KR20200062071A - Peptide, compositions, and methods for stimulating adipogenesis - Google Patents

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Abstract

Provided are: poly-L-lysine having a molecular weight of 5,000 or more and 150,000 or less, which stimulates subcutaneous adipogenesis or heals wounds; and uses thereof. A pharmaceutical or cosmetic composition according to embodiments can heal wounds by containing poly-L-lysine, which is effective for wound healing.

Description

지방 생성을 자극하는 펩타이드, 조성 및 방법{PEPTIDE, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR STIMULATING ADIPOGENESIS}Peptide, composition and method to stimulate fat production{PEPTIDE, COMPOSITIONS, AND METHODS FOR STIMULATING ADIPOGENESIS}

본 기재는 지방 생성을 자극하는 펩타이드, 조성 및 방법에 관한 것이다. The present description relates to peptides, compositions and methods that stimulate fat production.

최근 피부의 건강과 아름다움을 위한 소비자들의 다양한 제품의 수요가 급증하였다. 인간 피부는, 상피층이 얇아지고 상피층 하부에 있는 지방 및 연결 조직의 퇴화로 인해, 나이가 들면서 극단적으로 변화하여서 더 얇아지고 더 건조해진다. 노화된 피부의 다른 징후는 피부 탄성, 탄력 및 복원력의 소실을 포함한다. 얼굴 및 목 부위의 피부는 특히 노화의 징후에 걸리기 쉽다. 얼굴 및 목의 피부에 영향을 미치는 노화의 징후는 예를 들어 주름, 가는 주름, 얇아진 피부, 처진 피부, 피부 건조 및 피부 가려움을 포함한다.Recently, the demand for various products of consumers for the health and beauty of the skin has skyrocketed. Human skin becomes thinner and drier with extreme changes with age, due to thinning of the epithelial layer and degeneration of fat and connective tissue underlying the epithelial layer. Other signs of aging skin include loss of skin elasticity, elasticity and resilience. Skin on the face and neck is particularly susceptible to signs of aging. Signs of aging affecting the skin of the face and neck include, for example, wrinkles, fine wrinkles, thinned skin, sagging skin, dry skin and itching of the skin.

얼굴 및 몸에서의 피부의 외관, 및 때때로 이의 구조를 미용상으로 개선할 수 있는 매우 다양한 크림 및 로션이 존재한다. 이러한 조성물은 피부 회춘을 조장하거나, 탄력을 증가시키거나, 그렇지 않으면 피부를 미용상으로 개선하는 레티노이드, 하이드록시산 및/또는 박피제(exfoliant)를 대개 이용한다. 많은 미용 제품은 수분을 제공하고, 염증을 야기하는 자극제를 사용하여 피부를 탱탱하게 함으로써 피부의 외관을 증대시킬 수 있다. 추가로, 지방생성을 증대시키도록 요구하는 공지된 활성 미용 성분이 존재하지만, 이의 효력은 변동이 심하고, 따라서 이의 사용이 효과적인 것으로 보이지 않는다. There are a wide variety of creams and lotions that can cosmetically improve the appearance of the skin on the face and body, and sometimes its structure. These compositions usually use retinoids, hydroxy acids and/or exfoliants that promote skin rejuvenation, increase elasticity, or otherwise cosmetically improve the skin. Many cosmetic products can increase the appearance of the skin by providing moisture and firming the skin with irritants that cause inflammation. In addition, there are known active cosmetic ingredients that require augmentation of fat production, but their potency is variable and therefore their use does not appear to be effective.

의학 시술, 예컨대 진피 주사 및 복원 수술은 노화의 징후를 감소시키기 위해 또한 이용 가능하다. 미용 수술은 피부의 외관을 심미적으로 증대시키기 위해 최근 인기가 높아지고 있다. 또한, 미용의 목적이외에도 상처 조직의 수복을 위해서도 지방생성의 자극이 중요한 요소로 작용한다. 따라서, 얼굴 및 몸의 노화 피부 및/또는 상처를 개선하기 위해서 지방 생성을 자극할 수 있는 조성물 및 방법이 요구된다. Medical procedures such as dermal injection and restorative surgery are also available to reduce signs of aging. Cosmetic surgery has recently become popular in order to aesthetically increase the appearance of the skin. In addition, stimulation of fat production acts as an important factor for the repair of wound tissues in addition to the purpose of beauty. Accordingly, what is needed is a composition and method that can stimulate fat production to improve the aging skin and/or wounds of the face and body.

본 개시는 지방 생성을 자극할 수 있는 약제학적 또는 화장품 조성물을 제공하고자 한다. The present disclosure seeks to provide pharmaceutical or cosmetic compositions capable of stimulating fat production.

본 개시는 지방 생성을 자극할 수 있는 방법을 제공하고자 한다. The present disclosure seeks to provide methods that can stimulate fat production.

실시예들에 따른 조성물은 피하 지방생성을 자극하거나 상처를 치유하기 위한 분자량 5,000 이상 150,000 이하인 폴리-L-라이신. 및 약제학적으로 또는 화장용으로 허용가능한 담체를 포함한다. The composition according to the embodiments is poly-L-lysine having a molecular weight of 5,000 or more and 150,000 or less for stimulating subcutaneous adipogenesis or healing a wound. And pharmaceutically or cosmetically acceptable carriers.

상기 폴리-L-라이신의 분자량은 30,000 이상 70,000 이하일 수 있다. The molecular weight of the poly-L-lysine may be 30,000 or more and 70,000 or less.

상기 조성물은 국소, 피하 또는 경피 투여용일 수 있다. The composition may be for topical, subcutaneous or transdermal administration.

상기 조성물은 주사용일 수 있다. The composition may be for injection.

상기 조성물은 콜라겐, 콜라겐 유도체, 하이알루론산 또는 하이알루론산 유도체를 더 포함할 수 있다. The composition may further include collagen, collagen derivatives, hyaluronic acid or hyaluronic acid derivatives.

상기 조성물은 피부 크림일 수 있다. The composition may be a skin cream.

실시예들에 따른 지방생성을 자극하거나 상처를 치유하기 위한 방법은 상기 조성물을 대상체에게 흉터의 체표를 감소시키거나 흉터있는 체표의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 흉터를 감소시키거나, 상기 조성물을 대상체에게 대상체의 체표에서 피부의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 피부의 외관을 개선하거나, 상기 조성물이 주름을 줄이고, 제거하거나 메우고, 처지는 피부를 감소시키고, 피부의 표면 질감을 개선하고, 노인 반점을 제거하거나 줄게 하거나, 또는 눈 아래의 다크써클을 줄이거나 제거하도록 하거나, 상기 조성물을 대상체에게 체표의 조직 용적을 증가시키는데 충분한 양으로 투여하는 방법일 수 있다. A method for stimulating adiogenesis or healing a wound according to embodiments comprises administering the composition to a subject in an amount sufficient to reduce the body surface of the scar or improve the appearance of the scary body surface. Or improving the appearance of the skin, comprising administering the composition to the subject in an amount sufficient to improve the appearance of the skin in the subject's body surface, or the composition reduces, eliminates or fills wrinkles, reduces sagging skin, It may be a method of improving the surface texture of the skin, removing or reducing age spots, reducing or removing dark circles under the eyes, or administering the composition to a subject in an amount sufficient to increase the tissue volume of the body surface. .

기타 본 발명의 측면들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.Other details of aspects of the present invention are included in the detailed description below.

실시예들에 따른 약제학적 또는 화장품 조성물은 지방생성의 자극에 효과적인 폴리- L-라이신을 포함하여 지방생성을 효과적으로 자극할 수 있다. 또한, 실시예들에 따른 약제학적 또는 화장품 조성물은 상처 치료에 효과적인 폴리-L-라이신을 포함하여 상처를 치유할 수 있다. The pharmaceutical or cosmetic composition according to the embodiments can effectively stimulate fat production by including poly-L-lysine effective for stimulation of fat production. In addition, the pharmaceutical or cosmetic composition according to the embodiments can heal wounds by including poly-L-lysine effective for wound healing.

도 1은 오일 레드 O 염색법을 사용한 세포 내 지방축적량을 관찰한 결과를 나타낸다.
도 2 및 도 3은 지방세포분화에 의해 발현이 증가하는 인자들을 확인한 결과를 나타낸다.
도 4는 KSEVSK와 폴리-L-라이신을 각각 처리하였을 경우의 중성지방 축적량을 측정한 결과를 나타낸다.
도 5는 폴리-L-라이신 처리시 3T3L1 지방전구세포에서 pAKT가 유도되는지를 확인한 결과를 나타낸다.
도 6은 인슐린과 폴리-L-라이신을 각각 처리하였을 경우의 지방세포분화 수준 변화를 관찰한 결과를 나타낸다.
도 7은 폴리-L-라이신이 지방세포 분화에 관여하는 주된 기간을 확인하기 위한 실험 결과이다.
도 8은 폴리-L-라이신이 세포이동능을 증가시키는 효과를 관찰한 결과를 나타낸다.
Figure 1 shows the results of observing the fat accumulation in the cells using the oil red O staining method.
2 and 3 show the results of confirming factors that increase expression by adipocyte differentiation.
Figure 4 shows the results of measuring the amount of triglycerides when treated with KSEVSK and poly-L-lysine, respectively.
Figure 5 shows the results confirming that pAKT is induced in 3T3L1 adipocytes during poly-L-lysine treatment.
Figure 6 shows the results of observing the change in the level of adipocyte differentiation when insulin and poly-L-lysine were treated respectively.
7 is an experimental result for confirming the main period in which poly-L-lysine is involved in adipocyte differentiation.
8 shows the results of observing the effect of poly-L-lysine to increase cell migration capacity.

이하 본 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 실시예들에 대하여 상세히 설명한다. 실시예는 여러가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며, 여기에서 설명하는 구체적인 실시예로만 한정되지 않는다.Hereinafter, exemplary embodiments will be described in detail so that those skilled in the art can easily implement them. The embodiments may be implemented in various different forms, and are not limited to the specific embodiments described herein.

일반적으로 매우 작은 아미노산으로 이루어진 펩타이드가 지방 세포 분화에 효과적이라고 알려져 있다. KR10-2015-0088841에서도 1~6 또는 1~31개의 아미노산으로 이루어진 펩타이드가 지방 생성 자극에 효과적이라고 개시하고 있다. It is generally known that peptides composed of very small amino acids are effective for adipocyte differentiation. KR10-2015-0088841 also discloses that peptides consisting of 1 to 6 or 1 to 31 amino acids are effective for stimulating fat production.

그러나 본 개시에 따르면 기존에 알려져 있던 사실과 달리 특정 분자량 범위 내의 폴리-L-라이신이 지방 생성 자극에 보다 효과적이다. However, according to the present disclosure, unlike previously known facts, poly-L-lysine within a specific molecular weight range is more effective in stimulating fat production.

구체적으로 폴리-L-라이신의 분자량이 5,000 내지 150,000일 경우에 지방 생성 자극에 보다 효과적이다. 나아가 폴리-L-라이신의 분자량이 30,000 내지 70,000일 경우에 지방 생성 자극에 보다 효과적이다. Specifically, when the molecular weight of poly-L-lysine is 5,000 to 150,000, it is more effective in stimulating fat production. Furthermore, when the molecular weight of poly-L-lysine is 30,000 to 70,000, it is more effective in stimulating fat production.

본 개시에서 폴리-L-라이신은 100% L-라인신만으로 이루어진 폴리펩타이드 이외에도 이의 필수적인 특성, 즉 지방생성을 유도하는 능력을 유지하는 변이체도 포함할 수 있다. 일반적으로, 변이체는 전체적으로 분자량이 아주 유사하고, 폴리-L-라이신과 많은 영역에서 동일할 수 있다. 보존적 아미노산의 치환 외에도, 폴리-L-라이신 변이체는 (i) 하나 이상의 비-보존된 아미노산 잔기를 이용한 치환(상기 치환된 아미노산 잔기는 표준 아미노산이거나 표준 아미노산이 아닐 수 있고 천연 발생 아미노산이거나 천연 발생 아미노산이 아닐 수 있음) 및/또는 (ii) 하나 이상의 비-표준 또는 비-천연 발생 아미노산 잔기를 이용한 보존적 치환, 및/또는 (iii) 펩타이드의 안정성 및/또는 용해도를 증가시키는 화합물(예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜)과 같은, 또 다른 화합물과의 펩타이드의 융합, 및/또는 (iv) 예를 들면, IgG Fc 융합 영역 펩타이드, 또는 리더 또는 분비성 서열, 또는 정제를 촉진하는 서열과 같은, 부가적인 아미노산과의 펩타이드의 융합을 포함할 수 있다. 그러한 변이체 펩타이드를 만드는 방법은 당해분야의 숙련가의 기술 내에 속한다. 예를 들면, 전하를 띠는 아미노산을 다른 전하를 띠거나 중성인 아미노산과 아미노산으로 치환한 것을 함유하는 펩타이드 변이체는 개선된 특성, 예컨대 낮은 응집을 갖는 펩타이드를 생산할 수 있다. In the present disclosure, poly-L-lysine may include, in addition to a polypeptide composed of only 100% L-linesin, a variant that retains its essential properties, that is, its ability to induce adiogenesis. In general, variants have very similar overall molecular weights and can be identical in many areas to poly-L-lysine. In addition to the substitution of conservative amino acids, poly-L-lysine variants are (i) substituted with one or more non-conserved amino acid residues (the substituted amino acid residues may or may not be standard amino acids and may be naturally occurring amino acids or naturally occurring amino acids). May not be amino acids) and/or (ii) conservative substitutions with one or more non-standard or non-naturally occurring amino acid residues, and/or (iii) compounds that increase the stability and/or solubility of the peptide (e.g. Fusion of a peptide with another compound, such as, for example, polyethylene glycol), and/or (iv) addition, such as, for example, an IgG Fc fusion region peptide, or a leader or secretory sequence, or a sequence that promotes purification. And fusion of the peptide with an amino acid. Methods for making such variant peptides are within the skill of those skilled in the art. For example, peptide variants containing amino acids that are charged or substituted with neutral or amino acids that have different charges can produce peptides with improved properties, such as low aggregation.

또한 폴리-L-라이신은 1 이상의 보호 그룹을 보유할 수 있다. 보호 그룹은 펩타이드의 C- 및/또는 N-말단 및/또는 펩타이드의 1 이상의 내부 잔기에 커플링될 수 있다.In addition, poly-L-lysine may have one or more protecting groups. The protecting group can be coupled to the C- and/or N-terminus of the peptide and/or one or more internal residues of the peptide.

약제학적 및 화장품 조성물Pharmaceutical and cosmetic composition

분자량이 5,000 에서 150,000 인 폴리-L-라이신은 약제학적으로 또는 화장용으로 허용가능한 담체와 함께 약제학적 및/또는 화장품 조성물로 제공될 수 있다. Poly-L-lysine having a molecular weight of 5,000 to 150,000 can be provided in pharmaceutical and/or cosmetic compositions with a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier.

폴리-L-라이신은 피하 지방세포 형성을 자극하거나 상처를 치유하기 위해 이를 필요로 하는 대상체(예를 들면, 포유동물)에게 투여될 수 있다. 폴리-L-라이신은 "원상태" 형태 또는, 원한다면, 염, 에스테르, 아미드, 전구약물, 유도체, 등의 형태로 투여될 수 있으며, 단, 상기 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 또는 유도체는 약리적으로 적합하고, 즉, 본 방법(들)에 효과적인 물질에서 선택될 수 있다. 펩타이드의 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 및 다른 유도체는 합성 유기 화학 분야의 숙련가에게 공지되고, 예를 들면, 공지의 표준 절차를 사용하여 제조될 수 있다. Poly-L-lysine can be administered to a subject (eg, a mammal) in need of it to stimulate subcutaneous adipocyte formation or to heal a wound. The poly-L-lysine can be administered in the "in situ" form or, if desired, in the form of a salt, ester, amide, prodrug, derivative, etc. provided that the salt, ester, amide, prodrug or derivative is pharmacological It can be selected from materials that are suitable, ie effective for the method(s). Salts, esters, amides, prodrugs, and other derivatives of peptides are known to those skilled in the art of synthetic organic chemistry, and can be prepared, for example, using known standard procedures.

폴리-L-라이신은 피하 지방세포 형성을 자극하기 위해 이를 필요로 하는 대상체(예를 들면, 포유동물)에게 투여될 수 있다. 폴리-L-라이신은 "원상태" 형태 또는, 원한다면, 염, 에스테르, 아미드, 전구약물, 유도체, 등의 형태로 투여될 수 있으며, 단, 상기 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 또는 유도체는 약리적으로 적합하고, 즉, 본 방법(들)에 효과적인 물질에서 선택될 수 있다. 펩타이드의 염, 에스테르, 아미드, 전구약물 및 다른 유도체는 합성 유기 화학 분야의 숙련가에게 공지되고, 예를 들면, 공지의 표준 절차를 사용하여 제조될 수 있다. Poly-L-lysine can be administered to a subject (eg, a mammal) in need of it to stimulate subcutaneous adipocyte formation. The poly-L-lysine can be administered in the "in situ" form or, if desired, in the form of a salt, ester, amide, prodrug, derivative, etc. provided that the salt, ester, amide, prodrug or derivative is pharmacological It can be selected from materials that are suitable, ie effective for the method(s). Salts, esters, amides, prodrugs, and other derivatives of peptides are known to those skilled in the art of synthetic organic chemistry, and can be prepared, for example, using known standard procedures.

폴리-L-라이신은 피하, 비경구, 국소, 경구, 코 (또는 그렇지 않으면 흡입된), 직장, 또는 국소 투여를 위해, 예컨대 에어로졸, 크림, 세럼 그리고 패취형태의 경피투여형 제품으로 제형화될 수 있다. 조성물은 투여 방법에 따라서 다양한 단위 복용 형태로 투여될 수 있다. 적합한 단위 복용 형태는, 비제한적으로 분말, 정제, 알약, 캡슐, 로젠지, 좌약, 패치, 비강 스프레이, 주사제, 이식가능 지속 방출 제형, 지질 복합체, 등을 포함할 수 있다. Poly-L-lysine may be formulated for subcutaneous, parenteral, topical, oral, nasal (or otherwise inhaled), rectal, or topical administration, such as aerosol, cream, serum and transdermal products in the form of patches. Can be. The composition may be administered in various unit dosage forms depending on the method of administration. Suitable unit dosage forms can include, but are not limited to, powders, tablets, pills, capsules, lozenges, suppositories, patches, nasal sprays, injections, implantable sustained release formulations, lipid complexes, and the like.

폴리-L-라이신이 화장용으로 허용가능한 담체와 조합되어 화장품 조성물을 형성할 경우 충전제(예를 들면 히알루론 충전제,, 폴리메틸메타크릴레이트(PMMA) 마이크로구형체 및 콜라겐 충전제) 등을 추가로 포함할 수 있다 When poly-L-lysine is combined with a cosmetically acceptable carrier to form a cosmetic composition, a filler (for example, hyaluron filler, polymethyl methacrylate (PMMA) microspheroid and collagen filler) is additionally added. Can contain

본 조성물은 바람직하게는 국소, 피하, 또는 경피 투여용일 수 있다. The composition may preferably be for topical, subcutaneous, or transdermal administration.

본 조성물은 주사용 조성물일 수 있다.The composition may be a composition for injection.

본 조성물은 콜라겐 (예를 들면, 소, 돼지, 또는 인간 콜라겐)을 추가로 포함할 수 있다. 콜라겐은 합성 콜라겐일 수 있으며, 히알루론산은 닭벼슬 또는 미생물의 발효 산물일 수 있다. The composition may further include collagen (eg, cow, pig, or human collagen). Collagen may be synthetic collagen, and hyaluronic acid may be a chicken rice or a fermentation product of microorganisms.

본 조성물은 마취제 (예를 들면, 리도카인)을 추가로 포함할 수 있다. The composition may further include an anesthetic (eg, lidocaine).

본 조성물은 피부 크림 (예를 들면, 얼굴 크림)일 수 있다. The composition may be a skin cream (eg, face cream).

본 조성물은 세럼 또는 토너형태의 액상형 제제일 수 있다. The composition may be a liquid formulation in the form of a serum or toner.

본 조성물은 겔 상태의 반고형 제제일 수 있다. The composition may be a gel-like semi-solid preparation.

약제학적으로 허용가능한 담체는 연방 또는 주 정부의 관리 기관에 의해 승인되거나 U.S. 약전 또는 동물, 더 상세하게는 인간에서 또는 동물, 더 상세하게는 인간에 대해 사용하기 위한 다른 일반적으로 인식된 약전에서 열거된 것을 포함한다. "담체"는, 예를 들면, 본원에서 기재된 1 이상의 펩타이드와 함께 투여되는 희석제, 아쥬반트, 부형제, 보조제 또는 비히클을 의미한다. Pharmaceutically acceptable carriers may be approved by federal or state government agencies or U.S. Pharmacopoeia or animal, more specifically human, or other generally recognized pharmacopeia for use on animals, more specifically humans. "Carrier" means, for example, a diluent, adjuvant, excipient, adjuvant, or vehicle administered with one or more peptides described herein.

약제학적으로 허용가능한 담체는, 예를 들면, 조성물을 안정화시키거나 폴리-L-라이신의 흡수를 증가 또는 감소시키는 것으로 작용하는 1 이상의 생리적으로 허용가능한 화합물을 함유할 수 있다. 생리적으로 허용가능한 화합물은 하기를 포함할 수 있다: 예를 들면, 탄수화물, 예컨대 글루코오스, 수크로오스, 또는 덱스트란, 항산화제, 예컨대 아스코르브산 또는 글루타티온, 킬레이트제, 저분자량 단백질, 보호 및 흡수 인핸서 예컨대 지질, 펩타이드의 청소능 또는 가수분해를 감소시키는 화합물, 또는 다른 부형제, 안정제 및/또는 pH 조절 완충제일 수 있다. Pharmaceutically acceptable carriers may contain, for example, one or more physiologically acceptable compounds that act to stabilize the composition or increase or decrease the absorption of poly-L-lysine. Physiologically acceptable compounds may include: for example, carbohydrates such as glucose, sucrose, or dextran, antioxidants such as ascorbic acid or glutathione, chelating agents, low molecular weight proteins, protective and absorption enhancers such as lipids , A compound that reduces the scavenging ability or hydrolysis of the peptide, or other excipients, stabilizers and/or pH control buffers.

특히 정제, 캡슐, 겔 캡, 등의 제조에서 사용되는 다른 생리적으로 허용가능한 화합물은, 비제한적으로 결합제, 희석제/충전제, 붕해제, 윤활유, 및 현탁화제를 포함할 수 있다.Other physiologically acceptable compounds used in the manufacture of tablets, capsules, gel caps, etc. may include, but are not limited to, binders, diluents/fillers, disintegrants, lubricants, and suspending agents.

경구 복용 형태(예를 들면, 정제)를 제조하기 위해서 부형제, 임의의 붕해제, 결합제 및 임의의 윤활유 등이 폴리-L-라이신에 부가되고 수득한 조성물은 압축될 수 있다. 필요한 경우, 압축된 생성물은 맛을 차단하거나 장의 용해 또는 지속 방출을 위해 공지된 방법을 사용하여 코팅될 수 있다. Excipients, optional disintegrants, binders and optional lubricants, etc. are added to the poly-L-lysine and the resulting composition can be compressed to produce an oral dosage form (eg, tablets). If necessary, the compressed product can be coated using known methods for blocking taste or dissolving or sustained release of the intestine.

폴리-L-라이신과 제형화될 수 있는 다른 생리적으로 허용가능한 화합물은 미생물의 성장 또는 작용을 방지하는데 특히 유용한 습윤제, 유화제, 분산제 또는 보존제를 포함할 수 있다. 부형제는 멸균되고 오염물질이 없는 상태로 사용될 수 있다. Other physiologically acceptable compounds that can be formulated with poly-L-lysine can include wetting agents, emulsifying agents, dispersing agents or preservatives that are particularly useful for preventing the growth or action of microorganisms. Excipients can be used sterile and free of contaminants.

폴리-L-라이신은 화장품 용도를 위한 제형에 편입되어 국소로 도포될 수 있고 피부 크림 (예를 들면, 얼굴 크림) 또는 바디 로션, 주름-제거 크림으로서 제형될 수 있거나 화장품, 햇볕차단제, 또는 보습제에 편입될 수 있다.Poly-L-lysine can be incorporated topically and incorporated into formulations for cosmetic use and can be formulated as a skin cream (eg, face cream) or body lotion, wrinkle-removing cream, or as a cosmetic, sunscreen, or moisturizer Can be incorporated in.

또한 폴리-L-라이신은 충전제, 보습제, 비타민 (예를 들면, 비타민 E), 및/또는 착색제/염색약을 임의로 추가로 포함하는 제형에 편입될 수 있다.Poly-L-lysine can also be incorporated into formulations optionally further comprising fillers, moisturizers, vitamins (eg, vitamin E), and/or colorants/dyes.

적합한 주사가능 화장품 제형은 1 이상의 충전제 물질과 함께 폴리-L-라이신을 편입하는 제형을 비제한적으로 포함할 수 있다. 주사가능 화장품 주름 충전제로서 사용가능한 예시적인 물질은, 비제한적으로, 일시적 (흡수성) 충전제 예컨대 콜라겐 (예를 들면, 합성 콜라겐, 소 콜라겐, 돼지 콜라겐, 인간 콜라겐, 등), 히알루론산 겔, 칼슘 하이드록실인회석 (전형적으로 겔의 형태로 이식됨), 또는 폴리-L-락트산 (PLLA) 등을 포함할 수 있다. 펩타이드는 영구적 (비-흡수성) 충전제를 함유하는 주사가능 화장품 제형에 또한 편입될 수 있다. 예증적인 "영구적" 충전제는, 비제한적으로, 폴리메틸메타크릴레이트 비드 (PMMA 마이크로구형체)를 포함할 수 있다. Suitable injectable cosmetic formulations may include, but are not limited to, formulations incorporating poly-L-lysine with one or more filler materials. Exemplary materials usable as injectable cosmetic wrinkle fillers include, but are not limited to, temporary (absorbable) fillers such as collagen (e.g. synthetic collagen, bovine collagen, porcine collagen, human collagen, etc.), hyaluronic acid gels, calcium hydroxide Hydroxyapatite (typically implanted in the form of a gel), or poly-L-lactic acid (PLLA), and the like. Peptides can also be incorporated into injectable cosmetic formulations containing permanent (non-absorbable) fillers. Exemplary “permanent” fillers can include, but are not limited to, polymethylmethacrylate beads (PMMA microspheres).

폴리-L-라이신은 진피 충전제, 주사가능 등에 편입되거나 함께 투여될 수 있다: 그와 같은 주사가능 제형은 마취제 (예를 들면, 리도카인 또는 그것의 유사체)를 추가로 포함할 수 있다. 주사가능 제형은 실질적으로 멸균되거나 멸균되고/거나 피하 주사가능 충전제용 관리 기관 지침에 부합한다 Poly-L-lysine can be incorporated into or administered with dermal fillers, injectables, etc.: Such injectable formulations may further include an anesthetic (eg, lidocaine or an analog thereof). Injectable formulations are substantially sterile or sterile and/or comply with regulatory agency guidelines for subcutaneous injectable fillers

폴리-L-라이신은 당해기술에서 공지된 임의의 경로를 사용하여 대상체에게 투여될 수 있고, 그 경로는 예를 들면, 주사로 (예를 들면, 정맥내, 복강내, 피하, 근육내, 또는 진피내), 흡입, 경피 적용, 직장 투여, 질 투여, 또는 경구 투여를 포함한다. 바람직한 투여 경로는 피하, 경피, 또는 국소 적용을 포함한다.Poly-L-lysine can be administered to a subject using any route known in the art, the route being, for example, by injection (e.g., intravenous, intraperitoneal, subcutaneous, intramuscular, or Intradermal), inhalation, transdermal application, rectal administration, vaginal administration, or oral administration. Preferred routes of administration include subcutaneous, transdermal, or topical application.

효과적인 양의 폴리-L-라이신은 국소 (즉, 비-전신) 투여를 통해, 예컨대 말초 근육내, 선상내, 및 피하 투여를 비제한적으로 포함하는 말초 투여에 의해 투여될 수 있다. An effective amount of poly-L-lysine can be administered via topical (ie, non-systemic) administration, such as peripheral administration including, but not limited to, peripheral intramuscular, in-line, and subcutaneous administration.

폴리-L-라이신의 투여는 임의의 편리한 방식, 예를 들면, 주사로, 정맥내 및 동맥 스텐트 (용출 스텐트 포함), 카테터, 경구 투여, 흡입, 경피 적용, 직장 투여, 등일 수 있다. Administration of poly-L-lysine can be in any convenient way, for example, by injection, intravenous and arterial stent (including elution stent), catheter, oral administration, inhalation, transdermal application, rectal administration, and the like.

폴리-L-라이신은 투여 전에 예를 들면, 상기에서 기재된 바와 같이, 약제학적으로 허용가능한 담체와 함께 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용가능한 담체는 투여될 특정한 조성물에 의해서, 뿐만 아니라 조성물을 투여하기 위해 사용된 특정한 방법에 의해서 부분적으로 결정된다. Poly-L-lysine can be formulated with a pharmaceutically acceptable carrier prior to administration, eg, as described above. Pharmaceutically acceptable carriers are determined in part by the particular composition to be administered, as well as by the particular method used to administer the composition.

대상체에서 투여된 용량은, 본워에서 기재된 방법의 맥락에서, 경시적으로 상기 대상체에서 유익한 치료적 반응 (예를 들면, 증가된 피하 지방생성)에 영향을 미치기에 충분해야 한다. 용량은 이용된 특정한 비히클/전달 방법의 효능, 투여 부위, 투여 경로, 및 상기 대상체의 상태, 뿐만 아니라 치료될 대상체의 체중 또는 표면적에 의해 결정될 것이다. 용량의 크기는 또한, 특정한 대상체에서 특정한 펩타이드의 투여를 동반하는 임의의 부정적인 부작용의 존재, 본성, 및 정도에 의해 결정될 것이다.The dose administered in a subject should be sufficient to affect the beneficial therapeutic response (eg, increased subcutaneous adipogenesis) in the subject over time, in the context of the methods described herein. Dosage will be determined by the efficacy of the particular vehicle/delivery method employed, the site of administration, route of administration, and the condition of the subject, as well as the weight or surface area of the subject to be treated. The size of the dose will also be determined by the presence, nature, and extent of any negative side effects accompanying the administration of a specific peptide in a particular subject.

폴리-L-라이신은 당해분야의 숙련가에게 잘 알려진 표준 방법에 따라 전신으로(예를 들면, 경구로, 또는 주사제로서) 투여될 수 있다. 펩타이드는 로젠지, 에어로졸 스프레이, 구강청결제, 코팅된 면봉 등과 같은 다양한 형태로 구강에 투여될 수 있다. 다양한 구강, 및 설하 제형 역시 고려될 수 있다. 폴리-L-라이신은 일정 기간에 걸쳐 치료를 제공하기 위해 주사제로서 제형화될 때 데포(depot) 제형으로 투여될 수 있다.Poly-L-lysine can be administered systemically (eg, orally, or as an injection) according to standard methods well known to those skilled in the art. Peptides can be administered to the oral cavity in various forms, such as lozenges, aerosol sprays, mouthwashes, coated cotton swabs, and the like. Various oral, and sublingual formulations are also contemplated. Poly-L-lysine can be administered in a depot formulation when formulated as an injection to provide treatment over a period of time.

폴리-L-라이신은 예를 들면, 피부 표면에, 국소 병변 또는 창상에, 수술 부위 등에 국소로 투여될 수 있다.Poly-L-lysine can be administered topically, for example, to the skin surface, to local lesions or wounds, to surgical sites, and the like.

폴리-L-라이신은 종래의 경피 약물 전달 시스템, 즉, 경피 "패치"를 이용하여 피부를 통해 전달될 수 있고, 폴리-L-라이신은 전형적으로 피부에 부착될 약물 전달 장치로서 제공되는 적층된 구조 내에 함유될 수 있다. Poly-L-lysine can be delivered through the skin using a conventional transdermal drug delivery system, i.e., a transdermal "patch," and poly-L-lysine is typically deposited as a drug delivery device to be attached to the skin. It may be contained in the structure.

국소 전달을 위한 다른 제형은, 비제한적으로, 연고, 겔, 스프레이, 유체, 및 크림을 포함한다. 연고는 전형적으로 바셀린 또는 다른 석유 유도체에 기초한 반고형 조제물일 수 있다. 다른 담체 또는 비히클과 마찬가지로, 연고 기제는 불활성이고, 안정하고, 무자극이고 비감작이어야 한다. 선택된 폴리-L-라이신을 함유하는 크림은 전형적으로 점성 액체 또는 반고체 에멀젼, 종종 수중유 또는 유중수일 수 있다. 크림 기제는 전형적으로 수세척성이고, 오일상, 유화제 및 수성상을 함유한다. 사용될 특정 연고 또는 크림 기제는, 당해분야의 숙련가에게 의해 인정될 바와 같이, 최적의 약물 전달을 위해 제공될 기제이다. Other formulations for topical delivery include, but are not limited to, ointments, gels, sprays, fluids, and creams. The ointment can be a semi-solid preparation, typically based on petrolatum or other petroleum derivatives. As with other carriers or vehicles, the ointment base should be inert, stable, non-irritating and non-sensitizing. Creams containing the selected poly-L-lysine may typically be a viscous liquid or semi-solid emulsion, often oil-in-water or water-in-oil. Cream bases are typically water washable and contain an oil phase, an emulsifier and an aqueous phase. The specific ointment or cream base to be used is one that will be provided for optimal drug delivery, as will be appreciated by those skilled in the art.

폴리-L-라이신은 희석을 위해 준비된 저장 용기(예를 들면, 미리측정된 부피로), 또는 다량의 물, 알코올, 과산화수소, 또는 다른 희석제에의 첨가를 위해 준비된 가용성 캡슐 내에, "농축물"로서 제공될 수 있다. 예를 들면, 상기 펩타이드는 추후 재구성을 위해 동결건조될 수 있다. Poly-L-lysine is a "concentrate" in a storage container prepared for dilution (eg, in a pre-determined volume), or in a soluble capsule prepared for addition to large amounts of water, alcohol, hydrogen peroxide, or other diluents. It can be provided as. For example, the peptide can be lyophilized for later reconstitution.

폴리-L-라이신은 다양한 용도를 가질 수 있다. 폴리-L-라이신은 많은 적용에서 용도를 가질 수 있다. 예를 들면, 피하 지방은 피부에 풍만함과 견고함을 제공하므로, 피하 지방의 형성을 향상시키는 것은 성형수술 절차에서 용도를 갖는다. 노화하는 피부는 적은 피하 지방을 함유한다. 따라서 본원에서 기재된 하나 이상의 폴리-L-라이신을 원하는 부위에 투여하여 피하 지방 형성을 촉진하는 것은 더 풍만하고 더 어려보이는 피부를 야기할 수 있다. 이 접근법은 종종 낮은 성공률을 나타내는 과정인, 신체의 다른 부위(예를 들면, 허벅지 또는 엉덩이)로부터 지방세포를 이식하는 현재의 방법을 대체할 수 있다.Poly-L-lysine can have a variety of uses. Poly-L-lysine can find use in many applications. For example, subcutaneous fat gives the skin fullness and firmness, so improving the formation of subcutaneous fat has use in plastic surgery procedures. Aging skin contains less subcutaneous fat. Thus, promoting subcutaneous fat formation by administering one or more of the poly-L-lysines described herein to a desired site can result in skin that is fuller and looks younger. This approach can replace current methods of transplanting adipocytes from other parts of the body (eg, thighs or hips), a process that often results in low success rates.

폴리-L-라이신은 피하 지방 조직을 선택적으로 향상시키기 위해(예를 들면, 내장 지방 및/또는 다른 지방 조직을 실질적으로 증가시키지 않으면서 피하 지방 조직을 향상시키기 위해) 투여될 수 있다. 폴리-L-라이신의 투여에 반응하여, 지방세포 형성이 진피 섬유아세포에서 일어나고, 대상에서 선택된 피하 부위 안에서 부피가 추가될 수 있다. Poly-L-lysine can be administered to selectively enhance subcutaneous adipose tissue (eg, to improve subcutaneous adipose tissue without substantially increasing visceral fat and/or other adipose tissue). In response to administration of poly-L-lysine, adipocyte formation occurs in dermal fibroblasts, and volume can be added within the subcutaneous site selected in the subject.

폴리-L-라이신은 흉터를 줄이는데 사용될 수 있다. 이것은 하나 이상의 폴리-L-라이신을 흉터 부위를 줄이고/거나 흉터 부위의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 흉터는, 예를 들면, 화상에 의해 생성된 흉터, 수술에 의해 생성된 흉터, 여드름에 의해 생성된 흉터, 생검에 의해 생성된 흉터, 또는 부상으로 생긴 흉터일 수 있다.Poly-L-lysine can be used to reduce scarring. This can be achieved by administering one or more poly-L-lysine in an amount sufficient to reduce the scar area and/or improve the appearance of the scar area. The scar may be, for example, a scar produced by burns, a scar produced by surgery, a scar produced by acne, a scar produced by biopsy, or an injury scar.

폴리-L-라이신은 예를 들면, 피부의 외관을 개선하기 위해, 다양한 화장 과정에서 사용될 수 있다. 이것은 하나 이상의 펩타이드를 대상의 부위에 피부의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 그러한 투여는 입술, 눈꺼풀, 뺨, 이마, 턱, 목 등과 같은 영역에의 피하 투여를 포함할 수 있다. 상기 펩타이드는 주름을 줄이고, 처지는 피부를 줄이고, 피부의 표면 질감을 개선하고, 주름을 줄이거나, 제거하거나, 메우고, 노인 반점을 제거하거나 줄이고, 및/또는 눈 아래의 다크써클을 제거하는 이들 방법 등에 사용될 수 있다. 이들 화장 적용은 예시적이며 제한하고자 하는 것이 아니다. Poly-L-lysine can be used in various cosmetic processes, for example, to improve the appearance of the skin. This can be achieved by administering one or more peptides to a site of the subject in an amount sufficient to improve the appearance of the skin. Such administration may include subcutaneous administration to areas such as lips, eyelids, cheeks, forehead, chin, neck, and the like. These peptides reduce wrinkles, reduce sagging skin, improve the surface texture of the skin, reduce or eliminate wrinkles, fill, remove or reduce age spots, and/or remove dark circles under the eyes. Etc. These cosmetic applications are exemplary and not intended to be limiting.

폴리-L-라이신은 대상의 부위에서 조직 부피를 개선하는데 사용될 수 있다. 이것은 본원에 기재된 하나 이상의 펩타이드를 대상의 부위에서 조직 부피를 증가시키는데 충분한 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 예를 들면, 조직 부피의 증가는 유방 조직을 견고하게 하거나 증대시키는 것 및/또는 엉덩이 조직 또는 신체 또는 얼굴의 다른 부위를 견고하게 하거나 증대시키는 것을 포함할 수 있다.Poly-L-lysine can be used to improve tissue volume at the site of the subject. This can be accomplished by administering one or more of the peptides described herein in an amount sufficient to increase tissue volume at the site of the subject. For example, an increase in tissue volume may include firming or augmenting breast tissue and/or firming or augmenting hip tissue or other parts of the body or face.

폴리-L-라이신은 또한 대상의 부위 내의 피부를 부드럽게 하는데 사용될 수 있다. 이것은 본원에 기재된 하나 이상의 펩타이드를 원하는 부위에서 피부를 부드럽게 하는데 충분한 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 상기 부드럽게 하는 것은 여드름에 의해 흉터난 피부를 부드럽게 하는 것, 셀룰라이트의 부위를 부드럽게 하는 것, 임신선을 부드럽게 하거나 줄이는 것, 및/또는 주름을 펴는 것을 포함할 수 있다.Poly-L-lysine can also be used to soften the skin within the subject's area. This can be achieved by administering one or more of the peptides described herein in an amount sufficient to soften the skin at the desired site. The softening may include softening the skin scarred by acne, softening the area of cellulite, softening or reducing the pregnancy line, and/or straightening wrinkles.

폴리-L-라이신은 대상에서 줄기세포를 피하 지방의 형성으로 동원하는데 사용될 수 있다. 이것은 폴리-L-라이신을 줄기세포를 피하 지방의 형성으로 동원하는데 충분한 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 이는, 예를 들면, 다양한 재건 수술 과정 등에서 유용성을 갖는다.Poly-L-lysine can be used to mobilize stem cells into the formation of subcutaneous fat in a subject. This can be achieved by administering poly-L-lysine in an amount sufficient to mobilize the stem cells into the formation of subcutaneous fat. It has utility in, for example, various reconstructive surgical procedures.

폴리-L-라이신은 대상에서 조직을 재건하는데 사용될 수 있다. 그러한 재건은, 예를 들면, 유방재건(예를 들면 종양을 제거하는 수술 후), 또는 얼굴 또는 팔다리 재건(예를 들면 자동차 사고 또는 화상 후)을 포함할 수 있다. 이것은 폴리-L-라이신을 조직 재건 과정 동안 또는 이후에 조직의 부피를 증가시키는 양으로 투여함으로써 달성될 수 있다. 폴리-L-라이신은 조직 이식 물질 또는 피부 또는 부상된 조직의 치유를 향상시키는 다른 절차와 함께 임의로 사용될 수 있다.Poly-L-lysine can be used to reconstruct tissue in subjects. Such reconstruction may include, for example, breast reconstruction (eg, after surgery to remove the tumor), or facial or limb reconstruction (eg, after an automobile accident or burn). This can be achieved by administering poly-L-lysine in an amount that increases the volume of the tissue during or after the tissue reconstruction process. Poly-L-lysine can optionally be used in combination with a tissue transplant material or other procedure that enhances the healing of skin or injured tissue.

폴리-L-라이신은 걸을 때 상기 대상에 의해 경험되는 뒷꿈치 통증을 감소시키는데 충분한 양으로 투여함으로써 대상에서 뒷꿈치 통증을 감소시키는데 사용될 수 있다.Poly-L-lysine can be used to reduce heel pain in a subject by walking in an amount sufficient to reduce the heel pain experienced by the subject when walking.

폴리-L-라이신은 체온조절을 증가시키고/거나 면역 기능을 개선하기 위해 피하 지방의 확대를 위해 투여될 수 있다. 대상은 질환을 예방하거나, 비제한적으로 심혈관 질환을 포함하는 증가된 장기 지방과 연관된 진행중인 질환, 및 다른 비만 연관된 질환을 치료하기 위해 폴리-L-라이신으로 처리될 수 있다.Poly-L-lysine can be administered for the expansion of subcutaneous fat to increase thermoregulation and/or improve immune function. Subjects can be treated with poly-L-lysine to prevent disease, or to treat ongoing disease associated with increased organ fat, including but not limited to cardiovascular disease, and other obesity related diseases.

이들 방법 중 어느 것에서의 투여는 국소 또는 전신일 수 있고, 본원에 기재된 임의의 경로, 예컨대 국소, 피하, 경피, 경구, 코, 질, 및/또는 직장 투여에 의할 수 있다. 바람직하게는, 폴리-L-라이신은 피하 주사에 의해 투여될 수 있다. 대안적으로, 상기 폴리-L-라이신은 얼굴 크림과 같은 피부 크림의 형태로 국소 투여되거나, 또는 경피 패치를 통해 경피로 투여될 수 있다. Administration in any of these methods can be local or systemic and can be by any route described herein, such as topical, subcutaneous, transdermal, oral, nasal, vaginal, and/or rectal administration. Preferably, the poly-L-lysine can be administered by subcutaneous injection. Alternatively, the poly-L-lysine may be administered topically in the form of a skin cream such as a face cream, or transdermally via a transdermal patch.

상기 용도 및 방법이 인간에서의 용도와 관련하여 기재되어 있음에도 불구하고, 이들은 또한 동물, 예를 들면, 수의적 용도에 적합하다. 따라서 어떤 바람직한 유기체는, 비제한적으로 인간, 비-인간 영장류, 개과, 말, 고양이, 돼지, 유제류, 토끼류 등을 포함한다.Although the above uses and methods have been described in relation to their use in humans, they are also suitable for animals, for example veterinary uses. Thus, certain preferred organisms include, but are not limited to, human, non-human primates, canines, horses, cats, pigs, ungulates, rabbits, and the like.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실험예들을 제시하나, 하기 실험예들은 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred experimental examples are provided to help understanding of the present invention, but the following experimental examples are only illustrative of the present invention and the scope of the present invention is not limited to the following examples.

세포배양 및 폴리-L-라이신(PLL) 처리Cell culture and poly-L-lysine (PLL) treatment

3T3L1 지방전구세포는 10% 소 혈청(bovine serum), 1% 페니실린/스트렙토마이신(penicillin/streptomycin)을 포함한 DEME(Dulbecco's modified Eagle's medium)을 사용하여 37도, 5 % CO2 환경에서 배양하였다. 세포가 가득 찬 후 2일간 추가 배양한 후에 지방세포분화배지로 교환함으로써 지방세포분화를 유도하였다. 지방세포분화는 3가지 종류의 배지를 순차적으로 교환함으로써 유도되었다. 처음으로 10% 태아 소 혈정(FBS) DMEM에 0.5 uM 3-이소부틸-1-메틸잔티(isobutyl-1-methylxanthine, IBMX), 0.25 uM 덱사메타손(dexamethasone), 5 ug/ml 인슐린을 첨가한 배지에서 2일간 배양하였다. 그 후에 10 % FBS과 1 ug/ml 인슐린을 포함한 DMEM으로 교환하여 2일간 배양하였고, 이후 4일간 10% FBS를 포함한 DMEM에서 배양하였다. Poly-L-라이신을 각각의 지방세포분화 배지에 첨가하여 세포에 처리하였다.3T3L1 adipocytes were cultured in a 37 degree, 5% CO2 environment using DEME (Dulbecco's modified Eagle's medium) containing 10% bovine serum and 1% penicillin/streptomycin. After incubation for 2 days after the cells were full, adipocyte differentiation was induced by exchanging with adipocyte differentiation medium. Adipose cell differentiation was induced by sequentially exchanging three types of media. For the first time in 10% fetal bovine serum (FBS) DMEM, 0.5 uM 3-isobutyl-1-methylxanthine (IBMX), 0.25 uM dexamethasone, 5 ug/ml insulin Cultured for 2 days. After that, the cells were cultured for 2 days by exchanging with 10% FBS and DMEM containing 1 ug/ml insulin, and then cultured in DMEM containing 10% FBS for 4 days. Poly-L-lysine was added to each adipocyte differentiation medium to treat the cells.

오일 레드 O 염색Oil Red O Dye

세포는 PBS를 사용하여 워싱한 후, 3.5 % 포름알데하이드를 10분간 처리하여 고정하였다. PBS로 워싱 후에 60% 이소프로판올에 1.5 % Oil red O 용액을 1시간 처리하였다. PBS로 워싱후에 건조시킨 후 관찰하였다.The cells were washed with PBS and then fixed by treatment with 3.5% formaldehyde for 10 minutes. After washing with PBS, a 1.5% Oil red O solution was treated with 60% isopropanol for 1 hour. After washing with PBS, it was observed after drying.

결과result

지방세포분화능 증진 효과Fat cell differentiation effect

실험 결과로부터 분자량 5,000이상인 Poly-L-라이신이 지방세포분화능 증진 효과를 가짐을 알 수 있었다. 3T3L1 지방전구세포를 지방세포로 분화유도과정 중, 지방세포분화 배지에 각기 다른 분자량(MW)을 갖는 폴리-L-라이신(PLL)을 농도별로 함께 처리하였다. 오일 레드 O 염색법을 사용한 세포 내 지방축적량을 관찰함으로써 지방세포분화를 비교하였다. 도 1에 예시되어 있는 바와 같이, MW 1,000 - 5,000 폴리-L-라이신 처리에 의해서는 세포 내 지방축적량 증가효과가 관찰되지 않은 반면, MW 5,000 이상의 PLL에서 PLL 농도의존적으로 세포 내 지방축적량 증가를 확인하였다. From the experimental results, it was found that Poly-L-lysine having a molecular weight of 5,000 or more has an effect of enhancing adipocyte differentiation. During the differentiation induction process of 3T3L1 adipocytes into adipocytes, adipocyte differentiation medium was treated with poly-L-lysine (PLL) having different molecular weights (MW) by concentration. Adipose cell differentiation was compared by observing the amount of fat accumulation in the cells using the Oil Red O staining method. As illustrated in FIG. 1, the effect of increasing the amount of fat accumulation in the cells was not observed by treatment with MW 1,000-5,000 poly-L-lysine, whereas the increase of the amount of fat accumulation in the cells was dependent on the concentration of PLL in PLL of MW 5,000 or more Did.

다음으로, 지방세포분화에 의해 발현이 증가하는 인자들로써, PPARg, C/EBPa, 아디포넥틴(adiponectin), FABP4의 수준을 확인해 보았다. 도 2 및 도 3에 도시되어 있는 바와 같이, MW 1,000 - 5,000 폴리-L-라이신을 처리한 실험군에서 이 인자들의 수준은 폴리-L-라이신을 처리하지 않은 실험군과 유사하였으나, 고분자량의 폴리-L-라이신 처리군에서 이 인자들의 수준이 증가함을 확인하였다. 또한, 분화증진 효과는 MW 30,000 - 70,000 폴리-L-라이신 처리군에서 더 좋은 경향이 관찰되었다. 이 결과들을 통해서 MW 5,000 이상 150,000 이하의 폴리-L-라이신 처리에 의해 지방세포분화가 증가함을 확인하였다.Next, as factors that increase expression by adipocyte differentiation, the levels of PPARg, C/EBPa, adiponectin, and FABP4 were confirmed. 2 and 3, in the experimental group treated with MW 1,000-5,000 poly-L-lysine, the level of these factors was similar to the experimental group not treated with poly-L-lysine, but high molecular weight poly- It was confirmed that the level of these factors increased in the L-lysine treatment group. In addition, a better tendency of differentiation promoting effect was observed in the MW 30,000-70,000 poly-L-lysine treatment group. Through these results, it was confirmed that adipocyte differentiation was increased by poly-L-lysine treatment of MW 5,000 or more and 150,000 or less.

인슐린 신호전달계를 활성화 효과Effect of activating insulin signaling system

기존에 분화증진 효과가 보고된 KSEVSK와 비교하여 폴리-L-라이신의 분화증진 효과를 비교하였다. 이 실험을 위해 지방세포분화유도 배지에 MW 30,000 - 70,000 PLL 또는 KSEVSK를 추가한 배지를 사용하여 지방세포분화를 유도하였다. Compared to KSEVSK, which has been reported to have a differentiation-enhancing effect, the differentiation-enhancing effect of poly-L-lysine was compared. For this experiment, adipocyte differentiation was induced using a medium in which MW 30,000-70,000 PLL or KSEVSK was added to adipocyte differentiation-inducing medium.

도 4에 도시되어 있는 바와 같이, KSEVSK 처리에 의한 중성지방축적량 증가는 관찰되지 않은 반면, 폴리-L-라이신 처리군에서는 세포내 중성지방 축적량이 증가함을 확인하였다. 다음으로 인슐린을 넣지 않은 지방세포분화유도 배지에 폴리-L-라이신 또는 KSEVSK를 추가하여 분화를 유도하였다. 지방세포분화 유도 배지 성분 중 인슐린을 뺀 경우와 인슐린 대신 KSEVSK을 추가한 배지를 사용한 경우 세포내 중성지방축적이 거의 일어나지 않았다. 이와 달리, 지방세포분화 유도 배지 성분 중 인슐린을 빼고 폴리-L-라이신을 추가한 배지를 사용한 경우 중성지방 축적량이 증가함이 관찰되었고, 이를 통해 지방세포분화가 유도되었음을 확인하였다. As shown in Figure 4, while the increase in triglyceride accumulation by KSEVSK treatment was not observed, in the poly-L-lysine treatment group, it was confirmed that the intracellular triglyceride accumulation increased. Next, differentiation was induced by adding poly-L-lysine or KSEVSK to the adipocyte differentiation-inducing medium without insulin. In the case of subtracting insulin from the components of the adipocyte differentiation-inducing medium and using medium in which KSEVSK was added instead of insulin, intracellular triglyceride accumulation hardly occurred. On the other hand, in the case of using media in which adipocyte differentiation-inducing medium component was subtracted from insulin and added poly-L-lysine, it was observed that the amount of triglyceride accumulation increased, and it was confirmed that adipocyte differentiation was induced.

인슐린이 없는 지방세포분화 유도배지에 PLL이 추가되었을 때 지방세포분화가 진행되었기 때문에, 폴리-L-라이신이 인슐린처럼 인슐린 신호전달계를 자극할 수 있는지 여부를 확인하였다. 3T3L1 지방전구세포를 사용하여 인슐린 신호전달계에 속하는 pAKT 수준을 확인하였다. 도 5에 예시되어 있는 바와 같이, 인슐린에 의한 pAKT 유도 수준보다는 낮지만, 폴리-L-라이신 처리에 의해 pAKT가 유도됨을 확인함으로써 인슐린 신호전달계를 자극함을 확인하였다. 하지만, 인슐린과 폴리-L-라이신을 함께 처리하였을 때 pAKT 수준의 추가적인 증가는 관찰되지 않았다. 폴리-L-라이신에 의한 지방세포분화 증진 효과가 인슐린 신호전달계 자극에 의한 것인지 여부를 확인하기 위해서, 폴리-L-라이신이 처리 군과 인슐린 농도에 따른 지방세포분화를 비교하였다. 지방세포분화 유도과정에서 분화 day 0 -2 에는 인슐린 5ug/ml, day 3-4 에는 인슐린 1ug/ml, day 5 - 8 동안에는 인슐린을 넣지 않는 방법으로 지방세포분화를 유도하였다. Since adipocyte differentiation progressed when PLL was added to the adipocyte-free adipocyte differentiation induction medium, it was confirmed whether poly-L-lysine can stimulate the insulin signaling system like insulin. 3T3L1 adipocytes were used to determine the level of pAKT belonging to the insulin signaling system. As illustrated in FIG. 5, it was confirmed that it stimulates the insulin signaling system by confirming that pAKT is induced by poly-L-lysine treatment, although it is lower than the level of pAKT induction by insulin. However, no further increase in pAKT levels was observed when insulin and poly-L-lysine were treated together. In order to confirm whether the effect of promoting adipocyte differentiation by poly-L-lysine is due to stimulation of the insulin signaling system, adipocyte differentiation according to insulin concentration and the treatment group of poly-L-lysine was compared. In the process of inducing differentiation of adipocytes, adipocyte differentiation was induced by not adding insulin during the differentiation day 0-2, insulin 5ug/ml, day 3-4, insulin 1ug/ml, and day 5-8.

기존 지방세포분화 방법과 달리, 지방세포분화유도 과정 동안 (day0 - day8) 다양한 인슐린 농도를 지속적으로 처리함으로써 지방세포분화 수준 변화를 관찰하였다. 도 6에 도시되어 있는 바와 같이, 인슐린 500 ug/ml을 지속적으로 처리한 군을 제외하고, 지속적인 높은 농도 (5 ug/ml ~ 100 ug/ml)의 인슐린 처리에 의해 세포 내 중성지방축적량 증가를 확인할 수 있었다. 하지만, 폴리-L-라이신에 의한 중성지방축적 수준까지 증가시키지 못함을 통하여, 폴리-L-라이신에 의한 지방세포분화 증진 기전에는 인슐린 신호전달계 자극 외의 다른 경로 및 기능이 존재함을 확인할 수 있었다. Unlike the existing adipocyte differentiation method, adipocyte differentiation level changes were observed by continuously processing various insulin concentrations during the adipocyte differentiation induction process (day0-day8). As shown in Figure 6, except for the group that was continuously treated with insulin 500 ug/ml, increasing the amount of triglyceride in the cell by continuous high concentration (5 ug/ml ~ 100 ug/ml) insulin treatment I could confirm. However, through the failure to increase the level of triglyceride accumulation by poly-L-lysine, it was confirmed that there are other pathways and functions other than stimulation of insulin signaling system in the mechanism of promoting adipocyte differentiation by poly-L-lysine.

지방세포분화 과정 중, 폴리-L-라이신이 지방세포 분화에 관여하는 주된 기간을 확인하기 위하여, PLL 처리 기간을 다르게 하여 세포내 중성지방축적량을 확인해 보았다. 도 7에 도시되어 있는 바와 같이 day 2-8 동안 폴리-L-라이신을 처리하였을 때 지방분화증진 효과가 거의 관찰되지 않은 반면 day 0-2 동안 폴리-L-라이신을 처리한 결과 세포내 중성지방축적량이 증가함을 통하여, day 0-2 가 폴리-L-라이신의 주요 작용 기간임을 확인할 수 있었다.During the adipocyte differentiation process, in order to confirm the main period during which poly-L-lysine is involved in adipocyte differentiation, the amount of triglyceride accumulation in the cells was determined by varying the PLL treatment period. As shown in FIG. 7, when poly-L-lysine was treated for 2-8 days, the effect of adipogenesis was hardly observed, whereas poly-L-lysine treatment for day 0-2 resulted in intracellular triglyceride. Through the increase in the accumulation amount, it was confirmed that day 0-2 is the main action period of poly-L-lysine.

상처 치유능 시험Wound healing ability test

인간 피부 각질 형성 세포주인 HaCaT (Human Keratinocyte) 세포에서 세포 이동성 시험(Cell migration assay)를 실시하였다. 이동성은 IncuCyte®Bioscience)을 이용하여 측정하였다. MW 30,000 - 70,000의 폴리-L-라이신을 사용하여 이동성을 측정하였으며 그 결과가 도 8에 도시되어 있다. 도 8의 결과로부터 폴리-L-라이신의 농도 50, 150, 500ng/ml에서 세포이동능력(cell migration potency)가 증가하였을 알 수 있다. 25시간 처리 조건에서 대조군(control) 대비 약 10%가 증가하였음을 알 수 있다. 또한 12시간 처리 조건의 결과로부터 폴리-L-라이신의 농도가 50ng/ml 및 150ng/ml일 경우 500ng/ml일 경우보다 높은 세포이동능력을 나타내는 것을 알 수 있었다. 한편, 1500ng/ml 이상의 농도에서는 세포이동능의 억제가 관찰되는 것을 확인할 수 있었다. 이로부터 폴리-L-라이신이 지방분화증진 효과가 있을 뿐만 아니라 상처치유능(wound healing potency)도 있음을 확인할 수 있다. Cell migration assay was performed in human skin keratinocyte cell line HaCaT (Human Keratinocyte) cells. Mobility was measured using IncuCyte® Bioscience. Mobility was measured using MW 30,000-70,000 poly-L-lysine and the results are shown in FIG. 8. It can be seen from the results of FIG. 8 that cell migration potency was increased at concentrations of 50, 150, and 500 ng/ml of poly-L-lysine. It can be seen that in the 25 hour treatment condition, about 10% increased compared to the control. In addition, it was found from the results of the 12-hour treatment conditions that the concentrations of poly-L-lysine showed higher cell migration capacity than those of 500 ng/ml at 50 ng/ml and 150 ng/ml. On the other hand, it was confirmed that inhibition of cell migration was observed at a concentration of 1500 ng/ml or more. From this, it can be confirmed that poly-L-lysine not only has an effect of promoting fat differentiation, but also has a wound healing potency.

상기에서는 실험예에 대하여 설명하였지만, 권리범위는 이에 의해 한정되는 것이 아니다. 구현되는 형태는 발명의 상세한 설명 및 첨부한 도면의 범위 안에서 여러 가지로 변형하여 실시하는 것이 가능하고 이 또한 권리 범위에 속하는 것은 당연하다. Although the experimental examples have been described above, the scope of rights is not limited thereby. The embodied form can be implemented in various ways within the scope of the detailed description of the invention and the accompanying drawings, and it is natural that this also belongs to the scope of rights.

Claims (7)

피하 지방생성을 자극하거나 상처를 치유하기 위한 분자량 5,000 이상 150,000 이하인 폴리-L-라이신; 및
약제학적으로 또는 화장용으로 허용가능한 담체를 포함하는 조성물.
Poly-L-lysine having a molecular weight of 5,000 or more and 150,000 or less for stimulating subcutaneous adipogenesis or healing wounds; And
A composition comprising a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier.
제1 항에 있어서,
상기 폴리-L-라이신의 분자량은 30,000 이상 70,000 이하인 조성물.
According to claim 1,
The poly-L-lysine has a molecular weight of 30,000 or more and 70,000 or less.
제1 항에 있어서,
상기 조성물은 국소, 피하 또는 경피 투여용인 조성물.
According to claim 1,
The composition is for topical, subcutaneous or transdermal administration.
제1 항에 있어서,
상기 조성물은 주사용인 조성물.
According to claim 1,
The composition is for injection.
제1 항에 있어서,
상기 조성물은 콜라겐, 콜라겐 유도체, 하이알루론산 또는 하이알루론산 유도체를 더 포함하는 조성물.
According to claim 1,
The composition further comprises collagen, collagen derivatives, hyaluronic acid or hyaluronic acid derivatives.
제1 항에 있어서,
상기 조성물은 피부 크림인 조성물.
According to claim 1,
The composition is a skin cream composition.
제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 조성물을 대상체에게 흉터의 체표를 감소시키거나 흉터있는 체표의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 흉터를 감소시키거나,
상기 조성물을 대상체에게 대상체의 체표에서 피부의 외관을 개선하는데 충분한 양으로 투여하는 것을 포함하는, 피부의 외관을 개선하거나,
상기 조성물이 주름을 줄이고, 제거하거나 메우고, 처지는 피부를 감소시키고, 피부의 표면 질감을 개선하고, 노인 반점을 제거하거나 줄게 하거나, 또는 눈 아래의 다크써클을 줄이거나 제거하도록 하거나,
상기 조성물을 대상체에게 체표의 조직 용적을 증가시키는데 충분 충분한 양으로 투여하는 것을 포함하는 방법.
The method according to any one of claims 1 to 6,
Reducing the scar, comprising administering to the subject an amount sufficient to reduce the body surface of the scar or improve the appearance of the scared body surface,
Improving the appearance of the skin, comprising administering the composition to the subject in an amount sufficient to improve the appearance of the skin in the subject's body surface, or
The composition reduces wrinkles, removes or fills, reduces sagging skin, improves the skin's surface texture, removes or reduces age spots, or reduces or eliminates dark circles under the eyes,
A method comprising administering said composition to a subject in an amount sufficient to increase the tissue volume of the body surface.
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