KR20190071785A - 인터페론 감마 관련 적응증의 치료 또는 예방을 위한 방법, 조성물 및 투여 요법 - Google Patents

인터페론 감마 관련 적응증의 치료 또는 예방을 위한 방법, 조성물 및 투여 요법 Download PDF

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월터 펠린
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Abstract

본 개시내용은 일반적으로 IFNγ 수준 상승과 연관된 증상 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행 지연, 또는 완화를 위한 방법, 조성물 및 투여 요법에 관한 것이다.

Description

인터페론 감마 관련 적응증의 치료 또는 예방을 위한 방법, 조성물 및 투여 요법
관련 출원
본 출원은 2016년 10월 24일에 출원된 미국 가출원 번호 62/411,783의 이익 및 그에 대한 우선권을 주장하며, 상기 가출원의 내용은 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다.
본 발명의 기술분야
본 개시내용은 일반적으로 인터페론 감마(IFNγ, IFN 감마) 수준 상승과 연관된 증상, 예컨대, 예를 들어, 혈구탐식성 림프조직구증(HLH: hemophagocytic lymphohistiocytosis), 출혈열, CAR-T 세포 요법, 이식 실패, 이식 거부, 이식편 대 숙주 질환(GvHD: Graft-versus-host disease), 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행 지연, 또는 완화를 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 본 개시내용은 또한 이식된 생물학적 물질의 생존을 연장시키기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 배경
인간 인터페론 감마(IFNγ, IFN 감마)는 활성화된 T 림프구 및 자연 살해 세포에 의해 생산되는 림포카인이다. 이는 항증식 및 면역조절 활성을 나타내고, 면역계의 대부분의 1차 세포 상의 이종이량체 수용체인 IFNγ-R에 결합하고, 염증을 유발하는 이벤트의 캐스케이드를 유발한다. IFNγ의 면역조절 활성은 많은 임상 병태에서 유익한 효과를 보인다고 알려져 있다. 그러나, IFNγ 활성이 해로운 효과를 보인다고 알려진 임상 환경도 다수 존재한다. 예를 들어, 자가면역 질환은 자가면역 환자의 혈액 및 이환 조직에서 높은 수준의 IFNγ와 연관이 있다. IFNγ 활성은 또한 악액질 및 패혈증 쇼크와 같은 질환 상태와 상호연관성이 있었다.
IFNγ는 많은 장애에 연루되어 왔으며; 항IFNγ 작용제가 치료제로서 개발되고 있다.
본 발명의 요약
다양한 측면에서, 본 발명은 IFN-g 수준 상승과 연관된 질환, 장애 또는 병태의 치료를 위한 다중의 가변 용량 치료 요법을 제공한다.
한 측면에서, 본 발명은 피험체에게 제1 용량 및 제2 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체를 정맥내로 투여함으로써 인간에서 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하는 방법을 제공한다. 피험체는 성인 피험체 또는 소아 피험체이다. 제1 용량은 1.0 또는 3.0 mg/kg(피험체의 체중)이고, 제2 용량은 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(피험체의 체중)이다. 임의적으로, 1.0 mg/kg(피험체의 체중)인 제3 용량이 투여된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 인간 소아 피험체에게 제1 용량 및 제2 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체를 정맥내로 투여함으로써 인간 소아 피험체에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하는 방법을 제공한다. 제1 용량은 6.0 mg/kg(피험체의 체중)이고, 제2 용량은 3.0 mg/kg(피험체의 체중)이다. 임의적으로, 6.0 mg/kg(피험체의 체중)인 제3 용량이 투여된다.
추가 측면에서, 본 발명은 인간 성인 피험체에게 제1 용량 및 제2 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체를 정맥내로 투여함으로써 인간 성인 피험체에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하는 방법을 제공한다. 제1 용량은 3.0 mg/kg(피험체의 체중) 또는 6.0 mg/kg(피험체의 체중)이고, 제2 용량은 10 mg/kg(피험체의 체중) 이하이다. 예를 들어, 제2 용량은 1.0, 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg이다. 임의적으로, 10.0 mg/kg(피험체의 체중) 미만인 제3 용량이 투여된다. 예를 들어, 제3 용량은 1.0, 3.0, 또는 6.0 mg/kg(피험체의 체중)이다.
추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 인간 피험체에게 제1 용량 및 제2 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체를 정맥내로 투여함으로써 인간 피험체에서 병태를 치료하는 방법을 제공한다. 피험체는 성인 피험체 또는 소아 피험체이다. 병태는 이식 거부, 예컨대, 고형 장기 이식 장애 또는 골수 급성 이식편 거부이다. 병태는 이식편 대 숙주 질환, 방종양성 소뇌 변성, 출혈열, 사르코이드증, 또는 성인형 스틸병이다. 대안적으로, 본 방법은 CART 세포 요법을 받은 이후에 피험체에게 수행된다. 제1 용량은 1.0 내지 10 mg/kg(피험체의 체중)이고, 제2 용량은 1.0 내지 10 mg/kg(피험체의 체중)(피험체의 체중)이다. 예를 들어, 제2 용량은 1.0, 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg이다. 바람직하게는, 제2 용량은 제1 용량보다 높거나, 또는 낮다. 임의적으로, 1.0 내지 10 mg/kg(피험체의 체중)인 제3 용량이 투여된다. 예를 들어, 제1, 제2, 또는 제3 용량은 1.0, 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(피험체의 체중)이다.
인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함한다. 예를 들어, 항체는 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
항체 용량은 1 hr, 6 hr 또는 12 hr 이내에 투여된다.
제2 용량은 제1 용량 후 3일마다인 제1 치료 기간 동안 투여된다. 추가로, 제2 용량은 제1 치료 기간의 완료 후 제2 치료 기간 동안 투여된다. 제2 치료 기간은 예를 들어, 주 2회이다.
항체 용량은 단일 주사로서 투여된다.
항체는 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여된다.
임의적으로, 본 발명의 방법은 항체 투여 직전에 덱사메타손을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 덱사메타손은 적어도 10 mg/m2 또는 적어도 5 mg/m2인 용량으로 투여된다.
피험체는 이전에 HLH에 대해 치료받은 적이 없는 피험체이다.
다양한 측면에서, 본 방법은 피험체에게 적어도 제2 작용제를 투여하는 단계를 포함한다. 제2 작용제는 치료제, 항염증제, 및/또는 면역억제제이다.
본 발명에서는 또한 1 mL당 5 mg 또는 25 mg의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체; 1.55 mg의 L-히스티딘, 3.14 mg의 L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg의 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg의 폴리소르베이트 80을 포함하고, pH가 5.8 내지 6.2인 주사가능한 약학 제제도 포함한다.
추가 측면에서, 본 발명은 주사용으로 적합한 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 5 mg/ml 또는 25 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알을 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 주사용으로 적합한 10 ml 또는 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 25 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알을 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다.
추가의 또 다른 측면에서, 본 발명은 주사용으로 적합한 2 ml 또는 10 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 5 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알을 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다.
인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함한다. 예를 들어, 항체는 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
상기 측면 또는 실시양태 중 임의의 것은 임의의 다른 측면 또는 실시양태와 조합될 수 있다.
달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명과 관련된 분야의 숙련가가 통상 이해하는 것과 동일한 의미를 가진다. 비록 본원에 기술된 것과 유사하거나, 또는 그와 등가인 방법 및 물질이 본 발명의 실시에서 사용될 수 있지만, 적합한 방법 및 물질은 하기에 기술한다. 본원에서 언급된 모든 공개문헌, 특허 출원, 특허, 및 다른 참고문헌들은 그 전문이 명백하게 참조로 포함된다. 상충하는 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선할 것이다. 추가로, 본원에 기술된 물질, 방법, 및 실시예는 단지 예시적인 것이며, 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
본 발명의 다른 특징 및 이점은 하기 설명되는 설명 및 청구범위로부터 자명해질 것이며, 그에 포함된다.
도면의 간단한 설명
도 1은 원발성 HLH 환자에서 진행 중인 2상 예비 연구에서 NI-0501 항체 주입 후 24 h째에 투약 전 혈청 CXCL9 수준과 총 IFNγ 수준 사이의 상호연관성을 도시한 그래프이다.
도 2는 원발성 HLH 환자에서 진행 중인 2상 예비 연구에서 NI-0501 항체 주입 후 24 h째에 혈청 CXCL9 수준과 총 IFNγ 투약 전 수준 사이의 상호연관성을 도시한 그래프이다.
도 3A 및 3B는 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA: systemic Juvenile Idiopathic Arthritis)에 대해 속발성인 대식세포 활성화 증후군(MAS: Macrophage Activation Syndrome) 환자 및 활동성 sJIA 환자에서 혈청 CXCL9 수준과 IFNγ 수준 사이의 상호연관성을 도시한 일련의 그래프이다.
도 4A-1, 4A-2, 4B-1, 4B-2, 4C-1, 4C-2, 4D-1, 및 4D-2는 활동성 sJIA 및 sJIA에 대해 속발성인 MAS 환자에서 IFNγ 및 혈청 CXCL9 수준과 임상 파라미터 사이의 상호연관성을 도시한 일련의 그래프이다.
도 5는 검출불가능한 수준의 IFNγ 유도성 케모카인으로 나타난 바와 같이 IFNγ가 완전히 중화되었다는 것을 도시한 그래프이다.
도 6은 NI-0501 치료 동안(치료 2주 및 치료 종료) HLH 질환 활성의 개선을 도시하는 그래프이다: 혈소판 계수 >100 x109/L, 호중구 계수 >1x109/L, 피브리노겐 >1.5 g/L 및 페리틴이 적어도 25% 감소된 환자의 비율(%).
도 7A 및 7B는 NI-0501 주입 후 24 h째에 투약 전 CXCL9와 총 IFNγ 수준 사이의 상호연관성을 도시한 일련의 그래프이다. 도 7B에 제시된 인서트는 NI-0501 치료 동안 개별 IFNγ 및 CXCL9 프로파일의 예를 도시하는 것이다.
도 8A, 8B, 8C, 및 8D는 대응 샘플이 샘플링시 활동성 MAS 동안 및 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA(Act sJIA) 동안 이용가능한 개별 환자에서 IFNγ 및 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 혈청 수준을 도시한 일련의 그래프이다. 유의도 수준(p)은 대응 표본에 대해 윌콕슨(Wilcoxon) 순위 검정을 이용하여 얻었다.
도 9A 및 9B는 sJIA 과정에서 MAS의 3가지 에피소드를 나타내는 한 환자에서 백혈구(WBC: white blood cell) 및 혈소판(PLT) 계수 및 페리틴 수준(도 9A)의 변화 및 IFNγ, CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 혈청 수준의 변화(도 9B)를 도시한 일련의 그래프이다.
도 10A, 10B, 10C, 10D, 10E, 10F, 10G, 10H, 10I, 및 10J는 샘플링시 활동성 MAS 환자에서(적색 동그라미 표시) 및 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자에서(검은색 삼각형 표시) 페리틴 수준, 호중구 및 혈소판 계수와, 및 LDH 및 ALT 수준과 IFNγ 및 CXCL9의 수준의 상호연관성을 도시한 일련의 그래프이다. 스피어만 상관 계수(Rs) 및 각 상호연관성의 유의도 수준(p)은 하기 표 3에 제시되어 있다.
도 11A, 11B, 11C, 11D, 11E, 및 11F는 MAS에서 CXCL9 및 CXCL10 생산과 IFNγ의 관계를 도시한 일련의 그래프이다. 패널 A: 샘플링시 MAS 환자에서 CXCL9 및 CXCL10의 수준과 IFNγ 수준의 상호연관성. 스피어만 상관 계수(Rs) 및 각 상호연관성의 유의도 수준(p)은 하기 표 3에 제시되어 있다.
도 12는 실시예 7에 제시된 연구의 스크리닝, 치료, 및 추적 조사 부분을 개략적으로 나타낸 것이다.
도 13A 및 13B는 NI-0501 치료 개시시 체온이 > 37.5℃인 2명의 환자에서 NI-0501 투여가 체온에 미치는 효과를 도시한 그래프이다.
도 14는 환자에서 NI-0501 투여가 호중구 계수에 미치는 효과를 도시한 일련의 그래프와 표이다.
도 15는 환자에서 NI-0501 투여가 혈소판 계수에 미치는 효과를 도시한 일련의 그래프와 표이다.
도 16은 환자에서 NI-0501 투여가 페리틴의 혈청 수준에 미치는 효과를 도시한 일련의 그래프와 표이다.
도 17은 환자에서 NI-0501 투여가 글루코코르티코이드 점감에 미치는 효과를 도시한 일련의 그래프와 표이다.
도 18은 NI-0501의 투여가 HSCT 시점까지 IFNγ 중화를 유지시켰다는 것을 도시한 그래프이다. 또한, NI-0501 치료에 대한 HLH 반응은 이식 때까지 지속되었다.
도 19는 실시예 8에 제시된 연구의 스크리닝, 치료, 및 추적 조사 부분을 개략적으로 나타낸 것이다.
본 발명의 간단한 설명
본원에서 제공되는 조성물 및 방법은 IFNγ에 결합하고, 그를 중화시키는, 본원에서 NI-0501로도 지칭되는 완전 인간 IgG1 항 인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체(mAb: monoclonal antibody)를 사용한다. NI-0501은 가용성 및 수용체(IFNγR1) 결합된 형태의 IFNγ에 결합한다. NI-0501은 인간 IgG1이기 때문에, Fcγ 수용체에 관여하고, 보체에 결합할 수 있는 능력을 포함하는, 상기 면역글로불린 아이소타입의 특징을 보유한다. IFNγ는 면역계의 가장 강력한 다면발현성 사이토카인 중 하나이다. 이는 바이러스 및 세포내 바이러스 감염에 대한 선천 및 적응 면역에 중요하다. IFNγ는 그의 수용체에 결합한 후에 다양한 생리학적 반응 및 세포 반응을 일으키는 역할을 한다. 지난 20년에 걸쳐 수행된 수많은 연구는 염증 질환의 발병 기전 및 유지와 IFNγ를 연관시켜 왔다(예컨대, 문헌 [Billiau A. "Interferon-gamma: biology and role in pathogenesis." Adv. Immunol. 1996; 62:61-130; Schoenborn JR, Wilson CB. "Regulation of interferon-gamma during innate and adaptive immune responses." Adv. Immunol. 2007; 96:41-101]; 및 [Zhang SY, Boisson-Dupuis S, Chapgier A et al. "Inborn errors of interferon (IFNγ)-mediated immunity in humans: insights into the respective roles of IFN-alpha/beta, IFN-gamma, and IFN-lambda in host defense." Immunol. Rev. 2008; 226:29-40] 참조). IFNγ는 선천 면역 반응의 일부로서 자연 살해 세포(NK: natural killer) 및 자연 살해 T(NKT: natural killer T) 세포에 의해, 및 일단 항원 특이적 면역 반응이 발생하고 나면, CD4 Th1 및 CD8 세포독성 T 림프구(CTL: cytotoxic T lymphocyte) 이펙터 T 세포에 의해서 주로 생산된다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법은 IFNγ 상승과 연관된 질환, 장애 및 병태 치료에 유용하다. 본 발명의 조성물 및 방법을 사용하여 치료 또는 예방될 수 있는 질환, 장애 및 병태로는 예를 들어, 혈구탐식성 림프조직구증(HLH), 이식편 대 숙주 질환, 방종양성 소뇌 변성, 출혈열, 사르코이드증, 성인형 스틸병, 이식 실패, 이식 거부, 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애를 포함한다. 이식 거부는 고형 장기 이식 장애, 골수, 급성 이식편 거부를 포함하였다. 추가로, 조성물 및 방법은 또한 CAR-T 세포 요법의 부작용을 치료 또는 완화시키는 데에도 유용하다.
HLH는 면역계의 현저한 활성화를 보이면서, NK 및 CD8+ T 세포에 의한 세포독성 기능이 심각하게 손상되거나, 또는 그 기능이 없는 것을 특징으로 하는 증후군이다. HLH는 원발성(유전성/가족성) HLH 및 속발성 HLH를 포함하며, 이 둘 모두 임상적으로 면역계의 조절장애로 설명되며, 다양한 조직 및 장기에 해로운 결과를 보이는 극심한 고사이토카인 혈증을 일으킨다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O et al. "Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis." Blood 1991; 78:2918-2922]). HLH 분류는 하기 표 9에 제시되어 있다. HLH는 성인 및 소아 환자, 둘 모두에서 발생한다.
Figure pct00001
원발성 HLH는 이종의 보통 염색체 열성 질환이다. 원발성 HLH는 유럽에서 1/50,000 생존 출생률의 예측 유병률로 대부분 영아기 및 유아기에 나타난다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O, Ost A. Incidence in Sweden and clinical features of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Acta Paediatr. Scand. 1991; 80:428-435]). 이 질환은 치료받지 않을 경우, 증상 발병 후 2개월 미만의 중앙 생존기간으로 예외 없이 치명적이다(문헌 [Janka GE. Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Eur. J. Pediatr. 1983; 140:221-230]; 및 [Arico M, Janka G, Fischer A, Henter JI, Blanche S, Elinder G, Martinetti M, Rusca MP hemophagocytic lymphohistiocytosis Report of 122 children from the International Registry. FHL Study Group of the Histiocyte Society. Leukemia. 1996 Feb; 10(2):197-203]).
HLH에 존재하는 손상된 세포독성 기능은 고사이토카인 혈증 및 혈구 탐식을 일으킨다. 이는 결국에는 HLH의 전형적인 모든 증상을 유발한다(문헌 [Dhote R, Simon J, Papo T et al. Reactive hemophagocytic syndrome in adult systemic disease: report of twenty-six cases and literature review. Arthritis Rheum. 2003; 49:633-639]; [Risdall RJ, McKenna RW, Nesbit ME et al. Virus-associated hemophagocytic syndrome: a benign histiocytic proliferation distinct from malignant histiocytosis. Cancer 1979; 44:993-1002]; 및 [Risdall RJ, Brunning RD, Hernandez JI, Gordon DH. Bacteria-associated hemophagocytic syndrome. Cancer 1984; 54:2968-2972]). HLH의 전형적인 증상으로는 예를 들어, 지속적 발열, 비장 비대, 간비대, 혈구감소증, 고페리틴 혈증, 고중성지방혈증, 저피브리노겐 혈증, 혈구 탐식, 고사이토카인 혈증, 및/또는 림프조직구성 침윤, 골수 형성 저하증, 수막 침윤을 포함한다.
HLH 환자에서 상승된 사이토카인 중에는 IFNγ, 인터류킨 6(IL-6), IL-10, 종양 괴사 인자(TNF: tumor necrosis factor) α, IL-8, 대식세포 콜로니 자극 인자(MCSF: macrophage colony stimulating factor) 및 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF: granulocyte-macrophage colony-stimulating factor)가 있다.
또한, HLH는 감염, 류마티스성 또는 신생물 질환의 과정에서 발생할 수 있으며, 이 경우에, 속발성 HLH로 지칭된다. 속발성 HLH는 원발성 형태의 동일한 징후 및 증상을 나타내고, 똑같이 중증일 수 있다. 속발성 HLH의 현행 치료는 원질환의 원인을 다루는 것을 목표로 한다. 이는 분명히 리슈만편모충증과 같은 감염에 의해 유발된 HLH의 경우이다. 중요하게는, 특정 감염, 특히 바이러스 감염, 예컨대, CMV 또는 EBV에 기인하는 것들의 존재는 매우 빈번하게 원발성 형태의 HLH의 징후의 유발인자이다. 이러한 관찰 결과는 또한 원발성 HLH의 동물 모델에서 림프구성 맥락수막염 바이러스(LCMV: lymphocytic choriomeningitis virus)로 감염이 질환의 발생에 필요하다는 증거에 의해 뒷받침된다(문헌 [Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P. An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004; 104:735-743]; [Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F et al. Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV- infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol. Med. 2009; 1:112-124]; [Kogl T, Muller J, Jessen B et al. Hemophagocytic lymphohistiocytosis in syntaxin-11-deficient mice: T- cell exhaustion limits fatal disease. Blood. 2013; 121:604-613]; 및 [Sepulveda FE, Debeume F, Menasche G et al. Distinct severity of HLH in both human and murine mutants with complete loss of cytotoxic effector PRF1, RAB27A, and STX11 Blood. 2013; 121:595-603]).
HLH가 신생물 질환, 특히 혈액암 중에 나타날 때, 대개 환자 병태의 중증도는 특별하게 원질환을 다루기 전에 HLH의 즉각적인 치료를 필요로 한다.
류마티스성 질환, 예컨대, 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA) 및 전신 홍반 루푸스(SLE: Systemic Lupus Erythematosus)를 앓는 환자에서 HLH의 징후 및 증상의 존재는 대개 류마티스 전문의에 의해 대식세포 활성화 증후군(MAS)으로 지칭되며, 류마티스성 질환 자체의 출현에 선행할 수 있다. 대부분의 MAS 환자는 손상된 NK 및 퍼포린 기능 검사를 받고, 상당한 수의 환자가 PRF1 및 UNC13D에서 다형태 또는 이형접합성 돌연변이를 나타낸다. 이는 매우 증증의 생명을 위협하는 병태이지만, 이는 대개 대부분 경우에 코르티코스테로이드 및 시클로스포린으로 이루어지는 적절한 치료가 시작되면 치유된다. 그러나, MAS 발생 환자 중 대략 15%에서, 질환은 제어하기 어려울 수 있고, 에토포시드의 사용이 고려될 수 있다(문헌 [Minoia F, Davi S, Horne AC et al. Clinical Features, Treatment, and Outcome of Macrophage Activation Syndrome Complicating Systemic Juvenile Idiopathic Arthritis: A Multinational, Multicenter Study of 362 Patients. Arthritis & Rheumatism 2014; 66: 3160-3169]).
원발성 HLH는 주로 아동기 질환으로 인정되고 있지만, HLH는 성인에서 발견될 수 있는 병태이고, 관심이 증가하면서 이것이 과거에 인정된 것보다 더 빈번하게 발생할 수 있다는 것을 나타낸다. 대부분의 성인 환자에서, 질환은 악성 종양(주로 비호지킨 림프종), 감염, 자가 염증 또는 자가면역 질환 및 의원성 면역 결핍증 중에 발생한다.
현재, HLH의 치료에 대해 승인받은 약물은 없다. 그러나, 본 분야의 전문가들은 HLH 환자 관리를 위한 가이드라인을 확립하였다(문헌 [Henter JI, Horne AC, Arico' M, Egeler RM, Filipovich AH, Imashuku S Ladisch S, McClain K, Webb D, Winiarski J, and Janka Diagnostic and Therapeutic Guidelines for Hemophagocytic Lymphohistiocytosis Blood Cancer 2007; 48:124-13.1]; [Henter JI, Samuelsson-Horne A, Arico M et al. Treatment of hemophagocytic lymphohistiocytosis with HLH-94 immunochemotherapy and bone marrow transplantation. Blood 2002; 100:2367-2373]; 및 [Jordan MB, Allen CE, Weitzman S, Filipovich AH, McClain KL. How I treat hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 2011; 118:4041-4052]).
원발성 HLH 환자의 관리는 현재 하기 단계로 구성된다(문헌 [Henter et al, Blood Cancer 2007]): (i) 코르티코스테로이드와 면역억제제(예컨대, 에토포시드, CsA, 알렘투주맙, 항흉선 글로불린)와 조합된 8주의 유도 요법; (ii) 이식까지 유지 요법; 및 (iii) 유전적 결합이 확인된 환자 및 결국 질환과 관련된 돌연변이가 없는 극도로 중증인 HLH 사례의 모든 환자 이식.
유도 요법의 주요 목적은 HLH의 특징이 되는 생명을 위협하는 염증 과정을 억제하여 이식이 필요한 환자에서 이식을 가능하게 하는 것이다(문헌 [Horne A, Janka G, Maarten ER et al. Haematopoietic stem cell transplantation in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 2005; 129:622-630]). 이식은 높은 침투도의 유전적 돌연변이와 연관된 HLH를 위한 유일한 근치적 치료이다(문헌 [Henter et al., Blood 2002]).
상기 가이드라인의 채택에 불구하고, 원발성 HLH의 전체 사망률은 여전히 대략 40 내지 50%이다(문헌 [Henter et al., Blood 2002; Trottestam H, Horne A, Arico M et al. Chemoimmunotherapy for hemophagocytic lymphohistiocytosis: long-term results of the HLH-94 treatment protocol. Blood 2011; 118:4577-4584]).
심각한 단기간 및 장기간 안전성 문제와 연관된 약물을 유도 기간에 사용해야 하는 필요성은 이미 높은 사망률의 추가적인 원인이 된다. 본원에서 제공되는 조성물 및 방법은 낮은 독성을 가지며 효능을 보장하는 표적화된 치료로서 개발되었다.
지난 수년간 HLH의 발생에 IFNγ의 중추적 역할에 대한 증거가 증가하였다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O et al. Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991; 78:2918-2922]; [Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P. An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004; 104:735-743]; [Pachlopnik SJ, Ho CH, Chretien F et al. Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol. Med. 2009; 1:112-124]; [Behrens EM, Canna SW, Slade K et al. Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J. Clin. Invest 2011; 121:2264-2277]; [Xu XJ, Tang YM, Song H, MD, Yang SL, Xu WQ, Zhao N, Shi SW, Shen HP, Mao JQ, Zhang LY, and Pan BH, Diagnostic Accuracy of a Specific Cytokine Pattern in Hemophagocytic Lymphohistiocytosis in Children J Pediatr 2011]; 및 [Risma K, Jordan MB. Hemophagocytic lymphohistiocytosis: updates and evolving concepts. Curr. Opin. Pediatr. 2012; 24:9-15]).
원발성 형태의 HLH의 특징이 되는 유전자의 돌연변이는 모두 결국 세포독성 활성에 손상을 주는 동일한 과정에 관여하는 단백질에 영향을 준다. 퍼포린 돌연변이는 HLH 환자에서 최초로 확인되었다.
퍼포린 녹아웃(KO: knocked out) 마우스가 인간 질환의 적절한 모델로서 간주된다. 실제로, 상기 마우스는 일단 LCMV로 감염되고 나면, 인간 질환의 모든 진단 및 많은 임상 및 검사실(laboratory)의 특징적인 소견을 나타내고, 이들은 치료받지 않을 경우 사망한다. 이러한 이유에서, 퍼포린 KO 마우스는 HLH의 병태생리를 연구하는데 사용되어왔다. 이들이 발생하는 HLH 유사 병상은 항원 자극에 반응하여 생산된 CD8+ T 세포 및 IFNγ에 의존적이다.
IFNγ의 높은 순환 수준이 항IFNγ 항체의 투여로 중화될 때, 임상 및 검사실의 이상소견이 회복될 뿐 아니라, 생존율이 극적으로 향상된다는 것이 증명되었다. 대조적으로, 임의의 다른 사이토카인의 차단은 생존에 영향을 주지 않았다(문헌 [Jordan et al., Blood 2004]; [Pachlopnik et al., EMBO Mol. Med. 2009]).
속발성 HLH의 2가지 모델이 NI-0501 개발 프로그램과 관련하여 조사되었다. 한 모델에서, CpG의 반복 투여(TLR9 자극 유발)를 이용하여 감염에 대해 속발성인 HLH의 모델로서 건강한 마우스(즉, 세포독성 경로의 정상적인 유전적 특징을 가지는 것)에서 만성의 중증 과다자극을 모방하였다. 비록 이들 마우스가 반드시 사망하는 것은 아니지만, 이들은 HLH의 전형적인 임상 및 검사실 소견을 나타낸다. IFNγ가 항IFNγ 항체 투여로 중화될 때, 질환의 임상 및 검사실 소견이 회복된다. 흥미롭게도, 이 모델에서, 항IFNγ 항체 투여가 관련 표적 조직, 예컨대, 간 및 비장에서도 IFNγ 효과를 완전히 중화시킨다는 것이 증명되었다(원고 준비중).
류마티스성 질환과 관련하여 발생하는 속발성 HLH의 병태생리를 연구하기 위해서, 속발성 형태의 HLH와 가장 빈번하게 연관되어진 류마티스성 질환인 sJIA 환자에서 발생하는 것과 유사하게 고수준의 IL-6을 발현하는 IL-6 형질전환 마우스를 이용하여 동물 모델을 생성하였다. Toll 유사 수용체(TLR: Toll Like Receptor) 리간드로 유발될 때, 상기 마우스는 인간 질환의 많은 소견으로 인해 사망한다(문헌 [Strippolli R, Carvallo F, Scianaro R et al. Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: Implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis & Rheumatism 2012; 64: 1680-1688]). 상기 마우스에서, IFNγ가 항IFNγ 항체의 투여로 중화될 때, 생존은 크게 향상되고, 검사실 파라미터는 회복되었다(Prencipe G et al, 원고 준비중).
HLH에서 IFNγ의 중요성을 더 크게 강화시키는 것은 원발성 HLH 환자에서 고농도의 순환 IFNγ 수준이다(문헌 [Henter et al., Blood 1991]; [Xu et al., J Pedatr 2011]). HLH 진단에서 치료 및 추적 조사까지 모니터링된 일련의 71명의 환자에서, IFNγ 수준이 모든 환자에서 정상의 상한(17.3 pg/mL)보다 높았고, 특히 53.5%는 1,000 pg/mL를 넘는 수준을 보였다. 또한, IFNγ 수준이 조기에 신속하게 상승하고, HLH의 효과적인 치료시 48시간 내에 > 5,000 pg/mL에서 정상으로 떨어질 수 있다는 것이 보고되었다.
더 최근에, 속발성 형태의 HLH 환자의 관찰 연구에서, 고수준의 IFNγ는 감염에 대해 속발성인 HLH 환자 및 sJIA와 관련하여 발생하는 HLH 환자 모두에서 증명되었다. IFNγ에 의해 유도된다고 알려진 3가지 케모카인 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준 또한 상당히 높았다. 주목할만하게도, IFNγ, 및 3가지 IFNγ 케모카인의 수준이 페리틴, 혈소판 계수 및 트랜스아미나제와 같은 질환 중증도의 검사실 파라미터와 유의적인 상호연관성이 있다는 것이 확인되었다(Bracaglia et al, 원고 제출).
활성화된 림프구 및 조직구에 의한 고사이토카인 혈증 및 장기 침윤은 모든 HLH 증상의 원인이 되고, CD8+ T 세포 과다활성 및 높은 IFNγ 수준에 의존적이기 때문에, IFNγ의 중화는 합리적인 치료 접근법이 된다. 실제로, 현재 CD8+ T 세포를 특이적으로 표적화하는 작용제는 이용불가능하고, IFNγ 하류의 개별 사이토카인을 표적화하는 것은 반드시 실현 가능하지는 않을 것이다.
따라서, HLH 질환의 발병 기전에서 IFNγ가 중요한 역할을 한다는 것을 확인해주는, 원발성 및 속발성 HLH의 동물 모델로부터의 데이터 및 원발성 및 속발성 HLH 둘 모두를 앓는 환자에서 이루어진 관찰 결과를 기초로 하여, IFNγ의 중화는 독성이 없거나, 제한된 독성을 보이면서 효과적이어야 하는 HLH의 표적화 요법을 개발하기 위한 확고한 근거를 제공한다.
본 개시내용은 또한 환자가 단독으로, 또는 하나 이상의 추가의 인터페론γ(IFNγ) 관련 바이오마커와 함께 조합하여 상승된 수준의 CXCL9를 보이는, 장애를 앓는 환자 집단을 확인하거나, 또는 다르게는 그를 정제하는 데 유용한 조성물 및 방법을 제공한다. 특히, 본 개시내용은 혈구탐식성 림프조직구증(HLH), 속발성 HLH, 및/또는 대식세포 활성화 증후군(MAS)에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다.
동물 모델에서 일련의 증거는 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)에서 IFNγ의 중추적 병원성 역할을 나타낸다. 또한, 높은 수준의 IFNγ가 HLH를 앓는 인간에서 발견된다. IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인인 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 높은 수준이 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA)과 관련하여 발생하는 속발성 HLH 형태인 활동성 MAS 환자에서 발견된다고 앞서 보고된 바 있다(예컨대, 문헌 [Bracaglia C., Caiello I, De Graaf K., et al. Pediatric Rheumatology 2014,12(Suppl 1):O3)] 참조). 마우스에서 간접적인 증거는 IFNγ가 주로 말초 조직에서 생산되고, 혈액 농도가 상대적으로 낮을 수 있다는 것을 제안한다.
대식세포 활성화 증후군(MAS)이라는 용어는 만성 염증성 류마티스성 질환의 중증의 잠재적으로 치명적인 합병증을 지칭한다. 이는 전형적으로 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA)과 관련하여 발생하며, 환자 중 10-20%가 질환 과정 중에 상기 증후군을 나타낸다. 이는 또한 비록 더 드물기는 하지만, 전신 홍반 루푸스, 가와사키병 뿐만 아니라, 다른 자가면역 및 자가염증성 장애에서 발생할 수 있다. sJIA에서, MAS는 전형적으로 질환 발병을 포함하는, 활성 질환 단계 동안 발생한다. 감염성 유발 인자는 높은 비율의 환자에서 확인될 수 있다. MAS의 전형적인 특징은 발열, 비장 비대, 출혈 및 간의 징후, 복합 장기 부전을 일으킬 수 있는 간, 중추신경계 및 신장 병발의 징후를 포함한다. 검사실 이상소견은 백혈구, 혈소판 및 헤모글로빈의 감소, 고아미노전달효소혈증, 페리틴의 현저한 증가 및 응고 시스템의 혈관내 활성화의 증거를 포함한다(문헌 [Ravelli, A., et al., Macrophage activation syndrome as part of systemic juvenile idiopathic arthritis: diagnosis, genetics, pathophysiology and treatment. Genes Immun. 13(4): p. 289-98]). MAS는 sJIA로 인한 사망자의 관련된 부분을 차지하는 상당한 이환율 및 사망률을 초래한다(문헌 [Minoia, F., et al., Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(11): p. 3160-9]; [Hashkes, P.J., et al., Mortality outcomes in pediatric rheumatology in the US. Arthritis Rheum, 2010. 62(2): p. 599-608]). 질환 발병기전에 관한 더욱 우수한 이해, 그 결과 새로운 치료 표적 확인 및 표적화 요법의 가능한 개발을 통하여 MAS의 관리 및 결과를 유의적으로 개선시킬 수 있다.
MAS는 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)의 대부분의 임상 소견 및 검사실 이상소견을 공유하고, 이는 실제로 현재 속발성 또는 반응성 HLH(sec-HLH) 중에서 분류된다(문헌 [Jordan, M.B., et al., How I treat hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood, 2011. 118(15): p. 4041-52]). 원발성 형태의 HLH(p-HLH)는 PRF1, UNC13D, STXBP2, STX11, RAB27A 및 XIAP를 비롯한, 과립 엑소시토시스에 관여하는 단백질을 코딩하는 유전자의 돌연변이에 의해 유발되며, 전형적으로 CD8+ 림프구 및 NK 세포의 결함 있는 세포독성 활성을 일으킨다. 현 분류에 따르면, 확인가능한 유전적 원인 및/또는 가족 유전이 존재하지 않을 경우, HLH는 속발성 또는 반응성으로 정의된다. Sec-HLH는 증명할 수 있는 유발 인자가 존재하지 않을 때에도, 또는 감염, 악성 종양 또는 류마티스성 질환과 관련하여 발생할 수 있으며, 후자는 보편적으로 MAS로 지칭된다. p-HLH의 동일한 원인 유전자의 낮은 침투도 변이체 또는 돌연변이로 인한 이형접합성과 MAS의 상호연관성, 및 일반적으로 sec-HLH의 상호연관성을 시사하는 많은 연구로 MAS 발생의 유전적 근거는 점차 풀리고 있다(문헌 [Kaufman, K.M., et al., Whole- exome sequencing reveals overlap between macrophage activation syndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis and familial hemophagocytic lymphohistiocytosis . Arthritis Rheumatol, 2014. 66(12): p. 3486-95]; [Vastert, S.J., et al., Mutations in the perforin gene can be linked to macrophage activation syndrome in patients with systemic onset juvenile idiopathic arthritis. Rheumatology (Oxford), 2010. 49(3): p. 441-9.]; [Zhang, K., et al., Macrophage activation syndrome in patients with systemic juvenile idiopathic arthritis is associated with MUNC13-4 polymorphisms . Arthritis Rheum, 2008. 58(9): p. 2892-6]; 및 [Zhang, M., et al., Genetic defects in cytolysis in macrophage activation syndrome. Curr Rheumatol Rep, 2014. 16(9): p. 439]; 및 [Bracaglia C, Sieni E, Da Ros M, et al. Mutations of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis (FHL) related genes and abnormalities of cytotoxicity function tests in patients with macrophage activation syndrome (MAS) occurring in systemic juvenile idiopathic arthritis (sJIA). Pediatric Rheumatology 2014, 12(Suppl 1):P53]). p-HLH와 MAS 사이에서 유전적 배경의 상기 유사성은 또한 공유된 발병 기전을 뒷받침한다.
p-HLH 환자 뿐만 아니라, p-HLH의 뮤린 모델에서의 연구는 결함 있는 세포독성 활성 및 항원 제시세포(APC: antigen-presenting cell)-CD8+ T 세포 크로스토크에서의 이상이 면역 반응의 결함 있는 침묵 및 비정상적인 T 세포 활성화를 일으킨다는 가설을 뒷받침한다. 이는 결과적으로 T 림프구 및 대식세포에 의해 염증유발 사이토카인의 제어되지 않는 면역 활성화 및 생산을 일으키고, 이는 장기 손상으로 이어진다. 퍼포린 결핍 마우스 및 Rab27 결핍 마우스에서 실시된 p-HLH의 동물 모델에서의 연구는 활성화된 CD8+ T 세포에 의해 생산된 인터페론-감마(IFNγ)의 중요한 역할을 시사한다. 퍼포린 결핍 마우스에서, IFNγ의 중화는 생화학적 및 혈액학적 이상소견의 회복으로 그렇지 않으면 치명적인 증후군의 생존으로 이어진다(문헌 [Jordan, M.B., et al., An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood, 2004. 104(3): p. 735-43]; [Pachlopnik Schmid, J., et al., Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV -infected perforin- and Rab27a -deficient mice. EMBO Mol Med, 2009. 1(2): p. 112-24]). 질환이 사망에 이르지 않은 Rab27 결핍 마우스에서, IFNγ의 중화는 중추 신경계를 포함한 말초 장기의 병발을 크게 개선시킨다(문헌 [Pachlopnik 2009]). 또한, HLH 2004 진단 가이드라인에 따라서(문헌 [My, L.T., et al., Comprehensive analyses and characterization of haemophagocytic lymphohistiocytosis in Vietnamese children. Br J Haematol, 2010. 148(2): p. 301-10]; [Takada, H., et al., Increased serum levels of interferon-gamma-inducible protein 10 and monokine induced by gamma interferon in patients with haemophagocytic lymphohistiocytosis. Clin Exp Immunol, 2003. 133(3): p. 448-53]; [Tang, Y., et al., Early diagnostic and prognostic significance of a specific Th1 / Th2 cytokine pattern in children with haemophagocytic syndrome. Br J Haematol, 2008. 143(1): p. 84-91]; [Xu, X.J., et al., Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J Pediatr, 2012. 160(6): p. 984-90 e1.]), 그러므로, 유전적 돌연변이의 존재를 반드시 기초로 하지 않고 진단받은 HLH 환자에서 높은 순환 IFNγ 수준이 발견된다. 상기 연구는 증명할 수 있는 유전적 원인이 없는 환자를 가변적이지만, 상당한 비율로 포함하였다는 것에 주목해야 한다(상기 문헌 동일).
본원에서 제공된 연구는 IFNγ의 생체내 생산의 바이오마커를 조사하기 위해서 IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인의 혈청 수준의 그들 자신과의 상호연관성 및 활동성 MAS 환자에서 질환 활동성의 검사실 파라미터와의 상호연관성을 평가하도록 디자인되었다. 특히, IFNγ, CXCL9, CXCL10, CXCL11 및 IL-6의 순환 수준을 sJIA 환자에서 측정하였고, 여기서, 환자의 약 37%(54명 중 20명)가 샘플링 시점에 MAS를 보였다. IFNγ 수준의 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11 수준과의 상호연관성과 같이, 질환 활동성 파라미터와 순환 수준과의 관계도 평가하였다. 일부 실시양태에서, 바이오마커는 약력학적 바이오마커로서 유용한 총 IFNγ 수준이다.
본원에서 증명된 바와 같이, IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인 CXCL9, CXCL10, 및 CXCL11의 수준은 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA에 비해 활동성 MAS에서 유의적으로 높았다. 활동성 MAS에서, 질환 중증도의 검사실 파라미터, 예컨대, 페리틴, 호중구, 혈소판, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 및 락테이트 데하이드로게나제는 IFNγ 및 CXCL9와 유의적인 상호연관성이 있었으며, CXCL10 및 CXCL11과는 더 낮은 정도로 유의적인 상호연관성이 있었으며; IL-6 수준과의 상호연관성은 확인되지 않았다. MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자에서, 검사실 파라미터와 사이토카인 수준 사이에 유의적인 상호연관성은 없었다. 활동성 MAS에서, IFNγ 수준은 CXCL9의 수준과 유의적인 상호연관성이 있었으며, CXCL10의 수준과는 더 낮은 정도로 유의적인 상호연관성이 있었으며, CXCL11의 수준과는 무관하였다.
활동성 MAS 환자에 존재하는 높은 수준의 IFNγ 및 CXCL9는 질환 중증도의 검사실 파라미터와 유의적인 상호연관성이 있다. 활동성 MAS 환자에서, IFNγ와 CXCL9는 밀접한 상호연관성이 있다. CXCL9는 IFNγ에 의해서만 유도되고, 다른 인터페론에 의해서는 유도되지 않는 것으로 나타났기 때문에(예컨대, 문헌 [Groom J.R. and Luster A.D. Immunol Cell Biol 2011, Feb; 89(2):207-15] 참조), 본원에 개시된 결과는 CXCL9가 MAS에서 IFNγ 생산의 바이오마커임을 증명해준다.
또한, 본원에서 제공된 연구는 IFNγ의 수준 및 IFNγ에 의해 유도된다고 알려진 3가지 케모카인인 케모카인(C-X-C 모티프) 리간드 9(CXCL9), CXL10 및 CXCL11의 수준이 MAS 합병 sJIA 환자에서 높지만, MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자에서 높지 않다는 것을 증명해준다. 또한, 상기 환자에서 IFNγ, CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준은 질환 중증도의 검사실 파라미터와 상호연관성이 있었다.
본 개시내용은 이식 실패, 이식 거부, 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애, 예컨대, 고형 장기 이식 장애, 골수 급성 이식편 거부와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 중화 항IFNγ 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하는 조성물 및 방법을 제공한다. 본 개시내용은 생물학적 물질을 포함하는 이식체, 또는 생물학적 물질을 포함하는 일련의 이식체를 받았거나, 또는 받고 있는 환자에서 이식편 대 숙주 질환(GvHD)의 증상을 치료, 억제, 그의 진행을 지연시키거나, 또는 다르게는 그를 호전시키기 위해 중화 항IFNγ 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하는 조성물 및 방법을 제공한다. 본 개시내용은 이식된 생물학적 물질의 생존을 연장시키기 위해 중화 항IFNγ 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하는 조성물 및 방법을 제공한다. 본 개시내용은 방종양성 소뇌 변성, 출혈열, 사르코이드증, 성인형 스틸병 또는 CART-T 세포 요법과 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 중화 항IFNγ 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 사용하는 조성물 및 방법을 제공한다.
본원에 제공된 조성물 및 방법은 예를 들어, 세포, 조직(들), 골수, 및/또는 비제한적인 예로서, 심장, 신장, 췌장, 간, 및/또는 장을 비롯한, 장기(들)를 포함하는 임의의 생물학적 물질을 이식시키는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 이식되는 생물학적 물질은 동종이계 생물학적 물질이다. 일부 실시양태에서, 이식된 생물학적 물질은 골수이다. 일부 실시양태에서, 이식된 생물학적 물질은 조혈 줄기 세포 집단이다. 일부 실시양태에서, 이식되는 생물학적 물질은 하나 이상의 간세포이거나, 또는 그로부터 유래된 것이다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 이식 실패, 이식 거부, 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 이식 실패로도 지칭되는 이식 거부는 급성이다. 일부 실시양태에서, 이식 거부는 초급성이다.
본 발명의 중화 항IFNγ 항체는, 예를 들어, 하기 표 1A에 제시된 중쇄 상보성 결정 영역(CDR), 표 1B에 제시된 경쇄 CDR, 및 그의 조합을 포함한다. 문헌 [Chothia et al. 1989, E.A. Kabat et al., 1991]에 의해 정의된 바와 같은 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 아미노산은 하기에 밑줄 및 이탤릭체 문자로 강조 표시되어 있다(문헌 [Chothia, C, et al., Nature 342:877-883 (1989)]; [Kabat, EA, et al., Sequences of Protein of immunological interest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, US Government Printing Office (1991)] 참조).
Figure pct00002
Figure pct00003
본 발명의 예시적인 항체는 예를 들어, PCT 공개 번호 WO 2006/109191(상기 출원의 내용은 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다)에 기재된 항IFNγ 항체이다.
본 발명의 예시적인 항체는 예를 들어 인간 IFNγ에 결합하는, NI-0501로도 지칭되는 항체를 포함한다. NI-0501 항체의 중쇄, 경쇄, 중쇄 가변(VH), 및 경쇄 가변(VL) 서열은 하기에 제시되어 있으며, 여기서, CDR 서열은 VH 및 VL 아미노산 서열에 밑줄로 표시되어 있다:
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
적합한 항IFNγ 항체는 미국 특허 7,700,098(상기 특허는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다)에 기재된 항체를 포함한다. 수개의 예시적인 항체는 상기 특허에서 ARC1.2R3P2_A6("A6"), ARC1.2R3P2_B4("B4"), ARC1.2R3P2_B9("B9"), ARC1.2R3P2_C9("C9"), ARC1.2R3P2_C10("C10"), ARC1.2R3P2_D3("D3"), ARC1.2R3P2_D6("D6"), ARC1.2R3P2_D8("D8"), ARC1.2R3P2_E1("E1"), ARC1.2R3P2_F8("F8"), ARC1.2R3P2_F9("F9"), ARC1.2R3P2_G7("G7"), ARC1.2R3P2_G9("G9"), 및 ARC1.2R3P2_G10("G10")으로 지칭된 항체를 포함한다.
상기 항체의 서열은 하기에 제시된다.
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
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Figure pct00011
Figure pct00012
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Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
일부 실시양태에서, IFNγ 항체는 IgG 아이소타입으로 제제화된다. 일부 실시양태에서, IFNγ 항체는 IgG1 아이소타입으로 제제화된다.
일부 실시양태에서, 본 발명의 IFN 항체는 인간 및/또는 시노몰구스 IFNγ에 특이적으로 결합하고, 여기서, 항체는 NI-0501 항체, A6 항체, B4 항체, B9 항체, C9 항체, C10 항체, D3 항체, D6 항체, D8 항체, E1 항체, F8 항체, F9 항체, G7 항체, G9 항체, 및/또는 G10 항체와 동일한 에피토프에 결합한다.
치료 방법
조성물 및 방법은 비정상적인 IFNγ 발현 및/또는 활성을 비롯한, 인터페론 감마(IFNγ) 발현 및/또는 활성과 연관된 임의의 다양한 질병의 치료에 유용하다. 본 개시내용의 조성물 및 방법은 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)의 치료에 유용하다. HLH는 극심한 염증(발열, 비장 비대, 혈구감소증, 응고 병증)의 임상 징후 및 증상을 특징으로 하는, 병적인 면역 활성화의 희귀하고, 중증이며, 생명을 위협하는 질환으로, 비정상적인 면역 매개된 병상의 발생을 유도하고, 이는 조직 손상을 통해 결국 복합 장기 부전 및 사망을 일으킬 수 있다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918- 2922]). HLH는 원발성(유전성/가족성) HLH 및 속발성 HLH를 포함한다.
원발성 HLH는 이종의 보통 염색체 열성 질환으로, 유럽에서 1/50,000 생존 출생률의 예측 유병률로 대부분 영아기 및 유아기에 나타난다(문헌 [Janka GE: Familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Eur. J. Pediatr. 1983, 140:221-230]). 이 질환은 치료받지 않을 경우, 증상 발병 후 2개월 미만의 중앙 생존기간으로 예외 없이 치명적이다(문헌 [Filipovich AH: Hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH) and related disorders. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2009:127-131]).
원발성 HHL에서 유전적 결함은 모두 활성화된 대식세포를 제거하는 데 필요한 NK 세포 및/또는 세포독성 림프구의 세포독성 경로에 관여하고, 퍼포린 합성, 세포용해 과립 성숙화, 과립 엑소시토시스 및 방출 과립 엑소시토시스 또는 기능을 위한 단백질을 코딩하는 유전자에 영향을 준다(문헌 [Filipovich, A., K. McClain, and A. Grom. 2010. Histiocytic disorders: recent insights into pathophysiology and practical guidelines. Biol. Blood Marrow Transplant. 16(1 Suppl):S82-S89]). 원발성 HLH 환자의 대략 20-40%에서, HLH 증후군의 특징을 나타내는 손상된 세포독성 기능은 T 세포 및 자연 살해 세포 매개된 세포용해의 중요한 조절 인자인 세포독성 과립의 세포용해 단백질인 퍼포린 코딩 유전자(PRF1) 내 돌연변이에 기인한다. 환자의 약 10%에서, 질환은 표적 세포 내로의 퍼포린 방출에 관여하는 단백질을 코딩하는 UNC13D 유전자 내 돌연변이에 의해 유발된다. 추가로, 일부 면역결핍 증후군, 예컨대, 그리셀리 증후군 2형(GS-2: Griscelli syndrome type 2) 및 체디아크-히가시 증후군(CHS: Chediak-Higashi syndrome)은 HLH를 빈번하게 나타낸다(문헌 [Janka GE, Lehmberg K: Hemophagocytic lymphohistiocytosis: pathogenesis and treatment. Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2013, 2013:605-611]).
속발성 형태의 HLH는 감염, 자가면역/류마티스성 질환 과정 중에 또는 악성 종양과 관련하여 발생할 수 있다. 속발성 형태는 원발성 HLH와 동일한 징후 및 증상을 나타내고, 똑같이 중증일 수 있다.
본 개시내용의 조성물 및 방법은 속발성 HLH의 치료에 유용하다. 본 개시내용의 조성물 및 방법은 대식세포 활성화 증후군(MAS)의 치료에 유용하다.
MAS는 T 림프구 및 대식세포의 과도한 활성화 및 증식에 의해 유발되는 류마티스성 질환의 중증의 잠재적으로 치명적인 합병증이다. 이러한 면역 세포의 제어되지 않는 증식은 결과적으로 발열, 혈구감소증, 간 비장 비대, 간 기능장애, 응고 이상 및 고페리틴 혈증과 연관된 현저한 과염증 상태 및 고사이토카인 혈증을 일으키고, 복합 장기 부전 및 사망으로 진행될 수 있다(문헌 [Schulert GS, Grom AA: Pathogenesis of macrophage activation syndrome and potential for cytokine- directed therapies. Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159]). HLH와 강한 임상적 및 병리적 유사성 때문에, MAS는 속발성 또는 후천성 형태의 HLH에 분류된다. 실제로, 최근에 대부분의 MAS 환자가 손상된 NK 및 퍼포린 기능 검사를 받았고, 상당수의 MAS 환자가 PRF1 및 UNC13D에서 다형태 또는 이형접합성 돌연변이를 나타낸다는 것이 증명되었다(문헌 [Zhang M, Behrens EM, Atkinson TP, Shakoory B, et al: Genetic defects in cytolysis in macrophage activation syndrome. Curr Rheumatol Rep 2014, 16:439]).
MAS는 sJIA 환자에서 가장 빈번하게 발생하고, 전신 홍반 루푸스(SLE)에서 보다 드물게 발생하지만, 더 드물기는 하지만 혈관염 환자, 특히 카와사키병 환자에서도 설명된다. sJIA 환자 중 대략 7-17%는 현성의 MAS로 발전하고(문헌 [Sawhney S, Woo P, Murray KJ: Macrophage activation syndrome: a potentially fatal complication of rheumatic disorders. Arch. Dis. Child. 2001, 85:421-426]; [Moradinejad MH, Ziaee V: The incidence of macrophage activation syndrome in children with rheumatic disorders. Minerva Pediatr. 2011, 63:459-466]), 일부 증거는 무증상 MAS가 활동성 전신 질환 환자의 ⅓ 정도로 많은 환자에서 나타날 수 있다는 것을 시사한다(문헌 [Behrens EM, Beukelman T, Paessler M, Cron RQ: Occult macrophage activation syndrome in patients with systemic juvenile idiopathic arthritis. J. Rheumatol. 2007, 34:1133-1138]).
MAS는 잠재적으로 치명적이기 때문에, 적기의 진단 및 즉각적인 치료 개입이 질환의 적절한 관리를 위해 필수적이다. MAS에서 보고된 사망률은 20-30%에 이르며, 이는 여전히 소아 류마티스학에서는 사망의 주요 원인이 된다(문헌 [Grom AA, Horne A, De Benedetti F: Macrophage activation syndrome in the era of biologic therapy. Nat Rev Rheumatol. 2016 Mar 24. doi: 10.1038/nrrheum.2015.179]).
sJIA 환자에서 MAS의 진단을 위해 상이한 세트의 기준이 제안되었다. 주로 원발성(유전성) 형태의 HLH를 위해 개발된 HLH-2004 진단 가이드라인(문헌 [Henter J, Horne A, Arico M, Egeler RM, et al: HLH-2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer 2007, 48:124-131])이 종종 권고되어 왔다. 그러나, 이들은 여러 제약을 나타내며, sJIA 환자에는 적용되지 않을 수 있다. 예를 들어, HLH-2004에서 요구되는 역치 미만의 혈구감소증 및 저피브리노겐 혈증과 같은 기준은, 이들 환자가 대개 sJIA 염증 반응의 일부로서 백혈구 및 혈소판 계수 증가 뿐만 아니라, 피브리노겐의 혈청 수준이 상승을 보이기 때문에 MAS의 후기에서만 나타난다(문헌 [Schulert GS, Grom AA: Pathogenesis of macrophage activation syndrome and potential for cytokine- directed therapies. Annu. Rev. Med. 2015, 66:145-159]). 혈구 탐식은 제시하는 대로 유의한 비율의 MAS 환자에 존재하지 않을 수 있다(문헌 [Minoia F, Davμ S, Horne A, Demirkaya E, et al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169]). 또한, 혈구 탐식, NK 세포 활성 및 sCD25는 MAS와 관련하여 통상적으로 사정되지 않는다.
또 다른 접근법은 악화를 보이는 sJIA1 환자군과 비교하여 MAS 환자의 코호트의 분석을 통해 생성된, MAS 합병 sJIA에 대한 예비 진단 가이드라인(PDG: preliminary diagnostic guidelines)의 적용을 기초로 한다.
최근, sJIA 연관된 MAS의 HLH-2004 진단 가이드라인 및 예비 진단 가이드라인을 다수의 환자 집단에서 (MAS를 보이지 않는) sJIA 및 전신성 감염으로부터 sJIA/MAS를 식별해낼 수 있는 능력에 대해 비교하였다(문헌 [Davi S, Minoia F, Pistorio A, Horne A, et al: Performance of current guidelines for diagnosis of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2871-2880]). 그의 후향적 성질에 기인하여 약간의 제약이 있었지만, 상기 연구는 예비 MAS 가이드라인이 민감도와 특이도 사이의 최상의 균형을 달성하고, 치료 의사가 내린 진단과 가장 잘 일치한다고 나타내는 것으로 보인다. HLH-2004 세트의 기준의 민감도는 <30%였다. 그럼에도 불구하고, PDG의 각각의 단일 기준을 충족시키는 환자 비율이 매우 가변적이고, 일부 임상 소견(예컨대, CNS 기능장애 및 출혈)은 MAS의 후기에 나타날 수 있는 바, 이에 막 시작된 MAS에서 그의 민감도는 낮다는 것 또한 보고되었다(문헌 [Lehmberg K, Pink I, Eulenburg C, Beutel K, et al: Differentiating macrophage activation syndrome in systemic juvenile idiopathic arthritis from other forms of hemophagocytic lymphohistiocytosis. The Journal of pediatrics 2013, 162:1245-1251]).
더 최근에는, 진단 점수(HScore)가 개발되어 312명 환자의 후향적 코호트에서 입증되었으며, 이들 중 162명이 반응성 혈구탐식 증후군을 앓는 것으로 판단되었다(문헌 [Fardet L, Galicier L, Lambotte O, Marzac C, Aumont C, Chahwan D, Coppo P, Hejblum G: Development and validation of the HScore, a score for the diagnosis of reactive hemophagocytic syndrome. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:2613-2620]).
9가지 변수(3가지 임상 변수[즉, 알고 있는 내재하는 면역 억제, 고온, 장기비대], 5가지 생물학적 변수[즉, 트리글리세리드, 페리틴, 혈청 글루탐산 옥살로아세트산 트랜스아미나제, 피브리노겐 수준, 및 혈구감소증], 및 1가지 세포학적 변수[즉, 골수 흡인물에 대한 혈구탐식 특성])가 HScore에 포함되고, 혈구탐식 증후군을 앓을 확률은 HScore ≤90인 경우 <1%에서 HScore ≥ 250인 경우 >99% 범위이다.
MAS에 대해 입증된 진단 기준에 대해 최종 합의에 도달할 때까지, 전문의에 의한 임상 진단이 sJIA의 악화 또는 패혈증 유사 증후군과 같이 중복되는 특성을 나타내는 병태와 MAS를 구별하는 검사에서 여전히 중요하다.
현재, MAS의 치료에 대해 승인받은 약물은 없다. 보통, 고용량의 글루코코르티코이드가 MAS에 대한 제1선의 치료법이다. 글루코코르티코이드에 반응하지 못하는 환자에서, 시클로스포린 A(CsA)가 추가 치료법으로 제안되었다(문헌 [Stephan JL, Kone-Paut I, Galambrun C, Mouy R, Bader-Meunier B, Prieur AM: Reactive haemophagocytic syndrome in children with inflammatory disorders. A retrospective study of 24 patients. Rheumatology (Oxford, England) 2001, 40:1285-1292]).
pHLH를 치료하기 위해 개발된 HLH-94 치료 프로토콜의 일부인 에토포시드의 투여 또한 고용량의 글루코코르티코이드에 실패한 환자에서 고려된다. 그러나 약물의 잠재적인 독성이 주요 문제로 남는다. 제1선의 다른 현행 HLH 치료법은 덱사메타손을 포함한다. 그러나, 에토포시드 및/또는 덱사메타손과 같은 치료법은 골수 억제성이고/거나, 광범위하게는 면역억제성이다. 현재 제2선의 HLH 치료법을 위한 치료 기준이 존재하지 않으며, 알렘투주맙/ATG와 같은 치료법은 완전하게 면역억제성이고, 생존은 이들 치료법으로 매우 열악한 것으로 생각된다.
MAS의 치료에 있어 IL-1, IL-6R 또는 TNFα 경로를 억제하는 생물제제의 유용성은 여전히 분명하지 않다. 상기 경로를 억제하는 생물제제가 단독 사례에 효과적이라고 보고되었지만, 상기 치료의 환경에서 MAS가 나타난 환자(문헌 [Stern A, Riley R, Buckley L: Worsening of macrophage activation syndrome in a patient with adult onset Still's disease after initiation of etanercept therapy. J Clin Rheumatol 2001, 7:252-256]; [Ramanan AV, Schneider R: Macrophage activation syndrome following initiation of etanercept in a child with systemic onset juvenile rheumatoid arthritis. J. Rheumatol. 2003, 30:401-403]; [De Benedetti F, Brunner HI, Ruperto N, Kenwright A, et al: Randomized trial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N. Engl. J. Med. 2012, 367:2385-2395]; [Ruperto N, Brunner HI, Quartier P, Constantin T, et al: Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N. Engl. J. Med. 2012, 367:2396-2406]) 뿐만 아니라, 상기 치료에 반응하지 않은 환자에 관한 보고가 있으며, 이는 IL-1, IL-6R 또는 TNFα의 억제가 MAS 발생으로부터 완전한 보호하지 못하거나, 또는 완전히 진행된 증후군을 효과적으로 치료하지 못한다는 것을 나타낸다.
대규모 후향적 다기관 연구는 총 362명의 환자에서 MAS/sJIA의 임상, 검사실, 및 조직병리학 특징 뿐만 아니라, 현행 치료법 및 결과를 조사하였다(문헌 [Minoia F, Davi S, Horne A, Demirkaya E, et al: Clinical features, treatment, and outcome of macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis: a multinational, multicenter study of 362 patients. Arthritis & rheumatology (Hoboken, N.J.) 2014, 66:3160-3169]). 환자 중 대략 절반에서, MAS는 활동성 sJIA와 관련하여 발생하거나, 질환 발병시 그들 중 30%에서 sJIA 악화 중에 발생하였다. 감염 유발 인자는 환자의 ⅓에서 확인되었다. 감염 유형이 보고된 24명의 환자 중에서, EBV가 가장 보편적인 원인 인자였다(25%). 11명의 환자(38%)에서, MAS는 치료 부작용과 관련이 있다고 생각되었다: 이들 중 8명은 IL-6(N=4), IL-1(N=3) 또는 TNFα(N=1) 경로를 표적화하는 생물학적 제제를 수반하였다. 거의 모든 환자에게 글루코코르티코이드를 제공하였다. 시클로스포린, 생물학적 약물 및 에토포시드는 각각 환자의 61%, 15% 및 12%에게 제공되었다.
그러므로, MAS의 효과적인 치료 요법의 확인은 높은 의학적 요구가 충족되지 않는 영역을 대표한다. sJIA 및 MAS 환자 중 50% 초과의 환자는 전신성 글루코코르티코이드 단독에 반응하지 않거나, 또는 유의적인 이환율과 관련된 고용량의 지속적인 치료를 필요로 할 수 있다. 환자가 글루코코르티코이드에 반응하지 않을 때, CsA 또는 에토포시드와 같은 추가 치료법의 효과에 대해 우수한 증거 기반 자료가 이용불가능하다. MAS의 과정은 신속하게 비가역적으로 되어 치명적인 결과로 이어질 수 있다. 현재 데이터는 sJIA 관련된 MAS의 사망률이 8%이며, 환자 중 약 ⅓이 ICU 입원을 필요로 한다는 것을 시사한다. 질환의 발병 기전에서 IFNγ의 중추적 역할에 대한 최근 결과는 IFNγ 차단이 가능성 있게는 신규 치료 표적을 나타낸다는 것을 시사한다.
NI-0501 조성물을 포함한 본 개시내용의 조성물 및 방법은 원발성 및 속발성 HLH를 위한 현행 요법에 비해 유리하다.
MAS 및 HLH는 지속된 면역 세포 활성화, 및 IFNγ, TNFα, IL-1 및 IL-6의 과다생산과 연관된 염증유발 사이토카인의 사이토카인 폭풍을 특징으로 한다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922]; [Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807]; [Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1]; [Put K, Avau A, Brisse E, Mitera T, et al: Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocytic lymphohistiocytosis: tipping the balance between interleukin-18 and interferon-γ. Rheumatology (Oxford) 2015]). 지난 수년간, 두 가지 HLH(문헌 [Jordan MB, Hildeman D, Kappler J, Marrack P: An animal model of hemophagocytic lymphohistiocytosis (HLH): CD8+ T cells and interferon gamma are essential for the disorder. Blood 2004, 104:735-743]; [Pachlopnik Schmid J, Ho C, Chretien F, Lefebvre JM, et al: Neutralization of IFNgamma defeats haemophagocytosis in LCMV-infected perforin- and Rab27a-deficient mice. EMBO Mol Med 2009, 1:112-124]; [Zoller EE, Lykens JE, Terrell CE, Aliberti J, et al: Hemophagocytosis causes a consumptive anemia of inflammation. J. Exp. Med. 2011, 208:1203-1214]) 및 MAS(문헌 [Behrens EM, Canna SW, Slade K, Rao S, et al: Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J. Clin.Invest. 2011, 121:2264-2277]) 모두의 발생에서 IFNγ의 중추적 역할을 뒷받침하는 증거가 축적되고 있다.
원발성 HLH 경우, 퍼포린 녹아웃 마우스가 인간 질환의 적절한 모델로 고려되는데, 이들 마우스가 LCMV로 감염되면, 인간 질환의 모든 진단 및 많은 임상 및 검사실의 특징적인 소견을 발생하기 때문이다. 이들이 발생하는 HLH 유사 질환은 항원 자극에 반응하여 생산된 CD8+ T 세포 및 IFNγ에 의존적이다(문헌 [Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807]). IFNγ의 높은 순환 수준이 항IFNγ 항체의 투여로 중화될 때, 임상 및 검사실의 이상소견이 회복될 뿐만 아니라, 생존율이 극적으로 향상된다는 것이 증명되었다. 대조적으로, 다수의 다른 사이토카인의 차단은 생존에 영향을 주지 않았다(문헌 [Imashuku S, Hibi S, Fujiwara F, Todo S: Hyper-interleukin (IL)-6-naemia in haemophagocytic lymphohistiocytosis. Br. J. Haematol. 1996, 93:803-807]; [Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1]). HLH 환자에서 IFNγ의 중요성을 더 크게 하는 것은 이들 환자에서 확인된 고농도의 순환 IFNγ 수준이다(문헌 [Henter JI, Elinder G, Soder O, Hansson M, et al: Hypercytokinemia in familial hemophagocytic lymphohistiocytosis. Blood 1991, 78:2918-2922]; [Xu X, Tang Y, Song H, Yang S, et al: Diagnostic accuracy of a specific cytokine pattern in hemophagocytic lymphohistiocytosis in children. J. Pediatr. 2012, 160:984-90.e1]). HLH 진단에서 치료 및 추적 조사까지 모니터링된 일련의 71명 환자에서, IFNγ 수준이 모든 환자에서 정상의 상한(17.3 pg/mL)을 초과하였고, 특히 53.5%는 1,000 pg/mL를 초과하는 수준을 보였다. IFNγ 수준이 조기에 신속하게 상승하고, HLH의 효과적인 치료시 48시간 내에 > 5,000 pg/mL에서 정상으로 떨어질 수 있다는 것이 보고되었다.
NI-0501 개발 프로그램과 관련하여 IFNγ의 가능한 병원성 역할을 설명하기 위해 속발성 HLH의 두 동물 모델을 조사하였다. 우선, 감염 유발된 HLH를 모방하는 뮤린 모델에서, TLR9의 활성화를 통한 CpG의 반복 투여는 고사이토카인 혈증을 유발하여 HLH33의 임상(예컨대, 체중 감소, 비장 비대) 및 검사실(예컨대, 혈구감소증, 고페리틴 혈증) 소견이 생겼다. IFNγ가 항IFNγ 항체의 투여에 의해 중화될 때, 질환의 임상 및 검사실 소견이 회복되었다. IFNγ의 중화는 간 및 비장과 같은 관련된 표적 조직에서도 완전한 것으로 나타났다. 흥미롭게도, 항IFNγ 항체의 투여는 혈액에서 측정된 것보다 500- 내지 2,000배 더 높은 IFNγ 양이 조직에서 IFNγ 생산을 더 잘 반영할 것 같다는 것을 밝혔다. 2가지 IFNγ 유도성 케모카인(CXCL9 및 CXCL10)은 혈액 및 간, 둘 모두에서 TLR9 자극 후 상승조절되었고, CXCL9 및 CXCL10 혈청 농도와 IFNγ의 혈청 수준 사이에서 유의적인 상호연관성이 관찰되었다. IFNγ의 중화는 혈청 CXCL9 및 CXCL10, 및 간에서 그의 mRNA 수준의 유의적인 감소를 유도하였다(문헌 [Buatois V, Chatel L, Cons L, Lory S, et al: IFNγ drives disease in the TLR9-mediated secondary HLH in mice: rationale for a new therapeutic target in secondary HLH, in preparation]).
둘째, 고수준의 IL-6을 발현하는 IL-6 트랜스제닉 마우스의 동물 모델을 연구하였는데, 그 이유는 속발성 형태의 HLH와 가장 빈번하게 연관된 류마티스성 질환인 sJIA 환자의 병태를 모방하기 때문이다. Toll 유사 수용체(TLR) 리간드로 유발될 때, 치사율의 증가, 염증성 사이토카인 생산의 증가 및 염증 신호전달 경로의 과다활성화가 관찰되었다. 또한, 이들 마우스는 혈소판 및 호중구 계수의 감소, sCD25, 페리틴 및 LDH 수준의 증가를 보였으며, 이는 MAS 환자에 전형적으로 존재하는 많은 소견과 비슷하다(문헌 [Strippoli R, Carvello F, Scianaro R, De Pasquale L, et al: Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum. 2012, 64:1680-1688]). 이들 마우스에서, IFNγ가 항IFNγ 항체의 투여로 중화될 때, 생존은 크게 향상되고, 검사실 파라미터는 회복되었다(Prencipe G et al., 원고 준비중).
최근 유사한 증거가 감염에 대해 속발성이거나, 또는 기원을 알지 못하는 속발성 형태의 HLH 환자(정상의 세포독성 활성, pHLH를 유발하는 공지된 유전자에서 돌연변이의 부재 및 가족력의 부재에 의해 배제된 pHLH) 또는 sJIA와 관련하여 발생한 MSA 환자에서 수행된 관찰 연구에서 수집되었다.
14명의 속발성 HLH 환자(그 중 7명에서 내재하는 감염이 확인가능하였다)에서, 혈청 샘플을 완전히 진행된 활동성 질환 동안, 및 질환 완화 동안에 분석하였다. IFNγ, CXCL9 및 CXCL10의 수준은 질환 완화와 비교하여 활동성 단계에서 현저하게 더 높았다(IFNγ: 34.7 대 <3.5 pg/ml; CXCL9: 33598 대 745 pg/ml; CXCL10: 4420 대 132 pg/ml; 중앙값). IFNγ 수준은 CXCL9의 수준과 유의적인 상호연관성이 있었으며(p=0.0018), CXCL10의 수준과 더 적은 정도로 유의적인 상호연관성이 있었다(p=0.014). IFNγ 및 케모카인(특히, CXCL9)의 수준은 질환 중증도의 파라미터, 예컨대, 호중구 및 혈소판 계수, 페리틴 및 ALT와 유의적인 상호연관성이 있었으며, 이는 속발성 HLH에서 IFNγ의 병원성 역할 및 질환의 적절한 바이오마커로서 케모카인의 가능한 용도를 뒷받침해준다(문헌 [Buatois V, Chatel L, Cons L, Lory S, et al: IFNγ drives disease in the TLR9-mediated secondary HLH in mice: rationale for a new therapeutic target in secondary HLH]).
sJIA 환자 중 MAS가 발생한 환자에서 유사한 결과가 나타났다. IFNγ, IFNγ 유도성 케모카인(CXCL9, CXCL10, CXCL11) 및 IL-6의 혈청 농도를 54명의 sJIA 환자(그 중 20명이 MAS를 앓음)에서 측정하였다. IL-6의 수준은 샘플링 시점에 완전히 진행된 MAS 환자와 활동성 sJIA를 앓지만, MAS는 앓지 않는 환자에서 비슷하였다. 반면, 순환하는 IFNγ 및 케모카인 수준은 MAS에서 유의적으로 더 높았으며, 특히, CXCL9 경우, 그의 중앙값 수준이 MAS는 앓지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하여 대략 15배 더 높았다(13392 대 837 pg/mL; p=0.005). 주목할만하게도, 유의적인 상호연관성은 CXCL9 수준 및 전형적으로 비정상적인 파라미터, 예컨대, 페리틴(p=0.041), 호중구(p=0.010) 및 혈소판(p=0.022) 계수, ALT(p=0.044) 및 LDH(p=0.013) 사이에서 MAS 환자에서만 증명되었다. 또한, IFNγ의 수준은 통계학적 유의도에 도달하지 못한 LDH를 제외하고는 질환 중증도의 검사실 파라미터와 상호연관성이 있었다(Bracaglia et al, 원고 준비중).
상기 모든 데이터는 속발성 HLH 및 MAS를 위한 표적화된 요법으로서 IFNγ의 중화 및 임상 환경에서 그의 조사에 확고한 근거를 제공한다.
본 개시내용의 NI-0501 조성물을 포함한 조성물 및 방법은 sJIA에 대한 현행 요법에 비해 유리하다. 예를 들어, 본 개시내용의 NI-0501 조성물을 포함한 조성물 및 방법은 MAS 완화를 달성하는 주요 목적을 갖는 sJIA 환자에서 MAS/sHLH를 치료하는 데 유용하다.
NI-0501을 이용한 치료로 유익한 상기 환자 집단의 확인을 위한 근거 및 MAS/sHLH에서 NI-0501의 효능을 평가하기 위한 근거는 여러 인자에 기초한다. 첫째, sJIA에서 MAS에 적절한 동물 모델에서 얻은 임상전 데이터는 IFNγ 중화가 생존율을 크게 향상시키고, 검사실 파라미터의 변화를 회복시켰다는 것을 보였다. 다음, MAS/sHLH 환자에서 관찰 데이터는 고수준의 IFNγ의 존재, 및 더 중요하게는, 매우 높은 수준의 IFNγ 유도성 케모카인 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 존재를 증명한다. 셋째, MAS/sHLH 환자에서, IFNγ와 CXCL9의 농도는 예컨대, 페리틴, 혈소판 계수 및 트랜스아미나제와 같은 질환 파라미터와 유의적인 상호연관성이 있다. 다음, 투여된 모든 주입이 우수한 내약성을 보였던 이전의 연구에서 바람직한 내약성 프로파일 및 관련된 안전성 문제가 없다는 것이 pHLH 환자에서 관찰되었으며, 이는 건강한 지원자에 이루어진 결과를 확인해주며, IFNγ의 중화에 의해 유리하다고 공지된 병원체에 의해 유발된 감염은 보고되지 않았으며, 일부 pHLH 환자에 발생한 감염은 NI-0501 치료와 전혀 관련되지 않는다고 간주되었으며, 오히려 이들의 면역 상태, 질환 기간 및 이전의 또는 공동 치료와 관련된다고 생각되었다. 다섯째, 이전의 임상 연구의 예비 데이터는 치료 첫날 내에 주목할만한 효과의 개시와 함께 질환 파라미터에 바람직한 효과를 나타내며: HLH의 전형적인 임상 징후 및 증상은 NI-0501의 최초 투여 후 신속하게 개선되기 시작하였고(수시간 내에 발열, 수일 내에 비장/간 비대); 컷-오프에 있는 18명의 평가가능한 환자 중에서 NI-0501을 이용한 치료는 10명 환자가 HSCT로 옮겨가는 것을 가능하게 하였다. 다음으로, PK 모델링 및 모의 접근법의 증거는 NI-0501의 예측가능한 약동적 프로파일을 나타내고, IFNγ의 중화가 달성되고, 유지된다는 것을 보여준다. 마지막으로, 통상적인 요법(예컨대, CsA)은 NI-0501이 질환을 적절하게 제어하지 못할 경우, 세척 기간 필요없이 즉시 개시될 수 있다.
마지막으로, 임상전 및 임상 증거를 기초로 하여 류마티스성 질환에 대해 속발성인 MAS/sHLH에서 IFNγ를 중화시키기 위한 강력한 근거가 존재하며, pHLH 환자에서 예비 데이터는 HLH 특성의 정상화로 유의적으로 향상된 NI-0501의 바람직한 유익성 위해성 프로파일을 나타낸다.
따라서, NI-0501은 가능하게는 장기간 고용량 글루코코르티코이드 치료로 인한 부작용을 제한하면서, 류마티스성 질환의 상기 중증의 생명을 위협하는 합병증을 관리하는 데 획기적이고, 효과적인 치료 접근법을 제시한다.
항IFNγ 항체의 투여
본 발명에 따른 치료 엔티티의 투여가 제제에 포함되는 적합한 담체, 부형제, 및 다른 작용제와 함께 투여되어 운반, 전달, 내약성 등을 개선시킬 것이라는 것을 이해할 것이다. 다수의 적절한 제제는 모든 약화학자에게 공지된 의약품집인 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA (1975))], 특히 그 안의 87과(Blaug, Seymour)에서 찾아볼 수 있다. 이들 제제는, 예를 들어, 분제, 페이스트, 연고, 젤리, 왁스, 오일, 지질, 소포를 포함한 (양성 또는 음성) 지질(예컨대, Lipofectin™), DNA 접합체, 무수 흡수 페이스트, 수중유 및 유중수 에멀젼, 에멀젼 카보왁스(다양한 분자량의 폴리에틸렌 글리콜), 반고체 겔, 및 카보왁스를 포함하는 반고체 혼합물을 포함한다. 상기 혼합물 중 임의의 것은 제제 내 활성 성분이 제제에 의해 불활성화되지 않거나, 제제가 투여 경로와 생리적으로 적합하거나, 허용 가능하기만 한다면, 본 발명에 따른 치료 및 요법에 적절할 수 있다. 또한, 약화학자에게 널리 공지된 제제, 부형제 및 담체와 관련된 추가적인 정보에 대해 문헌 [Baldrick P. "Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance." Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000)], [Wang W. "Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals." Int. J. Pharm. 203(1-2):1-60 (2000)], [Charman WN "Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery- some emerging concepts." J Pharm Sci. 89(8):967-78 (2000)], [Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA J Pharm Sci Technol. 52:238-311 (1998)] 및 그 안의 인용 내용을 참조한다.
치료의 유효성은 특정 면역 관련 장애를 진단하거나, 치료하기 위한 임의의 공지된 방법과 연관하여 결정된다. 면역 관련 장애의 하나 이상의 증상의 완화는 항체가 임상적 유익성을 제공한다는 것을 나타낸다.
다중클론, 단일클론, 인간화 및 완전 인간 항체를 포함한 본 발명의 항체는 치료제로서 사용될 수 있다. 상기 작용제는 일반적으로 피험체에서 주어진 표적의 비정상적인 발현 또는 활성화와 연관된 질환 또는 병상을 치료 또는 예방하는 데 이용될 것이다. 항체 제제, 바람직하게는 그의 표적 항원에 고특이성 및 고친화도를 보이는 것이 피험체에게 투여되고, 일반적으로 표적과 그의 결합으로 인한 효과를 보일 것이다. 항체의 투여는 표적의 신호전달 기능을 제거하거나, 억제하거나, 또는 방해할 수 있다. 항체의 투여는 표적이 자연적으로 결합하는 내인성 리간드와 표적의 결합을 제거하거나, 억제하거나, 또는 방해할 수 있다.
본 발명의 항체의 치료 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하는 데 필요한 양에 관한 것이다. 상기에 나타낸 바와 같이, 이는, 어떤 경우에, 표적의 기능을 방해하는, 항체와 그의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있다. 추가로, 투여 필요량은 항체의 그의 특이적 항원에 대한 결합 친화도에 의존할 것이며, 이는 또한 투여된 항체가 그를 투여받은 피험체에서 유리 부피로부터 제거되는 속도에 의존할 것이다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편의 치료 유효한 용량의 통상적인 범위는 비제한적인 예로서 약 0.1 mg/kg(체중) 내지 약 50 mg/kg(체중)일 수 있다. 바람직한 용량은 1, 3, 6, 10 mg/kg(체중)을 포함한다. 보편적인 투약 빈도는 예를 들어, 1일 1회 내지 주 2회 범위일 수 있다. 치료는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주 이상 지속될 수 있다.
본 발명의 항체 또는 그의 단편은 약학 조성물의 형태로 다양한 질환 및 장애의 치료를 위해 투여될 수 있다. 상기 조성물을 제조하는 데 관련된 원리 및 고려사항 뿐만 아니라, 구성 요소의 선택에 있어 가이던스는, 예를 들어, 문헌 [Alfonso R. Gennaro, et al., editors) Mack Pub. Co., Easton, Pa.: 1995]; [Drug Absorption Enhancement: Concepts, Possibilities, Limitations, And Trends, Harwood Academic Publishers, Langhorne, Pa., 1994]; 및 [Peptide And Protein Drug Delivery (Advances In Parenteral Sciences, Vol. 4), 1991, M. Dekker, New York]에 제시되어 있다.
또한, 제제는 치료되는 특정 적응증에 필요에 따라 1개 초과의 활성 화합물, 예컨대, 항IFNγ 길항제, 바람직하게는 서로 부작용을 주지 않으면서, 상보적인 활성을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은, 예컨대, 예를 들어, 세포독성제, 사이토카인, 화학요법제, 또는 성장 억제제와 같이, 그의 기능을 증진시키는 작용제를 포함할 수 있다. 상기 분자는 적합하게는 의도하는 목적에 효과적인 양으로 조합하여 존재한다.
한 실시양태에서, 활성 화합물, 예컨대, 항IFNγ 길항제는 조합 요법으로, 즉, 병리 상태 또는 장애를 치료하는 데 유용한 하나 이상의 추가의 작용제와 조합하여 투여된다. 이와 관련하여 "조합하여"라는 용어는 작용제가 실질적으로 동시 발생적으로, 동시에 또는 순차적으로 제공된다는 것을 의미한다. 제2 화합물의 투여 개시시 순차적으로 제공될 경우, 두 화합물 중 제1 화합물은 바람직하게는 치료 부위에서 여전히 유효 농도로 검출가능하다.
예를 들어, 조합 요법은, 하기에 더 상세하게 기술되는 바와 같은, 하나 이상의 추가 치료제, 예컨대, 하나 이상의 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및/또는 세포독성제 또는 세포분열 억제제와 함께 공동으로 제제화되고/거나, 공동으로 투여되는 본 발명의 하나 이상의 중화 항IFNγ 항체를 포함할 수 있다. 상기 조합 요법은 유리하게는 투여되는 치료제를 더 낮은 투여량으로 이용하여, 각종의 단일 요법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 방지할 수 있다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 면역억제제이다. 일부 실시양태에서, 면역억제제는 시클로스포린 A(CsA)이다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501 투여 이전에 CsA를 받고 있는 피험체이다. 일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 적어도 에토포시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501 투여 이전에 에토포시드를 받고 있는 피험체이다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 척수강내 메토트렉세이트 및/또는 글루코코르티코이드이다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501 투여 이전에 척수강내 메토트렉세이트 및/또는 글루코코르티코이드를 받고 있는 피험체이다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 IV 면역글로불린(IVIG: IV immunoglobulin)이다. 일부 실시양태에서, IVIG는 기록된 면역글로불린 결핍증에 걸린 피험체에서 대체 치료로서 투여된다. 피험체가 기록된 면역글로불린 결핍증에 걸린 일부 실시양태에서, IVIG는 적합한 IgG 수준을 유지하기 위해서 0.5 g/kg의 용량으로 4주마다 또는 더 빈번하게 투여된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 추가의 작용제는 진통 치료, 혈액 제품의 수혈, 전해질 및 글루코오스 주입, 항생제, 항진균 치료 및 항바이러스 치료 및/또는 일반 지지 치료이다.
항체 단편이 사용될 경우, 표적 단백질의 결합 도메인에 특이적으로 결합하는 최소 억제 단편 및/또는 IFNγ 신호전달을 방해하거나, 또는 다르게는 그를 길항시키는 최소 억제 단편이 바람직하다. 예를 들어, 항체의 가변 영역 서열을 기초로 하여, 펩티드 분자는 표적 단백질 서열에 결합할 수 있는 능력을 보유하도록 디자인될 수 있다. 상기 펩티드는 화학적으로 합성되고/거나, 재조합 DNA 기술에 의해 제조될 수 있다(예컨대, 문헌 [Marasco et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)] 참조). 또한, 제제는 치료되는 특정 적응증에 필요에 따라 1개 초과의 활성 화합물, 바람직하게는 서로 부작용을 주지 않으면서, 상보적인 활성을 갖는 것들을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가로, 조성물은, 예컨대, 예를 들어, 세포독성제, 사이토카인, 화학요법제, 또는 성장 억제제와 같이, 그의 기능을 증진시키는 작용제를 포함할 수 있다. 상기 분자는 적합하게는 의도하는 목적에 효과적인 양으로 조합하여 존재한다.
투여 요법
본 발명은 IFNγ 수준 상승과 연관된 증상 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행 지연, 또는 완화를 위한 투여 요법을 추가로 제공한다. 투여 요법은 다중 가변 용량 요법이다. 용량은 1.0 내지 10 mg/kg(피험체의 체중)의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체이다. 용량은 적어도 제1 및 제2 용량으로 투여된다. 제2 용량은 제1 용량보다 더 낮거나, 또는 더 높다.
인간 피험체에서 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 요법은 유도 또는 제1 용량 및 치료 또는 제2 용량의 항IFN-g 단일클론 항체를 포함한다. 피험체는 성인 피험체 또는 소아 피험체이다.
제1 용량은 1.0 또는 3.0 mg/kg(체중)이다. 제2 용량은 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다. 제1 용량은 1.0 mg/kg(체중)의 항체이고, 제2 용량은 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다. 대안적으로, 제1 용량은 3.0 mg/kg(체중)의 항체이고, 제2 용량은 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다.
제1 용량은 단일 용량으로서 1회 투여된다. 대안적으로, 제1 용량은 유도 치료 기간 동안 1회 초과로 투여된다.
제2 용량은 1회 이상의 치료 기간 동안 투여된다. 제2 용량은 제1 치료 기간 동안 투여된다. 제1 치료 기간 동안, 제2 용량은 제1 용량 후 3일마다 투여된다. 제1 치료 기간은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6주 이상 지속된다. 바람직하게, 제1 치료 기간은 2주이다. 임의적으로, 제2 용량은 제1 치료 기간의 완료 후, 제2 치료 기간 동안 투여된다. 제2 치료 기간 동안, 제2 용량은 주 2회 투여된다. 제2 치료 기간은 약 1-20주, 2-20주, 3-20주, 4-20주, 5-20주, 6-20주, 1-10주, 2-10주, 3-10주, 4-10주, 5-10주, 6-10주 지속된다. 제2 치료 기간은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주 이상 지속된다.
일부 실시양태에서, 제2 용량은 제1 또는 제2 치료 기간 진행 동안 증가 또는 감소된다. 증가 또는 감소된 용량은 제3 용량으로 지칭한다. 제3 용량은 1.0, 3.0 또는 6.0 mg/kg(체중)일 수 있다. 제3 용량은 제1 및 제2 치료 기간의 남은 기간 동안 투여된다. 대안적으로, 제3 용량은 제3 치료 기간 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 제3 용량은 유지 용량으로 지칭되고, 제3 치료 기간은 유지 기간으로 지칭된다.
인간 소아에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 요법은 유도 또는 제1 용량 및 치료 또는 제2 용량의 항IFN-g 단일클론 항체를 포함한다.
제1 용량은 6.0 mg/kg(체중)이다. 제2 용량은 3.0 mg/kg(체중), 10.0 mg/kg(체중)이다.
제1 용량은 단일 용량으로서 1회 투여된다. 대안적으로, 제1 용량은 유도 치료 기간 동안 1회 초과로 투여된다.
제2 용량은 1회 이상의 치료 기간 동안 투여된다. 제2 용량은 제1 치료 기간 동안 투여된다. 제1 치료 기간 동안, 제2 용량은 제1 용량 후 3일마다 투여된다. 제1 치료 기간은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6주 이상 지속된다. 바람직하게, 제1 치료 기간은 2주이다. 임의적으로, 제2 용량은 제1 치료 기간의 완료 후, 제2 치료 기간 동안 투여된다. 제2 치료 기간 동안, 제2 용량은 주 2회 투여된다. 제2 치료 기간은 약 1-20주, 2-20주, 3-20주, 4-20주, 5-20주, 6-20주, 1-10주, 2-10주, 3-10주, 4-10주, 5-10주, 6-10주 지속된다. 제2 치료 기간은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주 이상 지속된다.
일부 실시양태에서, 제2 용량은 제1 또는 제2 치료 기간 진행 동안 증가 또는 감소된다. 증가 또는 감소된 용량은 제3 용량으로 지칭한다. 바람직하게, 제3 용량은 6.0 mg/kg(체중)이다. 제3 용량은 제1 및 제2 치료 기간의 남은 기간 동안 투여된다. 대안적으로, 제3 용량은 제3 치료 기간 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 제3 용량은 유지 용량으로 지칭되고, 제3 치료 기간은 유지 기간으로 지칭된다.
인간 성인에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 요법은 유도 또는 제1 용량 및 치료 또는 제2 용량의 항IFN-g 단일클론 항체를 포함한다.
제1 용량은 3.0 또는 6.0 mg/kg(체중)이다. 바람직하게, 제1 용량은 6.0 mg/kg(체중)이다. 제2 용량은 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다. 바람직하게, 제2 용량은 10.0 mg/kg(체중)이다. 제1 용량은 6.0 mg/kg(체중)의 항체이고, 제2 용량은 10.0 mg/kg(체중)이다. 제1 용량은 단일 용량으로서 1회 투여된다. 대안적으로, 제1 용량은 유도 치료 기간 동안 1회 초과로 투여된다.
제2 용량은 1회 이상의 치료 기간 동안 투여된다. 제2 용량은 제1 치료 기간 동안 투여된다. 제1 치료 기간 동안, 제2 용량은 제1 용량 후 3일마다 투여된다. 제1 치료 기간은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6주 이상 지속된다. 바람직하게, 제1 치료 기간은 2주이다. 임의적으로, 제2 용량은 제1 치료 기간의 완료 후, 제2 치료 기간 동안 투여된다. 제2 치료 기간 동안, 제2 용량은 주 2회 투여된다. 제2 치료 기간은 약 1-20주, 2-20주, 3-20주, 4-20주, 5-20주, 6-20주, 1-10주, 2-10주, 3-10주, 4-10주, 5-10주, 6-10주 지속된다. 제2 치료 기간은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주 이상 지속된다.
일부 실시양태에서, 제2 용량은 제1 또는 제2 치료 기간 진행 동안 증가 또는 감소된다. 증가 또는 감소된 용량은 제3 용량으로 지칭한다. 제3 용량은 1.0, 3.0 또는 6.0 mg/kg(체중)일 수 있다. 제3 용량은 제1 및 제2 치료 기간의 남은 기간 동안 투여된다. 대안적으로, 제3 용량은 제3 치료 기간 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 제3 용량은 유지 용량으로 지칭되고, 제3 치료 기간은 유지 기간으로 지칭된다.
인간 피험체에서 병태를 치료하기 위한 다중 가변 용량 요법은 유도 또는 제1 용량 및 치료 또는 제2 용량의 항IFN-g 단일클론 항체를 포함한다. 피험체는 성인 피험체 또는 소아 피험체이다. 병태는 IFNg 수준 상승과 상호연관성이 있다. 병태는 이식 거부, 예컨대, 고형 장기 이식 장애 또는 골수 급성 이식편 거부 이식편 대 숙주 질환, 방종양성 소뇌 변성, 출혈열, 사르코이드증, 성인형 스틸병이다. 다른 실시양태에서, 투여 요법은 CAR-T 세포 요법을 받은 이후에 피험체에게 투여된다.
제1 용량은 1.0-10 mg/kg(체중)이다. 예를 들어, 제1 용량은 1.0, 3.0, 6.0, 또는 10 mg/kg(체중)의 항체이다. 제2 용량은 제1 용량보다 더 높거나, 또는 더 낮다. 제2 용량은 1.0-10 mg/kg(체중)이다. 예를 들어, 제2 용량은 1.0, 3.0, 6.0 또는 10 mg/kg(체중)의 항체이다. 제1 용량은 1.0 mg/kg(체중)이고, 제2 용량은 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다. 대안적으로, 제1 용량은 3.0 mg/kg(체중)의 항체이고, 제2 용량은 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)이다. 제1 용량은 6.0 mg/kg(체중)의 항체이고, 제2 용량은 10.0 mg/kg(체중)이다.
제1 용량은 단일 용량으로서 1회 투여된다. 대안적으로, 제1 용량은 유도 치료 기간 동안 1회 초과로 투여된다.
제2 용량은 1회 이상의 치료 기간 동안 투여된다. 제2 용량은 제1 치료 기간 동안 투여된다. 제1 치료 기간 동안, 제2 용량은 제1 용량 후 3일마다 투여된다. 제1 치료 기간은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6주 이상 지속된다. 바람직하게, 제1 치료 기간은 2주이다. 임의적으로, 제2 용량은 제1 치료 기간의 완료 후, 제2 치료 기간 동안 투여된다. 제2 치료 기간 동안, 제2 용량은 주 2회 투여된다. 제2 치료 기간은 약 1-20주, 2-20주, 3-20주, 4-20주, 5-20주, 6-20주, 1-10주, 2-10주, 3-10주, 4-10주, 5-10주, 6-10주 지속된다. 제2 치료 기간은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12주 이상 지속된다.
일부 실시양태에서, 제2 용량은 제1 또는 제2 치료 기간 진행 동안 증가 또는 감소된다. 증가 또는 감소된 용량은 제3 용량으로 지칭한다. 제3 용량은 1.0, 3.0, 6.0 또는 10.0 mg/kg(체중)일 수 있다. 제3 용량은 제1 및 제2 치료 기간의 남은 기간 동안 투여된다. 대안적으로, 제3 용량은 제3 치료 기간 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 제3 용량은 유지 용량으로 지칭되고, 제3 치료 기간은 유지 기간으로 지칭된다.
본 발명에 따른 다중 가변 용량 요법에서, 제2 용량을 위한 제1 및 제2 기간은 때때로 예를 들어, 피험체의 건강 상태에 기초하여 조정될 수 있다. 예를 들어, 용량 사이의 기간 조정은 ±1, 2, 3, 또는 4일, 바람직하게, ±2일로 조정될 수 있다.
본 발명에 따른 다중 가변 용량 요법에서, 용량은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 또는 12 hr로 투여된다. 바람직하게, 용량은 1시간으로 투여된다. 용량 주입 기간은 다수의 인자, 예를 들어, 연령, 체중, 신체 상태 또는 치료제에 대한 역반응에 기초한다. 용량 주입 기간은 전형적으로 피험체에 의해 허용되는 (즉, 역반응을 유발하지 않는) 고속화된 주입 속도이다.
용량을 단일 주사로서 투여된다. 항체는 치료되는 질환 또는 병태를 위한 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여된다. 예를 들어, 피험체는 제2 작용제를 투여받는다. 제2 작용제는 예를 들어, 항염증제, 및/또는 면역억제제이다.
임의적으로, 피험체는 항체 투여 직전에 덱사메타손을 투여받는다. 덱사메타손은 적어도 10 mg/m2의 용량으로 투여된다. 대안적으로, 덱사메타손은 적어도 5 mg/m2의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 피험체는 HLH 치료를 받은 적인 없는 피험체이다.
약학 조성물
본 발명의 항체 또는 가용성 키메라 폴리펩티드(이는 또한 본원에서 "활성 화합물"로도 지칭됨), 및 그의 유도체, 단편, 유사체 및 상동체는 투여에 적합한 약학 조성물에 포함될 수 있다. 상기 조성물은 전형적으로 항체 또는 가용성 키메라 폴리펩티드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 본원에서 사용되는 바, "약학적으로 허용가능한 담체"라는 용어는 약물 투여에 적합한 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함하는 것으로 의도된다. 적합한 담체는 본 분야의 표준 참고서인 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences](상기 문헌은 본원에서 참조로 포함된다)의 최신판에 기재되어 있다. 상기 담체 또는 희석제의 바람직한 예로는 물, 염수, 링거액, 덱스트로스 용액, 및 5% 인간 혈청 알부민을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 리포솜 및 비수성 비히클, 예컨대, 고정유가 또한 사용될 수 있다. 약학적 활성 물질을 위한 상기 매질 및 작용제의 사용은 당업계에 널리 공지되어 있다. 임의의 통상의 매질 또는 작용제가 활성 화합물과 부적합한 경우를 제외하고는, 조성물 내 그의 사용이 고려된다. 또한, 보조 활성 화합물이 조성물에 포함될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 그의 의도되는 투여 경로에 적합하도록 제제화된다. 투여 경로의 예로는 비경구, 예컨대, 정맥내, 진피내, 피하, 경구(예컨대, 흡입), 경피(즉, 국소), 경점막, 및 직장 투여를 포함한다. 비경구, 진피내, 또는 피하 적용에 사용되는 액제 또는 현탁제는 하기 구성요소를 포함할 수 있다: 멸균 희석액, 예컨대, 주사용수, 식염수, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항박테리아제, 예컨대, 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예컨대, 아스코르브산 또는 황산수소나트륨; 킬레이트제, 예컨대, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 완충제, 예컨대, 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트, 및 긴장도의 조정을 위한 작용제, 예컨대, 염화나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대, 염산 또는 수산화나트륨으로 조정될 수 있다. 비경구 제제는 앰플, 1회용 시린지, 유리 또는 플라스틱으로 제조된 다회 용량 바이알에 봉입될 수 있다.
바람직한 투여 경로는 주사, 예컨대, 정맥내 주사에 의한 것이다. 정맥내 주사는 고속 또는 저속 주입일 수 있다. 예를 들어, 주입은 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12시간이라는 기간에 걸쳐 진행된다. 주입 기간은 당업계에 공지된 다수의 인자, 예를 들어, 연령, 체중, 신체 상태 또는 치료제에 대한 역반응에 기초한다. 주입 기간은 전형적으로 피험체에 의해 허용되는 (즉, 역반응을 유발하지 않는) 고속화된 주입 속도이다.
주사 용도에 적합한 약학 조성물은 멸균 수용액(수용액일 경우) 또는 분산액 및 멸균 주사액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 정맥내 투여 경우, 적합한 담체는 생리 식염수, 정균수, 크레모포(Cremophor) EL™(BASF, 미국 뉴저지주 파시파니 소재) 또는 포스페이트 완충처리된 염수(PBS: phosphate buffered saline)를 포함한다. 모든 경우에, 조성물은 멸균 상태여야 하며, 용이한 주사가능성이 존재하는 정도로 유동적이어야 한다. 이는 제조 및 저장 조건하에서 안정적이어야 하고, 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염 작용으로부터 보존되어야 한다. 담체는 예를 들어, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 및 액체 지질 폴리에틸렌 글리콜 등), 및 그의 적합한 혼합물을 포함하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적합한 유동성은, 예를 들어, 레시틴과 같은 코팅제의 사용, 분산액의 경우, 요구되는 입자 크기의 유지, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 각종의 항박테리아제 및 항진균제, 예를 들어, 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브산, 티머로살 등에 미생물의 작용을 방지할 수 있다. 많은 경우에, 조성물 내에 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예컨대, 만닛톨, 소르비톨, 염화나트륨을 포함하는 것이 바람직할 것이다. 조성물 내에 흡수를 지연시키는 작용제, 예를 들어, 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴을 포함함으로써 주사가능한 조성물의 흡수를 연장시킬 수 있다.
멸균 주사액은 적절한 용매 내에 필요량의 활성 화합물을 필요에 따라 상기에 열거된 성분의 하나 이상의 조합을 혼입한 후, 여과 멸균하여 제조될 수 있다. 일반적으로, 분산액은 활성 화합물을 기본 분산 매질 및 상기에 열거된 것들로부터 필요한 다른 성분을 포함하는 멸균 비히클에 혼입함으로써 제조된다. 멸균 주사액 제조를 위한 멸균 분제의 경우, 제조 방법은 진공 건조 및 동결 건조이며, 이로써, 활성 성분 및 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 이전에 멸균 여과된 그의 액제로부터 수득하게 된다.
바람직한 주사가능한 약학 조성물은 부형제, 예컨대, L-히스티딘, 3 L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 염화나트륨(NaCl), 폴리소르베이트 80을 포함한다.
주사가능한 약학 조성물의 pH는 약 5.8 내지 6.2이다. 바람직하게, 주사가능한 약학 조성물의 pH는 pH 6.0이다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체, 예컨대, NI-0501은 하기와 같이 제제화된다(ml당): 5 mg의 NI-051, 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80, 여기서, pH는 6.0 ± 0.2이다.
일부 측면에서, 약학 조성물은 단위 용량으로 패키징된다. 단위 용량은 용기에 패키징된다. 용기는 유리 또는 플라스틱 용기이다. 용기는 시린지, 바이알, 주입병, 앰플 또는 카풀이다. 용기는 1-25 ml의 부피를 수용할 수 있다. 예를 들어, 용기는 2, 5, 10 또는 20 ml 부피를 수용할 수 있다.
완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체(예컨대, NI-501)의 단위 용량은 5-25 mg/ml이다. 바람직하게, 단위 용량은 5 mg/ml 또는 25 mg/ml이다. 항체는 1 ml당 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(예컨대, 주사용수) 중에 존재한다.
일부 실시양태에서, 본 발명은 5 mg/ml 또는 25 mg/ml 항체의 농도로 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하며, 여기서, 용액의 pH는 5.8 내지 6.2인 것인 단위 용량 용기를 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다. 바람직하게, 항체는 1 ml당 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(예컨대, 주사용수) 중에 존재한다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 25 mg/ml 항체의 농도로 10 ml 또는 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하며, 여기서, 용액의 pH는 5.8 내지 6.2인 것인 단위 용량 용기를 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다. 바람직하게, 항체는 1 ml당 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(예컨대, 주사용수) 중에 존재한다.
다른 실시양태에서, 본 발명은 5 mg/ml 항체의 농도로 2 ml 또는 10 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 함유하며, 여기서, 용액의 pH는 5.8 내지 6.2인 것인 단위 용량 용기를 제공한다. 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화된다. 바람직하게, 항체는 1 ml당 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80을 포함하는 용액(예컨대, 주사용수) 중에 존재한다.
경구 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용가능한 담체를 포함한다. 이들은 젤라틴 캡슐에 봉입되거나, 정제로 압축될 수 있다. 경구 치료 투여를 위해서, 활성 화합물은 부형제와 함께 혼입되고, 정제, 트로키, 또는 캡슐의 형태로 사용될 수 있다. 또한, 경구 조성물은 구강 세정제로서 사용하기 위해 유동성 담체를 이용하여 제조될 수 있으며, 여기서, 유동성 담체내 화합물은 경구적으로 적용되고, 헹구어 내고 뱉거나 삼킬 수 있다. 약학적으로 적합한 결합제, 및/또는 애주번트 물질이 조성물의 일부로서 포함될 수 있다. 정제, 환제, 캡슐, 트로키 등은 하기 성분 또는 유사한 성질의 화합물 중 임의의 것을 포함할 수 있다: 결합제, 예컨대, 미정질 셀룰로스, 트라가칸트 검 또는 젤라틴; 부형제, 예컨대, 전분 또는 락토스, 붕해제, 예컨대, 알긴산, 프리모겔(Primogel), 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예컨대, 스테아르산마그네슘 또는 스테로트(Sterote); 활택제, 예컨대, 콜로이드성 이산화규소; 감미제, 예컨대, 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예컨대, 페퍼민트, 메틸 살리실레이트, 또는 오렌지 향.
흡입에 의한 투여일 경우, 화합물은 적합한 압축가스, 예컨대, 이산화탄소와 같은 가스를 포함하는 가압 용기 또는 분배기로부터 에어로졸 스프레이, 또는 네불라이저의 형태로 전달된다.
또한, 전신 투여는 경점막 또는 경피 방법에 의해 이루어질 수 있다. 경점막 또는 경피 투여일 경우, 침투되는 장벽에 적합한 침투제가 제제에 사용된다. 상기 침투제는 일반적으로 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 경점막 투여일 경우, 계면활성제, 담즙염, 및 푸시딘산 유도체를 포함한다. 경점막 투여는 비강용 스프레이 또는 좌제 사용을 통해 수행될 수 있다. 경피 투여일 경우, 활성 화합물은 당 업계에 일반적으로 알려진 연고, 고약, 겔, 또는 크림으로 제제화된다.
또한, 화합물은 직장 전달을 위한 좌제(예컨대, 통상적인 좌제 베이스, 예컨대, 코코아 버터 및 다른 글리세리드 이용) 또는 정체 관장의 형태로 제조될 수 있다.
한 실시양태에서, 활성 화합물은 예컨대, 이식 및 미세캡슐화 전달 시스템을 포함하는 방출 조절형 제제와 같이 체내에서 신속한 제거로부터 화합물을 보호할 담체와 함께 제조된다. 생체분해성, 생체적합성 중합체, 예컨대, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리안하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르, 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 상기 제제의 제조 방법은 당업자에게 자명할 것이다. 또한, 물질은 알자 코포레이션(Alza Corporation) 및 노바 파마슈티칼즈, 인크.(Nova Pharmaceuticals, Inc.)로부터 상업적으로 입수할 수 있다. 리포솜 현탁액(바이러스 항원에 대한 단일클론 항체로 감염된 세포로 표적화되는 리포솜 포함)은 또한 약학적으로 허용가능한 담체로서 사용될 수 있다. 이들은 당업자에게 공지된 방법, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,522,811에 기재된 방법에 따라 제조될 수 있다.
투여의 용이성 및 투여량의 균일성을 위해 경구 또는 비경구 조성물은 투여 단위 형태로 제제화하는 것이 특히 이롭다. 본원에서 사용되는 바, 투여 단위 형태란, 치료하고자 하는 피험체에 단일 투여량으로서 적합한 물리적 개별 단위로서; 각 단위는 필요한 약학 담체와 결합하여 바라는 치료 효과를 가져 오도록 계산된 활성 화합물의 예정된 양을 함유하는 것을 지칭한다. 본 발명의 투여 단위 형태에 대한 상세내용은 활성 화합물의 고유한 특징 및 달성하고자 하는 특정 치료 효과, 및 개체의 치료를 위해 상기 활성 화합물을 혼합하는 기술에 내재하는 제약에 의해 좌우되거나, 이에 직접적으로 의존한다.
약학 조성물은 투여를 위한 설명서와 함께 용기, 팩 또는 분배기에 포함될 수 있다.
CXCL9 및 다른 바이오마커 검출
CXCL9 및 다른 바이오마커의 수준은 다양한 표준 검출 기술 중 임의의 것을 이용하여 검출된다. 검출제는 샘플 중 주어진 표적(또는 그의 단백질 단편)의 존재를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 검출제는 검출가능한 표지를 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출제는 항체(또는 그의 단편) 또는 프로브이다. 일부 실시양태에서, 제제 또는 프로브는 표지된다. 프로브 또는 항체와 관련하여 "표지된"이라는 용어는 검출가능한 물질의 프로브 또는 항체에의 커플링(즉, 물리적 연결)에 의한 프로브 또는 항체의 직접적인 표지 뿐만 아니라, 직접적으로 표지된 또 다른 시약과의 반응성에 의한 프로브 또는 항체의 간접적인 표지를 포함하고자 한다. 간접적인 표지의 예로는 형광 표지된 2차 항체를 이용한 1차 항체의 검출 및 형광 표지된 스트렙트아비딘으로 검출될 수 있도록 비오틴으로의 DNA 프로브의 말단 표지를 포함한다.
"생물학적 샘플"이라는 용어는 피험체로부터 단리된 조직, 세포 및 생체액 뿐만 아니라, 피험체 내에 존재하는 조직, 세포, 및 체액을 포함하고자 한다. 그러므로, 혈액, 및 혈액 혈청, 혈액 혈장, 또는 림프를 포함하는 혈액의 분획 또는 구성 성분이 요소가 "생물학적 샘플"이라는 용어의 용법 내에 포함된다. 체액은 피험체의 신체 모든 곳, 바람직하게는 말초 부위로부터 단리된 체액일 수 있으며, 예를 들어, 혈액, 혈장, 혈청, 활액, 소변, 객담, 척수액, 뇌척수액, 흉수, 기도, 장관, 및 비뇨 생식관의 체액, 타액, 장기내 시스템 체액, 복수, 종양 낭액, 양수 및 그의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 생물학적 샘플은 또한 상기 체액 모두의 실험적으로 분리된 분획도 포함한다. 생물학적 샘플은 또한 균질화된 고체 물질, 예컨대, 대변, 조직, 및 생검 샘플을 함유하는 용액 또는 혼합물도 포함한다. 본 발명의 검출 방법을 이용하여 시험관내 및 생체내에서 생물학적 샘플 중의 피분석물 mRNA, 단백질, 또는 게놈 DNA를 검출할 수 있다. 예를 들어, 피분석물 mRNA의 검출을 위한 시험관내 기술은 노던 하이브리드화 및 동소 하이브리드화를 포함한다. 피분석물 단백질의 검출을 위한 시험관내 기술은 효소 결합 면역흡착 검정법(ELISA: enzyme linked immunosorbent assay), 웨스턴 블롯, 면역침전법, 및 면역형광법을 포함한다. 피분석물 게놈 DNA를 검출하기 위한 시험관내 기술은 서던 하이브리드화를 포함한다. 면역검정법을 수행하기 위한 절차는 예를 들어, 문헌 ["ELISA: Theory and Practice: Methods in Molecular Biology", Vol. 42, J. R. Crowther (Ed.) Human Press, Totowa, NJ, 1995]; ["Immunoassay", E. Diamandis and T. Christopoulus, Academic Press, Inc., San Diego, CA, 1996]; 및 ["Practice and Theory of Enzyme Immunoassays", P. Tijssen, Elsevier Science Publishers, Amsterdam, 1985]에 기술되어 있다. 추가로, 피분석물 단백질의 검출을 위한 생체내 기술은 표지된 항피분석물 단백질 항체를 피험체에 도입하는 단계를 포함한다. 예를 들어, 항체는 방사성 마커로 표지될 수 있으며, 피험체에서 그의 존재 및 위치는 표준 영상화 기술에 의해 검출될 수 있다.
정의:
달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용되는 과학 용어 및 기술 용어는 당업계의 숙련가가 통상적으로 이해되는 의미를 가져야 한. 추가로, 맥락상 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함하여야 하고, 복수 용어는 단수를 포함하여야 한다. 일반적으로, 본원에 기술된 세포 및 조직 배양, 분자생물학, 및 단백질 및 올리고뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 화학 및 하이브리드화와 관련하여 이용되는 명명법, 및 그의 기술은 당업계에 널리 공지되어 있고, 이는 보편적으로 사용되는 것이다. 재조합 DNA, 올리고뉴클레오티드 합성, 및 조직 배양 및 형질전환(예컨대, 전기천공, 리포펙션)을 위해 표준 기술이 이용된다. 효소 반응 및 정제 기술은 제조사의 상세설명에 따라서, 또는 당업계에서서 보편적으로 수행되는 바와 같이, 또는 본원에 기술된 바와 같이 수행된다. 상기 기술 및 절차는 일반적으로 당업계에 널리 공지된 통상적인 방법에 따라서, 및 본 명세서 전역에서 인용되고, 논의된 각종의 일반 참고문헌 및 더욱 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 예컨대, 문헌 [Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989))]을 참조한다. 본원에 기술된 분석화학, 합성 유기화학, 및 의학 및 약학 화학과 관련하여 이용되는 명명법, 및 그의 실험 절차 및 기술은 당업계에 널리 공지되어 있고, 보편적으로 사용되는 것이다. 화학적 합성, 화학적 분석, 약학적 제조, 제제화, 및 전달 및 환자 치료를 위해 표준 기술이 이용된다.
본원에서 사용되는 바, "용량"이라는 용어는 피험체에게 투여되는 항IFN 감마 항체의 양을 지칭한다.
"다중 가변 용량"이라는 용어는 치료적 치료를 위해 피험체에게 투여되는 항IFN 감마 항체의 상이한 용량을 포함한다. "다중 가변 용량 계획" 또는 "다중 가변 용량 요법"은 치료 과정 전 기간 동안에 걸쳐 다양한 시점에 상이한 양의 항IFN 감마 항체를 투여하는 것에 기초한 치료 스케줄을 기술한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 유도 단계 및 치료 단계를 포함하는 다중 가변 용량 치료 방법으로서, 항IFN 감마 항체는 치료 단계보다 유도 단계 동안에 더 높은 용량 또는 더 낮은 용량으로 투여되는 것인 방법을 기술한다. 또 다른 실시양태에서, 본 발명은 유도 단계, 제1 치료 단계, 및 제2 치료 단계를 포함하는 다중 가변 용량 치료 방법으로서, 항IFN 감마 항체는 치료 단계보다 유도 단계 동안에 더 높은 용량 또는 더 낮은 용량으로 투여되는 것인 방법을 기술한다. 항IFN 감마 항체는 제2 치료 단계보다 제1 치료 단계 동안에 더 높은 용량 또는 더 낮은 용량으로 투여될 수 있다. 바람직하게, 용량은 제1 치료 단계 및 제2 치료 단계에서 동일하다.
본원에서 사용되는 바, "유도 단계" 또는 "부하 단계"라는 용어는 역치 수준을 달성하기 위해 피험체에게 IFN 감마를 투여하는 것을 포함하는 치료 기간을 지칭한다. 유도 단계 동안, 적어도 1회의 유도 용량의 IFN 감마가, IFN 감마가 해로운 장애를 앓고 있는 피험체에게 투여된다.
본원에서 사용되는 바, "역치 수준"이라는 용어는 피험체에서 IFN 감마 항체의 치료적으로 효과적인 수준을 지칭한다. 역치 수준은 치료의 유도 단계 동안 적어도 1회의 유도 용량을 투여함으로써 달성된다. IFN 감마의 역치 수준을 달성하기 위해서는 유도 용량이 임의 회차로 투여될 수 있다. 일단 역치 수준을 달성하고 나면, 치료 단계가 개시된다.
"유도 용량" 또는 "부하 용량"이라는 용어는 상호교환적으로 사용되며, 이는 항IFN 감마 항체의 제1 용량을 지칭하고, 유지 또는 치료 용량과 비교하여 더 크거나, 또는 더 작다. 유도 용량은 단일 용량, 또는 대안적으로, 용량 세트일 수 있다. 유도 용량은 대개 체내 약물이 정상 상태인 양이 되도록 하는 데 사용되며, 이는 유지 약물 수준을 신속하게 달성하도록 하는 데에도 사용될 수 있다. 유도 용량 다음으로 더 작은 또는 더 큰 용량의 항IFN 감마 항체 투여, 즉, 치료 용량이 진행된다. 유도 용량은 요법의 유도 단계 동안 투여된다.
본원에서 사용되는 바, "치료 단계" 또는 "유지 단계"라는 용어는 원하는 치료 효과를 유지시키기 위해 피험체에게 항IFN 감마 항체를 투여하는 것을 포함하는 치료 기간을 지칭한다. 치료 단계는 유도 단계 다음으로 진행되고, 그러므로, 일단 역치 수준을 달성한 후에 개시된다. 1회 초과의 치료 단계가 존재할 수 있고, 즉, 특정 역치를 유지시키기 위해, 또는 원하는 임상 반응을 달성하기 위해 치료 단계는 단축되거나, 연장된다. 치료 단계에서는 유도 용량일 (예컨대, 개시 용량일) 후, 3일마다 물질이 투여되는 것이 바람직할 수 있다. 대안적으로, 물질은 주 1회 또는 주 2회 투여된다.
"치료 용량" 또는 "유지 용량"이라는 용어는 원하는 치료 효과를 유지 또는 지속시키기 위해 피험체가 복용하는 항IFN 감마 항체의 양이다. 치료 용량은 유도 용량 다음으로 투여된다. 치료 용량은 단일 용량, 또는 대안적으로, 용량 세트일 수 있다. 치료 용량은 요법의 치료 단계 동안 투여된다. 치료 용량은 유도 용량보다 더 작거나, 더 크고, 연속 투여시, 이는 서로 동일할 수 있다. 치료 단계가 1회 초과로 존재할 때, 1 초과의 치료 용량이 존재할 수 있다.
"투여 요법" 또는 "투약 요법"은 결정된 용량 세트에 기초한 치료 요법을 포함한다.
본원에서 사용되는 바, "투약"이라는 용어는 치료 목적(예컨대, IFN 감마 연관 장애 치료)을 달성하기 위해 물질(예컨대, 항IFN 감마 항체)을 투여하는 것을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "격주 투약 요법," "격주 투약," 및 "격주 투여"라는 용어는 치료 목적(예컨대, IFN 감마 연관 장애 치료)을 달성하기 위해 피험체에게 물질(예컨대, 항IFN 감마 항체)을 투여하는 시간 과정을 지칭한다. 격주 투약 요법은 주 1회 투약 요법을 포함하는 것으로 의도되지 않는다.
"제2 작용제와 조합된 제1 작용제"라는 어구에서와 같이 "조합"이라는 용어는, 예를 들어, 동일한 약학적으로 허용가능한 담체 중에 용해되거나, 또는 혼합될 수 있는 제1 작용제 및 제2 작용제의 공동 투여, 또는 제1 작용제 투여 후, 제2 작용제 투여, 또는 제2 작용제 투여 후, 제1 작용제 투여를 포함한다. 그러므로, 본 발명은 치료적 치료 조합 및 약학 조성물 조합 방법을 포함한다.
"공동 치료적 치료"라는 어구에서와 같이 "공동"이라는 용어는 제2 작용제의 존재하에 한 작용제를 투여하는 것을 포함한다. 공동 치료적 치료 방법은 제1, 제2, 제3, 또는 추가의 작용제를 공동 투여하는 방법을 포함한다. 공동 치료적 치료 방법은 또한 제1 또는 추가의 작용제를 제2 또는 추가의 작용제의 존재하에 투여하는 방법을 포함하며, 여기서, 제2 또는 추가의 작용제는 예를 들어, 이전에 투여될 수 있다. 공동 치료적 치료 방법은 다른 관계자에 의해 단계식으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 한 관계자는 피험체에게 제1 작용제를 투여할 수 있고, 제2 관계자는 피험체에게 제2 작용제를 투여할 수 있고, 투여 단계는 동시에, 또는 거의 동시에, 또는 제1 작용제(및 추가의 작용제)가 제2 작용제(및 추가의 작용제)의 존재하에서의 투여 후에 존재하는 한, 시간상 먼 간격을 두고 수행될 수 있다. 관계자 및 피험체는 같은 엔티티(예컨대, 인간)일 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "조합 요법"이라는 용어는 2종 이상의 치료 물질, 예컨대, 항IFN 감마 항체 및 또 다른 약물, 예컨대, DMARD 또는 NSAID를 투여하는 것을 지칭한다. 다른 약물(들)은 항IFN 감마 항체와 함께 공동으로, 그 이전에, 또는 그 이후에 투여될 수 있다.
실시양태
본원에서 제공되는 조성물 및 방법, NI-0501은 주입용 멸균 농축물로서 제제화된다(ml당). 일부 실시양태에서, NI-0501은 하기와 같이 제제화된다: 5 mg의 NI-051, 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80, 여기서, pH는 5.8 내지 6.2이다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 하기와 같이 제제화된다: 5 mg의 NI-051, 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80, 여기서, pH는 6.0이다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다. 특정 환자 집단, 예컨대, 저체중이고/거나, 아주 어린 환자에서, IV 주입은 1시간 넘게, 예를 들어, 적어도 90분, 적어도 2시간, 또는 적어도 3시간 이상 지속될 수 있다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸친 개시 IV 주입 이후에 적어도 1회의 추가 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입 투여량은 3 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸친 개시 IV 주입 이후에 적어도 한 시리즈의 추가 IV 주입에 의해 투여되고, 여기서, 추가 IV 주입 시리즈는 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입은 3 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3주 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 개시 IV 주입 이후에 적어도 2회의 추가 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 2회의 추가 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 동일한 투여량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 개시 용량보다 높은, 동일한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 중 적어도 하나는 3 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은, 제2 추가 IV 주입 투여량이 제1 추가 IV 주입보다 높은, 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은, 제2 추가 IV 주입 투여량이 제1 추가 IV 주입보다 높고, 여기서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 투여량, 둘 모두는 개시 용량보다 높은, 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 중 적어도 하나는 3 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 3 mg/kg인 투여량으로 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 6 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 적어도 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함하고, 제2 추가 IV 주입은 적어도 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입 및 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입은 3 mg/kg의 용량으로 투여되고, 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입은 6 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된 후, 이어서, 개시 투여 후 적어도 15일째를 시작으로 주 2회 주입이 실시된다. 일부 실시양태에서, 주입 투여량은 개시 투여 후 어느 시점에서든지 3 mg/kg으로 증가된다. 일부 실시양태에서, 3　mg/kg으로 최소 2회 주입 후, NI-0501의 용량은 최대 4회 주입까지 6 mg/kg으로 증가된다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된 후, 이어서, 개시 투여 후 적어도 15일째를 시작으로 주 2회 주입이 실시된다. 일부 실시양태에서, 주입 투여량은 개시 투여 후 어느 시점에서든지 3 mg/kg으로 증가된다. 일부 실시양태에서, 3　mg/kg으로 최소 2회 주입 후, NI-0501의 용량은 최대 4회 주입까지 6 mg/kg으로 증가된다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 6 mg/kg 초과의 투여량으로 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 개시 투여량 후, 6 mg/kg 초과의 제2 투여량으로 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 적어도 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 매일 반복하여 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 1주 동안 매일 반복하여 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 2주 동안 매일 반복하여 10 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 제2 투여량은 2주 초과의 기간 동안 매일 반복하여 10 mg/kg이다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 속발성 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 sJIA를 배경으로 하는 속발성 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 6 mg/kg의 개시 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, NI-0501 치료는 후속 NI-0501 용량으로 계속된다. 일부 실시양태에서, NI-0501 치료는 3 mg/kg의 후속 NI-0501 용량으로 3일마다 적어도 4주 동안 계속된다(즉, 최대 SD27까지)
일부 실시양태에서, NI-0501 치료는 원하는 임상 결과가 달성시, 축소되거나, 정지되거나, 또는 다르게는 단축된다. 일부 실시양태에서, NI-0501 치료는 완전 임상 반응, 즉, MAS 완화의 입증시 단축된다.
일부 실시양태에서, 4주 후에, NI-0501 치료는 MAS 완화에 도달할 때까지 필요에 따라 유지로서 추가로 최대 4주까지(즉, 최대 SD56까지) 계속된다. 일부 실시양태에서, 4주 후에, NI-0501 치료는 가능하게는 용량을 1 mg/kg으로 감소시키고, 주입 사이 간격을 주 1회 투여로 연장하면서, MAS 완화에 도달할 때까지 필요에 따라 유지로서 추가로 최대 4주까지(즉, 최대 SD56까지) 계속된다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 HLH와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여되며, 피험체는 덱사메타손의 배경을 투여받는다. 일부 실시양태에서, 피험체는 치료 무경험 환자이고(즉, 이전에 HLH에 대해 치료받은 적이 없는 환자), 덱사메타손은 적어도 10 mg/㎡의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 피험체는 제2선의 HLH 치료로서 NI-0501을 받고 있고, 덱사메타손은 10 mg/㎡ 내지 5 mg/㎡ 범위의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 피험체는 제2선의 HLH 치료로서 NI-0501을 받고 있고, 덱사메타손은 적어도 5 mg/㎡의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 피험체는 제2선의 HLH 치료로서 NI-0501을 받고 있고, 덱사메타손은 5 mg/㎡ 미만의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501은, 예컨대, 비제한적인 예로서, 치료제, 항염증제, 및/또는 면역억제제와 같은 하나 이상의 추가의 작용제와 함께 조합하여 치료 이전 및/또는 그 동안에 및/또는 그 이후에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 작용제는 HLH의 치료에 사용된다고 알려진 작용제이다. 일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 적어도 에토포시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, NI-0501 및 추가의 작용제는 단일 치료 조성물로 제제화되고, NI-0501 및 추가의 작용제는 동시에 투여된다. 대안적으로, NI-0501 및 추가의 작용제는 서로 분리되어, 예컨대, 각각 별개의 치료 조성물로 제제화되어, NI-0501 및 추가의 작용제는 동시에 투여되거나, NI-0501 및 추가의 작용제는 치료 요법 동안 상이한 시점에 투여된다. 예를 들어, NI-0501은 추가의 작용제의 투여 이전에 투여되거나, NI-0501은 추가의 작용제의 투여 이후에 투여되거나, NI-0501 및 추가의 작용제는 교대 방식으로 투여된다. 본원에서 기술된 바와 같이, NI-0501 및 추가의 작용제는 단일 용량으로 또는 다회 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501 및 추가의 작용제(들)는 동시에 투여된다. 예를 들어, NI-0501 및 추가의 작용제(들)는 단일 조성물로 제제화되거나, 2개 이상의 별개의 조성물로서 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, NI-0501 및 추가의 작용제(들)는 순차적으로 투여되거나, NI-0501 및 추가의 작용제는 치료 요법 동안 상이한 시점에 투여된다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 면역억제제이다. 일부 실시양태에서, 면역억제제는 시클로스포린 A(CsA)이다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501의 투여 이전에 CsA를 받고 있는 피험체이다. 일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 적어도 에토포시드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501의 투여 이전에 에토포시드를 받고 있는 피험체이다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 척수강내 메토트렉세이트 및/또는 글루코코르티코이드이다. 일부 실시양태에서, 피험체는 NI-0501의 투여 이전에 척수강내 메토트렉세이트 및/또는 글루코코르티코이드를 받고 있는 피험체이다.
일부 실시양태에서, 추가의 작용제는 IV 면역글로불린(IVIG)이다. 일부 실시양태에서, IVIG는 기록된 면역글로불린 결핍증에 걸린 피험체에서 대체 치료로서 투여된다. 피험체가 기록된 면역글로불린 결핍증에 걸린 일부 실시양태에서, IVIG는 적절한 IgG 수준을 유지하기 위해서 0.5 g/kg의 용량으로 4주마다 또는 더 빈번하게 투여된다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 추가의 작용제는 진통 치료, 혈액 제품의 수혈, 전해질 및 글루코오스 주입, 항생제, 항진균 치료 및 항바이러스 치료 및/또는 일반 지지 치료이다.
본원에 제공된 조성물 및 방법은 이식 실패, 이식 거부, 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키는 데 유용하다. 본원에 제공된 조성물 및 방법은 생물학적 물질을 포함하는 이식체, 또는 생물학적 물질을 포함하는 일련의 이식체를 받았거나, 또는 받고 있는 피험체에서 이식편 대 숙주 질환(GvHD)의 증상을 치료, 억제, 그의 진행을 지연시키거나, 또는 다르게는 그를 호전시키는 데 유용하다. 본원에 제공된 조성물 및 방법은 이식된 생물학적 물질의 생존을 연장시키는 데 유용하다.
본원에 제공된 조성물 및 방법은 예를 들어, 세포, 조직(들), 골수, 및/또는 비제한적인 예로서, 심장, 신장, 췌장, 간, 및/또는 장을 비롯한, 장기(들)의 적어도 일부를 포함하는 임의의 생물학적 물질을 이식시키는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 이식되는 생물학적 물질은 동종이계 생물학적 물질이다. 일부 실시양태에서, 이식된 생물학적 물질은 골수이다. 일부 실시양태에서, 이식된 생물학적 물질은 조혈 줄기 세포 집단이다. 일부 실시양태에서, 이식되는 생물학적 물질은 하나 이상의 간세포이거나, 또는 그로부터 유래된 것이다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 이식 실패, 이식 거부, 및/또는 이식 거부와 연관된 염증성 장애와 연관된 증상을 치료, 예방, 및/또는 그의 발병 또는 진행을 지연, 또는 완화시키기 위해 그를 필요로 하는 피험체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 본원에서 이식 실패로도 지칭되는 이식 거부는 급성이다. 일부 실시양태에서, 이식 거부는 초급성이다.
본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서, NI-0501은 주입용 멸균 농축물로서 제제화된다(ml당). 일부 실시양태에서, NI-0501은 하기와 같이 제제화된다: 5 mg의 NI-051, 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80, 여기서, pH는 5.8 내지 6.2이다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 하기와 같이 제제화된다: 5 mg의 NI-051, 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80, 여기서, pH는 6.0이다.
일부 실시양태에서, 이식 거부는 만성이다. 일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다. 특정 환자 집단, 예컨대, 저체중이고/거나, 아주 어린 환자에서, IV 주입은 1시간 넘게, 예를 들어, 적어도 90분, 적어도 2시간, 또는 적어도 3시간 이상 지속될 수 있다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸친 개시 IV 주입 이후에 적어도 1회의 추가 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입 투여량은 3 mg/kg이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸친 개시 IV 주입 이후에 적어도 한 시리즈의 추가 IV 주입에 의해 투여되고, 여기서, 추가 IV 주입 시리즈는 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 한 시리즈의 주 2회 IV 주입은 3 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3주 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1회의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, NI-0501은 그를 필요로 하는 피험체에게 개시 IV 주입 이후에 적어도 2회의 추가 IV 주입에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 2회의 추가 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 동일한 투여량으로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 개시 용량보다 높은, 동일한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 중 적어도 하나는 3 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 제2 추가 IV 주입은, 제2 추가 IV 주입 투여량이 제1 추가 IV 주입보다 높은, 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입 및 제2 추가 IV 주입은, 제2 추가 IV 주입 투여량이 제1 추가 IV 주입보다 높고, 여기서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 투여량, 둘 모두는 개시 용량보다 높은, 상이한 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 및 제2 추가 IV 주입 중 적어도 하나는 3 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 3 mg/kg인 투여량으로 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 6 mg/kg인 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 제1 추가 IV 주입은 적어도 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함하고, 제2 추가 IV 주입은 적어도 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입 및 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입은 1 mg/kg의 개시 용량보다 높은 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 주 2회 IV 주입은 3 mg/kg의 용량으로 투여되고, 제2 시리즈의 주 2회 IV 주입s 6 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 적어도 3일 경과시에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째로 구성된 군으로부터 선택되는 시점에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다. 일부 실시양태에서, 제1 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3일째, 개시 IV 주입 후 6일째, 개시 IV 주입 후 9일째, 개시 주입 후 12일째, 및 개시 주입 후 15일째에 투여되고, 제2 시리즈의 추가 IV 주입은 개시 IV 주입 후 3주째, 개시 IV 주입 후 4주째, 개시 IV 주입 후 5주째, 개시 IV 주입 후 6주째, 개시 IV 주입 후 7주째, 및 개시 IV 주입 후 8주째에 투여된다.
일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 주입은 개시 투여 후 3일마다 개시 투여 후 최대 15일 동안 수행된 후, 이어서, 개시 투여 후 적어도 15일째를 시작으로 주 2회 주입이 실시된다. 일부 실시양태에서, 주입 투여량은 개시 투여 후 어느 시점에서든지 3 mg/kg으로 증가된다. 일부 실시양태에서, 3　mg/kg으로 최소 2회 주입 후, NI-0501의 용량은 최대 4회 주입까지 6 mg/kg으로 증가된다.
본 개시내용 또한 환자가 단독으로, 또는 하나 이상의 추가의 인터페론(IFNγ) 관련 바이오마커와 함께 조합하여 상승된 수준의 CXCL9를 보이는, 장애를 앓는 환자 집단을 확인하거나, 또는 다르게는 그를 정제하는 데 유용한 조성물 및 방법을 제공한다. 특히, 본 개시내용은 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 특히, 본 개시내용은 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하기 위한 조성물 및 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 방법은 대식세포 활성화 증후군(MAS)을 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 방법은 자가면역 질환 또는 염증성 장애와 관련하여 MAS를 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 방법은 전신 자가면역 질환 또는 염증성 장애와 관련하여 MAS를 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 방법은 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA)과 관련하여 MAS를 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하는 데 사용된다. 일부 실시양태에서, 조성물 및 방법은 전신 홍반 루푸스(SLE)와 관련하여 MAS를 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 환자에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서 CXCL9 수준을 검출하는 데 사용된다.
CXCL9 수준이 상승된 것으로 확인된 환자는 예를 들어, IFNγ 신호전달과 같은 IFNγ의 하나 이상의 생물학적 활성을 방해하거나, 또는 다르게는 그를 길항시키고, IFNγ의 적어도 하나의 생물학적 활성을 중화시키는 작용제(예컨대, 항체 또는 다른 폴리펩티드 기반 치료제, 펩티드 기반 치료제, 소분자 억제제, 핵산 기반 치료제 및 그의 유도체)로 치료하기에 적합한 후보자로서 확인된다.
장애를 앓고 있거나, 또는 앓을 것으로 의심되는 일부 환자에서, 체액 및 다른 생물학적 샘플은 단독으로, 또는 예컨대, 예를 들어, CXCL10 및/또는 CXCL11과 같은 다른 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여 상승된 수준의 CXCL9를 포함한다.
CXCL9 및 상기 다른 바이오마커는 생체내 IFNγ 생산의 지표이다. 따라서, IFNγ 신호전달을 방해하거나, 억제하거나, 감소시키거나, 또는 다르게는 그를 길항시키는 항IFNγ 길항제, 예컨대, 중화 항IFNγ 항체 또는 다른 폴리펩티드 기반 치료제, 펩티드 기반 치료제, 소분자 억제제, 핵산 기반 치료제 및 그의 유도체의 사용은 IFNγ 활성을 차단하거나, 또는 다르게는 억제시킨다. 따라서, 조성물 및 방법은 항IFNγ 길항제, 예컨대, 중화 항IFNγ 항체 또는 다른 폴리펩티드 기반 치료제, 펩티드 기반 치료제, 소분자 억제제, 핵산 기반 치료제 및 그의 유도체를 CXCL9 및/또는 다른 바이오마커의 상승된 발현 수준을 보이는 환자에게 투여함으로써 비정상적인, 예컨대, 상승된 IFNγ 발현 및/또는 활성, 비정상적인 염증유발성 사이토카인 생산 및/또는 그의 조합에 의존하거나, 그에 의해 유발되거나, 그와 연관되거나, 또는 다르게는 그에 의해 영향받는 장애의 증상을 치료하거나, 그의 진행을 지연시키거나, 또는 다르게는 호전시키는 데 유용하다. 항IFNγ 길항제, 예컨대, 본원에 기술된 것들과 같은 중화 항IFNγ 항체로 치료하기에 적합한 후보자가 될 가능성이 있는 환자는 단독으로, 또는 하나 이상의 IFNγ 관련 리간드 또는 다른 바이오마커와 함께 조합하여 CXCL9의 수준을 검출함으로써 확인된다. 일부 실시양태에서, 단독으로, 또는 다른 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여, CXCL9의 수준이 상승되지 않은 환자도 역시 본원에 기술된 중화 항IFNγ 항체 또는 다른 폴리펩티드 기반 치료제, 펩티드 기반 치료제, 소분자 억제제, 핵산 기반 치료제 및 그의 유도체 중 임의의 것을 포함하는 항IFNγ 길항제로 치료될 수 있다.
단독으로, 또는 하나 이상의 추가의 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여, CXCL9의 수준이 상승된 환자는 예컨대, 본원에 기술된 중화 항IFNγ 항체와 같은 하나 이상의 항IFNγ 길항제를 이용한 요법에 적합한 후보자로서 확인된다. 본원에서 사용되는 바, "상승된 발현 수준"이라는 어구는 원발성 또는 속발성 HLH 또는 HLH 관련 장애를 앓지 않거나, 또는 앓는 것으로 의심되지 않는 환자의 샘플 또는 또 다른 대조군 샘플에서 단독으로, 또는 하나 이상의 추가의 바이오마커와 함께 조합하여 CXCL9의 기준선 발현 수준보다 더 큰 발현 수준을 지칭한다. 일부 실시양태에서, CXCL9 및/또는 다른 바이오마커의 상승된 발현 수준은 유의적으로 상승된 수준이다.
단독으로, 또는 하나 이상의 다른 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여, CXCL9의 검출된 수준은 환자 집단을 정제하거나, 또는 다르게는 그를 계층화하는 데 유용하다. 일부 실시양태에서, 검출된 수준을 이용하여 주어진 환자에게 투여되어야 하는 항IFNγ 길항제의 투여량을 결정한다. 일부 실시양태에서, 검출된 수준을 이용하여 환자 집단을 분류하거나, 또는 다르게는 그를 계층화한다. 예를 들어, 환자는 CXCL9의 검출된 수준을 기준으로 하여 "중증의" 또는 높은 등급의 MAS, 또는 반대로 중증이 아니거나, 또는 낮은 등급의 MAS로 분류될 수 있다.
샘플은, 예를 들어, 혈액 또는 혈액 구성 성분, 예컨대, 혈청, 혈장이다. 일부 실시양태에서, 샘플은 또 다른 체액, 예컨대, 비제한적인 예로서, 소변, 활액, 기관지 폐포액, 뇌척수액, 기관지 폐포 세척액(BAL: broncho-alveolar lavage), 및/또는 타액이다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 CSF이다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 HLH 환자의 CSF이다.
IFNγ 및/또는 다른 IFNγ 관련 바이오마커의 수준을 검출하는 것 이외에, 항IFNγ 길항제로 치료하기에 적합한 환자는 또한 환자 집단을 확인하거나, 또는 다르게는 그를 정제하기 위한 바이오마커의 민감도 및 특이도를 개선시킬 수 있는 수개의 추가의 생물학적 임상 파라미터 중 임의의 것을 평가함으로써 확인될 수 있다. 대안적으로, 상기 추가의 생물학적 임상 파라미터는 항IFNγ 길항제 또는 다른 적합한 요법으로 치료하기에 적합한 후보자인 환자를 확인하기 위한 수단으로서 단독으로 이용될 수 있다. 이러한 생물학적 임상 파라미터는, 비제한적인 예로서, 하기: 페리틴 수준, 호중구 계수, 혈소판 계수, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 수준, 및/또는 락테이트 데하이드로게나제 수준 중 임의의 것을 포함한다.
본 발명의 조성물 및 방법에 유용한 장애로는 비정상적인, 예컨대, 상승된 IFNγ 발현 및/또는 활성을 보이는 임의의 장애, 특히, 속발성 HLH를 비롯한 HLH, MAS, 및/또는 sJIA를 포함한다.
비제한적인 예로서, 본원에서 제공되는 방법 및 조성물은 장애, 예컨대, 원발성 및/또는 속발성 HLH 장애를 진단하고/거나, 치료하는 데 적합하다. 적합한 자가면역 및/또는 염증성 장애로는 비제한적인 예로서, 비정상적인 IFNγ 활성 및/또는 발현과 연관된 원발성 및/속발성 HLH 장애를 포함한다.
일단 환자가 단독으로, 또는 하나 이상의 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여 CXCL9의 수준이 상승된 것으로 확인되고 나면, 이때 상기 환자는 항IFNγ 길항제로 치료된다. 예를 들어, 항IFNγ 길항제는 중화 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인(예컨대, 항원 결합) 단편이다. 적합한 중화 항IFNγ 항체는 본원에서 기술된 항IFNγ 항체 중 임의의 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2); 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1; AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2 영역; 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3 영역; TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1) 영역; EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 VH CDR1 서열, VH CDR2 서열, 및 VH CDR3 서열의 조합을 포함하는 중쇄로서, 여기서, 조합은 표 1A에 일렬로 제시된 3개의 중쇄 CDR 서열(VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3)의 조합인 중쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 VL CDR1 서열, VL CDR2 서열, 및 VL CDR3 서열의 조합을 포함하는 경쇄로서, 여기서, 조합은 표 1B에 일렬로 제시된 3개의 경쇄 CDR 서열(VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3)의 조합인 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 VH CDR1 서열, VH CDR2 서열, 및 VH CDR3 서열의 조합을 포함하는 중쇄로서, 여기서, 조합은 표 1A에 일렬로 제시된 3개의 중쇄 CDR 서열(VH CDR1, VH CDR2, VH CDR3)의 조합인 중쇄, 및 VL CDR1 서열, VL CDR2 서열, 및 VL CDR3 서열의 조합을 포함하는 경쇄로서, 여기서, 조합은 표 1B에 일렬로 제시된 3개의 경쇄 CDR 서열(VL CDR1, VL CDR2, VL CDR3)의 조합인 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 44의 아미노산 서열에 대한 중쇄 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 46의 아미노산 서열에 대한 경쇄 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 44의 아미노산 서열에 대한 중쇄 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 서열 번호 46의 아미노산 서열에 대한 경쇄 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 44의 아미노산 서열에 대한 중쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 46의 아미노산 서열에 대한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 44의 아미노산 서열에 대한 중쇄 아미노산 서열, 및 서열 번호 46의 아미노산 서열에 대한 경쇄 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 및 102로 구성된 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 96, 100, 및 104로 구성된 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 및 102로 구성된 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 은 서열 번호 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 96, 100, 및 104로 구성된 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 아미노산 서열과 적어도 90%, 92%, 95%, 96%, 97% 98%, 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 및 102로 구성된 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 96, 100, 및 104로 구성된 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 서열 번호 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 98, 및 102로 구성된 군으로부터 선택되는 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92, 96, 100, 및 104로 구성된 군으로부터 선택되는 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 치료 유효량으로 투여된다. 본 발명의 항체의 치료 유효량은 일반적으로 치료 목적을 달성하는 데 필요한 양에 관한 것이다. 상기 치료 목적은, 특정 경우에는 표적의 기능을 방해하는, 항체와 그의 표적 항원 사이의 결합 상호작용일 수 있다. 본 발명의 항체 또는 항체 단편의 치료적으로 효과적인 투약을 위한 보편적인 범위는 비제한적인 예로서 약 0.1 mg/kg(체중) 내지 약 50 mg/kg(체중)일 수 있다. 보편적인 투여 빈도는 예를 들어, 1일 2회 내지 주 1회 범위일 수 있다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 약 0.5 mg/kg 내지 약 2 mg/kg 범위, 예를 들어, 약 0.5 mg/kg 내지 약 1.5 mg/kg 범위, 및/또는 약 0.5 mg/kg 내지 약 1.0 mg/kg 범위의 개시 용량, 즉, 부하 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 약 1.0 mg/kg의 개시 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 개시 부하 용량, 이어서, 1회 이상의 유지 용량으로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 개시 부하 용량과 실질적으로 유사한 투여량이다. 일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 개시 부하 용량보다 더 적은 투여량이다. 일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 개시 부하 용량보다 더 큰 투여량이다.
일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 적어도 2회의 투여량을 포함하며, 여기서, 각 유지 투여량은 동일한 투여량이다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 유지 투여량은 개시 부하 용량과 실질적으로 유사하다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 유지 투여량은 개시 부하 용량보다 더 크다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 유지 투여량은 개시 부하 용량보다 더 적다.
일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 적어도 2회의 투여량을 포함하며, 여기서, 각 유지 투여량은 동일한 투여량이 아니다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 유지 투여량은 증가하는 투여량으로 투여된다. 일부 실시양태에서,2회 이상의 유지 투여량은 감소하는 투여량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 1회 이상의 유지 용량(들)은 적어도 2회의 투여량을 포함하며, 여기서, 각 유지 투여량은 주기적인 시간 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 투여량은 증가하는 시간 간격으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 2회 이상의 투여량은 감소하는 시간 간격으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 약 0.5 mg/kg 내지 약 2 mg/kg 범위, 예를 들어, 약 0.5 mg/kg 내지 약 1.5 mg/kg 범위, 및/또는 약 0.5 mg/kg 내지 약 1.0 mg/kg 범위의 개시 부하 용량, 이어서, 적어도 1회, 예컨대, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 또는 5회 이상의 유지 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항IFNγ 항체 또는 그의 면역적으로 활성인 단편은 약 1.0 mg/kg의 개시 부하 용량, 이어서, 적어도 1회, 예컨대, 2회 이상, 3회 이상, 4회 이상, 또는 5회 이상의 유지 용량으로 투여된다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 본 발명의 항IFN항체, 및 담체를 포함할 수 있다. 상기 약학 조성물은 키트, 예컨대, 예를 들어, 진단용 키트에 포함될 수 있다.
본 발명은 또한 본원에서 제공된 방법 중 임의의 것을 실시하기 위한 키트를 제공한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 키트는 단독으로, 또는 하나 이상의 IFNγ 관련 바이오마커와 함께 조합하여 CXCL9에 특이적인 검출 시약, 및 검출 시약을 검출하기 위한 수단을 포함한다.
본 발명은 하기 실시예에서 추가로 설명될 것이며, 이는 청구범위에 기술된 본 발명의 범주를 제한하지 않는다.
실시예
실시예 1 . 대식세포 활성화 증후군( MAS )에서 IFNγ 생산에 대한 바이오마커로서의 CXCL9 수준
본원에 제시된 연구는 생체내 IFNγ 생산에 관한 가능한 바이오마커를 조사하기 위해서 활동성 MAS 환자에서 IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인의 혈청 수준과 그 자신들 사이, 및 질환 활동성의 검사실 파라미터 사이의 상호연관성을 평가하도록 디자인하였다.
IFNγ, CXCL9, CXCL10, CXCL11 및 IL-6의 순환 수준은 sJIA 환자(n=54)에서 루미넥스 복합 검정법(Luminex multiplexing assay)을 이용하여 측정하였으며, 상기 환자 중 20명은 샘플링 시점에 MAS를 앓는 환자였다. 상기 순환 수준과 질환 활동성 파라미터와의 관계는 IFNγ의 수준과 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11 수준의 상호연관성과 함께 평가하였다.
IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인(CXCL9, CXCL10 및 CXCL11)의 수준은 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA와 비교하여 활동성 MAS에서 유의적으로 높았다(모든 p 값 <0.005). 활동성 MAS에서, 질환 중증도의 검사실 파라미터(페리틴, 호중구, 혈소판, 알라닌 아미노트랜스퍼라제 및 락테이트 데하이드로게나제)는 IFNγ 및 CXCL9와 유의적인 상호연관성이 있었으며, CXCL10 및 CXCL11과는 더 낮은 정도로 유의적인 상호연관성이 있었으며; IL-6 수준과는 상호연관성이 발견되지 않았다. 하기 표 7에 제시된 바와 같이, MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자에서, 검사실 파라미터와 사이토카인 수준 사이에 유의적인 상호연관성은 없었다. 활동성 MAS에서, IFNγ 수준은 CXCL9의 수준과 유의적인 상호연관성이 있었으며(r=0.69;r2=0.47; p=0.001), CXCL10의 수준과는 더 낮은 정도로 유의적인 상호연관성이 있었으며(r=0.53; r2=0.28; p=0.015), CXCL11의 수준과는 무관하였다(r=-0.04; p=0.886).
Figure pct00017
활동성 MAS 환자에 존재하는 높은 수준의 IFNγ 및 CXCL9는 질환 중증도의 검사실 파라미터와 유의적인 상호연관성이 있다. 활동성 MAS 환자에서, IFNγ와 CXCL9는 밀접한 상호연관성이 있다. CXCL9는 IFNγ에 의해서만 유도되고, 다른 인터페론에 의해서는 유도되지 않는 것으로 나타났기 때문에(예컨대, 문헌 [Groom J.R. and Luster A.D. Immunol Cell Biol 2011,Feb; 89(2):207-15] 참조), 상기 결과는 CXCL9가 MAS에서 IFNγ 생산에 관한 바이오마커임을 증명해준다.
실시예 2 . 원발성 혈구탐식성 림프조직구증 ( HLH ) 환자에서의 CXCL9와 IFNγ 수준의 상호연관성
본원에 제시된 연구는 NI-0501 항체를 투여받은 원발성 HLH 환자 및 동정적 사용으로 NI-0501 항체를 받은 환자에서 진행중인 2상 예비 연구로부터의 것이다.
도 1에 도시된 바와 같이, CXCL9 및 IFNγ의 혈청 수준은 각각 6명의 원발성 HLH 환자 및 3명의 동정적 사용 환자로부터 얻은 샘플에서 루미넥스 및 메소 스케일 디스커버리(MSD: Meso Scale Discovery) 기술에 의해 측정하였다. CXCL9와 총 IFNγ 농도 사이의 상호연관성 분석을 수행하였다. 통계 분석을 수행하고, 스피어만 검정을 이용하여 p 값을 얻었다.
도 2에 도시된 바와 같이, CXCL9 및 IFNγ의 투약 전 혈청 수준은 각각 6명의 원발성 HLH 환자 및 3명의 동정적 사용 환자로부터 얻은 샘플에서 루미넥스 및 MSD 기술에 의해 측정하였다. CXCL9와 총 IFNγ 농도 사이의 상호연관성에 관하여 수행하였다. 통계 분석을 수행하고, 스피어만 검정을 이용하여 p 값을 얻었다.
실시예 3 . 속발성 혈구탐식성 림프조직구증 ( HLH ) 환자에서의 CXCL9와 IFNγ 수준의 상호연관성
본원에 제시된 연구는 NI-0501 항체를 투여받은 속발성 HLH 환자 및 동정적 사용으로 NI-0501 항체를 받은 환자에서의 관찰 연구로부터의 것이다.
특히, 이들은 대식세포 활성화 증후군(MAS, 속발성 HLH 형태)이 발생한 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA) 환자이다. 상기 환자의 경우, CXCL9 또는 IFNγ와 질환 파라미터, 예컨대, 페리틴, 혈소판 계수(PLT), 호중구 계수(Neu), 및 알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) 사이에도 또한 상호연관성이 존재한다.
도 3A 및 도 3B에 제시된 바와 같이, CXCL9 및 IFNγ의 혈청 수준은 샘플링 시점에 sJIA에 대해 속발성인 MAS 환자 19명 및 활동성 sJIA 환자 24명으로부터 얻은 샘플로부터 루미넥스 기술을 이용한 복합 검정법으로 측정하였다. CXCL9와 IFNγ 농도 사이의 상호연관에 관하여 수행하였다. 통계 분석을 수행하고, 스피어만 검정을 이용하여 p 값을 얻었다.
도 4A-1, 4A-2, 4B-1, 4B-2, 4C-1, 4C-2, 4D-1, 및 4D-2에 제시된 바와 같이, CXCL9 및 IFNγ의 혈청 수준은 샘플링 시점에 sJIA에 대해 속발성인 MAS 환자 및 활동성 sJIA 환자로부터 루미넥스 기술을 이용한 복합 검정법으로 측정하였다. IFNγ 또는 CXCL9 수준과 페리틴, 혈소판 계수, 호중구 계수 또는 ALT(알라닌 아미노트랜스퍼라제) 사이의 상호연관에 관하여 수행하였다. 통계 분석을 수행하고, 스피어만 검정을 이용하여 p 값을 얻었다.
실시예 4 . 중증의 혈구탐식성 림프조직구증 ( HLH ) 환자에서의 CXCL9와 IFNγ 수준의 상호연관성
본원에 제시된 연구는 동정적 사용으로 NI-0501을 받은 환자로부터의 것이다. 상기 환자는 NLRC4 관련 질환 및 중증의 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)의 증상을 보였다. NLRC4 유전자에서 돌연변이가 재발성 대식세포 활성화 증후군을 유발하고, IFNγ를 유도한다고 알려진 IL-18의 생산을 증가시킨다는 것이 최근 보고되었다.
본 연구에서 환자는 하기 특징을 보였다: 생후 20일째에 발병하여, 발열, 발진, 현저한 간 비장 비대, 범혈구감소증, 저피브리노겐 혈증, 고중성지방혈증, 현저한 페리틴 및 sCD25 증가를 보임. 복합 장기 부전 후에, ICU 입원이 요구되었다. HLH 진단은 8가지 HLH-2004 기준 중 6가지를 기준으로 하였다. 원발성 HLH를 유발하는 유전자(PRF1, UNC13D, STXBP2, STX11, RAB27A, XIAP) 및 기능 검사(퍼포린 발현, 탈과립화 및 세포독성)는 음성이었다. 일반 건강 상태 및 검사실 이상소견이 점진적 개선을 보이는 고용량의 i.v. 글루코코르티코이드 및 i.v. 시클로스포린 A. 감염(칸디다 알비칸스(Candida Albicans), 및 클레브시엘라 뉴모니아에(Klebsiella Pneumoniae) 패혈증)에 의해 유발된 HLH 재활성화, 일반 건강 상태의 신속한 악화, 및 신규 ICU 입원. 에토포시드 및/또는 ATG로 치료는 이미 면역력이 약화된 피험체에는 활동성 감염이 존재하고 있기 때문에 고려하지 않았다.
IFNγ의 측정가능한 혈청 수준 및 IFNγ 유도성 케모카인 CXCL9 및 CXCL10의 높은 혈청 수준이 기록되었을 뿐만 아니라, IL-18의 혈청 수준이 현저히 상승된 것으로 나타났다(표 8).
Figure pct00018
NI-0501을 이용한 동정적 사용 치료는 덱사메타손(13.6 mg/㎡) 및 i.v. 시클로스포린 A를 배경으로 시작하였다. NI-0501을 약동학적 성질에 따라 3일마다, 이어서, 7일마다 투여하였다. 주입 반응은 관찰하지 않았다. NI0501은 우수한 내약성을 보였다. HLH 임상 소견 및 검사실의 이상소견은 점진적으로 개선되었다. 진행 중인 활동성 감염은 신속하게 제거되었다. 치료 5개월 후, 환자는 최상의 상태가 되었다. 환자는 경구 시클로스포린 A(6 mg/kg) 및 프레드니손(0.9 mg/㎡의 덱사메타손과 등가인 0.3 mg/kg)을 계속하여 받았다. 모든 HLH 파라미터는 정상화되었다.
피험체는 여전히 설명되지 않는 염증 에피소드를 보였다. NLRC4 분석을 통해 새로운(de novo) 미스센스 돌연변이(T337N)가 밝혀졌다. 상승된 혈청 IL-18이 기록되었으며, 이는 NLRC4 돌연변이의 관련성을 입증하였다. IFNγ의 높은 생산은 NI-0501과 복합체를 형성한 높은 수준의 IFNγ에 의해 입증되었다. IFNγ는 검출불가능한 수준의 IFNγ 유도성 케모카인에 의해 나타난 바와 같이 완전히 중화되었다(도 5 및 표 8). IL-18의 순환 수준은 지속적으로 상승하였다.
따라서, 본 연구는 중증의 난치성 HLH(NLRC4 돌연변이에 기인) 환자에서, NI-0501을 이용한 IFNγ의 차단은 안전성의 문제 없이 우수한 내약성을 보였으며, 모든 HLH 특성의 제어를 허용하였으며, 신속한 글루코코르티코이드 점감을 허용하였고, 진행 중인 활동성 감염의 치유와 상호연관성이 있다는 것을 증명해준다.
실시예 5. NI -0501을 이용한 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)의 치료에 대한 표적화된 접근법
본원에 제시된 연구는 원발성 HLH 아동에서의 예비 2상 연구로부터의 것이다. 원발성 HLH(pHLH)는 치료받지 않을 경우 예외 없이 치명적인 희귀한 면역 조절 장애이다. 이는 병원성 면역 활성화에 의해 유도되어, 발열, 비장 비대, 혈구감소증, 응고 병증으로 이어지고, 복합 장기 부전 및 사망을 일으킬 수 있다. 항IFNγ 항체로 치료받은 원발성, 및 속발성 HLH(sHLH)의 뮤린 모델의 데이터 및 HLH 환자에서의 관찰 연구에 기초하여, IFNγ의 높은 생산은 질환의 발생을 유발하는 중요한 인자라고 간주된다. 주로 에토포시드 기반 요법인 면역화학요법은 현재 HLH를 제어하고, 환자에게 치유적 동종이계 조혈 줄기세포 이식(알로-HSCT: allogeneic hematopoietic stem cell transplant)을 제공하는 유일한 약리학적 접근법이다. 치료 요법을 더 강화시키고자 하는 최근 시도에도 불구하고, 사망률 및 이환율은 부분적으로는 약물 관련 독성에 기인하여 여전히 높다.
상기에 기술된 바와 같이, NI-0501은 인간 IFNγ에 결합하고, 그를 중화시키는 완전 인간, 고친화도, 항IFNγ mAb이며, HLH를 제어하기 위한 신규의 표적화된 접근법을 제공한다.
방법: pHLH 확진을 받았거나, 또는 그를 앓는 것으로 의심되는 아동에서 NI-0501의 안전성 및 효능을 평가하기 위해서 미국 및 유럽에서 개방 표지 2상 연구를 수행하였다. 덱사메타손 5-10 mg/㎡를 개시 배경으로 하여, 각 환자에서 PK 데이터 및/또는 임상 반응에 의해 가이드되는 가능한 용량 증가하에 NI-0501을 1 mg/kg의 개시 용량으로 3일마다 투여하였다. 치료 기간은 4 내지 8주 범위였다. 알로-HSCT로 이동할 수 있는 능력, 적절한 HLH 질환 파라미터, 및 8주간 생존을 사정하였다.
연구 집단: 총 13명의 환자를 등록받았다: 8F/5M, 중위 연령 1.0y(범위 2.5mo-13y), 12명의 pts는 종래의 요법을 받고, 재활성화되거나, 만족스럽지 못한 반응을 얻거나, 또는 요법에 불내약성을 나타낸 후 제2선 치료로서 NI-0501을 받았다. 한 환자는 제1선에서 NI-0501로 치료받았다. 9명의 환자는 공지된 HLH 유전적 결함을 수반하였다(3명 FHL2, 2명 FHL3, 2명 GS-2, 1명 XLP1, 1명 XLP2). 대부분의 환자는 선행 HLH 치료로부터 상당한 독성을 수반하면서, 약화된 일반 건강 상태로 HLH 범위의 중증 말단에 있었다. 페리틴은 12/13명 환자에서 상승하였고 sCD25는 8명에서 상승하였고, 혈구감소증은 10명 환자에서, 비장 비대는 8명에서, 저피브리노겐 혈증 및 고중성지방혈증은 9명에서 존재하였다. 간 손상 및 CNS 병발은 각각 7명 및 3명의 환자에 존재하였다.
결과: 종합하면, NI-0501 치료는 HLH 질환 활동성의 파라미터를 유의적으로 개선시켰고(도 6), 13명의 환자 중 9명은 만족스러운 반응을 달성하였다. 6명의 환자는 HSCT를 진행하였다. HLH가 잘 제어된 2명의 환자는 적합한 기증자 확인시 HSCT로 진행할 계획에 있다. (제1선 NI-0501로 질환 제어를 달성한) 한 환자에서, 원인이 되는 HLH 유전자 돌연변이가 없다는 것을 고려해 볼 때, HSCT 계획은 아직 없다. 13명의 환자 중 11명은 8주째에 생존해 있었다. CNS 징후 및 증상은 2명의 평가가능한 환자에서 치유되었다. NI-0501 치료의 처음 4주 동안 환자의 50%에서 덱사메타손 용량의 50% 초과를 감소시킬 수 있었다.
바이오마커의 사정 특히, IFNγ에 의해 정교하게 유도된다고 알려진 케모카인인 CXCL9는 완전한 IFNγ 중화를 입증하였을 뿐만 아니라, IFNγ 생산과 상호연관성이 있는 HLH의 진단을 위한 신규 파라미터처럼 보인다(도 7A 및 7B).
NI-0501은 우수한 내약성을 보였으며, 안전성 문제는 확인되지 않았다. IFNγ 중화에 유리하다고 공지된 감염은 전혀 보고되지 않았으며, 이전의 화학요법을 받지 않았던 환자에서 감염은 전혀 발생하지 않았다. 7명의 환자는 적어도 하나의 SAE를 보고하였으며, 모두 DMC에 의해 NI-0501 투여와 관련이 없다고 사정되었다. NI-0501의 "표적 이탈" 효과에 기인하는 예상하지 못한 반응(예컨대, 골수 독성, 혈류역학적 효과)는 관찰되지 않았다.
결론: NI-0501에 의한 IFNγ의 표적화된 중화는 HLH 관리에 획기적이고, 가능하게는 독성이 낮은 접근법을 제공한다. 본 연구의 결과는 NI-0501이 종래의 요법에 만족스럽지 못하게 반응했거나, 이에 불내약성을 보인 원발성 HLH 환자에서 안전하고, 효과적인 치료 옵션이라는 것을 보여준다. 추가로, NI-0501을 이용한 요법은 에토포시드에 기반한 요법과 연관된 전형적인 단기간 또는 장기간 독성과의 상호연관성은 없었다. pHLH 환자에서 제1선의 치료로서 NI-0501의 사정은 진행 중이며, 유사한 유의적인 임상적 유익성이 달성될 수 있다고 기대된다.
실시예 6 . 인터페론γ 및 인터페론 유도된 케모카인의 상승된 순환 수준이 대식세포 활성화 증후군이 합병된 전신성 JIA 환자를 특징화한다
인터페론 감마(IFNγ)는 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)의 뮤린 모델에서 중추적 매개 인자이다. 대식세포 활성화 증후군(MAS)을 포함하여 원발성 및 속발성 HLH(sec-HLH) 사이의 유사성을 고려해 볼 때, 전신성 소아 특발성 관절염(sJIA) 및 MAS 환자에서 IFNγ 수준 및 그의 생물 활성을 분석하였다.
본원에서 제공된 연구에서, 루미넥스 복합 검정법을 이용하여 sec-HLH 환자(n=11) 및 20명은 샘플링 시점에 MAS를 앓았던 sJIA 환자(n=54)에서 IL-1β, IL-6, IFNγ의 혈청 수준, 및 IFN 유도 및/또는 IFN 관련 케모카인 CXCL9, CXCL10, 및 CXCL11의 혈청 수준을 사정하였다. MAS 특징이 LPS와 함께 TLR4 자극에 의해 유도되는 IL-6 트랜스제닉 마우스 모델에서 IFNγ 유도성 케모카인(간 및 비장에서 CXCL9 및 CXCL10 mRNA 수준)의 발현 뿐만 아니라, 그의 혈청 페리틴 수준과의 상호연관성을 사정하였다.
하기에 더욱 상세하게 제시되는 바와 같이, IFNγ 및 IFN 유도성 케모카인의 순환 수준은 MAS 중에 현저히 높았으며, 이는 본원에서 활동성 MAS 및 sec-HLH로도 언급된다. IFNγ 및 IFN 유도성 케모카인의 수준은 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자의 수준과 비교하여 MAS 환자에서 현저히 더 높았다. 상기 후자의 군에서, IFNγ 및 IFNγ 유도성 케모카인은 임상적으로 비활동성 sJIA 환자와 비슷하였다. MAS 중에, 페리틴 및 알라닌 트랜스퍼라제 수준 및 호중구 및 혈소판 계수를 포함하는, 이 증후군의 특징이 되는 검사실 이상소견은 IFNγ 및 CXCL9의 수준과 유의적인 상호연관성이 있었다. MAS 뮤린 모델에서, 페리틴의 혈청 수준은 간 및 비장에서 CXCL9의 mRNA 수준과 유의적인 상호연관성이 있었다.
따라서, 하기에 제시되는 연구는 높은 수준의 IFNγ 및 IFN 유도성 케모카인 및 그의 MAS의 검사실 이상소견의 중증도와의 상호연관성, 특히, CXCL9의 상호연관성이 IFNγ가 MAS에서 중추적 역할을 한다는 것을 시사한다는 것을 증명한다. 인터페론γ 및 인터페론 유도성 케모카인의 상승된 순환 수준은 대식세포 활성화 증후군이 합병된 전신성 JIA 환자를 특징화한다.
재료 및 방법: 환자 및 샘플. 3개의 소아 류마티스학 센터(Paediatric Rheumatology Centres): 이탈리아 로마 소재의 밤비노 게스 소아과 병원(Ospedale Pediatrico Bambino Gesu in Rome), 이탈리아 제노아 소재의 기안니나 가스리니 병원(Istituto Giannina Gaslini in Genoa) 및 미국 신시내티 어린이 병원 (Cincinnati Children's Hospital Medical Centre)에서 MAS가 있거나, 없는 sJIA 환자로부터 말초 혈액 샘플을 수집하였다. 전신성 류마티스의 ILAR 분류 기준을 충족시키는 54명의 sJIA 환자(발병 연령 79세, 사분 범위 4.6-13.6세; 여성 48%)를 연구하였다(문헌 [Petty, R.E., et al., International League of Associations for Rheumatology classification of juvenile idiopathic arthritis: second revision, Edmonton, 2001. J Rheumatol, 2004. 31(2): p. 390-2]). 20명의 sJIA 환자에 대해, 샘플을 3개의 각 센터에서 치료 의사에 의해 진단받은 활동성인 완전히 진행된 MAS의 에피소드 동안에 수집하였다. 사후 검증 분석 결과, 상기 20개의 에피소드 중 17건(85%)이 새로 제안된 MAS 분류 기준을 충족시킨 것으로 나타났다(문헌 [Minoia F, Davμ S, Bovis F, et al. Development of new classification criteria for macrophage activation syndrome complicating systemic juvenile idiopathic arthritis. Pediatric Rheumatology 2014, 12(Suppl 1):O1]). MAS 증거가 없는 28명의 활동성 sJIA 환자의 샘플이 이용가능하였다. (Wallace)의 기준(문헌 [Wallace, C.A., et al., Preliminary criteria for clinical remission for select categories of juvenile idiopathic arthritis. J Rheumatol, 2004. 31(11): p. 2290-4])에 따라 정의된, 임상적으로 비활동성 질환 동안 35명의 sJIA 환자(이들의 병력에 MAS 있거나, 또는 없는 것, 둘 모두)로부터 35개의 샘플이 이용가능하였다.
IFNγ가 sec-HLH(류마티스 질환 배제) 환자에서 증가된 것으로 나타났는 바, 밤비노 게스 소아과 병원에서 나타난 11명의 sec-HLH 환자(발병 연령 8.6세, 사분 범위 4.1-12.9세; 여성 36%)로부터 샘플을 또한 수집하고, 양성 대조군으로 사용하였다. 모든 sec-HLH 환자는 2004-HLH 진단 가이드라인(문헌 [Henter, J.I., et al., HLH -2004: Diagnostic and therapeutic guidelines for hemophagocytic lymphohistiocytosis. Pediatr Blood Cancer, 2007. 48(2): p. 124-31])을 충족시켰다: 6명 환자는 5가지 기준을 충족시켰고, 5명 환자는 4가지 기준을 충족시켰다. 시험은 상기 환자가 동원된 기관에서 통상적으로 실시되지 않기 때문에, sCD25 수준(U/ml)이 이용불가능하였다는 것을 인지하여야 한다. 가족력의 부재, HLH를 유발하는 것으로 알려져 있는 유전자에서 병원성 돌연변이의 부재 및 존재하는 정상적인 기능 연구(NK 활성, 퍼포린 발현 및 CD107 탈과립화 포함)를 기준으로 하여 원발성 HLH의 진단을 제외하였다. 모두 11명의 sec-HLH 환자가 활동성 질환 동안 얻은 각각 샘플 하나씩을 제공하였다.
샘플링 시점에 진단에 관한 모든 환자의 임상 및 검사실 소견은 각 센터의 연구원이 중앙 집중식 웹 데이터베이스에서 수집하였다. 활동성 질환 동안 샘플링된 20명의 MAS 환자 중 6명은 샘플링 시점에 어떤 치료도 받고 있지 않았던 반면, 나머지 14명의 환자는 글루코코르티코이드 펄스, 시클로스포린 A, 아나킨라 또는 시클로포스파미드를 비롯한, MAS에 특이적인 치료법 중 하나를 이미 받은 상태였다. 활동성 질환에서 11명의 sec-HLH 환자 중 6명은 샘플링 시점에 특정 치료를 아직 받고 있지 않았지만, 나머지 5명의 환자는 상기에 언급한 치료 중 적어도 하나를 이미 받은 상태였다. 밤비노 게스 소아과 병원의 윤리 위원회(Ethical Committee)는 연구를 허가하였다. 모든 참가자에 대해 서면 동의서를 수집하였다.
사이토카인의 정량화. IL-6, IL-1β, IFNγ, CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준은 루미넥스® 복합 비드 기술에 의해 분석하였다. 시약은 밀리포어(Millipore)로부터 구입하였고, 모든 시약은 밀리플렉스(Milliplex)® MAP 키트로 제공받았다. 시약은 제조사의 프로토콜에 따라 제조하였다. 25 ㎕/웰의 표준, 블랭크 및 품질 확인 샘플은 밀리플렉스 MAP 96 웰 플레이트에 이중으로 첨가한 후, 25 ㎕의 세럼 매트릭스(Serum Matrix)를 첨가하였다. 25 ㎕의 어세이 버퍼(Assay Buffer)를 각 샘플 웰에 첨가한 후, 25 ㎕의 샘플을 첨가하였다. 샘플의 이용가능한 부피에 따라 샘플을 이중 또는 삼중으로 첨가한다. 플레이트는 루미넥스 200® 시스템(Luminex Corp.)에서 측정하였다. 원시 데이터는 x PONENT 소프트웨어 버전 3.1(Luminex Corp.)을 이용하여 획득하고, 밀리플렉스 애널리스트(Milliplex Analyst) 소프트웨어 버전 3.5.5.0(Millipore)을 이용하여 데이터를 분석하였다. 이어서, 밀리플렉스 애널리스트 소프트웨어에서 얻은 원시 데이터를 루미넥스 분석 전용 매크로(NI-Sc-ESM-MAC-012-v01 및 Sc-ESM-MAC-013-v01)에서 추가로 분석하였다.
동물 실험. IL-6 트랜스제닉 마우스의 생성 및 표현형 뿐만 아니라, TLR 리간드 투여에 의해 유도된 MAS 유사 증후군의 특징은 앞서 기술된 바 있다(문헌 [Strippoli, R., et al., Amplification of the response to Toll-like receptor ligands by prolonged exposure to interleukin-6 in mice: implication for the pathogenesis of macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum, 2012. 64(5): p. 1680-8]). 특정 병원체가 없는 조건하에서 마우스를 유지시키고, 국가 정책에 따라 취급하였다. 본 연구 프로토콜은 지역 윤리 위원회에 의해 승인받았다. 모든 실험은 10 내지 14주령된 마우스에서 수행되었다. 마우스에 5 ㎍/g(체중)의 단일 용량의 지질다당류(LPS, E. 콜라이(E. coli) 혈청형 055:B5; Sigma-Aldrich)를 복강내로 투여하였다. 30시간 후 마우스를 희생시켰다. 전체 RNA는 트리졸(Trizol)(Life technologies)을 이용하여 비장 및 간으로부터 추출하였다. cDNA는 슈퍼스크립트 빌로(Superscript Vilo) 키트(Invitrogen)를 이용하여 수득하였다. 마우스 Cxcl9 및 Cxcl10 유전자 발현 검정법(Applied Biosystems)과 함께 택맨 유니버셜 PCR 마스터 믹스(TaqMan Universal PCR Master Mix)(Applied Biosystems)를 이용하여 실시간 PCR 검정법을 수행하였다. 유전자 발현 데이터는 마우스 Hprt(Applied Biosystems)를 이용하여 정규화하였다. 데이터는 2-Δct 방법을 이용하여 측정되는, 임의 단위(AU: arbitrary unit)로서 표현한다. 혈청 페리틴 농도는 상업적으로 이용가능한 ELISA 키트(ALPCO Diagnostics)를 이용하여 제조사의 설명서에 따라 측정하였다.
통계 분석: 통계 분석은 그래프패드 프리즘 5(GraphPad Prism 5) 소프트웨어를 이용하여 실시하였다. 연속 변수(정량적 인구 통계, 임상 및 검사실 데이터)는 중앙값 및 사분 범위(IQR: interquartile range)로서 나타냈고, 만-위트니 U(Mann-Whitney U) 검정을 이용하여 비교하였다. 전후 차이의 분포가 가우스 분포를 따른다고 가정하지 않고, 윌콕슨 부호 순위 검정을 이용하여 2개 쌍별 대응군을 비교하였다. 스피어만 순위 상호연관성을 이용하여 검사실 파라미터와의 관계를 사정하였다. p 값 <0.05를 통계적으로 유의적인 것으로 간주하였다.
결과: MAS 환자에서 IFNγ 및 IFNγ 유도성 케모카인의 수준 증가. 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자를 임상적으로 비활동성 질환 동안 샘플링된 환자와 비교하였을 때, 예상대로(문헌 [de Benedetti, F., et al., Correlation of serum interleukin-6 levels with joint involvement and thrombocytosis in systemic juvenile rheumatoid arthritis. Arthritis Rheum, 1991. 34(9): p. 1158-63]), IL-6 수준이 임상적으로 비활동성 질환의 환자의 수준과 비교하여 활동성 sJIA 환자에서 유의적으로 더 높은 것으로 나타났다(p<0.01). 활동성 sJIA의 여러 이전 연구에서 보고된 바와 같이, 혈청 IL-1β 수준은 질환 활동성 상태와 상관없이, 대부분의 환자에서 검출 한계 미만이었다. 임상적으로 활동성 sJIA 환자 및 임상적으로 비활동성 질환의 환자 가운데에서 IFNγ의 수준과 3가지의 IFNγ 유도성 케모카인의 수준 사이에는 차이가 없었다는 것은 주목할 만하다.
샘플링 시점에 MAS 환자를 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하였을 때, IL-1β의 수준과 IL-6의 수준은 비슷하였고, 이는 활동성 sJIA에서 중추적 역할을 한다고 공지된 2가지 사이토카인의 수준이 완전히 진행된 MAS 동안 증가하지 않는다는 것을 시사한다. 순환 IL-1β 수준은 MAS가 있거나, 또는 없는 sJIA 환자 대부분에서 정량 한계(즉, 3.5 pg/ml) 미만이었다는 것에 주목하여야 한다. 그에 반해, 순환 IFNγ 수준은 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하여 활동성 MAS 환자에서 유의적으로 더 높았다. 또한, 3가지 IFNγ 관련 케모카인 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준은 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하여 활동성 MAS 환자에서 현저하게 더 높았다. 이러한 차이는 중앙값 수준이 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하여 MAS 환자에서 대략 15배 더 높은 CXC9 경우에 특히 명백하였다.
sec-HLH 환자에서, IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인의 수준은 현저히 증가하였다. IFNγ의 수준과 IFNγ 관련 케모카인의 수준은 MAS 환자에서의 수준과 크게 구별되지 않았으며, 차이는 통계적으로 유의적이지 않았다. 그런데, 활동성 MAS 환자에서와 활동성 sec-HLH 환자에서, IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 유도성 케모카인의 수준은 치료받지 않은 환자에서와 이미 치료를 받은 환자에서 비슷하였다.
IFNγ의 수준과 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준은 개별 환자에서 MAS의 존재와 상호연관성이 있다. 도 8A-8D는 대응 샘플이 활동성 MAS 동안, 및 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 동안 이용가능한 개별 환자에서의 IFNγ의 수준 및 CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준을 보여주는 것이다. 횡단면 분석에서 얻은 결과와 일치하여, IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 유도성 케모카인의 수준은 대응 샘플 분석에 의해 MAS 동안 얻은 샘플에서 유의적으로 더 높았다. 추가로, 여러 환자에서 샘플은 MAS 에피소드 이전 및 이후, 둘 모두에 이용가능하였고, IFNγ 및 IFNγ 유도성 케모카인 수준이 MAS 임상적 증상 치유시 정상으로 회복된다는 것을 증명하였다. 예를 들어, 본 연구에서 한 환자는 MAS의 3가지 에피소드를 경험하였고, 여기서, 혈청 샘플은 이들 에피소드 동안에, 그 뿐만 아니라, 샘플링시 MAS를 보이지 않는 질환 단계 동안 수득되었다. 활동성 MAS와 IFNγ 및 3가지 IFNγ 유도성 케모카인의 생산 증가 사이의 관계를 추가로 확인하면서, 상기 환자에서 IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인의 수준 상승은 MAS 에피소드 당시에만 발견되었다(도 9A-9B).
IFNγ의 수준 및 IFNγ 관련 케모카인의 수준은 MAS의 검사실 이상소견과 상호연관성이 있다. 이어서, IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 유도성 케모카인의 수준과 샘플링 시점에 MAS의 검사실 파라미터와의 상호연관성을 조사하였다. MAS를 보이지 않는 활성 sJIA 환자에서, IFNγ의 수준 및 3가지 IFNγ 유도성 케모카인의 수준은 다음 한 가지 경우를 제외하고 MAS의 검사실 파라미터와 상호연관성이 없었다: CXCL9, CXCL10 및 CXCL11의 수준은 0.17 내지 0.25 범위의 r2를 ALT 수준과 약한 상호연관성이 있었다(표 2). 이러한 상호연관성의 유의성은 불분명하다; 그러나 ALT 수준이 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자 모두에서 정상 범위 내에 있었다는 것은 주목해야 한다. 샘플링시 MAS 환자에서, IL-1 및 IL-6과 MAS의 검사실 소견과의 유의적인 상호연관성은 발견되지 않았다. 그에 반해, 샘플링시 MAS 환자에서, IFNγ의 수준 및 IFNγ 유도성 케모카인의 수준은 MAS 환자에서 모두 전형적으로 비정상인 페리틴의 수준과, 및 호중구 및 혈소판 계수와, 및 증가된 LDH 및 ALT와 상호연관성이 있었다(표 2). 검사실의 이상소견과의 상호연관성은 특히 IFNγ 및 CXCL9에 특히 분명하였고, 유일한 예외는 IFNγ의 LDH와의 상호연관성이었으며, 이는 통계학적인 유의성에 도달하지 못했다(표 2 및 도 10A-10J). 또한, 상기에 언급한 바와 같이, 이들 상호연관성은 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자에 존재하지 않았다. 상기 군의 한 환자는 현저하게 높은 수준의 IFNγ(336.2 pg/ml), CXCL9(549,400 pg/ml) 및 CXCL10(35,066 pg/ml)을 보였다. 이 환자는 특히 중증의 MAS를 보였으며, 중증의 중추 신경계 병발로 중환자실에 입원하였다. 상기 관찰결과는 IFNγ및 CXCL9의 수준과 질환 중증도 사이에 강한 상호연관성이 존재한다는 가설을 더 뒷받침해준다. 종합해보면, 상기 결과는 IFNγ 및 IFNγ 관련 케모카인의 생산 증가가 MAS의 검사실 이상소견의 중증도와 강력한 상호연관성이 있는 활동성 MAS의 특징이다.
Figure pct00019
Figure pct00020
MAS 환자에서 IFNγ 유도성 케모카인 수준과 IFNγ의 상호연관성. MAS 환자에 IFNγ와 3가지 IFNγ 유도성 케모카인 사이의 관계를 추가로 특징화하기 위해, IFNγ 수준과 각각의 개별 케모카인의 수준과의 상호연관성을 평가하였다. 특히, CXCL9는 IFNγ에 의해 주로 및 특이적으로 유도되는 것처럼 보이지만, CXCL10 및 CXCL11은 또한 I형 인터페론에 의해 유도된다. 이와 일치하여, 활동성 MAS 환자에서, IFNγ의 순환 수준은 CXCL9와 유의적인 상호연관성이 있었지만(r=0.693; r2=0.48; p=0.001), CXCL10 수준과는 더 약한 상호연관성을 보였다(r=0.535; r2=0.29; p=0.015)(도 11A-11F). 또한, CXCL11 수준과의 상호연관성은 더 약했고, 통계적 유의성에 도달하지 못했다(r=0.447; r2=0.20; p=0.08)(제시되지 않음).
IFNγ 유도성 케모카인은 MAS의 마우스 모델에서 질환 활동성과 상호연관성이 있다. MAS와 IFNγ 유도성 케모카인 생산의 연관성을 추가로 조사하기 위해, MAS의 뮤린 모델에서 표적 조직(간 및 비장)에서의 상기 케모카인의 발현을 조사하였다. 상기 모델에서, MAS 임상 및 검사실 소견은 IL-6 트랜스제닉 마우스에서 높은 수준의 IL-6의 배경에서 TLR4 작용제 지질 지질다당류(LPS)로 급성 감염을 모방함으로써 유도된다(문헌 [Strippoli et al., Arthritis Rheum 2012]). 상기 접근법은 sJIA 환자에서 일어나는 것을 재현한다: 감염은 실제로 높은 수준의 IL-6을 특징으로 하는 활동성 질환이 존재할 때 MAS/HLH를 유발할 수 있다. LPS에 의한 유도 후, CXCL9 및 CXCL10의 높은 mRNA 수준이 IL-6 트랜스제닉 마우스의 간과 비장에 존재하였다. 특히, 페리틴의 혈청 수준은 비장 및 간에서 CXCL9 및 간에서 CXCL10의 발현 수준과 유의적인 상호연관성이 있었고, 이는 표적 조직에서 IFNγ 관련 상류 이벤트(즉, 간 및 비장에서 CXCL9 및 CXCL10 생산) 및 전형적인 하류 검사실 이상소견, 예컨대, 높은 페리틴 수준 사이의 상호연관성을 나타낸다. 모두 종합하면, MAS 환자 및 MAS 뮤린 모델에서의 데이터는 CXCL9의 발현 증가, 더 적은 정도의 CXCL10의 발현 증가, 및 MAS의 검사실 이상소견과 IFNγ의 생산 증가의 명백한 상호연관성을 나타낸다.
pHLH의 환자 및 동물 모델, 둘 모두에서의 연구는 질환 발병 기전에서 IFNγ의 중요한 역할을 증명하였다. 그러나, sJIA의 환경에서 MAS를 포함하여, sec-HLH에서 IFNγ의 역할은 분명하지 않다. 본 연구는 결론적으로 IFNγ 및 IFNγ 유도성 케모카인의 높은 수준이 sJIA하에 발생하는 MAS 환자에 존재하였다는 것을 증명해준다. 추가로, IFNγ의 수준, CXCL9의 수준 및 CXCL10의 수준이 MAS 중증도의 검사실 파라미터와 강력한 상호연관성이 있었다. 본 연구에서는 IFNγ 및 3가지 IFNγ 관련 케모카인의 혈청 수준이 활동성 sJIA 환자와 임상적으로 비활동성 질환의 환자 사이에서 비슷한 것으로 나타났다. 이러한 결과는 sJIA에서 IFNγ의 병원성 역할을 입증하며, 실제로 다른 연구자들의 많은 관찰 결과와 일치한다. 3가지 유전자 발현 연구는 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자의 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC: peripheral blood mononuclear cell)에서 두드러진 IFNγ 유도된 징후를 발견하는 데 실패하였다(문헌 [Fall, N., et al., Gene expression profiling of peripheral blood from patients with untreated new-onset systemic juvenile idiopathic arthritis reveals molecular heterogeneity that may predict macrophage activation syndrome. Arthritis Rheum, 2007. 56(11): p. 3793-804]; [Ogilvie, E.M., et al., Specific gene expression profiles in systemic juvenile idiopathic arthritis. Arthritis Rheum, 2007. 56(6):p. 1954-65]; [Pascual, V., et al., Role of interleukin -1 (IL-1) in the pathogenesis of systemic onset juvenile idiopathic arthritis and clinical response to IL-1 blockade. J Exp Med, 2005. 201(9): p. 1479-86]). PBMC의 생체외 자극 이후, 활동성 sJIA 환자에서 IFNγ를 생산하는 세포수는 대조군과 유사하였다(문헌 [Lasiglie, D., et al., Role of IL-1 beta in the development of human T(H)17 cells: lesson from NLPR3 mutated patients. PLoS One, 2011. 6(5): p. e20014]). 일관적으로, 활동성 sJIA 환자 및 비활동성 sJIA 환자, 둘 모두에서 IFNγ의 증가된 혈청 수준 또는 활액 수준을 보이지 않았다(문헌 [de Jager, W., et al., Blood and synovial fluid cytokine signatures in patients with juvenile idiopathic arthritis: a cross-sectional study. Ann Rheum Dis, 2007. 66(5): p. 589-98]). sJIA의 관절 염증에서 IFNγ의 역할의 부재를 뒷받침하여, CXCL9 및 CXCL10은 sJIA 환자의 활액 조직에서는 거의 검출되지 않지만, 소수 관절 또는 다관절 JIA 환자의 활액 조직에서 이들 케모카인의 높은 수준이 확인될 수 있다(문헌 [Sikora, K.A., et al., The limited role of interferon-gamma in systemic juvenile idiopathic arthritis cannot be explained by cellular hyporesponsiveness. Arthritis Rheum, 2012. 64(11): p. 3799-808]). 마우스에서의 최근 데이터는 프로인트 완전 애주번트로 IFNγ 녹아웃 마우스를 면역 자극하는 것이 sJIA의 특징을 포함하는 전신성 염증 증후군을 일으킨다는 것을 보여주며, 이는 sJIA에서 제한된 IFNγ의 제한된 역할을 뒷받침해준다(문헌 [Avau, A., et al., Systemic juvenile idiopathic arthritis-like syndrome in mice following stimulation of the immune system with Freund's complete adjuvant: regulation by interferon-gamma. Arthritis Rheumatol, 2014. 66(5): p. 1340-51]).
확연히 대조적으로, 본 연구에서는 샘플링시 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자의 수준과 비교하여 샘플링시 활동성 MAS 환자에서 현저히 더 높은 수준의 IFNγ 및 IFNγ 관련 케모카인이 나타났다. 이는 또한 활동성 MAS 동안, 및 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 동안, 이 둘 모두에서 수득된 일련의 샘플로 각각의 환자에서 확인되었다. 그런데, 본 연구에서는 MAS 동안 샘플링된 환자에서, IL-6 또는 IL-1β 수준의 유의적인 증가 또는 MAS의 검사실 파라미터와의 어떤 상호연관성도 발견되지 않았고, 이는 이들 사이토카인이, 비록 sJIA의 발병 기전에 중요하게 관여하기는 하지만(문헌 [De Benedetti, F., et al., Randomized trial of tocilizumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2385-95]; [Ruperto, N., et al., Two randomized trials of canakinumab in systemic juvenile idiopathic arthritis. N Engl J Med, 2012. 367(25): p. 2396-406]), MAS를 유지하는 데에는 중요하지 않을 수 있다는 것을 시사한다. 상승된 수준의 IFNγ 및 IFNγ 관련 케모카인에 관한 상기 관찰 결과는 일부 이전의 관찰 결과와 일치한다. (Shimizu et al.)은 IFNγ로 자극시 인간 대식세포에 의해 합성되는 구아노신 트리포스페이트의 분해 대사산물인 네오프테린의 수준이 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 환자와 비교하여 sJIA 동안에 MAS 환자에서 더 높았다고 보고하였다(문헌 [Shimizu, M., et al., Distinct cytokine profiles of systemic-onset juvenile idiopathic arthritis-associated macrophage activation syndrome with particular emphasis on the role of interleukin -18 in its pathogenesis. Rheumatology (Oxford), 2010. 49(9): p. 1645-53]). 더욱 최근에, (Put et al.)은 원발성 및 속발성 HLH 모두를 보이는 5명 환자에서 상승된 수준의 IFNγ 및 CXCL10을 보고하였고, 상기 환자 중 3명은 sJIA 과정 중에 MAS를 보였다(문헌 [Put, K., et al., Cytokines in systemic juvenile idiopathic arthritis and haemophagocytic lymphohistiocytosis : tipping the balance between interleukin -18 and interferon-gamma. Rheumatology (Oxford), 2015). Consistently with these results, 5 patients with active sJIA without MAS at sampling had markedly lower levels of IFNγ and CXCL10 (Put et al., Rheumatology 2015]).
흥미롭게도, 본 연구를 통해 IFNγ 및 IFNγ 관련 케모카인의 수준이 크게 상승되었다는 것뿐 아니라, 그의 수준, 특히 CXCL9의 수준이 MAS의 검사실 소견과 밀접한 상호연관성이 있는 것으로 나타났고, 이는 질환 중증도와의 상호연관성을 시사하는 것이다. 질환 중증도와의 상호연관성을 추가로 뒷받침하면서, 본 연구에서는 다발성 장기 부전 및 장기간 중환자실 입원이 요구되는 전신 발작을 보이는 중추 신경계 병발을 나타내는 한 환자에서 현저하게 더 높은 수준의 IFNγ 및 CXCL9 및 CXCL10의 수준이 발견되었다.
MAS 환자에서, 3가지 IFNγ 유도성 케모카인 중에서, CXCL9가 IFNγ 수준과 가장 강력한 상호연관성을 가지는 것으로 확인되었다. 이러한 관찰 결과는 CXCL9 생산이, I형 인터페론에 의해서도 또한 유도될 수 있는 CXCL10 및 CXCL11의 생산과는 대조적으로, 특이적이로 및 오직 IFNγ에 의해서만 유도되는 것처럼 보인다는 확립된 견해와 일치한다(문헌 [Groom, J.R. and A.D. Luster, CXCR3 ligands : redundant, collaborative and antagonistic functions. Immunol Cell Biol, 2011. 89(2): p. 207-15]). 이는 CXCL9 수준이 MAS 활성의 민감하고, 특이적인 바이오마커로서의 역할을 할 수 있다는 것을 시사한다. 실제로, 높은 IL-6 수준의 배경에서 감염성 자극에 의해 MAS의 유발을 모방하는 MAS의 뮤린 모델을 이용하여(문헌 [Strippoli et al., Arthritis Rheum 2012]), 본 연구에서는 또한 간 및 비장에서 CXCL9의 발현 수준이 페리틴의 순환 수준과 유의적인 상호연관성이 있다는 것도 확인되었다. CXCL10 발현 수준 경우, 이러한 상호 연관성은 간에서만 존재하고, 비장 수준에는 존재하지 않았다. 또한, 이는 CXCL9 수준이 MAS의 모든 검사실 파라미터와 밀접한 상호연관성이 있다는 MAS 환자에서의 결과에 의해서 뒷받침된다. 종합해보면, 인간 및 마우스에서의 상기 관찰 결과는 CXCL9가 MAS 특징 및 IFNγ 생산과 강력한 상호연관성이 있다는 것을 나타내며, 이는 IFNγ의 과다 생산이 MAS에서 주요한 병원성 역할을 한다는 가설을 추가로 뒷받침한다. 이 관찰 결과는 또한 MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 동안, 및 MAS 동안에 얻은 동일한 sJIA로부터의 일련의 림프절 생검을 이용하여 (Put et al.)에 의해 생성된 면역조직화학 데이터와 일치한다. 이들은, 둘 모두가 IFNγ 유도성 단백질인 CXCL10 및 인돌아민 2,3-디옥시게나아제가 MAS 동안에 얻은 조직에서 면역조직화학에 의해 높은 수준으로 검출되었지만, MAS를 보이지 않는 활동성 sJIA 동안에 얻은 것에서는 검출되지 않았다는 것을 보고한다(문헌 [Put et al., Rheumatology 2015]).
문헌상에서 이용가능한 p-HLH 환자에서의 관찰 결과와 함께, MAS 및 sec-HLH에서의 상기 결과는 IFNγ 및 IFNγ 관련 케모카인, 특히 CXCL9의 증가가 내재하는 원인과는 상관없이, HLH의 특징적인 소견이라는 가설을 뒷받침한다. 이와 관련하여, 흥미롭게도 NLRC4의 기능 획득 돌연변이에 의해 유발된 재발성 MAS 환자에서 높은 수준의 CXCL9가 검출되었다는 것이 주목되며(문헌 [Canna, S.W., et al., An activating NLRC4 inflammasome mutation causes autoinflammation with recurrent macrophage activation syndrome. Nat Genet, 2014. 46(10): p. 1140-6]), 이는 심지어 오직 인플라마솜 조절장애에 의해서만 유도된 HLH의 환경에서도 IFNγ 과다생산이 일어날 수 있다는 것을 시사한다.
퍼포린 및 Rab27a 녹아웃 마우스, 둘 모두에서의 p-HLH의 동물 모델 데이터는 IFNγ의 병원성 역할을 명백히 증명한다. 유사하게, 감염에 대해 속발성인 HLH 모델인 TLR9 유도된 HLH 모델에서의 최근 데이터는 또한 IFNγ 생산 증가에 중요한 역할을 보여주었다(문헌 [Behrens, E.M., et al., Repeated TLR9 stimulation results in macrophage activation syndrome-like disease in mice. J Clin Invest, 2011. 121(6): p. 2264-77] 및 (Bautois et al., 진행중)). 추가의 연구는 최근 상기에 언급된 뮤린 MAS 모델에서 항IFNγ 항체를 이용한 치료가 생존을 증가시키고, MAS의 임상 및 검사실 소견을 회복시켰다는 것을 증명하였다(Prencipe et al, 진행중). 종합해보면, 동물에서의 본 연구 결과 및 상기의 관찰 결과들은 MAS에서 치료 접근법으로서의 IFNγ 중화의 근거를 제공한다.
실시예 7 . 원발성 혈구탐식성 림프조직구증 ( HLH ) 소아 환자에서의 항인터페론 감마 항IFNγ 단일클론 항체의 다회에 걸친 정맥내 투여의 안전성, 내약성 , 약동학적 성질 및 효능 사정
본원에 제시된 연구는 본원에서 NI-0501로 지칭되는 항IFNγ 항체의 다회에 걸치 정맥내(IV) 투여의 안전성 및 내약성 프로파일을 측정하고; HLH 환자에서 NI-0501 효능 및 유익성/위해성 프로파일을 측정하고; HLH 환자에서 NI-0501의 약동학적 성질(PK) 프로파일을 기술하고; HLH에 적절한 NI-0501 치료 용량 요법을 정의하고; NI-0501의 면역원성을 사정하기 위해 디자인하였다.
임상전 연구: 이전 연구는 NI-0501이 개, 고양이, 돼지, 토끼, 래트 또는 마우스가 아닌, 레수스(rhesus) 및 시노몰구스 원숭그를 비롯한, 비인간 영장류 종으로부터의 IFNγ에 대해 유사한 결합 친화도 및 차단 활성을 나타낸다고 증명하였다. 시노몰구스 원숭이에서의 독성학 및 안전성 연구는 NI-0501의 투여에 기인한 표적이탈 독성이 없었으며, NI-0501의 주 1회 투여가 우수한 내약성을 보였고, 항생제 예방에 대한 필요성을 요구하지 않았으며, 비정상적인 조직병리학적 또는 행동 결과가 이 사전 연구 기간에 관찰되지 않았다는 것을 증명하였다.
유리 및 IFNγR1 결합된 IFNγ에 결합할 수 있는 NI-0501의 능력에 기인하여, 표적 존재하에서 NI-0501이 ADCC 및 CDC 활성을 매개할 수 있는 잠재능을 조사하는 연구를 수행하였다. ADCC 활성이 없다는 것이 증명되었으며, CDC 활성의 유도는 관찰되지 않았다.
I상 임상 연구: NI-0501의 단일 정맥내(IV) 투여의 안전성, 내약성 및 약동학적 프로파일을 조사하는, 20명의 건강한 성인 지원자에서의 1상 무작위 이중 맹검 위약 대조 단일 증가 용량 연구. 본 연구 동안, 6명의 피험체가 위약을 받은 반면, 3명, 3명, 4명, 및 4명의 피험체(총 14명의 피험체)는 각각 0.01, 0.1, 1, 및 3 mg/kg의 용량으로 NI-0501을 받았다.
NI-0501의 PK 분석 결과, 긴 반감기(약 22일), 느린 제거율(≤0.007 L/h) 및 낮은 분포 부피(평균 < 6 L)를 보이는 IgG1에 대한 예측 프로파일이 밝혀졌다. 약물 주입 시작 후, 20명의 피험체 중 14명(70%)에서 총 41건의 이상 반응(AE: adverse event)이 관찰되었으며, 그 중 10건은 위약을 받은 4명 피험체에서 보고되었다. 36건(87.8%) AE는 경등도였고, 5건(12.2%)은 중등도였다. 중증이거나, 또는 생명을 위협하는 AE는 보고되지 않았다. AE를 경험한 14명의 피험체 중 10명에서 23건의 AE(56.1%)가 (적어도 합리적인 가능성을 가지고) 약물과 관련이 있는 것으로 보고되었다. 대부분의 AE는 1회 발생하였으며, NI-0501 투여량 증가와 관련된 경향은 관찰되지는 않았다. 모든 NI-0501 주입은 특별한 것은 없었다.
요약하면, NI-0501의 주입은 우수한 내약성을 보였으며, 약물 주입 후 8주의 모니터링 동안 관찰된 효과는 중대하거나 예측하지 못한 표적이탈 안전성 또는 면역원성 문제를 전혀 나타내지 않았다.
2/3상 임상 연구 재료 및 방법: 본 연구는 원발성 HLH 환자에서 수행된다. 본 연구는 스크리닝, 치료, 및 추적 조사인 3 부분으로 나뉜다. 개요는 도 12에 제시되어 있다.
본 연구에서, 적합한 환자는 HLH 치료 무경험 환자(이는 또한 본원에서 "제1선 환자"로도 지칭됨), 또는 종래의 HLH 요법을 이미 받았고, 예컨대, 치료 의사에 따르면, 만족스러운 반응을 얻지 못하였거나, 또는 그에 대한 불내약성의 징후를 보인 적이 없을 수 있는 환자(이는 또한 본원에서 "제2선 환자"로도 지칭됨)를 포함한다. 종래의 HLH 요법에 실패했거나, 또는 그 대한 불내약성을 나타낸 이후에 NI-0501을 받은 환자는 원발성 HLH의 제2선 치료로서 NI-0501의 효능을 증명하기 위한 본 연구의 중추적 코호트를 대표한다. 치료 무경험 환자를 제1선 설정 환경에서 효능 및 안전성 데이터 수집을 위해 등록받는다.
하기 환자는 본 연구에서 배제된다: 증명된 류마티스성 질환 또는 신생물 질환 이후 그 결과로서 발생한 속발성 HLH를 진단받은 경험이 있는 환자; 스크리닝 전에 앞선 2주간 임의의 T 세포 고갈제(예컨대, 예를 들어, 항흉선세포 글로불린(ATG: antithymocyte globulin), 항CD52 요법)로 사전에 치료받은 환자 또는 그의 정의된 반감기의 5배 기간 내에 임의의 다른 생물학적 약물로 치료받은 환자(기록된 B 세포 EBV 감염일 경우, 리툭시맙은 예외); 활성의 마이코박테리아, 히스토플라스마 캡슐라툼(Histoplasma Capsulatum), 시겔라(Shigella), 살모넬라(Salmonella), 캄필로박터(Campylobacter) 및 리슈마니아(Leishmania) 감염 환자; 결핵 또는 잠복 결핵의 과거 병력의 증거 자료가 있는 환자; HIV 항체, B형 간염 표면 항원 또는 C형 간염 항체에 대해 양성인 혈청학적 성질을 보이는 환자; 악성 종양이 있는 환자; 심혈관, 폐, 간 또는 신장 기능에 심각하게 영향을 주는 또 다른 수반 질환 또는 기형을 갖는 환자; 연구 요법의 임의의 구성 요소에 대해 과민성 또는 알레르기 병력이 있는 환자; 스크리닝 이전 12주 이내에 생백신 또는 약독화 생백신(BCG 포함)을 받은 환자; 및/또는 임신 또는 수유 중인 여성 환자.
본원에 제시된 연구는 인간 IFNγ에 대한 완전 인간 IgG1 단일클론 항체(mAb)인 항인터페론 감마 항체 NI-0501을 사용한다. NI-0501은 하기 표 4에 제시된 주입용 멸균 농축물(mL당)로서 제공된다.
Figure pct00021
본 연구에서, NI-0501은 1 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸쳐 IV 주입에 의해 투여된다. 상기 용량은 기준선 IFNγ 농도가 3,400 pg/mL 이하인 환자에서 3일 동안 IFNγ 효과의 적어도 99%를 억제시킬 것으로 예상된다. 주입은 연구 15일째(SD15: Study Day 15)(주입 #6)까지 3일마다, 그 후로 주 2회로 실시한다. 3 mg/kg으로의 NI-0501 용량 증가는 (하기 표 5에 기술된 바와 같은) 각 환자에서의 임상 및 검사실 반응에 의해 가이드되는 미리 정해진 기준에 따라 연구 동안 어느 시점에서든 가능하다. 3 mg/kg으로 최소 2회 주입 후, 재사정시, 3 mg/kg의 NI-0501을 받은 환자를 자격화하는 동일한 임상 및 검사실 기준이 계속해서 적용되는 것으로 된다고 보일 경우, NI-0501의 용량은 임상 및 검사실의 HLH 파라미터를 주기적으로 모니터링하면서 최대 4회 주입까지 6 mg/kg으로 증가될 수 있다. 상기 파라미터의 진화에 기초하여, NI-0501의 용량은 i) 3 mg/kg으로 다시 감소시킬 수 있거나, 또는 ii) PK 및 PD 증거에 따르면, IFNγ 생산이 과도하게 높게 나타내고, 그 결과로 NI-0501이 신속한 제거되는 것으로 보일 경우, 추가의 IV 주입을 위해 6 mg/kg으로 유지할 수 있다(또는 6 mg/kg 초과로 증가시킬 수 있다). 용량 증가는 본원에 기술된 임상 및 검사실 기준을 충족시킨다면, 연구 동안 어느 시점에서든 이루어질 수 있다.
Figure pct00022
Figure pct00023
본 연구에서, NI-0501은 8주 동안 투여되며, 치료 기간은 도 12에 제시된 바와 같이 치료 기간 1 및 2인 2개의 분리된 기간으로 나뉠 것이다.
NI-0501을 8주 동안 투여한 후, 조혈 줄기 세포 이식(HSCT)을 준비하는 전처리 요법을 개시할 수 있다. 치료 예상 기간은 환자의 상태와 기증자의 이용가능성으로 이식이 시행될 수 있다면, 4주 미만까지는 아니지만, 단축될 수 있다. 적절한 기증자가 8주째까지 확인되지 않을 경우, 또는 NI-0501의 투여와 상관없는 이유로 인해 이식 스케줄이 지연되어야 하는 경우, 환자에 대해 바람직한 유익성/위해성이 확립된다면, NI-0501 치료를 장기간 추적 조사 연구와 관련하여 계속할 수 있다.
본 연구에서, NI-0501은 덱사메타손을 배경으로 투여되며, 이는 환자 상태에 따라 점감될 수 있다. 치료 무경험 환자에서, NI-0501은 10 mg/㎡의 덱사메타손을 배경으로 투여될 것이다. 제2선 HLH 치료로서 NI-0501을 받은 환자에서, 덱사메타손은 적어도 5 mg/㎡의 용량으로, 또는 더 높다면, 스크리닝 이전에 투여된 것과 동일한 용량으로 투여되어야 한다. 환자는 SD-1부터 덱사메타손을 받도록 요구된다.
덱사메타손은 치료 의사의 판단에 따라, 환자 상태에 의존하여 점감될 수 있다. 점감 방식은 각 단계에서 덱사메타손 용량이 절반을 넘지 않고, 변화 빈도는 주 1회를 넘지 않는다면 치료 의사에 의해 선택될 수 있다.
덱사메타손 점감 후에 질환이 악화될 경우, 덱사메타손의 용량은 치료 의사에 따라서 만족스러운 반응에 도달할 때까지 증가되고, 유지될 수 있다.
HLH 치료 가이드라인에서 권장되는 바와 같이, 환자는 NI-0501 치료의 개시 전날부터 연구 종료시까지 뉴모시스티스 지로베시(Pneumocystis jiroveci), 진균 및 헤르페스 조스터(Herpes Zoster) 바이러스 감염에 대한 예방적 치료를 받는다. 환자는 NI-0501 치료의 개시 전날(즉, SD-1)에 시작하여 연구 종료시까지 예방적 치료를 받는다. 예를 들어, 뉴모시스티스 지로베시 예방을 위해, 환자는 주 3일 연속으로 예를 들어, 150 mg/㎡/일 트리메토프림과 함께 750/㎡/일 술파메톡사졸을 1일 2회 동일하게 분할된 용량으로 경구적으로 제공받을 수 있다. 진균 감염 예방을 위해, 환자는 예컨대, 최대 400 mg을 1일 용량으로 매일 플루코나졸 12 mg/kg을 받을 수 있다. HZ 바이러스 예방을 위해, 환자는 예컨대, 2세 초과의 아동일 경우, 아시클로비르 200 mg을 1일 4회, 2세 미만의 아동일 경우, 100 mg을 1일 4회 받을 수 있다. 상기 치료는 경구적으로, 가능한 경우, 다르게는 정맥내로 제공될 것이다.
환자는 또한 다양한 공동 요법 중 임의의 것, 예컨대, 예를 들어, 시클로스포린 A, 척수강내 메토트렉세이트 및 글루코코르티코스테로이드 등을 받을 수 있다. 시클로스포린 A(CsA)는 스크리닝 전에 환자에게 이미 투여되고 있다면, 계속될 수 있다. CsA는 언제든지 중단될 수 있다. CsA는 NI-0501 투여가 일단 시작되고 나면 연구 진행 과정 중에 새롭게 도입되어서는 안 된다.
환자가 NI-0501 치료 개시 시점에 척수강내 메토트렉세이트 및 글루코코르티코이드를 받고 있는 경우, 이 치료는 필요에 따라 계속될 수 있다. CNS 증상의 출현이 NI-0501 치료 개시 전에 발생할 경우, 척수강내 메토트렉세이트 및 글루코코르티코이드를 이용한 요법은 NI-0501의 제1 투여 이전에 개시되어야 한다.
IV 면역글로불린(IVIG)은 오직 기록된 면역글로불린 결핍증일 경우에 대체 치료로서만 허용된다. 예를 들어, 대체가 타당한 기록된 면역글로불린 결핍증일 경우, IVIG는 적절한 IgG 수준을 유지하기 위해서 0.5 g/kg의 용량으로 4주마다 또는 더 빈번하게 제공될 수 있다. 스크리닝 전 앞선 4주 이내의 임의의 주입 뿐만 아니라, NI-0501 치료 동안의 임의의 주입이 허용된다.
진통 치료, 혈액 제품의 수혈, 전해질 및 글루코오스 주입, 항생제, 항진균 치료 및 항바이러스 치료 및 일반 지지 치료가 허용된다. 일단 최대 NI-0501 용량 수준에 도달하고 나면, HLH 개선이 지속되지 않거나, 제한된 경우에는 추가의 HLH 치료가 허용될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, HLH 개선이 지속되지 않는다는 것은 환자가 3가지 HLH 파라미터의 기준선으로부터 적어도 50%의 개선을 유지할 수 없다는 것을 지칭한다(하기 표 6 참조). 적어도 2회 연속 측정이 HLH 개선의 소실을 입증하여야 한다. 본원에서 사용되는 바, HLH 개선이 제한되어 있다는 것은 최소 3가지 HLH 임상 및 검사실 기준에서 기준선으로부터 50% 미만의 변화를 지칭한다. 에토포시드는 약물에 대해 반응이 없거나, 불내약성이 있다는 명백한 증거가 이전 병력으로부터 유래하지 않는다면 추가의 HLH 치료로서 투여되어야 한다.
하기 요법은 NI-0501 투여와 공동으로 사용될 수 없다: 에토포시드, T 세포 고갈제, 또는 임의의 다른 생물학적 약물은 하기의 경우를 제외하고는 일반적으로 허용되지 않는다: 장기간 호중구 감소증일 경우, G-CSF; 기록된 B 세포 EBV 감염일 경우, 리툭시맙; 최대 NI-0501 용량 수준에서 (본원에 기술된 바와 같은) HLH 개선이 지속되지 않거나, 제한된 경우, 추가의 HLH 치료. 에토포시드는 약물에 대한 반응이 없거나, 불내약성이 있다는 명백한 증거가 이전 병력으로부터 유래하지 않는다면 투여되어야 한다. 생백신 또는 약독화 백신(BCG 포함)으로 진행되는 백신 접종은 4주의 추적 조사 기간을 포함하는 전체 연구 동안에는 피해야 한다. NI-0501 농도가 연구 종료 후에 치료 수준으로 그대로 유지되는 경우, NI-0501의 측정가능한 농도가 더 이상은 검출되지 않을 때까지 백신을 접종하지 않는 기간은 연장되어야 한다.
질환을 특징화하는 임상 징후(발열, 비장 비대, CNS 증상) 및 검사실 파라미터(CBC, 피브리노겐, 페리틴, sCD25 수준)의 진화를 이용하여 반응 달성 및 반응까지 소요 시간을 사정한다. 1차 효능 종점은 하기 표 6에 정의된 바와 같이, 치료 종료(EoT: End of Treatment) 시점에서의 전체 반응률, 즉, 완전 반응 또는 부분 반응 또는 HLH 개선 달성을 포함한다. 2차 효능 종점은 연구 동안 임의 시점에서든 반응까지의 소요 시간; 반응의 지속성, 즉, EoT 및 그 이상까지 연구 동안 임의 시점에서든 달성된 반응 유지(임의의 장기간 추적 조사 연구에서 수집된 데이터 포함); 글루코코르티코이드를 기준선 용량의 50% 이상만큼 감소시킬 수 있는 환자수; 명시된 것으로 간주될 때 HSCT로 진행할 수 있는 환자수; 8주째(또는 EoT) 및 연구 종료시 생존; NI-0501 약동학적 성질(PK) 프로파일을 측정하는 NI-0501의 혈청 농도; 순환 총 IFNγ 및 그의 중화 마커, 즉, CXCL9 및 CXCL10의 수준을 비롯한, 약력학적 성질(PD) 효과의 측정; 및 다른 바이오마커, 예컨대, sCD25, IL-10의 측정.
Figure pct00024
Figure pct00025
Figure pct00026
수집 및 사정되는 안전성 파라미터로는 감염에 특히 주의하면서, (중증 및 중증이 아닌) 이상 반응(AE)의 발생, 중증도, 인과성 및 결과; 적혈구(헤모글로빈), 호중구 및 혈소판, 간 검사, 신장 기능 검사 및 응고에 중점을 두면서, 예컨대, 전혈구 계수(CBC: complete blood cell count)와 같은 검사실 파라미터의 진화; 안전성 이유로 중단된 환자수; 및 다른 파라미터, 예컨대, 면역원성(ADA)을 결정하는 NI-0501에 대한 순환 항체의 수준(존재할 경우)을 포함한다.
1차 종점(전체 반응률)은 단측 0.025 수준에서 정확한 이항 검정을 이용하여 평가한다. 반응까지의 소요 시간, 반응의 지속성 및 생존 시간은 이용가능한 경우, 계산된 중앙값을 이용한 카플란-마이어 곡선을 이용하여 제시한다. 95% 신뢰 구간은 이들 각 종점의 중앙값에 대해 계산한다. 글루코코르티코이드를 50% 이상만큼 감소시킨 환자수 및 HSCT로 진행할 수 있는 환자수를 포함한 이항 결과에 치고한 추가의 종점은 비율로 전환하고, 연관된 95% 신뢰 구간을 계산한다. 오직 1차 종점에 대해서만 p 값에 의한 통계학적 유의도를 수득한다. 다른 모든 종점은 1차 종점을 지원하는 것으로 간주하고, 그 결과, 종점의 형식적인 계층은 명시하지 않는다.
환자에서 NI-0501의 투여는 NI-0501의 제1 주입 후 수 시간 이내에 발열을 신속하게 정상화시킨다. 도 13A 및 13B는 NI-0501 치료 개시 시점에 체온이 >37.5℃인 2명 환자의 체온에 대한 NI-0501 주입의 효과를 도시한 것이다. 도 14는 환자에서 호중구 계수에 대한 NI-0501 투여의 효과를 도시한 일련의 그래프 및 표이다. 도 15는 환자에서 혈소판 계수에 대한 NI-0501 투여의 효과를 도시한 일련의 그래프 및 표이다. 도 16은 환자에서 페리틴의 혈청 수준에 대한 NI-0501 투여의 효과를 도시한 일련의 그래프 및 표이다. 도 17은 환자에서 글루코코르티코이드 점감에 대한 NI-0501 투여의 효과를 도시한 일련의 그래프 및 표이다. 도 18은 NI-0501의 투여가 HSCT 시점까지 IFNγ 중화를 유지시켰다는 것을 도시한 그래프이다. 또한, NI-0501 치료에 대한 HLH 반응은 이식 때까지 지속되었다. 또한, 환자를 NI-0501 투여 후, 임의의 CNS 병발에 대해 평가하였다. 치료 종료(EOT)까지 기준선 CNS 병발 및 상태에 관한 요약은 하기 표 11에 제시되어 있다.
Figure pct00027
조혈 줄기세포 이식(HSCT)을 받은 10명의 환자 중, 모든 환자가 생착되었고; 1명의 환자에서, HSCT 후 D+145에 혼합 키메라증에 기인하여 CD34 줄기세포 부스트가 요구되었다. 1명의 환자에서 2차 이식 실패가 발생하였고, 그 이후에, HLH 재활성화가 일어났다. 상기 환자는 급성 호흡 부전 및 박테리아 감염으로 인해 HSCT 후 D+68에 사망하였다. 또 다른 환자는 HSCT 후 D+47에 사망하였다(중증의 GvHD와 관련된 패혈증 쇼크). 다른 3명 환자에서 경증 GvHD가 보고되었고, 이는 치유되었거나, 치유 중에 있다.
정량 한계 미만인 CXCL9(IFNγ에 의해 정교하게 유도되는 케모카인)의 수준에 의해 반영되는 바와 같이, 이식을 받고 있는 10명의 환자 중 8명에서 HSCT 시점에 NI-0501의 중화 혈청 농도를 측정하였다. 따라서, 상기 데이터는 에토포시드 기반 요법에 대해 보고된 단기간 또는 장기간 독성을 피할 수 있다는 것을 보여준다. 이는 알로-HSCT 관련된 합병증의 위험을 감소시킨다는 것으로 해석된다.
상기 데이터는 NI-0501 치료가 CNS 징후 및 증상을 비롯한, HLH의 관련된 임상 및 검사실의 이상소견을 개선시키고/거나, 치유할 수 있다는 것을 증명해준다. NI-0501에 대한 반응은 원인이 되는 돌연변이의 존재 및 유형 및/또는 감염 유발 인자의 존재 및 유형과는 상관이 없다. NI-0501은 우수한 내약성을 보였다. 현재까지 어떤 안전성 문제도 출현하지 않았다(예컨대, 골수 독성 없음, 광범위한 면역 억제 없음). IFNγ 중화에 의해 촉진된다고 공지된 병원체에 의해 유발되는 감염도 발견되지 않았다. NI-0501에 의한 IFNγ의 중화는 HLH의 관리에 획기적이고, 표적화된 접근법을 제공할 수 있다.
실시예 8 . 대식세포 활성화 증후군/속발성 HLH(MAS/sHLH)가 발생한 전신성 소아 특발성 관절염( sJIA ) 환자에서 항인터페론 감마( 항IFNγ ) 단일클론 항체인 NI-0501의 단기간의 정맥내 투여의 안전성, 내약성, 약동학적 성질 및 효능
(i) NI-0501의 PK 프로파일 및 투약 전략법을 평가하고, 상기 환자 집단에서 NI-0501 유익성/위해성을 예비적으로 사정하기 위한 예비 연구; 및 (ii) NI-0501의 효능 및 안전성을 증명하기 위한 주요 연구(NI-0501의 투약 요법 및 긍정적인 유익성/위해성 프로파일이 확인될 때 계속되는 연구)인, 2개 부분으로 나누어진, 본원에 제공된 연구는 sJIA 환자에서의 MAS/sHLH의 치료를 위한 NI-0501의 효능 및 안전성을 증명하기 위해 디자인된 것이다. 본 연구 디자인의 개요는 도 19에 제시되어 있다.
예비 연구의 주요 목적은 (i) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에 적절한 NI-0501 치료 용량 요법을 정의하고; (ii) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 NI-0501의 유익성/위해성 프로파일을 평가하고; (iii) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 약동학적 성질(PK) 프로파일을 기술하고자 하는 것이다. 주요 연구의 주된 목적은 (i) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 NI-0501의 효능을 측정하고; (ii) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 NI-0501의 단기간 정맥내(iv) 투여의 안전성 및 내약성 프로파일을 평가하고; (iii) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 NI-0501의 긍정적인 유익성/위해성 프로파일을 확인하고; (iv) MAS/sHLH 진단 바이오마커로서 및 NI-0501 치료에 대한 반응의 예측 변수로서 케모카인 CXCL9 및 CXCL10의 탐색적 평가를 실시하고; (v) MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자에서 NI-0501의 면역원성을 사정하고자 하는 것이다.
연구 집단은 고용량의 글루코코르티코이드 치료에 대해 부적절한 반응을 나타냈던 MAS/sHLH를 보이는 sJIA 환자를 포함한다. 포함 기준은 하기를 포함한다: (i) 성별: 남성 및 여성; (ii) 연령: sJIA 진단시 < 16세; (iii) 하기 검사실 및 임상 기준 중 적어도 2가지가 존재하며, 치료 류마티스 전문의에 의한 활동성 MAS/sHLH의 확진: (a) 검사실 기준: 혈소판 계수 ≤ 262 x109/L, WBC 계수 ≤ 4.0 x109/L, AST 수준 > 59 U/L, 및/또는 피브리노겐 수준 ≤ 2.5 g/L; (b) 임상 기준: 간비대, 출혈 소견, 및/또는 CNS 기능장애; (iv) 국소 치료 기준에 따라, 적어도 3일 동안 고용량의 i.v. 글루코코르티코이드(3일 연속 30 mg/kg mPDN의 펄스를 포함하나, 이에 제한되지 않음)에 대해 부적절한 반응을 나타내는 환자; (v) 고용량의 i.v. 글루코코르티코이드는 2회 분리된 1일 용량으로 최대 60 mg/일과 등가인 2 mg/Kg/일의 mPDN보다 낮아서는 안 된다. 환자의 상태 및/또는 검사실 파라미터가 신속하게 악화될 경우, 포함은 고용량의 i.v. 글루코코르티코이드에서 시작하여 3일 미만인 기간 이내에 일어날 수 있다; (vi) 환자 동의(또는 법적으로 권한을 부여받은 대리인(들)의 동의); 및 (vii) 환자가 사춘기가 지난 경우, 피임 수락.
배제 기준으로는 하기를 포함한다: (i) 원발성 HLH 또는 신생물 질환 이후 그 결과로서 발생한 HLH로 의심되거나, 확인된 진단; (ii) 안킨라, 토실리주맙, 카나키누맙, TNF 억제제, 리툭시맙 또는 그의 정의된 반감기의 5배 이내의 임의의 다른 생물학적 약물로 치료받은 환자; (iii) 활성의 마이코박테리아(정형 및 비정형), 히스토플라스마 캡슐라툼, 시겔라, 살모넬라, 캄필로박터 및 리슈마니아 감염; (iv) 잠복 결핵의 증거; (v) HIV 항체에 대해 양성인 혈청학적 성질; (vi) 악성 종양의 존재; (vii) 연구원의 의견에 따라, 치료에 반응할 가능성 및/또는 NI-0501 안전성 사정에 유의적인 영향을 줄 수 있는 심혈관, 폐, CNS, 간 또는 신장 기능에 심각하게 영향을 주는 또 다른 수반 질환 또는 기형을 갖는 환자; (viii) 연구 요법의 임의의 구성 요소에 대해 과민성 또는 알레르기 병력; (ix) 스크리닝 이전 12주 이내 BCG 백신 접종; (x) 스크리닝 이전 6주 이내 다른 생백신 또는 약독화 생백신 접종; 및/또는 (xi) 임신 또는 수유 중인 여성 환자.
투약 요법, 투여 빈도 & 치료 기간: 본 연구에서, NI-0501을 실시예 7에 제시된 제제에 사용한다. 1부에서, NI-0501을 SD0에 6 mg/kg의 개시 용량으로 1시간의 기간에 걸쳐 주입에 의해 투여한다. NI-0501 치료는 4주 동안(즉, 최대 SD27까지) 3일마다 3 mg/kg의 용량으로 계속 진행한다. NI-0501 치료는 완전 임상 반응(즉, MAS 완화)을 달성하면, 단축될 수 있다. 4주 후, NI-0501 치료는 가능하게는 용량을 1 mg/kg으로 감소시키고, 주입 사이 간격을 주 1회 투여로 연장시키면서, MAS 완화를 달성할 때까지 필요에 따라 유지로서 최대로 추가 4주 동안(즉, SD56까지) 계속 진행될 수 있다. PK 프로파일이 예상 밖의 TMDD를 나타낼 때(따라서, 특별히 높은 IFNγ 생산을 신호전달할 때), NI-0501의 용량은 임상 및 PK 증거에 의해 가이드되는 10 mg/kg까지 증가될 수 있다. 이러한 용량 증가는 개별 환자에서 유익성/위해성 프로파일을 면밀하게 사정한 경우에만 허가된다.
2부에서, 제안된 투약 요법이 적절하다고 확인되고, NI-0501의 긍정적인 유익성/위해성 프로파일이 증명되면, 연구는 계속될 것이다. 1부에서 얻은 증거를 기초로 하여 필요한 경우, 투약 요법의 약간의 변형이 적용될 수 있다.
배경 요법 & 공동 약물 투약: NI-0501은 최대 60 mg/일에 등가인 적어도 2 mg/kg의 메틸프레드니솔론(mPDN)을 배경으로 투여되며(30 kg 이상의 환자에서), 이는 환자의 상태에 따라 치료 동안에 점감될 수 있다. 바람직하게는 혈청 NI-0501 수준이 더 이상 검출되지 않을 때의 바로 전날(및 어떤 경우에는 NI-0501 치료 개시 이전에) 시작하여 환자는 헤르페스 조스터 감염에 대해 예방적 치료를 받는다. 시클로스포린 A(CsA)는 NI-0501 치료 개시의 적어도 3일 전에 시작할 경우 계속될 수 있다. CsA 용량 조정은 치료 수준을 유지하기 위해서 허용된다. CsA는 연구원의 판단에 따라, 연구 기간 중 어느 시점에서든 가능하다 중단될 수 있다. CsA는 NI-0501 투여가 일단 시작되고 나면 새롭게 도입될 수 없다. 환자가 NI-0501 치료 개시 시점에 척수강내 메토트렉세이트 및 글루코코르티코이드를 받고 있는 경우, 이 치료는 필요에 따라 계속될 수 있다. CNS 증상의 출현이 NI-0501 치료 개시 시점에 척수강내 메토트렉세이트 및 글루코코르티코이드를 받고 있다면, 상기 치료는 필요에 따라 계속될 수 있다. 생백신 또는 약독화 백신(BCG 포함)에 의한 백신접종은 전체 연구 기간 동안에 피해야만 하고, 어떤 경우에는 혈청 NI-0501 수준이 더 이상 검출되지 않을 때까지 피해야 한다. 진통 치료, 혈액 제품의 수혈, 전해질 및 글루코오스 주입, 항생제, 항진균 치료 및 항바이러스 치료 및 일반 지지 치료가 허용된다.
샘플 크기: 1부에서, 적어도 5명의 평가가능한 환자를 등록받을 것이다. 2부에서, 연구를 계속 진행할 때, 총 15명의 평가가능한 환자를 얻기 위해서 적어도 10명의 평가가능한 환자를 등록받을 것이다. 질환의 성질이 희귀한 고아성을 띠고, 승인받은 치료가 없다는 점을 고려하면, 샘플 크기가 15명인 것은 공식적으로 정당화되지 못한다. 그럼에도 불구하고, 환자 중 적어도 50%는 전신 글루코코르티코이드 단독에 대해 부적절하게 반응한다는 가정, 즉, 글루코코르티코이드에 대해 환자 중 50%가 치료 시작 후 8주째에 MAS 완화를 달성한다는 가정에 기초하면, 본 연구는 5%의 단측 유의도 수준을 이용하여 50%에서 77%로의 개선을 검출하는 70% 검정력을 보일 것이다.
연구 기간 및 연구 종료 정의: 연구 기간은 각 환자에 대해 8주가 될 것이다(추가 최대 1주 스크리닝 기간). 연구 종료는 마지막 환자가 마지막 방문한 때로 정의한다. 적어도 1회 용량의 NI-0501을 받은 모든 환자는 장기간 추적 조사를 위해 NI-0501 연구에 참가하도록 요청받게 될 것이다.
연구 종점: 1부(예비) 연구에서, 상기 환자 집단에서 투약 요법을 확인하기 위해 하기를 사정한다: (i) NI-0501의 유익성/위해성 프로파일; (ii) NI-0501의 PK 프로파일; (iii) IFNγ에 의해 유도된다고 알려진 케모카인(예컨대, CXCL9, CXCL10, CXCL11)의 수준; (iv) NI-0501 개시 후 2, 4, 6, 및 8주째의 혈구감소증, 간 기능장애, 응고 이상의 MAS 특징적인 소견의 진화; 및 (v) NI-0501 치료의 용량 및 기간. 2부 연구(주요) 연구에서, 효능 연구 종점은 하기와 같다: (a): 1차 효능 종점: NI-0501 치료 개시 후 8주째까지 MAS 완화를 달성한 환자수; 및 (b) 2차 효능 종점: MAS 완화까지의 소요 시간; 연구자의 사정에 따른 개시 반응까지의 소요 시간; 연구 동안 어느 시점에서든 글루코코르티코이드가 MAS의 발생 이전에 투여되고 있는 것과 동일한(또는 더 낮은) 용량으로 점감될 수 있는 환자수; 글루코코르티코이드 점감을 달성하는 데 소요되는 시간; 연구 종료시 생존; 및 효능이 없어서 연구가 중단된 환자수. 2부(주요) 연구)에서, 안전성 연구 종점은 하기와 같다: (a) 감염에 특히 주의하면서, (중증 및 중증이 아닌) AE의 발생, 중증도, 인과성 및 결과; 검사실 파라미터, 특히 CBC(헤모글로빈, 호중구 및 혈소판에 중점을 두면서), LFT, 및 응고 파라미터의 진화; 안전성 이유로 연구가 중단된 환자수; 및 면역원성(ADA)을 결정하는 NI-0501에 대한 순환 항체의 수준(존재할 경우).
약동학적 및 약력학적 성질은 NI-0501의 PK 프로파일; 투여 전 순환 유리 IFNγ의 수준, 및 NI-0501 개시 후 총 IFNγ(유리 IFNγ+ NI-0501에 결합된 IFNγ); IFNγ에 의해 유도된다고 알려진 케모카인(예컨대, CXCL9, CXCL10, CXCL11)의 수준; 케모카인 수준(CXCL9, CXCL10)과 유리 NI-0501, 유리 IFNγ(투약 전) 및 총 IFNγ의 수준 사이의 상호연관성; 케모카인 및 총 IFNγ 수준, 및 MAS 중증도의 검사실 파라미터, 예컨대, 페리틴, 혈소판 계수, LFT(탐색적 분석)의 연관성; 및 다른 잠재적 질환 바이오마커(예컨대, sCD25, IL-10, IL-6, IL-18, TNFα, 네오프테린)의 수준에 의해 평가된다.
다른 실시양태
본 발명은 그의 상세한 설명과 함께 기술되었지만, 상기 설명은 본 발명의 범주를 예시하는 것이고, 이를 제한하고자 하는 것은 아니며, 본 발명의 범주는 첨부된 청구범위의 범주에 의해 정의된다. 다른 측면, 이점, 및 변형은 하기 청구범위의 범주 내에 포함된다.

Claims (67)

  1. a) 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 1.0 또는 3.0 mg인 제1 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체; 및
    b) 12 시간 이내에 피험체의 체중 1 kg당 3.0, 6.0 또는 10.0 mg인 제2 용량의 상기 항체
    를 피험체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인, 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH) 치료를 필요로 하는 인간 피험체에서 원발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 방법.
  2. 제1항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 항체의 용량이 6 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  4. 제3항에 있어서, 항체의 용량이 1 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 제2 용량이 제1 용량 후 3일마다인 제1 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 제2 용량이 제1 치료 기간의 완료 후 제2 치료 기간 동안 제1 용량 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8주째에 투여되는 것인 방법.
  7. 제6항에 있어서, 제2 치료 기간이 주 2회인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 1.0 mg인 제3 용량의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  9. 제1항에 있어서, 항체 용량이 단일 주사로서 투여되는 것인 방법.
  10. 제1항에 있어서, 항체가 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여되는 것인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 피험체가 성인 피험체 또는 소아 피험체인 방법.
  12. a) 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 6.0 mg인 제1 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체; 및
    b) 12 시간 이내에 피험체의 체중 1 kg당 3.0 mg인 제2 용량의 상기 항체
    를 피험체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인, 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH) 치료를 필요로 하는 인간 소아 피험체에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 방법.
  13. 제12항에 있어서, 항체의 용량이 6 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 항체의 용량이 1 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  15. 제12항에 있어서, 제2 용량이 제1 용량 후 3일마다인 제1 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 제2 용량이 제1 치료 기간의 완료 후 제2 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  17. 제16항에 있어서, 제2 치료 기간이 주 2회인 방법.
  18. 제12항에 있어서, 제2 용량 후, 12 시간 이내에 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 6.0 mg인 추가 용량의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  19. 제12항에 있어서, 항체 용량이 단일 주사로서 투여되는 것인 방법.
  20. 제12항에 있어서, 항체가 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여되는 것인 방법.
  21. a) 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 3 mg 또는 6.0 mg인 제1 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체; 및
    b) 12 시간 이내에 피험체의 체중 1 kg당 10.0 mg 이하인 제2 용량의 상기 항체
    를 피험체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인, 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH) 치료를 필요로 하는 인간 성인 피험체에서 속발성 혈구탐식성 림프조직구증(HLH)을 치료하기 위한 다중 가변 용량 방법.
  22. 제21항에 있어서, 항체의 용량이 6 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  23. 제22항에 있어서, 항체의 용량이 1 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  24. 제22항에 있어서, 제2 용량이 제1 용량 후 3일마다인 제1 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 제2 용량이 제1 치료 기간의 완료 후 제2 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 제2 치료 기간이 주 2회인 방법.
  27. 제21항에 있어서, 제2 용량 후, 12 시간 이내에 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 1.0, 3.0, 또는 6.0 mg인 추가 용량의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  28. 제21항에 있어서, 항체 용량이 단일 주사로서 투여되는 것인 방법.
  29. 제21항에 있어서, 항체가 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여되는 것인 방법.
  30. a) 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 제1 용량의, 인터페론 감마(IFNγ)에 결합하는 항체; 및
    b) 12 시간 이내에 피험체의 체중의 제2 용량의 상기 항체
    를 피험체에게 정맥내로 투여하는 단계를 포함하고,
    상기 항체는 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인, 병태 치료를 필요로 하는 인간 피험체에서 병태를 치료하기 위한 다중 가변 용량 방법.
  31. 제30항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  32. 제30항에 있어서, 항체의 용량이 6 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  33. 제32항에 있어서, 항체의 용량이 1 시간 이내에 투여되는 것인 방법.
  34. 제30항에 있어서, 제2 용량이 제1 용량 후 3일마다인 제1 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  35. 제34항에 있어서, 제2 용량이 제1 치료 기간의 완료 후 제2 치료 기간 동안 투여되는 것인 방법.
  36. 제35항에 있어서, 제2 치료 기간이 주 2회인 방법.
  37. 제30항에 있어서, 제1 용량이 피험체의 체중 1 kg당 1.0 내지 10 mg인 방법.
  38. 제30항에 있어서, 용량이 피험체의 체중 1 kg당 1.0 내지 10 mg이고, 제2 용량은 제1 용량보다 더 낮거나 더 높은 것인 방법.
  39. 제30항에 있어서, 12 시간 이내에 피험체에게 투여되는, 피험체의 체중 1 kg당 1.0 내지 10 mg인 제3 용량의 항체를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  40. 제30항에 있어서, 항체 용량이 단일 주사로서 투여되는 것인 방법.
  41. 제30항에 있어서, 항체가 단일 요법 또는 공동 요법으로서 투여되는 것인 방법.
  42. 제30항에 있어서, 피험체가 성인 피험체 또는 소아 피험체인 방법.
  43. 제30항에 있어서, 병태가 이식 거부인 방법.
  44. 제43항에 있어서, 이식 거부가 고형 장기 이식 장애, 골수 급성 이식편 거부인 방법.
  45. 제30항에 있어서, 병태가 이식편 대 숙주 질환, 방종양성 소뇌 변성, 출혈열, 사르코이드증, 성인형 스틸병인 방법.
  46. 제30항에 있어서, CART 세포 요법을 받은 이후에 피험체에게 수행되는 방법.
  47. 제1항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 피험체가 항체 투여 직전에 덱사메타손을 투여받는 것인 방법.
  48. 제30항에 있어서, 덱사메타손이 적어도 10 mg/㎡인 용량으로 투여되는 것인 방법.
  49. 제30항에 있어서, 덱사메타손이 적어도 5 mg/㎡의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  50. 제1항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, 피험체가 이전에 HLH에 대해 치료받은 적이 없는 것인 방법.
  51. 제1항 내지 제50항 중 어느 한 항에 있어서, 피험체에게 적어도 제2 작용제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  52. 제523항에 있어서, 제2 작용제가 치료제, 항염증제, 및/또는 면역억제제인 방법.
  53. 1 mL당
    a) 5 mg 또는 25 mg의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체; 및
    b) 1.55 mg L-히스티딘, 3.14 mg L-히스티딘 모노하이드로클로라이드, 일수화물, 7.31 mg 염화나트륨(NaCl), 및 0.05 mg 폴리소르베이트 80을 포함하고, pH가 5.8 내지 6.2인 주사가능한 약학 제제.
  54. 제53항에 있어서, 항체가 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인 제제.
  55. 제54항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 제제.
  56. 주사용으로 적합한 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 포함하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 5 mg/ml 또는 25 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알.
  57. 제56항에 있어서, 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화되는 것인 단위 용량 바이알.
  58. 제56항에 있어서, 항체가 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
  59. 제58항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
  60. 주사용으로 적합한 10 ml 또는 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 포함하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 25 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알.
  61. 제60항에 있어서, 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화되는 것인 단위 용량 바이알.
  62. 제60항에 있어서, 항체가 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
  63. 제62항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
  64. 주사용으로 적합한 2 ml 또는 20 ml의 완전 인간 항인터페론 감마(IFNγ) 단일클론 항체 용액을 포함하는 단위 용량 바이알로서, 항체의 농도가 5 mg/ml이고, 용액의 pH가 5.8 내지 6.2인 단위 용량 바이알.
  65. 제64항에 있어서, 용액이 투명하고, 무색이며, 침전물이 없도록 항체가 용액에 가용화되는 것인 단위 용량 바이알.
  66. 제64항에 있어서, 항체가 SYAMS(서열 번호 1)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 1(VH CDR1); AISGSGGSTYYADSVKG(서열 번호 2)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 2(VH CDR2); 및 DGSSGWYVPHWFDP(서열 번호 3)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 중쇄 상보성 결정 영역 3(VH CDR3); TRSSGSIASNYVQ(서열 번호 4)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 1(VL CDR1); EDNQRPS(서열 번호 5)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 2(VL CDR2) 영역; 및 QSYDGSNRWM(서열 번호 6)의 아미노산 서열을 포함하는 가변 경쇄 상보성 결정 영역 3(VL CDR3) 영역을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
  67. 제66항에 있어서, 항체가 서열 번호 47의 아미노산 서열에 대한 중쇄 가변 아미노산 서열, 및 서열 번호 48의 아미노산 서열에 대한 경쇄 가변 아미노산 서열을 포함하는 것인 단위 용량 바이알.
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