KR20190139236A - 장 질환의 예방 및/또는 치료에서의 베르베린 알칼로이드 - Google Patents

장 질환의 예방 및/또는 치료에서의 베르베린 알칼로이드 Download PDF

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콜린 포우턴
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Abstract

본 발명은 베르베린 알칼로이드, 이의 제제 및 동물에서의 감염성 질환, 특히 클로스트리듐 퍼프린젠스 및 아이메리아에 의해 생긴 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 이의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 베르베린 조성물을 투여함으로써 식품 생성 동물에서 사료 전환율을 개선하는 것에 관한 것이다.

Description

장 질환의 예방 및/또는 치료에서 베르베린 알칼로이드
본 발명은 베르베린 알칼로이드(berberine alkaloid), 이의 제제 및 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료를 위한 이의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 베르베린 알칼로이드, 이의 제제 및 식품 생성 동물에서의 박테리아, 바이러스, 기생충 또는 진균 감염을 포함하는 감염성 질환의 예방 및/또는 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.
항생제 사용은 수십 년 동안 세계적으로 동물 생산에서 주요산물이다. 세계가, 사람에서의 감염에 싸우기 위해 세계적으로 의사가 처방하는 항생제의 것의 거의 2배인, 소, 닭 및 돼지를 키우기 위해 매년 약 63,000톤의 항생제를 사용하는 것으로 예상되고, 현재의 경향은 동물에서의 항생제의 세계 소비가 다음의 20년에 ⅔으로 올라가는 것을 제시한다.
항생제는 감염을 치료하고 제어할 뿐만 아니라, 낮은 용량에서의 성장 촉진물질로서 동물 및 가금류 사료에 보충되고, 생성물의 품질을 개선하여서, 고기에서의 더 낮은 백분율의 지방 및 더 높은 단백질 함량을 생성시키는 것으로 생각된다. 국립 동물 건강 협회(National Office of Animal Health: NOAH, 2001)에 따르면, 이들은 "성장하는 동물이 이들의 식품을 더 효율적으로 섭취하고, 이로부터 최대 이익을 얻고, 이들이 강하고 건강한 개체로 발달하게 하는 것을 도와서", 농부에 경제적인 이점을 생성하도록 사용된다. 감염성 질환에 싸우도록 항생제로서 작용할 가능성을 갖고 비용 효과적인 물질의 의료품을 증가시키고 개발하는 것이 따라서 중요하다.
항균제 내성(antimicrobial resistance: AMR)은 약물의 작용에 저항하여서, 이들이 비효과적이게 만들도록 미생물이 진화하는 천연 과정이다. 이는 항생제가 시간에 걸쳐 덜 효과적이고 극도의 경우에는, 궁극적으로 쓸모없게 한다. AMR은 새로운 항생제가 개발되는 속도가 극적으로 느려지고 결과적으로 매우 제한된 수의 새로운 약물이 있으므로 점점 더 문제가 된다. 한편, 항생제 사용은 증가하여서, 내성의 발생을 기하급수적으로 증가시킨다.
최근에, 식품 생성 동물에서의 항생제의 사용은 이들의 남용이 동물에서 항생제 내성 박테리아의 선택을 촉진함으로써 항생제 내성 유전자의 확산에 기여한다는 증가하는 우려로 다시 한번 정밀조사된다. 또한, 동물로부터의 폐재료는 항생제 잔류물을 함유할 수 있어서, 환경에서 더 넓게 퍼뜨린다. 이것은 집약 농업 방법의 주요 문제이고, 이의 사용에 의해 생긴 논쟁은 대부분 오히려 개발도상국보다 선진국의 것이다.
항균제 내성(AMR)은 박테리아, 기생충, 바이러스 및 진균에 의해 생긴 감염의 계속 증가하는 범위의 효과적인 예방 및 치료를 위협한다. AMR은 모든 정부 부문 및 사회에 걸쳐 조치를 요하는 세계적인 공공 건강에 점점 더 심각한 위협이다. 식품 생성 동물에서의 항생제의 폭 및 남용은 식품 및 이어서 소비자(결국 이어서 항생제 내성 감염을 발생시킬 수 있음)를 오염시킬 수 있는 항생제 내성 박테리아의 출현에 기여한다. 도 1은 식품 생성 동물로부터의 인간으로의 AMR의 확산을 도시한다.
두려움은 인간에 대한 약물 내성 박테리아의 확산을 발생시키는 식품 생성 동물에서의 항생제의 남용이고, 이어서 결국 인간에서의 항생제의 남용은 '슈퍼버그(superbug)' - 항생제의 몇몇 종류에 내성인 박테리아를 생성시킬 것이고 생성시켰다. 벌써, 슈퍼버그가 중국 및 미국에서 매년 320,000개 초과의 사망을 발생시키고, 사망자 수는 2050년에 1000만 명을 초과하는 것으로 예상되고, 세계적으로 100조 USD 초과의 비용이 든다고 예상된다.
기존의 항균제 약제에 내성인 감염의 세계적 부담은 걱정스러운 속도로 증가하고 있다. 메티실린 내성 스타필로코커스 아우레우스(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus: MRSA) 및 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella pneumoniae)는 병원 감염의 주원인이다. 흔한 장 박테리아인 클레브시엘라 뉴모니아는 몇몇 나라에서 β-락탐 카바페넴 항생제에 의한 훨씬 마지막의 수단의 치료에 내성이 된다. 세계의 많은 부분에서, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) 박테리아에 의해 생긴 요로 감염의 치료는 플루오로퀴놀론 항생제에 대한 내성 때문에 이제 비효과적이다.
β-락탐 항생제 및 플루오로퀴놀론의 사용은 2차 감염 및 추가의 합병증, 예컨대 클로스트리듐 디피실(CD)의 과성장을 발생시킬 수 있다. CD는 설사로부터 삶을 위협하는 결장 염증의 범위의 증상을 발생시킬 수 있는 박테리아이다. CD로부터의 질병은 대개 장기간 관리 설비에서 노인 성인에 가장 흔히 영향을 미치고, 통상적으로 항생제 약제의 사용 후 발생한다. 그러나, 연구는 항생제 사용의 병력 또는 건강 관리 설비에 대한 노출이 없는 젊은이 및 건강한 개체와 같은 높은 위험이 전통적으로 고려되지 않는 사람 중에서 CD 감염의 증가하는 속도를 보여준다. 미국에서 매년, 약 50만 명의 사람은 CD 독소의 방출의 결과로서 아프고, 최근에는, CD 감염은 더 흔해지고 중증이고 항균제 내성의 증가에 의해 치료하기 어렵다. 얄궂게도, CD에 대한 표준 치료는 중증 내지 중등도 감염에 대해 메트로니다졸; 더 중증의 감염에 대해 반코마이신인 또 다른 항생제이다. 그러나, CD를 갖는 사람의 20% 이하는 다시 아프다. 2 이상의 재발 후, 추가의 재발의 비율은 65%까지 상승한다.
약물 내성 박테리아에 의해 생긴 감염을 갖는 환자는 악화하는 임상 결과 및 사망의 증가된 위험에 있고, 동일한 박테리아의 비내성 균주에 의해 감염된 환자보다 건강 관리 자원을 더 많이 소모한다. 항균제 내성은 모든 사회에 영향을 미치고 많은 상호연결된 인자에 의해 추진되는 복잡한 문제이다. 단일의 격리된 중재는 제한된 영향을 갖는다. 조직화된 작용은 항균제 내성의 확산 및 응급성을 최소화하는 데 필요하다. 인간 및 동물 건강에 직면하는 세계적인 내성 문제를 방지하기 위한 대안으로서 새로운 항균 약물을 개발하는 것이 중요하다.
주정부 관리자는 유럽 연합, FDA, 호주 농업 보건부(Australia's Department of Agriculture and Health)를 포함하여 내성의 선택을 감소시키도록 식품 생성 동물에서 항생제의 사용을 제어하는 데 있어서 심각한 새로운 명령 및 제정을 이미 지금 실행하고 있다. 식품 산업에서의 주요 회사, 예컨대 맥도날드(McDonalds) 및 월마트(Wal-Mart)는 식품에서의 항생제의 사용을 감소시키도록 그 자체의 계획을 제안한다.
동물에서의 항생제 사용의 폐지 또는 금지는 다수의 결과를 발생시키거나 발생시켰다. 미국 동물 보건 협회(Animal Health Institute of America)는, 성장 촉진 항생제의 사용 없이는, USA가 농업 산업에 더 큰 경제적인 부담을 발생시키는, 현재의 실행에 의해 획득한 생성의 수준에 도달하도록 추가적인 45200만 마리의 닭, 2300만 마리 초과의 소 및 1200만 마리 초과의 돼지를 요한다고 추정한다.
더 걱정스럽게는, 항생제의 감소 또는 철수 및 농업 실행의 변화는 더 확산되고 지배적이 되는 몇몇 동물 질환, 예를 들어 가금류에서의 괴사성 장염을 발생시킨다. 이는 유럽, 예컨대 프랑스 및 스칸디나비아에서의 나라에 의해 보고되었고, 여기서 항생제 성장 촉진물질의 금지는 괴사성 장염 발병의 극적인 증가를 수반하여서, 항생제 성장 촉진물질이 질환을 방제하는 데 있어서 예방학적 효과를 갖는다는 것을 나타낸다. 항생제 사용을 감소시키는 정책을 실행하는 몇몇 나라에 의해, 1년에 대략 20억 US 달러인 것으로 예상되는 국제 가금류 산업에 대한 괴사성 장염의 현재의 비용은 훨씬 더 상승하도록 계획된다. 다른 질환은 가금류 산업에 상당한 손실, 예컨대 콕시디아증(Coccidiosis)을 야기한다. 스포티 간 질환(Spotty Liver Disease)은 계란 층에서 사망률의 주원인이 되고, 계란 생성을 감소시킨다.
항생제 사용의 감소 또는 철수 및 농업 실행의 변화는 또한 돼지 산업에 영향을 미치고, 질환은 더 확산되고 지배적이 된다. 장독소성 에스케리키아 콜라이와 연관된 설사 및 브라키스피라(Brachyspira)와 연관된 돼지 이질의 발생은 돼지에서의 높은 사망률 및 이환율을 담당한다. 박테리아 로소니아 인트라셀룰라리스(Lawsonia intracellularis)와 연관되고 소장에 영향을 미치는 병태의 회장염 군은 또한 돼지 산업을 손상시킨다. 병태의 군은 돼지 장 선병증, 괴사성 장염, 국한 회장염 및 증식성 출혈성 장병증을 포함한다.
살모넬라증(Salmonellosis)은 가장 흔하고 널리 분포된 식품 중독 중 하나이고, 박테리아 살모넬라에 의해 생긴다. 수천만 명의 인간 사례가 매년 세계적으로 발생하고, 질환이 십만 건 초과의 사망을 발생시킨다고 예상된다. 살모넬라 혈청형에서의 항균제 내성은 세계적인 문제이다. 감시 데이터는 몇몇 나라에서 1990년대 초기에 20% 내지 30%로부터 세기의 전환에서 70%만큼 높게 살모넬라에 중에서 전체 항균제 내성의 명확한 증가를 입증하였다. 살모넬라는 농사 동물(특히 닭 및 소)의 장에서 산다. 이것은 물, 식품에서, 또는 감염된 동물 또는 인간의 대변에 의해 오염된 표면에서 발견될 수 있다(도 2는 살모넬라 감염 및 식품 중독의 양태를 도시한다).
캄필로박터증(Campylobacteriosis)은 캄필로박터(CB)라 불리는 박테리아에 의해 생기는 위장 질환이고, 식품 매개 질병의 주원인이다. CB는 오염된 식품(주로 가금류), 물 또는 비저온살균 우유를 섭취하거나 마셔서 인간에게 주로 전파된다. CB는 감염된 사람과의 접촉을 통해 또는 박테리아를 보유하는 고양이, 개 및 농장 동물과의 접촉으로부터 또한 전파될 수 있다. 도 3은 역학을 보여준다.
CB에 의해 감염되는 대부분의 사람은 1주 내지 2주 지속하는 설사, 경련, 복통 및 열을 얻을 것이다. 증상은 보통 감염 후 2일 내지 5일 내에 발생한다. 설사는 혈액 또는 점막을 함유할 수 있다. 드문 경우에, CB는 혈류에 진입하고, 더 심각한 질환을 야기할 수 있다. 매우 어린 아동, 노인, 부족한 면역력을 갖는 사람 및 작업 농장 동물과 작업하는 사람이 더 큰 감염 위험에 있지만, 누구나 캄필로박터증을 얻을 수 있다. 치료는 보통 재수화를 수반하지만, 중중의 또는 복잡한 경우에, 항생제, 예컨대, 에리쓰로마이신은 질병 기간을 감소시키도록 처방된다.
더 구체적으로, 가금류 시체/고기의 CB 오염의 발생이 지속한다. CB 오염을 방제하는 방법은 세척 및 내장적출을 통한 가공 플랜트에 초점을 두었다. 그러나, CB 콜로니화가 조류의 장관에서 조절될 수 있는 경우, 도축 전에, 가공된 조류의 오염이 감소한다고 생각된다.
'항생제 후 시대(post-antibiotic era)'로의 이동을 발생시키는 항생제의 강제된 감소 또는 철수는 질환으로부터 식품 생성 동물(및 인간)을 치료하고 방제하고 보호하기 위한 대안을 생각하고 개발하려는 필요를 발생시켰다. 현재, 항생제 및 결과적인 수반하는 질환 발병의 감소 또는 철수와 연관된 문제를 해소하기 위해 사용될 수 있는 약제가 있는 사료를 포함하는 약제에 대한 수요가 존재한다. 현재까지, 동물 사료에서의 항생제를 치환할 수 있는 비용 효과적인 단일의 예방학적 또는 치료학적 물질이 발견되지 않았다.
본 개시내용은 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 베르베린 알칼로이드를 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용은 또한 베르베린 알칼로이드를 포함하는 동물 사료 및 동물 식량에 관한 것이고, 여기서 베르베린 알칼로이드는 약 0.001% w/w 내지 2% w/w의 동물 식량의 양이다.
본 개시내용은 또한 베르베린 알칼로이드 또는 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 것을 포함하는 투약 요법에 관한 것이고, 여기서 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료는 1주 내지 6주 동안 동물에서의 감염성 질환을 예방 및/또는 치료하기에 효과적인 양으로 투여된다.
본 개시내용은 또한 식품 생성 동물에서의 사료 전환율(feed conversion ratio)의 감소 방법에 관한 것이고, 여기서 상기 방법은 베르베린 알칼로이드 또는 본 명세서에 개시된 동물 사료를 식품 생성 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 장 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이고, 여기서 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스이다.
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조에서의 베르베린 알칼로이드의 용도에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료에서의 베르베린 알칼로이드의 용도에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 베르베린 알칼로이드에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
정의
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "허용 가능한 부형제"는 투여에서 안전하게 사용될 수 있는 고체 또는 액체 충전제, 담체, 희석제 또는 캡슐화 물질을 의미한다. 특정한 투여 경로에 따라, 당해 분야에 널리 공지된 다양한 담체를 사용할 수 있다. 이들 담체 또는 부형제는 당, 전분, 셀룰로스 및 이의 유도체, 맥아, 젤라틴, 탈크, 황산칼슘, 식물성 오일, 합성 오일, 폴리올, 알긴산, 포스페이트 완충 용액, 유화제, 등장성 식염수 및 발열원 비함유 물을 포함하는 군으로부터 선택될 수 있다. 부형제는, 예를 들어, 문헌[Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams and Wilkins, 2005]에 기재되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "허용 가능한 염"은 전신 투여에 독성학적으로 안전한 염을 의미한다. 허용 가능한 산성/음이온성 또는 염기성/양이온성을 포함하는 허용 가능한 염은 문헌[P. L. Gould, International Journal of Pharmaceutics, 1986, November, 33 (1-3), 201-217; S. M. Berge et al., Journal of Pharmaceutical Science, 1977, January, 66 (1), 1; P. Heinrich Stahl, Camille G. Wermuth (Eds.), Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, Second Revised Edition, Wiley, 2011]에 기재되어 있다. 본 발명의 산성 또는 염기성 화합물의 허용 가능한 염이 물론 종래의 절차(예컨대, 유리 산과 원하는 염 형성 염기와의 반응 또는 유리 염기와 원하는 염 형성 산의 반응)에 의해 이루어질 수 있다.
산성 화합물의 허용 가능한 염은 양이온과의 염을 포함하고, 알칼리 또는 알칼리 토금속염, 예를 들어, 나트륨, 리튬, 칼륨, 칼슘, 마그네슘 등, 및 비독성 암모늄, 4급 암모늄, 및 아민 양이온, 예를 들어, 암모늄, 테트라메틸암모늄, 테트라에틸암모늄, 메틸아민, 다이메틸아민, 트라이메틸아민, 트라이에틸아민, 에틸아민, 트라이에탄올아민 등(이들로 제한되지는 않음), 및 유기 염기와의 염으로부터 선택될 수 있다. 적합한 유기 염기는 N-메틸-D-글루카민, 아르기닌, 벤자틴, 다이올라민, 올라민, 프로카인 및 트로메타민을 포함한다.
염기성 화합물의 허용 가능한 염은 음이온과의 염을 포함하고, 유기 또는 무기 산으로부터 선택될 수 있다. 적합한 음이온은 아세테이트, 아실설페이트, 아실설포네이트, 아디페이트, 아스코르베이트, 벤조에이트, 베실레이트, 브로마이드, 캄실레이트, 카프레이트, 카프로에이트, 카프릴레이트, 클로라이드, 시트레이트, 도쿠세이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 포르메이트, 퓨마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 히푸레이트, 하이클레이트, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토비오네이트, 라우레이트, 말레이트, 말레에이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸설페이트, 납실레이트, 니트레이트, 옥타노에이트, 올레에이트, 파모에이트, 포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 설페이트, 설포네이트, 설포살리실레이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테레프탈레이트, 토실레이트, 트라이에티오다이드 등을 포함한다.
베르베린은 양으로 하전된 4급 암모늄 양이온이다. 베르베린의 허용 가능한 염은 제한 없이 클로라이드, 헤미설페이트 및 요오다이드 염을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, "허용 가능한 용매"는 본 개시내용의 목적을 위해 용질의 생물학적 활성을 방해하지 않을 수 있는 용매이다. 적합한 용매의 예는 물, 에탄올 및 아세트산, 글라이세롤, 액체 폴리에틸렌 글라이콜 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다. 특정한 용매는 물이다. 용어 "용매화물"은 용질(예를 들어, 베르베린 알칼로이드) 및 용매에 의해 형성된 다양한 화학량론의 복합체를 의미한다. 특히, 사용된 용매는 본 명세서에 정의된 바대로 "허용 가능한 용매"이다. 물이 용매일 때, 분자는 수화물이라 불린다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, "IRP001"은 본 명세서에 기재된 바대로 4차 암모늄 양이온인 베르베린 및 항균제 활성을 갖는 식물 천연 생성물을 의미한다. 용어 "IRP001" 및 "베르베린"은 본 명세서에서 상호교환되어 사용된다. 본 명세서에 사용된 바와 같은, "IRP001 클로라이드" 또는 "IRP001 Cl"은 베르베린의 클로라이드 염을 나타내고; "IRP001 설페이트"는 베르베린의 헤미설페이트 염을 의미한다. 따라서, 용어 "IRP001 설페이트", "베르베린 설페이트", "IRP001 헤미설페이트" 및 "베르베린 헤미설페이트"가 본 명세서에서 동등하다고 이해될 것이다. 베르베린 4급 암모늄 양이온, 및 클로라이드 및 헤미설페이트 염의 분자 구조는 도 4에 도시되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "베르베린 알칼로이드(들)"는 베르베린 및 베르베린과 유사한 구조 및 특징을 공유하고 본 발명의 조성물/방법/용도에 적합한 화합물을 의미한다. 이러한 화합물은 프로토베르베린: 베르베루빈, 코렉시민, 테트라하이드로팔마틴, 자토르히진, 13-하이드록시베르베린 클로라이드, 코랄린 클로라이드, 7,8-다이하이드로-13-메틸베르베린, 피브라우레틴(팔마틴) 및 13-벤질베르베린을 포함하지만, 이들로 제한되지는 않는다.
베르베린 알칼로이드는 상이한 이성질체 또는 상이한 이성질체 형태, 예를 들어, 다양한 호변이체 또는 호변이체 형태로 존재할 수 있다. 용어 "베르베린 알칼로이드(들)"가 서로로부터 단리된 상이한 이성질체 형태, 및 조합을 포함하는 것으로 이해될 것이다.
베르베린 알칼로이드는 또한 다양한 비정질 형태 및 결정질 형태(즉, 다형)로 존재할 수 있다. 용어 "베르베린 알칼로이드(들)"가 서로로부터 단리된 상이한 비정질 및 결정질 형태, 및 조합을 포함하는 것으로 또한 이해될 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "베르베린 알칼로이드(들)"는 허용 가능한 염, 용매화물, 상기 염의 용매화물 또는 이의 프로드럭을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "식품 생성 동물"은 또 다른 동물, 예를 들어, 인간에 의한 소비에 대해 식품의 생성을 위해 길러진 동물을 의미한다. 용어 "식품 생성 동물"이, 예를 들어, 닭 또는 돼지를 포함한다고 이해될 것이다.
용어 "이성질체"가 구조적 또는 구성적 이성질체, 호변이체, 위치이성질체, 기하 이성질체, 또는 입체이성질체, 예를 들어, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체를 의미한다고 이해될 것이다. 추가로, 라세메이트는 거울상이성질체의 쌍의 등몰량의 혼합물을 포함한다고 이해될 것이다.
용어 "프로드럭"이 생체내 활성 형태로 변환되는 화합물의 불활성 형태를 의미한다고 이해될 것이다. 적합한 프로드럭은 화합물의 활성 형태의 에스터, 포스포네이트 에스터 등을 의미한다. 프로드럭의 추가의 설명은 문헌[Stella, V. J. et al., "Prodrugs", Drug Delivery Systems, 1985, pp. 112-176, Drugs, 1985, 29, pp. 455-473 및 "Design of Prodrugs", ed. H. Bundgard, Elsevier, 1985]에서 발견될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 베르베린의 "안전한" 잔류물 수준은 질환, 특히 암의 사소한 위험을 부여하는 것이다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "치료", "치료한다", "치료하는" 등은, 본 발명의 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 투여하지 않는 것과 비교하여, 질환, 장애 또는 병태의 제어, 취급 또는 개선, 또는 질환, 장애 또는 병태의 진행의 속도의 감소, 또는 증상 또는 부작용의 방어 또는 저해, 증상 또는 부작용의 발생의 중증도의 감소, 및/또는 동물 대상체가 겪는 증상 또는 부작용의 수 또는 유형의 감소를 의미한다. 용어 "치료"는 일시적인 환경에서의 용도를 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "예방", "예방한다", "예방하는" 등은 질환, 장애 또는 병태, 또는 이의 증상 또는 부작용의 발생을 지연시키거나 느리게 하도록 사용되는 치료를 포함하도록 의도된다.
본 명세서에 사용된 바대로, "예방" 및 "치료"와 관련하여, 용어 "유효량"은, 동물에게 투여될 때, 원하는 효과를 달성하는 양을 의미한다. 예를 들어, 본 명세서에 개시된 조성물의 유효량은 닭에서의 괴사성 장염을 예방하거나 치료하는 양이다. 항균제의 정확한 전체 유효량은 동물 대상체(예를 들면, 닭 대 돼지), 투여 경로, 체중 및 질환의 중증도를 포함하는 치료 및 다른 인자에 따라 달라진다.
도 1은 식품 생성 동물로부터 인간으로의 AMR의 확산을 도시한다. 도면은 https://www.cdc.gov/foodsafety/challenges/from-farm-to-table.html로부터 취해진다.
도 2는 살모넬라 감염 및 식품 중독의 양태를 도시한다. 도면은 http://thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(11)61752-2/fulltext 및 https://www.epainassist.com/abdominal-pain/stomach/food-poisoning로부터 취해진다.
도 3은 캄필로박터 역학을 도시한다. 도면은 https://wwwnc.cdc.gov/eid/article/10/6/04-0403-f1로부터 취해진다.
도 4는 베르베린 4급 암모늄 양이온; 베르베린 클로라이드 및 베르베린 헤미설페이트의 분자 구조를 도시한다.
도 5 내지 도 12는 실시예 1에 기재된 닭에서의 괴사성 장염 파일럿 연구의 결과를 도시한다.
도 5는 각각의 그룹에 대한 부검 전의 조류 사망률의 그래프이다.
도 6은 치료/시험감염 그룹에 의한 중간치 소장 병변 점수를 도시하는 그래프이다.
도 7은 괴사성 장염 병변 점수를 도시한다.
도 8은 그룹 9로부터의 조류(NE 시험감염된, IVP/베르베린 물 1.0g/ℓ)의 십이지장의 사진을 도시한다.
도 9는 그룹 6으로부터의 조류(NE 시험감염된, 베르베린 치료 무)의 십이지장의 사진을 도시한다.
도 10은 그룹 12로부터의 조류(NE 시험감염된, IVP/베르베린 사료 2.0g/㎏)의 십이지장의 사진을 도시한다.
도 11은 그룹 4로부터의 조류(시험감염 무, IVP 베르베린/물 1.0g/ℓ)의 십이지장의 사진을 도시한다.
도 12는 그룹 6으로부터의 조류(NE 시험감염된, IVP 무/베르베린)의 십이지장의 사진을 도시한다.
도 13은 본 개시내용에 언급된 대표적인 화합물의 분자 구조 및 명칭을 도시한다.
도 14는 본 발명의 추가의 대표적인 화합물의 분자 구조 및 명칭을 도시한다.
도 15는 실시예 2에 기재된 괴사성 장염 파일럿 연구에 대한 전체 개체 물 섭취(1상)를 도시한다.
도 16은 실시예 2에 기재된 괴사성 장염 파일럿 연구에 대한 전체 개체 물 섭취(2상)를 도시한다.
도 17은 실시예 2에 기재된 괴사성 장염 파일럿 연구에 대한 사료 전환율(1상 및 2상)을 도시한다.
도 18은 실시예 3에 기재된 연구에 대한 햇병아리에 의한 펜 설정을 도시한다.
도 19는 실시예 3에 기재된 연구의 14일에 시더 펜(seeder pen)으로부터 수집된 짚(litter)을 도시한다.
도 20은 실시예 3에 기재된 연구의 14일에 펜마다 배정된 400그램의 짚을 도시한다.
도 21은 치료 그룹에 의해 실시예 3에 기재된 연구에서 조류의 평균 매일의 체중 증가의 그래프이다: x축에서의 성장 기간(일)에 대한 y축에서의 평균 매일의 증가(ADG)(g/일). 치료 그룹 1(대조군): 치료 그룹 2(IVP 0.30g/㎏); 치료 그룹 3(IVP 0.10g/㎏); 치료 그룹 4(IVP 0.03g/㎏); 치료 그룹 5(살리노마이신(Salino) 60ppm); 치료 그룹 6(살리노마이신 + Zn 바시트라신 50ppm(Salino Zn Bac)).
도 22는 실시예 3, 치료 그룹 2(IVP의 용량 0.30g/㎏)에서 사용된 컨트롤 완료기 사료(control 완료기 사료)와 IVP 사이의 비교를 도시한다.
도 23은 실시예 3, 치료 그룹 2(IVP의 용량 0.30g/㎏)으로부터의 조류로부터의 42일에서의 대변을 도시한다.
도 24는 실시예 3으로부터의 (십이지장의 외부 및 내부로부터의) 아이메리아 아세르불리나(Eimeria acervulina)-타입 병변(점수 +1)을 도시한다.
도 25는 실시예 3으로부터의 아이메리아 아세르불리나-타입 병변(점수 +2 및 +3)을 도시한다.
도 26은 실시예 3으로부터의 아이메리아 아세르불리나-타입 병변(점수 +4)을 도시한다.
도 27은 실시예 3으로부터의 장의 벌룬현상을 도시한다.
도 28은 실시예 3으로부터의 상부 장의 충혈(백색 화살표; 좌변 캡션) 및 장 반투명(검정 화살표; 우변 캡션)을 도시한다.
도 29는 실시예 3으로부터의 오렌지 색상의 점액을 포함하는 물기가 많은 내용물을 도시한다.
도 30은 42일에 수정된 사료 전환율과 21일에 전체 장 콕시디아증 병변 점수 사이의 상관관계를 도시한다. 실선은 베스트 피트의 선을 보여주고; 파선은 95% 신뢰 간격을 보여준다.
본 개시내용의 구체적인 실시형태는 하기 기재되어 있다. 이 실시형태가 예시적이고 제한적이지 않다고 이해될 것이다.
본 개시내용은 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 베르베린 알칼로이드 또는 이의 허용 가능한 염을 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법(및 동물 사료; 투약 요법 및 용도)에서: 동물은 바람직하게는 인간이다. 동물은 바람직하게는 비인간이다. 바람직하게는, 비인간 동물은 식품 생성 동물이다. 식품 생성 동물은 바람직하게는 닭 및 돼지로부터 선택된다. 바람직하게는, 동물은 수생 동물이다. 수생 동물은 바람직하게는 물고기이다. 바람직하게는, 수생 동물은 조개류이다. 조개류는 바람직하게는 갑각류 또는 연체동물로부터 선택된다. 바람직하게는, 갑각류는 게, 가재, 랍스터, 프론 및 새우를 포함하는 군으로부터 선택된다. 연체동물은 바람직하게는 조개, 홍합, 굴, 가리비 및 경단고둥을 포함하는 군으로부터 선택된다. 바람직하게는, 동물은 포유류이다. 포유류는 바람직하게는 인간, 말, 개, 고양이, 양, 소, 돼지 또는 영장류이다. 바람직하게는, 동물은 조류이다. 조류는 바람직하게는 닭, 거위, 칠면조 또는 오리이다.
스포티 간 질환
바람직하게는, 감염성 질환은 간의 질환 또는 장 질환이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 장 질환이다. 간 질환은 바람직하게는 스포티 간 질환이고, 동물은 닭이다. 바람직하게는, 닭은 산란 닭이다. 스포티 간 질환은 바람직하게는 캄필로박터 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴다. 바람직하게는, 캄필로박터는 항생제 내성이다.
살모넬라증
바람직하게는, 감염성 질환은 식품 중독과 연관된다. 식품 중독은 바람직하게는 살모넬라증이다. 바람직하게는, 살모넬라증은 살모넬라의 항생제 내성 균주에 의해 생긴다.
캄필로박터증
바람직하게는, 감염성 질환은 캄필로박터증이다. 캄필로박터증은 바람직하게는 캄필로박터의 항생제 내성 균주에 의해 생긴다.
병원체가 에스케리키아 콜라이인 감염성 질환: 돼지 설사/설사변(Scour)
바람직하게는, 감염성 질환은 에스케리키아 콜라이에 의해 생긴다.
젖먹이 새끼돼지에서의 모든 질환 중에서, 설사는 가장 흔하고, 아마 가장 중요하다. 몇몇 발병에서, 이것은 높은 이환율 및 사망률을 책임진다. 잘 운영되는 무리에서, 치료를 요하는 임의의 하나의 시간에 3% 미만의 짚이 있어야 하고, 설사로부터의 새끼돼지 사망률은 0.5% 미만이어야 한다. 그러나, 심각한 발병에서 사망률의 수준은 7% 이상까지 상승하고, 개별 비치료된 짚에서 100%까지 상승할 수 있다. 주요 박테리아 원인은 에스케리키아 콜라이이다. 새끼돼지에서의 설사변은 젖먹이 동안 임의의 연령에서 발생할 수 있지만, 5일 전에 및 7일과 14일 사이에 대개 2개의 피크 기간이 있다.
감염성 질환은 바람직하게는 설사이고, 동물은 돼지이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 설사변이고, 동물은 돼지이다. 감염성 질환은 바람직하게는 이질이고, 동물은 돼지이다.
바람직하게는, 감염성 질환은 에스케리키아 콜라이의 항생제 내성 균주에 의해 생긴다.
브라키스피라와 연관된 돼지 이질
돼지 이질(SD)은 브라키스피라 하이오디센테리아(Brachyspira hyodysenteriae), 브라키스피라 필로스콜리(Brachyspira piloscoli) 및 브라키스피라 함프소니(Brachyspira hampsonii)를 포함하는 브라키스피라라 불리는 스피로헤타 박테리아에 의해 생긴다. 이 유기체는 출혈 점막 설사를 갖는 대장의 중증 염증을 발생시킨다. 질환의 높은 비용은 이환율, 사망률, 성장 저하 및 사료 전환 효율성, 및 거듭되는 사료내 약제의 비용과 연관된다.
바람직하게는, 감염성 질환은 브라키스피라 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴다. 감염성 질환은 바람직하게는 이질이고, 동물은 돼지이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 브라키스피라의 항생제 내성 균주에 의해 생긴다.
감염성 질환은 바람직하게는 로소니아 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴다. 바람직하게는, 감염성 질환은 로소니아 속으로부터의 항생제 내성 박테리아 균주에 의해 생긴다. 감염성 질환은 바람직하게는 로소니아 인트라셀룰라리스에 의해 생긴다.
돼지 회장염 연관된 로소니아 인트라셀룰라리스
회장염은 박테리아 로소니아 인트라셀룰라리스와 연관된 소장에서의 병리학적 변화를 수반하는 병태의 군을 포함한다. 질환은 4개의 상이한 형태를 취한다. 돼지 장 선병증(porcine intestinal adenopathy: PIA)인 제1 형태는 장에 이어지는 세포의 비정상 증식이다. PIA는 3개의 다른 형태로 발생할 수 있고, 이들은 더 드물다: 괴사성 장염(necrotic enteritis: NE)(여기서, 소장의 증식된 세포는 소장의 중대한 비후화(호스파이프 장)에 의해 죽고 버려짐); 국한 회장염(regional ileitis: RI), 소장의 말단 부분의 염증 및 증식성 출혈성 장병증(proliferative haemorrhagic enteropathy: PHE) 또는 "출혈 장"(여기서, 소장에 거대한 출혈이 있음). PHE는 성장하는 돼지에서 회장염의 가장 흔한 형태이다. PHE는 60㎏의 돼지 및 어린 암퇘지에서 더 흔하다.
바람직하게는, 감염성 질환은 돼지 장 선병증, 괴사성 장염, 국한 회장염 및 증식성 출혈성 장병증으로부터 선택된 병태의 군으로 표시되고, 동물은 돼지이다.
아이메리아가 병원체인 감염성 질환
바람직하게는, 감염성 질환은 아이메리아(Eimeria) 속로부터의 기생충에 의해 생긴다. 기생충은 바람직하게는 아이메리아 맥시마(Eimeria maxima), 아이메리아 아세르불리나(Eimeria acervulina) 및 아이메리아 브루네티(Eimeria brunetti)로부터 선택된다. 바람직하게는, 감염성 질환은 속 아이메리아로부터의 항생제 내성 기생충에 의해 생긴다. 항생제 내성 기생충은 바람직하게는 아이메리아 맥시마, 아이메리아 아세르불리나 및 아이메리아 브루네티 항생제 내성 박테리아 균주로부터 선택된다. 바람직하게는, 감염성 질환은 콕시디아증이고, 동물은 닭이다.
클로스트리듐이 병원체인 감염성 질환
바람직하게는, 감염성 질환은 클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴다. 박테리아는 바람직하게는 클로스트리듐 디피실(Clostridium difficile) 및 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
바람직하게는, 박테리아는 클로스트리듐 디피실이다. 감염성 질환은 바람직하게는 설사이고, 동물은 인간이다. 바람직하게는, 감염성 질환은 결장염이고, 동물은 인간이다.
닭에서의 클로스트리듐 퍼프린젠스 및 괴사성 장염
바람직하게는, 감염성 질환은 클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생기고, 여기서 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스이다. 감염성 질환은 클로스트리듐 속으로부터의 항생제 내성 박테리아에 의해 생기고, 여기서 항생제 내성 박테리아는 항생제 내성 클로스트리듐 퍼프린젠스이다.
감염성 질환은 바람직하게는 괴사성 장염이고, 동물은 닭이다. 바람직하게는, 괴사성 장염은 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주에 의해 생긴다. 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주는 바람직하게는 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주 EHE-NE36이다. 바람직하게는, 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주는 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주 EHE-NE18이다. 괴사성 장염은 바람직하게는 클로스트리듐 퍼프린젠스 C형 균주에 의해 생긴다.
바람직하게는, 투여는 닭의 사료 또는 물을 통해 발생한다. 사료는 바람직하게는 크럼블 또는 펠릿의 형태이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 0.001g/㎏ 내지 2.0g/㎏의 사료의 용량으로 닭의 사료에 투여된다. 베르베린 알칼로이드는 바람직하게는 0.003g/㎏ 내지 0.3g/㎏의 사료의 용량으로 사료에 투여된다. 베르베린 알칼로이드는 바람직하게는 0.001g/ℓ 내지 1g/ℓ의 물의 용량으로 닭의 물에서 투여된다.
바람직하게는, 병변 점수는 감소하고/하거나, 대변 접합자 수는 감소한다. 바람직하게는, 병변 점수는 감소한다. 바람직하게는, 대변 접합자 수는 감소한다. 바람직하게는 이환율의 감소가 있다. 바람직하게는, 사망률의 감소가 있다. 바람직하게는 FCR의 감소가 있다. 바람직하게는, 평균 매일의 체중 증가의 증가가 있다.
사료 안전성 및 잔류물 수준
인간 및 동물 약물 및 동물 사료 첨가제는 안전성 이유로 고도로 조절된다. 호주에서, 식품의약청(Therapeutic Goods Administration: TGA)은 인간 사용에 대한 치료학적 제품을 조절하는 것을 담당하는 한편, 호주 살충제 수의학 약품 당국(Australian Pesticides and Veterinary Medicines Authority: APVMA)은 살충제 및 수의학 약품의 평가 및 등록을 담당한다. 미국에서, 식품의약청(Food and Drug Administration: FDA)은 연방 식품, 약품 및 화장품 조항(Federal Food, Drug, and Cosmetic Act: FD&C Act)에 의해 관리되는 인간 및 동물 약물 및 사료 첨가제의 허가를 담당한다.
FD&C 조항은 식품 생성 동물에서 사용하기에 의도되는 화합물이 안전하도록 보이고, 이들 화합물에 노출된 동물로부터 생성된 식품이 사람에 의한 소비에 안전하도록 보일 것을 요한다. 특히, 사람 또는 동물에 의해 섭취될 때 암을 유도하는 것으로 발견된 임의의 화합물의 식품 생성 동물에서의 사용은, 소정의 조건이 충족되지 않는 한(소위 "다이에틸스틸베스트롤(DES) 단서"), 법규(21 CFR Part 500, Subpart E - Regulation of carcinogenic compounds used in food-producing animals(식품 생성 동물에서 사용되는 발암성 화합물의 규제))에 의해 금지된다. DES 단서하에 의심되는 발암성 화합물의 사용은 그 화합물의 "무 잔류물"이 실행에서 이행되기에 합당하게 확실한 사용의 조건하에 식품 생성 동물로부터 생성된 식품에서 발견된다는 검사의 규정된 방법에 의해 결정될 수 있는 경우 금지되지 않는다.
예를 들어, 인간에 대한 식이 보충제로서의 이의 넓은 사용에 의해 입증된 바대로 베르베린 알칼로이드의 안전성에도 불구하고, 베르베린이 자체가 항암 활성을 갖더라고, 베르베린은 이것이 발암성 물질이라는 의심 하에 이른다(Ma, W.; Zhu, M.; Zhang, D.; Yang, L.; Yang, T.; Li, X.; and Zhang, Y. "Berberine inhibits the proliferation and migration of breast cancer ZR-75-30 cells by targeting Ephrin-B2" Phytomedicine 2017, 25: 45-51). 따라서, FDA가 베르베린이 발암성 화합물로서 조절되지 않아야 한다고 결정하는 경우, 미국 정부는, "무 잔류물" DES가 적용하지 않는 한, 식품 생성 동물에서 베르베린의 사용을 금지한다.
용어 "무 잔류물"은 소비자에게 암의 사소한 위험을 제시하기에 너무 낮은 식용 조직에 남은 임의의 잔류물을 의미한다. 더 구체적으로, 암의 사소한 위험은 위험의 100백만 개 중 1개의 증가로 정의된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 베르베린의 "안전한" 잔류물 수준은 질환, 특히 암의 사소한 위험을 부여하는 것이다.
바람직하게는, 치료 기간 후 동물에서의 낮은 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준이 있다. 치료 기간 후 바람직하게는 동물에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 치료 기간 후 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다. 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 적어도 약 13ng 미만의 베르베린 알칼로이드이다.
바람직하게는, 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 약 10ng의 베르베린 알칼로이드이다. 잔류물 수준은 바람직하게는 약 5ng/g이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 속도로 닭의 사료에 투여된다. 바람직하게는 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
닭의 가슴에서의 근육 조직에서의 약 6.1ng/g;
닭의 아랫다리에서의 근육 조직에서의 약 5.5ng/g; 및
닭의 윗다리에서의 근육 조직에서의 약 11.6ng/g이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.1g/㎏ 미만의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다. 바람직하게는 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
닭의 가슴에서의 근육 조직에서의 2ng/g 미만;
닭의 아랫다리에서의 근육 조직에서의 2ng/g 미만; 및
닭의 윗다리에서의 근육 조직에서의 2ng/g 미만이다.
바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간(washout period) 후 동물의 근육 조직에서 낮은 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준이 있다. 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 바람직하게는 동물의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 워시아웃 기간은 1주 내지 2주의 기간이다. 워시아웃 기간은 바람직하게는 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일의 기간으로부터 선택된다. 바람직하게는, 워시아웃 기간은 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간이다.
바람직하게는, 1일의 워시아웃 기간 후 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
닭의 가슴에서의 근육 조직에서의 약 5.7ng/g;
닭의 아랫다리에서의 근육 조직에서의 약 3.2ng/g; 및
닭의 윗다리에서의 근육 조직에서의 약 6.0ng/g이다.
바람직하게는, 2일의 워시아웃 기간 후 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
닭의 가슴에서의 근육 조직에서의 약 3.6ng/g;
닭의 아랫다리에서의 근육 조직에서의 약 3.1ng/g; 및
닭의 윗다리에서의 근육 조직에서의 약 4.5ng/g이다.
바람직하게는, 4일, 7일 및 14일의 워시아웃 기간 후, 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
잔류물의 수준은 바람직하게는 근육 조직의 1g당 적어도 13ng 미만의 베르베린 알칼로이드이다. 잔류물의 수준은 바람직하게는 근육 조직의 1g당 약 10ng의 베르베린 알칼로이드이다. 바람직하게는, 잔류물의 수준은 약 5ng/g이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.1g/㎏ 초과의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 치료 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 낮은 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준이 있다. 바람직하게는, 치료 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 치료 기간 후 닭의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다. 닭의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 바람직하게는 2ng/g 미만이다. 바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 낮은 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준이 있다. 바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 닭의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다. 워시아웃 기간은 바람직하게는 1주 내지 2주의 기간이다. 바람직하게는, 워시아웃 기간은 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일로부터 선택된 기간이다. 워시아웃 기간은 바람직하게는 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간이다.
바람직하게는, 1일의 워시아웃 기간 후 닭의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
닭의 가슴에서의 근육 조직에서의 약 5.7ng/g;
닭의 아랫다리에서의 근육 조직에서의 약 3.2ng/g; 및
닭의 윗다리에서의 근육 조직에서의 약 6.0ng/g이고,
닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 8.0ng/g이다.
바람직하게는, 7일의 워시아웃 기간 후 닭의 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만이고, 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 6.5ng/g이다.
바람직하게는, 14일의 워시아웃 기간 후 닭의 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만이고, 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 3.0ng/g이다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 치료 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 낮은 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준이 있다. 바람직하게는, 치료 기간 후 동물의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다.
바람직하게는, 치료 기간 후 닭의 간 및 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다. 닭의 간 조직 및 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 바람직하게는 2ng/g 미만이다. 바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있다. 워시아웃 기간은 바람직하게는 1주 내지 2주로부터 선택된 기간이다. 바람직하게는, 워시아웃 기간은 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일로부터 선택된 기간이다. 워시아웃 기간은 바람직하게는 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간이다.
바람직하게는, 1일의 워시아웃 기간 후 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 8.0ng/g이다. 7일의 워시아웃 기간 후 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 바람직하게는 약 6.5ng/g이다. 바람직하게는, 14일의 워시아웃 기간 후 닭의 간 조직에서의 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 3.0ng/g이다. 베르베린 알칼로이드는 바람직하게는 약 0.3g/㎏의 용량으로 닭의 사료에 투여된다.
바람직하게는, 치료 기간은 35일이다.
"잔류물 연구"는 그 외 기재되어 있다. 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 실험에 의해 결정될 수 있다. LC-MS/MS를 사용하여 동물 조직에서 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준을 결정하기 위한 예시적인 프로토콜은 하기와 같다:
가슴, 다리 및 넓적다리로부터의 근육, 및 간 및 신장의 샘플을 안락사 후 각각의 조류로부터 절제한다. 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시킨다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의해 베르베린의 분석을 위해 제거하여서 근육 조직에서의 베르베린의 잔류물 수준(근육 조직 1g당 베르베린의 ng)을 제공한다.
베르베린 제제의 투여
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 베르베린 헤미설페이트이다. 베르베린 알칼로이드는 바람직하게는 베르베린 클로라이드이다.
바람직하게는, 상기 방법은 베르베린 알칼로이드의 쓴맛을 차폐하는 첨가제 또는 허용 가능한 염을 추가로 포함한다.
베르베린
베르베린은 리조마 콥티디스(Rhizoma coptidis), 펠로덴드리 차이넨시스(Phellodendri chinensis) 피질 및 다른 약초로부터 추출된 아이소퀴놀린 알칼로이드이다. 중국 약전에 따르면, 리조마 콥티디스, 펠로덴드리 차이넨시스 및 펠로덴드론 아뮤렌스 및 베르베리디스 라딕스의 베르베린 함량은 각각 5.5%, 3.0%, 0.6% 및 0.6%이다. 리조마 콥티디스(중국에서의 황련)는 라눈쿨라세아에 과에 속하고, 콥티스 차이넨시스(중국에서 웨리안(Weilian)), 콥티스 델토이데아(중국에서 아리안(Yalian)) 및 콥티스 테타(중국에서 유리안(Yunlian))의 3개의 주요 콥티스 종을 함유한다. 리조마 콥티디스는 가을에 수확되고, 수염 뿌리를 제거한 후 썰린다. 밝은 황색 구획 및 매우 쓴맛을 갖는 것은 양호한 품질로 생각된다. 베르베린(및 본 명세서에 개시된 바와 같은 다른 베르베린 알칼로이드)의 쓴맛은 동물 대상체에 대한 투여에 대해 베르베린 알칼로이드를 제제화할 때 맛 차폐/식미가 고려한 중요한 안건이 되게 한다.
베르베린은 황색의 분말이다. 클로라이드 염은 차가운 물에서 약간 가용성이지만, 끓는 물에서 자유로이 가용성이다. 이것은 차가운 에탄올 중에 실제로 불용성이다. 헤미설페이트 염은 약 30부 물 중에 가용성이고, 에탄올 중에 약간 가용성이다. 베르베린은 C20H18NO4 +의 분자식 및 336.36의 분자량을 갖는 4차 암모늄 양이온이다. 도 4는 베르베린 암모늄 양이온, 베르베린 클로라이드 염 및 베르베린 헤미설페이트 염의 분자 구조를 도시한다.
베르베린은 경장 투여에 허용 가능한 임의의 형태로 투여될 수 있다. 경장 투여를 위한 적합한 비제한적인 형태는 정제, 캡슐, 페이스트, 과립, 츄잉 웨이퍼, 겔, 경구 액체, 주사용 액체, 약제가 있는 물 및 약제가 있는 사료 및 좌제를 포함한다. 그러나 경제적 관심이 중요한 식품 생성 동물에 의해, 베르베린을 투여하는 바람직한 방법은 과립의 형태의 사료 첨가제 또는 약제가 있는 사료를 통해서이다. 이것은 물을 베르베린의 적합한 용액 또는 현탁액과 혼합함으로써 동물 대상체의 음용수를 통해 또한 투여될 수 있다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 제제를, 예를 들어, 식품 생성 동물 대상체에게 더 식미가 있게 만드는 식품 및 물에 첨가될 수 있는 과립 및 액체 제제의 제공을 고려한다. 예를 들어, 식미가 있는 베르베린 알칼로이드 제제는 베르베린 및 과립 생성물을 형성하는 데 적합한 허용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 과립 생성물을 형성하는 데 적합한 허용 가능한 부형제는, 예를 들어, 옥수수 전분 또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)이다. 일 예에서, 액체 제제는 액체 농축물이다.
프로토베르베린: 베르베루빈, 코렉시민, 테트라하이드로팔마틴, 자토르히진, 13-하이드록시베르베린 클로라이드, 코랄린 클로라이드, 7,8-다이하이드로-13-메틸베르베린, 피브라우레틴(팔마틴) 및 13-벤질베르베린을 포함하는 베르베린과 유사한 구조 및 특징을 공유하는 많은 화합물이 또한 있다. 프로토베르베린은, 베르베린과 함께, 본 발명의 조성물/방법/용도에 적합하고, 본 명세서에서 "베르베린 알칼로이드"라 불린다.
피브라우레틴(팔마틴)
피브라우레틴 또는 팔마틴은 피바우에라 레시사 피에르(Fibauera recisa Pierre)로부터 추출된 쓴맛의 알칼로이드이다. 중국 약전에 따르면, 피브라우에라 레시사 피에르는 2.0% 이상의 피브라우레틴으로 이루어진다. 또 다른 소스는 콥티스 차이넨시스 프랜치(Coptis chinensis Franch), 콥티스 델토이데아(Coptis deltoidea) 및 콥티스 테타 웰(Coptis teeta Wall)의 근경인 콥티디스 리조마이다. 콥티디즈 리조마는 1.5% 이상의 피브라우레틴으로 이루어진다.
팔마틴 클로라이드는 온수 중에 가용성이고, 수중에 난용성이고, 에탄올 중에 약간 가용성인 황색의 고체이다. 이의 융점은 196 내지 198℃이다. 이의 분자식은 387.86의 분자량으로 C21H22NO4Cl이다. 팔마틴 4차 암모늄 양이온의 분자 구조 및 클로라이드 염의 구조는 도 13에 도시되어 있다.
제조된 사료에서의 항균 화합물의 전체 유효량 또는 용량은 0.001g/㎏ 내지 2g/㎏의 범위일 수 있다. 제조된 사료에서의 항균 화합물의 전체 양의 예시적인 양은 0.001g/㎏(0.0001%), 0.003g/㎏(0.0003%), 0.01g/㎏(0.001%), 0.03g/㎏(0.003%), 0.1g/㎏(0.01%), 0.3g/㎏(0.03%), 1.0g/㎏(0.1%) 및 2g/㎏(0.2%)이다.
본 개시내용은 또한 베르베린 알칼로이드를 포함하는 동물 사료 및 동물 식량에 관한 것이고, 여기서 베르베린 알칼로이드는 약 0.001% 내지 1% w/w의 동물 식량의 양이다.
식량에서의 베르베린 알칼로이드의 양은 0.001g/㎏ 내지 2g/㎏, 즉 0.001% 내지 0.2% w/w의 범위일 수 있다. 식량에서의 베르베린 알칼로이드의 예시적인 양은 0.001g/㎏(0.0001%), 0.003g/㎏(0.0003%), 0.01g/㎏(0.001%), 0.03g/㎏(0.003%), 0.1g/㎏(0.01%), 0.3g/㎏(0.03%), 1.0g/㎏(0.1%) 및 2.0g/㎏(0.2%)이다.
사료는 바람직하게는 크럼블의 형태; 펠릿의 형태; 또는 수성 형태이다.
본 개시내용은 또한 베르베린 알칼로이드 또는 본 명세서에 개시된 바와 같은 동물 사료를 동물에게 투여하는 단계를 포함하는 투약 요법에 관한 것이고, 여기서 베르베린 알칼로이드, 또는 조성물 또는 동물 사료는 1주 내지 6주 동안 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료에 효과적인 양으로 투여된다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료는 1주, 2주, 3주, 4주, 5주 또는 6주 동안 투여된다. 바람직하게는, 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료는 1주 내지 6주; 2주 내지 5주; 또는 3주 내지 4주 동안 투여된다.
바람직하게는, 베르베린 알칼로이드는 물 중의 약 0.6g/ℓ 또는 사료 중의 약 1.2g/㎏의 농도로 투여된다. 사료에서의 베르베린 알칼로이드의 양은 0.001g/㎏ 내지 2g/㎏, 즉 0.0001% 내지 0.2% w/w의 범위일 수 있다. 식량에서의 베르베린 알칼로이드 또는 허용 가능한 염의 예시적인 양은 0.001g/㎏(0.0001%), 0.003g/㎏(0.0003%), 0.01g/㎏(0.0001%), 0.03g/㎏(0.0003%), 0.1g/㎏(0.01%), 0.3g/㎏(0.03%), 1.0g/㎏(0.1%) 및 2g/㎏(0.2%)이다.
본 개시내용은 또한 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법에 관한 것이고, 여기서 상기 방법은 베르베린 알칼로이드를 식품 생성 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
바람직하게는, 식품 생성 동물은 질환이 없다. 식품 생성 동물은 바람직하게는 이환된다. 바람직하게는, 식품 생성 동물은 닭 및 돼지로부터 선택된다. 식품 생성 동물은 바람직하게는 닭이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 장 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 방법에 관한 것이다.
바람직하게는, 감염성 질환은 아이메리아 속으로부터의 항생제 내성 기생충에 의해 생긴다. 감염성 질환은 바람직하게는 콕시디아증이고, 동물은 닭이다.
바람직하게는, 감염성 질환은 괴사성 장염이고, 동물은 닭이다.
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조에서의 베르베린 알칼로이드의 용도에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료에서의 베르베린 알칼로이드의 용도에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
본 개시내용은 또한 하기의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 베르베린 알칼로이드에 관한 것이다:
동물에서의 감염성 질환;
동물에서의 감염성 장 질환;
동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환(여기서, 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스임).
동물에서의 감염성 질환의 예방 또는 치료를 위한 제제, 투약량 및 섭생의 개발은 하기 연구에 기재되어 있다.
제제 및 식미 연구
브로일러 닭에 대한 4개의 IRP001 제제의 투여 이후에 사료 식미 및 조류 생산성을 결정하기 위한 연구.
연구 설계 - 수취 시, 240개의 하루 지난 상업용 브로일러 닭은 개별 바닥 펜에서 균등하게 분할되고, 7일 동안 익숙해지게 한다. 7일에, 조류를 칭량하고, 16개의 그룹(각각 15개의 조류)에 제시되면서 순차적으로 할당된다. 사료 섭취, 물 섭취, 체중 증가 및 사망률은 결과 매개변수로서 사용된다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP)
Figure pct00001
연구 동물에 하기 표 2에 기재된 치료 섭생에 따라 투약한다. 약제가 있는 사료는 또한 자유식으로 제공된 음용수와 함께 자유식으로 사료의 이들의 유일한 공급원으로서 관련 치료에서 닭에 제공된다.
Figure pct00002
Figure pct00003
상기로부터, 동물의 식품 및 물 섭취 및 체중(및 안락사 후 장기)을 기록할 수 있다. 치료 기간에 걸친 평균 체중 증가, 평균 매일의 체중 증가 및 사료 전환율(FCR)을 계산될 수 있다. 동물의 성능은 이들 매개변수에 의해 평가될 수 있다. 또한, 식품 및 물 섭취 매개변수는 약제 식미의 표시를 제공할 수 있는 한편, 체중 증가 및 사료 전환율(FCR) 매개변수는 IVP의 항생제 효과, 즉 IVP가 성장을 촉진하는 정도를 제공할 수 있다.
사료 전환 효율성 연구
상업용 브로일러 닭에 사료를 통해 투여될 때 사료 전환 효율성 및 IRP001의 조직 잔류물을 결정하기 위한 연구. 1주의 워시아웃 기간에 의한 잔류물을 또한 이용한다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP)
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
1주의 워시아웃 기간을 관찰한 후 IRP0001의 잔류물 수준은 하기와 같이 실험에 의해 결정된다:
가슴, 다리 및 넓적다리로부터의 근육, 및 간 및 신장의 샘플을 안락사 후 각각의 조류로부터 절제한다. 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시킨다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의해 IRP001의 분석을 위해 제거하여서 근육 조직에서의 베르베린의 잔류물 수준(근육 조직 1g당 베르베린의 ng)을 제공한다.
산업 표준 바시트라신아연에 대한 IRP001의 효율 연구
용량 반응, 사료 전환율, 조직 잔류물 및 안전성의 조사를 포함하는 IRP001의 투여에 의한 괴사성 장염의 예방 또는 치료에서의 효율의 결정. IRP001은 입증된 실험 모델을 이용하는 아이메리아 종 및 클로스트리듐 퍼프린젠스의 병원성 균주에 의해 인공적으로 시험감염된 브로일러 닭에 사료를 통해 투여된다. 현재의 산업 표준 치료, 바시트라신아연은 효율 및 FCR 비교에 사용된다.
연구 설계(괴사성 장염 시험감염) - 격리장치에 감금된 상업용 브로일러 닭을 1㎖의 1%(w/v) 무균 식염수 중에 아이메리아 맥시마 및 아이메리아 아세르불리나의 각각의 5,000개의 약독화된 백신 균주 포자형성된 접합자 및 아이메리아 브루네티의 2,500개의 포자형성된 접합자에 의해 9일령에 경구로 감염시킨다.
접합자 시험감염(15일) 이후의 6일에, 클로스트리듐 퍼프린젠스의 공지된 병원성 균주(A형 균주 NE18)를 i.t.(약 8.0 log10cfu/닭) 투여한다. 모든 42개의 그룹으로부터의 그룹마다 2마리의 조류를 17일에 희생시켜 병변 점수를 정의한다.
부검 시 사료 섭취, 체중 증가, 사망률 및 NE 병변 점수는 결과 매개변수로서 사용된다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP) - IRP001
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
IRP0001의 잔류물 수준은 하기와 같이 실험에 의해 결정될 수 있다:
가슴, 다리 및 넓적다리로부터의 근육, 및 간 및 신장의 샘플을 안락사 후 각각의 조류로부터 절제한다. 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시킨다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의해 IRP001의 분석을 위해 제거하여서 근육 조직에서의 베르베린의 잔류물 수준(근육 조직 1g당 베르베린의 ng)을 제공한다.
용량 속도 연구
연구 목적은 상업용 닭고기에서 혼합된 중등도 콕시디아증 시험감염(아이메리아 종)에 대해 사료내 IRP001의 3개의 용량 비율의 효율을 평가하고, 괴사성 장염 또는 비특이적 장염의 임의의 발생을 평가하는 것이다. 조직 잔류물 데이터와 함께 안전성 데이터가 얻어져야 한다.
연구 설계(아이메리아 시험감염) - 펜에서 감금된 상업용 브로일러 닭을 14일령(14일)에 야생형 아이메리아 접합자; 대략 12,000개의 아이메리아 테넬라, 40,000개의 아이메리아 아세르불리나 및 조류마다 가능한 한 많은 아이메리아 맥시마 접합자에 의해 감염시킨다.
접합자 시험감염 후 7일(21일)에, 그룹마다 4마리의 조류를 각각의 실험 펜으로부터 무작위로 선택하고, 인간적으로 안락사시킨다.
21일에 및 부검 시 일반적인 장 건강(장염) 및 병변 점수는 평가되어야 한다. 사료 섭취, 체중 증가 및 사망률은 결과 매개변수로서 사용되어야 한다. 사료 전환율은 각각의 시간 기간에 걸쳐 계산된다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP) - IRP001
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
IRP0001의 잔류물 수준은 하기한 바대로 실험에 의해 결정될 수 있다:
가슴, 다리 및 넓적다리로부터의 근육, 및 간 및 신장의 샘플을 안락사 후 각각의 조류로부터 절제한다. 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시킨다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의해 IRP001의 분석을 위해 제거하여서 근육 조직에서의 베르베린의 잔류물 수준(근육 조직 1g당 베르베린의 ng)을 제공한다.
잔류물 연구
이 연구 및 프로토콜은 전체 생성 사이클에 걸쳐 사료 투여를 통해 치료된 브로일러 닭에서 마커 조직 잔류물의 정량화를 통해 최대 라벨 용량 속도에서 투여되는 천연 발생 IVP에 대한 잔류물 고갈 프로필을 결정하는 것이 목표이다.
배경
항균제는 집약 가축 산업에서 질환의 잠재적으로 치사인 발생의 제어 및 예방을 위해 동물 농사 목적을 위해 광범위하게 사용된다. 몇몇은 이것을 내성 미생물의 발생에 대한 원인으로 보고, 정부 관리자는 이들 항균제의 사용을 제어하는 데 명령을 이제 실행한다.
본 발명자들은 식품 생성 동물, 예컨대 가금류 및 돼지에서 사용되는 현재의 항생제를 대체하기 위해 천연 항생제로서 사용될 수 있는 몇몇 천연 발생 화합물을 확인하였다.
후보 제제는, 예를 들어, 호주 살충제 수의학 약품 당국(APVMA) 및 미국 식품의약청(FDA)에 의해 필요한 바대로 규제 표준을 만족시키는 시험을 겪는다. 이와 관련하여, 동물 건강 치료의 잔류물 고갈 프로필의 결정은 생성물 개발 과정의 필수 부분이다. 이는 인간 건강 및 농업 무역 둘 다를 보호하도록 정부 관리자 당국이 적절한 절식 기간(with-holding period: WHP)을 설정하게 한다.
IRP001은 안전하고 비독성인 것으로 잘 확립되면서 후보 IVP로서 선택되었다. 가금류는 장용 병원균에 의해 생긴 다수의 질환을 예방하거나 치료하기 위해 닭 산업에서 항균제에 대한 널리 퍼진 의존도로 인해 표적 동물 종으로서 선택되었다. 이 임상적으로 중요한 장용 병원균은 IRP001에 잠재적으로 반응할 수 있다.
순응도
이 조직 잔류물 고갈 연구는 SOP를 이용하는 동의된 프로토콜 및 우수한 과학 실행에 따라 수행되어야 한다.
연구 설계
a. 실험 유닛: 실험 및 관찰 유닛 둘 다는 개별 동물일 것이다. 통계 유닛은 치료 그룹일 것이다.
b. 동물 모델: 사료 섭취, 매일의 물 소비, 중량 변화, 사망률 및 조직에서의 마커 잔류물은 결과 매개변수로서 사용될 것이다.
c. 포함 기준: 동물은 하기 섹션 10에 기재된 기준을 만족시키는 경우 연구에 선택될 것이다.
d. 배제 및 제거 기준: 조사자의 견해에서 수취 시 약화되거나, 질환, 손상을 겪거나, 달리 연구에서의 포함에 부적합한 동물을 배제될 것이다.
선택에 후속하여, 연구에서의 계속에 적합하지 않다고 생각될 수 있는 동물은 스폰서 또는 조사자의 기록된 동의에 의해 오직 제거될 것이다. 어떠한 제거에 대한 이유는 원시 데이터(raw data) 및 연구 보고서에서 완전히 기록되고 정당화될 것이다. 연구로부터 제거된 어떠한 동물은 적절한 수의학적 관리를 받을 것이다.
e. 할당: 브로일러 병아리: 수취 시 포함 기준을 만족시키는 180마리의 브로일러 병아리는 18개의 개별 치료 그룹(각각 10마리의 조류)에 수송 컨테이너로부터 제거되면서 순차적으로 할당되어야 한다. 할당 및 무작위화의 방법은 원시 데이터 및 연구 보고서에 기재될 것이다.
f. 맹검: 이용 불가.
조사 중인 수의학적 제품(IVP)
배치 번호, 유효 기일, 수취 및 용법을 포함하는 모든 제제 상세내용을 기록한다.
a. 조사 중인 수의학적 제품: 100% IRP001 Cl로서의 IRP001 Cl.
b. 공급원: IVP는 스폰서에 의해 공급될 것이다.
c. 저장: IVP는 온도 지정된 구역에서 주변 온도에서 저장되어야 한다. IVP의 저장 위치 및 조건을 기록한다.
d. 안전성: SDS 또는 이의 균등물(이용 가능한 경우)은 스폰서에 의해 제공된다.
e. 검정: 분석 증명서(Certificate of Analysis)(이용 가능한 경우)는 IVP에 대해 제공된다.
f. 약물 폐기: 모든 남은 IVP의 폐기를 기록한다.
치료
a. 용량 계산: 용량은 사료에서 IRP001 Cl의 고정된 농도(0.03 또는 0.1g/㎏ IRP001 Cl)에 기초한다.
b. 용량 준비: 분말화된 IRP001 Cl은 로우 상업용 사료 성분에 의해 도입되고, 이후 기재된 바대로 사료에서 최종 농도를 제공하도록, 예를 들어, "콘트리트 혼합장치" 타입 장치에서 완전히 혼합된다.
c. 용량 투여의 방법: 연구 동물에 하기 표 1에 기재된 치료 섭생에 따라 투약한다. 약제가 있는 사료는 이의 유일한 사료 공급원으로서 자유식으로 관련 치료에서 닭에게 제공될 것이다.
Figure pct00015
사건 스케줄
Figure pct00016
시험 시스템
동물 상세내용을 원 데이터에 기록한다. 즉, 종, 브로일러 닭; 수, 180; 공급원, 상업용(90의 하나의 배치); 연령, 1일령.
동물 관리
a. 동물 복지: 연구 동물은 유사하게 이들의 복지에 대해 듀 관련하여 관리된다. 연구 동물은 동물 윤리 위원회(Animal Ethics Committee: AEC) 요건에 따라 관찰되고, "동물 관리의 기록(Record of Animal Care)"은 완료된다.
b. 건강 관리: 임의의 일상적인 예방학적 치료는, 필요한 경우, 가능한 한 빨리 주어지고, 기록된다(생성물 명칭, 배치 번호, 유효 기일, 용량, 투여의 경로 및 일자(들)).
연구 동물은 0일에 시작하여 제자리에서 표준 조작 프로토콜(SOP)에 따라 매일 2회 관찰된다. 추가의 검사를 요하는 임의의 건강 문제는 기록된다.
모든 건강 문제 및 부작용은 하루의 작업 일자 내에 조사자에게 보고되어야 한다. 조사자에 의해 관련된 생성물로서 특징지어진, 임의의 부작용은 사망을 발생시키고, 삶을 위협하고, 다수의 동물을 포함하거나, 인간 부작용은 하루의 작업 일자 내에 기록되고 스폰서 및 AEC에 보고되어야 한다.
일반 수의학적 관리 및 절차는 수행될 수 있고, 원시 데이터에 기재된다. 동반 약제는, 조사자, 및 스폰서(관련된 경우)로부터의 이전의 허가에 의해, 표준 관리 실행 및 인간 이유에 대해 투여될 수 있다. IVP와 유사한 치료는 투여되지 않는다. 모든 동반 약제는 기록되어서, 사용된 재료의 식별(생성물 명칭, 배치 번호 및 유효 기일), 동물 번호(들), 사용 이유, 투여 경로, 투여되는 용량 및 날짜(들)를 제공하고, 원시 데이터(실험 로그) 및 연구 보고서에 포함된다.
손상 또는 질병이 연구 동물의 안락사 또는 사망을 발생시키는 경우, 이는 기록되고 가능한 경우 수의사에 의해 사후분석 수행되어야 한다. 사망의 개연성이 있는 원인을 포함하는 "사후 보고서(Post Mortem Report)"는 원시 데이터에 포함된다.
치료와의 이들의 관계를 포함하는, 모든 건강 문제, 부작용 및 동물 사망률은 연구 보고서에 포함된다.
c. 감금: 닭을 허가된 동물 설비에서 2개의 별개의 분리된 제어된 환경 룸에서 치료 그룹에 의해 목적 건축된 닭 바닥 펜에서 유지시킨다. 하나의 룸은 모든 약제가 없는 13 내지 18 그룹(포함) 조류를 감금하고, 제2 룸은 모든 약제가 있는 조류 - 1 내지 12 그룹(포함)을 감금한다. 각각의 펜은 대략 1.5㎡의 바닥 공간을 갖는다. 닭을 일반 상업용 실행에 따라 짚에서 키워진다.
49일까지 18개의 바닥 펜, 펜마다 10마리의 닭이 있다. 연구 결론에서의 각각의 펜의 최대 닭 중량은 호주 직업 규약(Australian Code of Practice)에서 닭고기에 대해 40㎏/㎡의 추천된 최대의 바로 아래에 있다.
주의 - 13 내지 18 그룹(포함)에서의 조류(비치료된 대조군 동물)는 약제가 있는 1 내지 12 그룹 조류에 유사하게, 그러나 물리적으로 별개의 격리 룸에서 유지되어서, 연구 동안 교차 오염을 보장한다.
d. 실험 식이: 제제화된 상업용 초기 사료, 이어서 성장기 사료 배급량은 연구에 걸쳐 공급된다. 사료 조성을 보여주는, 사료 백 라벨의 카피, 또는 균등물은 원시 데이터에 포함된다.
e. 사료 및 물 섭취: 첨가된 사료를 매일 칭량하고 기록하고, 치료 그룹에 의해 사료 섭취를 매일 계산한다. 물 용적을 매일 측정하고 기록하고, 치료 그룹에 의해 물 섭취를 매일 계산한다.
f. 동물 폐기: 연구 동물을 AEC 허가에 따라 인간적으로 안락사시키고, 사건의 스케줄에 기재된 바대로 간격으로 기록한다(표 14).
연구 절차
a. 실험 로그: 연구 동안 모든 예정된 및 예정되지 않은 사건을 기록한다.
효과의 평가
a. 체중: 닭을 0일(그룹 중량) 및 7일, 14일, 21일, 28일 및 35일에 칭량한다 - 개별 동물 중량을 기록한다. 저울을 보정된 시험 중량에 의해 칭량 전 및 후 확인하고 기록한다. 연구 종료 시의 체중을 그룹 사이에 비교하여, (있다면) 치료 효과를 결정한다.
b. 검사: 개별 임상 검사는 총체적 병리학 및 조직 수집의 시간에 안락사에서 수행된다. 임상 검사를 기록한다. 디지털 스틸 영상을 적절한 바대로 기록할 수 있다.
c. 관찰: 조류를 일반적인 웰빙, 통상적으로 오전의 8am 전 및 오후의 4pm 후 일반적인 웰빙에 대해 1일 2회 조사한다. 따라서, 관찰 사이의 통상적인 간격은은 낮 동안 9시간, 및 밤에 15시간일 것이다. 비정상 임상 징후를 보여주는 조류를 기록하고, 면밀히 관찰하고, 조사자에 의해 상당히(예를 들어, 낮은 회복 가능성으로 현저한 저하) 겪는다고 생각되는 경우 안락사시킨다.
d. 부검 검사: 모든 조류를 안락사시키고, 스케줄에 따라 35일 내지 49일에 부검한다 - 표 14.
e. 총체적 병리학: 모든 1 내지 18 그룹의 모든 닭을 부검하고, 기재된 총체적 시각 병리학적 변화에 대해 조사하고, 개별 조류에 의해 적절한 바대로 점수화한다.
f. 조직 잔류물 분석: 간, 신장, 가슴 근육(1), 다리 근육(2)[상퇴 및 하퇴] 및 지방 온전한 전체 피부의 2회 반복 대표 샘플을 수집하고, 후속하는 마커 잔류물 분석에 대해 스케줄, 표 1에 따라 각각의 그룹(1 내지 18 그룹(포함))에서 6개의 가장 무거운 조류로부터 수집되고 동결하여(<10℃) 저장될 것이다. 13 내지 18 그룹 조류는 조직 검정 요건을 위해 수집된 조직에 의해 비치료된 대조군 조류로서 35일에 희생되어야 한다.
샘플은 연구 번호, 동물 번호, 시점, 날짜, 샘플 유형 및 반복 실험을 기재한 접착 라벨에 의해 표지될 것이다.
잔류물 분석을 위해, 샘플을 해동하고, 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시킨다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의한 분석에 의해 제거한다.
Figure pct00017
g. 샘플 저장, 이동 및 폐기: 샘플 저장, 이동 및 폐기를 기록한다. 반복 실험 1 조직 샘플을 10 부문에 기재된 바와 같은 시간에 분석 실험실(Analytical Laboratory)로 웨트 아이스에서 동결하여 선적한다. 샘플을 동반된 온도 데이터 로거 및 동결된 물 바이알에 의해 표준 조적 프로토콜(SOP)에 따라 이동시킨다. 반복 실험 2 조직 샘플은 마지막 샘플 수집 시점 후 6개월의 기간 동안 동결하여 보유된다. 그 지점을 넘어서, 스폰서의 대표에 의해 구체적으로 요청되지 않는 한, 이들은 연구 사이트의 결정에 따라 폐기될 수 있다.
통계 분석
방법은 연구 보고서(Study Report)에 기록된다.
데이터 기록
프로토콜 사양은 설비 SOP를 대체해야 한다. 연구 형태는 프로토콜 수정 또는 편차(Protocol Amendment or Deviation)에 대한 필요 없이 연구 동안 필요한 바대로 추가되거나 수정될 수 있다.
a. 프로토콜 허가: 프로토콜은 연구 시작 전에 모든 관련 직원(1페이지 참조)에 의해 허가되고 서명된다.
b. 수정/편차: 수정은 변경된 또는 변형된 업무의 집행 전에 이루어진 프로토콜의 변화 또는 변형이다. 수정은 변화의 이유를 기술하고 스폰서로부터의 권한을 기록해야 한다. 수정은 조사자 및 스폰서에 의해 서명되어야 한다.
이 프로토콜 또는 적용 가능한 SOP의 편차는 편차(들)가 확인되는 시간에 기록되고, 서명되고, 날짜 기입되어야 한다. 전체 결과 또는 연구의 통합성에 대한 영향에 대한 평가가 이루어질 것이다. 실행에서 가능한 한 편차는 스폰서에게 통신되어야 한다.
모든 프로토콜 수정 및 편차는 따라서 기록되고, 발생의 날짜 또는 확인의 날짜에 기초하여 순차적으로 숫자 매겨진다.
c. 파일에 대한 주의: 파일에 대한 주의가 원시 데이터로부터 달리 명확하지 않을 수 있는 사건 또는 상황을 명확히 하도록 따라서 기록된다. 실행에서 가능한 한 파일에 대한 주의는 스폰서에게 통신되어야 한다.
d. 연구 직원의 변화: 연구 조사자, 또는 다른 책임 연구 직원의 변화는 따라서 기록되어야 한다.
e. 원시 데이터: 모든 원래의 원시 데이터 페이지를 관찰을 하는 사람 및 정보를 기록하는 사람이 페이지를 매기고, 연구 번호에 의해 확인하고, 서명하고, 날짜 기입한다.
f. 통신 로그: 조사자는 연구와 관련된 모든 서신의 사본을 유지시킨다. 연구의 문서화, 설계, 실행 또는 보고를 변화시키는, 임의의 전화 대화를 기록한다.
g. 허가: 이 프로토콜에 기재된 연구는 정부 기관 허가(예를 들어, APVMA 작은 실험 허가)에 의해 다루어지는 것이다.
연구 보고
연구 보고서는 조사자 또는 설계자에 의해 준비된다. 측정된 각각의 변수의 데이터 목록이 포함된다. 연구 조사자의 준수 기술은 연구 보고서에 포함된다. 원시 데이터를 갖는 원래의 서명된 연구 보고서 및 첨부된 통계 보고서는 스폰서에 제출되고 보관된다.
살모넬라 및 캄필로박터 연구
본 개시내용은 또한 살모넬라 또는 캄필로박터에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 또는 치료를 고려한다. 살모넬라 또는 캄필로박터 감염에 의해 생긴 질환을 예방하거나 치료하는 데에 있어서의 베르베린 알칼로이드 또는 베르베린 알칼로이드 조성물의 효과를 조사하기 위한 연구가 하기 기재되어 있다. 연구는 공개된 프로토콜에 대해 모델링된다: Alali, W. Q et al. "Effect of essential oil compound on shedding and colonization of Salmonella enteric serovar heidelberg in broilers", Poultry Science, 2013, 92: 836-841; Berghaus, R. et al. "Enumeration of Salmonella and Campylobacter in environmental farm samples and processing plant carcass rinses from commercial broiler chicken flocks", Appl. Environ. Microbiol. 2013, 1-37; Cochran, W. G., and G. M. Cox, Experimental Design. 2nd Ed. John Wiley & Sons, New York, NY. Pages 582-583, 1992 (Cochran and Cox, 1992).
살모넬라 연구
이 연구의 목적은 브로일러 조류에서 살모넬라 하이델베르그를 제어하는 수단으로서 IVP의 효과를 평가하는 것이다.
실험 설계
이 12개의 펜 연구에서, 600개의 병아리를 4개의 반복 가능한 블록에 의해 3개의 치료 그룹에 배정하고, 펜마다 50마리의 조류의 그룹에 할당한다.
치료 그룹을 무작위화된 완전한 블록 설계(Cochran and Cox, 1992)를 이용하여 펜에 배정한다. 치료 그룹은 하기와 같다:
1. 무치료 - 살모넬라 하이델베르그 시험감염 대조군
2. 치료 1 - 살모넬라 하이델베르그 시험감염
3. 치료 2 - 살모넬라 하이델베르그 시험감염
연구는 조류가 배치될 때(부화일자(day-of-hatch); DOT 0) 시작하고, 이 시간에 조류는 실험 펜에 할당된다. 오직 건강하게 보이는 조류는 연구 사용 및 최종 번호에 대해 할당되고, 할당되지 않은 모든 조류의 배치는 기록된다. 조류는 연구의 과정 동안 대체되지 않는다. 펜에 의한 조류 중량(㎏)은 연구 개시(DOT 0), DOT 35 및 종료(DOT 42) 시 기록된다.
재료 및 방법
조류. 육백(600)의 부화일자 Ross x Ross 스트레이트-런(straight-run) 브로일러 병아리를 얻는다. 조류는 일상적인 백신접종(HVTSB1)을 받고, 사육자 무리 번호 정보는 기록된다. 모든 조류를 추천된 용량에서 상업용 콕시디아증 백신에 의해 백신접종한다.
감금 및 환경 제어. 연구 개시 시, 50마리의 브로일러 병아리는 단단한 측벽 및 더러운 바닥을 갖는 변형된 관습적인 가금류 하우스에서 5x10(1.00 ft2 /조류 스톡 밀도)으로 측정되는 12개의 바닥 펜에 할당될 것이다. 설비를 팬 냉각한다. 자동온도 제어된 가스 가열기는 1차 열원이다. 보충적인 열 램프(펜마다 하나[1]의 램프)는 (필요할 때) 열을 제공한다. 조류는 주변 습도에서 키워지고, 1차 사육자 추천에 따라 조명 프로그램이 제공된다. 배치 시, 각각의 펜은 대략 사(4) 인치의 새로운 소나무 대팻밥을 함유한다. 짚은 연구 과정 동안 대체되지 않는다. 각각의 펜은 하나(1)의 관 피더 및 하나(1)의 벨 드링커를 함유하여서 오십(50)의 조류/피더 및 드링커 비율을 생성시킨다.
사료 및 워터링 방법. 자유식
식이. 배급량이 하기와 같이 공급된다: 초기 사료 DOT 0 내지 DOT 14, 성장기 사료 DOT 14 내지 DOT 35, 및 완료기 사료 DOT 35 내지 DOT 42. 식이는 크럼블(초기 사료) 또는 펠릿(성장기 사료 및 완료기 사료)으로서 공급된다. 이 연구를 위한 사료 제제는, NRC 규격을 만족시키거나 초과하도록 분석이 계산된, 적절한 식량과 배합된 약제가 없는 상업용 유형의 브로일러 초기 사료, 성장기 사료 및 완료기 사료 식이로 이루어지고, 항생제는 치료 프로토콜 성분으로 달리 구체적으로 기재되지 않는 한 임의의 사료에 첨가되지 않는다. 실험 처리 사료는 모든 기본 사료의 분량을 갖는 기본 초기 사료 및 기록되는 치료 배치를 제조하기 위해 사용되는 시험 물품으로부터 제조된다. 모든 시험 물품의 균일한 분포를 보장하도록, 처리 사료는 혼합되고, 80℃(펠릿 온도는 기록됨)에서 캘리포니아 펠릿 밀(California Pellet Mill)에서 펠릿화된다. 혼합이 완료된 후, 사료는 지정된 치료 그룹의 펜 중에서 분포된다. 시험 물품(들)을 SPRG 기후 제어된 저장 부위에 저장한다. 모든 식이, 제제, 및 다른 사료 정보를 기록한다.
사료 변화. 조류는 DOT 0 내지 DOT 42에 치료 적절 사료를 받는다. 배급량은 DOT 14에 초기 사료로부터 성장기 사료로 및 DOT 35에 성장기 사료로부터 완료기 사료로 변한다. 그 시간에, 모든 이전의 사료를 각각의 펜으로부터 제거하고, 개별적으로 칭량하고, 완료기 사료에 의해 대체한다. DOT에 42개의 모든 비소비된 완료기 사료를 펜으로부터 제거하고, 개별적으로 칭량하고, 폐기한다.
살모넬라 접종. DOT 0에 펜마다 25마리의 병아리(50% 시더)를 태그화하고, (확인을 위해) 색상 코딩하고, 107 CFU 날리딕스산 내성 살모넬라 하이델베르그에 의해 경구로 투약(위관영양)한다.
살모넬라 샘플링. 부츠 양말(bootsock) 면봉 샘플을 DOT 14 및 DOT 42에 모든 펜으로부터 살모넬라 환경 오염 결정을 위해 수집한다. 잠재적인 샘플 교차오염을 감소시키도록 각각의 면봉의 완료 사이에 글러브를 바꾼다. 무균 백으로부터 미리 촉촉하게 한 부츠 양말 면봉(Solar Biologicals, Inc., 카탈로그 BT SW-001호)을 제거하고, 깨끗한 새로운 플라스틱 부츠에 의해 덮인 발에 배치하고, 펜의 주변부 및 내부를 걷고, 부츠 양말을 제거하고, 펜 번호에 의해 표지된 무균 백에 배치한다. 각각의 펜에 대해 절차를 반복한 후, 샘플을 적절히 저장하고, 이후 살모넬라 분석을 위해 제출한다.
맹장 살모넬라 배양. 맹장 샘플링을 DOT 42에 완료한다. DOT 42에 10마리의 수평 노출된(비태그화된) 조류를 각각의 개별 펜으로부터 취하고, (경추 파열에 의해) 안락사시키고, 각각의 조류의 맹장을 무균으로 제거한다. 제거 후 맹장 샘플을 하나(1)의 무균 플라스틱 샘플 백(Fisher Scientific)에 배치하고, 표지하고, 얼음에 저장하고, 살모넬라 분석을 위해 제출한다.
살모넬라 단리 및 확인. 살모넬라 단리 및 확인을 위해 제출된 모든 샘플(부츠 양말 면봉 및/또는 맹장)을 분석 전에 무균 Whirl Pack 백에서 얼음에 저장한다. 도착 시 테트로티오네이트 브로쓰를 맹장을 칭량하면서 부츠 양말 면봉 샘플에 첨가하고, 무균 식염수를 첨가하고, 샘플을 스토머커(stomacher)한다. 일(1) ㎖의 분취액을 MPN 분석을 위해 제거하고, 10X 테트로티오네이트 브로써(Difco) 용액을 첨가하고, 샘플을 41.5℃에서 밤새 항온처리한다. 루프(loopful)의 샘플을 37℃에서 밤새 항온처리된 자일로스 라이신 터지톨-4 한천(XLT-4, Difco) 플레이트에 스트라이킹한다. 3개 이하의 검정 콜로니는 선택하고, 폴리-O 살모넬라 특이적 항혈청(MiraVista(인디애나주 인디애나폴리스))을 사용하여 살모넬라 양성으로 확인된다. (Berghaus et al., 2013; Alali et al., 2013)
살모넬라 열거 절차(MPN 방법). 모든 10개의 수평 노출된(비태그화된) 및 5개의 직접적인 시험감염된(태그화된) 샘플에 대해, 일(1) ㎖의 스토머커된 펩톤 브로쓰의 샘플을 96웰 이(2) ㎖의 딥 블록(deep block)의 제1 열에서 세(3) 개의 인접한 웰로 이동시킨다. 0.1㎖의 샘플의 분취액을 제2 열에서 0.9㎖의 테트로티오네이트 브로쓰로 이동시키고, (5개의 10배 희석을 생성하도록) 남을 열에 대해 과정을 반복하고, 블록을 항온처리한다(42℃에서 24시간)(표 16). 핀-툴 레플리케이터에 의해 일(1) ㎕의 각각의 웰을 (날리딕스산을 함유하는) XLT-4 한천으로 이동시키고, 플레이트를 항온처리하고(37℃에서 24시간 동안), 각각의 샘플의 최종 희석을 기록하고, (샘플 MPN을 결정하도록) MPN 계산장치에 들어간다. 의심 살모넬라 단리물은 폴리-O 살모넬라 특이적 항혈청(MiraVista(인디애나주 인디애나폴리스))에 의해 확인된다. (Berghaus et al., 2013; Alali et al., 2013).
Figure pct00018
질환 및 콕시디안 제어. 모든 조류를 USDA 허가된 콕시디아 백신에 의해 스프레이 캐비넷에 의해 일(1) 일령에 백신접종한다. 동반 약물 치료는 연구 동안 사용되지 않는다. 교차오염을 방지하기 위해, 플라스틱 폐기용 부츠는 펜에 들어가고 각각의 펜 사이에 바꿀 때 닳는다.
조류 확인. 펜은 측정의 유닛이다. 펜 보안은 조류 이동을 방지할 것이다.
모니터링. 모든 조류를 일반적인 무리 조건, 온도, 조명, 물, 사료, 짚 조건 및 예상되지 않은 감금 조건/사건에 대해 모니터링한다. 정기적인 작업 시간 동안 1일 2회 발견을 기록한다(하나[1]의 관찰은 최종 연구 일에 기록됨). 하나(1)의 관찰은 토요일, 일요일에 기록되고 휴일에 관찰된다.
사망률. 펜을 사망률에 대해 매일 확인한다. 조류를 고통을 경감시키도록 도태시킨다. 날짜 및 제거 중량(㎏)을 도태된(또는 죽었다고 발견된) 임의의 조류에 대해 기록하고, 총체적 괴사를 모든 도태된(또는 죽은) 조류에서 수행하고, 하기 정보를 기록한다: 성별 및 개연성 있는 사망 원인.
조류 및 사료 폐기. 모든 조류, 폐사물 및 남은 사료(혼합장치 플러시 포함)는 적절하고 윤리적인 방법에 의해 폐기된다.
소스 데이터 제어 및 취급. 데이터는 읽을 수 있는 참가자에 의해 만년 잉크로 기록되고, 각각의 소스 데이터 시트는 개별 기록 참가자에 의해 서명(또는 이니셜 표시)되고, 날짜 기입된다. 모든 소스 데이터 오류(및/또는 변화)는 이니셜 표시되고, 날짜 기입되고, 간단한 설명 기재 또는 오류 코드는 폼에 바로 쓰여진다.
데이터 관리. 체중 증가, 사료 소비, 사료 전환 및 살모넬라 결과의 데이터 관리 및 통계 분석은 수행된다.
사건의 일정표
Figure pct00019
캄필로박터 연구
연구는 없어진 캄필로박터 제주니(수평 전파) 및 브로일러 맹장에서의 콜로니화를 감소시키는 조사 중인 수의학적 제품(IVP)의 효율을 결정하는 것이다.
실험 설계
백이십(120) 일령(비-SPF)의 상업용 브로일러를 받는다. 5마리의 조류를 경추 파열에 의해 안락사시키고, 이의 맹장을 캄필로박터 제주니에 대해 배양한다. 남은 선택된 105마리의 조류를 3개의 그룹으로 무작위화하고, 그룹마다 35마리의 조류로 하나의 격리 룸을 ⅓로 세분한다. 실험 변수는 하기 기재되어 있다. 모든 조류는 하기 기재된 바대로 치료에 의해 브로일러 초기 사료 크럼블 식이가 공급된다.
룸의 수 - 3마리의 조류 공간으로 세분된 1개
병아리의 전체 수 - 120마리
즉시 안락사된 병아리의 수 - 05마리
치료 그룹으로 세분되어야 하는 조류의 수 - 105개의 치료 그룹 - 3마리
반복 실험 블록 - 해당 없음
룸 세분마다 조류 - 35마리
치료 그룹
1. 무치료 - 캄필로박터 제주니 시험감염
2. 치료 1 - 캄필로박터 제주니 시험감염
3. 치료 2 - 캄필로박터 제주니 시험감염
재료 및 방법
조류. 백십(110)의 부화일자 Ross 708 수컷 브로일러 병아리를 얻는다. 조류는 성교되고, 일상적인 백신접종(HVTSB1)을 받고, 사육자 무리 번호 정보는 기록된다. 조류는 제조사 추천에 따라 일(1) 일령에 상업적으로 허가된 콕시디아 백신의 하나(1)의 용량을 받는다.
감금 및 환경 제어. 연구 개시 시, 백오(105)의 부화일자 Ross 708 수컷 브로일러 병아리를 하나(1)의 격리 룸에 할당한다. 룸을 3개의 동일한 조류 공간으로 세분한다. 공간마다 35마리의 병아리를 각각의 룸에 배치한다. 각각의 룸은 13.4'x15.7'(대략 2.0피트2 수용 밀도) 측정된다. 격리 룸 환경은 독립적인 HEPA 여과 시스템 및 가열 램프 유닛에 의해 제어되고, 하나(1)의 가열 램프는 육추 동알 보충적인 열을 제공한다. 조류는 주변 습도 하에 길러진다. 배치 시, 각각의 펜은 대략 사(4) 인치의 가마 건조된 처진 새로운 소나무 대팻밥을 함유한다. 짚은 이 연구의 과정 동안 대체되지 않는다. 각각의 공간은 하나(1)의 관 피더 및 하나(1)의 벨 드렁커(35의 조류/피더 및 드렁커 비율)를 함유한다. 조류는 일마다 이십사(24)시간 조명이 제공된다.
사료 및 워터링 방법. 자유식
식이. 조류는 연구에 걸쳐 브로일러 초기 사료 식이가 공급된다. 약제가 없는 상업용 유형의 브로일러 초기 사료 식이는 NRC 규격을 만족시키거나 초과하도록 분석이 계산된, 적절한 식량과 배합되고, 항생제의 첨가 없이 치료 프로토콜 성분으로 달리 구체적으로 기재되지 않는 한 임의의 사료가 제제화된다. 사료는 기준 초기 사료로부터 제조된다. 혼합이 완료된 후, 사료는 지정된 치료 그룹의 펜 중에서 분포된다. 시험 물품(들)을 기후 제어된 부위에 저장한다. 모든 식이 및 제제 및 사료를 기록한다.
사료 변화. 조류는 DOT 0 내지 DOT 35에 초기 사료를 받는다.
캄필로박터 제주니 투여의 방법: DOT 14에, 치료마다 35마리의 조류를 대략 106 CFU/㎖(대략 105 CFU/㎖의 병아리 용량)를 함유하는 0.1㎖의 캄필로박터 제주니 JB 균주 브로쓰에 의해 경구로 위관영양한다.
캄필로박터 콜로니화 평가: DOT 0에 5마리의 조류를 캄필로박터 제주니 보급을 위해 배양한다; DOT 35에, 치료마다 33마리의 조류를 경추 파열에 의해 안락사시킨다. 각각의 조류의 맹장을 무균으로 제거하고, 캄필로박터 격리 분석을 위해 무균 플라스틱 샘플링 백(Fisher Scientific)에 배치한다. 모든 샘플을 캄필로박터 분석 전에 얼음에서 저장한다.
캄필로박터 열거 절차: 캄필로박터 열거 절차(직접적인 계수). 각각의 샘플에 대해 일(1) ㎖의 스토머커된 펩톤 브로쓰의 샘플은 96웰 이(2) ㎖의 딥 블록의 제1 열에서 3개의 인접한 웰로 이동될 것이다. 0.1㎖의 샘플의 분취액을 제2 열에서 0.9㎖의 Bolton 브로쓰로 이동시키고, (12개의 10배 희석을 생성하도록) 남을 열에 대해 과정을 반복하고, 이후 각각의 웰로부터의 0.1㎖를 Campy Cefex Agar에 확산 플레이팅될 것이다(표 18). 플레이트를 캄필로박터 가스의 존재 하에 항온처리(24시간 동안 42℃)하고, 각각의 샘플의 최종 희석을 기록한다. 의심 캄필로박터 단리물은 그램 염색에 의해 확인된다.
Figure pct00020
질환 제어. 동반 약물 치료는 연구 동안 사용되지 않을 것이다. 교차오염을 방지하기 위해, 플라스틱 폐기용 부츠는 룸에 들어가고 각각의 룸 사이에 바꿀 때 닳아질 것이다.
조류 확인. 룸은 측정의 유닛이다. 룸 보안은 조류 이동을 방지한다.
모니터링. 모든 조류를 일반적인 무리 조건, 온도, 조명, 물, 사료, 짚 조건 및 예상되지 않은 감금 조건/사건에 대해 모니터링한다. 정기적인 작업 시간 동안 1일 2회 발견을 기록한다(하나[1]의 관찰은 35일에 기록됨). 하나(1)의 관찰은 토요일, 일요일에 기록되고 휴일에 관찰될 것이다.
사망률. 룸을 사망률에 대해 매일 확인한다. 조류를 고통을 경감시키도록 도태시킨다. 날짜 및 제거 중량(㎏)을 도태된(또는 죽었다고 발견된) 임의의 조류에 대해 기록하고, 총체적 괴사를 모든 도태된(또는 죽은) 조류에서 수행하고, 하기 정보를 기록한다: 성별 및 개연성 있는 사망 원인.
조류 및 사료 폐기. 모든 조류, 폐사물 및 남은 사료(혼합장치 플러시 포함)는 적절한 방법에 의해 폐기된다.
소스 데이터 제어 및 취급. 데이터는 읽을 수 있는 참가자에 의해 만년 잉크로 기록되고, 각각의 소스 데이터 시트는 개별 기록 참가자에 의해 서명(또는 이니셜 표시)되고, 날짜 기입된다. 모든 소스 데이터 오류(및/또는 변화)는 이니셜 표시되고, 날짜 기입되고, 간단한 설명 기재 또는 오류 코드는 폼에 바로 쓰여진다.
데이터 관리. 체중 증가, 사료 소비, 사료 전환 및 캄필로박터 결과의 데이터 관리 및 통계 분석은 수행된다.
사건의 일정표
Figure pct00021
실시예
괴사성 장염
괴사성 장염은 식품 생성 동물, 예컨대, 가금류에서 발견되는 장 감염이다. 1961년에 Parish에 의해 처음 기재되어, 이것은 클로스트리듐 퍼프린젠스인 박테리아에 의해 가금류에서 생기고, 급성 임상 질환 또는 준임상 질환으로 존재할 수 있다. 클로스트리듐 퍼프린젠스가 괴사성 장염의 병인학적 물질로서 인식되지만, 다른 기여 인자는 보통 동물이 질환에 취약하게 하는데 필요하다. 괴사성 장염이 다인성 질환 과정이라고 인정되고, 다수의 위험 인자는 아이메리아 감염, 항생제 성장 촉진자의 제거, 환경 및 관리 조건, 생리학적 스트레스 및 면역억제, 및 식이의 성질 및 형태를 포함한다.
괴사성 장염인 잠재적으로 치명적인 질환은 사육 기간의 마지막 주 동안에 연속 수일 동안 매일 1%까지의 무리 사망률을 야기할 수 있고, 전체 누적 사망률을 30% 내지 50%까지 오른다. 준임상 형태에서, 장 점막에 대한 손상은 소화 및 흡수를 감소시키고, 체중 증가를 감소시키고, 사료 전환율을 증가시켜서, 상업용 성능을 감소시킨다. 이것은 보고에 의하면 가금류 제조 산업에서 가장 큰 경제학적 손실을 야기하는 질환의 이 징후이다. 또한, 가금류에서의 클로스트리듐 퍼프린젠스는 식품 유통을 통해 인간에 대한 전파의 위험을 구성하고, 클로스트리듐 퍼프린젠스는 인간에서의 식품 매개 질환 발생에서 흔히 단리되는 박테리아 병원균 중 하나이다.
괴사성 장염은 이전에 널리 공지된 항박테리아 약물, 예컨대 버지니아마이신, 바시트라신 등에 의해 제어되었다. 더욱 많은 나라에서의 식품 생성 동물에서의 항생제 사용의 금지는 동물 및 공중 건강에 대한 심각한 위협으로서 생기는 괴사성 장염을 발생시킨다.
클로스트리듐 퍼프린젠스는 토양, 먼지, 대변, 사료, 가금류 짚 및 장 내용물에서 발견되는 그램 양성 혐기성 박테리아이다. 이것은 극도로 증식적이고, 다양한 독소 및 효소를 생성할 수 있다. 클로스트리듐 퍼프린젠스 균주는 4개의 독소(α, β, ε 및 ι)의 생성에 기초하여 5개의 독소형태(A, B, C, D 및 E)로 분류된다. 괴사성 장염이 A형 및 더 적은 정도로 C형에 의해 생긴다고 제안되고, A형 균주는 염색체 코딩된 알파 독소를 생성하지만, C형 균주는 베타 독소와 함께 알파 독소를 생성한다.
알파 독소는 인지질을 가수분해하고 매개자, 예컨대 류코트리엔, 트롬복산, 혈소판 응집 인자 및 프로스타사이클린의 합성을 포함하는 막 분열을 촉진하는 포스포리파제 C 스핑고미엘린분해효소이다. 이 매개자는 혈관 수축, 혈소판 응집 및 심근 기능장애를 발생시켜서, 급성 사망을 발생시킨다. 정확한 기전이 아직 공지되지 않았으므로, 베타 독소는 장 점막의 출혈성 괴사를 유도한다. 괴사성 장염의 병리학은 다른 약력 인자에 대한 조사와 함께 재평가된다. 최근에, 알파 독소가 제안되는 괴사성 장염의 발병에서 중요한 역할을 가지지 않을 수 있다는 것을 제안하는 증거가 있고, 연구는 비야생형 알파 독소를 사용하여 질환을 야기하는 손상된 능력을 보고한다. 증거는, 장으로 인퓨징될 때, 클로스트리듐 퍼프린젠스 배양 상청액에서의 분자가 질환 유사 병리학을 재생성한다는 것을 제안한다. 최근의 증거는 또한 클로스트리듐 퍼프린젠스로부터의 NetB 독소가 괴사성 장염 발병에서 중요한 역할을 할 수 있다는 것을 제안한다.
클로스트리듐 퍼프린젠스는 장에서 낮은 수준으로 천연으로 발견되지만, 정상 장 미생물총에 대한 방해는 박테리아의 신속한 증식을 야기하여서, 괴사성 장염을 발생시킬 수 있다. 닭은 가장 흔히 2주령 내지 6주령에 이환되지만, 괴사성 장염은 조류 7주령 내지 16주령 또는 심지어 6개월령까지에서 발생할 수 있다.
질환은, 대개 전조의 징후 없이, 무리 사망률에서의 갑작스런 증가를 임상적으로 특징으로 하지만, 젖은 짚은 때때로 초기 표시자이다. 임상 징후는 우울, 탈수, 졸림, 잔주름의 깃털, 설사 및 감소된 사료 소비 감소를 포함할 수 있지만, 사망 전의 임상 질병은 짧은 기간이어서, 체중 증가의 감소는 명확하지 않다. 거시적인 병변은 소장에서 발견될 수 있고; 십이지장, 공장 및 회장은 얇은 벽이 되고 잘 부스러지고 팽창되고 가스에 의해 충전된다. 또한, 점막 표면은 회색-갈색 내지 황색-녹색 디프테리아 막 또는 위막에 의해 덮인다. 병변, 및 점액낭 및 적혈구의 위축은 또한 다른 장기에서 발견될 수 있다. 괴사성 장염의 준임상 형태는 상당히 덜 인식 가능하고, 항생제 유사체에 의한 치료에 반응하는 아픈 조류는 대개 질환을 갖는 것으로 생각된다. 젖은 짚은 일반적으로, 젖은 짚이 기원에서 항상 클로스트리디아가 아님에도 불구하고, 가금류 농장에서 항생제 치료에 바로 침전한다. 또한, 장 점막의 가벼운 괴사가 준임상 괴사성 장염에 보고되어 있다. 실시예 1은 괴사성 장염의 예방 또는 치료에서의 베르베린 설페이트(IRP001 설페이트)의 사용을 기재한다.
실시예 1
입증된 실험 모델을 이용하여 클로스트리듐 퍼프린젠스에 의해 인공적으로 시험감염된 특정한 병원균 무 닭에게 (사료를 통해 경구로) 예방학적으로 및 (음용수를 통해 경구로) 치료학적으로 투여될 때 IRP001 설페이트의 용량 반응, 효율 및 안전성을 결정하기 위한 파일럿 연구.
재료 및 방법
연구 설계(괴사성 장염 시험감염) - 격리장치에 감금된 상업용 브로일러 닭을 1㎖의 1%(w/v) 무균 식염수 중에 아이메리아 맥시마 및 아이메리아 아세르불리나의 각각의 5,000개의 약독화된 백신 균주 포자형성된 접합자 및 아이메리아 브루네티의 2,500개의 포자형성된 접합자에 의해 9일령에 경구로 감염시켰다.
접합자 시험감염(14일 및 15일) 이후의 5일 및 6일에, 클로스트리듐 퍼프린젠스의 공지된 병원성 균주(A형 균주 EHE-NE36, CSIRO Livestock Industries(호주 질롱)를 i.t.(약 8.0 log10cfu/닭) 투여하였다. 모든 NE 코호트 조류를 희생시키고 16일에 부검하였다. 부검 시 NE 병변 점수 및 사망률은 결과 매개변수로서 사용되고, 하기 표 22 및 표 23에 기재되어 있다. 사료 및 물 섭취 및 체중 증가를 또한 측정한다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP) - IRP001 베르베린 헤미설페이트 염(IRP001 설페이트)
Figure pct00022
Figure pct00023
결과
Figure pct00024
Figure pct00025
물내 1.0g/ℓ 또는 사료내 2.0g/㎏에서의 IRP001 설페이트의 포함은 nil-치료 그룹 및 물내 0.1g/ℓ 또는 사료내 0.2g/㎏에 의해 치료된 그룹 둘 다에 비해 NE 시험감염된 브로일러에서 사망률을 상당히 감소시켰다(도 5 참조). nil-치료, 물내 0.1g/ℓ 및 사료내 0.2g/㎏ 그룹에서의 사망률은 NE 시험감염된 브로일러에서 유의미하게 다르지 않았다.
이환율은 또한 감소하였다. 물내 1.0g/ℓ 또는 사료내 2.0g/㎏에서의 IRP001 설페이트의 포함은 NE에 의해 시험감염된 브로일러에서 nil 치료 그룹에 비해 소장 병변 점수를 실질적으로 감소시켰다(도 6 내지 도 12 참조). 반대로, 물내 0.1g/ℓ 또는 사료내 0.2g/㎏에서의 IRP001의 포함은 NE 시험감염된 브로일러에서 nil-치료에 비해 중앙치 병변 점수를 감소시키지 않았다.
실시예 2
사료내 또는 물내 브로일러 닭에 공급될 때 IRP001 헤미설페이트 염(비마스킹됨)의 단일 제제의 도입 이후에 사료 식미, 사료 및 물 소비 및 조류 생산성을 결정하기 위한 추적관찰 연구. 연구는 치료 시작 일자의 면에서 최적 치료 섭생을 탐구한다.
재료 및 방법
연구 설계
1상: 수취 시, 270마리의 하루 지난 상업용 브로일러 닭을 0일에 16개의 개별 바닥 펜(각각 16 또는 17마리의 조류)으로 이들을 받은 대로 순차적으로 할당하였다.
2상 : 수취 시, 90마리의 하루 지난 상업용 브로일러 닭을 22일에 4개의 개별 바닥 펜(각각 22 또는 23마리의 조류)으로 이들을 받은 대로 순차적으로 할당하였다.
사료 섭취, 물 섭취, 체중 증가 및 사망률은 결과 매개변수로서 사용되었다.
조사 중인 수의학적 제품(IVP)
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
Figure pct00029
결과
펜에 의한 및 이후 치료 그룹에 의한 개별 매일의 사료 섭취 및 개별 매일의 물 섭취 데이터를, 각각의 펜에서 조류의 숫자로 나눈 각각의 펜에 매일 제공된 전체 사료 및 물에 대한 숫자를 사용하여, 1상 및 2상(및 상 둘 다를 통해 계속하는 그룹/펜 2, 15 및 16에서 조류에 대한 전체 실험)에 대해 계산하였다. 칭량, 피딩/워터링 또는 기록(또는 다른 설명되지 않은 사료 및 물의 손실)에서의 오류가 생길 때, 명백한 오류의 양측의 1일 내지 2일에 동일한 펜에 대한 평균 값을 이용함으로써 평균을 조정하였다. 유사하게, 0일 동안 전체 중량/전체 조류 수 및 7일, 14일, 21일, 28일, 35일 및 42일로부터의 개별 중량을 이용하여 1상에 대해 그룹 평균 체중을 계산하였다. 소비된 전체(개별) 사료는 치료마다 계산되고, 치료마다의 사료 전환율은 전체(개별) 사료/전체(개별) 체중 증가의 표현을 이용하여 계산되었다.
개별 매일의 사료 섭취 및 개별 매일의 물 섭취는 선형 모델 및 Tibco SPOTFIRE S+ 8.2(2010)를 이용하여 상 둘 다에 대해 각각의 상 내에 그리고 펜 2와 15/16 사이에 치료에 의해 통계학적으로 비교되었다:
(매개변수) ~ 치료 + 일 + 펜 + 치료:일.
'일'은 모델에 포함되어서 시간에 걸친 변화를 허용하고, 각각의 치료로서의 '펜'은 2개의 펜으로 이루어지고, 상호작용 용어 '치료:일'은 포함되어서 치료x시간 효과를 허용한다. 모델 적합성은 잔차 그림의 검사에 의해 확인되고; 모든 경우에 통계 모델은 적절하였다.
1상 :
Figure pct00030
사료 섭취: '치료'는 유의미하고, '일'은 고도로 유의미하고, '펜'은 유의미하지 않았다. 그러나, 치료의 개별 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
물 섭취: '치료'는 유의미하고, '일'은 고도로 유의미하였다. 치료의 다수의 쌍별 비교는 유의미하지만, 결과는 결정적이지 않았다. 적당한 경향이 존재하는 것으로 보이지 않아서, 더 긴 기간 동안 (음용수에서 마스킹되지 않은) 시험 치료를 받는 그룹은 더 짧은 기간 동안 치료된 그룹 및 비치료된 대조군 그룹보다 물을 덜 마셨다(도 13 참조).
체중: 사료 섭취: '치료'는 유의미하고, '일'은 고도로 유의미하고, '펜'은 유의미하지 않았다. 그러나, 치료의 개별 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
1상 내에, 변하는 기간에 걸쳐 음용수를 통한 마스킹되지 않은 치료는 따라서 사료 섭취 또는 체중에 영향을 미치는 것으로 나타나지 않았지만, 치료된 조류는 물을 덜 마시는 경향이 있었다.
2상 :
Figure pct00031
사료 섭취: '치료 및 '펜'은 유의미하지 않지만, '일'은 고도로 유의미하였다. 그러나, 2개의 치료의 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
물 섭취: '치료'는 고도로 유의미하고, '일'은 고도로 유의미하였다. 2개의 치료의 쌍별 비교에서 유의미한 차이가 관찰되고, (사료내 치료를 받는) 치료된 조류는 더 많은 물을 마셨다(도 14 참조).
체중: '치료 및 '펜'은 (예상된 바대로 '일'은 그렇지만) 유의미하지 않았다. 2개의 치료의 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
2상 내에, 치료(사료내)는 사료 섭취 또는 체중에 영향을 미치는 것으로 나타나지 않았지만, 치료된 조류는 물을 더 마시는 경향이 있었다(1상과 반대로 여기서 이들은 마스킹되지 않은 치료가 음용수에서 적용될 때 물을 덜 마시는 경향이 있었다).
1상 + 2상(그룹-펜 2 비치료된 대 15/16, 치료된 물내 6일 내지 42일):
사료 섭취: '치료'가 전체 모델에서 유의미하지 않지만(그리고 '일'은 고도로 유의미함), 2개의 치료의 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 있고, 비치료된 조류는 비치료된 조류보다 전체 실험에 걸쳐 약 0.14㎏ 더 많은 사료를 먹었다.
물 섭취: '치료'는 고도로 유의미하고, '일'은 고도로 유의미하였다. 2개의 치료의 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되고, 비치료된 조류는 비치료된 조류보다 전체 실험에 걸쳐 더 많은 물을 마셨다.
체중: '치료'가 모델에서 유의미하지 않지만(그리고, 예상된 바대로, '일'은 고도로 유의미함), 2개의 치료의 쌍별 비교에서 (p<0.05에서의) 유의미한 차이가 관찰되지 않았다.
유의미하게 더 높은 사료 섭취 및 유사한(무의미하게 다른) 체중의 조합이 둘 다 사료 전환율을 통해 고려될 때, 무치료에 비해 6일 내지 42일에 걸쳐 치료에 적절한 이점이 있는 것으로 보였다(도 15 참조). 치료된 조류는 3.84㎏의 사료를 소모하고, 2.35㎏(1.6㎏의 사료: 1㎏의 증가의 FCR) 증가하지만, 비치료된 조류는 4.17㎏의 사료를 소모하고, 2.14㎏(1.95㎏의 사료: 1㎏의 증가의 FCR) 증가하였다.
실시예 3
상업용 닭고기에서 혼합된 중등도 콕시디아증 시험감염에 대해 사료내 베르베린 클로라이드인 IVP의 3개의 용량 비율의 효율을 평가하고, 괴사성 장염 또는 비특이적 장염의 임의의 발생을 평가하는 것. 연구는 브로일러 닭에 대한 IVP의 가장 그럴듯한 유효 용량 비율에 대한 관찰 프로젝트를 제공하고, 산업 표준과 비교하여 콕시디아증 및 후속하는 괴사성 장염의 제어에서의 그럴듯한 성공을 평가한다.
재료 및 방법
콕시디아 접합자(브로일러 및 산란 닭 공급원으로부터의 아이메리아 종)의 필드 샘플을 얻고, 실험실로 옮기고(여기서, 이들을 필터링함), 포자형성하고, 위생처리하고, 저장하였다. 존재하는 아이메리아 종을 PCR에 의해 확인하고, 접합자를 계수하였다. 이것을 미경험 병아리를 통해 번식시켜서 시더 조류에 대해 시험감염 접종원에 충분한 수를 생성하였다. 30마리의 1일령 닭고기를 상업용 부화장으로부터 얻고, 실험 설비에서 배터리 육추기 우리에서 우리마다 10마리의 병아리를 배치하였다. 이것에 약제가 없는 배급량을 공급하고, 포자형성된 접합자를 7일에 위관영양에 의해 투여하였다. 13일에, 조류를 안락사시키고, 이의 장관을 제거하였다. 상부 및 하부 소장 및 맹장을 분리하고, 2% 중크롬산칼륨에 배치하고, 4℃에서 3일 내지 5일 동안 두고, 이후 긁어내어서 점막을 제거하였다. 이것을 새로운 중크롬산칼륨 용액에 굵은 체를 통해 통과시켰다. 여기서의 접합자를 포자형성하고, 현미경 하에 조사하고, 계수하고, 종을 PCR에 의해 확인하였다.
1180마리의 1일령 Ross 308 닭을 상업용 부화장으로부터 얻고, 부화장에서 감염성 기관지염 및 뉴캐슬병에 대해 백신접종하였다. 병아리를 실험 설비로 이동시키고, 30개의 바닥 펜의 각각에 무작위화하고, 펜마다 36마리의 병아리로 배치하였다(도 18). 펜을 디바이더에 의해 반의 일반 크기로 감소시켜서 펜마다 3.5㎡ 바닥 공간을 제공하였다. 이것은 대략 30㎏/㎡의 최종 조류 밀도를 제공하도록 의도되었다. 추가의 2개의 풀 크기 펜은 펜마다 배치된 50마리의 조류를 가졌다(이것은 콕시디아증 시험감염에 대한 시더로서 작용하였다).
사료는 적합한 균형화된 기본 배급량 제제(초기 사료, 성장기 사료 및 완료기 사료)에 기초하였다. 생성물을 하기한 바대로 기본 배급량의 각각에 첨가하였다(표 30).
Figure pct00032
펜을 무작위화된 완전한 블록 기준으로 사료에 할당하였다. 사료를 조류 초기 사료마다 0.7㎏(대략 0일 내지 14일), 조류 성장기 사료마다 1.2㎏(대략 15일 내지 28일) 및 이후 종료(42일)까지 완료기 사료에서 각각의 펜에 제공하였다. 시더 조류 펜은 배급량 #1(약제가 없음)을 받았다.
6일에, 시더 펜에서의 조류는 스텝퍼 피펫을 이용하여 개별 위관영양(조류당 대략 0.5㎖)에 의해 접합자 접종원이 주어졌다. 다양한 닭 농장 공급원으로부터의 포자형성된 접합자의 3개의 별개의 샘플을 사용하였다 - 각각의 시더 펜에서 조류의 대략 ⅓에 주어짐. 시더 펜에서의 짚을 12일, 13일 및 14일에 약하게 갈퀴로 모았다. 14일에 시더 펜에서의 짚의 상부 2 내지 3㎝를 수집하고, 함께 잘 혼합하고, 칭량하였다(도 19). 짚의 전체 중량을 30으로 나누고, 짚의 그 양은 실험 펜의 각각에 분포되었다(각각의 펜은 400g의 혼합된 시딩된 짚을 받았다 - 도 20).
혼합된 짚의 4개의 하위샘플은 수집될 것이고, 접합자 계수는 7g의 짚을 75㎖의 포화 수크로스 중에 현탁시키고, 100배 배율 하에 Whitlock Universal 계수 챔버에서 보이는 접합자의 전체 수를 계수함으로써 수행되었다.
조류를 0일, 14일, 21일, 28일 및 42일에 펜 기준으로 칭량하였다. 사료 소비를 14일, 21일, 28일 및 42일에 측정하였다. 사료 전환율(FCR)을 각각의 시간 기간에 걸쳐 계산하고, 조류 손실 및 제거에 대해 수정하였다.
죽거나 도태된 임의의 조류를 기록하고, 칭량하고, 부검 시 조사하여서, 콕시디아증 또는 장염과 일치하는 병변에 대해 장관에 주의를 기울였다. 성별을 기록하였다.
21일에, 4마리의 조류를 각각의 실험 펜으로부터 무작위로 선택하고, 인간적으로 안락사시키고, 이들의 장 및 맹장을 4개의 장 분절(상부, 중간 및 하부 장 및 맹장)에서 콕시디아증 병변 및 언급된 아이메리아 종에 통상적인 병변에 대해 점수화하였다. (장염을 살펴보는) 일반적인 장 품질은 그 시점에 또한 시각적으로 평가되었다.
펜마다 4개의 개별 대변 샘플을 21일에 수집하고 풀링하고, 접합자 계수치에 대해 평가하였다.
42일에, 모든 생존한 조류를 안락사시키고, 이들의 시체를 (인간 소비를 위해 도축이 되지 않도록) 오염된 폐기물 수집에 의해 폐기하였다.
결과
표 31은 Birling Avian 실험실에서 PCR에 의해 결정된 바대로 시더 조류에 주어진 접종원에 포함된 아이메리아 종의 식별을 보여준다. 이 PCR은 오직 정성적이지만, 각각의 종의 상대 풍부도는 예측될 수 있다(더 풍부한 경우 "+" 기호의 증가하는 수로 표시됨).
Figure pct00033
표 32는 접종 후 7일에 시더 펜으로부터 유래된 혼합된 짚 샘플(4중으로 계수된 샘플)의 그램마다 접합자의 수를 기재한다. 접합자의 가시적인 크기는 평가될 수 있지만, 종은 정확히 결정될 수 없다. 포자형성의 수준은 이 기법에서 판단될 수 있다.
Figure pct00034
표 32에 기재된 접합자 계수치에 기초하여, 각각의 펜은 14일에 분포된 시딩된 짚에서 대략 630만 개의 접합자를 받았다.
아이메리아의 몇몇 종에 통상적인 크기의 접합자는 시험감염 시딩된 짚의 계수(표 32에 예상된 백분율) 동안 보였다. 그러나, 오직 작은 접합자는 포자형성되는 것 같고, 매우 적은 다른 크기는 짚 확산의 시간에 포자형성의 징후를 보여준다.
표 33은 각각의 체중측정 시간에 평균 중량을 보여주고, 표 34는 각각의 기간에 평균 체중 증가를 보여준다. 도 21은 치료에 의한 중량의 평균 매일의 증가를 보여준다.
Figure pct00035
Figure pct00036
14일에서의 중량은 치료에 유의미한 차이를 보여주고, 조류는 음성 대조군 및 더 낮은 IRP 용량 비율의 둘 다보다 유의미하게 더 낮은 중량을 갖는 0.3g/㎏ IRP를 받았다. 살리노마이신을 함유하는 사료 둘 다는 14일에 중간이었다. 이 경향은 그 연령에서 상당하지는 않지만 7일에 명확하게 되었다. 이는 이 기간에 걸친 체중 증가에서 또한 반영되었다. 21일에 0.3g/㎏ IVP 치료 그룹에서의 조류의 평균 중량은 임의의 다른 치료보다 유의미하게 더 낮았다. 21일에 0.03g/㎏에서의 IVP는 가장 높은 숫자 평균 중량을 갖고, 살리노마이신 + 바시트라신 그룹 및 0.3g/㎏ IRP 그룹보다 상당히 더 높았다. IVP 0.3g/㎏를 받는 조류는 실험의 종료로 모든 다른 그룹보다 상당히 더 가볍게 있지만, 21일 후 증가의 비율은 그룹 사이에 다르지 않았다. 경험한 콕시디아증 시험감염은 치료된 그룹과 비교하여 음성 대조군에서 성장 속도를 유의미하게 감소시키지 않았다.
IVP 0.3g/㎏ 그룹은 14일로부터 계속하여 대조군 및 더 낮은 IVP 용량 그룹보다 유의미하게 더 가벼운 중량을 가졌다. 이 그룹(사료 #2)은 실험에 걸쳐 임의의 다른 그룹보다 더 적은 사료 및 2개의 IVP에 의해 치료된 다른 그룹보다 훨씬 더 적은 사료를 소비하였다(표 35). 이 그룹에 대한 사료는 밝은 황색이고(도 22), 42일에 이들 조류의 대변에서 가시적인 소화되지 않은 사료 입자가 있었다(도 23). IVP 0.3g/㎏ 용량에 의한 더 느린 성장 속도는 도 21에서 보일 수 있다. 조류는 항상 건강해 보였다.
콕시디아증 시험감염은 시험감염의 주(15일 내지 21일) 동안 음성 대조군 그룹의 성장 속도를 저하시키지 않았다.
더 낮은 IVP 용량 그룹 및 살리노마이신 및 살리노마이신 + 바시트라신 그룹의 성장 속도는 실험에 걸쳐 대조군 그룹과 통계학적으로 유사하였다.
표 35는 조류마다 사료 섭취를 보여주고, 표 36은 조류 손실에 대해 수정된 사료 전환율(FCR = 사료: 증가 비율)을 보여준다.
0일 내지 14일 및 0일 내지 21일에 걸쳐 0.3g/㎏에서의 IVP 및 0일 내지 21일에 걸쳐 살리노마이신을 함유하는 사료 둘 다를 받는 조류에 대한 사료 섭취는 대조군보다 조류마다 유의미하게 더 낮은 사료 섭취를 가졌다. 0.1g/㎏ 및 0.03g/㎏에서의 IVP는 대조군과 유사한 사료 섭취를 가졌다. 유의미한 사료 섭취 차이가 이후 보이지 않았다.
Figure pct00037
(조류 손실 및 제거에 대해 수정된) FCR은 전체 실험 기간 후(0일 내지 42일에 걸쳐) 오직 유의미한 변동을 보여주었다. 살리노마이신을 함유하는 사료 둘 다(#5 및 #6)는 대조군보다 유의미하게 더 양호한 FCR을 갖고, 바시트라신을 또한 함유하는 사료(#6)는 IVP 0.1g/㎏ 그룹(#3)보다 유의미하게 더 양호한 FCR을 가졌다. 그룹 사이에 결정된 성별 비율에서의 작은 차이는 조류 성능에서 유의미한 효과를 갖지 않았다(비기재).
Figure pct00038
표 37은 21일에 콕시디아 병변 코어의 결과를 보여준다(오염된 짚에 대한 노출 후 7일).
Figure pct00039
콕시디아 병변은 주로 아이메리아 아세르불리나에 통상적인 것이었다. 시험감염 짚에서의 PCR은 또한 아이메리아 맥시마, 아이메리아 테넬라 및 아이메리아 미티스의 존재를 보여주었다. 이는 접합자가 시험감염 전에 계수될 때 접합자를 살펴 볼 정도까지 시험감염 전에 접합자 데이터와 일치하고, 오직 더 적은 접합자(아이메리아 아세르불리나 및 아이메리아 미티스)는 양호한 수준의 포자형성을 갖는 것으로 보였다.
음성 대조군 및 가장 낮은 수준의 IVP는 십이지장, 공장 및 전체 장에서 가장 높은 병변 점수를 보여주었다. 병변의 위치 및 이의 외관은 아이메리아 아세르불리나에 통상적이었다(도 24 내지 도 26 참조). 십이지장에서, 오직 살리노마이신과 바시트라신은 대조군 및 2개의 더 낮은 용량 비율의 IVP와 비교하여 병변을 유의미하게 감소시켰다. 공장 병변은 일반적으로 낮지만, 약간의 유의미한 차이가 있었다. 대체로, 가장 높은 수준의 IRP 및 살리노마이신 함유 사료(#5 및 #6)는 전체 장 병변 점수를 유의미하게 감소시켰다.
각각의 펜으로부터의 풀링된 대변 샘플을 접합자 함량에 대해 평가하였다. 표 38은 결과를 보여준다. 결과는 하나의 펜으로부터의 대변 샘플에서 접합자 계수치를 제외하고(0.1g IVP/㎏ 그룹에서 극도로 높았다(2회 확인)) 약간의 일관성을 보여주었다. 이 개별 펜은 또한 매우 높은 콕시디아 병변 점수를 보여주었다. 이는 이 치료 그룹에 대한 결과를 왜곡시켰다. 로우 접합자 계수치는 (유의미한 Levene 시험에 의해) 균일하지 않은 것으로 관찰되고, 그러므로 계수치는 베이스 10 대수로 변환되어서, ANOVA 분석에 대한 이 문제를 극복한다. 변환된 log10 결과는 표 38에 또한 기재되어 있다. 대변에서의 접합자 계수치가 IVP 치료된 사료 그룹(#2, #3 및 #4)에 대해 숫자상 더 낮지만, 오직 살리노마이신을 함유하는 사료(#5 및 #6)는 음성 대조군과 비교하여 대변에서 접합자 계수치를 유의미하게 감소시켰다.
Figure pct00040
표 39는 문헌[Tierlynck et al. Avian Pathology, 2011, 40: 139-144 (Tierlynck et al., 2011)]에 기초한 장 병변 점수를 보여준다. 이는 소정의 총체적으로 가시적인 비정상에 대한 점수에 기여하는 조류의 그룹에 존재하는 미생물 불균형(dysbacteriosis)의 수준을 정량화하는 것을 목표로 하는 점수화 시스템이다. 더 높은 전체 점수(최대 10)는 더 높은 수준의 미생물 불균형을 반영하지만, 이는 콕시디아증이 존재하는 경우 손상될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해, 장 점수는 총체적 장 병리학을 단순히 반영한다. 몇몇 관찰된 장 비정상의 예는 도 27 내지 도 29에 도시되어 있다.
21일에서의 평균 장 통합성 점수는 이 실험에서 28일에서보다 낮았다. 21일에 장 점수를 증가시키는 장의 구역은 벌룬현상, 충혈, 반투명 및 상부 장에서의 비정상 내용물 및 직장에서의 소화되지 않은 사료 입자의 존재였다. 28일에 더 높은 점수에 기여하는 구역은 벌룬현상 및 충혈, 반투명 및 상부 장에서의 긴장이었다.
21일에도 28일에도 임의의 치료에 걸쳐 전체 장 건강 점수의 유의미한 차이가 없지만, 21일에 IVP의 더 높은 2개의 수준(0.3 및 0.1g/㎏) 및 살리노마이신을 함유하는 사료 둘 다는 대조군 및 IVP의 가장 낮은 수준(0.03g/㎏)과 비교하여 상부 장에서의 반투명 점수 및 직장에서의 소화되지 않은 사료 입자의 존재를 감소시켰다. 28일에, 0.3g/㎏에서의 IVP는 대조군과 비교하여 유의도에 근접한 전체 장 건강 점수를 생성시켰다(P=0.06).
Figure pct00041
Figure pct00042
42일에서의 수정된 사료 전환율은 21일에 전체 콕시디아증 병변 점수에 의해 유의미하고 강한 양의 상관관계(r=0.70)를 가졌다(즉, 더 높은 병변 점수는 더 높은 FCR과 연관되고, 이 병변에서의 변동은 FCR에서의 변동의 83%를 차지함). 이 관계식은 도 30에 그래프로 도시된다. 콕시디아 병변 코어는 21일에서의 대변에서의 접합자 수와 적절히 양으로 상관관계되었다(하나에서의 변동은 다른 하나에서의 변동의 62%를 차지함). 21일에서의 장 벌룬현상은 21일에서의 대변 접합자 계수치 및 42일에서의 FCR과 적적히 연관되었다. 21일에 직장에서의 소화되지 않은 사료 입자의 더 높은 수준의 존재는 42일에서의 더 높은 콕시디아 병변 점수 및 더 불량한(더 높은) FCR과 상관되었다. 28일에서의 전체 장 통합성 점수는 또한 21일로부터의 콕시디아 병변 점수 및 42일에서의 FCR과 적절한 양의 상관관계를 보여주었다.
토의 및 결론
적용된 콕시디아 시험감염이 아이메리아의 몇몇 종을 함유하지만, 오직 아이메리아 아세르불리나 유형은 시험감염의 시간에 양호한 포자형성을 보여주었다. 포자형성 조건은 일반적으로 모든 종에 대해 동일하다고 생각되고, 그래서 이 관찰은 특별하고, 이에 대한 이유는 공지되어 있지 않다. 오직 아이메리아 아세르불리나 유형 병변이 21일에 검사 시 보이므로 관찰은 확실히 정확하였다. 아이메리아 아세르불리나는 더 낮은 병원성 종이고, 아마도 사망률을 발생시키지 않고, 성장 속도에 더 적은 효과를 가졌다. 이것은 그러나 설사를 생성하고 사료 전환 효율성에 영향을 미칠 수 있다.
적용된 시험감염은 살리노마이신을 함유하는 사료 및 0.30g/㎏ IVP를 함유하는(그러나 더 낮은 용량 비율이 아니라) 사료에 의해 유의미하게 감소된 음성 대조군 그룹에서의 중등도의 콕시디아 병변을 생성하였다. 오직 살리노마이신 함유 사료는 21일에 대변에서 접합자 수준을 유의미하게 감소시킬 수 있지만, IVP 수준을 받는 모든 그룹은 대조군보다 숫자상 더 낮았다. 그래서 아이메리아 아세르불리나에 대해 IVP의 약간의 효과가 나타날 것이다.
0.30g/㎏의 IVP를 함유하는 사료를 받는 병아리의 조기 성장 속도는 (21일까지) 모든 다른 그룹보다 유의미하게 더 낮았고, 후속하여 이의 성장 속도가 개선되었지만, 이들은 실험에서 가장 가벼운 조류를 남겼다. 이것은 21일로 조류마다 더 낮은 사료 섭취와 연관되었다. IVP의 이 더 높은 수준을 갖는 사료는 밝은 황색이고, 이것을 먹는 조류는 축축한 황색의 대변을 나타냈다. 이 더 낮은 사료 섭취가 식미로 인하는지는 정확히 결정될 수 없고 추가의 평가를 요할 것이고, 묽은 대변의 출현은 이 포함 비율에서 약간의 성질의 좋지 않은 효과를 나타낼 수 있다.
전체 실험(0일 내지 42일)에 걸친 수정된 사료 전환율은 모든 치료에 의해 약간 감소하였지만, 음성 대조군과 비교하여 살리노마이신을 함유하는 사료에 의해 오직 유의미하게 그러했다. FCR은 21일에서의 콕시디아 병변 점수와 강하게 그리고 대변 접합자 수 및 약간의 장 통합성 점수(벌룬현상, 21일에 직장에서의 소화되지 않은 사료 입자 및 28일에 전체 장 점수)와 적절히 상관되었다. 42일에서의 FCR의 변동의 83%는 21일에서의 콕시디아 병변 점수의 변동에 의해 통계학적으로 설명될 수 있었다. 장 벌룬현상은 콕시디아증과 연관되는 것으로 흔히 기재되는 징후이다. 28일 장 점수가 또한 21일에 콕시디아 병변 점수와 적절히 상관관계되므로, 본 발명자들은 이의 병변이 해결된 후 장에서 계속하는 콕시디아 감염의 효과를 추정할 수 있다(콕시디아 병변은 28일에 관찰되지 않았다). 장 점수화 시스템은 브로일러 닭에서 미생물 불균형으로 공지된 병태의 존재 및 수준을 정량화하는 것을 목표로 하고, 이 병태는 콕시디아 감염에 의해 유발되는 것으로 생각된다. 장 통합성 점수는 21일에서보다 28일에 더 높고(즉, 더 심각하고), 존재하는 미생물 불균형의 수준을 제안할 것이다. 치료된 사료는 음성 대조군과 비교하여 통계 유의도(P=0.06)에 근접하는 수준에서 장 점수를 감소시켰다. 이와 관련하여, IVP는 살리노마이신 및 살리노마이신과 바시트라신아연에 대한 유사한 개선을 제공하였다. 이는 IVP가 미생물 불균형에 대해 약간의 보호 효과를 가질 수 있다는 합당한 증거일 것이다.
캄필로박터증
캄필로박터증은 캄필로박터(CB)라 불리는 박테리아에 의해 생기는 위장 질환이다. 호주에서, CB는 박테리아 위장염의 가장 흔한 원인 중 하나이고, 오염된 가금류의 소비와 자주 연관된다. 감염은 임의의 해에 발생할 수 있지만, 더 따뜻한 달에 더 흔하다. 2011년에, 캄필로박터는 미국에서의 식품 매개 질병의 4번째의 주요 원인이다.
CB에 의해 감염되는 대부분의 사람은 1주 내지 2주 지속하는 설사, 경련, 복통 및 열을 얻을 것이다. 증상은 보통 감염 후 2일 내지 5일 내에 발생한다. 설사는 혈액 또는 점막을 함유할 수 있다. 드문 경우에, CB는 혈류에 진입하고, 더 심각한 질환을 야기할 수 있다.
CB는 오염된 식품(주로 가금류), 물 또는 비저온살균 우유를 섭취하거나 마셔서 인간에게 주로 전파된다. CB는 감염된 사람과의 접촉을 통해 또는 박테리아를 보유하는 고양이, 개 및 농장 동물과의 접촉으로부터 또한 전파될 수 있다(도 3은 역학을 보여준다).
매우 어린 아동, 노인, 부족한 면역력을 갖는 사람 및 작업 농장 동물과 작업하는 사람이 더 큰 감염 위험에 있지만, 누구나 캄필로박터증을 얻을 수 있다.
대부분의 사람은 휴식 및 유체에 의해 캄필로박터증으로부터 회복할 것이다. 회복하는 데 보통 1주가 걸리지만, 2주만큼 길게 걸릴 수 있다. 치료는 설사로부터의 탈수를 돕도록 보통 약사로부터 구입 가능한 재수화 용액을 포함한다. 중증의 또는 복잡한 경우에, 항생제, 예컨대, 에리쓰로마이신은 질병의 기간을 감소시키도록 처방될 수 있다.
가금류 시체/고기의 CB 오염의 발생이 지속한다. CB 오염을 방제하는 방법은 세척 및 내장적출을 통한 가공 플랜트에 초점을 두었다. 그러나, CB 콜로니화가 조류의 장관에서 조절될 수 있는 경우, 도축 전에, 가공된 조류의 오염이 감소할 것이라고 생각된다.
실시예 4는 캄필로박터에 대한 소정의 천연 화합물의 항균제 활성을 개시한다.
실시예 4
실험실 작업
천연 화합물은 캄필로박터 유도된 질환의 예방 및 치료에서 잠재적인 사용에 대해 확인되었다. 시험관내 최소 저해 농도(MIC) 및 최소 살균성 농도(MBC)를 시험하였다.
1. 베르베린 클로라이드
2. 베르베린 설페이트
3. 아레콜린
4. 아네모닌
5. 마트린
6. 옥시마트린
7. 안드로그라폴라이드
8. 팔마틴
9. 바이칼린
재료 및 방법
임상 검사 표준 연구소(Clinical and Laboratory Standards Institute: CLSI) 가이드라인은 이 프로젝트에 채택되었다. 10개의 대표적인 균주는 선택되었다. 각각의 화합물에 시험된 농도는 1000, 500, 250, 125, 62.5㎍/㎖이었다. 사용된 양성 대조군은 테트라사이클린이었다.
Figure pct00043
결과
Figure pct00044
돼지의 질환
에스케리키아 콜라이 - 설사변(설사)
젖먹이 새끼돼지에서의 모든 질환 중에서, 설사는 가장 흔하고, 아마 가장 중요하다. 몇몇 발병에서, 이것은 높은 이환율 및 사망률을 책임진다. 잘 운영되는 무리에서, 치료를 요하는 임의의 하나의 시간에 3% 미만의 짚이 있어야 하고, 설사로부터의 새끼돼지 사망률은 0.5% 미만이어야 한다. 심각한 발병에서 사망률의 수준은 7% 이상까지 상승하고, 개별 비치료된 짚에서 100%까지 상승할 수 있다. 주요 박테리아 원인은 에스케리키아 콜라이이다. 새끼돼지에서의 설사변은 젖먹이 동안 임의의 연령에서 발생할 수 있지만, 5일 전에 및 7일과 14일 사이에 대개 2개의 피크 기간이 있다.
급성 질환의 경우, 유일한 징후는 완벽히 양호한 돼지가 죽었다고 발견된다는 것일 수 있다. 사후 검사는 중증 급성 장염을 보여주고, 너무 급작스러워서, 외부적으로 설사변의 증가가 없을 수 있다. 임상적으로 영향을 받는 새끼돼지는 떨면서 함께 모이거나 코너에 누워 있다. 직장 및 꼬리 주위의 피부는 젖어 있다. 펜 주위를 보면 희미하거나 샐러드 크림색의 점조도 설사변의 증거가 있을 수 있다. 많은 경우에, 독특한 냄새가 있다. 설사가 진행되면서, 새끼돼지는 눈이 쑥 들어가고 두꺼운 가죽 같은 피부를 가지면 탈수가 된다. 설사변은 대개 다른 새끼돼지의 피부에 달라붙어서 오렌지색 내지는 백색이 된다. 사망 전에 새끼돼지는 이들의 옆구리의 패들링(paddling) 및 입에서의 거품이 발견될 수 있다.
아급성 질환에서, 증상은 유사하지만, 새끼돼지에 대한 효과는 덜 극적이고, 더 연장되고, 사망률은 낮춰지는 경향이 있다. 이 유형의 설사변은 대개 7일령 내지 14일령에 보여서 대개 백색 내지 황색인 희미하거나 얇은 샐러드 크림색의 점조도 설사에 의해 나타난다.
새끼돼지 설사변은 호주 돼지 산업에 매년 $ 700만 초과가 들게 한다고 예상된다. 설사변의 발생 및 유형, 건강 비용 및 회복 속도는 개별 양돈장에서 이 손실의 정도를 결정한다. 설사방지 물질, 예컨대, 벤토나이트 또는 카올린 점토는 장 벽을 보호하도록 사용된다. 음료수에 대한 전해질의 첨가는 또한 자주 사용된다. 항생제는 장에서의 박테리아의 집단을 감소시키도록 사용되지만, 내성이 진행되면서 약물 남용은 회피될 필요가 있다. 현재의 항생제 약제는 하기 표 43에 기재되어 있다.
Figure pct00045
실시예 5는 돼지 질환에 대한 소정의 천연 화합물의 항균제 활성을 개시한다.
실시예 5
실험실 작업
천연 화합물은 설사변 유도 에스케리키아 콜라이를 포함하는 돼지에서의 감염성 장 질환의 예방 및 치료에서 잠재적인 사용을 위해 확인되었다. 시험관내 최소 저해 농도(MIC)를 시험하였다. 시험된 화합물은 하기이다.
1. 베르베린 클로라이드
2. 베르베린 설페이트
3. 아레콜린
4. 아네모닌
5. 마트린
6. 옥시마트린
7. 안드로그라폴라이드
8. 팔마틴
9. 바이칼린
재료 및 방법
임상 검사 표준 연구소(CLSI) 가이드라인은 문헌[Wiegland et al. "Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances" Nature Protocols 2008; 3(2): 163-175]로부터 채택된 MIC를 평가하기 위한 방법에 따라 이 프로젝트에 채택되었다. 대표적인 균주는 선택되었다. 각각의 화합물에 시험된 농도는 1000, 500, 250, 125, 62.5㎍/㎖이었다. 사용된 양성 대조군은 테트라사이클린이었다.
Figure pct00046
결과
베르베린 및 팔마틴은 설사변을 발생시키는 에스케리키아 콜라이의 모든 5개의 균주에 대해 125㎍/㎖의 MIC를 나타냈다. 테트라사이클린 결과는 MIC에 대해 얻은 표준 결과와 인라인에 있었다.
클로스트리듐 디피실
클로스트리듐 디피실(CD)은 설사로부터 삶을 위협하는 결장 염증의 범위의 증상을 발생시킬 수 있는 박테리아이다. CD로부터의 질병은 대개 장기간 관리 설비에서 노인 성인에 가장 흔히 영향을 미치고, 통상적으로 항생제 약제의 사용 후 발생한다. 그러나, 연구는 항생제 사용의 병력 또는 건강 관리 설비에 대한 노출이 없는 젊은이 및 건강한 개체와 같은 높은 위험이 전통적으로 고려되지 않는 사람 중에서 CD 감염의 증가하는 속도를 보여준다. 미국에서 매년, 약 50만명의 사람은 CD 독소의 방출의 결과로서 아프고, 최근에는, CD 감염은 더 흔해지고 중증이고 항균제 내성의 증가에 의해 치료하기 어렵다.
몇몇 사람은 이들의 장에서 박테리아 클로스트리듐 디피실을 보유하지만, 감염을 여전히 확산시킬 수 있더라도 결코 아프지 않았다. 징후 및 증상은 보통 항생제의 과정을 시작한 후 5일 내지 10일 내에 발생하지만, 제1 일만큼 곧 또는 나중에 2개월까지 발생할 수 있다. 경증 내지 중등도의 CD 감염의 가장 흔한 증상은 물 설사 및 경증의 복부 경련이다. 중증의 경우에, 사람은 탈수되는 경향이 있고, 입원을 필요로 할 수 있다. 결장은 염증이 되고(결장염), 때때로 출혈하거나 고름을 생성할 수 있는 날 조직의 패치를 형성할 수 있다.
CD 감염을 대부분 발생시키는 항생제는 플루오로퀴놀론, 세팔로스포린, 페니실린 및 클린다마이신을 포함한다. 얄궂게도, CD에 대한 표준 치료는 또 다른 항생제이다. 경증 내지 중등도 감염의 경우, 경구로 섭취된 메트로니다졸은 FDA 허가되지 않더라도 대개 처방된다. 가장 중증인 경우에, 경구로 섭취된 반코마이신이 처방된다. 피닥소미신은 CD를 치료하지만 상당히 더 비용이 드는 또 다른 허가된 옵션이다. CD를 갖는 사람의 20% 이하는 다시 아프다. 2 이상의 재발 후, 추가의 재발의 비율은 65%까지 증가한다. CD 재발을 위한 치료는 통상적으로 반코마이신을 수반한다. 대변 미생물총 이식 또는 변 이식은 고려될 수 있지만, 아직 FDA 승인되지 않는다.
따라서, 본 개시내용은 베르베린 알칼로이드를 투여하는 것을 포함하는 인간에서 속 클로스트리듐으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환을 예방하거나 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 개시된 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료가 포자 형성을 저해할 수 있다는 것을 고려한다. 항생제 치료 후 포자의 과성장은 인간에서 문제인 것으로 인정된다. 따라서, 본 개시내용은 본 명세서에 개시된 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료의 투여에 의한 항생제 치료 후 과성장하는 클로스트리듐 디피실 포자를 예방하는 것에 관한 것이다.
실시예 6은 클로스트리듐에 대한 소정의 천연 화합물의 항균제 활성을 개시한다.
실시예 6
실험실 작업
천연 화합물은 클로스트리듐 디피실의 예방 및 치료에서 잠재적인 사용에 확인되었다. 시험관내 최소 저해 농도(MIC) 및 최소 살균성 농도(MBC)를 시험하였다. 클로스트리듐 퍼프린젠스를 또한 시험하였다. 시험된 천연 화합물은 하기이다:
1. 베르베린 클로라이드
2. 베르베린 설페이트
3. 아레콜린
4. 아네모닌
5. 마트린
6. 옥시마트린
7. 안드로그라폴라이드
8. 팔마틴
9. 바이칼린
재료 및 방법
임상 검사 표준 연구소(CLSI) 가이드라인은 이 프로젝트에 채택되었다. 가이드라인은 문헌[Wiegland et al. "Agar and broth dilution methods to determine the minimal inhibitory concentration (MIC) of antimicrobial substances" Nature Protocols 2008; 3(2): 163-175]로부터 채택된 MIC를 평가하기 위한 방법에 따라 채택되고, MBC를 평가하는 방법은 문헌[Chen "Novel therapeutic approaches targeting Clostridium difficile", in: Biology Dissertations, Boston (Mass.): Northeastern University, 2014]로부터 채택되었다. 대표적인 균주는 선택되었다. 각각의 화합물에 시험된 농도는 1000, 500, 250, 125, 62.5㎍/㎖이었다. 사용된 양성 대조군은 테트라사이클린이었다.
결과
Figure pct00047
실험 데이터
최소 저해 농도(MIC) 검정은 시험 물질로서 베르베린 설페이트 및 확립된 대조군으로서 반코마이신을 사용하여 클로스트리듐 퍼프린젠스의 괴사성 장염 균주 및 클로스트리듐 디피실의 임상 단리물에 대해 수행되었다. 98.0%의 순도를 갖는 베르베린 설페이트는 Sichuan BioFarm Inc.로부터의 천연 추출물로부터 얻어졌다. 클로스트리듐 퍼프린젠스에 대한 베르베린의 MIC는 125㎍/㎖이지만, 성장의 부분 저해는 62.5㎍/㎖의 농도에서 보일 수 있어서, 진정한 MIC가 이들 2개의 값 사이에 있다는 것을 나타낸다.
클로스트리듐 퍼프린젠스에 대한 베르베린의 최소 박테리아 농도(MBC)는 MIC(125㎍/㎖)와 동일하고, 생존가능 세포의 100% 사멸은 이 농도에서 관찰되었다. 클로스트리듐 디피실에 대한 베르베린의 MIC는 500 내지 1000㎍/㎖인 것으로 발견되었다(반복실험 사이의 변동). 클로스트리듐 디피실에 대한 베르베린의 MBC는 1000㎍/㎖였다. 클로스트리듐 디피실에 대한 베르베린에 대한 MIC 및 MBC 값은 이전의 연구로부터의 값과 동일하거나 2배 희석 내였다. 반코마이신 MIC는 클로스트리듐 퍼프린젠스 및 클로스트리듐 디피실 둘 다에 대해 예상된 범위 내였다.
실시예 7
이 연구는 사료를 통해 상업용 브로일러 닭에 경구로 투여될 때 천연 발생 식물 화합물 IRP001 클로라이드(베르베린 클로라이드)의 조직 잔류물을 결정하는 것을 목표로 한다.
요약
브로일러 닭은 이들의 사료로 혼합된 0.3g/㎏ 또는 0.03g/㎏ IRP001 클로라이드를 받거나, 첨가제가 없는 정기적인 사료(즉 대조군 그룹)를 받았다. 치료는 조류를 (10마리의 그룹에서) 펜에 감금한 직후 시작하고, 치료는 35일 동안 지속하였다. 조류를 조직 수집 동안 35일에 안락사시키거나, 7일 이하 동안 정기적인 사료에서 35일 넘게 공급하여서 워시아웃 기간 후 잔류물을 조사하였다. 2개의 다른 그룹은 이들의 사료로 혼합된 0.3g/㎏ 또는 0.03g/㎏으로 28일 동안 IRP001 클로라이드 사료 첨가제(즉, 1㎏의 사료 중의 0.3g의 IRP001 클로라이드 또는 1㎏의 사료 중의 0.03g의 IRP001 클로라이드)를 받고, 안락사 및 조직 수집 전 14일의 워시아웃 기간 동안 후속하여 정기적인 식품을 공급받았다.
IRP001 클로라이드를 (각각의 우리에서 가슴, 윗다리 및 아랫다리로부터) 각각의 조류로부터 취한 3개의 근육 조직의 1g의 샘플로부터 추출하였다. IRP001 클로라이드의 잔류 질량을 LC-MS/MS를 이용하여 결정하였다. 상기 방법은 IRP001이 2ng의 IRP001/g 조직의 하한에 의해 검출되게 하였다. 검정은 각각의 검정 실행 동안 완전히 검증되고, 5ng/g 조직에서 ±20% 정확도보다 더 양호하게 정량적인 것으로 입증되었다. 2ng의 IRP001/g 미만의 수준은 검정의 기준치 노이즈 내인 것으로 발견되고, 검출 하한(LLOD)보다 낮고, 즉 IRP001은 검출 가능하지 않았다.
일 실시형태에서, 상기 방법은 IRP001 클로라이드가 2ng/g 조직에서의 확실성으로 검출될 수 있도록 최적화되었다. 검정은 각각의 검정 실행 동안 완전히 검증되고, 4ng/g 또는 5ng/g 조직에서 +20% 정확도보다 더 양호하게 정량적인 것으로 입증되었다. 1ng/g 조직 이하의 수준은 검정의 기준치 노이즈 내인 것으로 발견되고, 정량화의 하한(LLOQ)보다 낮았다.
베르베린의 잔류물은 높은 IRP001 클로라이드 농도에서 35일 동안 피딩 후 검출 가능하고 정량화 가능하였다. 워시아웃 없이 35일 피딩 후 높은 사료 첨가제 농도에서의 평균 잔류물 수준(n = 3)은 각각 가슴, 아랫다리 및 윗다리 조직에서의 조직의 1그램당 6.1ng, 5.5ng 및 11.6ng이었다. 워시아웃 효과는 모든 3개의 근육 조직에서 높은 사료 첨가제 농도에서 명확하여서, 4일 워시아웃 후 LLOQ보다 낮은 대략 1ng/g의 수준에 도달하였다. 사료 첨가제의 낮은 농도에서 평균 잔류물 수준은 모든 경우에 워시아웃과 함께 또는 이것 없이 LLOQ보다 낮은 1ng/g 미만이었다.
연구에서 결정된 모든 잔류물 수준은 워시아웃 기간 없이 0.3g의 IRP001 클로라이드/㎏(사료)에서 35일 피딩 후 측정될 때에도 13ng/g의 공칭된 안전한 잔류물 수준보다 낮았다.
높은 사료 첨가제 농도 후 간에서의 잔류물 수준은 워시아웃 없이 13ng/g 초과이지만, 워시아웃의 1일 후 13ng/g 미만이었다. 닭 간의 평균 소비가 제한된다는 것을 고려하면, 간에서의 IRP001의 수준은 우려에 대한 원인을 나타내지 않는다.
전체로 취해진 데이터는 IRP001 클로라이드 공급된 닭으로부터의 닭고기의 소비로부터 생긴 암의 위험이 0.3g의 베르베린/㎏(사료) 이하의 사료 첨가제 수준에서 100만 미만이라는 것을 나타낸다.
닭 근육(즉, 닭고기)에서의 베르베린 수준은 0.03g의 IRP001/㎏(사료)의 투약 후, 또는 0.3g의 IRP001/㎏(사료)에서의 투약 후 워시아웃의 4일 후 LLOD보다 낮았다.
도입
베르베린을 포함하는 베르베린 알칼로이드는 안전하다. 베르베린은 많은 해 동안 인간에 의한 식이 보충제로서 사용되었고, 캡슐 형태로 몇몇 제조사로부터 구입 가능하다. 이것은 캡슐마다 베르베린 클로라이드의 400㎎만큼 높은 용량에서 매일 1회 또는 2회 사용을 위해 판매된다. 추가로, 본 발명을 발생시키는 실험에서, 불리한 반응 또는 예상치 못한 사건은 42일에 걸쳐 1㎏의 상업용 사료에서 1g 베르베린의 용량에서 베르베린에 의해 치료된 브로일러에서 관찰되지 않았다(실시예 8 참조).
어딘가에 기재된 바대로, 미국에서, 식품의약청(FDA)은 연방 식품, 약품 및 화장품 조항(FD&C Act)에 의해 관리되는 인간 및 동물 약물 및 사료 첨가제의 허가를 담당한다.
FD&C 조항은 식품 생성 동물에서 사용하기에 의도되는 화합물이 안전하도록 보이고, 이들 화합물에 노출된 동물로부터 생성된 식품이 사람에 의한 소비에 안전하도록 보일 것을 요한다. 특히, 사람 또는 동물에 의해 섭취될 때 암을 유도하는 것으로 발견된 임의의 화합물의 식품 생성 동물에서의 사용은, 소정의 조건이 충족되지 않는 한(소위 "다이에틸스틸베스트롤(DES) 단서"), 법규(21 CFR Part 500, Subpart E - Regulation of carcinogenic compounds used in food-producing animals(식품 생성 동물에서 사용되는 발암성 화합물의 규제))에 의해 금지된다. DES 단서하에 의심되는 발암성 화합물의 사용은 그 화합물의 "무 잔류물"이 실행에서 이행되기에 합당하게 확실한 사용의 조건하에 식품 생성 동물로부터 생성된 식품에서 발견된다는 검사의 규정된 방법에 의해 결정될 수 있는 경우 금지되지 않는다.
따라서, FDA가 베르베린이 발암성 화합물로서 조절되지 않아야 한다고 결정하는 경우, 미국 정부는, "무 잔류물" DES가 적용하지 않는 한, 식품 생성 동물에서 베르베린의 사용을 금지한다.
용어 "무 잔류물"은 소비자에게 암의 사소한 위험을 제시하기에 너무 낮은 식용 조직에 남은 임의의 잔류물을 의미한다. 더 구체적으로, 암의 사소한 위험은 위험의 100백만 개 중 1개의 증가로 정의된다.
베르베린의 기록된 안전성에도 불구하고, 독성학 연구는 미국 정부(국립 독성 조사 협회(National Centre for Toxicological Research))에 의해 주문되고, 이 연구는 고용량 만성 설치류 연구에서 잠재적인 발암성을 확인하였다.
GRAS 상태를 얻기 위한 결과로서, 닭고기의 통상적인 생애 소비를 고려하면 허용 가능한 닭고기에서의 베르베린의 최대 잔류물을 예상하는 것이 필요하였다. 닭 소비로부터 생긴 암의 100만 중 1의 위험보다 낮게 보장하도록, 최대 허용 가능한 잔류물이 닭고기(즉, 가슴 또는 다리 근육 조직)의 1그램당 13ng의 베르베린인 것으로 예상되었다.
개시된 사료 첨가제가 기재된 용량에서 GRAS 상태에 안전하고 적합한지를 조사하기 위해, 적합한 잔류물 실험을 수행하였다. Invetus Pty Ltd는 실험을 수행하고, 조직을 수집하도록 계약하고, Monash University는 베르베린에 대한 조직 샘플을 평가하도록 계약하였다.
잔류물 연구 설계
브로일러 닭을 사용한 이 연구에 대한 프로토콜은 부록 B로서 실시예에 첨부된다. 사료 첨가제의 높은 농도 및 낮은 농도를 나타내는 0.3g/㎏ 사료 및 0.03g/㎏ 사료인 IRP0001 클로라이드의 2개의 농도를 조사하였다.
180마리의 조류를 18개의 펜으로 나누고, 각각은 10마리의 조류를 함유한다. 브로일러 닭에 대한 통상적인 영농 과정을 대표하도록, 시험 조류는 높은 농도 또는 낮은 농도에서 35일 동안 첨가제가 있는 사료를 받았다. 35일 후 각각의 첨가제 농도에서의 하나의 그룹을 조직 수집을 위해 안락사시켰다(각각의 펜에서의 6마리의 가장 큰 조류).
IRP001 클로라이드를 함유하는 사료가 정기적인 사료에 의해 대체될 때 IRP001 클로라이드의 제거(대사 및 배설)이 명확한지를 조사하기 위해, 다른 그룹은 35일 동안 IRP001 클로라이드를 받고, 이후 안락사 및 조직 수집 전 1일, 2일, 4일 또는 7일 동안 정기적인 사료가 주어졌다. 2개의 추가적인 그룹은 28일 동안 IRP001 클로라이드를 받고, 이후 14일(즉, 14일 워시아웃) 동안 정기적인 사료를 받았다. 대조군 조류가 연구에 걸쳐 정기적인 사료를 받는다는 것을 제외하고는 정확히 동일한 방식으로 병행하는 대조군 그룹을 치료하였다. 모든 경우에, 근육 조직의 3개의 영역(가슴, 상퇴 및 하퇴)으로부터 샘플을 취했다. 샘플을 수집하고, 동결시키고, 분석을 위해 선적하였다. 표 46은 잔류물 연구에서 조류의 18개의 그룹의 각각에 대해 사용된 IRP001의 농도 및 피딩 섭생을 보여주는 연구 설계를 요약한다.
Figure pct00048
LC-MS/MS 검정의 성능
조직 추출에 사용된 검정 방법 및 LC-MS/MS의 상세내용은 부록 A에 요약되어 있다. 베르베린의 검정은 조직 추출이 검증된 후 초기에 단순한 용액으로부터 및 후속하여 검정에 대한 방법으로부터 교정되었다.
조직 샘플로부터의 베르베린 피크는 2ng/g(조직)만큼 낮은 농도에서 검출될 수 있지만, 1ng/g(조직)에서의 분석물질 캐리오버 및 조직 매트릭스 효과로 인한 간섭은 IRP001의 정량화가 이 농도 또는 더 낮은 농도에서 어렵게 만든다. 5ng/g(또는 몇몇 경우에 4ng/g)에서, 검정은 ±20%만큼 정확한 진정한 분석물질 농도에서 검증될 수 있었다. 결과 부문에서 5ng/g 초과의 IRP001 수준은 절대값으로 매겨지고, 2 내지 5ng/g의 IRP001 수준은 LLOQ보다 낮다고 생각되고, 2ng/g 미만의 값을 나타내는 출력은 LLOD보다 낮은 기준치 노이즈 내에 있다고 생각되고, 그러므로 검출 불가능하다.
일 실시형태에서, 조직 샘플로부터의 베르베린 피크는 1ng/g(조직)만큼 낮은 농도에서 검출될 수 있지만, 1ng/g(조직)에서의 분석물질 캐리오버 및 조직 매트릭스 효과로 인한 간섭은 IRP001의 정량화가 이 농도 또는 더 낮은 농도에서 어렵게 만들었다. 5ng/g(또는 몇몇 경우에 4ng/g)에서, 검정은 ±20%만큼 정확한 진정한 분석물질 농도에서 검증될 수 있었다. 현실적으로 2ng/g 미만의 농도는 정량화의 하한(LLOQ)보다 낮다고 생각될 수 있다. 피크 검출의 하한은 1 내지 2ng/g이었다.
결과
각각의 사료 첨가제 그룹으로부터의 3마리의 조류로부터의 조직 샘플을 Monash 분석 팀에 의해 받고, LC-MS/MS에 의해 분석하였다. 각각의 대조군 그룹으로부터의 단일 샘플을 평가하였다.
표 47은 각각의 그룹에서 3마리의 조류로부터 절제된 각각의 근육 조직에 대해 결정된 베르베린의 평균 농도 및 표준 편차를 보여준다. 각각의 대조군 그룹으로부터 하나의 대표를 평가하고, 각각의 대조군 그룹으로부터의 하나의 대표는 평가되고, 이 값은 결과 표에 LLOD 미만 "<LLOD", 즉 검출 불가로 표시되어 효과적으로 0인 것으로 발견되었다.
대체로 말해서, 가슴 조직 샘플, 상부 및 아랫다리 근육 샘플은 비교 가능하고, 결정된 낮은 농도에도 불구하고 데이터는 분명하고 타당한 경향을 보여준다. 0.03g/㎏(사료)의 낮은 사료 첨가제 농도에서, 베르베린의 평균 잔류물은 워시아웃과 함께 또는 이것 없이 모든 경우에 검출 불가능하였다(즉, LLOD 및 LLOQ 미만).
0.3g/㎏ 사료의 더 높은 IRP001 농도에서, 35일 후 평균 베르베린 잔류물은 정량화 가능한 범위; 가슴에 대해 6.1±1.6, 아랫다리에 대해 5.5±3.0ng/g 및 윗다리 조직에 대해 11.6 ±6.6ng/g에 있다. 조직 둘 다에서, 점진적인 워시아웃이 명확하였다. 베르베린 잔류물은 1일 및 2일 후 떨어지고, 4일 후 베르베린 수준은 LLOD보다 낮았다.
Figure pct00049
표 48은 각각의 그룹에서 3마리의 조류로부터 절제된 간 조직에 대해 결정된 베르베린의 평균 농도 및 표준 편차를 보여준다. 각각의 대조군 그룹으로부터의 하나의 대표는 평가되고, 이 값은 결과 표에 LLOD 미만 "<LLOD", 즉 검출 불가로 표시되어 효과적으로 0인 것으로 발견되었다.
Figure pct00050
결론
연구에서 결정된 근육 조직(닭고기)에서의 모든 잔류물 수준은 워시아웃 기간 없이 0.3g 베르베린/㎏(사료)에서 35일 피딩 후 측정될 때에도 13ng/g의 공칭된 안전한 잔류물 수준보다 낮았다. 0.03g/㎏(사료)의 더 낮은 IRP001 농도에서의 잔류물 수준은 모든 경우에 조직의 1그램당 2ng 미만인 것으로 결정되고, 검출 불가능하다고 생각될 수 있다.
간에서의 잔류물 수준은 조류에 0.3g의 IRP001/㎏ 사료가 공급된 후 정량화의 한계보다 높고, 7일에 걸쳐 워시아웃 기간에 의해 감소하고, 14일 워시아웃 후 정량화의 한계보다 낮게 감소하였다. 조류에 0.03g의 IRP001/㎏ 사료가 공급된 후 간에서의 잔류물 수준은 워시아웃 전 및 후 검출의 한계보다 낮았다.
부록 A
분석 방법
베르베린을 내부 표준품으로서 테트라하이드로팔미틴을 사용하여 LC-MS/MS에 의해 평가하였다.
조직 샘플의 제조
1. 대략 1g의 조직을 절단하고, M-관으로 칭량하였다. 조직을 균질화에 준비될 때까지 동결기에서 -20℃에서 저장하였다.
2. 조직의 각각의 그램에 대해, 2 용적의 MilliQ 물을 관에 첨가하였다.
3. M-관을 GentleMACS 균질화기에 부착시키고, 프로그램 방법 RNA_01_01(60초)을 3회 실행하여서, 조직이 완전히 균질화되도록 보장하였다.
4. 조직 균질액을 Eppendorf 관으로 200㎕ 분취액 중에 분포시켰다.
5. 조직 균질액의 각각의 200㎕의 분취액에, 10㎕의 내부 표준 용액, 이어서 600㎕의 100% 메탄올을 첨가하였다. 샘플을 3x10초 동안 최대 환경에서 와류시키고, 이후 3분 동안 10,000rpm에서 원심분리하였다.
6. 100㎕의 상청액을 분석을 위해 LC 바이알로 옮겼다.
방법 검증
1. 상기 방법은 선택도, 선형성, LLOQ, 정확성, 정확도, 회수, 안정성 및 매트릭스 효과에 대해 검증되었다.
2. 선택도는 각각 5회 반복실험에 의해 500ng/g 이하의 농도에서 개별 분석물질에 의해 스파이킹된 샘플을 제조함으로써 평가되었다. 피크 신호는 (분석물질에 의해 스파이킹된) 보정 표준품과 비교되어서, 간섭이 없도록 보장하였다.
3. LLOQ를 평가하기 위해, 5ng/g 및 10ng/g 표준품을 6회 반복실험에서 제조하였다. LLOQ는 정확도 및 정확성 둘 다가 20% 이하인 보정 곡선의 최저 농도에서 결정되었다.
4. 정확성 및 정확도의 표시를 위해, 20, 50, 100 및 500ng/g의 4개의 농도 수준을 제조하였다(각각 5회 반복실험). 정확성은 일반 농도로부터의 바이어스(%)로서 표시되고, 정확도는 반복실험의 상대 표준 편차(RSD)로서 표시된다.
5. 회수를 평가하기 위해, 블랭크 조직을 추출하고 이후 분석물질 용액에 의해 스파이킹하여 500ng/g 이하의 다양한 농도 수준을 생성시킴으로써 매트릭스 회수 샘플을 제조하였다(각각 5회 반복실험). 회수는 추출된 샘플의 평균 피크 면적 대 매트릭스 회수 샘플의 평균 피크 면적의 비율에 의해 정의되었다.
6. 벤치-탑 안정성을 평가하기 위해, 20, 50, 100 및 500ng/g의 4개의 농도 수준을 각각 5회 반복 실험에서 준비하고, 여기서 이들을 추출 전에 30분 동안 실온에서 저장하였다. 평균 피크 면적은 새로 제조된 표준품의 것과 비교되었다.
7. 매트릭스 효과(matrix effect: ME)를 평가하기 위해, 니트 용액 중의 20, 50, 100 및 500ng/g의 4개의 농도 수준을 각각 5회 반복실험에서 제조하였다. ME는 회복 샘플의 평균 피크 면적 대 니트 표준 샘플의 것의 비율로서 정의되었다.
Figure pct00051
부록 B
순응도
이 조직 잔류물 고갈 연구는 SOP를 이용하는 동의된 프로토콜 및 우수한 과학 실행에 따라 수행되었다.
연구 설계
a. 실험 유닛: 실험 및 관찰 유닛 둘 다는 개별 동물이었다. 통계 유닛은 치료 그룹이었다.
b. 동물 모델: 사료 섭취, 매일의 물 소비, 중량 변화, 사망률 및 조직에서의 마커 잔류물은 결과 매개변수로서 사용되었다.
c. 포함 기준: 동물은 하기에 기재된 기준을 만족시키는 경우 연구에 선택되었다.
d. 배제 및 제거 기준: 조사자의 견해에서 수취 시 약화되거나, 질환, 손상을 겪거나, 달리 연구에서의 포함에 부적합한 동물은 배제되었다.
선택에 후속하여, 연구에서의 계속에 적합하지 않다고 생각될 수 있는 동물은 스폰서 또는 조사자의 기록된 동의에 의해 오직 제거될 것이다. 어떠한 제거에 대한 이유는 원시 데이터 및 연구 보고서에서 완전히 기록되고 정당화될 것이다. 연구로부터 제거된 어떠한 동물은 적절한 수의학적 관리를 받을 것이다.
e. 할당: 브로일러 병아리: 수취 시 포함 기준을 만족시키는 180마리의 브로일러 병아리는 18개의 개별 치료 그룹(각각 10마리의 조류)에 수송 컨테이너로부터 제거되면서 순차적으로 할당되었다. 할당 및 무작위화의 방법은 원시 데이터 및 연구 보고서에 기재되었다.
f. 맹검: 이용 불가.
조사 중인 수의학적 제품(IVP)
배치 번호, 유효 기일, 수취 및 용법을 포함하는 모든 제제 상세내용을 기록하였다.
a. 조사 중인 수의학적 제품: 100% IRP001 Cl로서의 IRP001 Cl.
b. 공급원: IVP는 스폰서에 의해 공급되었다.
c. 저장: IVP는 온도 지정된 구역에서 주변 온도에서 저장되었다. IVP의 저장 위치 및 조건을 기록하였다.
d. 안전성: SDS 또는 이의 균등물(이용 가능한 경우)은 스폰서에 의해 제공되었다.
e. 검정: 분석 증명서(이용 가능한 경우)는 IVP에 대해 제공되었다.
f. 약물 폐기: 모든 남은 IVP의 폐기를 기록하였다.
치료
a. 용량 계산: 용량은 사료에서 IRP001 Cl의 고정된 농도(0.03 또는 0.1g/㎏ IRP001 Cl)에 기초하였다.
b. 용량 준비: 분말화된 IRP001 Cl은 로우 상업용 사료 성분에 의해 도입되고, 이후 기재된 바대로 사료에서 최종 농도를 제공하도록, 예를 들어, "콘트리트 혼합장치" 타입 장치에서 완전히 혼합되었다.
c. 용량 투여의 방법: 연구 동물에 하기 표 49에 기재된 치료 섭생에 따라 투약하였다. 약제가 있는 사료는 이의 유일한 사료 공급원으로서 자유식으로 관련 치료에서 닭에게 제공되었다.
Figure pct00052
사건의 스케줄
Figure pct00053
시험 시스템
동물 상세내용을 원 데이터에 기록하였다. 즉, 종, 브로일러 닭; 수, 180; 공급원, 상업용(90의 하나의 배치); 연령, 1일령.
동물 관리
a. 동물 복지: 연구 동물은 유사하게 이들의 복지에 대해 듀 관련하여 관리되었다. 연구 동물은 동물 윤리 위원회(AEC) 요건에 따라 관찰되고, "동물 관리의 기록"은 완료되었다.
b. 건강 관리: 임의의 일상적인 예방학적 치료는, 필요한 경우, 가능한 한 빨리 주어지고, 기록되었다(생성물 명칭, 배치 번호, 유효 기일, 용량, 투여의 경로 및 일자(들)).
연구 동물은 0일에 시작하여 제자리에서 표준 조작 프로토콜(SOP)에 따라 매일 2회 관찰되었다. 추가의 검사를 요하는 임의의 건강 문제는 기록되었다.
모든 건강 문제 및 부작용은 하루의 작업 일자 내에 조사자에게 보고되어야 한다. 조사자에 의해 관련된 생성물로서 특징지어진, 임의의 부작용은 사망을 발생시키고, 삶을 위협하고, 다수의 동물을 포함하거나, 인간 부작용은 하루의 작업 일자 내에 기록되고 스폰서 및 AEC에 보고되어야 한다.
일반 수의학적 관리 및 절차는 수행될 수 있고, 원시 데이터에 기재된다. 동반 약제는, 조사자, 및 스폰서(관련된 경우)로부터의 이전의 허가에 의해, 표준 관리 실행 및 인간 이유에 대해 투여될 수 있다. IVP와 유사한 치료는 투여되지 않는다. 모든 동반 약제는 기록되어서, 사용된 재료의 식별(생성물 명칭, 배치 번호 및 유효 기일), 동물 번호(들), 사용 이유, 투여 경로, 투여되는 용량 및 날짜(들)를 제공하고, 원시 데이터(실험 로그) 및 연구 보고서에 포함된다.
손상 또는 질병이 연구 동물의 안락사 또는 사망을 발생시키는 경우, 이는 기록되고 가능한 경우 수의사에 의해 사후분석 수행되어야 한다. 사망의 개연성이 있는 원인을 포함하는 "사후 보고서"는 원시 데이터에 포함된다.
치료와의 이들의 관계를 포함하는, 모든 건강 문제, 부작용 및 동물 사망률은 연구 보고서에 포함되었다.
c. 감금: 닭을 허가된 동물 설비에서 2개의 별개의 분리된 제어된 환경 룸에서 치료 그룹에 의해 목적 건축된 닭 바닥 펜에서 유지시켰다. 하나의 룸은 모든 약제가 없는 13 내지 18 그룹(포함) 조류를 감금하고, 제2 룸은 모든 약제가 있는 조류 - 1 내지 12 그룹(포함)을 감금한다. 각각의 펜은 대략 1.5㎡의 바닥 공간을 갖는다. 닭을 일반 상업용 실행에 따라 짚에서 키웠다.
49일까지 18개의 바닥 펜, 펜마다 10마리의 닭이 있다. 연구 결론에서의 각각의 펜의 최대 닭 중량은 호주 직업 규약에서 닭고기에 대해 40㎏/㎡의 추천된 최대의 바로 아래에 있다.
주의 - 13 내지 18 그룹(포함)에서의 조류(비치료된 대조군 동물)는 약제가 있는 1 내지 12 그룹 조류에 유사하게, 그러나 물리적으로 별개의 격리 룸에서 유지되어서, 연구 동안 교차 오염을 보장하였다.
d. 실험 식이: 제제화된 상업용 초기 사료, 이어서 성장기 사료 배급량은 연구에 걸쳐 공급되었다. 사료 조성을 보여주는, 사료 백 라벨의 카피, 또는 균등물은 원시 데이터에 포함되었다.
e. 사료 및 물 섭취: 첨가된 사료를 매일 칭량하고 기록하고, 치료 그룹에 의해 사료 섭취를 매일 계산한다. 물 용적을 매일 측정하고 기록하고, 치료 그룹에 의해 물 섭취를 매일 계산한다.
f. 동물 폐기: 연구 동물을 AEC 허가에 따라 인간적으로 안락사시키고, 사건의 스케줄에 기재된 바대로 간격으로 기록하였다(표 50).
연구 절차
a. 실험 로그: 연구 동안 모든 예정된 및 예정되지 않은 사건을 기록하였다.
효과의 평가
a. 체중: 닭을 0일(그룹 중량) 및 7일, 14일, 21일, 28일 및 35일에 칭량한다 - 개별 동물 중량을 기록하였다. 저울을 보정된 시험 중량에 의해 칭량 전 및 후 확인하고 기록하였다. 연구 종료 시의 체중을 그룹 사이에 비교하여, (있다면) 치료 효과를 결정하였다.
b. 검사: 개별 임상 검사는 총체적 병리학 및 조직 수집의 시간에 안락사에서 수행되었다. 임상 검사를 기록하였다. 디지털 스틸 영상을 적절한 바대로 기록할 수 있다.
c. 관찰: 조류를 일반적인 웰빙, 통상적으로 오전의 8am 전 및 오후의 4pm 후 일반적인 웰빙에 대해 1일 2회 조사하였다. 따라서, 관찰 사이의 통상적인 간격은은 낮 동안 9시간, 및 밤에 15시간일 것이다. 비정상 임상 징후를 보여주는 조류를 기록하고, 면밀히 관찰하고, 조사자에 의해 상당히(예를 들어, 낮은 회복 가능성으로 현저한 저하) 겪는다고 생각되는 경우 안락사시켰다.
d. 부검 검사: 모든 조류를 안락사시키고, 스케줄에 따라 35일 내지 49일에 부검하였다 - 표 14.
e. 총체적 병리학: 모든 1 내지 18 그룹의 모든 닭을 부검하고, 기재된 총체적 시각 병리학적 변화에 대해 조사하고, 개별 조류에 의해 적절한 바대로 점수화하였다.
f. 조직 잔류물 분석: 간, 신장, 가슴 근육(1), 다리 근육(2)[상퇴 및 하퇴] 및 지방 온전한 전체 피부의 2회 반복 대표 샘플을 수집하고, 후속하는 마커 잔류물 분석에 대해 스케줄, 표 50에 따라 각각의 그룹(1 내지 18 그룹(포함))에서 6개의 가장 무거운 조류로부터 수집되고 동결하여(<10℃) 저장하였다. 13 내지 18 그룹 조류는 조직 검정 요건을 위해 수집된 조직에 의해 비치료된 대조군 조류로서 35일에 희생되어야 한다.
샘플은 연구 번호, 동물 번호, 시점, 날짜, 샘플 유형 및 반복 실험을 기재한 접착 라벨에 의해 표지되었다.
잔류물 분석을 위해, 샘플을 해동하고, 조직의 공지된 중량(대략 1g)을 2㎖의 물 중에 균질화시켰다. 샘플을 원심분리하고, 상청액의 공지된 용적을 LC-MS/MS에 의한 분석에 의해 제거하였다.
Figure pct00054
g. 샘플 저장, 이동 및 폐기: 샘플 저장, 이동 및 폐기를 기록하였다. 반복 실험 1 조직 샘플을 10 부문에 기재된 바와 같은 시간에 분석 실험실로 웨트 아이스에서 동결하여 선적하였다. 샘플을 동반된 온도 데이터 로거 및 동결된 물 바이알에 의해 표준 조적 프로토콜(SOP)에 따라 이동시켰다. 반복 실험 2 조직 샘플은 마지막 샘플 수집 시점 후 6개월의 기간 동안 동결하여 보유되었다. 그 지점을 넘어서, 스폰서의 대표에 의해 구체적으로 요청되지 않는 한, 이들은 연구 사이트의 결정에 따라 폐기될 수 있다.
통계 분석
방법은 연구 보고서에 기록되었다.
데이터 기록
프로토콜 사양은 설비 SOP를 대체해야 한다. 연구 형태는 프로토콜 수정 또는 편차에 대한 필요 없이 연구 동안 필요한 바대로 추가되거나 수정될 수 있다.
a. 프로토콜 허가: 프로토콜은 연구 시작 전에 모든 관련 직원(1페이지 참조)에 의해 허가되고 서명되어야 한다.
b. 수정/편차: 수정은 변경된 또는 변형된 업무의 집행 전에 이루어진 프로토콜의 변화 또는 변형이다. 수정은 변화의 이유를 기술하고 스폰서로부터의 권한을 기록해야 한다. 수정은 조사자 및 스폰서에 의해 서명되어야 한다.
이 프로토콜 또는 적용 가능한 SOP의 편차는 편차(들)가 확인되는 시간에 기록되고, 서명되고, 날짜 기입되어야 한다. 전체 결과 또는 연구의 통합성에 대한 영향에 대한 평가가 이루어져야 한다. 실행에서 가능한 한 편차는 스폰서에게 통신되어야 한다.
모든 프로토콜 수정 및 편차는 따라서 기록되고, 발생의 날짜 또는 확인의 날짜에 기초하여 순차적으로 숫자 매겨져야 한다.
c. 파일에 대한 주의: 파일에 대한 주의가 원시 데이터로부터 달리 명확하지 않을 수 있는 사건 또는 상황을 명확히 하도록 따라서 기록된다. 실행에서 가능한 한 파일에 대한 주의는 스폰서에게 통신되어야 한다.
d. 연구 직원의 변화: 연구 조사자, 또는 다른 책임 연구 직원의 변화는 따라서 기록되어야 한다.
e. 원시 데이터: 모든 원래의 원시 데이터 페이지를 관찰을 하는 사람 및 정보를 기록하는 사람이 페이지를 매기고, 연구 번호에 의해 확인하고, 서명하고, 날짜 기입하였다.
f. 통신 로그: 조사자는 연구와 관련된 모든 서신의 사본을 유지시켰다. 연구의 문서화, 설계, 실행 또는 보고를 변화시키는, 임의의 전화 대화를 기록하였다.
g. 허가: 이 프로토콜에 기재된 연구는 정부 기관 허가(예를 들어, APVMA 작은 실험 허가)에 의해 다루어지는 것이다.
연구 보고
연구 보고서는 조사자 또는 설계자에 의해 준비되었다. 측정된 각각의 변수의 데이터 목록이 포함되었다. 연구 조사자의 준수 기술은 연구 보고서에 포함되었다. 원시 데이터를 갖는 원래의 서명된 연구 보고서 및 첨부된 통계 보고서는 스폰서에 제출되고 보관되었다.
실시예 8
이 연구는 조직학의 검사를 통해 브로일러에서 IRP001 클로라이드의 안전성을 평가한다.
요약 및 결론
조직학 결과는 표 53에 기재되어 있다.
Figure pct00055
상기로부터, 누적 병리학 및 장염 점수는 대조군 치료 1 Nil 그룹과 동일하거나 이보다 낮았다. 마지막으로, 확인된 모든 위장관(GIT) 조직학적 병변은 제조 환경에서 브로일러 닭에 대한 정상 한계 내에 있었다. 확인된 모든 간 조직학적 병변은 제조 환경에서 브로일러 닭에 대한 정상 한계 내에 있었다.
실험 설명 및 프로토콜
연구 목적
이 연구의 목적은 조직학의 검사에 의해 시장 중량으로 길러진 브로일러에서 IRP001 클로라이드의 일반 안전성을 시험하는 것이다.
실험 설계
실험은 하기 치료로 이루어졌다(치료마다 1개의 펜, 표 54).
Figure pct00056
바닥 펜 기술 및 관리
조류를 대략 4인치의 두께를 갖는 잠자리로서 깨끗한 대팻밥에 의해 4x10 = 40 ft2의 면적을 갖는 펜에서 유지시켰다. 펜은 조류 이동을 막도록 5피트 높이의 측벽을 갖고 바닥은 단단한 목재의 1 1/2 피트였다.
빌딩의 온도를 모니터링하였다. 실험 동안의 환경 조건(온도)은 동물의 연령에 적절하였다(최적이었다). 조명은 펜 위에 배치된 형광등에 의해 제공되었다. 식이는 펜마다 하나의 관형 피더에서 자유식으로 제공되었다. D0으로부터 D7까지, 사료는 또한 각각의 펜의 짚에 배치된 트레이에 제공되었다. 물은 펜마다 하나의 Plasson 드링커로부터 자유식으로 제공되었다.
표준 바닥 펜 관리 실행을 실험에 걸쳐 사용하였다. 동물 및 감금 설비를 매일 2회 조사하여서, 일반적인 건강 상태, 일정한 사료 및 물 공급, 및 온도를 관찰하고 기록하여서, 모든 죽은 조류를 제거하고, 예상되지 않은 사건을 인식하였다. 연구 동안 죽었다고 발견된 조류는 일일 사망률 기록에 기입되고, 대체되지 않았다. 펜 번호, 사망률의 날짜, 성별, 중량 및 진단을 기록하였다.
조류
부화일자 수컷 Cobb 병아리를 얻고, 10마리의 수컷 브로일러 병아리를 각각의 펜에 배치하였다. 모든 시험 동물 및 임의의 추가의 조류의 책임을 동물 배치 폼에 기록하였다. 조류를 부화장에서 성교시켰다. 부화장에서의 사육자 무리 히스토리 및 백신접종 기록을 기록하였다. 펜에 의한 조류 중량을 D0 및 42에 기록하였다.
사료
모든 사료는 제조되고, 크럼블/펠릿으로서 공급되었다.
치료 배치를 제조하기 위해 사용된 모든 기본 사료 및 물품의 분량을 기록하였다. 사료의 각각의 배치를 혼합하고 별개로 백에 담았다. 각각의 백을 연구 번호, 혼합 일자, 사료 유형 및 정확한 치료 번호에 의해 식별하였다. 사료 혼합 및 시험 물품 재고의 완전한 기록을 유지시켰다.
사료 샘플
처리 사료 샘플(각각 약 150g)을 수집하고 블렌딩하였다: 치료 식이의 각각의 배치의 시작, 중간 및 종료로부터의 각각의 것. 샘플을 선적에 지시될 때까지 보유하거나, 보고서의 제출 후 2개월에 폐기하였다.
피딩 스케줄
모든 중량은 펜에 의했다. 치료 초기 사료 사료는 D0 내지 21에 공급되었다. D21에, 비소비된 초기 사료를 펜에 의해 칭량하고 폐기하였다. 성장기 사료를 배급하고 D35까지 공급하였다. D35에, 비소비된 성장기 사료를 펜에 의해 칭량하고 폐기하였다. 완료기 사료를 D42까지 공급하였다. D42에, 비소비된 완료기 사료를 펜에 의해 칭량하고 폐기하였다.
식이
식이 세부사항은 표 55 및 표 56에 기재되어 있다.
Figure pct00057
사용된 주성분은 옥수수, 대두박 및 동물 부산물이었다.
Figure pct00058
기본 사료는 임의의 프로바이오틱/프레바이오틱 사료 첨가제, NSPase, 콕시디오스타트(coccidiostat) 또는 항생제 성장 촉진물질을 함유하지 않았다. 모든 식이는 피타아제를 함유하였다.
조직학적 샘플
연구 완료의 일자(D42)에, 각각의 펜으로부터의 5마리의 조류를 인간적으로 안락사시키고, 상부, 중간 및 하부 장 부문과 간엽을 수집하고, 중성 완충 포르말린에서 저장하였다. 이들 샘플을 분석을 위해 선적하였다.
절차
1. 표준 바닥 펜 관리 실행을 실험에 걸쳐 사용하였다. 빌딩의 온도를 모니터링하였다. 실험 동안의 환경 조건(온도)은 동물의 연령에 적절(최적)하였다. 조명은 펜 위에 배치된 형광등에 의해 제공되었다. 조명 계획은 D0 내지 D14의 광의 24시간, 이후 D42에 대한 광의 18시간이었다.
2. 식이는 펜마다 하나의 관형 피더에서 자유식으로 제공되었다. 1일로부터 7일까지, 사료는 또한 각각의 펜에서 짚에 배치된 트레이에 공급되었다.
3. 사료 및 워터링 방법. 자유식.
4. 환경 조건. 주변 습도가 있었다.
5. 질환 제어. 동반 약물 치료는 연구 동안 사용되지 않았다.
6. 조류 확인. 펜은 측정의 유닛이었다. 펜 보안은 조류 이동을 방지하였다.
7. 1일 2회 관찰을 일반적인 무리 조건에 대해 연구 동안 기록하였다. 포함된 관찰은 사료 및 물의 이용가능성, 온도 제어 및 임의의 비일상적인 조건이었다. 조류를 임의의 비정상 반응에 대해 면밀히 살펴보았다.
데이터 기입 및 분석
소스 데이터는 만년 잉크로 기입되었다. 목록은 읽을 수 있고, 관찰 목록을 만드는 사람에 의해 서명되거나 이니셜 표시되고, 날짜 기입되었다. 소스 데이터의 각각의 시트는 데이터를 책임지는 사람(들)에 의해 서명되었다. 소스 데이터에 대한 어떠한 실수 또는 변화는 이니셜 표시되고 날짜 기입되고, 보정 코드 또는 기재는 왜 변화가 생겼는지에 대해 추가되었다.
조류 및 사료의 폐기
모든 조류 및 사료를 하기 SOP에서 매장하였다. 폐기의 기록은 소스 데이터에 포함되었다.
소스 데이터의 위치
원래의 소스 데이터 시트 및 최종 보고서는 스폰서에게 전송되었다. 파일 및 최종 보고서의 정확한 사본은 보유되었다.
실시예 9
이 연구는 아이메리아 아세르불리나, 아이메리아 맥시마, 및 아이메리아 테넬라의 혼합물에 대해 IRP001의 항콕시디아 효율/민감도를 측정한다.
실험 설계
실험은 8마리의 수컷 병아리로 시작하여 72개의 우리로 이루어졌다. 치료는 6개의 블록에서 반복되고, 각각 12개의 우리의 블록 내에 무작위화되었다. 치료 및 블록에 대한 펜 배정에 대한 무작위화 절차는 스폰서에 대해 연구를 수행한 Southern Poultry Research, Inc.(SPR, Athens, GA 30607)에 의해 제공되었다.
치료 그룹은 표 57에 기재되어 있다.
Figure pct00059
관리
1. 설비를 철저히 확인하여서 모든 우리가 각각의 우리에서 이용 가능한 물 및 사료를 갖도록 보장하였다. 빌딩 온도를 조류의 연령에 대해 적절한 바대로 유지시켰다.
2. 균등한 일정한 조명은 벽을 따라 수직으로 매달린 형광 램프에 의해 제공되었다.
3. 사료 및 물은 자유식으로 제공되었다.
4. 우리를 1일 2회 확인하였다. 사료, 물의 이용 가능성, 온도 및 어떠한 비일반적인 조건을 포함하는 관찰을 기록하였다.
5. 사망 조류가 우리로부터 제거될 때, 우리 번호, 일자, 조류의 중량, 성별 및 개연성 있는 사망 원인을 매일의 사망률 기록에 기록하였다.
실험 배급량
노스 조지아(North Georgia)에서 흔히 사용되는 식량과 배합된 약제가 없는 상업용 초기 사료 배급량을 제제화하였다. (삶은 곡물 형태의) 이 배급량은 병아리 도착의 일자로부터 연구의 완료까지 자유식으로 공급되었다. 실험 식이는 균일한 기본 식이로부터 제조되었다. 치료 배치를 제조하기 위해 사용된 모든 기본 사료 및 시험 물품의 분량을 기록하였다. 치료 식이를 혼합하여 시험 물품의 균일한 분포를 보장하였다. 혼합장치를 약제가 있는 치료 식이 사이에 플러싱하였다. 사료를 빌딩 #2로 이동시키고, 동일한 치료의 우리 중에서 분포시켰다.
사료를 배급하고, DOT 14 및 20에 남은 것을 칭량하였다.
사료 샘플
치료 식이의 각각의 배치의 시작, 중간 및 종료로부터의 각각의 것을 수집하고 혼합하여 복합 샘플을 형성하였다. 각각의 치료에 대해 복합물로부터 하나의 샘플을 취하고, 연구의 완료까지 유지시켰다.
동물
부화일자 수컷 병아리(Cobb 500)를 연구로부터 얻었다. 균주, 공급원 및 백신접종 기록을 기록하였다. 도착 시, 병아리는 치료 배터리 우리에 배정되었다. 병아리(DOT 0)를 8개의 세트로 그룹화하고, 칭량하고, 배정된 우리에 베치하였다. 시험에 참가한 조류의 전체 수는 576마리였다. 모든 조류의 책임은 소스 데이터에 기록되었다.
조류를 DOT 0, 14 및 20에 우리에 의해 칭량하였다.
접합자 접종
콕시디아 접합자 접종 절차는 SPR SOP에 기재되어 있다. 연구의 DOT 14에 모든 T1 조류는 경구 피펫에 의해 1㎖의 증류수를 받았다(p.o.). 모든 다른 조류는 1㎖의 용적으로 희석된 콕시디아 접종원을 받았다(p.o.). 접종원은 아이메리아 아세르불리나(100,000개의 접합자/조류), 아이메리아 맥시마(50,000개의 접합자/조류) 및 아이메리아 테넬라(75,000개의 접합자/조류)의 혼합물이었다.
대변 재료 1그램당 접합자
DOT 19에, 모든 대변 수집 팬을 깨끗이 하였다. DOT 20에, 모든 치료 우리로부터, 대변의 샘플을 수집하였다. 각각의 우리로부터 수집된 대변을 완전히 혼합하고, 대변 부유에 준비하였다. 각각의 샘플을 대변 재료의 1그램당 접합자의 수에 대해 조사하였다.
병변 점수화
DOT 20에, 우리마다 모든 조류를 병변 점수화하였다. 콕시디아증 병변 점수화의 Johnson 및 Reid의 방법(1970)은 장의 감염된 영역(들)을 점수화하도록 사용되었다(Johnson J, Reid WM. "Anticoccidial drugs: lesion scoring techniques in battery and floor-pen experiments with chickens" Exp Parasitol. 1970 Aug; 28(1):30-6).
수집된 데이터
1. 하기 스케줄은 데이터 수집에 대해 준수되었다:
DOT 0 사료를 배급하고, 조류를 우리에 의해 칭량하고, 할당하였다.
DOT 14 조류를 콕시디아에 의해 접종하였다(T1 제외).
DOT 19 대변 팬을 깨끗이 하였다.
DOT 20 조류를 우리에 의해 칭량하였다. 남은 사료를 칭량하였다. 대변 재료를 우리에 의해 수집하였다. 모든 조류 콕시디아 병변을 점수화하였다.
2. 사망 중량은 개연성 있는 사망 원인을 결정하도록 부검에 의해 기록되었다.
1일 2회 임상 관찰을 기록하였다.
시험 동물 및 사료의 폐기
모든 조류 및 남은 사료를 SPR SOP에 따라 SPR 구덩이에 매장하였다. 폐기의 기록은 소스 데이터에 포함되었다.
데이터 분석
그룹 체중 증가, 사료 소비, 사료 전환, opg, 콕시디아 병변 점수 및 사망률에 대한 평균을 계산하였다. 데이터를 데이터 분석을 위해 SPR 표준 조작 절차에 따라 분석하였다. STATIX 프로그램 LSD 시험을 이용하여 원시 데이터를 분석하였다. P 값 0.05은 ANOVA F 값이 유의미할 때(p≤0.05) 평균을 분리시키도록 사용되었다.
기록
최종 보고서 및 원래의 소스 데이터 시트는 스폰서에게 전송되었다. Southern Poultry Research, Inc.는 정확한 사본을 유지시켰다.
결과
(아이메리아 아세르불리나(Eimeria acervulina), 아이메리아 맥시마 및 아이메리아 테넬라에 대한) 사료 섭취, 조정된 사료 전환율(Adj. FCR), 체중 증가(Wt. Gain), 사망률(% Cocci Mort.); 병변 점수; 및 대변 접합자 계수치에 대한 결과는 표 58에 기재되어 있다.
Figure pct00060
광범위하게 기재된 바대로 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않으면서 구체적인 실시형태에 기재된 바대로 본 발명에 다수의 변경 및/또는 변형이 이루어질 수 있다고 당업자에 의해 이해될 것이다. 본 실시형태는 따라서 모든 면에서 예시적이고 제한이 아닌 것으로 생각되어야 한다.

Claims (91)

  1. 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법으로서, 베르베린 알칼로이드(berberine alkaloid)를 상기 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 동물은 인간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 동물은 비인간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 비인간 동물은 식품 생성 동물(food producing animal)인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 식품 생성 동물은 돼지 및 닭으로부터 선택되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 장 질환인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 아이메리아(Eimeria) 속으로부터의 기생충에 의해 생기는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 기생충은 아이메리아 맥시마(Eimeria maxima), 아이메리아 아세르불리나(Eimeria acervuline) 및 아이메리아 브루네티(Eimeria brunetti)로부터 선택되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  9. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 상기 아이메리아 속으로부터의 항생제 내성 기생충에 의해 생기는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 항생제 내성 박테리아 기생충은 아이메리아 맥시마, 아이메리아 아세르불리나 및 아이메리아 브루네티 항생제 내성 기생충으로부터 선택되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 콕시디아증이고, 상기 동물은 닭인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  12. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 클로스트리듐(Clostridium) 속으로부터의 박테리아에 의해 생기고, 상기 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스(Clostridium perfringens)인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  13. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 클로스트리듐 속으로부터의 항생제 내성 박테리아에 의해 생기고, 상기 항생제 내성 박테리아는 항생제 내성 클로스트리듐 퍼프린젠스인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 괴사성 장염이고, 상기 동물은 닭인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 괴사성 장염은 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주에 의해 생기는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  16. 제15항에 있어서,
    상기 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주는 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주 EHE-NE36인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  17. 제15항에 있어서,
    상기 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주는 클로스트리듐 퍼프린젠스 A형 균주 EHE-NE18인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  18. (누락)
  19. 제14항에 있어서,
    상기 괴사성 장염은 클로스트리듐 퍼프린젠스 C형 균주에 의해 생기는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  20. 제14항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 투여는 상기 닭의 사료 또는 물을 통해 발생하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  21. 제20항에 있어서,
    상기 사료는 크럼블(crumble) 또는 펠릿의 형태인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 0.001g/㎏ 사료 내지 2g/㎏ 사료의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  23. 제20항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 0.001g/ℓ 물 내지 0.1g/ℓ 물의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  24. 제11항 및 제14항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서,
    병변 점수는 감소하고/하거나, 대변 접합자 수는 감소하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  25. 제14항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서,
    이환율의 감소가 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  26. 제11항 및 제14항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서,
    사망률의 감소가 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  27. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    치료 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  28. 제27항에 있어서,
    상기 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 적어도 약 13ng 미만의 베르베린 알칼로이드인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  29. 제27항에 있어서,
    상기 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 약 10ng의 베르베린 알칼로이드인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  30. 제27항에 있어서,
    상기 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 약 5ng의 베르베린 알칼로이드인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  31. 제27항 또는 제28항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  32. 제31항에 있어서,
    상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
    상기 닭의 가슴에서의 상기 근육 조직에서의 약 6.1ng/g;
    상기 닭의 아랫다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 5.5ng/g; 및
    상기 닭의 윗다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 11.6ng/g인,
    동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  33. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.1g/㎏ 미만의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  34. 제27항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  35. 제34항에 있어서,
    상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
    상기 닭의 가슴에서의 상기 근육 조직에서의 2ng/g 미만;
    상기 닭의 아랫다리에서의 상기 근육 조직에서의 2ng/g 미만; 및
    상기 닭의 윗다리에서의 상기 근육 조직에서의 2ng/g 미만인,
    동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  36. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  37. 제36항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1주 내지 2주의 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  38. 제36항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  39. 제36항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  40. 제39항에 있어서,
    1일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
    상기 닭의 가슴에서의 상기 근육 조직에서의 약 5.7ng/g;
    상기 닭의 아랫다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 3.2ng/g; 및
    상기 닭의 윗다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 6.0ng/g인,
    동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  41. 제39항에 있어서,
    2일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
    상기 닭의 가슴에서의 상기 근육 조직에서의 약 3.6ng/g;
    상기 닭의 아랫다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 3.1ng/g; 및
    상기 닭의 윗다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 4.5ng/g인,
    동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  42. 제39항에 있어서,
    4일, 7일 및 14일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  43. 제36항 내지 제42항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  44. 제36항 또는 제37항에 있어서,
    상기 잔류물 수준은 근육 조직의 1g당 적어도 13ng 미만의 베르베린 알칼로이드인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  45. 제36항 또는 제37항에 있어서,
    상기 잔류물의 수준은 약 5ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  46. 제36항, 제37항, 제44항 및 제45항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.1g/㎏ 초과의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  47. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간 후 상기 닭의 간 및 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  48. 제47항에 있어서,
    상기 닭의 간 및 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  49. 제48항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  50. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 상기 닭의 간 및 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  51. 제50항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1주 내지 2주의 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  52. 제50항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  53. 제50항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  54. 제53항에 있어서,
    1일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은,
    상기 닭의 가슴에서의 상기 근육 조직에서의 약 5.7ng/g;
    상기 닭의 아랫다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 3.2ng/g; 및
    상기 닭의 윗다리에서의 상기 근육 조직에서의 약 6.0ng/g이고,
    상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 8.0ng/g인,
    동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  55. 제53항에 있어서,
    7일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만이고, 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 6.5ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  56. 제53항에 있어서,
    14일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만이고, 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 3.0ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  57. 제50항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  58. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간 후 상기 닭의 간 및 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  59. 제58항에 있어서,
    상기 닭의 간 조직 및 가슴, 아랫다리 및 윗다리에서의 근육 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 2ng/g 미만인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  60. 제58항 또는 제59항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.03g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  61. 제14항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간 및 워시아웃 기간 후 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 안전한 잔류물 수준이 있는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  62. 제61항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1주 내지 2주로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  63. 제61항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일 내지 14일; 1일 내지 7일; 1일 내지 4일; 및 1일 내지 2일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  64. 제61항에 있어서,
    상기 워시아웃 기간은 1일, 2일, 4일, 7일 및 14일로부터 선택된 기간인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  65. 제64항에 있어서,
    1일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 8.0ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  66. 제64항에 있어서,
    7일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 6.5ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  67. 제64항에 있어서,
    14일의 워시아웃 기간 후 상기 닭의 간 조직에서의 상기 베르베린 알칼로이드의 잔류물 수준은 약 3.0ng/g인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  68. 제61항 내지 제67항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 약 0.3g/㎏의 용량으로 상기 닭의 사료에 투여되는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  69. 제27항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 치료 기간은 35일인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  70. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 베르베린 헤미설페이트인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  71. 제1항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드는 베르베린 클로라이드인, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  72. 제1항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 베르베린 알칼로이드의 쓴맛을 차폐하는 첨가제를 추가로 포함하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  73. 베르베린 알칼로이드 및 동물 식량을 포함하는 동물 사료로서, 상기 베르베린 알칼로이드는 0.001% w/w 내지 2% w/w의 동물 식량의 양으로 있는, 동물 사료.
  74. 제73항에 있어서,
    상기 사료는 크럼블의 형태; 펠릿의 형태; 또는 수성 형태인, 동물 사료.
  75. 베르베린 알칼로이드 또는 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는 투약 요법으로서, 상기 베르베린 알칼로이드 또는 동물 사료는 1주 내지 6주 동안 동물에서의 감염성 질환을 예방하거나 치료하기에 효과적인 양으로 투여되는, 투약 요법.
  76. 식품 생성 동물에서의 사료 전환율(feed conversion ratio)의 감소 방법으로서, 베르베린 알칼로이드 또는 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 상기 식품 생성 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법.
  77. 제76항에 있어서,
    상기 식품 생성 동물은 질환이 없는, 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법.
  78. 제77항에 있어서,
    상기 식품 생성 동물은 이환된, 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법.
  79. 제76항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식품 생성 동물은 닭 및 돼지로부터 선택되는, 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법.
  80. 제79항에 있어서,
    상기 식품 생성 동물은 닭인, 식품 생성 동물에서의 사료 전환율의 감소 방법.
  81. 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  82. 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 감염성 장 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  83. 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하는, 동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법.
  84. 제82항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 아이메리아 속으로부터의 항생제 내성 기생충에 의해 생기는, 예방 및/또는 치료 방법.
  85. 제82항 또는 제83항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 콕시디아증이고, 상기 동물은 닭인, 예방 및/또는 치료 방법.
  86. 동물에서의 클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환의 예방 및/또는 치료 방법으로서, 제73항 또는 제74항에 따른 동물 사료를 투여하는 단계를 포함하되, 상기 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스인, 예방 및/또는 치료 방법.
  87. 제86항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 항생제 내성 클로스트리듐 퍼프린젠스에 의해 생기는, 예방 및/또는 치료 방법.
  88. 제86항 또는 제87항에 있어서,
    상기 감염성 질환은 괴사성 장염이고, 상기 동물은 닭인, 예방 및/또는 치료 방법.
  89. 동물에서의 감염성 질환;
    동물에서의 감염성 장 질환;
    동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
    클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환
    의 예방 및/또는 치료를 위한 약제의 제조에서의, 베르베린 알칼로이드의 용도로서,
    상기 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스인, 베르베린 알칼로이드의 용도.
  90. 동물에서의 감염성 질환;
    동물에서의 감염성 장 질환;
    동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
    클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환
    의 예방 및/또는 치료에서의, 베르베린 알칼로이드의 용도로서,
    상기 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스인, 베르베린 알칼로이드의 용도.
  91. 동물에서의 감염성 질환;
    동물에서의 감염성 장 질환;
    동물에서의 아이메리아에 의해 생긴 감염성 질환; 또는
    클로스트리듐 속으로부터의 박테리아에 의해 생긴 감염성 질환
    의 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한, 베르베린 알칼로이드로서,
    상기 박테리아는 클로스트리듐 퍼프린젠스인, 베르베린 알칼로이드.
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Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3810137A4 (en) 2018-05-29 2022-03-09 IRP Health Pty Ltd NITROIMIDAZOLE FORMULATIONS
WO2021072473A1 (en) * 2019-10-14 2021-04-22 IRP Health Pty Ltd Antimicrobials as feed preservatives
WO2022192535A1 (en) * 2021-03-10 2022-09-15 Cornell University Methods for improving poultry health
CN113817842B (zh) * 2021-09-26 2024-05-03 中国农业大学 与鸡柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药性相关的snp分子标记及其应用

Family Cites Families (28)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002021933A2 (de) * 2000-09-15 2002-03-21 Hermann Roth Futtermittel oder futtermittelzusatz als leistungsförderer oder appetitförderer für nutztiere
WO2004093876A2 (en) * 2003-04-03 2004-11-04 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Composition containing berberine or a derivative thereof and an antimicrobial agent or an antibiotic agent, and their use for treating oral pathogens and other disorders
US8927565B2 (en) * 2003-08-28 2015-01-06 Australian Biomedical Company Pty. Ltd. Compositions for veterinary and medical applications
US8003136B2 (en) * 2004-03-03 2011-08-23 Randy Beavers Standardization of botanical products utilizing biological activity as a marker
US20070098649A1 (en) * 2004-03-22 2007-05-03 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Method and composition for controlling oral pathogens
WO2006120495A1 (fr) * 2005-05-13 2006-11-16 Advanced Scientific Developements Composition pharmaceutique comprenant un antiviral, an antitumoral ou un antiparasitaire, et un actif choisi parmi le carveol, le thymol, l’eugenol, le borneol et le carvacrol
CN101467999A (zh) * 2007-12-25 2009-07-01 郑州后羿制药有限公司 一种盐酸小檗碱复方制剂
CN101411717B (zh) * 2008-11-07 2010-10-13 北京宏泰康达医药科技有限公司 一种治疗急性肠炎和痢疾的组合物
US20130072513A1 (en) * 2009-04-22 2013-03-21 James Spencer COMBINATIONS OF BERBERINE, ARTEMISININ, Loperamide AND THEIR DERIVATIVES TO TREAT MALARIA, DIARRHEA, TRAVELERS' DIARRHEA, DYSENTERY, DENGUE FEVER, PARASITES, CHOLERA AND VIRUSES
CN102475193A (zh) * 2010-12-29 2012-05-30 吉林省农业科学院 一种抗热应激植物提取物饲料添加剂及其制备方法
US9023345B2 (en) * 2011-03-01 2015-05-05 Novus International, Inc. Methods for improving gut health
CN102151260B (zh) * 2011-03-12 2012-12-05 暨南大学 穿心莲内酯和黄连素组合物及其应用
CN102526657B (zh) * 2011-12-16 2013-12-04 青岛绿曼生物工程有限公司 一种治疗猪增生性肠炎的复方蜂胶组合物及其制备方法
CN106620189B (zh) * 2012-06-06 2021-11-19 上海交通大学 改善肠道菌群结构的方法及应用
CN103768252A (zh) * 2012-10-25 2014-05-07 蔡田湉 用于防治初生牛肾病的保健品
CN104208238B (zh) * 2013-09-29 2016-08-10 郑州后羿制药有限公司 一种用于治疗鸡球虫病的中药组合物及其制备方法
CN103584256B (zh) * 2013-11-26 2015-07-22 青岛嘉瑞生物技术有限公司 一种利用石莼资源化开发的天然食品保鲜剂及制备方法
CN103947869A (zh) * 2014-04-08 2014-07-30 安徽壮大饲料有限公司 用于预防蛋鸡产蛋期患大肠杆菌病的预混料
KR101656929B1 (ko) * 2014-06-02 2016-09-13 씨제이제일제당 (주) 반추동물의 메탄 생성 저감용 사료 첨가제 조성물
CN104286422A (zh) * 2014-11-18 2015-01-21 广东康达尔农牧科技有限公司 一种高抗病性的复合家禽饲料添加剂
CN105831392B (zh) * 2015-01-16 2020-12-22 北京大北农科技集团股份有限公司 一种猪用饲料添加剂及其饲料
CN104605164A (zh) * 2015-02-13 2015-05-13 安徽恒源药业有限公司 一种畜用饲料脱霉添加剂
CN106389717A (zh) * 2015-07-21 2017-02-15 沈阳伟嘉牧业技术有限公司 一种用于治疗仔猪耐药性大肠杆菌病的中药组合物
CN105056121A (zh) * 2015-08-07 2015-11-18 北京农业职业学院 一种含有茜草的抗柔嫩艾美耳球虫病的中药组方
CN106309464A (zh) * 2015-10-10 2017-01-11 长沙博海生物科技有限公司 一种用于禽畜增免抗病毒的中药成分的组合物、制备方法及应用
CN105410441A (zh) * 2015-12-04 2016-03-23 山东新希望六和集团有限公司 一种含益生菌肉鸡配合饲料及其制备方法
CN106490337A (zh) * 2017-01-16 2017-03-15 胡润四 一种发酵猪饲料
CN107669543A (zh) * 2017-10-11 2018-02-09 广州市禾基生物科技有限公司 一种防腐剂及其制备方法

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