KR20180117653A - 면역 유도제 - Google Patents

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Abstract

암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 유용한 신규의 펩티드를 발견하고, 상기 폴리펩티드의 면역 유도제로서의 사용을 제공하는 것을 과제로 한다. (a) 서열 번호 3~45에 나타내어지는 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드, (b) 상기 (a)의 폴리펩티드 중 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환 또는 부가된 폴리펩티드를 유효 성분으로서 함유하는 면역 유도제는 암의 치료 또는 예방약 등으로서 유용하다.

Description

면역 유도제
본 발명은 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 유용한 신규인 면역 유도제에 관한 것이다.
SCD1(stearoyl-CoA desaturase 1) 단백질은 포화 지방산의 C9-C10위치에 2중 결합을 도입하는 단백질이다.
SCD1 단백질은 발암과의 관련성이 시사되어 있다. 예를 들면, 비특허문헌 1 및 2에서는 간암, 식도암, 대장암 등 여러 가지 암에서 발현이 상승하고 있으며, siRNA나 저분자 저해 화합물에 의해 SCD1의 기능을 저해하면 암세포의 증식이 억제되거나 아포토시스가 유도되어 형성된 종양이 축소되는 것이 개시되어 있다.
한편, 특허문헌 1에서는 SCD1 단백질이 암세포에 대한 면역 유도 활성을 갖고 있으며, 그러므로 암의 치료나 예방에 유용한 것이 개시되어 있다. 그러나 특허문헌 1에는 MHC 분자에 결합하는 펩티드에 대한 정보는 개시되어 있지 않다.
WO 2012/157736
Igal RA. Carcinogenesis. Sep;31(9):1509-15(2010) Chen L. Sci. Rep.6, 19665(2016)
본 발명의 과제는 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 유용한 신규 폴리펩티드를 발견하고, 상기 폴리펩티드의 면역 유도제로서의 사용을 제공하는 것이다.
또한, 본 발명의 과제는 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포, 및 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 선택적으로 결합하는 단리 T 세포, 및 그들의 암의 치료 또는 예방약을 제공하는 것이다.
본원 발명자들은 예의 연구한 결과, 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 SCD1 단백질이 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암, 및 폐암의 조직 또는 세포에 특이적으로 발현하고 있다는 지견을 얻었다. 또한, 상기 SCD1 단백질의 특정 영역에 존재하는 부분 펩티드가 항원 제시 세포에 의해 제시되어 상기 폴리펩티드에 특이적인 T 세포를 활성화 및 증식시키는 능력(면역 유도 활성)을 갖는 것 및 상기 면역 유도 활성이 암의 치료 또는 예방에 유용한 것을 발견했다. 그들의 결과에 의거하여 상기 폴리펩티드가 암의 치료 및/또는 예방을 위한 면역 유도제의 유효 성분이 될 수 있는 것, 또한 상기 펩티드와 접촉한 항원 제시 세포나 상기 항원 제시 세포와 접촉한 T 세포도 암의 치료 또는 예방에 유용한 것을 발견하여 본 발명을 완성했다.
즉, 본 발명은 이하의 (1)~(12)의 특징을 갖는다.
(1) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드,
(a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드, 또는
상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터를 유효 성분으로서 함유하는 면역 유도제.
(2) (1)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 MHC 클래스 I분자에 결합하는 면역 유도제.
(3) (2)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(e)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드인 면역 유도제.
(c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드
(d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드
(e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드
(4) (1)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 MHC 클래스 II분자에 결합하는 면역 유도제.
(5) (4)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (f)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드인 면역 유도제.
(f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드
(g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드
(h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드
(6) (1) 내지 (5) 중 어느 하나에 있어서, 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 사용하는 면역 유도제.
(7) (6)에 있어서, 상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 면역 유도제.
(8) (6) 또는 (7)에 있어서, 상기 암이 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암 또는 폐암인 면역 유도제.
(9) (1) 내지 (8) 중 어느 하나에 있어서, 면역 증강제를 더 포함하는 면역 유도제.
(10) (1), (3) 또는 (5) 중 어느 하나에 기재된 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포.
(11) (1), (3) 또는 (5) 중 어느 하나에 기재된 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 선택적으로 결합하는 단리 T 세포.
(12) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 어느 하나의 폴리펩티드.
(a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드,
(b) 상기 (a)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드.
(13) 이하의 (i)~(iv)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효 성분으로서 포함하는 암의 치료 또는 예방약.
(i) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드:
(a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드,
(b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(ii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터;
(iii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포; 및
(iv) 상기 어느 하나의 폴리펩티드에 특이적인 단리 T 세포.
(14) (13)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 적어도 1개의 폴리펩티드인 암의 치료 또는 예방약:
(c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
(d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드;
(f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
(g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드.
(15) (13) 또는 (14)에 있어서, 상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 암의 치료 또는 예방약.
(16) 이하의 (i)~(iv)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 그것을 필요로 하는 대상 동물에 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
(i) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드:
(a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드,
(b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(ii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터;
(iii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포; 및
(iv) 상기 어느 하나의 폴리펩티드에 특이적인 단리 T 세포.
(17) (16)에 있어서, 상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 적어도 1개의 폴리펩티드인 방법:
(c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
(d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드;
(f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
(g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
(h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드.
(18) (16) 또는 (17)에 있어서, 상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 방법.
본 명세서는 본원의 우선권의 기초가 되는 일본국 특허출원번호 2016-040364호의 개시 내용을 포함한다.
(발명의 효과)
본 발명에 의해 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 유용한 신규의 면역 유도제가 제공된다.
또한, 후술하는 실시예에 있어서 구체적으로 나타내어지는 바와 같이 본 발명에서 사용되는 폴리펩티드에 의해 암세포를 살상하는 면역 세포를 유도할 수 있고, 이미 발생되어 있는 암을 축소 또는 퇴축시킬 수 있다. 또한, 본 발명에서 사용되는 펩티드에 의해 암세포를 살상하는 면역 세포의 유도를 증강할 수 있고, 이미 발생되어 있는 암을 축소 또는 퇴축시킬 수도 있다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 암의 치료나 예방약의 유효 성분으로서 유용하다.
도 1은 SCD1 유전자의 인간 종양 조직 또는 암세포주에서의 발현 패턴을 나타내는 도면이다. 참조 번호 1; 인간 SCD1 유전자의 발현 패턴을 나타낸다. 참조 번호 2; 인간의 하우스 키핑 유전자인 GAPDH 유전자의 발현 패턴을 나타낸다.
도 2는 서열 번호 3~23에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포가 상기 폴리펩티드와 HLA-A0201의 복합체를 인식해서 IFN-γ를 산생하는 것을 나타내는 도면이다. 도면 중 가로축의 레인 4~24는 각각 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 펄스한 수지상 세포의 자극에 의한 HLA-A0201 양성 CD8 양성 T 세포의 IFN-γ 산생능을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 상기 처리를 행한 경우에 대한 결과(Mock)를 나타내고, 레인 2는 서열 번호 46에 나타내는 본 발명의 범위 외의 음성 컨트롤 폴리펩티드를 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타내고, 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타낸다.
도 3은 서열 번호 24~36에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포가 상기 폴리펩티드와 HLA-A24의 복합체를 인식해서 IFN-γ를 산생하는 것을 나타내는 도면이다. 도면 중 가로축의 레인 4~16은 각각 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 펄스한 수지상 세포의 자극에 의한 HLA-A24 양성 CD8 양성 T 세포의 IFN-γ 산생능을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 상기 처리를 행한 경우에 대한 결과(Mock)를 나타내고, 레인 2는 서열 번호 47에 나타내는 본 발명의 범위 외의 음성 컨트롤 펩티드를 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타내고, 그리고 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타낸다.
도 4a는 서열 번호 3~23에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포의 암세포에 대한 장해 활성을 나타내는 도면이다. 도면 중 가로축의 레인 4~24는 각각 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 사용하여 유도한 HLA-A0201 양성 CD8 양성 T 세포의 U251 세포에 대한 세포 장해 활성을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 유도한 CD8 양성 T 세포(Mock)의 세포 장해 활성을 나타내고, 레인 2는 음성 컨트롤의 폴리펩티드(서열 번호 46)를 사용해서 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타내고, 그리고 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 사용하여 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타낸다.
도 4b는 서열 번호 3~23에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포의 암세포에 대한 장해 활성을 나타내는 도면이다. 도면 중 가로축의 레인 4~24는 각각 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 사용하여 유도한 HLA-A0201 양성의 CD8 양성 T 세포의 SK-Hep-1 세포에 대한 세포 장해 활성을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 유도한 CD8 양성 T 세포(Mock)의 세포 장해 활성을 나타내고, 레인 2는 음성 컨트롤의 폴리펩티드(서열 번호 46)를 사용해서 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타내고, 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 사용하여 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타낸다.
도 5a는 서열 번호 24~36에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포의 암세포에 대한 장해 활성을 나타내는 도면이다. 가로축의 레인 4~16은 각각 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 사용하여 자극한 HLA-A24 양성의 CD8 양성 T 세포의 SW480 세포에 대한 세포 장해 활성을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 유도한 CD8 양성 T 세포(Mock)의 세포 장해 활성을 나타내고, 참조 번호 2는 음성 컨트롤의 폴리펩티드(서열 번호 47)를 사용해서 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타내고, 그리고 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 사용하여 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타낸다.
도 5b는 서열 번호 24~36에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 펩티드에 특이적인 CD8 양성 T 세포의 암세포에 대한 장해 활성을 나타내는 도면이다. 가로축의 레인 4~16은 각각 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 사용하여 자극한 HLA-A24 양성 CD8 양성 T 세포의 ZR-75-1 세포에 대한 세포 장해 활성을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 유도한 CD8 양성 T 세포(Mock)의 세포 장해 활성을 나타내고, 참조 번호 2는 음성 컨트롤의 폴리펩티드(서열 번호 47)를 사용해서 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타내고, 그리고 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 사용하여 유도한 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 나타낸다.
도 6은 서열 번호 37~45에 나타내는 아미노산 서열로 이루어지는 각 폴리펩티드에 특이적인 CD4 양성 T 세포가 상기 폴리펩티드와 HLA-DRB1*04의 복합체를 인식해서 IFN-γ를 산생하는 것을 나타내는 도면이다. 레인 4~12는 각각 서열 번호 37~45의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 펄스한 수지상 세포의 자극에 의한 HLA-DRB1*04 양성 CD4 양성 T 세포의 IFN-γ 산생능을 나타낸다. 레인 1은 폴리펩티드를 첨가하지 않고 상기 처리를 행한 경우에 대한 Mock의 결과를 나타내고, 레인 2는 서열 번호 48에 나타내는 본 발명의 범위 외의 음성 컨트롤 폴리펩티드를 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타내고, 그리고 레인 3은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 첨가해서 상기 처리를 행한 결과를 나타낸다.
<폴리펩티드>
본 발명에 있어서 「폴리펩티드」란 복수의 아미노산이 펩티드 결합함으로써 형성되는 분자를 말한다. 구성하는 아미노산 수가 많은 폴리펩티드 분자뿐만 아니라 아미노산 수가 적은 저분자량의 분자(올리고펩티드)도 본 발명의 폴리펩티드에 포함된다.
본 발명의 면역 유도제를 구성하는 폴리펩티드에는 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드를 들 수 있다.
(a) 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 인간 SCD1 단백질에 있어서, 개시 메티오닌을 1위치로 했을 때에 34~50위치(17 아미노산), 69~148위치(80 아미노산), 178~195위치(18 아미노산), 207~242위치(36 아미노산), 247~280위치(34 아미노산), 296~332위치(37 아미노산)의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
(b) 상기 (a)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드.
또한, 본 발명에 있어서 「아미노산 서열로 이루어지는」이란 아미노산 잔기가 그와 같은 순서로 서열되어 있다는 의미이다. 따라서, 예를 들면 「서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드」란 서열 번호 2에 나타내어지는 Met Asp Pro Ala···(중략) ···Tyr Lys Ser Gly의 아미노산 서열을 갖는 359 아미노산 잔기의 사이즈의 폴리펩티드를 의미한다. 또한, 본 명세서에서는, 예를 들면 「서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드」를 종종 「서열 번호 2의 폴리펩티드」로 약기한다. 「염기 서열로 이루어지는」이라는 표현에 대해서도 마찬가지이다.
또한, 본 발명에서 「면역 유도 활성」이란 SCD1 단백질을 발현하는 암세포에 대하여 반응하는 T 세포를 활성화 및 증식시키는 능력을 의미한다. 구체적으로는 SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드로 자극된 세포 장해성 T 세포 및/또는 헬퍼 T 세포의 IFN-γ 산생 능력이 자극하고 있지 않은 대조 T 세포의 그것보다 높은 것, SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드로 자극된 세포 장해성 T 세포의 SCD1 단백질 발현 암세포에 대한 세포 장해 활성이 자극하고 있지 않은 대조의 T 세포의 그것보다 높은 것, SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드로 자극된 헬퍼 T 세포가 세포 장해성 T 세포의 세포 장해 활성을 자극하고 있지 않은 대조의 T 세포의 그것보다 증강하는 것 또는 SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드로 자극된 세포 장해성 T 세포 또는 헬퍼 T 세포가 자극하고 있지 않은 대조의 T 세포의 그것보다 잘 증식하는 것을 의미한다.
세포의 증식은 육안 관찰, 현미경하에서의 세포수 계측, 플로우 사이토메트리, 배지 중의 트리튬티미딘의 세포 내로의 도입량 등에 의해 확인할 수 있다. 또한, IFN-γ 산생 능력의 측정은, 예를 들면 공지의 에리스팟 어세이 등을 사용하여 확인할 수 있다. 구체적으로는, 예를 들면 후술하는 실시예에 기재되는 바와 같이 우선 T 세포를 면역 유도 활성을 평가해야 할 폴리펩티드(본 발명에서는 SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드)와 말초혈 단핵구(이하, 「PBMC」로 표기한다) 유래의 항원 제시 세포와 공배양함으로써 T 세포를 평가해야 할 폴리펩티드를 제시하는 항원 제시 세포와 접촉시킨다. 계속해서 T 세포로부터 산생된 IFN-γ를 IFN-γ에 특이적인 항체를 사용하여 측정한다. 이에 따라 상기 T 세포 중의 면역 세포수를 측정할 수 있다. 이들의 측정 결과로부터 면역 유도 활성을 평가할 수 있다.
또한, 세포 장해 활성의 측정은, 예를 들면 T 세포를 세포 장해 활성을 평가해야 할 폴리펩티드(본 발명에서는 SCD1 단백질 또는 그 부분 폴리펩티드) 및 PBMC 유래의 항원 제시 세포와 공배양한 후 생체 외에서 종양 세포의 증식을 억제하는 능력 또는 종양 세포를 죽이는 능력(이하, 「세포 장해 활성」으로 표기한다)을 나타내는지의 여부를 조사함으로써 평가할 수 있다. T 세포와 항원 제시 세포의 접촉은 후술하는 바와 같이 양자를 액체 배양지 중에서 공배양함으로써 달성할 수 있다. 세포 장해 활성의 측정은, 예를 들면 Int.J.Cancer, 58: P317, 1994에 기재된 51Cr 릴리스 어세이라고 불리는 공지의 방법에 의해 행할 수 있다.
상기에서 유도된 T 세포를 담암생체에 투여함으로써 그 T 세포의 세포 장해 활성에 의해 종양을 축소 또는 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 상기 면역 유도 활성은 암세포의 증식을 억제하고, 또는 암 조직(종양)을 축소 또는 소멸시키는 능력(이하, 「항종양 활성」으로 표기한다)으로서 평가할 수도 있다.
상기 폴리펩티드를 암의 치료 또는 예방 용도로 사용할 경우에는 특별히 한정되지 않지만, 면역 유도 활성의 평가는 세포 장해 활성 또는 항종양 활성을 지표로 하는 것이 바람직하다.
이 분야에서 공지와 같이 약 7 아미노산 잔기 이상의 폴리펩티드이면 에피토프를 포함할 수 있는 점에서 항원성 및 면역 원성을 발휘할 수 있고, 면역 유도 활성을 가질 수 있으므로 본 발명의 면역 유도제로서 사용할 수 있다.
따라서, 상기 (a)의 폴리펩티드는 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내에 있어서의 연속하는 7개 이상, 바람직하게는 연속하는 8, 9 또는 10개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드이며, 또한 면역 유도 활성을 갖는 것이다. 특히 바람직하게는 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치로 나타내어지는 아미노산 서열을 갖는 것이다.
암 항원 폴리펩티드를 투여하는 것에 의한 면역 유도의 원리로서 폴리펩티드가 항원 제시 세포에 도입되고, 그 후 상기 세포 내에서 펩티다아제에 의한 분해를 받아서 보다 작은 단편이 되고, 그 후 단편화된 항원 펩티드는 상기 항원 제시 세포의 표면상에 제시된다. 세포 표면에 제시된 항원을 세포 장해성 T 세포 등이 인식하고, 상기 항원을 세포 표면에 제시하고 있는 암세포를 선택적으로 죽여 가는 것이 알려져 있다. 또한, 항원 제시 세포의 표면상에 제시된 항원을 헬퍼 T 세포가 인식하고, 그 항원을 세포 표면에 제시하고 있는 암세포를 선택적으로 죽이는 세포 장해성 T 세포의 유도를 촉진하는 것이 알려져 있다. 항원 제시 세포의 표면상에 제시되는 항원 폴리펩티드의 사이즈는 비교적 작아 아미노산 수로 7~30 정도이다. 따라서, 항원 제시 세포상에 제시시킨다는 관점에서는 상기 (a)의 폴리펩티드로서는 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치로 나타내어지는 아미노산 서열 중의 연속하는 7~30 정도인 것이 바람직하다. 상기 폴리펩티드는 8~30 정도, 9~30 정도 또는 9~25 정도의 아미노산으로 이루어지는 것이면 충분하다. 이들 비교적 작은 사이즈의 폴리펩티드는 항원 제시 세포 내에 도입되는 일 없이 직접 항원 제시 세포상의 세포 표면에 제시되는 경우도 있다.
또한, 항원 제시 세포에 도입된 폴리펩티드는 상기 세포 내의 펩티다아제에 의해 랜덤한 위치에서 절단을 받아 여러 가지의 폴리펩티드 단편이 발생하고, 이들의 폴리펩티드 단편이 항원 제시 세포 표면상에 제시되므로 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치와 같이 큰 사이즈의 폴리펩티드를 투여하면 항원 제시 세포 내에서의 분해에 의해 항원 제시 세포를 통하는 면역 유도에 유효한 폴리펩티드 단편이 필연적으로 발생한다. 따라서, 항원 제시 세포를 통하는 면역 유도는 사이즈가 큰 폴리펩티드를 사용할 수도 있다. 예를 들면, 상기 폴리펩티드의 아미노산 수를 30 이상, 바람직하게는 40 이상, 보다 바람직하게는 50 이상, 더 바람직하게는 100 이상으로 해도 좋다.
또한, 본 발명의 폴리펩티드는 후술하는 MHC(인간에게 있어서는 HLA)의 클래스 I분자 또는 클래스 II분자와의 결합 모티프를 갖는 8~25개, 바람직하게는 9~24개, 더 바람직하게는 9~23개의 아미노산으로 이루어지는 에피토프펩티드를 검색할 수 있는 대조 매체, 예를 들면 Bioinformatics ＆ Molecular Analysis Selection(BIMAS)의 HLA Peptide Binding Predictions(http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/index.html)나 SYFPEITHI에 의해 대조하여 에피토프펩티드가 될 수 있는 펩티드를 스크리닝함으로써 얻을 수 있다. 구체적으로는 본 발명의 폴리펩티드는 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드이다. 예를 들면, 본 발명의 폴리펩티드로서는 서열 번호 3~45로 나타내어지는 폴리펩티드 또는 서열 번호 3~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하고, 또한 아미노산 잔기 수가 10~30인 폴리펩티드를 들 수 있다. 이 중 서열 번호 3~45로 나타내어지는 폴리펩티드 또는 서열 번호 3~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하고, 또한 아미노산 잔기 수가 10~30인 폴리펩티드 중 서열 번호 3~36으로 나타내어지는 폴리펩티드의 면역 유도 활성은 MHC 클래스 I분자와의 결합에 의한 것이며, 서열 번호 37~45로 나타내어지는 폴리펩티드의 면역 유도 활성은 MHC 클래스 II분자와의 결합에 의한 것이다.
한편, 상기 (b)의 폴리펩티드는 상기 (a)의 폴리펩티드 중 1개 또는 수 개의 아미노산 잔기가 치환되고, 결실되고, 삽입되고, 및/또는 부가된 폴리펩티드이며, 또한 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드이다. 예를 들면, 본 발명의 폴리펩티드로서는 서열 번호 3~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드를 들 수 있다.
본 명세서 중의 「수 개」에 있어서의 「수」란 2~10의 정수, 바람직하게는 2~6의 정수, 보다 바람직하게는 2~4, 더 바람직하게는 2 또는 3의 정수를 나타낸다.
일반적으로 어떤 폴리펩티드 중 1개 또는 수 개의 아미노산의 개변은 본래의 폴리펩티드의 기능에 영향을 미치지 않는다고 생각되고, 경우에 따라서는 본래의 폴리펩티드의 소망의 기능을 강화하는 것마저 있다고 생각되어 있다. 실제 본래의 아미노산 서열과 비교해서 1개 또는 수 개의 아미노산 잔기가 개변된(즉, 치환, 결실, 부가 및/또는 삽입된) 아미노산 서열로 구성되는 개변 펩티드는 본래의 펩티드의 생물 활성을 유지하는 것이 알려져 있다(Mark et al., 1984, Proc Natl Acad Sci USA, 81:5662-5666, Zoller and Smith, 1982, Nucleic Acids Res. 10:6487-6500, Dalbadie-McFarland et al., 1982, Proc Natl Acad Sci USA. 79:6409-6413). 따라서, 상기 (b)의 폴리펩티드도 면역 유도 활성을 발휘할 수 있으므로 본 발명의 면역 유도제의 조제에 사용할 수 있다.
또한, 천연의 단백질을 구성하는 20종류의 아미노산은 저극성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Gly, Ile, Val, Leu, Ala, Met, Pro), 친수성 측쇄를 갖는 중성 아미노산(Asn, Gln, Thr, Ser, Tyr, Cys), 산성 아미노산(Asp, Glu), 염기성 아미노산(Arg, Lys, His), 방향족 아미노산(Phe, Tyr, Trp)과 같이 유사의 성질을 갖는 것으로 그룹을 나눌 수 있고, 이들 사이에서의 치환이면 폴리펩티드의 성질이 변화하지 않는 것이 많은 것이 알려져 있다. 따라서, 본 발명의 상기 (a)의 폴리펩티드 중의 아미노산 잔기를 치환할 경우에는 이들의 각 그룹 사이에서 치환함으로써 면역 유도 활성을 유지할 수 있을 가능성이 높아지기 때문에 바람직하다.
또한, 상기 (b)의 폴리펩티드는 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드, 예를 들면 서열 번호 3~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드 중 어느 하나와 90% 이상, 바람직하게는 95% 이상, 보다 바람직하게는 98% 이상, 더 바람직하게는 99% 이상 또는 99.5% 이상의 아미노산 서열의 동일성을 갖고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드이어도 좋다.
본 명세서에 있어서 아미노산 서열(또는 염기 서열)의 「동일성」이란 비교해야 할 2개의 아미노산 서열(또는 염기 서열)의 아미노산 잔기(또는 염기)가 가능한 한 많이 일치하도록 양쪽 아미노산 서열(또는 염기 서열)을 정렬시켜서 일치한 아미노산 잔기 수(또는 일치한 염기 수)를 전체 아미노산 잔기 수(또는 전체 염기 수)로 나눈 것을 백분율로 나타낸 것이다. 상기 정렬 시에는 필요에 따라 비교하는 2개의 서열의 일방 또는 쌍방에 적당히 갭을 삽입한다. 이러한 서열의 정렬화는, 예를 들면 BLAST, FASTA, CLUSTAL W 등의 주지의 프로그램을 사용하여 행할 수 있다. 갭이 삽입될 경우 상기 전체 아미노산 잔기 수는 1개의 갭을 1개의 아미노산 잔기로서 센 잔기 수가 된다. 이렇게 해서 센 전체 아미노산 잔기 수가 비교하는 2개의 서열 사이에서 상이한 경우에는 서열 동일성(%)은 긴 쪽의 서열의 전체 아미노산 잔기 수이며, 일치한 아미노산 잔기 수를 나누어서 산출된다.
암치료 또는 예방과의 관련에서 사용된 경우 본 발명의 폴리펩티드는 바람직하게는 HLA의 각 형태와의 복합체로서 세포 또는 엑소좀의 표면상에 제시되어야 한다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드는 면역 유도 활성을 가질 뿐만 아니라 HLA의 각 형태에 대한 높은 결합 친화성을 갖는 펩티드를 선택하는 것이 바람직하다. 그 때문에 아미노산 잔기의 치환, 삽입, 결실 및/또는 부가에 의해 펩티드를 개변하여 결합 친화성이 개선된 개변 펩티드로 해도 좋다. 천연으로 제시되는 펩티드에 추가하여 HLA의 각 형태로의 결합에 의해 제시되는 펩티드의 서열의 규칙성은 기지인 점에서(J Immunol, 1994, 152:3913; Immunogenetics, 1995, 41:178; J Immunol, 1994, 155:4307) 그러한 규칙성에 의거한 개변을 본 발명의 면역 원성 펩티드에 도입할 수 있다. 예를 들면, HLA-A24 결합 친화성을 높이기 위해서는 N 말단으로부터 2번째의 아미노산을 류신 또는 메티오닌으로 치환하는 것 및/또는 C 말단의 아미노산을 발린 또는 류신으로 치환하는 것이 바람직할 가능성이 있다. 따라서, 서열 번호 24~36의 아미노산 서열을 갖는 펩티드로서, 이들 펩티드의 N 말단으로부터 2번째의 아미노산이 류신 또는 메티오닌으로 치환되어 있는 및/또는 아미노산의 C 말단이 발린 또는 류신으로 치환되어 있는 펩티드는 본 발명의 범위에 포함된다.
치환을 말단 아미노산의 개소뿐만 아니라 펩티드의 TCR 인식의 가능성이 있는 위치에 도입할 수도 있다. 몇 가지의 연구에 의해 펩티드의 아미노산 치환물은 본래의 것과 동등하거나 또는 보다 우수한 면역 유도 활성을 갖는 것이 실증되어 있으며, 이것에는, 예를 들면 CAP1, p53(264-272), Her-2/neu(369-377) 또는 gp100(209-217)이 있다(Zaremba et al. 1997, Cancer Res. 57:4570-4577, T.K.Hoffmann et al. 2002, J Immunol. 168(3):1338-47, S.O.Dionne et al. 2003, Cancer Immunol immunother. 52:199-206, 및 S.O.Dionne et al. 2004, Cancer Immunology, Immunotherapy, 53:307-314).
상기 개변에 추가하여 결과로서 발생하는 연결 폴리펩티드가 본래의 펩티드의 필요한 면역 유도 활성을 유지하는 한 본 발명의 폴리펩티드를 다른 물질과 연결시킬 수도 있다. 다른 물질의 예로서 한정은 하지 않지만 펩티드, 지질, 당 및 당쇄, 아세틸기, 천연 및 합성 폴리머 등이 포함된다. 펩티드는 개변에 의해 본래의 펩티드의 생물 활성을 손상하지 않는 것을 조건으로 하여 글리코실화, 측쇄 산화 또는 인산화 등의 개변을 포함할 수 있다. 이들의 종류의 개변은 부가적인 기능(예를 들면, 표적화 기능 및 송달 기능)을 부여하기 위해서 또는 폴리펩티드를 안정화하기 위해서 행할 수 있다. 예를 들면, 폴리펩티드의 인비보 안정성을 높이기 위해서 D-아미노산, 아미노산 모방체 또는 비천연 아미노산을 도입하는 기술이 상기 분야에 있어서 공지이며, 이 개념을 본 발명의 폴리펩티드에 적용할 수도 있다. 폴리펩티드의 안정성은 몇 가지의 방법으로 분석할 수 있다. 예를 들면, 펩티다아제 및 인간의 혈장 및 혈청 등의 여러 가지 생체 매질을 사용하여 안정성을 시험할 수 있다(예를 들면, Verhoef et al., 1986, Eur J Drug Metab Pharmacokin, 11:291-302를 참조).
또한, 본 발명의 폴리펩티드를 스페이서 또는 링커를 통해 다른 펩티드와 연결시켜도 좋다. 다른 펩티드의 예로서 한정은 하지 않지만 다른 폴리펩티드로부터 유래되는 에피토프펩티드가 포함된다. 또는 본 발명의 2개 또는 그 이상의 폴리펩티드를 스페이서 또는 링커를 통해 연결시켜도 좋다. 스페이서 또는 링커를 통해 연결시키는 펩티드는 동일해도 서로 상이해도 좋다. 스페이서 및 링커의 종류는 특별히 한정되지 않고 펩티드로 구성되는 것, 보다 바람직하게는 펩티다아제, 프로테아제, 및 프로테아솜 등의 효소에 의해 절단될 수 있는 1개 또는 복수 개의 절단 부위를 갖는 펩티드로 구성되는 것이 포함된다. 링커 또는 스페이서의 예로서 한정은 하지 않지만 AAY(P.M.Daftarian et al., J Trans Med, 2007, 5:26), AAA, NKRK(R.P.M.Sutmuller et al., J Immunol. 2000, 165:7308-7315), 또는 1개~수 개의 리신 잔기(S.Ota et al., 2002, Can Res. 62:1471-1476, K.S.Kawamura et al., 2002, J Immunol. 168:5709-5715)를 들 수 있다. 본 발명은 스페이서 또는 링커를 통해 다른 펩티드와 연결된 폴리펩티드를 상정하고 있다.
본 발명의 폴리펩티드가 시스테인 잔기를 포함할 경우 그들의 폴리펩티드는 시스테인 잔기의 SH 기간의 디술피드 결합을 통해 2량체를 형성하는 경향이 있다. 따라서, 폴리펩티드의 2량체도 본 발명의 폴리펩티드에 포함된다.
본 발명의 폴리펩티드는 주지의 기법을 사용하여 조제할 수 있다. 예를 들면, Fmoc법(플루오렌일메틸옥시카르보닐법), tBoc법(t-부틸옥시카르보닐법) 등의 화학 합성법에 따라 합성할 수 있다. 또한, 각종 시판된 펩티드 합성기를 이용하여 상법에 의해 합성할 수도 있다.
또한, 공지의 유전자 공학적 방법을 사용하여 상기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 조제하고, 상기 폴리뉴클레오티드를 발현 벡터에 장착하여 숙주 세포에 도입하고, 상기 숙주 세포 중에서 목적으로 하는 폴리펩티드를 생산시킴으로써 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 수도 있다. 숙주 세포로부터 목적으로 하는 폴리펩티드를 얻을 경우, 다른 천연의 숙주 세포 단백질 및 그들의 단편 또는 다른 임의의 화학 물질을 실질적으로 포함하지 않도록 정제 또는 단리하면 좋다.
상기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드는 공지의 유전자 공학적 방법이나 시판된 핵산 합성기를 사용한 상법에 의해 용이하게 조제할 수 있다. 예를 들면, 서열 번호 1의 염기 서열을 갖는 DNA는 인간 염색체 DNA 또는 cDNA 라이브러리를 주형으로서 사용하고, 서열 번호 1에 기재한 염기 서열을 증폭할 수 있도록 설계한 한 쌍의 프라이머를 사용하여 PCR을 행함으로써 조제할 수 있다. PCR의 반응 조건은 적당히 설정할 수 있고, 예를 들면 94℃에서 30초간(변성), 55℃에서 30초~1분간(어닐링), 72℃에서 2분간(신장)으로 이루어지는 반응 행정을 1사이클로 하고, 예를 들면 30사이클 행한 후, 72℃에서 1분간 반응시키는 조건 등을 들 수 있지만 이것에 한정되지 않는다. 또한, 서열 번호 1에 나타내어지는 염기 서열 및 아미노산 서열의 정보에 의거하여 적당한 프로브나 프라이머를 조제하고, 그것을 사용하여 인간 등의 cDNA 라이브러리를 스크리닝함으로써 소망의 DNA를 단리할 수 있다. cDNA 라이브러리는 서열 번호 2의 단백질을 발현하고 있는 세포, 기관 또는 조직으로 제작하는 것이 바람직하다. 상술한 프로브 또는 프라이머의 조제, cDNA 라이브러리의 구축, cDNA 라이브러리의 스크리닝, 및 목적 유전자의 클로닝 등의 조작은 당업자에게 기지이며, 예를 들면 Green, M.R. and Sambrook, J., 2012, Molecular Cloning: A Laboratory Manual Fourth Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York 또는 Current Protocolin Molecular Biology: www.currentprotocols.com 등에 기재된 방법에 준하여 행할 수 있다. 이렇게 해서 얻어진 DNA로부터 상기 (a)의 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 얻을 수 있다. 또한, 각 아미노산을 코딩하는 코돈은 공지이기 때문에 특정 아미노산 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 염기 서열은 용이하게 특정할 수 있다. 따라서, 상술한 (b)의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드의 염기 서열도 용이하게 특정할 수 있으므로 그러한 폴리뉴클레오티드도 시판된 핵산 합성기를 사용하여 상법에 의해 합성하면 좋다.
상기 숙주 세포로서는 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 세포이면 어떠한 것이어도 좋다. 원핵 세포의 예로서는 대장균 등, 진핵 세포의 예로서는 원숭이 신장 세포 COS1, 차이니즈 햄스터 난소 세포 CHO 등의 포유동물 배양 세포, 출아 효모, 분열 효모, 누에 세포, 아프리카 발톱개구리 난세포 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
숙주 세포로서 원핵 세포를 사용할 경우 발현 벡터로서는 원핵 세포 중에서 복제 가능한 오리진, 프로모터, 리보솜 결합 부위, DNA 클로닝 부위, 터미네이터 등을 갖는 발현 벡터를 사용한다. 대장균용 발현 벡터로서는 pUC계, pBluescriptII, pET 발현 시스템, pGEX 발현 시스템 등을 예시할 수 있다. 상기 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 장착하고, 상기 벡터에서 원핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면 상기 DNA가 코딩하고 있는 폴리펩티드를 원핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 이때 상기 폴리펩티드를 다른 단백질과의 융합 단백질로서 발현시킬 수도 있다.
숙주 세포로서 진핵 세포를 사용할 경우 발현 벡터로서는 프로모터, 스플라이싱 영역, 폴리 (A) 부가 부위 등을 갖는 진핵 세포용 발현 벡터를 사용한다. 그러한 발현 벡터로서는 pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV 벡터, pRS, pcDNA3, pMSG, pYES2 등을 예시할 수 있다. 상기와 마찬가지로 상기 폴리펩티드를 코딩하는 DNA를 이러한 발현 벡터에 장착하고, 상기 벡터에서 진핵 숙주 세포를 형질 전환한 후, 얻어진 형질 전환체를 배양하면 상기 DNA가 코딩하고 있는 폴리펩티드를 진핵 숙주 세포 중에서 발현시킬 수 있다. 발현 벡터로서 pIND/V5-His, pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1 등을 사용한 경우에는 His 태그, FLAG 태그, myc 태그 HA 태그, GFP 등 각종 태그를 부가한 융합 단백질로서 상기 폴리펩티드를 발현시킬 수 있다.
발현 벡터의 숙주 세포로의 도입은 전기 천공법, 인산 칼슘법, 리포솜법, DEAE 덱스트란법 등의 주지의 방법을 사용할 수 있다.
숙주 세포로부터 목적의 폴리펩티드를 단리 정제하기 위해서는 공지의 분리 조작을 조합하여 행할 수 있다. 예를 들면, 요소 등의 변성제나 계면활성제에 의한 처리, 초음파 처리, 효소 소화, 염석이나 용매 분별 침전법, 투석, 원심 분리, 한외 여과, 겔 여과, SDS-PAGE, 등전점 전기영동, 이온 교환 크로마토그래피, 소수 크로마토그래피, 어피니티 크로마토그래피, 역상 크로마토그래피 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다.
이상의 방법에 의해 얻어지는 폴리펩티드에는 상술한 바와 같이 다른 임의의 단백질과의 융합 단백질의 형태에 있는 것도 포함된다. 예를 들면, 글루타티온-S-트랜스페라제(GST)나 His 태그와의 융합 단백질 등을 예시할 수 있다. 따라서, 이러한 융합 단백질 형태의 폴리펩티드도 본 발명의 범위에 포함된다. 또한, 형질 전환 세포에서 발현된 폴리펩티드는 번역된 후 세포 내에서 각종 수식을 받는 경우가 있다. 이러한 번역 후 수식된 폴리펩티드도 면역 유도 활성을 갖는 한 본 발명의 범위에 포함된다. 이러한 번역 수식으로서는 N 말단 메티오닌의 탈리, N 말단 아세틸화, 당쇄 부가, 세포 내 프로테아제에 의한 한정 분해, 미리스토일화, 이소프레닐화, 인산화 등을 예시할 수 있다.
<면역 유도제>
본 발명의 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자를 포함하는 발현 벡터를 담암생체에 투여하면 이미 발생되어 있는 종양을 퇴축시킬 수 있다. 또한, 상술한 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드를 코딩하는 유전자를 암의 발병 전의 생체에 투여함으로써 종양의 발생을 예방할 수 있다. 따라서, 본 발명의 폴리펩티드 또는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자는 면역 유도제의 유효 성분이 될 수 있다.
여기에서 「종양」 및 「암」이라는 용어는 악성 신생물을 의미하고, 호환적으로 사용된다. 이 경우 대상이 되는 암으로서는 SCD1 단백질을 발현하고 있는 암인 것이 바람직하며, 그 중에서도 바람직하게는 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암, 및 폐암이다.
대상 동물은 바람직하게는 포유동물이며, 보다 바람직하게는 영장류, 애완동물, 가축류, 경기용 동물 등을 포함하는 포유동물이며, 더 바람직하게는 인간, 개 또는 고양이이며, 특히 바람직하게는 인간이다.
대상이 되는 암 이환 개체(개체가 인간일 경우에는 암환자)는 생체 내에서 SCD1 단백질을 발현하고 있는 암 이환 개체인 것이 바람직하며, 구체적으로는 WO 2011/027807에 기재되는 암의 검출 방법에 의해 스크리닝되는 암 이환(罹患) 개체인 것이 바람직하다. 특히, 대상 생체로부터 얻어진 시료 중에 포함되는 SCD1 단백질에 대한 항체의 발현량이 건상 개체의 생체로부터 얻어진 시료 중에 포함되는 상기 항체의 발현량과 비교해서 많음으로써 스크리닝되는 암 이환 개체인 것이 바람직하다. 대상이 되는 암 이환 개체의 스크리닝에 제공되는 시료로서는 혈액, 혈청, 혈장, 복수, 흉수 등의 체액, 조직, 세포를 들 수 있지만 SCD1 단백질에 대한 항체의 발현량의 측정에 의해 스크리닝하는 경우에는 혈청, 혈장, 복수 또는 흉수가 바람직하다.
본 발명의 면역 유도제의 투여 경로는 경구 투여이어도 비경구 투여이어도 좋지만, 근육 내 투여, 피하 투여, 정맥 내 투여, 동맥 내 투여 등의 비경구 투여가 바람직하다. 암의 치료 목적으로 상기 면역 유도제를 사용할 경우에는 항암 작용을 높이기 위해서 치료 대상이 되는 종양 근방의 소속 림프절에 투여할 수도 있다. 투여량은 면역 유도하는데에 유효한 양이면 좋고, 예를 들면 암의 치료 또는 예방에 사용하는 것이면, 암의 치료 또는 예방에 유효한 양이면 좋다. 암의 치료 또는 예방에 유효한 양은 종양의 크기나 증상, 대상 동물의 체중, 체적 등에 따라 적당히 선택되지만 대상 동물이 인간일 경우 통상 1일당 유효량은 0.0001~1000㎍, 바람직하게는 0.001~1000㎍이 된다. 이것을 1회 또는 수회로 나누어서 투여할 수 있다. 1일당 수회로 나누고, 그것을 수일 또는 수개월 간격으로 투여하는 것이 바람직하다. 후술하는 실시예에 구체적으로 나타내어지는 바와 같이 본 발명의 면역 유도제는 이미 형성되어 있는 종양을 퇴축시킬 수 있다. 따라서, 발생 초기의 소수의 암세포에도 항암 작용을 발휘할 수 있으므로 암의 발병 전이나 암의 치료 후에 사용하면 암의 발병이나 재발을 방지할 수 있다. 즉, 본 발명의 면역 유도제는 암의 치료와 예방의 쌍방에 유용하며, 암치료 또는 예방약의 유효 성분이 될 수 있다.
본 발명의 면역 유도제는 상술한 본 발명의 폴리펩티드를 유효 성분으로서 함유하지만 단일의 폴리펩티드만으로 이루어져 있어도 좋고, 복수의 폴리펩티드를 조합해도 좋다. 본 발명의 폴리펩티드를 복수 조합함으로써 각 폴리펩티드가 갖는 면역 유도 활성(세포 상해 활성 T 세포의 유도·활성화 작용)이 증강되어 암의 치료 또는 예방을 보다 효과적으로 달성할 수 있다.
본 발명의 면역 유도제를 공지의 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있는 펩티드와 조합하여 사용할 수도 있다. 본 발명의 폴리펩티드를 조합함으로써 각 폴리펩티드가 갖는 면역 유도 활성(세포 상해 활성 T 세포의 유도·활성화 작용)이 증강되어 암의 치료 또는 예방을 보다 효과적으로 달성할 수 있다. 이 경우의 「조합」은 본 발명의 면역 유도제와 공지의 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있는 펩티드를 별개로 또는 동시에 투여하는 것을 포함한다. 여기에서 말하는 「별개로 투여하는」이란 본 발명의 면역 유도제와 공지의 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있는 펩티드를 시간차를 두고 각각 투여하는 것을 말한다. 투여하는 순서는 상관 없다. 한편, 「동시에 투여하는」이란 본 발명의 면역 유도제와 공지의 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있는 펩티드를 미리 혼합해서 일체화시킨 형태로 투여하는 것 또는 본 발명의 면역 유도제와 공지의 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있는 펩티드를 개별 형태로 시간차 없이 투여하는 것을 말한다.
본 발명의 면역 유도제는 생체 내에서의 면역학적 응답을 강화할 수 있는 다른 면역 증강제와 조합하여 사용할 수 있다. 다른 면역 증강제는 본 발명의 면역 유도제에 포함되어 있어도 좋고, 별개의 조성물로서 본 발명의 면역 유도제와 병용해서 환자에게 투여해도 좋다.
상기 「다른 면역 증강제」로서는, 예를 들면 애쥬벤트를 들 수 있다. 애쥬벤트는 항원의 저장소(세포 외 또는 마크로파지 내)를 제공하고, 마크로파지를 활성화하고, 또한 특정 림프구를 자극함으로써 면역학적 응답을 강화할 수 있으므로 항암 작용을 높일 수 있다. 따라서, 본 발명의 면역 유도제를 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분에 사용할 경우, 면역 유도제는 유효 성분인 본 발명의 폴리펩티드에 추가하여 애쥬벤트를 더 포함하는 것이 바람직하다. 다수의 종류의 애쥬벤트가 당업계에서 주지이며, 어느 하나의 애쥬벤트에서도 사용할 수 있다. 애쥬벤트의 구체예로서는 MPL(SmithKline Beecham), 살모넬라속의 Salmonella minnesota Re 595 리포 다당류의 정제 및 산가수 분해 후에 얻어지는 동류물; QS21(SmithKline Beecham), Quillja saponaria 추출물로부터 정제되는 순 QA-21 사포닌; PCT 출원 WO96/33739(SmithKline Beecham)에 기재된 DQS21; QS-7, QS-17, QS-18, 및 QS-L1(So, H.S., et al., 1997, Molecules and cells, 7:178-186); 프로인트의 불완전 애쥬벤트; 프로인트의 완전 애쥬벤트; 비타민 E; 몬타니드; 명반; CpG 올리고뉴클레오티드(예를 들면, Kreig, A.M., et al., 1995, Nature374:546-549를 참조); 폴리 IC 및 그 유도체(폴리 ICLC 등) 및 스쿠알렌 및/또는 토코페롤과 같은 생분해성 기름으로 조제되는 여러 가지의 유중수 에멀젼을 들 수 있다. 그 중에서도 프로인트의 불완전 애쥬벤트, 몬타니드, 폴리 IC 및 그 유도체, 및 CpG 올리고뉴클레오티드가 바람직하다. 상기 애쥬벤트와 폴리펩티드의 혼합비는 전형적으로는 약 1:10~10:1, 바람직하게는 약 1:5~5:1, 보다 바람직하게는 약 1:1이다. 단, 애쥬벤트는 상기 예시에 한정되지 않고, 당업계에서 공지의 상기 이외의 애쥬벤트도 본 발명의 면역 유도제를 투여할 때에 사용할 수 있다(예를 들면, Goding, Monoclonal Antibodies:Principles and Practice, 제 2 판, 1986년을 참조). 면역 유도제 및 애쥬벤트의 혼합물 또는 에멀젼의 조제 방법은 예방 접종의 당업자에게는 주지이다.
또한, 상기 다른 면역 증강제로서는 상기 애쥬벤트 이외에도 대상의 면역 응답을 자극하는 인자를 사용할 수도 있다. 예를 들면, 림프구나 항원 제시 세포를 자극하는 특성을 갖는 각종 사이토카인을 면역 증강제로서 본 발명의 면역 유도제와 조합하여 사용할 수 있다. 그러한 면역학적 응답을 증강 가능한 다수의 사이토카인은 당업자에게 공지이며, 그 예로서 백신의 방어 작용을 강화하는 것이 나타내어져 있는 인터류킨-12(IL-12), GM-CSF, IL-18, 인터페론α(IFN-α), 인터페론β(IFN-β), 인터페론ω(IFN-ω), 인터페론γ(IFN-γ), 및 Flt3 리간드를 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다. 이러한 인자도 상기 면역 증강제로서 사용할 수 있고, 본 발명의 면역 유도제에 포함시켜서 또는 별개의 조성물로서 본 발명의 면역 유도제와 병용해서 환자에게 투여할 수 있다.
<암의 치료 또는 예방약 >
본 발명의 면역 유도제는 암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 사용할 수 있다.
암의 치료 또는 예방약은 본 발명의 면역 유도제를 각 투여 형태에 적합한 약리학적으로 허용되는 담체, 희석제, 부형제 등의 첨가제를 적당히 혼합시켜서 제제할 수도 있다.
제제 방법 및 사용 가능한 첨가제는 의약 제제의 분야에 있어서 주지이며, 어느 하나의 방법 및 첨가제도 사용할 수 있다. 첨가제의 구체예로서는 생리 완충액과 같은 희석제; 설탕, 유당, 콘스타치, 인산 칼슘, 소르비톨, 글리신 등과 같은 부형제; 시럽, 젤라틴, 아라비아 고무, 소르비톨, 폴리비닐클로라이드, 트라간트 등과 같은 결합제; 스테아르산 마그네슘, 폴리에틸렌글리콜, 탤크, 실리카 등의 활택제 등을 들 수 있지만 이들에 한정되지 않는다. 제제 형태로서는 정제, 캅셀제, 과립제, 산제, 시럽제 등의 경구제, 흡입제, 주사제, 좌제, 액제 등의 비경구제 등을 들 수 있다. 이들의 제제는 일반적으로 알려져 있는 제법에 의해 제작할 수 있다.
<항원 제시 세포>
또한, 상기 폴리펩티드와 항원 제시 세포를 인비트로에서 접촉시킴으로써 상기 폴리펩티드를 항원 제시 세포에 제시시킬 수 있다. 즉, 상술한 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드는 항원 제시 세포의 처리제로서 이용할 수 있다. 여기에서 항원 제시 세포로서는 MHC 클래스 I분자 및 클래스 II분자를 보유하는 수지상 세포 또는 B 세포를 바람직하게 사용할 수 있다. 여러 가지의 MHC 클래스 I분자 및 클래스 II분자가 동정(同定)되어 있으며, 주지이다. 인간에게 있어서의 MHC 분자는 HLA라고 부른다. HLA 클래스 I분자로서는 HLA-A, HLA-B, HLA-C를 들 수 있고, 보다 구체적으로는 HLA-A1, HLA-A0201, HLA-A0204, HLA-A0205, HLA-A0206, HLA-A0207, HLA-A11, HLA-A24, HLA-A31, HLA-A6801, HLA-B7, HLA-B8, HLA-B2705, HLA-B37, HLA-Cw0401, HLA-Cw0602 등을 들 수 있다. HLA 클래스 II분자로서는 HLA-DR, HLA-DQ, HLA-DP를 들 수 있고, 보다 구체적으로는 HLA-DRB1*01, HLA-DRB1*03, HLA-DRB1*04, HLA-DRB1*0405, HLA-DRB1*07, HLA-DRB1*08, HLA-DRB1*11, HLA-DRB1*13, HLA-DRB1*15, HLA-DRB1*15, HLA-DQA1, HLA-DQB1, HLA-DPB1을 들 수 있다.
MHC 클래스 I 또는 MHC 클래스 II분자를 보유하는 수지상 세포 또는 B 세포는 주지의 방법에 의해 혈액 등으로 조제할 수 있다. 예를 들면, 골수, 제대혈 또는 환자 말초혈로부터 과립구 마크로파지 콜로니 자극 인자(GM-CSF)와 IL-3(또는 IL-4)을 사용해서 수지상 세포를 유도하고, 그 배양계에 종양 관련 펩티드를 첨가함으로써 종양 특이적인 수지상 세포를 유도할 수 있다.
이 수지상 세포를 유효량 투여함으로써 암의 치료에 바람직한 면역 응답을 유도할 수 있다. 사용하는 세포는 건강인으로부터 제공된 골수나 제대혈, 환자 본인의 골수나 말초혈 등을 사용할 수 있다. 환자 본래의 자가 세포는 안전성이 높고, 중독인 부작용을 회피하는 것도 기대할 수 있으므로 바람직하다. 말초혈 또는 골수는 신선 시료, 저온 보존 시료, 및 동결 보존 시료 중 어느 것이어도 좋다. 말초혈은 전혈을 배양해도 좋고, 백혈구 성분만을 분리해서 배양해도 좋지만 후자 쪽이 효율적이며 바람직하다. 또한, 백혈구 성분 중에서도 단핵구를 분리해도 좋다. 또한, 골수나 제대혈을 기원으로 할 경우에는 골수를 구성하는 세포 전체를 배양해도 좋고, 이제부터 단핵구를 분리해서 배양해도 좋다. 말초혈이나 그 백혈구 성분, 골수 세포에는 수지상 세포의 기원이 되는 단핵구, 조혈간세포 또는 미성숙 수지상 세포나 CD4 양성 세포 등이 포함되어 있다. 사용되는 사이토카인은 안전성과 생리 활성이 확인된 특성의 것이면 천연형 또는 유전자 재조합형 등 그 생산 방법에 대해서는 상관 없지만, 바람직하게는 의료용에 사용되는 품질이 확보된 표품이 필요 최저량으로 사용된다. 첨가하는 사이토카인의 농도는 수지상 세포가 유도되는 농도이면 특별히 한정되지 않고, 통상 사이토카인의 합계 농도로 10~1000ng/mL 정도가 바람직하며, 보다 바람직하게는 20~500ng/mL 정도이다. 배양은 백혈구의 배양에 통상 사용되어 있는 주지의 배지를 사용하여 행할 수 있다. 배양 온도는 백혈구의 증식이 가능하면 특별히 한정되지 않지만 인간의 체온인 37℃ 정도가 가장 바람직하다. 또한, 배양 중의 기체 환경은 백혈구의 증식이 가능하면 특별히 한정되지 않지만 5% CO2를 통기하는 것이 바람직하다. 또한, 배양 기간은 필요수의 세포가 유도되는 기간이면 특별히 한정되지 않지만 통상 3일~2주간의 사이에서 행해진다. 세포의 분리나 배양에 제공되는 기기는 적당히 알맞은 것을 사용할 수 있지만 의료용으로 안전성이 확인되고, 또한 조작이 안정되어 간편한 것이 바람직하다. 특히 세포 배양 장치에 대해서는 샬레, 플라스크, 보틀 등의 일반적 용기에 상관없이 적층형 용기나 다단식 용기, 롤러 보틀, 스피너식 보틀, 백식 배양기, 중공사 칼럼 등도 사용할 수 있다.
상기 폴리펩티드와 항원 제시 세포를 인비트로에서 접촉시키는 방법 자체는 주지의 방법에 의해 행할 수 있다. 예를 들면, 항원 제시 세포를 상기 폴리펩티드를 포함하는 배양액 중에서 배양함으로써 달성할 수 있다. 배지 중의 펩티드 농도는 특별히 한정되지 않지만 통상 1~100㎍/mL 정도, 바람직하게는 5~20㎍/mL 정도이다. 배양 시의 세포 밀도는 특별히 한정되지 않지만 통상 103~107세포/mL 정도, 바람직하게는 5×104~5×106세포/mL 정도이다. 배양은 상법에 따라 37℃, 5% CO2 분위기 중에서 행하는 것이 바람직하다. 또한, 항원 제시 세포가 표면상에 제시할 수 있는 펩티드의 길이는 통상 최대로 30 아미노산 잔기 정도이다. 따라서, 특별히 한정되지 않지만 항원 제시 세포와 폴리펩티드를 인비트로에서 접촉시킬 경우 상기 폴리펩티드를 30 아미노산 잔기 이하의 길이로 조제해도 좋다.
상술한 폴리펩티드의 공존하에 있어서 항원 제시 세포를 배양함으로써 펩티드가 항원 제시 세포의 MHC 분자에 도입되어 항원 제시 세포의 표면에 제시된다. 따라서, 상기 폴리펩티드를 사용하여 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포를 조제할 수 있다. 이러한 항원 제시 세포는 생체 내 또는 인비트로에 있어서 T 세포에 대하여 상기 폴리펩티드를 제시하고, 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포 장해성 T 세포 또는 헬퍼 T 세포를 유도하여 증식시킬 수 있다.
상기와 같이 해서 조제되는 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 항원 제시 세포를 T 세포와 인비트로에서 접촉시킴으로써 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포 장해성 T 세포 또는 헬퍼 T 세포를 유도하여 증식시킬 수 있다. 이것은 상기 항원 제시 세포와 T 세포를 액체 배양지 중에서 공배양함으로써 행할 수 있다. 예를 들면, 항원 제시 세포를 액체 배양지에 현탁하여 마이크로 플레이트의 웰 등의 용기에 넣고, 이것에 T 세포를 첨가해서 배양함으로써 행할 수 있다. 공배양 시의 항원 제시 세포와 T 세포의 혼합 비율은 특별히 한정되지 않지만 통상 세포수의 비율로 1:1~1:100 정도, 바람직하게는 1:5~1:20 정도이다. 또한, 액체 배양지 중에 현탁하는 항원 제시 세포의 밀도는 특별히 한정되지 않지만 통상 100~1000만세포/mL 정도, 바람직하게는 10000~100만세포/mL 정도이다. 공배양은 상법에 따라 37℃, 5% CO2 분위기 중에서 행하는 것이 바람직하다. 배양 시간은 특별히 한정되지 않지만 통상 2일~3주간, 바람직하게는 4일~2주간 정도이다. 또한, 공배양은 IL-2, IL-6, IL-7, 및 IL-12와 같은 인터류킨의 1종 또는 복수의 존재하에서 행하는 것이 바람직하다. 이 경우 IL-2 및 IL-7의 농도는 통상 5~20U/mL 정도, IL-6의 농도는 통상 500~2000U/mL 정도, IL-12의 농도는 통상 5~20ng/mL 정도이지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 상기 공배양은 신선한 항원 제시 세포를 추가하여 1회 또는 수회 반복해도 좋다. 예를 들면, 공배양 후의 배양 상청을 버리고, 신선한 항원 제시 세포의 현탁액을 첨가하여 공배양을 더 행한다는 조작을 1회 또는 수회 반복해도 좋다. 각 공배양의 조건은 상기와 마찬가지이면 좋다.
상기 공배양에 의해 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포 장해성 T 세포 및 헬퍼 T 세포가 유도되어 증식된다. 따라서, 상기 폴리펩티드를 사용하여 상기 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 선택적으로 결합하는 단리 T 세포를 조제할 수 있다.
후술하는 실시예에 기재되는 바와 같이 SCD1 단백질을 코딩하는 유전자(SCD1 유전자)는 각각 악성 림프종 조직, 악성 림프종 세포, 유방암 조직, 유방암 세포, 간암 조직, 간암 세포, 전립선암 조직, 전립선암 세포, 난소암 조직, 난소암 세포, 신장암 조직, 신장암 세포, 대장암 조직, 대장암 세포, 위암 조직, 위암 세포, 악성 뇌종양 조직, 악성 뇌종양 세포, 식도암 조직, 식도암 세포, 폐암 조직, 폐암 세포에 특이적으로 발현되어 있다. 따라서, 이들 암종류에 있어서는 SCD1 단백질이 정상세포보다 유의하게 많이 존재하고 있다고 생각된다. 암세포 내에 존재하는 SCD1 단백질의 일부가 암세포 표면상의 MHC 분자에 제시되고, 상기와 같이 해서 조제한 세포 장해성 T 세포 또는 헬퍼 T 세포가 생체 내에 투여되면 이것을 안표로 하여 세포 장해성 T 세포가 암세포를 장해하거나 또는 세포 상해성 T 세포의 세포 장해 활성을 증강할 수 있다. 또한, 상기 폴리펩티드를 제시하는 항원 제시 세포는 생체 내에 있어서도 상기 폴리펩티드에 특이적인 세포 장해성 T 세포 및 헬퍼 T 세포를 유도하여 증식시킬 수 있으므로 상기 항원 제시 세포를 생체 내에 투여함으로써도 세포 상해성 T 세포가 암세포를 장해하거나 또는 세포 장해성 T 세포의 세포 장해 활성을 증강할 수 있다. 즉, 상기 폴리펩티드를 사용하여 조제된 상기 세포 장해성 T 세포나 헬퍼 T 세포, 상기 항원 제시 세포도 또한 본 발명의 면역 유도제와 마찬가지로 암의 치료 또는 예방약으로서 유용하다.
상술한 단리 항원 제시 세포나 단리 T 세포를 생체에 투여할 경우에는 이들의 세포를 이물로서 공격하는 생체 내에서의 면역 응답을 회피하기 위해서 치료를 받는 환자로부터 채취한 항원 제시 세포 또는 T 세포를 상기와 같이 상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 사용하여 조제한 것이 바람직하다.
항원 제시 세포 또는 단리 T 세포를 유효 성분으로서 포함하는 암의 치료 또는 예방약의 투여 경로는 정맥 내 투여나 동맥 내 투여와 같은 비경구 투여가 바람직하다. 또한, 투여량은 증상이나 투여 목적 등에 따라 적당히 선택되지만 통상 1개~10조개, 바람직하게는 100만개~10억개이며, 이것을 수일 또는 수개월에 1회 투여하는 것이 바람직하다. 제제는, 예를 들면 세포를 생리 완충 식염수에 현탁한 것 등이면 좋고, 다른 항암제나 사이토카인 등과 병용할 수도 있다. 또한, 제제 분야에 있어서 주지의 1 또는 2 이상의 첨가제를 첨가할 수도 있다.
<유전자 백신>
또한, 상기 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 대상 동물의 체내에서 발현시킴으로써도 면역 유도, 즉 상기 생체 내에서 항체 생산이나 세포 장해성 T 세포를 유도할 수 있고, 폴리펩티드를 투여하는 것과 동등한 효과가 얻어진다. 즉, 본 발명의 면역 유도제는 상술한 (a) 또는 (b)의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터를 유효 성분으로서 포함하는 것이어도 좋다. 후술하는 실시예에 나타내어지는 바와 같이 이러한 항원 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터는 「유전자 백신」이라고도 불린다.
유전자 백신을 제조하기 위해서 사용하는 벡터는 대상 동물 세포 내(바람직하게는 포유동물 세포 내)에서 발현 가능한 벡터이면 특별히 한정되지 않고, 플라스미드 벡터이어도 바이러스 벡터이어도 좋고, 유전자 백신의 분야에서 공지의 어떠한 벡터를 사용해도 좋다. 또한, 상기 폴리펩티드를 코딩하는 DNA나 RNA 등의 폴리뉴클레오티드는 상술한 바와 같이 상법에 의해 용이하게 조제할 수 있다. 또한, 벡터로의 상기 폴리뉴클레오티드의 장착은 당업자에게 주지의 방법을 사용하여 행할 수 있다.
유전자 백신의 투여 경로는 바람직하게는 근육 내 투여, 피하 투여, 정맥 내 투여, 동맥 내 투여 등의 비경구 투여 경로이며, 투여량은 항원의 종류 등에 따라 적당히 선택할 수 있지만 통상 체중 1㎏당 유전자 백신의 중량으로 0.1㎍~100㎎ 정도, 바람직하게는 1㎍~10㎎ 정도이다.
바이러스 벡터에 의한 방법으로서는, 예를 들면 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 헤르페스바이러스, 백시니아바이러스, 폭스바이러스, 폴리오바이러스, 신드비스바이러스 등의 RNA 바이러스 또는 DNA 바이러스에 상기 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 조합하고, 이것을 대상 동물에 감염시키는 방법을 들 수 있다. 이 중에서 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 백시니아바이러스 등을 사용한 방법이 특히 바람직하다.
그 밖의 방법으로서는 발현 플라스미드를 직접 근육 내에 투여하는 방법(DNA 백신법), 리포솜법, 리포펙틴법, 마이크로인젝션법, 인산 칼슘법, 일렉트로포레이션법 등을 들 수 있고, 특히 DNA 백신법, 리포솜법이 바람직하다.
본 발명에서 사용되는 상기 폴리펩티드를 코딩하는 유전자를 실제로 의약으로서 작용시키기 위해서는 유전자를 직접 체내에 도입하는 인비보 방법, 및 대상 동물로부터 어떤 종류의 세포를 채취하여 체외에서 유전자를 상기 세포에 도입하여 그 세포를 체내로 되돌리는 엑소 비보 방법이 있지만, 인비보 방법이 보다 바람직하다.
인비보 방법에 의해 투여하는 경우에는 치료 목적의 질환, 증상 등에 따른 적당한 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 예를 들면, 정맥, 동맥, 피하, 근육 내 등에 투여할 수 있다. 인비보 방법에 의해 투여하는 경우에는, 예를 들면 액제 등의 제제 형태를 취할 수 있지만 일반적으로는 유효 성분인 본 발명의 상기 펩티드를 코딩하는 DNA를 함유하는 주사제 등이 되고, 필요에 따라 관용의 담체를 첨가해도 좋다. 또한, 상기 DNA를 함유하는 리포솜 또는 막 융합 리포솜(센다이바이러스(HVJ)-리포솜 등)에 있어서는 현탁제, 동결제, 원심 분리 농축 동결제 등의 리포솜 제제의 형태로 할 수 있다.
또한, 본 발명에 있어서 「서열 번호 1에 나타내어지는 염기 서열」이라고 한 경우에는 서열 번호 1에 실제로 나타내어져 있는 염기 서열 외에 이것과 상보적인 서열도 포함한다. 따라서, 「서열 번호 1에 나타내어지는 염기 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드」라고 한 경우에는 서열 번호 1에 실제로 나타내어져 있는 염기 서열을 갖는 1개쇄 폴리뉴클레오티드, 그 상보적인 염기 서열을 갖는 1개쇄 폴리뉴클레오티드, 및 이들로 이루어지는 2개쇄 폴리뉴클레오티드가 포함된다. 본 발명에서 사용되는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 조제할 경우에는 적당히 어느 하나의 염기 서열을 선택하게 되지만 당업자이면 용이하게 그 선택을 할 수 있다.
실시예
이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 보다 구체적으로 설명한다.
<실시예 1: 각 조직에서의 발현 해석>
(1) 각 암세포주에서의 SCD1 유전자 발현 해석
인간 SCD1 단백질의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자 서열(서열 번호 1)을 Gene Bank로부터 얻었다. 얻어진 유전자에 대해서 인간 각종 세포주에 있어서의 발현을 RT-PCR(Reverse Transcription-PCR)법에 의해 조사했다. 역전사 반응은 이하와 같이 행했다. 즉, 각 조직 50~100㎎ 및 각 세포주 5~10×106개의 세포로부터 TRIZOL 시약(Life Technologies Corporation제)을 사용하여 첨부된 프로토콜에 따라 전체 RNA를 추출했다. 이 전체 RNA를 사용하여 Superscript First-Strand Synthesis System for RT-PCR(Life Technologies Corporation제)에 의해 첨부된 프로토콜에 따라 cDNA를 합성했다. 인간 정상 조직(뇌, 해마, 정소, 결장, 태반)의 cDNA는 진풀 cDNA(Life Technologies Corporation제), QUICK-Clone cDNA(Clontech Laboratories, Inc.제), 및 Large-Insert cDNA Library(Clontech Laboratories, Inc.제)를 사용했다. PCR 반응은 취득한 유전자 특이적인 프라이머(프라이머의 염기 서열은 서열 번호 49 및 50에 기재)를 사용하여 이하와 같이 행했다. 즉, 역전사 반응에 의해 조제한 샘플 0.25㎕, 상기 프라이머를 각 2μM, 0.2mM의 각 dNTP, 0.65U의 ExTaq 폴리메라아제(TAKARA SHUZO CO., LTD.제)가 되도록 각 시약과 첨부 버퍼를 추가하여 전량을 25㎕로 하고, Thermal Cycler(Bio-Rad Laboratories, Inc.제)를 사용해서 94℃-30초, 55℃-30초, 및 72℃-1분의 사이클을 30회 반복하여 행했다. 비교 대조를 위해 하우스 키핑 유전자인 GAPDH 유전자에 특이적인 프라이머(인간 GAPDH 프라이머의 염기 서열은 서열 번호 51 및 52에 기재)도 동시에 사용했다.
그 결과 도 1에 나타내는 바와 같이 인간 SCD1 유전자는 대부분의 암세포주, 즉 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암, 및 폐암에서 발현이 검출되었다.
(2) 인간 암 조직에 있어서의 SCD1 단백질의 발현(면역 조직 화학 염색)
파라핀 포매된 다종류의 암 조직 어레이(US BIOMAX Inc.제)의 암 조직 72검체를 사용하여 면역 조직 화학 염색을 행했다. 인간 암 조직 어레이를 60℃에서 3시간 처리 후, 크실렌을 채운 염색병에 넣어서 5분 마다 크실렌을 바꿔 넣는 조작을 3회 행했다. 이어서, 크실렌 대신에 에탄올 및 PBS-T로 마찬가지의 조작을 행했다. 0.05% Tween 20을 포함하는 10mM 시트르산 완충액(pH 6.0)을 채운 염색병에 인간 암 조직 어레이를 넣고, 125℃에서 5분간 처리 후 실온에서 40분 이상 정치했다. 절편 주위의 여분인 수분을 킴와이프로 닦아내고, DAKOPEN으로 둘러싸고, Peroxidase Block(DAKO Co., Ltd.제)을 적당량 적하했다. 실온에서 5분간 정치 후 PBS-T를 채운 염색병에 넣어서 5분 마다 PBS-T를 바꿔 넣는 조작을 3회 행했다. 블록킹액으로서 10% FBS를 포함하는 PBS-T용액을 얹고, 모이스트 체임버 내에서 실온에서 1시간 정치했다. 이어서, SCD1 단백질에 반응하는 시판 토끼 폴리클로날 항체(SIGMA Corporation)를 5% FBS를 포함하는 PBS-T용액으로 10㎍/mL로 조제한 용액을 얹고, 모이스트 체임버 내에서 4℃에서 하룻밤 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후 Peroxidase Labelled Polymer Conjugated(DAKO Co., Ltd.제) 적량 적하하고, 모이스트 체임버 내에 실온에서 30분간 정치했다. PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후 DAB 발색액(DAKO Co., Ltd.제)을 얹고, 실온에서 10분 정도 정치한 후 발색액을 버리고, PBS-T로 10분간 3회 세정을 행한 후 증류수로 린싱하고, 70%, 80%, 90%, 95%, 100%의 각 에탄올 용액에 차례대로 1분간씩 넣은 후 크실렌 중에서 하룻밤 정치했다. 슬라이드 유리를 인출하고, Glycergel Mounting Medium(DAKO Co., Ltd.제)으로 봉입 후 관찰을 행했다.
그 결과, SCD1 단백질은 검증한 대부분의 암, 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암, 및 폐암에서 강한 발현이 확인되었다.
<실시예 2: 펩티드에피토프 반응성 CD8 양성 T 세포의 유도>
(1) HLA-A0201과 HLA-A24에 결합하는 펩티드모티프의 예측
서열 번호 2로 나타내어지는 인간 SCD1 단백질의 아미노산 서열의 정보를 GenBank로부터 얻었다. HLA-A0201과 HLA-A24 결합 모티프 예측을 위해 공지의 BIMAS 소프트(http://bimas.dcrt.nih.gov/molbio/hla_bind/에서 이용 가능)를 사용한 컴퓨터 예측 프로그램을 사용하여 인간 SCD1 단백질의 아미노산 서열을 해석하고, HLA-A0201 분자에 결합 가능한 것으로 예상되는 서열 번호 3~23으로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드 21 종류와, HLA-A24 분자에 결합 가능한 것으로 예상되는 서열 번호 24~36으로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드 13 종류를 선택했다. 선택한 모든 폴리펩티드는 Greiner Bio One International GmbH의 커스텀펩티드 합성 서비스에 합성 의뢰했다. 또한, 합성된 폴리펩티드는 HPLC 분석과 매스스펙트럼 분석에 의한 품질이 보증된 것이다.
(2) 펩티드에피토프 반응성 CD8 양성 T 세포의 유도
HLA-A0201 양성의 건상인으로부터 말초혈을 분리하고, Lymphocyte separation medium(OrganonpTeknika, Durham, NC)에 중층해서 1,500rpm으로 실온에서 20분간 원심 분리했다. PBMC를 함유하는 획분을 회수하고, 냉인산염 완충액 중에서 3회(또는 그 이상) 세정하여 PBMC를 얻었다. 얻어진 PBMC를 AIM-V 배지(Life Technologies Corporation제) 20mL에 현탁하고, 배양 플라스크(FALCON Co., Ltd.제) 중에 37℃, 5% CO2의 조건하에서 2시간 부착시켰다. 비부착 세포는 T 세포 조제에 사용하고, 부착 세포는 수지상 세포를 조제하기 위해서 사용했다.
부착 세포를 AIM-V 배지 중에서 IL-4(1000U/mL) 및 GM-CSF(1000U/mL)의 존재하에서 배양했다. 6일 후에 IL-4(1000U/mL), GM-CSF(1000U/mL), IL-6(1000U/mL, Genzyme Corporation제), IL-1β(10ng/mL, Genzyme Corporation제), 및 TNF-α(10ng/mL, Genzyme Corporation제)를 첨가한 AIM-V 배지로 교환하고, 2일간 더 배양한 후 얻어진 비부착 세포 집단을 수지상 세포로서 사용했다.
조제한 수지상 세포를 AIM-V 배지 중에 1×106세포/mL의 세포 밀도로 현탁하고, 상기 (1)에서 선택한 HLA-A0201 분자에 결합 가능한 것으로 예상되는 펩티드를 10㎍/mL의 농도로 첨가하고, 96구멍 플레이트를 사용하여 37℃, 5% CO2의 조건하에서 4시간 배양했다. 배양 후 X선 조사(3000rad)하고, AIM-V 배지로 세정하고, 10% 인간 AB 혈청(Nabi Co., Ltd.제), IL-6(1000U/mL), 및 IL-12(10ng/mL, Genzyme Corporation제)를 함유하는 AIM-V 배지로 현탁하고, 24구멍 플레이트 1구멍당 각각 1×105세포씩 첨가했다. 또한, 조제한 T 세포 집단을 1구멍당 각각 1×106세포 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양했다. 7일 후 각각의 배양 상청을 버리고 상기와 마찬가지로 해서 얻은 각 펩티드로 처리 후 X선 조사한 수지상 세포를 10% 인간 AB 혈청(Nabi Co., Ltd.제), IL-7(10U/mL, Genzyme Corporation제), 및 IL-2(10U/mL, Genzyme Corporation제)를 함유하는 AIM-V 배지로 현탁하고(세포 밀도: 1×105세포/mL), 24구멍 플레이트 1구멍당 각각 1×105세포씩 첨가하여 더 배양했다. 마찬가지의 조작을 7일간 간격으로 4회 반복한 후 자극된 T 세포를 회수하고, 플로우 사이토메트리에 의해 CD8 양성 T 세포의 유도를 확인했다.
또한, 음성 컨트롤로서 본 발명의 범위 외의 서열인 펩티드(서열 번호 46) 및 WO 2012/157736의 실시예 3에 의거하여 제작한 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 비교예로서 사용하여 상기와 마찬가지의 처리를 행했다.
또한, HLA-A24 분자에 결합 가능한 것으로 예상되는 펩티드에 대해서도 HLA-A24 양성의 건상인의 말초혈로부터 유도한 수지상 세포와 T 세포 집단을 사용하여 상기와 마찬가지의 방법으로 펩티드에피토프 반응성 CD8 양성 T 세포의 유도를 시험해 보았다. 또한, 음성 컨트롤로서 본 발명의 범위 외의 서열인 펩티드(서열 번호 47)를 상기 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 비교예로서 사용하여 마찬가지의 처리를 행했다.
<실시예 3: 세포 장해성 T 세포 항원 에피토프의 결정>
(1) IFN-γ 산생능
실시예 2(2)에서 유도한 T 세포 각각에 대해서 에피토프펩티드 및 단백질 에 대한 특이성을 조사하기 위해서 HLA-A0201 분자를 발현하는 수지상 세포에 각종 폴리펩티드를 펄스했다. 상기 수지상 세포는 10㎍/mL의 농도로 AIM-V 배지 중 각 폴리펩티드를 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 4시간 배양해서 조제했다. 또한, 각종 폴리펩티드에는 HLA-A0201 분자에 결합 가능한 것으로 예상되는 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 각 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드(서열 번호 46), 및 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 사용했다. 펄스 후의 수지상 세포 5×104개에 대하여 5×103개의 T 세포를 첨가하고, 10% 인간 AB 혈청을 포함하는 AIM-V 배지 중에서 96구멍 플레이트에서 24시간 배양했다. 배양 후의 상청을 취하여 IFN-γ의 산생량을 ELISA법에 의해 측정했다.
그 결과, 폴리펩티드를 펄스하고 있지 않은 수지상 세포 및 음성 컨트롤 폴리펩티드를 사용한 레인 1 및 2에 비해서 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 펄스한 수지상 세포를 사용한 레인 4~24에서는 명백하게 높은 IFN-γ 산생이 확인되었다(도 2). 이 결과로부터 서열 번호 3~23의 펩티드는 특이적으로 HLA-A0201 양성 CD8 양성 T 세포를 증식 자극시켜서 IFN-γ 산생을 유도하는 능력을 갖는 T 세포 에피토프펩티드인 것이 판명되었다. 또한, 이들 펩티드를 사용한 IFN-γ의 산생량은 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질(레인 3)로 자극한 T 세포로부터 산생되는 IFN-γ보다 현저하게 높은 것도 판명되었다. 즉, 서열 번호 3~23의 폴리펩티드는 현저하게 높은 면역 유도 활성을 갖고 있는 것을 나타내고 있다. 또한, 서열 번호 2로 나타내어지는 전체 길이 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 상기 면역 유도 활성을 갖는 서열 번호 3~23이 포함되어 있음에도 상관없이 서열 번호 2의 전체 길이 SCD1 단백질로 자극한 T 세포로부터 산생되는 IFN-γ의 산생량은 낮았다. 이것은 전체 길이 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 면역 유도 활성을 억제하는 서열도 많이 포함되는 점에서 충분한 면역 유도 활성을 나타내지 않았다고 생각된다.
또한, 상기와 마찬가지로 실시예 3(2)에서 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드를 사용하여 유도한 펩티드에피토프 반응성 CD8 양성 T 세포에 대해서 펩티드에피토프에 대한 특이성을 조사하기 위해서 서열 번호 24~36 폴리펩티드(레인 4~16), 서열 번호 47의 아미노산 서열로 나타내어지는 음성 컨트롤 폴리펩티드, 서열 번호 2의 아미노산 서열로 나타내어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 펄스한 HLA-A24 분자를 발현하는 수지상 세포에 대한 T 세포의 IFN-γ의 산생량을 상기 방법에 준하여 ELISA법에 의해 측정했다.
그 결과, 폴리펩티드를 펄스하고 있지 않은 수지상 세포의 레인 1 및 음성 컨트롤 폴리펩티드를 사용한 레인 2에 비해서 서열 번호 24~36의 폴리펩티드를 펄스한 수지상 세포를 사용한 레인 4~16에서는 배양 상청에 있어서 현저한 IFN-γ 산생이 확인되었다(도 3).
이 결과로부터 서열 번호 24~36의 폴리펩티드는 특이적으로 HLA-A24 양성 CD8 양성 T 세포를 증식 자극시켜서 IFN-γ 산생을 유도하는 능력을 갖는 T 세포 에피토프펩티드인 것이 밝혀졌다. 또한, 이들 폴리펩티드를 사용한 IFN-γ의 산생량은 서열 번호 2의 아미노산 서열로 나타내어지는 전체 길이 SCD1 단백질로 자극한 T 세포로부터 산생되는 IFN-γ보다 현저하게 높은 것도 판명되었다. 상기와 마찬가지의 이유에 의해 전체 길이 SCD1 단백질에서는 충분한 면역 유도 활성을 나타내지 않았다고 생각된다.
(2) 세포 장해성 평가
이어서, 본 발명에서 사용되는 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드가 HLA-A0201 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 종양 세포상의 HLA-A0201 분자상에 제시되는 것인지, 또한 본 발명의 폴리펩티드로 자극된 CD8 양성 T 세포가 HLA-A0201 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 종양 세포를 장해할 수 있을지, 또한 SCD1 단백질로 자극된 CD8 양성 T 세포와 비교해서 종양 세포를 현저하게 장해할지를 검토했다.
인간 SCD1 단백질의 발현이 확인되어 있는 인간 글리오마(악성 뇌종양) 세포주 U251 세포, 백혈병 세포주 THP1, 간암 세포주 SK-Hep-1, 유방암 세포주 MCF7, 난소암 세포주 OVCAR3, 신장암 세포주 A498, 대장암 세포주 HCT116, 위암 세포주 AGS, 및 폐암 세포주 NCI-H522(JCRB, RIKEN 및 ATCC로부터 구입)의 세포주를 각각 106개 50mL용의 원심 튜브에 모으고, 100μCi의 크롬 51을 첨가하여 37℃에서 2시간 인큐베이트했다. 그 후 10% 소 태아 혈청(이하 FBS라고 한다, GIBCO Corporation제)을 포함하는 RPMI 배지(GIBCO Corporation제)로 3회 세정하고, 96구멍 V바닥 플레이트 1구멍당 103개씩 첨가하고, 또한 이것에 10%의 FBS를 포함하는 RPMI 배지로 현탁된 5×104개의 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드(서열 번호 46), 및 서열 번호 2의 아미노산 서열로 나타내어지는 전체 길이 SCD1 단백질에 의한 자극으로 유도된 HLA-A0201 양성의 CD8 양성 T 세포를 각각 첨가하여 37℃, 5% CO2의 조건하에서 4시간 배양했다. 배양 후 장해를 받은 종양 세포로부터 방출되는 배양 상청 중의 크롬 51의 양을 측정함으로써 각 폴리펩티드 및 단백질의 자극으로 유도된 CD8 양성 T 세포의 세포 장해 활성을 산출했다.
그 결과, 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드 자극으로 유도된 HLA-A0201 양성의 CD8 양성 T 세포가 상기 세포 모두에 대하여 현저한 세포 장해 활성을 갖는 것이 판명되었다. 대표예로서 도 4a 및 도 4b에 각각 U251 세포 및 SK-Hep-1 세포에 대한 세포 장해 활성의 결과를 나타낸다. 서열 번호 3~23의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드로 자극된 CD8 양성 T 세포(각각 레인 4~24)에서는 전체 길이 SCD1 단백질로 자극된 CD8 양성 T 세포(레인 3)와 비교해서 U251 세포 및 SK-Hep-1 세포에 대하여 현저하게 높은 세포 장해 활성을 나타내고 있다. 한편, 음성 컨트롤의 폴리펩티드(레인 2)를 사용해서 유도한 CD8 양성 T 세포는 Mock(레인 1)와 같은 정도이며, 세포 장해 활성을 나타내지 않았다. 이 결과는 본 발명에서 사용되는 서열 번호 3~23의 폴리펩티드가 HLA-A0201 양성이며 인간 SCD1 폴리펩티드를 발현하는 종양 세포상의 HLA-A0201 분자상에 제시되는 것이며, 또한 본 발명의 폴리펩티드는 이러한 종양 세포를 장해할 수 있는 CD8 양성 세포 장해성 T 세포를 유도하는 능력이 있는 것을 시사하고 있다. 또한, 전체 길이 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 서열 번호 3~23이 포함되어 있음에도 상관없이 서열 번호 3~23의 폴리펩티드로 자극된 CD8 양성 T 세포에 의한 세포 장해 활성보다 현저하게 약했다(레인 3, 4~24). 이것은 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 면역 유도 활성을 억제하는 서열이 많이 포함되는 점에서 강한 세포 장해 활성을 갖는 T 세포를 유도할 수 없었기 때문으로 생각된다.
마찬가지로 서열 번호 24~36의 폴리펩티드가 HLA-A24 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 종양 세포상의 HLA-A24 분자상에 제시되는 것인지, 또한 본 발명의 폴리펩티드로 자극된 CD8 양성 T 세포가 HLA-A24 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 종양 세포를 장해할 수 있을지, 또한 SCD1 단백질로 자극된 CD8 양성 T 세포와 비교해서 종양 세포를 현저하게 장해할지를 검토했다.
HLA-A24 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 인간 글리오마 세포주 KNS-42, 간암 세포주 SK-Hep1, 신장암 세포주 Caki1, 대장암 세포주 SW480, 위암 세포주 MKN45, 전립선암 세포주 PC3, 유방암 세포주 ZR75-1(JCRB, RIKEN 및 ATCC로부터 구입)에 크롬 51을 도입시키고, 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드(서열 번호 47), 및 전체 길이 SCD1 단백질에 의한 자극으로 유도된 HLA-A24 양성의 CD8 양성 T 세포를 배양했을 때의 장해를 받은 세포로부터 방출되는 배양 상청 중의 크롬 51의 양을 측정했다.
그 결과, 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드로 자극된 HLA-A24 양성의 CD8 양성 T 세포가 사용한 모든 암세포에 대하여 통상에서는 예상할 수 없을 정도로 현저한 세포 장해 활성을 갖는 것이 판명되었다. 대표예로서 도 5a 및 도 5b에 각각 SW480 세포 및 ZR75-1 세포에 대한 세포 장해 활성의 결과를 나타낸다. 서열 번호 24~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드로 자극된 CD8 양성 T 세포(각각 레인 4~16)에서는 전체 길이 SCD1 단백질로 자극된 CD8 양성 T 세포(레인 3)와 비교해서 SW480 세포 및 ZR75-1 세포에 대하여 현저하게 높은 세포 장해 활성을 나타내고 있다. 한편, 음성 컨트롤의 폴리펩티드를 사용하여 유도한 CD8 양성 T 세포는 Mock(레인 1)와 같은 정도이며, 세포 장해 활성을 나타내지 않았다(레인 2). 따라서, 서열 번호 24~36은 HLA-A24 양성이며 인간 SCD1 단백질을 발현하는 세포상의 HLA-A24 분자상에 제시되는 것이며, 이 결과는 본 발명의 폴리펩티드가 이러한 세포를 장해할 수 있는 CD8 양성 세포 장해성 T 세포를 유도하는 능력이 있는 것을 시사하고 있다.
한편으로 상기 암세포에 대하여 서열 번호 3~36의 아미노산 서열로 나타내어지는 폴리펩티드 및 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 폭로시킨 결과, 암세포는 완전히 사멸하지 않았다. 이것으로부터 이들 폴리펩티드에는 직접적으로 암세포를 죽이는 작용이 없는 것도 확인했다.
세포 장해 활성은 상기와 같이 본 발명에서 사용되는 각 폴리펩티드로 자극 유도된 CD8 양성 T 세포 5×104개와 크롬 51을 도입시킨 103개의 각 종양 세포를 혼합해서 4시간 배양하고, 배양 후 배지에 방출된 크롬 51의 양을 측정하고, 이하 계산식 *에 의해 산출한 CD8 양성 T 세포의 각 종양 세포(표적 세포라고 한다)에 대한 세포 장해 활성을 나타낸 결과이다.
*식: 세포 장해 활성(%)=CD8 양성 T 세포를 첨가했을 때의 표적 세포로부터의 크롬 51 유리(遊離)량÷1N 염산을 첨가한 표적 세포로부터의 크롬 51 유리량×100.
<실시예 4: SCD1 단백질 유래 펩티드에피토프 반응성 CD4 양성 T 세포의 유도>
CD4 양성 T 세포 항원 에피토프 예측을 위해 SYFPEITHI 알고리즘(라멘세저(Rammensee)의 컴퓨터 예측 프로그램을 사용하여 인간 SCD1 단백질의 아미노산 서열을 해석하고, HLA 클래스 II결합 펩티드로 예상되는 서열 번호 37~45에 나타내는 9종류의 펩티드를 선택했다. 선택한 모든 펩티드는 Greiner Bio One International GmbH의 커스텀펩티드 합성 서비스에 합성 의뢰했다.
HLA-DRB1*04 양성의 건상인으로부터 말초혈을 분리하고, Lymphocyte separation medium(Organon Teknika Corporation LLC,.제)에 중층해서 1,500rpm으로 실온에서 20분간 원심 분리했다. PBMC를 함유하는 획분을 회수하고, 냉인산염 완충액 중에서 3회(또는 그 이상) 세정하여 PBMC를 얻었다. 얻어진 PBMC를 20mL의 AIM-V 배지(Life Technologies Corporation제)에 현탁하여 배양 플라스크(FALCON Co., Ltd.제) 중에 37℃, 5% CO2의 조건하에서 2시간 부착시켰다. 비부착 세포는 T 세포 조제에 사용하고, 부착 세포는 수지상 세포를 조제하기 위해서 사용했다.
한편, 부착 세포를 AIM-V 배지 중에서 IL-4(1000U/mL) 및 GM-CSF(1000U/mL)의 존재하에서 배양했다. 6일 후에 IL-4(1000U/mL), GM-CSF(1000U/mL), IL-6(1000U/mL, Genzyme Corporation제), IL-1β(10ng/mL, Genzyme Corporation제), 및 TNF-α(10ng/mL, Genzyme Corporation제)를 첨가한 AIM-V 배지로 교환해서 2일간 더 배양한 후 얻어진 비부착 세포 집단을 수지상 세포로서 사용했다.
조제한 수지상 세포를 AIM-V 배지 중에 1×106세포/mL의 세포 밀도로 현탁하고, 서열 번호 37~45의 각 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드(서열 번호 48), 및 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 SCD1 단백질을 각각 10㎎/mL의 농도로 첨가하고, 96구멍 플레이트를 사용하여 37℃, 5% CO2의 조건하에서 4시간 배양했다. 배양 후 X선 조사(3000rad)하고, AIM-V 배지로 세정하고, 10% 인간 AB 혈청(Nabi Co., Ltd.제), IL-6(1000U/mL), 및 IL-12(10ng/mL, Genzyme Corporation제)를 함유하는 AIM-V 배지로 현탁하여 24구멍 플레이트 1구멍당 각각 1×105세포씩 첨가했다. 또한, 조제한 T 세포 집단을 1구멍당 각각 1×106세포 첨가하여 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양했다. 7일 후 각각의 배양 상청을 버리고, 상기와 마찬가지로 해서 얻은 각 펩티드 및 SCD1 단백질로 처리 후 X선 조사한 수지상 세포를 10% 인간 AB 혈청(Nabi Co., Ltd.제) 및 IL-2(10U/mL, Genzyme Corporation제)를 함유하는 AIM-V 배지로 현탁하고, 24구멍 플레이트 1구멍당 각각 1×105세포씩 첨가하여 더 배양했다. 마찬가지의 조작을 7일간 간격으로 4회 반복한 후 자극된 T 세포를 회수하여 플로우 사이토메트리에 의해 CD4 양성 T 세포의 유도를 확인했다. 그 결과, 유도한 각 구멍의 T 세포가 증식하고 있는 것이 확인되었다.
<실시예 5: HLA-DRB1*04 양성 CD4 양성 T 세포를 자극하는 SCD1 단백질 유래 헬퍼 T 세포 항원 에피토프의 결정>
상기 실시예 4에서 유도한 CD4 양성 T 세포의 각 펩티드 단백질에 대한 특이성을 조사하기 위해서 각종 폴리펩티드에서 HLA-DRB1*04 분자를 발현하는 PBMC를 펄스했다. 상기 PBMC는 10㎍/mL의 농도로 AIM-V 배지 중 각 폴리펩티드를 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 4시간 배양해서 조제했다. 또한, 각종 폴리펩티드에는 서열 번호 37~45의 아미노산 서열로 나타내어지는 각 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드(서열 번호 48), 및 서열 번호 2로 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 전체 길이 SCD1 단백질을 사용했다. 펄스 후의 PBMC 5×104개에 대하여 5×104개의 CD4 양성 T 세포를 첨가하고, 10% 인간 AB 혈청을 포함하는 AIM-V 배지 중에서 96구멍 플레이트에서 24시간 배양했다. 배양 후의 상청을 취하여 IFN-γ의 산생량을 ELISA법에 의해 측정했다.
그 결과, 각각 서열 번호 37~45의 각 펩티드를 펄스한 PBMC를 사용한 구멍의 배양 상청에 있어서 1000pg/mL 이상의 IFN-γ가 산생되어 있었다. 한편, 음성 컨트롤 폴리펩티드 및 폴리펩티드를 펄스하고 있지 않은 수지상 세포만(Mock)을 사용한 구멍의 배양 상청에서는 IFN-γ의 산생은 거의 확인되지 않았다. 따라서, 서열 번호 37~45의 아미노산 서열로 나타내어지는 각종 폴리펩티드는 특이적으로 HLA-DRB1*04 양성 CD4 양성 T 세포를 증식 자극시켜서 IFN-γ 산생을 유도하는 능력을 갖는 T 세포 에피토프펩티드인 것이 판명되었다. 또한, 전체 길이 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 상기 면역 유도 활성을 갖는 서열 번호 37~45가 포함되어 있음에도 상관없이 전체 길이 SCD1 단백질을 펄스한 PBMC포를 사용한 구멍의 배양 상청에 있어서의 IFN-γ의 산생량이 매우 적었다. 이것은 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에 면역 유도 활성을 억제하는 서열이 많이 포함되기 때문에 충분한 면역 유도 활성을 나타내지 않은 것으로 생각된다.
이어서, HLA-DRB1*04 양성 T 세포를 증식 자극시키는 능력을 갖는 서열 번호 37~45의 폴리펩티드가 SCD1 단백질로부터 항원 제시 세포 내에서 내추럴하게 프로세스되어서 HLA-DR상에 제시되는 에피토프인지의 여부에 대해서 검토했다. SCD1 단백질을 일과적으로 발현시킨 HEK293 세포(ATCC로부터 구입)의 라이세이트를 미성숙 수지상 세포에 첨가해서 소화시키고, 수지상 세포를 성숙화시킨 후 서열 번호 37~45의 폴리펩티드, 음성 컨트롤 폴리펩티드, 및 SCD1 단백질로 자극된 T 세포가 본 수지상 세포에 의해 자극되는지를 조사했다. HLA-DRB1*04 양성의 건상인으로부터 말초혈을 분리하고, Lymphocyte separation medium에 중층해서 1,500rpm으로 실온에서 20분간 원심 분리했다. PBMC를 함유하는 상간을 수확하고, 냉인산염 완충액 중에서 3회(또는 그 이상) 세정하여 PBMC를 얻었다. 얻어진 PBMC를 AIM-V 배지 20mL에 현탁하고, 배양 플라스크(Falcon) 중에 37℃, 5% CO2의 조건하에서 2시간 부착시키고, 부착 세포를 AIM-V 배지 중에서 IL-4(1000U/mL) 및 GM-CSF(1000U/mL)의 존재하에서 6일간 배양하여 미성숙 수지상 세포를 제작했다. 상기 라이세이트를 5×105개의 미성숙 수지상 세포에 첨가하고, IL-4(1000U/mL), GM-CSF(1000U/mL), IL-6(1000U/mL), IL-1β(10ng/mL), 및 TNF-α(10ng/mL)를 첨가한 AIM-V 배지 중에서 2일간 배양했다. 배양 후의 수지상 세포를 X선 조사(3000rad)하고, AIM-V 배지로 세정 후 10% 인간 AB 혈청을 함유하는 AIM-V 배지로 현탁하여 96구멍 플레이트 1구멍당 각각 3.3×104개씩 첨가했다. 이들에 5×104개의 서열 번호 37~45의 폴리펩티드 음성 컨트롤 폴리펩티드 및 SCD1 단백질로 자극된 T 세포를 첨가하고, 37℃, 5% CO2의 조건하에서 24시간 배양했다. 배양 후의 상청을 취하여 IFN-γ의 산생량을 ELISA법에 의해 측정했다.
그 결과, 도 6에 나타내는 바와 같이 서열 번호 37~45의 폴리펩티드로 자극된 레인 4~12의 T 세포는 SCD1 단백질을 첨가한 수지상 세포의 자극에 의해 IFN-γ를 산생하는 것을 알 수 있었다. 한편, 음성 컨트롤 폴리펩티드로 자극한 레인 2 및 폴리펩티드로 자극하지 않은 레인 1에 있어서는 IFN-γ의 산생은 거의 확인되지 않았다. 따라서, 서열 번호 37~45의 폴리펩티드가 SCD1 단백질이 항원 제시 세포 내에서 내추럴하게 프로세스되어서 HLA-DR상에 제시되는 에피토프인 것이 밝혀졌다. 또한, 본 실험에 있어서도 전체 길이 SCD1 단백질을 펄스한 레인 3에서는 IFN-γ의 산생량이 매우 적었다. 전체 길이 SCD1 단백질의 아미노산 서열 중에는 면역 유도 활성을 억제하는 서열이 많이 포함되는 점에서 충분한 면역 유도 활성을 나타내지 않은 것으로 생각된다.
(산업상 이용가능성)
본 발명의 각종 암에 대하여 항종양 활성을 발휘하는 폴리펩티드를 포함하는 면역 유도제는 암의 치료 또는 예방에, 또는 암의 검출에 유용하다.
본 명세서에서 인용한 모든 간행물, 특허, 및 특허출원은 그대로 인용에 의해 본 명세서에 원용되는 것으로 한다.
SEQUENCE LISTING <110> TORAY INDUSTRIES, INC. <120> Immunity inducing agent <130> PH-6814-PCT <150> JP 2016-040364 <151> 2016-03-02 <160> 52 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 5473 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (491)..(1570) <223> <400> 1 ggcaggacga ggtggcacca aattcccttc ggccaatgac gagccggagt ttacagaagc 60 ctcattagca tttccccaga ggcaggggca ggggcagagg ccgggtggtg tggtgtcggt 120 gtcggcagca tccccggcgc cctgctgcgg tcgccgcgag cctcggcctc tgtctcctcc 180 ccctcccgcc cttacctcca cgcgggaccg cccgcgccag tcaactcctc gcactttgcc 240 cctgcttggc agcggataaa agggggctga ggaaataccg gacacggtca cccgttgcca 300 gctctagcct ttaaattccc ggctcgggga cctccacgca ccgcggctag cgccgacaac 360 cagctagcgt gcaaggcgcc gcggctcagc gcgtaccggc gggcttcgaa accgcagtcc 420 tccggcgacc ccgaactccg ctccggagcc tcagccccct ggaaagtgat cccggcatcc 480 gagagccaag atg ccg gcc cac ttg ctg cag gac gat atc tct agc tcc 529 Met Pro Ala His Leu Leu Gln Asp Asp Ile Ser Ser Ser 1 5 10 tat acc acc acc acc acc att aca gcg cct ccc tcc agg gtc ctg cag 577 Tyr Thr Thr Thr Thr Thr Ile Thr Ala Pro Pro Ser Arg Val Leu Gln 15 20 25 aat gga gga gat aag ttg gag acg atg ccc ctc tac ttg gaa gac gac 625 Asn Gly Gly Asp Lys Leu Glu Thr Met Pro Leu Tyr Leu Glu Asp Asp 30 35 40 45 att cgc cct gat ata aaa gat gat ata tat gac ccc acc tac aag gat 673 Ile Arg Pro Asp Ile Lys Asp Asp Ile Tyr Asp Pro Thr Tyr Lys Asp 50 55 60 aag gaa ggc cca agc ccc aag gtt gaa tat gtc tgg aga aac atc atc 721 Lys Glu Gly Pro Ser Pro Lys Val Glu Tyr Val Trp Arg Asn Ile Ile 65 70 75 ctt atg tct ctg cta cac ttg gga gcc ctg tat ggg atc act ttg att 769 Leu Met Ser Leu Leu His Leu Gly Ala Leu Tyr Gly Ile Thr Leu Ile 80 85 90 cct acc tgc aag ttc tac acc tgg ctt tgg ggg gta ttc tac tat ttt 817 Pro Thr Cys Lys Phe Tyr Thr Trp Leu Trp Gly Val Phe Tyr Tyr Phe 95 100 105 gtc agt gcc ctg ggc ata aca gca gga gct cat cgt ctg tgg agc cac 865 Val Ser Ala Leu Gly Ile Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ser His 110 115 120 125 cgc tct tac aaa gct cgg ctg ccc cta cgg ctc ttt ctg atc att gcc 913 Arg Ser Tyr Lys Ala Arg Leu Pro Leu Arg Leu Phe Leu Ile Ile Ala 130 135 140 aac aca atg gca ttc cag aat gat gtc tat gaa tgg gct cgt gac cac 961 Asn Thr Met Ala Phe Gln Asn Asp Val Tyr Glu Trp Ala Arg Asp His 145 150 155 cgt gcc cac cac aag ttt tca gaa aca cat gct gat cct cat aat tcc 1009 Arg Ala His His Lys Phe Ser Glu Thr His Ala Asp Pro His Asn Ser 160 165 170 cga cgt ggc ttt ttc ttc tct cac gtg ggt tgg ctg ctt gtg cgc aaa 1057 Arg Arg Gly Phe Phe Phe Ser His Val Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys 175 180 185 cac cca gct gtc aaa gag aag ggg agt acg cta gac ttg tct gac cta 1105 His Pro Ala Val Lys Glu Lys Gly Ser Thr Leu Asp Leu Ser Asp Leu 190 195 200 205 gaa gct gag aaa ctg gtg atg ttc cag agg agg tac tac aaa cct ggc 1153 Glu Ala Glu Lys Leu Val Met Phe Gln Arg Arg Tyr Tyr Lys Pro Gly 210 215 220 ttg ctg atg atg tgc ttc atc ctg ccc acg ctt gtg ccc tgg tat ttc 1201 Leu Leu Met Met Cys Phe Ile Leu Pro Thr Leu Val Pro Trp Tyr Phe 225 230 235 tgg ggt gaa act ttt caa aac agt gtg ttc gtt gcc act ttc ttg cga 1249 Trp Gly Glu Thr Phe Gln Asn Ser Val Phe Val Ala Thr Phe Leu Arg 240 245 250 tat gct gtg gtg ctt aat gcc acc tgg ctg gtg aac agt gct gcc cac 1297 Tyr Ala Val Val Leu Asn Ala Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His 255 260 265 ctc ttc gga tat cgt cct tat gac aag aac att agc ccc cgg gag aat 1345 Leu Phe Gly Tyr Arg Pro Tyr Asp Lys Asn Ile Ser Pro Arg Glu Asn 270 275 280 285 atc ctg gtt tca ctt gga gct gtg ggt gag ggc ttc cac aac tac cac 1393 Ile Leu Val Ser Leu Gly Ala Val Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His 290 295 300 cac tcc ttt ccc tat gac tac tct gcc agt gag tac cgc tgg cac atc 1441 His Ser Phe Pro Tyr Asp Tyr Ser Ala Ser Glu Tyr Arg Trp His Ile 305 310 315 aac ttc acc aca ttc ttc att gat tgc atg gcc gcc ctc ggt ctg gcc 1489 Asn Phe Thr Thr Phe Phe Ile Asp Cys Met Ala Ala Leu Gly Leu Ala 320 325 330 tat gac cgg aag aaa gtc tcc aag gcc gcc atc ttg gcc agg att aaa 1537 Tyr Asp Arg Lys Lys Val Ser Lys Ala Ala Ile Leu Ala Arg Ile Lys 335 340 345 aga acc gga gat gga aac tac aag agt ggc tga gtttggggtc cctcaggttc 1590 Arg Thr Gly Asp Gly Asn Tyr Lys Ser Gly 350 355 ctttttcaaa aaccagccag gcagaggttt taatgtctgt ttattaacta ctgaataatg 1650 ctaccaggat gctaaagatg atgatgttaa cccattccag tacagtattc ttttaaaatt 1710 caaaagtatt gaaagccaac aactctgcct ttatgatgct aagctgatat tatttcttct 1770 cttatcctct ctctcttcta ggcccattgt cctccttttc actttattgc tatcgccctc 1830 ctttccctta ttgcctccca ggcaagcagc tggtcagtct ttgctcagtg tccagcttcc 1890 aaagcctaga caacctttct gtagcctaaa acgaatggtc tttgctccag ataactctct 1950 ttccttgagc tgttgtgagc tttgaagtag gtggcttgag ctagagataa aacagaatct 2010 tctgggtagt cccctgttga ttatcttcag cccaggcttt tgctagatgg aatggaaaag 2070 caacttcatt tgacacaaag cttctaaagc aggtaaattg tcgggggaga gagttagcat 2130 gtatgaatgt aaggatgagg gaagcgaagc aagaggaacc tctcgccatg atcagacata 2190 cagctgccta cctaatgagg acttcaagcc ccaccacata gcatgcttcc tttctctcct 2250 ggctcggggt aaaaagtggc tgcggtgttt ggcaatgcta attcaatgcc gcaacatata 2310 gttgaggccg aggataaaga aaagacattt taagtttgta gtaaaagtgg tctctgctgg 2370 ggaagggttt tcttttcttt ttttctttaa taacaaggag atttcttagt tcatatatca 2430 agaagtcttg aagttgggtg tttccagaat tggtaaaaac agcagctcat agaattttga 2490 gtattccatg agctgctcat tacagttctt tcctctttct gctctgccat cttcaggata 2550 ttggttcttc ccctcatagt aataagatgg ctgtggcatt tccaaacatc caaaaaaagg 2610 gaaggattta aggaggtgaa gtcgggtcaa aaataaaata tatatacata tatacattgc 2670 ttagaacgtt aaactattag agtatttccc ttccaaagag ggatgtttgg aaaaaactct 2730 gaaggagagg aggaattagt tgggatgcca atttcctctc cactgctgga catgagatgg 2790 agaggctgag ggacaggatc tataggcagc ttctaagagc gaacttcaca taggaaggga 2850 tctgagaaca cgttgccagg ggcttgagaa ggttactgag tgagttattg ggagtcttaa 2910 taaaataaac tagatattag gtccattcat taattagttc cagtttctcc ttgaaatgag 2970 taaaaactag aaggcttctc tccacagtgt tgtgcccctt cactcatttt tttttgagga 3030 gaagggggtc tctgttaaca tctagcctaa agtatacaac tgcctggggg gcagggttag 3090 gaatctcttc actaccctga ttcttgattc ctggctctac cctgtctgtc ccttttcttt 3150 gaccagatct ttctcttccc tgaacgtttt cttctttccc tggacaggca gcctcctttg 3210 tgtgtattca gaggcagtga tgacttgctg tccaggcagc tccctcctgc acacagaatg 3270 ctcagggtca ctgaaccact gcttctcttt tgaaagtaga gctagctgcc actttcacgt 3330 ggcctccgca gtgtctccac ctacacccct gtgctcccct gccacactga tggctcaaga 3390 caaggctggc aaaccctccc agaaacatct ctggcccaga aagcctctct ctccctccct 3450 ctctcatgag gcacagccaa gccaagcgct catgttgagc cagtgggcca gccacagagc 3510 aaaagagggt ttattttcag tcccctctct ctgggtcaga accagagggc atgctgaatg 3570 ccccctgctt acttggtgag ggtgccccgc ctgagtcagt gctctcagct ggcagtgcaa 3630 tgcttgtaga agtaggagga aacagttctc actgggaaga agcaagggca agaacccaag 3690 tgcctcacct cgaaaggagg ccctgttccc tggagtcagg gtgaactgca aagctttggc 3750 tgagacctgg gatttgagat accacaaacc ctgctgaaca cagtgtctgt tcagcaaact 3810 aaccagcatt ccctacagcc tagggcagac aatagtatag aagtctggaa aaaaacaaaa 3870 acagaatttg agaaccttgg accactcctg tccctgtagc tcagtcatca aagcagaagt 3930 ctggctttgc tctattaaga ttggaaatgt acactaccaa acactcagtc cactgttgag 3990 ccccagtgct ggaagggagg aaggcctttc ttctgtgtta attgcgtaga ggctacaggg 4050 gttagcctgg actaaaggca tccttgtctt ttgagctatt cacctcagta gaaaaggatc 4110 taagggaaga tcactgtagt ttagttctgt tgacctgtgc acctacccct tggaaatgtc 4170 tgctggtatt tctaattcca caggtcatca gatgcctgct tgataatata taaacaataa 4230 aaacaacttt cacttcttcc tattgtaatc gtgtgccatg gatctgatct gtaccatgac 4290 cctacataag gctggatggc acctcaggct gagggcccca atgtatgtgt ggctgtgggt 4350 gtgggtggga gtgtgtctgc tgagtaagga acacgatttt caagattcta aagctcaatt 4410 caagtgacac attaatgata aactcagatc tgatcaagag tccggatttc taacagtcct 4470 tgctttgggg ggtgtgctga caacttagct caggtgcctt acatcttttc taatcacagt 4530 gttgcatatg agcctgccct cactccctct gcagaatccc tttgcacctg agaccctact 4590 gaagtggctg gtagaaaaag gggcctgagt ggaggattat cagtatcacg atttgcagga 4650 ttcccttctg ggcttcattc tggaaacttt tgttagggct gcttttctta agtgcccaca 4710 tttgatggag ggtggaaata atttgaatgt atttgattta taagtttttt tttttttttt 4770 gggttaaaag atggttgtag catttaaaat ggaaaatttt ctccttggtt tgctagtatc 4830 ttgggtgtat tctctgtaag tgtagctcaa ataggtcatc atgaaaggtt aaaaaagcga 4890 ggtggccatg ttatgctggt ggttaaggcc agggcctctc caaccactgt gccactgact 4950 tgctgtgtga ccctgggcaa gtcacttaac tataaggtgc ctcagttttc cttctgttaa 5010 aatggggata ataatactga cctacctcaa agggcagttt tgaggcatga ctaatgcttt 5070 ttagaaagca ttttgggatc cttcagcaca ggaattctca agacctgagt attttttata 5130 ataggaatgt ccaccatgaa cttgatacgt ccgtgtgtcc cagatgctgt cattagtcta 5190 tatggttctc caagaaactg aatgaatcca ttggagaagc ggtggataac tagccagaca 5250 aaatttgaga atacataaac aacgcattgc cacggaaaca tacagaggat gccttttctg 5310 tgattgggtg ggattttttc cctttttatg tgggatatag tagttacttg tgacaagaat 5370 aattttggaa taatttctat taatatcaac tctgaagcta attgtactaa tctgagattg 5430 tgtttgttca taataaaagt gaagtgaatc tgattgcaaa aaa 5473 <210> 2 <211> 359 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Ala His Leu Leu Gln Asp Asp Ile Ser Ser Ser Tyr Thr Thr 1 5 10 15 Thr Thr Thr Ile Thr Ala Pro Pro Ser Arg Val Leu Gln Asn Gly Gly 20 25 30 Asp Lys Leu Glu Thr Met Pro Leu Tyr Leu Glu Asp Asp Ile Arg Pro 35 40 45 Asp Ile Lys Asp Asp Ile Tyr Asp Pro Thr Tyr Lys Asp Lys Glu Gly 50 55 60 Pro Ser Pro Lys Val Glu Tyr Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Met Ser 65 70 75 80 Leu Leu His Leu Gly Ala Leu Tyr Gly Ile Thr Leu Ile Pro Thr Cys 85 90 95 Lys Phe Tyr Thr Trp Leu Trp Gly Val Phe Tyr Tyr Phe Val Ser Ala 100 105 110 Leu Gly Ile Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ser His Arg Ser Tyr 115 120 125 Lys Ala Arg Leu Pro Leu Arg Leu Phe Leu Ile Ile Ala Asn Thr Met 130 135 140 Ala Phe Gln Asn Asp Val Tyr Glu Trp Ala Arg Asp His Arg Ala His 145 150 155 160 His Lys Phe Ser Glu Thr His Ala Asp Pro His Asn Ser Arg Arg Gly 165 170 175 Phe Phe Phe Ser His Val Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro Ala 180 185 190 Val Lys Glu Lys Gly Ser Thr Leu Asp Leu Ser Asp Leu Glu Ala Glu 195 200 205 Lys Leu Val Met Phe Gln Arg Arg Tyr Tyr Lys Pro Gly Leu Leu Met 210 215 220 Met Cys Phe Ile Leu Pro Thr Leu Val Pro Trp Tyr Phe Trp Gly Glu 225 230 235 240 Thr Phe Gln Asn Ser Val Phe Val Ala Thr Phe Leu Arg Tyr Ala Val 245 250 255 Val Leu Asn Ala Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu Phe Gly 260 265 270 Tyr Arg Pro Tyr Asp Lys Asn Ile Ser Pro Arg Glu Asn Ile Leu Val 275 280 285 Ser Leu Gly Ala Val Gly Glu Gly Phe His Asn Tyr His His Ser Phe 290 295 300 Pro Tyr Asp Tyr Ser Ala Ser Glu Tyr Arg Trp His Ile Asn Phe Thr 305 310 315 320 Thr Phe Phe Ile Asp Cys Met Ala Ala Leu Gly Leu Ala Tyr Asp Arg 325 330 335 Lys Lys Val Ser Lys Ala Ala Ile Leu Ala Arg Ile Lys Arg Thr Gly 340 345 350 Asp Gly Asn Tyr Lys Ser Gly 355 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 3 Lys Leu Glu Thr Met Pro Leu Tyr Leu 1 5 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Tyr Leu Glu Asp Asp Ile Arg Pro Asp Ile 1 5 10 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Tyr Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Met 1 5 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Ile Leu Met Ser Leu Leu His Leu Gly Ala 1 5 10 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Leu Leu His Leu Gly Ala Leu Tyr Gly Ile 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Ala Leu Tyr Gly Ile Thr Leu Ile Pro Thr 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Thr Leu Ile Pro Thr Cys Lys Phe Tyr Thr 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Trp Leu Trp Gly Val Phe Tyr Tyr Phe Val 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Gly Val Phe Tyr Tyr Phe Val Ser Ala Leu 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12 Arg Leu Trp Ser His Arg Ser Tyr Lys Ala 1 5 10 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13 Arg Leu Pro Leu Arg Leu Phe Leu Ile 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14 Arg Leu Phe Leu Ile Ile Ala Asn Thr 1 5 <210> 15 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15 Phe Leu Ile Ile Ala Asn Thr Met Ala 1 5 <210> 16 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 16 Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro Ala Val 1 5 10 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17 Gly Leu Leu Met Met Cys Phe Ile Leu 1 5 <210> 18 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18 Leu Leu Met Met Cys Phe Ile Leu Pro Thr Leu 1 5 10 <210> 19 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19 Phe Val Ala Thr Phe Leu Arg Tyr Ala Val 1 5 10 <210> 20 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 20 Val Val Leu Asn Ala Thr Trp Leu Val 1 5 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21 Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22 His Ile Asn Phe Thr Thr Phe Phe Ile 1 5 <210> 23 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23 Phe Ile Asp Cys Met Ala Ala Leu Gly Leu 1 5 10 <210> 24 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 24 Lys Phe Tyr Thr Trp Leu Trp Gly Val Phe 1 5 10 <210> 25 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25 Thr Trp Leu Trp Gly Val Phe Tyr Tyr Phe 1 5 10 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26 Phe Tyr Tyr Phe Val Ser Ala Leu Gly Ile 1 5 10 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27 Ser Tyr Lys Ala Arg Leu Pro Leu Arg Leu 1 5 10 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 28 Phe Phe Ser His Val Gly Trp Leu Leu 1 5 <210> 29 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29 Leu Met Met Cys Phe Ile Leu Pro Thr Leu 1 5 10 <210> 30 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30 Pro Trp Tyr Phe Trp Gly Glu Thr Phe 1 5 <210> 31 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 31 Arg Tyr Ala Val Val Leu Asn Ala Thr Trp 1 5 10 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32 Gly Tyr Arg Pro Tyr Asp Lys Asn Ile 1 5 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33 Gly Phe His Asn Tyr His His Ser Phe 1 5 <210> 34 <211> 10 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 34 Asn Tyr His His Ser Phe Pro Tyr Asp Tyr 1 5 10 <210> 35 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35 Asp Tyr Ser Ala Ser Glu Tyr Arg Trp 1 5 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36 Arg Trp His Ile Asn Phe Thr Thr Phe 1 5 <210> 37 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37 Val Glu Tyr Val Trp Arg Asn Ile Ile Leu Met Ser Leu Leu His Leu 1 5 10 15 Gly Ala Leu Tyr Gly Ile Thr Leu 20 <210> 38 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Trp Gly Val Phe Tyr Tyr Phe Val Ser Ala Leu Gly Ile Thr Ala Gly 1 5 10 15 Ala His <210> 39 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 39 Thr Ala Gly Ala His Arg Leu Trp Ser His Arg Ser Tyr Lys Ala Arg 1 5 10 15 Leu Pro Leu Arg 20 <210> 40 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40 His Arg Ser Tyr Lys Ala Arg Leu Pro Leu Arg Leu Phe Leu Ile 1 5 10 15 <210> 41 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41 Pro Leu Arg Leu Phe Leu Ile Ile Ala Asn Thr Met Ala Phe Gln Asn 1 5 10 15 <210> 42 <211> 15 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 42 His Val Gly Trp Leu Leu Val Arg Lys His Pro Ala Val Lys Glu 1 5 10 15 <210> 43 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43 Ala Glu Lys Leu Val Met Phe Gln Arg Arg Tyr Tyr Lys Pro Gly Leu 1 5 10 15 Leu <210> 44 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44 Asn Ala Thr Trp Leu Val Asn Ser Ala Ala His Leu Phe Gly Tyr Arg 1 5 10 15 <210> 45 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Ala Ser Glu Tyr Arg Trp His Ile Asn Phe Thr Thr 1 5 10 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> A2-control peptide <400> 46 Ser Leu Tyr Asn Thr Tyr Ala Thr Leu 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> A24-control peptide <400> 47 Arg Tyr Leu Arg Asp Gln Gln Leu Leu 1 5 <210> 48 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Helper-control peptide <400> 48 Tyr Val Asp Arg Phe Phe Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala Thr Gln 1 5 10 15 Asp Val <210> 49 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer sense <400> 49 gatgatgtgc ttcatcctgc 20 <210> 50 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> primer antisense <400> 50 tgtggtgaag ttgatgtgcc 20 <210> 51 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> GAPDH primer <400> 51 gggctgcttt taactctg 18 <210> 52 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> GAPDH primer <400> 52 ccaggaaatg agcttgac 18

Claims (18)

  1. 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드,
    (a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드
    (b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드, 또는
    상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터를 유효 성분으로서 함유하는 면역 유도제.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 MHC 클래스 I분자에 결합하는 면역 유도제.
  3. 제 2 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(e)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드인 면역 유도제.
    (c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드
    (d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드
    (e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드
  4. 제 1 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 MHC 클래스 II분자에 결합하는 면역 유도제.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (f)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 어느 하나의 폴리펩티드인 면역 유도제.
    (f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드
    (g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드
    (h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,
    암의 치료 또는 예방약의 유효 성분으로서 사용하는 면역 유도제.
  7. 제 6 항에 있어서,
    상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 면역 유도제.
  8. 제 6 항 또는 제 7 항에 있어서,
    상기 암이 악성 림프종, 유방암, 간암, 전립선암, 난소암, 신장암, 대장암, 위암, 악성 뇌종양, 식도암 또는 폐암인 면역 유도제.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서,
    면역 증강제를 더 포함하는 면역 유도제.
  10. 제 1 항, 제 3 항 또는 제 5 항 중 어느 한 항에 기재된 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포.
  11. 제 1 항, 제 3 항 또는 제 5 항 중 어느 한 항에 기재된 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 선택적으로 결합하는 단리 T 세포.
  12. 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 어느 하나의 폴리펩티드.
    (a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드,
    (b) 상기 (a)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드.
  13. 이하의 (i)~(iv)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 유효 성분으로서 포함하는 암의 치료 또는 예방약.
    (i) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드:
    (a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드,
    (b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (ii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터;
    (iii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포; 및
    (iv) 상기 어느 하나의 폴리펩티드에 특이적인 단리 T 세포.
  14. 제 13 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 적어도 1개의 폴리펩티드인 암의 치료 또는 예방약:
    (c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
    (d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드;
    (f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
    (g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드.
  15. 제 13 항 또는 제 14 항에 있어서,
    상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 암의 치료 또는 예방약.
  16. 이하의 (i)~(iv)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 그것을 필요로 하는 대상 동물에 투여하는 것을 포함하는 암을 치료 또는 예방하는 방법.
    (i) 이하의 (a) 또는 (b)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되고, 또한 면역 유도 활성을 갖는 적어도 1개의 폴리펩티드:
    (a) 서열 번호 2에 나타내어지는 아미노산 서열 중의 34~50위치, 69~148위치, 178~195위치, 207~242위치, 247~280위치, 296~332위치의 영역 내의 연속하는 7개 이상의 아미노산으로 이루어지는 폴리펩티드,
    (b) 상기 (a)에 기재된 어느 하나의 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (ii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 적어도 1개 포함하고, 생체 내에서 상기 폴리펩티드를 발현 가능한 재조합 벡터;
    (iii) 상기 어느 하나의 폴리펩티드와 MHC 분자의 복합체를 포함하는 단리 항원 제시 세포; 및
    (iv) 상기 어느 하나의 폴리펩티드에 특이적인 단리 T 세포.
  17. 제 16 항에 있어서,
    상기 면역 유도 활성을 갖는 폴리펩티드가 이하의 (c)~(h)에 기재된 폴리펩티드군으로부터 선택되는 적어도 1개의 폴리펩티드인 방법:
    (c) 서열 번호 3~36에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
    (d) 상기 (c)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (e) 상기 (c) 또는 (d)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드;
    (f) 서열 번호 37~45에 나타내어지는 아미노산 서열로 이루어지는 폴리펩티드;
    (g) 상기 (f)에 기재된 폴리펩티드의 아미노산 서열에 있어서 1~수 개의 아미노산이 결실, 치환, 삽입 또는 부가된 폴리펩티드;
    (h) 상기 (f) 또는 (g)에 기재된 폴리펩티드를 부분 서열로서 포함하는 폴리펩티드.
  18. 제 16 항 또는 제 17 항에 있어서,
    상기 암이 SCD1 단백질을 발현하는 암인 방법.
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