KR20190071714A

KR20190071714A - 인플루엔자 바이러스 중화 화합물

Info

Publication number: KR20190071714A
Application number: KR1020197011328A
Authority: KR
Inventors: 자로스로 쥬라스젝; 마리아 반 동겐; 보에리스 브란덴부르그
Original assignee: 얀센 백신스 앤드 프리벤션 비.브이.
Priority date: 2016-10-27
Filing date: 2017-10-26
Publication date: 2019-06-24
Also published as: AU2017350304A1; CN110234337A; US20200048308A1; JP2020500169A; WO2018078008A1; EP3532085A1; AU2017350304B2; CA3039576A1

Abstract

본 발명은 인플루엔자 바이러스, 구체적으로 H1 아형 1의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스에 결합하고/하거나 상기 인플루엔자 바이러스를 중화시키는 것이 가능한 신규 화합물, 구체적으로 펩티드성 거대환식 펩티드, 및 그러한 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염의 진단, 예방 및/또는 치료에서의 5가지의 펩티드 모방 화합물의 용도에 관한 것이다.

Description

인플루엔자 바이러스 중화 화합물

본 발명은 의학 분야에 관한 것이다. 본 발명은 인플루엔자 바이러스, 구체적으로 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스에 결합하고/하거나 상기 바이러스를 중화시키는 것이 가능한 신규 화합물, 및 그러한 화합물을 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 또한 본 발명은 인플루엔자 바이러스 감염의 진단, 예방 및/또는 치료에서의 인플루엔자 바이러스 결합 및/또는 중화 화합물의 용도에 관한 것이다.

계절형 A형 인플루엔자는 주요한 공중 보건 문제로서, 이는 수백만명에게 경제적 부담을 주면서 매해 전세계적으로 250,000명보다 많은 이를 사망에 이르게 한다. 새로운 바이러스가 나와서 전세계적으로 면역성이 거의 없거나 전혀 없는 사람을 감염시킬 때 발생하는 유행성 인플루엔자는 인간 건강에 대하여 훨씬 더 큰 위협이 되며; 예를 들어, 1918년에 유행한 "스페인 독감"은 5000만명으로 추산되는 사망을 야기하였다. 계속된 관심사 중에는 고병원성 조류 인플루엔자(highly pathogenic avian influenza; HPAI)가 있으며, 이는 감염된 인간에 있어서 50% 초과의 사망률을 보여주었다. H5 및 H7 인플루엔자 바이러스는 세계의 특정 지역의 가금류에서 풍토성이다. 이러한 바이러스는 현재 사람에서 사람으로 쉽게 전염될 수 있는 것으로는 보이지 않지만, 조류 H5에 대한 최근의 데이터는 생체 내 모델 시스템에서 포유동물에 있어서 이러한 바이러스가 에어로졸 전파를 통하여 확산될 수 있게 하는 데 단지 몇 개의 아미노산 변화가 충분함을 나타낸다.

A형 및/또는 B형 인플루엔자 바이러스를 광범위하게 중화시킬 수 있는 항체, 예컨대 CR9114 (국제 공개 제2013/007770호에 개시됨), CR6261 (국제 공개 제2008/028946호에 개시됨), FI6 (문헌[Corti et al., Science 333, 850-856 (2011)]에 기술됨)가 최근에 기술되었다. 이러한 항체는 매우 다양한 헤마글루티닌 단백질과 상호작용하여 넓은 스펙트럼의 인플루엔자 주(strain)를 중화시키는 것으로 밝혀졌다. 그러한 항체는, 그의 효력 및 관용(breadth)의 결과로서, 현재 중병 환자의 치료적 치료용 및 고위험군에 속하는 사람을 위한 예방적 응용용으로 개발 중에 있다. 그러나 상대적으로 높은 비용의 상품 및 그의 비경구 투여는 더 큰 집단에서의 단클론 항체의 사용을 제한할 것으로 예상된다.

현재 인플루엔자 감염의 예방 및/또는 치료에 이용가능한 다른 에이전트(agent)가 또한 심각한 제한과 연관되어 있다. 항바이러스약, 예컨대 뉴라미니다아제 저해제 오셀타미비르 및 자나미비르와 M2 저해제 아만타딘 및 리만타딘은 감염 후기에 투여될 경우 제한된 효능을 가지며, 광범위한 사용은 내성 바이러스 주의 출현으로 이어질 가능성이 있다. 더욱이, 성인에서의 오셀타미비르의 사용은 부작용, 예컨대 오심, 구토, 정신의학적 효과(psychiatric effect) 및 신장 이벤트(renal event)와 연관되어 있다.

더욱이, 인플루엔자 백신의 효능은 고위험 환자 (중장년층)에 있어서 차선인 것으로 밝혀졌으며, 순환 인플루엔자 바이러스의 영구적인 항원 변화는 인플루엔자 백신 주와 순환 인플루엔자 주 사이의 가장 가까운 가능한 매치(match)를 보장하기 위하여 인플루엔자 백신 제형의 매해 적응(annual adaptation)을 요구한다.

인플루엔자 감염의 예방 및/또는 치료를 위한 대안적인 전략으로서 헤마글루티닌(HA)에 작용하는 신규한 인플루엔자 항바이러스제를 발견하는 것이 또한 이 단백질의 큰 서열 가변성에 의해 방해를 받는다. 따라서 지금까지 개시된 헤마글루티닌 리간드는 단지 제한된 수의 근연 인플루엔자 주들에 대하여 활성을 나타낸다. 취근에 발견된 광범위 중화 항체는 인플루엔자 HA의 스템(stem) 상의 특정 에피토프를 표적화한다. 이 에피토프에의 결합은 바이러스 탈출의 낮은 가능성 및 결합 관용의 증가와 연관되어서 기존의 인플루엔자 항바이러스제의 가장 중요한 쟁점을 해결한다. 그러나, 항체는 큰 분자이며, 생성이 어렵고 비용이 많이 들 수 있다.

A형 인플루엔자 바이러스에 의해 야기되며, 또한 계절형 유행병의 높은 경제적 영향, 및 범유행병(pandemics)에 대한 계속되는 위험을 갖는 호흡기 질환의 중증도를 고려하면, A형 인플루엔자 바이러스에 대하여 광범위한 활성을 갖고 인플루엔자 감염의 예방 또는 치료용 의약으로 사용될 수 있는 새롭고 효과적인 저해제에 대한 지속적인 필요성이 있다.

본 발명은 예를 들어 H1N1 주 A/캘리포니아(California)/07/2009 및 A/뉴칼레도니아(New Caledonia)/20/1999와 같은 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주의 헤마글루티닌(HA)에 특이적으로 결합할 수 있는 신규 화합물, 구체적으로 선형 및 거대환식 펩티드 화합물을 제공한다. 본 발명의 화합물 중 적어도 일부는 예를 들어 H1N1 주 A/캘리포니아/07/2009 및 A/뉴칼레도니아/20/1999와 같은 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주에 대하여 중화 활성을 갖는다. 적어도 일부의 화합물은 적어도 2가지의 상이한 H1 인플루엔자 바이러스 주들에 대하여 중화 활성을 갖는다.

특정 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 하기 서열/화학식을 갖는다:

CapN-Tyr-X1-Asp-Pro-X2-Gly-X3-X4-Gly-X5-[Met/Nlu]-CapC

여기서, CapN 및 CapC는 0 ~ 10개의 잔기를 포함하는 임의의 아미노산 서열일 수 있으며;

X1은 임의의 하전, 친수성 또는 극성 L 또는 D-아미노산, 및 임의의 비정규 친수성, 하전 또는 극성 L 또는 D 아미노산이며;

X2는 소수성, 지방족 또는 방향족 [정규 또는 비정규] 아미노산이되, 단, X2는 프롤린이 아니며;

X3은 소형 또는 중형 지방족 또는 소수성 L-아미노산(바람직하게는 150 Da 이하임)이며;

X4는 소형 지방족 또는 소수성 L-아미노산(바람직하게는 100 Da 이하임)이며;

X5는 임의의 극성 또는 하전 L- 또는 D- 아미노산이다.

특정 실시 형태에서, 본 화합물은 길이가 11 내지 17개 아미노산이다.

특정 실시 형태에서, 본 화합물은 하기 서열/화학식을 갖는다:

CapN-Tyr-[Glu/Arg]-Asp-Pro-{Leu/Ph5]-Gly-Val-[Alu/Abu]-Gly-Gly-[Met/Nlu]-CapC

여기서, CapN은 [Pro|Gly]-Val-Ser-Leu이며, CapC = Gly-Val-Tyr-D-Pro 및 CapN이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일(head-to-tail) 연결에 의해 연결되거나; 또는

CapN은 {Suc}-Val-Ser-Leu이며, Cap N은 Gly-Val-Tyr-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 연결되지 않거나; 또는

CapN은 D-Pro-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-[Pro/Gly]이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나; 또는

CapN은 [Gly|Pro]-Leu이며, CapC는 Gly-Dsp-Pro이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나; 또는

CapN은 {Suc}-Cys-Leu이며, CapC는 Gly-Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 Cys 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결되거나; 또는

CapN은 Leu이며, CapC는 Gly-Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나; 또는

CapN은 Leu이며, CapC는 Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나; 또는

CapN은 {Suc}-Cys이며, CapC는 Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 시스테인 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결된다.

특정 실시 형태에서, 화합물은 다음으로 이루어진 군으로부터 선택된다:

Suc-Cys-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 1);

Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 2);

Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Glu-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 3);

Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Nlu-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 4);

Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 5);

Suc-Cys-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 6);

Suc-Cys-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 7);

Pro-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 8);

Gly-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 9);

Gly-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro (헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 10);

Suc-Cys-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 11);

Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 12);

Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 13);

D-Pro-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 14);

Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Nlu-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 15);

D-Pro-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 16);

Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Glu-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 17);

Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 18);

Pro-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 19);

Gly-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 20);

Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 21); 및

Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Cys(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 22);

더욱이 본 발명은 본원에 개시된 적어도 1가지의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 인플루엔자의 진단, 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 본원에 개시된 화합물에 관한 것이다.

본 발명으로 이어진 연구에서, 신규한 인플루엔자 바이러스 결합 및/또는 중화 화합물이 개발되었다. 구체적으로, 광범위 인플루엔자 바이러스 중화 항체의 작용을 모방하지만 바람직하게는 길이가 단지 11 내지 17개 아미노산인 일련의 선형 및 거대환식 펩티드 화합물이 제공된다. 본 발명의 화합물은 적어도 H1 아형의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스 주, 예컨대 H1N1 인플루엔자 바이러스 주 A/캘리포니아/07/2009 및 A/뉴칼레도니아/20/1999에 대하여 경쟁적 결합 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 화합물 중 적어도 일부는 또한 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주, 예컨대 H1N1 인플루엔자 바이러스 주 A/캘리포니아/07/2009 및 A/뉴칼레도니아/20/1999에 대하여 중화 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 본 발명의 화합물은 예를 들어 항-헤마글루티닌 항체와 관련하여 몇몇 장점을 제공하며, 이는 작은 크기 (1.3 ~ 1.9 kDa), 저비용의 화학물질 생산, 다량체 포맷(format)으로의 단순한 엔지니어링(engineering), 및 비-주사가능 투여 경로를 지원하는 잠재력을 갖는 높은 안정성을 포함한다.

이와 같이, 제1 양태에서 본 발명은 하기 서열을 포함하는 화합물을 제공한다:

CapN-Tyr-X1-Asp-Pro-X2-Gly-X3-X4-Gly-X5-[Met/Nlu]-CapC

여기서, CapN 및 CapC는 0 ~ 10개의 잔기를 포함하는 임의의 아미노산 서열일 수 있으며;

X5는 임의의 극성 또는 하전 L- 또는 D- 아미노산이다.

본 발명의 화합물은 본 출원과 공계류 중인 특허 출원 WO2016/124768에 기술된 단일 도메인 항체 SD1038의 CDR3 서열을 기반으로 한다. 상기 20개 아미노산 길이의 CDR3의 서열은 다음과 같이 정의된다:

His1-Val2-Ser3-Leu4-Tyr5-Arg6-Asp7-Pro8-Leu9-Gly10-Val11-Ala12-Gly13-Gly14-Met15-Gly16-Val17-Tyr18-Trp19-Gly20 (서열 번호 23).

이러한 CDR3 서열을 이용하여, 프레임워크(framework) 영역에서의 환화에 의해서뿐만 아니라 다양한 링커의 사용에 의해서도 다수의 환형 펩티드가 설계되었다.

이와 같이, 본 발명에 따르면, X1은 임의의 하전, 친수성 또는 극성 D 또는 L-아미노산, 예컨대 아르기닌, 라이신, 글루타메이트, 아스파르트산, 글루타민 또는 아스파라긴, 및 임의의 비정규 친수성, 하전 또는 극성 L 또는 D 아미노산, 예컨대 오르니틴, 시트룰린 등일 수 있으며;

X2는 임의의 소수성, 지방족 또는 방향족 아미노산(정규 또는 비정규)일 수 있지만, 단, X2는 프롤린이 아니며;

X3은 소형(즉, < 100 Da) 또는 중형(즉, < 150 Da) 지방족 또는 소수성 L-아미노산, 예컨대 Val, Ile, 알로-Ile, Abu 또는 Met 및 이들의 유사 유도체일 수 있으며;

X4는 임의의 소형(즉, < 100 Da) 지방족, 소수성 L-아미노산, 예컨대 Ala, Abu, 트리플루오로알라닌, 2-아미노-3-부텐산, 2-아미노-3-부틴산 또는 이들의 유도체일 수 있으며;

X5는 임의의 극성 또는 하전 L- 또는 D-아미노산일 수 있다.

본 발명에 따르면, CapN 및 CapC는 부재할 수 있거나 임의의 단일 아미노산 또는 2 ~ 10개 아미노산의 사슬일 수 있으며, 여기서, CapN 및 CapC는 예를 들어 직접적 N - C 말단 환화, 링커 서열의 삽입, 또는 시스테인 가교에 의해 거대환을 형성하도록 공유 결합에 의해 연결될 수 있다. CapN 및 CapC의 다른 연결 방법도 가능하다.

본 발명의 특정 실시 형태에서:

CapN은 [Pro|Gly]-Val-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-Tyr-D-Pro 및 CapN이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 {Suc}-Val-Ser-Leu이며, Cap N은 Gly-Val-Tyr-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 연결되지 않거나;

CapN은 D-Pro-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-[Pro/Gly]이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 [Gly|Pro]-Leu이며, CapC는 Gly-Dsp-Pro이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 {Suc}-Cys-Leu이며, CapC는 Gly-Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 CapN 및 CapC에서의 Cys 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결되거나;

CapN은 Leu이며, CapC는 Gly-Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 Leu이며, CapC는 Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 {Suc}-Cys이며, CapC는 Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 CapN 및 CapC에서의 시스테인 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결된다.

특정 실시 형태에서,

X1은 아르기닌, 라이신, 글루타메이트, 아스파르트산, 글루타민, 아스파라긴, 오르니틴, 시트룰린이며;

X2는 알라닌, 발린, 메티오닌, 류신, 이소류신, 페닐알라닌이며;

X3은 발린, 이소류신, 알로-이소류신, L-2-아미노부티르산 또는 메티오닌, 또는 이들의 유사 유도체이며;

X4는 알라닌, L-2-아미노부티르산, 트리플루오로알라닌, 2-아미노-3-부텐산, 2-아미노-3-부틴산 또는 이들의 유도체이며;

X5는 글리신, 알라닌 또는 세린인 화합물이 제공된다.

본 발명의 화합물은 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주, 예컨대 H1N1 인플루엔자 바이러스 주 A/캘리포니아/07/2009 및/또는 A/뉴칼레도니아/20/1999에 특이적으로 결합할 수 있다.

특정 실시 형태에서, 본 화합물은 H1 아형의 HA를 포함하는 2가지 이상의, 바람직하게는 3가지 이상의, 더 바람직하게는 4가지 이상의 상이한 A형 인플루엔자 바이러스 주에 특이적으로 결합할 수 있다.

특정 실시 형태에서, 본 화합물은 또한 H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주, 예컨대 H1N1 인플루엔자 바이러스 주 A/캘리포니아/07/2009 및/또는 A/뉴칼레도니아/20/1999를 중화시킬 수 있다. 특정 실시 형태에서, 본 화합물은 H1 아형의 HA를 포함하는 2가지 이상의, 바람직하게는 3가지 이상의, 더 바람직하게는 4가지 이상의 상이한 인플루엔자 바이러스 주를 중화시킬 수 있다.

특정 실시 형태에서, 본 화합물은 계통발생군 1로부터의 또 다른 아형, 예컨대 H2, H5 및/또는 H9 아형의 HA를 포함하는 1가지 이상의 인플루엔자 바이러스에 결합할 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "특이적으로 결합하는"이라는 용어는 관심 대상의 단백질, 즉 HA의 에피토프에 결합하지만 생물학적 항원 분자 혼합물을 함유하는 샘플 중의 다른 분자는 실질적으로 인식하지 않고 결합하지 않는 화합물을 나타낸다. 전형적으로, 본 발명의 화합물은 군 1의 A형 인플루엔자 바이러스의 HA에 10 μM 미만, 바람직하게는 1 μM 미만, 더 바람직하게는 0.1 μM 미만, 더욱 더 바람직하게는 10 nM 미만, 더욱 더 바람직하게는 1 nM 미만의 친화도 상수 (Kd 값)로 결합한다.

[발명을 실시하기 위한 구체적인 내용] 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, A형 인플루엔자 바이러스와 관련하여 "인플루엔자 바이러스 아형" 이라는 용어는 헤마글루티닌(H) 및 뉴라미니다아제(N) 바이러스 표면 단백질들의 다양한 조합들을 특징으로 하는 A형 인플루엔자 바이러스 주를 나타낸다. A형 인플루엔자 바이러스 아형들은 예를 들어 "H1 또는 H5 아형의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스" 또는 "H1 인플루엔자 바이러스", "H5 인플루엔자 바이러스"와 같이 이들의 H 수에 의하여, 또는 예를 들어 "인플루엔자 바이러스 아형 H1N1" 또는 "H5N1"과 같이, H 수 및 N 수의 조합에 의하여 지칭될 수 있다. 인플루엔자 바이러스 "아형"이라는 용어는 구체적으로 그러한 아형 내의 모든 개별적인 인플루엔자 바이러스 "주"를 포함하는데, 상기 주는 일반적으로 헤마글루티닌 및/또는 뉴라미니다아제의 돌연변이의 결과로서 상이하며, 상이한 병원성 프로파일(pathogenic profile)을 나타내고, 천연 단리체와, 인공 돌연변이체 또는 재조합체 등을 포함한다. 그러한 주는 또한 바이러스 아형의 다양한 "단리체"로 지칭될 수 있다. 따라서, 본원에서 사용되는 바와 같이, "주" 및 "단리체"라는 용어는 상호교환가능하게 사용될 수 있다. A형 인플루엔자 바이러스 아형은 그의 계통발생군을 참조하여 추가로 분류될 수 있다. 이와 같이 계통발생 분석에 의하면 인플루엔자 헤마글루티닌의 하기 2개의 주요 군으로의 세분이 입증되었다: 특히 계통발생군 1 ("군 1" 인플루엔자 바이러스)에서 H1, H2, H5 및 H9 아형 및 특히 계통발생군 2 ("군 2" 인플루엔자 바이러스)에서 H3, H4, H7 및 H10 아형.

본 발명에 따른 아미노산은 임의의 20가지의 천연 발생 아미노산 또는 이의 변이체, 예를 들어 D-아미노산 (키랄 중심을 갖는 아미노산의 D-거울상 이성질체), 또는 단백질에서 천연적으로는 발견되지 않는 임의의 변이체일 수 있다. 표 4는 표준 아미노산의 약어 및 특성을 나타낸다. 직접적으로 보편적 유전자 코드의 코돈에 의해 코딩되는 20개 아미노산은 표준 또는 정규 아미노산으로 칭해진다. 다른 것은 비표준 또는 비정규로 칭해진다. 다른 시스테인 잔기와 공유적 디술피드 결합을 형성할 수 있는 시스테인, 폴리펩티드 골격에 대하여 환을 형성하는 프롤린, 및 다른 아미노산보다 더 유연한 글리신과 같이, 일부 아미노산은 특별한 특성을 갖는다.

본 발명의 화합물과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같이, "중화시키는" 또는 "중화"라는 용어는 중화가 달성되는 기작과 상관없이, 대상체 내에서 생체 내에서 및/또는 시험관 내에서 인플루엔자 바이러스가 복제되는 것을 저해하는 화합물의 능력을 나타낸다. 일부 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 표적 세포에의 인플루엔자 바이러스의 부착 후 바이러스 막 및 세포 막의 융합의 저해를 통하여 인플루엔자 바이러스를 중화시킨다. 본 발명의 화합물과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같이, "교차-중화시키는" 또는 "교차-중화"라는 용어는 A형 인플루엔자의 상이한 아형들의 인플루엔자 바이러스 주들을 중화시키는 능력을 나타낸다. 중화 활성은 예를 들어 본원에 개시된 바와 같이 측정될 수 있다. 중화 활성을 측정하는 대안적인 분석법은 예를 들어 문헌[WHO Manual on Animal Influenza Diagnosis and Surveillance, Geneva: World Health Organisation, 2005, version 2002.5]에 기술되어 있다. 전형적으로, 본 발명의 화합물은 예를 들어 실시예에 설명된 바와 같이 시험관 내 바이러스 중화 분석법(virus neutralization assay; VNA)에서 결정되는 바와 같이 1 μM 이하, 바람직하게는 100 nM 이하, 더 바람직하게는 10 nM 이하의 중화 활성을 갖는다.

특정 실시 형태에서, 본 발명의 화합물은 하기 서열을 갖는다:

CapN-Tyr-[Glu/Arg]-Asp-Pro-lLeu/Ph5]-Gly-Val-[Alu/Abu]-Gly-Gly-[Met/Nlu]-CapC

여기서, CapN은 [Pro|Gly]-Val-Ser-Leu이며, CapC = Gly-Val-Tyr-D-Pro 및 CapN이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;

CapN은 {Suc}-Val-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-Tyr-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 연결되지 않거나; 또는

CapN은 {Suc}-Cys-Leu이며, CapC는 Gly-Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 CapN 및 CapC에서의 Cys 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결되거나; 또는

본 출원 전체에 걸쳐 사용되는 바와 같이, Suc = 숙시닐이며; Ph5 = (S)-2-아미노-5-페닐펜탄산이며; Abu = L-2-아미노부티르산이며, Nlu = L-노르류신이다. 펩티드 서열에서 [ ] 사이에 표시된 아미노산 잔기는 가능한 대안적인 잔기를 나타내며, 반면에, 펩티드 서열에서 {} 사이에 표시된 아미노산 잔기는 그 아미노산 잔기의 생략 가능성을 갖는 가능한 대안을 나타낸다.

본 발명에 따르면, "헤드-투-테일 연결"은 선형 펩티드의 C 말단과 N 말단 사이의 펩티드 결합의 형성을 의미한다.

Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Cys(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 22).

본 발명의 화합물은 본 기술 분야에 잘 알려진 임의의 절차에 의해, 구체적으로, 자동화된 고상 펩티드 합성기를 이용한 잘 확립된 화학적 합성 절차, 이어서 크로마토그래피 정제에 의해 제조될 수 있다.

추가로 본 발명은 본원에 개시된 1가지 이상의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물을 제공한다. "제약상 허용가능한 부형제"는 적합한 조성물을 제조하기 위하여 본 발명에 따른 화합물과 같은 활성 분자와 조합되는 임의의 불활성 물질일 수 있다. 제약상 허용가능한 부형제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수령체에게 비-독성이며, 제형의 다른 성분과 상용성인 부형제이다. 제약상 허용가능한 부형제는 광범위하게 적용되며, 본 기술 분야에 공지되어 있다. 본 발명에 따른 제약 조성물은 적어도 하나의 다른 치료제, 예방제 및/또는 진단제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 추가의 치료제 및/또는 예방제는 예를 들어 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 및/또는 치료가 또한 가능한 에이전트, 예를 들어 M2 저해제 (예를 들어, 아만티딘, 리만타딘) 및/또는 뉴라미니다아제 저해제 (예를 들어, 자나미비르, 오셀타미비르)일 수 있다. 이들은 본 발명의 화합물과 조합되어 사용될 수 있다. 본원에서 "조합되어"는 별개의 제형으로서 또는 하나의 단일 병용 제형으로서 동시에, 또는 임의의 순서로 별개의 제형으로 순차적으로 투여하는 요법에 따름을 의미한다.

추가의 측면에서, 본 발명은 인플루엔자의 진단, 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 본원에 개시된 화합물을 제공한다. 더욱이 본 발명은 인플루엔자의 진단, 예방 및/또는 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 본원에 개시된 화합물의 용도를 제공한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "인플루엔자" 또는 "인플루엔자 바이러스 감염 또는 질환"이라는 용어는 인플루엔자 바이러스에 의한 세포 또는 대상체의 감염에서 생기는 병리학적 상태(pathological condition)를 나타낸다. 특정한 실시 형태에서, 상기 용어는 인플루엔자 바이러스에 의해 야기되는 호흡기 질환을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "인플루엔자 바이러스 감염"이라는 용어는 세포 또는 대상체에서의 인플루엔자 바이러스의 증식(multiplication) 및/또는 존재에 의한 침습을 의미한다. 인플루엔자 바이러스 감염은 작은 집단에서 일어날 수 있지만, 또한 계절형 유행병으로, 또는 더 나쁘게는 전 세계적 범유행병 (수백만명의 개인이 위험에 처함)으로 전세계에 퍼질 수 있다. 본 발명은 그러한 계절성 유행병과, 잠재적 범유행병을 야기하는 인플루엔자 주들의 감염을 중화시킬 수 있는 화합물을 제공한다. 특정 실시 형태에서, 본 화합물은 A형 인플루엔자 바이러스 감염, 바람직하게는 계통발생군 1 유래의 A형 인플루엔자 바이러스 주, 예컨대 H1 아형의 HA를 포함하는 인플루엔자 바이러스 주에 의해 야기되는 A형 인플루엔자 바이러스 감염의 진단, 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 것이다.

추가로 본 발명은 대상체에서 인플루엔자를 예방 및/또는 치료하는 방법을 제공하며, 이는 본원에 개시된 화합물의 치료적 유효량을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. "치료적 유효량"이라는 용어는 인플루엔자 바이러스 감염에서 생기는 병태의 예방, 개선 및/또는 치료에 효과적인, 본원에 정의된 화합물의 양을 나타낸다. 예방 및/또는 치료는 인플루엔자에 감염되기 쉬운 환자군을 표적으로 할 수 있다. 그러한 환자군은 예를 들어 중장년층 (예를 들어 50세 이상, 60세 이상 및 바람직하게는 65세 이상), 어린이 (예를 들어 5세 이하, 1세 이하), 입원 환자 및 항바이러스 화합물로 치료 받았지만 부적절한 항바이러스 반응을 보인 이미 감염된 환자를 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 화합물은 대상체에게 예를 들어 정맥내 투여, 비강내 투여, 경구 흡입을 통한 투여, 폐 투여, 피하 투여, 피내 투여, 유리체내 투여, 경구 투여, 근육내 투여 등을 할 수 있다. 최적 투여 경로는 활성 분자의 물리화학적 특성, 임상 상황의 긴급성 및 활성 분자의 혈장 중 농도와 요망되는 치료 효과의 관계를 비롯한 몇몇 요인에 의해 영향을 받는다.

추가로 본 발명은 샘플에서 A형 인플루엔자 바이러스를 검출하는 방법을 제공하며, 여기서, 본 방법은 a) 상기 샘플을 진단적 유효량의 본 발명에 따른 화합물과 접촉시키는 단계, 및 b) 화합물이 샘플 중 분자에 특이적으로 결합하는지를 결정하는 단계를 포함한다. 샘플은 (잠재적으로) 감염된 대상체로부터의 혈액, 혈청, 조직 또는 기타 생물학적 물질을 포함하지만 이에 한정되는 것은 아닌 생물학적 샘플일 수 있다. (잠재적으로) 감염된 대상체는 인간 대상체일 수 있지만 인플루엔자 바이러스의 매개체(carrier)로 의심되는 동물이 또한 본 발명의 화합물을 이용하여 인플루엔자 바이러스의 존재에 대하여 테스트될 수 있다.

본 발명을 하기 비제한적 실시예에서 추가로 예시한다.

실시예

실시예 1: 본 발명의 화합물의 합성

하기 일반 화학식을 포함하는 본 발명의 22가지의 화합물의 세트를 설계하였다:

CapN-Tyr-X1-Asp-Pro-X2-Gly-X3-X4-Gly-X5-[Met|Nlu]-CapC

본 발명의 예시적인 화합물이 표 1에 열거되어 있다:

[표 1]

모든 펩티드를 하기에 설명된 바와 같이 수동 고상 Fmoc 펩티드 화학으로 제조하였다. 아미노산 측쇄 작용체를 N-Boc (W), O-t-Bu (D,E,S,Y), C-t-Bu (C), 및 N-Pbf (R) 기로 보호하였다 (Boc: tert. 부톡시카르보닐, t-Bu: tert. 부틸, Fmoc: 9-플루오레닐메톡시카르보닐, Pbf: 2,2,4,6,7-펜타메틸디히드로벤조푸란-5-술포닐).

모든 화학물질 (천연 및 비천연 아미노산, 수지, 시약 및 용매)을 상업적 공급처로부터 획득하였다. 펩티드의 순도 및 아이덴티티(identity)를 HPLC 및 질량 분광법으로 평가하였다.

선형 펩티드

선형 펩티드를 링크(Rink) 아미드 MBHA 수지 (0.53 mmol/g)에서의 수동 고상 Fmoc 화학에 의해 제조하였다. 수지를 DMF (디메틸포름아미드)에서 1시간 동안 팽창시키고, DMF 중 20% 피페리딘으로 처리하여 (2 x 15분) Fmoc 제거를 초래하였다. 2 당량의 DIPEA (N,N-디이소프로필에틸아민)의 존재 하에 0.95 당량의 HBTU ((2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,1,3,3-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트)를 이용하여 활성화한 3배 과량의 Fmoc-아미노산을 사용하여 모든 아실화 반응을 실시하였으며, 1.5 내지 2시간의 커플링 시간을 이용하였다. DIPEA (10 당량)의 존재 하에 숙신산 무수물 (5 당량)을 이용하여 펩티드-수지를 처리함으로써 N-말단 숙시닐화를 수행하였다(1시간).

펩티드를 수지로부터 절단하고, 트리플루오로아세트산/티오아니솔/1,2-에탄디티올/물 (90:5:2.5:2.5)을 사용하여 3시간 동안 탈보호시켰다. 수지를 여과로 제거하고, 그 후 여과액을 빙냉 tert-부틸 메틸 에테르에 부어서 조 펩티드를 침전시켰다. 최종 정제를 RP-HPLC (역상 고성능 액체 크로마토그래피)로 행하였다.

디술피드 환화 펩티드

디술피드 환화를 요오드 산화로 초래하였다. 상기에 설명한 바와 같이 제조한 조 선형 펩티드 전구체를 물 / 아세토니트릴 (7:3)에 용해시키고, 반응 혼합물의 영구적인 변색이 관찰될 때까지 요오드 용액 (메탄올 중 0.1 M)을 첨가하였다. 후속적인 동결건조에 의해 조 환화 펩티드를 수득하고, 이를 RP-HPLC로 정제하였다.

헤드-투-테일 락탐 환화 펩티드

상기에 설명한 프로토콜에 따라 글리신 사전로딩 2-클로로트리틸 클로라이드 수지 (0.5 mmol/g)에서의 수동 고상 Fmoc 화학에 의해 선형 펩티드를 제조하였다. 디클로로메탄/헥사플루오로이소프로판올/트리플루오로에탄올/트리이소프로필실란 (6.5:2:1:0.5)의 혼합물에서 상기 펩티드-수지를 1시간 동안 선회시킴으로써 펩티드를 수지로부터 절단하였다. 수지를 여과 제거하고, 냉 tert-부틸 메틸 에테르를 첨가하여 펩티드를 여과액으로부터 침전시켰다. 펩티드를 진공 하에 건조시키고, 후속 락탐 환화 단계에서 그대로 사용하였다.

상기 선형 측쇄 보호 펩티드를 DMF (0.001 M)에 용해시킴으로써 (여기에 DMF 중 PyBOP (벤조트리아졸-1-일-옥시트리피롤리디노포스포늄 헥사플루오로포스페이트,2 당량, 0.004 M) 및 N-메틸모르폴린 (6 당량, 0.012 M)의 용액을 적가함) 고 희석도에서 락탐 환화를 수행하였다. 완전한 전환이 관찰될 때까지 상기 반응 혼합물을 실온에서 교반시켰다. 감압 하에 용매를 제거하여 환화 펩티드를 수득하고, 이를 트리플루오로아세트산/티오아니솔/1,2-에탄디티올/물 (90:5:2.5:2.5)을 사용한 혼합물로 실온에서 3시간 동안 처리함으로써 완전히 탈보호시켰다. 반응 혼합물을 빙냉 tert-부틸 메틸 에테르에 부어서 조 펩티드를 침전시켰다. 최종 정제를 RP-HPLC로 행하였다.

유량을 0.8 mL/분으로 하고 컬럼 온도를 30 ℃로 하여 조르박스 이클립스(ZORBAX Eclipse) XDB-C18 컬럼(5 μm, 4.6 x 150 mm)을 이용하여 애질런트(Agilent) 1200 HPLC 시스템에서 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)를 수행하였다. 10% B에서 시작하여 50% B까지인 2% B/분의 선형 AB 구배, 이어서 2.6% B/분에서 90% B까지의 선형 AB 구배를 적용하였다 (용매 A: 물 중 0.1% TFA, 용매 B: ACN 중 0.05% TFA). 다이오드-어레이(DAD) 및 질량 선택 검출기(MSD)를 사용하여 검출을 행하였다. 펩티드 질량을 실험적 질량:전하(m/z) 비로부터 계산하였다.

실시예 2: 화합물의 인플루엔자 HA에의 결합 및 화합물과 기타 HA 결합제의 경쟁

HA 상의 공지된 에피토프를 갖는 다른 잘 특성화된 HA 결합 단백질 (예를 들어 CR9114, CR6261 및 HB80.4)과의 경쟁에 대하여 본 발명의 화합물을 테스트하기 위하여 결합 경쟁 연구를 설계하였다. 에피토프는 HA의 스템 (바이러스 막 근위부의 HA)에 위치하거나, 또는 대조 목적의 경우, HA의 헤드 (바이러스 막 원위부의 HA)에 위치하였다. 경쟁이 관찰될 경우, 둘 다의 분자가 HA의 표면의 유사 에피토프 또는 적어도 중첩된 에피토프에 결합하는 것으로 추정되었다. HA 헤드- 및 스템-결합제와의 경쟁을 비특이적 결합으로 해석하였다.

여기에 알파LISA(AlphaLISA) 경쟁 분석 (퍼킨 엘머(Perkin Elmer))을 확립하였는데, 이는 바이오티닐화 전장 및 삼량체형 HA 단백질 (프로테인 사이언시즈(Protein Sciences), 10 μL, 0.5 nM의 최종 농도 (50 μL에서))이 HA-특이적 결합제와 결합된 것에 의존하였다. HA와 상기 결합제 사이의 상호작용을 하기 2가지 비드와 함께 실온(RT)에서 1시간 인큐베이션한 후 탐지하였다: 스트렙타비딘 공여 비드 인식 HA (10 μL의 10 μg/mL) 및 사용한 IgG를 인식하는 항 Fc 비드 (10 μg/mL).실온에서 추가 1시간의 인큐베이션 후, 여기된 공여 비드 (680 nm) 및 수용 비드가 매우 근접한 상태로 있는 경우, 에너지 전달 (일중항 산소)은 수용 비드의 발광 신호로서 측정될 수 있다 (퍼킨 엘머 엔비전(EnVision) 플레이트 판독기).이러한 균질 분석 포맷에서의 신호 강도는 두 결합 파트너 사이의 결합 강도 (친화도/친화력)에 정비례한다. 경쟁자 (화합물)는, 그의 친화도 및 농도에 따라 (일반적으로 100 nM 내지 0.5 pM의 범위에서 테스트함) 알파LISA 신호를 방해하여 S자형의 저해제 곡선을 초래할 수 있으며, 상기 곡선은 SPSS에서 표준 4개 파라미터 로지스틱 비선형 회귀 모델(standard four parameter logistic nonlinear regression model)을 이용하여 피팅된다(fitted). 계산된 pIC50 값을 표 2에 나타낸다.

[표 2]

본 발명의 화합물은 잘 알려진 결합 분자와의 경쟁을 통하여 보이는 바와 같이 HA에 결합한다. 알파lisa 분석에서, 최상의 화합물 - CP141085 - 은 13 nM의 IC50에 도달하였다. 가장 적은 효력의 펩티드들은 IC50을 10 μM의 범위 내로 하여 경쟁하였다. 활성은 2가지 H1 주, H1/Cal 및 H1/Nca에서 입증되었는데, 이는 2가지의 가장 풍부한 H1 스템 에피토프를 대표하며, 2011년 현재 모든 스템 에피토프 서열 변이의 60%를 커버하였다(NCBI 플루(flu) 데이터베이스에서 입수가능한 서열을 기반으로 함). 결론적으로, 본 발명의 화합물은 10 μM로부터 10 nM 근처까지의 범위에서 잘 알려진 HA 결합 분자와의 경쟁을 통하여 보이는 바와 같이 HA에 결합한다.

실시예 3: 화합물의 인플루엔자 바이러스 중화 활성 및 세포 독성

화합물을 포유동물 세포의 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 능력에 대하여 바이러스 중화 분석법 (VNA)에서 분석하였다. 이 목적을 위하여, 인간 폐 상피 유래된 Calu-3 세포 (ATCC, 카탈로그 번호 HTB-55)를 96웰 플레이트에 접종하고 (4E+04개의 세포/웰), 37℃ 및 10% CO2에서 완전 DMEM (1x MEM 비-필수 아미노산, 2 mM L-글루타민, 및 10% FBSHI (기원: 오스트레일리아; 깁코(Gibco))를 함유함)에서 적어도 7일 동안 인큐베이션하였다. 약 90% 융합도의 그리고 밀착 연접(tight junction)이 확립된 분극화된(polarized) Calu-3 세포는 VNA에 대하여 준비가 된 것이다. 분석일에, 불완전 DMEM (2 mM L-글루타민, 1 x pen/strep을 함유함)에서 2배 희석시킨 화합물 스톡 (PBS 0.1% BSA, 0.1% 트윈(Tween) 5% DMSO에 용해시킴, 500 nM의 시작 농도)으로부터 샘플 희석물 플레이트를 준비하였다. 샘플 희석물 플레이트를 원심분리하여 (1000 g, 15분) 잠재적인 응집물을 제거하였다. 그 후, 불완전 DMEM 중 5 TCID50/50 μL 인플루엔자 바이러스 (Calu-3 세포에서 사전 적정함)를 샘플 희석물 플레이트에 첨가하고, 37℃ 및 10% CO2에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 배지를 세포로부터 제거하고, 3% FBS가 보충된 50 μL 불완전 DMEM으로 교체하였다. 그 후 100 μL의 바이러스/화합물 믹스를 세포에 첨가하여 1% FBS의 최종 농도를 갖는 150 μL의 전체 분석 부피를 생성하였다. 37℃ 및 10% CO2에서 4일 동안 인큐베이션한 후, 세포를 PBS로 세척하고, 200 μL/웰의 80% 아세톤으로 실온(RT)에서 15분 동안 고정하였다. 인플루엔자 감염 수준을 인플루엔자 핵단백질(nucleoprotein; NP) ELISA로 결정하였다. 일차 항체 항-Flu-A-NP (애비오텍(Abbiotec), 클론(Clone) 5D8)를 PBS 중 1% BSA에서 1:1000으로 희석시켜 사용하고, 실온에서 300 rpm에서 진탕시키면서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 세척 완충제 (PBS, 0.05% 트윈)로 3회 세척한 후, 이차 항체 (항-마우스 HRP, 1:2000)를 첨가하고, 실온에서 300 rpm에서 진탕시키면서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세포를 3회 세척한 후, 50　μL/웰의 POD 화학발광 기질을 첨가하고, 2 내지 5분 동안 인큐베이션한 후 바이오텍 시너지 네오 플레이트(Biotek Synergy Neo Plate) 판독기에서 발광을 판독하였다. 화합물의 pIC50을 SPSS 소프트웨어를 이용하여 계산하였다. 결과가 표 3에 제시되어 있다:

[표 3]

결론적으로, 본 발명의 일부 화합물은 A/뉴칼레도니아에 대하여 마이크로몰의 중화 활성에 도달하며, 이는 증가된 단백질 분해 안정성을 나타내는 것이다.

[표 4]

SEQUENCE LISTING <110> Janssen Vaccines & Prevention B.V. <120> Influenza virus neutralizing compounds <130> 0282 WO 00 ORD <140> PCT/EP2017/077424 <141> 2017-10-27 <150> EP16195971.3 <151> 2016-10-27 <160> 22 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 1 <400> 1 Cys Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Cys 1 5 10 <210> 2 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 2 <400> 2 Cys Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Glu Met Cys 1 5 10 <210> 3 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 3 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..(6) <223> x=(S)-2-Amino-5-phenylpentanoic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..(9) <223> x=L-2-Aminobutyric acid <400> 3 Cys Tyr Arg Asp Pro Xaa Gly Val Xaa Gly Glu Met Cys 1 5 10 <210> 4 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 4 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..(12) <223> X=L-Norleucine <400> 4 Cys Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Glu Xaa Cys 1 5 10 <210> 5 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 5 <400> 5 Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Gly 1 5 10 <210> 6 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 6 <400> 6 Cys Leu Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Cys 1 5 10 15 <210> 7 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 7 <400> 7 Cys Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Cys 1 5 10 15 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 8 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X= D-Proline <400> 8 Pro Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Xaa 1 5 10 15 <210> 9 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 9 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..(7) <223> X=(S)-2-Amino-5-phenylpentanoic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..(10) <223> X=L-2-Aminobutyric acid <400> 9 Gly Leu Tyr Glu Asp Pro Xaa Gly Val Xaa Gly Gly Met Gly Pro 1 5 10 15 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO:10 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..(15) <223> X=D-Proline <400> 10 Gly Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Xaa 1 5 10 15 <210> 11 <211> 15 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 11 <400> 11 Cys Leu Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Glu Met Gly Cys 1 5 10 15 <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 12 <400> 12 Val Ser Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Val 1 5 10 15 Tyr <210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 13 <400> 13 Val Ser Leu Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Val 1 5 10 15 Tyr <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 14 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X=D-Proline <400> 14 Xaa Ser Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Val 1 5 10 15 Pro <210> 15 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 15 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(14) <223> X=L-Norleucine <400> 15 Val Ser Leu Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Xaa Gly Val 1 5 10 15 Tyr <210> 16 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 16 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> X=D-Proline <400> 16 Xaa Ser Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly Val 1 5 10 15 Gly <210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 17 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (8)..(8) <223> X=(S)-2-Amino-5-phenylpentanoic acid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..(11) <223> X=L-2-Aminobutyric acid <400> 17 Val Ser Leu Tyr Arg Asp Pro Xaa Gly Val Xaa Gly Glu Met Gly Val 1 5 10 15 Tyr <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 18 <400> 18 Val Ser Leu Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Glu Met Gly Val 1 5 10 15 Tyr <210> 19 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 19 <220> <221> MISC_FEATURE <223> X=D-Proline <220> <221> misc_feature <222> (19)..(19) <223> Xaa can be any naturally occurring amino acid <400> 19 Pro Val Ser Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly 1 5 10 15 Val Tyr Xaa <210> 20 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 20 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..(19) <223> X=D-Proline <400> 20 Gly Val Ser Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly 1 5 10 15 Val Tyr Xaa <210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 21 <400> 21 Leu Tyr Glu Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Gly 1 5 10 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> SEQ ID NO: 22 <400> 22 Cys Tyr Arg Asp Pro Leu Gly Val Ala Gly Gly Met Cys 1 5 10

Claims

하기 서열을 포함하는 화합물:
CapN-Tyr-X1-Asp-Pro-X2-Gly-X3-X4-Gly-X5-[Met/Nlu]-CapC
(여기서, CapN 및 CapC 각각은 0 ~ 10개의 잔기를 포함하는 아미노산 서열이며;
X1은 임의의 하전, 친수성 또는 극성 L 또는 D-아미노산, 및 임의의 비정규 친수성, 하전 또는 극성 L 또는 D 아미노산이며;
X2는 소수성, 지방족 또는 방향족, 정규 또는 비정규 아미노산이되, 단, X2는 프롤린이 아니며;
X3은 소형 또는 중형 지방족 또는 소수성 L-아미노산이며;
X4는 소형 지방족 또는 소수성 L-아미노산이며;
X5는 임의의 극성 또는 하전 L- 또는 D-아미노산이며;
상기 화합물은 H1 아형의 헤마글루티닌(HA)을 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주의 HA에의 특이적 결합이 가능함).
제1항에 있어서, H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주의 중화도 가능한 화합물.
제1항 또는 제2항에 있어서, H1 아형의 HA를 포함하는 A형 인플루엔자 바이러스 주는 H1N1 인플루엔자 바이러스 주 A/캘리포니아(California)/07/2009 또는 A/뉴칼레도니아(New Caledonia)/20/1999인 화합물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
X1은 아르기닌, 라이신, 글루타메이트, 아스파르트산, 글루타민, 아스파라긴, 오르니틴, 시트룰린이며;
X2는 알라닌, 발린, 메티오닌, 류신, 이소류신, 페닐알라닌이며;
X3은 발린, 이소류신, 알로-이소류신, L-2-아미노부티르산 또는 메티오닌, 또는 이들의 유사 유도체이며;
X4는 알라닌, L-2-아미노부티르산, 트리플루오로알라닌, 2-아미노-3-부텐산, 2-아미노-3-부틴산 또는 이들의 유도체이며;
X5는 글리신, 알라닌 또는 세린인 화합물.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
CapN은 [Pro|Gly]-Val-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-Tyr-D-Pro 및 CapN이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일(head-to-tail) 연결에 의해 연결되거나;
CapN은 {Suc}-Val-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-Tyr-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 연결되지 않거나;
CapN은 D-Pro-Ser-Leu이며, CapC는 Gly-Val-[Pro/Gly]이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;
CapN은 [Gly|Pro]-Leu이며, CapC는 Gly-Dsp-Pro이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;
CapN은 {Suc}-Cys-Leu이며, CapC는 Gly-Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 CapN 및 CapC에서의 Cys 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결되거나;
CapN은 Leu이며, CapC는 Gly-Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;
CapN은 Leu이며, CapC는 Gly이며, CapN 및 CapC는 헤드-투-테일 연결에 의해 연결되거나;
CapN은 {Suc}-Cys이며, CapC는 Cys-{NH2}이며, CapN 및 CapC는 CapN 및 CapC에서의 시스테인 잔기들 사이의 시스테인 가교를 통하여 연결된 화합물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 서열을 포함하는 화합물:
CapN-Tyr-[Glu/Arg]-Asp-Pro-lLeu/Ph5]-Gly-Val-[Alu/Abu]-Gly-Gly-[Met/Nlu]-CapC (여기서, CapN 및 CapC는 제5항에 정의된 바와 같음).
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
Suc-Cys-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 1);
Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 2);
Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Glu-Met-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 3);
Suc-Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Nlu-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 4);
Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 5);
Suc-Cys-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 6);
Suc-Cys-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 7);
Pro-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 8);
Gly-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 9);
Gly-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-D-Pro (헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 10);
Suc-Cys-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Gly-Cys-NH2(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 11);
Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 12);
Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 13);
D-Pro-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 14);
Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Nlu-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 15);
D-Pro-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 16);
Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Ph5-Gly-Val-Abu-Gly-Glu-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 17);
Suc-Val-Ser-Leu-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Glu-Met-Gly-Val-Tyr-NH2 (서열 번호 18);
Pro-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 19);
Gly-Val-Ser-Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly-Val-Tyr-D-Pro(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 20);
Leu-Tyr-Glu-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Gly(헤드-투-테일 연결을 통하여 환화됨) (서열 번호 21); 및
Cys-Tyr-Arg-Asp-Pro-Leu-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-Met-Cys(시스테인 가교를 통하여 환화됨) (서열 번호 22).
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 화합물 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
인플루엔자의 진단, 예방 및/또는 치료에서 사용하기 위한 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물.
인플루엔자의 진단, 예방 및/또는 치료를 위한 의약의 제조에 있어서의 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.