KR20210019977A - 엑세나타이드 이종이량 유사체 및 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 엑세나타이드 이종이량 유사체 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명은 종래의 엑세나타이드 및 이의 유사체에 비해 매우 향상된 체내 안정성을 보이는 신규 당뇨 및 비만 치료 물질을 제공한다.

Description

엑세나타이드 이종이량 유사체 및 이의 용도 {Exenatide heterodimeric form analogs and uses thereof}
본 발명은 엑세나타이드 이종이량 유사체 및 이의 용도에 관한 것이다.
GLP-1R 및 GCGR (glucagon receptor)은 각각 체내의 GLP-1, 글루카곤과 결합하여 혈당 조절을 통해 체내 항상성 유지에 중요한 작용을 한다.
GLP-1R은 대뇌 피질 및 장에서 활성화되어 식욕을 저해하는 동시에 장 운동성을 감소시켜 체중 감소에 중요하게 작용하는 것으로 알려져 있다.
또한, GCGR은 백색 지방 조직에서 지방 분해 효소인 HSL, ATGL 활성 증가, 갈색 지방 조직에서의 열에너지 발생 증가를 통해 축적된 지방을 분해하여 체중 감소에 기여하는 것으로 알려져 있으며 (REFERENCE), 제2형 당뇨병, 비만을 가진 환자를 대상으로 한 대사 기능 연구에서 글루카곤과 GLP-1을 동시에 투여하였을 시 글루카곤의 고혈당 위험성이 GLP-1의 인슐린 분비 증진에 의해 방지되어 혈당수준이 안정화되고, 열에너지 발생이 증가됨을 확인하였다.
본 발명자들은 GLP-1 유사체인 엑세나타이드 및 글루카곤 (glucagon)을 이용한 유사체를 제작하여 이중 표적 효현제 (dual agonist)로써 작용하여 혈당 조절능 및 생체 내 안정성이 개선되며 신규 당뇨 및 비만 치료 후보물질의 개발을 하고자 한다.
본 발명에서는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 개발하여, 약물의 효능 및 체내 안정성이 증진된 신규 당뇨 치료 후보물질의 개발을 하고자 한다.
본 발명의 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선 또는 완화용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선 또는 완화용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 식욕 억제용 식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 당뇨의 개선, 예방 또는 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에 투여하여 당뇨의 개선, 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 비만의 개선, 예방 또는 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에 투여하여 비만의 개선, 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 당뇨 개선, 예방 또는 치료 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 비만 개선, 예방 또는 치료 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 식욕 억제 용도를 제공하는 것이다.
본 발명은 엑세나타이드 (exenatide) 이종이량 유사체 및 이의 용도에 관한 것이다.
이하 본 발명을 더욱 자세히 설명하고자 한다.
본 발명의 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체에 관한 것이다.
본 발명에 있어서 엑세나타이드 이종이량 유사체는 엑세나타이드 (exenatide) 아미노산 서열의 1 내지 15개의 아미노산이 결실되고, 지방산이 접합 (conjugation)된 엑세나타이드 유사체로 이루어진 제1체; 및 글루카곤으로 이루어진 제2체;를 포함하고, 상기 제1체 및 제2체는 결합되어 이종이량 유사체를 형성하고 있는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 엑세나타이드는 GLP-1 수용체 항진제로, 디펩티딜 펩티데이즈-IV (DPP-IV)에 의해 빠르게 분해되는 GLP-1을 모방한 유사체 (GLP-1 metrics)로서, DPP-IV에 의해 빠르게 분해되지 않으면서 당-의존적 인슐린 분비를 촉진하고 글루카곤 분비, 위 배출 및 식욕을 억제하며, 베타세포 보호효과를 보이는 GLP-1의 효과를 나타내는 약물이다.
본 발명에 있어서 엑세나타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 엑세나타이드 또는 서열번호 1의 아미노산 서열과 서열 상동성 최소 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상을 나타내는 엑세나타이드 유사체를 포함한다.
본 발명의 일 예에 있어서, 엑세나타이드는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있으며, 예를 들어, 서열번호 1의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 글루카곤은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 글루카콘 또는 서열번호 2의 아미노산 서열과 서열 상동성 최소 80% 이상, 90% 이상, 95% 이상을 나타내는 글루카콘 유사체를 포함한다.
본 발명의 일 예에 있어서, 글루카곤은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있으며, 예를 들어, 서열번호 2의 아미노산 서열로 이루어진 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 상기 제1체 및 제2체의 결합은 트리아졸을 통해 결합하는 것일 수 있으며, 예를 들어, 제1체의 C-말단과 제2체의 C-말단이 트리아졸 (triazole)의 결합을 이루고 있는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 엑세나타이드 유사체는 엑세나타이드의 아미노산 서열의 일부 아미노산이 결실되고 지방산이 접합 (conjugation)된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 결실은 엑세나타이드의 아미노산 서열의 1 내지 15개, 1 내지 14개, 1 내지 13개, 1 내지 12개, 1 내지 11개, 1 내지 10, 1 내지 9개, 4 내지 15개, 4 내지 14개, 4 내지 13개, 4 내지 12개, 4 내지 11개, 4 내지 10, 4 내지 9개, 7 내지 15개, 7 내지 14개, 7 내지 13개, 7 내지 12개, 7 내지 11개, 7 내지 10, 예를 들어, 7 내지 9개의 아미노산이 결실된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 결실은 엑세나타이드의 아미노산 서열의 N-말단 또는 C-말단의 아미노산이 결실된 것일 수 있으며, 예를 들어, 엑세나타이드의 아미노산 서열의 C-말단의 아미노산이 결실된 것일 수 있다.
본 발명의 일 구체예에 있어서, 결실은 엑세나타이드의 아미노산 서열의 C-말단의 아미노산이 1 내지 15개, 1 내지 14개, 1 내지 13개, 1 내지 12개, 1 내지 11개, 1 내지 10, 1 내지 9개, 4 내지 15개, 4 내지 14개, 4 내지 13개, 4 내지 12개, 4 내지 11개, 4 내지 10, 4 내지 9개, 7 내지 15개, 7 내지 14개, 7 내지 13개, 7 내지 12개, 7 내지 11개, 7 내지 10, 예를 들어, 7 내지 9개 결실된 것일 수 있다.
본 발명의 엑세나타이드 유사체에서의 지방산은 아미노산 서열의 일부 아미노산이 결실된 엑세나타이드의 다양한 위치에 접합된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 지방산은 당업계에 공지된 다양한 포화 지방산 및 불포화 지방산을 포함한다.
본 발명에 있어서 지방산은 C3 내지 C36의 탄소수를 갖는 지방산인 것일 수 있으며, 예를 들어, 프로피온산(propionic acid), 부티르산(butyric acid), 발레르산(valeric acid), 카프로산(caproic acid), 에난트산(enanthic acid), 카프릴릭산(caprylic acid), 펠라르곤산(pelargonic acid), 카프릭산(capric acid), 언데실산(undecylic acid), 라우르산(lauric acid), 트리데실산(tridecylic acid), 미리스트산(myristic acid), 펜타데실산(pentadecylic acid), 팔미트산(palmitic acid), 마르가르산(margaric acid), 스테아르산(stearic acid), 논아데실산(nonadecylic acid), 아라키트산(arachidic acid), 헤네이코실산(heneicosylic acid), 베헨산(behenic acid), 트리코실(tricosylic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 펜타코실산(pentacosylic acid), 세로트산(cerotic acid), 헵타코실산(heptacosylic acid), 몬탄산(montanic acid), 논아코실산(nonacosylic acid), 멜리스산(melissic acid), 헤나트리아콘틸산(henatriacontylic acid), 라세로산(lacceroic acid), 사일산(psyllic acid), 게드산(geddic acid), 세로플라스트산(ceroplastic acid) 및 헥사트리아콘틸산(hexatriacontylic acid)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 일 구현예에 있어서, 지방산은 일부 아미노산이 결실된 엑세나타이드의 아미노산 서열의 C-말단의 Lys 잔기, N-말단 또는 C-말단에 접합된 것일 수 있으며, 예를 들어, C-말단에 접합된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서 아미노산 서열의 일부 아미노산이 결실된 엑세나타이드 및 지방산의 접합은 직접 결합 및/또는 간접 결합을 모두 포함한다.
본 발명에 있어서 직접 결합은 지방산에 있는 카복실기와 같은 작용기와 아미노산이 결실된 엑세나타이드의 작용기 (예를 들어, -NH2)가 반응하여 공유결합을 형성함으로써 결실된 엑세나타이드-지방산 접합을 형성할 수 있다.
본 발명에 있어서 간접 결합은 당업계에서 링커로 통상적으로 이용되는 화합물이 중개하여 결실된 엑세나타이드-지방산 접합을 형성할 수 있다.
본 발명에서 이용되는 링커는 당업계에서 링커로 이용되는 어떠한 화합물도 가능하며, 결실된 엑세나타이드에 있는 작용기 종류에 따라 적합한 링커를 선택할 수 있으며, 예를 들어, 링커는 N-숙시니미딜 요오도아세테이드 (N-succinimidyl iodoacetate), N-히드록시숙시니미딜 브로모아세테이트(N-Hydroxysuccinimidyl Bromoacetate), m-말레이미도벤조일-N-히드록시숙신이미드 에스테르 (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester), m-말레이미도벤조일-N-히드록시설포숙신이미드 에스테르 (m-Maleimidobenzoyl-N-hydroxysulfosuccinimide ester), N-말레이미도부티릴옥시숙신아미드 에스테르 (N-Maleimidobutyryloxysuccinamide ester) 및 Lys을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
구체적으로, 아미노산이 결실된 엑세나타이드는 그의 C-말단에 링커를 추가적으로 결합되며, 상기 지방산은 상기 C-말단에 결합된 링커에 접합되어 있다. 예를 들어, 아미노산이 결실된 엑세나타이드의 C-말단에 링커로서 Lys이 결합되고 이 Lys에 지방산이 접합될 수 있다. 이 경우, 상기 추가적인 Lys의 -NH2 작용기와 지방산의 카복실기가 반응하여 컨쥬게이트를 형성할 수 있다.
본 명세서에서 용어 “AGM-212”는 서열번호 1로 이루어진 엑세나타이드의 서열의 1번부터 32번까지의 서열로 이루어지며, 상기 서열 C-말단에 카프릭 산 (capric acid)이 측쇄에 결합된 라이신 (lysine)을 접합한 것으로, Ex4(1-32)K-cap의 서열로 명시한다.
본 명세서에서 용어 "AGM-212-GCG"는 AGM-212의 C-말단과 글루카곤의 C-말단이 트리아졸 (triazole)의 결합을 이루고 있는 물질이다.
본 발명의 다른 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 약제학적 조성물에 있어서 엑세나타이드 이종이량 유사체에 관한 기재는 상술한 바와 동일하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체를 포함할 수 있다.
본 발명에 있어서 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 약제학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용되는 담체 및 제제는 Remington's Pharmaceutical Sciences (19th ed., 1995)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 경구 또는 비경구로 투여할 수 있고, 비경구 투여인 경우에는 정맥내 주입, 피하 주입, 근육 주입, 복강 주입, 경피 투여 등으로 투여할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물의 적합한 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하며, 보통으로 숙련된 의사는 소망하는 치료 또는 예방에 효과적인 투여량을 용이하게 결정 및 처방할 수 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 약제학적 조성물의 1일 투여량은 0.001-10000 ㎎/㎏이다.
본 발명의 약제학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체 및/또는 부형제를 이용하여 제제화 함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다. 이때 제형은 오일 또는 수성 매질중의 용액, 현탁액 또는 유화액 형태이거나 엑스제, 분말제, 과립제, 정제 또는 캅셀제 형태일 수도 있으며, 분산제 또는 안정화제를 추가적으로 포함할 수 있다.
본 명세서에서 용어 '유효성분으로 포함하는'이란 하기의 엑세타나이드 유사체의 효능 또는 활성을 달성하는 데 충분한 양을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 조성물에 포함된 양적 상한은 당업자가 적절한 범위 내에서 선택하여 실시할 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선 또는 완화용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선 또는 완화용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 또 다른 일 예는 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 식욕 억제용 식품 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 식품 조성물에 있어서 엑세나타이드 이종이량 유사체에 관한 기재는 상술한 바와 동일하여, 그 기재를 생략한다.
본 발명의 조성물이 식품 조성물인 경우에는 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료 등의 형태로 제조될 수 있다. 예컨대 캔디류의 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 또는 건강보조 식품류 등이 있다.
본 발명의 식품 조성물은 유효성분으로서 식품 제조 시에 통상적으로 첨가되는 성분을 포함할 수 있으며, 예를 들어, 단백질, 탄수화물, 지방, 영양소, 조미제 및 향미제를 포함한다.
상술한 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스, 올리고당 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 사이클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 향미제로서 천연 향미제 [타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어 레바우디오시드 A, 글리시르히진 등]) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 사용할 수 있다. 예컨대, 본 발명의 식품 조성물이 드링크제로 제조되는 경우에는 본 발명의 화합물 이외에 구연산, 액상과당, 설탕, 포도당, 초산, 사과산, 과즙, 두충 추출액, 대추 추출액, 감초 추출액 등을 추가로 포함시킬 수 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 당뇨의 개선, 예방 또는 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에 투여하여 당뇨의 개선, 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체를 비만의 개선, 예방 또는 치료 유효량으로 이를 필요로 하는 대상에 투여하여 비만의 개선, 예방 또는 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 당뇨 개선, 예방 또는 치료 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 비만 개선, 예방 또는 치료 용도를 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 엑세나타이드 이종이량 유사체의 식욕 억제 용도를 제공하는 것이다.
본 명세서에서 용어 "당뇨"는 포도당-비관용(intolerance)을 초래하는 인슐린의 상대적 또는 절대적 부족으로 특징되는 만성질환을 의미한다. 용어 당뇨는 모든 종류의 당뇨병을 포함하며, 예를 들어, 제1형 당뇨, 제2형 당뇨 및 유전성 당뇨를 포함한다. 제1형 당뇨는 인슐린 의존성 당뇨병으로서, β-세포의 파괴에 의해 주로 초래된다. 제2형 당뇨는 인슐린 비의존성 당뇨병으로서, 식사 후 불충분한 인슐린 분비에 의해 초래되거나 또는 인슐린 내성에 의해 초래된다.
본 명세서에서 용어 "비만"은 건강에 이상을 초래할 정도로 지방 조직이 체내에 과잉으로 축적된 상태를 의미한다.
본 명세서에서 용어 "식욕 억제"는 음식을 섭취하고자 하는 욕구가 억제되는 것을 의미한다.
본 발명은 엑세나타이드 이종이량 유사체 및 이의 용도에 관한 것으로, 본 발명은 종래의 엑세나타이드 및 이의 유사체에 비해 향상된 체내 안정성을 보이는 신규 당뇨 치료 물질을 제공한다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG의 인슐린 분비능을 rat islets에서 rat insulin ELISA를 통해 분석한 결과이다.
도 2a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 9주간 일일1회 피하 투여하여 비만 질병 동물 모델에서의 체중 및 식이 조절능을 분석한 결과이다.
도 2b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 9주간 일일1회 피하 투여하여 비만 질병 동물 모델에서의 체중 및 식이 조절능을 분석한 결과이다.
도 2c는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 9주간 일일1회 피하 투여하여 비만 질병 동물 모델에서의 체중 및 식이 조절능을 분석한 결과이다.
도 3a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 비만 질병 동물 모델에서의 9주 장기 약물 투여 실험 중 7주차에 해당하는 기간에 당 내성 변화를 분석한 결과이다.
도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 비만 질병 동물 모델에서의 9주 장기 약물 투여 실험 중 7주차에 해당하는 기간에 당 내성 변화를 분석한 결과이다.
도 4a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 비만 질병 동물 모델에서의 9주 장기 약물 투여 실험 중 8주차에 해당하는 기간에 인슐린 내성 변화를 분석한 결과이다.
도 4b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 비만 질병 동물 모델에서의 9주 장기 약물 투여 실험 중 8주차에 해당하는 기간에 인슐린 내성 변화를 분석한 결과이다.
도 5a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 간 내 지질량을 분석한 결과이다.
도 5b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 간 내 지질량을 분석한 결과이다.
도 6a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델에서의 열에너지 증진 효과를 분석한 결과이다.
도 6b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델에서의 열에너지 증진 효과를 분석한 결과이다.
도 7a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 갈색 지방 조직 내 열에너지 발생 관련 인자들의 발현량을 웨스턴 블랏을 통해 분석한 결과이다.
도 7b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 갈색 지방 조직 내 열에너지 발생 관련 인자들의 발현량을 q-PCR을 통해 분석한 결과이다.
도 8a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 백색 지방 조직 내 지방 분해 관련 인자들의 발현량을 확인하여 지방 분해능을 분석한 도면이다.
도 8b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 백색 지방 조직 내 지방 분해 관련 인자들의 발현량을 확인하여 지방 분해능을 분석한 도면이다.
도 8c는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 백색 지방 조직 내 지방 분해 관련 인자들의 발현량을 확인하여 지방 분해능을 분석한 도면이다.
도 8d는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 백색 지방 조직 내 지방 분해 관련 인자들의 발현량을 확인하여 지방 분해능을 분석한 도면이다.
도 8e는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 피하 투여한 비만 질병 동물 모델의 백색 지방 조직 내 지방 분해 관련 인자들의 발현량을 확인하여 지방 분해능을 분석한 도면이다.
도 9a는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 근육세포인 C2C12에 농도별로 처리하여 내 지방 분해능 및 열에너지 발생 관련 인자들의 발현량을 분석한 결과이다.
도 9b는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 근육세포인 C2C12에 농도별로 처리하여 내 지방 분해능 및 열에너지 발생 관련 인자들의 발현량을 분석한 결과이다.
도 9c는 본 발명의 일 실시예에 따라 AGM-212-GCG을 근육세포인 C2C12에 농도별로 처리하여 내 지방 분해능 및 열에너지 발생 관련 인자들의 발현량을 분석한 결과이다.
이하, 본 발명을 하기의 실시예에 의하여 더욱 상세히 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시하기 위한 것일 뿐이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의하여 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. AGM-212-GCG의 제조
1-1. 화학식 1
트리틸 레진(trityl resin)에 Fmoc-Lys(dde)-OH 및 DMF를 첨가하여 Fmoc-Lys(dde) 트리틸 레진을 제조하였다. Fmoc-Lys(dde) 트리틸 레진에 20% 피페리딘(piperidine)이 포함된 DMF 및 Fmoc-Ser(tBu)-OH 및 HOBt(hydroxyl-benzo triazole)를 첨가하여 Fmoc-Ser(tBu)-Lys(dde) 트리틸 레진을 제조하였다. Fmoc-Ser(tBu)-Lys(dde) 트리틸 레진에 상기 제작 방법을 동일하게 하여 순차적으로 Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Pro-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Asn(trt)-OH, Fmoc-Lys(boc)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Cys(trt)-OH, Fmoc-Ile-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Arg(pbf)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Cys(Acm)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Gln(trt)-OH, Fmoc-Lys(boc)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Le)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Glu(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-His(trt)-OH을 첨가하여 아래의 화학식 1을 제조하였다.
[화학식 1]
Fmoc-His(trt)-Gly-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Lyc(Boc)-Gln(trt)-Met-Glu(tBu)-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Cys(trt)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys(dde)-트리틸 레진
1-2. 화학식 2
화학식 1에 2% NH2NH2·H2O를 포함하는 DMF를 첨가하고 dde를 제거하여 화학식 2을 제조하였다.
[화학식 2]
Fmoc-His(trt)-Gly-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Lyc(Boc)-Gln(trt)-Met-Glu(tBu)-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Cys(trt)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser(tBu)-Lys-트리틸 레진
1-3. 화학식 3
화학식2에 capric acid 및 HOBt 및 DIC를 포함하는 DMF를 첨가하여 화학식 4를 제조하였다.
[화학식 3]
Fmoc-His(trt)-Gly-Glu(tBu)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Leu-Ser(tBu)-Lyc(Boc)-Gln(trt)-Met-Glu(tBu)-Glu(tBu)-Cys(Acm)-Ala-Val-Arg(pbf)-Leu-Phe-Ile-Cys(trt)-Trp(Boc)-Leu-Lys(Boc)-Asn(trt)-Gly-Gly-Pro-Ser(tBu)-Lys(capric acid)- Lys(N3)-트리틸 레진
1-4. 화학식 4
화학식 3의 보호기를 절단 한 후, 정제하여 화학식 4를 제조하였다.
[화학식 4]
His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lyc-Gln-Met-Glu-Glu-Cys(Acm)-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Cys-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Lys(capric acid)-Lys(N3)-OH
1-5. 화학식 5
트리틸 레진에 Fmoc-propargylglycine-OH 및 DMF를 첨가하여 Fmoc-propargylglycine 트리틸 레진을 제조하였다. Fmoc-propargylglycine 트리틸 레진에 20% 피페리딘(piperidine)이 포함된 DMF 및 Fmoc-Thr(tBu)-OH 및 HOBt(hydroxyl-benzo triazole)를 첨가하여 Fmoc-Thr(tBu)-propargylglycine 트리틸 레진을 제조하였다. Fmoc-Thr(tBu)-propargylglycine 트리틸 레진에 상기 제작 방법을 동일하게 하여 순차적으로 Fmoc-Asn(trt)-OH, Fmoc-Met-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Trp(Boc)-OH, Fmoc-Gln(trt)-OH, Fmoc-Val-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Gln(trt)-OH, Fmoc-Ala-OH, Fmoc-Arg(pbf)-OH, Fmoc-Arg(pbf)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Leu-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Lys(trt)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Tyr(tBu)-OH, Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmor-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Phe-OH, Fmor-Thr(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Gln(trt)-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-His(trt)-OH을 첨가하여 아래의 화학식 5을 제조하였다.
[화학식 5]
Fmoc-His(trt)-Ser(tBu)-Gln(trt)-Gly-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(tBu)-Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(trt)-Tyr(tBu)-Leu-Asp(tBu)-Ser(tBu)-Arg(pbf)-Arg(pbf)-Ala-Gln(trt)-Asp(tBu)-Phe-Val-Gln(trt)-Trp(Boc)-Leu-Met-Asn(trt)-Thr(tBu)-propargyglycine-트리틸 레진
1-6. 화학식 6
화학식 5의 보호기를 절단하고 정제하여 화학식 6를 제조하였다.
[화학식 6]
His-Ser-Gln-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-Asp-Ser-Arg-Arg-Ala-Gln-Asp-Phe-Val-Gln-Trp-Leu-Met-Asn-Thr-propargyglycine-OH
1-7. AGM-212-GCG
화학식 6에 Copper iodide 및 sodium ascorbate 및 화학식 4의 물질을 첨가하여 표 1의 AGM-212-GCG을 제조하였다.
명명 서열
Ex4 HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSSGAPPPS
Glucagon HSQGTFTSDY SKYLDSRRAQ DFVQWLMNT
AGM-212 HGEGTFTSDL SKQMEEEAVR LFIEWLKNGG PSK-capric acid
AGM-212-GCG AGM-212- TRIAZOL-Glucagon
실험예 1. 유사체의 GLP-1 수용체 및 GCGR 결합력 확인
실시예 1에서 제조한 유사체의 GLP-1 수용체와 GCGR에 대한 결합력을 알아보기 위해, luciferase assay system을 사용하였다. Luciferase assay system은 세포의 특정 수용체에 대한 리간드의 결합력을 측정하여 수용체의 활성 정도를 확인할 수 있는 방법이다.
구체적으로, 섬유아세포주인 HEK293T (1 x 104 cells/ml, 한국세포주은행)을 96well white cell culture plate에 24시간 배양 후, human GLP-1R (pcDNA3.1_hGLP-1R) 또는 human GCGR (pcDNA3.1_hGCGR), cAMP response element (CRE, pcDNA3.1_hCRE)를 첨가하여 형질전환 (transfection)하였다. 24시간 배양 후, serum이 없는 배지로 교체하여, 16시간 배양 후, 각 유사체를 6시간 동안 처리하였다. 활성화된 GLP-1R과 GCGR에 의해 reporter gene인 luciferase의 발현 정도를 luminometer를 이용하여 정량 하여, 그 결과를 표 2에 나타내었다.
GLP-1R GCGR
명명 EC50
(nM)		 Emax
(fold induction over basal)		 EC50
(nM)		 Emax
(fold induction over basal)
Ex4 0.8 ± 0.12 10.6 ± 1.5 - -
AGM-212 0.91 ± 0.21 10.4 ± 1.4 - -
Glucagon - - 0.93 ± 0.05 12.23 ± 0.24
AGM-212-GCG 0.36 ± 0.32 12.77 ± 1.19 0.69 ± 0.07 9.71 ± 0.23
표 2에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG가 Ex4보다 약 2배이상 증진된 EC50 수준을 발견하였다. 이 결과는 Triazole moiety로 구성된 엑세나타이드 동종 유사체와 Glucagon 의 접합체가 GLP-1 수용체에 대해 기존의 Ex4보다 또한 AGM-212보다도 높은 활성을 가짐을 알 수 있다.
또한, AGM-212-GCG가 글루카곤과 유사한 수준의 EC50 수준을 보임을 확인하였다. 이 결과는, 글루카곤과 엑세나타이드 유사체가 Click reaction에 의한 triazole moiety를 통해 접합되더라도, GCGR에 대한 활성이 유지됨을 알 수 있다. 하지만 모든 유사체가 GLP-1 수용체에 대해 nM 수준은 선택적이고 특이적인 효현제의 기능을 가짐을 알 수 있다.
그 결과, AGM-212-GCG는 Ex4, AGM-212보다 GLP-1R에 대한 높은 활성을 보이며, GCGR에 대해 Glucagon과 유사한 수준의 활성을 가지며 이것은 AGM-212-GCG가 두 상이한 수용체에 대해서 선택적이고 특이적인 효현제의 기능을 가짐을 알 수 있다.
실험예 2. 유사체의 인슐린 분비능 확인
실시예 1에서 제조한 유사체의 인슐린 분비능을 확인하기 위해, rat islets에 대한 유사체의 당 의존성 인슐린 분비능을 확인하였다. SD rat (다물사이언스) 8주령의 pancreas를 추출하여, islets을 분리하였다. 분리된 islets을 28 mM glucose에서의 각 유사체를 농도별(10 nM, 100 nM)로 처리 한 후, rat insulin ELISA kit를 이용해 분비된 인슐린 양을 측정하여, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
목록 Insulin secretion from rat islets (pg/ml)
1 nM 10 nM
Control 1592.45 ± 184.04 1717.43 ± 261.23
Ex4 1684.90 ± 470.56 4201.25 ± 668.91
AGM-212-GCG 2212.52 ± 294.86 2693.58 ± 547.69
도 1 및 표 3에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG가 Control에 대비하여 농도 의존적으로 증진된 인슐린 분비능을 보이고 있음을 발견하였다. 이는 AGM-212-GCG가 Glucagon과의 접합에 의한 인슐린 분비능의 저하를 보이지 않으며, 엑세나타이드와 유사한 인슐린 분비 유도 효과를 보유하고 있음을 나타낸다.
실험예 3. 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 체중 및 식이 조절능 확인
실시예 1에서 제조한 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 체중 감소 및 식이 조절능 시험 평가를 하였다. C57BL/6 마우스를 대상으로 비만과 고혈당 증세를 동시에 보유하도록 60% 이상 지방이 함유된 고지방 식이 섭취를 유도한 비만 질병 동물 모델을 제작하였다. 16주령의 비만 질병 마우스를 대상으로 9주간 AGM-212-GCG을 50 nmole/kg으로 일일 1회 피하 투여하여, 그 결과를 도 2a 내지 도 2c에 나타내었다.
군 체중 변화량 (%)
Vehicle 17.17 ± 0.56
Ex4 -2.63 ± 1.06
AGM-212 11.71 ± 2.40
Glucagon -8.67 ± 1.76
AGM-212 + 글루카곤 -12.36 ± 2.11
AGM-212-GCG -21.03 ± 2.21
도 2a 내지 도 2c 및 표 4에서 확인할 수 있듯이, 3주차부터 AGM-212-GCG을 투여한 군의 체중이 유의미하게 감소됨을 확인하였고, 5주차부터 AGM-212 또는 AGM-212와 glucagon의 동시 투여군과 대비하여 유의미한 차이를 보임을 확인하였다. 또한, 실험이 종료된 9주차에서 AGM-212-GCG을 투여한 군의 식이 섭취량도 유의미하게 감소됨을 확인하였다.
실험예 4. 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 당내성 개선효과 확인
실험예 3의 실험 과정 중 7주에 해당하는 기간에 AGM-212-GCG으로 인한 당내성 개선 효과를 확인하였다. 구체적으로, 실험 7주차의 비만 질병 동 마우스를 16시간 절식한 후, 각 유사체들을 1 nmole/kg으로 피하투여하고, 30분 후, 포도당(1.5 g/kg)을 복강으로 투여하였다. 120분 동안, 0, 15, 30, 45, 60, 90, 120분에서의 마우스 꼬리 미정맥에서 추출한 혈액을 이용하여 혈당측정기(acu-check, Roche, Germany)로 혈당을 측정하여, 그 결과를 도 3a 내지 도 3b에 나타내었다.
군 Blood glucose (Area under curve)
Vehicle 43957.5 ± 2483.8
Ex4 17795.0 ± 2137.4
AGM-212 45846.2 ± 5538.1
Glucagon 29029.5 ± 1784.5
AGM-212 + 글루카곤 23684.5 ± 3393.1
AGM-212-GCG 16636.2 ± 837.3
도 3a 내지 도 3b 및 표 5에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG 을 투여한 마우스 군의 혈당이 감소되었고, 대조군 대비 각 혈당 측정 시간대에서 유의한 혈당 감소를 보였다. 상기 결과는 AGM-212 GCG의 장기간 투여에 따른 비만 질병 마우스의 당 내성이 개선되었음을 시사한다.
실험예 5. 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 인슐린 내성 개선효과 확인
비만에 의한 체내 지방 축적량 증가는 인슐린을 생산하는 췌장 islet의 베타 세포에 대한 지방 독성을 증가시켜 인슐린 생산량을 감소시키고, 식후 증가한 혈당에 대해 이를 흡수, 저장하는 조직인 간, 근육에서의 인슐린 소비를 저해하여 고 인슐린 혈증과 인슐린의 기능 감소를 유도해 고혈당 증세를 유발하는 주 원인인 인슐린 저항성 증가의 주 원인으로 보고되어 있다.
실험예 3의 9주 비만 질병 마우스를 사용한 장기 투여 실험 8주에 해당하는 기간에 인슐린 내성 실험을 진행하여 약물의 장기 투여에 따른 인슐린에 대한 민감성 (insulin sensitivity)을 확인하였으며, 장기 투여 실험 종료 후 마우스 혈액을 채취하여 mouse insulin ELISA를 통해 혈중 인슐린 농도를 분석하여 인슐린 저항성 (insulin resistance)의 개선 여부를 확인하였다.
구체적으로, 장기 투여 실험 8주차의 비만 질병 마우스를 6시간 절식한 후, 각 유사체들을 1 nmol/kg의 농도로 피하 투여하고, 30분 경과 후, 인슐린 (1 unit/kg)을 복강 투여하였다. 0, 15, 30, 60, 90, 120 분 경과 후 마우스의 꼬리에서 혈액을 채취, 이를 혈당 측정기 (acc-check, Roche, Germany)로 혈당을 측정하여 인슐린에 대한 민감성을 분석하여, 그 결과를 도 4a 내지 도 4b 및 표 6, 표 7에 나타내었다.
군 Insulin (ng/ml) Leptin (pg/ml) Triglyceride (nmol/ul) Cholesterol(ug/ul)
Vehicle 241.72 ± 56.27 669.92 ± 30.47 56.25 ± 2.11 205.92 ± 7.19
Ex4 67.52 ± 12.33 341.41 ± 43.10 48.64 ± 1.94 156.17 ± 8.56
AGM-212 44.77 ± 12.21 212.52 ± 23.92 40.51 ± 1.28 134.28 ± 5.06
Glucagon 86.08 ± 21.43 463.09 ± 44.22 43.01 ± 1.38 161.43 ± 7.55
AGM-212 + Glucagon 44.46 ± 9.17 175.21 ± 40.57 34.51 ± 0.85 111.23 ± 1.62
AGM-212-GCG 38.33 ± 4.46 94.49 ± 22.72 33.93 ± 2.44 95.47 ± 6.27
군 Blood glucose (Area under curve)
Vehicle 21231.2 ± 293.4
Ex4 11847.0 ± 582.7
AGM-212 23749.5 ± 387.6
Glucagon 13102.5 ± 638.8
AGM-212 + 글루카곤 15222.0 ± 263.6
AGM-212-GCG 13166.2 ± 504.1
도 4a 내지 도 4b 및 표 6에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG을 투여한 실험군의 혈당이 복강 투여한 인슐린에 대해 높은 민감성으로 보이며 혈당이 빠르게 감소됨을 확인하였다.
또한, 표 7에서 확인할 수 있듯이, 실험 종료 후 AGM-212-GCG을 투여한 마우스 군의 혈중 인슐린 농도가 유의하게 감소하였음을 확인하였다.
상기 결과들을 통해 AGM-212-GCG의 장기간 투여에 인슐린 민감성, 고인슐린 혈증이 개선되어 비만 질병 마우스의 인슐린 기능의 회복을 유도하였음을 시사한다.
실험예 6. 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 간내 지방 축적량 변화 확인
고열량 식이 섭취에 의한 과체중, 비만의 발생은 대사 조직인 간 내 지방 축적 및 간세포 내 지질 합성 등을 증가시켜 대사 질환인 비알코올성 지방간 (non-alcoholic fatty liver disease)의 발병률을 증가시키는 원인으로 알려져 있다. AGM-212-GCG의 장기 투여에 따른 비만 질병 마우스의 체중 감소가 연관된 대사 질환인 지방간의 증세 완화에 영향을 주는지 확인하기 위해, 지질 확인 염색법인 Oil red O staining을 통해 간 조직 내 지질 량을 분석하였으며, 또한 간 조직을 분해하여 세포 내 지질 저장 형태인 Triglyceride 의 양을 확인하였다.
구체적으로, 실험예 3의 9주 장기 투여 실험 종료 후 마우스 간을 적출하여 각 엽 (lobe) 별로 구분해 일부는 4% formaldehyde에 넣어 고정시킨 뒤, 파라핀 블록을 제조하여 슬라이스 한 후 만들어진 슬라이드에 지질 확인 염색 시약인 Oil red O를 처리하여 염색 시킨 후, 이를 현미경을 통해 관찰하였다. 간 조직 내 triglyceride 량의 측정은 분리한 간 조직을 70 um cell strainer를 이용해 분해한 후, 14,000 rpm에서 원심 분리해 얻어진 triglyceride를 포함한 상층액을 일정 비율로 희석한 후 Triglyceride ELISA를 이용해 분석하여, 그 결과를 도 5a 내지 도 5b에 나타내었다.
군 Hepatic triglyceride (mg/g)
Vehicle 39.38 ± 4.08
AGM-212 7.50 ± 1.01
AGM-212-GCG 3.82 ± 0.46
도 5a 내지 도 5b 및 표 5에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG을 투여한 마우스의 간 내 Oil red O 로 염색된 지질 범위가 감소하였음을 확인할 수 있으며, 간 조직 내 triglyceride 량 또한 유의하게 감소함을 확인하였다.
상기 결과는 AGM-212-GCG의 장기간 투여에 따른 체중 감소가 비만 질병 마우스에의 고지방 식이 섭취에 따른 지방간 발생 위험을 감소시키는 효능을 보유하고 있음을 시사한다.
실험예 7. AGM-212-GCG의 비만 질병 동물 모델에서의 혈중 대사 관여 인자량 변화 확인
혈당 조절 호르몬 인슐린, 식이 조절 호르몬 렙틴의 혈중 농도는 제2형 당뇨병, 비만 발생 시 각 호르몬에 대한 조직에서의 저항성으로 인해 정상치보다 높아지며 이러한 증상을 각각 고인슐린 혈증, 고렙틴 혈증 이라 하며 대사질환 진단의 표지로써 사용된다. 콜레스테롤, 트리글리세라이드와 같은 지질의 혈중 농도의 증가, 즉 고지혈증은 과체중, 비만의 대표적인 증상으로 비만도를 측정하는 대표적인 표지이다.
실험예 3에서의 AGM-212-GCG의 장기 투여에 의해 인슐린, 렙틴 저항성 및 비만도와 같은 대사 이상 증세 개선이 유도되었는지 확인하기 위해 실험 종료 후 마우스 혈액을 채취하여 확인하고자 하는 각 인자에 해당하는 ELISA 검사를 통해 혈중 대사 관여 인자량을 분석하였다.
표 3에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG을 투여한 마우스 군의 혈중 인슐린, 렙틴 농도가 유의하게 감소하였으며, 콜레스테롤, Triglyceride의 지질 농도 또한 유의하게 감소하였다.
상기 결과는 AGM-212-GCG의 투여에 따른 비만 질병 마우스의 고지방식이 섭취에 의해 발생하는 대사 호르몬에 대한 저항성 및 고지혈증의 개선이 유도되었음을 시사한다.
실험예 8. 유사체의 비만 질병 동물 모델에서의 열에너지 발생 증진 효과 확인
Glucagon과 Glucagon receptor의 갈색 지방 조직에서의 상호작용에 의해 유도되는 열에너지 발생 증가는 단백질인 Uncoupling protein 1 (UCP-1)의 미토콘드리아에서의 발현을 증가시켜 지방산을 산화하여 발생한 Acetyl CoA 의 산화, 환원 과정 중에 발생하는 수소를 산화적 인산화, 즉 호흡에의 사용을 막고 UCP1을 통과하도록 하여, 이 때 발생한 에너지를 열로써 방출되도록 함으로써 체내 축적된 지방의 소비를 증가시켜 체중 감소에 주요하게 작용하는 것으로 보고되었다.
AGM-212-GCG의 열에너지 발생 증진 효과를 확인하기 위해 16주령 비만 질병 마우스 (Diet induced obese C57BL/6)를 대상으로 5주간 일일 1회 피하 투여한 후 열에너지 발생량, 운동량, 호흡 계수, 직장 내 온도를 측정하였다.
구체적으로, 5주간 장기 투여한 마우스를 에너지 대사 분석 기기인 indirect calorimetry system 와 연결된 대사 사육장 (Metabolic cage)에서 24시간 동안 사육하면서, 호흡을 통해 소비되는 산소량, 방출되는 이산화탄소량을 1시간 간격으로 측정하여 열에너지 발생량과 체내 소비되는 영양소 선호도를 확인할 수 있는 지표인 호흡 계수 (Respiratory quotient)를 분석하였다. 24시간 후 마우스는 대사 사육장에서 꺼내어 thermal probe를 항문을 통해 삽입하여 직장 온도를 측정하여, 그 결과를 도 6a 내지 도 6b 및 표6에 나타내었다.
군 Energy expenditure (kcal/day/kg0.75)
Dark Light
Vehicle 161.76 ± 3.49 145.56 ± 2.58
AGM-212 189.30 ± 3.53 158.01 ± 3.43
AGM-212-GCG 199.95 ± 3.99 171.02 ± 3.35
도 6a 내지 도 6b 및 표 9에서 확인할 수 있듯이, 12시간 간격으로 측정한 낮, 밤 시간대에서 AGM-212-GCG을 투여한 마우스 군의 열에너지 소비량, 직장 내 온도가 유의하게 증가됨을 확인하였다. 반면, 운동량은 대조군과 비교하여 운동 패턴의 변화는 있으나 전체 운동량에서는 유의한 변화가 일어나지 않았음을 확인하였다.
또한, 호흡 계수는 낮, 밤 시간대에서 모두 0.7에 근사하게 유의한 감소를 보였다.
상기 결과는 비만 질병 마우스의 운동량과 무관하게 유사체에 따른 글루카곤 활성의 장기적인 유지에 의해 지방을 소비하는 열에너지 발생이 증가되었으며 체중 감소에 주요하게 작용하였음을 시사한다.
실험예 9. AGM-212-GCG의 비만 질병 동물 모델에서의 열에너지 발생 관여 인자량 변화 확인
실험예 8에서의 AGM-212-GCG의 열에너지 발생 증진 기작을 검증하기 위해 5주 장기 투여 실험 후 마우스 갈색 지방 조직을 분리하여 웨스턴 블랏 (Western blotting)과 정량적 실시간 중합 효소 연쇄 반응 (Quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)을 통해 열에너지 발생 기작의 주요 인자인 UCP1, PRDM16, CIDEA 의 발현량을 분석하였다. 또한, 4% paraformaldehyde에 고정된 갈색 지방 조직을 대상으로 UCP1에 특이적 affinity를 가지는 항체를 처리해 갈색 지방 조직 내 UCP1 발현량을 관찰하여, 그 결과를 도 7a 내지 도 7b에 나타내었다.
군 UCP-1/
Figure pat00001
-actin expression ratio
(arbitrary units)
Vehicle 1.002 ± 0.022
AGM-212 0.933 ± 0.150
AGM-212-GCG 1.301 ± 0.002
군 mRNA expression (fold.)
UCP-1 PRDM16 CIDEA
Vehicle 1.02 ± 0.10 1.06 ± 0.05 1.00 ± 0.08
AGM-212 3.47 ± 1.69 1.01 ± 0.23 1.73 ± 0.31
AGM-212-GCG 5.34 ± 0.43 4.75 ± 0.38 5.10 ±0.33
도 7a 내지 도 7b 및 표 10 및 표 11에서 확인할 수 있듯이, 유사체를 투여한 군의 갈색 지방 조직 내 UCP1 단백질 발현량, UCP-1, PRDM16, CIDEA mRNA 발현량 모두 대조군과 비교하여 유의하게 증가되었음을 확인하였다. 또한, immunohistochemistry (IHC) 이미지에서도 갈색 지방 조직 내 UCP1 량이 대조군과 대비하여 증가됨을 확인하였다.
상기 결과는 AGM-212-GCG이 갈색 지방 조직에서의 글루카곤 수용체를 활성화 시켜 열에너지 발생 관여 인자들의 발현을 조절하는 신호 전달 경로의 발생을 증가시켰음을 시사한다.
실험예 10. AGM-212-GCG의 지방 분해능 확인
AGM-212-GCG의 장기 투여에 따른 지방 조직의 감소 및 조직 내 지질 합성/분해 기작의 주요 인자들의 발현량 변화를 확인하기 위해, 실시예 9의 장기 투여 실험 종료 후 고환부, 서혜부 백색지방 조직과 피하 갈색 지방 조직을 분리하여 각 조직 별 크기를 측정한 뒤, 웨스턴 블랏, qRT-PCR을 통해 각 대사 인자들의 발현량 변화를 분석하여, 그 결과를 도 8a 내지 도 8e에 나타내었다.
도 8a 내지 도 8e에서 확인할 수 있듯이, 실험군 마우스의 고환부 백색 지방 조직에서 지방 분해 신호 전달에 중요한 인자인 Protein kinase A와 지질 분해 효소인 HSL의 단백질 발현이 유의하게 증가하였음을 웨스턴 블랏을 통해 확인하였다.
또한, 지질 분해 효소인 ATGL, HSL과 지방 분해 작용의 주요 인자인 Perilipin의 mRNA 발현량이 유의하게 증가하였고, 지질 합성 및 세포 내 지방산 흡수에 관여하는 CD36, PPARr, C/EBPa, FABP4의 mRNA 발현량은 유의하게 감소함을 qRT-PCR을 통해 확인하였다.
도 8d 및 도 8e에서 확인할 수 있듯이, 실험군 마우스의 서혜부 백색 지방 조직 내 지질 합성 신호 전달의 주요인자인 FAS의 단백질 발현량과 SCD, ACACA1의 mRNA 발현량은 감소한 반면, 지방산의 베타 산화 (Beta-oxidation) 신호 전달의 주요 인자인 ACSL1의 단백질 발현량, 그리고 CPT1a, CPT2, CACT, PGC-1a의 단백질, mRNA 발현량이 유의하게 증가하였음을 Western blot, qRT-PCR을 통해 확인하였다.
실험예 11. AGM-212-GCG의 근육세포 내 지방 분해능 및 열에너지 발생 효과 확인
골격근은 기초 대사율의 주 원인이 되는 기관으로 갈색 지방과 동일한 기작을 통해 열에너지 발생을 증가시켜 체중 조절에 중요한 역할을 담당하는 것으로 보고되어 있다.
이에, AGM-212-GCG의 근육에서의 열에너지 발생을 증가시킬 수 있는지의 기능 검증을 위해, 근원세포주인 C2C12를 대상으로, 지질 합성, 분해, 지방산 수송 신호 전달과 연관된 대사인자들의 발현량 변화를 웨스턴 블랏, qRT-PCR을 통해 분석하여, 그 결과를 도 9a 내지 도 9c에 나타내었다.
도 9a 내지 도 9c에서 확인할 수 있듯이, 웨스턴 블랏을 통해 C2C12 세포 내 열에너지 발생 신호 전달 경로의 주요 신호 전달자인 AMPK의 인산화 정도가 지방산인 palmitic acid (0.75mM) 를 처리한 경우 대조군과 비교하여 감소하는 경향을 보이나, 유사체의 농도 별 처리 (10nM, 20nM, 50nM, 100nM) 시 농도 의존적으로 AMPK의 인산화 정도가 유의하게 증가하였다.
또한, qRT-PCR을 통해, C2C12 세포 내 지방산 대사 및 미토콘드리아 기질 내 지방산 수송 관여 인자 (ACSL1, CPT1a, CPT2, CACT)와 지방산의 베타 산화 신호 전달 인자 (Acox1, PGC-1a, FoxA2)의 mRNA 발현량이 처리한 접합체의 농도 의존적으로 유의하게 증가한 반면, 지질 합성 신호 전달 인자 (FAS, SREBP-1c)의 mRNA 발현량은 접합체의 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다.
상기 결과는 AGM-212-GCG가 갈색 지방과 마찬가지로 골격근에서도 열에너지 발생을 증가시키며 지질 합성을 저해할 수 있으며 유요한 체중 감소능을 보유하고 있음을 시사한다.
실험예 12. 유사체의 약동력학 시험
실시예 1에서 제조한 유사체의 약동력학(pharmacokinetics) 시험을 실시하였다. 야생형 C57BL/6J mice(male, 5-6주령, n=5)을 이용, 각 유사체들을 50 nmole/kg으로 피하 투여 후, 각 0, 0.5, 1, 2, 4, 8, 10, 12, 14, 24시간에 혈액을 추출하였다. 추출한 혈액의 혈장을 분리하여 Exendin-4 EIA를 이용하여 정량 분석을 진행하였다. 결과 분석은 winnolin 프로그램을 이용하여 Pharmacokinetics parameter를 결정하여, 그 결과를 표 12에 나타내었다.
Peptide t 1/2 (h) T max (h) C max (ng/mL) AUC (ng/h/mL) Vd (mL/kg) Cl (mL/h/kg)
Ex-4 0.56 ± 0.03 0.5 107.38 ± 12.48 171.5 ± 7.15 1004 .9 ± 81.51 1236.9 ± 52.4
AGM-212 3.68 ± 0.35 4 750.67 ± 107.7 6698.8 ± 621 334.8 ± 38.35 63.36 ± 5.93
AGM-212-GCG 3.65 ± 0.07 2 721.68 ± 24.1 3994.5 ± 251.3 781.76 ± 53.77 148.45 ± 9.26
표 12에서 확인할 수 있듯이, AGM-212-GCG가 Ex4보다 현저히 증진된 반감기를 나타냈으며, AGM-212와 유사한 수준의 반감기 수준을 보임을 확인하였다.
<110> ANYGEN CO., LTD Gwangju Institute of Science and Technology <120> Exenatide heterodimeric form analogs and uses thereof <130> PN190190P3 <150> KR 10-2019-0098911 <151> 2019-08-13 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ex4 <400> 1 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 2 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Glucagon <400> 2 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr 20 25

Claims (13)

  1. 엑세나타이드 (exenatide) 아미노산 서열의 1 내지 15개의 아미노산이 결실되고, 지방산이 접합 (conjugation)된 엑세나타이드 유사체로 이루어진 제1체; 및
    글루카곤으로 이루어진 제2체;를 포함하고,
    상기 제1체 및 제2체는 결합되어 이종이량 유사체를 형성하고 있는 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 엑세나타이드의 아미노산 서열은 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  3. 제1항에 있어서, 상기 글루카곤의 아미노산 서열은 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  4. 제1항에 있어서, 상기 1체 및 제2체의 결합은 트리아졸을 통해 결합된 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  5. 제1항에 있어서, 상기 결실은 엑세나타이드의 아미노산 서열의 N-말단 또는 C-말단의 아미노산이 결실된 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  6. 제1항에 있어서, 상기 지방산은 엑세나타이드의 Lys 잔기, N-말단 또는 C-말단에 접합된 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  7. 제6항에 있어서, 상기 지방산은 링커를 통하여 Lys 잔기, N-말단 또는 C-말단에 접합된 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  8. 제1항에 있어서, 상기 지방산은 프로피온산(propionic acid), 부티르산(butyric acid), 발레르산(valeric acid), 카프로산(caproic acid), 에난트산(enanthic acid), 카프릴릭산(caprylic acid), 펠라르곤산(pelargonic acid), 카프릭산(capric acid), 언데실산(undecylic acid), 라우르산(lauric acid), 트리데실산(tridecylic acid), 미리스트산(myristic acid), 펜타데실산(pentadecylic acid), 팔미트산(palmitic acid), 마르가르산(margaric acid), 스테아르산(stearic acid), 논아데실산(nonadecylic acid), 아라키트산(arachidic acid), 헤네이코실산(heneicosylic acid), 베헨산(behenic acid), 트리코실(tricosylic acid), 리그노세르산(lignoceric acid), 펜타코실산(pentacosylic acid), 세로트산(cerotic acid), 헵타코실산(heptacosylic acid), 몬탄산(montanic acid), 논아코실산(nonacosylic acid), 멜리스산(melissic acid), 헤나트리아콘틸산(henatriacontylic acid), 라세로산(lacceroic acid), 사일산(psyllic acid), 게드산(geddic acid), 세로플라스트산(ceroplastic acid) 및 헥사트리아콘틸산(hexatriacontylic acid)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인, 엑세나타이드 이종이량 유사체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선, 예방 또는 치료용 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 당뇨 개선 또는 완화용 식품 조성물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 비만 개선 또는 완화용 식품 조성물.
  13. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 엑세나타이드 이종이량 유사체를 포함하는 식욕 억제용 식품 조성물.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20110301084A1 (en) * 2004-10-07 2011-12-08 Novo Nordisk A/S Protracted Exendin-4 Compounds
KR20150111297A (ko) * 2014-03-21 2015-10-05 애니젠 주식회사 신규한 엑세나타이드 유사체 및 그의 용도
WO2017189342A1 (en) * 2016-04-26 2017-11-02 Merck Sharp & Dohme Corp. Insulin dimer-incretin conjugates
KR102419566B1 (ko) * 2019-08-13 2022-07-12 애니젠 주식회사 엑세나타이드 이량 유사체 및 이의 용도

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Bioconjugate Chem, 22(4):625-632(2011.03.14.) *
Chem. Sci. 7:2492-2500(2016) *
Peptides 88:46-54(2017) *

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