KR20210005154A - 유전자 요법 작제물 및 사용 방법 - Google Patents
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Abstract
본 명세서에는, 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질의 개선된 발현 및 세포 표적화를 위한 서열을 포함하는, 개선된 유전자 요법 벡터 및 사용 방법이 제공된다.
Description
상호 참조
본 출원은 2018년 4월 30일자로 출원된 미국 가출원 제62/664,741호; 2018년 6월 22일자로 출원된 미국 가출원 제62/688,640호; 및 2018년 10월 10일자로 출원된 미국 가출원 제62/744,068호의 유익을 주장하며, 이들 기초 출원의 각각은 그들의 전문이 참조에 의해 본 명세서에 원용된다.
유전 장애(genetic disorder)는 게놈의 유전자 암호화 영역에서 일어나는 새로운 돌연변이 또는 유전을 통해서 발생한다. 몇몇 경우에, 이러한 유전 장애는 유전 장애를 가진 개체에서 돌연변이된 유전자에 의해 암호화된 단백질의 투여에 의해 치료된다. 그러나, 이러한 치료는, 단백질의 투여가 기관, 세포 또는 필요한 경우 세포소기관에 도달하는 단백질에서 항상 초래되는 것은 아니므로 문제를 갖는다. 또한, 이러한 치료는 또한 흔히 격주 주입을 필요로 하는데, 이는 유전자 요법을 필요로 하지 않으며, 이때 단일 치료가 지속적인 완화를 제공할 수 있다. 따라서, 유전자 요법은 유전 장애를 위하여 현재 이용 가능한 치료에 비해서 개선된 결과를 제공하는 잠재성을 갖는다.
본 명세서에서는 유전자 요법을 이용해서 유전 장애를 치료하는 조성물 및 방법이 제공된다. 또한 본 명세서에서는 단백질 발현을 개선하고 유전자 요법 벡터(gene therapy vector)에 의해 제공된 치료용 단백질(therapeutic protein)의 세포 흡수 또는 전달을 증가시키고 세포내 또는 세포하(sub-cellular) 표적화시키기 위하여 유전자 요법에 사용될 유전자 요법 벡터 성분 및 방법을 제공한다.
소정의 양상에 있어서, 유전자 요법 벡터, 예를 들어, 5'에서 3'로의 순서로, (a) 번역 개시 서열 및 (b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 코작 서열(Kozak sequence)을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열이 중첩될 수 있으므로, 번역 개시 서열의 마지막 3개의 뉴클레오타이드는 또한 치료용 단백질용의 개시 코돈이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함하되, 여기서 마지막 3개의 뉴클레오타이드(ATG)는 또한 치료용 단백질용의 개시 코돈이다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 치료용 단백질의 분비를 증가시킬 수 있는 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(binding immunoglobulin protein: BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드(Gaussia signal peptide)로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 32의 서열과 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 내부 리보솜 유입 서열(internal ribosomal entry sequence: IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(cricket paralysis virus: CrPV) IRES이다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 5'에서 3'로의 순서로, (a) 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열 및 (b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는 유전자 요법 벡터가 제공되되, 여기서 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 가우시아 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 32의 서열과 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하는 코작 서열을 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 내부 리보솜 유입 서열(IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES, 피코르나바이러스(picornavirus) IRES, 아프토바이러스(Aphthovirus) IRES, 카포시 육종-연관 헤르페스 바이러스 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스(Pestivirus) IRES, 크리파바이러스(Cripavirus) IRES, 로팔로시품 파디 바이러스(Rhopalosiphum padi virus) IRES 및 마렉병 바이러스(Merek's disease virus) IRES로 이루어진 군으로부터 선택된 IRES를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 5'에서 3'로의 순서로, (a) 내부 리보솜 유입 서열(IRES) 및 (b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES, 피코르나바이러스 IRES, 아프토바이러스 IRES, 카포시 육종-연관 헤르페스 바이러스 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스 IRES, 크리파바이러스 IRES, 로팔로시품 파디 바이러스 IRES 및 마렉병 바이러스 IRES로 이루어진 군으로부터 선택된 IRES를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES이다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, IRES는 서열번호 12를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하는 코작 서열을 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 치료용 단백질의 분비를 증가시킬 수 있는 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 핵산 작제물의 임의의 것은 CI-MPR에 고친화도로 선택적으로 결합하는 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하되, 여기서 치료용 단백질 및 CI-MPR에 선택적으로 결합하는 펩타이드는 융합 단백질로서 발현된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 CI-MPR 뉴클레오타이드 서열에 선택적으로 결합하는 펩타이드를 암호화하는 핵산과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 간의 링커 펩타이드를 암호화하는 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드의 서열은 치료용 펩타이드의 서열 또는 CI-MPR에 선택적으로 결합하는 펩타이드의 서열, 또는 둘 다와 중첩될 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, CI-MPR에 고친화도로 결합하는 펩타이드는 변이체(variant) IGF2 펩타이드(vIGF2)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 세포 내로의 흡수를 용이하게 한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 2 내지 11로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 뉴클레오타이드 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 5'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 뉴클레오타이드 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 3'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 vIGF2 뉴클레오타이드 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 사이의 링커 펩타이드를 암호화하는 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21, 서열번호 33 또는 서열번호 37과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21, 서열번호 33 또는 서열번호 37을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 축적 장애(lysosomal storage disorder)와 연관된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 효소 또는 이의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제(galactosylceramidase), 아릴설파타제(arylsulfatase)(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제(β-glucocerebrosidase), 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제(lysosomal acid lipase), 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제(lysosomal enzyme acid sphingomyelinase), 폼일글리신-생성 효소(formylglycine-generating enzyme), 이두로니다제(iduronidase)(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제(sialidase)), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소(phosphotransferase), 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1 및 2(각각 PPT1 및 PPT2)을 포함하는 팔미토일 단백질 티오에스테라제(PPT)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 CDKL5 결핍 장애, 낭성 성뮤증, 알파- 및 베타-지중해빈혈증, 겸상적혈구성 빈혈증, 마르팡 증후군(Marfan syndrome), 취약 X 증후군(fragile X syndrome), 헌팅턴병, 혈색소증, 선천성 귀머거리(비증후군성(nonsyndromic)), 테이-삭스(Tay-Sachs), 가족성 고콜레스테롤혈증, 스타가르트 질환(Stargardt disease), 어셔 증후군(Usher syndrome), 맥락막결손, 완전색맹, X-연관 망막분리(X-linked retinoschisis), 혈우병, 비스코트-알드리히 증후군(Wiskott-Aldrich syndrome), X-연관 만성 육아종증, 방향족 L-아미노산 데카복실라제 결핍, 퇴행적 이영양성 수포성 표피박리증, 알파 1 안티트립신 결핍, 허친슨-길포드 조로증 증후군(Hutchinson-Gilford 조로증 syndrome: HGPS), 누난 증후군(Noonan syndrome), X-연관성 중증 복합 면역결핍증(X-linked severe combined immunodeficiency: X-SCID)로 이루어진 군으로부터 선택된 유전 장애와 연관된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 CDKL5, 코넥신 26, 헥소스아미니다제 A, LDL 수용체, 디스트로핀(Dystrophin), CFTR, 베타-글로불린, HFE, 헌팅턴, ABCA4, 미오신 VIIA (MYO7A), Rab 에스코트 단백질-1(REP1), 사이클릭 뉴클레오타이드 게이티드 채널 베타 3(CNGB3), 레티노쉬신 1(retinoschisin 1: RS1), 헤모글로빈 소단위 베타(헤모글로빈 소단위 beta: HBB), 인자 IX, WAS, 사이토크롬 B-245 베타쇄, 도파 데카복실라제(dopa decarboxylase: DDC), 콜라겐 제VII형 알파 1쇄(COL7A1), 세르핀 패밀리 A 멤버 1(serpin family A member 1: SERPINA1), LMNA, PTPN11, SOS1, RAF1, KRAS 및 IL2 수용체 γ 유전자로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 유전 장애를 가진 대상체에서 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨(aspartylglucosaminuria), 바텐병(Batten disease), 시스틴증(cystinosis), 파브리병(Fabry disease), 고쉐병 I형(Gaucher disease type I), 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병(Pompe disease), 테이삭스병(Tay Sachs disease), 샌드호프병(Sandhoff disease), 이염성 백질이영양증(metachromatic leukodystrophy), 뮤코지질증 I형(mucolipidosis type I), 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병(Hurler disease), 헌터병(Hunter disease), 산필립포병 A형(Sanfilippo disease type A), 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형(Morquio disease type A), 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병(Maroteaux-Lamy disease), 슬라이병(Sly disease), 니만-픽병 A형(Niemann-Pick disease type A), 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증(activator deficiency), GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병(late-onset) 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군(Chanarin-Dorfman syndrome); 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병(Danon disease); 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증(fucosidosis); 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질 이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증(Metachromatic Leukodystrophy); 뮤코다당체침착증 장애(Mucopolysaccharidoses disorder): MPS I, 힐러 증후군(Hurler syndrome); MPS I, 힐러-샤이에 증후군(Hurler-Scheie syndrome); MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군(Hunter syndrome); MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군(Morquio syndrome), B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군(Maroteaux-Lamy syndrome); MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병(Leroy disease), 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍(multiple sulfatase deficiency); 니만-픽병(Niemann-Pick disease)(B형; C1형/만성 신경계침윤형(chronic neuronopathic form); C2형; D형/노바 스코티안형(Nova Scotian type)); 신경세포 세로이드 리포푸신증(Neuronal Ceroid Lipofuscinosis): CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트(Batten-Spielmeyer-Vogt)/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병(Jansky-Bielschowsky disease)/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스(Kufs)/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질(Northern Epilepsy)/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아(Santavuori-Haltia)/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스(Pycnodysostosis); 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(Schindler disease)(III형/중간, 가변); 칸자키병(Kanzaki disease); 살라병(Salla disease); 영아기 유리 시알산 축적 질환(infantile free sialic acid storage disease: ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(spinal muscular atrophy with progressive myoclonic epilepsy: SMAPME); 테이-삭스병(Tay-Sachs disease)/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군(Christianson syndrome); 로 안뇌신 증후군(Lowe oculocerebrorenal syndrome); 샤르코-마리-투스 4J형(Charcot-Marie-Tooth type 4J), CMT4J; 유니스-바론 증후군(Yunis-Varon syndrome); 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(bilateral temporooccipital polymicrogyria: BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증(X-linked hypercalciuric nephrolithiasis), 덴트-1(Dent-1); 및 덴트병 2(Dent disease 2), 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(adenosine deaminase severe combined immunodeficiency: ADA-SCID) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신경세포 세로이드 리포푸스신증은 영아기 NCL(산타보리-할티아병(Santavuori-Haltia disease)), 후반 영아기 NCL(얀스키-비엘슈보스키병), 바텐병, 성인 NCL(쿠프스병(Kufs disease)), 핀란드(Finnish) 후반 영아기 NCL, 변이 후반 영아기 NCL, CLN7, CLN8, 터키 후반 영아기 NCL, NCL 제9형, 및 CLN10으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 아데노-연관 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 폭스 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 또는 헤르페스 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 AAV 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 반전 말단 반복부(inverted terminal repeat: ITR)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 AAV1 벡터, AAV2 벡터, AAV3 벡터, AAV4 벡터, AAV5 벡터, AAV6 벡터, AAV7 벡터, AAV8 벡터, AAV9 벡터, AAVrhS 벡터, AAVrh10 벡터, AAVrh33 벡터, AAVrh34 벡터, AAVrh74 벡터, AAV Anc80 벡터, AAVPHP.B 벡터, AAVhu68 벡터 및 AAV-DJ 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
소정의 양상에 있어서, 유전자 요법 벡터, 예컨대, (a) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열, 및 (b) CI-MPR에 고친화도로 결합하는 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 변이체 IGF2(vIGF2) 펩타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는, 서열번호 1과 적어도 90% 동일하고 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55 및 65번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에 적어도 1개의 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 1개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54 및 55번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에 적어도 2개의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 2개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R 및 L55R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 2번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 3번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실 및 E6R, Y27L 및 K65R의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실 및 E6R 및 Y27L의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 5번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 6번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 7번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 천연 IGF2 펩타이드에 비해서 인슐린 수용체 및 IGF1R에 대해서 감소된 친화도를 갖거나 또는 친화도를 갖지 않는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 세포 내로의 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 리소좀 내로 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 유전 장애를 가진 대상체에서 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 효소 또는 이의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증, GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군; 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병; 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증; 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증; 뮤코다당체침착증 장애: MPS I, 힐러 증후군; MPS I, 힐러-샤이에 증후군; MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군; MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군, B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군; MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병, 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증(Pseudo-Hurler polydystrophy)/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍; 니만-픽병(B형; C1형/만성 신경계침윤형; C2형; D형/노바 스코티안형); 신경세포 세로이드 리포푸신증: CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(III형/중간, 가변); 칸자키병; 살라병; 영아기 유리 시알산 축적 질환(ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(SMAPME); 테이-삭스병/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군; 로 안뇌신 증후군; 샤르코-마리-투스 4J형, CMT4J; 유니스-바론 증후군; 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증, 덴트-1; 및 덴트병 2, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(chronic granulomatous disease: CGD) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신경세포 세로이드 리포푸스신증은 영아기 NCL(산타보리-할티아병), 후반 영아기 NCL(얀스키-비엘슈보스키병), 바텐병, 성인 NCL(쿠프스병), 핀란드 후반 영아기 NCL, 변이 후반 영아기 NCL, CLN7, CLN8, 터키 후반 영아기 NCL, NCL 제9형, 및 CLN10으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 가용성 리소좀 효소이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 팔미토일 단백질 티오에스테라제는 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1(PPT1) 또는 2(PPT2)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 팔미토일 단백질 티오에스테라제는 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 코작 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하되, 여기서 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하되, 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 천연 신호 펩타이드를 가진 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 비-천연 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하되, 여기서 비-천연 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 치료용 단백질용의 천연 신호 펩타이드에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 가우시아 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 5'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 3'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 vIGF2 뉴클레오타이드 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 사이에 있는 링커 펩타이드를 암호화하는 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21 또는 서열번호 33을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스(adeno-associated virus: AAV) 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 헤르페스 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 AAV 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 반전 말단 반복부(ITR)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 AAV1 벡터, AAV2 벡터, AAV3 벡터, AAV4 벡터, AAV5 벡터, AAV6 벡터, AAV7 벡터, AAV8 벡터, AAV9 벡터, AAVrhS 벡터, AAVrh10 벡터, AAVrh33 벡터, AAVrh34 벡터, AAVrh74 벡터, AAV Anc80 벡터, AAVPHP.B 벡터, AAVhu68 벡터 및 AAV-DJ 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
유전자 요법 벡터는 (a) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열, 및 (b) 치료용 단백질의 세포내섭취를 증가시키는 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 작제물을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질의 세포내섭취를 증가시키는 펩타이드는 CI-MPR에 결합하는 펩타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 변이체 IGF2(vIGF2) 펩타이드, HIRMab, 또는 TfRMab 또는 기타 세포 표적화 펩타이드 또는 단백질이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는vIGF2이다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1과 적어도 90% 동일하고 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55 및 65번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에 적어도 1개의 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 1개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 1개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R 및 L55R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54 및 55번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에 적어도 2개의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 2개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R 및 L55R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 6번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 2번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 3번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실 및 E6R, Y27L 및 K65R의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치의 N-말단 결실 및 E6R 및 Y27L의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 5번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 6번 위치의 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 7번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 천연 IGF2 펩타이드에 비해서 양이온-독립적 M6P 수용체(CI-MPR)에 대해서 증가된 특이성을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 세포의 리소좀 내로의 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 유전 장애를 가진 대상체에서 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 효소 또는 이의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증, GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군; 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병; 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증(fucosidosis); 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증; 뮤코다당체침착증 장애: MPS I, 힐러 증후군; MPS I, 힐러-샤이에 증후군; MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군; MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군, B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군; MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병, 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍; 니만-픽병(B형; C1형/만성 신경계침윤형; C2형; D형/노바 스코티안형); 신경세포 세로이드 리포푸신증: CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(III형/중간, 가변); 칸자키병; 살라병; 영아기 유리 시알산 축적 질환(ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(SMAPME); 테이-삭스병/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군; 로 안뇌신 증후군; 샤르코-마리-투스 4J형, CMT4J; 유니스-바론 증후군; 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증, 덴트-1; 및 덴트병 2, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신경세포 세로이드 리포푸스신증은 영아기 NCL(산타보리-할티아병), 후반 영아기 NCL(얀스키-비엘슈보스키병), 바텐병, 성인 NCL(쿠프스병), 핀란드 후반 영아기 NCL, 변이 후반 영아기 NCL, CLN7, CLN8, 터키 후반 영아기 NCL, NCL 제9형, 및 CLN10로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 가용성 리소좀 효소 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 팔미토일 단백질 티오에스테라제는 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1(PPT1) 또는 2(PPT2)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 팔미토일 단백질 티오에스테라제는 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 코작 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 핵산 서열을 더 포함하되, 여기서 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 가우시아 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 5'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 3'에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 vIGF2 뉴클레오타이드 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 사이에 링커 펩타이드를 암호화하는 링커 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21 또는 서열번호 33을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터 또는 헤르페스 바이러스 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 AAV 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 반전 말단 반복부(ITR)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, AAV 벡터는 AAV1 벡터, AAV2 벡터, AAV3 벡터, AAV4 벡터, AAV5 벡터, AAV6 벡터, AAV7 벡터, AAV8 벡터, AAV9 벡터, AAVrhS 벡터, AAVrh10 벡터, AAVrh33 벡터, AAVrh34 벡터, AAVrh74 벡터, AAV Anc80 벡터, AAVPHP.B 벡터, AAVhu68 벡터 및 AAV-DJ 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 양상에 있어서, (i) 치료적 유효량의 본 명세서에서의 유전자 요법 벡터 중 어느 하나 및 (ii) 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 담체 또는 부형제는 비-이온성, 저-삼투성(low-osmolar) 화합물, 완충제, 중합체, 염, 또는 이들의 조합물을 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 벡터 중 어느 하나 또는 본 명세서에서 제공되는 약제학적 조성물 중 어느 하나를 유전 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 유전 장애를 치료를 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증, GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군; 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병; 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증; 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증; 뮤코다당체침착증 장애: MPS I, 힐러 증후군; MPS I, 힐러-샤이에 증후군; MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군; MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군, B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군; MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병, 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍; 니만-픽병(B형; C1형/만성 신경계침윤형; C2형; D형/노바 스코티안형); 신경세포 세로이드 리포푸신증: CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(III형/중간, 가변); 칸자키병; 살라병; 영아기 유리 시알산 축적 질환(ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(SMAPME); 테이-삭스병/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군; 로 안뇌신 증후군; 샤르코-마리-투스 4J형, CMT4J; 유니스-바론 증후군; 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증, 덴트-1; 및 덴트병 2, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD), CDKL5 결핍 장애 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신경세포 세로이드 리포푸스신증은 영아기 NCL(산타보리-할티아병), 후반 영아기 NCL(얀스키-비엘슈보스키병(Jansky-Bielschowsky disease)), 바텐병, 성인 NCL(쿠프스병), 핀란드 후반 영아기 NCL, 변이 후반 영아기 NCL, CLN7, CLN8, 터키 후반 영아기 NCL, NCL 제9형, 및 CLN10으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여는 척추강내로, 안구내로, 유리체내로, 망막으로, 정맥내로, 근육내로, 심실내로, 대뇌내로, 소뇌내로, 뇌혈관내, 뇌실질내로, 안구로, 피하로, 또는 이들의 조합으로 수행된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여는 척추강내로 수행된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 투여는 안구내로, 유리체내로 또는 망막으로 수행된다.
추가의 양상에 있어서, 유전 장애를 치료하는데 사용하기 위한, 본 명세서에서의 유전자 요법 벡터 중 어느 하나 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 추가의 양상에 있어서, 유전 장애의 치료용의 약제(medicament)의 제조에 사용하기 위한, 본 명세서에서의 유전자 요법 벡터 중 어느 하나 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증, GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군; 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병; 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증; 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증; 뮤코다당체침착증 장애: MPS I, 힐러 증후군; MPS I, 힐러-샤이에 증후군; MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군; MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군, B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군; MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병, 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍; 니만-픽병(B형; C1형/만성 신경계침윤형; C2형; D형/노바 스코티안형); 신경세포 세로이드 리포푸신증: CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(III형/중간, 가변); 칸자키병; 살라병; 영아기 유리 시알산 축적 질환(ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(SMAPME); 테이-삭스병/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군; 로 안뇌신 증후군; 샤르코-마리-투스 4J형, CMT4J; 유니스-바론 증후군; 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증, 덴트-1; 및 덴트병 2, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD), CDKL5 결핍 장애 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신경세포 세로이드 리포푸스신증은 영아기 NCL(산타보리-할티아병), 후반 영아기 NCL(얀스키-비엘슈보스키병), 바텐병, 성인 NCL(쿠프스병), 핀란드 후반 영아기 NCL, 변이 후반 영아기 NCL, CLN7, CLN8, 터키 후반 영아기 NCL, NCL 제9형 및 CLN10로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 조성물은 척추강내, 안구내, 유리체내로, 망막, 정맥내, 근육내, 심실내, 대뇌내, 소뇌내, 안구 또는 피하 투여용으로 제형화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 조성물은 척추강내 투여용으로 제형화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 조성물은 신경퇴행성 장애를 치료하기 위하여 척추강내 투여용으로 제형화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 조성물은 안구, 유리체내 또는 망막 투여용으로 제형화된다.
본 명세서에는 (a) 치료용 단백질; (b) 양이온-독립적 만노스 6-포스페이트(mannose 6-phosphate: M6P) 수용체(CI-MPR)에 고친화도로 결합하는 펩타이드; 및 (c) 치료용 단백질과 CI-MPR에 결합하는 펩타이드 사이에 있는 링커를 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 작제물을 포함하는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 변이체 IGF2(vIGF2) 펩타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1과 적어도 90% 동일하고 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55 및 65번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 위치에 적어도 1개의 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 1개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55, 65번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이상의 위치에 적어도 2개의 치환을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 적어도 2개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R, K65R로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치에 N-말단 결실을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 천연 IGF2 펩타이드에 비해서 인슐린 수용체 및 IGF1R에 대해서 감소된 친화도를 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 세포에의 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 리소좀 내로 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 유전 장애를 가진 대상체에서 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체할 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 폼페병이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 CLN1 질환이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 가용성 리소좀 효소 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 효소 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함하되, 여기서 리소좀 효소는 알파-갈락토시다제 A, β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 이두로네이트-2-설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 사이클린 의존적 키나제 유사 5 및 알파-글루코시다제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 팔미토일 단백질 티오에스테라제 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 팔미토일 단백질 티오에스테라제-1 또는 이들의 효소 활성 단편이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 번역 개시 서열은 코작 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하되, 여기서 신호 펩타이드는 치료용 단백질의 분비를 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 서열번호 31의 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 작제물은 서열번호 36을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 폴리펩타이드는 서열번호 23을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 작제물은 서열번호 38을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2는 폴리펩타이드의 N-말단에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2는 폴리펩타이드의 C-말단에 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21 또는 서열번호 33을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 폭스 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 및 헤르페스 바이러스 벡터로 이루어진 군으로부터 선택된 바이러스 벡터이다.
소정의 양상에 있어서, 융합 단백질, 예컨대, 변이체 IGF2 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37, 여기서 "2GS"라고도 지칭됨), 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
추가의 양상에 있어서, 신호 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질이 제공되되, 여기서 신호 펩타이드는 세포로부터 분비 시 번역 후 제거된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산 서열이 제공되되, 여기서 융합 단백질은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질이 제공되되, 여기서 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
추가의 양상에 있어서, 융합 단백질을 암호화하는 핵산, 예컨대, 변이체 IGF2 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 신호 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공되되, 여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 제공되되, 여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다.
추가의 양상에 있어서, (a) 변이체 IGF2 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 신호 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 제공되되, 여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 제공되되, 여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 변이체 IGF2 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 개체로부터의 세포는 체외 처리되고, 체외 처리 후 개체에 투여된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 신호 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 개체로부터의 세포는 체외 처리되고, 체외 처리 후 개체에 투여된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 치료용 단백질 및 표적화 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공되되, 여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 개체로부터의 세포는 체외 처리되고, 체외 처리 후 개체에 투여된다.
추가의 양상에 있어서, (a) 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공되되, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 개체로부터의 세포는 체외 처리되고, 체외 처리 후 개체에 투여된다.
추가의 양상에 있어서, 변이체 IGF2 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 세포는 개체로부터 유래된다.
추가의 양상에 있어서, 신호 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 세포는 개체로부터 유래된다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공되되, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 리포솜, 나노입자 또는 세포-침투 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 세포는 개체로부터 유래된다.
추가의 양상에 있어서, 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 유전 장애를 치료하는 방법이 제공하되, 여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 GGGGSGGGG(서열번호 18), GGGGS(서열번호 19), GGGSGGGGS(서열번호 20), GGGGSGGGS(서열번호 21), GGGGSGGGGS(서열번호 37) 또는 GGSGSGSTS(서열번호 33)의 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 변이체 IGF2 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 1종의 효소를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU)이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 촉진제를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은 바이러스 벡터 내에 포함된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 연관 바이러스, 렌티바이러스, 또는 헤르페스 바이러스를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제는 바이러스 외피 단백질을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 외피 단백질은 수포성 구내염 바이러스 외피 단백질, 아데노바이러스 외피 단백질, 아데노-연관 바이러스 외피 단백질, 뮤린 백혈병 바이러스 외피 단백질, HIV 외피 단백질 및 인플루엔자 바이러스 외피 단백질로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 만성 육아종증(CGD)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 세포는 개체로부터 유래된다.
본 명세서에서는, 천연 신호 펩타이드, ER 단백질분해성 절단 도메인, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질이 더 제공되되, 여기서 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
본 명세서에는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질이 추가로 제공되되, 여기서 융합 단백질은 코작 서열을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
본 명세서에는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질이 추가로 제공되되, 여기서 융합 단백질은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 포함하는 핵산에 의해 암호화된다.
본 명세서에는 천연 신호 펩타이드, ER 단백질분해성 절단 도메인, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 추가로 제공되되, 여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함한다.
본 명세서에는 변이체 IGF2 펩타이드 및 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산이 추가로 제공되되, 여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다.
본 명세서에는 (a) 천연 신호 펩타이드, ER 단백질분해성 절단 도메인, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 (a) 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산(여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함함); 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 (a) 변이체 IGF2 펩타이드 및 알파-글루코시다제을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산(여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함함); 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 (a) 천연 신호 펩타이드, ER 단백질분해성 절단 도메인, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산; 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 (a) 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산(여기서 핵산은 코작 서열을 더 포함함); 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 (a) 변이체 IGF2 펩타이드 및 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산(여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함함); 및 (b) 유전자 요법에 적합한 완충제 또는 부형제를 포함하는 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 천연 신호 펩타이드, ER 단백질분해성 절단 도메인, 변이체 IGF2 펩타이드, 및 이의 천연 신호 펩타이드를 결여하는 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드, 변이체 IGF2 펩타이드 및 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편을 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공된다.
본 명세서에는 변이체 IGF2 펩타이드 및 알파-글루코시다제를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 세포를 투여하는 단계를 포함하는, 개체의 폼페병을 치료하는 방법이 추가로 제공하되, 여기서 핵산은 귀뚜라미마비병 바이러스 내부 리보솜 유입 서열(CrPV IRES)을 더 포함한다.
참조에 의한 편입
본 명세서에서 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 마치 각각 개별의 간행물, 특허 또는 특허 출원이 참조에 의해 편입되는 것으로 구체적으로 그리고 개별적으로 나타낸 것과 같은 정도로 참조에 의해 본 명세서에 편입된다.
본 특허 출원 파일은 컬러로 수행된 적어도 하나의 도면을 포함한다. 컬러 도면(들)을 가진 본 특허 출원의 사본은 요청과 필요한 요금의 지불 시 특허청에 의해 제공될 것이다. 본 개시내용의 특징 및 이점의 이해는 본 개시내용의 원리가 활용되는 예시적인 실시형태를 제시하는 이하의 상세한 설명을 참조하여 얻어질 것이며, 첨부 도면은 다음과 같다:
도 1은 M6P를 가진 그리고 가지지 않는 알글루코시다제-알파(alglucosidase-alfa) rhGAA의 GAA 활성도를 도시한다. 도 1은 CI-MPR에 결합될 수 있는 상업적 ERT의 비율을 도시한다. 제1 피크는 글리칸을 함유하는 임의의 M6P를 결여하고 흡수되어 리소좀으로 전달될 수 없는 rhGAA이다. 제2 피크는 적어도 하나의 인산화 글리칸을 수용하고 세포에 의해 흡수되고 글리코겐의 가수분해를 위하여 리포솜에 전달될 가능성을 갖는 분획이다.
도 2는 IGF2에 대한 그리고 모노- 및 비스-인산화된 올리고당에 대한 상이한 결합 도메인을 포함하는 CI-MPR의 구조를 도시한다.
도 3은 성숙한 인간 IGF2 펩타이드의 서열 및 구조를 도시한다. 부위 특이적 아미노산 치환이 다른 수용체의 결합에 영향을 미치는 것으로 제시된다.
도 4는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 바 CI-MPR에 대한 야생형 IGF2 (wtIGF2) 펩타이드의 결합을 도시한다.
도 5는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 바 CI-MPR에 대한 변이체 IGF2(vIGF2) 펩타이드의 결합을 도시한다.
도 6은 IGF2/CI-MPR에 대한 결합을 증가시키기 위하여 알글루시다제 알파에 vIGF2를 첨가하는 유익을 도시한다.
도 7은 IGF2/CI-MPR에 대한 결합을 증가시키기 위하여 재조합 인간 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(rhNAGLU)에 vIGF2를 첨가하는 유익을 도시한다.
도 8은 인슐린 수용체에 대한 야생형 인간 IGF2의 결합을 도시한다.
도 9는 인슐린 수용체에 대한 vIGF2의 검출 가능한 결합이 없는 것을 도시한다.
도 10은 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체에 대한 야생형 IGF2의 결합을 도시한다.
도 11은, 야생형 IGF2에 비해서, 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체에 대한 vIGF2 펩타이드의 감소된 결합을 도시한다.
도 12는 천연 hGAA 및 조작된 hGAA를 암호화하는 유전자 요법 발현 카세트의 두가지 예를 도시한다. 천연 hGAA는 불량한 CIMPR 결합 및 세포 흡수로 이어지는 불량한 인산화를 지닌다. 조작된 hGAA는 개선된 CIMPR 결합(vIGF2), CIMPR를 갖는 vIGF2-GAA 단백질의 입체 장애를 저감시키는 2GS 링커, 및 분비를 개선시키는 BiP 신호 펩타이드를 위하여 첨가된 요소를 갖는다.
도 13은 재조합 인간 PPT1을 발현하는 세포(PPT1-1), vIGF2 표적화 도메인을 갖는 재조합 인간 PPT1(PPT1-2) 및 vIGF2 표적화 도메인 및 BiP 신호 서열을 갖는 재조합 인간 PPT1(PPT1-29)으로부터의 PPT1의 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 14는 CI-MPR에 대한 PPT1 작제물의 결합을 도시한다.
도 15는 조작된 또는 천연 hGAA를 발현하는 CHO 세포의 조건조절된 배지 중의 GAA 활성도를 도시한다.
도 16은 GAA 넉아웃 마우스에서의 유전자 요법의 4주 마우스 연구의 연구 설계를 도시한다.
도 17은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에서의 GAA 혈장 활성도를 도시한다.
도 18은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에서 측정된 GAA 수준을 도시한다.
도 19는 표시된 바와 같이 처리된 마우스로부터 얻어진 혈장 샘플로부터의 rhGAA의 세포 표면 수용체 결합을도시한다.
도 20은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스의 전경골근에 대한 GAA 활성도, 및 쿼드(quad) 글리코겐 조직병리학 점수를 도시한다.
도 21은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 전경골근의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 22는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 전경골근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 23은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌 및 척수에 대한 뇌 GAA 활성도, 뇌 글리코겐, 및 척수 글리코겐 조직병리학 점수를 도시한다.
도 24는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 25는 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌줄기 및 맥락총의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 26은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 척수의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 27은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 척수의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 28은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근 GAA 활성도 및 글리코겐 조직병리학을 도시한다.
도 29는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근에 대한 글리코겐 룩솔(luxol)/PAS를 도시한다.
도 30은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 31은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에 대한 삼두근 GAA 활성도 및 조직병리학 점수를 도시한다.
도 32는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 삼두근의 글리코겐 룩솔/PAS를 도시한다.
도 33은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 삼두근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 1은 M6P를 가진 그리고 가지지 않는 알글루코시다제-알파(alglucosidase-alfa) rhGAA의 GAA 활성도를 도시한다. 도 1은 CI-MPR에 결합될 수 있는 상업적 ERT의 비율을 도시한다. 제1 피크는 글리칸을 함유하는 임의의 M6P를 결여하고 흡수되어 리소좀으로 전달될 수 없는 rhGAA이다. 제2 피크는 적어도 하나의 인산화 글리칸을 수용하고 세포에 의해 흡수되고 글리코겐의 가수분해를 위하여 리포솜에 전달될 가능성을 갖는 분획이다.
도 2는 IGF2에 대한 그리고 모노- 및 비스-인산화된 올리고당에 대한 상이한 결합 도메인을 포함하는 CI-MPR의 구조를 도시한다.
도 3은 성숙한 인간 IGF2 펩타이드의 서열 및 구조를 도시한다. 부위 특이적 아미노산 치환이 다른 수용체의 결합에 영향을 미치는 것으로 제시된다.
도 4는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 바 CI-MPR에 대한 야생형 IGF2 (wtIGF2) 펩타이드의 결합을 도시한다.
도 5는 표면 플라스몬 공명에 의해 측정된 바 CI-MPR에 대한 변이체 IGF2(vIGF2) 펩타이드의 결합을 도시한다.
도 6은 IGF2/CI-MPR에 대한 결합을 증가시키기 위하여 알글루시다제 알파에 vIGF2를 첨가하는 유익을 도시한다.
도 7은 IGF2/CI-MPR에 대한 결합을 증가시키기 위하여 재조합 인간 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(rhNAGLU)에 vIGF2를 첨가하는 유익을 도시한다.
도 8은 인슐린 수용체에 대한 야생형 인간 IGF2의 결합을 도시한다.
도 9는 인슐린 수용체에 대한 vIGF2의 검출 가능한 결합이 없는 것을 도시한다.
도 10은 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체에 대한 야생형 IGF2의 결합을 도시한다.
도 11은, 야생형 IGF2에 비해서, 인슐린-유사 성장 인자 1 수용체에 대한 vIGF2 펩타이드의 감소된 결합을 도시한다.
도 12는 천연 hGAA 및 조작된 hGAA를 암호화하는 유전자 요법 발현 카세트의 두가지 예를 도시한다. 천연 hGAA는 불량한 CIMPR 결합 및 세포 흡수로 이어지는 불량한 인산화를 지닌다. 조작된 hGAA는 개선된 CIMPR 결합(vIGF2), CIMPR를 갖는 vIGF2-GAA 단백질의 입체 장애를 저감시키는 2GS 링커, 및 분비를 개선시키는 BiP 신호 펩타이드를 위하여 첨가된 요소를 갖는다.
도 13은 재조합 인간 PPT1을 발현하는 세포(PPT1-1), vIGF2 표적화 도메인을 갖는 재조합 인간 PPT1(PPT1-2) 및 vIGF2 표적화 도메인 및 BiP 신호 서열을 갖는 재조합 인간 PPT1(PPT1-29)으로부터의 PPT1의 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 14는 CI-MPR에 대한 PPT1 작제물의 결합을 도시한다.
도 15는 조작된 또는 천연 hGAA를 발현하는 CHO 세포의 조건조절된 배지 중의 GAA 활성도를 도시한다.
도 16은 GAA 넉아웃 마우스에서의 유전자 요법의 4주 마우스 연구의 연구 설계를 도시한다.
도 17은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에서의 GAA 혈장 활성도를 도시한다.
도 18은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에서 측정된 GAA 수준을 도시한다.
도 19는 표시된 바와 같이 처리된 마우스로부터 얻어진 혈장 샘플로부터의 rhGAA의 세포 표면 수용체 결합을도시한다.
도 20은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스의 전경골근에 대한 GAA 활성도, 및 쿼드(quad) 글리코겐 조직병리학 점수를 도시한다.
도 21은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 전경골근의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 22는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 전경골근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 23은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌 및 척수에 대한 뇌 GAA 활성도, 뇌 글리코겐, 및 척수 글리코겐 조직병리학 점수를 도시한다.
도 24는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 25는 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 뇌줄기 및 맥락총의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 26은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 척수의 글리코겐 PAS를 도시한다.
도 27은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 척수의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 28은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근 GAA 활성도 및 글리코겐 조직병리학을 도시한다.
도 29는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근에 대한 글리코겐 룩솔(luxol)/PAS를 도시한다.
도 30은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 사두근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
도 31은 비처리 야생형("정상") 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스에 대한 삼두근 GAA 활성도 및 조직병리학 점수를 도시한다.
도 32는 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 삼두근의 글리코겐 룩솔/PAS를 도시한다.
도 33은 비처리 야생형 마우스 또는 표시된 바와 같이 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA 넉아웃 마우스로부터의 삼두근의 hGAA 면역조직화학을 도시한다.
단일 유전자 유전 장애에 대한 유전자 요법은 질환 및 장애에 대한 잠재적인 1회 처리를 나타내며, 이들 중 일부는 삶에서 조기에 나타나고 때로는 평생 불능을 초래하는 대단히 파괴적인 증상을 갖는다. 신경계 유전 장애, 예컨대, 리소좀 축적 장애는, 종종 질환 또는 장애 상태에서 결함 또는 결손인 단백질의 활성 형태인 치료용 단백질을 환자에게 투여하는 효소 대체 요법으로 치료된다. 그러나, 빈번한 치료, 치료용 단백질로의 면역 반응의 발달, 및 치료용 단백질을 이환된 조직, 세포, 또는 세포하 구획으로 표적화하기 곤란함을 비롯한 현재의 요법에 대한 문제가 있다. 유전자 요법은 저감된 치료 횟수 및 장기 효능을 비롯한 이점을 제공한다.
본 명세서에는, 필요한 경우 더 많은 치료용 단백질을 제공하여 치료 효능을 개선하는 것과 같은 유전자 요법에 대한 개선을 제공을 유전자 요법 벡터에 대한 성분이 제공된다. 이러한 문제는 치료용 단백질의 발현 및 세포 흡수 또는 전달 및 세포내 또는 세포하 표적하 표적화를 개선함으로써 본 명세서에서 해소된다. 본 명세서에서 제공된 특정 툴 또는 성분은, 분비를 증가시키기 위한 신호 펩타이드(예컨대, 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 및 가우시아 신호 펩타이드) 및 치료용 단백질의 세포내 섭취를 증가시키는 펩타이드(예컨대, 세포 흡수 및 리소좀 전달을 증가시키기 위하여 높은 친화도로 CI-MPR에 결합하는 펩타이드)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이러한 펩타이드는 유전자 요법 벡터에 의해 암호화된 치료용 단백질에 융합된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 IGF2(인슐린 유사 성장 인자 2) 펩타이드 또는 이의 변이체이다. 본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 벡터는, 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법의 효능을 최적화시키기 위하여 높은 친화도로 CI-MPR에 결합하는 펩타이드에 융합하는 치료용 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 것으로 상정된다.
효소 대체 유전자 요법에 대한 유전자 요법 작제물이 설계되었다. 번역 개시 서열은 작제물의 5' 말단에 위치된, 코작 서열 또는 IRES 서열, 예컨대 CrPV IRES에 이어서, GAA 신호 펩타이드 중 하나 이상으로부터 선택된 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산, 항-트립신 저해제를 암호화하는 핵산, 및 BiP 서열을 암호화하는 핵산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들에 이어서 vIGF-2, HIRMab 또는 TfRMab일 수 있는 세포 표적화 도메인을 암호화하는 핵산 또는 다른 세포 표적화 펩타이드 또는 단백질이 후속된다. 유전자 요법 작제물은 링커를 암호화하는 핵산 및 교정 효소 또는 이의 효소적 활성 단편을 암호화하는 핵산을 더 포함하되, 여기서 링커는 교정 효소, 또는 이의 효소적 활성 단편에 세포 표적화 도메인을 연결한다. 적합한 교정 효소는 알파-글루코시다제(GAA), 알파-갈락토시다제(GLA), 이두로니다제(IDUA), 이두로네이트-2-설파타제(IDS), PPT1, 또는 이들의 효소적 활성 단편, 및 개체에서 결손이 발견되는 기타 효소를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
치료용 단백질의 세포내 표적화
대부분의 리소좀 단백질의 N-연결된 탄수화물은 만노스 6-포스페이트(M6P)라 불리는 특수화된 탄수화물 구조를 포함하도록 변형된다. M6P는 막-결합된 M6P 수용체를 통해서 리소좀에 리소좀 단백질의 수송을 가능하게 하는 생물학적 신호이다. 리소좀 축적 장애에 대한 효소 대체 요법은 리소좀에 치료용 단백질의 흡수 및 전달을 위하여 M6P 수용체를 이용한다. 소정의 요법은 Cerezyme®을 비롯한 M6P 수용체를 이용하지 않고, 재조합 인간 GCase의 기타 버전은, 단백질 글리칸 상의 말단 만노스를 결합하고 리소좀에 전달할 수 있는 만노스 수용체를 이용한다. 소정의 효소 대체 요법이 직면하는 문제는 치료 효능에 도달하는데 더 높은 용량을 필요로 하는 효소 효법에 존재하는 다량의 M6P가 있다는 점이다. 이것은 실질적으로 더 긴 주입 시간, 요법에 대한 면역 반응을 전개시키는 더 높은 가능성 및 더 높은 약물 수요로 이어져, 단백질 제조 증가를 필요로 하여 비용 증가를 초래한다.
CI-MPR는 순환으로부터 M6P-함유 리소좀 효소를 포착한다. 이 수용체는 M6P 및 인슐린-유사 성장 인자에 대한 별도의 결합 도메인을 갖고(도메인 1 내지 3 및 7 내지 9, 도 2 참조) 따라서 IGF2/만노스-6-포스페이트수용체 또는 IGF2/CI-MPR로도 공지되어 있다. 이 수용체는 M6P- 또는 IGF2- 또는 IGF2 변이체-함유 효소 대체 요법을 표적화하는데 사용될 수 있다. 인슐린-유사 성장 인자를 비롯한 이들 리간드에 대한 이 수용체의 결합 친화도가 표 1에 제공된다. 현저하게는, IGF2 펩타이드는 모노- 또는 비스-인산화 올리고당보다 CI-MPR에 대해서 더 높은 결합 친화도를 갖는다.
유전자 요법에 대한 치료용 융합 단백질
유전자 요법 벡터로부터 생산된 치료용 융합 단백질이 본 명세서에서 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서 융합 단백질은 융합 단백질을 암호화하는 유전자 요법 벡터가 형질도입된 세포에 의해 분비된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 형질도입된 세포는 조직 또는 기관(예컨대, 간) 내에 있다. 융합 단백질은, 일단 세포로부터 분비되면, 환자의 혈관계를 통해서 수송되어 관심 대상 조직에 도달한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 융합 단백질은 분비 개선되도록 조작된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은, 신호 펩타이드를 결여하지만 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질에 비해서, 분비 수준을 개선시키기 위한 신호 펩타이드를 포함한다.
제공된 유전자 요법 벡터는, 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질의 전달에 관하여 유전자 요법으로 인한 문제를 해결하도록 조작된다. 예를 들어, 몇몇 경우에, 유전자 요법은, 예를 들어, 요구되는 부위로의 치료용 단백질의 분포를 손상시키는 물리적 및/또는 생물학적 장벽으로 인해, 불충분한 양의 치료용 단백질이 치료용 단백질을 필요로 하는 세포 내로 전달된다면, 환자의 신체 내에서 충분한 양의 치료용 단백질을 단지 생성하는 것에 의해 의도된 치료를 달성할 수 없다. 그와 같이, 유전자 요법이 고농도의 치료용 단백질로 포화 지점에 혈액 또는 조직을 범람(flooding)시키는 것이 가능하다고 해도, 유전자 요법은 충분히 치료적이 아닐 수 있다. 게다가, 비-생산적 제거 경로(non-productive clearance pathway)는 방대한 치료용 단백질을 제거할 수 있다. 치료용 단백질이 혈관으로부터 조직(예컨대, 근섬유) 내 사이 공간으로 수송된다고 해도, 적절한 치료 효과가 보증되지 않는다. 리소좀 축적 장애의 효과적인 치료를 위하여, 치료적 유효량의 치료용 단백질이 세포의 세포내섭취 및 리소좀 전달을 받아, 유의한 효능을 초래해야 한다. 본 개시내용은, 효과적인 치료를 초래하는 치료를 위하여 표적 세포 내로 치료용 단백질의 세포내섭취를 가능하게 하는 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 유전자 요법 벡터를 제공함으로써 이들 문제를 해결하고 있다. 몇몇 실시형태에 있어서, 세포내섭취를 가능하게 하는 펩타이드는 CI-MPR에 결합하는 펩타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, CI-MPR에 결합하는 펩타이드는 vIGF2 펩타이드이다.
본 명세서에서는 치료를 위한 표적 세포에 치료용 단백질의 세포내 섭취를 가능하게 하는 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 치료용 단백질 및 CI-MPR에 결합하는 펩타이드를 포함하는 융합 단백질을 암호화한다. 이러한 융합 단백질은, 유전자 요법 벡터 표적 치료용 단백질, 예컨대, 효소 대체 요법제로부터 필요로 되는 세포에 발현되는 경우, 이러한 세포로의 전달 또는 이러한 세포에 의한 세포 흡수를 증가시키고, 치료용 단백질을 세포하 개소(예컨대, 리소좀)에 표적화시킨다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 IGF2 펩타이드 또는 이의 변이체이며, 이는 치료용 단백질을 리소좀에 표적화시킬 수 있다. 본 명세서에서의 융합 단백질은 또한, 몇몇 실시형태에 있어서, 분비를 증가시키는 신호 펩타이드, 예컨대, BiP 신호 펩타이드 또는 가우시아 신호 펩타이드를 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 링커 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서의 융합 단백질을 암호화하는 핵산은 내부 리보솜 유입 서열을 포함한다.
vIGF2 펩타이드를 포함하는 유전자 요법에 대한 치료용 단백질이 본 명세서에서 제공된다. 예시적인 단백질은 이하의 표 2에 제공된다.
본 명세서에서 제공되는 융합 단백질의 성분은 이하에 추가로 설명된다.
CI-MPR에 결합하는 펩타이드(예컨대, vIGF2 펩타이드)
본 명세서에서는 CI-MPR에 결합하는 펩타이드가 제공된다. 이러한 펩타이드 및 치료용 단백질을 포함하는 융합 단백질은, 유전자 요법 벡터로부터 발현된 경우, 필요한 경우 세포에 치료용 단백질을 표적화하고, 이러한 세포에 의한 세포 흡수를 증가시키고, 세포하 위치(예컨대, 리소좀)에 치료용 단백질을 표적화한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 치료용 펩타이드의 N-말단에 융합된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 치료용 단백질의 C-말단에 융합된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 펩타이드는 vIGF2 펩타이드이다. 몇몇 vIGF2 펩타이드는 CI-MPR에 대한 높은 친화도를 유지하는 한편 IGF1 수용체, 인슐린 수용체 및 IGF 결합 단백질(IGFBP)에 대한 이들의 친화도가 감소 또는 제거된다. 따라서, 몇몇 변이체 IGF2 펩타이드는 실질적으로 더 민감하고, 야생형(wt) IGF2에 비해서 저감된 안전 위험성을 갖는다. 본 명세서에서의 vIGF2 펩타이드는 서열번호 31의 아미노산 서열을 가진 것들을 포함한다. 변이체 IGF2 펩타이드는 wt IGF2(서열번호 1)와 비교해서 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55 또는 65번 위치에 변이 아미노산을 가진 것들을 더 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 E6R의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 F26S의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 Y27L의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 V43L의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 F48T의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 R49S의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 S50I의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 A54R의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 L55R의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 K65R의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R 및 L55R의 치환을 갖는 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 1개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 2개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 3개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 4개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 4개의 아미노산의 N-말단 결실 및 E6R, Y27L 및 K65R의 치환을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 4개의 아미노산의 N-말단 결실 및 E6R 및 Y27L의 치환을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 5개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 6개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 7개의 아미노산의 N-말단 결실을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드는 7개의 아미노산의 N-말단 결실 및 Y27L 및 K65R의 치환을 갖는다.
내부 리보솜 유입 서열
본 명세서에서는 번역 개시의 병목을 우회시킴으로써 유전자 발현을 증가시키기 위한 내부 리보솜 유입 서열(IRES)을 더 포함하는 장애를 치료하는데 유용한 유전자 요법 작제물이 제공된다. 유전자 요법에 대한 발현을 최적화하기 위한 적합한 내부 리보솜 유입 서열은 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES, 피코르나바이러스 IRES, 아프토바이러스 IRES, 카포시 육종-연관 헤르페스 바이러스 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스 IRES, 크리파바이러스 IRES, 로팔로시품 파디 바이러스 IRES, 마렉병 바이러스 IRES, 및 기타 적합한 IRES 서열을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 작제물은 CrPV IRES를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, CrPV IRES은 AAAAATGTGATCTTGCTTGTAAATACAATTTTGAGAGGTTAATAAATTACAAGTAGTGCTATTTTTGTATTTAGGTTAGCTATTTAGCTTTACGTTCCAGGATGCCTAGTGGCAGCCCCACAATATCCAGGAAGCCCTCTCTGCGGTTTTTCAGATTAGGTAGTCGAAAAACCTAAGAAATTTACCTGCT(서열번호 12)의 핵산 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, CrPV IRES 서열은 서열번호 12와 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일하다.
신호 펩타이드
본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물은, 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 작제물이 형질도입된 세포로부터 치료용 단백질의 분비를 개선하는 신호 펩타이드를 더 포함한다. 신호 펩타이드는 몇몇 실시형태에 있어서 치료용 단백질의 단백질 처리를 개선시키고, 발생기 폴리펩타이드-리보솜 복합체의 ER로의 전좌를 용이하게 하며, 적절한 공동번역 변형 및 번역후 변형을 확보하게 한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 (i) 신호 번역 개시 서열의 상류 위치에, (ii) 번역 개시 서열과 치료용 단백질 사이에, 또는 (iii) 치료용 단백질의 하류 위치에 위치된다. 유전자 요법 작제물에 유용한 신호 펩타이드는 HSP70 단백질의 패밀리로부터의 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드(예컨대, HSPA5, 열 충격 단백질 패밀리 A 구성원 5) 및 가우시아 신호 펩타이드, 및 이들의 변이체를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 이들 신호 펩타이드는 신호 인식 입자에 최고 친화도를 갖는다. BiP 및 가우시아 아미노산 서열의 예는 이하의 표 5에 제공된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 서열과 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다.
BiP 신호 펩타이드-신호 인식 입자(SRP) 상호작용은 ER로의 전좌를 용이하게 한다. 이 상호작용은 도 20에 예시되어 있다.
가우시아 신호 펩타이드는 가우시아 프린센스(Gaussia princeps)로부터의 루시페라제로부터 유래되고, 이 신호 펩타이드에 융합된 치료용 단백질의 증가된 단백질 합성 및 분비를 안내한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서, 신호 펩타이드는 서열번호 32와 5개 이하, 4개 이하, 3개 이하, 2개 이하, 또는 1개의 아미노산만큼 상이하다.
링커
본 명세서에서 제공된 유전자 요법 작제물은, 몇몇 실시형태에 있어서, 표적화 펩타이드와 치료용 단백질 사이의 링커를 포함한다. 이러한 링커는, 몇몇 실시형태에 있어서, vIGF2 펩타이드와 치료용 단백질 사이에 정확한 간격을 유지하고 입체적 충돌을 완화시킨다. 링커는, 몇몇 실시형태에 있어서, 반복된 글리신 잔자, 반복된 글리신-세린 잔기 및 이들의 조합을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 링커는 5 내지 20개의 아미노산, 5 내지 15개의 아미노산, 5 내지 10개의 아미노산, 8 내지 12개의 아미노산, 또는 약 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 또는 13개의 아미노산으로 이루어진다. 본 명세서에서의 유전자 요법 작제물에 대한 적합한 링커는 이하의 표 6에 제공된 것들을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
번역 개시 서열
본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물은 mRNA의 번역의 개시를 돕는 코작 서열과 같은 번역 개시 서열을 갖는 핵산을 포함한다. 본 명세서에서 상정되는 코작 서열은 (gcc)RccATGG(서열번호 27)의 공통 서열을 가지며, 여기서 소문자는 그 위에서의 가장 공통적인 염기 및 염기 변수를 나타내고, 대문자는 단지 거의 변화하지 않는 고도로 보존된 염기를 나타낸다. R은 퓨린(아데닌 또는 구아닌)이 항상 그 위치에서 관찰되는 것을 나타낸다. 괄호 속의 서열(gcc)은 불확실한 의미이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, 여기서 X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드이다. 몇몇 실시형태에 있어서, X1은 A를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, X2는 G를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)의 서열을 갖는다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)의 서열과 1 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)와 적어도 85% 동일한 핵산 서열을 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)의 서열과 1개 또는 2개의 뉴클레오타이드만큼 상이하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 코작 서열은 CACCATG(서열번호 47)를 포함한다.
치료용 단백질
본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물은 부재 또는 결함 단백질 중에서 초래되는 개체의 유전적 결함으로 인해 유전 장애를 치료하기 위한 치료용 단백질의 유전적 결함으로 인해 유전 장애를 치료하기 위한 치료용 단백질을 암호화하는 핵산을 포함한다. 유전자 요법 작제물로부터 발현된 치료용 단백질은 부재 또는 결함 단백질을 대체한다. 따라서, 치료용 단백질은, 개체에서 치료를 필요로 하는 유전적 결함에 기초하여 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 구조 단백질이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 효소이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 조절 단백질이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 수용체이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 펩타이드 호르몬이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 사이토카인 또는 케모카인이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서의 유전자 요법 작제물은 효소, 예컨대, 리소좀 축적 장애를 가진 개체에서의 유전적 결함을 가진 효소를 암호화한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 작제물는 리소좀 효소, 예컨대, 갈락토시다제, 프로테아제 또는 설파타제를 암호화한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물에 의해 암호화된 효소는, α-D-만노시다제; N-아스파틸-β-글루코사미니다제; β-갈락토시다제; 세라미다제; 푸코시다제; 갈락토세레브로시다제; 아릴설파타제 A; N-아세틸글루코사민-1-인산기전이효소; 이두로네이트 설파타제; N-아세틸글루코사미니다제; 아세틸-CoA:α-글루코사미니드 아세틸전이효소; N-아세틸글루코사민 6-설파타제; β-글루쿠로니다제; 히알루로니다제; 시알리다제; 설파타제; 스핑고미엘리나제; 산 β-만노시다제; 카텝신 K; 3-헥소스아미니다제 A; β-헥소스아미니다제 B; α-N-아세틸갈락토사미니다제; 시알린(sialin); 헥소스아미니다제 A; 베타-글루코시다제; α-이두로니다제; α-갈락토시다제 A; β-글루코세레브로시다제; 리소솜 산 리파제; 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제; 이두로네이트-2-설파타제; N-아세틸갈락토사민-6-설파타제; 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제; 알파-글루코시다제; 헤파란 설파미다제; NADPH 산화효소의 gp-91 소단위; 아데노신 데아미나제; 사이클린 의존적 키나제 유사 5; 및 팔미토일 단백질 티오에스테라제 1을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물에 의해 암호화된 효소는 알파-글루코시다제를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 CDKL5 결핍 장애, 낭성 성뮤증, 알파- 및 베타-지중해빈혈증, 겸상적혈구성 빈혈증, 마르팡 증후군, 취약 X 증후군, 헌팅턴병, 혈색소증, 선천성 귀머거리(비증후군성), 테이-삭스, 가족성 고콜레스테롤혈증, 스타가르트 질환, 어셔 증후군, 맥락막결손, 완전색맹, X-연관 망막분리, 혈우병, 비스코트-알드리히 증후군, X-연관 만성 육아종증, 방향족 L-아미노산 데카복실라제 결핍, 퇴행적 이영양성 수포성 표피박리증, 알파 1 안티트립신 결핍, 허친슨-길포드 조로증 증후군(HGPS), 누난 증후군, X-연관성 중증 복합 면역결핍증(X-SCID)으로 이루어진 군으로부터 선택된 유전 장애와 연관된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 CDKL5, 코넥신 26, 헥소스아미니다제 A, LDL 수용체, 디스트로핀, CFTR, 베타-글로불린, HFE, 헌팅턴, ABCA4, 미오신 VIIA(MYO7A), Rab 에스코트 단백질-1(REP1), 사이클릭 뉴클레오타이드 게이티드 채널 베타 3(CNGB3), 레티노쉬신 1(RS1), 헤모글로빈 소단위 베타(HBB), 인자 IX, WAS, 사이토크롬 B-245 베타쇄, 도파 데카복실라제(DDC), 콜라겐 제VII형 알파 1쇄(COL7A1), 세르핀 패밀리 A 멤버 1(SERPINA1), LMNA, PTPN11, SOS1, RAF1, KRAS 및 IL2 수용체 γ 유전자로 이루어진 군으로부터 선택된다.
유전자 요법 벡터예
유전자 요법 벡터 및 조성물
본 명세서에서는 치료용 융합 단백질, 예컨대, 선택적으로 신호 펩타이드를 갖는 vIGF2 융합을 암호화하는 핵산, 예컨대, DNA를 갖는 유전자 요법 벡터가 제공된다. 유전자 요법 벡터는 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 포함한다. 레트로바이러스, 예컨대, 렌티바이러스로부터 유래된 벡터는 딸 세포에서 트랜스젠(transgene)의 장기 안정적인 통합 및 이의 전파를 허용하기 때문에 장기 유전자 전달을 달성하는 적합한 툴이다. 렌티바이러스 벡터 및 아데노-연관 바이러스 벡터는, 비-증식 세포, 예컨대, 간세포 및 뉴런에 형질도입할 수 있는 온코-레트로바이러스, 예컨대, 뮤린 백혈병 바이러스로부터 유래된 벡터에 비해서 부가된 이점을 갖는다. 이들은 또한 낮은 면역원성의 부가된 이점을 갖는다.
본 명세서에서의 예시적인 유전자 요법 벡터는 vIGF2 펩타이드를 포함하는 치료용 단백질 및 치료용 융합 단백질을 암호화한다. 예시적인 융합 단백질 아미노산 서열을 암호화하는 핵산이 이하의 표 7에 제공된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체와 같은 목적하는 치료용 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터는 아데노-연관 바이러스 벡터(A5/35)이다.
몇몇 실시형태에 있어서, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 vIGF2 융합체와 같은 치료용 융합 단백질을 암호화하는 핵산은 많은 유형의 벡터에 클로닝된다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에 있어서, 핵산은, 플라스미드, 파지미드, 파지 유도체, 동물 바이러스 및 코스미드를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 벡터에 클로닝된다. 특정 관심 대상 벡터는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터 및 서열결정 벡터를 포함한다.
또한, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체와 같은 치료용 융합 단백질을 암호화하는 발현 벡터는, 몇몇 실시형태에 있어서, 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공된다. 바이러스 벡터 기술은, 예컨대, 문헌[Sambrook et al., 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY)]에 그리고 기타 바이러스학 및 분자 생물 매뉴얼에 기재되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는, 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스 및 렌티바이러스를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기체, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위 및 하나 이상의 선택 가능한 마커에서 기능적인 복제 기원을 함유한다(예컨대, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 제6,326,193호).
또한 본 명세서에서는 유전자 전달용 조성물 및 시스템이 제공된다. 많은 바이러스 기반 시스템이 포유류 세포에 유전자 전달을 위하여 개발되어 왔다. 예를 들어, 레트로바이러스는 유전자 전달 시스템을 위한 편리한 플랫폼을 제공한다. 선택된 유전자는, 몇몇 실시형태에 있어서, 벡터에 삽입되고, 적합한 기술을 이용해서 레트로바이러스 입자에 패키징된다. 이어서, 재조합 바이러스가 단리되고 생체내 또는 생체외에서 대상체의 세포에 전달된다. 많은 레트로바이스 시스템이 유전자 요법에 적합하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 아데노바이러스 벡터가 사용된다. 많은 아데노바이러스 벡터가 유전자 요법에 적합하다. 몇몇 실시형태에 있어서, 아데노-연관 바이러스 벡터가 사용된다. 많은 아데노-연관 바이러스가 유전자 요법에 적합하다. 일 실시형태에 있어서, 렌티바이러스 벡터가 사용된다.
본 명세서에서 제공되는 유전자 요법 작제물은 관심대상 유전자가 클로닝되거나 또는 다르게는 벡터의 뉴클레오타이드 서열이 (구성적 또는 다르게는 몇몇 방식으로 조절된) 관심대상 유전자의 발현을 허용하는 방식으로 관심대상 유전자를 포함하는 벡터(또는 유전자 요법 발현 벡터)를 포함한다. 본 명세서에서 제공되는 벡터 작제물은 관심 대상 조직에 전달될 수 있고 선택된 관심 대상 조직에서 관심대상 유전자의 발현을 제공할 임의의 적합한 유전자 발현 벡터를 포함한다.
몇몇 실시형태에 있어서, 벡터는 뉴런 조직의 형질도입 및 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 AAV 벡터의 능력 때문에 아데노-연관 바이러스(AAV) 벡터이다. 본 명세서에서 제공되는 방법에 있어서, 임의의 혈청형의 AAV가 사용될 것으로 상정된다. 소정의 실시형태에서 사용되는 바이러스 벡터의 혈청형은 AAV1 벡터, AAV2 벡터, AAV3 벡터, AAV4 벡터, AAV5 벡터, AAV6 벡터, AAV7 벡터, AAV8 벡터, AAV9 벡터, AAVrhS 벡터, AAVrh10 벡터, AAVrh33 벡터, AAVrh34 벡터, AAVrh74 벡터, AAV Anc80 벡터, AAVPHP.B 벡터, AAVhu68 벡터, AAV-DJ 벡터, 및 유전자 요법 적합한 기타의 것으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
AAV 벡터는 포유동물에 대해서 비병원성인 DNA 파보바이러스이다. 간략히 말하면, AAV-기반 벡터는, 바이러스 DNA 복제, 패키징 및 통합을 개시하는데 사용되는 2개의 측접하는 145개 염기쌍 반전 말단 반복부(ITR)를 남기고 제거되는 바이러스 게놈이 96%를 차지하는 렙(rep) 및 캡(cap) 바이러스 유전자를 갖는다.
추가의 실시형태는 AAV1 벡터, AAV2 벡터, AAV3 벡터, AAV4 벡터, AAV5 벡터, AAV6 벡터, AAV7 벡터, AAV8 벡터, AAV9 벡터, AAVrhS 벡터, AAVrh10 벡터, AAVrh33 벡터, AAVrh34 벡터, AAVrh74 벡터, AAV Anc80 벡터, AAVPHP.B 벡터, AAV-DJ 벡터, 및 유전자 요법 적합한 기타의 것을 작성하는데 다른 혈청형 캡시드를 사용하는 것을 포함한다. 선택적으로, AAV 바이러스 캡시드는 AAV2/9, AAV9, AAVrhS, AAVrh10, AAVAnc80 또는 AAV PHP.B이다.
추가의 프로모터 요소, 예컨대, 증강제는, 전사 개시의 빈도를 조절한다. 전형적으로, 이들은 개시 부위의 상류의 30 내지 110 bp 영역에 위치하지만, 많은 프로모터는 개시 부위의 하류의 기능적 요소도 함유하는 것으로 나타났다. 프로모터 요소 간의 간격은 빈번하게 유연하므로, 프로모터 기능은 요소가 서로에 대해서 역전되거나 이동될 때 보존된다. 티미딘 키나제(tk) 프로모터에서, 프로모터 요소 간의 간격은 종종 활성도가 감소하기 시작하기 전에 50 bp까지 떨어져서 증가된다. 프로모터에 따라서, 개별적인 요소가 전사를 활성화시키기 위하여 협업적으로 또는 독립적으로 기능하는 것으로 보인다.
선택적으로 포유류 T-세포에 내부 리보솜 유입 서열인 트랜스젠을 갖는 치료용 융합 단백질, vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체를 발현할 수 있는 프로모터의 예는 EF1a 프로모터이다. 천연 EF1a 프로모터는, 리보솜에 아미노아실 tRNA의 효소적 전달을 담당하는 신장인자-1 복합체(elongation factor-1 complex)의 알파 소단위의 발현을 추진시킨다. EF1a 프로모터는 포유류 발현 플라스미드에서 광범위하게 사용되어 왔고, 렌티바이러스 벡터에 클로닝된 트랜스젠으로부터 발현을 추진시키는데 효과적인 것으로 나타났다(예컨대, 문헌[Milone et al., Mol. Ther. 17(8): 1453-1464 (2009)] 참조). 프로모터의 다른 예는 급초기 거대세포바이러스(CMV) 프로모터 서열이다. 이 프로모터 서열은 이에 작동 가능하게 연결된 임의의 폴리뉴클레오타이드 서열의 높은 수준의 발현을 촉진시킬 수 있는 강력한 구성적 프로모터 서열이다. 그러나, 닭 β 액틴 프로모터, P546 프로모터, 유인원 바이러스 40(SV40) 초기 프로모터, 마우스 유방 종양 바이러스(MMTV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 긴 말단 반복부(LTR) 프로모터, MoMuLV 프로모터, 조류 백혈병 바이러스 프로모터, 엡스타인-바 바이러스 급초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스 프로모터뿐만 아니라, 인간 유전자 프로모터, 예컨대, 제한 없이, 액틴 프로모터, 미오신 프로모터, 신장인자-1a 프로모터, 헤모글로빈 프로모터 및 크레아틴 키나제 프로모터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는, 다른 구성적 프로모터 서열이 때때로 또한 사용된다. 또한, 유전자 요법 벡터는 구성적 프로모터의 사용으로 제한되는 것으로 상정되지 않는다. 유도성 프로모터가 또한 여기서 상정된다. 유도성 프로모터의 사용은 이러한 발현이 바람직한 경우 작동 가능하게 연결된 폴리뉴클레오타이드 서열의 발현을 턴 온시키거나, 또는 발현이 바람직하지 않을 경우 발현을 턴 오프시키는 분자 스위치를 제공한다. 유도성 프로모터의 예는 메탈로티오닌 프로모터, 글루코코르티코이드 프로모터, 프로게스테론 프로모터, 및 테트라사이클린-조절된 프로모터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
치료용 융합 단백질, 예컨대, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열, 또는 이의 부분을 갖는 vIGF 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체의 발현을 평가하기 위하여, 세포 내로 도입될 발현 벡터는 종종 바이러스 벡터를 통해서 형질감염 또는 감염되도록 추구되는 세포의 모집단으로부터 발현 세포의 식별 및 선택을 용이하게 하기 위하여 선택 가능한 마커 유전자 또는 리포터 유전자 또는 둘 다를 포함한다. 다른 양상에서, 선택 가능한 마커는 흔히 별도의 부분의 DNA 상에 보유되어 동시-형질감염 절차에 사용된다. 선택 가능한 마커와 리포터 유전자는 둘 다 때때로 숙주 세포에서 발현을 가능하게 하도록 적절한 조절 서열이 측접된다. 유용한 선택 가능한 마커는, 예를 들어, 항생체-내성 유전자, 예컨대, 네오(neo) 등을 포함한다.
세포 내로 유전자를 도입하고 발현시키기 위한 방법 및 조성물은 본 명세서에서의 방법에 적합하다. 발현 벡터의 맥락에서, 벡터는 당업계에서의 임의의 방법에 의해 숙주 세포, 예컨대, 포유류, 박테리아, 효모 또는 곤충 세포에 용이하게 도입된다. 예를 들어, 발현 벡터는 물리적, 화학적 또는 생물학적 수단에 의해 숙주 세포에 전달된다.
숙주 세포에 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 물리적 방법 및 조성물은 인산칼슘 석출, 리포펙션, 입자 충격주입법(particle bombardment), 미량주사법, 유전자총법(gene gun), 전기천공법 등을 포함한다. 벡터 및/또는 외인성 핵산을 포함하는 세포를 생산하는 방법이 본 명세서에서의 방법에 적합하다(예컨대, 문헌[Sambrook et al., 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, volumes 1-4, Cold Spring Harbor Press, NY] 참조). 숙주 세포에 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 하나의 방법은 인산칼슘트랜스펙션이다.
숙주 세포에 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 화학적 수단 및 조성물은 콜로이드 분산 시스템, 예컨대, 거대분자 복합체, 나노캡슐, 미소구체, 비드, 및 지질-기반 시스템, 예컨대, 수중유 에멀션, 마이셀, 혼합 마이셀, 핵산-지질 입자, 및 리포솜을 포함한다. 시험관내 및 생체내 전달 비히클로서 사용하기 위한 예시적인 콜로이드 시스템은 리포솜(예컨대, 인공 막 소포)이다. 핵산의 최신 표적화 전달의 기타 방법, 예컨대, 표적화된 나노입자 또는 기타 적합한 서브미크론 크기의 전달 시스템을 이용한 폴리뉴클레오타이드의 전달이 이용 가능하다.
비-바이러스 전달 시스템이 사용되는 경우에, 예시적인 전달 비히클은 리포솜이다. 지질 제형의 사용은 숙주 세포에 (시험관내, 생체외 또는 생체내) 핵산의 도입을 상정한다. 다른 양상에 있어서, 핵산은 지질과 연관된다. 지질과 연관된 핵산은, 몇몇 실시형태에 있어서, 리포솜의 수성 내부에 캡슐화되고, 리포솜의 지질 이중층 내에 배치되고, 리포솜과 올리고뉴클레오타이드 둘 다에 연관된 연결 분자를 통해서 리포솜에 부착되고, 리포솜 내에 포획되고, 리소폼과 복합체화되고, 지질을 함유하는 용액에 분산되고, 지질과 혼합되고, 지질과 배합되고, 지질 내 현탁액으로서 포함되고, 마이셀과 혼합 또는 복합체화되거나 또는 다르게는 지질과 연관된다. 지질, 지질/DNA 또는 지질/발현 벡터 연관 조성물은 용액 중 임의의 특정 구조로 제한되지 않는다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에 있어서, 이들은 이중층 구조에, 마이셀로서 또는 "붕괴된"(collapsed) 구조로 존재한다. 대안적으로, 이들은 단순히 용액 중에 배치되어, 가능하게는 크기나 형상이 균일하지 않은 응집체를 형성한다. 지질은, 몇몇 실시형태에 있어서, 천연 유래 또는 합성 지질인 지방 물질이다. 예를 들어, 지질은 세포질 내에 천연으로 발생하는 지방 액적뿐만 아니라 장쇄 지방족 탄화수소 및 이들의 유도체, 예컨대, 지방산, 알코올, 아민, 아미노 알코올 및 알데하이드를 함유하는 화합물의 부류를 포함한다.
사용하기에 적합한 지질은 상업적 공급원으로부터 얻어진다. 예를 들어, 몇몇 실시형태에 있어서, 다이미리스틸 포스파티딜콜린("DMPC")은 Sigma사(미주리주 세인트루이스 소재)로부터 얻어지고; 몇몇 실시형태에 있어서, 다이세틸 포스페이트("DCP")는 K & K Laboratories사(뉴욕주 플레인뷰 소재)로부터 얻어지고; 콜레스테롤("Choi")은, 몇몇 실시형태에 있어서, Calbiochem-Behring사로부터 얻어지며; 다이미리스틸 포스파티딜클리세롤("DMPG") 및 기타 지질은 종종 Avanti Polar Lipids, Inc.(앨라배마주 버밍엄 소재)로부터 얻어진다. 클로로폼 또는 클로로폼/메탄올 중의 지질의 스톡 용액은 종종 약 -20℃에서 저장된다. 클로로폼은 단지 용매로서 사용되는데, 그 이유는 이것이 메탄올보다 더 쉽게 증발되기 때문이다. "리포솜"은 봉합된 지질 이중층 또는 응집체의 발생에 의해 형성된 가종 단일 및 다중층 지질 비히클을 포괄하는 일반 용어이다. 리포솜은 종종 인지질 이중층 막과 내부 수성 매질을 가진 소포성 구조를 특징으로 한다. 다중층 리포솜은 수성 매질에 의해 분리된 다수 지질층을 갖는다. 이들은 인지질이 과잉의 수용액에 현탁되는 경우 자발적으로 형성된다. 지질 성분은 폐쇄된 구조의 형성 전에 자체-재배열을 겪고, 지질 이중층 사이에 물 및 용해된 용질을 포획한다(Ghosh et al., 1991 Glycobiology 5: 505-10). 그러나, 정상 수포 구조와는 상이한 용액 중 구조를 갖는 조성물도 포괄된다. 예를 들어, 지질은, 몇몇 실시형태에 있어서, 마이셀 구조를 가정하거나 또는 지질 분자의 비균일 응집체로서 단지 존재한다. 또한 리포펙타민-핵산 복합체가 상정된다.
숙주 세포 내 재조합 DNA 서열의 존재를 확인하기 위하여, 숙수 세포에 외인성 핵산을 도입하거나 또는 다르게는, 본 명세서에서 제공되는, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는, 치료용 융합 단백질, 예컨대, vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체에 세포를 노출시키는데 사용되는 방법에도 불구하고, 각종 검정법이 수행되도록 상정된다. 이러한 검정법은, 예를 들어, 본 명세서에서의 방법에 적합한 "분자 생물학" 검정법, 예컨대, 서던 및 노던 블로팅, RT-PCR 및 PCR; "생화학적" 검정법, 예컨대, 특정 펩타이드의 존재 또는 부재를, 예컨대, 면역학적 수단(ELISA 및 웨스턴 블롯)에 의해 또는 본 명세서에서의 범위 내에 들어가는 제제를 식별하기 위하여 본 명세서에 기재된 검정법에 의해 검출하는 방법을 포함한다.
본 개시내용은, 선택적으로 핵산 분자를 암호화하는, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 치료용 융합 단백질, 예컨대, vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체를 포함하는 벡터를 더 제공한다. 일 양상에 있어서, 치료용 융합 단백질 벡터는 세포에 직접 형질주입되는 것이 가능하다. 일 양상에 있어서, 벡터는 클로닝 또는 발현 벡터, 예컨대, 1종 이상의 플라스미드를 포함하는 벡터(예컨대, 발현 플라스미드, 클로닝 벡터, 미니서클(minicircle), 미니벡터, 이중 극미 염색체(double minute chromosome)), 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터 작제물이다. 일 양상에 있어서, 벡터는 포유류 세포에서 vIGF2-치료용 융합 단백질 작제물을 발현할 수 있다. 일 양상에 있어서, 포유류 세포는 인간 세포이다.
치료 용도 및 방법
본 명세서에서는 또한 본 명세서에 개시된, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 치료용 융합 단백질(예컨대, vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체 또는 신호 펩타이드-vIGF2 융합체)을 암호화하는 핵산을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 유전자 요법을 이용하는 유전 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 본 명세서에서의 방법을 이용하는 치료에 적합한 유전 장애는 돌연변이 유전자에 의해 기능장애 단백질의 발현 또는 발현의 결여에 기인하는 게놈 내 하나 이상의 돌연변이에 기인하는 개체에서의 장애를 포함한다.
또한, 본 명세서에서는, 유전 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 사용하기 위한, 유전자 요법 벡터, 본 명세서에 개시된, 선택적으로 내부 리보솜 유입 서열을 갖는 치료용 융합 단백질(예컨대, vIGF2 융합체 또는 신호 펩타이드 융합체 또는 신호 펩타이드-vIGF2 융합체)을 암호화하는 핵산을 포함하는 유전자 요법 벡터, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다.
본 명세서에서의 방법에 적합한 유전 장애는 연골무형성증, 알파-1 안티트립신 결핍증, 항인지질 증후군, 상염색체 우성 다낭성 신장병, 샤르코-마리-투스, 결장암, 묘성(Cri du chat), 크론병, 낭성 성뮤증, 더컴병(Dercum Disease), 두엔 증후군(Duane Syndrome), 뒤센 근이영양증(Duchenne Muscular Dystrophy), 인자 V 레이든 혈전성향증(Factor V Leiden Thrombophilia), 가족성 고콜레스테롤혈증, 가족성 지중해열, 취약 X 증후군, 고쉐병, 혈색소증, 혈우병, 전전뇌증, 헌팅턴병, 클라인펠터 증후군, 마르팡 증후군, 근긴장성 이영양증, 신경섬유종증, 누난 증후군, 골형성 부전증(Osteogenesis Imperfecta), 파킨슨병, 페닐케톤뇨증, 폴란드 증후군(Poland Anomaly), 포르피린증(Porphyria), 조로증, 망막색소변성증, 중증합병성 면역결핍증(Severe Combined Immunodeficiency: SCID), 겸상적혈구 질환, 척수성 근위축증, 테이-삭스병, 지중해빈혈증(Thalassemia), 트라이메틸아민뇨증, 터너 증후군(Turner Syndrome), 구개심장안면증후군(Velocardiofacial Syndrome), WAGR 증후군(WAGR Syndrome), 또는 윌슨병(Wilson Disease)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전 장애는 CDKL5 결핍 장애, 낭성 성뮤증, 알파- 및 베타-지중해빈혈증, 겸상적혈구성 빈혈증, 마르팡 증후군, 취약 X 증후군, 헌팅턴병, 혈색소증, 선천성 귀머거리(비증후군성), 테이-삭스, 가족성 고콜레스테롤혈증, 스타가르트 질환, 어셔 증후군, 맥락막결손, 완전색맹, X-연관 망막분리, 혈우병, 비스코트-알드리히 증후군, X-연관 만성 육아종증, 방향족 L-아미노산 데카복실라제 결핍, 퇴행적 이영양성 수포성 표피박리증, 알파 1 안티트립신 결핍, 허친슨-길포드 조로증 증후군(HGPS), 누난 증후군, X-연관성 중증 복합 면역결핍증(X-SCID)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서 제공되는 방법을 이용하는 치료에 적합한 유전 장애는 리소좀 축적 장애이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 환자에게 누락 또는 결함 효소를 전달하도록 유전자 요법을 이용해서 본 명세서에서 치료된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서의 방법은 필요한 경우 세포에 효소를 전달하기 위하여 vIGF2에 융합된 또는 신호 펩타이드에 융합된 효소를 환자에게 전달한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형 및 신들러병 II형으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 몇몇 실시형태에 있어서, 리소좀 축적 장애는 활성제 결핍증, GM2-강글리오사이드증; GM2-강글리오사이드증, AB 변이체; 알파-만노사이드축적증(제2형, 보통 형태; 제3형, 신생아, 중증); 베타-만노사이드축적증; 아스파르틸글루코사민뇨; 리소솜 산 리파제 결핍; 시스틴증(후기-발병 청소년 또는 청년기 신장병증 유형; 영아기 신장병증); 카나린-도르프만 증후군; 근육병을 가진 중성 지질 축적 질환; NLSDM; 다논병; 파브리병; 파브리병 II형, 후기-발병; 파버병; 파버 지방육아종증; 푸코스축적증; 갈락토시알산증(조합된 뉴라미니다제 및 베타-갈락토시다제 결핍); 고쉐병; 고쉐병 II형; 고쉐병 III형; IIIC형 고쉐병; 사포신 C 결핍으로 인한 비정형 고쉐병; GM1-강글리오사이드증(후기-영야기/청소년 GM1-강글리오사이드증; 성인/만성 GM1-강글리오사이드증); 구형세포 백질디스트로피, 크라베병(후기 영아기 발병; 청소년 발병; 성인 발병); 사포신 A 결핍으로 인한 비정형 크라베병; 이염성 백질이영양증(청소년; 성인); 부분 세레브로사이드 설페이트 결핍; 슈도아릴설파타제 A 결핍; 사포신 B 결핍으로 인한 이염성 백질이영양증; 뮤코다당체침착증 장애: MPS I, 힐러 증후군; MPS I, 힐러-샤이에 증후군; MPS I, 샤이에 증후군; MPS II, 헌터 증후군; MPS II, 헌터 증후군; 산필립포 증후군 A형/MPS IIIA; 산필립포 증후군 B형/MPS IIIB; 산필립포 증후군 C형/MPS IIIC; 산필립포 증후군 D형/MPS IIID; 모르키오 증후군, A형/MPS IVA; 모르키오 증후군, B형/MPS IVB; MPS IX 히알루로니다제 결핍; MPS VI 마로토-라미 증후군; MPS VII 슬라이 증후군; 뮤코리피드증 I, 시알산증 II형; I-세포 질환, 레로이병, 뮤코리피드증 II; 가성-후를러 다발성 이영양증/뮤코지질증 III형; 뮤코리피드증 IIIC/ML III GAMMA; 뮤코지질증 IV형; 다종 설파타제 결핍; 니만-픽병(B형; C1형/만성 신경계침윤형; C2형; D형/노바 스코티안형); 신경세포 세로이드 리포푸신증: CLN6 질환 - 비정형 후반 영아기, 후기-발병 변이체, 조기 청소년; 바텐-스필메이어-보그트/청소년 NCL/CLN3 질환; 핀란드 변이 후반 영아기 CLN5; 얀스키-비엘슈보스키병/후기 영아기 CLN2/TPP1 질환; 쿠프스/성인-발병 NCL/CLN4 질환(B형); 노던 간질/변이 후반 영아기 CLN8; 산타보리-할티아/영아기 CLN1/PPT 질환; 폼페병(글리코겐 축적 질환 II형); 후기-발병 폼페병; 피크노디소토시스; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 샌드호프병/GM2 강글리오사이드증; 쉰들러병(III형/중간, 가변); 칸자키병; 살라병; 영아기 유리 시알산 축적 질환(ISSD); 진행성 근간대성 발작을 가진 척수성 근위축증(SMAPME); 테이-삭스병/GM2 강글리오사이드증; 청소년-발병 테이-삭스병; 후기-발병 테이-삭스병; 크리스티얀센 증후군; 로 안뇌신 증후군; 샤르코-마리-투스 4J형, CMT4J; 유니스-바론 증후군; 양쪽 후두측두 다왜소뇌회증(BTOP); X-연관 고칼슘뇨증 신장결석증, 덴트-1; 및 덴트병 2. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질은 리소좀 축적 장애와 연관되고 치료용 단백질은 GM2-활성제 단백질; α-만노시다제; MAN2B1; 리소좀 ß-만노시다제; 글리코실아스파라기나제; 리소솜 산 리파제; 시스티노신(cystinosin); CTNS; PNPLA2; 리소좀-연관 막 단백질-2; α-갈락토시다제 A; GLA; 산 세라미다제; α-L-푸코시다제; 보호 단백질/카텝신 A; 산 ß-글루코시다제; GBA; PSAP; β-갈락토시다제-1; GLB1; 갈락토실세라마이드 β-갈락토시다제; GALC; PSAP; 아릴설파타제 A; ARSA; α-L-이두로니다제; 이두로네이트 2-설파타제; 헤파란 N-설파타제; N-α-아세틸글루코사미니다제; 헤파란 아세틸 CoA: α-글루코사미니드 아세틸전이효소; N-아세틸글루코사민 6-설파타제; 갈락토사민-6-설페이트 설파타제; β-갈락토시다제; 히알루로니다제; 아릴설파타제 B; ß-글루쿠로니다제; 뉴라미니다제; NEU1; N-아세틸글루코사민-1-인산기전이효소의 감마 소단위; 뮤코리핀-1; 설파타제-변형 인자-1; 산 스핑고미엘리나제; SMPD1; NPC1; 및 NPC2로 이루어진 군으로부터 선택된다.
몇몇 실시형태에 있어서, 본 명세서에서의 방법을 통한 치료는 치료용 단백질의 필요 시 세포에 치료용 단백질을 암호화하는 유전자를 전달한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료는 개체에서 모든 체세포에 유전자를 전달한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료는 표적화된 세포에서 결함 유전자를 대체한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 치료용 단백질을 발현하기 위하여 세포외에서 처리된 세포는 개체에게 전달된다.
본 명세서에 개시된 장애용의 유전자 요법은 효소 보충 요법을 비롯한 통상의 치료로 우수한 치료 성과를 제공하는데, 그 이유는 이것이 긴 주입 치료를 필요로 하지 않기 때문이다. 또한, 이것은 효소 보충 요법을 받고 있는 개체에서 흔히 경험하는 치료용 단백질에 대한 면역 반응을 전개시키는 개체의 위험을 저감시킨다.
정의
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "생체외 유전자 요법"은 환자 세포가 예를 들어 치료용 유전자를 발현하기 위해 대상체의 외부에서 유전자 변형되는 방법을 지칭한다. 이어서, 새로운 유전 정보를 가진 세포들은 이들이 유래된 대상체로 되돌아간다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "생체내 유전자 요법"은 치료제(들)를 보유하는 벡터가 대상체에게 직접 투여되는 방법이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "융합 단백질" 및 "치료용 융합 단백질"은 본 명세서에서 호환 가능하게 사용되고, 적어도 1종의 추가의 단백질, 펩타이드, 또는 폴리펩타이드를 갖는 치료용 단백질을 지칭한다. 몇몇 경우에, 융합 단백질은, 화학적 링커없이, 각각의 펩타이드 사슬 내에 펩타이드 결합을 통해서 공유 연결된, 2개 이상의 단백질 또는 이의 단편을 함유하는 단일 단백질 분자이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 융합 단백질은 치료용 단백질과, 신호 펩타이드, 융합 단백질의 세포내 섭취를 증가시키는 펩타이드, 또는 둘 다를 포함한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 포내 섭취를 증가시키는 펩타이드는 CI-MPR에 결합하는 펩타이드이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "벡터" 또는 "유전자 요법 벡터"(본 명세서에서 호환 가능하게 사용됨)는, 치료용 유전자를 세포에 전달하는 유전자 요법 전달 비히클 또는 담체를 지칭한다. 유전자 요법 벡터는, 유전자 요법에 사용하기에 적합한 임의의 벡터, 예컨대, 환자의 표적 세포(예컨대, 감각 뉴런)에 (폴리펩타이드 또는 이의 변이체를 암호화하는) 핵산 중합체의 치료적 전달을 위하여 적합한 임의의 벡터이다. 몇몇 실시형태에 있어서, 유전자 요법 벡터는 세포로 치료용 단백질 또는 치료용 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 전달하며, 여기서 치료용 단백질 또는 융합체가 발현되어 세포로부터 분비된다. 벡터는 임의의 유형일 수 있으며, 예를 들어, 이것은 플라스미드 벡터 또는 미니서클 DNA일 수 있다. 전형적으로, 벡터는 바이러스 벡터이다. 이들은 유전적으로 장애가 있는 바이러스, 예컨대, 아데노바이러스 및 비바이러스 벡터, 예컨대, 리포솜를 둘 다 포함한다. 바이러스 벡터는 예를 들어 아데노-연관 바이러스(AAV), 레트로바이러스, 렌티바이러스, 단순 헤르페스 바이러스, 또는 아데노바이러스, AAV 유래 벡터로부터 유래될 수 있다. 벡터는 AAV 게놈 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "작제물"은 치료용 단백질 또는 융합 단백질을 암호화하고 선택적으로 번역 개시 서열 또는 IRES 서열과 같은 추가의 서열을 포함하는 핵산 분자 또는 서열을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "플라스미드"는 염색체 DNA와는 독립적으로 세포 내에서 복제되는 DNA의 원형의 이중가닥 단위를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "프로모터"는, 효소인 RNA 중합효소가 결합하여 DNA의 RNA로의 전사를 개시시키는 DNA 상의 부위를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "신체 요법"은, 세포 내 유전자 발현의 조작이 다음 세대에 의해 물려받지 않지만 환자에 대해 수정되게 되는 방법을 지칭한다. 체세포는 인체 내 비생식 세포를 모두 포함한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "체세포"는 생식세포를 제외한 신체 세포를 모두 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이 "향성(tropism)"은 소정의 세포 또는 조직 유형에 대해서 바이러스와 같은 벡터의 선호도를 지칭한다. 각종 인자는 특정 세포를 감염시키는 벡터의 능력을 결정한다. 바이러스는, 예를 들어, 특정 세포 표면 수용체에 결합하여 세포에 유입되어야 한다. 바이러스는 전형적으로 필요한 수용체를 발현하지 않지만 세포를 감염시킬 수 없다.
용어 "형질도입(transduction)"은, 수용자 세포에 의해 기능적 폴리펩타이드의 발현을 초래하는 본 개시내용의 복제-결손 rAAV를 통해서 생체내 또는 시험관내에서 표적 세포에의 치료용 단백질을 암호화하는 핵산의 투여/전달을 지칭한다. 본 개시내용의 rAAV와 같은 유전자 요법 벡터의 세포에의 형질도입은 rAAV에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 또는 RNA의 지속적인 발현을 초래한다. 따라서, 본 개시내용은 치료용 단백질을 암호화하는 rAAV와 같은 유전자 요법 벡터를 척추강내, 망막내, 안구내, 유리체내, 뇌실내, 뇌실질내, 또는 정맥내 경로 또는 이들의 임의의 조합에 의해 대상체에게 투여/전달하는 방법을 제공한다. "척추강내" 전달은 뇌 또는 척수의 거미막하의 공간 내로의 전달을 지칭한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 척추강내 투여는 수조내 투여(intracisternal administration)를 통하는 것이다.
용어 "수용자", "개체", "대상체", "숙주" 및 "환자"는, 본 명세서에서 호환 가능하게 사용되고, 몇몇 경우에, 진단, 치료 또는 요법이 바람직한 임의의 포유류 대상체, 특히 인간을 지칭한다. 치료 목적을 위한 "포유류"는 포유류, 예컨대, 인간, 가축 및 농장 동물, 실험실, 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 예컨대, 개, 말, 고양이, 소, 양, 염소, 돼지, 마우스, 래트, 토끼, 기니픽, 원숭이 등으로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 포유류는 인간이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "증후군을 치료", "치료하는", "개선하는" 등은, 몇몇 경우에, 통계학적으로 유의한 방식으로 또는 임상적으로 유의한 방식으로, 질환의 적어도 하나의 양상 또는 마커를 저해, 약화, 저감, 예방 또는 변경할 목적으로, 절차를 수행하거나 또는 제제를 투여하는 것을 포함한다. 용어 "개선하다" 또는 "치료하는"은 기저 조건에 대한 치유를 기술 또는 암시하지 않는다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "치료" 또는 "개선한다"(및 등)는, 포유류, 특히 인간을 치료하는 것을 포함할 수 있고, (a) 아직 장애(예컨대, 일차적 장애와 연관될 수 있거나 도는 이에 의해 초래될 수 있는 장애를 포함)를 지니고 있는 것으로 진단되지 않았지만 장애에 잘 걸릴 성형을 가질 수 있는 대상체에서 장애 또는 장애의 증상이 일어나는 것을 예방하는 것; (b) 장애를 저해하는 것, 즉, 그의 발병을 저지하는 것; (c) 장애를 완화시키는 것, 즉, 장애의 퇴행을 일으키는 것; 및 (d) 장애의 적어도 하나의 증상을 개선하는 것을 포함한다. 치료하는은, 증상의 경감; 차도; 감소 또는 장애 병태를 더욱 환자에게 견디게 하는 것; 퇴행 또는 감소율의 늦춤; 또는 퇴행의 최종지점을 덜 쇠약하게 만드는 것과 같은 임의의 객관적 또는 주관적인 파라미터를 비롯한, 장애의 치료 또는 개선 또는 예방의 성공의 임의의 표시를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 의사에 의한 검사의 결과를 비롯한 하나 이상의 객관적 또는 주관적인 파라미터에 기초한다. 따라서, 용어 "치료하는"은, 장애와 관련된 증상 또는 병태의 발병을 예방 또는 지연, 완화 또는 저지 또는 저해하는 본 발명의 화합물 또는 제제의 투여를 포함한다. 용어 "치료 효과"는 대상체에서 장애, 장애의 증상 또는 장애의 부작용의 저감, 제거 또는 예방을 지칭한다.
용어 "친화도"는 분자와 이의 결합 파트너 또는 수용체 간의 결합 강도를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 어구 "고친화도"는, 예를 들어, 펩타이드 없는 치료용 단백질의 친화도에 비해서 약 100 내지 1,000배 또는 500 내지 1,000배 더 높은 CI-MPR에 대한 친화도를 갖는 CI-MPR를 결합하는 이러한 펩타이드를 함유하는 치료용 융합체를 지칭한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 친화도는 펩타이드 없는 것보다 적어도 100, 적어도 500, 또는 적어도 1000배 더 높다. 예를 들어, 치료용 단백질과 CI-MPR이 비교적 동등한 농도로 배합되는 경우, 고친화도의 펩타이드는 고농도의 얻어지는 복합체를 향하여 평형이 이동되도록 이용 가능한 CI-MPR에 결합할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "분비"는, 세포로부터, 예를 들어, 치료용 단백질의 작용 부위 또는 관심 대상 조직으로 운반될 혈류로의 단백질의 방출을 지칭한다. 유전자 요법 산물이 기관의 사이 공간 내로 분비되는 경우, 분비는 이웃하는 세포의 교차-보정을 허용할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "전달"은 약물 전달을 의미한다. 몇몇 실시형태에 있어서, 전달 과정은 세포(예컨대, 혈액, 조직 또는 사이 공간)의 외부로부터 약물 물질의 치료적 활성도를 위하여 표적 세포 내로 약물 물질(예컨대, 유전자 요법 벡터로부터 생산된 치료용 단백질 또는 융합 단백질)을 수송하는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "조작하는" 또는 "단백질 조작하는"은 목적하는 특성을 내도록 단백질을 암호화하는 핵산 서열을 적절하게 제공함으로써 단백질의 구조, 또는 특정 구조를 가진 단백질의 합성의 조작을 지칭한다.
"치료적 유효량"은, 몇몇 경우에, 장애를 치료하기 위하여 대상체에게 투여될 경우, 그 장애에 대한 치료를 행하는데 충분한 양을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 용어 "약" 수치는, 그 수치 자체와 같은 범위 내의 값들을 비롯하여, 그 수치의 10% 미만에서부터 그 수치의 10% 초과에 이르는 범위를 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같이, 청구범위의 요소 또는 요소들을 "포함하는(comprising)"이란 용어는 추가의 요소 또는 요소들의 내포를 못하게 하지만 이들 요소를 지칭한다.
실시예
이하의 실시예는 본 발명의 각종 실시형태를 예시할 목적으로 제공되며, 어떤 방식으로도 본 발명을 제한하는 의미는 없다. 본 명세서에 기재된 방법과 함께 본 실시예는 현재 바람직한 실시형태를 나타내고, 예시적이며, 본 발명의 범위에 대한 제한으로서 의도되지 않는다. 청구범위의 범주에 의해 규정된 바와 같은 본 발명의 정신 내에 포괄되는 그 안의 변화 및 기타 용도가 당업자에게 떠오를 것이다.
실시예 1: CI-MPR수용체에 대한 변이체 IGF2 펩타이드의 결합
표면 플라스몬 공명(surface plasmon resonance: SPR) 실험은 CI-MPR 수용체에 대한 야생형 및 변이체 IGF2(vIGF2)의 결합을 측정하기 위하여 Biacore를 사용해서 행하였다. 야생형, 인간 성숙 IGF2 펩타이드(wt IGF2)는 서열번호 1에 제시된 서열을 가진다. vIGF2 서열은, 잔기 1 내지 4를 결여하고 이하의 돌연변이: E6R, Y27L 및 K65R을 갖는다는 점에서, IGF2와는 상이하다. 이것은 아미노산 서열: SRTLCGGELVDTLQFVCGDRGFLFSRPASRVSRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPARSE(서열번호 31)를 갖는다. vIGF2는 또한 서열 GGGGSGGGG(서열번호 18)을 갖는 N-말단 링커를 가진다. 조합된 서열은 GGGGSGGGGSRTLCGGELVDTLQFVCGDRGFLFSRPASRVSRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPARSE(서열번호 43)이다. 도 4는, 예상된 바와 같이, 야생형 IGF2 펩타이드가 CI-MPR수용체에 고친화도(0.2nM)로 결합하는 것을 나타낸다. 도 5는 변이체 IGF2 펩타이드(vIGF2)가 또한 CI-MPR수용체에 고친화도(0.5nM)로 결합하는 것을 나타낸다. 이들 데이터는 vIGF2 펩타이드가 리소좀에 대한 표적 치료제를 위하여 의도된 CI-MPR수용체에 대해서 높은 친화도를 갖는 것을 나타낸다.
SPR은 잠재적인 부작용을 평가하기 위하여 인슐린 수용체에 대한 펩타이드 결합을 측정하는데 사용되었다. 인슐린은 인슐린 수용체를 고친화도(대략 8nM; 데이터 제시 생략)로 결합한다. 야생형 IGF2 및 vIGF2가 시험되었는데, 이때 vIGF2는 서열 GGGGSGGGG(서열번호 18)를 갖는 N-말단 링커를 가진 서열 SRTLCGGELVDTLQFVCGDRGFLFSRPASRVSRRSRGIVEECCFRSCDLALLETYCATPARSE(서열번호 31)를 가졌다. 도 8은 야생형 IGF2가 또한 인슐린 수용체를 비교적 고친화도(대략 100nM)로 결합하는 것을 나타낸다. Biomarin/Zystor IGF2-GAA 융합 단백질(BMN-701)로부터의 IGF2 펩타이드는 또한 인슐린 수용체를 고친화도로 결합하고, 임상 시험에서 저혈당증을 유발하는 것으로 나타났다. 도 9는 인슐린 수용체에 대한 vIGF2 펩타이드의 측정 가능한 결합이 없는 것을 나타낸다. 이들 데이터는 vIGF2 펩타이드가 wt IGF2 펩타이드 융합체에 비해서 우수한 안전성 프로파일을 제공하는 것을 나타낸다.
동일한 SPR 결합 분석이 IGF1 수용체와의 vIGF2 펩타이드 상호작용을 특성 규명하는데 사용되었다. 도 10은 야생형 IGF2 펩타이드가 IGF1 수용체를 비교적 고친화도(대략 100nM)로 결합하는 것을 나타낸다. 도 11은 IGF1 수용체에 대한 vIGF2 펩타이드의 측정 가능한 결합이 없는 것을 나타내는데, 이는 wt IGF2에 비해서 개선된 안전성 프로파일을 나타낸다.
실시예 2: vIGF2는 저친화도 리간드를 CI-MPR에 대해서 고친화도 ERT로 전환시킨다
vIGF2 펩타이드가 CI-MPR에 대해서 친화도를 향상시킬 수 있는지를 결정하기 위하여 N-말단 링커(서열번호 18)를 가진 vIGF2 펩타이드(서열번호 31)를 vIGF2-알글루코시다제-알파로서 본 명세서에서 표기되는 알글루코시다제-알파에 화학적으로 커플링시켰다. 도 6에 도시된 바와 같이, 알글루코시다제-알파 및 vIGF2-알글루코시다제-알파의 결합 친화도를, CI-MPR로 코팅된 96-웰 ELISA 플레이트에서 CI-MPR 플레이트 결합 검정법을 이용해서 직접 비교하였다. 결합된 효소 활성도를 측정하기 전에 비결합 효소를 세척하였다. 다양한 농도의 두 효소 제제를 유리 WT IGF2 펩타이드와 함께 또는 이것 없이 사용하였다. vIGF2는 CI-MPR에 대해서 친화도를 실질적으로 개선시켰다. 또한, vIGF2-알글루코시다제-알파의 결합은 유리 WT IGF2에 의해 차단되었는데, 이는 결합이 IGF2-의존적이었음을 나타낸다(데이터 제시 생략). vIGF2 펩타이드의 커플링은 GAA 효소 활성도를 손상시키지 않았다.
vIGF2를 재조합 인간 N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(rhNAGLU)에 커플링시켰다. 펩타이드가 비-리간드를 CI-MPR에 대해서 고친화도 리간드로 전환시킬 수 있는지를 결정하기 위하여 M6P를 결여하는 리소좀 효소인 RrhNAGLU. 이 실험에서, rhNAGLU 및 vIGF2-rhNAGLU는, CI-MPR-코팅된 플레이트를 이용해서, CI-MPRplate 결합 검정법을 이용하여 직접 비교되었다. 미결합 효소는 결합된 효소 활성도를 측정하기 전에 세척하여 제거하였다. 각종 농도의 두 효소 제제가 유리 vIGF2 펩타이드와 함께 또는 이것 없이 사용되었다. 도 7에 도시된 바와 같이, vIGF2-rhNAGLU는 rhNAGLU 결여 vIGF2보다 CI-MPR에 대해서 상당히 더 높은 친화도를 갖는다. 또한, vIGF2-rhNAGLU 결합은 유리 vIGF2 펩타이드에 의해 차단되었는데, 이는 수용체 결합이 IGF2 펩타이드에 대해서 특이적이었음을 나타낸다. 이들 결과는 vIGF2 펩타이드가 리소좀에 대한 약물 표적화를 개선시키기 위하여 사용될 수 있음을 나타낸다.
실시예 3: vIGF2-GAA 융합 단백질의 근모세포 흡수
vIGF2-GAA 융합 단백질(실시예 1 내지 2에서와 같은 서열)을 투여하고 효소의 L6 근모세포 흡수를 측정하였다. 도 6은 rhGAA 및 M6P-GAA에 비해서 vIGF2-rhGAA의 우수한 흡수를 나타낸다. 따라서, vIGF2는 세포에 GAA를 표적화하는데 유효하다.
실시예 4: 유전자 요법에 의해 전달된 ERT에 대한 작제물
두 상이한 작제물이 도 12에 예시되어 있다. 상부 패널에는 코작 서열 및 천연 신호 펩타이드(서열번호 45)를 갖는 재조합 인간 GAA를 암호화하고 "천연 hGAA"(서열번호 45)를 암호화하는 핵산을 함유하는 작제물이다. 중간 패널에는 "조작된 hGAA"(서열번호 23)를 암호화하는 작제물 코작-BiP-vIGF2-2GS-GAA이다. 이 작제물은, vIGF2의 조숙한 처리 및 제거를 방지하기 위하여, 코작 서열, BiP 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산, 서열번호 31에 제시된 서열을 가진 vIGF2 펩타이드를 암호화하는 핵산, 및 2GS 링커(서열번호 18)를 암호화하는 핵산에 이어서 N-말단의 60 아미노산이 제거된 재조합 인간 GAA(서열번호 46)를 암호화하는 핵산을 특징으로 한다.
실시예 5: 유전자 요법 작제물의 증대된 분비물
조작된 hGAA는 더 낳은 분비물을 지니고 세포 흡수 및 리소좀 표적화에 적합한 세포 표면 수용체와 상호작용하는 것이 가능하다
이하에 더욱 상세히 기재된 조작된 hGAA, 또는 천연 hGAA를 발현하는 CHO를 배양하고, 조건 조절된 배지를 GAA 활성도의 측정을 위하여 수집하였다. 도 15는 조작된 및 천연 hGAA의 상대 활성도를 도시하는데, 이는 조작된 hGAA가 천연 hGAA에 비해서 증가된 활성도를 갖는 것을 표시하며, 조작된 hGAA의 더욱 효율적인 분비를 나타낸다.
실시예 6: 조건조절된 배지에서의 PPT1의 분석
PPT1 작제물의 클로닝
PPT1 작제물은 CMV 프로모터를 함유하는 pcDNA3.1 발현 벡터(ThermoFisher cat# V79020)에 클로닝되었다. 시험된 작제물은 PPT1-1(WT-PPT1)(서열번호 24); PPT1-2(WT-vIGF2-PPT1)(서열번호 25); PPT1-29(BiP2aa-vIGF2-PPT1)(서열번호 26)를 포함하였다.
PPT1 분비 및 결합
PPT1 작제물은 3일 동안 HEK293T 세포에 일시적으로 발현되었고 PPT1이 배지에 분비되었다. 분비된 PPT1은 웨스턴 블로팅에 의해 정량화되고, 확립된 방법을 이용해서 CI-MPR 결합에 대해서 검정되었다. 분비된 PPT1은 도 13에 도시되어 있다. CI-MPR 결합은 도 14에 도시되어 있다.
실시예 7: 폼페병의 동물 모델에서의 유전자 요법 벡터의 시험
폼페 유전자 요법: 개념 연구 설계의 전임상 증거
초기 비교 작제물에 대해서 고용량을 이용해서 GAA 넉아웃(GAA KO) 마우스에 전임상 연구를 수행하였다. 작제물은 도 12에 도시되어 있다. 마우스를 2가지 작제물 - 천연 - hGAA 또는 조작된 - hGAA 중 하나 또는 비히클로 처리하였다. 마우스에게는 5e11 gc/마우스(대략 2.5e13 gc/㎏) 투여하였다. GAA 넉아웃 마우스는 2개월령으로 사용하였다. 정상(야생형) 마우스가 대조군으로서 사용되었다. 연구 설계는 도 16에 개요되어 있다.
폼페 유전자 요법: 혈장
야생형(정상) 마우스 또는 표시된 바와 같은 유전자 요법 벡터 또는 비히클로 처리된 GAA KO 마우스로부터 혈장을 수집하고, GAA 활성도 및 세포 표면 결합을 측정하였다. 데이터는 도 17, 도 27 및 도 19에 요약되어 있다. 유사한 높은 GAA 수준이 유전자 요법 벡터로 처리된 마우스에서 보였다(도 17, 도 18). 그러나, 더 큰 세포 표적화 수용체 결합이 조작된 작제물에서 관찰되었다(도 19).
폼페 유전자 요법: 사두근
GAA 활성도, 및 글리코겐 축적/세포질 액포화가 정상(야생형) 마우스 및 처리된 GAA KO 마우스에서 평가되었다(도 28). 사두근에서의 GAA 활성도는 야생형보다 약 20배 더 높았다. 글리코겐 PAS(도 29) 및 면역조직화학(도 30)이 또한 평가되었다. 면역조직화학은 야생형에 비해서 조작된 hGAA의 더 큰 리소좀 표적화를 나타내었다. 글리코겐 저감은 PAS 염색에 의해 조작된 hGAA에 대해서 더욱 일관되었다.
폼페 유전자 요법: 삼두근
GAA 활성도, 및 글리코겐 축적/세포질 액포화가 정상(야생형) 마우스 및 처리된 GAA KO 마우스에서 평가되었다(도 31). GAA 활성도는 야생형보다 약 10 내지 15배 더 높았다. 면역조직화학 및 글리코겐 PAS가 또한 평가되었다(도 32 및 도 33). 면역조직화학은 야생형 GAA에 비해서 조작된 hGAA의 더 큰 리소좀 표적화를 예시하였다. 글리코겐 저감은 PAS 염색에 의해 측정된 바 조작된 hGAA에 대해서 더욱 일관되었다.
폼페 유전자 요법: 전경골근(Tibialis Anterior: TA)
GAA 활성도, 및 글리코겐 축적/세포질 액포화가 정상(야생형) 및 GAA KO 마우스에서 평가되었다(도 20). TA에서의 GAA 활성도는 야생형보다 약 15 내지 20배 더 높았다. 면역조직화학 및 글리코겐 PAS가 또한 평가되었다(도 21 및 도 22). 면역조직화학은 야생형 GAA에 비해서 조작된 hGAA의 더 큰 리소좀 표적화를 예시하였다. 글리코겐 수준은 야생형 수준에 가까웠다. 글리코겐 저감은 PAS 염색에 의해 조작된 hGAA에 대해서 더욱 일관되었다.
폼페 유전자 요법: 뇌 및 척수
GAA 활성도, 글리코겐 함유량 및 글리코겐 축적/세포질 액포화는 정상(야생형) 마우스 및 처리된 GAA KO 마우스에서 평가되었다(도 23). 뇌에서의 GAA 활성도는 야생형보다 약 5배 더 낮았다. 면역조직화학 및 글리코겐 PAS가 또한 평가되었다(도 24, 도 25, 도 26, 도 27). 면역조직화학은 일부 세포의 직접 형질도입이 있을 수 있음을 나타내었다. 그러나, 천연 작제물에서는 글리코겐 제거율이 거의 또는 전혀 관찰되지 않았다. 활성도가 야생형의 고작 20%였지만 글리코겐 수준은 조작된 작제물에 대해서 야생형 수준에 가까웠다. 척수에서의 PAS 염색은 천연 작제물에 의한 글리코겐 제거율이 거의 또는 전혀 없는 것을 나타낸다. 조작된 작제물에 대해서 야생형에 가까운 글리코겐 수준은 운동 뉴런을 비롯한 전각(ventral horn)에서 관찰되었다. 면역조직화학은 척수 뉴런에서 직접 형질도입을 입증하였다. 맥락총 및 뉴런 세포에 의해 생산된 조작된 hGAA는 척수에서의 교차 교정에 의해 글리코겐을 저감시킬 수 있었던 반면 천연 hGAA에 대해서 약간의 글리코겐 저감이 관찰되었다.
결론
종합적으로 이 예에서의 데이터는, 조작된 유전자 요법 작제물이 뇌 및 척수에서의 영향을 비롯하여, 통상의 치료에서 사용된 야생형 GAA보다 조직 내로의 극적으로 더 양호한 흡수 및 글리코겐 저감을 지닌 것을 입증하였다.
실시예 8: 동물 연구 프로토콜
AAVhu68 벡터가 생산되었고, 기재된 바와 같이 Penn Vector Core에 의해 적정되었다(Lock, Alvira et al. 2010, "Rapid, simple, and versatile manufacturing of recombinant adeno-associated viral vectors at scale." Hum Gene Ther 21(10): 1259-1271).
C57BL/6/129 배경 파운더(background founder)에서 킥아웃된 폼페 마우스 Gaa인 무스 무스쿨르스(Mus musculus)를 Jackson Labs에서 구입하였다(stock#004154, 6neo 마우스로도 알려짐).
측부 꼬리정맥을 통해서 0.1㎖의 5×1011 GC(대략 2.5×1013 GC/kg)의 AAVhu68.CAG.hGAA(천연 hGAA(서열번호 45) 또는 조작된 hGAA(서열번호 38을 포함함))를 공급받은 마우스에서 혈청 단리를 위한 벡터 투여 후 제7일 및 제21일에 채혈하고, (혈장 단리를 위하여) 말기에 채혈하고, 주사 후 28일에 방혈에 의해 안락사시켰다. 뇌에서 시작해서 조직을 신속하게 수집하였다.
GAA 활성도
혈장을 5.6mM 4-MU-α-글루코피라노사이드 pH 4.0와 혼합하고 37℃에서 3시간 동안 인큐베이션하였다. 반응을 0.4M 탄산나트륨, pH 11.5으로 중지시켰다. 상대 형광 단위(relative fluorescence unit: RFU)는 Victor3 형광측정계(여기 355㎚ 및 방출 460㎚)를 이용해서 측정하였다. n㏖/㎖/hr 단위의 활성도는 4-MU의 표준 곡선으로부터의 보간에 의해 계산되었다. 개별 조직 샘플에서의 활성도는 균질액 중 총 단백질 함량을 기준으로 더욱 정규화되었다.
LC/MS에 의한 GAA 시그니처(signature) 펩타이드
혈장을 100% 메탄올에 석출시키고 원심분리하였다. 상청액은 따라버렸다. 펠릿을 내부 표준으로서의 hGAA에 고유한 안정적인 동위원소-표지된 펩타이드로 스파이킹하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 10% 폼산으로 소화를 중지시켰다. 전형적인 펩타이드는 C-18 역상 크로마토그래피에 의해 분리시키고, ESI-질량분광법에 의해 식별하고 정량하였다. 혈장 중 총 GAA 농도는 시그니처 펩타이드 농도로부터 계산하였다.
세포 표면 수용체 결합 검정
96-웰 플레이트를 수용체로 피복하고, 세척하고, BSA로 블로킹하였다. AAV 처리된 마우스로부터의 제28일자 혈장을 연속 희석시켜 일련의 감소하는 농도를 제공하였고, 커플링된 수용체와 함께 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 플레이트를 세척하여 임의의 미결합 hGAA를 제거하고, 37℃에서 1시간 동안 4-MU-α-글루코피라노사이드를 첨가하였다. 반응은 1.0M 글리신, pH 10.5로 중지시키고, RFU를 Spectramax 형광측정계(여기 370, 발광 460)로 판독하였다. 각 샘플에 대한 RFU를 4-MU의 표준 곡선으로부터의 보간에 의해 활성도(n㏖/㎖/hr)로 전환시켰다. 비선형 회귀는 GraphPad Prism을 이용해서 수행하였다.
조직학
조직을 포르말린 고정시키고 파라핀 포매시켰다. 근육 슬라이드를 PAS로 염색하고; CNS 슬라이드를 룩솔 신속 청색/과요오드산-쉬프(Periodic Acid-Schiff: PAS)로 염색하였다. 면허가 있는 수의과 병리학자(JH)가 조직학 슬라이드를 맹검 검토하였다. 글리코겐 축적 및 세포질 액포화를 갖는 세포의 전체 백분율의 반정량 추정을 스캐닝된 슬라이드에 행하였다. 0 내지 4의 점수가 이하의 표에 기재된 바와 같이 배정되었다.
면역-조직화학(IHC)
본 발명자들은 항-인간 GAA 항체(Sigma HPA029126)를 이용해서 면역염색된 슬라이드로부터 트랜스젠 발현 및 세포 국재화를 연구하였다.
실시예 9: 조직학-조직 처리 - 폼페병의 동물 모델에서의 프로토콜 및 결과
모든 조직을 10% NBF(중성 완충 포르말린)에 고정시켰다. 이 검정법(PAS 및 IHC)은 이 분야에서 통상 사용된다.
사두근 및 삼두근의 PAS 염색(도 29 및 도 32) - 조직을 10% NBF에 고정시키고, 파라핀에 포매하였다. 절편을 1% 과요오드산에 후 고정시키고, 쉬프 시약(Schiff's reagent)으로 염색하였다. 그 후, 절편을 헤마톡실린으로 대비염색하였다. 글리코겐이 마젠타 응집물(리소좀 결합됨) 또는 확산된 분홍색(사이토졸)으로 나타나고; 핵이 청색이다. 화상에 기초하고 각각이 기를 나타내는 것으로 가정하면, 글리코겐 제거율(clearance)의 관점에서 등급 순위는 조작된 hGAA > 천연 hGAA이다. 조작된 hGAA 작제물은 나머지에 비해서 전체 화상에 걸쳐서 더욱 염색을 초래하는데, 이는 CI-MPR에 대한 vIGF2의 결합을 통해 매개된 GAA 단백질의 개선된 세포내섭취를 나타낸다.
척수의 PAS 염색(도 26) - 조직을 10% NBF에 고정시켰다. 1% 과요오드산에서의 후 고정은 파라핀 포매 전 또는 후에 행할 수 있었다. 절편을 쉬프 시약으로 염색하고 메틸렌 블루로 마찬가지로 대비염색하였다. 글리코겐은 마젠타 응집체(결합된 리소좀)로서 나타나고; 신경 섬유는 청색을 나타낸다. 이 화상은 운동 뉴런에서 척수의 전각 및 글리코겐 축적에 집중되었다. 조작된 hGAA는 작제물 중 글리코겐 저감에 가장 유효한 것으로 나타났다.
GAA IHC(도 22, 도 25, 도 27, 도 30 및 도 35) - 조직을 10% NBF에 고정시키고 파라핀에 포매시켰다. 절편을 항-GAA 1차 항체와 인큐베이션하고 나서, 1차 항체를 인식하여 효소 태그 --- HRP를 보유하는 2차 항체와 인큐베이션하였다. 이어서, 효소 반응을 수행하여 갈색 석출물을 형성시켰다. 이어서, 절편을 헤마톡실린으로 대비염색하였다. 작제물은 근섬유 내로의 GAA 흡수를 나타내었다(도 31). 조작된 hGAA > 천연 hGAA. BiP-vIGF2 작제물은 나머지에 비해서 전체 화상에 걸쳐서 더욱 확산된 염색을 지녔다.
다른 벡터와 비교해서, 조작된 hGAA는 근섬유 내에 반점-유사 외관을 가진 더 많은 GAA IHC 신호를 생성하였는데, 이는 훨씬 더 유효한 리소좀 표적화를 나타낸다(도 22).
종합하면, 조작된 hGAA는 작제물 중 각종 조직에서 조직 흡수, 리소좀 표적화 및 글리코겐 저감이 일관되게 우수한 것을 입증하였다.
본 발명의 바람직한 실시형태가 본 명세서에 도시되고 설명되었지만, 이러한 실시형태는 단지 예로서 제공된 것임이 당업자에게 명백할 것이다. 이제 수 많은 변경, 변화 및 치환이 본 발명으로부터 벗어나는 일 없이 당업자에게 떠오를 것이다. 본 명세서에 기재된 실시형태에 대한 각종 대안이 이용될 수 있음이 이해되어야 한다. 이하의 청구범위는 본 발명의 범위를 규정하고 이러한 청구범위의 범주 내의 방법 및 구조 및 이들의 등가물이 이에 의해 커버되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING
<110> AMICUS THERAPEUTICS, INC.
<120> GENE THERAPY CONSTRUCTS AND METHODS OF USE
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atttttgtat ttaggttagc tatttagctt tacgttccag gatgcctagt ggcagcccca 120
caatatccag gaagccctct ctgcggtttt tcagattagg tagtcgaaaa acctaagaaa 180
tttacctgct 190
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100 105 110
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145 150 155 160
Pro Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu
165 170 175
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210 215 220
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225 230 235 240
Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr
245 250 255
Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met Leu Ser Thr Ser
260 265 270
Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala Pro Thr Pro Gly
275 280 285
Ala Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala Leu Glu Asp Gly
290 295 300
Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn Ala Met Asp Val
305 310 315 320
Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser Thr Gly Gly Ile
325 330 335
Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys Ser Val Val Gln
340 345 350
Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro Pro Tyr Trp Gly
355 360 365
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370 375 380
Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe Pro Leu Asp Val
385 390 395 400
Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg Asp Phe Thr Phe
405 410 415
Asn Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val Gln Glu Leu His
420 425 430
Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro Ala Ile Ser Ser
435 440 445
Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu Gly Leu Arg Arg
450 455 460
Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu Ile Gly Lys Val
465 470 475 480
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485 490 495
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500 505 510
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530 535 540
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545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
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595 600 605
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645 650 655
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660 665 670
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Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys Ala Pro Asp Lys Ala Ile
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Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met Met Glu Thr Glu Asn Arg
195 200 205
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Leu Glu Thr Pro His Val His Ser Arg Ala Pro Ser Pro Leu Tyr Ser
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Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu Pro Ser Gln Tyr Ile Thr
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Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala His Val Ala Gly Glu Thr
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Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr Gly Tyr Phe Pro Leu Gly
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Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Val Glu Ala Leu Gly Ser Leu
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Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro Ala Ile His Ser Glu Gly
820 825 830
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1 5 10 15
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Leu Pro Leu Val Ile Trp His Gly Met Gly Asp Ser Cys Cys Asn Pro
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Leu Ser Met Gly Ala Ile Lys Lys Met Val Glu Lys Lys Ile Pro Gly
50 55 60
Ile Tyr Val Leu Ser Leu Glu Ile Gly Lys Thr Leu Met Glu Asp Val
65 70 75 80
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Leu Gly
305
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Met Lys Leu Ser Leu Val Ala Ala Met Leu Leu Leu Leu Trp Val Ala
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Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly
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Ala
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Ser Arg Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val
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Ala Tyr Arg Pro Ser Arg Thr Leu Cys Gly Gly Glu Leu Val Asp Thr
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65
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10
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<211> 2954
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<222> (869)..(869)
<223> a, c, t, g, unknown or other
<400> 38
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cggccaccct gacccgtacc acccccacct tcttccccaa ggacatcctg accctgcggc 600
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gcgtgctgct gaacacgacg gtggcgcccc tgttctttgc ggaccagttc cttcagctgt 840
ccacctcgct gccctcgcag tatatcacng gcctcgccga gcacctcagt cccctgatgc 900
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cgaacctcta cgggtctcac cctttctacc tggcgctgga ggacggcggg tcggcacacg 1020
gggtgttcct gctaaacagc aatgccatgg atgtggtcct gcagccgagc cctgccctta 1080
gctggaggtc gacaggtggg atcctggatg tctacatctt cctgggccca gagcccaaga 1140
gcgtggtgca gcagtacctg gacgttgtgg gatacccgtt catgccgcca tactggggcc 1200
tgggcttcca cctgtgccgc tggggctact cctccaccgc tatcacccgc caggtggtgg 1260
agaacatgac cagggcccac ttccccctgg acgtccagtg gaacgacctg gactacatgg 1320
actcccggag ggacttcacg ttcaacaagg atggcttccg ggacttcccg gccatggtgc 1380
aggagctgca ccagggcggc cggcgctaca tgatgatcgt ggatcctgcc atcagcagct 1440
cgggccctgc cgggagctac aggccctacg acgagggtct gcggaggggg gttttcatca 1500
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acttcaccaa ccccacagcc ctggcctggt gggaggacat ggtggctgag ttccatgacc 1620
aggtgccctt cgacggcatg tggattgaca tgaacgagcc ttccaacttc atcaggggct 1680
ctgaggacgg ctgccccaac aatgagctgg agaacccacc ctacgtgcct ggggtggttg 1740
gggggaccct ccaggcggcc accatctgtg cctccagcca ccagtttctc tccacacact 1800
acaacctgca caacctctac ggcctgaccg aagccatcgc ctcccacagg gcgctggtga 1860
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acgccggcca ctggacgggg gacgtgtgga gctcctggga gcagctcgcc tcctccgtgc 1980
cagaaatcct gcagtttaac ctgctggggg tgcctctggt cggggccgac gtctgcggct 2040
tcctgggcaa cacctcagag gagctgtgtg tgcgctggac ccagctgggg gccttctacc 2100
ccttcatgcg gaaccacaac agcctgctca gtctgcccca ggagccgtac agcttcagcg 2160
agccggccca gcaggccatg aggaaggccc tcaccctgcg ctacgcactc ctcccccacc 2220
tctacacact gttccaccag gcccacgtcg cgggggagac cgtggcccgg cccctcttcc 2280
tggagttccc caaggactct agcacctgga ctgtggacca ccagctcctg tggggggagg 2340
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tgggcacatg gtacgacctg cagacggtgc cagtagaggc ccttggcagc ctcccacccc 2460
cacctgcagc tccccgtgag ccagccatcc acagcgaggg gcagtgggtg acgctgccgg 2520
cccccctgga caccatcaac gtccacctcc gggctgggta catcatcccc ctgcagggcc 2580
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agggtgggga ggcccgaggg gagctgttct gggacgatgg agagagcctg gaagtgctgg 2700
agcgaggggc ctacacacag gtcatcttcc tggccaggaa taacacgatc gtgaatgagc 2760
tggtacgtgt gaccagtgag ggagctggcc tgcagctgca gaaggtgact gtcctgggcg 2820
tggccacggc gccccagcag gtcctctcca acggtgtccc tgtctccaac ttcacctaca 2880
gccccgacac caaggtcctg gacatctgtg tctcgctgtt gatgggagag cagtttctcg 2940
tcagctggtg ttag 2954
<210> 39
<211> 3139
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
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polynucleotide"
<400> 39
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atttttgtat ttaggttagc tatttagctt tacgttccag gatgcctagt ggcagcccca 120
caatatccag gaagccctct ctgcggtttt tcagattagg tagtcgaaaa acctaagaaa 180
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tcgcgggttc ctcttctctc gccccgcttc cagagtttca cggaggtcta ggggtatagt 360
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caagagcgtg gtgcagcagt acctggacgt tgtgggatac ccgttcatgc cgccatactg 1380
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catggactcc cggagggact tcacgttcaa caaggatggc ttccgggact tcccggccat 1560
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cagctcgggc cctgccggga gctacaggcc ctacgacgag ggtctgcgga ggggggtttt 1680
catcaccaac gagaccggcc agccgctgat tgggaaggta tggcccgggt ccactgcctt 1740
ccccgacttc accaacccca cagccctggc ctggtgggag gacatggtgg ctgagttcca 1800
tgaccaggtg cccttcgacg gcatgtggat tgacatgaac gagccttcca acttcatcag 1860
gggctctgag gacggctgcc ccaacaatga gctggagaac ccaccctacg tgcctggggt 1920
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acactacaac ctgcacaacc tctacggcct gaccgaagcc atcgcctccc acagggcgct 2040
ggtgaaggct cgggggacac gcccatttgt gatctcccgc tcgacctttg ctggccacgg 2100
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cagcgagccg gcccagcagg ccatgaggaa ggccctcacc ctgcgctacg cactcctccc 2400
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tgagctggta cgtgtgacca gtgagggagc tggcctgcag ctgcagaagg tgactgtcct 3000
gggcgtggcc acggcgcccc agcaggtcct ctccaacggt gtccctgtct ccaacttcac 3060
ctacagcccc gacaccaagg tcctggacat ctgtgtctcg ctgttgatgg gagagcagtt 3120
tctcgtcagc tggtgttag 3139
<210> 40
<211> 921
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 40
atggcatcac cgggttgcct ctggttgttg gccgttgcgt tgcttccgtg gacatgtgca 60
tcaagagctc ttcaacatct ggatccccca gctcccctgc cgctcgtaat ctggcacggg 120
atgggggatt catgttgtaa cccgttgtca atgggcgcga taaaaaagat ggttgaaaag 180
aagattccag gcatctacgt tctgtccctg gaaatcggta agacactgat ggaagacgtg 240
gagaactcct tctttctcaa cgtcaatagt caggtcacta ccgtctgtca agcattggca 300
aaggacccta aacttcagca ggggtacaat gcgatggggt ttagccaggg cggacagttt 360
cttagagccg tcgcacagcg ctgtccatct cccccgatga ttaaccttat atctgtcggg 420
ggacaacacc agggtgtttt tggtcttcct cgctgtcctg gtgaaagctc ccacatctgt 480
gatttcatac gcaaaacgtt gaacgcagga gcttatagta aagtcgtcca agaacggctt 540
gttcaagcgg agtattggca tgacccaata aaagaagacg tttataggaa tcactctatc 600
ttcttggccg atatcaacca agaacgcgga atcaacgaaa gctacaaaaa gaatcttatg 660
gctctcaaga aatttgttat ggtgaaattc cttaatgact ctatagtaga tcctgtcgat 720
tcagaatggt tcgggttcta caggtctggc caggcgaagg agactattcc cctccaagaa 780
acgtctctct atacacaaga cagactcgga ctgaaagaga tggataatgc gggccagttg 840
gtcttcttgg ctacggaagg cgatcatctc caactctccg aagagtggtt ctatgcccat 900
ataatcccgt tcctgggcta a 921
<210> 41
<211> 1164
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 41
atggcatccc ccggatgttt gtggctgctg gcggttgcgc ttctgccatg gacgtgcgcc 60
tcccgagccc tccaacacct gtccaggaca ctttgcggcg gagagttggt cgatacgctt 120
caattcgtgt gtggggatag aggcttcctt ttttctcggc ccgctagccg cgtgtcccga 180
aggtcccggg gtatcgttga ggaatgctgt ttccggtcct gcgatcttgc actgttggag 240
acatactgtg ctacgcctgc gagaagcgag ggtggagggg gttctggagg tggagggagc 300
cggcctcggg cggttcccac ccaggatcct ccagctcctc tgcctctggt catctggcat 360
gggatggggg actcatgttg taacccgctg agtatggggg caattaaaaa aatggttgaa 420
aagaaaattc caggtattta tgtcctctct cttgaaatcg gtaagacact tatggaggat 480
gtggaaaact cctttttcct taatgtcaat tctcaggtca caacagtttg tcaggctctg 540
gcgaaggatc ctaagctgca gcaaggctac aacgccatgg gtttttccca gggaggccaa 600
tttctcagag cggtagctca gcgatgtcca tcaccaccga tgataaatct gatcagtgtc 660
ggcggacaac accagggagt tttcgggctg cccaggtgtc cgggggaatc tagtcacata 720
tgtgacttca ttcgcaagac ccttaacgcc ggcgcttact caaaggtggt tcaagaacgg 780
cttgtgcagg ctgaatactg gcacgatccc atcaaggaag atgtatatag gaaccacagt 840
atctttctgg cagacataaa tcaggaaagg ggtattaacg aaagctacaa gaaaaatctc 900
atggccctga agaaatttgt aatggttaag tttttgaacg attctatagt agatcctgtt 960
gactccgagt ggttcgggtt ctatcgatct ggtcaagcca aggagacgat tccgcttcag 1020
gaaacttcac tgtacacaca ggatcggctg ggactcaagg agatggacaa tgcgggccag 1080
ttggtgtttc tggctacaga gggagaccat ctccagttga gtgaagaatg gttctatgca 1140
catattatcc cattcctcgg ctaa 1164
<210> 42
<211> 1164
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 42
atgaagctct ccctggtggc cgcgatgctg ctgctgctct gggtggcact gctgctgctc 60
agcgcggcga gggccgccgc gagtcgcacg ttgtgtggag gtgaactcgt cgacaccctt 120
cagttcgtat gtggagatcg cggtttcctc ttctcacgcc cagcttccag agtttcccga 180
agatcacgag gaatagttga ggagtgctgt tttcggtctt gtgatctggc tctcctcgag 240
acttattgtg ctacgccggc ccgctctgaa ggaggtggtg gcagtggagg aggagggagt 300
cggcctaggg cagtcccaac ccaggacccg ccggcgccgc tgccgttggt gatctggcat 360
gggatgggag acagctgttg caatccctta agcatgggtg ctattaaaaa aatggtggag 420
aagaaaatac ctggaattta cgtcttatct ttagagattg ggaagaccct gatggaggac 480
gtggagaaca gcttcttctt gaatgtcaat tcccaagtaa caacagtgtg tcaggcactt 540
gctaaggatc ctaaattgca gcaaggctac aatgctatgg gattctccca gggaggccaa 600
tttctgaggg cagtggctca gagatgccct tcacctccca tgatcaatct gatctcggtt 660
gggggacaac atcaaggtgt ttttggactc cctcgatgcc caggagagag ctctcacatc 720
tgtgacttca tccgaaaaac actgaatgct ggggcgtact ccaaagttgt tcaggaacgc 780
ctcgtgcaag ccgaatactg gcatgacccc ataaaggagg atgtgtatcg caaccacagc 840
atcttcttgg cagatataaa tcaggagcgg ggtatcaatg agtcctacaa gaaaaacctg 900
atggccctga agaagtttgt gatggtgaaa ttcctcaatg attccattgt ggaccctgta 960
gattcggagt ggtttggatt ttacagaagt ggccaagcca aggaaaccat tcccttacag 1020
gagacctccc tgtacacaca ggaccgcctg gggctaaagg aaatggacaa tgcaggacag 1080
ctagtgtttc tggctacaga aggggaccat cttcagttgt ctgaagaatg gttttatgcc 1140
cacatcatac cattccttgg atga 1164
<210> 43
<211> 72
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polypeptide"
<400> 43
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Arg Thr Leu Cys Gly Gly
1 5 10 15
Glu Leu Val Asp Thr Leu Gln Phe Val Cys Gly Asp Arg Gly Phe Leu
20 25 30
Phe Ser Arg Pro Ala Ser Arg Val Ser Arg Arg Ser Arg Gly Ile Val
35 40 45
Glu Glu Cys Cys Phe Arg Ser Cys Asp Leu Ala Leu Leu Glu Thr Tyr
50 55 60
Cys Ala Thr Pro Ala Arg Ser Glu
65 70
<210> 44
<211> 8
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 44
gcaagatg 8
<210> 45
<211> 2864
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
polynucleotide"
<400> 45
gcaagatggg agtgaggcac ccgccctgct cccaccggct cctggccgtc tgcgccctcg 60
tgtccttggc aaccgctgca ctcctggggc acatcctact ccatgatttc ctgctggttc 120
cccgagagct gagtggctcc tccccagtcc tggaggagac tcacccagct caccagcagg 180
gagccagtag accagggccc cgggatgccc aggcacaccc cggccgtccc agagcagtgc 240
ccacacagtg cgacgtcccc cccaacagcc gcttcgattg cgcccctgac aaggccatca 300
cccaggaaca gtgcgaggcc cgcggctgtt gctacatccc tgcaaagcag gggctgcagg 360
gagcccagat ggggcagccc tggtgcttct tcccacccag ctaccccagc tacaagctgg 420
agaacctgag ctcctctgaa atgggctaca cggccaccct gacccgtacc acccccacct 480
tcttccccaa ggacatcctg accctgcggc tggacgtgat gatggagact gagaaccgcc 540
tccacttcac gatcaaagat ccagctaaca ggcgctacga ggtgcccttg gagaccccgc 600
atgtccacag ccgggcaccg tccccactct acagcgtgga gttctccgag gagcccttcg 660
gggtgatcgt gcgccggcag ctggacggcc gcgtgctgct gaacacgacg gtggcgcccc 720
tgttctttgc ggaccagttc cttcagctgt ccacctcgct gccctcgcag tatatcacag 780
gcctcgccga gcacctcagt cccctgatgc tcagcaccag ctggaccagg atcaccctgt 840
ggaaccggga ccttgcgccc acgcccggtg cgaacctcta cgggtctcac cctttctacc 900
tggcgctgga ggacggcggg tcggcacacg gggtgttcct gctaaacagc aatgccatgg 960
atgtggtcct gcagccgagc cctgccctta gctggaggtc gacaggtggg atcctggatg 1020
tctacatctt cctgggccca gagcccaaga gcgtggtgca gcagtacctg gacgttgtgg 1080
gatacccgtt catgccgcca tactggggcc tgggcttcca cctgtgccgc tggggctact 1140
cctccaccgc tatcacccgc caggtggtgg agaacatgac cagggcccac ttccccctgg 1200
acgtccagtg gaacgacctg gactacatgg actcccggag ggacttcacg ttcaacaagg 1260
atggcttccg ggacttcccg gccatggtgc aggagctgca ccagggcggc cggcgctaca 1320
tgatgatcgt ggatcctgcc atcagcagct cgggccctgc cgggagctac aggccctacg 1380
acgagggtct gcggaggggg gttttcatca ccaacgagac cggccagccg ctgattggga 1440
aggtatggcc cgggtccact gccttccccg acttcaccaa ccccacagcc ctggcctggt 1500
gggaggacat ggtggctgag ttccatgacc aggtgccctt cgacggcatg tggattgaca 1560
tgaacgagcc ttccaacttc atcaggggct ctgaggacgg ctgccccaac aatgagctgg 1620
agaacccacc ctacgtgcct ggggtggttg gggggaccct ccaggcggcc accatctgtg 1680
cctccagcca ccagtttctc tccacacact acaacctgca caacctctac ggcctgaccg 1740
aagccatcgc ctcccacagg gcgctggtga aggctcgggg gacacgccca tttgtgatct 1800
cccgctcgac ctttgctggc cacggccgat acgccggcca ctggacgggg gacgtgtgga 1860
gctcctggga gcagctcgcc tcctccgtgc cagaaatcct gcagtttaac ctgctggggg 1920
tgcctctggt cggggccgac gtctgcggct tcctgggcaa cacctcagag gagctgtgtg 1980
tgcgctggac ccagctgggg gccttctacc ccttcatgcg gaaccacaac agcctgctca 2040
gtctgcccca ggagccgtac agcttcagcg agccggccca gcaggccatg aggaaggccc 2100
tcaccctgcg ctacgcactc ctcccccacc tctacacact gttccaccag gcccacgtcg 2160
cgggggagac cgtggcccgg cccctcttcc tggagttccc caaggactct agcacctgga 2220
ctgtggacca ccagctcctg tggggggagg ccctgctcat caccccagtg ctccaggccg 2280
ggaaggccga agtgactggc tacttcccct tgggcacatg gtacgacctg cagacggtgc 2340
cagtagaggc ccttggcagc ctcccacccc cacctgcagc tccccgtgag ccagccatcc 2400
acagcgaggg gcagtgggtg acgctgccgg cccccctgga caccatcaac gtccacctcc 2460
gggctgggta catcatcccc ctgcagggcc ctggcctcac aaccacagag tcccgccagc 2520
agcccatggc cctggctgtg gccctgacca agggtgggga ggcccgaggg gagcttttct 2580
gggacgatgg agagagcctg gaagtgctgg agcgaggggc ctacacacag gtcatcttcc 2640
tggccaggaa taacacgatc gtgaatgagc tggtacgtgt gaccagtgag ggagctggcc 2700
tgcagctgca gaaggtgact gtcctgggcg tggccacggc gccccagcag gtcctctcca 2760
acggtgtccc tgtctccaac ttcacctaca gccccgacac caaggtcctg gacatctgtg 2820
tctcgctgtt gatgggagag cagtttctcg tcagctggtg ttag 2864
<210> 46
<211> 892
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 46
Ser Arg Pro Gly Pro Arg Asp Ala Gln Ala His Pro Gly Arg Pro Arg
1 5 10 15
Ala Val Pro Thr Gln Cys Asp Val Pro Pro Asn Ser Arg Phe Asp Cys
20 25 30
Ala Pro Asp Lys Ala Ile Thr Gln Glu Gln Cys Glu Ala Arg Gly Cys
35 40 45
Cys Tyr Ile Pro Ala Lys Gln Gly Leu Gln Gly Ala Gln Met Gly Gln
50 55 60
Pro Trp Cys Phe Phe Pro Pro Ser Tyr Pro Ser Tyr Lys Leu Glu Asn
65 70 75 80
Leu Ser Ser Ser Glu Met Gly Tyr Thr Ala Thr Leu Thr Arg Thr Thr
85 90 95
Pro Thr Phe Phe Pro Lys Asp Ile Leu Thr Leu Arg Leu Asp Val Met
100 105 110
Met Glu Thr Glu Asn Arg Leu His Phe Thr Ile Lys Asp Pro Ala Asn
115 120 125
Arg Arg Tyr Glu Val Pro Leu Glu Thr Pro His Val His Ser Arg Ala
130 135 140
Pro Ser Pro Leu Tyr Ser Val Glu Phe Ser Glu Glu Pro Phe Gly Val
145 150 155 160
Ile Val Arg Arg Gln Leu Asp Gly Arg Val Leu Leu Asn Thr Thr Val
165 170 175
Ala Pro Leu Phe Phe Ala Asp Gln Phe Leu Gln Leu Ser Thr Ser Leu
180 185 190
Pro Ser Gln Tyr Ile Thr Gly Leu Ala Glu His Leu Ser Pro Leu Met
195 200 205
Leu Ser Thr Ser Trp Thr Arg Ile Thr Leu Trp Asn Arg Asp Leu Ala
210 215 220
Pro Thr Pro Gly Ala Asn Leu Tyr Gly Ser His Pro Phe Tyr Leu Ala
225 230 235 240
Leu Glu Asp Gly Gly Ser Ala His Gly Val Phe Leu Leu Asn Ser Asn
245 250 255
Ala Met Asp Val Val Leu Gln Pro Ser Pro Ala Leu Ser Trp Arg Ser
260 265 270
Thr Gly Gly Ile Leu Asp Val Tyr Ile Phe Leu Gly Pro Glu Pro Lys
275 280 285
Ser Val Val Gln Gln Tyr Leu Asp Val Val Gly Tyr Pro Phe Met Pro
290 295 300
Pro Tyr Trp Gly Leu Gly Phe His Leu Cys Arg Trp Gly Tyr Ser Ser
305 310 315 320
Thr Ala Ile Thr Arg Gln Val Val Glu Asn Met Thr Arg Ala His Phe
325 330 335
Pro Leu Asp Val Gln Trp Asn Asp Leu Asp Tyr Met Asp Ser Arg Arg
340 345 350
Asp Phe Thr Phe Asn Lys Asp Gly Phe Arg Asp Phe Pro Ala Met Val
355 360 365
Gln Glu Leu His Gln Gly Gly Arg Arg Tyr Met Met Ile Val Asp Pro
370 375 380
Ala Ile Ser Ser Ser Gly Pro Ala Gly Ser Tyr Arg Pro Tyr Asp Glu
385 390 395 400
Gly Leu Arg Arg Gly Val Phe Ile Thr Asn Glu Thr Gly Gln Pro Leu
405 410 415
Ile Gly Lys Val Trp Pro Gly Ser Thr Ala Phe Pro Asp Phe Thr Asn
420 425 430
Pro Thr Ala Leu Ala Trp Trp Glu Asp Met Val Ala Glu Phe His Asp
435 440 445
Gln Val Pro Phe Asp Gly Met Trp Ile Asp Met Asn Glu Pro Ser Asn
450 455 460
Phe Ile Arg Gly Ser Glu Asp Gly Cys Pro Asn Asn Glu Leu Glu Asn
465 470 475 480
Pro Pro Tyr Val Pro Gly Val Val Gly Gly Thr Leu Gln Ala Ala Thr
485 490 495
Ile Cys Ala Ser Ser His Gln Phe Leu Ser Thr His Tyr Asn Leu His
500 505 510
Asn Leu Tyr Gly Leu Thr Glu Ala Ile Ala Ser His Arg Ala Leu Val
515 520 525
Lys Ala Arg Gly Thr Arg Pro Phe Val Ile Ser Arg Ser Thr Phe Ala
530 535 540
Gly His Gly Arg Tyr Ala Gly His Trp Thr Gly Asp Val Trp Ser Ser
545 550 555 560
Trp Glu Gln Leu Ala Ser Ser Val Pro Glu Ile Leu Gln Phe Asn Leu
565 570 575
Leu Gly Val Pro Leu Val Gly Ala Asp Val Cys Gly Phe Leu Gly Asn
580 585 590
Thr Ser Glu Glu Leu Cys Val Arg Trp Thr Gln Leu Gly Ala Phe Tyr
595 600 605
Pro Phe Met Arg Asn His Asn Ser Leu Leu Ser Leu Pro Gln Glu Pro
610 615 620
Tyr Ser Phe Ser Glu Pro Ala Gln Gln Ala Met Arg Lys Ala Leu Thr
625 630 635 640
Leu Arg Tyr Ala Leu Leu Pro His Leu Tyr Thr Leu Phe His Gln Ala
645 650 655
His Val Ala Gly Glu Thr Val Ala Arg Pro Leu Phe Leu Glu Phe Pro
660 665 670
Lys Asp Ser Ser Thr Trp Thr Val Asp His Gln Leu Leu Trp Gly Glu
675 680 685
Ala Leu Leu Ile Thr Pro Val Leu Gln Ala Gly Lys Ala Glu Val Thr
690 695 700
Gly Tyr Phe Pro Leu Gly Thr Trp Tyr Asp Leu Gln Thr Val Pro Val
705 710 715 720
Glu Ala Leu Gly Ser Leu Pro Pro Pro Pro Ala Ala Pro Arg Glu Pro
725 730 735
Ala Ile His Ser Glu Gly Gln Trp Val Thr Leu Pro Ala Pro Leu Asp
740 745 750
Thr Ile Asn Val His Leu Arg Ala Gly Tyr Ile Ile Pro Leu Gln Gly
755 760 765
Pro Gly Leu Thr Thr Thr Glu Ser Arg Gln Gln Pro Met Ala Leu Ala
770 775 780
Val Ala Leu Thr Lys Gly Gly Glu Ala Arg Gly Glu Leu Phe Trp Asp
785 790 795 800
Asp Gly Glu Ser Leu Glu Val Leu Glu Arg Gly Ala Tyr Thr Gln Val
805 810 815
Ile Phe Leu Ala Arg Asn Asn Thr Ile Val Asn Glu Leu Val Arg Val
820 825 830
Thr Ser Glu Gly Ala Gly Leu Gln Leu Gln Lys Val Thr Val Leu Gly
835 840 845
Val Ala Thr Ala Pro Gln Gln Val Leu Ser Asn Gly Val Pro Val Ser
850 855 860
Asn Phe Thr Tyr Ser Pro Asp Thr Lys Val Leu Asp Ile Cys Val Ser
865 870 875 880
Leu Leu Met Gly Glu Gln Phe Leu Val Ser Trp Cys
885 890
<210> 47
<211> 7
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<221> source
<223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic
oligonucleotide"
<400> 47
caccatg 7
<210> 48
<211> 201
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 48
gcttaccgcc ccagtgagac cctgtgcggc ggggagctgg tggacaccct ccagttcgtc 60
tgtggggacc gcggcttcta cttcagcagg cccgcaagcc gtgtgagccg tcgcagccgt 120
ggcatcgttg aggagtgctg tttccgcagc tgtgacctgg ccctcctgga gacgtactgt 180
gctacccccg ccaagtccga g 201
Claims (150)
- 유전자 요법 벡터(gene therapy vector)로서,
(a) 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 핵산 서열, 및
(b) 양이온-독립적 만노스 6-포스페이트(mannose 6-phosphate: M6P) 수용체(CI-MPR)에 높은 친화도로 결합하는 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열
을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는, 유전자 요법 벡터. - 제1항에 있어서, 상기 펩타이드는 변이체(variant) IGF2(vIGF2) 펩타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제2항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 서열번호 1과 적어도 90% 동일하고 서열번호 1의 6, 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54, 55 및 65번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 위치에 적어도 1개의 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제3항에 있어서, 상기 적어도 1개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제3항 또는 제4항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 26, 27, 43, 48, 49, 50, 54 및 55번 위치로 이루어진 군으로부터 선택된 2개 이상의 위치에 적어도 2개의 치환을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제5항에 있어서, 상기 적어도 2개의 치환은 서열번호 1의 E6R, F26S, Y27L, V43L, F48T, R49S, S50I, A54R, L55R 및 K65R로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1번 위치에 N-말단 결실을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제7항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 서열번호 1의 1 내지 4번 위치에 N-말단 결실을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 천연 IGF2 펩타이드에 비해서 인슐린 수용체 및 IGFR1에 대해서 감소된 친화도를 갖거나 또는 친화도가 없는, 유전자 요법 벡터.
- 제9항에 있어서, 상기 vIGF2 펩타이드는 세포 내 리소좀에 치료용 단백질의 흡수를 용이하게 할 수 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 유전 장애(genetic disorder)를 가진 대상체에서 상기 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체 가능한, 유전자 요법 벡터.
- 제11항에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애(lysosomal storage disorder)인, 유전자 요법 벡터.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨(aspartylglucosaminuria), 바텐병(Batten disease), 시스틴증(cystinosis), 파브리병(Fabry disease), 고쉐병 I형(Gaucher disease type I), 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병(Pompe disease), 테이삭스병(Tay Sachs disease), 샌드호프병(Sandhoff disease), 이염성 백질이영양증(metachromatic leukodystrophy), 뮤코지질증 I형(mucolipidosis type I), 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병(Hurler disease), 헌터병(Hunter disease), 산필립포병 A형(Sanfilippo disease type A), 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형(Morquio disease type A), 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병(Maroteaux-Lamy disease), 슬라이병(Sly disease), 니만-픽병 A형(Niemann-Pick disease type A), 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형(Schindler disease type I), 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(adenosine deaminase severe combined immunodeficiency: ADA-SCID), 만성 육아종증(chronic granulomatous disease: CGD), CDKL5 결핍 장애 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증(neuronal ceroid lipofuscinosis)으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 유전자 요법 벡터.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제(galactosylceramidase), 아릴설파타제(arylsulfatase)(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제(β-glucocerebrosidase), 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제(lysosomal acid lipase), 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제(lysosomal enzyme acid sphingomyelinase), 폼일글리신-생성 효소(formylglycine-generating enzyme), 이두로니다제(iduronidase)(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제(sialidase)), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소(phosphotransferase), 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌(battenin), 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 효소를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제16항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편인, 유전자 요법 벡터.
- 제16항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 팔미토일 단백질 티오에스테라제인, 유전자 요법 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제19항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 코작 서열(Kozak sequence)을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제20항에 있어서, 상기 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제21항에 있어서, X1은 A를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제21항 또는 제22항에 있어서, X2는 G를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제21항 또는 제22항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제20항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제20항에 있어서, 상기 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제20항 또는 제26항에 있어서, 상기 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 신호 핵산 서열을 더 포함하되, 상기 신호 펩타이드는 상기 치료용 단백질의 분비를 상기 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제28항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(binding immunoglobulin protein: BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드(Gaussia signal peptide)로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제29항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제29항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제28항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 가우시아 신호 펩타이드를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제32항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제32항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 5'인, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 핵산 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 3'에 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 상기 vIGF2 뉴클레오타이드 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 사이의 링커 펩타이드를 암호화하는 링커 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제37항에 있어서, 상기 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21, 서열번호 33, 또는 서열번호 37을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제1항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전자 요법 벡터는 바이러스 벡터인, 유전자 요법 벡터.
- 제39항에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 아데노바이러스 벡터, 아데노-연관 바이러스(adeno-associated virus: AAV) 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 폭스 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 또는 헤르페스 바이러스 벡터인, 유전자 요법 벡터.
- 치료적 유효량의 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제41항에 있어서, 상기 부형제는 비-이온성, 저-삼투성(low-osmolar) 화합물, 완충제, 중합체, 염, 또는 이들의 조합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
- 유전 장애를 치료하는 방법으로서, 유전 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 또는 제41항 또는 제42항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
- 제43항에 있어서, 유전 장애는 리소좀 축적 장애인, 방법.
- 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD), CDKL5 결핍 장애 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 방법.
- 제43항 또는 제44항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 방법.
- 제43항 내지 제47항 중 어느 한 항 있어서, 상기 투여는 척추강내로, 안구내로, 유리체내로, 망막으로, 정맥내로, 근육내로, 심실내로, 대뇌내로, 소뇌내로, 뇌혈관내, 뇌실질내로, 피하로, 또는 이들의 조합으로 수행되는, 방법.
- 제43항 내지 제47항 중 어느 한 항 있어서, 상기 투여는 척추강내로 수행되는, 방법.
- 유전 장애를 치료하는데 사용하기 위한, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 유전 장애의 치료를 위한 약제(medicament)의 제조에서 사용하기 위한, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제50항 또는 제51항에 있어서, 상기 유전 장애는 리소좀 축적 장애인, 약제학적 조성물.
- 제50항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID), 만성 육아종증(CGD) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
- 제50항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 약제학적 조성물.
- 제50항 내지 제53항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 약제학적 조성물.
- 제50항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 척추강내, 안구내, 유리체내, 망막, 정맥내, 근육내, 심실내, 대뇌내, 소뇌내, 또는 피하 투여용으로 제형화되는, 약제학적 조성물.
- 제50항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 척추강내 투여용으로 제형화되는, 약제학적 조성물.
- 유전자 요법 벡터로서, 5'에서 3'로의 순서로,
(a) 번역 개시 서열, 및
(b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열
을 핵산 작제물을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
[청구항 58]
제58항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 코작 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터. - 제58항에 있어서, 상기 코작 서열은 서열 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하되, X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제59항에 있어서, X1은 A를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제59항 또는 제60항에 있어서, X2는 G를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항에 있어서, 상기 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 또는 제64항에 있어서, 상기 코작 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하되, 상기 신호 펩타이드는 상기 치료용 단백질의 분비를 상기 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제66항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제67항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제67항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제67항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제67항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32의 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 내부 리보솜 유입 서열(IRES)을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제72항에 있어서, 상기 IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES인, 유전자 요법 벡터.
- 제72항 또는 제73항에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제72항 또는 제73에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 유전자 요법 벡터로서, 5'에서 3'로의 순서로,
(a) 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열, 및
(b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열로서, 상기 신호 펩타이드는 상기 치료용 단백질의 분비를 상기 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 증가시킬 수 있는, 상기 핵산 서열
을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는, 유전자 요법 벡터. - 제76항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제77항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제77항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제76항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 가우시아 신호 펩타이드를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제80항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제80항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제76항 내지 제82항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제83항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 코작 서열은 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하는 코작 서열을 포함하되, X1 및 X2의 각각인, 유전자 요법 벡터.
- 제84항에 있어서, X1은 A를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제84항 또는 제85항에 있어서, X2는 G를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제84항 내지 제87항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제83항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제83항 또는 제89항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제76항 내지 제90항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 내부 리보솜 유입 서열(IRES)을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제91항에 있어서, 상기 IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES, 피코르나바이러스(picornavirus) IRES, 아프토바이러스(Aphthovirus) IRES, 카포시 육종-연관 헤르페스 바이러스 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스(Pestivirus) IRES, 크리파바이러스(Cripavirus) IRES, 로팔로시품 파디 바이러스(Rhopalosiphum padi virus) IRES 및 마렉병 바이러스(Merek's disease virus) IRES로 이루어진 군으로부터 선택된 IRES를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제91항 또는 제92항에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제91항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 유전자 요법 벡터로서, 5'에서 3'로의 순서로,
(a) 내부 리보솜 유입 서열(IRES) 및
(b) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열
을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는, 유전자 요법 벡터. - 제95항에 있어서, 상기 IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES, 피코르나바이러스 IRES, 아프토바이러스 IRES, 카포시 육종-연관 헤르페스 바이러스 IRES, A형 간염 IRES, C형 간염 IRES, 페스티바이러스 IRES, 크리파바이러스 IRES, 로팔로시품 파디 바이러스 IRES 및 마렉병 바이러스 IRES로 이루어진 군으로부터 선택된 IRES를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제96항에 있어서, 상기 IRES는 귀뚜라미마비병 바이러스(CrPV) IRES인, 유전자 요법 벡터.
- 제96항 또는 제97항에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제96항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 IRES는 서열번호 12를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제95항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 번역 개시 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제100항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 AX1X2ATGA(서열번호 28)를 포함하는 코작 서열을 포함하되, X1 및 X2의 각각은 임의의 뉴클레오타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제101항에 있어서, X1은 A를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제101항 또는 제102항에 있어서, X2는 G를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제101항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제101항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 코작 서열은 AAGATGA(서열번호 29)를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제100항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제100항 또는 제106항에 있어서, 상기 번역 개시 서열은 GCAAGATG(서열번호 44)와 적어도 90% 동일한 핵산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 신호 펩타이드 없는 치료용 단백질에 비해서 치료용 단백질의 분비를 증가시킬 수 있는 신호 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제106항에 있어서, 상기 신호 펩타이드는 결합 면역글로불린 단백질(BiP) 신호 펩타이드 및 가우시아 신호 펩타이드로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제109항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제109항에 있어서, 상기 BiP 신호 펩타이드는 서열번호 13 내지 17로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제109항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32와 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제109항에 있어서, 상기 가우시아 신호 펩타이드는 서열번호 32를 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 IGF2 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제114항에 있어서, 상기 IGF2 펩타이드는 서열번호 1 내지 11, 서열번호 30 내지 31, 서열번호 34 및 서열번호 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 vIGF2 펩타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제114항에 있어서, 상기 IGF2 펩타이드는 서열번호 1 내지 11, 서열번호 30 내지 31, 서열번호 34 및 서열번호 35로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 vIGF2 펩타이드인, 유전자 요법 벡터.
- 제114항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 뉴클레오타이드 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 5'에 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제114항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 vIGF2 뉴클레오타이드 서열은 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열에 대해서 3'에 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제114항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 핵산 작제물은 vIGF2 뉴클레오타이드 서열과 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열 간의 링커 펩타이드를 암호화하는 링커 서열을 더 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제119항에 있어서, 상기 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21, 서열번호 33, 또는 서열번호 37과 적어도 90% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제119항에 있어서, 상기 링커 펩타이드는 서열번호 18 내지 21, 서열번호 33, 또는 서열번호 37을 포함하는, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제121항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 알파-갈락토시다제(A 또는 B), β-갈락토시다제, β-헥소스아미니다제(A 또는 B), 갈락토실세라미다제, 아릴설파타제(A 또는 B), β-글루코세레브로시다제, 글루코세레브로시다제, 리소솜 산 리파제, 리소솜 효소 산 스핑고미엘리나제, 폼일글리신-생성 효소, 이두로니다제(예컨대, 알파-L), 아세틸-CoA:알파-글루코사미니드 N-아세틸전이효소, 글리코사미노글리칸 알파-L-이두로노하이드롤라제, 헤파란 N-설파타제, N-아세틸-α-D-글루코사미니다제(NAGLU), 이두로네이트-2-설파타제, 갈락토사민-6-설페이트 설파타제, N-아세틸갈락토사민-6-설파타제, 글리코사미노글리칸 N-아세틸갈락토사민 4-설파타제, β-글루쿠로니다제, 히알루로니다제, 알파-N-아세틸 뉴라미니다제(시알리다제), 강글리오사이드 시알리다제, 인산기전이효소, 알파-글루코시다제, 알파-D-만노시다제, 베타-D-만노시다제, 아스파틸글루코사미니다제, 알파-L-푸코시다제, 바테닌, 팔미토일 단백질 티오에스테라제, 및 기타 바텐-관련 단백질(예컨대, 세로이드-리포푸신증 신경 단백질 6), 또는 이들의 효소 활성 단편으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제122항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 알파-글루코시다제, 또는 이들의 효소 활성 단편인, 유전자 요법 벡터.
- 제122항에 있어서, 상기 효소는 팔미토일 단백질 티오에스테라제인, 유전자 요법 벡터.
- 제122항에 있어서, 상기 치료용 단백질은 유전 장애를 가진 대상체에서 상기 유전 장애와 연관된 결함 또는 결손 단백질을 대체할 수 있는, 유전자 요법 벡터.
- 제125항에 있어서, 상기 유전 장애는 리소좀 축적 장애인, 유전자 요법 벡터.
- 제125항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전자 요법 벡터.
- 제125항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 유전자 요법 벡터.
- 제125항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 유전자 요법 벡터.
- 제58항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전자 요법 벡터는 바이러스 벡터인, 유전자 요법 벡터.
- 제130항에 있어서, 상기 바이러스 벡터는 아데노-연관 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터, 렌티바이러스 벡터, 폭스 바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 아데노바이러스 벡터 또는 헤르페스 바이러스 벡터인, 유전자 요법 벡터.
- (i) 치료적 유효량의 제58항 내지 제131항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 (ii) 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제132항에 있어서, 상기 담체 또는 부형제는 비-이온성, 저-삼투성 화합물, 완충제, 중합체, 염, 또는 이들의 조합물을 포함하는, 약제학적 조성물.
- 유전 장애를 치료하는 방법으로서, 유전 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제58항 내지 제131항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 또는 제132항 또는 제133항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항에 있어서, 상기 유전 장애는 리소좀 축적 장애인, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항 또는 제135항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항 또는 제135항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항 또는 제135항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 척추강내로, 정맥내로, 근육내로, 심실내로, 대뇌내로, 소뇌내로, 뇌혈관내, 뇌실질내로, 안구로, 피하로, 또는 이들의 조합으로 수행되는, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 제134항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 척추강내로 수행되는, 유전 장애를 치료하는 방법.
- 유전 장애를 치료하는데 사용하기 위한, 제58항 내지 제131항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 유전 장애의 치료를 위한 약제의 제조에서 사용하기 위한, 제58항 내지 제131항 중 어느 한 항의 유전자 요법 벡터 및 약제학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
- 제141항 또는 제142항에 있어서, 상기 유전 장애는 리소좀 축적 장애인, 약제학적 조성물.
- 제141항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 아스파르틸글루코사민뇨, 바텐병, 시스틴증, 파브리병, 고쉐병 I형, 고쉐병 II형, 고쉐병 III형, 폼페병, 테이삭스병, 샌드호프병, 이염성 백질이영양증, 뮤코지질증 I형, 뮤코지질증 II형, 뮤코지질증 III형, 뮤코지질증 IV형, 힐러병, 헌터병, 산필립포병 A형, 산필립포병 B형, 산필립포병 C형, 산필립포병 D형, 모르퀴오병 A형, 모르퀴오병 B형, 마로토-라미병, 슬라이병, 니만-픽병 A형, 니만-픽병 B형, 니만-픽병 C1형, 니만-픽병 C2형, 신들러병 I형, 신들러병 II형, 아데노신 탈아미노효소 결핍 중증 복합성 면역 결핍증(ADA-SCID) 및 신경세포 세로이드 리포푸스신증으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 약제학적 조성물.
- 제141항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 폼페병인, 약제학적 조성물.
- 제141항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 유전 장애는 신경세포 세로이드 리포푸스신증인, 약제학적 조성물.
- 제141항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 척추강내, 정맥내, 근육내, 심실내, 대뇌내, 소뇌내, 안구 또는 피하 투여용으로 제형화되는, 약제학적 조성물.
- 제141항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 척추강내 투여용으로 제형화되는, 약제학적 조성물.
- 유전자 요법 벡터로서,
(a) 치료용 단백질을 암호화하는 핵산 서열, 및
(b) 상기 치료용 단백질의 세포내섭취를 증가시키는 펩타이드를 암호화하는 핵산 서열
을 포함하는 핵산 작제물을 포함하는, 유전자 요법 벡터. - 제149항에 있어서, 상기 치료용 단백질의 세포내섭취를 증가시키는 펩타이드는 CI-MPR에 결합되는 펩타이드인, 유전자 요법 벡터.
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