KR20190090970A - 망막색소상피 재생용 알지네이트/타우린 하이드로겔 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 천연고분자인 알지네이트와 타우린을 이용하여, 망막색소상피의 재생용 하이드로겔 조성물을 제공하고자 한다. 또한, 망막에 이식할 경우에 생기는 수술 부위를 최소화하기 위하여, 이를 주입 가능한 형태의 하이드로겔로 제공하고자 한다.

Description

망막색소상피 재생용 알지네이트/타우린 하이드로겔 조성물{Alginate/Taurine hydrogel composition suitable for retinal pigment epithelium regeneration}

본 발명은 망막색소상피 (retinal pigment epithelium, RPE)의 재생을 위한 알지네이트 (alginate, Al)와 타우린 (Taurine, Ta)을 포함하는 하이드로겔 조성물에 관한 것이다.

황반변성 (Macula Degeneration, MD)는 시각에 중요한 역할을 하는 망막 중심 부위의 신경조직인 황반이 노화, 유전 요인, 심혈관 질환, 과한 자외선 노출 등 다양한 원인으로 인해 변성이 일어나 시력장애를 일으키는 질병이다. 특히, 전세계 노인 환자에게 주로 발병하고 있는 노인성 황반변성(Age-related Macula Degeneration, AMD)를 치료하기 위한 기술들이 연구되고 있지만, 현재의 기술로는 치료 효과를 기대하기가 어려운 실정이다. 또한, 망막 손상 부위에 단순히 RPE 세포만을 이식하였을 때는 잘못된 부위로의 증식이나 세포 사멸, 망막 섬유증 등의 다양한 문제가 일어나는 것으로 알려져 있다(T.H. Tezel, L.V. Del Priore, A.S. Berger, H.J. Kaplan, Adult retinal pigment epithelial transplantation in exudative age-related macular degeneration, Am J Ophthalmol 143(4) (2007) 584-95.). 그러나, RPE 세포를 이식부위에 고정시킬 수 있는 지지체를 이용하면 더욱 효과적인 이식이 가능하다는 것을 확인할 수 있었다(G. Thumann, A. Viethen, A. Gaebler, P. Walter, S. Kaempf, S. Johnen, A.K. Salz, The in vitro and in vivo behaviour of retinal pigment epithelial cells cultured on ultrathin collagen membranes, Biomaterials 30(3) (2009) 287-94).

한국등록특허 제10-1352504호는 망막질환 치료용 지지체 형성을 위한 하이드로 겔형 주사제 조성물에 관한 것으로, 망막질환 치료용 지지체 형성을 위한 하이드로 겔형 주사제 조성물에 관하여 개시하고 있다. 그러나, 상기 조성물은 히알루론산 나트륨, 포비돈 및 주사용수를 포함하는 것이지만, 그 효과의 개선이 필요하고, 특히 세포 부착성이나 증식률이 개선된 새로운 소재가 필요한 실정이다.

한편, 상처치유, 약물전달 및 손상조직 재생을 위한 지지체로써 널리 응용되고 있는 고분자 다공성 지지체에 있어서, 특히 손상된 조직의 재생을 위한 지지체는 조직편으로부터 추출, 분리한 세포를 충분한 양으로 배양하는데 적합한 구조와 안정성이 요구되며, 체내이식후 부작용이 나타나지 않는 생체 적합성과 생분해성을 가지고 있어야 하는바, 상기 지지체의 고분자 재료로는 콜라겐, 젤라틴, 알지네이트 등이 사용되고 있다. 특히, 생체적합성이 뛰어한 생체재료중 하나인 알지네이트는 RPE65와 tyrosinase와 같은 전형적인 RPE 세포의 표현형을 향상시킨다고 알려졌다(N.C. Hunt, D. Hallam, A. Karimi, C.B. Mellough, J. Chen, D.H.W. Steel, M. Lako, 3D culture of human pluripotent stem cells in RGD-alginate hydrogel improves retinal tissue development, Acta Biomater 49 (2017) 329-343). 또한, 타우린은 광수용체 막에 존재하는 인지질의 산화를 막아줌으로써 망막 구조를 안정화시키고, 망막에서 신경전달물질의 역할을 하여 정상적인 시력 형성에 도움이 준다고 알려져 있다.

(0001) 한국등록특허 제10-1352504호

(0001) T.H. Tezel, L.V. Del Priore, A.S. Berger, H.J. Kaplan, Adult retinal pigment epithelial transplantation in exudative age-related macular degeneration, Am J Ophthalmol 143(4) (2007) 584-95. (0002) G. Thumann, A. Viethen, A. Gaebler, P. Walter, S. Kaempf, S. Johnen, A.K. Salz, The in vitro and in vivo behaviour of retinal pigment epithelial cells cultured on ultrathin collagen membranes, Biomaterials 30(3) (2009) 287-94. (0003) N.C. Hunt, D. Hallam, A. Karimi, C.B. Mellough, J. Chen, D.H.W. Steel, M. Lako, 3D culture of human pluripotent stem cells in RGD-alginate hydrogel improves retinal tissue development, Acta Biomater 49 (2017) 329-343. (0004) 최민수 외 5명, 열처리에 의해 가교된 다공성 키토산-알지네이트-젤라틴 지지체의 특성, 대한화학회지, Vol.50, No.3 (2006) 224-231.

이에, 본 발명자들은 망막색소상피 세포의 부착 및 증식률을 높이고, 망막색소상피 세포를 이식하는 과정에서 발생하는 부작용의 최소화 및 망막색소상피 재생에 적합한 하이드로겔을 개발함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 세포의 부착 및 증식률이 개선된 새로운 지지체를 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 생체적합성이 우수한 알지네이트와 타우린을 포함하는 망막색소상피 재생에 적합한 하이드로겔 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 생분해도 및 생체적합도가 높은 고분자를 포함하는 하이드로겔 조성물을 제공한다.

본 발명의 목적을 달성하기 위한 조성물은 생분해도 및 생체적합도가 높은 알지네이트(Al) 및 여러 생리기능에 관여하고 동물조직에 많이 분포하는 타우린(Ta)을 포함한다.

본 발명에 따른 조성물은 망막세포의 재생에 이용 가능하며, 바람직하게는 망막색소상피 재생에 이용 가능하다.

또한, 본 발명은 캡슐화한 망막세포 또는 망막색소상피 세포를 포함하는 망막세포 또는 망막색소상피 재생에 적합한 하이드로겔형 주사제 조성물을 제공한다.

구체적인 예로서는, 알지네이트(Al) 및 타우린(Ta)을 포함하는 하이드로겔 조성물로 캡슐화한 망막색소상피 세포를 포함하는 망막색소상피 재생용 하이드로겔형 주사제 조성물을 제공한다.

본 발명의 용어 "망막색소상피(retinal pigment epithelium, RPE)"란, 외부 혈관 망막 베리어의 일부분을 형성하는 단층의 색소세포들은 의미한다. 이들 세포들은 망막의 기능을 유지하는데 있어서 중요한 역할을 수행하는 것을 특징으로 하며, 광에너지를 흡수, 시각 사이클의 유지를 위한 광수용체와 상호작용, 광수용체와 맥락모세 혈관층의 결합구조를 유지하는 다양한 성장인자들을 분비하고, 이온, 물, 대사 산물을 서브레티날 공간으로부터 혈액으로 이송하는 역할, 광수용체의 outer segment의 식세포 작용을 수행할 수 있다고 알려져 있다.

본 발명의 용어 “알지네이트(Al)”는 생분해도 및 생체적합도가 높은 생체고분자로, 갈조류에서 추출한 물질을 주재료로 한다. 알지네이트는 주로 치과에서 사용되지만 인체에 사용하여도 안전하며, 빠르게 경화 하기 때문에 최근 생체재료학으로 각광받고 있다.

본 발명의 용어 “타우린(Ta)”은 2-아미노에탄설포익산(2-aminoethanesulfonic acid)으로 아미노산처럼 양성 전해질의 성질을 갖고 있다. 타우린은 사람을 포함한 동물의 조직에 흔히 있는 유기산으로, 쓸개즙의 주 구성성분으로 쓰이며 쓸개즙을 만드는 것 외에도 근골격계를 만들고 심혈관계 기능 유지, 중추신경계의 기능 조절 등 많은 생물학적 기능을 한다고 알려진 물질이다.

본 발명에서 알지네이트/타우린 하이드로겔은 이온 가교, 공유 가교, 광 가교, 세포 가교 등을 이용하여 캡슐이 형성될 수 있으며, 바람직하게는 이온 가교를 통해 형성될 수 있다.

상기 이온 가교를 이용하는 경우, 알지네이트와 타우린이 혼합된 하이드겔에 2가 양이온 수용액의 혼합으로 캡슐화가 이루어질 수 있다. 상기 2가 양이온의 예에는 Ca²⁺이 포함되며, 염화칼슘(CaCl₂), 황산칼슘(CaSO₄), 탄산칼슘(CaCO₃) 등이 사용될 수 있다. 바람직하게는 염화칼슘(CaCl₂)일 수 있다.

상기 이온 가교에 사용되는 2가 양이온은 0.1~1.0M 로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.5M 이 포함될 수 있다.

본 발명의 일 구현예에 따르면, 알지네이트 수용액을 제조하는 단계; 타우린 첨가하여 하이드로겔을 제조하는 단계;를 포함하는 하이드로겔 조성물의 제조방법을 제공한다.

또한, 본 발명의 일 구현예에 따르면, 알지네이트 수용액을 제조하는 단계; 타우린 첨가하여 하이드로겔을 제조하는 단계; RPE 세포를 혼합하는 단계; 및 2가 양이온 수용액의 혼합하여 알지네이트와 타우린을 가교시키는 단계; 상기 세포가 혼합된 하이드로겔을 배양하는 단계를 포함하는, 캡슐화한 망막색소상피 세포를 포함하는 망막색소상피 재생용 하이드로겔형 주사제 조성물의 제조방법을 제공한다.

상기 알지네이트 수용액을 제조하는 단계에 있어서, 알지네이트 수용액은 1~5% 농도로 제조될 수 있으며, 바람직하게는 1.5% 농도로 제조될 수 있다.

상기 Al/Ta 하이드로겔의 제조하는 단계에 있어서, 50~90㎛, 바람직하게는 70 ㎛ cell strainer를 이용해 이물질을 걸러주는 단계를 포함할 수 있다.

상기 제조방법 중 망막색소상피 세포를 캡슐화하는 단계에 있어서, 100~150℃, 바람직하게는 120℃에서 10~50분, 바람직하게는 30분 동안 멸균하는 단계를 포함할 수 있다.

또한, 상기의 망막색소상피 세포를 캡슐화하는 단계에서 RPE 세포는 1 ml에 대하여 10³ 내지 10⁹개의 충분한 세포수를 포함할 수 있으며, 바람직하게는 5×10⁵ cells/ml의 RPE 세포를 포함할 수 있다.

본 발명의 조성물 중 알지네이트는 총 중량을 기준으로 100 중량부 대비 1 내지 20 중량부가 포함될 수 있다. 바람직하게는 총 중량 100 중량부 대비 1.5 중량부가 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 알지네이트는 상기 중량부보다 적게 포함되는 경우, 본 발명의 효과가 저해될 수 있고, 상기 중량부보다 많이 포함되는 경우 효과상의 큰 차이가 없다.

본 발명의 조성물 중 타우린은 총 중량을 기준으로 100 중량부 대비 0.1 내지 2 중량부가 포함될 수 있고, 바람직하게는 총 중량 100 중량부 대비 0.5 중량부가 포함될 수 있다.

본 발명의 조성물에 포함되는 타우린은 상기 중량부보다 적게 포함되는 경우, 본 발명의 효과가 저해될 수 있고, 상기 중량부보다 많이 포함되는 경우 효과상의 큰 차이가 없다.

상기 알지네이트와 타우린이 포함된 하이드로겔 지지체는 100~500㎛의 크기의 다공이 있는 구조를 가지며, 상기 다공의 크기는 바람직하게는 200~350㎛를 가질 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기와 같은 하이드로겔 주사제 조성물은 예컨대 통상의 망막 국소투여용 주사제에 적용 가능한 부형제를 포함할 수 있다. 투여는 적용 부위에 0.01-1ml로 극소량 국소투여할 수 있다. 이러한 또한 이러한 주사제 조성물은 환자의 상황에 따라 시술 시에 1회 또는 수회 투여할 수 있다.

본 발명에 따른 Ta/Al 하이드로겔은 RPE 세포 증식 및 유전자발현을 증대시키는 효과가 있고, Ta/Al 주입형 하이드로겔은 생체적합성이 우수하여 안구에 큰 상처를 일으키지 않고, 망막부위에 이식될 수 있다.

도 1a는 제조된 알지네이트 하이드로겔을 포함하여, 0.1, 0.3, 0.5% Al/Ta 하이드로겔의 육안 이미지를 나타낸 것이다.
도 1b는 다공의 형태를 확인한 SEM을 나타낸 것이다.
도 2는 알지네이트, 타우린, 제조된 0.1, 0.3, 0.5% Al/Ta 하이드겔을 FT-IR을 통해 나타낸 그래프이다.
도 3은 Al/Ta 하이드로겔들의 공극률을 나타낸 결과이다.
도 4는 Al/Ta 하이드로겔들의 팽윤도를 나타낸 결과이다.
도 5는 Al/Ta 하이드로겔들의 세포증식률을 나타낸 결과이다.
도 6a는 Al/Ta 하이드로겔에서 배양된 세포들의 RPE65 유전자 발현을 정량화하여 나타낸 결과이다.
도 6b는 Al/Ta 하이드로겔에서 배양된 세포들의 CRALBP 유전자 발현을 정량화하여 나타낸 결과이다.
도 6c는 Al/Ta 하이드로겔에서 배양된 세포들의 NPR-A 유전자 발현을 정량화하여 나타낸 결과이다.
도 7은 Al/Ta 하이드로겔들에서의 세포 독성 평가를 나타낸 결과이다.
도 8은 Al/Ta 하이드로겔들내 세포들의 부착과 이동 양상을 나타낸 SEM 사진이다.

이하, 본 발명을 제조예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 제조예 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 한정되는 것은 아니다.

<제조예 1: 세포 배양>

RPE는 친칠라 토끼 (4주령, 1kg, 암컷)의 망막에서 분리하였다. 토끼의 안구를 적출한 후 각막과 공막사이의 연곽 뒤 2mm를 절개하여 수정체 및 유리체를 제거하고, 망막색소를 가지고 있는 부위를 긁어내어 Collagenase A를 처리함으로써, RPE 세포를 채취하였다. 채취한 RPE 세포는 5% CO_2, 37℃의 인큐베이터에서 배양 하였고, 배양액은 10% FBS와 1% 페니실린/스트렙토마이신이 함유된 DMEM/F-12 (Gibco, USA)를 사용하였다. 배양액은 2~3일 마다 교환하였으며, 배양용기의 90% 정도가 세포로 채워지면 1% 트립신을 처리한 후 계대배양하여 passage 2의 세포를 사용하였다.

<실시예 1: Al/Ta 용액 제조>

3차 증류수에 알지네이트를 넣어 교반시킴으로써, 1.5% 알지네이트 수용액을 제조하였고, 70 ㎛ cell strainer를 이용해 이물질을 걸러주었다. 10ml의 알지네이트 수용액에 0, 0.01, 0.03, 0.05g의 타우린을 각각 첨가하여 혼합하였고, Al, 0.1, 0.3, 0.5% Ta/Al 하이드로겔로 명명하였다.

<실시예 2: 망막색소상피세포 캡슐화>

제조된 Al/Ta 용액을 120℃에서 30분동안 멸균한 후에, 5×10⁵ cells/ml의 RPE 세포를 혼합하였다. 멸균된 실리콘 몰드(직경 8mm, 두께 3mm)에 세포가 혼합된 Al/Ta 하이드로겔을 150㎕씩 분주한 후, 0.5M의 CaCl₂ 용액을 60㎕ 첨가하여 15분 동안 가교하여, PBS(Phosphate buffer saline) 1X로 3분 동안 세척하였고, DMEM/F-12 배양액에 넣어 5% CO_2, 37℃ 의 인큐베이터에서 배양하였다.

<실험예 1: 하이드로겔 지지체 특성 분석>

실험예 1-1: Ta/Al 하이드로겔의 육안 관찰 및 내부 형태 관찰

제조된 Al/Ta 하이드로겔의 표면을 관찰하기 위해, 전자주사현미경 (Bio-LV-SEM, SN-3000 Hitachi, Japan)을 이용하였다. 관찰하기에 앞서, 하이드로겔은 냉장, 냉동 각 3시간 처리하고, 딥프리져에 하루 보관한 후, 24시간 동안 동결건조시켰다. 제조된 Al/Ta 하이드로겔의 육안 관찰은 도 1a에 나타내었으며, 건조된 지지체를 카본테이프로 고정하여 백금 코팅하여 관찰한 결과를 도 1b에 나타내었다.

실험결과, 타우린 함량에 따른 외적인 변화는 관찰되지 않았다.

실험예 1-2: 타우린/알지네이트 하이드로겔의 FT-IR 분석

제조된 하이드로겔의 화학성분 변화를 확인하기 위해 FT-IR (Perkin Elmer, USA)을 이용해 4,000~600cm^-1의 파장영역에서 측정하였고, 본 결과를 도 2에 나타내었다.

실험결과, 1610cm^-1, 1416cm^-1, 1306cm^-1 에서 carboxylate anion의 고유 피크가 나타났으며, 3430cm^-1에서 Hydroxyl의 고유 피크가 나타난 것을 확인함으로써 알지네이트의 특성이 변하지 않음을 확인하였다. 또한, 타우린 함량이 증가함에 따라 피크의 폭이 깊어지는 것을 통해 하이드로겔의 특성이 개질되었음을 확인하였다.

실험예 1-3: 공극률 측정

지지체 내의 공극을 측정하기 위해 하이드로겔을 동결 건조시켰으며, 증류수에 일정 시간 담가 증류수의 부피 변화를 통해 측정하였다. 측정한 공식은 다음과 같고, 측정 결과는 도 3에 나타내었다.

공극률(%) =

(V₁: 처음 증류수의 부피, V₂: 지지체를 넣은 후 증가한 증류수의 부피, V₃: 지지체를 제거한 후 줄어든 증류수의 부피)

실험결과, 모두 100%에 가까운 공극률을 보임을 확인하였다.

실험예 1-4: 팽윤도 측정

지지체의 팽윤도 측정을 위해 하이드로겔을 동결 건조시켰으며, PBS에 담가 시간에 따른 지지체의 무게 변화를 측정하였고 측정 공식은 다음과 같다.

팽윤도(ratio) =

(W_s: PBS에 적신 무게, W_d: 동결건조 무게)

도 4에 나타낸 측정 결과에서 0.5% Al/Ta 지지체의 수분 흡수율이 가장 높음을 확인하였다.

<실험예 2: 하이드로겔에 캡슐화된 세포 특성 평가>

실험예 2-1: 세포 증식률 평가

세포 증식률은 MTT 분석법 (3-[4,-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide; thiazolyl blue, Amresco, USA)을 이용하여 평가하였다. RPE 세포를 하이드로겔에 캡슐화한 후, 1, 3, 5, 7, 14일 째에 배양액 1ml과 MTT 시약 100㎕를 첨가하여 4시간 동안 5% CO₂, 37℃의 인큐베이터에서 배양하였다.

하이드로겔을 녹이기 위해 300mM의 Sodium citrate (sodium chloride를 이용하여 pH를 7로 맞춤)에 30분 동안 녹인 후, 600xg, 8분 조건으로 원심분리하여 세포만을 채취하였다. Dimethyl sulfoxide (DMSO, SAMCHUN, South Korea)용액을 1ml씩 넣어 피펫팅하였다. 결정이 용해된 용액을 96-well plate에 100㎕씩 분주하고, 570㎚에서 흡광도를 측정하였고, 측정 결과는 도 5에 나타내었다.

실험결과, 배양기간이 증가할수록 세포가 증식하였고, 0.5% Al/Ta 하이드로겔에서 가장 높은 세포 증식률을 확인하였다.

실험예 2-2: mRNA 발현 분석

하이드로겔에서 배양된 RPE 세포에서 추출된 mRNA의 발현을 RT-PCR (Reverse transcription-polymerase chain reaction)을 이용해 분석하여 도 6a, 도 6b, 도 6c에 나타내었다. 3, 7, 14일 째의 샘플을 cDNA를 합성하여 증폭시키고, 1% 아가로스겔에 넣어 100V 조건으로 전기영동하였으며, 360㎚ 파장의 자외선으로 조사하여, RPE65, CRALBP, NPR-A 밴드를 관찰하였다.

항존 유전자인 β-actin을 사용하여, RPE65, CRALBP, NPR-A의 발현정도를 표준화하여 수치화한 결과, 0.5% Ta/Al 하이드로겔에서 배양된 세포의 mRNA발현이 가장 높게 나타남을 확인하였다.

실험예 2-3: 세포 독성 평가

세포 독성을 평가하기 위해 Live/Dead cell imaging kit (Invitrogen, USA)을 이용하였으며, 본 평가의 결과는 도 7에 나타내었다.

각각의 Ta/Al 하이드로겔을 얇게 잘라 컨포컬용 dish에 Live/Dead cell imaging kit를 이용해 부착하고 하이드로겔 위를 덮어 시약이 내부까지 들어갈 수 있도록 4시간동안 5% CO₂, 37℃ 조건으로 인큐베이션 하였다. 빛을 차단한 뒤 공초점 레이저 현미경 (Confocal laser scanning microscope, LSM 510 META, Carl Zeiss, Germany)으로 하이드로겔 내부에 살아있는 세포와 죽은 세포를 관찰하였다.

7, 14일 째의 샘플을 확인한 결과, 살아있는 세포를 나타내는 녹색은 시간이 지남에 따라 증가하였으며, 0.5% Al/Ta 하이드로겔에서 가장 많이 나타남을 확인하였다.

실험예 2-4: Ta/Al 하이드로겔 내부의 세포의 부착과 이동 분석(전자주사현미경 관찰)

Al/Ta 하이드로겔에서 RPE 세포의 부착과 이동양상을 확인하기 위해 전자주사현미경 (Bio-LV-SEM, SN-3000 Hitachi, Japan)을 이용하여 관찰하여 도 8에 나타내었다.

5×10⁵ cells/ml 세포를 파종한 하이드로겔을 7, 14일 동안 배양하였다. 배양액을 제거 하고 PBS로 세척한 후, 2.5% 글루타알데하이드 (Sigma-aldrich)로 24시간 동안 고정하고, 딥프리져에 얼려서 동결건조하였다. 건조된 지지체를 자른 후 단면을 관찰하기 위해 금속판에 카본테이프를 부착하여 지지체를 고정시키고 백금 코팅하였다. 이를 전자주사현미경 (Bio-LV-SEM, SN-3000 Hitachi, Japan)을 이용해 지지체에서의 세포 부착과 이동양상을 관찰하였다.

실험결과, 대조군인 Al 하이드로겔보다 Ta가 포함된 Al/Ta 하이드로겔에서 RPE 세포의 부착과 이동이 잘 일어났으며, 특히, 그중에서도 0.5% Ta/Al 하이드로겔에서 RPE 세포의 부착과 이동이 가장 잘 일어났음을 확인하였다.

본 발명에 따른 망막색소상피 재생용 Ta/Al 하이드로겔은 망막의 조직 재생에 적용 가능하며, 그 외 타 장기 조직재생의학 분야에 이용 가능하다.

Claims (14)

1. 타우린(Ta) 및 알지네이트(Al)를 포함하는 망막세포 재생용 하이드로겔 조성물.
2. 청구항 1에 있어서, 망막색소상피 재생용인 것을 특징으로 하는 하이드로겔 조성물.
3. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 알지네이트는 총 중량 100 중량부 대비 1 내지 20중량부가 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 알지네이트는 총 중량 100 중량부를 대비 1.5중량부가 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 타우린은 총 중량 100 중량부 대비 0.1내지 2중량부가 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 제1항에 있어서, 상기 조성물에 포함되는 타우린은 총 중량 100 중량부 대비 0.5중량부가 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 조성물을 포함하되, 타우린과 알지네이트로 이루어진 가교결합에 의해 형성된 캡슐 내에 RPE세포를 함유하는 망막세포 재생용 하이드로겔 조성물.
8. 청구항 제7항에 따른 하이드로겔 조성물을 포함하는 망막색소상피 재생용 하이드로겔형 주사제 조성물.
9. 알지네이트 수용액을 제조하는 단계; 상기 알지네이트 수용액에 타우린을 첨가하여 하이드로겔을 제조하는 단계;를 포함하는 하이드로겔 조성물의 제조방법.
10. 알지네이트 수용액을 제조하는 단계; 상기 알지네이트 수용액에 타우린을 첨가하여 하이드로겔을 제조하는 단계; RPE 세포를 혼합하는 단계; 및 2가 양이온 수용액의 혼합하여 알지네이트와 타우린을 가교시키는 단계; 상기 세포가 혼합된 하이드로겔을 배양하는 단계를 포함하는, 캡슐화한 망막색소상피 세포를 포함하는 망막색소상피 재생용 하이드로겔형 주사제 조성물의 제조방법.
11. 제9항에 있어서, 상기 하이드로겔 조성물은 0.1~1.0M의 CaCl₂를 이용하여 가교하는 것을 특징으로 하는 하이드로겔 조성물.
12. 제9항에 있어서, 상기 하이드로겔 조성물은 0.5M의 CaCl₂를 이용하여 가교하는 것을 특징으로 하는 하이드로겔 조성물.
13. 제10항에 있어서, 상기 하이드로겔형 주사제 조성물은 0.1~1.0M의 CaCl₂를 이용하여 가교하는 것을 특징으로 하는 하이드로겔형 주사제 조성물.
14. 제10항에 있어서, 상기 하이드로겔형 주사제 조성물은 0.5M의 CaCl₂를 이용하여 가교하는 것을 특징으로 하는 하이도르겔형 주사제 조성물.
    
    

Images