KR20200075995A

KR20200075995A - 파장-의존형 플라스몬 고유 탄성 산란에너지를 이용한 캡사이신류의 비례 정량방법

Info

Publication number: KR20200075995A
Application number: KR1020180164407A
Authority: KR
Inventors: 강성호; 서혜영; 큐마 차카라파니 슈레시; 이승아; 박보연
Original assignee: 한국식품연구원
Priority date: 2018-12-18
Filing date: 2018-12-18
Publication date: 2020-06-29
Also published as: KR102205211B1

Abstract

본 발명은 파장-의존형 플라스몬 고유 탄성 산란에너지를 이용한 캡사이신류의 비례 정량방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 금나노입자(GNP)의 표면을 개질하여 GNP-MUA-MCH-NHSS를 형성하는 단계; 상기에서 제조된 GNP-MUA-MCH-NHSS와 Anti-HVA를 반응하여 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 형성하는 단계; 상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 사용하여 캡사이신류 반응시키는 단계; 및 상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그의 파장-의존 전반사(total internal reflection) 신호를 선택적 대역통과필터(bandpass filter)를 통해 검출하는 단계를 포함함으로써, 캡사이신류 분자에 결합된 금나노입자의 파장-의존형 플라스몬 고유 탄성 산란에너지를 캡사이신류 형광분자로 전이하여, 캡사이신류 분자 자체의 약한 형광신호를 획기적으로 증강시킴으로써 단일분자 수준에서 캡사이신류의 동시 정량 분석을 가능하고, 형광 표지물질 없이 순수한 캡사이신류의 분자를 간편하고 신뢰성 있게 검출할 수 있는 캡사이신류의 비례 정량방법에 관한 것이다.

Description

파장-의존형 플라스몬 고유 탄성 산란에너지를 이용한 캡사이신류의 비례 정량방법 {Ratiometric Detection of Capsaicinoids based on Wavelength-Dependent Plasmon Inherent Elastic Scattering}

본 발명은 초극미향의 캡사이신류(Capsaicinoids)를 동시 정량할 수 있는 비례 정량방법에 관한 것이다.

고추의 성분 중에서 매운맛을 나타내는 성분의 90 %를 차지하는 캡사이신(Capsaicin) 및 디하이드로캡사이신(Dihydrocapsaicin)은 캡사이신류(캡사이시노이드, Capsaicinoid)의 유도체로, 내인성 형광 물질(endogenous fluoroscence materials)로 알려져 있다.

상기 캡사이신류는 항응고제(anti-coagulant), 항혈소판제(anti-platelet) 등 다양한 약리학적 효과를 나타내는 것으로 알려져 있지만, 이들의 약리학적 효과는 농도 의존적인 매운맛에 의해 나타나는 자극 때문에 간섭받는 점에서 한계가 있다.

상기 언급된 한계로 인해 저농도의 캡사이신류 유사체를 정량할 수 있는 분석 기술의 개발이 활발해지고 있다.

일반적으로 단일분자를 고감도 정량화하여 검출하는 기술은 상기 단일분자에 형광 염료나 프로브를 결합하는 방식이 보편적으로 사용되고 있다. 특히 내인성 형광 분자 기반 기술은 표지된 물질의 추가적인 사용을 줄임으로써 단일분자 검출 및 이미징의 복잡성을 줄일 수 있다는 장점이 있어, 형광 염료나 프로브 기반의 검출방법을 대체할 수 있는 기술로 부상하고 있다. 그러나 정량 단일 분자 형광 이미징 기술에서 내인성 형광 분자 기반 검출 기술은 신호의 강도가 미약하여 적합하지 않다는 문제점이 있다는 한계가 있다.

일본특허등록 제5595862호 일본특허등록 제3706914호

본 발명자들은 금나노입자를 이용하여 초극미량의 캡사이신류를 검출하는 방법에 의해 비례 정량 분석할 수 있는 방법을 찾고자 연구 노력한 결과, GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체를 나노 태그로 사용하여 금나노입자(GNP)에서 생성된 플라즈몬 고유 탄성 산란에너지를 타겟 검출분자로 전이(transfer) 시키는 가교 역할로 하여 검출분자의 형광세기를 증강시킬 수 있도록 한 뒤에, 선택적 대역통과필터(bandpass filter)를 이용하여 RFI(respective fluorescence images) 신호를 검출하면서 동시에 각 캡사이신류(캡사이신, 디하이드로캡사이신)의 형광 기여도를 표준검정곡선과 비교하여 비율을 추정함으로써 정량분석을 할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 금나노입자(GNP)의 표면을 개질하여 GNP-MUA-MCH-NHSS를 형성하는 단계; 상기에서 제조된 GNP-MUA-MCH-NHSS와 Anti-HVA를 반응하여 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 형성하는 단계; 상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 사용하여 캡사이신류 반응시키는 단계; 및 상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그의 파장-의존 전반사(total internal reflection) 신호를 선택적 대역통과필터(bandpass filter)를 통해 검출하는 단계를 포함하는 캡사이신류의 정량방법을 제공한다.

본 발명에 따른 캡사이신류의 정량방법은 캡사이신류 분자에 결합된 금나노입자의 파장-의존형 플라스몬 고유 탄성 산란에너지를 캡사이신류 형광분자로 전이하여, 캡사이신류 분자 자체의 약한 형광신호를 획기적으로 증강시킴으로써 단일분자 수준에서 캡사이신류의 동시 정량 분석을 가능하게 한다는 이점이 있다.

또한, 본 발명에 따른 캡사이신류의 정량방법은 형광 표지물질 없이 순수한 캡사이신류의 분자를 간편하고 신뢰성 있게 검출할 수 있는 이점이 있다.

따라서, 초극미량, 초고감도 검출 및 정확도가 중요시되는 분야의 시료 정량 분석에 널리 사용될 수 있는 이점이 있다.

도 1은 본 발명에 따른 전반사 산란(total internal reflection; TIR) 검출 시스템을 나타낸 것이고,
도 2는 캡사이신류의 UV-Vis 흡광 스펙트럼을 나타낸 것이고,
도 3은 본 발명에 따른 금나노입자의 크기에 따른 파장별 산란강도를 나타낸 것이고,
도 4(a)는 본 발명에 따른 금나노입자의 크기별 TEM사진을 나타낸 것이고,
도 4(b)는 각 크기별 금나노입자의 UV-Vis 흡광 스펙트럼과 각 크기별 금나노입자와 결합된 캡사이신류의 UV-Vis 흡광 스펙트럼을 나타낸 것이고,
도 5(a)는 캡사노이드류와 결합된 금나노입자의 TIRF와 TIRS, 및 반응 후 TIRF와 TIRS를 나타낸 것이고,
도 5(b)는 시간에 따른 형광 강도를 나타낸 것이고,
도 6은 캡사이신류, 금나노입자가 결합된 캡사이신류, 및 실리카 코팅된 자성입자와 결합된 로다민 B 이소티오시아네이트 염료(MNP@ SiO₂RITC)의 상대 형광강도를 나타낸 것이고,
도 7(a)와 (d)는 각각 캡사이신(CAP)과 디하이드로캡사이신(DICAP)의 표준검정곡선을 나타낸 것이고,
도 7(c)와 (f)는 각각 561/14 대역필터와 615/20 대역필터에서의 CAP와 DICAP의 비례형광강도 차이를 나타낸 것이고,
도 7(b)와 (e)는 각 농도별 형광강도를 나타낸 것이고,
도 8은 532nm 여기 파장에서, CAP-GNP와 DICAP-GNP의 상대형광강도를 나타낸 것이고,
도 9는 HPLC-FLD의 표준검정곡선(CAP와 DICAP)을 나타낸 것이다.

이하, 본 발명에 따른 바람직한 실시 형태를 첨부된 도면을 참조하여 상세하게 설명한다. 첨부된 도면과 함께 이하에 개시될 상세한 설명은 본 발명의 예시적인 실시형태를 설명하고자 하는 것이며, 본 발명이 실시될 수 있는 유일한 실시형태를 나타내고자 하는 것이 아니다. 이하의 상세한 설명은 본 발명의 완전한 이해를 제공하기 위해서 구체적 세부사항을 포함한다. 그러나, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 이러한 구체적 세부사항 없이도 실시될 수 있음을 안다.

몇몇 경우, 본 발명의 개념이 모호해지는 것을 피하기 위하여 공지의 구조 및 장치는 생략되거나, 각 구조 및 장치의 핵심기능을 중심으로 한 블록도 형식으로 도시될 수 있다.

명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함(comprising 또는 including)"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다. 또한, 명세서에 기재된 "…부"의 용어는 적어도 하나의 기능이나 동작을 처리하는 단위를 의미한다.

또한, "일(a 또는 an)", "하나(one)", "그(the)" 및 유사 관련어는 본 발명을 기술하는 문맥에 있어서(특히, 이하의 청구항의 문맥에서) 본 명세서에 달리 지시되거나 문맥에 의해 분명하게 반박되지 않는 한, 단수 및 복수 모두를 포함하는 의미로 사용될 수 있다.

본 발명의 실시예들을 설명함에 있어서 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명을 생략할 것이다. 그리고 후술되는 용어들은 본 발명의 실시예에서의 기능을 고려하여 정의된 용어들로서 이는 사용자, 운용자의 의도 또는 관례 등에 따라 달라질 수 있다. 그러므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.

본 발명에 따른 캡사이신류의 정량방법은 형광신호를 이용하여 캡사이신류를 동시 정량 분석하는 방법에 관한 것이다. 상기 캡사이신류 분자 자체가 약한 형광신호를 가지므로 형광신호를 증가시키기 위하여, 상기 캡사이신류의 분자와 유사한 에너지 파장을 갖는 크기의 금나노입자를 선택 사용하여 정량 분석을 수행한다.

구체적으로 본 발명은 (금나노입자)-(11-메캅토운데카노익 에시드)-(6-머캅토-1-헥사놀)-(N-하이드록시설포숙신이미드)-(항 호모바닐린산 폴리클로날 항체)[이하, ‘HVA’라 함] 복합체를 나노 태그로 사용하여, 상기 금나노입자에서 생성된 플라즈몬 고유 탄성 산란에너지를 캡사이신 분자로 이동시켜 형광세기를 증강시키므로 단일분자 수준에서도 캡사이신류를 비례 정량할 수 있다.

이하, 본 발명에 따른 캡사이신류의 정량방법을 실시예를 기반으로 구체적으로 설명하면 다음과 같다.

실시예

본 실시예에서 사용된 물질은 하기와 같다.

켑사이신(CAP, Sigma-Aldrich사), 디하이드로캡사이신(DICAP, Sigma-Aldrich사), 디-티오비스(숙신이미드일 프로피오네이트)(Di-thiobis(succinimidyl propionate), DSP, Pierce사), 트리스-염화수소(Tris-HCl, J.T. Baker Company), 6-머캅토-1-헥사놀(6-Mercapto-1-hexanol, MCH, 97%), 2-(몰포즈리노)에탄설포닉에시드(2-(morphozlino)ethanesulfonic acid, MES), 디메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide, DMSO, 99.5%), 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride, EDC), 11-메캅토운데카노익 에시드(11-mercaptoundecanoic acid, MUA, 95%), 글리신(glycine), 인산염 완충식염수(phosphate-buffered saline, PBS), 10 내지 250nm 금나노입자(GNPs, BBI^TMSolutions), 항 호모바닐린산 폴리클로날 항체(Anti-HomovanillicAcidPolyclonalAntibodies, Anti-HVA, MyBioSource사), N-하이드록시설포숙신이미드(N-hydroxysulfosuccinimide, NHSS, Molecular Probes).

실시예 1 : 샘플제조

캡사이신류는 김치, 배추, 고추 가루로 각각 준비했다. 이때, 김치는 세계 김치 연구소에서 하기 표 1의 방법으로 제조하고, 배추는 광주 농산물 시장에서 구입, 고추 가루는 다산 식품(주)에서 구입 하였다.

캡사이신류 추출을 위해, 각 반응용기에 유리구슬(크기 4), 15mL의 메탄올을 넣고 2.5g의 균질화된 김치, 고추가루 및 배추를 각각 첨가하였다. 상기 각 샘플은 선형 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE)로 밀봉된 22mL 크기의 투명 용기에 넣고, 90℃에서 1 시간 동안 가열하였다. 이후에 샘플을 실온에서 냉각시키고, 25mL 크기의 플라스크로 옮긴 다음 메탄올을 첨가하였다. 이후에 상층액은 0.2μm 멤브레인 필터(Milipore, Billeri ca)를 갖는 주사기를 사용하여 여과하였다. 상기 여과된 상층액을 분석시료로 사용하여 캡사이신을 정량하였다.

성분	함량비 (중량%)
Salted baechu	70
Mu (radish)	8.82
Green onion	3.18
Red pepper powder	3.96
Garlic	2.16
Ginger	0.61
Jeotgal	1.72
Jindasi	0.9
Glutinous rice	3.44
Tap water	5.21

실시예 2

10mM MUA 및 30mM MCH가 용해되어 있는 에탄올을 금나노입자 용액에 첨가하고 20분 동안 초음파 처리한 후 상온에서 2시간 30분동안 반응시켜 금나노입자 표면에 MUA-MCH의 자기조립 단일층을 형성하였다. 이때 금나노입자의 크기는 10 내지 250㎚에서 다양하게 사용하였다.

상기 GNP-MUA-MCH 단일층을 50 mM MES 및 0.1 M NaCl(pH 6.0)에 현탁시켜 표면상에 카복실산 말단의 알칸 티올 단일층을 형성하였다. GNP-MUA-MCH-NHSS를 형성하기 위해 EDC 40μg(50mM MES, pH 6.0에서 2mg/mL)과 NHSS(2mg/mL in 1×PBS) 196μg을 첨가하였다. 상기 EDC는 형광단과 GNP 사이의 거리를 최적화하기 위해 추가하였다.

이후에 실온에서 40분 동안 교반한 후, GNP-MUA-MCH-NHSS를 1×PBS에 현탁시키고 PBS(pH 7.4) 중의 anti-HVA를 최종 농도 10㎍/mL로 첨가 하였다. GNP-anti HVA를 원심분리하고 탈 이온수로 세척 하였다. 그 결과 상기에서 제조된 GNP-anti HVA 복합체 나노 태그는 캡사노이드류(capsaicinoid) 정량 실험에 사용하였다.

상기와 같은 반응 과정을 도식화하면 다음과 같다.

파장-의존 전반사 검출시스템

도 1에는 본 발명에 따른 파장-의존 전반사(total internal reflection; TIR) 검출 시스템을 나타내었다.

정립형 올림푸스 BX51 현미경(Olympus Optical Co., Ltd., Tokyo, Japan)을 기본으로 하여 비형광 TIR 시스템을 구축하였다.

TIR 광원은 금나노입자(GNPs) 조사를 위해 532nm 고체 상태 연속파 레이저(50mW, SDL-671-040T, Shanghai Dream Lasers Technology Co., Ltd., Shanghai, China)와 671nm 고체 상태 연속파 레이저(70mW, SDL-532-LM-100T Shanghai Dream Lasers Technology Co., Ltd., Shanghai, China) 두 대를 사용하였다.

또한, 레이저광원 뒤에 이색 성 거울(DC 미러, SWR-45UNP-R488 / 532-T633-PW-1025-C, Edmund Optics Inc., Barrington, NJ, USA)을 두고, 레이저광 방향 제어를 위해 2 개의 반사 거울(MM2-311-12.5, Semrock, Rochester, NY)를 설치하였다.

파장의 선택적인 검출을 위하여 561/14nm, 615/20nm 및 680/10nm의 흡수파장을 가지는 대역통과필터를 이용하였다.

산란 신호는 개구수 0.6-1.3의 대물렌즈(UPLANFLN, ×100, Olympus Co., Ltd., Tokyo, Japan)를 이용하여 얻었다.

HPLC-FLD 분석

형광 검출기(FLD)가 장착된 Lachrom Ultra C18(50mm×2.0mm, 2.0μm, Hitachi, Tokyo, Japan)컬럼과 Agilent 1260 Infinity LC 시스템(Agilent Technologies, Santa Clara, CA, USA)을 사용하였다.

상기 크로마토그래피 조건은 다음과 같다. 이동상 A : 0.1% 아세트산, 이동상 B : 아세토 니트릴, 등용매 조건 A : B = 6 : 4, 유속 0.6mL/분, 여기파장 280nm, 발광파장 325nm, 주입부피 2μL.

도 2는 캡사이신류의 UV-Vis 흡광 스펙트럼을 나타낸 것으로, 몰흡광계수는 280nm에서 3720M^-1cm^-1이고, 532nm에서 0.3756M^-1cm^-1이나 경제성을 고려하여 532nm에서의 흡광도를 최적 파장으로 선택하였다.

도 3은 본 발명에 따른 금나노입자의 크기에 따른 파장별 산란강도를 나타낸 것으로, 100nm에서 산란빈도가 높다는 것을 확인할 수 있었다.

도 4(a)는 본 발명에 따른 금나노입자의 크기별 TEM사진을 나타낸 것이고, 도 4(b)는 각 크기별 금나노입자의 UV-Vis 흡광 스펙트럼과 각 크기별 금나노입자와 결합된 캡사이신류의 UV-Vis 흡광 스펙트럼을 나타낸 것이다. 흡광 스펙트럼이 붉은색으로 이동하는 것으로부터 금나노입자에 캡사이신류의 결합을 확인할 수 있었다.

도 5(a)는 캡사노이드류와 결합된 금나노입자의 TIRF와 TIRS, 및 반응 후 TIRF와 TIRS를 나타낸 것으로 반응 이후에만 형광 강도가 관찰되었다. 도 5(b)는 시간에 따른 형광 강도로 각 금나노입자는 일관되게 광변색이 관찰되었다.

상기 도 4(a)와 도 4(b) 및 도 5(a)와 도 5(b)로부터 100nm의 금나노입자가 최적인 것을 확인할 수 있었다.

또한, 금나노입자는 형광발색단 사이의 최적의 거리를 얻기 위해 HVA 링커를 갖는 11-머캅토운데카노익에시드로 금나노입자를 개질하였다.

단일 나노입자의 형광증진

도 6은 캡사이신류, 금나노입자가 결합된 캡사이신류, 및 실리카 코팅된 자성입자와 결합된 로다민 B 이소티오시아네이트 염료(MNP@ SiO₂RITC)의 상대 형광강도를 나타낸 것이다. 금나노입자가 결합된 캡사이신류는 캡사이신류보다 형광신호가 100배 이상 증가했으며, MNP@SiO₂RITC와 형광 강도 및 스펙트럼이 유사하였다.

본 발명은 상기 나노입자의 형광을 정확하게 정량화하기 위해 개개의 나노입자로부터 형광신로를 검출하였고, 개별적 point spread function(PSF)에 대한 Born-Wolf optical model of full width half maxima(FWHM)을 얻어진 이미지와 일치시키면서 관찰하였다. 이때, 상기 PSF는 trackmate algorithm을 이용하여 정확한 지점을 분석하였다.

비례정량분석

캡사이신류 분석의 형광 스펙트럼 오버랩을 해결하기 위하여 형광 강도 기반의 비례정량분석 방법을 이용하였다. 2개의 대역필터를 사용하였다.

도 7(a)와 (d)는 각각 캡사이신(CAP)과 디하이드로캡사이신(DICAP)의 표준 검정 곡선을 나타낸 것으로 이로부터 CAP와 DICAP의 비율을 추정하였다. 도 7(c)와 (f)는 각각 561/14 대역필터와 615/20 대역필터에서의 CAP와 DICAP의 비례형광강도 차이를 나타낸 것이고, 도 7(b)와 (e)는 각 농도별 형광강도를 나타낸 것이다.

도 8은 532nm 여기 파장에서, CAP-GNP와 DICAP-GNP의 상대형광강도를 나타낸 것으로, CAP-GNP와 DICAP-GNP의 형광 방출 시프트는 상이하였다.

HPLC-FLD검증

상기와 같은 방법은 HPLC-FLD을 이용하여 검증하였다.

도 9는 HPLC-FLD의 표준검정곡선(CAP와 DICAP)을 나타낸 것이다. 여기파장 및 발광파장은 280nm과 325nm이다.

		Red pepper powder	Kimchi	Baechu
Capsaicin (mg/kg)	PAEFS	194.78±1.26²	7.42±0.05	3.924×10^-9± 0.001×10^-9
Capsaicin (mg/kg)	HPLCFLD	187.80±2.00	7.12±0.40	ND³
Dihydrocapsaicin (mg/kg)	PAEFS	115.46±0.06	4.69±0.02	0.216×10^-9± 0.001×10^-9
Dihydrocapsaicin (mg/kg)	HPLCFLD	117.39±1.57	4.54±0.23	ND
Capsaicinoids¹ (mg/kg)	PAEFS	316.43±2.07	12.14±0.64	4..232×10^-9± 0.001×10^-9
Capsaicinoids¹ (mg/kg)	HPLCFLD	305.19±3.57	11.66±0.63	ND
¹Capsaicinoids = capsaicin + dihydrocapsaicin ²Values are mean ±standard deviation of three measurements (n = 3). ³ND: not detected.

상기 표 2와 같이, 두 결과의 수치는 유사하며 결과 간의 차이는 평균 11.24이었다. 또한, 표준편차는 4.31로 계산되었다.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 예를 들어, 단일형으로 설명되어 있는 각 구성 요소는 분산되어 실시될 수도 있으며, 마찬가지로 분산된 것으로 설명되어 있는 구성 요소들도 결합된 형태로 실시될 수 있다.

본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위에 의하여 나타내어지며, 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 균등 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims

금나노입자(GNP)의 표면을 11-메캅토운데카노익 에시드(11-mercaptoundecanoic acid, MUA), 6-머캅토-1-헥사놀(6-Mercapto-1-hexanol, MCH) 및, N-하이드록시설포숙신이미드(N-hydroxysulfosuccinimide, NHSS)으로 개질하여 GNP-MUA-MCH-NHSS를 형성하는 단계;
상기에서 제조된 GNP-MUA-MCH-NHSS와 항 호모바닐린산 폴리클로날 항체(Anti-Homovanillic Acid Polyclonal Antibodies, Anti-HVA)를 반응하여 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 형성하는 단계;
상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그를 사용하여 캡사이신류 반응시키는 단계; 및
상기 GNP-MUA-MCH-NHSS-anti HVA 복합체 나노 태그의 파장-의존 전반사(total internal reflection) 신호를 선택적 대역통과필터(bandpass filter)를 통해 검출하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.
기지 농도로 캡사이신류를 포함하는 일련의 표준시료에 대해 RFI(respective fluorescence images) 신호를 검출하여 농도에 따른 RFI 신호의 검정곡선을 작성하는 단계; 및
미지의 캡사이신류 시료에 대해 RFI 신호를 산기 표준시료로부터 작성한 검정곡선에 대입하여 농도를 유추하는 단계를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.
청구항 1에 있어서, 상기 캡사이신류는 캡사이신(Capsaicin) 및 디하이드로캡사이신(Dihydrocapsaicin)을 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.
청구항 1에 있어서, 상기 금나노입자는 10 내지 250㎚의 평균직경을 갖는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.
청구항 4에 있어서, 상기 금나노입자는 100nm의 평균직경을 갖는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.
청구항 1에 있어서, 상기 선택적 대역통과필터(bandpass filter)는 561/14nm, 615/20nm 및 680/10nm의 흡수파장을 가지는 것을 특징으로 하는 캡사이신류의 비례 정량방법.