KR20180132401A - 암 치료 또는 예방용 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 암을 치료하기 위해 항-VEGFR 항체와 항-PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체 중 하나 이상의 조합을 이용한다. 항-VEGFR 항체와 항-PD-1 항체 또는 항 PD-L1 항체의 병용 투여는 약물의 시너지 효과를 발생시킴으로써, 다양한 종류의 고형암에서 단일 항체 투여 요법에 비해 유의적으로 더욱 우수한 치료, 예방 및 개선 효능을 제공한다.

Description

암 치료 또는 예방용 조성물{COMPOSITION FOR TREATING OR PREVENTING CANCER}
본 발명은 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상 및 항-VEGFR 항체를 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물에 관한 것이다.
수년간, 암을 치료하기 위해 약물, 방사능 및 화학요법을 포함한 다양한 치료 방법이 연구되어 왔다. 이에 따라 높은 치료 효능을 갖는 일부 항암 요법이 성공적으로 개발되었으나 이는 소수 암에만 국한된 것으로, 암 환자의 수는 꾸준히 증가하고 있으며, 여전히 암으로 인한 사망률은 높은 수준이다.
암의 발생 기전은 다양하다. 그 중에서 혈관신생은 암의 성장, 생존, 이동 및 전이의 중요한 구성요소로 알려져 있다. 암성 종양(cancerous tumor) 부위에 새로운 혈관의 형성은 종양 세포의 통로뿐만 아니라 가속된 종양 성장 및 발현의 영양분 공급원을 제공한다. 1971년 Dr. J. Folkman에 의해, 종양의 성장과 전이는 혈관신생 의존적이고, 이에 따라 항 혈관신생에 초점을 맞춘 치료법이 고형암에 대한 새로운 치료제가 될 수 있을 것이라는 가설이 제기된 이후, 과도한 혈관신생 기작의 억제와 관련된 연구는 다수 연구진들의 관심을 끌어왔다. 그 결과 암 치료를 위해 여러 종류의 혈관 내피 성장 인자 억제제 또는 혈관 내피 성장 인자 수용체(VEGFR) 억제제가 개발되었다. 그러나 다수의 혈관신생 억제 기작의 항암제는 실제 암 환자에서 치료 효능을 나타내지 못하거나 부작용이 보고되었다. 대표적인 VEGF 억제제, 베바시주맙(아바스틴®)은 VEGF-A에 특이적으로 결합하는 단클론 인간화 항체로, 진행성 및 전이성 암종을 포함하는 다양한 유형의 암 치료제로서 승인받았으며, 비교적 성공적인 항암제로서 평가된다. 그러나, 베바시주맙 역시 위장 천공, 단백뇨 등의 여러 부작용이 보고되었으며, 유방암을 포함한 일부 암에 대해서는 치료 효과를 나타내지 못하고 있다. 따라서, 암 치료 또는 예방 관련 업계에서는 새로운 약물에 대한 필요성이 여전히 크게 존재한다.
한편, 다양한 인간 암 조직에서 PD-1에 대한 2종의 공지된 리간드 PD-L1 및 PD-L2가 발현되는 것이 보고되었다. 이에 따라 암을 치료하기 위해 PD-1과 그의 리간드인 PD-L1 또는 PD-L2 사이의 상호작용을 억제하는 많은 치료제들이 임상 개발 중에 있다. 그러나 이들 치료제는 효과에 비해 고비용이 소요된다는 단점을 나타내며, 또한 치료 효과를 높이기 위해 많은 양을 사용하는 경우에는 면역기능을 지나치게 강화시킴에 따라 자가면역질환이 발생되는 사례가 보고되고 있어 해당 치료제를 신중하게 사용해야 한다는 의견이 제시되고 있다.
본 발명자들은 종래 기술의 문제점을 해결할 수 있는 신규 항암 요법을 개발하기 위하여 예의 노력한 결과, 항-VEGFR 항체와 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제의 조합이 단일 요법에 비해 유의적으로 더욱 우수한 항암효과를 나타내는 것을 확인하여, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 일 목적은 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 암 치료 또는 예방 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명의 일 양태는 항-VEGFR 항체, 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학 조성물은 항-VEGFR 항체, 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상의 조합물을 유효성분으로 함유한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항체"는 면역학적으로 특정 항원과 반응성을 갖는 면역글로불린 분자 또는 항원을 특이적으로 인식하는 수용체 역할을 하는 단백질 분자를 의미한다. 따라서, 본 발명에서 "항체"는 광범위한 의미로 사용되며, 다클론항체, 단일클론항체, 전장(whole) 항체(디설파이드 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄로 이루어진 항체) 및 항체 단편을 모두 포함하는 것으로 해석된다. 상기 전장 항체는 IgA, IgD, IgE, IgM 및 IgG를 포함한다. 또한 상기 IgG는 아형(subtype)으로서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함할 수 있다. 용어 "항체 단편"은 모 항체의 결합 특이성을 적어도 일부 보유하고, 모 항체의 항원 결합 영역의 일부(예를 들면, 하나 이상의 CDR) 또는 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편 또는 항체의 유사체를 의미한다. 상기 항체 단편은 예를 들면 Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, sc-Fv, 유니바디(unibody), 디아바디, 선형 항체, 나노바디, 도메인 항체 또는 항체 단편으로부터 형성된 다특이적 항체일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "VEGFR"은 혈관 내피 성장인자(vascular endothelial growth factor)의 수용체를 의미하는 것으로, 예를 들면 VEGFR-1, VEGFR-2 및/또는 VEGFR-3일 수 있다. 혈관내피세포의 생장 활성을 증진시키는 VEGF의 생물학적 기능은 VEGF에 대하여 고친화성을 가지는 VEGF 수용체를 통하여 매개되는데, 상기 VEGF 수용체는 종양 형성 동안 내피세포에서 선택적으로 발현된다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항-VEGFR 항체"는 혈관 내피 성장인자 수용체에 특이적으로 결합하여 혈관 내피 성장인자 수용체의 활성을 억제하는 항체를 의미한다. 구체적으로 상기 항-VEGFR 항체는 VEGF 수용체의 서브 타입 중 VEGFR-2에 특이적으로 결합하여 VEGFR의 활성을 중화시키는 항체일 수 있다. 또한 보다 구체적으로 상기 항-VEGFR 항체는 인간 VEGFR-2(KDR)를 표적으로 하면서 동시에 마우스나 렛트 유래의 flk-1에 대해서도 반응성을 갖는, 인간 항체일 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 프레임워크 및 CDR 영역이 인간 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는 항체를 의미하는 것으로 "완전 인간 항체"라고도 지칭된다. 본 발명에서 인간 항체는 인간 유래 면역글로불린 서열에 의해 코딩되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관내 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다.
본 발명에 따른 일 구체예에서, 상기 항-VEGFR 항체는 서열번호 1의 경쇄 CDR1, 서열번호 2의 경쇄 CDR2, 및 서열번호 3의 경쇄 CDR3를 포함하는 경쇄가변영역과 서열번호 4의 중쇄 CDR1, 서열번호 5의 중쇄 CDR2, 및 서열번호 6의 중쇄 CDR3를 포함하는 중쇄가변영역을 포함하는 항체일 수 있다. 또한 상기 항-VEGFR 항체는 바람직하게 서열번호 7의 경쇄가변영역 및 서열번호 8의 중쇄가변영역을 포함하는 항체일 수 있다. 또한 상기 항-VEGFR 항체는 보다 바람직하게 타니비루맵(TTAC-0001, WO 2008/153237), 또는 타니비루맵이 결합하는 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-1(Programmed cell death protein 1)"은 CD28 패밀리에 속하는 면역억제 수용체로서 활성화된 T세포(면역세포)의 표면에 있는 단백질을 의미하며, CD279로도 명명된다. PD-1은 2개의 리간드 PD-L1 및 PD-L2에 결합한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-1 길항제(antagonist)"는 면역 세포(T 세포, B 세포 또는 NKT 세포) 상에서 발현되는 PD-1에 대한 암 세포 상에서 발현되는 PD-L1의 결합을 차단하고, 또한 면역 세포 발현 PD-1에 대한 암 세포 상에서 발현되는 PD-L2의 결합을 차단하는, 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 의미한다. 상기 PD-1 길항제는 바람직하게 항-PD-1 항체일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "항-PD-1 항체"는 PD-1에 특이적으로 결합하여 PD-1의 활성을 억제하는 항체를 의미한다. 구체적으로 상기 항-PD-1 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하여 PD-1에 대한 PD-L1 또는 PD-L2의 결합을 차단하는 항체라면 모두 포함할 수 있다. 암세포의 표면에 있는 단백질인 PD-L1, PD-L2가 T세포의 표면에 있는 PD-1과 결합하면 T세포는 암세포를 공격하지 못하는데, 상기 항-PD-1 항체는 T세포의 PD-1 수용체에 결합하여 PD-1과 PD-L1 또는 PD-L2의 결합을 방해함으로써 T세포의 암세포 회피 기능을 억제할 수 있다.
상기 항-PD-1 항체는 예를 들어 니볼루맙, 펨브롤리주맙, MEDI0608, 피딜리주맙 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
니볼루맙(OPDIVO®)은 PD-1과 PD-1 리간드(PD-L1 및 PD-L2)와의 상호작용을 선택적으로 방지함으로써 항종양 T-세포 기능의 하향-조절을 차단하는, 완전 인간 IgG4(S228P) PD-1 면역 체크포인트 억제제 항체이다(미국 특허 번호 8,008,449; Wang et al., 2014 Cancer Immunol Res. 2(9):846-56). 펨브롤리주맙(KEYTRUDA®)은 흑색종의 치료를 위해 FDA에 의해 승인된 PD-1에 대한 인간화 모노클로날 IgG4 항체이며, 미국 특허 번호 8,354,509 및 8,900,587를 참조할 수 있다. MEDI0608은, 예를 들어 미국 특허 번호 8,609,089 B2 또는 http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=756047에 기재되어 있다. 피딜리주맙은 예를 들어 미국 특허 번호 8,686,119 B2 또는 국제공개번호 WO 2013/014668 A1의 기재를 참조할 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-L1(Programmed death-ligand 1)"은 CD274 유전자에 의해 코딩되는 단백질을 의미하며, CD274 또는 B7-H1(B7 homolog 1)라고도 알려져 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "PD-L1 길항제(antagonist)"는 PD-L1의 신호전달을 감소, 차단, 억제, 폐지 또는 저해하는 분자를 의미한다. 상기 PD-L1 길항제는 바람직하게 PD-L1과 PD-1 및/또는 B7-1 중 하나 이상의 상호작용을 차단하거나 이들의 신호전달을 억제, 또는 감소하는 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 의미한다. 보다 바람직하게 상기 PD-L1 길항제는 항-PD-L1 항체일 수 있다.
상기 항-PD-L1 항체는 예를 들어 BMS-936559, 아벨루맙, 두르발루맙, 아텔졸리주맙 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상일 수 있다.
BMS-936559(MDX-1105)은 예를 들면 국제공개번호 WO2007/005874에 기술된 내용을 참조할 수 있다. 아벨루맙(MSB0010718C)은 머크와 화이자가 개발한 완전 인간(human) PD-L1 IgG1 단클론 항체이다. 두르발루맙(MEDI4736)은 아스트라제네카에서 개발된 면역항암제이다. 아테졸리주맙(MPDL3280A)은 제넨텍/로슈에서 개발된 PD-L1에 대한 IgG1 이소형의 완전 인간화(fully humanized) 단클론 항체이다.
본 발명의 약학 조성물은 혈관신생억제능을 갖는 항-VEGFR 항체와 면역항암 기능을 갖는 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상의 조합물을 유효성분으로 함유하고 있으며, 이들 항체의 조합을 통해 본 발명의 약학 조성물은 각 단일 항체의 효과에 비해 증폭된 항암 효과를 갖는다. 일 실시예에서, 타니비루맵과 항 PD-1 항체의 조합물의 투여는 각 항체의 단일 투여에 비해 뛰어난 폐암 및 결장암 마우스 모델의 종양의 크기 감소 효과를 보였다. 다른 실시예에서, 폐암 및 결장암 마우스 모델에 타니비루맵과 항 PD-L1 항체의 조합물 투여 또한 각 항체의 단일 투여에 비해 유의한 종양 크기 감소 효과를 나타냈다.
본 발명의 약학 조성물은 암을 치료 또는 예방하기 위해 사용된다. 상기 암은 고형암일 수 있으며, 바람직하게는 뇌종양, 위암, 간암, 폐암, 갑상선암, 유방암, 자궁경부암, 대장암, 췌장암, 직장암, 대장직장암, 전립선암, 신장암, 흑색종, 골전이암, 난소암으로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다.
상기 약학 조성물은 약학적 유효량의 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상과 약학적 유효량의 항-VEGFR 항체를 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여되도록 제형화될 수 있다.
동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여를 위해, 본 발명의 조성물에 함유되는 VEGFR 항체 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상은 각각 별도의 용기로 분리시켜 제형화되거나, 동일한 용기에서 함께 제형화될 수 있다.
상기 약학적 유효량은 "치료 유효량" 및 "예방 유효량"을 포함한다. 용어 "치료 유효량"은 약물 또는 치료제가 단독으로 또는 다른 치료제와 조합되어 사용되는 경우에, 질환 증상의 중증도 감소, 질환 증상이 없는 기간의 빈도 및 지속기간의 증가, 또는 질환 고통으로 인한 손상 또는 장애의 방지를 나타낼 수 있는 약물의 임의의 양을 의미한다. 용어 "예방 유효량"은 암 발생 위험이 있는 개체 또는 암 재발로 인해 고통받을 위험이 있는 개체에서 암의 발생 또는 재발을 억제하는 약물의 임의의 양을 의미한다. 유효량의 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소 등에 따라 결정될 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 다양한 방법 및 전달 시스템 중 임의의 것을 사용하여 조성물을 개체에게 물리적으로 도입하는 것을 지칭한다. 본 발명의 약학 조성물을 위한 투여 경로는 모든 투여 경로를 포함한다. 바람직하게는, 비경구 투여일 수 있으며, 예를 들어 정맥내, 근육내, 피하, 복강내, 척수 또는 다른 비경구 투여 경로, 예컨대 주사 또는 주입에 의한 투여 경로를 포함한다. 본 발명의 조성물을 위한 투여 횟수는 예를 들어 1회, 복수 회, 및/또는 하나 이상의 연장된 기간에 걸쳐 수행될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 구체적으로 암을 갖는 개체의 질환 발병 정도에 따라 본 발명의 조성물을 0.1 내지 100 mg/kg을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 그 투여량은 투여 경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이, 특히 환자가 갖는 암의 발병 정도 등에 따라 증감될 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여되거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있다. 다른 치료제와 병용하여 투여되는 경우, 본 발명의 조성물과 다른 치료제는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 상기 다른 치료제는 암 퇴행을 촉진하거나 또는 추가로 종양 성장을 방지하는 화합물, 단백질 등의 약물일 수 있으며, 또한 방사선 치료 등 약물 요법 이외의 기타 항암 요법을 모두 포함한다.
본 발명의 약학 조성물은 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 조성물에 함유될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제는 예를 들면 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 또 다른 양태는 암을 갖는 개체에 항-VEGFR 항체, 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상의 조합물을 투여하는 단계를 포함하는 암 치료 또는 예방 방법을 제공한다.
본 발명에 따른 암 치료 또는 예방 방법에서 각 용어는 특별히 언급하지 않는 한 상기 암 치료 또는 예방용 약학 조성물에서 상기한 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 "개체"는 임의의 인간 또는 비인간 동물을 포함한다. 용어 "비인간 동물"은 척추동물, 예컨대 비인간 영장류, 양, 개, 및 설치류, 예컨대 마우스, 래트 및 기니 피그일 수 있다. 상기 개체는 바람직하게 인간일 수 있다. 용어 "개체"는 본 명세서에서 "대상체" 및 "환자"와 상호교환적으로 사용 가능하다.
상기 암 치료는 예를 들면 비치료 개체에 비해 종양 성장을 약 10% 이상, 약 20% 이상, 약 40% 이상, 약 60% 이상, 또는 약 80% 이상 억제할 수 있다.
본 발명에 따른 암 치료 또는 예방 방법에서, 상기 항-VEGFR 항체와 상기 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상은 동시에, 순차적으로, 또는 개별적으로 개체에 투여될 수 있다. 상기 "동시" 투여는 항-VEGFR 항체와 상기 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상을 동일한 주입방법을 통해 한번에 투여되는 것을 의미한다. 상기 "순차적" 투여는 별개의 주입방법을 이용하여 항-VEGFR 항체와 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상을 투여하되, 각각의 항체를 비교적 연속적으로 투여하는 것을 의미하는 것으로, 투여 간격에 소모되는 시간으로 가능한 최소한의 시간을 허락한다. 상기 "개별적" 투여는 일정 시간 간격을 두고 항-VEGFR 항체와 상기 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상을 투여하는 것을 의미한다. 상기 항-VEGFR 항체 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상의 조합물의 투여 방법은 환자의 치료 효능 및 부작용을 고려하여 당업자가 적절하게 선택할 수 있다.
본 발명에 따른 항-VEGFR 항체 및 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상의 조합을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물은 단일 투여 요법에 비해 유의적으로 더욱 우수한 암 치료, 예방 및 개선 효과를 제공한다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1. 항-VEGFR-2와 항-PD-1 항체 조합의 폐암 치료 효과 확인
1-1. 폐암 마우스 모델 제작
폐암 마우스 모델을 제작하기 위해 Fluc-LL/2(LLC1, lewis lung carcinoma; 마우스 기원) 세포주를 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 세포의 형태, 생존력, 배가 시간(doubling time) 등을 항시 체크한 후, 세포의 생장 곡선 등 생존 능력(viability)에 이상이 없음을 확인한 다음, 배양된 Fluc-LL/2의 세포를 마우스에 이식하였다. 5주령의 C57BL/6N 마우스를 실험에 사용하였으며, 동물 실험은 아산생명의학연구원의 실험동물윤리위원회의 가이드라인에 따라 수행하였다. 본 실험에 사용된 마우스는 사육실에서 1주일간의 모니터링 및 순화 기간을 거친 후, 배양된 폐암 세포를 이식하였다. 이식 후 1주일마다 2회 종양 크기를 측정하였으며, 종양 크기가 100mm3이 되었을 때, 마우스를 하기 약물 투여 시험에 이용하였다.
1-2. 약물 투여
항-VEGFR 항체와 항-PD-1 항체 조합물의 종양 치료 효과를 확인하기 위해, 항-VEGFR 항체인 TTAC-0001(타니비루맵; 파멥신), 항-PD-1 항체인 PD-1(InVivoMab anti-mouse PD-1; Bio X Cell), 및 대조군으로 Rat IgG2a 항체를 사용하였다. 상기 실시예 1-1에서 제작된 폐암 마우스 모델에 각 약물을 투여하였으며, 구체적인 투여 방법은 하기 표 1에 나타냈다.
실험군 약물 n수 투여방법 투여횟수
1 Rat IgG2a 6 정맥 볼루스 투여 (i.v. bolus injection) 총 4회
(3일마다 1회씩)
2 TTAC-0001 6
3 PD-1 6
4 TTAC-0001 & PD-1 6
1-3. 광학 이미지(IVIS) 분석
약물 투여 전을 기점으로 IVIS 영상을 획득하였으며(Prescan), 약물 투여 시작 시점의 주부터 7일마다 1회 IVIS 영상을 획득하였다. 총 3주에 걸쳐 IVIS 영상을 획득한 후(Prescan 포함 총 3회) 동물을 안락사시켰다. 영상의 분석은 Living image를 이용하였고, 주입 부위를 처리대상 영역(ROI)으로 설정하여 분석하였으며 ROI에서 나오는 신호 강도 값을 저장하였다.
1-4. 면역조직화학(Immunohistochemistry) 분석
면역조직화학 분석을 수행하기 위해, H&E 염색을 수행하였으며, Ki-67, CD31, CD8, CD4, PD-1 항체를 이용하였다. 탈파라핀화된 조직 슬라이스를 준비한 후 PBS로 2번에 걸쳐 헹굼을 수행하였다(각 10분). 블로킹 단계 전처리 과정 및 항원회복 과정(antigen retrieval)을 위하여 회수(retrieval) 버퍼를 90~95℃에 이르도록 가열한 후, 슬라이스를 버퍼에 20~40분 동안 담가두었다. 그 후, 슬라이스가 담긴 버퍼의 온도를 상온에서 20~40분 동안 식힌 다음, PBS로 3회 헹굼을 수행하였다(각 10분). 항원 회복 과정을 거치지 않는 경우 슬라이스를 0.5% 트리톤-X100이 첨가된 PBS 용액에 20분 동안 반응시켰다. 그 후 PBS 버퍼로 2회 세척하고, PBS 버퍼(10% 정상 혈청, 0.1% 트리톤-X100, 3% BSA 첨가됨)를 이용하여 약 30분~2시간 동안 블로킹 단계를 수행하였다. 각각의 일차 항체를 희석 비율에 맞춰 2% BSA가 첨가된 PBS 용액에 넣은 후 4℃ 챔버에서 밤새(12~16 시간) 반응시켰다. 다음날 일차 항체가 포함된 용액을 수거한 후, PBS로 2번에 걸쳐 15분 동안 헹굼을 수행하였다. 이차 항체를 1% BSA가 첨가된 PBS 용액에 희석하여 45분간 반응시킨 후, 핵 염색을 수행하였다. 이어서, PBS 세척을 15분 동안 3회 수행한 후, 마운팅(mounting) 용액을 조직에 떨어뜨린 다음 커버글래스를 덮고 도말하였다. 그 후, 현미경으로 조직을 촬영하고 Image J를 이용하여 분석하였다.
실시예 2. 항-VEGFR-2 항체와 항-PD-1 항체 조합물의 결장암 치료 효과
2-1. 결장암 마우스 모델 제작
결장암 마우스 모델을 제작하기 위해 Fluc-MC-38(colon adenocarcinoma; 마우스 기원) 세포주를 10% FBS, 1% 페니실린/스트렙토마이신이 첨가된 DMEM 배지를 이용하여 5% CO2, 37℃ 인큐베이터에서 배양하였다. 배양된 세포주를 마우스에 이식하였으며, 구체적인 방법은 상기 실시예 1-1의 폐암 마우스 모델 제작 방법과 동일하게 수행하였다.
2-2. 약물 투여
항-VEGFR 항체와 항-PD-1 항체 조합물의 결장암 치료 효과를 확인하기 위해, 항-VEGFR 항체인 TTAC-0001(타니비루맵; 파멥신), 항-PD-1 항체인 PD-1(InVivoMab anti-mouse PD-1; Bio X Cell), 및 대조군으로 Rat IgG2a 항체를 상기 실시예 2-1에서 제작된 결장암 마우스 모델에 각 약물을 투여하였다. 구체적인 투여 방법은 하기 표 2에 나타냈다.
실험군 약물 n수 투여방법 투여횟수
1 Rat IgG2a 6 정맥 볼루스 투여 (i.v. bolus injection) 총 4회
(3일마다 1회씩)
2 TTAC-0001 6
3 PD-1 6
4 TTAC-0001 & PD-1 6
2-3. 결장암 치료 효과
약물의 결장암 치료 효과 확인을 위해, 광학 이미지(IVIS) 분석 및 면역조직화학 분석을 수행하였다. 광학 이미지(IVIS) 분석은 상기 실시예 1-3과 동일한 방법으로 실시하였으며, 면역조직화학 분석은 상기 실시예 1-4와 동일한 방법을 이용하여 수행하였다.
<110> PharmAbcine Inc. <120> COMPOSITION FOR TREATING OR PREVENTING CANCER <130> DP17032KR <160> 8 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody LCDR-1 <400> 1 Arg Gly Asp Asn Leu Gly Asp Val Asn Val His 1 5 10 <210> 2 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody LCDR-2 <400> 2 Tyr Asp Ala Asp Arg Pro Ser 1 5 <210> 3 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody LCDR-3 <400> 3 Gln Val Trp Asp Arg Thr Ser Glu Tyr Val 1 5 10 <210> 4 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody HCDR-1 <400> 4 Ser Tyr Trp Met His 1 5 <210> 5 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody HCDR-2 <400> 5 Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 1 5 10 15 Ser <210> 6 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody HCDR-3 <400> 6 Ile Trp Gly Pro Ser Leu Thr Ser Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 7 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody LCV <400> 7 Asn Phe Met Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Lys 1 5 10 15 Thr Ala Arg Ile Thr Cys Arg Gly Asp Asn Leu Gly Asp Val Asn Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Met Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ala Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Val Glu Ala Gly 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Arg Thr Ser Glu Tyr 85 90 95 Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Val Thr Val Leu Gly 100 105 <210> 8 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGFR-2 antibody HCV <400> 8 Gln Met Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Glu Ile Asn Pro Gly Asn Gly His Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Thr Val Asp Lys Ser Ala Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Ile Trp Gly Pro Ser Leu Thr Ser Pro Phe Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (12)

  1. 항-VEGFR 항체; 및
    PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상을 포함하는 암 치료 또는 예방용 약학 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 항-VEGFR 항체는 VEGFR-2에 특이적으로 결합하여 VEGFR의 활성을 중화시키는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 항-VEGFR 항체는 서열번호 1의 경쇄 CDR1, 서열번호 2의 경쇄 CDR2 및 서열번호 3의 경쇄 CDR3를 포함하는 경쇄가변영역; 및 서열번호 4의 중쇄 CDR1, 서열번호 5의 중쇄 CDR2 및 서열번호 6의 중쇄 CDR3를 포함하는 중쇄가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 항-VEGFR 항체는 서열번호 7의 경쇄가변영역 및 서열번호 8의 중쇄가변영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 항-VEGFR 항체는 타니비루맵, 또는 타니비루맵이 결합하는 에피토프와 동일한 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 PD-1 길항제는 항-PD-1 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  7. 제6항에 있어서,
    상기 항-PD-1 항체는 PD-1에 특이적으로 결합하여 PD-1에 대한 PD-L1 또는 PD-L2의 결합을 차단하는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  8. 제6항에 있어서,
    상기 항-PD-1 항체는 니볼루맙, 펨브롤리주맙, MEDI0608, 피딜리주맙 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 PD-1 길항제는 항-PD-L1 항체인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 항-PD-L1 항체는 BMS-936559, 아벨루맙, 두르발루맙, 아텔졸리주맙 및 이의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  11. 제1항에 있어서,
    상기 약학 조성물은 약학적 유효량의 PD-1 길항제 또는 PD-L1 길항제 중 하나 이상과 약학적 유효량의 항-VEGFR 항체를 동시에, 개별적으로 또는 순차적으로 투여하도록 제형화된 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 암은 고형암인 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
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WO2023043156A1 (ko) * 2021-09-15 2023-03-23 주식회사 파멥신 항-vegfr2(kdr) 개량 항체 및 이의 용도
WO2023211068A1 (ko) * 2022-04-25 2023-11-02 웰마커바이오 주식회사 항-igsf1 항체 및 항-pd-1 항체를 포함하는 암 치료용 약학 조성물

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