KR20190032377A - 알레르겐 검출 방법 - Google Patents

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Abstract

고감도의 알레르겐 측정 방법을 제공한다. 시료 중의 알레르겐을 검출하는 방법에 있어서, 시료를 단백질 분해 효소로 처리하는 것, 및 크로마토그래피 분리를 이용한 분석에 의해, 상기 효소 처리한 시료 중에 있어서의 알레르겐 유래 폴리펩티드의 존재의 유무를 검출하는 것을 포함하며, 상기 알레르겐이 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 방법.

Description

알레르겐 검출 방법
본 발명은 시료 중의 알레르겐을 검출하는 방법에 관한 것이다.
음식 알레르기는 음식을 원인으로 하는 면역 응답에 의해, 피부염, 천식, 위장관 기능 장해, 아나필락스 쇼크 등의 불이익한 증상을 일으킨다. 음식 알레르기의 원인이 되는 음식의 종류는 여러 가지이지만, 특히 새우, 게, 밀, 메밀, 알, 우유 및 땅콩의 7품목은 알레르기 환자 수가 많으며, 또 위중한 알레르기 증상을 일으키기 쉽다.
알레르겐이 되는 식품을 원재료에 포함하지 않는 가공 식품이라도, 알레르겐을 포함한 가공 식품과 공장에서의 제조 라인을 공유하고 있거나, 또는 상기 원재료의 제조 과정에서 알레르겐을 사용하고 있거나 한 경우, 최종 제품에 알레르겐이 혼입되어 있는 경우가 있다. 약간의 알레르겐의 혼입이라도 음식 알레르기의 환자에게 있어서는 위험하다. 식품 등의 시료 중에 있어서의 미량의 알레르겐을 검출할 수 있는 고감도의 알레르겐 측정 방법이 요구되고 있다.
고감도인 알레르겐 측정 방법으로서 특허 문헌 1에는, 오보알부민, 라이소자임(lysozyme), 카제인, 락토글로불린, 고분자량 글루테닌, 저분자량 글루테닌, 밀 단백질, 호밀 단백질, 귀리 단백질, 대맥 단백질, 겨자 단백질, 참깨 단백질, 마카다미아 너트 단백질, 피스타치오 너트 단백질, 브라질 너트 단백질, 호두 단백질, 땅콩 단백질 및 헤이즐 너트 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 알레르겐을 효소 분해하여 얻어지는 특정 배열의 펩티드를 LC－MS/MS로 검출하는, 시료 중의 상기 알레르겐을 검출하는 방법이 기재되어 있다. 특허 문헌 2에는, 시료 조성물로부터 알레르겐을 포함한 추출액을 형성하고, 상기 추출액 중의 알레르겐의 양을 LC－UV/MS 또는 LC－MS를 사용하여 측정하는, 조성물 중의 알레르겐 함유량을 측정하는 방법이 기재되어 있다.
특허 문헌 1 JP 2014－525588 A 특허 문헌 2 JP 2013－539039 A
식품 등의 시료 중에 있어서의 알레르겐(특히 메밀 또는 갑각류)의 존재를 고감도로 검출하는 것이 요구되고 있다.
본 발명자들은 각 알레르겐에 대해서, 이에 포함되는 특정 아미노산 배열을 검출함으로써, 상기 알레르겐의 존재를 고감도로 검출할 수 있는 것을 발견하였다.
따라서, 본 발명은 시료 중의 알레르겐을 검출하는 방법에 있어서,
시료를 단백질 분해 효소로 처리하는 것, 및
크로마토그래피 분리를 사용한 분석에 의해, 상기 효소 처리한 시료 중에 있어서의 알레르겐 유래 폴리펩티드의 존재의 유무를 검출하는 것을 포함하며,
상기 알레르겐이 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 방법을 제공한다.
본 발명은 식품 등의 시료 중에 있어서의 미량의 알레르겐(특히 메밀 또는 갑각류)의 존재를 검출할 수 있는 고감도의 알레르겐 검출 방법을 제공한다.
도 1은 메밀 알레르겐의 트립신 소화물에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 2는 갑각류 알레르겐의 트립신 소화물에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 3은 메밀 알레르겐 함유 소맥분의 트립신 소화물에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다. 위；메밀 알레르겐 무첨가 소맥분, 아래；메밀 알레르겐 첨가 소맥분.
도 4는 갑각류 알레르겐 함유 소맥분의 트립신 소화물에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다. 위；갑각류 알레르겐 무첨가 소맥분, 아래；갑각류 알레르겐 첨가 소맥분.
도 5는 우유 알레르겐에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 6은 알 알레르겐에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 7은 땅콩 알레르겐에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 8은 우유 첨가 빵에 있어서의 카제인에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
도 9는 땅콩 첨가 빵에 있어서의 Ara h1 또는 h3에 대한 LC－MS/MS분석 결과 도면이다.
본 발명은 시료 중의 알레르겐을 검출하는 방법을 제공한다. 본 발명의 방법에 의하면, 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 알레르겐을 검출할 수 있다. 바람직한 실시 형태에서, 본 발명의 방법에 의해 검출되는 알레르겐은 적어도 메밀 및 갑각류로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이며, 보다 바람직하게는 메밀 및 갑각류로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상이고, 더욱 바람직하게는, 메밀 또는 갑각류 중 어느 하나이다. 또는, 본 발명의 방법에 의해 검출되는 알레르겐은 적어도 메밀을 포함하며, 예를 들면, 메밀 단독, 메밀 및 갑각류, 또는 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩일 수 있다.
본 발명에서 알레르겐 검출에 제공하는 대상물의 예로서는, 식품, 화장품, 의약품, 이들의 원재료, 이들의 제조 공정에서 사용하는 기기류 등을 들 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 이들 대상물을 통상의 사전 처리, 예를 들면 분쇄, 용해, 현탁, 추출 등, 또는 이들 조합에 도입한 것을, 본 발명의 방법의 시료로서 사용할 수 있다. 또는, 대상물이 기기류의 경우, 그 세정액이나 와이프(wipe) 검체 등 또는 이들을 분쇄, 용해, 현탁, 추출 등, 또는 이들의 조합에 도입한 것을, 본 발명의 방법의 시료로서 사용할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법에서 사용하는 시료의 조제 방법은 상기로 한정되지 않으며, 후술하는 단백질 분해 효소 처리를 위한 시료의 조제에 사용할 수 있는 모든 방법을 포함할 수 있다.
본 발명의 방법에서는 조제한 시료를 단백질 분해 효소로 처리한다. 본 발명의 방법에서 사용되는 단백 분해 효소의 예로서는, 트립신, 키모트립신, 엘라스타제, 서몰리신(thermolysin) 등을 들 수 있고, 바람직하게는 트립신이다. 처리 조건은, 효소의 종류에 따라 적절히 선택할 수 있지만, 예를 들면 트립신의 경우, 효소 농도 1000∼20000U, 25∼45℃, pH7∼9 정도에서 4∼24시간이 바람직하다. 상기 효소 처리는 표적의 알레르겐의 단백질 분자를 분해하고, 상기 알레르겐에 유래하는 폴리펩티드를 생성한다. 따라서, 시료 중에 표적의 알레르겐이 포함되어 있으면, 상기 효소 처리 후의 시료는 표적 알레르겐에 유래하는 폴리펩티드를 포함한다. 한편, 시료 중에 표적의 알레르겐이 포함되지 않으면, 상기 효소 처리 후의 시료는 표적 알레르겐에 유래하는 폴리펩티드를 포함하지 않는다.
따라서, 상기 단백 분해 효소로 처리한 시료 중에 있어서의 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드의 존재의 유무를 검출함으로써, 상기 시료 중에 있어서의 표적 알레르겐의 존재의 유무를 판정할 수 있다.
메밀에 대해서는 메밀 22kDa 단백질 분자(배열 번호 25)의 분해산물을 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출할 수 있다. 본 발명의 방법의 바람직한 실시 형태에서는 알레르겐이 메밀인 경우, 하기 배열 번호 1∼7 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드를 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출한다.
VQVVGDEGR (배열 번호 1)
SVFDDNVQR (배열 번호 2)
GQILVVPQGFAVVLK (배열 번호 3)
EGLEWVELK (배열 번호 4)
NFFLAGQSK (배열 번호 5)
GFIVQAR (배열 번호 6)
NDDNAITSPIAGK (배열 번호 7)
본 발명의 방법에서는 상기 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드 중 어느 1종 이상의 유무가 검출되면 좋지만, 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다.
게, 새우 등의 갑각류에 대해서는 트로포미오신의 분해산물을 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출할 수 있다. 본 발명의 방법의 바람직한 실시 형태에서는 알레르겐이 갑각류인 경우, 하기 배열 번호 8∼12 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드를 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출한다.
IQLLEEDLER (배열 번호 8)
MDALENQLK (배열 번호 9)
FLAEEADR (배열 번호 10)
IVELEEELR (배열 번호 11)
LAMVEADLER (배열 번호 12)
본 발명의 방법에서는 상기 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상의 유무가 검출되면 좋지만, 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다.
알레르겐이 메밀 및 갑각류인 경우, 검출되는 알레르겐 유래 폴리펩티드는 바람직하게는 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상이며, 보다 바람직하게는 배열 번호 1∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드 모두이다.
우유에 대해서는 카제인 또는 β락토글로불린(BLG)의 분해산물을 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출할 수 있다. 본 발명의 방법의 바람직한 실시 형태에서는 알레르겐이 우유인 경우, 하기 배열 번호 13∼17 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드를 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출한다. 하기 폴리펩티드 중, 배열 번호 13∼15는 카제인 유래 폴리펩티드이며, 배열 번호 16∼17은 BLG 유래 폴리펩티드이다.
FFVAPFPEVFGK (배열 번호 13)
YLGYLEQLLR (배열 번호 14)
NAVPITPTLNR (배열 번호 15)
VLVLDTDYK (배열 번호 16)
TPEVDDEALEK (배열 번호 17)
본 발명의 방법에서는 상기 배열 번호 13∼17로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상의 유무가 검출되면 좋지만, 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다. 카제인에 대해서는 바람직하게는 배열 번호 13∼15로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상, 보다 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출되고, BLG에 대해서는 바람직하게는 배열 번호 16∼17로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상, 보다 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다.
알에 대해서는, 오보알부민의 분해 산물을, 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출할 수 있다. 본 발명의 방법의 바람직한 실시 형태에 대해서는, 알레르겐이 알인 경우, 하기 배열 번호 18∼21 중 어느 하나가 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드를 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출한다.
YPILPEYLQCVK (배열 번호 18)
ELINSWVESQTNGIIR (배열 번호 19)
LTEWTSSNVMEER (배열 번호 20)
HIATNAVLFFGR (배열 번호 21)
본 발명의 방법에서는 상기 배열 번호 18∼21로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상의 유무가 검출되면 좋지만, 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다.
땅콩에 대해서는 Ara h1-3의 분해산물을 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출할 수 있다. 본 발명의 방법의 바람직한 실시 형태에서는 알레르겐이 땅콩인 경우, 하기 배열 번호 22∼24 중 어느 하나로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드를 알레르겐 유래 폴리펩티드로서 검출한다. 하기 폴리펩티드 중, 배열 번호 22∼23은 Ara h1유래 폴리펩티드이며, 배열 번호 24는 Ara h3유래 폴리펩티드이다.
DLAFPGSGEQVEK (배열 번호 22)
VLLEENAGGEQEER (배열 번호 23)
SPDIYNPQAGSLK (배열 번호 24)
본 발명의 방법에서는 상기 배열 번호 22∼24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상의 유무가 검출되면 좋지만, 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출된다. Ara h1에서는 바람직하게는 배열 번호 22∼23으로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상, 보다 바람직하게는 이들의 폴리펩티드의 모든 유무가 검출되고, Ara h3에서는 바람직하게는 배열 번호 24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 유무가 검출된다.
따라서, 알레르겐이 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩인 경우, 검출되는 알레르겐 유래 폴리펩티드는 바람직하게는 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 13∼17로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 18∼21로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 22∼24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상이며, 보다 바람직하게는 배열 번호 1∼24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 모두이다.
상기 단백 분해 효소로 처리한 시료 중에 있어서의 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드의 존재의 유무를 검출하는 수단으로서는 크로마토그래피 분리를 이용한 분석이 매우 적합하다. 크로마토그래피 분리를 사용한 분석으로서는 액체 크로마토그래피-질량 분석, 예를 들면, 액체 크로마토그래피 탠덤형 질량 분석(LC－MS/MS), 액체 크로마토그래피 비행 시간형 질량 분석(LC－TOF/MS) 등을 들 수 있다. 측정 정도(S/N비)가 높고 또한 복수 펩티드를 한 번에 검출할 수 있는 것으로부터, LC－MS/MS를 사용한 다중 반응 모니터링(MRM)이 바람직하다.
본 발명의 방법에서, 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드의 검출에 사용하는 크로마토그래피로서는, 액체 크로마토그래피(LC)가 바람직하고, 역상 액체 크로마토그래피(RPLC)가 보다 바람직하다. 또 바람직하게는 상기 LC는 고속 액체 크로마토그래피(HPLC)이며, 더욱 바람직하게는 RP－HPLC이다. RPLC용 담체로서는, 실리카 겔이나 폴리머 겔 기재에 탄화수소쇄(바람직하게는 옥타데실기)를 결합한 충전제를 갖는 담체, 예를 들면 C18 컬럼, C8컬럼 등을 들 수 있다. 상기 LC의 이동상(용리액)은 목적의 각 알레르겐 유래 폴리펩티드를 개별적으로 분리할 수 있는 것이면 좋고, 예를 들면, 포름산 수용액(A)과 포름산 아세트니트릴 수용액(B)과의 100：0∼0：100(체적비) 그래디언트(gradient) 용액을 들 수 있지만, 이것으로 한정되지 않는다.
액체 크로마토그래피-질량 분석에 있어서는, 상기 LC의 용출물을 질량 분석(MS/MS, TOF/MS 등)에 도입한다. 질량 분석은 탠덤 사중극형 질량 분석 장치, 비행 시간형 질량 분석 장치 등의 공지의 질량 분석 장치를 사용하여 펩티드의 검출에 사용되는 통상의 조건에 따라서 실시할 수 있다. 예를 들면, 일렉트로 스프레이 이온화법(ESI) 또는 대기압 화학 이온화법(APCI)을 사용한 다중 반응 모니터링(MRM)이 바람직하다. 질량 분석에서는 용매물 중의 각 폴리펩티드는 질량수/전하(m/z)에 따라서 분리된다. 예를 들면, 목적의 폴리펩티드의 m/z값을 미리 데이타베이스화하여 두는 것으로, 측정된 m/z값에 근거하여 시료 중에 있어서의 목적의 폴리펩티드의 유무를 검출할 수 있다.
(실시예)
이하에 실시예를 나타내며 본 발명을 더욱 상세하게 설명하지만, 본 발명은 이하의 실시예로 한정되는 것은 아니다.
(시약)
아세트니트릴(와코쥰야쿠고교, 특급, HPLC용)
트립신(와코쥰야쿠고교, 돼지 비장 유래 생화학 분석용)
요오드아세트아미드(IA)(와코쥰야쿠고교, 생화학 분석용)
디티오트레이톨(DTT)(와코쥰야쿠고교, 생화학 분석용)
요소(와코쥰야쿠고교, 특급)
트리플루오르 초산(TFA)(쥰세이카가쿠 특급)
(완충액)
A：0.1MDTT＿0.5MTris－HCl＿4 M요소(pH8.2) 완충액
B：0.5MTris－HCl＿2 M요소(pH8.2) 완충액
참고예 1 알레르겐 함유 시료의 조제
검체 0.5g을 15㎖ 디스포 시험관에 채취하고, 완충액 A(시험예 1∼3) 또는 완충액 B(시험예 4∼5)를 5㎖ 더하여 3시간(시험예 1∼3) 또는 5시간(시험예 4∼5) 진동 추출했다. 얻어진 반응물을 3000rpm으로 5분간 원심 분리하여 상청(上淸)을 회수했다.
실시예 1 LC－MS/MS에 의한 트립신 소화물의 분석
1) 트립신 소화
알레르겐 분자 1mg 또는 참고예 1에서 조제한 상청 0.25㎖를 1.5㎖용 폴리 튜브에 채취하고, 완충액 A(시험예 1∼3) 또는 완충액 B(시험예 4∼5)를 0.25㎖ 더하여 완전하게 용해시켰다. 얻어진 용액에 40mg/㎖ DTT 50㎕를 더하여 37℃에서 90분간 인큐베이트하고, 이어서 40mg/㎖ IA 50㎕를 더하여 37℃에서 30분간, 차광화로 인큐베이트했다. 반응액에 50mM 탄산수소나트륨 600㎕를 더하고, 이어서 10mg/㎖ 트립신 50mM 탄산수소나트륨 용액을 100㎕ 더하여 37℃에서 16시간 인큐베이트 했다(pH7∼9). 반응 후, TFA 10㎕를 더하여 트립신을 실활(失活)시켰다.
2) 탈염
OASIS HLB(3cc, 60mg；Waters)를 메탄올 1㎖ 및 물 2㎖로 컨디셔닝했다. 이것에 1)에서 얻어진 반응액의 전량을 적하한 후, 물 1㎖로 세정하고, 이어서 60% 아세트니트릴 1㎖에 의해 용출하였다.
3) LC－MS/MS에 의한 다중 반응 모니터링(MRM)
2)에서 얻어진 용출물을 40℃에서 질소 건고한 후, 25%아세트니트릴 0.2㎖에 용해시켰다. 얻어진 용액을 필터 여과 후, 하기 조건으로 LC－MS/MS MRM을 실시했다.
(LC－MS/MS장치)
HPLC：Shimadzu NexeraX2
MS/MS：ABSCIEX QTRAP5500
(HPLC 조건)
컬럼：Kinetik C18 150mm×2.1mm, 입경 2.6㎛
컬럼 온도：50℃
컬럼 유량：0.3㎖
용리액 A： 0.1% 포름산；용리액B：0.1%포름산 아세트니트릴
그래드언트：A：B95：5(0 min)→40：60(20 min)→20：80(50 min)→95：5(55 min)→95：5(90 min)
(질량 분석 조건)
이온화법：일렉트로 스프레이 이온화법
극성：포지티브
스프레이 전압：5500V
터보 히터 온도：450℃
시험예 1 메밀 알레르겐의 검출
22kDa 단백질(배열 번호 25)을 표적 알레르겐 분자로서 표 1에 나타내는 조건으로 LC－MS/MS MRM에 의해 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드를 검출했다. 결과를 도 1에 나타낸다.
Figure pct00001
시험예 2 갑각류 알레르겐의 검출
트로포미오신(배열 번호 26)을 표적 알레르겐 분자로서 표 2에 나타내는 조건으로 LC－MS/MS MRM에 의해 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드를 검출했다. 결과를 도 2에 나타낸다.
Figure pct00002
시험예 3 식품 조성물로부터의 메밀 알레르겐 및 갑각류 알레르겐의 검출
메밀 또는 갑각류(새우 파우더)를 0.01질량% 첨가한 소맥분으로부터 참고예 1에 따라서 알레르겐 함유 시료를 조제했다. 얻어진 시료를 실시예 1에 따라서 트립신 소화, 탈염 및 LC－MS/MS MRM에 도입하여 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드를 검출했다. 대조로서 메밀 또는 갑각류 무첨가 소맥분을 사용하여 동일한 분석을 실시했다. 검출하는 메밀 및 갑각류의 알레르겐 유래 폴리펩티드, 및 LC－MS/MS분석의 조건은 각각 표 1 및 표 2와 동일하게 하였다. 측정 결과를 도 3 및 4에 나타낸다.
시험예 4 우유, 알 및 땅콩 알레르겐의 검출
전분유, 전란분 및 땅콩가루 각각으로부터, 참고예 1에 따라서 알레르겐 함유 시료를 조제했다. 각 시료를 실시예 1의 1)∼3)에 따라서 트립신 소화, 탈염 및 LC－MS/MS MRM에 도입하여 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드를 검출했다. 전분유, 전란분 및 땅콩가루의 각각에 대한 표적 알레르겐 분자, 및 검출한 알레르겐 유래 폴리펩티드를 표 3∼5에 나타낸다. 전분유, 전란분 및 땅콩가루 중 어느 알레르겐도, LC－MS/MS분석으로 검출할 수 있었다(도 5∼7).
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
시험예 5 식품 조성물로부터의 우유 및 땅콩 알레르겐의 검출
전분유 및 땅콩가루의 어느 하나를 첨가한 빵(첨가 빵；첨가량 0.84질량%), 및 우유 및 땅콩을 포함하지 않는 빵(무첨가 빵)을 제조했다. 첨가 빵과 무첨가 빵을 혼합하여 100배 희석 첨가 빵(전분유 및 땅콩가루의 첨가량 0.0084질량%)를 조제했다. 얻어진 100배 희석 첨가 빵에 포함되는 우유 또는 땅콩 알레르겐(카제인 및 Ara h를 포함한 땅콩 가용성 단백질)의 농도를 ELISA법으로 측정했다(정량 하한값 1 ppm). 측정 결과를 표 6에 나타낸다.
Figure pct00006
이어서, 무첨가 빵 및 100배 희석 첨가 빵으로부터 참고예 1에 따라서 알레르겐 함유 시료를 조제했다. 얻어진 시료를, 실시예 1에 따라서 트립신 소화, 탈염 및 LC－MS/MS MRM에 도입하여 표적 알레르겐 유래 폴리펩티드를 검출했다. 검출 대상에는 우유에서는 카제인 유래 폴리펩티드(배열 번호 13∼15), 땅콩에서는 Ara h1 또는 h3 유래 폴리펩티드(배열 번호 22∼24)를 선택했다.
그 결과, 100배 희석 첨가 빵에 대해서, 우유 알레르겐(카제인) 및 땅콩 알레르겐(Ara h1 또는 h3)의 피크를 충분한 감도로 확인할 수 있었다(도 8 및 9). 또한, 500배 희석 첨가 빵을 사용한 동일한 LC－MS/MS MRM 측정에서도, 피크의 S/N가 10 이상 있는 것이 확인되었다. 한편, 무첨가 빵에서는 피크는 확인되지 않았다. 따라서, 본 발명의 방법에 의하면, ELISA법과 동등한 측정 감도(정량 하한값 1ppm)로 알레르겐을 검출할 수 있다.
<110> NISSHIN SEIFUN GROUP INC. <120> Method of Detecting Allergen <130> P2018-0316 <150> JP 2016-142994 <151> 2016-07-21 <160> 26 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 1 Val Gln Val Val Gly Asp Glu Gly Arg 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 2 Ser Val Phe Asp Asp Asn Val Gln Arg 1 5 <210> 3 <211> 15 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 3 Gly Gln Ile Leu Val Val Pro Gln Gly Phe Ala Val Val Leu Lys 1 5 10 15 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 4 Glu Gly Leu Glu Trp Val Glu Leu Lys 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 5 Asn Phe Phe Leu Ala Gly Gln Ser Lys 1 5 <210> 6 <211> 7 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 6 Gly Phe Ile Val Gln Ala Arg 1 5 <210> 7 <211> 13 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 7 Asn Asp Asp Asn Ala Ile Thr Ser Pro Ile Ala Gly Lys 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 8 Ile Gln Leu Leu Glu Glu Asp Leu Glu Arg 1 5 10 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 9 Met Asp Ala Leu Glu Asn Gln Leu Lys 1 5 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 10 Phe Leu Ala Glu Glu Ala Asp Arg 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 11 Ile Val Glu Leu Glu Glu Glu Leu Arg 1 5 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 12 Leu Ala Met Val Glu Ala Asp Leu Glu Arg 1 5 10 <210> 13 <211> 12 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 13 Phe Phe Val Ala Pro Phe Pro Glu Val Phe Gly Lys 1 5 10 <210> 14 <211> 10 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 14 Tyr Leu Gly Tyr Leu Glu Gln Leu Leu Arg 1 5 10 <210> 15 <211> 11 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 15 Asn Ala Val Pro Ile Thr Pro Thr Leu Asn Arg 1 5 10 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 16 Val Leu Val Leu Asp Thr Asp Tyr Lys 1 5 <210> 17 <211> 11 <212> PRT <213> Bos taurus <400> 17 Thr Pro Glu Val Asp Asp Glu Ala Leu Glu Lys 1 5 10 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 18 Tyr Pro Ile Leu Pro Glu Tyr Leu Gln Cys Val Lys 1 5 10 <210> 19 <211> 16 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 19 Glu Leu Ile Asn Ser Trp Val Glu Ser Gln Thr Asn Gly Ile Ile Arg 1 5 10 15 <210> 20 <211> 13 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 20 Leu Thr Glu Trp Thr Ser Ser Asn Val Met Glu Glu Arg 1 5 10 <210> 21 <211> 12 <212> PRT <213> Gallus gallus <400> 21 His Ile Ala Thr Asn Ala Val Leu Phe Phe Gly Arg 1 5 10 <210> 22 <211> 13 <212> PRT <213> Arachis hypogaea <400> 22 Asp Leu Ala Phe Pro Gly Ser Gly Glu Gln Val Glu Lys 1 5 10 <210> 23 <211> 14 <212> PRT <213> Arachis hypogaea <400> 23 Val Leu Leu Glu Glu Asn Ala Gly Gly Glu Gln Glu Glu Arg 1 5 10 <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Arachis hypogaea <400> 24 Ser Pro Asp Ile Tyr Asn Pro Gln Ala Gly Ser Leu Lys 1 5 10 <210> 25 <211> 183 <212> PRT <213> Fagopyrum esculentum <400> 25 Leu Lys Phe Arg Gln Asn Val Asn Arg Pro Ser Arg Ala Asp Val Phe 1 5 10 15 Asn Pro Arg Ala Gly Arg Ile Asn Thr Val Asp Ser Asn Asn Leu Pro 20 25 30 Ile Leu Glu Phe Ile Gln Leu Ser Ala Gln His Val Val Leu Tyr Lys 35 40 45 Asn Ala Ile Leu Gly Pro Arg Trp Asn Leu Asn Ala His Ser Ala Leu 50 55 60 Tyr Val Thr Arg Gly Glu Gly Arg Val Gln Val Val Gly Asp Glu Gly 65 70 75 80 Arg Ser Val Phe Asp Asp Asn Val Gln Arg Gly Gln Ile Leu Val Val 85 90 95 Pro Gln Gly Phe Ala Val Val Leu Lys Ala Gly Arg Glu Gly Leu Glu 100 105 110 Trp Val Glu Leu Lys Asn Asp Asp Asn Ala Ile Thr Ser Pro Ile Ala 115 120 125 Gly Lys Thr Ser Val Leu Arg Ala Ile Pro Val Glu Val Leu Ala Asn 130 135 140 Ser Tyr Asp Ile Ser Thr Lys Glu Ala Phe Arg Leu Lys Asn Gly Arg 145 150 155 160 Gln Glu Val Glu Val Phe Arg Pro Phe Gln Ser Arg Asp Glu Lys Glu 165 170 175 Arg Glu Arg Phe Ser Ile Val 180 <210> 26 <211> 284 <212> PRT <213> Marsupenaeus japonicus <400> 26 Met Asp Ala Ile Lys Lys Lys Met Gln Ala Met Lys Leu Glu Lys Asp 1 5 10 15 Asn Ala Met Asp Arg Ala Asp Thr Leu Glu Gln Gln Asn Lys Glu Ala 20 25 30 Asn Asn Arg Ala Glu Lys Ser Glu Glu Glu Val His Asn Leu Gln Lys 35 40 45 Arg Met Gln Gln Leu Glu Asn Asp Leu Asp Gln Val Gln Glu Ser Leu 50 55 60 Leu Lys Ala Asn Ile Gln Leu Val Glu Lys Asp Lys Ala Leu Ser Asn 65 70 75 80 Ala Glu Gly Glu Val Ala Ala Leu Asn Arg Arg Ile Gln Leu Leu Glu 85 90 95 Glu Asp Leu Glu Arg Ser Glu Glu Arg Leu Asn Thr Ala Thr Thr Lys 100 105 110 Leu Ala Glu Ala Ser Gln Ala Ala Asp Glu Ser Glu Arg Met Arg Lys 115 120 125 Val Leu Glu Asn Arg Ser Leu Ser Asp Glu Glu Arg Met Asp Ala Leu 130 135 140 Glu Asn Gln Leu Lys Glu Ala Arg Phe Leu Ala Glu Glu Ala Asp Arg 145 150 155 160 Lys Tyr Asp Glu Val Ala Arg Lys Leu Ala Met Val Glu Ala Asp Leu 165 170 175 Glu Arg Ala Glu Glu Arg Ala Glu Thr Gly Glu Ser Lys Ile Val Glu 180 185 190 Leu Glu Glu Glu Leu Arg Val Val Gly Asn Asn Leu Lys Ser Leu Glu 195 200 205 Val Ser Glu Glu Lys Ala Asn Gln Arg Glu Glu Ala Tyr Lys Glu Gln 210 215 220 Ile Lys Thr Leu Thr Asn Lys Leu Lys Ala Ala Glu Ala Arg Ala Glu 225 230 235 240 Phe Ala Glu Arg Ser Val Gln Lys Leu Gln Lys Glu Val Asp Arg Leu 245 250 255 Glu Asp Glu Leu Val Asn Glu Lys Glu Lys Tyr Lys Ser Ile Thr Asp 260 265 270 Glu Leu Asp Gln Thr Phe Ser Glu Leu Ser Gly Tyr 275 280

Claims (13)

  1. 시료 중의 알레르겐을 검출하는 방법에 있어서,
    시료를 단백질 분해 효소로 처리하는 것, 및
    크로마토그래피 분리를 이용한 분석에 의해, 상기 효소 처리한 시료 중에 있어서의 알레르겐 유래 폴리펩티드의 존재의 유무를 검출하는 것을 포함하며,
    상기 알레르겐이 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상인 방법.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 알레르겐이 메밀 및/또는 갑각류인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 알레르겐이 메밀, 갑각류, 우유, 알 및 땅콩인 방법.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 알레르겐이 메밀이며, 상기 알레르겐 유래 폴리펩티드가 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상인 방법.
  5. 청구항 1에 있어서,
    상기 알레르겐이 갑각류이며, 상기 알레르겐 유래 폴리펩티드가 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상인 방법.
  6. 청구항 2에 있어서,
    상기 알레르겐 유래 폴리펩티드가 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상인 방법.
  7. 청구항 3에 있어서,
    상기 알레르겐 유래 폴리펩티드가 배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 13∼17로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 18∼21로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상과, 배열 번호 22∼24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 어느 1종 이상인 방법.
  8. 청구항 4에 있어서,
    배열 번호 1∼7로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 모두에 대해 존재의 유무를 검출하는 방법.
  9. 청구항 5에 있어서,
    배열 번호 8∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 모두에 대해 존재의 유무를 검출하는 방법.
  10. 청구항 6에 있어서,
    배열 번호 1∼12로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 모두에 대해 존재의 유무를 검출하는 방법.
  11. 청구항 7에 있어서,
    배열 번호 1∼24로 나타내는 아미노산 배열로 이루어진 폴리펩티드의 모두에 대해 존재의 유무를 검출하는 방법.
  12. 청구항 1 내지 11 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 크로마토그래피 분리를 이용한 분석이 액체 크로마토그래피 탠덤 질량분석법(LC－MS/MS)인, 방법.
  13. 청구항 1 내지 12 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 분해 효소가 트립신인 방법.
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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4242663A3 (en) * 2015-12-29 2023-11-15 Sanofi Methods for characterizing compositions comprising peanut antigens
WO2021039147A1 (ja) 2019-08-30 2021-03-04 国立医薬品食品衛生研究所長が代表する日本国 アレルゲン検出用マーカーおよびそれを用いたアレルゲン検出方法
CA3150323A1 (en) * 2019-09-12 2021-03-18 Mars, Incorporated QUANTIFICATION OF PEANUT PROTEIN IN FOOD PRODUCTS
JP7405266B2 (ja) * 2020-08-24 2023-12-26 株式会社島津製作所 質量分析制御装置、質量分析装置、質量分析方法およびプログラム
EP4293351A1 (en) * 2021-08-27 2023-12-20 ifp Privates Institut für Produktqualität GmbH Sensitive detection of food allergens by immunoenrichment and lc-ms/ms
CN114539377A (zh) * 2022-02-25 2022-05-27 青岛海关技术中心 一种使用液相色谱-质谱检测十足目水产过敏原的方法
WO2023190098A1 (ja) * 2022-03-31 2023-10-05 日本ハム株式会社 落花生アレルゲンの検査用キットおよび検査方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2013033713A1 (en) * 2011-09-02 2013-03-07 Dh Technologies Development Pte. Ltd. System and method for the detection of allergens
JP2013539039A (ja) 2010-10-01 2013-10-17 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー アレルゲンの定量および特徴付け

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP4841494B2 (ja) * 2006-12-11 2011-12-21 株式会社マルハニチロ水産 食品中タンパク質の高感度検出法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2013539039A (ja) 2010-10-01 2013-10-17 ダウ アグロサイエンシィズ エルエルシー アレルゲンの定量および特徴付け
WO2013033713A1 (en) * 2011-09-02 2013-03-07 Dh Technologies Development Pte. Ltd. System and method for the detection of allergens
JP2014525588A (ja) 2011-09-02 2014-09-29 ディーエイチ テクノロジーズ デベロップメント プライベート リミテッド アレルゲンを検出および定量するためのシステムおよび方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
A M. Abdel Rahman 등, rapid commun. mass spectrom., 2010, 24권, 페이지 2462-2470.(2010.12.31.)* *
M Takaoka 등, proceedings of the 9th international ssymposium on buckwheat, 2004,페이지 95-98.(2004.12.31.)* *
NAGAI 등, journal of aoac international, 2015, 98권, 5호, 페이지 1355-1365.(2015.12.31.)* *
박민화 등, koran j. plant res., 2009, 22권, 3호, 페이지 227-235.(2009.12.31.)* *

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