KR20180119467A - Anti-cancer Composition Comprising Lawsone - Google Patents

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KR20180119467A KR1020170183134A KR20170183134A KR20180119467A KR 20180119467 A KR20180119467 A KR 20180119467A KR 1020170183134 A KR1020170183134 A KR 1020170183134A KR 20170183134 A KR20170183134 A KR 20170183134A KR 20180119467 A KR20180119467 A KR 20180119467A
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Abstract

The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating a cancer including lawson (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone, HNQ) as an effective ingredient. Also, the present invention relates to a food composition and a feed composition for preventing and improving the caner including the lawson as the effective ingredient. According to the present invention, the lawson reduces viability of a HeLa cervical cancer cell, induces cell death due to cytotoxicity, causes cell cycle arrest and aging and induces a cell death path. The lawson shows an effect of reducing tumor formation in a xenotransplantation athymic nude mouse. Therefore, the lawson according to the present invention can be particularly utilized as a natural remedial agent for cervical cancer treatment.

Description

로손을 유효성분으로 포함하는 항암 조성물 {Anti-cancer Composition Comprising Lawsone}Anti-cancer Composition Comprising Lawsone ", which contains Lawson as an active ingredient,

본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물에 관한 것이다. The present invention relates to a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

또한, 본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 사료 조성물에 관한 것이다. The present invention also relates to a food composition and a feed composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

자궁경부암은 젊은 여성에게 심각한 우려를 낳고 있으며, 매년 전세계적으로 자경경부암에 의한 약 20 만 명의 사망과 50 만명의 발병이 확인된다. 초기 단계 암의 대략 80-90%는 수술 및 화학요법으로 치료할 수 있으나, 재발 및 전이성 질환의 가능성은 여전히 주요 관심사에 해당한다. 자궁경부암의 주요 원인은 인간 유두종 바이러스 (human papillomavirus, HPV)이다. HPV는 성적으로 전염되며 고위험군의 만성 감염은 자궁경부암을 일으킬 수 있다. HPV 감염에서 자궁경부암에 이르기까지 보통 10년에서 20년이 소요된다. 결과적으로, 자궁경부암 환자는 이미 치료가 어려운 진행 단계에 들어간 경우에만 탐지된다. 그러나 전신 화학 요법과 방사선 요법 모두 심각한 부작용과 관련성이 높다. 따라서 조기에 암을 치료하기 위해서는 새로운 진단, 치료 및 예방 방법이 시급히 필요하다.Cervical cancer is a serious concern for young women, and about 200,000 deaths and 500,000 cases of cervical cancer are diagnosed worldwide each year. Approximately 80-90% of early stage cancers can be treated with surgery and chemotherapy, but the likelihood of recurrence and metastatic disease remains a major concern. The main cause of cervical cancer is human papillomavirus (HPV). HPV is sexually transmitted, and chronic infections of high risk can lead to cervical cancer. It usually takes 10 to 20 years from HPV infection to cervical cancer. As a result, patients with cervical cancer are detected only when they have already entered a difficult stage of treatment. However, both systemic chemotherapy and radiotherapy are associated with serious side effects. Therefore, new methods of diagnosis, treatment and prevention are urgently needed to treat cancer early.

나프토퀴논(naphthoquinone)의 항종양 활성은 종양 세포에서 확인된 바 있다. 또한, 나프토퀴논이 산화 스트레스를 일으켜 산화 환원 신호 전달에 영향을 줄 수 있다는 것 역시 보고된 바 있다. 특히, CHNQ와 같은 1,4-나프토퀴논은 산화 환원 순환을 통해 하나 또는 두 개의 전자를 받아들여 음이온 또는 이음이온(di-anion) 종을 형성 할 수 있는 퀴논기를 2 개 함유하고 있다.  The antitumor activity of naphthoquinone has been confirmed in tumor cells. It has also been reported that naphthoquinone can cause oxidative stress and thus affect redox signaling. In particular, 1,4-naphthoquinone, such as CHNQ, contains two quinone groups capable of accepting one or two electrons through the redox cycle to form anions or di-anion species.

이것은 산소로의 전자(들) 전달을 통하여 초과산화물 (superoxide)을 생성하는 ROS (reactive oxygen species)의 생성을 유도할 수 있으며, 이는 NADPH-cytochrome-P-450 환원 효소와 같은 플라보효소 (flavoenzyme)에 의해 촉매된다. 인간 신생아 섬유아세포에 CHNQ를 처리하면, ROS가 생성된다는 것이 종래 연구에 보고된 바 있다. 향상된 ROS 생성으로 세포주기를 정지시키고, 뒤이어 암세포에서 산화 스트레스와 관련된 자가 포식 세포사멸을 유발한다. 이는 농도 의존적인 증식의 감소 및 세포 독성의 향상을 동반하였다. 이러한 현상은 LC3, Beclin-1, Bax, caspase-3 등의 자식작용 또는 세포사멸 마커의 증가를 동반하였다. 따라서 항암제 잠재력을 가진 식물 화합물을 발견하는 것이 중요하다.This can lead to the production of reactive oxygen species (ROS) that produce superoxide through electron (s) transfer to oxygen, which is a flavoenzyme such as NADPH-cytochrome-P-450 reductase, Lt; / RTI > Previous studies have reported that treatment of human neonatal fibroblasts with CHNQ produces ROS. Improved ROS generation results in arresting the cell cycle, followed by autoprosthetic cell death associated with oxidative stress in cancer cells. This was accompanied by a decrease in concentration-dependent proliferation and an improvement in cytotoxicity. This phenomenon was accompanied by an increase in the number of childhood or cell death markers such as LC3, Beclin-1, Bax, and caspase-3. It is therefore important to find plant compounds with anticancer potential.

천연물은 항암제의 주요 공급원이다. 천연물은 최근 화학 요법의 독성을 고려하여 암에 대한 치료제로서 널리 보급되고 있다. 천연물은 안전성이 보장되며, 정상 세포의 돌연변이 유발성을 감소시키는 능력을 가지는 것이 밝혀진바 있다.Natural products are a major source of anticancer drugs. Natural products have recently become widespread as a therapeutic against cancer in consideration of the toxicity of chemotherapy. Natural products have been shown to be safe and capable of reducing mutagenic potential of normal cells.

일반적으로 헤나(henna)라고 불리는 Lawsonia inermis L. (동의어 Lawsonia alba)는 Lythraceae 속에 속하며 해당 속 중 유일한 종이다. 그것은 나무처럼 작은 관목으로 높이 2 ~ 6m이며, 가시가 있는 작은 가지를 갖는다. Lawsonia inermis L. (synonym Lawsonia alba), commonly referred to as henna, belongs to the genus Lythraceae and is the only species in the genus. It is a small tree-like shrub with a height of 2 ~ 6m and a small branch with spikes.

따라서 본 연구의 목적은 자궁 경부암 세포주인 HeLa에 대한 HNQ (Lawsone)의 자가포식 (Autophagy) 및 세포자멸 효과를 조사하는 것이다.Therefore, the purpose of this study is to investigate the effect of HNQ (Lawsone) on autophagy and apoptosis in cervical cancer cell line HeLa.

이에 본 발명자들은 헤나 유래의 로손 (lawson, 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone; HNQ)의 HeLa 자궁 경부암 세포에 대한 효과를 확인하였으며, 그 결과, 로손이 HeLa 자궁 경부암 세포의 생존력을 감소시키고, 세포 독성에 의한 세포 사멸을 유도하며, 세포주기 정지 및 노화를 야기하고, 세포 사멸 경로를 유도함을 확인하였다. 또한, 로손이 이종 이식 누드 마우스 내에서 종양 형성을 감소하는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하기에 이르렀다. Accordingly, the present inventors confirmed the effect of henna-derived lawson (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone) (HNQ) on HeLa cervical cancer cells. As a result, Lawson reduced the viability of HeLa cervical cancer cells, Induces apoptosis by cytotoxicity, induces cell cycle arrest and senescence, and induces apoptosis pathway. In addition, it has been confirmed that Lawson has an effect of reducing tumor formation in a xenografted nude mouse, and the present invention has been accomplished.

이에 본 발명의 목적은, 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다. Accordingly, an object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

또한, 본 발명의 다른 목적은 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 사료 조성물을 제공하는 것이다. Another object of the present invention is to provide a food composition and a feed composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

또한, 본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물 및 사료 조성물을 제공한다. The present invention also provides a food composition and a feed composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

본 발명에 따르면, 로손 (lawson, 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone; HNQ)은 HeLa 자궁 경부암 세포의 생존력을 감소시키고, 세포 독성에 의한 세포 사멸을 유도하며, 세포주기 정지 및 노화를 야기하고, 세포 사멸 경로를 유도한다. 로손이 이종 이식 누드 마우스 내에서 종양 형성을 감소하는 효과를 나타내었다.According to the present invention, lawson (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone) (HNQ) decreases the viability of HeLa cervical cancer cells, induces apoptosis by cytotoxicity, causes cell cycle arrest and senescence , Leading to apoptotic pathways. Lawson showed the effect of reducing tumor formation in xenotransplantation nude mice.

이에, 본 발명에 따른 로손은 자궁경부암 치료에 효과적인 천연물 치료제로 활용될 수 있을 것으로 기대된다. Accordingly, it is expected that Lawson according to the present invention can be used as a natural agent for treating cervical cancer.

도 1에서,
(A) HNQ의 대표적인 구조을 나타낸 도이다.
(B) HeLa 자궁 경부암 세포 (0-100 μm)에 HNQ의 MTT 분석결과를 나타낸 도이다.
(C) HeLa 세포에서 형태학적 변화와 GFP LC3 puncta 발현이 농도 의존적으로 증가함을 확인한 결과이다.
(D) HNQ의 존재 하에서 클론원성 형성 (Clonogenic formation)을 확인한 결과이다.
모든 실험은 3 번 반복실험하였으며, 막대 그래프의 각 값은 3개의 독립적 인 실험의 평균 ±SD를 나타낸다. 값은 대조군에 대하여, *** p <0.001, ** p <0.01이다.
그림 2에서,
(A) 상측은 DAPI, GFP-LC3 염색과 GFP-LC3 puncta 병합한 도로서, 농도의존적으로 증가한 것을 확인할 수 있다. 현미경 영상은 scale bar 0.1mm에서 20x에서 촬영한 이미지이다.
하측은 아크리딘 오렌지 산성 액포가 용량 의존적으로 상승되는 것을 나타낸 도이다. 스케일 바 = 0.1mm로 40x에서 촬영한 이미지이다.
(B) 자가포식 (autophagy) 마커를 면역블롯팅을 이용하여 평가하였다. LC3, ATG5, ATG7, 4EBP-1, APOL-1, Beclin-1, p-mTOR, p-AKT은 β-액틴으로 정규화 하였다. 모든 실험은 3 회 반복하였다.
그림 3에서
(A) SA-β-gal (Senescence-associated β-galactosidase) 활성을 염색한 결과이다. HeLa 세포에 HNQ를 처리 한 후 SA-β galactosidase는 의존적으로 증가하는 것으로 나타났다. 40X 배율로 촬영한 현미경 이미지 (scale bar = 0.1mm).
(B) 세포주기 정지 마커 Cdk5, Cdk4, 사이클린 D1 발현을 확인하였으며, 이를 β-액틴과 비교하였다. 모든 실험은 3 회 반복하였다.
도 4에서
(A) 상부은 AO/PI을 통하여 생존/사멸 염색을 수행한 도이다. 여기서 녹색은 생존한 세포를 나타내고 빨간색은 사멸 세포를 나타낸다. Scale bar = 0.1 mm로 20x에서 찍은 현미경 사진이다. 하부의 DCHFDA 염색에 따른 ROS 염색결과는 농도 의존적으로 ROS 생산량이 증가된 것을 나타낸다. Scale bar = 0.1 mm로 20x에서 찍은 현미경 사진이다.
(B) 면역블롯팅을 통하여 세포사멸 (apoptotic) 마커에 대한 HNQ의 효과를 나타낸 도이다. Bax, Bcl2, Cleaved caspase-3, p53, p-p38, JNK, Caspase-9은 β- 액틴으로 정규화하였으며, 모든 실험은 3 회로 반복되었다.
도 5에서,
(A) HeLa 이종 이식 모델에서 50 및 100 mg/kg HNQ를 4 주 동안 처리한 후 대조군과 비교한 결과를 나타낸 도이다. (B) 처리 후, 종양 부피 및 처리 후의 기간경과를 표시한 도이다. 종양 사이즈는 HNQ 처리 후 감소함을 확인하였다. (C) HNQ로 처리한 후에 체중이 정상에 가까워졌음을 확인한 도이다. 모든 실험은 3 회 반복되었다.1,
(A) Representative structure of HNQ.
(B) MTT analysis of HNQ in HeLa cervical cancer cells (0-100 μm).
(C) Morphological changes and GFP LC3 puncta expression in HeLa cells were increased in a dose dependent manner.
(D) Clonogenic formation in the presence of HNQ.
All experiments were repeated three times and each value in the bar graph represents the mean ± SD of three independent experiments. Values are *** p < 0.001, ** p < 0.01 for the control group.
In Figure 2,
(A), the concentration of DAPI, GFP-LC3 staining and GFP-LC3 puncta was increased in a concentration-dependent manner. The microscope image is taken at 20x at scale bar 0.1mm.
And the lower side shows a dose-dependent elevation of acridine orange acidic vacuole. It is an image taken at 40x with scale bar = 0.1mm.
(B) autophagy markers were evaluated using immunoblotting. 1, p-mTOR, p-AKT were normalized to? -Actin. All experiments were repeated 3 times.
In Figure 3
(A) Staining of SA-β-gal (senescence-associated β-galactosidase) activity. After treatment of HNQ with HeLa cells, SA-β galactosidase was found to increase dependently. A microscope image taken at 40X magnification (scale bar = 0.1mm).
(B) Expression of cell cycle arrest markers Cdk5, Cdk4 and cyclin D1 was confirmed and compared with β-actin. All experiments were repeated 3 times.
4,
(A) The upper part shows survival / death killing through AO / PI. Here, green represents surviving cells and red represents dead cells. It is a photomicrograph taken at 20x with scale bar = 0.1 mm. The result of ROS staining according to the lower DCHFDA staining indicates that the ROS production is increased in a concentration dependent manner. It is a photomicrograph taken at 20x with scale bar = 0.1 mm.
(B) shows the effect of HNQ on apoptotic markers through immunoblotting. Bax, Bcl2, Cleaved caspase-3, p53, p-p38, JNK and Caspase-9 were normalized with β-actin and all experiments were repeated three times.
5,
(A) HeLa xenograft model with 50 and 100 mg / kg HNQ for 4 weeks and then compared with control group. (B) shows the volume of the tumor and the elapsed time after the treatment. Tumor size decreased after HNQ treatment. (C) After the treatment with HNQ, it was confirmed that the body weight became close to normal. All experiments were repeated three times.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.The present invention provides a pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, comprising Lawson as an active ingredient.

본 발명에서 로손 (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone)은 빨간색-오렌지 염료로서 헤나 식물(Lawsonia inermis)뿐만 아니라 부레옥잠의 꽃 등으로부터 추출할 수 있다. 해당 로손은 상기 화합물을 포함하고 있는 다양한 식물로부터 추출할 수 있으며, 그 식물의 종류를 제한하지 않는다. In the present invention, 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone can be extracted not only from henna plants (Lawsonia inermis) but also from water hyacinth flowers as red-orange dyes. The Lawson can be extracted from various plants containing the compound, and the kind of the plant is not limited.

본 발명의 로손은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산, 아인산 등과 같은 무기산류, 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류 등과 같은 무독성 유기산, 아세트산, 안식향산, 구연산, 젖산, 말레인산, 글루콘산, 메탄설폰산, 4-톨루엔설폰산, 주석산, 푸마르산 등과 같은 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염의 종류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.The Lawson of the present invention can be used in the form of a pharmaceutically acceptable salt, and as the salt, an acid addition salt formed by a pharmaceutically acceptable free acid is useful. Acid addition salts include those derived from inorganic acids such as hydrochloric acid, nitric acid, phosphoric acid, sulfuric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, nitrous acid, phosphorous acid and the like, aliphatic mono- and dicarboxylates, phenyl-substituted alkanoates, Derived from organic acids such as acetic acid, benzoic acid, citric acid, lactic acid, maleic acid, gluconic acid, methanesulfonic acid, 4-toluenesulfonic acid, tartaric acid, fumaric acid and the like. Examples of such pharmaceutically non-toxic salts include sulfate, pyrosulfate, bisulfate, sulfite, bisulfite, nitrate, phosphate, monohydrogenphosphate, dihydrogenphosphate, metaphosphate, pyrophosphate chloride, bromide, But are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, but are not limited to, halides, halides, halides, halides, halides, halides, But are not limited to, lactose, sebacate, fumarate, maleate, butyne-1,4-dioate, hexane-1,6-dioate, benzoate, chlorobenzoate, methylbenzoate, dinitrobenzoate, Methoxybenzoate, phthalate, terephthalate, benzene sulfonate, toluene sulfonate, chlorobenzene Sulfonates, methanesulfonates, propanesulfonates, naphthalene-1-sulfonates, and the like, as well as sulfonates such as benzyl sulfonate, sulfonate, xylene sulfonate, phenylacetate, phenylpropionate, phenylbutyrate, citrate, lactate, -Sulfonate, naphthalene-2-sulfonate, mandelate, and the like.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법으로 제조할 수 있으며, 예를 들면 로손 또는 로손 유도체를 메탄올, 에탄올, 아세톤, 메틸렌클로라이드, 아세토니트릴 등과 같은 유기용매에 녹이고 유기산 또는 무기산을 가하여 생성된 침전물을 여과, 건조시켜 제조하거나, 용매와 과량의 산을 감압 증류한 후 건조시켜 유기용매 하에서 결정화시켜셔 제조할 수 있다. The acid addition salt according to the present invention can be prepared by a conventional method. For example, it is possible to dissolve a Lawson or a Lawson derivative in an organic solvent such as methanol, ethanol, acetone, methylene chloride, acetonitrile and the like, Followed by filtration and drying. Alternatively, the solvent and excess acid may be distilled off under reduced pressure, followed by drying and crystallization in an organic solvent.

또한, 염기를 사용하여 약학적으로 허용가능한 금속염을 만들 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻는다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 음염(예, 질산은)과 반응시켜 얻는다.In addition, bases can be used to make pharmaceutically acceptable metal salts. The alkali metal or alkaline earth metal salt is obtained, for example, by dissolving the compound in an excess amount of an alkali metal hydroxide or an alkaline earth metal hydroxide solution, filtering the insoluble compound salt, and evaporating and drying the filtrate. At this time, it is preferable for the metal salt to produce sodium, potassium or calcium salt. In addition, the corresponding salt is obtained by reacting an alkali metal or alkaline earth metal salt with a suitable salt (such as silver nitrate).

나아가, 본 발명은 상기 로손 및 이의 약학적으로 허용가능한 염뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 용매화물, 광학 이성질체, 수화물 등을 모두 포함한다.Furthermore, the present invention encompasses the above Lawson and pharmaceutically acceptable salts thereof as well as solvates, optical isomers, hydrates and the like which can be prepared therefrom.

또한, 상기 로손은 화학적, 또는 생물학적으로 합성될 수 있으며, 그 합성 방법을 제한하지 않는다. In addition, the Lawson can be chemically or biologically synthesized, and the synthesis method thereof is not limited.

본 발명에서 암은 고형암 또는 비고형암일 수 있다. 고형암은 예를 들어 간, 폐, 유방, 피부 등 장기에 암 종양이 발생한 것을 말한다. 비고형암은 혈액 내에서 발생한 암이고, 혈액암으로도 불린다. 상기 암은 암종 (carcinoma), 육종(sarcoma), 조혈세포 유래의 암, 배세포 종양(germ cell tumor), 또는 모세포종(blastoma)일 수 있다. 암종은 상피세포(epithelial cells) 유래의 암일 수 있다. 육종은 각 조직이 골수 밖의 중간엽 세포(mesenchymal cell)에서 유래된 세포로부터 발생된 것일 수 있는 결합 조직(즉, 뼈, 연골, 지방, 및 신경)으로부터 유래된 암일 수 있다. 조혈세포 유래의 암은 골수를 떠나 림프절 및 혈액에서 성숙하는 경향이 있는 조혈 세포로부터 유래할 수 있다. 배세포 종양은 다능성 세포(pluripotent cell)로부터 유래된 암일 수 있다. 상기 다능성 세포는 정소 또는 난소에 종종 존재할 수 있다. 모세포종은 미성숙 전구 세포 또는 배아 조직으로부터 유래할 수 있다. 상기 암은 흑색종, 뇌척수종양, 두경부암, 폐암, 유방암, 흉선종, 중피종, 식도암, 위암, 대장암, 간암, 췌장암, 담도암, 신장암, 방광암, 전립선암, 고환암, 생식세포종, 갑상선암, 난소암, 자궁 경부암, 자궁 내막암, 림프종, 골수형성이상 증후군(myelodysplastic syndromes: MDS), 골수섬유증(myelofibrosis), 급성 백혈병, 만성 백혈병, 다발성 골수종, 육종, 및 피부암으로 이루어진 군으로부터 선택된 것일 수 있다.In the present invention, the cancer may be solid cancer or non-solid cancer. Solid tumors are cancerous tumors that occur in organs such as the liver, lungs, breast, and skin. Non-solid cancer is cancer that develops in the blood, also called blood cancer. The cancer may be carcinoma, sarcoma, cancer derived from hematopoietic cells, germ cell tumor, or blastoma. Carcinoma may be cancer from epithelial cells. Sarcoma may be a cancer derived from connective tissue (i.e., bone, cartilage, fat, and nerves) where each tissue may be derived from cells derived from mesenchymal cells outside the bone marrow. Cancer from hematopoietic cells may originate from hematopoietic cells that leave the bone marrow and tend to mature in the lymph nodes and blood. Gastric cell tumors can be cancer derived from pluripotent cells. The pluripotent cells can often be present in testes or ovaries. Bromoblastoma may originate from immature progenitor cells or embryonic tissue. The cancer is selected from the group consisting of melanoma, cerebrospinal tumor, head and neck cancer, lung cancer, breast cancer, thymoma, mesothelioma, esophageal cancer, gastric cancer, colon cancer, liver cancer, pancreatic cancer, biliary cancer, kidney cancer, bladder cancer, prostate cancer, testicular cancer, Myelodysplastic syndromes (MDS), myelofibrosis, acute leukemia, chronic myelogenous leukemia, multiple myeloma, sarcoma, skin cancer, and the like.

특히 상기 암은 자궁경부암일 수 있다. In particular, the cancer may be cervical cancer.

본 발명에서 사용되는 용어인 용어 "예방"은 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 암을 억제하거나 암의 발병을 지연시키는 모든 행위를 말한다. 상기 용어 "치료"는 상기 약학적 조성물의 투여에 의해 암의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다.As used herein, the term "prevention" refers to any action that inhibits cancer by delaying administration of the pharmaceutical composition or delaying the onset of cancer. The term " treatment "refers to any action that improves or alters the symptoms of cancer by administration of the pharmaceutical composition.

본 발명에서 로손 (lawson, 2-hydroxy-1,4-naphthoquinone; HNQ)은 HeLa 자궁 경부암 세포의 생존력을 감소시키고 (실시예 1), 세포 독성에 의한 세포 사멸을 유도하며 (실시예 2), 세포주기 정지 및 노화를 야기하고(실시예 3), 세포 사멸 경로를 유도한다(실시예 4). 또한, 로손은 이종 이식 누드 마우스 내에서 종양 형성을 감소하는 효과를 나타낸다 (실시예 5).In the present invention, lawson (2-hydroxy-1,4-naphthoquinone) (HNQ) reduces the viability of HeLa cervical cancer cells (Example 1), induces cell death by cytotoxicity (Example 2) Causing cell cycle arrest and aging (Example 3) and inducing apoptosis pathway (Example 4). In addition, Lawson shows the effect of reducing tumor formation in xenografted nude mice (Example 5).

본 발명에서, 상기 약학 조성물은 암의 예방 또는 치료방법에 이용될 수 있으며, 구체적으로 상기 예방 또는 치료방법은 암이 발병되거나 또는 발병될 것으로 예상되는 개체에 투여하는 단계를 포함할 수 있다.In the present invention, the pharmaceutical composition may be used in a method for preventing or treating cancer, and specifically, the method for preventing or treating cancer may include administering to a subject in which cancer is expected to occur or to be developed.

본 발명의 용어 "투여"란, 적절한 방법으로 개체에게 상기 조성물을 도입하는 것을 의미한다.The term "administration" of the present invention means introducing the composition into a subject in an appropriate manner.

본 발명의 용어 "개체"란, 암이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 쥐, 생쥐, 가축 등의 모든 동물을 의미하고, 구체적인 예로, 인간을 포함한 포유동물일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The term "individual" of the present invention means all animals such as mice, mice, livestock and the like, including humans that have developed or can develop cancer. Specific examples include, but are not limited to, mammals including humans.

본 발명의 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명의 용어, "약학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 예를 들면, 상기 조성물은 유효성분으로 1일 0.01 내지 500 mg/kg으로, 구체적으로 10 내지 100 mg/kg의 용량으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 또는 수회 나누어 투여할 수도 있다. 또한, 본 발명의 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 본 발명의 로손을 0.001 내지 50% 중량 백분율로 포함할 수 있다.The composition of the present invention is administered in a pharmaceutically effective amount. The term "pharmaceutically effective amount" of the present invention means an amount sufficient to treat a disease at a reasonable benefit / risk ratio applicable to medical treatment, and the effective dose level is determined by the kind and severity of the subject, The activity of the compound, the sensitivity to the drug, the time of administration, the route of administration and the rate of release, the duration of the treatment, factors including co-administered drugs, and other factors well known in the medical arts. For example, the composition may be administered as an active ingredient at a dose of 0.01 to 500 mg / kg per day, specifically 10 to 100 mg / kg, and the administration may be administered once a day or divided into several times . In addition, the pharmaceutical composition of the present invention may contain the Lawson of the present invention in an amount of 0.001 to 50% by weight based on the total weight of the composition.

본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.The composition of the present invention may be administered as an individual therapeutic agent or in combination with other therapeutic agents, and may be administered sequentially or simultaneously with conventional therapeutic agents. And can be administered singly or multiply. It is important to take into account all of the above factors and to administer the amount in which the maximum effect can be obtained in a minimal amount without side effects, which can be easily determined by a person skilled in the art.

본 발명의 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 상기 기재한 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.The pharmaceutical composition for preventing or treating cancer of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent in addition to the above-described effective ingredient. Examples of the carrier, excipient and diluent include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose, methylcellulose, Cellulose, polyvinylpyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil.

본 발명의 상기 약학 조성물은 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 제형화할 경우 통상 사용하는 충진제, 중량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제로는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다. 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘 카보네이트, 수크로오스, 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제 등도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등을 첨가하여 조제될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제를 포함한다. 비수성 용제 및 현탁제로는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 오일, 에틸올레이트와 같은 주사가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔, 마크로골, 트윈 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.The pharmaceutical compositions of the present invention may be formulated in the form of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols or the like, oral preparations, suppositories or sterilized injection solutions according to a conventional method have. Specifically, when formulating, it can be prepared by using diluents or excipients such as fillers, weights, binders, humectants, disintegrants, surfactants and the like commonly used. Solid formulations for oral administration include, but are not limited to, tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like. Such a solid preparation may be prepared by mixing at least one excipient, for example, starch, calcium carbonate, sucrose, lactose, gelatin, and the like. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc may also be used. Liquid preparations for oral administration, liquid paraffin, and various excipients such as wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives and the like. Formulations for parenteral administration include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents, suspensions, emulsions, lyophilized preparations and suppositories. Non-aqueous solvents and suspensions may include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, injectable esters such as ethyl oleate, and the like. Examples of the suppository base include withexol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin, glycerogelatin and the like.

본 발명의 상기 약학 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있으며, 투여량은 환자의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 시간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be administered orally or parenterally (for example, intravenously, subcutaneously, intraperitoneally or topically) depending on the intended method, and the dose may be determined depending on the condition and the weight of the patient, The mode of administration, the route of administration, and the time, but may be appropriately selected by those skilled in the art.

본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.The present invention provides a food composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

본 발명의 용어, "개선"이란, 상기 조성물의 투여로 암이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.The term "improvement" of the present invention means all the actions in which the administration of the composition improves or alters the cancer.

본 발명의 용어 "식품"은 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료, 비타민 복합제, 건강 기능 식품 및 건강 식품 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 식품을 모두 포함한다.The term "food" of the present invention is intended to encompass all kinds of foods, such as meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionery, pizza, ramen, other noodles, gums, ice cream, Vitamin complex, health functional food, and health food, all of which include foods in a conventional sense.

상기 건강 기능(성) 식품(functional food)이란, 특정보건용 식품(food for special health use, FoSHU)과 동일한 용어로, 영양 공급 외에도 생체조절기능이 효율적으로 나타나도록 가공된 의학, 의료효과가 높은 식품을 의미한다. 여기서 "기능(성)"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 식품은 당 업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조 가능하며, 상기 제조시에는 당 업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한, 상기 식품의 제형 또한 식품으로 인정되는 제형이면 제한 없이 제조될 수 있다. 본 발명의 식품용 조성물은 다양한 형태의 제형으로 제조될 수 있으며, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고 휴대성이 뛰어나므로, 본 발명의 식품은 암의 예방 또는 개선의 효과를 증진시키기 위한 보조제로 섭취가 가능하다.The term "functional food" as used herein means the same term as "food for special health use" (FoSHU). In addition to nutrition, It means food. Here, the term "function (surname)" means that the structure and function of the human body have a beneficial effect for health use such as controlling nutrients or physiological action. The food of the present invention can be prepared by a method commonly used in the art and can be prepared by adding raw materials and ingredients which are conventionally added in the art. In addition, the formulations of the foods can also be produced without restrictions as long as they are formulations recognized as food. The composition for food of the present invention can be manufactured in various forms, and unlike general drugs, it has advantages of being free from side effects that may occur when a food is used as a raw material for a long period of time, and is excellent in portability, Can be ingested as an adjuvant to promote the effect of preventing or improving cancer.

상기 건강 식품(health food)은 일반식품에 비해 적극적인 건강유지나 증진 효과를 가지는 식품을 의미하고, 건강보조식품(health supplement food)은 건강 보조 목적의 식품을 의미한다. 경우에 따라, 건강 기능 식품, 건강 식품, 건강 보조 식품의 용어는 혼용될 수 있다.The health food refers to a food having an active health promotion or promotion effect compared with a general food, and a health supplement food refers to a food for health assistance. In some cases, the terms health functional foods, health foods, and health supplements may be used interchangeably.

본 발명의 식품 조성물은, 일상적으로 섭취하는 것이 가능하기 때문에 암의 예방 또는 개선에 대하여 높은 효과를 기대할 수 있으므로, 매우 유용하게 사용될 수 있다.Since the food composition of the present invention can be routinely ingested, it can be very usefully used because a high effect can be expected for preventing or improving cancer.

상기 식품 조성물은 생리학적으로 허용 가능한 담체를 추가로 포함할 수 있는데, 담체의 종류는 특별히 제한되지 않으며 당해 기술 분야에서 통상적으로 사용되는 담체라면 어느 것이든 사용할 수 있다.The food composition may further comprise a physiologically acceptable carrier. The type of carrier is not particularly limited, and any carrier conventionally used in the art can be used.

또한, 상기 식품 조성물은 식품 조성물에 통상 사용되어 냄새, 맛, 시각 등을 향상시킬 수 있는 추가 성분을 포함할 수 있다. 예들 들어, 비타민 A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, 니아신(niacin), 비오틴(biotin), 폴레이트(folate), 판토텐산(panthotenic acid) 등을 포함할 수 있다. 또한, 아연(Zn), 철(Fe), 칼슘(Ca), 크롬(Cr), 마그네슘(Mg), 망간(Mn), 구리(Cu), 크륨(Cr) 등의 미네랄을 포함할 수 있다. 또한, 라이신, 트립토판, 시스테인, 발린 등의 아미노산을 포함할 수 있다. In addition, the food composition may contain additional components that are commonly used in food compositions and can improve odor, taste, visual appearance, and the like. For example, vitamins A, C, D, E, B1, B2, B6, B12, niacin, biotin, folate, panthotenic acid and the like. In addition, it may include minerals such as zinc (Zn), iron (Fe), calcium (Ca), chromium (Cr), magnesium (Mg), manganese (Mn), copper (Cu) It may also include amino acids such as lysine, tryptophan, cysteine, valine, and the like.

또한, 상기 식품 조성물은 방부제(소르빈산 칼륨, 벤조산나트륨, 살리실산, 데히드로초산나트륨 등), 살균제(표백분과 고도 표백분, 차아염소산나트륨 등), 산화방지제(부틸히드록시아니졸(BHA), 부틸히드록시톨류엔(BHT) 등), 착색제(타르색소 등), 발색제(아질산 나트륨, 아초산 나트륨 등), 표백제(아황산나트륨), 조미료(MSG 글루타민산나트륨 등), 감미료(둘신, 사이클레메이트, 사카린, 나트륨 등), 향료(바닐린, 락톤류 등), 팽창제(명반, D-주석산수소칼륨 등), 강화제, 유화제, 증점제(호료), 피막제, 검기초제, 거품억제제, 용제, 개량제 등의 식품 첨가물(food additives)을 포함할 수 있다. 상기 첨가물은 식품의 종류에 따라 선별되고 적절한 양으로 사용될 수 있다.In addition, the food composition may further contain antiseptic agents (such as potassium sorbate, sodium benzoate, salicylic acid, sodium dehydroacetate), bactericides (Sodium nitrite), bleach (sodium sulfite), seasoning (sodium MSG glutamate, etc.), sweeteners (dicin, cyclamate, saccharin, etc.), coloring agents , Sodium, etc.), perfume (vanillin, lactones, etc.), swelling agents (alum, potassium hydrogen D-tartrate), emulsifiers, thickeners (foams), encapsulating agents, gum bases, foam inhibitors, solvents, And may include food additives. The additives may be selected and used in appropriate amounts depending on the type of food.

본 발명의 로손은 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 식품 조성물은 식품 또는 음료에 대하여 50 중량부 이하, 구체적으로 20 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 장기간 섭취할 경우에는 상기 범위 이하의 함량을 포함할 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.The Lawson of the present invention can be added intact or used together with other food or food ingredients, and can be suitably used according to conventional methods. The amount of the active ingredient to be mixed can be suitably determined according to its intended use (prevention, health or therapeutic treatment). Generally, the food composition of the present invention may be added in an amount of not more than 50 parts by weight, specifically not more than 20 parts by weight, based on the food or beverage, when the food or drink is prepared. However, in case of long-term ingestion for health and hygiene purposes, the active ingredient may be contained in an amount not exceeding the above range and there is no problem in terms of safety.

본 발명의 식품 조성물의 일 예로 건강음료 조성물로 사용될 수 있으며, 이 경우 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드; 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드; 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드; 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜일 수 있다. 감미제는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제; 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 건강음료 조성물 100 mL 당 일반적으로 약 0.01 ∼ 0.04 g, 구체적으로 약 0.02 ∼ 0.03 g이 될 수 있다.As an example of the food composition of the present invention, it can be used as a health beverage composition. In this case, various flavors or natural carbohydrates can be added as an additional ingredient like ordinary beverages. The above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose; Disaccharides such as maltose, sucrose; Polysaccharides such as dextrin, cyclodextrin; Xylitol, sorbitol, erythritol, and the like. Sweeteners include natural sweeteners such as tau Martin and stevia extract; Synthetic sweetening agents such as saccharin and aspartame, and the like can be used. The ratio of the natural carbohydrate may be generally about 0.01 to 0.04 g, specifically about 0.02 to 0.03 g per 100 mL of the health beverage composition of the present invention.

상기 외에 건강음료 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산, 펙트산의 염, 알긴산, 알긴산의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올 또는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스, 과일주스 음료, 또는 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 건강음료 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.In addition to the above, the health beverage composition may contain various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid, salts of pectic acid, alginic acid, salts of alginic acid, organic acid, protective colloid thickener, pH adjuster, stabilizer, Alcohols or carbonating agents, and the like. It may also contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks, or vegetable drinks. These components may be used independently or in combination. The proportion of such additives is not critical, but is generally selected in the range of 0.01 to 0.1 parts by weight per 100 parts by weight of the health beverage composition of the present invention.

본 발명의 식품 조성물은 암의 예방 또는 개선 효과를 나타낼 수 있다면 다양한 중량%로 포함할 수 있으나, 구체적으로 본 발명의 로손을 식품 조성물의 총 중량 대비 0.00001 내지 100 중량% 또는 0.01 내지 80 중량%로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.The food composition of the present invention can be contained in various weight percentages as long as it can exhibit the preventive or ameliorative effect of cancer, but specifically, the roseone of the present invention is 0.00001 to 100% by weight or 0.01 to 80% by weight But are not limited thereto.

또한, 본 발명은 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다. The present invention also provides a feed composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.

상기 사료는 가축에 급여되는 일반적인 사료로, 용어 "가축"은 집에서 기르는 짐승, 즉 포유류, 가금류 등을 의미하는 것이다. 본 발명에서 상기 포유류는 개, 고양이, 소, 돼지, 염소, 양, 말 등을 예로 들 수 있으며, 가금류로는 닭, 오리, 칠면조 등을 예로 들 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니다.The term "livestock" refers to domestic animals, such as mammals, poultry, and the like. In the present invention, the mammal may be, for example, a dog, a cat, a cow, a pig, a goat, a sheep or a horse. Examples of the poultry include a chicken, a duck and a turkey.

상기 사료 조성물은 가축의 종류에 따라 급여되는 일반적인 기초사료들을 포함할 수 있다. 이러한 기초사료들은 가축의 종류에 따라서 그 필요한 성분 및 조성 그리고 적합한 조성 비율이 모두 당업계에 공지되어 있으며, 또한 시판되고 있기 때문에 당업자라면 누구나 매우 용이하게 이를 제조 또는 구입하여 사용할 수 있을 것이다.The feed composition may include general basic feeds fed according to the type of livestock. These basic feeds are known in the art and are commercially available depending on the type of livestock, so that any person skilled in the art will be able to manufacture or purchase them very easily.

구체적으로 기초사료로는 가축의 종류에 따라 적합한 전분함유 물질, 단백질 함유 물질, 지방 함유 물질, 비타민 함유 물질, 무기질 함유 물질, 산화 방지 물질, 항생제 등의 일부 또는 전부를 포함하여 구성될 수 있다.Specifically, the basic feed may include some or all of a starch-containing substance, a protein-containing substance, a fat-containing substance, a vitamin-containing substance, an inorganic substance-containing substance, an antioxidant substance, an antibiotic,

상기 전분 함유 물질은 그것이 사육동물의 성장을 유지할 수 있는 한 모두 사육동물의 기초사료에 포함될 수 있는데, 이러한 전분 함유 물질은 일반적으로 옥수수, 콩, 밀, 수수, 보리, 귀리 등으로부터 얻어진다. 적합한 전분 함유 물질로서는 옥수수 분쇄물이나 분말, 귀리 분쇄물이나 분말, 콩 분쇄물이나 분말, 밀 분쇄물이나 분말 등을 들 수 있다. 바람직한 적합한 전분 함유 물질은 귀리 분말, 옥수수 분쇄물, 밀 분쇄물, 콩 분말 등이다. 이러한 전분 함유 물질은 사육동물의 성장을 효과적으로 유지할 수 있다면, 그 농도는 특별히 제한되지 않는다. 일반적으로 전분 함유 물질은 약 30~80중량%의 범위로 기초사료에 포함될 수 있다.The starch-containing material may be included in the feedstuff of the rabbit as long as it can sustain the growth of the animal. Such starch-containing material is generally obtained from corn, soybean, wheat, sorghum, barley, oats and the like. Examples of suitable starch-containing substances include corn flour or powder, oat flour or powder, bean flour or powder, wheat flour or powder. Suitable suitable starch containing materials are oat flour, corn flour, wheat flour, soy flour, and the like. The concentration of such a starch-containing substance is not particularly limited as long as it can effectively maintain the growth of the animal. Generally, the starch-containing material may be included in the basic feed in a range of about 30 to 80% by weight.

단백질 함유 물질도 사육동물의 성장을 유지시킬 수 있는 한, 가축의 기초사료에 포함될 수 있다. 경제적인 이유로 어분, 콩 분말 등과 같은 단백질 함유 물질이 사용되고 있는데, 다른 것들로서는 콩 단백질 농축물, 혈분, 혈장 단백질, 탈지유 건체물, 유(乳) 단백질 농축물, 옥수수 글루텐(Gluten) 분말, 밀 글루텐 분말, 이스트, 해바라기씨 분말 등을 들 수 있다. 바람직한 단백질 함유 물질은 어분, 혈분, 혈장 단백질, 콩 분말 등이다. 단백질 함유 물질도 사육동물의 성장을 효과적으로 유지할 수 있는 한, 사육동물의 기초사료에 포함되는 그것의 농도는 중요하지 않다. 일반적으로, 단백질 함유 물질은 약 10~50중량%의 범위로 기초사료에 포함될 수 있다.Protein-containing materials can also be included in animal feed as long as they can sustain the growth of the animal. For economic reasons, protein-containing substances such as fish meal and soybean powder have been used. Others include soy protein concentrate, blood meal, plasma protein, skim milk dry product, milk protein concentrate, corn gluten powder, wheat gluten Powder, yeast, sunflower seed powder and the like. Preferred protein-containing substances are fish meal, blood meal, plasma protein, soybean powder and the like. As long as the protein-containing material can effectively maintain the growth of the animal, its concentration in the animal feed is not important. Generally, the protein-containing material can be included in the basic feed in a range of about 10 to 50% by weight.

상기 지방 함유 물질로는 라드(Lard), 우지, 콩기름, 레시틴, 코코넛유 등을 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 지방 함유 물질 또한 사육동물의 성장을 유지할 수 있는 한 그 농도는 제한되지 않으며, 일반적으로 약 2~20중량의 범위로 기초사료에 포함될 수 있다.The fat-containing material includes, but is not limited to, lard, tallow, soybean oil, lecithin, coconut oil and the like. The concentration of the fat-containing substance is not limited as long as it can maintain the growth of the animal, and it can be included in the basic feed in the range of about 2 to 20 wt%.

또한 기초사료에는 수용성, 지용성 비타민과 미량의 무기물이 포함될 수 있다. 상기 비타민으로는 비타민 A, 비타민 D, 비타민 E, 비타민 K, 리보플라빈, 판토텐산(Pantothenic Acid), 나이아신, 비타민 B12, 엽산, 비오틴, 비타민 C 등이 사용될 수 있다. 미량의 무기물로서는 구리, 아연, 요오드, 셀렌, 망간, 철, 코발트 등이 사용될 수 있다. 여기서 "미량"이 의미하는 바는 가축의 기초사료에 사용된 이들 성분들의 양이 다른 성분들의 양보다 실질적으로 적은 것을 의미한다. 일반적으로, 비타민이나 무기질이 미량으로 기초사료에 포함될 경우에 조성물 총 중량에 약 0.0001~5중량%로 포함될 수 있다.The base feed can also contain water-soluble, fat-soluble vitamins and trace minerals. Examples of the vitamins include vitamin A, vitamin D, vitamin E, vitamin K, riboflavin, pantothenic acid, niacin, vitamin B12, folic acid, biotin and vitamin C. Copper, zinc, iodine, selenium, manganese, iron, cobalt and the like can be used as a trace amount of an inorganic substance. Here, "trace" means that the amount of these ingredients used in the livestock base feed is substantially less than the amount of the other ingredients. Generally, when a small amount of vitamin or mineral is included in the basic feed, it may be contained in an amount of about 0.0001 to 5% by weight based on the total weight of the composition.

또한 기초사료에는 BHT(Butylated Hydroxytoluene), BHA(Butylated Hydroxyanisole), 비타민 E, 아스코르브산 등의 산화방지물질이 포함될 수 있으며, 이들 산화방지물질은 약 0.0001~1중량%의 극소량으로 포함될 수 있다.In addition, the base feed may include antioxidants such as BHT (Butylated Hydroxytoluene), BHA (Butylated Hydroxyanisole), vitamin E and ascorbic acid, and these antioxidants may be contained in a very small amount of about 0.0001 to 1% by weight.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다. 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. It will be apparent to those skilled in the art that the embodiments are only for describing the present invention in more detail and that the scope of the invention is not limited by these embodiments in accordance with the gist of the present invention.

실험예Experimental Example

실험예Experimental Example 1: 시약 및 화학물질  1: Reagents and Chemicals

시약 및 HNQ를 포함하는 모든 화학물질은 Sigma-Aldrich USA에서 구매하였다. β-actin, BAX, caspase-3, caspase-9, Bcl-2 등의 대부분의 항체는 Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA, USA)로부터 구매하였다. BECN-1 및 ATG5는 Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA)로부터 구매하였다. LC3는 Abcam (Cambridge, MA, USA)으로부터 구매하였다. 웨스턴 블롯을 위한 HRP (Horseradish peroxidase)-컨쥬게이트 제2 항체는 Santa Cruz Biotechnology로부터 구매하였다. All chemicals including reagents and HNQ were purchased from Sigma-Aldrich USA. Most antibodies such as β-actin, BAX, caspase-3, caspase-9, and Bcl-2 were obtained from Santa Cruz Biotechnology, Inc. (Santa Cruz, CA, USA). BECN-1 and ATG5 were purchased from Cell Signaling Technology (Beverly, MA, USA). LC3 was purchased from Abcam (Cambridge, MA, USA). HRP (Horseradish peroxidase) -conjugate second antibody for Western blot was purchased from Santa Cruz Biotechnology.

실험예Experimental Example 2: 세포 독성 및 형태학적 평가 2: Cytotoxic and morphological evaluation

HNQ의 세포 독성 효과는 MTT 분석으로 먼저 결정하였다. The cytotoxic effect of HNQ was first determined by MTT assay.

5 ×104 HeLa세포/웰을 25, 50 및 100 μM 농도의 HNQ의 존재하에 37℃에서 24시간동안 CO2 인큐베이터에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 세포를 MTT 용액 (5 mg/ml)으로 처리하여 진한 파란색의 포르마잔 결정체를 제조하고, 이를 DMSO 50 μl에 용해시켰다. 마지막으로 마이크로 플레이트 리더 (Bio-Tek instrument Co., WA, USA)에서 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.5 x 10 &lt; 4 &gt; HeLa cells / well were incubated in a CO 2 incubator at 37 &lt; 0 &gt; C for 24 hours in the presence of 25, 50 and 100 [mu] M HNQ concentrations. After incubation, cells were treated with MTT solution (5 mg / ml) to produce dark blue formazan crystals, which were dissolved in 50 μl of DMSO. Finally, the absorbance was measured at 540 nm in a microplate reader (Bio-Tek instrument Co., WA, USA).

또한, HNQ (25, 50 및 100μM)에 노출시킨 후 HeLa 세포의 형태학적 변화를 역상 현미경 (Nikon Eclipse TS200, Nikon Corp., Tokyo, Japan)을 사용하여 확인하였다.Further, morphological changes of HeLa cells after exposure to HNQ (25, 50 and 100 μM) were confirmed using an inverted microscope (Nikon Eclipse TS200, Nikon Corp., Tokyo, Japan).

실험예Experimental Example 3:  3: 클론원성Clonogenic ( ( ClonogenicClonogenic ) ) 어세이Assay

총 54 세포/웰을 12-웰 배양 플레이트에 접종하고 24시간 동안 부착시킨 후, HNQ (25, 50 및 100μM)를 투여하고 세포를 7일 동안 CO2 인큐베이터에서 37℃에서　인큐베이션하였다．마지막으로, 세포를 PBS로 세척하고 0.5 % 수정 자색으로 염색하였다.A total of 5 4 cells / well were inoculated on a 12-well culture plate and adhered for 24 hours, followed by HNQ (25, 50 and 100 μM) and the cells were incubated for 7 days in a CO 2 incubator at 37 ° C. Finally , Cells were washed with PBS and stained with 0.5% modified purple color.

실험예Experimental Example 4: SA-β-gal (Senescence-associated b- 4: SA-β-gal (Senescence-associated b- galactosidase가alat 시드세제 ）활성　측정) Active measurement

세포를 HNQ와 함께 24 시간동안 배양하고, HNQ 제거 후 7 일째에 SA-b-gal 활성을 측정하였다．Cells were incubated with HNQ for 24 h and SA-b-gal activity was measured 7 days after HNQ removal.

실험예Experimental Example 5:  5: 세포사멸적Apoptosis 　형태학적　변화의　결정Determination of morphological changes

세포를 12-웰 플레이트에 접종하고 24시간 동안 부착시킨 다음, ２４새간　동안　추가로　HNQ (25, 50 및 100μM)를　처리하였다． 인큐베이션　후, 세포사멸을　검출하기　위하여　ＡＯ　（acridine orange）및　ＰＩ　（propidium iodide） 염색을 수행하였다．　부착 된 세포를 24시간　동안 상이한 농도의 HNQ로 처리 한 후 AO/PI (1 : 1)로 염색시켰다. 마지막으로 형광 이미지를 EPI 형광 현미경 (Nikon, Japan)으로 촬영하였다.Cells were inoculated into 12-well plates and adhered for 24 hours, then treated with HNQ (25, 50 and 100 [mu] M) for 24 additional days. After incubation, AO (acridine orange) and PI (propidium iodide) staining were performed to detect apoptosis. Adherent cells were treated with different concentrations of HNQ for 24 hours and stained with AO / PI (1: 1). Finally, fluorescence images were taken with an EPI fluorescence microscope (Nikon, Japan).

실험예Experimental Example 6: 세포 내  6: Intracellular ROSROS 수준의 결정 Level of determination

HNQ에 반응하는 ROS（reactive oxygen species) 생산은 H2DCFDA형광 염색을 사용하여 결정하였다. 세포를 12-웰 배양 플레이트에 접종하고 24 시간동안 부착시킨 후 HNQ (25, 50 및 100μM)를 처리하였다. 처리 24 시간 후, 세포를 PBS로 세척한 후, 30 분 동안 20μM H2DCFDA염료와 함께 인큐베이션하였다. 세포를 PBS로 2 회 세척하고, EPI 형광 현미경 (Nikon, Japan)을 사용하여 ROS 형성을 즉시 검출하였다. 형광 강도는 Image-J 소프트웨어를 사용하여 정량화하였다.ROS (reactive oxygen species) production in response to HNQ was determined using H 2 DCFDA fluorescence staining. Cells were seeded onto 12-well culture plates and adhered for 24 h before treatment with HNQ (25, 50 and 100 [mu] M). After 24 hours of treatment, the cells were washed with PBS and incubated with 20 [mu] M H 2 DCFDA dye for 30 minutes. Cells were washed twice with PBS and ROS formation was detected immediately using an EPI fluorescence microscope (Nikon, Japan). Fluorescence intensity was quantified using Image-J software.

실험예Experimental Example 7: 면역  7: Immunity 블롯Blot 분석법( Method ( ImmunoblotImmunoblot analysis) analysis)

HeLa 세포를 24 시간동안 다양한 농도의 HNQ (25, 50 및 100μM)로 처리 한 후, RIPA 용해 완충액을 사용하여 단백질을 분리하였다. 동일한 양의 단백질 용해물 (각 레인 당 50μg)을 환원성 폴리아크릴아미드 겔에서 분리하고 전기 블로팅 (electroblotting)을 이용하여 PVDF (polyvinyldenefluoride) 막 (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA)으로 이동시켰다. 이어서, 1차 항체 및 HRP (horseradish peroxidase)-결합된 2차 항체로 탐침하고, 권장 절차 (Amersham Pharmacia, Piscataway, New Jersey)에 따라 ECL (enhanced chemiluminescence)으로 시각화하였다.HeLa cells were treated with various concentrations of HNQ (25, 50 and 100 [mu] M) for 24 hours and proteins were isolated using RIPA lysis buffer. The same amount of protein lysate (50 μg per lane) was separated from the reducing polyacrylamide gel and transferred to PVDF (polyvinyldenefluoride) membrane (Roche Diagnostics, Indianapolis, IN, USA) using electroblotting. Next, primary antibodies and HRP (horseradish peroxidase) -binding secondary antibodies were probed and visualized by ECL (enhanced chemiluminescence) according to the recommended procedure (Amersham Pharmacia, Piscataway, New Jersey).

실험예Experimental Example 8: In  8: In vivovivo 동물 실험 Animal experiment

HeLa 세포를 4 주령의 BALB/cnu/nu 수컷 마우스에 피하주사하였다 (1x106 cell/ml).종양 의 부피가 50 mm3에 도달 했을 때, 비히클 대조군 (5% DMSO) 또는 15 mg/kg HNQ을 무작위로 마우스에 할당하였다. 약물은 i.p.를 통하여 30일 동안, 주 3회 주사하였다. 종양의 성장을 격일로 측정하였으며, 종양 부피는 다음 공식을 이용하여 계산하였다 : 부피 = (폭2×길이)/2. 30일 후, 마우스를 희생시키고 이종 이식편을 IHC 및 웨스턴 블롯팅 분석을 위해 제거하였다.HeLa cells were subcutaneously injected (4 x 10 6 cells / ml) into male BALB / cnu / nu mice at 4 weeks of age. When tumor volume reached 50 mm 3 , vehicle control (5% DMSO) or 15 mg / kg HNQ Were randomly assigned to mice. The drug was injected three times a week for 30 days via ip. Tumor growth was measured every second and tumor volume was calculated using the following formula: volume = (width 2 x length) / 2. After 30 days, mice were sacrificed and xenografts were removed for IHC and Western blotting analysis.

실험예Experimental Example 9: 통계학적 분석 9: Statistical analysis

값을 3회의 독립적인 실험의 평균±로 표시하였다. 통계적 유의성은 Student's t-test로 결정하였다. #는 p <0.05, ##는 p <0.01, ###는 p <0.001을 나타낸다.The values were expressed as the mean of three independent experiments. Statistical significance was determined by Student's t-test. # Indicates p < 0.05, ## indicates p < 0.01, and ### indicates p < 0.001.

실시예Example

실시예Example 1:  One: HNQ가HNQ HeLaHeLa 자궁경부암 세포의 생존력을 감소시키는 것을 확인  Confirming the reduction of viability of cervical cancer cells

HeLa 세포에 대한 HNQ의 항암 활성 (도 1A)을 조사하기 위해, MTT 어세이를 통하여 자궁 경부암 세포의 증식에 대한 다양한 농도의 HNQ (25, 50 및 100μM)의 영향을 측정하였다. To investigate the anticancer activity of HNQ (Figure 1A) on HeLa cells, the effect of varying concentrations of HNQ (25, 50 and 100 [mu] M) on the proliferation of cervical cancer cells was measured by MTT assay.

그 결과 자궁경부암 세포주의 세포 생존력은 HNQ의 노출에 의하여 농도 의존적으로 감소함을 확인하였다 (도 1B). IC50은 100 μM이었다. As a result, it was confirmed that the cell viability of the cervical cancer cell line was decreased in a concentration-dependent manner by exposure to HNQ (FIG. 1B). The IC 50 was 100 [mu] M.

HNQ로 처리한 자궁경부암 세포의 광학 현미경 관찰은 다양한 형태학적 변화를 나타내었으며, 예를 들어, GFP-tag LC3 puncta 발현 (도 1C)뿐만 아니라 죽어가는 세포의 특성인, 낮은 농도에서의 세포질의 공포변성 (cytoplasmic vacuolation), 및 높은 농도에서의 세포 수축 (shrinkage)을 나타내었다 (도 1C). 또한, 콜로니 형성 분석은 in vitro에서 HNQ 처리가 HeLa 암 세포의 증식률을 감소 시켰다는 것을 나타냈다 (도 1D).Optical microscopic observation of HNQ-treated cervical cancer cells showed various morphological changes including, for example, GFP-tag LC3 puncta expression (Fig. 1C) as well as the fear of cytoplasm at low concentrations, Cytoplasmic vacuolation, and cell shrinkage at high concentrations (Fig. 1C). In addition, colony formation assays indicated that HNQ treatment in vitro reduced the proliferation rate of HeLa cancer cells (Fig. 1D).

실시예Example 2:  2: HNQ가HNQ 자궁 경부암 세포에서 세포 독성에 의한 세포 사멸을 유도함을 확인 It was confirmed that cell death caused by cytotoxicity was induced in cervical cancer cells.

최근에, 자가포식 (autophagy)이 세포사멸의 새로운 형태로써 세포를 죽도록 유도하는 또 다른 방식임이 밝혀진 바 있다. 이에, 암세포에서 자가포식 세포사멸(autophagic cell death)을 유도하는 것은 종양 치료에 유용 할 수 있다. Recently, it has been shown that autophagy is another way of inducing cells to die as a new form of apoptosis. Thus, inducing autophagic cell death in cancer cells may be useful in tumor therapy.

GFP-LC3 puncta의 형성 및 면역블롯팅(immunoblotting)은 오토파고좀(autophagosome)을 영상화하는 수단이다. 이에 따라, 본 발명자는 자가포식 (autophagy)를 분석하기 위해 상기 두 가지 방법을 사용하였다. Formation of GFP-LC3 puncta and immunoblotting is a means of imaging the autophagosome. Accordingly, the present inventors used the above two methods to analyze autophagy.

도 2a에 도시된 바와 같이, HNQ는 HeLa 세포 및 blue nucleus에서 자가포식 (autophagy) 및 많은 수의 자가포식체(autophagy body) (녹색)를 유도할 수 있다. 아크리딘오렌지 염색 현미경을 사용하여, HNQ로 처리된 HeLa 세포에서 자가포식체 (autophagy body)과 오토파지-리소좀 (autophagy-lysosome)을 모니터링하였다 (그림 2A).As shown in FIG. 2A, HNQ can induce autophagy and a large number of autophagy bodies (green) in HeLa cells and the blue nucleus. The autophagy body and autophagy-lysosome were monitored in HeLa cells treated with HNQ using an acridine orange staining microscope (Figure 2A).

다음으로, 자가포식 마커인 LC3가 막에 결합된 형태인, LC3-II의 발현을 측정하였다 (도 2B). 마지막으로, LC3-II 수준의 용량 의존적인 증가가 HNQ 처리 된 HeLa 세포에서 관찰되었다 (도 2B).Next, the expression of LC3-II, in which LC3, an autoregulatory marker, was bound to the membrane, was measured (Fig. 2B). Finally, a dose-dependent increase in LC3-II levels was observed in HNQ-treated HeLa cells (Fig. 2B).

이러한 결과는 HNQ가 HeLa 세포에서 자식작용을 유도함을 나타낸다. 또한 ATG5, ATG7, 4EBP-1, APOL1, Beclin-1, p-mTOR, p-AKT와 같은 다른 자가포식 마커의 변화가 관찰되었으며, 이는 HNQ가 자가포식을 유도한다는 것을 시사한다.These results indicate that HNQ induces a malfunction in HeLa cells. Other autosomal marker changes such as ATG5, ATG7, 4EBP-1, APOL1, Beclin-1, p-mTOR and p-AKT were also observed, suggesting that HNQ induces autophagy.

실시예Example 3: 자궁 경부암 세포에서  3: in cervical cancer cells HNQ가HNQ 세포주기 정지 및 노화를 야기한다는 것을 확인 Confirming that it causes cell cycle arrest and aging

세포주기 및 세포 사멸 분석은 면역 블롯팅을 사용하여 수행하였다. 또한, HNQ로 처리한 후에 증가된 세포 노화를 관찰하였다 (도 3A). 24 시간 동안 일련의 HNQ로 처리한 후, HeLa 세포는 용량 의존적으로 CDK5, CDK4, Cyclin D1 및 p21과 같은 세포주기 정지 마커의 증가를 보였다 (도 3B). HNQ는 용량 의존적으로 SA-β-gal 양성 세포의 증가된 수준을 유도한다.Cell cycle and apoptosis assays were performed using immunoblotting. In addition, increased cell senescence was observed after treatment with HNQ (FIG. 3A). After treatment with a series of HNQ for 24 hours, HeLa cells showed an increase in cell cycle arrest markers such as CDK5, CDK4, Cyclin D1 and p21 in a dose-dependent manner (FIG. 3B). HNQ induces an increased level of SA-β-gal positive cells in a dose-dependent manner.

실시예Example 4: 자궁 경부암 세포에서  4: in cervical cancer cells HNQ가HNQ 세포 사멸 경로를 유도함을 확인 Confirmation of induction of apoptosis pathway

AO / PI 염색을 통하여 검출한 결과 HNQ는 용량의존적으로 생존 자궁경부암 세포 수를 감소시킨다. 녹색의 AO 흡수는 용량의존적으로 감소하는 반면, 죽은 세포를 염색하는 붉은색은 증가하였다. 또한, 세포 사멸과 관련이 있는 ROS도 상승되는 것을 확인하였다.AO / PI staining revealed that HNQ decreased the number of viable cervical cancer cells in a dose-dependent manner. Green AO uptake decreased dose-dependently while red staining of dead cells increased. In addition, it was confirmed that ROS associated with apoptosis was also elevated.

산화 스트레스 후, Bax, Bcl2, caspase-3, p53 및 phospho-p38과 같은 세포 사멸 마커에 대한 HNQ의 효과를 평가했다. 그 결과, Bax, cleaved caspase-3, p53 및 phospho-p38과 같은 세포사멸 마커의 증가와 Bcl2 단백질의 감소가 관찰된다는 것을 확인하였다 (도 4B). JNK는 자가포식(autophagy)과 세포사멸(apoptosis) 유도 모두에 이중 역할을 수행한다. 본 발명의 결과에서, 발명자는 JNK가 HNQ 처리 후에 과발현됨을 발견하였다. 이는 JNK가 자가포식 및 세포 사멸 매개 세포 죽음에 결정적인 역할을 할 수 있음을 나타낸다.After oxidative stress, the effects of HNQ on cell death markers such as Bax, Bcl2, caspase-3, p53 and phospho-p38 were evaluated. As a result, it was confirmed that increase of cell death markers such as Bax, cleaved caspase-3, p53 and phospho-p38 and decrease of Bcl2 protein were observed (Fig. 4B). JNK plays a dual role in both autophagy and induction of apoptosis. In the results of the present invention, the inventors have found that JNK is overexpressed after HNQ treatment. Indicating that JNK can play a crucial role in autopoietic and apoptotic cell death.

실시예Example 5: 누드 마우스에서  5: In nude mice HNQ의HNQ 종양 형성 감소효과 확인 Identification of tumor formation reduction effect

생체 내에서 HNQ의 항종양 활성을 연구하기 위해, HeLa 이종 이식 BALB/c 누드 마우스를 50 mg/kg 및 100 mg/kg 투여량의 HNQ 또는 비히클을 처리 하였다. 처리 뒤 24 일 후, 비히클과 비교하여 HNQ가 종양 진행을 억제하는데 중요한 항 종양 활성을 나타낸다는 것을 확인하였다. HNQ는 100 mg/kg의 투여량에서 43.9%의 항종양률을 나타내며 HeLa 종양 성장을 유의하게 억제하였다(도 5A). To study the antitumor activity of HNQ in vivo, HeLa xenografted BALB / c nude mice were treated with 50 mg / kg and 100 mg / kg doses of HNQ or vehicle. After 24 days of treatment, it was confirmed that HNQ exhibited significant antitumor activity in inhibiting tumor progression as compared to vehicle. HNQ showed 43.9% antineoplasticity at a dose of 100 mg / kg and significantly inhibited HeLa tumor growth (FIG. 5A).

한편, 전체 실험을 통해 3 일에 한 번 마우스의 체중을 모니터링하였다. 도 5B에 나타낸 바와 같이, HNQ 처리간에 유의한 차이는 보이지 않았지만, 비히클 군에서는 체중이 현저히 감소하였다. HNQ 그룹에서는 피부 궤양이나 독성 사망과 같은 다른 부작용이 관찰되지 않았다. 이 데이터는 종양 성장의 억제가 전신 독성에 기인 한 것이 아니라는 것을 확인한 것이다.On the other hand, mouse body weight was monitored once every three days through the whole experiment. As shown in Figure 5B, there was no significant difference between the HNQ treatments, but body weight was significantly reduced in the vehicle group. No other adverse events such as skin ulcers or toxic deaths were observed in the HNQ group. This data confirms that inhibition of tumor growth is not due to systemic toxicity.

Claims (6)

로손을 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.A pharmaceutical composition for preventing or treating cancer, which comprises Lawson as an active ingredient. 청구항 1에 있어서, 상기 암은 자궁경부암인 것인, 약학적 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the cancer is cervical cancer. 청구항 1에 있어서, 상기 로손은 암세포 또는 암조직의 사멸, 암세포 주기 정지 또는 암세포 또는 암조직의 노화를 유도하는 것인, 약학적 조성물. [Claim 2] The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the Lawson induces apoptosis of cancer cells or cancer tissues, arrestment of cancer cell cycle or aging of cancer cells or cancer tissues. 청구항 1에 있어서, 상기 로손은 자가포식 세포 사멸을 유도하는 것인, 약학적 조성물. The pharmaceutical composition according to claim 1, wherein the Lawson induces apoptotic cell death. 로손을 유효성분으로 포함하는, 암의 예방 또는 개선용 식품 조성물.A food composition for preventing or improving cancer, which comprises Lawson as an active ingredient. 로손을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 개선용 사료 조성물.
A pharmaceutical composition for preventing or ameliorating cancer comprising Lawson as an active ingredient.
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