/또는 복부에 존재하는 감염에서 비롯될 수 있다. 패혈증은 때로 여러 장기 부전 및 사망으로 이어지는 극히 중증 상태일 수 있다. 패혈증의 각 유형과 관련된 많은 병리 및/또는 증상이 있을 수 있으며, 이들은 이하에서 "패혈증 관련 병리"로서 종합적으로 지칭될 것이다. 예를 들어, 패혈증 관련 병리는 예를 들어, 열, 심박수 증가, 호흡률 증가 및/또는 저혈압을 포함할 수 있다. 패혈증의 병리 및 이와 관련된 많은 증상 및 결과를 뒷받침하는 1차 메커니즘은 악화된, 과장된 및/또는 부적절한 숙주 면역 반응이다. 이 악화된 면역 반응(감염에 대한 신체 반응)은 숙주 조직 손상 및/또는 장기 손상/부전을 초래한다. 악화되거나 부적절한 면역 반응은 선천성 면역 반응의 조절장애 뿐만 아니라 특정 응고촉진 사이토카인[예를 들어, 종양 괴사 인자, 인터루킨-1(IL-1) 및 인터루킨-6(IL-6) 포함]의 생산 및/또는 과잉생산을 포함할 수 있다.

일 실시형태에서, 치료는 SIRS 또는 패혈증의 하나 이상의 증상을 감소시킨다. 일 실시형태에서, 치료는 대상체에서 IL-6, IL-10, IL-12, MIP-1α(CCL3), 에오탁신, G-CSF, KC 및/또는 MCP-1과 같은 하나 이상의 염증촉진성 사이토카인의 수준(예를 들어, 혈장 수준)을 감소시킨다. 추가 실시형태에서, 치료는 IL-10, MIP-1α 및 MCP-1 중 적어도 하나의 수준(예를 들어, 혈장 수준)을 감소시키고, 바람직하게 치료는 IL-10, MIP-1α 및 MCP-1의 수준(예를 들어, 혈장 수준)을 감소시킨다.

본 명세서에 사용된 용어 "대상체"(본 명세서에서 "환자"라고도 지칭됨)은 온혈 동물, 바람직하게는 인간을 포함한 포유류를 포함한다. 바람직한 실시형태에서, 대상체는 영장류이다. 특히 더 바람직한 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 일 실시형태에서, 대상체는 SIRS 또는 패혈증의 하나 이상의 증상을 갖는다. 다른 실시형태에서, 대상체는 SIRS 또는 패혈증의 발생 위험이 있다.

일 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 유전자 조작된 MSC는 조성물, 바람직하게는 약제학적 조성물에 존재한다. 따라서, 다른 양상에서, 본 개시내용은 본 명세서에 기재된 유전자 조작된 MSC를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 본 명세서에 기재된 유전자 조작된 MSC의 치료적 유효량을 포함한다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 약제학적 허용성 담체 또는 부형제를 추가로 포함한다. 용어 "약제학적 허용성"은 건전한 의학적 판단 범위 내에서 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응 또는 기타 문제 또는 합병증 없이 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합하고 합리적인 유익/유해 비율에 상응하는 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 지칭한다. 본 명세서에 사용된 "약제학적 허용성 담체 또는 부형제"라는 문구는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제 또는 용매 캡슐화 물질과 같은 약제학적 허용성 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다.

약제학적 허용성 담체 또는 부형제는 식염수, 수성 완충 용액, 용매 및/또는 분산 매질을 포함한다. 이러한 담체 또는 부형제의 사용은 본 기술분야에 잘 알려져 있다. 용액은 바람직하게는 멸균성이고 주사가 용이할 정도로 유동적이다. 바람직하게는, 용액은 제조 및 보관 조건 하에서 안정적이고 보존제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티메로살 등의 사용을 통해 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용에 대해 보존된다.

약제학적 허용성 담체 또는 부형제로서 작용할 수 있는 물질 및 용액의 일부 예는 다음을 포함한다: 락토스, 글루코스 및 수크로스와 같은 당; 옥수수 전분 및 감자 전분과 같은 전분; 셀룰로스 및 그 유도체, 예컨대, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; 분말형 트라가칸트; 맥아; 젤라틴; 활석; 코코아 버터 및 좌약용 왁스와 같은 윤활제; 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유와 같은 오일; 프로필렌 글리콜과 같은 글리콜; 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 폴리올; 에틸 올리에이트 및 에틸 라우레이트와 같은 에스터; 아가; 완충화제, 예컨대, 수산화 마그네슘 및 수산화 알루미늄; 알긴산; 발열원이 없는 물; 등장성 식염수; 링거액; 에틸 알코올; pH 완충 용액; 폴리에스터, 폴리카보네이트 및/또는 폴리무수물; 산화방지제; 항미생물제; 및 약제학적 제형에 사용되는 다른 무독성 화합성 물질.

본 개시내용의 방법에 유용한 약제학적 조성물은 중합체성 담체 또는 세포외 매트릭스를 포함할 수 있다. 다양한 생물학적 또는 합성 고체 매트릭스 물질(예를 들어, 고체 지지체 매트릭스, 생물학적 접착제 또는 드레싱, 및 생물학적/의학적 스캐폴드)이 본 개시내용에 사용하기에 적합하다. 이 매트릭스 물질은 바람직하게는 생체내 응용예에 사용하기에 의학적으로 허용성인 것이다. 이러한 의학적 허용성 및/또는 생물학적 또는 생리학적 허용성 또는 화합성 물질의 비제한적인 예는 흡수성 및/또는 비흡수성인 고체 매트릭스 물질, 예컨대, 소장 점막하층(SIS), 예를 들어, 돼지 유래(및 기타 SIS 공급원); 가교 또는 비가교 알긴산염, 하이드로콜로이드, 폼, 콜라겐 젤, 콜라겐 스폰지, 폴리글리콜산(PGA) 메쉬, 폴리글락틴(PGL) 메쉬, 플리스, 폼 드레싱, 생체접착제(예를 들어, 피브린 글루 및 피브린 젤) 및 죽은 표피 제거된 피부 등가물을 하나 이상의 층으로 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.

적합한 중합체 담체는 중합체 용액뿐만 아니라 합성 또는 천연 중합체로 형성된 다공성 메쉬 또는 스폰지를 포함한다. 매트릭스의 한 형태는 중합체 메쉬 또는 스폰지이고; 다른 형태는 중합체 하이드로겔이다. 사용될 수 있는 천연 중합체는 콜라겐, 알부민, 및 피브린과 같은 단백질; 및 알긴산염 및 하이알루론산의 중합체와 같은 다당류를 포함한다. 합성 중합체는 생물분해성 및 비생물분해성 중합체를 둘 모두 포함한다. 생물분해성 중합체의 예는 하이드록시 산의 중합체, 예컨대, 폴리락트산(PLA), 폴리글리콜산(PGA) 및 폴리락트산-글리콜산(PLGA), 폴리오르토에스터, 폴리무수물, 폴리포스파젠, 및 이들의 조합을 포함한다. 비생물분해성 중합체는 폴리아크릴레이트, 폴리메타크릴레이트, 에틸렌 비닐 아세테이트 및 폴리비닐 알코올을 포함한다.

가단성(malleable)인 이온 또는 공유 가교된 하이드로겔을 형성할 수 있는 중합체는 세포를 캡슐화하는 데 사용된다. 하이드로겔은 유기 중합체(천연 또는 합성)가 공유 결합, 이온 결합 또는 수소 결합을 통해 가교되어, 물 분자를 포획하여 겔을 형성하는 3차원 개방 격자 구조를 만들 때 형성되는 물질이다.

하이드로겔을 형성하는 데 사용될 수 있는 물질의 예는 이온 가교된 알긴산염, 폴리포스파진 및 폴리아크릴레이트와 같은 다당류, 또는 온도 또는 pH에 의해 각각 가교된 Pluronics™ 또는 Tetronics™, 폴리에틸렌 옥사이드-폴리프로필렌 글리콜 블록 공중합체와 같은 블록 공중합체를 포함한다. 다른 물질은 피브린과 같은 단백질, 폴리비닐피롤리돈, 하이알루론산 및 콜라겐과 같은 중합체를 포함한다.

일반적으로, 이들 중합체는 하전된 측기 또는 이의 1가 이온 염을 갖는 물, 완충 염 용액 또는 수성 알코올 용액과 같은 수용액 또는 이의 1가 이온 염에 적어도 부분적으로 용해성이다. 양이온과 반응할 수 있는 산성 측기를 갖는 중합체의 예는 폴리(포스파젠), 폴리(아크릴산), 폴리(메타크릴산), 아크릴산과 메타크릴산의 공중합체, 폴리(비닐 아세테이트), 및 설폰화 중합체, 예컨대, 설폰화 폴리스티렌이다. 아크릴산 또는 메타크릴산과 비닐 에터 단량체 또는 중합체의 반응에 의해 형성된 산성 측기를 갖는 공중합체도 사용될 수 있다. 산성 기의 예는 카복실산기, 설폰산기, 할로겐화(바람직하게는 플루오르화) 알코올기, 페놀성 OH기 및 산성 OH기이다. 음이온과 반응할 수 있는 염기성 측기를 갖는 중합체의 예는 폴리(비닐 아민), 폴리(비닐 피리딘), 폴리(비닐 이미다졸) 및 일부 이미노 치환된 폴리포스파젠이다. 중합체의 암모늄 또는 4차 염 또한 백본 질소 또는 펜던트 이미노기로부터 형성될 수 있다. 염기성 측기의 예는 아미노기 및 이미노기이다.

일부 실시형태에서, 약제학적 조성물은 적어도 하나의 추가 치료제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 염증 또는 통증 치료를 돕는 진통제, 또는 조성물에 의해 치료된 부위의 감염을 예방하기 위한 항감염제를 함유할 수 있다. 보다 구체적으로, 유용한 치료제의 비제한적인 예는 다음과 같은 치료 범주를 포함한다: 비스테로이드성 항염증제, 아편제 작용제 및 살리실레이트와 같은 진통제; 항감염제, 예컨대, 항기생충제, 항혐기성제, 항생제, 아미노글리코사이드 항생제, 항진균성 항생제, 세팔로스포린 항생제, 마크롤라이드 항생제, 기타 β-락탐 항생제, 페니실린 항생제, 퀴놀론 항생제, 설폰아마이드 항생제, 테트라사이클린 항생제, 항마이코박테리아제, 항결핵성 항마이코박테리아제, 항원생동물제, 항말라리아 항원생동물제, 항바이러스제, 항레트로바이러스제, 살개선제, 항염증제, 코르티코스테로이드 항염증제, 항소양제/국소 마취제, 국소 항감염제, 항진균 국소 항감염제, 항바이러스성 국소 항감염제; 전해질 및 신장 제제, 예컨대, 산성화제, 알칼리화제, 이뇨제, 탄산 탈수효소 저해제 이뇨제, 루프 이뇨제, 삼투성 이뇨제, 칼륨 보존 이뇨제, 티아지드 이뇨제, 전해질 대체제 및 요산뇨제; 췌장 효소 및 혈전용해 효소와 같은 효소; 위장관 제제, 예컨대, 지사제, 위장관 항염증제, 위장관 항염증제, 제산성 항궤양제, 위산 펌프 저해제 항궤양제, 위 점막 항궤양제, H2-차단제 항궤양제, 담즙분해제, 소화제, 구토제, 완하제 및 대변 연화제 및 운동 촉진제; 전신 마취제, 예컨대, 흡입 마취제, 할로겐화 흡입 마취제, 정맥 마취제, 바르비투레이트 정맥 마취제, 벤조디아제핀 정맥 마취제 및 아편 작용제 정맥 마취제; 호르몬 및 호르몬 변형제, 예컨대, 낙태제, 부신제, 코르티코스테로이드 부신제, 안드로겐, 항안드로겐, 면역생물제, 예컨대, 면역글로불린, 면역억제제, 톡소이드 및 백신; 국소 마취제, 예컨대, 아마이드 국소 마취제 및 에스터 국소 마취제; 항염증제, 예컨대, 코르티코스테로이드 항염증제, 금 화합물 항염증제, 면역억제성 항염증제, 비스테로이드성 항염증제(NSAID), 살리실레이트 항염증제, 미네랄; 및 비타민, 예컨대, 비타민 A, 비타민 B, 비타민 C, 비타민 D, 비타민 E 및 비타민 K.

본 개시내용의 일 실시형태에 따르면, 조성물은 SIRS 또는 패혈증에 대한 적어도 하나의 다른 약제와 공동투여될 수 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물은 예를 들어, 항생제, 정맥내 수액, 코르티코스테로이드, 인슐린, 진통제, 진정제 및/또는 혈관수축제와 공동투여될 수 있다. 본 개시내용의 예방제/치료제 및/또는 조성물의 조합은 임의의 통상적인 투여 형태로 투여되거나 (예를 들어, 연속적으로, 동시에, 상이한 시간에) 공동투여될 수 있다. 본 개시내용의 정황에서 공동투여는 개선된 임상 결과를 달성하기 위해 조화된 치료 과정에서 하나보다 많은 치료제의 투여를 지칭한다. 이러한 공동투여는 또한 공존할 수 있고, 즉, 중복되는 시간 기간 동안 일어날 수 있다. 예를 들어, 제1 제제는 제2 활성 제제가 투여되기 전, 동시에, 전후, 또는 후에 환자에게 투여될 수 있다. 일 실시형태에서, 제제는 단일 조성물에 조합/제형화되어 동시에 투여될 수 있다.

본 개시내용의 방법에 유용한 조성물은 세포 배양 성분, 예를 들어, 아미노산, 금속, 조효소 인자, 뿐만 아니라 다른 세포의 소 집단, 예컨대, 이 중 일부는 줄기 세포의 후속 분화에 의해 발생할 수 있는 것을 포함하는 배양 배지를 포함할 수 있다.

본 개시내용의 방법에 유용한 조성물은 예를 들어, 배양 배지로부터 대상체 세포를 침전시키고 원하는 용액 또는 물질에 재현탁시킴으로써 제조될 수 있다. 세포는 예를 들어, 원심분리, 여과, 한외여과 등에 의해 배양 배지로부터 침전 및/또는 교체될 수 있다.

숙련된 기술자는 본 개시내용의 방법에서 투여되어야 하는 조성물 중의 MSC 및 선택적인 운반체(들)의 양을 쉽게 결정할 수 있다. 물론, 동물 또는 인간에게 투여되어야 하는 임의의 조성물, 및 임의의 특정 투여 방법을 위해, 예컨대, 마우스와 같은 설치류 등의 적합한 동물 모델에서 치사량(LD) 및 LD₅₀을 결정하는 것과 같은 독성; 및 적합한 반응을 유도해내는 조성물(들)의 투여량, 조성물 내의 성분의 농도 및 조성물(들)의 투여 시기를 결정하는 것이 바람직하다. 이러한 결정은 본 기술분야의 기술자의 지식, 본 개시내용 및 본 명세서에 인용된 문서로부터 과도한 실험을 필요로 하지 않는다. 그리고, 순차 투여의 시간은 과도한 실험없이 확인할 수 있다.

일 실시형태에서, MSC의 다음과 같은 양 및 양의 범위가 대상체에게 투여된다: (i) 약 1×10² 내지 약 1×10⁸개 세포/㎏ 체중; (ii) 약 1×10³ 내지 약 1×10⁷개 세포/㎏ 체중; (iii) 약 1×10⁴ 내지 약 1×10⁶개 세포/㎏ 체중; (iv) 약 1×10⁴ 내지 약 1×10⁵개 세포/㎏ 체중; (v) 약 1×10⁵ 내지 약 1×10⁶개 세포/㎏ 체중; (vi) 약 5×10⁴ 내지 약 0.5×10⁵개 세포/㎏ 체중; (vii) 약 1×10³개 세포/㎏ 체중; (viii) 약 1×10⁴개 세포/㎏ 체중; (ix) 약 5×10⁴개 세포/㎏ 체중; (x) 약 1×10⁵개 세포/㎏ 체중; (xi) 약 5×10⁵개 세포/㎏ 체중; (xii) 약 1×10⁶ 세포/㎏ 체중; 및 (xiii) 약 1×10⁷개 세포/㎏ 체중. 예상된 인체 체중은 약 5㎏, 10㎏, 15㎏, 30㎏, 50㎏, 약 60㎏; 약 70㎏; 약 80㎏, 약 90㎏; 약 100㎏, 약 120㎏ 및 약 150㎏을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. MSC는 볼루스 형태, 즉, 짧은 시간 동안 모든 세포의 주사로 투여될 수 있거나, 장기간에 걸쳐 소량의 세포를 지속적으로 투여(예를 들어, 주입)하거나, 또는 대안적으로 제한된 크기의 볼루스를 일정 기간에 걸쳐 여러 차례 투여함으로써 달성할 수 있다.

본 개시내용의 방법에 유용한 조성물은 특히 국소 주사, 예컨대, 카테터 투여, 전신 주사, 국소 주사, 정맥 주사, 자궁내 주사 또는 비경구 투여를 통해 투여될 수 있다. 본 명세서에 기재된 치료 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)을 투여할 때, 이는 일반적으로 단위 투여량 주사제 형태(용액, 현탁액, 에멀젼)로 제형 화될 것이다.

개시내용의 실시형태를 수행하기 위한 방식(들)

본 개시내용은 하기 비제한적 실시예에 의해 더욱 상세하게 예시된다.

실시예 1: MSC에서 AOAH의 발현을 위한 플라스미드의 작제

재료: AOAH 유전자는 GenScript에 의해 합성하였고, 제한효소(Restriction endonuclease) NheI, SalI, BamHI 및 EcoRI는 New England Biolabs에서 구입했으며 T4 DNA Ligase는 New England Biolabs에서 구입하였다.

방법: AOAH 유전자 합성 후, 유전자 서열을 유전자 서열결정에 의해 점검하였다. 그 후, 목표 유전자를 제한효소에 의해 37℃에서 2시간 동안 절단하고, 모(parent) 클로닝 벡터에 T4 DNA 리가제를 이용하여 삽입하였고, 16℃에서 밤새 항온처리하였다. 증폭 및 미니플라스미드 제조를 위해 모 AOAH 플라스미드를 컴피턴트 이.콜라이에 형질전환시켰다.

3개의 상이한 플라스미드, 즉, EF-1 프로모터의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 플라스미드(플라스미드 #2, 도 1a), CMV 프로모터의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 플라스미드(플라스미드 #3, 도 1b), 및 CMV 프로모터/인핸서의 제어하에 AOAH 암호 서열을 포함하는 다른 플라스미드(플라스미드 #1, 도 1c)를 작제하여 MSC에서 AOAH의 발현을 시험하였다. MCS를 상이한 플라스미드로 형질감염시켰고, 세포 용해물에 대해 웨스턴 블롯에 의해 AOAH의 세포내 발현 수준을 측정하였다. 도 2에 도시된 결과는 플라스미드 #1에 의해 형질감염된 MCS가 플라스미드 #2 및 플라스미드 #3에 의해 각각 형질감염된 MCS보다 3.6배 및 6.2배 더 높은 수준으로 AOAH를 발현한다는 것을 보여준다. 따라서, 플라스미드 #1을 다음 실험을 수행하기 위해 선택하였다.

실시예 2: MSC에서 AOAH의 발현 및 분비

재료: 항-AOAH 항체는 ThermoFisher에서 구입하였고, 항-AOAH ELISA 키트는 MyBioSource에서 구입하였다.

방법: MSC는 T75 플라스크에 10,000/㎠의 밀도로 접종하였다. 접종 후 16 내지 20시간 후, 세포를 플라스미드 #1(약 1 ㎍/100,000개 세포)로 형질감염시켰다. 형질감염 후, 세포를 24시간 동안 배양하였다. 세포 용해물 40㎍을 웨스턴 블롯에 사용하였다. 배양 배지를 수확하고 ELSIA로 검정하였다.

MSC에서 AOAH의 과발현의 기간을 결정하기 위해, 플라스미드 #1을 MSC에 형질감염시키고, 형질감염 후 24시간, 48시간 및 72시간째 수확한 세포 용해물에 대해 웨스턴 블롯을 수행하였다. 세포내 AOAH의 총 수준(전구체 및 성숙 형태)은 형질감염 후 24시간째에 비해 72시간째에 약간 낮은 것으로 발견되었다(도 3a). 하지만, AOAH의 성숙 형태의 비율(총 AOAH 대비)은 형질감염 후 72시간에 24시간에서보다 더 높았다(약 45% 대 약 24%, 도 3b). 따라서, 플라스미드 #1에 의한 MSC의 형질감염은 이 세포에서 성숙 AOAH의 지속적인 발현을 야기한다. 도 3c에 제시된 결과는 플라스미드 #1에 의해 형질감염된 MSC의 배양 배지에서 24시간부터 72시간까지 AOAH 수준의 점진적 증가를 보여준다.

실시예 3: 뮤린의 패혈증 모델에서 AOAH를 암호화하는 플라스미드 #1에 의해 형질감염된 MSC의 투여 효과

재료: 10주령의 C57BL/6 암컷 마우스는 Charles River에서 구입하였다. LPS는 Sigma에서 구입하였고, Plasma-Lyte A는 Baxter에서 구입하고, 인간 알부민은 Sigma에서 구입하였으며, 마우스 사이토카인 Bio-Plex 키트는 Bio-Rad에서 구입하였다. Bio-Plex™ 200 System 및 Bio-Plex Pro™II Wash Station은 Bio-Rad에서 구입하였다.

방법: 패혈증은 내독소(LPS) 또는 병원성 이.콜라이로 유도하였다. LPS는 멸균 식염수로 희석하고, 15 mg/㎏의 용량으로 마우스에게 복강내 주사하였다. 저온보존된 병원성 이.콜라이는 멸균 식염수로 희석하고, 마우스당 1.2×10⁶ CFU의 용량으로 마우스에게 복강내 주사하였다. IP 주사 후 1시간째, 세포를 마우스 당 250,000 세포의 용량으로 경정맥내 주사에 의해 전달하였다. 내독소에 의한 패혈증 연구에서, LPS 주사 후 20시간째, 각 마우스로부터 혈액 500㎕를 50mM EDTA 50㎕가 사전충전된 주사기로 채혈하였다. 주사기에서 바늘을 제거하고, 혈액을 소형원심분리 관으로 조심스럽게 배출시켰다. 혈액을 1700×g로 4℃에서 10분 동안 원심분리하였다. 혈장 상층을 새로운 소형원심분리 관으로 이동시키고, 11,000×g로 4℃에서 5분 동안 원심분리하여 임의의 잔류 오염 파편/혈소판을 제거하였다. 혈장은 원심분리 후 새로운 소형원심분리 관으로 이동시키고, 사이토카인 수준을 보존하거나 결정하기 위해 -80℃에서 동결시켰다. 사이토카인 수준은 Bio-Plex에 의해 제조업체의 프로토콜에 따라 결정하였다.

플라스미드 #1에 의해 형질감염된 MSC가 패혈증의 뮤린 모델인 LPS-유도 내독소혈증의 염증을 감소시킬 수 있는지를 시험하였다. 내독소혈증은 LPS를 복강내 주사하여 유도하였고, 이 마우스를 LPS 주사 후 1시간째 NT002, 미형질감염된 MSC 또는 식염수 비히클로 처리하였다. 몇몇 염증촉진성 사이토카인 및 케모카인의 혈장 수준을 LPS 주사 후 20시간째 평가하였다. 도 4b 내지 도 4i에 제시된 결과는 NT002의 투여가 LPS 주사에 의해 유도된 특정 염증촉진성 사이토카인 및 케모카인의 혈장 수준의 증가를 약화시켜, AOAH를 과발현하는 MSC가 패혈증에 의해 유도된 전신 염증 반응 증후군(SIRS)의 중증도를 치료하거나 감소시키는데 유용할 수 있다는 증거를 제공한다는 것을 입증한다.

병원성 이.콜라이에 의한 패혈증 연구에서는 생존율을 결정하기 위해 박테리아 접종 후 5일째에 동물을 관찰하였다(도 5a). 도 5b에 제시된 결과는 NT002의 투여가 병원성 이.콜라이 접종에 의해 유도된 높은 치사율(약 50%)로부터 마우스를 보호한다는 것을 입증한다.

실시예 4: 패혈증 뮤린 모델에서 AOAH 및 ANGPT1을 과발현하는 MSC의 투여 효과

AOAH 및 ANGPT1의 과발현을 유도하기 위해 hAOAH를 암호화하는 코돈 최적화 서열(도 6b) 및 hANGPT1을 암호화하는 서열(도 6c)을 포함하는 플라스미드 #4(도 6a)로 MSC를 형질감염시켰다. 이러한 AOAH 및 ANGPT1을 과발현하는 MSC(NT003)의 효과는 전술한 병원성 이.콜라이에 의한 패혈증 모델, 뿐만 아니라 맹장 결찰 및 천공(CLP)에 의한 패혈증 모델(도 7a)에서도 평가하였다. CLP 후 6시간째 NT003 또는 비히클로 마우스를 처리하였고, CLP 후 5일째에 생존율을 측정하였다. 도 6d에 제시된 결과는 비히클이 아닌 NT003에 의해 처리된 마우스가 병원성 이.콜라이에 의한 패혈증으로 인한 사망으로부터 보호되었음을 보여준다. NT003 처리는 또한 도 7b에 도시된 바와 같이, 비히클 대비 CLP에 의한 패혈증 모델에서 생존율을 유의적으로 개선시키는 것을 보여주었다.

본 기술의 개별 양상들의 단일 예시들로서 의도된 본 출원에 기재된 특정 실시형태 양상에서 본 기술이 제한되어서는 안 된다. 본 기술분야의 기술자에게 명백하듯이, 이러한 본 기술의 많은 변형 및 변경은 그 취지 및 범위를 벗어남이 없이 이루어질 수 있다. 본 명세서에 열거된 것 외에, 본 기술의 범위 내인 기능적 등가 시약 및 방법은 이전 상세한 설명으로부터 본 기술분야의 기술자에게 명백할 것이다. 이러한 변형 및 변경은 본 기술의 범위 내에 속하는 것으로 간주한다. 이러한 본 기술은 당연히 변동될 수 있는 특정 방법, 시약, 화합물 조성물 또는 생물학적 시스템에 제한되지 않는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 명세서에 사용된 용어는 특정 실시형태를 단지 설명하기 위한 목적인 것이지, 제한하려는 의도가 아닌 것으로 이해되어야 한다.

SEQUENCE LISTING <110> OTTAWA HOSPITAL RESEARCH INSTITUTE UNITED THERAPEUTICS CORPORATION <120> GENETICALLY-ENGINEERED MESENCHYMAL STEM CELLS OVERPRESSING AOAH AND USES THEREOF <130> G17018-00007 <150> US 62/752,000 <151> 2018-10-29 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 1734 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (7)..(1734) <400> 1 gccacc atg cag tcc ccc tgg aag att ctg acc gtg gca ccc ctg ttt 48 Met Gln Ser Pro Trp Lys Ile Leu Thr Val Ala Pro Leu Phe 1 5 10 ctg ctg ctg tcc ctg cag tcc tcc gca agc ccc gca aat gat gat cag 96 Leu Leu Leu Ser Leu Gln Ser Ser Ala Ser Pro Ala Asn Asp Asp Gln 15 20 25 30 tcc agg cct tcc ctg tct aac gga cac acc tgc gtg gga tgc gtg ctg 144 Ser Arg Pro Ser Leu Ser Asn Gly His Thr Cys Val Gly Cys Val Leu 35 40 45 gtg gtg tct gtg atc gag cag ctg gcc cag gtg cac aat tct aca gtg 192 Val Val Ser Val Ile Glu Gln Leu Ala Gln Val His Asn Ser Thr Val 50 55 60 cag gcc agc atg gag cgc ctg tgc tcc tac ctg cca gag aag ctg ttt 240 Gln Ala Ser Met Glu Arg Leu Cys Ser Tyr Leu Pro Glu Lys Leu Phe 65 70 75 ctg aag acc aca tgt tac ctg gtc atc gat aag ttc ggc agc gac atc 288 Leu Lys Thr Thr Cys Tyr Leu Val Ile Asp Lys Phe Gly Ser Asp Ile 80 85 90 atc aag ctg ctg tcc gcc gac atg aac gcc gac gtg gtg tgc cac acc 336 Ile Lys Leu Leu Ser Ala Asp Met Asn Ala Asp Val Val Cys His Thr 95 100 105 110 ctg gag ttt tgt aag cag aat aca ggc cag cct ctg tgc cac ctg tac 384 Leu Glu Phe Cys Lys Gln Asn Thr Gly Gln Pro Leu Cys His Leu Tyr 115 120 125 ccc ctg cct aag gag aca tgg aag ttc aca ctg cag aag gcc agg cag 432 Pro Leu Pro Lys Glu Thr Trp Lys Phe Thr Leu Gln Lys Ala Arg Gln 130 135 140 atc gtg aag aag tct cca atc ctg aag tat agc cgc tcc ggc tct gat 480 Ile Val Lys Lys Ser Pro Ile Leu Lys Tyr Ser Arg Ser Gly Ser Asp 145 150 155 atc tgc agc ctg ccc gtg ctg gcc aag att tgc cag aag atc aag ctg 528 Ile Cys Ser Leu Pro Val Leu Ala Lys Ile Cys Gln Lys Ile Lys Leu 160 165 170 gcc atg gag cag agc gtg ccc ttt aag gac gtg gat agc gac aag tac 576 Ala Met Glu Gln Ser Val Pro Phe Lys Asp Val Asp Ser Asp Lys Tyr 175 180 185 190 tcc gtg ttc cct acc ctg agg gga tat cac tgg agg gga agg gac tgt 624 Ser Val Phe Pro Thr Leu Arg Gly Tyr His Trp Arg Gly Arg Asp Cys 195 200 205 aac gat tct gac gag agc gtg tac cct ggc aga cgg ccc aac aat tgg 672 Asn Asp Ser Asp Glu Ser Val Tyr Pro Gly Arg Arg Pro Asn Asn Trp 210 215 220 gat gtg cac cag gac agc aac tgc aat ggc atc tgg gga gtg gat cca 720 Asp Val His Gln Asp Ser Asn Cys Asn Gly Ile Trp Gly Val Asp Pro 225 230 235 aag gac gga gtg cct tat gag aag aag ttt tgt gag ggc tcc cag cct 768 Lys Asp Gly Val Pro Tyr Glu Lys Lys Phe Cys Glu Gly Ser Gln Pro 240 245 250 aga ggc atc atc ctg ctg ggc gac tcc gcc gga gca cac ttt cac atc 816 Arg Gly Ile Ile Leu Leu Gly Asp Ser Ala Gly Ala His Phe His Ile 255 260 265 270 tct cca gag tgg atc acc gcc tcc cag atg tct ctg aac agc ttc atc 864 Ser Pro Glu Trp Ile Thr Ala Ser Gln Met Ser Leu Asn Ser Phe Ile 275 280 285 aat ctg cca acc gcc ctg aca aat gag ctg gat tgg cca cag ctg agc 912 Asn Leu Pro Thr Ala Leu Thr Asn Glu Leu Asp Trp Pro Gln Leu Ser 290 295 300 gga gca acc ggc ttt ctg gac tcc aca gtg ggc atc aag gag aag tct 960 Gly Ala Thr Gly Phe Leu Asp Ser Thr Val Gly Ile Lys Glu Lys Ser 305 310 315 atc tac ctg cgg ctg tgg aag aga aac cac tgc aat cac cgg gat tat 1008 Ile Tyr Leu Arg Leu Trp Lys Arg Asn His Cys Asn His Arg Asp Tyr 320 325 330 cag aac atc tct agg aat ggc gcc agc tcc cgc aac ctg aag aag ttc 1056 Gln Asn Ile Ser Arg Asn Gly Ala Ser Ser Arg Asn Leu Lys Lys Phe 335 340 345 350 atc gag agc ctg tcc aga aat aag gtg ctg gac tac cca gcc atc gtg 1104 Ile Glu Ser Leu Ser Arg Asn Lys Val Leu Asp Tyr Pro Ala Ile Val 355 360 365 atc tat gcc atg atc ggc aac gac gtg tgc tcc ggc aag tct gac cca 1152 Ile Tyr Ala Met Ile Gly Asn Asp Val Cys Ser Gly Lys Ser Asp Pro 370 375 380 gtg ccc gcc atg acc aca ccc gag aag ctg tac agc aat gtg atg cag 1200 Val Pro Ala Met Thr Thr Pro Glu Lys Leu Tyr Ser Asn Val Met Gln 385 390 395 acc ctg aag cac ctg aac tcc cac ctg cct aat ggc tct cac gtg atc 1248 Thr Leu Lys His Leu Asn Ser His Leu Pro Asn Gly Ser His Val Ile 400 405 410 ctg tac ggc ctg cca gat ggc acc ttt ctg tgg gac aac ctg cac aat 1296 Leu Tyr Gly Leu Pro Asp Gly Thr Phe Leu Trp Asp Asn Leu His Asn 415 420 425 430 agg tat cac ccc ctg ggc cag ctg aac aag gat atg aca tac gcc cag 1344 Arg Tyr His Pro Leu Gly Gln Leu Asn Lys Asp Met Thr Tyr Ala Gln 435 440 445 ctg tat agc ttc ctg aat tgc ctg cag gtg tcc cct tgt cac ggc tgg 1392 Leu Tyr Ser Phe Leu Asn Cys Leu Gln Val Ser Pro Cys His Gly Trp 450 455 460 atg tct agc aac aag aca ctg cgg acc ctg aca tct gag aga gcc gag 1440 Met Ser Ser Asn Lys Thr Leu Arg Thr Leu Thr Ser Glu Arg Ala Glu 465 470 475 cag ctg agc aat acc ctg aag aag atc gcc gcc tcc gag aag ttc aca 1488 Gln Leu Ser Asn Thr Leu Lys Lys Ile Ala Ala Ser Glu Lys Phe Thr 480 485 490 aac ttt aat ctg ttc tac atg gac ttc gcc ttt cac gag atc atc cag 1536 Asn Phe Asn Leu Phe Tyr Met Asp Phe Ala Phe His Glu Ile Ile Gln 495 500 505 510 gag tgg cag aag aga gga gga cag cca tgg cag ctg atc gag cca gtg 1584 Glu Trp Gln Lys Arg Gly Gly Gln Pro Trp Gln Leu Ile Glu Pro Val 515 520 525 gat ggc ttt cac cct aac gag gtg gcc ctg ctg ctg ctg gcc gac cac 1632 Asp Gly Phe His Pro Asn Glu Val Ala Leu Leu Leu Leu Ala Asp His 530 535 540 ttc tgg aag aag gtg cag ctg cag tgg ccc cag atc ctg ggg aaa gaa 1680 Phe Trp Lys Lys Val Gln Leu Gln Trp Pro Gln Ile Leu Gly Lys Glu 545 550 555 aac cca ttc aac cca cag att aag cag gtg ttc ggg gac cag ggc ggg 1728 Asn Pro Phe Asn Pro Gln Ile Lys Gln Val Phe Gly Asp Gln Gly Gly 560 565 570 cac tag 1734 His 575 <210> 2 <211> 575 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Gln Ser Pro Trp Lys Ile Leu Thr Val Ala Pro Leu Phe Leu Leu 1 5 10 15 Leu Ser Leu Gln Ser Ser Ala Ser Pro Ala Asn Asp Asp Gln Ser Arg 20 25 30 Pro Ser Leu Ser Asn Gly His Thr Cys Val Gly Cys Val Leu Val Val 35 40 45 Ser Val Ile Glu Gln Leu Ala Gln Val His Asn Ser Thr Val Gln Ala 50 55 60 Ser Met Glu Arg Leu Cys Ser Tyr Leu Pro Glu Lys Leu Phe Leu Lys 65 70 75 80 Thr Thr Cys Tyr Leu Val Ile Asp Lys Phe Gly Ser Asp Ile Ile Lys 85 90 95 Leu Leu Ser Ala Asp Met Asn Ala Asp Val Val Cys His Thr Leu Glu 100 105 110 Phe Cys Lys Gln Asn Thr Gly Gln Pro Leu Cys His Leu Tyr Pro Leu 115 120 125 Pro Lys Glu Thr Trp Lys Phe Thr Leu Gln Lys Ala Arg Gln Ile Val 130 135 140 Lys Lys Ser Pro Ile Leu Lys Tyr Ser Arg Ser Gly Ser Asp Ile Cys 145 150 155 160 Ser Leu Pro Val Leu Ala Lys Ile Cys Gln Lys Ile Lys Leu Ala Met 165 170 175 Glu Gln Ser Val Pro Phe Lys Asp Val Asp Ser Asp Lys Tyr Ser Val 180 185 190 Phe Pro Thr Leu Arg Gly Tyr His Trp Arg Gly Arg Asp Cys Asn Asp 195 200 205 Ser Asp Glu Ser Val Tyr Pro Gly Arg Arg Pro Asn Asn Trp Asp Val 210 215 220 His Gln Asp Ser Asn Cys Asn Gly Ile Trp Gly Val Asp Pro Lys Asp 225 230 235 240 Gly Val Pro Tyr Glu Lys Lys Phe Cys Glu Gly Ser Gln Pro Arg Gly 245 250 255 Ile Ile Leu Leu Gly Asp Ser Ala Gly Ala His Phe His Ile Ser Pro 260 265 270 Glu Trp Ile Thr Ala Ser Gln Met Ser Leu Asn Ser Phe Ile Asn Leu 275 280 285 Pro Thr Ala Leu Thr Asn Glu Leu Asp Trp Pro Gln Leu Ser Gly Ala 290 295 300 Thr Gly Phe Leu Asp Ser Thr Val Gly Ile Lys Glu Lys Ser Ile Tyr 305 310 315 320 Leu Arg Leu Trp Lys Arg Asn His Cys Asn His Arg Asp Tyr Gln Asn 325 330 335 Ile Ser Arg Asn Gly Ala Ser Ser Arg Asn Leu Lys Lys Phe Ile Glu 340 345 350 Ser Leu Ser Arg Asn Lys Val Leu Asp Tyr Pro Ala Ile Val Ile Tyr 355 360 365 Ala Met Ile Gly Asn Asp Val Cys Ser Gly Lys Ser Asp Pro Val Pro 370 375 380 Ala Met Thr Thr Pro Glu Lys Leu Tyr Ser Asn Val Met Gln Thr Leu 385 390 395 400 Lys His Leu Asn Ser His Leu Pro Asn Gly Ser His Val Ile Leu Tyr 405 410 415 Gly Leu Pro Asp Gly Thr Phe Leu Trp Asp Asn Leu His Asn Arg Tyr 420 425 430 His Pro Leu Gly Gln Leu Asn Lys Asp Met Thr Tyr Ala Gln Leu Tyr 435 440 445 Ser Phe Leu Asn Cys Leu Gln Val Ser Pro Cys His Gly Trp Met Ser 450 455 460 Ser Asn Lys Thr Leu Arg Thr Leu Thr Ser Glu Arg Ala Glu Gln Leu 465 470 475 480 Ser Asn Thr Leu Lys Lys Ile Ala Ala Ser Glu Lys Phe Thr Asn Phe 485 490 495 Asn Leu Phe Tyr Met Asp Phe Ala Phe His Glu Ile Ile Gln Glu Trp 500 505 510 Gln Lys Arg Gly Gly Gln Pro Trp Gln Leu Ile Glu Pro Val Asp Gly 515 520 525 Phe His Pro Asn Glu Val Ala Leu Leu Leu Leu Ala Asp His Phe Trp 530 535 540 Lys Lys Val Gln Leu Gln Trp Pro Gln Ile Leu Gly Lys Glu Asn Pro 545 550 555 560 Phe Asn Pro Gln Ile Lys Gln Val Phe Gly Asp Gln Gly Gly His 565 570 575 <210> 3 <211> 1503 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (7)..(1503) <400> 3 gccacc atg aca gtt ttc ctt tcc ttt gct ttc ctc gct gcc att ctg 48 Met Thr Val Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu 1 5 10 act cac ata ggg tgc agc aat cag cgc cga agt cca gaa aac agt ggg 96 Thr His Ile Gly Cys Ser Asn Gln Arg Arg Ser Pro Glu Asn Ser Gly 15 20 25 30 aga aga tat aac cgg att caa cat ggg caa tgt gcc tac act ttc att 144 Arg Arg Tyr Asn Arg Ile Gln His Gly Gln Cys Ala Tyr Thr Phe Ile 35 40 45 ctt cca gaa cac gat ggc aac tgt cgt gag agt acg aca gac cag tac 192 Leu Pro Glu His Asp Gly Asn Cys Arg Glu Ser Thr Thr Asp Gln Tyr 50 55 60 aac aca aac gct ctg cag aga gat gct cca cac gtg gaa ccg gat ttc 240 Asn Thr Asn Ala Leu Gln Arg Asp Ala Pro His Val Glu Pro Asp Phe 65 70 75 tct tcc cag aaa ctt caa cat ctg gaa cat gtg atg gaa aat tat act 288 Ser Ser Gln Lys Leu Gln His Leu Glu His Val Met Glu Asn Tyr Thr 80 85 90 cag tgg ctg caa aaa ctt gag aat tac att gtg gaa aac atg aag tcg 336 Gln Trp Leu Gln Lys Leu Glu Asn Tyr Ile Val Glu Asn Met Lys Ser 95 100 105 110 gag atg gcc cag ata cag cag aat gca gtt cag aac cac acg gct acc 384 Glu Met Ala Gln Ile Gln Gln Asn Ala Val Gln Asn His Thr Ala Thr 115 120 125 atg ctg gag ata gga acc agc ctc ctc tct cag act gca gag cag acc 432 Met Leu Glu Ile Gly Thr Ser Leu Leu Ser Gln Thr Ala Glu Gln Thr 130 135 140 aga aag ctg aca gat gtt gag acc cag gta cta aat caa act tct cga 480 Arg Lys Leu Thr Asp Val Glu Thr Gln Val Leu Asn Gln Thr Ser Arg 145 150 155 ctt gag ata cag ctg ctg gag aat tca tta tcc acc tac aag cta gag 528 Leu Glu Ile Gln Leu Leu Glu Asn Ser Leu Ser Thr Tyr Lys Leu Glu 160 165 170 aag caa ctt ctt caa cag aca aat gaa atc ttg aag atc cat gaa aaa 576 Lys Gln Leu Leu Gln Gln Thr Asn Glu Ile Leu Lys Ile His Glu Lys 175 180 185 190 aac agt tta tta gaa cat aaa atc tta gaa atg gaa gga aaa cac aag 624 Asn Ser Leu Leu Glu His Lys Ile Leu Glu Met Glu Gly Lys His Lys 195 200 205 gaa gag ttg gac acc tta aag gaa gag aaa gag aac ctt caa ggc ttg 672 Glu Glu Leu Asp Thr Leu Lys Glu Glu Lys Glu Asn Leu Gln Gly Leu 210 215 220 gtt act cgt caa aca tat ata atc cag gag ctg gaa aag caa tta aac 720 Val Thr Arg Gln Thr Tyr Ile Ile Gln Glu Leu Glu Lys Gln Leu Asn 225 230 235 aga gct acc acc aac aac agt gtc ctt cag aag cag caa ctg gag ctg 768 Arg Ala Thr Thr Asn Asn Ser Val Leu Gln Lys Gln Gln Leu Glu Leu 240 245 250 atg gac aca gtc cac aac ctt gtc aat ctt tgc act aaa gaa ggt gtt 816 Met Asp Thr Val His Asn Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val 255 260 265 270 tta cta aag gga gga aaa aga gag gaa gag aaa cca ttt aga gac tgt 864 Leu Leu Lys Gly Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys 275 280 285 gca gat gta tat caa gct ggt ttt aat aaa agt gga atc tac act att 912 Ala Asp Val Tyr Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile 290 295 300 tat att aat aat atg cca gaa ccc aaa aag gtg ttt tgc aat atg gat 960 Tyr Ile Asn Asn Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp 305 310 315 gtc aat ggg gga ggt tgg act gta ata caa cat cgt gaa gat gga agt 1008 Val Asn Gly Gly Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser 320 325 330 cta gat ttc caa aga ggc tgg aag gaa tat aaa atg ggt ttt gga aat 1056 Leu Asp Phe Gln Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn 335 340 345 350 ccc tcc ggt gaa tat tgg ctg ggg aat gag ttt att ttt gcc att acc 1104 Pro Ser Gly Glu Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr 355 360 365 agt cag agg cag tac atg cta aga att gag tta atg gac tgg gaa ggg 1152 Ser Gln Arg Gln Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly 370 375 380 aac cga gcc tat tca cag tat gac aga ttc cac ata gga aat gaa aag 1200 Asn Arg Ala Tyr Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys 385 390 395 caa aac tat agg ttg tat tta aaa ggt cac act ggg aca gca gga aaa 1248 Gln Asn Tyr Arg Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys 400 405 410 cag agc agc ctg atc tta cac ggt gct gat ttc agc act aaa gat gct 1296 Gln Ser Ser Leu Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala 415 420 425 430 gat aat gac aac tgt atg tgc aaa tgt gcc ctc atg tta aca gga gga 1344 Asp Asn Asp Asn Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly 435 440 445 tgg tgg ttt gat gct tgt ggc ccc tcc aat cta aat gga atg ttc tat 1392 Trp Trp Phe Asp Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr 450 455 460 act gcg gga caa aac cat gga aaa ctg aat ggg ata aag tgg cac tac 1440 Thr Ala Gly Gln Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr 465 470 475 ttc aaa ggg ccc agt tac tcc tta cgt tcc aca act atg atg att cga 1488 Phe Lys Gly Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg 480 485 490 cct tta gat ttt tag 1503 Pro Leu Asp Phe 495 <210> 4 <211> 498 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Thr Val Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu Thr His 1 5 10 15 Ile Gly Cys Ser Asn Gln Arg Arg Ser Pro Glu Asn Ser Gly Arg Arg 20 25 30 Tyr Asn Arg Ile Gln His Gly Gln Cys Ala Tyr Thr Phe Ile Leu Pro 35 40 45 Glu His Asp Gly Asn Cys Arg Glu Ser Thr Thr Asp Gln Tyr Asn Thr 50 55 60 Asn Ala Leu Gln Arg Asp Ala Pro His Val Glu Pro Asp Phe Ser Ser 65 70 75 80 Gln Lys Leu Gln His Leu Glu His Val Met Glu Asn Tyr Thr Gln Trp 85 90 95 Leu Gln Lys Leu Glu Asn Tyr Ile Val Glu Asn Met Lys Ser Glu Met 100 105 110 Ala Gln Ile Gln Gln Asn Ala Val Gln Asn His Thr Ala Thr Met Leu 115 120 125 Glu Ile Gly Thr Ser Leu Leu Ser Gln Thr Ala Glu Gln Thr Arg Lys 130 135 140 Leu Thr Asp Val Glu Thr Gln Val Leu Asn Gln Thr Ser Arg Leu Glu 145 150 155 160 Ile Gln Leu Leu Glu Asn Ser Leu Ser Thr Tyr Lys Leu Glu Lys Gln 165 170 175 Leu Leu Gln Gln Thr Asn Glu Ile Leu Lys Ile His Glu Lys Asn Ser 180 185 190 Leu Leu Glu His Lys Ile Leu Glu Met Glu Gly Lys His Lys Glu Glu 195 200 205 Leu Asp Thr Leu Lys Glu Glu Lys Glu Asn Leu Gln Gly Leu Val Thr 210 215 220 Arg Gln Thr Tyr Ile Ile Gln Glu Leu Glu Lys Gln Leu Asn Arg Ala 225 230 235 240 Thr Thr Asn Asn Ser Val Leu Gln Lys Gln Gln Leu Glu Leu Met Asp 245 250 255 Thr Val His Asn Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu 260 265 270 Lys Gly Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp 275 280 285 Val Tyr Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile 290 295 300 Asn Asn Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn 305 310 315 320 Gly Gly Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp 325 330 335 Phe Gln Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser 340 345 350 Gly Glu Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln 355 360 365 Arg Gln Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg 370 375 380 Ala Tyr Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn 385 390 395 400 Tyr Arg Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser 405 410 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Lys Glu Lys Ser Ile Tyr 305 310 315 320 Leu Arg Leu Trp Lys Arg Asn His Cys Asn His Arg Asp Tyr Gln Asn 325 330 335 Ile Ser Arg Asn Gly Ala Ser Ser Arg Asn Leu Lys Lys Phe Ile Glu 340 345 350 Ser Leu Ser Arg Asn Lys Val Leu Asp Tyr Pro Ala Ile Val Ile Tyr 355 360 365 Ala Met Ile Gly Asn Asp Val Cys Ser Gly Lys Ser Asp Pro Val Pro 370 375 380 Ala Met Thr Thr Pro Glu Lys Leu Tyr Ser Asn Val Met Gln Thr Leu 385 390 395 400 Lys His Leu Asn Ser His Leu Pro Asn Gly Ser His Val Ile Leu Tyr 405 410 415 Gly Leu Pro Asp Gly Thr Phe Leu Trp Asp Asn Leu His Asn Arg Tyr 420 425 430 His Pro Leu Gly Gln Leu Asn Lys Asp Met Thr Tyr Ala Gln Leu Tyr 435 440 445 Ser Phe Leu Asn Cys Leu Gln Val Ser Pro Cys His Gly Trp Met Ser 450 455 460 Ser Asn Lys Thr Leu Arg Thr Leu Thr Ser Glu Arg Ala Glu Gln Leu 465 470 475 480 Ser Asn Thr Leu Lys Lys Ile Ala Ala Ser Glu Lys Phe Thr Asn Phe 485 490 495 Asn Leu Phe Tyr Met Asp Phe Ala Phe His Glu Ile Ile Gln Glu Trp 500 505 510 Gln Lys Arg Gly Gly Gln Pro Trp Gln Leu Ile Glu Pro Val Asp Gly 515 520 525 Phe His Pro Asn Glu Val Ala Leu Leu Leu Leu Ala Asp His Phe Trp 530 535 540 Lys Lys Val Gln Leu Gln Trp Pro Gln Ile Leu Gly Lys Glu Asn Pro 545 550 555 560 Phe Asn Pro Gln Ile Lys Gln Val Phe Gly Asp Gln Gly Gly His 565 570 575 <210> 6 <211> 2440 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 6 aacagatcag ttccggcaag cctcgaggct cacggggttt atgcacacta acttcactga 60 gccagggagc acggaagttg tgccactgtg caacttgggt tttctttatc ctgcagtctt 120 tacctcagca gaaccgcaca ccacagactc cctccagctc tttgtgtgtg gctctctcag 180 ggtccaacaa gagcaagctg tgggtctgtg agtgtttatg tgtgctttta ttcacttcac 240 acttattgaa aagtgtgtat gtgagagggt ggggtgtgtg tgtcaaagag agtgaggaag 300 agaaggagag agagatcaat tgattctgca gcctcagctc cagcatccct cagttgggag 360 cttccaaagc cgggtgatca cttggggtgc atagctcgga gatgcagtcc ccctggaaaa 420 tccttacggt ggcgcctcta ttcttgctcc tgtctcttca gtcctcggcc tctccagcca 480 acgatgacca gtccaggccc agcctctcga atgggcacac ctgtgtaggg tgtgtgctgg 540 tggtgtctgt aatagaacag cttgctcaag ttcacaactc gacggtccag gcctcgatgg 600 agagactgtg cagctacctg cctgaaaaac tgttcttgaa aaccacctgc tatttagtca 660 ttgacaagtt tggatcagac atcataaaac tgcttagcgc agatatgaat gctgatgtgg 720 tatgtcacac tctggagttt tgtaaacaga acactggcca accattgtgt catctctacc 780 ctcttcccaa ggagacatgg aaatttacac tacagaaggc aagacaaatt gtcaagaagt 840 ccccgattct gaaatattct agaagtggtt ctgacatttg ttcactcccg gttttggcca 900 agatctgcca gaaaattaaa ttagctatgg aacagtctgt gccattcaaa gatgtggatt 960 cagacaaata cagcgttttc ccaacactgc ggggctatca ctggcggggg agagactgta 1020 atgacagcga cgagtcagtg tacccaggta gaaggccgaa caactgggat gtccatcagg 1080 attcaaactg taatggcatt tggggtgtcg atccaaaaga tggagttcca tatgagaaga 1140 aattctgtga aggttcacag cccaggggaa tcattttgct gggagactca gctggggctc 1200 attttcacat ctctcctgaa tggatcacag cgtcgcagat gtctttgaac tctttcatca 1260 atctaccaac agcccttacc aacgagcttg actggcccca actctctggt gctacaggat 1320 ttctggactc cactgttgga attaaagaaa aatctattta ccttcgctta tggaaaagaa 1380 accactgtaa tcacagggac taccagaata tttcaagaaa tggtgcatct 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caatgaagag 2280 catatctgga cgactgtgca atgctgtgtg ctcccgggat cagtaaccct tccgctgttc 2340 ctgaaataac ctttcataaa gtgctttggg tgccattcca aacaagagag tatctgtgcc 2400 ctttacagct aattgttcta aaaggagttt ctaaaaacac 2440 <210> 7 <211> 498 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> SIGNAL <222> (1)..(15) <400> 7 Met Thr Val Phe Leu Ser Phe Ala Phe Leu Ala Ala Ile Leu Thr His 1 5 10 15 Ile Gly Cys Ser Asn Gln Arg Arg Ser Pro Glu Asn Ser Gly Arg Arg 20 25 30 Tyr Asn Arg Ile Gln His Gly Gln Cys Ala Tyr Thr Phe Ile Leu Pro 35 40 45 Glu His Asp Gly Asn Cys Arg Glu Ser Thr Thr Asp Gln Tyr Asn Thr 50 55 60 Asn Ala Leu Gln Arg Asp Ala Pro His Val Glu Pro Asp Phe Ser Ser 65 70 75 80 Gln Lys Leu Gln His Leu Glu His Val Met Glu Asn Tyr Thr Gln Trp 85 90 95 Leu Gln Lys Leu Glu Asn Tyr Ile Val Glu Asn Met Lys Ser Glu Met 100 105 110 Ala Gln Ile Gln Gln Asn Ala Val Gln Asn His Thr Ala Thr Met Leu 115 120 125 Glu Ile Gly Thr Ser Leu Leu Ser Gln Thr Ala Glu Gln Thr Arg Lys 130 135 140 Leu Thr Asp Val Glu Thr Gln Val Leu Asn Gln Thr Ser Arg Leu Glu 145 150 155 160 Ile Gln Leu Leu Glu Asn Ser Leu Ser Thr Tyr Lys Leu Glu Lys Gln 165 170 175 Leu Leu Gln Gln Thr Asn Glu Ile Leu Lys Ile His Glu Lys Asn Ser 180 185 190 Leu Leu Glu His Lys Ile Leu Glu Met Glu Gly Lys His Lys Glu Glu 195 200 205 Leu Asp Thr Leu Lys Glu Glu Lys Glu Asn Leu Gln Gly Leu Val Thr 210 215 220 Arg Gln Thr Tyr Ile Ile Gln Glu Leu Glu Lys Gln Leu Asn Arg Ala 225 230 235 240 Thr Thr Asn Asn Ser Val Leu Gln Lys Gln Gln Leu Glu Leu Met Asp 245 250 255 Thr Val His Asn Leu Val Asn Leu Cys Thr Lys Glu Gly Val Leu Leu 260 265 270 Lys Gly Gly Lys Arg Glu Glu Glu Lys Pro Phe Arg Asp Cys Ala Asp 275 280 285 Val Tyr Gln Ala Gly Phe Asn Lys Ser Gly Ile Tyr Thr Ile Tyr Ile 290 295 300 Asn Asn Met Pro Glu Pro Lys Lys Val Phe Cys Asn Met Asp Val Asn 305 310 315 320 Gly Gly Gly Trp Thr Val Ile Gln His Arg Glu Asp Gly Ser Leu Asp 325 330 335 Phe Gln Arg Gly Trp Lys Glu Tyr Lys Met Gly Phe Gly Asn Pro Ser 340 345 350 Gly Glu Tyr Trp Leu Gly Asn Glu Phe Ile Phe Ala Ile Thr Ser Gln 355 360 365 Arg Gln Tyr Met Leu Arg Ile Glu Leu Met Asp Trp Glu Gly Asn Arg 370 375 380 Ala Tyr Ser Gln Tyr Asp Arg Phe His Ile Gly Asn Glu Lys Gln Asn 385 390 395 400 Tyr Arg Leu Tyr Leu Lys Gly His Thr Gly Thr Ala Gly Lys Gln Ser 405 410 415 Ser Leu Ile Leu His Gly Ala Asp Phe Ser Thr Lys Asp Ala Asp Asn 420 425 430 Asp Asn Cys Met Cys Lys Cys Ala Leu Met Leu Thr Gly Gly Trp Trp 435 440 445 Phe Asp Ala Cys Gly Pro Ser Asn Leu Asn Gly Met Phe Tyr Thr Ala 450 455 460 Gly Gln Asn His Gly Lys Leu Asn Gly Ile Lys Trp His Tyr Phe Lys 465 470 475 480 Gly Pro Ser Tyr Ser Leu Arg Ser Thr Thr Met Met Ile Arg Pro Leu 485 490 495 Asp Phe <210> 8 <211> 4367 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 8 gccctaagcc atcagcaatc cttagtatag gggcacactc atgcattcct gtcaagtcat 60 cttgtgaaag gctgcctgct tccagcttgg cttggatgtg caaccttaat aaaactcact 120 gaggtctggg agaaaatagc agatctgcag cagatagggt agaggaaagg gtctagaata 180 tgtacacgca gctgactcag gcaggctcca tgctgaacgg tcacacagag aggaaacaat 240 aaatctcagc tactatgcaa taaatatctc aagttttaac gaagaaaaac atcattgcag 300 tgaaataaaa aattttaaaa ttttagaaca aagctaacaa atggctagtt ttctatgatt 360 cttcttcaaa cgctttcttt gagggggaaa gagtcaaaca aacaagcagt tttacctgaa 420 ataaagaact agttttagag gtcagaagaa aggagcaagt tttgcgagag gcacggaagg 480 agtgtgctgg cagtacaatg acagttttcc tttcctttgc tttcctcgct gccattctga 540 ctcacatagg gtgcagcaat cagcgccgaa gtccagaaaa cagtgggaga agatataacc 600 ggattcaaca tgggcaatgt gcctacactt tcattcttcc agaacacgat ggcaactgtc 660 gtgagagtac gacagaccag tacaacacaa acgctctgca gagagatgct ccacacgtgg 720 aaccggattt ctcttcccag aaacttcaac atctggaaca tgtgatggaa aattatactc 780 agtggctgca aaaacttgag aattacattg tggaaaacat gaagtcggag atggcccaga 840 tacagcagaa tgcagttcag aaccacacgg ctaccatgct ggagatagga accagcctcc 900 tctctcagac tgcagagcag accagaaagc tgacagatgt tgagacccag gtactaaatc 960 aaacttctcg acttgagata cagctgctgg agaattcatt atccacctac aagctagaga 1020 agcaacttct tcaacagaca aatgaaatct tgaagatcca tgaaaaaaac agtttattag 1080 aacataaaat cttagaaatg gaaggaaaac acaaggaaga gttggacacc ttaaaggaag 1140 agaaagagaa ccttcaaggc ttggttactc gtcaaacata tataatccag gagctggaaa 1200 agcaattaaa cagagctacc accaacaaca gtgtccttca gaagcagcaa ctggagctga 1260 tggacacagt ccacaacctt gtcaatcttt gcactaaaga aggtgtttta ctaaagggag 1320 gaaaaagaga ggaagagaaa ccatttagag actgtgcaga tgtatatcaa gctggtttta 1380 ataaaagtgg aatctacact atttatatta ataatatgcc agaacccaaa aaggtgtttt 1440 gcaatatgga tgtcaatggg ggaggttgga ctgtaataca acatcgtgaa gatggaagtc 1500 tagatttcca aagaggctgg aaggaatata aaatgggttt tggaaatccc tccggtgaat 1560 attggctggg gaatgagttt atttttgcca ttaccagtca gaggcagtac atgctaagaa 1620 ttgagttaat ggactgggaa gggaaccgag cctattcaca gtatgacaga ttccacatag 1680 gaaatgaaaa gcaaaactat aggttgtatt taaaaggtca cactgggaca gcaggaaaac 1740 agagcagcct gatcttacac ggtgctgatt tcagcactaa agatgctgat aatgacaact 1800 gtatgtgcaa atgtgccctc atgttaacag gaggatggtg gtttgatgct tgtggcccct 1860 ccaatctaaa tggaatgttc tatactgcgg gacaaaacca tggaaaactg aatgggataa 1920 agtggcacta cttcaaaggg cccagttact ccttacgttc cacaactatg atgattcgac 1980 ctttagattt ttgaaagcgc aatgtcagaa gcgattatga aagcaacaaa gaaatccgga 2040 gaagctgcca ggtgagaaac tgtttgaaaa cttcagaagc aaacaatatt gtctcccttc 2100 cagcaataag tggtagttat gtgaagtcac caaggttctt gaccgtgaat ctggagccgt 2160 ttgagttcac aagagtctct acttggggtg acagtgctca cgtggctcga ctatagaaaa 2220 ctccactgac tgtcgggctt taaaaaggga agaaactgct gagcttgctg tgcttcaaac 2280 tactactgga ccttattttg gaactatggt agccagatga taaatatggt taatttcatg 2340 taaaacagaa aaaaagagtg aaaaagagaa tatacatgaa gaatagaaac aagcctgcca 2400 taatcctttg gaaaagatgt attataccag tgaaaaggtg ttatatctat gcaaacctac 2460 taacaaatta tactgttgca caattttgat aaaaatttag aacagcattg tcctctgagt 2520 tggttaaatg ttaatggatt tcagaagcct aattccagta tcatacttac tagttgattt 2580 ctgcttaccc atcttcaaat gaaaattcca tttttgtaag ccataatgaa ctgtagtaca 2640 tggacaataa gtgtgtggta gaaacaaact ccattactct gatttttgat acagttttca 2700 gaaaaagaaa tgaacataat caagtaagga tgtatgtggt gaaaacttac cacccccata 2760 ctatggtttt catttactct aaaaactgat tgaatgatat ataaatatat ttatagcctg 2820 agtaaagtta aaagaatgta aaatatatca tcaagttctt aaaataatat acatgcattt 2880 aatatttcct ttgatattat acaggaaagc aatattttgg agtatgttaa gttgaagtaa 2940 aagcaagtac tctggagcag ttcattttac agtatctact tgcatgtgta tacatacatg 3000 taacttcatt attttaaaaa tatttttaga actccaatac tcaccctgtt atgtcttgct 3060 aatttaaatt ttgctaatta actgaaacat gcttaccaga ttcacactgt tccagtgtct 3120 ataaaagaaa cactttgaag tctataaaaa ataaaataat tataaatatc attgtacata 3180 gcatgtttat atctgcaaaa aacctaatag ctaattaatc tggaatatgc aacattgtcc 3240 ttaattgatg caaataacac aaatgctcaa agaaatctac tatatccctt aatgaaatac 3300 atcattcttc atatatttct ccttcagtcc attcccttag gcaattttta atttttaaaa 3360 attattatca ggggagaaaa attggcaaaa ctattatatg taagggaaat atatacaaaa 3420 agaaaattaa tcatagtcac ctgactaaga aattctgact gctagttgcc ataaataact 3480 caatggaaat attcctatgg gataatgtat tttaagtgaa tttttggggt gcttgaagtt 3540 actgcattat tttatcaaga agtcttctct gcctgtaagt gtccaaggtt atgacagtaa 3600 acagttttta 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Claims (42)

1. 아실옥시아실 가수분해효소(acyloxyacyl hydrolase: AOAH) 폴리펩타이드를 과발현하도록 유전자 변형된 중간엽 줄기 세포(mesenchymal stem cell: MSC).
2. 제1항에 있어서, 상기 MSC는 재조합 AOAH 폴리펩타이드를 발현하는, MSC.
3. 제2항에 있어서, 상기 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
4. 제3항에 있어서, 상기 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
5. 제4항에 있어서, 상기 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 35 내지 575의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
6. 제5항에 있어서, 상기 재조합 AOAH 폴리펩타이드는 서열번호 5의 잔기 24 내지 575의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
7. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 프로모터 또는 프로모터/인핸서 조합에 작동 가능하게 연결된 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역을 포함하는 제1 외인성 핵산을 포함하는, MSC.
8. 제7항에 있어서, 상기 프로모터는 거대세포바이러스(CMV) 또는 연장 인자(elongation factor)-1(EF1) 프로모터인, MSC.
9. 제7항에 있어서, 상기 프로모터/인핸서 조합은 CMV 프로모터/인핸서 조합인, MSC.
10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734와 적어도 70% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
11. 제10항에 있어서, 상기 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734와 적어도 90% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
12. 제11항에 있어서, 상기 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 1의 뉴클레오타이드 7 내지 1734의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 안지오포에이틴-1(ANGPT1) 폴리펩타이드를 과발현하도록 유전자 변형된, MSC.
14. 제13항에 있어서, 상기 MSC는 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드를 발현하는, MSC.
15. 제14항에 있어서, 상기 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열과 적어도 70% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
16. 제15항에 있어서, 상기 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
17. 제16항에 있어서, 상기 재조합 ANGPT1 폴리펩타이드는 서열번호 7의 잔기 16 내지 498의 아미노산 서열을 포함하는, MSC.
18. 제13항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 제2 프로모터 또는 프로모터/인핸서 조합에 작동 가능하게 연결된 ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역을 포함하는 제2 외인성 핵산을 포함하는, MSC.
19. 제18항에 있어서, 상기 제2 프로모터는 CMV 또는 EF1 프로모터인, MSC.
20. 제18항에 있어서, 상기 제2 프로모터/인핸서 조합은 CMV 프로모터/인핸서 조합인, MSC.
21. 제18항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503과 적어도 70% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
22. 제21항에 있어서, 상기 ANGPT1 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503과 적어도 90% 동일성을 갖는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
23. 제22항에 있어서, 상기 AOAH 폴리펩타이드-암호화 영역은 서열번호 3의 뉴클레오타이드 7 내지 1503의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, MSC.
24. 제7항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제1 및/또는 제2 외인성 핵산(들)이 벡터 또는 플라스미드에 포함되어 있는, MSC.
25. 제24항에 있어서, 상기 제1 및 제2 외인성 핵산은 동일한 벡터 또는 플라스미드에 포함되어 있는, MSC.
26. 약제로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 MSC.
27. 제26항에 있어서, 상기 약제는 대상체의 전신 염증 반응 증후군(systemic inflammatory response syndrome: SIRS)의 예방 또는 치료를 위한 것인, MSC.
28. 제27항에 있어서, 상기 SIRS는 패혈증에 의해 유발되는, MSC.
29. 제27항 또는 제28항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, MSC.
30. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 대상체에 대해 동종이계인, MSC.
31. 제27항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 대상체에 대해 자가유래인, MSC.
32. 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하는 방법으로서, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 MSC의 유효량을 예방 또는 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
33. 제32항에 있어서, 상기 SIRS는 패혈증에 의해 유발된, 방법.
34. 제32항 또는 제33항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
35. 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 상기 대상체에 대해 동종이계인, 방법.
36. 제32항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 상기 대상체에 대해 자가유래인, 방법.
37. 대상체의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위한, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 MSC의 용도.
38. 대상체의 전신 염증 반응 증후군(SIRS)을 예방 또는 치료하기 위한 약제의 제조에 사용하기 위한, 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항의 MSC의 용도.
39. 제37항 또는 제38항에 있어서, 상기 SIRS는 패혈증에 의해 유발된, 용도.
40. 제37항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 용도.
41. 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 대상체에 대해 동종이계인, 용도.
42. 제37항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MSC는 상기 대상체에 대해 자가유래인, 용도.

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