KR20200017493A - Lgr5와 결합하는 항체 약물 접합체 - Google Patents

Lgr5와 결합하는 항체 약물 접합체 Download PDF

Info

Publication number
KR20200017493A
KR20200017493A KR1020207001231A KR20207001231A KR20200017493A KR 20200017493 A KR20200017493 A KR 20200017493A KR 1020207001231 A KR1020207001231 A KR 1020207001231A KR 20207001231 A KR20207001231 A KR 20207001231A KR 20200017493 A KR20200017493 A KR 20200017493A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
ser
leu
antibody
val
thr
Prior art date
Application number
KR1020207001231A
Other languages
English (en)
Inventor
피터 추
크리스토퍼 엘. 레예스
Original Assignee
바이오노믹스 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 바이오노믹스 인코포레이티드 filed Critical 바이오노믹스 인코포레이티드
Publication of KR20200017493A publication Critical patent/KR20200017493A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68033—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a maytansine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 실시태양은 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체에 관한 것이고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 약물과 같은 치료제에 접합된다. 일부 실시태양은 이러한 항체 약물 접합체를 사용하는 치료 방법 및 이러한 항체 약물 접합체를 제조하는 방법에 관한 것이다.

Description

LGR5와 결합하는 항체 약물 접합체
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 실시태양은 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체(ADC)에 관한 것이고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 치료제, 예컨대 약물에 접합된다. 일부 실시태양은 이런 ADC를 사용하는 치료 방법 및 이런 ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
GPR49/HG38/FEX로도 알려진 G-단백질 결합 수용체 5(LGR5)를 함유하는 류신-풍부 반복체는 당 단백질 호르몬 수용체와 구조적으로 유사한 수용체 단백질의 G-단백질 결합 수용체(LGR)/G-단백질 결합 수용체(GPR) 단백질 패밀리를 함유하는 류신-풍부 반복체에 속한다. LGR은 3개의 하위 그룹으로 나뉜다: (1) 갑상선 자극 호르몬(TSH) 수용체, 여포 자극 호르몬(FSH) 수용체 및 황체 형성 호르몬(LH) 수용체를 포함하는 당 단백질 호르몬 수용체; (2) 릴렉신 수용체 LGR7 및 LGR8; 및 (3) LRG4, LGR5 및 LGR6. LGR5는 장, 골격근, 태반, 뇌 및 척수를 포함하는 여러 조직에서 발현된다.
본 발명은 상기 문제를 해결하는 것을 목적으로 한다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 G-단백질 결합 수용체 5(LGR5)를 함유하는 인간 류신-풍부 반복체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체를 포함하고, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 약물에 접합된다.
일부 실시태양에서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역(CDR1) 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 25를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR2) 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 27을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR3), 또는 이의 보존적 변형체, SEQ ID NO: 29를 포함하는 경쇄 CDR1, 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 31을 포함하는 경쇄 CDR2, 또는 이의 보존적 변이체, 및 SEQ ID NO: 33을 포함하는 경쇄 CDR3 또는 이의 보존적 변이체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항-LGR5 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1을 포함한다.
일부 실시태양에서, 링커는 절단 불가능한 링커이다. 일부 실시태양에서, 링커는 절단 가능한 링커이다.
일부 실시태양에서, 약물은 미세소관 억제제 및 DNA 손상제로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 미세소관 억제제는 카바지탁셀, 콜세미드, 콜히친, 크립토피신, 데메콜신, 도세탁셀, 2-메톡시에스트라다이올, 도코다졸, 파클리탁셀, 타칼로놀리드, 탁세인 및 빈블라스틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 약물은 모노메틸 아우리스타틴 F, 모노메틸 아우리스타틴 E, 모노메틸 돌라스타틴 10, 듀오카마이신, 메이탄사노이드 1, 듀얼스타틴 3, 칼리케아미신 및 듀오카마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양에서, 약학적 조성물은 본 발명에 제공된 항체 약물 접합체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양에서, 암을 갖는 대상을 치료하는 방법은 본 발명에 제공된 유효량의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 고형 종양을 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 암 줄기세포를 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 폐암, 유방암, 결장암 및 췌장암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 암은 삼중 음성 유방암 세포, K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자에 돌연변이를 갖는 결장암 세포, 및 소세포 폐암 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포를 포함한다. 일부 실시태양에서, 대상은 포유류이다. 일부 실시태양에서, 대상은 인간이다.
일부 실시태양은 또한 항체 약물 접합체와 조합하여 추가 요법을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 추가 요법은 방사선 요법 및 화학 요법제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 항체 약물 접합체의 투여는 추가 요법의 투여와 동시에 수행된다. 일부 실시태양에서, 화학 요법제는 폴리닌산, 플루오로 우라실, 이리노테칸, 젬시타빈, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀, ERBITUX(세툭시맙), PI3K/mTOR 이중 억제제(NVP) 및 SN38로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 추가 요법은 폴리닌산, 플루오로우라실 및 이리노테칸을 포함한다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 항체 약물 접합체를 제조하는 방법은: 링커를 약물에 연결시키는 단계; 및 연결된 약물을 항체에 접합시키는 단계를 포함한다. 일부 실시태양은 또한 접합된 항체를 정제하는 단계를 포함한다.
본 발명의 내용 중에 포함되어 있다.
도 1a는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 NC-MMAF와 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1b는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 CL-MD10과 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1c는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 CL-MMAE와 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1d는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 CL-DMSA와 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1e는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 NC-DM1과 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1f는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 CK-DUA3와 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 1g는 1차 항-LGR5 항체(C12) 및 CK-CAL과 접합된 2차 ADC로 처리된 세포에 대한 세포 생존력의 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM, n = 2.
도 2는 상이한 1차 항-LGR5 항체로 처리된 세포 및 NC-MMAF와 접합된 2차 ADC에 대한 일련의 세포 생존력 그래프를 도시한다. 상이한 1차 항-LGR5 항체는 C12(왼쪽 상단 패널); 18G7Ch(오른쪽 상단 패널); 18G7H6A1(왼쪽 하단 패널); 및 18G7H6A3(오른쪽 하단 패널)을 포함하였다. 평균 +/- SEM.
도 3은 상이한 1차 항-LGR5 항체로 처리된 세포 및 CL-DMSA와 접합된 2차 ADC에 대한 일련의 종양구 형성 그래프를 도시한다. 상이한 1차 항-LGR5 항체는 C12(왼쪽 상단 패널); 18G7Ch(오른쪽 상단 패널); 18G7H6A1(왼쪽 하단 패널); 및 18G7H6A3(오른쪽 하단 패널)을 포함하였다. 평균 +/- SEM.
도 4는 듀오카마이신(왼쪽 패널) 또는 MMAE(오른쪽 패널)와 접합된 1차 항-LGR5 항체로 처리된 세포에 대한 일련의 종양구 형성 그래프를 도시한다. 평균 +/- SEM.
도 5a는 MMAE 또는 PBS(n = 6)와 접합된 항-LGR5 항체(BNC101)로 처리된 이종 이식편 모델에서 시간에 따른 종양 부피의 그래프를 도시한다.
도 5b는 MMAE, MOPC-MMAE 또는 PBS(n = 6)와 접합된 항-LGR5 항체(BNC101)로 처리된 이종 이식편 모델에서 시간에 따른 종양 부피의 그래프를 도시한다.
도 5c는 듀오카마이신, MOPC-듀오카마이신 또는 PBS(n = 6)와 접합된 항-LGR5 항체(BNC101)로 처리된 이종 이식편 모델에서 시간에 따른 종양 부피의 그래프를 도시한다.
도 6a는 링커 및 DMSA의 구조의 예를 도시한다.
도 6b는 항체에 연결된 DMSA의 구조의 예를 도시한다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 실시태양은 인간 LGR5에 특이적으로 결합하고 치료제에 접합된 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체(ADC)에 관한 것이다. 치료제는 링커를 통해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 결합된 약물일 수 있다. 일부 실시태양은 이러한 ADC를 사용하는 치료 방법 및 이러한 ADC를 제조하는 방법에 관한 것이다.
하기 참고문헌은 각각 본 발명에 제공된 방법 및 조성물에 유용한 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체에 관한 것이다: 미국 특허 No. 9221906; 미국 특허 No. 9220774; 미국 특허 No. 9221907; 미국 특허 No. 9546214; 및 미국 특허 No. 9631024를 포함하며, 이들 각각은 그 전문이 본 발명에 명백히 참고로 포함된다. 예를 들어, 미국 특허 No. 9221906; 미국 특허 No. 9220774; 및 미국 특허 No. 9221907은 각각 본 발명에 제공된 방법 및 조성물에 유용한 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체를 개시한다. 미국 특허 No. 9546214는 본 발명에 제공된 방법 및 조성물에 유용한 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 인간화 항체를 개시한다.
LGR5는 계통 내 추적 연구를 통해 장에서 정상 줄기세포 및 종양-개시 세포의 매우 특이적인 마커로서 확인되었다. 이전에 약 150개의 유전자가 확인되었고, 그의 유전자는 Wnt 발현의 중단 이후에 급랭되었다. 이러한 'Wnt 표적 유전자'의 포괄적인 특징화는 LGR5가 선와 기저에서 10-14 증식 쐐기형 세포 집단에서 선택적으로 발현된다는 것을 발견하였다. 이들 선와 기저 원주 세포는 이전에 후보 줄기세포 집단인 것으로 제안되었다. 유전성 lacZ-LGR5 리포터 유전자와 함께 생체 내 혈통 추적을 사용하여, LGR5 장 줄기세포는 선와 기저로부터 시작하여 융모 선단까지 연장되는 lacZ + 자손 세포의 중단되지 않은 리본을 발생시키는 성인 장 줄기세포의 다발성, 자가 재생성 집단인 것으로 확인되었다.
암 줄기세포(CSC)에서 LGR5의 특이적 발현은 선택적이고 효과적으로 CSC를 표적화할 기회를 제공한다. LGR5는 정상 조직과 비교하여 결장 직장암(CRC), 췌장 및 대부분의 다른 고형 종양에서 과발현되어, CRC, 췌장, 유방, 난소, 폐, 위 및 간암에서 CSC를 표적으로하는 넓은 치료 영역을 제공한다.
암에서 LGR5의 기능적 역할은 리보핵산 간섭(RNAi) 녹다운 연구를 통해 확인되었다. CRC 종양 세포주 패널에서 LGR5의 녹다운은 시험관 내 연한 한천 콜로니의 성장 및 생체 내 HCT116 결장 종양 이종 이식편의 성장을 유의하게 억제하였다. LGR5 RNAi 녹다운은 이어서 시험관 내 환자 유래 CRC 종양 세포로부터의 CSC 콜로니의 성장을 감소시키는 것으로 나타났다(데이터는 나타내지 않음). 마지막으로, 분류된 LGR5(+) 환자 유래 이종 이식편 CRC 종양 세포는 대조군 LGR5(-) 세포와 비교하여 생체 내에서 종양 형성이 높은 것으로 밝혀졌다.
CSC는 수술 및 표준 치료 화학요법으로 치료된 많은 암 환자에서 종양 재발의 높은 발생률에 대한 원인인 것으로 여겨진다. 예를 들어, 유방암 환자의 CD44+ CSC는 화학요법 후에 풍부해진 것으로 발혀졌고, 높은 수준의 CSC는 화학요법에 대한 나쁜 임상 반응과 관련이 있는 것으로 밝혀졌다. 유사하게, 전이성 CRC에서, 화학요법 후 손상된 간에서 LGR5 발현이 상향 조절되었는데, 이는 화학요법에 반응하여 증가된 LGR5 CSC가 전이성 질환을 개시 및/또는 악화시키는 것을 암시한다. 실제로, LGR5 발현은 원발성 CRC 종양과 비교하여 전이성 부위에서 유의하게 더 큰 것으로 밝혀졌다.
항- LGR5 항체
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 실시태양은 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 본 발명에 사용된 용어 "항체"는 합성 항체, 단클론 항체, 재조합적으로 생산된 항체, 인트라바디, 다중 특이적 항체(이중 특이적 항체 포함), 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 단일 쇄 Fvs(scFv), Fab 단편, F(ab') 단편, 이황화 결합 Fvs(sdFv)(이중 특이적 sdFv 포함) 및 항-이디오타입(항-Id) 항체, 및 상기의 임의의 에피토프 결합 또는 항원이 LGR5인 항원-결합 단편을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 본 발명에 제공된 여러 실시태양의 항체는 단일 특이적, 이중 특이적, 삼중 특이적이거나 더 큰 다중 특이적일 수 있다. 다중 특이적 항체는 폴리펩타이드의 상이한 에피토프에 대해 특이적일 수 있거나, 이종성 폴리펩타이드 또는 고체 지지체 물질과 같은 이종성 에피토프뿐만 아니라 폴리펩타이드에 대해 특이적일 수 있다. 예를 들어, PCT 공개 WO 93/17715; WO 92/08802; WO91/00360; WO 92/05793; Tutt, et al., J. Immunol. 147:60-69 (1991); 미국 특허 Nos. 4,474,893; 4,714,681; 4,925,648; 5,573,920; 5,601,819; Kostelny et al., J. Immunol. 148 : 1547-1553(1992) 참조; 이들 각각은 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다.
본 발명에 사용된 바와 같이, LGR5는 NCBI 수탁 번호 NP_003658.1의 폴리펩타이드, 또는 NM_003667.2 내의 코딩 뉴클레오타이드 서열 또는 이의 단편에 의해 암호화되는 그의 단편을 포함하는 인간 LGR5를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. NCBI 수탁 번호 NP_003658.1의 아미노산 서열 및 전체 엔트리 및 NM_003667.2의 뉴클레오타이드 서열 및 전체 엔트리는 그 전체가 참조로 완전히 포함된다. 본 발명에서 고려되는 LGR5 단편의 예는 LGR5 엑토도메인, 막관통 도메인 또는 세포내 도메인 및 이의 부분을 포함한다.
일부 실시태양은 본 발명에 제공된 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 항-LGR5 항체 중 어느 하나를 포함하는 항-LGR5 항체의 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 양태에서, 핵산 분자는 본 발명에 제공된 항체 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1과 같은 인간화 또는 완전 인간 단클론의 경쇄 또는 중쇄를 암호화한다.
다양한 실시태양은 본 발명에 제공된 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 항-LGR5 항체 중 어느 하나를 포함하는 항-LGR5 항체의 경쇄 및/또는 중쇄를 암호화하는 핵산 분자 또는 분자들을 포함하는 벡터에 관한 것이다
다양한 실시태양에서, 항체의 당화는 변형될 수 있다. 예를 들어, 당화된 항체가 만들어질 수 있다(즉, 항체는 당화가 없다). 당화는, 예를 들어, 표적 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은, 예를 들어, 항체 서열 내에서 하나 이상의 당화 부위를 변경함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 골격 당화 부위를 제거하여 그 부위에서 당화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 당화는 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시킬 수 있다. 이러한 접근 방식은 미국 특허 Nos. 5,714,350 및 6,350,861에 더욱 상세하게 기술되어 있고; 이들 각각은 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다.
여러 실시태양에서, 항체는 NCBI 수탁 번호 NP_003658.1(SEQ ID NO: 47)의 인간 LGR5 폴리펩타이드 또는 이의 단편에 대해 적어도 60%의 상동성, 또는 적어도 70%의 상동성, 또는 적어도 80%의 상동성, 적어도 85%의 상동성, 적어도 90% 상동성, 적어도 95% 상동성, 또는 적어도 97% 상동성, 또는 적어도 99% 상동성, 또는 100% 상동성을 갖는 LGR5 폴리펩타이드를 포함하거나 이로 이루어진 폴리펩타이드에 특이적으로 결합한다. 이러한 단편은, 예를 들어, 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850 또는 900개의 LGR5 폴리펩타이드의 연속적이거나 비 연속적인 아미노산, 또는 임의의 상기 언급된 길이 사이의 임의의 수의 연속적이거나 비 연속적인 아미노산일 수 있다.
여러 실시태양에서, 항체는 항체 18G7H6A3이고, SEQ ID NO: 13의 중쇄 아미노산 서열 및 SEQ ID NO: 11의 DNA 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체는 항체 18G7H6A3이고 SEQ ID NO:19의 중쇄 가변 도메인을 갖는다. 여러 실시태양에서, 항체는 항체 18G7H6A3이고 SEQ ID NO: 14의 경쇄 서열을 포함한다. 다른 실시태양에서, 항체는 항체 18G7H6A3이고 SEQ ID NO: 21의 경쇄 가변 도메인을 포함한다.
일부 실시태양에서, 항체는 상기 서열들의 서열과 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체는 상기 서열의 중쇄, 경쇄 또는 가변 도메인의 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114, 115, 116, 117 또는 118개 잔기의 범위에 걸쳐 상기 항체 서열과 100% 동일한 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 항체는 항체 서열과 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체는 항체 서열과 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96% 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일한 서열을 포함한다. 일부 실시태양에서, 항체는 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 110, 또는 111개 잔기의 범위에 걸쳐 항체 서열과 100% 동일한 서열을 포함한다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 GYSFTAYW(SEQ ID NO: 23)를 포함하는 중쇄 CDR1, ILPGSDST(SEQ ID NO: 2)를 포함하는 중쇄 CDR2 및 ARSGYYGSSQY(SEQ ID NO: 3)를 포함하는 중쇄 CDR3을 포함한다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 ESVDSYGNSF(SEQ ID NO: 4)를 포함하는 경쇄 CDR1, LTS를 포함하는 경쇄 CDR2 및 QQNAEDPRT(SEQ ID NO: 33)를 포함하는 경쇄 CDR3을 포함한다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 (a) 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 상기 서열의 변이체를 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다. 항체는 또한 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 갖는 중쇄 CDR2를 가질 수 있다. 항체는 또한 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 갖는 중쇄 CDR3을 가질 수 있다. 중쇄의 이러한 변형 이외에도, 항체는 또한 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 갖는 경쇄 CDR1을 가질 수 있다. 항체는 또한 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 포함하는 변이체를 갖는 경쇄 CDR2를 가질 수 있다. 항체는 또한 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 경쇄 CDR3을 가질 수 있다. 일부 실시태양에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다.
일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 첨부된 서열 목록에서 본 발명에 기술된 서열과 80% 또는 90% 이상의 서열 상동성을 갖는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항체를 포함한다. 항체는 또한 본 발명에 기술된 항체 서열과 적어도 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역을 가질 수 있다.
2개의 아미노산 서열(또는 2개의 핵산 서열)의 상동성 백분율은 예를 들어 최적의 비교 목적을 위해 서열을 정렬함으로써 결정될 수 있다(예를 들어, 갭은 제 1 서열의 서열에 도입될 수 있다). 그런 후에, 상응하는 위치에서 아미노산 또는 뉴클레오타이드를 비교하고, 두 서열 사이의 상동성 백분율은 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수이다(즉, % 상동성 = 동일 위치의 수/총 위치 수 × 100). 두 서열의 실제 비교는 공지된 방법, 예를 들어 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 그러한 수학적 알고리즘의 특정한 비 제한적인 예는 Karlin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:5873-5877 (1993)에 기술되어 있으며, 이는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다. 이러한 알고리즘은 Schaffer et al., Nucleic Acids Res., 29 : 2994-3005(2001)에 기술된 바와 같이 BLASTN 및 BLASTX 프로그램 (버전 2.2)에 통합되며, 이는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함된다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 사용할 때 각 프로그램의 기본 매개 변수(예를 들어, BLASTN)가 사용될 수 있다. 한 실시태양에서, 검색된 데이터베이스는 비 이중화(NR) 데이터베이스이고, 서열 비교를 위한 파라미터는 다음에서 설정될 수 있다: http://www.ncbi.nlm.nih.gov, 2002. 4. 10. : 필터 없음; 기대 값 10; 3의 단어 크기; 매트릭스는 BLOSUM62이며; 갭 비용의 존재(Existence)는 11이고 확장(Extension)은 1이다.
또한, 다양한 실시태양은 가변 경쇄(VL) 및/또는 가변 중쇄(VH) 도메인에서 하나 이상의 아미노산 잔기 치환을 포함하는 본 발명에 제공된 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 항-LGR5 항체 중 임의의 하나를 포함하는 상기 항체의 변이체를 포함한다. 몇몇은 또한 하나 이상의 VL CDR 및/또는 하나 이상의 VH CDR에서 하나 이상의 추가 아미노산 잔기 치환을 갖는 상기 항체의 변이체를 포함한다. 상기 항체의 VH 도메인, VH CDR, VL 도메인 및/또는 VL CDR에 치환을 도입함으로써 생성된 항체는, 예를 들어, LGR5에 결합하는 능력에 대해 시험관 내 및 생체 내에서 테스트될 수 있다(예를 들어, ELISA 및 BIAcore를 포함하나 이에 제한되지 않는 면역 분석).
다양한 실시태양은 본 발명에 제공된 LGR5에 특이적으로 결합하는 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 항-LGR5 항체 중 임의의 하나와 같은 항-LGR5 항체의 VH 도메인, VH CDR, VL 도메인 또는 VL CDR의 유도체를 포함하는 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 이는 당업자에게 공지된 표준 기술을 사용하여, 예를 들어 부위-지정 돌연변이 유발 및 PCR-매개 돌연변이유발을 비롯한 항체를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에서 돌연변이(예를 들어, 첨가, 결실 및/또는 치환)를 도입할 수 있다 아미노산 치환을 생성하기 위해 일상적으로 사용된다. 한 실시태양에서, VH 및/또는 VL CDR 유도체는 원래의 VH 및/또는 VL CDR에 비해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환 또는 2개 미만 아미노산 치환을 포함한다. 다른 실시태양에서, VH 및/또는 VL CDR 유도체는 하나 이상의 예측된 비 필수 아미노산 잔기(즉, 항체가 LGR5에 특이적으로 결합하는 데 중요하지 않은 아미노산 잔기)에서 이루어진 보존적 아미노산 치환(예를 들어 상기)을 갖는다. 대안적으로, 돌연변이는 포화 돌연변이 발에 의해와 같이 VH 및/또는 VL CDR 암호화 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위로 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이체는 생물학적 활성에 대해 선별되어 활성을 보유하는 돌연변이체를 식별할 수 있다. 돌연변이유발 후, 암호화된 항체가 발현될 수 있고 항체의 활성이 결정될 수 있다.
몇몇 실시태양은 또한 LGR5 또는 이의 단편에 특이적으로 결합하는 항체를 포함하며, 상기 항체는 본 발명에 제공된 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 것을 포함하는 항-LGR5 항체 중 어느 하나를 포함하는 본 발명에 기술된 임의의 항체의 가변 중쇄 및/또는 경쇄의 아미노산 서열과 적어도 45%, 적어도 50%, 적어도 55%, 적어도 60%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일한 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄의 아미노산 서열을 포함한다.
다른 실시태양은 본 발명에 제공된 18G7Ch, 18G7H6A3 및 18G7H6A1로 지정된 항-LGR5 항체 중 임의의 하나와 같은 항-LGR5 항체의 임의의 부분에서 보존적 아미노산 치환의 도입을 포함한다. "보존적 아미노산 치환"은 기능적으로 동등한 아미노산을 치환하는 아미노산 치환을 지칭하는 것이 당업계에 잘 알려져 있다. 보존적 아미노산 변화는 생성된 펩타이드의 아미노산 서열에서 침묵 변화를 초래한다. 예를 들어, 유사한 극성의 하나 이상의 아미노산이 기능적 등가물로서 작용하여 펩타이드의 아미노산 서열 내에서 침묵 변경을 초래한다. 전하 중성이고 잔기를 더 작은 잔기로 대체하는 치환은 잔기가 상이한 그룹에 있더라도 "보존적 치환"으로 간주될 수 있다(예를 들어, 더 작은 이소류신에 의한 페닐알라닌의 대체). 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리가 당업계에 정의되어 있다. 보존적 아미노산 치환의 여러 패밀리가 표 1에 제시되어 있다.
패밀리 아미노산
비 극성 Trp, Phe, Met, Leu, Ile, Val, Ala, Pro
불변 극성 Gly, Ser, Thr, Asn, Gln, Tyr, Cys
산성/음으로 하전 Asp, Glu
염기/양으로 하전 Arg, Lys, His
베타-가지화 Thr, Val, Ile
사슬 배향에 영향을 미치는 잔기 Gly, Pro
방향족 Trp, Tyr, Phe, His
일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 약 200nM 미만, 약 100nM 미만, 약 80nM 미만, 약 50nM 미만, 약 20nM 미만, 약 10nM 미만, 약 1nM 미만의 KD, 및 임의의 상기 값 사이의 범위로 인간 LGR5에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 약 10nM, 5nM, 4nM, 3nM, 2nM, 1nM 미만 및 상기 임의의 상기 값의 범위의 친화성으로 LGR5에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 약 0.0001nM, 0.001nM, 0.01nM 초과, 및 임의의 상기 값의 범위의 친화성으로 LGR5에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 SEQ ID NO: 47의 아미노산 T175, E176, Q180, R183, S186, A187, Q189, D247, E248, T251, R254, S257, N258, K260을 포함하거나 이로 이루어지거나 이의 내부의 에피토프에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 류신이 풍부한 반복체 6-9를 포함하거나 이로 이루어지거나 이의 내부의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 전문이 참조로 포함된 Chen et al. Genes Dev. 27(12):1345-50 참조). 일부 실시양태에서, 본 발명에 제공된 항-LGR5 항체는 LGR5 엑토 도메인의 볼록한 표면을 포함하거나 이로 이루어거나 이의 내부의 에피토프에 결합한다(예를 들어, 전문이 참조로 포함된 Chen et al. Genes Dev. 27(12):1345-50 참조).
특정 인간화 항- LGR5 항체
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 뮤린 항체 '18G7.1'로부터 유래된 것을 비롯한 특정 항-LGR5 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 사용을 포함한다. 뮤린 항체 18G7.1을 인간화하기 위한 수용체 프레임워크로서 인간 생식 계열 서열이 사용되었다. 가장 가까운 생식선 서열을 찾기 위해, 가장 유사한 발현 된 경쇄 및 가장 유사한 중쇄는 NCI IgBLAST(ncbi.nlm.nih.gov/igblast/)에 의해 생식선 서열 데이터베이스에서 확인되었다. 이 검색에서 18G7.1의 CDR 서열이 마스킹되었다. 가장 적합한 발현 서열의 선택은 표준 및 계면 잔기의 서열 상동성을 확인하고 CDR 루프 길이의 유사성을 확인하는 것을 포함하였다.
후보 인간화 서열과 부모 뮤린 단클론 항체 18G7.1 사이의 주요 구조적 프레임워크 잔기에서 잠재적 구조 충돌을 확인하기 위해, 3차원 모델이 생성되었다. 항체 구조의 복합체를 사용하여 이식된 후보 인간화 서열을 갖는 상동성 모델을 생성하고 분자 에너지를 최소화하였다. 컴퓨터 소프트웨어 Pymol을 사용하는 구조 분석을 사용하여 적절한 폴딩에 부정적인 영향을 줄 수 있는 잔기를 확인하였다.
이 분석으로부터, i) 폴딩에 대한 가능한 영향의 분석에 기초하여 후보 인간화된 프레임 워크 영역 내에서 선택된 치환을 함유하는 기능성 인간 프레임워크 및 ii) 부모 18G7.1 뮤린 항체 CDR(SEQ ID NOs: 1, 2 및 3)을 포함하는 6개의 후보 VH 사슬이 제작되었다. 프레임 내에서 인간 IgG1 불변 영역에 융합된 후보 VH 사슬은 화학적으로 합성된다.
유사하게, 다음을 포함하는 2개의 후보 VL 사슬이 제작되었다: 1) 폴딩에 대한 잠재적 영향의 분석에 기초하여 후보 인간화된 프레임워크 영역 내에서 선택된 치환을 함유하는 기능성 인간 프레임워크 및 ii) 부모 18G7.1 뮤린 항체 CDR(SEQ ID NOs: 4, 5 및 6)을 포함하는 2개의 후보 VL 사슬이 제작되었다. 프레임 내에서 인간 IgG1 불변 영역에 융합된 후보 VL 사슬 및 후보 VH 사슬은 화학적으로 합성 되었다.
선택된 후보 변이체 인간화된 중쇄 및 경쇄 조합을 포유 동물 세포로의 공동-형질 감염에 의해 기능성에 대해 테스트하였다. 상기 6개의 후보 인간화 18G7.1 중쇄 각각은 HEK 293 세포 내로 후보 18G7.1 경쇄 중 하나와 공동-형질 감염되었고, 조절된 배지를 유세포 분석법에 의해 LGR5 항원 결합 활성에 대해 분석하였다. 또한, 상기 3개의 후보 인간화된 18G7.1 중쇄를 HEK 293 세포 내로 제 2 후보 18G7.1 경쇄와 공동-형질 감염시키고, 조절된 배지를 유동 세포 측정법에 의해 LGR5 항원 결합 활성에 대해 분석하였다. 18G7H6으로 알려져 있고 가장 강력한 결합을 나타내는 18G7.1 후보 중쇄/경쇄 조합(인간화 변이체)이 친화도 성숙을 위해 선택되었다.
선택된 인간화된 변이체 18G7H6의 친화성을 증가시키기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 및 포화 돌연변이 유발의 조합을 사용하였다. 중쇄 CDR1 및 경쇄 CDR1 및 CDR3의 잔기를 알라닌으로 돌연변이시키고, HEK 293 세포로 형질 감염시키고, 생성된 조절된 배지를 유세포 분석법에 의해 LGR5 항원 결합 활성에 대해 분석하였다. 포화 돌연변이유발은 중쇄 CDR3에서 수행하였으며, CDR3의 모든 잔기는 그 위치에서 원래 아미노산 상동성을 제외하고 19개의 자연 발생 아미노산 각각으로 돌연변이되었다. 각각의 돌연변이체를 HEK 293 세포로 형질감염시키고, 생성된 조절된 배지를 유세포 분석법에 의해 LGR5 항원 결합 활성에 대해 분석하였다.
이들 돌연변이는 3개의 구조체로 증가하는 수로 혼입되었다. 이어서, 이들 3개의 구조체를 HEK 293 세포 내로 형질감염시키고, 생성된 조절된 배지를 유세포 분석법에 의해 LGR5 항원 결합 활성에 대해 분석하였다. 추가 특성화를 위해 2개의 구조체 18G7H6A1 및 18G7H6A3(BNC101로도 알려짐)을 선택하였다. 표 2는 항체의 특정 서열을 열거한다.
설명 SEQ ID NO:
18G7.1 중쇄 CDR1 아미노산 1
18G7.1 중쇄 CDR2 아미노산 2
18G7.1 중쇄 CDR3 아미노산 3
18G7.1 경쇄 CDR1 아미노산 4
18G7.1 경쇄 CDR2 아미노산 5
18G7.1 경쇄 CDR3 아미노산 6
18G7H6A1 중쇄 DNA 7
18G7H6A1 경쇄 DNA 8
18G7H6A1 중쇄 아미노산 9
18G7H6A1 경쇄 아미노산 10
18G7H6A3 중쇄 DNA 11
18G7H6A3 경쇄 DNA 12
18G7H6A3 중쇄 아미노산 13
18G7H6A3 경쇄 아미노산 14
18G7Ch 중쇄 DNA 15
18G7Ch 경쇄 DNA 16
18G7Ch 중쇄 아미노산 17
18G7ch 경쇄 아미노산 18
18G7H6A3 중쇄 가변성 도메인 아미노산 19
18G7H6A3 중쇄 가변성 도메인 DNA 20
18G7H6A3 경쇄 가변성 도메인 21
18G7H6A3 경쇄 가변성 도메인 DNA 22
18G7H6A3 중쇄 CDR1 아미노산 23
18G7H6A3 중쇄 CDR1 DNA 24
18G7H6A3 중쇄 CDR2 아미노산 25
18G7H6A3 중쇄 CDR2 DNA 26
18G7H6A3 중쇄 CDR3 아미노산 27
18G7H6A3 중쇄 CDR3 DNA 28
18G7H6A3 경쇄 CDR1 아미노산 29
18G7H6A3 경쇄 CDR1 DNA 30
18G7H6A3 경쇄 CDR2 아미노산 31
18G7H6A3 경쇄 CDR2 DNA 32
18G7H6A3 경쇄 CDR3 아미노산 33
18G7H6A3 경쇄 CDR3 DNA 34
18G7H6A1 중쇄 CDR1 아미노산 35
18G7H6A1 중쇄 CDR1 DNA 36
18G7H6A1 중쇄 CDR2 아미노산 37
18G7H6A1 중쇄 CDR2 DNA 38
18G7H6A1 중쇄 CDR3 아미노산 39
18G7H6A1 중쇄 CDR3 DNA 40
18G7H6A1 경쇄 CDR1 아미노산 41
18G7H6A1 경쇄 CDR1 DNA 42
18G7H6A1 경쇄 CDR2 아미노산 43
18G7H6A1 경쇄 CDR2 DNA 44
18G7H6A1 경쇄 CDR3 아미노산 45
18G7H6A1 경쇄 CDR3 DNA 46
LGR5 아미노산 서열 47
18G7H6A1 중쇄 가변성 아미노산 48
18G7H6A1 경쇄 가변성 아미노산 49
18G7H6A3과 같은 항-LGR5 항체의 특정 특성은 그 전문이 명백히 참조로 포함된 미국 특허 No. 9546214에 개시되어 있다. 특정 특성이 아래에 요약되어 있다.
특정 항- LGR5 항체의 특성
재조합 LGR5를 발현하는 차이니즈 햄스터 난소(CHO)를 이용하는 FACS-기반 분석에서, 18G7H6A1 및 18G7H6A3은 각각 인간 LGR5 결합에 대해 EC50 <10nM을 갖는 것으로 결정되었다. 다른 연구에서, 18G7H6A3은 인간 및 사이노 LGR5에 강하게 결합하지만 랫트 또는 마우스 LGR5에는 결합하지 않는 것으로 밝혀졌다. ELISA-기반 플레이트 결합 분석에서, 18G7H6A3는 300pM의 EC50으로 LGR5 엑토도메인-IgG-Fc 융합 단백질에 결합하는 것으로 결정되었다.
LGR5의 세포 표면 발현 수준을 유세포 분석법을 사용하여 다양한 인간 세포주에 대해 결정하였다. CT1 결장 직장 종양 세포 및 췌장암 세포주 Panc-1, Capan2 및 CFPAC는 가장 높은 LGR5 발현체 중 하나이었다. 췌장암 세포주(AsPC-1, SW1990, HPAFII), 시스플라틴 내성 난소암 세포주(OVCAR8/CP, A2780/CP 및 Igrov1/CP)와 결장암, 유방암 및 난소암 세포주(SW48, Hs578T 및 OVCAR3)에서 중간 정도의 발현 수준이 관찰되었다. 결장(SW480, LoVo) 및 유방암 세포주(MDA-MB-231)에서 LGR5 세포 표면 발현의 낮지만 검출 가능한 수준이 관찰되었다. 표 3은 다양한 종양 세포주에 대한 18G7H6A3 FACS 결합에 대한 데이터를 요약한다.
종양 세포주 18G7H6A3 (18G7.1) IgG
CT1 + -
CT3 + -
DLD1 +/- -
Ls174T +/- -
LoVo +/- -
SW48 + -
SW480 +/- -
SW620 +/- -
HCT116 +/- -
Breast
MDA-MB-231 +/- -
MDA-MB-231 LM2 +/- -
Hs578T + -
CN34 +/- -
CN34 LM1 +/- -
Prostate
PC-3 +/- -
PCSD1 +/- -
Ovarian
OVCAR-3 + -
SK-OV-3 +/- -
SK-OV-3/CP +/- -
OVCAR8/CP + -
Igrov1/CP + -
A2780/CP + -
Lung
HOP-62 +/- -
Pancreatic
AsPC-1 + -
Capan2 ++ -
HPAFII + -
Sw1990* + -
CFPAC ++ -
PANC-1 ++ -
LGR5를 과발현하는 CHO 세포에서 18G7H6A3의 내재화를 조사하였다. 세포를 4℃에서 30분 내지 2시간 동안 100nM 항체로 염색하고, 과량의 Ab를 세척하고 염색 된 세포를 4℃ 또는 37℃에서 배양하였다. 세포 표면-결합된 항체의 내재화를 관찰하기 위해 다양한 시점에서 AlexaFluor488-접합된 2차 항체로 세포를 염색하였다. 37℃에서 배양할 때, 내재화된 비율은 6.703±1.282 분의 표면 국소화에 대한 측정 된 t1/2 값을 가졌다. 표면 결합 항체의 일부 감소가 관찰되었지만 4℃에서 배양에 의해 내재화가 크게 차단되었다.
항체 18G7H6A3이 결합하는 LGR5의 특정 영역(들)을 특성화하기 위해 수소 중수소 교환 질량 분석법을 사용하여 에피토프 맵핑 실험을 수행하였다. 수소/중수소 (H/D)-교환 데이터는 18G7H6A3이 X-선 결정학적 연구에 의해 확인된 바와 같이 R-스폰딘 결합 부위의 반대면에서, 류신 풍부 반복체 6-9의 볼록한 표면 내의 아미노산 T175, E176, Q180, R183, S186, A187, Q189, D247, E248, T251, R254, S257, N258, K260에 결합하는 것을 나타냈다. (예를 들어, 전문이 참조로 포함된 Chen et al. Genes Dev . 27(12):1345-50 참조). 이들 데이터는 LGR5와 R-스폰딘의 결합에 관여하는 잔기가 18G7H6A3의 결합에 관여하지 않음을 보여준다. 이러한 예비 결과는 LGR5의 다른 구조적 요소가 18G7H6A3의 결합 부위에 관련될 수 있다는 사실을 배제하지는 않는다.
특정 항- LGR5 항체의 생체 내 활성
마우스에 이식된 IV기 전이성 결장암 환자에서 유래된 인간 결장 CT1 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 18G7H6A3는 4회 투여(15mg/kg, 주 2회) 동안 PBS 및 MOPC 항체 대조군과 비교하여 생체 내에서 상당한 항-종양 활성을 나타내었다. 항체 18G7H6A1은 항-종양 활성을 나타내지만, 단클론 18G7H6A3은 18G7H6A1 및 부모 뮤린 키메라 18G7Ch 항체 둘 다에 대해 우수한 활성을 나타내었다. 표 4는 1-4회 투여량의 Lgr5 + Ab 후 CT1 종양 부피 감소 백분율(그룹 vs MOPC)을 나타낸다.
#의 투여량: 1 2 3 4
18G7Ch 9.2% 30.6% 19.5% 29.0%
18G7H6A1 17.5% 19.1% 14.2% 19.0%
18G7H6A3 38.8% 42.0% 28.9% 35.4%
마우스에 이식된 IV기 전이성 결장암 환자에서 유래된 인간 결장 CT3 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 4회 투여(15mg/kg, 주 2회) 동안 PBS 및 MOPC 항체 대조군과 비교하여 18G7H6A1은 항-종양 활성을 나타내었고 18G7H6A3은 현저한 항-종양 활성을 나타내었다. 18G7H6A3은 부모 뮤린 키메라 18G7Ch 항체에 대해 우수한 활성 및 18G7H6A1에 동등한 활성을 나타냈다. 표 5는 테스트 Abs의 n회 투여 후 CT3 종양 부피 감소 백분율(그룹 vs MOPC)을 나타낸다.
# Ab의 투여량: 1 2 3 4
18G7Ch 22.6% 8.9% 17.0% 13.8%
18G7H6A1 18.3% 12.6% 28.8% 28.7%
18G7H6A3 34.2% 38.1% 23.4% 28.2%
FOLFIRI 요법과 조합하여 18G7H6A3로 처리된 CSC 조건하에서 성장된 인간 CT3 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 종양 부피의 분석은 18G7H6A3 및 FOLFIRI의 투여가 FOLFIRI에 비해 CT3 종양의 성장을 추가로 감소시켰음을 나타내었다. FOLFIRI와 함께 18G7H6A3로 처리된 마우스로부터 분리된 세포를 마우스에 이식하였다. 이식된 세포는 FOLFIRI 단독으로 처리된 마우스로부터 분리된 세포와 비교하여 종양원성을 크게 감소시켰다. 또한, 18G7H6A3 FOLFIRI 조합으로부터의 재 이식된 세포는 FOLFIRI 단독과 비교하여 상당히 느린 종양 성장 프로파일 및 지연된 진행 시간을 가졌다. 이들 데이터는 FOLFIRI와 조합된 18G7H6A3이 효과적으로 종양 개시 또는 암 줄기 세포 집단을 표적으로 한다는 것을 나타낸다.
인간 췌장 AsPC-1 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 단일 작용제로서 18G7H6A3는 이식 후 41일에 식염수 및/또는 대조군 IgG와 비교하여 거의 40%까지 마우스에서 종양 성장을 억제하였다. 또한, 18G7H6A3 및 젬시타빈의 조합은 젬시 타빈 단독과 비교하여 AsPC-1 모델(이식 후 61일에 최대 36%)에서 종양 성장을 유의하게 억제하였다. 단일 제제로서의 18G7H6A3은 또한 65일까지 PBS 및 대조군 IgG와 비교하여 종양 성장에 약간의 억제를 제공하였다.
인간 유방 MDA-MB-231-LM3 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 18G7H6A3은 PBS(60.7% 종양 성장 억제) 또는 MOPC 항체(49.3% 종양 성장 억제) 대조군과 비교하여 마우스에서 유의한 항-종양 활성을 나타냈다. 파클리탁셀과 조합하여 18G7H6A3으로 처리된 마우스로부터 분리된 세포를 마우스에 이식하였다. 이러한 세포는 파클리탁셀 단독으로 처리된 마우스로부터 분리된 세포와 비교하여 종양원성을 크게 감소시켰다. 또한, 18G7H6A3 + 파클리탁셀 종양으로부터의 재이식된 세포는 파클리탁셀 단독과 비교하여 상당히 느린 종양 성장 프로파일 및 지연된 진행 시간을 가졌다. 이들 데이터는 파클리탁셀과 조합된 18G7H6A3이 효과적으로 종양 개시 또는 암 줄기 세포 집단을 표적으로 한다는 것을 나타낸다.
인간 췌장 PANC1 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 18G7H6A3 단독은 마우스에서 종양 성장을 억제하였고(이식 후 70일에 최대 30%), 젬시 타빈과 조합한 18G7H6A3은 젬시타빈 단독 그룹과 비교하여 종양 성장을 현저히 억제하였다(이식 후 80일에 최대 52%). 젬시타빈과 조합하여 18G7H6A3으로 처리된 마우스로부터 분리된 세포를 마우스에 이식하였다. 이러한 세포는 젬시타빈 단독으로 처리된 마우스로부터 분리된 세포와 비교하여 종양원성을 크게 감소시켰다. 젬시타빈 및 18G7H6A3의 조합으로 처리된 재이식된 PANC1 종양은 4500개 세포로 이식된 마우스(젬시타빈에서 40% vs. 조합에서 20%) 및 13500개 세포로 이식된 마우스(젬시타빈에서 100% vs. 조합에서 70%)에서 생착 빈도 감소를 나타냈다. 이들 데이터는 젬시 타빈과 조합된 18G7H6A3이 효과적으로 종양 개시 또는 암 줄기 세포 집단을 표적으로 한다는 것을 나타낸다.
인간 췌장 JH109 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 18G7H6A3 처리 단독은 마우스의 종양 성장에 영향을 미치지 않았다. Nab-파클리탁셀 및 젬시타빈 화학 요법과 조합된 18G7H6A3는 화학 요법 단독과 비교하여 상당히 더 큰 정도의 종양 억제를 야기하였다. 화학 요법과 조합된 18G7H6A3는 화학 요법 단독과 비교하여 77% 더 큰 종양 성장 억제를 유도하였다. 18G7H7A3 화학 요법 조합으로 처리된 3마리 마우스는 종양을 완전히 박멸시켰다.
인간 BMCRC086 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, FOLFIRI와 조합된 18G7H6A3는 FOLFIRI 단독과 비교하여 마우스에서 유의한 항-종양 활성을 나타냈다.
BLG293 종양으로부터 유래된 인간 소세포 폐암 세포를 사용하는 이종 이식편 모델에서, 18G7H6A3은 PBS(24.9% 종양 성장 억제) 및 MOPC 항체(24.7% 종양 성장 억제) 대조군과 비교하여 마우스에서 유의한 항-종양 활성을 나타냈다.
항체 약물 접합체
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 실시태양은 ADC를 포함한다. 이러한 일부 실시태양에서, 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 치료제, 예컨대 약물에 접합된다. 일부 실시태양에서, 치료제는 세포 증식 억제제 또는 세포 독성제를 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료제는 DNA 손상제 또는 미세소관 억제제이다. 치료제의 예는 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE) 및 모노메틸 아우리스타틴 F(MMAF)를 포함하는 돌라스타틴 및 아우리스타틴, 아마니틴, 예를 들어, α-아마니틴, β-아마니틴 또는 γ-아마니틴, DNA 마이너 그루브 결합제, 예를 들어 듀오카마이신 유도체, 알킬화제, 예를 들어, 변형 또는 이량체 피롤로벤조다이아제핀(PBD), 메클로레타민, 티오에파, 클로람부실, 멜팔란, 카무스틴, 로무스틴, 사이클로토스파미드, 부술판, 다이브로모만니톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C 및 시스다이클로로다이아민 백금(II) (DDP) 시스플라틴, 분할 억제제, 예를 들어, 미야마이신 유사체 또는 유도체, 관형 결합제, 예를 들어, 에포틸론 유사체 및 파클리탁셀 및 DNA 손상제, 예를 들어, 칼리케아마이신 및 에스페라마이신, 항대사제, 예를 들어, 메토트렉세이트, 6-머캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈 및 5-플루오로우라실 데카바진, 유사분열 억제제, 예를 들어, 빈블라스틴 및 빈크리스틴 및 안트라사이클린, 예를 들어, 다우노루비신(다우노마이신으로도 알려져 있음) 및 독소루비신 및 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 용매화물, 산 또는 유도체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료제는 유사분열 억제제, 예를 들어, 알로콜히친; 아우리스타틴, 예를 들어, MMAE 및 MMAF; 할리콘드린 B; 세마도틴; 콜히친; 콜히친 유도체(N-벤조일-데아세틸 벤즈아마이드); 돌라스타틴-10; 돌라스타틴-15; 메이 탄신; 메이탄시노이드, 예를 들어, DM1; 로족신; 파클리탁셀; 파클리탁셀 유도체((2'-N-[3-(다이메틸아미노)프로필]글루타라메이트 파클리탁셀); 도세탁셀; 티오 콜히친; 트라이틸 시스테인; 빈블라스틴 설페이트; 및 빈크리스틴 설페이트를 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료제는 알킬화 항종양제, 예를 들어, 카보큐온; 카무스틴; 클로르나파진; 클로로조토신; 듀오카마이신; 에보포스파미드; 포테무스틴; 글루포스파미드; 로무스틴; 만노술판; 니무스틴; 페난트리플라틴; 피포브로만; 라니무스틴; 세무스틴; 스트렙토조토신; ThioTEPA; 트레오술판; 트라이지큐온; 트라이에틸렌멜라민; 및 트라이플라틴 테트라나이트레이트를 포함한다. 일부 실시태양에서, 치료제는 MMAF, MMAE, 모노메틸 돌라스타틴 10, 듀오카마이신, 메이탄사노이드 1, 듀얼스타틴 3, 칼리케아미신 및 듀오카마이신을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 치료제는 DNA 손상제 또는 미세소관 억제제이다. 미세소관 억제제의 예는 카바지탁셀, 콜세미드, 콜히친, 크립토피신, 세포 골격 약물, 데메콜신, 도세탁셀, 2-메톡시에스트라다이올, 노코다졸, 파클리탁셀, 타칼로놀리드, 탁세인 및 빈 블라스틴을 포함할 수 있다. 본 발명에 제공된 방법 및 조성물에 유용한 치료제의 추가 예는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되는 미국 2017/0137533; 미국 2017/0158769; 미국 2017/0151344; 및 미국 2017/0136130에 개시되어 있다.
이러한 일부 실시태양에서, 인간 LGR5에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 치료제에 접합된다. 일부 실시태양에서, 링커는 하나 이상의 작용제를 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 단일 부위에 공유적으로 연결시키도록 다가일 수 있거나 단일 작용제를 항체 또는 이의 항원 결합 단편 상의 단일 부위에 공유적으로 연결시키도록 단가일 수 있다. 본 발명에 제공된 치료제 및 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 연결하는 데 유용한 예시적인 링커가 미국 특허 No. 7,223,837; 미국 특허 No. 8,568,728; 미국 특허 No. 8,535,678; WO 2009/073445; WO 2010/068795; WO 2010/138719; WO 2011/120053; WO 2011/171020; WO 2013/096901; WO 2014/008375; WO 2014/093379; WO 2014/093394; 및 WO 2014/093640에 기술되어 있다.
일부 실시태양에서, 링커는 절단 가능한 링커일 수 있다. 절단 가능한 링커는 화학적으로 또는 효소적으로 불안정하거나 분해 가능한 연결을 포함할 수 있다. 절단 가능한 링커는 일반적으로 세포질의 감소, 리소좀의 산성 조건에의 노출, 또는 세포 내의 특정 프로테아제 또는 다른 효소에 의한 절단과 같이 치료제를 유리시키기 위해 세포 내부의 과정에 의존한다. 절단 가능한 링커는 일반적으로 화학적으로 또는 효소적으로 절단될 수 있는 반면 링커의 나머지는 절단 불가능한 하나 이상의 화학적 결합을 포함한다. 특정 실시태양에서, 링커는 하이드라존 및/또는 이황화물 그룹과 같은 화학적으로 불안정한 그룹을 포함한다. 화학적으로 불안정한 그룹을 포함하는 링커는 혈장과 일부 세포질 구획 사이의 차별적 특성을 이용한다. 하이드라존 함유 링커에 대한 치료제 방출을 용이하게 하는 세포 내 조건은 엔도좀 및 리소좀의 산성 환경이며, 이황화물 함유 링커는 높은 티올 농도, 예를 들어 글루타티온을 함유하는 시토졸에서 감소된다. 특정 실시태양에서, 화학적 불안정 그룹을 포함하는 링커의 혈장 안정성은 화학적 불안정 그룹 근처의 치환기를 사용하여 입체 장애를 도입함으로써 증가될 수 있다.
일부 실시태양에서, 링커는 절단 불가능한 링커일 수 있다. 절단 불가능한 성 링커의 경우, 치료제의 방출은 혈장과 일부 세포질 구획 사이의 차별적 특성에 의존하지 않을 수 있다. 치료제의 방출은 항원-매개 세포 내 이입을 통한 ADC의 내재화 및 리소좀 구획으로의 전달 후에 발생하는 것으로 가정되며, 여기서 항체는 세포 내 단백질 분해 분해를 통해 아미노산 수준으로 분해된다. 이 과정은 치료제, 링커 및 링커가 공유 결합된 아미노산 잔기에 의해 형성된 약물 유도체를 방출한다. 절단 불가능한 링커를 갖는 접합체로부터의 아미노산 약물 대사 산물은 더욱 친수성이고 일반적으로 막 투과성이 적으며, 이는 절단 가능한 링커를 갖는 접합체에 비해 더 적은 방관자 효과 및 더 적은 비특이적 독성을 유도한다. 일반적으로, 절단 불가능한 링커가 있는 ADC는 절단 가능한 링커가 있는 ADC보다 순환 안정성이 뛰어나다. 절단 불가능한 링커는 알킬렌 사슬일 수 있거나, 예를 들어 폴리알킬렌 글리콜 폴리머, 아미드 폴리머에 기초한 것과 같은 본질적으로 폴리머일 수 있거나, 알킬렌 사슬, 폴리알킬렌 글리콜 및/또는 아마이드 폴리머의 단편을 포함할 수 있다. 본 발명에 제공된 치료제 및 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 연결하는 데 유용한 절단 가능한 및 절단 불가능한 링커의 예는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되는 미국 2017/0151344에 기술되어 있다. 약물을 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결하는 방법의 예는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되는 Behrens C.R. et al., MAbs. 2014 Jan 1; 6(1): 46-53; and Zhou q., et al, Anticancer Agents Med Chem. 2015;15(7):828-36에 개시되어 있다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 ADC를 제조하는 것을 포함한다. 이러한 일부 실시태양은 링커를 치료제에 연결시키는 것을 포함할 수 있고, 연결된 치료제는 링커를 통해 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 접합될 수 있다. 이러한 일부 실시태양은 링커에 연결하는 것을 포함할 수 있고, 연결된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 치료제에 접합 될 수 있다. 일부 실시태양은 또한 ADC를 정제하는 것을 포함한다.
치료 방법
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 암에 걸린 대상을 치료하는 단계를 포함한다. 본 발명에 사용된 "치료하는" 또는 "치료" 또는 "치료하다"는 증상의 치료, 둔화, 감소 및/또는 암과 같은 진단된 병리학적 상태 또는 이상의 진행을 중단시키는 치료 효과 및 암과 같은 암과 같은 표적화된 병리학적 상태 또는 이상의 발생을 예방 및/또는 늦추는 예방 수단 모두를 의미할 수 있다. 이러한 일부 실시태양은 본 발명에 제공된 유효량의 ADC를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 고형 종양을 포함한다. 일부 실시태양에서, 암은 폐암, 유방암, 결장암 및 췌장암을 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 암은 삼중 음성 유방암 세포, K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자에 돌연변이를 갖는 결장암 세포 및 소세포 폐암 세포와 같은 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 암은 암 줄기 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 대상은 인간과 같은 포유 동물이다.
일부 실시태양은 또한 본 발명에 제공된 ADC와 조합하여 추가 요법을 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시태양에서, 추가 요법은 방사선 요법제 및 화학 요법 제를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, ADC의 투여는 추가 요법의 투여와 동시에 이루어진다. 일부 실시태양에서, 화학 요법제는 폴리닌산, 플루오로 우라실, 이리노테칸, 젬시타빈, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀, ERBITUX(세툭시맙), PI3K/mTOR 이중 억제제(NVP) 및 SN38로 이루어진 그룹으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 추가 요법은 폴리닌산, 플루오로 우라실 및 이리노테칸을 포함한다. 본 발명에 제공된 방법 및 조성물에 유용한 화학 요법제의 추가 예는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되는 미국 2017/0137533에 개시되어 있다.
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 신생물 세포의 성장을 억제하는 단계를 포함한다. 이러한 일부 실시태양은 세포를 본 발명에 제공된 ADC와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시태양에서, 신생물 세포는 폐암 세포, 유방암 세포, 결장암 세포 및 췌장암 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 신생물 세포는 삼중 음성 유방암 세포, K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자에 돌연변이를 갖는 결장암 세포 및 소세포 폐암 세포와 같은 세포를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, 신생물 세포는 인간과 같은 포유 동물이다. 일부 실시태양에서, 신생물 세포는 시험관 내이다. 일부 실시태양에서, 신생물 세포는 생체 내이다.
본 발명에 제공된 일부 실시태양에서, ADC는 관련 기술 분야의 인식된 기술을 사용하여 다양한 방식으로 제제화될 수 있다. 일부 실시태양에서, 본 발명에 제공된 치료 조성물은 순수하거나 최소의 추가 성분으로 투여될 수 있는 반면, 다른 것들은 임의로 적합한 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하도록 제제화될 수 있다. 본 발명에 사용된 "약학적으로 허용 가능한 담체"는 당업계에 널리 공지되어 있고 의약 제조에 사용하기 위한 상업적 공급원으로부터 구입할 수 있는 부형제, 비히클, 보조제 및 희석제를 포함한다(예를 들어, Gennaro (2003) Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed., Mack Publishing; Ansel et al. (2004) Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7.sup.th ed., Lippencott Williams and Wilkins; Kibbe et al. (2000) Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3.sup.rd ed., Pharmaceutical Press. 참조).
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 비경구 투여(예를 들어, 주사에 의한)에 적합한 ADC의 제형을 포함하고, 수성 또는 비수성, 등장성, 발열원이 없는 멸균 액체(예를 들어, 용액, 현탁액)를 포함할 수 있고, 여기에 활성 성분은 용해되고 현탁되고 또는 다른 경우에는 (예를 들어, 리포좀 또는 다른 미세미립자에) 제공된다.
특정 실시태양의 특정 용량 요법, 즉 용량, 타이밍 및 반복은 약동학(예를 들어, 반감기, 클리어런스율 등)과 같은 경험적 고려사항뿐만 아니라 특정 대상에 의존할 수 있다. 투여 빈도의 결정은 상태 및 치료될 상태의 심각성, 치료될 대상의 연령 및 일반적인 건강 상태 등을 고려하여 주치의와 같은 당업자에 의해 이루어질 수 있다. 투여 빈도는 선택된 조성물의 효능 및 투여 요법의 평가에 기초하여 치료 과정에 걸쳐 조정될 수 있다. 이러한 평가는 특정 질환, 장애 또는 상태의 마커에 기초하여 이루어질 수 있다. 개체가 암에 걸린 실시태양에서, 이들은 촉진 또는 육안 관찰을 통한 종양 크기의 직접 측정; 엑스레이 또는 다른 이미징 기술에 의한 종양 크기의 간접 측정; 종양 샘플의 직접적인 종양 생검 및 현미경 검사에 의해 평가된 개선; 본 발명에 기술된 방법에 따라 확인된 대리 바이오마커 또는 항원의 측정; 증식성 또는 종양 형성 세포의 수 감소, 이러한 신생물 세포의 감소 유지; 신생물 세포의 증식 감소; 또는 전이 진행의 지연을 포함한다.
키트
본 발명에 제공된 방법 및 조성물의 일부 실시태양은 키트를 포함한다. 일부 실시태양에서, 키트는 본 발명에 제공된 ADC를 포함할 수 있다. 일부 실시태양에서, ADC는 동결 건조된다. 일부 실시태양에서, ADC는 수용액에 있다. 일부 실시태양에서, 키트는 ADC의 투여를 위한 약학적 담체를 포함한다. 일부 실시태양에서, 키트는 또한 화학 요법제를 포함한다. 일부 실시태양에서, 화학 요법제는 폴리닌산, 플루오로 우라실, 이리노테칸, 젬시타빈 및 아브락세인으로부터 선택된다. 일부 실시태양에서, 키트는 얼음 또는 드라이 아이스와 같은 냉각제와 같은 ADC의 활성을 유지하기 위한 성분을 포함한다.
실시예
실시예 1 - 접합된 2차 항체를 이용하는 증식 분석
중국 햄스터 난소 세포(CHO) 및 CHO 세포 발현 인간 LGR5(CHO-LGR5)를 발현하는 1차 인간 항-LGR5 항체(C12) 및 1차 항체에 결합할 수 있는 2차 항-인간 항체 약물 접합체(ADC)로 처리하였다. 항체 C12는 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되는 미국 특허 No. 9221906에 개시되어 있다. 세포를 F12 배지 + 10% 소 태아 혈청 + 항생제/유사분열 억제제 속 96-웰 플레이트에서 5000 세포/웰로 플레이팅하여 단일 층을 형성하였다. ADC(Moradec, San Diego CA)는 표 6에 나열되어 있다.
2차 ADC 접합된 약물 링커
NC-MMAF 모노메틸 아우리스타틴 F (MMAF) 절단 불가능
CL-MD10 모노메틸 돌라스타틴 10 (MD10) 절단 가능
CL-MMAE 모노메틸 아우리스타틴 E (MMAE) 절단 가능
CL-DMSA 듀오카마이신 (DMSA) 절단 가능
NC-DM1 메이탄사노이드 1 (DM1) 절단 불가능
CK-DUA3 듀얼스타틴 3 (DUA3) 라이신
절단 가능
CK-CAL 칼리케아미신(CAL) 라이신
절단 가능
표 7은 세포를 치료하는 데 사용되는 1차 항체 및 2차 ADC의 농도를 열거한다. CK-CAL로 처리된 세포는 30nM C12에서 평가되지 않았고, CK로 처리된 세포는 30 pM C12에서 평가되지 않았다.
1차 항체 C12 2차 ADC
0 0
30pM 150pM
100pM 500pM
300pM 1.5nM
1nM 5nM
3nM 15nM
10nM 50nM
30nM 150nM
3일 처리 후 MTS 증식 분석을 사용하여 세포 생존율을 결정하였다. 간단히 말하면, 테트라졸륨 화합물[3-(4,5-다이메틸티아졸-2-일)-5-(3-카복시메톡시페닐) -2-(4-설포페닐)-2H-테트라졸륨, 내부 염; MTS]을 포함하는 20㎕의 MTS 시약; 및 전자 결합 시약(페나진 에토설페이트; PES)을 96웰 플레이트에서 성장한 세포에 총 부피 100㎕로 첨가하였다. 플레이트를 37℃에서 1-4시간 동안 배양하고, 490nm에서 세포 배지의 흡광도를 측정하였다. 490nm 흡광도의 양으로 측정된 포마잔 생성물의 양은 배양액에서 살아있는 세포의 수에 직접 비례하였다. IC50 값도 측정하였다. 결과는 도 1a-1g 및 표 8에 도시되어 있다.
2차 ADC IC50 (nM) 곡선 min ( % )
NL-MMAF 0.140 35.8
CL-MD10 1.04 39.4
CL-MMAE 5.81 69.9
CL-DMSA 0.765 0
NC-DM1 1.45 46.2
CK-DUA3 0.159 49.7
CK-CAL 0.060 34.4
도시된 바와 같이, C12 항체 및 라이신 절단 가능한 칼리케아미신(CK-CAL) 항체의 조합은 0.060의 최저 IC50 점수를 가졌다. 모노메틸 아우리스타틴 F(NL-MMAF)에 절단 불가능하게 결합된 항-인간 항체는 0.140의 다음으로 가장 낮은 IC50 값을 가졌다.
실시예 2- 접합된 2차 항체를 이용하는 증식 분석
CHO 및 CHO-LGR5를 다양한 1차 인간 항-LGR5 항체 및 2 차 항-인간 ADC(NL-MMAF)로 3일 동안 처리하였다. 세포 생존력은 실시예 1에 기재된 MTS 분석법을 사용하여 측정하였다. 1차 항체는 C12, 18G7Ch, 18G7H6A1 및 18G7H6A3을 포함하였다. 세포를 처리하는 데 사용된 1차 항체 및 2차 ADC의 농도는 표 9에 열거되어 있다. 결과는 도 2 및 표 10에 도시되어 있다.
1차 항체 2차 ADC
0 0
30pM 150pM
100pM 500pM
300pM 1.5nM
1nM 5nM
3nM 15nM
10nM 50nM
30nM* 150nM*
* C12 실험 단독
치료 IC50 (nM) IC50% 값(nM)의 95% 신뢰 구간
ADC 단독 N/A N/A
C12 + ADC (NL-MMAF) 0.073 Wide
18G7Ch + ADC (NL-MMAF) 0.115 0.041 - 0.315
18G7H6A3 + ADC (NL-MMAF) 0.142 0.079 - 0.254
2차 항-인간 ADC(NL-MMAF)를 갖는 4개의 테스트된 1차 항체 각각은 CHO 발현 인간 LGR5의 세포 생존력을 감소시키는 데 효과적이었다.
실시예 3-인간 세포에서 접합된 2차 항체를 이용하는 종양구 분석
종양구는 단일 암 줄기/전구 세포의 증식으로부터 발생하는 고체구 형성이다. 무 혈청 및/또는 비 부착성 조건에서 세포를 성장시킴으로써 세포 집단으로부터 종양구가 유도될 수 있다. 따라서, 종양구는 세포 집단에서 암 줄기 세포의 수를 나타낼 수 있다. 인간 CT3 세포는 종양구를 형성하도록 유도될 수 있는 IV기 전이성 결장암을 갖는 환자로부터 유래된 저 계대수 1차 세포이며, 다음 유전자: K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO에 돌연변이를 포함한다.
LGR5를 발현하는 인간 CT3 세포를 정상 조건하에서 배양에서 성장시키고, 아큐타제 세포 해리 시약 및 셀 스트레이너를 통해 세포를 통과시킴으로써 형성된 단일 세포 현탁액을 사용하여 수확하였다. 단일 세포 현탁액을 특정 암 줄기 세포(CSC) 배지에서 500-세포/웰로 96-웰 저 부착 플레이트에 플레이팅하였다. 세포를 다음 농도: 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 및 10nM에서 1차 및 2차 항체의 1:1 비로 다양한 1차 인간 항-LGR5 항체 및 2차 항-인간 ADC(CL-DMSA)로 처리하였다. 1차 항체는 C12, 18G7Ch, 18G7H6A1 및 18G7H6A3을 포함하였다. 처리된 세포를 7일 동안 배양하고 종양구 수를 계수하였다.
결과는 1차 항체 및 ADC 항체의 각각의 조합이 분석 기간 동안 형성된 종양구의 수를 감소시키는 약간의 활성을 가짐을 나타내는 도 3 및 표 11에 도시되어 있다. C12 항체 및 ADC 항체의 조합은 대조군과 비교하여 더 낮은 농도의 조합에서 종양구 형성을 감소시키는 활성이 실질적으로 적었다. 그러나, C12 항체 및 ADC 항체의 조합은 3nM 초과의 농도에서 종양구 형성을 억제하는 데 점차 효과적이었다. 18G7 H6A1 항체 및 ADC 항체의 조합은 0.931nM의 가장 낮은 IC50 스코어를 가졌다.
처리 IC50 (nM)
C12 + ADC (CL-DMSA) 4.23
18G7Ch + ADC (CL-DMSA) 3.81
18G7H6A1 + ADC (CL-DMSA) 0.931
18G7H6A3 + ADC (CL-DMSA) 1.90
실시예 4 - 인간 세포에서 접합된 항- LGR5 항체를 이용하는 종양구 분석
종양구 분석은 절단 가능한 링커(CL-DMSA)를 통해 듀오카마이신(DMSA)에 접합된 인간 항-LGR5 항체 18G7H6A3(BNC101) 또는 절단 불가능한 링커(NL-MMAE)를 통해 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)에 접합된 인간 항-LGR5 항체 18G7H6A3(BNC101)으로 처리된 LGR5를 발현하는 인간 CT1 세포로 실행시켰다. CT1 세포는 종양구를 형성하도록 유도될 수 있는 IV기 전이성 결장암 환자에서 유래된 저 계대수 1차 세포이고 다음 유전자: K-Ras, PI3K, PTEN, p53 및 APC에 돌연변이를 포함한다. 접합된 항-LGR 항체 및 CL-DMSA 및 NL-MMAE와 접합된 대조군 MOPC 항체는 샌디에고 캘리포니아의 Concortis Biotherapeutics에 의해 제조되었다. 세포를 실시예 3에 기술된 바와 같이 플레이팅하고, 0.01, 0.03, 0.1, 0.3, 1, 3, 10 및 30nM에서 접합된 18G7H6A3 또는 대조군 MOPC 항체로 처리하였다. 7일 후, 종양구를 계수하였다. 결과는 CL-DMSA 또는 NL-MMAE와 접합된 18G7H6A3에 대한 IC50 농도는 동일한 링커-약물과 접합된 대조 MOPC 항체에 대한 IC50 농도보다 적어도 2배 낮았다는 것을 나타내는 도 4 및 표 12에 도시되어 있다. CL-DMSA와 접합된 18G7H6A3에 대한 IC50은 또는 NL-MMAE와 접합된 18G7H6A3에 대한 IC50보다 낮았다.
처리 IC50
CL-DMSA로 접합된 18G7H6A3 28.1pM
CL-DMSA로 접합된 MOPC 2.41nM
NL-MMAE로 접합된 18G7H6A3 52.5pM
NL-MMAE로 접합된 MOPC 330nM
실시예 5 - 항- LGR5 약물 접합체를 이용하는 이종 이식편 모델의 생체 내 처리
7-8주령의 암컷 CB.17 SCID 마우스(Charles River Laboratories)에 2000 CT1 세포(1:1 매트리겔:배지)를 접종하였다. 종양은 25일 동안 120-130mm3의 평균 부피로 발달하였다. 동물에게 25, 32 및 39일에 상이한 ADC 처리를 투여하였다. ADC는 DMSA 또는 MMAE와 접합된 18G7H6A3(BNC101)을 포함하였다. DMSA 또는 MMAE로 접합된 샌디에고 캘리포니아의 Concortis Biotherapeutics에 의해 공급되었고 시애틀 유전학 접합 기술을 사용하여 vc-PAB 접합을 포함하였다. 도 6a 및 6b는 본 실시 예에서 사용된 것과 실질적으로 유사한 링커 및 DMSA의 구조를 도시한다. 도 6a에서, 구조는 MA-PEG4-vcPAB-다이아미노에틸-카바모일-듀오카마이신을 포함하며, DMSA는 박스에 도시되어 있다. 도 6b에서, DMSA는 항체에 연결된다. 대조군 항체는 DMSA 또는 MMAE와 접합된 MOPC 항체를 포함하였다.
처리 그룹은 다음을 포함하였다: PBS; 3mg/kg MOPC-듀오카마이신; 10mg/kg MOPC-듀오카마이신; 3mg/kg MOPC-MMAE; 10mg/kg MOPC-MMAE; 3mg/kg BNC101-듀오카마이신; 10mg/kg BNC101-듀오카마이신; 3mg/kg BNC101-MMAE; 및 10mg/kg BNC101-MMAE, (n = 6). 종양 길이 및 너비에 대해 평균 3회 측정하여 자동화된 디지털 캘리퍼를 사용하여 3-4일마다 종양을 측정하였다. 42일에 실험을 종료하고, FACS 및 종양구 형성 분석을 위해 종양을 수집하고 해리시켰다. 결과는 도 5a-5c에 도시되어 있다. 도 5a는 MMAE와 접합된 18G7H6A3의 처리가 42일째에 약 적어도 37% PBS 대조군에 의한 처리와 비교하여 종양 성장을 억제함을 보여준다. 도 5b 및 5c는 MMAE와 접합된 18G7H6A3(도 5b) 또는 듀오카마이신(도 5c)과 접합된 18G7H6A3에 의한 처리가 접합된 MOPC 대조군에 의한 처리와 비교하여 적어도 40일 동안 종양 성장을 억제하는 데 효과적임을 보여준다.
특정 실시태양
본 발명의 특정 실시태양은 다음 양태를 포함한다.
양태 1. G-단백질 결합 수용체 5(LGR5)를 함유하는 인간 류신-풍부 반복체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 약물에 접합된다.
양태 2. 제 1 양태의 항체 약물 접합체, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역(CDR1) 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 25를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR2) 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 27을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR3), 또는 이의 보존적 변형체, SEQ ID NO: 29를 포함하는 경쇄 CDR1, 또는 이의 보존적 변이체, SEQ ID NO: 31을 포함하는 경쇄 CDR2, 또는 이의 보존적 변이체, 및 SEQ ID NO: 33을 포함하는 경쇄 CDR3 또는 이의 보존적 변이체를 포함한다.
양태 3. 제 1 양태의 항체 약물 접합체, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 CDR1을 포함한다.
양태 4. 제 1-3 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체, 항-LGR5 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1을 포함한다.
양태 5. 제 1-4 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체, 링커는 절단 불가능한 링커이다.
양태 6. 제 1-4 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체, 링커는 절단 가능한 링커이다.
양태 7. 제 1-6 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체, 약물은 미세소관 억제제 및 DNA 손상제로부터 선택된다.
양태 8. 제 7 양태의 항체 약물 접합체, 미세소관 억제제는 카바지탁셀, 콜세미드, 콜히친, 크립토피신, 데메콜신, 도세탁셀, 2-메톡시에스트라다이올, 도코다졸, 파클리탁셀, 타칼로놀리드, 탁세인 및 빈블라스틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
양태 9. 제 1-6 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체, 약물은 모노메틸 아우리스타틴 F, 모노메틸 아우리스타틴 E, 모노메틸 돌라스타틴 10, 듀오카마이신, 메이탄사노이드 1, 듀얼스타틴 3, 칼리케아미신 및 듀오카마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
양태 10. 제 1-9 양태 중 어느 하나의 항체 약물 접합체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
양태 11. 제 1-9 양태 중 어느 하나의 유효량의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하여 암에 걸린 대상을 치료하는 방법.
양태 12. 제 11 양태의 방법, 암은 고형 종양을 포함한다.
양태 13. 제 11 양태의 방법, 암은 암 줄기세포를 포함한다.
양태 14. 제 11 양태의 방법, 암은 폐암, 유방암, 결장암 및 췌장암으로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
양태 15. 제 11 양태의 방법, 암은 삼중 음성 유방암 세포, K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자에 돌연변이를 갖는 결장암 세포, 및 소세포 폐암 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포를 포함한다.
양태 16. 제 11-15 양태 중 어느 하나의 방법, 대상은 포유류이다.
양태 17. 제 11-16 양태 중 어느 하나의 방법, 대상은 인간이다.
양태 18. 제 11-16 양태 중 어느 하나의 방법, 항체 약물 접합체와 조합하여 추가 요법을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 추가 요법은 방사선 요법 및 화학 요법제로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
양태 19. 제 18 양태의 방법, 항체 약물 접합체의 투여는 추가 요법의 투여와 동시에 수행된다.
양태 20. 제 18 양태의 방법, 화학 요법제는 폴리닌산, 플루오로 우라실, 이리노테칸, 젬시타빈, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀, ERBITUX(세툭시맙), PI3K/mTOR 이중 억제제(NVP) 및 SN38로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
양태 21. 제 18 양태의 방법, 추가 요법은 폴리닌산, 플루오로우라실 및 이리노테칸을 포함한다.
양태 22. 링커를 약물에 연결시키는 단계; 및 연결된 약물을 항체에 접합시키는 단계를 포함하여 본 발명에 제공된 항체 약물 접합체를 제조하는 방법.
양태 23. 제 22 양태의 방법, 접합된 항체를 정제하는 단계를 포함한다.
본 발명에 사용된 용어 "포함하는(comprising)"은 "포함하는(including)", "함유하는(containing)" 또는 "특징으로 하는(characterized by)"과 동의어이며, 포괄적이거나 개방형이며 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다.
상기 설명은 본 발명의 여러 방법 및 재료를 개시한다. 본 발명은 방법 및 재료의 변형뿐만 아니라 제조 방법 및 장비의 변형에도 영향을 받기 쉽다. 이러한 변형은 본 개시 내용 또는 본 명세서에 개시된 본 발명의 실시를 고려하여 당업자에게 명백해질 것이다. 결과적으로, 본 발명은 본 명세서에 개시된 특정 실시태양으로 제한되는 것이 아니라 본 발명의 진정한 범위 및 사상에 속하는 모든 수정 및 대안을 포함하는 것으로 의도된다.
공개 및 미공개 출원, 특허 및 문헌 참고를 포함하지만 이에 제한되지 않는 본 발명에 인용된 모든 참고 문헌은 그 전문이 본 발명에 참조로 포함되며 본 명세서의 일부로 구성된다. 참고 문헌으로 포함된 공보 및 특허 또는 특허 출원이 명세서에 포함된 개시 내용과 모순되는 한, 명세서는 임의의 이러한 모순적 자료를 대체 및/또는 우선하도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> Bionomics Limited <120> ANTIBODY DRUG CONJUGATES THAT BIND LGR5 <130> BIONO.015WO <150> 62/520726 <151> 2017-06-16 <160> 49 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Heavy Chain CDR1 Amino Acid <400> 1 Gly Tyr Thr Phe Ser Gly Tyr Trp 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Heavy Chain CDR2 Amino Acid <400> 2 Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Heavy Chain CDR3 Amino Acid <400> 3 Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr 1 5 10 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Light Chain CDR1 Amino Acid <400> 4 Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe 1 5 10 <210> 5 <211> 3 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Light Chain CDR2 Amino Acid <400> 5 Leu Thr Ser 1 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Mouse <220> <223> 18G7.1 Light Chain CDR3 Amino Acid <400> 6 Met Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Arg Thr 1 5 10 <210> 7 <211> 354 <212> DNA <213> Artifical Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain DNA <400> 7 gaggtgcagc tggtgcagag cggagccgag gtgaagaagc ccggcgagag cctgaggatc 60 agctgcaagg gcagcggcta cagcttcacc gcgtactgga tcgagtgggt gaggcaggct 120 cccggcaagg gcctggagtg gatcggcgag atcctgcccg gcagcgacag caccaactac 180 aacgagaagt tcaagggcca cgtgaccatc agcgccgaca agagcatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggccagcgac accgccgtgt actactgcgc ccgcagcggc 300 tactacggca gcagccagta ctggggccag ggcaccctgg tgaccgtgag cagc 354 <210> 8 <211> 333 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain DNA <400> 8 gacatcgtgc tgacccagag ccccgccagc ctggccgtga gccccggcca gagggccacc 60 atcacctgcc gcgccagcga gagcgtggac agctacggca acagcttcat gcactggtat 120 cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tgaccagcaa cctggagtcc 180 ggcgtgcccg acaggttcag cggcagcggc agcggcaccg acttcaccct gaccatcaac 240 cccgtggagg ccaacgacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggaccccagg 300 accttcggcg gcggcaccaa gctggagatc aag 333 <210> 9 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain Amino Acid <400> 9 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ala Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly 465 <210> 10 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain Amino Acid <400> 10 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 11 <211> 1423 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain DNA <400> 11 aagcttgccg ccaccatgga atggtcctgg gtgttcctgt tcttcctgtc cgtgaccacc 60 ggcgtgcact ccgaagtgca gctggtgcag tctggcgccg aagtgaagaa gcctggcgag 120 tccctgcgga tctcctgcaa gggctccggc tactccttca ccgcctactg gattgagtgg 180 gtgcgacagg cccctggcaa gggcctggaa tggatcggag agatcctgcc cggctccgac 240 tccaccaact acaacgagaa gttcaagggc cacgtgacca tctccgccga caagtccatc 300 tctaccgcct acctgcagtg gtcctccctg aaggcctctg acaccgccgt gtactactgc 360 gccagatccg gcctgtacgg ctcctctcag tattggggcc agggcaccct cgtgaccgtg 420 tcctctgctt ctaccaaggg cccaagcgtg ttccccctgg cccccagcag caagagcacc 480 agcggcggca cagccgccct gggctgcctg gtgaaggact acttccccga gcccgtgacc 540 gtgtcctgga acagcggagc cctgacctcc ggcgtgcaca ccttccccgc cgtgctgcag 600 agcagcggcc tgtacagcct gagcagcgtg gtgaccgtgc ccagcagcag cctgggcacc 660 cagacctaca tctgtaacgt gaaccacaag cccagcaaca ccaaggtgga caagaaggtg 720 gagcccaaga gctgtgacaa gacccacacc tgccccccct gcccagcccc cgagctgctg 780 ggcggaccca gcgtgttcct gttccccccc aagcccaagg acaccctgat gatcagcaga 840 acccccgagg tgacctgtgt ggtggtggac gtgtcccacg aggacccaga ggtgaagttc 900 aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcac aacgccaaga ccaagcccag agaggagcag 960 tacaacagca cctacagggt ggtgtccgtg ctgaccgtgc tgcaccagga ctggctgaac 1020 ggcaaggagt acaagtgtaa ggtgtccaac aaggccctgc cagccccaat cgaaaagacc 1080 atcagcaagg ccaagggcca gccaagagag ccccaggtgt acaccctgcc acccagcagg 1140 gacgagctga ccaagaacca ggtgtccctg acctgtctgg tgaagggctt ctacccaagc 1200 gacatcgccg tggagtggga gagcaacggc cagcccgaga acaactacaa gaccaccccc 1260 ccagtgctgg acagcgacgg cagcttcttc ctgtacagca agctgaccgt ggacaagagc 1320 agatggcagc agggcaacgt gttcagctgc tccgtgatgc acgaggccct gcacaaccac 1380 tacacccaga agagcctgag cctgtcccca ggctgatgaa ttc 1423 <210> 12 <211> 739 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain DNA <400> 12 aagcttgccg ccaccatgtc cgtgcctacc caggtgctgg gactgctgct gctgtggctg 60 accgacgcca gatgcgacat cgtgctgacc cagagccctg cctctctggc tgtgtctcct 120 ggccagaggg ccaccatcac ctgtagagcc tccgagtccg tggactccta cggcaactcc 180 ttcatgcact ggtatcagca gaagcccggc cagcccccca agctgctgat ctacctgacc 240 tccaacctgg aatccggcgt gcccgacaga ttctccggct ctggctctgg caccgacttc 300 accctgacca tcaaccccgt ggaagccaac gacgccgcca cctactactg ccagcagaac 360 gccgaggacc ccagaacctt tggcggaggc accaagctgg aaatcaagcg tacggtggcc 420 gctcccagcg tgttcatctt ccccccaagc gacgagcagc tgaagagcgg caccgccagc 480 gtggtgtgtc tgctgaacaa cttctacccc agggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac 540 aacgccctgc agagcggcaa cagccaggag agcgtcaccg agcaggacag caaggactcc 600 acctacagcc tgagcagcac cctgaccctg agcaaggccg actacgagaa gcacaaggtg 660 tacgcctgtg aggtgaccca ccagggcctg tccagccccg tgaccaagag cttcaacagg 720 ggcgagtgct gatgaattc 739 <210> 13 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain Amino Acid <400> 13 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ala Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Leu Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly 465 <210> 14 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain Amino Acid <400> 14 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 15 <211> 354 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7Ch Heavy Chain DNA <400> 15 caggttcagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtgaagc ctggggcctc agtgaagata 60 tcctgcaagg ctactggcta cacattcagt ggctactgga tagagtgggt aaagcagagg 120 cctggacatg gccttgagtg gattggagag attttgcctg gaagtgatag tactaactac 180 aatgagaagt tcaagggcaa ggccacattc actgcagata catcctccaa cacagtctac 240 atgcaattca gcagcctgac atctgaggac tctgccgtct attactgtgc aagatcgggt 300 tactacggta gtagtcagta ctggggccaa ggcaccactc tcacagtctc ctca 354 <210> 16 <211> 334 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7Ch Light Chain DNA <400> 16 aacattgtgc tgacccaatc tcctgcttct ttggctgtgt ctctagggca gagggccacc 60 atatcctgca gagccagtga aagtgttgat agttatggca atagttttat gcactggtac 120 cagcagaaac caggacagcc acccaaactc ctcatctatc ttacatccaa cctagaatct 180 ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctaggacag acttcaccct caccattgat 240 cctgtggagg ctgatgatgc tgcaacctat tactgtcagc aaaataatga ggatcctcgg 300 acgttcggtg gaggcaccaa gctggaaatc aaac 334 <210> 17 <211> 466 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7Ch Heavy Chain Amino Acid <400> 17 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys 20 25 30 Pro Gly Ala Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe 35 40 45 Ser Gly Tyr Trp Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn 85 90 95 Thr Val Tyr Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser 130 135 140 Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala 145 150 155 160 Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val 165 170 175 Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala 180 185 190 Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val 195 200 205 Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His 210 215 220 Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys 225 230 235 240 Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly 245 250 255 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 260 265 270 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 275 280 285 Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 290 295 300 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr 305 310 315 320 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 325 330 335 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile 340 345 350 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val 355 360 365 Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser 370 375 380 Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu 385 390 395 400 Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 405 410 415 Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 420 425 430 Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 435 440 445 His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser 450 455 460 Pro Gly 465 <210> 18 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7ch Light Chain Amino Acid <400> 18 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Leu Gly Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asp Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Gln Asn Asn Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro 130 135 140 Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 145 150 155 160 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn 165 170 175 Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser 180 185 190 Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala 195 200 205 Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly 210 215 220 Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 19 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain Variable Domain Amino Acid <400> 19 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ala Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 20 <211> 411 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain Variable Domain DNA <400> 20 atggaatggt cctgggtgtt cctgttcttc ctgtccgtga ccaccggcgt gcactccgaa 60 gtgcagctgg tgcagtctgg cgccgaagtg aagaagcctg gcgagtccct gcggatctcc 120 tgcaagggct ccggctactc cttcaccgcc tactggattg agtgggtgcg acaggcccct 180 ggcaagggcc tggaatggat cggagagatc ctgcccggct ccgactccac caactacaac 240 gagaagttca agggccacgt gaccatctcc gccgacaagt ccatctctac cgcctacctg 300 cagtggtcct ccctgaaggc ctctgacacc gccgtgtact actgcgccag atccggcctg 360 tacggctcct ctcagtattg gggccagggc accctcgtga ccgtgtcctc t 411 <210> 21 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain Variable Domain <400> 21 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130 <210> 22 <211> 393 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain Variable Domain DNA <400> 22 atgtccgtgc ctacccaggt gctgggactg ctgctgctgt ggctgaccga cgccagatgc 60 gacatcgtgc tgacccagag ccctgcctct ctggctgtgt ctcctggcca gagggccacc 120 atcacctgta gagcctccga gtccgtggac tcctacggca actccttcat gcactggtat 180 cagcagaagc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctacc tgacctccaa cctggaatcc 240 ggcgtgcccg acagattctc cggctctggc tctggcaccg acttcaccct gaccatcaac 300 cccgtggaag ccaacgacgc cgccacctac tactgccagc agaacgccga ggaccccaga 360 acctttggcg gaggcaccaa gctggaaatc aag 393 <210> 23 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR1 Amino Acid <400> 23 Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Trp 1 5 <210> 24 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR1 DNA <400> 24 ggctactcct tcaccgccta ctgg 24 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR2 Amino Acid <400> 25 Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr 1 5 <210> 26 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR2 DNA <400> 26 atcctgcccg gctccgactc cacc 24 <210> 27 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR3 Amino Acid <400> 27 Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr 1 5 10 <210> 28 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Heavy Chain CDR3 DNA <400> 28 gccagatccg gcctgtacgg ctcctctcag tat 33 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR1 Amino Acid <400> 29 Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe 1 5 10 <210> 30 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR1 DNA <400> 30 gagtccgtgg actcctacgg caactccttc 30 <210> 31 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR2 Amino Acid <400> 31 Leu Thr Ser 1 <210> 32 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR2 DNA <400> 32 ctgacctcc 9 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR3 Amino Acid <400> 33 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr 1 5 <210> 34 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A3 Light Chain CDR3 DNA <400> 34 cagcagaacg ccgaggaccc cagaacc 27 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR1 Amino Acid <400> 35 Gly Tyr Ser Phe Thr Ala Tyr Trp 1 5 <210> 36 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR1 DNA <400> 36 ggctactcct tcaccgccta ctgg 24 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR2 Amino Acid <400> 37 Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr 1 5 <210> 38 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR2 DNA <400> 38 atcctgcccg gcagcgacag cacc 24 <210> 39 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR3 Amino Acid <400> 39 Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr 1 5 10 <210> 40 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain CDR3 DNA <400> 40 gcccgcagcg gctactacgg cagcagccag tac 33 <210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR1 Amino Acid <400> 41 Glu Ser Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe 1 5 10 <210> 42 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR1 DNA <400> 42 gagagcgtgg acagctacgg caacagcttc 30 <210> 43 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR2 Amino Acid <400> 43 Leu Thr Ser 1 <210> 44 <211> 9 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR2 DNA <400> 44 ctgaccagc 9 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR3 Amino Acid <400> 45 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr 1 5 <210> 46 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain CDR3 DNA <400> 46 cagcagaacg ccgaggaccc caggacc 27 <210> 47 <211> 561 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 47 Met Asp Thr Ser Arg Leu Gly Val Leu Leu Ser Leu Pro Val Leu Leu 1 5 10 15 Gln Leu Ala Thr Gly Gly Ser Ser Pro Arg Ser Gly Val Leu Leu Arg 20 25 30 Gly Cys Pro Thr His Cys His Cys Glu Pro Asp Gly Arg Met Leu Leu 35 40 45 Arg Val Asp Cys Ser Asp Leu Gly Leu Ser Glu Leu Pro Ser Asn Leu 50 55 60 Ser Val Phe Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Ser Met Asn Asn Ile Ser Gln 65 70 75 80 Leu Leu Pro Asn Pro Leu Pro Ser Leu Arg Phe Leu Glu Glu Leu Arg 85 90 95 Leu Ala Gly Asn Ala Leu Thr Tyr Ile Pro Lys Gly Ala Phe Thr Gly 100 105 110 Leu Tyr Ser Leu Lys Val Leu Met Leu Gln Asn Asn Gln Leu Arg His 115 120 125 Val Pro Thr Glu Ala Leu Gln Asn Leu Arg Ser Leu Gln Ser Leu Arg 130 135 140 Leu Asp Ala Asn His Ile Ser Tyr Val Pro Pro Ser Cys Phe Ser Gly 145 150 155 160 Leu His Ser Leu Arg His Leu Trp Leu Asp Asp Asn Ala Leu Thr Glu 165 170 175 Ile Pro Val Gln Ala Phe Arg Ser Leu Ser Ala Leu Gln Ala Met Thr 180 185 190 Leu Ala Leu Asn Lys Ile His His Ile Pro Asp Tyr Ala Phe Gly Asn 195 200 205 Leu Ser Ser Leu Val Val Leu His Leu His Asn Asn Arg Ile His Ser 210 215 220 Leu Gly Lys Lys Cys Phe Asp Gly Leu His Ser Leu Glu Thr Leu Asp 225 230 235 240 Leu Asn Tyr Asn Asn Leu Asp Glu Phe Pro Thr Ala Ile Arg Thr Leu 245 250 255 Ser Asn Leu Lys Glu Leu Gly Phe His Ser Asn Asn Ile Arg Ser Ile 260 265 270 Pro Glu Lys Ala Phe Val Gly Asn Pro Ser Leu Ile Thr Ile His Phe 275 280 285 Tyr Asp Asn Pro Ile Gln Phe Val Gly Arg Ser Ala Phe Gln His Leu 290 295 300 Pro Glu Leu Arg Thr Leu Thr Leu Asn Gly Ala Ser Gln Ile Thr Glu 305 310 315 320 Phe Pro Asp Leu Thr Gly Thr Ala Asn Leu Glu Ser Leu Thr Leu Thr 325 330 335 Gly Ala Gln Ile Ser Ser Leu Pro Gln Thr Val Cys Asn Gln Leu Pro 340 345 350 Asn Leu Gln Val Leu Asp Leu Ser Tyr Asn Leu Leu Glu Asp Leu Pro 355 360 365 Ser Phe Ser Val Cys Gln Lys Leu Gln Lys Ile Asp Leu Arg His Asn 370 375 380 Glu Ile Tyr Glu Ile Lys Val Asp Thr Phe Gln Gln Leu Leu Ser Leu 385 390 395 400 Arg Ser Leu Asn Leu Ala Trp Asn Lys Ile Ala Ile Ile His Pro Asn 405 410 415 Ala Phe Ser Thr Leu Pro Ser Leu Ile Lys Leu Asp Leu Ser Ser Asn 420 425 430 Leu Leu Ser Ser Phe Pro Ile Thr Gly Leu His Gly Leu Thr His Leu 435 440 445 Lys Leu Thr Gly Asn His Ala Leu Gln Ser Leu Ile Ser Ser Glu Asn 450 455 460 Phe Pro Glu Leu Lys Val Ile Glu Met Pro Tyr Ala Tyr Gln Cys Cys 465 470 475 480 Ala Phe Gly Val Cys Glu Asn Ala Tyr Lys Ile Ser Asn Gln Trp Asn 485 490 495 Lys Gly Asp Asn Ser Ser Met Asp Asp Leu His Lys Lys Asp Ala Gly 500 505 510 Met Phe Gln Ala Gln Asp Glu Arg Asp Leu Glu Asp Phe Leu Leu Asp 515 520 525 Phe Glu Glu Asp Leu Lys Ala Leu His Ser Val Gln Cys Ser Pro Ser 530 535 540 Pro Gly Pro Phe Lys Pro Cys Glu His Leu Leu Asp Gly Trp Leu Ile 545 550 555 560 Arg <210> 48 <211> 137 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Heavy Chain Variable Amino acid <400> 48 Met Glu Trp Ser Trp Val Phe Leu Phe Phe Leu Ser Val Thr Thr Gly 1 5 10 15 Val His Ser Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys 20 25 30 Pro Gly Glu Ser Leu Arg Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe 35 40 45 Thr Ala Tyr Trp Ile Glu Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Ile Gly Glu Ile Leu Pro Gly Ser Asp Ser Thr Asn Tyr Asn 65 70 75 80 Glu Lys Phe Lys Gly His Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser 85 90 95 Thr Ala Tyr Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ser Gly Tyr Tyr Gly Ser Ser Gln Tyr Trp Gly 115 120 125 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 130 135 <210> 49 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 18G7H6A1 Light Chain Variable Amino acid <400> 49 Met Ser Val Pro Thr Gln Val Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp Leu Thr 1 5 10 15 Asp Ala Arg Cys Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala 20 25 30 Val Ser Pro Gly Gln Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Glu Ser 35 40 45 Val Asp Ser Tyr Gly Asn Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro 50 55 60 Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Asn Leu Glu Ser 65 70 75 80 Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr 85 90 95 Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asn Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys 100 105 110 Gln Gln Asn Ala Glu Asp Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu 115 120 125 Glu Ile Lys 130

Claims (22)

  1. G-단백질 결합 수용체 5(LGR5)를 함유하는 인간 류신-풍부 반복체에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 항체 약물 접합체로서, 여기서 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 링커를 통해 약물에 접합하며, 항체 또는 이의 항원-결합 단편은
    SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역(CDR1) 또는 이의 보존적 변이체,
    SEQ ID NO: 25를 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 2(CDR2) 또는 이의 보존적 변이체,
    SEQ ID NO: 27을 포함하는 중쇄 상보성 결정 영역 3(CDR3), 또는 이의 보존적 변형체,
    SEQ ID NO: 29를 포함하는 경쇄 CDR1, 또는 이의 보존적 변이체,
    SEQ ID NO: 31을 포함하는 경쇄 CDR2, 또는 이의 보존적 변이체, 및
    SEQ ID NO: 33을 포함하는 경쇄 CDR3 또는 이의 보존적 변이체를 포함하는 항체 약물 접합체.
  2. 제 1 항에 있어서,
    항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO: 23을 포함하는 중쇄 CDR1을 포함하는 항체 약물 접합체.
  3. 제 1 항에 있어서,
    항-LGR5 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IgG1을 포함하는 항체 약물 접합체.
  4. 제 1 항에 있어서,
    링커는 절단 불가능한 링커인 항체 약물 접합체.
  5. 제 1 항에 있어서,
    링커는 절단 가능한 링커인 항체 약물 접합체.
  6. 제 1 항에 있어서,
    약물은 미세소관 억제제 및 DNA 손상제로부터 선택되는 항체 약물 접합체.
  7. 제 6 항에 있어서,
    미세소관 억제제는 카바지탁셀, 콜세미드, 콜히친, 크립토피신, 데메콜신, 도세탁셀, 2-메톡시에스트라다이올, 도코다졸, 파클리탁셀, 타칼로놀리드, 탁세인 및 빈블라스틴으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 약물 접합체.
  8. 제 1 항에 있어서,
    약물은 모노메틸 아우리스타틴 F, 모노메틸 아우리스타틴 E, 모노메틸 돌라스타틴 10, 듀오카마이신, 메이탄사노이드 1, 듀얼스타틴 3, 칼리케아미신 및 듀오카마이신으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 항체 약물 접합체.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 어느 하나의 항체 약물 접합체 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적 조성물.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 어느 하나의 유효량의 항체 약물 접합체를 이를 필요로 하는 대상에게 투여하는 단계를 포함하여 암에 걸린 대상을 치료하는 방법.
  11. 제 10 항에 있어서,
    암은 고형 종양을 포함하는 방법.
  12. 제 10 항에 있어서,
    암은 암 줄기세포를 포함하는 방법.
  13. 제 10 항에 있어서,
    암은 폐암, 유방암, 결장암 및 췌장암으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  14. 제 10 항에 있어서,
    암은 삼중 음성 유방암 세포, K-Ras, H-Ras, APC, PI3K, PTEN, STK11, RB1, TP53, FGFR2, VANGL2 및 ISCO로 이루어진 그룹으로부터 선택된 유전자에 돌연변이를 갖는 결장암 세포, 및 소세포 폐암 세포로 이루어진 그룹으로부터 선택된 세포를 포함하는 방법.
  15. 제 10 항에 있어서,
    대상은 포유류인 방법.
  16. 제 15 항에 있어서,
    대상은 인간인 방법.
  17. 제 10 항에 있어서,
    항체 약물 접합체와 조합하여 추가 요법을 투여하는 단계를 포함하고, 여기서 추가 요법은 방사선 요법 및 화학 요법제로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  18. 제 17 항에 있어서,
    항체 약물 접합체의 투여는 추가 요법의 투여와 동시에 수행되는 방법.
  19. 제 17 항에 있어서,
    화학 요법제는 폴리닌산, 플루오로 우라실, 이리노테칸, 젬시타빈, 파클리탁셀, nab-파클리탁셀, ERBITUX(세툭시맙), PI3K/mTOR 이중 억제제(NVP) 및 SN38로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  20. 제 17 항에 있어서,
    추가 요법은 폴리닌산, 플루오로우라실 및 이리노테칸을 포함하는 방법.
  21. 링커를 약물에 연결시키는 단계; 및
    연결된 약물을 항체에 접합시키는 단계를 포함하여 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항의 항체 약물 접합체를 제조하는 방법.
  22. 제 21 항에 있어서,
    접합된 항체를 정제하는 단계를 포함하는 방법.
KR1020207001231A 2017-06-16 2018-06-14 Lgr5와 결합하는 항체 약물 접합체 KR20200017493A (ko)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201762520726P 2017-06-16 2017-06-16
US62/520,726 2017-06-16
PCT/US2018/037613 WO2018232164A1 (en) 2017-06-16 2018-06-14 Antibody drug conjugates that bind lgr5

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20200017493A true KR20200017493A (ko) 2020-02-18

Family

ID=64659309

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020207001231A KR20200017493A (ko) 2017-06-16 2018-06-14 Lgr5와 결합하는 항체 약물 접합체

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20200114017A1 (ko)
EP (1) EP3638309A4 (ko)
JP (1) JP2020523414A (ko)
KR (1) KR20200017493A (ko)
CN (1) CN110958889A (ko)
AU (1) AU2018285523A1 (ko)
WO (1) WO2018232164A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2015240599B2 (en) * 2014-04-04 2020-11-19 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
CN108697799A (zh) 2016-03-22 2018-10-23 生态学有限公司 抗lgr5单克隆抗体的施用
EP3512548B1 (en) * 2016-09-16 2023-03-22 Bionomics Limited Antibody and checkpoint inhibitor combination therapy
KR20230118850A (ko) * 2020-11-18 2023-08-14 카리나 바이오테크 피티와이 엘티디 키메라 항원 수용체 t 세포 및 방법

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR090549A1 (es) * 2012-03-30 2014-11-19 Genentech Inc Anticuerpos anti-lgr5 e inmunoconjugados
KR102048718B1 (ko) * 2013-08-02 2019-11-26 화이자 인코포레이티드 항-cxcr4 항체 및 항체-약물 접합체
AU2015240599B2 (en) * 2014-04-04 2020-11-19 Bionomics, Inc. Humanized antibodies that bind LGR5
TW201625688A (zh) * 2014-09-12 2016-07-16 建南德克公司 經半胱胺酸改造之抗體及接合物

Also Published As

Publication number Publication date
US20200114017A1 (en) 2020-04-16
WO2018232164A1 (en) 2018-12-20
JP2020523414A (ja) 2020-08-06
EP3638309A4 (en) 2021-03-24
CN110958889A (zh) 2020-04-03
EP3638309A1 (en) 2020-04-22
AU2018285523A1 (en) 2020-01-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210128742A1 (en) CD123 Antibodies and Conjugates Thereof
JP6728264B2 (ja) 抗ｈｅｒ２抗体及びその結合体
CN108290948B (zh) 抗-cd47抗体及使用方法
CN108473575B (zh) 抗-bcma多肽和蛋白质
CN106211774B (zh) 抗cxcr4抗体及抗体-药物缀合物
JP6282745B2 (ja) 修飾抗上皮成長因子受容体抗体およびその使用法
WO2017161206A1 (en) Conjugates containing conditionally active antibodies or antigen-binding fragments thereof, and methods of use
KR20200017493A (ko) Lgr5와 결합하는 항체 약물 접합체
CN111819200B (zh) 抗c-met抗体
US20240299574A1 (en) Antibodies to pmel17 and conjugates thereof
WO2022048521A1 (zh) 抗c-Met抗体药物偶联物及其应用
CN113423736A (zh) 对muc18特异性的抗体
WO2023143535A1 (zh) 一种靶向il-18bp的抗体及其应用
WO2019157973A1 (zh) 抗trailr2抗体-毒素-偶联物及其在抗肿瘤治疗中的药物用途
CA3023088A1 (en) Novel anti-tnfrsf21 antibodies and methods of use
CN110152014B (zh) 抗trailr2抗体-毒素-偶联物及其在抗肿瘤治疗中的药物用途
US11999786B2 (en) Anti-CD48 antibodies, antibody drug conjugates, and uses thereof
TW201711702A (zh) 使用針對纖維母細胞生長因子受體３（ｆｇｆｒ３）之化合物的療法

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application