KR20200052305A - 항체 변이체 - Google Patents

항체 변이체 Download PDF

Info

Publication number
KR20200052305A
KR20200052305A KR1020207008389A KR20207008389A KR20200052305A KR 20200052305 A KR20200052305 A KR 20200052305A KR 1020207008389 A KR1020207008389 A KR 1020207008389A KR 20207008389 A KR20207008389 A KR 20207008389A KR 20200052305 A KR20200052305 A KR 20200052305A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
antibody
val
gly
leu
Prior art date
Application number
KR1020207008389A
Other languages
English (en)
Inventor
에스더 마리아 퍼레르
Original Assignee
틸로츠 파마 아게
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 틸로츠 파마 아게 filed Critical 틸로츠 파마 아게
Publication of KR20200052305A publication Critical patent/KR20200052305A/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/72—Increased effector function due to an Fc-modification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 TNFα에 결합하고, 변형된 Fc 영역을 포함하는 항체에 관한 것이다. 본 발명의 항체는 단백질 가수분해성 분해에 대하여 개선된 저항성, 및 우수한 이펙터 기능 및/또는 약동학적 특성을 갖는다.

Description

항체 변이체
본 발명의 분야
본 발명은 단백질 가수분해성 분해(proteolytic degradation)에 대하여 개선된 저항성, 및 변경된 이펙터 기능 및/또는 약동학적 특성을 갖는 변형된 항체에 관한 것이다. 항체는 각종 장애, 특히, 염증성 병태의 치료적 처치에서 유용하다.
배경
모노클로날 항체는 지난 20년 동안에 걸쳐 임상 의학에서 치료적 시약으로서 계속해서 그 중요성이 증가하여 왔다. 수년 동안, 항체를 개선시키기 위한 노력은 그의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 데 집중되었고, 이로써 인간화 항체 또는 심지어는 완전한 인간 항체를 얻게 되었다. 또 다른 접근법은 항체를 그의 이펙터 기능을 개선시킴으로써 최적화시키는 것을 목표로 한다. 직접적인 효과는 항체의 가변 항원 결합 영역에 의해 매개되는 반면, 간접적인 효과는 불변 Fc 영역에 의해 매개된다. 이펙터 기능을 개선시키기 위한 노력은 주로 Fc 영역을 조정하는 데 집중된다. 추가로, 치료 항체의 혈청 반감기를 개선시키는 것이 바람직한데, 이는 필요한 항체의 양을 감소시킬 수 있고, 치료 간격을 연장시킴으로써 그의 환자에 대한 편의를 증가시킬 수 있다.
치료적으로 적용하는 경우, 면역글로불린 G (IgG)는 여러 이유에서 선택된 바람직한 부류가 되고 있다; IgG는 정제가 용이하고, 보관시 비교적 안정적이고, 정맥내로 투여될 수 있고, 생체내에서 연장된 생물학적 반감기를 갖고, 예컨대, 보체 의존성 세포독성 (CDC) 활성화 및 다양한 Fc 수용체 상호작용 (항체 의존성 세포 세포독성: ADCC)을 통한 이펙터 세포의 동원과 같은, 다양한 생물학적 이펙터 기능을 이용할 수 있다. 5개의 면역글로불린 부류 중 IgG가 신생아 Fc 수용체 (FcRn)인 IgG 재순환 수용체와의 그의 고유한 상호작용에 기인하여 가장 긴 생물학적 반감기를 나타낸다. 수용체의 공지된 기능 중 하나는 촉매적 분해로부터 IgG를 구제하는 것이다. FcRn-Fc 공결정 구조 해석 결과, Fc와의 상호작용은 IgG 힌지-CH2-CH3 영역에서 발생하는 것으로 나타났다. 이러한 상호작용은 엔도솜 내의 산성 pH 6.0-6.5에서 엄격하게 pH에 의존하는 방식으로 일어난다. 결합된 IgG 분자는 세포 표면으로 다시 재순환되고, 거기서 상기 분자는 생리적 pH 7.4에서 순환으로 유리되는 반면, 복합체를 형성하지 않은 IgG 분자는 리소좀에 의해 분해되게 된다. 이러한 재순환이 IgG의 반감기 연장에 대한 기전이며; 그러므로, FcRn-IgG 상호작용을 조정하면, 감마 면역글로불린 및 Fc-융합 단백질의 혈청 반감기를 특이적으로 제어할 수 있게 될 것이다.
적용에 따라, IgG가 혈청에 존재하는 체류 시간을 연장 또는 단축시키는 것이 바람직할 수 있다. 치료적으로 적용하는 경우, 더 작은 소량 및 더 적은 회수의 주사가 요구될 수 있기 때문에, 반감기는 더욱 긴 것이 바람직하다. 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 사용, 알부민- 또는 Fc-융합 단백질 생성, 및 FcRn-IgG 상호작용 강화를 비롯한, 반감기를 연장시키는 여러 접근법이 연구되어 왔다. 1990년 이래로 PEG화된 제약이 진료소에 있고, PEG화는 혈중 약물의 체류 연장을 위한 확립된 기술이다. 인간 혈청 알부민 (HSA) 또한 pH 의존성 상호작용을 통해 FcRn에 의해 재순환되기 때문에, 안정성 및 반감기를 증진시키는 수개의 알부민-융합 단백질 또한 제조되어 왔다. 추가로, 알부민 또는 알부민 결합 도메인에 융합된 항체 단편이 임상전 연구에서 연장된 혈청 체류 시간을 보였다. Fc-융합 단백질 생성이, 무손상 항체와 유사한 특성을 갖는 단백질 또는 펩티드를 부여하는 또 다른 전략법이다.
연구되었던 Fc 영역의 변형은 문헌 [Saxena (2016) Frontiers in Immunology, Vol. 7, Article 580]에 요약되어 있다. 다양한 Fc 돌연변이가 WO 1998/023289 A1, WO 2000/042072 A2, WO 2010/106180 A2 및 WO 2014/108198 A1에 추가로 기술되어 있다.
WO 2012/087746 A1 및 문헌 [Kinder et al. (2013) The Journal Of Biological Chemistry Vol. 288, No. 43, pp. 30843-30854]에서는 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성을 개선시키기 위한 항체의 Fc 영역 중의 다양한 돌연변이가 연구되었다.
개선된 이펙터 기능, 약동학적 성질 및/또는 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성을 갖는 항체가 현재 요구되고 있다.
본 발명의 요약
본 출원의 발명자들은 항체의 Fc 영역 중의 특정 돌연변이의 조합이, 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성 개선 및 pH 6에서의 FcRn에의 친화도 증가를 비롯한, 바람직한 특성을 항체에 부여한다는 것을 발견하게 되었다. 상기 돌연변이를 갖는 항체가 개선된 약동학적 특성을 갖는다. 추가로, 항체는 비변형된 항체 및/또는 공지된 항체, 예컨대, 인플리시맙 (IFX)과 비교하여 우수한 이펙터 기능을 보인다.
그러므로, 본 발명은 하기 [1]항 내지 [100]항에서 정의된 주제에 관한 것이다:
[1] TNFα 결합 도메인 및 FcRn 결합 부위를 포함하는 항체로서, 여기서, 항체의 아미노산 서열은
(i) 아미노산 233P, 234V, 235A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실; 및
(ii) 아미노산 434A 또는 아미노산 252Y, 254T 및 256E를 포함하는 것인 항체.
[2] [1]항에 있어서, 항체가 치환 E233P, L234V 및 L235A, G236의 결실을 갖는 변형된 항체인 것인 항체.
[3] [2]항에 있어서, 항체가 치환 N434A를 추가로 포함하는 것인 항체.
[4] [2]항에 있어서, 항체가 치환 M252Y, S254T 및 T256E를 추가로 포함하는 것인 항체.
[5] [1]항 내지 [4]항 중 어느 한 항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 239D, 330L 및 332E를 추가로 포함하는 것인 항체.
[6] [5]항에 있어서, 항체가 치환 S239D, A330L 및 I332E를 갖는 변형된 항체인 것인 항체.
[7] [1]항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 239D, 330L, 332E 및 434A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
[8] [7]항에 있어서, 항체가 E233P, L234V, L235A, S239D, A330L, I332E 및 N434A, 및 G236의 결실을 갖는 변형된 항체인 것인 항체.
[9] [7]항 또는 [8]항에 있어서, 서열 번호: 29에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체.
[10] [1]항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 239D, 330L, 332E, 252Y, 254T 및 256E, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
[11] [10]항에 있어서, 항체가 치환 E233P, L234V, L235A, S239D, A330L, I332E, M252Y, S254T 및 T256E, 및 G236의 결실을 갖는 변형된 항체인 것인 항체.
[12] [10]항 또는 [11]항에 있어서, 서열 번호: 28에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체.
[13] [1]항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 326A, 332E, 333A 및 434A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
[14] [13]항에 있어서, 항체가 치환 E233P, L234V, L235A, K326A, I332E, E333A 및 N434A, 및 G236의 결실을 갖는 변형된 항체인 것인 항체.
[15] [13]항 또는 [14]항에 있어서, 서열 번호: 30에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 항체.
[16] [1]항 내지 [15]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서의 그의 인간 FcRn에의 친화도가 인플리시맙의 것보다 더 큰 항체.
[17] [1]항 내지 [16]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 500 nM 미만인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[18] [1]항 내지 [17]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 400 nM 미만인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[19] [1]항 내지 [18]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 300 nM 미만인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[20] [1]항 내지 [19]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 200 nM 미만인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[21] [1]항 내지 [20]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 5 nM 내지 500 nM, 또는 10 nM 내지 400 nM, 또는 25 nM 내지 300 nM, 또는 50 nM 내지 200 nM, 또는 75 nM 내지 175 nM 범위인 해리 상수 KD를 특징으로 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[22] [1]항 내지 [21]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서의 인간 FcRn에의 친화도를 특징으로 하는 상기 KD가 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 측정되는 것인 항체.
[23] [1]항 내지 [22]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 7.4에서 10 μM 초과인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖는 항체.
[24] [1]항 내지 [23]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 7.4에서의 인간 FcRn에의 친화도를 특징으로 하는 상기 KD가 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 측정되는 것인 항체.
[25] [1]항 내지 [22]항 중 어느 한 항에 있어서, pH 7.4에서의 그의 인간 FcRn에의 친화도가 너무 느려서 KD 값이 SPR에 의해 측정될 수 없는 것인 항체.
[26] [1]항 내지 [25]항 중 어느 한 항에 있어서, 200 pM 미만인 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
[27] [1]항 내지 [26]항 중 어느 한 항에 있어서, 100 pM 미만인 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
[28] [1]항 내지 [27]항 중 어느 한 항에 있어서, 50 pM 미만인 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
[29] [1]항 내지 [28]항 중 어느 한 항에 있어서, 25 pM 미만인 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
[30] [1]항 내지 [29]항 중 어느 한 항에 있어서, 10 pM 미만인 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
[31] [1]항 내지 [30]항 중 어느 한 항에 있어서, 분극화된 세포 단일층(polarized cell monolayer)을 통해 첨부(apical side)로부터 기저외측부(basolateral side)로 수송되는 항체.
[32] [1]항 내지 [31]항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 및 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 대조군 항체보다 더 큰 양으로 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 수송되는 항체.
[33] [1]항 내지 [32]항 중 어느 한 항에 있어서, 인플리시맙보다 더 큰 양으로 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 수송되는 항체.
[34] [32]항 또는 [33]항에 있어서, 상기 양이 4시간 이내에 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 항체의 질량을 지칭하는 것인 항체.
[35] [31]항 내지 [34]항 중 어느 한 항에 있어서, 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 항체의 양이 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 모체 면역글로불린의 양의 2배보다 더 크고, 여기서, 상기 모체 면역글로불린이 오직 그의 Fc 영역이 오직 야생형 아미노산만을 갖는다는 점에서만 상기 항체와 상이한 것인 항체.
[36] [1]항 내지 [35]항 중 어느 한 항에 있어서, 인플리시맙의 것보다 더욱 큰 비율(%)의 항체가 10배 과량의 경쟁 인플리시맙의 존재하에서 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 수송되고, 여기서, 상기 비율(%)은 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 면역글로불린의 총 질량을 지칭하는 것인 항체.
[37] [36]항에 있어서, 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 항체의 비율(%)이 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 모체 면역글로불린의 비율(%)의 2배보다 더 크고, 여기서, 상기 모체 면역글로불린이 오직 그의 Fc 영역이 오직 야생형 아미노산만을 갖는다는 점에서만 상기 항체와 상이한 것인 항체.
[38] [31]항 내지 [37]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 분극화된 세포 단일층이 분극화된 T84 세포의 단일층인 것인 항체.
[39] [1]항 내지 [38]항 중 어느 한 항에 있어서, 500 nM 미만, 또는 300 nM 미만, 또는 200 nM 미만, 또는 100 nM 미만인 KD로 CD16a(V)에 결합하는 항체.
[40] [1]항 내지 [39]항 중 어느 한 항에 있어서, 10 μM 미만, 또는 1 μM 미만인 KD로 CD16a(F)에 결합하는 항체.
[41] [1]항 내지 [40]항 중 어느 한 항에 있어서, 10 μM 미만, 또는 5 μM 미만, 또는 1 μM 미만인 KD로 CD16b(NA2)에 결합하는 항체.
[42] [1]항 내지 [41]항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 의존성 세포 세포독성 (ADCC)을 갖는 항체.
[43] [1]항 내지 [42]항 중 어느 한 항에 있어서, CD14+CD206+ 대식세포를 유도할 수 있는 항체.
[44] [1]항 내지 [43]항 중 어느 한 항에 있어서, 인플리시맙과 동일하거나, 또는 그보다 더 큰 수준으로 CD14+CD206+ 대식세포를 유도할 수 있는 항체.
[45] [1]항 내지 [44]항 중 어느 한 항에 있어서, T 세포 증식을 억제시킬 수 있는 항체.
[46] [1]항 내지 [45]항 중 어느 한 항에 있어서, 인플리시맙과 동일하거나, 또는 그보다 더 큰 정도로 T 세포 증식을 억제시킬 수 있는 항체.
[47] [1]항 내지 [46]항 중 어느 한 항에 있어서, 비-푸코실화된 항체, 또는 푸코실화가 감소된 항체인 항체.
[48] [1]항 내지 [47]항 중 어느 한 항에 있어서, (i) 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VL 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 6에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 항체.
[49] [1]항 내지 [48]항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체.
[50] [1]항 내지 [49]항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 및 서열 번호: 11, 서열 번호: 12, 또는 서열 번호: 13에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체.
[51] [1]항 내지 [47]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 (i) 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VL 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함하는 것인 항체.
[52] [51]항에 있어서, 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및 서열 번호: 21 또는 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함하는 항체.
[53] [51]항 또는 [52]항에 있어서, 서열 번호: 23 또는 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 및 서열 번호: 25, 서열 번호: 26 또는 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 항체.
[54] [1]항 내지 [53]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 인간 TNFα에 특이적으로 결합하는 것인 항체.
[55] [1]항 내지 [54]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가 TNFβ에 유의적으로 결합하지 않는 것인 항체.
[56] [1]항 내지 [55]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체가
(i) 125 pM 미만인 해리 상수 (KD)로 인간 TNFα에 결합하고/거나;
(ii) 마카카 물라타(Macaca mulatta) TNFα와, 및 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis) TNFα와 교차 반응성이고/거나;
(iii) L929 검정법에 의해 측정된 바, 인플리시맙보다 효력이 더 크고/거나;
(iv) 화학량론상 (항체:TNFα삼량체) 적어도 2로 인간 TNFα삼량체에 결합할 수 있는 것인 항체.
[57] [1]항 내지 [56]항 중 어느 한 항에 있어서, 1 nM 미만인 KD로 마카카 물라타로부터의 TNFα에 결합하는 항체.
[58] [1]항 내지 [57]항 중 어느 한 항에 있어서, 1 nM 미만인 KD로 마카카 파시쿨라리스로부터의 TNFα에 결합하는 항체.
[59] [1]항 내지 [58]항 중 어느 한 항에 있어서, L929 검정법에서 측정된, TNFα 유도 아폽토시스를 억제시키는 항체의 효력이 인플리시맙의 것과 비교하여 (상대적 효력) 3 초과이고, 여기서, 상기 상대적 효력은 L929 검정법에서의 인플리시맙의 IC50 값 (ng/mL) 대 L929 검정법에서의 항체의 IC50 값 (ng/mL)의 비인 것인 항체.
[60] [1]항 내지 [59]항 중 어느 한 항에 있어서, 시차 주사 형광측정법에 의해 측정된, scFv 포맷의 항체의 가변 도메인의 융점이 적어도 65℃인 것인 항체.
[61] [1]항 내지 [60]항 중 어느 한 항에 있어서, 시차 주사 형광측정법에 의해 측정된, scFv 포맷의 항체의 가변 도메인의 융점이 적어도 68℃인 것인 항체.
[62] [1]항 내지 [61]항 중 어느 한 항에 있어서, 시차 주사 형광측정법에 의해 측정된, 융점이 적어도 70℃인 것인 항체.
[63] [1]항 내지 [62]항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 TNFα와 TNF 수용체 I (TNFRI) 사이의 상호작용을 차단할 수 있는 것인 항체.
[64] [1]항 내지 [63]항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간 TNFα와 TNF 수용체 II (TNFRII) 사이의 상호작용을 차단할 수 있는 것인 항체.
[65] [1]항 내지 [64]항 중 어느 한 항에 있어서, 혼합된 림프구 반응에서 말초 혈액 단핵 세포의 세포 증식을 억제시킬 수 있는 항체.
[66] [1]항 내지 [65]항 중 어느 한 항에 있어서, CD14+ 단핵구로부터의 LPS 유도 인터루킨-1β 분비를 억제시킬 수 있는 항체.
[67] [66]항에 있어서, LPS 유도 인터루킨-1β 분비를 억제시키기 위한 IC50 값이 1 nM 미만인 것인 항체.
[68] [67]항에 있어서, LPS 유도 인터루킨-1β 분비를 억제시키기 위한 상기 IC50 값이 몰 기준으로 아달리무맙의 것보다 더 낮은 것인 항체.
[69] [1]항 내지 [68]항 중 어느 한 항에 있어서, CD14+ 단핵구로부터의 LPS 유도 TNFα 분비를 억제시킬 수 있는 항체.
[70] [69]항에 있어서, LPS 유도 TNFα 분비를 억제시키기 위한 IC50 값이 1 nM 미만인 것인 항체.
[71] [70]항에 있어서, LPS 유도 TNFα 분비를 억제시키기 위한 상기 IC50 값이 몰 기준으로 아달리무맙의 것보다 더 낮은 것인 항체.
[72] [1]항 내지 [71]항 중 어느 한 항에 있어서, 면역글로불린 G (IgG), 바람직하게, IgG1인 항체.
[73] [1]항 내지 [72]항 중 어느 한 항에 있어서, 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성이 야생형 항체보다 더 큰 것인 항체.
[74] [73]항에 있어서, 상기 야생형 항체가 인플리시맙인 것인 항체.
[75] [73]항에 있어서, 상기 야생형 항체가 오직 그의 Fc 영역이 오직 야생형 아미노산만을 갖는다는 점에서만 상기 항체와 상이한 면역글로불린인 것인 항체.
[76] [73]항에 있어서, 상기 야생형 항체가 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 및 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 것인 항체.
[77] [73]항 내지 [76]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질 가수분해성 분해가 매트릭스 메탈로프로테이나제 3 (MMP-3)에 의한 분해를 포함하는 것인 항체.
[78] [73]항 내지 [77]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질 가수분해성 분해가 S. 피오게네스(S. pyogenes)의 면역글로불린 G-분해 효소 (IdeS)에 의한 분해를 포함하는 것인 항체.
[79] [73]항 내지 [78]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단백질 가수분해성 분해가 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) 균주 V8로부터의 엔도프로테이나제 Glu-C (GluC)에 의한 분해를 포함하는 것인 항체.
[80] [1]항 내지 [79]항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산.
[81] [80]항의 핵산을 포함하는 벡터 또는 플라스미드.
[82] [80]항의 핵산, 또는 [81]항의 벡터 또는 플라스미드를 포함하는 세포.
[83] [1]항 내지 [79]항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산의 발현을 허용하는 조건하에 배지 중에서 [82]항의 세포를 배양하는 단계, 및 세포로부터, 또는 배지로부터 항체를 회수하는 단계를 포함하는, [1]항 내지 [79]항 중 어느 한 항의 항체를 제조하는 방법.
[84] [1]항 내지 [79]항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 장애 또는 TNFα 관련 장애를 치료하는 방법에서 사용하기 위한 항체.
[85] [84]항에 있어서, 상기 염증성 장애가 하기 "치료되는 장애" 섹션에 열거된 질환 및 장애의 목록으로부터 선택되는 것에서 사용하기 위한 항체.
[86] [84]항에 있어서, 상기 염증성 장애가 위장관의 염증성 장애인 것에서 사용하기 위한 항체.
[87] [86]항에 있어서, 상기 위장관의 염증성 장애가 염증성 장 질환인 것에서 사용하기 위한 항체.
[88] [86]항 또는 [87]항에 있어서, 상기 위장관의 염증성 장애가 크론병(Crohn's disease)인 것에서 사용하기 위한 항체.
[89] [88]항에 있어서, 상기 크론병이 회장, 결장, 회장결장, 및/또는 고립성 상부 크론병 (위, 십이지장 및/또는 공장), 및 비-협착성/비-투과성, 협착성, 투과성 및 항문주위 질환 행동(disease behavior)을 포함하고, 상기 언급된 것 중 임의의 것의 국재화 및 질환 행동의 임의 조합을 허용하는 것으로 구성된 군으로부터 선택되는 것에서 사용하기 위한 항체.
[90] [86]항 또는 [87]항에 있어서, 상기 위장관의 염증성 장애가 궤양성 결장염인 것에서 사용하기 위한 항체.
[91] [90]항에 있어서, 상기 궤양성 결장염이 궤양성 직장항문염(ulcerative proctitis), S상 결장염(sigmoiditis), 직장 S상 결장염(proctosigmoiditis), 좌측 결장염(left-sided colitis), 전범위 궤양성 결장염(pan-ulcerative colitis), 및 낭염(pouchitis)으로 구성된 군으로부터 선택되는 것에서 사용하기 위한 항체.
[92] [86]항 또는 [87]항에 있어서, 상기 위장관의 염증성 장애가 현미경적 결장염(microscopic colitis)인 것에서 사용하기 위한 항체.
[93] [84]항에 있어서, 상기 염증성 장애가 관절염인 것에서 사용하기 위한 항체.
[94] [84]항 또는 [93]항에 있어서, 상기 염증성 장애가 류머티스성 관절염인 것에서 사용하기 위한 항체.
[95] [84]항 내지 [94]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 항체를 피험체에게 경구적으로 투여하는 단계를 포함하는 것에서 사용하기 위한 항체.
[96] [84]항 내지 [94]항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법이 항체를 국소적으로 적용하는 단계를 포함하는 것에서 사용하기 위한 항체.
[97] [1]항 내지 [79]항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 제약 조성물.
[98] 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 트랜스사이토시스를 개선시키는 방법.
[99] 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 혈장 반감기를 연장시키는 방법.
[100] 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성을 개선시키는 방법.
도면 설명
도 1: L929 검정법에서의 인간 TNFα를 중화시키는 항-TNFα 항체 변이체의 효력. TNFα 항체 변이체 및 참조 인플리시맙에 대한 용량 반응 곡선이 제시되어 있다.
도 2: 분극화된 T84 세포를 통한 항-TNFα IgG 변이체의 수송. 첨가 후 4시간째의 첨부로부터 기저외측부 저장소로의 항-TNFα 항체 변이체 및 인플리시맙 (IFX)의 양. ng/㎠로 제공된다. 오차 막대는 2 내지 4개의 개별 단일층의 SD를 나타낸다.
도 3: 과량의 골수종 IgG의 존재하에서의 분극화된 T84 세포를 통한 항-TNFα IgG 변이체의 수송. 첨가 후 4시간째의 10배 과량의 인간 골수종 IgG의 존재하에서 첨부로부터 기저외측부 저장소로 수송된 항-TNFα IFX 및 Ab 변이체의 양. ng/㎠로 제공된다. 오차 막대는 3 내지 4개의 개별 단일층의 SD를 나타낸다.
도 4: ADCC 활성. 항-TNFα 항체 변이체 및 Ab-wt에 의한 ADCC의 유도.
도 5: IFX의 유도 대비의, 각 화합물에 의한 CD14+CD206+ 대식세포의 유도. 4개의 독립 실험의 요약된 데이터. 막대는 평균을 나타내고, 오차 막대는 SEM을 나타낸다.
도 6: IFX대비의, 각 화합물에 의한 T 세포 증식의 억제. 3개의 독립 실험의 요약된 데이터. 막대는 평균을 나타내고, 오차 막대는 SEM을 나타낸다.
도 7: MMP-3에 의한 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성.
도 8: IdeS에 의한 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성.
도 9: GluC에 의한 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성.
도 10: 부위 지정 돌연변이유발을 개략적으로 나타낸 개략도.
상세한 설명
본 발명은 TNFα에 결합할 수 있고, 변형된 Fc 영역을 포함하는 항체에 관한 것이다. 항체는 단백질 가수분해성 분해에 대한 개선된 저항성을 갖는다. 항체는 추가로 pH 6에서 인간 FcRn에의 높은 친화도를 갖고, pH 7.4에서 인간 FcRn에의 낮은 친화도를 갖는다. 항체의 아미노산 서열은 아미노산 233P, 234V, 235A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실 (EU 넘버링)을 포함한다. 항체는 추가로 아미노산 434A 또는 아미노산 252Y, 254T 및 256E (EU 넘버링)를 포함한다.
본 명세서 및 청구범위 전역에 걸쳐, 가변 도메인 중 잔기를 언급할 때에는 일반적으로 카바트(Kabat) 넘버링 체계가 사용된다 (대략적으로, 경쇄의 잔기 1-107 및 중쇄의 잔기 1-113) (문헌 [Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]). "EU 넘버링 체계" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 중의 중 잔기를 언급할 때 사용된다 (예컨대, 문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] (본원에서 명확하게 참조로 인용됨)에 기록된 EU 인덱스). 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 가변 도메인 중의 잔기 번호에 대한 언급은 카바트 넘버링 체계에 의한 잔기 넘버링을 의미한다. 본원에서 달리 언급되지 않는 한, 항체의 불변 도메인 중의 잔기 번호에 대한 언급은 EU 넘버링 체계에 의한 잔기 넘버링을 의미한다 (예컨대, WO 2006/073941 참조).
항체
본 출원과 관련하여, "항체"라는 용어는 IgG, IgM, IgE, IgA, 또는 IgD 부류 (또는 그의 임의의 하위부류)에 속하는 단백질로서 정의되고, 종래 공지된 모든 항체 및 그의 기능성 단편을 포함하는, "면역글로불린" (Ig)에 대한 동의어로서 사용된다. 본 발명과 관련하여, 항체/면역글로불린의 "기능성 단편"은 본질적으로 모체 항체의 특성들 중 하나 이상을 유지하는 상기 모체 항체의 항원 결합 단편 또는 다른 유도체로서 정의된다. 항체/면역글로불린의 "항원 결합 단편"은 항원 결합 영역을 보유하는 단편 (예컨대, IgG의 가변 영역)으로서 정의된다. 항체의 "항원 결합 영역"은 전형적으로 항체의 하나 이상의 초가변 영역(들), 즉, CDR-1, -2, 및/또는 -3 영역에서 발견된다. 본 발명의 항체는 이기능성 또는 다기능성 구축물의 일부일 수 있다.
바람직하게, 항체는 모노클로날 항체이다. 본원에서 사용되는 바, "모노클로날 항체"라는 용어는 하이브리도마 기술을 통해 제조된 항체로 제한되지 않는다. "모노클로날 항체"라는 용어는 그가 제조되는 방법이 아닌, 임의의 진핵성, 원핵성, 또는 파지 클론을 포함하는, 단일 클론으로부터 유래되는 항체를 지칭한다. 모노클로날 항체는 하이브리도마, 재조합, 및 파지 디스플레이 기술, 또는 그의 조합의 사용을 포함하는 당업계에 공지된 매우 다양한 기술을 사용하여 제조될 수 있다 (문헌 [Harlow and Lane, "Antibodies, A Laboratory Manual" CSH Press 1988, Cold Spring Harbor N.Y.]).
인간에서의 항-TNFα 항체의 생체내 사용과 관련된 실시양태를 포함하는 다른 실시양태에서, 키메라, 영장류화, 인간화, 또는 인간 항체가 사용될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항체는 인간 항체 또는 인간화 항체, 더욱 바람직하게, 모노클로날 인간 항체 또는 모노클로날 인간화 항체이다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 면역글로불린, 바람직하게, 면역글로불린 G (IgG)이다. 본 발명의 IgG의 하위부류는 제한되지 않고, IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4를 포함한다. 바람직하게, 본 발명의 IgG는 하위부류 1, 2 또는 4의 것이며, 즉, 이는 각각 IgG1, IgG2, 또는 IgG4 분자이다. 가장 바람직하게, 본 발명의 IgG는 하위부류 1의 것이며, 즉, 이는 IgG1 분자이다.
TNFα 결합 도메인
본 발명의 항체의 TNFα 결합 도메인은 특별히 제한되지 않는다. 이는 TNFα에 결합할 수 있는 임의의 항체로부터 유래된 것일 수 있다.
바람직하게, 본 발명의 항체는 TNFα에 특이적으로 결합한다. 본원에서 사용되는 바, 항체가 인간 TNFα와 하나 이상의 참조 분자(들) 사이를 구별할 수 있는 경우, 항체는 인간 TNFα를 "특이적으로 인식하거나," 또는 "그에 특이적으로 결합하는" 것이다. 바람직하게, 각각의 참조 분자에의 결합에 대한 IC50 값은 TNFα에의 결합에 대한 IC50 값보다 적어도 1,000배 더 크다. 그의 가장 일반적인 형태로 (및 정의된 참조가 언급되지 않을 때), "특이적 결합"은 예를 들어, 당업계에 공지된 특이성 검정 방법에 따라 측정된 바, 인간 TNFα와, 비관련 생체분자 사이를 구별할 수 있는 항체의 능력을 지칭한다. 상기 방법으로는 웨스턴 블롯 및 ELISA 검사를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 예를 들어, 표준 ELISA 검정법이 수행될 수 있다. 전형적으로, 결합 특이성의 측정은 단일 참조 생체분자가 아닌, 약 3 내지 5개의 비관련 생체분자, 예컨대, 모유 분말, BSA, 트랜스페린 등으로 이루어진 세트를 사용함으로써 수행된다. 한 실시양태에서, 특이적 결합이란, 인간 TNFα와 인간 TNFβ 사이를 구별할 수 있는 항체의 능력을 지칭한다.
본 발명의 항체는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함한다. VL 도메인은 CDR1 영역 (CDRL1), CDR2 영역 (CDRL2), CDR3 영역 (CDRL3) 및 프레임워크 영역을 포함한다. VH 도메인은 CDR1 영역 (CDRH1), CDR2 영역 (CDRH2), CDR3 영역 (CDRH3) 및 프레임워크 영역을 포함한다.
"CDR"이라는 용어는 주로 항원 결합에 기여하는 항체의 가변 도메인 내의 6개긔 초가변 영역 중 하나를 지칭한다. 6개의 CDR에 대하여 가장 일반적으로 사용되는 정의 중 하나는 문헌 [Kabat E. A. et al., (1991) Sequences of proteins of immunological interest. NIH Publication 91-3242)]에 의해 제공되었다. 본원에서 사용되는 바, CDR의 카바트의 정의는 오직 경쇄 가변 도메인의 CDR1, CDR2 및 CDR3 (CDR L1, CDR L2, CDR L3, 또는 L1, L2, L3) 뿐만 아니라, 중쇄 가변 도메인의 CDR2 및 CDR3 (CDR H2, CDR H3, 또는 H2, H3)에 적용된다. 그러나, 본원에서 사용되는 바, 중쇄 가변 도메인의 CDR1 (CDR H1 또는 H1)은 하기 잔기 (카바트 넘버링)에 의해 정의된다: 이는 26번 위치에서 시작하고, 36번 위치 앞에서 종료된다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 (i) 서열 번호: 3에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 4에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 5에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VL 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 6에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 7에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 8에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 본 발명의 항체는 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함한다. 또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 항체는 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 가장 바람직하게, 본 발명의 항체는 (i) 서열 번호: 9에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 10에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
또 다른 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체는 (i) 서열 번호: 14에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 15에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 16에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VL 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 17에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR1 영역, 서열 번호: 18에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR2 영역, 및 서열 번호: 19에 제시된 아미노산 서열을 갖는 CDR3 영역을 포함하는 VH 도메인을 포함한다.
더욱 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 본 발명의 항체는 서열 번호: 20에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인을 포함한다. 또 다른 더욱 바람직한 실시양태에서, 항체는 서열 번호: 21 또는 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다. 가장 바람직하게, 본 발명의 항체는 (i) 서열 번호: 21에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VH 도메인, 및 (ii) 서열 번호: 21 또는 서열 번호: 22에 제시된 아미노산 서열을 갖는 VL 도메인을 포함한다.
본 발명의 항체는 인간 TNFα에 대하여 높은 친화도를 갖는다. "KD"라는 용어는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭한다. 전형적으로, 본 발명의 항체는 비아코어(BIACORE) 장치에서 표면 플라스몬 공명 (SPR) 기술을 사용하여 측정된 바, 대략 2x10-10 M 미만, 바람직하게, 1.5x10-10 M 미만, 바람직하게, 1.25x10-10 M 미만, 더욱 바람직하게, 1x10-10 M 미만, 가장 바람직하게, 7.5x10-11 M 미만, 또는 심지어는 5x10-11 M 미만인 해리 평형 상수 (KD)로 인간 TNFα에 결합한다. 특히, KD 측정은 실시예 1에 기술된 바와 같이 수행된다.
Fc 영역의 변형
"변형된 Fc 영역"은 본원에서 정의된 바와 같이, 적어도 하나의 "아미노산 변형" 또는 "돌연변이"에 의해 천연 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게, 변형된 Fc 영역은 천연 서열 FcRn 결합 부위와, 또는 모체 항체의 FcRn 결합 부위와 비교하여 천연 서열 FcRn 결합 부위 중에, 또는 모체 항체의 FcRn 결합 부위 중에 적어도 하나의 아미노산 치환, 예컨대, 약 1 내지 약 10개의 아미노산 치환, 및 바람직하게, 약 1 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는 변형된 FcRn 결합 부위를 포함한다. 대안적으로, 항체는 예컨대, 구조적 변화에 의해 FcRn에의 친화도에 영향을 주는, FcRn 결합 부위 밖에 변형을 가질 수 있다. 전형적으로, pH 6에서의 인간 FcRn에의 친화도는 변형에 기인하여 증가된다. pH 7.4에서의 인간 FcRn에의 친화도는 실질적으로는 변형에 의해 영향을 받지 않는 것이 바람직하다. 변형은 그 자체가 공지된 방법, 예컨대, 문헌 ["Antibody Engineering - Methods and Protocols", edited by Patrick Chames, 2nd ed., 2012, Chapter 31 (ISBN 978-1-61779-973-0)]에 기술된 바와 같은, 부위 지정 돌연변이유발법에 의해 생성에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 항체의 아미노산 서열은 233번 위치에 아미노산 프롤린, 234번 위치에 아미노산 발린, 및 235번 위치에 아미노산 알라닌을 포함하고, 236번 위치에 아미노산 결실을 추가로 갖는다 (EU 넘버링). 이는 본원에서 "233P/234V/235A/236del"로 지칭된다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 233번 위치의 천연 아미노산은 글루탐산 (E)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 234번 위치의 천연 아미노산은 류신 (L)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 235번 위치의 천연 아미노산은 류신 (L)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 236번 위치의 천연 아미노산은 글리신 (G)이다. 따라서, 본 발명의 항체는 돌연변이 E233P, L234V, L235A 미 G236del을 항체 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다. 이는 본원에서 E233P/L234V/L235A/G236del로 지칭된다. 바람직하게, 본 발명의 항체는 233번 위치의 글루탐산 대신 프롤린으로 치환하고, 234번 위치의 류신 대신 발린으로 치환하고, 235번 위치의 류신 대신 알라닌으로 치환하고, 236번 위치의 글리신을 결실시킴으로써 수득가능하거나, 또는 수득된다.
본 발명의 항체의 아미노산 서열은 (i) 434번 위치에 아미노산 알라닌, 또는 (ii) 252번 위치에 아미노산 티로신, 254번 위치에 아미노산 트레오닌, 및 256번 위치에 아미노산 글루탐산을 추가로 포함한다. 이는 본원에서 각각 434A 및 252Y/254T/256E로 지칭된다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 434번 위치의 천연 아미노산은 아스파라긴 (N)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 252번 위치의 천연 아미노산은 메티오닌 (M)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 254번 위치의 천연 아미노산은 세린 (S)이다. 비-변형된 인간 IgG 항체의 256번 위치의 천연 아미노산은 트레오닌 (T)이다. 따라서, 본 발명의 항체는 추가의 돌연변이(들) N434A 또는 M252Y/S254T/T256E를 항체 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다.
즉, 본 발명의 항체의 아미노산 서열은 233P/234V/235A/236del/434A 또는 233P/234V/235A/236del/252Y/254T/256E를 포함한다. 상기 아미노산 서열은 돌연변이 E233P/L234V/L235A/ G236del/N434A 또는 E233P/L234V/L235A/G236del/M252Y/S254T/T256E를 항체의 아미노산 서열, 예컨대, 항체의 Fc 영역이 비-변형된 또는 야생형 아미노산 서열을 갖는 것인 항체의 아미노산 서열 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다.
Fc 영역의 남은 아미노산 서열은 전형적인 인간 IgG의 천연 아미노산 서열과 동일할 수 있다. 그러나, 항체가 여전히 TNFα 결합 활성, pH 6.0에서의 FcRn 결합 활성 및 하나 이상의 이펙터 기능을 갖는 한, 항체의 아미노산 서열은 천연 항체의 Fc 영역의 천연 아미노산 서열에 대해 하나 이상의 추가의 돌연변이 또는 치환을 포함하는 것도 가능하다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 적어도 1개, 또는 적어도 2개, 또는 적어도 3개의 추가의 치환을 갖는다. 한 실시양태에서, 항체의 아미노산 서열은 바람직하게, 치환 S239D/A330L/I332E를 도입시킴으로써 수득가능하거나, 또는 수득된 아미노산 239D/330L/332E를 갖는다. 또 다른 실시양태에서, 항체의 아미노산 서열은 바람직하게, 치환 K326A/I332E/E333A를 도입시킴으로써 수득가능하거나, 또는 수득된 아미노산 326A/332E/333A를 갖는다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 아미노산 서열은 233P/234V/235A/236del/239D/330L/332E/434A를 포함한다. 상기 항체는 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/S239D/A330L/I332E/N434A를 항체의 아미노산 서열, 예컨대, 항체의 Fc 영역이 비-변형된 또는 야생형 아미노산 서열을 갖는 것인 항체의 아미노산 서열 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 아미노산 서열은 233P/234V/235A/236del/239D/330L/332E/252Y/254T/256E를 포함한다. 상기 항체는 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/S239D/A330L/I332E/ M252Y/S254T/T256E를 항체의 아미노산 서열, 예컨대, 항체의 Fc 영역이 비-변형된 또는 야생형 아미노산 서열을 갖는 것인 항체의 아미노산 서열 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다.
또 다른 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 아미노산 서열은 233P/234V/235A/236del/326A/332E/333A/434A를 포함한다. 상기 항체는 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/K326A/I332E/E333A/N434A를 항체의 아미노산 서열, 예컨대, 항체의 Fc 영역이 비-변형된 또는 야생형 아미노산 서열을 갖는 것인 항체의 아미노산 서열 내로 도입시킴으로써 수득될 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 힌지 영역을 포함하는, 본 발명의 항체의 Fc 영역은 서열 번호: 28, 서열 번호: 29 및 서열 번호: 30으로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하거나, 또는 그로 구성된다.
한 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 여기서, 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/S239D/A330L/I332E/N434A가 도입되어 있다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 여기서, 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/ S239D/A330L/I332E/M252Y/S254T/T256E가 도입되어 있다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖고, 여기서, 돌연변이 E233P/L234V/L235A/236del/ K326A/I332E/E333A/N434A가 도입되어 있다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 25에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 23 또는 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 26에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 23 또는 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체의 중쇄는 서열 번호: 27에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 바람직하게, 상기 항체는 서열 번호: 23 또는 서열 번호: 24에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄를 추가로 포함한다.
본 발명의 바람직한 측면에서, 본 발명의 항체는 비-푸코실화된 항체 또는 푸코실화가 감소된 항체이다.
본원에서 사용되는 바, "푸코실화가 감소된 항체"라는 용어는 항체의 N-글리칸 중 90% 미만이 푸코실화된 것인 항체를 지칭한다. 푸코실화율(%)을 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 한 실시양태에서, 항체의 N-글리칸 중 75% 미만, 또는 50% 미만, 또는 25% 미만이 푸코실화된다. 가장 바람직하게, 항체의 N-글리칸 중 10% 미만이 푸코실화된다. 특정 실시양태에서, 본 발명의 항체의 N-글리칸은 푸코스를 전혀 함유하지 않는다.
바람직하게, 항체의 N297 (EU 넘버링)의 N-글리칸 중 90% 미만이 푸코실화된다. 또 다른 실시양태에서, 항체의 N297 (EU 넘버링)의 N-글리칸 중 75% 미만, 또는 50% 미만, 또는 25% 미만이 푸코실화된다. 가장 바람직하게, 항체의 N297 (EU 넘버링)의 N-글리칸 중 10% 미만이 푸코실화된다.
또 다른 실시양태에서, 항체의 N297의 N-글리칸은 푸코스를 전혀 함유하지 않는다.
종종 어푸코실화된 항체로도 또한 지칭되는 비-푸코실화된 항체는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, CHO 세포에서의 α1,6-푸코실트랜스퍼라제 (FUT8) 및 GDP-만노스 4,6-데히드라타제 (GMD)에 대한 유전자의 시너지적 넉다운을 사용하여 완전히 어푸코실화되고, ADCC가 증진된 모노클로날 항체 변이체를 제조할 수 있다 (예컨대, 문헌 [Imai-Nishiya et al. (2007) BMC Biotechnol. 7, 84] 참조). α1,6-푸코실트랜스퍼라제의 촉매성 코어를 코딩하는 영역 중 FUT8 유전자를 절단하고, 이로써, CHO 세포에서 상응하는 효소 기능을 파괴하는 아연 핑거 뉴클레아제 (ZFN)를 사용하는 방법을 사용하여 코어 푸코스가 완전히 결여된 모노클로날 항체를 제조할 수 있다 (예컨대, 문헌 [Malphettes et al. (2010) Biotechnol. Bioeng. 106, 774-783] 참조).
푸코실화가 감소된 항체는 데코이 기질, 예컨대, 2-데옥시-2-플루오로-2-푸코스를 배양 배지에 첨가하여 (예컨대, 문헌 [Dekker et al. (2016) Sci Rep 6:36964] 참조) IgG-Fc 글리칸 중 푸코스 도입을 감소시킴으로써 제조될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명의 항체는 높은 시알산 함량을 갖는다. 시알릴화 증가는 예컨대, 시티딘 모노포스페이트-시알산 신타제 (CMP-SAS), 시티딘 모노포스페이트-시알산 수송체 (CMP-SAT), 및 α 2,3-시알릴트랜스퍼라제의 동시 형질감염에 의해 달성될 수 있다 (예컨대, 문헌 [Son et al. (2011) Glycobiology 21, 1019-1028] 참조).
FcRn에의 친화도
pH 6에서의 본 발명의 항체의 인간 FcRn에의 친화도는 높다. pH 6에서의 인간 FcRn에의 항체의 높은 친화도의 결합은 전형적으로 500 nm 미만의 KD 값을 특징으로 한다. 바람직하게, pH 6에서의 높은 친화도의 결합의 KD 값은 400 nm 미만, 또는 300 nm 미만, 또는 200 nm 미만이다. 예를 들어, pH 6에서의 친화도를 특징으로 하는 KD 값은 5 내지 500 nM, 또는 10 내지 400 nM, 또는 25 내지 300 nM, 또는 50 내지 200 nM, 또는 100 내지 175 nM 범위일 수 있다.
바람직한 실시양태에서, pH 6에서의 인간 FcRn에의 본 발명의 항체의 친화도는 pH 6에서의 인간 FcRn에의 인플리시맙의 친화도보다 크다.
인간 FcRn에의 본 발명의 항체의 친화도는 예를 들어, 본 출원의 실시예 4에 기술된 바와 같이, 바람직하게, 표면 플라스몬 공명 (SPR)에 의해 측정된다.
본 발명의 항체는 전형적으로 pH 7.4에서 인간 FcRn에 대해 낮은 친화도를 갖는다. 낮은 친화도는 1 μM. 초과인 KD 값을 특징으로 한다. 바람직하게, pH 7.4에서의 인간 FcRn에의 낮은 친화도는 2 μM 초과, 또는 5 μM 초과, 또는 10 μM 초과인 KD 값을 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, pH 7.4에서의 낮은 친화도는 너무 낮기 때문에, KD 값은 SPR에 의해 측정될 수 없다.
특정 실시양태에서, (ii) pH 6.0에서의 인간 FcRn에의 결합에 대한 KD 값 대비 (i) pH 7.4에서의 인간 FcRn에의 본 발명의 항체의 결합에 대한 KD 값의 비는 적어도 50이다. 바람직하게, 상기 비는 적어도 100, 또는 적어도 150, 또는 적어도 200이다.
항체의 기능적 특성
본 발명의 항체는 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 효율적으로 수송된다. 전형적으로, 분극화된 세포 단일층을 통한 수송은 인플리시맙의 것보다 더 큰 양으로 이루어지며, 여기서, 인플리시맙 항체의 양은 분극화된 세포 단일층 1 ㎠당 질량을 지칭한다. 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 인플리시맙의 양 대비의 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 항체의 양은 적어도 110%, 바람직하게, 적어도 120%, 더욱 바람직하게, 적어도 130%, 또는 적어도 140%, 또는 적어도 150%이다 (여기서, 수송되는 인플리시맙의 양은 100%로 설정된다).
추가로, 항체는 과량의 경쟁 면역글로불린의 존재하에서 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 특이적으로 수송된다. 이는 본원에서 특이적 수송으로 지칭된다.
분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 면역글로불린의 총 질량의 백분율(%)은 10배 과량의 경쟁 면역글로불린의 존재하에서 분극화된 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부로 수송되는 인플리시맙의 백분율(%)보다 더 크다. 10배 과량의 비관련된 항체의 존재하에서 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 인플리시맙의 백분율(%) 대비의, 10배 과량의 비관련된 면역글로불린의 존재하에서 분극화된 세포 단일층을 통해 수송되는 본 발명의 항체의 백분율(%)은 적어도 120%, 또는 적어도 130%, 또는 적어도 140%, 또는 적어도 150%이다 (인플리시맙은 100%인 것으로 설정된다).
바람직하게, 분극화된 세포 단일층은 분극화된 T84 세포의 단일층이다. 트랜스사이토시스의 프로세스를 모방하는 수송 검정법은 본 출원의 실시예 5에 기술된 바와 같이 수행될 수 있다.
본 발명의 항체는 CD16a(V), CD16a(F) 및 CD16b(NA2)에 결합한다.
본 발명의 항체는 전형적으로 1 μM 미만, 바람직하게, 500 nM 미만, 더욱 바람직하게, 100 nM 미만인 KD로 CD16a(V)에 결합한다.
본 발명의 항체는 전형적으로 10 μM 미만, 바람직하게, 1 μM 미만인 KD로 CD16a(F)에 결합한다.
본 발명의 항체는 전형적으로 10 μM 미만, 바람직하게, 1 μM 미만인 KD로 CD16b(NA2)에 결합한다.
본 발명의 항체는 추가로 CD14+CD206+ 대식세포를 유도할 수 있다. 유도 수준은 바람직하게, 인플리시맙의 것에 필적하거나, 그와 동일하거나, 또는 그보다 크다.
본 발명의 항체는 추가로 T 세포 증식을 억제시킬 수 있다. T 세포 증식 억제 정도는 바람직하게, 인플리시맙의것에 필적하거나, 그와 동일하거나, 또는 그보다 크다.
제약 조성물 및 치료
질환 치료는 임의의 임상 단계의 임의 형태의 질환 또는 징후(manifestation)를 앓는 것으로 이미 진단받은 환자의 치료; 질환의 증상 또는 징후의 발병 또는 발전 또는 심각화 또는 악화 지연; 및/또는 질환의 예방 및/또는 그의 중증도 감소를 포함한다.
항-TNFα 항체가 투여되는 "대상체" 또는 "환자"는 포유동물, 예컨대, 비-영장류 (예컨대, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 래트 등) 또는 영장류 (예컨대, 원숭이 또는 인간)일 수 있다. 특정 측면에서, 인간은 소아 환자이다. 다른 측면에서, 인간은 성인 환자이다.
본원에서는 항-TNFα 항체 및, 임의적으로 하나 이상의 추가 치료제, 예컨대, 하기 기술되는 제2 치료제를 포함하는 조성물이 기술된다. 조성물은 전형적으로 제약상 허용되는 담체를 포함하는 멸균 제약 조성물의 일부로서 공급된다. 본 조성물은 (그를 환자에게 투여하는 원하는 방법에 따라) 임의의 적합한 형태일 수 있다.
항-TNFα 항체는 다양한 경로에 의해, 예컨대, 경구적으로, 경피적으로, 피하로, 비내로, 정맥내로, 근육내로, 경막내로, 국소적으로 또는 국부적으로, 예컨대, 점막으로 환자에게 투여될 수 있다. 임의의 주어진 경우에서 가장 적합한 투여 경로는 특정 항체, 대상체, 질환의 성질 및 중증도, 및 대상체의 건강 상태에 의존할 것이다. 한 실시양태에서, 항-TNFα 항체는 정맥내로 투여된다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경구적으로 투여된다. 투여가 경구적 경로를 통해 이루어질 경우, 항체는 바람직하게, IgG, 가장 바람직하게, IgG1이다.
항-TNFα 항체는 0.5 mg/kg (체중) 내지 20 mg/kg (체중)으로 정맥내 투여를 허용하는 데 충분한 농도로 제약 조성물 내 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 조성물 및 방법에서의 사용에 적합한 항체의 농도는 0.5 mg/kg, 0.75 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 2.5 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg, 5 mg/kg, 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, 10 mg/kg, 11 mg/kg, 12 mg/kg, 13 mg/kg, 14 mg/kg, 15 mg/kg, 16 mg/kg, 17 mg/kg, 18 mg/kg, 19 mg/kg, 20 mg/kg, 또는 상기 값 중 임의의 값 사이인 범위의 농도, 예컨대, 1 mg/kg 내지 10 mg/kg, 5 mg/kg 내지 15 mg/kg, 또는 10 mg/kg 내지 18 mg/kg을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
항-TNFα 항체의 유효 용량은 단일 (예컨대, 볼루스) 투여, 다중 투여 또는 연속 투여당, 또는 단일 (예컨대, 볼루스) 투여, 다중 투여 또는 연속 투여당 0.01-5000 ㎍/ml의 혈청 농도를 달성하기 위해 약 0.001 내지 약 750 mg/kg 범위일 수 있거나, 또는 치료되는 병태, 투여 경로, 및 대상체의 연령, 체중 및 상태에 의존하여 상기 값 내의 임의의 유효 범위 또는 값일 수 있다. 경구 투여의 경우, 혈청 농도는 극도로 낮거나, 또는 심지어는 검출 한계 미만일 수 있다. 특정 실시양태에서, 각 용량은 체중 1 kg당 약 0.5 mg 내지 약 50 mg, 또는 체중 1 kg당 약 3 mg 내지 약 30 mg 범위일 수 있다. 항체는 수성 액제로서 제제화될 수 있다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 항체는 경구적으로 투여된다. 투여가 경구 경로를 통해 이루어지는 경우, 항체는 바람직하게, IgG, 가장 바람직하게, IgG1이다. 항체가 경구적으로 투여되는 경우, 항체의 1일 용량은 전형적으로 약 0.01 mg/kg (체중) 내지 약 100 mg/kg (체중), 또는 약 0.05 mg/kg (체중) 내지 약 50 mg/kg (체중), 또는 약 0.1 mg/kg (체중) 내지 약 25 mg/kg (체중), 또는 약 0.15 mg/kg (체중) 내지 약 10 mg/kg (체중), 또는 약 0.16 mg/kg (체중) 내지 약 5 mg/kg (체중), 또는 약 0.2 mg/kg (체중) 내지 약 2 mg/kg (체중), 또는 약 0.2 mg/kg (체중) 내지 약 1 mg/kg (체중) 범위이다. 일반적으로, 유익한 용량은 1일당 1 내지 200 mg, 바람직하게, 1일당 5 내지 100 mg, 또는 10 내지 50 mg인 용량이다.
제약 조성물은 편리하게는 용량당 미리 결정된 양의 항-TNFα 항체를 함유하는 단위 투약 형태로 제공될 수 있다. 상기 단위는 0.5 mg 내지 5 g, 예를 들어, 제한 없이, 1 mg, 10 mg, 20 mg, 30 mg, 40 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 750 mg, 1000 mg, 또는 상기 값 중 임의의 2개 값 사이의 임의 범위, 예를 들어, 10 mg 내지 1000 mg, 20 mg 내지 50 mg, 또는 30 mg 내지 300 mg을 함유할 수 있다. 제약상 허용되는 담체는 예컨대, 치료하고자 하는 병태, 또는 투여 경로에 의존하여 매우 다양한 형태를 취할 수 있다.
유효 투여량, 총 투약 횟수, 및 그의 항-TNFα 항체의 치료 기간에 관한 결정은 충분히 당업자의 능력 범위 내에 있고, 이는 표준 용량 증가 연구를 사용하여 결정될 수 있다.
본원에 기술된 방법에서 적합한 항-TNFα 항체의 치료 제제는 보관을 위해 원하는 순도를 갖는 항체를 당업계에서 전형적으로 사용되는 임의적인 제약상 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제 (이들은 모두 본원에서 "담체"로 지칭된다), 즉, 완충화제, 안정화제, 보존제, 등장화제, 비-이온성 표면활성제, 항산화제, 및 다른 기타 첨가제와 혼합함으로써 동결건조된 제제 또는 수성 액제로서 제조될 수 있다. 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition (Osol, ed. 1980)]을 참조한다. 상기 첨가제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이어야 한다.
완충화제는 pH를 생리적 조건에 가까운 범위로 유지시키는 데 도움을 준다. 이는 약 2 mM 내지 약 50 mM 범위의 농도로 존재할 수 있다. 적합한 완충화제는 유기산 및 무기산, 둘 모두, 및 그의 염, 예컨대, 시트레이트 완충제 (예컨대, 모노소듐 시트레이트-디소듐 시트레이트 혼합물, 시트르산-트리소듐 시트레이트 혼합물, 시트르산-모노소듐 시트레이트 혼합물 등), 시트레이트-포스페이트 완충제, 숙시네이트 완충제 (예컨대, 숙신산-모노소듐 숙시네이트 혼합물, 숙신산-수산화나트륨 혼합물, 숙신산-디소듐 숙시네이트 혼합물 등), 타르트레이트 완충제 (예컨대, 타르타르산-타르타르산 나트륨 혼합물, 타르타르산-타르타르산 칼륨 혼합물, 타르타르산-수산화나트륨 혼합물 등), 푸마레이트 완충제 (예컨대, 푸마르산-모노소듐 푸마레이트 혼합물, 푸마르산-디소듐 푸마레이트 혼합물, 모노소듐 푸마레이트-디소듐 푸마레이트 혼합물 등), 글루코네이트 완충제 (예컨대, 글루콘산-글리콘산 나트륨(sodium glyconate) 혼합물, 글루콘산-수산화나트륨 혼합물, 글루콘산-글류콘산 칼륨(potassium glyuconate) 혼합물 등), 옥살레이트 완충제 (예컨대, 옥살산-옥살산 나트륨 혼합물, 옥살산-수산화나트륨 혼합물, 옥살산-옥살산 칼륨 혼합물 등), 락테이트 완충제 (예컨대, 락트산-락트산 나트륨 혼합물, 락트산-수산화나트륨 혼합물, 락트산-락트산 칼륨 혼합물 등) 및 아세테이트 완충제 (예컨대, 아세트산-아세트산 나트륨 혼합물, 아세트산-수산화나트륨 혼합물 등)를 포함한다. 추가로, 포스페이트 완충제, 히스티딘 완충제 및 트리메틸아민 염, 예컨대, 트리스(Tris)가 사용될 수 있다.
본 발명의 제약 조성물은 적어도 하나의 염, 예컨대, 염화나트륨을 추가로 포함할 수 있다. 염 농도는 바람직하게, 100 mM 내지 200 mM 범위, 예컨대, 약 150 mM이다.
보존제는 미생물 성장을 지연시키기 위해 첨가될 수 있고, 0.2% (w/v)-1% (w/v) 범위의 양으로 첨가될 수 있다. 적합한 보존제로는 페놀, 벤질 알콜, 메타-크레졸, 메틸 파라벤, 프로필 파라벤, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드, 벤즈알코늄 할라이드 (예컨대, 클로라이드, 브로마이드, 및 아이오다이드), 헥사메토늄 클로라이드, 및 알킬 파라벤, 예컨대, 메틸 또는 프로필 파라벤, 카테콜, 레조르시놀, 시클로헥사놀, 및 3-펜타놀을 포함한다. 종종 "안정제"로도 공지되어 있는 등장화제는 액체 조성물의 등장성을 보장하기 위해 첨가될 수 있고, 다가 당 알콜, 바람직하게, 3가 이상의 당 알콜, 예컨대, 글리세린, 에리트리톨, 아라비톨, 크실리톨, 소르비톨 및 만닛톨을 포함한다. 안정제란, 치료제를 가용화시키거나, 또는 변성 또는 용기 벽에의 부착을 막는 데 도움을 주는 벌크화제부터 첨가제까지 다양한 범위의 기능을 가질 수 있는 광범위한 카테고리의 부형제를 지칭한다. 전형적인 안정제는 (상기 열거된) 다가 당 알콜; 아미노산, 예컨대, 아르기닌, 리신, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 알라닌, 오르니틴, L-류신, 2-페닐알라닌, 글루탐산, 트레오닌 등, 유기 당 또는 당 알콜, 예컨대, 락토스, 트레할로스, 스타키오스, 만닛톨, 소르비톨, 크실리톨, 리비톨, 미오이니시톨, 갈락티톨, 글리세롤 등 (시클리톨, 예컨대, 이노시톨 포함); 폴리에틸렌 글리콜; 아미노산 중합체; 황 함유 환원제, 예컨대, 우레아, 글루타티온, 티옥트산, 소듐 티오글리콜레이트, 티오글리세롤, α-모노티오글리세롤 및 소듐 티오술페이트; 저분자량 폴리펩티드 (예컨대, 10개 이하의 잔기로 이루어진 펩티드); 단백질, 예컨대, 인간 혈청 알부민, 소 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈 단당류, 예컨대, 크실로스, 만노스, 프럭토스, 글루코스; 이당류, 예컨대, 락토스, 말토스, 수크로스 및 삼당류, 예컨대, 라피노오스; 및 다당류, 예컨대 덱스트란일 수 있다. 안정제는 활성 단백질 중량부당 0.1 내지 10,000 중량 범위로 존재할 수 있다.
(또한 "습윤제"로도 공지된) 비-이온성 계면활성제 또는 표면활성제는 치료제의 가용화를 돕기 위해 뿐만 아니라, 교반 유도 응집으로부터 치료 단백질을 보호하기 위해 첨가될 수 있으며, 또한 이를 통해서 제제는 유발되는 단백질 변성 없이 응력을 받는 전단 표면에 노출될 수 있다. 적합한 비-이온성 계면활성제로는 폴리소르베이트 (20, 80 등), 폴리옥사머 (184, 188 등), 플루로닉 폴리올(Pluronic polyol), 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노에테르 (트윈(TWEEN)®-20, 트윈®-80 등)를 포함한다. 비-이온성 계면활성제는 약 0.05 mg/ml 내지 약 1.0 mg/ml 범위로, 또는 약 0.07 mg/ml 내지 약 0.2 mg/ml 범위로 존재할 수 있다.
추가의 기타 부형제로는 벌크화제 (예컨대, 전분), 킬레이팅제 (예컨대, EDTA), 항산화제 (예컨대, 아스코르브산, 메티오닌, 비타민 E), 프로테아제 억제제 및 공용매를 포함한다.
본원의 제제는 또한 그의 항-TNFα 항체 이외에도 제2 치료제도 함유한다. 적합한 제2 치료제의 예가 하기에 제시되어 있다.
투약 스케줄은, 질환의 유형, 질환의 중증도, 및 항-TNFα 항체에 대한 환자의 감수성을 포함하는, 다수의 임상 인자에 의존하여 월 1회 내지 1일 1회로 달라질 수 있다. 구체적인 실시양태에서, 그의 항-TNFα 항체는 1일 1회, 주 2회, 주 3회, 격일로, 매 5일마다, 주 1회, 매 10일마다, 매 2주마다, 매 3주마다, 매 4주마다, 또는 월 1회로, 또는 상기 값 중 임의의 2개 값 사이의 임의의 범위로, 예를 들어, 매 4일마다 내지 매월, 매 10일마다 내지 매 2주마다, 또는 주 2 내지 3회 등으로 투여된다.
투여되는 항-TNFα 항체의 투여량은 특정 항체, 대상체, 및 질환의 성질 및 중증도, 대상체의 건강 상태, 치료 요법 (예컨대, 제2 치료제 사용 여부), 및 선택된 투여 경로에 따라 달라질 것이며; 적절한 투여량은 당업자에 의해 쉽게 결정될 수 있다.
그의 항-TNFα 항체의 개별 투여의 최적의 양 및 그의 간격은 치료되는 병태의 성질 및 정도, 투여 형태, 경로 및 부위, 및 치료받는 특정 대상체의 연령 및 상태에 의해 결정될 것이고, 최종적으로는 의사가 사용되는 적절한 투여량을 결정하게 될 것이라는 것은 당업자에 의해 인식될 것이다. 부작용이 발생한다면, 투여량 및/또는 투여 빈도는 일반 임상 실무에 따라 변경되거나, 또는 감소될 수 있다.
치료되는 장애
본 발명은 대상체에게 본원에서 정의된 바와 같은 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 인간 TNFα 관련 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. "TNFα 관련 장애" 또는 "TNFα 관련 질환"이라는 용어는, 그의 증상 또는 질환의 발병, 진행 또는 지속이 TNFα의 관여가 요구되는 것인 임의의 장애를 지칭한다. 예시적인 TNFα 관련 장애로는 일반 염증의 만성 및/또는 자가면역 상태, 일반 면역 매개 염증성 장애, 염증성 CNS 질환, 눈, 관절, 피부, 점막, 중추 신경계, 위장관, 요로 또는 폐에서 이환된 염증성 질환, 일반 포도막염 상태, 망막염, HLA-B27+ 포도막염, 베체트병(Behcet's disease), 안구 건조 증후군, 녹내장, 쇼그렌 증후군(Sjogren syndrome), 당뇨병 (당뇨병성 신경병증(diabetic neuropathy) 포함), 인슐린 내성, 일반 관절염 상태, 류머티스성 관절염, 골관절염, 반응성 관절염 및 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 소아 관절염, 강직성 척추염 (ankylosing spondylitis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 길랑-바레 증후군(Guillain-Barre syndrome), 중증 근무력증(myasthenia gravis), 근위축 측삭 경화증(amyotrophic lateral sclerosis), 유육종증(sarcoidosis), 사구체신염, 만성 신장 질환, 방광염, 건선 (건선성 관절염(psoriatic arthritis) 포함), 화농성 한선염(hidradenitis suppurativa), 지방층염(panniculitis), 괴저성 농피증(pyoderma gangrenosum), SAPHO 증후군 (윤활막염(synovitis), 여드름, 농포증(pustulosis), 골과다증 및 골염), 여드름, 스위트 증후군(Sweet's sydrome), 천포창(pemphigus), 크론병 (장외 징후(extraintestinal manifestastation) 포함), 궤양성 결장염, 기관지 천식(asthma bronchiale), 과민성 폐렴(hypersensitivity pneumonitis), 일반 알레르기, 알레르기성 비염, 알레르기성 부비강염(allergic sinusitis), 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD), 폐 섬유증, 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis), 카와사키 증후군(Kawasaki syndrome), 거대 세포 동맥염(Giant cell arteritis), 처그-스트라우스 혈관염(Churg-Strauss vasculitis), 결절성 다발동맥염(polyarteritis nodosa), 화상, 이식편 대 숙주 질환(graft versus host disease), 숙주 대 이식편 반응, 장기 또는 골수 이식 후 거부 에피소드, 일반 혈관염의 전신 및 국부 상태, 전신 및 피부 홍반성 낭창(systemic and cutaneous lupus erythematode), 다발성근염(polymyositis) 및 피부근염(dermatomyositis), 경피증(sclerodermia), 전자간증(pre-eclampsia), 급성 및 만성 췌장염, 바이러스성 간염, 알콜성 간염, 예컨대, 눈 수술 (예컨대, 백내장 (수정체 대체) 또는 녹내장 수술), 관절 수술 (관절경 수술 포함), 관절 관련된 구조 (예컨대, 인대) 수술, 구강 및/또는 치과 수술, 최소 침습성 심혈관 시술 (예컨대, PTCA, 죽상반절제술, 스텐트 배치), 복강경검사 및/또는 내시경 복부내 및 부인과 시술, 내시경 비뇨기과 시술 (예컨대, 전립선 수술, 요관내시경, 방광내시경, 간질성 방광염(interstitial cystitis))과 같은 수술 후 염증, 또는 일반 수술 전후 염증 (예방), 수포성 피부염(bullous dermatitis), 호중구성 피부염(neutrophilic dermatitis), 독성 표피 괴사성용해(toxic epidermal necrolysis), 농포성 피부염(pustular dermatitis), 뇌 말라리아(cerebral malaria), 용혈성 요독 증후군(hemolytic uremic syndrome), 동종이식편 거부반응(allograft rejection), 중이염, 독사교상(snakebite), 결절성 홍반(erythema nodosum), 골수이형성 증후군(myelodysplastic syndrome), 원발성 경화 담관염(primary sclerosing cholangitis), 혈청 반응 음성 척추관절병증(seronegative spondylartheropathy), 자가면역 용혈성 빈혈(autoimmune hematolytic anemia), 구강안면 육아종(orofacial granulamatosis), 증식성 화농성 구내염(pyostomatitis vegetans), 아프타성 구내염(aphthous stomatitis), 지리상 설(geographic tongue), 이동성 구내염(migratory stomatitis), 알츠하이머병(Alzheimer disease), 파킨슨병(Parkinson's disease), 헌팅턴병(Huntington's disease), 벨 마비(Bell's palsy), 크로이츠펠트-야콥병(Creutzfeld-Jakob disease) 및 일반 신경변성 병태를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
암 관련 골용해, 암 관련 염증, 암 관련 동통, 암 관련 악액질(cachexia), 골 전이, 이들이 TNFα의 중추 또는 주변 효과에 의해 유발되는지 및 이들이 염증성, 통각성 또는 신경병성 형태의 동통으로서 분류되는지와는 상관없이, 급성 및 만성 형태의 동통, 좌골 신경통(sciatica), 요통증(low back pain), 손목 터널 증후군(carpal tunnel syndrome), 복합 부위 동통 증후군(complex regional pain syndrome: CRPS), 통풍, 대상포진후 신경통(postherpetic neuralgia), 섬유근육통(fibromyalgia), 국부 동통 상태, 전이성 종양으로 인한 만성 동통 증후군, 월경통(dismenorrhea).
치료되는 특정 장애로는 일반 관절염의 상태, 류마티스성 관절염, 골관절염, 반응성 관절염, 소아 관절염; 건선 (건선성 관절염 포함); 염증성 장 질환 (크론병 포함); 궤양성 결장염 (직장항문염 포함), S상 결장염, 직장 S상 결장염, 좌측 결장염, 광범위한 결장염(extensive colitis) 및 전범위 결장염(pancolitis), 원인불명 결장염(undetermined colitis), 현미경적 결장염 (콜라겐성 결장염(collagenous colitis) 및 림프구성 결장염(lymphocytic colitis), 결합 조직 질환에서의 결장염, 전환 결장염(diversion colitis), 게실병(diverticular disease)에서의 결장염, 호산구성 결장염(eosinophilic colitis) 및 낭염을 포함한다.
가장 바람직하게, 본 발명의 항체는 염증성 장 질환, 특히, 크론병, 궤양성 결장염 또는 현미경적 결장염을 치료하는 데 사용된다. 크론병은 비-협착성/비-투과성, 협착성, 투과성 및 항문주위 질환 행동을 포함한, 회장, 결장, 회장결장 또는 고립성 상부 크론병 (위, 십이지장 및/또는 공장)일 수 있으며, 이는 상기 언급된 것 중 임의의 것의 국재화 및 질환 행동의 임의 조합을 허용할 수 있다. 궤양성 결장염은 궤양성 직장항문염, 직장 S상 결장염, 좌측 결장염, 전범위 궤양성 결장염 및 낭염일 수 있다.
조합 요법 및 다른 측면
바람직하게, 그의 항-TNFα 항체를 이용하여 치료되는 항체는 또한 또 다른 종래 의약으로도 치료된다. 예를 들어, 염증성 장 질환을 앓는 환자는 특히, 중간 내지 중증 질환을 앓는 경우라면, 전형적으로는 또한 메살라진 또는 그의 유도체 또는 프로드럭, 코르티코스테로이드, 예컨대, 부데소니드 또는 프레드니솔론 (경구 또는 i.v.), 면역억제제, 예컨대, 아자티오프린/6-메르캅토퓨린 (6-MP) 또는 메토트렉세이트, 시클로스포린 또는 타크롤리무스로 치료받고 있는 중이다. 환자에게 공동으로 투여될 수 있다는 다른 의약으로는 다른 항-TNFα 항체 (예컨대, 인플리시맙, 아달리무맙, 에타너셉트, 세르톨리주맙 페골, 골리무맙), 인테그린 길항제 (예컨대, 나탈리주맙, 베돌리주맙), 항-IL-23 항체 (예컨대, MEDI2070), 항-β7 항체 (예컨대, 에트롤리주맙), JAK/STAT 경로에서의 JAK 억제제 (예컨대, 토파시티닙) 등을 포함한다. 환자에게 공동으로 투여될 수 있다는 추가 의약으로는 안정적이고, 더욱 장기간의 관해를 유지시키기 위해 면역억제제 (예컨대, 아자티오프린/6-MP 또는 메토트렉세이트 또는 경구용 시클로스포린)를 포함한다. 추가로, 본 발명의 또 다른 측면은 염증을 감소시키기 위한, 본원 상기에서 정의된 바와 같은 항-TNFα 항체의 용도이다.
추가로, 본 발명의 또 다른 측면은 염증성 병태를 앓는 환자에서 염증을 감소시키는 데 사용하기 위한 본원 상기에서 정의된 바와 같은 항-TNFα 항체이다.
본 발명의 추가 측면은 염증성 병태 치료를 필요로 하는 환자에게 유효량의, 본원 상기에서 정의된 바와 같은 항-TNFα 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 병태를 치료하는 방법이다. 염증성 병태는 바람직하게, 상기 정의된 병태들 중 하나이다.
본 발명의 추가 측면은 염증성 병태 예방을 필요로 하는 환자에게 유효량의, 본원 상기에서 정의된 바와 같은 항-TNFα 항체를 투여하는 단계를 포함하는, 염증성 병태를 예방하는 방법이다. 염증성 병태는 바람직하게, 상기 정의된 병태들 중 하나이다.
본 발명의 추가의 또 다른 측면은 개선된 트랜스사이토시스를 갖는 변형된 항체를 수득하기 위해, 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 트랜스사이토시스를 개선시키는 방법이다. 변형된 항체는 바람직하게, 본원 상기에 기술된 항체이다.
본 발명의 추가의 또 다른 측면은 연장된 혈장 반감기를 갖는 변형된 항체를 수득하기 위해, 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 혈장 반감기를 연장시키는 방법이다. 변형된 항체는 바람직하게, 본원 상기에 기술된 항체이다. 혈장 반감기는 비-변형된 항체 (즉, 언급된 돌연변이가 없는 각 모체 항체)의 혈장 반감기 대비 적어도 10%, 또는 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%만큼 연장될 수 있다.
본 발명의 추가의 또 다른 측면은 단백질 가수분해성 분해에 대하여 개선된 저항성을 갖는 변형된 항체를 수득하기 위해, 치환 E233P, L234V 및 L235A를 도입시키는 단계, G236을 결실시키는 단계, 및 하기 추가의 치환(들) (a) 또는 (b):
(a) M252Y, S254T 및 T256E, 또는
(b) N434A를 도입시키는 단계; 및
임의적으로 추가로 본원에 기술된 다른 치환들 중 하나 이상의 것을 도입시키는 단계를 포함하는, TNFα에 대한 항체의 단백질 가수분해성 분해에 대한 저항성을 개선시키는 방법이다.
Figure pct00001
실시예
항체 변이체
항체 아미노산 서열의 Fc 영역 중에 치환을 도입시킴으로써 (이하, "모체 항체" 또는 "Ab-wt"로 지칭되는) 항-TNFα 항체의 수개의 변이체를 생성하였다. Ab-wt의 경쇄는 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖고, Ab-wt의 중쇄는 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는다. 확립된 방법에 의한 부위 지정 돌연변이유발법에 의해 돌연변이를 도입시켰다. 간략하면, PCR에 의해 돌연변이를 도입시켰다. 정방향 프라이머는 의도된 돌연변이를 함유하도록 디자인한 반면, 역방향 프라이머는 두 프라이머의 5' 단부가 연속해서(back-to-back) 어닐링되도록 (그러나, 오버랩은 되지 않도록) 디자인하였다 (도 10). PCR을 25 사이클 (98℃에서 10s 동안, 64℃에서 30s 동안, 72℃에서 3 min 동안) 수행하였다. 아가로스 겔 상에서 PCR 생성물을 전개시키기 전에, 제한 효소 DpnI를 이용하여 PCR 생성물 풀로부터 비-돌연변이화된 PCR 주형을 제거하였다. PCR 생성물의 겔 정제 후, 블런트 단부를 라이게이션시켜 고리화된 플라스미드를 수득하고, 이를 적격 E. 콜라이(E. coli) 세포로 형질전환시켰다. 밤새도록 인큐베이션시킨 후, 수개의 콜로니를 채취하고, 플라스미드 DNA를 단리시키고, 서열분석하여 돌연변이가 도입되었음을 확인하였다.
Figure pct00002
실시예 1. TNFα에의 친화도
방법:
비아코어에 의해 TNFα에의 친화도를 측정하였다. 표준 아민 고정화 비아코어 방법을 이용하여 CM5 칩을 제조하였다. CM5 칩 삽입시, 시스템을 프라이밍한 후, 이어서, BIA-정규화 용액 (비아코어 프리벤터티브 메인트넌스 키트 2(Biacore Preventative Maintenance Kit 2))으로 정규화시켰다. 칩을 포스페이트 완충처리된 염수 트윈-20 (PBS-T) 전개 완충제와 함께 시스템에 첨가하고; 고정화 전, 50 mM NaOH를 3회 주입하여 칩 표면을 프라이밍하였다. 단백질 A를 칩 표면 상에 고정화시켰다. 이를 위해, 단백질을 10 mM 아세테이트 완충제 (pH 4.5) 내로 5 ㎍/mL로 희석시키고, 4개의 모든 플로우 셀에서 ~1000 RU의 결합 반응이 생성되도록 주입하였다. 모든 칩 플로우 셀로부터 비-공유 결합 물질을 제거하기 위해, 3회에 걸쳐 15초 동안 50 mM NaOH로 세척하였다. 단백질 A 칩 상에서, 플로우 셀 2 및 4에서 항체가 포획되었고, 여기서, 플로우 셀 1 및 3은 참조 공제를 위해 사용되었다. 시험 항체를 PBS-T 중에 10 nM으로 희석시키고, 2.5-7.5 uL를 주입하여 120 RU의 포획된 항체를 수득하였다. 피분석물 TNFα를 공급처의 지시대로 물 중 500 ㎍/mL로 제조하고, 추가로 전개 완충제 PBS-T 중에 희석하였다. 단일 사이클 동역학을 이용하여 정상 상태 친화도를 추정하였다. 각각의 단일 사이클 분석 사이클을 위해, 5개의 피분석물 농도의 적정물을 리간드 상에 주입한 후, 이어서, 복합체의 해리를 측정하였다. 글리신 (pH 1.7)을 이용하여 표면을 재생시켰다. 리간드가 포획되지 않은 참조 표면 (각각 fc 1 및 3)으로부터 리간드 결합 포획 표면 (fc 2 및 4)으로부터의 데이터를 공제하는 이중 참조 방법을 사용하였다. 매 3-4 사이클마다 완충제의 블랭크 주입을 실행한 후, 피분석물 주입 사이클로부터 공제하여 리간드 포획 표면 중의 작은 변화에 대해 보정하였다. 각 분석 실행 시작 및 종료시 피분석물의 반복 주입을 사용하여 샘플 분해, 또는 장치 성능 변화에 대해 체크하였다. 모든 분석은 25℃에서 수행하였고, 실험 실행시 샘플 랙(rack)을 10℃에서 인큐베이션시켰다. 각 실험은 적어도 3회 실행하였다. 1-대-1 결합 모델을 이용하여 생성된 동역학적 데이터를 피팅하였다.
결과:
모든 항체는 TNFα와 유사한 결합 동역학적 성질을 보였으며, 이는 도입된 변형 중 어느 것도 항원 결합 영역에 유의적인 변화를 일으키지 않았다는 것을 시사하는 것이다.
Figure pct00003
실시예 2. 효력
방법:
L929 세포를 항-TNFα 항체 변이체의 연속 희석액의 존재하에 0.25 ng/mL의 TNFα 및 1 ㎍/웰의 악티노마이신 D와 함께 인큐베이션시켰다. 37℃/5% CO2에서 20 h 동안 인큐베이션시킨 후, MTS (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-5-(3-카르복시메톡시페닐)-2-(4-술포페닐)-2H-테트라졸륨 및 전자 커플링 시약 (페나진 에토술페이트, PES)을 이용하여 증식 반응을 측정하였다. 대사 활성 세포에 존재하는 데히드로게나제 효소에 의해 MTS를 포르마잔으로 전환시켰다. 492 nm에서의 흡광도에 의해 측정된, 포르마잔 생성물의 양은 배양물 중 살아있는 세포의 개수와 정비례하였다.
결과:
본 결과는 도 1에 제시되어 있다. 항-TNFα 항체의 Fc 영역 내로의 돌연변이 도입이 효력에 어떤 영향도 미치지 않았다.
실시예 3. Fcγ 수용체 ( CD16a , CD16b ) 에의 친화도
방법:
비아코어에 의해 FcγR에의 친화도를 측정하였다. 표준 아민 고정화 비아코어 방법을 이용하여 CM5 칩을 제조하였다. CM5 칩 삽입시, 시스템을 프라이밍한 후, 이어서, BIA-정규화 용액 (비아코어 프리벤터티브 메인트넌스 키트 2)으로 정규화시켰다. 칩을 PBS-T 전개 완충제와 함께 시스템에 첨가하고; 고정화 전, 50 mM NaOH를 3회 주입하여 칩 표면을 프라이밍하였다. His-태그 포획 시스템을 이용하여 FcγR을 칩 표면 상에 고정화시켰다. 비아코어 키트 설명서에 따라 항-His 태그 칩을 제조하였고, 여기서, 4개의 모든 플로우 셀 상에 ~12,000 RU의 항체가 침착되었다. 모든 칩 플로우 셀로부터 비-공유 결합 물질을 제거하기 위해, 3회에 걸쳐 30초 동안 10 mM 글리신 (pH 1.5)으로 세척하였다. Fcγ 수용체를 PBS-T 중에 0.5-2 ㎍/mL 범위로 희석하였고, 여기서, 2.5-5.0 ㎕를 칩 상에 주입하여 포획 수준이 60 내지 200 RU가 되도록 만들었다. 분석 전에 항체를 PBS-T 중에 희석하였다. 단일 사이클 동역학을 이용하여 정상 상태 친화도를 추정하였다. 각각의 단일 사이클 분석 사이클을 위해, 5개의 항체 농도의 적정물을 FcγR 리간드 상에 주입한 후, 이어서, 복합체의 해리를 측정하였다. 권고된 용액, 항-His 포획 표면에 대해서는 10 mM 글리신 (pH 1.5)을 이용하여 표면을 재생시켰다. 리간드가 포획되지 않은 참조 표면 (각각 fc 1 및 3)으로부터 리간드 결합 포획 표면 (fc 2 및 4)으로부터의 데이터를 공제하는 이중 참조 방법을 사용하였다. 매 항체 적정 사이클마다 완충제의 블랭크 주입을 실행한 후, 피분석물 주입 사이클로부터 공제하여 리간드 포획 표면 중의 작은 변화에 대해 보정하였다. 모든 분석은 25℃에서 수행하였고, 실험 실행시 샘플 랙을 10℃에서 인큐베이션시켰다. 각 실험은 적어도 3회 실행하였다.
결과:
돌연변이의 도입이 CD16a(V), CD16a(F) 및 CD16b에의 친화도에는 어떤 영향도 미치지 않았다. 그러나, 일부 항체 변이체는 CD16a에 대해 증가된 결합을 보였다. 특히, Ab-A-DLE-PVAΔG는 CD16a 수용체에 대해 낮은 친화도로 및 CD16b에 대해 개선된 결합을 보였다.
Figure pct00004
실시예 4. FcRn에의 친화도
방법:
제조사에 의해 기술된 바와 같이 아민-커플링 화학법을 이용하여 항-TNFα IgG1 항체 (~500 공명 단위 (RU))와 커플링된 CM5 센서 칩이 장착된 비아코어 3000 장치를 이용하여 SPR을 수행하였다. 아민-커플링 키트 (GE 헬쓰케어(GE Healthcare))를 이용하여 10 mM 아세트산 나트륨 (pH 4.5) 중 2.0 ug/mL의 각 단백질을 주입하여 커플링을 수행하였다. HBS-P 완충제 (pH 7.4) (10 mM HEPES, 150 mM NaCl, 0.005% 계면활성제 P20) 또는 포스페이트 완충제 (pH 6.0) (67 nM 포스페이트 완충제, 150 mM NaCl, 0.005% 트윈 20)를 전개 및 희석 완충제로서 사용하였다. pH 7.4 또는 pH 6.0에서 고정화된 항체 상에 적정된 양 (1,000 - 31.2 nM)의 단량체 His-태그부착된 인간 FcRn (hFcRn)을 주입하여 결합 동역학적 성질을 측정하였다. 모든 SPR 실험은 25℃에서 40 ul/min 유속으로 수행하였다. 결합 데이터는 0으로 조정하고, 참조 셀 값을 공제하였다. BIA이벨류에이션(BIAevaluation) 소프트웨어 (버전 4.1)에 의해 제공된 랭뮤어(Langmuir) 1:1 리간드 결합 모델을 이용하여 결합 동역학적 성질을 측정하였다.
결과:
본 결과는 야생형 항체 Ab-wt가 엄격하게 pH에 의존하는 방식으로 hFcRn에 결합한 것으로 나타났다. 모든 조작된 항체 변이체는 pH 6.0에서 FcRn에 대하여 더 높은 친화도를 보였지만, 그의 pH 의존성은 유지하였고, pH 7.4에서는 수용체에 결합하지 않았다. 모든 항체 변이체는 야생형 IgG1 Fc 영역을 함유하는 인플리시맙과 비교하여 FcRn에 대하여 개선된 결합을 보였다.
Figure pct00005
실시예 5. 트랜스사이토시스
방법:
0.4 ㎛ 공극 크기가 0.4 ㎛인 콜라겐으로 코팅된 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE) 막이 있는 트랜스웰 필터 (1.12 ㎠)를 완전 성장 배지 중에서 O/N 인큐베이션시킨 후, 웰당 1.0 x 106개의 T84 세포를 시딩하였다. MILLICELL-ERS-2 볼트-옴 미터를 이용하여 경상피 전기 저항 (TEER)을 매일 모니터링하였다. ~1,000 - 1,300 Ω x ㎠의 TEER 값으로 전면생장에 도달하기 전에 4-5일 동안 배양물을 성장시켰다. 실험 전, 단일층을 행크스 평형 염 용액(Hank's Balanced Salt Solution: HBSS) 중에서 1 h 동안 기근시켰다. 이어서, 400 nM의 항체 변이체 또는 IFX 단독 또는 관련된 특이성이 없는 4,000 nM 인간 골수종 IgG와 함께 첨부 트랜스웰 챔버에 첨가하였다. 첨가 후 0 및 4 h째에 기저외측 저장소로부터 샘플을 수집하였다. ELISA에 의해 기저외측 저장소 중의 항체 농도를 측정하였다. 간략하면, 96웰 맥시소르프(Maxisorp) 플레이트를, 둘 모두 PBS 중에 1 ㎍/ml로 희석된 것인, 재조합 TNFα 또는 염소로부터의 항-인간 Fc 특이적 항체로 O/N 코팅하였다. 이어서, 플레이트를 RT에서 2 h 동안 4% 탈지유를 함유하는 PBS로 차단한 후, 0.05% 트윈 20을 함유하는 PBS로 4회에 걸쳐 세척하였다. 트랜스사이토시스 실험 동안 수집된 샘플을 웰에 첨가하고, 상기와 같이 세척하기 전 2 h 동안 인큐베이션시켰다. 알칼리성 포스파타제 (ALP)-접합된, 염소로부터의 항-인간 Fc 특이적 항체를 이용하여 포획된 항체 변이체, IFX 또는 전체 IgG를 검출하였다. 100 ㎕ ALP-기질을 첨가하여 결합을 시각화하고, 405 nm 흡수 스펙트럼을 기록하였다. 수송된, 항체 변이체, IFX 및 전체 IgG의 양을 각각의 개별 항체 변이체의 표준 곡선으로부터 계산하였다.
분극화된 인간 상피 세포를 통한 항체 변이체의 트랜스사이토시스
결과:
조작된 항-TNFα 항체 변이체를 세포 단일층을 통한 트랜스사이토시스에 대해 시험하고, wt 항체 또는 또 다른 인간 IgG1 항-TNFα 항체로서 IFX와 비교하였다. 결과는 도 2에 도시되어 있다. wt 항-TNFα 항체는 첨부로부터 기저외측부 저장소로 수송되었다. Ab-wt와 비교하였을 때, 조작된 변이체의 항체 패널 중 Ab-YTE-DLE-PVAΔG가 좀더 FcRn에의 개선된 결합을 위해 기저외측부에서 방출된 것으로 나타났다. wt Fc 영역을 갖는 또 다른 IgG1 항체인 IFX와 비교하였을 때, Ab-A-DLE-PVAΔG가 약 1.8배 더 효율적으로 수송되었다.
경쟁 IgG의 존재하에서의 분극화된 인간 상피 세포를 통한 항체 변이체의 트랜스사이토시스
결과:
항-TNFα 항체 변이체를 10배 과량의 인간 골수종 IgG와 함께 인큐베이션시켰을 때, 분극화된 T84 세포 단일층을 통해 첨부로부터 기저외측부 저장소로 수송된 면역글로불린의 총량은 첨가 후 4시간째 모든 항체에 대하여 유사하였다. 그러나, pH 6.0에서의 FcRn에 대하여 증가된 친화도는 관련된 특이성이 없는 과량의 경쟁 인간 IgG의 존재하에서도 또한 세포 단일층을 통한 특이적인 항-TNFα 수송을 유의적으로 더 높은 비율로 일으켰다. 본 결과는 도 3에 도시되어 있다.
실시예 6. ADCC
방법:
프로메가(Promega)로부터의 ADCC 리포터 생물검정 코어 키트를 이용하였다. 간략하면, mTNFα CHO-K1 표적 세포를 1 x 105/mL로 백색 (투명 바닥) 조직 배양 플레이트 100 ㎕/웰 상에 시딩하였다. 플레이트를 37℃/5% CO2에서 O/N 인큐베이션시켰다. 2일째, 95 ㎕의 검정 배지를 제거하고, 3 x 106/mL의 조작된 주르카트(Jurkat) 이펙터 세포 25 ㎕로 대체하였다. 이어서, 플레이트를 37℃/5% CO2에서 6 h 동안 인큐베이션시켰다. 인큐베이션이 끝날 무렵 바이오글로(BioGlo)™ 시약을 제조하였다. 웰당 75 ㎕의 바이오글로™ 시약을 첨가하기 전 10 - 20 min 동안 RT에서 플레이트를 평형화시켰다. 암실에서 5 - 10 min의 인큐베이션 후, 발광을 측정하였다. 4-PL 모델을 이용하여 데이터를 피팅하였다.
결과:
본 결과 (도 4 참조)는 항-TNFα 항체 모두 ADCC를 유도하였지만, 단, 뚜렷이 다른 강도로 이루어진 것으로 나타났다. 야생형 항체 Ab-wt와 비교하였을 때, Ab-A-AEA-PVAΔG는 유사한 ADCC 활성을 보인 반면, 나머지 다른 항체 변이체는 증가된 ADCC를 보였다. 구체적으로, Ab-A-DLE-PVAΔG는 유의적으로 개선된 ADCC를 가졌다.
실시예 7. 조절성 대식세포의 유도
방법:
말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 건강한 기증자의 버피 코트로부터 단리시켰다. 피콜(Ficoll) 구배 원심분리를 통해 세포를 단리시켰다. 두 개별 기증자의 세포를 동일한 개수로 혼합하고, 2 x 105개의 세포 혼합물을 100 ㎕/웰인 총 부피로 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 37℃/5% CO2에서 48 h 동안 인큐베이션시켰다. 48 h 후, 항-TNFα 항체 변이체 또는 IFX를 첨가하여 최종 농도가 10 ㎍/mL에 도달하도록 만들었다. 각 화합물을 5 또는 6회 반복하여 첨가하였다. 최종 부피는 150 ㎕/웰이었다. 인간 혈청 IgG1 (시그마(Sigma) #I5154)을 대조군으로서 사용하였다. 화합물 첨가 후, 혼합된 림프구 반응물 (MLR)을 37℃/5% CO2에서 추가로 4일 동안 배양하였다. 이후, PBS/5 mM EDTA (PBS/EDTA)를 이용하여 플레이트를 세척하고, 50 ㎕/웰 PBS/EDTA와 함께 RT에서 20 min 동안 인큐베이션시켰다. 플레이트를 원심분리하고, 액체를 플리킹하여 밖으로 제거하였다(flicked out). 항체를 PBS/EDTA 중에서 희석하였다 (항-CD14-PE, 항-CD206-APC, 둘 모두 1:10으로 희석). 세포를 50 ㎕의 항체 용액 중에 재현탁시키고, RT에서 20 min 동안 인큐베이션시켰다. 이후, 세포를 PBS/EDTA로 세척하고, 50 ㎕ PBS/EDTA 중에 재현탁시켰다. 염색된 샘플을 FACS디바(FACSDiva) 소프트웨어를 이용하여 FACS 포테사(FACS Fortessa)에서 분석하였다. 플로우조(FlowJo) 소프트웨어를 이용하여 분석을 수행하였다.
결과:
조절성 대식세포의 유도를 4개의 독립 MLR에서 분석하였고, (IFX를 IgG 대조군과 비교하였을 때) 이는 모든 실험에서 성공적이었다. 본 결과는 도 5에 제시되어 있다. 각 실험은 개체간 차이가 있는 상이한 기증자를 사용하여 수행하였다는 사실 때문에, IFX에 의한 유도 수준은 실험마다 상이할 수 있다. 시험된 항-TNFα 항체 변이체 모두 화합물마다 약간 다른 차이를 보이면서 CD14+CD206+ 조절성 대식세포를 유도하였다. Ab-A-DLE-PVAΔG는 IFX보다 더 많은 조절성 대식세포를 유도하였다.
실시예 8. T 세포 증식 억제
방법:
PBMC를 건강한 기증자의 버피 코트로부터 단리시켰다. 피콜 구배 원심분리를 통해 세포를 단리시켰다. 두 개별 기증자의 세포를 동일한 개수로 혼합하고, 2 x 105개의 세포 혼합물을 100 ㎕/웰인 총 부피로 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 37℃/5% CO2에서 48 h 동안 인큐베이션시켰다. 48 h 후, 항-TNFα 항체 변이체 또는 IFX를 첨가하여 최종 농도가 10 ㎍/mL에 도달하도록 만들었다. 각 화합물을 5 또는 6회 반복하여 첨가하였다. 최종 부피는 150 ㎕/웰이었다. 인간 혈청 IgG1 (시그마 #I5154)을 대조군으로서 사용하였다. 화합물 첨가 후, 혼합된 림프구 반응물 (MLR)을 37℃/5% CO2에서 추가로 2일 동안 배양하였다. 이후, 삼중 수소의 티미딘 (3H 티미딘, 0.5 마이크로퀴리/웰)을 배양물에 첨가하였다. 배양물을 37℃/5% CO2에서 18 h 동안 추가로 인큐베이션시켰다. 마이크로베타 필터매트 96(Microbeta Filtermat 96) 세포 수확기를 이용하여 샘플을 수확하고, 단일 검출기가 장착된 마이크로베타 마이크로플레이트카운터(Microbeta MicroplateCounter)를 이용하여 분석하였다. 샘플을 웰당 10초 동안 계수하고, 분당 계수 (cpm)로 변환시켰다.
결과:
T 세포 증식 억제를 3개의 독립 MLR에서 측정하였고, 양성 대조군으로서 IFX가 억제를 유도하였다면, 성공적인 것으로 정의하였다. 가정컨대, 조절성 대식세포 유도 차이에 기인하여 개별 실험에서의 IFX에 의한 억제 수준은 상이할 수 있다. 각 실험에서, T 세포 증식을 억제시킬 수 있는 항-TNFα 항체 변이체의 잠재능은 양성 대조군 IFX 대비로 계산하였다. 항체 Ab-A-DLE-PVAΔG는 IFX와 비교하였을 때, 유의적으로 증진된 억제를 보인 반면, Ab-YTE-DLE-PVAΔG에 의한 억제는 IFX와 유사하였다 (도 6 참조).
실시예 9. 프로테아제 안정성
방법:
환원 및 비환원 조건하에서 분석을 수행하였다. 환원제 DTT의 존재 및 부재하에서 퍼킨엘머 프로테인 익스프레스 리에이젼트 키트(PerkinElmer Protein Express Reagent Kit)로부터의 상응하는 샘플 완충제를 사용하여 반응을 ?칭하였다 (즉, 정지 시약으로서 사용).
변이체 사이를 식별할 수 있도록 하기 위해, 30시간 동안 분해-시간 프로파일을 얻을 수 있도록 하기와 같이 IgG마다 프로테아제의 양을 선택하였다. 마이크로칩 기반 전기영동 시스템을 이용하여 분석을 수행하였다.
IdeS 분해
실험 용액(working solution: ws)을 제조하기 위해, 한 IdeS 분취물을 100 ㎕ 밀리-Q(Milli-Q) 물 중에서 재구성하였다. IdeS ws 및 샘플을 1:1 (v/v) 비로 조합하고, 완전하게 균질화하였다. 용액을 37℃에서 인큐베이션시키고, 5, 10, 30, 60분 후 샘플을 풀링하고, 정지 시약 중 하나를 이용하여 ?칭하였다. 프로테아제/IgG의 몰비: 4:1.
GluC 분해
실험 용액 (ws)을 제조하기 위해, GluC 스톡을 2X GluC 반응 완충제로 희석하여 50 ㎍/mL 농도로 만들었다. GluC ws 및 샘플을 1:1 (v/v) 비로 조합하고, 완전하게 균질화하였다. 용액을 37℃에서 인큐베이션시키고, 2, 6, 24, 30시간 후 샘플을 풀링하고, 정지 시약 중 하나를 이용하여 ?칭하였다. IgG/프로테아제의 몰비: 4:1.
MMP-3 분해
키모트립신 스톡을 검정 완충제 MMP로 희석하여 50 ㎍/mL로 만들었다. 0.186 mg/mL의 MMP-3을 희석된 키모트립신과 1:1 (v/v) 비로 스파이킹하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션시켰다. 최종 농도 2 mM로 PMSF를 이용하여 활성화를 정지시켰다. 실험 용액 (ws)을 제조하기 위해, 활성화된 MMP-3을 검정 완충제 MMP 중에 희석하여 3.72 ㎍/mL로 만들었다.
MMP-3 ws 및 샘플을 1:1 (v/v) 비로 조합하고, 완전하게 균질화하였다. 용액을 37℃에서 인큐베이션시키고, 2, 6, 24, 30시간 후 샘플을 풀링하고, 정지 시약 중 하나를 이용하여 ?칭하였다. IgG/프로테아제의 몰비: 98:1.
결과:
시험된 항체 변이체는 MMP-3 및 IdeS에 의한 단백질 가수분해성 분해에 대해 탁월한 저항성, 및 GluC에 의한 분해에 대해 우수한 저항성을 보였다 (도 7-9 참조).
<110> Tillotts Pharma AG <120> Antibody variants <130> PWO00311TIL <150> EP17191987.1 <151> 2017-09-19 <160> 30 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 221 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of Ab-wt, the parent antibody of the modified antibodies used in the examples (clone 16-22-H05) <400> 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Phe Ser Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser Ser 85 90 95 Ser Ser Asp Gly Ser Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 100 105 110 Leu Gly Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 115 120 125 Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 130 135 140 Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala 145 150 155 160 Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys 165 170 175 Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp 180 185 190 Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu 195 200 205 Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <210> 2 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-wt, the parent antibody of the modified antibodies used in the examples (clone 16-22-H05) <400> 2 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 245 250 255 Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 275 280 285 Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn 305 310 315 320 Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val 370 375 380 Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 385 390 395 400 Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 405 410 415 Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 420 425 430 Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu 435 440 445 Ser Pro Gly Lys 450 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 of clone 16-22-H05? <400> 3 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Phe Ser Gly Leu Ala 1 5 10 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 of clone 16-22-H05 <400> 4 Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser 1 5 <210> 5 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 of clone 16-22-H05 <400> 5 Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser Ser Ser Ser Asp Gly Ser Tyr Ala 1 5 10 15 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 of clone 16-22-H05 <400> 6 Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr Gly Ile Gly 1 5 10 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 of clone 16-22-H05 <400> 7 Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 8 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 of clone 16-22-H05 <400> 8 Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu 1 5 10 <210> 9 <211> 122 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of humanized IgG of clone 16-22-H05 <400> 9 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 10 <211> 114 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of humanized IgG of clone 16-22-H05? <400> 10 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Phe Ser Gly 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Gly Ala Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Gly Leu Gln Pro 65 70 75 80 Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Tyr Tyr Ser Ser Ser 85 90 95 Ser Ser Asp Gly Ser Tyr Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val 100 105 110 Leu Gly <210> 11 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-YTE-DLE-PVAdeltaG (based on clone 16-22-H05) <400> 11 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 225 230 235 240 Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr 245 250 255 Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu Pro Glu 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 12 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-A-DLE-PVAdeltaG (based on clone 16-22-H05) <400> 12 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 225 230 235 240 Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu Pro Glu 325 330 335 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 13 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-A-AEA-PVA?G (based on clone 16-22-H05) <400> 13 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Asn Asn Tyr 20 25 30 Gly Ile Gly Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Thr Tyr Ile Tyr Pro Gly Phe Ala Ile Thr Asn Phe Ala Asn Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ser Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Pro Val Tyr Ala Thr Ser Ser Gly Tyr Phe Asp Leu Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro 115 120 125 Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr 130 135 140 Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr 145 150 155 160 Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro 165 170 175 Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr 180 185 190 Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn 195 200 205 His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser 210 215 220 Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 225 230 235 240 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 290 295 300 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 305 310 315 320 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Ala Ala Leu Pro Ala Pro Glu 325 330 335 Ala Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 340 345 350 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser 355 360 365 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 370 375 380 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445 Pro Gly Lys 450 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L1 of clone 17-22-B03 <400> 14 Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L2 of clone 17-22-B03 <400> 15 Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser 1 5 <210> 16 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR L3 of clone 17-22-B03 <400> 16 Gln Cys Thr Tyr Tyr Glu Pro Ser Tyr Val Phe Arg Ala 1 5 10 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H1 of clone 17-22-B03 <400> 17 Gly Ile Asp Phe Ser Ala Gly Tyr Asp Met Cys 1 5 10 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H2 of clone 17-22-B03 <400> 18 Cys Ile Asp Ser Arg Arg Glu Glu Ser Asp Tyr Ala Ser Trp Ala Lys 1 5 10 15 Gly <210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR H3 of clone 17-22-B03 <400> 19 Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gly Val Asp Gly Ala Phe Asp Pro 1 5 10 <210> 20 <211> 124 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH of humanized IgG of clone 17-22-B03 <400> 20 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Asp Ser Arg Arg Glu Glu Ser Asp Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gly Val Asp Gly Ala Phe Asp 100 105 110 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 21 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of humanized IgG of clone 17-22-B03?(sc08) <400> 21 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Glu Pro Ser 85 90 95 Tyr Val Phe Arg Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 22 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL of humanized IgG of clone 17-22-B03?(sc02) <400> 22 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Pro 65 70 75 80 Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Glu Pro Ser 85 90 95 Tyr Val Phe Arg Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 <210> 23 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of humanized IgG of clone 17-22-B03?(sc08) <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Glu Pro Ser 85 90 95 Tyr Val Phe Arg Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 24 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Light chain of humanized IgG of clone 17-22-B03?(sc02) <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Lys Cys Gln Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Lys Ala Ser Thr Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu Glu Pro 65 70 75 80 Ala Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Cys Thr Tyr Tyr Glu Pro Ser 85 90 95 Tyr Val Phe Arg Ala Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 25 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-YTE-DLE-PVAdeltaG (based on clone 17-22-B03) <400> 25 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Asp Ser Arg Arg Glu Glu Ser Asp Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gly Val Asp Gly Ala Phe Asp 100 105 110 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 225 230 235 240 Val Ala Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 26 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-A-DLE-PVAdeltaG (based on clone 17-22-B03) <400> 26 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Asp Ser Arg Arg Glu Glu Ser Asp Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gly Val Asp Gly Ala Phe Asp 100 105 110 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 225 230 235 240 Val Ala Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Leu 325 330 335 Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 27 <211> 453 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of Ab-A-AEA-PVAdeltaG (based on clone 17-22-B03) <400> 27 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Ile Asp Phe Ser Ala Gly 20 25 30 Tyr Asp Met Cys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Ala Cys Ile Asp Ser Arg Arg Glu Glu Ser Asp Tyr Ala Ser Trp 50 55 60 Ala Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Lys Asp Ser Ser Lys Asn Thr Val 65 70 75 80 Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95 Cys Ala Arg Gly Gly Tyr Gly Gly Asp Gly Val Asp Gly Ala Phe Asp 100 105 110 Pro Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys 115 120 125 Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly 130 135 140 Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro 145 150 155 160 Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr 165 170 175 Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val 180 185 190 Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn 195 200 205 Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro 210 215 220 Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro 225 230 235 240 Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 245 250 255 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 260 265 270 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 275 280 285 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 290 295 300 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 305 310 315 320 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Ala Ala Leu Pro Ala 325 330 335 Pro Glu Ala Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 340 345 350 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 355 360 365 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 370 375 380 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 385 390 395 400 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 405 410 415 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 420 425 430 Val Met His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 435 440 445 Leu Ser Pro Gly Lys 450 <210> 28 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc region of Ab-YTE-DLE-PVAdeltaG (including hinge region) <400> 28 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Pro Val Ala Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30 Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 85 90 95 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 100 105 110 Pro Leu Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 115 120 125 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 180 185 190 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 195 200 205 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 29 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc region of Ab-A-DLE-PVAdeltaG (including hinge region) <400> 29 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Pro Val Ala Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 85 90 95 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu 100 105 110 Pro Leu Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 115 120 125 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 180 185 190 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 195 200 205 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230 <210> 30 <211> 231 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fc region of Ab-A-AEA-PVAdeltaG (including hinge region) <400> 30 Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 1 5 10 15 Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 20 25 30 Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 35 40 45 Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp 50 55 60 Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr 65 70 75 80 Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 85 90 95 Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Ala Ala Leu 100 105 110 Pro Ala Pro Glu Ala Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 115 120 125 Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys 130 135 140 Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 145 150 155 160 Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 165 170 175 Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 180 185 190 Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser 195 200 205 Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Ala His Tyr Thr Gln Lys Ser 210 215 220 Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 225 230

Claims (16)

  1. TNFα 결합 도메인 및 FcRn 결합 부위를 포함하는 항체로서, 여기서, 항체의 아미노산 서열은
    (i) 아미노산 233P, 234V, 235A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실; 및
    (ii) 아미노산 434A 또는 아미노산 252Y, 254T 및 256E를 포함하는 것인 항체.
  2. 제1항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 239D, 330L 및 332E를 추가로 포함하는 것인 항체.
  3. 제1항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 326A, 332E 및 333A를 추가로 포함하는 것인 항체.
  4. 제1항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 239D, 330L, 332E 및 434A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
  5. 제1항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 239D, 330L, 332E, 252Y, 254T 및 256E, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
  6. 제1항에 있어서, 항체의 아미노산 서열이 아미노산 233P, 234V, 235A, 326A, 332E, 333A 및 434A, 및 아미노산 236번 위치에서의 결실을 포함하는 것인 항체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, pH 6에서 300 nM 미만인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 인간 FcRn에의 친화도를 갖고, pH 7.4에서 인간 FcRn에 대해 친화도를 갖지 않거나, 또는 10 μM 초과인 해리 상수 KD를 특징으로 하는 낮은 친화도를 갖는 항체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 100 pM 미만의 KD로 인간 TNFα에 결합하는 항체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 번호: 1에 제시된 아미노산 서열을 갖는 경쇄, 및 서열 번호: 2에 제시된 아미노산 서열을 갖는 중쇄를 포함하는 대조군 항체보다 더 큰 양으로 분극화된 세포 단일층(polarized cell monolayer)을 통해 첨부(apical side)로부터 기저외측부(basolateral side)로 수송되는 항체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, MMP-3 및 IdeS에 의한 단백질 가수분해성 분해(proteolytic degradation)에 대한 저항성이 인플리시맙보다 더 큰 것인 항체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체를 코딩하는 핵산.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 염증성 병태 치료에서 사용하기 위한 항체.
  13. 제12항에 있어서, 염증성 병태가 위장관의 염증성 장애인 것에서 사용하기 위한 항체.
  14. 제12항에 있어서, 상기 치료가 유효량의 상기 항체를 경구적으로 투여하는 단계를 포함하는 것에서 사용하기 위한 항체.
  15. 제12항에 있어서, 상기 항체가 국소적으로 적용되는 것에서 사용하기 위한 항체.
  16. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항의 항체를 포함하는 제약 조성물.
KR1020207008389A 2017-09-19 2018-09-11 항체 변이체 KR20200052305A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17191987.1 2017-09-19
EP17191987.1A EP3456736B1 (en) 2017-09-19 2017-09-19 Antibody variants
PCT/EP2018/074525 WO2019057567A1 (en) 2017-09-19 2018-09-11 ANTIBODY VARIANTS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20200052305A true KR20200052305A (ko) 2020-05-14

Family

ID=59923273

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207008389A KR20200052305A (ko) 2017-09-19 2018-09-11 항체 변이체

Country Status (20)

Country Link
US (2) US11472872B2 (ko)
EP (2) EP3456736B1 (ko)
JP (2) JP7370965B2 (ko)
KR (1) KR20200052305A (ko)
CN (2) CN118146386A (ko)
AR (1) AR113117A1 (ko)
CA (1) CA3074250A1 (ko)
CY (1) CY1124244T1 (ko)
DK (1) DK3456736T3 (ko)
ES (1) ES2873650T3 (ko)
HR (1) HRP20210823T1 (ko)
HU (1) HUE054261T2 (ko)
LT (1) LT3456736T (ko)
MX (1) MX2020002934A (ko)
PL (1) PL3456736T3 (ko)
PT (1) PT3456736T (ko)
RS (1) RS61883B1 (ko)
SI (1) SI3456736T1 (ko)
TW (1) TWI829648B (ko)
WO (1) WO2019057567A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RS61883B1 (sr) * 2017-09-19 2021-06-30 Tillotts Pharma Ag Varijante antitela
WO2020114616A1 (en) 2018-12-07 2020-06-11 Tillotts Pharma Ag Topical treatment of immune checkpoint inhibitor induced diarrhoea, colitis or enterocolitis using antibodies and fragments thereof
WO2023109928A1 (zh) * 2021-12-16 2023-06-22 上海宝济药业有限公司 抗免疫球蛋白降解酶酶切的Fc变体

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998023289A1 (en) 1996-11-27 1998-06-04 The General Hospital Corporation MODULATION OF IgG BINDING TO FcRn
KR101077001B1 (ko) 1999-01-15 2011-10-26 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US20040132101A1 (en) * 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
AU2005277567A1 (en) * 2004-08-16 2006-03-02 Medimmune, Llc Integrin antagonists with enhanced antibody dependent cell-mediated cytotoxicity activity
US7645450B2 (en) 2004-12-29 2010-01-12 Yuhan Corporation Humanized antibody specific for tumor necrosis factor-alpha
US20080181888A1 (en) 2004-12-31 2008-07-31 Ambrose Christine M Polypeptides That Bind Br3 and Uses Thereof
EP2233500A1 (en) 2009-03-20 2010-09-29 LFB Biotechnologies Optimized Fc variants
BR112013018317A2 (pt) 2010-12-23 2017-03-21 Janssen Biotech Inc mutantes de fc do anticorpo resistentes a protease ativa
EP2943506B1 (en) 2013-01-10 2024-03-13 Genmab B.V. Human igg1 fc region variants and uses thereof
TN2018000301A1 (en) 2016-03-14 2020-01-16 Univ Oslo Engineered immunoglobulins with altered fcrn binding
DK3219726T3 (da) * 2016-03-17 2020-12-07 Tillotts Pharma Ag Anti-TNF-alfa-antistoffer og funktionelle fragmenter deraf
RS61883B1 (sr) * 2017-09-19 2021-06-30 Tillotts Pharma Ag Varijante antitela

Also Published As

Publication number Publication date
RS61883B1 (sr) 2021-06-30
DK3456736T3 (da) 2021-05-03
MX2020002934A (es) 2020-07-22
CY1124244T1 (el) 2022-07-22
EP3684809A1 (en) 2020-07-29
TWI829648B (zh) 2024-01-21
ES2873650T3 (es) 2021-11-03
SI3456736T1 (sl) 2021-06-30
CN111094344B (zh) 2024-03-19
HRP20210823T1 (hr) 2021-06-25
EP3456736B1 (en) 2021-04-07
LT3456736T (lt) 2021-06-10
PT3456736T (pt) 2021-05-28
US20230295288A1 (en) 2023-09-21
AR113117A1 (es) 2020-01-29
US20200277367A1 (en) 2020-09-03
HUE054261T2 (hu) 2021-08-30
EP3456736A1 (en) 2019-03-20
JP2020533996A (ja) 2020-11-26
JP2024010000A (ja) 2024-01-23
CN111094344A (zh) 2020-05-01
CN118146386A (zh) 2024-06-07
WO2019057567A1 (en) 2019-03-28
JP7370965B2 (ja) 2023-10-30
CA3074250A1 (en) 2019-03-28
PL3456736T3 (pl) 2021-09-13
TW201915020A (zh) 2019-04-16
US11472872B2 (en) 2022-10-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9845363B2 (en) Antibodies to plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) and uses thereof
US20230295288A1 (en) Antibody variants
JP7402304B2 (ja) 抗体変異体
JP2023109960A (ja) 抗体バリアント
EA046315B1 (ru) Антитело к фно-альфа, фармацевтическая композиция, содержащая это антитело, его применение, способы трансцитоза и увеличения времени полужизни в плазме

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application
E902 Notification of reason for refusal