KR20210055740A - 혈액암의 치료를 위한 종양용해성 바이러스 플랫폼 - Google Patents

혈액암의 치료를 위한 종양용해성 바이러스 플랫폼 Download PDF

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KR20210055740A
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그랜트 맥파덴
도밍게즈 리노 토레스
낸시 빌라
모하메드 마스무두르 라흐만
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아리조나 보드 오브 리젠츠 온 비하프 오브 아리조나 스테이트 유니버시티
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Abstract

본 개시는 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 발현하는 믹소마 바이러스 및 대상체에서 혈액암의 억제 및/또는 치료에서 이의 용도를 제공한다. 본 개시는 또한 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 발현하는 믹소마 바이러스를 갖는 백혈구 및 대상체에서 혈액암의 억제 및/또는 치료를 위한 백혈구의 용도를 제공한다.

Description

혈액암의 치료를 위한 종양용해성 바이러스 플랫폼
교차 참조
본 출원은 참조로 본 명세서에 편입되는, 2018년 9월 5일 출원된 미국 가출원 제62/727,307호의 이득을 청구한다.
기술 분야
본 개시는 암의 치료, 예를 들어, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT, 및/또는 디코린을 발현하는 믹소마 바이러스를 사용한 혈액암의 치료를 위한 믹소마 바이러스 및 그들이 용도에 관한 것이다.
다양한 유형의 암을 치료하는데 사용되는 현재 치료들은 암성 세포를 중독시키거나 또는 사멸시켜 작용하는 경향이 있다. 불행하게도, 암 세포에 유독한 치료는 전형적으로 건강한 세포에도 역시 유독한 경향이 있다. 게다가 암 치료를 위한 유효한 치료는 여전히 포착이 어려운 채로 남아 있다. 현재의 주류 요법 예컨대 화학요법 및 방사선요법은 협소한 치료창 (예를 들어, 효능을 달성하기에는 충분히 높지만 독성을 피하기에는 충분히 낮은 농도)을 가질 수 있다. 이들 유형의 요법은 이들 치료가 투여될 수 있는 제한된 창 및 다양한 유형의 종양 세포로 인해 제한된 적용가능성을 갖는 둔감한 도구로 간주된다.
요약
일부 측면에서, 본 명세서는 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스 (MYMX)를 개시하고, 여기서 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE (이중-특이적 자연 살해자 및 호중구 인게이저)(Bi-specific Natural Killer and Neutrophil engager), LIGHT (림포톡신-유사, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구에 의해 발현되는 수용체, 헤르페스바이러스 진입 매개인자 (MVEM)에 대해 HSV 당단백질 E와 경쟁함)(Lymphotoxins-like, exhibits Inducible expression, and competes with HSV Glycoprotein D for Herpesvirus entry mediator (HVEM), a receptor expressed by T lymphocytes), 디코린, 또는 이의 조합을 코딩한다.
일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 골수종 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 백혈병 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD16에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD138에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 리포터 유전자를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 형광 단백질이다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소이다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 게놈 내 결실을 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함한다. 일부 실시형태에서 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물의 일부이다.
본 명세서는 일부 측면에서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스를 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 치료하는 방법을 개시한다.
일부 실시형태에서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE, LIGHT, 디코린, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 골수종 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 백혈병 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD16에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD138에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 리포터 유전자를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 형광 단백질이다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소이다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 게놈 내 결실을 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포를 감염시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 암 세포를 감염시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 혈액암은 골수종, 백혈병, 또는 림프종이다. 일부 실시형태에서, 혈액암은 다발성 골수종이다.
본 명세서는 일부 측면에서, 대상체에 백혈구를 투여하는 단계로서, 백혈구는 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스를 포함하는 것인 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 치료하는 방법을 개시한다.
일부 실시형태에서, 방법은 백혈구의 표면 상에 생체외에서 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구의 표면에 믹소마 바이러스의 결합을 허용하는 조건 하에서 믹소마 바이러스에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 적어도 5분 동안 백혈구에 노출된다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 약 1시간 동안 백혈구에 노출된다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 약 0.001 내지 1000의 감염 다중도로 백혈구에 노출된다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 약 0.1 내지 10의 감염 다중도 (MOI)로 백혈구에 노출된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 말초 혈액으로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 골수로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 말초 혈액 단핵 세포이다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 대상체로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 대상체에 대해 HLA-일치, HLA-불일치, 반수체 일치, 또는 이의 조합인 공여자로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE, LIGHT, 디코린, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 골수종 세포, 백혈병 세포, 또는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD16에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 CD138에 결합한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 리포터 유전자를 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 형광 단백질이다. 일부 실시형태에서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소이다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 게놈 내 결실을 더 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함한다. 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함한다. 일부 실시형태에서, 대상체는 인간 대상체이다. 일부 실시형태에서, 대상체는 암을 갖거나 또는 암을 가질 것으로 의심된다. 일부 실시형태에서 믹소마 바이러스는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포를 감염시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 혈액암은 골수종, 백혈병, 또는 림프종이다. 일부 실시형태에서, 혈액암은 다발성 골수종이다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 약학 조성물로 투여된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 전신으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 비경구로 투여된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 주입으로 투여된다.
본 개시의 일정 실시형태의 새로운 특징은 첨부된 청구항에서 특별히 기재한다. 본 개시의 특성 및 장점의 더 나은 이해는 본 발명의 원리를 이용하는 예시적인 실시형태를 기재하는 하기 상세한 설명, 및 첨부된 도면을 참조하여 얻어질 것이다.
도 1A-1G는 MYXV-m디코린-GFP의 구조를 도시한다. 도 1A는 MYXV 게놈 및 디코린 및 eGFP를 발현하는 카세트의 삽입 부위의 개략도이다. 양쪽 이식유전자는 폭스 바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (sE/L) 하에서 발현된다. 도 1B는 디코린의 존재 (패널 1-5), 및 도 1C, 적절한 삽입 (유전자간 영역 M135-M1356)을 확인하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 MYXV-m디코린-GFP 클론으로부터 게놈 바이러스 DNA의 PCR 분석을 도시한다. 레인 1은 MYXV-Lau 유래 DNA이고, 레인 2-6: MYXV-m디코린-GFP 클론이고, M은 기지 크기의 DNA 래더를 나타낸다. 도 1D는 감염 후 24시간에 MYXV-m디코린-GFP 감염된 RK13 세포의 세포 용해물, 및 도 1E, 상등액의 웨스턴 블롯 분석을 도시한다. 도 1F는 디코린 또는 GFP를 코딩하는 MYXV로 감염된 RK13 세포로부터의 조건화 배지와 인큐베이션 후 MLE/PAI/LUC 세포에서 루시퍼라제 활성을 도시한다. 도 1G는 재조합 MYXV-디코린 대 MYXV-GFP의 단일 단계 성장 분석을 도시한다.
도 2A-2F는 MYXV-BiKE의 구성을 도시한다. 도 2A는 인간 CD138 표적화 BiKE의 구조의 개략도를 도시한다. 도 2B는 BiKE 및 eGFP를 발현하는 카세트의 삽입 부위의 개략도이고, 이식유전자 둘 모두는 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (sE/L) 하에 발현된다. 도 2C는 BiKE 카세트의 존재 (패널 1-4), 도 2D, 적절한 삽입 (유전자간 영역 M135-M1356)을 확인하기 위한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용한 MYXV-BiKE 클론으로부터의 게놈 바이러스 DNA의 PCR 분석을 도시한다. 레인 1은 MYXV-Lau로부터의 DNA이고, 레인 2-4: MYXV-BiKE 클론이며, M은 기지 크기 DNA 래더를 나타낸다. 도 2E는 감염 후 24시간에 MYXV-디코린 감염된 RK13 세포로부터의 세포 용해물 및 상등액의 웨스턴 블롯 분석을 도시한다. 도 2F는 재조합 MYXV-BIKE 대 MYXV-GFP의 단일-단계 성장 분석을 도시한다.
도 3은 인간 및 쥐과 LIGHT 발현 야생형 (wt) 믹소마 바이러스의 생성을 도시하는 플라스미드 맵이다. 이 바이러스는 야생형 MYXV 골격을 갖는데, 바이러스 M135R 및 M136R 유전자 사이의 유전자간 유전자좌에 삽입되기 때문이고, 따라서 M135R 또는 M136R의 유전자 녹다운 또는 파괴가 존재하지 않는다는 것을 유의한다.
도 4는 인간 및 쥐과 LIGHT 발현 M135KO 믹소마 바이러스의 생성을 도시하는 플라스미드 맵이다. 이 바이러스는 바이러스 M135R 유전자의 녹아웃을 갖는다는 것을 유의한다.
도 5A는 재조합 플라스미드로부터 폭스 바이러스 sE/L 프로모터 하의 인간 및 쥐과 LIGHT의 발현의 웨스턴 블롯 분석을 도시한다.
도 5B는 재조합 MYXV로부터 인간 및 쥐과 LIGHT의 발현의 웨스턴 블롯 분석을 도시한다.
도 6A-6C는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato가 MM으로 오염된 환자 #3으로부터의 1차 인간 모의-처리군 샘플에서 증식적으로 감염시키고 직접 다발성 골수종 (MM) 세포 사멸을 유도한다는 것을 도시한다. 도 6A는 MM 세포 (CD138+) 및 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플의 감염 (TdTomato+), 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+) 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 도 6B는 3종의 상이한 MOI에서 CD138+ 의 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato 감염 (TdTomato+)을 도시한다. 도 6C는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato에 의해 유도된 CD138+ 세포의 아폽토시스 및 세포 사멸을 도시한다.
도 7A 및 7B는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato에 노출된 다발성 골수종 (MM) 세포로 오염된 환자 #3 유래 1차 인간 모의-처리군 샘플로부터의 미감염 MM 세포 (즉, TdTomato-)의 사멸을 도시한다. 도 7A는 24시간 이후에 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플에서 미감염 MM 세포 (즉, CD138+TdTomato-)의 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+) 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 화살표는 TdTomato- 세포에 대한 게이팅을 표시한다. 도 7B는 바이러스 처리 후 24시간에 CD138+TdTomato- 세포에서 아폽토시스 및 세포 사멸의 백분율을 도시한다.
도 8A-8C는 MYXV-huBiKE-GFP가 다발성 골수종 (MM) 세포로 오염된 환자 #3 유래 1차 인간 모의-처리군 샘플을 증식적으로 감염시키고 사멸을 유도한다는 것을 도시한다. 도 8A는 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플의 MM 세포 (CD138+)의 감염 (GFP+), 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+) 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 도 8B는 3종의 상이한 MOI에서 CD138+ 의 MYXV-huBiKE-GFP 감염을 도시한다. 도 8C는 MYXV-huBiKE-GFP에 의해 유도된 CD138+ 세포에서 아폽토시스 및 세포 사멸을 도시한다.
도 9A 및 9B는 MYXV-huBiKE-GFP의 처리 후 환자 #3 유래 1차 인간 샘플로부터의 미감염 다발성 골수종 (MM) 세포 (즉, GFP-)의 사멸을 도시한다. 도 9A는 24시간 후, 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플에서 미감염 MM 세포 (즉, CD138+GFP-)의 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+) 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 화살표는 GFP- 세포에 대한 게이팅을 표시한다. 도 9B는 감염 후 24시간에 CD138+GFP- 인 미감염 MM 세포의 아폽토시스 및 세포 사멸의 백분율을 도시한다.
도 10A-10D는 MYXV-huBiKE-GFP가 환자 #4 유래 1차 인간 샘플로부터의 다발성 골수종 (MM) 세포를 증식적으로 감염시키고 사멸을 유도한다는 것을 도시한다. 도 10A는 모의-처리의 24시간 후에 MM 세포 (CD138+)의 생존능 (근 IR-), 감염 (GFP+), 아폽토시스 (아넥신 V+), 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 도 10B는 3종의 상이한 MOI에서 CD138+ 의 MYXV-huBiKE-GFP 감염을 도시한다. 도 10C는 MYXV-huBiKE-GFP에 의해 유도된 CD138+ 세포에서 아폽토시스 및 세포 사멸을 도시한다. 도 10D는 감염 후 24시간에 형광 현미경 사진을 도시한다.
도 11A 및 11B은 MYXV-huBiKE-GFP의 처리 후 환자 #4 유래 1차 인간 샘플로부터의 미감염 다발성 골수종 (MM) 세포 (즉, GFP-)의 사멸을 도시한다. 도 11A는 24시간 후 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플에서 미감염 MM 세포 (즉, CD138+GFP-)의 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+), 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 화살표는 GFP- (미감염)에 대한 게이팅을 표시한다. 도 11B는 바이러스의 처리 후 24시간에 미감염 CD138+GFP- 세포에서 아폽토시스 및 세포 사멸의 백분율을 도시한다.
도 12A-12D는 MYXV-m디코린-GFP가 환자 #4 유래 1차 인간 샘플에서 다발성 골수종 (MM) 세포를 증식적으로 감염시키고 사멸을 유도한다는 것을 도시한다. 도 12A는 모의 처리 (즉, MYXV 미첨가)의 24시간 후에 MM 세포 (CD138+)의 감염 (GFP+), 아폽토시스 (아넥신 V+), 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 도 12B는 3종의 상이한 MOI에서 CD138+ 의 MYXV-m디코린-GFP 감염을 도시한다. 도 12C는 MYXV-m디코린-GFP에 의해 유도된 CD138+ 세포에서 생존능, 아폽토시스 및 세포 사멸을 도시한다. 도 12D는 감염후 24시간 이후 형광 현미경 사진을 도시한다.
도 13A 및 13B는 MYXV-m디코린-GFP로 처리 후 환자 #4 유래 1차 인간 샘플로부터의 미감염 다발성 골수종 (MM) 세포 (즉, GFP-)의 사멸을 도시한다. 도 13A는 24시간에, 모의-처리군 (즉, MYXV 미첨가) 샘플에서 미감염 MM 세포 (즉, CD138+GFP-)의 생존능 (근 IR-), 아폽토시스 (아넥신 V+) 및 세포 사멸 (근 IR+)을 도시한다. 도 13B는 감염 후 24시간 후에 미감염 CD138+GFP- 세포에서 아폽토시스 및 세포 사멸의 백분율을 도시한다.
도 14A-14C는 BOR-내성 VK12598 세포주가 MYXV에 감수성임을 도시한다. 도 14A는 VK12598 세포주와 MYXV의 결합 (비너스+)을 도시한다. 도 14B는 형광 현미경을 통한 VK12598 세포주의 증식성 감염을 도시한다. 도 14C는 유세포측정을 통한 VK12598 세포주의 증식성 감염을 도시한다.
도 15A 및 15B는 다제 내성 VK12653 세포주의 MYXV 결합 및 감염을 도시한다. 도 15A는 VK12653 세포주에 MYXV의 결합 (비너스+)을 도시한다. 도 15B는 형광 현미경 및 유세포측정을 통한 VK12598 세포주의 증식성 감염을 도시한다.
도 16A-16C는 자가-이식 수령체에서 기존에 존재하는 다발성 골수종 암을 치료하기 위한 믹소마 바이러스를 사용한 생체외 요법을 도시한다. 도 16A는 VK12598 세포로 이식 후 4주에 마우스의 M-스파이크를 제공하는 웨스턴 블롯 (위 패널) 및 4개 실험 코호트 (아래 패널)를 도시한다. MM 세포 이식 후 4주에 M-스파이크의 수준. 도 16B는 저 M-스파이크 (0.1)의 대표적인 마우스 모의-처리 마우스에서 MM 세포 (CD138+B220-)의 백분율 및 고 M-스파이크 (0.6)의 대표적인 골수-수령 마우스에서 MM (CD138+B220-)의 백분율을 도시한다. 도 16C는 MYXV-M135KO-GFP로 생체외 처리된 골수가 처리된 마우스의 M-스파이크를 도시하고, 이식 후 8일, 29일, 및 37일에 M-스파이크 밴드는 검출되지 않았다.
본 개시의 측면은 면역조절성 이식유전자를 발현하는 종양용해성 바이러스 재조합 구성체, 및 암 예컨대 혈액암을 치료하기 위한 그들의 용도에 관한 것이다. 종양용해성 바이러스는 믹소마 바이러스 (MYXV)일 수 있고, 구성체에 사용되는 면역조절성 이식유전자는 디코린 이식유전자, BiKE (Bi-specific Natural Killer and Neutrophil engager) 이식유전자, LIGHT (Lymphotoxins-like, exhibits Inducible expression, and competes with HSV Glycoprotein D for Herpesvirus entry mediator (HVEM), a receptor expressed by T lymphocytes) 이식유전자, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다. 본 명세서에 기술된 MYXV는 최소 잔존 질환 (MRD) 및 약제-내성 MRD를 포함하여, 혈액암을 치료하는데 사용될 수 있다.
본 명세서에 기술된 MYXV는 혈액암 예컨대 재발성 다발성 골수종 질환을 치료하고, 불응성 및 약제-내성 MRD를 완전히 제거하는데 보다 유효한 요법일 수 있다. 다발성 골수종 (MM)을 예로 들면, MM은 용해성 뼈 병변, 빈혈, 신부전, 또는 고칼슘혈증을 포함하여, 종말 기관 손상을 일으키는 악성 형질 세포의 클론 확장을 특징으로 하는 혈액학적 악성종이다 (Hari P. Recent advances in understanding multiple myeloma. Hematol Oncol Stem Cell Ther. 2017;In press). MM의 골수 (BM) 종양 환경은 악성 MM 세포의 분화, 이동, 증식, 생존, 및 약제 내성을 지지하고 지속시키는데서 핵심 역할을 한다 (Kawano Y, Moschetta M, Manier S, Glavey S, Goerguen GT, Roccaro AM, et al. Targeting the Bone marrow microenvironment in Multiple myeloma. Immunol Rev. 2015;263(1)). 화학요법과 함께, 이식 적격한 환자에 대한 자기유래 줄기 세포 이식이 MM의 표준 치료이다 (Landgren O, Lu SX, and Hultcrantz M. MRD Testing in Multiple Myeloma: The Main Future Driver for Modern Tailored Treatment. Semin Hematol. 2018;55(1):44-50; Hoyos V, and I. B. The immunotherapy era of myeloma: monoclonal antibodies, vaccines, and adoptive T-cell therapies. Blood. 2016;128(13):1679-87). 그러나, 이들 요법의 주요 장애물은 최소 잔존 질환 (MRD)을 일으키게 되는, 요법-내성 MM 세포의 저장소로서 제공될 수 있는 신생물성 클론으로 인한 질환의 재발이다.
결과의 개선에도 불구하고, MM은 여전히 대부분의 환자에게 치유불가로 여겨지며 고-위험 특성의 환자들에서 나쁜 생존률이 관찰된다 (Bustoros M, Mouhieddine TH, Detappe A, and IM. G. Established and Novel Prognostic Biomarkers in Multiple Myeloma. Am Soc Clin Oncol Educ Book. 2017;37:548-60). 종양용해성 바이러스 예컨대 MYXV는 형질전환된 암 세포를 선택적으로 감염시키고 사멸시키는 그들 능력, 및 숙주 면역계를 활성화시키는 그들 능력에 대해 디자인되고/되거나 선택될 수 있는 포유동물 바이러스이다. 본 명세서에 기술된 MYXV는 면역조절성 이식유전자를 이용하고 암 세포를 표적화하기 위해 숙주 면역계와 함께 작용할 수 있다. 그러므로, 본 명세서에 기술된 믹소마 바이러스는 불응성 및 약제-내성 최소 잔존 질환을 감소시키거나 또는 제거하는데 도움을 줄 수 있고 재발된 MM 질환을 치료하는데 더 유효할 수 있다.
정의
달리 언급하지 않으면, 기술 용어는 통상의 용법에 따라 사용된다. 분자 생물학의 공통 용어의 정의는 다음의 문헌들에서 확인할 수 있다: Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19-854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd., 1994 (ISBN 0-632-02182-9); 및 Robert A. Meyers (ed.), Molecular Biology and Biotechnology: a Comprehensive Desk Reference, published by VCR Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8).
달리 설명하지 않으면, 본 명세서에서 사용되는 모든 과학 및 기술 용어는 본 개시가 속하는 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본 명세서에 기술된 것과 유사하거나 또는 동등한 방법 및 재료가 본 개시의 실시 또는 시험에서 사용될 수 있으나, 적합한 방법 및 재료가 하기에 기술된다. 또한, 재료, 방법, 및 예는 단지 예시이며 제한하려는 의도가 아니다.
용어 및 방법의 하기 설명은 본 발명의 화합물, 조성물, 및 방법을 보다 잘 설명하고, 본 개시의 실시에서 당업자를 안내하고자 제공된다. 또한 본 개시에서 사용되는 전문용어는 단지 특정 실시형태 및 예를 설명하려는 목적이고 제한하려는 의도가 아니다.
본 명세서에서 사용되는 단수형 "하나", "한", 및 "그"는 명확하기 달리 문맥에서 의미하지 않으면, 복수형도 역시 포함하고자 한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "및/또는"은 연관된 열거 항목의 하나 이상의 임의의 모든 가능한 조합을 비롯하여, 대안으로 설명될 때 ("또는") 조합의 결여를 의미하고 포괄한다.
본 명세서에서 사용되는 "하나 이상의" 또는 적어도 하나는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 또는 그 이상, 임의 숫자 이하를 의미할 수 있다. 　
본 명세서에서 용어 "포함하다" 또는 "포함하는"은 "포괄하다"를 의미한다. 그러므로, "A 또는 B"를 포함하는"은 A, B, 또는 A 및 B를 포괄하는 것을 의미한다. "포함하다" 및 이 용어의 변형, 예컨대 본 명세서에서 사용되는 "포함하는", "포함한다", 및 "포함된"은 다양한 추가 성분 또는 단계가 공동으로 적용될 수 있다는 것을 의미한다.
"유효량" 또는 "치료적 유효량"은 치료적 및/또는 유익한 효과일 수 있는, 바람직한 효과를 일으키기에 충분한 본 발명의 화합물 또는 조성물의 양을 의미한다. 이러한 예에서, 유효량은 대상체의 연령, 전신 상태, 치료되는 병태의 중증도, 투여되는 특정 작용제, 치료 지속기간, 임의의 동시 치료의 성질, 사용되는 약학적으로 허용되는 담체, 및 당업자의 지식 및 전문 지식 내의 유사 인자들에 따라 다양할 수 있다. 적절하게, 임의 개별 사례에서 유효량 또는 치료적 유효량은 관련 문서 및 문헌을 참조하고/하거나 실험을 통해 결정될 수 있다 (참조: 예를 들어 Remington, The Science and Practice of Pharmacy (최신판)).　
본 명세서에서 사용되는 용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용되는 인간 및 비인간 동물 둘 모두를 의미한다. 본 명세서에서 용어 "비인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유동물 및 비포유동물, 예컨대 인간이외의 영장류, 양, 개, 고양이, 말, 소, 설치류 (예를 들어, 마우스, 래트 등)를 포함한다. 대상체는 인간일 수 있다. 대상체는 인간 환자일 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 대상체는 인간 대상체이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "세포"는 단일 세포뿐만 아니라 다수 세포 또는 세포 개체군을 포함한다. 세포에 작용제의 투여 또는 노출은 시험관내, 생체외, 및 생체내 투여 또는 노출을 포함할 수 있다.
"이를 필요로 하는 대상체" 또는 "이를 필요로 하는 대상체"는 암, 예컨대 혈액암을 갖는 것으로 알려지거나, 또는 가질 것으로 의심되는 대상체이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "암은 악성 신성물, 예를 들어 분화 상실, 높은 성장률, 주변 조직의 침윤이 수반되는 특징적인 역형성을 겪고 전이할 수 있는 신생물을 의미한다.
잔존 암은 암을 감소 또는 근절시키기 위해 대상체에게 제공된 임의 형태의 치료 이후에 대상체에 잔존하는 암이다. 전이성 암은 체내 하나 이상의 부위, 예를 들어 전이성 암이 유래된 본래 (원발성) 암의 기원 부위 이외의, 제2 부위의 암이다. 국소 재발은 본래 암과 동일한 부위 (예컨대 동일 조직 내) 또는 그 근처 암의 재발이다. 혈액암은 혈액, 골수, 및/또는 림프계에 발병한 암이다.
혈액암의 비제한적인 예는 백혈병, 림프종 및 골수종, 예컨대 하기를 포함한다: 다발성 골수종 (MM); 활동성 다발성 골수종; 무증상 다발성 골수종; 형질 세포종; 뼈의 고립 형질세포종; 골수외 형질 세포종; 경쇄 골수종; 비분비성 골수종; 면역글로불린 G (IgG) 골수종; 면역글로불린 A (IgA) 골수종; 면역글로불린 M (IgM) 골수종; 면역글로불린 D (IgD) 골수종; 면역글로불린 E (IgE) 골수종; 과 이배체 다발성 골수종; 비-과이배체 다발성 골수종; 호지킨 림프종; 비호지킨 림프종; 급성 림프모구성 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 본태성 혈소판증가증; 적혈구 증가증; 원발성 골수섬유화증; 전신 비만세포증; 만성 골수성 백혈병; 만성 호중구성 백혈병; 만성 호산구성 백혈병; 고리형 철아구 수반 불응성 빈혈; 다계통 이형성증 동반 불응성 세포감소증; 1형 과도한 모세포 수반 불응성 빈혈; 2형 과도한 모세포 수반 불응성 빈혈; 고립성 del (5q) 수반 골수이형성 증후군 (MDS); MDS 미분류형; 만성 골수단핵구성 백혈병 (CML); 비정형 만성 골수성 백혈병; 청소년 골수 단핵구성 백혈병; 골수증식성/골수이형성성 증후군-미분류형; B 림프모세포성 백혈병/림프종; T 림프모세포성 백혈병/림프종; 미만성 거대 B 세포 림프종; 원발성 중추 신경계 림프종; 원발성 종격동 B 세포 림프종; 버킷 림프종/백혈병; 여포 성 림프종; 만성 림프구성 백혈병 (CLL)/소림프구성 림프종; B 세포 전림프구성 백혈병; 림프형질세포성 림프종/발덴스트롬 거대글로불린 혈증; 맨틀 세포 림프종; 변연부 림프종; 이식 후 림프증식성 장애; HIV-관련 림프종; 원발성 삼출 림프종; 혈관내 거대 B 세포 림프종; 원발성 피부 원발성 피부 B 세포 림프종; 모발 세포 백혈병; 의미불명 단일클론 감마병증; 역형성 거대세포 림프종; 혈관면역모세포 T 세포 림프종; 간비장 T 세포 림프종, B 세포 림프종, 망상내피증, 망상증, 점막 관련 림프 조직 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 림프종모양 육아종증, 결절성 림프구 우세 호지킨 림프종, 형질 세포 백혈병, 급성 적혈병 및 적혈구 백혈병, 급성 적혈구성 골수증, 급성 적혈구 백혈병, 하일마이어-슈너병, 급성 거핵모세포 백혈병, 비만 세포 백혈병, 범골수증, 골수섬유증 동반 급성 범골수성 백혈병, 림프육종 세포 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 불특정 세포 유형의 만성 백혈병증, 불특정 세포유형의 아급성 백혈병, 가속기 만성 골수성 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 급성 호염기성 백혈병, 급성 호산구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 성숙화 동반 급성 골수아구성 백혈병, 급성 골수성 수지상 세포 백혈병, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 공격성 NK 세포 백혈병, B 세포 만성 림프 구성 백혈병, B 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 특발성 골수섬유증, 케흘러병, 골수종증, 고립형 골수종, 형질 세포 백혈병, 혈관중심성 면역증식성 병변, 림프성 육아종증, 혈관면역아구성 림프절증, T-감마 림프증식성 질환, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 알파 중쇄 질환, 감마 중쇄 질환 및 프랭클린 병. 일부 실시형태에서, 혈액암은 다발성 골수종이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "화학요법제"는 비정상적인 세포 성장을 특징으로 하는 질환의 치료에서 치료적 유용성을 갖는 임의의 화학제를 의미한다. 이러한 질환은 종양, 신생물, 및 암을 비롯하여, 과형성 성장 예컨대 건선을 특징으로 하는 질환을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 화학요법제는 암을 치료하는데 유용한 작용제 예컨대 항-신생물제이다. 일부 실시형태에서, 화학요법제는 방사능 화합물이다. 당업자는 사용되는 화학요법제를 쉽게 확인할 수 있다 (참조: 예를 들어, Slapak and Kufe, Principles of Cancer Therapy, Chapter 86 in Harrison's Principles of Internal Medicine, 14th edition; Perry et al., Chemotherapy, Ch. 17 in Abeloff, Clinical Oncology 2nd ed., 2000 Churchill Livingstone, Inc; Baltzer and Berkery. (eds): Oncology Pocket Guide to Chemotherapy, 2nd ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1995; Fischer Knobf, and Durivage (eds): The Cancer Chemotherapy Handbook, 4th ed. St. Louis, Mosby-Year Book, 1993). 병용 화학요법은 암을 치료하기 위한 하나 초과의 작용제의 투여이다. 예를 들어, 면역조절성 이식유전자를 발현하는 믹소마 바이러스가 투여될 수 있고, 하나 이상의 화학요법제가 임의 순서로 시간을 분리하여, 또는 동시에 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 "치료하다", "치료", 또는 "치료하는"은 질환 또는 병태를 앓는 환자에게 약학 조성물을 투여하는 것을 의미한다. 본 명세서에서 사용되는 용어 암 같은, "질환을 억제하거나 또는 치료하는"은 질환 또는 병태의 발생 또는 진행을 지연시키거나 또는 억제하는 것을 의미한다. "치료"는 발생이 시작되고 나서 병적 상태 또는 질환의 징후 또는 증상을 경감시키는 치료적 중재를 의미한다. 질환 또는 병적 상태와 관련하여 용어 "경감시키는"은 치료의 임의의 관찰가능한 유익한 효과를 의미한다. 유익한 효과는 예를 들어, 감수성 대상체에서 질환의 임상적 증상의 개시 지연, 질환의 임상 증상의 일부 또는 전부의 중증도 감소, 질환, 예컨대 전이의 더 느린 진행, 대상체의 전체 건강 또는 웰빙의 개선, 또는 특정 질환에 특이적인 당분야에 충분히 공지된 다른 매개변수로 증명될 수 있다. "예방적" 치료는 병상, 예를 들어 전이성 암의 발생 위험성 감소 목적으로 오직 초기 징후만을 나타내거나 또는 질환의 징후를 나타내지 않는 대상체에게 투여되는 치료이다.
본 명세서에 개시된 치료 화합물과 함께 유용한 본 명세서에서 사용되는 "약학적으로 허용되는 담체"는 통상적일 수 있다. 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, by E. W. Martin, Mack Publishing Co., Easton, Pa., 19th Edition (1995)]은 치료제의 약학적 전달에 적합한 조성물 및 제제를 기술한다.
일반적으로, 담체의 성질은 적용되는 특정 투여 방식에 의존적일 것이다. 예를 들어, 비경구 제제는 일반적으로 약학적으로 그리고 생리적으로 허용되는 유체 예컨대 물, 생리 식염, 균형 염 용액, 수성 덱스트로서, 글리세롤 등을 비히클로서 포함하는 주사가능한 유체를 포함한다. 고형 조성물 (예를 들어, 분말, 알약, 정제, 또는 캡슐 형태)의 경우, 통상의 무독성 고형 담체는 예를 들어 약학 등급의 만니톨, 락토스, 전분, 또는 마그네슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 생물학적-중성 담체외에도, 투여하려는 약학 조성물은 소량의 무독성 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, 보존제, 및 pH 완충제 등, 예를 들어, 소듐 아세테이트 또는 솔비탄 모노라우레이트를 함유할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "약학" 및 "치료제"는 대상체 또는 세포에 적절히 투여될 때 바람직한 치료적 또는 예방적 효과를 유도할 수 있는 화학적 화합물 또는 조성물을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "복제-적격"은 특정 숙주 세포, 예컨대 인간 혈액 세포 (예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포)를 감염시켜서 그 안에서 복제할 수 있는 믹소마 바이러스 같은 바이러스를 의미한다.
용어 "면역조절성 이식유전자"는 바이러스 게놈으로 도입될 수 있고 예를 들어 면역계의 기능에 영향을 미칠 수 있는, 예를 들어 염증, 선천성 또는 후천성 면역 신호전달, 선천성 또는 후천성 면역 세포 활성화 (예를 들어, 표적 세포 사멸, 사이토카인, 케모카인, 또는 다른 염증성 매개인자의 생산), 선천성 또는 후천성 면역 세포 귀소 (예를 들어, 화학주성, 유출, 및/또는 부위에 축적), 또는 선천성 또는 후천성 면역 세포 증식, 선천성 또는 후천성 면역 세포 분화, 항체 생산, 또는 이의 조합에 영향을 미치는 산물을 코딩할 수 있는 유전자 서열을 의미한다. 면역조절성 이식유전자의 예는 제한없이 디코린, BiKE, 및 LIGHT를 포함한다.
믹소마 바이러스
믹소마 바이러스 (MYXV)는 다발성 골수종 (MM) 같은 혈액암에 대한 치료 바이러스로서 잠재적으로 충분히 적합한데, 이의 고유한 생물학때문이다. MYXV는 폭스바이러스과 및 레포리폭스 바이러스 속의 구성원이다 (Chan WM, Rahman MM, and McFadden G. Oncolytic myxoma virus: the path to clinic. Vaccine. 2013;31(39):4252-8, Chan WM, and McFadden G. Oncolytic poxviruses. Annu Rev Virol. 2014;1(1):119-41).
MYXV는 1차 및 확립 세포주 둘 모두로서, 다양한 인간 및 쥐과 암을 표적으로 할 수 있는 신규한 종양용해성 바이러스이다 (Stanford MM, and McFadden G. Myxoma virus and oncolytic virotherapy: a new biologic weapon in the war against cancer. Expert Opin Biol Ther. 2007;7(9):1415-11425; Wang G, Barrett JW, Stanford M, Werden SJ, Johnston JB, Gao X, et al. Infection of human cancer cells with myxoma virus requires Akt activation via interaction with a viral ankyrin-repeat host range factor. Proc Natl Acad Sci USA. 2006;103(12):4640-5; Bartee E, Chan WM, Moreb JS, Cogle CR, and McFadden G. Selective purging of human multiple myeloma cells from autologous stem cell transplantation grafts using oncolytic myxoma virus. Biol Blood Marrow Transplant. 2012;18(10):1540-51; Chan WM, Rahman MM, and McFadden G. Oncolytic myxoma virus: the path to clinic. Vaccine. 2013;31(39):4252-8; Kim M, Madlambayan GJ, Rahman MM, Smallwood SE, Meacham AM, Hosaka K, et al. Myxoma virus targets primary human leukemic stem and progenitor cells while sparing normal hematopoitic stem and progenitor cells. Leukemia. 2009;32:2313-7; Villa NY, Wasserfall CH, Meacham AM, Wise E, Chan W, Wingard JR, et al. Myxoma virus suppresses proliferation of activated T lymphocytes yet permits oncolytic virus transfer to cancer cells. Blood. 2015;125(24):3778-88).
자연적으로, MYXV는 오로지 토끼-특이적이고 인간, 마우스, 또는 임의 다른 가축 동물에서 감염 또는 질환을 초래하지 않는다. 그러나, 암발생과 연관된 암 경로 돌연변이의 성질 때문에, 마우스 및 인간으로부터의 암 세포는 MYXV를 포함하여, 일부 바이러스에 의한 감염에 저항하는 손상된 능력 (예를 들어, 손상된 선천성 면역 경로)을 나타낼 수 있다 (Chan WM, and McFadden G. Oncolytic Poxviruses. Annu Rev Virol. 2014;1(1):119-41, Sypula J, 'Wang F, Ma Y, Bell J, and McFadden G. Myxoma virus tropism in human tumors. Gene Ther and Mol Biol. 2004;8:103-14).
본 명세서는, 일부 실시형태에서, 변형된 믹소마 바이러스 (MYXV)를 제공한다. MYXV는 복제-적격한 폭스 바이러스의 레포리폭스 바이러스 종에 속하는 임의 바이러스일 수 있다. MYXV는 MYXV의 야생형 균주일 수 있거나, 또는 유전자 변형된 MYXV 균주일 수 있다. 일부 예에서, MYXV는 로잔 균주이다. 일부 예에서, MYXV는 실비라구스 브라실리엔시스 (Sylvilagus brasiliensis)에서 순환하는 남아메리카 MYXV 균주이다. 일부 예에서, MYXV는 실비라구스 바크마니 (Sylvilagus bachmani)에서 순환하는 캘리포니아 MYXV 균주이다. 일부 에에서, MYXV는 유전자 M009L, M036L, M135R, 및 M148R에 변형을 포함하는, 6918, 약독화 스페인 사육장 균주이다 (GenBank 수탁 번호 EU552530로서, 2019년 8월 27일자로 GenBank가 제공하여 참조로 본 명세서에 편입됨). 일부 예에서, MYXV는 6918VP60-T2이다 (GenBank 수탁 번호 EU552531로서, 2019년 8월 27일자로 GenBank가 제공하여 참조로 본 명세서에 편입됨). 일부 예에서, MYXV는 SG33로서, 유전자 M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M008.1R, M008R, M007R, M006R, M005R, M004.1R, M004R, M003.2R, M003.1R, M002R, 및 M001R에 영향을 미치는 게놈 결실을 포함하는 균주이다 (CNCM (Collection Nationale de Cultures de Microorganismes) 수탁 번호1-1594). 일부 예에서, MYXV는 표준 실험실 균주 (Standard laboratory Strain) (SLS)라고 하는 균주이다.
일부 예에서, MYXV는 [Cameron, et al., "The complete DNA sequence of Myxoma Virus," Virology 264: 298-318 (1999)]에 개시된 서열과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%, 예컨대 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%를 포함하여, 95% 내지 98%, 95% 내지 99%의 서열 동일성을 포함한다. 일부 경우에, MYXV는 [Cameron, et al., "The complete DNA sequence of Myxoma Virus," Virology 264: 298-318 (1999)]에 개시된 서열을 포함한다.
크고 유전적으로 안정한 폭스 바이러스 게놈은 하나 이상의 치료적 (예를 들어, 면역조절성) 이식유전자의 하나 이상의 결실 및/또는 도입으로 바이러스의 유전자 조작, 예를 들어, 생성을 가능하게 한다 (Nayerossadat N, Maedeh T, and Ali PA. Virus and nonvirus delivery systems for gene delivery. Adv Biomed Res. 2012;1:27).
본 명세서는 일부 실시형태에서, 믹소마 바이러스 (MYXV) 및 변형된 MYXV를 제공한다. MYXV는 복제-적격한 폭스 바이러스의 레포리폭스 바이러스 종에 속하는 임의 바이러스일 수 있다. MYXV는 MYXV의 야생형 균주일 수 있거나 또는 MYXV의 유전자 변형 균주일 수 있다.
믹소마 바이러스 게놈은 당업자에게 공지되고, 예를 들어, [Sambrook et al. ((2001) Molecular Cloning: a Laboratory Manual, 3rd　ed., Cold Spring Harbour Laboratory Press]에 기술된 분자 생물학 기술을 사용해 하나 이상의 치료적 이식유전자 (예를 들어, 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT, 및/또는 디코린)를 발현하도록 변형될 수 있다. 당업자는 바이러스가 예를 들어 복제 적격 바이러스를 제공하도록 여전히 증식성 감염을 할 수 있게, 믹소마 바이러스 게놈의 어떠한 부분을 결실시킬 수 있는지 결정할 수 있을 것이다. 예를 들어, 결실시킬 수 있는 바이러스 게놈의 불필수 영역은 다른 충분히 특징규명된 바이러스의 게놈과 공개된 바이러스 게놈 서열을 비교하여 추론할 수 있다 (참조: 예를 들어 C. Cameron, S. Hota-Mitchell, L. Chen, J. Barrett, J.-X. Cao, C. Macaulay, D. Willer, D. Evans, and G. McFadden,　Virology　(1999) 264: 298-318)).
일부 실시형태에서, 개시된 MYXV 재조합 구성체는 다발성 골수종 (MM) 같은 재발성/불응성 1차 인간 혈액학적 악성종을 치료하고 최소 잔존 질환 (MRD)을 표적화하여 감소시키거나 또는 제거시키기 위한 종양용해성 바이러스 후보이다. 일부 실시형태에서, MYXV는 하나 이상의 이식유전자를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 MYXV 게놈에 하나 이상의 유전자 변형, 결실, 및/또는 파괴를 포함한다. 예를 들어, 본 개시의 MYXV는 게놈 내 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함할 수 있다. 삽입, 결실 또는 변형은 유전자 녹아웃 (예를 들어, 유전자에 의해 코딩되는 산물의 기능성을 방지하는 하나 이상의 뉴클레오티드의 결실, 또는 유전자에 의해 코딩되는 산물의 발현 및/또는 기능을 파괴하는 하나 이상의 뉴클레오티드의 삽입)을 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 삽입, 결실, 또는 변형은 유전자 녹아웃을 포함하지 않는다 (예를 들어, 서열은 2개 유전자의 발현을 파괴하지 않고, 2개 유전자 사이의 유전자간 유전자좌에 삽입될 수 있음).
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 숙주 동물에서 질환을 야기하는 바이러스의 능력과 연관된 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 숙주 세포 향성(tropism)과 연관된 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 선천성 면역 반을을 회피하는 바이러스 능력과 연관된 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 감염된 세포에서 면역 신호전달 (예를 들어, 사이토카인 수용체 신호전달)을 조절하는 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 감염된 세포에서 세포 사멸 경로를 조절하는 하나 이상의 유전자 (예를 들어, 아폽토시스를 촉진 또는 억제하는 산물, 예컨대 M011L을 코딩하는 유전자) 내 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 암 세포에서 바이러스 복제를 조절 (예를 들어, 암 세포에서 바이러스 복제의 속도를 증가 또는 감소)시키는 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다.
일부 실시형태에서, 숙주 동물에서 질환을 야기하는 바이러스의 능력과 연관되거나, 숙주 세포 향성과 연관되거나, 선천성 면역 반응을 회피하는 바이러스의 능력과 연관되거나, 감염된 세포에서 면역 신호전달을 조절할 수 있거나, 감염된 세포에서 세포 사멸 경로를 조절할 수 있거나, 암 세포에서 바이러스 복제를 조절할 수 있거나, 또는 이의 조합인, 하나 이상의 유전자는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD 중 어느 하나 이상을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 MYXV 유전자의 변형을 포함한다. 일부 예에서, 변형은 MYXV 유전자에 의해 코딩되는 단백질의 기능을 손상시키는 결실이다. 일부 경우에, 변형은 MYXV 유전자의 부분 결실 (예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 결실)이다. 다른 경우에, 변형은 MYXV 유전자의 완전한 결실이다. 일부 실시형태에서, 변형은 본 개시의 하나 이상의 이식유전자 (예를 들어, BiKE, 디코린, 및/또는 LIGHT)로 MYXV 유전자의 치환이다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 숙주 세포 향성 (예를 들어, 토끼 세포 향성)과 연관된 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 토끼 세포 향성과 연관된 하나 이상의 유전자는 M11L, M063, M135R, M136R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 예에서, 토끼 세포 향성과 연관된 하나 이상의 유전자는 M135R, M136R, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 M135R 유전자의 변형을 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 M135R 유전자의 부분 결실 또는 완전 결실을 포함한다. M135R 유전자의 결실 또는 파괴는 예를 들어 항암 효과를 나타내는 (예를 들어, 암 세포를 감염 및 사멸시키는) MYXV의 능력을 손상시키지 않고, 숙주 동물에서 질환을 야기하는 본 개시의 MYXV의 능력을 약독화시킬 수 있다. 일부 예에서, 변형은 M135R 유전자에 의해 코딩되는 단백질의 기능을 손상시키는 결실이다. 일부 경우에, 변형은 M135R 유전자의 부분 결실 (예를 들어, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 95% 결실)이다. 다른 경우에, 변형은 M135R 유전자의 완전 결실이다. 일부 실시형태에서, MYXV는 M135R 유전자의 기능을 손상시키는 M135R 유전자의 변형 (예를 들어, M135R 유전자의 발현 및/또는 기능을 파괴하는 서열의 삽입)이다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 이식유전자는 MYXV 게놈 내 M135R 유전자를 치환시킨다 (예를 들어, 본 개시의 하나 이상의 이식유전자 (예를 들어, BiKE, 디코린, 및/또는 LIGHT)로 M135R 유전자를 파괴하거나 또는 치환시킨다). 일부 실시형태에서, 본 개시의 이식유전자는 MYXV 게놈 내에서 M135R 유전자 및 M136R 유전자 사이에 삽입된다.
이식유전자
본 명세서는 일부 실시형태에서, 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스 (MYXV) 재조합 구성체를 제공한다.
암 및 종양 미세환경 상황에서, 다양한 면역조절성 인자가 암 세포와 면역계 간 상호작용에 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 면역조절성 인자는 악성 세포와 직접적으로 상호작용할 수 있거나, 종양 미세환경으로 세포독성 림프구의 침윤에 양성적으로 또는 음성적으로 영향을 미칠 수 있거나, 암 세포에 대한 면역 반응을 매개하는 사이토카인 및 케모카인의 생산에 양성적으로 또는 음성적으로 영향을 미칠 수 있거나, 또는 이의 조합일 수 있다. 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 MYXV 게놈에 도입되어서, 예를 들어, 암을 보다 유효하게 치료하거나 또는 감소시키는 면역 반응을 촉진시킬 수 있다.
예를 들어, 일부 실시형태에서, 상이한 형태의 면역 조절 및/또는 세포 사멸을 조절하는 하나 이상의 MYXV 내생성 유전자가 제거된다. 일부 실시형태에서, 하나 이상의 치료적 면역조절성 이식유전자는 바이러스 게놈에 도입된다 (예를 들어, 면역원성을 증가시키고/시키거나 바람직한 형태의 암 세포 사멸을 유도하기 위함). 일부 실시형태에서, 하나 이상의 MYXV 내생성 유전자가 제거되고, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 바이러스 게놈에 도입된다.
일부 실시형태에서, 이식유전자는 면역조절성 이식유전자이다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 디코린 이식유전자, BiKE (Bi-specific Natural Killer and Neutrophil engager) 이식유전자, LIGHT (림포톡신에 해당하며, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구에 의해 발현되는 수용체, 헤르페스바이러스 진입 매개인자 (HVEM)에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함) 이식유전자, 또는 이의 조합을 포함한다.
본 개시의 MYXV는 디코린 이식유전자(MYXV-디코린)를 포함할 수 있다. 디코린은 MYXV 게놈으로 도입될 수 있는 면역조절성 이식유전자의 일례이다. 디코린은 종양-억제 속성을 나타낼 수 있는 소형, 류신-풍부 프로테오글리칸이다. 예를 들어, 디코린은 TGF-β에 결합하고 억제할 수 있어서, 종양 미세환경에서 면역 억제를 경감시킬 수 있다. MM 환자는 건강한 지원자와 비교하여 낮은 수준의 디코린을 생산한다 (Nemani N, Santo L, Eda H, Cirstea D, Mishima Y, Patel C, et al. Role of decorin in multiple myeloma (MM) bone marrow microenvironment. J Bone Miner Res. 2015;30(3):465-70).
일부 실시형태에서, 디코린 이식유전자는 포유동물 디코린 유전자 유래의 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린 이식유전자는 마우스 디코린 유전자 (m디코린) 유래의 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린 이식유전자는 인간 디코린 유전자 (hu디코린) 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 디코린 이식유전자는 분비형 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, 디코린 이식유전자는 (예를 들어, 경막 도메인을 포함하는) 세포 표면에 국재화되는 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, 디코린 유전자는 표 1에 제공된 바와 같은 서열번호 7-12 중 어느 하나로부터의 서열을 포함한다.
Figure pct00001
Figure pct00002
본 개시의 MYXV는 LIGHT 이식유전자 (MYXV-LIGHT)를 포함한다. LIGHT (림포톡신에 해당하며, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구에 의해 발현되는 수용체, 헤르페스바이러스 진입 매개인자 (HVEM)에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함)는 MYXV 게놈으로 도입될 수 있는 면역조절성 이식유전자의 다른 예이다. LIGHT는 면역 자극성 활성을 나타낼 수 있는 TNF 수퍼패밀리 구성원이고, 예를 들어, LIGHT는 T 세포 증식, 화학주성, 및 Th1 사이토카인의 분비를 촉진할 수 있다. 종양 미세환경에서 LIGHT의 발현은 케모카인의 증가된 발현, 부착 분자의 증가된 발현, 및 T 세포의 침윤을 촉진할 수 있다. 이의 면역 자극성 활성 및 이의 동족 수용체, HveA의 광범위한 발현에 기인하여, LIGHT는 항종양 면역 반응을 촉진하는 유망한 후보 분자이다.
일부 실시형태에서, LIGHT 이식유전자는 포유동물 LIGHT 유전자 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT 이식유전자는 마우스 LIGHT 유전자 (mLIGHT) 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT 이식유전자는 인간 LIGHT 유전자 (huLIGHT) 유래 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, LIGHT 이식유전자는 분비형 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, LIGHT 이식유전자는 (예를 들어, 경막 도메인을 포함하는) 세포 표면에 국재화되는 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, LIGHT 유전자는 표 2에 제공되는 바와 같은, 서열번호 13-15 중 어느 하나로부터의 서열을 포함한다.
Figure pct00003
본 개시의 MYXV는 BiKE 이식유전자 (MYXV-BiKE)를 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 하나 이상의 항체로부터 유래되는 서열 (예를 들어, 하나 이상의 중쇄 가변 도메인, 하나 이상의 경쇄 가변 도메인, 하나 이상의 상보성 결정 영역 (CDR), 또는 이의 조합)을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 하나 이상의 포유동물 항체로부터 유래되는 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 하나 이상의 마우스 항체로부터 유래되는 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 하나 이상의 인간화 항체 (huBiKE)로부터 유래되는 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 분비형 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, BiKE 이식유전자는 (예를 들어, 경막 도메인을 포함하는) 세포 표면에 국재하는 산물을 코딩한다. 일부 실시형태에서, BiKE 유전자는 표 3에 제공된 바와 같은, 서열번호 16-31 중 어느 하나 이상으로부터의 서열을 포함한다. 서열번호 16-17은 CD138에 특이적인 항체로부터의 가변 영역의 서열을 제공한다. 서열번호 18-19는 CD16에 특이적인 항체로부터의 가변 영역의 서열을 제공한다. 서열번호 20-25는 카밧 (Kabat)의 방법으로 확인된, CD138에 특이적인 항체로부터의 CDR의 서열을 제공한다. 서열번호 26-31은 카밧의 방법으로 확인된, CD16에 특이적인 항체로부터의 CDR의 서열을 제공한다.
Figure pct00004
이중-특이적 자연 살해자 및 호중구 인게이저 (Bi-specific Natural Killer and Neutrophil engager) (BiKE) (CD138-CD16)는 MYXV 게놈에 도입될 수 있는 면역조절성 이식유전자의 다른 예이다. BiKE (CD138-CD16)는 예를 들어, NK 세포 및 호중구의 표면 상의 CD16에 결합하고, MM 세포의 표면 상의 CD138에 결합하여, 자연 살해 (NK) 세포 및 호중구가 종양 표적을 공격하도록 유도할 수 있다. 이것은 악성 표적에 반응하여 NK/호중구 활성화, 표적 암 세포 아폽토시스의 유도, 및 사이토카인 및 케모카인의 생산을 일으킬 수 있다 (Gleason MK, Verneris MR, Todhunter DA, Zhang B, McCullar V, Zhou SX, et al. Bispecific and trispecific killer cell engagers directly activate human NK cells through CD16 signaling and induce cytotoxicity and cytokine production. Mol Cancer Ther 2012;11(12):2674-84).
본 명세서는 일부 실시형태에서, MM을 포함하여, 혈액암을 표적화하기 위해 하나 이상의 이들 면역조절성 이식유전자로 무장된 재조합 MYXV 구성체를 개시한다. 이식유전자 BiKE, 디코린, 또는 LIGHT를 발현하는 MYXV는 표준 요법에 내성인 불응성 질환을 갖는 환자로부터의 1차 인간 MM 세포를 선택적으로 감염시켜 사멸시키는 것으로 확인된다. 또한, 이들 바이러스 구성체는 MM 세포의 아폽토시스 및 사멸을 유도하여 MM 세포 생존능을 손상시킬 수 있다는 것을 입증한다. 특히, 하기 2 종류의 MM 세포 사멸이 관찰될 수 있다: 바이러스-감염된 MM 세포의 직접 세포독성 사멸, 이에 더해서 미감염된 MM 세포의 "오프-표적" 사멸. 이론에 국한하고 싶지 않지만, 미감염 MM 세포의 사멸은 환자 샘플에 체류하는 MYXV-활성화된 면역 세포에 의해 매개될 수 있다.
본 개시의 서열은 본 명세서에서 개시된 아미노산 또는 핵산 서열과 적어도 70% 상동성, 적어도 71% 상동성, 적어도 72% 상동성, 적어도 73% 상동성, 적어도 74% 상동성, 적어도 75% 상동성, 적어도 76% 상동성, 적어도 77% 상동성, 적어도 78% 상동성, 적어도 79% 상동성, 적어도 80% 상동성, 적어도 81% 상동성, 적어도 82% 상동성, 적어도 83% 상동성, 적어도 84% 상동성, 적어도 85% 상동성, 적어도 86% 상동성, 적어도 87% 상동성, 적어도 88% 상동성, 적어도 89% 상동성, 적어도 90% 상동성, 적어도 91% 상동성, 적어도 92% 상동성, 적어도 93% 상동성, 적어도 94% 상동성, 적어도 95% 상동성, 적어도 96% 상동성, 적어도 97% 상동성, 적어도 98% 상동성, 적어도 99% 상동성, 적어도 99.1% 상동성, 적어도 99.2% 상동성, 적어도 99.3% 상동성, 적어도 99.4% 상동성, 적어도 99.5% 상동성, 적어도 99.6% 상동성, 적어도 99.7% 상동성, 적어도 99.8% 상동성, 적어도 99.9% 상동성, 적어도 99.91% 상동성, 적어도 99.92% 상동성, 적어도 99.93% 상동성, 적어도 99.94% 상동성, 적어도 99.95% 상동성, 적어도 99.96% 상동성, 적어도 99.97% 상동성, 적어도 99.98% 상동성, 또는 적어도 99.99% 상동성을 가질 수 있다.
본 개시의 이식유전자 (예를 들어, BiKE 이식유전자)는 항원-결합 단백질, 예를 들어 항체로부터의 하나 이상의 가변 영역 또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 코딩할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 이식유전자 (예를 들어, BiKE 이식유전자)는 하나 이상의 항체로부터 유래하는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함한다. scFv (단쇄 가변 단편)는 펩티드 링커에 의해 연결된 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함할 수 있는 융합 단백질이다. 예를 들어, BiKE 이식유전자는 2개 표적의 결합을 허용하도록 2개 scFv를 포함할 수 있다.
항원 결합 단백질은 항체 가변 영역 또는 CDR을 기반으로 조작될 수 있다. 항체의 가변 (V) 영역은 항원 결합을 매개하고 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 한정한다. 가변 영역은 상이한 결합 특이성의 항체 간에 서열이 상당히 상이한 초가변 영역, 및 프레임워크 영역이라고 하는 비교적 불변의 서열을 포함한다. 초가변 영역 내에는 항체의 결합 특이성을 주로 결정하는 아미노산 잔기가 존재한다. 이들 잔기를 포함하는 서열은 상보성 결정 영역 (CDR)으로 알려져 있다. 항체의 하나의 항원 결합 부위는 6개 CDR로서, 경쇄의 초가변 영역에 3개, 그리고 중쇄의 초가변 영역에 3개를 포함한다. 경쇄의 CDR은 L1, L2, 및 L3으로 표시되는 한편, 중쇄의 CDR은 H1, H2, 및 H3이라고 표시된다. CDR은 또한 각각 LCDR1, LCDR2, LCDR3, HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3으로 표시된다. 항원 결합에 대한 각 CDR의 기여도는 항체 간에 가변적이다. CDR은 길이가 다양할 수 있다. 예를 들어, CDR은 종종 5 내지 14개 잔기 길이이지만, 0 잔기만큼 짧거나, 또는 24개 잔기 이상 만큼 긴 CDR이 존재한다. 몇가지 방법, 예를 들어, 카밧 (Kabat), 초티아 (Chothia), IMGT, 파라톰 (paratome), 마틴 (Martin), 및 AHo 방법을 사용해 CDR 서열을 예측하거나 또는 지정할 수 있다. 이들 CDR 예측 방법은 예를 들어 서열 삽입 및 결실이 다르게 번호표시되기 때문에, 상이한 번호매김 체계를 사용할 수 있다.
항원-결합 단백질은 항체의 일부, 예를 들어 온전한 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함할 수 있다. 항체 단편의 비제한적인 예는 Fab, Fab, F(ab")2, Fab 접합체의 이량체 및 삼량체, Fv, scFv, 미니바디, 디아바디, 트리아바디, 및 테트라바디, 및 선형 항체를 포함한다. Fab 및 Fab'은 디술피드 결합을 통해서 경쇄의 VL 및 CL 도메인에 연결된 중쇄의 VH 및 CH1 도메인을 포함할 수 있는 항원-결합 단편이다. F(ab')2는 디술피드 결합으로 연결된 2개의 Fab 또는 Fab'을 포함할 수 있다. Fv는 비공유 상호작용으로 함께 유지되는 VH 및 VL 도메인을 포함할 수 있다. scFv (단쇄 가변 단편)은 펩티드 링커를 통해 연결된 VH 및 VL 도메인을 포함할 수 있는 융합 단백질이다. 링커의 길이 및 VH 및 VL 도메인의 배향의 조작은 단량체, 이량체 (디아바디), 삼량체 (트리아바디), 또는 사량체 (테트라바디))일 수 있는 상이한 형태의 분자를 생성시키는데 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 이식유전자는 링커 서열 (예를 들어, 이식유전자에 의해 코딩되는 단백질의 상이한 도메인 사이의 링커 서열)을 코딩할 수 있다. 일부 실시형태에서, 링커는 scFv를 형성하도록 항체 가변 영역을 연결시키는데 사용된다. 일부 실시형태에서, 링커는 2개 scFv를 연결하여 BiKE를 생성시키는데 사용된다. 링커 서열은 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 또는 50 아미노산 잔기 길이일 수 있다.
가요성 링커는 글리신 및 세린 잔기의 스트레치를 함유하는 서열을 가질 수 있다. 작은 크기의 글리신 및 세린 잔기는 가요성을 제공하여, 연결된 기능성 도메인의 움직임을 허용한다. 세린 또는 트레오닌의 도입은 물 분자와 수소 결합을 형성하여 수용액 중에서 링커의 안정성을 유지시킬 수 있어서, 링커와 단백질 모이어티 간 불리한 상호작용을 감소시킨다. 가요성 링커는 또한 가요성을 유지하기 위해서 트레오닌 및 알라닌 같은 추가 아미노산을 비롯하여 가용성을 개선시키기 위해 리신 및 글루타민 같은 극성 아미노산을 함유할 수 있다. 강성 링커는 예를 들어 알파 나선형-구조를 가질 수 있다. 알파-나선형 강성 링커는 단백질 도메인 간 스페이서로서 작용할 수 있다. 링커는 표 4의 임의의 서열, 및 이의 반복부를 포함할 수 있다. 서열번호 32-37은 가요성 링커를 제공하고, 서열번호 38-41은 강성 링커를 제공한다.
Figure pct00005
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 하나 이상의 추가 이식유전자 (예를 들어, 하나 이상의 디코린, BiKE, 및 LIGHT 이외에도 하나 이상의 이식유전자)를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 하나 이상의 비-면역조절성 이식유전자 (예를 들어, 하나 이상의 디코린, BiKE, 및 LIGHT 이외에도 하나 이상의 비-면역조절성 이식유전자)를 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 하나 이상의 리포터 이식유전자 (예를 들어, 하나 이상의 디코린, BiKE, 및 LIGHT 이외에도 하나 이상의 리포터 이식유전자)를 포함할 수 있다. 리포터 이식유전자 (또는 리포터 유전자)는 시험관내, 생체외, 또는 생체내에서 MYXV를 모니터링하거나 또는 정량하는데 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 리포터 이식유전자는 본 개시의 MYXV에 의해 감염된 세포를 확인하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 MYXV는 형광 이식유전자를 발현할 수 있고, 감염된 세포는 형광 (예를 들어, 형광 현미경 또는 유세포측정)을 통해서 확인될 수 있다. 일부 실시형태에서, 리포터 이식유전자는 본 개시의 MYXV에 의해 감염된 세포를 정량하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 MYXV는 형광 이식유전자를 발현할 수 있고, 감염된 세포는 형광을 통해 정량될 수 있다 (예를 들어, 형광 현미경 또는 유세포측정을 통한 감염된 세포의 수 또는 비율 정량). 일부 실시형태에서, 리포터 이식유전자는 본 개시의 MYXV로 감염된 세포에서 바이러스 복제 또는 바이러스 존재량을 정량하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 개시의 MYXV는 형광 이식유전자를 발현할 수 있고, 감염된 세포는 형광을 통해 정량될 수 있다 (예를 들어, 형광 현미경의 유세포측정을 통한 세포의 평균 형광 강도의 정량). 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 생체내에서 바이러스 존재량 또는 바이러스 복제를 정량하는데 사용될 수 있는 리포터 유전자를 발현할 수 있다 (예를 들어, 생체내 이미지화 시스템 (IVIS)을 사용한 이미지화).
본 개시의 리포터 이식유전자는 항상적으로 (예를 들어, 항상성 프로모터의 제어 하에) 발현될 수 있다. 본 개시의 리포터 이식유전자는 조건적으로 발현 (예를 들어, 조건 프로모터, 예를 들어 일정 시기의 복제 주기에서 더 활성이나 또는 그 주기에서만 활성인 프로모터의 제어 하에 발현)될 수 있다.
리포터 이식유전자의 비제한적인 예는 형광 단백질 (예를 들어, 녹색 형광 단백질 (GFP), TdTomato, 청록색 형광 단백질 (CFP), 노란색 형광 단백질 (YFP), 적색 형광 단백질 (RFP), 버드 (Verde) 형광 단백질 (VFP), 킨들링 (kindling) 형광 단백질 (KFP), mCherry, mTangerine, mRaspberry, mPlum, DsRed, 등) 및 발광에 관여되는 효소 및 기질 (예를 들어, 루시페린 및/또는 루시퍼라제)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 리포터 이식유전자를 포함하지 않는다 (예를 들어, 임의의 형광 또는 발광 단백질을 코딩하지 않음).
하나 이상의 면역조절성 이식유전자의 발현 이외에도, 본 개시의 MYXV는 MYXV 치료의 항암 효과를 증강시킬 수 있는 하나 이상의 다른 유전자를 운반하도록 변형될 수 있다. 이러한 유전자는 아폽토시스의 촉발에 관여하거나, 또는 면역 파괴를 위해 감염된 세포를 표적화하는데 관여하는 유전자, 예컨대 인터페론에 대한 세포의 반응성을 복원시키거나, 또는 항체 반응을 자극하는 세포 표면 마커, 예컨대 박테리아 세포 표면 항원의 발현을 일으키는 유전자일 수 있다. 본 개시의 MYXV는 신생물성 또는 암 세포의 증식 및 성장을 차단시키는데 관여되는 하나 이상의 유전자를 발현하도록 변형될 수 있어서, 암 세포의 분열을 방지 또는 감소시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 치료 유전자, 예컨대 화학요법제의 합성에 관여하는 유전자를 포함하도록 변형될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 특정 종의 세포에서 바이러스 복제를 증가 (예를 들어, 인간 암 세포의 증가된 사멸 및 억제를 위한 인간 암 세포에서 증가된 복제)시키는 이식유전자를 포함할 수 있다.
치료 방법
본 명세서는 일부 실시형태에서, 본 개시의 믹소마 바이러스 (MYXV)를 이용하여 대상체에서 혈액암을 치료하는 방법을 제공한다. 혈액암은 최소 잔존 질환 (MRD) 및/또는 약제-내성 MRD을 포함하는 혈액암일 수 있다.
하기 실시예에 개시된 바와 같이, 시험관내 연구는 표준 요법이 실패된 환자로부터의 불응성 1차 인간 다발성 골수종 (MM) 세포를 유의하게 제거하는 본 개시의 MYXV 구성체의 능력을 입증하였다. MYXV를 사용한 연구는 이것이 수많은 인간 및 쥐과 암 유형에 대해 향성을 갖는 고도로 특이적인 항암제일 수 있음을 확인하였다.
본 개시의 치료 (예를 들어, MYXV-BiKE-, MYXV-LIGHT-, 또는 MYXV-디코린을 이용한 치료)는 수많은 신규의 유리한 측면을 포함할 수 있다. 예를 들어, 이들 바이러스 구성체는 각 바이러스가 직접적으로 감염된 약제-내성 1차 인간 MM 세포 (예를 들어, 바이러스 리포터 유전자, 예컨대 GFP+ 또는 TdTomato+를 발현하는 CD138+ 세포)를 선택적으로 표적화하고 직접적으로 제거하는 지금까지 유일하게 기술된 종양용해성 바이러스이다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 바이러스-감염된 세포의 사멸을 유도하여 오염된 혈액암 세포를 제거할 수 있을 뿐만 아니라, 또한 미감염 암 세포의 증강된 "오프-표적" 사멸을 통해 질환을 제거할 수 있다 (예를 들어, 바이러스-활성화된 면역 세포를 통함). 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 다른 바이러스 (예를 들어, 비무장 바이러스 또는 이식유전자 결여 바이러스)와 비교하여 미감염 암 세포의 증가된 사멸을 유발시켰다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 미감염 MM 세포 (예를 들어, 바이러스 리포터 유전자, 예컨대 GFP- 또는 TdTomato- 에 음성인 CD138+ 세포)의 증강된 "오프-표적" 사멸을 나타낼 수 있다. 임의의 특별한 이론에 국한하고 싶지 않지만, 미감염 세포의 바이러스-증강된 사멸은 MYXV-활성화된 면역 세포 (예를 들어, 본 개시의 이식유전자, 다른 바이러스 성분, 또는 이의 조합에 의해 활성화된 면역 세포)에 의해 매개될 수 있다.
혈액학정 악성종 (예를 들어, 혈액학적 악성종의 불응성 및/또는 최소 잔존 질환 (MRD))을 치료하기 위한 MYXV-BiKE, MYXV-LIGHT, 또는 MYXV-디코린의 용도는 화학요법 및 줄기 세포 이식을 포함한 현행 요법, 및 다른 후보 종양용해성 바이러스에 비해 복수의 장점을 가질 수 있다. MYXV는 예를 들어, 바이러스가 인간 암 세포를 감염시킬 수 있지만, 바이러스가 비암성 인간 세포는 감염시키지 않도록 제한된 향성을 포함한다. 인간 병원체로부터 개조된 대부분의 바이러스처럼, MYXV는 인간에서 질환을 야기하지 않아서, 면역계가 약화된 환자에도 안전하다. 인간 개체군에서 사전 존재하는 항-MYXV 적응성 면역력의 결여는 예를 들어, 인간 병원체로부터 개조된 바이러스만큼 빠르게 제거되지 않고, 바이러스가 암 세포를 감염시키고 사멸시키게 하는데 유리할 수 있다.
본 명세서에 개시된 생체외 치료 접근법에서, MYXV와 세포 (예를 들어, 골수 (BM) 세포 및/또는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC))의 인큐베이션은 빠를 수 있는데, 예를 들어, 암 환자로 세포를 다시 재주입하기 전에 생체외에서 오직 1시간의 바이러스 인큐베이션을 요구한다.
따라서, 본 개시의 측면은 이를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 억제 및/또는 치료하기 위한 방법을 제공한다. 일정 구현예에서, 방법은 대상체, 예컨대 인간 대상체, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 발현하는 본 개시의 MYXV를 투여하여, 이를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 치료 및/또는 억제하는 단계를 포함한다. 대상체는 포유동물일 수 있다. 대상체는 인간일 수 있다.
일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-LIGHT를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 LIGHT 및 디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 LIGHT 및 BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 디코린 및 BiKE를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 LIGHT, 디코린, 및 BiKE를 포함한다. LIGHT, 디코린, 또는 BiKE는 인간, 마우스, 포유동물, 또는 이의 조합으로부터의 서열을 포함할 수 있고, 본 명세서에 개시된 임의 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 리포터 이식유전자 (예를 들어, 형광 단백질 또는 발광성 기질 또는 효소)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 하나 이상의 LIGHT, 디코린, 및 BiKE를 포함하고, 리포터 이식유전자를 더 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 바이러스 게놈 내 하나 이상의 유전자에 변형, 삽입, 결실, 또는 파괴를 포함한다. 예를 들어, 본 개시의 MYXV는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD 유전자 중 어느 하나 이상에 변형, 삽입, 결실, 또는 파괴를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV 내 바이러스 유전자의 결실 또는 파괴는 숙주 세포에서 질환을 야기하거나, 숙주 세포 향성을 조절하거나, 비암 세포에서, 선천성 면역 회피를 감소시키거나, 감염된 세포에서 면역 신호전달을 조절하거나, 감염된 세포에서 세포 사멸 경로를 조절하거나, 암 세포에서 바이러스 복제를 증가시키는 능력, 또는 이의 조합을 감소시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 숙주 세포 향성 (예를 들어, 토끼 세포 향성)과 연관된 하나 이상의 유전자 내에 또는 그에 인접하여 하나 이상의 삽입, 결실, 또는 치환을 포함한다. 일부 실시형태에서, 토끼 세포 향성과 연관된 하나 이상의 유전자는 M11L, M063, M135R, M136R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 예에서, 토끼 세포 향성과 연관된 하나 이상의 유전자는 M135R, M136R, 또는 이의 조합을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 M135R 유전자에 변형, 삽입, 결실, 또는 파괴를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 M135R 유전자에 결실 또는 파괴를 포함한다. M135R 유전자의 결실 또는 파괴는 항암 효과를 나타내는 MYXV의 능력 (예를 들어, 암 세포 감염 및 사멸, 항종양 면역 반응 유발, 또는 이의 조합)을 손상시키지 않고, 숙주 세포에서 질환을 야기하는 본 개시의 MYXV의 능력을 약화시킨다.
일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-LIGHT, MYXV-BiKE, 또는 MYXV-디코린을 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-FLuc-LIGHT-TdTomato, MYXV-BiKE-GFP, 또는 MYXV-디코린-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato, MYXV-huBiKE-GFP, 또는 MYXV-m디코린-GFP를 포함한다. 일부 실시형태에서, MYXV는 MYXV-FLuc-huLIGHT, MYXV-huBiKE, 또는 MYXV-m디코린을 포함하고, 즉 형광 리포터 유전자는 생략한다.
MYXV는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포 (예를 들어, 인간 세포)를 감염시킬 수 있다. 본 명세서에 사용되는 "결핍성 선천성 항-바이러스 반응"을 갖는다는 것은 바이러스에 노출될 때 또는 바이러스가 침입했을 때, 하나 이상의 항-바이러스 방어 기전을 유도하는데 실패한 세포를 의미할 수 있다. 예를 들어, 결핍성 선천성 항-바이러스 반응은 바이러스 복제 억제의 실패, 항-바이러스 사이토카인 (예를 들어, 인터페론) 생산의 실패, 항-바이러스 사이토카인에 대한 반응 (예를 들어, 인터페론 반응 경로 유도)의 실패, 아폽토시스 유도 실패, 선천성 면역 수용체 (예를 들어, 패턴 인식 수용체)를 통한 인식 촉발 실패, 또는 이의 조합을 포함할 수 있다.
결핍성 선천성 항-바이러스 반응은 다양한 인자, 예를 들어, 악성 형질전환, 돌연변이, 감염, 유전자 결함, 또는 환경 스트레스에 의해 야기될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 유전자 결함, 환경 스트레스, 또는 감염 (예를 들어, 상이한 병원체에 의한 미리 존재하는 감염)으로 야기되는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 포함하는 대상체에게 투여되지 않는다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 악성 형질전환 (예를 들어, 암)에 의해 야기된 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 포함하는 대상체에게 투여된다. 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 포함하는 세포는 암 세포, 예를 들어 정상 세포, 예를 들어, 비암 세포와 비교하여 바이러스에 의한 노출 또는 감염 시 감소 또는 결함 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 암 세포일 수 있다. 이것은 예를 들어, 인터페론 (예를 들어, I형 인터페론)에 비반응성인 암 세포, 및/또는 감소되거나 결함성인 아폽토시스 반응 또는 아폽토시스 경로를 감소시키는 암 세포를 포함할 수 있다. 방법의 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포를 감염시킬 수 있다. 일부 실시형태에서, 세포는 포유동물 암 세포이다. 일부 실시형태에서, 세포는 인간 암 세포, 예를 들어 인간 혈액암 세포이다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXY는 암을 치료하는데 사용된다. 다발성 골수종에 대해 본 명세서에서 제공하는 예는 확장하여, 다른 혈액암에 적용가능하다. 본 개시된 방법에 따라 치료할 수 있는 암의 유형은 제한없이, 다음을 포함한다: 혈액암 예컨대 백혈병, 림프종, 및 골수종, 예를 들어, 다발성 골수종 (MM); 활동성 다발성 골수종; 무증상 다발성 골수종; 형질 세포종; 뼈의 고립 형질세포종; 골수외 형질 세포종; 경쇄 골수종; 비분비성 골수종; 면역글로불린 G (IgG) 골수종; 면역글로불린 A (IgA) 골수종; 면역글로불린 M (IgM) 골수종; 면역글로불린 D (IgD) 골수종; 면역글로불린 E (IgE) 골수종; 과 이배체 다발성 골수종; 비-과이배체 다발성 골수종; 호지킨 림프종; 비호지킨 림프종; 급성 림프모구성 백혈병; 급성 골수성 백혈병; 본태성 혈소판증가증; 적혈구 증가증; 원발성 골수섬유화증; 전신 비만세포증; 만성 골수성 백혈병; 만성 호중구성 백혈병; 만성 호산구성 백혈병; 고리형 철아구 수반 불응성 빈혈; 다계통 이형성증 동반 불응성 세포감소증; 1형 과도한 모세포 수반 불응성 빈혈; 2형 과도한 모세포 수반 불응성 빈혈; 고립성 del (5q) 수반 골수이형성 증후군 (MDS); MDS 미분류형; 만성 골수단핵구성 백혈병 (CML); 비정형 만성 골수성 백혈병; 청소년 골수 단핵구성 백혈병; 골수증식성/골수이형성성 증후군-미분류형; B 림프모세포성 백혈병/림프종; T 림프모세포성 백혈병/림프종; 미만성 거대 B 세포 림프종; 원발성 중추 신경계 림프종; 원발성 종격동 B 세포 림프종; 버킷 림프종/백혈병; 여포 성 림프종; 만성 림프구성 백혈병 (CLL)/소림프구성 림프종; B 세포 전림프구성 백혈병; 림프형질세포성 림프종/발덴스트롬 거대글로불린 혈증; 맨틀 세포 림프종; 변연부 림프종; 이식 후 림프증식성 장애; HIV-관련 림프종; 원발성 삼출 림프종; 혈관내 거대 B 세포 림프종; 원발성 피부 원발성 피부 B 세포 림프종; 모발 세포 백혈병; 의미불명 단일클론 감마병증; 역형성 거대세포 림프종; 혈관면역모세포 T 세포 림프종; 간비장 T 세포 림프종, B 세포 림프종, 망상내피증, 망상증, 점막 관련 림프 조직 림프종, B 세포 만성 림프구성 백혈병, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 림프종모양 육아종증, 결절성 림프구 우세 호지킨 림프종, 형질 세포 백혈병, 급성 적혈병 및 적혈구 백혈병, 급성 적혈구성 골수증, 급성 적혈구 백혈병, 하일마이어-슈너병, 급성 거핵모세포 백혈병, 비만 세포 백혈병, 범골수증, 골수섬유증 동반 급성 범골수성 백혈병, 림프육종 세포 백혈병, 줄기 세포 백혈병, 불특정 세포 유형의 만성 백혈병증, 불특정 세포유형의 아급성 백혈병, 가속기 만성 골수성 백혈병, 급성 전골수성 백혈병, 급성 호염기성 백혈병, 급성 호산구성 백혈병, 급성 단핵구성 백혈병, 성숙화 동반 급성 골수아구성 백혈병, 급성 골수성 수지상 세포 백혈병, 성인 T-세포 백혈병/림프종, 공격성 NK 세포 백혈병, B 세포 만성 림프 구성 백혈병, B 세포 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 만성 특발성 골수섬유증, 케흘러병, 골수종증, 고립형 골수종, 형질 세포 백혈병, 혈관중심성 면역증식성 병변, 림프성 육아종증, 혈관면역아구성 림프절증, T-감마 림프증식성 질환, 발덴스트롬 거대글로불린혈증, 알파 중쇄 질환, 감마 중쇄 질환 및 프랭클린 병. 일부 실시형태에서, 혈액암은 다발성 골수종이다. 일부 실시형태에서, 암은 혈액암이다. 일정 구현예에서, 암은 다발성 골수종을 포함한다.
본 명세서는, 일부 실시형태에서, 혈액암을 치료 (예를 들어, 혈액암의 진행을 억제, 경감, 안정화, 감소, 또는 지연)하는 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 방법은 혈액암을 치료하기 위해서 이를 필요로 하는 대상체에게 본 개시의 MYXV를 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 혈액암을 갖거나 또는 갖는 것으로 의심되는 대상체, 예컨대 인간 대상체를 선택하는 단계를 더 포함할 수 있다.
본 개시의 MYXV는 혈액암을 치료하는데 유효한 양으로 투여될 수 있다. 양은 대상체에서 암 세포의 수 (예를 들어, 대상체 혈액 중 암 세포의 농도)를 감소시키는데 충분할 수 있다.
대상체에게 투여하려는 유효량은 많은 인자들, 예컨대 MYXV의 약동학적 성질, 투여 방식, 대상체의 연령, 건강 및 체중, 질환 상태의 성질 및 정도, 치료 빈도 및 있다면 동시 치료의 유형, 및 바이러스의 병독성 및 역가에 따라 다양할 수 있다.
MYXV는 대상체의 임상 반응에 의존하여 필요하다면 조정할 수 있는 적합한 양을 초기에 투여할 수 있다. 바이러스의 유효량은 실증적으로 결정할 수 있고 안전하게 투여될 수 있는 MYXV의 최소량, 및 바람직한 결과를 생산하는 바이러스의 최소량에 의존적일 수 있다.
질환 부위에서 바이러스의 주사를 통해 달성되듯이 전신으로 바이러스를 투여할 때 동일한 임상 효과를 생산하기 위해서, 유의하게 더 높은 양의 바이러스의 투여가 요구될 수 있다. 그러나, 적절한 용량 수존은 바람직한 결과를 달성하는 최소량이어야 한다.
투여하려는 바이러스의 농도는 표적화되는 세포의 성질 및 투여하려는 MYXV의 특정 균주의 병독성에 의존하여 다양할 것이다. 일 실시형태에서, "감염 유닛"이라고도 하는, 약 3x 1010 미만의 병소 형성 유닛 ("ffu")의 용량이 인간 대상체에게 투여되고, 다양한 실시형태에서 약 102 내지 약 109 pfu, 약 102 내지 약 107 pfu, 약 103 내지 약 106 pfu, 또는 약 104　내지 약 105 pfu가 단일 용량으로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 대상체는 본 개시의 MYXV의 병소 형성 유닛 (FFU) 또는 플라크 형성 유닛 (PFU)의 일정 용량이 투여된다.
일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 MYXV의 용량은 적어도 1 x10^2, 2 x10^2, 3 x10^2, 4 x10^2, 5 x10^2, 6 x10^2, 7 x10^2, 8 x10^2, 9 x10^2, 1 x10^3, 2 x10^3, 3 x10^3, 4 x10^3, 5 x10^3, 6 x10^3, 7 x10^3, 8 x10^3, 9 x10^3, 1 x10^4, 2 x10^4, 3 x10^4, 4 x10^4, 5 x10^4, 6 x10^4, 7 x10^4, 8 x10^4, 9 x10^4, 1 x10^5, 2 x10^5, 3 x10^5, 4 x10^5, 5 x10^5, 6 x10^5, 7 x10^5, 8 x10^5, 9 x10^5, 1 x10^6, 2 x10^6, 3 x10^6, 4 x10^6, 5 x10^6, 6 x10^6, 7 x10^6, 8 x10^6, 9 x10^6, 1 x10^7, 2 x10^7, 3 x10^7, 4 x10^7, 5 x10^7, 6 x10^7, 7 x10^7, 8 x10^7, 9 x10^7, 1 x10^8, 2 x10^8, 3 x10^8, 4 x10^8, 5 x10^8, 6 x10^8, 7 x10^8, 8 x10^8, 9 x10^8, 1 x10^9, 2 x10^9, 3 x10^9, 4 x10^9, 5 x10^9, 6 x10^9, 7 x10^9, 8 x10^9, 9 x10^9, 1 x10^10, 2 x10^10, 3 x10^10, 4 x10^10, 5 x10^10, 6 x10^10, 7 x10^10, 8 x10^10, 9 x10^10, 1 x10^11, 2 x10^11, 3 x10^11, 4 x10^11, 5 x10^11, 6 x10^11, 7 x10^11, 8 x10^11, 9 x10^11, 1 x10^12, 2 x10^12, 3 x10^12, 4 x10^12, 5 x10^12, 6 x10^12, 7 x10^12, 8 x10^12, 9 x10^12, 1 x10^13, 2 x10^13, 3 x10^13, 4 x10^13, 5 x10^13, 6 x10^13, 7 x10^13, 8 x10^13, 9 x10^13, 1 x10^14, 2 x10^14, 3 x10^14, 4 x10^14, 5 x10^14, 6 x10^14, 7 x10^14, 8 x10^14, 9 x10^14, 1 x10^15, 2 x10^15, 3 x10^15, 4 x10^15, 5 x10^15, 6 x10^15, 7 x10^15, 8 x10^15, 9 x10^15, 1 x10^16, 2 x10^16, 3 x10^16, 4 x10^16, 5 x10^16, 6 x10^16, 7 x10^16, 8 x10^16, 9 x10^16, 1 x10^17, 2 x10^17, 3 x10^17, 4 x10^17, 5 x10^17, 6 x10^17, 7 x10^17, 8 x10^17, 9 x10^17, 1 x10^18, 2 x10^18, 3 x10^18, 4 x10^18, 5 x10^18, 6 x10^18, 7 x10^18, 8 x10^18, 9 x10^18, 1 x10^19, 2 x10^19, 3 x10^19, 4 x10^19, 5 x10^19, 6 x10^19, 7 x10^19, 8 x10^19, 9 x10^19, 1 x10^20, 2 x10^20, 3 x10^20, 4 x10^20, 5 x10^20, 6 x10^20, 7 x10^20, 8 x10^20, or 9 x10^20 FFU 또는 PFU의 본 개시의 MYXV이다.
일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 MYXV의 용량은 최대로 1 x10^2, 2 x10^2, 3 x10^2, 4 x10^2, 5 x10^2, 6 x10^2, 7 x10^2, 8 x10^2, 9 x10^2, 1 x10^3, 2 x10^3, 3 x10^3, 4 x10^3, 5 x10^3, 6 x10^3, 7 x10^3, 8 x10^3, 9 x10^3, 1 x10^4, 2 x10^4, 3 x10^4, 4 x10^4, 5 x10^4, 6 x10^4, 7 x10^4, 8 x10^4, 9 x10^4, 1 x10^5, 2 x10^5, 3 x10^5, 4 x10^5, 5 x10^5, 6 x10^5, 7 x10^5, 8 x10^5, 9 x10^5, 1 x10^6, 2 x10^6, 3 x10^6, 4 x10^6, 5 x10^6, 6 x10^6, 7 x10^6, 8 x10^6, 9 x10^6, 1 x10^7, 2 x10^7, 3 x10^7, 4 x10^7, 5 x10^7, 6 x10^7, 7 x10^7, 8 x10^7, 9 x10^7, 1 x10^8, 2 x10^8, 3 x10^8, 4 x10^8, 5 x10^8, 6 x10^8, 7 x10^8, 8 x10^8, 9 x10^8, 1 x10^9, 2 x10^9, 3 x10^9, 4 x10^9, 5 x10^9, 6 x10^9, 7 x10^9, 8 x10^9, 9 x10^9, 1 x10^10, 2 x10^10, 3 x10^10, 4 x10^10, 5 x10^10, 6 x10^10, 7 x10^10, 8 x10^10, 9 x10^10, 1 x10^11, 2 x10^11, 3 x10^11, 4 x10^11, 5 x10^11, 6 x10^11, 7 x10^11, 8 x10^11, 9 x10^11, 1 x10^12, 2 x10^12, 3 x10^12, 4 x10^12, 5 x10^12, 6 x10^12, 7 x10^12, 8 x10^12, 9 x10^12, 1 x10^13, 2 x10^13, 3 x10^13, 4 x10^13, 5 x10^13, 6 x10^13, 7 x10^13, 8 x10^13, 9 x10^13, 1 x10^14, 2 x10^14, 3 x10^14, 4 x10^14, 5 x10^14, 6 x10^14, 7 x10^14, 8 x10^14, 9 x10^14, 1 x10^15, 2 x10^15, 3 x10^15, 4 x10^15, 5 x10^15, 6 x10^15, 7 x10^15, 8 x10^15, 9 x10^15, 1 x10^16, 2 x10^16, 3 x10^16, 4 x10^16, 5 x10^16, 6 x10^16, 7 x10^16, 8 x10^16, 9 x10^16, 1 x10^17, 2 x10^17, 3 x10^17, 4 x10^17, 5 x10^17, 6 x10^17, 7 x10^17, 8 x10^17, 9 x10^17, 1 x10^18, 2 x10^18, 3 x10^18, 4 x10^18, 5 x10^18, 6 x10^18, 7 x10^18, 8 x10^18, 9 x10^18, 1 x10^19, 2 x10^19, 3 x10^19, 4 x10^19, 5 x10^19, 6 x10^19, 7 x10^19, 8 x10^19, 9 x10^19, 1 x10^20, 2 x10^20, 3 x10^20, 4 x10^20, 5 x10^20, 6 x10^20, 7 x10^20, 8 x10^20, 또는 9 x10^20 FFU 또는 PFU의 본 개시의 MYXV이다.
일부 실시형태에서, 대상체는 체중 킬로그램 당 본 개시의 MYXV의 일정 용량의 병소 형성 유닛 (FFU) 또는 플라크 형성 유닛 (PFU)이다.
일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 MYXV의 용량은 대상체의 체중 킬로그램 당 적어도 1 x10^2, 2 x10^2, 3 x10^2, 4 x10^2, 5 x10^2, 6 x10^2, 7 x10^2, 8 x10^2, 9 x10^2, 1 x10^3, 2 x10^3, 3 x10^3, 4 x10^3, 5 x10^3, 6 x10^3, 7 x10^3, 8 x10^3, 9 x10^3, 1 x10^4, 2 x10^4, 3 x10^4, 4 x10^4, 5 x10^4, 6 x10^4, 7 x10^4, 8 x10^4, 9 x10^4, 1 x10^5, 2 x10^5, 3 x10^5, 4 x10^5, 5 x10^5, 6 x10^5, 7 x10^5, 8 x10^5, 9 x10^5, 1 x10^6, 2 x10^6, 3 x10^6, 4 x10^6, 5 x10^6, 6 x10^6, 7 x10^6, 8 x10^6, 9 x10^6, 1 x10^7, 2 x10^7, 3 x10^7, 4 x10^7, 5 x10^7, 6 x10^7, 7 x10^7, 8 x10^7, 9 x10^7, 1 x10^8, 2 x10^8, 3 x10^8, 4 x10^8, 5 x10^8, 6 x10^8, 7 x10^8, 8 x10^8, 9 x10^8, 1 x10^9, 2 x10^9, 3 x10^9, 4 x10^9, 5 x10^9, 6 x10^9, 7 x10^9, 8 x10^9, 9 x10^9, 1 x10^10, 2 x10^10, 3 x10^10, 4 x10^10, 5 x10^10, 6 x10^10, 7 x10^10, 8 x10^10, 9 x10^10, 1 x10^11, 2 x10^11, 3 x10^11, 4 x10^11, 5 x10^11, 6 x10^11, 7 x10^11, 8 x10^11, 9 x10^11, 1 x10^12, 2 x10^12, 3 x10^12, 4 x10^12, 5 x10^12, 6 x10^12, 7 x10^12, 8 x10^12, 9 x10^12, 1 x10^13, 2 x10^13, 3 x10^13, 4 x10^13, 5 x10^13, 6 x10^13, 7 x10^13, 8 x10^13, 9 x10^13, 1 x10^14, 2 x10^14, 3 x10^14, 4 x10^14, 5 x10^14, 6 x10^14, 7 x10^14, 8 x10^14, 9 x10^14, 1 x10^15, 2 x10^15, 3 x10^15, 4 x10^15, 5 x10^15, 6 x10^15, 7 x10^15, 8 x10^15, 9 x10^15, 1 x10^16, 2 x10^16, 3 x10^16, 4 x10^16, 5 x10^16, 6 x10^16, 7 x10^16, 8 x10^16, 9 x10^16, 1 x10^17, 2 x10^17, 3 x10^17, 4 x10^17, 5 x10^17, 6 x10^17, 7 x10^17, 8 x10^17, 9 x10^17, 1 x10^18, 2 x10^18, 3 x10^18, 4 x10^18, 5 x10^18, 6 x10^18, 7 x10^18, 8 x10^18, 9 x10^18, 1 x10^19, 2 x10^19, 3 x10^19, 4 x10^19, 5 x10^19, 6 x10^19, 7 x10^19, 8 x10^19, 9 x10^19, 1 x10^20, 2 x10^20, 3 x10^20, 4 x10^20, 5 x10^20, 6 x10^20, 7 x10^20, 8 x10^20, 또는 9 x10^20 FFU 또는 PFU의 본 개시의 MYXV이다.
일부 실시형태에서, 대상체에게 투여되는 MYXV의 용량은 대상체의 체중 킬로그램 당 최대로 1 x10^2, 2 x10^2, 3 x10^2, 4 x10^2, 5 x10^2, 6 x10^2, 7 x10^2, 8 x10^2, 9 x10^2, 1 x10^3, 2 x10^3, 3 x10^3, 4 x10^3, 5 x10^3, 6 x10^3, 7 x10^3, 8 x10^3, 9 x10^3, 1 x10^4, 2 x10^4, 3 x10^4, 4 x10^4, 5 x10^4, 6 x10^4, 7 x10^4, 8 x10^4, 9 x10^4, 1 x10^5, 2 x10^5, 3 x10^5, 4 x10^5, 5 x10^5, 6 x10^5, 7 x10^5, 8 x10^5, 9 x10^5, 1 x10^6, 2 x10^6, 3 x10^6, 4 x10^6, 5 x10^6, 6 x10^6, 7 x10^6, 8 x10^6, 9 x10^6, 1 x10^7, 2 x10^7, 3 x10^7, 4 x10^7, 5 x10^7, 6 x10^7, 7 x10^7, 8 x10^7, 9 x10^7, 1 x10^8, 2 x10^8, 3 x10^8, 4 x10^8, 5 x10^8, 6 x10^8, 7 x10^8, 8 x10^8, 9 x10^8, 1 x10^9, 2 x10^9, 3 x10^9, 4 x10^9, 5 x10^9, 6 x10^9, 7 x10^9, 8 x10^9, 9 x10^9, 1 x10^10, 2 x10^10, 3 x10^10, 4 x10^10, 5 x10^10, 6 x10^10, 7 x10^10, 8 x10^10, 9 x10^10, 1 x10^11, 2 x10^11, 3 x10^11, 4 x10^11, 5 x10^11, 6 x10^11, 7 x10^11, 8 x10^11, 9 x10^11, 1 x10^12, 2 x10^12, 3 x10^12, 4 x10^12, 5 x10^12, 6 x10^12, 7 x10^12, 8 x10^12, 9 x10^12, 1 x10^13, 2 x10^13, 3 x10^13, 4 x10^13, 5 x10^13, 6 x10^13, 7 x10^13, 8 x10^13, 9 x10^13, 1 x10^14, 2 x10^14, 3 x10^14, 4 x10^14, 5 x10^14, 6 x10^14, 7 x10^14, 8 x10^14, 9 x10^14, 1 x10^15, 2 x10^15, 3 x10^15, 4 x10^15, 5 x10^15, 6 x10^15, 7 x10^15, 8 x10^15, 9 x10^15, 1 x10^16, 2 x10^16, 3 x10^16, 4 x10^16, 5 x10^16, 6 x10^16, 7 x10^16, 8 x10^16, 9 x10^16, 1 x10^17, 2 x10^17, 3 x10^17, 4 x10^17, 5 x10^17, 6 x10^17, 7 x10^17, 8 x10^17, 9 x10^17, 1 x10^18, 2 x10^18, 3 x10^18, 4 x10^18, 5 x10^18, 6 x10^18, 7 x10^18, 8 x10^18, 9 x10^18, 1 x10^19, 2 x10^19, 3 x10^19, 4 x10^19, 5 x10^19, 6 x10^19, 7 x10^19, 8 x10^19, 9 x10^19, 1 x10^20, 2 x10^20, 3 x10^20, 4 x10^20, 5 x10^20, 6 x10^20, 7 x10^20, 8 x10^20, 또는 9 x10^20 FFU 또는 PFU의 본 개시의 MYXV이다.
본 개시의 MYXV는 바람직한 임의 간격으로 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, MYXV는 1시간 마다 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, MYXV는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 36, 40, 44, 또는 48시간 마다 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, MYXV는 1일 2회, 1일 1회, 1주 5회, 1주 4회, 1주 3회, 1주 2회, 1주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 1개월에 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 8주마다 1회, 2개월마다 1회, 12주마다 1회, 3개월 마다 1회, 4개월 마다 1회, 6개월 마다 1회, 1년에 1회, 또는 그 미만의 빈도로 투여될 수 있다.
본 개시 내용의 MYXV는 예를 들어 전신, 경구, 국소, 비경구, 정맥내 주사, 정맥내 주입, 종양내 주사, 피하 주사, 근육내 주사, 피내 주사, 복강내 주사, 뇌내 주사, 지주막하 주사, 척추내 주사, 흉골내 주사, 관절내 주사, 내피 투여, 국소 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 동맥내 투여, 척수강내 투여, 흡입, 병변내 투여, 피내 투여, 경막외 투여, 상피 또는 점막 피부 내막을 통한 흡수 (예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막), 피막내 투여, 피막하 투여, 심장내 투여, 기관내 투여, 피하 투여, 지주막하 투여, 피막하 투여, 척추내 투여 또는 흉골내 투여를 포함하는 경로 및 다양한 형태를 통해 치료 유효량으로 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 바이러스는 전신으로 투여된다. 일부 실시형태에서, 바이러스는 질환 부위에서 주사를 통해 투여된다. 일부 실시형태에서, 바이러스는 경구로 투여된다. 일부 실시형태에서, 바이러스는 비경구로 투여된다.
본 개시의 MYXV (예를 들어, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 발현함)는 단독 요법으로서 투여될 수 있거나 또는 하나 이상의 다른 요법과 병용하여 투여될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 화학요법, 면역요법, 세포 요법, 방사선 요법, 줄기 세포 이식 (예컨대, 자기유래 줄기 세포 이식), 또는 이의 조합과 병용하여 투여된다. 예를 들어, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 발현하는 MYXV는 하기 다른 치료, 예컨대 방사선요법 또는 통상의 화학치료 약제 및/또는 줄기 세포 이식, 예컨대 자기유리 줄기 세포 이식, 또는 동종이계 줄기 세포 이식 (예를 들어, HLA-일치, HLA-불일치, 또는 반수체 일치 이식) 전에 또는 이후에 투여될 수 있다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 면역 체크포인트 조절인자와 병용할 수 있다. 면역 체크포인트 조절인자의 예는 제한없이, 다음을 포함한다: PD-L1 억제제 예컨대 둘바루맙 (Imfinzi) (AstraZeneca), 아테졸리주맙 (MPDL3280A) (Genentech), 아벨루맙 (EMD Serono/Pfizer), CX-072 (CytomX Therapeutics), FAZ053 (Novartis Pharmaceuticals), KN035 (3D Medicine/Alphamab), LY3300054 (Eli Lilly), 또는 M7824 (항-PD-L1/TGFbeta trap) (EMD Serono); PD-L2 억제제 예컨대 GlaxoSmithKline의 AMP-224 (Amplimmune), 및 rHIgM12B7; PD-1 억제제 예컨대 니볼루맙 (Opdivo) (Bristol-Myers Squibb), 펨브롤리주맙 (Keytruda) (Merck), AGEN 2034 (Agenus), BGB-A317 (BeiGene), Bl-754091 (Boehringer-Ingelheim Pharmaceuticals), CBT-501 (게놀림주맙) (CBT Pharmaceuticals), INCSHR1210 (Incyte), JNJ-63723283 (Janssen Research & Development), MEDI0680 (MedImmune), MGA 012 (MacroGenics), PDR001 (Novartis Pharmaceuticals), PF-06801591 (Pfizer), REGN2810 (SAR439684) (Regeneron Pharmaceuticals/Sanofi), 또는 TSR-042 (TESARO); CTLA-4 억제제 예컨대 이필리무맙 (Yervoy®, MDX-010, BMS-734016 및 MDX-101이라고도 함) (Bristol Meyers Squibb), 트레멜리무맙 (CP-675,206, 티실리무맙)(Pfizer), 또는 AGEN 1884 (Agenus); LAG3 억제제 예컨대 BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb), IMP701 (Novartis Pharmaceuticals), LAG525 (Novartis Pharmaceuticals), 또는 REGN3767 (Regeneron Pharmaceuticals); B7-H3 억제제 예컨대 에노블리투주맙 (MGA271) (MacroGenics); KIR 억제제 예컨대 리릴무맙 (IPH2101; BMS-986015) (Innate Pharma); CD137 억제제 예컨대 우렐루맙 (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), PF-05082566 (항-4-1BB, PF-2566, Pfizer), 또는 XmAb-5592 (Xencor); 및 PS 억제제 예컨대 바비툭시맙. 일부 실시형태에서, MYXV는 예를 들어 TIM3, CD52, CD30, CD20, CD33, CD27, OX40, GITR, ICOS, BTLA (CD272), CD160, 2B4, LAIR1, TIGHT, LIGHT, DR3, CD226, CD2, 또는 SLAM에 작용하거나 또는 이에 특이적인, 항체 또는 이의 항원-결합 단편, RNAi 분자, 또는 소형 분자와 병용된다.
본 개시의 MYXV는 표준 기술을 사용해 제조될 수 있다. 예를 들어, 바이러스는 사용하려는 MYXV 균주로, 배양된 토끼 세포, 또는 불멸화된 관용 인간 또는 영장류 세포를 감염시키고, 감염을 진행시켜 바이러스가 배양된 세포에서 복제되고 세포 표면을 파괴하기 위한 표준 방법을 통해 방출시켜서 수확을 위한 바이러스 입자를 방출시켜서 제조될 수 있다. 수확 시, 바이러스 역가는 예를 들어 토끼 세포의 합류점 층을 감염시키고 플라크 어세이를 수행하여 결정될 수 있다 (참조: Mossman et al. (1996)　Virology　215:17-30, 이의 전문이 참조로 본 명세서에 편입됨).
MYXV의 세포 전달
본 명세서는 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV가 먼저 세포로 흡착되고, 세포가 대상체에게 투여되는 새로운 전달 전략을 더욱 개시한다. 이 방법은 바이러스-보유 "캐리어" 세포를 통해서 질환 부위로 본 개시의 MYXV를 전달할 수 있다. 일부 실시형태에서, 바이러스의 이러한 세포-보조 전달은 종양 부담을 감소시키거나 또는 제거하고 대상체의 생존을 증가시키는 능력을 갖는다.
캐리어 세포를 통한 MYXV의 전달은 혈액암에 대한 새로운 잠재적 치료 용법을 대표한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 백혈구 (예를 들어, 골수 및/또는 말초 혈액 유래 백혈구)에 흡착되고, 그 백혈구가 대상체에게 주압된다. 암-보유 수령체에게 백혈구 주입 전에 생체외에서 MYXV가 사전-적재된 백혈구가 다발성 골수종 (MM) 및 본 명세서에 개시된 임의의 다른 혈액암에 대해 이용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 암-보유 수령체에게 백혈구 주입 전에 생체외에서 MYXV가 사전-적재된 백혈구는 먼 종양 부위로 백혈구의 국재화 및 침윤이 일어날 수 있는 임의 암을 치료하는데 유효할 수 있다.
일부 실시형태에서, 복합 "백혈구/MYXV" 요법은 항-종양 면역원성을 증강시키도록 종양층에서 증가된 암 세포 사멸을 야기시킨다. 예를 들어, 일부 실시형태에서 본 개시의 MYXV (예를 들어, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자 예컨대 BiKE, LIGHT, 및/또는 디코린을 발현하는 MYXV)는 생체외에서 바이러스가 사전-흡착 또는 사전-감염된 백혈구의 이동을 통해서, 최소 잔존 질환 (MRD)이 잠복하는 골수층 같은 암 부위로 전달된다. 이러한 체계적 전달 방법은 때때로 "생체외 바이러스요법" 또는 또는 EVV (EV2라고도 함)라고 불리는데, 바이러스가 환자에게 주입 전에 먼저 백혈구로 전달되기 때문이다.
일부 실시형태에서, MYXV의 세포-매개 전달은 감염된 혈액암의 직접 사멸 수준을 증가시키고, (이론에 국한하지 않지만) 암의 장기간 퇴행을 이끌 수 있는, 숙주 면역계의 활성인자로서 작용한다. 이것은 현행 치료로는 어렵다고 증명된, 뼈 및/또는 림프절의 혈액암의 새로운 치료 방법을 제공할 수 있다.
따라서, 일정 구현예에서, 본 개시의 방법은 본 개시의 흡착된 MYXV (예를 들어, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 포함하는 MYXV)를 포함하는 암 백혈구를 대상체에게 투여하여, 대상체에서 암을 치료 및/또는 억제하는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 백혈구 (예를 들어, 골수 및/또는 말초 혈액 유래 백혈구)에 흡착되고, 그 백혈구가 대상체에게 주입된다. 백혈구는 골수 유래 (예를 들어, 골수 흡인물 또는 골수 생검 유래)이다. 백혈구는 혈액 (예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포) 유래일 수 있다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 대상체, 예를 들어 암을 갖는 대상체로부터 수득되어, MYXV를 흡착시키고, 대상체에게 (예를 들어, 자기유래 세포 이식으로서) 재주입될 수 있다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 하나 이상의 동종이계 공여자 (예를 들어, HLA-일치, HLA-불일치, 또는 반수체 일치 공여자)로부터 수득된다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 HLA-일치 형제자매로부터 수득된다.
백혈구는 본 개시의 MYXV가 흡착되기 전 또는 후에, 예를 들어, 적혈 세포 용해, 밀도 구배 원심분리 (예를 들어, Ficoll-Paque), 백혈구분반술, 항체 또는 이의 유도체를 포함하는 기술 (예를 들어, 형광 활성화된 세포 분류 또는 자성 활성화된 세포 분류를 통한 양성 또는 음성 선별), 또는 이의 임의 조합을 통해 분류 또는 정제될 수 있다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 본 개시의 MYXV가 흡착되기 전 또는 후에 암 세포에 대해 농축하기 위해 분류 또는 정제된다 (예를 들어, 암 세포와 연관된 마커, 예를 들어 다발성 골수종 세포의 경우, CD138을 발현하는 세포). 일부 실시형태에서, 백혈구는 본 개시의 MYXV가 흡착되기 전 또는 후에 비-암 세포에 대해 농축하기 위해 분류 또는 정제된다. 일부 실시형태에서, 세포는 본 개시의 MYXV가 흡착되기 전에 하나 이상의 세포 서브세트 세포 (예를 들어, 단핵구, 림프구, B 세포, 형질 세포, T 세포, 호중구, 호염기구, 호산구, 거핵세포, NK 세포, NKT 세포, 비만 세포, 선천성 림프 세포, 공통 골수 전구체, 공통 림프 전구체, 골수아세포, 단구모세포, 전단구세포, 림프모세포, 전림프구, 혈구모세포, 거핵모세포, 전구거대핵구, 줄기 세포, 프로 B 세포, 프리 B 세포 세포, 이의 전구체, 또는 이의 임의 조합)에 대해 농축하기 위해 분류 또는 정제된다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV는 백혈구에 흡착되고, 백혈구는 MYXV를 포함하는 세포 (예를 들어, MYXV 결합 및/또는 내재화됨)에 대해 농축된다.
백혈구는 본 개시의 MYXV의 흡착 전 또는 후에 저장 (예를 들어, 저온보존)될 수 있다. 일부 실시형태에서, 백혈구는 저온보존될 수 있고, 이후에 대상체에게 주입 전에 해동될 수 있다.
일부 실시형태에서, 방법은 백혈구 (예를 들어, 말초 혈액 단핵 세포, 골수세포, 또는 정제/농축된 이의 서브세트)의 표면 상에 본 개시의 MYXV를 흡착시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 단핵 말초 혈액 세포 및/또는 골수 세포의 표면에 MYXV의 결합을 허용하는 조건 하에서 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 방법은 본 개시의 YXV로 백혈구를 감염시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 개시의 MYXV로 백혈구를 감염시키는 단계는 백혈구로 MYXV의 내재화를 허용하는 조건 하에서 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다. MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계는 임의의 적합한 시약 또는 상태 (예를 들어, 백혈구의 흡착 및/또는 감염을 허용하고, 백혈구의 생존능을 유지시키는, 멸균 세포 배양 배지, 배지 보충물, 및 적절한 인큐베이션 조건)를 포함할 수 있다.
MYXV 및 백혈구는 바이러스가 백혈구에 흡착되도록 허용하는 임의 비율로 서로에 노출될 수 있다. 일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구 당 약 0.000001, 0.00001, 0.0001, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 1 x10^4, 1 x10^5, 1 x10^6, 1 x 10^9, 1 x10^10, 1 x10^11, 1 x 10^12, 1 x10^13, 1 x10^14, 또는 1 x 10^15 바이러스의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구 당 적어도 0.000001, 0.00001, 0.0001, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 1 x10^4, 1 x10^5, 1 x10^6, 1 x 10^9, 1 x10^10, 1 x10^11, 1 x 10^12, 1 x10^13, 1 x10^14, 또는 1 x 10^15 바이러스의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구 당 최대로 0.000001, 0.00001, 0.0001, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000, 6000, 7000, 8000, 9000, 1 x10^4, 1 x10^5, 1 x10^6, 1 x 10^9, 1 x10^10, 1 x10^11, 1 x 10^12, 1 x10^13, 1 x10^14, 또는 1 x 10^15 바이러스의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구 당 예를 들어, 약 0.000001 내지 1 x 10^15, 0.0001 내지 1 x10^6, 0.001 내지 1 x10^4, 0.001 내지 1000, 0.001 내지 100, 0.001 내지 10, 0.001 내지 1, 0.001 내지 0.1, 0.001 내지 0.01, 0.01 내지 1 x10^4, 0.01 내지 1000, 0.01 내지 100, 0.01 내지 10, 0.01 내지 1, 0.01 내지 0.1, 0.1 내지 1 x10^4, 0.1 내지 1000, 0.1 내지 100, 0.1 내지 10, 0.1 내지 1, 1 내지 1 x10^4, 1 내지 1000, 1 내지 100, 또는 1 내지 10 바이러스의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 약 0.1 내지 10의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 약 0.01 내지 100의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다. 일부 실시형태에서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 약 0.001 내지 1000의 감염 다중도 (MOI)로 MYXV에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함한다.
일부 실시형태에서, 백혈구는 약 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 65분, 70분, 75분, 80분, 85분, 90분, 95분, 100분, 105분, 110분, 115분, 120분, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 4.5시간, 5시간, 5.5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 또는 24시간의 기간 동안 본 개시의 MYXV와 접촉하거나 또는 흡착된다.
일부 실시형태에서, 백혈구는 적어도 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 65분, 70분, 75분, 80분, 85분, 90분, 95분, 100분, 105분, 110분, 115분, 120분, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 4.5시간, 5시간, 5.5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간 이상의 기간 동안 본 개시의 MYXV와 접촉하거나 또는 흡착된다.
일부 실시형태에서, 백혈구는 최대로 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 35분, 40분, 45분, 50분, 55분, 60분, 65분, 70분, 75분, 80분, 85분, 90분, 95분, 100분, 105분, 110분, 115분, 120분, 2.5시간, 3시간, 3.5시간, 4시간, 4.5시간, 5시간, 5.5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 18시간, 20시간, 22시간, 24시간, 또는 그 이하의 기간 동안 본 개시의 MYXV와 접촉하거나 또는 흡착된다.
일부 실시형태에서, BM 또는 PBMC 세포는 약 1시간 동안 생체외에서 MYXV 구성체와 접촉하거나 또는 흡착된다.
추가의 생체외 방법
본 명세서에 개시된 바와 같이, MYXV는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 가지며, 세포에서 이러한 결핍의 지시자로서 사용될 수 있는 세포를 선택적으로 감염시킬 수 있다. 따라서, 대상체로부터 제거된 세포는 본 개시의 방법을 사용하여 선천성 항-바이러스 반응의 결핍에 대해 어세이될 수 있다. 이러한 결정은 다른 지시자와 조합될 때, 대상체가 특정 질환 상태, 예를 들어 암을 앓고 있을 수 있다는 것을 의미할 수 있다. 세포는 기지의 생검 방법을 사용하여, 인간 대상체를 포함한, 대상체로부터 제거될 수 있다. 생검은 시험하려는 세포의 유형 및 위치에 의존적일 수 있다. 세포를 배양할 수 있고, 예를 들어 배양 배지에 살아있는 MYXV에 노출시킬 수 있다. 감염 다중도 (MOI)는 MYXV에 노출 시 감염되는 것으로 알려진 양성 대조군 세포 배양물을 사용하여, 소정 세포 유형, 밀도, 및 배양 기술에 대한 최적 MOI를 결정하기 위해 가변적일 수 있다.
배양되는 세포에 첨가되는 MYXV의 양은 세포 유형, 배양 방법, 및 바이러스 균주에 따라 다양할 수 있다.
MYXV에 의한 배양된 세포의 감염도는 세포 사멸을 야기하는 MYXV의 능력을 포함하여, 당업자에게 공지된 다양한 방법으로 결정할 수 있다. 바이러스 발현 산물과 효소적 또는 화학적 반응을 완료하기 위해서 세포 배양물의 시약의 첨가가 포함될 수도 있다. 바이러스 발현 산물은 MYXV 게놈으로 삽입된 리포터 유전자로부터 발현될 수 있다.
일 구현예에서, MYXV는 감염 상태의 검출 용이성을 증가시키도록 변형될 수 있다. 예를 들어, MYXV는 위상차 현미경, 형광 현미경, 또는 방사능이미지화를 통해 쉽게 검출할 수 있는 마커를 발현하도록 유전자 변형될 수 있다. 마커는 비색 또는 방사능표지화 반응에 관여될 수 있는 발현된 효소 또는 발현된 형광 단백질일 수 있다. 일부 실시형태에서, 마커는 시험되는 세포의 특정 기능을 파괴하거나 또는 억제하는 유전자 산물일 수 있다.
약학 조성물
본 개시의 MYXV 또는 본 개시의 MYXV를 포함하는 세포는 약학 조성물 중 성분으로서 제제화될 수 있다. 그러므로, 일부 실시형태에서, 본 개시는 하나 이상의 면역조절성 이식유전자 (예컨대 BiKE, LIGHT, 및/또는 디코린)를 발현하는 믹소마 바이러스, 및 약학적으로 허용되는 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 조성물은 약학적으로 허용되는 농도의 염, 완충제, 보존제, 및 다양한 상용성 담체를 함유할 수 있다.
약학 조성물은 추가의 치료제, 예컨대 추가의 항암제를 함유할 수 있다. 일 실시형태에서, 조성물은 화학요법제를 포함한다. 화학요법제는 예를 들어, 대상체의 암 세포 또는 신생물성 세포에 대한 효과를 나타내고 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 발현하는 MYXV의 종양 사멸 효과를 억제 또는 감소시키지 않는, 실질적으로 임의의 작용제일 수 있다. 예를 들어, 화학요법제는 제한없이, 안트라사이클린, 알킬화제, 알킬 술포네이트, 아지리딘, 에틸렌이민, 메틸멜라민, 질소 머스타드, 니트로소우레아, 항생제, 항대사산물제, 폴산 유사체, 푸린 유사체, 피리미딘 유사체, 효소, 포도필로톡신, 플래티늄-함유제, 또는 사이토카인일 수 있다. 화학요법제는 암성 또는 신생물성 특정 세포 유형에 유효한 것으로 공지된 것일 수 있다.
약학적으로 허용되는 희석제의 비율 및 정체는 예를 들어 선택된 투여 경로, 생바이러스와의 상용성, 및 표준 약학적 관행을 통해 결정될 수 있다. 일부 실시형태에서, 약학 조성물은 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 발현하는 MYXV의 생물학적 속성을 유의하게 손상시키지 않는 성분으로 제제화될 것이다. 약학 조성물은 유효 분량의 활성 물질 또는 물질들을 약학적으로 허용되는 비히클과 혼합물로 배합되게, 대상체에게 투여에 적합한 약학적으로 허용되는 조성물의 제조를 위한 기지 방법으로 제조될 수 있다. 적합한 비히클은 예를 들어 [Remington's Pharmaceutical Sciences (Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., USA 1995)]에 기술된다. 이를 기반으로, 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용되는 비히클 또는 희석제와 회합하여 MYXV를 포함하는 세포 또는 MYXV의 용액을 포함할 수 있고, 생리적 유체와 등장성이고 적합한 pH를 갖는 완충 용액에 함유될 수 있다.
약학 조성물은 선택된 투여 경로에 의존하여 다양한 형태로 대상체에게 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 비경구 또는 경구로 투여될 수 있다. 비경구 투여는 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 경상피, 비내, 폐내, 척추강내, 직장, 및 국소 방식의 투여를 포함한다. 비경구 투여는 선택된 시간 기간 동안 연속 주입 (예를 들어, 정맥내 주입)에 의할 수 있다.
약학 조성물은 경구로, 예를 들어 불활성 희석제 또는 담체와 함께 투여될 수 있거나, 또는 경질 또는 연질 쉘 젤라틴 캡슐에 내포될 수 있거나, 또는 정제로 압착될 수 있다. 경구 치료 투여 경우, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자 (예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린)를 발현하는 MYXV는 부형제와 혼입될 수 있고 섭취가능한 정제, 구강정, 트로키, 캡슐, 엘릭시르, 현탁액, 시럽, 웨이퍼 등의 형태로 사용될 수 있다.
본 개시의 MYXV 또는 본 개시의 MYXV를 포함하는 세포의 용액은 생리적으로 적합한 완충액으로 제조될 수 있다. 통상의 보관 및 사용 조건 하에서, 이들 조제물은 미생물 성장을 방지하지만, 생바이러스는 불활성화시키지 않는 보존제를 함유할 수 있다. 적합한 제제의 선택 및 제조를 위한 통상의 절차 및 성분은 예를 들어, [Remington's Pharmaceutical Sciences and in The United States Pharmacopeia: The National Formulary (USP 24 NF19) published in 1999]에 기술된다. 사용하려는 약?e 조성물의 용량은 치료되는 특정 병태, 병태의 중증도, 연령, 신체 조건, 신장 및 체중을 포함한 개별 대상체 매개변수, 치료의 지속기간, 동시 요법 (있다면)의 성질, 건강 종사자의 전문 지식 및 지식 내에 있는 특별한 투여 경로 및 다른 유사 인자에 의존적이다. 일정 구현예에서, 치료 바이러스는 실온에서 보관을 위해 냉동 건조될 수 있다.
키트
본 개시의 측면은 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및 디코린을 발현하는 MYXV, 및 이를 포함하는 키트를 고려한다. 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 예컨대 BiKE, LIGHT 및/또는 디코린을 발현하는 MYXV, 또는 MYXV를 포함하는 약학 조성물은 예를 들어 MYXV의 사용에 관한 설명서를 함유하는 키트로서 포장될 수 있다. 키트는 본 명세서에 개시된 임의의 MYXV, 예를 들어 하나 이상의 면역조절성 이식유전자, 하나 이상의 리포터 이식유전자, 하나 이상의 비-면역조절성 이식유전자, 또는 이의 조합을 포함하는 MYXV를 포함할 수 있다. 일부 실시형태에서, 키트는 MYXV-LIGHT, MYXV-BiKE, MYXV-디코린, 또는 이의 조합을 포함한다. 일부 실시형태에서, 키트는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato, MYXV-huBiKE-GFP, 및/또는 MYXV-m디코린-GFP를 포함한다.
실시예
실시예 1: 디코린, LIGHT 또는 BiKE를 발현하는 재조합 MYXV 구성체의 디자인
MYXV-m디코린-GFP의 구축
마우스 디코린을 발현하는 MYXV 바이러스: 디코린은 기질 및 상피 세포에 존재하고 기능하는 세포외 매트릭스 프로테오글리칸 패밀리의 구성원이다 (Nemani N, Santo L, Eda H, Cirstea D, Mishima Y, Patel C, et al. Role of decorin in multiple myeloma (MM) bone marrow microenvironment. J Bone Miner Res. 2015;30(3):465-70). 축적된 증거들은 디코린이 세포 성장, 생존, 전이, 및 혈관생성에 관여되는 신호전달 분자를 직접적으로 또는 간접적으로 표적화하여, 예를 들어, 부골화를 표적화하여 상이한 유형의 암의 생물학에 영향을 미친다는 것을 의미한다. 디코린은 종양 미세환경에서 면역 억제를 담당하는 주요 억제성 사이토카인인 TGF-β에 결합하여 활성을 차단할 수 있다. 그러므로, 디코린을 발현하는 MYXV 종양용해성 벡터는 종양 미세환경에서 TGF-β를 차단하게 되고 광범위하게 다양한 고형 및 혈액암에서 더 강력한 항종양 면역 반응을 잠재적으로 촉진하게 된다. 이외에도, 디코린은 종양 세포 성장 및 증식을 직접적으로 억제할 수 있다. 예를 들어, 다양한 혈액암으로 디코린의 다아데노바이러스 전달은 종양형성에 대항할 수 있다 (Jiang G, Sun C, Li RH, Wei ZP, Zheng JN, and Liu YQ. Enhanced antitumor efficacy of a novel oncolytic adenovirus combined with temozolomide in the treatment of melanoma in vivo. J Cancer Res Clin Oncol. 2015;141(1):75-85; Kaliberova LN, Krendelchtchikova V, Harmon DK, Stockard CR, Petersen AS, Markert JM, et al. CRAdRGDflt-IL24 virotherapy in combination with chemotherapy of experimental glioma. Cancer Gene Ther. 2009;16(10):794-805; and Xu W, Neill T, Yang Y, Zebin Hu, Cleveland E, Wu Y, et al. The systemic delivery of an oncolytic adenovirus expressing decorin inhibits bone metastasis in a mouse model of human prostate cancer. Gene Ther. 2015;22(3):247-56). 이들 전임상 발견들은 많은 유형의 암에 대한 잠재적 항암 표적으로서 디코린을 강조한다.
MYXV-m디코린-GFP는 C-말단 V5-태그를 가지며 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (sE/L)의 제어 하에 디코린 코딩 서열 (NM001190451.2; GenScript)을 함유하는 디코린-발현 카세트를 야생형 (wt) MYXV 균주 로잔 (MYXV-Lau) 게놈의 M135 및 M136 유전자 사이의 유전자간 위치에 삽입시켜서 구축하였다 (도 1A). 강화 녹색 형광 단백질 (eGFP)을 위한 발현 카세트는 디코린 발현 카세트의 바로 하류에 삽입되었고 이의 발현도 역시 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터에 의해 구동되었다. MYXV 감염이 eGFP 발현의 라이브 이미지화를 통해 모니터링될 수 있으므로, 시험관내 및 생체내에서 MYXV 복제에 대한 형광 마커로서 제공된다.
MYXV-m디코린-GFP 구성체를 제작하기 위해서, 재조합 플라스미드를 먼저 게이트웨이 시스템 (Gateway System) (ThermoFisher Scientific)을 사용해 구축하였다. 적절한 pDONR 벡터와 게이트웨이 BP 재조합을 통해 진입 클론을 생성시키기 위해 PCR을 통해서 상류 및 하류 하이브리드화 서열을 증폭시켰다. 최종 재조합 플라스미드는 순차적 방식으로 목적 벡터와 3종 진입 클론을 재조합시켜서 구축하였다. 디코린 및 eGFP 발현 카세트는 토끼 신장13 (RK13) 세포주를 MYXV-Lau로 감염시키고 나서 적절한 재조합 플라스미드를 형질감염시켜서 MYXV 게놈에 삽입시켰다. 다수 라운드의 병소 정제를 수행하여 재조합 바이러스의 순수 스톡을 수득하였다. 이식유전자의 존재는 디코린 특이적 프라이머를 사용해 확인하였다:
AttB4r_mDCN_F:
Figure pct00006
AttB3r_mDCN_R:
Figure pct00007
순도는 적절한 프라이머 세트를 사용한 PCR을 통해서 확인하였다 (도 1B-C).
몇가지 디코린 단백질 종 (40-60 kDa)은 V5 태그에 특이적인 마우스 단일클론 항체 (Invitrogen)를 사용하여 MYXV-디코린-감염된 RK13 세포로부터의 용해물에서 웨스턴 블롯으로 검출되었다 (도 1D-E).
생물학적으로 활성인 단백질을 발현하고 TGF-β 생활성을 억제하는 MYXV-디코린 감염된 RK13 세포의 능력은 플라스미노겐 활성인자 억제제-1 프로모터-루시퍼라제 구성체가 안정하게 형질감염된 밍크 폐 상피 세포를 사용해 평가되었다 (MLE/PAI/L 세포). TGF-β에 MLE/PAI/L 세포의 노출은 루시퍼라제 활성의 용량-의존적 증가를 유도시킨다. MLE/PAI/L 세포는 다양한 조건 하에서 MYXV 균주에 의해 감염되거나 또는 모의-감염된 RK13 세포로부터의 상등액과 혼합된 0.1 ng/mL의 재조합 TGF-β를 함유하는 조건화 배지와 인큐베이션시켰고, 루시퍼라제 활성을 측정하여 TGF-β 생활성을 정량하였다. 상등액은 (i) 모의-감염되거나, (ii) 10 MOI의 MYXV-GFP (디코린 결여 대조군)로 감염되거나, 또는 (iii) 1, 10, 또는 15 MOI의 MYXV-m디코린-GFP로 감염된 RK13 세포로부터의 것이었다. 10 또는 15의 감염 다중도의 MYXV-m디코린-GFP로 감염된 RK13 세포로부터의 상등액은 TGF-β의 생물학적 활성을 억제할 수 있었다 (도1F). 새로운 구성체 MYXV-m디코린-GFP의 RK13 세포에서의 복제 능력은 부모 바이러스 MYXV-GFP와 유사하였다 (도1G).
MYXV-BiKE-GFP의 구축
MYXV-이중-특이적 자연 살해자 및 호중구 인게이저 (BiKE) (CD138-CD16): BiKE는 짧은 펩티드 링커에 의해 연결된, 항체로부터 유래된 2개 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 분자이다. 하나의 scFv 팔부는 NK 세포 및 호중구 표면 상의 CD16에 결합하는 한편 나머지는 선택된 표적 항원 (다발성 골수종 (MM) 세포의 특징인, CD138의 경우)에 결합한다. 이들 분자는 종양 표적의 증강된 NK/호중구 세포-매개 사멸을 촉발시키기 위해서 NK 세포 또는 호중구 및 종양 세포 간에 항원-특이적 면역학적 시냅스를 형성하도록 디자인된다. 몇개의 BiKE가 상이한 쥐과 종양 모델에서 유망한 결과를 보여주었다 (Davis ZB, Vallera DA, Miller JS, and Felices M. Natural killer cells unleashed: Checkpoint receptor blockade and BiKE/TriKE utilization in NK-mediated 항-tumor immunotherapy. Semin Immunol. 2017;31:64-75). MYXV로부터 분비형 BiKE 구성체의 발현은 TME에서 MM 세포를 사멸시키는 NK 및 호중구의 능력을 강화시킬 수 있고, 바이러스-발현된 BiKE 기술은 또한 암-특이적 세포 표면 마커가 존재하는 임의의 다른 암에도 적용시킬 수 있다.
항-CD16 scFv (중쇄 및 경쇄 가변 도메인) 인간 Ab 서열은 공공으로 이용가능한 출처 (AY345160.1 및 AY345161.2; Genbank)에서 수득하였다. 항-CD138 scFv 서열은 공공으로 입수가능한 출처 (Genbank)에서 수득하였다. scFv를 형성하기 위해서, 항-CD16 가변 영역은 (G4S1)3 링커에 의해 연결되었고, 항-CD138 가변 영역은 (G4S1)3 링커에 의해 연결되었다. 항-CD16 및 항-CD138 scFv는 (G4S1)2 가요성 링커에 의해 서로 연결되었다. BiKE는 정렬된 VL(CD138)-VH(CD138)-VH(CD16)-VL(CD16) 였고, N-말단에 마우스 Ig 중쇄 유래 신호 펩티드, 및 C-말단에 V5 태그를 포함하였다 (도2A 및 서열번호 6). BiKE 구성체는 인간 코돈 용법으로 최적화되었고 Genscript를 통해 합성하였다.
MYXV-BiKE-GFP는 C-말단 V5-태그를 가지며 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (sE/L)의 제어 하에 BiKE 코딩 서열을 함유하는 BiKE-발현 카세트 (GenScript)를 야생형 (wt) MYXV 균주 로잔 (MYXV-Lau) 게놈의 M135 및 M136 유전자 사이의 유전자간 위치에 삽입시켜 구축되었다. 증강된 녹색 형광 단백질 (eGFP)을 위한 발현 카세트는 BiKE 발현 카세트의 바로 하류에 삽입되었고, 이의 발현도 역시 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (도 2B)에 의해 구동되었다. eGFP는 MYXV 감염을 GFP 발현의 라이브 이미지화를 통해 모니터링할 수 있으므로, 시험관내 및 생체내에서 MYXV 복제에 대한 형광 마커로서 제공될 수 있다. MYXV-BiKE 구성체를 만들기 위해서, 재조합 플라스미드는 먼저 게이트웨이 시스템 (ThermoFisher Scientific)을 사용해 구축되었다. 적절한 pDONR 벡터와 게이트웨이 BP 재조합에 의해 진입 클론을 생성시키기 위해 PCR을 통해서 상류 및 하류 혼성화 서열을 증폭시켰다. 최종 재조합 플라스미드는 순차적 방식으로 목적 벡터와 3종 진입 클론을 재조합하여 구축되었다. BiKE 및 eGFP 발현 카세트는 RK13 세포를 MYXV-Lau로 감염시키고 나서 적절한 재조합 플라스미드를 형질감염시켜서 MYXV 게놈에 삽입시켰다. 다수 라운드의 병소 정제를 수행하여 재조합 바이러스의 순수 스톡을 수득하였고, 적절한 프라이머 세트를 사용한 PCR로 특이성을 확인하였다:
Figure pct00008
순도는 또한 적절한 프라이머 세트를 사용한 PCR을 통해 확인하였다 (도 2C-D).
BiKE 발현은 세포 용해물 상등액 둘 모두에서, V5 태그에 특이적인 마우스 단일클론 Ab (Invitrogen)를 사용하여 MYXV-BiKE 감염된 RK13 세포 유래 용해물 중 56 kDa 밴드의 존재를 검출해, 웨스턴 블롯에 의해 확인하였다 (도 2E). RK13 세포에서 새로운 구성체 MYXV-BiKE의 복제 능력은 부모 바이러스 MYXV-GFP와 유사하였다 (도 2F).
서열번호 5는 BiKE를 코딩하는 이식유전자의 뉴클레오티드 서열을 제공한다. 서열번호 6은 BiKE를 코딩하는 이식유전자의 아미노산 서열을 제공한다. 서열번호 6에서, N-말단 신호 서열은 밑줄표시되어 있고, 링커는 굵은체이며, C-말단 V5 태그는 이탤릭체이다.
DNA BiKE 서열:
Figure pct00009
단백질 BiKE 서열:
Figure pct00010
MYXV-FLuc-LIGHT-TdTomato 바이러스의 구축
LIGHT (림포톡신에 해당하며, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구에 의해 발현되는 수용체, 헤르페스바이러스 진입 매개인자 (HVEM)에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함)는 TNF 수퍼패밀리의 구성원이다 (유전자: TNFSF14). LIGHT는 3종의 기지 수용체, 헤르페스 심플렉스 바이러스 세포 수용체 HveA (이전명 HVEM), 림포톡신-수용체 (LT-R), 및 디코이 수용체 3 (DcR3/TR6)에 결합하는 동종삼량체 형태로 조립되는 II형 경막 단백질이다. LIGHT는 활성화된 T 세포 (CD4+ 및 CD8+ 유형) 및 미성숙 수지상 세포 (DC) 상에서 발현된다. 이전 연구들은 T-세포 증식 및 T 헬퍼 세포 1 (Th1) 사이토카인의 분비를 촉발시키는 이의 능력때문에 면역-자극성 사이토카인으로서 LIGHT를 동정하였다. T 세포 및 DC 세포에서 이의 강력한 면역 자극성 활성과 이의 동족 수용체, HveA의 광범위한 발현으로 인해, LIGHT는 항-종양 면역 반응을 자극시키기 위한 유망한 후보 분자이다 (Yu P, and Fu YX. Targeting tumors with LIGHT to generate metastasis-clearing immunity. Cytokine Growth Factor Rev. 2008;19(3-4):285-94).
종양 미세환경 내에서 LIGHT의 발현은 케모카인 생산 및 부착 분자의 발현 둘 모두를 상향조절하는 미접촉 T 세포의 대규모 침윤을 생성시키는 것으로 확인되었다. 침윤된 T 세포의 활성화는 면역 체크포인트 억제제 (ICI)-내성 암에 대한 긍정적인 암-퇴행 반응, 및 전이성 암 부위의 제거에 결정적일 수 있다 (Yu P, Lee Y, Liu W, Chin RK, Wang J, Wang Y, et al. Priming of naive T cells inside tumors leads to eradication of established tumors. Nat Immunol. 2004;5(2):141-9; Tang H, Wang Y, Chlewicki LK, Zhang Y, Guo J, Liang W, et al. Facilitating T Cell Infiltration in Tumor Microenvironment Overcomes Resistance to PD-L1 Blockade. Cancer Cell. 2016;29(3):285-96). 종양 조직에서 LTR 신호전달의 LIGHT-매개 활성화는 다수의 케모카인 및 부착 분자의 유도를 일으켜서, 종양 조직으로 효과적인 T 세포 동원, 및 T 세포 활성화를 촉진한다. 예를 들어, 종양 조직으로 LIGHT를 전달하기 위해 구축된 아데노바이러스 벡터는 마우스 종양 모델에서 강력한 면역 반응 및 종양 성장 및 전이의 감소를 촉진시킨다 (Yu P, and Fu YX. Targeting tumors with LIGHT to generate metastasis-clearing immunity. Cytokine Growth Factor Rev. 2008;19(3-4):285-94).
이들 면역-자극 성질을 기반으로, LIGHT는 암 면역요법을 위한 유망한 후보로 간주된다. 그러므로, LIGHT-발현 종양용해성 MYXV 플랫폼은 항-암 면역 반응을 증강시킬 수 있고, 예를 들어, 바이러스요법 이외에도 면역 체크포인트 억제제 (ICI)의 효능을 증강시킬 수 있다.
인간 또는 마우스 LIGHT/TNFSF14를 발현하는 재조합 MYXV의 구축은 각 유전자의 cDNA를 수집하여 시작되었다. 인간 및 마우스 LIGHT/TNFSF14 cDNA를 GenScript에서 구매하였다. 이식유전자는 폭스바이러스 합성 초기/후기 프로모터 (sE/L) 하에 발현될 수 있어서, 오직 바이러스-감염된 세포에서 발현을 허용한다. 이식유전자 외에도, 리포터 유전자, 예를 들어, 녹색 형광 단백질 (GFP) 또는 TdTomato가 이식유전자-발현 재조합 바이러스의 신속한 선별 및 정제를 위해 폭스 바이러스 프로모터 하에서 발현될 수 있다. 추가의 리포터 유전자, 예를 들어, 반딧불이 루시퍼라제 (F-Luc)는 살아있는 동물에서 바이러스 복제의 실시간 모니터링을 가능하게 할 수 있다. 이식유전자 및 리포터 유전자는 부모 야생형 MYXV 골격을 유지하기 위해 ORF M135 및 M136 사이에 삽입될 수 있다. 이식유전자는 또한 유전자 녹아웃 바이러스 배경에서 삽입될 수 있다. 이러한 경우에, M135 유전자 좌위가 이식유전자 발현 카세트의 구축을 위해 선택되었다. MYXV 최종 재조합 플라스미드 카세트는 이식유전자, 리포터 유전자(들) 및 재조합이 일어나게 되는 경우 MYXV 유래 유전자 서열을 함유한다.
재조합 플라스미드의 구축은 박테리아에서 재조합에 의한 다수 DNA 단편으로부터의 단일 플라스미드의 구축을 가능하게 하는 게이트웨이 기술 (Multisite Gateway Pro)을 통해 수행되었다. 최종 재조합 카세트를 만들기 위해 상이한 엘리먼트를 함유하는 4종의 진입 클론이 생성되었다. 그들은 다음과 같다; a) 엘리먼트 1, 믹소마 바이러스 M135 영역; b) 엘리먼트 2, 폭스 바이러스 Syn E/L 프로모터 서열을 갖는 인간 또는 마우스 LIGHT/TNFSF14 cDNA; c) 엘리먼트 3, 폭스 바이러스 후기 p11 프로모터 하의 리포터 유전자 TdTomato; d) 엘리먼트 4, 믹소마 바이러스 M136 유전자 서열과 함께, 폭스 바이러스 Syn E/L 프로모터 하의 반딧불이 루시퍼라제. M135KO 바이러스 골격을 만들기 위해서, 엘리먼트 1은 M134 ORF 유래 부분 서열 및 M135 ORF 유래 50nt로 치환되었다. 최종 재조합 플라스미드 카세트를 구축하기 위해서, 모든 이들 4종 엘리머트는 표준 프로토콜을 사용한 LR 재조합 반응을 통해 게이트웨이 목적 벡터와 재조합되었다. 최종 재조합 플라스미드는 다음과 같았다: a) pDEST M135-136-FLuc-muLIGHT-TdTomato, b) pDEST M135-136-huLIGHT-FLuc-TdTomato, c) pDEST M135KO-Fluc-muLIGHT-TdTomato, 및 d) pDEST M135KO-FLuc-huLIGHT-TdTomato (도 3 및 4). 재조합 바이러스를 만들기 전에 이 단계에서, 폭스 바이러스 프로모터 하에서 쥐과 또는 인간 LIGHT 단백질 (대략 26 kDa)의 발현은 RK13 세포에서 플라스미드의 감염 및 형질감염 이후에 웨스턴 블롯 분석으로 확인하였다 (도5A). 측접 서열과 함께 선별 마커 및 이식유전자를 코딩하는 최종 재조합 플라스미드는 야생형 MYXV 로잔이 감염된 RK13 세포로 형질감염시켰다. 재조합 바이러스는 야생형 바이러스로부터 단리되었고 선별 마커의 발현을 기반으로 연속적으로 정제되었다. 이식유전자 발현은 다시 웨스턴 블롯 어세이 및 기능 어세이를 통해 확인하였다 (도 5B). 4 바이러스는 다음과 같았다: a) MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato, b) MYXV-FLuc-mLIGHT-TdTomato, c) MYXV-M135KO-FLuc-huLIGHT-TdTomato, 및 d) MYXV-M135KO-FLuc-muLIGHT-tdTomato.
실시예 2
다발성 골수종 (MM) 세포로 오염된 인간 1차 환자 샘플을 사용한 시험관내 연구
MYXV 감염에 대한 3명의 약제-내성 환자로부터의 다발성 골수종 (MM) 세포로 오염된 1차 환자 샘플의 감수성을 평가하기 위해서, MM 세포 (CD138+)의 수준이 상이한 환자 2, 3, 및 4로부터의 1차 미조작 말초 혈액 (PB) 흡인물 (표 5에 요약)에 대해서 Ficoll-paque plus 농도구배를 사용한 정제를 수행하여 단핵 세포를 단리하였고 대부분의 적혈 세포 (RBC)를 제거하였다. 현탁된 이들 1차 세포를 이어서 모의-처리 (즉, 바이러스 무첨가)하거나, 또는 도 6-13 및 표 6에 표시된 바와 같이, 바이러스 흡착을 허용하도록 1시간 동안 37℃에서 MOI=10, 1, 및 0.1을 포함한 상이한 감염 다중도 (MOI) 유닛으로, MYXV-BiKE-GFP, MYXV-huLIGHT-FLuc-TdTomato 또는 MYXV-m디코린-GFP 구성체와 인큐베이션시켰다. 이후에, 모의-처리군, 또는 MYXV-처리된 세포는 바이러스 감염을 허용하도록 밤새 (∼24시간) 37℃에서 인큐베이션시켰다. 환자 #3의 경우, MOI=10, 1.0 및 0.1에서 (즉, MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato, 또는 MYXV-huBiKE를 사용한) 바이러스 감염의 백분율을 비롯하여, MM 세포의 생존능, 아폽토시스, 및 세포 사멸은 유세포측정을 사용해 결정하였다 (도 6A-C 및 도 8A-C). 이외에도, 바이러스에 노출시켰지만 미감염된 환자 샘플에서 MM 세포의 생존능, 아폽토시스, 및 세포 사멸의 백분율을 유세포측정을 사용해 평가하였다 (도 7A-B 및 9A-B). 이것은 바이러스가 직접 감염되지 않았지만 (즉, 임의의 바이러스-특이적 형광 단백질을 발현하지 않지만), 예를 들어, 동일한 환자 샘플로부터의 MYXV-활성화된 백혈구에 의해, "오프-표적 (off-target)" 방식으로 사멸된 세포에서 MM 세포 사멸의 측정을 가능하게 한다.
환자 #4 유래 세포에서 MYXV-BiKE-GFP 및 MYXV-m디코린-GFP를 사용한 감염 수준은 먼저 형광 현미경을 사용하여 평가하였다 (각각 도 10D 및 도 12D). 감염, 생존, 및 아폽토시스 MM 세포의 백분율은 유세포측정을 사용해 결정하였다 (도 10A-C 및 도 12A-C). 더 나아가서, 바이러스에 노출되었지만 미감염된 그들 골수종 세포의 생존능, 아폽토시스, 및 세포 사멸의 백분율은 유세포측정을 사용해 평가하였다 (도 11A-B 및 12A-B).
CD138은 다발성 골수종 (MM) 세포의 마커로서 사용된다. GFP 또는 TdTomato는 MYXV-감염된 세포의 마커로서 사용된다. 아넥신-V는 아폽토시스 세포의 마커로서 사용된다. 근-IR 염색은 사멸 세포의 마커로서 사용된다.
표 2 및 3은 환자 #3 및 #4의 데이터를 요약한다. 환자 2에서 CD138+ MM 세포의 양이 1% 미만이었기 때문에, 그 환자에서 시험된 바이러스 구성체에 대해 MM 세포 감염 및 세포 사멸의 백분율을 결정할 수 없었다. 표 6에 표시된 아폽토시스 및 MM 세포 사멸 데이터는 CD138+ (MM) 세포에 대해 게이팅하여 생성되었고, 데이터는 시험되니 모든 바이러스 구성체가 약제-내성 환자로부터 유래된 1차 인간 말초 혈액 샘플 내에서 유래된 MM 세포를 효율적으로 감염시킬 수 있고 사멸시킬 수 있다는 것을 시사한다. 두드러지게, 환자 #3의 경우, huLIGHT 또는 BiKE를 발현하는 MYXV는 시험된 모든 상이한 MOI에서 MM 세포의 증가된 사멸을 유도시킬 수 있었다 (도 6, 8, 및 표 6). 예를 들어, MOI 10으로 huLIGHT 발현 MYXV로 감염된 세포 중 90.8%가 사멸되었고, MOI 10으로 huBiKE 발현 MYXV로 감염된 세포의 50.1%가 사멸되었으며, 모의-처리 세포의 6.51-12.99%가 사멸되었다. 환자 #4의 경우, BiKE 및 m디코린을 발현하는 MYXV는 또한 바이러스 감염 후에 감염된 MM 세포를 사멸시켰다 (도 10, 12 및 표 6). 예를 들어, MOI 10으로 BiKE 발현 MYXV로 감염된 세포의 35.9%가 사멸되었고, MOI 10으로 m디코린 발현 MYXV로 감염된 세포의 33.1%가 사멸되었으며, 모의-처리 세포의 4.85%가 사멸되었다.
표 7에 표시된 데이터는 미감염 MM 세포 (즉, CD138+GFP- 또는 CD138+TdTomato-)의 사멸에 대해 게이팅하여 생성되었다. 미감염된 MM 세포의 이러한 "오프-표적" 사멸은 모의-처리군 세포와 비교하여 모든 MOI에서 이들 바이러스 구성체 경우에 더 높았다 (환자 #3의 경우 도 7 및 9 및 표 7, 환자 #4의 경우 도 11 및 12 및 표 7). 예를 들어, MOI 10으로 MYXV 구성체를 배양물에 첨가한 실험에서, 모의-처리 세포의 5.41%와 비교하여, 환자 4로부터의 미감염 세포의 96.12% 및 32.3%가 사멸하였다.
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
실시예 3: 다발성 골수종 (MM)에 대한 미소마 바이러스 (MYXV)를 사용한 종양용해성 바이러스요법: 1차 인간 샘플로부터 오염된 암 세포를 제거하는데 적합한 MYXV 구성체의 확인.
1차 인간 세포 샘플로부터 오염된 불응성 암 세포를 제거하는데 적합한 MYXV 구성체 및 실험 조건을 확인하기 위한 실험을 수행한다. 골수 또는 말초 혈액 샘플은 혈액암 (예를 들어, 골수종, 백혈병, 또는 림프종)이 존재하는 대상체로부터 수득된다. 단핵 세포를 단리한다 (예를 들어, Ficoll-Paque를 통함). 암 세포를 포함하는 단핵 세포의 샘플은 다양한 조건 (예를 들어, MOI, 인큐베이션 시간) 하에서 (예를 들어, 상이한 이식유전자 및/또는 결실을 포함하는) 본 개시의 MYXV 구성체로 처리되고, 암 세포를 사멸시키는 MYXV 구성체의 능력을 본 개시에 개시된 대로 결정한다 (예를 들어, 유세포측정, 형광 현미경, 및/또는 세포독성 어세이에 의함).
확인된 구성체 및/또는 실험 조건은 대상체를 치료하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 적합한 것으로 확인된 MYXV 구성체는 대상체에게 직접적으로 (예를 들어, 주사 또는 정맥내 주입을 통해) 투여될 수 있거나, 또는 MYXV-흡착 백혈구를 통해 투여될 수 있다.
실시예 4: 믹소마 바이러스 (MYXV)를 사용한 종양용해성 바이러스요법
대상체는 혈액암 (예를 들어, 골수종, 백혈병, 또는 림프종)을 갖는 것으로 확인된다. 혈액암은 경우에 따라 최소 잔존 질환 (MRD) 및/또는 약제-내성 MRD를 포함하는 혈액암일 수 있다.
경우에 따라서, 대상체로부터 채취된 샘플 (예를 들어, 말초 혈액 또는 골수 샘플)로부터 암 세포를 제거한 본 개시의 MYXV 구성체를 확인하기 위한 연구가 수행된다.
MYXV는 대상체에게 투여 (예를 들어, 주사 또는 주입을 통한 투여)된다. MYXV는 대상체에서 암 세포를 감염시켜서, 암 세포 사멸 및 항암 면역 반응을 야기시킨다.
실시예 5: MYXV-흡착 백혈구의 자기유래 이식을 통한 믹소마 바이러스 (MYXV)를 사용한 종양용해성 바이러스요법.
MYXV는 MYXV-흡착 백혈구의 자기유래 이식을 통해 혈액암 존재의 대상체에게 투여된다.
골수 또는 말초 혈액 샘플은 혈액암 (예를 들어, 골수종, 백혈병, 또는 림프종)이 존재하는 대상체로부터 수득되고, 단핵 세포를 단리한다 (예를 들어, Ficoll-Paque를 통함). 암세포는 비암 세포로부터 분리될 수 있다 (예를 들어, FACS 또는 MACS를 통함). 본 개시의 MYXV는 백혈구에 흡착 (예를 들어, 약 0.1 내지 10의 MOI에서 약 1시간 동안 흡착)된다. MYXV-흡착 백혈구는 정맥내 주입을 통해 대상체에게 다시 투여된다. MYXV는 대상체에서 암 세포를 감염시켜서, 암 세포 사멸 및 항암 면역 반응을 야기시킨다.
실시예 6: MYXV-흡착 백혈구의 동종이계 이식을 통한 믹소마 바이러스 (MYXV)를 사용한 종양용해성 바이러스요법.
MYXV는 MYXV-흡착 백혈구의 동종이계 이식을 통해서 혈액암 (예를 들어, 골수종, 백혈병, 또는 림프종)이 존재하는 대상체에게 투여된다. 골수 또는 말초 혈액 샘플은 공여자 (예를 들어, HLA-일치, HLA-불일치, 반수체 일치, 또는 형제자매 공여자, 또는 이의 조합)로부터 수득된다. 단핵 세포를 단리한다 (예를 들어, Ficoll-Paque를 통함). 경우에 따라, 세포는 특별한 백혈구 서브세트에 대해 농축되거나 또는 정제된다 (예를 들어, FACS 또는 MACS를 통함). 본 개시의 MYXV는 백혈구에 흡착 (예를 들어, 약 0.1 내지 10의 MOI에서 약 1시간 동안 흡착)된다. MYXV-흡착 백혈구는 정맥내 주입을 통해서 대상체에게 다시 투여된다. MYXV는 대상체에서 암 세포를 감염시켜서, 암 세포 사멸 및 항암 면역 반응을 야기시킨다.
실시예 7: 생체내에서 약제-내성 파종성 MM을 표적화하고 제거하기 위한 최소 잔존 질환 (MRD)의 Vk*MYC 면역적격 마우스 모델에서 자가-이식과 함께 생체외 MYXV 바이러스요법.
하기 2종의 C57BL/6-유래 VK*MYC 세포주가 생체내 실험에 사용되었다: 보르테조밉-내성 (BOR-내성)의 VK12598, 및 다제 내성 세포주 VK12653. 먼저, MYXV 결합 및 감염에 대한 이들 2종의 VK*MYC 세포주의 감수성을 평가하였다.
VK12598 및 VK12653에 MYXV 결합, 시험관내 연구: 결합 실험의 경우, MYXV-M093L-비너스 바이러스 (M093L의 아미노 말단에 형광 단백질 비너스의 융합체를 포함)가 10의 감염 다중도 (MOI)에서 사용되었다. 간략히, VK12598, 또는 VK12653은 BM (또는 신선하게-해동된 BM)으로부터 신선하게 단리되었고, 바이러스 결합을 허용하도록 1시간 동안 4℃에서 MYXV-M093L-비너스와 인큐베이션시켰다. 미결합 바이러스는 바이러스-흡착 세포를 2회 세척하여 제거하였다. 비리온 결합 수준은 유세포측정을 사용해 정량하였다. 바이러스 감염의 분석을 위해서, 세포는 바이러스 흡착을 허용하도록 37℃에서 1시간 동안 MOI=10으로 리포터 MYXV-GFP(E/L)/TdTomato(L)와 인큐베이션시켰다. 세포는 바이러스 감염을 허용하도록 37℃에서 밤새 인큐베이션시켰다. MYXV는 효율적으로 양쪽 세포주에 결합하였다 (도 14A 및 15A). 이외에도, MYXV는 양쪽 세포를 증식적으로 감염시킨다 (도 14B-C 및 15B).
VK12598 세포주를 사용한 생체내 연구: 제1 생체내 실험에서, C57BL/6 마우스는 VK12598 세포 (예를 들어, 마우스 당 1x106 세포)가 사전-파종되었다. MM 세포 이식 후 4주에, 마우스에서 채혈하였고 M-스파이크를 측정하였다. 마우스는 M-스파이크의 수준에 따라서 분리하였다 (예를 들어, 0, 저=0.1, 중=0.2, 고=0.6) (도 16A, 위 패널). 그 다음에 마우스는 다음과 같이 처리되었다: C57BL/6 BM 비이식 (코호트 I), C57BL/6 BM 세포 단독 (코호트 II), MYXV-M135KO-GFP 단독 (코호트 III), MYXV-M135KO-GFP 생체외 처리된 C57BL/6 BM (코호트 IV) (도 16A, 아래 패널). 도 16B는 저 M-스파이크 (0.1)의 코호트 I로부터의 대표 마우스에서 MM (CD138+B220-)의 백분율 및 고 M-스파이크 (0.6)의 코호트 II로부터의 대표 마우스에서 MM (CD138+B220-)의 백분율을 도시한다. 도 16C는 이식후 8일, 29일, 및 37일에 M-스파이크 밴드가 검출되지 않고, MM의 전체 퇴행을 나타낸, 코호트 IV의 유일한 생존체의 M-스파이크를 도시한다. 이들 데이터는 생체외 MYXV-처리 골수의 이식이 MM 퇴행을 유도시킬 수 있다는 것을 의미한다. 함께, 이들 데이터는 또한 이러한 제1 실험에서 코호트 처리가 질환 진행에서 너무 늦게 시작되었고, 대신 바이러스요법이 이 모델에서 훨씬 더 일찍 시작되었어야 한다는 것을 의미한다 (예를 들어, MM 이식 후 4주보다는 MM 이식 후 1주 미만). MM 퇴행이 이러한 늦은 중재 시간에라도 일어날 수는 있지만, 보다 빠른 바이러스요법 시작 (예를 들어, 폐사 또는 종결점에 가깝지 않은 마우스 코호트)은 바이러스 기술의 개선된 평가를 가능하게 할 수 있다.
추가 시험에서, MYXV는 다른 치료제 (예컨대 SMAC 모방체 LC161)와 병용하여 시험된다. VK12598 암 세포를 이식하고, M-스파이크는 1-4주에 정량하며, 마우스는 사이클로포스파미드로 처리하여 1개월간 지속될 수 있는 일시적 완전 반응 (CR)을 유도시킨다. 사이클로포스파미드 후 1주 또는 2주에, 마우스는 바이러스요법이 사이클로포스파미드에 의해 개시된 부분 퇴행을 연장시킬 수 있거나 또는 완료시킬 수 있는지를 시험하기 위해서 BM + MYXV 또는 PBMC+MYXV (예를 들어, 본 명세서에 개시된 면역조절성 이식유전자를 발현하는 MYXV)가 이식된다. 이러한 상황에서, 기능적으로 이러한 화학요법에 내성인 질환으로 정의되는 MM 최소 잔존 질환 (MRD)을 제거하는 MYXV의 능력을 조사한다. 단일요법 또는 병용 요법으로서, 다제-내성 VK12653 세포주를 제거하는 MYXV의 능력이 또한 조사된다.
본 개시가 특정 실시형태에 중점을 두고 설명되었지만, 당업자에게는 특정 실시형태의 변형을 사용할 수 있다는 것이 자명하며, 본 명세서에 특별히 기술된 것 이외에도 실시될 수 있는 것으로 의도된다. 본 발명의 특정 측면, 실시형태, 또는 예와 함께 기술된 특성, 특징, 화합물, 또는 예는 본 발명의 임의의 다른 측면, 실시형태, 또는 예에 적용가능한 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 본 개시는 하기 청구항에 의해 정의되는 본 개시의 정신 및 범주 내에 포괄되는 모든 변형을 포함한다. 그러므로, 우리는 이들 청구항의 범주 및 정신 내에 있는 모든 것을 본 발명으로서 청구한다.
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5 10

Claims (119)

  1. 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스 (MYXV)로서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE (이중-특이적 자연 살해자 및 호중구 인게이저) (Bi-specific Natural Killer and Neutrophil engager), LIGHT (림포톡신-유사, 유도성 발현을 나타내고, T 림프구에 의해 발현되는 수용체인, 헤르페스바이러스 진입 조절인자 (HVEM)에 대해 HSV 당단백질 D와 경쟁함)(Lymphotoxins-like, exhibits Inducible expression, and competes with HSV Glycoprotein D for Herpesvirus entry mediator (HVEM), a receptor expressed by T lymphocytes), 디코린, 또는 이의 조합을 코딩하는 것인 믹소마 바이러스.
  2. 제1항에 있어서, MYXV-BiKE를 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 골수종 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 백혈병 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD16에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD138에 결합하는 것인 믹소마 바이러스.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 믹소마 바이러스.
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  15. 제1항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  16. 제15항에 있어서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  18. 제15항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 믹소마 바이러스.
  19. 제1항 및 제15항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  20. 제1항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  21. 제20항에 있어서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  22. 제20항에 있어서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  23. 제20항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 믹소마 바이러스.
  25. 제16항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 리포터 유전자를 더 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  27. 제26항에 있어서, 리포터 유전자는 형광 단백질인 믹소마 바이러스.
  28. 제27항에 있어서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소인 믹소마 바이러스.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스 게놈 내에 결실을 더 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  31. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함하는 것인 믹소마 바이러스.
  32. 제1항 내지 제31항 중 어느 한 항의 믹소마 바이러스 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 조성물.
  33. 혈액암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 치료하는 방법으로서,
    대상체에게 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스를 투여하는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
  34. 제33항에 있어서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE, LIGHT, 디코린, 또는 이의 조합을 포함하는 것인 치료 방법.
  35. 제33항 또는 제34항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-BiKE를 포함하는 것인 치료 방법.
  36. 제34항 또는 제35항에 있어서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  38. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 골수종 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  39. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 백혈병 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  40. 제34항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  41. 제34항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD16에 결합하는 것인 치료 방법.
  42. 제34항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD138에 결합하는 것인 치료 방법.
  43. 제34항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 치료 방법.
  44. 제34항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 치료 방법.
  45. 제34항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  46. 제34항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  47. 제34항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함하는 것인 치료 방법.
  48. 제33항 또는 제34항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함하는 것인 치료 방법.
  49. 제32항 또는 제48항에 있어서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  50. 제34항, 제48항, 및 제49항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  51. 제34항 및 제48항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  52. 제34항 및 제48항 내지 제51항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함하는 것인 치료 방법.
  53. 제33항 또는 제34항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함하는 것인 치료 방법.
  54. 제34항 또는 제53항에 있어서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  55. 제34항 또는 제53항에 있어서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  56. 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  57. 제53항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  58. 제53항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP를 포함하는 것인 치료 방법.
  59. 제33항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 리포터 유전자를 더 포함하는 것인 치료 방법.
  60. 제59항에 있어서, 리포터 유전자는 형광 단백질인 치료 방법.
  61. 제59항에 있어서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소인 치료 방법.
  62. 제33항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 게놈에 결실을 더 포함하는 것인 치료 방법.
  63. 제33항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함하는 것인 치료 방법.
  64. 제33항 내지 제63항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함하는 것인 치료 방법.
  65. 제33항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간인 치료 방법.
  66. 제33항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포를 감염시킬 수 있는 것인 치료 방법.
  67. 제33항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 암 세포를 감염시킬 수 있는 것인 치료 방법.
  68. 제33항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액암은 골수종, 백혈병, 또는 림프종인 치료 방법.
  69. 제33항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액암은 다발성 골수종인 치료 방법.
  70. 혈액암의 치료를 필요로 하는 대상체에서 혈액암을 치료하는 방법으로서,
    대상체에게 백혈구를 투여하는 단계로서, 백혈구는 하나 이상의 면역조절성 이식유전자를 포함하는 믹소마 바이러스를 포함하는 것인 단계를 포함하는 치료 방법.
  71. 제70항에 있어서, 백혈구의 표면 상에 생체외로 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계를 더 포함하는 것인 치료 방법.
  72. 제71항에 있어서, 백혈구의 표면 상에 믹소마 바이러스를 흡착시키는 단계는 백혈구의 표면에 믹소마 바이러스의 결합을 허용하는 조건 하에서 믹소마 바이러스에 백혈구를 노출시키는 단계를 포함하는 것인 치료 방법.
  73. 제72항에 있어서, 믹소마 바이러스는 적어도 5분 동안 백혈구에 노출되는 것인 치료 방법.
  74. 제73항에 있어서, 믹소마 바이러스는 약 1시간 동안 백혈구에 노출되는 것인 치료 방법.
  75. 제72항 내지 제74항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 약 0.001 내지 1000의 감염 다중도 (MOI)로 백혈구에 노출되는 것인 치료 방법.
  76. 제75항에 있어서, 믹소마 바이러스는 약 0.1 내지 10의 감염 다중도 (MOI)로 백혈구에 노출되는 것인 치료 방법.
  77. 제70항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 말초 혈액으로부터 수득되는 것인 치료 방법.
  78. 제70항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 골수로부터 수득되는 것인 치료 방법.
  79. 제70항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 말초 혈액 단핵 세포인 치료 방법.
  80. 제70항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 대상체로부터 수득되는 것인 치료 방법.
  81. 제70항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 대상체에 대해 HLA-일치, HLA-불일치, 반수체 일치, 또는 이의 조합인 공여자로부터 수득되는 것인 치료 방법.
  82. 제70항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 면역조절성 이식유전자는 BiKE, LIGHT, 디코린, 또는 이의 조합을 포함하는 것인 치료 방법.
  83. 제70항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-BiKE를 포함하는 것인 치료 방법.
  84. 제82항 또는 제83항에 있어서, BiKE는 자연 살해 세포, 호중구, 또는 이의 조합 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  85. 제82항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 혈액암 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  86. 제82항 내지 제85항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 골수종 세포, 백혈병 세포, 또는 림프종 세포 상에 존재하는 항원에 결합하는 것인 치료 방법.
  87. 제82항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD16에 결합하는 것인 치료 방법.
  88. 제82항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 CD138에 결합하는 것인 치료 방법.
  89. 제82항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 치료 방법.
  90. 제82항 내지 제89항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 하나 이상의 인간화 단쇄 가변 단편 (scFv)을 포함하는 것인 치료 방법.
  91. 제82항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 서열번호 6 또는 16-31 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  92. 제82항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, BiKE는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  93. 제82항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-huBiKE-GFP를 포함하는 것인 치료 방법.
  94. 제70항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-LIGHT를 포함하는 것인 치료 방법.
  95. 제82항 또는 제94항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 인간 LIGHT 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  96. 제82항, 제94항 및 제95항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 서열번호 13-15 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  97. 제82항, 및 제94항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, LIGHT는 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  98. 제82항, 및 제94항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-FLuc-huLIGHT-TdTomato를 포함하는 것인 치료 방법.
  99. 제70항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-디코린을 포함하는 것인 치료 방법.
  100. 제82항 또는 제99항에 있어서, 디코린은 인간 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  101. 제82항 또는 제99항에 있어서, 디코린은 마우스 디코린 유래 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  102. 제82항, 또는 제99항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 서열번호 7-12 중 어느 하나와 적어도 70%가 동일한 서열을 포함하는 것인 치료 방법.
  103. 제82항, 또는 제99항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 디코린은 믹소마 바이러스 게놈의 M135 및 M136 오픈 리딩 프레임 사이에 존재하는 것인 치료 방법.
  104. 제82항, 또는 제99항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 MYXV-m디코린-GFP를 포함하는 것인 치료 방법.
  105. 제70항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 리포터 유전자를 더 포함하는 것인 치료 방법.
  106. 제105항에 있어서, 리포터 유전자는 형광 단백질인 치료 방법.
  107. 제105항에 있어서, 리포터 유전자는 발광성 기질 또는 효소인 치료 방법.
  108. 제70항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 믹소마 바이러스 게놈에 결실을 더 포함하는 것인 치료 방법.
  109. 제70항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M001R, M002R, M003.1R, M003.2R, M004.1R, M004R, M005R, M006R, M007R, M008.1R, M008R, M009L, M013, M036L, M063L, M11L, M128L, M131R, M135R, M136R, M141R, M148R, M151R, M152R, M153R, M154L, M156R, M-T2, M-T4, M-T5, M-T7, 및 SOD로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 유전자의 결실 또는 파괴를 포함하는 것인 치료 방법.
  110. 제70항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 M135의 결실을 포함하는 것인 치료 방법.
  111. 제70항 내지 제110항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 인간 대상체인 치료 방법.
  112. 제70항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 대상체는 암을 갖거나 또는 암을 갖는 것으로 의심되는 것인 치료 방법.　
  113. 제70항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 믹소마 바이러스는 결핍성 선천성 항-바이러스 반응을 갖는 세포를 감염시킬 수 있는 것인 치료 방법.
  114. 제70항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액암은 골수종, 백혈병, 또는 림프종인 치료 방법.
  115. 제70항 내지 제114항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액암은 다발성 골수종인 치료 방법.
  116. 제70항 내지 제115항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 약학 조성물로 투여되는 것인 치료 방법.
  117. 제70항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 전신으로 투여되는 것인 치료 방법.
  118. 제70항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 비경구로 투여되는 것인 치료 방법.
  119. 제70항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 백혈구는 주입으로 투여되는 것인 치료 방법.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3946373A4 (en) * 2019-03-28 2023-01-11 Arizona Board of Regents, a Body Corporate of the State of Arizona, acting for and on behalf of Arizona State University ONCOLYTIC MYXOMA VIRUS EXPRESSING FAST P14 FOR TREATING BLOOD CANCER
JP2022546539A (ja) 2019-09-02 2022-11-04 アリゾナ ボード オブ リージェンツ オン ビハーフ オブ アリゾナ ステート ユニバーシティ 粘液腫ウイルスを用いて癌を治療するための新しい腫瘍崩壊ウイルスプラットフォーム
MX2022004323A (es) * 2019-10-10 2022-08-02 Univ Arizona State Virus oncoliticos que expresan captadores multiespecificos de celulas inmunitarias.
WO2023192955A2 (en) * 2022-03-30 2023-10-05 Arizona Board Of Regents On Behalf Of Arizona State University Cancer therapies comprising a nuclear export inhibitor and an oncolytic virus

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA05009526A (es) * 2003-03-07 2005-12-15 Robarts Res Inst Uso de virus de mixoma para el tratamiento terapeutico de cancer e infeccion viral cronica.
CA2565974A1 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Receptor Biologix, Inc. Cell surface receptor isoforms and methods of identifying and using the same
EP1863906A4 (en) * 2005-03-07 2009-06-03 Robarts Res Inst USE OF MYXOMA VIRUS AND RAPAMYCIN COMBINATION FOR THERAPEUTIC TREATMENT
NZ572893A (en) * 2006-06-01 2011-06-30 Robarts Res Inst Myxoma virus mutants for cancer treatment
FR2946536B1 (fr) * 2009-06-11 2011-07-29 Agronomique Inst Nat Rech Utilisation d'une souche attenuee de myxoma virus comme oncolytique
AU2011286024B2 (en) * 2010-08-02 2014-08-07 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
WO2014089354A1 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 The Regents Of The University Of California Cd138-targeted interferon demonstrates potent apoptotic and anti-tumor activities
PL2968520T3 (pl) * 2013-03-14 2022-01-03 Macrogenics, Inc. Dwuspecyficzne cząsteczki, które są immunoreaktywne wobec immunologicznych komórek efektorowych wykazujących ekspresję receptora aktywującego
CN106714835A (zh) * 2014-09-17 2017-05-24 默克专利股份公司 治疗骨转移疾病的方法、其药物以及预测治疗骨转移疾病的临床结果的方法
JP6797803B2 (ja) * 2014-12-31 2020-12-09 セルジーン コーポレイション ナチュラルキラー細胞を用いて血液障害、固形腫瘍、又は感染性疾患を治療する方法
WO2017210058A1 (en) * 2016-06-01 2017-12-07 Ibc Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with t-cell redirecting bispecific antibodies and checkpoint inhibitors
WO2018049261A1 (en) * 2016-09-09 2018-03-15 Icellhealth Consulting Llc Oncolytic virus expressing immune checkpoint modulators
CN110325209A (zh) * 2017-02-24 2019-10-11 宏观基因有限公司 能够结合cd137和肿瘤抗原的双特异性结合分子及其用途
AU2018223821B2 (en) * 2017-02-27 2022-05-19 Shattuck Labs, Inc. TIGIT- and LIGHT-based chimeric proteins
CN107164338A (zh) * 2017-06-27 2017-09-15 镇江市卫克生物科技有限公司 一种重组溶瘤病毒及其应用
JP2022546539A (ja) * 2019-09-02 2022-11-04 アリゾナ ボード オブ リージェンツ オン ビハーフ オブ アリゾナ ステート ユニバーシティ 粘液腫ウイルスを用いて癌を治療するための新しい腫瘍崩壊ウイルスプラットフォーム

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