KR20190063422A

KR20190063422A - 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 피부과용 조성물

Info

Publication number: KR20190063422A
Application number: KR1020180148265A
Authority: KR
Inventors: 한스-외르크 뮐러; 토마스 미카엘 슈미츠; 쿠르트 침머만; 폴커 러쉬
Original assignee: 심바이오그루페 게엠베하 운트 코. 카게
Priority date: 2017-11-29
Filing date: 2018-11-27
Publication date: 2019-06-07
Also published as: US10933103B2; DK3492089T3; ES2861306T3; EP3492089A1; RU2018142254A3; EP3492089B1; US20190160116A1; JP2019099560A; CN109846907A; CA3024590A1; PL3492089T3; RU2018142254A

Abstract

피부과 병태 및 질환의 치료, 지지 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)와 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)의 혼합물 및 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학 조성물을 개시한다.

Description

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 피부과용 조성물{DERMATOLOGIC COMPOSITION CONTAINING ESCHERICHIA COLI AND ENTEROCOCCUS FAECALIS}

피부의 가장 중요한 기능은 그 장벽 기능, 즉, 생물체를 건조와 외부 영향으로부터 보호하는 것이다. 피부의 외층(표피)이 본래 이 기능에서 역할을 한다. 피부 외층은 외부 환경에 대한 경계면이며 항상 부드럽고 유연하게 유지되어야 한다. 피부 수분보유도가 여기에서 매우 중요한 역할을 한다. 피부의 수분은, 표피에서, 피부의 신생 과정 중에 지속적으로 보충되는 지질 및 단백질 구조로 이루어지는 계에서 연화제로서 작용한다.

건성 피부로 만들어 피부가 이 장벽 기능을 제공하지 못하도록 하는 다양한 피부 질환이 있다.

이 문제를 해결하기 위한 약학적 및 미용적 접근법은 수분을 제공하는 조성물에 의해 손상된 피부를 재수화시키는 물질을 사용하는 것 및/또는 보호층에 의해 수분 손실을 방지하는 것을 기반으로 한다.

따라서, 본 발명의 목적은 피부과 병태 및 질환의 치료, 지지 치료 또는 예방에 사용되는 신규한 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적은 청구범위의 대상에 의해 달성된다.

따라서, 피부과 병태 및 질환의 치료, 지지 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)와 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)의 혼합물 및 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학 조성물을 개시한다.

상기 조성물은 국소 적용 가능한 형태일 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 용해물로서 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물은 전체 조성물의 1∼95 wt%, 20∼80 wt%, 40∼60 wt% 또는 45∼55 wt%의 양으로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 혼합물 중에 0.5:1.5∼1.5:0.5, 0.75:1.25∼1.25:0.75, 또는 1.15:0.85∼0.85:1.15 또는 1.05:0.95∼0.95:1.05의 비로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 각각 전체 질량 100 g당 0.5×10⁷∼10×10⁷, 1.0×10⁷∼7×10⁷, 또는 1.5×10⁷∼4.5×10⁷의 세포수로 존재할 수 있다.

피부과 질환 또는 피부과 병태는 건성 피부, 경피 수분 손실, 염증성 피부 질환, 신경피부염 또는 이들의 조합으로부터 선택될 수 있다.

상기 조성물은 연고, 액체, 에멀션 또는 용액의 형태일 수 있다.

유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물을 포함하는 미용 조성물이 추가로 개시된다.

상기 미용 조성물은 국소 적용 가능한 형태로 존재할 수 있다.

엔테로코커스 패칼리스는 미용 조성물에 용해물의 형태로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물은 미용 조성물 중에 전체 조성물의 1∼95 wt%, 20∼80 wt%, 40∼60 wt% 또는 45∼55 wt%의 양으로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 미용 조성물 중에 0.5:1.5∼1.5:0.5, 0.75:1.25∼1.25:0.75, 또는 1.15:0.85∼0.85:1.15 또는 1.05:0.95∼0.95:1.05의 비로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 미용 조성물 중에 전체 질량 100 g당 0.5×10⁷∼10×10⁷, 1.0×10⁷∼7×10⁷ 또는 1.5×10⁷∼4.5×10⁷의 각각의 세포수로 존재할 수 있다.

미용적 적용의 적응증은 건성 피부 또는 경피 수분 손실로부터 선택될 수 있다.

미용 조성물은 연고, 액체, 에멀션 또는 용액의 형태일 수 있다.

약학 조성물 또는 미용 조성물의 제조 방법으로서, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스와 약학적으로 또는 미용적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 혼합하여 상기에 언급된 피부과적으로 유효한 약학 또는 미용 조성물을 얻는 것인 제조 방법을 추가로 개시한다.

도 1: 10 ng/mL의 TNFα(TNFα가 없는 대조군)로 처리하고 테스트 물질(PSF) 또는 하이드로코티손(HC)과 72시간 동안(달리 나타내지 않는다면) 인큐베이션한 후의 HaCaT 세포에서의 IL-8 분비의 측정, MV±SEM, n=3(각각 3중).
도 2: 10 ng/mL의 TNFα(TNFα가 없는 대조군)로 처리하고 테스트 물질(PSF) 또는 하이드로코티손(HC)과 72시간 동안(달리 나타내지 않는다면) 인큐베이션한 후의 HaCaT 세포에서의, TNFα를 갖는 대조군(72시간)과 비교한 IL-8 분비, MV±SEM, n=3(각각 3중).
도 3: 10 ng/mL의 TNFα(TNFα가 없는 대조군)로 처리하고 테스트 물질(PSF) 또는 하이드로코티손(HC)과 72시간 동안(달리 나타내지 않는다면) 인큐베이션한 후의 HaCaT 세포에서의 IL-6 분비의 측정, MV±SEM, n=3(각각 3중).
도 4: 10 ng/mL의 TNFα(TNFα가 없는 대조군)로 처리하고 PSF 또는 하이드로코티손(HC)과 72시간 동안(달리 나타내지 않는다면) 인큐베이션한 후의 HaCaT 세포에서의, TNFα를 갖는 대조군(72시간)과 비교한 IL-6 분비, MV±SEM, n=3(각각 3중).

불활성화된 박테리아의 혼합물은, 박테리아가 생존성이 없는, 즉, 더 이상 대사를 행할 수 없고/없거나 증식이 불가능한 박테리아의 혼합물을 의미한다. 불활성화된 박테리아는 방사선 또는 자외선 조사, 가열, 동결, 계면활성제 또는 염과 같은 박테리아 외피를 뚫을 수 있는 물질에 의한 처리, 또는 용해, 예를 들어, 세포막을 파괴하는 압력 강하(예를 들어, 프렌치 프레스의 사용)에의 노출에 의해 얻을 수 있다.

원하는 세포수를 갖는 박테리아를 포함하는 액체 배양물을 10∼20분, 12∼18분, 13∼17분 또는 14∼16분 동안, 예를 들어 50∼150 rpm, 70∼130 rpm 또는 80∼120 rpm으로 교반함으로써 균질화하는 용해에 의해 제조될 수 있다. 그 후, 균질화된 액체 배양물을 통상적인 오토클레이브 처리에 적용하는데, 예를 들어 적어도 20분(예를 들어, 20∼40분, 20∼30분 또는 20∼25분) 동안 적어도 121℃(예를 들어, 121℃∼130℃, 121℃∼125℃ 또는 121℃∼123℃)에서 가열, 즉, 멸균한다. 그 후, 얻어진 용해물을 냉각시킨다(예를 들어, 18∼20℃로).

유효량은 원하는 또는 치료 효과를 얻는 데 충분한 성분의 양인 것으로 간주된다.

수치 앞에 용어 "약"이 오는 경우, 이것은 해당 수치의 ±20%, 바람직하게는 ±10%, 또는 특히 바람직하게는 ±5%의 값의 범위를 의미한다.

섹션 표제는 개시의 이해를 단순화하기 위한 것으로, 한 개시를 다른 것과 분리하지 않는다. 특히, 섹션 표제 뒤의 각각의 개시는 섹션 표제 뒤의 하나 이상의 다른 개시와 조합될 수 있다.

조성물

유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물을 포함하는 조성물을 개시한다. 이 조성물은 약학 또는 미용 조성물일 수 있다.

바람직하게는, 에스케리키아 콜라이는 이 콜라이(E. coli) DSM 17252이다.

바람직하게는, 엔테로코커스 패칼리스는 엔테로코커스 패칼리스 DSM 16440이다.

바람직하게는, 상기 혼합물은 이 콜라이 DSM 17252와 엔테로코커스 패칼리스 DSM 16440의 혼합물이다.

상기 조성물은 용해물의 형태일 수 있다. 바람직하게는, 상기 용해물은 박테리아의 모든 가용성 및 불용성 성분들을 포함하며, 따라서 수성 현탁액의 형태이다. 상기 용해물은, 예를 들어 상기한 바와 같이 얻을 수 있다.

에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물은 전체 조성물의 1∼95 wt%, 10∼90 wt%, 20∼80 wt%, 30∼70 wt%, 40∼60 wt%, 45∼55 wt%, 50∼54 wt% 또는 52∼53 wt%의 양으로 존재할 수 있다.

에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스는 전체 질량 100 g당 0.5×10⁷∼10×10⁷, 1.0×10⁷∼7×10⁷ 또는 1.5×10⁷∼4.5×10⁷의 각각의 세포수로 존재할 수 있다. 용어 세포수는, 무세포 용해물의 경우, 용해물을 제조하는 데 사용된 세포의 수를 의미한다.

약학 또는 미용 조성물은 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함한다.

따라서, 조성물은 경우에 따라 하기 성분들을 포함할 수 있다("국제화장품원료사전(International Nomenclature of Cosmetic Ingredients; INCI)"에 따른 명칭, 여기서, 통상적으로 사용된다면, 관행적인 독일어 제품명도 표기됨):

시몬드시아 치넨시스(Simmondsia chinensis) 종자 오일, 특히 0.5∼10 wt% 또는 약 3.00 wt%의 시몬드시아 치넨시스 종자 오일(천연 호호바 왁스),

카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 특히 1∼20 wt% 또는 약 16.80 wt%의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드(중쇄 트리글리세라이드),

세라 알바, 특히 0.1∼3.0 wt% 또는 약 0.50 wt%의 세라 알바(밀랍),

경화 피마자유, 특히 0.1∼3.0 wt% 또는 약 0.80 wt%의 경화 피마자유,

세틸 PEG/PPG-10/1 디메티콘, 특히 1.0∼4.0 wt% 또는 약 2.0 wt%의 세틸 PEG/PPG-10/1 디메티콘(Abil EM 180),

세틸 팔미테이트, 특히 0.1∼3.0 wt% 또는 약 0.3 wt%의 세틸 팔미테이트,

글리세릴 디베헤네이트, 트리베헤닌, 글리세릴 베헤네이트, 스쿠알란, 세라마이드 3, 세라마이드 3B, 세라마이드 6, 콜레스테롤의 혼합물, 특히 0.1∼10.0 wt% 또는 약 0.5 wt%의, 글리세릴 디베헤네이트, 트리베헤닌, 글리세릴 베헤네이트, 스쿠알란, 세라마이드 3, 세라마이드 3B, 세라마이드 6, 콜레스테롤, 파이토스핑고신의 혼합물(여기서, 이 혼합물은 약 56.0∼75.0 wt%의 스쿠알란, 약 5.0∼15.0 wt%의, 약 1:1:1의 중량비의 글리세릴 디베헤네이트, 트리베헤닌, 및 글리세릴 베헤네이트의 혼합물, 약 1.0∼5.0 wt%의, 약 1:1의 중량비의 세라마이드 3 및 세라마이드 3B의 혼합물, 약 0.1∼1.0 wt%의 세라마이드 6 및 약 5.0∼15.0 wt%의, 약 1:1의 중량비의 콜레스테롤과 파이토스핑고신의 혼합물을 포함함, 여기서 함량의 총 합계는 100 wt%임),

오에노테라 비에니스(Oenothera biennis) 오일, 특히 0.5∼10 wt% 또는 약 2.00 wt%의 오에노테라 비에니스 오일(산화 방지에 충분한 양의 선택적인 토코페롤, 비타민 E로 안정화된 이브닝 프림로즈 오일을 포함함),

스쿠알란, 특히 1.0∼20 wt% 또는 약 6.0 wt%의 스쿠알란(이 스쿠알란 함량은 조성물 중에 포함된 다른 스쿠알란 함량에 더하여 함유됨),

프루누스 아미그달루스 둘시스(Prunus amygdalus dulcis) 오일, 특히 0.5∼20 wt% 또는 약 2.50 wt%의 프루누스 아미그달루스 둘시스 오일(아몬드 오일),

페르세아 그라티시마 오일(Persea gratissima) 오일, 특히 0.5∼10 wt% 또는 약 2.00 wt%의 페르세아 그라티시마 오일(정제된 아보카도 오일),

토코페롤 아세테이트, 특히 0.1∼5 wt% 또는 약 0.5 wt%의 토코페롤 아세테이트(비타민 E 아세테이트),

부티로스퍼뭄 파키이(Butyrospermum parkii) 버터, 특히 0.1∼5 wt% 또는 약 0.5 wt%의 부티로스퍼뭄 파키이 버터(시어 버터),

펜틸렌 글리콜, 특히 1.0∼5.0 wt% 또는 약 4.0 wt%의 펜틸렌 글리콜,

글리세롤, 특히 1.0∼5.0 wt% 또는 약 4.0 wt%의 글리세롤(글리세롤 99%),

하이알루론산나트륨, 특히 0.01∼0.5 wt% 또는 약 0.10 wt%의 하이알루론산나트륨(Na 하이알루로네이트),

판테놀, 특히 0.1∼5.0 wt% 또는 약 1.0 wt%의 판테놀(75% 덱스판테놀),

베타인, 0.1∼5.0 wt% 또는 약 0.3 wt%의 베타인,

황산마그네슘, 특히 0.1∼3.0 wt% 또는 약 0.8 wt%의 황산마그네슘(황산마그네슘 7수화물),

락트산나트륨, 특히 0.05∼1.00 wt% 또는 약 0.10 wt%의 50% 락트산나트륨(Na 락테이트 50%),

글루콘산나트륨, 특히 0.05∼3.00 wt% 또는 약 0.10 wt%의 글루콘산나트륨, 및/또는

락트산, 특히 0.01∼1.00 wt%의 락트산(90%)(락트산 90%).

바람직하게는, 상기 조성물은 상기에 언급한 부형제 전부를 포함한다. 상기에 언급한 부형제 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 및 22종의 모든 조합이 또한 개시된다.

바람직하게는, 상기 조성물은 불포화 지방산을 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.1, 0.001 또는 0.0001 wt% 미만, 또는 유리 및/또는 에스테르 형태의 불포화 지방산을 0 wt% 포함한다. 불포화 지방산은 하나 이상의 이중 결합을 포함하는 지방산으로서, 본 개시에 있어서 세라마이드는 불포화 지방산 중에 포함되지 않으므로 본 조성물에 포함될 수 있다.

상기 조성물의 pH는 4∼6 또는 4.5∼5이다. pH는 바람직하게는 약학적으로 허용되는 산, 바람직하게는 유기 산을 첨가함으로써 조절한다. 특히 바람직하게는, pH를 조절하는 데 사용되는 산은 락트산이다.

피부과 병태 및 질환

상기 약학 조성물은 피부과 병태 및 질환의 치료, 지지 치료 또는 예방에 사용된다. 바람직하게는, 피부과 질환 및 피부과 병태는 건성 피부, 경피 수분 손실, 염증성 피부 질환, 및 신경피부염으로부터 선택된다.

특히, 약학 또는 미용 조성물은 인터루킨 8의 (경우에 따라 상승된) 방출을 특징으로 하는 피부 질환 또는 피부 병태의 치료에 적합하다. 인터루킨 8의 상승된 방출은 건강한 피부를 갖는 대상체에서의 인터루킨 8의 분비보다 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 100% 높은 인터루킨 8의 분비이다. 본 발명에 따른 조성물은 인터루킨 8의 방출을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50% 또는 100% 감소시킬 수 있다. 인터루킨 8은 염증 조직에서 방출되므로, 상기에 언급된 피부과 질환 및 피부과 병태에서 방출된다. 따라서, 인터루킨 8의 방출의 감소는 손상 조직에서의 염증 감소의 특징이다.

"건성 피부"의 피부과 병태 및 피부과 질환은 지나치게 적은 지방 및/또는 수분 함량을 특징으로 할 수 있고, 칙칙하고 창백한 겉모습, 탄력성 감소, 당기는 느낌 및 가려움을 나타낸다.

수분은 2 가지 경로로, 즉 발한과 수동 확산을 통해 피부를 통해 방출될 수 있기 때문에, 경피 수분 손실(TEWL)은 발한을 통한 수분 손실을 제외한 피부로부터의 수분을 증발을 의미한다. 피부를 통한 수동 확산 과정을 경피 수분 손실이라 칭한다. TEWL은 각질층의 무결성에 크게 의존한다. 따라서, TEWL은 피부의 상태를 평가하는 데 이용될 수 있는 값이다. 본 발명에 따른 조성물은 TEWL을 저감하는 데, 특히 TEWL을 적어도 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% 또는 50% 저감하는 데 적합하다.

TEWL을 측정하기 위해, 이 목적에 공지된 임의의 방법, 예를 들어, 비통기형 챔버, 통기형 챔버, 증기압 구배(예를 들어, 테와미터(Tewameter)의 사용) 또는 코네오미터(Corneometer)를 사용할 수 있다.

코네오미터를 사용한 측정의 원리에서, 표피의 "외층"(각질층)의 피부 수분보유도를 측정하기 위해 커패시턴스 측정을 행한다. 이 원리는 수분과 다른 물질의 서로 다른 유전율에 기초한 것이다. 상응하게 구성된 측정 커패시터는 커패시턴스를 다양하게 변화시키면서 그 측정 부피로 놓여진 샘플에 반응하며, 이것은 상기 장치에 의해 완전 자동으로 검출되고 평가된다. 특수 유리로 코팅된 능동 프로브를 측정하려는 피부 부위에 대고 가압하면, 1초 후, 디스플레이가 코네오미터 측정값, 즉, 피부 표면의 수분보유도를 표시한다. 특수한 설계는, 프로브의 능동 단부면이 매 경우 일정한 힘으로, 접근 불가능한 모든 피부 부위를 포함하여 피부 부위에 확실히 가압되도록 한다.

코네오미터는 폴 하우징과 부속 측정 센서로 이루어진다. 이 센서는 특수한 커넥터에 의해 나선형 케이블을 통해 폴 하우징에 연결된다. 측정값은 폴 하우징의 디스플레이 필드 상에 최대 3개 숫자를 갖는 수로서 표시된다. 이 디스플레이 필드는 또한 추가적인 정보 기능을 수행한다.

측정 센서는 사각형이다. 특수 유리로 코팅된 이것의 능동 단부면은 축방향으로 이동 가능하며, 3 mm 이상의 변위를 갖는다. 측정 원리는 단부면이 일정한 압력 하에 편평하게 놓일 것을 요구한다. 이것이 가능한 한 재현 가능하도록 하기 위해, 측정 헤드의 단부면을 매우 작게(7×7 mm) 구성한다. 내부의 이동형 부품 - 능동 단부면 - 은 매 경우 3.5 N의 힘으로 스프링에 의해 피부에 가압된다.

코네오미터는 전자동일 수 있다. 측정을 행하기 위해, 측정 헤드를 측정하려는 피부 부위에 대고 가압한다. 1초 후, 측정값이 표시된다.

코네오미터의 표시값은, 예를 들어, 미용 또는 약학 제품으로 피부를 처리하기 전과 후에, 피부 표면의 수분보유도를 나타내며, 즉, 장치는 피부 표면의 수분보유도의 상태 또는 변화를 나타낸다.

측정은 조성물 적용 후에 일정한 시간대 내에 행할 수 있다.

염증성 피부 질환은 알러지원, 두드러기, 비만세포증, 습진, 피부염, 약물 발진, 태선, 결절 홍반, 소아 황색육아종, 고리 육아종, 괴저성 농피증, 및/또는 지방생괴사에 의해 유발되는 피부병이다. 특히, 습진은 신경피부염이라고도 불리는 아토피 습진, 아토피 피부염 및 내인성 습진을 포함한다.

적용 형태

상기 조성물은 특히 피부에 조성물을 외용함으로써 국소 적용될 수 있으며, 이 때 피부는 점막, 특히 비내 점막을 포함하지 않는다.

적용은 1, 2, 3, 4, 5 또는 7일의 기간에 걸쳐 행해질 수 있다. 적용은 1, 2, 3, 4, 5 또는 7주의 기간에 걸쳐, 바람직하게는 4주의 기간에 걸쳐 행해질 수 있다. 적용은 하루에 1, 2, 3, 4 또는 5회, 바람직하게는 하루에 2회 행해질 수 있다. 하루에 다회 적용하는 경우, 적용이 거의 동일한 간격을 두고 행해지는 것이 바람직하다.

특히 바람직하게는, 조성물의 적용은 하루에 2회 적용으로(바람직하게는 12시간 간격으로) 4주의 기간에 걸쳐 행해진다.

제조 방법

약학 조성물 또는 미용 조성물의 제조 방법으로서, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 약학적으로 또는 미용적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체와 혼합하여 상기에 언급된 피부과적으로 유효한 약학 또는 미용 조성물을 얻는 제조 방법을 추가로 개시한다.

바람직하게는, 얻어진 조성물은 에멀션이다.

상기 에멀션은 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 에멀션은 하기 방법에 의해 제조될 수 있으며, 이 때 사용되는 양은 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 혼합물과 부형제에 대해 상기에 언급한 양에 해당한다:

하이알루론산나트륨을 펜틸렌 글리콜 및 글리세롤 중에 분산시켜, C 상을 형성한다;

불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 혼합물을 판테놀, 베타인, 황산마그네슘, 락트산나트륨, 글루콘산나트륨, 및 락트산과 수용액으로서 블렌딩하여, D 상을 형성하고; 그 후, D 상을 C 상에 첨가하여, E 상을 형성한다;

E 상을, 하이알루론산나트륨이 (확실히) 용해될 때까지 교반한다;

E 상을 pH 4.0∼5.5 또는 4.5∼5.0가 되도록 유기산, 예를 들어 락트산으로 조절한다;

E 상을 약 75℃로 가열한다;

A 상은, 성분들, 즉 시몬드시아 치넨시스 종자 오일, 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드, 세라 알바, 경화 피마자유, 세틸 PEG/PPG-10/1 디메티콘, 세틸 팔미테이트, 글리세릴 디베헤네이트, 트리베헤닌, 글리세릴 베헤네이트, 스쿠알란, 세라마이드 3, 세라마이드 3B, 세라마이드 6, 콜레스테롤, 및 파이토스핑고신을 혼합함으로써 제조하고; A 상을 약 75℃로 가열한다;

B 상은, 성분들, 즉 오에노테라 비에니스 오일, 스쿠알란, 프루누스 아미그달루스 둘시스 오일, 페르세아 그라티시마 오일, 토코페롤 아세테이트, 및 부티로스퍼뭄 파키이 버터를 혼합함으로써 제조하고; B 상을 약 50℃로 가열한다;

가열된 E 상을 A 상에 첨가하여 혼합해서 AE 상을 형성하고; 가열된 B 상을 AE 상에 첨가하여 균질화해서, 유중수형 에멀션을 얻는다;

얻어진 에멀션을 약 30℃까지(최대 30℃) 교반 하에 냉각시키고, 이 온도에서 유지한다;

에멀션을 약 30℃(최대 30℃)에서 약 5분 동안 균질화하여, 본 발명에 따른 조성물을 에멀션으로서 얻는다.

혼합 단계들은 교반기에서 약 75 rpm으로 수행할 수 있다. 균질화 단계들은 균질화기에서 약 19,000 rpm으로 수행한다.

미용 방법

상기에 기재된 본 발명에 따른 조성물로 피부의 탄력성 및/또는 수분보유를 증가시키는 미용 방법을 추가로 개시한다. 이 방법은 피부가 어떠한 병리학적 변화를 갖지 않는 사람에게 적합하다.

미용 방법에 있어서, 본 발명에 따른 조성물은, 특히 피부에 조성물을 외용함으로써 국소 적용될 수 있으며, 이 때 피부는 점막, 특히 비내 점막을 포함하지 않는다.

적용은 1, 2, 3, 4, 5 또는 7일의 기간에 걸쳐 행해질 수 있다. 적용은 1, 2, 3, 4, 5 또는 7주의 기간에 걸쳐, 바람직하게는 4주의 기간에 걸쳐 행해질 수 있다. 적용은 하루에 1, 2, 3, 4 또는 5회, 바람직하게는 하루에 2회 행해질 수 있다. 하루에 다회 적용하는 경우, 적용은 거의 동일한 간격으로 행해지는 것이 바람직하다.

특히 바람직하게는, 조성물의 적용은 4주의 기간에 걸쳐, 1일 2회(바람직하게는 12시간 간격으로) 행한다.

실시예

실시예 1: HaCaT 세포에서의 인터루킨의 분비에 대한 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 혼합물의 효과

염증성 피부 질환의 치료에 대한 본 발명에 따른 조성물의 용도를 입증하기 위해, 사이토카인 분비 저감에 대한 테스트를 수행하였다.

일례로서, 인터루킨 6(IL-6) 및 인터루킨 8(IL-8)의 분비를 측정하였다. TNFα(10 ng/mL)에 의한 자극에 의해, 다양한 세포 유형에서 인터루킨이 형성될 수 있다. 인터루킨 생산은 항염증제 또는 면역조절제의 적용에 의해 영향을 받을 수 있다. HaCaT 세포(성인 저칼슘 고온 케라티노사이트)에서 면역조절 특성을 테스트하였다. 인간의 비악성 케라티노사이트(= 정상 피부)로부터 얻은 세포주 HaCaT(자발적 불멸화)는 남성 환자의 건강한 피부로부터 유래된 것으로, 본질적으로 기저 표피 케라티노사이트의 특성을 갖는다.

물질의 항염증(소염) 또는 면역조절 특성은, 예를 들어 시험관내에서 세포주에 대해 조사될 수 있다. 이러한 테스트 디자인에서, 염증(인터루킨 생산의 상향조절)은 세포주에서 외부 자극에 의해 유도된다.

테스트 물질 1의 조성은 다음과 같았다:

불활성화된 형태의 천연 장내 박테리아 엔테로코커스 패칼리스 및 에스케리키아 콜라이. 1 ml의 현탁액은 1.5∼4.5×10⁷개 세포의 에스케리키아 콜라이(DSM 17252) 및 1.5∼4.5×10⁷개 세포의 엔테로코커스 패칼리스(DSM 16440)로부터 제조된 박테리아 용해물을 함유한다.

테스트 물질 1을 2종의 희석률로 자극된 세포에 적용하고, 인터루킨 생산(IL-6 및 IL-8)의 하향조절 또는 조절을 조사한다. 평가는 ELISA(효소 결합 면역흡착 분석)로 행한다. 비교 물질로서 항염증제 하이드로코티손도 테스트한다. HaCaT 세포를 웰당 20,000개 세포의 세포 밀도로 24웰 조직 배양 플레이트에 시딩하고, 24시간 후, HaCaT 세포를 TNF-α(10 ng/mL)(인터루킨, 예를 들어 IL-8 생산의 유도)로 자극하고, 테스트하려는 물질을 첨가한다. 72시간 인큐베이션 후, 2종의 염증 마커(IL-8 및 IL-6)를 ELISA로 정량적으로 평가한다.

항염증 활성을 검출하기 위해, 3개의 독립적 테스트를 3중으로 수행한다.

TNFα에 의한 HaCaT 세포의 자극은 72시간 후 인터루킨 8의 분비를 대조군에 비해 2.5배 증가시켰다(도 1 + 2). 단지 테스트 물질(1:10, TNFα가 없는 대조군)과 인큐베이션된 HaCaT 세포의 IL-8 분비는 72시간째 대조군에 비해 평균 약 10% 감소되었다. TNFα와 테스트 물질(1:10)의 동시 첨가 시, IL-8 분비는 72시간 후 TNFα를 갖는 대조군에 비해 약 27%(1:10) 감소되었다.

테스트 물질(1:100)의 사용 시, 72시간 후 TNFα를 갖는 대조군에 비해 IL-8 분비에 있어서 평균적으로 어떠한 변화도 검출할 수 없었다.

TNFα에 의한 자극 후의 인터루킨 6의 분비는 HaCaT 세포에서의 인터루킨 8에 비해 현저히 더 적었다(도 3 + 4). TNFα 첨가 없이(대조군) 24시간 후, IL-6 분비는 검출 한계 아래였다. TNFα와 물질(1:10)의 동시 첨가 시, 72시간 후 TNFα 처리 대조군에 비해 IL-6 분비가 평균적으로 24% 약간 증가한 것으로 관찰되었다.

1:100 희석률의 테스트 물질에서의 IL-6 분비는 72시간 후 처리된 대조군과 유사하였다. IL-8 분비와는 대조적으로, 하이드로코티손(10^-7 M)은 72시간 후 처리된 대조군에 비해 IL-6 분비를 현저히 감소(40%)시켰다.

염증 과정에 대한 테스트 물질의 효과의 테스트 결과, IL-8 및 IL-6 둘 다에 대해 농도 의존적 방출 조절이 확인되었다. 1:10 희석률의 테스트 물질의 경우, 72시간 후 TNFα 처리 대조군에 비해 IL-8 분비가 27% 감소되었지만, IL-6 분비는 24% 증가되었다. 1:100 희석률의 테스트 물질 경우, 72시간 후 IL-8 분비와 IL-6 분비 둘 다 TNFα 처리 대조군의 범위 내였다.

염증은 TNFα의 첨가에 의해 유발될 수 있다. TNFα는 염증 이외에도 면역 반응 및 아폽토시스를 또한 조절하는 다기능성 사이토카인이다. TNFα는, 염증 마커로 간주되는 추가적인 세포 분열의 발생을 개시시킴으로써 면역 반응을 활성화시킨다. IL-6은 체내(생체내)에서 TNFα에 의한 자극 후 형성되어 다양한 염증 반응에 영향을 미친다. 예를 들어, IL-6은, 종종 급성 염증 파마미터로서 사용되는 C 반응성 단백질의 형성을 자극한다. IL-8은 다양한 조직 및 혈액 세포에 의해 발현되는 주화성 사이토카인이다. IL-8은, 염증 매개인자로서, 호중성 과립구를 이동시켜 활성화하고 그 탈과립화를 지원한다. T 림프구, 호중성 과립구 및 표피 세포 간의 상호작용은 아마도 건선 등의 염증성 피부 질환의 병태생리에 있어서 결정적인 역할을 하는 것으로 생각된다.

TNFα에 의한 자극 후 HaCaT 세포에 대한 수행된 테스트 결과, 테스트 물질 1이 시험관내에서 인터루킨 분비에 대해 농도 의존적 효과를 나타냄이 확인되었다.

실시예 2: 인간 피부의 경피 수분 손실(TEWL)에 대한 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 혼합물의 효과

피부의 경피 수분 손실은 피부의 보호 기능을 평가하기 위한 가장 중요한 파라미터 중 하나이다. 이 과정은 발한을 통해 손실된 수분을 제외하고 신체 내부로부터의 수분의 증발을 포함한다. 피부 장벽 기능을 유지 또는 개선하는 제제는 경피 수분 손실의 감소를 유도한다. 피부로부터의 수분 증발의 감소는 피부의 수분 보유도를 유지하는 바람직한 작용에 해당한다.

피부의 경피 수분 손실(TEWL)의 정량적 측정은 증발계를 사용하여 수행하였다. 증발계의 측정 프로브는, 2개의 온도 및 수분 센서가 사이에 약간의 거리를 두고 서로에 겹쳐 부착되어 있는 위쪽이 개방된 튜브로 구성된다. 2개의 수분 센서는 피부 위의 확산 영역에서 직접 증기압 구배를 측정한다. 컴퓨터 지원을 통해, 픽(Fick)의 확산 법칙에 따라 수분 방출량(g/hm²)을 측정한다:

여기서,

dm/dt = 확산 흐름,

D = 확산 계수,

A = 면적,

dc/dx = 밀도 구배.

피부의 경피 수분 손실 테스트는 테와미터(Tewameter)^®(Courage + Khazaka Electronic GmbH)를 사용하여 행하였다.

테플론 튜브의 가장자리가 피부와 수평이 되도록 측정 프로브를 테스트하려는 피부 부위에 압력을 가하지 않으면서 올려 놓는다. 전부 합해, 테스트 영역당, 장치에 의해 기록되고 평균되는 측정 시리즈의 20회 측정 사이클을 수행한다. 테스트 부위는 얼굴에 위치하였고, 측정 필드는 직경 약 3 cm의 크기였다. 측정은 이들 부위에서 3곳의 서로 다른 개소에서 행하였고, 측정값은 평균하였다. 얻어진 측정값은 하기 표에 기재한다.

피험자 집단은 23∼66세의 20명의 피험자로 이루어졌다. 피험자에게 4주의 기간 동안 아침과 저녁에 규칙적으로 테스트 물질 2를 사용하도록 지시하였다.

피험자는 테스트 부위에 신경피부염(약물 치료를 요하지 않는) 경향이 있는 피부 또는 악건성 피부를 가졌다.

테스트 물질 2의 조성은 다음과 같았다:

3.00 wt%의 시몬드시아 치넨시스 종자 오일,

16.80 wt%의 카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드,

0.50 wt%의 세라 알바,

0.80 wt%의 경화 피마자유,

세틸 PEG/PPG-10/1 디메티콘,

0.3 wt%의 세틸 팔미테이트,

0.5 wt%의 글리세릴 디베헤네이트, 트리베헤닌, 글리세릴 베헤네이트, 스쿠알란, 세라마이드 3, 세라마이드 3B, 세라마이드 6, 콜레스테롤 및 파이토스핑고신의 혼합물(여기서, 각 성분들은 각각 동일한 비율로 존재함),

2.00 wt%의 오에노테라 비엔니스 오일(토코페롤로 안정화됨),

6.0 wt%의 스쿠알란,

2.50 wt%의 프루누스 아미갈두스 둘리스 오일,

2.00 wt%의 페르세아 그라티시마 오일,

0.5 wt%의 토코페롤 아세테이트,

0.5 wt%의 부티로스퍼뭄 파키이 버터,

4.0 wt%의 펜틸렌 글리콜,

4.0 wt%의 글리세롤(99%),

0.10 wt%의 하이알루론산나트륨,

52.19 wt%의 테스트 물질 1(실시예 1 참조)

1.0 wt%의 판테놀,

0.3 wt%의 베타인,

0.8 wt%의 황산마그네슘,

0.10 wt%의 락트산나트륨,

0.10 wt%의 글루콘산나트륨, 또는

pH를 4.5∼5 범위로 조절하기 위한 락트산.

하기 표에 각각 4주 간의 규칙적인 적용 전과 후의 테스트 부위에서의 TEWL 측정의 평균값(g/hm²)을 제공한다.

피부의 경피 수분 손실이 1차 측정에서 2차 측정으로 감소하였을 때 음의 값이 얻어졌다.

제제의 적용으로 인한 TEWL 값의 평균 변화율(%)은 20명의 피험자에 대한 개별 결과들에 대해 평균을 낸 것이다. 측정된 TEWL 값 평균의 차이는 -4.7이다. 이 값은 제제 적용 후 수분 방출의 평균 감소를 제공한다. 평균 TEWL 출발값이 17.6인 경우, 이것은 피부의 경피 수분 손실이 약 -26.70% 감소한 것에 해당한다.

제제의 적용으로 인한 TEWL 값의 평균 변화율(%)은 20명의 피험자에 대한 개별 결과들에 대해 평균을 낸 것이다. 측정된 TEWL 값 평균의 차이는 -3.0이다. 이 값은 제제 적용 후 수분 방출에 있어서의 평균 감소를 제공한다. 평균 TEWL 출발값이 16.9인 경우, 이것은 피부의 경피 수분 손실이 약 -17.75% 감소한 것에 해당한다.

처리되지 않은 대조군 부위에서의 TEWL 값의 평균 변화율(%)은 20명의 피험자에 대한 개별 결과에 대해 평균을 낸 것이다. 측정된 TEWL 값 평균의 차이는 -0.5이다. 이 값은 제제를 적용하지 않았을 때의 수분 방출의 평균 감소를 제공한다. 평균 TEWL 출발값이 10.3인 경우, 이것은 피부의 경피 수분 손실이 약 -4.85% 감소한 것에 해당한다.

이러한 방식으로, 테스트 물질 2가 현저한 건성 피부를 갖는 사람에게서 경피 수분 손실을 상당히 저감한다는 것이 확립될 수 있다.

실시예 3: 피부 수분보유도에 대한 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스를 포함하는 혼합물의 작용

측정은 제품의 사용 후에 일정한 시간대 내에 행한다.

피험자에게 지정된 테스트 기간에 테스트 내내 테스트 제품만을 사용하도록 지시하였다.

측정은 다음과 같이 수행하였다:

1. 피험자들을 22℃의 온도 및 60% 상대 습도에서 45분 동안 순응시킨다.

2. 각각의 테스트 영역에서 3개의 상이한 개소에서 피부 측정값을 측정한다. 얻어진 값은 평균한다.

3. 이 테스트에서, 처리되지 않은 피부 부위를 대조군 측정 영역으로서 사용한다.

4. 실시예 2의 테스트 조성물 2의 사용 시작 전과 적용 4주 후에 측정을 행한다. 매회 측정은 기존에 사용했던 제품 또는 테스트 제품을 마지막으로 적용한 지 10∼12시간 후에 행한다.

테스트 영역 및 시점당 각각의 피부 수분보유도 값을 측정한다. 각각의 값을 하기 표에 기재한다.

일련 번호, 나이, 및 성별로 지정한 피험자들을 평균내고 그 표준 편차를 측정한다.

(문헌: L. Sachs, "Statistische Methoden" [Statistical Methods], 6th edition, Springer Verlag Berlin Heidelberg 1988).

델타 = 피부 수분보유도 값의 차이

델타(%) = 출발 값에 기초한, 사용에 의한 수분보유도의 평균 변화율(%)

해당 표에, 측정된 각각의 값이 기재되어 있다.

테스트 부위에서, 피험자들은 심한 건성 피부 또는 신경피부염의 경향이 있는 피부(의학적 치료를 요하지 않음)를 보인다.

4주의 적용 테스트에서, 총 20명의 피험자가 피부과적/임상적 기준에 따른 문제 없이 테스트 물질 2를 받아들였다. 테스트 부위에서 바람직하지 않은 또는 병리학적 피부 변화의 사례는 없었다.

피부 수분보유도에 대한 테스트 물질 2의 효과를 테스트하기 위해 코네오미터 프로브 CM 825(Courage + Khazaka 제조)를 사용하여 20명의 피험자에 대해 피부 보습 측정을 행하였다.

제제의 규칙적인 적용 전과 적용 4주 후 테스트 부위에서, 그리고 처리되지 않은 대조군 부위에서, 피부 수분보유도 값의 변화를 측정하였다. 처리된 부위는 51.37%(신체의 우측 반쪽) 및 53.67%(신체의 좌측 반쪽)의 피부 수분보유도 개선을 보였다. 처리되지 않은 피부 부위에서의 평균 피부 수분보유도는 5.23%였다.

따라서, 테스트 물질 2는 피부 수분보유도를 명백히 개선시켰다.

Claims

피부과 병태 및 질환의 치료, 지지 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli)와 엔테로코커스 패칼리스(Enterococcus faecalis)의 혼합물과 약학적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 포함하는 약학 조성물.
제1항에 있어서, 국소 적용 가능한 형태인 약학 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스가 용해물로서 존재하는 것인 약학 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물이 전체 조성물의 1∼95 wt%, 20∼80 wt%, 40∼60 wt% 또는 45∼55 wt%의 양으로 존재하는 것인 약학 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스가 혼합물 중에 0.5:1.5∼1.5:0.5, 0.75:1.25∼1.25:0.75, 또는 1.15:0.85∼0.85:1.15 또는 1.05:0.95∼0.95:1.05의 비로 존재하고, 경우에 따라, 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스가 전체 질량 100 g당 0.5×10⁷∼10×10⁷, 1.0×10⁷∼7×10⁷ 또는 1.5×10⁷∼4.5×10⁷의 각각의 세포수로 존재하는 것인 약학 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 피부과 질환 및 피부과 병태가 건성 피부, 경피 수분 손실, 염증성 피부 질환 및 신경피부염으로부터 선택되는 것인 약학 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 연고, 액체, 에멀션 또는 용액의 형태인 약학 조성물.
유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물을 포함하는 미용 조성물.
제8항에 있어서, 국소 적용 가능한 형태인 미용 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스가 용해물의 형태인 미용 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 에스케리키아 콜라이와 엔테로코커스 패칼리스의 혼합물이 전체 조성물의 1∼95 wt%, 20∼80 wt%, 40∼60 wt% 또는 45∼55 wt%의 양으로 존재하는 것인 미용 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스가 0.5:1.5∼1.5:0.5, 0.75:1.25∼1.25:0.75, 또는 1.15:0.85∼0.85:1.15 또는 1.05:0.95∼0.95:1.05의 비로 존재하고, 경우에 따라, 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스가 전체 질량 100 g당 0.5×10⁷∼10×10⁷, 1.0×10⁷∼7×10⁷ 또는 1.5×10⁷∼4.5×10⁷의 각각의 세포수로 존재하는 것인 미용 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 미용적 적용의 적응증이 건성 피부 및 경피 수분 손실로부터 선택되는 것인 미용 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 연고, 액체, 에멀션 또는 용액의 형태인 미용 조성물.
제1항 또는 제2항에 따른 약학 조성물 또는 제8항 또는 제9항에 따른 미용 조성물의 제조 방법으로서, 유효량의 불활성화된 에스케리키아 콜라이 및 엔테로코커스 패칼리스와 약학적으로 또는 미용적으로 허용되는 부형제 및/또는 담체를 혼합하여, 상기 피부과적으로 유효한 약학 또는 미용 조성물을 얻는 것인 제조 방법.